JP2913229B2

JP2913229B2 - 油性アジュバントワクチン製剤

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Publication number: JP2913229B2
Application number: JP3302347A
Authority: JP
Inventors: 巖安藤; 信一深野木; 好一入谷; 茂美青山
Original assignee: Shionogi and Co Ltd
Current assignee: Shionogi and Co Ltd
Priority date: 1991-10-21
Filing date: 1991-10-21
Publication date: 1999-06-28
Anticipated expiration: 2014-06-28
Also published as: JPH05112466A

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、不活化された細菌およ
び／またはウィルスを抗原として含む優れた有効性と安
定性を有する家畜・家禽用ｗ／ｏ型油性アジュバントワ
クチン製剤を提供する。

【０００２】

【従来技術】近年、ウィルス、細菌による感染病から家
畜や家禽を予防するために各種の生ワクチンおよび不活
化ワクチンが開発されている。その中でも不活化ワクチ
ンは、単独では免疫効果が低く抗原として作用しないた
め、免疫応答を増強させるにはアジュバント化が必要で
ある。現在、市販の不活化ワクチンは抗原液を水酸化ア
ルミニウムゲル、ミョウバンなどの無機塩粒子に吸着さ
せた沈降性アジュバント製剤が大半であるが、この製剤
は免疫効果の持続期間が短いために頻回投与しなければ
ならないという欠点があった。以上のような背景から、
畜産業界、特に養鶏業界では、経済性、省力化、鶏への
ストレス軽減の立場から、少ない抗原量で高い免疫効果
を長時間持続させることの可能な投与システム・投与剤
型（ドラッグデリバリ−システム；ＤＤＳ）の開発を待
望していた。

【０００３】効果持続型剤型のひとつに、油で抗原液を
包含した油性アジュバント製剤があげられる。１９４２
年に J. Freund がベイオ−ルＦ（鉱物油）とアラセル
Ａ（マンニト−ルモノオレイン酸エステル）に結核死菌
を加えてツベルクリン反応を強めることに成功したが、
この油性アジュバント製剤は副作用として接種局所で壊
死を起こす等の反応が強く、安全性に問題があった。ま
た、ニュ−カッスル病ウィルスには有効であるが、抗原
液の種類によっては、油性アジュバントにすると免疫効
果を認めないものもあり、P. J.Blackallらは鶏伝染性
コリ−ザには有用でないことを報告している（G. G. Re
id et al., Avian Diseases 31, 59-63,(1986)）。最近
では、無水マンニト−ルオレイン酸エステルと流動パラ
フィンから成る鶏伝染性気管支炎ウィルスおよびニュ−
カッスル病ウィルスの単味油性アジュバントが開示され
ている（特開昭６３−３５５２５）。さらに、一方では
一回の接種で複数の対象疾患を予防することができるワ
クチン、すなわち多種混合の油性アジュバントワクチン
の開発も進められているが未だ実用化には至らず、ニュ
−カッスル病ウィルスにトリインフルエンザウィルスお
よび鶏伝染性気管支炎ウィルスを配合し混合ウィルス製
剤にすると互いの免疫原性によって免疫現象を低下させ
る、すなわち干渉作用を示し混合ワクチンとして有用で
ないことが報告されている（Zhixun Xie etal., Avian
Diseases 34,154-162, (1990)）。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】上述のように、鶏伝染
性気管支炎ウィルスおよびニュ−カッスル病ウィルスの
ようなウィルスの単味油性アジュバント製剤については
提供されているものの、細菌の油性製剤については、製
剤の安定化が困難であり現在に至るまで安定なアジュバ
ント製剤は提供されていない。さらに細菌および／また
はウィルスを複数用いた混合ワクチンについても安定か
つ有用な製剤は提供されていないのが現状である。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記の諸問
題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、不活化されたニ
ューカッスル病ウィルスおよび鶏伝染性気管支炎ウィル
スを抗原として含む抗原液を、セスキオレイン酸ソルビ
タンを含む非イオン性界面活性剤で油中に乳化すること
により、貯蔵安定性に優れ、高い安全性・免疫効果を有
するｗ／ｏ型油性アジュバントワクチン製剤を完成する
に至った。なお、本発明のワクチン製剤を調製に際して
は、前記添加剤の他、さらに陰イオン性界面活性剤を添
加しても良く、また適宜、ｐＨ調製剤、等張化剤、局麻
剤、防腐剤等の自体公知の添加剤を加えても良い。本発
明のニューカッスル病ウィルス（ＮＤＶ）および鶏伝染
性気管支炎ウィルス（ＩＢＶ）の他に使用される抗原と
しては、細菌としては、例えば鶏伝染性コリーザ（Ｉ
Ｃ）、ヘモフィルス菌、ボルデテラ菌、および大腸菌な
どが、ウィルスとしては、日本脳炎ウィルス、伝染性鼻
気管炎ウィルス、伝染性肝炎ウィルス、および狂犬病ウ
ィルスなどが例示される。これらを目的に応じ、適宜１
種類以上選択して用いればよい。この中では特に鶏伝染
性コリーザが使用される。

【０００６】ＩＣとしては例えば２２１株（Avian Dise
ases 33(3), 511-515, 1989;家衛試研究報告45号, 21-2
6, 1962）やＳ１株（Avian Diseases 33(3), 511-515,
1989）などが挙げられる。ＩＣ２２１株は、東京都国
分寺市戸倉１−１５−１にある農林水産省動物用医薬品
検査所、および東京都千代田区神田美倉町１１（寿楽ビ
ル内）にある社団法人動物用生物学的製剤協会に保管
されている。ＩＣＳ１株は、茨城県つくば市東１丁目１
−３にある工業技術院微生物工業研究所にある微工研菌
寄第５１９１号として寄託されている。ＮＤＶとしては
例えば佐藤株（Avian Diseases 23(4), 979-982, 197
9）や石井株（鶏病研究会報第17巻第1号, 28-33, 1981
年4月）が挙げられる。ＮＤＶ佐藤株は、ＩＣ２２１
株と同様農林水産省動物用医薬品検査所に保管されてい
る。ＮＤＶ石井株は、茨城県筑波郡谷田部観音台３−１
−１にある農林水産省家畜衛生試験場に保管されてい
る。ＩＢＶとしては例えばBeaudette４２株（Jpn. J. V
et. Sci. 45(6), 767-774,1983）が挙げられる。ＩＢＶ
beaudette ４２株は、ＮＤＶ石井株と同様農林水産
省家畜衛生試験場に保管されている。

【０００７】本発明に使用可能な油としては、鉱物油、
植物油、動物油および脂肪酸エステルが挙げられるが、
好ましくは、鉱物油を用いる。鉱物油としては、流動パ
ラフィンである、カ−ネ−ション、クレアロ−ル、ハイ
コ−ルＫ−１４０、ハイコ−ルＫ−１４０Ａ、ハイコ−
ルＫ−１６０、流動パラフィンＮｏ．４０Ｓ、クリスト
−ル５２、クリスト−ル７２、ベイオ−ルＦ、Ｄｒａｋ
ｅｒ１６−ＶＲ、Ｍａｒｃｏｌ等（全て商品名）が挙げ
られ、これらを単独あるいは組み合わせて用いる。

【０００８】本発明の非イオン性界面活性剤として、セ
スキオレイン酸ソルビタンが使用される。その他には、
親油性にはソルビタン脂肪酸エステルおよびグリセリン
脂肪酸−エステル、親水性にはポリオキシエチレンソル
ビタン脂肪酸エステルが挙げられる。ソルビタン脂肪酸
エステルとしては例えば、モノオレイン酸ソルビタン、
およびトリオレイン酸ソルビタンが挙げられ、グリセリ
ン脂肪酸エステルとしては、モノオレイン酸グリセリ
ン、モノカプリル酸グリセリンおよびジオレイン酸グリ
セリンが挙げられ、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪
酸エステルとしては例えば、モノオレイン酸ポリオキシ
エチレン（２０）ソルビタンが挙げられ、これらから１
種以上が選択されて使用される。陰イオン性界面活性剤
としては、アルキル硫酸塩および脂肪酸塩が挙げられ、
例えばラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸アル
ミニウムなどが使用可能である。また、本発明において
は免疫活性を更に増強する目的で、有機系のキサンタン
ガム、グアーゴム、ランザンガム、アラビアゴム、ポリ
ビニルアルコール、ポリアクリル酸塩、ポリビニルピロ
リドン、アルギン酸塩、ゼラチン、メチルセルロース、
カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセル
ロース、さらに、無機系のモンモリロナイト、水酸化ア
ルミニウム、ミョウバン、ラジオライト、ホワイトカー
ボンから選択される１種類以上を添加することも可能で
ある。

【０００９】本発明において抗原液とは、通常、媒体中
に抗原を約１０⁸個／ｍｌ含有するものを意味するが、
使用目的に応じて適宜濃度調整して本発明の製剤に用い
ても良い。本発明の油性アジュバントワクチン製剤は次
のようにして調製される。まず、油と界面活性剤を混合
溶解し、その液を濾過滅菌する。別に、先に調製した抗
原液、水、および前記免疫活性増強剤を混合した液を調
製し、先の油成分中に徐々に加え、撹拌する。その後、
温度を約２５℃以下に保ちながらホモジナイズし、目的
の油性アジュバントワクチン製剤を得る。水としてはリ
ン酸緩衝液（ｐＨ７）、生理食塩水あるいは精製水等が
使用される。

【００１０】本発明の油性アジュバントワクチン製剤の
好ましい組成を表１に示す。

【表１】さらに、好ましい非イオン性界面活性剤の配合量は４〜
６％である。また、陰イオン性界面活性剤を使用する場
合には０.５％以下で配合するのがさらに好ましく、そ
の中でも０.３％以下で配合するのが特に好ましい。抗
原の種類によっては、この陰イオン性界面活性剤を加え
ることで製剤物性（貯蔵後の再分散性）をさらに改善
し、免疫効果を向上させることができる。

【００１１】本発明で用いる非イオン性界面活性剤は、
親水性親油性バランス（ＨＬＢ：Hydrophile - Lipophi
le Balance）が３〜７さらに好ましくは３〜６になるよ
うな配合比率にすることが奨められる。特に、抗原液が
細菌のみ（ウィルスを含まない）の場合は、ＨＬＢが３
〜５になることが好ましい。また、製剤中の水相部（抗
原液と水）の配合量は、好ましくは１０〜５０％、特に
好ましくは２０〜４０％とする。本発明の油性アジュバ
ントワクチン製剤は、通常のワクチン製剤で用いられる
投与経路で投与することができるが、０.１〜１.５ｍｌ
好ましくは０.１〜０.５ｍｌを、筋肉内注射または皮下
注射で投与するとよい。

【００１２】

【実施例】以下に実施例をあげて本発明を詳細に説明す
るが、本発明は実施例によりなんら限定されるものでは
ない。１．抗原液の調製抗原として、鶏伝染性コリ−ザ（ＩＣ）のＡ型 Hpg ２
２１株およびＣ型 HpgＳ１株、ニュ−カッスル病ウィル
ス（ＮＤＶ）の佐藤株および石井株、鶏伝染性気管支炎
ウィルス（ＩＢＶ）のBeaudette ４２株を用いて抗原液
を調製した。（調製法）ＩＣＩＣＡ型 Hpg ２２１株およびＣ型 Hpg Ｓ１株をそれ
ぞれ０.５％鶏血清加鶏肉汁培地で１８時間培養し培養
菌液とした。これにホルマリン（日本薬局方）を０.２
％添加し、４℃で２日間不活化感作した。不活化感作し
た培養菌液を連続遠心後、菌体をＰＢＳで再浮遊し６６
０ｎｍの波長でＯＤ値が０.８にしたものを１０倍濃縮
しＡ型 Hpg ２２１株およびＣ型 Hpg Ｓ１株の抗原とし
た。ＮＤＶＮＤＶ佐藤株を１０日齢発育鶏卵の尿膜腔内に１０^4.0
ＥＩＤ₅₀／Ｅggを接種し、３６.５℃で２日間培養し、
感染尿膜腔液を採取した。これにホルマリン（日本薬局
方）を２％添加し、４℃で６日間不活化感作したものを
ウィルス抗原とした。このウィルス抗原の不活化前ウィ
ルス感染価は１０^9.0ＥＩＤ₅₀／ｍｌであった。ＮＤＶ
石井株を１０日齢発育鶏卵の尿膜腔内に１０^4.0ＥＩＤ
₅₀／Ｅggを接種し、３６.５℃で４日間培養し、感染尿
膜腔液を採取した。これにホルマリン（日本薬局方）を
２％添加し、４℃で６日間不活化感作したものをウィル
ス抗原とした。このウィルス抗原の不活化前ウィルス感
染価は１０¹⁰ＥＩＤ₅₀／ｍｌであった。ＩＢＶＩＢＶ Beaudette ４２株を１０日齢発育鶏卵の尿膜腔
内に１０^4.0ＥＩＤ₅₀／Ｅggを接種し、３６.５℃で２日
間培養し、感染尿膜腔液を採取した。これにホルマリン
（日本薬局方）を１％添加し、４℃で３日間不活化感作
したものをウィルス抗原とした。このウィルス抗原の不
活化前ウィルス感染価は１０^7.5ＥＩＤ₅₀／ｍｌであっ
た。

【００１３】これら抗原液の製剤中の配合量は、ＩＣ Hpg ２２１株の場合１〜４％ＩＣ Hpg Ｓ１株の場合１〜４％ＮＤＶ佐藤株の場合１０〜２０％（３倍濃縮した場合３〜１０％）ＮＤＶ石井株の場合１０〜２０％（３倍濃縮した場合３〜１０％）ＩＢＶ Beaudette ４２株の場合１０〜３０％（３倍濃縮した場合３〜１０％）とした。

【００１４】２．製剤（実施例１〜７および参考例１〜１０）の調製

【表２】

【表３】

【表４】表２〜４に示すように、原材料を配合し（配合の割合は
容量％）、油性アジュバントワクチン製剤を調製した。
調製方法は前述の通りである。但し、ホモジナイズは投
入式超音波ホモジナイザーを用い、電気出力１６０Ｗで
６０秒間照射した。なお、実施例４〜７では上記ＮＤＶ
佐藤株、ＩＢＶBeaudette 42株を超遠心により、さらに
３倍濃縮して使用した。

【００１５】参考例１〜４はＩＣ Hpg 221株の単味油性
アジュバントワクチン製剤、参考例５はＩＣ Hpg S1株
の単味油性アジュバントワクチン製剤、参考例６はＮＤ
Ｖ佐藤株の単味油性アジュバントワクチン製剤、参考例
７はＩＢＶBeaudette 42株の単味油性アジュバントワク
チン製剤である。また、参考例８はＩＣ Hpg 221株とＩ
Ｃ Hpg S1株との、実施例１はＮＤＶ佐藤株とＩＢＶBea
udette 42株との、実施例２〜３はＮＤＶ石井株とＩＢ
ＶBeadette 42株との２種混合油性アジュバントワクチ
ン製剤、参考例９はＩＣ Hpg 221株、ＩＣ Hpg S1株お
よびＮＤＶ佐藤株の、参考例１０はＩＣ Hpg 221株、Ｉ
ＣHpg S1株およびＩＢＶBeadette 42株の３種混合油性
アジュバントワクチン製剤である。さらに、実施例４〜
７はＩＣ Hpg 221株、ＩＣ Hpg S1株、ＮＤＶ佐藤株、
およびＩＢＶBeadette 42株の４種混合油性アジュバン
トワクチン製剤である。

【００１６】３．製剤物性の経時安定性（貯蔵安定性）参考例１、５〜１０、実施例２〜４で調製した本発明の
製剤を４℃で５日、３０日および９０日保存した後の物
理的安定性を、沈殿および層分離の度合いを観察して５
段階評価した。その結果、何れの製剤も貯蔵安定性はき
わめて良好であった。なお、表５にその代表例を示す。

【表５】 −；良好 ±；かなり良好（わずかに上層分離するが可逆的）＋；やや悪化（二層分離するが可逆的） ++；かなり悪化（三層分離するが可逆的） +++：悪化（不可逆的な三層分離）

【００１７】４．製剤の免疫効果および副作用参考例１の製剤の０．３ｍｌおよび０．５ｍｌを、鶏
（３０日齢）の大腿部筋肉内に接種した後の免疫効果の
推移を測定した。免疫効果は下記の２）生物試験中に記
載のＨＩ抗体価の測定方法に従った。その結果を図１に
示す。また、フロイント不完全アジュバントを注射する
と、接種局所の壊死、腫脹、硬結が認められ安全性に問
題がある。そこで参考例１の製剤の０．３ｍｌおよび
０．５ｍｌを接種した上記鶏の接種部位を１０週目に解
剖し、血腫、チーズ様物質、製剤痕跡の有無を観察し
た。その結果、接種後の鶏には沈うつ、跛行は認められ
ず、餌食いも変化せず、表６に示したように接種１０週
目で接種部位に製剤痕跡が少し認められる程度であっ
た。

【表６】

【００１８】５．比較実験本発明の油性アジュバント製剤と、水酸化アルミニウム
ゲルを用いた従来の沈降性アジュバント製剤（比較例１
〜４）、フロイントの不完全アジュバント製剤（比較例
５）および特開昭６３−３５５２５に開示されているＮ
ＤＶ石井株の単味油性アジュバント製剤（比較例６）と
の比較実験を行なった。比較例１〜５は以下の通り調製
した。

【００１９】比較例１ＩＣ Hpg ２２１株が製剤全容量の１％となるように、
水酸化アルミニウムゲル中に配合し製剤とした。比較例２ＩＣ Hpg ２２１株およびＩＣ Hpg Ｓ１株が、それぞれ
製剤全容量の１％および１％となるように水酸化アルミ
ニウムゲル中に配合し製剤とした。比較例３ＮＤＶ石井株およびＩＢＶ Beaudette ４２株が、それ
ぞれ製剤全容量の１０％および１０％となるように水酸
化アルミニウムゲル中に配合し製剤とした。比較例４ＩＣ Hpg ２２１株、ＩＣ Hpg Ｓ１株、ＮＤＶ佐藤株
（３倍濃縮）およびＩＢＶ Beaudette ４２株（３倍濃
縮）が、それぞれ製剤全容量の１％、１％、３％および
５％となるように水酸化アルミニウムゲル中に配合し製
剤とした。比較例５油（ベイオ−ルＦ）４２.５％と界面活性剤（アラセル
Ａ）７.５％を混合溶解した後、ＩＣ Hpg ２２１株１
％、ＰＢＳ４９％を混合した液を、徐々に加え撹拌し
た。その後、温度を２５℃以下に保ちながら６０秒間超
音波処理（１６０Ｗ）を行ない、フロイント不完全アジ
ュバントを得た。比較例６（市販品）処方発育鶏卵培養ニュ−カッスル病ウィルス（石井株）１０.０％無水マンニト−ルオレイン酸エステル加流動パラフィン７０.０％残り（不活化剤、チメロサ−ル、ｐＨ調製剤（ＰＢＳ））２０.０％

【００２０】１）粘度測定参考例１、実施例３〜４および比較例５について、温度
２０℃、回転数５０ｒｐｍ（但し、比較例５のときは
２．５ｒｐｍ）の条件下でＥ型粘度計（東京計器
（株））を用いて製剤の粘度（ｃＰ）を測定した。その
結果、表７からも分かるようにフロイント不完全アジュ
バントは粘度が高く、一般に市販されている注射器での
接種は困難である。また貯蔵安定性も悪く３０日保存で
二層分離し、そのうえ粘度が高いため再分散性も悪い。
一方、本製剤はいずれも粘度が２００ｃＰ以下で注射が
容易であり、さらに貯蔵安定性（表５参照）にも優れて
いる。

【表７】

【００２１】２）生物試験試験１参考例１〜４の製剤ならびに比較例１および５の製剤
を、調製直後、９１日および１１２日間４℃で保存後、
それぞれ鶏（３０〜３３日齢）の大腿部筋肉内に０．５
ｍｌ接種し、経時的に採血を行ない製剤中のそれぞれの
抗原について免疫効果を測定した。ＩＣの免疫効果の測
定はＨＩ抗体価で行なった。その結果を表８に示す。抗
体価の測定は以下の通りである。

【００２２】（ＩＣ(Hpg 221株，S1株)に対するＨＩ抗
体価測定法）可検血清の０.０２５ｍｌをリン酸緩衝液
食塩水で２倍段階希釈した。０.０２５ｍｌ中に４単位
のＩＣ（Hpg 221株，S1株）の各赤血球凝集素を含有し
たリン酸緩衝液食塩水を加えた。室温で１０分間感作
後、ＩＣ（Hpg 221株）は、０.５％新鮮鶏赤血球を０.
５ｍｌ加え、またＩＣ（Hpg S1株）では、０.００１％
ゼラチンと０.１％牛血清アルブミン加食塩水に１.０％
ホルマリン固定血球を加えた液を０.５ｍｌ加えた。４
５分室温に置いた後、赤血球凝集抑制を示した最高希釈
倍数をＨＩ抗体価とした。

【００２３】

【表８】

【００２４】試験２参考例８および比較例２の製剤を鶏（３５日齢）の大腿
部筋肉内に０.５ｍｌ接種した後経時的に採血を行な
い、上記と同様の方法で製剤中のそれぞれの抗原につい
て免疫効果を測定した。その結果を表９に示す。

【表９】

【００２５】試験３実施例２〜３および比較例３、６の製剤を、鶏（３５日
齢）の大腿部筋肉内に０.３ｍｌ接種した後経時的に採
血を行ない、製剤中のそれぞれの抗原について免疫効果
を測定した。ＮＤＶの免疫効果の測定はＨＩ抗体価で、
ＩＢＶの場合は中和抗体価で行なった。その結果を表９
に示す。抗体価の測定は以下の通りである。（ＮＤＶに対するＨＩ抗体価測定法）可検血清の０.０２５ｍｌをリン酸緩衝液食塩水で２倍
段階希釈した。０.０２５ｍｌ中に４単位のＮＤＶの各
赤血球凝集素を含有したリン酸緩衝液食塩水を加えた。
室温で１０分間感作後、０.５％新鮮鶏赤血球を０.５ｍ
ｌ加えた。４５分室温に置いた後、赤血球凝集抑制を示
した最高希釈倍数をＨＩ抗体価とした。（ＩＢＶの中和抗体価の測定方法）１０倍段階希釈ウィルス液０.６ｍｌと非働化済みの被
検血清０.６ｍｌと混合し、４℃で１８〜２４時間感作
後、各希釈液あたり０.１ｍｌずつ５個の９〜１１日齢
発育鶏胚に接種した。接種後２４時間以内の死亡は事故
死とみなし、計算より除外した。残りの生死を７日間観
察し、５０％感染価をベ−レンス・ゲルバ−法にて算出
した。中和抗体価はウィルス対照との差によって求め対
数で表現した。

【００２６】

【表１０】

【００２７】試験４実施例４〜７および比較例４の製剤を、鶏（３３日齢）
の大腿部筋肉内に０．５ｍｌ接種した後経時的に採血を
行ない、上記と同様の方法で製剤中のそれぞれの抗原に
ついて免疫効果を測定した。その結果を表１１に示す。

【表１１】

【００２８】

【発明の効果】以上の記載のごとく、本発明のｗ／ｏ型
油性アジュバントワクチン製剤は、製剤の貯蔵安定性に
優れ、かつ取り扱いに際し好ましい物性を有した。さら
に、現在知られている油性アジュバント製剤に比べて免
疫効果が高く、安全性も良好な油性アジュバントワクチ
ン製剤となった。

【００２９】

【図面の簡単な説明】

【図１】参考例１の製剤の０．３ｍｌおよび０．５ｍｌ
を、鶏の大腿部筋肉内に接種した後の免疫効果の推移を
示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 39/295 Ａ６１Ｋ 39/295 39/39 39/39 47/14 47/14 Ｈ (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) A61K 39/17 A61K 9/107 A61K 39/215 A61K 39/295 A61K 39/39 A61K 47/14 ＢＩＯＴＥＣＨＡＢＳ（ＳＴＮ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ)

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】不活化されたニュ−カッスル病ウィルス
および鶏伝染性気管支炎ウィルスを抗原として含む抗原
液を、セスキオレイン酸ソルビタンを含む非イオン性界
面活性剤で油中に乳化してなるｗ／ｏ型油性アジュバン
トワクチン製剤。
【請求項２】さらに抗原として不活化された鶏伝染性
コリ−ザを含む請求項１記載のワクチン製剤。
【請求項３】該非イオン性界面活性剤が、セスキオレ
イン酸ソルビタンおよびモノオレイン酸ポリオキシエチ
レン（２０）ソルビタンから成る請求項１または２記載
のワクチン製剤。