JP3079183B2 - 褐藻分解物の製造法 - Google Patents
褐藻分解物の製造法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、褐藻分解物の製造法、
詳しくは、微生物の生産する酵素を用いて褐藻類（褐藻
類由来の多糖類等）を分解させる方法に関するものであ
る。
詳しくは、微生物の生産する酵素を用いて褐藻類（褐藻
類由来の多糖類等）を分解させる方法に関するものであ
る。
【０００２】
【従来の技術】褐藻類の主要構成成分の一つに多糖類で
あるアルギン酸がある。このアルギン酸は、褐藻類から
水、アルカリなどを用いた抽出法により得られている。
上記アルギン酸は、その主構成分子としてＤ−マンヌロ
ン酸及びＬ−グルロン酸を含むもので、このアルギン酸
を低分子化すれば、オリゴ糖を得ることができると考え
られる。上記オリゴ糖の製造法としては、前記のアルギ
ン酸を酸または酵素で分解することにより得る方法が開
発されている。
あるアルギン酸がある。このアルギン酸は、褐藻類から
水、アルカリなどを用いた抽出法により得られている。
上記アルギン酸は、その主構成分子としてＤ−マンヌロ
ン酸及びＬ−グルロン酸を含むもので、このアルギン酸
を低分子化すれば、オリゴ糖を得ることができると考え
られる。上記オリゴ糖の製造法としては、前記のアルギ
ン酸を酸または酵素で分解することにより得る方法が開
発されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記の
ように褐藻類から一旦アルギン酸を抽出し、そのアルギ
ン酸からオリゴ糖を得る工業的方法は、確立されておら
ず、褐藻類由来のオリゴ糖は、市販されるに至っていな
い。また、褐藻類には、糖以外の有効成分（生理活性物
質）が含まれているが、現在、一般に用いられている
酸、アルカリ、有機溶媒を用いた抽出法では、それらの
有効成分のすべてを、その有効性を低下させずに抽出す
ることは不可能であるという問題もあった。
ように褐藻類から一旦アルギン酸を抽出し、そのアルギ
ン酸からオリゴ糖を得る工業的方法は、確立されておら
ず、褐藻類由来のオリゴ糖は、市販されるに至っていな
い。また、褐藻類には、糖以外の有効成分（生理活性物
質）が含まれているが、現在、一般に用いられている
酸、アルカリ、有機溶媒を用いた抽出法では、それらの
有効成分のすべてを、その有効性を低下させずに抽出す
ることは不可能であるという問題もあった。
【０００４】従って、本発明の目的は、褐藻類に属する
海藻であるミツイシコンブ、ワカメ、ヒジキなどから直
接、褐藻分解物を製造する方法を提供することにある。
海藻であるミツイシコンブ、ワカメ、ヒジキなどから直
接、褐藻分解物を製造する方法を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者等は、種々の検
討を行った結果、海藻を常食にしている魚介類の腸管及
び海藻に付着している細菌から、コンブを唯一の炭素源
としてスクリーニングを実施した結果、三陸大谷海岸で
採取した砂泥より分離した微生物（本菌株）の生産する
酵素である褐藻分解酵素を用いることにより、上記目的
を達成し得ることを知見した。
討を行った結果、海藻を常食にしている魚介類の腸管及
び海藻に付着している細菌から、コンブを唯一の炭素源
としてスクリーニングを実施した結果、三陸大谷海岸で
採取した砂泥より分離した微生物（本菌株）の生産する
酵素である褐藻分解酵素を用いることにより、上記目的
を達成し得ることを知見した。
【０００６】本発明は、上記知見に基づいてなされたも
ので、アルテロモナス属に属する微生物によって生産さ
れる褐藻分解酵素を用いて褐藻類を分解することを特徴
とする褐藻分解物の製造法を提供するものである。以
下、本発明の褐藻分解物の製造法について詳述する。先
ず、本発明の褐藻分解物の製造法で用いる褐藻分解酵素
を生産する微生物（本菌株）について説明する。
ので、アルテロモナス属に属する微生物によって生産さ
れる褐藻分解酵素を用いて褐藻類を分解することを特徴
とする褐藻分解物の製造法を提供するものである。以
下、本発明の褐藻分解物の製造法について詳述する。先
ず、本発明の褐藻分解物の製造法で用いる褐藻分解酵素
を生産する微生物（本菌株）について説明する。
【０００７】上記微生物の形態学的性質及び生理学的性
質は、下記の表１に示す通りである。 上記表１に示す菌株の性質に基づいて、清水らの方法
〔海洋微生物研究法、学会出版センター、２２８〜２３
９（１９８５）〕に従って同定を行った結果、上記記微
生物（本菌株）は、アルテロモナス属に属するものであ
ることが判明した。本菌株は、微生物工業技術研究所
に、微工研菌寄第１２３４６号（ＦＥＲＭＰ−１２３４
６）として寄託されている。さらに、本菌株の各種炭素
源に対する利用（資化性）を下記表２に示した。 而して、本発明で用いられる褐藻分解酵素は、上記表
１に示す性質を有する菌株を、実施例として示す後記の
培養法等により培養して得られるもので、褐藻類を直接
可溶化することができ、その最適酵素反応条件は次の通
りである。
質は、下記の表１に示す通りである。 上記表１に示す菌株の性質に基づいて、清水らの方法
〔海洋微生物研究法、学会出版センター、２２８〜２３
９（１９８５）〕に従って同定を行った結果、上記記微
生物（本菌株）は、アルテロモナス属に属するものであ
ることが判明した。本菌株は、微生物工業技術研究所
に、微工研菌寄第１２３４６号（ＦＥＲＭＰ−１２３４
６）として寄託されている。さらに、本菌株の各種炭素
源に対する利用（資化性）を下記表２に示した。 而して、本発明で用いられる褐藻分解酵素は、上記表
１に示す性質を有する菌株を、実施例として示す後記の
培養法等により培養して得られるもので、褐藻類を直接
可溶化することができ、その最適酵素反応条件は次の通
りである。
【０００８】従って、本発明の製造法は、下記の酵素反
応条件下に実施するのが好ましい。 （１）至適ｐＨ：本発明で用いる褐藻分解酵素の各ｐＨ
における相対活性量を示す図１のグラフから明らかなよ
うに、ｐＨ６．５〜８．０の範囲で相対活性量が高く、
相対活性量が最大になるｐＨ７．５が至適ｐＨである。 （２）至適温度：褐藻分解酵素の各温度における相対活
性量を示す図２のグラフから明らかなように、３０℃〜
４０℃の範囲で相対活性が高く、相対活性量が最大とな
る３５℃が至適温度である。
応条件下に実施するのが好ましい。 （１）至適ｐＨ：本発明で用いる褐藻分解酵素の各ｐＨ
における相対活性量を示す図１のグラフから明らかなよ
うに、ｐＨ６．５〜８．０の範囲で相対活性量が高く、
相対活性量が最大になるｐＨ７．５が至適ｐＨである。 （２）至適温度：褐藻分解酵素の各温度における相対活
性量を示す図２のグラフから明らかなように、３０℃〜
４０℃の範囲で相対活性が高く、相対活性量が最大とな
る３５℃が至適温度である。
【０００９】尚、本発明においては、上記本菌株を通常
の変異手段を適用して得られる変異株であって、褐藻分
解酵素産生能を有する菌株を培養して得られる、褐藻分
解酵素も使用することができる。
の変異手段を適用して得られる変異株であって、褐藻分
解酵素産生能を有する菌株を培養して得られる、褐藻分
解酵素も使用することができる。
【００１０】
【実施例】以下、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説
明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
なお、実施例１は本発明で用いる褐藻分解酵素を得るた
めの前記微生物（本菌株）の培養法を示し、実施例２は
本発明の褐藻分解物の製造法の実施例を示す。
明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
なお、実施例１は本発明で用いる褐藻分解酵素を得るた
めの前記微生物（本菌株）の培養法を示し、実施例２は
本発明の褐藻分解物の製造法の実施例を示す。
【００１１】実施例１ 〔培地組成〕 ・ミツイシコンブ・・・・・２０ｇ ・ＮａＣｌ・・・・・・・・２０ｇ ・脱塩水・・・・・・・１０００ml 上記組成の培地に、凍結乾燥保存菌体アルテロモナス・
エスピーＮｏ．４７７８株を接種し、２５℃の温度で２
４時間振とう培養した。
エスピーＮｏ．４７７８株を接種し、２５℃の温度で２
４時間振とう培養した。
【００１２】〔酵素液の調製〕上述のようにして得られ
た培養液を、４℃の温度で１００００ｒｐｍにて１０分
間遠心分離して、その上澄液を酵素液とした。 〔褐藻分解反応試験〕上記酵素液１００μｌを基質であ
るミツイシコンブ５mg及び０．０５Ｍリン酸ナトリウム
緩衝液（ｐＨ７．５）５００μｌと共にエッペンドルフ
チュウブに入れ、３０℃で３０分間反応させた後、沸騰
水浴中で１０分間加熱して酵素反応を停止させ、次い
で、急冷後反応液を遠心分離した。この、遠心分離した
反応液の上澄液中の遊離全糖量をフェノール硫酸法で比
色定量したところ、酵素活性を示した。その結果、培養
液１mlあたり１．２単位の褐藻分解酵素が生産されてい
ることがわかった。なお、酵素活性は３０℃、１分間に
１００μｇの糖をコンブから溶出する酵素量を１単位と
定義している。なお、フェノール硫酸法の検量線は、ア
ルギン酸ナトリウムで作成した。
た培養液を、４℃の温度で１００００ｒｐｍにて１０分
間遠心分離して、その上澄液を酵素液とした。 〔褐藻分解反応試験〕上記酵素液１００μｌを基質であ
るミツイシコンブ５mg及び０．０５Ｍリン酸ナトリウム
緩衝液（ｐＨ７．５）５００μｌと共にエッペンドルフ
チュウブに入れ、３０℃で３０分間反応させた後、沸騰
水浴中で１０分間加熱して酵素反応を停止させ、次い
で、急冷後反応液を遠心分離した。この、遠心分離した
反応液の上澄液中の遊離全糖量をフェノール硫酸法で比
色定量したところ、酵素活性を示した。その結果、培養
液１mlあたり１．２単位の褐藻分解酵素が生産されてい
ることがわかった。なお、酵素活性は３０℃、１分間に
１００μｇの糖をコンブから溶出する酵素量を１単位と
定義している。なお、フェノール硫酸法の検量線は、ア
ルギン酸ナトリウムで作成した。
【００１３】反応液の組成 ・コンブ粉末０．５％を含む０．０５Ｍリン酸ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ７．５）；０．５ml ・酵素液；０．１ml 実施例２ ミツイシコンブ８００ｇに、上記実施例１で得られた褐
藻分解酵素溶液１２リットル（１１５２０単位）を加
え、３５℃で２４時間攪拌しながら反応させた。その結
果、ミツイシコンブオリゴ糖が３１８ｇ得られた。
ム緩衝液（ｐＨ７．５）；０．５ml ・酵素液；０．１ml 実施例２ ミツイシコンブ８００ｇに、上記実施例１で得られた褐
藻分解酵素溶液１２リットル（１１５２０単位）を加
え、３５℃で２４時間攪拌しながら反応させた。その結
果、ミツイシコンブオリゴ糖が３１８ｇ得られた。
【００１４】その一部を脱塩水に溶解させ、ＨＰＬＣに
供した。この際の溶出条件は、以下のとうりであった。
蒸留水と２Ｍ塩化ナトリウム水溶液を用いて、塩化ナト
リウム濃度を４０分間で０〜０．２５Ｍまで直線的に上
昇させた後、直ちに塩化ナトリウム濃度を２Ｍに上げ５
分間その濃度に保ち、その後蒸留水を１５分間流して溶
出した。
供した。この際の溶出条件は、以下のとうりであった。
蒸留水と２Ｍ塩化ナトリウム水溶液を用いて、塩化ナト
リウム濃度を４０分間で０〜０．２５Ｍまで直線的に上
昇させた後、直ちに塩化ナトリウム濃度を２Ｍに上げ５
分間その濃度に保ち、その後蒸留水を１５分間流して溶
出した。
【００１５】図３に、上記ＨＰＬＣによる生成物の溶出
結果を示した。
結果を示した。
【００１６】
【発明の効果】１）本発明の褐藻分解物の製造法によれ
ば、褐藻類から多糖類（アルギン酸）を抽出することな
く、褐藻類由来のオリゴ糖を直接得ることができる。 ２）また、褐藻類を分解することにより、糖以外の低分
子化合物（有効成分）を、穏和な条件で可溶化物として
得ることができる。
ば、褐藻類から多糖類（アルギン酸）を抽出することな
く、褐藻類由来のオリゴ糖を直接得ることができる。 ２）また、褐藻類を分解することにより、糖以外の低分
子化合物（有効成分）を、穏和な条件で可溶化物として
得ることができる。
【００１７】３）アルテロモナス属に属する上記本菌株
を用いることにより、コンブを、２％ＮａＣｌ溶液に２
％懸濁させた、簡単な培地で褐藻分解酵素を容易に生産
することができる。
を用いることにより、コンブを、２％ＮａＣｌ溶液に２
％懸濁させた、簡単な培地で褐藻分解酵素を容易に生産
することができる。
【図１】図１は、本発明で用いる褐藻分解酵素の各ｐＨ
における相対活性量を示すグラフである。
における相対活性量を示すグラフである。
【図２】図２は、褐藻分解酵素の各温度における相対活
性量を示すグラフである。
性量を示すグラフである。
【図３】図３は、分取用ＤＥＡＥ ＧＬＡＳＳでのミツ
イシコンブオリゴ糖の溶出結果を示すグラフである。
イシコンブオリゴ糖の溶出結果を示すグラフである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:01） (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12P 19/00 - 19/64 C12N 1/00 - 1/38 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (2)
- 【請求項１】 アルテロモナス属に属する微生物によっ
て生産される褐藻分解酵素を用いて褐藻類を分解するこ
とを特徴とする褐藻分解物の製造法。 - 【請求項２】 アルテロモナス属に属する微生物が、ア
ルテロモナス・エスピー（Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ ｓ
ｐ．）Ｎｏ．４７７８である請求項１記載の褐藻分解物
の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19458091A JP3079183B2 (ja) | 1991-08-03 | 1991-08-03 | 褐藻分解物の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19458091A JP3079183B2 (ja) | 1991-08-03 | 1991-08-03 | 褐藻分解物の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0530988A JPH0530988A (ja) | 1993-02-09 |
| JP3079183B2 true JP3079183B2 (ja) | 2000-08-21 |
Family
ID=16326910
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19458091A Expired - Fee Related JP3079183B2 (ja) | 1991-08-03 | 1991-08-03 | 褐藻分解物の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3079183B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP5052884B2 (ja) * | 2006-12-25 | 2012-10-17 | 株式会社スギヨ | 海藻分解物の調製方法および海藻分解物の調製のための組成物 |
-
1991
- 1991-08-03 JP JP19458091A patent/JP3079183B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0530988A (ja) | 1993-02-09 |
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