JP3098739B2 - 抗原特異的なｔ細胞寛容の誘導剤 - Google Patents

抗原特異的なｔ細胞寛容の誘導剤

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Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は抗原特異的なＴ細胞
寛容の誘導剤、さらに詳しくは、Ｔ細胞に抗原を呈示す
る細胞上のリガンドとＴ細胞上の表面上の受容体との相
互作用を抑制する、該Ｔ細胞の表面上の該受容体のアン
タゴニストの1種である抗gp39抗体を有効成分とする抗
原に曝された被験者における抗原特異的Ｔ細胞寛容の誘
導剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】抗原特異的なＴ細胞の活性化およびクロ
ーン拡張（clonal expansion）を誘導するには、抗原提
示細胞（ＡＰＣｓ）によって提供される２つのシグナル
が休止Ｔリンパ球の表面に送達される必要がある（ジェ
ンキンス（Ｊenkins,Ｍ.）およびシュバルツ（Ｓchwart
z,Ｒ.）（１９８７）Ｊ.Ｅxp.Ｍed.１６５、３０２〜３
１９；ミュラー（Ｍueller,Ｄ.Ｌ.）ら（１９９０）Ｊ.
Ｉmmunol.１４４、３７０１〜３７０９；ウイリアムズ
（Ｗilliams,Ｉ.Ｒ.）およびウナヌエ（Ｕnanue,Ｅ.
Ｒ.）（１９９０）Ｊ.Ｉmmunol.１４５、８５〜９
３）。第一のシグナルは免疫応答に特異性を付与するも
のであり、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）と関連して
提示される外来抗原性ペプチドの認識後のＴ細胞受容体
（ＴＣＲ）を介して媒介される。第二のシグナルはコス
ティミュレーション（costimulation）と呼ばれるもの
で、Ｔ細胞を誘導して増殖させ、機能的にする（シュバ
ルツ（１９９０）Ｓcience２４８、１３４９〜１３５
６）。コスティミュレーションは抗原特異的でもないし
ＭＨＣに拘束されるものでもなく、ＡＰＣｓによって発
現される１または２以上の異なる細胞表面分子によって
提供されると思われる（ジェンキンスら（１９８８）
Ｊ.Ｉmmunol.１４０、３３２４〜３３３０；リンスレイ
（Ｌinsley,Ｐ.Ｓ.）ら（１９９１）Ｊ.Ｅxp.Ｍed.１７
３、７２１〜７３０；ギミ（Ｇimmi,Ｃ.Ｄ.）ら（１９
９１）Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ８８、６５７５
〜６５７９；ヤング（Ｙoung,Ｊ.Ｗ.）ら（１９９２）
Ｊ.Ｃlin.Ｉnvest.９０、２２９〜２３７；クーロバ
（Ｋoulova,Ｌ.）ら（１９９１）Ｊ.Ｅxp.Ｍed.１７
３、７５９〜７６２；ライザー（Ｒeiser,Ｈ.）ら（１
９９２）Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ８９、２７１
〜２７５；バン−セベンター（van-Ｓeventer,Ｇ.Ａ.）
ら（１９９０）Ｊ.Ｉmmunol.１４４、４５７９〜４５８
６；ラサル（ＬaＳalle,Ｊ.Ｍ.）ら（１９９１）Ｊ.Ｉm
munol.１４７、７７４〜８０；ダスティン（Ｄustin,
Ｍ.Ｉ.）ら（１９８９）Ｊ.Ｅxp.Ｍed.１６９、５０
３；アーミテージ（Ａrmitage,Ｒ.Ｊ.）ら（１９９２）
Ｎature３５７、８０〜８２；リウ（Ｌiu,Ｙ.）ら（１
９９２）Ｊ.Ｅxp.Ｍed.１７５、４３７〜４４５）。Ｔ
細胞活性化に関与する一つのコスティミュラトリー経路
にはＴ細胞表面上の分子ＣＤ２８が関与する。この分子
は、Ｂ細胞または他のＡＰＣｓ上のリガンドによって送
達されるコスティミュラトリーシグナルを受け取ること
ができる。ＣＤ２８のリガンドとしては、Ｂ７−１およ
び／またはＢ７−２などのＢリンパ球活性化抗原のＢ７
ファミリーの成員が挙げられる（フリードマン（Ｆreed
man,Ａ.Ｓ.）ら（１９８７）Ｊ.Ｉmmunol.１３７、３２
６０〜３２６７；フリーマン（Ｆreeman,Ｇ.Ｊ.）ら
（１９８９）Ｊ.Ｉmmunol.１４３、２７１４〜２７２
２；フリーマンら（１９９１）Ｊ.Ｅxp.Ｍed.１７４、
６２５〜６３１；フリーマンら（１９９３）Ｓcience２
６２、９０９〜９１１；アズマ（Ａzuma,Ｍ.）ら（１９
９３）Ｎature３６６、７６〜７９；フリーマンら（１
９９３）Ｊ.Ｅxp.Ｍed.１７８、２１８５〜２１９
２）。Ｂ７−１およびＢ７−２はまた活性化Ｔ細胞表面
上に存在する他の分子、ＣＴＬＡ４のリガンドでもある
が、コスティミュレーションにおけるＣＴＬＡ４の役割
はわかっていない。
【０００３】コスティミュラトリーシグナルとともに抗
原特異的シグナルがＴ細胞に送達されるとＴ細胞が活性
化される。Ｔ細胞の活性化にはＴ細胞の増殖およびサイ
トカイン分泌の両方が含まれる。対照的に、コスティミ
ュラトリーシグナルの不在下で抗原特異的シグナルがＴ
細胞に送達されると非応答性の状態またはアネルギーが
Ｔ細胞において誘導され、それによって抗原特異的な寛
容がＴ細胞において誘導されると考えられている。Ｔ細
胞とＢ細胞との相互作用は免疫応答において中心的役割
を果たしている。胸腺依存性抗原への液性免疫の誘導に
はＴヘルパー（以下、Ｔｈという）細胞によって提供さ
れる「ヘルプ」が必要である。Ｂリンパ球に提供される
ある種のヘルプはＴｈ細胞によって放出される可溶性分
子（たとえば、ＩＬ−４やＩＬ−５などのリンホカイ
ン）によって媒介されるが、Ｂ細胞の活性化にはまた接
触依存性のＢ細胞とＴｈ細胞との相互作用が必要である
（ヒロハタ（Ｈirohata）ら、Ｊ.Ｉmmunol.、１４０：
３７３６〜３７４４（１９８８）；バートレット（Ｂar
tlett）ら、Ｊ.Ｉmmunol.、１４３：１７４５〜１７５
４（１９８９））。このことは、Ｂ細胞の活性化にはＢ
細胞およびＴｈ細胞上の細胞表面分子間での必須の相互
作用が関与していることを示している。それゆえ、Ｔ細
胞上の該分子はＴ細胞の接触依存性のヘルパーエフェク
ター機能を媒介している。Ｂ細胞およびＴ細胞上の分子
間の接触依存性の相互作用はさらに、活性化Ｔ細胞から
単離した原形質膜がＢ細胞の活性化に必要なヘルパー機
能を提供しうるという観察によって支持されている。ブ
ライアン（Ｂrian）、Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳ
Ａ、８５：５６４〜５６８（１９８８）；ホジキン（Ｈ
odgkin）ら、Ｊ.Ｉmmunol.、１４５：２０２５〜２０３
４（１９９０）；ノエル（Ｎoelle）ら、Ｊ.Ｉmmuno
l.、１４６：１１１８〜１１２４（１９９１）。
【０００４】分子ＣＤ４０は未成熟および成熟Ｂリンパ
球の表面上で同定されており、抗体と架橋したときにＢ
細胞の増殖を誘導する。バル（Ｖalle）ら、Ｅur.Ｊ.Ｉ
mmunol.、１９：１４６３〜１４６７（１９８９）；ゴ
ードン（Ｇordon）ら、Ｊ.Ｉmmunol.、１４０：１４２
５〜１４３０（１９８８）；グルーバー（Ｇruber）
ら、Ｊ.Ｉmmunol.、１４２：４１４４〜４１５２（１９
８９）。ＣＤ４０は分子レベルでクローニングされ、特
徴付けられている。スタメンコビッチ（Ｓtamenkovic）
ら、ＥＭＢＯ Ｊ.、８：１４０３〜１４１０（１９８
９）。ＣＤ４０のリガンドであるｇｐ３９（ＣＤ４０リ
ガンドまたはＣＤ４０Ｌとも称する）もまた分子レベル
でクローニングされ、特徴付けられている。アーミテー
ジラ、Ｎature、３５７：８０〜８２（１９９２）；レ
ーダーマン（Ｌederman）ら、Ｊ.Ｅxp.Ｍed.、１７５：
１０９１〜１１０１（１９９２）；ホレンバウ（Ｈolle
nbaugh）ら、ＥＭＢＯ Ｊ.、１１：４３１３〜４３１９
（１９９２）。ｇｐ３９タンパク質は活性化されたＣＤ
４+Ｔｈ細胞では発現されるが、休止のＣＤ４+Ｔｈ細胞
では発現されない。スプリッグス（Ｓpriggs）ら、Ｊ.
Ｅxp.Ｍed.、１７６：１５４３〜１５５０（１９９
２）；レーン（Ｌane）ら、Ｅur.Ｊ.Ｉmmunol.、２２：
２５７３〜２５７８（１９９２）；ロイ（Ｒoy）ら、
Ｊ.Ｉmmunol.、１５１：１〜１４（１９９３）。ｇｐ３
９遺伝子でトランスフェクトされ細胞表面上にｇｐ３９
タンパク質を発現する細胞はＢ細胞の増殖を誘導するこ
とができ、他の刺激性シグナルとともに抗体の産生を誘
導することができる。アーミテージら、Ｎature、３５
７：８０〜８２（１９９２）；ホレンバウら、ＥＭＢＯ
Ｊ.、１１：４３１３〜４３１９（１９９２）。
【０００５】発明の要約 Ｔ細胞の接触依存性のヘルパーエフェクター機能を媒介
する細胞表面分子は、Ｔ細胞ヘルプを必要とする免疫応
答を誘導するのに重要である。たとえば、Ｔ細胞上のｇ
ｐ３９とＢ細胞上のＣＤ４０との相互作用は、抗原への
Ｂ細胞応答を活性化するうえで中心的な役割を果たして
いる。本発明は、少なくともその一部は、接触依存性の
ヘルパーエフェクター機能を媒介する細胞表面分子はま
た抗原へのＴ細胞の応答においても重要な役割を果たし
ているという知見に基づいている。とりわけ、適当な条
件下、Ｔ細胞上のｇｐ３９と該Ｔ細胞に抗原を提示する
細胞上のリガンドとの間の相互作用を妨害することによ
って抗原特異的な寛容を誘導できることがわかった。従
って、該Ｔ細胞に抗原を提示する細胞は、該Ｔ細胞の活
性化に必要なシグナルを提供しうるためには該細胞上の
ｇｐ３９リガンド（たとえば、ＣＤ４０）と該Ｔ細胞上
のｇｐ３９との間の相互作用が必要である。ｇｐ３９と
ｇｐ３９リガンドとの間の相互作用を抑制するとＴ細胞
活性化が妨害され、抗原特異的なＴ細胞寛容が誘導され
る。
【０００６】本発明は、抗原特異的なＴ細胞寛容の誘導
に関する。本発明には、Ｔ細胞を、（１）該Ｔ細胞に抗
原を提示し、接触依存性のヘルパーエフェクター機能を
媒介する該Ｔ細胞の表面上の受容体と相互作用するリガ
ンドを表面に有する細胞、および（２）接触依存性のヘ
ルパーエフェクター機能を媒介するＴ細胞の表面上の該
受容体のアンタゴニストと接触させることが含まれる。
該アンタゴニストは該受容体とそのリガンドとの相互作
用を抑制する。Ｔ細胞に抗原を提示する細胞および該ア
ンタゴニストとインビトロで接触させることができる
し、または該細胞と該アンタゴニストとを被験者に投与
してＴ細胞寛容をインビボで誘導することもできる。
【０００７】好ましい態様において、接触依存性のヘル
パーエフェクター機能を媒介するＴ細胞の表面上の受容
体はｇｐ３９である。この態様においては、アンタゴニ
ストはｇｐ３９と該Ｔ細胞に抗原を提示する細胞上のそ
のリガンドとの相互作用を抑制する分子である。特に好
ましいｇｐ３９アンタゴニストは抗ｇｐ３９抗体であ
る。別の態様として、ｇｐ３９アンタゴニストは可溶性
の形態のｇｐ３９リガンド、たとえば可溶性のＣＤ４０
である。Ｔ細胞に抗原を提示する細胞は好ましくはＢ細
胞である。このＢ細胞は小さな休止Ｂ細胞であってよ
い。可溶性抗原に対してＴ細胞寛容を誘導するには、該
Ｂ細胞を該Ｔ細胞に接触させる前に（たとえば、被験者
に投与する前に）該抗原に接触させることができる。他
の態様において、アロ抗原に対してＴ細胞寛容を誘導す
る場合は、該Ｔ細胞に抗原を提示するのに用いる細胞は
同種細胞［アロジェニック（allogeneic cells），同種
異系細胞］である。同種細胞は、たとえば、同種Ｂ細
胞、同種骨髄、同種脾臓細胞または末梢血液中の同種細
胞であってよい。
【０００８】本発明は、たとえば、可溶性抗原に対する
Ｔ細胞寛容を誘導するため、骨髄移植片または他の臓器
移植に対するＴ細胞寛容を誘導するため、または骨髄移
植における移植片対宿主病を抑制するために用いること
ができる。骨髄移植の場合には、移植した骨髄細胞自身
が本発明においてＴ細胞に抗原を提示する細胞として働
く。従って、本発明の一つの態様において、同種骨髄を
ｇｐ３９アンタゴニスト（たとえば、抗ｇｐ３９抗体）
とともに被験者に投与することによって骨髄の受け入れ
が促進される。本発明はさらに、Ｂ細胞増殖、Ｂ細胞分
化およびＴ細胞応答を抑制しうる抗ヒトｇｐ３９モノク
ローナル抗体、および該抗体を含む医薬組成物に関す
る。本発明の抗ヒトｇｐ３９モノクローナル抗体は一般
に免疫応答を調節するため、および特に抗原特異的なＴ
細胞寛容を誘導するために使用するのが好ましい。好ま
しい抗体としては、実施例６に記載するモノクローナル
抗体３Ｅ４、２Ｈ５、２Ｈ８、４Ｄ９−８、４Ｄ９−
９、２４−３１、２４−４３、８９−７６および８９−
７９が挙げられる。特に好ましい抗体はモノクローナル
抗体８９−７６および２４−３１である。８９−７６お
よび２４−３１抗体をそれぞれ産生する８９−７６およ
び２４−３１ハイブリドーマは、ブダペスト条約の規定
に従ってアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクショ
ン、パークローンドライブ、ロックビル、メリーランド
に１９９４年９月２日に寄託してある。８９−７６ハイ
ブリドーマはＡＴＣＣ受託番号ＨＢ１１７１３を、２４
−３１ハイブリドーマはＡＴＣＣ受託番号ＨＢ１１７１
２を付与された。２４−３１抗体および８９−７６抗体
はＩｇＧ１イソタイプである。
【０００９】従って、一つの態様において、本発明はＩ
ｇＧ１イソタイプの抗ヒトｇｐ３９モノクローナル抗体
（ｍＡｂ）を提供する。本発明の抗ヒトｇｐ３９ｍＡｂ
は標準インビトロアッセイにおけるＢ細胞増殖、たとえ
ばインターロイキン−４および可溶性ｇｐ３９でＢ細胞
を処理することにより誘導されるＢ細胞増殖を抑制する
ことができる。抗ヒトｇｐ３９抗体によるＢ細胞増殖の
抑制は、約０.０１〜５.０μｇ／ｍｌ、より好ましくは
約０.１〜２.５μｇ／ｍｌ、さらに一層好ましくは約
０.１〜１.２５μｇ／ｍｌのＩＣ50（すなわち、増殖を
５０％抑制するのに必要な濃度）で行うのが好ましい。
本発明の抗ヒトｇｐ３９ｍＡｂはまた、標準インビトロ
アッセイにおけるＢ細胞によるＩｇＧ、ＩｇＭおよび／
またはＩｇＡの産生、たとえばＢ細胞を活性化Ｔ細胞
（たとえば、抗ＣＤ３抗体で処理することによって活性
化されたＴ細胞）とともに培養することによって誘導さ
れるＩｇの産生を抑制することができる。ＩｇＧ、Ｉｇ
Ｍおよび／またはＩｇＡのＢ細胞産生の抗ｇｐ３９抗体
による抑制は、約０.０１〜１.０μｇ／ｍｌ、または一
層好ましくは約０.０１〜０.１μｇ／ｍｌのＩＣ５０で
行うのが好ましい。
【００１０】好ましい態様において、本発明の抗ヒトｇ
ｐ３９ｍＡｂは、３Ｅ４、２Ｈ５、２Ｈ８、４Ｄ９−
８、４Ｄ９−９、２４−３１、２４−４３、８９−７６
および８９−７９よりなる群から選ばれたモノクローナ
ル抗体によって認識されるエプトープに結合する。さら
に好ましくは、抗ヒトｇｐ３９ｍＡｂはモノクローナル
抗体２４−３１またはモノクローナル抗体８９−７６に
よって認識されるエプトープに結合する。上記抗体のい
ずれかにより認識されるエプトープに結合するｍＡｂの
能力は、標準交差競合アッセイにより決定することがで
きる。たとえば、ｍＡｂ２４−３１によって認識される
エプトープと同じエプトープに結合する抗体は標識２４
−３１の活性化Ｔ細胞への結合に競合するであろうし、
一方、ｍＡｂ２４−３１によって認識されるエプトープ
とは異なるエプトープに結合する抗体は標識２４−３１
の活性化Ｔ細胞への結合に競合しないであろう。本発明
はまた、本発明の抗ヒトｇｐ３９抗体の医薬組成物をも
提供する。これら組成物は一般に、抗ヒトｇｐ３９ｍＡ
ｂ（たとえば、好ましくは２４−３１または８９−７
６）および薬理学的に許容しうる担体を含む。
【００１１】本発明のさらに他の側面は、抗ヒトｇｐ３
９ｍＡｂをコードする核酸（たとえば、抗ヒトｇｐ３９
ｍＡｂの免疫グロブリンＨ鎖またはＬ鎖またはその一部
をコードするＤＮＡ）に関する。かかる核酸は、抗ヒト
ｇｐ３９ｍＡｂを産生する細胞（たとえば、ハイブリド
ーマ）から標準法により単離することができる。たとえ
ば、２４−３１または８９−７６ｍＡｂをコードする核
酸は、それぞれ２４−３１または８９−７６ハイブリド
ーマから、ｃＤＮＡライブラリースクリーニング、ＰＣ
Ｒ増幅または他の標準法により単離することができる。
抗ヒトｇｐ３９ｍＡｂ鎖をコードする核酸は、標準組換
えＤＮＡ法により操作して組換え抗ヒトｇｐ３９ｍＡ
ｂ、たとえばキメラ化またはヒト化した抗ヒトｇｐ３９
ｍＡｂを製造することができる。さらに、抗ヒトｇｐ３
９ｍＡｂをコードする核酸は、発現ベクター中に組み込
み、宿主中に導入して組換え形態の抗ヒトｇｐ３９抗体
の発現および産生を容易にすることができる。
【００１２】発明の詳細な記載 本発明は、抗原特異的なＴ細胞寛容の誘導剤に関する。
本発明には、Ｔ細胞を、（１）該Ｔ細胞に抗原を提示
し、接触依存性のヘルパーエフェクター機能を媒介する
該Ｔ細胞の表面上の受容体と相互作用するリガンドを表
面に有する細胞、および（２）接触依存性のヘルパーエ
フェクター機能を媒介するＴ細胞の表面上の該受容体の
アンタゴニストと接触させることが含まれる。本明細書
において接触依存性のヘルパーエフェクター機能を媒介
する分子または受容体とは、Ｔｈ細胞上で発現され、エ
フェクター細胞（たとえば、Ｂ細胞）上のリガンドと相
互作用するものであって、該受容体とそのリガンドとの
相互作用がエフェクター細胞の応答（たとえば、Ｂ細胞
活性化）に必要であるものをいう。エフェクター細胞の
応答に関与することに加えて、かかる分子はまた該Ｔ細
胞の抗原への応答にも関与することが今やわかった。接
触依存性のヘルパーエフェクター機能を媒介するＴ細胞
上の好ましい分子はｇｐ３９である。従って、好ましい
態様において、本発明にはＴ細胞を、抗原を提示する細
胞およびｇｐ３９アンタゴニストと接触させることが含
まれる。従って、抗原を提示させるのに用いる細胞は、
Ｔ細胞の表面上のｇｐ３９と相互作用して該Ｔ細胞を活
性化させる（すなわち、該Ｔ細胞にＴ細胞活性化に必要
なシグナルを送達する）ものである。たとえば、該細胞
は、ＣＤ４０を発現し、抗原をＴ細胞に提示するＢ細胞
であってよい。抗原提示細胞上のｇｐ３９リガンドと該
Ｔ細胞上のｇｐ３９との相互作用を抑制することによ
り、該Ｔ細胞は提示された該抗原によって活性化され
ず、該抗原に対して寛容となる。
【００１３】本発明は、インビボで抗原に対するＴ細胞
寛容を誘導させるのに用いることができる。たとえば、
Ｔ細胞に抗原を提示する細胞を、接触依存性のヘルパー
エフェクター機能を媒介する該Ｔ細胞上に発現された受
容体のアンタゴニスト（たとえば、ｇｐ３９アンタゴニ
スト）とともに被験者に投与することができる。本発明
はさらに、Ｔ細胞を、接触依存性のヘルパーエフェクタ
ー機能を媒介するＴ細胞上に発現される受容体のアンタ
ゴニスト（たとえば、ｇｐ３９アンタゴニスト）ととも
に該Ｔ細胞に抗原を提示する細胞とインビトロにて接触
させることにより、抗原に対してＴ細胞をインビトロに
て寛容にするのに用いることができる。ついで、インビ
トロで寛容にされたＴ細胞を被験者に投与することがで
きる。本発明は、特定の抗原に対して、または同種骨髄
（たとえば、骨髄移植において）などの移植された細胞
に対して被験者のＴ細胞を寛容にするのに用いることが
できる。本発明はまた、骨髄移植における移植片対宿主
病を抑制するうえでも有用である。
【００１４】本発明の種々の側面を以下の細項目におい
てさらに詳細に記載する。Ｉ．ｇｐ３９アンタゴニスト ：本発明によれば、ｇｐ３
９アンタゴニストをＴ細胞と接触させて（たとえば被験
者に投与して）、Ｔ細胞上のｇｐ３９とＢ細胞などの抗
原提示細胞上のｇｐ３９リガンドとの相互作用を妨害す
る。ｇｐ３９アンタゴニストとは、この相互作用を妨害
する分子として定義される。ｇｐ３９アンタゴニスト
は、ｇｐ３９に対して向けられた抗体（たとえば、ｇｐ
３９に対するモノクローナル抗体）、ｇｐ３９に対して
向けられた抗体のフラグメントまたは誘導体（たとえ
ば、ＦａｂまたはＦ(ａｂ')２フラグメント、キメラ抗
体またはヒト化抗体）、可溶性形態のｇｐ３９リガンド
（たとえば、可溶性ＣＤ４０）、可溶性形態のｇｐ３９
リガンドの融合タンパク質（たとえば、可溶性ＣＤ４０
Ｉｇ）、またはｇｐ３９−ＣＤ４０相互作用を破壊また
は妨害する薬剤であってよい。
【００１５】Ａ．抗体 哺乳動物（たとえば、マウス、ハムスター、またはウサ
ギ）は、該哺乳動物において抗体応答を引き起こす免疫
原の形態のｇｐ３９タンパク質またはタンパク質断片
（たとえば、ペプチド断片）で免疫することができる。
その表面にｇｐ３９を発現する細胞もまた免疫原として
用いることができる。他の免疫原としては、精製したｇ
ｐ３９タンパク質またはタンパク質断片が挙げられる。
ｇｐ３９の精製は、標準精製法によりｇｐ３９発現細胞
から行うことができる。ｇｐ３９ｃＤＮＡ（アーミテー
ジら、Ｎature、３５７：８０〜８２（１９９２）；レ
ーダーマンら、Ｊ.Ｅxp.Ｍed.、１７５：１０９１〜１
１０１（１９９２）；ホレンバウら、ＥＭＢＯ Ｊ.、１
１：４３１３〜４３１９（１９９２））を宿主細胞、た
とえば細菌または哺乳動物細胞株中で発現させ、細胞培
養液から標準法に従ってｇｐ３９タンパク質を精製する
ことができる。ｇｐ３９ペプチドは、ｇｐ３９のアミノ
酸配列（アーミテージら、Ｎature、３５７：８０〜８
２（１９９２）；レーダーマンら、Ｊ.Ｅxp.Ｍed.、１
７５：１０９１〜１１０１（１９９２）；ホレンバウ
ら、ＥＭＢＯ Ｊ.、１１：４３１３〜４３１９（１９９
２）に開示）に基づき、公知の方法（たとえば、Ｆ−ｍ
ｏｃまたはＴ−ｂｏｃ化学合成）により合成することが
できる。タンパク質に免疫原性を付与する技術として
は、担体への結合、または当該技術分野でよく知られた
他の方法が挙げられる。たとえば、タンパク質をアジュ
バントの存在下で投与することができる。免疫の進行
は、血漿または血清中の抗体力価の検出によりモニター
することができる。抗体レベルを評価するため、抗原と
して免疫原を用いた標準ＥＬＩＳＡまたは他のイムノア
ッセイを用いることができる。
【００１６】免疫後、抗血清を得ることができ、所望な
らポリクローナル抗体を該血清から単離することができ
る。モノクローナル抗体を産生するには、抗体産生細胞
（リンパ球）を免疫動物から回収し、標準体細胞融合法
によりミエローマ細胞と融合させてこれら細胞を不死化
し、ハイブリドーマ細胞を得る。かかる技術は当該技術
分野においてよく知られている。たとえば、コーラーお
よびミルシュテインにより最初に開発されたハイブリド
ーマ法（Ｎature（１９７５）２５６：４９５〜４９
７）、並びにヒトＢ細胞ハイブリドーマ法（コズバー
（Ｋozbar）ら、Ｉmmunol.Ｔoday（１９８３）４：７
２）、ヒトモノクローナル抗体を産生するためのＥＢＶ
−ハイブリドーマ法（コール（Ｃole）ら、Ｍonoclonal
ＡntibodiesinＣancer Ｔherapy（１９８５）（アレン
・アール・ブリス、７７〜９６頁）)、および結合（com
binatorial）抗体ライブラリーのスクリーニング（ヒュ
ーズ（Ｈuse）ら、Ｓcience（１９８９）２４６：１２
７５）などの他の方法。該タンパク質またはペプチドに
特異的に反応する抗体の産生についてハイブリドーマ細
胞を免疫化学的にスクリーニングし、モノクローナル抗
体を単離することができる。
【００１７】本明細書において用いる抗体なる語は、ｇ
ｐ３９タンパク質またはそのペプチドまたはｇｐ３９融
合タンパク質と特異的に反応するフラグメントをも包含
する。抗体は常法によりフラグメントとすることがで
き、全抗体について記載したのと同様にしてフラグメン
トを有用性についてスクリーニングすることができる。
たとえば、Ｆ(ａｂ')2フラグメントは抗体をペプシンで
処理することにより生成させることができる。得られた
Ｆ(ａｂ')2フラグメントは、ジスルフィド架橋を還元す
べく処理してＦａｂ'フラグメントとすることができ
る。本発明の抗体はさらに、抗ｇｐ３９部分を有する２
特異的(bispecific)分子およびキメラ分子を包含する。
【００１８】非ヒト被験者において産生された抗体をヒ
トの治療に用いる場合には、これら抗体は種々の程度で
外来のものとして認識され、該患者において免疫応答が
生じるかもしれない。この問題を最小限に抑えまたは排
除する（一般的な免疫抑制に好ましい）一つの方法は、
キメラ抗体誘導体、すなわち非ヒト動物の可変領域とヒ
トの定常領域とを組み合わせた抗体分子を作製すること
である。キメラ抗体分子としては、たとえば、マウス、
ラットまたは他の種からの抗体の抗原結合ドメインをヒ
ト定常領域と組み合わせたものが挙げられる。種々のキ
メラ抗体の作製法が記載されており、ｇｐ３９を認識す
る免疫グロブリン可変領域を含むキメラ抗体を作製する
のに用いることができる。たとえば、モリソン（Ｍorri
son）ら、Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ ８１：６８
５１（１９８５）；タケダ（Ｔakeda）ら、Ｎature ３
１４：４５２（１９８５）、カビリー（Ｃabilly）ら、
米国特許第４,８１６,５６７号；ボス（Ｂoss）ら、米
国特許第４,８１６,３９７号；タナグチ（Ｔanaguchi）
ら、ヨーロッパ特許出願公開ＥＰ１７１４９６号；ヨー
ロッパ特許出願公開第０１７３４９４号、英国特許第Ｇ
Ｂ２１７７０９６Ｂ号を参照。かかるキメラ抗体は、対
応する非キメラ抗体に比べてヒト被験者にける免疫原性
が小さいことが期待される。
【００１９】ヒトの治療目的に用いる場合、可変領域の
一部、とりわけ抗原結合ドメインの保存されたフレーム
ワーク領域をヒト由来のものとし、超可変領域のみを非
ヒト由来のものとしたヒト可変領域キメラを作成するこ
とによって、ｇｐ３９タンパク質またはペプチドに特異
的に反応するモノクローナル抗体またはキメラ抗体をさ
らにヒト化することができる。かかる改変免疫グロブリ
ン分子は当該技術分野で知られた幾つかの技術（たとえ
ば、テング（Ｔeng）ら、Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳ
Ａ、８０：７３０８〜７３１２（１９８３）；コズバー
ら、ＩmmunologyＴoday、４：７２７９（１９８３）；
オルソン（Ｏlsson）ら、Ｍeth.Ｅnzymol.、９２：３〜
１６（１９８２））のいずれによっても作製することが
でき、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０６１９３号またはＥＰ０
２３９４００号の教示に従って作成するのが好ましい。
ヒト化抗体は、たとえば、スコットジェン・リミテッド
（Ｓcotgen Ｌimited）、グレートブリテン、ミドルセ
ックス、トゥイッケナム、ホリー・ロード２番によって
商業的に製造することができる。ｇｐ３９タンパク質ま
たはペプチドに対して特異的に反応する特異的抗体、ま
たは抗体フラグメントの他の作製方法は、細菌中に発現
された免疫グロブリン遺伝子またはその一部をコードす
る発現ライブラリーをｇｐ３９タンパク質またはペプチ
ドでスクリーニングすることである。たとえば、ファー
ジ発現ライブラリーを用い、完全なＦａｂフラグメン
ト、ＶＨ領域およびＦＶ領域を細菌中で発現させること
ができる。たとえば、ウォード（Ｗard）ら、Ｎature、
３４１：５４４〜５４６：（１９８９）；ヒューズら、
Ｓcience、２４６：１２７５〜１２８１（１９８９）；
およびマッカファーティ（ＭcＣafferty）ら、Ｎatur
e、３４８：５５２〜５５４（１９９０）を参照。かか
るライブラリーを、たとえばｇｐ３９ペプチドを用いて
スクリーニングすることにより、ｇｐ３９に反応性の免
疫グロブリンフラグメントを同定することができる。別
法として、ＳＣＩＤ−ｈｕマウス（ジェンファーム（Ｇ
enpharm）より入手可能）を用いて抗体またはそのフラ
グメントを作製することができる。
【００２０】ヒトｇｐ３９およびマウスｇｐ３９を含む
ｇｐ３９に対して向けられたモノクローナル抗体の作製
方法および本発明に使用するのに適したモノクローナル
抗体については実施例６にさらに詳細に記載してある。
本発明の特に好ましい抗ヒトｇｐ３９抗体は、ハイブリ
ドーマ２４−３１および８９−７６によってそれぞれ産
生されたｍＡｂ２４−３１および８９−７６である。８
９−７６抗体および２４−３１抗体をそれぞれ産生する
８９−７６ハイブリドーマおよび２４−３１ハイブリド
ーマは、ブダペスト条約の規定に従い、アメリカン・タ
イプ・カルチャー・コレクション、パークローンドライ
ブ、ロックビル、メリーランドに１９９４年９月２日に
寄託してある。８９−７６ハイブリドーマはＡＴＣＣ受
託番号ＨＢ１１７１３を、２４−３１ハイブリドーマは
ＡＴＣＣ受託番号ＨＢ１１７１２を付与された。キメラ
抗体やヒト化抗体などの組換え抗ｇｐ３９抗体は、標準
組換えＤＮＡ法に従い、抗ｇｐ３９抗体をコードする核
酸（たとえば、ＤＮＡ）を操作することにより作製する
ことができる。従って、本発明の他の側面は、ｇｐ３
９、とりわけヒトｇｐ３９に反応性の免疫グロブリンＨ
鎖またはＬ鎖またはその一部をコードする単離核酸分子
に関する。該免疫グロブリンをコードする核酸は、免疫
グロブリンのＬ鎖またはＨ鎖可変領域をコードしていて
よく、Ｈ鎖またはＬ鎖の定常領域（またはその一部）が
結合していても結合していなくてもよい。かかる核酸
は、抗ヒトｇｐ３９ｍＡｂを産生する細胞（たとえば、
ハイブリドーマ）から標準法により単離することができ
る。たとえば、２４−３１または８９−７６ｍＡｂをコ
ードする核酸は、それぞれ２４−３１ハイブリドーマま
たは８９−７６ハイブリドーマからｃＤＮＡライブラリ
ースクリーニング、ＰＣＲ増幅その他の標準法により単
離することができる。抗ヒトｇｐ３９ｍＡｂをコードす
る核酸を単離およびさらに操作した後、該核酸を発現ベ
クター中に組み込み、宿主細胞中に導入して組換え形態
の抗ヒトｇｐ３９抗体の発現および産生を容易にするこ
とができる。
【００２１】Ｂ．ｇｐ３９の可溶性リガンド Ｔ細胞寛容を誘導するのに用いることのできる他のｇｐ
３９アンタゴニストは、可溶性形態のｇｐ３９リガンド
である。可溶性ＣＤ４０などのｇｐ３９の１価可溶性リ
ガンドはｇｐ３９に結合することができ、それによって
ｇｐ３９とＢ細胞上のＣＤ４０との相互作用を抑制す
る。「可溶性」なる語は、リガンドが細胞膜に永久的に
結合していないことを示す。可溶性ｇｐ３９リガンド
は、化学合成によって、または好ましくは組換えＤＮＡ
法によって、たとえば、該リガンドの細胞外ドメインの
み（経膜ドメインおよび細胞質ドメインを欠く）を発現
させることによって作製することができる。好ましい可
溶性ｇｐ３９リガンドは可溶性ＣＤ４０である。別の態
様として、可溶性ｇｐ３９リガンドはまた融合タンパク
質の形態であってもよい。かかる融合タンパク質は、第
二の分子に結合した少なくとも一部のｇｐ３９リガンド
を含む。たとえば、ＣＤ４０は免疫グロブリンとの融合
タンパク質（すなわち、ＣＤ４０Ｉｇ融合タンパク質）
として発現させることができる。一つの態様において、
免疫グロブリンＨ鎖、たとえばＣγ１のヒンジ領域、Ｃ
Ｈ２領域およびＣＨ３領域に対応する配列のアミノ酸残
基に結合したＣＤ４０分子の細胞外ドメイン部分のアミ
ノ酸残基からなる融合タンパク質を作製してＣＤ４０Ｉ
ｇ融合タンパク質を生成する（たとえば、リンスレイら
（１９９１）Ｊ.Ｅxp.Ｍed.１７８３：７２１〜７３
０；カポン（Ｃapon）ら（１９８９）Ｎature ３３７、
５２５〜５３１；およびカポン 米国特許第５,１１６,
９６４号を参照）。融合タンパク質は、化学合成によっ
て、または好ましくはＣＤ４０のｃＤＮＡに基づいて組
換えＤＮＡ法によって作製することができる（スタメン
コビッチら、ＥＭＢＯ Ｊ.、８：１４０３〜１４１０
（１９８９））。
【００２２】ＩＩ．抗原特異的な寛容を誘導する細胞：
本発明は、少なくとも一部、抗原を提示しｇｐ３９と相
互作用する細胞により該抗原がＴ細胞に提示されると、
該抗原の該Ｔ細胞への提示がｇｐ３９アンタゴニストの
存在下で行われた場合に抗原特異的なＴ細胞寛容が生じ
るという知見に基づいている。このメカニズムによるＴ
細胞寛容を誘導しうる細胞としては、Ｔ細胞に抗原を提
示し、Ｔ細胞活性化に必要なシグナルを該Ｔ細胞に送達
するためにその表面上のｇｐ３９リガンドと該Ｔ細胞上
のｇｐ３９との相互作用を必要とする細胞が挙げられ
る。この相互作用を抑制することにより、提示された抗
原によるＴ細胞の活性化が妨害され、該Ｔ細胞において
抗原特異的な寛容が誘導される。ｇｐ３９を介したＴ細
胞の活性化を妨害することにより、抗原提示細胞上のコ
スティミュラトリー分子（たとえば、Ｂ細胞などの抗原
提示細胞上のＢ７ファミリー分子）の誘導が妨害され、
該抗原提示細胞はコスティミュラトリーシグナルの不在
下で抗原性シグナルのみを送達しそれゆえ寛容が誘導さ
れる。従って、本発明において、抗原を提示する細胞を
受容者に投与する。「抗原を提示する細胞」および「抗
原提示細胞」なる語は本明細書において同じ意味で用い
られ、受容者のＴ細胞に抗原を提示しうる細胞を包含
し、Ｂリンパ球、「プロフェッショナル（professiona
l）」抗原提示細胞（たとえば、単球、樹状細胞、ラン
ゲルハンス細胞）および免疫細胞に抗原を提示する他の
細胞（たとえば、ケラチノサイト、内皮細胞、星状細
胞、線維芽細胞、寡突起神経膠細胞）が含まれる。さら
に、抗原提示細胞は受容Ｔ細胞においてコスティミュラ
トリーシグナルを刺激する能力が減少しているのが好ま
しい。たとえば、抗原提示細胞はＢ７ファミリーのタン
パク質（たとえば、Ｂ７−１およびＢ７−２）などのコ
スティミュラトリー分子を発現しないかまたは低レベル
しか発現しなくてよい。本発明の方法において使用すべ
き可能な抗原提示細胞上のコスティミュラトリー分子の
発現は、標準法により、たとえば、コスティミュラトリ
ー分子に対して向けられた抗体を用いたフローサイトメ
トリーにより評価することができる。
【００２３】Ｔ細胞寛容を誘導するための好ましい抗原
提示細胞は、リンパ球細胞、たとえば末梢血リンパ球ま
たは脾臓細胞である。Ｔ細胞寛容を誘導するのに好まし
いリンパ球細胞はＢ細胞である。Ｂ細胞は細胞の混合集
団（たとえば、末梢血または脾臓中の他の細胞型）から
標準細胞分離法により精製することができる。たとえ
ば、接着細胞は、脾臓細胞をプラスチック皿上で培養
し、ついで非接着細胞集団を回収することによって除去
することができる。Ｔ細胞は、抗Ｔ細胞抗体（たとえ
ば、抗Ｔｈｙ１.１抗体および／または抗Ｔｈｙ１.２抗
体）および補体で処理することにより細胞の混合集団か
ら取り出すことができる。一つの態様において、休止リ
ンパ球細胞、好ましくは休止Ｂ細胞を抗原提示細胞とし
て用いる。休止Ｂ細胞などの休止リンパ球細胞の単離
は、当該技術分野で知られた技術により、たとえばこれ
ら細胞の小さなサイズおよび密度に基づいて行うことが
できる。休止リンパ球細胞の単離は、たとえば、トニー
（Ｔony,Ｈ−Ｐ.）およびパーカー（Ｐarker,Ｄ.Ｃ.）
（１９８５）Ｊ.Ｅxp.Ｍed.１６１：２２３〜２４１に
記載された向流遠心エルトリエーション（counterflow
centrifugal elutriation）により行うことができる。
向流遠心エルトリエーションを用い、１４〜１９ｍｌ／
分、好ましくは１９ｍｌ／分（３,２００ｒｐｍ）にて
フラクションを回収することにより、Ｔ細胞応答を活性
化しうる細胞を含まない休止リンパ球細胞集団を得るこ
とができる。別法として、たとえばフィコールまたはパ
ーコール勾配を用いた不連続密度勾配遠心分離により小
さな休止リンパ球（たとえば、Ｂ細胞）を単離すること
ができ、遠心分離後に小さな休止リンパ球を含む層を得
ることができる。小さな休止Ｂ細胞はまた、標準法（た
とえば、蛍光抗体法）により、活性化されたＢ細胞の表
面のＢ７−１および／またはＢ７−２などのコスティミ
ュラトリー分子の発現をアッセイすることにより、活性
化されたＢ細胞から分離することができる。
【００２４】Ｂ細胞などの抗原提示細胞は、該Ｔ細胞に
接触させる前に（たとえば、被験者に投与する前に）抗
原（たとえば、可溶性タンパク質）と接触させることが
でき、該細胞を用いてｇｐ３９アンタゴニストの存在下
で該Ｔ細胞に該抗原を提示させることにより該抗原に特
異的なＴ細胞寛容を誘導させることができる（実施例１
参照）。別法として、抗原提示細胞として同種細胞を用
いることにより、アロ抗原に対する寛容を誘導すること
ができる（実施例２および３参照）。同種細胞はＴ細胞
に同種タンパク質の抗原性断片を提示する。一つの態様
において、同種細胞は同種Ｂ細胞などの同種リンパ球細
胞である。別法として、被験者はまた末梢血中の細胞
（たとえば、末梢血リンパ球）、脾臓細胞または骨髄細
胞で寛容にすることができる。骨髄移植の場合、ドナー
の骨髄細胞自身がＴ細胞に接触する抗原提示細胞として
働く（たとえば、被験者に投与）。従って、同種骨髄を
ｇｐ３９アンタゴニストとともに投与することにより、
受容者において骨髄に対する寛容を誘導し、移植片対宿
主病を防ぐことができる（実施例４および５参照）。
【００２５】ＩＩＩ．細胞およびｇｐ３９アンタゴニス
トの投与：抗原特異的なＴ細胞寛容は、本発明に従い、
Ｔ細胞に抗原を提示し、該Ｔ細胞上のｇｐ３９と相互作
用するリガンドを発現する細胞とともにｇｐ３９アンタ
ゴニストを被験者に投与することによって誘導すること
ができる。好ましい態様において、抗原提示細胞および
ｇｐ３９アンタゴニストは同時に投与する。別法とし
て、たとえばｇｐ３９アンタゴニストが長い半減期を有
する抗体である場合に、該細胞を投与する前に該アンタ
ゴニストを投与することができる。投与しようとする細
胞が骨髄細胞であり、移植片対宿主病の抑制が望まれる
場合には、ドナー骨髄を受容者のＢ細胞およびｇｐ３９
アンタゴニストとともにインビトロでインキュベートす
ることにより、受容者宿主に移す前に該骨髄中のドナー
Ｔ細胞を寛容にすることができる。ｇｐ３９処置は、必
要なら骨髄を移す間または移した後にインビボで継続す
ることができる。骨髄または他の臓器移植を受ける被験
者において、該臓器または骨髄細胞を移す前に同種寛容
を誘導させる治療計画で処置することにより、該被験者
において該移植に対する同種寛容を誘導することができ
る。この前処置治療計画には、ｇｐ３９アンタゴニスト
とともにドナーの細胞を被験者に投与することが含まれ
る。ドナーの細胞としては、たとえば、Ｂ細胞、全末梢
血またはそのフラクション（たとえば、末梢血リンパ球
または小さな休止リンパ球またはＢ細胞）が挙げられ
る。
【００２６】抗原提示細胞の（アンタゴニストと組み合
わせた）単回投与量の投与が、Ｔ細胞寛容を誘導するに
充分であることがわかった（実施例参照）。投与する抗
原提示細胞の数は、使用した細胞のタイプ、組織または
臓器移植のタイプ、受容者の体重、受容者の一般的状態
または当業者に知られた他の変数に依存して変わってよ
い。本発明の方法に使用する細胞の適当な数は、常法
（たとえば、実施例に記載するアッセイを用いて）によ
り当業者が決定することができる。細胞の投与は、受容
者において寛容を誘導するのに適した形態および経路で
行う。細胞の投与は、緩衝食塩水や同様のビヒクルなど
の生理学的に許容しうる溶液中にて行うことができる。
細胞は静脈内に投与するのが好ましい。本発明のアンタ
ゴニストは、Ｔ細胞寛容を誘導するため、インビボの医
薬投与に適した生物学的に両立しうる形態にて被験者に
投与する。「インビボの医薬投与に適した生物学的に両
立しうる形態」とは、該タンパク質の治療効果が毒性作
用より重視されるように投与されるアンタゴニストの形
態をいう。被験者なる語は、免疫応答を引き起こしうる
生物、たとえば哺乳動物を包含する。被験者の例として
は、ヒト、イヌ、ネコ、マウス、ラット、およびこれら
のトランスジェニック種が挙げられる。ｇｐ３９アンタ
ゴニストの投与は、任意に薬理学的に許容しうる担体中
にて医薬形態で行うことができる。治療学的に活性な量
のアンタゴニストの投与とは、所望の結果を達成するの
に必要な投与量および時間にて有効な量と定義される。
たとえば、ｇｐ３９のアンタゴニストの治療学的に活性
な量は、個体の疾患状態、年齢、性および体重、および
該アンタゴニストが該個体において所望の応答を引き起
こす能力に従って変わってよい。投与計画は最適の治療
応答をもたらすように調節する。たとえば、幾つかの分
割投与量を毎日投与することができるし、または治療状
況の緊急性によって示されるように比例して投与量を減
らしていくこともできる。
【００２７】活性化合物（たとえば、アンタゴニスト）
の投与は、注射（皮下、静脈内など）、経口投与、吸
入、経皮投与、または直腸投与などの常法により行うこ
とができる。投与経路に応じて、活性化合物を不活化す
る酵素、酸または他の天然の条件から該化合物を保護す
るために該化合物を物質中にコーティングすることがで
きる。好ましい投与経路は静注である。非経口以外の投
与によりｇｐ３９のアンタゴニストを投与するには、不
活化を防ぐ物質で該アンタゴニストをコーティングする
かまたは該物質と該アンタゴニストとを同時に投与する
必要がある。たとえば、アンタゴニストは、適当な担体
または希釈剤中にて、または酵素阻害剤とともにまたは
リポソームなどの適当な担体中にて一緒に投与すること
ができる。薬理学的に許容しうる希釈剤としては、食塩
および水性緩衝液が挙げられる。酵素阻害剤としては、
膵臓トリプシンインヒビター、ジイソプロピルフルオロ
ホスフェート（ＤＥＰ）およびトラシロール（trasylo
l）が挙げられる。リポソームとしては、水中油中水懸
濁液並びに通常のリポソーム（ストレジャン（Ｓtreja
n）ら（１９８４）Ｊ.Ｎeuroimmunol７：２７）が挙げ
られる。
【００２８】活性化合物はまた、非経口または腹腔内投
与することもできる。グリセロール、液体ポリエチレン
グリコール、およびそれら混合物中、および油中で分散
液を調製することもできる。通常の貯蔵および使用条件
では、これら調製物には微生物の増殖を防ぐための保存
剤が含まれる。注射用途に適した医薬組成物としては、
滅菌水溶液（水溶性の場合）または分散液および滅菌注
射用溶液または分散液を即座に調製するための滅菌粉末
が挙げられる。いずれの場合においても組成物は滅菌さ
れていなければならず、容易な注射器操作が可能な程度
に流体でなければならない。該組成物は製造および貯蔵
条件下で安定でなければならず、細菌や真菌などの混入
微生物の作用から保護されていなければならない。担体
は、たとえば、水、エタノール、ポリオール（たとえ
ば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体
ポリエチレングリコールなど）、およびこれらの適当な
混合物を含む溶媒であるかまたは分散媒体であってよ
い。適当な流動性は、たとえば、レシチンなどのコーテ
ィングを使用することによって、分散液の場合は必要な
粒径を維持することによって、および界面活性剤を使用
することによって維持することができる。微生物の作用
からの保護は、種々の抗菌剤および抗真菌剤、たとえば
パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビ
ン酸、チメロサールなどにより行うことができる。多く
の場合、等張剤、たとえば糖、ポリアルコール、たとえ
ばマンニトール、ソルビトール、塩化ナトリウムなどが
組成物中に含まれているのが好ましいであろう。注射用
組成物の持続吸収は、吸収を遅らせる薬剤、たとえばモ
ノステアリン酸アルミニウムやゼラチンなどを組成物中
に配合することにより行うことができる。滅菌注射用溶
液の調製は、必要なら上記成分の１またはその組み合わ
せとともに所要量の活性化合物（たとえば、ｇｐ３９の
アンタゴニスト）を適当な溶媒中に配合し、ついで滅菌
濾過することにより行うことができる。一般に分散液の
調製は、基本的な分散媒体と上記から選ばれた必要な他
の成分を含む滅菌ビヒクル中に活性化合物を配合するこ
とにより行う。滅菌注射溶液の調製のための滅菌粉末の
場合は、好ましい調製法は真空乾燥および凍結乾燥であ
り、これにより活性成分（たとえば、アンタゴニスト）
と前以て滅菌濾過した溶液からの所望の追加成分との粉
末が得られる。
【００２９】上記のように活性化合物を適切に保護して
ある場合は、該タンパク質は、たとえば不活性な希釈剤
または同化しうる食用担体とともに経口投与することが
できる。本明細書において「薬理学的に許容しうる担
体」とは、溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤およ
び抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などのすべてを包
含する。薬理学的に活性な物質のためのかかる媒体およ
び剤の使用は、当該技術分野でよく知られている。通常
の媒体または剤が活性化合物と両立しない場合以外は、
治療学的組成物中に使用することができる。補助的な活
性化合物を該組成物中に配合することもできる。投与の
容易および投与量の均一さのため、単位投与剤型で非経
口組成物に調合するのが特に有利である。本明細書にお
いて単位投与剤型とは、治療すべき哺乳動物被験者に対
する単位投与量として適した物理的に区別される単位を
いう。各単位には、所要の薬理学的担体と組み合わせて
所望の治療効果を奏するように計算された前以て決定さ
れた量の活性化合物が含まれる。本発明の単位投与剤型
は、（ａ）活性化合物の独特の特性および達成しようと
する特定の治療効果、および（ｂ）個体における治療感
受性（treatment of sensitivity）のためにかかる活性
化合物を調合する際の内在する技術的制約に直接依存し
て個々に特定される。 インビボでのＴ細胞の寛容に加
え、本発明はまた、たとえばｇｐ３９アンタゴニストの
存在下で抗原提示細胞と接触させることによる、インビ
トロでのＴ細胞の寛容をも包含する。たとえば、Ｔ細胞
を被験者から採取し、抗原提示細胞およびアンタゴニス
トとともに培養することによってインビトロで寛容に
し、ついで該Ｔ細胞を被験者に再投与することができ
る。
【００３０】ＩＶ．本発明の用途：本発明は、種々の抗
原に対してＴ細胞寛容を誘導するために応用することが
できる。たとえば、実施例１に記載するように、可溶性
抗原（たとえば、可溶性タンパク質）に対してＴ細胞寛
容を誘導することができる。Ｔ細胞の寛容はまた、自己
免疫疾患または異常な免疫応答を伴う疾患に関与する抗
原に対して行うことができる。たとえば、一つの態様に
おいて、抗原は自己抗原である。他の態様において、抗
原はアレルゲンである。別の態様において、Ｔ細胞の寛
容はまた外来細胞上に発現される抗原に対して行うこと
ができる（実施例２〜５に記載するように）。従って、
さらに他の態様において、抗原はアロ抗原または異種抗
原［ジェノアンチゲン（xenoantigen）］である。アロ
抗原および異種抗原に対するＴ細胞寛容の誘導は、ドナ
ーの移植片、たとえば組織または臓器移植片または骨髄
移植の移植受容者による拒絶を抑制するために移植にお
いて特別の用途を有する。加えて、骨髄移植中のドナー
Ｔ細胞の寛容は、移植片対宿主病を抑制するのに有用で
ある（実施例５参照）。
【００３１】
【発明の実施の形態】本発明を下記実施例によりさらに
詳しく説明するが、本発明はこれらに限られるものでは
ない。本明細書中に引用した全ての参考文献、特許およ
び公開された特許出願の内容は参照のため本明細書中に
引用される。
【００３２】実施例１：抗原特異的な寛容の誘導方法 マウスをＫＬＨ−パルス標識した脾臓Ｂリンパ球で５日
間免疫した。一次免疫の間、動物を抗ｇｐ３９抗体ＭＲ
１で処理するかまたは処理しなかった。最初の免疫から
５日後、マウスをフロイントの完全アジュバント（ＣＦ
Ａ）中のＫＬＨで局所（食趾（food pad））攻撃した。
マウスを５日後に屠殺し、取り出したリンパ節の水を切
り、その後、ＫＬＨに対するＴ細胞増幅応答をインビト
ロでアッセイした。結果 抗原でパルス標識した活性化Ｂリンパ球で免疫し、その
後、同抗原で攻撃した動物は、免疫を行った該抗原に対
して有意の免疫応答を生じる。抗原特異的Ｔリンパ球の
増殖により測定した応答を図１に示す。一次免疫の間に
抗ｇｐ３９抗体で動物を処理すると、インビトロで抗原
攻撃したときに抗原特異的なＴリンパ球の非応答性とい
う結果となった。抗ｇｐ３９抗体で処理した動物のリン
パ節から得られたＴリンパ球は、未処理の動物のリンパ
節から得られたＴリンパ球に比べて低下した増殖能を示
す。
【００３３】実施例２：同種細胞に対するＴ細胞寛容の
誘導方法 Ｂａｌｂ／ｃ（Ｈ−２d）マウスをＤＢＡ／２（Ｈ−
２b）マウスからの同種脾臓Ｂ細胞で免疫した。免疫後
の５日間、動物を抗ｇｐ３９抗体、ＭＲ１で処理するか
または処理しなかった。第６日目に動物を屠殺し、脾臓
を取り出した。その後、抗ｇｐ３９抗体で処理した動物
または未処理動物からの脾臓を刺激なしでまたは照射Ｄ
ＢＡ／２脾臓細胞とともにインビトロで培養した。この
二次同種刺激に対する増殖応答を培養の開始後３日目に
測定した。結果 同種脾臓Ｂ細胞で免疫した動物からのＴリンパ球は、同
細胞でインビトロにて５日後に攻撃したときに強い増殖
応答を生じる（図２）。しかしながら、同種Ｂ細胞で免
疫し抗ｇｐ３９抗体で処理したマウスからのＴリンパ球
は、その後インビトロで攻撃したときに低下した増殖能
を有する。抗ｇｐ３９抗体処理したマウスは、対照の未
処理動物に比べて攻撃に対する応答性において約５０％
の低下を示す。
【００３４】実施例３：抗ｇｐ３９抗体処理は同種Ｂ細
胞に対するＣＴＬ応答の生成を妨害する。 本実施例においては、細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）の生
成におけるｇｐ３９の役割を調べた。ＣＴＬの発生にお
けるｇｐ３９のインビボ機能を評価するため、同種Ｂ細
胞で免疫することによるアロ特異的なＣＴＬの生成に対
する抗ｇｐ３９抗体処理の効果を調べた。一次ＣＴＬ応
答および二次ＣＴＬ応答の両方に対する抗ｇｐ３９抗体
処理の効果を決定した。一次ＣＴＬ応答 同種Ｂ細胞がインビボでアロ特異的なＣＴＬ応答を引き
起こすのを抗ｇｐ３９抗体が妨害しうるか否かを試験す
るため、同種Ｂ細胞（Ｔ細胞を欠く脾臓細胞）を抗ｇｐ
３９抗体とともに、または抗ｇｐ３９抗体なしで受容者
のマウスに投与した。Ｂａｌｂ／ｃマウス（雌、６〜８
週齢、ジャクソン・ラボラトリーズ（Ｊackson Ｌabora
tories）、バーハーバー、メイン州）を、抗Ｔｈｙ１.
２抗体（ＡＴＣＣクローンＨＯ１３.４から調製した腹
水）およびウサギ補体処理によりＴ細胞を欠くＣ５７Ｂ
Ｌ／６（雌、６〜８週齢、ジャクソン・ラボラトリー
ズ、バーハーバー、メイン州）脾臓細胞（３０〜５０×
１０6）で免疫した。ついで、これら受容者のマウスを
抗ｇｐ３９抗体で５日間処理するか（第０日目、第２日
目および第４日目に２５０ｍｇ／受容者）または処理し
なかった。第５日目に脾臓を取り出し、４時間クロム放
出アッセイを用いてＣＴＬ応答を測定した。未感作Ｂａ
ｌｂ／ｃマウスからの脾臓細胞を負の対照エフェクター
細胞として用いた。使用した標的細胞は、Ｅ雌Ｋ１（Ｈ
−２b，Ｃ５７ＢＬ／６株由来のＴ細胞リンパ腫）およ
びＰ８１５（Ｈ−２d、肥満細胞腫、ＤＢＡ／２Ｊ株由
来）であった。51Ｃｒ−標識した標的細胞を洗浄し、エ
フェクター細胞とともにエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）
比が１００：１、２０：１および４：１で９６ウエルプ
レート中にウエル当たり１×１０4細胞にてプレーティ
ングした。プレートを簡単に遠心分離にかけ、ついで５
％ＣＯ2中、３７℃にて４時間インキュベートした。プ
レートをもう一度遠心分離にかけ、各ウエルから１００
ｍｌの細胞不含上澄み液を回収し、ガンマカウンティン
グにかけた（ＬＫＢクリニガンマ（ＬＫＢＣlinigamm
a）、ウオレス（Ｗallace Ｉnc.）、ゲイサーズバー
グ、メリーランド州）。特異的溶解％を（ａ−ｂ）／ｃ
と定義する（式中、ａ＝エフェクター細胞とともにイン
キュベートした標的細胞により放出されるｃｐｍ、ｂ＝
培地のみでインキュベートした標的細胞により放出され
る（自然放出）ｃｐｍ、およびｃ＝標的細胞から凍結−
解糖により放出可能なｃｐｍ（導入された全ｃｐｍの約
８０％））。Ｐ８１５標的は、試験した細胞試料のいず
れによっても溶解しなかった。Ｅ雌Ｋ１標的の結果を図
３に示す。図３において、図示したグループは、未処理
マウス（ｉ）、抗ｇｐ３９抗体処理マウス（ｉｉ）およ
び未感作Ｂａｌｂ／ｃマウスからの脾臓細胞［（ｉｉ
ｉ）；負の対照エフェクター細胞として使用］である。
これら結果は、抗ｇｐ３９抗体および同種細胞を与えら
れたマウスは同種Ｂ細胞に応答してインビボで一次ＣＴ
Ｌ応答を生成しないことを示す。対照的に、抗ｇｐ３９
抗体が存在しないと、同種Ｂ細胞はアロ抗原に対して受
容者を感作し、実質的なＣＴＬ応答を誘導する。
【００３５】抗ｇｐ３９抗体が活性化されていない脾臓
Ｂ細胞の寛容原作用のみを増幅しうるか否かを決定する
ため、ＬＰＳ−活性化Ｂ細胞を用いて抗ｇｐ３９抗体の
存在下または不在下でＣＴＬを感作させた。Ｃ５７ＢＬ
／６マウスからのＢ細胞を上記と同様にして調製し、リ
ポ多糖（ＬＰＳ；５０ｍｇ／ｍｌ；シグマ・ダイアグノ
スティックス（Ｓigma Ｄiagnositics）、セントルイ
ス、ミズーリ州）の存在下または不在下で２日間培養し
た。ついで、細胞を回収し、充分に洗浄し、Ｂａｌｂ／
ｃ受容マウスに腹腔内注射した（３０〜５０×１
０6）。受容マウスを上記のように第０日目、第２日目
および第４日目に抗ｇｐ３９抗体で処理するかまたは処
理しなかった。第５日目に脾臓細胞を取り出し、ＣＴＬ
応答を上記と同様にして決定した。２つの独立した実験
の結果を図４に示す（上段および下段のパネル）。図示
したグループは、処理なしのインビボＬＰＳ幼若細胞
（blasts）（ｉ）、抗ｇｐ３９抗体処理したインビボＬ
ＰＳ幼若細胞（ｉｉ）、処理なしのインビボ休止Ｂ細胞
（ｉｉｉ）、および抗ｇｐ３９抗体処理したインビボ休
止Ｂ細胞（ｉｖ）である。これら結果は、完全ではない
が、抗ｇｐ３９抗体はまた同種ＬＰＳ幼若細胞に対する
一次ＣＴＬ応答をも減少させることを示している。
【００３６】二次ＣＴＬ応答 ＣＴＬ生成に対する抗ｇｐ３９抗体および同種Ｂ細胞の
投与の影響を調べるため、処理および未処理マウスから
の脾臓細胞をインビトロで刺激し、ＣＴＬ応答の範囲を
調べた。Ｂａｌｂ／ｃマウスを上記と同様にしてＣ５７
ＢＬ／６由来のＢ細胞でインビボにて感作させた。抗ｇ
ｐ３９抗体および対照のハムスターＩｇ（ＨＩｇ）処理
した動物から脾臓細胞を取り出し、種々のマイトマイシ
ンＣ処理した（３７℃にて２.５ｍｇ／ｍｌ、シグマ・
ダイアグノスティックス、セントルイス、ミズーリ州）
脾臓Ｂ細胞の株（抗Ｔｈｙ１.２抗体＋補体処理により
調製）とともに５×１０6スティミュレーター／ｍｌに
て５日間培養した（「レスポンダー（responder
s）」）。スティミュレーターグループはＣ５７ＢＬ／
６（Ｈ−２b）およびＢａｌｂ／ｃ（Ｈ−２d）であり、
それぞれ二次同種応答および一次同系応答を示す。ステ
ィミュレーター細胞およびレスポンダー細胞を、新たに
調製した感作ＲＰＭＩ−１６４０培地（バイオ・ホワイ
テーカー（Ｂio Ｗhittaker）、ウオーカースビル、メ
リーランド州）、１×１０5Ｍ ２−メルカプトエタノー
ル（バイオ−ラド・ラボラトリーズ（Ｂio−Ｒad Ｌabo
ratories）、ハーキュールズ、カリフォルニア州）、２
ｍＭ Ｌ−グルタミン（シグマ・ダイアグノスティック
ス、セントルイス、ミズーリ州）、５００Ｕ／ｍｌペニ
シリンおよび５０００Ｕ／ｍｌストレプトマイシン（シ
グマ・ダイアグノスティックス、セントルイス、ミズー
リ州）中で培養した。５日後、レスポンダー細胞を回収
し、死細胞を密度勾配遠心分離により除去した。得られ
た生細胞を上記ＣＴＬアッセイにおいてエフェクターと
して用いた。標的にはＥ雌Ｋ１（Ｈ−２b，Ｃ５７ＢＬ
／６株由来のＴ細胞リンパ腫）およびＰ８１５（Ｈ−２
d，肥満細胞腫、ＤＢＡ／２Ｊ株由来）が含まれてい
た。その結果を図６に示す。図示した同種刺激エフェク
ターグループは、ＨＩｇ処理受容者（ｉ）、未感作Ｂａ
ｌｂ／ｃ（ｉｉ）および抗ｇｐ３９抗体処理した受容者
（ｉｉｉ）である。対応する同系応答（Ｂａｌｂ／ｃ細
胞で刺激したＢａｌｂ／ｃ細胞）は白抜きの記号で示
す。予想されたように、抗ｇｐ３９抗体の不在下で同種
Ｔ欠損脾臓細胞（Ｈ−２b）でマウスをインビボ免疫す
ると、インビトロで強い二次ＣＴＬ応答となった。マウ
スに抗ｇｐ３９抗体を与えた場合には、強められた二次
抗Ｈ−２b ＣＴＬ応答は観察されなかった。
【００３７】抗ｇｐ３９抗体によるＣＴＬ応答の抑制の
特異性を決定するため、上記脾臓細胞培養を、ＣＴＬア
ッセイにおいてスティミュレーターとしてＢ１０ＢＲ
（Ｈ−２k）脾臓Ｂ細胞を、標的としてＳＬ８（Ｈ−
２k、ＡＫＲ株由来の特発性Ｔ細胞リンパ腫）を用いて
抗Ｈ−２k同種応答（第三者同種応答）について分析し
た。その結果を図７に示す。図示したグループは、未感
作Ｂａｌｂ／ｃ（ｉ）および抗ｇｐ３９抗体処理した受
容者（ｉｉ）である。これら結果は、抗ｇｐ３９抗体処
理による抗Ｈ２b特異的ＣＴＬ応答の抑制がアロ特異的
であることを示している。なぜなら、Ｈ−２b脾臓細胞
および抗ｇｐ３９抗体の投与が傍観者であるアロ抗原
（Ｈ−２k）に対するインビトロＣＴＬ応答に変化をも
たらさなかったからである。以上を総合すると、これら
データは、抗ｇｐ３９抗体がアロ特異的なＣＴＬ応答
（一次および二次の両者）の生成を妨害することを示し
ている。抗ｇｐ３９抗体の存在下では、関連するアロ抗
原に特異的なＣＴＬ前駆体はなお存在している。なぜな
ら、インビトロの二次培養において若干の抗Ｈ−２b Ｃ
ＴＬ活性を示すことができるからである。抗ｇｐ３９抗
体処理は、ＣＴＬ感作（priming）を阻止することによ
り、または感作アロ特異的ＣＴＬの頻度を減少させるこ
とにより、二次インビトロ応答を減少させたと結論する
ことができる。休止Ｂ細胞の使用は、この非応答性を示
すために強制的なものではない。なぜなら、ＬＰＳ幼若
細胞によって誘導された同種ＣＴＬ応答もまた抗ｇｐ３
９抗体によって損なわれたからである。
【００３８】実施例４：同種マウス骨髄の移植は、受容
者をｇｐ３９に対する抗体で処理した場合には安定なキ
メラを誘導する。 従来の化学療法では治癒され得なかった多くの血液疾患
の治療には、同種骨髄の移植が含まれる。この攻撃的な
療法には、クロノジェニックな（clonogenic）腫瘍細胞
を撲滅させるべく、同種骨髄の潅流と組み合わせた骨髄
腫を撲滅しうる（myeloablative）高投与量の化学療法
剤の投与が含まれる。胸腺を照射して胸腺Ｔ細胞を欠失
させると、抗ＣＤ４モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を含
むＴ細胞に対するｍＡｂを使用した場合に安定なキメラ
の頻度が増大することがすでに示されている。この抗体
療法により、Ｔ細胞欠失、それゆえドナー特異的な寛容
が得られ、このことはドナー皮膚移植に対する寛容によ
って示される。３００ラドのＷＢＩ、インビボ抗Ｔ細胞
ｍＡｂ処理、および同種骨髄の投与後に永久的な同種移
植を達成できないのは、胸腺内の影響を受けないＴ細胞
によるものである。抗ＣＤ４ｍＡｂおよび抗ＣＤ８ｍＡ
ｂの使用により末梢血および脾臓のＴ細胞の有効な欠失
をもたらし得るが、胸腺のＴ細胞はｍＡｂでコーティン
グされるのみで欠失されるわけではない。それゆえ、胸
腺照射をマウスに行う。
【００３９】方法 移植片対宿主病が誘導されるのを回避するため、親への
Ｆ１の同種骨髄移植（ＢＭＴ）のマウスモデルを用い
た。本発明者らは、（Ｃ５７ＢＬ／６×Ｂａｌｂ／ｃ）
Ｆ１であるＦ１株ＣＢ６を用い、その結果、Ｈ−２d/b
の全ＭＨＣハプロタイプとなった。骨髄を取り出し、抗
ｇｐ３９抗体ＭＲ１とともに、または抗ｇｐ３９抗体な
しで、照射したＢＡＬＢ／ｃ親に静脈内注射した。キメ
ラ化（chimerism）の最良のレベルを決定するため、お
よび各照射レベルで抗ｇｐ３９抗体処理した動物と処理
しない動物とを比較するため、全身照射（whole body i
rradiation）（ＷＢＩ）レベルを変化させた。キメラ化
の決定は、Ｈ−２d（ＢＡＬＢ／ｃ）マウス内に存在す
るＨ−２bＭＨＣハプロタイプの末梢血リンパ球のフロ
ーサイトメトリーにより行った。このマウスの組み合わ
せが適しており、５００および６００ラドＷＢＩのレベ
ルでキメラ現象が得られることが以前に示されている。
【００４０】結果 フローサイトメトリーによりＣ５７ＢＬ／６由来細胞
（Ｈ−２b）の同定を行うことによってキメラ化を検出
した。この研究の開始のときから抗ｇｐ３９抗体で処理
した場合にのみ、４００、５００および６００全身照射
にて照射したマウスにおいて１４日以内にキメラ化が出
現することがわかった。６００全身照射を受けた場合に
４００ラドの抗体処理群と同じ程度に骨髄を受け入れた
のを例外として、抗体処理を受けなかったマウスはすべ
ての照射レベルにおいて細胞を拒絶した（表１）。抗ｇ
ｐ３９抗体療法とともに４００、５００および６００ラ
ドで治療後６週間のキメラ化のレベルは、それぞれ７
０.７＋５.７４、９４.１および８４.４＋８.５６であ
ったのに対し、抗体処理なしでの６００ラドでは８５.
７＋５.９キメラであることがわかった（表２）。この
時点で細胞を表現型で分類すると、Ｔ細胞、Ｂ細胞およ
びマクロファージはすべてキメラ化され、処理した場合
の４００ラドでの程度は未処理群の６００ラドでの程度
と同じであった（表２）。また、抗ｇｐ３９抗体処理
は、末梢内でのリンパ球細胞のいずれの全パーセント集
団をも有意に変化させないとも思われた。抗ｇｐ３９抗
体により動物の処理が終了したとき、これら動物は移植
後８週間まで安定にキメラ化されることがわかった。
【表１】 キメラ化を生じる全身照射のレベル。括弧内の数字は各
レベルでの被験動物の総数を示す。
【表２】 Ｈ−２ｋｂ±標準誤差について陽性のＢ細胞、Ｔ細胞お
よびマクロファージ（Ｍac）のパーセント
【００４１】実施例５：抗ｇｐ３９抗体による受容者の
処理と組み合わせた同種骨髄移植は急性および慢性の移
植片対宿主病を抑制する。 本実施例においては以下の方法を用いた。 マウス：ＤＢＡ／２（Ｈ−２d）、Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ
−２b）およびＢ６Ｄ２Ｆ1（（Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ−２
d）×ＤＢＡ／２）Ｆ1ハイブリッド）マウスをＮＣＩラ
ボラトリーズ（ベセスダ、メリーランド州）から入手
し、ダートーマス・メディカル・スクールの動物施設中
のウイルス不含環境中で維持した。この研究に使用した
マウスはすべて雌であり、６〜８週齢であった。慢性Ｇ
ＶＨＤの誘導：慢性ＧＶＨＤの誘導を、親（ＤＢＡ／
２）の脾臓細胞を非照射（Ｃ５７ＢＬ／６×ＤＢＡ／
２）Ｆ1ハイブリッド受容者に静脈内注射することによ
り行った（ファスト（Ｆast,Ｌ.Ｄ.）（１９９０）、
Ｊ.Ｉmmunol.１４４：４１７７）。脾臓を取り出すた
め、親マウスを麻酔し、頚部脱臼により屠殺した。分離
した脾臓細胞を洗浄し、Ｆ1受容者に静脈内注射するた
めＲＰＭＩ１６４０培地中に再懸濁した（ホワイテーカ
ー、ウオルダースビル、メリーランド州）。急性ＧＶＨ
Ｄの誘導：急性ＧＶＨＤの誘導は、親Ｃ５７ＢＬ／６脾
臓細胞を非照射（Ｃ５７ＢＬ／６×ＤＢＡ／２）Ｆ1ハ
イブリッド受容者に静脈内注射することにより行った。
慢性ＧＶＨＤの誘導の場合と同様にして、移植のための
細胞を調製した。
【００４２】抗体：抗ｇｐ３９抗体：以前に記載されて
いるようにして（フォイら（１９９３）Ｊ.Ｅxp.Ｍed.
１７８：１５６７〜１５７５；ノエル（Ｎoelle,Ｒ.
Ｊ.）ら（１９９２）Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ８
９：６５５０）、ＭＲ１を腹水中に産生させ、イオン交
換ＨＰＬＣにより精製した。ポリクローナル抗イソタイ
プ抗体：抗ＩｇＧ１抗体および抗ＩｇＡ抗体および標準
対照はすべてサザーン・バイオテクノロジー・アソシエ
ーツ（Ｓouthern Ｂiotechnology Ａssociates,Ｉnc.）
（バーミンガム、アラバマ州）から入手した。抗ＩｇＥ
抗体：ＩｇＥ特異的ＥＬＩＺＡに用いる抗ＩｇＥ抗体
（ＢＩＥ３およびビオチンＡＭ９５）および標準（Ａ３
Ｂ１）はすべて、ワルドシュミット（Ｔ.Ｗaldschmid
t）博士（アイオワ州）から親切に贈呈されたものであ
った。抗ＭＨＣハプロタイプ抗体：Ｈ−２Ｋb ＦＩＴＣ
結合抗体およびＨ−２Ｄdビオチン結合抗体をファーミ
ンジェン（ＰharＭingen）（サンジエゴ、カリフォルニ
ア州）から入手した。細胞株：使用した細胞株にはＰ８
１５（Ｈ−２d）およびＬＢ２７.４（Ｈ−２bxd）が含
まれ、これらはアメリカン・タイプ・カルチャー・コレ
クションから入手した。細胞株ｃｌ.１８.５（Ｈ−２
ｂ）はウイリアム・アール・グリーン（Ｗilliam Ｒ.Ｇ
reen）博士から親切に贈呈されたものであった。インビ
トロでのポリクローナルＩｇ産生：対照およびｃＧＶＨ
Ｄマウスから脾臓を取り出し、単一細胞懸濁液を調製し
た。細胞をトリス緩衝塩化アンモニウムで処理して赤血
球を除去し、血球計で目視でカウントすることにより全
白血球数を決定した。細胞（５×１０6）を１ｍｌの完
全(ｃ)ＲＰＭＩ−１６４０培地（１０％ウシ胎仔血清
（ハイクローン（Ｈyclone）、ローガン（Ｌogan）、ユ
タ州）、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、２ｍＭ Ｌ−グルタミ
ン、５０００Ｕ／ｍｌペニシリンおよび５０００ｍｇ／
ｍｌストレプトマイシンを添加）中、３７℃、５％ＣＯ
2にて３日間インキュベートした。細胞をペレット化す
ることにより培養上澄み液を回収し、イソタイプ−特異
的ＥＬＩＳＡアッセイによりＩｇを定量した。イソタイ
プ特異的および抗原特異的ＥＬＩＳＡ：ＩｇＧ1および
ＩｇＡの検出のためのＥＬＩＳＡ：ＰＢＳ中のヤギ抗マ
ウスＩｇＧ1およびＩｇＡ（１０μｇ／ｍｌ；サザーン
・バイオテクノロジー・アソシエーツ、バーミンガム、
アラバマ州）を９６−ウエルポリビニルマイクロタイタ
ープレートのウエル上に、３７℃にて１時間、ついで４
℃にて一夜吸着させた。プレートを洗浄し、１％ＦＣＳ
を含有するＰＢＳで３７℃にて１時間ブロックした。プ
レートを再び洗浄し、上澄み液の適当な希釈液および標
準対照（ＩｇＧ1およびＩｇＡ、サザーン・バイオテク
ノロジー・アソシエーツ、バーミンガム、アラバマ州）
を３７℃にて２時間かけて加えた。この時間後、プレー
トを３回洗浄し、アルカリホスファターゼを結合したヤ
ギ抗マウスＩｇＧ1またはＩｇＡ（１／５００希釈）
（サザーン・バイオテクノロジー・アソシエーツ、バー
ミンガム、アラバマ州）を３７℃にて２時間かけて加え
た。プレートを充分に洗浄し、ホスファターゼ基質（１
ｍｇ／ｍｌ；シグマ・ダイアグノスティックス（Ｓima
Ｄiagnostics）、セントルイス、ミズーリ州）を加え、
適当な発色変化を起こさせた。４１０ｎｍの吸光度をＥ
ＬＩＳＡリーダー（ダイナテック・ラボラトリーズ（Ｄ
ynatech Ｌaboratories,Ｉnc.））で読み取ることによ
り読み取りを行った。適当なイソタイプ標準曲線と比較
することによってＩｇの濃度を決定し、平均＋標準誤差
（ｎ＝３）として表した。
【００４３】ＩｇＥの検出のためのＥＬＩＳＡ：９６−
ウエルポリビニルマイクロタイタープレートのウエルを
抗マウスＩｇＥ捕捉抗体（Ｂ１Ｅ３（２ｍｇ／ｍｌ））
で４℃にて一夜コーティングし、ついで１％ＦＣＳを含
有するＰＢＳで３７℃にて１時間ブロックした。プレー
トを再び洗浄し、上澄み液の適当な希釈液および標準対
照（Ａ３Ｂ１（ＩｇＥ））を３７℃にて２時間かけて加
えた。プレートを充分に洗浄し、各ウエルにＥＭ９５−
ビオチン（５ｍｇ／ｍｌ）を加え、３７℃にて２時間イ
ンキュベートした。この時間の後、ストレプトアビジン
に結合したアルカリ−ホスファターゼをさらに２時間か
けて加え（１／５００希釈）、ついでホスファターゼ基
質（１ｍｇ／ｍｌ；シグマ・ダイアグノスティックス、
セントルイス、ミズーリ州）を加える前に充分に洗浄
し、適当な発色変化を起こさせた。４１０ｎｍの吸光度
をＥＬＩＳＡリーダー（ダイナテック・ラボラトリー
ズ）で読み取ることにより読み取りを行った。標準曲線
と比較することによってＩｇの濃度を決定し、平均＋標
準誤差（ｎ＝３）として表した。抗ＤＮＡ抗体の検出の
ためのＥＬＩＳＡ：０.１Ｍ炭酸ナトリウム／重炭酸ナ
トリウムを含有するカップリング緩衝液（ｐＨ９.８）
中でウシ胸腺ＤＮＡ（シグマ、セントルイス、ミズーリ
州）を溶解した。これを１０分間沸騰させ、ついで氷上
で３分間インキュベートした。ついで、このＤＮＡのＯ
Ｄ２６０を決定し、所望の５μｇ／ｍｌのＤＮＡが得ら
れるよう濃度を調節した。ついで、１００μｌを９６ウ
エルポリビニルマイクロタイタープレートのウエルに加
え、４℃にて一夜インキュベートした。ついで、プレー
トを３回洗浄し、１％ＣＦＣＳおよび０.０２％アジ化
ナトリウムを含むＰＢＳで３７℃にて１時間ブロックし
た。プレートを再び洗浄し、ついで系列希釈の血清試料
を加え（１００ｍｌ）、３７℃にて２時間インキュベー
トした。ついで、検出抗体、ヤギ抗マウスＩｇＧ1アル
カリホスファターゼを各ウエルに加え、３７℃にて再び
２時間インキュベートした。プレートを充分に洗浄し、
ホスファターゼ基質（１ｍｇ／ｍｌ；シグマ・ダイアグ
ノスティックス、セントルイス、ミズーリ州）を加え、
適当な発色変化を起こさせた。４１０ｎｍの吸光度をＥ
ＬＩＳＡリーダー（ダイナテック・ラボラトリーズ）で
読み取ることにより読み取りを行った。抗体力価を陽性
血清試料と比較し、結果を任意の単位で表した。
【００４４】ドナー由来の細胞の検出のためのフローサ
イトメトリー分析：正常ＢＤＦ1、抗ｇｐ３９抗体で処
理したｃＧＶＨＤマウスおよび処理していないｃＧＶＨ
Ｄマウスから脾臓細胞を取り出し、単一細胞懸濁液を調
製した。細胞をフィコール−ハイパック（４；１）上に
重層し、ついで室温で２０００ｒｐｍにて２０分間遠心
分離にかけた。得られたリンパ球層を取り、５％ＦＣＳ
を含有するＢＳＳで１回洗浄した。チューブ当たり１×
１０6細胞を５０μｌの最終容量中で染色のため用い
た。各チューブに５０μｌのラット血清を加えて抗体の
非特異的結合を防いだ。細胞を（ａ）対照抗体：ラット
Ｉｇ ＦＩＴＣ（１：１００最終希釈）およびＰＥ−ス
トレプトアビジン（１：５００最終希釈）および（ｂ）
ＦＩＴＣＨ−２ＫbおよびビオチンＨ−２Ｄd（ともに
１：１００最終希釈）で染色した。細胞を氷上で２０分
間インキュベートし、ついで２回洗浄して未結合抗体を
除去した。最後にＰＥ−ストレプトアビジン（１：５０
０最終希釈）を適当なチューブに加えてビオチン結合抗
体を氷上でさらに２０分間検出した。細胞をさらに２回
洗浄してベクトンディッキンソンＦＡＣスキャン（ＦＡ
ＣＳan）上で分析するための準備をした。前および側部
スキャッターによる陽性ゲーティングの後、関連するＭ
ＨＣハプロタイプについて陽性の細胞のパーセントを決
定するために試料当たり１０,０００の事象を集めた。
【００４５】ＣＴＬアッセイの評価のためのクロム放出
アッセイ：51Ｃｒ−標識標的細胞を洗浄し、エフェクタ
ー細胞とともにＥ：Ｔ比１００：１、２０：１および
４：１にて９６ウエルプレート中にウエル当たり１×１
０4でプレーティングした。使用した標的細胞には、Ｐ
８１５（Ｈ−２d）、ＬＢ２７.４（Ｈ−２bxd）および
ｃ１１８.５（Ｈ−２b）が含まれていた。プレートを簡
単に遠心分離にかけ、ついで５％ＣＯ2中、３７℃にて
４時間インキュベートした。プレートをもう一度遠心分
離にかけ、細胞不含上澄液のアリコートを各ウエルから
回収してガンマカウンターでカウントした。特異的溶解
パーセントは、（ａ−ｂ）／ｃ（式中、ａ＝エフェクタ
ー細胞とともにインキュベートした標的細胞から放出さ
れるｃｐｍ、 ｂ＝培地とのみインキュベートした標的
細胞から放出される（自然放出）ｃｐｍ、およびｃ＝標
的細胞について凍結−融解放出可能なｃｐｍ（導入した
全ｃｐｍの約８０％））として定義される。急性ＧＶＨ
Ｄ脾臓細胞のインビトロでの二次刺激：急性ＧＶＨＤ脾
臓を、抗ｇｐ３９抗体処理した動物、ＨＩｇ処理した動
物、または未処理動物から取り出した。脾臓の赤血球を
欠失させ、ついで細胞ウエル当たり１×１０4のアリコ
ートとした。照射したスティミュレーター細胞（Ｐ８１
５）を上記のように適当な標的細胞に加えた。
【００４６】結果 マウスにおけるＧＶＨＤは脾腫となる マウスにおいてｃＧＶＨＤの結果の一つは脾臓の肥大で
ある。これはドナー細胞の存在に応答して生じるもので
あるが、脾臓中に浸潤し肥大させるのは主として宿主自
身の細胞である（ロリンク（Ｒolink,Ａ.Ｇ.）ら（１９
８３）Ｊ.Ｅxp.Ｍed.１５８：５４６）。図８は、ｃＧ
ＶＨＤの開始から７〜１４日後には、脾臓がｃＧＶＨＤ
のないマウスに比べてほとんど２倍の数の白血球を含む
ことを示している。ｃＧＶＨＤの開始のときにマウスを
抗ｇｐ３９抗体で処理すると（２５０μｇ／マウス、第
０日目、２日目、４日目、および６日目）、ｃＧＶＨＤ
マウス中の白血球／脾臓の数が疾患のないマウスと同等
の値まで減少する。
【００４７】ＧＶＨＤによって誘導されたポリクローナ
ル免疫グロブリンの過剰産生 ｃＧＶＨＤを有するマウスではドナーＴ細胞とＢ細胞と
の間の同族相互作用のためにＩｇの過剰産生が起こるこ
とが報告されている（モリス（Ｍorris,Ｓ.Ｅ.）ら（１
９９０）Ｊ.Ｅxp.Ｍed.１７１：５０３）。抗ｇｐ３９
抗体がＩｇの過剰産生を抑制するかどうかを決定するた
め、ｃＧＶＨＤを有するマウスに抗ｇｐ３９抗体を投与
した。第７日目または１４日目に対照およびｃＧＶＨＤ
マウスから脾臓を取り出し、インビトロでのＩｇＧ1お
よびＩｇＡの自然産生についてＢ細胞をアッセイした。
ｃＧＶＨＤを有するマウスの脾臓細胞はインビトロで高
レベルのＩｇＡおよびＩｇＧ1を産生した（図９および
図１０）。しかしながら、ｃＧＶＨＤを有し抗ｇｐ３９
抗体で処理した（第０日目、２日目、４日目および６日
目）マウスでは、疾患を有しないマウスと同等のレベル
でＩｇＧ1およびＩｇＡを産生した。ｃＧＶＨＤを有す
るマウスの脾臓細胞の培養液に抗ｇｐ３９抗体を加えて
もインビトロでのＩｇ産生レベルは減少せず、抗ｇｐ３
９抗体がインビボでその作用を発揮することが示唆され
た。これら実験においてハムスターＩｇ（ＨＩｇ）を対
照として用いると、ＧＶＨＤの誘導において何ら抑制的
役割を示さず、実際にはポリクローナルＩｇの産生のみ
ならず結果としての脾腫においても該疾患が強調される
ことがわかった。未処理の１週間ＧＶＨＤ誘導マウスに
比べ、１週間ＨＩｇ処理したＧＶＨＤ誘導マウスにより
産生されるＩｇのレベルは８倍増加することが検出され
た。ＨＩｇはそれ自体免疫原であることは明白であっ
た。従って、未処理のＦ1受容マウスを関連対照群と表
示することに決定した。
【００４８】ＧＶＨＤにより誘導された血清の過剰なＩ
ｇＥおよび抗ＤＮＡ自己抗体に対する抗ｇｐ３９抗体の
作用 ｃＧＶＨＤの経過は、血清ＩｇＥおよび二本鎖ＤＮＡに
対する抗体の上昇によりモニターできる（モリスら（１
９９０）Ｊ.Ｅxp.Ｍed.１７１：５０３）。血清ＩｇＥ
レベルはＩｇＥ特異的なＥＬＩＳＡを用いて測定した。
慢性ＧＶＨＤが誘導されたマウスを抗ｇｐ３９抗体で第
０日目、２日目、４日目および６日目に処理し、その
後、何ら抗体を投与しなかった。マウスを１週間毎に採
血し、血清ＩｇＥレベルを確かめた（図１１）。ｃＧＶ
ＨＤは血清ＩｇＥレベルを１０〜１５倍増加させる。抗
ｇｐ３９抗体の投与は、ｃＧＶＨＤによって誘導された
血清ＩｇＥの増加を疾患の開始から８週間後まで抑制し
た。上昇血清ＩｇＥの抑制に加え、抗ｇｐ３９抗体の投
与はまた血清の抗ＤＮＡ自己抗体の生成を阻止した。慢
性ＧＶＨＤは抗ＤＮＡ抗体のレベルを５〜１０倍上昇さ
せるが、これが抗ｇｐ３９抗体処理によって減少した
（図１２）。
【００４９】以前の研究によると抗ｇｐ３９抗体（ＭＲ
１クローン）の半減期は１２日である（フォイら（１９
９３）Ｊ.Ｅxp.Ｍed.１７８：１５６７〜１５７５）。
抗ｇｐ３９抗体の検出に特異的なＥＬＩＳＡアッセイ
は、治療後８週間の処理マウスの血清で抗ｇｐ３９抗体
が検出されないことを示している。それゆえ、持続する
抗ｇｐ３９抗体ではｃＧＶＨＤの長引いた抑制を説明で
きない。ｃＧＶＨＤを有するマウスおよび抗ｇｐ３９抗
体を投与したマウスからの脾臓細胞がｃＧＶＨＤを転移
しうるか否かを調べるため、転移研究を行った。ｃＧＶ
ＨＤおよび抗ｇｐ３９抗体を受けた脾臓細胞は養子転移
（adoptive transfer）によりＩｇＥおよび抗ＤＮＡ自
己抗体の上昇血清レベルを誘導できなかったが、一方、
ｃＧＶＨＤを有するマウスの脾臓細胞は高められたｓＩ
ｇＥおよび抗ＤＮＡ抗体を誘導した。これらデータは、
アロ反応性のＴ細胞が誘導されて抗ｇｐ３９抗体処理の
結果、非応答性になったことを示唆している。
【００５０】アロ反応性のドナー細胞の検出 ドナー由来の細胞の脾臓内での存在についてｃＧＶＨＤ
誘導したマウスを分析したところ、Ｈ−２ＫbおよびＨ
−２Ｄdに対して二重に陽性に染色される正常なＢＤＦ1
と比べ、ｃＧＶＨＤは約５〜７％のドナー細胞を有して
いた。これら細胞はＤＢＡ／２由来であり、それゆえＨ
−２Ｄdに対してのみ陽性に染色される。これら細胞は
抗ｇｐ３９抗体処理とは無関係に検出された。このこと
は、未処理のｃＧＶＨＤ群においてポリクローナルＩｇ
の産生をもたらす受容Ｂ細胞に対するヘルパー機能を生
じさせることなく抗ｇｐ３９抗体処理がドナー細胞の移
植を可能とする時点を示している。
【００５１】急性ＧＶＨＤの誘導に対する抗ｇｐ３９抗
体処理の効果 急性ＧＶＨＤは、増大した抗同種ＣＴＬ応答の誘導を伴
う。ｇｐ３９−ＣＤ４０相互作用がＴh−Ｂ細胞相互作
用に重要であることは明らかであるが、他の免疫エフェ
クター機構の誘導もまた抗ｇｐ３９抗体療法によって変
化を受けるのかどうかについては明らかではない。ＡＧ
ＶＨＤをＦ1受容者にＣ５７ＢＬ／６脾臓を投与するこ
とにより誘導した。図８に示すように、同種細胞の移植
から１２日後に強いＨ−２b抗Ｈ−２d ＣＴＬ応答が測
定される。マウスをＨＩｇではなく抗ｇｐ３９抗体で処
理すると、Ｈ−２b抗Ｈ−２d ＣＴＬの生成が妨害され
た（図８）。２つの実験のうち一つにおいて、抗ｇｐ３
９抗体で処理するとＣＴＬ応答が未感作脾臓細胞で観察
されるものよりも低い程度まで減少した。このことは、
攻撃したときにＧＶＨＤマウスからの脾臓細胞を示唆し
た。ついで、これら脾臓細胞を照射Ｐ８１５細胞の存在
下で７日間培養し、ついでＣＴＬアッセイを行うと、こ
れら細胞は該Ｐ８１５細胞に対して二次刺激を起こさな
かったが、正常なＢＤＦ1脾臓は一次応答を起こした。
未処理のａＧＶＨＤ誘導マウスは、予想通り二次免疫応
答を起こした。これら結果は、急性ＧＶＨＤマウスを抗
ｇｐ３９抗体で処理するとＣＤ８＋集団が二次攻撃に対
して非応答性になることを示している。
【００５２】考察 抗ｇｐ３９抗体投与によるＧＶＨ誘導マウスにおける脾
腫の逆転（図８）、過剰Ｉｇ産生の抑制（図９および図
１０）、ＩｇＥおよび抗ＤＮＡ自己抗体産生の血清レベ
ルの抑制（図１１および図１２）は、抗ｇｐ３９抗体が
移植したＴ細胞が宿主Ｂ細胞活性化を誘導する能力を阻
止することを示唆している。この脾腫およびポリクロー
ナルＩｇＧ1およびＩｇＡ産生の抑制は抗体投与終了の
７日後に低いままである。ＩｇＥおよび抗ＤＮＡ抗体の
減少は、該処理の終了後８週間持続する。これら結果
は、反応性Ｔ細胞のクローン性欠失かまたはＴ細胞アネ
ルギーが起こったかのいずれかによりＴ細胞機能が影響
を受けたことを示している。サイトカイン産生細胞レベ
ルは抗体処理マウスにおいて正常のままであることが免
疫マウスのインシトゥ研究において以前に示されている
（ファン・デン・アートウエ（Ｖan den Ｅertwegh）ら
（１９９３）Ｊ.Ｅxp.Ｍed.１７８：１５５５〜１５６
５）。このことは該処理の結果としてＴ細胞が欠失しな
いことを示している。ｃＧＶＨＤマウスをドナー由来細
胞の存在について分析すると、未処理であるか抗ｇｐ３
９抗体で処理したかに関係なく存在することがわかっ
た。それゆえ、抗ｇｐ３９抗体は、これらドナーＴ細胞
に非応答性の状態を誘導する能力を有し、抗体応答の抑
制を引き起こす。実際、これら動物の脾臓を未感作の受
容者に移植すると、ドナーの脾臓が未処理のｃＧＶＨＤ
である場合に抗体レベルが上昇するが、抗ｇｐ３９抗体
処理したｃＧＶＨＤマウスは移植後に二次ｃＧＶＨＤ状
態を生じさせることができない。このデータは、抗ｇｐ
３９抗体がＴ細胞が強いＧＶＨＤ臨床免疫病理学および
脾腫を引き起こす能力を妨害すること、抗体投与がＣＤ
４+サブ集団に非応答性を引き起こすことを示唆してい
る。
【００５３】フリーンド（Ｆriend）マウス白血病ウイ
ルス誘発白血病に対する防御Ｔ細胞免疫を誘導させるた
めのＢ細胞欠失マウスの研究によって認められるよう
に、ＣＴＬの誘導のためにヘルプを提供するにはＢ細胞
が必要である（シュルツ（Ｓchultz,Ｋ.Ｒ.）ら（１９
９０）Ｓcience２４９）。それゆえ、ａＧＶＨＤ誘導マ
ウスにおいて抗ｇｐ３９抗体はＢ細胞の活性化を抑制
し、それゆえ抗原の提示を妨害し、かくしてＣＤ８+Ｔ
細胞を感作するものと思われる。ＣＤ８+ＣＴＬの生成
にはクラスＩＩ制限（class ＩＩ−restricted）Ｔｈ細
胞が必要であること（フォン・ベーマー（von Ｂoehme
r,Ｈ.）ら（１９７９）Ｊ.Ｅxp.Ｍed.１５０：１１３
４；キーン（Ｋeene,Ｊ.）ら（１９８２）Ｊ.Ｅxp.Ｍe
d.１５５：７６８）およびＴＣＲ親和性が低い場合には
ＣＤ４＋媒介Ｔ細胞ヘルプがインビボで必要であること
もまた示唆されている（ガオ（Ｇao,Ｘ.）ら（１９９
１）Ｊ.Ｉmmunol.１４７：３２６８）。
【００５４】ＣＤ８＋ＣＴＬ応答の誘導におけるＣＤ２
８−Ｂ７／ＢＢ１相互作用の役割を考察する研究が行わ
れている。ＣＤ２８−Ｂ７／ＢＢ１相互作用はクラスＩ
ＭＨＣ特異的ＣＴＬの生成に必要であり充分であること
がわかった（ハーディング（Ｈarding,Ｆ.Ａ.）および
アリソン（Ａllison,Ｊ.Ｐ.）（１９９３）Ｊ.Ｅxp.Ｍe
d.１７７：１７９１）。ＣＤ４０に対する抗体による正
常および白血病Ｂ細胞でのＢ７発現の抑制を含む研究に
よって示されるように、ＣＤ４０のリガンドがＢ７の重
要なインデューサーであるかもしれないことが示唆され
ている（ランハイム（Ｒanheim,Ｅ.Ａ.）およびキップ
ス（Ｋipps,Ｔ.Ｊ.）（１９９３）Ｊ.Ｅxp.Ｍed.１７
７：９２５）。以上を総合すると、これら研究は、抗ｇ
ｐ３９抗体は、ＣＤ４＋Ｔ細胞とＢ細胞との相互作用を
阻止することによって、増殖およびサイトカインの産生
を可能とするほど充分にＢ細胞がＴ細胞を活性化させる
ようにするＢ７の発現を誘導できないようにすることを
示している。以上を要するに、このデータは、まずｇｐ
３９とそのリガンドＣＤ４０との間のＴ−Ｂ細胞同族相
互作用によるＣＴＬ生成の誘導にＣＤ４＋Ｔ細胞が必要
であることを示唆している。ついで、Ｂ細胞上のＣＤ４
０のシグナル生成（signaling）はＢ７／ＢＢ１を上方
制御（upregulation）する。ついで、Ｂ７／ＢＢ１とＴ
細胞上のリガンドＣＤ２８との相互作用がＴ細胞増殖お
よびサイトカイン産生を促進させる。しかしながら、Ｔ
細胞に一つのシグナルのみが提供される、すなわちｇｐ
３９とＣＤ４０との相互作用のみの場合には、第二のシ
グナルは得られない。ついで、Ｔ細胞において非応答性
が誘導され、寛容となり、またはアネルギーとなる。
【００５５】これら研究は、ａＧＶＨＤがマウスに誘導
される場合には抗Ｈ−２d応答が得られることを示して
いる。しかしながら、動物を抗ｇｐ３９抗体で処理する
とＣＴＬ応答は得られない。抗ｇｐ３９抗体は、以前に
記載された方法によって（シュルツら（１９９０）Ｓci
ence２４９）ＣＴＬ生成を抑制することが明らかであ
る。Ｂ細胞はＣＤ４０結合によって活性化されえず、そ
れゆえＣＴＬの誘導を促進することができない。さら
に、本発明者らの研究は、脾臓細胞をインビトロでＰ８
１５細胞で攻撃した場合に、抗ｇｐ３９抗体にインビボ
で暴露された細胞は二次抗Ｈ−２dＣＴＬを起こさせる
ことができないことを示している。それゆえ、このこと
は、抗ｇｐ３９抗体がＴ細胞区画に寛容の状態を誘導し
たことを示している。なぜなら、ｇｐ３９はＣＤ４０に
結合することができないからであり、かくしてＢ７／Ｂ
Ｂ１上方制御は存在せず、それゆえＴ細胞はさらに活性
化されることなく非応答性のままである。また、休止Ｂ
細胞は、抗ＩｇＭ抗体、ＰＭＡまたはＬＰＳで前以て活
性化されない限り、混合リンパ球反応において同種Ｔ細
胞の効果のないスティミュレーターであることも知られ
ている（イナバ（Ｉnaba,Ｋ.）およびステインマン（Ｓ
teinman,Ｒ.Ｍ.）（１９８９）Ｊ.Ｅxp.Ｍed.１６０：
１７１７；メットレイ（Ｍetley,Ｊ.Ｐ.）ら（１９８
９）Ｊ.Ｅxp.Ｍed.１６９：２３９；フローマン（Ｆroh
man,Ｍ.）およびカウイング（Ｃowing,Ｃ.）（１９８
５）Ｊ.Ｉmmunol.１３４：２２６９）。加えて、インビ
ボでの提示のためのＢ細胞に向けられた可溶性のモノマ
ー抗原は特異的Ｔ細胞アネルギーとなる（エイノン（Ｅ
ynon,Ｅ.Ｅ.）およびパーカー（Ｐarker,Ｄ.）（１９９
２）Ｊ.Ｅxp.Ｍed.１７５：１３１）。それゆえ、関与
する抗原およびＡＰＣの投与法に依存してアネルギーま
たは寛容が誘導されることが明らかであると思われる。
脾臓のＣＤ８＋Ｔ細胞区画にＰ８１５細胞を攻撃させる
と、抗原提示のためにＢ細胞は必要ではなく、かくして
アロ抗原を直接提示することができ、ＣＴＬを誘導する
ことができる。該脾臓の二次刺激への非応答性は、この
系においてアロ特異的な寛容が誘導されたことを示して
いる。
【００５６】このことは、抗原特異的な系において抗体
によって寛容が誘導されないことを示す以前の研究（フ
ォイら（１９９３）Ｊ.Ｅxp.Ｍed.１７８：１５６７〜
１５７５）と反対である。これら２つの系は異なる。と
いうのは、ａＧＶＨＤモデルは抗原提示細胞にすでに結
合したアロ抗原を提示するのに対して、抗原特異的な系
では抗原を投与し、インビボで取り込み、プロセスを受
け、プロフェッショナルＡＰＣによって提示されるから
である。それゆえ、抗ｇｐ３９抗体は使用した抗原およ
び提示方法に依存して異なる効果を有する。抗ｇｐ３９
抗体は免疫系のＣＤ４＋およびＣＤ８＋区画の両方にお
いてアロ特異的な寛容を誘導すること、およびこのこと
は移植免疫学および免疫療法を考慮する場合に明らかに
有利な治療学的介入であることが結論付けられる。骨髄
移植を受けている患者の治療において、抗ｇｐ３９抗体
療法は該移植に対する寛容を誘導するに充分であり、Ｇ
ＶＨＤなどのような移植処置による結果の誘導を防ぐで
あろうことが考えられる。
【００５７】実施例６：抗ｇｐ３９抗体の産生および特
徴付け実験１−ヒトｇｐ３９に対する抗体 ヒト被験者において抗原特異的なＴ細胞寛容を誘導する
には、ヒトｇｐ３９に対する抗体を投与するのが好まし
い。マウス抗ヒトｇｐ３９モノクローナル抗体を作製す
るため、以下の方法を用いた。Ｂａｌｂ／ｃマウスを完
全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）中の可溶性ｇｐ３
９融合タンパク質、ｇｐ３９−ＣＤ８で免疫した。引き
続き、マウスを不完全フロイントアジュバント（ＩＦ
Ａ）中の可溶性ｇｐ３９−ＣＤ８で６週間後に攻撃し
た。二次免疫の４週間後に可溶性ｇｐ３９−ＣＤ８を可
溶性の形態で与えた。ついで、２週間後にマウスを活性
化ヒト末梢血リンパ球でブースター処理し、ついでさら
に２週間後に活性化ｇｐ３９−ＣＤ８で最後のブースタ
ー処理を行った。最後の免疫から４日目に標準プロトコ
ールに従って脾臓細胞をＮＳ−１融合相手と融合させ
た。
【００５８】抗ｇｐ３９抗体を産生する細胞を、複数ス
クリーニング法に基づいて選択した。クローンをまず、
ｇｐ３９−ＣＤ８を用いたプレート結合アッセイにより
スクリーニングした。ついで、陽性のクローンを対照の
ＣＤ８融合タンパク質であるＣＤ７２−ＣＤ８に対して
スクリーニングした。ＣＤ８−ＣＤ７２プレート結合ア
ッセイで陽性とされたクローンを排除した。残ったクロ
ーンを、引き続き休止および６時間活性化ヒト末梢血リ
ンパ球（ＰＢＬ）上でスクリーニングし、ついでフロー
サイトメトリー分析を行った。活性化されたＰＢＬは染
色するが休止ＰＢＬは染色しないハイブリドーマを陽性
とした。最後に、残りのクローンをｇｐ３９の結合した
プレートへのＣＤ４０Ｉｇの結合を阻止する能力につい
て試験した。プレート結合アッセイにおいて、約３００
クローンがｇｐ３９−ＣＤ８およびＣＤ７２−ＣＤ８に
対して最初にスクリーニングされた。これらクローンの
うち、３０のクローンはプレートに結合したｇｐ３９を
検出するがＣＤ８は検出しないことがわかった。引き続
き、これらクローンを活性化ヒトＰＢＬ上のｇｐ３９の
検出についてスクリーニングした。約１５のクローンが
活性化ＰＢＬ上の分子を検出したが、休止細胞上の分子
は検出しなかった。これらクローンがプレートに結合し
たｇｐ３９のＣＤ４０Ｉｇ検出を阻止する能力を決定す
ることにより特異性をさらに確認した。１０のクローン
のうち３つのクローンが、このアッセイにおいてＣＤ４
０Ｉｇ結合を阻止することが試験された。これらクロー
ンは、３Ｅ４、２Ｈ５および２Ｈ８であった。かかるク
ローンは本発明の方法に使用するのに好ましい。活性化
ＰＢＬでは陽性だが休止ＰＢＬでは陽性ではないと試験
されたクローンを、活性化されたラットＴ細胞クローン
であるＰＯＭＣ８との反応性についてもスクリーニング
した。クローン２Ｈ８はこのラットＴ細胞株との交差反
応性を示した。
【００５９】実験２−ヒトｇｐ３９に対する抗体 実験１と同様の免疫手順を用い、ヒトｇｐ３９に対する
別の抗体を産生させた。１匹のＢａｌｂ／ｃマウスをＣ
ＦＡ中の可溶性ｇｐ３９−ＣＤ８で免疫し、ついで４週
間後に６時間活性化ヒト末梢血リンパ球で攻撃した。脾
臓細胞をＮＳ−１融合相手と標準プロトコールに従って
融合させる４日前に、マウスを可溶性ｇｐ３９−ＣＤ８
でブースター処理した。ハイブリドーマクローンのスク
リーニングを６時間活性化ヒトＰＢＬのフローサイトメ
トリー染色により行った。活性化ヒトＰＢＬは染色する
が休止ヒトＰＢＬは染色しないクローンを選択した。６
つのクローン、４Ｄ９−８、４Ｄ９−９、２４−３１、
２４−４３、８９−７６および８９−７９を選択し、さ
らに分析した。これら選択した抗体の特異性を幾つかの
アッセイにより確認した。まず、フローサイトメトリー
分析は、６つのすべてのｍＡｂが活性化末梢血Ｔ細胞を
染色するが休止末梢血Ｔ細胞は染色しないことを示した
（代表的な例について図１６および図１７を参照、それ
ぞれ、活性化Ｔ細胞の４Ｄ９−８および４Ｄ９−９によ
る染色を示す）。これら６つの抗体のそれぞれによって
認識される分子の発現は、活性化の４時間以内には検出
可能であり、活性化の６〜８時間で最大であり、活性化
の２４時間後には検出できない。６つのすべてのｍＡｂ
は活性化ＣＤ３+ＰＢＬ上に発現される分子（主として
ＣＤ４＋表現型の）を認識するが、ＣＤ８+Ｔ細胞の一
部もまた該分子を発現する。これら６つのｍＡｂによっ
て認識される分子の発現は、ｇｐ３９の発現と同様に培
地中のシクロスポリンＡの存在によって抑制される（代
表的な例について図１８および図１９を参照、それぞ
れ、シクロスポリン処理Ｔ細胞の４Ｄ９−８および４Ｄ
９−９による染色を示す）。これら６つのｍＡｂによっ
て認識される分子の発現の動力学および分布は、ヒトＣ
Ｄ４０Ｉｇの融合タンパク質によって検出されるように
ｇｐ３９のものと同一である。加えて、これら６つのす
べてのｍＡｂはＣＤ４０Ｉｇによるｇｐ３９の染色を阻
止する（代表的な例について図２１および２２を参照、
それぞれ、４Ｄ９−８および４Ｄ９−９の存在下でのＣ
Ｄ４０Ｉｇによるｇｐ３９染色の抑制を示す）。ＥＬＩ
ＳＡアッセイにおいて、これら６つのすべてのｍＡｂは
可溶性融合形態のｇｐ３９分子であるｇｐ３９−ＣＤ８
を認識する。さらに、これら６つのすべてのｍＡｂは、
35Ｓ−メチオニン標識した活性化ヒトＰＢＬから約３６
ｋｄの分子を免疫沈降させる。この免疫沈降した分子
は、ヒトＣＤ４０Ｉｇ融合タンパク質によって沈降した
ものと同一である。
【００６０】上記６つの選択したｍＡｂ（４Ｄ９−８、
４Ｄ９−９、２４−３１、２４−４３、８９−７６およ
び８９−７９）の機能的活性を以下のようにしてアッセ
イした。まず、ＩＬ−４および可溶性ｇｐ３９とともに
培養した精製ヒトＢ細胞の増殖をｍＡｂが抑制する能力
を測定した。精製ヒトＢ細胞を、精製モノクローナル抗
体またはＣＤ４０Ｉｇ（０〜１２.５μｇ／ｍｌの範囲
の投与量）の存在下または不在下でｇｐ３９およびＩＬ
−４とともに培養した。培養３日後にチミジン導入によ
りＢ細胞増殖を決定した。得られた結果（図２３に示
す）は、６つのすべてのｍＡｂがｇｐ３９およびＩＬ−
４によって誘導されるＢ細胞増殖を抑制しうることを示
している。ｍＡｂ８９−７６および２４−３１は誘導Ｂ
細胞増殖の抑制において最も効果的であった。ＩＣ
50（Ｂ細胞増殖を５０％抑制するのに必要な抗体の濃
度）は、８９−７６については約１μｇ／ｍｌ、２４−
３１については約１.２５μｇ／ｍｌであった。
【００６１】つぎに、抗ＣＤ３抗体活性化Ｔ細胞および
ＩＬ−２によって誘導されるＩｇ産生により測定される
ように、Ｂ細胞分化をｍＡｂが抑制する能力を調べた。
精製ＩｇＤ+ヒトＢ細胞をＦＡＣＳによる陽性選択によ
り調製し、ついで精製抗ｇｐ３９モノクローナル抗体
（０〜１０μｇ／ｍｌの範囲の投与量）の存在下または
不在下、抗ＣＤ３抗体活性化ヒトＴ細胞（マイトマイシ
ンＣ処理）およびＩＬ−２とともに６日間培養した。Ｉ
ｇＭ、ＩｇＧおよびＩｇＡ産生を第６日目にＥＬＩＳＡ
により評価した。得られた結果（下記表３に示す）は、
ＩｇＭ、ＩｇＧおよびＩｇＡ産生によって測定されるよ
うに、これら６つのすべての抗体はＴ細胞依存性Ｂ細胞
分化を抑制しうることを示している。ＩＣ50（Ｉｇ産生
を５０％抑制するのに必要な抗体の濃度）は、２４−３
１抗体および８９−７６抗体を含む上記６つのｍＡｂに
ついて１.０μｇ／ｍｌから０.１μｇ／ｍｌ未満の範囲
であった。
【表３】
【００６２】Ｔ細胞応答に対する抗ｇｐ３９ｍＡｂの作
用を調べるため、これらｍＡｂを標準混合リンパ球反応
（ＭＬＲ）中に含めた。３００,０００個のヒト末梢血
リンパ球（レスポンダー＝Ｒ）を抗ｇｐ３９ｍＡｂ（１
０μｇ／ｍｌ）の存在下または不在下、１００,０００
個の照射同種末梢血リンパ球（スチィミュレーター＝
Ｓ）とともに培養した。培養液を第４日目、５日目また
は６日目に３Ｈ−チミジンでパルス標識し、１８時間後
に回収した。６つのすべての抗ヒトｇｐ３９ｍＡｂは、
ＭＬＲによって測定されるようにアロ特異的応答を抑制
した（代表的な例について図２４を参照、ＲおよびＳを
２４−３１および８９−７６の存在下でインキュベート
した場合のアロ特異的応答の抑制を示す；ＣＴＬＡ４−
免疫グロブリン融合タンパク質および抗ＣＤ２８ｍＡｂ
を正の対照として用いた）。上記６つのｍＡｂがヒトｇ
ｐ３９分子上の異なるエプトープを認識するのかどうか
を決定するため、交差実験を行った。まず、活性化ヒト
ＰＢＬを上記６つのｍＡｂのそれぞれで阻止した（２５
μｇ／ｍｌの未結合抗体）。細胞を洗浄し、ついで１０
μｇ／ｍｌのビオチン結合抗体で染色し、ついでフィト
エリトリン（phytoerythrin）結合アビジン（ＰＥ−Ａ
ｖ）と反応させた。ＰＥ−Ａｖでの細胞の染色をＦＡＣ
Ｓにより分析した。その結果を下記表４に示す。
【表４】
【００６３】染色の強度および陽性細胞のパーセントを
＋の記号で示す（＋＋＋＋＝ＭＩ＞２００；＋＋＋＝Ｍ
Ｉ＞１２５；＋＋＝ＭＩ＞５０；＋＝ＭＩ＞２５；−＝
バックグラウンドを越える染色なし）。ＮＤ＝決定せ
ず。すべての抗体が活性化ヒトＰＢＬへのＣＤ４０Ｉｇ
の結合を阻止した。しかしながら、表４に示すデータ
は、幾つかの抗体は他の抗体が活性化ヒトＰＢＬに結合
するのを阻止できないことを明らかに示しており、これ
らがヒトｇｐ３９分子上の異なるエプトープを認識する
ことを示唆している。８９−７６抗体および２４−３１
抗体をそれぞれ産生する８９−７６および２４−３１ハ
イブリドーマは、ブダペスト条約の規定に従い、アメリ
カン・タイプ・カルチャー・コレクション、パークロー
ンドライブ、ロックビル、メリーランド州に１９９４年
９月２日に寄託してある。８９−７６ハイブリドーマは
ＡＴＣＣ受託番号ＨＢ１１７１３、２４−３１ハイブリ
ドーマはＡＴＣＣ受託番号ＨＢ１１７１２を与えられ
た。２４−３１抗体および８９−７６抗体はＩｇＧ１イ
ソタイプである。
【００６４】実験３−マウスｇｐ３９に対する抗体 本発明の一つの態様にいて、ｇｐ３９アンタゴニストは
抗マウスｇｐ３９モノクローナル抗体、ＭＲ１である。
以下の方法を用いてＭＲ１モノクローナル抗体を作製
し、ｇｐ３９に対する他の抗体を作製するのにも用いる
ことができる。ハムスターを５〜１０6個の活性化Ｔh１
細胞（ｄ１.６）で１週間間隔で６週間腹腔内免疫し
た。マウスＴh１に対する血清力価が約１：１０,０００
よりも大きいときに、免疫ハムスターの脾臓細胞および
ＮＳ−１を用いてポリエチレングリコールで細胞融合を
行った。増殖するハイブリドーマを含むウエルからの上
澄み液を休止Ｔh１および活性化Ｔh１に対するフローサ
イトメトリーによりスクリーニングした。活性化Ｔhを
選択的に認識するＭａｂを産生した一つの特定のハイブ
リドーマをさらに試験し、サブクローニングしてＭＲ１
を得た。ＭＲ１は腹水中で産生され、イオン交換ＨＰＬ
Ｃにより精製した。ハイブリドーマＭＲ１はアメリカン
・タイプ・カルチャー・コレクションに寄託してあり、
受託番号ＨＢ１１０４８を与えられた。
【００６５】図１は、インビボ抗ｇｐ３９抗体処理によ
り誘導されたタンパク質抗原に対するＴ細胞寛容を示す
グラフである。Ｔ細胞応答の測定は、抗ｇｐ３９抗体を
用い、または用いることなく、すでにインビボで投与し
た抗原を抗原パルス標識した（antigen-pulsed）Ｂ細胞
に攻撃することによりインビトロで行った。図２は、イ
ンビボ抗ｇｐ３９抗体処理により誘導された同種Ｂ細胞
に対するＴ細胞寛容を示すグラフである。Ｔ細胞応答の
測定は、抗ｇｐ３９抗体を用い、または用いることな
く、すでにインビボで投与した同種Ｂ細胞で攻撃するこ
とによりインビトロで行った。図３は、受容動物を抗ｇ
ｐ３９抗体で処理した場合の、同種Ｂ細胞によって誘導
される一次同種ＣＴＬ応答の抑制を示すグラフである。
表示したグループは、未処理マウス（ｉ）、抗ｇｐ３９
抗体処理マウス（ｉｉ）および未感作Ｂａｌｂ／ｃマウ
スからの脾臓細胞［（ｉｉｉ）；負の対照エフェクター
細胞として使用］である。図４および図５は、受容動物
を抗ｇｐ３９抗体で処理した場合の、ＬＰＳ処理Ｂ幼若
細胞によって誘導される一次同種ＣＴＬ応答の抑制を示
すグラフである。図４および図５は２つの独立した実験
を表す。表示したグループは、処理しない場合のインビ
ボＬＰＳ幼若細胞（ｉ）、抗ｇｐ３９抗体処理したイン
ビボＬＰＳ幼若細胞（ｉｉ）、処理しない場合のインビ
ボ休止Ｂ細胞（ｉｉｉ）および抗ｇｐ３９抗体処理した
インビボ休止Ｂ細胞（ｉｖ）である。
【００６６】図６は、受容動物を抗ｇｐ３９抗体で処理
した場合の、同種Ｂ細胞によって誘導される二次同種Ｃ
ＴＬ応答の抑制を示すグラフである。表示したエフェク
ターグループは、ＨＩｇ処理した受容者（ｉ）、未感作
（naive）Ｂａｌｂ／ｃ（ｉｉ）および抗ｇｐ３９抗体
処理した受容者（ｉｉｉ）である。対応する同系応答
（Ｂａｌｂ／ｃ細胞で刺激したＢａｌｂ／ｃ細胞）は白
抜きの記号で示す。図７は、抗ｇｐ３９抗体処理による
同種ＣＴＬ応答の抑制の特異性を示す。未感作Ｂａｌｂ
／ｃ細胞による（ｉ）またはＨ−２bハプロタイプＢ細
胞および抗ｇｐ３９抗体を投与することによりＨ−２b
に対して寛容となった細胞による（ｉｉ）Ｈ−２k標的
に対するＣＴＬ応答を示す。図８は、抗ｇｐ３９抗体で
処理した場合および処理しない場合の、骨髄移植を宿主
に移植後の種々の時間における宿主の脾臓細胞の数を示
す棒グラフである。図９は、抗ｇｐ３９抗体でインビボ
処理した場合および処理しない場合の、骨髄移植を受け
たマウスから取り出した脾臓Ｂ細胞によりインビトロで
産生されたＩｇＡの濃度を示すグラフである。骨髄移植
から７日後または１４日後に脾臓Ｂ細胞を取り出し、抗
体産生を測定した。図１０は、抗ｇｐ３９抗体でインビ
ボ処理した場合および処理しない場合の、骨髄移植を受
けたマウスから取り出した脾臓Ｂ細胞によりインビトロ
で産生されたＩｇＧ１の濃度を示すグラフである。骨髄
移植から７日後または１４日後に脾臓Ｂ細胞を取り出
し、抗体産生を測定した。図１１は、抗ｇｐ３９抗体で
インビボ処理した場合および処理しない場合の、骨髄移
植を受けたマウスにおける骨髄移植後の種々の時間の血
清ＩｇＥ濃度を示すグラフである。図１２は、抗ｇｐ３
９抗体でインビボ処理した場合および処理しない場合
の、骨髄移植を受けたマウスにおける骨髄移植後の種々
の時間の血清抗ＤＮＡ抗体濃度を示すグラフである。
【００６７】図１３および図１４は、抗ｇｐ３９抗体で
インビボ処理した場合および処理しない場合の、骨髄移
植を受けたマウスからの細胞障害性Ｔ細胞のインビトロ
細胞溶解活性を異なるエフェクター／標的細胞比（Ｅ：
Ｔ比）で示すグラフである。図１３および図１４は２つ
の独立した実験を示す。図１５、１６および１７は、Ｃ
Ｄ４０Ｉｇ（図１５）、ｍＡｂ４Ｄ９−８（ず１６）ま
たはｍＡｂ４Ｄ９−９（図１７）のいずれかによる６時
間活性化ヒト末梢血リンパ球の染色を示すフローサイト
メトリープロフィールである。図１８、１９および２０
は、ｍＡｂ４Ｄ９−８（図１８）、ｍＡｂ４Ｄ９−９
（図１９）、ＣＤ４０Ｉｇ（図２０）のいずれかで染色
し、シクロスポリンＡの存在下で培養した６時間活性化
ヒト末梢血リンパ球の染色を示すフローサイトメトリー
プロフィールである。図２１および２２は非標識ｍＡｂ
４Ｄ９−８（図２１）または非標識ｍＡｂ４Ｄ９−９
（図２２）の存在下、ＣＤ４０Ｉｇによる６時間活性化
ヒト末梢血リンパ球の染色を示すフローサイトメトリー
プロフィールである。図２３は、細胞を抗ヒトｇｐ３９
ｍＡｂ４Ｄ９−８、４Ｄ９−９、２４−３１、２４−４
３、８９−７６または８９−７９の存在下で培養した場
合の、可溶性ｇｐ３９およびＩＬ−４によって誘導され
たヒトＢ細胞増殖の抑制を示すグラフである。図２４
は、細胞を抗ヒトｇｐ３９ｍＡｂ２４−３１または８９
−７９の存在下で培養した場合のアロ特異的混合リンパ
球応答の抑制を示すグラフである。
【図面の簡単な説明】
【図１】 インビボ抗ｇｐ３９抗体処理により誘導され
たタンパク質抗原に対するＴ細胞寛容を示すグラフであ
る。
【図２】 インビボ抗ｇｐ３９抗体処理により誘導され
た同種Ｂ細胞に対するＴ細胞寛容を示すグラフである。
【図３】 受容動物を抗ｇｐ３９抗体で処理した場合
の、同種Ｂ細胞によって誘導される一次同種ＣＴＬ応答
の抑制を示すグラフである。
【図４】 受容動物を抗ｇｐ３９抗体で処理した場合
の、ＬＰＳ処理Ｂ幼若細胞によって誘導される一次同種
ＣＴＬ応答の抑制を示すグラフである。
【図５】 受容動物を抗ｇｐ３９抗体で処理した場合
の、ＬＰＳ処理Ｂ幼若細胞によって誘導される一次同種
ＣＴＬ応答の抑制を示すグラフである。
【図６】 受容動物を抗ｇｐ３９抗体で処理した場合
の、同種Ｂ細胞によって誘導される二次同種ＣＴＬ応答
の抑制を示すグラフである。
【図７】 抗ｇｐ３９抗体処理による同種ＣＴＬ応答の
抑制の特異性を示すグラフである。
【図８】 抗ｇｐ３９抗体で処理した場合および処理し
ない場合の、骨髄移植を宿主に移植後の種々の時間にお
ける宿主の脾臓細胞の数を示す棒グラフである。
【図９】 抗ｇｐ３９抗体でインビボ処理した場合およ
び処理しない場合の、骨髄移植を受けたマウスから取り
出した脾臓Ｂ細胞によりインビトロで産生されたＩｇＡ
の濃度を示すグラフである。
【図１０】 抗ｇｐ３９抗体でインビボ処理した場合お
よび処理しない場合の、骨髄移植を受けたマウスから取
り出した脾臓Ｂ細胞によりインビトロで産生されたＩｇ
Ｇ１の濃度を示すグラフである。
【図１１】 抗ｇｐ３９抗体でインビボ処理した場合お
よび処理しない場合の、骨髄移植を受けたマウスにおけ
る骨髄移植後の種々の時間の血清ＩｇＥ濃度を示すグラ
フである。
【図１２】 抗ｇｐ３９抗体でインビボ処理した場合お
よび処理しない場合の、骨髄移植を受けたマウスにおけ
る骨髄移植後の種々の時間の血清抗ＤＮＡ抗体濃度を示
すグラフである。
【図１３】 抗ｇｐ３９抗体でインビボ処理した場合お
よび処理しない場合の、骨髄移植を受けたマウスからの
細胞障害性Ｔ細胞のインビトロ細胞溶解活性を異なるエ
フェクター／標的細胞比（Ｅ：Ｔ比）で示すグラフであ
る。
【図１４】 抗ｇｐ３９抗体でインビボ処理した場合お
よび処理しない場合の、骨髄移植を受けたマウスからの
細胞障害性Ｔ細胞のインビトロ細胞溶解活性を異なるエ
フェクター／標的細胞比（Ｅ：Ｔ比）で示すグラフであ
る。
【図１５】 ＣＤ４０Ｉｇによる６時間活性化ヒト末梢
血リンパ球の染色を示すフローサイトメトリープロフィ
ールである。
【図１６】 ｍＡｂ４Ｄ９−８による６時間活性化ヒト
末梢血リンパ球の染色を示すフローサイトメトリープロ
フィールである。
【図１７】 ｍＡｂ４Ｄ９−９による６時間活性化ヒト
末梢血リンパ球の染色を示すフローサイトメトリープロ
フィールである。
【図１８】 ｍＡｂ４Ｄ９−８で染色し、シクロスポリ
ンＡの存在下で培養した６時間活性化ヒト末梢血リンパ
球の染色を示すフローサイトメトリープロフィールであ
る。
【図１９】 ｍＡｂ４Ｄ９−９で染色し、シクロスポリ
ンＡの存在下で培養した６時間活性化ヒト末梢血リンパ
球の染色を示すフローサイトメトリープロフィールであ
る。
【図２０】 ＣＤ４０Ｉｇで染色し、シクロスポリンＡ
の存在下で培養した６時間活性化ヒト末梢血リンパ球の
染色を示すフローサイトメトリープロフィールである。
【図２１】 非標識ｍＡｂ４Ｄ９−８の存在下、ＣＤ４
０Ｉｇによる６時間活性化ヒト末梢血リンパ球の染色を
示すフローサイトメトリープロフィールである。
【図２２】 非標識ｍＡｂ４Ｄ９−９の存在下、ＣＤ４
０Ｉｇによる６時間活性化ヒト末梢血リンパ球の染色を
示すフローサイトメトリープロフィールである。
【図２３】 細胞を抗ヒトｇｐ３９ｍＡｂ４Ｄ９−８、
４Ｄ９−９、２４−３１、２４−４３、８９−７６また
は８９−７９の存在下で培養した場合の、可溶性ｇｐ３
９およびＩＬ−４によって誘導されたヒトＢ細胞増殖の
抑制を示すグラフである。
【図２４】 細胞を抗ヒトｇｐ３９ｍＡｂ２４−３１ま
たは８９−７９の存在下で培養した場合のアロ特異的混
合リンパ球応答の抑制を示すグラフである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 テレサ・エム・フォイ アメリカ合衆国03756ニュー・ハンプシ ャー、レバノン、メドウ・ブルック・ビ レッジ３−13番 (72)発明者 フィオナ・エイチ・デュリー アメリカ合衆国98107ワシントン、シア トル、ナンバー101、ノース・ウエス ト・フィフティーエイス1731番 (56)参考文献 国際公開93／8207（ＷＯ，Ａ１) Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃ ａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ. 13，Ｎｏ．３（1993）ｐ．165−174 Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ, Ｖｏｌ．13，Ｎｏ．11（1992）ｐ．431 −433 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) A61K 39/395 A61P 37/06 ＢＩＯＴＥＣＨＡＢＳ（ＳＴＮ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＥＭＢＡＳＥ（ＳＴＮ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ)

Claims (10)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 抗ｇｐ３９抗体を有効成分とする被験者
    におけるＴ細胞機能を抑制する薬剤。
  2. 【請求項２】 抗ｇｐ３９抗体を有効成分とする抗原に
    曝された被験者における抗原特異的Ｔ細胞寛容の誘導
    剤。
  3. 【請求項３】 該抗ｇｐ３９抗体がキメラモノクローナ
    ル抗体である請求項１または２に記載の薬剤または誘導
    剤。
  4. 【請求項４】 該抗ｇｐ３９抗体がヒト化モノクローナ
    ル抗体である請求項１または２に記載の薬剤または誘導
    剤。
  5. 【請求項５】 該抗ｇｐ３９抗体がモノクローナル抗体
    である請求項１または２に記載の薬剤または誘導剤。
  6. 【請求項６】 該抗ｇｐ３９抗体が抗ヒトｇｐ３９抗体
    である請求項１、２、３、４または５に記載の薬剤また
    は誘導剤。
  7. 【請求項７】 該抗原がアレルゲンである請求項２に記
    載の誘導剤。
  8. 【請求項８】 該抗原が自己抗原である請求項２に記載
    の誘導剤。
  9. 【請求項９】 該抗原が治療用薬剤である請求項２に記
    載の誘導剤。
  10. 【請求項１０】 該治療用薬剤が抗体である請求項９に
    記載の誘導剤。
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