CN1293383C - 一种临床检测试剂的制备方法 - Google Patents

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Abstract

一种临床检测试剂的制备方法，是将活鲎加抗凝血剂采血，收集鲎细胞，将细胞崩解后进行亲和层析柱，收集不同盐浓度的洗脱液，鉴别后将相同成分的洗脱液进行合并、低温浓缩，复溶后脱盐，加保护剂低温浓缩，再溶解，混入发色物质和保护剂，最后分装、冻干、封口，即得临床检测试剂。临床检测试剂与Tris-HCl缓冲液及重氮化试剂组成临床检测试剂盒，可用于细菌内毒素的定量检测。其优点是能够定量地检测人体血液及体液标本中微量细菌内毒素，诊断出革兰氏阴性细菌感染者血液中的革兰氏阴性感染疾病，并可监测肝病严重性及愈后情况，为临床诊断革兰氏阴性细菌感染提供了一种更精密、准确、快速的新方法，具有较大的推广应用价值。

Description

一种临床检测试剂的制备方法
技术领域
本发明涉及一种临床检测试剂的制备方法。
背景技术
目前，在细菌内毒素检测法中，凝胶法的鲎试剂只能半定量样品中细菌内毒素；比浊定量法可以定量检测药品中的细菌内毒素，但在检验有色药品和临床血液及各种体液标本中细菌内毒素时，由于这些标本中含有干扰物质，使标本含有颜色或浊度而影响了比浊定量法的测定。因此，原有的鲎试剂不能用于临床检验各种血液、体液标本中细菌内毒素及有色药品。
发明内容
本发明的目的在于提供一种临床检测试剂的制备方法，其成品可用于更精密、准确、快速地检测细菌内毒素。
本发明所述的一种临床检测试剂的制备方法的特征在于，所述的临床检测试剂按以下步骤配制：(1)活鲎加抗凝剂采血后，离心，弃上清液，收集细胞，再加洗涤液洗涤，弃去上清液；(2)收集的细胞加崩解液进行细胞崩解，之后进行离心，收集提取液；(3)提取液进行亲和层析柱，用不同盐浓度的洗脱液洗柱，收集洗脱液；(4)对洗脱液进行鉴别后，将相同成分的洗脱液进行合并，用冷冻干燥机进行低温浓缩；(5)浓缩液重新复溶，进行脱盐，并收集不含盐的洗脱液；(6)将不含盐的洗脱液加入0.2～1.0mg/mL蛋白酶保护剂(人血白蛋白)8～12ml，再进行低温浓缩；(7)将浓缩液重新溶解后，加入0.9～1.6mg/ml Boc LGR-pNA发色物质，再加入0.2～1.0mg/ml蛋白酶保护剂，混合均匀后，进行分装、冻干、封口，即得成品临床检测试剂。
其中，洗涤液组成为NaCl 1.0～4.0mol/L与Tris-HCl 0.01～0.2mol/L pH 7.5～8.0，崩解液组成为NaCl 0.02～0.15mol/L与Tris-HC0.01～0.025mol/L pH 7.5～8.0，洗脱液组成为NaCl 0.01～2.1mol/L与Tris-HCl 0.01～0.025mol/L pH 7.5～8.0。
临床检测试剂与缓冲液、细菌内毒素工作品及重氮化试剂构成可用于检测细菌内毒素的临床检测试剂盒，其中缓冲液为0.05～0.1mol/L pH 7.8～8.0 Tris-HCl溶液。其检测方法为：取标准内毒素或其他样品，加入临床检测试剂，混合均匀后，在37℃下恒温30min后，加入重氮化试剂进行重氮化，于545nm处测定。按标准曲线，计算出样品中内毒素的含量。其中，重氮化试剂组成为0.02～0.08％亚硝酸钠、0.15～0.5％氨基磺酸、0.03～0.15％萘基盐酸二氨基乙烯、0.35～0.8mol/L盐酸溶液及无热原水。
本发明的优点在于：制成的临床检测试剂与其它试剂构成的临床检测试剂盒能定量检测人体血液及体液标本中微量细菌内毒素，诊断出败血症、胆囊炎、肺炎、肾炎等革兰氏阴性细菌感染者血液中革兰氏阴性感染疾病，并可监测肝病严重性及愈后情况。
具体实施方式
活鲎加抗凝剂采血后，于1000rpm下离心，弃上清液，收集细胞，再加入含NaCl 3mol/L和Tris HCl 0.05mol/L pH 8.0的洗涤液洗涤，弃去上清液；收集的细胞加入含有NaCl 0.1mol/L和Tris HCl 0.02mol/L pH 8.0的崩解液进行细胞崩解，之后进行离心，收集提取液；提取液进行亲和层析柱，用不同盐浓度的NaCl和Tris-HCl洗脱液洗柱，收集洗脱液；对洗脱液进行鉴别后，将相同成分的洗脱液进行合并，用冷冻干燥机进行低温浓缩；浓缩液重新复溶，进行脱盐，并收集不含盐的洗脱液；将不含盐的洗脱液加入0.5mg/mL蛋白酶保护剂(人血白蛋白)10ml，再进行低温浓缩；将浓缩液重新溶解后，加入1.0mg/mlBoc-LGR-pNA发色物质4ml、0.5mg/ml蛋白酶保护剂10ml，混合均匀后，进行分装、冻干、封口，即得成品临床检测试剂。
处理检品或按药典规定稀释内毒素，分装至10×75mm的小试管中，每管200μl；将0.05mol/L pH 8.0Tris-HCl溶液按临床检测试剂标示量加入临床检测试剂中，用灭菌锡箔纸盖上，并用手轻轻摇动溶解后放入冰水浴中冷却；接着将临床检测试剂分装于前面装有处理过检品的小试管中，每支200μl，并置于漩涡混合器中振动混匀，以水作为空白对照，于37℃下恒温水浴30min；再将小试管从恒温水浴中移至冰水浴中，加入重氮化试剂(分别加入配制好的0.04％亚硝酸钠溶液200μl，0.3％氨基磺酸铵溶液200μl，0.07％萘基盐酸二氨基乙烯溶液200μl)，并在漩涡混合器上混合，进行反应后，在545nm处测定吸光度；最后，作出标准曲线，计算检品的内毒素含量。
本发明为临床诊断革兰氏阴性细菌感染提供了一种更精密、准确、快速的新方法，具有较大的推广应用价值。

Claims (2)

1.一种临床检测试剂的制备方法，其特征在于所述的临床检测试剂按以下步骤配制：
(1)活鲎加抗凝剂采血后，离心，弃上清液，收集细胞，再加洗涤液洗涤，弃去上清液；
(2)收集的细胞加崩解液进行细胞崩解，之后进行离心，收集提取液；
(3)提取液进行亲和层析柱，用不同盐浓度的洗脱液洗柱，收集洗脱液；
(4)对洗脱液进行鉴别后，将相同成分的洗脱液进行合并，用冷冻干燥机进行低温浓缩；
(5)浓缩液重新复溶，进行脱盐，并收集不含盐的洗脱液；
(6)在不含盐的洗脱液中加入0.2～1.0mg/mL蛋白酶保护剂，再进行低温浓缩；
(7)将浓缩液重新溶解后，加入0.9～1.6mg/ml Boc-LGR-pNA发色物质，再加入0.2～1.0mg/ml蛋白酶保护剂，混合均匀后，进行分装、冻干、封口，即得临床检测试剂成品。
2.根据权利要求1所述的一种临床检测试剂的制备方法，其特征在于所述的洗涤液组成为NaCl 1.0～4.0mol/L和Tris-HCl 0.01～0.2mol/L pH 75～8.0，崩解液组成为NaCl 0.02～0.15mol/L和Tris-HCl 0.01～0.025mol/L pH 7.5～8.0，洗脱液组成为NaCl 0.01～2.1mol/L和Tris-HCl 0.01～0.025mol/L pH 7.5～8.0。
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Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0476459A (ja) * 1990-07-19 1992-03-11 Taiyo Fishery Co Ltd β―グルカン類に対する特異性の高いアメボサイト・ライセート及びその製造方法
CN1091832A (zh) * 1992-09-14 1994-09-07 生化学工业株式会社 特异地检测内毒素的试剂
CN1105757A (zh) * 1993-02-26 1995-07-26 生化学工业株式会社 用于内毒素测定的试剂以及使用该试剂进行测定的方法
EP0379549B1 (en) * 1988-06-23 1995-12-27 Associates Of Cape Cod, Inc. Endotoxin binding protein and uses thereof
CN1185161A (zh) * 1994-09-01 1998-06-17 生化学工业株式会社 (1→3)－β－葡聚糖结合性蛋白质、识别该蛋白质的抗体及其利用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0379549B1 (en) * 1988-06-23 1995-12-27 Associates Of Cape Cod, Inc. Endotoxin binding protein and uses thereof
JPH0476459A (ja) * 1990-07-19 1992-03-11 Taiyo Fishery Co Ltd β―グルカン類に対する特異性の高いアメボサイト・ライセート及びその製造方法
CN1091832A (zh) * 1992-09-14 1994-09-07 生化学工业株式会社 特异地检测内毒素的试剂
CN1105757A (zh) * 1993-02-26 1995-07-26 生化学工业株式会社 用于内毒素测定的试剂以及使用该试剂进行测定的方法
CN1185161A (zh) * 1994-09-01 1998-06-17 生化学工业株式会社 (1→3)－β－葡聚糖结合性蛋白质、识别该蛋白质的抗体及其利用

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Denomination of invention: Preparing method for clinical detection reagent

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License type: Exclusive License

Open date: 20050629

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