JP2023140054A - ヘモグロビンｆの測定方法 - Google Patents

Abstract

【課題】血液検体を液体クロマトグラフィーに供して得られるクロマトグラムから、ＨｂＦをより正確に測定する。【解決手段】ＨｂＡ１ｃを含み、かつ、ＨｂＦが全ヘモグロビンに対し所定の含有率未満であることが既知の第一の血液検体群を液体クロマトグラフィーに供して得られるクロマトグラムから、ＨｂＡ１ｃピーク値と、ＨｂＡ１ａピーク及びＨｂＡ１ｂピークを含む合成ピーク値との相関式である第一相関式をあらかじめ決定し、測定対象の血液検体を液体クロマトグラフィーに供して得られるクロマトグラムのＨｂＡ１ｃピーク値を第一相関式に当て嵌めて得られた合成ピーク値を、当該血液検体のＨｂＡ１ａピーク及びＨｂＡ１ｂピークを含む合成ピーク値から減じて修飾ＨｂＦピーク値を算出し、前記修飾ＨｂＦピーク値を当該血液検体のＨｂＦピーク値に加算して当該ＨｂＦピーク値を補正する。【選択図】図８

Description

本発明は、血液検体中のヘモグロビンＦの測定方法に関する。

血液検体中の各種ヘモグロビンは、高速液体クロマトグラフィーなどの分離分画法において測定することが可能である。ヘモグロビンの一種であるヘモグロビンＦ（ＨｂＦ）の測定値は、異常ヘモグロビン症やサラセミア症の診断材料となるため、高い正確性が求められている。液体クロマトグラフィーを用いたヘモグロビンＦの測定方法としては、下記特許文献１に開示されている方法が挙げられる。

特開２０１４－２３５０２３号公報

血液検体を陽イオン交換液体クロマトグラフィーに供して得られるクロマトグラムでは、ＨｂＦピークよりもカラムからの溶出速度の早い側に、ヘモグロビンＡ（ＨｂＡ）の糖化物であるヘモグロビンＡ１（ＨｂＡ１）のうち、ヘモグロビンＡ１ａ（ＨｂＡ１ａ）ピーク及びヘモグロビンＡ１ｂ（ＨｂＡ１ｂ）ピークが重なったピークである合成ピークが現れる。

そこで本開示の実施態様は、血液検体を液体クロマトグラフィーに供して得られるクロマトグラムから、ＨｂＦをより正確に測定することを課題とする。

ＨｂＡが糖化されるとＨｂＡ１ｃとなるように、ＨｂＦも糖化などの修飾を受けて修飾型ＨｂＦとなると推測される。修飾型ＨｂＦもＨｂＦの一種であるため、ＨｂＦをより正確に測定するためには修飾型ＨｂＦのピーク値も測定する必要がある。発明者の実験では、この合成ピークの大きさは、ＨｂＦピークの大きさに応じて変化することが観察された。この観察結果から、この合成ピークには、ＨｂＦの修飾物も含まれていることが推察された。合成ピークに含まれるＨｂＡ１ａとＨｂＡ１ｂと修飾型ＨｂＦの電荷や大きさは互いに近いため、ＨｂＡ１ａとＨｂＡ１ｂと修飾型ＨｂＦを陽イオン交換クロマトグラフィーで分離するのは困難であり、修飾型ＨｂＦのピーク値を正確に測定できない。その結果、血液検体中のＨｂＦ総量（換言すると、修飾されてないＨｂＦ濃度と修飾型ＨｂＦ濃度との合計濃度）の測定ができない。

本開示の一態様のＨｂＦの測定方法は、ＨｂＡ１ｃを含み、かつ、ＨｂＦが全ヘモグロビンに対し所定の含有率未満であることが既知の第一の血液検体群を液体クロマトグラフィーに供して得られるクロマトグラムから、ＨｂＡ１ｃピーク値と、ＨｂＡ１ａピーク及びＨｂＡ１ｂピークを含む合成ピーク値との相関式である第一相関式をあらかじめ決定し、測定対象の血液検体のＨｂＡ１ｃピーク値を第一相関式に当て嵌めて得られた合成ピーク値を、当該血液検体のＨｂＡ１ａピーク及びＨｂＡ１ｂピークを含む合成ピーク値から減じて修飾ＨｂＦピーク値を算出し、この修飾ＨｂＦピーク値を当該血液検体のＨｂＦピーク値に加算して当該ＨｂＦピーク値を補正する。

本発明の実施態様によれば、血液検体を液体クロマトグラフィーに供して得られるクロマトグラムから、ＨｂＦをより正確に測定することが可能となる。

血液検体を高速液体クロマトグラフィーに供して得られるヘモグロビンのクロマトグラムの例を模式的に示す。 通常検体におけるＨｂＦピークと合成ピークとの関係を模式的に示す。 高ＨｂＦ検体におけるＨｂＦピークと合成ピークとの関係を模式的に示す。 血液検体１を高速液体クロマトグラフィーに供して得られたクロマトグラムである。 血液検体２を高速液体クロマトグラフィーに供して得られたクロマトグラムである。 血液検体３を高速液体クロマトグラフィーに供して得られたクロマトグラムである。 血液検体４を高速液体クロマトグラフィーに供して得られたクロマトグラムである。 健常人の血液検体群を高速液体クロマトグラフィーに供して得られたクロマトグラムにおける、ＨｂＡ１ｃピーク値と、ＨｂＡ１ａピーク及びＨｂＡ１ｂピークを含む合成ピーク値との相関関係を示す散布図である。 ＨｂＦを含むことが既知な血液検体群を高速液体クロマトグラフィーに供して得られたクロマトグラムにおける、ＨｂＦピーク値と修飾ＨｂＦピーク値との相関関係を示す散布図である。

以下、本開示における実施形態を、図面を参照しつつ説明する。各図において共通する符号は、特段の説明がなくとも同一の部分を指し示す。なお、本開示における「ピーク値」とは、クロマトグラムで認められる各ピークの高さ又は面積であり、相対値を用いることができ、絶対値を用いることもできる。この相対値は、クロマトグラムの面積の全体に帯する比率であってもよいし、クロマトグラムに占めるヘモグロビンに関するピーク面積の全体に対する比率であってもよいし、あるいは、特定のピーク（たとえば、ＨｂＡ０ピーク）の面積に対する比率であってもよい。

（１）第一実施形態
血液検体を陽イオン交換液体クロマトグラフィーに供すると、たとえば図１に模式的に示すようなヘモグロビンのクロマトグラムが得られる。このクロマトグラムでは、カラムからの溶出速度の速い順に、ＨｂＡ１ａピーク１１及びＨｂＡ１ｂピーク１２（図２及び図３参照）を含む合成ピーク１０、ＨｂＦピーク２０、不安定型ＨｂＡ１ｃピーク３０、ＨｂＡ１ｃピーク４０、ＨｂＡ０ピーク５０及びＨｂＡ２ピーク６０（図４～図７を参照）が認められる。

ＨｂＦピーク値が１％未満である通常の血液検体のクロマトグラムを図２に、また、高ＨｂＦ血症患者の血液検体のクロマトグラムを図３に、それぞれ模式的に示す。両図でほぼ同じ大きさのＨｂＡ１ｃピーク４０と比較して分かるように、図３のクロマトグラムのＨｂＦピーク２０は、図２のクロマトグラムのＨｂＦピーク２０より高くなっている。このとき、図３のクロマトグラムの合成ピーク１０もまた、図２のクロマトグラムの合成ピーク１０よりも高くなっている。

ここで、合成ピーク１０には、ＨｂＡの糖化物であるＨｂＡ１のうち、図２に示すように、ＨｂＡ１ａピーク１１及びＨｂＡ１ｂピーク１２が含まれている。そして、図３に示すようにＨｂＦピーク２０が増大すると合成ピーク１０が増大する。この合成ピーク１０は糖化物であるＨｂＡ１ａピーク１１及びＨｂＡ１ｂピーク１２が含まれているため、この合成ピーク１０の増大分は、図３に示すように、ＨｂＦの修飾物である修飾ＨｂＦピーク１３の増大によるものと考えられる。一方、図２に示す通常検体では修飾ＨｂＦピーク１３はごくわずかであり、合成ピーク１０の大部分はＨｂＡ１ａピーク１１及びＨｂＡ１ｂピーク１２で占められていると考えられる。

一方、図２に示すような通常検体でも、図３に示すような高ＨｂＦ検体でも、ＨｂＡ１ｃピーク４０に対するＨｂＡ１ａピーク１１値及びＨｂＡ１ｂピーク１２値の合計の割合はほぼ一定であると仮定する。この仮定の下、通常検体において、ＨｂＡ１ｃピーク４０のピーク値と合成ピーク１０のピーク値（実質的にＨｂＡ１ａピーク１１のピーク値及びＨｂＡ１ｂピーク１２のピーク値の合計値）との相関関係を見出せば、この相関関係を高ＨｂＦ検体のＨｂＡ１ｃピーク４０に当て嵌めて合成ピーク１０中のＨｂＡ１ａピーク１１及びＨｂＡ１ｂピーク１２の合計を算出することができる。ＨｂＡ１ａピーク１１のピーク値及びＨｂＡ１ｂピーク１２のピーク値の合計値と合成ピーク１０のピーク値との差は修飾ＨｂＦピーク１３値に基づく。そしてその算出した合計を、図３に示すクロマトグラム中の合成ピーク１０から差し引くことで、修飾ＨｂＦピーク１３を算出することができると考えられる。そして、後述の実施例（図８参照）に示すように、複数の通常検体について、ＨｂＡ１ｃピーク４０と合成ピーク１０との間には高い相関関係があることが分かった。

この相関関係に基づき、本開示の第一実施形態のＨｂＦの測定方法は、ＨｂＡ１ｃを含み、かつ、ＨｂＦを含まないことが既知の第一の血液検体群を液体クロマトグラフィーに供して得られるクロマトグラムから、ＨｂＡ１ｃピーク値と、ＨｂＡ１ａピーク及びＨｂＡ１ｂピークを含む合成ピーク値との相関式である第一相関式をあらかじめ決定し、測定対象の血液検体を液体クロマトグラフィーに供して得られるクロマトグラムのＨｂＡ１ｃピーク値を前記第一相関式に当て嵌めて得られた合成ピーク値を、当該血液検体のＨｂＡ１ａピーク及びＨｂＡ１ｂピークを含む合成ピーク値から減じて修飾ＨｂＦピーク値を算出し、修飾ＨｂＦピーク値を当該血液検体のＨｂＦピーク値に加算して当該ＨｂＦピーク値を補正する。当該ＨｂＦピーク値は血液検体に含まれるＨｂＦ濃度と相関するので、当該ＨｂＦピーク値に基づいて、たとえば血液検体に含まれるＨｂＦ濃度や全ヘモグロビン量に対するＨｂＦ量の割合などを求めることができる。

具体的には、ＨｂＡ１ｃを含み、かつ、ＨｂＦが全ヘモグロビンに対し所定の含有率未満であることが既知の複数の血液検体について、ＨｂＡ１ｃピーク値と合成ピーク値（実質的にＨｂＡ１ａピーク値とＨｂＡ１ｂピーク値との合計）との相関関係から、第一相関式を決定する。なお、ここでいう「所定の含有率」とは、ＨｂＦピーク値が正常値以下（たとえば、全ヘモグロビンのピーク値の５％、望ましくは３％、さらに望ましくは１％とすることができる。この「ＨｂＦが全ヘモグロビンに対し所定の含有率未満であることが既知の複数の血液検体」は、液体クロマトグラフィーで血液検体に含まれるヘモグロビンを分離分析したときに得られるＨｂＦピーク値が上記所定の含有率未満を示す血液検体として得てもよく、また、たとえば、液体クロマトグラフィー以外の測定原理（たとえばキャピラリー電気泳動）を用いた分析によりヘモグロビンＦの含有量が全ヘモグロビンに対し所定の含有率未満であることが示された血液検体として得てもよい。この第一相関式は、ＨｂＡ１ｃピーク値を変数ｘとして、合成ピーク値を変数ｙとすれば、下記式（１）のように表される。

ｙ＝ａ_１ｘ＋ｂ_１ ・・・（１）
ｘ：ＨｂＡ１ｃピーク値（変数）
ｙ：合成ピーク値（変数）
ａ_１：傾き（定数）
ａ_２：切片（定数）

そして、測定対象の血液検体から得たクロマトグラムからＨｂＡ１ｃピーク値を求め、これを上記式（１）の変数ｘに代入して、算出された変数ｙとして合成ピーク値が推定される。この算出された合成ピーク値の推定値を、クロマトグラムに表れた合成ピーク１０から得られた（すなわち、クロマトグラムに表れた合成ピーク１０を用いて測定された）合成ピーク値から減じることで、合成ピーク１０に含まれる修飾ＨｂＦピーク値が算出される。そして、この算出された修飾ＨｂＦピーク値を、クロマトグラムから得られたＨｂＦピーク２０のピーク値に加算することで、当該ＨｂＦピーク値を補正して、血液検体中の真のＨｂＦピーク値が推定される。修飾ＨｂＦピーク値は下記式（２）のように表され、修飾ＨｂＦピーク値をｗとし、ＨｂＦピーク値を変数ｚとすれば、真のＨｂＦピーク値（ｖ）は下記式（３）のように表される。

ｗ＝ｙ－（ａ_１ｘ＋ｂ_１） ・・・（２）
ｖ＝ｚ＋ｗ＝ｚ＋（ｙ－（ａ_１ｘ＋ｂ_１）） ・・・（３）
ｖ：真のＨｂＦピーク値（変数）
ｗ ：修飾ＨｂＦピーク値（変数）
ｘ ：ＨｂＡ１ｃピーク値（変数）
ｙ ：合成ピーク値（変数）
ｚ ：ＨｂＦピーク値（変数）
ａ_１：傾き（定数）
ｂ_１：切片（定数）

（２）第二実施形態
上記第一実施形態では、測定対象の血液検体にＨｂＡ１ｃが含まれることを前提としているが、ＨｂＡ１ｃが含まれない血液検体や、ＨｂＡ１ｃが検出されない血液検体では第一相関式にＨｂＡ１ｃピーク値を当て嵌めることができない。

そこで、第二実施形態のＨｂＦの測定方法では、上述の第一実施形態で示したように第一相関式をあらかじめ決定し、さらに、ＨｂＡ１ｃ及びＨｂＦを含むことが既知の第二の血液検体群を液体クロマトグラフィーに供して得られるクロマトグラムから、ＨｂＡ１ｃピーク値を前記第一相関式に当て嵌めて合成ピーク値を得て、当該第二の血液検体群の、ＨｂＡ１ａピーク及びＨｂＡ１ｂピークを含む合成ピーク値から前記合成ピーク値を減じて当該第二の血液検体群の修飾ＨｂＦピーク推定値を得て、当該第二の血液検体群のＨｂＦピーク値と前記修飾ＨｂＦピーク推定値との相関式である第二相関式をあらかじめ決定し、測定対象の血液検体を液体クロマトグラフィーに供して得られるクロマトグラムのＨｂＦピーク値を前記第二相関式に当て嵌めて修飾ＨｂＦピーク値を算出し、前記修飾ＨｂＦのピーク値を当該血液検体のＨｂＦピーク値に加算して当該ＨｂＦピーク値を補正する。

具体的には、まず、上述の第一実施形態で述べたとおりに、上記式（１）で表される第一相関式が決定される。

次いで、ＨｂＡ１ｃ及びＨｂＦがいずれも含まれることが既知である複数の血液検体のクロマトグラムについて、まずＨｂＡ１ｃピーク値を求め、これを上記式（１）の変数ｘに代入して、算出された変数ｙとして合成ピーク値が推定される。この算出された合成ピーク値を、クロマトグラムに表れた合成ピーク１０から得られた（すなわち、クロマトグラムに表れた合成ピーク１０を用いて測定された）合成ピーク値から減じることで、合成ピーク１０に含まれる修飾ＨｂＦピーク値が算出される。一方、同じクロマトグラムからＨｂＦピーク値を得て、このＨｂＦピーク値と、算出された修飾ＨｂＦピーク値との相関関係から、第二相関式を決定する。この第二相関式は、ＨｂＦピーク値を変数ｚとして、修飾ＨｂＦピーク値をｗとすれば、下記式（４）のように表される。

ｗ＝ａ_２ｚ＋ｂ_２ ・・・（４）
ｗ ：修飾ＨｂＦピーク値（変数）
ｚ ：ＨｂＦピーク値（変数）
ａ_２：傾き（定数）
ｂ_２：切片（定数）

そして、測定対象の血液検体から得たクロマトグラムからＨｂＦピーク値を求め、これを上記式（４）の変数ｚに代入して、変数ｗとして修飾ＨｂＦピーク値が算出される。そして、この算出された修飾ＨｂＦピーク値を、クロマトグラムから得られたＨｂＦピーク値に加算することで、当該ＨｂＦピーク値を補正して、血液検体中の真のＨｂＦピーク値が推定される。血液検体中の真のＨｂＦピーク値（ｖ）は下記式（５）のように表される。

ｖ＝ｚ＋ｗ＝ｚ＋（ａ_２ｚ＋ｂ_２） ・・・（５）
ｖ：真のＨｂＦピーク値（変数）
ｗ：修飾ＨｂＦピーク値（変数）
ｚ：ＨｂＦピーク値（変数）
ａ_２：傾き（定数）
ｂ_２：切片（定数）

なお、上述の第二相関式の代わりに、ＨｂＦピーク値と、補正ＨｂＦピーク値（ＨｂＦピーク値と修飾ＨｂＦピーク値との合計）との相関関係から、第三相関式を決定することとしてもよい。この第三相関式は、ＨｂＦピーク値を変数ｚとして、真のＨｂＦピーク値である補正ＨｂＦピーク値をｖとすれば、下記式（６）のように表される。

ｖ＝ａ_３ｚ＋ｂ_３ ・・・（６）
ｖ ：真のＨｂＦピーク値（変数）
ｚ ：ＨｂＦピーク値（変数）
ａ_３：傾き（定数）
ｂ_３：切片（定数）

そして、測定対象の血液検体から得たクロマトグラムからＨｂＦピーク値を求め、これを上記式（５）又は上記式（６）の変数ｚに代入して、算出された変数ｖとして、補正ＨｂＦピーク値、すなわち、血液検体中の真のＨｂＦピーク値が推定される。

（３）第三実施形態
上述の第一実施形態は、ＨｂＡ１ｃが含まれている血液検体に適している。また、上述の第二実施形態は、ＨｂＡ１ｃが含まれていない血液検体に適している。よって、クロマトグラムにＨｂＡ１ｃが含まれているか否かによって、上述の第一実施形態の測定方法と、上述の第二実施形態の測定方法とを使い分けるのが望ましい。

すなわち、第三実施形態のＨｂＦの測定方法では、上述の第一実施形態で示したように第一相関式をあらかじめ決定し、また、上述の第二実施形態で示したように第二相関式をあらかじめ決定する。そして、測定対象の血液検体を液体クロマトグラフィーに供して得られる対象クロマトグラムがＨｂＡ１ｃピークを有する場合、上述の第一実施形態で示したように当該血液検体のＨｂＦピーク値を補正する。一方、測定対象の血液検体を液体クロマトグラフィーに供して得られる対象クロマトグラムがＨｂＡ１ｃピークを有しない場合、上述の第一実施形態で示したように当該血液検体のＨｂＦピーク値を補正する。

（１）液体クロマトグラフィー装置
市販の高速液体クロマトグラフィーの装置に、メタクリル酸エステル共重合体からなる親水性ポリマーを充填した市販の陽イオン交換クロマトカラムを接続した。陽イオン交換クロマトカラムの下流の流路の所定の位置に、流路を流れるヘモグロビンの濃度を検出する光学検出器（具体的には吸光度計）を取り付けた。

（２）溶離液
３種類の溶離液を、下記表１に示すとおりの組成の水溶液として調整した。

なお、溶離液ＡはｐＨ５．０８に調整し、溶離液ＢはｐＨ８．０に調整し、溶離液ＣはｐＨ６．８２に調整した。これらの溶離液のヘモグロビンの溶出力は、溶離液Ａが最も小さく、溶離液Ｂが最も大きかった。

（３）クロマトグラム
上記（１）の液体クロマトグラフィー装置に溶離液Ａを流してカラムを平衡化した。その後、溶血した血液検体をカラムに導入した。その後、溶離液Ａを１３秒間流してＨｂＡ１ａ、ＨｂＡ１ｂ、ＨｂＦ及びＨｂＡ１ｃ溶出した。次いで、溶離液Ａ及び溶離液Ｃを１：９で混合した液を５秒間流してＨｂＡ０を溶出した。次いで、溶離液Ｃを５秒間流してＨｂＡ２を溶出した。そして、溶離液Ｂを２秒間流してカラムに残ったヘモグロビンを全て溶出したのち、溶離液Ａを５秒流した。この溶出の間、検出波長４２０ｎｍで光学検出器より得られた吸光度からクロマトグラムを作成した。

得られたクロマトグラムの例を、図４～図７に示す。これらの図からも明らかなように、ＨｂＦピーク２０の面積（ＨｂＦピーク値）が大きいほど、合成ピーク１０の面積（合成ピーク値）は大きくなった。よって、ＨｂＡ１ａピーク１１及びＨｂＡ１ｂピーク１２（図３参照）を含むことが知られている合成ピーク１０は、修飾ＨｂＦピーク１３（図３参照）を含むことが強く推測された。

（４）第一相関式
第一相関式を決定するために、健常者の血液検体（ＨｂＦピーク値が全ヘモグロビンのピーク値の１％未満を示す血液検体）６６人分を用意した。これらの血液検体からそれぞれクロマトグラムを得て、各々でＨｂＡ１ｃピーク値と合成ピーク値とを測定したところ、図８の散布図に示すような相関関係があることが分かった。なお、グラフの横軸はＨｂＡ１ｃピーク値を示し、縦軸は合成ピーク値（すなわち、ＨｂＡ１ａピーク値とＨｂＡ１ｂピーク値との合計）を示す。また、図８中の破線の直線で表される第一相関式は、ＨｂＡ１ｃピーク値を変数ｘとして、合成ピーク値を変数ｙとすると下記式（７）のとおりであった。この第一相関式の相関係数（ｒ）は０．８９５１であった。

ｙ＝０．１４７５ｘ＋０．８０４８ ・・・（７）
ｘ ：ＨｂＡ１ｃピーク値（変数）
ｙ ：合成ピーク値（変数）

なお、このようにＨｂＡ１ａとＨｂＡ１ｂとを含む合成ピーク１０とＨｂＡ１ｃピーク４０とが相関関係を示すのは、ＨｂＡ１ａ、ＨｂＡ１ｂ、ＨｂＡ１ｃはいずれもＨｂＡ０の糖化物であり、ＨｂＡ０の糖化によって生じるＨｂＡ１ａ、ＨｂＡ１ｂ、ＨｂＡ１ｃのそれぞれの比率はほぼ一定であるからだと推測される。

そして、測定対象の血液検体から得たクロマトグラムから、ＨｂＡ１ｃピーク値を測定して、これを変数ｘとして上記式（７）に代入して、変数ｙとしてＨｂＡ１ａピーク値とＨｂＡ１ｂピーク値との合計値（以下、「ＡＢ値」とする。）が算出される。クロマトグラムから測定された合成ピーク値とこのＡＢ値の差は修飾ＨｂＦピーク値に基づく。そこでこのＡＢ値を、クロマトグラムから測定された合成ピーク値から減じて、修飾ＨｂＦピーク値が算出される。そして、この算出された修飾ＨｂＦピーク値を、クロマトグラムから測定されたＨｂＦピーク値に加えた値が、当該血液検体の正しいＨｂＦピーク値であると推測される。

（２）第二相関式
第二相関式を決定するために、健常者の血液検体（ＨｂＦピーク値が全ヘモグロビンのピーク値の１％未満を示す血液検体）６６人分及び高ＨｂＦ症患者の血液検体４８人分を用意した。これらの血液検体からそれぞれクロマトグラムを得た。これらのクロマトグラムから、ＨｂＡ１ｃピーク値を測定して、これを変数ｘとして上記式（７）に代入して、変数ｙとしてＡＢ値を算出した。さらに、このＡＢ値を、クロマトグラムから測定された合成ピーク値から減じて、修飾ＨｂＦピーク値を算出した。そして、これらのクロマトグラムから測定されＨｂＦピーク値と、算出された修飾ＨｂＦピーク値との間には、図９の散布図に示すような相関関係があることが分かった。なお、グラフの横軸はＨｂＦピーク値を示し、縦軸は修飾ＨｂＦピーク値を示す。また、図９中の破線の直線で表される第二相関式は、ＨｂＦピーク値を変数ｚとして、修飾ＨｂＦピーク値を変数ｗとすると下記式（８）のとおりであった。この第一相関式の相関係数（ｒ）は０．９６９７であった。

ｗ＝０．２３２３ｚ ・・・（８）

そして、測定対象の血液検体から得たクロマトグラムから、ＨｂＦピーク値を測定して、それを変数ｚとして上記式（８）に代入して、変数ｗとして修飾ＨｂＦピーク値が算出される。そして、この算出された修飾ＨｂＦピーク値を、クロマトグラムから測定されたＨｂＦピーク値に加えた値が、当該血液検体の正しいＨｂＦピーク値であると推測される。

本発明は、液体クロマトグラフィーを用いた血液検体中のＨｂＦの測定に利用可能である。

１０ 合成ピーク
１１ ＨｂＡ１ａピーク
１２ ＨｂＡ１ｂピーク
１３ 修飾ＨｂＦピーク
２０ ＨｂＦピーク
３０ 不安定型ＨｂＡ１ｃピーク
４０ ＨｂＡ１ｃピーク
５０ ＨｂＡ０ピーク
６０ ＨｂＡ２ピーク

Claims (5)

1. ヘモグロビンＡ１ｃを含み、かつ、ヘモグロビンＦが全ヘモグロビンに対し所定の含有率未満であることが既知の第一の血液検体群を液体クロマトグラフィーに供して得られるクロマトグラムから、ヘモグロビンＡ１ｃピーク値と、ヘモグロビンＡ１ａピーク及びヘモグロビンＡ１ｂピークを含む合成ピーク値との相関式である第一相関式をあらかじめ決定し、
   測定対象の血液検体を液体クロマトグラフィーに供して得られるクロマトグラムのヘモグロビンＡ１ｃピーク値を前記第一相関式に当て嵌めて得られた合成ピーク値を、当該血液検体のヘモグロビンＡ１ａピーク及びヘモグロビンＡ１ｂピークを含む合成ピーク値から減じて修飾ヘモグロビンＦピーク値を算出し、
   前記修飾ヘモグロビンＦピーク値を当該血液検体のヘモグロビンＦピーク値に加算して当該ヘモグロビンＦピーク値を補正する、ヘモグロビンＦの測定方法。
2. ヘモグロビンＡ１ｃを含み、かつ、ヘモグロビンＦが全ヘモグロビンに対し所定の含有率未満であることが既知の第一の血液検体群を液体クロマトグラフィーに供して得られるクロマトグラムから、ヘモグロビンＡ１ｃピーク値と、ヘモグロビンＡ１ａピーク及びヘモグロビンＡ１ｂピークを含む合成ピーク値との相関式である第一相関式をあらかじめ決定し、
   ヘモグロビンＡ１ｃ及びヘモグロビンＦを含むことが既知の第二の血液検体群を液体クロマトグラフィーに供して得られるクロマトグラムから、ヘモグロビンＡ１ｃピーク値を前記第一相関式に当て嵌めて合成ピーク値を得て、当該第二の血液検体群の、ヘモグロビンＡ１ａピーク及びヘモグロビンＡ１ｂピークを含む合成ピーク値から前記合成ピーク値を減じて当該第二の血液検体群の修飾ヘモグロビンＦピーク推定値を得て、当該第二の血液検体群のヘモグロビンＦピーク値と前記修飾ヘモグロビンＦピーク推定値を用いて、ヘモグロビンＦピーク値と修飾ヘモグロビンＦピーク値との相関式である第二相関式をあらかじめ決定し、
   測定対象の血液検体を液体クロマトグラフィーに供して得られるクロマトグラムのヘモグロビンＦピーク値を前記第二相関式に当て嵌めて修飾ヘモグロビンＦピーク値を算出し、
   前記修飾ヘモグロビンＦピーク値を当該血液検体のヘモグロビンＦピーク値に加算して当該ヘモグロビンＦピーク値を補正する、ヘモグロビンＦの測定方法。
3. ヘモグロビンＡ１ｃを含み、かつ、ヘモグロビンＦが全ヘモグロビンに対し所定の含有率未満であることが既知の第一の血液検体群を液体クロマトグラフィーに供して得られるクロマトグラムから、ヘモグロビンＡ１ｃピーク値と、ヘモグロビンＡ１ａピーク及びヘモグロビンＡ１ｂピークを含む合成ピーク値との相関式である第一相関式をあらかじめ決定し、
   ヘモグロビンＡ１ｃ及びヘモグロビンＦを含むことが既知の第二の血液検体群を液体クロマトグラフィーに供して得られるクロマトグラムから、ヘモグロビンＡ１ｃピーク値を前記第一相関式に当て嵌めて合成ピーク値を得て、当該第二の血液検体群の、ヘモグロビンＡ１ａピーク及びヘモグロビンＡ１ｂピークを含む合成ピーク値から前記合成ピーク値を減じて当該第二の血液検体群の修飾ヘモグロビンＦピーク推定値を得て、当該第二の血液検体群のヘモグロビンＦピーク値と前記修飾ヘモグロビンＦピーク推定値を用いて、ヘモグロビンＦピーク値と修飾ヘモグロビンＦピーク値との相関式である第二相関式をあらかじめ決定し、
   測定対象の血液検体を液体クロマトグラフィーに供して得られるクロマトグラムがヘモグロビンＡ１ｃピークを有する場合、
   当該血液検体のヘモグロビンＡ１ｃピーク値を前記第一相関式に当て嵌めて得られた合成ピーク値を、当該血液検体のヘモグロビンＡ１ａピーク及びヘモグロビンＡ１ｂピークを含む合成ピーク値から減じて修飾ヘモグロビンＦピーク値を算出し、
   前記修飾ヘモグロビンＦピーク値を当該血液検体のヘモグロビンＦピーク値に加算して当該ヘモグロビンＦピーク値を補正し、
   測定対象の血液検体を液体クロマトグラフィーに供して得られるクロマトグラムがヘモグロビンＡ１ｃピークを有しない場合、
   当該血液検体のヘモグロビンＦピーク値を前記第二相関式に当て嵌めて修飾ヘモグロビンＦピーク値を算出し、
   前記修飾ヘモグロビンＦピーク値を当該血液検体のヘモグロビンＦピーク値に加算して当該ヘモグロビンＦピーク値を補正する、ヘモグロビンＦの測定方法。
4. 前記第二相関式の代わりに、当該第二の血液検体群のヘモグロビンＦピーク値と、当該ヘモグロビンＦピーク値及び前記修飾ヘモグロビンＦピーク推定値の合計値との相関式である第三相関式をあらかじめ決定し、
   測定対象の血液検体を液体クロマトグラフィーに供して得られるクロマトグラムのヘモグロビンＦピーク値を、前記第二相関式の代わりに前記第三相関式に当て嵌めて、当該ヘモグロビンＦピーク値を補正する、請求項２又は請求項３に記載のヘモグロビンＦの測定方法。
5. 前記液体クロマトグラフィーは陽イオン交換クロマトグラフィーである、請求項１から請求項４までのいずれか１項に記載の測定方法。