JPH02276575A - 耐熱性の高いヌクレアーゼ画分の製造方法 - Google Patents
耐熱性の高いヌクレアーゼ画分の製造方法Info
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- JPH02276575A JPH02276575A JP2186689A JP2186689A JPH02276575A JP H02276575 A JPH02276575 A JP H02276575A JP 2186689 A JP2186689 A JP 2186689A JP 2186689 A JP2186689 A JP 2186689A JP H02276575 A JPH02276575 A JP H02276575A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、糸状菌による生産物中に存在する耐熱性の高
いヌクレアーゼ活性画分からなる酵素製剤に関する。具
体的には、本発明は１００℃、３０分の加熱後も活性を
失わないヌクレアーゼ活性画分からなる酵素製剤に関す
る。
いヌクレアーゼ活性画分からなる酵素製剤に関する。具
体的には、本発明は１００℃、３０分の加熱後も活性を
失わないヌクレアーゼ活性画分からなる酵素製剤に関す
る。
（先行技術）
従来より、糸状菌が生産するセルラーゼからなる酵素製
剤が種々市販されている。例えば、セルラーゼオノズ力
”（近畿ヤクルト製造；トリコデルマ由来）、セルラー
ゼＡＰ”（天野製薬；アスペルギルス由来）およびトー
ヨー セルラーゼ８（東洋醸造：フザリウム由来）が市
販されている。
剤が種々市販されている。例えば、セルラーゼオノズ力
”（近畿ヤクルト製造；トリコデルマ由来）、セルラー
ゼＡＰ”（天野製薬；アスペルギルス由来）およびトー
ヨー セルラーゼ８（東洋醸造：フザリウム由来）が市
販されている。
これらのセルラーゼ製剤には、種々の多糖分解酵素およ
びタンパク分解酵素が含まれていることが知られている
。そして、かかる酵素の一部についてはすでに単離がな
されており、その性質が検討されている。このため、こ
れらのセルラーゼ製剤は多糖やタンパクの分解に広く用
いられている。
びタンパク分解酵素が含まれていることが知られている
。そして、かかる酵素の一部についてはすでに単離がな
されており、その性質が検討されている。このため、こ
れらのセルラーゼ製剤は多糖やタンパクの分解に広く用
いられている。
しかしながら、これらのセルラーゼ製剤ならびに糸状菌
の生産物自体の、ＤＮＡに対する作用については全く検
討が試みられていない。また、ヌクレアーゼ活性の有無
についても何等知られていない。
の生産物自体の、ＤＮＡに対する作用については全く検
討が試みられていない。また、ヌクレアーゼ活性の有無
についても何等知られていない。
一方、従来知られている酵素は加熱すると活性が著しく
低下し、利用価値が大きく減するものがほとんどである
。とくに、酵素を１００℃で３０分以上加熱した場合で
あっても、その活性を維持しうる酵素は皆無に近い。こ
のため高温で長時間活性を維持し得る酵素製剤の開発が
求められている。
低下し、利用価値が大きく減するものがほとんどである
。とくに、酵素を１００℃で３０分以上加熱した場合で
あっても、その活性を維持しうる酵素は皆無に近い。こ
のため高温で長時間活性を維持し得る酵素製剤の開発が
求められている。
（発明が解決しようとする課題）
本発明は、糸状菌による生産物中に存在する耐熱性の高
いヌクレアーゼ活性画分からなる酵素製剤を提供するこ
とを目的とする。
いヌクレアーゼ活性画分からなる酵素製剤を提供するこ
とを目的とする。
また、本発明は１００°Ｃで３０分以上加熱しても酵素
活性を失わない耐熱性に優れたヌクレアーゼ酵素製剤を
提供することをも目的とする。
活性を失わない耐熱性に優れたヌクレアーゼ酵素製剤を
提供することをも目的とする。
（課題を解決するための手段）
本発明は、糸状菌の生産物にヌクレアーゼ活性が存在す
ることを初めて発見したことに基づき完成された。即ち
、トリコデルマ由来のセルラーゼオノズカ９、アスペル
ギルス由来のセルラーゼＡＰ”およびフザリウム由来の
トーヨー セルラーゼ８等の糸状菌生産物にヌクレアー
ゼ活性があることを、初めて見いだしたことに基づき本
発明は完成された（例１）。本発明は、糸状菌の生産物
中に存在するヌクレアーゼ活性画分を得て、これをヌク
レアーゼ酵素製剤の活性成分とするものである。
ることを初めて発見したことに基づき完成された。即ち
、トリコデルマ由来のセルラーゼオノズカ９、アスペル
ギルス由来のセルラーゼＡＰ”およびフザリウム由来の
トーヨー セルラーゼ８等の糸状菌生産物にヌクレアー
ゼ活性があることを、初めて見いだしたことに基づき本
発明は完成された（例１）。本発明は、糸状菌の生産物
中に存在するヌクレアーゼ活性画分を得て、これをヌク
レアーゼ酵素製剤の活性成分とするものである。
本発明に係るヌクレアーゼ活性画分は、例えば以下の方
法で糸状菌の生産物から得ることができるが、本発明で
使用しうるヌクレアーゼ活性画分はこれらの方法で得ら
れる画分のみに限定されるものではない。本発明に係る
ヌクレアーゼ活性画分は、セルラーゼオノズカ８、セル
ラーゼＡＰ”およびトーヨーセルラーゼ１等の糸状菌由
来のセルラーゼ製剤の溶液（ｐＨ７，０）を８０℃で１
０分間加熱し、生成する熱変性不溶物を除去した後、Ｄ
ＥＡＥ−セファデックス８カラムクロマトにチャージし
て０．５Ｍ塩化ナトリウムで溶出することによって得る
ことができる（例２−４）。
法で糸状菌の生産物から得ることができるが、本発明で
使用しうるヌクレアーゼ活性画分はこれらの方法で得ら
れる画分のみに限定されるものではない。本発明に係る
ヌクレアーゼ活性画分は、セルラーゼオノズカ８、セル
ラーゼＡＰ”およびトーヨーセルラーゼ１等の糸状菌由
来のセルラーゼ製剤の溶液（ｐＨ７，０）を８０℃で１
０分間加熱し、生成する熱変性不溶物を除去した後、Ｄ
ＥＡＥ−セファデックス８カラムクロマトにチャージし
て０．５Ｍ塩化ナトリウムで溶出することによって得る
ことができる（例２−４）。
また、８０℃で加熱することなくセルラーゼ製剤の溶液
を直接ＤＥＡＥ−セファデックス１カラムクロマトにか
けｐ Ｈ７，０で吸着されない両分をとることによって
も得ることができる（例５−７）。
を直接ＤＥＡＥ−セファデックス１カラムクロマトにか
けｐ Ｈ７，０で吸着されない両分をとることによって
も得ることができる（例５−７）。
さらに、トリコデルマ、アスペルギルスおよびフザリウ
ム等の糸状菌をポテトデキストロース培地、サブロー培
地等の培地で培養することによって得られた培養物にエ
タノールを加えて上清を分離し、その上清に上記の方法
を施してヌクレアーゼ活性画分を得ることもできる。
ム等の糸状菌をポテトデキストロース培地、サブロー培
地等の培地で培養することによって得られた培養物にエ
タノールを加えて上清を分離し、その上清に上記の方法
を施してヌクレアーゼ活性画分を得ることもできる。
λＤＮＡに対するヌクレアーゼ活性を検討したところ、
上記方法で得た本発明に係る画分には活性が認められる
が、他の両分には全く認められないことが判明した（例
８）。このことから、糸状菌生産物に認められるヌクレ
アーゼ活性は、本発明に係る画分のみに起因することが
明らかになった。従って、糸状菌生産物またはそのセル
ラーゼ酵素製剤中の該活性画分のみを取り出し濃縮して
使用すれば、糸状菌生産物や酵素製剤そのものにあるヌ
クレアーゼ活性以上の活性と選択性が期待できる。
上記方法で得た本発明に係る画分には活性が認められる
が、他の両分には全く認められないことが判明した（例
８）。このことから、糸状菌生産物に認められるヌクレ
アーゼ活性は、本発明に係る画分のみに起因することが
明らかになった。従って、糸状菌生産物またはそのセル
ラーゼ酵素製剤中の該活性画分のみを取り出し濃縮して
使用すれば、糸状菌生産物や酵素製剤そのものにあるヌ
クレアーゼ活性以上の活性と選択性が期待できる。
本発明に係る活性画分は、極めて優れた耐熱性を有して
いる（例９および１０）。本発明に係る活性画分は、６
０〜ｌＯＯ℃という高温域においてもヌクレアーゼ活性
を有するが、とくにアスペルギルスおよびフザリウム由
来の活性画分はその活性が高い。また本発明に係る活性
画分はＺｏ。
いる（例９および１０）。本発明に係る活性画分は、６
０〜ｌＯＯ℃という高温域においてもヌクレアーゼ活性
を有するが、とくにアスペルギルスおよびフザリウム由
来の活性画分はその活性が高い。また本発明に係る活性
画分はＺｏ。
°Ｃで３０分加熱してもその活性を失わないという従来
の酵素にない著しい効果を有している。トリコデルマ由
来の活性画分では１００℃で４５分加熱してもなお活性
が認められる（例１０）。かかる耐熱性の高い両分から
なる本発明の酵素製剤は高温での核酸分解処理が必要な
場合等に有効に活用されるものである。なお、ＪＤＮＡ
分解の至適温度はトリコデルマ由来の活性画分では４５
℃である（例１１）。
の酵素にない著しい効果を有している。トリコデルマ由
来の活性画分では１００℃で４５分加熱してもなお活性
が認められる（例１０）。かかる耐熱性の高い両分から
なる本発明の酵素製剤は高温での核酸分解処理が必要な
場合等に有効に活用されるものである。なお、ＪＤＮＡ
分解の至適温度はトリコデルマ由来の活性画分では４５
℃である（例１１）。
また、本発明に係るヌクレアーゼ活性画分は、ＤＮＡの
分解生成物の長さを揃えるという特徴的な効果も併せ持
つ。通常ＤＮＡを酵素分解すると様々な長さの分解生成
物が生じる。しかし、本発明に係る′ヌクレアーゼ活性
画分を使用すれば、分解生成物の長さが比較的揃っｔ；
生成物を得ることかでさる。例えば、λＤＮＡに本発明
に係る活性画分を作用させた場合は、反応開始から３０
〜４５分俊に分解生成物がほぼ一定の＼長さに揃う（例
１２）。
分解生成物の長さを揃えるという特徴的な効果も併せ持
つ。通常ＤＮＡを酵素分解すると様々な長さの分解生成
物が生じる。しかし、本発明に係る′ヌクレアーゼ活性
画分を使用すれば、分解生成物の長さが比較的揃っｔ；
生成物を得ることかでさる。例えば、λＤＮＡに本発明
に係る活性画分を作用させた場合は、反応開始から３０
〜４５分俊に分解生成物がほぼ一定の＼長さに揃う（例
１２）。
さらに、本発明に係るヌクレアーゼ活性画分は基質特異
性が低く、様々な核酸の分解に広く適用しうるものであ
る。たとえば、λＤＮＡ１熱変性させたＪＤ Ｎ Ａ、
ボビン・サイマスＤＮＡ、熱変性させたボビン・サイマ
スＤＮＡ、ニシン精子ＤＮＡ。
性が低く、様々な核酸の分解に広く適用しうるものであ
る。たとえば、λＤＮＡ１熱変性させたＪＤ Ｎ Ａ、
ボビン・サイマスＤＮＡ、熱変性させたボビン・サイマ
スＤＮＡ、ニシン精子ＤＮＡ。
熱変性させたニシン精子ＤＮＡ、Ｍｌ ３ＤＮＡ。
酵母ＲＮＡおよび仔牛肝臓ＤＮＡのいずれに対しても十
分な活性を示す（例１３）。
分な活性を示す（例１３）。
以下、本発明に係るヌクレアーゼ活性画分の製造方法お
よびその活性について具体的に述べる。
よびその活性について具体的に述べる。
例１
セルラーゼ酵素製剤のヌクレアーゼ活性を以下の方法で
検討した。
検討した。
セルラーゼオノズカＩ（近畿ヤクルト製造：試料ｌ）、
トリメラーゼ（協和発酵工業：試料２）、ナガーゼ８（
長瀬：試料３）、トーヨー セルラーゼ”（東洋醸造：
試料４）およびセルラーゼＡＰ”（大野製薬：試料５）
の各々について、酵素濃度２０ｍｇ／ｍｌ （０，０５
Ｍリン酸バッファー ｐＨ７，０）の溶液を調製した。
トリメラーゼ（協和発酵工業：試料２）、ナガーゼ８（
長瀬：試料３）、トーヨー セルラーゼ”（東洋醸造：
試料４）およびセルラーゼＡＰ”（大野製薬：試料５）
の各々について、酵素濃度２０ｍｇ／ｍｌ （０，０５
Ｍリン酸バッファー ｐＨ７，０）の溶液を調製した。
その各々の溶液を３５．４５および５５℃でＪＤＮＡに
対して１時間作用させた後、電流値３８ｍＡで１時間ア
ガロース電気脈動し、プロファイル（第１図）を観察し
た。第１図中（ａ）、（ｂ）および（ｃ）はそれぞれ３
５．４５および５５℃のプロファイルであり、Ａ−Ｇは
順にＪＤＮＡ （Ａ） 、試料１（Ｂ）、試料２（Ｃ）
、試料３（Ｄ）、試料４（Ｅ）、試料５（Ｆ）およびＪ
ＤＮＡをＨｉｎｄｌｎで処理したマーカー（Ｇ）に対応
している。
対して１時間作用させた後、電流値３８ｍＡで１時間ア
ガロース電気脈動し、プロファイル（第１図）を観察し
た。第１図中（ａ）、（ｂ）および（ｃ）はそれぞれ３
５．４５および５５℃のプロファイルであり、Ａ−Ｇは
順にＪＤＮＡ （Ａ） 、試料１（Ｂ）、試料２（Ｃ）
、試料３（Ｄ）、試料４（Ｅ）、試料５（Ｆ）およびＪ
ＤＮＡをＨｉｎｄｌｎで処理したマーカー（Ｇ）に対応
している。
例２
本発明に係るヌクレアーゼ活性画分を、以下の方法によ
って得た。
って得た。
０．０５Ｍのリン酸バッファーによりｐＨを７．０に保
ったセルラーゼオノズカ３Ｓ”（近畿ヤクルド製造）の
２％溶液を、８０℃で１０分間加熱した。遠心分離し上
溝をとることによって、加熱によって生成した熱変性不
溶物を除去した。
ったセルラーゼオノズカ３Ｓ”（近畿ヤクルド製造）の
２％溶液を、８０℃で１０分間加熱した。遠心分離し上
溝をとることによって、加熱によって生成した熱変性不
溶物を除去した。
この上清をＤＥＡＥ−セファデックス”Ａ−５０カラム
にチャージし、０．５Ｍ塩化ナトリウムで溶出する両分
を得た。
にチャージし、０．５Ｍ塩化ナトリウムで溶出する両分
を得た。
例３
セルラーゼオノズ力Ｒ（近畿ヤクルト製造）の代わりに
セルラーゼＡＰ”（天野製薬）を用いて例２と同一の操
作を行いヌクレアーゼ活性画分を得た。
セルラーゼＡＰ”（天野製薬）を用いて例２と同一の操
作を行いヌクレアーゼ活性画分を得た。
例４
セルラーゼオノズ力Ｒ（近畿ヤクルト製造）の代わりに
トーヨー セルラーゼ８（東洋醸造）を用いて例２と同
一の操作を行いヌクレアーゼ活性画分を得た。
トーヨー セルラーゼ８（東洋醸造）を用いて例２と同
一の操作を行いヌクレアーゼ活性画分を得た。
例５
本発明に係るヌクレアーゼ活性画分を、以下の方法によ
って得た。
って得た。
０．０５Ｍのリン酸バッファーによりＩ）Ｈを７．０に
保ったセルラーゼ□オノズカ３Ｓ”（近畿ヤクルト製造
）の２％溶液を調製した。この溶液をＤＥＡＥ−セファ
デックス”Ａ−５０カラムにかけて、吸着されない両分
を得た。
保ったセルラーゼ□オノズカ３Ｓ”（近畿ヤクルト製造
）の２％溶液を調製した。この溶液をＤＥＡＥ−セファ
デックス”Ａ−５０カラムにかけて、吸着されない両分
を得た。
廻」Ｌ
セルラーゼオノズカ３（近畿ヤクルト製造）の代わりに
セルラーゼＡＰ”（天野製薬）を用いて例５と同一の操
作を行いヌクレアーゼ活性画分を得ｌこ。
セルラーゼＡＰ”（天野製薬）を用いて例５と同一の操
作を行いヌクレアーゼ活性画分を得ｌこ。
例７
セルラーゼオノズカｌＩ（近畿ヤクルト製造）の代わり
にトーヨーセルラーゼ３（東洋醸造）を用いて例５と同
一の操作を行いヌクレアーゼ活性画分を得た。
にトーヨーセルラーゼ３（東洋醸造）を用いて例５と同
一の操作を行いヌクレアーゼ活性画分を得た。
例８
本発明に係る画分と他の画分とのヌクレアーゼ活性の比
較を行った。
較を行った。
０．０５Ｍのリン酸バッファーによりＩ）Ｈを７．０に
保ったセルラーゼ酵素製剤３Ｓ”（近畿ヤクルト製造）
の２％溶液を調製した。この溶液をＤＥＡＥ−セファデ
ックス”Ａ−５０カラムにかけ、ｐＨ７，０で吸着され
ない両分を得た（第１画分）。その後、塩化ナトリウム
の濃度を０から２モルに徐々に高めながら、第２画分、
第３画分および第４画分を溶出させた。画分は２８０ｎ
ｍでの光学密度を調べながら分離した（第２図）。
保ったセルラーゼ酵素製剤３Ｓ”（近畿ヤクルト製造）
の２％溶液を調製した。この溶液をＤＥＡＥ−セファデ
ックス”Ａ−５０カラムにかけ、ｐＨ７，０で吸着され
ない両分を得た（第１画分）。その後、塩化ナトリウム
の濃度を０から２モルに徐々に高めながら、第２画分、
第３画分および第４画分を溶出させた。画分は２８０ｎ
ｍでの光学密度を調べながら分離した（第２図）。
ＪＤＮＡに対する分解活性をアガロース電気泳動のプロ
ファイルを観察することによって調べた。
ファイルを観察することによって調べた。
結果は、第１画分については＠３図に、第２画分、第３
画分および第４画分については第２図の上部に示す通り
であった。ＪＤＮＡ自体のプロファイルは第３図の左端
に示す通りである。
画分および第４画分については第２図の上部に示す通り
であった。ＪＤＮＡ自体のプロファイルは第３図の左端
に示す通りである。
これらの図から明らかなように、第１画分についてはフ
ラクションＮｏ、３１を中心とする分解活性のピークが
観察された。しかし、第２画分、第３画分および第４画
分については全く分解活性が認められなかった。
ラクションＮｏ、３１を中心とする分解活性のピークが
観察された。しかし、第２画分、第３画分および第４画
分については全く分解活性が認められなかった。
例９
本発明に係る活性画分の耐熱性を以下の方法で遵司べ
ｔこ 。
ｔこ 。
例５、例６および例７で得られた活性画分を、酵素濃度
２０ ｍ（／ｍｌにして下記の条件でＪＤＮＡに作用さ
せた。
２０ ｍ（／ｍｌにして下記の条件でＪＤＮＡに作用さ
せた。
条件１：反応温度６０’Ｏ，反応時間ｌＯ分条件２：反
応温度７０℃、反応時間１０分条件３：反応温度８０°
Ｃ１反応時間１０分条件４：反応温度１００’Ｏ，反応
時間１０分条件５；反応温度１００℃、反応時間３０分
条件６：反応温度１０００ｃ、反応時間６０分電流値３
８ｍＡで１時間アガロース電気脈動し、プロ７フイル（
第４図）を観察した。第４図中（ａ）、（ｂ）および（
ｅ）はそれぞれ例５、例６および例７で得られた活性画
分についてのプロファイルである。Ａ−１は順にＪＤＮ
Ａに何も作用させないもの（Ａ）、両分を得る前の原液
を作用させたもの（Ｂ）、活性画分を条件１ （Ｃ）、
条件２ （Ｄ） 、条件３（Ｅ）、条件４ （Ｆ） 、
条件５（Ｇ）、条件６（Ｈ）で作用させたもの、Ｈｉｎ
ｄｎ［を作用させたものである。
応温度７０℃、反応時間１０分条件３：反応温度８０°
Ｃ１反応時間１０分条件４：反応温度１００’Ｏ，反応
時間１０分条件５；反応温度１００℃、反応時間３０分
条件６：反応温度１０００ｃ、反応時間６０分電流値３
８ｍＡで１時間アガロース電気脈動し、プロ７フイル（
第４図）を観察した。第４図中（ａ）、（ｂ）および（
ｅ）はそれぞれ例５、例６および例７で得られた活性画
分についてのプロファイルである。Ａ−１は順にＪＤＮ
Ａに何も作用させないもの（Ａ）、両分を得る前の原液
を作用させたもの（Ｂ）、活性画分を条件１ （Ｃ）、
条件２ （Ｄ） 、条件３（Ｅ）、条件４ （Ｆ） 、
条件５（Ｇ）、条件６（Ｈ）で作用させたもの、Ｈｉｎ
ｄｎ［を作用させたものである。
例１０
本発明°に係る活性画分の耐熱性を以下の方法で調べた
。
。
例５で得られた本発明に係る第１画分を１００℃で０．
１０，２０．３０，４５および６０分間加熱した後、各
々についてＪＤＮＡに対する分解活性をアガロース電気
泳動のプロファイルで調べた（第５図上）。０分間の場
合に対して１０分間、２０分間、３０分間加熱した場合
は徐々に活性が低下しているものの、なお相当な活性が
認められる。４５分間加熱した場合でも、かな、り弱ま
るもののまだ活性は認められる。
１０，２０．３０，４５および６０分間加熱した後、各
々についてＪＤＮＡに対する分解活性をアガロース電気
泳動のプロファイルで調べた（第５図上）。０分間の場
合に対して１０分間、２０分間、３０分間加熱した場合
は徐々に活性が低下しているものの、なお相当な活性が
認められる。４５分間加熱した場合でも、かな、り弱ま
るもののまだ活性は認められる。
例１１
本発明に係る活性画分の活性と温度との関係について調
べた。
べた。
０．４０．５０．６０１７０．８０．９０．および１０
０°Ｃの各々の温度で１ｏ分間加熱し、各々についてＪ
ＤＮＡに対する分解活性をアガロース電気泳動のプロフ
ァイルで調べた（第５図下）。
０°Ｃの各々の温度で１ｏ分間加熱し、各々についてＪ
ＤＮＡに対する分解活性をアガロース電気泳動のプロフ
ァイルで調べた（第５図下）。
０、〜５０°Ｃの間は活性に大きな差異は認められなか
った。しかし、活性は６０’Ｃで減少し、７０’Ｃで完
全に認められなくなった。ところが、８０〜１００°Ｃ
では再び−様な活性が認められた。
った。しかし、活性は６０’Ｃで減少し、７０’Ｃで完
全に認められなくなった。ところが、８０〜１００°Ｃ
では再び−様な活性が認められた。
また、２０．３０．４０１４５．５０，６０および７０
°Ｃの各々の温度において活性を詳細に調べたところ、
第１画分の至適温度は４５℃であることが明らかになっ
Ｉ；（第６図）。
°Ｃの各々の温度において活性を詳細に調べたところ、
第１画分の至適温度は４５℃であることが明らかになっ
Ｉ；（第６図）。
例１２
本発明に係る活性画分にょるλＤＮＡ分解と時間との関
係を調べた。
係を調べた。
例５で得られた第１画分にＪＤＮＡを加えｏ１３．５、
ｌｏ、ｔｓ、３０，４５および６０分後ノアカロース電
気泳動のプロファイルｔ−ｍ ヘｆ：（第７図）。その
結果、ＪＤＮＡを加えて３０〜４５分後には、分解生成
物の長さが揃うことが判明した。その長さは０．６アガ
ロースの場合は５００ベースペア、１．２％アガロース
の場合は４００ベースペアと計算された。
ｌｏ、ｔｓ、３０，４５および６０分後ノアカロース電
気泳動のプロファイルｔ−ｍ ヘｆ：（第７図）。その
結果、ＪＤＮＡを加えて３０〜４５分後には、分解生成
物の長さが揃うことが判明した。その長さは０．６アガ
ロースの場合は５００ベースペア、１．２％アガロース
の場合は４００ベースペアと計算された。
例１３
本発明に係る活性画分の基質特異性について調べ ｌこ
。
。
例５で゛得られた第２画分にＪＤＮＡ （Ａ） 、熱変
性させたＪＤＮＡ （Ｂ） 、ボビン・サイマスＤＮＡ
（Ｃ） 、熱変性させたボビン・サイマスＤＮＡ（Ｄ
）、ニシン精子ＤＮＡ （Ｅ） 、熱変性させたニシン
精子ＤＮＡ （Ｆ） 、Ｍｌ ３ＤＮＡ （Ｇ）、酵母
ＲＮＡ （Ｈ）および仔牛の肝臓ＤＮＡ （１）を反応
させ、アガロース電気泳動のプロファイルを調べた（第
８図）。いずれの基質についても分解がおこり、本発明
に係る活性画分の基質特異性は低いことが明らかになっ
た。
性させたＪＤＮＡ （Ｂ） 、ボビン・サイマスＤＮＡ
（Ｃ） 、熱変性させたボビン・サイマスＤＮＡ（Ｄ
）、ニシン精子ＤＮＡ （Ｅ） 、熱変性させたニシン
精子ＤＮＡ （Ｆ） 、Ｍｌ ３ＤＮＡ （Ｇ）、酵母
ＲＮＡ （Ｈ）および仔牛の肝臓ＤＮＡ （１）を反応
させ、アガロース電気泳動のプロファイルを調べた（第
８図）。いずれの基質についても分解がおこり、本発明
に係る活性画分の基質特異性は低いことが明らかになっ
た。
第１図は、セルラーゼ酵素製剤のλＤＮＡ分解活性を示
したものである。 第２図は、ＤＥＡＥ−セファデックス３カラムクロマト
のフラクションと２８０ｎｍにおける光学密度との関係
を示しＩ；ものである。 第３図は、ヌクレアーゼ活性画分の各７ラクＶヨンのＪ
ＤＮＡ分解活性を示したものである。 第４図は、高温処理した場合のヌクレアーゼ活性の変化
を示したものである。 第５図は、ヌクレアーゼ活性画分の耐熱性および温度に
よる活性の変化を示したものである。 第６図は、ヌクレアーゼ活性画分の温度による活性の変
化を示したものである。 第７図は、ヌクレアーゼ活性画分によるλＤＮΔの分解
と時間との関係を示したものである。 第８図は、ヌクレアーゼ活性画分の基質特異性を示しｔ
；ものである。 為５ 凹 為７図 尾 ム 図 尾８図
したものである。 第２図は、ＤＥＡＥ−セファデックス３カラムクロマト
のフラクションと２８０ｎｍにおける光学密度との関係
を示しＩ；ものである。 第３図は、ヌクレアーゼ活性画分の各７ラクＶヨンのＪ
ＤＮＡ分解活性を示したものである。 第４図は、高温処理した場合のヌクレアーゼ活性の変化
を示したものである。 第５図は、ヌクレアーゼ活性画分の耐熱性および温度に
よる活性の変化を示したものである。 第６図は、ヌクレアーゼ活性画分の温度による活性の変
化を示したものである。 第７図は、ヌクレアーゼ活性画分によるλＤＮΔの分解
と時間との関係を示したものである。 第８図は、ヌクレアーゼ活性画分の基質特異性を示しｔ
；ものである。 為５ 凹 為７図 尾 ム 図 尾８図
Claims (2)
- （１）糸状菌の生産する、１００℃で３０分加熱後も活
性を有するヌクレアーゼからなる酵素製剤。 - （２）糸状菌がトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ
）、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）および
フザリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）からなる群より選ばれ
る菌である請求項１の酵素製剤。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CA 604181 CA1335084C (en) | 1989-01-31 | 1989-06-28 | Nuclease enzyme preparation having high resistance to heat |
| US07/807,816 US5145780A (en) | 1989-01-31 | 1991-12-16 | Method of decomposing nucleic acids with a heat stable nuclease from Trichoderma or Fusarium |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2186589 | 1989-01-31 | ||
| JP1-21865 | 1989-06-15 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02276575A true JPH02276575A (ja) | 1990-11-13 |
| JP2522538B2 JP2522538B2 (ja) | 1996-08-07 |
Family
ID=12067021
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1021866A Expired - Lifetime JP2522538B2 (ja) | 1989-01-31 | 1989-01-31 | 耐熱性の高いヌクレア―ゼ画分の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2522538B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010079594A1 (ja) | 2009-01-07 | 2010-07-15 | 三菱化学株式会社 | ステロール側鎖切断酵素蛋白質およびその利用 |
| WO2012029819A1 (ja) | 2010-08-31 | 2012-03-08 | 株式会社エーピーアイ コーポレーション | 新規加水分解酵素タンパク質 |
-
1989
- 1989-01-31 JP JP1021866A patent/JP2522538B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| CAN J MICROBIOL=1980 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010079594A1 (ja) | 2009-01-07 | 2010-07-15 | 三菱化学株式会社 | ステロール側鎖切断酵素蛋白質およびその利用 |
| WO2012029819A1 (ja) | 2010-08-31 | 2012-03-08 | 株式会社エーピーアイ コーポレーション | 新規加水分解酵素タンパク質 |
| US9029107B2 (en) | 2010-08-31 | 2015-05-12 | Api Corporation | Hydrolase protein |
| US9334509B2 (en) | 2010-08-31 | 2016-05-10 | Api Corporation | Hydrolase protein |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2522538B2 (ja) | 1996-08-07 |
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