JPH02238361A - 免疫反応測定法および免疫反応測定用試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は高惑度で非特異反応が少ない免疫反応測定方法
および測定用試薬に関する。

（従来の技術） 各種生体成分から特定の被測定物質を検出もしくは定量
するために抗原抗体反応が利用されている。例えば，抗
原もしくは抗体である被測定物質に対する抗体もしくは
抗原を担持させたラテックスなどを試薬として凝集反応
を測定することにより被測定物質の測定がなされる。こ
のような免疫反応の測定方法としては５上記のように凝
集反応を光学的もしくは肉眼により目視観察する方法，
酵素免疫測定法（ＥＩＡ）　，放射免疫測定法（ＲＩＡ
）など各種方法が知られている。

これらの免疫反応の測定法において，抗原抗体反応を促
進させ，あるいは微量成分を効果的に測定することを目
的として種々の添加剤が用いられている。例えば．反応
系にポリエチレングリコールやデキストランを添加する
方法が採用されている。これらは水溶性もしくは親水性
のボリマーであり，これらを加えることにより疎水性相
互作用により進行する抗原抗体反応が促進される。例え
ば，これらの化合物を加えることによりラテックス試薬
の凝集反応が促進される。しかし，これらの化合物によ
り反応系における非特異反応もまた促進されるため，バ
ックグラウンド値がとがる。

そのため，バックグラウンド値を越える量の測定値でな
いと検出することができない。つまり多量の試料を必要
とする。従って，この方法は，短時間で反応を進行させ
ることは可能であるが，非特異反応を抑制するには充分
な方法とはいえない。

さらに，使用されるポリエチレングリコールの市販品は
，　２９０ｎｍ　４４近に吸収を有する不純物を含有す
ることが多い。そのため，使用前に精製する必要があり
，取扱いが煩雑となる。

非特異反応を抑制する方法として，特開昭５７−１８２
１６９号公報には測定すべき試料にポリアニオンを添加
する方法が開示されている。ポリアニオンとしては，デ
キストラン硫酸，ヘパリン８ボリスチレンスルホン酸，
コンドロイチン硫酸などが挙げられる。これらを添加す
ることにより非特異反応が抑制される。Ｌ記公報の方法
においては，ポリアニオンは．　０．００１〜０．５重
量％の割合で反応系に含有される。しかし，上限の０．
５重量％付近の濃度においては．反応液の粘度が高いた
め反応性が高くなりすぎ，バックグランド値が上がる。

下限の０．００１重量％付近では，非特異反応の抑制が
充分に行なわれ得ない。さらにこの方法においては，測
定の感度自体がいまだ充分であるとはいえない。

（発明が解決しようとする課題） 本発明は，上記従来の問題点を解決するものであり，そ
の目的とするところは，非特異反応が抑制されかつ高感
度の得られる免疫反応測定法．および免疫反応測定用試
薬を提供することにある。

（課題を解決するための手段） 本発明の免疫反応測定法は，抗原または抗体で′／′ζ
イ，被測定物質を該抗原または抗体に対する抗体または
抗原を用いて測定する免疫反応測定法であ、，゛乙該免
疫反応の反応系にコンドロイチン硫酸が０．１〜０．３
％（重量／重量）の割合で存在し，そのことにより上記
目的が達成される。

本発明の免疫反応測定用試薬は，被測定物質である抗原
または抗体に対する抗体または抗原，お４ζびコンドロ
イチン硫酸を含有する免疫反応測定用試薬であって；該
免疫反応の反応系に該コントロイチン硫酸が０．１〜０
．３％（重量／重量）の割合で含有されるようにして用
いられ，そのことにより上記目的が達成される。

本発明に用いられるコンドロイチノ硫酸の分子量は１　
，　０００〜・ｂｏｏ，ｏｏｏが適当である。分子量が
小さすぎると，抗原および抗体との相互作用が小さくな
るため所期の効果が得られない。分子量が大きすぎると
水に溶解させたときの粘度が高くなるため，取り扱いが
困難となる。

本発明により測定されるべき物質は特に限定されず．一
般に抗原抗体反応を利用して測定し得る生理活性物質は
いずれも測定が可能である。被測定物質としては，タン
パク５脂質などがあり、それには例えば、各種抗原，レ
セプター，酵素などが挙げられる。具体的には，　ＨＢ
Ｓ抗体，　ＩＩＢｃ抗体，梅毒抗体（トレボネーマ抗原
および脂質抗原に対する抗体），抗旧■　（ヒト免疫不
全ウィルス）抗体，抗ＡＴＬＡ　（成人′１゛細胞白血
病関連抗原）抗体などの，怒染症に関係する抗体が挙げ
られる。

本発明により被測定物質を測定する場合の測定系は特に
限定されず，通常の免疫比濁法，　ＩＩ！ＩＡ，　ＲＩ
Ａ，蛍光免疫測定法，血球凝集法などが利用され得る。

凝集反応，特にラテックス凝集反応のような逆受ム・凝
集反応が好適に用いられる。例えば，ラテックス試薬を
用いた免疫反応により被測定物質を測定する場合には，
被測定物質である抗原または抗体に対する抗体または抗
原を含有するラテックス試薬シ１″．あらかじめコンド
ロイチン硫酸を添加して，おく。このような試薬を用い
て免疫凝集反応を行ない．生じた凝集の程度を光学的に
観察もしくは目視観，察することにより被測定物質が測
定され得る、′Ｉｊ）るいは，コンドロイチン硫酸を含
まないラテユ・クスを使用することも可能で．この場合
には免疫反応時にコンドロイチン硫酸が該反応系に存在
するようにすればよい。例えば，検体にあらかしめコン
ドロイチン硫酸を添加してお《方法；使川ずろ緩衝液に
コンドロイチン硫酸を加えておく方法などがあり，特に
限矩されない。言いかえれば，本発明の測定用試薬は．
例えば．抗体または抗原，およびコンドロイチン硫酸を
含む，１液系の試薬；抗体または抗原を含む第１試薬と
，コンドロイチン硫酸を含む緩衝液でなる，第２試薬と
で構成される２液系の試薬；など種々の形態であり得る
。上記免疫反応においては，コンドロイチン硫酸は，該
反応系に０．１〜０．３％（Ｗ／Ｗ）　，好ましくは０
．２〜０．３％（訂■の割合で含有されるように調整さ
れる。コンドロイチン硫酸の濃度が０．１％（Ｗ／Ｗ）
を下まわると．該コンドロイチン硫酸の抗原および抗体
との相互作用が小さくなる結果，増感効果が得られない
。逆に０．３％（讐ハ）を上まわると反応液の粘度が高
くなるため反応性が必要以上に高《なり，非特異反応が
促進される。その結果，バックグランド値が上昇する。

上記免疫反応の条件は通常の場合と同様であり，反応媒
体としては，被測定物質の種類に応じた各種緩衝液が用
いられる。この緩衝液は，被測定物質を失活させること
がな《，かつ抗原抗体反応を阻害しないようなイオンへ
度やｐＨを有するものであればよい。反応時には，さら
に測定系の特異性を高めるために，塩化コリン，　ＥＤ
ＴＡなどを添加することも可能である。

本発明によれば，コンドロイチン硫酸の働きにより．免
疫反応における非特異反応が抑制され，かつ高感度に被
測定物質が測定され得る。以下に，本発明の実施例を述
べ，その効果を具体的に説明する。

（実施例） 以下に本発明を実施例につき説明する。

尖施貞土 （凝集板を用いたマニュアル法による梅毒抗体の測定） 梅毒トレポネーマ抗原に対する抗体の測定を行なった。

本実施例においては，次に挙げる試薬および測定用検体
を使用した。後述の実施例２〜６および比較例１〜６に
おいて〜も，特に指示されない限り，同名の試薬および
検体については，同様のものを使用した。

ＰＢＳ　（リン酸緩衝液）：リン酸一ナトリウム（２水
和物），リン酸二ナトリウム（２水和物）および塩化ナ
トリウムを，リン酸および塩化ナトリウムの終濃度がそ
れぞれ０．０２Ｍおよび０．１５Ｍ，　ｐＨが７．４と
なるように精製水に加えて，調製を行なった。

１％　ＢＳＡ　−　ＰＢＳ　：　ＰＢＳに試薬特級ＲＳ
Ａ　　（ウシ血清アルブミン）を１％（Ｗ／Ｗ　）とな
るように溶解させて調製した。

１％トリトンｘ−ｉｏｏ　　：リン酸緩衝液に１・リト
ンＸ−１００を１％（誓八）となるように？容解させた
。

コンドロイチン硫酸溶液：１％ＢＳＡ　−　ＰＢＳ４１
：　：＋ンドロイチン硫酸ナトリウム（東京化成社製；
特級試薬）を，それぞれ０．００５，　０．０１　，　
Ｏ．．０５，　０．１．．０．２．　０．３，　０．４
．　０．５，　０．６，　０．８および１、Ｏ％（ＩＱ
／りとなるように溶解させた。

３％ポリエチレングリコール：１％ＢＳＡ　　−ＰＢＳ
にポリエチレングリコール（半井化学社製；平均分子ｉ
１６０００　）を３％（一ハ）となるように溶解させた
。

３％デキストラン．：１％ＢＳＡ　−　ＰＢＳにデキス
トラン（和光純薬社製）を３％（Ｗ／Ｗ　）となるよう
に溶解させた。

デキストラン硫酸溶液：１％ＢＳＡ　　−ＰＢＳにデキ
ストラン硫酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ社製；特級試薬）
を，それぞれ０．００５．　０．０１，０．０５，　０
．１．　０．２，　０．３，０．４，０．５．０．６．
０．８および１．０％（一八）となるように溶解させた
。

梅毒抗原液一家兎翠丸中で１０〜１４日間培養したトレ
ボネーマ　パリダム「肛肛匹竺虹Ｕ旦旦」；ＣＤＣ　（
（：ｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｄｉｓｅａｓｅ　Ｃｃ−ｒ＋
＊ｖｏ１，　Ｐｕｂｌｉｃ　ＩｌｅａｌｔｂＳｅｒｖｉ
ｃｅ，　Ｕ．Ｓ．　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｈｅ
ａｌｔｈ，　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｎｄ　Ｗｅｌｆａｒ
ｅ　，　Ａｔｌａｎｔａ　，　Ｇ＋ｌｏｒｇｉａ　）よ
り入手し〆たちのを家兎翠丸に接種し，８１代培養した
ものを用いた〕を生理食塩水中に１０９個菌体／ｍｌと
なるように懸濁した菌体懸濁液１ｍｌを採り２　リン酸
緩衝液中で遠心分離（６，　０００ｒｐｍ　Ｘ　５分，
３回）することにより洗浄した。次いで，得られた沈澱
に１％トリトンＸ−１００をｌｍｌ添加し，３７゜Ｃに
て３０分間インキユベートした。その後，これを超遠心
分離機にか，けて（５０，　０００ｒｐｍ　Ｘ　１時間
）上清を採取し，１％トリトンＸ−１００で１　，　０
００倍希釈して使用した。

梅毒陽性家兎血清：トレポネーマ　パリダムを來丸に接
種後４５日間飼育した家兎から血清を採取した。この血
清を１％ＢＳＡ・ＰＢＳで１００倍，２００倍および４
００倍に希釈して使用した。

正常家兎血清：トレポネーマ　バリダムを接種されてい
ない家兎から採取した血清を用いた。市販のＴＰＨＡキ
ット（セロディアＴＰ；富士レビオ製）およびセロクリ
ットＴＰ（化血研）を用いてタイター（力価）を測定し
たところ，結果は陰性を示した。この血清を１％ＢＳＡ
　−　ＰＢＳで１００倍から４００倍に希釈して用いた
。

ラテックス：積水化学工業■製の粒径０．２３μｍのポ
リスチレンラテックス（固形分１０％）を用いた。

（Ａ）ラテックスへの梅毒抗原の惑作：ラテックス１０
０μ２と，梅毒抗原液４００μ２とを速やかに混合し，
室温で撹拌した。１時間後に１％ＢＳＡＰＢＳを５ｄ加
え，室温で１時間撹拌した後，　１５０００ｒｐｍで１
時間遠心した。これを２回繰り返してラテックスを洗浄
した。洗浄後のべレフトを２ｄのコンドロイチン硫酸溶
液（０．０１，　０．１，　０．２，　０．４０．６，
　０．８または１．０％（Ｗ／Ｗ）　）に懸濁させ，よ
く分散して固形分０．５％のラテックス試薬を得た。

これを４゜Ｃにて保存した。

（Ｂ）梅毒抗体の測定：梅毒陽性家兎血清と（Ａ）項で
得られたラテックス試薬とを５０μβずつ凝集観察板上
に採り，混合・撹拌したのち３分間反応させた。対照と
して，正常家兎血清についても同様に反応を行なった。

ラテックス試薬の凝集を目視観察した。凝集した検体を
陽性，凝集の認められなかった検体を陰性とした。その
結果を表１に示す。表１における判定の基準は，次のと
おりである。

コンドロイチン硫酸溶液の代わりに１％ＢＳＡ・ＰＢＳ
，３％ポリエチレングリコール，３％デキストランまた
はデキストラン硫酸溶液〔０．Ｏｌ，　０．１，０．２
．　０．４．　０．６．　０．８または１．０％（Ｗ／
Ｗ）　）を用いて実施例１と同様に反応を行なった。そ
の結果を表１に示す。

（以下余白） 表１ １′０．０１〜１．０の数値は各溶液中の濃度（重量／
重量）％を示す。

表１から，本発明のラテックス試薬を用いると．従来の
試薬では偽陽性が生じる検体でも．非特異反応を起こす
ことなく正確に測定し得ることが明らかである。さらに
，高希釈率の検体も高惑度で測定し得ることがわかる。

実崖五又 （全自動分析装置を用いた梅毒抗体の測定）実施例１と
同様の検体および試薬を用い．日立７０５０型全自動分
析装置により測定を行なった。但し，ラテックス試薬に
はコンドロイチン硫酸は加えず，１％ＢＳＡ　−　ＰＢ
Ｓで希釈して固形分０．２５％に調整した。後述の希釈
液としてはコンドロイチン硫酸溶液（０．００５，０．
０５．　０．１．　０．２．　０．３，　０．４または
０．５％（Ｗ／Ｗ）　）を使用した。測定条件は次のと
おりである。

検体容量　　　　　２０μ！ ラテックス試薬（Ｒ２）　５０μ２ 希釈液（Ｒｌ）　　　　　３５０μ２ 測定波長　　　　　５７０ｎｍ 測定温度　　　　　３７゛Ｃ 測定開始後，５分後と１０分後の５７０ｎｍにおける吸
光度の差（Δ０ロ，，。）を測定し．この吸光度の変化
量を表２に示した（ｎ−４の平均値）。各希釈倍率の陽
性血清試料を用いて試験したときの，使用したコンドロ
イチン硫酸の濃度と八００，ク。との関係を，第１図（
ａ）に示す． 工較拠呈 希釈液として，ｌ％ＢＳＡ−ＰＢＳ，　　３％ポリエチ
レングリコール，３％デキストランまたはデキストラン
硫酸溶液（０．Ｏ０５．０．０５．　０．１，　０．２
．　０．３．　０．４または０．５％（Ｗ／Ｗ）　］を
用いたこと以外は実施例２と同様である。その結果を表
２に示す。

各希釈倍率の陽性血清試料を用いて試験したときの，使
用したデキストラン硫酸の濃度とΔＯＤ，，。

との関係を第１図Φ）に示す。

（以下余白） 表２および第１図（ａ）および（ｂ）の結果から明らか
なように，本発明によれば従来の方法では凝集が認めら
れなかうた高希釈率の陽性血清においても，陽性と判定
し得る程度の高い感度が得られた。さらに，非特異反応
による凝集が認められない。特開昭５７−１８２１６９
号公報に記載のデキストラン硫酸を用いても比較的良好
な結果が得られるが．例えば．０．３％の濃度の場合を
比較すると，本発明のコンドロイチン硫酸を用いた方法
のほうが，その効果がはるかに大きいことがわかる。こ
のように．本発明により，特異性が高く，高感度の測定
が達成された． １隻■工 （ＥＬＩＳＡによる梅毒抗体の測定） 実施例１に挙げられた試薬および検体に加えて，本実施
例では，さらに次の試薬およびプレートを用いた． ベルオキシダーゼ標識抗ウサギＩｇＧ　　：ベルオキシ
ダーゼ標識抗ウサギＩｇＧ　　（マイルズ・ラボラトリ
ーズ社）を１％ＢＳＡ　−　ＰＢＳで１　．　０００倍
に希釈して？いた． マイクロタイタープレート：９６六マイクロタイタープ
レート（ヌンク社製）を用いた。

ベルオキシダーゼ基質：リン酸−クエン酸緩衝液にＯ−
フェニレンジアミン（２塩酸塩）を２■／ｄ，そして過
酸化水素水を０．０３％（Ｈ２０■）となるように加え
た。基質の調製は使用直前に行った。

ＩＮ硫酸：濃硫酸と精製水で希釈してＩＮ硫酸水溶液と
した． （Ａ）抗原の固定化：梅毒抗原液をマイクロタイタープ
レートの各ウェルに，５０μ２ずつ分注し，室温で１時
間インキヱベートした。ウエルをｌ％ＢＳＡ−ＰＢＳ　
２００　１１　１テ１回洗浄した後，１％ＢＳＡ　・Ｐ
ＢＳ　２００μｌを加えて室温で１時間インキユベート
シ，プロッキングを行った。その後．ｌ％ＢＳＡ・ＰＢ
Ｓを吸引除去し，直ちにＥＬＩＳ八分析に使用した。

（Ｂ）梅毒抗体の測定：１％ＢＳＡ　−　ＰＢＳの代わ
りに，コンドロイチン硫酸溶液（０．００５．　０．０
５，　０．１，０．２，　０．３．　０．４または０．
５％（訂り〕を用いて１００，２００および４００倍に
希釈した梅毒陽性家兎血清を第１抗体溶液とした。これ
を各ウエルに５０μｌずつ分注し，室温で１時間インキ
ユベートした。対照として，正常家兎血清を同様に希釈
した溶液を調製し．これを用いて同様に分注・インキユ
ベートした。

１時間後に，反応液を吸引除去し，１％ＢＳＡＰＢＳ　
２００μｌで３回洗浄したのち，ベルオキシダーゼ標識
抗ウサギＩｇＧ　　（第２抗体溶液）を各ウエルに５０
μｉずつ分注した。室温で１時間インキュ．ベートした
後，反応液を吸引除去し，１％ＢＳＡ　−ＰＢＳ　２０
０μｔで３回洗浄した。

各ウェルに直ちにベルオキシダーゼ基質１００μ！ずつ
を分注し，室温で１５分間インキユベートした。

基質ブランクとして，第１抗体および第２抗体のいずれ
も添加していないウェルを用意し，同様に基質液を添加
してインキユベートした。インキュベート後，ＩＮ硫酸
を１００μβずつ分注し，酵素反応を停止させた。各ウ
ェルの酵素反応時間が一定となるように操作を行った。

反応停止後，マイクロタイタープレートリーダー（ＭＴ
Ｐ−１００　，コロナ社製）により，基質ブランクを対
照として，４９２ｎｍの吸光度を測定した．その結果を
表３に示す（ｎ−４の平均値）．各希釈倍率の陽性血清
試料を用いて試験したときの，使用したコンドロイチン
硫酸の濃度とＯＤａｑｚとの関係を第２図（ａ）に示す
。

上較■主 梅毒陽性血清の希釈液として１％ＢＳＡ　−　ＰＢＳ　
，３％ポリエチレングリコール，３％デキストランまた
はデキストラン硫酸溶液（０．００５，　０．０５．　
０．１．０．２，　０．３，　０．４または０。５％（
Ｗ／Ｗ）　）用いたこと以外は実施例３と同様である。

その結果を表３に示す。各希釈倍率の陽性血清試料を用
いて試験したときの，使用したデキストラン硫酸の濃度
と００４ｑｚとの関係を第２図（ｂ）に示す． （以下余白） 表３の結果から明らかなように，本発明によれば．従来
の方法では抑制できなかった正常家兎血清での非特異反
応を吸光度０から０．００５の間に低下させることが可
能となる。陽性血清に関しては．抗原・抗体反応を特異
的に促進した結果，感度をほぼ２倍に向上させることが
可能となった．裏旌開工 （凝集板を用いたマニュアル法によるＨＢ，抗体の測定
） 本実施例において．実施例ｌと同一名の試薬は実施例１
と同様に調製を行なった。その他の試薬の調製法を次に
示す。

ＨＢ．抗原液：ヒト血漿よりアフィニティーク口マトグ
ラフィーにより精製した精製１１Ｂｓ抗原を使用した。

抗原はリン酸緩衝液に溶解し，濃度をローリー法により
測定した。使用直前に，リン酸緩衝液により希釈し，濃
度を１〜１０μｇ／ｒｔｒｉとなるように調整し，これ
をＨＢ３抗原液とした。

ＨＢ．陽性家兎血清：精製ＨＢＩ抗原を，フロイントの
完全アジュバントとともに家兎に免疫して得られた抗血
清を，正常ヒト血清を結合させたカラムで吸収操作をし
てから用いた。正常ヒト血清を結合させたカラムはＣＮ
Ｂｒ活性化セファロースＣＬ４Ｂ（ファルマシア社）を
用い，メーカー（ファルマシア）の使用説明書に従って
行った。吸収操作を行った抗Ｈａｓ血清は．ｌ％ＢＳＡ
　−　ＰＢＳにより，ｌ００から４００倍に希釈して用
いた。

（Ａ）ラテックスへのＨＢｓ抗原の感作：ラテックス１
００μ！と，　ＨＢｓ抗原液４００ｔｔ！．とを速やか
に混合し，室温で撹拌した。１時間後に１％ＢＳＡ　−
　ＰＢＳを５一加え，室温で１時間撹拌した後，　１５
０００ｒｐｍで１時間遠心した。これを２回繰り返して
ラテックスを洗浄した。洗浄後のペレットを２蔵のコン
ドロイチン硫酸溶液（０．０１，　０．１，　０．２．
　０．４．　０．６，０．８または１．０％（一／り〕
に懸濁させ，よく分散して固形分０．５％のラテックス
試薬を得た。これを４℃にて保存した。

（Ｂ）　ＨＢ，抗体の測定：ＨＢ，陽性家兎血清と本実
施例（Ａ）項で得られたラテックス試薬とを５０μβず
つ凝集観察板上に採り，混合・撹拌したのち３分間反応
させた。対照として，正常家兎血清についても同様に反
応を行なった。ラテックス試薬の凝集を実施例１と同様
に行なった。その結果を表４に示す。

北殿班土 コンドロイチン硫酸溶液の代わりに１％ＢＳ八・ＰＢＳ
，３％ポリエチレングリコール，３％デキストランまた
はデキストラン硫酸溶液（０．０１，　０．１．０．２
．　０．４．　０．６．　０．８または１．０％０１／
Ｗ））を用いて実施例４と同様に反応を行なった。その
結果を表４に示す。

（以下余白） 表４ ”０．０１〜１．０の数値は各溶液中の濃度（重量／重
量）％を示す。

表４から明らかなように，本発明によれば従来の方法で
は偽陽性が生じる検体でも，特異性高く診断することが
可能である。

裏隻■旦 （全自動分析装置を用いたＨＢＳ抗体の測定）実施例４
の検体および試薬を用い．実施例２の方法に従って１１
Ｂ，抗体の測定を行なった。ラテックス試薬についても
実施例２と同様に０．２５％とし，希釈液にコンドロイ
チン硫酸溶液（０．００５．　０．０５．・０．１，　
０．２．　０．３．　０．４または０．５％（Ｗ／Ｗ）
　：ｌを使用した。その結果を表５および第３図（ａ）
に示す。

止較拠ｌ 希釈液として，１％ＢＳＡ　　−ＰＢＳ　，　　３％ポ
リエチレングリコール，３％デキストランまたはデキス
トラン硫酸溶液（０．００５．　０．０５，　０．１．
　０．２，　０．３，０．４または０．５％（Ｗ／Ｗ）
　）を用いたこと以外は実施例５と同様である。その結
果を表５および第３図（ロ）に示す． （以下余白） 表５および第３図（ａ）および（ｂ）の結果から明らか
なように，本発明によれば従来の方法では凝集が認めら
れなかった高希釈率の陽性血清においても，陽性と判定
し得る強度の高い感度が得られた。さらに，非特異反応
による凝集が認められない．このために，特異性が高《
，高感度の測定が達成された． 実ｌ己１灸 （ＥＩＡによるインスリンの測定） 本実施例において，実施例１と同一名の試薬は実施例１
と同様に調製を行なった。ＥＩＡキットおよび検体は，
次のキットおよび血清を使用した。

インスリン測定用ＥＩＡキット：ＩＮＳＵＩｊＮ　　（
ＭＩＴＳＵＩ）■（カイノス社製）． インスリン高値血清：インスリン濃度が高値の血清で，
インスリン測定用キット［Ｉｎｓｕｌｉｎ　Ｂ−Ｔｅｓ
ｔＷａｋｏ　（和光純薬社製）］により，インスリンを
含有することが確認されている血清（３種［０，ｆ！．
Ｆ）　．キット構成品である酵素標識抗体溶液中に，コ
ンドロイチン硫酸を添加し，終濃度が０．００５，　０
．０５．０．１．　０．２．　０．３．　０．４または
０．５％（一／りとなるようにした。この酵素標識抗体
溶液を使用し，カイノス社のキットの使用添付書に従っ
て，インスリン高値血清について，インスリン濃度の測
定を行った。対照として，他のインスリン測定法（Ｉｎ
ｓｕｌｉｎ　Ｂ−Ｔｅｓｔ　Ｗａｋｏ　）によりインス
リン濃度が低値（１０μＵ／一以下）であると確認され
たインスリン低値血清（３種類Ａ，Ｂ，Ｃ　）も同時に
測定した。

４２０ｎｍにおける吸光度（ｎ＝４の平均値）を表６お
よび第４図（ａ）に示す。

止較■ｌ 実施例６において，酵素標識抗体にコンドロイチン硫酸
を添加しない場合．コンドロイチン硫酸の代わりにポリ
エチレングリコールまたはデキストランを終濃度が３％
となるように添加した場合，およびデキストラン硫酸を
終濃度が０．００５，　０．０５．０．１．　０．２，
　０．３．　０．４または０．５％（一／一）となるよ
うに添加した場合についてそれぞれ測定を行なった。そ
の結果を表６および第４図５）に示す。

示すグラフである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、抗原または抗体でなる被測定物質を該抗原または抗
   体に対する抗体または抗原を用いて測定する免疫反応測
   定法であって、該免疫反応の反応系にコンドロイチン硫
   酸が０．１〜０．３％（重量／重量）の割合で存在する
   、免疫反応測定法。 ２、被測定物質である抗原または抗体に対する抗体また
   は抗原、およびコンドロイチン硫酸を含有する免疫反応
   測定用試薬であって；該免疫反応の反応系に該コンドロ
   イチン硫酸が０．１〜０．３％（重量／重量）の割合で
   含有されるようにして用いられる、免疫反応測定用試薬
   。