JP2504087B2 - 生理活性物質固定化用担体の製造法 - Google Patents
生理活性物質固定化用担体の製造法Info
- Publication number
- JP2504087B2 JP2504087B2 JP62316199A JP31619987A JP2504087B2 JP 2504087 B2 JP2504087 B2 JP 2504087B2 JP 62316199 A JP62316199 A JP 62316199A JP 31619987 A JP31619987 A JP 31619987A JP 2504087 B2 JP2504087 B2 JP 2504087B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- physiologically active
- active substance
- producing
- carrier
- immobilizing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Landscapes
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Physical Or Chemical Processes And Apparatus (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、生理活性物質固定化用担体の製造法に関す
る。更に詳しくは、生理活性物質固定化に用いられる含
フッ素重合体成形品担体の製造法に関する。
る。更に詳しくは、生理活性物質固定化に用いられる含
フッ素重合体成形品担体の製造法に関する。
従来から各種の生理活性物質を担体上に固定化し、例
えばバイオセンサ用膜、アフィニティクロマトグラフィ
ー、バイオリアクタ用担体などの用途に用いることが行
われている。
えばバイオセンサ用膜、アフィニティクロマトグラフィ
ー、バイオリアクタ用担体などの用途に用いることが行
われている。
一方、従来から人工血管、カテーテル、人工臓器など
の材料として用いられている、テトラフルオロエチレン
樹脂によって代表される樹脂状またはエラストマー状の
含フッ素重合体に、例えばヘパリン、ウロキナーゼなど
を固定化することができれば、生体材料の問題点となっ
ている抗血栓性の特性を付与することができるなどの効
果が期待できる。
の材料として用いられている、テトラフルオロエチレン
樹脂によって代表される樹脂状またはエラストマー状の
含フッ素重合体に、例えばヘパリン、ウロキナーゼなど
を固定化することができれば、生体材料の問題点となっ
ている抗血栓性の特性を付与することができるなどの効
果が期待できる。
即ち、耐有機溶剤性、耐薬品性、耐熱性、酸素透過性
などの性質ですぐれた特性を示す含フッ素重合体に、生
化学的特性を更に付加することができれば、それの応用
範囲が質的にもまた量的にも飛躍的に拡大することが期
待される。
などの性質ですぐれた特性を示す含フッ素重合体に、生
化学的特性を更に付加することができれば、それの応用
範囲が質的にもまた量的にも飛躍的に拡大することが期
待される。
そのための一つの手段として、まず含フッ素重合体成
形品の表面に官能性基を導入し、それを足掛りとして各
種の生理活性物質をそこに固定化することが考えられる
が、含フッ素重合体に通常の有機合成反応によって官能
性基を導入することはほぼ不可能である。
形品の表面に官能性基を導入し、それを足掛りとして各
種の生理活性物質をそこに固定化することが考えられる
が、含フッ素重合体に通常の有機合成反応によって官能
性基を導入することはほぼ不可能である。
具体的には、例えばテトラフルオロエチレン樹脂では
Ｃ−Ｆ結合力が大きく、またＦ原子がＣ−Ｃ結合の周囲
をくまなく埋めていて、Ｃ−Ｆ結合に対する他の原子団
からのアタックに対する立体障害となっているため、そ
こにアミノ基などの官能性基を導入した上で酵素などを
固定させることはほぼ不可能であった。
Ｃ−Ｆ結合力が大きく、またＦ原子がＣ−Ｃ結合の周囲
をくまなく埋めていて、Ｃ−Ｆ結合に対する他の原子団
からのアタックに対する立体障害となっているため、そ
こにアミノ基などの官能性基を導入した上で酵素などを
固定させることはほぼ不可能であった。
そこで本発明者らは、含フッ素重合体成形品表面に官
能性基を有機合成反応によってではなく、他の方法によ
って形成せしめることを種々検討した結果、不活性ガス
雰囲気中および含窒素化合物ガス雰囲気中で順次プラズ
マ処理することにより、そこにアミノ基が効率的に導入
されることを見出し、かかる課題を効果的に解決するこ
とができた。
能性基を有機合成反応によってではなく、他の方法によ
って形成せしめることを種々検討した結果、不活性ガス
雰囲気中および含窒素化合物ガス雰囲気中で順次プラズ
マ処理することにより、そこにアミノ基が効率的に導入
されることを見出し、かかる課題を効果的に解決するこ
とができた。
従って、本発明は生理活性物質固定化用担体の製造法
に係り、生理活性物質固定化用担体の製造は、含フッ素
重合体成形品表面を不活性ガス雰囲気中および含窒素化
合物ガス雰囲気中で順次プラズマ処理した後、ジアルデ
ヒド化合物と処理することにより行われる。
に係り、生理活性物質固定化用担体の製造は、含フッ素
重合体成形品表面を不活性ガス雰囲気中および含窒素化
合物ガス雰囲気中で順次プラズマ処理した後、ジアルデ
ヒド化合物と処理することにより行われる。
含フッ素重合体成形品としては、樹脂状またはエスト
ラマー状の含フッ素重合体の成形品、一般には膜状、シ
ート状、板状のものなとが用いられる。成形品を形成す
る含フッ素重合体としては、好ましくはテトラフルオロ
エチレン樹脂（ポリテトラフルオロエチレン）が用いら
れるが、この他にポリフッ化ビニル、ポリフッ化ビニリ
デン、ポリトリフルオロエチレン、テトラフルオロエチ
レン−ヘキサフルオロプロペン共重合体なども用いられ
る。
ラマー状の含フッ素重合体の成形品、一般には膜状、シ
ート状、板状のものなとが用いられる。成形品を形成す
る含フッ素重合体としては、好ましくはテトラフルオロ
エチレン樹脂（ポリテトラフルオロエチレン）が用いら
れるが、この他にポリフッ化ビニル、ポリフッ化ビニリ
デン、ポリトリフルオロエチレン、テトラフルオロエチ
レン−ヘキサフルオロプロペン共重合体なども用いられ
る。
不活性ガスとしては、アルゴン、窒素、ヘリウムなど
が用いられ、好ましくはアルゴンが用いられる。また、
含窒素化合物としては、アンモニア、揮発性アミン化合
物などが用いられ、好ましくはアンモニアが用いられ
る。
が用いられ、好ましくはアルゴンが用いられる。また、
含窒素化合物としては、アンモニア、揮発性アミン化合
物などが用いられ、好ましくはアンモニアが用いられ
る。
これらのガス雰囲気中でのプラズマ処理は、例えば真
空ポンプ、リークバルブおよびメインバルブに接続さ
れ、真空計を備えたチューブ状プラズマ反応容器内に含
フッ素重合体成形品を収容し、反応容器内の圧力を約0.
001〜1Torrとした後バルブを開き、反応容器内にガスを
約0.01〜5Torrの圧力になる迄導入し、このようにして
反応容器内にガスを充満させたら、高周波発生装置（1
3.56MHz）およびマッチングユニットからなる高周波電
源を用いて、有効電力約10〜100W、グロー放電時間約１
〜60分間の条件下で、反応容器の端部細径円筒部に捲回
された発振コイルからプラズマ照射することにより行わ
れる。反応容器としては、上記チューブ状のもの以外
に、ベルジャー型なども用いることができる。また、放
電電極としては、上記コイル状のもの以外に、外部もし
くは内部平行電極板を用いることもできる。
空ポンプ、リークバルブおよびメインバルブに接続さ
れ、真空計を備えたチューブ状プラズマ反応容器内に含
フッ素重合体成形品を収容し、反応容器内の圧力を約0.
001〜1Torrとした後バルブを開き、反応容器内にガスを
約0.01〜5Torrの圧力になる迄導入し、このようにして
反応容器内にガスを充満させたら、高周波発生装置（1
3.56MHz）およびマッチングユニットからなる高周波電
源を用いて、有効電力約10〜100W、グロー放電時間約１
〜60分間の条件下で、反応容器の端部細径円筒部に捲回
された発振コイルからプラズマ照射することにより行わ
れる。反応容器としては、上記チューブ状のもの以外
に、ベルジャー型なども用いることができる。また、放
電電極としては、上記コイル状のもの以外に、外部もし
くは内部平行電極板を用いることもできる。
具体的なプラズマ処理条件は、各プラズマ処理工程に
おけるグロー放電時間と有効電力との組合せによって決
められ、後記実施例の表に示されるように、アンモニア
ガス雰囲気中での処理条件が一定の場合にはアルゴンガ
ス雰囲気中での時間および／または電力が大きい程アミ
ノ基導入量が多くなり、またアルゴンガス雰囲気中での
処理条件が一定の場合には特に電力量が大きい程アミノ
基導入量が多くなる。ただし、アミノ基の導入量は、一
般に成形品表面１m2当り約１〜20μＭ程度であれば生理
活性物質の固定化を有効に達成せしめるので、過度のプ
ラズマ処理は成形品自体の変質を防止する上からも避け
なければならない。
おけるグロー放電時間と有効電力との組合せによって決
められ、後記実施例の表に示されるように、アンモニア
ガス雰囲気中での処理条件が一定の場合にはアルゴンガ
ス雰囲気中での時間および／または電力が大きい程アミ
ノ基導入量が多くなり、またアルゴンガス雰囲気中での
処理条件が一定の場合には特に電力量が大きい程アミノ
基導入量が多くなる。ただし、アミノ基の導入量は、一
般に成形品表面１m2当り約１〜20μＭ程度であれば生理
活性物質の固定化を有効に達成せしめるので、過度のプ
ラズマ処理は成形品自体の変質を防止する上からも避け
なければならない。
このような一連のプラズマ処理によって、この担体表
面にはアミノ基が導入されているので、それを利用して
の生理活性物質の固定化が一般にアルデヒド処理を経て
行われる。
面にはアミノ基が導入されているので、それを利用して
の生理活性物質の固定化が一般にアルデヒド処理を経て
行われる。
アルデヒド処理は、一般にグルタルアルデヒドなどの
ジアルデヒドの水溶液（濃度約0.5〜５％）中に浸漬す
ることによって行われるが、ガス状としたジアルデヒド
化合物雰囲気中でのプラズマ処理によってもそれを行な
うことができる。
ジアルデヒドの水溶液（濃度約0.5〜５％）中に浸漬す
ることによって行われるが、ガス状としたジアルデヒド
化合物雰囲気中でのプラズマ処理によってもそれを行な
うことができる。
ジアルデヒド化合物の一方のアルデヒド基は、担体表
面上に導入されたアミノ基と反応して結合するが、他方
のアルデヒド基はそれを利用してアミノ基を有する生理
活性物質を結合、固定化させる。
面上に導入されたアミノ基と反応して結合するが、他方
のアルデヒド基はそれを利用してアミノ基を有する生理
活性物質を結合、固定化させる。
生理活性物質としては、例えばインベルターゼ、ウレ
アーゼ、クレアチニンディミナーゼ、クレアチニンアミ
ドヒドロラーゼ、グルコースオキシダーゼ、パーオキシ
ダーゼ、ヘキソキナーゼ、カタラーゼ、Ｇ−６−Ｐデヒ
ドロゲナーゼ、グルタメートデヒドロゲナーゼ、ウロキ
ナーゼ、ウリカーゼ、コレステロールオキシダーゼ、コ
レステロールエステルヒドロラーゼ、アデノシントリフ
ォスファターゼ、アルカリフォスファターゼ、ホスホリ
パーゼＧなどの酵素、各種酵母、糸状菌、放線菌、バク
テリアなどの微生物、抗生物質、抗原抗体、ホルモン、
レセプター、ヘパリン、カルモジュリン、生体組織など
が挙げられ、また人工酵素としの鉄−フタロシアニン錯
体などにも適用される。
アーゼ、クレアチニンディミナーゼ、クレアチニンアミ
ドヒドロラーゼ、グルコースオキシダーゼ、パーオキシ
ダーゼ、ヘキソキナーゼ、カタラーゼ、Ｇ−６−Ｐデヒ
ドロゲナーゼ、グルタメートデヒドロゲナーゼ、ウロキ
ナーゼ、ウリカーゼ、コレステロールオキシダーゼ、コ
レステロールエステルヒドロラーゼ、アデノシントリフ
ォスファターゼ、アルカリフォスファターゼ、ホスホリ
パーゼＧなどの酵素、各種酵母、糸状菌、放線菌、バク
テリアなどの微生物、抗生物質、抗原抗体、ホルモン、
レセプター、ヘパリン、カルモジュリン、生体組織など
が挙げられ、また人工酵素としの鉄−フタロシアニン錯
体などにも適用される。
これらの生理活性物質の固定化は、一般に濃度約0.1
〜10mg/mlの生理活性物質水溶液中に約３〜５℃または
室温下にアルデヒド処理担体を浸漬することによって行
われる。
〜10mg/mlの生理活性物質水溶液中に約３〜５℃または
室温下にアルデヒド処理担体を浸漬することによって行
われる。
本発明方法により、各種生理活性物質を固定化可能な
含フッ素重合体成形品担体が得られ、各種のすぐれた性
質を有する含フッ素重合体に更に生化学的特性を付加さ
せることができる。
含フッ素重合体成形品担体が得られ、各種のすぐれた性
質を有する含フッ素重合体に更に生化学的特性を付加さ
せることができる。
次に、実施例について本発明を説明する。
実施例１ 市販テトラフルオロエチレン樹脂膜（厚さ0.2mm）を
容量結合型プラズマ発生装置内に置き、アルゴンガス圧
力0.1Torr、電力25〜100W、時間15〜45分間の条件下
で、プラズマ処理を行った。次いで、アンモニアガス圧
力0.2Torr、電力30〜60W、時間１〜10分間の条件下でプ
ラズマ処理を行った。いずれも、13.56MHzの高周波が用
いられている。
容量結合型プラズマ発生装置内に置き、アルゴンガス圧
力0.1Torr、電力25〜100W、時間15〜45分間の条件下
で、プラズマ処理を行った。次いで、アンモニアガス圧
力0.2Torr、電力30〜60W、時間１〜10分間の条件下でプ
ラズマ処理を行った。いずれも、13.56MHzの高周波が用
いられている。
このようにしてプラズマ処理された樹脂膜の表面は、
水に対しての濡れ角が大きく変化し、表面が疎水性から
親水性になっており、そこに導入されたアミノ基の量を
ニンヒドリン法で定量すると、次のような結果が得られ
た。
水に対しての濡れ角が大きく変化し、表面が疎水性から
親水性になっており、そこに導入されたアミノ基の量を
ニンヒドリン法で定量すると、次のような結果が得られ
た。
次いで、No.6の試料について、ジアルデヒド化合物処
理を行った後、酵素の固定化を行なった。即ち、この試
料を１％グルタルアルデヒド水溶液中に室温下で24時間
浸漬し、水洗後1mg/mlの濃度のインベルターゼ水溶液中
に４℃で24時間浸漬した。
理を行った後、酵素の固定化を行なった。即ち、この試
料を１％グルタルアルデヒド水溶液中に室温下で24時間
浸漬し、水洗後1mg/mlの濃度のインベルターゼ水溶液中
に４℃で24時間浸漬した。
その後、pH7.0のリン酸緩衝液で洗浄し、固定化イン
ベルターゼ量をケルダール窒素分析法で測定したとこ
ろ、樹脂膜表面１m2当り20mgのインベルターゼが結合さ
れていることが分った。
ベルターゼ量をケルダール窒素分析法で測定したとこ
ろ、樹脂膜表面１m2当り20mgのインベルターゼが結合さ
れていることが分った。
また、この固定化酵素の活性を、ネルソン−ソモギィ
法により測定したところ、同量の非結合酵素の活性に対
する相対的な活性が95％であるという結果が得られた。
法により測定したところ、同量の非結合酵素の活性に対
する相対的な活性が95％であるという結果が得られた。
実施例２ 市販の酸素通過性テトラフルオロエチレン樹脂膜（厚
さ0.1mm）について、実施例１のNo.6と同一条件でのプ
ラズマ処理およびグルタルアルデヒド処理を行った後、
乾燥重量で1mg/ml濃度の酵母（サッカロマイセツ セレ
ヴィジェ、対数増殖期集菌）水溶液中に室温下で24時間
浸漬した。
さ0.1mm）について、実施例１のNo.6と同一条件でのプ
ラズマ処理およびグルタルアルデヒド処理を行った後、
乾燥重量で1mg/ml濃度の酵母（サッカロマイセツ セレ
ヴィジェ、対数増殖期集菌）水溶液中に室温下で24時間
浸漬した。
この酵母固定化膜をクラーク型酸素電極に装着し、10
mg/ml濃度のグルコース水溶液に対する応答をみたとこ
ろ、溶存酸素の減少がみられ、固定化酵母としての活性
を有していることが示された。
mg/ml濃度のグルコース水溶液に対する応答をみたとこ
ろ、溶存酸素の減少がみられ、固定化酵母としての活性
を有していることが示された。
Claims (4)
- 【請求項１】含フッ素重合体成形品表面を不活性ガス雰
囲気中および含窒素化合物ガス雰囲気中で順次プラズマ
処理した後、ジアルデヒド化合物で処理することを特徴
とする生理活性物質固定化用担体の製造法。 - 【請求項２】含フッ素重合体成形品がテトラフルオロエ
チレン樹脂成形品である特許請求の範囲第１項記載の生
理活性物質固定化用担体の製造法。 - 【請求項３】不活性ガスがアルゴンである特許請求の範
囲第１項記載の生理活性物質固定化用担体の製造法。 - 【請求項４】含窒素化合物ガスがアンモニアである特許
請求の範囲第１項記載の生理活性物質固定化用担体の製
造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62316199A JP2504087B2 (ja) | 1987-12-16 | 1987-12-16 | 生理活性物質固定化用担体の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62316199A JP2504087B2 (ja) | 1987-12-16 | 1987-12-16 | 生理活性物質固定化用担体の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01158967A JPH01158967A (ja) | 1989-06-22 |
| JP2504087B2 true JP2504087B2 (ja) | 1996-06-05 |
Family
ID=18074398
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62316199A Expired - Lifetime JP2504087B2 (ja) | 1987-12-16 | 1987-12-16 | 生理活性物質固定化用担体の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2504087B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0391481A (ja) * | 1989-08-18 | 1991-04-17 | Natl Sci Council | プラズマ表面処理法による固定化グルコース酸化酵素膜の製造法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1215676A (en) * | 1983-04-27 | 1986-12-23 | Terry S. Dunn | Heparinization of plasma treated substrates |
| JPS59216587A (ja) * | 1983-05-25 | 1984-12-06 | Nok Corp | 生物活性物質の固定化方法 |
-
1987
- 1987-12-16 JP JP62316199A patent/JP2504087B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH01158967A (ja) | 1989-06-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2790348B2 (ja) | 固定化方法 | |
| JP2826569B2 (ja) | 表面改質された固体基体の調製方法 | |
| EP0563984B1 (en) | Antithrombotic intraocular lens | |
| Sipehia et al. | Immobilization of enzymes on polypropylene bead surfaces by anhydrous ammonia gaseous plasma technique | |
| JP3151333B2 (ja) | 生化学物質の固定化方法 | |
| JP3151331B2 (ja) | 生化学物質の固定化方法 | |
| JPH02131500A (ja) | たん白固定化方法およびその装置 | |
| JP2504087B2 (ja) | 生理活性物質固定化用担体の製造法 | |
| JP2658211B2 (ja) | 生理活性物質固定化用担体の製造法 | |
| JP2778048B2 (ja) | 生体物質固定化用担体の製造法 | |
| JP3121673B2 (ja) | 生理活性物質固定化シリコーン成形体の製造法 | |
| US4434229A (en) | Enzyme immobilization with an immobilizing reagent in vapor phase | |
| JPH0191783A (ja) | 微生物または細胞を固定するためのアミン含有表面層を有する無機担体、それらの製造方法およびそれらの用途 | |
| JPH0318877B2 (ja) | ||
| JP2787507B2 (ja) | 生理活性物質を固定化した担持物とその製造方法 | |
| JPS63304000A (ja) | 生体由来物質の固定化方法 | |
| CN115645606B (zh) | 一种改善钛合金表面血液相容性的方法 | |
| JPS63283582A (ja) | 酵素固定化ポリアクリロニトリル膜の製造法 | |
| JPH01102352A (ja) | バイオセンサー | |
| JPH08283667A (ja) | コラーゲン賦形物およびその製造方法 | |
| JPH0575430B2 (ja) | ||
| JPH0261549A (ja) | グルコースオキシダーゼ固定化酸素透過膜の製造法 | |
| JPS615782A (ja) | 固定化酵素の安定化法 | |
| JPS5878587A (ja) | 酵素固定膜及びその製造方法 | |
| JPS6187699A (ja) | 生理活性物質の固定化方法 |