JP2649016B2 - 免疫反応干渉作用の除去方法 - Google Patents

免疫反応干渉作用の除去方法

Info

Publication number
JP2649016B2
JP2649016B2 JP6186566A JP18656694A JP2649016B2 JP 2649016 B2 JP2649016 B2 JP 2649016B2 JP 6186566 A JP6186566 A JP 6186566A JP 18656694 A JP18656694 A JP 18656694A JP 2649016 B2 JP2649016 B2 JP 2649016B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
antibody
immunoassay
immune reaction
tsh
afp
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
JP6186566A
Other languages
English (en)
Other versions
JPH0829420A (ja
Inventor
祐人 黒川
幸子 黒田
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sanyo Chemical Industries Ltd
Original Assignee
Sanyo Chemical Industries Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sanyo Chemical Industries Ltd filed Critical Sanyo Chemical Industries Ltd
Priority to JP6186566A priority Critical patent/JP2649016B2/ja
Publication of JPH0829420A publication Critical patent/JPH0829420A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP2649016B2 publication Critical patent/JP2649016B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【産業上の利用分野】本発明は、免疫反応干渉作用の除
去方法に関する。さらに詳しくは、生体試料中のリウマ
チ因子や補体成分などの免疫反応干渉物質の作用を防止
し、生体試料中の微量物質定量を正確に行うことができ
る免疫測定法における免疫反応干渉作用の除去方法に関
する。
【0002】
【従来の技術】従来、免疫測定法における免疫反応干渉
作用を除去するには、完全体の抗体からFc部分を除い
たFab、Fab′、F(ab′)2などの抗体フラグ
メントを免疫測定法中の固相化抗体や標識抗体などに使
用していた。具体的には、特開昭55−152458号
や特開平4−221762号に記載の方法が挙げられ
る。
【0003】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、抗体フ
ラグメントを免疫測定法中に使用した免疫反応干渉作用
の除去方法では、血清の個別差など生体試料の種によっ
ては免疫反応干渉作用を完全に除去できない場合があ
り、さらに強力に除去する方法が望まれていた。
【0004】また、完全体の抗体を蛋白質分解酵素で分
解し抗体フラグメントを得るには、例えば、「免疫生化
学研究法(第1版)、東京化学同人、89〜96(19
86)」に記載のIgGからFab)の調製には16時
間以上の作業が必要で、IgGからF(ab′)2の調
製には20時間以上の作業が必要であった。さらに、抗
体フラグメントに調製することで元の完全抗体よりも抗
体力価が下がることがあった。よって、免疫測定法に使
用する抗体としては抗体フラグメントでなく完全体の抗
体をそのまま使用することが望まれていた。
【0005】
【課題を解決するための手段】本発明者らは上記問題点
を解決するため鋭意検討した結果、完全抗体を使用した
免疫測定法でも免疫反応干渉作用の除去を発現する共存
物質を発見し、本発明に到達した。すなわち本発明は、
抗体または抗原をガラスビーズに物理的または化学的に
吸着させた固相に検体を反応させ結合した抗原または抗
体を標識物質で検出または定量する固相免疫測定法によ
る生体試料中の微量物質定量において、抗体として完全
体の抗体を用い、ヘパリンを共存させて生体試料中に含
まれる免疫反応干渉物質の影響を除去することを特徴と
する免疫反応干渉作用の除去方法である。
【0006】本発明の方法においで、ヘパリンの濃度と
しては、抗体と生体試料中の測定目的の微量物質が反応
する際に、通常0.002〜2g/lの濃度で共存し、
好ましくは、0.01〜0.4g/lで共存する。
【0007】本発明の方法において免疫反応に使用され
る抗体としては、調製作業が不要で抗体力価の低下もな
い完全体の抗体が使用される。完全体の抗体とは基本構
造を崩していない免疫グロブリン(IgG、IgM、I
gA、IgD、IgE)であり、この免疫グロブリンの
うぢ好ましいものは、IgGである。
【0008】また、抗体の由来は、ウザギなどの哺乳動
物等に抗原を投与し免疫して得られる抗血清を精製した
ポリクローナル杭体あるいは、免疫されたマウス等の脾
臓細胞と骨髄腫細胞から得られた雑種細胞から産生され
るモノクローナル抗体などが挙げられる。
【0009】本発明の方法において、標識物質を用いる
固相免疫測定法とは、抗体または抗原を物理的または化
学的に吸着させた固相に検体を反応させ、結合した抗原
または抗体を標識抗体や標識抗原で検出する測定法であ
る。この測定法としては、エンザイムイムノアッセイ
法、ラジオイムノアッセイ法、発光・蛍光イムノアッセ
イ法などが挙げられる。これらのうち好ましいものは、
エンザイムイムノアッセイ法である。
【0010】また、本発明の方法において、免疫測定法
で測定される生体試料中の微量物質には、例えば、「検
査と技術、Vol.16、No.7、633(198
8)」に記載のAFP、CEA、FER、TSHなどの
生体試料中にng/mlレベルの濃度の蛋白成分があ
る。
【0011】
【実施例】以下、実施例により本発明をさらに説明する
が、本発明はこれに限定されるものではない。
【0012】ムコ多糖含有の免疫反応用緩衝液の調製; 0.02Mのリン酸緩衝液(pH7.2)に、牛血清ア
ルブミンを10g/lおよび塩化ナトリウムを8.5g
/lおよびアジ化ナトリウムを0.5g/lの濃度にな
るように添加し、免疫反応用緩衝液(b)を調製した。
調製後、免疫反応用緩衝液に、ムコ多糖としてヘパリ
ン,コンドロイチン硫酸,ヒアルロン酸をそれぞれ0.
1g/lの濃度になるように添加し、コンドロイチン硫
酸含有の免疫反応用緩衝液(c1),ヒアルロン酸含有
の免疫反応用緩衝液(c2),ヘパリン含有の免疫反応
用緩衝液(c)を調製した。
【0013】比較例1 TSH免疫測定法1(使用抗体:IgG,モノクローナ
ル抗体) (b)の0.3mlと、標準TSH液またはTSH含有
検体0.1mlと、抗TSHモノクローナル抗体[Ig
G]結合ガラスビーズ(以下G1とする)1個とを試験
管に分注し、試験管中で37℃,15分間免疫反応さ
せ、G1−TSH複合体を形成した。反応後、試験管中
の液をアスピレーターで除き、G1−TSH複合体を生
食水3mlで3回洗浄した。
【0014】次に、試験管中のG1−TSH複合体1個
に、牛血清アルブミンを10g/lおよび塩化ナトリウ
ムを8.5g/lおよびペルオキシダーゼ標識抗TSH
モノクローナル抗体[IgG](以下P1とする)を
0.1mg/l含有する0.02Mのリン酸緩衝液(p
H7.2)の0.3mlを添加し、試験管中で37℃,
15分間免疫反応させ、G1−TSH−P1複合体を形
成した。反応後、試験管中の液をアスピレーターで除
き、C1−TSH−P1複合体を生食水3mlで3回洗
浄した。
【0015】さらに、試験管中のG1−TSH−P1複
合体1個に、過酸化水素を0.2g/lおよびオルト−
フェニレンジアミン3g/lを含有するクエン酸−リン
酸緩衝液0.3mlを加え37℃,15分間発色反応さ
せ、反応後、1.5規定の硫酸3mlを加えて酵素反応
を停止させ溶液の吸収を分光光度計を用い492nmで
測光した。
【0016】最後に、各標準TSH液の濃度値と測光値
をグラフ用紙にプロットし検量線を作製しその検量線か
ら、TSH含有検体の測光値に対する濃度値を算出し
た。この濃度値をTSH測定値とした。
【0017】比較例2,比較例3および実施例1 TSH免疫測定法2(使用抗体:IgG,モノクローナ
ル抗体) 比較例1の(b)を(c1),(c2),(c)に変更
してそれぞれ比較例2,比較例3および実施例1とし
た。
【0018】比較例4 AFP免疫測定法1(使用抗体:IgG,ポリクローナ
ル抗体) (b)の0.3nlと、標準AFP液またはAFP含有
検体0.02mlと、抗ΛFPポリクローナル抗体[I
gG]結合ガラスビーズ(以下G3とする)1個とを試
験管に分注し、試験管中で37℃,15分間免疫反応さ
せ、G3−AFP複合体を形成した。反応後、試験管中
の液をアスピレーターで除き、G3−AFP複合体を生
食水3mlで3回洗浄した。
【0019】次に、試験管中のG3−AFP複合体1個
に、牛血清アルブミンを10g/lおよび塩化ナトリウ
ムを8.5g/lおよびペルオキシダーゼ標識抗AFP
ポリクローナル抗体[IgG](以下P3とする)を
0.2mg/l含有する0.02Mのリン酸緩衝液(p
H7.2)の0.3mlを添加し、試験管中で37℃,
15分間免疫反応させ、G3−AFP−P3複合体を形
成した。反応後、試験管中の液をアスピレーターで除
き、G3−AFP−P3複合体を生食水3mlで3回洗
浄した。
【0020】さらに、試験管中のG3−AFP−P3複
合体1個に、過酸化水素を0.2g/lおよびオルト−
フェニレンジアミン3g/lを含有するクエン酸−リン
酸緩衝液0.3mlを加え37℃,15分間発色反応さ
せ、反応後、1.5規定の硫酸3mlを加えて酵素反応
を停止させ溶液の吸収を分光光度計を用い492nmで
測光した。
【0021】最後に、各標準AFP液の濃度値と測光値
をグラフ用紙にプロットし検量線を作製しその検量線か
ら、ΛFP含有検体の測光値に対する濃度値を算出し
た。この濃度値をAFP測定値とした。
【0022】比較例5,比較例6および実施例2 AFP免疫測定法2(使用抗体:IgG,ポリクローナ
ル抗体) 比較例4の(b)を(c1),(c2),(c)に変更
してそれぞれ比較例5,比較例6および実施例2とし
た。
【0023】評価 免疫反応干渉作用の除去効果を確かめるため、RF含有
検体の添加回収率を評価した。RFを含む血清(RF
(+))の0.9mlおよびRFを含まない血清(RF
(−))の0.9mlに標準TSH液の50μU/ml
を0.1mlずつそれぞれ添加し添加回収率用検体(T
SH)とした。この検体を比較例1〜3および実施例1
のTSH免疫測定法で測定し添加回収率を求めた。その
結果を表1に示す。
【0024】
【表1】
【0025】また、RF(+)の0.9mlおよびRF
(−)の0.9mlに標準AFP液の640ng/ml
を0.1mlずつそれぞれ添加し添加回収率用検体(A
FP)とした。この検体を比較例4〜6および実施例2
のAFP免疫測定法で測定し添加回収率を求めた。その
結果を表2に示す。
【0026】
【表2】
【0027】表1〜表2の添加回収率が実施例において
飛躍的に向上し、本発明の免疫反応干渉作用の除去効果
が優れていることがわかる。
【0028】
【発明の効果】本発明により、完全抗体を使用した免疫
測定法でも免疫反応干渉物質の作用を防止することが可
能となった。また、この免疫反応干渉作用の除去方法
は、免疫測定法中に使用するポリクローナル抗体やモノ
クローナル抗体など、抗体の由来に関係なく除去効果を
発現した。従って、如何なる抗体を使用した免疫測定法
においても、免疫反応干渉作用が除去され、生体試料中
の微量物質定量を正確に行うことが可能となった。

Claims (2)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】 抗体または抗原をガラスビーズに物理的
    または化学的に吸着させた固相に検体を反応させ結合し
    た抗原または抗体を標識物質で検出または定量する固相
    免疫測定法による生体試料中の微量物質定量において、
    抗体として完全体の抗体を用い、ヘパリンを共存させて
    生体試料中に含まれる免疫反応干渉物質の影響を除去す
    ることを特徴とする免疫反応干渉作用の除去方法。
  2. 【請求項2】 生体試料中の微量物質がAFP、CE
    A、FERおよびTSHからなる群から選ばれる請求項
    1記載の方法。
JP6186566A 1994-07-15 1994-07-15 免疫反応干渉作用の除去方法 Expired - Fee Related JP2649016B2 (ja)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP6186566A JP2649016B2 (ja) 1994-07-15 1994-07-15 免疫反応干渉作用の除去方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP6186566A JP2649016B2 (ja) 1994-07-15 1994-07-15 免疫反応干渉作用の除去方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPH0829420A JPH0829420A (ja) 1996-02-02
JP2649016B2 true JP2649016B2 (ja) 1997-09-03

Family

ID=16190776

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP6186566A Expired - Fee Related JP2649016B2 (ja) 1994-07-15 1994-07-15 免疫反応干渉作用の除去方法

Country Status (1)

Country Link
JP (1) JP2649016B2 (ja)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5238190B2 (ja) * 2007-05-24 2013-07-17 株式会社ビーエル ヒアルロン酸存在下における免疫測定法及びそれに用いられる物
US8617820B2 (en) 2007-08-28 2013-12-31 Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. Use of glycosaminoglycans to reduce non-specific binding in immunoassays
JP2010127827A (ja) * 2008-11-28 2010-06-10 Abbott Japan Co Ltd 非特異的相互作用抑制剤及びその診断測定系への応用
CN113671195A (zh) * 2021-09-13 2021-11-19 迈克生物股份有限公司 抗双链dna抗体检测试剂盒及其应用

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH02238361A (ja) * 1989-03-10 1990-09-20 Sekisui Chem Co Ltd 免疫反応測定法および免疫反応測定用試薬
JPH07104352B2 (ja) * 1991-06-10 1995-11-13 ベックマン インスツルメンツ インコーポレーテッド リュウマチ因子検出用の新規緩衝剤及びその方法
JP3102827B2 (ja) * 1993-11-30 2000-10-23 ダイナボット株式会社 特異的結合アッセイ試薬及びそれを使用した測定方法

Also Published As

Publication number Publication date
JPH0829420A (ja) 1996-02-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2016203292B2 (en) Monoclonal antibody, and immunoassay using same
JP3958797B2 (ja) 抗原特異的IgM検出
CA1336063C (en) One-step immunoassay for the determination of antigen- specific antibodies of one of the immunoglobulin classes a, m, d or e, and an agent suitable for this purpose
EP2902782B1 (en) Immunological detection process and reagent for immunological detection process
WO2004011607A2 (en) Reagent and method for determination of a substance using an immunoaggregator
EP3264083B1 (en) L-fabp immunoassay method
JP3602135B2 (ja) 抗体クラス特異的干渉除去剤
Berneman et al. Flow-cytometric analysis of erythrocytic blood group A antigen density profile
US6136545A (en) Homogeneous detection methods for the determination of subpopulations of an analyte
JPH0735752A (ja) 凝集イムノアッセイ法
JPH0616044B2 (ja) 免疫学的ラテツクス凝集法
JP3899029B2 (ja) 免疫学的分析方法
JP2649016B2 (ja) 免疫反応干渉作用の除去方法
EP4286850A1 (en) Immunological assay method
JPS58211662A (ja) 試験試料中の被検体を測定するための均一系結合分析方法および該方法に用いる試薬系
KR900005486B1 (ko) 고상 분석 방법
US5466611A (en) Method for the determination of antigens or antibodies in the presence of an immune complex
JPS58146855A (ja) 免疫検定法
JP2004012434A (ja) ペプシノーゲン測定方法および測定用キット
JP2006038823A (ja) 非特異的反応抑制剤、非特異的反応の抑制方法、免疫学的測定方法及び免疫学的測定試薬
JP5714791B2 (ja) 非特異反応抑制剤
JP5500423B2 (ja) アレルギー検査方法
JPH0727764A (ja) Fc部位をブロックした免疫学的測定用抗体、該抗体を含む免疫学的測定用試薬、該免疫学的測定用試薬を使用する免疫学的測定法及びFc部位をブロックするブロック試薬
US5591598A (en) Method for quantitating hydrazide groups
JPS59102161A (ja) 逆受身凝集反応による抗原検出用試薬

Legal Events

Date Code Title Description
FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090516

Year of fee payment: 12

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100516

Year of fee payment: 13

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110516

Year of fee payment: 14

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110516

Year of fee payment: 14

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120516

Year of fee payment: 15

LAPS Cancellation because of no payment of annual fees