JPH03218463A - 抗体固定化不溶性担体粒子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は免疫字的な測定試薬に閏し、更に詳しくは抗体
を固定化した不溶性担体粒子に関する．［従来の技術及
び発明が解決しようとする問題点］従来，不溶性担体粒
子に物理吸着あるいは共有結合の形成により抗体を固定
化した免疫字的活性物質固定化不溶性担休粒子（以Ｆ、
固定化担体粒子と略す）と血清や尿などの被検体中の対
応ずる抗原との間における抗原抗体反応に基づく凝集反
応あるいはｓ１集阻止反応をｌｌｊ１察することにより
、被検体中の対応する抗原を測定する免疫字的測定方法
が知られている．そしてこの免疫７的測定方法を臨床的
診断に用いるためには，測定対象となる抗原以外の被検
体中の多種多様な抗原を認識しない抗体を使用する必要
があった．臨床的診断において、従来は単一の抗原のみ
を特異的に測定する事が求められた。このため、単一の
抗原のみを認識する抗体を一種のみ不溶性担体粒子に固
定化して用いた．上記固定化担体粒子を用いる測定方法
は被検体中に含まれる微菫の抗原を迅速に、高精度でか
つ簡便に測定できるため広く利用されている。

しかしながら、抗原が、例えば細菌、ウイルス、真菌な
どの場合は、従来主に培養法により検出されていた．こ
の培養法による測定は、判定までに数日を要し迅速に診
断を下す事が困難であった。

上記固定化担体粒子を用いると数分で判定しうるためそ
の場での誇断が可能となる．このため種々の固定化担体
粒子を製造して誇断に用いる試みがなされている． 例えば腟カンジダ症の於断を目的として，その原因とな
る菌Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓに対応する抗Ｃ
ａｎｄｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ抗体を不溶性担体粒子に
固定化した抗Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ抗体固
定化担体粒子を調製し、用いた場合、Ｃａｎｄｉｄａ　
ａｌｂｉｃａｎｓに対しては高い感度を示す． しかし腟カンジダ症のもう一桟の原因菌であり抗Ｃａｎ
ｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ抗体が交叉反応を示すＣａ
ｎｄｉｄａ　ｇｌａｂｒａｔａに対しては感度が低く、
実用的な感度には至らない．逆に抗Ｃａｎｄｉｄａ　ｇ
ｌａｂｒａｔａ抗体固定化担体粒そを調製し、用いた場
合、Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓに対しては、同
様に感度が低く、実用的な感度には至らない．従って、
抗Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ抗体、または抗Ｃ
ａｎｄｉｄａ　ｇｌａｂｒａ［ａ抗体のいづれか一方を
固定化した固定化担体粒子を用いても、正確な腟カンジ
ダ症の誇断は出来ない９また、あらかじめ個別に調製さ
れた抗Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ抗体固定化担
体粒子と抗Ｃａｎｄｉｄａ　ｇｌａｂｒａ［ａ抗体固定
化担体粒子とを栄に混合した場合には、いずれの抗原に
対しても感度不足となる． さらには、使用する抗体のＭ製度を増す事により抗原を
認識する感度を高める事ができるが、この方法を用いた
場合腟カンジダ症の原因菌即ち上記２ｆ１ｌの抗原に対
する感度が高くなるのみならず腟カンジダ症の原因菌以
外の菌に対する交叉反応性を示す様になり腟カンジダ症
に対する特異性が低下する欠点があった．ずなわち従来
の抗体固定化不溶性担体粒子を用いた腟カンジダ症原因
菌の検出では、培養法などの従来検出法と比べると、感
度及び特異性が不十分であり、感度及び特異性を同時に
満足できなかった．腟カンジダ症に限らず、複数の、細
菌、ウイルス、真菌などが原因となる疾病の於断におい
て．感度及び特異性を同時に満足して、正確な誇断が可
能となる抗体固定化担体拉子が求められていた． ところで、華一の抗原に対して調製したモノクロナル抗
体を担体粒子に固定化した抗体固定化担体粒子とその抗
原とを混合しても凝集を示さない場合に、同一抗原の異
なる抗原決定部位に対して調製したモノクロナル抗体を
２粍以−Ｌ組み合わせて固定化すると、抗体固定化担体
粒子がその抗原と混合して凝集を示す場合があることが
知られている．即ち、従来技術はあくまでも単一の抗原
に対する２種以上の抗体を固定化させるものである．一
方、本発明は、上記従来技術と技術思想を異にし、異な
る２株以−Ｅの抗原を感度及び特異性共に良く認識して
凝集することを目的として研究を進めたものである． １問題を解決するための手段］ 本発明者らは前記目的を達成し得る抗体固定化担体粒子
を得るため鋭意研究してきた結果、ｈ二いに相異なる抗
原を認識する少なくとも２種の抗体を固定化した固定化
担体粒子を、臨床的な診断に使用した場合には、感度及
び特異性が共に優れることを見出だし、本発明を完成す
るに至った．即ち、本発明は，２種以−トの抗体を固定
化した抗体固定化不溶性担体粒子において、前記抗体の
うちの少なくも２踵の抗体が、互いに相胃なる抗原を認
識する抗体であることを１８徴とする抗体固定化不溶性
担体粒子である。

本発明において、不溶性担体粒子に複数の抗体を固定化
する。上記固定化される抗体は、複数の抗体のうち少な
くとも２種の抗体が，互いに相異なる抗原を認識する抗
体の組み合わせであれば特に限定的ではなく、公知のも
のを２種以上組み合わせて使用できる． そして異なる抗原の組み合わせについては、例えば同居
の細菌又は、同居のウィルス等で同時に測定する臨床的
意義がある場合の組み合わせや、異なる抗原が分類学上
の近縁閏係に無くとも臨床上の測定目的等に共通点があ
り同時に測定する意義がある場合の組み合わせが、本発
明において特に好適な、異なる抗原の組み合わせである
．好適に使用できる代表的なものを例示すれば、例えば
抗Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ抗体／抗Ｃａｎｄ
ｉｄａ　ｇｌａｂｒａｔａ抗体：　抗Ｃａｎｄｉｄａ　
ａｌｂｉｃａｎｓ抗体／抗Ｃａｎｄｉｄａ　ｇｌａｂｒ
ａｌａ抗体／抗Ｔｒｉｃｈｏｓｏｎａｓ抗体；　抗｝１
ｙｃｏｐｌａｓｍａ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ抗体／抗Ｈ
ｙｃｏｐｌａｓｌａ　Ｏｅｎｉｔａｌｉｕ一抗体；　抗
ロタウィルス抗体／抗アデノウィルス抗体；　抗Ｈ　Ｂ
　ｓ抗体／抗ＨＢｅ抗体；　抗ａｌｐｈａ−ｆｅｔｏｐ
ｒｏｔｅｉｎ抗体／抗ｃａｒｃｉｎｏｅｓｂｒｙｏｎｉ
ｃ　ａｎｔ＋ｇｅｎ抗体：　などてあり、細菌、ウイル
ス、真菌などで同属に分類される抗原に対応する２種以
上の抗体の組み合わせが好適に使用できる，上記固定化
される抗体の組み合わせの内、少なくとも２種の抗体が
、互いに他の抗体に対応する抗原に交叉反応性を有する
抗体の組み合わせの場合が特に好適に使用できる， 昭和５１年、株式会社南江堂発行の医科免疫字、第１１
７頁−１１８頁には、交叉反応性について以下の如く説
明されている，ＡあるいはＢ抗原の免疫によって生じた
抗ＡあるいはＢ抗体はおのおのＡあるいはＢ抗原とのみ
反応し、Ａ抗原は抗Ｂ，Ｃ，Ｄ・・　抗体とは反応しな
い．〈中略》この原則はときとしてくずれることがある
．たとえば、抗ウシ血清アルブミン抗体はヒツジ血清ア
ルブミンともある程度反応することができる．このよう
な反応を交叉反応という．原則的には交叉反応は本反応
に比べると弱く、抗原の由来する生物種が近縁なほど強
くあらわれる．これは双方のアルブミンに共通の決定基
があるために起こる現象である。

尚、本発明において、交叉反応性とは，詳しくは後述す
るが、単一の抗体を固定化した固定化担体粒子が、その
固定化した抗体と対応する抗原以外の抗原と反応し凝集
を示すことである．従来、単一の抗原の異なる抗原決定
部位に対して調製した２種のモノクロナル抗体を担体拉
ｒに固定化する技術が知られている．しがし、この場合
は、凝集を示す抗原がその哨一の抗原のみである．一方
、本発明では、少なくとも２種の抗体が、各々異なる抗
原に対して凝集反応性を示す抗体であることを１７徴と
しており、既に知られている技術の態様が、凝集を示す
抗原が９一の抗原のみである点で、本発明の態様とは責
なる９ 不溶性担体粒子としては、固定化、保存及び測定を行う
時に用いられる液体媒体に実質的に不溶性の不溶性担体
粒子であり、詳しくは後述するが平均粒子径１０μｍ程
度以下の微粒子が好適に用いられる． これらの粒子はすでに抗原抗体反応に使用されるものが
種ク知られており、本発明においてもこれらの公知の微
粒子が特に限定されず使用できる．特に好適に使用され
るものを例示すると例えば、ボリスチレン、スチレンー
ブタジエン共重合体、スチレンーメタクリル酸共重合体
、ポリグリシジルメタクリレート、アク口レインーエチ
レングリコールジメタクリレート共重体の様な乳化重合
法により得られる有機高分子ラテックス粒子などの有機
高分子物質の微粒子、あるいはシリカ、シリカーアルミ
ナ、アルミナの様な無機酸化物または該無ａｖｉ化物な
どにシランカップリング処理などの操作で官能基を導入
した無機粒子さらにはヒト０型赤血球、ヒツジ赤血球な
どの生物由来の粒子などである． 」−記不溶性担体粒子の粒子径については、粒子径か大
きい場合、ｌｉ’Ａにともなう粒子径の変化斌は大きい
が凝集反応速度が遅く、粒子径が小さいとブラウン運動
が活発で凝集反応速度は速いが一次粒子径が小さいため
に８１４Ａ反応にともなう粒子径の変化闇が小さい．こ
のために凝集反応に用いられる不溶性担休粒子の平均粒
子径は１０μｍ程度以下、好ましくは０．０５・〜５．
０μｍの不溶性担体粒子が好適に用いられる． 本発明において、抗体固定化担体粒子を用いた免疫字的
測定方法即ち、抗体固定化担体粒子上の抗体と被検体中
の対応する抗原などとの間における抗原抗体反応に基づ
＜ｓＩＳ反応あるいはａａ阻止反応を観察する方法は、
目視、光字的測定方法など公知の方法が特に限定されず
使用できる．本発明において、不溶性担体粒子に抗体を
固定化する方法は、物理的吸着、化字的共有結合の形成
のいずれでも良い．化学的共有結合の形成についてはす
でに多くの方法が提案されており、固定化する抗体の特
性に合わせ公知の方法から固定化方法を選択すれば良い
。一般には分散媒中で抗体を必要に応じて架橋剤の存在
下に不溶性担体粒子と混合すれば良い．架橋剤としては
グルタルアルデヒド、１−エチル−３−（３−ジメチル
アミノプロビル）カルボジイミド塩酸塩などの公知のも
のが使用できる． 不溶性担体粒子に抗体を固定化する際の分散媒は特に限
定的ではなく公知のものが使用されるが、Ｆ記の架橋剤
を使用する場合には分散媒中の成分が架橋剤と反応しな
い分散媒を用いる必要がある．好適に使用される分散媒
としてはリン酸ＭＷｒ液、グリシンー水酸化ナトリウム
緩衝液、トリス−塩＃１１ＥＷｇ液，塩化アンモニウム
ーアンモニア緩衝液、などの！ｉ液が好適に使用される
．固定化する際の不溶性担体粒子の分散媒中の濃度は特
に限定されるものではないが、一般には抗体と混合した
時点で０．０５重量％以上、好ましくは０．２〜２、０
重鼠％となる様に選ぶのが好適である．抗体の濃度も特
に限定されるものではないが、一般には不溶性担体粒子
と混合した時点で０．０００５重駄％以上、好ましくは
０．００２〜０．２重量％となる様に選ぶのが好適であ
る。

本発明においては、少なくとも２桟の抗体を組み合わせ
て固定化する事が必須である．２種の抗体を組み合わせ
る場合は、両抗体が、互いに、他の抗体に対応する抗原
に交叉反応性を有する場合が特に好適である．３種以上
の抗体を組み合わせる場合は、いづれか２種の抗体が、
互いに、他の抗体に対応する抗原に交叉反応性を有して
おれば良い。もちろん、各抗体が、他の抗体に対応ずる
抗原全てに交叉反応性を有していても良い． 抗体が他の抗体に対応する抗原に対し交叉反応性を有ず
る事を確認する方法として、例えば一種の抗体（抗体Ａ
）を不溶性担体粒子に固定化して抗体Ａ固定化担体粒子
を製造し、固定化した抗体Ａに対応する抗原Ａと凝集反
応を行い、凝集が認められる抗原の最低濃度即ち感度を
求める。次いで同じ抗体八固定化担体粒子を他の抗体Ｂ
に対応する抗原ｎと混合し、凝集反応の有無より交叉反
応性の有無を確認する．抗体Ａ固定化担体粒子の抗原Ｂ
に対する感度についても同様に求める。各々の抗体に対
応する抗原としては、その抗体を産生する際に使用した
抗原を使用すれば良い．逆に抗体Ｂ固定化担体粒子の抗
原Ｂ、抗原Ａに対する感度についても同様に求める．本
発明においては、各々の抗体が互いに他の抗体に対応す
る抗原に交叉反応性を示す組み合わせが特に好適に使用
できる． 上記凝集反応で求まる抗体固定化担体粒子の各抗原に対
する感度の比即ち凝集を示す最低濃度の比は特に限定的
ではないが、その抗体に対応する抗原に対する感度を１
として他の抗体に対応する抗原に対する感度は１００以
下が特に好適である．２種以上の抗体を組み合わせて固
定化する順序は特に限定的ではなく、２種以上の抗体を
同時に固定しても、逐次固定しても良い．複数の抗体の
使用量比も特に限定的ではなく、得られる固定化担体粒
子の感度、特異性などを勘案して決定すれば良いが、使
用する全抗体に対し、各抗体を１割以上使用するのが好
適であり、さらに好ましくは３割以上使用すると良い。

１作用及び効果」 本発明による抗体固定化担体粒子の製造方法と従来の抗
体固定化担体粒子の製造方法とを例えば腟カンジダ症の
詮断につき比較すると，以下のごとく本発明による抗体
固定化担体粒子が優れる．ＩＱ一の抗体を固定化した従
来の抗体固定化担体粒子を用いた検出方法では、正確な
詮断が出来ない。即ち、腟カンジダ症の原因菌であるＣ
ａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓに対応する抗Ｃａｎｄｉ
ｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ抗体を固定化した抗Ｃａｎｄｉ
ｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ抗体固定化担体粒子は、腟カン
ジダ症のもう一種の原因菌であるＣａｎｄｉｄａ　ｇｌ
ａｂｒａ［ａに対し、実用的な感度で検出出来ない．逆
に，抗Ｃａｎｄｉｄａ　ｇｌａｂｒａｔａ抗体固定化担
体粒子を−１製した場合も、同様にＣａｎｄｉｄａ　ａ
ｌｂｉｃａｎｓを実用的な感度で検出できない．これに
比較して本発明による抗体固定化担体粒子即ち、抗Ｃａ
ｎｄ　ｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ抗体及び抗Ｃａｎｄｉｄ
ａ　ｇｌａｂｒａｔａ抗体の両者を固定化した固定化担
体粒子によれば、Ｃａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ及び
Ｃａｒｌｄｉｄａ　（ｌＩａｂｒａｔａノイずれに対し
ても、実用的な高い感度を示す固定化担体粒子が得られ
る． また、あらかじめ個別に調製された抗Ｃａｎｄｉｄａａ
ｌｂｉｃａｎｓ抗体固定化担体粒子と抗Ｃａｎｄｉｄａ
　ｇｌａｂｒａ１ａ抗体固定化担体拉子とを単に混合し
た場合には、いずれの抗原に対しても感度不足となり、
実用的ではない．この原因につき，本発明者らは次のよ
うに考える．即ち、単一の抗体を固定化した固定化担体
粒子２種を混合した場合、各々の固定化担体粒子が対応
する抗原に対してのみ強く反応し他方の抗原に対しては
反応が弱く、又反応が弱い固定化担体粒子が共存するた
めに本来強＜ａＳすべき固定化担体粒子同志の衝突頻度
が低くなり、結果としていずれの抗原に対しても感度不
足となる．これに対し、本発明による抗体固定化担体粒
子は同一固定化担体粒子上に２種の抗体が共存しており
、いずれの抗原に対しても強く反応する．このため、上
記の固定化担体粒子２種を混合した場合の様な固定化担
体粒子同志の衝突頻度が低下する現象がなく、いずれの
抗原に対しても高い感度を示すものと考える． 単一の抗体のみを使用する従来の抗体固定化担体粒子に
おいては、使用する抗体の精製度を増す事により，互い
の抗原に対する感度を高める事ができるが，この方法を
用いた場合には、例えば腟カンジダ症の場合でも原因菌
以外の菌に対する交叉反応性を示す様になり特異性が低
下する欠点があった．これに対し、本発明の抗体画定化
担体粒子では、同一固定化担体粒子上に２ｆｉの抗体が
共存ずるなめ、不必要な交叉反応性が他方の抗体により
希釈され特異性の低下が抑ル１されるものと考える．即
ち、従来の抗体固定化担体粒子では、培養法などの従来
検出法と比べると、感度及び特異性が不十分であり、診
断に用いるために要求される感度及び特異性を同時に満
足できなかった．これに対し、本発明の抗体固定化担体
粒子は感度及び特異性を同時に満足し、正確さを要求さ
れる種々の診断用試薬として利用可能である．また固定
化する２種の抗体が交叉反応性を示さない組み合わせの
場合として、例えばアデノウイルス／ロタウィルス試薬
の場合がある．アデノウイルス及びロタウィルスは、共
に下痢の原因ウィルスである．臨床的には、細菌性の下
痢か，ウイルス性の下痢かを診断する事が重要であり、
原因ウィルスが何かは、あまり重要ではない．本発明に
よる抗アデノウィルス抗体及び抗ロタウィルス抗体を共
に固定化した抗体固定化担体粒子を用いた試薬は、アデ
ノウィルス及びロタウイルスいずれに対しても高感度で
検出できるのみならず、抗アデノウィルス抗体又は抗ロ
タウィルス抗体を各々単独に固定化した抗体固定化担体
粒子を用いる従来の試薬が検出不可能であった低濃度の
アデノウィルス及びロタウィルスを共に含む場合にも検
出できる効果がある． ［実施例］ 以下、実施例によりさらに本発明を詳細に説明するが本
発明はこれらの実施例に限定されるものではない． 実施例１〜・４　カンジダ試薬 （１）免疫抗原の調製 カンジダ症の原因菌の１つであるＣａｎｄｉｄａ　ａｌ
ｂｉｃａｎｓ　ｃ−ａ−１１１　（千葉大真核微生物セ
ンターより入手》を、酵母エキスペプトンデキストロー
ス培地に接桟し、２５℃で２４時同好気培養を行った．
培養後の菌体液にホルマリン《３７％ホルマリン液》を
１０分の１′Ｂ−３１加え、室温３０分処理し，死菌と
した後、遠心分＠（１ｏｏｏｘ　Ｑ，　１０分間》シ，
沈渣（菌体）に１７６０モルのリン酸！！街生理食塩水
（以下ＰＢＳと略す、ｐｌ−１７．２）を加えて洗浄し
た．遠心、洗浄の操作をさらに２回縁り返した．得られ
た沈渣に生理食塩水を加え、菌の濃度を１（）１１個／
ｍｌに調製して免疫抗原を得た．もう１方のカンジダ症
の原因菌であるＣａｎｄｉｄａｇｌａｂｒａｔａ　ｔ−
ｇ−１０８　（同じく千葉大真核微生物センターより入
手》を上記Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ　ｃ−ａ
−７１１と同様に操作して、菌の濃度を１０”個／ｍｌ
に調製した免疫抗原を得た． （２）抗体の産生 ニュージーランド　ホワイト　ラビット　（メス、体重
　約２ｋｇ）に、（１）で得たＣａｎｄｉｄａ　ａｌｂ
ｉＣａｎＳ　ｃ−ａ−１１１の免疫抗原をｌｍｌずつ隔
週に、計４回静注した．最終免疫より７日後に部分採血
し、さらに追加免疫を行ない、この７日後に全採血を行
なった．部分採血及び全採血により得な血液より抗Ｃａ
ｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ抗血清を得た．Ｃａｎｄ
ｉｄａ　ｇｌａｂｒａｔａ　ｔ−６−７０８の免疫抗原
にツいても同様に操作して抗Ｃａｎｄｉｄａ　ｇｌａｂ
ｒａ［ａ抗血清を得た． （３）アフィニティーＭ製抗体の調製 （３−ａ）　Ｍ製マンナン抗原の調製 （１）で得たＣａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ　ｃ−
ａ−１１１の免疫抗原を遠心分離した後、凍結乾燥した
。これに水を加え１０％＜Ｗ／Ｖ）とした液を、オート
クレープ処理（１２１℃、３時間》した後、酢酸を１規
定となる様に加えた．この液を遠心分離し、マンナン抗
原を含む上清を得た．この上清に水酸化ナトリウム水溶
液を加え中和した．中和後の液１容に対し３容のエタノ
ールを添加してマンナン抗原を析出させ，遠心分離して
マンナン抗原を含む沈渣をｆ｝な。この沈渣に８０％エ
タノール水溶液を加えて洗浄した後、再び遠心分離して
マンナン抗原を含む沈渣を得た．湿潤状態の沈渣の重量
に対し３０倍重量の水を加えて溶解し、さちに水と等容
量のフエーリング試薬を加え、４℃１夜攪拌した後、遠
心分離してマンナン抗原を含む沈渣を得た．この沈渣の
重輩に対し１０倍重量の水を加えて懸濁し、さらに同５
倍重量の濃塩酸を加えて沈渣を溶解した．この後、エタ
ノールによるマンナン抗原の析出、水による溶解操作を
２回縁り返した後、イオン交換樹脂（Ａｍｂｅｒｌｉｔ
ｅ　ＣＧ−１２０）を加え４゜Ｃ２時間攪拌した．次い
でろ過し、ろ液にＯＩＭの塩化ナトリウム、次いでエタ
ノールを加えて精製マンナン抗原を析出させ、遠心操作
により沈渣を得、これに水を加えて精製マンナン抗原水
溶液を得た． ガスクロマトグラフィーにより、得られたＣａｎｄｉｄ
ａ　ａｌｂｉｃａｎｓの精製マンナン抗原は、マンノー
スのみより成ることを確認した．アンスロン−硫酸法に
よりＮ’ｔＲ度を求めたところ６　０　ｍ　ｇ　／　ｎ
目であった． （１）テ得たＣａｎｄｉｄａ　ｇｌａｂｒａｔａ　ｔ−
ｇ−１０８の免疫抗原にツイても同様に揉作して、Ｃａ
ｎｄｉｄａ　ｇｌａｂｒａｔａの精製マンナン抗原を得
た．糖濃度は、２６ｍｇ／ｍｌであっな． （３−ｂ）精製マンナン抗原をカップリングしたセファ
ロースの調製 エボキシ活性化セファロース６Ｂ（ファルマシアＬＫＢ
バイオテクノロジー社製）と、（３−ａ）で得たＣａｎ
ｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓの精製マンナン抗原とをア
ルカリ粂件下（ｐＨ１２）で混合し、ｌ＃製マンナン抗
原をカップリングした後、エタノールアミンを加え未反
応のエボキシ基を不活性化し、ＰＢＳにより平衡化しテ
Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓノｈｊ″ｇＪマンナ
ン抗原をカップリングしたセファロース得た．（３−ａ
＞　−Ｃ得たＣａｎｄ　ｉｄａ　ｇ　ｌａｂｒａｔａノ
Ｍ￥Ａマンナン抗原にツイても同様に操作して、Ｃａｎ
ｄｉｄａ　ＱｌａｂｒａｔａノＭ！！マンナン抗原をカ
ップリングしたセファロースをｆＨ＞た９ （３−ｃ）精製マンナン抗原力・・Ｉプリンタセファロ
ースによる抗体のアフィニティー精製 （２）で１１｝た抗Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ
抗血清に等容量の飽和硫安を加え、４℃で１０時間撹拌
した後、生成した沈渣を遠心分離した．次いで、沈渣に
抗血清と等容量の水を加えて溶解した液を水に対して透
析し、さらにｒ）　Ｂ　Ｓに対して透析した．透析後、
（３−ｂ）で得たＣａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓの
精製マンナン抗原をカップリングしたセファロースを加
え、４℃１６時間攪拌した後、カラムを作製し、未反応
の抗体（マンナンに対する抗体活性がない抗体）等を留
出した．さらにＰＢＳで十分洗浄した後、０．０５Ｍグ
リシン塩ｍ緩衝液（ｐＨ２−２）を加えて反応した抗体
（マンナンに対する抗体活性が有る抗体）を溶出し、直
ちにトリス緩街液で中和して抗Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂ
ｉｃａｎｓアフィニティ−Ｍ製抗体を得た。（２）テ得
た抗Ｃａｎｄｉｄａ　ｇｌａｂｒａｔａ抗血清について
もＣａｎｄｉｄａ　ｇ＋ａｂｒａｔａノ精製マンナン抗
原をカップリングしたセファロースを用いて同様に揉作
し、抗Ｃａｎｄｉｄａ　Ｑｌａｂｒａｔａ７’　７　イ
−ティ−精製抗体を得た． （４）抗体固定化担体粒子の調製 （３）テ得た抗Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ及び
抗Ｃａｎｄｉｄａｇｔａｂｒａｔａアフィニティー精製
抗体を各々別個に１７６０モルのリン酸Ｍ街液《以下Ｐ
Ｂと略す，ｐＨ６．３》で透析した後、ＰＢを加え濃度
０．２５ｍｇ／ｍｌにそれぞれ調製し、実施例ｌとして
、各々容蟹比で３対２の割合で混合し抗体混合液を得な
．さらに、実施例２〜４として、同じく各々容菫比で４
対ｌ、２対３、１対４の各割合で混合し各抗体混合液を
得な．次いで、平均粒子径０．７２８μｍのボリスチレ
ンラテックス粒子（担体粒子）をＰＦ｛で希釈し、ラテ
ックス濃度が１重菫％の分散液を調製し、上記抗体混合
液に等容菫添加し直ちに攪拌混合した．２時間靜置後、
ウシ血清アルブミン（凍結莞燥晶）を０．１重量部加え
さらに２時間靜置した．次いで、遠心分離し、得られた
沈渣（抗体固定化担体粒子）に上記抗体液の２倍容菫の
ＰＢを加えて懸濁（粒子濃度　約０．５重呈％》し、抗
Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓアフィニティー精製
抗体及び抗Ｃａｎｄｉｄａ　ｇＩａｂｒａｔａアフィニ
ティー精製抗体を共に固定化した抗体固定化担体粒子の
分散液すなわちカンジダ試薬を得た． （５）凝集反応 （５−１）　％度試験 （１）テ得たＣａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ　ｃ−
ａ−１１１及びＣａｎｄｌｄａ　ｇｌａｂｒａｔａ　ｊ
−ｇ−１０８の菌濃度１０”個／ｍｌに調製した各免疫
抗原をＰＢで希釈してｌｍｌ当なりの菌濃度がｌ００ｘ
ｌＯ’個、５　０　ｘ　１０’個、２５ｘ１０５個、１
２．５ｘｌＯ’個、６．３ｘｌＯ’個、３．ｌｘ１０’
個、１．６ｘｌＧ’個、０．８ｘｌＯ’個の抗原液を調
製した．（４）で得た実施例１〜４の各カンジダ試薬を
ガラス平板上に１滴ずつ滴下し、各１滴のカンジダ試薬
に上記Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ及びＣａｎｄ
ｉｄａ　ｇｌａｂｒａｔａノ各抗原希釈液１滴を加え、
爪楊枝で混合し、直ちに平沢制作所■製テーハー式攪拌
機によりガラス平板を１分間に１２０回転の速度で２分
間水平回転し攪拌した．＃１！拌後の８１集状態を肉眼
で判定し、ｓｉ％が明らかに認められな抗原の最小濃度
をもって各カンジダ試薬の各々の抗原に対する感度を求
めた．得られた結果を第１表に示しな． （５−２）特異性試験 Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ　ｃ−ａ−１１１及
びＣａｎｄｉｄａ　ｇｌａｂｒａ［ａ　ｔ−（１−１０
８にかえて、同じＣａｎｄｉｄａ属の他の真菌及び他の
属の真菌（千葉大真核微生物センターより入手）、さら
にカンジダ試薬を使用する際に検体中に存在する常在菌
（理化学研究所より入手）をそれぞれＰＢで希釈してｌ
ｍｌ当たりのｌｌＪ濃度が１００ｘ１０’個となるよう
に菌体液を調製した．（４）で得た実施例１〜４の各カ
ンジダ試薬をガラス平板上に１滴ずつ滴下し、各１滴の
カンジダ試薬に−Ｅ記の各菌体液１滴を加え、（５−１
）感度試験と同様にａ集試験を行った．凝集状態を肉眼
で判定し、凝集が認められない場合（−）、Ｗ集の有無
が判定しがたい場合（ト）、明らかにｓ１集が認められ
た場合、凝集の強い順に（　＋　十＋　）、（＋＋）、
（十）と判定した．得られた結果を第１表に示した． 比較例１〜・２ 実施例１におイテ、抗Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎ
ｓ及び抗Ｃａｎｄｉｄａ　ｇ＋ａｂｒ’ａｔａア７｛−
ティーＭ製抗体の各抗体液を混合し、抗体混合液として
使用したがわりに抗Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ
７７　イ：−ティ−Ｎ製抗体液を単独で使用する以外は
実施例１と同様に操作して、抗Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂ
ｉｃａｎｓア７　イ：−ティ−Ｍ製抗体を単独に固定化
した抗体固定化担体粒子の分散液を得た。（比較例ｌ） 同じく抗Ｃａｎｄｉｄａ　！ｌｌａｂｒａｔａアフィニ
ティー精製抗体液を弔独で使用する以外は実施例】と同
様に揉作して、抗Ｃａｎｄｉｄａ　ｇｌａｂｒａｔａア
フィニティー精製抗体を単独に固定化した抗体固定化担
体粒子の分散液を得た．（比較例２》 実施例１と同様に凝集反応を行なった．得られた結果を
第１表に示しな． 第１ｉ１％の感度試験結果に示した如く、比較例１及び
２の抗体を単独に固定化した抗体固定化担体粒子は、各
々の免疫抗原に対してそれぞれ菌濃度１．６及び６．３
ｘｌＯ’個／ｍｌの抗原希釈液で凝集を示し、高感度で
あった．これに対し、他の抗体に対応する抗原に対して
は、それぞれ菌濃度５０及び１’２．５ｘ１０′３個／
ｍｌの抗原希釈液で凝集を示すにとどまり、低感度であ
った。

これに対して実施例１〜４の２桟の抗体を共に固定化し
た抗体固定化担体粒子は、いずれの免疫抗原に対しても
それぞれ菌濃度１．６及び６．３ｘ１０５個７／ｍ１の
抗原希釈液で凝集を示し、高感度であった，　ＰｒＪち
、本発明の抗体固定化担体粒子は、抗体を弔独に固定化
した抗体固定化担体粒子《比較例１及び２）が各々の免
疫抗原に対し示すのと同じ高感度を示し、比較例１及び
２における他の抗体に対応する抗原に対して示す感度に
ついては実施例１〜４いずれもそれぞれの抗原に対して
８倍感度が優れた． 第１表の特異性試験結果に、各々の免疫抗原と同一の種
の抗原としてＣａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ　ｃ−
ａ−１０４及びＣａｎｄｉｄａ　ｇｌａｂｒａ［ａ　ｔ
−ｇ−１０９に対する凝集反応性を示した．第１表に示
した如く、比較例１及び２の抗体を単独に固定化した抗
体固定化担体粒子は、各々の免疫抗原と同一の種の抗原
に対してそれぞれ（＋十＋）で示す強い凝集を示したの
に対し、他の抗体に対応する抗原と同一の種の抗原に対
してはそれぞれ（＋）で示す弱い凝集及び（±）で示す
凝集の有無が判定しがたい結果であった．これに対し本
発明の抗体固定化担体粒子は免疫抗原と同一の種の抗原
いずれに対しても明らかな凝集（＋＋＋、＋＋）を示し
た． 次いで，各々の免疫抗原と極は異なるが属は同一の抗原
、属が異なるが同じ真菌類である菌、類が異なる菌のう
ち特にカンジダ試薬の測定対象となる検体中に通常存在
するいわゆる常在菌との凝集反応性をみな．比較例２が
非特異的にｓ１集を示し、特異性が劣ったのに対し本発
明の抗体固定化担体粒子はいずれも凝集を示さず（±、
一》特異性が優れた． （Ｓ−３）患者検体の測定 （５−３−１）培養法による測定 カンジダ症が疑われた患者より、綿棒で膣分泌液を採取
し，クロラムフエニコール加サブ口ーブドウ糖寒天培地
（Ｄｉｆｃｏ社製）に塗布後、３７℃４８時間培養を行
い，３０個以上のコロニを認めた検体をカンジダ症が陽
性と判定した．（５−３−２）抗体固定化担体粒子によ
る測定（５−３−１）で、培養法によりカンジダ症が陽
性と判定された患者より綿棒で採取した分泌液をＰＢ１
　ｍ　ｌに分散して検体とした． （Ｓ−１）感度試験と同様に凝集試験を行った．培養法
によりカンジダ症が陽性と判定された患者１０名分の検
体に対し、明らかにｓ１集が認められた検体の割合（陽
性率）を、実施例１〜４及び比較例１〜２につき求めた
． 実施例ｌ−４の陽性率がいずれも１０割と実用的に充分
な感度を示したのに対し、比較例１では陽性率が８割、
比較例２では陽性率が６割と劣り実用に不適であった． 以上示した通り、本発明の抗体固定化担体粒子を用いる
カンジダ試薬は、カンジダ症の原因菌であるＣａｎｄｉ
ｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ及びＣａｎｄｉｄａ　ｇｌａｂ
ｒａｔａノイずれに対しても、高感度を示したのに対し
、比較例１及び２は、他の抗体に対応する抗原に対して
感度が低くかった．また患者検体についても本発明の抗
体固定化担体粒子を用いるカンジダ試薬が陽性率が高く
実用的に充分な感度を示したのに対し、比較例ｌ及び２
では陽性率が低く実用に不適であった．さらに特異性に
ついては、比較例２の試薬は各抗体に対応する抗原以外
の抗原に対しても明らかな凝集を示し、特異性が劣った
．この事は、比較例２の試薬を臨床的に用いるとカンジ
ダ症以外の検体についても高頻度に非特異的なａ＃集を
示し、実用に耐えない事を意味する．これに対し、本発
明の抗体固定化担体粒子を用いるカンジダ試薬は、特異
性に優れた．実施例５〜７ （１）ＤＥＡＥｌ’ｉ製抗体の調製 実施例ｌの（２）で得た抗Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃ
ａｎｓ抗血清に等容量の飽和硫安を加え、４℃で１時間
攪拌した後，生成した沈渣を遠心分離した．次いで．沈
渣に抗血清と等容量の水を加えて溶解した液を水に対し
て透析し、さらにＰＢに対して透析した．透析液をＰＢ
で平衡化したｒ）ＥＡＥセファロース力ラムに通し、そ
の素通り画分を集め、抗Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａ
ｎｓ抗休のＤＥＡＥＭＩｌ！！抗体を得た．抗Ｃａｎｄ
ｉｄａ　ｇｌａｂｒａｔａ抗血清にツイテも同様に操作
して抗Ｃ１ｌｌｎｄｉｄａ　ｇｌａｂｒａｔａ抗体のＤ
ＥＡＥＭＷ抗体を得た。

（２）抗体固定化担体粒子の調製 （１）で得た抗Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓＤ　
Ｅ　Ａ　ＥＭ製抗体及び抗Ｃａｎｄｉｄａ　ｇｌａｂｒ
ａｔａＤ　Ｅ　Ａ　Ｅ精製抗体に、各々別個にＰＢを加
え、濃度（Ｌ　５０ｍｇ／ｍｌにそれぞれ調製し、実施
例５として各々容量比で１対】の割合で混合し抗体混合
液を得た．さらに、実施＠６及び７として、同じく各々
容量比で９対１、１対９の割合で混合し抗体混合液を得
た．実施例１に用いた担体粒子と同じ担体粒ｒを用いて
、実施例ｌと同様に操作して、抗Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌ
ｂｉｃａｎｓＤ　Ｅ　Ａ　Ｅ　Ｍ製抗体及び抗Ｃａｎｄ
ｉｄａ　ｇｌａｂｒａｔａＤＥＡＥＭ製抗体を共に固定
化した抗体固定化担体粒子の分散液即ちカンジダ試薬を
得た．（３）凝集反応 実施例５〜７につき、実施例１と同様に掻作して凝集反
応を行った．得られた結果を第２表に示した． 比較例３〜５ 実施例５において、抗Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎ
ｓ及び抗Ｃａｎｄｉｄａ　ｇｌａｂｒａｔａＤ　Ｅ　Ａ
　Ｅ精製抗体の各抗体液を混合し、抗体混合液として使
用したかわりに抗Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓＤ
　Ｅ　Ａ　ＥＭ製抗体液を単独で使用する以外は実施例
５と同様に操作して、抗Ｃａ　ｎｄ　ｉ　ｄａ　ａｌｂ
ｉｃａｎｓＤ　Ｅ　Ａ　Ｅ精製抗体を単独に固定化した
抗体固定化担体粒子の分散液を得た（比較例３）．同じ
く抗Ｃａｎｄｉｄａ　ｇｌａｂｒａｔａＤ　Ｅ　Ａ　Ｅ
精製抗体液を単独で使用する以外は実施例５と同様に操
作して、抗Ｃａｎｄｉｄａ　ｇｌａｂｒａｔａＤＥＡＥ
ｌ＠ＷＡＪ抗体を単独に固定化した抗体固定化担体粒子
の分散液を得た（比較例４）． さらに、比較例３及び４で得た抗体固定化担体粒子の分
散液を等容量混合して、抗Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃ
ａｎｓＤ　Ｅ　Ａ　Ｅ　Ｎ製抗体を単独に固定化した抗
体固定化担体粒子と抗Ｃａｎｄｉｄａ　ｌ）ｆａｂｒａ
ｔａＤ　Ｅ　Ａ　Ｅ＠＠抗体を争独に固定化した抗体固
定化担体粒子とを共に含む抗体固定化担体粒子の分散液
を得た（比較例５）。

比較例３〜・５につき、実施例１と同様に繰作して凝集
反応を行った．得られた結果を第２表に示した３ 第２表の感度試験結果に示した如（　、Ｃａｎｄｉｄａ
ａｌｂｉｃａｎｓ　ｃ−ａ−１１１を免疫抗原とする抗
体を単独に固定化した比較例３の抗体固定化担体粒子は
、その免疫抗原であるＣａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎ
ｓ　ｃ−ａ−１１１に対して菌濃度３．ｌｘｌＯ″個／
ｍｌの抗原希釈液で凝集を示し、高感度であったが、Ｃ
ａｎｄｉｄａ　ｇｌａｂｒａｔａ　［−０−１０８　（
他の抗体に対応する抗原》に対しては、菌濃度１００ｘ
ｔＯ’個／ｍｌの抗原希釈液で一疑隼を示すにとどまっ
た。

これに対して実施例６の抗Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃ
ａｎｓ　ｃ−ａ−１１１抗体に抗Ｃａｎｄｉｄａ　ｇｌ
ａｂｒａｔａ　ｔ−ｇ−１０８抗体を１割混合して２種
の抗体を共に固定化した抗体固定化担体粒子は、Ｃａｎ
ｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ　ｃ−ａ−［１に対して菌
濃度３．１ｘｌＯ’個／ｍ＋の抗原希釈液で凝集を示し
、高感度であったが、Ｃａｎｄｉｄａ　ｇｌａｂｒａｔ
ａ　ｔ−ｇ−１０８　（他の抗体に対応する抗原》に対
しては、菌濃度１００ｘ１０″′個／ｍｌの抗原希釈液
で１ｊｌ’Ａを示すにとどまった。

これに対して実施例６の抗Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃ
ａｎｓ　ｃ−ａ−１１１抗体に抗Ｃａｎｄｉｄａ　ｇｌ
ａｂｒａｔａ　［−ｇ−１０８抗体を１割混合して２種
の抗体を共に固定化した抗体固定化担体粒子は、Ｃａｎ
ｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ　ｃ−ａ−１１１に対して
菌濃度３．１ｘｌＯ’個／ｍｌの抗原希釈液で凝集を示
し、比較例３と同じく、高感度であり、Ｃａｎｄｉｄａ
　ｇｌａｂｒａｔａ　［−ｇ−１０８に対して菌濃度２
５ｘ１０〜個／ｍｌの抗原希釈液でｓｉ集を示し、比較
例３に比べ４倍高感度であった． Ｃａｎｄｉｄａ　ｇｌａｂｒａｔａ　ｔ−ｇ−１０８を
免疫抗原とする抗体を単独に固定化した比較例４と、抗
Ｃａｎｄｉｄａ　ｇｌａｂｒａ［ａ　ｊ−ｇ−１０８抗
体に抗Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ　ｃ−ａ−１
１１抗体を１割混合して２種の抗体を共に固定化した実
施Ｐｉ４７の抗体固定化担体粒子を比較すると、実施ｇ
Ａ７はＣａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ　ｃ−ａ−１
１１に対して比較例４に比べ４倍高感度であった． さらに、比較例３及び４を等容量混合して調製した比較
例５の抗体固定化担体粒子はＣａｎｄｉｄａ　ａｔｂｉ
ｃａｎｓ　ｃ−ａ−１１１、Ｃａｎｄｉｄａ　ｇｌａｂ
ｒａｔａ　ｔ−ｇ−１０８のそれぞれの抗原に対し菌濃
度６　３及び５　０　ｘ　１０’個／ｍｌの抗原希釈液
で凝集を示した．これに対して実施例５の２種の抗体を
共に固定化した抗体固定化担体粒子は、Ｃａｎｄｉｄａ
　ａｌｂｉｃａｎｓＣ−ａ−１１１に対し菌濃度３．１
ｘｌＯ’個／ｍｌの抗原希釈液で凝集を示し、比較例５
に比べ２倍高感度であり、Ｃａｎｄｉｄａ　ｇｌａｂｒ
ａｔａ　ｔ−ｇ−１０８に対し菌濃度１２．５ｘｌＯ’
個／ｍ＋の抗原希釈液で凝集を示し、比較例５に比べ４
倍高感度であった．第２表の特異性試験結果に、各々の
免疫抗原と同一のｎの抗原としてＣａｎｄｉｄａ　ａｌ
ｂｉｃａｎｓ　ｃ−ａ−１０４及びＣａｎｄｉｄａ　ｇ
ｌａｂｒａｔａ　［−ｇ−１０９に対するＨａ反応性を
示した．第２表に示した如く、比較例３〜５の抗体固定
化担体粒子は、抗原によっては（ト）で示す弱い凝集及
び　（±）で示すａｔの有無が判定しがたい場合があっ
た．これに対し本発明の抗体固定化担体粒子はいずれの
抗原に対しても明らかな凝集（　＋　＋　＋、ト＋》を
示し高感度であった．次いで、各々の免疫抗原と種は異
なるが属は同−の抗原、属が異なるが同じ真菌類である
菌、類が異なる菌のうち特にカンジダ試薬の測定対象と
なる検体中に通常存在するいわゆる常在菌との’８１５
反応性をみたが、比較例３〜５と比較して実施例５〜７
は同等の特異性であった． （４）患者検体の測定 （Ｓ−３−１）で示した培養法によりカンジダ症が陽性
と判定した検体１０例と、カンジダ症が陰性と判定した
検体２０例とにつき（５−３−２）抗体固定化担体粒子
による測定で示した方法によりＪＩ集反応を行った．実
施例５〜７及び比較例３〜５で得た抗体固定化担体粒子
につき凝集反応を行い明らかな凝集を示した場合（＋＋
十、＋＋，　＋）凝集反応陽性と判定した．結果を第３
表に示した．第３表において、培養法と凝集反応が一致
した例数を全例数で除して求めた培養法とｓ１集反応の
一致率をみると、実施例５〜７の一致率がいずれも（Ｌ
’）０以上と良い一致を示したのに対し、比第３表 （注）培養法でカンジダ症が陽性又は陰性と判定した検
体につき，それぞれａ策反応陽性又は陰性を判定し、そ
の例数を示した．計３０例につき両測定方法の判定結果
が一致、不一致を率で示した． 較例３〜５では一致率が０．８０以下と劣った．さらに
、不一致率は、比較例３〜５では０，２０以上と劣るの
に対し、実施例５〜７では０．１０以下と優れた． 以上実施例５〜７として示した通り、本発明の抗体固定
化担体粒子を用いるカンジダ試薬は、カンジダ症の原因
菌であるＣａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ及びＣａｎ
ｄｉｄａ　ｇｌａｂｒａｔａのいずれに対しても、高感
度を示したのに対し、比較例３〜５は、感度が低くかっ
た。また患者検体についても本発明の抗体固定化担体粒
子を用いるカンジダ試薬が培養法との一致率が高く実用
的に充分な感度及び特異性を示したのに対し、比較例３
〜５では不一致率が０．２０以上と劣り、実用に不適で
あった． 実施例８アデノウィルス／ロタウィルス検出試薬（１）
ＤＥ！．ＡＥ精製抗体の調製 抗アデノウィルス抗血清、及び抗ロタウィルス抗血清（
いずれもニワトリ由来の市販品、ウエルカムダイアグノ
スティック社製）をそれぞれ実施例５〜７，（１）の操
作方法に従い操作して抗アデノウィルスＤＥＡＥ精製抗
体、及び抗ロタウィルスＤＥＡＥ精製抗体を得た． （２）抗体固定化担体粒子の調製 （１）で得た抗アデノウィルスＤＥＡＥ精製抗体、及び
抗ロタウィルスＤＥＡＥＭ製抗体に、各々別個にＰＢを
加え、濃度０．５０ｍｇ／ｍｌにそれぞれ調製し、実施
例８として各々容量比で１対１の割合で混合し抗体混合
液を得た． 平均粒子径０．４１４７１ｍのボリスチレンラテックス
粒子を担体粒子として、実施例１と同様に繰作して、抗
アデノウィルスＤＥＡＥＮ製抗体及び抗ロタウィルスＤ
ＥＡＥＱ製抗体を共に固定化した抗体固定化担体粒子の
分散液《粒子濃度約０．５重量％のＰＢ！！Ｉ濁液》す
なわちアデノウィルス／ロタウィルス検出試薬を得た． （３）凝集反応 凝集反応に用いた抗原は、市販アデノウイルス検出用試
薬《商品名アデノレツクス》及び市販ロタウィルス検出
用試薬（商品名口タレツクス）に添付されている陽性コ
ントロールを使用した．上記市販検出試薬はいずれも製
造元がＯＲ　Ｉ　ＯＮＤｆＡＧＮＯＳＴＩＣＡ社（フィ
ンランド）、輸入販売元が第一化字薬晶■のものであり
、陽性コントロール中の抗原濃度は、アデノウィルス、
ロタウィルスともに０．２μｇ／ｍ＋と表示されていた
， 各陽性コントロールをＰＢで希釈して、抗原濃度を０．
１−０．０５、０．０２５ノｌｇ／ｍｌの各抗原液を調
製した．さらに両陽性コントロールを等容量混合した後
、ＰＢで希釈して、抗原濃度を０．１、０．０５、０．
０２５μｇ／ｍｌの抗原混合液を調製した． 実施例８につき、実施例ｌと同様に操作して凝集反応を
行った．明らかに凝集が認められた場合の抗原濃度の鮫
小値をもって感度とした．その結果、実施例８の試薬の
アデノウィルス、ロタウィルス、混合抗原に対する感度
は、各々（Ｌ　０２５μｇ／ｍｌ、０．０５μｇ／ｍｌ
，０−　０２５，ｕｇ／ｍｌであった． 比較ＰｉＩ４６、７ 実施例８において、抗アデノウィルスおよび抗ロタウィ
ルスＤＥＡＥ精製抗体の各抗体液を混合し、抗体混合液
として使用したかわりに抗アデノウィルスＤＥＡＥ［ｌ
ｌ抗体液を単独で使用する以外は実施例８と同様に操作
して、抗アデノウィルスＤＥＡＥ精製抗体を単独に固定
化した抗体固定化担体粒子の分散液を得た（比較例６）
．同じく抗ロタウィルスＤＥＡＥＭ製抗体液を単独で使
用する以外は実施例８と同様に損作して、抗ロタウィル
スＤＥＡＥＮ製抗体を単独に固定化した抗体固定化担体
粒子の分散液を得たく比較例７》． 比較例６につき、実施例８と同様に操作して凝集反応を
行った．明らかに凝集がみとめられた場合の抗原濃度の
最小値をもって感度とした．その結果、比較例６の試薬
のアデノウィルス、ロタウィルス、混合抗原に対する感
度は、各々０．０２５，ｕｇ／ｍｌ、凝集示さず、０．
０５μｓ／ｍｌであった． 比較例７につき、実施例８と同様に採作して凝集反応を
行った．その結果、比較例７の試薬のアデノウィルス、
ロタウィルス、混合抗原に対する感度は、各々ａＳ示さ
ず，Ｏ．ｌμｇ／ｍｌ．０．２μｇ／ｍｌであった。実
施例８、比較例６、比較ｐＡ７のｓ１ｇ．試験結果を第
４表に示した．実施例８の試薬は、アデノウィルス及び
ロタウィルスともに凝集を示し、各々のウィルスに対す
る感度も、各抗体を単独に固定化した比較例の感度に比
べ同等以上に高感度であった．即ち、１試薬でアデノウ
ィルス及びロタウィルスともに高感度に検出できた．こ
れに対し、抗アデノウィルス抗体を争独に固定化した比
較例６及び抗ロタウィルス抗体を単独に固定化した比較
例７の試薬では、それぞれロタウィルス及びアデノウィ
ルスに対し本実験条件下では、凝集を示さなかった．即
ち、患者がウィルス性の下痢か否がを詮断するためには
、比較例６及び７の２試薬を組み合わせて測定する必要
があった． さらに、検体中に両ウィルスが混在する場合は、実施例
８の試薬が抗原濃度０．０２５μｇ／ｍｌ第４表 《注》感度は、明らかにＭ集が認められた抗原濃度《単
位はＪｌｌｇｌ霞ｌ》の最小値をもって感度とした．混
合抗原は両ウィルスを等重量混合したもので各抗原を表
示値の半量含む． （各ウィルス濃度０．　０　１　２　５μｇ／ｍ　ｌ　
）で凝集したのに対し、比較例６では抗原濃度０．０５
Ｊ１ｇ／ｍｌ，比較例７では抗原濃度０．２μｇ／ｍ１
で凝集を示すにとどまった．即ち抗原ウィルスが混在し
た場合、従来技術に比べ本発明による試薬は２ないし８
倍高感度であった． 実施例９　カンジダ／トリコモナス試薬ウサギに免疫し
て得た抗Ｔｒｉｃｈｏｉｉｏｎａｓ抗血清を、実施例１
〜４の（３）で行った抗Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａ
ｎｓ及び抗Ｃａｎｄｉｄａ　ｇｌａｂｒａ［ａ抗体ノア
フィニティー精製法と同様に操作して抗ｒｒｉｃｈｎｍ
ｏｎａｓアフィニティー精製抗体を得た． 抗Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ、抗Ｃａｎｄｉｄ
ａ　ｇｌａｂｒａｔａ及び抗Ｔｒｉｃｈｏｓｏｎａｓの
各アフィニティー精製抗体（いずれも０．２５ｍｇ／ｍ
ｌのＰＢ溶液）を各々容菫比で１対１対１の割合で混合
し、抗体混合液を得た，次いで、平均粒子径０−　９０
２μｍのボリスチレンラテックス粒子を担体拉子として
、実施例ｌと同様に操作して抗Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂ
ｉｃａｎｓ、抗Ｃａｎｄｉｄａ　Ｑｌａｂｒａｔａ及び
抗ＴｒｉＣｈＯｌＯｎａＳ　ノ各アフィニティー精製抗
体を共に固定化した抗体固定化担体粒子の分散液（粒子
濃度約０．５重量％のＰＢ懸濁液）すなわちカンジダ／
トリコモナス検出試薬を得た． （２）凝集試験 腟炎が疑われた３検体（検体Ａ、検体Ｂ、検体Ｃ）につ
き、各々カンジダ菌及びトリコモナス原虫の検出試薬に
より、測定した． カンジダ菌の検出呻は、実施例１の（５−３−１）培養
法による測定の項と同様に、クロラムフエニコール加サ
ブローブドウ糖寒天培地に、綿棒で採取した腟分泌液《
検体》を塗布後、３７℃４８時間培養して判定しな． トリコモナス原虫の検出には、市販トリコモナス検出用
培地《日水製薬■製、商品名トリコモナス培地「ニッス
イ」》に上記検体を培地深部に入れ、試薬使用法に従い
３７℃４８時間培養後、鏡検して判定しな． 検体Ａの判定結果は、カンジダ菌及びトリコモナス原虫
ともに陽性であった． 検体Ｈの判定結果は，カンジダ菌は陽性でトリ＝ｌモナ
ス原虫は陰性であった． 検休Ｃの判定結果は、カンジダ菌は陰性でトリコモナス
原虫は陽性であった． 実施ｆｌＡ９と実施例１の試薬を用い、実施例１と同様
に掻作して凝集反応を行った。

検体Ａの凝集試験結果は、実施例９及び実施例１の試薬
ともに明らかな凝集（＋）を示した．検体［３も同じく
両試薬とも明らかな凝集（＋》を示した。

検体Ｃは実施例９の試薬では明らかな凝集《＋》を示し
たものの実施例ｌの試薬に対しては凝集を示さなかった
． 各患各にトリコマイシンを投一ｊした後、経過をみるＬ
Ｊ的で再び検体《検体ａ、検体ｂ、検体Ｃ》を採取し、
測定した。」二記の両検出試薬及び実施ｆｆ４ｇ実施例
ｌの試薬ともにいずれの検体に対して陰性を示した．

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）２種以上の抗体を固定化した抗体固定化不溶性担
   体粒子において、前記抗体のうちの少なくとも２種の抗
   体が、互いに相異なる抗原を認識する抗体であることを
   特徴とする抗体固定化不溶性担体粒子。
2. （２）互いに相異なる抗原を認識する少なくとも２種の
   抗体が、互いに他の抗体の認識する抗原に対して交叉反
   応性を有する特許請求の範囲（１）記載の抗体固定化不
   溶性担体粒子。