JP2522538B2 - 耐熱性の高いヌクレア―ゼ画分の製造方法 - Google Patents
耐熱性の高いヌクレア―ゼ画分の製造方法Info
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Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、糸状菌による生産物中に存在する耐熱性の
高いヌクレアーゼ活性画分に関する。具体的には、本考
案は100℃、30分の加熱後も活性を失わないヌクレアー
ゼ活性画分の製造方法に関する。
高いヌクレアーゼ活性画分に関する。具体的には、本考
案は100℃、30分の加熱後も活性を失わないヌクレアー
ゼ活性画分の製造方法に関する。
（先行技術） 従来より、糸状菌が生産するセルラーゼからなる酵素
製剤が種々市販されている。例えば、セルラーゼオノズ
カR（近畿ヤクルト製造；トリコデルマ由来）、セルラ
ーゼAPR（天野製薬；アスペルギルス由来）およびトー
ヨーセルラーゼR（東洋醸造；フザリウム由来）が市販
されている。これらのセルラーゼ製剤には、種々の多糖
分解酵素およびタンパク分解酵素が含まれていることが
知られている。そして、かかる酵素の一部についてはす
でに単離がなされており、その性質が検討されている。
このため、これらのセルラーゼ製剤は多糖やタンパクの
分解に広く用いられている。
製剤が種々市販されている。例えば、セルラーゼオノズ
カR（近畿ヤクルト製造；トリコデルマ由来）、セルラ
ーゼAPR（天野製薬；アスペルギルス由来）およびトー
ヨーセルラーゼR（東洋醸造；フザリウム由来）が市販
されている。これらのセルラーゼ製剤には、種々の多糖
分解酵素およびタンパク分解酵素が含まれていることが
知られている。そして、かかる酵素の一部についてはす
でに単離がなされており、その性質が検討されている。
このため、これらのセルラーゼ製剤は多糖やタンパクの
分解に広く用いられている。
しかしながら、これらのセルラーゼ製剤ならびに糸状
菌の生産物自体の、DNAに対する作用については全く検
討が試みられていない。また、ヌクレアーゼ活性の有無
についても何等知られていない。
菌の生産物自体の、DNAに対する作用については全く検
討が試みられていない。また、ヌクレアーゼ活性の有無
についても何等知られていない。
一方、従来知られている酵素は加熱すると活性が著し
く低下し、利用価値が大きく減ずるものがほとんどであ
る。とくに、酵素を100℃で30分以上加熱した場合であ
っても、その活性を維持しうる酵素は皆無に近い。この
ため高温で長時間活性を維持し得る酵素製剤の開発が求
められている。
く低下し、利用価値が大きく減ずるものがほとんどであ
る。とくに、酵素を100℃で30分以上加熱した場合であ
っても、その活性を維持しうる酵素は皆無に近い。この
ため高温で長時間活性を維持し得る酵素製剤の開発が求
められている。
（発明が解決しようとする課題） 本発明は、100℃で30分以上加熱しても酵素活性を失
わない耐熱製に優れたヌクレアーゼ画分の製造方法を提
供することを目的とする。
わない耐熱製に優れたヌクレアーゼ画分の製造方法を提
供することを目的とする。
（課題を解決するための手段） 本発明は、トリコデルマ由来のセルラーゼオノズ
カR、アスペルギルス由来のセルラーゼAPRおよびフザリ
ウム由来のトーヨーセルラーゼR等の糸状菌生産物にヌ
クレアーゼ活性があることを、初めて見いだしたことに
基づき完成された（例１）。本発明は、トリコデルマ、
アスペルギルスおよびフザリウムからなる群より選ばれ
る菌の培養生成物を精製することを特徴とする、100℃
で30分加熱後も活性を有するヌクレアーゼ画分の製造方
法をその内容とする。
カR、アスペルギルス由来のセルラーゼAPRおよびフザリ
ウム由来のトーヨーセルラーゼR等の糸状菌生産物にヌ
クレアーゼ活性があることを、初めて見いだしたことに
基づき完成された（例１）。本発明は、トリコデルマ、
アスペルギルスおよびフザリウムからなる群より選ばれ
る菌の培養生成物を精製することを特徴とする、100℃
で30分加熱後も活性を有するヌクレアーゼ画分の製造方
法をその内容とする。
本発明に係るヌクレアーゼ活性画分は、例えば以下の
方法で糸状菌の生産物から得ることができるが、本発明
で使用しうるヌクレアーゼ活性画分はこれらの方法で得
られる画分のみに限定されるものではない。本発明に係
るヌクレアーゼ活性画分は、セルラーゼオノズカR、セ
ルラーゼAPRおよびトーヨーセルラーゼR等の糸状菌由来
のセルラーゼ製剤の溶液（pH7.0）を80℃で10分間加熱
し、生成する熱変性不溶物を除去した後、DEAE−セファ
デックスRカラムクロマトにチャージして0.5M塩化ナト
リウムで溶出することによって得ることができる（例２
−４）。また、80℃で加熱することなくセルラーゼ製剤
の溶液を直接DEAE−セファデックスRカラムクロマトに
かけpH7.0で吸着されない画分をとることによっても得
ることができる（例５−７）。さらに、トリコデルマ、
アスペルギルスおよびフザリウム等の糸状菌をポテトデ
キストロース培地、サブロー培地等の培地で培養するこ
とによって得られた培養物にエタノールを加えて上清を
分離し、その上清に上記の方法を施してヌクレアーゼ活
性画分を得ることもできる。
方法で糸状菌の生産物から得ることができるが、本発明
で使用しうるヌクレアーゼ活性画分はこれらの方法で得
られる画分のみに限定されるものではない。本発明に係
るヌクレアーゼ活性画分は、セルラーゼオノズカR、セ
ルラーゼAPRおよびトーヨーセルラーゼR等の糸状菌由来
のセルラーゼ製剤の溶液（pH7.0）を80℃で10分間加熱
し、生成する熱変性不溶物を除去した後、DEAE−セファ
デックスRカラムクロマトにチャージして0.5M塩化ナト
リウムで溶出することによって得ることができる（例２
−４）。また、80℃で加熱することなくセルラーゼ製剤
の溶液を直接DEAE−セファデックスRカラムクロマトに
かけpH7.0で吸着されない画分をとることによっても得
ることができる（例５−７）。さらに、トリコデルマ、
アスペルギルスおよびフザリウム等の糸状菌をポテトデ
キストロース培地、サブロー培地等の培地で培養するこ
とによって得られた培養物にエタノールを加えて上清を
分離し、その上清に上記の方法を施してヌクレアーゼ活
性画分を得ることもできる。
λDMAに対するヌクレアーゼ活性を検討したところ、
上記方法で得た本発明に係る画分には活性が認められる
が、他の画分には全く認められないことが判明した（例
８）。このことから、糸状菌生産物に認められるヌクレ
アーゼ活性は、本発明に係る画分のみに起因することが
明らかになった。従って、糸状菌生産物またはそのセル
ラーゼ酵素製剤中の該活性画分のみを取り出し濃縮して
使用すれば、糸状菌生産物や酵素製剤そのものにあるヌ
クレアーゼ活性以上の活性と選択性が期待できる。
上記方法で得た本発明に係る画分には活性が認められる
が、他の画分には全く認められないことが判明した（例
８）。このことから、糸状菌生産物に認められるヌクレ
アーゼ活性は、本発明に係る画分のみに起因することが
明らかになった。従って、糸状菌生産物またはそのセル
ラーゼ酵素製剤中の該活性画分のみを取り出し濃縮して
使用すれば、糸状菌生産物や酵素製剤そのものにあるヌ
クレアーゼ活性以上の活性と選択性が期待できる。
本発明に係る活性画分は、極めて優れた耐熱性を有し
ている（例９および10）。本発明に係る活性画分は、60
〜100℃という高温域においてもヌクレアーゼ活性を有
するが、とくにアスペルギルスおよびフザリウム由来の
活性画分はその活性が高い。また本発明に係る活性画分
は100℃で30分加熱してもその活性を失わないという従
来の酵素にない著しい効果を有している。トリコデルマ
由来の活性画分では100℃で45分加熱してもなお活性が
認められる（例10）。かかる耐熱性の高い画分からなる
本発明の酵素製剤は高温での核酸分解処理が必要な場合
等に有効に活用されるものである。なお、λDNA分解の
至適温度はトリコデルマ由来の活性画分では45℃である
（例11）。
ている（例９および10）。本発明に係る活性画分は、60
〜100℃という高温域においてもヌクレアーゼ活性を有
するが、とくにアスペルギルスおよびフザリウム由来の
活性画分はその活性が高い。また本発明に係る活性画分
は100℃で30分加熱してもその活性を失わないという従
来の酵素にない著しい効果を有している。トリコデルマ
由来の活性画分では100℃で45分加熱してもなお活性が
認められる（例10）。かかる耐熱性の高い画分からなる
本発明の酵素製剤は高温での核酸分解処理が必要な場合
等に有効に活用されるものである。なお、λDNA分解の
至適温度はトリコデルマ由来の活性画分では45℃である
（例11）。
また、本発明に係るヌクレアーゼ活性画分は、DNAの
分解生成物の長さを揃えるという特徴的な効果も併せ持
つ。通常DNAを酵素分解すると様々な長さの分解生成物
が生じる。しかし、本発明に係るヌクレアーゼ活性画分
を使用すれば、分解生成物の長さが比較的揃った生成物
を得ることができる。例えば、λDNAに本発明に係る活
性画分を作用させた場合は、反応開始から30〜45分後に
分解生成物がほぼ一定の長さに揃う（例12）。
分解生成物の長さを揃えるという特徴的な効果も併せ持
つ。通常DNAを酵素分解すると様々な長さの分解生成物
が生じる。しかし、本発明に係るヌクレアーゼ活性画分
を使用すれば、分解生成物の長さが比較的揃った生成物
を得ることができる。例えば、λDNAに本発明に係る活
性画分を作用させた場合は、反応開始から30〜45分後に
分解生成物がほぼ一定の長さに揃う（例12）。
さらに、本発明に係るヌクレアーゼ活性画分は基質特
異性が低く、様々な核酸の分解に広く適用しうるもので
ある。たとえば、λDNA、熱変性させたλDNA、ボビン・
サイマスDNA、熱変性させたボビン・サイマスDNA、ニシ
ン精子DNA、熱変性させたニシン精子DNA、M13DNA、酵母
RNAおよび仔牛肝臓DNAのいずれに対しても十分な活性を
示す（例13）。
異性が低く、様々な核酸の分解に広く適用しうるもので
ある。たとえば、λDNA、熱変性させたλDNA、ボビン・
サイマスDNA、熱変性させたボビン・サイマスDNA、ニシ
ン精子DNA、熱変性させたニシン精子DNA、M13DNA、酵母
RNAおよび仔牛肝臓DNAのいずれに対しても十分な活性を
示す（例13）。
以下、本発明に係るヌクレアーゼ活性画分の製造方法
およびその活性について具体的に述べる。
およびその活性について具体的に述べる。
例１ セルラーゼ酵素製剤のヌクレアーゼ活性を以下の方法
で検討した。
で検討した。
セルラーゼオノズカR（近畿ヤクルト製造：試料
１）、ドリメラーゼR（協和発酵工業：試料２）、ナガ
ーゼR（長瀬：試料３）、トーヨーセルラーゼR（東洋醸
造：試料４）およびセルラーゼAPR（天野製薬：試料
５）の各々について、酵素濃度20mg/ml（0.05Mリン酸バ
ッファー、pH7.0）の溶液を調製した。その各々の溶液
を35、45および55℃でλDNAに対して１時間作用させた
後、電流値38mAで１時間アガロース電気泳動し、プロフ
ァイル（第１図）を観察した。第１図中（ａ）、（ｂ）
および（ｃ）はそれぞれ35、45および55℃のプロファイ
ルであり、Ａ〜Ｇは順にλDNA（Ａ）、試料１（Ｂ）、
試料２（Ｃ）、試料３（Ｄ）、試料４（Ｅ）、試料５
（Ｆ）およびλDNAをHindIIIで処理したマーカー（Ｇ）
に対応している。
１）、ドリメラーゼR（協和発酵工業：試料２）、ナガ
ーゼR（長瀬：試料３）、トーヨーセルラーゼR（東洋醸
造：試料４）およびセルラーゼAPR（天野製薬：試料
５）の各々について、酵素濃度20mg/ml（0.05Mリン酸バ
ッファー、pH7.0）の溶液を調製した。その各々の溶液
を35、45および55℃でλDNAに対して１時間作用させた
後、電流値38mAで１時間アガロース電気泳動し、プロフ
ァイル（第１図）を観察した。第１図中（ａ）、（ｂ）
および（ｃ）はそれぞれ35、45および55℃のプロファイ
ルであり、Ａ〜Ｇは順にλDNA（Ａ）、試料１（Ｂ）、
試料２（Ｃ）、試料３（Ｄ）、試料４（Ｅ）、試料５
（Ｆ）およびλDNAをHindIIIで処理したマーカー（Ｇ）
に対応している。
例２ 本発明に係るヌクレアーゼ活性画分を、以下の方法に
よって得た。
よって得た。
0.05Mのリン酸バッファーによりpHを7.0に保ったセル
ラーゼオノズカ３SR（近畿ヤクルト製造）の２％溶液
を、80℃で10分間加熱した。遠心分離し上清をとること
によって、加熱によって生成した熱変性不溶物を除去し
た。この上清をDEAE−セファデックスRＡ−50カラムに
チャージし、0.5M塩化ナトリウムで溶出する画分を得
た。
ラーゼオノズカ３SR（近畿ヤクルト製造）の２％溶液
を、80℃で10分間加熱した。遠心分離し上清をとること
によって、加熱によって生成した熱変性不溶物を除去し
た。この上清をDEAE−セファデックスRＡ−50カラムに
チャージし、0.5M塩化ナトリウムで溶出する画分を得
た。
例３ セルラーゼオノズカR（近畿ヤクルト製造）の代わり
にセルラーゼAPR（天野製薬）を用いて例２と同一の操
作を行いヌクレアーゼ活性画分を得た。
にセルラーゼAPR（天野製薬）を用いて例２と同一の操
作を行いヌクレアーゼ活性画分を得た。
例４ セルラーゼオノズカR（近畿ヤクルト製造）の代わり
にトーヨーセルラーゼR（東洋醸造）を用いて例２と同
一の操作を行いヌクレアーゼ活性画分を得た。
にトーヨーセルラーゼR（東洋醸造）を用いて例２と同
一の操作を行いヌクレアーゼ活性画分を得た。
例５ 本発明に係るヌクレアーゼ活性画分を、以下の方法に
よって得た。
よって得た。
0.05Mのリン酸バッファーによりpHを7.0に保ったセル
ラーゼオノズカ３SR（近畿ヤクルト製造）の２％溶液を
調製した。この溶液をDEAE−セファデックスRＡ−50カ
ラムにかけて、吸着されない画分を得た。
ラーゼオノズカ３SR（近畿ヤクルト製造）の２％溶液を
調製した。この溶液をDEAE−セファデックスRＡ−50カ
ラムにかけて、吸着されない画分を得た。
例６ セルラーゼオノズカR（近畿ヤクルト製造）の代わり
にセルラーゼAPR（天野製薬）を用いて例５と同一の操
作を行いヌクレアーゼ活性画分を得た。
にセルラーゼAPR（天野製薬）を用いて例５と同一の操
作を行いヌクレアーゼ活性画分を得た。
例７ セルラーゼオノズカR（近畿ヤクルト製造）の代わり
にトーヨーセルラーゼR（東洋醸造）を用いて例５と同
一の操作を行いヌクレアーゼ活性画分を得た。
にトーヨーセルラーゼR（東洋醸造）を用いて例５と同
一の操作を行いヌクレアーゼ活性画分を得た。
例８ 本発明に係る画分と他の画分とのヌクレアーゼ活性の
比較を行った。
比較を行った。
0.05Mのリン酸バッファーによりpHを7.0に保ったセル
ラーゼオノズカ３SR（近畿ヤクルト製造）の２％溶液を
調製した。この溶液をDEAE−セファデックスRＡ−50カ
ラムにかけ、pH7.0で吸着されない画分を得た（第１画
分）。その後、塩化ナトリウムの濃度を０から２モルに
徐々に高めながら、第２画分、第３画分および第４画分
を溶出させた。画分は280nmでの光学密度を調べながら
分離した（第２図）。
ラーゼオノズカ３SR（近畿ヤクルト製造）の２％溶液を
調製した。この溶液をDEAE−セファデックスRＡ−50カ
ラムにかけ、pH7.0で吸着されない画分を得た（第１画
分）。その後、塩化ナトリウムの濃度を０から２モルに
徐々に高めながら、第２画分、第３画分および第４画分
を溶出させた。画分は280nmでの光学密度を調べながら
分離した（第２図）。
λDNAに対する分解活性をアガロース電気泳動のプロ
ファイルを観察することによって調べた。結果は、第１
画分については第３図に、第２画分、第３画分および第
４画分については第２図の上部に示す通りであった。λ
DNA自体のプロファイルは第３図の左端に示す通りであ
る。
ファイルを観察することによって調べた。結果は、第１
画分については第３図に、第２画分、第３画分および第
４画分については第２図の上部に示す通りであった。λ
DNA自体のプロファイルは第３図の左端に示す通りであ
る。
これらの図から明らかなように、第１画分については
フラクションNo.31を中心とする分解活性のピークが観
察された。しかし、第２画分、第３画分および第４画分
については全く分解活性が認められなかった。
フラクションNo.31を中心とする分解活性のピークが観
察された。しかし、第２画分、第３画分および第４画分
については全く分解活性が認められなかった。
例９ 本発明に係る活性画分の耐熱性を以下の方法で調べ
た。
た。
例５、例６および例７で得られた活性画分を、酵素濃
度20mg/mlにして下記の条件でλDNAに作用させた。
度20mg/mlにして下記の条件でλDNAに作用させた。
条件1:反応温度60℃、反応時間10分 条件2:反応温度70℃、反応時間10分 条件3:反応温度80℃、反応時間10分 条件4:反応温度100℃、反応時間10分 条件5:反応温度100℃、反応時間30分 条件6:反応温度100℃、反応時間60分 電流値38mAで１時間アガロース電気泳動し、プロファイ
ル（第４図）を観察した。第４図中（ａ）、（ｂ）およ
び（ｃ）はそれぞれ例５、例６および例７で得られた活
性画分についてのプロファイルである。Ａ〜Ｉは順にλ
DNAに何も作用させないもの（Ａ）、画分を得る前の原
液を作用させたもの（Ｂ）、活性画分を条件１（Ｃ）、
条件２（Ｄ）、条件３（Ｅ）、条件４（Ｆ）、条件５
（Ｇ）、条件６（Ｈ）で作用させたもの、HindIIIを作
用させたものである。
ル（第４図）を観察した。第４図中（ａ）、（ｂ）およ
び（ｃ）はそれぞれ例５、例６および例７で得られた活
性画分についてのプロファイルである。Ａ〜Ｉは順にλ
DNAに何も作用させないもの（Ａ）、画分を得る前の原
液を作用させたもの（Ｂ）、活性画分を条件１（Ｃ）、
条件２（Ｄ）、条件３（Ｅ）、条件４（Ｆ）、条件５
（Ｇ）、条件６（Ｈ）で作用させたもの、HindIIIを作
用させたものである。
例10 本発明に係る活性画分の耐熱性を以下の方法で調べ
た。
た。
例５で得られた本発明に係る第１画分を100℃で０、1
0、20、30、45および60分間加熱した後、各々について
λDNAに対する分解活性をアガロース電気泳動のプロフ
ァイルで調べた（第５図上）。０分間の場合に対して10
分間、20分間、30分間加熱した場合は徐々に活性が低下
しているものの、なお相当な活性が認められる。45分間
加熱した場合でも、かなり弱まるもののまだ活性は認め
られる。
0、20、30、45および60分間加熱した後、各々について
λDNAに対する分解活性をアガロース電気泳動のプロフ
ァイルで調べた（第５図上）。０分間の場合に対して10
分間、20分間、30分間加熱した場合は徐々に活性が低下
しているものの、なお相当な活性が認められる。45分間
加熱した場合でも、かなり弱まるもののまだ活性は認め
られる。
例11 本発明に係る活性画分の活性と温度との関係について
調べた。
調べた。
０、40、50、60、70、80、90、および100℃の各々の
温度で10分間加熱し、各々についてλDNAに対する分解
活性をアガロース電気泳動のプロファイルで調べた（第
５図下）。０〜50℃の間に活性に大きな差異は認められ
なかった。しかし、活性は60℃で減少し、70℃で完全に
認められなくなった。ところが、80〜100℃では再び一
様な活性が認められた。
温度で10分間加熱し、各々についてλDNAに対する分解
活性をアガロース電気泳動のプロファイルで調べた（第
５図下）。０〜50℃の間に活性に大きな差異は認められ
なかった。しかし、活性は60℃で減少し、70℃で完全に
認められなくなった。ところが、80〜100℃では再び一
様な活性が認められた。
また、20、30、40、45、50、60および70℃の各々の温
度において活性を詳細に調べたところ、第１画分の至適
温度は45℃であることが明らかになった（第６図）。
度において活性を詳細に調べたところ、第１画分の至適
温度は45℃であることが明らかになった（第６図）。
例12 本発明に係る活性画分によるλDNA分解と時間との関
係を調べた。
係を調べた。
例５で得られた第１画分にλDNAを加え０、３、５、1
0、15、30、45および60分後のアガロース電気泳動のプ
ロファイルを調べた（第７図）。その結果、λDNAを加
えて30〜45分後には、分解生成物の長さが揃うことが判
明した。その長さは0.6アガロースの場合は500ベースペ
ア、1.2％アガロースの場合は400ベースペアと計算され
た。
0、15、30、45および60分後のアガロース電気泳動のプ
ロファイルを調べた（第７図）。その結果、λDNAを加
えて30〜45分後には、分解生成物の長さが揃うことが判
明した。その長さは0.6アガロースの場合は500ベースペ
ア、1.2％アガロースの場合は400ベースペアと計算され
た。
例13 本発明に係る活性画分の基質特異性について調べた。
例５で得られた第２画分にλDNA（Ａ）、熱変性させ
たλDNA（Ｂ）、ボビン・サイマスDNA（Ｃ）、熱変性さ
せたボビン・サイマスDNA（Ｄ）、ニシン精子DNA
（Ｅ）、熱変性させたニシン精子DNA（Ｆ）、M13DNA
（Ｇ）、酵母RNA（Ｈ）および仔牛の肝臓DNA（Ｉ）を反
応させ、アガロース電気泳動のプロファイルを調べた
（第８図）。いずれの基質についても分解がおこり、本
発明に係る活性画分の基質特異性は低いことが明らかに
なった。
たλDNA（Ｂ）、ボビン・サイマスDNA（Ｃ）、熱変性さ
せたボビン・サイマスDNA（Ｄ）、ニシン精子DNA
（Ｅ）、熱変性させたニシン精子DNA（Ｆ）、M13DNA
（Ｇ）、酵母RNA（Ｈ）および仔牛の肝臓DNA（Ｉ）を反
応させ、アガロース電気泳動のプロファイルを調べた
（第８図）。いずれの基質についても分解がおこり、本
発明に係る活性画分の基質特異性は低いことが明らかに
なった。
第１図は、セルラーゼ酵素製剤のλDNA分解活性を示し
た写真である。 第２図は、DEAE−セファデックスRカラムクロマトのフ
ラクションと280nmにおける光学密度との関係を示した
写真付グラフである。 第３図は、ヌクレアーゼ活性画分の各フラクションのλ
DNA分解活性を示した写真付グラフである。 第４図は、高温処理した場合のヌクレアーゼ活性の変化
を示した写真である。 第５図は、ヌクレアーゼ活性画分の耐熱性および温度に
よる活性の変化を示した写真である。 第６図は、ヌクレアーゼ活性画分の温度による活性の変
化を示した写真である。 第７図は、ヌクレアーゼ活性画分によるλDNAの分解と
時間との関係を示した写真である。 第８図は、ヌクレアーゼ活性画分の基質特異性を示した
写真である。
た写真である。 第２図は、DEAE−セファデックスRカラムクロマトのフ
ラクションと280nmにおける光学密度との関係を示した
写真付グラフである。 第３図は、ヌクレアーゼ活性画分の各フラクションのλ
DNA分解活性を示した写真付グラフである。 第４図は、高温処理した場合のヌクレアーゼ活性の変化
を示した写真である。 第５図は、ヌクレアーゼ活性画分の耐熱性および温度に
よる活性の変化を示した写真である。 第６図は、ヌクレアーゼ活性画分の温度による活性の変
化を示した写真である。 第７図は、ヌクレアーゼ活性画分によるλDNAの分解と
時間との関係を示した写真である。 第８図は、ヌクレアーゼ活性画分の基質特異性を示した
写真である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｎ 9/16 (Ｃ１２Ｎ 9/16 Ｚ Ｃ１２Ｒ 1:885） Ｃ１２Ｒ 1:885）
Claims (1)
- 【請求項１】トリコデルマ（Trichoderma）、アスペル
ギルス（Aspergillus）およびフザリウム（Fusarium）
からなる群より選ばれる菌の培養生成物を精製すること
を特徴とする、100℃で30分加熱後も活性を有するヌク
レアーゼ画分の製造方法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CA 604181 CA1335084C (en) | 1989-01-31 | 1989-06-28 | Nuclease enzyme preparation having high resistance to heat |
| US07/807,816 US5145780A (en) | 1989-01-31 | 1991-12-16 | Method of decomposing nucleic acids with a heat stable nuclease from Trichoderma or Fusarium |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1-21865 | 1989-01-31 | ||
| JP2186589 | 1989-01-31 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02276575A JPH02276575A (ja) | 1990-11-13 |
| JP2522538B2 true JP2522538B2 (ja) | 1996-08-07 |
Family
ID=12067021
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1021866A Expired - Lifetime JP2522538B2 (ja) | 1989-01-31 | 1989-01-31 | 耐熱性の高いヌクレア―ゼ画分の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2522538B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102272304B (zh) | 2009-01-07 | 2013-10-23 | 三菱化学株式会社 | 切断固醇侧链的酶蛋白质及其应用 |
| CN102834515B (zh) | 2010-08-31 | 2016-08-03 | 株式会社Api | 新的水解酶蛋白 |
-
1989
- 1989-01-31 JP JP1021866A patent/JP2522538B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ｃａｎ．Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２６（４）（１９８０）Ｐ．５３２−５３５ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH02276575A (ja) | 1990-11-13 |
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