JPH0261549A - グルコースオキシダーゼ固定化酸素透過膜の製造法 - Google Patents
グルコースオキシダーゼ固定化酸素透過膜の製造法Info
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- JPH0261549A JPH0261549A JP63212005A JP21200588A JPH0261549A JP H0261549 A JPH0261549 A JP H0261549A JP 63212005 A JP63212005 A JP 63212005A JP 21200588 A JP21200588 A JP 21200588A JP H0261549 A JPH0261549 A JP H0261549A
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Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、グルコースオキシダーゼ固定化酸素透過膜の
製造法に関する。更に詳しくは、酸素透過膜の片面側表
面にグルコースオキシダーゼを固定化させるグルコース
オキシダーゼ固定化酸素透過膜の製造法に関する。
製造法に関する。更に詳しくは、酸素透過膜の片面側表
面にグルコースオキシダーゼを固定化させるグルコース
オキシダーゼ固定化酸素透過膜の製造法に関する。
〔従来の技術〕および〔発明が解決しようとする課題〕
従来、酸素電極を構成要素とするグルコースセンサを作
製する場合には、酸素透過膜の片面側表面にグルコース
オキシダーゼを固定化させる際に、その中間にグルコー
スオキシダーゼを担持させるための固定化膜の設置が必
要とされていた。しかしながら、このような固定化膜の
形成は、その作製工程を煩雑なものとしている。
従来、酸素電極を構成要素とするグルコースセンサを作
製する場合には、酸素透過膜の片面側表面にグルコース
オキシダーゼを固定化させる際に、その中間にグルコー
スオキシダーゼを担持させるための固定化膜の設置が必
要とされていた。しかしながら、このような固定化膜の
形成は、その作製工程を煩雑なものとしている。
本発明の目的は、このような中間層固定化膜の介在を必
要とはせず、直接酸素透過膜の片面側表面にグルコース
オキシダーゼの固定化を可能とするグルコースオキシダ
ーゼ固定化酸素透過膜の製造法を提供することにある。
要とはせず、直接酸素透過膜の片面側表面にグルコース
オキシダーゼの固定化を可能とするグルコースオキシダ
ーゼ固定化酸素透過膜の製造法を提供することにある。
かかる本発明の目的は、酸素透過膜の片面側を酸素ガス
または含酸素化合物ガス雰囲気中でプラズマ処理し、そ
の表面にカルボキシル基を導入した後、１−シクロヘキ
シル−３−（２−モルホリニル−４−エチル）カルボジ
イミドメト−ｐ−トルエンスルホナート存在下のグルコ
ースオキシダーゼ水溶液中に浸漬し、酸素透過膜の片面
側表面にグルコースオキシダーゼを固定化させ、グルコ
ースオキシダーゼ固定化酸素透過膜を製造することによ
り達成される。
または含酸素化合物ガス雰囲気中でプラズマ処理し、そ
の表面にカルボキシル基を導入した後、１−シクロヘキ
シル−３−（２−モルホリニル−４−エチル）カルボジ
イミドメト−ｐ−トルエンスルホナート存在下のグルコ
ースオキシダーゼ水溶液中に浸漬し、酸素透過膜の片面
側表面にグルコースオキシダーゼを固定化させ、グルコ
ースオキシダーゼ固定化酸素透過膜を製造することによ
り達成される。
酸素透過膜としては、テトラフルオロエチレン樹脂によ
って代表される含フツ素重合体あるいはポリプロピレン
などの膜状体が用いられる。
って代表される含フツ素重合体あるいはポリプロピレン
などの膜状体が用いられる。
これらの酸素透過膜は、酸素、空気などの酸素ガスある
いはＣＯ，、ＮＯ，、Ｓ０２などの含酸素化合物ガス雰
囲気中でその片面側がプラズマ処理され。
いはＣＯ，、ＮＯ，、Ｓ０２などの含酸素化合物ガス雰
囲気中でその片面側がプラズマ処理され。
その表面にカルボキシル基を導入する。
これらのガス雰囲気中でのプラズマ処理は、例えば真空
ポンプ、リークバルブおよびメインバルブに接続され、
真空計を備えたチューブ状プラズマ反応容器内に酸素透
過膜を収容し、反応容器内の圧力を約０．００１〜ＩＴ
ｏｒｒとした後バルブを開き、反応容器内にガスを約０
．０１〜５Ｔｏｒｒの圧力になる迄導入し、このように
して反応容器内にガスを充満させたら、高周波発生装置
（１３，５６ＭＨｚ）およびマツチングユニットからな
る高周波電源を用いて、有効電力約１０〜１００１ｉ１
．グロー放電時間約１〜６０分間の条件下で、反応容器
の端部細径円筒部に捲回された発振コイルからプラズマ
照射することにより行われる６反応容器としては、上記
チューブ状のもの以外に、ペルジャー型なども用いるこ
とができる。また、放電電極としては、上記コイル状の
もの以外に、外部もしくは内部平行電極板を用いること
もできる。
ポンプ、リークバルブおよびメインバルブに接続され、
真空計を備えたチューブ状プラズマ反応容器内に酸素透
過膜を収容し、反応容器内の圧力を約０．００１〜ＩＴ
ｏｒｒとした後バルブを開き、反応容器内にガスを約０
．０１〜５Ｔｏｒｒの圧力になる迄導入し、このように
して反応容器内にガスを充満させたら、高周波発生装置
（１３，５６ＭＨｚ）およびマツチングユニットからな
る高周波電源を用いて、有効電力約１０〜１００１ｉ１
．グロー放電時間約１〜６０分間の条件下で、反応容器
の端部細径円筒部に捲回された発振コイルからプラズマ
照射することにより行われる６反応容器としては、上記
チューブ状のもの以外に、ペルジャー型なども用いるこ
とができる。また、放電電極としては、上記コイル状の
もの以外に、外部もしくは内部平行電極板を用いること
もできる。
このようにして酸素透過膜片面側表面にカルボキシル基
を導入した後、そ、れを１−シクロヘキシル−３−（２
−モルホリニル−４−エチル）カルボジイミドメト−ｐ
−トルエンスルホナート［ＣＤＩ］を存在させたグルコ
ースオキシダーゼ水溶液中に浸漬して、酸素透過膜表面
にグルコースオキシダーゼを固定化させることが行われ
る。
を導入した後、そ、れを１−シクロヘキシル−３−（２
−モルホリニル−４−エチル）カルボジイミドメト−ｐ
−トルエンスルホナート［ＣＤＩ］を存在させたグルコ
ースオキシダーゼ水溶液中に浸漬して、酸素透過膜表面
にグルコースオキシダーゼを固定化させることが行われ
る。
具体的には、例えばプラズマ処理酸素透過膜を５ｍｆｌ
の蒸留水中に浸漬させた後、そこに約５〜３０ｍｇのグ
ルコースオキシダーゼを添加して溶解させ、０、ＩＮ塩
酸水溶液を用いてＰＨを約２．５〜３．５とした後ＣＤ
Ｉ約３０〜５０＋ａｇを加え、常温で約３０〜９０分間
１次いで約３〜５℃で約１８〜３６時間攪拌し、水洗す
ることにより、グルコースオキシダーゼ固定化酸素透過
膜が得られる。
の蒸留水中に浸漬させた後、そこに約５〜３０ｍｇのグ
ルコースオキシダーゼを添加して溶解させ、０、ＩＮ塩
酸水溶液を用いてＰＨを約２．５〜３．５とした後ＣＤ
Ｉ約３０〜５０＋ａｇを加え、常温で約３０〜９０分間
１次いで約３〜５℃で約１８〜３６時間攪拌し、水洗す
ることにより、グルコースオキシダーゼ固定化酸素透過
膜が得られる。
〔作用〕および〔発明の効果〕
酸素透過膜表面へのグルコースオキシダーゼの固定化は
、プラズマ処理で酸素透過膜表面に導入されたカルボキ
シル基とグルコースオキシダーゼのアミノ基とがＣＤＩ
により縮合反応し、ペプチド結合を形成させることによ
り行われる。
、プラズマ処理で酸素透過膜表面に導入されたカルボキ
シル基とグルコースオキシダーゼのアミノ基とがＣＤＩ
により縮合反応し、ペプチド結合を形成させることによ
り行われる。
このようにして行なわれるプラズマ処理およびＣＤＩに
よる固定化は、酸素透過膜へのグルコースオキシダーゼ
の直接の固定化を可能とさせる。
よる固定化は、酸素透過膜へのグルコースオキシダーゼ
の直接の固定化を可能とさせる。
次に、実施例について本発明を説明する。
実施例１
市販テフロン製酸素透過膜をプラズマ反応容器内に設置
し、周波数１３．５６ＭＨｚ、酸素ガス圧力０．ＩＴｏ
ｒｒ、有効電力５ＯＩＪ、グロー放電時間５分間の条件
下でプラズマ処理し、酸素透過膜片面側表面にカルボキ
シル基を導入した。
し、周波数１３．５６ＭＨｚ、酸素ガス圧力０．ＩＴｏ
ｒｒ、有効電力５ＯＩＪ、グロー放電時間５分間の条件
下でプラズマ処理し、酸素透過膜片面側表面にカルボキ
シル基を導入した。
このカルボキシル基導入酸素透過膜を５ｍＱの蒸留水中
に浸漬し、そこに１０＋ａｇのグルコースオキシダーゼ
（シグマ社製品）を添加、溶解させた後、０、ＩＮ塩酸
水溶液を加えてｐＨを３．０とした。その後、ＣＤＩ
４０ｍｇを加え、２５′℃で６０分間、次いで４℃で２
４時間攪拌し、水洗してグルコースオキシダーゼの固定
化を行なった。
に浸漬し、そこに１０＋ａｇのグルコースオキシダーゼ
（シグマ社製品）を添加、溶解させた後、０、ＩＮ塩酸
水溶液を加えてｐＨを３．０とした。その後、ＣＤＩ
４０ｍｇを加え、２５′℃で６０分間、次いで４℃で２
４時間攪拌し、水洗してグルコースオキシダーゼの固定
化を行なった。
この片面側表面にグルコースオキシダーゼ（ＣＯＤ）を
固定化させた酸素透過膜を、酵素固定化面側を表側にし
てクラーク型酸素電極（ベックマン社製）に装着し、こ
れと白金電極との間には飽和塩化カリウム水溶液を満し
た。
固定化させた酸素透過膜を、酵素固定化面側を表側にし
てクラーク型酸素電極（ベックマン社製）に装着し、こ
れと白金電極との間には飽和塩化カリウム水溶液を満し
た。
このようにして構成されたセンサを、各種濃度のグルコ
ース水溶液（ｐＨ７，０，２５℃）中に浸漬し。
ース水溶液（ｐＨ７，０，２５℃）中に浸漬し。
ＣＯＤ
グルコース十〇、→ グルコン酸＋８２０□なる反応原
理に基く電流減少の定常値を測定した。
理に基く電流減少の定常値を測定した。
得られた検量線は第１図のグラフに示され、この結果か
ら、グルコース濃度１〜２０ｍｇ／ Ｑの範囲では。
ら、グルコース濃度１〜２０ｍｇ／ Ｑの範囲では。
電流値との間に相関性が認められた。
実施例２
実施例１において、市販テフロン製酸素透過膜の代りに
、市販ポリプロピレン製酸素透過膜が用いられた。
、市販ポリプロピレン製酸素透過膜が用いられた。
得られた検量線は第１図のグラフに併記されており、こ
こで実施例１よりも大きい電流減少値が示されているの
は、総合エネルギーに基因してポリプロピレン製の方が
テフロン樹脂製よりもカルボキシル基導入量が多く、従
ってグルコースオキシダーゼの固定化量が多いためと考
えられる。
こで実施例１よりも大きい電流減少値が示されているの
は、総合エネルギーに基因してポリプロピレン製の方が
テフロン樹脂製よりもカルボキシル基導入量が多く、従
ってグルコースオキシダーゼの固定化量が多いためと考
えられる。
第１図は、実施例１〜２におけるグルコース水溶液濃度
と電流との関係を示す検量線のグラフである。
と電流との関係を示す検量線のグラフである。
Claims (1)
- １、酸素透過膜の片面側を酸素ガスまたは含酸素化合物
ガス雰囲気中でプラズマ処理し、その表面にカルボキシ
ル基を導入した後、１−シクロヘキシル−３−（２−モ
ルホリニル−４−エチル）カルボジイミドメト−ｐ−ト
ルエンスルホナート存在下のグルコースオキシダーゼ水
溶液中に浸漬し、酸素透過膜の片面側表面にグルコース
オキシダーゼを固定化させることを特徴とするグルコー
スオキシダーゼ固定化酸素透過膜の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63212005A JPH0261549A (ja) | 1988-08-26 | 1988-08-26 | グルコースオキシダーゼ固定化酸素透過膜の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63212005A JPH0261549A (ja) | 1988-08-26 | 1988-08-26 | グルコースオキシダーゼ固定化酸素透過膜の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0261549A true JPH0261549A (ja) | 1990-03-01 |
Family
ID=16615311
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63212005A Pending JPH0261549A (ja) | 1988-08-26 | 1988-08-26 | グルコースオキシダーゼ固定化酸素透過膜の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0261549A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000063685A1 (fr) * | 1999-04-15 | 2000-10-26 | Center For Advanced Science And Technology Incubation, Ltd. | Biocapteur |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5029575A (ja) * | 1973-03-22 | 1975-03-25 | ||
| JPS52139777A (en) * | 1976-05-14 | 1977-11-21 | Omron Tateisi Electronics Co | Fixed enzyme membrane |
-
1988
- 1988-08-26 JP JP63212005A patent/JPH0261549A/ja active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5029575A (ja) * | 1973-03-22 | 1975-03-25 | ||
| JPS52139777A (en) * | 1976-05-14 | 1977-11-21 | Omron Tateisi Electronics Co | Fixed enzyme membrane |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000063685A1 (fr) * | 1999-04-15 | 2000-10-26 | Center For Advanced Science And Technology Incubation, Ltd. | Biocapteur |
| US7087149B1 (en) | 1999-04-15 | 2006-08-08 | Katayanagi Institute | Biosensor |
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