JP2544094B2 - アルカリ性セルラ−ゼの製造法 - Google Patents
アルカリ性セルラ−ゼの製造法Info
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、アルカリ性セルラーゼの製造法に関し、更
に詳しくはストレプトマイセス属に属する新規なアルカ
リ性セルラーゼ生産菌を培養し、その培地からアルカリ
性セルラーゼを採取することを特徴とするアルカリ性セ
ルラーゼの製造法に関する。
に詳しくはストレプトマイセス属に属する新規なアルカ
リ性セルラーゼ生産菌を培養し、その培地からアルカリ
性セルラーゼを採取することを特徴とするアルカリ性セ
ルラーゼの製造法に関する。
アルカリ性セルラーゼは、衣料用洗浄剤の新規成分と
して近時注目を集めている。然し、自然界において微生
物の産生するセルラーゼは、大部分が中性乃至酸性にお
いて安定な酵素活性を有する、所謂中性若しくは酸性セ
ルラーゼであつて、アルカリ性セルラーゼは極めて少な
い。
して近時注目を集めている。然し、自然界において微生
物の産生するセルラーゼは、大部分が中性乃至酸性にお
いて安定な酵素活性を有する、所謂中性若しくは酸性セ
ルラーゼであつて、アルカリ性セルラーゼは極めて少な
い。
而して、従来アルカリ性セルラーゼ生産菌によりアルカ
リ性セルラーゼを生産する方法としては、僅かに２例、
バチルス属に属しアルカリ側に至適pHを有するセルラー
ゼＡ生産菌を培養して培地より採取する方法（特公昭50
−28515号公報）、及びセルロモナス属に属する好アル
カリ性細菌を培養しアルカリセルラーゼ301−Ａを生産
する方法（特開昭58−224686号公報）が知られているの
みであつた。
リ性セルラーゼを生産する方法としては、僅かに２例、
バチルス属に属しアルカリ側に至適pHを有するセルラー
ゼＡ生産菌を培養して培地より採取する方法（特公昭50
−28515号公報）、及びセルロモナス属に属する好アル
カリ性細菌を培養しアルカリセルラーゼ301−Ａを生産
する方法（特開昭58−224686号公報）が知られているの
みであつた。
従つて、本発明の目的は、アルカリ性セルラーゼの新
規な製造法を提供することにある。
規な製造法を提供することにある。
本発明者は、アルカリ性セルラーゼを生産する微生物
を自然界に求め、鋭意探索を続けてきたが、今般、栃木
県芳賀那の土壤より採取した放線菌がアルカリ性セルラ
ーゼを生産することを見出し、本発明を完成した。
を自然界に求め、鋭意探索を続けてきたが、今般、栃木
県芳賀那の土壤より採取した放線菌がアルカリ性セルラ
ーゼを生産することを見出し、本発明を完成した。
従来放線菌が産生するセルラーゼとして中性若しくは
酸性セルラーゼは公知であつたが（例えば特公昭56−30
32号公報）、本発明の様に放線菌がアルカリ性セルラー
ゼを生産することについては今迄知られていなかつた。
酸性セルラーゼは公知であつたが（例えば特公昭56−30
32号公報）、本発明の様に放線菌がアルカリ性セルラー
ゼを生産することについては今迄知られていなかつた。
本発明で使用される微生物は、ストレプトマイセス属
に属し、かつ、アルカリ性セルラーゼを生産しうるもの
であればよく、例えばストレプトマイセス・エスピ−
（Streptomyces sp.）KSM−９（微工研菌寄第7620号）
及びストレプトマイセス・エスピ−KSM−２（微工研菌
寄第7621号）が挙げられる。この２つの菌株は、本発明
者が栃木県芳賀郡の土壤より分離したもので、次の第１
表及び第２表に示す菌学的性質を有する。
に属し、かつ、アルカリ性セルラーゼを生産しうるもの
であればよく、例えばストレプトマイセス・エスピ−
（Streptomyces sp.）KSM−９（微工研菌寄第7620号）
及びストレプトマイセス・エスピ−KSM−２（微工研菌
寄第7621号）が挙げられる。この２つの菌株は、本発明
者が栃木県芳賀郡の土壤より分離したもので、次の第１
表及び第２表に示す菌学的性質を有する。
KSM−２株およびKSM−９株は形態学的に放線菌の特徴
を有する。また細菌壁にＬ−Ｌ−ジアミノピメリン酸を
含むなどのことからストレプトマイセス属に分類され
る。
を有する。また細菌壁にＬ−Ｌ−ジアミノピメリン酸を
含むなどのことからストレプトマイセス属に分類され
る。
KSM−２株は、各種寒天培地上での気中菌糸の色から
黄色シリーズの菌株に属すること、胞子の表面は平滑で
あること、胞子鎖はやや屈曲するかおおむね直線である
こと、メラニン様色素は生成しないこと及び炭素源の同
化性試験の結果をもとに既知菌株の中から、本菌株の類
似株をバージエーズマニユアル第８版に従つて検索する
と、ストレプトマイセス・カネセンス（Streptomyces C
anescens）が類似の菌株として挙げられる。しかし、KS
M−２株が耐アルカリセルラーゼを生産するのに対し、
ストレプトマイセス・カネセンスには耐アルカリセルラ
ーゼの生産は認められない点で両者は異なり、KSM−２
株は新菌種である。
黄色シリーズの菌株に属すること、胞子の表面は平滑で
あること、胞子鎖はやや屈曲するかおおむね直線である
こと、メラニン様色素は生成しないこと及び炭素源の同
化性試験の結果をもとに既知菌株の中から、本菌株の類
似株をバージエーズマニユアル第８版に従つて検索する
と、ストレプトマイセス・カネセンス（Streptomyces C
anescens）が類似の菌株として挙げられる。しかし、KS
M−２株が耐アルカリセルラーゼを生産するのに対し、
ストレプトマイセス・カネセンスには耐アルカリセルラ
ーゼの生産は認められない点で両者は異なり、KSM−２
株は新菌種である。
また、KSM−９は同様にバージエーズマニユアル第８
版に従つて検索すると、ストレプトマイセス・プニセウ
ス（Streptomyces Puniceus）が類似の菌株として挙げ
られる。しかし、ストレプトマイセス・プニセウスは紫
〜赤系統の色素をつくるのが特徴であるのに対し、KSM
−９にはその性質が無く、また耐アルカリセルラーゼの
生産がKSM−９にのみ認められることから、KSM−９株も
新菌種である。
版に従つて検索すると、ストレプトマイセス・プニセウ
ス（Streptomyces Puniceus）が類似の菌株として挙げ
られる。しかし、ストレプトマイセス・プニセウスは紫
〜赤系統の色素をつくるのが特徴であるのに対し、KSM
−９にはその性質が無く、また耐アルカリセルラーゼの
生産がKSM−９にのみ認められることから、KSM−９株も
新菌種である。
分離源の土壤からの本菌株の分離は、例えば後記参考
例１に示す如く、寒天培地を用いて従来法により行つ
た。
例１に示す如く、寒天培地を用いて従来法により行つ
た。
本発明方法は、ストレプトマイセス属に属し、アルカ
リ性セルラーゼを生産する微生物を適当な培地に接種
し、培養することにより実施される。微生物としては、
上記KSM−９株及びKSM−２株はもとより、その変異株も
同様に使用できる。
リ性セルラーゼを生産する微生物を適当な培地に接種
し、培養することにより実施される。微生物としては、
上記KSM−９株及びKSM−２株はもとより、その変異株も
同様に使用できる。
本発明で使用する培地の組成は、使用する菌株が良好
に生育し、アルカリ性セルラーゼの生産を順調に行なわ
しめるために適当な炭素源、窒素源あるいは有機栄養
源、無機塩等からなつている。
に生育し、アルカリ性セルラーゼの生産を順調に行なわ
しめるために適当な炭素源、窒素源あるいは有機栄養
源、無機塩等からなつている。
炭素源としては、例えばカルボキシメチルセルロース
（CMC）等の可溶性繊維素誘導体、パルプ粉末、ロ紙粉
末、アビセル等の固型繊維素等のセルロース等；グルコ
ース、フラクトース、シユクロース若しくはソルビトー
ル等の炭水化物；クエン酸、コハク酸等の有機酸;n−ド
デカン、ｎ−ヘキサデカン等の炭化水素等々の資化され
るものであればいずれも使用できる。これら炭素源のう
ちではセルロース等、就中、可溶性繊維素誘導体を使用
した培地はアルカリ性セルラーゼの生産量も多く好適で
ある。
（CMC）等の可溶性繊維素誘導体、パルプ粉末、ロ紙粉
末、アビセル等の固型繊維素等のセルロース等；グルコ
ース、フラクトース、シユクロース若しくはソルビトー
ル等の炭水化物；クエン酸、コハク酸等の有機酸;n−ド
デカン、ｎ−ヘキサデカン等の炭化水素等々の資化され
るものであればいずれも使用できる。これら炭素源のう
ちではセルロース等、就中、可溶性繊維素誘導体を使用
した培地はアルカリ性セルラーゼの生産量も多く好適で
ある。
窒素源あるいは有機栄養源としては、例えば硝酸ナト
リウム、硝酸カリウム、硝酸アンモニウム等の硝酸塩
類；酵母エキス、肉エキス、ペプトンが挙げられる。
リウム、硝酸カリウム、硝酸アンモニウム等の硝酸塩
類；酵母エキス、肉エキス、ペプトンが挙げられる。
無機塩としては、例えば炭酸ナトリウム、炭酸カリウ
ム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム等の炭酸
塩、リン酸ナトリウム、リン酸−水素ナトリウム、リン
酸二水素ナトリウム、リン酸カリウム、ピロリン酸カリ
ウム、ピロリン酸ナトリウム、トリポリリン酸ナトリウ
ム、ヘキサメタリン酸ナトリウム等々のリン酸塩、硫酸
マグネシウム等の無機塩が使用できる。就中炭酸塩を0.
1〜1.5重量％含有する培地はアルカリ性セルラーゼの産
生量が多く好適である。さらに微量の重金属塩類が使用
されるが天然物を含む培地では必ずしも添加を必要とし
ない。
ム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム等の炭酸
塩、リン酸ナトリウム、リン酸−水素ナトリウム、リン
酸二水素ナトリウム、リン酸カリウム、ピロリン酸カリ
ウム、ピロリン酸ナトリウム、トリポリリン酸ナトリウ
ム、ヘキサメタリン酸ナトリウム等々のリン酸塩、硫酸
マグネシウム等の無機塩が使用できる。就中炭酸塩を0.
1〜1.5重量％含有する培地はアルカリ性セルラーゼの産
生量が多く好適である。さらに微量の重金属塩類が使用
されるが天然物を含む培地では必ずしも添加を必要とし
ない。
また、上記以外の栄養源を必要とする変異株を用いる
場合には、その栄養要求を満たす物質を培地に添加しな
ければならない。
場合には、その栄養要求を満たす物質を培地に添加しな
ければならない。
培養は、培地を加熱等により殺菌後、菌を接種し、25
〜35℃で、２〜４日振盪又は通気攪拌すれば良い。pHは
８〜11程度に調整すると良い結果が得られる。水に難溶
性の炭素源等を使用する場合にはポリオキシエチレンソ
ルビタン等の各種界面活性剤を培地に添加することも可
能である。
〜35℃で、２〜４日振盪又は通気攪拌すれば良い。pHは
８〜11程度に調整すると良い結果が得られる。水に難溶
性の炭素源等を使用する場合にはポリオキシエチレンソ
ルビタン等の各種界面活性剤を培地に添加することも可
能である。
斯くして得られた培養物中からの目的物質であるアル
カリ性セルラーゼの採取及び精製は、例えば後記実施例
に示す如く、一般の酵素の採取及び精製の手段に準じて
行うことができる。
カリ性セルラーゼの採取及び精製は、例えば後記実施例
に示す如く、一般の酵素の採取及び精製の手段に準じて
行うことができる。
すなわち、培養物を遠心分離、又は過等に付して菌
体を分離し、その菌体及び培養液から通常の分離手
段、例えば塩析法、沈澱法、限外過法、溶媒抽出法等
を単独で、あるいは適宜組合せてアルカリ性セルラーゼ
を分離する。沈澱法は例えば培養液にアルコールやアセ
トン等の有機溶媒を添加して酵素を沈澱させることによ
り、また限外過法は例えばダイアフローメンブレンYC
（アミコン社製）を用いて上清液中の酵素を濃縮乾固す
ることによりこれを分離する。塩析法では例えば硫安に
より塩析した沈澱を、過あるいは遠心分離後、脱塩
し、凍結乾燥して粉末とする。脱塩の方法としては、透
析法、又は例えばセフアデツクスＧ−25を用いるゲルロ
過法等が挙げられる。
体を分離し、その菌体及び培養液から通常の分離手
段、例えば塩析法、沈澱法、限外過法、溶媒抽出法等
を単独で、あるいは適宜組合せてアルカリ性セルラーゼ
を分離する。沈澱法は例えば培養液にアルコールやアセ
トン等の有機溶媒を添加して酵素を沈澱させることによ
り、また限外過法は例えばダイアフローメンブレンYC
（アミコン社製）を用いて上清液中の酵素を濃縮乾固す
ることによりこれを分離する。塩析法では例えば硫安に
より塩析した沈澱を、過あるいは遠心分離後、脱塩
し、凍結乾燥して粉末とする。脱塩の方法としては、透
析法、又は例えばセフアデツクスＧ−25を用いるゲルロ
過法等が挙げられる。
更に、酵素を精製するには、例えばDEAE−セルロース
またはDEAE−セフアデツクスを用いるイオン交換クロマ
トグラフイー及びセフアデツクスＧ−50のようなゲルク
ロマトグラフイーを夫々単独で、あるいは併用して分別
精製すればよい。
またはDEAE−セフアデツクスを用いるイオン交換クロマ
トグラフイー及びセフアデツクスＧ−50のようなゲルク
ロマトグラフイーを夫々単独で、あるいは併用して分別
精製すればよい。
なお、培養液はそのまま酵素源とすることもできる。
以上の如くして得られたアルカリ性セルラーゼは次の
ような理化学的性質を有する。
ような理化学的性質を有する。
本発明において、セルラーゼ活性は次の方法により測
定した。
定した。
〈セルラーゼ活性測定法〉 （ｉ）CMC分解活性 CMC2.5％溶液、グリシンNaCl−NaOH緩衝液（500mM,pH
9.0）、イオン交換水を2:1:1の割合で混合して基質とす
る。
9.0）、イオン交換水を2:1:1の割合で混合して基質とす
る。
基質0.4mlに酵素液0.1mlを加え40℃、20分間反応させ
る。反応終了後3.5−ジニトロ−サリチル酸法（DNS法）
にて還元糖の定量を行なう。すなわち、反応液0.5mlにD
NS試薬1mlを加え、５分間100℃で加熱発色し、冷却後4.
5mlのイオン交換水を加えて希釈する。これを波長535m
μで比色定量する。
る。反応終了後3.5−ジニトロ−サリチル酸法（DNS法）
にて還元糖の定量を行なう。すなわち、反応液0.5mlにD
NS試薬1mlを加え、５分間100℃で加熱発色し、冷却後4.
5mlのイオン交換水を加えて希釈する。これを波長535m
μで比色定量する。
対照は、基質0.4mlに酵素液0.1ml、DNS試薬0.5mlを同
時に加え、ただちに５分間100℃で加熱発色し同様に比
色定量する。
時に加え、ただちに５分間100℃で加熱発色し同様に比
色定量する。
（ii）アビセル分解活性 上記CMC分解活性の測定法において、反応系を5mlと
し、CMCの代りにアビセルを50mg加え数時間反応し、生
成する還元糖を同様に比色定量する。
し、CMCの代りにアビセルを50mg加え数時間反応し、生
成する還元糖を同様に比色定量する。
尚、酵素活性は、上記条件で1mgの酵素が１分間に生
成する還元糖の量をグルコース相当量として評価した。
成する還元糖の量をグルコース相当量として評価した。
次に参考例及び実施例を挙げて本発明を説明する。
参考例１ 栃木県芳賀郡の土壤スパーテル１杯分（約0.5g）を10
ml無菌水に懸濁し、充分攪拌した後放置した。かくして
得られる土壤懸濁液上清0.1mlを下記組成の分離用寒天
培地に塗布した。
ml無菌水に懸濁し、充分攪拌した後放置した。かくして
得られる土壤懸濁液上清0.1mlを下記組成の分離用寒天
培地に塗布した。
組成： CMC 20g ペプトン 10g 肉エキス 10g KH2PO4 1g NaCl 10g NA2CO3 10g 寒天 7.5g 水 1000ml PH 10.5 次いで、これを30℃で３日間培養し、集落の周囲にCM
Cの溶解にもとづく透明帯を有する菌が出現するのを確
認し、明瞭な透明帯を形成する集落を釣菌し、上記分離
用寒天培地と同組成の斜面寒天培地に接種し30℃で３日
間培養し、10本の斜面培地上の菌株が肉眼的及び顕微鏡
的に同一菌株であることを確認した。
Cの溶解にもとづく透明帯を有する菌が出現するのを確
認し、明瞭な透明帯を形成する集落を釣菌し、上記分離
用寒天培地と同組成の斜面寒天培地に接種し30℃で３日
間培養し、10本の斜面培地上の菌株が肉眼的及び顕微鏡
的に同一菌株であることを確認した。
またこれら10菌株の各培地上の性状及び生理学的性質
が同一であることを確認した。
が同一であることを確認した。
上記菌株の各培地上の性状及び生理学的性質は前記第
１表及び第２表に示したとおりであり、本発明者はこれ
をストレプトマイセス・エスピー（Streptomyces sp）K
SM−２と命名した。
１表及び第２表に示したとおりであり、本発明者はこれ
をストレプトマイセス・エスピー（Streptomyces sp）K
SM−２と命名した。
ストレプトマイセス・エスピー（Streptomyces sp）K
SM−９も同様にして栃木県芳賀郡の土壤より分離した。
SM−９も同様にして栃木県芳賀郡の土壤より分離した。
上記試験の結果、各10本の培養菌はすべて自然界より
純粋に分離された単一菌株であることが判る。
純粋に分離された単一菌株であることが判る。
次いで、上記で純粋培養された斜面培地上の菌株より
一白金耳を滅菌した10％グリセリン水溶液（2ml）の入
つた凍結保存用バイアルに懸濁し、−80℃にて凍結保存
する。かくして３ケ月凍結保存後、迅速に解凍し得られ
る懸濁液の一白金耳を普通寒天培地に蘇生後前記と同条
件下に各培地上での性状及び生理学的性質を調べた結
果、凍結前とは変化が認められなかった。
一白金耳を滅菌した10％グリセリン水溶液（2ml）の入
つた凍結保存用バイアルに懸濁し、−80℃にて凍結保存
する。かくして３ケ月凍結保存後、迅速に解凍し得られ
る懸濁液の一白金耳を普通寒天培地に蘇生後前記と同条
件下に各培地上での性状及び生理学的性質を調べた結
果、凍結前とは変化が認められなかった。
また、上記凍結及び解凍を１ケ月毎に５度繰り返した
菌株について同様に、各培地上での性状及び生理学的性
質を調べた結果変化は認められなかつた。
菌株について同様に、各培地上での性状及び生理学的性
質を調べた結果変化は認められなかつた。
実施例１ 500ml容量の坂口フラスコ、アビセル1.0％、肉エキス
1.5％、酵母エキス0.5％、リン酸二水素カリウム0.1
％、炭酸ナトリウム0.5％（pH9.5）を入れ、この液体培
地に、ストレプトマイセスsp.KSM−２株（微工研菌寄託
番号第7621号）をスラントより接種し、30℃で振盪培養
した。
1.5％、酵母エキス0.5％、リン酸二水素カリウム0.1
％、炭酸ナトリウム0.5％（pH9.5）を入れ、この液体培
地に、ストレプトマイセスsp.KSM−２株（微工研菌寄託
番号第7621号）をスラントより接種し、30℃で振盪培養
した。
２日間培養後、菌体を遠心分離して除去して得た培養
液を硫安分画し、生成する固型分を凍結乾燥して酵素粉
末を得た。培養液１当たり0.6gの酵素粉末が得られ
た。
液を硫安分画し、生成する固型分を凍結乾燥して酵素粉
末を得た。培養液１当たり0.6gの酵素粉末が得られ
た。
得られた酵素のCMC分解活性は、pH7.0と9.0で各々1.8
4mg及び1.02mgグルコース相当量/mg・分であり、アビセ
ル分解活性は、同様にそれぞれ0.083mg、0.056mgグルコ
ース相当量/mg・分であつた。
4mg及び1.02mgグルコース相当量/mg・分であり、アビセ
ル分解活性は、同様にそれぞれ0.083mg、0.056mgグルコ
ース相当量/mg・分であつた。
実施例２ 実施例１に於てアビセル1.0％に代えてCMC1.0％を炭
素源として用いた以外は、実施例１と同様にストレプト
マイセスsp.KSM−２株を培養して得た培養液から酵素粉
末を得た。得られた酵素のCMC分解活性は、pH7.0と9.0
で各々0.90mg及び0.44mgグルコース相当量/mg・分であ
つた。
素源として用いた以外は、実施例１と同様にストレプト
マイセスsp.KSM−２株を培養して得た培養液から酵素粉
末を得た。得られた酵素のCMC分解活性は、pH7.0と9.0
で各々0.90mg及び0.44mgグルコース相当量/mg・分であ
つた。
実施例３ 実施例１と同様にストレプトマイセスsp.KSM−９株
（微工研菌寄託番号第7620号）を培養して得た培養液か
ら酵素粉末を得た。得られた酵素のCMC分解活性は、pH
7.0と9.0で各々3.85mg及び2.50mgグルコース相当量/mg
・分であつた。
（微工研菌寄託番号第7620号）を培養して得た培養液か
ら酵素粉末を得た。得られた酵素のCMC分解活性は、pH
7.0と9.0で各々3.85mg及び2.50mgグルコース相当量/mg
・分であつた。
実施例４ 実施例２と同様にストレプトマイセスsp.KSM−９株を
培養して得た培養液から酵素粉末を得た。得られた酵素
のCMC分解活性は、pH7.0と9.0で各々2.01mg及び1.49mg
グルコース相当量/mg・分であつた。
培養して得た培養液から酵素粉末を得た。得られた酵素
のCMC分解活性は、pH7.0と9.0で各々2.01mg及び1.49mg
グルコース相当量/mg・分であつた。
第１図から第14図はいずれも実施例２又は実施例４で得
た酵素の理化学的性質を調べた結果を示す図面で、第１
図はKSM−９株セルラーゼの至適pHを示す図面、第２図
はKSM−２株セルラーゼの至適pHを示す図面、第３図及
び第４図はKSM−９株セルラーゼのpH安定性を示す図
面、第５図及び第６図はKSM−２株セルラーゼのpH安定
性を示す図面、第７図及び第８図はKSM−９株セルラー
ゼの至適温度を示す図面、第９図及び第10図はKSM−２
株セルラーゼの至適温度を示す図面、第11図及び第12図
はKSM−９株セルラーゼの熱安定性を示す図面、第13図
及び第14図はKSM−２株セルラーゼの熱安定性を示す図
面である。
た酵素の理化学的性質を調べた結果を示す図面で、第１
図はKSM−９株セルラーゼの至適pHを示す図面、第２図
はKSM−２株セルラーゼの至適pHを示す図面、第３図及
び第４図はKSM−９株セルラーゼのpH安定性を示す図
面、第５図及び第６図はKSM−２株セルラーゼのpH安定
性を示す図面、第７図及び第８図はKSM−９株セルラー
ゼの至適温度を示す図面、第９図及び第10図はKSM−２
株セルラーゼの至適温度を示す図面、第11図及び第12図
はKSM−９株セルラーゼの熱安定性を示す図面、第13図
及び第14図はKSM−２株セルラーゼの熱安定性を示す図
面である。
Claims (1)
- 【請求項１】ストレプトマイセス属に属するアルカリ性
セルラーゼ生産菌を培養して培地中にアルカリ性セルラ
ーゼを生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とす
るアルカリ性セルラーゼの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13882884A JP2544094B2 (ja) | 1984-07-04 | 1984-07-04 | アルカリ性セルラ−ゼの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13882884A JP2544094B2 (ja) | 1984-07-04 | 1984-07-04 | アルカリ性セルラ−ゼの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6119483A JPS6119483A (ja) | 1986-01-28 |
| JP2544094B2 true JP2544094B2 (ja) | 1996-10-16 |
Family
ID=15231170
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13882884A Expired - Lifetime JP2544094B2 (ja) | 1984-07-04 | 1984-07-04 | アルカリ性セルラ−ゼの製造法 |
Country Status (1)
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| JP (1) | JP2544094B2 (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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-
1984
- 1984-07-04 JP JP13882884A patent/JP2544094B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6119483A (ja) | 1986-01-28 |
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