JP2023082151A - 核酸、当該核酸を含む組成物及び複合体ならびに調製方法と使用 - Google Patents

核酸、当該核酸を含む組成物及び複合体ならびに調製方法と使用 Download PDF

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Abstract

【課題】アンジオポエチン様タンパク質３遺伝子発現を抑制するｓｉＲＮＡ複合体、および該ｓｉＲＮＡ複合体を含む薬物組成物を提供する。【解決手段】ｓｉＲＮＡ及び該ｓｉＲＮＡに複合された複合基を含むｓｉＲＮＡ複合体であって、前記ｓｉＲＮＡがセンス鎖とアンチセンス鎖とを含み、前記ｓｉＲＮＡの各ヌクレオチドがそれぞれ独立して修飾又は未修飾のヌクレオチドであり、前記センス鎖は５’－ＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＡＡＣＵＺＡ－３’を含み、アンチセンス鎖は５’－Ｚ’ＢＡＧＵＵＣＵＵＧＧＵＧＣＵＣＵＵＧＧ－３’を含み、ここでＺＡはＡ、Ｕ、Ｇ又はＣから選択され、Ｚ’Ｂはアンチセンス鎖の５’末端の最初のヌクレオチドであってＺＡと相補的であり、且つ、前記センス鎖の長さが１９～２３ヌクレオチドであり、アンチセンス鎖の長さが２０～２６ヌクレオチドである、ｓｉＲＮＡ複合体である。【選択図】図１２Ｃ

Description

本開示は、核酸、当該核酸を含む組成物及び複合体ならびに調製方法と使用に関する。
脂質（血中脂質）異常は、高脂血症とも呼ばれ、脂肪代謝又は作動の異常により、血漿
脂質が正常値より高くなる全身性疾患であり、全世界の患者の健康に深刻な脅威を与えて
いる。従来の脂質異常治療薬としては、主にスタチン系、コレステロール吸収阻害剤、樹
脂系、プロブコール、フィブラート系及びニコチン酸並びにその誘導体がある。
アンジオポエチン様タンパク質３（ＡＮＧＰＴＬ３）は、主に肝臓に発現する分泌タン
パク質であり、アンジオポエチンと遺伝子構造が類似しているので命名される。従来の研
究によると、脂質異常がＡＮＧＰＴＬ３の高発現量に関連しており、ＡＮＧＰＴＬ３が脂
肪組織と結合してリポタンパク質リパーゼの活性を抑制することで脂質代謝を調節するこ
とが実証された。ＡＮＧＰＴＬ３の低発現により、脂質異常によるアテローム性動脈硬化
を軽減することができる。したがって、遺伝子レベルで遺伝子発現をサイレンシングさせ
、ＡＮＧＰＴＬ３の生成を遮断することを可能にすれば、最も理想的な治療手段となるこ
とが疑いない。また、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡ
、ｓｉＲＮＡ）は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ、ＲＮＡｉ）という
機構に基づき、興味あるいずれかの目的とする遺伝子の発現を配列特異的に抑制又は遮断
し、疾患を治療する目的を達成することができる。
低分子ＲＮＡ薬物の開発では、ｓｉＲＮＡの安定化修飾及びその送達系は、２つのキー
技術である。
いくつかの実施形態において、本開示は、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子発現を抑制できるｓｉ
ＲＮＡを提供し、当該ｓｉＲＮＡは、センス鎖とアンチセンス鎖を含み、前記ｓｉＲＮＡ
における各ヌクレオチドは、それぞれ独立して修飾又は未修飾のヌクレオチドであり、前
記センス鎖は、ヌクレオチド配列Ｉを含み、前記アンチセンス鎖は、ヌクレオチド配列Ｉ
Ｉを含み、前記ヌクレオチド配列Ｉと前記ヌクレオチド配列ＩＩとは、少なくとも一部で
逆相補的に二本鎖領域を形成し、前記ヌクレオチド配列Ｉはヌクレオチド配列Ａを含み、
前記ヌクレオチド配列Ａは、配列番号１に示されるヌクレオチド配列と長さが等しく、ヌ
クレオチド差異が３つ以下であり、前記ヌクレオチド配列ＩＩはヌクレオチド配列Ｂを含
み、前記ヌクレオチド配列Ｂは、配列番号２に示されるヌクレオチド配列と長さが等しく
、ヌクレオチド差異が３つ以下であり、
５’－ＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＡＡＣＵＺ－３’（配列番号１）、
５’－Ｚ’ＡＧＵＵＣＵＵＧＧＵＧＣＵＣＵＵＧＧ－３’（配列番号２）
ただし、ＺはＡであり、Ｚ’はＵである。
前記ヌクレオチド配列Ａには、位置がＺに対応するヌクレオチドＺＡが含まれ、前記ヌ
クレオチド配列Ｂには、位置がＺ’に対応するヌクレオチドＺ’Ｂが含まれ、前記Ｚ’Ｂ
は、前記アンチセンス鎖の５’末端の１番目のヌクレオチドである。
いくつかの実施形態において、本開示は、本開示のｓｉＲＮＡ及び薬学的に許容可能な
担体を含む薬物組成物を提供する。
いくつかの実施形態において、本開示は、本開示により提供されるｓｉＲＮＡ及び当該
ｓｉＲＮＡに複合して結合される複合基を含むｓｉＲＮＡ複合体（コンジュゲート）を提
供する。
いくつかの実施形態において、本開示は、本開示のｓｉＲＮＡ、及び／又は薬物組成物
及び／又はｓｉＲＮＡ複合体の、前記ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の異常発現による脂質異常の
治療及び／又は予防のための薬物の調製への使用を提供する。
いくつかの実施形態において、本開示は、本開示のｓｉＲＮＡ、及び／又は薬物組成物
及び／又はｓｉＲＮＡ複合体の有効量を脂質異常に罹患している被験体に投与することを
含む、脂質異常の治療及び／又は予防方法を提供する。
いくつかの実施形態において、本開示は、本開示のｓｉＲＮＡ、及び／又は薬物組成物
及び／又はｓｉＲＮＡ複合体の有効量を肝細胞と接触させることを含む、前記肝細胞にお
けるＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現の抑制方法を提供する。
いくつかの実施形態において、本開示は、本開示のｓｉＲＮＡ、及び／又は薬物組成物
及び／又はｓｉＲＮＡ複合体を含むキットを提供する。
[引用による組み込み]
本明細書で言及される全ての出版物、特許及び特許出願は、各々の出版物、特許及び特
許出願が特別にかつ個別に引用により本明細書に組み込まれるのと同じ程度に、引用によ
り本明細書に組み込まれる。
本開示により提供されるｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ複合体は、良好な安定性、高い遺伝子
抑制活性、非常に低いオフターゲット効果を有し、脂質レベルを顕著に低下させることが
できる。
いくつかの実施形態において、本開示により提供されるｓｉＲＮＡ、当該ｓｉＲＮＡを
含む組成物又はｓｉＲＮＡ複合体は、体内でより高い安定性及び／又はより高い活性を有
することができる。いくつかの実施形態において、本開示により提供されるｓｉＲＮＡ、
ｓｉＲＮＡ組成物又はｓｉＲＮＡ複合体は、体内で少なくとも２０％、３０％、４０％、
５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は９５％の標的遺伝子発現抑制率を示す。い
くつかの実施形態において、本開示により提供されるｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ組成物又は
ｓｉＲＮＡ複合体は、体内で少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０
％、８０％、９０％又は９５％のＡＮＧＰＴＬ３遺伝子発現抑制率を示す。いくつかの実
施形態において、本開示により提供されるｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ組成物又はｓｉＲＮＡ
複合体は、体内で少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％
、９０％又は９５％の肝内ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子発現抑制率を示す。いくつかの実施形態
において、本開示により提供されるｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ組成物又はｓｉＲＮＡ複合体
は、体内で少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０
％又は９５％の動物モデルにおける肝内ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子発現抑制率を示す。いくつ
かの実施形態において、本開示により提供されるｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ組成物又はｓｉ
ＲＮＡ複合体は、体内で少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、
８０％、９０％又は９５％のヒト被験体における肝内ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子発現抑制率を
示す。いくつかの実施形態において、本開示により提供されるｓｉＲＮＡ、当該ｓｉＲＮ
Ａを含む組成物又はｓｉＲＮＡ複合体は、明らかなオフターゲット効果を示していない。
オフターゲット効果は、例えば、標的遺伝子でない遺伝子の正常発現の抑制であってもよ
い。オフターゲット遺伝子発現の結合／抑制がオンターゲット遺伝子効果に比べて５０％
、４０％、３０％、２０％又は１０％を下回る場合、当該オフターゲット効果が顕著では
ないと考えられている。
いくつかの実施形態において、本開示により提供されるｓｉＲＮＡは、優れたＡＮＧＰ
ＴＬ３遺伝子発現抑制特性を示し、ｐｓｉＣＨＥＣＫ系においてｓｉＲＮＡを検出するＩ
Ｃ５０が３～３０ｐＭであり、５ｎＭであっても、本開示の修飾ｓｉＲＮＡにオフターゲ
ット効果が認められず、かつ、本開示の修飾ｓｉＲＮＡは、体外リソソーム溶解液におい
て良好な安定性を保ち、少なくとも２４時間分解されない。
いくつかの実施形態において、本開示により提供されるｓｉＲＮＡ複合体は、良好な安
定性を有し、体外リソソーム溶解液においても、ヒト血漿又はサル血漿においても一致し
た安定性を保つ。
いくつかの実施形態において、本開示により提供されるｓｉＲＮＡ複合体は、優れたＡ
ＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡ抑制効率を示し、脂質レベルを顕著に低下させる。例えば、いく
つかの実施形態において、単回皮下投与後１４日目に、マウスのＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮ
Ａ抑制率が９５％以上と高い。いくつかの実施形態において、単回皮下投与することによ
り、トリグリセリド（ＴＧ）の最大抑制率が９３％であり、総コレステロール（ＣＨＯ）
の最大抑制率が８３％であり、薬剤投与後１５４日目に、ＴＧに対する抑制率が５５％以
上に維持され、ＣＨＯに対する抑制率が４０％以上に維持されることができる。特に、従
来技術で提供される複合分子からなる複合体に比べて、本開示により提供されるｓｉＲＮ
Ａ複合体は、より優れた遺伝子抑制率、より高い脂質低下能力を示すとともに、低用量、
低投与頻度で、１８９日と長い実験期間にわたって優れた脂質抑制作用を示し続けること
ができる。
このように、本開示により提供されるｓｉＲＮＡ、薬物組成物及びｓｉＲＮＡ複合体は
、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を抑制し、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子過剰発現による脂質異常
を効率的に治療及び／又は予防することができ、応用において明るい見通しを有している
。
本開示の他の特徴と利点については、後述する発明を実施するための形態部分において
詳しく説明する。
本発明の実施例及び従来技術の技術的解決手段をより明瞭に説明するために、以下に、
実施例と従来技術に用いられる図面を簡単に説明する。以下に説明される図面は、単に本
発明のいくつかの実施例に過ぎず、当業者であれば、創造的な労力を要することなく、さ
らにこれらの図面により他の図面を得られることが明らかである。
ｓｉＲＮＡ ８の体外ｐｓｉＣＨＥＣＫ系におけるオンターゲット活性及びオフターゲット効果を示す。 ｓｉＲＮＡ １の体外ｐｓｉＣＨＥＣＫ系におけるオンターゲット活性及びオフターゲット効果を示す。 Ｈｕｈ７細胞系における本開示のｓｉＲＮＡによるＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡ発現量に対する抑制効果を示す。 Ｈｕｈ７細胞系における本開示のｓｉＲＮＡ複合体によるＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡ発現量に対する抑制効果を示す。 本開示のｓｉＲＮＡの体外でのマウス由来のリソソーム溶解液における安定性の半定量的検出結果を示す。 本開示のｓｉＲＮＡ複合体の体外でのマウス由来のリソソーム溶解液における安定性の半定量的検出結果を示す。 本開示のｓｉＲＮＡ複合体の体外でのヒト血漿における安定性の半定量的検出結果を示す。 本開示のｓｉＲＮＡ複合体の体外でのサル血漿における安定性の半定量的検出結果を示す。 本開示のｓｉＲＮＡ複合体による正常マウスＢＡＬＢ／ｃ脂質レベルに対する抑制効果を示す。 本開示のｓｉＲＮＡ複合体による正常マウスＢＡＬＢ／ｃ肝臓ＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡ発現量に対する抑制効果を示す。 本開示のｓｉＲＮＡ複合体による正常マウスＢＡＬＢ／ｃ脂質レベルに対する抑制効果を示す。 本開示のｓｉＲＮＡ複合体によるｏｂ／ｏｂマウスの脂質レベルに対する抑制効果を示す。 本開示のｓｉＲＮＡ複合体によるｏｂ／ｏｂマウスの肝臓ＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡ発現量に対する抑制効果を示す。 本開示のｓｉＲＮＡ複合体によるｏｂ／ｏｂマウスの脂質レベルに対する抑制効果を示す。 本開示のｓｉＲＮＡ複合体によるｏｂ／ｏｂマウスの肝臓ＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡ発現量に対する抑制効果を示す。 複合体１による高脂血症モデルマウスにおける血清トリグリセリド（ＴＧ）及び総コレステロール（ＣＨＯ）に対する経時的な抑制効果を示す。 異なる用量の複合体２による高脂血症モデルマウスにおける血清総コレステロール（ＣＨＯ）及びトリグリセリド（ＴＧ）に対する経時的な抑制効果を示す。 複合体２によるメタボリックシンドロームのサルにおける血清トリグリセリド（ＴＧ）及び総コレステロール（ＣＨＯ）に対する経時的な抑制効果を示す。 複合体２によるメタボリックシンドロームのサルにおけるＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡ発現量に対する抑制効果を示す。
以下に本開示の発明を実施するための形態を詳しく説明する。また、ここで説明される
発明を実施するための形態は、本開示を説明又は解釈するためのものに過ぎず、本開示を
制限するためのものではないと理解すべきである。
本開示において、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子とは、ｍＲＮＡ配列がＧｅｎｂａｎｋ登録番号
ＮＭ＿０１４４９５．３に示される遺伝子を指す。
[定義]
文脈において、特に説明がない限り、大文字Ｃ、Ｇ、Ｕ、Ａは、ヌクレオチドの塩基配
列を表し、小文字ｍは、当該文字ｍの左側に隣接する１つのヌクレオチドがメトキシ修飾
ヌクレオチドであることを表し、小文字ｆは、当該文字ｆの左側に隣接する１つのヌクレ
オチドがフルオロ修飾ヌクレオチドであることを表し、小文字ｓは、当該文字ｓの左右に
隣接する２つのヌクレオチド間がチオリン酸エステル基により結合されていることを表し
、Ｐ１は、当該Ｐ１の右側に隣接する１つのヌクレオチドが５’－リン酸ヌクレオチド又
は５’－リン酸アナログ修飾ヌクレオチドであることを表し、組合せ文字ＶＰは、当該組
合せ文字ＶＰの右側に隣接する１つのヌクレオチドがビニルリン酸エステル修飾ヌクレオ
チドであることを表し、組合せ文字Ｐｓは、当該組合せ文字Ｐｓの右側に隣接する１つの
ヌクレオチドがチオリン酸エステル修飾ヌクレオチドであることを表し、大文字Ｐは、当
該文字Ｐの右側に隣接する１つのヌクレオチドが５’－リン酸ヌクレオチドであることを
表す。
文脈において、前記「フルオロ修飾ヌクレオチド」とは、ヌクレオチドのリボース基の
２’位のヒドロキシ基がフッ素で置換されたヌクレオチドを指し、「非フルオロ修飾ヌク
レオチド」とは、ヌクレオチドのリボース基の２’位のヒドロキシ基が非フッ素基で置換
されたヌクレオチド又はヌクレオチドアナログを指す。「ヌクレオチドアナログ」とは、
核酸においてヌクレオチドの代わりとなることができるが、アデニンリボヌクレオチド、
グアニンリボヌクレオチド、シトシンリボヌクレオチド、ウラシルリボヌクレオチドまた
はチミンデオキシリボヌクレオチドと構造が異なる基を指し、例えば、イソヌクレオチド
、架橋ヌクレオチド（ｂｒｉｄｇｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ、ＢＮＡと略称される
）又は非環式ヌクレオチドがある。前記「メトキシ修飾ヌクレオチド」とは、リボース基
の２’－ヒドロキシ基がメトキシで置換されたヌクレオチドを指す。
本明細書の文脈において、「相補」又は「逆相補」という用語は、互換的に使用されて
もよく、当業者に周知の意味、即ち、二本鎖核酸分子において、一方の鎖の塩基と他方の
鎖上の塩基とが相補的に対合するという意味を有する。ＤＮＡにおいて、プリン塩基であ
るアデニン（Ａ）は、常にピリミジン塩基であるチミン（Ｔ）（又は、ＲＮＡにおいてウ
ラシル（Ｕ）である）と対合し、プリン塩基であるグアニン（Ｃ）は、常にピリミジン塩
基であるシトシン（Ｇ）と対合する。各塩基対は、いずれも１つのプリンと１つのピリミ
ジンを含む。一方の鎖上のアデニンが常に他方の鎖上のチミン（又はウラシル）と対合す
るとともに、グアニンが常にシトシンと対合する場合、両方の鎖同士が相補的である、ま
たその相補鎖の配列から当該鎖の配列を推知できると考えられる。これに応じて、「ミス
マッチ」は、本分野では、二本鎖核酸において、対応する位置での塩基が相補的に対合し
て存在しないことを意味する。
文脈において、特に説明がない限り、「基本的に逆相補的」とは、関連する２つのヌク
レオチド配列間に３つ以下の塩基ミスマッチが存在することを指し、「実質的に逆相補的
」とは、２つのヌクレオチド配列間に１つ以下の塩基ミスマッチが存在することを指し、
「完全に相補的」とは、２つのヌクレオチド配列間に塩基ミスマッチが存在しないことを
指す。
文脈において、一方のヌクレオチド配列と他方のヌクレオチド配列に「ヌクレオチド差
異」が存在するとは、前者が後者に比べて、同じ位置のヌクレオチドの塩基種類が変化し
たことを指し、例えば、後者において１つのヌクレオチド塩基がＡであるとき、前者の同
じ位置での、対応するヌクレオチド塩基がＵ、Ｃ、Ｇ又はＴである場合に、当該位置で２
つのヌクレオチド配列間にヌクレオチド差異が存在すると認められている。いくつかの実
施形態において、元の位置のヌクレオチドの代わりに無塩基ヌクレオチド又はその等価物
を用いる場合、当該位置でヌクレオチド差異が生じたとも考えられる。
文脈において、特に本開示のｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡを含む組成物又はｓｉＲＮＡ複合
体の調製方法を説明する際に、特に説明がない限り、前記ヌクレオシドモノマー（ｎｕｃ
ｌｅｏｓｉｄｅ ｍｏｎｏｍｅｒ）とは、調製するｓｉＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ複合体にお
けるヌクレオチドの種類と手順に応じてホスホルアミダイト固相合成に用いられる修飾又
は未修飾のヌクレオシドホスホルアミダイトモノマー（ｕｎｍｏｄｉｆｉｅｄ ｏｒ ｍ
ｏｄｉｆｉｅｄ ＲＮＡ ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅｓ。ＲＮＡ ｐｈｏｓｐｈｏ
ｒａｍｉｄｉｔｅｓをＮｕｃｌｅｏｓｉｄｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅｓともい
うことがある）を指す。ホスホルアミダイト固相合成は、当業者に公知のＲＮＡ合成に用
いられる方法である。本開示に用いられるヌクレオシドモノマーは、いずれも市販品とし
て購入可能である。
本開示の文脈において、特に説明がない限り、「複合」とは、それぞれ特定の機能を有
する２つ以上の化学部分間が共有結合的に互いに結合することを指し、これに応じて、「
複合体」とは、当該各化学部分間が共有結合的に結合することにより形成された化合物を
指す。さらには、「ｓｉＲＮＡ複合体」は、特定の機能を有する１又は複数の化学部分が
ｓｉＲＮＡに共有結合的に結合して形成された化合物を表す。以下の文章では、本開示の
ｓｉＲＮＡ複合体を単に「複合体」ともいうことがある。ｓｉＲＮＡ複合体は、文脈によ
り、ｓｉＲＮＡ複合体の総称、式（３０５）及び式（３０７）に示されるｓｉＲＮＡ複合
体の総称、又は式（３０５）、式（３０７）、式（３０８）に示されるｓｉＲＮＡ複合体
であると理解される。本開示の文脈において、「複合分子」は、反応させることによりｓ
ｉＲＮＡに複合され、最終的に本開示のｓｉＲＮＡ複合体を形成することができる特定の
化合物であると理解すべきである。
本明細書で用いられる場合、２つのアルファベット文字間又は記号間のものでないダッ
シュ（「－」）は、置換基の結合点の位置を示すために用いられている。例えば、－Ｃ１
－Ｃ１０アルキル－ＮＨ２は、Ｃ１－Ｃ１０アルキル基により結合する。
本明細書で用いられる場合、「任意の」又は「任意に」とは、続いて記載する事象又は
状況が発生してもよく、発生しなくてもよいこと、並びに前記記載が事象又は状況が発生
した場合と発生しない場合を含むことを指す。例えば、「任意に置換されたアルキル」は
、以下の文章で定義される「アルキル」及び「置換アルキル」を含む。１又は複数の置換
基を含む任意の基に関して、これらの基が、立体的に非現実的な、合成上実行不可能な及
び／又は本質的に不安定な、いかなる置換又は置換パターンも導入することは意図されな
いと、当業者に理解される。
本明細書で用いられる場合、「アルキル」とは、特定の数の炭素原子を有する直鎖と分
岐鎖を指し、前記特定の数は、通常１～２０個の炭素原子、例えば、１～１０個の炭素原
子、１～８個又は１～６個の炭素原子である。例えば、Ｃ１－Ｃ６アルキルは、１～６個
の炭素原子の直鎖と分岐鎖アルキルを含む。特定の数の炭素を有するアルキル残基を命名
する場合、当該数の炭素を有する全ての分岐鎖及び直鎖形式を含むことを意図する。した
がって、例えば、「ブチル」は、ｎ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、イソブチル及びｔｅｒｔ
－ブチルを含むことを意味し、「プロピル」は、ｎ－プロピル及びイソプロピルを含む。
アルキレンは、アルキルのサブセットであり、アルキルと同じであるが２つの結合点を有
する残基を指す。
本明細書で用いられる場合、「アルケニル」とは、少なくとも１つの炭素－炭素二重結
合を有する不飽和分岐鎖又は直鎖アルキルを指し、前記炭素－炭素二重結合は、親アルキ
ルの隣接する炭素原子から１つの水素分子を除去することにより得られる。当該基は、二
重結合のシス又はトランス配置にあってもよい。典型的なアルケニルとしては、ビニルと
、プロパ－１－エン－１－イル、プロパ－１－エン－２－イル、プロパ－２－エン－１－
イル（アリル）、プロパ－２－エン－２－イル等のプロペニルと、ブタ－１－エン－１－
イル、ブタ－１－エン－２－イル、２－メチルプロパ－１－エン－１－イル、ブタ－２－
エン－１－イル、ブタ－２－エン－２－イル、ブタ－１，３－ジエン－１－イル、ブタ－
１，３－ジエン－２－イル等のブテニルと、を含むが、これらに限定されない。ある実施
形態において、アルケニルは２～２０個の炭素原子を有するが、他の実施形態においては
、２～１０個、２～８個又は２～６個の炭素原子を有する。アルケニレンは、アルケニル
のサブセットであり、アルケニルと同じであるが２つの結合点を有する残基を指す。
本明細書で用いられる場合、「アルキニル」とは、少なくとも１つの炭素－炭素三重結
合を有する不飽和分岐鎖又は直鎖アルキル基を指し、前記炭素－炭素三重結合は、親アル
キルの隣接する炭素原子から２つの水素分子を除去することにより得られる。典型的なア
ルキニルとしては、エチニルと、プロパ－１－イン－１－イル、プロパ－２－イン－１－
イル等のプロピニルと、ブタ－１－イン－１－イル、ブタ－１－イン－３－イル、ブタ－
３－イン－１－イル等のブチニルと、を含むが、これらに限定されない。ある実施形態に
おいて、アルキニルは２～２０個の炭素原子を有するが、他の実施形態においては、２～
１０、２～８又は２～６個の炭素原子を有する。アルキニレンは、アルキニルのサブセッ
トであり、アルキニルと同じであるが２つの結合点を有する残基を指す。
本明細書で用いられる場合、「アルコキシ」とは、酸素橋により結合した特定の数の炭
素原子のアルキルを指し、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、
ｎ－ブトキシ、ｓｅｃ－ブトキシ、ｔｅｒｔ－ブトキシ、ペンチルオキシ、２－ペンチル
オキシ、イソペンチルオキシ、ネオペンチルオキシ、ヘキシルオキシ、２－ヘキシルオキ
シ、３－ヘキシルオキシ、３－メチルペンチルオキシ等がある。アルコキシは、通常１～
１０個、１～８個、１～６個又は１～４個の、酸素橋により結合した炭素原子を有する。
本明細書で用いられる場合、「アリール」とは、芳香族単環式又は多環式炭化水素環系
から誘導される、環炭素原子から水素原子を除去して形成された基を指す。前記芳香族単
環式又は多環式炭化水素環系は、水素及び６～１８個の炭素原子の炭素のみを含有し、こ
の環系中の環の少なくとも１つは完全不飽和であり、即ち、それは、ヒュッケル理論に従
う環状、非局在化（４ｎ＋２）π－電子系を含む。アリールとしては、フェニル、フルオ
レニル及びナフチル等の基を含むが、これらに限定されない。アリーレンは、アリールの
サブセットであり、アリールと同じであるが２つの結合点を有する残基を指す。
本明細書で用いられる場合、「シクロアルキル」とは、通常３～７個の環状炭素原子を
有する非芳香族炭素環を指す。環は、飽和であってもよいし、１又は複数の炭素－炭素二
重結合を有してもよい。シクロアルキルの実例としては、シクロプロピル、シクロブチル
、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル及びシクロヘキセニル、並びにノ
ルボルナン（ｎｏｒｂｏｒｎａｎｅ）等の架橋及びカゴ状環状基を含む。
本明細書で用いられる場合、「ハロゲン置換基」又は「ハロ」とは、フルオロ、クロロ
、ブロモ及びヨードを指し、用語「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素を含む
。
本明細書で用いられる場合、「ハロゲン化アルキル」とは、特定の数の炭素原子が１又
は複数、最大許容数までのハロゲン原子で置換された、上記のように定義されるアルキル
基を指す。ハロゲン化アルキルの実例としては、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル
、２－フルオロエチル及びペンタフルオロエチルを含むが、これらに限定されない。
「複素環基」とは、２～１２個の炭素原子と、窒素、酸素及び硫黄から選択される１～
６個のヘテロ原子とを含む、安定した３～１８員非芳香族環状基を指す。明細書において
特に説明がない限り、複素環基は、単環、二環、三環又は四環系であり、縮合環又は架橋
環系を含んでもよい。複素環式ラジカルにおけるヘテロ原子は、任意に酸化されてもよい
。１又は複数の窒素原子（存在する場合）は、任意に４級化される。複素環基は、一部飽
和又は完全飽和である。複素環基は、環の任意の原子を介して分子の残りの部分に結合す
ることができる。このような複素環基の実例としては、ジオキサニル、チオフェニル［１
，３］ジスルホニル、デカヒドロイソキノリニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、
イソチアゾリジニル、イソオキサゾリジニル、モルホリニル、オクタヒドロインドール、
オクタヒドロイソインドール、２－オキサピペラジニル、２－オキサピペリジル、２－オ
キサピリミジニル、オキサゾリジニル、ピペリジル、ピペラジニル、４－ピペリドニル、
ピロリジニル、ピラゾリジル、キヌクリジニル、チアゾリジニル、テトラヒドロフリル、
トリスルホニル、テトラヒドロピラニル、チオモルホリニル、チアモルホリニル、１－オ
キソチオモルホリニル及び１，１－ジオキソチオモルホリニルを含むが、これらに限定さ
れない。
「ヘテロアリール」とは、２個～１７個の炭素原子と、窒素、酸素及び硫黄から選択さ
れる１～６個のヘテロ原子とを含む、３～１８員芳香環ラジカルから誘導される基を指す
。本明細書で用いられる場合、ヘテロアリールは、単環、二環、三環又は四環系であって
もよく、この環系中の環の少なくとも１つは完全不飽和であり、即ち、それは、ヒュッケ
ル理論に従う環状非局在化（４ｎ＋２）π－電子系を含む。ヘテロアリールは、縮合環又
は架橋環系を含む。ヘテロアリールにおけるヘテロ原子は任意に酸化される。１又は複数
の窒素原子（存在する場合）は、任意に４級化される。ヘテロアリールは、環中の任意の
原子を介して分子の残りの部分に結合する。ヘテロアリールの実例としては、アゼピニル
、アクリジニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾインドール、１，３－ベンゾジオキサゾリ
ル、ベンゾフリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾ［ｄ］チアゾリル、ベンゾチアジアゾリ
ル、ベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキサゾリル、ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゾリル、１
，４－ベンゾジオキサゾリル、ベンゾナフトフラニル、ベンゾジアゾリル、ベンゾジオキ
サフェニル、ベンゾピラニル、ベンゾピラノニル、ベンゾフリル、ベンゾフラノニル、ベ
ンゾチオフェニル、ベンゾチエノ［３，２－ｄ］ピリミジニル、ベンゾトリアゾリル、ベ
ンゾ［４，６］イミダゾ［１，２－ａ］ピリジル、カルバゾリル、シンノリル、シクロペ
ンタ［ｄ］ピリミジニル、６，７－ジヒドロ－５Ｈ－シクロペンタ［４，５］チエノ［２
，３－ｄ］ピリミジニル、５，６－ジヒドロベンゾ［ｈ］キナゾリニル、５，６－ジヒド
ロベンゾ［ｈ］シンノリニル、６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ
［１，２－ｃ］ピリダジニル、ジベンゾフリル、ジベンゾチオフェニル、フリル、フラノ
ニル、フロ［３，２－ｃ］ピリジル、５，６，７，８，９，１０－ヘキサヒドロシクロヘ
プタ［ｄ］ピリミジニル、５，６，７，８，９，１０－ヘキサヒドロシクロオクタ［ｄ］
ピリダジニル、５，６，７，８，９，１０－ヘキサヒドロシクロオクタ［ｄ］ピリジル、
イソチアゾリル、インダゾリル、イミダゾリル、インドール、イソインドール、インドリ
ニル、イソインドリニル、イソキノリル、インドリジニル、イソオキサゾリル、５，８－
メタノ－５，６，７，８－テトラヒドロキナゾリニル、ナフチリジノニル、１，６－ナフ
チリジノニル、オキサジアゾリル、２－オキソアゼピニル、オキサゾリル、オキシラニル
、５，６，６ａ，７，８，９，１０，１０ａ－オクタヒドロベンゾ［Ｈ］キナゾリニル、
１－フェニル－１Ｈ－ピロリル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、
フタロイル、プテリジニル、プリニル、ピロリル、ピラゾリル、ピラゾロ［３，４－ｄ］
ピリミジニル、ピリジル、ピリド［３，２－ｄ］ピリミジニル、ピリド［３，４－ｄ］ピ
リミジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピロリル、キナゾリニル、キノ
キサリニル、キノリル、イソキノリル、テトラヒドロキノリル、５，６，７，８－テトラ
ヒドロキナゾリニル、５，６，７，８－テトラヒドロベンゾ［４，５］チエノ［２，３－
ｄ］ピリミジニル、６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－シクロヘプタ［４，５］チエ
ノ［２，３－ｄ］ピリミジニル、５，６，７，８－テトラヒドロピリド［４，５－ｃ］ピ
リダジニル、チアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、トリアジニル
、チエノ［２，３－ｄ］ピリミジニル、チエノ［３，２－ｄ］ピリミジニル、チエノ［２
，３－ｃ］プリジニル及びチオフェニルを含むが、これらに限定されない。
本開示において各種のヒドロキシ保護基を用いることができる。一般的には、保護基は
、化学官能性（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ）を特定の反応条件に不敏感にすること
ができ、且つ分子の他の部分を実質的に損傷することなく分子中の当該官能性に付加する
、及びそれから除去することができる。代表的なヒドロキシ保護基は、Ｂｅａｕｃａｇｅ
ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９９２，４８，２２２３～２３１１、及びＧｒｅｅｎｅ
ａｎｄ Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙ
ｎｔｈｅｓｉｓ，Ｃｈａｐｔｅｒ ２，２ｄ ｅｄ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎ
ｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１に開示されており、引用により、上記文献は、全体とし
て本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態において、保護基は、塩基性条件で安定
しているが、酸性条件で除去されることができる。いくつかの実施形態において、本明細
書で使用できるヒドロキシ保護基の非排他的実例としては、ジメトキシトリチル（ＤＭＴ
）、モノメトキシトリチル、９－フェニルキサンテン－９－イル（Ｐｉｘｙｌ）「９－ｐ
ｈｅｎｙｌｘａｎｔｈｅｎ－９－ｙｌ（Ｐｉｘｙｌ）」及び９－（ｐ－メトキシフェニル
）キサンテン－９－イル（Ｍｏｘ）「９－（ｐ－ｍｅｔｈоｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｘａｎｔ
ｈｅｎ－９－ｙｌ（Ｍｏｘ）」を含む。いくつかの実施形態において、本明細書で使用で
きるヒドロキシ保護基の非排他的実例としては、Ｔｒ（トリチル）、ＭＭＴｒ（４－メト
キシトリチル）、ＤＭＴｒ（４，４’－ジメトキシトリチル）及びＴＭＴｒ（４，４’，
４’’－トリメトキシトリチル）を含む。
「被験体」という用語は、本明細書で用いられる場合、任意の動物、例えば、哺乳動物
又は有袋動物を指す。本開示の主題としては、ヒト、非ヒト霊長類（例えば、アカゲザル
又は他の種類のマカク属のサル）、マウス、ブタ、ウマ、ロバ、ウシ、ヒツジ、ラット及
び任意の種類の家禽を含むが、これらに限定されない。
本明細書で用いられる場合、「治療」、「軽減」又は「改善」は、ここで互換的に使用
されてもよい。これらの用語は、有益な又は所望の結果を得る方法を指し、治療効果を含
むが、これに限定されない。「治療効果」は、治療される潜在的障害を根絶又は改善する
ことを意味する。また、治療効果は、被験体が依然として潜在的障害の苦痛を受ける可能
性があるにもかかわらず、潜在的障害に関連する１又は複数の生理的症状を根絶又は改善
することにより、被験体に改善が観察されて得られる。
本明細書で用いられる場合、「防止」と「予防」は互換的に使用されてもよい。これら
の用語は、有益又は所望の結果を得る方法を指し、予防効果を含むが、これに限定されな
い。「予防効果」を得るために、当該疾患に対する診断が行っていないかもしれないが、
複合体又は組成物を特定の疾患に罹患するリスクのある被験体に投与し、又は疾患の１又
は複数の病理学的症状が報告された被験体に投与することができる。
＜ｓｉＲＮＡ＞
本開示は、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子発現を抑制できるｓｉＲＮＡを提供する。
本開示のｓｉＲＮＡは、基本的な構造単位としてヌクレオチド基を含み、前記ヌクレオ
チド基がリン酸基、リボース基及び塩基を含むことは、当業者に公知であるので、ここで
説明を省略する。
本開示のｓｉＲＮＡは、センス鎖とアンチセンス鎖を含み、前記ｓｉＲＮＡにおける各
ヌクレオチドは、それぞれ独立して修飾又は未修飾のヌクレオチドであり、前記センス鎖
は、ヌクレオチド配列Ｉを含み、前記アンチセンス鎖は、ヌクレオチド配列ＩＩを含み、
前記ヌクレオチド配列Ｉと前記ヌクレオチド配列ＩＩとは、少なくとも一部で逆相補的に
二本鎖領域を形成し、前記ヌクレオチド配列Ｉはヌクレオチド配列Ａを含み、前記ヌクレ
オチド配列Ａは、配列番号１に示されるヌクレオチド配列と長さが等しく、ヌクレオチド
差異が３つ以下であり、前記ヌクレオチド配列ＩＩはヌクレオチド配列Ｂを含み、前記ヌ
クレオチド配列Ｂは、配列番号２に示されるヌクレオチド配列と長さが等しく、ヌクレオ
チド差異が３つ以下である。
５’－ＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＡＡＣＵＺ－３’（配列番号１）、
５’－Ｚ’ＡＧＵＵＣＵＵＧＧＵＧＣＵＣＵＵＧＧ－３’（配列番号２）
ただし、ＺはＡであり、Ｚ’はＵである。
前記ヌクレオチド配列Ａに、位置がＺに対応するヌクレオチドＺＡが含まれ、前記ヌク
レオチド配列Ｂに、位置がＺ’に対応するヌクレオチドＺ’Ｂが含まれ、前記Ｚ’Ｂは、
前記アンチセンス鎖の５’末端の１番目のヌクレオチドである。
文脈において、「位置が対応する」とは、ヌクレオチド配列の同一端から、ヌクレオチ
ド配列において同じ位置にあることを指す。例えば、ヌクレオチド配列Ａの３’端の１番
目のヌクレオチドは、位置が配列番号１の３’端の１番目のヌクレオチドに対応するヌク
レオチドである。
いくつかの実施形態において、前記センス鎖は、ヌクレオチド配列Ｉのみを含み、前記
アンチセンス鎖は、ヌクレオチド配列ＩＩのみを含む。
いくつかの実施形態において、前記ヌクレオチド配列Ａと配列番号１に示されるヌクレ
オチド配列との間のヌクレオチド差異が１つ以下であり、及び／又は前記ヌクレオチド配
列Ｂと配列番号２に示されるヌクレオチド配列との間のヌクレオチド差異が１つ以下であ
る。
いくつかの実施形態において、前記ヌクレオチド配列Ｂと配列番号２に示されるヌクレ
オチド配列との間のヌクレオチド差異は、Ａ、Ｃ又はＧから選択されるＺ’Ｂの位置の差
異を含む。いくつかの実施形態において、前記ヌクレオチド差異は、Ａ、Ｃ又はＧから選
択されるＺ’Ｂの位置の差異である。いくつかの実施形態において、ＺＡは、Ｚ’Ｂと相
補的なヌクレオチドである。これらのヌクレオチド差異により、ｓｉＲＮＡ複合体による
標的遺伝子抑制能力を顕著に低下させることがなく、これらのヌクレオチド差異を含むｓ
ｉＲＮＡ複合体も、本開示の保護範囲内にある。
いくつかの実施形態において、前記ヌクレオチド配列Ａと前記ヌクレオチド配列Ｂは、
基本的に逆相補的、実質的に逆相補的又は完全に逆相補的であり、前記基本的に逆相補的
とは、２つのヌクレオチド配列間に３つ以下の塩基ミスマッチが存在することを指し、前
記実質的に逆相補的とは、２つのヌクレオチド配列間に１つ以下の塩基ミスマッチが存在
することを指し、完全に逆相補的とは、２つのヌクレオチド配列間にミスマッチがないこ
とを指す。
いくつかの実施形態において、ヌクレオチド配列Ａは、配列番号３に示されるヌクレオ
チド配列であり、ヌクレオチド配列Ｂは、配列番号４に示されるヌクレオチド配列である
。
５’－ＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＡＡＣＵＺＡ－３’（配列番号３）、
５’－Ｚ’ＢＡＧＵＵＣＵＵＧＧＵＧＣＵＣＵＵＧＧ－３’（配列番号４）
ここで、前記Ｚ’Ｂは、アンチセンス鎖の５’末端の１番目のヌクレオチドであり、Ｚ
Ａは、Ａ、Ｕ、Ｇ又はＣから選択され、Ｚ’Ｂは、ＺＡと相補的なヌクレオチドであり、
いくつかの実施形態において、ＺＡはＡであり、Ｚ’ＢはＵであり、
前記センス鎖とアンチセンス鎖とは、長さが同じか又は異なり、前記センス鎖の長さが
１９～２３ヌクレオチドであり、アンチセンス鎖の長さが２０～２６ヌクレオチドである
。このように、本開示により提供されるｓｉＲＮＡのセンス鎖とアンチセンス鎖の長さ比
が、１９／２０、１９／２１，１９／２２、１９／２３、１９／２４、１９／２５、１９
／２６、２０／２０、２０／２１、２０／２２、２０／２３、２０／２４、２０／２５、
２０／２６、２１／２０、２１／２１、２１／２２、２１／２３、２１／２４、２１／２
５、２１／２６、２２／２０、２２／２１、２２／２２、２２／２３、２２／２４、２２
／２５、２２／２６、２３／２０、２３／２１、２３／２２、２３／２３、２３／２４、
２３／２５又は２３／２６であってもよい。いくつかの実施形態において、前記ｓｉＲＮ
Ａのセンス鎖とアンチセンス鎖の長さ比が１９／２１、２１／２３又は２３／２５である
。
いくつかの実施形態において、本開示は、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子発現を抑制できるｓｉ
ＲＮＡを提供する。当該ｓｉＲＮＡは、センス鎖とアンチセンス鎖を含み、前記ｓｉＲＮ
Ａにおける各ヌクレオチドは、それぞれ独立して修飾又は未修飾のヌクレオチドであり、
前記センス鎖は、ヌクレオチド配列Ｉを含み、前記アンチセンス鎖は、ヌクレオチド配列
ＩＩを含み、配列番号３に示されるヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列Ｉと、配列
番号４に示されるヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列ＩＩとは、逆相補的に二本鎖
領域を形成する。
５’－ＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＡＡＣＵＺＡ－３’（配列番号３）、
５’－Ｚ’ＢＡＧＵＵＣＵＵＧＧＵＧＣＵＣＵＵＧＧ－３’（配列番号４）
ここで、前記Ｚ’Ｂは、アンチセンス鎖の５’末端の１番目のヌクレオチドであり、Ｚ
Ａは、Ａ、Ｕ、Ｇ又はＣから選択され、Ｚ’Ｂは、ＺＡと相補的なヌクレオチドであり、
いくつかの実施形態において、ＺＡはＡであり、Ｚ’ＢはＵであり、
前記センス鎖とアンチセンス鎖とは、長さが同じか又は異なり、前記センス鎖の長さが
１９～２３ヌクレオチドであり、アンチセンス鎖の長さが２０～２６ヌクレオチドである
。このように、本開示により提供されるｓｉＲＮＡのセンス鎖とアンチセンス鎖の長さ比
が、１９／２０、１９／２１，１９／２２、１９／２３、１９／２４、１９／２５、１９
／２６、２０／２０、２０／２１、２０／２２、２０／２３、２０／２４、２０／２５、
２０／２６、２１／２０、２１／２１、２１／２２、２１／２３、２１／２４、２１／２
５、２１／２６、２２／２０、２２／２１、２２／２２、２２／２３、２２／２４、２２
／２５、２２／２６、２３／２０、２３／２１、２３／２２、２３／２３、２３／２４、
２３／２５又は２３／２６であってもよい。いくつかの実施形態において、前記ｓｉＲＮ
Ａのセンス鎖とアンチセンス鎖の長さ比が１９／２１、２１／２３又は２３／２５である
。
いくつかの実施形態において、前記センス鎖とアンチセンス鎖とは、長さが同じであり
、前記ヌクレオチド配列Ｉは、ヌクレオチド配列ＩＩＩをさらに含み、前記ヌクレオチド
配列ＩＩは、ヌクレオチド配列ＩＶをさらに含み、ヌクレオチド配列ＩＩＩとヌクレオチ
ド配列ＩＶは、長さがそれぞれ独立して１～４ヌクレオチドであり、前記ヌクレオチド配
列ＩＩＩは、ヌクレオチド配列Ａの５’末端に結合され、前記ヌクレオチド配列ＩＶは、
ヌクレオチド配列Ｂの３’末端に結合され、前記ヌクレオチド配列ＩＩＩと前記ヌクレオ
チド配列ＩＶは、長さが等しい。
前記ヌクレオチド配列ＩＩＩとヌクレオチド配列ＩＶは、相補的であってよく、相補的
でなくてもよく、ｓｉＲＮＡの安定性を向上させるために、いくつかの実施形態において
、ヌクレオチド配列ＩＩＩとヌクレオチド配列ＩＶは、少なくとも一部相補的であり、い
くつかの実施形態において、ヌクレオチド配列ＩＩＩとヌクレオチド配列ＩＶは、８０％
以上又は９０％以上の塩基が相補的であり、いくつかの実施形態において、ヌクレオチド
配列ＩＩＩとヌクレオチド配列ＩＶは、実質的に逆相補的又は完全に逆相補的である。前
記実質的に逆相補的とは、２つのヌクレオチド配列間に１つ以下の塩基ミスマッチが存在
することを指し、完全に逆相補的とは、２つのヌクレオチド配列間にミスマッチがないこ
とを指し、いくつかの実施形態において、ヌクレオチド配列ＩＩＩとヌクレオチド配列Ｉ
Ｖは完全に逆相補的である。これにより、前記ｓｉＲＮＡのセンス鎖とアンチセンス鎖は
、長さが等しく、その長さ比が２０／２０、２１／２１、２２／２２又は２３／２３であ
る。いくつかの実施形態において、前記ｓｉＲＮＡのセンス鎖とアンチセンス鎖の長さ比
が２１／２１又は２３／２３である。
いくつかの実施形態において、前記ヌクレオチド配列ＩＩＩとヌクレオチド配列ＩＶは
、長さがいずれも１ヌクレオチドであり、ヌクレオチド配列ＩＩＩの塩基がＧであり、ヌ
クレオチド配列ＩＶの塩基がＣであり、このとき、センス鎖とアンチセンス鎖の長さ比が
２０／２０であり、或いは、ヌクレオチド配列ＩＩＩとＩＶは、長さがいずれも２ヌクレ
オチドであり、５’末端から３’末端に向かって、ヌクレオチド配列ＩＩＩの塩基配列が
ＡＧであり、ヌクレオチド配列ＩＶの塩基配列がＣＵであり、このとき、センス鎖とアン
チセンス鎖の長さ比が２１／２１であり、或いは、ヌクレオチド配列ＩＩＩとＩＶは、長
さがいずれも３ヌクレオチドであり、５’末端から３’末端に向かって、ヌクレオチド配
列ＩＩＩの塩基配列がＡＡＧであり、ヌクレオチド配列ＩＶの塩基配列がＣＵＵであり、
このとき、センス鎖とアンチセンス鎖の長さ比が２２／２２であり、或いは、ヌクレオチ
ド配列ＩＩＩとＩＶは、長さがいずれも４ヌクレオチドであり、５’末端から３’末端に
向かって、ヌクレオチド配列ＩＩＩの塩基配列がＣＡＡＧであり、ヌクレオチド配列ＩＶ
の塩基配列がＣＵＵＧであり、このとき、センス鎖とアンチセンス鎖の長さ比が２３／２
３である。いくつかの実施形態において、前記ヌクレオチド配列ＩＩＩとヌクレオチド配
列ＩＶは、長さが２ヌクレオチドであり、５’末端から３’末端に向かって、ヌクレオチ
ド配列ＩＩＩの塩基配列がＡＧであり、ヌクレオチド配列ＩＶの塩基配列がＣＵであり、
このとき、センス鎖とアンチセンス鎖の長さ比が２１／２１である。
いくつかの実施形態において、ヌクレオチド配列ＩＩＩとヌクレオチド配列ＩＶは、長
さが同じであり、完全に逆相補的であるので、ヌクレオチド配列ＩＩＩの塩基が与えられ
ると、ヌクレオチド配列ＩＶの塩基も決定される。
いくつかの実施形態において、前記センス鎖とアンチセンス鎖は、長さが異なり、前記
ヌクレオチド配列ＩＩは、ヌクレオチド配列Ｖをさらに含み、ヌクレオチド配列Ｖは、長
さが１～３ヌクレオチドであり、前記アンチセンス鎖の３’末端に結合され、アンチセン
ス鎖の３’オーバーハング末端を構成する。これにより、本開示により提供されるｓｉＲ
ＮＡのセンス鎖とアンチセンス鎖の長さ比が、１９／２０、１９／２１，１９／２２、２
０／２１、２０／２２、２０／２３、２１／２２、２１／２３、２１／２４、２２／２３
、２２／２４、２２／２５、２３／２４、２３／２５又は２３／２６であってもよい。い
くつかの実施形態において、前記ヌクレオチド配列Ｖは、長さが２ヌクレオチドであり、
これにより、本開示により提供されるｓｉＲＮＡのセンス鎖とアンチセンス鎖の長さ比が
、１９／２１、２１／２３又は２３／２５であってもよい。
前記ヌクレオチド配列Ｖにおける各ヌクレオチドは、任意のヌクレオチドであってもよ
く、合成しやすく合成コストを節約するために、前記ヌクレオチド配列Ｖは、連続した２
個のチミンデオキシリボヌクレオチド（ＴＴ）又は連続した２個のウラシルリボヌクレオ
チド（ＵＵ）であり、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖と標的ｍＲＮＡとの親和力を向上させ
るために、ヌクレオチド配列Ｖは、標的ｍＲＮＡの対応する位置のヌクレオチドと相補的
である。したがって、いくつかの実施形態において、本開示のｓｉＲＮＡのセンス鎖とア
ンチセンス鎖の長さの比が１９／２１又は２１／２３であり、このとき、本開示のｓｉＲ
ＮＡがより良好なｍＲＮＡサイレンシング活性を有する。
いくつかの実施形態において、前記ｓｉＲＮＡのセンス鎖は、配列番号３に示されるヌ
クレオチド配列を含み、前記ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖は、配列番号５に示されるヌク
レオチド配列を含む。
５’－ＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＡＡＣＵＺＡ－３’（配列番号３）、
５’－Ｚ’ＢＡＧＵＵＣＵＵＧＧＵＧＣＵＣＵＵＧＧＣＵ－３’（配列番号５）
或いは、前記ｓｉＲＮＡのセンス鎖は、配列番号６に示されるヌクレオチド配列を含み
、前記ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖は、配列番号７に示されるヌクレオチド配列を含む。
５’－ＡＧＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＡＡＣＵＺＡ－３’（配列番号６）、
５’－Ｚ’ＢＡＧＵＵＣＵＵＧＧＵＧＣＵＣＵＵＧＧＣＵＵＧ－３’（配列番号７）
ただし、前記Ｚ’Ｂは、アンチセンス鎖の５’末端の１番目のヌクレオチドであり、Ｚ
Ａは、Ａ、Ｕ、Ｇ又はＣから選択され、Ｚ’Ｂは、ＺＡと相補的なヌクレオチドである。
いくつかの実施形態において、本開示に記載されたｓｉＲＮＡはｓｉＡＮ１又はｓｉＡ
Ｎ２である。
ｓｉＡＮ１
センス鎖：５’－ＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＡＡＣＵＡ－３’（配列番号８）
アンチセンス鎖：５’－ＵＡＧＵＵＣＵＵＧＧＵＧＣＵＣＵＵＧＧＣＵ－３’（配列番
号９）
ｓｉＡＮ２
センス鎖：５’－ＡＧＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＡＡＣＵＡ－３’（配列番号１０
）
アンチセンス鎖：５’－ＵＡＧＵＵＣＵＵＧＧＵＧＣＵＣＵＵＧＧＣＵＵＧ－３’（配
列番号１１）
前述したように、本開示のｓｉＲＮＡにおけるヌクレオチドは、それぞれ独立して修飾
又は未修飾のヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、本開示のｓｉＲＮＡに
おけるヌクレオチドは未修飾ヌクレオチドであり、いくつかの実施形態において、本開示
のｓｉＲＮＡにおけるヌクレオチドの一部又は全部は修飾ヌクレオチドであり、ヌクレオ
チド基上のこれらの修飾によって本開示のｓｉＲＮＡ複合体のＡＮＧＰＴＬ３遺伝子発現
の抑制機能を明らかに弱める又は喪失させることはない。
いくつかの実施形態において、本開示のｓｉＲＮＡは、少なくとも１つの修飾ヌクレオ
チドを含む。本開示の文脈において用いられる用語「修飾ヌクレオチド」とは、ヌクレオ
チドのリボース基の２’位のヒドロキシ基が他の基で置換されたヌクレオチド又はヌクレ
オチドアナログ、或いは、ヌクレオチド上の塩基が修飾された塩基であるヌクレオチドを
指す。前記修飾ヌクレオチドにより、ｓｉＲＮＡの遺伝子発現の抑制機能を明らかに弱め
る又は喪失させることはない。例えば、Ｊ．Ｋ． Ｗａｔｔｓ，Ｇ．Ｆ． Ｄｅｌｅａｖ
ｅｙ，ａｎｄ Ｍ．Ｊ． Ｄａｍｈａ，Ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｓｉ
ＲＮＡ：ｔｏｏｌｓ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ． Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ
Ｔｏｄａｙ，２００８，１３（１９－２０）：８４２－５５に開示された修飾ヌクレオチ
ドを選択してもよい。
いくつかの実施形態において、本開示により提供されるｓｉＲＮＡのセンス鎖又は前記
アンチセンス鎖は、少なくとも１つのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、及び／又
は少なくとも１つのリン酸エステル基が、修飾基を有するリン酸エステル基である。言い
換えれば、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖において少なくとも１本の一本鎖のリン酸
－糖骨格中のリン酸エステル基及び／又はリボース基の少なくとも一部は、修飾基を有す
るリン酸エステル基及び／又は修飾基を有するリボース基である。
いくつかの実施形態において、前記センス鎖及び／又は前記アンチセンス鎖におけるヌ
クレオチドは、全て修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、本開示によ
り提供されるｓｉＲＮＡのセンス鎖と前記アンチセンス鎖における各ヌクレオチドは、独
立してフルオロ修飾ヌクレオチド又は非フルオロ修飾ヌクレオチドである。
本開示の発明者は、驚くべきことに、本開示に記載されたｓｉＲＮＡにより、動物実験
において血漿中安定性と遺伝子サイレンシング効率の高度なバランスが取られていること
を見出した。
いくつかの実施形態において、前記フルオロ修飾ヌクレオチドは、ヌクレオチド配列Ａ
とヌクレオチド配列Ｂに位置し、５’末端から３’末端に向かって、前記ヌクレオチド配
列Ａの第７、８、９位のヌクレオチドがフルオロ修飾ヌクレオチドであり、５’末端から
３’末端に向かって、前記ヌクレオチド配列Ｂの第２、６、１４、１６位のヌクレオチド
がフルオロ修飾ヌクレオチドである。
いくつかの実施形態において、前記フルオロ修飾ヌクレオチドは、ヌクレオチド配列Ａ
とヌクレオチド配列Ｂに位置し、前記ヌクレオチド配列Ａにおけるフルオロ修飾ヌクレオ
チドが５個以下であり、５’末端から３’末端に向かって、前記ヌクレオチド配列Ａの第
７、８、９位のヌクレオチドがフルオロ修飾ヌクレオチドであり、前記ヌクレオチド配列
Ｂにおけるフルオロ修飾ヌクレオチドが７個以下であり、前記ヌクレオチド配列Ｂの第２
、６、１４、１６位のヌクレオチドがフルオロ修飾ヌクレオチドである。
いくつかの実施形態において、５’末端から３’末端に向かって、前記センス鎖におい
て、前記ヌクレオチド配列Ａの第７、８、９位又は５、７、８、９位のヌクレオチドがフ
ルオロ修飾ヌクレオチドであり、前記センス鎖において残りの位置のヌクレオチドが非フ
ルオロ修飾ヌクレオチドであり、５’末端から３’末端に向かって、前記アンチセンス鎖
において、前記ヌクレオチド配列Ｂの第２、６、１４、１６位又は第２、６、８、９、１
４、１６位のヌクレオチドがフルオロ修飾ヌクレオチドであり、前記アンチセンス鎖にお
いて残りの位置のヌクレオチドが非フルオロ修飾ヌクレオチドである。
フルオロ修飾ヌクレオチドとは、ヌクレオチドのリボース基の２’位のヒドロキシ基が
フッ素で置換された、以下の式（７）に示される構造を有するヌクレオチドを指す。非フ
ルオロ修飾ヌクレオチドとは、ヌクレオチドのリボース基の２’位のヒドロキシ基が非フ
ッ素基で置換されたヌクレオチド又はヌクレオチドアナログを指す。いくつかの実施形態
において、各非フルオロ修飾ヌクレオチドは、ヌクレオチドのリボース基の２’位のヒド
ロキシ基が非フッ素基で置換されたヌクレオチド又はヌクレオチドアナログから独立して
選択される１つである。
これらのリボース基の２’位のヒドロキシ基が非フッ素基で置換されたヌクレオチドは
、当業者に公知であり、これらのヌクレオチドは、２’－アルコキシ修飾ヌクレオチド、
２’－置換アルコキシ修飾ヌクレオチド、２’－アルキル修飾ヌクレオチド、２’－置換
アルキル修飾ヌクレオチド、２’－アミノ修飾ヌクレオチド、２’－置換アミノ修飾ヌク
レオチド、２’－デオキシヌクレオチドから選択される１つであってもよい。
いくつかの実施形態において、２’－アルコキシ修飾ヌクレオチドは、式（８）に示さ
れる、メトキシ修飾ヌクレオチド（２’－ＯＭｅ）である。いくつかの実施形態において
、２’－置換アルコキシ修飾ヌクレオチドは、例えば、式（９）に示される２’－Ｏ－メ
トキシエチル修飾ヌクレオチド（２’－ＭＯＥ）であってもよい。いくつかの実施形態に
おいて、２’－アミノ修飾ヌクレオチド（２’－ＮＨ２）は式（１０）に示される。いく
つかの実施形態において、２’－デオキシヌクレオチド（ＤＮＡ）は式（１１）に示され
る。
Figure 2023082151000002
ヌクレオチドアナログとは、核酸においてヌクレオチドの代わりとなることができるが
、アデニンリボヌクレオチド、グアニンリボヌクレオチド、シトシンリボヌクレオチド、
ウラシルリボヌクレオチド又はチミンデオキシリボヌクレオチドと構造が異なる基を指す
。いくつかの実施形態において、ヌクレオチドアナログは、イソヌクレオチド、架橋ヌク
レオチド（ｂｒｉｄｇｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ、ＢＮＡ）又は非環式ヌクレオチ
ドであってもよい。
ＢＮＡとは、拘束された又は近づけないヌクレオチドを指す。ＢＮＡは、五員環、六員
環、又は七員環の、「固定された」Ｃ３’－エンド糖パッカリングを有する架橋構造を含
んでもよい。通常当該橋を当該リボースの２’－、４’－位に導入して２’，４’－ＢＮ
Ａヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態において、ＢＮＡは、式（１２）に示さ
れるＬＮＡ、式（１３）に示されるＥＮＡ、式（１４）に示されるｃＥＴ ＢＮＡ等であ
ってもよい。
Figure 2023082151000003
非環式ヌクレオチドは、ヌクレオチドの糖環が開環されたヌクレオチドである。いくつ
かの実施形態において、非環式ヌクレオチドは、式（１５）に示されるアンロックド核酸
（ＵＮＡ）、又は式（１６）に示されるグリセロール核酸（ＧＮＡ）であってもよい。
Figure 2023082151000004
上記式（１５）及び式（１６）中、Ｒは、Ｈ、ＯＨ又はアルコキシ基（Ｏ－アルキル）
から選択される。
イソヌクレオチドとは、ヌクレオチドにおいて塩基のリボース環における位置が変化し
た化合物を指す。いくつかの実施形態において、イソヌクレオチドは、式（１７）又は（
１８）に示される、塩基がリボース環の１’－位から２’－位又は３’－位に移行した化
合物であってもよい。
Figure 2023082151000005
上記式（１７）～式（１８）の化合物において、Ｂａｓｅは、Ａ、Ｕ、Ｇ、Ｃ又はＴ等
の塩基を表し、Ｒは、Ｈ、ＯＨ、Ｆ又は上述した非フッ素基から選択される。
いくつかの実施形態において、ヌクレオチドアナログは、イソヌクレオチド、ＬＮＡ、
ＥＮＡ、ｃＥＴ、ＵＮＡ及びＧＮＡから選択される１つである。いくつかの実施形態にお
いて、各非フルオロ修飾ヌクレオチドは、いずれもメトキシ修飾ヌクレオチドであり、文
脈において、前記メトキシ修飾ヌクレオチドは、リボース基の２’－ヒドロキシ基がメト
キシで置換されたヌクレオチドを指す。
文脈において、「フルオロ修飾ヌクレオチド」、「２’－フルオロ修飾ヌクレオチド」
、「リボース基の２’－ヒドロキシ基がフッ素で置換されたヌクレオチド」及び「２’－
フルオロリボース基」は、意味が同じであり、いずれもヌクレオチドの２’－ヒドロキシ
基がフッ素で置換された、式（７）に示される構造を有する化合物を指し、「メトキシ修
飾ヌクレオチド」、「２’－メトキシ修飾ヌクレオチド」、「リボース基の２’－ヒドロ
キシ基がメトキシで置換されたヌクレオチド」及び「２’－メトキシリボース基」は、意
味が同じであり、いずれもヌクレオチドのリボース基の２’－ヒドロキシ基がメトキシで
置換された、式（８）に示される構造を有する化合物を指す。
いくつかの実施形態において、本開示のｓｉＲＮＡは、以下の修飾を有するｓｉＲＮＡ
である。すなわち、５’末端から３’末端に向かって、前記センス鎖において、前記ヌク
レオチド配列Ａの第７、８、９位又は第５、７、８、９位のヌクレオチドがフルオロ修飾
ヌクレオチドであり、前記センス鎖において残りの位置のヌクレオチドがメトキシ修飾ヌ
クレオチドであり、前記アンチセンス鎖において、前記ヌクレオチド配列Ｂの第２、６、
１４、１６位又は第２、６、８、９、１４、１６位のヌクレオチドがフルオロ修飾ヌクレ
オチドであり、前記アンチセンス鎖において残りの位置のヌクレオチドがメトキシ修飾ヌ
クレオチドである。
いくつかの実施形態において、本開示のｓｉＲＮＡは、以下の修飾を有するｓｉＲＮＡ
である。すなわち、５’末端から３’末端に向かって、前記ｓｉＲＮＡのセンス鎖におけ
るヌクレオチド配列Ａの第５、７、８及び９位のヌクレオチドがフルオロ修飾ヌクレオチ
ドであり、ｓｉＲＮＡのセンス鎖の残りの位置のヌクレオチドがメトキシ修飾ヌクレオチ
ドであり、また、５’末端から３’末端に向かって、前記ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖に
おけるヌクレオチド配列Ｂの第２、６、８、９、１４及び１６位のヌクレオチドがフルオ
ロ修飾ヌクレオチドであり、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖の残りの位置のヌクレオチドが
メトキシ修飾ヌクレオチドであり、
或いは、５’末端から３’末端に向かって、前記ｓｉＲＮＡのセンス鎖におけるヌクレ
オチド配列Ａの第５、７、８及び９位のヌクレオチドがフルオロ修飾ヌクレオチドであり
、ｓｉＲＮＡのセンス鎖の残りの位置のヌクレオチドがメトキシ修飾ヌクレオチドであり
、また、５’末端から３’末端に向かって、前記ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖におけるヌ
クレオチド配列Ｂの第２、６、１４及び１６位のヌクレオチドがフルオロ修飾ヌクレオチ
ドであり、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖の残りの位置のヌクレオチドがメトキシ修飾ヌク
レオチドであり、
或いは、５’末端から３’末端に向かって、前記ｓｉＲＮＡのセンス鎖におけるヌクレ
オチド配列Ａの第７、８及び９位のヌクレオチドがフルオロ修飾ヌクレオチドであり、ｓ
ｉＲＮＡのセンス鎖の残りの位置のヌクレオチドがメトキシ修飾ヌクレオチドであり、ま
た、５’末端から３’末端に向かって、前記ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖におけるヌクレ
オチド配列Ｂの第２、６、１４及び１６位のヌクレオチドがフルオロ修飾ヌクレオチドで
あり、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖の残りの位置のヌクレオチドがメトキシ修飾ヌクレオ
チドである。
言い換えれば、当該ｓｉＲＮＡのリン酸－糖骨格中のリボース基は、それぞれ以下の修
飾基を有する。５’末端から３’末端に向かって、前記ｓｉＲＮＡのセンス鎖におけるヌ
クレオチド配列Ａの第５、７、８及び９位のグリコシル基が２’－フルオロリボース基で
あり、ｓｉＲＮＡのセンス鎖の残りの位置のヌクレオチドのグリコシル基が２’－メトキ
シリボース基であり、また、５’末端から３’末端に向かって、前記ｓｉＲＮＡのアンチ
センス鎖におけるヌクレオチド配列Ｂの第２、６、８、９、１４及び１６位のグリコシル
基が２’－フルオロリボース基であり、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖の残りの位置のヌク
レオチドのグリコシル基が２’－メトキシリボース基であり、
或いは、５’末端から３’末端に向かって、前記ｓｉＲＮＡのセンス鎖におけるヌクレ
オチド配列Ａの第５、７、８及び９位のグリコシル基が２’－フルオロリボース基であり
、ｓｉＲＮＡのセンス鎖の残りの位置のヌクレオチドのグリコシル基が２’－メトキシリ
ボース基であり、また、５’末端から３’末端に向かって、前記ｓｉＲＮＡのアンチセン
ス鎖におけるヌクレオチド配列Ｂの第２、６、１４及び１６位のグリコシル基が２’－フ
ルオロリボース基であり、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖の残りの位置のヌクレオチドのグ
リコシル基が２’－メトキシリボース基であり、
或いは、５’末端から３’末端に向かって、前記ｓｉＲＮＡのセンス鎖におけるヌクレ
オチド配列Ａの第７、８及び９位のグリコシル基が２’－フルオロリボース基であり、ｓ
ｉＲＮＡのセンス鎖の残りの位置のヌクレオチドのグリコシル基が２’－メトキシリボー
ス基であり、また、５’末端から３’末端に向かって、前記ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖
におけるヌクレオチド配列Ｂの第２、６、１４及び１６位のグリコシル基が２’－フルオ
ロリボース基であり、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖の残りの位置のヌクレオチドのグリコ
シル基が２’－メトキシリボース基である。
いくつかの実施形態において、本開示により提供されるｓｉＲＮＡは、ｓｉＡＮ１－Ｍ
１、ｓｉＡＮ２－Ｍ１、ｓｉＡＮ１－Ｍ２、ｓｉＡＮ２－Ｍ２、ｓｉＡＮ１－Ｍ３、ｓｉ
ＡＮ２－Ｍ３のいずれか１つである。
ｓｉＡＮ１－Ｍ１
センス鎖：５’－ＣｍＣｍＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＡ
ｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号１２）
アンチセンス鎖：５’－ＵｍＡｆＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｆＧｆＧｍＵｍＧｍＣｍＵｆ
ＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍ－３’（配列番号１３）
ｓｉＡＮ２－Ｍ１
センス鎖：５’－ＡｍＧｍＣｍＣｍＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧ
ｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号１４）
アンチセンス鎖：５’－ＵｍＡｆＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｆＧｆＧｍＵｍＧｍＣｍＵｆ
ＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍＵｍＧｍ－３’（配列番号１５）
ｓｉＡＮ１－Ｍ２
センス鎖：５’－ＣｍＣｍＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＡ
ｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号１２）
アンチセンス鎖：５’－ＵｍＡｆＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧｍＣｍＵｆ
ＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍ－３’（配列番号１６）
ｓｉＡＮ２－Ｍ２
センス鎖：５’－ＡｍＧｍＣｍＣｍＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧ
ｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号１４）
アンチセンス鎖：５’－ＵｍＡｆＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧｍＣｍＵｆ
ＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍＵｍＧｍ－３’（配列番号１７）
ｓｉＡＮ１－Ｍ３
センス鎖：５’－ＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＡ
ｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号１８）
アンチセンス鎖：５’－ＵｍＡｆＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧｍＣｍＵｆ
ＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍ－３’（配列番号１６）
ｓｉＡＮ２－Ｍ３
センス鎖：５’－ＡｍＧｍＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧ
ｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号１９）
アンチセンス鎖：５’－ＵｍＡｆＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧｍＣｍＵｆ
ＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍＵｍＧｍ－３’（配列番号１７）
上記修飾を有するｓｉＲＮＡは、コストが低いだけでなく、血中のリボヌクレアーゼで
核酸を切断しにくくすることができ、これにより、核酸の安定性を向上させ、核酸により
強いヌクレアーゼ加水分解耐性という性能を持たせる。
いくつかの実施形態において、本開示により提供されるｓｉＲＮＡのセンス鎖とアンチ
センス鎖において、少なくとも１本の一本鎖のリン酸－糖骨格中のリン酸エステル基の少
なくとも一部は、修飾基を有するリン酸エステル基である。いくつかの実施形態において
、修飾基を有するリン酸エステル基は、リン酸エステル基におけるリン酸ジエステル結合
の少なくとも１つの酸素原子が硫黄原子で置換されたチオリン酸エステル基である。いく
つかの実施形態において、前記修飾基を有するリン酸エステル基は、式（１）に示される
構造を有するチオリン酸エステル基である。
Figure 2023082151000006
このような修飾により、ｓｉＲＮＡの二本鎖構造を安定化させ、塩基対合の高い特異性
と高い親和力を維持することができる。
いくつかの実施形態において、本開示により提供されるｓｉＲＮＡにおいて、チオリン
酸エステル基は、センス鎖又はアンチセンス鎖の任意の一端の１番目のヌクレオチドと２
番目のヌクレオチドとの間、センス鎖又はアンチセンス鎖の任意の一端の２番目のヌクレ
オチドと３番目のヌクレオチドとの間、又はそれらの任意の組合せからなる群より選ばれ
る少なくとも１つに結合されて存在する。いくつかの実施形態において、チオリン酸エス
テル基は、センス鎖の５’末端を除く全ての上記位置に結合されて存在する。いくつかの
実施形態において、チオリン酸エステル基は、センス鎖の３’末端を除く全ての上記位置
に結合されて存在する。いくつかの実施形態において、チオリン酸エステル基は、以下の
位置のうち少なくとも一箇所に結合されて存在する。
前記センス鎖の５’末端から１番目のヌクレオチドと２番目のヌクレオチドとの間、
前記センス鎖の５’末端から２番目のヌクレオチドと３番目のヌクレオチドとの間、
前記センス鎖の３’末端から１番目のヌクレオチドと２番目のヌクレオチドとの間、
前記センス鎖の３’末端から２番目のヌクレオチドと３番目のヌクレオチドとの間、
前記アンチセンス鎖の５’末端から１番目のヌクレオチドと２番目のヌクレオチドとの
間、
前記アンチセンス鎖の５’末端から２番目のヌクレオチドと３番目のヌクレオチドとの
間、
前記アンチセンス鎖の３’末端から１番目のヌクレオチドと２番目のヌクレオチドとの
間、及び
前記アンチセンス鎖の３’末端から２番目のヌクレオチドと３番目のヌクレオチドとの
間。
いくつかの実施形態において、本開示により提供されるｓｉＲＮＡは、ｓｉＡＮ１－Ｍ
１Ｓ、ｓｉＡＮ２－Ｍ１Ｓ、ｓｉＡＮ１－Ｍ２Ｓ、ｓｉＡＮ２－Ｍ２Ｓ、ｓｉＡＮ１－Ｍ
３Ｓ、ｓｉＡＮ２－Ｍ３Ｓのいずれか１つである。
ｓｉＡＮ１－Ｍ１Ｓ
センス鎖：５’－ＣｍｓＣｍｓＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡ
ｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号２０）
アンチセンス鎖：５’－ＵｍｓＡｆｓＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｆＧｆＧｍＵｍＧｍＣｍ
ＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍｓＣｍｓＵｍ－３’（配列番号２１）
ｓｉＡＮ２－Ｍ１Ｓ
センス鎖：５’－ＡｍｓＧｍｓＣｍＣｍＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡ
ｍＧｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号２２）
アンチセンス鎖：５’－ＵｍｓＡｆｓＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｆＧｆＧｍＵｍＧｍＣｍ
ＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍｓＵｍｓＧｍ－３’（配列番号２３）
ｓｉＡＮ１－Ｍ２Ｓ
センス鎖：５’－ＣｍｓＣｍｓＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡ
ｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号２０）
アンチセンス鎖：５’－ＵｍｓＡｆｓＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧｍＣｍ
ＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍｓＣｍｓＵｍ－３’（配列番号２４）
ｓｉＡＮ２－Ｍ２Ｓ
センス鎖：５’－ＡｍｓＧｍｓＣｍＣｍＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡ
ｍＧｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号２２）
アンチセンス鎖：５’－ＵｍｓＡｆｓＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧｍＣｍ
ＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍｓＵｍｓＧｍ－３’（配列番号２５）
ｓｉＡＮ１－Ｍ３Ｓ
センス鎖：５’－ＣｍｓＣｍｓＡｍＡｍＧｍＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡ
ｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号２６）
アンチセンス鎖：５’－ＵｍｓＡｆｓＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧｍＣｍ
ＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍｓＣｍｓＵｍ－３’（配列番号２４）
ｓｉＡＮ２－Ｍ３Ｓ
センス鎖：５’－ＡｍｓＧｍｓＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡ
ｍＧｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号２７）
アンチセンス鎖：５’－ＵｍｓＡｆｓＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧｍＣｍ
ＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍｓＵｍｓＧｍ－３’（配列番号２５）
いくつかの実施形態において、前記ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖の５’末端ヌクレオチ
ドは、５’－リン酸ヌクレオチド又は５’－リン酸アナログ修飾ヌクレオチドである。
慣用の前記５’－リン酸ヌクレオチド又は５’－リン酸アナログ修飾ヌクレオチドは、
当業者に公知であり、例えば、５’－リン酸ヌクレオチドは、以下の構造を有してもよい
。
Figure 2023082151000007
また、例えば、Ａｎａｓｔａｓｉａ Ｋｈｖｏｒｏｖａ ａｎｄ Ｊｏｎａｔｈａｎ
Ｋ． Ｗａｔｔｓ，Ｔｈｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｏｌｉｇｏ
ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｕｔｉｌｉｔｙ
． Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１７，３５（３）：２３８～４８
には、以下の４種類の５’－リン酸アナログ修飾ヌクレオチドが開示されている。
Figure 2023082151000008
 ただし、ＲはＨ、ＯＨ、メトキシ、フッ素から選択され、Ｂａｓｅは塩基を表し、Ａ、
Ｕ、Ｃ、Ｇ又はＴから選択される。
いくつかの実施形態において、５’－リン酸ヌクレオチドは、式（２）に示される、５
’－リン酸修飾を含むヌクレオチドであり、５’－リン酸アナログ修飾ヌクレオチドは、
式（３）に示される、ビニルリン酸エステル（５’－（Ｅ）－ｖｉｎｙｌｐｈｏｓｐｈｏ
ｎａｔｅ、Ｅ－ＶＰ）修飾を含むヌクレオチドであり、又は、式（５）に示される、チオ
リン酸エステル修飾ヌクレオチドである。
いくつかの実施形態において、本開示により提供されるｓｉＲＮＡは、ｓｉＡＮ１－Ｍ
１Ｐ１、ｓｉＡＮ２－Ｍ１Ｐ１、ｓｉＡＮ１－Ｍ２Ｐ１、ｓｉＡＮ２－Ｍ２Ｐ１、ｓｉＡ
Ｎ１－Ｍ３Ｐ１、ｓｉＡＮ２－Ｍ３Ｐ１、ｓｉＡＮ１－Ｍ１ＳＰ１、ｓｉＡＮ２－Ｍ１Ｓ
Ｐ１、ｓｉＡＮ１－Ｍ２ＳＰ１、ｓｉＡＮ２－Ｍ２ＳＰ１、ｓｉＡＮ１－Ｍ３ＳＰ１、ｓ
ｉＡＮ２－Ｍ３ＳＰ１のいずれか１つである。
ｓｉＡＮ１－Ｍ１Ｐ１
センス鎖：５’－ＣｍＣｍＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＡ
ｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号１２）
アンチセンス鎖：５’－Ｐ１－ＵｍＡｆＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｆＧｆＧｍＵｍＧｍＣ
ｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍ－３’（配列番号２８）
ｓｉＡＮ２－Ｍ１Ｐ１
センス鎖：５’－ＡｍＧｍＣｍＣｍＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧ
ｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号１４）
アンチセンス鎖：５’－Ｐ１－ＵｍＡｆＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｆＧｆＧｍＵｍＧｍＣ
ｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍＵｍＧｍ－３’（配列番号２９）
ｓｉＡＮ１－Ｍ２Ｐ１
センス鎖：５’－ＣｍＣｍＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＡ
ｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号１２）
アンチセンス鎖：５’－Ｐ１－ＵｍＡｆＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧｍＣ
ｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍ－３’（配列番号３０）
ｓｉＡＮ２－Ｍ２Ｐ１
センス鎖：５’－ＡｍＧｍＣｍＣｍＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧ
ｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号１４）
アンチセンス鎖：５’－Ｐ１－ＵｍＡｆＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧｍＣ
ｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍＵｍＧｍ－３’（配列番号３１）
ｓｉＡＮ１－Ｍ３Ｐ１
センス鎖：５’－ＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＡ
ｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号１８）
アンチセンス鎖：５’－Ｐ１－ＵｍＡｆＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧｍＣ
ｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍ－３’（配列番号３０）
ｓｉＡＮ２－Ｍ３Ｐ１
センス鎖：５’－ＡｍＧｍＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧ
ｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号１９）
アンチセンス鎖：５’－Ｐ１－ＵｍＡｆＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧｍＣ
ｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍＵｍＧｍ－３’（配列番号３１）
ｓｉＡＮ１－Ｍ１ＳＰ１
センス鎖：５’－ＣｍｓＣｍｓＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡ
ｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号２０）
アンチセンス鎖：５’－Ｐ１－ＵｍｓＡｆｓＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｆＧｆＧｍＵｍＧ
ｍＣｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍｓＣｍｓＵｍ－３’（配列番号３２）
ｓｉＡＮ２－Ｍ１ＳＰ１
センス鎖：５’－ＡｍｓＧｍｓＣｍＣｍＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡ
ｍＧｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号２２）
アンチセンス鎖：５’－Ｐ１－ＵｍｓＡｆｓＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｆＧｆＧｍＵｍＧ
ｍＣｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍｓＵｍｓＧｍ－３’（配列番号３３）
ｓｉＡＮ１－Ｍ２ＳＰ１
センス鎖：５’－ＣｍｓＣｍｓＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡ
ｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号２０）
アンチセンス鎖：５’－Ｐ１－ＵｍｓＡｆｓＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧ
ｍＣｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍｓＣｍｓＵｍ－３’（配列番号３４）
ｓｉＡＮ２－Ｍ２ＳＰ１
センス鎖：５’－ＡｍｓＧｍｓＣｍＣｍＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡ
ｍＧｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号２２）
アンチセンス鎖：５’－Ｐ１－ＵｍｓＡｆｓＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧ
ｍＣｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍｓＵｍｓＧｍ－３’（配列番号３５）
ｓｉＡＮ１－Ｍ３ＳＰ１
センス鎖：５’－ＣｍｓＣｍｓＡｍＡｍＧｍＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡ
ｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号２６）
アンチセンス鎖：５’－Ｐ１－ＵｍｓＡｆｓＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧ
ｍＣｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍｓＣｍｓＵｍ－３’（配列番号３４）
ｓｉＡＮ２－Ｍ３ＳＰ１
センス鎖：５’－ＡｍｓＧｍｓＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡ
ｍＧｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号２７）
アンチセンス鎖：５’－Ｐ１－ＵｍｓＡｆｓＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧｍ
ＣｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍｓＵｍｓＧｍ－３’（配列番号３５）
本開示の発明者は、本開示により提供されるｓｉＲＮＡが、顕著に向上した血漿とリソ
ソーム安定性を有するだけでなく、非常に高い遺伝子抑制活性を維持することを意外にも
見出した。
本開示により提供されるｓｉＲＮＡは、本分野における通常のｓｉＲＮＡ調製方法（例
えば、固相合成方法及び液相合成方法）により得ることができる。ここで、固相合成は、
既に商用カスタマイズサービスが行われている。対応する修飾を有するヌクレオシドモノ
マーを用いることにより修飾ヌクレオチド基を本開示に記載されたｓｉＲＮＡに導入する
ことができ、対応する修飾を有するヌクレオシドモノマーを調製する方法、及び修飾ヌク
レオチド基をｓｉＲＮＡに導入する方法も、当業者によく知られている。
＜薬物組成物＞
本開示は、活性成分として上述したｓｉＲＮＡと、薬学的に許容可能な担体を含む薬物
組成物を提供する。
前記薬学的に許容可能な担体は、ｓｉＲＮＡ投与分野で通常用いられる担体であっても
よく、例えば、磁性ナノ粒子（ｍａｇｎｅｔｉｃ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ、例えば
、Ｆｅ３Ｏ４又はＦｅ２Ｏ３に基づくナノ粒子）、カーボンナノチューブ（ｃａｒｂｏｎ
ｎａｎｏｔｕｂｅｓ）、メソポーラスシリコン（ｍｅｓｏｐｏｒｏｕｓ ｓｉｌｉｃｏ
ｎ）、リン酸カルシウムナノ粒子（ｃａｌｃｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｎａｎｏｐａ
ｒｔｉｃｌｅｓ）、ポリエチレンイミン（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｉｍｉｎｅ、ＰＥＩ）
、ポリアミドアミンデンドリマー（ｐｏｌｙａｍｉｄｏａｍｉｎｅ （ＰＡＭＡＭ） ｄ
ｅｎｄｒｉｍｅｒ）、ポリリジン（ｐｏｌｙ（Ｌ－ｌｙｓｉｎｅ）、ＰＬＬ）、キトサン
（ｃｈｉｔｏｓａｎ）、１，２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（
１，２－ｄｉｏｌｅｏｙｌ－３－ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ－ｐｒｏｐａｎｅ
、ＤＯＴＡＰ）、ポリＤ－又はＬ－乳酸／グリコール酸共重合体（ｐｏｌｙ（Ｄ＆Ｌ－ｌ
ａｃｔｉｃ／ｇｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ）ｃｏｐｏｌｙｍｅｒ、ＰＬＧＡ）、ポリ（ア
ミノエチルエチレンリン酸エステル）（ｐｏｌｙ（２－ａｍｉｎｏｅｔｈｙｌ ｅｔｈｙ
ｌｅｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、ＰＰＥＥＡ）及びポリ（Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノエチ
ルメタクリレート）（ｐｏｌｙ（２－ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｅｔｈｙｌ ｍｅｔｈ
ａｃｒｙｌａｔｅ）、ＰＤＭＡＥＭＡ）並びにこれらの誘導体の１又は複数があるが、こ
れらに限定されない。
いくつかの実施形態において、前記薬物組成物におけるｓｉＲＮＡ及び薬学的に許容可
能な担体の含有量に対して特段の要件はないが、いくつかの実施形態においては、ｓｉＲ
ＮＡと薬学的に許容可能な担体との重量比が、１：（１～５００）であってもよい。いく
つかの実施形態においては、上記重量比が１：（１～５０）である。
いくつかの実施形態において、前記薬物組成物には、薬学的に許容できる他の添加剤が
含まれてもよく、当該添加剤は、本分野で通常採用される各種の製剤又は化合物の１種又
は複数種であってもよい。例えば、前記薬学的に許容できる他の添加剤は、ｐＨ緩衝液、
保護剤及び浸透圧調節剤の少なくとも１種を含んでもよい。
前記ｐＨ緩衝液は、ｐＨ７．５～８．５のトリスヒドロキシメチルアミノメタン塩酸塩
緩衝液（ｔｒｉｓ（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ） ａｍｉｎｏｍｅｔｈａｎｅ ｈｙｄ
ｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ ｂｕｆｆｅｒ）及び／又はｐＨ５．５～８．５のリン酸塩緩衝液
であってもよく、例えば、ｐＨ５．５～８．５のリン酸塩緩衝液であってもよい。
前記保護剤は、イノシトール、ソルビトール、スクロース、トレハロース、マンノース
、マルトース、ラクトース及びグルコースの少なくとも１種であってもよい。前記薬物組
成物の全重量を基準とし、前記保護剤の含有量は０．０１～３０重量％であってもよい。
前記浸透圧調節剤は、塩化ナトリウム及び／又は塩化カリウムであってもよい。前記浸
透圧調節剤の含有量は、前記薬物組成物の浸透圧が２００～７００ミリオスモル／キログ
ラム（ｍＯｓｍ／ｋｇ）となるように決定される。所望の浸透圧により、当業者は、前記
浸透圧調節剤の含有量を容易に決定することができる。
いくつかの実施形態において、前記薬物組成物は、注射液等の液体製剤であってもよく
、凍結乾燥粉末注射剤として、投与時に液体添加剤と混合し、液体製剤としてもよい。前
記液体製剤は、皮下、筋肉又は静脈注射投与に用いることができるが、これらに限定され
ず、噴霧により肺臓に投与し、或いは、噴霧により肺臓を通して他の臓器組織（例えば、
肝臓）に投与することもできるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において
、前記薬物組成物は、静脈注射投与に用いられる。
いくつかの実施形態において、前記薬物組成物は、リポソーム製剤の形式であってもよ
い。いくつかの実施形態において、前記リポソーム製剤に用いられる薬学的に許容可能な
担体は、アミン含有トランスフェクション化合物（以下、有機アミンともいう）、補助脂
質及び／又はＰＥＧ化（ポリエチレングリコール化）脂質を含む。ここで、前記有機アミ
ン、補助脂質及びＰＥＧ化脂質は、ＣＮ１０３３８０１１３Ａ（引用によりその全体を本
明細書に組み込む）に記載されたアミン含有トランスフェクション化合物又はその薬学的
に許容できる塩又は誘導体、補助脂質及びＰＥＧ化脂質からそれぞれ選択される１種又は
複数種であってよい。
いくつかの実施形態において、前記有機アミンは、ＣＮ１０３３８０１１３Ａに記載さ
れた式（２０１）に示される化合物又はその薬学的に許容できる塩であってもよい。
Figure 2023082151000009
 式中、
Ｘ１０１及びＸ１０２はそれぞれ独立してＯ、Ｓ、Ｎ－Ａ又はＣ－Ａであり、Ａは水素
又はＣ１－Ｃ２０炭化水素鎖であり、
Ｙ及びＺがそれぞれ独立してＣ=Ｏ、Ｃ=Ｓ、Ｓ=Ｏ、ＣＨ－ＯＨ又はＳＯ２であり、
Ｒ１０１、Ｒ１０２、Ｒ１０３、Ｒ１０４、Ｒ１０５、Ｒ１０６及びＲ１０７はそれぞ
れ独立して水素、環式又は非環式の、置換又は無置換の、分岐鎖又は直鎖脂肪族基、環式
又は非環式の、置換又は無置換の、分岐鎖又は直鎖ヘテロ脂肪族基、置換又は無置換の、
分岐鎖又は直鎖アシル基、置換又は無置換の、分岐鎖又は直鎖アリール基、置換又は無置
換の、分岐鎖又は直鎖ヘテロアリール基であり、
ｘは１～１０の整数であり、
ｎは１～３の整数であり、ｍは０～２０の整数であり、ｐは０又は１であり、ここでｍ
＝ｐ＝０である場合、Ｒ１０２は水素であり、
ｎ又はｍの少なくとも１つが２である場合、Ｒ１０３と式（２０１）における窒素とが
、式（２０２）又は式（２０３）に示される構造を形成する。
Figure 2023082151000010
 式中、ｇ、ｅ及びｆはそれぞれ独立して１～６の整数であり、「ＨＣＣ」は炭化水素鎖
を表し、各＊Ｎは式（２０１）における窒素原子を表す。
いくつかの実施形態において、Ｒ１０３はポリアミンである。他の実施形態において、
Ｒ１０３はケタールである。いくつかの実施形態において、式（２０１）におけるＲ１０
１及びＲ１０２のそれぞれは独立して、任意に置換又は無置換の、分岐鎖又は直鎖アルキ
ル又はアルケニルであり、前記アルキル又はアルケニルは、３～約２０個の炭素原子、例
えば、８～約１８個の炭素原子、及び０～４個の二重結合、例えば、０～２個の二重結合
を有する。
いくつかの実施形態において、ｎとｍのそれぞれが独立して１又は３の値である場合、
Ｒ１０３は、下記式（２０４）～式（２１３）のいずれか１つであってもよい。
Figure 2023082151000011
 式（２０４）～式（２１３）中、ｇ、ｅ及びｆはそれぞれ独立して１～６の整数であり
、各「ＨＣＣ」は炭化水素鎖を表し、各＊はＲ１０３と式（２０１）における窒素原子と
の結合可能点を示し、任意の＊位置上の各Ｈが、式（２０１）における窒素原子と結合す
るために置換されてもよい。
式（２０１）に示される化合物は、ＣＮ１０３３８０１１３Ａの記載により調製されて
もよい。
いくつかの実施形態において、前記有機アミンは、式（２１４）に示される有機アミン
及び／又は式（２１５）に示される有機アミンである。
Figure 2023082151000012
前記補助脂質は、コレステロール、コレステロールのアナログ及び／又はコレステロー
ルの誘導体であり、
前記ＰＥＧ化脂質は、１，２－ジパルミトアミド－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジ
ルエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］－２０００（１，２
－ｄｉｐａｌｍｉｔｏｙｌ－ｓｎ－ｇｌｙｃｅｒｏ－３－ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｅｔ
ｈａｎｏｌａｍｉｎｅ－Ｎ－［ｍｅｔｈｏｘｙ（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏ
ｌ）－２０００］）である。
いくつかの実施形態において、前記薬物組成物において、前記有機アミン、前記補助脂
質及び前記ＰＥＧ化脂質のモル比は（１９．７～８０）：（１９．７～８０）：（０．３
～５０）であり、例えば、（５０～７０）：（２０～４０）：（３～２０）であってもよ
い。
いくつかの実施形態において、本開示のｓｉＲＮＡと上記アミン含有トランスフェクシ
ョン試薬により形成された薬物組成物粒子は、約３０ｎｍ～約２００ｎｍの平均径を有し
、一般に約４０ｎｍ～約１３５ｎｍであり、より一般的には、当該リポソーム粒子の平均
径は約５０ｎｍ～約１２０ｎｍ、約５０ｎｍ～約１００ｎｍ、約６０ｎｍ～約９０ｎｍ又
は約７０ｎｍ～約９０ｎｍであり、例えば、当該リポソーム粒子の平均径は、約３０、４
０、５０、６０、７０、７５、８０、８５、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１
４０、１５０又は１６０ｎｍである。
いくつかの実施形態において、本開示のｓｉＲＮＡと上記アミン含有トランスフェクシ
ョン試薬により形成された薬物組成物において、ｓｉＲＮＡと全脂質（例えば有機アミン
、補助脂質及び／又はＰＥＧ化脂質）の重量比（重量／重量比）は、約１：１～約１：５
０、約１：１～約１：３０、約１：３～約１：２０、約１：４～約１：１８、約１：５～
約１：１７、約１：５～約１：１５、約１：５～約１：１２、約１：６～約１：１２又は
約１：６～約１：１０の範囲内にあり、例えば、本開示のｓｉＲＮＡと全脂質の重量比は
約１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１１，１：１２、１：１３
、１：１４、１：１５、１：１６、１：１７又は１：１８である。
いくつかの実施形態において、前記薬物組成物は、市販時に各成分が独立して存在して
もよく、使用時に液体製剤として存在してもよい。いくつかの実施形態において、本開示
により提供されるｓｉＲＮＡと上記薬学的に許容可能な担体により形成された薬物組成物
は、既知の各種の方法に従い調製されてもよく、従来のｓｉＲＮＡの代わりに本開示によ
り提供されるｓｉＲＮＡを用いればよい。いくつかの実施形態において、以下の方法に従
い調製されてもよい。
有機アミン、補助脂質及びＰＥＧ化脂質を上記モル比でアルコールに懸濁させ均一に混
合して脂質溶液を得る。アルコールの用量は、得られた脂質溶液の総質量濃度が２～２５
ｍｇ／ｍＬ、例えば、８～１８ｍｇ／ｍＬとなるように決定される。前記アルコールは、
薬学的に許容できるアルコール、例えば、エタノール、プロピレングリコール、ベンジル
アルコール、グリセリン、ポリエチレングリコール２００、ポリエチレングリコール３０
０、ポリエチレングリコール４００など、室温付近で液体であるアルコールから選択され
る１種又は複数種であり、例えばエタノールであってよい。
本開示により提供されるｓｉＲＮＡを緩衝塩溶液に溶解し、ｓｉＲＮＡ水溶液を得る。
緩衝塩溶液の濃度は０．０５～０．５Ｍであり、例えば、０．１～０．２Ｍであってもよ
く、緩衝塩溶液のｐＨを４．０～５．５に調節し、例えば、５．０～５．２であってもよ
く、緩衝塩溶液の用量は、ｓｉＲＮＡの濃度が０．６ｍｇ／ｍＬ以下、例えば、０．２～
０．４ｍｇ／ｍＬとなるように決定される。前記緩衝塩は、可溶性酢酸塩、可溶性クエン
酸塩から選択される１種又は複数種であり、例えば、酢酸ナトリウム及び／又は酢酸カリ
ウムであってよい。
脂質溶液とｓｉＲＮＡ水溶液を混合した後、得られた生成物を４０～６０℃で少なくと
も２分間、例えば、５～３０分間培養し、培養したリポソーム製剤を得る。脂質溶液とｓ
ｉＲＮＡ水溶液の体積比は１：（２～５）、例えば、１：４であってもよい。
培養したリポソーム製剤を濃縮又は希釈し、不純物を除去し、除菌し、本開示により提
供される薬物組成物を得る。その物理化学的パラメーターとしては、ｐＨが６．５～８で
あり、封入効率が８０％以上であり、粒子径が４０～２００ｎｍであり、多分散指数が０
．３０以下であり、浸透圧が２５０～４００ｍＯｓｍ／ｋｇであり、例えば、物理化学的
パラメーターとしては、ｐＨが７．２～７．６、封入効率が９０％以上、粒子径が６０～
１００ｎｍ、多分散指数が０．２０以下、浸透圧が３００～４００ｍＯｓｍ／ｋｇであっ
てもよい。
ここで、濃縮又は希釈は、不純物を除去する前、不純物を除去した後又は同時に行われ
てもよい。不純物を除去する方法としては、従来の各種の方法を採用してもよく、例えば
、タンジェンシャルフロー系、中空糸カラムを用い、１００ＫＤａの条件で限外濾過し、
限外濾過交換溶液をｐＨ７．４のリン酸塩緩衝液（ＰＢＳ）としてもよい。除菌方法とし
ては、従来の各種の方法を採用してもよく、例えば、０．２２μｍのフィルターで濾過し
て除菌してもよい。
＜ｓｉＲＮＡ複合体＞
本開示は、上記ｓｉＲＮＡ及び当該ｓｉＲＮＡに複合して結合される複合基を含むｓｉ
ＲＮＡ複合体を提供する。
一般的には、前記複合基は、薬学的に許容できる少なくとも１つの標的基及び任意のリ
ンカー（ｌｉｎｋｅｒ）を含み、前記ｓｉＲＮＡ、前記リンカー及び前記標的基は順に結
合されている。いくつかの実施形態において、前記標的基は１～６個である。いくつかの
実施形態において、前記標的基は２～４個である。前記ｓｉＲＮＡ分子は、前記複合基に
非共有結合的又は共有結合的に複合されてもよく、例えば、前記複合基に共有結合的に複
合されてもよい。ｓｉＲＮＡと複合基との複合部位は、ｓｉＲＮＡのセンス鎖の３’端又
は５’端にあってもよく、アンチセンス鎖の５’端にあってもよく、ｓｉＲＮＡの内部配
列にあってもよい。いくつかの実施形態において、前記ｓｉＲＮＡと複合基との複合部位
は、ｓｉＲＮＡのセンス鎖の３’末端にある。
いくつかの実施形態において、前記複合基は、ヌクレオチドのリン酸基、２’－位のヒ
ドロキシ基又は塩基に結合されてもよい。いくつかの実施形態において、前記複合基は、
３’－位のヒドロキシ基に結合されてもよく、この場合、ヌクレオチド間が２’－５’リ
ン酸ジエステル結合により結合されている。複合基は、ｓｉＲＮＡ鎖の末端に結合される
場合、通常ヌクレオチドのリン酸基に結合され、ｓｉＲＮＡの内部配列に結合される場合
、通常リボース糖環或いは塩基に結合される。各種の結合方法については、文献：Ｍｕｔ
ｈｉａｈ Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ．ａｌ． ｓｉＲＮＡ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｃ
ａｒｒｙｉｎｇ ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌｌｙ ａｓｓｅｍｂｌｅｄ ｔｒｉｖａｌｅｎｔ
Ｎ－ａｃｅｔｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ ｌｉｎｋｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｎｕ
ｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ｅｌｉｃｉｔ ｒｏｂｕｓｔ ｇｅｎｅ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ ｉ
ｎ ｖｉｖｏ ｉｎ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ． ＡＣＳ Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｂｉｏｌ
ｏｇｙ，２０１５，１０ （５）：１１８１～７．を参照することができる。
いくつかの実施形態において、前記ｓｉＲＮＡと複合基との間が酸不安定な又は還元可
能な化学結合により結合されてもよく、細胞エンドソームの酸性環境で、これらの化学結
合が分解され、ｓｉＲＮＡが遊離状態になることができる。分解できない複合方法につい
ては、複合基は、ｓｉＲＮＡのセンス鎖に結合され、複合によるｓｉＲＮＡ活性への影響
をできるだけ低下させることができる。
いくつかの実施形態において、前記薬学的に許容できる標的基は、ｓｉＲＮＡ投与分野
で通常用いられるリガンド、例えば、ＷＯ２００９０８２６０７Ａ２に記載された各種の
リガンドであってもよく、引用によりその開示内容が全体として本明細書に組み込まれる
。
いくつかの実施形態において、前記薬学的に許容できる標的基は、コレステロール、胆
汁酸、ビタミン（例えば、トコフェロール）、鎖長が異なる脂質分子等の親油性分子と、
ポリエチレングリコール等のポリマーと、膜透過性ペプチド等のポリペプチドと、アプタ
マーと、抗体と、量子ドットと、ラクトース、ポリラクトース、マンノース、ガラクトー
ス、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）等の糖類と、葉酸（ｆｏｌａｔｅ）と
、アシアロ糖タンパク質、アシアロ糖残基、リポタンパク（例えば、高密度リポタンパク
、低密度リポタンパク等）、グルカゴン、神経伝達物質（例えば、アドレナリン）、成長
因子、トランスフェリン等の肝実質細胞に発現する受容体リガンド等の標的分子又はその
誘導体により形成されたリガンドから選択される１種又は複数種であってよい。
いくつかの実施形態において、前記各リガンドは、細胞表面の受容体と結合できるリガ
ンドから独立して選択される。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのリガンド
は、肝細胞表面の受容体と結合できるリガンドである。いくつかの実施形態において、少
なくとも１つのリガンドは、哺乳動物の細胞表面の受容体と結合できるリガンドである。
いくつかの実施形態において、少なくとも１つのリガンドは、ヒト肝細胞表面の受容体と
結合できるリガンドである。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのリガンドは
、肝表面のアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）と結合できるリガンドである。こ
れらのリガンドの種類は、当業者に公知であり、その作用として、一般的に標的細胞表面
の特異的受容体と結合し、リガンドに結合されるｓｉＲＮＡの標的細胞への送達を媒介す
る。
いくつかの実施形態において、前記薬学的に許容できる標的基は、哺乳動物の肝細胞表
面におけるアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）と結合するいずれか１種のリガン
ドであってもよい。いくつかの実施形態において、各リガンドは、独立してアシアロ糖タ
ンパク質、例えば、アシアロオロソムコイド（ａｓｉａｌｏｏｒｏｓｏｍｕｃｏｉｄ、Ａ
ＳＯＲ）又はアシアロフェチュイン（ａｓｉａｌｏｆｅｔｕｉｎ、ＡＳＦ）である。いく
つかの実施形態において、前記リガンドは、糖又は糖の誘導体である。
いくつかの実施形態において、少なくとも１つのリガンドは糖である。いくつかの実施
形態において、各リガンドはいずれも糖である。いくつかの実施形態において、少なくと
も１つのリガンドは、単糖、多糖、修飾単糖、修飾多糖又は糖誘導体である。いくつかの
実施形態において、少なくとも１つの前記リガンドは、単糖、二糖又は三糖であってもよ
い。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのリガンドは修飾糖である。いくつか
の実施形態において、各リガンドは、いずれも修飾糖である。いくつかの実施形態におい
て、各リガンドは、いずれも独立して多糖、修飾多糖、単糖、修飾単糖、多糖誘導体又は
単糖誘導体から選択される。いくつかの実施形態において、リガンドのそれぞれ又は少な
くとも１つは、グルコース及びその誘導体、マンナン及びその誘導体、ガラクトース及び
その誘導体、キシロース及びその誘導体、リボース及びその誘導体、フコース及びその誘
導体、ラクトース及びその誘導体、マルトース及びその誘導体、アラビノース及びその誘
導体、フルクトース及びその誘導体並びにシアル酸からなる群から選択される。
いくつかの実施形態において、各前記リガンドは、Ｄ－マンノピラノース、Ｌ－マンノ
ピラノース、Ｄ－アラビノース、Ｄ－キシロフラノース、Ｌ－キシロフラノース、Ｄ－グ
ルコース、Ｌ－グルコース、Ｄ－ガラクトース、Ｌ－ガラクトース、α－Ｄ－マンノフラ
ノース、β－Ｄ－マンノフラノース、α－Ｄ－マンノピラノース、β－Ｄ－マンノピラノ
ース、α－Ｄ－グルコピラノース、β－Ｄ－グルコピラノース、α－Ｄ－グルコフラノー
ス、β－Ｄ－グルコフラノース、α－Ｄ－フルクトフラノース、α－Ｄ－フルクトピラノ
ース、α－Ｄ－ガラクトピラノース、β－Ｄ－ガラクトピラノース、α－Ｄ－ガラクトフ
ラノース、β－Ｄ－ガラクトフラノース、グルコサミン、シアル酸、ガラクトサミン、Ｎ
－アセチルガラクトサミン、Ｎ－トリフルオロアセチルガラクトサミン、Ｎ－プロピオニ
ルガラクトサミン、Ｎ－ｎ－ブチリルガラクトサミン、Ｎ－イソブチリルガラクトサミン
、２－アミノ－３－Ｏ－［（Ｒ）－１－カルボキシエチル］－２－デオキシ－β－Ｄ－グ
ルコピラノース、２－デオキシ－２－メチルアミノ－Ｌ－グルコピラノース、４，６－ジ
デオキシ－４－ホルムアミド－２，３－ジ－Ｏ－メチル－Ｄ－マンノピラノース、２－デ
オキシ－２－スルホアミノ－Ｄ－グルコピラノース、Ｎ－グリコリル－α－ノイラミン酸
、５－チオ－β－Ｄ－グルコピラノース、メチル２，３，４－トリス－Ｏ－アセチル－１
－チオ－６－Ｏ－トリチル－α－Ｄ－グルコピラノシド（ｍｅｔｈｙｌ ２，３，４－ｔ
ｒｉｓ－Ｏ－ａｃｅｔｙｌ－１－ｔｈｉｏ－６－Ｏ－ｔｒｉｔｙｌ－α－Ｄ－ｇｌｕｃｏ
ｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ）、４－チオ－β－Ｄ－ガラクトピラノース、エチル３，４，６，
７－テトラ－Ｏ－アセチル－２－デオキシ－１，５－ジチオ－α－Ｄ－グルコヘプトピラ
ノシド、２，５－アンヒドロ－Ｄ－アロニトリル、リボース、Ｄ－リボース、Ｄ－４－チ
オリボース、Ｌ－リボース又はＬ－４－チオリボースから独立して選択されてもよい。前
記リガンドの他の選択肢は、例えば、ＣＮ１０５３７８０８２Ａの記載を参照してもよく
、引用によりその開示内容が全体として本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態において、前記ｓｉＲＮＡ複合体における薬学的に許容できる標的
基は、ガラクトース又はＮ－アセチルガラクトサミンであってもよく、ガラクトース又は
Ｎ－アセチルガラクトサミン分子は、１価、２価、３価、４価であってもよい。ここでい
う１価、２価、３価、４価は、それぞれｓｉＲＮＡ分子と、標的基としてのガラクトース
又はＮ－アセチルガラクトサミン分子を含む複合基から形成されたｓｉＲＮＡ複合体にお
けるｓｉＲＮＡ分子とガラクトース又はＮ－アセチルガラクトサミン分子とのモル比が１
：１、１：２、１：３又は１：４であることを指すと理解すべきである。いくつかの実施
形態において、前記薬学的に許容できる標的基はＮ－アセチルガラクトサミンである。い
くつかの実施形態において、本開示に記載されたｓｉＲＮＡがＮ－アセチルガラクトサミ
ンを含む複合基と複合する場合、Ｎ－アセチルガラクトサミン分子は３価又は４価である
。いくつかの実施形態において、本開示に記載されたｓｉＲＮＡがＮ－アセチルガラクト
サミンを含む複合基と複合する場合、Ｎ－アセチルガラクトサミン分子は３価である。
標的基は、適切なリンカーを介してｓｉＲＮＡ分子に結合されてもよく、当業者は、標
的基の具体的な種類により適切なリンカーを選択することができる。これらのリンカー、
標的基の種類及びｓｉＲＮＡへの結合方法については、ＷＯ２０１５００６７４０Ａ２の
開示内容を参照してもよく、引用によりその内容が全体として本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態において、前記標的基がＮ－アセチルガラクトサミンである場合、
適切なリンカーは、式（３０１）に示される構造であってもよい。
Figure 2023082151000013
 式中、
ｋは１～３の整数であり、
ＬＡは、式（３０２）に示される構造を有するアミド結合を含む鎖状部であり、各前記
ＬＡは、その両端でそれぞれ１つの前記標的基及び前記ＬＣ部にエーテル結合により結合
される。
Figure 2023082151000014
 ＬＢは、式（３０３）に示される構造を有するＮ－アシルピロリジンを含む鎖状部であ
り、前記鎖状部は、その一端にカルボニル基を有し、前記ＬＣ部にアミド結合により結合
され、他端に酸素基を有し、前記ｓｉＲＮＡにリン酸エステル結合により結合される。
Figure 2023082151000015
 ＬＣは、ヒドロキシメチルアミノメタン、ジヒドロキシメチルアミノメタン又はトリヒ
ドロキシメチルアミノメタンに基づく２～４価のリンカー基であり、前記ＬＣは、酸素原
子を介してエーテル結合により各前記ＬＡ部に結合されるとともに、窒素原子を介してア
ミド結合により前記ＬＢ部に結合される。
いくつかの実施形態において、ｎ＝３であり、ＬＣがトリヒドロキシメチルアミノメタ
ンに基づく４価のリンカー基である場合、リンカーとしての－（ＬＡ）３トリヒドロキシ
メチルアミノメタン－ＬＢ－によりＮ－アセチルガラクトサミン分子とｓｉＲＮＡ分子を
結合して形成されたｓｉＲＮＡ複合体は、その構造が以下の式（３０４）に示される。
Figure 2023082151000016
 式中、二重螺旋構造はｓｉＲＮＡを表す。
同様に、ｓｉＲＮＡと複合基との複合部位は、ｓｉＲＮＡのセンス鎖の３’端又は５’
端にあってもよく、アンチセンス鎖の５’端にあってもよく、ｓｉＲＮＡの内部配列にあ
ってもよい。
いくつかの実施形態において、本開示に記載されたｓｉＲＮＡのセンス鎖の３’末端は
、リンカー－（ＬＡ）３トリヒドロキシメチルアミノメタン－ＬＢ－により３個のＮ－ア
セチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）分子に共有結合的に複合され、ｓｉＲＮＡ分子と
ＧａｌＮＡｃ分子とのモル比が１：３である、構造が以下の式（３０５）に示されるｓｉ
ＲＮＡ複合体（以下、（ＧａｌＮＡｃ）３－ｓｉＲＮＡともいう）を得る。
Figure 2023082151000017
 式中、二重螺旋構造は前記ｓｉＲＮＡを表し、前記リンカーは前記ｓｉＲＮＡのセンス
鎖の３’末端に結合される。
いくつかの実施形態において、前記標的基がＮ－アセチルガラクトサミンである場合、
適切なリンカーは、式（３０６）に示される構造であってもよい。
Figure 2023082151000018
 式中、
ｌは０～３の整数であり、
＊は、リンカーにおいてエーテル結合により標的基に結合される部位を表し、
＃は、リンカーにおいてリン酸エステル結合によりｓｉＲＮＡに結合される部位を表す
。
いくつかの実施形態において、ｌ＝２である場合、前記ｓｉＲＮＡ複合体は、式（３０
７）に示される構造を有する。
Figure 2023082151000019
 式中、二重螺旋構造は前記ｓｉＲＮＡを表し、前記リンカーは前記ｓｉＲＮＡのセンス
鎖の３’末端に結合される。
上記複合体は、従来技術において既に詳しく記載された方法により合成されてもよい。
例えば、ＷＯ２０１５００６７４０Ａ２には、複数種の複合体の調製方法が詳しく記載さ
れている。当業者によく知られた方法により、本開示のｓｉＲＮＡ複合体を得る。例えば
、ＷＯ２０１４０２５８０５Ａ１には、式（３０５）に示される構造の調製方法が記載さ
れており、Ｒａｊｅｅｖらは、ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ ２０１５，１６，９０３－９０
８に式（３０７）に示される構造の調製方法を記載した。
いくつかの実施形態において、前記ｓｉＲＮＡ複合体は、式（３０８）に示される構造
を有する。
Figure 2023082151000020
 式中、
ｎ１は、１～３から選択される整数であり、ｎ３は、０～４から選択される整数であり
、
ｍ１、ｍ２及びｍ３は独立して、２～１０から選択される整数であり、
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４及びＲ１５は、それぞれ独立して、Ｈであり
、又はＣ１－Ｃ１０アルキル基、Ｃ１－Ｃ１０ハロゲン化アルキル基及びＣ１－Ｃ１０ア
ルコキシ基からなる群から選択され、
Ｒ３は式Ａ５９に示される構造の基である。
Figure 2023082151000021
 式中、Ｅ１はＯＨ、ＳＨ又はＢＨ２であり、Ｎｕは本開示のｓｉＲＮＡである。
Ｒ２は、長さ１～２０の炭素原子の直鎖アルキレン基であり、１又は複数の炭素原子は
、Ｃ（Ｏ）、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、ＣＨ=Ｎ、Ｓ（Ｏ）２、Ｃ２－Ｃ１０アルケニレン基、Ｃ２
－Ｃ１０アルキニレン基、Ｃ６－Ｃ１０アリーレン基、Ｃ３－Ｃ１８ヘテロシクリレン基
及びＣ５－Ｃ１０ヘテロアリーレン基からなる群から選択される１又は複数で任意に置換
され、Ｒ２は、Ｃ１－Ｃ１０アルキル基、Ｃ６－Ｃ１０アリール基、Ｃ５－Ｃ１０ヘテロ
アリール基、Ｃ１－Ｃ１０ハロゲン化アルキル基、－ＯＣ１－Ｃ１０アルキル基、－ＯＣ
１－Ｃ１０アルキルフェニル基、－Ｃ１－Ｃ１０アルキル－ＯＨ、－ＯＣ１－Ｃ１０ハロ
ゲン化アルキル基、－ＳＣ１－Ｃ１０アルキル基、－ＳＣ１－Ｃ１０アルキルフェニル基
、－Ｃ１－Ｃ１０アルキル－ＳＨ、－ＳＣ１－Ｃ１０ハロゲン化アルキル基、ハロゲン置
換基、－ＯＨ、－ＳＨ、－ＮＨ２、－Ｃ１－Ｃ１０アルキル－ＮＨ２、－Ｎ（Ｃ１－Ｃ１
０アルキル基）（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－ＮＨ（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、シア
ノ基、ニトロ基、－ＣＯ２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－ＣＯＮ（Ｃ
１－Ｃ１０アルキル基）（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－ＣＯＮＨ（Ｃ１－Ｃ１０アルキ
ル基）、－ＣＯＮＨ２、－ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－ＮＨＣ（Ｏ）（
フェニル基）、－Ｎ（Ｃ１－Ｃ１０アルキル）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－
Ｎ（Ｃ１－Ｃ１０アルキル）Ｃ（Ｏ）（フェニル基）、－Ｃ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ１０アルキル
基、－Ｃ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ１０アルキルフェニル基、－Ｃ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ１０ハロアルキル
基、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ１０アルキル基、－ＳＯ２（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－Ｓ
Ｏ２（フェニル基）、－ＳＯ２（Ｃ１－Ｃ１０ハロゲン化アルキル基）、－ＳＯ２ＮＨ２
、－ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－ＳＯ２ＮＨ（フェニル基）、－ＮＨＳＯ
２（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－ＮＨＳＯ２（フェニル基）及び－ＮＨＳＯ２（Ｃ１－
Ｃ１０ハロゲン化アルキル基）からなる群のいずれか１つ又は複数の置換基を任意に有し
てもよい。
各Ｌ１は、長さ１～７０の炭素原子の直鎖アルキレン基であり、１又は複数の炭素原子
は、Ｃ（Ｏ）、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、ＣＨ=Ｎ、Ｓ（Ｏ）２、Ｃ２－Ｃ１０アルケニレン基、Ｃ
２－Ｃ１０アルキニレン基、Ｃ６－Ｃ１０アリーレン基、Ｃ３－Ｃ１８ヘテロシクリレン
基及びＣ５－Ｃ１０ヘテロアリーレン基からなる群から選択される１又は複数で任意に置
換され、Ｌ１は、Ｃ１－Ｃ１０アルキル基、Ｃ６－Ｃ１０アリール基、Ｃ５－Ｃ１０ヘテ
ロアリール基、Ｃ１－Ｃ１０ハロゲン化アルキル基、－ＯＣ１－Ｃ１０アルキル基、－Ｏ
Ｃ１－Ｃ１０アルキルフェニル基、－Ｃ１－Ｃ１０アルキル－ＯＨ、－ＯＣ１－Ｃ１０ハ
ロゲン化アルキル基、－ＳＣ１－Ｃ１０アルキル基、－ＳＣ１－Ｃ１０アルキルフェニル
基、－Ｃ１－Ｃ１０アルキル－ＳＨ、－ＳＣ１－Ｃ１０ハロゲン化アルキル基、ハロゲン
置換基、－ＯＨ、－ＳＨ、－ＮＨ２、－Ｃ１－Ｃ１０アルキル－ＮＨ２、－Ｎ（Ｃ１－Ｃ
１０アルキル基）（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－ＮＨ（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、シ
アノ基、ニトロ基、－ＣＯ２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－ＣＯＮ（
Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－ＣＯＮＨ（Ｃ１－Ｃ１０アル
キル基）、－ＣＯＮＨ２、－ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－ＮＨＣ（Ｏ）
（フェニル基）、－Ｎ（Ｃ１－Ｃ１０アルキル）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、
－Ｎ（Ｃ１－Ｃ１０アルキル）Ｃ（Ｏ）（フェニル基）、－Ｃ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ１０アルキ
ル基、－Ｃ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ１０アルキルフェニル基、－Ｃ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ１０ハロアルキ
ル基、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ１０アルキル基、－ＳＯ２（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－
ＳＯ２（フェニル基）、－ＳＯ２（Ｃ１－Ｃ１０ハロゲン化アルキル基）、－ＳＯ２ＮＨ
２、－ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－ＳＯ２ＮＨ（フェニル基）、－ＮＨＳ
Ｏ２（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－ＮＨＳＯ２（フェニル基）及び－ＮＨＳＯ２（Ｃ１
－Ｃ１０ハロゲン化アルキル基）からなる群のいずれか１つ又は複数の置換基を任意に有
してもよい。
いくつかの実施形態において、Ｌ１は、Ａ１～Ａ２６基又はその任意の組合せからなる
群から選択されてもよく、Ａ１～Ａ２６の構造と定義は以下のとおりである。
Figure 2023082151000022
Figure 2023082151000023
ただし、ｊ１は１～２０の整数であり、ｊ２は１～２０の整数であり、
Ｒ’はＣ１－Ｃ１０のアルキル基であり、
Ｒａは、式Ａ２７～Ａ４５の基又はその任意の組合せからなる群から選択される。
Figure 2023082151000024
 ＲｂはＣ１－Ｃ１０のアルキル基であり、
Figure 2023082151000025
は、基が分子の残りの部分に結合される部位を表す。
便宜上、Ｌ１は、線形アルキレン基として定義されるが、例えば上述した取替及び／又は置換によって生じるアミンやアルケニル基で、線形基ではない、又は名称が異なる可能性があることは、当業者に理解される。本開示内容の目的のために、Ｌ１の長さは、２つの結合点を結合する鎖における原子数である。この目的のために、前記直鎖アルキレンの炭素原子を置換して得られた環（例えば、ヘテロシクリレン又はヘテロアリーレン）を、１個の原子とする。
Ｍ１は、標的基を表し、その定義と選択可能な範囲は上記標的基と同じである。いくつ
かの実施形態において、各Ｍ１は、哺乳動物の肝臓細胞表面におけるアシアロ糖タンパク
質受容体に対して親和力を有するリガンドから独立して選択される１つである。
Ｍ１が哺乳動物の肝臓細胞表面におけるアシアロ糖タンパク質受容体に対して親和力を
有するリガンドである場合、いくつかの実施形態において、ｎ１は、１～３の整数であっ
てもよく、ｎ３は、０～４の整数であってもよく、前記複合体におけるＭ１標的基の個数
が少なくとも２であることを確保する。いくつかの実施形態において、ｎ１＋ｎ３≧２で
あり、これにより、Ｍ１標的基の個数が少なくとも３であり、Ｍ１標的基と肝表面のアシ
アロ糖タンパク質受容体をより容易に結合させ、さらに前記複合体がエンドサイトーシス
作用により細胞に取り込まれることを促進することができる。実験から分かるように、Ｍ
１標的基の個数が３個以上である場合、Ｍ１標的基と肝表面のアシアロ糖タンパク質受容
体との結合の容易さの向上が明らかではないので、合成の容易さ、構造／プロセスコスト
及び送達効率等の多方面を総合的に考慮すると、いくつかの実施形態において、ｎ１は１
～２の整数であり、ｎ３は０～１の整数であり、かつ、ｎ１＋ｎ３＝２～３である。
いくつかの実施形態において、ｍ１、ｍ２及びｍ３は、独立して２～１０の整数から選
択される場合、複数のＭ１標的基間の空間位置をＭ１標的基と肝表面のアシアロ糖タンパ
ク質受容体との結合に適合させることができる。本開示により提供される複合体をより簡
略化し、より合成しやすく、及び／又はコストを低下させるために、いくつかの実施形態
において、ｍ１、ｍ２及びｍ３は、それぞれ独立して２～５の整数であり、いくつかの実
施形態において、ｍ１＝ｍ２＝ｍ３である。
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４及びＲ１５が、Ｈ、Ｃ１－Ｃ１０アルキル基
、Ｃ１－Ｃ１０ハロゲン化アルキル基及びＣ１－Ｃ１０アルコキシからそれぞれ独立して
選択される１つである場合、いずれも本開示の複合体の性質を変化させることなく、本開
示の目的を実現することができることは、当業者に理解され得る。いくつかの実施形態に
おいて、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４及びＲ１５は、それぞれ独立してＨ、
メチル基及びエチル基から選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ１０、Ｒ１１、
Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４及びＲ１５は、いずれもＨである。
Ｒ３は、式Ａ５９に示される構造の基であり、そのうち、Ｅ１はＯＨ、ＳＨ又はＢＨ２
であり、調製原料の入手しやすさを考慮し、いくつかの実施形態においては、Ｅ１はＯＨ
又はＳＨである。
Ｒ２は、窒素含有骨格上のＮとＡ５９との結合を実現するために選択される。本開示の
文脈において、「窒素含有骨格」とは、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４及びＲ
１５が結合された炭素原子とＮが互いに結合している鎖状構造を指す。したがって、Ｒ２
は、適当な方法でＡ５９基を窒素含有骨格上のＮに結合することができる任意のリンカー
基であってもよい。いくつかの実施形態において、固相合成プロセスにより式（３０８）
に示されるｓｉＲＮＡ複合体を調製する場合に、Ｒ２基には、窒素含有骨格上のＮに結合
される結合部位及びＲ３におけるＰに結合される結合部位がともに含まれる必要がある。
いくつかの実施形態において、Ｒ２における前記窒素含有骨格中のＮに結合される部位は
、Ｎとアミド結合を形成し、前記Ｒ３上のＰに結合される部位は、Ｐとリン酸エステル結
合を形成し、いくつかの実施形態において、Ｒ２は、Ｂ５、Ｂ６、Ｂ５’又はＢ６’であ
ってもよい。
Figure 2023082151000026
 ただし、
Figure 2023082151000027
は、基が共有結合的に結合する部位を表す。
ｑ２の値の範囲は、１～１０の整数であってもよく、いくつかの実施形態において、ｑ
２は１～５の整数である。
Ｌ１は、Ｍ１標的基と窒素含有骨格上のＮを結合し、式（３０８）に示されるｓｉＲＮ
Ａ複合体に肝標的機能を提供するという役割を果たす。いくつかの実施形態において、Ｌ
１は、式Ａ１～Ａ２６基の１又は複数の結合組合せから選択される。いくつかの実施形態
において、Ｌ１は、Ａ１、Ａ４、Ａ５、Ａ６、Ａ８、Ａ１０、Ａ１１及びＡ１３の１又は
複数の結合組合せから選択される。いくつかの実施形態において、Ｌ１は、Ａ１、Ａ４、
Ａ８、Ａ１０及びＡ１１の少なくとも２つの結合組合せから選択される。いくつかの実施
形態において、Ｌ１は、Ａ１、Ａ８、Ａ１０の少なくとも２つの結合組合せから選択され
る。
いくつかの実施形態において、Ｌ１の長さは、３～２５個の原子、３～２０個の原子、
４～１５個の原子又は５～１２個の原子であってもよい。いくつかの実施形態において、
Ｌ１の長さは、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、
１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、
２３個、２４個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個、６０個の
原子である。
便宜上、Ｌ１は、線形アルキレン基として定義されるが、例えば上述した取替及び／又は置換によって生じるアミンやアルケニル基で、線形基ではない、又は名称が異なる可能性があることは、当業者に理解される。本開示内容の目的のために、Ｌ１の長さは、２つの結合点を結合する鎖における原子数である。この目的のために、前記直鎖アルキレンの炭素原子を置換して得られた環（例えば、ヘテロシクリレン又はヘテロアリーレン）を、１個の原子とする。
いくつかの実施形態において、ｊ１は２～１０の整数であり、いくつかの実施形態にお
いて、ｊ１は３～５の整数である。いくつかの実施形態において、ｊ２は２～１０の整数
であり、いくつかの実施形態において、ｊ２は３～５の整数である。Ｒ’はＣ１－Ｃ４の
アルキル基であり、いくつかの実施形態において、Ｒ’は、メチル基、エチル基及びイソ
プロピル基の１つである。Ｒａは、Ａ２７、Ａ２８、Ａ２９、Ａ３０及びＡ３１の１つで
あり、いくつかの実施形態において、Ｒａは、Ａ２７又はＡ２８である。Ｒｂは、Ｃ１－
Ｃ５のアルキル基であり、いくつかの実施形態において、Ｒｂは、メチル基、エチル基、
イソプロピル基及びブチル基の１つである。いくつかの実施形態において、式Ａ１～Ａ２
６においてそれぞれｊ１、ｊ２、Ｒ’、Ｒａ、Ｒｂを選択することにより、Ｍ１標的基と
窒素含有骨格上のＮとの結合を実現し、Ｍ１標的基間の空間位置をＭ１標的基と肝表面の
アシアロ糖タンパク質受容体との結合に更に適合させる。
いくつかの実施形態において、当該複合体は、式（４０３）、（４０４）、（４０５）
、（４０６）、（４０７）、（４０８）、（４０９）、（４１０）、（４１１）、（４１
２）、（４１３）、（４１４）、（４１５）、（４１６）、（４１７）、（４１８）、（
４１９）、（４２０）、（４２１）又は（４２２）に示される構造を有する。
Figure 2023082151000028
Figure 2023082151000029
Figure 2023082151000030
Figure 2023082151000031
Figure 2023082151000032
Figure 2023082151000033
いくつかの実施形態において、式Ａ５９におけるＰは、ｓｉＲＮＡ配列における任意の
可能な位置に結合されてもよく、例えば、式Ａ５９におけるＰは、ｓｉＲＮＡのセンス鎖
又はアンチセンス鎖のいずれか１つのヌクレオチドに結合されてもよく、いくつかの実施
形態において、式Ａ５９におけるＰは、ｓｉＲＮＡのセンス鎖のいずれか１つのヌクレオ
チドに結合される。いくつかの実施形態において、式Ａ５９におけるＰは、ｓｉＲＮＡの
センス鎖又はアンチセンス鎖の端部に結合され、いくつかの実施形態において、式Ａ５９
におけるＰは、ｓｉＲＮＡのセンス鎖の端部に結合される。前記端部とは、前記センス鎖
又は前記アンチセンス鎖においてその一端から前の４個のヌクレオチドを指す。いくつか
の実施形態において、式Ａ５９におけるＰは、ｓｉＲＮＡのセンス鎖又はアンチセンス鎖
の末端に結合され、いくつかの実施形態において、式Ａ５９におけるＰは、ｓｉＲＮＡの
センス鎖の３’末端に結合される。ｓｉＲＮＡのセンス鎖の上記位置に結合される場合に
、式（３０８）に示されるｓｉＲＮＡ複合体は、細胞に入り込んだ後、巻き戻されるとき
に、単独のｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖を放出し、ＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡがタンパク
質を翻訳する過程を遮断し、アンジオポエチン様タンパク質３（ＡＮＧＰＴＬ３）遺伝子
発現を抑制することができる。
いくつかの実施形態において、式Ａ５９におけるＰは、ｓｉＲＮＡにおけるヌクレオチ
ド上の任意の可能な位置、例えば、ヌクレオチドの５’位、ヌクレオチドの２’位、ヌク
レオチドの３’位又はヌクレオチドの塩基に結合されてもよい。いくつかの実施形態にお
いて、式Ａ５９におけるＰは、リン酸ジエステル結合を形成することにより前記ｓｉＲＮ
Ａにおけるヌクレオチドの２’位、３’位又は５’位に結合されてもよい。いくつかの実
施形態において、式Ａ５９におけるＰは、ｓｉＲＮＡのセンス鎖の３’末端のヌクレオチ
ドの３’ヒドロキシ基を脱水素した酸素原子に結合され、或いは、式Ａ５９におけるＰは
、ｓｉＲＮＡのセンス鎖における１つのヌクレオチドの２’－ヒドロキシ基中の水素を置
換することによりヌクレオチドに結合され、或いは、式Ａ５９におけるＰは、ｓｉＲＮＡ
のセンス鎖の５’末端のヌクレオチドの５’ヒドロキシ基中の水素を置換することにより
ヌクレオチドに結合される。
本開示の発明者は、本開示のｓｉＲＮＡ複合体が、顕著に向上した血漿中安定性、低いオフターゲット効果を有するとともに、明らかに低下していないＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡサイレンシング活性をさらに示し、さらに高い脂質抑制作用を有することを意外にも見出した。したがって、いくつかの実施形態において、本開示のｓｉＲＮＡ複合体におけるｓｉＲＮＡは、表１に示されるｓｉＡＮ１、ｓｉＡＮ２、ｓｉＡＮ１－Ｍ１、ｓｉＡＮ２－Ｍ１、ｓｉＡＮ１－Ｍ２、ｓｉＡＮ２－Ｍ２、ｓｉＡＮ１－Ｍ３、ｓｉＡＮ２－Ｍ３、ｓｉＡＮ１－Ｍ１Ｓ、ｓｉＡＮ２－Ｍ１Ｓ、ｓｉＡＮ１－Ｍ２Ｓ、ｓｉＡＮ２－Ｍ２Ｓ、ｓｉＡＮ１－Ｍ３Ｓ、ｓｉＡＮ２－Ｍ３Ｓ、ｓｉＡＮ１－Ｍ１Ｐ１、ｓｉＡＮ２－Ｍ１Ｐ１、ｓｉＡＮ１－Ｍ２Ｐ１、ｓｉＡＮ２－Ｍ２Ｐ１、ｓｉＡＮ１－Ｍ３Ｐ１、ｓｉＡＮ２－Ｍ３Ｐ１、ｓｉＡＮ１－Ｍ１ＳＰ１、ｓｉＡＮ２－Ｍ１ＳＰ１、ｓｉＡＮ１－Ｍ２ＳＰ１、ｓｉＡＮ２－Ｍ２ＳＰ１、ｓｉＡＮ１－Ｍ３ＳＰ１、ｓｉＡＮ２－Ｍ３ＳＰ１の１つであってもよい。
Figure 2023082151000034
Figure 2023082151000035
本開示の複合体におけるｓｉＲＮＡ配列
本開示に記載されたｓｉＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ複合体において、各隣接するヌクレオチ
ド間がリン酸ジエステル結合又はチオリン酸ジエステル結合により結合され、リン酸ジエ
ステル結合又はチオリン酸ジエステル結合における非架橋酸素原子又は硫黄原子は、負電
荷を帯び、ヒドロキシ基又はスルフヒドリル基（Ｓｕｌｆｈｙｄｒｙｌ ｇｒｏｕｐ）と
して存在してもよく、ヒドロキシ基又はスルフヒドリル基における水素イオンは、一部又
は全部がカチオンで置換されてもよい。前記カチオンは、任意のカチオン、例えば、金属
カチオン、アンモニウムイオンＮＨ４ ＋、有機アンモニウムカチオンの１つであってもよ
い。溶解性の向上を考慮して、１つの実施形態において、前記カチオンは、アルカリ金属
イオン、第３級アミンにより形成されたアンモニウムカチオン及び４級アンモニウムカチ
オンから選択される１種又は複数種である。アルカリ金属イオンは、Ｋ＋及び／又はＮａ
＋であってもよく、第３級アミンにより形成されたカチオンは、トリエチルアミンにより
形成されたアンモニウムイオン、及び／又はＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンにより
形成されたアンモニウムイオンであってもよい。したがって、本開示に記載されたｓｉＲ
ＮＡ又はｓｉＲＮＡ複合体は、少なくとも一部が塩として存在してもよい。１つの態様に
おいて、リン酸ジエステル結合又はチオリン酸ジエステル結合における非架橋酸素原子又
は硫黄原子は、少なくとも一部がナトリウムイオンに結合され、本開示に記載されたｓｉ
ＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ複合体は、ナトリウム塩又は部分ナトリウム塩として存在する。
当業者であれば明らかに知っているように、対応する修飾を有するヌクレオシドモノマ
ーを用いることにより、修飾ヌクレオチド基を本開示に記載されたｓｉＲＮＡに導入する
ことができる。対応する修飾を有するヌクレオシドモノマーを調製する方法、及び修飾ヌ
クレオチド基をｓｉＲＮＡに導入する方法も、当業者によく知られている。全ての修飾ヌ
クレオシドモノマーは、市販品を購入してもよく、既知の方法により調製してもよい。
＜式（３０８）に示されるｓｉＲＮＡ複合体の調製＞
任意の合理的な合成経路により式（３０８）に示されるｓｉＲＮＡ複合体を調製しても
よい。
いくつかの実施形態において、式（３０８）に示されるｓｉＲＮＡ複合体は、以下の方
法により調製することができる。当該方法は、ホスホルアミダイト固相合成の条件で、そ
れぞれｓｉＲＮＡのセンス鎖及びアンチセンス鎖のヌクレオチド種類と手順により、３’
から５’に向かってヌクレオシドモノマーを順に結合し、各ヌクレオシドモノマーの結合
は脱保護、カップリング、キャッピング、酸化又は硫化の４つの反応を含み、ｓｉＲＮＡ
のセンス鎖及びアンチセンス鎖を単離し、アニールを行うことを含み、前記ｓｉＲＮＡは
、上記本開示のｓｉＲＮＡである。
また、当該方法は、カップリング反応条件及びカップリング試薬の存在下で、式（３２
１）に示される化合物を、ヌクレオシドモノマー又は固相担体に結合されたヌクレオチド
配列と接触させ、式（３２１）に示される化合物をカップリング反応させてヌクレオチド
配列に結合することをさらに含む。以下に、式（３２１）に示される化合物は、複合分子
とも呼ばれる。
Figure 2023082151000036
 式中、
Ｒ４は、Ｎｕに示されるｓｉＲＮＡに結合できる部分である。いくつかの実施形態にお
いて、Ｒ４は、共有結合によりＮｕに示されるｓｉＲＮＡに結合することができる部分で
ある。いくつかの実施形態において、Ｒ４は、反応を経てリン酸ジエステル結合によりＮ
ｕに示されるｓｉＲＮＡの任意の官能基に複合されることができる部分であり、
各Ｓ１は、独立してＭ１において全ての活性ヒドロキシ基がＹＣＯＯ－基で置換された
基であり、各Ｙは、メチル基、トリフルオロメチル基、ジフルオロメチル基、フルオロメ
チル基、トリクロロメチル基、ジクロロメチル基、クロロメチル基、エチル基、ｎ－プロ
ピル基、イソプロピル基、フェニル基、ハロフェニル基及びアルキルフェニル基から独立
して選択される１つであり、いくつかの実施形態において、Ｙはメチル基である。
ｎ１、ｎ３、ｍ１、ｍ２、ｍ３、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、
Ｌ１、Ｍ１それぞれの定義と選択可能な範囲は、前述したとおりである。
Ｒ４は、窒素含有骨格上のＮとの結合を実現し、式（３０８）に示されるｓｉＲＮＡ複
合体の合成に適切な反応部位を提供するために選択される。いくつかの実施形態において
、Ｒ４には、Ｒ２リンカー基又は保護されたＲ２リンカー基、及び反応させることにより
ｓｉＲＮＡとＡ５９に示される構造を形成することができる官能基が含まれる。
いくつかの実施形態において、Ｒ４は、Ｎｕに示されるｓｉＲＮＡ又はヌクレオシドモ
ノマー上の基と亜リン酸エステルを形成することができる第１の官能基と、ヒドロキシ基
又はアミノ基と反応させて共有結合を形成することができる第２の官能基または前記共有
結合により結合された固相担体とを含む。いくつかの実施形態において、前記第１の官能
基は、ホスホルアミダイト、ヒドロキシ基又は保護されたヒドロキシ基である。いくつか
の実施形態において、前記第２の官能基は、ホスホルアミダイト、カルボン酸又はカルボ
ン酸塩である。いくつかの実施形態において、前記第２の官能基は、共有結合を介して分
子の他の部分に結合される固相担体であり、前記共有結合は、ヒドロキシ基又はアミノ基
により形成されている。いくつかの実施形態において、前記固相担体は、リン酸エステル
結合、カルボン酸エステル結合又はアミド結合を介して結合されている。いくつかの実施
形態において、前記固相担体は樹脂である。
いくつかの実施形態において、前記第１の官能基は、ヒドロキシ基、－ＯＲｋ又は式（
Ｃ３）に示される基を含み、前記第２の官能基は、式（Ｃ１）、（Ｃ２）、（Ｃ３）、（
Ｃ１’）又は（Ｃ３’）に示される構造を含む。
Figure 2023082151000037
 式中、ｑ１は１～４の整数であり、ＸはＯ又はＮＨであり、Ｍ＋はカチオンであり、Ｒ
ｋはヒドロキシ保護基であり、ＳＰＳは固相担体を表し、
Figure 2023082151000038
は、基が分子の残りの部分に結合される部位を表す。
いくつかの実施形態において、前記第１の官能基は、式（Ｃ３）に示されるように、ホ
スホルアミダイト基を含み、当該ホスホルアミダイト基は、ヌクレオチド上の任意位置の
ヒドロキシ基、例えば、２’位のヒドロキシ基又は３’位のヒドロキシ基とカップリング
反応して亜リン酸エステルを形成し、酸化又は硫化されて式Ａ５９に示されるリン酸ジエ
ステル結合又はチオリン酸エステル結合を形成し、複合分子をｓｉＲＮＡに複合させるこ
とができる。この場合、前記第２の官能基が存在しなくても、式（３２１）の化合物は、
ヌクレオチドに複合されることができ、式（３０８）に示されるｓｉＲＮＡ複合体の取得
に影響することはない。この場合に、ホスホルアミダイト固相合成等の方法によりｓｉＲ
ＮＡのセンス鎖又はアンチセンス鎖を得た後、式（３２１）の化合物と、ヌクレオチド配
列において末端ヌクレオチド上のヒドロキシ基を反応させ、後の酸化又は硫化過程におい
てリン酸ジエステル結合結合又はチオリン酸エステル結合を形成し、式（３２１）の化合
物をｓｉＲＮＡに複合させる。
いくつかの実施形態において、前記第１の官能基は、保護されたヒドロキシ基を含む。
いくつかの実施形態において、前記第２の官能基は、固相担体と反応できる基を含み、前
記反応により固相担体を含む複合分子を提供する。いくつかの実施形態において、前記第
２の官能基は、式（Ｃ１）、（Ｃ２）又は（Ｃ３）に示されるように、カルボキシ基、カ
ルボン酸塩又はホスホルアミダイトを含む。前記第２の官能基がカルボキシ基又はカルボ
ン酸塩を含む場合、式（３２１）の化合物と固相担体、例えば、樹脂におけるヒドロキシ
基又はアミノ基をエステル化反応又はアミド化反応させ、カルボン酸エステル結合により
結合された、固相担体を含む複合分子を形成する。前記第２の官能基がホスホルアミダイ
ト官能基を含む場合、式（３２１）の化合物と汎用の固相担体、例えば、樹脂におけるヒ
ドロキシ基をカップリング反応させ、酸化されてリン酸ジエステル結合により結合された
、固相担体を含む複合分子を形成する。その後、上記固相担体が結合された生成物を出発
とし、ホスホルアミダイト固相合成方法に従いヌクレオシドモノマーを順に結合し、複合
基が結合されたｓｉＲＮＡのセンス鎖又はアンチセンス鎖を得る。ホスホルアミダイト固
相合成過程において、前記第１の官能基は、脱保護され、その後、カップリング反応条件
下でヌクレオシドモノマーにおけるホスホルアミダイト基とカップリングさせる。
いくつかの実施形態において、前記第１の官能基は、ヒドロキシ基又は保護されたヒド
ロキシ基を含み、前記第２の官能基は、式（Ｃ１’）又は（Ｃ３’）に示されるように、
カルボン酸エステル結合により結合された固相担体又はアミド結合により結合された固相
担体、又はリン酸エステル結合により結合された固相担体を含む。この場合、出発として
固相担体の代わりに式（３２１）の化合物を用い、ホスホルアミダイト固相合成方法に従
いヌクレオシドモノマーを順に結合し、複合基が結合されたｓｉＲＮＡのセンス鎖又はア
ンチセンス鎖を得る。
いくつかの実施形態において、カルボン酸塩は、－ＣＯＯ－Ｍ＋で表されてもよく、こ
こで、Ｍ＋はカチオンであり、例えば、金属カチオン、アンモニウムカチオンＮＨ４ ＋、
有機アンモニウムカチオンから選択される１つである。１つの実施形態において、前記金
属イオンは、アルカリ金属イオンから選択される１つであり、例えば、Ｋ＋又はＮａ＋で
ある。溶解性を向上させ、反応をスムーズに行うことを考慮して、いくつかの実施形態に
おいて、有機アンモニウムイオンは、第３級アミンにより形成されたアンモニウムカチオ
ン又は４級アンモニウムカチオン、例えば、トリエチルアミンにより形成されたアンモニ
ウムイオン又はＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンにより形成されたアンモニウムイオ
ンである。いくつかの実施形態において、カルボン酸塩は、トリエチルアミンカルボン酸
塩又はＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンカルボン酸塩である。
いくつかの実施形態において、Ｒ４は、式（Ｂ９）、（Ｂ１０）、（Ｂ９’）、（Ｂ１
０’）、（Ｂ１１）、（Ｂ１２）、（Ｂ１１’）又は（Ｂ１２’）に示される構造を含む
。
Figure 2023082151000039
 式中、ｑ１は１～４の整数であり、ｑ２は１～１０の整数であり、ＸはＯ又はＮＨであ
り、Ｍ＋はカチオンであり、Ｒｋはヒドロキシ保護基であり、ＳＰＳは固相担体を表し、
Figure 2023082151000040
は、基が分子の残りの部分に結合される部位を表す。いくつかの実施形態において、ｑ１
は１又は２である。いくつかの実施形態において、ｑ２は１～５の整数である。いくつか
の実施形態において、Ｒ４は、式（Ｂ９）又は（Ｂ１０）に示される構造を含む。いくつ
かの実施形態において、Ｒ４は、式（Ｂ１１）又は（Ｂ１２）に示される構造を含む。
いくつかの実施形態において、Ｒｋは、Ｔｒ（トリチル基）、ＭＭＴｒ（４－メトキシトリチル基）、ＤＭＴｒ（４，４’－ビスメトキシトリチル基）、ＴＭＴｒ（４，４’，４’－トリメトキシトリチル基）の１又は複数である。いくつかの実施形態において、Ｒｋは、ＤＭＴｒ、即ち、４，４’－ビスメトキシトリチル（４，４’－ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌ）であってもよい。
Ｌ１の定義は、前述したとおりである。
いくつかの実施形態において、Ｌ１は、Ｍ１標的基を窒素含有骨格上のＮ原子に結合し
、式（３０８）に示されるｓｉＲＮＡ複合体に肝標的機能を提供するために用いられる。
いくつかの実施形態において、Ｌ１は、Ａ１～Ａ２６のいずれか１つ又はその組合せを含
む。
上記記載により、当業者であれば容易に理解できるように、本分野で公知のホスホルア
ミダイト固相合成方法と比較して、上記第１の官能基及び任意の第２の官能基により、複
合分子がヌクレオチド配列の任意の可能な位置、例えば、ヌクレオチド配列の端部、ヌク
レオチド配列の末端に結合された、式（３０８）に示されるｓｉＲＮＡ複合体を得ること
ができる。これに応じて、特に説明がない限り、以下に複合体の調製に関する記載におい
て、「脱保護」、「カップリング」、「キャッピング」、「酸化」、「硫化」等の反応に
言及する場合、本分野で公知のホスホルアミダイト核酸の固相合成方法に係る反応条件と
試薬もまた同様にこれらの反応に適用されると理解すべきである。例示的な反応条件と試
薬は、以下に詳細に説明する。
いくつかの実施形態において、各Ｓ１は、独立してＭ１である。いくつかの実施形態に
おいて、各Ｓ１は、独立してＭ１において少なくとも１つの活性ヒドロキシ基がヒドロキ
シ保護基で保護された基である。いくつかの実施形態において、各Ｓ１は、独立してＭ１
に存在する活性ヒドロキシ基が全てヒドロキシ保護基で保護された基である。いくつかの
実施形態において、当業者に既知のあらゆるヒドロキシ保護基を、Ｍ１における活性ヒド
ロキシ基を保護するために用いることができる。いくつかの実施形態において、保護され
たヒドロキシ基は、式ＹＣＯＯ－で表されてもよく、各Ｙは、独立してＣ１－Ｃ１０アル
キル基及びＣ６－Ｃ１０アリール基からなる群から選択され、前記Ｃ１－Ｃ１０アルキル
基及びＣ６－Ｃ１０アリール基は、１又は複数の置換基で任意に置換され、前記置換基は
、ハロゲン及びＣ１－Ｃ６アルキル基からなる群から選択される。いくつかの実施形態に
おいて、各Ｙは、独立して、メチル基、トリフルオロメチル基、ジフルオロメチル基、モ
ノフルオロメチル基、トリクロロメチル基、ジクロロメチル基、クロロメチル基、エチル
基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、フェニル基、ハロフェニル基及びＣ１－Ｃ６アル
キルフェニル基からなる群から選択される。
いくつかの実施形態において、各Ｓ１は、それぞれ独立して式Ａ４６～Ａ５４からなる
群から選択される。
Figure 2023082151000041
いくつかの実施形態において、Ｓ１は式Ａ４９又はＡ５０である。
いくつかの実施形態において、各Ｙは、メチル基、トリフルオロメチル基、ジフルオロ
メチル基、モノフルオロメチル基、トリクロロメチル基、ジクロロメチル基、クロロメチ
ル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、フェニル基、ハロフェニル基及びア
ルキルフェニル基から独立して選択される１つであり、いくつかの実施形態において、Ｙ
はメチル基である。
前述したように、式（３０８）に示されるｓｉＲＮＡ複合体の調製方法は、ｓｉＲＮＡ
の他方の鎖を合成し（例えば、上記工程で、複合分子が結合されたｓｉＲＮＡのセンス鎖
を合成した場合、固相合成方法に従いｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖を合成することをさら
に含み、その逆も同様である）、センス鎖及びアンチセンス鎖を単離し、かつ、アニール
を行う工程をさらに含む。具体的には、単離工程において、ヌクレオチド配列及び／又は
複合分子に結合される固相担体が切断されるとともに、必要な保護基が除去され（この場
合、式（３２１）の化合物における各Ｓ１基が、対応するＭ１標的基に変換される）、複
合分子が結合されたｓｉＲＮＡのセンス鎖（又はアンチセンス鎖）及び対応するアンチセ
ンス鎖（又はセンス鎖）が得られ、センス鎖とアンチセンス鎖をアニールして二本鎖ＲＮ
Ａ構造を形成し、式（３０８）に示されるｓｉＲＮＡ複合体を得る。
いくつかの実施形態において、式（３０８）に示されるｓｉＲＮＡ複合体の調製方法は
、カップリング反応条件及びカップリング試薬の存在下で、式（３２１）に示される化合
物をセンス鎖又はアンチセンス鎖の３’端の１番目のヌクレオシドモノマーと接触させ、
式（３２１）に示される化合物を配列における１番目のヌクレオチドに結合させ、ホスホ
ルアミダイト固相合成の条件で、所望のセンス鎖又はアンチセンス鎖のヌクレオチドの種
類と手順により、３’から５’に向かってヌクレオシドモノマーを順に結合し、ｓｉＲＮ
Ａのセンス鎖又はアンチセンス鎖を合成する工程であって、（３２１）の化合物は、Ｒ４
に、保護されたヒドロキシ基を含む第１の官能基、及び式（Ｃ１’）又は（Ｃ３’）に示
される構造を有する第２の官能基が含まれる、式（３２１）に示される化合物であり、１
番目のヌクレオシドモノマーと結合する前に、式（３２１）の化合物を脱保護し、各ヌク
レオシドモノマーの結合が脱保護、カップリング、キャッピング、酸化又は硫化の４つの
反応を含み、複合基が結合された核酸のセンス鎖又はアンチセンス鎖を得る工程；ホスホ
ルアミダイト固相合成の条件で、アンチセンス鎖又はセンス鎖のヌクレオチドの種類と手
順により、３’から５’に向かってヌクレオシドモノマーを順に結合し、核酸のアンチセ
ンス鎖又はセンス鎖を合成し、各ヌクレオシドモノマーの結合が脱保護、カップリング、
キャッピング、酸化又は硫化の４つの反応を含み、保護基を除去して固相担体から切断し
、単離精製して核酸のセンス鎖及びアンチセンス鎖を得、アニールを行う工程を含む。
いくつかの実施形態において、式（３０８）に示されるｓｉＲＮＡ複合体の調製方法は
、当該二本鎖ｓｉＲＮＡにおけるセンス鎖又はアンチセンス鎖のヌクレオチドの種類と手
順により、３’から５’に向かってヌクレオシドモノマーを順に結合し、センス鎖及びア
ンチセンス鎖を合成し、各ヌクレオシドモノマーの結合が脱保護、カップリング、キャッ
ピング、酸化又は硫化の４つの反応を含み、固相担体に結合されたセンス鎖、及び固相担
体に結合されたアンチセンス鎖を得る工程；カップリング反応条件及びカップリング試薬
の存在下で、式（３２１）に示される化合物を、固相担体に結合されたセンス鎖又は固相
担体に結合されたアンチセンス鎖と接触させ、Ｒ４にホスホルアミダイト基である第１の
官能基が含まれる式（３２１）の化合物をセンス鎖又はアンチセンス鎖に結合させる工程
；保護基を除去して固相担体から切断し、それぞれ単離精製し、複合基が結合されたｓｉ
ＲＮＡのセンス鎖又はアンチセンス鎖を得、アニールを行う工程を含む。
いくつかの実施形態において、式Ａ５９におけるＰは、ｓｉＲＮＡにおけるセンス鎖の
３’末端に結合され、式（３０８）に示されるｓｉＲＮＡ複合体の調製方法は、
（１）式（３２１）の化合物（式（３２１）の化合物は、Ｒ４に、保護されたヒドロキ
シ基ＯＲｋを含む第１の官能基、及び式（Ｃ１’）又は（Ｃ３’）に示される構造を有す
る第２の官能基が含まれる化合物である）におけるヒドロキシ保護基Ｒｋを除去し、カッ
プリング反応条件及びカップリング試薬の存在下で、脱保護された生成物をヌクレオシド
モノマーと接触させ、複合分子により固相担体に結合されるヌクレオシドモノマーを得る
こと、
（２）当該複合分子により固相担体に結合されるヌクレオシドモノマーを出発とし、３
’－５’の方向に、ホスホルアミダイト固相合成方法によりｓｉＲＮＡのセンス鎖を合成
すること、
（３）ホスホルアミダイト固相合成方法により、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖を合成す
ること、
（４）ｓｉＲＮＡのセンス鎖及びアンチセンス鎖を単離してアニールし、式（３０８）
に示されるｓｉＲＮＡ複合体を得ること、を含む。
工程（１）において、式（３２１）の化合物における保護基Ｒｋを除去する方法は、脱
保護条件で、式（３２１）の化合物を脱保護試薬と接触させることを含む。脱保護条件と
しては、温度が０～５０℃であり、いくつかの実施形態において、１５～３５℃であり、
反応時間は３０～３００秒であり、いくつかの実施形態において、５０～１５０秒であり
、脱保護試薬は、トリフルオロ酢酸、トリクロロ酢酸、ジクロロ酢酸、クロロ酢酸から選
択される１種又は複数種であってよく、いくつかの実施形態において、ジクロロ酢酸であ
る。脱保護試薬と式（３２１）の化合物とのモル比は１０：１～１０００：１であり、い
くつかの実施形態において、５０：１～５００：１である。
前記カップリング反応条件とカップリング試薬としては、上記カップリング反応に適し
た任意の条件と試薬を用いてもよい。いくつかの実施形態において、採用される固相合成
方法におけるカップリング反応と同じ条件と試薬を用いてもよい。
いくつかの実施形態において、前記カップリング反応の条件として、反応温度は０～５
０℃であり、いくつかの実施形態において、１５～３５℃である。式（３２１）の化合物
とヌクレオシドモノマーとのモル比は１：１～１：５０であり、いくつかの実施形態にお
いて、１：２～１：５であり、式（３２１）の化合物とカップリング試薬とのモル比は１
：１～１：５０であってもよく、いくつかの実施形態において、１：３～１：１０であり
、反応時間は２００～３０００秒であり、いくつかの実施形態において、５００～１５０
０秒である。カップリング試薬は、１Ｈ－テトラゾール、５－エチルチオ１Ｈ－テトラゾ
ール、５－ベンジルチオ１Ｈ－テトラゾールから選択される１種又は複数種であり、いく
つかの実施形態において、５－エチルチオ１Ｈ－テトラゾールである。前記カップリング
反応は、有機溶剤で行われてもよく、前記有機溶剤は、無水アセトニトリル、無水ＤＭＦ
、無水ジクロロメタンから選択される１種又は複数種であり、いくつかの実施形態におい
て、無水アセトニトリルである。式（３２１）の化合物に対して、前記有機溶剤の用量は
３～５０Ｌ／ｍｏｌであり、いくつかの実施形態において、５～２０Ｌ／ｍｏｌである。
工程（２）において、ホスホルアミダイト核酸固相合成方法により、上記工程で調製さ
れた複合分子により固相担体に結合されるヌクレオシドモノマーを出発とし、３’－５’
の方向に、第２種のｓｉＲＮＡ複合体のセンス鎖Ｓを合成する。この場合、複合基は、得
られたセンス鎖の３’末端に結合される。
工程（２）及び（３）における前記固相合成の他の条件としては、ヌクレオシドモノマ
ーの脱保護条件、脱保護試薬の種類と用量、カップリング反応条件、カップリング試薬の
種類と用量、キャッピング反応の条件、キャッピング試薬の種類と用量、酸化反応条件、
酸化試薬の種類と用量、硫化反応条件、硫化試薬及び用量を含み、本分野で通常用いられ
る各種の試薬、用量及び条件を採用する。
例えば、いくつかの実施形態において、工程（２）及び（３）において、前記固相合成
では、以下の条件を用いてもよい。
ヌクレオシドモノマーの脱保護条件としては、温度が０～５０℃であり、いくつかの実
施形態において、１５～３５℃であり、反応時間が３０～３００秒であり、いくつかの実
施形態において、５０～１５０秒であり、脱保護試薬は、トリフルオロ酢酸、トリクロロ
酢酸、ジクロロ酢酸、クロロ酢酸から選択される１種又は複数種であってもよく、いくつ
かの実施形態において、ジクロロ酢酸である。脱保護試薬と固相担体における４，４’－
ジメトキシトリチル保護基とのモル比が、２：１～１００：１であってもよく、いくつか
の実施形態において、３：１～５０：１である。
カップリング反応条件としては、温度が０～５０℃であり、いくつかの実施形態におい
て、１５～３５℃であり、固相担体に結合される核酸配列とヌクレオシドモノマーとのモ
ル比が１：１～１：５０であってもよく、いくつかの実施形態において、１：５～１：１
５であり、固相担体に結合される核酸配列とカップリング試薬とのモル比が１：１～１：
１００であり、いくつかの実施形態において、１：５０～１：８０であり、反応時間とカ
ップリング試薬の選択は、前記と同じである。
キャッピング反応条件としては、温度が０～５０℃であり、いくつかの実施形態におい
て、１５～３５℃であり、反応時間が５～５００秒であり、いくつかの実施形態において
、１０～１００秒であり、キャッピング試薬の選択は、前記と同じである。キャッピング
試薬の総量と固相担体に結合される核酸配列とのモル比が１：１００～１００：１であり
、いくつかの実施形態において、１：１０～１０：１である。キャッピング試薬として等
モル量の酢酸無水物とＮ－メチルイミダゾールを用いる場合に、酢酸無水物、Ｎ－メチル
イミダゾール及び固相担体に結合される核酸配列のモル比が１：１：１０～１０：１０：
１であり、いくつかの実施形態において、１：１：２～２：２：１である。
酸化反応条件としては、温度が０～５０℃であり、いくつかの実施形態において、１５
～３５℃であり、反応時間が１～１００秒であり、いくつかの実施形態において、５～５
０秒であり、酸化試薬は、いくつかの実施形態において、ヨウ素である（いくつかの実施
形態において、ヨウ素水として提供する）。酸化試薬と、カップリング工程において固相
担体に結合される核酸配列とのモル比が、１：１～１００：１であってもよく、いくつか
の実施形態において、５：１～５０：１である。いくつかの実施形態において、前記酸化
反応は、テトラヒドロフラン：水：ピリジン＝３：１：１～１：１：３の混合溶剤で行わ
れる。硫化反応条件としては、温度が０～５０℃であり、いくつかの実施形態において、
１５～３５℃であり、反応時間が５０～２０００秒であり、いくつかの実施形態において
、１００～１０００秒であり、硫化試薬は、いくつかの実施形態において、キサンタンヒ
ドリドである。硫化試薬と、カップリング工程において固相担体に結合される核酸配列と
のモル比は１０：１～１０００：１であり、いくつかの実施形態において、１０：１～５
００：１である。いくつかの実施形態において、前記硫化反応は、アセトニトリル：ピリ
ジン＝１：３～３：１の混合溶剤で行われる。
全てのヌクレオシドモノマーを結合した後、アニールする前、当該方法は、ｓｉＲＮＡ
のセンス鎖及びアンチセンス鎖を単離することをさらに含む。単離方法は、当業者に公知
であり、一般的に、合成されたヌクレオチド配列を固相担体から切断し、塩基上、リン酸
基上及びリガンド上の保護基を除去し、精製し脱塩することを含む。
合成されたヌクレオチド配列を固相担体から切断し、塩基上、リン酸基上及びリガンド
上の保護基を除去するには、ｓｉＲＮＡ合成において通常の切断と脱保護方法により行わ
れてもよい。例えば、得られた固相担体が結合されたヌクレオチド配列を濃アンモニア水
と接触させ、脱保護過程において、Ａ４６～Ａ５４基の保護基ＹＣＯＯ－をヒドロキシ基
に変換させ、Ｓ１基を対応するＭ１基に変換させ、式（３０８）に示される複合体を生成
する。ここで、前記濃アンモニア水は、２５～３０重量％のアンモニア水であってもよく
、濃アンモニア水の用量は、目的とするｓｉＲＮＡ配列に対して０．２ｍｌ／μｍｏｌ～
０．８ｍｌ／μｍｏｌであってもよい。
合成されたヌクレオチド配列に少なくとも１つの２’－ＴＢＤＭＳ保護がある場合、前
記方法は、固相担体が除去されたヌクレオチド配列をトリエチルアミン三フッ化水素酸塩
と接触させることにより、当該２’－ＴＢＤＭＳ保護を除去することをさらに含む。この
場合、得られた目的とするｓｉＲＮＡ配列には、遊離の２’－ヒドロキシ基の対応するヌ
クレオシドを有する。純粋なトリエチルアミン三フッ化水素酸塩の用量は、目的とするｓ
ｉＲＮＡ配列に対して０．４ｍｌ／μｍｏｌ～１．０ｍｌ／μｍｏｌであってもよい。こ
のように式（３０８）に示されるｓｉＲＮＡ複合体を得ることができる。
精製及び脱塩する方法は、当業者によく知られている。例えば、分取用イオンクロマト
グラフィー精製カラムを用いて、ＮａＢｒ又はＮａＣｌの勾配溶出によって、核酸の精製
を完成し、生成物を回収して合わせた後、逆相クロマトグラフィー精製カラムにより脱塩
することができる。
このように得られた式（３０８）に示されるｓｉＲＮＡ複合体において、ヌクレオチド
間のリン酸ジエステル結合又はチオリン酸ジエステル結合における非架橋酸素原子又は硫
黄原子は、基本的にナトリウムイオンに結合されており、式（３０８）に示されるｓｉＲ
ＮＡ複合体は、基本的にナトリウム塩として存在する。よく知られたイオン交換方法によ
り、水素イオン及び／又は他のカチオンで前記ナトリウムイオンを置換し、他の形式の式
（３０８）に示されるｓｉＲＮＡ複合体を得ることができる。前記カチオンは、前述した
とおりである。
合成過程において、常に核酸配列の純度と分子量を検出し、合成品質をよりよく制御す
ることができる。このような検出方法は、当業者に公知である。例えば、イオン交換クロ
マトグラフィーにより核酸純度を検出し、液体クロマトグラフィータンデム質量分析によ
り分子量を測定することができる。
アニール方法も、当業者によく知られているものである。例えば、簡単に、合成された
センス鎖（Ｓ鎖）とアンチセンス鎖（ＡＳ鎖）を等モル比で注射用水に混合して７０～９
５℃に加熱し、その後室温で冷却し、水素結合により二本鎖構造を形成させることができ
る。このように式（３０８）に示されるｓｉＲＮＡ複合体を得ることができる。
前記複合体を得た後、いくつかの実施形態において、例えば、液体クロマトグラフィー
タンデム質量分析等の方法を用いて、分子量検出等により合成された式（３０８）に示さ
れるｓｉＲＮＡ複合体の特徴を明らかにし、合成されたｓｉＲＮＡ複合体が、目的設計の
式（３０８）に示されるｓｉＲＮＡ複合体であるとともに、合成されたｓｉＲＮＡの配列
が、所望のｓｉＲＮＡの配列、例えば表１に示される配列の１つであると確認することも
できる。
式（３２１）に示される化合物は、有機溶剤において、エステル化反応条件下及び塩基
とエステル化触媒の存在下で、式（３１３）に示される化合物を環状酸無水物と接触させ
、イオン交換を行い、単離して式（３２１）に示される化合物を得ることを含む調製方法
により得ることができる。
Figure 2023082151000042
 式中、ｎ１、ｎ３、ｍ１、ｍ２、ｍ３、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ
１５、Ｌ１、Ｓ１それぞれの定義と選択可能な範囲は、前述したとおりであり、
Ｒ６は、式（３２１）におけるＲ４を提供する基である。いくつかの実施形態において
、Ｒ６は、式（Ａ６１）に示される構造を有する。
Figure 2023082151000043
 式中、Ｒｉは、窒素含有骨格上のＮとの結合を実現できる、ＲｋＯと結合して１つの遊
離ヒドロキシ基が結合されている任意の基であり、Ｒｋはヒドロキシ保護基である。この
場合、Ｒ４にヒドロキシ保護基としての第１の官能基と第２の官能基が含まれ、前記第２
の官能基が式（Ｃ１）又は（Ｃ２）に示される構造を含む式（３２１）の化合物が得られ
る。
前記エステル化反応条件としては、反応温度が０～１００℃であり、反応時間が８～４
８時間であり、いくつかの実施形態において、前記エステル化反応条件としては、反応温
度が１０～４０℃であり、反応時間が２０～３０時間である。
いくつかの実施形態において、前記有機溶剤は、エポキシ類溶剤、エーテル類溶剤、ハ
ロゲン化アルキル類溶剤、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド及びＮ
，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの１種又は複数種を含む。いくつかの実施形態におい
て、前記エポキシ類溶剤は、ジオキサン及び／又はテトラヒドロフランであり、前記エー
テル類溶剤は、エチルエーテル及び／又はメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルであり、前記
ハロゲン化アルキル類溶剤は、ジクロロメタン、トリクロロメタン及び１，２－ジクロロ
エタンの１種又は複数種である。いくつかの実施形態において、前記有機溶剤は、ジクロ
ロメタンである。前記式（３１３）に示される化合物に対して、前記有機溶剤の用量が３
～５０Ｌ／ｍｏｌであり、いくつかの実施形態において、５～２０Ｌ／ｍｏｌである。
いくつかの実施形態において、前記環状酸無水物は、コハク酸無水物、グルタル酸無水
物、アジピン酸無水物又はピメリン酸無水物の１つであり、いくつかの実施形態において
、コハク酸無水物である。前記環状酸無水物と前記式（３１３）に示される化合物とのモ
ル比が１：１～１０：１であり、いくつかの実施形態において、２：１～５：１である。
前記エステル化触媒は、当該エステル化反応を触媒する任意の触媒であってもよく、例
えば、当該触媒は、４－ジメチルアミノピリジンであってもよい。前記触媒と式（３１３
）に示される化合物とのモル比が１：１～１０：１であり、いくつかの実施形態において
、２：１～５：１である。
いくつかの実施形態において、前記塩基は、任意の無機塩基、有機塩基又はこれらの組
合せであってもよい。溶解性及び生成物の安定性を考慮すると、前記塩基は、例えば、第
３級アミン類有機塩基であってもよい。いくつかの実施形態において、前記第３級アミン
類有機塩基は、トリエチルアミン又はＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンである。前記
第３級アミン類有機塩基と式（３１３）に示される化合物とのモル比は１：１～２０：１
であり、いくつかの実施形態において、３：１～１０：１である。
前記イオン交換作用は、式（３２１）の化合物を所望のカルボン酸又はカルボン酸塩の
形式に変換することであり、イオン交換方法は、当業者に公知であり、適切なイオン交換
溶液と交換条件を用い、前述したカチオンがＭ＋である複合分子を得ることができ、ここ
では詳しい説明を省略する。いくつかの実施形態において、前記イオン交換反応は、トリ
エチルアミンリン酸塩溶液を用いて行われ、前記トリエチルアミンリン酸塩溶液の濃度は
０．２～０．８Ｍであり、いくつかの実施形態においては、前記トリエチルアミンリン酸
塩溶液の濃度は０．４～０．６Ｍであり、式（３１３）の化合物に対して、前記トリエチ
ルアミンリン酸塩溶液の用量は３～６Ｌ／ｍｏｌであり、さらなる実施形態においては４
～５Ｌ／ｍｏｌである。
任意の適切な単離方法によって、反応混合物から式（３２１）の化合物を単離すること
ができる。いくつかの実施形態において、溶剤を蒸発除去した後、クロマトグラフィー方
法により式（３２１）の化合物を単離することができ、例えば、（１）順相精製シリカゲ
ル：２００～３００メッシュのシリカゲル充填剤を、１重量‰トリエチルアミンを含むジ
クロロメタン：メタノール＝１００：１８～１００：２０で勾配溶出すること、又は、（
２）逆相精製：Ｃ１８、Ｃ８逆相充填剤を、メタノール：アセトニトリル＝０．１：１～
１：０．１で勾配溶出することという２つのクロマトグラフィー条件で単離することがで
きる。いくつかの実施形態において、溶剤を直接除去して式（３２１）の化合物の粗製品
を得ることができ、当該粗製品は、そのまま後の反応に用いることができる。
いくつかの実施形態において、式（３２１）の化合物の調製方法は、縮合反応条件下で
、有機溶剤において、縮合剤と第３級アミン類有機塩基の存在下で、上記イオン交換反応
により得られた生成物を、さらにアミノ基又はヒドロキシ基を含む固相担体と接触させる
ことをさらに含む。この場合、Ｒ４に第１の官能基及び第２の官能基が含まれ、第１の官
能基がヒドロキシ保護基を含み、第２の官能基が式（Ｃ１’）に示される構造を含む式（
３２１）の化合物が得られる。
前記固相担体は、ｓｉＲＮＡの固相合成に用いられる担体の１つであり、そのうちのい
くつかは、当業者に公知である。例えば、前記固相担体は、活性ヒドロキシ基又はアミノ
官能基を含む固相担体から選択されてもよく、いくつかの実施形態において、前記固相担
体は、アミノ樹脂又はヒドロキシ樹脂である。いくつかの実施形態において、前記アミノ
樹脂又はヒドロキシ樹脂は、粒子径１００～４００メッシュ（ｍｅｓｈ）、表面における
アミノ基又はヒドロキシ基の担持量０．２～０．５ｍｍｏｌ／ｇというパラメーターを有
する。前記式（３２１）に示される化合物と固相担体との用量比は１０～４００μｍｏｌ
化合物／グラムの固相担体（μｍｏｌ／ｇ）である。いくつかの実施形態において、前記
式（３２１）に示される化合物と固相担体との用量比は５０～２００μｍｏｌ／ｇである
。
前記有機溶剤は、当業者に既知の任意の適切な溶剤又は混合溶剤であってもよい。いく
つかの実施形態において、前記有機溶剤は、アセトニトリル、エポキシ類溶剤、エーテル
類溶剤、ハロゲン化アルキル類溶剤、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムア
ミド及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの１種又は複数種である。いくつかの実施
形態において、前記エポキシ類溶剤は、ジオキサン及び／又はテトラヒドロフランであり
、前記エーテル類溶剤は、エチルエーテル及び／又はメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルで
あり、前記ハロゲン化アルキル類溶剤は、ジクロロメタン、トリクロロメタン及び１，２
－ジクロロエタンの１種又は複数種である。いくつかの実施形態において、前記有機溶剤
は、アセトニトリルである。式（３２１）の化合物に対して、前記有機溶剤の用量は２０
～２００Ｌ／ｍｏｌであり、いくつかの実施形態において、５０～１００Ｌ／ｍｏｌであ
る。
いくつかの実施形態において、前記縮合剤は、（ベンゾトリアゾール－１－イルオキシ
）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート、３－ジエトキシホスホリル
－１，２，３－ベンゾオキサゾール４（３Ｈ）－オン及び／又はＯ－ベンゾトリアゾール
－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートであってもよく、いくつかの実施
形態において、前記縮合剤は、Ｏ－ベンゾトリアゾール－テトラメチルウロニウムヘキサ
フルオロホスフェートである。前記縮合剤と式（３２１）に示される化合物とのモル比は
１：１～２０：１であり、さらなる実施形態において１：１～５：１である。
いくつかの実施形態において、前記第３級アミン類有機塩基は、トリエチルアミン及び
／又はＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンであり、いくつかの実施形態において、Ｎ，
Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンであり、前記第３級アミン類有機塩基と式（３２１）に
示される化合物とのモル比は１：１～２０：１であり、いくつかの実施形態において、１
：１～５：１である。
いくつかの実施形態において、式（３２１）の化合物の調製方法は、得られた縮合生成
物をキャッピング反応条件下で、有機溶剤において、キャッピング試薬及びアシル化触媒
と接触させ、単離して式（３２１）に示される化合物を得ることをさらに含んでもよい。
前記キャッピング反応の作用は、後の反応において不必要な副生成物が生じることを避け
るために、まだ完全に反応していないあらゆる活性反応官能基を除去することである。前
記キャッピング反応の条件としては、反応温度が０～５０℃であり、いくつかの実施形態
において、１５～３５℃であり、反応時間が１～１０ｈであり、いくつかの実施形態にお
いて、３～６ｈである。キャッピング試薬としては、当業者に公知の、ｓｉＲＮＡ固相合
成に用いられるキャッピング試薬を用いてもよい。
いくつかの実施形態において、前記キャッピング試薬は、キャッピング試薬１（ｃａｐ１）及びキャッピング試薬２（ｃａｐ２）からなり、キャッピング試薬１は、Ｎ－メチルイミダゾールであり、いくつかの実施形態において、Ｎ－メチルイミダゾールのピリジン／アセトニトリル混合溶液として提供され、ピリジンとアセトニトリルとの体積比は１：１０～１：１であり、いくつかの実施形態において、１：３～１：１であり、ピリジンとアセトニトリルの総体積とＮ－メチルイミダゾールの体積との比は１：１～１０：１であり、いくつかの実施形態において、３：１～７：１である。前記キャッピング試薬２は、酢酸無水物である。いくつかの実施形態において、前記キャッピング試薬２は、酢酸無水物のアセトニトリル溶液として提供され、酢酸無水物とアセトニトリルとの体積比が１：１～１：１０であり、さらなる実施形態において１：２～１：６である。
いくつかの実施形態において、前記Ｎ－メチルイミダゾールのピリジン／アセトニトリ
ル混合溶液の体積と式（３２１）の化合物の質量との比が５ｍｌ／ｇ～５０ｍｌ／ｇであ
り、いくつかの実施形態において、１５ｍｌ／ｇ～３０ｍｌ／ｇである。前記酢酸無水物
のアセトニトリル溶液の体積と式（３２１）の化合物の質量との比は０．５ｍｌ／ｇ～１
０ｍｌ／ｇであり、いくつかの実施形態において、１ｍｌ／ｇ～５ｍｌ／ｇである。
いくつかの実施形態において、キャッピング試薬としては、等モル量の酢酸無水物とＮ
－メチルイミダゾールを用いる。いくつかの実施形態において、前記有機溶剤は、アセト
ニトリル、エポキシ類溶剤、エーテル類溶剤、ハロゲン化アルキル類溶剤、ジメチルスル
ホキシド、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの１
種又は複数種である。いくつかの実施形態において、前記有機溶剤は、アセトニトリルで
ある。式（３２１）の化合物に対して、前記有機溶剤の用量は１０～５０Ｌ／ｍｏｌであ
り、いくつかの実施形態において、５～３０Ｌ／ｍｏｌである。
いくつかの実施形態において、前記アシル化触媒は、エステル化縮合又はアミド化縮合
に使用できる任意の触媒、例えばアルカリ複素環化合物から選択されてもよい。いくつか
の実施形態において、前記アシル化触媒は、４－ジメチルアミノピリジンである。前記触
媒と式（３２１）に示される化合物との質量比が０．００１：１～１：１であり、いくつ
かの実施形態において、０．０１：１～０．１：１である。
いくつかの実施形態において、任意の適切な単離方法により反応混合物から式（３２１
）の化合物を単離することができる。いくつかの実施形態において、有機溶剤で十分に洗
浄し、濾過し、未反応の反応物、過剰なキャッピング試薬及び他の不純物を除去すること
により、式（３２１）の化合物を得ることができる。前記有機溶剤は、アセトニトリル、
ジクロロメタン、メタノールから選択され、いくつかの実施形態において、アセトニトリ
ルである。
いくつかの実施形態において、式（３２１）に示される複合分子の調製方法は、有機溶
剤において、カップリング反応条件下及びカップリング試薬の存在下で、式（３１３）に
示される化合物をホスホルジアミダイトと接触させ、単離して式（３２１）に示される化
合物を得ることを含む。この場合、Ｒ４に第１の官能基及び第２の官能基が含まれ、第１
の官能基がヒドロキシ保護基を含み、第２の官能が式（Ｃ３）に示される構造を含む式（
３２１）の化合物が得られる。
いくつかの実施形態において、カップリング反応条件としては、温度が０～５０℃であ
ってもよく、例えば１５～３５℃であり、式（３１３）の化合物とホスホルジアミダイト
とのモル比が１：１～１：５０であってもよく、例えば１：５～１：１５であり、式（３
１３）の化合物とカップリング試薬とのモル比が１：１～１：１００であってもよく、例
えば１：５０～１：８０であり、反応時間が２００～３０００秒であってもよく、例えば
５００～１５００秒である。前記ホスホルジアミダイトは、例えばビス（ジイソプロピル
アミノ）（２－シアノエトキシ）ホスフィンを用いてもよく、市販品を購入してもよく、
又は本分野で公知の方法により合成されてもよい。カップリング試薬は、１Ｈ－テトラゾ
ール、５－エチルチオ１Ｈ－テトラゾール、５－ベンジルチオ１Ｈ－テトラゾールから選
択される１種又は複数種であり、例えば、５－エチルチオ１Ｈ－テトラゾールである。前
記カップリング反応は、有機溶剤で行われてもよく、前記有機溶剤は、無水アセトニトリ
ル、無水ＤＭＦ、無水ジクロロメタンから選択される１種又は複数種であり、例えば無水
アセトニトリルである。いくつかの実施形態において、式（３１３）の化合物に対して、
前記有機溶剤の用量が３～５０Ｌ／ｍｏｌであり、例えば、５～２０Ｌ／ｍｏｌであって
もよい。当該カップリング反応を行うことにより、式（３１３）の化合物におけるヒドロ
キシ基とホスホルジアミダイトを反応させてホスホルアミダイト基を形成する。いくつか
の実施形態において、溶剤を直接除去して式（３２１）の化合物の粗製品を得ることがで
き、当該粗製品は、そのまま後の反応に用いることができる。
いくつかの実施形態において、式（３２１）の化合物の調製方法は、カップリング反応
条件下で、有機溶剤において、カップリング試薬の存在下で、単離して得られた生成物を
、さらにヒドロキシ基含有固相担体と接触させる工程をさらに含む。その後、キャッピン
グ反応、酸化反応を行い、単離して式（３２１）の化合物を得る。この場合、Ｒ４に第１
の官能基及び第２の官能基が含まれ、第１の官能基がヒドロキシ保護基を含み、第２の官
能基が式（Ｃ３’）に示される構造を有する式（３２１）の化合物が得られる。
いくつかの実施形態において、前記固相担体は、本分野で公知の核酸固相合成に使用で
きる固相担体であり、例えば、脱保護反応された市販の汎用の固相担体（ＮｉｔｔｏＰｈ
ａｓｅ（登録商標）ＨＬ ＵｎｙＬｉｎｋｅｒＴＭ ３００ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔ
ｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｓｕｐｐｏｒｔ、Ｋｉｎｏｖａｔｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅ
ｎｃｅｓ社、構造が式Ｂ８０に示される）であってもよい。
Figure 2023082151000044
脱保護反応は、当業者に公知である。いくつかの実施形態において、脱保護条件として
は、温度が０～５０℃であり、例えば１５～３５℃であり、反応時間が３０～３００秒、
例えば５０～１５０秒である。脱保護試薬は、トリフルオロ酢酸、トリクロロ酢酸、ジク
ロロ酢酸、クロロ酢酸から選択される１種又は複数種であってもよく、いくつかの実施形
態において、脱保護試薬は、ジクロロ酢酸である。脱保護試薬と固定相における－ＤＭＴ
ｒ（４，４’－ジメトキシトリチル）保護基とのモル比が２：１～１００：１であり、例
えば３：１～５０：１である。前記脱保護を行うことにより、前記固相担体の表面に反応
活性を有する遊離ヒドロキシ基が得られ、次のカップリング反応を行いやすくする。
カップリング反応条件及びカップリング試薬の選択は、以上のとおりである。当該カッ
プリング反応を行うことにより、脱保護反応で形成された遊離ヒドロキシ基とホスホルア
ミダイト基を反応させて亜リン酸エステル結合を形成する。
いくつかの実施形態において、キャッピング反応条件としては、温度が０～５０℃であ
り、例えば１５～３５℃であり、反応時間が５～５００秒であり、例えば１０～１００秒
であり、前記キャッピング反応をキャッピング試薬の存在下で行う。キャッピング試薬の
選択と用量は、以上のとおりである。
酸化反応条件としては、温度が０～５０℃であり、例えば、１５～３５℃であってもよ
く、反応時間が１～１００秒、例えば、５～５０秒であってもよく、酸化試薬は、例えば
、ヨウ素であってもよい（いくつかの実施形態において、ヨウ素水として提供する）。い
くつかの実施形態において、酸化試薬と亜リン酸エステル基とのモル比が１：１～１００
：１であり、例えば、５：１～５０：１であってもよい。いくつかの実施形態において、
前記酸化反応は、テトラヒドロフラン：水：ピリジン＝３：１：１～１：１：３の混合溶
剤で行われる。
いくつかの実施形態において、Ｒ６は、式Ｂ７又はＢ８の基の１つである。
Figure 2023082151000045
 式中、ｑ２の定義は、前述したとおりである。
この場合、式（３１３）に示される化合物は、有機溶剤において、アミド化反応条件下
、及びアミド化反応縮合剤と第３級アミン類有機塩基の存在下で、式（３１４）に示され
る化合物を式（Ａ～１）に示される化合物又は式（Ａ～２）の化合物と接触させ、その後
単離する、という調製方法により得ることができる。
Figure 2023082151000046
 式中、ｎ１、ｎ３、ｍ１、ｍ２、ｍ３、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ
１５、Ｌ１、Ｓ１、ｑ２及びＲｋそれぞれの定義と選択可能な範囲は、前述したとおりで
ある。
前記アミド化反応条件としては、反応温度が０～１００℃であり、反応時間が１～４８
時間であってもよく、いくつかの実施形態において、前記アミド化反応条件としては、反
応温度が１０～４０℃であり、反応時間が２～１６時間である。
いくつかの実施形態において、前記有機溶剤は、アルコール類溶剤、エポキシ類溶剤、
エーテル類溶剤、ハロゲン化アルキル類溶剤、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ－ジメチル
ホルムアミド及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの１種又は複数種である。前記ア
ルコール類溶剤は、いくつかの実施形態において、メタノール、エタノール、プロパノー
ルの１種又は複数種であり、いくつかの実施形態において、エタノールである。前記エポ
キシ類溶剤は、いくつかの実施形態において、ジオキサン及び／又はテトラヒドロフラン
である。前記エーテル類溶剤は、いくつかの実施形態において、エチルエーテル及び／又
はメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルである。前記ハロゲン化アルキル類溶剤は、いくつか
の実施形態において、ジクロロメタン、トリクロロメタン及び１，２－ジクロロエタンの
１種又は複数種である。いくつかの実施形態において、前記有機溶剤は、ジクロロメタン
である。式（３１４）の化合物に対して、有機溶剤の用量が３～５０Ｌ／ｍｏｌであり、
さらなる実施形態において３～２０Ｌ／ｍｏｌである。
いくつかの実施形態において、前記アミド化反応縮合剤は、（ベンゾトリアゾール－１
－イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート、３－ジエトキ
シホスホリル－１，２，３－ベンゾオキサゾール４（３Ｈ）－オン、４－（４，６－ジメ
トキシトリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリン塩酸塩（４－（４，６－ｄｉｍｅ
ｔｈｏｘｙｔｒｉａｚｉｎ－２－ｙｌ）－４－ｍｅｔｈｙｌｍｏｒｐｈｏｌｉｎｅ ｈｙ
ｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、２－エトキシ－１－エトキシカルボニル－１，２－ジヒドロ
キノリン（ＥＥＤＱ）又はＯ－ベンゾトリアゾール－テトラメチルウロニウムヘキサフル
オロホスフェートであり、さらなる実施形態において、３－ジエトキシホスホリル－１，
２，３－ベンゾオキサゾール４（３Ｈ）－オンである。前記アミド化反応縮合剤と式（３
１４）に示される化合物とのモル比が１：１～１０：１であってもよく、いくつかの実施
形態において、２．５：１～５：１である。
いくつかの実施形態において、前記第３級アミン類有機塩基は、トリエチルアミン又は
Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンであり、さらなる実施形態において、Ｎ，Ｎ－ジイ
ソプロピルエチルアミンである。前記第３級アミン類有機塩基と式（３１４）に示される
化合物とのモル比が３：１～２０：１であり、いくつかの実施形態において、５：１～１
０：１である。
いくつかの実施形態において、式（Ａ～１）及び式（Ａ～２）の化合物は、任意の適当
な方法により調製されてもよい。例えば、ＲｋがＤＭＴｒ基である場合、グリセリン酸カ
ルシウムとＤＭＴｒＣｌを反応させて式（Ａ～１）の化合物を調製することができる。同
様に、３－アミノ－１，２－プロパンジオールと環状酸無水物を接触させた後、ＤＭＴｒ
Ｃｌと反応させて式（Ａ～２）の化合物を調製することができ、前記環状酸無水物は、炭
素原子数４～１３であってよく、いくつかの実施形態においては４～８の環状酸無水物で
あってもよい。当業者であれば容易に理解できるように、前記環状酸無水物の選択は、（
Ａ～２）の化合物におけるｑ２の異なる値に対応しており、例えば、前記環状酸無水物が
コハク酸無水物である場合、ｑ２＝１であり、前記環状酸無水物がグルタル酸無水物であ
る場合、ｑ２＝２であり、類推してもよい。
いくつかの変形において、式（３１４）に示される化合物を、前記環状酸無水物、３－
アミノ－１，２－プロパンジオール及びＤＭＴｒＣｌと順に反応させることにより、式（
３１３）の化合物を調製することもできる。当業者であれば容易に理解できるように、こ
れらの変形は、式（３１３）の化合物の構造と機能に影響を与えることがなく、かつ、当
業者が上記方法により容易に実現するものである。
上記と同様に、任意の適切な単離方法により反応混合物から式（３１３）の化合物を単
離することができる。いくつかの実施形態において、溶剤を蒸発除去した後、クロマトグ
ラフィー方法により式（３１３）の化合物を単離することができ、例えば、以下の２つの
クロマトグラフィー条件で単離することができる。（１）順相精製シリカゲル：２００～
３００メッシュのシリカゲル充填剤を、石油エーテル：酢酸エチル：ジクロロメタン：Ｎ
，Ｎ－ジメチルホルムアミド＝１：１：１：０．５～１：１：１：０．６で勾配溶出する
。（２）逆相精製：Ｃ１８、Ｃ８逆相充填剤を、メタノール：アセトニトリル＝０．１：
１～１：０．１で勾配溶出する。いくつかの実施形態において、溶剤を直接除去して式（
３１３）の化合物の粗製品を得ることができ、当該粗製品は、そのまま後の反応に用いる
ことができる。
いくつかの実施形態において、式（３１４）に示される化合物は、有機溶剤において、
脱保護反応条件下で、式（３１５）に示される化合物をハロ酢酸と接触させた後、単離す
ることを含む調製方法により得ることができる。
Figure 2023082151000047
 式中、Ｒ７は、式（３３０）、（３３１）、（３３２）又は（３３３）に示される基か
ら選択され、いくつかの実施形態において、Ｒ７の構造が式（３３０）に示される。
Figure 2023082151000048
 ｎ１、ｎ３、ｍ１、ｍ２、ｍ３、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、
Ｌ１、Ｓ１それぞれの定義と選択可能な範囲は、前述したとおりである。
前記ハロ酢酸は、ジクロロ酢酸、トリクロロ酢酸、クロロ酢酸及びトリフルオロ酢酸か
ら選択される１種又は複数種であり、いくつかの実施形態において、ジクロロ酢酸である
。
前記脱保護反応条件としては、反応温度が０～１００℃であり、反応時間が０．１～２
４時間であり、いくつかの実施形態において、反応温度が１０～４０℃であり、反応時間
が０．５～１６時間である。
いくつかの実施形態において、前記有機溶剤は、エポキシ類溶剤、エーテル類溶剤、ハ
ロゲン化アルキル類溶剤、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド及びＮ
，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの１種又は複数種である。前記エポキシ類溶剤は、い
くつかの実施形態において、ジオキサン及び／又はテトラヒドロフランであり、前記エー
テル類溶剤は、いくつかの実施形態において、エチルエーテル及び／又はメチルｔｅｒｔ
－ブチルエーテルであり、前記ハロゲン化アルキル類溶剤は、いくつかの実施形態におい
て、ジクロロメタン、トリクロロメタン及び１，２－ジクロロエタンの１種又は複数種で
あり、いくつかの実施形態において、前記有機溶剤は、ジクロロメタンである。式（３１
５）の化合物に対して、有機溶剤の用量が３～５０Ｌ／ｍｏｌであり、さらなる実施形態
において、５～２０Ｌ／ｍｏｌである。
前記ハロ酢酸と前記式（３１５）に示される化合物とのモル比が５：１～１００：１で
あり、いくつかの実施形態において、１０：１～５０：１である。
上記と同様に、任意の適切な単離方法により反応混合物から式（３１４）の化合物を単
離することができる。いくつかの実施形態において、溶剤を蒸発除去した後、クロマトグ
ラフィー方法により式（３１４）の化合物を単離することができ、例えば、以下のの２つ
のクロマトグラフィー条件で単離することができる。（１）順相精製シリカゲル：２００
～３００メッシュのシリカゲル充填剤を、ジクロロメタン：メタノール＝１００：３０～
１００：４０で勾配溶出する。（２）逆相精製：Ｃ１８、Ｃ８逆相充填剤を、メタノール
：アセトニトリル＝０．１：１～１：０．１で勾配溶出する。いくつかの実施形態におい
て、溶剤を直接除去して式（３１４）の化合物の粗製品を得ることができ、当該粗製品は
、そのまま後の反応に用いることができる。
式（３１５）に示される化合物は、有機溶剤において、アミド化反応縮合剤と第３級ア
ミン類有機塩基の存在下及び縮合反応条件下で、式（３１７）に示される化合物を式（３
１６）に示される化合物と接触させた後、単離することを含む調製方法により得ることが
できる。
Figure 2023082151000049
 式中、ｎ１、ｎ３、ｍ１、ｍ２、ｍ３、Ｒ７、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１
４、Ｒ１５、Ｌ１、Ｓ１それぞれの定義と選択可能な範囲は、前述したとおりである。
式（３１６）の化合物としては、例えば、Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． ２０
１４，１３６，１６９５８－１６９６１に開示された化合物を用いてもよく、或いは、式
（３１６）の化合物は、当業者が各種の方法により調製することができ、例えば、米国特
許ＵＳ ８，１０６，０２２ Ｂ２の実施例１に開示された方法を参照していくつかの式
（３１６）の化合物を調製することができ、引用により上記文献の全ての内容が全体とし
て本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態において、前記縮合反応条件としては、反応温度が０～１００℃で
あり、反応時間が０．１～２４時間であり、いくつかの実施形態において、反応温度は１
０～４０℃であり、反応時間は０．５～１６時間である。
前記式（３１６）に示される化合物と前記式（３１７）に示される化合物とのモル比が
２：１～１０：１であってもよく、いくつかの実施形態において、２．５：１～５：１で
ある。
いくつかの実施形態において、前記有機溶剤は、アセトニトリル、エポキシ類溶剤、エ
ーテル類溶剤、ハロゲン化アルキル類溶剤、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ－ジメチルホ
ルムアミド及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの１種又は複数種であり、前記エポ
キシ類溶剤は、いくつかの実施形態において、ジオキサン及び／又はテトラヒドロフラン
であり、前記エーテル類溶剤は、いくつかの実施形態において、エチルエーテル及び／又
はメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルであり、前記ハロゲン化アルキル類溶剤は、いくつか
の実施形態において、ジクロロメタン、トリクロロメタン及び１，２－ジクロロエタンの
１種又は複数種であり、いくつかの実施形態において、前記有機溶剤は、アセトニトリル
である。式（３１７）の化合物に対して、前記有機溶剤の用量は３～５０Ｌ／ｍｏｌであ
り、いくつかの実施形態において、５～２０Ｌ／ｍｏｌである。
いくつかの実施形態において、前記アミド化反応縮合剤は、（ベンゾトリアゾール－１
－イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート、３－ジエトキ
シホスホリル－１，２，３－ベンゾオキサゾール４（３Ｈ）－オン（ＤＥＰＢＴ）、Ｏ－
ベンゾトリアゾール－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート又は４－（４
，６－ジメトキシトリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリン塩酸塩であり、さらな
る実施形態において、４－（４，６－ジメトキシトリアジン－２－イル）－４－メチルモ
ルホリン塩酸塩である。前記アミド化反応縮合剤と式（３１７）に示される化合物とのモ
ル比は２：１～１０：１であってもよく、いくつかの実施形態において、２．５：１～５
：１である。
前記第３級アミン類有機塩基は、Ｎ－メチルモルホリン、トリエチルアミン又はＮ，Ｎ
－ジイソプロピルエチルアミンであってもよく、いくつかの実施形態において、Ｎ－メチ
ルモルホリンであり、前記第３級アミン類有機塩基と式（３１７）に示される化合物との
モル比は３：１～２０：１であってもよく、いくつかの実施形態において、５：１～１０
：１である。
上記と同様に、任意の適切な単離方法により反応混合物から式（３１５）の化合物を単
離することができる。いくつかの実施形態において、溶剤を蒸発除去した後、クロマトグ
ラフィー方法により式（３１５）の化合物を単離することができ、例えば、以下の２つの
クロマトグラフィー条件で単離することができる。（１）順相精製シリカゲル：２００～
３００メッシュのシリカゲル充填剤を、ジクロロメタン：メタノール＝１００：５～１０
０：７で勾配溶出する。（２）逆相精製：Ｃ１８、Ｃ８逆相充填剤を、メタノール：アセ
トニトリル＝０．１：１～１：０．１で勾配溶出する。いくつかの実施形態において、溶
剤を直接除去して式（３１５）の化合物の粗製品を得ることができ、当該粗製品は、その
まま後の反応に用いることができる。
いくつかの実施形態において、式（３１７）の化合物と十分な量の式（３１６）の化合
物を一度反応させるだけで所望の式（３１５）の化合物を生成する。この場合、各Ｓ１－
Ｌ１部分同士が同じである。いくつかの実施形態において、必要に応じて、式（３１７）
の化合物を、異なる式（３１６）の化合物、即ち、Ｌ１及び／又はＳ１が異なる式（３１
６）の化合物とバッチ反応させることにより、生成された式（３１５）の化合物に２種類
以上のＳ１及び／又はＬ１を含ませることができる。例えば、１ｅｑの式（３１７）の化
合物に対して、それを２ｅｑの第１の式（３１６）の化合物と接触させ、式（３１７）の
化合物における２つの末端第一級アミン基に第１のＳ１－Ｌ１部分を結合した後、続いて
（ｎ３＋ｎ１－１）ｅｑの第２の式（３１６）の化合物と接触させ（ｎ３及びｎ１の定義
と値の範囲は、前述したとおりである）、式（３１７）の化合物における（ｎ３＋ｎ１－
１）個の第二級アミン基に第２のＳ１－Ｌ１部分を結合することができる。
いくつかの実施形態において、式（３１７）に示される化合物は、有機溶剤の存在下及
び脱保護反応条件下で、式（３１８）に示される化合物をメチルアミン水溶液と接触させ
た後、単離することを含む調製方法により得ることができる。
Figure 2023082151000050
 式中、ｎ１、ｎ３、ｍ１、ｍ２、ｍ３、Ｒ７、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１
４、Ｒ１５それぞれの定義と選択可能な範囲は、前述したとおりである。
前記脱保護反応条件としては、反応温度が０～１５０℃であり、反応時間が５～７２時
間であり、いくつかの実施形態において、反応温度が２０～８０℃であり、反応時間が１
０～３０時間である。
前記有機溶剤は、アルコールから選択されてもよく、いくつかの実施形態において、メ
タノール、エタノール及びイソプロパノールの１つであり、いくつかの実施形態において
、メタノールであり、式（３１８）の化合物に対して、前記有機溶剤の用量が１～２０Ｌ
／ｍｏｌであり、いくつかの実施形態において、１．５～１０Ｌ／ｍｏｌである。
前記メチルアミン水溶液の濃度が３０～４０質量％であってもよく、メチルアミンと式
（３１８）に示される化合物とのモル比が１０：１～５００：１であってもよく、いくつ
かの実施形態において、５０：１～２００：１である。
上記と同様に、任意の適切な単離方法により反応混合物から式（３１７）の化合物を単
離することができる。いくつかの実施形態において、溶剤を蒸発除去した後、クロマトグ
ラフィー方法により式（３１７）の化合物を単離することができ、例えば、以下の２つの
クロマトグラフィー条件で単離することができる。（１）順相精製シリカゲル：２００～
３００メッシュのシリカゲル充填剤を、ジクロロメタン：メタノール：アンモニア水（２
５重量％）＝１：１：０．０５～１：１：０．２５で勾配溶出する。（２）逆相精製：Ｃ
１８、Ｃ８逆相充填剤を、メタノール：アセトニトリル＝０．１：１～１：０．１で勾配
溶出する。いくつかの実施形態において、溶剤を直接除去して式（３１７）の化合物の粗
製品を得ることができ、当該粗製品は、そのまま後の反応に用いることができる。
いくつかの実施形態において、式（３１８）に示される化合物は、有機溶剤の存在下及
び置換反応条件下で、式（３１９）に示される化合物を、トリフェニルクロロメタン（Ｔ
ｒＣｌ）、ジフェニルエチルフェニルクロロメタン、フェニルジエチルフェニルクロロメ
タン又はトリエチルフェニルクロロメタン、いくつかの実施形態においてトリフェニルク
ロロメタン（ＴｒＣｌ）と接触させた後、単離することを含む調製方法により得ることが
できる。
Figure 2023082151000051
 式中、ｎ１、ｎ３、ｍ１、ｍ２、ｍ３、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ
１５それぞれの定義と選択可能な範囲は、前述したとおりである。
前記置換反応条件としては、反応温度が０～１００℃であり、反応時間が５～７２時間
であってもよく、いくつかの実施形態において、反応条件としては、反応温度が１０～４
０℃であり、反応時間が１０～３０時間である。
トリフェニルクロロメタン（ＴｒＣｌ）、ジフェニルエチルフェニルクロロメタン、フ
ェニルジエチルフェニルクロロメタン又はトリエチルフェニルクロロメタンは、市販品を
購入することができ、トリフェニルクロロメタン（ＴｒＣｌ）、ジフェニルエチルフェニ
ルクロロメタン、フェニルジエチルフェニルクロロメタン又はトリエチルフェニルクロロ
メタンと式（３１９）に示される化合物とのモル比が１：１～１０：１であってもよく、
いくつかの実施形態において、１：１～３：１である。
前記有機溶剤は、エポキシ類溶剤、エーテル類溶剤、ハロゲン化アルキル類溶剤、ジメ
チルスルホキシド、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルア
ミンの１種又は複数種であってもよい。前記エポキシ類溶剤は、いくつかの実施形態にお
いて、ジオキサン及び／又はテトラヒドロフランであってもよく、前記エーテル類溶剤は
、いくつかの実施形態において、エチルエーテル及び／又はメチルｔｅｒｔ－ブチルエー
テルであってもよく、前記ハロゲン化アルキル類溶剤は、いくつかの実施形態において、
ジクロロメタン、トリクロロメタン及び１，２－ジクロロエタンの１種又は複数種であっ
てもよく、いくつかの実施形態において、前記有機溶剤は、ジクロロメタンである。式（
３１９）の化合物に対して、前記有機溶剤の用量が３～５０Ｌ／ｍｏｌであってもよく、
いくつかの実施形態において、５～２０Ｌ／ｍｏｌである。
上記と同様に、任意の適切な単離方法により反応混合物から式（３１８）の化合物を単
離することができる。いくつかの実施形態において、溶剤を蒸発除去した後、クロマトグ
ラフィー方法により式（３１８）の化合物を単離することができ、例えば、以下の２つの
クロマトグラフィー条件で単離することができる。（１）順相精製シリカゲル：２００～
３００メッシュのシリカゲル充填剤を、メタノール：ジクロロメタン＝０．０１：１～０
．５：１で、又はメタノール：ジクロロメタン：酢酸エチル：石油エーテル＝０．１：１
：１：１～１：１：１：１で勾配溶出する。（２）逆相精製：Ｃ１８、Ｃ８逆相充填剤を
、メタノール：アセトニトリル＝０．１：１～１：０．１で勾配溶出する。いくつかの実
施形態において、溶剤を直接除去して式（３１８）の化合物の粗製品を得ることができ、
当該粗製品は、そのまま後の反応に用いることができる。
いくつかの実施形態において、式（３１９）に示される化合物は、有機溶剤において、
置換反応条件下で、式（３２０）に示される化合物をトリフルオロ酢酸エチルと接触させ
た後、単離することを含む調製方法により得ることができる。
Figure 2023082151000052
 式中、ｎ１、ｎ３、ｍ１、ｍ２、ｍ３、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ
１５それぞれの定義と選択可能な範囲は、前述したとおりである。
いくつかの実施形態において、前記有機溶剤は、アセトニトリル、エポキシ類溶剤、エ
ーテル類溶剤、ハロゲン化アルキル類溶剤、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ－ジメチルホ
ルムアミド及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの１種又は複数種である。いくつか
の実施形態において、前記エポキシ類溶剤は、ジオキサン及び／又はテトラヒドロフラン
であり、いくつかの実施形態において、前記エーテル類溶剤は、エチルエーテル及び／又
はメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルであり、いくつかの実施形態において、前記ハロゲン
化アルキル類溶剤は、ジクロロメタン、トリクロロメタン及び１，２－ジクロロエタンの
１種又は複数種であり、いくつかの実施形態において、前記有機溶剤は、アセトニトリル
である。式（３２０）の化合物に対して、前記有機溶剤の用量が１～５０Ｌ／ｍｏｌであ
ってもよく、いくつかの実施形態において、１～２０Ｌ／ｍｏｌである。
前記置換反応条件としては、反応温度が０～１００℃であり、反応時間が５～７２時間
であってもよく、いくつかの実施形態において、前記置換反応条件としては、反応温度が
１０～４０℃であり、反応時間が１０～３０時間である。
式（３２０）の化合物は、市販品を購入して、又は、当業者により既知の方法を用いて
得ることができる。例えば、ｍ１＝ｍ２＝ｍ３＝３、ｎ１＝１、ｎ３＝２であり、Ｒ１０
、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５がいずれもＨである場合、式（３２０）の化
合物は、アルファ・エイサー社から市販品を購入できる。
前記トリフルオロ酢酸エチルと式（３２０）に示される化合物とのモル比が２：１～１
０：１であり、いくつかの実施形態において、３：１～５：１である。
上記と同様に、任意の適切な単離方法により反応混合物から式（３１９）の化合物を単
離することができる。いくつかの実施形態において、溶剤を蒸発除去した後、クロマトグ
ラフィー方法により式（３１９）の化合物を単離することができ、例えば、以下の２つの
クロマトグラフィー条件で単離することができる。（１）順相精製シリカゲル：２００～
３００メッシュのシリカゲル充填剤を、メタノール：ジクロロメタン＝０．０１：１～０
．５：１で、又はメタノール：ジクロロメタン：酢酸エチル：石油エーテル＝０．１：１
：１：１～１：１：１：１で勾配溶出する。（２）逆相精製：Ｃ１８、Ｃ８逆相充填剤を
、メタノール：アセトニトリル＝０．１：１～１：０．１で勾配溶出する。いくつかの実
施形態において、溶剤を直接除去して式（３１９）の化合物の粗製品を得ることができ、
当該粗製品は、そのまま後の反応に用いることができる。
本開示のｓｉＲＮＡ複合体は、薬学的に許容できる他の添加剤と併用してもよく、当該
添加剤は、本分野で通常採用される各種の製剤又は化合物の１種又は複数種であってもよ
く、詳細は、上述した本開示の薬物組成物に関する記載を参照のこと。
＜本開示のｓｉＲＮＡ、当該ｓｉＲＮＡを含む薬物組成物及び複合体の使用＞
いくつかの実施形態において、本開示は、本開示のｓｉＲＮＡ、及び／又は薬物組成物
及び／又はｓｉＲＮＡ複合体の、脂質異常の治療及び／又は予防のための薬物の調製にお
ける使用を提供する。
いくつかの実施形態において、本開示は、本開示のｓｉＲＮＡ、及び／又は薬物組成物
及び／又はｓｉＲＮＡ複合体の有効量を、それを必要とする被験体に投与することを含む
脂質異常の予防及び／又は治療方法を提供する。
本開示のｓｉＲＮＡ活性成分を、それを必要とする被験体に投与することにより、ＲＮ
Ａ干渉機構により脂質異常を予防及び／又は治療する目的を達成することができる。した
がって、本開示のｓｉＲＮＡ、及び／又は薬物組成物及び／又はｓｉＲＮＡ複合体は、脂
質異常の予防及び／又は治療に用いられ、又は脂質異常の予防及び／又は治療のための薬
物の調製に用いることができる。
前記脂質異常とは、肝細胞においてＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の過剰発現による脂質異常を
指し、通常、血中トリグリセリド、コレステロール等の脂質及び／又はリポタンパクのい
ずれか１つ又は全てのレベルの向上として表され、レベルの高い脂質は、高血圧、心血管
疾患、糖尿病及び他の病理学的疾患に高度に関連する。高トリグリセリド血症は、アテロ
ーム性動脈硬化に関連し、膵炎にもつながる。本開示に記載された脂質異常は、高コレス
テロール血症、高トリグリセリド血症又はアテローム性動脈硬化を含むが、これらに限定
されない。
本明細書で用いられる用語「薬剤投与／投与」とは、本開示のｓｉＲＮＡ、薬物組成物
及び／又はｓｉＲＮＡ複合体を少なくとも一部、所望の部位に局在化して所望の効果を生
じさせる方法又は経路により、本開示のｓｉＲＮＡ、薬物組成物及び／又はｓｉＲＮＡ複
合体を被験体の体内に入れることを指す。本開示の方法に適した投与経路は、局所投与と
全身投与を含む。一般的には、局所投与により、被験体全身よりも多くのｓｉＲＮＡ複合
体が特定の部位に送達されるが、全身投与により、本開示のｓｉＲＮＡ、薬物組成物及び
／又はｓｉＲＮＡ複合体が被験体のほぼ全身に送達される。本開示が脂質異常の予防及び
／又は治療手段を提供することを意図することを考慮すると、いくつかの実施形態におい
て、薬物を肝臓に送達することができる投与方法である。
本分野で既知の任意の適切な経路で被験体に投与することができ、前記経路としては、
経口投与又は胃腸外経路、例えば、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、経皮投与、気管
内投与（エアロゾル）、肺部投与、鼻部投与、直腸投与及び局所投与（口腔内投与と舌下
投与を含む）を含むが、これらのみに限定されない。投与頻度は、１日、１週間、２週間
、３週間、１ヶ月又は１年に１回又は複数回であってもよい。
本開示に記載されたｓｉＲＮＡ、薬物組成物又はｓｉＲＮＡ複合体の用量は、本分野に
おける通常の用量であってもよく、前記用量は、各種のパラメーター、特に被験体の年齢
、体重及び性別により決定されてもよい。細胞培養又は実験動物で標準薬学的手順により
毒性と治療効果を測定し、例えば、ＬＤ５０（５０％の群体を死亡させる用量）及びＥＤ
５０（定量的反応において、５０％の最大反応強度を引き起こすことができる用量を指し
、定性的反応において、５０％の実験対象に陽性反応が発生する場合の用量を指す）を測
定してもよい。細胞培養分析及び動物研究により得られたデータに基づいてヒト用量の範
囲を得ることができる。
本開示に記載されたｓｉＲＮＡ、薬物組成物、及び／又はｓｉＲＮＡ複合体を投与する
場合、例えば、雄性又は雌性、６～１２週齢、体重１８～２５ｇのＣ５７ＢＬ／６Ｊ又は
３０～４５ｇのｏｂ／ｏｂマウスに対して、ｓｉＲＮＡの量として、（ｉ）ｓｉＲＮＡ複
合体について、そのｓｉＲＮＡ用量が０．００１～１００ｍｇ／ｋｇ体重であってもよく
、さらなる実施形態において、０．０１～５０ｍｇ／ｋｇ体重であり、より更なる実施形
態において、０．０５～２０ｍｇ／ｋｇ体重であり、また更なる実施形態において、０．
１～１０ｍｇ／ｋｇ体重であり、（ｉｉ）ｓｉＲＮＡ及び薬学的に許容可能な担体により
形成された薬物組成物について、そのｓｉＲＮＡ用量が０．００１～５０ｍｇ／ｋｇ体重
であってもよく、さらなる実施形態において、０．０１～１０ｍｇ／ｋｇ体重であり、よ
り更なる実施形態において、０．０５～５ｍｇ／ｋｇ体重であり、また更なる実施形態に
おいて、０．１～３ｍｇ／ｋｇ体重である。
いくつかの実施形態において、本開示は、本開示のｓｉＲＮＡ、及び／又は薬物組成物
及び／又はｓｉＲＮＡ複合体の有効量を肝細胞と接触させ、本開示のｓｉＲＮＡ、及び／
又は薬物組成物及び／又はｓｉＲＮＡ複合体を前記肝細胞に導入し、ＲＮＡ干渉機構によ
り肝細胞におけるＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を抑制する目的を達成することを含む、肝
細胞におけるＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現の抑制方法を提供する。前記肝細胞は、Ｈｅｐ
３Ｂ、ＨｅｐＧ２、Ｈｕｈ７等の肝がん細胞系又は単離した初代肝細胞から選択されても
よい。いくつかの実施形態において、前記細胞は、Ｈｕｈ７肝がん細胞である。
本開示により提供される方法により細胞におけるＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を抑制す
る。提供される修飾ｓｉＲＮＡ、薬物組成物及び／又はｓｉＲＮＡ複合体におけるｓｉＲ
ＮＡ用量は、一般的に、標的遺伝子の発現を低減でき、標的細胞表面では１ｐＭ～１μＭ
、０．０１ｎＭ～１００ｎＭ、０．０５ｎＭ～５０ｎＭ、又は０．０５ｎＭ～約５ｎＭの
細胞外濃度となる量である。当該局所濃度を達成するのに必要な量は、送達方法、送達部
位、送達部位と標的細胞又は組織との間の細胞層の数、送達するのが局所か全身か等を含
む、各種の因子により変化する。送達部位における濃度は、標的細胞又は組織の表面にお
ける濃度よりも顕著に高くてもよい。
＜キット＞
本開示は、本開示の修飾ｓｉＲＮＡ、薬物組成物及びｓｉＲＮＡ複合体の少なくとも１
種の有効量を含むキットを提供する。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されたキットは、容器で修飾ｓｉＲＮＡ
を提供することができる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されたキットは
、薬学的に許容できる賦形剤を提供する容器を含んでもよい。いくつかの実施形態におい
て、前記キットには、他の成分、例えば、安定化剤又は防腐剤等が含まれてもよい。いく
つかの実施形態において、本明細書に記載されたキットは、本明細書に記載された修飾ｓ
ｉＲＮＡを提供する容器とは別の容器で少なくとも１種の他の治療剤を含んでもよい。い
くつかの実施形態において、前記キットは、修飾ｓｉＲＮＡと薬学的に許容可能な担体及
び／又は添加剤又は他の成分（存在する場合）を混合するための説明書を含んでもよい。
本開示のキットにおいて、前記修飾ｓｉＲＮＡ及び薬学的に許容可能な担体及び／又は
添加剤、並びに、前記修飾ｓｉＲＮＡ、薬物組成物及び／又はｓｉＲＮＡ複合体及び／又
は複合体、及び／又は薬学的に許容できる添加剤は、任意の形式、例えば、液体形式、乾
燥形式又は凍結乾燥形式として提供されてもよい。いくつかの実施形態において、前記修
飾ｓｉＲＮＡ及び薬学的に許容可能な担体及び／又は添加剤、並びに、前記薬物組成物、
及び／又は複合体及び薬学的に許容できる任意の添加剤は、基本的にクリーン及び／又は
無菌である。いくつかの実施形態において、本開示のキットで無菌水を提供することがで
きる。
以下に実施例により本開示をさらに説明するが、本開示は、これによって何ら制限され
ない。
以下に実施例により本開示を詳しく説明する。特に説明がない限り、以下の実施例で用
いられる試薬、培地は、いずれも市販品であり、用いられる核酸電気泳動、ｒｅａｌ－ｔ
ｉｍｅ ＰＣＲ等の操作は、いずれもＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ ＬＢｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（１９８９））に記載
された方法を参照して行われる。
ＨＥＫ２９３Ａ細胞は、北京大学分子医学研究所核酸技術実験室により提供され、２０
％のウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｈｙｃｌｏｎｅ社）及び０．２体積％のペニシリン－ストレ
プトマイシン（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ－Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ、Ｇｉｂｃｏ、Ｉｎｖ
ｉｔｒｏｇｅｎ社）を含むＤＭＥＭ完全培地（Ｈｙｃｌｏｎｅ社）で細胞を３７℃で５％
ＣＯ２／９５％空気含有インキュベーターにおいて培養した。
Ｈｕｈ７細胞は、中国科学院幹細胞バンクから購入され、１０％のウシ胎児血清（ＦＢ
Ｓ、Ｈｙｃｌｏｎｅ社）、１％非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ、Ｃｏｒｎｉｎｇ社）を含むＤ
ＭＥＭ完全培地（Ｈｙｃｌｏｎｅ社）で細胞を３７℃で５％ＣＯ２／９５％空気含有イン
キュベーターにおいて培養した。
本開示により合成されたＡＮＧＰＴＬ３遺伝子に対するｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ複合体
又は陰性コントロールであるｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ複合体で細胞をトランスフェクショ
ンした場合、トランスフェクション試薬としてＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＴＭ２０００
（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用い、具体的な操作については、メーカーにより提供される
説明書を参照のこと。
別に説明がない限り、以下で提供される試薬割合は、いずれも体積比（ｖ／ｖ）として
計算される。
用いられる動物モデルは以下のとおりである。
Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウス：６～８週齢、北京維通利華実験動物技術有限公司から購入さ
れ、以下単にｃ５７マウスという。
ＢＡＬＢ／ｃマウス：６～８週齢、北京維通利華実験動物技術有限公司から購入される
。
ｏｂ／ｏｂマウス：６～８週齢、常州キャヴェンス実験動物有限公司から購入される。
ヒトＡＰＯＣ３トランスジェニックマウス：Ｂ６、ＣＢＡ－Ｔｇ（ＡＰＯＣ３）３７０
７Ｂｒｅｓ／Ｊ、米国Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入される。
メタボリックシンドロームのサル：北京大学分子医学研究所非ヒト霊長類研究センター
により提供される。
実験データは、いずれも
Figure 2023082151000053
 で表され、データ分析では、Ｇｒａｐｈｐａｄ ｐｒｉｓｍ５．０統計分析ソフトウェア
を採用した。まずデータに対して正規分布と等分散性検定を行った。正規分布を満たす（
ｐ＞０．２０）とともに分散が等しい（ｐ＞０．１０）場合、複数の群間の比較では、一
元配置分散分析によるＬＳＤ法により多重比較し、ｐ＜０．０５である場合、統計学的有
意であるとみなした。正規分布を満たしておらず、又は分散が等しくない場合、複数の群
間の比較では、ノンパラメトリック検定であるＫｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ Ｈ方法を
採用し、Ｋｒｕｓｋａｌ－ｗａｌｌｉｓ Ｈ検定結果が有意（ｐ＜０．０５）である場合
、データをランク変換した後、複数の群間の一対比較を行い、ｐ＜０．０５である場合、
統計学的有意であるとみなした。図面において、「＊」は、ｐ＜０．０５を表し、「＊＊
」は、ｐ＜０．０１を表し、「＊＊＊」は、ｐ＜０．００１を表す。
（調製例１）複合体１～４の調製
本調製例で、複合体１、複合体２及び複合体４（以下、それぞれＬ１０－ｓｉＡＮ１Ｍ
３ＳＶＰ、Ｌ１０－ｓｉＡＮ１Ｍ３ＳＰ及びＬ１０－ｓｉＡＮ１Ｍ３Ｓ複合体ともいう）
を合成できた。また、複合体３（Ｌ１０－ｓｉＡＮ１Ｍ３ＳＰｓ複合体という）を合成で
きると予期した。前述した複合体は、Ｌ－９複合分子がそれぞれ番号ｓｉＡＮ１Ｍ３ＳＶ
Ｐ、ｓｉＡＮ１Ｍ３ＳＰ、ｓｉＡＮ１Ｍ３Ｓ又はｓｉＡＮ１Ｍ３ＳＰｓのｓｉＲＮＡと連
結した後に形成された複合体であった。当該複合体に複合されたｓｉＲＮＡの配列は、表
３に示される。
（１－１）Ｌ－１０化合物の合成
以下の方法に従い、Ｌ－１０化合物を合成した。
Figure 2023082151000054
（１－１－１）複合末端セグメントＧＡＬ－５の合成
Figure 2023082151000055
 （１－１－１ａ）ＧＡＬ－２の合成
１００．０ｇのＧＡＬ－１（Ｎ－アセチル－Ｄ－ガラクトサミン塩酸塩、ＣＡＳ番号：
１７７２－０３－８、寧波弘翔生化公司から購入、４６３．８ｍｍｏｌ）を１０００ｍｌ
の無水ピリジンに溶解させ、氷水浴下で５４０ｍｌの酢酸無水物（Ｅｎｏｘ社から購入、
５５６５．６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１．５時間攪拌反応した。反応液を１０Ｌの氷水
に注入し、減圧吸引濾過し、ケーキを２Ｌの氷水で洗浄した後、完全に溶解するまでアセ
トニトリル／トルエン混合溶剤（アセトニトリル：トルエンの体積比＝１：１）を加え、
溶剤を蒸発乾固し、１３０．０ｇの白色固形製品ＧＡＬ－２を得た。
（１－１－１ｂ）ＧＡＬ－３の合成
工程（１－１－１ａ）で得られたＧＡＬ－２（３５．１ｇ、９０．０ｍｍｏｌ）を２１
３ｍｌの無水１，２－ジクロロエタンに溶解させ、氷水浴下で、窒素保護条件で、２４．
０ｇのＴＭＳＯＴｆ（ＣＡＳ番号：２７６０７－７７－８、Ｍａｃｋｌｉｎ社から購入、
１０８．０ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩反応させた。
反応液に４００ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、珪藻土で濾過し、１Ｌの飽和炭
酸水素ナトリウム水溶液を加え、均一に攪拌し、有機相を分離し、水相をジクロロエタン
により１回あたり３００ｍｌで２回抽出し、有機相をあわせ、それぞれ３００ｍｌの飽和
炭酸水素ナトリウム水溶液及び３００ｍｌの飽和食塩水で洗浄し、有機相を分離し、無水
硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶剤を減圧蒸発乾固し、２６．９ｇの淡黄色の粘稠な水飴状
製品ＧＡＬ－３を得た。
（１－１－１ｃ）ＧＡＬ－４の合成
工程（１－１－１ｂ）で得られたＧＡＬ－３（２６．９ｇ、８１．７ｍｍｏｌ）を１３
６ｍｌの無水１，２－ジクロロエタンに溶解させ、乾燥した４Å分子篩粉３０ｇを加え、
９．０ｇの５－ヘキセン－１－オール（ＣＡＳ番号：８２１－４１－０、Ａｄａｍａｓ－
ｂｅｔａ社から購入、８９．９ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分間攪拌し、氷浴下で窒素
保護下で９．０８ｇのＴＭＳＯＴｆ（４０．９ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩攪拌反応さ
せた。４Å分子篩粉を濾過除去し、濾液に３００ｍｌのジクロロメタンを加えて希釈し、
珪藻土で濾過し、５００ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて１０分間攪拌し洗
浄し、有機相を分離し、水相を３００ｍｌのジクロロエタンで１回抽出し、有機相をあわ
せ、それぞれ３００ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び３００ｍｌの飽和食塩水で
洗浄し、有機相を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶剤を減圧蒸発乾固し、４１
．３ｇの黄色水飴状製品ＧＡＬ－４を得、精製することなく、そのまま次の酸化反応を行
った。
（１－１－１ｄ）ＧＡＬ－５の合成
工程（１－１－１ｃ）に記載された方法により得られたＧＡＬ－４（１４．９ｇ、３４
．７ｍｍｏｌ）を７７ｍｌのジクロロメタンと７７ｍｌのアセトニトリルの混合溶剤に溶
解させ、それぞれ１０３ｍｌの脱イオン水及び２９．７ｇの過ヨウ素酸ナトリウム（ＣＡ
Ｓ番号：７７９０－２８－５、Ａｌａｄｄｉｎ社から購入、１３８．８ｍｍｏｌ）を加え
、氷水浴下で１０分間攪拌し、塩化ルテニウム（ＩＩＩ）（ＣＡＳ番号：１４８９８－６
７－０、Ｅｎｅｒｇｙ社から購入、２３８ｍｇ、１．１４５ｍｍｏｌ）を加え、室温で一
晩反応させた。反応液に３００ｍｌの水を加えて希釈攪拌し、飽和炭酸水素ナトリウムを
加えてｐＨを約７．５に調整し、有機相を分離して捨て、水相をジクロロメタンで１回あ
たり２００ｍｌで３回抽出し、有機相を捨てた。水相を固形クエン酸でｐＨを約３に調節
し、ジクロロメタンで１回あたり２００ｍｌで３回抽出し、有機相をあわせ、無水硫酸ナ
トリウムで乾燥させ、溶剤を減圧蒸発乾固し、６．８５ｇの白色泡状固形製品ＧＡＬ－５
を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ） δ １２．０１ （ｂｒ，１Ｈ
），７．８３ （ｄ，Ｊ ＝ ９．２ Ｈｚ，１Ｈ），５．２１ （ｄ，Ｊ ＝ ３．２
Ｈｚ，１Ｈ），４．９６ （ｄｄ，Ｊ ＝ １１．２，３．２ Ｈｚ，１Ｈ），４．４
９ （ｄ，Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．０７ － ３．９５ （ｍ，３Ｈ），３
．９２ － ３．８５ （ｍ，１Ｈ），３．７４ － ３．６７ （ｍ，１Ｈ），３．４
８ － ３．３９ （ｍ，１Ｈ），２．２０ （ｔ，Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ，２Ｈ），２
．１１ （ｓ，３Ｈ），２．００ （ｓ，３Ｈ），１．９０ （ｓ，３Ｈ），１．７７
（ｓ，３Ｈ），１．５５ － １．４５ （ｍ，４Ｈ）．
（１－１－２）Ｍ－１１－Ｔ３の合成：
Figure 2023082151000056
 Ｊ－０（１．８８３ｇ、１０ｍｍｏｌ、アルファ・エイサー社から購入）を２５ｍｌの
アセトニトリルに溶解させ、トリエチルアミン（４．０４８ｇ、４０ｍｍｏｌ）を加えて
氷水浴で０℃まで冷却し、トリフルオロ酢酸エチル（５．６８３ｇ、４０ｍｍｏｌ）を加
え、室温で２２ｈ反応させ、溶剤を減圧蒸発乾固し、真空油ポンプで１８ｈ発泡乾燥させ
、５．３４２ｇの固形粗製品Ｍ－１１－Ｔ３を得、さらに精製することなく、そのまま後
の反応に用いた。ＭＳ ｍ／ｚ：Ｃ１５Ｈ２２Ｆ９Ｎ４Ｏ３，［Ｍ＋Ｈ］＋、理論値：４
７７．３５、実測値：４７７．６５。
（１－１－３）Ｍ－１１－Ｔ３－Ｔｒの合成：
Figure 2023082151000057
 Ｍ－１１－Ｔ３粗製品（５．３４２ｇ、１０ｍｍｏｌ）を５０ｍｌのジクロロメタンに
溶解させ、反応液にＴｒＣｌ（３．３４５ｇ、１２ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１
．５１８ｇ、１５ｍｍｏｌ）を加え、室温で２０ｈ攪拌反応させ、飽和炭酸水素ナトリウ
ムで反応液を１回あたり２０ｍｌで２回洗浄し、２０ｍｌの飽和食塩水で１回洗浄し、有
機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した後に有機溶剤を減圧蒸発乾固し、真空油
ポンプで一晩発泡乾燥させ、７．７６３ｇの固形粗製品Ｍ－１１－Ｔ３－Ｔｒを得た。Ｍ
Ｓ ｍ／ｚ：Ｃ３４Ｈ３６Ｆ９Ｎ４Ｏ３，［Ｍ＋Ｎａ］＋、理論値：７４１．２５、実測
値：７４１．５３。固形粗製品Ｍ－１１－Ｔ３－Ｔｒは、精製することなく、引き続き次
のＭ－１８－Ｔｒの合成に使用した。
（１－１－４）Ｍ－１８－Ｔｒの合成：
Figure 2023082151000058
 工程（１－１－３）で得られたＭ－１１－Ｔ３－Ｔｒ粗製品（７．７６３ｇ、１０ｍｍ
ｏｌ）を１００ｍｌのメタノールに溶解させ、１００ｍｌのメチルアミン水溶液（４０質
量％）を加え、５０℃で２３ｈ攪拌反応させ、不溶性粒子を濾過除去し、溶剤を減圧蒸発
乾固し、２００ｍｌの体積比１：１のジクロロメタン：メタノール混合溶剤を加え、５０
ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウムで洗浄し、水相をジクロロメタン（ＤＣＭ）で１回あたり
５０ｍｌで３回抽出し、有機相をあわせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した後に
溶剤を減圧蒸発乾固し、真空油ポンプで一晩発泡乾燥させ、２００～３００メッシュの順
相シリカゲルカラムで精製し、石油エーテルをカラムに入れ、１重量％トリエチルアミン
でシリカゲルの酸性を中和し、ジクロロメタン：メタノール：アンモニア水（２５重量％
）＝１：１：０．０５～１：１：０．２５で勾配溶出し、生成物溶出液を回収し、溶剤を
減圧蒸発乾固し、真空油ポンプで発泡乾燥させて２．８８７ｇの純粋なＭ－１８－Ｔｒを
得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ） δ７．４７ － ７．３９ （ｍ
，６Ｈ），７．３２ －７．２４ （ｍ，６Ｈ），７．１９ － ７．１２ （ｍ，３Ｈ
），２．６０ － ２．４７ （ｍ，４Ｈ），２．４６ － ２．１９ （ｍ，１３Ｈ）
，１．７０ － １．５５ （ｍ，４Ｈ），１．４０ （ｐ、Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ，２
Ｈ）． ＭＳ ｍ／ｚ：Ｃ２８Ｈ３９Ｎ４，［Ｍ＋Ｈ］＋、理論値：４３１．６５、実測
値：４３２．６１。
（１－１－５）Ｌ－５－Ｔｒの合成：
Figure 2023082151000059
 工程（１－１－４）で得られたＭ－１８－Ｔｒ（２．０２ｇ、４．６９ｍｍｏｌ）と工
程（１－１－１）で得られたＧＡＬ－５（６．９３ｇ、１５．４８ｍｍｏｌ）とを混合し
て４７ｍｌのアセトニトリルに溶解させ、Ｎ－メチルモルホリン（３．１３ｇ、３０．９
６ｍｍｏｌ）及び４－（４，６－ジメトキシトリアジン－２－イル）－４－メチルモルホ
リン塩酸塩（ＤＭＴＭＭ、４．２８ｇ、１５．４８ｍｍｏｌ）を加え、室温で２ｈ攪拌反
応させた。２００ｍｌのジクロロメタンで反応液を希釈し、１００ｍｌの飽和炭酸水素ナ
トリウム溶液で有機相を洗浄し、１００ｍｌの飽和食塩水で有機相を洗浄し、有機相を無
水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した後に溶剤を減圧蒸発乾固して粗製品を得た。２０
０～３００メッシュの順相シリカゲルカラムで精製し、石油エーテルをカラムに入れ、１
重量％トリエチルアミンでシリカゲルの酸性を中和し、ジクロロメタン：メタノール＝１
００：５～１００：７で勾配溶出し、生成物溶出液を回収し、減圧蒸発乾固して７．４９
ｇの純粋なＬ－５－Ｔｒを得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ） δ７．
８３ － ７．１０ （ｍ，４Ｈ），７．６７ － ７．６０ （ｍ，１Ｈ），７．４４
－ ７．３４ （ｍ，６Ｈ），７．３３ － ７．２４ （ｍ，６Ｈ），７．２０ －
７．１５ （ｍ，３Ｈ），５．２２ （ｓ，３Ｈ），４．９７ （ｄ，Ｊ ＝ １１．
３ Ｈｚ，３Ｈ），４．４９ （ｄ，Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ，３Ｈ），４．０６ － ３
．０７ （ｍ，９Ｈ），３．９５ － ３．８３ （ｍ，３Ｈ），３．７７ － ３．６
４ （ｍ，３Ｈ），３．４５ － ３．３５ （ｍ，３Ｈ），３．１２ － ２．８７
（ｍ，８Ｈ），２．３０ － ２．１５ （ｍ，３Ｈ），２．１１ － １．９８ （ｍ
，２２Ｈ），１．９５ － １．８４ （ｍ，１１Ｈ），１．８１ － １．６１ （ｍ
，１４Ｈ），１．５４ － １．３６ （ｍ，１４Ｈ）． ＭＳ ｍ／ｚ：Ｃ８５Ｈ１１
９Ｎ７Ｏ３０，［Ｍ＋Ｈ］＋、理論値：１７１８．８１、実測値：１７１８．０３。
（１－１－６）Ｌ－８の合成：
Figure 2023082151000060
 工程（１－１－５）で得られたＬ－５－Ｔｒ（５．９４ｇ、３．４５６ｍｍｏｌ）を６
９ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、ジクロロ酢酸（１３．３６７ｇ、１０３．６７ｍｍ
ｏｌ）を加え、室温で２ｈ反応させ、１００ｍｌのジクロロメタンを加えて反応液を希釈
し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液を加えて洗浄しｐＨ＝７～８になるように調節し、水相
をジクロロメタンで１回あたり３０ｍｌで６回抽出し、有機相をあわせ、無水硫酸ナトリ
ウムで乾燥させ、濾過した後に溶剤を減圧蒸発乾固して粗製品を得た。精製には、２００
～３００メッシュの順相シリカゲルを用い、１０重量％トリエチルアミンでシリカゲルの
酸性を中和し、１重量‰トリエチルアミンでカラムを平衡化し、ジクロロメタン：メタノ
ール＝１００：３０～１００：４０で勾配溶出し、生成物溶出液を回収し、溶剤を減圧蒸
発乾固して４．２６ｇの純粋なＬ－８を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＤＭＳ
Ｏ） δ ７．８４ （ｄ，Ｊ ＝ ９．０ Ｈｚ，３Ｈ），７．２７ － ７．２３
（ｍ，１Ｈ），７．１３ － ７．１８ （ｍ，１Ｈ），５．２２ （ｄ，Ｊ ＝ ３．
１ Ｈｚ，３Ｈ），４．９７ （ｄｄ，Ｊ ＝ １１．３，３．１ Ｈｚ，３Ｈ），４．
４８ （ｄ，Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ，３Ｈ），４．０９ － ３．９８ （ｍ，９Ｈ），
３．８８ （ｄｄ，Ｊ ＝ １９．３，９．３ Ｈｚ，３Ｈ），３．７５ － ３．６６
（ｍ，３Ｈ），３．４４ － ３．３８ （ｍ，３Ｈ），３．１７ － ３．３０ （
ｍ，４Ｈ），３．１０ － ２．９７ （ｍ，４Ｈ），２．３５ － ２．２０ （ｍ，
６Ｈ），２．１５ － ２．０８ （ｍ，９Ｈ），２．０７ － １．９８ （ｍ，１３
Ｈ），１．９４ － １．８７ （ｍ，９Ｈ），１．８１ － １．７４ （ｍ，９Ｈ）
，１．６５ － １．４２ （ｍ，１８Ｈ）． ＭＳ ｍ／ｚ：Ｃ８５Ｈ１１９Ｎ７Ｏ３
０，［Ｍ＋Ｈ］＋、理論値：１４７７．５９、実測値：１４７７．２３。
（１－１－７ａ）Ａ－１の合成
Figure 2023082151000061
 ＤＭＴｒＣｌ（４，４’－ビスメトキシトリチルクロリド、３８．１２ｇ、１１２．５
ｍｍｏｌ）を４５０ｍｌの無水ピリジンに溶解させ、ＤＬ－グリセリン酸カルシウム水和
物（１２．８８ｇ、４５．０ｍｍｏｌ）を加え、４５℃で２２ｈ反応させ、反応液を濾過
し、ケーキを２００ｍｌのＤＣＭでリンスし、濾液を乾燥させるまで減圧濃縮し、残りを
５００ｍｌのジクロロメタンに改めて溶解させ、０．５Ｍトリエチルアミンリン酸塩（ｐ
Ｈ＝７～８）で１回あたり２００ｍｌで２回洗浄し、水相をジクロロメタンで１回あたり
２００ｍｌで２回抽出し、有機相をあわせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶
剤を減圧蒸発乾固し、２００～３００メッシュの順相シリカゲルカラムで精製し、石油エ
ーテル：酢酸エチル：ジクロロメタン：メタノール＝１：１：１：０．３５～１：１：１
：０．５５で勾配溶出し、生成物溶出液を回収し、溶剤を減圧蒸発乾固し、５００ｍｌの
ジクロロメタンに改めて溶解させ、２００ｍｌの０．５Ｍトリエチルアミンリン酸塩で１
回洗浄し、水相をジクロロメタンで１回あたり２００ｍｌで２回抽出し、有機相をあわせ
、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶剤を減圧蒸発乾固し、真空油ポンプで一晩
減圧し、２０．７ｇの白色固形製品Ａ－１を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，Ｄ
ＭＳＯ－ｄ６） δ ７．４６ （ｄｄｄ，Ｊ ＝ ６．５，２．３，１．１ Ｈｚ，１
Ｈ），７．４０ － ７．２８ （ｍ，７Ｈ），６．８９ － ６．８１ （ｍ，４Ｈ）
，４．８４ （ｄ，Ｊ ＝ ５．０ Ｈｚ，１Ｈ），４．３６ － ４．２４ （ｍ，１
Ｈ），４．２９ （ｓ，６Ｈ），３．９２ （ｄｄ，Ｊ ＝ １２．４，７．０ Ｈｚ，
１Ｈ），３．６７ （ｄｄ，Ｊ ＝ １２．３，７．０ Ｈｚ，１Ｈ），２．５２ （ｑ
，Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ，６Ｈ），１．０３ （ｔ，Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ，９Ｈ）．
ＭＳ ｍ／ｚ：Ｃ２４Ｈ２３Ｏ６，［Ｍ－Ｈ］－、理論値：４０７．１５、実測値：４０
６．９２。
（１－１－７ｂ）Ｌ－７の合成：
Figure 2023082151000062
 工程（１－１－６）で得られたＬ－８（２．２６２ｇ、１．５３２ｍｍｏｌ）と工程（
１－１－７ａ）で得られたＡ－１（２．３４２ｇ、４．５９６ｍｍｏｌ）とを混合し、１
６ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、３－ジエトキシホスホリル－１，２，３－ベンゾオ
キサゾール４（３Ｈ）－オン（ＤＥＰＢＴ）（１．３７５ｇ、４．５９６ｍｍｏｌ）を加
え、さらにジイソプロピルエチルアミン（１．１８８ｇ、９．１９１ｍｍｏｌ）を加え、
２５℃で２ｈ攪拌反応させ、１０ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウムで有機相を洗浄し、水相
をジクロロメタンで１回あたり１０ｍｌで３回抽出し、１０ｍｌの飽和食塩水で有機相を
洗浄し、水相をジクロロメタンで１回あたり１０ｍｌで２回抽出し、有機相をあわせ、無
水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した後に溶剤を減圧蒸発乾固し、真空油ポンプで一晩
発泡乾燥させ、４．９００ｇの粗製品を得た。カラム精製には、１２０ｇの２００～３０
０メッシュの順相シリカゲルを用い、２０ｍｌのトリエチルアミンでシリカゲルの酸性を
中和し、１重量％トリエチルアミンを含む石油エーテルでカラムを平衡化し、石油エーテ
ル：酢酸エチル：ジクロロメタン：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド＝１：１：１：０．５
～１：１：１：０．６で勾配溶出し、生成物溶出液を回収し、溶剤を減圧蒸発乾固して２
．３３６ｇの純粋なＬ－７を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ） δ７
．９０ － ７．７８ （ｍ，４Ｈ），７．７５ － ７．６４ （ｍ，１Ｈ），７．３
８ － ７．１８ （ｍ，９Ｈ），６．９１ － ６．８３ （ｍ，４Ｈ），５．２５
－ ５．１０ （ｍ，４Ｈ），４．９７ （ｄｄ，Ｊ ＝ １１．２，３．２ Ｈｚ，３
Ｈ），４．４８ － ４．３０ （ｍ，４Ｈ），４．０２ （ｓ，９Ｈ），３．９３ －
３．８４ （ｍ，３Ｈ），３．７６ － ３．６６ （ｍ，９Ｈ），３．４５ － ３
．３５ （ｍ，３Ｈ），３．２４ － ２．９８ （ｍ，１０Ｈ），２．３０ － ２．
２０ （ｍ，２Ｈ），２．１１ － １．８８ （ｍ，３１Ｈ），１．８０ － １．４
０ （ｍ，２８Ｈ）． ＭＳ ｍ／ｚ：Ｃ９０Ｈ１２８Ｎ７Ｏ３５，［Ｍ－ＤＭＴｒ］＋
、理論値：１５６４．６５、実測値：１５６４．８８。
（１－１－８）Ｌ－９の合成：
Figure 2023082151000063
 工程（１－１－７ｂ）で得られたＬ－７（２．３００ｇ、１．２６ｍｍｏｌ）、コハク
酸無水物（０．３７８ｇ、３．７８ｍｍｏｌ）及び４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡ
Ｐ、０．４６２ｇ、３．７８ｍｍｏｌ）を混合して１３ｍｌのジクロロメタンに溶解させ
、さらにジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ、０．８１４ｇ、６．３０ｍｍｏｌ）を
加え、２５℃で２４ｈ攪拌し、５ｍｌの０．５Ｍトリエチルアミンリン酸塩で反応液を洗
浄し、水相をジクロロメタンで１回あたり５ｍｌで３回抽出し、有機相をあわせ減圧蒸発
乾固して２．７７４ｇの粗製品を得た。カラム精製には、６０ｇの２００～３００メッシ
ュの順相シリカゲルを用い、１重量％トリエチルアミンでシリカゲルの酸性を中和し、ジ
クロロメタンでカラムを平衡化し、１重量‰トリエチルアミンを含むジクロロメタン：メ
タノール＝１００：１８～１００：２０で勾配溶出し、生成物溶出液を回収し、溶剤を減
圧蒸発乾固して１．８７４ｇの純粋なＬ－９複合分子を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００
ＭＨｚ，ＤＭＳＯ） δ ８．５８ （ｄ，Ｊ ＝ ４．２ Ｈｚ，１Ｈ），７．９４
－ ７．８２ （ｍ，３Ｈ），７．４１ － ７．２９ （ｍ，５Ｈ），７．２２ （ｄ
，Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ，５Ｈ），６．８９ （ｄ，Ｊ ＝ ８．３ Ｈｚ，４Ｈ），５
．４９ － ５．３７ （ｍ，１Ｈ），５．２１ （ｄ，Ｊ ＝ ３．０ Ｈｚ，３Ｈ）
，４．９７ （ｄ，Ｊ ＝ １１．１ Ｈｚ，３Ｈ），４．４９ （ｄ，Ｊ ＝ ８．２
Ｈｚ，３Ｈ），４．０２ （ｓ，９Ｈ），３．８８ （ｄｄ，Ｊ ＝ １９．４、９．
４ Ｈｚ，３Ｈ），３．７７ － ３．６５ （ｍ，９Ｈ），３．５０ － ３．３９
（ｍ，６Ｈ），３．１１ － ２．９０ （ｍ，５Ｈ），２．６１ － ２．５４ （ｍ
，４Ｈ），２．４７ － ２．４１ （ｍ，２Ｈ），２．２６ － ２．１７ （ｍ，２
Ｈ），２．１５ － １．９５ （ｍ，２２Ｈ），１．９２ － １．８４ （ｍ，９Ｈ
），１．８０ － １．７０ （ｍ，１０Ｈ），１．６５ － １．３５ （ｍ，１７Ｈ
）、１．３１ － １．１９ （ｍ，４Ｈ），０．９６ （ｔ，Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ，
９Ｈ）． ＭＳ ｍ／ｚ：Ｃ９４Ｈ１３２Ｎ７Ｏ３８，［Ｍ－ＤＭＴｒ］＋、理論値：１
６６４．７２、実測値：１６６５．０３。
（１－１－９）Ｌ－１０化合物の合成：
Figure 2023082151000064
 この工程において、Ｌ－９複合分子を固相担体に結合することにより、Ｌ－１０化合物
を調製した。
工程（１－１－８）で得られたＬ－９複合分子（０．２３３ｇ、０．１１２６ｍｍｏｌ
）、Ｏ－ベンゾトリアゾール－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（Ｈ
ＢＴＵ、０．０６４ｇ、０．１６８９ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（ＤＩ
ＥＡ、０．０２９ｇ、０．２２５２ｍｍｏｌ）を混合し、１９ｍｌのアセトニトリルに溶
解させ、室温で５分間攪拌し、反応液にアミノメチル樹脂（０．９０１ｇ、１００～２０
０メッシュ、アミノ基担持量４００μｍｏｌ／ｇ、南開和成社から購入）を加え、２５℃
でシェーカーで反応を行い、回転数２２０回転／分間、１５ｈ反応させた後に濾過し、ケ
ーキをＤＣＭで１回あたり３０ｍｌで２回リンスし、アセトニトリルで１回あたり３０ｍ
ｌで３回リンスし、３０ｍｌのエチルエーテルで１回リンスし、真空油ポンプで２ｈ乾燥
させ、その後、表２に示す配合割合に従い原料（ＣａｐＡ、ＣａｐＢ、４－ジメチルアミ
ノピリジン（ＤＭＡＰ）及びアセトニトリル）を加えてキャッピング反応を行った。２５
℃でシェーカーに放置し、回転数２００回転／分間で５ｈ反応させ、反応液を濾過し、ケ
ーキをアセトニトリルで１回あたり３０ｍｌで３回リンスし、乾燥させるまで吸引濾過し
、真空油ポンプで一晩減圧乾燥させ、１．１００ｇ、担持量９０．８μｍｏｌ／ｇのＬ－
１０化合物（即ち、固相担体に結合されたＬ－９複合分子）を得た。
Figure 2023082151000065
 ここで、ＣａｐＡとＣａｐＢは、キャッピング試薬溶液であり、ＣａｐＡは、２０体積
％のＮ－メチルイミダゾールのピリジン／アセトニトリル混合溶液であり、ピリジンとア
セトニトリルとの体積比が３：５であり、ＣａｐＢは、２０体積％酢酸無水物のアセトニ
トリル溶液であった。
（１－２）複合体１～４のセンス鎖の合成
複合体１～４のセンス鎖配列が同じであるので、その調製方法も同じであった。
固相ホスホルアミダイト法により、上記工程で調製されたＬ－１０化合物を出発として循環させ、センス鎖のヌクレオチドの並び順に従い３’－５’方向に一つずつヌクレオシドモノマーを結合した。ヌクレオシドモノマーを結合するごとに、脱保護、カップリング、キャッピング、酸化又は硫化の４つの反応を行った。２個のヌクレオチド間がリン酸エステルにより結合される場合、次のヌクレオシドモノマーを結合するとき、脱保護、カップリング、キャッピング、酸化の４つの反応を行った。２個のヌクレオチド間がチオリン酸エステルにより結合される場合、次のヌクレオシドモノマーを結合するとき、脱保護、カップリング、キャッピング、硫化の４つの反応を行った。合成条件は、以下のように規定された。
ヌクレオシドモノマーを０．１Ｍ濃度のアセトニトリル溶液で提供し、各脱保護反応の
条件が同じであり、即ち、温度が２５℃であり、反応時間が７０秒であり、脱保護試薬は
、ジクロロ酢酸のジクロロメタン溶液（３％ｖ／ｖ）であり、ジクロロ酢酸と固相担体に
おける４，４’－ジメトキシトリチル保護基とのモル比が５：１であった。
各カップリング反応条件は、いずれも同じであり、温度が２５℃であり、固相担体に結
合される核酸配列とヌクレオシドモノマーとのモル比が１：１０であり、固相担体に結合
される核酸配列とカップリング試薬とのモル比が１：６５であり、反応時間が６００秒で
あり、カップリング試薬は、５－エチルチオ－１Ｈ－テトラゾールの０．５Ｍアセトニト
リル溶液であった。
各キャッピング条件は、いずれも同じであり、温度が２５℃であり、反応時間が１５秒
であった。キャッピング試薬溶液は、モル比が１：１であるＣａｐＡとＣａｐＢの混合溶
液であり、キャッピング試薬と固相担体に結合される核酸配列とのモル比が、酢酸無水物
：Ｎ－メチルイミダゾール：固相担体に結合される核酸配列＝１：１：１であった。
各酸化反応条件は同じであり、温度が２５℃であり、反応時間が１５秒であり、酸化試
薬が濃度０．０５Ｍのヨウ素水であった。ヨウ素と、カップリング工程において固相担体
に結合される核酸配列とのモル比が３０：１であった。反応をテトラヒドロフラン：水：
ピリジン＝３：１：１の混合溶剤で行った。
各硫化反応の条件は同じであり、温度が２５℃であり、反応時間が３００秒であり、硫
化試薬がキサンタンヒドリドであった。硫化試薬と、カップリング工程において固相担体
に結合される核酸配列とのモル比が１２０：１であった。反応をアセトニトリル：ピリジ
ン＝１：１の混合溶剤で行った。
切断と脱保護条件は以下のとおりである。合成された担体が結合されたヌクレオチド配
列を、濃度２５重量％のアンモニア水に加え、アンモニア水の用量が０．５ｍｌ／μｍｏ
ｌであり、５５℃で１６ｈ反応させ、液体を除去し、乾燥させるまで真空濃縮した。
精製と脱塩：分取用イオンクロマトグラフィー精製カラム（Ｓｏｕｒｃｅ １５Ｑ）に
より、ＮａＣｌによる勾配溶出で、核酸の精製を完成した。具体的には、溶出剤Ａ：２０
ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ ８．１）、溶剤が水／アセトニトリル＝９：１（体積比）
であり、溶出剤Ｂ：１．５Ｍ塩化ナトリウム、２０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ ８．１
）、溶剤が水／アセトニトリル＝９：１（体積比）であり、溶出勾配：溶出剤Ａ：溶出剤
Ｂ＝１００：０～５０：５０で勾配溶出した。製品溶出液を回収してからあわせ、逆相ク
ロマトグラフィー精製カラムにより脱塩し、具体的な条件としては、デキストランゲルカ
ラムにより脱塩し、充填剤がデキストランゲルＧ２５であり、脱イオン水で溶出した。
検出：イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＸ－ＨＰＬＣ）を用いて純度を検出し、液
体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）により分子量を分析した。理論値７５８４
．５、実測値７５８４．０であった。実測値が理論値に一致しており、３’末端にＬ－９
複合分子が複合されたセンス鎖Ｓが合成されたことを示した。
（１－３）アンチセンス鎖の合成
（１－３Ａ）複合体１のアンチセンス鎖の調製
固相ホスホルアミダイト法により、汎用の固相担体（ＵｎｙＬｉｎｋｅｒＴＭ ｌｏａ
ｄｅｄ ＮｉｔｔｏＰｈａｓｅ（登録商標）ＨＬ Ｓｏｌｉｄ Ｓｕｐｐｏｒｔｓ、Ｋｉ
ｎｏｖａｔｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社）を出発として循環させ、複合体１のアン
チセンス鎖ＡＳを合成した。固相合成方法における脱保護、カップリング、キャッピング
、酸化又は硫化の反応条件、切断と脱保護、精製と脱塩条件は、センス鎖の合成と同じで
あった。
検出：純度をイオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＸ－ＨＰＬＣ）により検出し、分子
量を液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）により分析した。理論値７００７．
４６、実測値７００６．２であった。実測値が理論値に一致しており、目的配列を有する
アンチセンス鎖ＡＳが合成されたことを示した。
ここで、ビニルリン酸エステルで修飾された２’－メトキシ修飾ウラシルヌクレオシド
モノマー（ＶＰ－Ｕｍ）（２’－ｍｅｔｈｏｘｙ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｕｒａｃｉｌ ｎ
ｕｃｌｅｏｓｉｄｅ ｍｏｎｏｍｅｒ （ＶＰ－Ｕｍ））は、以下の方法に従い合成され
た。
Figure 2023082151000066
（１－３－１）ＶＰ－Ｕ－２の合成
以下の方法に従い、ＶＰ－Ｕ－２分子を合成した。
Figure 2023082151000067
２’－メトキシ修飾ウラシルヌクレオシド（２’－ｍｅｔｈｏｘｙ ｍｏｄｉｆｉｅｄ
ｕｒａｃｉｌ ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ）（２’－ＯＭｅ－Ｕ、５１．３０ｇ、９１．６
ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ－ブチルジフェニルクロロシラン（ＴＢＤＰＳＣｌ、５０．３５ｇ
、１８３．２ｍｍｏｌ）、イミダゾール（１２．４７ｇ、１８３．２ｍｍｏｌ）を混合し
て４５０ｍｌのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解させ、室温で２０ｈ攪拌
反応させた。ＤＭＦを留去し、６００ｍｌのジクロロメタンで溶解した後３００ｍｌの飽
和炭酸水素ナトリウムを加えて洗浄し、水相をジクロロメタン（ＤＣＭ）で１回あたり３
００ｍｌで３回抽出し、有機相をあわせ、５％シュウ酸で水相をｐＨ＜５になるまで洗浄
し、乾燥させるまで溶剤を蒸発した後ＶＰ－Ｕ－１粗製品を得、そのまま後のＶＰ－Ｕ－
２の合成に用いた。
ＶＰ－Ｕ－１粗製品を１００ｍｌのジクロロメタンで溶解した後、氷浴を施して１０分
間攪拌し、さらに、予め４℃の冷蔵庫で冷蔵された４５０ｍｌの２％ｐ－トルエンスルホ
ン酸溶液（溶剤が、体積比３：７のメタノール－ジクロロメタン混合溶剤である）を加え
、１０分間反応させた。さらに２００ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウムを加えて反応をクエ
ンチングし、有機相に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えてｐＨ＝８になるまで洗浄し
た。水相をあわせ、ジクロロメタンで１回あたり２００ｍｌで２回抽出し、有機相をあわ
せ、さらに２００ｍｌの飽和食塩水で１回洗浄し、乾燥させるまで溶剤を蒸発した。２０
０～３００メッシュの順相シリカゲルカラムで精製し、石油エーテルをカラムに入れ、石
油エーテル：酢酸エチル：ジクロロメタン：メタノール＝１：１：１：０．０５～１：１
：１：０．２５で勾配溶出し、生成物溶出液を回収し、溶剤を減圧蒸発乾固し、真空油ポ
ンプで発泡乾燥させて計４０．００ｇの純粋なＶＰ－Ｕ－２を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４
００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．９６ （ｄ，Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ，１Ｈ）
，７．６４ （ｄｔｄ，Ｊ ＝ ５．１，４．０，２．２ Ｈｚ，４Ｈ），７．４１－７
．３０ （ｍ，６Ｈ），６．７９ （ｄ，Ｊ ＝ ４．７ Ｈｚ，１Ｈ），５．７３ （
ｄ，Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ，１Ｈ），４．９４ （ｔ，Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ，１Ｈ），
４．１２ （ｔｄ，Ｊ ＝ ４．６，３．９ Ｈｚ，１Ｈ），４．０５ （ｄｄ，Ｊ ＝
４．８、４．０ Ｈｚ，１Ｈ），３．９６ （ｔ，Ｊ ＝ ４．７ Ｈｚ，１Ｈ），３
．６８ （ｄｄｄ，Ｊ ＝ １１．８，７．０，４．６ Ｈｚ，１Ｈ），３．５７ －
３．４６ （ｍ，１Ｈ），３．３９ （ｓ，３Ｈ），１．０５ （ｓ，８Ｈ）． ＭＳ
ｍ／ｚ：Ｃ２６Ｈ３３Ｎ２Ｏ６Ｓｉ，［Ｍ＋Ｈ］＋、理論値：４９７．２１、実測値：４
９７．４５。
（１－３－２）ＶＰ－Ｕ－４の合成：
Figure 2023082151000068
 ＶＰ－Ｕ－２（１９．８４ｇ、４０．０ｍｍｏｌ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド
（ＤＣＣ、１６．４８ｇ、８０．０ｍｍｏｌ）、ピリジン（４．２０ｇ、５３．２ｍｍｏ
ｌ）、トリフルオロ酢酸（６．６１ｇ、５３．２ｍｍｏｌ）を混合して２００ｍｌのジメ
チルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解させ、室温で２０ｈ攪拌反応させた。別に、メチレ
ンジホスホン酸テトラエチル（２１．４４ｇ、７４．４ｍｍｏｌ）を１２０ｍｌのＴＨＦ
に溶解させ、氷浴で降温させ、氷浴温度でｔ－ＢｕＯＫ（１１．３６ｇ、１０１．２ｍｍ
ｏｌ）を加え、氷浴温度で１０ｍｉｎ反応させた後、室温まで昇温して０．５ｈ反応させ
、その後、約１ｈかけて前述した反応液に加え、氷浴温度で１ｈ反応させた後、室温まで
昇温して１８ｈ反応させた。水を加えて反応をクエンチングし、水相をジクロロメタンで
１回あたり２００ｍｌで３回抽出した。有機相をあわせ、２００ｍｌの飽和食塩水で１回
洗浄した後に乾燥させるまで溶剤を蒸発した。２００～３００メッシュの順相シリカゲル
カラムで精製し、石油エーテルをカラムに入れ、石油エーテル：酢酸エチル＝１：１～１
：４で勾配溶出し、生成物溶出液を回収し、溶剤を減圧蒸発乾固し、真空油ポンプで発泡
乾燥させて計１４．００ｇの純粋なＶＰ－Ｕ－４を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨ
ｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．９６ （ｄ，Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ，１Ｈ），７．６４
（ｄｔｄ，Ｊ ＝ ５．１，４．０，２．２ Ｈｚ，４Ｈ），７．４１ － ７．３０
（ｍ，６Ｈ），６．８２ － ６．７１ （ｍ，２Ｈ），５．９０ （ｄｄｄ，Ｊ ＝
２５．９、１５．０，１．０ Ｈｚ，１Ｈ），５．７３ （ｄ，Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ
，１Ｈ），４．３６ － ４．２１ （ｍ，３Ｈ），４．１８ （ｔ，Ｊ ＝ ４．９
Ｈｚ，１Ｈ），４．０５ （ｄｄｑ，Ｊ ＝ ９．７，８．５，６．９ Ｈｚ，２Ｈ），
３．８７ （ｔ，Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ，１Ｈ），３．３９ （ｓ，３Ｈ），１．３２
（ｔｄ，Ｊ ＝ ６．９，０．７ Ｈｚ，６Ｈ），１．０５ （ｓ，８Ｈ）． ＭＳ ｍ
／ｚ：Ｃ３１Ｈ４２Ｎ２Ｏ８ＰＳｉ，［Ｍ＋Ｈ］＋、理論値：６２９．２４、実測値：６
２９．５１。
（１－３－３）ＶＰ－Ｕ－５の合成：
Figure 2023082151000069
 ＶＰ－Ｕ－４（１４．００ｇ、２２．２９ｍｍｏｌ）を１００ｍｌのテトラヒドロフラ
ンに溶解させ、トリエチルアミン三フッ化水素酸（１７．９６ｇ、１１１．４５ｍｍｏｌ
）を加え、室温で２０ｈ攪拌して完全に反応させた。そのまま乾燥させるまで溶剤を蒸発
し、５０ｍｌのジクロロメタンで溶解した後で蒸発乾固する操作を２回繰り返し、粗製品
を得た。２００～３００メッシュの順相シリカゲルカラムで精製し、石油エーテルをカラ
ムに入れ、石油エーテル：酢酸エチル：ジクロロメタン：メタノール＝１：１：１：０．
０５～１：１：１：０．２５で勾配溶出し、生成物溶出液を回収し、溶剤を減圧蒸発乾固
し、真空油ポンプで発泡乾燥させて計６．７０ｇの純粋なＶＰ－Ｕ－５を得た。１Ｈ Ｎ
ＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．９６ （ｄ，Ｊ ＝ ７．８ Ｈ
ｚ，１Ｈ），６．７７ （ｄｄ，Ｊ ＝ １５．０，６．２ Ｈｚ，１Ｈ），５．９９
－ ５．８２ （ｍ，２Ｈ），５．７３ （ｄ，Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ，１Ｈ），５．２
７ （ｄ，Ｊ ＝ ５．１ Ｈｚ，１Ｈ），５．１０ （ｄｄ，Ｊ ＝ ５．３，４．７
Ｈｚ，１Ｈ），４．２９ （ｄｄｑ，Ｊ ＝ ９．８，８．６，７．０ Ｈｚ，２Ｈ）
，４．１７ （ｄｄｄ，Ｊ ＝ ６．２，５．２，１．０ Ｈｚ，１Ｈ），４．１２ －
３．９８ （ｍ，３Ｈ），３．３９ （ｓ，２Ｈ），１．３２ （ｔｄ，Ｊ ＝ ６．
９，０．６ Ｈｚ，６Ｈ）． ＭＳ ｍ／ｚ：Ｃ１５Ｈ２４Ｎ２Ｏ８Ｐ，［Ｍ＋Ｈ］＋、
理論値：３９１．１３、実測値：３９１．３８。
（１－３－４）ＶＰ－Ｕ－６の合成：
Figure 2023082151000070
 アルゴン保護条件で１０ｍｌの無水ジクロロメタンにＶＰ－Ｕ－５（３９１ｍｇ、１．
０ｍｍｏｌ）、ピリジントリフルオロアセテート（０．２３２ｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｎ
－メチルイミダゾール（０．０９９ｇ、１．２ｍｍｏｌ）、ビス（ジイソプロピルアミノ
）（２－シアノエトキシ）ホスフィン（０．４５２ｇ、１．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で
５時間攪拌反応させた。乾燥させるまで溶剤を留去し、カラムクロマトグラフィーにより
精製し（２００～３００メッシュの順相シリカゲルを、ジクロロメタン：アセトニトリル
（０．５重量％トリエチルアミンを含む）＝３：１～１：３で勾配溶出した）、生成物溶
出液を回収し、溶剤を濃縮除去し、計５０８ｍｇの目的生成物ＶＰ－Ｕ－６を得た。３１
Ｐ ＮＭＲ （１６１ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １５０．３４，１５０．２９，
１７．０７，１５．５０． ＭＳ ｍ／ｚ：Ｃ２４Ｈ４１Ｎ４Ｏ９Ｐ２，［Ｍ＋Ｈ］＋、
理論値：５９１．２３、実測値：５９１．５５。ＶＰ－Ｕ－６が目的生成物ＶＰ－Ｕｍで
あり、ヌクレオシドモノマーとしてＲＮＡ鎖の合成に関与することを示した。
（１－３Ｂ）複合体２のアンチセンス鎖の調製
複合体２のアンチセンス鎖と複合体１のアンチセンス鎖の区別は、５’－末端の１番目
のヌクレオチド修飾が異なることのみにあった。固相ホスホルアミダイト法によりアンチ
センス鎖を調製する場合、最後に結合されたヌクレオシドモノマーが２’－メトキシ修飾
ウラシルヌクレオシドモノマー（Ｕｍ）であり、脱保護、カップリング、キャッピング、
酸化の４つの反応を行ってＣＰＲ－Ｉモノマー（蘇州吉瑪、番号Ｃａｔ＃１３－２６０１
－ＸＸ）をアンチセンス鎖の５’末端に結合し、５’－リン酸エステル修飾を形成した。
Figure 2023082151000071
合成において用いられた汎用の固相担体、脱保護、カップリング、キャッピング、酸化
又は硫化反応の条件、切断と脱保護、精製と脱塩条件は、センス鎖の合成と同じであった
。
イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＸ－ＨＰＬＣ）により純度を検出し、液体クロマ
トグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）により分子量を分析したところ、理論値７０１１．
４７、実測値７０１１．３であった。実測値が理論値に一致しており、目的配列を有する
アンチセンス鎖ＡＳが合成されたことを示した。
（１－３Ｃ）複合体３のアンチセンス鎖の調製
ＣＰＲ－Ｉモノマーを結合した場合、上記酸化反応条件の代わりに硫化反応条件を用い
たこと以外、複合体２のアンチセンス鎖と同じ合成プロセスを採用した。５’－チオリン
酸エステル修飾を有する複合体３のアンチセンス鎖を製造できると予期した。
（１－３Ｄ）複合体４のアンチセンス鎖の調製
複合体４のアンチセンス鎖と複合体１のアンチセンス鎖の区別は、５’－末端の１番目
のヌクレオチド修飾が異なることのみにあった。固相ホスホルアミダイト法によりアンチ
センス鎖を調製する場合、最後に結合されたヌクレオシドモノマーが２’－メトキシ修飾
ウラシルヌクレオシドモノマー（Ｕｍ）であった。
イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＸ－ＨＰＬＣ）により純度を検出し、液体クロマ
トグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）により分子量を分析したところ、理論値６９３１．
４７、実測値６９３０．９であった。実測値が理論値に一致しており、目的配列を有する
アンチセンス鎖ＡＳが合成されたことを示した。
（１－４）複合体１～４の合成
複合体１に対して、Ｓ鎖とＡＳ鎖をそれぞれ注射用水に溶解させ、４０ｍｇ／ｍＬの溶
液を得、等モル比で混合し、５０℃で１５ｍｉｎ加熱し、室温で冷却した後、これらを水
素結合により二本鎖構造を形成させた。超純水（Ｍｉｌｌｉ－Ｑ超純水装置で自作、抵抗
率１８．２ＭΩ＊ｃｍ（２５℃））を用いて複合体を濃度が０．２ｍｇ／ｍＬになるまで
希釈した後、液体クロマトグラフィー質量分析計（ＬＣ－ＭＳ、Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏ
ｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ、Ｗａｔｅｒｓ社から購入
、型番：ＬＣＴ Ｐｒｅｍｉｅｒ）により分子量を検出した。実測値が理論値と一致して
おり、合成された複合体１が、Ｌ－９複合分子を含む目的設計の二本鎖核酸配列であるこ
とが示された。
複合体２～４に対して、同じ方法により調製し分子量を検出したところ、実測値が理論
値と一致しており、合成された複合体が、Ｌ－９複合分子を含む目的設計の二本鎖核酸配
列であることが示された。複合体１～４の構造は、式（４０３）に示される。
（調製例２）複合体５～２１及び比較複合体１の調製
１）前記ｓｉＲＮＡが、それぞれ表３に示される比較複合体１及び複合体５～２１に対
応する配列であり、２）目的配列に未修飾ヌクレオチドが含まれる場合、切断と脱保護条
件で、アンモニア水により処理した後、一本鎖核酸の量に対して、０．４ｍｌ／μｍｏｌ
のＮ－メチルピロリドンにより製品を溶解させた後、０．３ｍｌ／μｍｏｌのトリエチル
アミン及び０．６ｍｌ／μｍｏｌのトリエチルアミン三フッ化水素酸塩を加え、リボース
における２’－ＴＢＤＭＳ保護を除去したこと以外、調製例１と同じ方法により、複合体
５、６、７及び比較複合体１を合成した。複合体８～２１を製造できると予期した。
Figure 2023082151000072
Figure 2023082151000073
Figure 2023082151000074
（調製例３）Ｐ１０－ｓｉＡＮ１Ｍ３ＳＶＰ複合体（複合体２２）の調製
（３－１）Ｐ－１０化合物の合成
以下の方法に従い、Ｐ－１０化合物を合成した。
Figure 2023082151000075
（３－１－１）ＧＡＬ５－Ｃ４－１の合成
４０ｍｌのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに上記（１－１－１）に記載された方法によ
り得られたＧＡＬ－５（１３．４３ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）、４－アミノ酸ｔｅｒｔ－ブ
チルエステル塩酸塩（５．８７ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）、Ｏ－ベンゾトリアゾール－テト
ラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（１３．６５ｇ、３６．０ｍｍｏｌ）及
びジイソプロピルエチルアミン（１１．６３ｇ、９０．０ｍｍｏｌ）を加え、均一に溶解
させた後に室温で５時間攪拌反応させた。反応液に３００ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウム
水溶液を加え、酢酸エチルで１回あたり２００ｍｌで３回抽出し、有機相をあわせ、２０
０ｍｌの飽和食塩水で１回洗浄し、有機相を分離し、さらに無水硫酸ナトリウムで乾燥さ
せ、乾燥させるまで溶剤を減圧留去して３０．３ｇの油状物粗製品ＧＡＬ５－Ｃ４－１を
得、そのまま次の反応を行った。
（３－１－２）ＧＡＬ５－Ｃ４－２の合成
工程（３－１－１）で得られたＧＡＬ５－Ｃ４－１粗製品（３０．３ｇ、３０ｍｍｏｌ
）を１８０ｍｌギ酸に溶解させ、室温で１６時間攪拌反応させた。乾燥させるまで溶剤を
蒸発し、カラムクロマトグラフィーにより精製し（２００～３００メッシュの順相シリカ
ゲルを、ジクロロメタン：メタノール＝１００：１８～１００：２０で勾配溶出した）、
反応溶出液を回収し、溶剤を濃縮除去し、計１４．８４ｇの目的生成物ＧＡＬ５－Ｃ４－
２を得た。
（３－１－３）Ｐ－６の合成：
工程（１－１－４）に記載された方法により得られたＭ－１８－Ｔｒ（２．０２ｇ、４
．６９ｍｍｏｌ）と工程（３－１－２）で得られたＧＡＬ５－Ｃ４－２（８．２４ｇ、１
５．４８ｍｍｏｌ、２バッチの生成物をあわせたもの）を混合して４７ｍｌのアセトニト
リルに溶解させ、さらにＮ－メチルモルホリン（３．１３ｇ、３０．９６ｍｍｏｌ）を加
え、最後に４－（４，６－ジメトキシトリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリン塩
酸塩（ＤＭＴＭＭ、４．２８ｇ、１５．４８ｍｍｏｌ）を加え、室温で２ｈ攪拌反応させ
た。２０ｍｌのジクロロメタンで反応液を希釈し、１０ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウム溶
液で有機相を洗浄し、１０ｍｌの飽和食塩水で有機相を洗浄し、有機相をあわせ、無水硫
酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した後で溶剤を減圧蒸発乾固して粗製品を得、２００～３
００メッシュの順相シリカゲルカラムで精製し、石油エーテルをカラムに入れ、１重量％
トリエチルアミンでシリカゲルの酸性を中和し、ジクロロメタン：メタノール＝１００：
５～１００：７で勾配溶出し、生成物溶出液を回収し、減圧蒸発乾固して計８．２７ｇの
純粋なＰ－６を得た。
（３－１－４）Ｐ－７の合成：
上記（３－１－３）で得られたＰ－６（６．８２ｇ、３．４５６ｍｍｏｌ）を６９ｍｌ
のジクロロメタンに溶解させ、ジクロロ酢酸（１３．３６７ｇ、１０３．６７ｍｍｏｌ）
を加え、室温で２ｈ反応させた。１００ｍｌのジクロロメタンを加えて反応液を希釈し、
さらに飽和炭酸水素ナトリウム溶液を加えて洗浄しｐＨ＝７～８になるように調節し、水
相をジクロロメタンで１回あたり３０ｍｌで６回抽出し、有機相をあわせ、無水硫酸ナト
リウムで乾燥させ、濾過した後で溶剤を減圧蒸発乾固して粗製品を得た。２００～３００
メッシュの順相シリカゲルで精製し、１０重量％トリエチルアミンでシリカゲルの酸性を
中和し、１重量‰トリエチルアミンでカラムを平衡化し、ジクロロメタン：メタノール＝
１００：３０～１００：４０で勾配溶出し、生成物溶出液を回収し、溶剤を減圧蒸発乾固
して計４．８２ｇのＰ－７を得た。ＭＳ ｍ／ｚ：Ｃ７８Ｈ１２７Ｎ１０Ｏ３３，［Ｍ＋
Ｈ］＋、理論値：１７３２．９１、実測値：１７３５．７３。
（３－１－５）Ｐ－８の合成：
Figure 2023082151000076
 Ｐ－７（２．６５３ｇ、１．５３２ｍｍｏｌ）とＡ－１（２．３４２ｇ、４．５９６ｍ
ｍｏｌ）を混合して１６ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、３－ジエトキシホスホリル－
１，２，３－ベンゾオキサゾール４（３Ｈ）－オン（ＤＥＰＢＴ）（１．３７５ｇ、４．
５９６ｍｍｏｌ）を加え、さらにジイソプロピルエチルアミン（１．１８８ｇ、９．１９
１ｍｍｏｌ）を加え、２５℃で２ｈ攪拌反応させた。１０ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウム
で有機相を洗浄し、水相をジクロロメタンで１回あたり１０ｍｌで３回抽出し、１０ｍｌ
の飽和食塩水で有機相を洗浄し、水相をジクロロメタンで１回あたり１０ｍｌで２回抽出
し、有機相をあわせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した後に溶剤を減圧蒸発乾固
し、真空油ポンプで一晩発泡乾燥させて粗製品を得た。カラム精製には、１２０ｇの２０
０～３００メッシュの順相シリカゲルを用い、２０ｍｌのトリエチルアミンでシリカゲル
の酸性を中和し、１重量％トリエチルアミンを含む石油エーテルでカラムを平衡化し、石
油エーテル：酢酸エチル：ジクロロメタン：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド＝１：１：１
：０．５～１：１：１：０．６で勾配溶出し、生成物溶出液を回収し、溶剤を減圧蒸発乾
固して計２．７９３ｇの純粋なＰ－８を得た。
（３－１－６）Ｐ－９の合成：
Ｐ－８（４９０ｍｇ、０．２３１ｍｍｏｌ）、コハク酸無水物（６９ｍｇ、０．６９３
ｍｍｏｌ）及び４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、６８ｍｇ、０．５５４ｍｍｏｌ
）を混合して２．３ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、さらにジイソプロピルエチルアミ
ン（ＤＩＥＡ、１４９ｍｇ、１．１５５ｍｍｏｌ）を加え、２５℃で２１ｈ攪拌反応させ
た。５０ｍｌのジクロロメタンで反応液を希釈し、さらに１００ｍｌの０．５Ｍトリエチ
ルアミンリン酸塩を加えて反応液を洗浄し、水相をジクロロメタンで１回あたり１０ｍｌ
で３回抽出し、有機相をあわせ、減圧蒸発乾固して粗製品を得た。カラム精製には、８０
ｇの２００～３００メッシュの順相シリカゲルを用い、１重量％トリエチルアミンでシリ
カゲルの酸性を中和し、ジクロロメタンでカラムを平衡化し、１重量‰トリエチルアミン
を含むジクロロメタン：メタノール＝１００：１８～１００：２０で勾配溶出し、生成物
溶出液を回収し、溶剤を減圧蒸発乾固して計２００ｍｇの純粋なＰ－９複合分子を得た。
ＭＳ ｍ／ｚ：Ｃ１０６Ｈ１５３Ｎ１０Ｏ４１，［Ｍ－ＤＭＴｒ］＋、理論値：１９２１
．０５、実測値：１９２０．９７。
（３－１－７）Ｐ－１０の合成：
Ｌ－９複合分子の代わりにＰ－９複合分子を用い、固相担体に結合されたＰ－９複合分
子を得たこと以外、調製例１における工程（１－１－９）と同じ方法により、Ｐ－１０を
調製した。
（３－２）Ｐ１０－ｓｉＡＮ１Ｍ３ＳＶＰ複合体の合成
出発としてＬ－１０化合物の代わりにＰ－１０化合物を用いてセンス鎖を合成したこと
以外、調製例１における工程（１－２）、（１－３Ａ）、（１－４）と同じ方法により、
複合体２２を調製した。構造が式（４０４）に示されるＰ１０－ｓｉＡＮ１Ｍ３ＳＶＰ複
合体を得た。
（調製例４）Ｒ５－ｓｉＡＮ１Ｍ３ＳＶＰ複合体（複合体２３）の調製
（４－１）Ｒ－５化合物の合成
以下の方法に従い、Ｒ－５化合物を合成した。
Figure 2023082151000077
（４－１－１）ＧＡＬ－Ｃ７－１の合成
工程（１－１－１ｂ）に記載された方法により得られたＧＡＬ－３（２６．４ｇ、８０
．２ｍｍｏｌ）を１３４ｍｌの無水１，２－ジクロロエタンに溶解させ、６０ｇの４Å分
子篩粉を加え、さらに７－オクテン－１－オール（１１．３ｇ、８８．２ｍｍｏｌ）を加
え、室温で１０分間攪拌反応させ、氷浴下で窒素保護下でトリフルオロメタンスルホン酸
トリメチルシリル（８．９ｇ、４０．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で２４時間攪拌反応させ
た。４Å分子篩粉を濾過除去し、濾液に５００ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加
えて洗浄し、有機相を分離し、水相を１００ｍｌのジクロロメタンで１回抽出し、有機相
をあわせ、２５０ｍｌの飽和食塩水で１回洗浄し、有機相を分離し、無水硫酸ナトリウム
で乾燥させ、乾燥させるまで溶剤を減圧留去して３３．３ｇの黄色水飴状製品ＧＡＬ－Ｃ
７－１を得、精製することなく、そのまま次の酸化反応を行った。
（４－１－２）ＧＡＬ－Ｃ７－２の合成
工程（４－１－１）で得られたＧＡＬ－Ｃ７－１（３３．３ｇ、７２．８ｍｍｏｌ）を
１６０ｍｌのジクロロメタンと１６０ｍｌのアセトニトリルの混合溶剤に溶解させ、それ
ぞれ２１６ｍｌの水及び固形過ヨウ素酸ナトリウム（６２．３ｇ、２９１．２ｍｍｏｌ）
を加え、氷水浴下で１０分間攪拌し、触媒である塩化ルテニウム（ＩＩＩ）（４９８ｍｇ
、２．４ｍｍｏｌ）を加えて自然に室温まで昇温し２３時間攪拌反応させた。反応液に２
００ｍｌの水を加えて希釈攪拌し、飽和炭酸水素ナトリウムを加えてｐＨを７．５に調節
し、有機相を分離し、水相をジクロロメタンで３回抽出し、有機相を捨て、水相を固形ク
エン酸でｐＨを約３に調節し、ジクロロメタンで１回あたり２００ｍｌで３回抽出し、有
機相をあわせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶剤を減圧留去した後でカラムクロマト
グラフィー（２００～３００メッシュの順相シリカゲルを、ジクロロメタン：メタノール
＝１００：１８～１００：２０で勾配溶出した）により精製して２２．４ｇの白色泡状固
形製品ＧＡＬ－Ｃ７－２を得た。ＭＳ ｍ／ｚ：Ｃ２１Ｈ３２ＮＯ１１，［Ｍ＋Ｈ］＋、
理論値：４７６．５０、実測値：４７５．９４。
（４－１－３）Ｒ－１の合成：
工程（１－１－４）に記載された方法により得られたＭ－１８－Ｔｒ（２．０２ｇ、４
．６９ｍｍｏｌ）とＧＡＬ－Ｃ７－２（７．３６ｇ、１５．４８ｍｍｏｌ）を混合して４
７ｍｌのアセトニトリルに溶解させ、さらにＮ－メチルモルホリン（３．１３ｇ、３０．
９６ｍｍｏｌ）を加え、最後に４－（４，６－ジメトキシトリアジン－２－イル）－４－
メチルモルホリン塩酸塩（ＤＭＴＭＭ、４．２８ｇ、１５．４８ｍｍｏｌ）を加え、室温
で２ｈ攪拌反応させた。２００ｍｌのジクロロメタンで反応液を希釈し、１００ｍｌの飽
和炭酸水素ナトリウム溶液で有機相を洗浄し、１００ｍｌの飽和食塩水で有機相を洗浄し
、有機相をあわせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した後で溶剤を減圧蒸発乾固し
て粗製品を得、２００～３００メッシュの順相シリカゲルカラムで精製し、石油エーテル
をカラムに入れ、１重量％トリエチルアミンでシリカゲルの酸性を中和し、ジクロロメタ
ン：メタノール＝１００：５～１００：７で勾配溶出し、生成物溶出液を回収し、減圧蒸
発乾固して７．８２ｇの純粋なＲ－１を得た。
（４－１－４）Ｒ－２の合成：
Ｒ－１（６．２３ｇ、３．４５６ｍｍｏｌ）を６９ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、
ジクロロ酢酸（１３．３６７ｇ、１０３．６７ｍｍｏｌ）を加え、室温で２ｈ反応させた
。１００ｍｌのジクロロメタンを加えて反応液を希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液を
加えて洗浄しｐＨ＝７～８になるように調節し、水相をジクロロメタンで１回あたり３０
ｍｌで６回抽出し、有機相をあわせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した後で溶剤
を減圧蒸発乾固して粗製品を得た。２００～３００メッシュの順相シリカゲルを用いて、
１０重量％トリエチルアミンでシリカゲルの酸性を中和し、１重量‰トリエチルアミンで
カラムを平衡化し、ジクロロメタン：メタノール＝１００：３０～１００：４０で勾配溶
出し、溶剤を減圧蒸発乾固して４．４９ｇの純粋なＲ－２を得た。
（４－１－５）Ｒ－３の合成：
Ｒ－２（２．３９１ｇ、１．５３２ｍｍｏｌ）とＡ－１（２．３４２ｇ、４．５９６ｍ
ｍｏｌ）を混合して１６ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、３－ジエトキシホスホリル－
１，２，３－ベンゾオキサゾール４（３Ｈ）－オン（ＤＥＰＢＴ）（１．３７５ｇ、４．
５９６ｍｍｏｌ）を加え、さらにジイソプロピルエチルアミン（１．１８８ｇ、９．１９
１ｍｍｏｌ）を加え、２５℃で２ｈ攪拌反応させた。１０ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウム
で有機相を洗浄し、水相をジクロロメタンで１回あたり１０ｍｌで３回抽出し、１０ｍｌ
の飽和食塩水で有機相を洗浄し、水相をジクロロメタンで１回あたり１０ｍｌで２回抽出
し、有機相をあわせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した後で溶剤を減圧蒸発乾固
し、真空油ポンプで一晩発泡乾燥させて粗製品を得た。カラム精製には、１２０ｇの２０
０～３００メッシュの順相シリカゲルを用い、２０ｍｌのトリエチルアミンでシリカゲル
の酸性を中和し、１重量％トリエチルアミンを含む石油エーテルでカラムを平衡化し、石
油エーテル：酢酸エチル：ジクロロメタン：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド＝１：１：１
：０．５～１：１：１：０．６で勾配溶出し、溶剤を減圧蒸発乾固して２．６４２ｇの純
粋なＲ－３を得た。
（４－１－６）Ｒ－４の合成：
Ｒ－３（７９５ｍｇ、０．４０７４ｍｍｏｌ）、コハク酸無水物（８２ｍｇ、０．８１
４８ｍｍｏｌ）及び４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、１００ｍｇ、０．８１４８
ｍｍｏｌ）を混合して４ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、さらにジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ、１００ｍｇ、０．８１４８ｍｍｏｌ）を加え、２５℃で１８ｈ攪拌反
応させた。５ｍｌの０．５Ｍトリエチルアミンリン酸塩で反応液を洗浄し、水相をジクロ
ロメタンで１回あたり５ｍｌで３回抽出し、有機相をあわせ減圧蒸発乾固して粗製品を得
た。カラム精製には、３０ｇの２００～３００メッシュの順相シリカゲルを用い、１重量
％トリエチルアミンでシリカゲルの酸性を中和し、ジクロロメタンでカラムを平衡化し、
１重量‰トリエチルアミンを含むジクロロメタン：メタノール＝１００：１８～１００：
２０で勾配溶出し、生成物溶出液を回収し、溶剤を減圧蒸発乾固して５０５ｍｇの純粋な
Ｒ－４複合分子を得た。
（４－１－７）Ｒ－５複合分子の合成：
Ｌ－９複合分子の代わりにＲ－４複合分子を用い、固相担体に結合されたＲ－４複合分
子を得たこと以外、調製例１における工程（１－１－９）と同じ方法により、Ｒ－５を調
製した。
（４－２）Ｒ５－ｓｉＡＮ１Ｍ３ＳＶＰ複合体の合成
出発としてＬ－１０化合物の代わりにＲ－５化合物を用いてセンス鎖を合成したこと以
外、調製例１における工程（１－２）、（１－３Ａ）、（１－４）と同じ方法により、複
合体２３を調製した。構造が式（４０７）に示されるＲ５－ｓｉＡＮ１Ｍ３ＳＶＰ複合体
を得ることができると予期した。
（調製例５）ＬＡ５－ｓｉＡＮ１Ｍ３ＳＶＰ複合体（複合体２４）の調製
以下のプロセス経路により、ＬＡ－５化合物を合成できると予期した。
Figure 2023082151000078
出発としてＬ－１０化合物の代わりにＬＡ－５化合物を用いてセンス鎖を合成したこと
以外、調製例１における工程（１－２）、（１－３Ａ）、（１－４）と同じ方法により、
複合体２４を調製した。構造が式（４１２）に示されるＬＡ５－ｓｉＡＮ１Ｍ３ＳＶＰ複
合体を得ることができると予期した。
（調製例６）ＬＢ５－ｓｉＡＮ１Ｍ３ＳＶＰ複合体（複合体２５）の調製
（６－１）ＬＢ－５化合物の合成
以下の方法に従い、ＬＢ－５化合物を合成した。
Figure 2023082151000079
（６－１－１）ＬＢ－１の合成：
工程（１－１－６）に記載された方法により得られたＬ－８（５．０ｇ、３．３８６ｍ
ｍｏｌ）、アジピン酸無水物（８７０ｍｇ、６．７７２ｍｍｏｌ）及び４－ジメチルアミ
ノピリジン（ＤＭＡＰ、８２７ｍｇ、６．７７２ｍｍｏｌ）を混合して１３０ｍｌのジク
ロロメタンに溶解させ、さらにジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ、２．２ｇ、１６
．９３１ｍｍｏｌ）を加え、２５℃で４ｈ攪拌反応させた。７０ｍｌのジクロロメタンを
加えて反応液を希釈し、０．５Ｍトリエチルアミンリン酸塩で反応液を洗浄し、水相をジ
クロロメタンで１回あたり１０ｍｌで４回抽出し、有機相をあわせ減圧蒸発乾固して粗製
品を得た。カラム精製には、１２０ｇの２００～３００メッシュの順相シリカゲルを用い
、１重量％トリエチルアミンでシリカゲルの酸性を中和し、ジクロロメタンでカラムを平
衡化し、石油エーテル：酢酸エチル：ジクロロメタン：メタノール＝１：１：１：０．２
～１：１：１：１で勾配溶出し、溶剤を減圧蒸発乾固して４．２６７ｇの純粋なＬＢ－１
を得た。
（６－１－２）ＬＢ－２の合成：
工程（６－１－１）に記載された方法により得られたＬＢ－１（４．６９７ｇ、２．７
５３ｍｍｏｌ、２バッチの生成物をあわせたもの）、３－アミノ－１，２－プロパンジオ
ール（３１３ｍｇ、３．４４２ｍｍｏｌ）、４－（４，６－ジメトキシトリアジン－２－
イル）－４－メチルモルホリン塩酸塩（ＤＭＴＭＭ、９５３ｍｇ、３．４４２ｍｍｏｌ）
及びＮ－メチルモルホリン（７００ｍｇ、６．８８４ｍｍｏｌ）を順に３０ｍｌのアセト
ニトリルと３ｍｌのメタノールの混合液に加え、室温で一晩攪拌反応させた。乾燥させる
まで溶剤を蒸発し、カラムクロマトグラフィー（２００～３００メッシュの順相シリカゲ
ルをジクロロメタン：メタノール＝１：０．０７～１：０．５で勾配溶出した）により精
製し、生成物溶出液を回収し、溶剤を濃縮除去し、３．２７ｇの目的生成物ＬＢ－２を得
た。
（６－１－３）ＬＢ－３の合成：
ＬＢ－２（２．２７ｇ、１．３５３ｍｍｏｌ）を１４ｍｌの無水ピリジンで溶解させた
。さらに４，４’－ビスメトキシトリチルクロリド（６８８ｍｇ、２．０３ｍｍｏｌ）を
加えて室温で一晩攪拌反応させた。１５０ｍｌのメタノールを加えてクエンチングし、乾
燥させるまで溶剤を蒸発した。カラムクロマトグラフィー（２００～３００メッシュの順
相シリカゲルをジクロロメタン：メタノール＝１：０．０５～１：０．２で勾配溶出した
）により精製し、生成物溶出液を回収し、溶剤を濃縮除去し、１．６４７ｇの目的生成物
ＬＢ－３を得た。
（６－１－４）ＬＢ－４の合成：
ＬＢ－３（８２２ｍｇ、０．４１５ｍｍｏｌ）、コハク酸無水物（８３ｇ、０．８３ｍ
ｍｏｌ）及び４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、１０２ｍｇ、０．８３ｍｍｏｌ）
を混合して４ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、さらにＤＩＥＡ（２７０ｍｇ、２．０７
５ｍｍｏｌ）を加え、２５℃で一晩攪拌反応させた。０．５Ｍトリエチルアミンリン酸塩
で反応液を３回洗浄し、水相をジクロロメタンで１回あたり２ｍｌで３回抽出し、有機相
をあわせ減圧蒸発乾固して粗製品を得た。カラム精製には、２００～３００メッシュの順
相シリカゲルを用い、５重量％トリエチルアミンでシリカゲルの酸性を中和し、石油エー
テルでカラムを平衡化し、１重量‰トリエチルアミンを含むジクロロメタン：メタノール
＝１００：５～１００：２０で勾配溶出し、溶剤を減圧蒸発乾固して７８７ｍｇの純粋な
ＬＢ－４複合分子を得た。
（６－１－５）ＬＢ－５の合成：
Ｌ－９複合分子の代わりにＬＢ－４複合分子を用い、固相担体に結合されたＬＢ－４複
合分子を得たこと以外、調製例１における工程（１－１－９）と同じ方法により、ＬＢ－
５を調製した。
（６－２）ＬＢ５－ｓｉＡＮ１Ｍ３ＳＶＰ複合体の合成
出発としてＬ－１０化合物の代わりにＬＢ－５化合物を用いてセンス鎖を合成したこと
以外、調製例１における工程（１－２）、（１－３Ａ）、（１－４）と同じ方法により、
複合体２５を調製した。構造が式（４１３）に示されるＬＢ５－ｓｉＡＮ１Ｍ３ＳＶＰを
得ることができると予期した。
（調製例７）Ｖ８－ｓｉＡＮ１Ｍ３ＳＶＰ複合体（複合体２６）の合成
以下のプロセス経路により、Ｖ－８化合物を合成できると予期した。
Figure 2023082151000080
出発としてＬ－１０化合物の代わりにＶ－８化合物を用いてセンス鎖を合成したこと以
外、調製例１における工程（１－２）、（１－３Ａ）、（１－４）と同じ方法により、複
合体２６を調製した。構造が式（４１４）に示されるＶ８－ｓｉＡＮ１Ｍ３ＳＶＰを得る
ことができると予期した。
（調製例８）Ｗ８－ｓｉＡＮ１Ｍ３ＳＶＰ複合体（複合体２７）の調製
（８－１）Ｗ－８化合物の合成
以下の方法に従い、Ｗ－８化合物を合成した。
Figure 2023082151000081
（８－１－１）Ｗ－１の合成：
Ｗ－０（２．０２４ｇ、１０ｍｍｏｌ）を２５ｍｌのアセトニトリルに溶解させ、さら
にトリエチルアミン（４．０４８ｇ、４０ｍｍｏｌ）を加え、氷水浴で０℃程度まで冷却
し、トリフルオロ酢酸エチル（５．６８３ｇ、４０ｍｍｏｌ）を加え、室温で２２ｈ反応
させた。溶剤を減圧蒸発乾固し、真空油ポンプで１８ｈ発泡乾燥させ、５．８３５ｇの固
形粗製品Ｗ－１を得た。
（８－１－２）Ｗ－２の合成：
Ｗ－１粗製品（５．８３５ｇ、１０ｍｍｏｌ）を５０ｍｌのジクロロメタンに溶解させ
、反応液にＴｒＣｌ（３．３４５ｇ、１２ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１．５１８
ｇ、１５ｍｍｏｌ）を加え、室温で２０ｈ攪拌反応させた。２０ｍｌの飽和炭酸水素ナト
リウムで反応液を２回洗浄し、２０ｍｌの飽和食塩水で１回洗浄し、有機相をあわせ、無
水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した後で有機溶剤を減圧蒸発乾固し、真空油ポンプで
一晩発泡乾燥させ、８．０１２ｇの固形粗製品Ｗ－２を得た。処理されることなく、次の
脱保護反応を行った。
（８－１－３）Ｗ－３の合成：
Ｗ－２粗製品（８．０１２ｇ、１０ｍｍｏｌ）を１００ｍｌのメタノールに溶解させ、
さらに１００ｍｌのメチルアミン水溶液（４０重量％）を加え、５０℃で２３ｈ攪拌反応
させた。不溶性粒子を濾過除去し、溶剤を減圧蒸発乾固し、２００ｍｌの体積比１：１の
ＤＣＭ－メタノール混合溶剤を加え、５０ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウムで有機相を洗浄
し、水相をジクロロメタンで１回あたり５０ｍｌで３回抽出し、有機相をあわせ、無水硫
酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した後で溶剤を減圧蒸発乾固し、真空油ポンプで一晩発泡
乾燥させ、２００～３００メッシュの順相シリカゲルカラムで精製し、石油エーテルをカ
ラムに入れ、１重量％トリエチルアミンでシリカゲルの酸性を中和し、ジクロロメタン：
メタノール：アンモニア水（２５重量％）＝１：１：０．０５～１：１：０．２５で勾配
溶出し、生成物溶出液を回収し、溶剤を減圧蒸発乾固し、真空油ポンプで発泡乾燥させて
３．０６２ｇの純粋なＷ－３を得た。
（８－１－４）Ｗ－４の合成：
Ｗ－３（０．６７５ｇ、１．５１７ｍｍｏｌ）とＧＡＬ－Ｃ７－２（２．６０ｇ、５．
４６ｍｍｏｌ）を混合して４７ｍｌのアセトニトリルに溶解させ、さらにジイソプロピル
エチルアミン（１．５７ｇ、１２．１４ｍｍｏｌ）を加え、最後に３－ジエトキシホスホ
リル－１，２，３－ベンゾオキサゾール４（３Ｈ）－オン（ＤＥＰＢＴ、１．８１６ｇ、
６．０４ｍｍｏｌ）を加え、室温で２．５ｈ攪拌反応させた。１００ｍｌのジクロロメタ
ンで反応液を希釈し、８０ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウム溶液で有機相を洗浄し、８０ｍ
ｌの飽和食塩水で有機相を洗浄し、有機相をあわせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾
過した後で溶剤を減圧蒸発乾固して粗製品を得、２００～３００メッシュの順相シリカゲ
ルカラムで精製し、石油エーテルをカラムに入れ、１重量％トリエチルアミンでシリカゲ
ルの酸性を中和し、ジクロロメタン：メタノール＝１００：５～１００：７で勾配溶出し
、生成物溶出液を回収し、減圧蒸発乾固して１．６１０ｇの純粋なＷ－４を得た。
（８－１－５）Ｗ－５の合成：
Ｗ－４（１．６１ｇ、０．８８６ｍｍｏｌ）を１２５ｍｌのジクロロメタンに溶解させ
、さらにジクロロ酢酸（３．５ｍｌ、４２．４３ｍｍｏｌ）を加え、室温で１ｈ反応させ
た。１５０ｍｌのピリジンを加えて反応液を中和し、溶剤を減圧蒸発乾固して粗製品を得
た。２００～３００メッシュの順相シリカゲルを用いて、１０重量％トリエチルアミンで
シリカゲルの酸性を中和し、１重量‰トリエチルアミンでカラムを平衡化し、ジクロロメ
タン：メタノール＝１００：３０～１００：４０で勾配溶出し、生成物溶出液を回収し、
溶剤を減圧蒸発乾固して１．２６ｇの純粋なＷ－５を得た。
（８－１－６）Ｗ－６の合成：
Ｗ－５（１．２５ｇ、０．７９３ｍｍｏｌ）と工程（１－１－７ａ）に記載された方法
により得られたＡ－１（１．２１ｇ、２．３８ｍｍｏｌ）を混合して１２ｍｌのジクロロ
メタンに溶解させ、３－ジエトキシホスホリル－１，２，３－ベンゾオキサゾール４（３
Ｈ）－オン（ＤＥＰＢＴ、０．７１２ｇ、２．３８ｍｍｏｌ）を加え、さらにジイソプロ
ピルエチルアミン（０．６１５ｇ、４．７６ｍｍｏｌ）を加え、２５℃で３ｈ攪拌反応さ
せた。８０ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウムで有機相を洗浄し、水相をジクロロメタンで１
回あたり１０ｍｌで３回抽出し、有機相をあわせ、１０ｍｌの飽和食塩水で洗浄し、有機
相をあわせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した後で溶剤を減圧蒸発乾固し、真空
油ポンプで一晩発泡乾燥させて粗製品を得た。カラム精製には、１８５ｇの２００～３０
０メッシュの順相シリカゲルを用い、２０ｍｌのトリエチルアミンでシリカゲルの酸性を
中和し、１重量％トリエチルアミンを含む石油エーテルでカラムを平衡化し、石油エーテ
ル：酢酸エチル：ジクロロメタン：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド＝１：１：１：０．１
～１：１：０．７で勾配溶出し、生成物溶出液を回収し、溶剤を減圧蒸発乾固して１．５
７ｇの純粋なＷ－６を得た。
（８－１－７）Ｗ－７の合成：
Ｗ－６（１．２３８ｇ、０．６３ｍｍｏｌ）、コハク酸無水物（０．１８９ｇ、１．８
９ｍｍｏｌ）及び４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、０．２３１ｇ、１．８９ｍｍ
ｏｌ）を混合して７ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、さらにＤＩＥＡ（０．４０７ｇ、
３．１５ｍｍｏｌ）を加え、２５℃で２４ｈ攪拌反応させた。５ｍｌの０．５Ｍトリエチ
ルアミンリン酸塩で反応液を洗浄し、水相をジクロロメタンで１回あたり５ｍｌで３回抽
出し、有機相をあわせ減圧蒸発乾固して粗製品を得た。カラム精製には、３０ｇの２００
～３００メッシュの順相シリカゲルを用い、１重量％トリエチルアミンでシリカゲルの酸
性を中和し、ジクロロメタンでカラムを平衡化し、１重量‰トリエチルアミンを含むジク
ロロメタン：メタノール＝１００：１８～１００：２０で勾配溶出し、生成物溶出液を回
収し、溶剤を減圧蒸発乾固して１．０３３ｇの純粋なＷ－７複合分子を得た。ＭＳ ｍ／
ｚ：Ｃ１０１Ｈ１４６Ｎ７Ｏ３８，［Ｍ－ＤＭＴｒ］＋、理論値：１７６３．９２、実測
値：１７６３．２１。
（８－１－８）Ｗ－８の合成：
Ｌ－９複合分子の代わりにＷ－７複合分子を用い、固相担体に結合されたＷ－７複合分
子を得たこと以外、調製例１における工程（１－１－９）と同じ方法により、Ｗ－８を調
製した。
（８－２）Ｗ８－ｓｉＡＮ１Ｍ３ＳＶＰ複合体の合成
出発としてＬ－１０化合物の代わりにＷ－８化合物を用いてセンス鎖を合成したこと以
外、調製例１における工程（１－２）、（１－３Ａ）、（１－４）と同じ方法により、複
合体２７を調製した。構造が式（４１５）に示されるＷ８－ｓｉＡＮ１Ｍ３ＳＶＰを得た
。
（調製例９）Ｘ８－ｓｉＡＮ１Ｍ３ＳＶＰ複合体（複合体２８）の調製
以下のプロセス経路により、Ｘ－８化合物を合成できると予期した。
Figure 2023082151000082
出発としてＬ－１０化合物の代わりにＸ－８化合物を用いてセンス鎖を合成したこと以
外、調製例１における工程（１－２）、（１－３Ａ）、（１－４）と同じ方法により、複
合体２８を調製した。構造が式（４２１）に示されるＸ８－ｓｉＡＮ１Ｍ３ＳＶＰを得る
ことができると予期した。
（調製例１０）Ｚ５－ｓｉＡＮ１Ｍ３ＳＶＰ複合体（複合体２９）の調製
（１０－１）Ｚ－５化合物の合成
以下の方法に従い、Ｚ－５化合物を合成した。
Figure 2023082151000083
（１０－１－１）Ｚ－１の合成：
工程（８－１－３）に記載された方法により得られたＷ－３（１．５０ｇ、３．３７ｍ
ｍｏｌ）と工程（３－１－２）に記載された方法により得られたＧＡＬ５－Ｃ４－２（７
．１８ｇ、１３．４８ｍｍｏｌ）を混合して３４ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、さら
にジイソプロピルエチルアミン（３．４８ｇ、２６．９６ｍｍｏｌ）を加え、最後に３－
ジエトキシホスホリル－１，２，３－ベンゾオキサゾール４（３Ｈ）－オン（ＤＥＰＢＴ
、４．０４ｇ、１３．４８ｍｍｏｌ）を加え、室温で４．５ｈ攪拌反応させた。１００ｍ
ｌのジクロロメタンで反応液を希釈し、８０ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウム溶液で有機相
を洗浄し、８０ｍｌの飽和食塩水で有機相を洗浄し、有機相をあわせ、無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥させ、濾過した後で溶剤を減圧蒸発乾固して粗製品を得、２００～３００メッシ
ュの順相シリカゲルカラムで精製し、石油エーテルをカラムに入れ、１重量％トリエチル
アミンでシリカゲルの酸性を中和し、ジクロロメタン：メタノール＝３０：１～１５：１
で勾配溶出し、生成物溶出液を回収し、減圧蒸発乾固して３．９７ｇの純粋なＺ－１を得
た。ＭＳ ｍ／ｚ：Ｃ９８Ｈ１４３Ｎ１０Ｏ３３，［Ｍ＋Ｈ］＋、理論値：１９８７．９
８、実測値：１９８７．９０。
（１０－１－２）Ｚ－２の合成：
Ｚ－１（３．９７ｇ、２．００ｍｍｏｌ）を２５０ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、
さらにジクロロ酢酸（１０．９４１ｇ、８４．８５ｍｍｏｌ）を加え、室温で１ｈ反応さ
せた。ピリジンを加えて反応液を中性に中和し、溶剤を減圧蒸発乾固して粗製品を得た。
２２０ｇの２００～３００メッシュの順相シリカゲルをカラムに入れ、１０％ピリジンで
シリカゲルの酸性を中和し、１‰ピリジンでカラムを平衡化し、ジクロロメタン：メタノ
ール＝１０：１～２：１で勾配溶出し、生成物溶出液を回収し、溶剤を減圧蒸発乾固して
３．４９ｇの純粋なＺ－２を得た。ＭＳ ｍ／ｚ：Ｃ７９Ｈ１２９Ｎ１０Ｏ３３，［Ｍ＋
Ｈ］＋、理論値：１７４６．９４、実測値：１７４６．９０。
（１０－１－３）Ｚ－３の合成：
Ｚ－２（３．４９ｇ、２．０ｍｍｏｌ）と工程（１－１－７ａ）に記載された方法によ
り得られたＡ－１（３．０６ｇ、６．０ｍｍｏｌ）を混合して３０ｍｌのジクロロメタン
に溶解させ、３－ジエトキシホスホリル－１，２，３－ベンゾオキサゾール４（３Ｈ）－
オン（ＤＥＰＢＴ、１．８０ｇ、６．０ｍｍｏｌ）を加え、さらにジイソプロピルエチル
アミン（１．５５ｇ、１２．０ｍｍｏｌ）を加え、２５℃で３ｈ攪拌反応させた。１００
ｍｌのジクロロメタンで反応液を希釈し、飽和炭酸水素ナトリウムで有機相を１回あたり
３０ｍｌで２回洗浄し、水相を１０ジクロロメタンで抽出し、有機相をあわせ、５０ｍｌ
の飽和食塩水で洗浄し、有機相をあわせ無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した後で溶
剤を減圧蒸発乾固し、真空油ポンプで一晩発泡乾燥させて粗製品を得た。カラム精製には
、２００ｇの２００～３００メッシュの順相シリカゲルを用い、２０ｍｌのトリエチルア
ミンでシリカゲルの酸性を中和し、１重量％トリエチルアミンを含む石油エーテルでカラ
ムを平衡化し、ジクロロメタン：メタノール＝２５：１～１５：１で勾配溶出し、生成物
溶出液を回収し、溶剤を減圧蒸発乾固して２．２ｇの純粋なＺ－３を得た。ＭＳ ｍ／ｚ
：Ｃ１０３Ｈ１５１Ｎ１０Ｏ３８，［Ｍ＋Ｈ］＋、理論値：２１３６．０２、実測値：２
１３６．２０。
（１０－１－４）Ｚ－４の合成：
Ｚ－３（２．１０ｇ、０．９８３ｍｍｏｌ）をＤＩＥＡ（０．６３５ｇ、４．９１５ｍ
ｍｏｌ）を含む１４．８ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、４－ジメチルアミノピリジン
（ＤＭＡＰ、２４０ｍｇ、１．９６６ｍｍｏｌ）を加え攪拌して清澄させた後、コハク酸
無水物（１９７ｍｇ、１．９６６ｍｍｏｌ）を加え、２５℃で１８ｈ攪拌反応させた。５
０ｍｌのジクロロメタンを加えて反応液を希釈し、８０ｍｌの０．５Ｍトリエチルアミン
リン酸塩で有機相を洗浄し、水相をジクロロメタンで１回あたり５０ｍｌで２回抽出し、
有機相をあわせ減圧蒸発乾固して粗製品を得た。カラム精製には、１８８ｇの２００～３
００メッシュの順相シリカゲルを用い、１重量％トリエチルアミンでシリカゲルの酸性を
中和し、ジクロロメタンでカラムを平衡化し、１重量‰トリエチルアミンを含むジクロロ
メタン：メタノール＝１０：１～３：１で勾配溶出し、生成物溶出液を回収し、溶剤を減
圧蒸発乾固して１．９５ｇの純粋なＺ－４複合分子を得た。ＭＳ ｍ／ｚ：Ｃ１０７Ｈ１
５５Ｎ１０Ｏ４１，［Ｍ＋Ｈ］＋、理論値：１９３５．０７、実測値：１９３５．２９。
（１０－１－５）Ｚ－５の合成
Ｌ－９複合分子の代わりにＺ－４複合分子を用い、固相担体に結合されたＺ－４複合分
子を得たこと以外、調製例１における工程（１－１－９）と同じ方法により、Ｚ－５を調
製した。
（１０－２）Ｚ５－ｓｉＡＮ１Ｍ３ＳＶＰ複合体の合成
出発としてＬ－１０化合物の代わりにＺ－５化合物を用いてセンス鎖を合成したこと以
外、調製例１における工程（１－２）、（１－３Ａ）、（１－４）と同じ方法により、複
合体２９を調製した。構造が式（４２２）に示されるＺ５－ｓｉＡＮ１Ｍ３ＳＶＰ複合体
を得た。
（調製例１１）複合体Ｆ１～Ｆ１３の調製
本調製例で複合体Ｆ１～Ｆ１３を合成し、当該複合体に複合されたｓｉＲＮＡの配列は
、表３に示される。
（１１－１）ＦＩＮ－２複合分子の合成
Ｒａｊｅｅｖら、ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ ２０１５，１６，９０３－９０８に記載さ
れた調製方法を参照し、以下のプロセス経路により、ＦＩＮ－２複合分子を合成した。
（１１－１－１）ＰＲＯ－１０の合成
Figure 2023082151000084
 （１１－１－１ａ）ＰＲＯ－７の合成
２．９３ｇのＰＲＯ－６（Ｌ－ヒドロキシプロリン、ＣＡＳ番号：５１－３５－４、Ｅ
ｎｅｒｇｙ社から購入、２２．４ｍｍｏｌ）を２２．５ｍｌの１，４－ｄｉｏｘａｎｅ（
１，４－ジオキサン、ＣＡＳ番号：１２３－９１－１）に溶解させ、３４ｍｌの１０％（
ｗ／ｗ）Ｎａ２ＣＯ３の水溶液を加え、懸濁液状態にし、６．９５ｇのＦｍｏｃ－Ｃｌ（
クロロギ酸－９－フルオレニルメチル、ＣＡＳ番号：２８９２０－４３－６、Ｅｎｅｒｇ
ｙ社から購入、２６．８ｍｍｏｌ）を３４ｍｌの１，４－ｄｉｏｘａｎｅに溶解させ、氷
浴下で上記懸濁液中に加え、自然に室温まで昇温し一晩反応させた。反応液を１５０ｍｌ
の氷水に注入し、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルで１回あたり１００ｍｌで３回抽出し
、有機相を捨て、水相を濃ＨＣｌでｐＨ≦５になるように調節し、１００ｍｌの酢酸エチ
ルで２回抽出し、有機相をあわせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶剤を減圧蒸発乾固
して７．８３ｇの白色泡状固形製品ＰＲＯ－７を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ
，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．９１ （ｔ，Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ，２Ｈ），７．６７
（ｄ，Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ，２Ｈ），７．４８ － ７．３９ （ｍ，２Ｈ），７．３
８ － ７．２７ （ｍ，２Ｈ），５．１７ （ｓ，１Ｈ），４．２７ （ｓ，２Ｈ），
４．２３ － ４．１１ （ｍ，２Ｈ），３．５５ － ３．４１ （ｍ，３Ｈ），２．
３１ － ２．１０ （ｍ，１Ｈ），２．０８ － １．８８ （ｍ，１Ｈ）． ＨＲＭ
Ｓ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ 理論値 Ｃ２０Ｈ１９ＮＯ５ ［Ｍ－Ｈ］－３５２．１１９０
、実測値３５２．１０３３．
（１１－１－１ｂ）ＰＲＯ－８の合成
７．８３ｇのＰＲＯ－７（２２．２ｍｍｏｌ）を８０ｍｌのＴＨＦ（ＣＡＳ番号：１０
９－９９－９）に溶解させ、油浴で６５℃に加熱し、還流状態で３６．６ｍｌの２ｍｏｌ
／ＬのＢＨ３－Ｍｅ２ＳのＴＨＦ溶液（ＣＡＳ番号１３２９２－８７－０、Ｊ＆Ｋ Ｓｃ
ｉｅｎｔｉｆｉｃ社から購入、７３．２ｍｍｏｌ）を加え、３時間還流反応を続けた。反
応液を流出させ、メタノールで残りの固体を溶解させ、攪拌下で反応液に気体がなくなる
までメタノールを加えてから３０分間攪拌し続け、溶剤を減圧留去した後、石油エーテル
で３回精製して７．１ｇの白色固形生成物ＰＲＯ－８を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００
ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．９１ （ｔ，Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ，２Ｈ），７．
６７ （ｄ，Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ，２Ｈ），７．４９ － ７．３９ （ｍ，２Ｈ），
７．３８ － ７．２６ （ｍ，２Ｈ），５．１８ （ｄｄ，Ｊ ＝ ６．１，３．８
Ｈｚ，１Ｈ），４．２８ （ｓ，２Ｈ），４．２３ － ４．１３ （ｍ，２Ｈ），３．
５５ － ３．３８ （ｍ，２Ｈ），２．３２ － ２．１１ （ｍ，１Ｈ），２．０８
－ １．８９ （ｍ，１Ｈ）． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ 理論値 Ｃ２０Ｈ２
１ＮＯ４ ［Ｍ＋Ｎａ］＋３６２．１３６８、実測値３６２．１０１２．
（１１－１－１ｃ）ＰＲＯ－９の合成
７．１ｇのＰＲＯ－８（２１ｍｍｏｌ）を１００ｍｌのピリジンに溶解させ、１４．２
ｇのＤＭＴｒ－Ｃｌ（４，４’－ビスメトキシトリチルクロリド、４２ｍｍｏｌ）を加え
、室温で５時間攪拌反応させた。溶剤を減圧留去し、粗製品を酢酸エチルで溶解した後に
塩類不純物を濾過除去し、溶剤を減圧留去した後でシリカゲルカラムで精製し、シリカゲ
ルカラムを予めピリジンでアルカリ化した後でＤＣＭで粗製品を溶解させ負荷し、１％（
ｖ／ｖ）ピリジンを含むＤＣＭでＤＭＴｒ－Ｃｌを溶出させた後、酢酸エチルで生成物を
溶出させ、生成物溶出液を回収し、溶剤を減圧蒸発乾固し、８．２ｇの白色固形生成物Ｐ
ＲＯ－９を得た。ＨＲＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ 理論値 Ｃ４１Ｈ３９ＮＯ６ ［Ｍ＋
Ｎａ］＋６６４．２６７５、実測値６６４．２３４８，Ｃ１８ ＲＰ－ＨＰＬＣ（ロット
番号ＪＪＳ１６０３２４－１）純度９４．２０％。
（１１－１－１ｄ）ＰＲＯ－１０の合成
８．２ｇのＰＲＯ－９（１２．８ｍｍｏｌ）を６４ｍｌのＤＭＦ（Ｎ，Ｎ－ジメチルホ
ルムアミド）に溶解させ、４０ｍｌのピペリジン（３８４ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０
分間攪拌反応させた。反応液を３００ｍｌの氷水に注入し、酢酸エチルで１回あたり１５
０ｍｌで３回抽出し、有機相をあわせ、２００ｍｌの飽和食塩水で洗浄した後、有機相を
無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶剤を減圧留去した後でシリカゲルカラムで精製し、シ
リカゲルカラムを予めピリジンでアルカリ化した後でＤＣＭで粗製品を溶解させ負荷し、
１％（ｖ／ｖ）ピリジンを含むＤＣＭでＦｍｏｃを溶出させた後、酢酸エチルで生成物を
溶出させ、生成物溶出液を回収し、溶剤を減圧蒸発乾固し、４．６５ｇの白色固形生成物
ＰＲＯ－１０を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．４
０ （ｄ，Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ，２Ｈ），７．３５ － ７．１８ （ｍ，７Ｈ），６
．９３ － ６．８４ （ｍ，４Ｈ），４．５６ （ｄ，Ｊ ＝ ３．９ Ｈｚ，１Ｈ）
，４．１２ （ｓ，１Ｈ），３．７４ （ｓ，６Ｈ），３．４６ － ３．３７ （ｍ，
１Ｈ），２．８８ （ｄｄｄ，Ｊ ＝ １８．５，１０．０，５．５ Ｈｚ，２Ｈ），２
．７５ （ｄｄ，Ｊ ＝ ８．７，５．８ Ｈｚ，１Ｈ），２．６２ （ｄｄ，Ｊ ＝
１１．０，２．７ Ｈｚ，１Ｈ），１．７４ － １．６５ （ｍ，１Ｈ），１．４０
（ｄｄｄ，Ｊ ＝ １２．９，８．５，５．９ Ｈｚ，１Ｈ），ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）
ｍ／ｚ 理論値 Ｃ２６Ｈ２９ＮＯ４ ［Ｍ＋Ｎａ］＋４４２．１９９４、実測値４４２
．１９９９，Ｃ１８ ＲＰ－ＨＰＬＣ（ロット番号ＪＪＳ１６０３２９－１）純度９７．
０７％。
（１１－１－２）ＦＩＮ－１の合成
Figure 2023082151000085
（１－１－１）に記載された方法により得られたＧＡＬ－５（４．５ｇ、１０ｍｍｏｌ
）を４０ｍｌのＤＭＦに溶解させ、順に３．９ｇのＤＩＥＡ（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエ
チルアミン、ＣＡＳ番号：７０８７－６８－５、Ａｌａｄｄｉｎ社から購入、３０ｍｍｏ
ｌ）及び３．８ｇのＨＢＴＵ（ベンゾトリアゾール－Ｎ，Ｎ、Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル
ウロニウムヘキサフルオロホスフェート、ＣＡＳ番号：９４７９０－３７－２、Ａｌａｄ
ｄｉｎ社から購入、１１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１０分間攪拌し、工程（１１－１－１
ｄ）で得られたＰＲＯ－１０（４．２ｇ、１０ｍｍｏｌ）を４０ｍｌのＤＭＦに溶解させ
た後、上記反応液に加え、反応液に無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥させ、室温で２時間
攪拌した。反応液を１２０ｍｌの氷水に注入し、酢酸エチルで１回あたり６０ｍｌで３回
抽出し、有機相をあわせ、それぞれ２０ｍｌの水、２０ｍｌの飽和食塩水で洗浄し、有機
相を分離し無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶剤を減圧留去し、シリカゲルカラムで精製
し、シリカゲルカラムを予めピリジンでアルカリ化してからそれに試料を負荷し、１体積
％トリエチルアミン及び１体積％メタノールを含むジクロロメタン（ＤＣＭ）溶液で溶出
させ、生成物溶出液を回収し、溶剤を減圧蒸発乾固し、６．５ｇの淡黄色泡状固形製品Ｆ
ＩＮ－１を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．８３
（ｄ，Ｊ ＝ ９．２ Ｈｚ，１Ｈ），７．３２ （ｔ，Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ，４Ｈ）
，７．２０ （ｔｄ，Ｊ ＝ ８．９，３．５ Ｈｚ，５Ｈ），６．９３ － ６．８４
（ｍ，４Ｈ），５．２１ （ｄ，Ｊ ＝ ３．２ Ｈｚ，１Ｈ），５．０４ － ４．
９０ （ｍ，２Ｈ），４．４９ （ｓ，１Ｈ），４．４０ （ｄ，Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ
，０．８Ｈ），４．３１ （ｄ，Ｊ ＝ ５．０ Ｈｚ，０．２Ｈ），４．１５ （ｓ，
１Ｈ），４．０３ （ｓ，３Ｈ），３．９３ （ｓ，１Ｈ），３．７４ （ｓ、７Ｈ）、
３．５９ （ｄｔ、Ｊ ＝ １２．０，６．０ Ｈｚ，１Ｈ），３．５０ － ３．４０
（ｍ，１Ｈ），３．３９ － ３．２５ （ｍ，３Ｈ），３．１３ （ｄｄ，Ｊ ＝
８．９，５．２ Ｈｚ，１Ｈ），３．００ （ｄｑ，Ｊ ＝ ９．３，５．３，４．３
Ｈｚ，１Ｈ），２．２２ （ｓ，２Ｈ），２．０７ （ｓ，３Ｈ），１．９９ （ｓ，３
Ｈ），１．９０ （ｓ，４Ｈ），１．７４ （ｓ，３Ｈ），１．５０ （ｓ，３Ｈ），１
．３６ （ｓ，１Ｈ）。Ｃ１８ ＲＰ－ＨＰＬＣ（ロット番号ＬＪ１６０４２２）純度９
５．４５％。
（１１－１－３）ＦＩＮ－２の合成
Figure 2023082151000086
 工程（１１－１－２）で得られたＦＩＮ－１（３．０ｇ、３．５３ｍｍｏｌ）をアセト
ニトリルと共沸させて水を除去し、減圧吸引乾燥させ、１０ｍｌのＤＭＦに溶解させ、窒
素保護下で２．１３ｇのＰＡ（ビス（ジイソプロピルアミノ）（２－シアノエトキシ）ホ
スフィン、Ａｄａｍａｓ社から購入、商品番号１１３５６Ｂ、７．０６ｍｍｏｌ）、３４
６ｍｇのテトラゾール（ＣＡＳ番号：２８８－９４－８、Ａｌａｄｄｉｎ社から購入、４
．９４ｍｍｏｌ）を加え、室温で攪拌反応させ、１０ｍｌのＤＭＦを追加し、１時間攪拌
反応を続けた。溶剤を減圧留去した後でシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製
し、シリカゲルカラムを予めピリジンでアルカリ化した後でＤＣＭで粗製品を溶解させ負
荷し、酢酸エチルで溶出させ、生成物溶出液を回収し、溶剤を減圧留去し、４．５ｇの無
色シロップ状粗製品を得た。粗製品を５０体積％アセトニトリル水溶液で完全に溶解する
まで溶解させ、Ｃ－１８、３３０ｇ、３００Å中圧精製カラムでサンプルを精製し、カラ
ムをまず１体積％ピリジンのアセトニトリル溶液でアルカリ化し、勾配溶出させて製品の
ピークを回収し、溶剤を減圧留去して２．２ｇの白色粉末製品ＦＩＮ－２複合分子を得た
。３１Ｐ ＮＭＲ （１６２ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ １４８．０４，１４７．９４
，１４７．６２，１４７．１９、リンスペクトル純度９２％、Ｃ１８ ＲＰ－ＨＰＬＣ純
度９０．５４％。
（１１－２）ＦＩＮ－２複合分子の固相担体への結合
核酸固相合成方法により、工程（１１－１－３）で得られたＦＩＮ－２複合分子を３回
循環させることにより、汎用の固相担体（ＵｎｙＬｉｎｋｅｒＴＭ ｌｏａｄｅｄ Ｎｉ
ｔｔｏＰｈａｓｅ（登録商標）ＨＬ Ｓｏｌｉｄ Ｓｕｐｐｏｒｔｓ）に結合し、複合基
（ＦＩＮ＿ＦＩＮ＿ＦＩＮ）のＲＮＡセンス鎖の３’末端への結合を実現した。
Ｒａｊｅｅｖら、ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ ２０１５，１６，９０３－９０８に記載さ
れた調製方法を参照して上記結合を行い、具体的には、まず、上記汎用の固相担体から始
まり、固相担体におけるヒドロキシ保護基を除去し、カップリング反応条件及びカップリ
ング試薬の存在下でＦＩＮ－２複合分子と接触させてカップリングさせ、キャッピング反
応及び酸化反応を行った後、固相担体に結合されたＦＩＮ複合分子を得た。当該固相担体
に結合されたＦＩＮ複合分子におけるヒドロキシ保護基ＤＭＴｒを除去し、ＦＩＮ－２複
合分子と接触させてカップリングさせ、キャッピング反応及び酸化反応を行い、再び上記
脱保護－カップリング－キャッピング－酸化工程を１回繰り返し、３番目のＦＩＮ－２複
合分子を結合させ、固相担体に結合された複合基（ＦＩＮ＿ＦＩＮ＿ＦＩＮ）を得た。
上記反応において、上述した脱保護、カップリング、キャッピング、酸化は、反応条件
、溶剤及び試薬用量が前述した工程（１－２）に記載された核酸固相合成方法と同じであ
った。
（１１－３）複合体Ｆ１～Ｆ１３の合成
１）工程（１１－２）で得られた化合物を出発としてセンス鎖を合成し、２）複合ｓｉ
ＲＮＡが表３に示される複合体Ｆ１～Ｆ１３に対応する配列を有すること以外、調製例１
における工程（１－２）、（１－３）、（１－４）と同じ方法により、表題複合体を調製
した。
液体クロマトグラフィー質量分析計（ＬＣ－ＭＳ、Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ
ｒａｐｈｙ－Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ、Ｗａｔｅｒｓ社から購入、型番：Ｌ
ＣＴ Ｐｒｅｍｉｅｒ）により分子量を検出した。その結果、実測値が理論値に一致して
おり、合成された複合体は、構造が式（３０７）に示される目的設計の化合物であること
が確認された。
（調製例１２）比較複合体２の調製
本調製例で比較複合体２を合成し、当該複合体に複合されたｓｉＲＮＡの配列は、表３
に示される。当該複合体は、ＷＯ２０１６１６８２８６Ａ１における化合物ＡＤ－６５６
９５と構造が同じであった。
（１２－１）（ＧａｌＮＡｃ）３複合分子の合成
ＷＯ２０１４０２５８０５Ａ１に記載された調製方法により化合物３０、即ち、以上の
ようなリンカー－（ＬＡ）３トリヒドロキシメチルアミノメタン－ＬＢ－及び標的基であ
るＮ－アセチルガラクトサミン分子（ここで、各ＬＡに１つのＮ－アセチルガラクトサミ
ン分子が結合できるので、１つのリンカーに３個のＮ－アセチルガラクトサミン分子が結
合できる）を含む複合分子（（ＧａｌＮＡｃ）３複合分子とも呼ばれる）を合成し、前記
化合物３０の構造は、下式に示される。
Figure 2023082151000087
（１２－２）（ＧａｌＮＡｃ）３複合分子の固相担体への結合
調製例１における工程（１－１－９）と同じ方法により、（ＧａｌＮＡｃ）３複合分子
を固相担体に結合し、固相担体に結合された（ＧａｌＮＡｃ）３複合分子を得た。
（１２－３）比較複合体２の合成
１）工程（１２－２）で得られた化合物を出発としてセンス鎖を合成し、２）複合ｓｉ
ＲＮＡが表３において番号ＡＤ－６５６９５に示される配列を有すること以外、調製例１
における工程（１－２）、（１－３Ｄ）、（１－４）と同じ方法により、比較複合体２を
調製した。
液体クロマトグラフィー質量分析計（ＬＣ－ＭＳ、Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ
ｒａｐｈｙ－Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ、Ｗａｔｅｒｓ社から購入、型番：Ｌ
ＣＴ Ｐｒｅｍｉｅｒ）により分子量を検出した。センス鎖の理論値が８６２５．３２、
実測値が８６２３．７、アンチセンス鎖の理論値が７７２６．１５、実測値が７７２５．
２であった。実測値が理論値に一致しており、合成された複合体は、構造が式（３０５）
に示される目的設計の化合物であることが確認された。
（調製例１３）ｓｉＲＮＡ配列の合成
通常の固相合成方法により表４に示される本開示により提供されるｓｉＲＮＡ配列を得
、ＤＥＰＣ水を用いて等モルのセンス鎖とアンチセンス鎖の混合物を溶解させた後、通常
のアニールを行ってｓｉＲＮＡ二本鎖を形成した。
Figure 2023082151000088
上述した本開示のｓｉＲＮＡ又は複合体の調製が完了した後、使用するまで、標準的な
手段により固体粉末として凍結乾燥させて保存した。使用時、例えば注射用水を用いて改
めて溶解させ所望の濃度の溶液として用いてもよい。
（実験例１）ｓｉＲＮＡの体外ｐｓｉＣＨＥＣＫ系における活性抑制及びオフターゲッ
ト効果の検出
本実験例では、ｓｉＲＮＡ １、４、５、７、８の体外ｐｓｉＣＨＥＣＫ系におけるオ
ンターゲット活性及びオフターゲット効果を調べ、即ち、それぞれ５本のｓｉＲＮＡが、
完全マッチした目的配列又はシード領域がマッチングした目的配列を標的する活性を測定
した。
Ｋｕｍｉｃｏ Ｕｉ－Ｔｅｉ ｅｔ．ａｌ．、Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｄｉｓｓｅｃｔ
ｉｏｎ ｏｆ ｓｉＲＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｂｙ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ＤＮＡ
ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ：ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｓｉＲＮＡ ｗｉｔｈ ａ ＤＮＡ ｓ
ｅｅｄ ａｒｍ ｉｓ ａ ｐｏｗｅｒｆｕｌ ｔｏｏｌ ｆｏｒ ｍａｍｍａｌｉａｎ
ｇｅｎｅ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ ｗｉｔｈ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｒｅｄｕｃ
ｅｄ ｏｆｆ－ｔａｒｇｅｔ ｅｆｆｅｃｔ． Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅ
ａｒｃｈ，２００８．３６（７），２１３６－２１５１に記載された方法により、検出プ
ラスミドを構築し、被験ｓｉＲＮＡと共にＨＥＫ２９３Ａ細胞にコトランスフェクション
させ、デュアルルシフェラーゼレポーター遺伝子の発現レベルにより、ｓｉＲＮＡのオン
ターゲット活性及びオフターゲット効果を反映した。具体的な工程は以下のとおりである
。
［１］検出プラスミドの構築
ｐｓｉＣＨＥＣＫＴＭ－２（ＰｒｏｍｅｇａＴＭ）プラスミドにより４つの組換えプラ
スミドを構築した。そのうち、ＧＳＣＭは、オンターゲットプラスミドを表し、ＰＳＣＭ
、ＧＳＳＭ、ＰＳＳＭは、オフターゲットプラスミドを表す。
（１）ＧＳＣＭは、被験ｓｉＲＮＡにおけるアンチセンス鎖の２１個のヌクレオチド配
列の全てと完全に相補的な目的配列を含む。
（２）ＰＳＣＭは、被験ｓｉＲＮＡにおけるアンチセンス鎖の２１個のヌクレオチド配
列の全てと完全に一致している目的配列を含む。
（３）ＧＳＳＭは、被験ｓｉＲＮＡにおいてアンチセンス鎖の５’端から１～８位のヌ
クレオチド配列と完全に相補的であり、残部が被験ｓｉＲＮＡにおいてアンチセンス鎖の
５’端から９～２１位のヌクレオチド配列に対応し、その配列が全く相補的でない、即ち
、被験ｓｉＲＮＡにおいてアンチセンス鎖の５’端から９～２１位のいずれかのヌクレオ
チドがＧ、Ｃ、Ａ又はＵである場合、目的配列における対応する位置のヌクレオチドがそ
れぞれＴ、Ａ、Ｃ又はＧである目的配列を含む。
（４）ＰＳＳＭは、被験ｓｉＲＮＡにおいてセンス鎖の５’端から１～８位のヌクレオ
チド配列と完全に相補的であり、残部が被験ｓｉＲＮＡにおいてセンス鎖の５’端から９
～１９位のヌクレオチド配列に対応し、その配列が全く相補的でない、即ち、被験ｓｉＲ
ＮＡにおいてセンス鎖の５’端から９～１９位のいずれかのヌクレオチドがＧ、Ｃ、Ａ又
はＵである場合、目的配列における対応する位置のヌクレオチドがそれぞれＴ、Ａ、Ｃ又
はＧである目的配列を含む。ＧＳＳＭの標的配列の長さに等しくするために、目的配列の
３’末端に順にヌクレオチドＴ、Ｃを加えた。
目的配列をｐｓｉＣＨＥＣＫＴＭ－２プラスミドのＸｈｏ Ｉ／Ｎｏｔ Ｉ部位にクロ
ーニングした。
［２］トランスフェクション
９６ウェルプレートに、ＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＴＭ ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏ
ｇｅｎ社）の使用説明書により、それぞれｓｉＲＮＡと、プラスミドごとに１１群の特定
の濃度のｓｉＲＮＡが対応している上記各プラスミドをコトランスフェクションした。プ
ラスミドをウェルあたり１０ｎｇずつトランスフェクションし、０．２μＬのＬｉｐｏｆ
ｅｃｔａｍｉｎｅＴＭ ２０００を用いた。ｓｉＲＮＡ１、ｓｉＲＮＡ４、ｓｉＲＮＡ５
及びｓｉＲＮＡ８の濃度が５ｎＭから、０．００００８ｎＭに３倍ごとに希釈し、計１１
個の濃度であった。ｓｉＲＮＡ７の濃度が０．５ｎＭから、０．０００５ｎＭに倍加希釈
し、計１１個の濃度であった。１群あたり３個の複製ウェルがあった。
［３］検出
２４時間コトランスフェクションした後、デュアルルシフェラーゼレポーター遺伝子検
出キット（Ｄｕａｌ ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ｒｅｐｏｒｔｅｒ ｇｅｎｅ ａｓｓａｙ
ｋｉｔ、Ｐｒｏｍｅｇａ社、ｃａｔ．Ｅ２９４０）を用い、使用明細書によりＨＥＫ２
９３Ａ細胞を溶解させ、デュアルルシフェラーゼレポーター遺伝子の発現レベルを検出し
た。各特定の濃度のｓｉＲＮＡ試験群では、ｓｉＲＮＡ未処理群を対照（ｃｏｎ．）とし
た。ホタルルシフェラーゼ（Ｆｉｒ）タンパク質レベルに対するウミシイタケルシフェラ
ーゼ（Ｒｅｎ）タンパク質レベルで標準化した。
ｓｉＲＮＡ ８による４つの組換えプラスミドの発現抑制については、図１Ａ～１Ｄを
参照する。ｓｉＲＮＡ １による４つの組換えプラスミドの発現抑制については、図２Ａ
～２Ｄを参照する。図面から分かるように、未修飾ｓｉＲＮＡ ８は、５ｎＭで、ＧＳＳ
ＭとＰＳＣＭの発現に対して約２０％の抑制率があり、アンチセンス鎖シード領域のオフ
ターゲット効果及びセンス鎖のオフターゲット効果をわずかに示したのに対して、本開示
により提供される修飾ｓｉＲＮＡ １にはいかなるオフターゲット効果も認められなかっ
た。ｓｉＲＮＡ４、５、７は、ｓｉＲＮＡ １と同様に、いかなるオフターゲット効果も
認められなかった。
異なるｓｉＲＮＡ濃度で測定された活性結果から、Ｇｒａｐｈｐａｄ ５．０ソフトウ
ェアｌｏｇ（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ） ｖｓ． ｒｅｓｐｏｎｓｅ－Ｖａｒｉａｂｌｅ ｓ
ｌｏｐｅ機能により用量－効果曲線をフィッティングし、用量－効果曲線から以下の算出
方法により被験ｓｉＲＮＡのＧＳＣＭを標的したＩＣ５０値を算出した。結果を表５に示
した。
Figure 2023082151000089
 式中：
Ｙは、残存ｍＲＮＡの発現レベルであり、
Ｘは、トランスフェクションｓｉＲＮＡの濃度の対数値であり、
Ｂｏｔは、定常期の最低のＹ値であり、
Ｔｏｐは、定常期の最高のＹ値であり、
ＬｏｇＩＣ５０は、Ｙが最低と最高との間の半分にある場合のＸ値であり、ＨｉｌｌＳ
ｌｏｐｅは、曲線の傾きである。
Figure 2023082151000090
本実験から、本開示により提供される修飾ｓｉＲＮＡが体外ｐｓｉＣＨＥＣＫ系におい
て非常に高い抑制活性を有し、ＩＣ５０が３～３０ｐＭであり、同時に、５ｎＭでも、各
被験修飾ｓｉＲＮＡにいかなるオフターゲット効果も検出されなかったことが示された。
（実験例２）ｓｉＲＮＡ及びｓｉＲＮＡ複合体の体外細胞系における抑制活性の検出
（実験例２－１）Ｈｕｈ７細胞におけるｓｉＲＮＡによるＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡ発
現量に対する抑制効率の検出。
ＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＴＭ ２０００を用いて被験ｓｉＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ１、
２、４、５、６、７）をヒト肝がん細胞株Ｈｕｈ７にトランスフェクションし、ｓｉＲＮ
Ａの最終濃度がそれぞれ５ｎＭ、０．２５ｎＭ及び０．０５ｎＭであった。各濃度につき
２つの複製ウェルがあった。いかなるｓｉＲＮＡも処理されていない細胞をブランク対照
（図３Ａにおいて「ブランク」と記される）とした。
蛍光定量的リアルタイムＰＣＲ（Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ Ｐ
ＣＲ）によりそれぞれ各濃度のｓｉＲＮＡがトランスフェクションされたＨｕｈ７細胞に
おけるＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡの発現量を検出した。具体的な工程としては、トランス
フェクションした細胞を２４時間培養した後、Ｔｒｉｚｏｌ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅ
ｒ社）を用いて全ＲＮＡ抽出の標準操作手順により細胞における全ＲＮＡを抽出し、それ
ぞれ１μｇの全ＲＮＡをとり、逆転写キット（Ｐｒｏｍｅｇａ社、番号Ａ３５００）を用
いてその説明書の操作方法により逆転写してｃＤＮＡを得た。２×Ｕｌｔｒａ ＳＹＢＲ
Ｍｉｘｔｕｒｅ（ｗｉｔｈ ＲＯＸ）（北京康為世紀生物科技有限公司、番号ＣＷ０９
５６）キットを用い、ｃＤＮＡをテンプレートとして説明書の手順によりＡＮＧＰＴＬ３
ｍＲＮＡ発現量を検出した。ＡＮＧＰＴＬ３及び内因性参照遺伝子であるＧＡＰＤＨの
増幅のためのＰＣＲプライマーは、表６に示された。
Figure 2023082151000091
ＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡ発現量は、ＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡ発現量＝（試験群ＡＮ
ＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡの発現量／試験群ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡの発現量）／（対照群ＡＮ
ＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡの発現量／対照群ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡの発現量）×１００％とい
う等式により算出された。
ｓｉＲＮＡによるＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡ発現量に対する抑制率は、（１－ＡＮＧＰ
ＴＬ３ ｍＲＮＡ発現量）×１００％である。各試験群は、それぞれ各濃度のｓｉＲＮＡ
で処理されたＨｕｈ７細胞であり、対照群は、ｓｉＲＮＡで処理されていないＨｕｈ７細
胞であった。結果を図３Ａに示した。
図３Ａから分かるように、本開示により提供される修飾ｓｉＲＮＡは、Ｈｕｈ７細胞系
において高い抑制活性を有し、陽性対照ｓｉ６５６９５の活性に相当する。
（実験例２－２）Ｈｕｈ７細胞におけるｓｉＲＮＡ複合体によるＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲ
ＮＡ発現量に対する抑制効率の検出。
被験サンプルが複合体Ｆ１～Ｆ１１であり、複合体の最終濃度（ｓｉＲＮＡの量として
）がそれぞれ５０ｎＭ及び５ｎＭであったこと以外、実験例２－１と同じ方法により検出
した。各複合体の体外での抑制活性を図３Ｂに示した。
図３Ｂから分かるように、本開示により提供されるｓｉＲＮＡ複合体は、Ｈｕｈ７細胞
系において高い抑制活性を有し、５ｎＭの複合体によるＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡ発現量
に対する抑制率が６０～８０％に達した。
（実験例２－３）Ｈｕｈ７細胞におけるｓｉＲＮＡ複合体のＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡ
に対するＩＣ５０の測定。
被験サンプルが複合体Ｆ３、Ｆ４、Ｆ８、Ｆ９であり、複合体の最終濃度（ｓｉＲＮＡ
の量として）が５０ｎＭから、０．０１６ｎＭに５倍ごとに希釈し、最低濃度を０．００
００１ｎＭとし、計７個の濃度であり、１群あたり３個の複製ウェルがあったこと以外、
実験例２－１と同じ方法により検出した。
他の実験において、被験サンプルが複合体２であり、複合体の最終濃度（ｓｉＲＮＡの
量として）が２ｎＭから、０．００７８ｎＭに倍加希釈し、計９個の濃度であり、１群あ
たり２個の複製ウェルがあった。
他の実験において、被験サンプルが複合体１、４、５、７であり、複合体の最終濃度（
ｓｉＲＮＡの量として）が０．５ｎＭから、０．０３１２５ｎＭに倍加希釈し、最高濃度
を５ｎＭとし、計６個の濃度であり、１群あたり２個の複製ウェルがあった。
ｓｉＲＮＡ複合体の異なる濃度で測定されたＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡ発現量に対する
抑制率から、実験例１と同じ方法によりＩＣ５０を算出し、被験複合体の体外Ｈｕｈ７細
胞におけるＩＣ５０値を得た。結果を表７に示した。
Figure 2023082151000092
表７から分かるように、本開示により提供されるｓｉＲＮＡ複合体は、体外細胞系にお
いて非常に高い抑制活性を有し、ＩＣ５０が０．０８５～０．４６２ｎＭにあった。
（実験例３）ｓｉＲＮＡ及びｓｉＲＮＡ複合体の血漿及びリソソームにおける安定性の
検出
（実験例３－１）ｓｉＲＮＡのリソソームにおける安定性の検出。
本実験例では、ｓｉＲＮＡ １、２、４、５、６、７のマウス由来のリソソーム溶解液
における安定性を調べた。
リソソーム溶解液で処理された試験サンプルの調製：６μｌの各ｓｉＲＮＡ（２０μＭ
）をそれぞれ２７．２μＬのクエン酸ナトリウム水溶液（ｐＨ５．０）、４．０８μＬの
脱イオン水及び２．７２μＬのマウス由来のリソソーム溶解液（Ｒａｔ Ｌｉｖｅｒ Ｔ
ｒｉｔｏｓｏｍｅｓ、Ｘｅｎｏｔｅｃｈ社、番号Ｒ０６１０．ＬＴ、ロット番号１６１０
０６９）と均一に混合し、酸性ホスファターゼの最終濃度が０．２ｍＵ／μＬであった。
３７℃で恒温培養した。それぞれ０、１、２、４、６、２４時間でそれぞれ混合液を５μ
ｌ取り出し、１５μＬの９Ｍ尿素溶液に加えて変性させた後、４μｌの６×試料負荷緩衝
液（Ｓｏｌａｒｂｉｏ社、番号２０１６０８３０）を加え、直ちに－８０℃の冷蔵庫に冷
凍して反応を停止させた。０時間は、被験サンプルとリソソーム溶解液を均一に混合した
直後に取り出した時点を表す。
リソソーム溶解液で処理されていない参照サンプルの調製：等モル量のｓｉＲＮＡ（２
０μＭ）を各１．５μｌとり、それぞれ７．５μＬのクエン酸ナトリウム水溶液（ｐＨ５
．０）、１μＬの脱イオン水と均一に混合し、３０μＬの９Ｍ尿素溶液を加えて変性させ
た後、８μＬの６×試料負荷緩衝液を加えて均一に混合し、直ちに－８０℃の冷蔵庫に冷
凍して反応を停止させた。各ｓｉＲＮＡの参照サンプルは、電気泳動図においてＭと記さ
れる。
１６重量％の非変性ポリアクリルアミドゲルを配合し、上記試験サンプル及び参照サン
プルをそれぞれ２０μｌとり、ゲルに負荷し、２０ｍＡの定電流条件で１０ｍｉｎ電気泳
動した後、４０ｍＡの定電流条件で３０ｍｉｎ電気泳動し続けた。電気泳動終了後、ゲル
をシェーカーに放置し、Ｇｅｌｒｅｄ染料（ＢｉｏＴｉｕｍ社、番号１３Ｇ１２０３）で
１０ｍｉｎ染色した。ゲルイメージングを行い観察して撮影し、結果を図４Ａに示した。
図４Ａから分かるように、本開示により提供される修飾ｓｉＲＮＡは、マウス由来のリ
ソソームにおいて少なくとも２４時間安定して存在することができた。
（実験例３－２）ｓｉＲＮＡ複合体のリソソームにおける安定性の検出。
本実験例では、複合体１、４、５、７のマウス由来のリソソーム溶解液における安定性
を調べた。
被験サンプルが複合体１、４、５、７であり、複合体の濃度をｓｉＲＮＡの量として計
算され、検出時点が０時間、５分間、１５分間、３０分間、１時間、２時間、４時間、６
時間であったこと以外、実験例３－１と同じ方法により検出した。ゲルイメージングを図
４Ｂに示した。
図４Ｂから分かるように、本開示により提供されるｓｉＲＮＡ複合体は、マウス由来の
リソソームにおいて少なくとも１時間維持して分解されず、その後電気泳動における主バ
ンドは、下へわずかにシフトしたに過ぎず、対応するｓｉＲＮＡのリソソーム溶解液にお
ける高度な安定性に鑑みて、バンドシフトは、複合基において単糖の開裂である可能性が
あることが示唆され、本開示のｓｉＲＮＡ複合体は、満足できる安定性を示した。
（実験例３－３）ｓｉＲＮＡ複合体の血漿における安定性の検出。
本実験例では、複合体１、４、５、７のヒト血漿における安定性を調べた。
複合体１、４、５、７及び対照ｓｉＲＮＡ ８（ｓｉＲＮＡ又はｓｉＲＮＡ複合体の濃
度がいずれも２０μＭ、１２μｌであり、複合体をｓｉＲＮＡの量として計算された）を
それぞれ１０８μＬの９０％ヒト血漿（Ｈｕｍａｎ ｐｌａｓｍａ、ＰＢＳで希釈）と均
一に混合した。３７℃で恒温培養した。それぞれ０、２、４、６、８、２４、４８、７２
時間で１０μＬのサンプルを取り出し、直ちに液体窒素により急速冷凍し、－８０℃の冷
蔵庫に冷凍して保存した。各時点でサンプリングした後、１×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で５
倍希釈した後で各サンプルを１０μＬずつとり、同時に、等モル量のｓｉＲＮＡ（２μＭ
、２μｌ）又はｓｉＲＮＡ複合体（ｓｉＲＮＡ濃度が２μＭ、２μｌであった）をとり、
８μｌの１×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）と均一に混合し、ヒト血漿で処理されていない１０μ
Ｌのサンプルとして調製し、Ｍと記す。
２０重量％の非変性ポリアクリルアミドゲルを配合し、上記サンプルと４μｌの試料負
荷緩衝液（２０ｍＭのＥＤＴＡ、３６重量％グリセリン、０．０６重量％プロムフェノー
ルブルー）を均一に混合した後、ゲルに負荷し、８０ｍＡの定電流条件で６０分間程度電
気泳動した。電気泳動終了後、ゲルをシェーカーに放置し、１×Ｓｙｂｒ Ｇｏｌｄ染料
（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｔ．１１４９４）で１５分間染色した。ゲルイメージング
を行い観察して撮影し、結果を図４Ｃに示した。
図４Ｃから分かるように、本開示により提供されるｓｉＲＮＡ複合体は、ヒト血漿にお
いて７２ｈまでも分解されておらず、優れたヒト血漿における安定性を示した。
他の実験において、上記と同じ方法により複合体１、４、５、７のサル血漿（Ｍｏｎｋ
ｅｙ ｐｌａｓｍａ、鴻泉生物から購入、ＨＱ７００８２、ＰＢＳで希釈）における安定
性を検出した。結果を図４Ｄに示した。
結果から明らかなように、本開示により提供されるｓｉＲＮＡ複合体は、ヒト血漿及び
サル血漿のいずれにおいても少なくとも７２時間安定して存在することができ、優れた安
定性を示した。
（実験例４）マウス体内におけるｓｉＲＮＡ複合体によるＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡ発
現量に対する抑制効率の検出、及び脂質に対する抑制効果の検出。
（実験例４－１） 正常マウスｃ５７体内におけるｓｉＲＮＡ複合体のＡＮＧＰＴＬ３
ｍＲＮＡに対するＥＤ５０の測定。
本実験例では、正常マウスｃ５７体内における複合体Ｆ３、Ｆ４、Ｆ８、Ｆ９の抑制活
性を調べた。
６～８週齢の正常マウスｃ５７を５匹／群でランダムに分け、それぞれ各群のマウスに
複合体Ｆ３、Ｆ４、Ｆ８、Ｆ９及びＰＢＳを投与した。全ての動物について、体重に応じ
て投与量を算出し、皮下注射により単回投与し、各ｓｉＲＮＡ複合体の用量（ｓｉＲＮＡ
の量として）がそれぞれ１０ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋ
ｇ、０．１ｍｇ／ｋｇであり、複合体Ｆ３の最低用量が０．００５ｍｇ／ｋｇであり、複
合体Ｆ４及びＦ９の最低用量が０．００３ｍｇ／ｋｇであり、複合体Ｆ８の最低用量が０
．０１ｍｇ／ｋｇであり、各試験群につき、計６つの用量であり、投与体積が１０ｍＬ／
ｋｇであった。各ｓｉＲＮＡ複合体は、それぞれＰＢＳ水溶液として提供され、用量と投
与体積により、複合体について設定すべき薬物濃度を換算した。薬剤投与後３日にマウス
を死亡させ、肝臓を回収し、ＲＮＡ ｌａｔｅｒ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ社）で保
存し、その後、組織ホモジナイザーで肝組織をホモジナイズし、さらにＴｒｉｚｏｌ（Ｔ
ｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ社）で全ＲＮＡ抽出の標準操作手順により抽出して肝組織の全
ＲＮＡを得た。
蛍光定量的リアルタイムＰＣＲにより肝組織におけるＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡの発現
量を検出した。具体的には、逆転写キット（Ｐｒｏｍｅｇａ社、番号Ａ３５００）を用い
てその説明書の操作方法により逆転写してｃＤＮＡを得た。２×Ｕｌｔｒａ ＳＹＢＲ
Ｍｉｘｔｕｒｅ（ｗｉｔｈ ＲＯＸ）（北京康為世紀生物科技有限公司、番号ＣＷ０９５
６）キットを用い、ｃＤＮＡをテンプレートとして説明書の手順によりＡＮＧＰＴＬ３
ｍＲＮＡ発現量を検出した。ＡＮＧＰＴＬ３及び内因性参照遺伝子であるＧＡＰＤＨの増
幅のためのＰＣＲプライマーを表８に示した。
Figure 2023082151000093
肝臓におけるＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡの発現量及び複合体によるＡＮＧＰＴＬ３ ｍ
ＲＮＡに対する抑制率の算出は、実験例２－１と同じであった。また、対照群は、本実験
においてＰＢＳが施された対照群マウスであり、各試験群は、それぞれ異なるｓｉＲＮＡ
複合体が施された投与群マウスであった。
ｓｉＲＮＡ複合体の異なる濃度で測定されたＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡ発現量に対する
抑制率から、実験例１と同じ方法によりＥＤ５０を算出したところ、被験複合体の正常マ
ウス体内におけるＥＤ５０値を得た。結果を表９に示した。
Figure 2023082151000094
表９から分かるように、試験複合体の正常マウス体内における抑制活性は、実験例２－
３において対応する複合体の体外細胞系における抑制活性と高度に一致しており、ＥＤ５
０が０．１４０３～０．４２５８ｎＭにあり、本開示により提供されるｓｉＲＮＡ複合体
は、正常マウス体内において非常に高い抑制活性を有することが示された。
（実験例４－２）正常マウスＢＡＬＢ／ｃ体内におけるｓｉＲＮＡ複合体によるＡＮＧ
ＰＴＬ３ ｍＲＮＡ発現量に対する抑制効率及び脂質に対する影響
本実験例では、複合体Ｆ４、Ｆ１２、Ｆ１３による正常マウスＢＡＬＢ／ｃ体内におけ
る肝臓組織中のＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡに対する抑制率及び脂質に対する影響を調べた
。
６～８週齢の正常マウスＢＡＬＢ／ｃを１０匹／群でランダムに分け、それぞれ各群の
マウスに複合体Ｆ４、Ｆ１２、Ｆ１３、比較複合体２及びＰＢＳを投与した。全ての動物
について、体重に応じて投与量を算出し、皮下注射により単回投与し、ｓｉＲＮＡ複合体
の用量（ｓｉＲＮＡの量として）が３ｍｇ／ｋｇ（３ｍｐｋとも記す）及び０．３ｍｇ／
ｋｇ（０．３ｍｐｋとも記す）の２つの用量群であり、投与体積が１０ｍＬ／ｋｇであっ
た。各ｓｉＲＮＡ複合体は、それぞれＰＢＳ水溶液として提供され、用量と投与体積によ
り、複合体について設定すべき薬物濃度を換算した。薬剤投与前及び薬剤投与後７日目と
１４日目に動物に対して眼窩静脈採血を行い、各時点で血清脂質レベルを検出した。薬剤
投与後７日目と１４日目にそれぞれ５匹のマウスを死亡させ、肝臓を回収し、肝臓におけ
るＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡの発現量を検出した。
１回あたり約１００μＬで眼窩静脈採血を行い、遠心して血清を得、さらにＰＭ１Ｐ０
００／３全自動血清生化学分析装置（ＳＡＢＡ、イタリア）を用いて血清における総コレ
ステロール（ＣＨＯ）及びトリグリセリド（ＴＧ）の含有量を検出した。
標準化された脂質レベル＝（薬剤投与後の試験群における脂質の含有量／薬剤投与前の
試験群における脂質の含有量）×１００％。
脂質レベルの抑制率＝（１－薬剤投与後の試験群における脂質の含有量／薬剤投与前の
試験群における脂質の含有量）×１００％。脂質は、総コレステロール又はトリグリセリ
ドを指す。
薬剤投与後７日目のマウスの脂質の含有量を図５Ａ～５Ｂに示し、薬剤投与後１４日目
のマウスの脂質の含有量を図５Ｃ～５Ｄに示した。
図５Ａ～５Ｄから分かるように、試験されたｓｉＲＮＡ複合体により正常マウスの脂質
レベルを顕著に低下させることができ、薬剤投与後１４日に、３ｍｇ／ｋｇの本開示のｓ
ｉＲＮＡ複合体による脂質を低下させる能力は、陽性対照（比較複合体２）よりも強くな
った。
実験例４－１と同じ方法により、蛍光定量的リアルタイムＰＣＲによりｓｉＲＮＡ複合
体による肝ＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡ発現量に対する抑制効率を検出した。結果を表１０
に示した。
Figure 2023082151000095
他の実験において、投与された複合体が複合体１、４、５、７及び比較複合体２であり
、検出時間が薬剤投与後の１４日目と２８日目であったこと以外、上記と同じ方法により
マウスの脂質及びＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡ発現量を検出した。各複合体によるＡＮＧＰ
ＴＬ３ ｍＲＮＡに対する抑制効果を図６Ａ～６Ｄに示し、脂質に対する抑制効果を図７
Ａ～７Ｄに示した。
図６Ａ～６Ｄから分かるように、薬剤投与後１４日目に、高用量での本開示により提供
されるｓｉＲＮＡ複合体によるＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡに対する抑制率が９５％以上と
高く、その抑制強度は明らかに比較複合体２よりも優れていた。低用量の本開示のｓｉＲ
ＮＡ複合体、及び観察時間を薬剤投与後２８日目まで延長した結果について、試験された
ｓｉＲＮＡ複合体は、いずれも正常マウスの肝組織ＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡに対する強
い抑制作用を示し、かつ、その抑制強度が明らかに比較複合体よりも高くなった。
図７Ａ～７Ｄから分かるように、本開示のｓｉＲＮＡ複合体で治療されたマウス血清に
おけるＣＨＯとＴＧの含有量が明らかに低下し、かつ、少なくとも２８日に依然として一
定の脂質低下効果を示した。３ｍｇ／ｋｇの本開示のｓｉＲＮＡ複合体による脂質を低下
させる能力は、陽性対照（比較複合体２）よりも強くなった。
（実験例４－３）肥満マウス体内におけるｓｉＲＮＡ複合体によるＡＮＧＰＴＬ３ ｍ
ＲＮＡ発現量に対する抑制効率及び脂質に対する影響
本実験例では、ｏｂ／ｏｂマウス体内における複合体Ｆ２、Ｆ４による肝臓組織中のＡ
ＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡに対する抑制率及び脂質に対する影響を調べた。
６～８週齢のｏｂ／ｏｂマウスを６匹／群とし、投与された複合体が複合体Ｆ２、Ｆ４
であり、用量が３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇであり、採血時点が薬剤
投与前２日（－２日と記す）及び薬剤投与後７、１４、２１、２８、３４日目であり、３
４日目にマウスを死亡させたこと以外、実験例４－２と同じ方法によりｏｂ／ｏｂマウス
の脂質及びＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡ発現量を検出した。脂質検出結果を標準化処理し、
算出方法は、実験例４－２と同じであった。
複合体Ｆ４による脂質に対する抑制効果を図８Ａ～８Ｂに示し、ＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲ
ＮＡに対する抑制効果を図８Ｃに示し、複合体Ｆ２による脂質に対する抑制効果を図９Ａ
～９Ｂに示し、ＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡに対する抑制効果を図９Ｃに示した。
図から分かるように、本開示のｓｉＲＮＡ複合体で治療されたマウス血清におけるＣＨ
ＯとＴＧの含有量が明らかに低下し、かつ、少なくとも３４日に依然として一定の脂質低
下効果を示した。同時に、薬剤投与後３４日目に、各ｓｉＲＮＡ複合体は、依然としてＡ
ＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡの発現を効率的に抑制することができた。
（実験例４－４）高脂血症モデルマウス体内におけるｓｉＲＮＡ複合体による脂質に対
する影響
本実験例では、ヒトＡＰＯＣ３トランスジェニックマウス体内における複合体１による
肝臓組織中のＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡに対する抑制率及び脂質に対する影響を調べた。
ヒトＡＰＯＣ３トランスジェニックマウスＴｇ（ＡＰＯＣ３）３７０７Ｂｒｅを血清Ｔ
Ｇの含有量＞２ｍｍｏｌ／Ｌで６匹／群でランダムに分け、それぞれ各群のマウスに複合
体１、比較複合体１及びブランク対照のＰＢＳを投与した。全ての動物について、体重に
応じて投与量を算出し、皮下注射により単回投与し、ｓｉＲＮＡ複合体の用量（ｓｉＲＮ
Ａの量として）が３ｍｇ／ｋｇ及び１ｍｇ／ｋｇであり、体積が５ｍｌ／ｋｇであった。
各ｓｉＲＮＡ複合体は、それぞれＰＢＳ水溶液として提供され、用量と投与体積により、
複合体について設定すべき濃度を換算した。薬剤投与前（－１日と記す）と薬剤投与後７
、１４、２１、２８、３５、５６、７０、８４、９８、１１２、１２６、１４０、１５４
、１６８日目にマウスに対して眼窩静脈叢採血を行い、実験例４－３と同じ方法により各
時点での脂質レベルを検出した。結果を図１０Ａと１０Ｂに示した。
図１０Ａと１０Ｂから分かるように、薬剤投与後の異なる時点で、ＰＢＳブランク対照
群及び比較複合体１陰性対照群は、脂質に対していかなる抑制作用も示していないのに対
して、複合体１によりＴＧ及びＣＨＯを明らかに低下させることができ、ＴＧについては
、高用量群の最大抑制率が薬剤投与後７日目に現れ、９２．９％であり、低用量群の最大
抑制率が薬剤投与後２１日目に現れ、７９．１％であった。高用量群については、単回薬
剤投与後１５４日間と長期間にわたって、ＴＧに対する抑制率が常に５５％以上に維持さ
れ、低用量群については、単回薬剤投与後９８日間と長期間にわたり、ＴＧに対する抑制
率が常に５５％以上に維持された。また、ＣＨＯについては、高用量群の最大抑制率が薬
剤投与後１４日目に現れ、８２．９％であり、低用量群の最大抑制率が薬剤投与後１４日
目に現れ、６５．９％であった。高用量群については、単回薬剤投与後１５４日間と長期
間にわたり、ＣＨＯに対する抑制率が常に４０％以上に維持され、低用量群については、
単回薬剤投与後５６日間と長期間にわたり、ＣＨＯに対する抑制率が常に４０％以上に維
持された。図１０Ａと１０Ｂにより、複合体１を単回投与してから１６８日間で脂質レベ
ルを持続的、安定的且つ効率よく低下させることができることが明らかになった。
他の実験において、投与された複合体が複合体２及び比較複合体２であり、薬剤投与後
７０日目まで脂質検出を継続したこと以外、上記と同じ実験方法を採用した。その結果を
図１１Ａ～１１Ｄに示した。
図１１Ａと１１Ｂには、薬剤投与後の異なる時点で、２つの用量での複合体２によるＣ
ＨＯに対する抑制効果が示された。高用量群については、単回薬剤投与後２１日目に、Ｃ
ＨＯの最大抑制率が７４．３％に達し、薬剤投与後７０日間と長期間にわたり、ＣＨＯの
抑制率が常に５０％以上に維持された。また、低用量群については、ＣＨＯの最大抑制率
が薬剤投与後１４日目に現れ、５９．５％であった。
図１１Ｃ及び１１Ｄには、薬剤投与後の異なる時点で、２つの用量での複合体２による
ＴＧに対する抑制効果が示された。高用量群については、単回薬剤投与後１４日目に、Ｔ
Ｇの最大抑制率が９６．３％に達し、薬剤投与後７０日間と長期間にわたり、ＴＧの抑制
率が常に７０％以上に維持された。また、低用量群については、ＴＧの最大抑制率が薬剤
投与後１４日目に現れ、７５．３％であった。
図１１Ａ～１１Ｄから分かるように、複合体２は、単回投与後の７０日間で脂質レベル
を低下させ続けることができ、明らかに同じ用量での比較複合体２よりも優れていた。
（実験例５）非ヒト霊長類の体内におけるｓｉＲＮＡ複合体によるＡＮＧＰＴＬ３ ｍ
ＲＮＡ発現量に対する抑制効率の検出、及び脂質に対する抑制効果の検出。
メタボリックシンドロームのサル１２匹（全て雄性）をランダムに分け、そのうちの８
匹に複合体２を投与し、４匹に比較複合体１を投与した。各ｓｉＲＮＡ複合体をそれぞれ
注射用生理塩水で溶解させ、薬物濃度（ｓｉＲＮＡの量として）が１００ｍｇ／ｍｌであ
った。全ての動物について、体重に応じて投与量を算出し、皮下注射により単回投与し、
用量がいずれも９ｍｇ／ｋｇであり、注射量が０．０９ｍｌ／ｋｇであり、各注射点が２
ｍｌ以下であった。
薬剤投与前の３週間に、週に１回静脈採血し、脂質、肝機能、定期血液検査等の指標を
検出した。薬剤投与後の７、１４、２１、２８、３５日目にそれぞれ再び上記各項の指標
を検出した。脂質検出結果を標準化処理し、算出方法は、実験例４－２と同じであった。
薬剤投与前の脂質の含有量は、薬剤投与前の３週間の脂質の含有量の平均値であり、０日
目（Ｄ０）の基準データと記す。脂質抑制効果を図１２Ａ～１２Ｂに示した。
図１２Ａ～１２Ｂから、単回薬剤投与後２８日目に、薬剤投与前に対して、複合体２に
よるＴＧに対する最大抑制率が６８％に達し、ＣＨＯに対する最大抑制率が３０％に達し
たことが示された。
投与当日（薬剤投与前と記す）及び薬剤投与後２８日目（薬剤投与後と記す）に肝穿刺
生検を行うことにより、肝臓組織ＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡ発現量を検出した。蛍光定量
的リアルタイムＰＣＲの検出方法では、検出プライマーが異なること以外、実験例４－１
と同じであった。用いられたプライマー配列を表１１に示した。ＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮ
Ａ抑制率を図１２Ｃに示した。
Figure 2023082151000096
図１２Ｃから、単回投与２８日後、薬剤投与前に対して、複合体２によるＡＮＧＰＴＬ
３ ｍＲＮＡに対する抑制率が８３％と高かったことが示された。
薬剤投与後の各時点で他の指標を検出したところ、血小板、アラニンアミノトランスフ
ェラーゼ、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼの異常変化が認められておらず、複
合体２が比較的安全であり、明らかな毒性副作用が認められなかったことが示された。
図１２Ａ～１２Ｃから分かるように、複合体２は、非ヒト霊長類において明らかな脂質
低下及びＡＮＧＰＴＬ３遺伝子発現抑制効果を示すとともに、比較的安全性を示した。
上記結果から明らかなように、本開示により提供されるｓｉＲＮＡ及び複合体は、肝臓
におけるＡＮＧＰＴＬ３ ｍＲＮＡの発現を効率的に低下させ、血中総コレステロール、
トリグリセリドの含有量を低下させることができ、脂質異常を予防及び／又は治療するこ
とができ、臨床への応用という将来性がある。
以上に本開示のいくつかの実施形態を詳しく記載したが、本開示は、上記実施形態の具
体的な細部に限定されず、本開示の技術的思想の範囲で、本開示の技術的解決手段に対し
て複数種の簡単な変形をすることができ、これらの簡単な変形は、いずれも本開示の保護
範囲に属する。
このほかに説明すべきこととして、上記いくつかの実施形態に記載された各具体的な技
術的特徴は、矛盾がない場合、任意の適切な方法により組み合わせることができ、不必要
な重複を避けるために、本開示では各種の可能な組合せ方法を別途説明しない。
また、本開示の各種の異なる実施形態は任意に組み合わせることもでき、本開示の精神
から逸脱しない限り、その組み合わせも同様に、本開示に開示された内容とみなすべきで
ある。

Claims (29)

  1. ｓｉＲＮＡ及び該ｓｉＲＮＡに複合された複合基を含む、ｓｉＲＮＡ複合体であって、
    前記ｓｉＲＮＡがセンス鎖と、アンチセンス鎖とを含み、前記ｓｉＲＮＡの各ヌクレオチドがそれぞれ独立して修飾又は未修飾のヌクレオチドであり、
    前記センス鎖はヌクレオチド配列Ｉを含み、アンチセンス鎖はヌクレオチド配列ＩＩを含み、前記ヌクレオチド配列Ｉと前記ヌクレオチド配列ＩＩとが、逆相補的に二本鎖領域を形成し、前記ヌクレオチド配列Ｉは、５’－ＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＡＡＣＵＺＡ－３’（配列番号３）のヌクレオチド配列を含み、前記ヌクレオチド配列ＩＩは、５’－Ｚ’ＢＡＧＵＵＣＵＵＧＧＵＧＣＵＣＵＵＧＧ－３’（配列番号４）のヌクレオチド配列を含み、
    ＺＡはＡ、Ｕ、Ｇ又はＣから選択され、
    Ｚ’Ｂはアンチセンス鎖の５’末端の最初のヌクレオチドであって、ＺＡと相補的であり、且つ、前記センス鎖とアンチセンス鎖とは、長さが同じか又は異なり、前記センス鎖の長さが１９～２３ヌクレオチドであり、アンチセンス鎖の長さが２０～２６ヌクレオチドである、ｓｉＲＮＡ複合体。
  2. 前記ヌクレオチド配列Ｉがヌクレオチド配列ＩＩＩをさらに含み、前記ヌクレオチド配列ＩＩがヌクレオチド配列ＩＶをさらに含み、ヌクレオチド配列ＩＩＩとヌクレオチド配列ＩＶの長さがそれぞれ独立して１～４ヌクレオチドであり、前記ヌクレオチド配列ＩＩＩが配列番号３のヌクレオチド配列の５’末端に結合され、ヌクレオチド配列ＩＶが配列番号４のヌクレオチド配列の３’末端に結合され、前記ヌクレオチド配列ＩＩＩと前記ヌクレオチド配列ＩＶは、長さが等しく、逆相補的である、請求項１に記載のｓｉＲＮＡ複合体。
  3. 前記ヌクレオチド配列ＩＩＩとＩＶは、長さがいずれも１ヌクレオチドであり、前記ヌクレオチド配列ＩＩＩの塩基がＧである、
    或いは、前記ヌクレオチド配列ＩＩＩとＩＶは、長さがいずれも２ヌクレオチドであり、５’末端から３’末端に向かって、ヌクレオチド配列ＩＩＩの塩基配列がＡＧである、
    或いは、前記ヌクレオチド配列ＩＩＩとＩＶは、長さがいずれも３ヌクレオチドであり、５’末端から３’末端に向かって、ヌクレオチド配列ＩＩＩの塩基配列がＡＡＧである、
    或いは、前記ヌクレオチド配列ＩＩＩとＩＶは、長さがいずれも４ヌクレオチドであり、５’末端から３’末端に向かって、ヌクレオチド配列ＩＩＩの塩基配列がＣＡＡＧである、請求項２に記載のｓｉＲＮＡ複合体。
  4. 前記ヌクレオチド配列ＩＩがヌクレオチド配列Ｖをさらに含み、ヌクレオチド配列Ｖは、長さが１～３ヌクレオチドであり、前記アンチセンス鎖の３’末端に結合され、アンチセンス鎖の３’オーバーハング末端を構成する、請求項１に記載のｓｉＲＮＡ複合体。
  5. 前記ヌクレオチド配列Ｖの長さが２ヌクレオチドであり、かつ
    前記ヌクレオチド配列Ｖが、連続した２個のチミンデオキシリボヌクレオチド又は連続した２個のウラシルリボヌクレオチドである、又は、前記ヌクレオチド配列Ｖが、標的ｍＲＮＡの対応する位置のヌクレオチドと相補的である、請求項４に記載のｓｉＲＮＡ複合体。
  6. 前記ｓｉＲＮＡのセンス鎖が配列番号３に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号５に示されるヌクレオチド配列を含み、
    ５’－ＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＡＡＣＵＺＡ－３’（配列番号３）、
    ５’－Ｚ’ＢＡＧＵＵＣＵＵＧＧＵＧＣＵＣＵＵＧＧＣＵ－３’（配列番号５）、
    或いは、前記ｓｉＲＮＡのセンス鎖が配列番号６に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号７に示されるヌクレオチド配列を含み、
    ５’－ＡＧＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＡＡＣＵＺＡ－３’（配列番号６）、
    ５’－Ｚ’ＢＡＧＵＵＣＵＵＧＧＵＧＣＵＣＵＵＧＧＣＵＵＧ－３’（配列番号７）、
    ただし、前記Ｚ’Ｂはアンチセンス鎖の５’末端の１番目のヌクレオチドであり、ＺＡはＡ、Ｕ、Ｇ又はＣから選択され、Ｚ’ＢはＺＡと相補的なヌクレオチドである、請求項１に記載のｓｉＲＮＡ複合体。
  7. 前記ｓｉＲＮＡが、ｓｉＡＮ１又はｓｉＡＮ２である、請求項１に記載のｓｉＲＮＡ複合体：
    ｓｉＡＮ１
    センス鎖：５’－ＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＡＡＣＵＡ－３’（配列番号８）及びアンチセンス鎖：５’－ＵＡＧＵＵＣＵＵＧＧＵＧＣＵＣＵＵＧＧＣＵ－３’（配列番号９）；
    ｓｉＡＮ２
    センス鎖：５’－ＡＧＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＡＧＡＡＣＵＡ－３’（配列番号１０）及びアンチセンス鎖：５’－ＵＡＧＵＵＣＵＵＧＧＵＧＣＵＣＵＵＧＧＣＵＵＧ－３’
    （配列番号１１）。
  8. 前記センス鎖と前記アンチセンス鎖における各ヌクレオチドが、独立してフルオロ修飾ヌクレオチド又は非フルオロ修飾ヌクレオチドであり、
    前記フルオロ修飾ヌクレオチドが配列番号３のヌクレオチド配列及び配列番号４のヌクレオチド配列に位置し、
    ５’末端から３’末端に向かって、前記配列番号３のヌクレオチド配列の第７、８、９位のヌクレオチドがフルオロ修飾ヌクレオチドであり、かつ
    ５’末端から３’末端に向かって、前記配列番号４のヌクレオチド配列の第２、６、１４、１６位のヌクレオチドがフルオロ修飾ヌクレオチドである、請求項１に記載のｓｉＲＮＡ複合体。
  9. 各非フルオロ修飾ヌクレオチドが、いずれもメトキシ修飾ヌクレオチドであり、前記メトキシ修飾ヌクレオチドが、リボース基の２’－ヒドロキシ基がメトキシで置換されたヌクレオチドを指す、請求項８に記載のｓｉＲＮＡ複合体。
  10. ５’末端から３’末端に向かって、前記ｓｉＲＮＡのセンス鎖における配列番号３のヌクレオチド配列の第５、７、８及び９位のヌクレオチドがフルオロ修飾ヌクレオチドであり、ｓｉＲＮＡのセンス鎖の残りの位置のヌクレオチドがメトキシ修飾ヌクレオチドであり、５’末端から３’末端に向かって、前記ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖における配列番号４のヌクレオチド配列の第２、６、８、９、１４及び１６位のヌクレオチドがフルオロ修飾ヌクレオチドであり、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖の残りの位置のヌクレオチドがメトキシ修飾ヌクレオチドである、或いは、
    ５’末端から３’末端に向かって、前記ｓｉＲＮＡのセンス鎖における配列番号３のヌクレオチド配列の第５、７、８及び９位のヌクレオチドがフルオロ修飾ヌクレオチドであり、ｓｉＲＮＡのセンス鎖の残りの位置のヌクレオチドがメトキシ修飾ヌクレオチドであり、５’末端から３’末端に向かって、前記ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖における配列番号４のヌクレオチド配列の第２、６、１４及び１６位のヌクレオチドがフルオロ修飾ヌクレオチドであり、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖の残りの位置のヌクレオチドがメトキシ修飾ヌクレオチドである、
    或いは、５’末端から３’末端に向かって、前記ｓｉＲＮＡのセンス鎖における配列番号３のヌクレオチド配列の第７、８及び９位のヌクレオチドがフルオロ修飾ヌクレオチドであり、ｓｉＲＮＡのセンス鎖の残りの位置のヌクレオチドがメトキシ修飾ヌクレオチドであり、５’末端から３’末端に向かって、前記ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖における配列番号４のヌクレオチド配列の第２、６、１４及び１６位のヌクレオチドがフルオロ修飾ヌクレオチドであり、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖の残りの位置のヌクレオチドがメトキシ修飾ヌクレオチドである、請求項９に記載のｓｉＲＮＡ複合体。
  11. 前記ｓｉＲＮＡがｓｉＡＮ１－Ｍ１、ｓｉＡＮ２－Ｍ１、ｓｉＡＮ１－Ｍ２、ｓｉＡＮ２－Ｍ２、ｓｉＡＮ１－Ｍ３、またはｓｉＡＮ２－Ｍ３のいずれか１つであり、
    ｓｉＡＮ１－Ｍ１：
    センス鎖：５’－ＣｍＣｍＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号１２）、
    アンチセンス鎖：５’－ＵｍＡｆＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｆＧｆＧｍＵｍＧｍＣｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍ－３’（配列番号１３）、
    ｓｉＡＮ２－Ｍ１：
    センス鎖：５’－ＡｍＧｍＣｍＣｍＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号１４）、
    アンチセンス鎖：５’－ＵｍＡｆＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｆＧｆＧｍＵｍＧｍＣｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍＵｍＧｍ－３’（配列番号１５）、
    ｓｉＡＮ１－Ｍ２：
    センス鎖：５’－ＣｍＣｍＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号１２）、
    アンチセンス鎖：５’－ＵｍＡｆＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧｍＣｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍ－３’（配列番号１６）、
    ｓｉＡＮ２－Ｍ２：
    センス鎖：５’－ＡｍＧｍＣｍＣｍＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号１４）、
    アンチセンス鎖：５’－ＵｍＡｆＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧｍＣｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍＵｍＧｍ－３’（配列番号１７）、
    ｓｉＡＮ１－Ｍ３：
    センス鎖：５’－ＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号１８）、
    アンチセンス鎖：５’－ＵｍＡｆＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧｍＣｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍ－３’（配列番号１６）、
    ｓｉＡＮ２－Ｍ３：
    センス鎖：５’－ＡｍＧｍＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号１９）、
    アンチセンス鎖：５’－ＵｍＡｆＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧｍＣｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍＵｍＧｍ－３’（配列番号１７）
    ただし、大文字Ｃ、Ｇ、Ｕ、Ａはヌクレオチドの塩基配列を表し、小文字ｍは、当該文字ｍの左側に隣接する１つのヌクレオチドがメトキシ修飾ヌクレオチドであることを表し、小文字ｆは、当該文字ｆの左側に隣接する１つのヌクレオチドがフルオロ修飾ヌクレオチドであることを表す、請求項１に記載のｓｉＲＮＡ複合体。
  12. 前記ｓｉＲＮＡにおいて、少なくとも１つのリン酸エステル基がチオリン酸エステル基であり、該チオリン酸エステル基が、
    前記センス鎖の５’末端から１番目のヌクレオチドと２番目のヌクレオチドとの間、
    前記センス鎖の５’末端から２番目のヌクレオチドと３番目のヌクレオチドとの間、
    前記センス鎖の３’末端から１番目のヌクレオチドと２番目のヌクレオチドとの間、
    前記センス鎖の３’末端から２番目のヌクレオチドと３番目のヌクレオチドとの間、
    前記アンチセンス鎖の５’末端から１番目のヌクレオチドと２番目のヌクレオチドとの間、
    前記アンチセンス鎖の５’末端から２番目のヌクレオチドと３番目のヌクレオチドとの間、
    前記アンチセンス鎖の３’末端から１番目のヌクレオチドと２番目のヌクレオチドとの間、及び
    前記アンチセンス鎖の３’末端から２番目のヌクレオチドと３番目のヌクレオチドとの間からなる群より選ばれる少なくとも１つに結合されて存在する、請求項１に記載のｓｉＲＮＡ複合体。
  13. 前記ｓｉＲＮＡが、ｓｉＡＮ１－Ｍ１Ｓ、ｓｉＡＮ２－Ｍ１Ｓ、ｓｉＡＮ１－Ｍ２Ｓ、ｓｉＡＮ２－Ｍ２Ｓ、ｓｉＡＮ１－Ｍ３Ｓ、またはｓｉＡＮ２－Ｍ３Ｓのいずれか１つであり、
    ｓｉＡＮ１－Ｍ１Ｓ：
    センス鎖：５’－ＣｍｓＣｍｓＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号２０）、
    アンチセンス鎖：５’－ＵｍｓＡｆｓＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｆＧｆＧｍＵｍＧｍＣｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍｓＣｍｓＵｍ－３’（配列番号２１）、
    ｓｉＡＮ２－Ｍ１Ｓ：
    センス鎖：５’－ＡｍｓＧｍｓＣｍＣｍＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号２２）、
    アンチセンス鎖：５’－ＵｍｓＡｆｓＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｆＧｆＧｍＵｍＧｍＣｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍｓＵｍｓＧｍ－３’（配列番号２３）、
    ｓｉＡＮ１－Ｍ２Ｓ：
    センス鎖：５’－ＣｍｓＣｍｓＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号２０）、
    アンチセンス鎖：５’－ＵｍｓＡｆｓＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧｍＣｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍｓＣｍｓＵｍ－３’（配列番号２４）、
    ｓｉＡＮ２－Ｍ２Ｓ：
    センス鎖：５’－ＡｍｓＧｍｓＣｍＣｍＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号２２）、
    アンチセンス鎖：５’－ＵｍｓＡｆｓＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧｍＣｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍｓＵｍｓＧｍ－３’（配列番号２５）、
    ｓｉＡＮ１－Ｍ３Ｓ：
    センス鎖：５’－ＣｍｓＣｍｓＡｍＡｍＧｍＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号２６）、
    アンチセンス鎖：５’－ＵｍｓＡｆｓＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧｍＣｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍｓＣｍｓＵｍ－３’（配列番号２４）、
    ｓｉＡＮ２－Ｍ３Ｓ：
    センス鎖：５’－ＡｍｓＧｍｓＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号２７）、
    アンチセンス鎖：５’－ＵｍｓＡｆｓＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧｍＣｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍｓＵｍｓＧｍ－３’（配列番号２５）
    ただし、大文字Ｃ、Ｇ、Ｕ、Ａはヌクレオチドの塩基配列を表し、小文字ｍは、当該文字ｍの左側に隣接する１つのヌクレオチドがメトキシ修飾ヌクレオチドであることを表し、小文字ｆは、当該文字ｆの左側に隣接する１つのヌクレオチドがフルオロ修飾ヌクレオチドであることを表し、小文字ｓは、当該文字の左右２ヌクレオチド間がチオリン酸エステル基により結合されていることを表す、請求項１に記載のｓｉＲＮＡ複合体。
  14. 前記アンチセンス鎖の５’末端のヌクレオチドが、５’－リン酸ヌクレオチド又は５’－リン酸アナログ修飾ヌクレオチドである、又は、
    前記５’－リン酸ヌクレオチドが、式（２）に示される構造を有するヌクレオチドであり、前記５’－リン酸アナログ修飾ヌクレオチドが、式（３）～式（６）のいずれか１つに示す構造のヌクレオチドから選択され、
    Figure 2023082151000097
     ただし、ＲはＨ、ＯＨ、メトキシ基又はフッ素から選択され、ＢａｓｅはＡ、Ｕ、Ｃ、Ｇ又はＴから選択される塩基を表す、請求項１に記載のｓｉＲＮＡ複合体。
  15. 前記ｓｉＲＮＡがｓｉＡＮ１－Ｍ１Ｐ１、ｓｉＡＮ２－Ｍ１Ｐ１、ｓｉＡＮ１－Ｍ２Ｐ１、ｓｉＡＮ２－Ｍ２Ｐ１、ｓｉＡＮ１－Ｍ３Ｐ１、ｓｉＡＮ２－Ｍ３Ｐ１、ｓｉＡＮ１－Ｍ１ＳＰ１、ｓｉＡＮ２－Ｍ１ＳＰ１、ｓｉＡＮ１－Ｍ２ＳＰ１、ｓｉＡＮ２－Ｍ２ＳＰ１、ｓｉＡＮ１－Ｍ３ＳＰ１、またはｓｉＡＮ２－Ｍ３ＳＰ１のいずれか１つであり、
    ｓｉＡＮ１－Ｍ１Ｐ１：
    センス鎖：５’－ＣｍＣｍＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号１２）、
    アンチセンス鎖：５’－Ｐ１－ＵｍＡｆＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｆＧｆＧｍＵｍＧｍＣｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍ－３’（配列番号２８）、
    ｓｉＡＮ２－Ｍ１Ｐ１：
    センス鎖：５’－ＡｍＧｍＣｍＣｍＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号１４）、
    アンチセンス鎖：５’－Ｐ１－ＵｍＡｆＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｆＧｆＧｍＵｍＧｍＣｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍＵｍＧｍ－３’（配列番号２９）、
    ｓｉＡＮ１－Ｍ２Ｐ１：
    センス鎖：５’－ＣｍＣｍＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号１２）、
    アンチセンス鎖：５’－Ｐ１－ＵｍＡｆＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧｍＣｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍ－３’（配列番号３０）、
    ｓｉＡＮ２－Ｍ２Ｐ１：
    センス鎖：５’－ＡｍＧｍＣｍＣｍＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号１４）、
    アンチセンス鎖：５’－Ｐ１－ＵｍＡｆＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧｍＣｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍＵｍＧｍ－３’（配列番号３１）、
    ｓｉＡＮ１－Ｍ３Ｐ１：
    センス鎖：５’－ＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号１８）、
    アンチセンス鎖：５’－Ｐ１－ＵｍＡｆＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧｍＣｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍ－３’（配列番号３０）、
    ｓｉＡＮ２－Ｍ３Ｐ１：
    センス鎖：５’－ＡｍＧｍＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号１９）、
    アンチセンス鎖：５’－Ｐ１－ＵｍＡｆＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧｍＣｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍＵｍＧｍ－３’（配列番号３１）、
    ｓｉＡＮ１－Ｍ１ＳＰ１：
    センス鎖：５’－ＣｍｓＣｍｓＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号２０）、
    アンチセンス鎖：５’－Ｐ１－ＵｍｓＡｆｓＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｆＧｆＧｍＵｍＧｍＣｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍｓＣｍｓＵｍ－３’（配列番号３２）、
    ｓｉＡＮ２－Ｍ１ＳＰ１：
    センス鎖：５’－ＡｍｓＧｍｓＣｍＣｍＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号２２）、
    アンチセンス鎖：５’－Ｐ１－ＵｍｓＡｆｓＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｆＧｆＧｍＵｍＧｍＣｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍｓＵｍｓＧｍ－３’（配列番号３３）、
    ｓｉＡＮ１－Ｍ２ＳＰ１：
    センス鎖：５’－ＣｍｓＣｍｓＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号２０）、
    アンチセンス鎖：５’－Ｐ１－ＵｍｓＡｆｓＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧｍＣｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍｓＣｍｓＵｍ－３’（配列番号３４）、
    ｓｉＡＮ２－Ｍ２ＳＰ１：
    センス鎖：５’－ＡｍｓＧｍｓＣｍＣｍＡｍＡｍＧｆＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号２２）、
    アンチセンス鎖：５’－Ｐ１－ＵｍｓＡｆｓＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧｍＣｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍｓＵｍｓＧｍ－３’（配列番号３５）、
    ｓｉＡＮ１－Ｍ３ＳＰ１：
    センス鎖：５’－ＣｍｓＣｍｓＡｍＡｍＧｍＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号２６）、
    アンチセンス鎖：５’－Ｐ１－ＵｍｓＡｆｓＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧｍＣｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍｓＣｍｓＵｍ－３’（配列番号３４）、
    ｓｉＡＮ２－Ｍ３ＳＰ１：
    センス鎖：５’－ＡｍｓＧｍｓＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＧｆＣｆＡｆＣｍＣｍＡｍＡｍＧｍＡｍＡｍＣｍＵｍＡｍ－３’（配列番号２７）、
    アンチセンス鎖：５’－Ｐ１－ＵｍｓＡｆｓＧｍＵｍＵｍＣｆＵｍＵｍＧｍＧｍＵｍＧｍＣｍＵｆＣｍＵｆＵｍＧｍＧｍＣｍＵｍｓＵｍｓＧｍ－３’（配列番号３５）
    ただし、大文字Ｃ、Ｇ、Ｕ、Ａはヌクレオチドの塩基配列を表し、小文字ｍは、当該文字ｍの左側に隣接する１つのヌクレオチドがメトキシ修飾ヌクレオチドであることを表し、小文字ｆは、当該文字ｆの左側に隣接する１つのヌクレオチドがフルオロ修飾ヌクレオチドであることを表し、小文字ｓは、当該文字の左右２ヌクレオチド間がチオリン酸エステル基により結合されていることを表し、Ｐ１は、当該文字の右側に隣接する１つのヌクレオチドが５’－リン酸ヌクレオチド又は５’－リン酸アナログ修飾ヌクレオチドであることを表す、請求項１に記載のｓｉＲＮＡ複合体。
  16. 式（３０８）に示される構造を有する、請求項１に記載のｓｉＲＮＡ複合体：
    Figure 2023082151000098
     式中、
    ｎ１は、１～３から選択される整数であり、ｎ３は、０～４から選択される整数であり、
    ｍ１、ｍ２及びｍ３は独立して、２～１０から選択される整数であり、
    Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４及びＲ１５はそれぞれ独立して、Ｈであり、又はＣ１－Ｃ１０アルキル基、Ｃ１－Ｃ１０ハロゲン化アルキル基及びＣ１－Ｃ１０アルコキシ基からなる群から選択され、
    Ｒ３は式Ａ５９に示される構造の基であり、
    Figure 2023082151000099
     式中、Ｅ１はＯＨ、ＳＨ又はＢＨ２であり、ＮｕはｓｉＲＮＡであり、
    Ｒ２は、長さ１～２０の炭素原子の直鎖アルキレン基であり、そのうちの１又は複数の炭素原子は、Ｃ（Ｏ）、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、ＣＨ=Ｎ、Ｓ（Ｏ）２、Ｃ２－Ｃ１０アルケニレン基、Ｃ２－Ｃ１０アルキニレン基、Ｃ６－Ｃ１０アリーレン基、Ｃ３－Ｃ１８ヘテロシクリレン基及びＣ５－Ｃ１０ヘテロアリーレン基からなる群から選択される１又は複数で任意に置換され、Ｒ２は、Ｃ１－Ｃ１０アルキル基、Ｃ６－Ｃ１０アリール基、Ｃ５－Ｃ１０ヘテロアリール基、Ｃ１－Ｃ１０ハロゲン化アルキル基、－ＯＣ１－Ｃ１０アルキル基、－ＯＣ１－Ｃ１０アルキルフェニル基、－Ｃ１－Ｃ１０アルキル－ＯＨ、－ＯＣ１－Ｃ１０ハロゲン化アルキル基、－ＳＣ１－Ｃ１０アルキル基、－ＳＣ１－Ｃ１０アルキルフェニル基、－Ｃ１－Ｃ１０アルキル－ＳＨ、－ＳＣ１－Ｃ１０ハロゲン化アルキル基、ハロゲン置換基、－ＯＨ、－ＳＨ、－ＮＨ２、－Ｃ１－Ｃ１０アルキル－ＮＨ２、－Ｎ（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－ＮＨ（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、シアノ基、ニトロ基、－ＣＯ２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－ＣＯＮ（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－ＣＯＮＨ（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－ＣＯＮＨ２、－ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－ＮＨＣ（Ｏ）（フェニル基）、－Ｎ（Ｃ１－Ｃ１０アルキル）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－Ｎ（Ｃ１－Ｃ１０アルキル）Ｃ（Ｏ）（フェニル基）、－Ｃ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ１０アルキル基、－Ｃ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ１０アルキルフェニル基、－Ｃ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ１０ハロアルキル基、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ１０アルキル基、－ＳＯ２（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－ＳＯ２（フェニル基）、－ＳＯ２（Ｃ１－Ｃ１０ハロゲン化アルキル基）、－ＳＯ２ＮＨ２、－ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－ＳＯ２ＮＨ（フェニル基）、－ＮＨＳＯ２（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－ＮＨＳＯ２（フェニル基）及び－ＮＨＳＯ２（Ｃ１－Ｃ１０ハロゲン化アルキル基）からなる群のいずれか１つ又は複数の置換基を任意に有してもよく、
    各Ｌ１は、長さ１～７０の炭素原子の直鎖アルキレン基であり、そのうちの１又は複数の炭素原子は、Ｃ（Ｏ）、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、ＣＨ=Ｎ、Ｓ（Ｏ）２、Ｃ２－Ｃ１０アルケニレン基、Ｃ２－Ｃ１０アルキニレン基、Ｃ６－Ｃ１０アリーレン基、Ｃ３－Ｃ１８ヘテロシクリレン基及びＣ５－Ｃ１０ヘテロアリーレン基からなる群から選択される１又は複数で任意に置換され、Ｌ１は、Ｃ１－Ｃ１０アルキル基、Ｃ６－Ｃ１０アリール基、Ｃ５－Ｃ１０ヘテロアリール基、Ｃ１－Ｃ１０ハロゲン化アルキル基、－ＯＣ１－Ｃ１０アルキル基、－ＯＣ１－Ｃ１０アルキルフェニル基、－Ｃ１－Ｃ１０アルキル－ＯＨ、－ＯＣ１－Ｃ１０ハロゲン化アルキル基、－ＳＣ１－Ｃ１０アルキル基、－ＳＣ１－Ｃ１０アルキルフェニル基、－Ｃ１－Ｃ１０アルキル－ＳＨ、－ＳＣ１－Ｃ１０ハロゲン化アルキル基、ハロゲン置換基、－ＯＨ、－ＳＨ、－ＮＨ２、－Ｃ１－Ｃ１０アルキル－ＮＨ２、－Ｎ（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－ＮＨ（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、シアノ基、ニトロ基、－ＣＯ２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－ＣＯＮ（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－ＣＯＮＨ（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－ＣＯＮＨ２、－ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－ＮＨＣ（Ｏ）（フェニル基）、－Ｎ（Ｃ１－Ｃ１０アルキル）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－Ｎ（Ｃ１－Ｃ１０アルキル）Ｃ（Ｏ）（フェニル基）、－Ｃ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ１０アルキル基、－Ｃ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ１０アルキルフェニル基、－Ｃ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ１０ハロアルキル基、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ１０アルキル基、－ＳＯ２（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－ＳＯ２（フェニル基）、－ＳＯ２（Ｃ１－Ｃ１０ハロゲン化アルキル基）、－ＳＯ２ＮＨ２、－ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－ＳＯ２ＮＨ（フェニル基）、－ＮＨＳＯ２（Ｃ１－Ｃ１０アルキル基）、－ＮＨＳＯ２（フェニル基）及び－ＮＨＳＯ２（Ｃ１－Ｃ１０ハロゲン化アルキル基）からなる群のいずれか１つ又は複数の置換基を任意に有してもよく、
    Figure 2023082151000100
    は、基が分子の残りの部分に結合される部位を表し、
    Ｍ１は標的基を表す。
  17. 各Ｌ１が、式Ａ１～Ａ１９、及びＡ２１～Ａ２６の基から独立して選択される１又は複数の結合の組合せである、請求項１６に記載のｓｉＲＮＡ複合体：
    Figure 2023082151000101
     式中、ｊ１は１～２０の整数であり、ｊ２は１～２０の整数であり、
    Ｒ’はＣ１－Ｃ１０のアルキル基であり、
    Ｒａは、式Ａ２７～Ａ３１、Ａ３４～Ａ３６、Ａ４０、Ａ４３、Ａ４５の基及びその任意の組合せからなる群から選択され、
    Figure 2023082151000102
     ＲｂはＣ１－Ｃ１０のアルキル基である。
  18. Ｌ１は、Ａ１、Ａ４、Ａ５、Ａ６、Ａ８、Ａ１０、Ａ１１、Ａ１３から選択される１以上の結合の組合せである、又は、
    Ｌ１は、Ａ１、Ａ４、Ａ８、Ａ１０及びＡ１１から選択される少なくとも２つの結合の組合せである、請求項１７に記載のｓｉＲＮＡ複合体。
  19. Ｌ１の長さが３～２５個又は４～１５個の原子である、請求項１６に記載のｓｉＲＮＡ複合体。
  20. ｍ１、ｍ２及びｍ３がそれぞれ独立して２～５の整数である、又は、ｍ１＝ｍ２＝ｍ３である、請求項１６に記載のｓｉＲＮＡ複合体。
  21. 各前記標的基が独立して哺乳動物の肝細胞表面のアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）と親和性のあるリガンドである、又は、
    各前記標的基が、Ｄ－マンノピラノース、Ｌ－マンノピラノース、Ｄ－アラビノース、Ｄ－キシロフラノース、Ｌ－キシロフラノース、Ｄ－グルコース、Ｌ－グルコース、Ｄ－ガラクトース、Ｌ－ガラクトース、α－Ｄ－マンノフラノース、β－Ｄ－マンノフラノース、α－Ｄ－マンノピラノース、β－Ｄ－マンノピラノース、α－Ｄ－グルコピラノース、β－Ｄ－グルコピラノース、α－Ｄ－グルコフラノース、β－Ｄ－グルコフラノース、α－Ｄ－フルクトフラノース、α－Ｄ－フルクトピラノース、α－Ｄ－ガラクトピラノース、β－Ｄ－ガラクトピラノース、α－Ｄ－ガラクトフラノース、β－Ｄ－ガラクトフラノース、グルコサミン、シアル酸、ガラクトサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン、Ｎ－トリフルオロアセチルガラクトサミン、Ｎ－プロピオニルガラクトサミン、Ｎ－ｎ－ブチリルガラクトサミン、Ｎ－イソブチリルガラクトサミン、２－アミノ－３－Ｏ－［（Ｒ）－１－カルボキシエチル］－２－デオキシ－β－Ｄ－グルコピラノース、２－デオキシ－２－メチルアミノ－Ｌ－グルコピラノース、４，６－ジデオキシ－４－ホルムアミド－２，３－ジ－Ｏ－メチル－Ｄ－マンノピラノース、２－デオキシ－２－スルホアミノ－Ｄ－グルコピラノース、Ｎ－グリコリル－α－ノイラミン酸、５－チオ－β－Ｄ－グルコピラノース、メチル２，３，４－トリス－Ｏ－アセチル－１－チオ－６－Ｏ－トリチル－α－Ｄ－グルコピラノシド、４－チオ－β－Ｄ－ガラクトピラノース、エチル３，４，６，７－テトラ－Ｏ－アセチル－２－デオキシ－１，５－ジチオ－α－Ｄ－グルコヘプトピラノシド、２，５－アンヒドロ－Ｄ－アロニトリル、リボース、Ｄ－リボース、Ｄ－４－チオリボース、Ｌ－リボース、Ｌ－４－チオリボースから独立して選択される１つである、請求項１６に記載のｓｉＲＮＡ複合体。
  22. Ｒ２には、窒素含有骨格中のＮに結合される部位及びＲ３におけるＰに結合される部位がともに含まれ、Ｒ２上の前記窒素含有骨格中のＮに結合される部位がＮとアミド結合を形成し、前記Ｒ３におけるＰに結合される部位がＰとリン酸エステル結合を形成する、又は、
    Ｒ２がＢ５、Ｂ６、Ｂ５’又はＢ６’から選択され、
    Figure 2023082151000103
     式中、
    Figure 2023082151000104
    は、基が共有結合的に結合する部位を表し、ｑ２は１～１０の整数である、請求項１６に記載のｓｉＲＮＡ複合体。
  23. 式（４０３）、（４０４）、（４０５）、（４０６）、（４０７）、（４０８）、（４０９）、（４１０）、（４１１）、（４１２）、（４１３）、（４１４）、（４１５）、（４１６）、（４１７）、（４１８）、（４１９）、（４２０）、（４２１）又は（４２２）に示される構造を有する、請求項１に記載のｓｉＲＮＡ複合体。
    Figure 2023082151000105
    Figure 2023082151000106
    Figure 2023082151000107
    Figure 2023082151000108
    Figure 2023082151000109
  24. 式Ａ５９におけるＰ原子が、ｓｉＲＮＡのセンス鎖の３’末端に結合されている、請求項１６に記載のｓｉＲＮＡ複合体。
  25. 請求項１～２４のいずれか一項に記載のｓｉＲＮＡ複合体、及び薬学的に許容可能な担体を含み、前記ｓｉＲＮＡと前記薬学的に許容可能な担体との重量比が１：（１～５００）である、薬物組成物。
  26. 脂質異常の治療のための組成物であって、請求項１～２４のいずれか一項に記載のｓｉＲＮＡ複合体、及び／又は請求項２５に記載の薬物組成物を含有する、組成物。
  27. 前記脂質異常が、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症又はアテローム性動脈硬化である、請求項２６に記載の組成物。
  28. 肝細胞におけるＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現の抑制のために用いられる組成物であって、請求項１～２４のいずれか一項に記載のｓｉＲＮＡ複合体、及び／又は請求項２５に記載の薬物組成物を含有する、組成物。
  29. 請求項１～２４のいずれか一項に記載のｓｉＲＮＡ複合体、及び／又は請求項２５に記載の薬物組成物を含有する、キット。
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