JP2748046B2 - 耐熱性キチナーゼ - Google Patents
耐熱性キチナーゼInfo
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- JP2748046B2 JP2748046B2 JP2299448A JP29944890A JP2748046B2 JP 2748046 B2 JP2748046 B2 JP 2748046B2 JP 2299448 A JP2299448 A JP 2299448A JP 29944890 A JP29944890 A JP 29944890A JP 2748046 B2 JP2748046 B2 JP 2748046B2
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- chitin
- enzyme
- thermostable
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
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- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はキトオリゴ糖の大量生産に適した耐熱性キチ
ナーゼに関する。
ナーゼに関する。
キチナーゼは動物、植物及び微生物内に広く存在する
酵素であり、そのうちの何種類かはすでに精製・取得さ
れている〔E.Cabib et al.,Methods Enzymol.,161,460
−501（1988）〕。そしてこれらのキチナーゼは、カビ
の細胞壁の研究、キチンからのキトオリゴ糖の製造、転
移又は縮合反応によるキトオリゴ糖誘導体の製造などに
利用されている。
酵素であり、そのうちの何種類かはすでに精製・取得さ
れている〔E.Cabib et al.,Methods Enzymol.,161,460
−501（1988）〕。そしてこれらのキチナーゼは、カビ
の細胞壁の研究、キチンからのキトオリゴ糖の製造、転
移又は縮合反応によるキトオリゴ糖誘導体の製造などに
利用されている。
しかしながら、従来のキチナーゼはいずれも取得する
ためには多くの精製ステップを経なくてはならず、少量
しか得られないという欠点を有していた。また、その
上、50℃前後までの耐熱性しか有さないため、キチンか
らのキトオリゴ糖の製造時に失活したりしてしまい、産
業分野での利用は不可能な状態にあった。
ためには多くの精製ステップを経なくてはならず、少量
しか得られないという欠点を有していた。また、その
上、50℃前後までの耐熱性しか有さないため、キチンか
らのキトオリゴ糖の製造時に失活したりしてしまい、産
業分野での利用は不可能な状態にあった。
従って、簡易な方法によって得られる耐熱性キチナー
ゼの開発が望まれていた。
ゼの開発が望まれていた。
かかる実情において、本発明者らは、キトオリゴ糖の
大量生産に適した耐熱性キチナーゼを得るべく、鋭意研
究したところ、特開昭63−7792号記載のバチルス・リケ
ニフォルミス（Bacillus licheniformis）Ｘ−7u株の培
養液から新規なキチナーゼＩを精製・取得することに成
功し、更に該キチナーゼが優れた耐熱性を有することを
見出し、本発明を完成した。
大量生産に適した耐熱性キチナーゼを得るべく、鋭意研
究したところ、特開昭63−7792号記載のバチルス・リケ
ニフォルミス（Bacillus licheniformis）Ｘ−7u株の培
養液から新規なキチナーゼＩを精製・取得することに成
功し、更に該キチナーゼが優れた耐熱性を有することを
見出し、本発明を完成した。
従って、本発明は新規な耐熱性キチナーゼＩを提供す
るものである。
るものである。
本発明の耐熱性キチナーゼＩを生産する微生物である
バチルス・リケニフォルミス（Bacillus licheniformi
s）Ｘ−7uは、温泉より採取された微生物であり、本菌
は工業技術院微生物工業技術研究所に微工研菌寄第8810
号（FERM−P No.8810）として寄託されている。
バチルス・リケニフォルミス（Bacillus licheniformi
s）Ｘ−7uは、温泉より採取された微生物であり、本菌
は工業技術院微生物工業技術研究所に微工研菌寄第8810
号（FERM−P No.8810）として寄託されている。
本発明の耐熱性キチナーゼＩを得るには、通常バチル
ス属に属する微生物の培養に用いられる培地に、前記バ
チルス・リケニフォルミス（Bacillus licheniformis）
Ｘ−7u株を接種し、常法に従って回転振盪培養又は通気
撹拌培養を行なえばよい。
ス属に属する微生物の培養に用いられる培地に、前記バ
チルス・リケニフォルミス（Bacillus licheniformis）
Ｘ−7u株を接種し、常法に従って回転振盪培養又は通気
撹拌培養を行なえばよい。
本発明の酵素生産のためには培地中に炭素源としてキ
チンを含有させることが必須であり、更にＮ−アセチル
グルコサミンを添加することが好ましい。また、窒素源
としては硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム等の無機
化合物或いはコーンスチープリカー、酵母エキス等の有
機窒素化合物がともに使用できるが、特に酵母エキスが
好ましい。無機塩としてはNa2HPO4・KH2PO4、NaCl、MgS
O4・7H2O、CaCl2・2H2O等が用いられる。
チンを含有させることが必須であり、更にＮ−アセチル
グルコサミンを添加することが好ましい。また、窒素源
としては硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム等の無機
化合物或いはコーンスチープリカー、酵母エキス等の有
機窒素化合物がともに使用できるが、特に酵母エキスが
好ましい。無機塩としてはNa2HPO4・KH2PO4、NaCl、MgS
O4・7H2O、CaCl2・2H2O等が用いられる。
培地のpHは５〜10、好ましくは７〜９であり、培養温
度は40℃以上60℃未満、好ましくは50℃である。斯かる
培養条件で24〜96時間培養を行なえば、培養液中に本発
明のキチナーゼが蓄積する。
度は40℃以上60℃未満、好ましくは50℃である。斯かる
培養条件で24〜96時間培養を行なえば、培養液中に本発
明のキチナーゼが蓄積する。
斯くして得られた培養液中の耐熱性キチナーゼＩの精
製は、一般の酵素の採取及び精製の手段に準じて行なう
ことができる。すなわち、まず遠心分離又は濾過等の通
常の固液分離手段により、又は、必要に応じて塩折法、
沈澱法、限外濾過法等の分離手段により、粗酵素を得
る。次いでブチルトヨパール（Butyl−TOYOPEARL,東ソ
ー（株））カラムクラマトグラフィーにより粗酵素を分
画すると、本発明耐熱性キチナーゼＩが単品として分離
できる。
製は、一般の酵素の採取及び精製の手段に準じて行なう
ことができる。すなわち、まず遠心分離又は濾過等の通
常の固液分離手段により、又は、必要に応じて塩折法、
沈澱法、限外濾過法等の分離手段により、粗酵素を得
る。次いでブチルトヨパール（Butyl−TOYOPEARL,東ソ
ー（株））カラムクラマトグラフィーにより粗酵素を分
画すると、本発明耐熱性キチナーゼＩが単品として分離
できる。
斯くして得られる、本発明の耐熱性キチナーゼＩの酵
素化学的諸性質について、以下に説明する。
素化学的諸性質について、以下に説明する。
尚、酵素活性測定、タンパク質の定量及びSDS−ポリ
アクリルアミドゲル電気泳動（SDS−PAGE）は次に示す
方法により行なった。
アクリルアミドゲル電気泳動（SDS−PAGE）は次に示す
方法により行なった。
＜酵素活性測定法＞ ｉ）グリコールキチン水解活性 （反応液） 1.0ml 0.1％グリコールキチン水溶液＊１ 0.2ml 0.2Mホウ酸緩衝液（pH10.0） 0.3ml 酵素溶液 ＊1:S.Hirano,Methods Enzymol．161,408（1998）に記
載したものを使用した。
載したものを使用した。
上記反応液で50℃にて30分間反応後、生じた還元糖を
T.Imoto and K.Yagishita,Agric．Biol．Chem.,35,1154
（1971）に記載の方法により定量した。酵素１単位（Un
it）は、上記の条件で１分間に１μmoleのＮ−アセチル
−Ｄ−グルコサミンに相当する還元力を生成する酵素量
と定義した。
T.Imoto and K.Yagishita,Agric．Biol．Chem.,35,1154
（1971）に記載の方法により定量した。酵素１単位（Un
it）は、上記の条件で１分間に１μmoleのＮ−アセチル
−Ｄ−グルコサミンに相当する還元力を生成する酵素量
と定義した。
ii）ｐ−ニトロフェニル−ジ−Ｎ−アセチル−β−Ｄ−
キトビオシド水解活性 （反応液） 0.1ml 5mM ｐ−ニトロフェニル−ジ−Ｎ−アセチル−
β−Ｄ−キトビオシド（焼律水産化学製Lot No.881205
0） 0.2ml 0.2M リン酸緩衝液（pH6.0） 0.1ml 酵素溶液 上記反応液で37℃にて５分間反応後、0.2M Na2CO3水
溶液0.4mlを加えて反応を止め、生じたｐ−ニトロフェ
ノールを400nmの吸光度から定量した（吸光係数18.1cm2
/μmole）。酵素１単位（Unit）は、上記の条件で１分
間に１μmoleのｐ−ニトロフェノールを生成する酵素量
と定義した。
キトビオシド水解活性 （反応液） 0.1ml 5mM ｐ−ニトロフェニル−ジ−Ｎ−アセチル−
β−Ｄ−キトビオシド（焼律水産化学製Lot No.881205
0） 0.2ml 0.2M リン酸緩衝液（pH6.0） 0.1ml 酵素溶液 上記反応液で37℃にて５分間反応後、0.2M Na2CO3水
溶液0.4mlを加えて反応を止め、生じたｐ−ニトロフェ
ノールを400nmの吸光度から定量した（吸光係数18.1cm2
/μmole）。酵素１単位（Unit）は、上記の条件で１分
間に１μmoleのｐ−ニトロフェノールを生成する酵素量
と定義した。
＜蛋白質の定量＞ 精製酵素について得られた280nmにおける吸光係数Ｅ
１％ 1cm（耐熱性キチナーゼＩ＝14.4）を用いて測定し
た。
１％ 1cm（耐熱性キチナーゼＩ＝14.4）を用いて測定し
た。
＜SDS−PAGE＞ ラムリーの不連続緩衝液系を用いた方法（U.K.Laemml
i,Nature，277,680（1970）に従った。すなわち、耐熱
性キチナーゼI5μｇをテフコゲルSDS−PAGEミニグラジ
ェントゲル（TEFCO−Gel SDS−PAGE mini GRADIENT Ge
l）８〜16％を用いて12mA定電流で泳動した。次いで0.1
％クーマーシーブルー（Coomassie blue）250、40％メ
タノール、10％酢酸水溶液で染色後、10％メタノール、
7.5％酢酸水溶液で脱色した。分子量マーカーとして
は、ファルマシア製 ロウ モレキュラーウェイト カ
リブレーション キット（Low Molecular Weight Calib
ration Kit;ホスホリラーゼb94,000、アルブミン67,00
0、オボアルブミン43,000、カルボニックアンヒドラー
ゼ30,000、トリプシンインヒビター20,100、α−ラクト
アルブミン14,400）を用いた。
i,Nature，277,680（1970）に従った。すなわち、耐熱
性キチナーゼI5μｇをテフコゲルSDS−PAGEミニグラジ
ェントゲル（TEFCO−Gel SDS−PAGE mini GRADIENT Ge
l）８〜16％を用いて12mA定電流で泳動した。次いで0.1
％クーマーシーブルー（Coomassie blue）250、40％メ
タノール、10％酢酸水溶液で染色後、10％メタノール、
7.5％酢酸水溶液で脱色した。分子量マーカーとして
は、ファルマシア製 ロウ モレキュラーウェイト カ
リブレーション キット（Low Molecular Weight Calib
ration Kit;ホスホリラーゼb94,000、アルブミン67,00
0、オボアルブミン43,000、カルボニックアンヒドラー
ゼ30,000、トリプシンインヒビター20,100、α−ラクト
アルブミン14,400）を用いた。
＜酵素化学的諸性質＞ 作用 耐熱性キチナーゼＩはキチンを加水分解してキトオリ
ゴ糖を生成する。
ゴ糖を生成する。
基質特異性 キチナーゼＩはコロイダルキチンを加水分解してＮ−
アセチルキトビオースを生成する。
アセチルキトビオースを生成する。
また、耐熱性キチナーゼＩはグリコールキチンを加水
分解し、還元糖を生成する。更にｐ−ニトロフェニル−
ジ−Ｎ−アセチル−β−Ｄ−キトビオシド（以下「pNP
−キトビオシド」と略称する）を加水分解し、ｐ−ニト
ロフェノールを生成する。
分解し、還元糖を生成する。更にｐ−ニトロフェニル−
ジ−Ｎ−アセチル−β−Ｄ−キトビオシド（以下「pNP
−キトビオシド」と略称する）を加水分解し、ｐ−ニト
ロフェノールを生成する。
pNP−キトビオシドを基質としたときのKm及びＶの値
を表１に示す。
を表１に示す。
至適pH 0.2Mマクイルベン（McIlvaine）緩衝液（pH2.5〜7.
5）又は0.2Mホウ酸緩衝液（pH7.5〜11.0）0.2ml、5mM基
質水溶液（pNP−キトビオシド）0.1ml、酵素液0.1ml
（耐熱性キチナーゼ1.5μｇ）からなる反応液を、37
℃、５分間反応させ、活性を測定した。至適pHは6.0〜
7.0であった。
5）又は0.2Mホウ酸緩衝液（pH7.5〜11.0）0.2ml、5mM基
質水溶液（pNP−キトビオシド）0.1ml、酵素液0.1ml
（耐熱性キチナーゼ1.5μｇ）からなる反応液を、37
℃、５分間反応させ、活性を測定した。至適pHは6.0〜
7.0であった。
pH安定性 耐熱性キチナーゼＩの酵素液を0.02ml（1.5μｇ）に
0.2Mマクイルベン（McIlvaine）緩衝液（pH2.5〜8.5）
0.02mlを加え、35℃で24時間保存した。保存液に0.2Mリ
ン酸緩衝液（pH6.0）0.26ml及び5mM pNP−キトビオシ
ド0.1mlを加えて、37℃で５分間反応させ、活性を測定
したところ、pH6.0〜8.5の範囲で90％以上の残存活性を
示した。
0.2Mマクイルベン（McIlvaine）緩衝液（pH2.5〜8.5）
0.02mlを加え、35℃で24時間保存した。保存液に0.2Mリ
ン酸緩衝液（pH6.0）0.26ml及び5mM pNP−キトビオシ
ド0.1mlを加えて、37℃で５分間反応させ、活性を測定
したところ、pH6.0〜8.5の範囲で90％以上の残存活性を
示した。
至適温度 耐熱性キチナーゼＩの酵素液0.1ml（0.7μｇ）を用い
て、10〜35℃の各温度で５分間反応させ、活性を測定し
たところ、至適温度は65〜70℃であった。
て、10〜35℃の各温度で５分間反応させ、活性を測定し
たところ、至適温度は65〜70℃であった。
温度安定性 耐熱性キチナーゼＩの酵素液〔0.2Mトリス−塩酸緩衝
液（pH7.5）に1.7μｇの耐熱性キチナーゼを溶かしたも
の〕0.1mlを30〜80℃の各温度で30分間保温した後に、
0.2Mリン酸緩衝液（pH6.0）0.2ml及び5mM pNP−キトビ
オシド0.1mlを加え、37℃で５分間反応させ、活性を測
定したところ、60℃以下では90％以上の残存活性を示し
た。
液（pH7.5）に1.7μｇの耐熱性キチナーゼを溶かしたも
の〕0.1mlを30〜80℃の各温度で30分間保温した後に、
0.2Mリン酸緩衝液（pH6.0）0.2ml及び5mM pNP−キトビ
オシド0.1mlを加え、37℃で５分間反応させ、活性を測
定したところ、60℃以下では90％以上の残存活性を示し
た。
分子量 SDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法（SDS−PAG
E）の結果（図２）を基に、対数（分子量）−移動度の
プロットより算出した。キチナーゼＩの分子量は89,000
であった。
E）の結果（図２）を基に、対数（分子量）−移動度の
プロットより算出した。キチナーゼＩの分子量は89,000
であった。
キチナーゼＩはSDS−PAGEにより単一のバンドを示し
たので、単一の物質であると思われた。しかし、これら
をSDSを用いないポリアクリルアミドゲル電気泳動にか
けたところ、相互に近接した二本のバンドを示した。こ
れらは分子量が同一で電荷が僅かに異なる分子種が存在
することを示唆する。
たので、単一の物質であると思われた。しかし、これら
をSDSを用いないポリアクリルアミドゲル電気泳動にか
けたところ、相互に近接した二本のバンドを示した。こ
れらは分子量が同一で電荷が僅かに異なる分子種が存在
することを示唆する。
本発明の耐熱性キチナーゼＩは従来のキチナーゼに比
較して高温度における安定性が良好である。従って、本
発明の耐熱性キチナーゼＩはキチンからのキトオリゴ糖
の大量生産に非常に適している。また、従来のキチナー
ゼよりも精製工程が簡便であり、産業上有用なものであ
る。
較して高温度における安定性が良好である。従って、本
発明の耐熱性キチナーゼＩはキチンからのキトオリゴ糖
の大量生産に非常に適している。また、従来のキチナー
ゼよりも精製工程が簡便であり、産業上有用なものであ
る。
以下に、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明す
る。
る。
実施例１ バチルス・リケニフォルミス（Bacillus licheniform
is）Ｘ−7uを下記組成の培地を用いて培養し、キチン水
解活性を有する培養液を得た。
is）Ｘ−7uを下記組成の培地を用いて培養し、キチン水
解活性を有する培養液を得た。
使用培地 ｉ）前培養用液体培地 エルリッヒ肉エキス （極東製薬製、Lot No.DC9277） 3.0g ポリペプトン （日本製薬製、Lot No.0559WB） 3.0g NaCl 0.6g H2O 300ml 1N NaOH又は1N HClを用いてpH7.0に調整 ii）酵素生産用液体培地 コロイダルキチン 10.0g （焼律水産化学製のキチンPSL、 Lot No.8802130を用いて調整） Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン 10.0g （東京化成製、Lot No.AZ01） 酵母エキス 2.0g （DIFCO社製、Lot No.760805） Na2HPO4・12H2O 6.8g NH4NO3 4.0g KH2PO4 2.0g NaCl 1.0g MgSO4・7H2O 1.0g CaCl2・2H2O 0.2g H2O 2000ml 1N NaCH又は1N HClを用いてpH7.0に調整 培養方法 前溶媒培地300mlを500ml三角フラスコ２本に150mlず
つ分注し、本菌株１白金耳を接種後、50℃、24時間回転
振盪培養（150rpm）を行なった。次いで培養液300mlを
遠心分離（14,000rpm、20min）にかけ、集菌した菌を0.
05Mリン酸緩衝液80mlに懸濁後、酵素生産用培地2000ml
に接種した。培養は、いわしやminiジャーファメンタAC
D4を用いて50℃にて48時間行なった（撹拌250rpm、通気
量1200ml/min）。
つ分注し、本菌株１白金耳を接種後、50℃、24時間回転
振盪培養（150rpm）を行なった。次いで培養液300mlを
遠心分離（14,000rpm、20min）にかけ、集菌した菌を0.
05Mリン酸緩衝液80mlに懸濁後、酵素生産用培地2000ml
に接種した。培養は、いわしやminiジャーファメンタAC
D4を用いて50℃にて48時間行なった（撹拌250rpm、通気
量1200ml/min）。
実施例２ 実施例１で得られたキチン水解活性を有する培養液19
50mlを遠心分離（×8,000g、30分、４℃）し、その上清
1890mlに（NH4）2SO4を終濃度1Mとなるように加え、更
に1N NaOH又は1N HClを用いてpH7.5に調整した後、予め
0.02Mトリス−塩酸緩衝液（pH7.5:1M（NH4）2SO4を含
む）で平衡化したブチルヨトヨパール（Butyl−TOYOPEA
RL）650Mカラム（カラムサイズ2.6×20.5cm）に前記上
清を流速1.8ml/分で流した。0.8M（NH4）2SO4を含む、
0.02Mトリス−塩酸緩衝液（pH7.5）を流速0.48ml/分で
流し、カラムを洗浄した。次に0.4M（NH4）2SO4を含む
0.02Mトリス−塩酸緩衝液（pH7.5）を用いて流速0.48ml
/分、１フラクション＝5.0mlで酵素を溶出した。続いて
（NH4）2SO4を含まない0.02Mトリス−塩酸緩衝液（pH7.
5）を用いて流速0.48ml/分、１フラクション＝5.0mlで
酵素を溶出したところ、グリコールキチン水解活性及び
pNP−キトビオシド水解活性を示すピークＡ画分（フラ
クションNo.18〜33）80mlとピークＣ画分（フラクショ
ンNo.257〜262）30ml、並びに強いpNP−キトビオシド水
解活性を示すピークＢ画分（フラクションNo.45〜70）1
30mlが得られた（図１）。
50mlを遠心分離（×8,000g、30分、４℃）し、その上清
1890mlに（NH4）2SO4を終濃度1Mとなるように加え、更
に1N NaOH又は1N HClを用いてpH7.5に調整した後、予め
0.02Mトリス−塩酸緩衝液（pH7.5:1M（NH4）2SO4を含
む）で平衡化したブチルヨトヨパール（Butyl−TOYOPEA
RL）650Mカラム（カラムサイズ2.6×20.5cm）に前記上
清を流速1.8ml/分で流した。0.8M（NH4）2SO4を含む、
0.02Mトリス−塩酸緩衝液（pH7.5）を流速0.48ml/分で
流し、カラムを洗浄した。次に0.4M（NH4）2SO4を含む
0.02Mトリス−塩酸緩衝液（pH7.5）を用いて流速0.48ml
/分、１フラクション＝5.0mlで酵素を溶出した。続いて
（NH4）2SO4を含まない0.02Mトリス−塩酸緩衝液（pH7.
5）を用いて流速0.48ml/分、１フラクション＝5.0mlで
酵素を溶出したところ、グリコールキチン水解活性及び
pNP−キトビオシド水解活性を示すピークＡ画分（フラ
クションNo.18〜33）80mlとピークＣ画分（フラクショ
ンNo.257〜262）30ml、並びに強いpNP−キトビオシド水
解活性を示すピークＢ画分（フラクションNo.45〜70）1
30mlが得られた（図１）。
以上のピークＡ画分、ピークＢ画分及びピークＣ画分
をそれぞれSDS−PAGEにかけた。ピークＢ画分は単一の
バンドを示したのでこの画分を以て精製酵素標品とし、
これを耐熱性キチナーゼＩと命名した。
をそれぞれSDS−PAGEにかけた。ピークＢ画分は単一の
バンドを示したのでこの画分を以て精製酵素標品とし、
これを耐熱性キチナーゼＩと命名した。
実施例３ 実施例２で得られた本発明耐熱性キチナーゼＩの酵素
活性を測定した。その結果を下記表２に示す。なお、基
質としてはpNP−キトビオシドを用いた。
活性を測定した。その結果を下記表２に示す。なお、基
質としてはpNP−キトビオシドを用いた。
図１は、実施例２における培養液のブチルトヨパール65
0Mカラムクロマトグラフィーの溶出パターンを示す図面
である。 図２は、本発明の精製キチナーゼＩのSDS−ポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動（SDS−PAGE）の結果を示す図面
である。
0Mカラムクロマトグラフィーの溶出パターンを示す図面
である。 図２は、本発明の精製キチナーゼＩのSDS−ポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動（SDS−PAGE）の結果を示す図面
である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 藤本 浩 神奈川県小田原市成田540 明治乳業ヘ ルスサイエンス研究所内
Claims (1)
- 【請求項１】次の酵素化学的性質を有する耐熱性キチナ
ーゼＩ。 作用 キチンを加水分解してキトオリゴ糖を生成する。 基質特異性 コロイダルキチンを加水分解してＮ−アセチルキトビオ
ースを生成する。グリコールキチンを加水分解し、還元
糖を生成する。またｐ−ニトロフェニル−ジ−Ｎ−アセ
チル−β−Ｄ−キトビオシドを加水分解し、ｐ−ニトロ
フェノールを生成する。 至適pH 6.0〜7.0 pH安定性（35℃、24時間処理） 6.0〜8.5で90％以上の残存活性 至適温度 65〜70℃ 温度安定性（30分間処理） 60℃以下で90％以上の残存活性 分子量（SDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動
法） 約89,000
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1-288177 | 1989-11-06 | ||
| JP28817789 | 1989-11-06 |
Related Child Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7139789A Division JP3072025B2 (ja) | 1989-11-06 | 1995-06-07 | 抗癌剤 |
| JP9230571A Division JPH1070978A (ja) | 1997-08-27 | 1997-08-27 | 耐熱性キチナーゼ |
| JP9324368A Division JP2952579B2 (ja) | 1989-11-06 | 1997-11-26 | 耐熱性キチナーゼ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03219870A JPH03219870A (ja) | 1991-09-27 |
| JP2748046B2 true JP2748046B2 (ja) | 1998-05-06 |
Family
ID=17726810
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2299448A Expired - Lifetime JP2748046B2 (ja) | 1989-11-06 | 1990-11-05 | 耐熱性キチナーゼ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2748046B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5262310A (en) * | 1991-05-31 | 1993-11-16 | Akebono Brake Industry Co, Ltd. | Enzymatic decomposition method of chitin-containing materials |
-
1990
- 1990-11-05 JP JP2299448A patent/JP2748046B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH03219870A (ja) | 1991-09-27 |
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