JP3040184B2 - （１→３）−β−Ｄ−グルカン用測定剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、カブトガニ・アメボサ
イト・ライセートを用いる（１→３）−β−Ｄ−グルカ
ン用測定剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】カブトガニ・アメボサイト・ライセート
（以下単にライセートという）を使用して、エンドトキ
シンを測定する方法が知られている。この方法は、微量
のエンドトキシンによりライセートが凝固することに基
づいているが、その後の生化学的解明により、該反応は
いくつかの凝固因子の段階的活性化より成ることが明ら
かにされている（中村隆範他、日本細菌学雑誌、３８、
７８１−８０３（１９８３））。

【０００３】この反応を、例えば日本産カブトガニ（Ta
chypleus tridentatus）から得られるライセートによ
り、図１を用いて説明すると、ライセートにエンドトキ
シンが加わると、ライセート中に存在するＣ因子（エン
ドトキシン感受性因子、分子量１２３，０００）が活性
化され、生成した活性型Ｃ因子がＢ因子（分子量６４，
０００）の特定箇所を限定水解して活性型Ｂ因子を生成
し、活性型Ｂ因子はプロクロッティングエンザイム（分
子量５４，０００）を活性化してクロッティングエンザ
イムに変換し、クロッティングエンザイムはコアギュロ
ーゲン（凝固タンパク、分子量１９，７２３）のジスル
フィド結合で架橋されたループ内の特定箇所を、すなわ
ち…Ａｒｇ¹⁸−Ｔｈｒ¹⁹…の間および…Ａｒｇ⁴⁶−Ｇｌ
ｙ⁴⁷…の間を限定水解してＨ−Ｔｈｒ¹⁹…Ａｒｇ⁴⁶−Ｏ
Ｈで表されるペプチドＣ（アミノ酸２８残基）を遊離し
つつ残余の部分がコアギュリンゲルに変換される、とい
う一連の反応（カスケード反応とも言う）である。

【０００４】一方、このカスケード反応は、エンドトキ
シンのみではなく、ライセートに（１→３）−β−Ｄ−
グルカンが加わると図１におけるＧ因子が活性化され、
生成する活性型Ｇ因子がプロクロッティングエンザイム
をクロッティングエンザイムに活性化し、以下エンドト
キシンの場合と同様に反応してコアギュリンゲルを生成
する。

【０００５】また、上記カスケード反応により生成する
クロッティングエンザイムは、反応系に別に添加され
る、例えばｔ−ブトキシカルボニル−ロイシル−グリシ
ル−アルギニン−パラ−ニトロアニリド（ＢＯＣ−Ｌｅ
ｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐＮＡ）のパラーニトロアニリン
を遊離させるので、生成する発色物質パラーニトロアニ
リンの吸光度を測定することによりエンドトキシンまた
は（１→３）−β−Ｄ−グルカンの定量を行うことがで
きる。その作用を利用して、後記する実施例における
（１→３）−β−Ｄ−グルカンの特異的測定に使用して
いる。

【０００６】一方、従来から、ライセート中のＧ因子を
用いることにより（１→３）−β−Ｄ−グルカンを測定
する方法が報告されている（ObayashiT. et al., Clin.
Chim. Acta, 149, 55-65 (1985))。

【０００７】しかし、この方法は、ライセートをゲルろ
過法によりあるいはヘパリンまたはデキストラン硫酸を
固定化したアフィニティー担体を用いるクロマトグラフ
ィーにより分画し、エンドトキシン感受性因子のＣ因子
を除去して、Ｇ因子とクロッティングエンザイムとで
（１→３）−β−Ｄ−グルカンを測定する方法であっ
て、極めて煩雑な操作を必要とする方法である。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、改良された
方法により得られた、エンドトキシン感受性因子を実質
的に含まないライセートからなる（１→３）−β−Ｄ−
グルカン用測定剤を提供することを目的とする。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明は、カブトガニ・
アメボサイト・ライセートを、または該ライセートとデ
キストランとの混合物を、ポリアミド系不溶性担体に接
触させて得られるエンドトキシン感受性因子を実質的に
含まないライセートからなる（１→３）−β−Ｄ−グル
カン用測定剤である。

【００１０】ライセートとしては、リムルス・ポリフェ
ムス（L. polyphemus 、アメリカ産）、タキプレウス・
トリデンタツス（T. tridentatus、日本、中国産）、タ
キプレウス・ギガス（T. gigas、タイ国、マレーシア半
島産）、カルシノスコルピウス・ロツンディカウダ（C.
rotundicauda 、タイ国、マレーシア半島産）等のカブ
トガニ血リンパから、通常の方法により調製した血球抽
出液を挙げることができる。

【００１１】ポリアミド系不溶性担体に、カブトガニ・
アメボサイト・ライセートを接触させる方法としては、
膜状の該担体にライセートを通過させ、その通過液を採
取する方法、粒状の担体を充填したカラムにライセート
を通過させてその素通り液を採取する方法、適当な大き
さの担体（例えば、チップ状の担体）にライセートを接
触させた後に、遠心分離、ろ過等の手法により該担体を
除去する方法等を挙げることができる。

【００１２】また、該担体にライセートを接触させる
際、ライセートにデキストランを混合しておくことによ
り、さらにエンドトキシン感受性因子の該担体への吸着
作用を増大させることができ、かつ（１→３）−β−Ｄ
−グルカンに対する測定感度も高めることができる。

【００１３】用いるデキストランとしては平均分子量
５，０００〜５，０００，０００、好ましくは１０，０
００〜１００，０００の範囲を挙げることができる。

【００１４】平均分子量が５，０００より下のデキスト
ランはエンドトキシン感受性因子の吸着効果が弱く使用
することができない。また５，０００，０００より上の
ものは粘性が高すぎて使用することができない。

【００１５】本発明に使用するポリアミド系不溶性担体
としては、膜状、粒状、チップ状等の形態を有する酸ア
ミド結合の繰り返しによって主鎖を構成する結晶性の線
状高分子物質であり、ジアミンとジカルボン酸との重縮
合物ないしは、ω−アミノカルボン酸または相当するラ
クタムから重縮合によって合成された化合物（例えばナ
イロン６、ナイロン６６等）等を挙げることができる。

【００１６】本発明により、（１→３）−β−Ｄ−グル
カンを測定する生体試料としては、血液、血漿、血清、
脳脊髄液、腹水、関節液、胸水、乳汁、尿等の、体液、
浸出液、排泄液等を挙げることができる。

【００１７】本発明の測定剤を用いて（１→３）−β−
Ｄ−グルカンを測定するには、前述の発色合成基質ある
いは発蛍光合成基質を反応液中に共存させ、クロッティ
ングエンザイムのアミダーゼ活性を測定する方法、凝固
反応によるゲル形成を検査する方法等を採用することが
できる。

【００１８】

【作用】本発明は、ポリアミド系不溶性担体に（１→
３）−β−Ｄ−グルカン感受性因子の活性が損なわれる
ことなく、ライセート中のエンドトキシン感受性因子が
吸着除去されることによって、（１→３）−β−Ｄ−グ
ルカンにのみ反応するライセートが得られる。また、該
担体にライセートを接触させる際に、ライセートにデキ
ストランを混合してライセートの粘性を上げることによ
って、該吸着除去の効果を高める。

【００１９】

【実施例】以下に実施例を挙げ、本発明をさらに具体的
に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるも
のではない。

【００２０】実施例１ カブトガニ（T. tridentatus）血リンパ液５００mlを４
℃、１，５００rpm で１０分間遠心し、その沈殿部分
（アメボサイト）約２０g に１００mlの０．０２M トリ
ス−塩酸緩衝液（pH８．０）を加え、ホモゲナイザー
（ポリトロンＲ ＰＴ１０（商品名）、Kinematica社製
造）にて均一に破砕および抽出し、１０，０００×Ｇで
３０分間冷却遠心し、上澄液と沈殿物とを採取した。得
られた沈殿物をさらに６０mlの緩衝液にて２回抽出し、
最終的に２００mlのライセートを得た。

【００２１】以下の方法で５種類の試薬を調製し、エン
ドトキシンおよび（１→３）−β−Ｄ−グルカンに対す
る反応性を比較検討した。

【００２２】Ａ剤は、０．８M 塩化マグネシウム２００
μl と６mMＢｏｃ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐＮＡ２
００μl の混液（以下ＭＳ混液）にライセート８８０μ
l を添加し、凍結乾燥することにより調製した無処理の
ライセートである。

【００２３】Ｂ剤は、ライセート１．２mlを０．２０μ
m のナイロン膜（ナルゲンシリンジフィルター（商品
名）、直径２５mm、ナルジェ社製）に通過させた後、そ
のろ液８８０μl をＭＳ混液に添加し、凍結乾燥するこ
とにより調製した本発明のナイロン膜処理ライセートで
ある。

【００２４】Ｃ剤は、ライセート１．２mlを０．２２μ
m のポリビニリデンフロライド膜（マイレクスＧＶ（商
品名）、直径２５mm、ミリポア社製）に通過させた後、
そのろ液８８０μl をＭＳ混液に添加し、凍結乾燥する
ことにより調製した比較のライセートである。

【００２５】Ｄ剤は、ライセート１．２mlを０．２０μ
m のポリテトラフルオロエチレン膜（マイレクスＦＧ
（商品名）、直径２５mm、ミリポア社製）に通過させた
後、そのろ液８８０μl をＭＳ混液に添加し、凍結乾燥
することにより調製した比較のライセートである。

【００２６】Ｅ剤は、ライセート１．２mlを０．２０μ
m のポリスルフォン膜（アクロディスク（商品名）、直
径２５mm、ゲルマン社製）に通過させた後、そのろ液８
８０μl をＭＳ混液に添加し、凍結乾燥することにより
調製した比較のライセートである。

【００２７】上記５種類の試薬それぞれに２．２mlの
０．２M トリス−塩酸緩衝液（pH８．０）を加えて溶解
し、その溶液０．１mlにエンドトキシン（２５ Pg/ml）
および（１→３）−β−Ｄ−グルカン（３０ Pg/ml）各
々０．１mlを添加して、３７℃で３０分間加温した。５
種類の試薬に対する試料の反応性は、３０分後に生じた
ｐＮＡ（パラニトロアニリン）を、０．５mlの０．０４
％亜硝酸ナトリウム（０．４８M 塩酸溶液）、０．３％
スルファミン酸アンモニウム、０．７％Ｎ−（１−ナフ
チル）エチレンジアミン二塩酸塩を順次添加して発色さ
せ、５４５nmの吸光度値で示した。

【００２８】その結果を表１に示した。この結果から、
ポリアミド系膜であるナイロン膜を一度通過させたライ
セートを使用すれば、エンドトキシンの影響を受けず
に、（１→３）−β−Ｄ−グルカンを特異的に定量する
ことができる。

【００２９】

【表１】

【００３０】＊…（（１→３）−β−Ｄ−グルカンの調
製法）国際特許公開第９０／０２９５１（１９９０）に
準じ、カードラン（和光純薬工業販売）の１g を約１０
０mlの５mM ＮａＯＨ水溶液に懸濁し、氷冷下で音波発
生機、ソニケーター^TM（大岳製作所、型式５２０２ＰＺ
Ｔ、東京）により２０KHz 、８０W で１２分間音波処理
による低分子化を行った。処理液を５M ＮａＯＨ水溶液
を用い、最終０．３M 水溶液とし、ゲルパーミエーショ
ンクロマトグラフィー；ＧＰＣカラム：ＴＳＫ ｇｅｌ
Ｇ３０００ＰＷ×Ｌ ２本、Ｇ２５００ＰＷ×Ｌ １
本、移動相：０．３M ＮａＯＨ水溶液、流速０．５ml／
min)により分画採取し、再クロマトグラフィーにより分
子量２１６，０００のＧＰＣ分画精製標品（（１→３）
−β−Ｄ−グルカン標品）を得た。

【００３１】実施例２ 実施例１で調製した原料ライセート４０mlに同量の蒸留
水を加えた（以下ライセート＋ＤＷ）。また該ライセー
ト４０mlに同量の１５％（Ｗ／Ｖ）デキストラン（分子
量４０，０００）水溶液を加え、３，５００rpm で１０
分間遠心してその上清を得た（以下ライセート＋Ｄ
ｘ）。

【００３２】以下の方法で４種類の試薬を調製し、エン
ドトキシンおよび（１→３）−β−Ｄ−グルカンに対す
る反応性を比較検討した。

【００３３】Ｆ剤はＭＳ混液にライセート＋ＤＷ１．７
６mlを添加し、凍結乾燥することにより調製した無処理
のライセート＋ＤＷである。

【００３４】Ｇ剤は、ＭＳ混液にライセート＋Ｄｘ１．
７６mlを添加し、凍結乾燥することにより調製した無処
理のライセート＋Ｄｘである。

【００３５】Ｈ剤は、ライセート＋ＤＷ５．０mlを０．
２０μm のナイロン膜（ナルゲンシリンジフィルター）
に通過させた後、そのろ液１．７６mlをＭＳ混液に添加
し、凍結乾燥することにより調製した本発明のナイロン
膜処理ライセート＋ＤＷである。

【００３６】Ｉ剤は、ライセート＋Ｄｘ５．０mlを０．
２０μm のナイロン膜（ナルゲンシリンジフィルター）
に通過させた後、そのろ液１．７６mlをＭＳ混液に添加
し、凍結乾燥することにより調製した本発明のナイロン
膜処理ライセート＋Ｄｘである。

【００３７】上記４種類の試薬それぞれに２．２mlの
０．２M トリス−塩酸緩衝液（pH８．０）を加えて溶解
し、その溶液０．１mlにエンドトキシン（２５ Pg/ml）
および（１→３）−β−Ｄ−グルカン（３０ Pg/ml）各
々０．１mlを添加して、３７℃で３０分間加温し、実施
例１と同様にして各種の試薬に対する試料の反応性を調
べた。その結果を表２に示した。この結果から、あらか
じめライセートにデキストランを共存させておくと、エ
ンドトキシン感受性因子の吸着効果を高めるとともに、
（１→３）−β−Ｄ−グルカンに対する感度を著しく高
めることができることがわかる。

【００３８】

【表２】

【００３９】実施例３ カブトガニ（L. polyphemus)血リンパ液６００mlを４
℃、１，５００rpm で１０分間遠心し、その沈殿部分
（アメボサイト）約２３g に１１０mlの０．０２Mトリ
ス−塩酸緩衝液（pH８．０）を加え、ホモゲナイザー
（ポリトロンＲ ＰＴ１０）にて均一に破砕および抽出
し、１０，０００×Ｇで３０分間冷却遠心し、上澄液と
沈殿物とを採取した。得られた沈殿物をさらに６５mlの
緩衝液にて２回抽出し、最終的に２２０mlのライセート
を得た。同ライセート２０mlに同量の１５％（Ｗ／Ｖ）
デキストラン（分子量７０，０００）を加え、３，５０
０rpmで１０分間遠心後、その上清をＤ−ライセートと
した。これを用いて、以下の方法で２種類の試薬を調製
し、エンドトキシンおよび（１→３）−β−Ｄ−グルカ
ンに対する反応性を比較検討した。

【００４０】Ｊ剤はＭＳ混液にＤ−ライセート１．７６
mlを添加し、凍結乾燥することにより調製した無処理の
ライセート＋Ｄｘである。

【００４１】Ｋ剤は、Ｄ−ライセート１０mlを０．２０
μm のナイロン膜（ナルゲンメディアプラスフィルター
ユニット（商品名）、直径９０mm、ナルジェ社製）に通
過させた後、そのろ液１．７６mlをＭＳ混液に添加し、
凍結乾燥して調製した本発明のナイロン膜処理ライセー
ト＋Ｄｘである。

【００４２】上記２種類の試薬それぞれに２．２mlの
０．２M トリス−塩酸緩衝液（pH８．０）を加えて溶解
し、その溶液０．１mlにエンドトキシン（２５ｐｇ／m
l）及び（１→３）−β−Ｄ−グルカン溶液（３０ｐｇ
／ml）各々０．１mlを添加して、３７℃で３０分間加温
し、実施例１と同様にして、反応性を比較検討した。そ
の結果を表３に示した。ポリアミド系膜であるナイロン
膜を通過させたライセートはエンドトキシンとは反応せ
ず、（１→３）−β−Ｄ−グルカンとのみ反応すること
が明らかである。また、ライセートにデキストランを共
存させてから処理すると、（１→３）−β−Ｄ−グルカ
ンに対する感度を著しく高めることがわかる。

【００４３】

【表３】

【００４４】実施例４ 市販ゲル化法リムルステスト試薬を使用する（１→３）
−β−Ｄ−グルカン用測定剤の調製 市販のライセート製品すなわちゲル化法リムルステスト
試薬を使用して、目的とする（１→３）−β−Ｄ−グル
カン用測定剤を以下のように調製した。

【００４５】Ｌ剤はプレゲル−Ｍ（生化学工業販売ライ
セート、Lot. AB-01）を２．６mlの注射用蒸留水に溶解
した後、０．２０μm のナイロン膜（組織培養フィルタ
ーユニットＴＣ（商品名）、直径４７mm、ナルジェ社）
に通過させ、そのろ液を使用した本発明のナイロン膜処
理ライセート＋ＤＷである。

【００４６】Ｍ剤は無処理のプレゲル−Ｍである。

【００４７】Ｎ剤はリムルスＨＳII−テストワコー（和
光純薬工業販売ライセート、Lot. EMM090)を５．０mlの
注射用蒸留水に溶解した後、同様に組織培養フィルター
ユニットＴＣに通過させ、そのろ液２．６mlを凍結乾燥
することにより調製したナイロン膜処理のライセート＋
ＤＷである。

【００４８】Ｏ剤は無処理のリムルスＨＳII−テストワ
コーである。

【００４９】注射用蒸留水を用い、Ｍ剤およびＮ剤は
２．６ml、Ｏ剤は５．０mlで溶解した。Ｌ〜Ｏ剤の０．
１mlに注射用蒸留水（ブランク）、エンドトキシン（E.
coli0111:B4 由来）および（１→３）−β−Ｄ−グル
カンを別々に０．１ml加え、３７℃で６０分間静置加温
し、ゲル形成の有無を調べた。その結果を表４に示し
た。表中、＋はゲルを形成したことを、−はゲルを形成
しなかったことを表す。表４から明らかなように、Ｌお
よびＮ剤は（１→３）−β−Ｄ−グルカンとのみ反応す
る目的に適したライセートであることがわかる。

【００５０】

【表４】

【００５１】（１→３）−β−Ｄ−グルカンは、真菌細
胞壁の構成多糖体としても知られ、（１→３）−β−Ｄ
−グルカンを測定することにより、体内における真菌の
存在を検知することができる。以下、実施例５〜７にお
いて、本発明の方法による真菌の検出例をあげる。

【００５２】実施例５（血漿検体の測定） 真菌による敗血症を疑った入院中の重症血液疾患（急性
リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、多発性骨髄腫等）
を有する患者１１例を対象に、それぞれ無菌的に採血し
たヘパリン加血漿を試料として、４℃で１５０×Ｇ、１
０分間遠心して多血小板血漿を得た。その０．１mlに
０．３２M 過塩素酸０．２mlを加え、３７℃で２０分間
加温し、析出物を遠心（３，０００rpm 、１０分間）除
去し、その上清０．０５mlに０．１８M ＮａＯＨを０．
０５ml加えて中和し被検液とした。

【００５３】ひきつづき実施例２に記載の方法で調製し
た本発明の（１→３）−β−Ｄ−グルカン測定剤（Ｉ
剤）０．１mlを加え、３７℃で３０分間加温した。その
反応液に０．０４％亜硝酸ナトリウム（０．４８M 塩酸
溶液）、０．３％スルファミン酸アンモニウム、０．０
７％Ｎ−１−ナフチルエチレンジアミン二塩酸塩を各
０．５ml順次加えてジアゾカップリングし、５４５nmで
その吸光度を測定して、別に作成した検量線（図２）に
より（１→３）−β−Ｄ−グルカン換算量として表し
た。表５に示すように全例（No. １〜No. １１）におい
て高濃度の（１→３）−β−Ｄ−グルカンが検出され
（健常人：０．２±０．３pg／ml）、そのうちの５例
（No. １〜No. ５）は、血培にて、カンジダ・アルビカ
ンス（Candida albicans）、カンジダ・グリエルモンデ
ィ（Candida guilliermondii) 、カンジダ・トロピカリ
ス（Candida tropicalis）、カンジダ・クルセイ（Cand
ida krusei）およびクリプトコッカス・ネオフォルマン
ス（Cryptococcus neoformans)をそれぞれ検出し、２例
（No. ６及びNo. ７）は血培では陰性であったが、死亡
後の解剖による組織病理学的検査によりアスペルギルス
・フミガツス（Aspergillus fumigatus)を検出した。さ
らに残り４例（No. ８〜No. １１）については、臨床症
状、経過、薬剤感受性等から真菌感染を強く疑ったにも
かかわらず血培では陰性であったが、抗真菌剤（アンホ
テリシン、ミコナゾール、フルコナゾール）投与によ
り、臨床的に顕著な改善を見た。従って、本発明の測定
剤は真菌感染症とりわけ通常の検査法では診断がきわめ
て困難な深在性真菌感染症の迅速診断法として、適切に
用いられることが理解できる。

【００５４】

【表５】

【００５５】実施例６（尿検体の測定） 入院中に尿路感染症を併発した症例で、尿培養でカンジ
ダ・アルビカンス（Candida albicans）、カンジダ・グ
ラブレイタ（Candida glabrata）を検出した３症例につ
き、本発明の測定剤により尿中の（１→３）−β−Ｄ−
グルカンを定量した。尿は中間尿を無菌的に滅菌採尿コ
ップに採取し、その０．００５mlに注射用蒸留水０．１
mlを加えた後、実施例１に記載の本発明の（１→３）−
β−Ｄ−グルカン用測定剤（Ｂ剤）０．１mlを加え、３
７℃で３０分間加温した。前記と同様にジアゾカップリ
ング後、５４５nmでその溶液の吸光度を測定し、別に作
成した検量線より（１→３）−β−Ｄ−グルカン換算値
として表した。表６に示すように３例中全例において高
濃度の（１→３）−β−Ｄ−グルカンが検出され（健常
人：１０pg／ml以下）、本発明の測定剤は真菌性尿路感
染症の迅速診断法として、適切に用いられることが理解
できる。

【００５６】

【表６】

【００５７】実施例７（脳脊髄液検体の測定） 入院中に髄膜炎を疑われ、髄液中にクリプトコッカス・
ネオフォルマンス（Cryptococcus neoformans)を検出し
た真菌性髄膜炎の３症例につき、腰椎穿刺にて無菌的に
採取した髄液０．０５mlに注射用蒸留水０．０５mlを加
え、さらに実施例３に記載の本発明の（１→３）−β−
Ｄ−グルカン用測定剤（Ｋ剤）０．１mlを加え、３７℃
で３０分間加温した。前記と同様にジアゾカップリング
後、５４５nmでその溶液の吸光度を測定し、別に作成し
た検量線より（１→３）−β−Ｄ−グルカン換算値とし
て表した。表７に示すように、３例中全例において高濃
度の（１→３）−β−Ｄ−グルカンが検出され（健常
人：１pg／ml以下）、本発明の測定剤は真菌性髄膜炎の
迅速診断法として適切に用いられることが理解できる。

【００５８】

【表７】

【００５９】

【発明の効果】本発明はライセートを用いて（１→３）
−β−Ｄ−グルカンを特異的に測定するための、エンド
トキシン感受性因子を含まない測定剤を提供するもので
あり、血液や尿をはじめとした生体試料中に存在する真
菌由来の（１→３）−β−Ｄ−グルカンを迅速簡便かつ
高い精度で測定することが可能である。菌培養法等に代
表される通常の検査法では診断困難な深在性真菌感染症
の迅速診断ならびに適切な治療法および治療効果の判定
に利用することができる。

【００６０】さらに本発明の測定剤は、注射用蒸留水、
注射薬および医療用具に混入する（１→３）−β−Ｄ−
グルカンを迅速かつ正確に測定することを可能とし、ま
た（１→３）−β−Ｄ−グルカンに代表される抗腫瘍性
多糖のスクリーニングにも利用することができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】カブトガニ・アメボサイト・ライセートのエン
ドトキシンならびに（１→３）−β−Ｄ−グルカンによ
る反応機構を示す。

【図２】Ｉ剤の（１→３）−β−Ｄ−グルカンに対する
検量線を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 平２−138193（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C12Q 1/25 - 1/66 G01N 33/579 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＥＰＡＴ（ＱＵＥＳＴＥＬ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)

Claims (5)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 カブトガニ・アメボサイト・ライセート
   をポリアミド系不溶性担体に接触させて得られる、エン
   ドトキシン感受性因子を実質的に含まないライセートか
   らなる、（１→３）−β−Ｄ−グルカン用測定剤。
2. 【請求項２】 カブトガニ・アメボサイト・ライセート
   が、デキストランを含有するライセートである、請求項
   １記載の測定剤。
3. 【請求項３】 カブトガニ・アメボサイト・ライセート
   をポリアミド系不溶性担体に接触させて、エンドトキシ
   ン感受性因子を実質的に含まないライセートを得る工程
   を含む、（１→３）−β−Ｄ−グルカン用測定剤の製造
   方法。
4. 【請求項４】 請求項１又は２に記載の（１→３）−β
   −Ｄ−グルカン用測定剤に、検体を接触させる工程を含
   む、（１→３）−β−Ｄ−グルカンの測定方法。
5. 【請求項５】 請求項１又は２に記載の（１→３）−β
   −Ｄ−グルカン用測定剤を含む、真菌感染症診断薬。