CN1954214B - 侧流格式、材料和方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种侧流格式以及用于在多种应用中使用所述格式的材料和方法。更具体地说，本发明提供单层侧流格式、材料和方法，以使用一包含干燥多孔介质的测试条来检测分析物的存在，所述干燥多孔介质包含单一亲水性基质。本发明也提供制造和使用所述格式的装置和方法。所述格式对于诊断生理以及遗传状况特别有用。另外，本发明提供用于在多孔介质中浓缩试剂的方法和材料。

Description

侧流格式、材料和方法
相关申请案交叉参照
本申请案主张优先于在2004年3月30日提出申请的美国临时申请案第60/557,851号，该申请案的揭示内容以引用方式并入本文中。
技术领域
本发明提供侧流格式以及用于在多种应用中使用该格式的材料和方法。
背景技术
典型侧流测试利用侧向液体或悬浮液流原理输送给定试样来进行测试。这些测试用于多种应用中，包括诊断(例如妊娠及其他类型的医学测试)及环境测试。
通常，侧流测试可能需要多达5种不同的材料以优化测试。这些材料用作渗吸材料来输送试样进行测试；用作过滤材料来除去不需要的粒子；用作偶联物释放垫，在这里检测试剂在干燥时不能移动但当润湿时可移动；用作反应基质来固定捕获剂；及用作吸收剂来吸收试样并驱动液体使之沿测试格式流动。
尽管使用范围广，但侧流测试经常遇到流动问题且难于制造。这些测试为复杂的由多个部分构成的分析，其在一系列由排列于测试条上的不同类型材料构成的重叠垫上实施。材料不相容性、接触问题及材料性质缺陷导致多种问题。各区段间的边界可对流动性产生不利影响。不同的材料可具有极为不同的流动性或渗吸性、速率，且可对流经它们的分子产生不同的影响。
目前，该测试的不同部分使用不同的材料，因为各组件需要的物理性质极为不同。举例而言，试样渗吸材料必须具有快速毛细吸收能力且可具有极为敞开的结构；而过滤材料必须具有大小适当的孔尺寸以除去不需要的粒子；偶联物释放材料必须不能结合蛋白质；而反应基质必须可结合蛋白质且与之相容。由于需要的特性不同，因此正常的是测试通常由数种不同材料的重叠垫构成。通常，反应基质使用膜，例如硝酸纤维素膜；而试样施加/过滤层及偶联物释放层使用玻璃纤维或人造纤维(例如纤维素)；吸收剂使用纤维素或玻璃纤维材料(Whatman plc)。
通常，将试样置于试样施加渗吸材料(例如，玻璃纤维、浇注乙酸纤维素、熔融PE或纤维素纤维)上，渗吸过程从这里开始。视情况，试样经过该渗吸材料并进入且经过过滤垫(例如玻璃纤维、玻璃膜、纤维素纤维、浇注乙酸纤维素、熔融PE、人造纤维以及人造纤维与玻璃纤维的混合物)，其可用于除去杂质或(例如)除去血样中的红细胞(红血细胞)以将它们自试样除去或防止它们的红色干扰下游颜色指示剂。接下为，试样渗吸入一偶联物垫(例如玻璃纤维或聚酯)中，在这里试样液或悬浮液与有色偶联剂(例如抗体)混合，使偶联剂被释放。若试样呈阳性，则偶联物将与分析物结合。结合及未结合的偶联物均侧向流经偶联物垫进入捕获区域垫，捕获区域垫通常为硝酸纤维素。在某些实例中，该捕获区域垫可包含两条垂直设置于硝酸纤维素膜上的蛋白质线。一条线(测试)与分析物(如果存在)结合，而另一条线(对照)与偶联物结合，以指示测试本身已成功，无论结果为阳性还是阴性。因此，成功的阳性测试显示两条线(测试和对照)，而成功的阴性测试显示一条线(仅对照)。吸收垫通常为纤维素或玻璃纤维，其起吸收剂作用以使液体通过测试条。重叠垫(各自具有一或多个层)的整个组合件附着至一组合件薄片上，该薄片可由各种类型的材料(例如塑料)制成且不与测试相互作用。
理想的是具有一单层侧流格式，以减少由材料不相容性及接触问题造成的流动难题，降低显影时间，提高侧流测试结果的准确性及效率，提供优良的性能，降低制造成本，及有助于简化该格式的使用。
发明内容
一方面，本发明提供一种测试条，其用于检测施加至该测试条的液体试样中一分析物的可能存在，该测试条包含一干燥多孔介质，而该干燥多孔介质包含一单一亲水性基质，其中该单一亲水性基质包含：
a.一纤维网络；及
b.一系列包含下列的区：
i.一试样施加区；
ii.一包含经标记结合剂的偶联物释放区，其中
—该经标记结合剂特异性地与该分析物结合，以形成一包含该经标记结合剂及该z分析物的第一复合物；
—该经标记结合剂包含一标记；及
—该经标记结合剂在施加该液体试样之前呈干燥状态位于该测试条上，而在与该液体试样接触时释放成可移动形式；及
iii.一包含一捕获测试剂的捕获测试区，其中
—该捕获测试剂特异性地与该分析物或与该第一复合物结合，以形成一包含该经标记结合剂、该分析物及该捕获测试剂的第二复合物；及
—该捕获测试剂在施加该液体试样之前呈干燥状态位于该测试条上，基本上不能移动。
另一方面，本发明提供一种测试条，其用于检测施加至该测试条的液体试样中一分析物的可能存在，该测试条包含一干燥多孔介质，而该干燥多孔介质包含一单一亲水性基质，其中该单一亲水性基质包含：
a.一纤维网络；及
b.一系列包含下列的区：
i.一试样施加区；
ii.一偶联物释放区，较佳包含经标记结合剂，其中
—该经标记结合剂特异性地与该分析物结合，以形成一包含该经标记结合剂及该分析物的第一复合物；
—该经标记结合剂包含一标记；及
—该经标记结合剂在施加该液体试样之前呈干燥状态位于该测试条上，而在与该液体试样接触时释放成可移动形式；及
iii.一捕获测试区，较佳包含一捕获测试剂，其中
—该捕获测试剂特异性地与该分析物或与该第一复合物结合，以形成一包含该经标记结合剂、该分析物及该捕获测试剂的第二复合物；及
—该捕获测试剂在施加该液体试样之前呈干燥状态位于该测试条上且基本上不能移动；
iv.一捕获对照区，较佳包含一捕获对照剂，其中
—该捕获对照剂与该经标记结合剂结合，以形成一包含该经标记结合剂及该捕获对照剂的第三复合物；及
—该捕获对照剂在施加该液体试样之前呈干燥状态位于该测试条上且基本上不能移动；及
v.一吸收区，其中该吸收区通过毛细作用吸收该液体试样使之通过该测试条的干燥多孔介质。
又一方面，本发明提供一种用于检测液体试样中一分析物的可能存在的装置，其中该装置包含：
a.上述测试条；
b.一含有该测试条的外壳，其中该外壳包含至少一个开口以暴露该测试条在该施加区中的表面，以施加该液体试样。
再一方面，本发明提供一种测试条，其用于检测施加至该测试条的液体试样中一分析物的可能存在，该测试条包含一干燥多孔介质，而该干燥多孔介质包含单一亲水性基质，其中该单一亲水性基质包含：
a.一包含一纤维网络的单片式亲水性基质；及
b.一系列包含下列的区；
i.一试样施加区；
ii.一包含经标记结合剂的偶联物释放区，其中
—该经标记结合剂包含：
—一标记；
—一包含一载体珠粒的固体基材，其中当该载体珠粒及基质润湿时该载体珠粒可在该基质内移动；及
—一配体，其特异性地与该分析物结合以形成一包含该经标记结合剂及该分析物的第一复合物；及
—该经标记结合剂在施加该液体试样之前以干燥状态位于该测试条上且在与该液体试样接触时释放成可移动形式；
iii.一包含一捕获测试剂的捕获测试区，其中
—该捕获测试剂包含：
—一包含一捕获测试珠粒的固体基材；及
—一配体，其特异性地与该分析物或与该第一复合物结合，以形成一包含该经标记结合剂、该分析物及该捕获剂的第二复合物；及
—该捕获测试剂在施加该液体试样之前以干燥状态位于该测试条上且基本上不能移动；
iv.一包含一捕获对照剂的捕获对照区，其中
—该捕获对照剂包含：
—一包含一捕获对照珠粒的固体基材；及
—一配体，其特异性地与该经标记结合剂结合，以形成一包含该经标记结合剂及该捕获对照剂的第三复合物；及
—该捕获对照剂在施加该液体试样之前呈干燥状态位于该测试条上且基本上不能移动；及
v.一吸收区，其中该吸收区通过毛细作用吸收该液体试样使之通过该测试条的干燥多孔介质。
另一方面，本发明提供一种测试条制备方法，该测试条用于检测施加至测试条的液体试样中一分析物的可能存在，该测试条包含一干燥多孔介质，而该干燥多孔介质包含一单一亲水性基质，该单一亲水性基质包含一单片式亲水性基质，其中该方法包括：
a.提供一单片式亲水性基质，其中该单片式亲水性基质包含一纤维网络；
b.通过下列在该单片式亲水性基质上产生一偶联物释放区：
i.提供一经标记结合剂，其中该经标记结合剂包含：
—一标记；
—一包含一载体珠粒的固体基材，其中当该载体珠粒及基质润湿时该载体珠粒可在该基质内移动；及
—一配体，其特异性地与该分析物结合以形成一包含该经标记结合剂及该分析物的第一复合物；及
ii.将该经标记结合剂悬浮在一缓冲液中；
iii.将该经标记结合剂悬浮液施加至该单片式亲水性基质的第一区；
c.通过下列在该单片式亲水性基质上产生一捕获测试区：
i.提供一捕获测试剂，其中该捕获测试剂包含：
—一包含一捕获测试珠粒的固体基材；
—一配体，其特异性地与该分析物或与该第一复合物结合，以形成一包含该经标记结合剂、该分析物及该捕获测试剂的第二复合物；及
ii.将该捕获测试剂悬浮在一缓冲液中；
iii.将该捕获测试剂悬浮液施加至该单片式亲水性基质的第二区，其中该第二区位于该第一区的下游；及
d.通过下列在该单片式亲水性基质上产生一捕获对照区：
i.提供一捕获对照剂，其中该捕获对照剂包含：
—一包含一捕获对照珠粒的固体基材；及
—一配体，其特异性地与该经标记结合剂结合，以形成一包含该经标记结合剂及该捕获对照剂的第三复合物；及
ii.将该捕获对照剂悬浮在一缓冲液中；
iii.将该捕获对照剂悬浮液施加至该单片式亲水性基质的第三区，其中该第三区位于该第二区的下游；及
e.干燥该单片式亲水性基质，以产生一干燥多孔介质。
再一方面，本发明提供一种使用一测试条来检测施加至该测试条的液体试样中一分析物的可能存在的方法，其中该方法包括：
a.提供一包含一干燥多孔介质的测试条，该干燥多孔介质包含单一亲水性基质，其中该单一亲水性基质包含：
i.一包含一纤维网络的单片式亲水性基质；及
ii.一系列包含下列的区；
(a)一试样施加区；
(b)一包含一经标记结合剂的偶联物释放区，其中
(i)该经标记结合剂包含：
—一标记；
—一包含一载体珠粒的固体基材，其中当该载体珠粒及基质润湿时该载体珠粒可在该基质内移动；及
—一配体，其特异性地与该分析物结合以形成一包含该经标记结合剂及该分析物的第一复合物；及
(ii)该经标记结合剂在施加该液体试样之前以干燥状态位于该测试条上且在与该液体试样接触时释放成可移动形式；
(c)一包含一捕获测试剂的捕获测试区，其中
(i)该捕获测试剂包含：
—一包含一捕获测试珠粒的固体基材；及
—一配体，其特异性地与该分析物或与该第一复合物结合，以形成一包含该经标记结合剂、该分析物及该捕获剂的第二复合物；及
(ii)该捕获测试剂在施加该液体试样之前以干燥状态位于该测试条上且基本上不能移动；
(d)一包含一捕获对照剂的捕获对照区，其中
(i)该捕获对照剂包含：
—一包含一捕获对照珠粒的固体基材；及
—一配体，其特异性地与该经标记结合剂结合，以形成一包含该经标记结合剂及该捕获对照剂的第三复合物；及
(ii)该捕获对照剂在施加该液体试样之前呈干燥状态位于该测试条上且基本上不能移动；及
(e)一吸收区，其中该吸收区通过毛细作用吸收该液体试样使之通过该测试条的干燥多孔介质；
b.获得一液体试样；
c.将该液体试样施加至该测试条的试样施加区；
d.渗吸该液体试样，使之通过该单一亲水性基质而到达该偶联物释放区；
e.使该经标记结合剂与该液体试样接触，以使该经标记结合剂移动并且如果该液体试样包含分析物则允许形成该第一复合物；
f.渗吸该液体试样及该经标记结合剂(单独的或在该第一复合物中)，使之通过该单一亲水性基质而到达该捕获测试区；
g.使该捕获测试剂与该液体试样及该经标记结合剂(单独的或在该第一复合物中)接触，以便如果该第一复合物存在则允许形成该第二复合物；
h.浓缩在该单一亲水性基质的捕获测试区中该纤维网络中的该第二复合物；
i.检测在该捕获测试区中该第二复合物的存在；
j.渗吸该液体试样及该经标记结合剂，使之通过该单一亲水性基质而到达该捕获对照区；
k.使该捕获对照剂与该液体试样及该经标记结合剂接触，以允许形成该第三复合物；
l.浓缩在该单一亲水性基质的捕获对照区中该纤维网络中的该第三复合物；及
m.检测在该捕获对照区中该第三复合物的存在。
再一方面，本发明提供一种诊断生物体中一疾病、一表现型、一基因型或一生理状况的方法，该方法是通过检测液体生物试样中与该疾病、该表现型、该基因型或该生理状况相联系的分析物的存在来进行，其中该方法包括：
a.提供一包含一干燥多孔介质的测试条，该干燥多孔介质包含一单一亲水性基质，其中该单一亲水性基质包含：
i.一包含一纤维网络的单片式亲水性基质；及
ii.一系列包含下列的区；
(a)一试样施加区；
(b)一包含经标记结合剂的偶联物释放区，其中
(i)该经标记结合剂包含：
—一标记；
—一包含一载体珠粒的固体基材，其中当该载体珠粒及基质润湿时该载体珠粒可在该基质内移动；及
—一配体，其特异性地与该分析物结合以形成一包含该经标记结合剂及该分析物的第一复合物；及
(ii)该经标记结合剂在施加该液体试样之前以干燥状态位于该测试条上且在与该液体试样接触时释放成可移动形式；
(c)一包含一捕获测试剂的捕获测试区，其中
(i)该捕获测试剂包含：
—一包含一捕获测试珠粒的固体基材；及
—一配体，其特异性地与该分析物或与该第一复合物结合，以形成一包含该经标记结合剂、该分析物及该捕获剂的第二复合物；及
(ii)该捕获测试剂在施加该液体试样之前以干燥状态位于该测试条上且基本上不能移动；
(d)一包含一捕获对照剂的捕获对照区，其中
(i)该捕获对照剂包含：
—一包含一捕获对照珠粒的固体基材；及
—一配体，其特异性地与该经标记结合剂结合，以形成一包含该经标记结合剂及该捕获对照剂的第三复合物；及
(ii)该捕获对照剂在施加该液体试样之前呈干燥状态位于该测试条上且基本上不能移动；及
(e)一吸收区，其中该吸收区通过毛细作用吸收该液体试样使之通过该测试条的干燥多孔介质；
b.自一生物体获得一液体生物试样；
c.将该液体生物试样施加至该测试条的试样施加区；
d.渗吸该液体生物试样，使之通过该单一亲水性基质而到达该偶联物释放区；
e.使该经标记结合剂与该液体生物试样接触，以使该经标记结合剂移动使并且允许形成该第一复合物；
f.渗吸该液体生物试样、该经标记结合剂及该第一复合物，使之通过该单一亲水性基质而到达该捕获测试区；
g.使该捕获测试剂与该液体生物试样、该经标记结合剂及该第一复合物接触，以允许形成该第二复合物；
h.浓缩在该单一亲水性基质的捕获测试区中该纤维网络中的该第二复合物；
i.检测在该捕获测试区中该第二复合物的存在；
j.渗吸该液体试样及该经标记结合剂，使之通过该单一亲水性基质而到达该捕获对照区；
k.使该捕获对照剂与该液体试样及该经标记结合剂接触，以允许形成该第三复合物；
l.浓缩在该单一亲水性基质的捕获对照区中该纤维网络中的该第三复合物；及
m.检测在该捕获对照区中的该第三复合物的存在；
n.诊断该生物体中的该疾病、该表现型、该基因型或该生理状况。
又一方面，本发明提供一种测试条，其用于检测施加至该测试条上的液体试样中多个分析物中任一分析物的可能存在，该测试条包含一干燥多孔介质，而该干燥多孔介质包含一单一亲水性基质，其中该单一亲水性基质包含：
a.一包含一纤维网络的单片式亲水性基质；及
b.一系列包含下列的区；
i.一试样施加区；
ii.一包含复数种经标记结合剂的偶联物释放区，其中
(a)每一种经标记结合剂包含：
(i)一标记；
(ii)一包含一载体珠粒的固体基材，其中当该载体珠粒及基质润湿时该载体珠粒可在该基质内移动；及
(iii)一配体，其特异性地与这些分析物之一结合以形成一包含该经标记结合剂及该分析物的第一复合物；
(b)每一种经标记结合剂在施加该液体试样之前均以干燥状态位于该测试条上且在与该液体试样接触时释放成可移动形式；
(c)每一种经标记结合剂均特异性地与这些多个测试分析物中的一不同分析物结合；
iii.一包含复数种捕获测试剂的捕获测试区，其中
(a)每一种捕获测试剂包含：
(i)一包含一捕获测试珠粒的固体基材；及
(ii)一配体，其特异性地与这些分析物之一或与这些第一复合物之一结合，以形成一包含该经标记结合剂、该分析物及该捕获剂的第二复合物；及
(b)每一种捕获测试剂在施加该液体试样之前均以干燥状态位于该测试条上且基本上不能移动；
(c)每一种捕获测试剂均特异性地与这些多个测试分析物及第一复合物中的不同分析物或第一复合物结合；
iv.一包含至少一种捕获对照剂的捕获对照区，其中
(a)该捕获对照剂包含：
(i)一包含一捕获对照珠粒的固体基材；及
(ii)一配体，其特异性地与该经标记结合剂结合，以形成一包含该经标记结合剂及该捕获对照剂的第三复合物；及
(b)该捕获对照剂在施加该液体试样之前呈干燥状态位于该测试条上且基本上不能移动；及
v.一吸收区，其中该吸收区通过毛细作用吸收该液体试样使之通过该测试条的干燥多孔介质。
另一方面，本发明提供用于竞争性分析的测试条，其用于检测施加至该测试条上的液体试样中一分析物的可能存在，该测试条包含一干燥多孔介质，而该干燥多孔介质包含一单一亲水性基质，其中该单一亲水性基质包含：
a.一包含一纤维网络的单片式亲水性基质；及
b.一系列包含下列的区；
i.一试样施加区；
ii.一包含一经标记结合剂的偶联物释放区，其中
(a)该经标记结合剂包含：
(i)一标记；
(ii)一包含一载体珠粒的固体基材，其中当该载体珠粒及基质润湿时该载体珠粒可在该基质内移动；及
(iii)一配体，其特异性地与该分析物结合以形成一包含该经标记结合剂及该分析物的第一复合物；
(b)该经标记结合剂在施加该液体试样之前以干燥状态位于该测试条上且在与该液体试样接触时释放成可移动形式；
iii.一包含一捕获测试剂的捕获测试区，其中
(a)该捕获测试剂包含：
(i)一包含一捕获测试珠粒的固体基材；及
(ii)一配体，其包含该分析物或该分析物的一类似物；及
(b)该捕获测试剂在施加该液体试样之前以干燥状态位于该测试条上且基本上不能移动；
iv.一包含一捕获对照剂的捕获对照区，其中
(a)该捕获对照剂包含：
(i)一包含一捕获对照珠粒的固体基材；及
(ii)一配体，其特异性地与该经标记结合剂结合，以形成一包含该经标记结合剂及该捕获对照剂的第二复合物；及
(b)该捕获对照剂在施加该液体试样之前呈干燥状态位于该测试条上且基本上不能移动；及
v.一吸收区，其中该吸收区通过毛细作用吸收该液体试样使之通过该测试条的干燥多孔介质。
再一方面，本发明提供一种在包含一单片式亲水性基质的多孔介质中浓缩试剂的方法，其中该方法包括：
a.提供一单片式亲水性基质；
b.提供一试剂，其中该试剂包含：
i.一固体基材；及
ii.一当与水性液体接触时可激活的凝结剂；
c.使该试剂悬浮在一缓冲液中，以生成一试剂悬浮液；
d.将该试剂悬浮液施加至该单片式亲水性基质；
e.干燥在该单片式亲水性基质上的该试剂悬浮液；及
f.将一水性液体施加至该多孔介质上来激活该凝结剂，以自凝结该试剂的固体基材来浓缩在该多孔介质的单片式亲水性基质中的该试剂。
又一方面，本发明提供一种在包含一单片式亲水性基质的多孔介质中浓缩试剂的方法，其中该方法包括：
a.提供一单片式亲水性基质；
b.提供一试剂，其中该试剂包含：
a.一带负电的固体基材；及
b.一附着至该固体基材的带正电的配体；
c.使该试剂悬浮在一缓冲液中，以生成一试剂悬浮液；
d.将该试剂悬浮液施加至该单片式亲水性基质；
e.干燥在该单片式亲水性基质上的该试剂悬浮液；及
f.使该配体与一具有低于该配体的pH的pH且包含一与该配体结合的物质的水性液体接触；
g.改变该试剂的总电荷以自凝结该试剂来浓缩在该多孔介质的单片式亲水性基质中的该试剂。
附图说明
图1A绘示在一外壳中的单层侧流格式测试条的一实施例的分解图。
图1B绘示在一支撑条上的单层侧流格式测试条的一实施例的分解图。
图2A至2D绘示一种使用一单层侧流格式的较佳实施例的方法。
图3的条形图绘示与其他材料相比该测试条亲水性基质一实施例的吸水性(mg/cm2)实验测量结果。
图4的条形图绘示与三种硝酸纤维素膜相比4cm的该测试条亲水性基质一实施例的渗吸速率(秒)实验测量结果。
图5的条形图绘示在该经标记结合剂包含一金载体珠粒(G)或一乳胶载体珠粒(L)的情况下该经标记结合剂自该亲水性基质的偶联物释放(％)比较。
具体实施方式
本发明提供单层侧流格式以及用于在多种应用中使用该格式的材料和方法。一方面，本发明的膜为一用于侧流分析的侧流测试条。在一实施例中，其为一用于将抗体做成线条来作为测试和对照线的膜，由此用作测试和对照线抗体的载体。在一实施例中，此等偶联至乳胶，此允许这些测试及对照线抗体结合对该膜。该膜亦用作偶联物释放垫，维持该金偶联物的稳定性并允许良好的偶联物释放。最后，该膜可用作试样垫，在这里其接收并递送试样/缓冲液至该测试条的其余部分。当其将该分析物及缓冲液输送至该测试条的其余部分时可实施简单的过滤。可使用一渗吸材料来自试样进入区域吸引该缓冲液及分析物使之通过该测试条上的偶联物、测试及对照线。
一方面，本发明提供一种测试条，其用于检测施加至该测试条的液体试样中一分析物的可能存在，该测试条包含一干燥多孔介质，而该干燥多孔介质包含单一亲水性基质，其中该单一亲水性基质包含：
a.一纤维网络；及
b.一系列包含下列的区：
i.一试样施加区；
ii.一包含一经标记结合剂的偶联物释放区，其中
—该经标记结合剂特异性地与该分析物结合，以形成一包含该经标记结合剂及该分析物的第一复合物；
—该经标记结合剂包含一标记；及
—该经标记结合剂在施加该液体试样之前呈干燥状态位于该测试条上，在与该液体试样时释放成可移动形式；及
iii.一包含一捕获测试剂的捕获测试区，其中
—该捕获测试剂特异性地与该分析物或与该第一复合物结合，以形成一包含该经标记结合剂、该分析物及该捕获测试剂的第二复合物；及
—该捕获测试剂在施加该液体试样之前呈干燥状态位于该测试条上且基本上不能移动
iv.一包含一捕获对照剂的捕获对照区，其中
—该捕获对照剂与该经标记结合剂结合，以形成一包含该经标记结合剂及该捕获对照剂的第三复合物；及
—该捕获对照剂在施加该液体试样之前呈干燥状态位于该测试条上且基本上不能移动；及
v.一吸收区，其中该吸收区通过毛细作用吸收该液体试样使之通过该测试条的干燥多孔介质。
在一实施例中，该单一亲水性基质包含一单片式亲水性基质。
在一较佳实施例中，该单一亲水性基质包含玻璃、聚合物、乙酸纤维素或其组合。
较佳地，该玻璃包含玻璃纤维或玻璃微纤维。
较佳地，该聚合物包含聚酯、聚乙烯、聚丙烯、乳胶、聚醚砜、聚偏二氟乙烯、聚乙烯、尼龙、聚四氟乙烯或乙酸纤维素。更佳地，该单一亲水性基质包含玻璃纤维与聚合物的混合物。还要佳地，该非织造塑料包含乳胶。
在一较佳实施例中，该单一亲水性基质进一步包含一黏合剂。较佳地，该黏合剂选自由聚乙烯丙烯酰胺、聚乙烯丙烯酸酯、聚乙烯醇、聚苯乙烯及聚甲基丙烯酸甲酯以及明胶组成的群组。
在一较佳实施例中，该单一亲水性基质对于水具有在240秒内至少4cm的渗吸速率。更佳地，该单一亲水性基质对于水具有在100秒内至少4cm的渗吸速率。更佳地，对于水该渗吸速率为在60秒内至少4cm。还要佳地，对于水该渗吸速率在50秒内至少4cm的范围内。
在另一较佳实施例中，该单一亲水性基质具有介于1.5微米至25.0微米间的平均孔径。更佳地，该平均孔径为介于2.0微米至7.0微米之间。还要佳地，该平均孔径为介于3.0微米至6.0微米。
在另一较佳实施例中，该单一亲水性基质具有50微米至1000微米的厚度。更佳地，该厚度在150微米与500微米之间。
在另一较佳实施例中，该经标记结合剂进一步包含一特异性地与该分析物结合的配体。更佳地，该经标记结合剂进一步包含一附着有该配体的固体载体，且该固体载体包含金、乳胶、硒、铂、铜或铁。还要佳地，该固体载体包含一载体珠粒。在一特别佳的实施例中，该载体珠粒之尺寸允许该载体珠粒通过该基质，且当该珠粒及该基质润湿时该珠粒可在该基质内移动。更佳地，该载体珠粒的直径比该基质的平均孔径小10％或更小。
在一较佳实施例中，
a.该基质的平均孔径介于4.0至6.0微米之间；及
b.该载体珠粒包含一直径介于20至80纳米间的金珠粒。
在一较佳实施例中，
a.该基质的平均孔径介于4.0至6.0微米之间；及
b.该载体珠粒包含一直径介于100至800纳米间的乳胶珠粒。
在一较佳实施例中，该载体珠粒包含一乳胶珠粒，而该乳胶珠粒包含一比色染料或一荧光染料。在另一较佳实施例中，该载体珠粒包含一乳胶珠粒，而该乳胶珠粒包含一顺磁芯、一等离子体共振粒子或一量子点。
在一较佳实施例中，该经标记结合剂的结合包含一比色指示剂、一荧光指示剂、一光度指示剂、一放射性指示剂或一免疫指示剂。更佳地，该标记包含一染料。
在一较佳实施例中，该配体包含：
a.一多肽、一寡肽、一抗原、一抗体或一朊病毒；
b.一核酸或一肽核酸；
c.一药物、一药物类似物或一药物代谢产物；或
d.一印迹聚合物。
较佳地，该核酸包含DNA、PNA或RNA。较佳地，该DNA包含基因组DNA、cDNA、一蛋白质结合位点、一寡核苷酸或一引物，或该DNA包含一蛋白质结合位点而该蛋白质结合位点包含一启动子元件或一转录激活结构域。较佳地，该DNA包含单链DNA。较佳地，该RNA包含信使RNA(mRNA)或短干扰RNA(siRNA)。
在一较佳实施例中，
a.该分析物包含一具有相关靶序列的核酸；及
b.该配体包含一具有一与该相关靶序列有至少65％互补性的的序列的核酸。
较佳地，该配体包含一具有一与该相关靶序列有至少75％互补性的序列的核酸；更佳地，与该相关靶序列有至少85％的互补性；还要佳地，与该相关靶序列有至少95％的互补性；仍更佳地，与该相关靶序列有至少97％的互补性；且甚至更佳地，与该相关靶序列有至少99％的互补性。
在一较佳实施例中，
a.该分析物包含一抗原；及
b.该配体包含一特异性地与该抗原结合的抗体。
或者，
a.该配体包含一抗原；及
b.该分析物包含一特异性地与该抗原结合的抗体。
在另一较佳实施例中，
a.该配体包含一寡肽；及
b.该分析物包含一与该寡肽结合的蛋白质。
在再一较佳实施例中，
a.该分析物包含一药物或一药物类似物；及
b.该配体包含一与该药物结合的蛋白质。
或者，
a.该配体包含一药物或一药物类似物；及
b.该分析物包含一与该药物结合的蛋白质。
在又一较佳实施例中，
a.该配体包含一印迹聚合物；及
b.该分析物包含：
i.一多肽、一寡肽、一抗原、一抗体或一朊病毒；
ii.一核酸或一肽核酸；或
iii.一药物、一药物类似物或一药物代谢产物。
在另一较佳实施例中，该捕获测试剂进一步包含一特异性地与该分析物或与该第一复合物结合的配体。
在再一较佳实施例中，该捕获测试剂进一步包含一可附着有该配体的固体载体。较佳地，该固体载体包含乳胶、二氧化硅、玻璃、氧化铝、纤维素或糖。
在一特别佳的实施例中，该固体载体包含一捕获测试珠粒。较佳地，该捕获测试珠粒包含一硫酸盐封端的乳胶珠粒。
在一较佳实施例中，该硫酸盐封端的乳胶珠粒以物理方式结合蛋白质。
在另一较佳实施例中，该捕获测试珠粒包含一共价结合乳胶珠粒。
在再一较佳实施例中，该捕获测试珠粒的尺寸基本上能阻止其在基质中移动。较佳地，该捕获测试珠粒的尺寸介于该基质平均孔径的20％至70％之间。更佳地，该捕获测试珠粒的尺寸介于该基质平均孔径的30％至60％之间。
更佳地，
a.该基质的平均孔径介于4.0至6.0微米之间，及
b.该捕获测试珠粒包含一直径介于1.5至2.5纳米之间的乳胶珠粒。
在一较佳实施例中，该配体与该分析物或与该第一复合物的结合可浓缩该经标记结合剂，以便能够检测指示该第二复合物的存在的该标记。较佳地，该捕获测试珠粒包含一乳胶捕获珠粒，而该乳胶捕获珠粒包含一凝结剂。更佳地，该凝结剂包含聚乙二醇(PEG)。
在一较佳实施例中，该配体包含：
a.一多肽、一寡肽、一抗原或一抗体；或
b.一核酸或肽核酸；
c.一药物、一药物类似物或一药物代谢产物；或
d.一印迹聚合物。
较佳地，该核酸包含DNA、PNA或RNA。较佳地，该DNA包含基因组DNA、cDNA、一蛋白质结合位点、一寡核苷酸或一引物，或该DNA包含一蛋白质结合位点而该蛋白质结合位点包含一启动子元件或一转录激活结构域。较佳地，该DNA包含单链DNA。较佳地，该RNA包含信使RNA(mRNA)。
在一较佳实施例中，
a.该分析物包含一具有暴露的相关靶序列的核酸；及
b.该配体包含一具有一与该相关靶序列有至少65％互补性的序列的核酸。
较佳地，该配体包含一具有一与该相关靶序列有至少75％互补性的序列的核酸；更佳地，与该相关靶序列有至少85％的互补性；还要佳地，与该相关靶序列有至少95％的互补性；仍更佳地，与该相关靶序列有至少97％的互补性；甚至更佳地，与该相关靶序列有至少99％的互补性。
在一较佳实施例中，
a.该分析物或该第一复合物包含一抗原；及
b.该配体包含一特异性地与该抗原结合的抗体，其中在该分析物不存在的情况下该抗体并不显著地与该经标记结合剂结合。
或者，
a.该配体包含一抗原；及
b.该分析物或该第一复合物包含一特异性地与该抗原结合的抗体，其中在该分析物不存在的情况下该经标记结合剂并不显著地与该抗原结合。
在另一较佳实施例中，
a.该配体包含一寡肽；及
b.该分析物或该第一复合物包含一与该寡肽结合的蛋白质，其中在该分析物不存在的情况下该经标记结合剂并不显著地与该寡肽结合。
在再一较佳实施例中，
a.该配体包含一印迹聚合物；及
b.该分析物或该第一复合物包含一与该印迹聚合物结合的物质，其中在该分析物不存在的情况下该经标记结合剂并不显著地与该印迹聚合物结合。
更佳地，与该印迹聚合物结合的该物质包含一蛋白质。
在另一实施例中，该捕获对照剂进一步包含一特异性地与该经标记结合剂结合的配体。较佳地，该捕获对照剂进一步包含一可附着有该配体的固体载体。更佳地，该固体载体包含乳胶、二氧化硅、玻璃、氧化铝、纤维素或糖。
在一特别佳的实施例中，该固体载体包含一捕获对照珠粒。较佳地，该捕获对照珠粒包含一硫酸盐封端的乳胶珠粒。更佳地，该硫酸盐封端的乳胶珠粒以物理方式结合蛋白质。较佳地，该捕获对照珠粒包含一共价结合乳胶珠粒。
在一较佳实施例中，该捕获对照珠粒的尺寸基本上能阻止其在基质中移动。较佳地，该捕获对照珠粒的尺寸介于该基质平均孔径的20％至70％之间。更佳地，该捕获对照珠粒的尺寸介于该基质平均孔径的30％至60％之间。
在一特别佳的实施例中，
a.该基质的平均孔径介于4.0至6.0微米之间，及
b.该捕获对照珠粒包含一直径介于1.5至2.5纳米之间的乳胶珠粒。
在另一较佳实施例中，该配体与该经标记结合剂的结合可浓缩该经标记结合剂，以便能够检测该指示该第三复合物的存在的标记。较佳地，该捕获对照珠粒包含一乳胶捕获珠粒，而该乳胶捕获珠粒包含一凝结剂。更佳地，该凝结剂包含聚乙二醇(PEG)。
在另一较佳实施例中，
a.该经标记结合剂具有总的为负的电荷；及
b.该捕获对照剂具有总的为正的电荷。
更佳地，
a.该经标记结合剂包含一带负电的金载体珠粒；及
b.该捕获对照剂包含：
i.一带正电的聚合物；或
ii.一带正电的配体。
在另一较佳实施例中，
a.该经标记结合剂具有总的为正的电荷；及
b.该捕获对照剂具有总的为负的电荷。
在再一较佳实施例中，该配体包含：
a.一多肽、一寡肽、一抗原或一抗体；或
b.一核酸或肽核酸；
c.一药物、一药物类似物或一药物代谢产物；或
d.一印迹聚合物。
较佳地，该核酸包含DNA、PNA或RNA。较佳地，该DNA包含基因组DNA、cDNA、一蛋白质结合位点、一寡核苷酸或一引物，或该DNA包含一蛋白质结合位点而该蛋白质结合位点包含一启动子元件或一转录激活结构域。较佳地，该DNA包含单链DNA。较佳地，该RNA包含信使RNA(mRNA)。
在一较佳实施例中，
a.该经标记给合剂包含一具有暴露的相关靶序列的核酸；及
b.该配体包含一具有一与该相关靶序列有至少65％互补性的序列的核酸。
较佳地，该配体包含一具有一与该相关靶序列有至少75％互补性的序列的核酸；更佳地，与该相关靶序列有至少85％的互补性；还要佳地，与该相关靶序列有至少95％的互补性。
在一较佳实施例中，
a.该经标记结合剂包含一抗原；及
b.该配体包含一特异性地与该抗原结合的抗体。
或者，
a.该配体包含一抗原；及
b.该经标记结合剂包含一特异性地与该抗原结合的抗体。
在一较佳实施例中，
a.该配体包含一寡肽；及
b.该经标记结合剂包含一与该寡肽结合的蛋白质。
在另一较佳实施例中，
a.该配体包含一印迹聚合物；及
b.该经标记结合剂包含一与该印迹聚合物结合的物质。
更佳地，与该印迹聚合物结合的该物质包含一蛋白质。
在另一实施例中，该液体试样包含血液、血浆；血清；粘液；尿液；唾液；精液；阴道分泌物；汗液；泪液；淋巴液；胃肠液、悬浮液或胶质混合物；脑脊液；一细菌培养物；一组织培养物；一噬菌体裂解液；水；一饮料；一有机溶剂；一水溶液或有机溶液；细胞、病毒或其他可复制实体的悬浮液；或一胶质混合物。
在再一实施例中，该分析物包含一多肽、一寡核苷酸、一抗体、一抗原、一朊病毒、一核酸、一肽核酸、一药物、一药物类似物或一药物代谢产物。较佳地，该分析物的存在与否包含一生理状况的标志。更佳地，该生理状况包含妊娠、哺乳、疾病、一表现型、基因型或一正常或异常生理状况。
在又一较佳实施例中，该分析物包含一核酸而该生理状况包含一基因型。更佳地，该核酸包含基因突变或多态现象。
在另一较佳实施例中，该分析物包含一药物或一药物类似物。
在一较佳实施例中，
a.该分析物包含一来自一第一哺乳动物物种的抗原；及
b.该经标记结合剂包含一配体，而该配体包含一特异性地与该抗原结合的抗体，其中该抗体来自一第二哺乳动物物种。
更佳地，
c.该捕获对照试包含一配体，而该配全包含一来自一第三哺乳动物物种的抗体。
在一特别佳的实施例中，
a.该分析物包含人类绒毛膜促性腺激素(hCG)；
b.该经标记结合剂包含一单克隆小鼠抗人绒毛膜促性腺激素抗体；
c.该捕获对照剂包含一非人类、非鼠类哺乳动物抗小鼠抗体；及
d.该液体试样中人类绒毛膜促性腺激素的存在是妊娠生理状况的标志。
另一方面，本发明提供一种用于检测一液体试样中一分析物的可能存在的装置，其中该装置包含；
a.上述测试条；
b.一含有该测试条的外壳，其中该外壳包含至少一个开口以暴露该测试条在该施加区中的表面，以施加该液体试样。
较佳地，该外壳进一步包含一开口以暴露该测试条在该捕获测试区和捕获对照区中的表面，以检测测试结果。更佳地，该外壳包含标识该试样施加区、该捕获测试区及该捕获对照区的标记。
再一方面，本发明提供一种测试条，其用于检测施加至该测试条的液体试样中一分析物的可能存在，该测试条包含一干燥多孔介质，而该干燥多孔介质包含一单一亲水性基质，其中该单一亲水性基质包含：
a.一包含一纤维网络的单片式亲水性基质；及
b.一系列包含下列的区；
i.一试样施加区；
ii.一包含一经标记结合剂的偶联物释放区，其中
(a)该经标记结合剂包含：
(i)一标记；
(ii)一包含一载体珠粒的固体基材，其中当该载体珠粒及基质润湿时该载体珠粒可在该基质内移动；及
(iii)一配体，其特异性地与该分析物结合以形成一包含该经标记结合剂及该分析物的第一复合物；
(b)该经标记结合剂在施加该液体试样之前以干燥状态位于该测试条上且在与该液体试样接触时释放成可移动形式；
iii.一包含一捕获测试剂的捕获测试区，其中
(a)该捕获测试剂包含：
(i)一包含一捕获测试珠粒的固体基材；及
(ii)一配体，其特异性地与该分析物或该第一复合物结合以形成一包含该经标记结合剂、该分析物及该捕获剂的第二复合物；及
(b)该捕获测试剂在施加该液体试样之前以干燥状态位于该测试条上且基本上不能移动；
iv.一包含一捕获对照剂的捕获对照区，其中
(a)该捕获对照剂包含：
(i)一包含一捕获对照珠粒的固体基材；及
(ii)一配体，其特异性地与该经标记结合剂结合，以形成一包含该经标记结合剂及该捕获对照剂的第三复合物；及
(b)该捕获对照剂在施加该液体试样之前呈干燥状态位于该测试条上且基本上不能移动；及
v.一吸收区，其中该吸收区通过毛细作用吸收该液体试样使之通过该测试条的干燥多孔介质。
又一方面，本发明提供一种测试条制备方法，该测试条用于检测施加至测试条的液体试样中一分析物的可能存在，该测试条包含一干燥多孔介质，而该干燥多孔介质包含一单一亲水性基质，该单一亲水性基质包含一单片式亲水性基质，其中该方法包括：
a.提供一单片式亲水性基质，其中该单片式亲水性基质包含一纤维网络；
b.通过下列在该单片式亲水性基质上产生一偶联物释放区：
i.提供一经标记结合剂，其中该经标记结合剂包含：
—一标记；
—一包含一载体珠粒的固体基材，其中当该载体珠粒及基质润湿时该载体珠粒可在该基质内移动；及
—一配体，其特异性地与该分析物结合以形成一包含该经标记结合剂及该分析物的第一复合物；及
ii.将该经标记结合剂悬浮在一缓冲液中；
iii.将该经标记结合剂悬浮液施加至该单片式亲水性基质的第一区；
c.通过下列在该单片式亲水性基质上产生一捕获测试区：
i.提供一捕获测试剂，其中该捕获测试剂包含：
—一包含一捕获测试珠粒的固体基材；
—一配体，其特异性地与该分析物或与该第一复合物结合，以形成一包含该经标记结合剂、该分析物及该捕获测试剂的第二复合物；及
ii.将该捕获测试剂悬浮在一缓冲液中；
iii.将该捕获测试剂悬浮液施加至该单片式亲水性基质的第二区，其中该第二区位于该第一区的下游；及
d.通过下列在该单片式亲水性基质上产生一捕获对照区：
i.提供一捕获对照剂，其中该捕获对照剂包含：
—一包含一捕获对照珠粒的固体基材；及
—一配体，其特异性地与该经标记结合剂结合，以形成一包含该经标记结合剂及该捕获对照剂的第三复合物；及
ii.将该捕获对照剂悬浮在一缓冲液中；
iii.将该捕获对照剂悬浮液施加至该单片式亲水性基质的第三区，其中该第三区位于该第二区的下游；及
e.干燥该单片式亲水性基质，以产生一干燥多孔介质。
另一方面，本发明提供一种使用一测试条来检测施加至该测试条的液体试样中一分析物的可能存在的方法，其中该方法包括：
a.提供一包含一干燥多孔介质的测试条，该干燥多孔介质包含单一亲水性基质，其中该单一亲水性基质包含：
i.一包含一纤维网络的单片式亲水性基质；及
ii.一系列包含下列的区；
(a)一试样施加区；
(b)一包含一经标记结合剂的偶联物释放区，其中
(i)该经标记结合剂包含：
—一标记；
—一包含一载体珠粒的固体基材，其中当该载体珠粒及基质润湿时该载体珠粒可在该基质内移动；及
—一配体，其特异性地与该分析物结合以形成一包含该经标记结合剂及该分析物的第一复合物；及
(ii)该经标记结合剂在施加该液体试样之前以干燥状态位于该测试条上且在与该液体试样接触时释放成可移动形式；
(c)一包含一捕获测试剂的捕获测试区，其中
(i)该捕获测试剂包含：
—一包含一捕获测试珠粒的固体基材；及
—一配体，其特异性地与该分析物或与该第一复合物结合，以形成一包含该经标记结合剂、该分析物及该捕获剂的第二复合物；及
(ii)该捕获测试剂在施加该液体试样之前以干燥状态位于该测试条上且基本上不能移动；
(d)一包含一捕获对照剂的捕获对照区，其中
(i)该捕获对照剂包含：
—一包含一捕获对照珠粒的固体基材；及
—一配体，其特异性地与该经标记结合剂结合，以形成一包含该经标记结合剂及该捕获对照剂的第三复合物；及
(ii)该捕获对照剂在施加该液体试样之前呈干燥状态位于该测试条上且基本上不能移动；及
(e)一吸收区，其中该吸收区通过毛细作用吸收该液体试样使之通过该测试条的干燥多孔介质；
b.获得一液体试样；
c.将该液体试样施加至该测试条的试样施加区；
d.渗吸该液体试样，使之通过该单一亲水性基质而到达该偶联物释放区；
e.使该经标记结合剂与该液体试样接触，以使该经标记结合剂移动并且如果该液体试样包含分析物则允许形成该第一复合物；
f.渗吸该液体试样及该经标记结合剂(单独的或在该第一复合物中)，使之通过该单一亲水性基质而到达该捕获测试区；
g.使该捕获测试剂与该液体试样及该经标记结合剂(单独的或在该第一复合物中)接触，以便如果该第一复合物存在则允许形成该第二复合物；
h.浓缩在该单一亲水性基质的捕获测试区中该纤维网络中的该第二复合物；
i.检测在该捕获测试区中该第二复合物的存在；
j.渗吸该液体试样及该经标记结合剂，使之通过该单一亲水性基质而到达该捕获对照区；
k.使该捕获对照剂与该液体试样及该经标记结合剂接触，以允许形成该第三复合物；
l.浓缩在该单一亲水性基质的捕获对照区中该纤维网络中的该第三复合物；及
m.检测在该捕获对照区中该第三复合物的存在。
再一方面，本发明提供一种诊断生物体中一疾病、一表现型、一基因型或一生理状况的方法，该方法是通过检测液体生物试样中与该疾病、该表现型、该基因型或该生理状况相联系的分析物的存在来进行，其中该方法包括：
a.提供一包含一干燥多孔介质的测试条，该干燥多孔介质包含一单一亲水性基质，其中该单一亲水性基质包含：
i.一包含一纤维网络的单片式亲水性基质；及
ii.一系列包含下列的区；
(a)一试样施加区；
(b)一包含经标记结合剂的偶联物释放区，其中
(i)该经标记结合剂包含：
—一标记；
—一包含一载体珠粒的固体基材，其中当该载体珠粒及基质润湿时该载体珠粒可在该基质内移动；及
—一配体，其特异性地与该分析物结合以形成一包含该经标记结合剂及该分析物的第一复合物；及
(ii)该经标记结合剂在施加该液体试样之前以干燥状态位于该测试条上且在与该液体试样接触时释放成可移动形式；
(c)一包含一捕获测试剂的捕获测试区，其中
(i)该捕获测试剂包含：
—一包含一捕获测试珠粒的固体基材；及
—一配体，其特异性地与该分析物或与该第一复合物结合，以形成一包含该经标记结合剂、该分析物及该捕获剂的第二复合物；及
(ii)该捕获测试剂在施加该液体试样之前以干燥状态位于该测试条上且基本上不能移动；
(d)一包含一捕获对照剂的捕获对照区，其中
(i)该捕获对照剂包含：
—一包含一捕获对照珠粒的固体基材；及
—一配体，其特异性地与该经标记结合剂结合，以形成一包含该经标记结合剂及该捕获对照剂的第三复合物；及
(ii)该捕获对照剂在施加该液体试样之前呈干燥状态位于该测试条上且基本上不能移动；及
(e)一吸收区，其中该吸收区通过毛细作用吸收该液体试样使之通过该测试条的干燥多孔介质；
b.自一生物体获得一液体生物试样；
c.将该液体生物试样施加至该测试条的试样施加区；
d.渗吸该液体生物试样，使之通过该单一亲水性基质而到达该偶联物释放区；
e.使该经标记结合剂与该液体生物试样接触，以使该经标记结合剂移动并且允许形成该第一复合物；
f.渗吸该液体生物试样、该经标记结合剂及该第一复合物，使之通过该单一亲水性基质而到达该捕获测试区；
g.使该捕获测试剂与该液体生物试样、该经标记结合剂及该第一复合物接触，以允许形成该第二复合物；
h.浓缩在该单一亲水性基质的捕获测试区中该纤维网络中的该第二复合物；
i.检测在该捕获测试区中该第二复合物的存在；
j.渗吸该液体试样及该经标记结合剂，使之通过该单一亲水性基质而到达该捕获对照区；
k.使该捕获对照剂与该液体试样及该经标记结合剂接触，以允许形成该第三复合物；
l.浓缩在该单一亲水性基质的捕获对照区中该纤维网络中的该第三复合物；及
m.检测在该捕获对照区中的该第三复合物的存在；
n.诊断该生物体中的该疾病、该表现型、该基因型或该生理状况。
又一方面，本发明提供一种测试条，其用于检测施加至该测试条上的液体试样中多个分析物中任一分析物的可能存在，该测试条包含一干燥多孔介质，而该干燥多孔介质包含一单一亲水性基质，其中该单一亲水性基质包含：
a.一包含一纤维网络的单片式亲水性基质；及
b.一系列包含下列的区：
i.一试样施加区；
ii.一包含复数种经标记结合剂的偶联物释放区，其中
(a)每一种经标记结合剂均包含：
(i)一标记；
(ii)一包含一载体珠粒的固体基材，其中当该载体珠粒及基质润湿时该载体珠粒可在该基质内移动；及
(iii)一配体，其特异性地与这些分析物之一结合以形成一包含该经标记结合剂及该分析物的第一复合物；
(b)每一种经标记结合剂在施加该液体试样之前均以干燥状态位于该测试条上且在与该液体试样接触时释放成可移动形式；
(c)每一种经标记结合剂均特异性地与这些多个测试分析物中的一不同分析物结合；
iii.一包含复数种捕获测试剂的捕获测试区，其中
(a)每一种捕获测试剂均包含：
(i)一包含一捕获测试珠粒的固体基材；及
(ii)一配体，其特异性地与这些分析物之一或与这些第一复合物之一结合，以形成一包含该经标记结合剂、该分析物及该捕获剂的第二复合物；及
(b)每一种捕获测试剂在施加该液体试样之前均以干燥状态位于该测试条上且实质上不能移动；
(c)每一种捕获测试剂均特异性地与这些多个测试分析物及第一复合物中的一个不同分析物或第一复合物结合；
iv.一包含至少一种捕获对照剂的捕获对照区，其中
(a)该捕获对照剂包含：
(i)一包含一捕获对照珠粒的固体基材；及
(ii)一配体，其特异性地与该经标记结合剂结合，以形成一包含该经标记结合剂及该捕获对照剂的第三复合物；及
(b)该捕获对照剂在施加该液体试样之前呈干燥状态位于该测试条上且实质上不能移动；及
v.一吸收区，其中该吸收区通过毛细作用吸收该液体试样使之通过该测试条的干燥多孔介质。
另一方面，本发明提供一种诊断生物体中一疾病、一表现型、一基因型或一生理状况的方法，该方法是通过检测液体生物试样中至少一种与该疾病、该表现型、该基因型或该生理状况相联系的分析物的存在来进行，其中该方法包括：
a.提供能检测多种分析物中的任一分析物的存在的上述测试条；
b.自一生物体获得一液体生物试样；
c.将该液体生物试样施加至该测试条的试样施加区；
d.渗吸该液体生物试样，使之通过该单一亲水性基质而到达该偶联物释放区；
e.使该经标记结合剂与该液体生物试样接触，以使这些经标记结合剂移动并且允许形成至少一种第一复合物；
f.渗吸该液体生物试样、这些经标记结合剂及该一种或多种第一复合物，使之通过该单一亲水性基质而到达该捕获测试区；
g.使该捕获测试剂与该液体生物试样、这些经标记结合剂及该一种或多种第一复合物接触，以允许形成至少一种第二复合物；
h.浓缩在该单一亲水性基质的捕获测试区中该纤维网络中的该一种或多种第二复合物；
i.检测在该捕获测试区中这些第二复合物的存在；
j.渗吸该液体试样及这些经标记结合剂，使之通过该单一亲水性基质而到达该捕获对照区；
k.使这些捕获对照剂与该液体试样及这些经标记结合剂接触，以允许形成至少一种第三复合物；
l.浓缩在该单一亲水性基质的捕获对照区中该纤维网络中的这些第三复合物；及
m.检测在该捕获对照区中的这些第三复合物的存在；
n.诊断该生物体中的该疾病、该表现型、该基因型或该生理状况。
在一实施例中，可同时诊断一种以上的疾病、表现型、基因型或生理状况，较佳地，其中使用各分析物来诊断一不同的疾病、表现型、基因型或生理状况，包括但不限于选自由下列组成的群组的疾病、表现型、基因型或生理状况：妊娠、癌症、心脏病、高血压、胆固醇过高、高血糖症、低血糖症、糖尿病、疟疾、结核病、获得性免疫缺陷综合症(AIDS)、一性传播疾病(例如梅毒、淋病、疱疹)、登革热、伊波拉病(Ebola)、拉沙(Lassa)热、肝炎、肺炎(例如细菌性肺炎、病毒性肺炎)及一遗传疾病。
在一实施例中，该方法测试下列病原体中每一种的存在：
a.人类免疫缺陷病毒；
b.结核病；及
c.疟疾。
另一方面，本发明提供一种分离一血样中的成分的方法，其中该方法包括：
a.提供能检测多种分析物中的任一分析物的存在的上述测试条，其中该测试条检测下列中的至少一种：
i.蛋白质；
ii.免疫球蛋白(IgG)；
iii.胆固醇；
b.获得一血样；
c.将该血样施加至该测试条的试样施加区；
d.渗吸该血样，使之通过该单一亲水性基质而到达该偶联物释放区；
e.使该经标记结合剂与该血样接触，以使这些经标记结合剂移动并且允许形成至少一种第一复合物；
f.渗吸该血样、这些经标记结合剂及该一种或多种第一复合物，使之通过该单一亲水性基质而到达该捕获测试区；
g.使这些捕获测试剂与该血样、这些经标记结合剂及该一种或多种第一复合物接触，以允许形成至少一种第二复合物；
h.浓缩在该单一亲水性基质的捕获测试区中该纤维网络中的该一种或多种第二复合物；
i.检测在该捕获测试区中这些第二复合物的存在；
j.渗吸该血样及这些经标记结合剂，使之通过该单一亲水性基质而到达该捕获对照区；
k.使这些捕获对照剂与该液体试样及这些经标记结合剂接触，以允许形成至少一种第三复合物；
l.浓缩在该单一亲水性基质的捕获对照区中该纤维网络中的这些第三复合物；及
m.检测在该捕获对照区中的这些第三复合物的存在；
n.自该测试条除去血浆。
另一方面，本发明提供用于竞争性分析的测试条，其用于检测施加至该测试条上的液体试样中一分析物的可能存在，该测试条包含一干燥多孔介质，而该干燥多孔介质包含一单一亲水性基质，其中该单一亲水性基质包含：
a.一包含一纤维网络的单片式亲水性基质；及
b.一系列包含下列的区：
i.一试样施加区；
ii.一包含一经标记结合剂的偶联物释放区，其中
(a)该经标记结合剂包含：
(i)一标记；
(ii)一包含一载体珠粒的固体基材，其中当该载体珠粒及基质润湿时该载体珠粒可在该基质内移动；及
(iii)一配体，其特异性地与该分析物结合以形成一包含该经标记结合剂及该分析物的第一复合物；
(b)该经标记结合剂在施加该液体试样之前以干燥状态位于该测试条上且在与该液体试样接触时释放成可移动形式；
iii.一包含一捕获测试剂的捕获测试区，其中
(a)该捕获测试剂包含：
(i)一包含一捕获测试珠粒的固体基材；及
(ii)一配体，其包含该分析物或该分析物的一类似物；及
(b)该捕获测试剂在施加该液体试样之前以干燥状态位于该测试条上且基本上不能移动；
iv.一包含一捕获对照剂的捕获对照区，其中
(a)该捕获对照剂包含：
(i)一包含一捕获对照珠粒的固体基材；及
(ii)一配体，其特异性地与该经标记结合剂结合，以形成一包含该经标记结合剂及该捕获对照剂的第二复合物；及
(b)该捕获对照剂在施加该液体试样之前呈干燥状态位于该测试条上且基本上不能移动；及
v.一吸收区，其中该吸收区通过毛细作用吸收该液体试样使之通过该测试条的干燥多孔介质。
本发明也提供用于浓缩指示剂的方法。
另一方面，本发明提供一种在包含一单片式亲水性基质的多孔介质中浓缩试剂的方法，其中该方法包括：
a.提供一单片式亲水性基质；
提供一试剂，其中该试剂包含：
i.一固体基材；及
ii.一当与水性液体接触时可激活的凝结剂；
b.使该试剂悬浮在一缓冲液中，以生成一试剂悬浮液；
c.将该试剂悬浮液施加至该单片式亲水性基质；
d.干燥在该单片式亲水性基质上的该试剂悬浮液；及
e.将一水性液体施加至该多孔介质上来激活该凝结剂，以便自凝结该试剂的固体基材从而浓缩在该多孔介质的单片式亲水性基质中的该试剂。
较佳地，该单片式亲水性基质包含一纤维网络，该试剂的固体基材包含一珠粒，且该凝结剂包含聚乙二醇(PEG)。
再一方面，本发明提供一种在包含一单片式亲水性基质的多孔介质中浓缩试剂的方法，其中该方法包括：
a.提供一单片式亲水性基质；
b.提供一试剂，其中该试剂包含：
a.一带负电的固体基材；及
b.一附着至该固体基材的带正电的配体；
c.使该试剂悬浮在一缓冲液中，以生成一试剂悬浮液；
d.将该试剂悬浮液施加至该单片式亲水性基质；
e.干燥在该单片式亲水性基质上的该试剂悬浮液；及
f.使该配体与一具有低于该配体的pI的pH且包含一与该配体结合的物质的水性液体接触；
g.改变该试剂的总电荷，以便自凝结该试剂从而浓缩在该多孔介质的单片式亲水性基质中的该试剂。
较佳地，该单片式亲水性基质包含一纤维网络，该带负电的试剂固体基材包含一珠粒，该带正电的配体包含一蛋白质。更佳地，该蛋白质包含一抗体或一抗原。
一方面，本发明提供一单一侧流功能层。在较佳实施例中，该层包含一基质，更佳包含一由玻璃纤维、非织造聚合物或其组合构成的单片式基质。
在一较佳实施例中，本发明提供一包含聚合物与玻璃纤维的混合物(其可起适宜基质的作用)的单一侧流功能层。先前已显示此混合物可作为一血液分离材料及偶联物释放材料，以及作为试样垫和吸收剂。然而，最令人惊讶的是，本发明的教义显示，同样的材料可在一单层侧流功能格式中用作反应基质。
该亲水性复合材料具有低蛋白质结合能力，而这些捕获剂的结合性通常不是很高。然而，如果首先将这些捕获剂固定在一载体粒子(例如乳胶珠粒)上—其中该载体粒子的直径在正常孔径的40至70％之间(或大于吸收效率为98％时的尺寸但却小至足以进入该基质)，则这些乳胶珠粒将高效地保留在该基质内。该测试的灵敏性将取决于所添加的载体珠粒的数量、其表面(与珠粒直径有关)及固定在其表面上的捕获剂的量。通过在捕获珠粒(测试和对照二者)上使用一凝结剂(例如聚乙二醇)或通过在带负电的捕获珠粒上使用带正电的配体可进一步改进该系统，如下文所述。
使用此种类型的此材料具有诸多优点：
1)该复合材料天然具有亲水性且因此不需要进行封阻(与膜不同)；
2)该复合材料为低蛋白质，因而背景信号弱且因此最低可检测信号减少。
3)在膜中，当渗吸面积增加(与孔径有关)时，可利用的膜表面积(且因此测试灵敏度)降低。复合材料信号与这些珠粒的表面积而非与该复合材料有关。因此对于同一孔径材料，通过改变珠粒能够控制信号。
4)小的抗原将不能牢固地附着到膜上，然而，其可共价连接到珠粒上。因此该复合材料可用于任一测试。
5)该复合材料的渗吸速率远远高于膜的渗吸速率，因此可更快地进行测试(许多测试开发人员均期望如此)
6)固定至珠粒可允许更好地控制连接化学结构，此使得测试存架寿命延长。或者，可附着具有更长的存架寿命的其他材料。
适用的材料类型可为任何结合的玻璃纤维，然而，使用一乳胶结合的玻璃也曾观察到良好的结果。
因此，虽然过去已证明玻璃纤维或聚合物与玻璃纤维的混合物适用于这些结构中的一个或多个，但直到现在才证明该同样的材料可同时适用于所有五个区域。该发现是新颖的，其出人意料且极为令人惊讶。
图1A显示本发明一实施例的分解图。其中显示在一上部外壳(30)与下部外壳(32)内包含测试条(20)的装置(10)。在一较佳实施例中，该上部外壳具有两个开孔(34，36)，其中一个(34)使得使用者可接近测试条(20)的试样施加区，而另一开孔(36)使得使用者可观察或以其他方式检测该捕获测试区及捕获对照区中的测试结果。更佳地，在上部外壳(30)上提供有标记(40，42，44)来指示试样施加区(例如S(40))、捕获测试区(例如T(42))及捕获对照区(例如C(44))的位置。
如图1A及1B中所示，测试条(20)可另外由一支撑条(50)支撑，支撑条(50)可由塑料(例如聚苯乙烯、PET或聚乙烯(vinyl))或某些其他适宜的支撑材料制成。
图2A至2D绘示正在使用中的测试条的示意性顶视图。该测试条具有一系列包含下的区：一试样施加区(A)、一包含经标记结合剂(80)的偶联物释放区(B)、一包含捕获测试剂(90)的捕获测试区(C)、一包含捕获对照剂(100)的捕获对照区(D)以一吸收区(E)。
图2A中绘示的实施例显示一包含一载体珠粒和一抗体配体的经标记结合剂(80)、一包含一捕获珠粒和一抗体配体的捕获测试剂(90)及一包含一捕获珠粒及一抗体配体的捕获对照剂(100)。
在图2B中，一包含一分析物(110)的试样被施加到试样施加区(A)，其由毛细作用渗吸通过该测试条而到达偶联物释放区(B)，在这里它将与某些经标记结合剂(80)结合而形成第一复合物(120)，复合物(120)包含分析物(110)及经标记结合剂(80)(也参见图2C)。
在图2C中，第一复合物(120)及某些未结合的经标记结合剂(80)被渗吸通过该测试条而到达捕获测试区(C)，在这里它们与捕获测试剂(90)接触。在该实例中，捕获测试剂(90)也可识别分析物(110)，且因此与第一复合物(120)结合而形成第二复合物(130)。第二复合物(130)基本上固定在该测试条的基质中并形成一条显示阳性测试结果的线。“基本上固定”意指捕获测试珠粒(90)可受到推挤，可旋转，或可凝结，但它们不像该偶联物释放区的经标记结合剂那样可在基质内流动。捕获测试剂(90)不识别未结合的经标记结合剂(80)。
在图2D中，未结合的经标记结合剂(80)继续渗吸通过该测试条而到达捕获对照区(D)，在这里它与捕获对照剂(D)接触。在此实例中，捕获对照剂(100)识别并结合未结合的经标记结合剂(80)上的未结合的抗体并可形成第三复合物(140)。第三复合物(140)基本上固定在该测试条的基质中，并形成一对照线来指示试样的渗吸已到达吸收区(E)且测试已生效。“基本上固定”意指，如同捕获测试珠粒(90)，捕获对照珠粒(100)可受到推挤，可旋转，或可凝结，但它们不像该偶联物释放区的经标记结合剂那样可在基质内流动。
在图2A至2D所示的测试中，阳性结果在对照测试区(C)出现测试线且在捕获对照区(D)出现对照线，而阴性结果仅在捕获对照区(D)出现对照线。
在一实施例中，有多条捕获线，各自测试一种不同的分析物(与相应的经标记结合剂一起)，使得可同时检测一试样的数种分析物。
该实施例使得一份试样可针对一给定的疾病、表现型、基因型或生理状况经受多个测试。此类型的测试能力特别有用，例如，在关于一给定疾病、表现型、基因型或生理状况的测试具有高假阳性或假阴性率的情况下。
或者，一份试样可经受针对多种疾病、表现型、基因型或生理状况的测试。此类型的测试能力可用于多种应用中，包括但不限于年医学体格检查中的常规筛选；用于偏远地区的医学测试，在这些地区医师与人群的接触及/或患者与医师的接触较为有限(例如在工业化世界以及发展中国家的乡村地区)；用于大规模的测试环境，例如用于流行病及用于大的贫困城市人口；用于对患者的野外作业；用于在仅可利用有限数量的试样材料情况下的测试(例如，用于法医目的或用于外伤患者及已失去大量血液或具有降低量的血液或其他体液的其他患者)。举例而言，世界上的许多地区均需要一种简单的测试方法，来在其中有很少的或没有冷藏条件、实验设备或运输条件的地方以快速、低成本而有效的方式(使用易于运输且不太容易受损的装置或材料)测试许多疾病(尤其是感染性疾病)中的一种或多种。在其中多种疾病通常感染同一患者的区域中或情况下，可同时针对数种疾病对一份试样进行测试。举例而言，本发明预期可用于测试人类免疫缺陷病毒(HIV，与获得性免疫缺陷综合症的发生有关)感染、结核病、伊波拉病、疟疾、拉沙热、肝炎(A、B、C、D或E)及/或登革热。或者，在患者患有疾病(例如遗传性血红蛋白病)的情况下，本发明可同时针对镰状细胞贫血症及数种地中海贫血来测试基因型。
在另一实施例中，该测试格式用于检测基因突变或多态现象。
在再一实施例中，该测试格式包含一竞争性分析，其中该结合剂或该些捕获剂之一与该分析物(或该分析物的一类似物)相同。该竞争性分析格式在其中因空间问题很难形成一“三明治式”分析的小分析物(例如药物)测试中特别有用。
在一较佳实施例中，本发明提供一包含一材料的单一侧流功能层，该材料具有低蛋白质结合性，具有快速的渗吸速率且包含一纤维网络。较佳地，该材料具有亲水性。更佳地，该材料包含一玻璃纤维或微纤维网络。还要佳地，该材料包含与一聚合物组合的玻璃纤维的网络。该玻璃或玻璃-聚合物纤维网络能留住可附着有偶联物的珠粒(例如乳胶、金)或用作捕获测试剂或捕获对照剂的珠粒(例如乳胶)。其他物质包括浇注或模制乙酸纤维素及熔融聚乙烯。孔径(例如纤维网络之间)取决于珠粒的尺寸及目的(即，偶联vs.捕获)且也取决于试样的性质以及是需要进行任何分离还是过滤。如果需要除去红细胞(红血细胞)，则该材料将必须具有可留住红血细胞的孔径(98％的保留效率—低于约3.5微米)；然而，如果不需要除去红细胞，则孔径可更大。孔径越大，则需要截留住的珠粒的尺寸越大。然而，当珠粒的尺寸增大时，用于蛋白质固定的可用表面积将减少，从而导致灵敏度降低。
不太适合用于本发明的材料包括纤维素和硝酸纤维素。纤维素将使得试样不能在该材料中快速流动且使得偶联物不能释放。在需要分离血液的实施例中纤维素也不能作为有效的血液分离材料。硝酸纤维素膜可结合蛋白质且往往具有疏水性。该材料需要进行封阻才能起效。血液分离需要的孔径将很小且因此测试时间会过长。并且，硝酸纤维素不具有适当的吸收特性，因而不能用作试样渗吸材料及吸收剂。当渗吸距离增大时沿该材料流动的时间呈指数增加。举例而言，流过0.5cm需要5秒，而流过1cm需要15秒，流过1.5cm需要30秒，流过2cm需要90秒等。此外，其作为大体积的试样的渗吸材料不能很好地起作用。虽然其可用于小体积(例如小于30微升)，然而其对于大体积将不起作用。对于仅包含硝酸纤维素的试条，需要的材料长度将为约6至8cm，测试时间将极为漫长。在这样的速率下，在渗透测试条长度之前试样有干燥的危险。关于比较三种硝酸纤维素膜的渗吸速率与本发明一实施例的渗吸速率的测试结果，参见实例2和图4。
不过，硝酸纤维素及纤维素材料例如乙酸纤维素在本发明的某些实施例中仍有用。泡沫(包括完全或部分开孔的泡沫)及微粒(包括固定微粒)在本发明中也有用。
除单独的或呈与聚合物及非织造塑料组合的形式的玻璃纤维以外，基本上也可使用具有合适孔径的任何亲水性材料(例如，亲水性膜，如聚酯砜(PES)、聚偏二氟乙烯(PVDF)、熔融聚乙烯(PE)、非织造材料及模制乙酸纤维素)。如果孔径过大(例如聚丙烯筛)，则该膜将不起作用，因为将不能有效地截留粒子。结果，许多业内已知可成功用于偶联物释放的材料在本发明中未必能有效地发挥作用。
在一更佳实施例中，本发明提供一包含一聚合物-玻璃纤维基质的单层侧流格式，该基质天然具有亲水性、基本上不结合蛋白质且可快速流动，其具有高灵敏性及一低背景且容易制造。更佳地，该聚合物-玻璃纤维基质包含一乳胶结合(例如聚苯乙烯(PS)或聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA))玻璃纤维基质。在该实施例中，该基质同时作为试样渗吸材料、过滤材料/分离材料(例如血液分离材料)、偶联物分离垫、反应膜及吸收剂。(可增加另外一吸收垫，但不是必需。)较佳地，天然亲水性的程度可使得不需要进行任何封阻。在一更佳实施例中，该材料包含一Whatman SLF5TM单层侧流格式，而该格式包含Whatman FUSION5TM基质，该基质为乳胶结合玻璃纤维且具有表1中所示性质。
表1
Figure S05810478120061012D000301
将在适宜缓冲液中的偶联物在测试条上作线。该偶联物的性质将取决于所实施测试的性质且于下文更详细地论述。
在一较佳实施例中，该配体附着到载体珠粒上形成该偶联物。用作经标记结合剂的载体珠粒必须留在该网络的结构内(例如，通过物理吸附作用)，但在与该液体试样接触时必须能释放成可移动形式。这些珠粒较佳为金且应能结合蛋白质或核苷酸。或者，这些珠粒或为乳胶、硒或其他适宜材料。该结合剂(例如一抗体或寡核苷酸)固定至载体珠粒，其作线(呈在适宜缓冲液中的胶质混合物形式)于该侧流测试条上。(或者，该混合物可呈点线形式或可呈适用于一单层侧流格式的任何其他形状)。然而，通常，这些检测珠粒不必具有任何特殊形状，而是，珠粒施加的形状主要与捕获线相关。在一较佳实施例中，该载体珠粒包含40至80nm的金珠粒。在另一较佳实施例中，该载体珠粒包含100至800nm的乳胶珠粒。
用作捕获测试剂及捕获对照剂的捕获珠粒必须留在该网络结构内(例如通过物理截留作用)且在该测流测试条使用期间且甚至在与该液体试样接触时也必须保持基本上不能移动。这些珠粒较佳为乳胶，但可为不与载体珠粒上的标记相互干扰即不具有任何固有颜色或不具有将表现为与试条本身冲突的颜色的任何材料。其他潜在材料包括二氧化硅、玻璃、氧化铝、纤维素或糖(例如葡萄糖等)。理想地，这些捕获珠粒形成一致密形式，以便可容易地读取由这些捕获珠粒捕获的位于这些捕获珠粒上的标记。该捕获测试剂或捕获对照剂(例如一抗体或寡核苷酸)分别固定至这些捕获测试珠粒或捕获对照珠粒，其作线(例如呈在适宜缓冲液中的胶质混合物形式)于该侧流测试条上。(或者，该混合物可呈点线形式或可呈任何其他形状，例如一+或X形状，或呈适用于一单层侧流格式的任何其他形状)。
在一较佳实施例中，这些乳胶珠粒(例如PMMA、PS等)包含硫酸盐封端珠粒。物理结合(电荷及疏水性)使得这些材料可结合蛋白质。或者，可使用一共价结合乳胶珠粒。较佳实施例的实例包括由Estapor Microspheres或Bangs Laboratories公司制造的乳胶珠粒。珠粒尺寸必须小至足以进入该材料，但需大至足以变得被截留。对于FUSION5TM(Whatman)，最佳珠粒尺寸为约2微米；该FUSION5TM材料对于约2.5微米的珠料具有98％的保留效率。2.5微米的珠粒通常将不能进入该基质，而小于1.5微米的珠粒将会自该基质冲洗掉。
施加这些珠粒的典型方案如下：在该偶联物释放区施加已偶联至单克隆抗βhCG(经标记结合剂)、已浓缩或OD520＝10的40nm金胶体。抗体通常为小鼠单克隆抗体。自一含1％Tween20、0.5％PVA及0.2％BSA的硼酸盐缓冲液(pH8.2)施加至FUSION5TM。在该捕获区(分别为捕获测试区和捕获对照区)施加两条不同的线，一条为与抗αhCG(捕获测试剂)偶联的2微米乳胶珠粒，另一条线为与抗小鼠IgG(捕获对照剂)偶联的2微米乳胶珠粒。对照抗体通常为抗小鼠Ab(例如山羊抗小鼠)且有时为可固着至金的某物。干燥该测试条。干燥后，施加试样。虽然在某些实施例中，已使用100μl等份的珠粒，但所施加的试样量及珠粒量可根据所使用的材料而有相当大的变化。
在某些实施例中，这些捕获对照珠粒可结合至该第一复合物(例如包含该分析物及该经标记结合剂的复合物)，尤其是如果该第一复合物过量且如果这些捕获对照珠粒的结合不太具有特异性或在存在及不存在该分析物的情况下均能发生。由于该测试试样首先到达该捕获测试区，因此在该捕获对照区的结果将不影响测试的结果，且该捕获对照区的一目的是证明该试样已流过或渗吸通过该捕获测试区，以确保该结果不包含一假阴性测试结果。(小心地选择该捕获测试剂的特异性，以避免假阳性测试结果)。
在一较佳实施例中，添加聚乙二醇(PEG)来改良珠粒的凝结。捕获剂的量与所用乳胶珠粒的表面积呈正比例。为提高灵敏度，必须增大表面积；然而，该方法必须使用较小的珠粒，而这些小珠粒将会固着至基质。为解决该问题，可使用一在干燥时凝结的较小珠粒。乳胶珠粒的自凝结可通过下列之一达成：纳入一试剂来制备珠粒棒(例如，PEG)，在低于珠粒表面上的蛋白质的PI的pH下作业，或在一高离子强度(例如高盐浓度)下作业。该添加剂想法依赖于此一事实，即当珠粒干燥时，水分会离开系统。因此，如果添加剂的初始浓度不能产生凝结，则当系统干燥时，添加剂的有效浓度增大，直至最终该浓度达到一临界点，此时珠粒自凝结。该凝结剂较佳为PEG或某些其他亲水剂或聚合物，或其可为一粘着至珠粒表面上的蛋白质的试剂。对于pH改变，珠粒的电荷排斥作用使它们分开，但如果珠粒表面上的蛋白质吸收其他偶联物，则这些珠粒将粘着在一起。通常，乳胶珠粒带负电，因此为了使它们相互吸引，则可通过降低溶液的pH使蛋白质带正电。或者，使用电解质(即高盐浓度)也可使珠粒凝结。在使用凝结剂或程序的情况下，捕获测试珠粒和捕获对照珠粒的尺寸可减小。不欲受理论限制，由一团珠粒构成的聚结体将具有一比大珠粒大的表面积。浓度增加的盐的存在将也会导致凝结，这是因为胶质粒子的ζ电位降低。
较佳地，本发明用于治疗脊椎动物；用于治疗脊椎动物细胞、细胞系、组织或器官；用于与之相关的研究目的；或用于以上描述内容所涵盖的任何其他目的。更佳地，本发明用于治疗哺乳动物；用于治疗哺乳动物细胞、细胞系、组织或器官；用于与之相关的研究目的；或用于以上描述内容所涵盖的任何其他目的。仍然更佳地，本发明用于治疗哺乳动物；用于治疗哺乳动物细胞、细胞系、组织或器官；用于与之相关的研究目的；或用于以上描述内容所涵盖的任何其他目的。
为书面描述中使用的特定术语提供以下定义。
除非上下文有明确说明，否则说明书及权利要求书中使用的单数形式“一(a，an)”及“该(the)”包括复数意义。举例而言，术语“一分子”包括复数个分子。
本文所用“分析物”为欲由该测试条检测的试样的成分。该分析物特异性地与该测试秒偶联物释放区中的经标记结合剂结合。在某些实施例中，可利用该分析物的存在与否来检测由其获得该试样的生物体的生理状况。或者，该分析物的存在与否可用于检测(举例而言)试样的污染。所属领域的技术人员可想到多种其他用途。
本文所用“多孔介质”可具有均匀或不均匀的孔。或者，其可包含，举例而言，具有更小的适宜尺寸的材料可穿过的“基质”或“纤维网络”。
本文所用术语“孔径”指将保留在膜上或膜内的粒子的最小尺寸。因此，孔径为约0.45微米的膜意味着大于约0.45微米的粒子将保留在膜上或膜中，而小于约0.45微米的粒子将穿过而将不被保留住。在一纤维网络中，孔径的变化性比膜或具有规则孔径的介质中的要大。“平均孔径”可表达为一范围，“最大孔径”和“最小孔径”可相差甚远。
本文所用与一基材“稳定相联系”指聚合的、交联的表面修饰分子与基材间的相互作用在用水溶液及/或有机溶剂(例如醇)进行一次或多次洗涤后仍然保持不变，且较佳地，在至少约5次或至少约10次洗涤后仍保持不变。较佳地，与一基材“稳定相联系”的分子指一在至少约90℃下暴露至少约2小时后仍附着至该基材的分子。“稳定相联系”可通过评价涂覆有本发明双功能表面修饰分子的基材的可润湿性(即亲水性)来监测。
本文所用“亲水性”物质指该物质可吸收或吸附水，而“疏水性”物质指该物质不吸收或吸附水。
本文所用“可润湿”指一膜的整个表面可润湿而无疏水性斑点。
本文所用“一流经方法”指其中一溶液可流经一基材而用该溶液涂覆该基材的方法。
本文所用术语“功能上相关”意指该涂层放置、吸附于本发明载体上或以其他方式与本发明载体相联系，以便载体与涂层可一起发挥作用。亦即，可吸附、吸收、涂覆或以其他方式放置该涂层，使之与介质呈功能关系。
这些介质可与一“粘合剂”组合，该黏合剂可将纤维结合在一起。所属技术领域习知的某些粘合剂实例为聚乙烯丙烯酰胺、聚乙烯丙烯酸酯、聚乙烯醇(PVA)、聚苯乙烯(PS)、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)以及明胶。
本文所用“印迹聚合物”指一在纤维基质制造期间设置入纤维基质中的聚合物(例如置入一玻璃纤维基质或其他纤维基质中的聚合物)
本文所用“单片式亲水性基质”指以单个片形式浇注的亲水性基质。或者，其为由无接点或接缝的材料形成或构成的亲水性基质，或为由一单一单元组成或构成的亲水性基质。
本文所用“试样施加区”指向其施加试样的测试条部分。
本文所用“偶联物释放区”指初始时包含该“偶联物”的测试条部分，该偶联物可为例如一“经标记结合剂”，当该分析物存在时其可识别该分析物。
本文所用“捕获区”指包含该“捕获测试区”及该“捕获对照区”的测试条部分。该“捕获测试区”指包含该“捕获测试剂”的测试条部分，该捕获测试剂可识别或者该分析物或者该包含该分析物及该经标记结合剂的第一复合物。该“捕获对照区”指包含该“捕获对照剂”的测试条部分，在有或无该分析物的情况下，该捕获对照剂均可识别该经标记结合剂。
本文所用“吸收区”指通过渗吸或毛细作用吸收该液体试样使之通过该测试条的测试条部分。
本文所用“特异性”一抗体区别抗原决定簇的能力。其也指由一特定受体或抗体识别的精确决定簇。其也指一受体区别底物(例如药物)的能力。对于核酸，其指分别随竞争或识别/结合而变化的一致性或互补性。识别或结合的“特异性”可受到该识别或结合发生时的条件(例如pH、温度、盐浓度及所属领域习知的其他因素)的影响。
本文所用术语“基本上不能移动”或“基本上固定”指诸如捕获珠粒等基材可受到推挤，可旋转，或可凝结，但不能流经或渗吸经过该基质。
本文所用“凝结”或“自凝结”指包括但不限于珠粒在内的部分或基材的结块、簇集、聚结或积聚。
本文所用“渗吸”通过由该测试条上试样的“毛细现象”产生的“毛细作用”达成。“毛细现象”指分子间的相互吸引，其类似于表面张力，导致固体被液体润湿。
一材料的“渗吸速率”可能是作为在一时间段期间该材料的具体润湿距离的函数的量度。渗吸速率取决于该材料的性质、用于渗吸的物质的性质及多种其他条件。可对各种不同材料的“渗吸速率”加以比较。
本文所用“线倾斜”指在线施加开始后液体流经该测试条的速率达到一恒定速率所花费的时间。
本文所用“配体”指可由另一分子或分子复合物结合的分子或分子复合物。该配体可为但不限于由一受体或核酸的互补片段结合的分子或分子复合物。
本文所用“嵌合DNA”指至少两个可以确认的DNA区段，这些区段间的联系在自然界中不存在。等位基因改变或天然发生的突变事件不能产生本发明所定义的嵌合DNA。
本文所用“嵌合蛋白”或“融合蛋白”为一具有至少两个可以确认的区段的蛋白质，这些区段间的联系在自然界中不存在。在一实施例中，一嵌合蛋白可自(例如)一嵌合DNA的表达产生，该嵌合DNA能表达为蛋白质且具有至少两个DNA区段，这两个DNA区段以可行方式连接而使得每一区段的至少一部分能作为一单个蛋白质表达。所属领域的技术人员可想到其他实施例。
本文所用术语“多核苷酸”及“核酸分子”可互换使用，其均指任一长度的核苷酸聚合形式，其可具有任一三维结构，且可执行任一习知或未知的功能。这些多核苷酸可含有脱氧核糖核苷酸(DNA)、核糖核苷酸(RNA)，及/或其类似物，包括但不限于单-、双链及三螺旋分子、一基因或基因片段、外显子、内含子、信使RNA(mRNA)、转移RNA(tRNA)、核糖体RNA(rRNA)、小干扰RNA(siRNA)、核酶、反义分子、互补DNA(cDNA)、基因组DNA(gDNA)、重组多核苷酸、支链多核苷酸、适配子、质粒、载体、任一序列的分离DNA、任一序列的分离RNA、核酸探针、肽核酸(PNA)及引用。核酸分子也可包含经修饰核酸分子(例如，包含经修饰碱基、糖及/或核苷酸间连接子)
“核材料”及“来自核的材料”包括核膜及核的内含物，包括基因组DNA(gDNA)或质粒DNA。“核的非核酸内含物”包括核膜的各种成分及核的不为核酸的任何其他蛋白质或其他物质。
“核酸”包括各种类型的脱氧核糖核苷酸(DNA)及核糖核苷酸(RNA)，包括基因组DNA(gDNA)和信使RNA(mRNA)及其衍生物，例如经修饰DNA或RNA，包括肽核酸(PNA)。“肽核酸(PNA)”为其中糖-磷酸主链由酰胺键代替的多核苷酸类似物。“基因材料”包含基因组DNA(gDNA)，其为一种类型的DNA且编码基因信息，或基因RNA。
本文所用“基因修饰”指对细胞的正常核苷酸的任何添加、删减或中断。可达成抗原递呈细胞(APC)的基因修饰的任何方法均在本发明的精神及范围内。业内认可的方法包括病毒介导的基因转移、线粒体介导的转移、转化、转染及转导。
本文所用“基因突变”是基因改变并且是一种“基因修饰”。
本文所用“多态现象”或“遗传多态现象”是基因变异且包括但不限于单核苷酸多态现象(SNP)。
本文所用“基因型”为一生物体的基因组成，而“表现型”为一生物体的物理外观或特征。
“肽”为由两个或多个亚单位氨基酸、氨基酸类似物或拟肽物质的复合物。这些亚单位可通过肽键或通过其他键(例如酯、醚及类似键)连接。
“氨基酸”指天然的及/或非天然的或合成的胺基酸，包括甘氨酸及D或L旋光异构体二者以及氨基酸类似物和拟肽物质。“氨基酸”也包括亚氨基酸。“寡肽”指一具有3个或更多氨基酸的短肽链。如果肽链较长(例如大于约10个氨基酸)，则该肽为“多肽”或“蛋白质”。虽然术语“蛋白质”涵盖术语“多肽”，但“多肽”可为小于全长的蛋白质。
“标签肽序列”为具有3个或更多个氨基酸的短肽或多肽链，其可附着至相关蛋白质。在一较佳实施例中，多肽、蛋白质或嵌合蛋白包含一标签肽序列，其用于纯化、检测或某些其他功能，例如通过特异性地结合至一抗体。该抗体可在溶液中或结合至一表面(例如，珠粒、过滤材料或其他材料)。该标签肽序列不应干扰该多肽、蛋白质或嵌合蛋白的其余部分的功能。一可用于本发明的标签肽序列的实例为在羧基端有6个融合的His残基的短c-Myc标签。其他实例被所属领域的技术人员所熟知。
本文所用“表达”指将多核苷酸转录成mRNA及/或转译成肽、多肽或蛋白质的过程。如果该多核苷酸源自基因组DNA，则表达可包括但不要求包括自该基因组DNA转录的mRNA的剪接、该mRNA的5′端的封端、该mRNA的3′端的聚腺苷酸化或其他加工修饰或事件。
本文所用“信号序列”或“分泌序列”表示该内质网易位序列。该序列编码“信号肽”、“分泌肽”或“分泌结构域”，后者传送至细胞来将其与之连接(例如通过化学键)的多肽导向一内质网泡囊室，进入一胞吐/内吞细胞器，然后被递送至一细胞泡囊室、该细胞表面或来分泌该多肽。该信号序列在蛋白质突变期间可由细胞切除。业内习知各种不同物种的分泌序列及结构域。
“结构域”是具有显著的三级结构的蛋白质或多肽区域。
结构域序列的“保守修饰的变异体”亦可提供在本发明的范围内。对于特定的核酸序列，保守修饰的变异体指那些可编码完全相同的或基本上完全相同的氨基酸序列的核酸，或在该核酸不编码氨基酸序列的情况下指基本上完全相同的序列。特别地，通过产生其中一或多个所选(或全部)密码子的第三位由混合的碱基及/或脱氧次黄嘌呤核苷残基取代的序列可达成简并密码子取代。或者，一或多个氨基酸可由一具有类似结构、活性、电荷或其他性质的氨基酸取代。业内熟知可提供功能类似的氨基酸的保守取代表(参见，例如，Proc.Natl.Acad.Sci.USA89：10915-10919(1992))。
核酸或蛋白质的来源或为含有全细胞的生物试样。这些全细胞可为但不限于血液、细菌培养物、细菌菌落、酵母细胞、组织培养细胞、唾液、尿液、饮用水、血浆、粪便试样、精液、阴道试样、唾液、植物细胞试样或在科学、医学、法医及其他领域习知的其他细胞来源。这些试样可通过业内熟知的各种方法收集，输送至测试条，然后施加到测试条上。
“宿主生物体”指一生物体或活的实体，其可为原核生物或真核生物，单分子生物或多分子生物，且可期望其是或曾经是外源核酸分子、多核苷酸及/或蛋白质的受体。较佳地，该“宿主生物体”为细菌、酵母或一真核多分子活的实体(较佳为动物，更佳为哺乳动物，还要佳为人类)。
“哺乳动物”包括但不限于鼠类、猿类、人类、家畜、体育动物及宠物。
术语“多肽”及“蛋白质”可互换使用且指通过肽键或经修饰肽键连接的胺基酸的任一聚合物(二肽或更大)。因此，术语“多肽”及“蛋白质”包括寡肽、蛋白质片段、融合蛋白等。应了解，本文所用术语“多肽”及“蛋白质”包括诸如脂蛋白及糖蛋白等部分。
“抗体”(Ab)为可特异性地与称为“抗原”(Ag)(在下文中描述)的特定物质结合的蛋白质。“抗体”为任一可结合一特异性表位的免疫球蛋白，包括抗体及其片段。该术语涵盖多克隆、单克隆及嵌合抗体(例如多特异性抗体)。在自然界中，抗体通常由淋巴细胞响应于免疫刺激(例如通过感染或免疫)产生。“抗体结合位点”为由重和轻链可变及超变区构成且特异性地结合抗原的抗体分子结构部分。实例性抗体分子为完整的免疫球蛋白分子、实质上完整的免疫球蛋白分子及免疫球蛋白分子的那些含有抗体决定簇的部分，包括Fab、Fab′、F(ab′)2及F(v)部分。可使用包含轻链可变(V)区的小单链F(v)，尤其当需要穿透组织时。
“抗原”(Ag)可特异性地与抗体或T淋巴细胞(T细胞)反应的任何物质。“抗原结合位点”为免疫球蛋白分子的可特异性结合抗原的部分。另外，抗原结合位点包括在任何抗原结合分子(包括但不限于MHC分子或T细胞受体)上的任何此位点。“抗原加工”指将抗原降解成片段(例如蛋白质降解成肽)及将这些片段中的一或多个(例如通过结合)将MHC分子联系在一起，以由“抗原递呈细胞”递呈至特异性T细胞。
术语“抗原材料”涵盖可引发先天或获得性免疫反应的任何物质。本文所用“抗原材料的一部分”涵盖能引发先天或获得性免疫反应的任何抗原性材料或其片段，即使该片段为整个该抗原性材料的不完整代表或子集。在一实施例中，其包括当与由T细胞识别的MHC结合时可引发一特定免疫反应所需的最小抗原序列(较佳长度为约8至15个氨基酸残基)。
“表位”或“抗原决定簇”为一通常由短肽序列或寡糖构成的结构，其可由一免疫系统组分特异性地识别或特异性地结合。其为抗原上由抗原识别的位点。举例而言，如上文所述，T细胞表位是在抗原递呈细胞对抗原进行加工期间源自蛋白质抗原的短肽的一部分。通常已证明T细胞表位为线性寡肽。两个表位如果能由同一抗体特异性地结合，则它们彼此相当。两个表位如果均能结合到同一B细胞受体或结合到同一T细胞受体，则它们彼此相当，且将一抗体结合到其表位实质上可防止该抗体由另一表位结合。
“趋化因子”指与细胞的迁移及活化有关的小细胞因子，包括吞噬细胞及淋巴细胞，且在炎性反应中起作用。趋化因子的实例包括但不限于IL8、RANTES、MDC、IP10、MIP1α及MIPβ。
“细胞因子”是由一细胞产生的可影响其他细胞的性质的蛋白质，其通过该细胞因子所影响的细胞表面上的“细胞因子受体”来达到影响其他细胞的性质的目的。由淋巴细胞制造的细胞因子有时称为“淋巴因子”。细胞因子的实例包括但不限于IL1α、IL1β、TNF、IL6、IL12(p40)及IFNγ。
趋化因子及细胞因子可与“受体”结合，受体在特异性上可介于广泛识别(即结合许多类型的趋化因子、细胞因子或其他分子)与高度特异性识别(例如，结合一小组相关分子，仅结合密切相关的分子或仅结合一种类型的分子)之间。“趋化因子受体”的实例包括但不限于CCR2、CCR5、CCR6及CCR7。本发明涉及的“表面受体”的实例包括但不限于甘露糖受体(C1型)、巨噬细胞清除受体(例如清除受体2)及泌乳素受体。
可使用所属领域的技术人员熟知的多种方法直接或间接测量趋化因子、细胞因子、受体、标记基因或其他相关蛋白质的表达或分泌。方法包括蛋白质分析、免疫沉淀方法、Western印迹法及其他类型的直接或间接免疫印迹法、分光光度法或紫外(UV)方法。对细胞因子和趋化因子以及对细胞表面抗原和其他标记基因具有特异性的抗体在市面上有售。取决于所用方法，检测可使用标签或标记蛋白质、报道质粒、放射标记(例如使用放射性同位素，例如35S-Met或35S-Cys)、化学标记或染色剂、荧光标记、免疫标记或通过所属领域熟知的其他检测方法进行。在一较佳实施例中，该检测将具有可定量性或能够定量以测量蛋白质水平。举例而言，可检测血液中、分离的血细胞(例如白细胞)试样中、淋巴液中、唾液中或其他类型生理试样中的蛋白质。这些方法对于本发明的医学应用而言特别有用。
或者，可使用所属领域的技术人员熟知的多种方法直接或间接检测或测量一给定细胞因子、趋化因子、受体、标记基因或其他相关蛋白质的对应mRNA水平。类似地，可检测或测量具有相关序列的DNA(例如用于基因测试，用于DNA指纹分析，用于检测突变，及用于业内熟知的其他目的)的存在。此外，该测试也可检测或测量一蛋白质(例如聚合酶、激活子或抑制因子)与一DNA或mRNA片段(例如启动子或增强子)的结合。该测试也可检测或测量一物质(例如药物)与蛋白质的结合。这些方法包括但不限于Northern印迹法、杂交检测法(例如使用寡核苷酸或更长的核酸序列，其可经放射标记、化学标记、免疫标记或荧光标记)或聚合酶链反应(PCR)。PCR方法可定性或更佳地可定量(例如定量PCR)。mRNA可于活体内、原位或于活体外检测。举例而言，可检测血液中、分离的血细胞(例如白细胞)试样中、淋巴液中、唾液中或其他类型生理试样(包括细胞试样(例如骨髓、淋巴结))中的该蛋白质。用于杂交或用于PCR的核酸可具有特异性或简并性。另外，其可对应于自其采集试样的动物物种，或该序列可对应于一不同物种(例如使用小鼠序列来探测大鼠、人类或鸡试样)。
“分离”或“纯化”的细胞群体实质上不含在自然界中伴随其的细胞及材料。实质上游离的或实质上纯化的APC意指该群体的至少50％为APC，较佳至少70％、更佳至少80且甚至更佳至少90％不含在自然界中伴随其的非APC细胞。
“免疫原”为能激发免疫反应的物质。每一种免疫球蛋白均可有效地结合多种针对其独特特征的抗体或“独特型”，独特型由一系列“独特位”构成。“独特型”为一抗体或T细胞受体可变区域上的单个抗原决定簇。其为一抗体上的独特位的集合，这些独特位构成使该抗体具有独特性的独特型。“主要独特型”为响应于一抗原产生的抗体的主要部分上具有的独特型。
“载体”为一复制子，例如质粒、噬菌体或粘粒，另一DNA区段可附着至该载体，以便复制该所附着的区段。“复制子”是可起活体内自动DNA复制单元作用亦即能在其自身的控制下复制的任何基因遗传元件(例如质粒、染色体、病毒)。
“朊病毒”为能复制的蛋白质或蛋白质片段。
“致病性生物体”包括病毒、微生物或寄生虫。致病性生物体能诱发异常的生理状况或疾病或异常的生理反应。致病性生物体可能具有传染性。
“生物试样”包括组织、细胞、血液、体液或自生物有机体获得的其他材料的试样。其也包括一生物有机体、细胞、病毒或其他可复制实体。也包括固体培养物(例如细菌或组织培养物)。也包括固体试样，包括但不限于食品、粉末以及其他固体，包括非生物固体，其含有一生物有机体、细胞、病毒或其他可复制实体。也包括固体试样的洗涤、匀质化、超声波处理及类似的处理。同样，该术语包括非固体生物试样。
“非固体生物试样”包括不是组织或器官的生物试样。实例包括但不限于血液、血浆、血清、粘液、尿液、唾液、精液、阴道分泌物、汗液、泪液、淋巴液、胃肠悬浮液或胃肠液以及脑脊液。也包括培养物(例如细菌或组织培养物)及噬菌体裂解液。也包括液体试样，包括但不限于含有生物有机体、细胞、病毒或其他可复制实体的水及饮料。悬浮液及胶质混合物也包括在内。
“非生物试样”包括不是从生物有机体获得的试样，但其中此一试样被一生物试样污染的情况除外。非生物试样可呈液体、气体或固体形式。其可包括但不限于非生物固体试样、液体试样、气体试样、溶液、悬浮液、胶质混合物及气溶胶。
“非生物固体试样”包括自多种物体获得的试样，包括但不限于木材、水泥、泥土、塑料及有变得被污染的可能的任何其他固体。可将这些试样粉碎、超声波处理、切碎、剁碎、研碎或以其他方式破碎成细粒，然后在装置中分离之前制备成胶质混合物或悬浮液。更佳地，将非生物固体试样溶于溶液中。
“非生物液体试样”包括多种试样，包括但不限于水、有机溶剂、水溶液或有机溶液等。
分离细胞(例如组织、器官或多细胞生物中的细胞)的方法包括物理、化学及酶促方法。实例包括但不限于切碎、均质化、超声波处理及研碎，此较佳在生理缓冲液中进行，例如在本说明书中所述或如所属领域的技术人员所熟知。
所属领域的技术人员将容易地对这些方法中的某些加以修改来用于制备非生物试样。
较佳地，这些细胞选自由白血细胞、上皮细胞、口腔细胞、组织培养细胞、精液、阴道细胞、尿道细胞、结肠直肠细胞、植物细胞、细菌细胞及酵母细胞组成的群组。
在一实施例中，本发明方法可有利地应用于任何全细胞悬浮液。或者，在与测试条接触之前可裂解这些细胞，使之释放出细胞器及/或核酸。
检测方法可包含使用一指示剂。由本发明指示剂产生的信号提供关于基材上给定核酸或蛋白质的存在的阳性标识。举例而言，核酸可借助一特异性或非特异性核酸探针或其他信号发生器及免疫分析形式之一来检测(且较佳加以定量)蛋白质可借助免疫分析来检测(且较佳加以定量)。较佳地，该指示剂包括荧光指示剂、颜色指示剂或光度指示剂。或者，可使用与生物素及聚抗生物素蛋白-辣根过氧化物酶(HRP)偶联的抗体，或可使用一利及与DNA相互作用的聚乙烯亚胺-过氧化物酶偶联物(PEI-PO)的分析，如业内所熟知。所属领域的技术人员可想到其他检测方法。
在某些实施例中，特别是在光敏实施例中，可能需要提供一上部外壳及一下部外壳来阻止与光的一般接触及/或尤其与某些波长光的接触。如果该指示剂并未早已存在于测试条上，则可添加其，且如果需要可用外壳中的调试条材料加以培养。该指示剂可容易地自测试条提取出来并弃掉。同样可使封阻剂及洗剂在测试条材料中循环，但在较佳实施例中不需要进行封阻。当制备步骤结束时，在避光(或避开使指示剂反应的波长的光)的情况下打开外壳，然后使测试条材料暴露于期望波长的光下来引发光度反应。
“生理状况”可为正常或异常生理状况。该生理状况可由下列因素导致：生物体的基因制造(包括但不限于各种蛋白质的表达)代谢、环境因素(包括但不限于药物、毒品、食品及饮料的摄取以及生物体与有毒或无毒物质的接触)、疾病(传染性疾病或非传染性疾病二者)、外伤、代谢障碍、妊娠或哺乳以及多种业内熟知的其他情况。实例包括但不限于妊娠、哺乳、获得性免疫缺陷综合症(AIDS；例如受到人类免疫缺陷病毒(HIV)的感染)或其他性传播疾病(例如梅毒、淋病、疱疹)、结核病、伊波拉病、疟疾、拉沙热、肝炎(A、B、C、D或E)、登革热、肺炎(例如细菌性肺炎、病毒性肺炎)及遗传疾病、综合症或与生物体基因型及/或表现型相关的多态现象。
举例而言，业内众所周知，妊娠中女性的血液及尿液中的人类绒毛膜促性腺激素(hCG)水平升高，因此，hCG可用作妊娠测试的标记。
“异常生理状况或疾病”及“异常生理反应”的实例包括但绝不限于癌症或非免疫原性肿瘤的生长、过敏、哮喘、自身免疫性疾病、传染性疾病及炎症。癌症及非免疫原性肿瘤细胞的特征通常在于异常的蛋白质表达，包括由突变核苷酸序列编码的蛋白质的表达、异常水平的蛋白质表达或不适宜的蛋白质表达。过敏及哮喘(尤其是与过敏相关的哮喘)的特征通常在于肥大细胞的异常积聚，肥大细胞是由骨髓产生的细胞，其脱粒而释放组胺且其响应于由多种响应于过敏原的刺激(例如IgE)导致的异常激活而合成组胺。自身免疫性疾病针对“自身”抗原且特征为异常水平的MHC II类细胞及自体反应T细胞(尤其CD4+及CD8+T细胞)。由传染性疾病感染可引发免疫响应。炎症可能由感染、外损或自身免疫性疾病造成，其可引发一类似于免疫反应的反应。这些状况的特征为某些蛋白质上调而另外一些蛋白质下调。
术语“癌症”和“赘生物”可互换使用且可以单数或复数形式使用，均指细胞已经受恶性转化而使得它们对于宿主生物体而言为病态。本文所用的癌细胞的定义不仅包括原代细胞，而且也包括由原代癌细胞产生的任何细胞。此包括转移的癌细胞和源自癌细胞的活体外培养物和细胞系。术语“肿瘤”不论是呈单数形式还是复数形式均包括“癌症”和“赘生物”二者且也包括非恶性但却异常的细胞生长。癌症/赘生物肿瘤细胞与非恶性肿瘤细胞间的区别可使用各种测试并且尤其是组织学检查来确定。
“有效量”为足以达成有益或期望结果的量。有效量可一次或分多次给予来达成有益或期望的结果。
本文所用“治疗有效量”意指足以预防、纠正及/或正常化异常生理反应的量。一方面，“治疗有效量”为足以使临床上重要的病理特征(例如肿块尺寸、抗体的产生、细胞因子、发烧或白细胞量)降低至少约30％、更佳至少50％且最佳至少90％的量。另外，该治疗有效量为足以使临床上重要的病理特征(例如细胞因子的产生)增加至少约30％、更佳至少50％且最佳至少90％的量。
本文所用“药物”可为药剂或关于生理状况的其他治疗药品，或其可为通过摄取而改变生理状况的任何物质。“药物”包括但不限于化学、生物、放射和其他药剂、治疗药品、药物产品或通过摄取而改变生理状况的物质(食品除外)。“药物”也包括用于预防、诊断、舒缓、治疗或治愈疾病的除食品外的治疗剂或物质。
本文的网“代谢”局势稳定“生物转化”，而“药物代谢”指“药物的生物转化”。“代谢”也指发生于组织中的化学和物理变化的总和，由合成代谢(将小分子转化成大分子的反应)和分解代谢(将大分子转化成小分子的反尖)组合，既包括内源性大分子也包括生物异源物质的生物降解。类似地，“药物代谢”包括药物的生物降解。“初级代谢”指对于大多数细胞而言均重要的代谢过程(例如大分子的生物合成，能量的产生、周转，等等)。“次生代谢”指其中物质(例如色素、生物碱、萜等)仅在某些类型的组织或细胞中合成或仅在某些条件下合成的代谢过程。
本文所用“代谢产物”或“代谢物”包括“由代谢或由代谢过程产生的任何物质”，而“药物代谢产物”或“药物代谢物”包括由药物代谢或由源自施用药物的代谢过程产生的任何物质。“代谢产物”或“代谢物”也包括代谢尤其分解代谢(“初级”或“次生”代谢)的任何产物(食品，中间产物，废品)。“初级代谢产物”在初级代谢步骤中合成，而“次生代谢产物”在次生代谢步骤中合成。“药物代谢产物”或“药物代谢物”也包括药物代谢的任何产物。
本发明预期可用于测试药物与各种蛋白质及其他配体的相互作用。
本发明预期也可用于测试生物试样来根据药物与各种配体的已知相互作用确定药物是否存在。
本文所用术语“完整性维持器”或“完整性维持构件”指可防止基质的降解及/或损失的密封部件。较佳地，本发明的完整性维持器可产生一不透空气的密封，由此可防止空气、细胞或其他污染物与基质及经纯化的核酸接触。该完整性维持器可呈塑料袋(有或无密封)、玻璃纸、密封容器、封口膜等形式。
当无另外说明时，“实质上”指“大体上但非完全是规定的情况”。
现在将以举例方式更详细地描述本发明的各个方面及实施例。所属领域的技术人员可想到其他实例。这些实例仅意欲举例说明本发明，而非意欲以任何方式限制本发明。可以理解，可在不背离本发明范围的情况下对细节加以修改。
实例
实例1：FUSION5 TM 与其他材料的吸收性比较
FUSION5TM(Whatman pic)可在本发明一较佳实施例中用作亲水性基质，将FUSION5TM的吸收性与其他三种工业标准中常用的材料(CF3、CF4和CF5)的吸收性进行比较。CF3、CF4和CF5为工业侧流分析中通常使用的纤维素吸收剂且在业内众所周知。
方案
将10ml去离子水放置于佩氏(Petri)培养皿中。称重5cm2的吸收剂片，然后置于水中并放置10秒。取出吸收剂并重新称重。自湿重减去干重，得到5cm2片的吸水率。对每一种吸收剂进行5次这样的测试。
结果：
该实验的结果显示于图3的条形图中。该另外三种材料每平方厘米吸水率的范围是自约30mg/cm2至接近100mg/cm2，而FUSION5TM材料的吸收率为40mg/cm2(参见表2).
表2
材料 吸水率(mg/cm2)
FUSION5TM 40mg/cm2
CF3 31
CF4 46
CF5 98
这些结果表明，FUSION5TM材料的吸水率在用作工业标准的材料的吸水率范围内。
实例2：FUSION5 TM 与硝酸纤维素膜的渗吸速率比较
FUSION5TM(Whatman pic)可在本发明一较佳实施例中用作亲水性基质，将FUSION5TM的渗吸速率与三种硝酸纤维素膜(RP、FP及SP)的渗吸速率进行比较。在这些硝酸纤维素膜中，RP膜具有最大的平均孔径，而SP膜具有最小的平均孔径。
方案：
将10ml去离子水置于佩氏培养皿中。将这些渗吸材料切至长度为5cm，在距顶部及底部边缘0.5mm处用软铅笔画一标记。将渗吸材料自一夹具架垂直悬下，并放低使入进入水中，直到水到达该0.5mm标记。记录下水渗吸到达该顶部标记的时间。对于每一种材料重复此测试3次。
结果：
该实验的结果显示于图4的条形图中。各材料的渗吸速率测量为渗吸透4厘米的材料所需的时间(秒)。与RP、FP及SP硝酸纤维素膜相比，渗吸透4厘米长的FUSION5TM试样花费40秒(参见表3)。这些结果表明FUSION5TM材料(一聚合物/玻璃纤维基质)的试样渗吸速率远远大于所测试的硝酸纤维素膜的试样渗吸速率。
表3
材料 4cm的渗吸速率(秒)
FUSION5TM 40秒
RP 87
FP 175
SP 238
另外的FUSION5TM测试得到7.5cm140秒的渗吸速率。
实例3：使用金及乳胶载体珠粒的FUSION5TM的偶联物释放
通过比较金载体珠粒与乳胶载体珠粒的释放来研究FUSION5TM的偶联物释放特性。
方案：
将偶联物(40nm金偶联物，来自Alchemy Labs，Dundee，UK；288nm染色乳胶，Estapor，Paris，France)在18.2MΩ水(MilliQ)或该适宜缓冲液中稀释至一习知光学密度(520nm下OD10)。将偶联物(60μl)自移液管施加至FUSION5TM偶联物垫的区段上，并将偶联物垫干燥至一致的干燥水平(37℃下2小时，然后在干燥的硅胶上储存至少12小时)。通过将偶联物垫放置在18.2MΩ水(1ml，在一测试管中)中来测量释放量，通过在520nm(金)及280nm(乳胶)下在一分光光度计中读取吸收率来测量偶联物释放量。
结果：
该实验的结果显示于图5的条形图中。在暴露在测试管的水中45秒后，分光光度测量结果显示金偶联物载体珠粒(G)的释放>94％，而乳胶偶联物载体珠粒(L)的释放>83％。
实例4：FUSION5 TM 用作血液分离材料
制备一FUSION5TM血液分离材料并将其用作血液分离材料。
方案：
将该血液分离材料切成0.5×5cm的条并称重各条。将全血施加到表面(40μl)而加到该分离材料上，使血液侧向分离。分离结束后，立即切下含血浆的部分并称重。记录下分离完成的时间。将含血浆的材料转移到具有聚丙烯网的离心分离器(Whatman6838-0005)。在13000rpm下使血浆旋出过滤器，共进行20分钟，然后使用市售测试(Sigma，St Louis)对所有的分析物进行分析。各测试均重复10次。报导自36％血容比雌性获得的血液的结果。
结果：
在侧流格式中，FUSION5TM条具有86％的效率(血清回收率)，在垂直流格式中，FUSION5TM条具有67％的效率(血清回收率)。没有分析物被除去的证据。
使用侧流格式分离血液的结果示于表4中，作为与经离心血清的比较。
表4
测试的％可获得性* FUSION5TM
体积血清 86％
总蛋白质* 98％±1.7％
IgG* 99％±1.1％
胆固醇* 101％±2.1％
相对于经离心血清
实例5：FUSION5 TM 材料的其他特性
对FUSION5TM的其他特性进行研究。结果示于表5中。
表5
测试/特性 结果
厚度(μm@5KPa) 370
Klemm渗吸(7.5cm) 2:40(分钟/秒)
最大孔径(μm) 11.0
平均孔径(μm) 4.6-5.6
吸水率(mg/cm2) 40
粒子保留(μm) 2.3
％金偶联物的释放 >94
％乳胶偶联物的释放 >83
％获得的可用血清 86
实例6：将FUSION5 TM 用于全血进行妊娠测试
A.用于妊娠测试的FUSION5TM的制备：
取一卷宽8cm且长50m的FUSION5TM。将FUSION5TM基质层压到涂覆有压敏剂的PE卡片上以在处理期间提供额外的机械强度。
测试线：
在捕获区(离材料边缘约2.5cm)自一适宜缓冲液(例如10mM磷酸盐，pH7.2)将与一单克隆抗αhCG抗体偶联的2微米乳胶珠粒施加到FUSION5TM基质上。
对照线：
在对照区(离材料边缘约2.7cm)自一适宜缓冲液(例如10mM磷酸盐，pH7.2)将与一山羊抗小鼠IgG抗体偶联的2微米乳胶珠粒施加到FUSION5TM基质上。
偶联物释放：
在偶联物释放区(离材料边缘约1cm)自一适宜缓冲液(见上文)将与一单克隆抗βhCG抗体偶联的150nm染成蓝色的乳胶胶体施加到FUSION5TM基质上。
施加这些线(可同时进行)后，在37℃下将作成线条的FUSION5TM材料干燥至少3小时。
将FUSION5TM切成5mm宽的条并置于一塑料外壳中。
B.将FUSION5TM妊娠测试条用于全血
将100微升全血施加到该测试条上。当全血试样渗吸测试条时，血液的细胞成分将被FUSION5TM捕获，允许非细胞成分在不含红细胞的情况下流动。非细胞成分将到达该偶联物释放区并重悬浮该蓝色乳胶偶联物，并且存在的任一hCG将与该偶联物上的抗βhCG相互作用。该试样和重悬浮的偶联物将继续流到捕获线，在这里存在的任一hCG将附着到捕获线上所含的抗αhCG抗体上，形成三明治式结构，使得经染色的乳胶留在捕获线上。阳性结果(由在捕获线处出现一蓝色线指示)将表明存在升高水平的hCG(在人类中与妊娠相关的激素)。在对照线处，抗小鼠IgG将与偶联物上的单克隆抗体相互作用。不管hCG的水平是否升高，对照线均将变蓝。
实例7：将FUSION5 TM 用于尿液进行妊娠测试的方案
A.制备用于妊娠测试的FUSION5TM：
取一卷宽8cm且长50m的FUSION5TM。将FUSION5TM基质层压到涂覆有压敏剂的PE卡片上以在处理期间提供额外的机械强度。
测试线：
在捕获区(离材料边缘约2.5cm)由适宜缓冲液(例如10mM磷酸盐，pH7.2)将与单克隆抗αhCG抗体偶联的2微米乳胶珠粒施加到FUSION5TM基质上。
对照线：
在对照区(离材料边缘约2.7cm)由适宜缓冲液(例如10mM磷酸盐，pH7.2)将与山羊抗小鼠IgG抗体偶联的2微米乳胶珠粒施加到FUSION5TM基质上。
偶联物释放：
在偶联物释放区(离材料边缘约1cm)由适宜缓冲液(见上文)将与一单克隆抗βhCG抗体偶联的40nm金胶体施加到FUSION5TM基质上。
施加这些线(可同时进行)后，在37℃下将作成线条的FUSION5TM材料干燥至少3小时。
将FUSION5TM切成5mm宽的条并置于一塑料外壳中。
B.将FUSION5TM妊娠测试条用于尿液
将100微升尿液施加到该测试条上。尿液将沿测试条流动，直至其到达该捕获区。尿液将重悬浮该偶联物，并且尿液试样与该偶联物相互作用。存在的任一hCG将与所含的金偶联物结合。该试样及重悬浮的金偶联物将朝该捕获线流动，在这里，阳性结果(由在该捕获线处出现一红色线指示)将表明存在升高水平的hCG(在人类中与妊娠相关的激素)。不管hCG的水平是否升高，该对照线均将变红。
任何过量的金将流过这些线并被留在该测试线的顶端。
实例8：分配测试及对照线，喷洒及干燥蛋白A金偶联物用于在FUSION5 TM 膜 上进行人类IgG分析
使用以下方案制备FUSION5TM测试条。
A.所需的物项
名称　　 建议的制造商
FUSION5TM膜 Whatman
60mm背衬 G&L(Los Angeles，CA)
乳胶-蛋白@20mg/ml DCN(San Diego，CA)
乳胶-小鼠IgG@20mg/ml DCN
纤维素级470 Schleicher&Schuell
蛋白A金偶联物，OD＝20.0 DCN
山羊抗小鼠金偶联物，OD＝10.0 DCN
适宜的缓冲液及稳定剂，如下文所述 Sigma或其他供应商
(光学密度(O.D.)在520nm下测量。)
B.所需的设备
BIODOTTM AD5000TM，配有100μm陶瓷尖、真空泵及洗涤站
纸条，来控制液体至FUSION5TM膜的施加。
探针超声处理器
Mini-Vortexer
96孔源板
XYZ3050(一XY床，可相对于印刷珠粒沿膜移动来产生一线条)，具有AIRJETQUANTI3000TM分配器
干燥箱
BIODOTTM CM4000TM切割机
切割机或切纸机
5mm带盒
摇荡器
干燥剂
箔袋
C.测试卡/条的制备
1.记录下上述批料的详细情况。
2.将FUSION5TM膜切成44mm的条。
3.将FUSION5TM膜的44mm长条层压到背衬卡上，使其与该卡片的底部边缘对齐。
4.打开AD5000及计算机。放置纸条来控制液体至FUSION5TM膜的施加。
5.对测试和对照线试剂进行超声波处理，各1分钟。振荡。将各试剂用移液管移到96孔板的适宜源孔中。各个卡片将使用约200μl的各试剂。
6.移动纸条。
7.向OD＝20.0的蛋白A金偶联物和OD＝10.0的山羊抗小鼠金偶联物二者中添加20％w/v蔗糖和5％w/v海藻糖。(此处，使用DCN存储缓冲液。也可使用10mM的硼酸盐溶液(pH8.2)。通常偶联物制造商将提供、指定或限定一缓冲液。)置于摇荡器上，直至完全溶解或悬浮。
8.喷洒OD＝20.0的蛋白A金偶联物，速率10μl/cm，psi～1，微米开口＝1.0。以10μl/cm再实施一次超范围的喷洒。
9.在37℃下干燥卡片1小时。
10.喷洒OD＝10.0的山羊抗小鼠金偶联物，速率10μl/cm，psi～1，微米开口＝1.0。以10μl/cm再实施一次超范围的喷洒。
11.在37℃下干燥卡片1小时。
12.将纤维素级470切成18mm的条并将其层压，使其与卡片的顶端对齐。
13.由于线倾斜问题，划出每一条线开头的15mm。将该卡片定向，使渗吸材料位于顶部。将一标尺在渗吸材料上对准，使“0”位于卡片的左侧。在这些点即58mm、115mm、173mm及231mm处开始划出15mm的线。
14.将卡片切成5mm的条。
15.存储在热密封的干燥箔袋中，直至准备进行测试。
实例9：用FUSION5TM测试条测试人类IgG分析
A.所需的物项
名称
人类IgG分析，FUSION5TM测试条
正常的人类血浆
1X PBS/0.1％TWEENTM20*
*1X磷酸缓冲盐溶液(PBS)/0.1％TWEENTM20自10X PBS(137mM NaCl；2.7mMKCl；5.4mM Na2HP04；1.8mM KH2PO4；pH7.4)及TWEENTM20制备。TWEENTM20(Sigma)的习知名称为聚(氧基-1，1-乙烷二基)山梨糖醇酐单9-十八烯酸酯(sorbitanmono-9octadecenoate poly(oxy-1，1-ethanedlyl))、聚氧乙烯山梨糖醇酐单月桂酸酯及聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐单月桂酸酯。
B.所需的设备
移液管
测试管
C.测试
1.对于每一个欲运行的阳性测试条，将1μl正常的人类血浆或血清与140μl运行缓冲液预混合并添加至每一个带盒的试样入口。
2.对于每一个欲运行的阴性测试条，添加150μl运行缓冲液。
3.将每一个测试条运行15分钟；在测试条已运行15分钟后记录结果。
实例10：在FUSION5 TM 膜上的人类免疫球蛋白分析
材料技术规格
试样/偶联物垫：　FUSION5TM，宽度＝44mm(Whatman)
膜
测试线试剂： 乳胶-蛋白A@20mg/ml&2.016μl/cm，DCN
对照线试剂： 乳胶-小鼠IgG@20mg/ml&2.016μl/cm，DCN
金偶联物： 蛋白A金偶联物，OD＝20.0，DCN
山羊抗小鼠金偶联物，OD＝10.0，DCN(光学密度(OD)在520nm
下测量。)
顶部垫： 纤维素470，宽度＝18mm，
Schleicher&Schuell/Whatman
背衬卡： 60mm背衬，G&L
带盒： 5mm带盒，DCN
名称 卖方建议(如果有) 部件号
蛋白A金偶联物，OD＝20.0 DCN PACO-010
山羊抗小鼠金偶联物，OD＝10.0 DCN PACG-010
适宜的缓冲液及稳定剂，如下文所述 Sigma
lxPBS Sigma P-3813
TWEENTM20 Sigma P-1379
(光学密度(O.D.)于520nm下测量。)
实例11：在膜上的人类IgG分析℃—标准操作程序
A.FUSION5TM膜—材料技术规格
试样/偶联物垫/：FUSION5 TM ，宽度＝44mm，Whatman膜
测试线抗体：　　乳胶-蛋白A@20mg/ml&2.016μl/cm，DCN
对照线抗体： 乳胶-小鼠IgG@20mg/ml&2.016μl/cm，DCN
顶部垫： 纤维素470，宽度＝18mm，S&S
背衬卡 60mm背衬，G&L
带盒： 5mm带盒，DCN
运行缓冲液： lxPBS，pH＝7.4，0.1％Tween20
B.乳胶-蛋白A偶联物及乳胶-小鼠IgG偶联物
这些捕获抗体偶联到乳胶上。这些抗体将用于捕获该分析物(人类IgG)及金偶联物，而乳胶用于将这些抗体固定到它们在测试及对照线上的位置。乳胶为白色，在FUSION5TM膜的白色背景下很难看出。
这些偶联物当通过BIOJETTM阀的微-电磁阀时将变性。出于这一原因，应将该试剂加以抽吸来进行分配，在该试剂到达该微电磁阀之前可被抽吸的体积量有限。因此，通过并置更短的约58mm的线来作出测试及对照线。通常，抽吸及分配操作需要使用启动该分配器的“预分配”，以在分配于实际的卡上之前分配指定的实际比率。该程序限制测试卡上的“线倾斜”的量。因为试剂的量有限，所以必须绕过该步骤，在作出线后必须增加一额外步骤来除去通常发生“线倾斜”的区域。特别配置的BIODOTTM AD5000应能让使用者在该试剂进入该微电磁阀之前抽吸更多的量，这由此可限制测试卡上“线倾斜”的量。
C.5mm带盒
使用一5mm带盒可允许产生无试样垫的条构形。在标准侧流测试条上，该试样垫的一重要功能是将分析物和缓冲液缓慢地加到测试条的其余部分上。当不存在试样垫时可发生测试条的“泛溢”，使得分析物及缓冲液在整个膜上流动而非流经其。该带盒用于计量测试流的流动，使测试流沿测试条缓慢前进。它通过在试样进入区后挤压测试条并由此将测试流逐渐引入到测试条的其他部分来做到这一点。
D.干燥
干燥有助于延长存架寿命。干燥不彻底将导致测试不准确。每一种组分均应完全干燥，尤其是干燥剂。将每一种干燥剂重新干燥并控制干燥剂的使用及暴露。封装应在低湿度下进行，理想地在小于20％相对湿度(R.H.)下进行。测试及干燥剂暴露应尽可能地短，最长为几分钟。
E.分析程序
对于阳性测试结果试剂盒，将1μl的正常人类血浆与149μl的运行缓冲液预混合。将整个量加至试样入口。对于阴性测试结果试剂盒，将150μl运行缓冲液加至试样入口。允许测试条显影15分钟。在使用渗吸垫的情况下，通过剥掉位于测试条顶部的渗吸垫中止分析(自带盒内取出测试条)。在约15分钟时读取结果。
实例12至14：在同一平台上的不同捕获抗体或核苷酸
测试条可具有多个捕获线，每一捕获线具有一不同的捕获抗体。在实例12中，每一捕获线针对同一疾病的不同测试。在实例13中，每一捕获线针对一不同测试，其中每一测试针对一疾病的不同变异体或生物株或针对一密切相关的疾病家族中的不同疾病。在实例14中，每一捕获线针对对于一不同疾病的测试。
实例15：同时测试HIV、结核病及/或疟疾感染
该测试条具有多条捕获线，用于使用一份血液试样来对患者进行传染病检测。一条线测试患者的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染，HIV可导致获得性免疫缺陷综合症(AIDS)；另一条线测试结核病感染；而再一条线测试疟疾感染。
在不背离本发明精神及范围的情况下所属领域的技术人员可想到本文所阐述内容的变化形式、改进形式及其他实现形式。
上述实例展示本发明发明者在做出及实施本发明时进行或想到的实验。这些实例被认为包括技术揭示内容，该揭示内容既用于告知实施本发明的技术领域也用于展示其有用性。所属领域的技术人员将了解，本文所揭示的技术及实施例仅为较佳实施例，一般而言，可使用多种等效方法及技术来达成相同的结果。
上文以下文指出的所有参考文献均特此明确地以引用方式并入本文中，其并入程度为，这些参考文献描述、提出对于实施本发明一或多个实施例而言重要的组合物及/或方法，为这些组合物及/或方法提供基础，或使这些组合物/方法得以实现。
参照文献
美国专利第5,622,871号(1997年4月22日颁予)
美国专利第4,477,575号(1984年10月16日颁予)
美国专利第4,703,017号(1987年10月27日颁予)
美国专利第5,075,078号(1991年12月24日颁予)
美国专利第4,313,734号(1982年2月2日颁予)

Claims (67)

1.一种测试条，其用于检测施加至所述测试条的液体试样中分析物的可能存在，所述测试条包含干燥多孔介质，而所述干燥多孔介质包含单一单片式亲水性基质，其中所述单一单片式亲水性基质包含：
a.纤维网络；其包含聚合物与玻璃纤维或玻璃微纤维的混合物，其中所述聚合物包含聚酯、聚乙烯、聚丙烯、乳胶、聚醚砜、聚偏二氟乙烯、聚乙烯、尼龙或聚四氟乙烯或乙酸纤维素；以及
b.一系列包含下列各项的区：
i.试样施加区；
ii.包含经标记结合剂的偶联物释放区，其中
-所述经标记结合剂特异性地与所述分析物结合，以形成包含所述经标记结合剂和所述分析物的第一复合物；
-所述经标记结合剂包含标记；以及
-所述经标记结合剂在施加所述液体试样之前呈干燥状态位于所述测试条上，而在与所述液体试样接触时释放成可移动形式；以及
iii.包含捕获测试剂的捕获测试区，其中
-所述捕获测试剂特异性地与所述分析物或与所述第一复合物结合，以形成包含所述经标记结合剂、所述分析物和所述捕获测试剂的第二复合物；以及
-所述捕获测试剂在施加所述液体试样之前呈干燥状态位于所述测试条上并且基本上不能移动；
iv.包含捕获对照剂的捕获对照区，其中
-所述捕获对照剂与所述经标记结合剂结合，以形成包含所述经标记结合剂及所述捕获对照剂的第三复合物；以及
-所述捕获对照剂在施加所述液体试样之前呈干燥状态位于所述测试条上并且基本上不能移动；以及
v.吸收区，其中所述吸收区通过毛细作用吸收所述液体试样使之通过所述测试条的所述干燥多孔介质。
2.如权利要求1所述的测试条，其中所述聚合物包含乳胶。
3.如权利要求1所述的测试条，其中所述单一单片式亲水性基质进一步包含粘合剂。
4.如权利要求3所述的测试条，其中所述粘合剂选自由聚乙烯丙烯酰胺、聚乙烯丙烯酸酯、聚乙烯醇、聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯以及明胶组成的群组。
5.如权利要求1所述的测试条，其中所述单一单片式亲水性基质具有在240秒内至少4cm的渗吸速率。
6.如权利要求1所述的测试条，其中所述单一单片式亲水性基质对于水具有在100秒内至少4cm的渗吸速率。
7.如权利要求6所述的测试条，其中所述渗吸速率对于水在60秒内至少4cm的范围内。
8.如权利要求7所述的测试条，其中所述渗吸速率对于水在50秒内至少4cm的范围内。
9.如权利要求1所述的测试条，其中所述单一单片式亲水性基质具有介于1.5微米至25.0微米之间的平均孔径。
10.如权利要求9所述的测试条，其中所述单一单片式亲水性基质具有介于2.0微米至7.0微米之间的平均孔径。
11.如权利要求9所述的测试条，其中所述平均孔径介于3.0微米至6.0微米之间。
12.如权利要求1所述的测试条，其中所述单一单片式亲水性基质具有在50微米与1000微米之间的厚度。
13.如权利要求12所述的测试条，其中所述单一单片式亲水性基质具有在150微米与500微米之间的厚度。
14.如权利要求1所述的测试条，其中所述经标记结合剂另外包含特异性地与所述分析物结合的配体。
15.如权利要求14所述的测试条，其中所述经标记结合剂另外包含所述配体所附着的固体载体。
16.如权利要求15所述的测试条，其中所述固体载体包括金、乳胶、硒、铂、铜或铁。
17.如权利要求15所述的测试条，其中所述固体载体包含载体珠粒。
18.如权利要求17所述的测试条，其中所述载体珠粒的尺寸允许所述载体珠粒通过所述基质并且其中当所述珠粒和所述基质润湿时所述珠粒可在所述基质内移动。
19.如权利要求17所述的测试条，其中所述载体珠粒的直径比所述基质的平均孔径小10％或更小。
20.如权利要求17所述的测试条，其中
a.所述基质的平均孔径介于4微米至6微米之间；以及
b.所述载体珠粒包含具有介于20纳米至80纳米之间的直径的金珠粒。
21.如权利要求17所述的测试条，其中
a.所述基质的平均孔径介于4微米至6微米之间；以及
b.所述载体珠粒包含具有介于100纳米至800纳米之间的直径的乳胶珠粒。
22.如权利要求17所述的测试条，其中所述载体珠粒包含乳胶珠粒，所述乳胶珠粒包含比色染料、荧光染料、顺磁芯、等离子体共振粒子或量子点。
23.如权利要求1所述的测试条，其中所述经标记结合剂的所述标记包含比色指示剂、荧光指示剂、光度指示剂、放射性指示剂、免疫指示剂或染料。
24.如权利要求14所述的测试条，其中所述配体包含：
a.多肽、寡肽、抗原、抗体或朊病毒；
b.核酸或肽核酸；
c.药物、药物类似物或药物代谢产物；或
d.印迹聚合物。
25.如权利要求14所述的测试条，其中
a.所述分析物包含具有相关靶序列的核酸，而所述配体包含具有与所述相关靶序列有至少65％互补性的序列的核酸；
b.所述分析包含抗原，而所述配体包含特异性地与所述抗原结合的抗体；
c.所述配体包含抗原，而所述分析物包含特异性地与所述抗原结合的抗体；
d.所述配体包含寡肽，而所述分析物包含与所述寡肽结合的蛋白质；
e.所述分析物包含药物或药物类似物，而所述配体包含与所述药物结合的蛋白质；
f.所述配体包含药物或药物类似物，而所述分析物包含与所述药物结合的蛋白质；或
g.所述配体包含印迹聚合物，而所述分析物包含：
i.多肽、寡肽、抗原、抗体或朊病毒；
ii.核酸或肽核酸；或
iii.药物、药物类似物或药物代谢产物。
26.如权利要求1所述的测试条，其中所述捕获测试剂另外包含特异性地与所述分析物或与所述第一复合物结合的配体。
27.如权利要求26所述的测试条，其中所述配体与所述分析物或与所述第一复合物的所述结合可浓缩所述分析物或所述第一复合物。
28.如权利要求26所述的测试条，其中所述配体包含：
a.多肽、寡肽、抗原或抗体；
b.核酸或肽核酸；
c.药物、药物类似物或药物代谢产物；或
d.印迹聚合物。
29.如权利要求26所述的测试条，其中
a..所述分析物包含具有暴露的相关靶序列的核酸，而所述配体包含具有与所述相关靶序列有至少65％互补性的序列的核酸；
b.所述分析物或所述第一复合物包含抗原，而所述配体包含特异性地与所述抗原结合的抗体，其中在所述分析物不存在的情况下所述抗体并不显著地与所述经标记结合剂结合；
c.所述配体包含抗原，而所述分析物或所述第一复合物包含特异性地与所述抗原结合的抗体，其中在所述分析物不存在的情况下所述经标记结合剂并不显著地与所述抗原结合；
d.所述配体包含寡肽，而或所述分析物或所述第一复合物包含与所述寡肽结合的蛋白质，其中在所述分析物不存在的情况下所述经标记结合剂并不显著地与所述寡肽结合；或
e.所述配体包含印迹聚合物，而所述分析物或所述第一复合物包含与所述印迹聚合物结合的物质，其中在所述分析物不存在的情况下所述经标记结合剂并不显著地与所述印迹聚合物结合。
30.如权利要求1所述的测试条，其中所述捕获对照剂另外包含特异性地与所述经标记结合剂结合的配体。
31.如权利要求30所述的测试条，其中所述配体与所述经标记结合剂的所述结合可浓缩所述经标记试剂，使得能够检测可指示所述第三复合物的存在的所述标记。
32.如权利要求31所述的测试条，其中：
a.所述经标记结合剂具有总的为负的电荷；以及
b.所述捕获对照剂具有总的为正的电荷。
33.如权利要求31所述的测试条，其中：
a.所述经标记结合剂包含带负电的金载体珠粒；以及
b.所述捕获对照剂包含：
i.带正电的聚合物；或
ii.带正电的配体。
34.如权利要求31所述的测试条，其中：
a.所述经标记结合剂具有总的为正的电荷；以及
b.所述捕获对照剂具有总的为负的电荷。
35.如权利要求30所述的测试条，其中所述配体包含：
a.多肽、寡肽、抗原或抗体；或
b.核酸或肽核酸；
c.药物、药物类似物或药物代谢产物；或
d.印迹聚合物。
36.如权利要求35所述的测试条，其中：
a.所述经标记给合剂包含具有暴露的相关靶序列的核酸，而所述配体包含具有与所述相关靶序列有至少65％互补性的序列的核酸；
b.所述经标记结合剂包含抗原，而所述配体包含特异性地与所述抗原结合的抗体；
c.所述配体包含抗原，而所述经标记结合剂包含特异性地与所述抗原结合的抗体；
d.所述配体包含寡肽；以及
e.所述经标记结合剂包含与所述寡肽结合的蛋白质；或
f.所述配体包含印迹聚合物，而所述经标记结合剂包含与所述印迹聚合物结合的物质。
37.如权利要求1所述的测试条，其中所述捕获测试剂或所述捕获对照剂另外包含配体所附着的固体载体。
38.如权利要求37所述的测试条，其中所述固体载体包含乳胶、二氧化硅、玻璃、氧化铝、纤维素或糖。
39.如权利要求38所述的测试条，其包含下列各项中的至少一者：
a.所述捕获测试剂包含含有捕获测试珠粒的固体载体；或
b.所述捕获对照剂包含含有捕获对照珠粒的固体载体。
40.如权利要求39所述的测试条，其中：
a.所述捕获测试珠粒或所述捕获对照珠粒包含以物理方式结合蛋白质的硫酸盐封端的乳胶珠粒；或
b.所述捕获测试珠粒或所述捕获对照珠粒包含共价结合乳胶珠粒。
41.如权利要求39所述的测试条，其中所述捕获测试珠粒或所述捕获对照珠粒的尺寸基本上能抑制其通过所述基质。
42.如权利要求39所述的测试条，其中所述捕获测试珠粒或所述捕获对照珠粒的尺寸介于所述基质的平均孔径的20％至70％之间。
43.如权利要求39所述的测试条，其中所述捕获测试珠粒或所述捕获对照珠粒的尺寸介于所述基质的平均孔径的30％至60％之间。
44.如权利要求39所述的测试条，其中
a.所述基质的平均孔径介于4.0微米至6.0微米之间；以及
b.所述捕获测试珠粒或所述捕获对照珠粒包含具有介于1.5纳米至2.5纳米之间的直径的乳胶珠粒。
45.如权利要求37所述的测试条，其中所述捕获测试剂另外包含捕获测试珠粒和特异性地与所述分析物或与所述第一复合物结合的配体，并且其中所述配体与所述分析物或与所述第一复合物的结合可浓缩所述经标记结合剂，使得能够检测指示所述第二复合物的存在的所述标记。
46.如权利要求45所述的测试条，其中所述捕获测试珠粒包含含有凝结剂的乳胶捕获珠粒。
47.如权利要求46所述的测试条，其中所述凝结剂包含聚乙二醇。
48.如权利要求37所述的测试条，其中所述捕获对照剂另外包含捕获对照珠粒，所述捕获对照珠粒包含含有凝结剂的乳胶捕获珠粒。
49.如权利要求48所述的测试条，其中所述凝结剂包含聚乙二醇。
50.如权利要求1所述的测试条，其中所述液体试样包含血液、血浆；血清；粘液；尿液；唾液；精液；阴道分泌物；汗液；泪液；淋巴液；胃肠液、悬浮液或胶质混合物；脑脊液；细菌培养物；组织培养物；噬菌体裂解液；水；饮料；有机溶剂；水溶液或有机溶液；细胞、病毒或其他可复制实体的悬浮液；或胶质混合物。
51.如权利要求1所述的测试条，其中所述分析物包含多肽、寡核苷酸、抗体、抗原、朊病毒、核酸、药物或药物类似物。
52.如权利要求1所述的测试条，其中所述分析物的存在与否包含关于生理状况的标志。
53.如权利要求52所述的测试条，其中所述生理状况包含妊娠、哺乳、疾病、表现型、基因型或异常生理状况。
54.如权利要求1所述的测试条，其中所述分析物包含药物或药物类似物。
55.如权利要求1所述的测试条，其中：
a.所述分析物包含人类绒毛膜促性腺激素；
b.所述经标记结合剂包含单克隆小鼠抗人绒毛膜促性腺激素抗体；
c.所述捕获对照剂包含非人类、非鼠类哺乳动物抗小鼠抗体；以及
d.所述液体试样中人类绒毛膜促性腺激素的存在是妊娠生理状况的标志。
56.一种用于检测液体试样中分析物的可能存在的装置，其中所述装置包含：
a.如权利要求1所述的测试条；
b.含有所述测试条的外壳，其中所述外壳包含：
i.至少一个开口，以暴露所述测试条的所述施加区的表面，以便施加所述液体试样；
ii.开口，以暴露所述测试条的所述捕获测试区和捕获对照区的表面，以便检测测试结果；以及
iii.标识所述试样施加区、所述捕获测试区和所述捕获对照区的标记。
57.一种使用测试条来检测施加至所述测试条的液体试样中分析物的可能存在的方法，其中所述方法包括：
a.提供如权利要求1所述的测试条；
b.获得液体试样；
c.将所述液体试样施加至所述测试条的所述试样施加区；
d.渗吸所述液体试样，使之通过所述单一单片式亲水性基质而到达所述偶联物释放区；
e.使所述经标记结合剂与所述液体试样接触，以使所述经标记结合剂移动并且如果所述液体试样包含分析物则允许形成第一复合物；
f.渗吸所述液体试样和所述经标记结合剂-不管是单独的或是所述第一复合物，使之通过所述单一单片式亲水性基质而到达所述捕获测试区；
g.使所述捕获测试剂与所述液体试样和所述经标记结合剂接触-不管是单独的或是所述第一复合物，以便如果所述第一复合物存在则允许形成第二复合物；
h.浓缩在所述单一单片式亲水性基质的所述捕获测试区中所述纤维网络中的所述第二复合物；
i.检测在所述捕获测试区中所述第二复合物的存在；
j.渗吸所述液体试样和所述经标记结合剂，使之通过所述单一单片式亲水性基质而到达所述捕获对照区；
k.使所述捕获对照剂与所述液体试样和所述经标记结合剂接触，以允许形成第三复合物；
l.浓缩在所述单一单片式亲水性基质的所述捕获对照区中所述纤维网络中的所述第三复合物；以及
m.检测在所述捕获对照区中所述第三复合物的存在。
58.如权利要求57所述的方法，其中所述测试条用于竞争性分析中。
59.一种测试条，其用于检测施加至所述测试条上的液体试样中分析物的可能存在，所述测试条包含干燥多孔介质，而所述干燥多孔介质包含单-亲水性基质，其中所述单一亲水性基质包含：
a.包含纤维网络的单片式亲水性基质；以及
b.一系列包含下列各项的区：
i.试样施加区；
ii.包含经标记结合剂的偶联物释放区，其中
(a)所述经标记结合剂包含：
(i)标记；
(ii)包含载体珠粒的固体基材，其中当所述载体珠粒和基质润湿时所述载体珠粒可在所述基质内移动；以及
(iii)配体，其特异性地与所述分析物结合以形成包含所述经标记结合剂和所述分析物的第一复合物；以及
(b)所述经标记结合剂在施加所述液体试样之前以干燥状态位于所述测试条上，而在与所述液体试样接触时释放成可移动形式；
iii.包含捕获测试剂的捕获测试区，其中：
(a)所述捕获测试剂包含：
(i)包含捕获测试珠粒的固体基材；以及
(ii)配体，其特异性地与所述分析物或与所述第一复合物结合，
以形成包含所述经标记结合剂、所述分析物和所述捕获剂的第二复合物；以及
(b)所述捕获测试剂在施加所述液体试样之前以干燥状态位于所述测试条上并且实质上不能移动；
iv.包含捕获对照剂的捕获对照区，其中
(a)所述捕获对照剂包含：
(i)包含捕获对照珠粒的固体基材；以及
(ii)配体，其特异性地与所述经标记结合剂结合，以形成包含所述经标记结合剂和所述捕获对照剂的第三复合物；以及
(b)所述捕获对照剂在施加所述液体试样之前呈干燥状态位于所述测试条上并且实质上不能移动；以及
v.吸收区，其中所述吸收区通过毛细作用吸收所述液体试样使之通过所述测试条的所述干燥多孔介质。
60.一种制备测试条的方法，所述测试条用于检测施加至所述测试条的液体试样中分析物的可能存在，所述测试条包含干燥多孔介质，而所述干燥多孔介质包含单一亲水性基质，所述单一亲水性基质包含单片式亲水性基质，其中所述方法包括：
a.提供单片式亲水性基质，其中所述单片式亲水性基质包含纤维网络；
b.通过下列各项在所述单片式亲水性基质上产生偶联物释放区：
i.提供经标记结合剂，其中所述经标记结合剂包含：
-标记；
-包含载体珠粒的固体基材，其中当所述载体珠粒和基质润湿时所述载体珠粒可在所述基质内移动；以及
-配体，其特异性地与所述分析物结合以形成包含所述经标记结合剂和所述分析物的第一复合物；以及
ii.将所述经标记结合剂悬浮在缓冲液中；
iii.将所述经标记结合剂悬浮液施加至所述单片式亲水性基质的第一区；
c.通过下列各项在所述单片式亲水性基质上产生捕获测试区：
i.提供捕获测试剂，其中所述捕获测试剂包含：
-包含捕获测试珠粒的固体基材；
-配体，其特异性地与所述分析物或与所述第一复合物结合，以形成包含所述经标记结合剂、所述分析物和所述捕获测试剂的第二复合物；以及
ii.将所述捕获测试剂悬浮在缓冲液中；
iii.将所述捕获测试剂悬浮液施加至所述单片式亲水性基质的第二区，其中所述第二区位于所述第一区的下游；以及
d.通过下列各项在所述单片式亲水性基质上产生捕获对照区：
i.提供捕获对照剂，其中所述捕获对照剂包含：
-包含捕获对照珠粒的固体基材；以及
-配体，其特异性地与所述经标记结合剂结合，以形成包含所述经标记结合剂和所述捕获对照剂的第三复合物；以及
ii.将所述捕获对照剂悬浮在缓冲液中；
iii.将所述捕获对照剂悬浮液施加至所述单片式亲水性基质的第三区，其中所述第三区位于所述第二区的下游；以及
e.干燥所述单片式亲水性基质，从而产生干燥多孔介质。
61.一种测试条，其用于检测施加至所述测试条上的液体试样中多个分析物中任一分析物的可能存在，所述测试条包含干燥多孔介质，而所述干燥多孔介质包含单一亲水性基质，其中所述单一亲水性基质包含：
a.包含纤维网络的单片式亲水性基质；以及
b.一系列包含下列各项的区：
i.试样施加区；
ii.包含复数种经标记结合剂的偶联物释放区，其中
(a)每一种经标记结合剂均包含：
(i)标记；
(ii)包含载体珠粒的固体基材，其中当所述载体珠粒和基质润湿时所述载体珠粒可在所述基质内移动；以及
(iii)配体，其特异性地与所述分析物之一结合以形成包含所述经标记结合剂和所述分析物的第一复合物；
(b)每一种经标记结合剂在施加所述液体试样之前均以干燥状态位于所述测试条上并且在与所述液体试样接触时释放成可移动形式；
(c)每一种经标记结合剂均特异性地与所述多个测试分析物中的不同分析物结合；
iii.包含复数种捕获测试剂的捕获测试区，其中
(a)每一种捕获测试剂均包含：
(i)包含捕获测试珠粒的固体基材；以及
(ii)配体，其特异性地与所述分析物之一或与所述第一复合物之一结合，以形成包含所述经标记结合剂、所述分析物和所述捕获剂的第二复合物；
(b)每一种捕获测试剂在施加所述液体试样之前均以干燥状态位于所述测试条上并且实质上不能移动；以及
(c)每一种捕获测试剂均特异性地与所述多个测试分析物和第一复合物中的不同分析物或第一复合物结合；
iv.包含至少一种捕获对照剂的捕获对照区，其中
(a)所述捕获对照剂包含：
(i)包含捕获对照珠粒的固体基材；以及
(ii)配体，其特异性地与所述经标记结合剂结合，以形成包含所述经标记结合剂和所述捕获对照剂的第三复合物；以及
(b)所述捕获对照剂在施加所述液体试样之前呈干燥状态位于所述测试条上并且实质上不能移动；以及
v.吸收区，其中所述吸收区通过毛细作用吸收所述液体试样使之通过所述测试条的所述干燥多孔介质。
62.一种分离血样中的成分的方法，其中所述方法包括：
a.提供如权利要求61所述的测试条，其中所述测试条检测下列中的至少一种：
i.蛋白质；
ii.胆固醇；
b.获得血样；
c.将所述血样施加至所述测试条的所述试样施加区；
d.渗吸所述血样，使之通过所述单一亲水性基质而到达所述偶联物释放区；
e.使所述经标记结合剂与所述血样接触，以使所述经标记结合剂移动并且允许形成至少一种第一复合物；
f.渗吸所述血样、所述经标记结合剂和所述一种或多种第一复合物，使之通过所述单一亲水性基质而到达所述捕获测试区；
g.使所述捕获测试剂与所述血样、所述经标记结合剂和所述一种或多种第一复合物接触，以允许形成至少一种第二复合物；
h.浓缩在所述单一亲水性基质的所述捕获测试区中所述纤维网络中的所述一种或多种第二复合物；
i.检测在所述捕获测试区中所述第二复合物的存在；
j.渗吸所述血样和所述经标记结合剂，使之通过所述单一亲水性基质而到达所述捕获对照区；
k.使所述捕获对照剂与所述液体试样和所述经标记结合剂接触，以允许形成至少一种第三复合物；
l.浓缩在所述单一亲水性基质的所述捕获对照区中所述纤维网络中的所述第三复合物；
m.检测在所述捕获对照区中的所述第三复合物的存在；以及
n.自所述测试条除去血浆。
63.如权利要求62所述的方法，其中所述蛋白质为免疫球蛋白。
64.一种在包含单片式亲水性基质的多孔介质中浓缩试剂的方法，其中所述方法包括：
a.提供单片式亲水性基质；
提供试剂，其中所述试剂包含：
i.固体基材；以及
ii.当与水性液体接触时可激活的凝结剂；
b.使所述试剂悬浮在缓冲液中，以生成试剂悬浮液；
c.将所述试剂悬浮液施加至所述单片式亲水性基质；
d.干燥在所述单片式亲水性基质上的所述试剂悬浮液；以及
e.将水性液体施加至所述多孔介质上来激活所述凝结剂，以便自凝结所述试剂的所述固体基材从而浓缩在所述多孔介质的所述单片式亲水性基质中的所述试剂。
65.如权利要求64所述的方法，其中：
a.所述单片式亲水性基质包含纤维网络；
b.所述试剂的所述固体基材包含珠粒；以及
c.所述凝结剂包含聚乙二醇。
66.一种在包含单片式亲水性基质的多孔介质中浓缩试剂的方法，其中所述方法包括：
a.提供一单片式亲水性基质；
b.提供试剂，其中所述试剂包含：
i.带负电的固体基材；以及
ii.附着至所述固体基材的带正电的配体；
c.使所述试剂悬浮在缓冲液中，以生成试剂悬浮液；
d.将所述试剂悬浮液施加至所述单片式亲水性基质；
e.干燥在所述单片式亲水性基质上的所述试剂悬浮液；
f.使所述配体与具有低于所述配体的pI的pH值且包含与所述配体结合的物质的水性液体接触；以及
g.改变所述试剂的总电荷，以便自凝结所述试剂从而浓缩在所述多孔介质的所述单片式亲水性基质中的所述试剂。
67.如权利要求66所述的方法，其中：
a.所述单片式亲水性基质包含纤维网络；
b.所述试剂的所述带负电的固体基材包含珠粒；
c.所述带正电的配体包含蛋白质；以及
d.所述蛋白质包含抗体或抗原。
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