JP3420543B2 - 微量脂溶性成分分析のためのクリーンアップ方法及び装置 - Google Patents
微量脂溶性成分分析のためのクリーンアップ方法及び装置Info
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- JP3420543B2 JP3420543B2 JP33059699A JP33059699A JP3420543B2 JP 3420543 B2 JP3420543 B2 JP 3420543B2 JP 33059699 A JP33059699 A JP 33059699A JP 33059699 A JP33059699 A JP 33059699A JP 3420543 B2 JP3420543 B2 JP 3420543B2
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は微量脂溶性成分分析
のためのクリーンアップ方法及び装置に関し、特に水へ
の溶解度が１％未満の微量脂溶性成分、例えばダイオキ
シン、ＰＣＢ類の分析のためのクリーンアップ方法及び
装置に関するものである。
のためのクリーンアップ方法及び装置に関し、特に水へ
の溶解度が１％未満の微量脂溶性成分、例えばダイオキ
シン、ＰＣＢ類の分析のためのクリーンアップ方法及び
装置に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】ダイオキシン類測定方法として所謂ダイ
オキシン分析の基準法と謂われるものがあり（特開平１
１−１３３０１０）、この中で前処理クリーンアップに
於て、硫酸処理、シリカゲルカラムを用いて濃縮し、更
にアルミナカラムを用いて前処理を行い、キャピラリー
カラムに所謂ＧＣ／ＭＳ−ＳＩＭ法により測定すること
が行われている。然して、ダイオキシン類の濃度の測定
に於て、その濃度が非常に低い場合が多く、ＧＣ／ＭＳ
分析に妨害などの障害を来す場合に、標準法に於ても前
処理としてクリーンアップを行うようになっている。
オキシン分析の基準法と謂われるものがあり（特開平１
１−１３３０１０）、この中で前処理クリーンアップに
於て、硫酸処理、シリカゲルカラムを用いて濃縮し、更
にアルミナカラムを用いて前処理を行い、キャピラリー
カラムに所謂ＧＣ／ＭＳ−ＳＩＭ法により測定すること
が行われている。然して、ダイオキシン類の濃度の測定
に於て、その濃度が非常に低い場合が多く、ＧＣ／ＭＳ
分析に妨害などの障害を来す場合に、標準法に於ても前
処理としてクリーンアップを行うようになっている。
【０００３】具体的には、活性炭カラムを用いたＨＰＬ
Ｃリバースフロークリーンアップが行われ、モノオルト
ＰＣＢｓ分割、ノンオルトＰＣＢｓ分割及びダイオキシ
ン類に分割することが行われている。例えば活性炭カラ
ムＨＰＬＣクリンーアップとしては、次の如くである。 １．硫酸処理→シリカゲルカラム→活性炭カラムＨＰＬ
Ｃ １．硫酸処理→銅チップ処理（硫黄分除去が必要な場
合）→シリカゲルカラム→活性炭カラムＨＰＬＣ １．硫酸処理→硫酸銀シリカゲルカラム→活性炭カラム
ＨＰＬＣ １．多層シリカゲルカラム→活性炭カラムＨＰＬＣ 活性炭カラムＨＰＬＣで得られたダイオキシン類とノン
オルトＰＣＢｓ画分については、必要に応じて更にアル
ミナカラムによるクリーンアップを行う場合がある。
Ｃリバースフロークリーンアップが行われ、モノオルト
ＰＣＢｓ分割、ノンオルトＰＣＢｓ分割及びダイオキシ
ン類に分割することが行われている。例えば活性炭カラ
ムＨＰＬＣクリンーアップとしては、次の如くである。 １．硫酸処理→シリカゲルカラム→活性炭カラムＨＰＬ
Ｃ １．硫酸処理→銅チップ処理（硫黄分除去が必要な場
合）→シリカゲルカラム→活性炭カラムＨＰＬＣ １．硫酸処理→硫酸銀シリカゲルカラム→活性炭カラム
ＨＰＬＣ １．多層シリカゲルカラム→活性炭カラムＨＰＬＣ 活性炭カラムＨＰＬＣで得られたダイオキシン類とノン
オルトＰＣＢｓ画分については、必要に応じて更にアル
ミナカラムによるクリーンアップを行う場合がある。
【０００４】又、クリーンアップに於けるフラクション
に際して、実試料に於ては、ダイオキシン類のような目
的成分は微量成分となり、モニターすることは困難であ
り、実際の分割時間を定めることは至難である。
に際して、実試料に於ては、ダイオキシン類のような目
的成分は微量成分となり、モニターすることは困難であ
り、実際の分割時間を定めることは至難である。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】然して、吸着型充填剤
を用いてカラムクロマトグラフィーを行い、クリーンア
ップを行う際に、カラムへの吸着型充填剤の充填の仕方
が人により、業者により夫々異なり、充填剤の均一な充
填、又統一された圧力による充填は困難であり、又現実
に問題とされてこなかった。このため、カラムへの充填
剤の充填の不均一さにより、クリーンアップ精度が異な
り、再現性を得ることは困難であった。又、従来からク
リーンアップで用いられている３０μｍ以上のカラムク
ロマト用の充填剤ではピーク形状が悪く、時間を用いた
分割法では細かい分割はできなかった。（図３）
を用いてカラムクロマトグラフィーを行い、クリーンア
ップを行う際に、カラムへの吸着型充填剤の充填の仕方
が人により、業者により夫々異なり、充填剤の均一な充
填、又統一された圧力による充填は困難であり、又現実
に問題とされてこなかった。このため、カラムへの充填
剤の充填の不均一さにより、クリーンアップ精度が異な
り、再現性を得ることは困難であった。又、従来からク
リーンアップで用いられている３０μｍ以上のカラムク
ロマト用の充填剤ではピーク形状が悪く、時間を用いた
分割法では細かい分割はできなかった。（図３）
【０００６】
【課題を解決するための手段】 上記の問題点を解決す
るため、微量脂溶性成分を含有する試料をその注入部か
ら入れ、粒径３〜２０μｍの脂溶性性質を有する充填剤
が、２５Ｍｐａ以上の高圧で充填されたカラムを用いて
分割すると共に、不要成分と類似するモニタリング可能
な溶出位置確認試料を注入し、モニタリングし、該溶出
位置確認試料の溶出位置より分画をするようにしたこと
を特徴とする。
るため、微量脂溶性成分を含有する試料をその注入部か
ら入れ、粒径３〜２０μｍの脂溶性性質を有する充填剤
が、２５Ｍｐａ以上の高圧で充填されたカラムを用いて
分割すると共に、不要成分と類似するモニタリング可能
な溶出位置確認試料を注入し、モニタリングし、該溶出
位置確認試料の溶出位置より分画をするようにしたこと
を特徴とする。
【０００７】
【発明の実施の形態】 以下、図に示す実施例により本
発明を詳細に説明する。図１は本発明の実施例の概略説
明図である。１は送液部で、洗浄液１２、バッファー１
３、溶離液１４を電磁弁１５，１５により選択してポン
プ１６により注入部２に送入させるものである。又、該
液部１にはヘリウム等のパージ可能なキャリアリザーバ
ー１１を設置することが出来る。ポンプ１６は液体を高
圧下でも一定流量で流せるポンプであればその方式は問
わない。
発明を詳細に説明する。図１は本発明の実施例の概略説
明図である。１は送液部で、洗浄液１２、バッファー１
３、溶離液１４を電磁弁１５，１５により選択してポン
プ１６により注入部２に送入させるものである。又、該
液部１にはヘリウム等のパージ可能なキャリアリザーバ
ー１１を設置することが出来る。ポンプ１６は液体を高
圧下でも一定流量で流せるポンプであればその方式は問
わない。
【０００８】溶離液１４の切換としては、２台以上のポ
ンプを用い、時間に応じて各々の流量を変える方法やポ
ンプ１６前に電磁弁１５を用いて切換える前記の如き方
法がある。溶離液１４としては目的成分に変性を与えな
いものならばよく、ヘキサン、トルエン、アセトニトリ
ル、メタノール、水等がある。
ンプを用い、時間に応じて各々の流量を変える方法やポ
ンプ１６前に電磁弁１５を用いて切換える前記の如き方
法がある。溶離液１４としては目的成分に変性を与えな
いものならばよく、ヘキサン、トルエン、アセトニトリ
ル、メタノール、水等がある。
【０００９】又、輸送液にイソプロパノールやジオキサ
ンなどの水と脂の両方に混ざる液を用いることにより、
脂溶性の高い水と混和しない脂溶溶液でも両性溶媒でサ
ンドイッチすることにより、水溶性溶離液によってクリ
ーンアップすることも可能となる。
ンなどの水と脂の両方に混ざる液を用いることにより、
脂溶性の高い水と混和しない脂溶溶液でも両性溶媒でサ
ンドイッチすることにより、水溶性溶離液によってクリ
ーンアップすることも可能となる。
【００１０】又、ポンプ１６は、溶出時間がポンプ流速
によって異なり、正確なクリーンアップを行うためには
精度よく流す必要がある。このためには、空気が入って
もチェック弁の逆止めを防止する機構を有した送液部を
設けるのがよい。その逆止め機構の一例としてスプリン
グを設けて空気が混入したとしても、送液可能としたも
のを用いることは推奨される。
によって異なり、正確なクリーンアップを行うためには
精度よく流す必要がある。このためには、空気が入って
もチェック弁の逆止めを防止する機構を有した送液部を
設けるのがよい。その逆止め機構の一例としてスプリン
グを設けて空気が混入したとしても、送液可能としたも
のを用いることは推奨される。
【００１１】注入部２としては、ＨＰＬＣ分析に用いら
れるマニュアルインジェクターでもよいが、５００μＬ
以上のものがよい。自動注入を行う場合には、試料間の
クロスコンタミネーションを防止するための、例えば針
の洗浄機能を有する機構を設けることは推奨される。
れるマニュアルインジェクターでもよいが、５００μＬ
以上のものがよい。自動注入を行う場合には、試料間の
クロスコンタミネーションを防止するための、例えば針
の洗浄機能を有する機構を設けることは推奨される。
【００１２】自動注入機構としては、自動的に設定され
た試料ビンから試料を採取し、カラムに注入する機能を
有すれば良く、ＨＰＬＣに用いられるオートサンプラー
が使用できる。クリーンアップ用注入システムとして
は、１００μＬ以上の注入ができ、切換指標としての溶
出位置確認試料を実試料と同時に注入する機構を有する
方法が推奨される。その方法としては、具体的には、実
試料に直接添加する方法、実試料と切換指標試料をサン
ドイッチにして注入する方法、注入ライン上別途溶出位
置確認試料 を設け、自動的に添加していく方法などがあ
る。
た試料ビンから試料を採取し、カラムに注入する機能を
有すれば良く、ＨＰＬＣに用いられるオートサンプラー
が使用できる。クリーンアップ用注入システムとして
は、１００μＬ以上の注入ができ、切換指標としての溶
出位置確認試料を実試料と同時に注入する機構を有する
方法が推奨される。その方法としては、具体的には、実
試料に直接添加する方法、実試料と切換指標試料をサン
ドイッチにして注入する方法、注入ライン上別途溶出位
置確認試料 を設け、自動的に添加していく方法などがあ
る。
【００１３】実試料への添加では、更に添加試料を撹拌
する機能を有した方が良い。又、実試料への添加機構を
有することは、別の意味でも有効となる。添加するのを
切換指標ではなく、溶媒を添加することにより、試料ビ
ンを洗浄して注入することにより、残余試料を減らすこ
ともできる。
する機能を有した方が良い。又、実試料への添加機構を
有することは、別の意味でも有効となる。添加するのを
切換指標ではなく、溶媒を添加することにより、試料ビ
ンを洗浄して注入することにより、残余試料を減らすこ
ともできる。
【００１４】残った試料の再クリーンアップをする場合
には、サンドイッチ注入方法が有効となる。溶媒、実試
料、溶媒、溶出位置確認試料、溶媒をサンドイッチ的に
採取し、注入する方法が最も適している。実試料と溶出
位置確認試料採取間にはシリンジ洗浄機構を備えた方が
良い。注入ライン上別途溶出位置確認試料ラインを設
け、バルブ等による流路切換によって、自動的にライン
に添加していく方法も有効である。
には、サンドイッチ注入方法が有効となる。溶媒、実試
料、溶媒、溶出位置確認試料、溶媒をサンドイッチ的に
採取し、注入する方法が最も適している。実試料と溶出
位置確認試料採取間にはシリンジ洗浄機構を備えた方が
良い。注入ライン上別途溶出位置確認試料ラインを設
け、バルブ等による流路切換によって、自動的にライン
に添加していく方法も有効である。
【００１５】３は分離部で、高圧下で充填された第１カ
ラム３１を使用する。カラム材質としては、ステンレ
ス、ピーク等がある。又、該分離部３は一定温度に保た
れることが望ましく、カラム及びバルブがオーブン３２
内に設置されるのがよい。
ラム３１を使用する。カラム材質としては、ステンレ
ス、ピーク等がある。又、該分離部３は一定温度に保た
れることが望ましく、カラム及びバルブがオーブン３２
内に設置されるのがよい。
【００１６】充填剤としては、粒径３〜２０μｍの２５
Ｍｐａ以上の高圧に耐え得るシリカゲル、ガラス、チタ
ニア、グラファイトカーボンなどの担持体、若しくはそ
れらの担持体に疎水性を有するアルキル基、代表的には
ＨＰＬＣカラムに用いられるオクタデシル基などを結合
した充填剤が使用される。粒径５μｍの２５Ｍｐａ高圧
充填カラムを用いたクロマトグラムを図３と対応して示
す。（図４）
Ｍｐａ以上の高圧に耐え得るシリカゲル、ガラス、チタ
ニア、グラファイトカーボンなどの担持体、若しくはそ
れらの担持体に疎水性を有するアルキル基、代表的には
ＨＰＬＣカラムに用いられるオクタデシル基などを結合
した充填剤が使用される。粒径５μｍの２５Ｍｐａ高圧
充填カラムを用いたクロマトグラムを図３と対応して示
す。（図４）
【００１７】４は検出部で、液体クロマトグラフ用検出
器を用い、紫外可視検出器、電気化学検出器、示差屈折
率検出器等が利用される。これらの検出器の作動によ
り、溶出位置確認試料を検出し、フラクション部５とし
ての切換バルブ５１を作動させるモニターとしての役割
を有する。
器を用い、紫外可視検出器、電気化学検出器、示差屈折
率検出器等が利用される。これらの検出器の作動によ
り、溶出位置確認試料を検出し、フラクション部５とし
ての切換バルブ５１を作動させるモニターとしての役割
を有する。
【００１８】フラクション部５は検出部４からの信号に
よりモーター駆動される溶液切換バルブ５１を用い、そ
の切換口５２はドレイン５２１へ、切換口５３，５４，
５５，５６には夫々分画ライン５３１，５４１，５５
１，５６１を接続してある。溶液切換バルブ５１の切換
タイミングを測定するモニターとしての検出部４は一度
切換時間を定めれば、常時接続する必要はない。然し、
完全自動で試料注入から分離、フラクションまでを行う
場合には、溶出位置確認試料を添加することによって、
検出器４の検出をフラクション部５にフィードバックす
る機構を持たせることは推奨される。該フラクション部
５は溶出してきた液を一定時間分画できるものであれ
ば、その構成は問わない。例えばＨＰＬＣ分取に用いら
れるフラクションコレクターが用いうる。又、時間制御
が行えれば、バルブや電磁弁によって流路を切り換える
ものを使用してもよい。
よりモーター駆動される溶液切換バルブ５１を用い、そ
の切換口５２はドレイン５２１へ、切換口５３，５４，
５５，５６には夫々分画ライン５３１，５４１，５５
１，５６１を接続してある。溶液切換バルブ５１の切換
タイミングを測定するモニターとしての検出部４は一度
切換時間を定めれば、常時接続する必要はない。然し、
完全自動で試料注入から分離、フラクションまでを行う
場合には、溶出位置確認試料を添加することによって、
検出器４の検出をフラクション部５にフィードバックす
る機構を持たせることは推奨される。該フラクション部
５は溶出してきた液を一定時間分画できるものであれ
ば、その構成は問わない。例えばＨＰＬＣ分取に用いら
れるフラクションコレクターが用いうる。又、時間制御
が行えれば、バルブや電磁弁によって流路を切り換える
ものを使用してもよい。
【００１９】フラクション部５には、時間設定又は外部
信号によって溶出液を分割できる機構を持つクリーンア
ップシステムが推奨される。その一例としてのフラクシ
ョンコレクターは、設定された時間や外部からの信号等
によってクリーンアップ液を自動的に採取する機能を有
する装置である。溶媒出口に電磁弁とＸ−Ｙ軸動作機構
を持つものなどがある。電磁弁の切換によって、不要物
はドレインより廃棄され、Ｘ−Ｙ機能により溶媒出口が
採取容器上に移動される。時間や外部信号にて予め設置
された採取ビンに自動的に採取していく。
信号によって溶出液を分割できる機構を持つクリーンア
ップシステムが推奨される。その一例としてのフラクシ
ョンコレクターは、設定された時間や外部からの信号等
によってクリーンアップ液を自動的に採取する機能を有
する装置である。溶媒出口に電磁弁とＸ−Ｙ軸動作機構
を持つものなどがある。電磁弁の切換によって、不要物
はドレインより廃棄され、Ｘ−Ｙ機能により溶媒出口が
採取容器上に移動される。時間や外部信号にて予め設置
された採取ビンに自動的に採取していく。
【００２０】クリーンアップ用としては、ドレイン用電
磁弁は出口になるべく採取ロスの少ないものが推奨され
る。又、後の濃縮操作のため、採取容器としては、フラ
スコやスピッツ管に直接採取できる工夫がされており、
又、採取した液の外部からの汚染を減らす栓などをする
工夫がされているものが推奨される。
磁弁は出口になるべく採取ロスの少ないものが推奨され
る。又、後の濃縮操作のため、採取容器としては、フラ
スコやスピッツ管に直接採取できる工夫がされており、
又、採取した液の外部からの汚染を減らす栓などをする
工夫がされているものが推奨される。
【００２１】実試料に於ては、分取目的成分は微量成分
となり、モニターすることは困難で、分割時間を決め難
い。そのため不要成分類似試料を分割時間の目安として
溶出確認用に使用することで位置を確認し、時間設定で
きる。このときの溶出位置確 認試料としては、モニタリ
ングが可能な試料となる。例として、芳香族化合物が不
要成分となる場合には、溶出の遅い多環芳香族の代表で
あるアントラセン、フルオランセンなどが切換時間の指
標として用いられる。又、実試料にこの溶出位置確認試
料を添加し、モニターすることにより、分割時間をフラ
クションコレクターに自動的にフィードバックすること
も可能となる。
となり、モニターすることは困難で、分割時間を決め難
い。そのため不要成分類似試料を分割時間の目安として
溶出確認用に使用することで位置を確認し、時間設定で
きる。このときの溶出位置確 認試料としては、モニタリ
ングが可能な試料となる。例として、芳香族化合物が不
要成分となる場合には、溶出の遅い多環芳香族の代表で
あるアントラセン、フルオランセンなどが切換時間の指
標として用いられる。又、実試料にこの溶出位置確認試
料を添加し、モニターすることにより、分割時間をフラ
クションコレクターに自動的にフィードバックすること
も可能となる。
【００２２】図２に示す実施態様について説明する。該
実施態様は、一端クリーンアップした後、分離モードの
異なる第２カラムを用い、再度クリーンアップを行う構
成である。図１に示す実施態様に更に付加する構成につ
いて説明する。第１カラム３１の他に第２カラム３３を
設置する。該第１カラム３１と第２カラム３３間は、切
換バルブ６にて接続されている。例えば、第１カラム３
１は逆相分配型を使用し、第２カラム３３は吸着モード
型を使用するように、２つのカラムの分離モードを変え
るのがよい。
実施態様は、一端クリーンアップした後、分離モードの
異なる第２カラムを用い、再度クリーンアップを行う構
成である。図１に示す実施態様に更に付加する構成につ
いて説明する。第１カラム３１の他に第２カラム３３を
設置する。該第１カラム３１と第２カラム３３間は、切
換バルブ６にて接続されている。例えば、第１カラム３
１は逆相分配型を使用し、第２カラム３３は吸着モード
型を使用するように、２つのカラムの分離モードを変え
るのがよい。
【００２３】ポンプ１６により、注入部２を介して第１
カラム３１に送られた試料は、クリーンアップ後、切換
バルブ６２の態様によりモニター４１を経由してドレイ
ン部９に排出される。添加された溶出位置確認試料によ
り該溶出位置確認試料と不純物のドレイン部９への溶出
がモニター４１にて確認される。次に、切換バルブ６１
の態様に切り換えることにより、目的成分の含まれた試
料は第２カラム３３に送られる。第２カラム３３は予
め、両性溶媒で洗浄及び満たしておく。このことに於
て、第１クリーンアップ溶媒と第２クリーンアップ溶媒
が混合しなくても、両性溶媒によって混ざることにな
る。又、第１クリーンアップによって第２カラム３３を
汚染する不純物は除けるため大幅に第２カラム３３の寿
命は伸びる。
カラム３１に送られた試料は、クリーンアップ後、切換
バルブ６２の態様によりモニター４１を経由してドレイ
ン部９に排出される。添加された溶出位置確認試料によ
り該溶出位置確認試料と不純物のドレイン部９への溶出
がモニター４１にて確認される。次に、切換バルブ６１
の態様に切り換えることにより、目的成分の含まれた試
料は第２カラム３３に送られる。第２カラム３３は予
め、両性溶媒で洗浄及び満たしておく。このことに於
て、第１クリーンアップ溶媒と第２クリーンアップ溶媒
が混合しなくても、両性溶媒によって混ざることにな
る。又、第１クリーンアップによって第２カラム３３を
汚染する不純物は除けるため大幅に第２カラム３３の寿
命は伸びる。
【００２４】次に、目的試料成分は、第２カラム３３に
保持される。この際、溶媒を段階的に変更して行き分割
を得る。脂溶性の高い成分は、第２クリーンアップカラ
ムのフローを逆にし、クリーンアップできる。更に、温
度を高めることによってクリーンアップスピードを早め
られる。このため濃縮時の作業者への曝露の問題、再 現
性の問題も生じることなくできる。
保持される。この際、溶媒を段階的に変更して行き分割
を得る。脂溶性の高い成分は、第２クリーンアップカラ
ムのフローを逆にし、クリーンアップできる。更に、温
度を高めることによってクリーンアップスピードを早め
られる。このため濃縮時の作業者への曝露の問題、再 現
性の問題も生じることなくできる。
【００２５】試料への溶出位置確認試料の添加と、逆相
カラムを用いた第１クリーンアップにおいて、不純物成
分の除去がすべて可能となった。逆相溶離液条件では、
第２カラム３３にすべて濃縮され溶出しないので、添加
した成分が入ることがなく、逆相カラムで第１クリーン
アップする。クリーンアップされたことの確認用試料を
添加する。両溶媒は混ざらないので、両性溶媒で置換す
る。又、最後にクリーンアップ時間短縮のために温度を
上げ、逆流しを行う。
カラムを用いた第１クリーンアップにおいて、不純物成
分の除去がすべて可能となった。逆相溶離液条件では、
第２カラム３３にすべて濃縮され溶出しないので、添加
した成分が入ることがなく、逆相カラムで第１クリーン
アップする。クリーンアップされたことの確認用試料を
添加する。両溶媒は混ざらないので、両性溶媒で置換す
る。又、最後にクリーンアップ時間短縮のために温度を
上げ、逆流しを行う。
【００２６】
【実施例】〔実施例１〕図１に示す実施態様構成を使用
した実施例について説明する。定量用標準物質としての
サロゲートダイオキシンを添加した実試料を、ヘキサン
で１６時間以上ソックスレー抽出を行い、５００μＬ以
下に濃縮した。更にメタノールを加え、１ｍＬにメスア
ップした。予め、溶出位置確認試料によって、クリーン
アップのための分割時間を決定しておいた。ＵＶモニタ
ーにより溶出位置を確認した。１６分に溶出することが
確認できた（図５）。５００μＬ試料を注入し、この前
記時間によって確定した区間を分取した。（３０ｍＬ）
溶離液として、流量１ｍＬ／ｍｉｎでメタノール８０％
（５分ホールド）から１００％メタノールへのステップ
切換を行った。その３０ｍＬに水１０ｍＬ、ヘキサン１
０ｍＬを加えて１分間振盪後、ヘキサン部分を採取し、
更に、ヘキサン１０ｍＬを加え１分間振盪後ヘキサン部
分を採取する。合わせて約２０ｍＬのヘキサン層とす
る。更に、硫酸ナトリウムで脱水し、チッソパージ又は
ロータリーエバポレータで濃縮し、ＧＣ−ＭＳ分析を行
った。
した実施例について説明する。定量用標準物質としての
サロゲートダイオキシンを添加した実試料を、ヘキサン
で１６時間以上ソックスレー抽出を行い、５００μＬ以
下に濃縮した。更にメタノールを加え、１ｍＬにメスア
ップした。予め、溶出位置確認試料によって、クリーン
アップのための分割時間を決定しておいた。ＵＶモニタ
ーにより溶出位置を確認した。１６分に溶出することが
確認できた（図５）。５００μＬ試料を注入し、この前
記時間によって確定した区間を分取した。（３０ｍＬ）
溶離液として、流量１ｍＬ／ｍｉｎでメタノール８０％
（５分ホールド）から１００％メタノールへのステップ
切換を行った。その３０ｍＬに水１０ｍＬ、ヘキサン１
０ｍＬを加えて１分間振盪後、ヘキサン部分を採取し、
更に、ヘキサン１０ｍＬを加え１分間振盪後ヘキサン部
分を採取する。合わせて約２０ｍＬのヘキサン層とす
る。更に、硫酸ナトリウムで脱水し、チッソパージ又は
ロータリーエバポレータで濃縮し、ＧＣ−ＭＳ分析を行
った。
【００２７】従来のカラムクリーンアップでは、人為的
やカラム作成誤差によって生じる不純物混入による目的
ダイオキシンの微量分析の妨害が見られたが、この方法
では 再現良く妨害のない従来以上のクロマト効果が得ら
れた。下記のようなクロマトグラムＧＣ−ＭＳによって
得られた。 ＧＣ条件 CP-SIL88 for Dioxins 0.25mmx60m df=0.1μm 100℃(2min)→20℃／min→180℃→3℃／min→255℃(44min)（図６） 排ガスサンプルをクリーンアップ後、ＧＣ−ＭＳ分析し
たＳＩＭモードクロマトグラム選択イオン種８種。
やカラム作成誤差によって生じる不純物混入による目的
ダイオキシンの微量分析の妨害が見られたが、この方法
では 再現良く妨害のない従来以上のクロマト効果が得ら
れた。下記のようなクロマトグラムＧＣ−ＭＳによって
得られた。 ＧＣ条件 CP-SIL88 for Dioxins 0.25mmx60m df=0.1μm 100℃(2min)→20℃／min→180℃→3℃／min→255℃(44min)（図６） 排ガスサンプルをクリーンアップ後、ＧＣ−ＭＳ分析し
たＳＩＭモードクロマトグラム選択イオン種８種。
【００２８】〔実施例２〕図２に示す実施態様構成を使
用した実施例について説明する。第１クリーンアップは
逆相カラムを使用し、第２クリーンアップはグラファイ
トカーボンの充填されたカラムを使用する。定量用標準
物質としてのサロゲートダイオキシン添加実試料をヘキ
サンで１６時間以上ソックスレー抽出を行い、５００μ
Ｌ以下に濃縮した。メタノールを加え、１ｍＬにメスア
ップした。水−メタノール混合溶媒からメタノール溶媒
へのグラジエントにて、溶出位置確認試料を添加し、モ
ニターしながらクリーンアップを行った。（切換バルブ
６２の態様流路）不純物である炭化水素や多環芳香族
は、モニタリングされながらドレイン部９より分割排出
された。溶出位置確認試料の溶出が確認された後に、切
換バルブ６１の態様に切り換えた。
用した実施例について説明する。第１クリーンアップは
逆相カラムを使用し、第２クリーンアップはグラファイ
トカーボンの充填されたカラムを使用する。定量用標準
物質としてのサロゲートダイオキシン添加実試料をヘキ
サンで１６時間以上ソックスレー抽出を行い、５００μ
Ｌ以下に濃縮した。メタノールを加え、１ｍＬにメスア
ップした。水−メタノール混合溶媒からメタノール溶媒
へのグラジエントにて、溶出位置確認試料を添加し、モ
ニターしながらクリーンアップを行った。（切換バルブ
６２の態様流路）不純物である炭化水素や多環芳香族
は、モニタリングされながらドレイン部９より分割排出
された。溶出位置確認試料の溶出が確認された後に、切
換バルブ６１の態様に切り換えた。
【００２９】予め、第２カラム３３はポンプ８を介して
イソプロパノールに置換されている。（切換バルブ６３
流路図）多環芳香族などが分離され、それらの入ってい
ない部分が第２カラム３３に導入される。目的成分であ
るＰＣＢやダイオキシン類などは、第２カラム３３から
はメタノール及びイソプロパノールでは溶出されず濃縮
される。３０分間濃縮した。切換バルブ６４に切り換
え、イソプロパノールで第２カラム３３を置換した。次
に、溶出溶媒をヘキサンに換え、カラムをヘキサンに置
換。トルエン含有率を５％、３０％に変え、フラクショ
ン部５よりＰＣＢ及びコプラナーＰＣＢ分割を得た。次
に、溶出溶媒を１００％トルエンに変え逆に流して温度
を６０℃にし、 フラクション部５を経てダイオキシンを
得た。各分画を濃縮し、ＧＣ−ＭＳにて分析した。（図
７）ＰＣＢ分画部分のクロマト例を下記に示す。 （実験条件） カラム :CP-select for PCB 28/31 fused silica WCOT 10 m×0.32 mm,df=0.05μm Cat no.7479 温 度 :60℃(0.5min)→300℃、12℃／min キャリヤーガス :He,40kPa(0.4bar,5.7psi) 注入口 :Split T=250℃
イソプロパノールに置換されている。（切換バルブ６３
流路図）多環芳香族などが分離され、それらの入ってい
ない部分が第２カラム３３に導入される。目的成分であ
るＰＣＢやダイオキシン類などは、第２カラム３３から
はメタノール及びイソプロパノールでは溶出されず濃縮
される。３０分間濃縮した。切換バルブ６４に切り換
え、イソプロパノールで第２カラム３３を置換した。次
に、溶出溶媒をヘキサンに換え、カラムをヘキサンに置
換。トルエン含有率を５％、３０％に変え、フラクショ
ン部５よりＰＣＢ及びコプラナーＰＣＢ分割を得た。次
に、溶出溶媒を１００％トルエンに変え逆に流して温度
を６０℃にし、 フラクション部５を経てダイオキシンを
得た。各分画を濃縮し、ＧＣ−ＭＳにて分析した。（図
７）ＰＣＢ分画部分のクロマト例を下記に示す。 （実験条件） カラム :CP-select for PCB 28/31 fused silica WCOT 10 m×0.32 mm,df=0.05μm Cat no.7479 温 度 :60℃(0.5min)→300℃、12℃／min キャリヤーガス :He,40kPa(0.4bar,5.7psi) 注入口 :Split T=250℃
【００３０】
【発明の効果】上記の如き本発明請求項１によれば、微
量脂溶性成分を含有する試料をその注入部から入れ、粒
径３〜２０μｍの脂溶性性質を有する充填剤を、２５Ｍ
ｐａ以上の高圧で充填されたカラムを用いて分割すると
共に、不要成分と類似するモニタリング可能な溶出位置
確認試料を注入し、モニタリングし、該溶出位置確認試
料の溶出位置により分画をするようにしたので、２５Ｍ
ｐａ以上の高圧充填されたカラムは、ピーク形状が良く
溶出液の変化に応じて、微妙な溶出をコントロールでき
る。液の変化をコントロールするだけで、クリーンアッ
プ効果を簡単に変化させることができる。又、高圧充填
されたカラムにおいては、人的誤差がないので再現性が
得られる。又、ポンプ精度により時間設定だけでも分割
部分を決定できる。更に、目的成分を含む分画区間を不
純物と類似化合物の溶出時間によって決定することによ
り、正確な分割区間を決定することができる。このため
極めて精度の高いクリーンアップが達成できる。
量脂溶性成分を含有する試料をその注入部から入れ、粒
径３〜２０μｍの脂溶性性質を有する充填剤を、２５Ｍ
ｐａ以上の高圧で充填されたカラムを用いて分割すると
共に、不要成分と類似するモニタリング可能な溶出位置
確認試料を注入し、モニタリングし、該溶出位置確認試
料の溶出位置により分画をするようにしたので、２５Ｍ
ｐａ以上の高圧充填されたカラムは、ピーク形状が良く
溶出液の変化に応じて、微妙な溶出をコントロールでき
る。液の変化をコントロールするだけで、クリーンアッ
プ効果を簡単に変化させることができる。又、高圧充填
されたカラムにおいては、人的誤差がないので再現性が
得られる。又、ポンプ精度により時間設定だけでも分割
部分を決定できる。更に、目的成分を含む分画区間を不
純物と類似化合物の溶出時間によって決定することによ
り、正確な分割区間を決定することができる。このため
極めて精度の高いクリーンアップが達成できる。
【００３１】又、請求項２によれば、溶出位置確認試料
は、実試料に添加することによりその溶出をモニター
し、分画タイミングを得るようにしたので、試料への溶
出位置確認試料の添加によってフラクション部にフィー
ドバックすることにより、完全自動化が可能になる。
は、実試料に添加することによりその溶出をモニター
し、分画タイミングを得るようにしたので、試料への溶
出位置確認試料の添加によってフラクション部にフィー
ドバックすることにより、完全自動化が可能になる。
【００３２】又、請求項３によれば、目的成分を含む分
画区間を不純物と類似の溶出位置確認試料の溶出時間に
よって定めるようにしたので、フラクション部の切換タ
イミングは溶出してきた溶出位置確認試料を一旦モニタ
ーにより測定すれば常時接続しなくても時間によって切
換ができる。
画区間を不純物と類似の溶出位置確認試料の溶出時間に
よって定めるようにしたので、フラクション部の切換タ
イミングは溶出してきた溶出位置確認試料を一旦モニタ
ーにより測定すれば常時接続しなくても時間によって切
換ができる。
【００３３】又、請求項４によれば、請求項１に記載の
クリーンアップ方法に於いて分画された目的成分を含む
液を、更に、該カラムとは異なる分離モードを示し且つ
２５Ｍｐａ以上の高圧充填したカラムを用いて、極性の
異なる２種類以上の溶液の混合により、クリーンアップ
を行うので、１のカラムと他のカラムの関連的使用によ
り分離モードを変えることができ、これによるクリーン
アップ操作の容易性が確保でき、クリーンアップ精度の
向上、再現性の向上、濃縮時の作業者への暴露の回避、
クリーンアップ時間の短縮、更には、これらはオンライ
ン化で行えるため、試料の汚染が避けられ、高圧クリー
ンアップを付加できる。
クリーンアップ方法に於いて分画された目的成分を含む
液を、更に、該カラムとは異なる分離モードを示し且つ
２５Ｍｐａ以上の高圧充填したカラムを用いて、極性の
異なる２種類以上の溶液の混合により、クリーンアップ
を行うので、１のカラムと他のカラムの関連的使用によ
り分離モードを変えることができ、これによるクリーン
アップ操作の容易性が確保でき、クリーンアップ精度の
向上、再現性の向上、濃縮時の作業者への暴露の回避、
クリーンアップ時間の短縮、更には、これらはオンライ
ン化で行えるため、試料の汚染が避けられ、高圧クリー
ンアップを付加できる。
【００３４】
【図１】本発明一実施例構成説明図
【図２】本発明他実施例構成説明図
【図３】従来充填剤使用の一クロマトグラム
【図４】本発明充填剤使用の一クロマトグラム
【図５】溶出位置確認試料使用例の一クロマトグラム
【図６】本発明実施例１に得られたクロマトグラム
【図７】本発明実施例２に得られたクロマトグラム
１ 送液部
２ 注入部
３ 分離部
４ 検出部
５ フラクション部
６ 切換バルブ
９ ドレイン部
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
G01N 30/88
G01N 30/02
Claims (4)
- 【請求項１】 微量脂溶性成分を含有する試料をその注
入部から入れ、粒径３〜２０μｍの脂溶性性質を有する
充填剤が、２５Ｍｐａ以上の高圧で充填されたカラムを
用いて分割すると共に、不要成分と類似するモニタリン
グ可能な溶出位置確認試料を注入し、モニタリングし、
該溶出位置確認試料の溶出位置により分画をするように
したことを特徴とする微量脂溶性成分分析のためのクリ
ーンアップ方法。 - 【請求項２】 溶出位置確認試料を、実試料に添加する
ことによりその溶出をモニターし、分画タイミングを得
ることを特徴とする請求項１に記載の微量脂溶性成分分
析のためのクリーンアップ方法。 - 【請求項３】 目的成分を含む分画区間を不純物と類似
の溶出位置確認試料の溶出時間によって定めることを特
徴とする請求項１に記載の微量脂溶性成分分析のための
クリーンアップ方法。 - 【請求項４】 請求項１に記載のクリーンアップ方法に
於いて分画された目的成分を含む液を、更に、該カラム
とは異なる分離モードを示し且つ２５Ｍｐａ以上の高圧
充填したカラムを用いて、極性の異なる２種類以上の溶
液の混合により、クリーンアップを行うことを特徴とす
る微量脂溶性成分分析のためのクリーンアップ方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33059699A JP3420543B2 (ja) | 1999-11-19 | 1999-11-19 | 微量脂溶性成分分析のためのクリーンアップ方法及び装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33059699A JP3420543B2 (ja) | 1999-11-19 | 1999-11-19 | 微量脂溶性成分分析のためのクリーンアップ方法及び装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001147224A JP2001147224A (ja) | 2001-05-29 |
| JP3420543B2 true JP3420543B2 (ja) | 2003-06-23 |
Family
ID=18234432
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP33059699A Expired - Fee Related JP3420543B2 (ja) | 1999-11-19 | 1999-11-19 | 微量脂溶性成分分析のためのクリーンアップ方法及び装置 |
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| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3420543B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006058238A (ja) * | 2004-08-23 | 2006-03-02 | Central Res Inst Of Electric Power Ind | 有機化学成分分離方法並びに装置 |
| CN110146606B (zh) * | 2019-05-06 | 2020-07-07 | 北京水木滨华科技有限公司 | 一种高压液体组分的预处理方法 |
-
1999
- 1999-11-19 JP JP33059699A patent/JP3420543B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2001147224A (ja) | 2001-05-29 |
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