JP2687396B2 - 細胞質雑種植物の製造方法 - Google Patents
細胞質雑種植物の製造方法Info
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プロトプラストからその細胞質遺伝子をナタネ等のブラ
シカ属植物由来のプロトプラストに導入し、細胞質雑種
植物を製造する方法に関するものである。
もつことが知られており、ダイコンの細胞質雄性不稔
(Cytoplasmic Male Sterility:以下「CMS」と略す)も
その有用形質の1つである。
方法が知られているが、それは戻し交配と呼ばれる方法
によるものであった。即ちダイコンを母本としてナタネ
の花粉を交配し、得られた後代を母本としてナタネ花粉
を交配する。この交配はダイコン核が消失し、ナタネ核
に置換されるまで行なわれ、最終的にダイコン細胞質と
ナタネ核をあわせもつ植物を得る方法であるが、目的と
する植物体を得るまでに長年月を必要とした。
のプロトプラストにX線を照射してその核遺伝子を消失
乃至は破壊して、通常のナタネプロトプラストと融合し
て細胞質雑種を得ることが提案されているが、目的とす
る細胞質雑種植物を得るために依然として従来の戻し交
配を行っている〔プラントセルリポーツ(Plant Cell R
eports),6,98−101,1987〕。また、戻し交配法によ
り得られたCMSを有するナタネのプロトプラストにγ線
を照射し、ヨード酢酸処理された除草剤耐性(ctr)を
有するナタネのプロトプラストを融合させる方法も提案
されている〔セオレティカルアンドアプライドジェネテ
ィクス(Theor.Appl.Genet),73,809−814,1987〕。
トからその細胞質遺伝子をナタネ等のブラシカ属植物に
導入して、細胞質雑種植物を製造した例は本発明者らの
知る限りでは報告されていない。
ラストをX線照射し、これをヨード化合物処理したブラ
シカ属植物由来のプロトプラストと融合させ、それらを
培養してコロニーを形成させ、更に不定芽を形成させる
ことにより、容易に目的とする細胞質雑種植物を得るこ
とが判った。
ラストをヨード化合物処理し、それらを融合して非対称
体細胞雑種植物を製造する方法がブラシカ属において報
告されている〔第10回「植物組織培養シンポジウム」講
演要旨集、第166頁(1987)〕が、ダイコンとブラシカ
属植物との雑種植物については記載されていない。当該
技術分野においては、植物種が異なれば同様の処理条件
を直ちには適用し得ないものであるが、本発明者らが各
種条件について種々検討した結果、今般初めて直接ダイ
コン由来のプロトプラストから、その細胞質雑種植物を
得ることに成功したものである。
ロトプラストとヨード化合物処理したブラシカ属植物由
来のプロトプラストとを融合させ、次いで、得られた融
合細胞を培養してコロニーを形成させ、該コロニーから
植物体を再生させることを特徴とする細胞質雑種植物の
製造方法に存する。
げられ、特にUK−1、コセナという2系統が好適であ
る。
タネキャベツ、ブロッコリー、カリフラワー、ハボタン
等の各栽培品種が挙げられる。
し、セルラーゼやペクチナーゼ等の細胞壁分解酵素を含
む酵素液中に25〜30℃で5〜20時間処理したのち得られ
る。
(PEG)を含む溶液中で融合するが、融合に先立ち、ダ
イコンプロトプラストにX線を30〜300kレントゲン照射
し、核遺伝子を不活化する。またブラシカ属植物のプロ
トプラストは、ヨードアセトアミド等のヨード化合物2
〜40mMで4〜35℃で5〜30分間の条件で処理し、プロト
プラストが単独で分裂できないようにしておく。
含むW5〔プラントセルリポーツ(Plant Cell Repotr
s),3,196−198,1984〕を用いた〔プラントサイエン
ス(Plant Science)、43,155−162,1986。〕この溶液
中に両方のプロトプラストを1:3ないし3:1の割合で合計
1〜4×106個/mlになるように混合し、室温で融合させ
る。この時使用するPEGはベーリンガーマンハイム社の
分子量1500のPEGが適している。
ち、同じシォーレに培養液たとえばKM液体培地〔プラン
タ(Planta),126,105−110,1975〕に2,4−ジクロロフ
ェノキシ酢酸(2,4−D)0.2〜3.0mg/、ナフタレン酢
酸(NAA)0.02〜0.5mg/、ベンジルアミノプリン(BA
P)0.1〜2.0mg/、0.4Mグルコースを含む培地を加えて
培養する。1週間から10日後に、この培養液に0.1Mサツ
カロース、2,4−D0.2〜3.0mg/、NAA0.02〜0.5mg/、
BAP0.1〜2.0mg/を含むKM培地を等量加え、更に培養を
続けると、3週間位で0.5〜1mm程度の直径のコロニーを
形成する。本発明においては、このコロニーを更に増殖
培地、たとえば0.2Mマンニトール、0.1Mサッカロース、
2,4−D0.2〜3.0mg/、BAP0.02〜0.5mg/を含むK3アガ
ロース培地〔ツァイトシュリフトフュアプフランツェン
フィジオロジー(Z.Pflanzenp hysiol.),78,453−45
5,1976〕または0.2Mマンニトール、0.1Mサッカロース、
2,4−D0.2〜3.0mg/、BAP0.02〜0.5mg/を含むMS修正
培地などに移して増殖させる。ここで増殖したコロニー
は次に0.1Mマンニトール、0.06Mサッカロース、インド
ール酢酸(IAA)0.02〜0.5mg/、ゼアチン0.5〜5.0ml/
、硫酸アデニン20〜100mg/、カゼイン加水分解物50
〜200mg/を含むMS修正培地で再分化させる。再分化培
地に置床したカルスは、早いもので14日めには不定芽を
形成する。ここではカルスを0.03Mサッカロース、IAA0.
2〜3.0mg/、ゼアチン0.5〜5.0mg/を含むK3アガロー
ス培地に20日〜30日後に植え継ぐことにより、10〜30%
のカルスから不定芽形成を誘導することができた。
ライト上に移植して発根させると、目的とする細胞質雑
種植物を得ることができる。
サッカロース、2,4−D0.5mg/、NAA0.1mg/、BAP0.1m
g/を含むNN67液体培地内できざみ、4℃の暗所に16時
間静置する。次いでそれを0.5%セルラーゼR−10、0.0
5%マセロザイムR10、0.01%ペクトリアーゼY−23、2
%セルラーゼRSを含む0.4サッカロース液に移して、30
℃で5時間放置する。
r.p.m.で10分間遠心して沈澱物を集め、それを0.6Mサッ
カロース液の上に静かにのせる。これを800r.p.m.で10
分間遠心し、プロトプラストのバンドを回収する。
し、1400レントゲン/分の線量率で約107分照射し、計1
50kレントゲンのX線を照射した。
の下胚軸を切取り、0.3M塩化カルシウムを含む水溶液中
で細かくきざむ。水溶液を除去し、2%セルラーゼR−
10、0.01%ペリトリアーゼY−23、0.4Mシュクロースを
含むNN67培地を加え、30℃で4〜5時間酵素処理したの
ち800r.p.m.で10分間遠心して、上層のプロトプラスト
画分を回収した。
5個/mlの濃度に懸濁し、これに100mMのヨードアセトア
ミド液を最終濃度が10mMになるよう加えた。これを室温
で10分間放置し、800r.p.m.で5分間遠心分離してプロ
トプラストを集め、W5液で3回洗ってヨードアセトアミ
ド処理プロトプラストを得た。
アミド処理した春播きナタネプロトプラストを2:1の割
合で、最終濃度2×106個/mlになるよう混合し、100μ
のドロップとして6cmシャーレ上に3コ〜4コのドロ
ップを置いた。これらのドロップ内で2種の細胞が沈む
まで5分間放置した。次に40%PEGを含むW5液100μを
各ドロップに静かに加え、5分間放置した。その後PEG
液を吸いとり、13%PEGを含むW5液を100μ加え、5分
間放置した。13%PEG液を吸いとり、6.7%PEGを含むW5
液100μを加えて5分間放置した。6.7%PEGを除去し
たのち、0.4Mグルコース、2,4−D1ml/、NAA0.1mg/
、BAP0.4mg/を含むKM液体培地をシャーレに加え、2
5〜27℃、100〜200luxで培養を行なった。
カロース、2,4−D1mg/NAA0.1mg/、BAP0.4mg/を含
むKM液体培地を等量加えさらに培養を続けたところ、3
〜4週間で0.5〜1mmのコロニーが形成された。このコロ
ニーを0.2Mマンニトール、0.1Mサッカロース、2,4−D1m
g/、BAP0.1mg/、アガロース0.5%含むMS修正培地に
移し、約1か月培養して2mm程度にまで増殖させた。こ
のカルスを0.2Mマンニトール、0.06Mサッカロース、IAA
0.1mg/、ゼアチン2mg/、硫酸アデニン80mg/、カ
ゼイン加水分解物100mg/、0.6%アガロースを含むMS
修正培地に置床し、不定芽形成を誘導した。カルスは約
1か月後に0.03Mサッカロース、IAA0.1mg/、ゼアチン
2mg/,アガロース0.8%を含む培地に植え継ぎ、不定
芽誘導を促した。
0.8%アガロースを含むB5培地で成育させ、その後0.1mg
/NAA、0.1Mサッカロース、0.8%アガロースを含むMS
培地で発根させた。植物体はバーミキュライトに移植
し、さらに培地に移して育てた。得られた植物の80%が
雄性不稔を示した。
法を経ることなく、短時間にブラシカ属植物に導入する
ことができる。
Claims (1)
- 【請求項1】X線照射したダイコン由来のプロトプラス
トとヨード化合物処理したブラシカ属植物由来のプロト
プラストとを融合させ、次いで得られた融合細胞を培養
してコロニーを形成させ、該コロニーから植物体を再生
させることを特徴とする細胞質雑種植物の製造方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP63043561A JP2687396B2 (ja) | 1988-02-26 | 1988-02-26 | 細胞質雑種植物の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP63043561A JP2687396B2 (ja) | 1988-02-26 | 1988-02-26 | 細胞質雑種植物の製造方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH01218530A JPH01218530A (ja) | 1989-08-31 |
JP2687396B2 true JP2687396B2 (ja) | 1997-12-08 |
Family
ID=12667159
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP63043561A Expired - Lifetime JP2687396B2 (ja) | 1988-02-26 | 1988-02-26 | 細胞質雑種植物の製造方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP2687396B2 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7767886B2 (en) | 2001-04-25 | 2010-08-03 | Institut National De La Recherche Agronomique | Protein involved in restoration of cytoplasmic male sterility to fertility and gene encoding the protein |
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WO1995009910A1 (fr) * | 1993-10-01 | 1995-04-13 | Mitsubishi Corporation | Gene identifiant un cytoplasme vegetal sterile et procede pour preparer un vegetal hybride a l'aide de celui-ci |
NL1003239C2 (nl) * | 1996-05-31 | 1997-12-03 | Bejo Zaden Bv | Cytoplasmatisch mannelijk steriele Brassica oleracea plant, alsmede werkwijze voor het verkrijgen van een dergelijke plant. |
JP4139429B2 (ja) | 2005-10-26 | 2008-08-27 | 株式会社サカタのタネ | 細胞質雑種Lactuca属植物およびその作出方法 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2530620B2 (ja) * | 1986-07-31 | 1996-09-04 | 三菱商事株式会社 | 細胞質雑種細胞の製造方法 |
-
1988
- 1988-02-26 JP JP63043561A patent/JP2687396B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Lasazlo Menezel,Plant Cell Reports,(6)2(1987)p.98−101 |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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US7767886B2 (en) | 2001-04-25 | 2010-08-03 | Institut National De La Recherche Agronomique | Protein involved in restoration of cytoplasmic male sterility to fertility and gene encoding the protein |
US8134045B2 (en) | 2001-04-25 | 2012-03-13 | Institut National De La Recherche Agronomique | Protein involved in restoration of cytoplasmic male sterility to fertility and gene encoding the protein and gene |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH01218530A (ja) | 1989-08-31 |
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