JP3117823B2 - コラーゲン代謝賦活剤 - Google Patents
コラーゲン代謝賦活剤Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はコラゲナーゼ産生促進物
質とコラーゲン合成促進物質を含有することを特徴とす
るコラーゲン代謝賦活剤に関わり、更に詳しくは、コラ
ーゲンの分解を亢進させるとともに、コラーゲンの合成
を刺激することによって、コラーゲンの代謝回転を高め
ることの出来るコラーゲン代謝賦活剤に関する。
質とコラーゲン合成促進物質を含有することを特徴とす
るコラーゲン代謝賦活剤に関わり、更に詳しくは、コラ
ーゲンの分解を亢進させるとともに、コラーゲンの合成
を刺激することによって、コラーゲンの代謝回転を高め
ることの出来るコラーゲン代謝賦活剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】通常の蛋白質の代謝回転に比べ、コラー
ゲンの代謝回転は非常に遅く、生理的条件に於いても、
老化に伴ってコラーゲンの代謝回転がさらに低下してゆ
くことが知られている。コラーゲンの代謝回転はコラー
ゲンの分解速度と合成速度により決まるが、この様な老
化に伴う代謝回転の低下はコラーゲンの架橋構造（老化
架橋）の増加につながり、例えば、皮膚の硬化やしわの
形成に関わっている。難分解・難抽出性の固いコラーゲ
ンが増加することにより、細胞の足場として増殖・分化
・移動に関与するコラーゲンの機能が損なわれ、細胞活
性の低下を来し、さらにコラーゲンの代謝回転が低下す
るという悪循環に陥ると考えられている（現代化学、12
月号、36頁、1990年参照）。
ゲンの代謝回転は非常に遅く、生理的条件に於いても、
老化に伴ってコラーゲンの代謝回転がさらに低下してゆ
くことが知られている。コラーゲンの代謝回転はコラー
ゲンの分解速度と合成速度により決まるが、この様な老
化に伴う代謝回転の低下はコラーゲンの架橋構造（老化
架橋）の増加につながり、例えば、皮膚の硬化やしわの
形成に関わっている。難分解・難抽出性の固いコラーゲ
ンが増加することにより、細胞の足場として増殖・分化
・移動に関与するコラーゲンの機能が損なわれ、細胞活
性の低下を来し、さらにコラーゲンの代謝回転が低下す
るという悪循環に陥ると考えられている（現代化学、12
月号、36頁、1990年参照）。
【０００３】この様な老化に伴うコラーゲン代謝回転の
低下を食い止めるためには、コラーゲン分解の律速酵素
であるコラゲナーゼを増強してコラーゲンの分解を促す
ことにより老化架橋の形成を阻止することと、コラーゲ
ンの合成速度を高めてやることによりコラーゲンの代謝
を促進することが考えられる。
低下を食い止めるためには、コラーゲン分解の律速酵素
であるコラゲナーゼを増強してコラーゲンの分解を促す
ことにより老化架橋の形成を阻止することと、コラーゲ
ンの合成速度を高めてやることによりコラーゲンの代謝
を促進することが考えられる。
【０００４】コラゲナーゼは、結合組織中の間質型コラ
ーゲン（Ｉ型、ＩＩ型、およびＩＩＩ型コラーゲン）を
分解する際の律速酵素であり、コラーゲンの代謝に重要
な役割を果たしている。コラゲナーゼは、前駆体である
プロコラゲナーゼとして細胞より分泌され、生体内では
その後プラスミンやストロムライシン等のタンパク分解
酵素によってコラゲナーゼに活性化される(Biochemical
Journal、166 巻、21頁、1977年および Proceedings o
f the National Academy of Sciences of theU.S.A.、8
6巻、2632頁、1989年参照）と考えられているが、プロ
コラゲナーゼは一般的に得ることが困難で、充分に研究
が進んでいるとは言えず、その産生制御や活性化機構等
まだ未知の点が多い。
ーゲン（Ｉ型、ＩＩ型、およびＩＩＩ型コラーゲン）を
分解する際の律速酵素であり、コラーゲンの代謝に重要
な役割を果たしている。コラゲナーゼは、前駆体である
プロコラゲナーゼとして細胞より分泌され、生体内では
その後プラスミンやストロムライシン等のタンパク分解
酵素によってコラゲナーゼに活性化される(Biochemical
Journal、166 巻、21頁、1977年および Proceedings o
f the National Academy of Sciences of theU.S.A.、8
6巻、2632頁、1989年参照）と考えられているが、プロ
コラゲナーゼは一般的に得ることが困難で、充分に研究
が進んでいるとは言えず、その産生制御や活性化機構等
まだ未知の点が多い。
【０００５】プロコラゲナーゼの産生を促進する物質に
ついては、既に本発明者らにより、例えば、エタノール
アミン誘導体（特願平２−９７０７１号、特願平２−１
２７３９０号および特願平２−２１２９３１号）、セリ
ン誘導体（特願平２−９９５７９号および特願平２−１
８６７６３号）、絹部分水解物（特願平３−５９７５２
号）などの低分子物質が見出されており、他にもペント
キシフィリンなどの物質が報告されている。
ついては、既に本発明者らにより、例えば、エタノール
アミン誘導体（特願平２−９７０７１号、特願平２−１
２７３９０号および特願平２−２１２９３１号）、セリ
ン誘導体（特願平２−９９５７９号および特願平２−１
８６７６３号）、絹部分水解物（特願平３−５９７５２
号）などの低分子物質が見出されており、他にもペント
キシフィリンなどの物質が報告されている。
【０００６】一方、コラーゲン，特に結合組織内で主た
るコラーゲンであるＩ型コラーゲンの合成あるいは分泌
の亢進は、線維芽細胞を用いた実験により、ＴＧＦ−
β、アスコルビン酸およびその誘導体、エストロジェ
ン、テストステロンおよびインシュリンなどで達成でき
ることが知られている（細胞外マトリクスのバイオサイ
エンスとバイオテクノロジー、165 頁、株式会社アイピ
ーシー、1990年参照）。
るコラーゲンであるＩ型コラーゲンの合成あるいは分泌
の亢進は、線維芽細胞を用いた実験により、ＴＧＦ−
β、アスコルビン酸およびその誘導体、エストロジェ
ン、テストステロンおよびインシュリンなどで達成でき
ることが知られている（細胞外マトリクスのバイオサイ
エンスとバイオテクノロジー、165 頁、株式会社アイピ
ーシー、1990年参照）。
【０００７】ところで、例えばＴＧＦ−βやエストロジ
ェンの場合は、コラーゲンの合成を促進し、しかもコラ
ゲナーゼの分泌を抑制する為、コラーゲンの代謝賦活と
いうよりはむしろコラーゲンの蓄積を促進する物質であ
る。また、インターロイキン−１は、コラゲナーゼの分
泌を促進すると同時に、コラーゲンの合成を抑制する
為、この場合、コラーゲンの代謝賦活というよりはむし
ろコラーゲンの一方的な減少を促すと考えられる。ま
た、グルココルチコイドやレチノイン酸は、コラーゲン
とコラゲナーゼの分泌をともに抑制する物質である（細
胞マトリクスのバイオサイエンスとバイオテクノロジ
ー，１６５頁，株式会社アイピーシー，１９９０年参
照）。
ェンの場合は、コラーゲンの合成を促進し、しかもコラ
ゲナーゼの分泌を抑制する為、コラーゲンの代謝賦活と
いうよりはむしろコラーゲンの蓄積を促進する物質であ
る。また、インターロイキン−１は、コラゲナーゼの分
泌を促進すると同時に、コラーゲンの合成を抑制する
為、この場合、コラーゲンの代謝賦活というよりはむし
ろコラーゲンの一方的な減少を促すと考えられる。ま
た、グルココルチコイドやレチノイン酸は、コラーゲン
とコラゲナーゼの分泌をともに抑制する物質である（細
胞マトリクスのバイオサイエンスとバイオテクノロジ
ー，１６５頁，株式会社アイピーシー，１９９０年参
照）。
【０００８】つまり、これまで、コラーゲンの合成又は
分解の一方のみを促す物質，コラーゲンの合成を促進し
かつ分解をも抑制する物質，逆にコラーゲンの分解を促
進しかつ合成をも抑制する物質，あるいはコラーゲンと
コラゲナーゼを同時に抑制する物質（コラーゲン代謝を
抑制するもの）は知られていたが、本発明の如くコラー
ゲンの合成と分解と言う相反する作用を同時に促し、よ
り積極的にコラーゲンの代謝を促進しようとする試み
は、全くされていなかった。
分解の一方のみを促す物質，コラーゲンの合成を促進し
かつ分解をも抑制する物質，逆にコラーゲンの分解を促
進しかつ合成をも抑制する物質，あるいはコラーゲンと
コラゲナーゼを同時に抑制する物質（コラーゲン代謝を
抑制するもの）は知られていたが、本発明の如くコラー
ゲンの合成と分解と言う相反する作用を同時に促し、よ
り積極的にコラーゲンの代謝を促進しようとする試み
は、全くされていなかった。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的
とするところは、コラーゲンの合成と分解を同時に促す
ことのできるコラーゲン代謝賦活剤を提供するにある。
とするところは、コラーゲンの合成と分解を同時に促す
ことのできるコラーゲン代謝賦活剤を提供するにある。
【００１０】
【課題を解決するための手段】上述の目的は、Ｎ−メチ
ルエタノールアミン、ペントキシフィリン、硫酸ナトリ
ウム及びＮ−メチルセリンからなる群から選択されるコ
ラゲナーゼ産生促進物質と、アスコルビン酸またはその
リン酸塩もしくは硫酸塩からなる群から選ばれるコラー
ゲン合成促進物質を含有することを特徴とするコラーゲ
ン代謝賦活剤により達成される。
ルエタノールアミン、ペントキシフィリン、硫酸ナトリ
ウム及びＮ−メチルセリンからなる群から選択されるコ
ラゲナーゼ産生促進物質と、アスコルビン酸またはその
リン酸塩もしくは硫酸塩からなる群から選ばれるコラー
ゲン合成促進物質を含有することを特徴とするコラーゲ
ン代謝賦活剤により達成される。
【００１１】本発明に用いられるコラゲナーゼ産生促進
物質は、Ｎ−メチルエタノールアミン、ペントキシフィ
リン、硫酸ナトリウム及びＮ−メチルセリンである。こ
れらは、低分子であるため、皮膚浸透性が高い。
物質は、Ｎ−メチルエタノールアミン、ペントキシフィ
リン、硫酸ナトリウム及びＮ−メチルセリンである。こ
れらは、低分子であるため、皮膚浸透性が高い。
【００１２】本発明に用いられるコラーゲン合成促進物
質は、アスコルビン酸またはそのリン酸塩もしくは硫酸
塩である。アスコルビン酸またはそのリン酸塩もしくは
硫酸塩は老化予防化粧料として皮膚に適用するときは、
皮膚線維芽細胞の存在する真皮層（結合組織）への作用
が大きいため望ましい。
質は、アスコルビン酸またはそのリン酸塩もしくは硫酸
塩である。アスコルビン酸またはそのリン酸塩もしくは
硫酸塩は老化予防化粧料として皮膚に適用するときは、
皮膚線維芽細胞の存在する真皮層（結合組織）への作用
が大きいため望ましい。
【００１３】アスコルビン酸およびその誘導体として
は、アスコルビン酸とその塩、アスコルビン酸りん酸エ
ステルおよび硫酸エステルとその塩、ステアリン酸エス
テル、ジパルミチン酸エステルおよびモノパルミチン酸
エステルなどを用いることができる。
は、アスコルビン酸とその塩、アスコルビン酸りん酸エ
ステルおよび硫酸エステルとその塩、ステアリン酸エス
テル、ジパルミチン酸エステルおよびモノパルミチン酸
エステルなどを用いることができる。
【００１４】本発明のコラーゲン代謝賦活剤を、その使
用目的に応じて、通常用いられる公知の成分に配合する
ことによって、液剤，固形剤，半固形剤等の各種剤形に
調製することが可能で、好ましい組成物として軟膏、ゲ
ル、クリーム、スプレー剤、貼付剤、ローション等が挙
げられる。
用目的に応じて、通常用いられる公知の成分に配合する
ことによって、液剤，固形剤，半固形剤等の各種剤形に
調製することが可能で、好ましい組成物として軟膏、ゲ
ル、クリーム、スプレー剤、貼付剤、ローション等が挙
げられる。
【００１５】その例として、本発明のコラーゲン代謝賦
活剤を、ワセリン等の炭化水素、ステアリルアルコール
等の高級アルコール、ミリスチン酸イソプロピル等の高
級脂肪酸低級アルキルエステル、ラノリン等の動物性油
脂、グリセリン等の多価アルコール、グリセリン脂肪酸
エステル、モノステアリン酸ポリエチレングリコール等
の界面活性剤、無機塩、蝋、樹脂、水および要すればパ
ラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸ブチル等
の防腐剤に混合することによって、化粧品や医薬品を製
造することができる。
活剤を、ワセリン等の炭化水素、ステアリルアルコール
等の高級アルコール、ミリスチン酸イソプロピル等の高
級脂肪酸低級アルキルエステル、ラノリン等の動物性油
脂、グリセリン等の多価アルコール、グリセリン脂肪酸
エステル、モノステアリン酸ポリエチレングリコール等
の界面活性剤、無機塩、蝋、樹脂、水および要すればパ
ラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸ブチル等
の防腐剤に混合することによって、化粧品や医薬品を製
造することができる。
【００１６】その際のコラーゲン代謝賦活剤の添加量
は、剤形により異なるが、コラゲナーゼ産生促進物質と
しての添加量が、エタノールアミン誘導体を用いる場合
は、適用する組成物全量を基準として好ましくは０．０
１〜１０重量％、更に好ましくは０．１〜５重量％、ペ
ントキシフィリンの場合は好ましくは０．０１〜５重量
％、更に好ましくは０．１〜２重量％、硫酸塩を用いる
場合は、好ましくは０．０１〜２重量％、更に好ましく
は０．０３〜１．２重量％、セリン誘導体を用いる場合
は、好ましくは０．０１〜１０重量％、更に好ましくは
０．１〜５重量％である。
は、剤形により異なるが、コラゲナーゼ産生促進物質と
しての添加量が、エタノールアミン誘導体を用いる場合
は、適用する組成物全量を基準として好ましくは０．０
１〜１０重量％、更に好ましくは０．１〜５重量％、ペ
ントキシフィリンの場合は好ましくは０．０１〜５重量
％、更に好ましくは０．１〜２重量％、硫酸塩を用いる
場合は、好ましくは０．０１〜２重量％、更に好ましく
は０．０３〜１．２重量％、セリン誘導体を用いる場合
は、好ましくは０．０１〜１０重量％、更に好ましくは
０．１〜５重量％である。
【００１７】コラーゲン合成促進物質としての添加量
は、アスコルビン酸およびその誘導体の場合は、適用す
る組成物全量を基準として好ましくは０. ０１〜１０重
量％、更に好ましくは０. １〜３重量％である。
は、アスコルビン酸およびその誘導体の場合は、適用す
る組成物全量を基準として好ましくは０. ０１〜１０重
量％、更に好ましくは０. １〜３重量％である。
【００１８】
【発明の効果】本発明のコラーゲン代謝賦活剤をヒト皮
膚線維芽細胞の培養系に添加すると、プロコラゲナーゼ
の産生が促進されると共に、同時にコラーゲン産生量を
増加させることができる（後記試験例参照）。従って、
本発明のコラーゲン代謝賦活剤は、線維芽細胞に作用
し、コラゲナーゼ活性を増強することにより低下したコ
ラーゲンの分解を促すとともに、コラーゲンの合成・分
泌を亢進して、コラーゲンの代謝回転を高めることがで
きる。
膚線維芽細胞の培養系に添加すると、プロコラゲナーゼ
の産生が促進されると共に、同時にコラーゲン産生量を
増加させることができる（後記試験例参照）。従って、
本発明のコラーゲン代謝賦活剤は、線維芽細胞に作用
し、コラゲナーゼ活性を増強することにより低下したコ
ラーゲンの分解を促すとともに、コラーゲンの合成・分
泌を亢進して、コラーゲンの代謝回転を高めることがで
きる。
【００１９】
【実施例】以下、実施例により本発明を更に詳細に説明
するが、それに先立って、本発明のコラーゲン代謝賦活
剤の、コラーゲン分解能（プロコラゲナーゼ産生能）、
及びコラーゲン合成能の試験方法を記載する。
するが、それに先立って、本発明のコラーゲン代謝賦活
剤の、コラーゲン分解能（プロコラゲナーゼ産生能）、
及びコラーゲン合成能の試験方法を記載する。
【００２０】（コラーゲン代謝賦活能測定試験方法）正
常ヒト線維芽細胞株〔白人女性の皮膚より採取されたDe
troit-551 (ATCC CCL 110)〕を１０容量％ウシ胎仔血清
（以下ＦＢＳと略記）を含むＭＥＭ培地にて１ｘ１０5
個／ｍｌに調整し、２枚の２４穴プレートにそれぞれ
０. ４ｍｌずつ播種（４ｘ１０4 個／穴）して、５％炭
酸ガス、飽和水蒸気下、３７℃で培養した。
常ヒト線維芽細胞株〔白人女性の皮膚より採取されたDe
troit-551 (ATCC CCL 110)〕を１０容量％ウシ胎仔血清
（以下ＦＢＳと略記）を含むＭＥＭ培地にて１ｘ１０5
個／ｍｌに調整し、２枚の２４穴プレートにそれぞれ
０. ４ｍｌずつ播種（４ｘ１０4 個／穴）して、５％炭
酸ガス、飽和水蒸気下、３７℃で培養した。
【００２１】尚、ＭＥＭ培地は、大日本製薬社製最少必
須培地１０−１０１に、それぞれ終濃度０. １重量％ラ
クトアルブミン酵素水解物（シグマ社製）、１容量％非
必須アミノ酸、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（以上いず
れも大日本製薬社製）、０.１２重量％炭酸水素ナトリ
ウムおよび５０ｍｇ／ｌストレプトマイシンを添加して
調製した。
須培地１０−１０１に、それぞれ終濃度０. １重量％ラ
クトアルブミン酵素水解物（シグマ社製）、１容量％非
必須アミノ酸、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（以上いず
れも大日本製薬社製）、０.１２重量％炭酸水素ナトリ
ウムおよび５０ｍｇ／ｌストレプトマイシンを添加して
調製した。
【００２２】２４時間後培養液を吸引除去し、終濃度
０．６容量％ＦＢＳを添加したＭＥＭ培地で細胞を２回
洗浄した後、ポアーサイズが０．２μｍのニトロセルロ
ース膜（アドバンテック東洋社製、DISMIC-25 ）で濾過
滅菌した本発明のコラーゲン代謝賦活剤を終濃度５容量
％添加した同培地に交換した。
０．６容量％ＦＢＳを添加したＭＥＭ培地で細胞を２回
洗浄した後、ポアーサイズが０．２μｍのニトロセルロ
ース膜（アドバンテック東洋社製、DISMIC-25 ）で濾過
滅菌した本発明のコラーゲン代謝賦活剤を終濃度５容量
％添加した同培地に交換した。
【００２３】なお、同プレートを２枚作製して、１枚は
コラーゲン産生量の測定に、残りの１枚はプロコラゲナ
ーゼ産生量の測定に用いた。
コラーゲン産生量の測定に、残りの１枚はプロコラゲナ
ーゼ産生量の測定に用いた。
【００２４】２日間同様に培養後、１枚のプレートより
培養上清を得、プロコラゲナーゼ産生量の測定に用い
た。他の１枚には、β−アミノプロピオニトリルを終濃
度５０μｇ／ｍｌ、トリチウム−Ｌ−プロリンを最終１
μＣｉ／ｍｌ添加して、さらに２４時間培養した。
培養上清を得、プロコラゲナーゼ産生量の測定に用い
た。他の１枚には、β−アミノプロピオニトリルを終濃
度５０μｇ／ｍｌ、トリチウム−Ｌ−プロリンを最終１
μＣｉ／ｍｌ添加して、さらに２４時間培養した。
【００２５】本発明に於いて用いられる、Ｎ−メチルエ
タノールアミンのプロコラゲナーゼ産生促進活性を調べ
るのに先立って、培養上清中にプロコラゲナーゼと同時
に産生されている、コラゲナーゼインヒビター（蛋白
質）の除去を行う。
タノールアミンのプロコラゲナーゼ産生促進活性を調べ
るのに先立って、培養上清中にプロコラゲナーゼと同時
に産生されている、コラゲナーゼインヒビター（蛋白
質）の除去を行う。
【００２６】コラゲナーゼインヒビターの除去： 得ら
れた培養上清２５０μｌに１０ｍＭトリス塩酸緩衝液
〔４℃でｐＨ７.８に調整、１ｍＭ塩化カルシウム、0.
０５容量％Brij-35(ＩＣＩ社製ポリオキシエチレン(23)
ラウリルエーテル）を含む〕を1.７５ｍｌ加え、同緩衝
液で平衡化した CM-セファロースCL-6B TM（ファルマシ
ア社製、ベッド容量0.５ｍｌ）に供した。
れた培養上清２５０μｌに１０ｍＭトリス塩酸緩衝液
〔４℃でｐＨ７.８に調整、１ｍＭ塩化カルシウム、0.
０５容量％Brij-35(ＩＣＩ社製ポリオキシエチレン(23)
ラウリルエーテル）を含む〕を1.７５ｍｌ加え、同緩衝
液で平衡化した CM-セファロースCL-6B TM（ファルマシ
ア社製、ベッド容量0.５ｍｌ）に供した。
【００２７】次に、１２５ｍＭ食塩を含む同緩衝液0.５
ｍｌにてインヒビターを除去（計４回、総量２ｍｌ）
し、５００ｍＭ食塩を含む同緩衝液0.５ｍｌにてプロコ
ラゲナーゼを回収（計４回、総量２ｍｌ）した。
ｍｌにてインヒビターを除去（計４回、総量２ｍｌ）
し、５００ｍＭ食塩を含む同緩衝液0.５ｍｌにてプロコ
ラゲナーゼを回収（計４回、総量２ｍｌ）した。
【００２８】プロコラゲナーゼ産生量の定量： 本実験
で用いた細胞では、産生されるコラゲナーゼはそのまま
では活性をもたないプロコラゲナーゼとして回収される
ので、プロコラゲナーゼ産生量は、トリプシンで活性化
して得られるコラゲナーゼ活性として定量した。トリプ
シンによる活性化法、およびフルオレッセインイソチオ
シアネートで標識されたＩ型コラーゲン（コスモバイオ
社製）を基質としたコラゲナーゼ活性の測定法は、永井
らの方法（Japanese Journal of Inflamation、4巻、12
3 頁、1984年参照）に準じた。
で用いた細胞では、産生されるコラゲナーゼはそのまま
では活性をもたないプロコラゲナーゼとして回収される
ので、プロコラゲナーゼ産生量は、トリプシンで活性化
して得られるコラゲナーゼ活性として定量した。トリプ
シンによる活性化法、およびフルオレッセインイソチオ
シアネートで標識されたＩ型コラーゲン（コスモバイオ
社製）を基質としたコラゲナーゼ活性の測定法は、永井
らの方法（Japanese Journal of Inflamation、4巻、12
3 頁、1984年参照）に準じた。
【００２９】なお１単位は、３５℃で１分間に１μｇの
Ｉ型コラーゲンを分解する酵素量を示す。
Ｉ型コラーゲンを分解する酵素量を示す。
【００３０】コラーゲン産生量の定量：コラーゲンの産
生量はβ−アミノプロピオニトリルを終濃度５０μｇ／
ｍｌ，トリチウム−Ｌ−プロリンを最終１μＣｉ／ｍｌ
添加して、更に２４時間培養した培養液より、ペプシン
に耐性かつ食塩濃度依存的溶解度によって分画されたコ
ラーゲン画分に取り込まれた放射活性で測定した。ペプ
シン処理及び食塩濃度によるコラーゲンの分画法は、Ｗ
ｅｂｓｔｅｒらの方法（Analytical Biochemistry ，２
２０頁，１９７９年参照）に準じた。
生量はβ−アミノプロピオニトリルを終濃度５０μｇ／
ｍｌ，トリチウム−Ｌ−プロリンを最終１μＣｉ／ｍｌ
添加して、更に２４時間培養した培養液より、ペプシン
に耐性かつ食塩濃度依存的溶解度によって分画されたコ
ラーゲン画分に取り込まれた放射活性で測定した。ペプ
シン処理及び食塩濃度によるコラーゲンの分画法は、Ｗ
ｅｂｓｔｅｒらの方法（Analytical Biochemistry ，２
２０頁，１９７９年参照）に準じた。
【００３１】実施例１、比較例１〜３ Ｎ−メチルエタノールアミン１００ｍＭ溶液に、アスコ
ルビン酸硫酸エステル２ナトリウム塩と水を加え終濃度
としてＮ−メチルエタノールアミン２０ｍＭ、アスコル
ビン酸硫酸エステル２ナトリウム塩４．０ｍｇ／ｍｌと
したコラーゲン代謝賦活剤を得た（実施例１）。また、
比較例として培地のみの群（比較例１）およびＮ−メチ
ルエタノールアミンのみの群（比較例２）アスコルビン
酸硫酸エステル２ナトリウム塩のみの群（比較例３）を
設けた。これらについて前述の試験を行った結果を表１
に示す。
ルビン酸硫酸エステル２ナトリウム塩と水を加え終濃度
としてＮ−メチルエタノールアミン２０ｍＭ、アスコル
ビン酸硫酸エステル２ナトリウム塩４．０ｍｇ／ｍｌと
したコラーゲン代謝賦活剤を得た（実施例１）。また、
比較例として培地のみの群（比較例１）およびＮ−メチ
ルエタノールアミンのみの群（比較例２）アスコルビン
酸硫酸エステル２ナトリウム塩のみの群（比較例３）を
設けた。これらについて前述の試験を行った結果を表１
に示す。
【００３２】
【表１】 平均値 ± ＳＤ（ｎ＝３） ＊培養時の終濃度として表示： Ｎ−メチルエタノールアミン；ｍＭ Asc-S ；アスコルビン酸硫酸エステル２ナトリウム塩 μｇ／ｍｌ
【００３３】表１からわかるように、Ｎ−メチルエタノ
ールアミンには強いコラゲナーゼ産生促進活性があり、
また、アスコルビン酸誘導体を組み合わせることによっ
て互いの作用を相殺することなく、コラーゲンの合成と
分解の両方を促進することができる。
ールアミンには強いコラゲナーゼ産生促進活性があり、
また、アスコルビン酸誘導体を組み合わせることによっ
て互いの作用を相殺することなく、コラーゲンの合成と
分解の両方を促進することができる。
【００３４】実施例２〜３、比較例４ コラゲナーゼ産生促進物質として、Ｎ−メチルエタノー
ルアミンの代わりにペントキシフィリンを、およびコラ
ーゲン産生促進物質としてアスコルビン酸硫酸エステル
の代わりにアスコルビン酸リン酸エステルを用いる以外
は実施例１と同様にして行い、その結果を表２に示し
た。
ルアミンの代わりにペントキシフィリンを、およびコラ
ーゲン産生促進物質としてアスコルビン酸硫酸エステル
の代わりにアスコルビン酸リン酸エステルを用いる以外
は実施例１と同様にして行い、その結果を表２に示し
た。
【００３５】
【表２】 平均値 ± ＳＤ（ｎ＝４） ＊培養時の終濃度として表示： ペントキシフィリン）；μM Asc-P ；アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩
（２０〜２９重量％の水分を含有），μｇ／ｍｌ
（２０〜２９重量％の水分を含有），μｇ／ｍｌ
【００３６】表２からわかるように、ペントキシフィリ
ンとアスコルビン酸誘導体を組み合わせることによっ
て、コラーゲンの合成と分解の両方を促進することがで
きる。
ンとアスコルビン酸誘導体を組み合わせることによっ
て、コラーゲンの合成と分解の両方を促進することがで
きる。
【００３７】実施例４、比較例５〜６ コラゲナーゼ産生促進物質として、Ｎ−メチルエタノー
ルアミンの代わりに硫酸ナトリウムを、およびコラーゲ
ン産生促進物質としてアスコルビン酸硫酸エステルの代
わりにアスコルビン酸リン酸エステルを用いる以外は実
施例１と同様にして行い、その結果を表３に示した。
ルアミンの代わりに硫酸ナトリウムを、およびコラーゲ
ン産生促進物質としてアスコルビン酸硫酸エステルの代
わりにアスコルビン酸リン酸エステルを用いる以外は実
施例１と同様にして行い、その結果を表３に示した。
【００３８】
【表３】 平均値 ± ＳＤ（ｎ＝４） ＊培養時の終濃度として表示： 硫酸ナトリウム（ Na2SO4 ）；ｍＭ Asc-P ；アスコルビン酸りん酸エステルマグネシウム塩
（２０〜２９重量％の水分を含有），μｇ／ｍｌ
（２０〜２９重量％の水分を含有），μｇ／ｍｌ
【００３９】表３からわかるように、硫酸塩とアスコル
ビン酸誘導体を組み合わせることによって、コラーゲン
の合成と分解の両方を促進することができる。
ビン酸誘導体を組み合わせることによって、コラーゲン
の合成と分解の両方を促進することができる。
【００４０】実施例５、比較例７〜９ コラゲナーゼ産生促進物質として、Ｎ−メチルエタノー
ルアミンの代わりにＮ−メチルセリンを、およびコラー
ゲン産生促進物質としてアスコルビン酸硫酸エステルの
代わりにアスコルビン酸リン酸エステルを用いる以外は
実施例１と同様にして行い、その結果を表４に示した。
ルアミンの代わりにＮ−メチルセリンを、およびコラー
ゲン産生促進物質としてアスコルビン酸硫酸エステルの
代わりにアスコルビン酸リン酸エステルを用いる以外は
実施例１と同様にして行い、その結果を表４に示した。
【００４１】
【表４】 平均値 ± ＳＤ（ｎ＝４） ＊培養時の終濃度として表示： Ｎ−メチルセリン；ｍＭ Asc-P ；アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩 （２０〜２９重量％の水分を含有），μｇ／ｍｌ
【００４２】表４からわかるように、セリン誘導体とア
スコルビン酸誘導体を組み合わせることによって、コラ
ーゲンの合成と分解の両方を促進することができる。
スコルビン酸誘導体を組み合わせることによって、コラ
ーゲンの合成と分解の両方を促進することができる。
【００４３】以上の結果から、本発明で用いたコラゲナ
ーゼ産生促進物質群が、アスコルビン酸誘導体の存在の
有無によらずプロコラゲナーゼの産生量を増加させ（コ
ラゲナーゼ活性を発現し）、その条件下で、アスコルビ
ン酸誘導体はコラーゲン産生を促進することが分かっ
た。
ーゼ産生促進物質群が、アスコルビン酸誘導体の存在の
有無によらずプロコラゲナーゼの産生量を増加させ（コ
ラゲナーゼ活性を発現し）、その条件下で、アスコルビ
ン酸誘導体はコラーゲン産生を促進することが分かっ
た。
【００４４】以下に本発明のコラーゲン代謝賦活剤を応
用した組成物の処方例を示す。
用した組成物の処方例を示す。
【００４５】処方例１−軟膏 実施例２のコラーゲン代謝賦活剤３ｇと下記親水性成分
とを、湯浴で８０℃に加温して混合し、これを、８０℃
に加温した下記の親油性成分混合物に攪拌しながら徐々
に加えた。次に、ホモジナイザー（TOKUSHUKIKA KOGYO
社製）で２分半激しく攪拌(2500rpm) して各成分を充分
乳化分散させた後、攪拌しながら徐々に冷却し、１００
ｇ中に３重量％のコラーゲン代謝賦活剤を含む軟膏を得
た。
とを、湯浴で８０℃に加温して混合し、これを、８０℃
に加温した下記の親油性成分混合物に攪拌しながら徐々
に加えた。次に、ホモジナイザー（TOKUSHUKIKA KOGYO
社製）で２分半激しく攪拌(2500rpm) して各成分を充分
乳化分散させた後、攪拌しながら徐々に冷却し、１００
ｇ中に３重量％のコラーゲン代謝賦活剤を含む軟膏を得
た。
【００４６】 「親水性成分」 （ｇ） パラオキシ安息香酸メチル ０．１ プロピレングリコール ６．７ 精製水 ４１．１
【００４７】 「親油性成分」 スクワラン ４．７ 白色ワセリン ２４．０ ステアリルアルコール ８．７ ミリスチン酸イソプロピル ６．０ モノステアリン酸ポリエチレングリコール 〔商品名NIKKOL MYS-45 、日本サーファクタント工業（株）製〕 １．３ ポリエチレンアルキルエーテルリン酸 〔商品名NIKKOL DDP-2、日本サーファクタント工業（株）製〕 ２．３ モノステアリン酸グリセリン ２．０ パラオキシ安息香酸ブチル ０．１
【００４８】処方例２−ローション 重量％ 実施例１のコラーゲン代謝賦活剤 １．０ エタノール １０．０ 乳酸 ０．３ クエン酸ナトリウム ０．１ グリセリン ２．０ 防腐剤、香料および界面活性剤 適量 精製水 残量 ──────────────────────────────── １００％
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 7/00 Ａ６１Ｋ 7/00 Ｗ 7/48 7/48 31/198 31/198 31/375 31/375 31/522 31/522 33/00 33/00 Ａ６１Ｐ 17/00 Ａ６１Ｐ 17/00 // Ａ６１Ｋ 45/06 Ａ６１Ｋ 45/06 (56)参考文献 特開 昭60−78913（ＪＰ，Ａ) 特開 平１−175917（ＪＰ，Ａ) 特開 平３−109308（ＪＰ，Ａ) 特開 平３−275610（ＪＰ，Ａ) 特開 平３−294222（ＪＰ，Ａ) 特開 平４−1130（ＪＰ，Ａ) 特開 平４−21630（ＪＰ，Ａ) 特開 平４−346936（ＪＰ，Ａ) 特開 平５−32537（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) A61K 7/00 - 7/50 A61K 31/00 - 33/44 A61K 45/06
Claims (1)
- 【請求項１】 Ｎ−メチルエタノールアミン、ペントキ
シフィリン、硫酸ナトリウム及びＮ−メチルセリンから
なる群から選択されるコラゲナーゼ産生促進物質と、ア
スコルビン酸またはそのリン酸塩もしくは硫酸塩からな
る群から選ばれるコラーゲン合成促進物質を含有するこ
とを特徴とするコラーゲン代謝賦活剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04332519A JP3117823B2 (ja) | 1992-11-17 | 1992-11-17 | コラーゲン代謝賦活剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04332519A JP3117823B2 (ja) | 1992-11-17 | 1992-11-17 | コラーゲン代謝賦活剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06157232A JPH06157232A (ja) | 1994-06-03 |
| JP3117823B2 true JP3117823B2 (ja) | 2000-12-18 |
Family
ID=18255837
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP04332519A Expired - Lifetime JP3117823B2 (ja) | 1992-11-17 | 1992-11-17 | コラーゲン代謝賦活剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3117823B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH09255547A (ja) * | 1996-03-22 | 1997-09-30 | Kao Corp | 皮膚外用剤 |
| EP1210087A2 (en) * | 1999-04-29 | 2002-06-05 | City of Hope | Pentoxifylline, pioglitazone and metformin are inhibitors of formation of advanced glycation endproducts (age's) |
| JP2002080321A (ja) * | 2000-06-20 | 2002-03-19 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 化粧料 |
-
1992
- 1992-11-17 JP JP04332519A patent/JP3117823B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06157232A (ja) | 1994-06-03 |
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