JP3305307B2 - タマネギとニンニクの雑種植物の生産方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、タマネギとニンニ
クの雑種植物の生産方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】一般に、ネギ属の植物には、タマネギや
ネギ等、有性生殖によって繁殖するいわゆる種子繁殖性
のものと、ニンニクやワケギ等、種球（球根）によって
繁殖するいわゆる栄養繁殖性のものとがある。

【０００３】そして、これら種子繁殖性の植物と栄養繁
殖性の植物とは、一般にその性質が顕著に相違するた
め、いずれか一方の遺伝形質を他方に導入できれば極め
て好都合である。

【０００４】又、このような遺伝形質の導入は、上記の
ような種子繁殖性の植物と栄養繁殖性の植物間に限ら
ず、植物の品種改良の観点からは、種子繁殖性の植物相
互間，或いは栄養繁殖性の植物相互間で行われ、さらに
は同種の植物であって品種が異なる植物相互間で行われ
ることも奨励されるべきである。

【０００５】ところで、一般にある植物種の遺伝形質を
他の植物に導入する手段の１つとして従来では交配法が
採用されている。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、この方
法によれば、ごく近縁の植物相互間にしか使用できない
こと、及び作業時間や労力が多大となること等の問題点
もさることながら、そもそも上記のような栄養繁殖性の
植物については採用すること自体が不可能であるという
致命的な問題点がある。

【０００７】本発明者等は、上述のような点に鑑み、任
意のネギ属の植物に新しい遺伝形質を導入するという観
点から、品種改良により上記のような種子繁殖性の植物
と栄養繁殖性の植物との雑種植物、特にタマネギとニン
ニクとの雑種植物を育成し、両者の遺伝形質の雑種植物
への導入を容易に行わしめることを課題としてなされた
ものである。

【０００８】

【課題を解決するための手段】そして、本発明は、細胞
融合により上記のような課題を解決せんとするものであ
る。

【０００９】すなわち、その課題解決のための手段は、
生長点由来のカルス、胚由来カルス、又はその他の器官
若しくは組織由来のカルスのうちのいずれかが融合材料
として調製されたタマネギのプロトプラストと、通常の
植物体、種球中の普通葉を置床して得られた無菌幼植物
体、生長点由来の植物体、又はカルスからの再分化植物
体のうちのいずれかが融合材料として調製されたニンニ
クのプロトプラストとを細胞融合し、次にその細胞融合
によって得られた雑種細胞を培養して雑種のカルスを形
成し、その後、得られたカルスを、雑種のカルスは再分
化するがタマネギのカルスは再分化しないような培地で
培養することにより、雑種のカルスを再分化して雑種植
物を生育させることである。

【００１０】ニンニクの融合材料としては、ニンニクの
種球中の普通葉を置床して得られた無菌幼植物体を使用
することが好ましく、タマネギの融合材料としては、タ
マネギの生長点由来のカルス又は胚由来カルスを使用す
ることが好ましい。

【００１１】生長点由来の植物体、種球中の普通葉を置
床して得られた無菌幼植物体、生長点由来のカルス、胚
由来のカルスを融合材料として使用した場合には、プロ
トプラストやカルスレベルでの増殖能力や分化能が増大
するという効果がある。

【００１２】又、生長点由来の植物体やカルスを用いた
場合、一般にウィルスに侵され易いネギ属植物をいわゆ
るウィルスフリー化することができるという利点があ
る。

【００１３】タマネギのプロトプラストとニンニクのプ
ロトプラストとを細胞融合させるために、先ずタマネギ
及びニンニクのそれぞれの融合材料を調製する。

【００１４】次に、両融合材料をプロトプラスト化し、
その両プロトプラストの精製を行う。プロトプラスト化
の酵素処理液としては、植物の種類，融合材料の種類に
応じて任意のものが使用可能である。

【００１５】次に、精製された両プロトプラストを融合
する。

【００１６】その融合処理後の所望の雑種細胞を未融合
細胞と識別するには、たとえば細胞融合後に、顕微鏡の
可視領域にて識別し、或いは蛍光顕微鏡におけるＢ領域
の励起光を上記雑種細胞や未融合細胞の混合細胞に照射
して発色の有無により雑種細胞を識別する方法がある。

【００１７】これをより詳細に説明すると、たとえば一
方の植物の融合材料としてカルスを用い、他方の植物の
融合材料として植物体の葉身部を用いた場合、カルスの
細胞の特性としては一般に細胞質リッチ（液胞が小さく
細胞質が大きいもの）なことであり、又、葉身部の細胞
の特性としては、一般に可視領域において緑色の葉緑体
顆粒が存在することである。従って、いわゆる細胞質リ
ッチで且つ緑色の葉緑体顆粒が存在するという両者の特
性を併備しているものが、所望の雑種細胞として識別さ
れるのである。

【００１８】一方、上記葉緑体顆粒は可視領域では緑色
ではあるが、特に葉緑体顆粒が少ない場合には、透明な
ものとの識別が容易ではない。従って、雑種細胞と細胞
質リッチの未融合細胞とは必ずしも容易に識別できな
い。

【００１９】しかし、上記Ｂ領域の励起光を照射すれ
ば、上記緑色の葉緑体顆粒が赤色に発色する。従って、
このＢ領域の励起光の照射により、上記雑種細胞を細胞
質リッチな未融合細胞と識別することが一層容易とな
る。尚、細胞質リッチでない葉身部の未融合細胞と雑種
細胞とは、その細胞の形態によって自ずから識別でき、
又、仮に識別できなくとも、その後の培養時の培地の選
定等によっても選抜が可能である。

【００２０】尚、このようにして融合された雑種細胞
は、識別して摘出されるのであるが、その摘出前に予め
培養しておくことにより、細胞壁が再生し、活性も増大
することから、摘出操作による細胞の損傷が抑制され
る。この観点から、細胞融合後、雑種細胞の摘出前に、
未融合細胞と融合された雑種細胞とが混合された状態で
予め培養を行うことが好ましい。

【００２１】さらに、前記雑種細胞の摘出後、保護培養
用のシャーレ内に配設されたフィルターリングの内部に
前記摘出された雑種細胞を入れ、且つそのシャーレ内の
フィルターリングの外部に、増殖能の高いタマネギのプ
ロトプラストを予め入れて増殖を行うことも可能であ
り、この場合には、フィルターリング内部の雑種細胞の
増殖が促進されることとなる。

【００２２】尚、上記のように、細胞融合後に、雑種細
胞のみを摘出せずに、雑種細胞及び２種の未融合細胞が
混合した状態のままで培養し、その後に雑種細胞のみを
選抜することも可能である。

【００２３】これをより具体的に説明すれば、一般にネ
ギ属植物においては、ニンニクのように再分化能を有す
るものは、そのカルスがコンパクトで黄色である等の特
徴を有する場合が多い。従って、このニンニクのごとき
再分化能を有するものと、タマネギのように再分化能を
有しないものとを上記のように混合培養する場合におい
て、その混合培養時の培地としてタマネキは生育するが
ニンニクは生育し得ないような培地を使用すれば、その
混合培養によってニンニクのカルスが形成されることは
あり得ない。一方、タマネギのカルスは再分化せず、従
って、コンパクトで黄色のカルスとは容易に識別され
る。

【００２４】この結果、混合培養によって生育したカル
スのうち、上記のようにコンパクトで黄色のカルスが雑
種細胞のカルスである確率が高く、よってこのような判
断のもとに所望の雑種細胞のカルスを選別することがで
きるのである。

【００２５】

【実施例】以下、本発明の実施例について説明する。

【００２６】（実施例１）本実施例は、タマネギとニン
ニクの雑種細胞の生産方法についての実施例であり、先
ず、その生産方法の操作手順について説明する。

【００２７】(1) 融合材料の調製 先ず、タマネギとニンニクのそれぞれの融合材料を調製
する。

【００２８】滅菌処理したタマネギの種子を、次に示す
改変ＢＤＳ培地〔1.25×10^-5Ｍの２，４−ジクロロフェ
ノキシ酢酸( 以下、２，４−Ｄと略す）を含む１％寒天
培地〕に置床する。

【００２９】（改変ＢＤＳ培地の組成） 成分 重量／L モル濃度 CaCl₂・2H₂O 150 mg 1.02 mM KNO₃ 2.53 mg 25.02 mM NH₄NO₃ 320.16 mg 4.0 mM NH₄H₂PO₄ 230.06 mg 2.0 mM (NH₄)₂SO₄ 134 mg 1.01 mM MgSO₄・7H₂O 247 mg 1.00 mM MnSO₄・4H₂O 13.2 mg 0.045 mM ZnSO₄・7H₂O 2.0 mg 6.95μM CuSO₄・5H₂O 0.039 mg 0.1 μM KI 0.75 mg 4.52μM CoCl₂・6H₂O 0.025 mg 0.105 μM H₃BO₃ 3.0 mg 0.049 mM Na₂MoO₄・2H₂O 0.25 mg 1.03μM NaH₂PO₄・2H₂O 172 mg 1.04μM FeSO₄・7H₂O 27.85 mg 100μM Na₂ＥＤＴＡ 37.25 mg 100μM ニコチン酸 1.0 mg 8.1μM 塩酸チアミン 10 mg 0.03 mM 塩酸ピリドキシン 1.0 mg 4.9 μM メソ−イノシトール 100 mg 1.8 mM スクロース 30 g 0.088 M カザミノ酸 0.03％

【００３０】これによって得られた葉身部生長点由来の
カルスを、改変ＢＤＳ培地〔2.5 ×10^-6Ｍの２，４−Ｄ
を含む液体培地〕で継代培養する。そして、このような
継代培養によって得られた懸濁培養カルスであって植え
継ぎ２日目のものをタマネギの融合材料として使用す
る。

【００３１】一方、ニンニクについては、その種球を滅
菌処理して種球より普通葉を取り出し、これを改変ＢＤ
Ｓ培地〔ホルモンフリーな0.2 ％ゲランガム培地〕に１
〜２週間置床する。これによって得られた無菌幼植物体
の葉身部をニンニクの融合材料として使用する。

【００３２】そして、上記のようなタマネギの種子及び
ニンニクの種球の滅菌処理方法について説明すると、 (a) 先ず中性洗剤にてブラシを用いて種子及び種球を
１個ずつ洗浄する。尚、タマネギの種子については、ガ
ーゼでくるむ。 (b) 次に、これらを15〜20分間無菌水につけて脱泡し
た後、２％のオスバン水溶液中で15分間超音波洗浄す
る。 (c) 次に、無菌水にて３回洗浄した後、70％のエタノ
ール中に30〜60秒間浸漬し、その後、再度無菌水にて３
回洗浄する。 (d) 次に、２％アンチホルミンの５％水溶液中で15分
間の超音波洗浄を２回繰り返す。 (e) その後、無菌水によって６回以上洗浄することに
よって所望の播種が得られる。

【００３３】尚、ニンニクについては、洗浄後にメスで
普通葉を摘出する。

【００３４】(2) プロトプラストの精製 次に、上記のように滅菌処理したタマネギの懸濁培養カ
ルス及びニンニクの葉身部をプロトプラスト化し、その
精製を行う。

【００３５】（イ）タマネギのプロトプラスト精製 先ず、タマネギのプロトプラストについての精製手順を
説明する。

【００３６】(a) タマネギの懸濁培養細胞塊の約0.5g
に、その培養に用いた培地上清を除去した後に、次に示
す組成の酵素処理液を約25ml添加する。

【００３７】（タマネギプロトプラスト酵素処理液） セルラーゼオノズカＲ−10（Yakult) 1.0 ％ マセロザイムＲ−10（Yakult) 0.5 ％ ドリセラーゼ（協和発酵） 0.5 ％ マンニトール 0.6 Ｍ ＭＥＳ Good's buffer (pH 5.6)

【００３８】尚、上記酵素処理液の成分中、ＭＥＳGoo
d's buffer とは、20mMのＭＥＳ・Ｈ ₂Ｏの4.265gと、５
mMのＭｇＣｌ₂・６Ｈ₂Ｏの1.017gとを蒸留水に溶解して
１Lとし、ＮａＯＨでｐＨ5.6 に調整したものである。

【００３９】ここに、ＭＥＳとは、２−（Ｎ−モルホリ
ン）エタンスルフォン酸である。

【００４０】(b) 次に、上記の様にして得られた液を
約５〜６時間振とう処理する（100rpm)。

【００４１】(c) 次に、上記のように処理した液を、
次のようなメッシュにおだやかにとおす。 i) 150 μm のメッシュ ii）90 μm のメッシュ iii）60 μm のメッシュ iv）40 μm のメッシュ v) 40 μm のメッシュ

【００４２】上記ｉ）〜ｖ）のようなメッシュに通す操
作を順次行うことによって、粒径の粗いものは除去さ
れ、必要なもののみが残存する。

【００４３】(d) 次に、上記のようにメッシュを通し
た液を、600rpmで３分間遠心分離する。

【００４４】(e) そして、遠心分離した上澄を除去
し、沈澱残渣を洗浄液に懸濁する。この洗浄液として
は、0.5 Ｍのマンニトール22.77gと、2.5 mMのＣａＣｌ
₂ 0.09g とを蒸留水にて250mL とし、ｐＨ5.6 に調製し
たものを用いる。

【００４５】(f) 次に、上記 (e)で得られた液を、10m
Lの遠沈管に入れ、600rpmで３分間遠心分離し、この操
作を３回繰り返す。

【００４６】(g) その後、遠心分離及び上澄の除去に
よりタマネギのプロトプラストが精製されることとな
る。

【００４７】（ロ）ニンニクのプロトプラスト精製 次に、ニンニクのプロトプラストの精製手順を説明す
る。

【００４８】(a) ニンニクの無菌幼植物体をメスで約
３mmに切断する。

【００４９】(b) 上記 (a)の切断によって得られた細
断片を次に示す約25mLの酵素処理液に懸濁する。

【００５０】（ニンニクプロトプラスト酵素処理液） セルラーゼオノズカＲ−10（Yakult) 2.0 ％ マセロザイムＲ−10（Yakult) 0.5 ％ ドリセラーゼ（協和発酵） 1.0 ％ マンニトール 0.6 Ｍ ＭＥＳ Good's buffer (pH 5.6)

【００５１】(c) 次に、上記の様にして得られた液に
て上記細断片を約５〜６時間振とう処理する（50rpm)。

【００５２】(d) その後は、上記タマネギのプロトプ
ラストの (c)〜 (g)と同様の操作を行ってニンニクのプ
ロトプラストが精製されることとなる。

【００５３】(3) 細胞融合 上記のようにして得られたタマネギのプロトプラストを
２×10⁵cells ／mLに調製するとともに、ニンニクプロ
トプラストのうち、グリーンプロトプラストが２×10⁵c
ells ／mLとなるようにそれぞれ調製して両プロトプラ
ストを１：１で混合する。この混合液を0.8mL とり、島
津細胞融合装置ＳＳＨ−１を用いて電気融合処理を行っ
た。融合条件は次のとおりである。

【００５４】 （細胞融合の条件） (a) 細胞泳動用高周波の周波数 １MHz (b) 細胞泳動用高周波電圧（ＶＡＣ） 40Ｖ (c) オートモード時にＶＡＣを印加する時間 10 sec (d) パルス幅 30 microsec (e) 融合用方形波パルスの印加電圧 200Ｖ (f) 電場の強さ 1.00 KV/cm (g) パルス間隔に印加する高周波電圧 35Ｖ (h) オートモード時のパルス印加間隔 ３sec (i) 印加パルス数 ３回 (j) 印加パルス電圧の減衰率 80％ (k) 最終パルス印加後の高周波印加時間 15 sec (l) 最終パルス印加後の高周波電圧減衰率 90％

【００５５】(4) 培養 次に、上記のように融合処理したプロトプラスト懸濁液
を、次に示す改変８ｐ培地（ 2.5×10^-6Ｍの２，４−Ｄ
を含む）に遠心置換を行い、この懸濁液0.5mLと40℃に
保温しておいた0.6 ％Sea Plaqueアガロースを含む0.5m
L の改変８ｐ培地（ 2.5×10^-6Ｍの２，４−Ｄを含む）
とを混合し、35mm径のシャーレに広げて固化させた。

【００５６】（改変８ｐ培地の組成） (A) 無機塩（mg／L) ＮＨ₄ＮＯ₃ ６００ ＫＮＯ₃ １９００ ＣａＣｌ₂・２Ｈ₂Ｏ ６００ ＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ ３００ ＫＨ₂ＰＯ₄ １７０ ＫＣｌ ３００ Sequestrene330Fe(登録商標） ２８ ＫＩ ０．７５ Ｈ₃ＢＯ₃ ３．００ ＭｎＳＯ₄・Ｈ₂Ｏ １０．００ ＺｎＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ ２．００ Ｎａ₂ＭｏＯ₄・２Ｈ₂Ｏ ０．２５ ＣｕＳＯ₄・５Ｈ₂Ｏ ０．０２５ ＣｏＣｌ₂・６Ｈ₂Ｏ ０．０２５ (B) 糖 グルコース ０．５Ｍ (C) ビタミン（mg／L) イノシトール １００ ニコチンアミド １ 塩酸ピリドキシン １ 塩酸チアミン １ パントテン酸Ｄ−カルシウム １ 葉酸 ０．４ パラアミノ安息香酸 ０．０２ ビオチン ０．０１ 塩化コリン １．００ リボフラビン ０．２０ アスコルビン酸 ２．００ ビタミンＡ ０．０１ ビタミンＤ₃ ０．０１ ビタミンＢ₁₂ ０．０２ (D) 有機酸（mg／L) 〔ＮＨ₄ＯＨによりｐＨが5.5 に調整されている。 〕 ピルビン酸ナトリウム ２０ クエン酸 ４０ リンゴ酸 ４０ フマル酸 ４０ (E) カゼインの加水分解物及びココナツ水 ビタミンフリーカザミノ酸 ２５０mg／L ココナツ水 ２０mL／L

【００５７】この時のプロトプラスト密度は約１×10⁵c
ells／mLであった。その後、25℃の暗室で約10日間静置
培養した。

【００５８】そして、４〜５日おきに、上記改変ＢＤＳ
培地を約0.05mL添加していった。

【００５９】尚、上記改変８ｐ培地においては、タマネ
ギプロトプラストのみが分裂し、コロニー形成するもの
で、ニンニクプロトプラストはコロニー形成まで至らな
い。

【００６０】尚、全ての培地について、ｐＨは5.6 ( Na
OH )に調整されている。又、すべての培地は、濾過除菌
されている。

【００６１】そして、静置後に、図１に示すようにアガ
ロースゲル１を切断し、そのアガロースゲルの切断によ
って得られたビード２を0.8mL 改変ＢＤＳ液体培地の入
った35mm径のシャーレに３枚入れた。

【００６２】その後、50rpm の振とう処理を25℃の暗室
で約30日間行う。

【００６３】そして、コロニーが形成された後、これを
0.2 ％ゲランガムを含む改変ＢＤＳ培地（2.5 ×10^-6Ｍ
の２，４−Ｄを含む）に移行して25℃で静置培養する。

【００６４】これによって小カルスが形成されることと
なる。

【００６５】(5) カルスから植物への育成 (a) 増殖について 上記のような培養によって得られた小カルスのうち、１
個のカルスを５〜10mLの改変ＢＤＳ液体培地入りの50mL
マイヤーに入れ、50rpm で振とうし、徐々に容器をスケ
ールアップしていった。

【００６６】(b) 再分化について 次に、上記 (a)で得られたカルスを0.2 ％ゲランガムを
含む改変ＭＳ培地（5.4 ×10^-6ＭのＮＡＡ，8.9 ×10^-6
ＭのＢＡ）で25℃，1500〜2500LUXで培養した。

【００６７】その後、約４ケ月で不定芽が形成された。

【００６８】このようにして得られたカルスについて、
アイソザイムの電気泳動バンドパターンにより同定を行
った（参考写真１及び参考写真２）。

【００６９】ＨＹ１及びＨＹ２は上記のようにして形成
されたカルスのうち、任意に摘出した２つのカルスにつ
いての結果である。又、ＧとＯはそれぞれニンニクカル
スとタマネギカルスについての結果である。

【００７０】この結果からも明らかなように、ＨＹ１及
びＨＹ２については、ＧとＯの双方のバンドの位置に対
応してバンドが認められ、従って、ＨＹ１及びＨＹ２
が、ニンニクとタマネギの雑種細胞であることが確認で
きた。

【００７１】尚、電気泳動する酵素としては、ＮＡＤＨ
脱水素酵素〔参考写真１〕、及びエステラーゼ〔参考写
真２〕を用いた。

【００７２】尚、この改変ＭＳ培地においては、タマネ
ギのカルスは不定芽を形成しない。

【００７３】(c) 雑種植物の育成 上記のような再分化によって得られた不定芽を0.2 ％ゲ
ランガムを含む次に示す改変ＭＳ培地の１／２希釈培地
（ホルモンなし）に移し、発根を促し、幼植物体を得
た。

【００７４】（改変ＭＳ培地） NH₄NO₃ 1650 mg／L KNO₃ 1900 mg／L CaCl₂・2H₂O 440 mg／L MgSO₄・7H₂O 370 mg／L KH₂PO₄ 170 mg／L KI 0.83 mg ／L H₃BO₃ 6.2 mg／L MnSO₄・4H₂O 22.3 mg／L ZnSO₄・4H₂O 8.6 mg／L Na₂MoO₄・2H₂O 0.25 mg ／L CuSO₄・5H₂O 0.025 mg／L CoCl₂・6H₂O 0.025 mg／L Na₂ＥＤＴＡ 37.3 mg／L FeSO₄・7H₂O 27.8 mg／L ミオイノシトール 100 mg／L ニコチン酸 0.5 mg／L 塩酸チアミン 0.1 mg／L 塩酸ピリドキシン 0.5 mg／L グリシン 2 mg／L スクロース 3 ％ カザミノ酸 0.03％

【００７５】この幼植物体をバーミキュライトに植え、
順化を行い、次いで培土に植え、完全な植物体を得た。

【００７６】以上のような操作手順により、タマネギと
ニンニクとの雑種植物が生産されることとなる。

【００７７】（実施例２） （イ）本実施例は、前記実施例１の操作手順において、
ニンニクのプロトプラスト調製の操作として、上記(2)
の（ロ）の操作に代えて次のような操作にて行う。

【００７８】(a) 先ず、上記実施例１と同様に、ニン
ニクの無菌幼植物体を約３mmに切断し、次にその細断片
を上記改変ＭＳ液体培地（5.4 ×10^-6Ｍのナフタレン酢
酸及び8.9 ×10^-6Ｍ×ベンジルアデニンを含む）に浸
す。

【００７９】(b) 次に、これを25℃の暗室で24時間浸
とう処理する（50rpm)。

【００８０】(c) その後、酵素処理した後、上記実施
例１と同様の操作を行う。

【００８１】尚、このニンニクプロトプラスト用の酵素
処理液としては、上記実施例１と同様のものを用いる。

【００８２】（ロ）次に、本実施例においては、上記実
施例１における(4) の培養の操作に代えて、次のような
培養の操作を行う。

【００８３】(a) 先ず、前記実施例１の(3) の操作に
て細胞融合処理を施したプロトプラスト懸濁液を改変８
ｐ培地（ 2.5×10^-6Ｍの２，４−Ｄを含む）に置換し、
予め0.2 ％ゲランガムを含む改変８ｐ培地（ 2.5×10^-6
Ｍの２，４−Ｄを含む）の入った35mm径のシャーレに広
げ、これを25℃の暗室に静置した。

【００８４】融合処理５日以内に、次のi），ii）のよ
うな特徴を持つ細胞を、径100 〜150 μm のマイクロピ
ペットにてマニュアルピックアップした。

【００８５】i) 可視領域においては、細胞質リッチで
緑色の葉緑体顆粒が存在する。

【００８６】ii) Ｂ領域の励起光下においては、葉緑
体色素の赤色顆粒が存在する。

【００８７】(b) 上記のようにしてピックアップした
融合細胞を、図２に示した保護培養系シャーレ３内の中
央に配設されたメンブランフィルターリング４内に入れ
た。

【００８８】(c) リング内は40℃に保温した0.3 ％sea
plaque agarose を含む改変８ｐ培地（ 2.5×10^-6Ｍの
２，４−Ｄを含む）を滴下しカバーした。

【００８９】(d) 保護培養系シャーレ３には、予め１
％のseaplaque agarose （ＦＭＣ Corporation）を含む
改変８ｐ培地（ 2.5×10^-6Ｍの２，４−Ｄを含む）３mL
を入れ、培地が固化しないうちにメンブランフィルター
リング４を置床しておいた。

【００９０】さらに、培地固化後、メンブランフィルタ
ーリング４外に最終濃度１×10⁵cells／mLになるように
調製した0.3 ％seaplaque agarose を含むタマネギプロ
トプラスト懸濁液〔改変８ｐ培地（ 2.5×10^-6Ｍの２，
４−Ｄを含む）〕を２〜2.5mL広げた。４〜５日おきに
メンブランフィルターリング２外に改変ＢＤＳ培地（2.
5×10^-6Ｍの２，４−Ｄを含む）を0.15mL添加した。

【００９１】(e) 次に、25℃の暗室で約10日間静置し
た。

【００９２】(f) 上記 (e)の静置の後、50rpm で30日
間振とうした。

【００９３】(g) これによって、コロニーが形成さ
れ、その形成されたコロニーを、カルス形成培地へ移行
した。

【００９４】すなわち、図３のように、３日前から置床
した増殖能の高いタマネギ寒天カルス５をナースとした
保護培養系シャーレ６内に融合細胞由来コロニー７（リ
ング内コロニー）を移行し、25℃の暗室で約14日間静置
すると、小カルスが形成された。

【００９５】以上のような培養の操作以外の操作は、上
記実施例１と同様に行う。

【００９６】

【発明の効果】叙上のように、本発明においては、ネギ
属に属する２種の異なる植物であるタマネギとニンニク
のプロトプラストの細胞融合によって、新種であるタマ
ネギとニンニクの雑種食物を育種しうるに至った。

【００９７】この結果、タマネギとニンニクのそれぞれ
の性質を具備した全く新規な雑種植物を提供することが
可能となった。

【００９８】たとえば、次のようなことが可能となる。 i) ニンニクの有効成分（アリシン等）をタマネギに導
入する。 ii）タマネギの耐寒性，耐暑性をニンニクに導入する。 iii) タマネギの種子繁殖性を栄養繁殖性のニンニクに
導入する。

【００９９】さらに、細胞融合によって雑種細胞が育成
されるため、従来の交配法によっては到底得られなかっ
た雑種植物が得られるという格別顕著な効果を有するに
至った。

【０１００】さらに、細胞融合を利用する結果、交配法
のように作業時間や労力を要することもなく、又、季節
の制約もないという利点がある。

【図面の簡単な説明】

【図１】アガロースゲルの切り込み操作を示す概略平面
図。

【図２】保護培養系の概略図で、（イ）は平面断面図、
（ロ）は側面断面図をそれぞれ示す。

【図３】カルス形成時の操作を示す概略平面図。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 Ｔｈｅｏｒ．Ａｐｐｌ．Ｇｅｎｅ ｔ．，ｖｏｌ．64［２］（1983），ｐ. 119−122 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) A01H 4/00 A01H 1/00

Claims (3)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 生長点由来のカルス、胚由来カルス、又
   はその他の器官若しくは組織由来のカルスのうちのいず
   れかが融合材料として調製されたタマネギのプロトプラ
   ストと、通常の植物体、種球中の普通葉を置床して得ら
   れた無菌幼植物体、生長点由来の植物体、又はカルスか
   らの再分化植物体のうちのいずれかが融合材料として調
   製されたニンニクのプロトプラストとを細胞融合し、次
   にその細胞融合によって得られた雑種細胞を培養して雑
   種のカルスを形成し、その後、得られたカルスを、雑種
   のカルスは再分化するがタマネギのカルスは再分化しな
   いような培地で培養することにより、雑種のカルスを再
   分化して雑種植物を生育させることを特徴とするタマネ
   ギとニンニクの雑種植物の生産方法。
2. 【請求項２】 ニンニクの融合材料が、種球中の普通葉
   を置床して得られた無菌幼植物体である請求項１記載の
   タマネギとニンニクの雑種植物の生産方法。
3. 【請求項３】 タマネギの融合材料が、生長点由来のカ
   ルス又は胚由来カルスである請求項１又は２記載のタマ
   ネギとニンニクの雑種植物の生産方法。