JP2532788B2 - 免疫学的検定を行うための装置と方法 - Google Patents
免疫学的検定を行うための装置と方法Info
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Description
検出する免疫学的検定法に関し、特に内蔵型の、単段階
の固相帯片形態の検定装置と方法とに関する。
臨床医学、法医学、環境検査、食品品質検査、薬品試験
および試料中の免疫反応分析物の介在を検出するための
その他の関連領域のような分野において広く使用されて
いる。
や、診療所や、さらには使用者の家庭のような遠隔場所
での免疫学的検定による診断法の使用を促進してきた。
診療所においては、免疫学的方法は患者が診療所に居る
間に実行でき、そのため一回の診察の間遅滞なく検診が
出来かつ処置を施すことのできる迅速で、単純な検定を
提供する上で有用である。そのような簡単な検定法が無
ければ、医師が初回の来院中に患者から試料を採集し、
その試料を診療所の試験室で分析を行い、その結果が後
刻試験室から医師まで戻されるということが度々必要で
あった。一方患者の方は家へ戻され、適当な処置および
/または投薬を受けるよう医師のところへ2回目の再診
をする必要があった。そのような検定の遅れは非効率的
で、かつ不適当であり、ある場合には生命を脅かすこと
が明らかである。
中で検査を促進する上で望ましいものとなった。そのよ
うな検査の結果が、例えば、医師を訪問することの必要
性の是否を指示することができる。「家庭」での有用な
検査の市場の例としては妊娠、排卵、連鎖球菌感染およ
び、例えば尿、唾液、喉液、うみ、膣液、血液あるいは
その他の適当な試料を分析することにより検出可能のそ
の他の感染の検査を含む。
特異性とを想定すると、実用的な検定手順に対して少な
くとも3つの要件がある。これらの望ましい要素の1つ
は、短かければ短いほど良いのであるが、許容短時間で
検定を実行せねばならない速度である。検定要素が長時
間にわたって冷凍したり、あるいは特別の処理を要する
ことなく安定すべきであるという点で安定性も望ましい
特徴である。最後に商業的観点からは、試験は使用に便
利で、できる限り単純で、最小の器具を要するか、ある
いは器具が何ら不要で、不正確な結果をもたらすミスや
劣悪な性能を排除することが望ましい。
した困難の1つは、効率的で、比較的安価で、間違えよ
うのない検査方法を促進するための実用的な予めパッケ
ージ化した使い捨て装置を提供することである。このこ
とは、製作が安価につき、当該装置の寿命に対して適し
た貯蔵寿命を有し、扱い中汚染から保護されており、使
用に適当なときが来ると簡単かつ便利に使用でき、たと
え不馴れの人であっても便利、かつ安全に使用しうる装
置を必要とすることは勿論である。
のあるものを指向している。しかしながら、この装置
は、基板の介在に左右され、かつ不安定であることが多
く、貯蔵寿命に悪影響を与える酵素発色剤を利用する検
査を組み入れている。前記特許第4,868,108号は本発明
と共通に譲渡され、その開示全体を参考のため本明細書
に特に組み入れてある。
ている。この装置はコロイド状ゴールド即ち「ダイレク
ト」ラベルと称される着色粒体を使用している。しかし
ながら、この装置においては、非標識反応成分は観察ゾ
ーンにおいて永久に固定されている。このことが分析物
の検出メカニズムの効率に影響する。
いる単純で、安価で、効率的で、間違えようがなく、予
めパッケージ化され、一段式の装置に対する要請を満足
させないままとしている。
で、効率的で、間違えようがなく、予めパッケージ化さ
れた一段式の装置を提供する。さらに、本発明によれ
ば、検出反応は全ての成分を運動自在状態にしておいて
液相において発生する。このため、本発明の効率と迅速
性とを向上させる。さらに本発明によれば、水性試料に
おける免疫学的反応性分析物の検出を行う方法が提供さ
れる。本発明の一局面においては、第1の免疫学的反応
性物質と検出可能種との結合生成物からなる水分散性の
標識成分を提供し、捕獲可能種と第2の免疫学的反応性
物質との結合生成物からなる水分散性の捕獲可能成分を
提供し、多孔性の担体材料において検出ゾーンで局在化
され、捕獲可能の種を含むことにより検出ゾーンにおい
て生成物を捕獲し、かつ収集する反応生成物と相互作用
しうる捕獲物質からなる捕獲成分を提供し、標識および
捕獲可能成分を、分析物が試料と前記成分とを含有する
液状反応混合物を形成するように分析すべき試料からな
る水溶液と接触させ、前記第1と第2の物質が同じか、
あるいは相違し、前記分析物の介在の機能として直接あ
るいは間接的に結合でき、そのため、捕獲可能生成物成
分を含有する分散した、拡散可能反応生成物を形成し、
液状反応混合物を検出ゾーンにおいて捕獲成分と接触さ
せることにより捕獲可能成分を含有した反応生成物が捕
獲物質と相互作用することにより検出ゾーンにおいて収
集され、前記ゾーンで固定した反応生成物における検出
可能の種の介在を評価することにより試料中で分析物を
検出する段階を含む。
能要素とはそれぞれ初期は乾燥しており、再構成可能
の、水分散性で、かつ拡散性でよい。本発明のこの局面
によれば、前記成分は、同じ成分が分析物に対して分析
すべき試料を含む水溶液と接触すると再構成される。
獲可能成分とはそれぞれ多孔性の担体材料に含有され、
液体反応混合物が拡散し、多孔性担体材料を通して移動
し、検出ゾーンにおいて反応物を捕獲要素と接触させ
る。
可能成分とがそれぞれ、多孔性担体材料におけるあるゾ
ーンに含まれ、液体反応混合物が拡散し、多孔性担体材
料を通して、検出ゾーンへ移動し反応物を検出ゾーンに
おいて捕獲成分と接触させる。
性担体材料の細長い帯片の第1のゾーンに含まれ、捕獲
可能成分が多孔性担体材料の帯片の第2のゾーンに含ま
れる。検出ゾーンはまた、多孔性担体材料の帯片にもあ
る。本発明の好適な局面においては、第1と第2のゾー
ンは前記帯片の長手方向に離隔することができる。さら
に、検出ゾーンは前記帯片の一方端から長手方向に離隔
し、第1と第2ののゾーンは帯片の端部と検出ゾーンと
の間で配置することができる。本発明の特に好適な形態
によれば、混合物を捕獲成分と接触させる段階を、前記
第1と第2のゾーンから検出ゾーンまで帯片に沿って混
合物を拡散かつ移動させることにより達成することがで
きる。さらに、成分を再構成する段階が、液体試料を前
記帯片の一方端に供給することにより、前記試料が前記
帯片に沿って、第1と第2のゾーンへ拡散する段階を含
みうる。
の測定および検出過程を実行する装置を提供する。本発
明の装置は、第1の免疫学的反応物質と検出可能種との
結合生成物からなる水分散性標識成分を含む。本装置は
また、捕獲可能種と第2の免疫学的反応物質との結合生
成物からなる水分散性の捕獲可能の成分を含む。第1と
第2の物質は同じか、あるいは異なるものであり、分析
物の介在の機能として直接あるいは間接的に結合でき、
そのため捕獲可能成分を含む水分散性、拡散性の反応物
を形成するものでよい。前記装置はまた、多孔性担体材
料の検出ゾーンにおいて局在化された捕獲成分を含み、
捕獲成分は捕獲可能種を含有する反応物と相互作用で
き、そのため検出ゾーンにおいて生成物を捕獲し、かつ
集めることのできる捕獲物質を含む。
材料の細長い帯片を含みうる。本発明のこの形態におい
ては、標識成分は多孔性担体材料の帯片の第1ゾーンに
含まれ、捕獲可能成分は多孔性担体材料の第2のゾーン
に含まれる。検出ゾーンはまた多孔性担体材料の帯片に
も位置する。本発明のこの形態においては、第1と第2
のゾーンは帯片の長手方向に離隔され、検出ゾーンは、
第1と第2のゾーンを帯片の端部と、帯片に対して長手
方向に離隔関係にある検出ゾーンとの間に配置させ、帯
片の一方端から長手方向に離隔可能である。理想的に
は、本装置は前記の一方端における要素と緊密に接触し
ている芯部材を含めばよい。
し、本発明の原理と概念とを実施した装置10が第1図に
示されている。本装置10は多孔性の、好ましくは微小孔
担体材料の基本要素12を示す。第1図に示すように、基
本要素12は多孔性担体材料の細長い帯片の形態である。
帯片12が形成されている多孔性担体材料は約25ミクロン
以下の孔サイズを有するべきで、典型的には孔サイズは
約5と約10ミクロンの間でよい。帯片12は、例えばナイ
ロンあるいはセルローズ材料のような吸水性材料から形
成すればよい。本発明による、特に有用な材料はアール
ストローム(Ahlstrom)No.345ペーパとして知られる市
販の材料である。この材料は滑らかで、白色で、かつ10
0%セルローズから構成されている。好適材料は約158g/
m2の基本重量と、約0.7ミクロンの厚さと、約80mm/分の
水溶液に対する毛細管上昇特性を有している。勿論、特
定検定手順の希望する特性に応じて種々の種類の材料を
用いることができる。例えばウオットマン(Whatman)9
03およびウオットマン31ETペーパとして知られる市販の
材料が本発明によれば有用であることが判明した。
方端16において該帯片16に取り付けられている。芯14
は、繊維が整合しているか、あるいは整合していない
(二軸配置の)形態のいずれかで、アメリカン フイル
トローナ社(American Filtrona)から市販されている
結合したセルローズアセテート繊維材料から形成すれば
よい。芯材料14は、分離した長方形断片14a,14bに分割
され、次いで要素12の両面に対して緊密に押圧されるこ
とにより、芯部材14と帯片12とが緊密で毛管現象により
連通接触している材料の細長いブロックから形成すれば
よい。この目的に対して、個々の断片14aと14bとは、一
対のバンド34および36を用いて、相互に、かつ帯片12の
面に対して緊密に保持することができる。これらのバン
ド34,36はBARLOKケーブルタイ(デニソン−Dennisonの
部品番号08429、軍用規格3367−4−9)として市販さ
れている装置でよい。
も尺度通りになっていないことを指摘すべきである。本
発明の有用な形態においては、帯片12は長さが例えば15
0ミリで、幅が例えば9.5ミリでよい。帯片12の厚さは0.
5から1.0ミリの範囲であって、約0.7ミリであることが
好ましい。しかしながら、帯片の特定の寸法は重要でな
く、種々の寸法は確実な試験結果を表わすための速度お
よび/またはカラー強度についての望ましい結果を達成
する必要に応じて修正すればよい。
0.5ミリで、厚さ(t)が約12.5ミリでよい。細長い芯1
4は好ましくは第1図に示すように要素12の長さにわた
って延びるように位置することが好ましい。
2を含む。ゾーン20は、第1の免疫学的反応物質からな
る、乾燥し、再構成可能で、水分散性で拡散性の標識成
分を含有する。ゾーン20における標識成分は第1の免疫
学的反応物質と検出可能の種との結合生成物からなるこ
とが好ましい。ゾーン18は、第2の免疫学的反応物質か
らなる乾燥し、再構成可能の水分散性で拡散性の捕獲成
分を含む。捕獲成分は検出ゾーン22において局在化さ
れ、捕獲可能成分と相互作用し検出ゾーンにおいて捕獲
可能成分を捕獲し、かつ収集することのできる捕獲物質
からなる。このように、捕獲物質はまた、捕獲可能成分
と、それに結合されたものを捕獲し、かつ集めることが
できる。
は、ゾーン18および20は帯片12の長手方向に離隔されて
いる。しかしながら、これらのゾーンは重ねてもよいこ
とを認めるべきである。さらに、ゾーン18,20の相対位
置を反転してもよい。第1図を参照すれば、検出ゾーン
22も帯片12の端部16から長手方向に離隔され、かつゾー
ン18と20とは帯片に対して長手方向に離隔されて端部16
とゾーン22との間に配置されている。
に沿って延びるように配置されている。芯14は図示のよ
うに、芯14の端部14aをゾーン18から約2.5ミリのところ
に配置させその間に空間24を提供するようにしてゾーン
18に対する離隔関係で終っている。さらに、空間26がゾ
ーン18と20との間に設けられ、空間28がゾーン20と22と
の間に設けられている。最後に、空間30がゾーン22から
帯片12の端部32まで延びている。要素12の長さに沿って
測定すると、芯14は約51ミリの好適寸法を有し、ゾーン
18は約20ミリの好適寸法を有し、空間26は約2.5ミリの
好適寸法を有し、ゾーン28は約2.5ミリの好適寸法を有
し、ゾーン22は約2.6ミリの好適寸法を有し、空間30は
約71.9ミリの好適寸法を有する。
ーン18に含まれた捕獲可能成分の免疫学的反応物質は同
じか、あるいは異なるものでよく、本発明の唯一の要件
は、液状試料における目標の免疫学的反応分析物の介在
の機能として直接あるいは間接的に結合して、捕獲可能
成分と標識成分とを含む水分散性で拡散性反応生成物を
形成できねばならぬことである。
れぞれ分析物を結合してサンドイッチを形成することが
できる。この点に関して、前記物質は各々、目標の抗原
分析物を免疫学的に結合することのできる単クローン性
抗体でよい。代替的に、適当な特異性の適当に純粋の多
クローン性の抗体を採用することができる。そのような
抗体は抗体においてそれぞれの異なる部位を結合する。
互に結合しうる。即ち前記物質の一方は抗原で、他方は
それに対する抗体でよい。標識成分の免疫学的反応物質
は抗原でよく、本発明のこの形態においては、検定手順
は試料における未知の抗原分析物を検出ための拮抗的阻
害手順によって決めればよい。
能の種との結合生成物からなる。検出可能の種は前述
の′612の特許に詳細に記述され、かつ特別な引例とし
て本明細書に含めている種類の金属含有粒体でよい。こ
のように約25から約1000Åの範囲の粒体サイズを有する
金属コロイド粒体に抗体あるいは抗原をコーテイングし
て本発明によって使用すればよい。そのようなコーテイ
ングした粒体は粒体サイズによって、オレンジ色、赤あ
るいは紫色を強力に彩色する。
の特定の性質即ち特性によって左右されず、免疫学的反
応物質に結合しうるいずれの種類の標識に関しても広範
囲に有用である。
からなる。さらに、捕獲可能成分は捕獲可能種を含むこ
とにより、捕獲可能成分は捕獲可能種と免疫学的反応物
質との結合生成物からなる。
分と相互作用することによって捕獲可能成分を含む反応
生成物が検出ゾーンで捕獲され、かつ集めることができ
るようにする捕獲物質からなることが好ましい。捕獲物
質は、帯片12が形成されるセルローズ材に直接結合する
ことができる。しかしながら、本発明の好適形態におい
ては、捕獲物質は、検出ゾーンにおいて多孔性担体材料
の孔に堆積されることによって局在化しうる寸法と性質
とを有する固相粒体に結合しうる。本発明のこの形態に
おいては、固相粒体は、例えば前述の′612の特許に開
示の種々の粒体のような多数の公知の水分散性の粒体の
いずれかから構成すればよい。本発明に関して有用な固
相粒体は、例えば、例えばシリカ、アガローズ、ガラ
ス、ポリアクリルアミド、ポリメチルメタアクリラー
ト、カーボキシラート修正ラテックスおよびセファロー
ズのようなラテックスあるいはその他の支持材料の粒体
を含む。粒体はサイズが約0.2ミクロンから約10ミクロ
ンまで変動する。本発明に関連して使用するための特に
好適な材料は、1988年4月4日に出願され、その全体の
開示を参考のために特に本明細書に含めている、本発明
と共に譲渡され、出願中の米国特許第177,114号に記載
の0.99ミクロンのカーボオキシラート修正のラテックス
粒子(ポリサイエンシス)からなる。
検出するために使用しうる。この目的に対して、前記′
612特許に記載の2B2抗体を用いることができる。2B2抗
体はビオチンに結合でき、後者は捕獲可能種として作用
する。2B2抗体をビオチニレートするために、50mgのビ
オチン−X−NHSがまず5mlのDMSOに分解される。抗体を
含有する溶液は13.32mlの1M Na2CO3と80mlの0.15M NaCl
とを混合し、次いで833.35mgの透析した2B2抗体と29.3m
lのDMSOを前記混合物に添加することにより調整され
る。次いで、ビオチンとDMSOの初期溶液が抗体溶液に添
加され、出来た混合物は室温で約2時間反応するように
される。培養の後、2B2/ビオチンの、このようにして形
成された複合体が4℃で48時間0.15M NaCl/0.05%NaH3
溶液に対して透析される。次に、複合体が、12.11g/lの
トリスベース、100g/l MALTRIN365(グレインプロセシ
ング社−Grain Processing Gorp.),3g/l EDTA二ナトリ
ウム塩、0.3ml/l IGEPAL CA 720(GAFカムパニー GAF
Campany)、0.1g/lチメロサールを含有する、ある量の
緩衝液(ph8.0:0.05)に添加されることによって、タン
パクの濃度が約0.5g/lとなる。その結果出来た溶液を2
μlゾーン18において帯片に散布して、乾燥させる。緩
衝液の種々成分の機能および成分特性を、その全体の開
示を特別に引用するために本明細書に含めた、本発明と
共に譲渡され、出願中の特願第07/344,575号に詳細に説
明してある。
成分は第1の免疫学的反応物質と検出可能の種との結合
生成物からなることが理想的である。妊娠の検定に対し
ては、好ましい免疫学的反応物質は前述の′612の特許
に記載された2G9抗体であり、好ましい検出可能種は前
記′612特許にも記載の金コロイド粒体である。抗体を
コーテイングした金コロイド粒体は基本的には前述′61
2特許に記載のように調製すればよく、金コロイド粒体
は約30nmの直径を有することが好ましい(ジー、フレン
スのネーチャ−G.Frens,Nature241,240−22(1973)を
参照されたい)。抗体をコーテイングした金コロイド粒
体は前記′612特許に記載のように処理し、本発明の好
適形態において標識成分として使用しうる金コロイド標
識探査子粒体からなる最終生成物を作ることができる。
前記金コロイド標識探査子粒体は、30nm金コロイド粒体
の各1000 OD533rmの単位に対して約10.2mgの2G9抗体を
含む。
ウシ血清アルブミン(BSA)と、0.667g/lのナトリウム
アジ化物、リットル当り9.09mlのTRITON X−100と、8.6
9g/lのトリスベースと、253.64g/lのMALTRIN 365と、0.
215mlのIGEPAL CA720と、0.0718g/lのチメロサールと、
金コロイド粒体の785.45 OD 533nm単位にコーテイング
した8mg/lの2G9抗体とを含有する溶液に含まれる。次に
50μlのこの溶液を供給して装置12のゾーン20を覆い、
溶液は空気乾燥される。TRITON X−100はローム アン
ド ハース カムパニ(Rohm and Haas Company)の商
品である、オクチルフェノキシポリエソキシエタノール
(octyl phenoxy−polyethoxy ethanol)の非イオン界
面剤である。
複合化されたストレプトアビジンであるアビジン材料か
ら構成すればよい。次に、ストレプトアビジン ラテッ
クス粒体を堆積させ、ゾーン22において帯片の多孔性担
体材料の孔内で局在化すればよい。ストレプトアビジン
ラテックス粒体を調製するには、280mgのストレプト
アビジンを560mlの0.15M NaClに溶解させる。個別の容
器において、1050mlの0.36M NaClが、15.47gの0.99μカ
ーボキシラート修正ラテックス(ポリサイエンシス−Po
lysciences)を含有する800mlのラテックス懸濁液に添
加される。懸濁液を含有するラテックスの全体容積が約
2リットルとなるようにするに十分な量の純水が添加さ
れる。ラテックスを活性化させるために、105mlの水中
の10.5gのカーボジイミド(carbodiimide)がラテック
ス懸濁液に添加され、後者は約10分反応するようにされ
る。カーボジイミドにより活性化されたラテックスは次
に遠心分離機において集められ、約1540mlの0.14M NaCl
溶液中で再懸濁される。前述のように調製されたストレ
プトアビジン溶液は活性化されたラテックス溶液と混合
され、その混合物は10から20時間攪拌される。反応が完
了した後、210mlの1Mグリシン溶液がストレプトアビジ
ン ラテックス懸濁液に添加され、懸濁液は再び約1時
間攪拌される。混合物は遠心分離され、上澄みは吸出さ
れる。その後ストレプトアビジン ラテックス複合物は
手頃な食塩水で洗滌され、再び遠心分離される。生成物
は、300g/lのMALTRIN365と0.5g/lのナトリウム、アジ化
物とを含有する十分な量の水溶液で再び懸濁され、リッ
トル当り約735gのストレプトアビジン ラテックスを含
む最終の懸濁液を提供する。次に、約1.47mgのストレプ
トアビジン ラテックスを含有する前記懸濁液20μlが
ゾーン22に供給される。懸濁液がゾーン22に供給され、
一方(19インチ−482.6ミリの水柱)の真空が帯片12の
反対側に付与され、ストレプトアビジン ラテックスが
ゾーンを越えて広がらないように阻止し、かつラテック
ス粒体がゾーン22において、帯片12の孔を完全に浸透す
るようにする。
トリスベースと、100g/lのMALTRIN365と、3g/lのEDTA二
ナトリウム塩と、0.3ml/lのIGEPALCA720と、0.1g/lのチ
メロサールと、10g/lのBSAと、0.5ml/lのTRITON X−100
とを含有する溶液で処理することが好ましい。前記の処
理は芯14を溶液に浸透させ、溶液を乾燥させることを含
む。そのような処理は非特定吸収を阻止することが判明
した。
い。妊娠検査の場合、芯14を最初の日の朝の尿の流れに
直接位置させることにより液体試料に露出させればよ
い。検査の主体が妊娠であるとすれば、そのような尿は
ある程度の人間の毛膜性生殖刺激ホルモン(hCG)、即
ち免疫学的に反応し、2B2抗体に対して特に免疫学的に
反応性がある第1の部位と、2G9抗体に対して特に免疫
学的に反応性のある別の部位とを有するホルモン分析物
を含む。
素12の表面と緊密に接触しているので、要素12の孔が尿
を端部16から端部32に向かう方向に毛管作用により帯片
要素12に沿って移動するようにさせる。要素12の孔の毛
管作用により尿がゾーン18と20とを順次横行するにつれ
て、尿は乾燥した標識成分と捕獲可能成分と接触するよ
うになりこれらの成分を再構成して、尿と、その中に拡
散した成分とを含有する液体反応混合物を形成する。
定の部位に対しては免疫反応し、かつゾーン20からの標
識成分の2G9抗体はhCG分子の異なる特定部位に対して免
疫反応するので、標識2G9成分と、hCGとビオチニラート
した2B2成分とのサンドイッチからなる反応生成物が形
成される。
である液体系において行われることが顕著である。この
ように、反応は効率的であり、最小の量の反応物を低レ
ベルの分析物とで確実な結果を提供する。
ーン22で局在化されたラテックス粒体に結合されるスト
レプトアビジンと出合うまで毛管作用により帯片12に沿
って拡散し、移動し続ける。2G9抗体に結合された金コ
ロイド標識を含む反応生成物における、ラテックス粒体
に結合されたストレプトアビジンと2B2抗体に結合され
たビオチンとの間の反応によりゾーン22において反応生
成物を捕獲し、かつ収集する。このように、ゾーン22に
おける局在化された捕獲成分は、捕獲可能の種としてビ
オチンからなる捕獲可能成分を含む反応生成物と相互作
用しうる捕獲物質としてアビジンを含む。アビジンはビ
オチンと作用し、金標識が濃縮され可視検出しうるゾー
ンとなったゾーン22において反応生成物を捕獲し、かつ
集める。金はゾーン22で集められ、かつ濃縮されて、可
視検出して確実な結果を指示しうる直ちに見える彩色を
提供する。
の2CG抗体は単にゾーン22を介して拡散し、空間30に沿
って広がり、そこで個々の金粒体は拡散してはっきりし
た彩色は見ることができない。ビオチラニートの2B2抗
体は常にゾーン22で集められ、かつ濃縮されるものの、
hCGが介在しないとその個所で金標識の2G9抗体を集める
方法がない。
トアビジンが採用され、捕獲可能種としてビオチンが採
用されてきた。これらの材料が選ばれた理由は、それら
が迅速かつしっかりと相互作用して確実な捕獲および収
集機能を提供するからである。その他のアビジン材料も
使用しうる。さらに、本発明はこれらの特定の材料に限
定されるのでなく、その他の代替的な相互作用材料も採
用しうる。例えば、抗体はフルオレセイン チオシアネ
ートに対して上げることができ、それらの抗体とフルオ
レスセイン チオシアネートとの間の結合作用を用いて
反応生成物を捕獲し、集めることができる。このように
2B2抗体をフルオレスセイン チオシアネートに結合し
て捕獲可能成分を提供することができ、かつフルオレス
セイン チオシアネートに対する抗体を固相粒体に結合
させ局在化可能捕獲成分を提供することができる。その
他の可能性のある材料が当該技術分野において公知であ
るが、この点における唯一の制約は捕獲可能種を適当な
免疫反応性物質に結合可能で捕獲可能成分を提供する必
要があること、および捕獲物質が適当な検出ゾーンにお
いて局在化されうる必要があることである。
Claims (54)
- 【請求項1】免疫反応性分析物を測定するための水性試
料の免疫学的検定法において、 (1)一対の両側の端を有する細長い帯片要素であっ
て、そこを通して水性分散系が毛管作用により拡散する
ことのできる多孔構造を有する吸水性担体材料から形成
された帯片要素と、(2)前記帯片要素の検出ゾーンに
局在化された捕獲成分であって、捕獲可能の種に特定的
に結合できる捕獲種からなり、前記検出ゾーンが前記帯
片要素の端部の少なくとも一方から離隔されている捕獲
成分とを含む免疫学的検査装置を提供すること、 (a)前記分析物に対して検定すべき水性試料と、
(b)第1の免疫学的物質と検出可能な同位体との第1
の結合生成物からなる分散された第1の粒子の第1のバ
ッチと、(c)第2の免疫反応性物質と捕獲可能種との
第2の結合生成物からなる分散された第2の粒子の第2
のバッチとを含む水性拡散系であって、前記第1と、前
記第2の免疫反応性物質が同じか、あるいは異なり、前
記水性分散系における前記分析物の介在あるいは量の機
能として前記分析物に対して、あるいは相互に対して拮
抗的あるいは非拮抗的に特定的に結合でき、それにより
第1と第2の粒子の双方からなる複合反応生成物を形成
する水性分散系を形成すること、 前記水性分散系を前記帯片要素に沿って、吸水性材料を
通して前記検出ゾーンへ拡散させて前記複合反応生成物
を前記捕獲成分と接触させて複合反応生成物を検出ゾー
ンにおいて不働態化させ、かつ濃縮させること、および 水性試料中の免疫反応性分析物の介在あるいは量の指標
として検出可能な同位体の介在について検出ゾーンを評
価することを含むことを特徴とする方法。 - 【請求項2】前記検出可能な同位体が金属含有の第3の
粒子からなることを特徴とする請求の範囲第1項に記載
の方法。 - 【請求項3】前記第1の結合生成物が第1の免疫反応性
物質を直接、金属含有の第3の粒子に結合させることに
より調製されることを特徴とする請求の範囲第2項に記
載の方法。 - 【請求項4】第3の粒子を含有する前記金属が金属コロ
イド粒子であることを特徴とする請求の範囲第2項に記
載の方法。 - 【請求項5】前記金属コロイド粒子が約25から約1000オ
ングストロームの範囲の粒径を有していることを特徴と
する請求の範囲第4項に記載の方法。 - 【請求項6】前記金属コロイド粒体が金コロイド粒体で
あることを特徴とする請求の範囲第4項に記載の方法。 - 【請求項7】前記種の一方がビオチンからなり、他方の
種がアビジンからなり、前記の特定的に結合する機能が
ビオチン・アビジン結合物の形成からなることを特徴と
する請求の範囲第1項に記載の方法。 - 【請求項8】前記の捕獲可能種がビオチンからなり、前
記捕獲種がアビジンからなることを特徴とする請求の範
囲第7項に記載の方法。 - 【請求項9】前記捕獲成分が第4の粒体と前記捕獲種と
の第3の結合生成物からなり、前記第4の粒体は前記検
出ゾーンにおいて不働態化した担持材料の孔に堆積さ
れ、したがって不働態化されていることを特徴とする請
求の範囲第1項に記載の方法。 - 【請求項10】前記捕獲可能種がビオチンからなり、前
記捕獲種がアビジンからなり、記の特定的に結合する機
能がビオチン・アビジン結合物の形成からなることを特
徴とする請求の範囲第9項に記載の方法。 - 【請求項11】第1と第2の粒体とが双方共初期には、
乾燥し、再構成可能で、水分散可能の形態で前記の吸水
性担持部材に含まれ、前記水性拡散系が乾燥し、再構成
可能粒体を前記水性試料と接触させることにより形成さ
れることを特徴とする請求の範囲第1項に記載の方法。 - 【請求項12】水性試料と乾燥し、再構成可能粒体との
間の接触が、まず帯片要素と水性試料と接触させ、次に
試料を吸水性担体材料を通して、乾燥し、再構成可能の
粒体と接触するよう拡散させることにより行われるよう
にされていることを特徴とする請求の範囲第11項に記載
の方法。 - 【請求項13】前記の乾燥し、再構成可能で、水分散性
の粒体がまず、吸水性担持材料の1個以上の接触ゾーン
に含まれ、前記水分散系が前記水性試料を前記接触ゾー
ンを通して拡散することにより形成されることを特徴と
する請求の範囲第12項に記載の方法。 - 【請求項14】前記粒体の第1のバッチが前記吸水性材
料の第1の接触ゾーンに含まれ、前記の粒体の第2のバ
ッチが前記吸水性材料の第2の接触ゾーンに含まれてい
ることを特徴とする請求の範囲第13項に記載の方法。 - 【請求項15】前記帯片要素を水性試料と接触させる前
記の段階が前記基本要素の前記一方端を水性試料に浸漬
させることからなることを特徴とする請求の範囲第14項
に記載の方法。 - 【請求項16】前記第1と第2の接触ゾーンが前記帯片
要素の長手方向に離隔していることを特徴とする請求の
範囲第14項に記載の方法。 - 【請求項17】前記第1と第2の接触ゾーンが前記帯片
の前記一方端と前記検出ゾーンとの間で、検出ゾーンに
対して長手方向に離隔された関係で配置されていること
を特徴とする請求の範囲第14項に記載の方法。 - 【請求項18】前記の検出可能の標識が金属含有の第3
の粒体からなることを特徴とする請求の範囲第14項に記
載の方法。 - 【請求項19】前記第1の結合生成物が第1の免疫反応
性物質を直接、金属含有の第3の粒体に結合することに
より調製されることを特徴とする請求の範囲第18項に記
載の方法。 - 【請求項20】前記金属含有の第3の粒体が金属コロイ
ド粒体であることを特徴とする請求の範囲第18項に記載
の方法。 - 【請求項21】前記金属コロイド粒体が約25から約1000
オングストロームの範囲の粒体サイズを有することを特
徴とする請求の範囲第20項に記載の方法。 - 【請求項22】前記金属コロイド粒体が金コロイド粒体
であることを特徴とする請求の範囲第20項に記載の方
法。 - 【請求項23】前記種の一方がビオチンからなり、他方
の種がアビジンからなり、前記の特定的に結合する機能
がビオチン、アビジン結合物を形成することからなるこ
とを特徴とする請求の範囲第14項に記載の方法。 - 【請求項24】前記捕獲可能種がビオチンからなり、前
記捕獲種がアビジンからなることを特徴とする請求の範
囲第23項に記載の方法。 - 【請求項25】前記捕獲成分が第4の粒体と前記捕獲種
との第3の結合生成分からなり、前記第4の粒体が前記
検出ゾーンにおいて前記吸水性担体材料の孔に堆積さ
れ、したがって不働態化されることを特徴とする請求の
範囲第14項に記載の方法。 - 【請求項26】前記捕獲可能種がビオチンからなり、前
記捕獲種がアビジンからなり、前記の特定的に結合する
機能がビオチン、アビジン結合物の形成からなることを
特徴とする請求の範囲第25項に記載の方法。 - 【請求項27】前記第1と第2の免疫反応性物質がそれ
ぞれ分析物の異なる各部位と特定的に結合しサンドイッ
チを形成することを特徴とする請求の範囲第14項に記載
の方法。 - 【請求項28】前記第1と第2の免疫反応性物質がそれ
ぞれ抗体であり、分析物が双方の抗体によって特定的に
結合される抗原であることを特徴とする請求の範囲第27
項に記載の方法。 - 【請求項29】前記第1と第2の免疫反応性物質が特定
的に相互に結合することを特徴とする請求の範囲第14項
に記載の方法。 - 【請求項30】前記免疫反応性物質の一方が抗体であ
り、他方が前記抗体により特定的に結合される抗原であ
ることを特徴とする請求の範囲第29項に記載の方法。 - 【請求項31】第1の免疫反応性物質が抗体であり、第
2の免疫反応性物質が前記抗体により特定的に結合され
る抗原であることを特徴とする請求の範囲第29項に記載
の方法。 - 【請求項32】免疫反応性分析物を測定するための水性
試料の免疫学的検定のための材料のキットにおいて、 (1)一対の両側の端部を有する細長い帯片要素であっ
て、そこを通して水性分配系が毛管作用により拡散しう
る多孔性構造を有する吸水性担体材料から形成された帯
片要素と、(2)基本要素の検出ゾーンにおいて局在化
され、捕獲可能種に特定的に結合可能な捕獲種からなる
捕獲成分であって、前記検出ゾーンが帯片要素の端部の
少なくとも一方から離隔されている捕獲成分とからなる
免疫学的検定装置と、 第1の免疫反応性物質と検出可能標識との第1の結合生
成物からなる、乾燥し、再構成可能で水分散性の第1の
粒体の第1のバッチと、 第2の免疫反応性物質と前記捕獲可能種との第2の結合
生成物からなる、乾燥し、再構成可能で水分散性の第2
の粒体の第2のバッチとを含み、 前記の第1と第2のバッチの第1と第2の粒体が前記水
性試料と接触することにより前記試料と分散した第1と
第2の粒体とを含む水分散系を形成し、前記第1と第2
の免疫反応性物質が同じ、あるいは異なり、前記水分散
系中の前記分析物の介在あるいは量の機能として、前記
分析物あるいは相互に対して拮抗的あるいは非拮抗的に
特定的に結合でき第1と第2の粒体の双方からなる複合
反応生成物を形成し、 前記吸水性担体材料が、前記水分散系が帯片要素に沿っ
て、かつ吸水性材料を通して拡散することにより複合反
応生成物を前記検出ゾーンにおいて局在化した捕獲成分
と接触させ、複合反応生成物を検出ゾーンにおいて不働
態化し、かつ濃縮させることにより、検出ゾーンが水性
試料における免疫反応性分析物の介在あるいは量のイン
ジケータとして検出可能標識の介在について評価しうる
ことを特徴とするキット。 - 【請求項33】前記第1と第2の粒体が吸水性担体材料
に含まれていることを特徴とする請求の範囲第32項に記
載のキット。 - 【請求項34】前記第1と第2の粒体が前記吸水性材料
の1個以上の接触ゾーンに含まれていることを特徴とす
る請求範囲第33項に記載のキット。 - 【請求項35】前記粒体の第1のバッチが前記吸水性材
料の第1の接触ゾーンに含まれ、前記粒体の第2のバッ
チが前記吸水性材料の第2の接触ゾーンに含まれている
ことを特徴とする請求の範囲第34項に記載のキット。 - 【請求項36】前記第1と第2の接触ゾーンが前記帯片
の長手方向に離隔されていることを特徴とする請求の範
囲第35項に記載のキット。 - 【請求項37】前記第1と第2の接触ゾーンが帯片要素
の前記の一方端と前記検出ゾーンの間で、検出ゾーンに
対して長手方向に離隔した関係で配置されていることを
特徴とする請求の範囲第35項に記載のキット。 - 【請求項38】前記第1と第2の接触ゾーンが帯片要素
の前記一方端と前記検出ゾーンとの間で、検出ゾーンに
対して長手方向に離隔された関係で配置されていること
を特徴とする請求の範囲第36項に記載のキット。 - 【請求項39】前記検出可能の標識が金属含有の第3の
粒体からなることを特徴とする請求の範囲第38項に記載
のキット。 - 【請求項40】前記第1の結合生成物が第1の免疫反応
性物質を金属含有の第3の粒体に直接結合することによ
り調製されることを特徴とする請求の範囲第39項に記載
のキット。 - 【請求項41】前記金属含有の第3の粒体が金属コロイ
ド粒体であることを特徴とする請求の範囲第39項に記載
のキット。 - 【請求項42】前記金属コロイド粒体が約25から約1000
オングストロームの範囲の粒体サイズを有することを特
徴とする請求の範囲第41項に記載のキット。 - 【請求項43】前記粒体が金コロイド粒体であることを
特徴とする請求の範囲第41項に記載のキット。 - 【請求項44】前記種の一方がビオチンからなり、他方
の種がアビジンからなり、前記の特定的に結合する機能
がビオチン・アビジン結合物の形成からなることを特徴
とする請求の範囲第38項に記載のキット。 - 【請求項45】前記の捕獲可能種がビオチンからなり、
前記捕獲種がアビジンからなることを特徴とする請求の
範囲第44項に記載のキット。 - 【請求項46】前記捕獲成分が第4の粒体と前記捕獲種
との第3の結合生成物からなり、前記第4の粒体が前記
検出ゾーンにおいて前記吸水性担体材料の孔に堆積さ
れ、したがって不働態化されていることを特徴とする請
求の範囲第38項に記載のキット。 - 【請求項47】前記捕獲可能種がビオチンからなり、前
記捕獲種がアビジンからなり、前記の特定的に結合する
機能がビオチン・アビジン結合物の形成からなることを
特徴とする請求の範囲第46項に記載のキット。 - 【請求項48】前記第1と第2の免疫反応性物質がそれ
ぞれ分析物のそれぞれ異なる部位と特定的に結合してサ
ンドイッチを形成することを特徴とする請求の範囲第38
項に記載のキット。 - 【請求項49】前記第1と第2の免疫反応性物質がそれ
ぞれ抗体であり、分析物が双方の抗体によって特定的に
結合される抗原であることを特徴とする請求の範囲第38
項に記載のキット。 - 【請求項50】前記第1と第2の免疫反応性物質が特定
的に相互に結合することを特徴とする請求の範囲第38項
に記載のキット。 - 【請求項51】前記免疫反応性物質の一方が抗体であ
り、他方が前記抗体により特定的に結合される抗原であ
ることを特徴とする請求の範囲第50項に記載のキット。 - 【請求項52】第1の免疫反応性物質が抗体であり、第
2の免疫反応性物質が前記抗体により特定的に結合され
る抗原であることを特徴とする請求の範囲第50項に記載
のキット。 - 【請求項53】前記要素とその一端において緊密に接触
して配置している芯部材が含まれていることを特徴とす
る請求の範囲第32項に記載のキット。 - 【請求項54】前記要素とその一端において緊密に接触
して配置している芯部材が含まれていることを特徴とす
る請求の範囲第38項に記載のキット。
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