JP2651438B2 - 酵素標識抗体感作ラテックス及びそれを用いた酵素免疫測定法 - Google Patents
酵素標識抗体感作ラテックス及びそれを用いた酵素免疫測定法Info
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- JP2651438B2 JP2651438B2 JP62123907A JP12390787A JP2651438B2 JP 2651438 B2 JP2651438 B2 JP 2651438B2 JP 62123907 A JP62123907 A JP 62123907A JP 12390787 A JP12390787 A JP 12390787A JP 2651438 B2 JP2651438 B2 JP 2651438B2
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、微量分析分野において用いられる酵素と抗
体とを結合させた酵素標識抗体をさらにラテックス粒子
に結合させた酵素標識抗体感作ラテックス及びそれを用
いた酵素免疫測定法に関する。
体とを結合させた酵素標識抗体をさらにラテックス粒子
に結合させた酵素標識抗体感作ラテックス及びそれを用
いた酵素免疫測定法に関する。
近年、臨床検査の分野において微量生体成分の分析の
重要性が高まっている。一般に血清中の微量成分の分析
は酵素免疫測定法（EIA）により行われている。この方
法は、微量抗原に対する抗体と検出信号を与える酵素と
を化学的に結合して作製された酵素標識抗体が抗原と反
応することにより、被検物の検出が可能となるものであ
る。
重要性が高まっている。一般に血清中の微量成分の分析
は酵素免疫測定法（EIA）により行われている。この方
法は、微量抗原に対する抗体と検出信号を与える酵素と
を化学的に結合して作製された酵素標識抗体が抗原と反
応することにより、被検物の検出が可能となるものであ
る。
そうした免疫分析法の確立において、重要な問題とな
るのは、感度である。通常、正常な検体には存在しない
ウイルス抗原の測定にはng/ml以下のオーダーの測定を
行う必要があると言われている。このような目的に対
し、従来からの酵素と抗体とを化学結合によって結びつ
ける方法（グルタルアルデヒド法や過ヨウ素酸酸化法）
あるいは抗体等を仲立ちとして酵素と抗体とを結ぶ方法
（PAP法やAvidin−Biotin法）による酵素標識法によっ
て作製された酵素標識抗体〔酵素標識抗体法，改訂版，
学際企画（株）発行,1985年,21〜23頁参照〕は充分にそ
の目的を果たしていない。
るのは、感度である。通常、正常な検体には存在しない
ウイルス抗原の測定にはng/ml以下のオーダーの測定を
行う必要があると言われている。このような目的に対
し、従来からの酵素と抗体とを化学結合によって結びつ
ける方法（グルタルアルデヒド法や過ヨウ素酸酸化法）
あるいは抗体等を仲立ちとして酵素と抗体とを結ぶ方法
（PAP法やAvidin−Biotin法）による酵素標識法によっ
て作製された酵素標識抗体〔酵素標識抗体法，改訂版，
学際企画（株）発行,1985年,21〜23頁参照〕は充分にそ
の目的を果たしていない。
酵素免疫測定法における感度の向上には、一定量の酵
素標識抗体で高い定量信号が得られるような標識抗体の
質的な向上が必要である。このためには、被検物に対す
るアフィニティーの高い抗体を用いる必要がある。しか
しながら、高アフィニティー抗体を得ることは一般的に
難しく、ポリクローナルな抗体では安定的に作ることは
免疫動物の個体差等の問題があり困難と言われ、更にポ
リクローナル抗体は高アフィニティー抗体と低アフィニ
ティー抗体の混合物として得られるため、ロット差がで
やすい。一方、モノクローナル抗体では、一度確立した
融合細胞より得られる抗体は安定的に供給できるが、高
アフィニティーの抗体を産するクローンを得ることは多
大の費用と時間を要する。また、ひとつの抗原抗体反応
に関与する酵素の量を著しく増大させること、すなわ
ち、１抗体上に多数の酵素分子を結合させることは不可
能であり、感度を上昇させる手段は殆ど行われていな
い。
素標識抗体で高い定量信号が得られるような標識抗体の
質的な向上が必要である。このためには、被検物に対す
るアフィニティーの高い抗体を用いる必要がある。しか
しながら、高アフィニティー抗体を得ることは一般的に
難しく、ポリクローナルな抗体では安定的に作ることは
免疫動物の個体差等の問題があり困難と言われ、更にポ
リクローナル抗体は高アフィニティー抗体と低アフィニ
ティー抗体の混合物として得られるため、ロット差がで
やすい。一方、モノクローナル抗体では、一度確立した
融合細胞より得られる抗体は安定的に供給できるが、高
アフィニティーの抗体を産するクローンを得ることは多
大の費用と時間を要する。また、ひとつの抗原抗体反応
に関与する酵素の量を著しく増大させること、すなわ
ち、１抗体上に多数の酵素分子を結合させることは不可
能であり、感度を上昇させる手段は殆ど行われていな
い。
本発明は、従来から行われている酵素標識法により作
製された酵素標識抗体に代わる新規な作製法によって作
製される高感度の酵素標識抗体及びそれを用いた酵素免
疫測定法を提供しようとするものである。
製された酵素標識抗体に代わる新規な作製法によって作
製される高感度の酵素標識抗体及びそれを用いた酵素免
疫測定法を提供しようとするものである。
本発明者らは、上記目的を達成するために種々研究を
重ねた結果、以外にも、従来の酵素標識抗体をラテック
ス粒子に結合させることにより、極めて高感度の酵素標
識抗体感作ラテックスが得られることを見出し、この新
知見に基づいて本発明を完成するに到ったものである。
重ねた結果、以外にも、従来の酵素標識抗体をラテック
ス粒子に結合させることにより、極めて高感度の酵素標
識抗体感作ラテックスが得られることを見出し、この新
知見に基づいて本発明を完成するに到ったものである。
すなわち、上記の目的は、被検物に対応する抗体と定
量信号を与えるための酵素とを化学的に結合してなる酸
素標識抗体を、さらに、ラテックス粒子上に結合させた
酵素標識抗体感作ラテックス及び前記酵素標識抗体感作
ラテックスを用いた酵素免疫測定法を提供することによ
り解決される。
量信号を与えるための酵素とを化学的に結合してなる酸
素標識抗体を、さらに、ラテックス粒子上に結合させた
酵素標識抗体感作ラテックス及び前記酵素標識抗体感作
ラテックスを用いた酵素免疫測定法を提供することによ
り解決される。
酵素標識抗体のラテックス粒子上への結合は、具体的
には、例えばつぎのようにして行うことができる。すな
わち、適当な緩衝液に酵素標識抗体を約250μg/mlの濃
度に溶解し、この液を0.2％ラテックス粒子懸濁液と等
量混合して撹拌放置する。一定時間後、適当な緩衝液で
遠心洗浄し、その後適当なブロッキング液の0.01〜0.1
％水溶液中に懸濁し放置すれば、酵素標識抗体感作ラテ
ックスが得られる。
には、例えばつぎのようにして行うことができる。すな
わち、適当な緩衝液に酵素標識抗体を約250μg/mlの濃
度に溶解し、この液を0.2％ラテックス粒子懸濁液と等
量混合して撹拌放置する。一定時間後、適当な緩衝液で
遠心洗浄し、その後適当なブロッキング液の0.01〜0.1
％水溶液中に懸濁し放置すれば、酵素標識抗体感作ラテ
ックスが得られる。
緩衝液はリン酸又はトリス塩酸等を用い、ブロッキン
グ液はBSA、ゼラチン、スキムミルク又はカゼイン等を
用いる。
グ液はBSA、ゼラチン、スキムミルク又はカゼイン等を
用いる。
ラテックス粒子は公知のものを使用すればよいが、例
えば、ポリスチレン又はスチレン−ブタジエン共重合
体、スチレン−ジビニルベンゼンもしくはポリビニルト
ルエン等、あるいはそれらにカルボキシル基、水酸基又
はアミノ基等を一部有するラテックスでもよく、その粒
径は10μｍ以下が望ましい。
えば、ポリスチレン又はスチレン−ブタジエン共重合
体、スチレン−ジビニルベンゼンもしくはポリビニルト
ルエン等、あるいはそれらにカルボキシル基、水酸基又
はアミノ基等を一部有するラテックスでもよく、その粒
径は10μｍ以下が望ましい。
被検物に対応する抗体は、被検物に対する抗血清より
常法に従って精製する。例えば、ウサギ、ウシ、ウマ、
ヒツジ、ブタ、マウス、モルモット又はその他の動物よ
り得られた被検物に対する抗血清を硫酸ナトリウムもし
くは硫安で分画したもの、またはDEAE等のイオン交換カ
ラムで精製した抗体、もしくは抗原を固定化したカラム
を用いてアフィニティー精製した抗体を用いる。あるい
は、細胞融合法により作製されたマウスモノクローナル
抗体を用いてもよい。
常法に従って精製する。例えば、ウサギ、ウシ、ウマ、
ヒツジ、ブタ、マウス、モルモット又はその他の動物よ
り得られた被検物に対する抗血清を硫酸ナトリウムもし
くは硫安で分画したもの、またはDEAE等のイオン交換カ
ラムで精製した抗体、もしくは抗原を固定化したカラム
を用いてアフィニティー精製した抗体を用いる。あるい
は、細胞融合法により作製されたマウスモノクローナル
抗体を用いてもよい。
一方、標識酵素は、パーオキシダーゼ、グルコースオ
キシダーゼ、ヘキソキナーゼ、アルカリホスファター
ゼ、β−アラクトシダーゼ、ウレアーゼ又はアミラーゼ
等が挙げられるが、これらに限らずその酵素活性測定が
容易で、一分子当たりの活性が高く、扱い易い酵素であ
れば特に問題はない。
キシダーゼ、ヘキソキナーゼ、アルカリホスファター
ゼ、β−アラクトシダーゼ、ウレアーゼ又はアミラーゼ
等が挙げられるが、これらに限らずその酵素活性測定が
容易で、一分子当たりの活性が高く、扱い易い酵素であ
れば特に問題はない。
抗体と酵素を化学的に結合してなる酵素標識抗体は、
常法の酵素標識法で作成することができる。
常法の酵素標識法で作成することができる。
例えば、グルタルアルデヒド法、過ヨウ素酸酸化法、
PAP法、Avidin−Biotin法、ピリジルジスルフィド法又
はマレイミド化合物を用いる方法等公知の方法によって
酵素と抗体を結合させればよい。
PAP法、Avidin−Biotin法、ピリジルジスルフィド法又
はマレイミド化合物を用いる方法等公知の方法によって
酵素と抗体を結合させればよい。
このようにして得られた酵素標識抗体感作ラテックス
は、従来より行われている酵素免疫測定法における被検
物の微量分析の改良に役立つものである。
は、従来より行われている酵素免疫測定法における被検
物の微量分析の改良に役立つものである。
すなわち、上記酵素標識抗体感作ラテックスを用いた
酵素免疫測定法においては、例えばサンドイッチ法によ
る被検物の微量分析を極めて感度よく行うことができる
ものであって、具体的には、被検物のHBs抗原,CEA,AFP,
CRP,各種イムノグロブリン，β２−ミクログロブリン、
アンチトリプシン、セルロプラスミン又はトランスフエ
リン等に対する抗体を、マイクロタイタープレート又は
ビーズの固定相に固定し、これを適当なブロッキング剤
でブロッキング後、被検物を固定相と接触反応させる。
更に続けて、酵素標識抗体感作ラテックスを加えるか、
あるいは一定時間放置後、緩衝液で洗浄し酵素標識抗体
感作ラテックスを加える。その後、公知の発色系の試薬
を用いて酵素活性を比色定量することにより目的の被検
物の定量を感度よく測定することができる。
酵素免疫測定法においては、例えばサンドイッチ法によ
る被検物の微量分析を極めて感度よく行うことができる
ものであって、具体的には、被検物のHBs抗原,CEA,AFP,
CRP,各種イムノグロブリン，β２−ミクログロブリン、
アンチトリプシン、セルロプラスミン又はトランスフエ
リン等に対する抗体を、マイクロタイタープレート又は
ビーズの固定相に固定し、これを適当なブロッキング剤
でブロッキング後、被検物を固定相と接触反応させる。
更に続けて、酵素標識抗体感作ラテックスを加えるか、
あるいは一定時間放置後、緩衝液で洗浄し酵素標識抗体
感作ラテックスを加える。その後、公知の発色系の試薬
を用いて酵素活性を比色定量することにより目的の被検
物の定量を感度よく測定することができる。
さらに、上記酵素標識抗体感作ラテックスを用いた酵
素免疫測定法は、競合法を利用した抗体価の測定に適用
することもできる。即ち、固定相に抗原を固定し適当に
ブロッキング後、被検液と酵素標識抗体感作ラテックス
を同時に加え、被検液中の抗体と競合的に固相に結合し
た酵素標識抗体感作ラテックスの酵素活性を前記の方法
で測定し、被検液中の抗体量を測定することができる。
素免疫測定法は、競合法を利用した抗体価の測定に適用
することもできる。即ち、固定相に抗原を固定し適当に
ブロッキング後、被検液と酵素標識抗体感作ラテックス
を同時に加え、被検液中の抗体と競合的に固相に結合し
た酵素標識抗体感作ラテックスの酵素活性を前記の方法
で測定し、被検液中の抗体量を測定することができる。
また、例えばグルコースオキシダーゼとパーオキシダ
ーゼのように、一つの酵素の反応生成物が他の酵素の基
質になるような二種類の酵素を用いるエンザイムチャン
ネリング法のような均一系の測定法においても、本発明
による酵素標識抗体感作ラテックスを使用することが可
能である。
ーゼのように、一つの酵素の反応生成物が他の酵素の基
質になるような二種類の酵素を用いるエンザイムチャン
ネリング法のような均一系の測定法においても、本発明
による酵素標識抗体感作ラテックスを使用することが可
能である。
本発明の酵素標識抗体感作ラテックスを酵素免疫測定
法による被検物の分析に用いれば、従来の酵素標識抗体
に比べて著しい高感度を示す。
法による被検物の分析に用いれば、従来の酵素標識抗体
に比べて著しい高感度を示す。
以下、本発明を実施例により説明する。
実施例１ （１） パーオキシダーゼ標識抗HBs抗体感作ラテック
ス（PIL）の作製 パーオキシダーゼ5mgを1mlの0.3M炭酸水素ナトリウム
に溶解し、これに0.2mlの１％ 2,4−ジニトロフロロベ
ンゼンを加えて１時間撹拌した後、1mlの0.06M 過ヨウ
素酸ナトリウムを加え、30分撹拌、さらに1mlの0.16M
エチレングリコールを加えて１時間撹拌する。これを炭
酸緩衝液（pH9.5）で一昼夜透析する。これを炭酸緩衝
液（pH9.5）に溶解した抗HBsモノクローナル抗体（5mg/
ml）1mlと混合し、室温で３時間反応後、リン酸緩衝生
理食塩水（PBS）で透析し更にセファクリルＳ−200でゲ
ル濾過してパーオキシダーゼ標識抗体を得る。このパー
オキシダーゼ標識抗体（250μg/ml）1mlと粒径0.22μｍ
の0.2％ラテックス粒子懸濁液1mlを混合し、1.5時間シ
ェイキングした後、14000rpm×20分遠心し、その後、沈
澱部分を0.5％カゼインを含む50mMトリス緩衝液（pH8.
0）にサスペンドし、１時間ブロッキングした後、再び1
4000rpm×20分遠心し、ラテックス濃度0.043％に希釈し
てパーオキシダーゼ標識抗HBs抗体感作ラテックスを得
る。
ス（PIL）の作製 パーオキシダーゼ5mgを1mlの0.3M炭酸水素ナトリウム
に溶解し、これに0.2mlの１％ 2,4−ジニトロフロロベ
ンゼンを加えて１時間撹拌した後、1mlの0.06M 過ヨウ
素酸ナトリウムを加え、30分撹拌、さらに1mlの0.16M
エチレングリコールを加えて１時間撹拌する。これを炭
酸緩衝液（pH9.5）で一昼夜透析する。これを炭酸緩衝
液（pH9.5）に溶解した抗HBsモノクローナル抗体（5mg/
ml）1mlと混合し、室温で３時間反応後、リン酸緩衝生
理食塩水（PBS）で透析し更にセファクリルＳ−200でゲ
ル濾過してパーオキシダーゼ標識抗体を得る。このパー
オキシダーゼ標識抗体（250μg/ml）1mlと粒径0.22μｍ
の0.2％ラテックス粒子懸濁液1mlを混合し、1.5時間シ
ェイキングした後、14000rpm×20分遠心し、その後、沈
澱部分を0.5％カゼインを含む50mMトリス緩衝液（pH8.
0）にサスペンドし、１時間ブロッキングした後、再び1
4000rpm×20分遠心し、ラテックス濃度0.043％に希釈し
てパーオキシダーゼ標識抗HBs抗体感作ラテックスを得
る。
（２） パーオキシダーゼ活性の確認 （１）で得たパーコイシダーゼ標識抗HBs抗体感作ラ
テックス懸濁液を20μとり、これを過酸化水素0.3m
M、フェノール10mM、及び４−アミノアンチピリン0.82m
Mを含む50mMトリス−塩酸緩衝液（pH7.5）3mlに加え、3
7℃における500nmでの吸光度（ΔA500）を測定したとこ
ろ、7.3U/mlのパーオキシダーゼ活性がパーオキシダー
ゼ標識抗HBs抗体感作ラテックス上に存在することを認
めた。
テックス懸濁液を20μとり、これを過酸化水素0.3m
M、フェノール10mM、及び４−アミノアンチピリン0.82m
Mを含む50mMトリス−塩酸緩衝液（pH7.5）3mlに加え、3
7℃における500nmでの吸光度（ΔA500）を測定したとこ
ろ、7.3U/mlのパーオキシダーゼ活性がパーオキシダー
ゼ標識抗HBs抗体感作ラテックス上に存在することを認
めた。
（３） 抗HBsモノクローナル抗体活性の確認 （１）で得たパーオキシダーゼ標識抗HBs抗体感作ラ
テックスを20μとり、これに被検物（抗原）であるHB
s抗原を10μ加えたところ凝集が認められた。
テックスを20μとり、これに被検物（抗原）であるHB
s抗原を10μ加えたところ凝集が認められた。
以上の結果によりパーオキシダーゼ標識抗HBs抗体感
作ラテックスが生成していることが確認できた。
作ラテックスが生成していることが確認できた。
実施例２ （１） グルコースオキシダーゼ標識抗HBs抗体感作ラ
テックス（GIL）の作製 グルコースオキシダーゼ180mgをPBS4mlに溶解し、こ
れに400μの30mM n−サクシンイミジル３−（２−ピ
リジルジチオ）プロピオネート（以下SPDPと記す）を加
えて、23℃で30分放置してセファデックスＧ−25でゲル
濾過後、グルコースオキシダーゼ活性画分を集める。こ
れに100mMジチオスレイトールを400μ加え、20分放置
後再びゲル濾過してSPDPグルコースオキシダーゼを得
る。次に、抗HBsモノクローナル抗体（25mg/ml）1.5ml
及び20mM SPDP150μと混合し、30分放置後、セファデ
ックスＧ−25でゲル濾過してSPDP抗HBsモノクローナル
抗体を得る。この様にして得たSPDPグルコースオキシダ
ーエとSPDP抗HBsモノクローナル抗体を等量混合し、一
夜放置後、ゲル濾過してグルコースオキシダーゼ標識抗
HBs抗体を得る。このグルコースオキシダーゼ標識抗体
（250μ/ml）2mlを粒径0.09μｍの0.2％ラテックス懸
濁液2mlと混合し、１時間シェイキングした後、14000rp
m×20分遠心し、その後、沈澱部分に0.5％カゼインを含
む50mMトリス塩酸緩衝液（pH8.0）を1ml加えて、１時間
ブロッキングした後、再び14000rpm×20分遠心し、ラテ
ックス濃度0.25％になるようにカゼイン液を加えて希釈
してグルコースオキシダーゼ標識抗HBs抗体感作ラテッ
クスを得る。
テックス（GIL）の作製 グルコースオキシダーゼ180mgをPBS4mlに溶解し、こ
れに400μの30mM n−サクシンイミジル３−（２−ピ
リジルジチオ）プロピオネート（以下SPDPと記す）を加
えて、23℃で30分放置してセファデックスＧ−25でゲル
濾過後、グルコースオキシダーゼ活性画分を集める。こ
れに100mMジチオスレイトールを400μ加え、20分放置
後再びゲル濾過してSPDPグルコースオキシダーゼを得
る。次に、抗HBsモノクローナル抗体（25mg/ml）1.5ml
及び20mM SPDP150μと混合し、30分放置後、セファデ
ックスＧ−25でゲル濾過してSPDP抗HBsモノクローナル
抗体を得る。この様にして得たSPDPグルコースオキシダ
ーエとSPDP抗HBsモノクローナル抗体を等量混合し、一
夜放置後、ゲル濾過してグルコースオキシダーゼ標識抗
HBs抗体を得る。このグルコースオキシダーゼ標識抗体
（250μ/ml）2mlを粒径0.09μｍの0.2％ラテックス懸
濁液2mlと混合し、１時間シェイキングした後、14000rp
m×20分遠心し、その後、沈澱部分に0.5％カゼインを含
む50mMトリス塩酸緩衝液（pH8.0）を1ml加えて、１時間
ブロッキングした後、再び14000rpm×20分遠心し、ラテ
ックス濃度0.25％になるようにカゼイン液を加えて希釈
してグルコースオキシダーゼ標識抗HBs抗体感作ラテッ
クスを得る。
（２） グルコースオキシダーゼ活性の確認 （１）で得たグルコースオキシダーゼ標識抗HBs抗体
感作ラテックス懸濁液を20μとり、これをグルコース
33mM、フェノール14mM、４−アミノアンチピリン0.82mM
及びパーオキシダーゼ8U/mlを含む0.1M リン酸緩衝液
（pH7.0）3mlに加え、37℃における500nmでの吸光度
（ΔA500）を測定したところ、3.6U/mlのグルコースオ
キシダーゼ活性がグルコースオキシダーゼ標識抗HBs抗
体感作ラテックス上に存在することを認めた。
感作ラテックス懸濁液を20μとり、これをグルコース
33mM、フェノール14mM、４−アミノアンチピリン0.82mM
及びパーオキシダーゼ8U/mlを含む0.1M リン酸緩衝液
（pH7.0）3mlに加え、37℃における500nmでの吸光度
（ΔA500）を測定したところ、3.6U/mlのグルコースオ
キシダーゼ活性がグルコースオキシダーゼ標識抗HBs抗
体感作ラテックス上に存在することを認めた。
（３） 抗HBsモノクローナル抗体活性の確認 （１）で得たグルコースオキシダーゼ標識抗HBs抗体
感作ラテックスを20μとり、これに被検物（抗原）で
あるHBs抗原を10μ加えたところ凝集が認められた。
感作ラテックスを20μとり、これに被検物（抗原）で
あるHBs抗原を10μ加えたところ凝集が認められた。
以上の結果によりグルコースオキシダーゼ標識抗HBs
抗体感作ラテックスが生成していることが確認できた。
抗体感作ラテックスが生成していることが確認できた。
実施例３ 抗HBsモノクローナル抗体（10μg/ml）をマイクロ
（タイター用）プレートの各ウエルに80μ加えて、37
℃で２時間放置後、吸引し、0.5％カゼインを含む50mM
トリス−塩酸緩衝液（pH8.0）200μを加えて一昼夜放
置する。このプレトーにHBs抗原,0,50,100,200,500ng/m
lを各々含む血清を35μ加え、更に実施例１で得られ
たパーオキシダーゼ標識抗HBs抗体感作ラテックス（PI
L）を35μ加えて、37℃１時間放置して洗浄後、過酸
化水素0.3mM,フェノール10mM及び４−アミノアンチピリ
ン0.5mMを含む50mMトリス−塩酸緩衝液（pH7.5）200μ
を加えて、30分後の500nmでの吸光度（ΔA500）を測
定した。
（タイター用）プレートの各ウエルに80μ加えて、37
℃で２時間放置後、吸引し、0.5％カゼインを含む50mM
トリス−塩酸緩衝液（pH8.0）200μを加えて一昼夜放
置する。このプレトーにHBs抗原,0,50,100,200,500ng/m
lを各々含む血清を35μ加え、更に実施例１で得られ
たパーオキシダーゼ標識抗HBs抗体感作ラテックス（PI
L）を35μ加えて、37℃１時間放置して洗浄後、過酸
化水素0.3mM,フェノール10mM及び４−アミノアンチピリ
ン0.5mMを含む50mMトリス−塩酸緩衝液（pH7.5）200μ
を加えて、30分後の500nmでの吸光度（ΔA500）を測
定した。
同様の操作で従来法により作製したパーオキシダーゼ
標識抗体も反応させて比較例とした。
標識抗体も反応させて比較例とした。
その結果は、第１図に示す通り同一のパーオキシダー
ゼ標識抗体量を作用させた場合、本発明のパーオキシダ
ーゼ標識抗体感作ラテックスは従来のパーオキシダーゼ
標識抗体に比べて著しい感度の増加を認めた。
ゼ標識抗体量を作用させた場合、本発明のパーオキシダ
ーゼ標識抗体感作ラテックスは従来のパーオキシダーゼ
標識抗体に比べて著しい感度の増加を認めた。
実施例４ 実施例３と同様に作製したマイクロプレートを用いパ
ーオキシダーゼ標識抗HBs抗体感作ラテックスの代わり
にグルコースオキシダーゼ標識抗HBs抗体感作ラテック
ス（GIL）を用いてHBs抗原を反応させた。グルコースオ
キシダーゼ活性はグルコース33mM、フェノール14mM、４
−アミノアンチピリン0.82mM及びパーオキシダーゼ8U/m
lを含むリン酸緩衝液（pH7.0）を用いて500nmでの吸光
度（ΔA500）を測定した。
ーオキシダーゼ標識抗HBs抗体感作ラテックスの代わり
にグルコースオキシダーゼ標識抗HBs抗体感作ラテック
ス（GIL）を用いてHBs抗原を反応させた。グルコースオ
キシダーゼ活性はグルコース33mM、フェノール14mM、４
−アミノアンチピリン0.82mM及びパーオキシダーゼ8U/m
lを含むリン酸緩衝液（pH7.0）を用いて500nmでの吸光
度（ΔA500）を測定した。
その結果は第２図に示す通りパーオキシダーゼ標識抗
HBs抗体感作ラテックスと同様、著しい感度の増加を認
めた。
HBs抗体感作ラテックスと同様、著しい感度の増加を認
めた。
第１図及び第２図は、それぞれ本発明の実施例３及び実
施例４において測定したHBs抗原濃度と500nmでの吸光度
（ΔA500）との関係を示した検量線を示すものである。 図中の記号は下記の意味を有する。
施例４において測定したHBs抗原濃度と500nmでの吸光度
（ΔA500）との関係を示した検量線を示すものである。 図中の記号は下記の意味を有する。
Claims (4)
- 【請求項１】被検物に対応する抗体と定量信号を与える
ための酵素とを化学的に結合してなる酸素標識抗体を、
さらに、ラテックス粒子に結合したことを特徴とする酵
素標識抗体感作ラテックス。 - 【請求項２】酵素標識抗体のラテックス粒子への結合
が、酵素標識抗体を緩衝液中でラテックス懸濁液と混合
することにより行われたものであることを特徴とする特
許請求の範囲第１項記載の酵素標識抗体感作ラテック
ス。 - 【請求項３】酵素標識抗体を用いて被検物を免疫学的に
定量する酵素免疫測定法において、前記酵素標識抗体と
して、被検物に対応する抗体と定量信号を与えるための
酵素とを化学的に結合してなる酵素標識抗体を、さら
に、ラテックス粒子に結合したことを特徴とする酵素標
識抗体感作ラテックスを用いて行うことを特徴とする酵
素免疫測定法。 - 【請求項４】酵素免疫測定法がサンドイッチ法、競合法
又はエンザイムチャンネリング法により行われることを
特徴とする特許請求の範囲第３項記載の酵素免疫測定
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62123907A JP2651438B2 (ja) | 1987-05-22 | 1987-05-22 | 酵素標識抗体感作ラテックス及びそれを用いた酵素免疫測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62123907A JP2651438B2 (ja) | 1987-05-22 | 1987-05-22 | 酵素標識抗体感作ラテックス及びそれを用いた酵素免疫測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63290963A JPS63290963A (ja) | 1988-11-28 |
| JP2651438B2 true JP2651438B2 (ja) | 1997-09-10 |
Family
ID=14872295
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62123907A Expired - Lifetime JP2651438B2 (ja) | 1987-05-22 | 1987-05-22 | 酵素標識抗体感作ラテックス及びそれを用いた酵素免疫測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2651438B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014083666A1 (ja) * | 2012-11-29 | 2014-06-05 | ミライアル株式会社 | サンドイッチ法による抗原抗体反応測定方法及びマイクロ流路チップ |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106596963A (zh) * | 2016-05-27 | 2017-04-26 | 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 | 一种测定甲胎蛋白的试剂盒 |
| CN110596405A (zh) * | 2019-09-20 | 2019-12-20 | 上海捷门生物技术有限公司 | 胶乳增强免疫比浊法检测心型脂肪酸结合蛋白含量的试剂盒 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59206761A (ja) * | 1983-05-11 | 1984-11-22 | Igaku Seibutsugaku Kenkyusho:Kk | 酵素免疫測定法 |
-
1987
- 1987-05-22 JP JP62123907A patent/JP2651438B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014083666A1 (ja) * | 2012-11-29 | 2014-06-05 | ミライアル株式会社 | サンドイッチ法による抗原抗体反応測定方法及びマイクロ流路チップ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS63290963A (ja) | 1988-11-28 |
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