JP2720646B2 - 7s蛋白の分画法 - Google Patents
7s蛋白の分画法Info
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Description
豆蛋白からの7S蛋白の分画法に関する。
してその沈降定数から分類される2S,7S,11S,
15S等の蛋白を含んでいる。この内、7Sと11Sは
グロブリン画分の主要な構成蛋白成分であり、この両者
は粘性・凝固性・界面活性等において特異的に異なる性
質を有する。従って、7Sと11Sを分画することによ
り両蛋白の性質を利用することが可能となる。即ち、こ
の2大蛋白成分である7Sと11Sを高純度で分画分取
することは、基礎研究のみならず産業上の蛋白利用技術
としても両者の蛋白を各々個別にまたは適当な比率で混
合して利用する上で、極めて有意義であると考えられ
る。
11S蛋白画分はThanhらの方法(J.Agr.Food Che
m.(1976)24, 1117)、あるいは廣塚らの方法(特開昭6
1−236795号)等に開示されている方法により比
較的容易に高純度で分取することができるが、7S蛋白
画分に関しては純度が高々80%程度のものしか得られ
ず、より精製度を上げるにはゲルろ過やアフィニィーク
ロマトグラフィー等を用いる必要があり、大量にかつ安
定的に精製することは困難であった。なお、本発明にお
いて言う純度は、SDS−ポリアクリルアミドゲル電気
泳動で得られたパターンのデンシトメトリーによる面積
比に基づいている。
度が高々80%程度のものしか得られなかった7S蛋白
画分を、85%以上好ましくは90%以上の純度で効率
良く分画することを目的とするものである。
鑑み、蛋白含有物質から7S蛋白を85%以上、好まし
くは90%以上の高純度で且つ大量に分画する方法につ
いて鋭意研究した結果、イオン強度とpHの関係を調整す
ることにより可能であるという知見を得た。本発明はか
かる知見に基づいて完成されたものである。
する画分の分画法であって、蛋白含有溶液のイオン強度
を0.2〜0.3に調整し、かつpH値を4.8〜5.2
に調製して不溶画分を除いた後、さらにイオン強度を
0.2未満およびpH値を4.6〜5.0に調製して生ず
る不溶画分を分取することを特徴とする方法が提供され
る。
種、落花生、綿実等の油糧種子およびこれらの油糧種子
から得られる7S蛋白を含むものであれば全て用いるこ
とができる。原料の入手性、経済性等の点から大豆蛋白
原料が好ましく、例えば圧扁大豆、脱脂大豆、豆乳(乾
燥粉末も含む)、濃縮大豆蛋白、分離大豆蛋白等の大豆
蛋白を含む原料を好適に用いることができる。
上記する如く、7S蛋白を含有する蛋白含有物質の水溶
液を調製する。この蛋白含有物質の水溶液は、出発原料
から水もしくは塩水により抽出した水溶液であってもよ
く、また幾つかの精製プロセスを経た中間段階の水溶液
であってもよい。例えば植物性蛋白質の7S蛋白および
11S蛋白を含んだ水溶液でもよいし、また公知の方法
により11S蛋白を除去したものであってもよい。
液のイオン強度を0.2〜0.3に調製する。イオン強
度が0.2より低ければ次の操作で7S蛋白をほとんど
回収することができず、またイオン強度が0.3より高
いと11S蛋白の混入が多くなり、7S蛋白の純度が悪
くなる。
澱する不溶画分を除く。(以下、この不溶画分を便宜上
α沈澱と呼称する。)pH値が4.8以下であれば7S蛋
白がほとんど回収できなくなり、また5.2以上であれ
ば11S蛋白の混入が多くなって7S蛋白の純度が悪く
なる。
pH値を4.6〜5.0に調整することによって7S蛋白
画分を沈澱させ分取する。イオン強度が0.2以上であ
ればpH値を4.6〜5.0に調整しても7S蛋白画分の
回収が困難となり、またイオン強度を0.2未満にして
もpH値を4.6〜5.0に調整しなければ同様に7S蛋
白画分の回収が困難となり、本発明の目的を達成するこ
とができない。
併用することにより7S蛋白画分の純度を変えず、収量
を増加させることができる。還元剤としては亜硫酸水素
ナトリウム、ハイドロスルファイト等が例示できる。
画分は、pH値を適当に調節した後、ペーストとして若し
くは乾燥して用いることができ、殺菌処理が必要な場合
はHTST処理することが可能である。
一層明瞭にするが、これは例示であって本発明の精神が
これらの例示によって制限されるものではない。なお、
例中に示す部、%は何れも重量基準を意味する。
%,NSI:87)1部に15部の水を加え、ホモミキ
サーにて室温下に低速で攪拌、20%水酸化ナトリウム
溶液でpH7.5に維持しながら30分間抽出した。しか
る後、抽出液をろ布でろ過し、次いで9200Gで20
分間遠心分離して不溶物を除去した。
0mMになるように亜硫酸水素ナトリウム(SO2 含量6
0〜69%のものを豆乳1リットルに対し0.98g)
を加え、20%の塩酸でpH6.4に調製した後、氷水中
で一夜放置して沈澱した蛋白画分を6760Gで20分
間遠心分離することにより11S蛋白画分を分離した。
(即ち、イオン強度0.25)になるように塩化ナトリ
ウムを添加し、20%塩酸でpH5.0に調整した。調整
後30分間、4℃に放置後、6760Gで20分間遠心
分離することにより不溶性部分α沈澱を分離した。
ン強度0.125,pH4.8に調製して、6760Gで
20分間(4℃)で遠心分離することにより7S蛋白画
分を得た。表1に豆乳の蛋白質量を100としたときの
マテリアルバランスを示す。
分のSDS−ポリアクリルアミド電気泳動のゲルのデン
シトメトリーパターンをそれぞれ図1及び図2に示し
た。
白画分および7S蛋白画分は90%以上の純度であるこ
とが明らかである。
し、11S蛋白を分画した後、α沈澱を分離するときの
pH値およびイオン強度が7S蛋白画分の純度、収量に及
ぼす影響を見た。なお、7S蛋白画分はpH4.8および
イオン強度0.125の条件で得た。
5Mおよび0.3M濃度下でのpH値を変えたときに得ら
れたα沈澱及び7S蛋白画分の蛋白質量を示した。ま
た、表2にそれらの条件で得られた7S蛋白画分での7
S蛋白の純度を示した。
値は5.0およびイオン強度は0.25の条件が最適で
あった。
素ナトリウムを用いずに実施例1に従って実施し7S蛋
白画分を精製したところ、7S蛋白の純度にそれほど大
きな差異はみられなかったが、蛋白質の収量が2/3に
低下した。
いることにより、高収率高純度で7S蛋白画分の得られ
ることが判った。
程度の純度でしか得られなかった7S蛋白画分が、本発
明法により90%以上の高純度で分取できるようになっ
た。
動のゲルのデンシトメトリーパターンである。
のゲルのデンシトメトリーパターンである。
沈殿及び7S画分の蛋白質量を示すグラフである。
殿及び7S画分の蛋白質量を示すグラフである。
Claims (2)
- 【請求項1】 7S蛋白の分画法であって、蛋白含有溶
液のイオン強度を0.2〜0.3に調整し、かつpH値を
4.8〜5.2に調整して不溶画分を除いた後、さらに
イオン強度を0.2未満およびpH値を4.6〜5.0に
調整して生ずる不溶画分を分取することを特徴とする方
法。 - 【請求項2】 蛋白が大豆蛋白由来である、請求項1記
載の方法。
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Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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JP20161191A JP2720646B2 (ja) | 1991-08-12 | 1991-08-12 | 7s蛋白の分画法 |
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-
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- 1991-08-12 JP JP20161191A patent/JP2720646B2/ja not_active Expired - Fee Related
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