JP2669255B2 - ヘモグロビン類の分析方法，分析装置およびそれに用いるカラム劣化抑制液 - Google Patents
ヘモグロビン類の分析方法，分析装置およびそれに用いるカラム劣化抑制液Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ヘモグロビン類の分析
方法，分析装置およびそれに用いるカラム劣化抑制液に
係り、特に血液試料中のヘモグロビン類をクロマトグラ
フィによって分析する際に用いるに好適な技術に関す
る。
方法，分析装置およびそれに用いるカラム劣化抑制液に
係り、特に血液試料中のヘモグロビン類をクロマトグラ
フィによって分析する際に用いるに好適な技術に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】検体として採取された血液試料中のグリ
コヘモグロビンを液体クロマトグラフィによって測定
し、糖尿病等の診断に役立てることが従来から行われて
いる。
コヘモグロビンを液体クロマトグラフィによって測定
し、糖尿病等の診断に役立てることが従来から行われて
いる。
【０００３】この種の先行技術として、特開昭63−7555
8 号が知られている。この先行技術では、カルボキシル
基をイオン交換基とした分離カラムを用い、リン酸カリ
ウム緩衝液を溶離液として分離カラムに供給することに
より、試料中のグリコヘモグロビンを測定している。
8 号が知られている。この先行技術では、カルボキシル
基をイオン交換基とした分離カラムを用い、リン酸カリ
ウム緩衝液を溶離液として分離カラムに供給することに
より、試料中のグリコヘモグロビンを測定している。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】上述した先行技術のよ
うに、カルボキシル基等をイオン交換基とした分離カラ
ムを用い、リン酸系緩衝液によって血液試料をクロマト
グラフィ分離した場合には、次のような問題点を含んで
いる。すなわち、多数の血液試料を分析処理するため
に、グリコヘモグロビン等の分離操作を同じ液体クロマ
トグラフィ分析装置で繰り返すと、分析装置内の流路系
の圧力が次第に上昇し、試料成分の分離能が低下する。
このような圧力上昇と分離能の低下は、分離カラムの劣
化に起因する。
うに、カルボキシル基等をイオン交換基とした分離カラ
ムを用い、リン酸系緩衝液によって血液試料をクロマト
グラフィ分離した場合には、次のような問題点を含んで
いる。すなわち、多数の血液試料を分析処理するため
に、グリコヘモグロビン等の分離操作を同じ液体クロマ
トグラフィ分析装置で繰り返すと、分析装置内の流路系
の圧力が次第に上昇し、試料成分の分離能が低下する。
このような圧力上昇と分離能の低下は、分離カラムの劣
化に起因する。
【０００５】このため、グリコヘモグロビン等を測定す
るための液体クロマトグラフィ分析装置をある程度の時
間運転すると、劣化した分離カラムを新しいものに交換
しなければならなかった。従来は、このような分離カラ
ムの交換頻度が高かったため、操作者の作業の煩雑さを
もたらし、分離カラムの消耗数が多くなっていた。
るための液体クロマトグラフィ分析装置をある程度の時
間運転すると、劣化した分離カラムを新しいものに交換
しなければならなかった。従来は、このような分離カラ
ムの交換頻度が高かったため、操作者の作業の煩雑さを
もたらし、分離カラムの消耗数が多くなっていた。
【０００６】本発明の目的は、ヘモグロビン類をクロマ
トグラフィ分析する際の分析装置内流路系の圧力上昇を
抑制でき、高い成分分離能を長期間に亘って維持し得る
新規な手段を提供することにある。
トグラフィ分析する際の分析装置内流路系の圧力上昇を
抑制でき、高い成分分離能を長期間に亘って維持し得る
新規な手段を提供することにある。
【０００７】本発明の他の目的は、カルボキシル基又は
カルボキシアルキル基をイオン交換基として備えた分離
カラムの劣化を抑制し得る分析方法，分析装置、又はカ
ラム劣化抑制液を提供することにある。
カルボキシアルキル基をイオン交換基として備えた分離
カラムの劣化を抑制し得る分析方法，分析装置、又はカ
ラム劣化抑制液を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】上述した目的を達成する
ために、本発明では、リン酸系緩衝液を溶離液として分
離カラムに供給し試料中のヘモグロビン類を分析する際
に、Ｓ−（カルボキシアルキル）−Ｌ−システインを１
００ミリモル（ｍＭ）以下の濃度で含み、リン酸系緩衝
剤を含む液を、分離カラムに供給するようにした。この
ような液は、血液試料成分を分離するための溶離液とし
て用いられる場合もあるし、成分分離を終えた分離カラ
ムの洗浄液（再生液）として用いられる場合もある。
ために、本発明では、リン酸系緩衝液を溶離液として分
離カラムに供給し試料中のヘモグロビン類を分析する際
に、Ｓ−（カルボキシアルキル）−Ｌ−システインを１
００ミリモル（ｍＭ）以下の濃度で含み、リン酸系緩衝
剤を含む液を、分離カラムに供給するようにした。この
ような液は、血液試料成分を分離するための溶離液とし
て用いられる場合もあるし、成分分離を終えた分離カラ
ムの洗浄液（再生液）として用いられる場合もある。
【０００９】
【作用】血液中には、ヘモグロビンの類縁物質として、
ヘモグロビン，グリコヘモグロビン，ヘモグロビンＦ等
が存在することが知られている。ここでは、これらを含
む概念としてヘモグロビン類という呼称を用いる。
ヘモグロビン，グリコヘモグロビン，ヘモグロビンＦ等
が存在することが知られている。ここでは、これらを含
む概念としてヘモグロビン類という呼称を用いる。
【００１０】ヘモグロビン類を分析するために用いる液
体クロマトグラフィ用分離カラムは、基材に特定のイオ
ン交換基を結合させた粒状充填剤を充填させたものであ
る。基材としては、ポリビニルアルコール等のポリマー
やシリカが用いられる。イオン交換基としては、カルボ
キシル基やカルボキシメチル基等が用いられる。
体クロマトグラフィ用分離カラムは、基材に特定のイオ
ン交換基を結合させた粒状充填剤を充填させたものであ
る。基材としては、ポリビニルアルコール等のポリマー
やシリカが用いられる。イオン交換基としては、カルボ
キシル基やカルボキシメチル基等が用いられる。
【００１１】分離カラムによりヘモグロビン類を溶離す
る場合には、処理時間を短縮するために、複数種の溶離
液を段階的に供給する多段階溶離（一般には３段階溶
離）をするか、又は溶離液のｐＨを徐々に変化させるグ
ラジェント溶離をする。溶離液としては、リン酸カリウ
ム緩衝剤（リン酸２水素カリウムとリン酸水素２カリウ
ムの混合）を含む液を複数用いる系列や、リン酸ナトリ
ウム緩衝剤（リン酸２水素ナトリウムとリン酸水素２ナ
トリウムの混合）を含む液を複数用いる系列、あるいは
これらの両系列の内の一部を選択的に組合わせて用いる
系列が採用される。いずれにしても、溶離液としては、
リン酸系緩衝液が用いられる。
る場合には、処理時間を短縮するために、複数種の溶離
液を段階的に供給する多段階溶離（一般には３段階溶
離）をするか、又は溶離液のｐＨを徐々に変化させるグ
ラジェント溶離をする。溶離液としては、リン酸カリウ
ム緩衝剤（リン酸２水素カリウムとリン酸水素２カリウ
ムの混合）を含む液を複数用いる系列や、リン酸ナトリ
ウム緩衝剤（リン酸２水素ナトリウムとリン酸水素２ナ
トリウムの混合）を含む液を複数用いる系列、あるいは
これらの両系列の内の一部を選択的に組合わせて用いる
系列が採用される。いずれにしても、溶離液としては、
リン酸系緩衝液が用いられる。
【００１２】溶離液の液性は、好ましくは、いずれの溶
離液もｐＨ５.５〜６.５の間に調製されているが、必要
に応じてｐＨ５.５〜７.５の間に調製された複数の溶離
液が用いられる。多段階溶離の場合には、最終段の溶離
液が、１〜１０ミリモル（ｍＭ）の所定濃度となるよう
にＳ−（カルボキシアルキル）−Ｌ−システインを含む
ように調製される。また、グラジェント溶離の場合は、
全溶離行程の内の後半にＳ−（カルボキシアルキル）−
Ｌ−システインを１ミリモル（ｍＭ）以上含む溶離液が
分離カラムに供給される。いずれの場合も、ヘモグロビ
ン類の内のＡ１ｃ成分が分離カラムから溶出された後
に、１ミリモル濃度以上のＳ−（カルボキシアルキル）
−Ｌ−システインを含む液が分離カラムに供給される。
離液もｐＨ５.５〜６.５の間に調製されているが、必要
に応じてｐＨ５.５〜７.５の間に調製された複数の溶離
液が用いられる。多段階溶離の場合には、最終段の溶離
液が、１〜１０ミリモル（ｍＭ）の所定濃度となるよう
にＳ−（カルボキシアルキル）−Ｌ−システインを含む
ように調製される。また、グラジェント溶離の場合は、
全溶離行程の内の後半にＳ−（カルボキシアルキル）−
Ｌ−システインを１ミリモル（ｍＭ）以上含む溶離液が
分離カラムに供給される。いずれの場合も、ヘモグロビ
ン類の内のＡ１ｃ成分が分離カラムから溶出された後
に、１ミリモル濃度以上のＳ−（カルボキシアルキル）
−Ｌ−システインを含む液が分離カラムに供給される。
【００１３】Ｓ−(カルボキシルアルキル)−Ｌ−システ
インを含む液は、溶離液では無くカラム洗浄液であって
もよいが、この場合のカラム洗浄液は、ｐＨが５.０〜
６.５に調製されたリン酸系緩衝液からなる。このカラ
ム洗浄液は、リン酸系緩衝剤を主成分として含むことに
加えて、Ｓ−（カルボキシアルキル）−Ｌ−システイン
を５〜１００ミリモル（ｍＭ）の所定濃度で含有する。
インを含む液は、溶離液では無くカラム洗浄液であって
もよいが、この場合のカラム洗浄液は、ｐＨが５.０〜
６.５に調製されたリン酸系緩衝液からなる。このカラ
ム洗浄液は、リン酸系緩衝剤を主成分として含むことに
加えて、Ｓ−（カルボキシアルキル）−Ｌ−システイン
を５〜１００ミリモル（ｍＭ）の所定濃度で含有する。
【００１４】Ｓ−（カルボキシアルキル）−Ｌ−システ
インとしては、Ｓ−（カルボキシメチル）−Ｌ−システ
イン（以下Ｓ−ＣＭＣと略称する）を用いるのが実用的
であるが、Ｓ−（カルボキシエチル）−Ｌ−システイン
も同様の働きを得るために使用できる。説明の便宜上Ｓ
−（カルボキシアルキル）−Ｌ−システインの代表例と
してＳ−ＣＭＣを採りあげて以下に説明する。Ｓ−ＣＭ
Ｃは、溶離剤又はカラム洗浄液に単独で加えた場合で
も、分離カラムの汚染の種類によって分離カラムの劣化
抑制効果を奏し得る。しかし、Ｓ−ＣＭＣは、界面活性
剤と共存するように溶離液又はカラム洗浄液に加えた方
が、分離カラムの劣化抑制効果を大いに発揮する。
インとしては、Ｓ−（カルボキシメチル）−Ｌ−システ
イン（以下Ｓ−ＣＭＣと略称する）を用いるのが実用的
であるが、Ｓ−（カルボキシエチル）−Ｌ−システイン
も同様の働きを得るために使用できる。説明の便宜上Ｓ
−（カルボキシアルキル）−Ｌ−システインの代表例と
してＳ−ＣＭＣを採りあげて以下に説明する。Ｓ−ＣＭ
Ｃは、溶離剤又はカラム洗浄液に単独で加えた場合で
も、分離カラムの汚染の種類によって分離カラムの劣化
抑制効果を奏し得る。しかし、Ｓ−ＣＭＣは、界面活性
剤と共存するように溶離液又はカラム洗浄液に加えた方
が、分離カラムの劣化抑制効果を大いに発揮する。
【００１５】溶離液又は洗浄液中にＳ−ＣＭＣと共に含
有される界面活性剤は、蛋白質および脂質と結合しやす
い性質のものが用いられる。例えば、非イオン性界面活
性剤の１つであるポリオキシエチレン（１０）オクチル
エーテルは、主として蛋白質との結合性が強い。この種
の界面活性剤は、ローム・アンド・ハース社から商品名
トライトン（Triton）Ｘ−１００として市販されてい
る。また、両イオン性界面活性剤の１つであるドデシル
−Ｎ−ベタインは、主として脂質との結合性が強い。こ
の種の界面活性剤は、花王（株）社から商品名アンヒト
ール２４Ｂとして市販されている。
有される界面活性剤は、蛋白質および脂質と結合しやす
い性質のものが用いられる。例えば、非イオン性界面活
性剤の１つであるポリオキシエチレン（１０）オクチル
エーテルは、主として蛋白質との結合性が強い。この種
の界面活性剤は、ローム・アンド・ハース社から商品名
トライトン（Triton）Ｘ−１００として市販されてい
る。また、両イオン性界面活性剤の１つであるドデシル
−Ｎ−ベタインは、主として脂質との結合性が強い。こ
の種の界面活性剤は、花王（株）社から商品名アンヒト
ール２４Ｂとして市販されている。
【００１６】本発明を適用せずに、血液試料を液体クロ
マトグラフ装置に導入し溶離操作を繰り返すと、血液試
料中に含まれる蛋白質，脂質，多糖類，ポリ核酸等の汚
染物質が、分離カラム内の充填剤表面に吸着され、試料
導入数の増加に伴って充填剤表面に徐々に汚染物質が蓄
積される。このため、充填剤のイオン交換基の機能が次
第に損われると共に、分離カラムの入口側の圧力が次第
に上昇する。このような分離カラムの劣化の進行に伴っ
て成分分離機能も低下し、遂には分離カラムを新しいも
のに交換せざるを得なくなる。
マトグラフ装置に導入し溶離操作を繰り返すと、血液試
料中に含まれる蛋白質，脂質，多糖類，ポリ核酸等の汚
染物質が、分離カラム内の充填剤表面に吸着され、試料
導入数の増加に伴って充填剤表面に徐々に汚染物質が蓄
積される。このため、充填剤のイオン交換基の機能が次
第に損われると共に、分離カラムの入口側の圧力が次第
に上昇する。このような分離カラムの劣化の進行に伴っ
て成分分離機能も低下し、遂には分離カラムを新しいも
のに交換せざるを得なくなる。
【００１７】血液試料の液体クロマトグラフィの際に本
発明を適用して、例えば３段溶離の内の最終段階の溶離
液としてＳ−ＣＭＣおよび界面活性剤を含む液を分離カ
ラムに供給すると、分離カラムの充填剤表面に蛋白質や
脂質等の汚染物質が吸着され難くなり、溶離操作を繰り
返しても流路系の圧力上昇が極めて小さく、成分分離能
も長期間に亘り高い状態が持続される。このことは、Ｓ
−ＣＭＣが分離カラム劣化抑制剤として働くことを意味
する。
発明を適用して、例えば３段溶離の内の最終段階の溶離
液としてＳ−ＣＭＣおよび界面活性剤を含む液を分離カ
ラムに供給すると、分離カラムの充填剤表面に蛋白質や
脂質等の汚染物質が吸着され難くなり、溶離操作を繰り
返しても流路系の圧力上昇が極めて小さく、成分分離能
も長期間に亘り高い状態が持続される。このことは、Ｓ
−ＣＭＣが分離カラム劣化抑制剤として働くことを意味
する。
【００１８】しかも、Ｓ−ＣＭＣと界面活性剤を含む液
は、充填剤表面に一旦結合されてしまった汚染物質を、
充填剤表面から遊離させて除去する働きを有する。すな
わち、一旦劣化された分離カラムを使用可能状態まで回
復させる働きもある。界面活性剤を含むが、Ｓ−ＣＭＣ
を含まない液は、充填剤表面に一旦結合してしまった汚
染物質を除去させることが困難である。従って、Ｓ−Ｃ
ＭＣと界面活性剤を含む液は、劣化した分離カラムを再
生処理する場合の処理液として用いることができる。
は、充填剤表面に一旦結合されてしまった汚染物質を、
充填剤表面から遊離させて除去する働きを有する。すな
わち、一旦劣化された分離カラムを使用可能状態まで回
復させる働きもある。界面活性剤を含むが、Ｓ−ＣＭＣ
を含まない液は、充填剤表面に一旦結合してしまった汚
染物質を除去させることが困難である。従って、Ｓ−Ｃ
ＭＣと界面活性剤を含む液は、劣化した分離カラムを再
生処理する場合の処理液として用いることができる。
【００１９】Ｓ−ＣＭＣが１ミリモル（ｍＭ）濃度以上
含まれる液は、グリコヘモグロビンの成分分離を損なう
傾向にある。しかし、Ｓ−ＣＭＣが１ミリモル濃度以下
では、分離カラム劣化抑制効果が小さい。従って、Ｓ−
ＣＭＣが１ミリモル濃度以上の液は、Ａ１ａ，Ａ１ｂ，
Ａ１ｃ等のグリコヘモグロビン成分が分離カラムから溶
出された後に分離カラムに供給される。Ｓ−ＣＭＣが１
ミリモル濃度よりも更に低濃度であるならば、グリコヘ
モグロビン成分の分離への悪影響をほとんど無視できる
から、極めて低濃度のＳ−ＣＭＣを総ての溶離液に含有
させて使用することもできる。
含まれる液は、グリコヘモグロビンの成分分離を損なう
傾向にある。しかし、Ｓ−ＣＭＣが１ミリモル濃度以下
では、分離カラム劣化抑制効果が小さい。従って、Ｓ−
ＣＭＣが１ミリモル濃度以上の液は、Ａ１ａ，Ａ１ｂ，
Ａ１ｃ等のグリコヘモグロビン成分が分離カラムから溶
出された後に分離カラムに供給される。Ｓ−ＣＭＣが１
ミリモル濃度よりも更に低濃度であるならば、グリコヘ
モグロビン成分の分離への悪影響をほとんど無視できる
から、極めて低濃度のＳ−ＣＭＣを総ての溶離液に含有
させて使用することもできる。
【００２０】Ｓ−ＣＭＣが１０ミリモル濃度以上含まれ
る液は、ヘモグロビン成分（Ａｏ成分）の分離に影響を
もたらす。従って、Ｓ−ＣＭＣを溶離液に含有させる場
合は、１０ミリモル濃度以下に調製される。一方、Ｓ−
ＣＭＣをカラム洗浄液に含有させる場合は、１００ミリ
モル濃度程度まで高めることができる。この場合は成分
分離への直接的な影響を危惧しなくてもよいが、分離カ
ラムへ次の血液試料が導入される前に、Ｓ−ＣＭＣを含
まない初段溶離液でカラム洗浄液を追い出しておく必要
がある。Ｓ−ＣＭＣが高濃度であるほど、充填剤表面の
汚染物質の剥離作用が大きいので、カラム洗浄液による
処理時間が短時間で済む。
る液は、ヘモグロビン成分（Ａｏ成分）の分離に影響を
もたらす。従って、Ｓ−ＣＭＣを溶離液に含有させる場
合は、１０ミリモル濃度以下に調製される。一方、Ｓ−
ＣＭＣをカラム洗浄液に含有させる場合は、１００ミリ
モル濃度程度まで高めることができる。この場合は成分
分離への直接的な影響を危惧しなくてもよいが、分離カ
ラムへ次の血液試料が導入される前に、Ｓ−ＣＭＣを含
まない初段溶離液でカラム洗浄液を追い出しておく必要
がある。Ｓ−ＣＭＣが高濃度であるほど、充填剤表面の
汚染物質の剥離作用が大きいので、カラム洗浄液による
処理時間が短時間で済む。
【００２１】
【実施例】本発明に基づく実施例を以下に説明する。血
液中のヘモグロビン類を分析するための液体クロマトグ
ラフ分析装置の概略構成を図１に示す。この分析装置
は、３段階溶離を行うように構成されている。図１にお
いて、送液ポンプ１によって０.５〜１０ｍｌ／minの所
定流量で送液される溶離液は、定容量バルブ２７を有す
るサンプリングバルブ２および流路フィルタ３を経て、
分離カラム４に供給される。サンプリングバルブ２から
導入された血液試料は、分離カラム４によって成分分離
され、溶出された成分は紫外・可視吸光光度計からなる
検出器５によって検出される。測定されたクロマトグラ
ムは、表示装置７に表示される。また、検出器５で検出
された各成分ピークは、制御部６において演算処理さ
れ、その処理の結果が成分名、各ピークのリテンション
タイム、各ピークの成分濃度等として、表示装置７に表
示される。
液中のヘモグロビン類を分析するための液体クロマトグ
ラフ分析装置の概略構成を図１に示す。この分析装置
は、３段階溶離を行うように構成されている。図１にお
いて、送液ポンプ１によって０.５〜１０ｍｌ／minの所
定流量で送液される溶離液は、定容量バルブ２７を有す
るサンプリングバルブ２および流路フィルタ３を経て、
分離カラム４に供給される。サンプリングバルブ２から
導入された血液試料は、分離カラム４によって成分分離
され、溶出された成分は紫外・可視吸光光度計からなる
検出器５によって検出される。測定されたクロマトグラ
ムは、表示装置７に表示される。また、検出器５で検出
された各成分ピークは、制御部６において演算処理さ
れ、その処理の結果が成分名、各ピークのリテンション
タイム、各ピークの成分濃度等として、表示装置７に表
示される。
【００２２】溶離液槽１１は第１段目の溶離液を、溶離
液槽１２は第２段目の溶離液を、溶離液槽１３は最終段
の溶離液を、それぞれ収容している。また、洗浄液槽１
４は洗浄液を収容している。この洗浄液槽１４は必要に
応じて設置されるもので、日常分析操作では溶離液槽１
１〜１３だけを用いて各試料に対する溶離行程が繰り返
される場合がある。各槽１１〜１４には、それぞれ対応
する弁１６〜１９が付属されており、これらの弁の開閉
動作は、制御部６からの指示により所定のプログラムに
従ったタイミングでなされる。送液ポンプ１，サンプリ
ングバルブ２，検出器５，オートサンプラ２１等の動作
も制御部６によって所定のプログラムに従って制御され
る。
液槽１２は第２段目の溶離液を、溶離液槽１３は最終段
の溶離液を、それぞれ収容している。また、洗浄液槽１
４は洗浄液を収容している。この洗浄液槽１４は必要に
応じて設置されるもので、日常分析操作では溶離液槽１
１〜１３だけを用いて各試料に対する溶離行程が繰り返
される場合がある。各槽１１〜１４には、それぞれ対応
する弁１６〜１９が付属されており、これらの弁の開閉
動作は、制御部６からの指示により所定のプログラムに
従ったタイミングでなされる。送液ポンプ１，サンプリ
ングバルブ２，検出器５，オートサンプラ２１等の動作
も制御部６によって所定のプログラムに従って制御され
る。
【００２３】オートサンプラ２１は、取の外し可能なサ
ンプルラック２２を備えており、サンプルラック２２に
は最大１００本のサンプル容器を並べることができる。
サンプル容器としては通常の場合真空採血管がそのまま
利用される。オートサンプラ２１は、サンプル注入ポー
ト２３，ドレインポート２４，希釈容器２５，洗浄ポー
ト２６等を備えている。注入ポート２３は流路２８を介
してサンプリングバルブ２に接続されており、ドレイン
ポート２４は流路２９を介してサンプリングバルブ２に
接続されている。また、オートサンプラ２１は、Ｘ方向
およびＹ方向に移動可能な搬送機構と、この搬送機構に
よってオートサンプラ２１上を水平方向に自由に移動さ
れ、所定位置において上下動し得るピペットノズルと、
このピペットノズルに連通されたシリンジ機構を備えて
いる。
ンプルラック２２を備えており、サンプルラック２２に
は最大１００本のサンプル容器を並べることができる。
サンプル容器としては通常の場合真空採血管がそのまま
利用される。オートサンプラ２１は、サンプル注入ポー
ト２３，ドレインポート２４，希釈容器２５，洗浄ポー
ト２６等を備えている。注入ポート２３は流路２８を介
してサンプリングバルブ２に接続されており、ドレイン
ポート２４は流路２９を介してサンプリングバルブ２に
接続されている。また、オートサンプラ２１は、Ｘ方向
およびＹ方向に移動可能な搬送機構と、この搬送機構に
よってオートサンプラ２１上を水平方向に自由に移動さ
れ、所定位置において上下動し得るピペットノズルと、
このピペットノズルに連通されたシリンジ機構を備えて
いる。
【００２４】血液試料は、サンプリングバルブ２に導入
される前に、オートサンプラ２１内で前処理される。ま
ず、サンプル容器内の全血試料がピペットノズル内に一
定量採取され、希釈容器２５へ吐出される。続いてノズ
ルが洗浄ポート２６で洗浄された後、ノズルから希釈容
器２５内へ希釈液を吐出し、血液を１６０倍に希釈する
と共に、溶血する。希釈容器２５で希釈された血液試料
の一部は、ノズルによって採取され、サンプル注入ポー
ト２３からサンプリングバルブ２の定容量チューブ２７
内へ送り込まれる。定容量チューブ２７内が血液試料で
満たされたとき、サンプリングバルブ２が切り換わっ
て、一定容量の試料が溶離液の流れによって分離カラム
４の方へ運ばれる。
される前に、オートサンプラ２１内で前処理される。ま
ず、サンプル容器内の全血試料がピペットノズル内に一
定量採取され、希釈容器２５へ吐出される。続いてノズ
ルが洗浄ポート２６で洗浄された後、ノズルから希釈容
器２５内へ希釈液を吐出し、血液を１６０倍に希釈する
と共に、溶血する。希釈容器２５で希釈された血液試料
の一部は、ノズルによって採取され、サンプル注入ポー
ト２３からサンプリングバルブ２の定容量チューブ２７
内へ送り込まれる。定容量チューブ２７内が血液試料で
満たされたとき、サンプリングバルブ２が切り換わっ
て、一定容量の試料が溶離液の流れによって分離カラム
４の方へ運ばれる。
【００２５】分離カラム４には、基材にカルボキシル基
又はカルボキシアルキル基をイオン交換基として結合さ
せた粒状充填剤が充填されている。分離カラムの大きさ
は、内径が直径４〜６mm程度で、長さが３０〜８０mm程
度である。検出器５内のフローセルは、材質が石英から
なり、光路長が３〜１０mmである。検出器５として紫外
・可視光度計を用いる場合は、試料用の光として４１０
ｎｍの波長の光が検出され、参照用の光として５３０ｎ
ｍの波長の光が検出される。
又はカルボキシアルキル基をイオン交換基として結合さ
せた粒状充填剤が充填されている。分離カラムの大きさ
は、内径が直径４〜６mm程度で、長さが３０〜８０mm程
度である。検出器５内のフローセルは、材質が石英から
なり、光路長が３〜１０mmである。検出器５として紫外
・可視光度計を用いる場合は、試料用の光として４１０
ｎｍの波長の光が検出され、参照用の光として５３０ｎ
ｍの波長の光が検出される。
【００２６】試料注入時点をスタート時点とした場合、
洗浄液を用いない３段階溶離では、図２のように溶離液
が供給される。ここで、溶離液Ｂは第１段階溶離液槽１
１から供給され、溶離液Ｃは第２段階溶離液槽１２から
供給され、溶離液Ｄは第３段階溶離液槽１３から供給さ
れるものである。スタート時点では溶離液Ｂが分離カラ
ム４に供給されているが、スタートから０.６ 分後に溶
離液Ｃが供給開始され、さらにスタートから１.６ 分後
に溶離液Ｄが供給開始される。２.０ 分後には溶離液Ｂ
が供給開始され、次の試料の導入に備える。この例で
は、１つの試料の処理所要時間が３.３ 分であり、この
ような溶離液供給動作が試料導入タイミングに合わせて
繰り返される。
洗浄液を用いない３段階溶離では、図２のように溶離液
が供給される。ここで、溶離液Ｂは第１段階溶離液槽１
１から供給され、溶離液Ｃは第２段階溶離液槽１２から
供給され、溶離液Ｄは第３段階溶離液槽１３から供給さ
れるものである。スタート時点では溶離液Ｂが分離カラ
ム４に供給されているが、スタートから０.６ 分後に溶
離液Ｃが供給開始され、さらにスタートから１.６ 分後
に溶離液Ｄが供給開始される。２.０ 分後には溶離液Ｂ
が供給開始され、次の試料の導入に備える。この例で
は、１つの試料の処理所要時間が３.３ 分であり、この
ような溶離液供給動作が試料導入タイミングに合わせて
繰り返される。
【００２７】図２の例では、最終段の溶離液Ｄ内に、Ｓ
−ＣＭＣおよび界面活性剤が混合されており、試料導入
サイクルの都度分離カラム４の劣化抑制試薬によって、
分離カラム４の充填剤が清浄化される。最終段溶離液Ｄ
が導入されるタイミングは、Ａ１ｃ成分のピークが分離
カラムから溶出した後である。スタートから１.６ 分後
に、制御部６の指示により弁１８を開いて、溶離液Ｄの
供給を開始しても、その溶離液Ｄが分離カラム４から流
出し始めるのは破線で示すように約２分後である。ピー
クＡ１ａ，Ａ１ｂ，Ａ１ｃ、および不安定形Ａ１ｃ（図
示せず）等のグリコヘモグロビン成分、およびピークＦ
のヘモグロビンＦ成分は、Ｓ−ＣＭＣを含む溶離液Ｄが
分離カラム４に供給される前に、既に分離カラム４から
溶出している。しかし、ヘモグロビン成分であるピーク
Ａｏは、溶離液Ｄによって溶出される。以下に分析方法
の実施例を示す。
−ＣＭＣおよび界面活性剤が混合されており、試料導入
サイクルの都度分離カラム４の劣化抑制試薬によって、
分離カラム４の充填剤が清浄化される。最終段溶離液Ｄ
が導入されるタイミングは、Ａ１ｃ成分のピークが分離
カラムから溶出した後である。スタートから１.６ 分後
に、制御部６の指示により弁１８を開いて、溶離液Ｄの
供給を開始しても、その溶離液Ｄが分離カラム４から流
出し始めるのは破線で示すように約２分後である。ピー
クＡ１ａ，Ａ１ｂ，Ａ１ｃ、および不安定形Ａ１ｃ（図
示せず）等のグリコヘモグロビン成分、およびピークＦ
のヘモグロビンＦ成分は、Ｓ−ＣＭＣを含む溶離液Ｄが
分離カラム４に供給される前に、既に分離カラム４から
溶出している。しかし、ヘモグロビン成分であるピーク
Ａｏは、溶離液Ｄによって溶出される。以下に分析方法
の実施例を示す。
【００２８】実施例１ 図１の分析装置を用いて血液試料中のヘモグロビン類を
分析した。分離カラム４には、カルボキシメチル基をイ
オン交換基とした充填剤を充填した。充填剤の粒径は５
μｍである。ポンプ１の送液量は１.４ｍｌ／分 に設定
した。溶離液として、表１に示す３種の溶離液を用い、
図２のように段階的に溶離液を切り換えた。カラム洗浄
液は用いない。
分析した。分離カラム４には、カルボキシメチル基をイ
オン交換基とした充填剤を充填した。充填剤の粒径は５
μｍである。ポンプ１の送液量は１.４ｍｌ／分 に設定
した。溶離液として、表１に示す３種の溶離液を用い、
図２のように段階的に溶離液を切り換えた。カラム洗浄
液は用いない。
【００２９】
【表１】
【００３０】本発明を適用しない場合と適用した場合に
ついて比較した。本発明を適用しない場合の溶離液組成
は、第１段溶離液と第２段溶離液が表１のものと同じで
あるが、第３段溶離液は表１のものからＳ−ＣＭＣを欠
くだけで他は同じ組成の液を用いた。両者の系統の溶離
液で血液試料について溶離操作を１０００検体繰り返し
た。本発明を適用しない場合には、図３（Ａ）の如きク
ロマトグラムが得られ、本発明を適用した場合には、図
３（Ｂ）の如きクロマトグラムが得られた。
ついて比較した。本発明を適用しない場合の溶離液組成
は、第１段溶離液と第２段溶離液が表１のものと同じで
あるが、第３段溶離液は表１のものからＳ−ＣＭＣを欠
くだけで他は同じ組成の液を用いた。両者の系統の溶離
液で血液試料について溶離操作を１０００検体繰り返し
た。本発明を適用しない場合には、図３（Ａ）の如きク
ロマトグラムが得られ、本発明を適用した場合には、図
３（Ｂ）の如きクロマトグラムが得られた。
【００３１】本発明を適用せずに１０００検体を連続的
に処理したとき、分離カラム４の入口側の圧力が、当初
５０bar であったものが７０bar まで上昇した。図３
（Ａ）から理解されるように、Ａ１ｂピーク付近の分離
が悪く、本来存在するはずのＡ１ａピークを同定できな
い。また、Ａ１ｃピーク付近の分離も悪く、不安定形Ａ
１ｃ（Ｌ−Ａ１ｃ）のピークを同定できない。結局、４
成分しか同定されない。さらに、クロマトグラムの保持
時間が当初より若干短くなる傾向にある。
に処理したとき、分離カラム４の入口側の圧力が、当初
５０bar であったものが７０bar まで上昇した。図３
（Ａ）から理解されるように、Ａ１ｂピーク付近の分離
が悪く、本来存在するはずのＡ１ａピークを同定できな
い。また、Ａ１ｃピーク付近の分離も悪く、不安定形Ａ
１ｃ（Ｌ−Ａ１ｃ）のピークを同定できない。結局、４
成分しか同定されない。さらに、クロマトグラムの保持
時間が当初より若干短くなる傾向にある。
【００３２】本発明を適用した場合には、１０００検体
の連続処理後であっても、得られたクロマトグラムは初
期のころのものとほとんど変化していなかった。分離カ
ラムの入口側の圧力は、当初５０bar であったものが５
４bar まで上昇しただけである。図３（Ｂ）から理解さ
れるように、Ａ１ｂピークとＡ１ａピークが分離されて
おり、Ａ１ｃピークと不安定形Ａ１ｃピークが分離され
ている。つまり、６成分が同定でき、分離カラムの劣化
が極めて小さいことがわかる。クロマトグラムの保持時
間が当初のものとほとんど変わらない。本発明を適用す
れば、１万検体の連続処理でも高分離性能を維持できる
ことがわかった。
の連続処理後であっても、得られたクロマトグラムは初
期のころのものとほとんど変化していなかった。分離カ
ラムの入口側の圧力は、当初５０bar であったものが５
４bar まで上昇しただけである。図３（Ｂ）から理解さ
れるように、Ａ１ｂピークとＡ１ａピークが分離されて
おり、Ａ１ｃピークと不安定形Ａ１ｃピークが分離され
ている。つまり、６成分が同定でき、分離カラムの劣化
が極めて小さいことがわかる。クロマトグラムの保持時
間が当初のものとほとんど変わらない。本発明を適用す
れば、１万検体の連続処理でも高分離性能を維持できる
ことがわかった。
【００３３】実施例２ 図１の分析装置を用い、血液中のヘモグロビン類を分析
するために、分離カラムにはカルボキシル基をイオン交
換基とした粒径５μｍの充填剤を充填した。第１段〜第
３段の溶離液は、いずれもリン酸水素２ナトリウムとリ
ン酸２水素ナトリウムを含む緩衝液であり、溶離液のｐ
Ｈは、第１段が５.９４ ，第２段が5.82，第３段が５.
７１ である。この例では、溶離液の他にカラム洗浄液
を用いた。図１の洗浄液槽１４内に収容する洗浄液は、
溶離液と同様の主成分を含むリン酸系緩衝液であり、さ
らにＳ−ＣＭＣを２０ミリモル（ｍＭ）濃度を含み、Tr
itonＸ−１００（界面活性剤）を０.５％含有したもの
であり、ｐＨ５.６５に調製されている。
するために、分離カラムにはカルボキシル基をイオン交
換基とした粒径５μｍの充填剤を充填した。第１段〜第
３段の溶離液は、いずれもリン酸水素２ナトリウムとリ
ン酸２水素ナトリウムを含む緩衝液であり、溶離液のｐ
Ｈは、第１段が５.９４ ，第２段が5.82，第３段が５.
７１ である。この例では、溶離液の他にカラム洗浄液
を用いた。図１の洗浄液槽１４内に収容する洗浄液は、
溶離液と同様の主成分を含むリン酸系緩衝液であり、さ
らにＳ−ＣＭＣを２０ミリモル（ｍＭ）濃度を含み、Tr
itonＸ−１００（界面活性剤）を０.５％含有したもの
であり、ｐＨ５.６５に調製されている。
【００３４】Ｓ−ＣＭＣが含有されたカラム洗浄液は、
第３段溶離液の次に分離カラム４に供給され、所定時間
供給後に次の試料のためのカラム平衡を達成するよう第
１段の溶離液に切り換えられる。このように溶離液の他
にカラム洗浄液を用いる場合には、カラム洗浄液にＳ−
ＣＭＣと界面活性剤を含有させて、分離カラムの劣化を
抑制することができる。この方法によっても、繰り返し
て長期間使用される分離カラムの圧力上昇を抑制でき、
高い分離能を維持できるので、ヘモグロビン類の測定の
再現性が向上される。
第３段溶離液の次に分離カラム４に供給され、所定時間
供給後に次の試料のためのカラム平衡を達成するよう第
１段の溶離液に切り換えられる。このように溶離液の他
にカラム洗浄液を用いる場合には、カラム洗浄液にＳ−
ＣＭＣと界面活性剤を含有させて、分離カラムの劣化を
抑制することができる。この方法によっても、繰り返し
て長期間使用される分離カラムの圧力上昇を抑制でき、
高い分離能を維持できるので、ヘモグロビン類の測定の
再現性が向上される。
【００３５】実施例３ カルボキシメチル基をイオン交換基とした粒径７μｍの
充填剤を充填した分離カラムを用いた。溶離の最終段で
ある第３段溶離液に、分離カラム抑制試薬を含有させ、
カラム洗浄液は用いなかった。第１段溶離液は、ｐＨ
５.９２ のリン酸ナトリウム系緩衝液である。第２段溶
離液は、ｐＨ７.２５ のリン酸カリウム系緩衝液であ
る。第３段溶離液は、ｐＨ５.９５ のリン酸ナトリウム
系緩衝液であって、５ミリモル（ｍＭ）濃度のＳ−ＣＭ
Ｃと、０.２％ のTritonＸ−１００を含有している。こ
の実施例によっても、ヘモグロビン類を分析する場合の
分離カラムの圧力上昇が抑制される。
充填剤を充填した分離カラムを用いた。溶離の最終段で
ある第３段溶離液に、分離カラム抑制試薬を含有させ、
カラム洗浄液は用いなかった。第１段溶離液は、ｐＨ
５.９２ のリン酸ナトリウム系緩衝液である。第２段溶
離液は、ｐＨ７.２５ のリン酸カリウム系緩衝液であ
る。第３段溶離液は、ｐＨ５.９５ のリン酸ナトリウム
系緩衝液であって、５ミリモル（ｍＭ）濃度のＳ−ＣＭ
Ｃと、０.２％ のTritonＸ−１００を含有している。こ
の実施例によっても、ヘモグロビン類を分析する場合の
分離カラムの圧力上昇が抑制される。
【００３６】実施例４ 分離カラム用劣化抑制試薬の劣化された分離カラムに対
する分離能回復機能について実験した。本発明を適用せ
ずに血液試料を１０００検体処理した分離カラムは、図
３（Ａ）のように成分分離性能が劣化している。この劣
化した分離カラムに対して、表１に示す溶離液を適用し
て繰り返し血液試料中のヘモグロビン類を分析した。表
１の溶離液を適用開始してから１５サイクル目あたりか
らクロマトグラムに成分分離改善のきざしが現われはじ
め、３０サイクル目あたりから６成分の同定が可能とな
り、１００サイクル目では分離性能がほぼ元通りに回復
し図３（Ｂ）のクロマトグラムと同様のクロマトグラム
が得られた。
する分離能回復機能について実験した。本発明を適用せ
ずに血液試料を１０００検体処理した分離カラムは、図
３（Ａ）のように成分分離性能が劣化している。この劣
化した分離カラムに対して、表１に示す溶離液を適用し
て繰り返し血液試料中のヘモグロビン類を分析した。表
１の溶離液を適用開始してから１５サイクル目あたりか
らクロマトグラムに成分分離改善のきざしが現われはじ
め、３０サイクル目あたりから６成分の同定が可能とな
り、１００サイクル目では分離性能がほぼ元通りに回復
し図３（Ｂ）のクロマトグラムと同様のクロマトグラム
が得られた。
【００３７】
【発明の効果】本発明によれば、流路系の圧力上昇を抑
制して長期間ヘモグロビン類の分析を継続できるので、
分離カラムの劣化の抑制と分析結果の再現性の向上を達
成できる。
制して長期間ヘモグロビン類の分析を継続できるので、
分離カラムの劣化の抑制と分析結果の再現性の向上を達
成できる。
【図１】本発明を適用した液体クロマトグラフ分析装置
の概略構成を示す図である。
の概略構成を示す図である。
【図２】ヘモグロビン類の分析のための溶離液の供給例
を説明するための図である。
を説明するための図である。
【図３】本発明に基づく効果を説明するための図であ
る。
る。
２…サンプリングバルブ、４…分離カラム、６…制御
部、１１〜１３…溶離液槽、１４…洗浄液槽、１６〜１
９…弁、２１…オートサンプラ、２３…サンプル注入ポ
ート、２５…希釈容器。
部、１１〜１３…溶離液槽、１４…洗浄液槽、１６〜１
９…弁、２１…オートサンプラ、２３…サンプル注入ポ
ート、２５…希釈容器。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 大沼 定文 茨城県勝田市市毛882番地 株式会社 日立製作所 計測器事業部内 (72)発明者 三浦 順吉 茨城県勝田市市毛882番地 株式会社 日立製作所 計測器事業部内 (56)参考文献 特開 平１−232259（ＪＰ，Ａ)
Claims (9)
- 【請求項１】カルボキシル基又はカルボキシアルキル基
をイオン交換基として備えた分離カラムに、リン酸系緩
衝液を溶離液として供給し試料中のヘモグロビン類を分
析する方法において、Ｓ−（カルボキシアルキル）−Ｌ
−システインを含みリン酸系緩衝物質を含む液を、上記
分離カラムに供給することを特徴とするヘモグロビン類
の分析方法。 - 【請求項２】請求項第１項記載の分析方法において、上
記Ｓ−（カルボキシアルキル）−Ｌ−システインを含む
液は、溶離液の１つとして用いられ、該溶離液はｐＨ
５.５〜７.５ に調製されており、該溶離液は界面活性
剤を含むことを特徴とするヘモグロビン類の分析方法。 - 【請求項３】請求項第２項記載の分析方法において、上
記溶離液の１つとしての液は、上記分離カラムからグリ
コヘモグロビン成分が溶出された後に上記分離カラムに
供給されることを特徴とするヘモグロビン類の分析方
法。 - 【請求項４】カルボキシル基又はカルボキシアルキル基
をイオン交換基として備えた分離カラムの成分分離性能
を回復させる方法であって、カラム充填剤が汚染物質に
よって劣化されている上記分離カラムに、Ｓ−（カルボ
キシアルキル）−Ｌ−システインを含む液を供給するこ
とを特徴とするヘモグロビン類分析用の分離カラムの劣
化を回復させる方法。 - 【請求項５】劣化抑制物質としてＳ−（カルボキシアル
キル）−Ｌ−システインを１〜100ミリモル濃度で含有
し、血液試料による汚染物質を可溶化し得る界面活性剤
を０.０１〜１.０％の濃度で含有するヘモグロビン類分
析のための分離カラム用劣化抑制液。 - 【請求項６】請求項第５項記載の劣化抑制液において、
この液はリン酸系緩衝物質を主成分として含有すること
を特徴とする分離カラム用劣化抑制液。 - 【請求項７】請求項第６項記載の劣化抑制液において、
Ｓ−（カルボキシアルキル）−Ｌ−システインを１〜１
０ミリモル濃度で含有し、ｐＨが５.５〜７.５の溶離液
として調製されていることを特徴とする分離カラム用劣
化抑制液。 - 【請求項８】請求項第６項記載の劣化抑制液において、
Ｓ−（カルボキシアルキル）−Ｌ−システインを５〜１
００ミリモル濃度で含有し、ｐＨが５.０〜６.５のカラ
ム洗浄液として調製されていることを特徴とする分離カ
ラム用劣化抑制液。 - 【請求項９】リン酸系緩衝液を収容した第１および第２
の溶離液槽と、Ｓ−（カルボキシアルキル）−Ｌ−シス
テインおよび界面活性剤を含むリン酸系緩衝液を収容し
た第３の溶離液槽と、カルボキシル基又はカルボキシア
ルキル基をイオン交換基として有する分離カラムと、上
記第１，第２，第３の溶離液を上記分離カラムに供給す
る送液装置と、上記分離カラムからの溶出物を光学的に
検出する検出器を備え、上記分離カラムからグリコヘモ
グロビン成分が溶出された後に上記第３の溶離液槽から
の溶離液を上記分離カラムに供給する溶離液選択手段を
有することを特徴とするヘモグロビン類の分析装置。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4079508A JP2669255B2 (ja) | 1992-04-01 | 1992-04-01 | ヘモグロビン類の分析方法，分析装置およびそれに用いるカラム劣化抑制液 |
| US08/038,396 US5358639A (en) | 1992-04-01 | 1993-03-29 | Method of analyzing hemoglobins |
| EP93105197A EP0563865B1 (en) | 1992-04-01 | 1993-03-29 | Method and apparatus for analyzing hemoglobins and solution for suppressing column deterioration for use therein |
| DE69329403T DE69329403T2 (de) | 1992-04-01 | 1993-03-29 | Verfahren und Vorrichtung für die Analyse von Haemoglobinen und Lösung zum Unterdrücken der Verschlechterung der Kolonne zum Gebrauch darin |
| US08/257,306 US5468379A (en) | 1992-04-01 | 1994-06-09 | Solution for suppressing deterioration of a separation column for analyzing hemoglobins |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4079508A JP2669255B2 (ja) | 1992-04-01 | 1992-04-01 | ヘモグロビン類の分析方法，分析装置およびそれに用いるカラム劣化抑制液 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05281222A JPH05281222A (ja) | 1993-10-29 |
| JP2669255B2 true JP2669255B2 (ja) | 1997-10-27 |
Family
ID=13691895
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4079508A Expired - Lifetime JP2669255B2 (ja) | 1992-04-01 | 1992-04-01 | ヘモグロビン類の分析方法，分析装置およびそれに用いるカラム劣化抑制液 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5358639A (ja) |
| EP (1) | EP0563865B1 (ja) |
| JP (1) | JP2669255B2 (ja) |
| DE (1) | DE69329403T2 (ja) |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2669255B2 (ja) * | 1992-04-01 | 1997-10-27 | 株式会社日立製作所 | ヘモグロビン類の分析方法，分析装置およびそれに用いるカラム劣化抑制液 |
| JP2773569B2 (ja) * | 1992-09-17 | 1998-07-09 | 株式会社日立製作所 | 分離カラム、及び分離カラムの劣化防止方法，運搬方法，取扱方法そして分離カラム用封入液 |
| JP3346965B2 (ja) * | 1995-09-14 | 2002-11-18 | 株式会社日立製作所 | アミノ酸分析装置 |
| US5736654A (en) * | 1995-11-22 | 1998-04-07 | The Dow Chemical Company | Self-contained on-line sampling apparatus |
| US9449443B2 (en) * | 1996-04-23 | 2016-09-20 | Assa Abloy, AB | Logging access attempts to an area |
| JP3848459B2 (ja) * | 1998-04-10 | 2006-11-22 | 積水化学工業株式会社 | ヘモグロビン類の測定方法 |
| JP2000298122A (ja) * | 1999-04-14 | 2000-10-24 | Shimadzu Corp | 液体クロマトグラフ |
| JP2001349894A (ja) * | 2000-06-06 | 2001-12-21 | Sekisui Chem Co Ltd | ヘモグロビン類の測定方法 |
| JP3839641B2 (ja) * | 2000-06-20 | 2006-11-01 | 独立行政法人科学技術振興機構 | 水酸化物イオンの分離方法と分析方法並びにイオンクロマトグラフィー装置 |
| JP4478346B2 (ja) * | 2001-03-06 | 2010-06-09 | 大日本印刷株式会社 | 画像形成方法及び中間転写記録媒体 |
| JP4860367B2 (ja) * | 2006-06-23 | 2012-01-25 | 株式会社日立ハイテクノロジーズ | 液体クロマトグラフ装置 |
| JP4814204B2 (ja) * | 2007-11-29 | 2011-11-16 | 積水化学工業株式会社 | 糖化ヘモグロビンの測定方法 |
| JP2011141120A (ja) | 2008-10-07 | 2011-07-21 | Arkray Inc | 液体クロマトグラフィ装置および液体クロマトグラフィ |
| JP2010164579A (ja) * | 2010-03-23 | 2010-07-29 | Sekisui Chem Co Ltd | ヘモグロビン類の測定方法 |
| JP2016027326A (ja) | 2014-06-26 | 2016-02-18 | アークレイ株式会社 | 測定方法、測定装置および溶離液 |
| US20200393472A1 (en) * | 2018-04-18 | 2020-12-17 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Haemoglobin analysis method |
| JP7215146B2 (ja) * | 2018-12-21 | 2023-01-31 | 東ソー株式会社 | 吸光光度検出器 |
Family Cites Families (8)
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|---|---|---|---|---|
| JPS6336143A (ja) * | 1986-07-30 | 1988-02-16 | Tosoh Corp | 安定型糖化ヘモグロビン測定方法および装置 |
| JPS6375558A (ja) * | 1986-09-18 | 1988-04-05 | Shimadzu Corp | グリコヘモグロビン分析法 |
| US4810391A (en) * | 1987-11-06 | 1989-03-07 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Separation of hemoglobin A2 from hemoglobin mixture |
| US5028696A (en) * | 1988-10-28 | 1991-07-02 | Torres Anthony R | Ion exchange and separation method |
| JP2619537B2 (ja) * | 1989-09-18 | 1997-06-11 | 株式会社日立製作所 | 液体クロマトグラフの方法，その装置，そのシステム，及びその分離カラム |
| JP2516284B2 (ja) * | 1991-04-04 | 1996-07-24 | 花王株式会社 | ２剤式毛髪処理剤組成物及び毛髪処理方法 |
| JP2669255B2 (ja) * | 1992-04-01 | 1997-10-27 | 株式会社日立製作所 | ヘモグロビン類の分析方法，分析装置およびそれに用いるカラム劣化抑制液 |
| JP2773569B2 (ja) * | 1992-09-17 | 1998-07-09 | 株式会社日立製作所 | 分離カラム、及び分離カラムの劣化防止方法，運搬方法，取扱方法そして分離カラム用封入液 |
-
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