JP3276327B2 - テストステロン５α−リダクターゼ阻害剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術の分野】本発明は、テストステロン
５α−リダクターゼ阻害剤に関し、更に詳しくは天然物
であるホウセンカ抽出物又は当該ホウセンカ抽出物の含
有成分である特定のビスナフトキノン誘導体を有効成分
として含有する、有用かつ安全性の高いテストステロン
５α−リダクターゼ阻害剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】精巣や副腎で生合成され分泌されたテス
トステロン(男性ホルモン)は、血液を介して皮脂腺、毛
包、前立腺などに移行した後、各組織に存在する代謝酵
素であるテストステロン５α−リダクターゼにより還元
され、より活性なジヒドロテストステロン(ＤＨＴ)へと
変換される。各組織で生成したＤＨＴは、皮脂腺や毛包
では皮脂の分泌を、また、前立腺では細胞の増殖を促進
することが知られている。

【０００３】一方、男性型脱毛症、尋常性ざ瘡(アク
ネ)、前立腺肥大症などの疾患では、男性ホルモンによ
る作用がその発症原因あるいは憎悪因子とされており、
これらはＤＨＴの異常産生に起因するものと考えられて
いる。従って、これらの疾患の治療薬としては、テスト
ステロン５α−リダクターゼ阻害剤を含む抗男性ホルモ
ン剤が広く用いられている。抗男性ホルモン剤として
は、プロゲステロン、クロルマジノン、シプロテロンと
いった強力なステロイド剤が、また、天然物由来では、
センブリ、ウイキョウ、カンゾウなどの抽出物がテスト
ステロン５α−リダクターゼ阻害剤として利用されてい
る。更に、天然物中の成分としてローソン（ヘンナ
葉）、シコニン（シコン）、オイゲノール（チョウジ）
などにテストステロン５α−リダクターゼ阻害作用が報
告されている［フレグランス・ジャーナル，No.92，78
頁〜(1988).参照のこと］。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、これら
従来の抗男性ホルモン剤、特にステロイド剤は、その強
力なホルモン様作用による好ましくない副作用を有して
おり、安全性に問題があった。また、これまでに知られ
ている天然物由来のテストステロン５α−リダクターゼ
阻害剤は、作用は認められるものの、その活性成分の不
明なものが多かった。あるいは、前述のフレグランス・
ジャーナルのように活性成分が特定されていても作用が
弱いものが多かった。

【０００５】本発明は上記課題を解決するためになされ
たもので、その目的とするところは、優れた男性ホルモ
ン阻害作用を有し、かつホルモン様作用のない高い安全
性を備えたテストステロン５α−リダクターゼ阻害剤を
提供することにある。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するため、漢方処方中で汎用されている種々の生
薬から民間療法で利用されている生薬に至る種々の植物
抽出エキスについて、テストステロン５α−リダクター
ゼ阻害作用を指標として検索を行った。その結果、古く
から民間生薬として知られるホウセンカにテストステロ
ン５α−リダクターゼ阻害作用があることを見いだし
た。更に鋭意研究を重ねた結果、当該ホウセンカから特
定のビスナフトキノン誘導体を単離し、そのテストステ
ロン５α-リダクターゼ阻害作用を確認して、本発明を
完成するに至った。

【０００７】すなわち、本発明は、ホウセンカ抽出物を
有効成分として含有するテストステロン５α−リダクタ
ーゼ阻害剤を提供するものである。

【０００８】また、本発明は、下記式（Ｉ）で表される
ビスナフトキノン誘導体を有効成分として含有するテス
トステロン５α−リダクターゼ阻害剤を提供するもので
ある。

【０００９】

【化３】

【００１０】また、本発明は、上記式（Ｉ）で表される
ビスナフトキノン誘導体を有効量で含有するホウセンカ
抽出物を有効成分として含有するテストステロン５α−
リダクターゼ阻害剤を提供するものである。

【００１１】更に本発明は、上記の本発明のテストステ
ロン５α−リダクターゼ阻害剤を有効成分として含有す
る育毛用組成物及びアクネ用組成物を提供するものであ
る。

【００１２】

【発明の実施の形態】前記本発明のテストステロン５α
−リダクターゼ阻害剤に利用されるホウセンカの起源
は、わが国を含むアジア各国に自生するツリフネソウ科
の一年草で、インパティエンスバルサミナ(Impatiens B
alsamina L.)の学名を持つ植物である。

【００１３】本発明のテストステロン５α−リダクター
ゼ阻害剤は、その有効成分として前記ホウセンカ抽出物
またはその成分である式（Ｉ）で表されるビスナフトキ
ノン誘導体を含有する。ホウセンカ抽出物は、例えば、
ホウセンカの全草、あるいは、葉、茎、花弁のうち何れ
か１ヶ所以上(以下、「原体」という)を乾燥又は乾燥せ
ずに裁断した後、常温もしくは加温下で溶剤により抽出
することにより得られる。

【００１４】ここで用いられる溶剤としては、水、有機
溶媒及びこれらの混合物が挙げられる。これらの有機溶
媒の具体例としては、メタノール、エタノール、ブタノ
ール等の低級アルコール類、または、これら低級アルコ
ール類と水の混合液(10〜90V/V％、好ましくは20〜70V/
V％)、アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類、ま
たは、これらケトン類と水との混合液(10〜90V/V％、好
ましくは20〜70V/V％)、ヘキサン、ベンゼン、トルエ
ン、石油エーテル等の炭化水素類、クロロホルム、ジク
ロロメタン、1,2-ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水
素類、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン等のエー
テル類、酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類、及び
これらの混合物などが挙げられる。

【００１５】原体からの好ましい抽出方法の具体例とし
ては、原体を裁断した後、適当な有機溶媒(好ましく
は、低級アルコール類、含水低級アルコール類、ケトン
類、含水ケトン類、炭化水素類、または、エステル類)
で抽出し、溶媒を留去する方法、あるいは、原体を裁断
した後、無水あるいは含水低級アルコール等の溶媒で抽
出し、次いで抽出物を酢酸エチル、ブタノール等の水と
混和しない溶媒と水を用いる液-液抽出に付し、更に有
機層または水層から溶媒を留去する方法等が挙げられる
が、特に限定されるものではない。尚、ホウセンカ成分
の効率的抽出には、原体と溶剤の抽出比率が１〜80W/V
％、好ましくは10〜60W/V％であるのが好適である。

【００１６】また、抽出溶媒として例えば無水または含
水エタノールまたは水を用いた場合は、溶媒を留去する
ことなくそのまま用いることができ、更に溶媒の一部を
留去して或いは留去することなく、エタノール、水等を
適宜加えることによりアルコール濃度を調整して用いる
こともできる。

【００１７】一方、ホウセンカ成分である式（Ｉ）で表
されるビスナフトキノン誘導体は、前記何れかの抽出方
法、好ましくは含水低級アルコール(好ましくは含水メ
タノール、含水エタノール)、親水性有機溶剤(好ましく
はメタノール、エタノール、アセトン)、疎水性有機溶
剤(好ましくはブタノール、酢酸エチル、クロロホルム)
の中から選ばれる１種以上により得られた当該抽出物か
ら、更に適当な分離精製手段、好ましくは薄層クロマト
法、カラムクロマト法、高速液体クロマト法または再結
晶等を繰り返し行うことにより単離、精製され得る。

【００１８】また、式（Ｉ）で表されるビスナフトキノ
ン誘導体、すなわち2,2'-エチリデンビス(3-ヒドロキシ
-1,4-ナフトキノン)は、有機合成により得ることもでき
る。すなわち、2-ヒドロキシ-1,4-ナフトキノン(ローソ
ンと呼称されるときもある)とアセトアルデヒド又はア
セタールとを適当な有機溶媒、好ましくはジメチルホル
ムアミド又はアセトニトリルなどの溶媒中で、周囲温度
あるいは加温下、好ましくは50〜80℃で縮合することに
より製造される。次いで、得られる粗生成物から、通常
用いられる分離精製手段、例えば抽出、濃縮、カラムク
ロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、再結晶な
どにより単離、精製される。

【００１９】本発明者らの研究により、テストステロン
５α−リダクターゼ阻害作用が確認された式（Ｉ）で表
されるビスナフトキノン誘導体は、本発明のホウセンカ
抽出物のテストステロン５α−リダクターゼ阻害作用に
おける主要活性成分の１つであることがわかる。

【００２０】本発明に含まれるホウセンカ抽出物のテス
トステロン５α−リダクターゼ阻害作用については、今
まで全く報告されていない。更に、本発明者らによって
初めてホウセンカから単離された式（Ｉ）で表されるビ
スナフトキノン誘導体は、合成品としては公知物質であ
るが、これまで他の天然物成分として抽出、単離された
例もなく、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用
についても全く報告されていない。尚、ホウセンカに関
しては、その白色花弁の抽出物に抗アレルギー作用があ
ることが既に報告され［Phytotherapy Res. 6, 112 (19
92).参照のこと］、また、式（Ｉ）で表されるビスナフ
トキノン誘導体に関しては、抗エイズ作用(ＨＩＶ−１
インテグラーゼ及びプロテアーゼ阻害作用)の検討がな
されているが［J. Med. Chem., 39, 2472 (1996).参照
のこと］、いずれも本発明のテストステロン５α−リダ
クターゼ阻害作用とは作用メカニズムの異なるものであ
る。従って、本発明のホウセンカ抽出物又は式（Ｉ）で
表されるビスナフトキノン誘導体が有するテストステロ
ン５α−リダクターゼ阻害作用は、本発明者らによって
初めて見出された有用な薬理作用である。

【００２１】なお、本発明の効果を損なわない範囲で、
作用増強を目的として、上記の本発明のホウセンカ抽出
物に式（Ｉ）で表されるビスナフトキノン誘導体を別途
添加することもできる。

【００２２】また、本発明のテストステロン５α−リダ
クターゼ阻害剤としては、前記式（Ｉ）で表されるビス
ナフトキノン誘導体を有効量で含有するホウセンカ抽出
物を有効成分とするものが含まれる。ここで、「有効
量」とは、所望のテストステロン５α−リダクターゼ阻
害作用を得るのに充分な量を意味する。式（Ｉ）で表さ
れるビスナフトキノン誘導体は、本発明の有効成分であ
るホウセンカ抽出物の主要活性成分であり、ホウセンカ
抽出物が式（Ｉ）の化合物を有効量で含む場合はこれを
そのまま本発明のテストステロン５α−リダクターゼ阻
害剤として用いることができる。また、式（Ｉ）の化合
物を含有していても所望のテストステロン５α−リダク
ターゼ阻害作用を得るのに充分でない場合は、別途式
（Ｉ）の化合物を添加したホウセンカ抽出物を用いるこ
とができる。

【００２３】かくして得られるホウセンカ抽出物又は式
（Ｉ）で表されるビスナフトキノン誘導体は、いずれも
望ましからぬホルモン様作用のない優れたテストステロ
ン５α−リダクターゼ阻害作用を有しており、その応用
としては、ＤＨＴの異常産生に起因する疾患、例えば、
男性型脱毛症やアクネ等の皮膚疾患であれば外用剤の医
薬品、医薬部外品、化粧品として、また、前立腺肥大症
等の疾患であれば経口剤又は注射剤の医薬品として投与
することにより、その予防または治療に用いることがで
きるが、特にこれらに限定されるものではない。

【００２４】本発明のホウセンカ抽出物は、通常成人一
人当たり、外用剤の場合であれば、乾燥重量で１回に１
mg〜１g、好ましくは10mg〜500mg、内服剤の場合であれ
ば１回に0.1〜500mg、好ましくは0.5〜100mg配合するこ
とができる。また、本発明の式（Ｉ）で表されるビスナ
フトキノン誘導体は、通常成人一人当たり、外用剤の場
合であれば、0.1mg〜500mg、好ましくは1mg〜50mg、内
服剤の場合であれば0.01〜100mg、好ましくは0.1mg〜50
mg配合することができる。但し、投与量は年令、体重、
症状、治療効果、投与方法、処理時間等により変動する
ので、上記投与範囲より少ない量で十分の場合もある
し、また範囲を越えて投与する必要のある場合もある。

【００２５】本発明のテストステロン５α−リダクター
ゼ阻害剤の剤形は、特に限定されるものではなく、例え
ば、男性型脱毛症用であればヘアローション、シャンプ
ー、リンス、ヘアトニック、ヘアトリートメント、ヘア
クリーム等の通常頭髪に用いられるものが、また、アク
ネ用であれば軟膏、ローション、クリーム、ジェル、乳
液等の通常皮膚用として用いられるものが挙げられる。
また、前立腺肥大症用であれば錠剤、カプセル剤、顆粒
剤、細粒剤、散剤、液剤等の通常の経口剤あるいは注射
剤とすることもできる。

【００２６】本発明のテストステロン５α−リダクター
ゼ阻害剤には、上記必須成分であるホウセンカ抽出物又
は式（Ｉ）で表されるビスナフトキノン誘導体の他に、
必要に応じ、本発明の効果を損なわない範囲で、外用剤
の場合であれば、通常適用される炭化水素類、ロウ類、
油脂類、高級脂肪酸、低級あるいは高級アルコール、界
面活性剤、香料、色素、防腐剤、抗酸化剤、紫外線吸収
剤、pH調節剤、また、経口用製剤であれば、適当な賦形
剤、例えば、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、コーティング
剤、着色剤等を添加することができる。

【００２７】更に、本発明の有効成分であるホウセンカ
抽出物又は式（Ｉ）で表されるビスナフトキノン誘導体
以外の他の薬効成分として、例えば、卵胞ホルモン(エ
ストラジオール、エチニルエストラジオール等)、抗ア
ンドロゲン剤(スピロノラクトン、プロゲステロン等)、
消炎、鎮疹剤(グリチルリチン酸塩、アズレン等)、代謝
・毛根賦活剤(パントテン酸、パントテニールアルコー
ル等)、ビタミン類(ビタミンＡ,Ｂ₁,Ｅ,Ｂ₂,Ｂ₆,Ｂ₁₂,
Ｃ,Ｅ等)、血流改善剤(dl-α-トコフェロール、γ-オリ
ザノール等)、局所刺激剤(ショウキョウチンキ、トウガ
ラシチンキ等)、角質溶解剤(サリチル酸、レゾルシン
等)、抗脂漏剤(レシチン、イオウ等)、殺菌剤(塩化ベン
ザルコニウム、ヒノキチオール等)、保湿剤(レモンエキ
ス、ヒアルロン酸、プロピレングリコール、グリセリン
等)等を各種目的に応じてホウセンカ抽出物又は式
（Ｉ）で表されるビスナフトキノン誘導体と併せて用い
ることもできる。

【００２８】また、本発明のホウセンカ抽出物又は式
（Ｉ）で表されるビスナフトキノン誘導体以外の薬効成
分として、各種生薬、例えばセンブリ、オトギリソウ、
チンピ、カシュウ、ショウガ、ニンジン、レイシ、タヒ
ボ、ローズマリー、ニンニク等の抽出物を１種以上添加
することもできる。かかる生薬の抽出、添加方法として
は、通常生薬の抽出に用いられる方法、例えば、水およ
び／または有機溶媒で抽出して得られる液、あるいは溶
媒留去したものをホウセンカ抽出物又は式（Ｉ）で表さ
れるビスナフトキノン誘導体と混合する方法、あるい
は、当該ホウセンカの抽出の際、これら生薬を同時抽出
する方法、あるいは、ホウセンカ抽出液、好ましくは、
無水または含水低級アルコール(更に好ましくは、10〜8
0V/V％エタノール)により得られるホウセンカ抽出液を
用いて、これら生薬を再抽出する方法などが挙げられ
る。

【００２９】また、本発明のホウセンカ抽出物を外用剤
として用いる場合には、ホウセンカあるいは目的により
併用する生薬抽出物由来の特異臭を和らげ、また、ビタ
ミンＣ等の栄養成分を与える目的で、レモン、みかん、
すだち、ゆず等柑橘類の果実成分を添加することができ
る。更に、ホウセンカ抽出液、好ましくは、無水または
含水低級アルコール(更に好ましくは、10〜80V/V％エタ
ノール)により得られるホウセンカ抽出液を用いて、こ
れら果実を再抽出する方法が特に好適である。

【００３０】以上説明した本発明は、ホウセンカ抽出物
を含有する育毛用組成物を含むものであり、この場合に
おいて、ホウセンカ抽出物は、育毛効果と経済性の面か
ら、本発明の育毛用組成物中に乾燥重量で0.001〜10W/V
％、好ましくは0.01〜５W/V％配合することができる。

【００３１】

【実施例】以下に実施例として本発明を説明するが、本
発明はこれらに限定されるものではない。

【００３２】抽出例１ 一昼夜日陰干しした後裁断したホウセンカの全草（地上
部）（15kg）を35V/V％エタノール(30リットル)に漬け
込み、１ヶ月間浸出した。次いで、全草をろ別し、更に
２週間熟成した後、ろ過して抽出液(26リットル)を得
た。

【００３３】抽出例２ 一昼夜日陰干しした後裁断したホウセンカの全草（地上
部）（0.5kg）を50V/V％エタノール(１リットル)に漬け
込み、１ヶ月間浸出した。次いで、全草をろ別し、更に
２週間熟成した後、ろ過して抽出液(0.83リットル)を得
た。

【００３４】抽出例３ 一昼夜日陰干しした後裁断したホウセンカの全草（地上
部）（0.5kg）を70V/V％エタノール(１リットル)に漬け
込み、１ヶ月間浸出した。次いで、全草をろ別し、更に
２週間熟成した後、ろ過して抽出液(0.87リットル)を得
た。

【００３５】抽出例４ 抽出例１で得られた抽出液(１リットル)を減圧下溶媒留
去して、抽出物(19g)を得た。

【００３６】実験例１(急性毒性試験) ５匹づつ２群のICRマウス(雄性、５週齢、体重20〜25g)
に、抽出例４のホウセンカ抽出物を５g/kg経口投与及び
１g/kg腹腔内投与した。投与後14日目に至っても、いず
れのマウスも死亡例を認めず、LD₅₀値は、経口投与：５
g/kg以上、腹腔内投与：１g/kg以上であることがわかっ
た。これより、本発明のホウセンカ抽出物の安全性が非
常に高いことがわかる。

【００３７】実験例２(皮膚10日間累積刺激性試験) 日本白色ウサギ(雄性、体重2.5〜３kg)10匹それぞれの
背部を除毛し、更に除毛した部位を背骨を中心として左
右２カ所(左：試験部位、右：無処置部位)に分けた。次
に、これらの除毛したウサギを無作為に５匹づつ２つの
群に分け、一方を実施例群、他方をプラセボ(偽薬)群と
した。次いで、実施例群のウサギ５匹の試験部位に１日
１回の頻度で10日間、抽出例４のホウセンカ抽出物の10
W/V％流動パラフィン溶液(0.5mL)を均一に塗布し、一定
の条件下(気温：23±２℃、明暗サイクル12時間、但し
照明時間7:00〜19:00)で飼育した。また、プラセボ群に
は、流動パラフィン(0.5mL)を実施例群と同様に塗布し
た。10日間経過後、すべてのウサギの試験部位を肉眼に
より観察した。結果を表１に示す。

【００３８】

【表１】

【００３９】上記表１において、Ａは発赤、炎症等の刺
激性を示す所見が見られた個体数であり、Ｂは当該群の
全個体数を示す。本皮膚刺激性試験において、プラセボ
群と実施例群に全く差異が認められなかったことから、
本発明のホウセンカ抽出物には、皮膚に対する累積刺激
性がほとんどないことがわかった。

【００４０】抽出例５ 抽出例１で得られた抽出液(26リットル)を約２リットル
まで減圧濃縮した後、酢酸エチル(１リットル)で２回液
−液抽出した。次いで、酢酸エチル抽出液を合わせ、無
水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧下溶媒留去して、酢酸
エチル抽出物(8.6g)を得た。

【００４１】＜2,2'-エチリデンビス(3-ヒドロキシ-1,4
-ナフトキノン)（Ｉ）の製造方法＞ 製造例１ 抽出例５の方法で得られたホウセンカの酢酸エチル抽出
物(10.0g)にクロロホルムを加え、不溶物をろ別した。
次いで、ろ液を減圧濃縮して得られる残渣をシリカゲル
カラムクロマトグラフィー(展開溶媒：クロロホルム)で
２回分離精製した後、酢酸エチルで再結晶して黄色プリ
ズム晶の2,2'-エチリデンビス(3-ヒドロキシ-1,4-ナフ
トキノン)（1.03g)を得た。

【００４２】IR(KBr)cm^-1：3296, 1664, 1637, 1359, 1
344, 1278, 729.¹ H-NMR(CDCl₃)：1.73(3H, d, J=7.5Hz, ＝CHCH ₃ ), 4.83
(1H, q, J=7.5Hz,＝CHCH₃), 7.54-7.83(4H, m, 6,7-H o
f naphthoquinone), 7.96-8.14(4H, m, 5,8-H ofnaphth
oquinone).ここで、「＝C」はアルキリデンの１位の炭
素原子を意味する。 元素分析：C₂₂H₁₄O₆ 計算値 C%=70.59 H%=3.77, 実測値
C%=70.86 H%=3.93 m.p. 196-198℃。

【００４３】製造例２ アルゴン置換下、ローソン(10.0g)及びアセタール(14.2
8g)のジメチルホルムアミド(50mL)溶液を80℃で4.5時間
撹拌した。冷後、反応液に酢酸エチルを加え、希塩酸及
び飽和食塩水の順に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾
燥後、減圧下溶媒留去した。得られた残渣を酢酸エチル
で結晶化し、更に、酢酸エチルで再結晶して、黄色プリ
ズム晶の2,2'-エチリデンビス(3-ヒドロキシ-1,4-ナフ
トキノン)(9.10g)を得た。

【００４４】本製造例で得られた化合物の物性データ(I
R, ¹H-NMR, 元素分析, m.p.)は、ホウセンカから抽出、
単離した製造例１で得られたものと一致した。

【００４５】実験例３(急性毒性試験) １群５匹づつのICRマウス(雄性、５週齢、体重20〜25g)
に、製造例１の2,2'-エチリデンビス(3-ヒドロキシ-1,4
-ナフトキノン）を250mg/kgから1000mg/kgの間の用量で
経口投与した。化合物は0.5％カルボキシメチルセルロ
ースナトリウム水溶液に分散させて用いた。その結果、
LD₅₀値は514mg/kgであった。

【００４６】実験例４(テストステロン５α-リダクター
ゼ阻害活性実験) (酵素液の調製法)ウイスター系雄性ラットより摘出した
前立腺(湿重量15.038g)を小片にし、0.25Ｍ-スクロース
含有0.1Ｍ-ＨＥＰＥＳ緩衝液(以下、「緩衝液」という)
(45mL)を加え、ホモジネートした。次いで、900×gで５
分間遠心分離し、沈渣を緩衝液(27.5mL)に懸濁し、再度
900×gで５分間遠心分離した。この沈渣に緩衝液(11.25
mL)を加えて懸濁し、これを酵素液として使用した。

【００４７】(テストステロン５α-リダクターゼ阻害活
性測定法)各種濃度(10μg/mL〜１mg/mL)に調製した抽出
例５のホウセンカ抽出物又は製造例１の2,2'-エチリデ
ンビス(3-ヒドロキシ-1,4-ナフトキノン)のエタノール
溶液(100μL)及びテストステロンのエタノール溶液(５
μg/mL)(50μL)の混合物を窒素ガスで蒸発乾固した後、
40ｍＭ-リン酸水素ナトリウム緩衝液(488μL)、28ｍＭ-
ジチオトレイトール(20μL)、2.8ｍＭ-β-ＮＡＤＰＨ
(ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸還元型)
(10μL)及び酵素液(50μL)を加え混合し、37℃で30分間
インキュベートした。この混合液にn-ヘキサン(１mL)を
加え10分間振とうした後、3000ｒｐｍで10分間遠心分離
した。次いで、n-ヘキサン層を分取し減圧乾固した後、
トリフルオロ酢酸(100μL)を加え40℃で30分間インキュ
ベートした。続いて、混合液を減圧乾固した残渣に、内
部標準物質としてヘキサクロロベンゼンのn-ヘキサン溶
液(１μg/mL)(100μL)を加え溶解し、試料溶液とした。
一方、ホウセンカ抽出物又は2,2'-エチリデンビス(3-ヒ
ドロキシ-1,4-ナフトキノン)を含まない上記と同様の方
法で得られた溶液をコントロール溶液とした。

【００４８】前記各試料溶液及びコントロール溶液につ
き、ガスクロマトグラフ質量分析計を用いて、テストス
テロン5α-リダクターゼにより還元されたジヒドロテス
トステロン(ＤＨＴ)の量を測定し、次式に従い各試料溶
液のテストステロン5α-リダクターゼ阻害率を算出し
た。

【００４９】

【数１】

【００５０】Ａ：コントロール溶液のＤＨＴピーク面積
／内部標準物質のピーク面積 Ｂ：試料溶液のＤＨＴピーク面積／内部標準物質のピー
ク面積 更に、試料の各濃度における阻害率から、ホウセンカ抽
出物及び2,2'-エチリデンビス(3-ヒドロキシ-1,4-ナフ
トキノン)のテストステロン5α-リダクターゼに対する5
0％阻害濃度(IC₅₀値)を算出した。結果を表２、３に示
す。

【００５１】

【表２】

【００５２】

【表３】

【００５３】上記により、ホウセンカ抽出物及びホウセ
ンカ成分である2,2'-エチリデンビス(3-ヒドロキシ-1,4
-ナフトキノン)にはテストステロン５α−リダクターゼ
阻害活性があることが確認された。なお、比較としてロ
ーソンを用いて同様の試験を行ったところ、IC₅₀値は50
0μg/mL以上であった。

【００５４】実験例５(抗アクネ菌活性試験) ２種類のアクネ菌(Propionibacterium acnes、Prpionib
acterium avidum)に対する抗菌活性を寒天培養法により
試験した。

【００５５】(Propionibacterium acnesに対する抗菌活
性)各種濃度に調製した抽出例１のホウセンカ抽出液、
抽出例５のホウセンカ抽出物及び製造例１の2,2'-エチ
リデンビス(3-ヒドロキシ-1,4-ナフトキノン)のエタノ
ール溶液又は懸濁液(0.2mL)をGAM培地（日水製薬社製）
(9.8mL)に溶解又は均一に懸濁し試験管に流し込み凝固
させた（最終エタノール含量：２％）。各培地にPropio
nibacterium acnesを穿刺接種した後、培地上層にTrypt
ic Soy Broth培地(DIFCO社製)(2mL)を重層した（嫌気培
養）。次いで、30℃で７日間培養した後、各試料の各種
濃度における菌の発育を観察し、その有無から最小発育
阻止濃度(MIC)を測定した。結果を表４に示した。

【００５６】尚、予め、試料の溶媒であるエタノール
(0.2mL)のみを用いた培地でPropionibacterium acnesを
培養したところ、問題なく菌の発育が認められたことか
ら、本試験に対する溶媒の影響はないものとした。

【００５７】(Propionibacterium avidumに対する抗菌
活性)各種濃度に調製した抽出例１のホウセンカ抽出
液、抽出例５のホウセンカ抽出物及び製造例１の2,2'-
エチリデンビス(3-ヒドロキシ-1,4-ナフトキノン)の５
％エタノール溶液又は懸濁液(1mL)を1.5％寒天含有Tryp
tic Soy Broth培地(DIFCO社製)(9mL)に溶解又は均一に
懸濁しシャーレに流し込み凝固させた（最終エタノール
含量：0.5％）後、各培地にPropionibacterium avidum
を接種した。次いで、30℃で３日間培養した後、各試料
の各種濃度における菌の発育を観察し、その有無から最
小発育阻止濃度(MIC)を測定した。

【００５８】尚、予め、試料の溶媒である５％エタノー
ル(1mL)のみを用いた培地でPropionibacterium avidum
を培養したところ、問題なく菌の発育が認められたこと
から、本試験に対する溶媒の影響はないものとした。結
果を表４に示した。

【００５９】

【表４】

【００６０】上記より、ホウセンカ抽出物、特に脂溶性
成分を多く含有する酢酸エチル抽出物に高い抗アクネ菌
活性が認められた。このことから、当該ホウセンカ抽出
物は、前述のテストステロン５α−リダクターゼ阻害作
用により皮脂の分泌を抑制するばかりでなく、アクネ毛
嚢内菌に対する抗菌作用により皮膚炎症等を防ぐ働きを
併せ持つ、優れたアクネ予防・治療用組成物を提供する
ものである。

【００６１】抽出例６ 抽出例１で得られた抽出液(10リットル)に輪切りしたレ
モン果実(0.5kg)を加え、２週間浸出した。次いで、レ
モン果実をろ別し、更に２週間熟成した後、ろ過してレ
モン／ホウセンカ抽出液(9.8リットル)を得た。

【００６２】抽出例７ 裁断した乾燥ホウセンカの全草(地上部)(160ｇ)をメタ
ノール(１リットル)にて２回60℃で５時間加熱抽出し
た。冷後、全草をろ別し減圧下溶媒留去して、抽出物(1
8.9ｇ)を得た。

【００６３】抽出例８ 裁断した乾燥ホウセンカの全草(地上部)(160ｇ)を酢酸
エチル(１リットル)にて２回60℃で５時間加熱抽出し
た。冷後、全草をろ別し減圧下溶媒留去して、抽出物
(6.4ｇ)を得た。

【００６４】 実施例１(ヘアローション１−１〜１−３) Ａ 抽出例１の抽出液 31.5mL Ｂ 無水エタノール 12.0mL Ｃ 精製水 適 量 Ａ及びＢを混合した後全量が100mLになるようにＣを加
え、均一に混合攪拌してヘアローション（１−１）とし
た。

【００６５】 Ａ 製造例１の化合物 5.0mg Ｂ 無水エタノール 20.0mL Ｃ 精製水 適 量 ＡをＢに溶解した後全量が100mLになるようにＣを加
え、均一に混合攪拌してヘアローション（１−２）とし
た。

【００６６】 Ａ 抽出例１の抽出液 31.5mL Ｂ 製造例１の化合物 1.5mg Ｃ 無水エタノール 12.0mL Ｄ 精製水 適 量 ＢをＣに溶解し、Ａを加えた後全量が100mLになるよう
にＤを加え、均一に混合攪拌してヘアローション（１−
３）とした。

【００６７】 実施例２(ヘアローション２) Ａ 抽出例６の抽出液 31.5mL Ｂ グリチルリチン酸ジカリウム 0.2g センブリエキス 3.0mL ニンジンエキス 3.0mL Ｃ 精製水 10.0mL Ｄ 天然ビタミンＥ 0.1mg ヒノキチオール 0.1mg ショウキョウチンキ 1.0mg フェノキシエタノール 0.2g パラオキシ安息香酸メチル 0.1g Ｅ 無水エタノール 12.0mL Ｆ 精製水 適 量 Ｂの各成分をＣに溶解し、Ａと均一に混合した。次い
で、Ｄの各成分をＥに溶解した溶液を先に調製したＡ、
Ｂ、Ｃの混合液に加え、更に、全量が100mLになるよう
にＦを加えた後、均一に混合攪拌してヘアローションと
した。

【００６８】 実施例３(ヘアシャンプー) Ａ 抽出例１の抽出液 28.0mL Ｂ 25V/V％エタノール 12.0mL Ｃ ニッサンアノン5010〔日本油脂（株）製〕 360.0mL Ａ、Ｂ、Ｃをそれぞれ均一に混合攪拌して、ヘアシャン
プーとした。

【００６９】 実施例４(育毛用補助食品) Ａ 抽出例１の抽出液 0.75リットル Ｂ 朝鮮ニンジン軟エキス 15.0g 霊芝軟エキス 30.0g ショウガ軟エキス 3.0g Ｃ カンゾウエキス末 9.0g ＤＮＡ末 15.0g 根昆布末 150.0g コーンスターチ 3.0kg 乳糖 1.2kg Ｄ 95V/V％エタノール 1.0リットル Ｃの各成分を均一に混合した後、Ｄを加え予備混合し
た。次いで、均一に混合溶解したＡ及びＢの各成分を加
え更に混合した後、造粒乾燥(１m/m)して、顆粒剤の育
毛用補助食品とした。

【００７０】上記実施例１、３で得られたヘアローショ
ン及びヘアシャンプーを用いて下記の方法で育毛試験を
行った。

【００７１】＜育毛試験＞被験者95名(うち女性９名)
に、実施例１のヘアローション（１−１）(３ヶ月分：1
00mL×６本)及び実施例３のヘアシャンプー(３ヶ月分：
400mL×３本)両者を３ヶ月間継続使用させた。３ヶ月経
過後、まず、「効果あり」、「効果なし」、「効果の有無が
不明」の３段階で評価させ、更に「効果あり」と答えた
被験者には、その効果の内容及び発現時期についての回
答を得た。結果を表５〜７に示す。

【００７２】

【表５】

【００７３】下記表６は、上記表５の評価実験で「効果
があった」と答えた人（有効群）の具体的な効果の内容
を示すものである。

【００７４】

【表６】

【００７５】下記表７は、前記表５の評価実験で「効果
があった」と答えた人（有効群）の育毛用組成物の使用
開始から効果発現までにかかった期間を示すものであ
る。

【００７６】

【表７】

【００７７】尚、本試験終了時、すなわち３ヶ月間連続
使用後において、いずれの被験者も皮膚刺激等の異状は
全く認められなかった。

【００７８】 実施例５(スキンローション) 重量％ Ａ 抽出例６の抽出液 5.0％ エタノール 10.0％ パラオキシ安息香酸メチル 0.1％ Ｂ グリセリン 3.0％ 1,3-ブチレングリコール 2.0％ 精製水 適 量 100.0％ 上記処方に従い、Ａの成分を均一に溶解した後、Ｂの成
分溶液に徐々に加え均一に混合溶解してスキンローショ
ンとした。

【００７９】 実施例６(スキンクリーム) 重量％ Ａ 抽出例６の抽出液 5.0％ サラシミツロウ 5.0％ モノステアリン酸グリセリン 3.5％ ベヘニルアルコール65 3.0％ スクワレン 6.0％ パラオキシ安息香酸メチル 0.1％ パラオキシ安息香酸プロピル 0.1％ Ｂ グリセリン 10.0％ 精製水 適 量 100.0％ 上記処方に従い、Ａ、Ｂ各成分をそれぞれ約80℃に加温
し、撹拌下ＢにＡを徐々に加え均一に混合した後、冷却
してスキンクリームとした。

【００８０】 実施例７(乳液) 重量％ Ａ 抽出例６の抽出液 5.0％ モノステアリン酸グリセリン 2.0％ ベヘニルアルコール65 2.0％ 吸着精製ラノリン 1.0％ スクワレン 5.0％ パラオキシ安息香酸メチル 0.1％ パラオキシ安息香酸プロピル 0.1％ Ｂ ポリエチレングリコール 2.0％ グリセリン 10.0％ 精製水 適 量 100.0％ 上記処方に従い、Ａ、Ｂ各成分をそれぞれ約80℃に加温
し、撹拌下ＢにＡを徐々に加え均一に混合した後、冷却
して乳液とした。

【００８１】 実施例８(軟膏１) 重量％ Ａ 抽出例４の抽出物 2.0％ Ｂ ポリエチレングリコール400 15.0％ Ｃ マクロゴール軟膏 83.0％ 100.0％ 上記処方に従い、Ａ成分をＢに均一に分散させた後、Ｃ
を加え混合して軟膏とした。

【００８２】 実施例９(軟膏２) 重量％ Ａ 製造例１の化合物 0.5％ Ｂ ポリエチレングリコール400 15.0％ Ｃ マクロゴール軟膏 84.5％ 100.0％ 上記処方に従い、Ａ成分をＢに均一に分散させた後、Ｃ
を加え混合して軟膏とした。

【００８３】 実施例10(錠剤) 製造例１の化合物 5 mg 乳糖 73 mg トウモロコシデンプン 20 mg ヒドロキシプロピルセルロース 1 mg ステアリン酸 マグネシウム 1 mg 100 mg １錠が上記割合になるように各成分を均一に混合した
後、打錠して錠剤とした。

【００８４】 実施例11(カプセル１) 製造例１の化合物 10 mg 乳糖 188 mg ステアリン酸 マグネシウム 2 mg 200 mg １カプセルが上記割合になるように各成分を均一に混合
した後、カプセルに充填した。

【００８５】 実施例12(カプセル２) 抽出例４の抽出物 50 mg 乳糖 148 mg ステアリン酸 マグネシウム 2 mg 200 mg １カプセルが上記割合になるように各成分を均一に混合
した後、カプセルに充填した。

【００８６】

【発明の効果】本発明のホウセンカ抽出物及び式（Ｉ）
で表されるビスナフトキノン誘導体は、安全性が高くホ
ルモン様作用のない優れたテストステロン５α−リダク
ターゼ阻害作用を有していることから、当該抽出物又は
当該物質を有効成分として配合した組成物は、男性型脱
毛症、アクネ、前立腺肥大症等のＤＨＴの異常産生に起
因する疾患の予防及び治療に有効である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｐ 29/00 Ａ６１Ｐ 29/00 (56)参考文献 特開2002−12542（ＪＰ，Ａ) 特開 平10−330310（ＪＰ，Ａ) 特開 平９−59133（ＪＰ，Ａ) Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ. 39，Ｎｏ．13，ｐｐ．2472−2481，1996 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) A61K 35/78 A61K 7/06 A61K 31/12 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)

Claims (7)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ホウセンカ抽出物を有効成分として含有
   するテストステロン５α−リダクターゼ阻害剤。
2. 【請求項２】 ホウセンカ抽出物が、含水低級アルコー
   ル、親水性有機溶剤、疎水性有機溶剤の中から選ばれる
   １種以上を抽出溶媒として得られたものである請求項１
   記載のテストステロン５α−リダクターゼ阻害剤。
3. 【請求項３】 抽出溶媒が、含水メタノール、含水エタ
   ノール、メタノール、エタノール、ブタノール、アセト
   ン、酢酸エチル、クロロホルムの中から選ばれる１種以
   上である請求項１又は２項記載のテストステロン５α−
   リダクターゼ阻害剤。
4. 【請求項４】 ホウセンカから抽出、単離された下記式
   （Ｉ）で表されるビスナフトキノン誘導体を有効成分と
   して含有するテストステロン５α−リダクターゼ阻害
   剤。 【化１】
5. 【請求項５】 下記式（Ｉ）で表されるビスナフトキノ
   ン誘導体を有効量で含有するホウセンカ抽出物を有効成
   分として含有するテストステロン５α−リダクターゼ阻
   害剤。 【化２】
6. 【請求項６】 請求項１ないし５の何れか１項記載のテ
   ストステロン５α−リダクターゼ阻害剤を有効成分とし
   て含有する育毛用組成物。
7. 【請求項７】 請求項１ないし５の何れか１項記載のテ
   ストステロン５α−リダクターゼ阻害剤を有効成分とし
   て含有するアクネ用組成物。