CN113671195A - 抗双链dna抗体检测试剂盒及其应用 - Google Patents
抗双链dna抗体检测试剂盒及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113671195A CN113671195A CN202111069351.4A CN202111069351A CN113671195A CN 113671195 A CN113671195 A CN 113671195A CN 202111069351 A CN202111069351 A CN 202111069351A CN 113671195 A CN113671195 A CN 113671195A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- reagent
- double
- stranded dna
- heparin
- solid phase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 title claims abstract description 112
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 42
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 140
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims abstract description 84
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims abstract description 77
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 60
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 claims abstract description 60
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims abstract description 56
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 29
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 claims abstract description 20
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 claims abstract description 8
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 40
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 26
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 claims description 21
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 20
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 20
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 20
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 claims description 17
- 229960001008 heparin sodium Drugs 0.000 claims description 16
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 15
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 13
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 11
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 11
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 claims description 10
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 claims description 10
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 9
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 9
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 5
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- -1 cyclic olefin Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 4
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 4
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000001069 Raman spectroscopy Methods 0.000 claims description 3
- 125000002355 alkine group Chemical group 0.000 claims description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000012650 click reaction Methods 0.000 claims description 3
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229940095529 heparin calcium Drugs 0.000 claims description 3
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 claims description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 3
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 claims description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 3
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 3
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 claims description 3
- JRZJOMJEPLMPRA-UHFFFAOYSA-N olefin Natural products CCCCCCCC=C JRZJOMJEPLMPRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 22
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 13
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 12
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 12
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 12
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 12
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 12
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 12
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 241000894007 species Species 0.000 description 7
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 3
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 3
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 3
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 3
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M thionine Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC2=[S+]C3=CC(N)=CC=C3N=C21 ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QCPFFGGFHNZBEP-UHFFFAOYSA-N 4,5,6,7-tetrachloro-3',6'-dihydroxyspiro[2-benzofuran-3,9'-xanthene]-1-one Chemical compound O1C(=O)C(C(=C(Cl)C(Cl)=C2Cl)Cl)=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 QCPFFGGFHNZBEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical group [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010029719 Nonspecific reaction Diseases 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N ferrosoferric oxide Chemical compound O=[Fe]O[Fe]O[Fe]=O SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002866 fluorescence resonance energy transfer Methods 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 229940030980 inova Drugs 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000007885 magnetic separation Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- ACOJCCLIDPZYJC-UHFFFAOYSA-M thiazole orange Chemical compound CC1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1.C1=CC=C2C(C=C3N(C4=CC=CC=C4S3)C)=CC=[N+](C)C2=C1 ACOJCCLIDPZYJC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- LTMHDMANZUZIPE-AMTYYWEZSA-N Digoxin Natural products O([C@H]1[C@H](C)O[C@H](O[C@@H]2C[C@@H]3[C@@](C)([C@@H]4[C@H]([C@]5(O)[C@](C)([C@H](O)C4)[C@H](C4=CC(=O)OC4)CC5)CC3)CC2)C[C@@H]1O)[C@H]1O[C@H](C)[C@@H](O[C@H]2O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)C2)[C@@H](O)C1 LTMHDMANZUZIPE-AMTYYWEZSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N Fe2+ Chemical compound [Fe+2] CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Chemical group 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- ZCQWOFVYLHDMMC-UHFFFAOYSA-N Oxazole Chemical compound C1=COC=N1 ZCQWOFVYLHDMMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- HVUMOYIDDBPOLL-XWVZOOPGSA-N Sorbitan monostearate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O HVUMOYIDDBPOLL-XWVZOOPGSA-N 0.000 description 1
- PJANXHGTPQOBST-VAWYXSNFSA-N Stilbene Natural products C=1C=CC=CC=1/C=C/C1=CC=CC=C1 PJANXHGTPQOBST-VAWYXSNFSA-N 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 229920004894 Triton X-305 Polymers 0.000 description 1
- 229920004897 Triton X-45 Polymers 0.000 description 1
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 1
- 230000009102 absorption Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000001251 acridines Chemical class 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N benzo-alpha-pyrone Natural products C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XJHABGPPCLHLLV-UHFFFAOYSA-N benzo[de]isoquinoline-1,3-dione Chemical compound C1=CC(C(=O)NC2=O)=C3C2=CC=CC3=C1 XJHABGPPCLHLLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 229910052681 coesite Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 235000001671 coumarin Nutrition 0.000 description 1
- 150000004775 coumarins Chemical class 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052906 cristobalite Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- LTMHDMANZUZIPE-PUGKRICDSA-N digoxin Chemical compound C1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](C)O[C@@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@@H](O[C@@H]3C[C@@H]4[C@]([C@@H]5[C@H]([C@]6(CC[C@@H]([C@@]6(C)[C@H](O)C5)C=5COC(=O)C=5)O)CC4)(C)CC3)C[C@@H]2O)C)C[C@@H]1O LTMHDMANZUZIPE-PUGKRICDSA-N 0.000 description 1
- 229960005156 digoxin Drugs 0.000 description 1
- LTMHDMANZUZIPE-UHFFFAOYSA-N digoxine Natural products C1C(O)C(O)C(C)OC1OC1C(C)OC(OC2C(OC(OC3CC4C(C5C(C6(CCC(C6(C)C(O)C5)C=5COC(=O)C=5)O)CC4)(C)CC3)CC2O)C)CC1O LTMHDMANZUZIPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000000295 emission spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000000892 gravimetry Methods 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N iron(III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]=O JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 230000005389 magnetism Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 1
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- RXNXLAHQOVLMIE-UHFFFAOYSA-N phenyl 10-methylacridin-10-ium-9-carboxylate Chemical compound C12=CC=CC=C2[N+](C)=C2C=CC=CC2=C1C(=O)OC1=CC=CC=C1 RXNXLAHQOVLMIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000013460 polyoxometalate Substances 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 150000003220 pyrenes Chemical class 0.000 description 1
- 229910052761 rare earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- PJANXHGTPQOBST-UHFFFAOYSA-N stilbene Chemical compound C=1C=CC=CC=1C=CC1=CC=CC=C1 PJANXHGTPQOBST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021286 stilbenes Nutrition 0.000 description 1
- 229910052682 stishovite Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 229910052905 tridymite Inorganic materials 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6854—Immunoglobulins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/5308—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for analytes not provided for elsewhere, e.g. nucleic acids, uric acid, worms, mites
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/54326—Magnetic particles
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/10—Musculoskeletal or connective tissue disorders
- G01N2800/101—Diffuse connective tissue disease, e.g. Sjögren, Wegener's granulomatosis
- G01N2800/104—Lupus erythematosus [SLE]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种抗双链DNA抗体检测试剂盒,包括R1试剂和R2试剂,R1试剂包括包被有双链DNA的固相载体和、R1分散剂和肝素,R2试剂包括标记有信号物质的二抗,肝素在R1试剂中的浓度为1mg/mL以上,肝素存在于R1试剂中;或者,试剂盒包括R1试剂、R2试剂和R3试剂,R1试剂包括包被有双链DNA的固相载体和R1分散剂,R2试剂包括标记有信号物质的二抗,R3试剂包括R3分散剂,肝素存在于R1试剂或R3试剂中,或同时存在于R1试剂和R3试剂中,肝素在R1试剂中的浓度优选为1mg/mL以上;和/或,肝素在R3试剂中的浓度优选为1mg/mL以上;二抗为抗受试样品来源种属免疫球蛋白的抗体。本发明还公开了试剂盒在制备用于诊断系统性红斑狼疮的诊断试剂或试剂盒中的应用。
Description
技术领域
本发明涉及体外检测技术领域,具体涉及一种抗双链DNA抗体检测试剂盒及其应用。
背景技术
在IVD行业中,我们通常所说的免疫反应是指免疫应答过程中抗原与其所诱导产生的对应抗体特异性结合的反应。通过利用已知的抗原检测对应抗体或已知的抗体检测对应抗原的方法,从而达到定性或定量判定受试样品中某一种抗原或抗体的目的。
目前,抗原抗体反应常用的检测方法包括荧光免疫、酶联免疫和化学发光等。其中,化学发光法一般是先将已知的某种抗原或抗体固定在特定的固相载体上,再加入待测样本,通过抗原抗体反应检测待测样本中的物质。尽管抗原抗体反应是一种特异性的反应,但实际的实验过程中,会不可避免出现一些非特异性的反应或者吸附,导致检测出现假阳结果,进而影响临床判定。假阳结果出现的概率反映了诊断试剂特异性的好坏。在体外诊断试剂研发过程中,需尽量减少出现假阳的概率,才能保证产品的质量。因此,我们需要寻求一种方法,减少抗原抗体反应过程中的非特异性吸附。从而提高诊断试剂的特异性,保证产品的最终质量。因此,我们需要寻求一种方法,减少抗原抗体反应过程中的非特异性吸附,从而提高诊断试剂的特异性,保证产品的最终质量。
常见的干扰抗原抗体检测的物质有生物素、血红蛋白、甘油三酯、RF、胆红素等。传统抗双链DNA抗体的检测是将双链DNA固定在塑料板上以检测样本中的抗双链DNA抗体。然而,在检测时样本中带正电荷的物质会与带负电荷双链DNA进行结合,造成非特异性的反应引起假阳性结果。
发明内容
基于此,有必要针对抗双链DNA抗体中样本中带正电荷的物质造成的假阳性问题,提供一种抗双链DNA抗体检测试剂盒及其应用。
一种抗双链DNA抗体检测试剂盒,包括R1试剂和R2试剂,所述R1试剂包括包被有双链DNA的固相载体、R1分散剂和肝素,所述R2试剂包括标记有信号物质的二抗,所述肝素在所述R1试剂中的浓度为1mg/mL以上;
或者,
所述试剂盒包括R1试剂、R2试剂和R3试剂,所述R1试剂包括包被有双链DNA的固相载体和R1分散剂,所述R2试剂包括标记有信号物质的二抗,所述R3试剂包括R3分散剂,肝素存在于所述R1试剂或所述R3试剂中,或同时存在于所述R1试剂和所述R3试剂中,
所述肝素在所述R1试剂中的浓度为1mg/mL以上;和/或,所述肝素在所述R3试剂中的浓度为1mg/mL以上;
所述二抗为抗受试样品来源种属免疫球蛋白的抗体。
在其中一些实施例中,所述免疫球蛋白为IgG、IgM或IgA中的至少任意一种。
在其中一些实施例中,所述固相载体为磁微粒,所述肝素在所述R1试剂中的浓度为1mg/mL~100mg/mL;优选地,所述肝素在所述R1试剂中的浓度为1mg/mL~10mg/mL;优选地,所述肝素在所述R1试剂中的浓度为1mg/mL~2mg/mL。
在其中一些实施例中,所述包被有双链DNA的固相载体在R1试剂中的浓度为0.2mg/mL~0.6mg/mL;优选地,所述包被有双链DNA的固相载体在R1试剂中的浓度为0.2mg/mL~0.4mg/mL。
在其中一些实施例中,所述包被有双链DNA的固相载体中,双链DNA和固相载体的质量比例为(1~10):1000;优选地,包被有双链DNA的固相载体中,双链DNA和固相载体的质量比例为(2~10):1000;优选地,包被有双链DNA的固相载体中,双链DNA和固相载体的质量比例为(2~5):1000;优选地,每1mg固相载体上包被有2μg~5μg双链DNA。
在其中一些实施例中,所述肝素选自肝素的可溶性盐;优选地,所述肝素选自肝素钠、肝素钾、肝素锂和肝素钙中的一种或多种。
在其中一些实施例中,所述信号物质选自荧光团、比色标记、量子点、胶体金、生物素、用于拉曼衍射成像的炔烃基团、用于click反应的环烯烃、用于聚合物标记的引发基团、多肽/蛋白分子、LNA/PNA、非天然氨基酸及其类似物、非天然核酸及其类似物和纳米结构中的任意一种或多种;
优选地,所述信号物质为荧光团;
优选地,所述信号物质为吖啶类。
在其中一些实施例中,所述R1分散剂包括缓冲基质、无机盐、稳定剂、糖类、表面活性剂及防腐剂中的一种或多种;和/或,
所述R2试剂包括缓冲基质、无机盐、稳定剂、糖类、表面活性剂及防腐剂中的一种或多种;和/或,
所述R3分散剂包括缓冲基质、无机盐、稳定剂、糖类、表面活性剂及防腐剂中的一种或多种。
在其中一些实施例中,所述包被有双链DNA的固相载体中的双链DNA与固相载体的连接方式为共价连接或者非共价连接;优选地,所述双链DNA与固相载体的连接方式为共价连接;优选地,所述固相载体偶联有链霉亲和素,所述双链DNA连接有生物素,所述双链DNA通过生物素和链霉亲和素包被于所述固相载体上;优选地,所述固相载体偶联有链霉亲和素,所述链霉亲和素上结合有多聚赖氨酸标记的生物素,所述双链DNA通过多聚赖氨酸包被于所述固相载体上。
上述试剂盒在制备用于诊断系统性红斑狼疮的诊断试剂或试剂盒中的应用。
本发明旨在降低抗双链DNA抗体检测中的非特异性干扰,通过在含有双链DNA包被固相载体的分散试剂中加入肝素以达到此目的。
具体实施方式
为了便于理解本发明,下面将对本发明进行更全面的描述。本发明可以以许多不同的形式来实现,并不限于本文所描述的实施例。相反地,提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
除非另有定义,本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的,不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
双链脱氧核糖核酸(double stranded DNA,dsDNA)抗体是一种能够与天然DNA结合的自身抗体。在绝大多数系统性红斑狼疮(SLE)患者的血清中均存在该抗体,其与SLE的病理变化、活动性、疗效及预后有很密切的关系。
因此,对于抗双链DNA抗体IgG的检测成为SLE诊断、以及病情追踪和预后判断等具有重要意义。
一方面,本发明实施例提供一种抗双链DNA抗体检测试剂盒,包括包被有双链DNA的固相载体、标记有信号物质的二抗和肝素。在所述试剂盒中,所述肝素至少部分分散于溶液中,该溶液为含有所述包被有双链DNA的固相载体的溶液,或者,所述肝素单独以溶液形式存在于所述试剂盒中。所述肝素在溶液中的浓度为1mg/mL以上;所述二抗为抗受试样品来源种属免疫球蛋白的抗体。
本发明旨在降低抗双链DNA抗体检测中的非特异性干扰,通过在含有双链DNA包被固相载体的分散试剂中加入肝素以达到此目的。
所述包被双链DNA抗原的固相载体以分散液的形式存在。
所述肝素至少存在于所述试剂盒的分散液中。
所述包被有双链DNA的固相载体和肝素的分散液混合物可直接与受试样品反应,然后反应物与标记有信号物质的二抗反应,通过信号物质指征反应结果。
在一些实施方式中,所述试剂盒包括R1试剂和R2试剂,所述R1试剂包括所述包被有双链DNA的固相载体和R1分散剂,所述R2试剂包括所述二抗,所述肝素存在于所述R1试剂中。
在一些实施方式中,所述肝素在所述R1试剂中的浓度为1mg/mL~100mg/mL,例如为1mg/mL、5mg/mL、10mg/mL、20mg/mL、30mg/mL、40mg/mL、50mg/mL、60mg/mL、70mg/mL、80mg/mL、90mg/mL、100mg/mL。在一些实施方式中,所述肝素在所述R1试剂中的浓度为1mg/mL~10mg/mL。优选地,所述肝素在所述R1试剂中的浓度为1mg/mL~2mg/mL。
在一些实施方式中,所述试剂盒包括R1试剂、R2试剂和R3试剂。所述R1试剂包括所述包被有双链DNA的固相载体和R1分散剂。所述R2试剂包括所述二抗。优选地,所述R2试剂包括R2分散液。所述R3试剂包括R3分散剂,所述肝素存在于所述R1试剂或所述R3试剂中,或同时存在于所述R1试剂和所述R3试剂中。所述肝素在所述R1试剂中的浓度优选为1mg/mL以上。所述肝素在所述R3试剂中的浓度优选为1mg/mL以上。
在一些实施方式中,所述肝素选自肝素的可溶性盐。优选地,所述肝素选自肝素钠、肝素钾、肝素锂和肝素钙中的一种或多种。
在一些实施方式中,所述包被有双链DNA的固相载体在R1试剂中的浓度为0.2mg/mL~0.6mg/mL。例如0.2mg/mL、0.3mg/mL、0.4mg/mL、0.5mg/mL或0.6mg/mL。优选地,所述包被有双链DNA的固相载体在R1试剂中的浓度为0.2mg/mL~0.4mg/mL。
在一些实施方式中,所述包被有双链DNA的固相载体中,双链DNA和固相载体的质量比例为(1~10):1000。具体的,双链DNA和固相载体的质量比例可以为1:1000、2:1000、3:1000、4:1000、5:1000、6:1000、7:1000、8:1000、9:1000、10:1000。优选地,包被有双链DNA的固相载体中,双链DNA和固相载体的质量比例为(2~10):1000。优选地,包被有双链DNA的固相载体中,双链DNA和固相载体的质量比例为(2~5):1000。优选地,每1mg固相载体上包被有2μg~5μg双链DNA。
优选的,所述固相载体为铁基材料,如磁微粒。例如Fe2O3或Fe3O4。可选地,所述铁基材料的表面具有功能性的包覆层,例如SiO2。优选的,实施磁微粒为球形。相对于常规的固相载体,如相对于塑料板,磁微粒可通过快速液相动力学,快速有效地捕获生物素化分子,提高了速度和灵敏度。并且,因磁微粒为球体,单位体积的表面积大,可实现高效且稳定的结合能力。
在一些实施方式中,所述固相载体的粒径为50nm~5μm,例如50nm、80nm、100nm、150nm、180nm、200nm、230nm、250nm、280nm、300nm、350nm、380nm、400nm、450nm、480nm、500nm、1μm、2μm、3μm、4μm或5μm。
在一些实施方式中,所述包被有双链DNA的固相载体中的双链DNA与固相载体的连接方式为共价连接或者非共价连接。优选地,所述双链DNA与固相载体的连接方式为共价连接,共价结合能够提高双链DNA在固相载体上的结合牢固性,避免双链DNA的掉落而损失结合率。在一些实施方式中,所述固相载体偶联有链霉亲和素,所述双链DNA连接有生物素,所述双链DNA通过生物素和链霉亲和素包被于所述固相载体上。在一些实施方式中,所述固相载体偶联有链霉亲和素,所述链霉亲和素上结合有多聚赖氨酸标记的生物素,所述双链DNA通过多聚赖氨酸包被于所述固相载体上。
所述二抗为抗受试样品来源种属免疫球蛋白的抗体。优选所述免疫球蛋白为IgG、IgM或IgA中的至少任意一种。
在一些实施方式中,所述二抗与受试样品具有不同的种属来源。例如受试样品来自人,则二抗可选自鼠抗人IgG单克隆抗体、兔抗人IgG单克隆抗体等。
在一些实施方式中,信号物质指可用于提供可检测的(优选可定量的)效果且可以连接至二抗的任何原子或分子。信号物质包括但不限于染料;放射性标记,诸如32P;结合部分诸如生物素;半抗原诸如地高辛;发光、发磷光或发荧光部分;和单独的荧光染料或与可以通过荧光共振能量转移(FRET)抑制或移动发射光谱的部分组合的荧光染料。信号物质可以提供可通过荧光、放射性、比色、重量测定、X射线衍射或吸收、磁性、酶活性等检测的信号。信号物质可以是带电荷的部分(正电荷或负电荷)或可选地,可以是电荷中性的。信号物质可以包括核酸或蛋白序列或由其组合,只要包含标记的序列是可检测的。在一些实施方案中,核酸在没有标记的情况下直接检测(例如,直接读取序列)。
在一些实施方式中,所述信号物质是荧光团、比色标记、胶体金、量子点、生物素以及其他可以用于探测的标签分子(如用于拉曼衍射成像的炔烃基团,用于click反应的环烯烃,用于聚合物标记的引发基团),也可以选自多肽/蛋白分子,LNA/PNA,非天然氨基酸及其类似物(比如拟肽),非天然核酸及其类似物(拟核苷酸)和纳米结构(包括无机纳米颗粒,NV-center,聚集/组装诱导发光分子,稀土离子配体分子,多金属氧簇等)。
优选地,所述信号物质为荧光团。
在一些实施方式中,所述荧光团可选自荧光素类染料、罗丹明类染料以及菁染料。
在一些实施方式中,所述荧光素类染料包括标准荧光素及其衍生物,如异硫氰酸荧光素(FITC)、羟基荧光素(FAM)、四氯荧光素(TET)等。
在一些实施方式中,所述罗丹明类染料包括R101、四乙基罗丹明(RB200)和羧基四甲基罗丹明(TAMRA)等。
在一些实施方式中,所述菁染料主要选自两类,一类是噻唑橙(thiazole orange,TO)、噁唑橙(oxazole orange,YO)系列及其二聚体染料,另一类是多甲川系列菁染料。
在一些实施方式中,荧光团还可以选择下述染料:二苯乙烯、萘酰亚胺、香豆素类、吖啶类、芘类等。
在一些实施方式中,R1分散剂包括缓冲基质、无机盐、稳定剂、糖类、表面活性剂及防腐剂中的一种或多种。
在一些实施方式中,所述R2试剂包括R2分散剂。R2分散剂包括缓冲基质、无机盐、稳定剂、糖类、表面活性剂及防腐剂中的一种或多种。
在一些实施方式中,所述R3分散剂包括缓冲基质、无机盐、稳定剂、糖类、表面活性剂及防腐剂中的一种或多种。
所述R1试剂、R2试剂、R3试剂中的缓冲基质各自独立地选自磷酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、HEPES缓冲液、硼酸缓冲液、醋酸缓冲液、Tris盐酸缓冲液中的至少一种,优选Tris盐酸缓冲液。
所述R1试剂、R2试剂、R3试剂中的稳定剂各自独立地选自甘露醇、海藻糖、葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、聚乙二醇、丙三醇、丙二醇、蔗糖、海藻糖、山梨醇、牛血清白蛋白(BSA)、甘露醇、酪蛋白中的至少一种;优选R1试剂的稳定剂为甘露醇、牛血清白蛋白、丙三醇中的一种或多种,R2试剂的稳定剂为海藻糖、酪蛋白、丙三醇中的一种或多种;R3试剂中的稳定剂为牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白中的一种或多种。
所述R1试剂、R2试剂、R3试剂中的表面活性剂各自独立地选自Tween20、Tween-80、Span-60、Triton X-45、Triton X-100或Triton X-305中的至少一种。
所述R1试剂、R2试剂、R3试剂中的无机盐各自独立地选自钠盐、钾盐中的至少一种,优选氯化钠。
所述R1试剂、R2试剂、R3试剂中的防腐剂各自独立地选自KroVin系列防腐剂、ProClin系列防腐剂或叠氮钠中的至少一种,优选ProClin300(PC300)。
在一些实施方式中,R1试剂包括10mmol/L~200mmol/L的缓冲液、150mmol/L~600mmol/L的无机盐离子、10g/L~50g/L的稳定剂、0.1mL/L~1.0mL/L的表面活性剂、0.1mL/L~6mL/L的防腐剂;
在一些实施方式中,R2试剂包括10mmol/L~200mmol/L的缓冲液、150mmol/L~600mmol/L的无机盐离子、10g/L~50g/L的稳定剂、0.1mL/L~1.0mL/L的表面活性剂、0.1mL/L~6mL/L的防腐剂。
另一方面,本发明提供了如上所述的抗双链DNA抗体IgG测定试剂盒的制备方法,所述制备方法包括:双链DNA抗原的制备;固相载体的制备;信号物质标记的二抗的制备。
在一些实施方式中,所述固相载体偶联有链霉亲和素,所述双链DNA连接有生物素,所述双链DNA通过生物素和链霉亲和素包被于所述固相载体上。所述制备方法如下:
(1)将链霉亲和素溶液加入固相载体中进行偶联反应,得到链霉亲和素偶联的固相载体;
(2)将生物素化的双链DNA抗原溶液加入链霉亲和素偶联的固相载体中进行孵育包被,得到所述包被双链DNA抗原的固相载体。
在一些实施方式中,所述生物素化的双链DNA抗原的制备方法可以为:暗室中,取dsDNA和光敏生物素按比例混匀,高压汞灯照射15-20min,期间每隔3-5min混匀一次;正常光照下,用2倍体积正丁醇萃取两次,每次离心13000g离心5min,去上清;后加入2.5倍体积的-20℃预冷的无水乙醇,-20℃静置过夜,13000g离心10min,去上清,沉淀用乙醇洗涤,沉淀干燥后复溶,得到所述生物素化的双链DNA抗原。
在另一实施方式中,DNA与生物素之间形成酰胺键得到生物素化的双链DNA。
在一些实施方式中,所述链霉亲和素包被的固相载体的制备方法可以为:取柠檬酸修饰的固相载体悬浮液,磁分离去上清,缓冲液重悬,加入水溶液,活化固相载体表面羧基,加入链酶亲和素,室温下混悬2-10h,磁分离,去除上清,缓冲液重悬,得到链酶亲和素包被的固相载体。
在一些实施方式中,信号物质(例如吖啶酯)标记的二抗的制备方法可以为:取二抗,加入缓冲液(例如碳酸盐),混匀,然后加入信号物质混匀,室温下避光反应,1-2h后取出,离心脱盐柱脱盐处理,脱盐过程中首先分别用纯净水和/或缓冲液进行处理,最后加入得到的二抗的信号物质溶液,收集离心管中的液体至保存管得到二抗的信号物质标记物。
再一方面,本发明还提供上述实施例的包被有双链DNA的固相载体、标记有信号物质的二抗和肝素联合在制备用于诊断系统性红斑狼疮的诊断试剂或试剂盒中的应用。
再一方面,本发明提供上述的试剂盒的使用方法,包括以下步骤:
先将含有肝素的R1试剂与受试样品反应;然后添加R2试剂进行二抗反应,使得肝素先与受试样品接触。
或者,先将含有肝素的R1试剂和/或R3试剂与受试样品反应;然后添加R2试剂进行二抗反应,使得肝素先与受试样品接触。
以下为具体实施例。
各实施例基础组分为下表1所示:
表1
检测方法:
采用迈克生物全自动化学发光免疫分析仪利用间接法原理进行检测,取10μL样本、50μLR1试剂、100μLR3试剂混合,反应10min后洗涤;然后加入100μLR2试剂混合,继续反应10min后洗涤,最后加入底物液,测量RLU值。
实施例1
本实施例中,分别在试剂R1中加入肝素钠的浓度0(不加肝素钠,对照)、浓度1(0.01mg/mL)、浓度2(0.1mg/mL)、浓度3(1mg/mL)、浓度4(10mg/mL)、浓度5(100mg/mL),试剂R1的磁微粒浓度为0.4mg/mL、双链DNA包被量为5μg/mg,其余成分同表1。检测结果如表2所示;
表2:不同肝素钠浓度检测结果
注:样本Q1~Q10经INOVA(dsDNA)试剂盒检测显示为阴性,鉴定为健康人群样本;样本S11~S20经INOVA(dsDNA)试剂盒检测显示为阳性,鉴定为临床患者样本;
结论:随着肝素钠用量增加,RLU值逐渐降低,整体趋势逐渐变缓,当含量为1mg/mL时达到平台期,因此认为,当肝素钠的含量为1mg/mL时消除假阳效果最佳。
实施例2
在试剂R1中的肝素钠浓度为1mg/mL,双链DNA包被比例为5μg/mg的条件下,分别在试剂R1中加入不同浓度磁微粒(0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.6mg/mL),其余成分同表1。检测结果如表3所示;
表3:不同浓度磁微粒检测结果
结论:与不添加肝素钠的试剂盒相比,在试剂R1中添加肝素后,无论试剂R1磁微粒的浓度大小,其检测的RLU值均明显降低,可以认为,在试剂R1中添加肝素钠可以有效消除假阳性。
与0.6mg/mL相比,当磁微粒浓度为0.4mg/mL时,样本检测的RLU值变化更大。即当磁微粒浓度增加到0.4mg/mL时,RLU值变化趋势减缓。因此可以认为,磁微粒浓度为0.4mg/mL时,检出效果最佳。
实施例3
在试剂R1中的肝素钠浓度为1mg/mL、磁微粒浓度为0.4mg/mL的条件下,调整试剂R1中双链DNA包被量分别为1μg/mg、2μg/mg、5μg/mg、10μg/mg。其余成分同表1。检测结果如表4所示;
表4:双链DNA不同包被比例检测结果
结论:含肝素条件下,随双链DNA包被量增加,样本RLU值明显升高,当包被量为2μg/mg时,随机正常样本的RLU值变化较小,更利于去除假阳性。阳性样本的RLU值随着双链DNA包被量的增加变化率逐渐放缓,因此认为2μg/mg包被量检测效果最佳。
实施例4
将多聚赖氨酸标记生物素后包被于偶联有链霉亲和素的磁微粒上,然后双链DNA以5μg/mg比例与多聚赖氨酸非共价结合并包被在磁微粒上,最后将磁微粒稀释至0.4mg/mL,在试剂R1中加入1mg/mL肝素钠,其余成分同表1;检测、结果如表5所示;
表5:多聚赖氨酸连接方式检测结果
结论:使用多聚赖氨酸的连接方式,添加肝素钠后仍具有消除假阳的作用。因此认为,双链DNA抗原包被磁微粒的方式不影响肝素钠的抗干扰能力。
实施例5
本实施例中,将肝素钠(1mg/mL)添加到试剂R3组分中,其余成分同表1,
检测结果如表6所示;
表6:R3组分中含肝素钠检测结果
结论:在试剂反应体系中,无论将肝素添加至R3组分中、还是试剂R1中,都能使本发明的抗双链DNA抗体检测试剂盒在使用时,具有消除样本检测假阳性的作用。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合,为使描述简洁,未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述,然而,只要这些技术特征的组合不存在矛盾,都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,便于具体和详细地理解本发明的技术方案,但并不能因此而理解为对发明专利保护专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准,说明书可以用于解释权利要求的内容。
Claims (10)
1.一种抗双链DNA抗体检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括R1试剂和R2试剂,所述R1试剂包括包被有双链DNA的固相载体、R1分散剂和肝素,所述R2试剂包括标记有信号物质的二抗,所述肝素在所述R1试剂中的浓度为1mg/mL以上;
或者,
所述试剂盒包括R1试剂、R2试剂和R3试剂,所述R1试剂包括包被有双链DNA的固相载体和R1分散剂,所述R2试剂包括标记有信号物质的二抗,所述R3试剂包括R3分散剂,肝素存在于所述R1试剂或所述R3试剂中,或同时存在于所述R1试剂和所述R3试剂中,
所述肝素在所述R1试剂中的浓度为1mg/mL以上;和/或,所述肝素在所述R3试剂中的浓度为1mg/mL以上;
所述二抗为抗受试样品来源种属免疫球蛋白的抗体。
2.根据权利要求1所述的抗双链DNA抗体检测试剂盒,其特征在于,所述免疫球蛋白为IgG、IgM或IgA中的至少任意一种。
3.根据权利要求1所述的抗双链DNA抗体检测试剂盒,其特征在于,所述固相载体为磁微粒,所述肝素在所述R1试剂中的浓度为1mg/mL~100mg/mL;优选地,所述肝素在所述R1试剂中的浓度为1mg/mL~10mg/mL;优选地,所述肝素在所述R1试剂中的浓度为1mg/mL~2mg/mL。
4.根据权利要求3所述的抗双链DNA抗体检测试剂盒,其特征在于,所述包被有双链DNA的固相载体在R1试剂中的浓度为0.2mg/mL~0.6mg/mL;优选地,所述包被有双链DNA的固相载体在R1试剂中的浓度为0.2mg/mL~0.4mg/mL。
5.根据权利要求3所述的抗双链DNA抗体检测试剂盒,其特征在于,所述包被有双链DNA的固相载体中,双链DNA和固相载体的质量比例为(1~10):1000;优选地,包被有双链DNA的固相载体中,双链DNA和固相载体的质量比例为(2~10):1000;优选地,包被有双链DNA的固相载体中,双链DNA和固相载体的质量比例为(2~5):1000;优选地,每1mg固相载体上包被有2μg~5μg双链DNA。
6.根据权利要求3所述的抗双链DNA抗体检测试剂盒,其特征在于,所述包被有双链DNA的固相载体中的双链DNA与固相载体的连接方式为共价连接或者非共价连接;优选地,所述双链DNA与固相载体的连接方式为共价连接;优选地,所述固相载体偶联有链霉亲和素,所述双链DNA连接有生物素,所述双链DNA通过生物素和链霉亲和素包被于所述固相载体上;优选地,所述固相载体偶联有链霉亲和素,所述链霉亲和素上结合有多聚赖氨酸标记的生物素,所述双链DNA通过多聚赖氨酸包被于所述固相载体上。
7.根据权利要求1~6任一项所述的抗双链DNA抗体检测试剂盒,其特征在于,所述肝素选自肝素的可溶性盐;优选地,所述肝素选自肝素钠、肝素钾、肝素锂和肝素钙中的一种或多种。
8.根据权利要求1~6任一项所述的抗双链DNA抗体检测试剂盒,其特征在于,所述信号物质选自荧光团、比色标记、量子点、胶体金、生物素、用于拉曼衍射成像的炔烃基团、用于click反应的环烯烃、用于聚合物标记的引发基团、多肽/蛋白分子、LNA/PNA、非天然氨基酸及其类似物、非天然核酸及其类似物和纳米结构中的任意一种或多种;
优选地,所述信号物质为荧光团;
优选地,所述信号物质为吖啶类。
9.根据权利要求1~6任一项所述的抗双链DNA抗体检测试剂盒,其特征在于,所述R1分散剂包括缓冲基质、无机盐、稳定剂、糖类、表面活性剂及防腐剂中的一种或多种;和/或,
所述R2试剂包括缓冲基质、无机盐、稳定剂、糖类、表面活性剂及防腐剂中的一种或多种;和/或,
所述R3分散剂包括缓冲基质、无机盐、稳定剂、糖类、表面活性剂及防腐剂中的一种或多种。
10.权利要求1~9任一项所述的抗双链DNA抗体检测试剂盒在制备用于诊断系统性红斑狼疮的诊断试剂或试剂盒中的应用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202111069351.4A CN113671195A (zh) | 2021-09-13 | 2021-09-13 | 抗双链dna抗体检测试剂盒及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202111069351.4A CN113671195A (zh) | 2021-09-13 | 2021-09-13 | 抗双链dna抗体检测试剂盒及其应用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN113671195A true CN113671195A (zh) | 2021-11-19 |
Family
ID=78549338
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202111069351.4A Pending CN113671195A (zh) | 2021-09-13 | 2021-09-13 | 抗双链dna抗体检测试剂盒及其应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN113671195A (zh) |
Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0670495A1 (en) * | 1994-03-01 | 1995-09-06 | Hadasit Medical Research Services & Development Co. Ltd. | Immunoassay reagents, kits and methods |
JPH0829420A (ja) * | 1994-07-15 | 1996-02-02 | Sanyo Chem Ind Ltd | 免疫反応干渉作用の除去方法 |
JPH0835965A (ja) * | 1994-07-25 | 1996-02-06 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | 自己抗体の免疫学的測定法 |
CN1877329A (zh) * | 2005-06-07 | 2006-12-13 | 徐军杰 | 检测抗dna抗体的试剂盒 |
CN101377488A (zh) * | 2007-08-28 | 2009-03-04 | 奥索临床诊断有限公司 | 葡萄糖胺聚糖减少免疫测定中非特异性结合的应用 |
CN105929156A (zh) * | 2016-04-20 | 2016-09-07 | 北京中航赛维生物科技有限公司 | 一种抗双链DNA抗体IgG的磁微粒化学发光定量测定试剂盒及制备和检测方法 |
CN110632290A (zh) * | 2019-09-27 | 2019-12-31 | 昆山迪安医学检验实验室有限公司 | 一种抗双链dna抗体检测试剂 |
CN111548416A (zh) * | 2020-05-12 | 2020-08-18 | 迈克生物股份有限公司 | 检测抗双链dna抗体的试剂盒、组合物及用途 |
-
2021
- 2021-09-13 CN CN202111069351.4A patent/CN113671195A/zh active Pending
Patent Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0670495A1 (en) * | 1994-03-01 | 1995-09-06 | Hadasit Medical Research Services & Development Co. Ltd. | Immunoassay reagents, kits and methods |
JPH0829420A (ja) * | 1994-07-15 | 1996-02-02 | Sanyo Chem Ind Ltd | 免疫反応干渉作用の除去方法 |
JPH0835965A (ja) * | 1994-07-25 | 1996-02-06 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | 自己抗体の免疫学的測定法 |
CN1877329A (zh) * | 2005-06-07 | 2006-12-13 | 徐军杰 | 检测抗dna抗体的试剂盒 |
CN101377488A (zh) * | 2007-08-28 | 2009-03-04 | 奥索临床诊断有限公司 | 葡萄糖胺聚糖减少免疫测定中非特异性结合的应用 |
CN105929156A (zh) * | 2016-04-20 | 2016-09-07 | 北京中航赛维生物科技有限公司 | 一种抗双链DNA抗体IgG的磁微粒化学发光定量测定试剂盒及制备和检测方法 |
CN110632290A (zh) * | 2019-09-27 | 2019-12-31 | 昆山迪安医学检验实验室有限公司 | 一种抗双链dna抗体检测试剂 |
CN111548416A (zh) * | 2020-05-12 | 2020-08-18 | 迈克生物股份有限公司 | 检测抗双链dna抗体的试剂盒、组合物及用途 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
KRAGSTRUP TW 等: "A simple set of validation steps identifies and removes false results in a sandwich enzyme-linked immunosorbent assay caused by anti-animal IgG antibodies in plasma from arthritis patients", SPRINGERPLUS, vol. 2, no. 1, pages 263, XP055600558, DOI: 10.1186/2193-1801-2-263 * |
PETTERSSON K 等: "Free and complexed prostate-specific antigen (PSA): in vitro stability, epitope map, and development of immunofluorometric assays for specific and sensitive detection of free PSA and PSA-alpha 1-antichymotrypsin complex", CLIN CHEM, vol. 41, pages 1480 - 1488 * |
徐兵;陈怡;黄毅;马晓宁;潘晨;伍严安;: "鱼精蛋白和肝素预处理ELISA检测抗双链DNA抗体的研究", 临床检验杂志, no. 05, pages 351 - 352 * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4786589A (en) | Immunoassay utilizing formazan-prelabeled reactants | |
JP2806924B2 (ja) | 粒子分離方法 | |
US4960692A (en) | Assay employing binding pair members on particles and on a filter or membrane | |
US4735907A (en) | Stabilized fluorescent rare earth labels and labeled physiologically reactive species | |
US4962023A (en) | Single incubation immuno sorbent assay method using particle labels to detect test antigen specific antibodies in presence of other antibodies | |
US20110177620A1 (en) | Bioanalytical assay | |
US20030162236A1 (en) | Compensation for variability in specific binding in quantitative assays | |
JPH03502244A (ja) | 試験方法およびそのための試薬キツト | |
WO1993008472A1 (en) | Binding assay employing labelled reagent | |
JPH0737988B2 (ja) | イオン捕捉イムノアッセイ法および装置 | |
CN112730839B (zh) | 一种磁微粒化学发光法测定细胞角蛋白19片段含量的试剂盒 | |
JP2002214237A (ja) | 検出方法 | |
EP0648334A1 (en) | Immunoassay using dye complexed enzyme conjugates | |
WO2023098135A1 (zh) | 包含磁性发光微球的光激化学发光免疫检测的试剂盒及其应用 | |
AU648625B2 (en) | Test method and reagent kit therefor | |
US5672475A (en) | Mixed luminescent conjugate test | |
US6444261B1 (en) | Storage-stable particle, in particular carrier for carrier-bound reactions, and methods of producing said particle | |
WO2021217768A1 (zh) | 藻红蛋白免疫荧光探针制备方法 | |
EP0256117A1 (en) | Latex agglutination using avidin/biotin system | |
JP2657066B2 (ja) | 可逆的凝集メデイエーター | |
CA2105438A1 (en) | Indirect chromatographic antigen sandwich test for detection of specific antibody and device therefor | |
JPH06501559A (ja) | 増幅不均一化学ルミネッセンスイムノアッセイ | |
CN113671195A (zh) | 抗双链dna抗体检测试剂盒及其应用 | |
JP3684454B2 (ja) | 沈殿可能な固相を用いる不均一系イムノアッセイ | |
JPH1123573A (ja) | 免疫学的測定方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |