JP3169215B2 - タマネギとニンニクの雑種植物の生産方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、タマネギとニンニ
クの雑種植物の生産方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】一般に、ネギ属の植物には、タマネギや
ネギ等、有性生殖によって繁殖するいわゆる種子繁殖性
のものと、ニンニクやワケギ等、種球（球根）によって
繁殖するいわゆる栄養繁殖性のものとがある。

【０００３】そして、これら種子繁殖性の植物と栄養繁
殖性の植物とは、一般にその性質が顕著に相違するた
め、いずれか一方の遺伝形質を他方に導入できれば極め
て好都合である。

【０００４】又、このような遺伝形質の導入は、上記の
ような種子繁殖性の植物と栄養繁殖性の植物間に限ら
ず、植物の品種改良の観点からは、種子繁殖性の植物相
互間，或いは栄養繁殖性の植物相互間で行われ、さらに
は同種の植物であって品種が異なる植物相互間で行われ
ることも奨励されるべきである。

【０００５】ところで、一般にある植物種の遺伝形質を
他の植物に導入する手段の１つとして従来では交配法が
採用されている。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、この方
法によれば、ごく近縁の植物相互間にしか使用できない
こと、及び作業時間や労力が多大となること等の問題点
もさることながら、そもそも上記のような栄養繁殖性の
植物については採用すること自体が不可能であるという
致命的な問題点がある。

【０００７】本発明者等は、上述のような点に鑑み、任
意のネギ属の植物に新しい遺伝形質を導入するという観
点から、品種改良により上記のような種子繁殖性の植物
と栄養繁殖性の植物との雑種植物、特にタマネギとニン
ニクとの雑種植物を育成し、両者の遺伝形質の雑種植物
への導入を容易に行わしめることを課題としてなされた
ものである。

【０００８】

【課題を解決するための手段】そして、本発明は、細胞
融合により上記のような課題を解決せんとするものであ
る。

【０００９】すなわち、その課題解決のための手段は、
タマネギのカルスのプロトプラストとニンニクの葉身部
のプロトプラストとを細胞融合し、その細胞融合後に、
蛍光顕微鏡におけるＢ領域の励起光を照射して発色の有
無により、及び細胞質リッチであるか否かにより、雑種
細胞を識別して摘出し、その後、摘出された雑種細胞を
培養して生育させることにある。

【００１０】タマネギのプロトプラストとニンニクのプ
ロトプラストとを細胞融合させるために、先ずタマネギ
及びニンニクのそれぞれの融合材料を調製する。

【００１１】融合材料としては、たとえば通常の植物
体、種球中の普通葉を置床して得られた無菌幼植物体，
生長点由来の植物体，カルスからの再分化植物体，生長
点由来のカルス，胚由来カルス，若しくはその他の器
官，組織由来のカルス等の任意の材料が使用可能であ
る。

【００１２】特に、生長点由来の植物体，生長点由来の
カルス，胚由来のカルスを融合材料として使用した場合
には、プロトプラストやカルスレベルでの増殖能力や分
化能が増大するという効果がある。

【００１３】又、生長点由来の植物体やカルスを用いた
場合、一般にウィルスに侵され易いネギ属植物をいわゆ
るウィルスフリー化することができるという利点があ
る。

【００１４】次に、両融合材料をプロトプラスト化し、
その両プロトプラストの精製を行う。プロトプラスト化
の酵素処理液としては、植物の種類，融合材料の種類に
応じて任意のものが使用可能である。

【００１５】次に、精製された両プロトプラストを融合
する。

【００１６】その融合処理後の所望の雑種細胞を未融合
細胞と識別する際に、蛍光顕微鏡におけるＢ領域の励起
光を上記雑種細胞や未融合細胞の混合細胞に照射して発
色の有無により雑種細胞を識別する。

【００１７】これをより詳細に説明すると、タマネギの
融合材料としてカルスを用い、ニンニクの融合材料とし
て植物体の葉身部を用いた場合、カルスの細胞の特性と
しては一般に細胞質リッチ（液胞が小さく細胞質が大き
いもの）なことであり、又、葉身部の細胞の特性として
は、一般に可視領域において緑色の葉緑体顆粒が存在す
ることである。従って、いわゆる細胞質リッチで且つ緑
色の葉緑体顆粒が存在するという両者の特性を併備して
いるものを、所望の雑種細胞として識別することも可能
ではある。

【００１８】しかし、上記葉緑体顆粒は可視領域では緑
色ではあるが、特に葉緑体顆粒が少ない場合には、透明
なものとの識別が容易ではない。従って、雑種細胞と細
胞質リッチの未融合細胞とは必ずしも容易に識別できな
い。

【００１９】そこで、本発明においては、蛍光顕微鏡に
おけるＢ領域の励起光を照射する。

【００２０】すなわち、上記Ｂ領域の励起光を照射すれ
ば、上記緑色の葉緑体顆粒が赤色に発色する。従って、
このＢ領域の励起光の照射により、上記雑種細胞を細胞
質リッチな未融合細胞と識別することが非常に容易とな
る。

【００２１】細胞質リッチでない葉身部の未融合細胞と
雑種細胞とは、その細胞の形態によって自ずから識別で
き、又、仮に識別できなくとも、その後の培養時の培地
の選定等によっても選抜が可能である。

【００２２】尚、このようにして識別された雑種細胞
は、上記のような識別後に摘出されるのであるが、その
摘出前に予め培養しておくことにより、細胞壁が再生
し、活性も増大することから、摘出操作による細胞の損
傷が抑制される。この観点から、細胞融合後、雑種細胞
の摘出前に、未融合細胞と融合された雑種細胞とが混合
された状態で予め培養を行うことが好ましい。

【００２３】さらに、前記雑種細胞の摘出後、保護培養
用のシャーレ内に配設されたフィルターリングの内部に
前記摘出された雑種細胞を入れ、且つそのシャーレ内の
フィルターリングの外部に、増殖能の高いタマネギのプ
ロトプラストを予め入れて増殖を行うことも可能であ
り、この場合には、フィルターリング内部の雑種細胞の
増殖が促進されることとなる。

【００２４】

【実施例】以下、本発明の実施例について説明する。

【００２５】（実施例１）本実施例は、タマネギとニン
ニクの雑種細胞の生産方法についての実施例であり、先
ず、その生産方法の操作手順について説明する。

【００２６】(1) 融合材料の調製 先ず、タマネギとニンニクのそれぞれの融合材料を調製
する。

【００２７】滅菌処理したタマネギの種子を、次に示す
改変ＢＤＳ培地〔1.25×10^-5Ｍの２，４−ジクロロフェ
ノキシ酢酸( 以下、２，４−Ｄと略す）を含む１％寒天
培地〕に置床する。

【００２８】

【００２９】これによって得られた葉身部生長点由来の
カルスを、改変ＢＤＳ培地〔2.5 ×10^-6Ｍの２，４−Ｄ
を含む液体培地〕で継代培養する。そして、このような
継代培養によって得られた懸濁培養カルスであって植え
継ぎ２日目のものをタマネギの融合材料として使用す
る。

【００３０】一方、ニンニクについては、その種球を滅
菌処理して種球より普通葉を取り出し、これを改変ＢＤ
Ｓ培地〔ホルモンフリーな0.2 ％ゲランガム培地〕に１
〜２週間置床する。これによって得られた無菌幼植物体
の葉身部をニンニクの融合材料として使用する。

【００３１】そして、上記のようなタマネギの種子及び
ニンニクの種球の滅菌処理方法について説明すると、 (a) 先ず中性洗剤にてブラシを用いて種子及び種球を
１個ずつ洗浄する。尚、タマネギの種子については、ガ
ーゼでくるむ。 (b) 次に、これらを15〜20分間無菌水につけて脱泡し
た後、２％のオスバン水溶液中で15分間超音波洗浄す
る。 (c) 次に、無菌水にて３回洗浄した後、70％のエタノ
ール中に30〜60秒間浸漬し、その後、再度無菌水にて３
回洗浄する。 (d) 次に、２％アンチホルミンの５％水溶液中で15分
間の超音波洗浄を２回繰り返す。 (e) その後、無菌水によって６回以上洗浄することに
よって所望の播種が得られる。

【００３２】尚、ニンニクについては、洗浄後にメスで
普通葉を摘出する。

【００３３】(2) プロトプラストの精製 次に、上記のように滅菌処理したタマネギの懸濁培養カ
ルス及びニンニクの葉身部をプロトプラスト化し、その
精製を行う。

【００３４】（イ）タマネギのプロトプラスト精製 先ず、タマネギのプロトプラストについての精製手順を
説明する。

【００３５】(a) タマネギの懸濁培養細胞塊の約0.5g
に、その培養に用いた培地上清を除去した後に、次に示
す組成の酵素処理液を約25ml添加する。

【００３６】（タマネギプロトプラスト酵素処理液） セルラーゼオノズカＲ−10（Yakult) 1.0 ％ マセロザイムＲ−10（Yakult) 0.5 ％ ドリセラーゼ（協和発酵） 0.5 ％ マンニトール 0.6 Ｍ ＭＥＳ Good's buffer (pH 5.6)

【００３７】尚、上記酵素処理液の成分中、ＭＥＳGoo
d's buffer とは、20mMのＭＥＳ・Ｈ ₂Ｏの4.265gと、５
mMのＭｇＣｌ₂・６Ｈ₂Ｏの1.017gとを蒸留水に溶解して
１Lとし、ＮａＯＨでｐＨ5.6 に調整したものである。

【００３８】ここに、ＭＥＳとは、２−（Ｎ−モルホリ
ン）エタンスルフォン酸である。

【００３９】(b) 次に、上記の様にして得られた液を
約５〜６時間振とう処理する（100rpm)。

【００４０】(c) 次に、上記のように処理した液を、
次のようなメッシュにおだやかにとおす。 i) 150 μm のメッシュ ii）90 μm のメッシュ iii）60 μm のメッシュ iv）40 μm のメッシュ v) 40 μm のメッシュ

【００４１】上記ｉ）〜ｖ）のようなメッシュに通す操
作を順次行うことによって、粒径の粗いものは除去さ
れ、必要なもののみが残存する。

【００４２】(d) 次に、上記のようにメッシュを通し
た液を、600rpmで３分間遠心分離する。

【００４３】(e) そして、遠心分離した上澄を除去
し、沈澱残渣を洗浄液に懸濁する。この洗浄液として
は、0.5 Ｍのマンニトール22.77gと、2.5 mMのＣａＣｌ
₂ 0.09g とを蒸留水にて250mL とし、ｐＨ5.6 に調製し
たものを用いる。

【００４４】(f) 次に、上記 (e)で得られた液を、10m
Lの遠沈管に入れ、600rpmで３分間遠心分離し、この操
作を３回繰り返す。

【００４５】(g) その後、遠心分離及び上澄の除去に
よりタマネギのプロトプラストが精製されることとな
る。

【００４６】（ロ）ニンニクのプロトプラスト精製 次に、ニンニクのプロトプラストの精製手順を説明す
る。

【００４７】(a) ニンニクの無菌幼植物体をメスで約
３mmに切断する。

【００４８】(b) 上記 (a)の切断によって得られた細
断片を次に示す約25mLの酵素処理液に懸濁する。

【００４９】（ニンニクプロトプラスト酵素処理液） セルラーゼオノズカＲ−10（Yakult) 2.0 ％ マセロザイムＲ−10（Yakult) 0.5 ％ ドリセラーゼ（協和発酵） 1.0 ％ マンニトール 0.6 Ｍ ＭＥＳ Good's buffer (pH 5.6)

【００５０】(c) 次に、上記の様にして得られた液に
て上記細断片を約５〜６時間振とう処理する（50rpm)。

【００５１】(d) その後は、上記タマネギのプロトプ
ラストの (c)〜 (g)と同様の操作を行ってニンニクのプ
ロトプラストが精製されることとなる。

【００５２】(3) 細胞融合 上記のようにして得られたタマネギのプロトプラストを
２×10⁵cells ／mLに調製するとともに、ニンニクプロ
トプラストのうち、グリーンプロトプラストが２×10⁵c
ells ／mLとなるようにそれぞれ調製して両プロトプラ
ストを１：１で混合する。この混合液を0.8mL とり、島
津細胞融合装置ＳＳＨ−１を用いて電気融合処理を行っ
た。融合条件は次のとおりである。

【００５３】 （細胞融合の条件） (a) 細胞泳動用高周波の周波数 １MHz (b) 細胞泳動用高周波電圧（ＶＡＣ） 40Ｖ (c) オートモード時にＶＡＣを印加する時間 10 sec (d) パルス幅 30 microsec (e) 融合用方形波パルスの印加電圧 200Ｖ (f) 電場の強さ 1.00 KV/cm (g) パルス間隔に印加する高周波電圧 35Ｖ (h) オートモード時のパルス印加間隔 ３sec (i) 印加パルス数 ３回 (j) 印加パルス電圧の減衰率 80％ (k) 最終パルス印加後の高周波印加時間 15 sec (l) 最終パルス印加後の高周波電圧減衰率 90％

【００５４】(4) 培養 次に、上記のように融合処理したプロトプラスト懸濁液
を、次に示す改変８ｐ培地（ 2.5×10^-6Ｍの２，４−Ｄ
を含む）に遠心置換を行い、この懸濁液0.5mLと40℃に
保温しておいた0.6 ％Sea Plaqueアガロースを含む0.5m
L の改変８ｐ培地（ 2.5×10^-6Ｍの２，４−Ｄを含む）
とを混合し、35mm径のシャーレに広げて固化させた。

【００５５】 （改変８ｐ培地の組成） (A) 無機塩（mg／L) ＮＨ₄ＮＯ₃ ６００ ＫＮＯ₃ １９００ ＣａＣｌ₂・２Ｈ₂Ｏ ６００ ＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ ３００ ＫＨ₂ＰＯ₄ １７０ ＫＣｌ ３００ Sequestrene330Fe(登録商標） ２８ ＫＩ ０．７５ Ｈ₃ＢＯ₃ ３．００ ＭｎＳＯ₄・Ｈ₂Ｏ １０．００ ＺｎＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ ２．００ Ｎａ₂ＭｏＯ₄・２Ｈ₂Ｏ ０．２５ ＣｕＳＯ₄・５Ｈ₂Ｏ ０．０２５ ＣｏＣｌ₂・６Ｈ₂Ｏ ０．０２５ (B) 糖 グルコース ０．５Ｍ (C) ビタミン（mg／L) イノシトール １００ ニコチンアミド １ 塩酸ピリドキシン １ 塩酸チアミン １ パントテン酸Ｄ−カルシウム １ 葉酸 ０．４ パラアミノ安息香酸 ０．０２ ビオチン ０．０１ 塩化コリン １．００ リボフラビン ０．２０ アスコルビン酸 ２．００ ビタミンＡ ０．０１ ビタミンＤ₃ ０．０１ ビタミンＢ₁₂ ０．０２ (D) 有機酸（mg／L) 〔ＮＨ₄ＯＨによりｐＨが5.5 に調整されている。 〕 ピルビン酸ナトリウム ２０ クエン酸 ４０ リンゴ酸 ４０ フマル酸 ４０ (E) カゼインの加水分解物及びココナツ水 ビタミンフリーカザミノ酸 ２５０mg／L ココナツ水 ２０mL／L

【００５６】この時のプロトプラスト密度は約１×10⁵c
ells／mLであった。その後、25℃の暗室で約10日間静置
培養した。

【００５７】そして、４〜５日おきに、上記改変ＢＤＳ
培地を約0.05mL添加していった。

【００５８】尚、上記改変８ｐ培地においては、タマネ
ギプロトプラストのみが分裂し、コロニー形成するもの
で、ニンニクプロトプラストはコロニー形成まで至らな
い。

【００５９】尚、全ての培地について、ｐＨは5.6 ( Na
OH )に調整されている。又、すべての培地は、濾過除菌
されている。

【００６０】そして、静置後に、アガロースゲルを切断
し、そのアガロースゲルの切断によって得られたビード
を0.8mL 改変ＢＤＳ液体培地の入った35mm径のシャーレ
に３枚入れた。

【００６１】その後、50rpm の振とう処理を25℃の暗室
で約30日間行う。

【００６２】そして、コロニーが形成された後、これを
0.2 ％ゲランガムを含む改変ＢＤＳ培地（2.5 ×10^-6Ｍ
の２，４−Ｄを含む）に移行して25℃で静置培養する。

【００６３】これによって小カルスが形成されることと
なる。

【００６４】(5) カルスから植物への育成 (a) 増殖について 上記のような培養によって得られた小カルスのうち、１
個のカルスを５〜10mLの改変ＢＤＳ液体培地入りの50mL
マイヤーに入れ、50rpm で振とうし、徐々に容器をスケ
ールアップしていった。

【００６５】(b) 再分化について 次に、上記 (a)で得られたカルスを0.2 ％ゲランガムを
含む改変ＭＳ培地（5.4 ×10^-6ＭのＮＡＡ，8.9 ×10^-6
ＭのＢＡ）で25℃，1500〜2500LUXで培養した。

【００６６】その後、約４ケ月で不定芽が形成された。

【００６７】このようにして得られたカルスについて、
アイソザイムの電気泳動バンドパターンにより同定を行
った（参考写真１及び参考写真２）。

【００６８】ＨＹ１及びＨＹ２は上記のようにして形成
されたカルスのうち、任意に摘出した２つのカルスにつ
いての結果である。又、ＧとＯはそれぞれニンニクカル
スとタマネギカルスについての結果である。

【００６９】この結果からも明らかなように、ＨＹ１及
びＨＹ２については、ＧとＯの双方のバンドの位置に対
応してバンドが認められ、従って、ＨＹ１及びＨＹ２
が、ニンニクとタマネギの雑種細胞であることが確認で
きた。

【００７０】尚、電気泳動する酵素としては、ＮＡＤＨ
脱水素酵素〔参考写真１〕、及びエステラーゼ〔参考写
真２〕を用いた。

【００７１】尚、この改変ＭＳ培地においては、タマネ
ギのカルスは不定芽を形成しない。

【００７２】(c) 雑種植物の育成 上記のような再分化によって得られた不定芽を0.2 ％ゲ
ランガムを含む次に示す改変ＭＳ培地の１／２希釈培地
（ホルモンなし）に移し、発根を促し、幼植物体を得
た。

【００７３】

【００７４】この幼植物体をバーミキュライトに植え、
順化を行い、次いで培土に植え、完全な植物体を得た。

【００７５】以上のような操作手順により、タマネギと
ニンニクとの雑種植物が生産されることとなる。

【００７６】（実施例２）（イ）本実施例は、前記実施
例１の操作手順において、ニンニクのプロトプラスト調
製の操作として、上記(2) の（ロ）の操作に代えて次の
ような操作にて行う。

【００７７】(a) 先ず、上記実施例１と同様に、ニン
ニクの無菌幼植物体を約３mmに切断し、次にその細断片
を上記改変ＭＳ液体培地（5.4 ×10^-6Ｍのナフタレン酢
酸及び8.9 ×10^-6Ｍ×ベンジルアデニンを含む）に浸
す。

【００７８】(b) 次に、これを25℃の暗室で24時間浸
とう処理する（50rpm)。

【００７９】(c) その後、酵素処理した後、上記実施
例１と同様の操作を行う。

【００８０】尚、このニンニクプロトプラスト用の酵素
処理液としては、上記実施例１と同様のものを用いる。

【００８１】（ロ）次に、本実施例においては、上記実
施例１における(4) の培養の操作に代えて、次のような
培養の操作を行う。

【００８２】(a) 先ず、前記実施例１の(3) の操作に
て細胞融合処理を施したプロトプラスト懸濁液を改変８
ｐ培地（ 2.5×10^-6Ｍの２，４−Ｄを含む）に置換し、
予め0.2 ％ゲランガムを含む改変８ｐ培地（ 2.5×10^-6
Ｍの２，４−Ｄを含む）の入った35mm径のシャーレに広
げ、これを25℃の暗室に静置した。

【００８３】融合処理５日以内に、次のｉ），ii）のよ
うな特徴を持つ細胞を、径100 〜150 μm のマイクロピ
ペットにてマニュアルピックアップした。

【００８４】i) 可視領域においては、細胞質リッチで
緑色の葉緑体顆粒が存在する。

【００８５】ii) Ｂ領域の励起光下においては、葉緑
体色素の赤色顆粒が存在する。

【００８６】(b) 上記のようにしてピックアップした
融合細胞を、図１に示した保護培養系シャーレ１内の中
央に配設されたメンブランフィルターリング２内に入れ
た。

【００８７】(c) リング内は40℃に保温した0.3 ％sea
plaque agarose を含む改変８ｐ培地（ 2.5×10^-6Ｍの
２，４−Ｄを含む）を滴下しカバーした。

【００８８】(d) 保護培養系シャーレ１には、予め１
％のseaplaque agarose （ＦＭＣ Corporation）を含む
改変８ｐ培地（ 2.5×10^-6Ｍの２，４−Ｄを含む）３mL
を入れ、培地が固化しないうちにメンブランフィルター
リング２を置床しておいた。

【００８９】さらに、培地固化後、メンブランフィルタ
ーリング２外に最終濃度１×10⁵cells／mLになるように
調製した0.3 ％seaplaque agarose を含むタマネギプロ
トプラスト懸濁液〔改変８ｐ培地（ 2.5×10^-6Ｍの２，
４−Ｄを含む）〕を２〜2.5mL広げた。４〜５日おきに
メンブランフィルターリング２外に改変ＢＤＳ培地（2.
5×10^-6Ｍの２，４−Ｄを含む）を0.15mL添加した。

【００９０】(e) 次に、25℃の暗室で約10日間静置し
た。

【００９１】(f) 上記 (e)の静置の後、50rpm で30日
間振とうした。

【００９２】(g) これによって、コロニーが形成さ
れ、その形成されたコロニーを、カルス形成培地へ移行
した。

【００９３】すなわち、図２のように、３日前から置床
した増殖能の高いタマネギ寒天カルス３をナースとした
保護培養系シャーレ４内に融合細胞由来コロニー５（リ
ング内コロニー）を移行し、25℃の暗室で約14日間静置
すると、小カルスが形成された。

【００９４】以上のような培養の操作以外の操作は、上
記実施例１と同様に行う。

【００９５】

【発明の効果】叙上のように、本発明においては、ネギ
属に属する２種の異なる植物であるタマネギとニンニク
のプロトプラストの細胞融合によって、新種であるタマ
ネギとニンニクの雑種食物を育種しうるに至った。

【００９６】この結果、タマネギとニンニクのそれぞれ
の性質を具備した全く新規な雑種植物を提供することが
可能となった。

【００９７】たとえば、次のようなことが可能となる。 i) ニンニクの有効成分（アリシン等）をタマネギに導
入する。 ii）タマネギの耐寒性，耐暑性をニンニクに導入する。 iii) タマネギの種子繁殖性を栄養繁殖性のニンニクに
導入する。

【００９８】さらに、細胞融合によって雑種細胞が育成
されるため、従来の交配法によっては到底得られなかっ
た雑種植物が得られるという格別顕著な効果を有するに
至った。

【００９９】さらに、細胞融合を利用する結果、交配法
のように作業時間や労力を要することもなく、又、季節
の制約もないという利点がある。

【０１００】さらに、蛍光顕微鏡におけるＢ領域の励起
光を照射することにより、上述のように緑色の葉緑体顆
粒が赤色に発色し、雑種細胞を未融合細胞と識別するこ
とが非常に容易となる効果がある。

【図面の簡単な説明】

【図１】保護培養系の概略図で、（イ）は平面断面図、
（ロ）は側面断面図をそれぞれ示す。

【図２】カルス形成時の操作を示す概略平面図。

フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭62−275631（ＪＰ，Ａ) Ｔｈｅｏｒ．Ａｐｐｌ．Ｇｅｎｅ ｔ．，ｖｏｌ．64［２］（1983），ｐ. 119−122 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) A01H 1/00 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ)

Claims (2)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 融合材料としてそれぞれ調製され、その
   融合材料からそれぞれ精製された、タマネギのカルスの
   プロトプラストとニンニクの葉身部のプロトプラストと
   を細胞融合し、その細胞融合後に、蛍光顕微鏡における
   Ｂ領域の励起光を照射して発色の有無により、及び細胞
   質リッチであるか否かにより、雑種細胞を識別して摘出
   し、次に、摘出された雑種細胞を保護培養用のシャーレ
   内に配設されたフィルターリング内に入れ、且つ前記シ
   ャーレ内の前記フィルターリングの外部にタマネギのプ
   ロトプラストを入れて培養してカルスを形成し、その
   後、得られたカルスを、雑種のカルスは再分化するがタ
   マネギのカルスは再分化しないような培地で培養するこ
   とにより、雑種のカルスのみを選別すると同時に、雑種
   のカルスを再分化して雑種植物を生育させることを特徴
   とするタマネギとニンニクの雑種植物の生産方法。
2. 【請求項２】 細胞融合後、雑種細胞の摘出前に、未融
   合細胞と雑種細胞とが混合された状態で予め培養を行う
   請求項１記載のタマネギとニンニクの雑種植物の生産方
   法。