JP2023022154A - チャネル調節剤 - Google Patents

チャネル調節剤 Download PDF

Info

Publication number
JP2023022154A
JP2023022154A JP2022187091A JP2022187091A JP2023022154A JP 2023022154 A JP2023022154 A JP 2023022154A JP 2022187091 A JP2022187091 A JP 2022187091A JP 2022187091 A JP2022187091 A JP 2022187091A JP 2023022154 A JP2023022154 A JP 2023022154A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
connexin
modulating agent
pannexin
peptide
modulating
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2022187091A
Other languages
English (en)
Inventor
リチャード・グリーン コリン
Richard Green Colin
イエリ・キム
Yeri Kim
アンソニー・フィリップス
Phillips Anthony
ジェイムズ・ダフト ブラッドフォード
James Duft Bradford
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Auckland Uniservices Ltd
Ocunexus Therapeutics Inc
Original Assignee
Auckland Uniservices Ltd
Ocunexus Therapeutics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=55351389&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=JP2023022154(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from JP2020054620A external-priority patent/JP7185655B2/ja
Application filed by Auckland Uniservices Ltd, Ocunexus Therapeutics Inc filed Critical Auckland Uniservices Ltd
Publication of JP2023022154A publication Critical patent/JP2023022154A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/165—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide
    • A61K31/167—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide having the nitrogen of a carboxamide group directly attached to the aromatic ring, e.g. lidocaine, paracetamol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/38—Heterocyclic compounds having sulfur as a ring hetero atom
    • A61K31/382—Heterocyclic compounds having sulfur as a ring hetero atom having six-membered rings, e.g. thioxanthenes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/498—Pyrazines or piperazines ortho- and peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. quinoxaline, phenazine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/557—Eicosanoids, e.g. leukotrienes or prostaglandins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/557—Eicosanoids, e.g. leukotrienes or prostaglandins
    • A61K31/5575—Eicosanoids, e.g. leukotrienes or prostaglandins having a cyclopentane, e.g. prostaglandin E2, prostaglandin F2-alpha
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/575—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of three or more carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, ergosterol, sitosterol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/10—Peptides having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/39—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin, cold insoluble globulin [CIG]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0048—Eye, e.g. artificial tears
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1138—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against receptors or cell surface proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/323—Chemical structure of the sugar modified ring structure
    • C12N2310/3231—Chemical structure of the sugar modified ring structure having an additional ring, e.g. LNA, ENA

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)

Abstract

【課題】緑内障、ＤＭＥ、眼線維症、網膜潅流障害、または眼低酸素症の対象を治療するための方法を提供する。【解決手段】ココネキシン調節剤、パネキシン調節剤、ギャップ結合調節剤、ヘミチャネル調節剤、及びパネキシンチャネル調節剤を含む製造の組成物及び物品、ならびに眼の障害及び他の障害の治療における、これらの単独で、または組み合わせての使用を提供する。【選択図】なし

Description

関連出願
これは、２０１４年１１月１４日出願の米国規定出願第６２／０８０，２１７号、２０１４年１１月２６日出願の同第６２／０８５，２２６号、２０１５年４月１０日出願の同第６２／１４６，１２８号、２０１５年４月１４日出願の同第６２／１４７，４８８号、２０１４年８月２２日出願の新国出願第６２８６３０号、及び２０１５年７月２日出願の同第７０９６７３号に対する優先権を主張する米国出願であり、これらの各々の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本発明は、コネキシン及びパネキシンチャネル調節剤ならびに調節に関する。
以下は、本発明の理解において有用であり得る情報を含む。本明細書で明確に、または暗に参照される情報、刊行物、または文書のうちのいずれも、今回記載または特許請求される発明に対する先行技術であるか、または必須であることを認めるものではない。本明細書で言及または特定されるすべての刊行物、特許、関連出願、及び他の書面による資料または電子資料は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。組み込まれる情報は、文章及び他の内容のすべてが本出願内で繰り返されているのと同程度、提出される本出願の事実上一部であり、提出される本出願の文章及び内容の一部として扱われるべきである。
ギャップ結合は、大部分の動物の細胞型の間に見られる特化した細胞間接続である。これらは、精子及び赤血球等の成熟骨格筋及び可動性細胞型を除く、身体の実質上すべての組織内に発現する。ギャップ結合は、２つの細胞の細胞質を直接接続し、これは、様々な分子、イオン、及び電気インパルスが細胞間の制御されたゲートを直接通過することを可能にする。
閉鎖（密着）結合ならびに固定（接着及びデスモソーム）結合と対照的に、ギャップ結合は、膜を一緒に封止しないか、または、膜間の物質の通過を制限することが、ギャップ結合の機能ではない。むしろ、ギャップ結合チャネルは、ある特定の分子が１つの細胞から別の細胞に往復することを許容し、したがって、隣接した細胞の内部を直接結合することにより、物理的連通チャネルを提供する。
１つのギャップ結合チャネルは、隣接した細胞間の細胞間隙を越えて接続し、細胞間分子がこれらの細胞の間を流れることを可能にする２つのコネクソン（またはヘミチャネル）からなる。ギャップ結合の各コネクソンは、隣接した細胞膜内に存在し、６つの個々のコネキシン（「Ｃｘ」、または「Ｃｘｎ」）タンパク質の共有オリゴマー形成によって形成される。Ｙｅａｇｅｒ（１９９８）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｃａｒｄｉａｃ ｇａｐ
ｊｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｈａｎｎｅｌｓ，Ｊ Ｓｔｒｕｃｔ Ｂｉｏｌ １２１：２３１－２４５． コネクソンは、１つ以上の異なるコネキシンタンパク質を含み得るが、コネクソンは、通常、ホモ六量体の形態である。
遺伝子及びタンパク質のヒトコネキシンファミリーは、これより２１と番号を付ける。（Ｓｑｈｌ Ｇ＆Ｗｉｌｌｅｃｋｅ Ｋ．（２００４）． Ｇａｐ ｊｕｎｃｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｎｅｘｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆａｍｉｌｙ． Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｒｅｓ． ６２：２２８－２３２）。Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｃｏｎｎｅｘｉｎ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｔｈ
ｅ ｍｏｕｓｅ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｇｅｎｏｍｅ，Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ３８３：７２５－７３７。様々な組織型内に発現するコネキシンの範囲には多くの異形が存在し、多くの場合、２つ以上のコネキシンの形態が細胞型内に存在する。Ｓｏｈｌ ａｎｄ Ｗｉｌｌｅｃｋｅ（２００４）を参照されたい。コネキシンとコネクソンとの様々な組み合わせが、互いに相互作用することが可能であるが、適合性の制約が存在する。Ｍａｒｚｉａｎｏ，ｅｔ ａｌ．Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ． １２：８０５－８１２（２００３）。コネキシンタンパク質及びこれらの関連したギャップ結合チャネルは、通過することができる化学種に対して何らかの特異性を提供すると考えられるサイズ及び構成の範囲で生じる。Ｎｉｅｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｎｅｘｉｎ ｃｈａｎｎｅｌｓ ｔｏ ｔｈｅ ｓｅｃｏｎｄ ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ ｉｎｏｓｉｔｏｌ １，４，５－ｔｒｉｓ
ｔｒｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ，Ｊ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ １１３（Ｐｔ ８）：１３６５－１３７２。すべてのコネキシンは、４つの膜貫通ドメイン、２つの細胞外ループ、細胞質ループ、短い細胞質アミノ末端、及び長さが大幅に異なり得るカルボキシ末端と、共通の構造を共有する。Ｕｎｇｅｒ，ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｃｒｙｏ－ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ ｏｆ ａ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｃａｒｄｉａｃ ｇａｐ ｊｕｎｃｔｉｏｎ ｃｈａｎｎｅｌ， Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｆｏｕｎｄ Ｓｙｍｐ ２１９：２２－３０＆ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ ３１－４３。コネキシンタンパク質は、一般的にこれらの分子量に従って名付けられ、例えば、Ｃｘ２６は、２６ｋＤａのコネキシンタンパク質である。コネキシンタンパク質間の主な構造的差異は、Ｃ末端細胞質尾部の長さであり、コネキシン２６が、尾部をほとんど有さない（１６個のアミノ酸）一方で、コネキシン４３及び３２は、長い尾部及び中間の尾部（それぞれ１５６個及び７３個のアミノ酸）を有する。異なるコネキシンの細胞質尾部のサイズ及びアミノ酸配列における差異は、数ある中でも、チャネル開放及び閉鎖の立体配座に関与すると予測されている。ギャップ結合の機能及び／または機能不全は、いくつかの障害に関係付けられている。例えば、コネキシン３０は、クロウストン症候群（発汗性外胚葉形成異常症）において突然変異し、コネキシン２６遺伝子における突然変異は、遺伝性難聴の最も一般的な原因である。ヒトコネキシン３２遺伝子における突然変異が、遺伝性神経障害であるシャルコー・マリー・トゥース病を引き起こす一方で、眼歯指異形成症は、一般に、コネキシン４３をコードする遺伝子における突然変異によって引き起こされると考えられている。
パネキシンは、Ｐａｎｘ１、Ｐａｎｘ２、及びＰａｎｘ３を含む、膜貫通チャネル糖タンパク質のファミリーである。パネキシンは、細胞内Ｎ末端尾部及びＣ末端尾部と共に、４つの膜貫通ドメイン、２つの細胞外ループ、及び１つの細胞内ループからなる、コネキシンと類似した構造的特徴共有する。Ｐａｎｘ１が、多くの哺乳類の組織内で発現する一方で、Ｐａｎｘ２及びＰａｎｘ３発現は、より限定される。Ｐａｎｘ１は、カルシウム波の伝播、緊張度の制御、粘膜毛様体肺クリアランス、及び味蕾機能と関連付けられている。Ｐａｎｘ１が、脳、膀胱、精巣、及び卵巣内に発現するのに対し、Ｐａｎｘ２は、主に脳に発現し、Ｐａｎｘ３は、皮膚、軟骨、心臓、腎臓、及び蝸牛内に発現する。Ｐａｎｘ１ヘミチャネルは、ＡＴＰ放出、カルシウム情報伝達、ケラチン生成細胞及び骨芽細胞分化、味覚感知、細胞の死、虚血後神経変性、腫瘍抑制、ならびに発作に関係付けられている。Ｐａｎｘ２が、ニューロンの分化に関与する一方で、Ｐａｎｘ３は、軟骨細胞、骨芽細胞の分化、ならびに精子の突然変異及び輸送に関与する。Ｐａｎｘ１が、形質膜に局在化されるのに対して、Ｐａｎｘ２は、細胞内に配置される。コネキシンとパネキシンチャネルとの間の１つの主な違いは、パネキシンチャネルが細胞間チャネルを形成しないことであり、パネキシンタンパク質の高度にグリコシル化された細胞外ループが、ドッキングプロセスを妨げることを示唆している。コネキシンヘミチャネルと同様に、パネキシンチャネルは、いくつかの要因によって活性化されると言われているが、いくつかの違いも示す。コネキシンヘミチャネル及びパネキシンチャネルの両方が、グルタミン酸及びＡＴＰ放出に貢献するが、パネキシンチャネルは、カルシウムイオン濃度の低下に反応しない。
Ｙｅａｇｅｒ（１９９８）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｃａｒｄｉａｃ ｇａｐ ｊｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｈａｎｎｅｌｓ，Ｊ Ｓｔｒｕｃｔ Ｂｉｏｌ １２１：２３１－２４５ Ｓｏｈｌ Ｇ＆Ｗｉｌｌｅｃｋｅ Ｋ．（２００４）． Ｇａｐ ｊｕｎｃｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｎｅｘｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆａｍｉｌｙ． Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｒｅｓ． ６２：２２８－２３２ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｃｏｎｎｅｘｉｎ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｇｅｎｏｍｅ，Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ３８３：７２５－７３７ Ｍａｒｚｉａｎｏ，ｅｔ ａｌ．Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ． １２：８０５－８１２（２００３） Ｎｉｅｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｎｅｘｉｎ ｃｈａｎｎｅｌｓ ｔｏ ｔｈｅ ｓｅｃｏｎｄ ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ ｉｎｏｓｉｔｏｌ １，４，５－ｔｒｉｓ ｔｒｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ，Ｊ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ １１３（Ｐｔ ８）：１３６５－１３７２ Ｕｎｇｅｒ，ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｃｒｙｏ－ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ ｏｆ ａ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｃａｒｄｉａｃ ｇａｐ ｊｕｎｃｔｉｏｎ ｃｈａｎｎｅｌ， Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｆｏｕｎｄ Ｓｙｍｐ ２１９：２２－３０＆ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ ３１－４３
本明細書に説明及び特許請求される本発明は、限定されないが、この発明の概要に記載もしくは説明、または参照されるものを含む多くの特徴及び実施形態を有する。包括的であることを意図するものではなく、本明細書に説明及び特許請求される本発明は、例示目的のためだけに含められ、かつ制約ではない本導入で明らかにされる特徴もしくは実施形態に、またはこれらによって制限されるものではない。
ギャップ結合チャネル、ヘミチャネル、及び／もしくはパネキシンチャネルの調節のため、ならびに／または、ギャップ結合チャネル、ヘミチャネル、及び／もしくはパネキシンチャネルの調節から恩恵を受ける、障害の治療のための化合物、組成物、製剤、キット、及び方法を提供することが、本発明の目的である。したがって、一態様において、本発明は、ギャップ結合チャネル、ギャップ結合ヘミチャネル、及び／またはパネキシンチャネルの調節のための方法、特に、しかしながら排他的にではなく、ギャップ結合チャネル、ギャップ結合ヘミチャネル、及び／またはパネキシンチャネルの調節が有効である障害の治療のための方法に関し、本方法は、ギャップ結合チャネル調節剤、例えば、式Ｉの化合物（例えば、トナベルサット）、コネキシンペプチド摸倣化合物、及び／またはこれらの前述の化合物のうちのいずれかの１つ以上の類似体もしくはプロドラッグを投与すること、ならびに／あるいは、式ＶＩの化合物（例えば、プロベネシド）及び／またはこれらの前述の化合物のうちのいずれかの１つ以上の類似体もしくはプロドラッグ、ならびに／あるいは、パネキシンペプチド摸倣化合物及び／またはこれらの前述の化合物のうちのいずれかの１つ以上の類似体もしくはプロドラッグ等のパネキシン調節剤を投与することを含む。
一態様において、本発明は、ギャップ結合チャネル調節剤またはヘミチャネル調節剤を使用して、ギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネルを調節するための方法を提供する。いくつかの態様において、ギャップ結合チャネル調節剤またはヘミチャネル調節剤は
、小分子調節剤でもよい。小分子ギャップ結合チャネル調節剤には、例えば、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、ならびにその類似体及び／またはプロドラッグが含まれる。いくつかの態様において、ギャップ結合チャネル調節剤またはヘミチャネル調節剤は、ペプチド摸倣化合物でもよい。ペプチド摸倣ギャップ結合チャネル調節剤には、例えば、ペプチド５（ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ）及びその類似体が含まれる。他の態様において、ギャップ結合チャネル調節剤またはヘミチャネル調節剤は、アンチセンスオリゴヌクレオチドでもよく、これは、化学修飾または未修飾オリゴヌクレオチド、例えば、未修飾ＤＮＡオリゴヌクレオチドでもよい。
いくつかの態様において、本発明は、パネキシン調節剤を使用したパネキシンチャネルの調節のための方法を提供する。いくつかの態様において、パネキシン調節剤は、小分子調節剤でもよい。小分子パネキシンチャネル調節剤としては、例えば、式ＶＩの化合物、例えば、プロベネシド、ならびに前述の化合物のうちのいずれかの類似体及び／またはプロドラッグが挙げられる。いくつかの態様において、パネキシン調節剤は、パネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬でもよい。ペプチド摸倣パネキシンチャネル調節剤には、例えば、１０Ｐａｎｘ１、またはその類似体が含まれる。いくつかの態様において、パネキシン調節剤は、パネキシン２の合成模倣ペプチド遮断薬でもよい。いくつかの態様において、パネキシン調節剤は、パネキシン３の合成模倣ペプチド遮断薬でもよい。
いくつかの態様において、本方法は、ギャップ結合チャネル調節剤及びパネキシン調節剤を共投与することを含む。ギャップ結合チャネル調節剤の共投与は、パネキシン調節剤の投与と同時に、パネキシン調節剤の投与に続いて、またはパネキシン調節剤の投与の前でもよい。いくつかの態様において、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／あるいはペプチド５、またはこれらのいずれかの類似体、もしくはこれらの両方の類似体は、パネキシン拮抗薬、例えば、式ＶＩの化合物、例えば、プロベネシド、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの１つ以上の類似体もしくはプロドラッグ、及び／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１もしくはその類似体と一緒に共投与されてもよい。
別の態様において、本発明は、ギャップ結合チャネル及び／もしくはヘミチャネルの調節のための薬剤の製造、または、本明細書の疾患、障害、及び／もしくは病態のうちのいずれかの治療におけるヘミチャネル調節剤の使用を提供する。ヘミチャネル調節剤には、本明細書に記載されるように、例えば、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／もしくはその類似体、ならびに／またはペプチド５もしくはその類似体、ならびに／またはアンチセンスオリゴヌクレオチドが含まれる。
別の態様において、本発明は、ギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネルの調節において使用するための、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／もしくは前述の化合物のうちのいずれかの類似体、またはペプチド５もしくはその類似体等のギャップ結合チャネル調節剤、ヘミチャネル調節剤、コネキシン調節剤、及び／またはパネキシン調節剤を提供する。一態様において、ギャップ結合チャネル調節剤、ヘミチャネル調節剤、コネキシン調節剤、及び／またはパネキシン調節剤は、好ましくは、ヒトまたは他の動物において、それぞれ、ギャップ結合チャネル、ならびに／またはヘミチャネル及びパネキシンを調節する。いくつかの態様において、本発明は、パネキシンチャネルの調節において使用するための、パネキシン調節剤、例えば、式ＶＩの化合物、例えば、プロベネシド、及び／またはこれらの前述の化合物のうちのいずれかの１つ以上の類似体もしくはプロドラッグ、ならびに／またはパネキシン１等のパネキシンの合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１またはその類似体も取り上げる。好ましいパネキシンチャネル調節剤は、パネキシン１チャネル調節剤である。いくつかの態様において、ギャップ結合チャネル調節剤及び／またはヘミチャネル調節剤は、パネキシンまたはパネキシンチャネルの
調節と共に、ギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネルの調節のためのパネキシン調節剤と一緒に使用され得る。いくつかの態様において、パネキシン及び／またはパネキシンチャネルの調節は、コネキシンチャネルの調節前、調節後、または同時でもよい。他の態様において、コネキシンチャネルの調節は、パネキシンチャネルの調節前、または調節後でもよい。
別の態様において、本発明は、ギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネルの調節によって、ギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネルの調節が有益であり得る障害を治療するための方法を提供し、本方法は、対象にコネキシンチャネル調節剤及び／またはヘミチャネル調節剤を投与することを含む。いくつかの態様において、チャネル調節剤は、例えば、対象への、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／もしくは前述の化合物のうちのいずれかの類似体、ならびに／またはペプチド５もしくはその類似体等のペプチド摸倣化合物でもよい。パネキシンチャネルの調節が有益であり得るいくつかの態様において、本方法は、パネキシン拮抗薬またはパネキシンチャネル調節剤を投与することをさらに含む。パネキシン調節剤には、例えば、式ＶＩの化合物、例えば、プロベネシド、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体もしくはプロドラッグ、ならびに／あるいはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１またはその類似体が含まれる。いくつかの態様において、本方法は、パネキシン拮抗薬、例えば、式ＶＩの化合物、例えば、プロベネシド、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの１つ以上の類似体もしくはプロドラッグ、ならびに／あるいはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１またはその類似体と一緒に、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体を投与することを含む。式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体の投与は、パネキシン拮抗薬の投与と同時、それに続いて、またはそれの前でもよい。パネキシン拮抗薬の投与は、コネキシンチャネル拮抗薬、例えば、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体の投与に続いて、またはそれの前でもよい。いくつかの態様において、治療の方法は、ヒトに適用される。いくつかの態様において、治療の方法は、哺乳動物、例えば、ヒトに適用される。
別の態様において、本発明は、パネキシンチャネルの調節のための薬剤の製造におけるパネキシン調節剤の使用、または本明細書の疾患、障害、及び／もしくは病態のうちの１つ以上の治療を取り上げる。パネキシン調節剤には、例えば、式ＶＩの化合物、例えば、プロベネシド、ならびに／もしくは前述の化合物のうちのいずれかの類似体及びプロドラッグ、ならびに／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１もしくはその類似体が含まれる。いくつかの態様において、ギャップ結合チャネル調節剤またはヘミチャネル調節剤及びパネキシン調節剤は、ギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネルの調節、ならびにパネキシンチャネルの調節のための、単一の薬剤、または一組の薬剤の製造のための使用でもよい。
別の態様において、本発明は、ギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネルの調節が有益であり得る障害の治療のための薬剤の製造における、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／もしくはその類似体、またはペプチド５もしくはその類似体等のコネキシン調節剤の使用を提供する。パネキシンチャネルの調節が有益であり得るいくつかの態様において、本発明は、本明細書の疾患、障害、及び／または病態の治療のためを含む、パネキシンチャネルの調節が有益であり得る障害の治療のための薬剤の製造における、パネキシン拮抗薬またはパネキシンチャネル調節剤（例えば、式ＶＩの化合物、例えば、プロベネシド、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの１つ以上の類似体もしくはプロドラッグ、ならびに／あるいはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１もしくはその類似体）の使用を取り上げる。
いくつかの態様において、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体は、ギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネル、ならびにパネキシンチャネルの調節が有益である障害の治療のための薬剤の製造において、パネキシン拮抗薬と一緒に使用されてもよい。
別の態様において、本発明は、ギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネルの調節が有益であり得る障害の治療における使用のための、ギャップ結合チャネル調節剤、例えば、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／もしくは前述の化合物のうちのいずれかの類似体、またはペプチド５もしくはその類似体、あるいは別のギャップ結合チャネル調節剤を提供する。パネキシンチャネルの調節が有益であり得るいくつかの態様において、本発明は、本明細書に記載または示される疾患、障害、及び／または病態の治療のためを含む、パネキシンチャネルの調節が有益であり得る障害の治療における使用のための、パネキシン拮抗薬、例えば、式ＶＩの化合物、例えば、プロベネシド、及び／もしくはこれらの前述の化合物のうちのいずれかの１つ以上の類似体もしくはプロドラッグ、ならびに／またはパネキシン１、例えば、１０Ｐａｎｘ１もしくはその類似体等のパネキシンの合成模倣ペプチド遮断薬、あるいは別のパネキシンチャネル調節剤も取り上げる。い
くつかの態様において、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体もしくはプロドラッグ、あるいはペプチド５またはその類似体は、ギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネル、ならびにパネキシンチャネルの調節が有益であり得る障害の治療のためのパネキシン拮抗薬と一緒に使用されてもよい。式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体の投与は、パネキシン拮抗薬の投与と同時、それに続いて、またはそれの前でもよい。
本発明の態様のうちのいずれかにおいて、例えば、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、またはその類似体、ペプチド５またはその類似体のうちのいずれかが、ギャップ結合チャネル調節剤として使用されてもよい。いくつかのギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネル制御活性を有する他の化合物としては、（例えば、イソフルラン、ハロタン、エタンを含む）麻酔、オクタノール、ヘプタノール、（その代謝物を含む）１８α－グリチルレチン酸、カルベノキソロン、（例えば、フルフェナム酸またはニフルム酸を含む）フェナム酸、（例えば、ウアバインを含む）強心配糖体、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、ＩＧＦ－１、カルボコール、ホルボールエステル及びアラキドン酸、オレイン酸、またはパルミトオレイン酸（さらなる例は、Ｓａｌａｍｅｈ Ａ，ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １７１９：３６－５８を参照されたい）、及び／またはキノリンまたはメフロキン化合物（例えば、Ｄａｓ Ｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ（２００８）３７３：５０４－５０８を参照されたい）が挙げられる。
様々な実施形態において、調節されるギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネルは、コネキシン２３、２５、２６、３０、３０．２、３０．３、３１、３１．１、３１．９、３２、３６、３７、４０、４０．１、４３、４５、４６、４７、５０、５９、及び６２のうちの１つ以上を含む。一実施形態において、調節されるギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネルは、コネキシン２６、３０、３２、３６、３７、４０、４５、及び４７のうちの１つ以上を含む。１つの特定の実施形態において、調節されるギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネルは、コネキシン３０及び／またはコネキシン４３を含む。
様々な実施形態において、調節されるパネキシン及び／またはパネキシンチャネルは、パネキシン１、パネキシン２、及びパネキシン３のうちの１つ以上である。
別の態様において、本発明は、本明細書に示される１つ以上の疾患、障害、または病態の治療のための方法を提供し、本方法は、対象にギャップ結合チャネル調節剤を投与することを含む。いくつかの態様において、ギャップ結合チャネル調節剤は、例えば、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／もしくは前述の化合物のうちのいずれかの類似体、またはペプチド５もしくはその類似体でもよい。いくつかの態様において、本発明は、本明細書に示される１つ以上の疾患、障害、または病態の治療のための方法も提供し、本方法は、パネキシン調節剤を、単独で、または１つ以上のギャップ結合チャネルもしくはヘミチャネル調節剤と組み合わせて投与することを含む。いくつかの態様において、パネキシン調節剤は、例えば、式ＶＩの化合物、例えば、プロベネシド、及び／またはこれらの前述の化合物のうちのいずれかの１つ以上の類似体もしくはプロドラッグ、ならびに／あるいはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１またはその類似体でもよい。ある特定の実施形態において、１つ以上の疾患、障害、または病態は、例えば、慢性創傷、期待される速度で治癒しない創傷、裂開性創傷；線維症、線維性疾患、障害、または病態；異常または過剰な瘢痕化；血管障害；組織の損傷；整形外科的疾患または障害；炎症または炎症性疾患；浮腫からなる群から選択される。
別の態様において、本発明は、本明細書に示される１つ以上の疾患、障害、及び病態の治療のための薬剤の製造における、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤もしくはヘミチャネル調節剤、及び／またはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体の使用を提供する。いくつかの態様において、本発明は、本明細書に示される１つ以上の疾患、障害、及び病態の治療のための薬剤の製造における、パネキシン調節剤、例えば、式ＶＩの化合物、例えば、プロベネシド、及び／またはこれらの前述の化合物のうちのいずれかの１つ以上の類似体もしくはプロドラッグ、ならびに／あるいはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１、またはこれらのいずれかの類似体の使用も提供する。いくつかの態様において、ギャップ結合チャネル調節剤は、本明細書に示される１つ以上の疾患、障害、及び病態の治療のための別個の薬剤または組み合わせ薬剤の製造において、パネキシン調節剤と一緒に使用され得る。ある特定の実施形態において、１つ以上の障害は、例えば、慢性創傷、期待される速度で治癒しない創傷、裂開性創傷；線維症、線維性疾患、障害、または病態；異常または過剰な瘢痕化；血管障害；組織の損傷；整形外科的疾患または障害；炎症または炎症性疾患；及び浮腫からなる群から選択される。
別の態様において、本発明は、本明細書に示される１つ以上の疾患、障害、及び病態の治療のための、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤もしくはヘミチャネル調節剤、及び／またはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体を提供する。いくつかの態様において、本発明は、例えば、本明細書に示される１つ以上の疾患、障害、及び病態の治療のための、パネキシン調節剤、例えば、式ＶＩの化合物、例えば、プロベネシド、及び／またはこれらの前述の化合物のうちのいずれかの１つ以上の類似体もしくはプロドラッグ、ならびに／あるいはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１、またはこれらのいずれかの類似体の、単独で、または本開示のギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネル調節剤と組み合わせてのいずれかでの使用も提供する。ある特定の実施形態において、１つ以上の疾患、障害、または病態は、例えば、慢性創傷、期待される速度で治癒しない創傷、裂開性創傷；線維症、線維性疾患、障害、または病態；異常または過剰な瘢痕化；血管障害；組織の損傷；整形外科的疾患または障害；炎症または炎症性疾患；及び浮腫からなる群から選択される。
別の態様において、本発明は、例えば、本明細書に示される１つ以上の疾患、障害、及び病態の治療のための、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤もしくはヘミチャネル
調節剤、及び／またはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体を提供する。いくつかの態様において、本発明は、例えば、本明細書に示される１つ以上の障害の治療のための、パネキシン調節剤、例えば、式ＶＩの化合物、例えば、プロベネシド、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの１つ以上の類似体もしくはプロドラッグ、ならびに／あるいはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１、またはこれらのいずれかの類似体の、単独で、または本開示のものを含むギャップ結合チャネル調節剤と組み合わせてのいずれかでの使用も提供する。ある特定の実施形態において、１つ以上の疾患、障害、または病態は、例えば、（例えば、周産期虚血、皮膚虚血、及び心虚血を含む）虚血、脳卒中、仮死、脳外傷、脊髄損傷、心臓発作、（例えば、心膜炎を含む）炎症性心臓障害、（例えば、手術もしくは移植後の心臓再潅流を含む）再潅流傷害、手術もしくは移植後の肝臓再潅流、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）喪失及び／もしくは網膜虚血、または眼線維症のうちの１つ以上からなる群から選択される。
いくつかの態様において、本発明は、手術または処置からの回復を向上させるため、及び／または手術後拘縮を治療するための方法を提供し、本方法は、対象に、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤、及び／またはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体を投与することを含む。関連する実施形態において、本発明は、手術もしくは処置からの回復を向上させるため、及び／または手術後拘縮を治療するための薬剤の製造における、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤、及び／またはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体の使用を提供する。関連する実施形態において、本発明は、例えば、手術もしくは処置からの回復を向上させるため、及び／または手術後拘縮を治療するための、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤、及び／またはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体を提供する。
いくつかの態様において、本発明は、手術または処置からの回復を向上させるため、及び／または手術後拘縮を治療するための方法を提供し、本方法は、対象に、パネキシン調節剤、例えば、式ＶＩの化合物、例えば、プロベネシド、及び／またはこれらの前述の化合物のうちのいずれかの１つ以上の類似体もしくはプロドラッグ、ならびに／あるいはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１、またはこれらのいずれかの類似体を投与することを含む。関連する実施形態において、本発明は、手術もしくは処置からの回復を向上させるため、及び／または手術後拘縮を治療するための薬剤の製造における、パネキシン調節剤、例えば、式ＶＩの化合物、例えば、プロベネシド、及び／またはこれらの前述の化合物のうちのいずれかの１つ以上の類似体もしくはプロドラッグ、ならびに／あるいはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１、またはこれらのいずれかの類似体の使用を提供する。関連する実施形態において、本発明は、例えば、手術もしくは処置からの回復を向上させるため、及び／または手術後拘縮を治療するための、パネキシン調節剤、例えば、式ＶＩの化合物、例えば、プロベネシド、及び／またはこれらの前述の化合物のうちのいずれかの１つ以上の類似体もしくはプロドラッグ、ならびに／あるいはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１、またはいずれかの類似体を提供する。一実施形態において、手術または処置は、整形外科的手術または処置である。一実施形態において、手術後拘縮は、整形外科的手術後関節拘縮である。
別の態様において、本発明は、対象における癒着形成を治療または減少させるための方法を提供し、本方法は、対象に、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤、及び／またはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体を投与することを含む。関連する実施形態において、本発明は、対
象における癒着形成を治療または減少させるための薬剤の製造における、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤、及び／またはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体またはプロドラッグの使用を提供する。関連する実施形態において、本発明は、例えば、対象における癒着形成を治療または減少させるための、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤、及び／またはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体を提供する。
別の態様において、本発明は、対象における癒着形成を治療または減少させるための方法を提
供し、本方法は、対象に、パネキシン調節剤、例えば、式ＶＩの化合物、例えば、プロベネシド、及び／またはこれらの前述の化合物のうちのいずれかの１つ以上の類似体もしくはプロドラッグ、ならびに／あるいはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１、またはこれらのいずれかの類似体を投与することを含む。関連する実施形態において、本発明は、対象における癒着形成を治療または減少させるための薬剤の製造における、パネキシン調節剤、例えば、式ＶＩの化合物、例えば、プロベネシド、及び／またはこれらの前述の化合物のうちのいずれかの１つ以上の類似体もしくはプロドラッグ、ならびに／あるいはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１、またはこれらのいずれかの類似体の使用を提供する。関連する実施形態において、本発明は、例えば、対象における癒着形成を治療または減少させるための、パネキシン調節剤、例えば、式ＶＩの化合物、例えば、プロベネシド、及び／またはこれらの前述の化合物のうちのいずれかの１つ以上の類似体もしくはプロドラッグ、ならびに／あるいはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１、またはこれらのいずれかの類似体を提供する。
別の態様において、本発明は、例えば、Ｃｘ４３ヘミチャネルを直接かつ即時に遮断し、ＧＪカップリングの、濃度及び時間依存の減少を引き起こすための、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体の使用に関する。
さらに他の態様において、様々な障害を、ギャップ結合チャネル（例えば、ヘミチャネル）調節剤を単独またはパネキシンチャネル調節剤と一緒に用いる治療の方法を含む、本発明の組成物及び方法によって治療することができる。これらの障害には、神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病アルツハイマー病、ＡＩＤＳ関連痴呆、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、網膜色素変性、脊髄性筋萎縮症、及び小脳変性症）；虚血傷害；肺、腎臓、または肝臓の線維症；血管疾患（例えば、再狭窄、アテローム性動脈硬化症、アテローム性動脈硬化巣冠動脈疾患、または高血圧症）、呼吸器疾患（例えば、喘息、慢性気管支炎、気管支拡張症、または嚢胞性繊維症）、望ましくないまたは異常肥大、関節炎、リウマチ性関節炎（ＲＡ）、乾癬、乾癬プラーク、サルコイドーシス、脊髄損傷及び視神経損傷を含むＣＮＳ外傷、未熟児の網膜症を含む糖尿病性及び他の増殖性網膜症、水晶体後線維増殖症、開放隅角緑内障、閉塞隅角緑内障、及び正常眼圧緑内障、ならびに続発緑内障、色素性緑内障、偽落屑緑内障、外傷性緑内障、血管新生緑内障、及び虹彩角膜内皮症候群（ＩＣＥ）及び血管新生緑内障等の開放隅角緑内障及び閉塞隅角緑内障の変異形を含む緑内障、老人性黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植血管新生、角膜移植片拒絶反応、網膜／脈絡膜血管新生、隅角の血管新生（ルベオーシス）、眼新生血管疾患、血管再狭窄、ぶどう膜炎、ドライアイ疾患、眼及び角膜の持続的上皮欠損、動静脈奇形（ＡＶＭ）、（グレーブス病を含む）甲状腺過形成、角膜及び他の組織移植、慢性炎症、肺炎症、眼の炎症、急性肺傷害／ＡＲＤＳ、敗血症、全身性毛細血管漏出症候群、多臓器機能不全症候群（ＭＯＤＳ）、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、急性呼吸促迫症候群、熱傷後血管透過性症候群、腹水、胸水、及び心膜液によって示される病態、（特に
乳児及び幼児における）心肺バイパス術後の透過率変化、再潅流傷害、ヘビ咬傷、原発性肺高血圧症、悪性の肺滲出、（例えば、急性脳卒中／閉鎖性頭部損傷／外傷と関連した）脳浮腫、滑膜炎、骨関節症（ＯＡ）、第三間隙形成液疾患（３ｒｄ ｓｐａｃｉｎｇ ｏｆ ｆｌｕｉｄ ｄｉｓｅａｓｅｓ）（膵炎、コンパートメント症候群、熱傷、腸疾患）、（クローン病及び潰瘍性大腸炎を含む）炎症性腸疾患（ＩＢＤ）等の慢性炎症、腎同種移植片拒絶反応、炎症性腸疾患、ネフローゼ症候群、血友病関節症、肥厚性瘢痕、オスラー病、化膿性肉芽腫水晶体後線維増殖症、強皮症、トラコーマ、血管癒着、滑膜炎、皮膚炎、子癇前症、腹水症、（心膜炎と関連したもの等の）心膜液貯留、胸水貯留、手術後組織浮腫、急性整形外科的傷害、過敏症、嚢胞性線維症、及び慢性皮膚創傷、糖尿病性足部潰瘍、静脈下腿潰瘍、及び褥瘡を含む潰瘍または潰瘍性病変、ならびにマラリア、デング熱、及び肺炎を含む伝染病が含まれるが、これらに限定されない。
これらの疾患、障害、及び病態のある特定の好ましい治療は、ギャップ結合チャネル調節剤、例えば、式Ｉの化合物（例えば、トナベルサット）、コネキシンペプチド摸倣化合物、及び／またはこれらの前述の化合物のうちのいずれかの１つ以上の類似体もしくはプロドラッグの投与、ならびに／あるいは、式ＶＩの化合物（例えば、プロベネシド）等のパネキシン調節剤及び／またはこれらの前述の化合物のうちのいずれかの１つ以上の類似体もしくはプロドラッグ、及び／またはパネキシンペプチド摸倣化合物及び／もしくはこれらの前述の化合物のうちのいずれかの１つ以上の類似体もしくはプロドラッグの投与を含む。特に好ましい化合物は、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び式ＶＩの化合物、例えば、プロベネシドである。
いくつかの態様においてギャップ結合チャネル調節剤またはコネキシン調節剤は、血管内に存在するギャップ結合及び／またはコネキシンの調節剤、例えば、コネキシン４３ギャップ結合チャネル調節剤もしくはコネキシン４３調節剤、コネキシン４０ギャップ結合チャネル調節剤もしくはコネキシン４０調節剤、またはコネキシン４５ギャップ結合チャネル調節剤もしくはコネイキシン（ｃｏｎｎｅｉｘｎ）４５調節剤である。好ましくは、コネキシン調節剤は、コネキシン４３調節剤である。コネキシン調節剤及びコネキシン４３調節剤は、例えば、アンチセンス分子等の、コネキシン転写またはコネキシンの翻訳を下方制御するための手段を含む。これらは、コネキシン４３の場合、ＺＯ－１結合ペプチドも含む。好ましくは、ギャップ結合チャネル調節剤は、コネキシン４３ギャップ結合チャネル調節剤である。好ましいコネキシン４３ギャップ結合チャネル調節剤は、トナベルサット、または式Ｉの別の化合物である。本明細書に取り上げられる使用のうちのいずれかのための本発明の薬学的組成物は、眼または血管において、例えば、コネキシン２６（Ｃｘ２６）、コネキシン３０（Ｃｘ３０）、コネキシン３１．１（Ｃｘ３１．１）、コネキシン３６（Ｃｘ３６）、コネキシン３７（Ｃｘ３７）、コネキシン４０（Ｃｘ４０）、コネキシン４５（Ｃｘ４５）、コネキシン５０（Ｃｘ５０）、またはコネキシン５７（Ｃｘ５７）、もしくは任意の他のコネキシン、またはコネキシンギャップ結合、またはコネキシンヘミチャネルを抑制または遮断し得るギャップ結合チャネル調節剤、例えば、ポリヌクレオチドも含んでもよい。別の実施形態において、本明細書に取り上げられる用途のうちのいずれかのための本発明の薬学的組成物は、少なくとも１つのパネキシン調節剤でもよく、本明細書に記載または示されるギャップ結合チャネル調節剤またはコネキシン調節剤のうちのいずれかをさらに含んでもよい。
一態様において、本発明は、前記対象の眼に治療的に有効な量の少なくとも１つのパネキシン調節剤を投与することによって、例えば、緑内障、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、老人性黄斑変性（ＡＭＤ）、眼線維症、及び／または神経障害性の眼の障害を含む、眼及び他の障害を治療するための薬学的組成物、製造品、及び方法に関する。いくつかの態様において、神経障害性の眼の障害は、例えば、緑内障、ＲＧＣの喪失、及び／または緑内障性眼神経障害であり得る。いくつかの態様において、緑内障は
、高眼圧に起因し得る。いくつかの態様において、緑内障は、低眼圧緑内障または正常眼圧緑内障に起因し得る。いくつかの態様において、治療的に有効な量の少なくとも１つのコネキシン調節剤の投与は、緑内障、網膜神経節細胞の喪失の治療（例えば、治療、予防、減速、軽減、停止、もしくは改善）、及び／または硝子体のグルタミン酸濃度の低減に有効である。本明細書に取り上げられる用途のうちのいずれかのための本発明の薬学的組成物は、例えば、パネキシンチャネルを抑制または遮断し得るパネキシン調節剤も含んでもよい。いくつかの態様において、パネキシン調節剤は、Ｐａｎｘ１、Ｐａｎｘ２、またはＰａｎｘ３調節剤を含んでもよいか、または含まなくてもよい。いくつかの態様において、パネキシン調節剤は、Ｐａｎｘ１調節剤を含んでもよいか、または含まなくてもよい。
別の態様において、本発明は、前記対象の眼に治療的に有効な量の少なくとも１つのパネキシン調節剤を投与することによって、例えば、ＤＲ、緑内障、ＤＭＥ、ＡＭＤ、眼線維症、及び／または神経障害性の眼の障害を含む、眼及び他の障害を治療するための薬学的組成物、製造品、及び方法に関する。いくつかの態様において、神経障害性の眼の障害は、例えば、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）の喪失及び／または緑内障性眼神経障害であり得る。いくつかの態様において、治療的に有効な量の少なくとも１つのパネキシン調節剤の投与は、硝子体のグルタミン酸濃度の低減にさらに有用である膜神経節細胞の喪失の治療（例えば、治療、予防、減速、軽減、停止、もしくは改善）に有効である。
一態様において本発明は、高眼圧を治療するための薬学的組成物、製造品、及び方法に関する。いくつかの態様において、高眼圧の治療は、眼圧関連神経障害を治療または予防する。いくつかの態様において、高眼圧を治療するための方法は、例えば、前記対象の眼に、治療的に有効な量の少なくとも１つのヘミチャネルもしくはコネキシン調節剤、及び／または少なくとも１つのパネキシンチャネルもしくはパネキシン調節剤を投与することを含む。一態様において、本発明は、例えば、緑内障を治療するための薬学的組成物及び方法に関する。本明細書における方法は、眼圧を減少させるのに十分な量での、緑内障等の眼圧関連視神経障害の治療を提供する。いくつかの態様において、コネキシン調節剤及び／またはパネキシン調節剤は、眼圧の上昇と関連した外傷の治療に有用である。いくつかの態様において、コネキシン調節剤は、コネキシン４３調節剤である。いくつかの態様において、本発明の組成物及び方法は、高眼圧の治療、及び眼圧を正常レベル、例えば、２１ｍｍ Ｈｇ未満、例えば、８～２１ｍｍ Ｈｇのレベルに減少させるのに有用である。いくつかの態様において、本発明の組成物及び方法は、眼圧を約２２ｍｍ未満、２１ｍｍ、２０ｍｍ Ｈｇ、またはそれ未満に減少させるのに有用である。
本明細書に記載される組成物、製造品、及び方法は、一態様において、毒性副作用なしに緑内障を治療するのに有用である。いくつかの態様において、緑内障は、開放隅角緑内障または閉塞隅角緑内障であり得る。いくつかの態様において、治療的に有効な量の少なくとも１つのコネキシンまたはヘミチャネル調節剤、例えば、コネキシン４３調節剤もしくはコネキシン４３ヘミチャネル調節剤、及び／または少なくとも１つのパネキシン調節剤を必要とする対象の眼組織に、それらを投与することは、小柱網をとおる流動を増加させる。
一態様において、本発明は、正常眼圧緑内障（ｎｏｒｍａｌ ｔｅｎｓｉｏｎ ｇｌａｕｃｏｍａ）または正常眼圧緑内障（ｎｏｒｍｏｔｅｎｓｉｖｅ ｇｌａｕｃｏｍａ）を治療するための薬学的組成物、製造品、及び方法に関する。いくつかの態様において、本方法は、例えば、前記対象の眼に、治療的に有効な量の少なくとも１つのコネキシンもしくはヘミチャネル調節剤、及び／または少なくとも１つのパネキシン調節剤を投与することを含む。一態様において、本発明は、例えば、緑内障を治療するための薬学的組成物及び方法に関する。いくつかの態様において、コネキシン調節剤は、コネキシン４３またはコ
ネキシン
４３ヘミチャネル調節剤である。いくつかの態様において、コネキシン調節剤は、例えば、Ｃｘ２６、Ｃｘ３０、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ４５、Ｃｘ５０、Ｃｘ５７、または眼もしくは血管中の前記コネキシンを含む任意の他のコネキシンもしくはヘミチャネルの調節剤、及び／または少なくとも１つのパネキシンもしくはパネキシンチャネル調節剤であるか、あるいは、これらを含んでもよいか、または含まなくてもよい。いくつかの態様において、本発明の組成物及び方法は、眼圧が正常レベル、例えば、２１ｍｍ Ｈｇ未満のときでさえ、緑内障を治療するのに有用である。いくつかの実施形態において、本調節剤は、前述のもののうちのいずれかを含んでもよいか、または含まなくてもよい。
いくつかの態様において、本発明は、高血圧性緑内障及び正常眼圧緑内障、臨床的地図状萎縮を含む緑内障；乾燥型ＡＭＤ及び滲出型ＡＭＤを含むＡＭＤ、眼の異常もしくは障害、慢性黄斑虚血、線維症、特発性ポリープ状脈絡膜血管症（ＩＰＣ）；糖尿病性黄斑症、糖尿病性網膜症；高血圧性網膜症、炎症性脈絡膜血管新生；中心性漿液性網膜脈絡膜症（ＣＳＲ）；黄斑部毛細血管拡張症；パターンジストロフィ；網膜下／サブＰＲＤ（ｓｕｂＰＲＤ）血管新生；網膜神経感覚上皮の漿液性剥離；ＲＰＥ剥離；（硝子体への破綻出血を含む、網膜下色素上皮、網膜下、網膜内、もしくは網膜前）出血；網膜上、網膜内、網膜下、もしくは色素上皮下の瘢痕／グリア組織または線維素様の沈着；網膜線維症、網膜血管腫増殖及び網膜脈絡膜吻合；脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）；嚢胞性黄斑障；網膜肥厚；非滲出型ＡＭＤ；及び網膜瘢痕化、後部ぶどう膜炎を含むぶどう膜炎、強膜炎、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）網膜炎を含む上強膜炎ウイルス性網膜炎、未熟児の網膜症、網膜低酸素症、びまん性脈絡膜硬化症、脈絡毛細管板の硬化症、ドライアイ、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、神経障害性の眼の障害、外傷によって誘発された眼圧の低下、上皮基底膜ジストロフィ、ならびに／あるいは他の眼の障害を含み得るか、または含み得ない眼の障害の治療のための薬学的組成物、製造品、及び方法に関する。本明細書に記載される治療の方法のうちのいずれかにおいて有用な組成物及び製造品は、治療的に有効な量の少なくとも１つのコネキシンもしくはヘミチャネル調節剤、例えば、コネキシン調節剤、または少なくとも１つのパネキシンもしくはパネキシンチャネル調節剤を含む。いくつかの態様において、コネキシン調節剤は、例えば、コネキシン４３（Ｃｘ４３）、Ｃｘ２６、Ｃｘ３０、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ４５、Ｃｘ５０、Ｃｘ５７、もしくはそのようなコネキシンを含むヘミチャネル、または眼または血管中の任意の他のコネキシンもしくはコネキシンヘミチャネルの調節剤である。糖尿病性網膜症を治療するための実施形態において、本組成物は、例えば、パネキシンもしくはパネキシンチャネル調節剤、及び／または小分子コネキシンもしくはヘミチャネル調節剤、例えば、コネキシン４３ヘミチャネルもしくはコネキシン４３自体の小分子阻害剤を含んでもよい。いくつかの態様において、糖尿病性網膜症、または本明細書の他の疾患、障害、もしくは病態を治療するためのコネキシン調節剤は、配列番号１～３を有するポリヌクレオチド、及び／またはその調節された版を含むか、もしくは含まない本開示の任意のコネキシン４３調節剤でもよい。いくつかの実施形態において、本調節剤は、前述のもののうちのいずれかを含んでもよいか、または含まなくてもよい。
本明細書に記載及び特許請求される本発明は、白内障の治療においても使用され得る。網膜中心動脈は、眼に血液を供給し、脈絡膜への枝が眼の後方に潅流し、表面及び深部血管網が前方網膜に供給する。さらに、長い枝が、虹彩及び毛様体に潅流させて、（毛様体を介して）水晶体を含む眼の前方に栄養及び酸素を供給する発明者は、驚くべきことに、糖尿病性網膜症及び老人性黄斑変性を含む、血管床に影響を与える疾患が、前眼部への流れにも影響を与え、したがって、白内障形成の一因となることを確定し、白内障は、真性糖尿病を有する人々における視覚障害の最も一般的な原因のうちの１つであり、眼における重度の白内障もまた、後期ＡＭＤのより高い有病率と関連し得ることに留意されたい。
いくつかの態様において、本発明は、黄斑円孔、黄斑変性、網膜裂孔、ＤＭＥ、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、硝子体網膜症、屈折異常、ドライアイ、ウイルス性結膜炎、創傷治癒における潰瘍性結膜炎及び瘢痕形成、角膜の上皮創傷、シェーグレン症候群、白内障、放射状角膜切開の後遺症、角膜組織厚の増加を含み得るか、または含み得ない眼の障害を治療するための薬学的組成物、製造品、及び方法に関する。この実施形態において、本組成物は、例えば、パネキシン調節剤、またはコネキシン調節剤、例えば、コネキシン４３の小分子阻害剤またはペプチド阻害剤を含んでもよい。いくつかの態様において、コネキシン調節剤は、例えば、Ｃｘ４３の調節剤、Ｃｘ２６、Ｃｘ３０、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ４５、Ｃｘ５０、及びＣｘ５７、または眼もしくは血管中の任意の他のコネキシンの調節剤である。この実施形態のいくつかの態様において、本組成物は、例えば、配列番号１～３を有するポリヌクレオチドを含むか、または含まない、本開示の任意のコネキシン４３調節剤を含んでもよい。いくつかの実施形態において、本調節剤は、前述のもののうちのいずれかを含んでもよいか、または含まなくてもよい。
いくつかの態様において、本発明は、白内障を治療するための薬学的組成物、製造品、及び方法に関する。この実施形態において、本組成物は、例えば、パネキシンもしくはパネキシンチャネル調節剤、ギャップ結合調節剤、ギャップ結合もしくはヘミチャネルリン酸化剤、またはコネキシン拮抗薬、例えば、ポリヌクレオチド、ペプチドもしくはペプチド模倣薬またはコネキシンの小分子拮抗薬を含んでもよい。いくつかの態様において、コネキシン調節剤は、Ｃｘ４３、Ｃｘ２６、Ｃｘ３０、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ４５、Ｃｘ５０、Ｃｘ５７、または眼もしくは血管中の任意の他のコネキシンの調節剤である。この実施形態のいくつかの態様において、本組成物は、例えば、トナベルサットを含まない、本開示の任意のＣｘ４３調節剤を含んでもよい。いくつかの実施形態において、本調節剤は、前述のもののうちのいずれかを含んでもよいか、または含まなくてもよい。
いくつかの態様において、本発明は、網膜静脈または動脈閉塞、緑内障、網膜発作、眼圧上昇を引き起こす外傷、糖尿病性網膜症、嚢胞様黄斑浮腫を含み得るか、または含み得ない眼の障害を治療するための薬学的組成物、製造品、及び方法に関するこの実施形態において、本組成物は、例えば、パネキシンもしくはパネキシンチャネル調節剤、ギャップ結合調節剤、ギャップ結合もしくはヘミチャネルリン酸化剤、Ｃｘ４３の場合、ＺＯ－１結合部位ペプチド摸倣薬、または別のコネキシン拮抗薬、例えば、ポリヌクレオチド、ペプチドもしくはペプチド模倣薬、またはコネキシンの小分子拮抗薬を含んでもよい。いくつかの態様において、コネキシン調節剤は、Ｃｘ４３、Ｃｘ２６、Ｃｘ３０、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ４５、Ｃｘ５０、Ｃｘ５７、または眼もしくは血管中の任意の他のコネキシンの調節剤である。この実施形態のいくつかの態様において、本組成物は、例えば、トナベルサットを含まない、本開示の任意のＣｘ４３調節剤を含んでもよい。いくつかの実施形態において、本調節剤は、前述のもののうちのいずれかを含んでもよいか、または含まなくてもよい。
いくつかの態様において、本発明は、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、及び筋萎縮性側索硬化症、偏頭痛、または偏頭痛を伴うか、もしくは偏頭痛を伴わないアウラ、坐骨神経痛／神経根障害を治療するための薬学的組成物、製造品、及び方法に関する。この実施形態において、本組成物は、例えば、パネキシン調節剤、ギャップ結合もしくはヘミチャネルリン酸化剤、またはコネキシン拮抗薬を、例えば、単独で、または組み合わせで含んでもよい。いくつかの態様において、コネキシン調節剤は、例えば、Ｃｘ４３、Ｃｘ２６、Ｃｘ３０、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ４５、Ｃｘ５０、Ｃｘ５７、または眼もしくは血管中の任意の他のコネキシンの調節剤である。この実施形態のいくつかの態様において、本組成物は、例えば、式Ｉの化合物、例
えば、トナベルサット及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体、ならびに、例えば、トナベルサットプロドラッグ及び眼を標的とする本開示の式Ｉの化合物のプロドラッグを含む、本開示の任意のコネキシン４３調節剤を含んでもよい。いくつかの実施形態において、本調節剤は、前述のもののうちのいずれかを含んでもよいか、または含まなくてもよい。
一態様において、本発明は、眼低酸素症（ｏｃｕｌａｒ ｈｙｐｏｘｉａ）、眼の血管の損傷、及び／または血管漏出を治療するための薬学的組成物、製造品、及び方法に関する。いくつかの態様において、眼低酸素症の治療及び予防は、血管漏出、血管破綻、及び／または眼中の脈絡膜もしくは他の血管への正常よりも低い酸素化血流を引き起こす任意の他の病態の治療または予防を含む。いくつかの態様において、眼低酸素症の治療または予防は、血管の圧縮を引き起こすか、さもなければ眼への血流に影響を与える病態の治療を含む。いくつかの態様において、眼低酸素症、緑内障、ＡＭＤ、ＤＭＥ、眼の線維症、及び／または網膜潅流障害等の眼の障害を治療するための方法は、例えば、前記対象の眼に治療的に有効な量の少なくとも１つのギャップ結合調節剤もしくはコネキシン調節剤、または少なくとも１つのパネキシンもしくはパネキシンチャネル調節剤を投与することを含む。一態様において、本発明は、例えば、緑内障を治療するため、またはＡＭＤを治療するための薬学的組成物及び方法に関する。
いくつかの態様において、本発明の組成物は、線維柱帯切除術の成功率を向上させるためのアジュバントとして有用である。
眼の前方は、眼の前方部分内の構造体に栄養を供給する明澄な流体である房水で満たされている。この流体は、眼の水晶体を取り囲む毛様体によって絶えず産生されている。房水は、瞳孔をとおり、眼の排液隅角（ｄｒａｉｎａｇｅ ａｎｇｌｅ）と称される、角膜が虹彩に付着する接合部に位置する小柱網チャネルをとおって眼から流れ出る。本発明のいくつかの態様において、１つ以上のギャップ結合もしくはコネキシン調節剤、またはパネキシンもしくはパネキシンチャネル調節剤は、小柱網または毛様体に投与される。
本発明の一態様において、対象における他の眼の病態、例えば、網膜虚血性疾患または眼虚血性疾患を治療するための組成物、製造品、及び方法も取り上げられ、例えば、内網膜における炎症を軽減するのに有効な量を含む、治療的に有効な量のギャップ結合調節剤、コネキシン調節剤、またはパネキシンもしくはパネキシンチャネル調節剤を投与することを含む。いくつかの態様において、網膜虚血性疾患は、網膜動脈閉塞、または網膜中心静脈閉塞である。いくつかの態様において、眼虚血性疾患（ｏｐｔｉｃ ｉｓｃｈｅｍｉｃ
ｄｉｓｅａｓｅ）は、例えば、前部虚血性視神経障害である。いくつかの態様において、コネキシン調節剤は、コネキシン４３調節剤である。
本発明は、対象における脈絡膜潅流の障害及び／もしくは脈絡膜炎、または脈絡膜過剰潅流（ｃｈｏｒｏｉｄａｌ ｏｖｅｒｐｅｒｆｕｓｉｏｎ）を低減させるための組成物、製造品、及び方法も取り上げ、対象の脈絡膜に、内網膜内の脈絡膜潅流の障害及び／もしくは脈絡膜炎、または脈絡膜過剰潅流を低減させるのに有効な量のギャップ結合調節剤、コネキシン調節剤、またはパネキシンもしくはパネキシンチャネル調節剤を投与する
ことを含む。本発明のいくつかの態様において、対象の脈絡膜に、脈絡膜潅流の障害及び／もしくは脈絡膜炎、または脈絡膜過剰潅流を低減させるのに有効な、治療的に有効な量のギャップ結合調節剤、コネキシン調節剤、またはパネキシンもしくはパネキシンチャネル調節剤の投与は、脈絡毛細管板内皮細胞喪失及び／または脈絡毛細管板脱落も低減させ、それにより眼の障害を治療または予防する。いくつかの態様において、脈絡膜潅流の障害及び／もしくは脈絡膜炎、または脈絡膜過剰潅流の低減は、網膜色素上皮変性及び／またはドルーゼン発生も低減し、さもなければ、乾燥型黄斑変性または湿潤型黄斑変性であ
り得る黄斑変性または黄斑ジストロフィの進行を改善、停止、減速、及び／または逆戻りさせる。いくつかの態様において、脈絡膜潅流の障害及び／もしくは脈絡膜炎、または脈絡膜過剰潅流を低減させるためのギャップ結合調節剤、コネキシン調節剤、またはパネキシンもしくはパネキシンチャネル調節剤は、Ｃｘ４３調節剤である。脈絡膜潅流の障害及び／もしくは脈絡膜炎、または脈絡膜過剰潅流を低減させるためのギャップ結合調節剤、コネキシン調節剤、またはパネキシンもしくはパネキシンチャネル調節剤は、眼治療薬と一緒に投与されてもよい。
脈絡膜潅流の障害及び／もしくは脈絡膜炎、または脈絡膜過剰潅流は、脈絡膜における血管漏出を誘導し、網膜色素上皮における内皮細胞喪失を引き起こし得る。本明細書に記載されるように、驚くべきことに、脈絡膜潅流の障害及び／または脈絡膜炎、ならびに脈絡毛細管板脱落が、Ｃｘ４３の上方制御から生じ、Ｃｘ４３の上方制御がＡＭＤの寄与原因であることが見出された。脈管構造体が、Ｃｘ４３発現における変化と関連したＡＭＤ臓器提供者の網膜の脈絡膜に認められ、ＡＭＤにおけるＣｘ４３の上方制御の役割を裏付けた。いくつかの実施形態において、血管漏出及び脈絡膜潅流の障害、ならびに／もしくは脈絡膜炎、または脈絡膜過剰潅流の治療または予防は、非滲出型ＡＭＤ、もしくは乾燥型ＡＭＤ、血管新生ＡＭＤ、または湿潤型ＡＭＤ、及びドルーゼン発生等の病態と関連した網膜色素上皮変性または網膜血管新生の治療または予防において有用である。驚いたことに見出され、本明細書に記載されるように、血管漏出及び脈絡膜潅流の障害及び／または脈絡膜炎等の上流事象は、ＡＭＤ脈絡膜の変化と関連し、続いて、症状、そのような網膜色素上皮変性または網膜血管新生と関連する。
したがって、一態様において、本発明は、本発明のギャップ結合調節剤、コネキシン調節剤、及び／またはパネキシンもしくはパネキシンチャネル調節剤を、単独で、または血管新生ＡＭＤ、湿潤型ＡＭＤ、ドルーゼン発生、乾燥型ＡＭＤ、網膜色素上皮変性、または地図状萎縮の治療において使用するための眼の作用剤を含む、ＡＭＤの治療において使用するための１つ以上の眼治療薬と一緒に投与する方法を取り上げる。本発明のギャップ結合調節剤、コネキシン調節剤、またはパネキシンもしくはパネキシンチャネル調節剤は、眼治療薬とは別に、それと同時に、またはそれと合わせた組成物で投与されてもよい。
いくつかの態様において、本発明のコネキシンまたはパネキシンオリゴヌクレオチド及びポリヌクレオチドは、化学的に、または合成的に作製されるか、さもなければ製造される。いくつかの実施形態において、コネキシン調節剤は、コネキシンオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドである。一実施形態において、コネキシン調節剤は、化学的に修飾されたか、または修飾されていないかに関わらない、コネキシンアンチセンスオリゴデオキシヌクレオチド、例えば、Ｃｘ２６、Ｃｘ３０、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ４５、Ｃｘ５０、Ｃｘ５７、または眼もしくは血管中の任意の他のコネキシンに対する、Ｃｘ４３アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドまたはアンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドである。いくつかの態様において、修飾コネキシンアンチセンスポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドは、修飾及び未修飾ヌクレオチドの混合物を含んでもよい。いくつかの態様において、本明細書の方法で使用されるコネキシンアンチセンス化合物は、天然型ヌクレオチド及び未修飾ヌクレオシド間結合を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、コネキシンオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチド及び／またはコネキシンアンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドは、例えば、Ｃｘ４３アンチセンスオリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、及び／またはＣｘ４３アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドでもよい。いくつかの実施形態において、本調節剤は、前述のもののうちのいずれかを含んでもよいか、または含まなくてもよい。
少なくとも１個の未修飾ヌクレオチドを含むコネキシンアンチセンスオリゴヌクレオチド
またはポリヌクレオチドが、本発明に取り上げられる。一態様において、コネキシンアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドは、少なくとも１個の修飾ヌクレオチドを含んでもよい、かつ／または少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間結合、及び／もしくは少なくとも１つの修飾糖部分を有してもよい。修飾ヌクレオシド間結合は、例えば、ホスホロチオエート結合でもよい。いくつかの態様において、例えば、コネキシンポリヌクレオチドは、立体配座的に緊張させたヌクレオチド、例えば、ロックド核酸（ＬＮＡ）または架橋核酸（ＢＮＡ）を含む少なくとも１つのヌクレオチドを含んでもよい。ロックトヌクレオチドは、例えば、次の種類：２′－Ｏ－ＣＨ２－４′（オキシ－ＬＮＡ）、２′－ＣＨ２－ＣＨ２－４′（メチレン－ＬＮＡ）、２′－ＮＨ－ＣＨ２－４′（アミノ－ＬＮＡ）、２′－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２－４′（メチルアミノ－ＬＮＡ）、２′－Ｓ－ＣＨ２－４′（チオ－ＬＮＡ）、及び２′－Ｓｅ－ＣＨ２－４′（セレノ－ＬＮＡ）のうちの１つから選択されてもよい。いくつかの態様において、修飾ヌクレオチドは、ロックド核酸またはアンロックド核酸でもよい。いくつかの態様において、修飾及び未修飾コネキシンアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドは、修飾及び未修飾Ｃｘ４３アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドである。いくつかの態様において、修飾及び未修飾コネキシンアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドは、修飾及び未修飾Ｃｘ２６アンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはポリヌクレオチド、Ｃｘ３１．１アンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはポリヌクレオチド、Ｃｘ３０アンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはポリヌクレオチド、Ｃｘ４５アンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはポリヌクレオチド、Ｃｘ３６アンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはポリヌクレオチド、Ｃｘ３７アンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはポリヌクレオチド、Ｃｘ４０アンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはポリヌクレオチド、Ｃｘ５０アンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはポリヌクレオチド、またはＣｘ５７アンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはポリヌクレオチドである。いくつかの態様において、コネキシンアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドは、国際公開２０１３０１２７５８号に記載されるもの等のキラル亜リン酸部分を含む。
ヌクレオチド配列を含むか、または配列番号１～１６から選択されるヌクレオチド配列から改質された例となる修飾または未修飾コネキシン４３アンチセンス化合物も、本明細書に取り上げられる。本発明のポリヌクレオチドは、８０ヌクレオチド長未満、例えば、１２～１８から約５０～８０ヌクレオチド長、好ましくは、約３０ヌクレオチド長以下、例えば、１２～約３０ヌクレオチド長、より好ましくは、約１５～約３０ヌクレオチド長を有するポリヌクレオチドを含む。一例において、ポリヌクレオチドは、３０個のヌクレオチドを有する。本発明の方法は、いくつかの態様において、配列番号１～１７、配列番号４～１７から選択されるヌクレオチド配列を含むか、または配列番号１７の約８～４０個のヌクレオチドを含む、最大４０ヌクレオチド長、例えば、１５～４０ヌクレオチド長のコネキシン４３アンチセンス化合物の使用を取り上げる。いくつかの実施形態において、Ｃｘ４３アンチセンス化合物は、配列番号４～１７、または配列番号１～３の中の１個以上のチミンヌクレオチドを、１つ以上のウリジンヌクレオチド残基に置換することによって修飾されてもよい。
配列番号２１７の８～約８０個のヌクレオチドを含む修飾または未修飾Ｃｘ４５アンチセンスポリヌクレオチド、ならびに配列番号２７９の８～約８０個のヌクレオチドを含む修飾及び未修飾パネキシンアンチセンスポリヌクレオチドも本明細書に取り上げられる。本発明のポリヌクレオチドは、８０ヌクレオチド長未満、例えば、１２～１８から約５０～８０ヌクレオチド長、好ましくは、約３０ヌクレオチド長以下、例えば、１２～約３０ヌクレオチド長、より好ましくは、約１５～約３０ヌクレオチド長を有する合成ポリヌクレオチドを含む。一例において、ポリヌクレオチドは、３０個のヌクレオチドを有する。本発明の方法は、いくつかの態様において、最大４０ヌクレオチド長、例えば、１５～４０ヌクレオチド長、例えば、配列番号２１７の約８～約４０個または約１５～約４０個のヌ
クレオチドを含むコネキシン４５アンチセンス化合物の使用を取り上げる。本発明の方法は、いくつかの態様において、最大４０ヌクレオチド長、例えば、１５～４０ヌクレオチド長、例えば、配列番号２８３～２８７の約８～約４０個または約１５～約４０個のヌクレオチドを含むパネキシンアンチセンス化合物の使用を取り上げる。いくつかの実施形態において、コネキシン４５またはパネキシンアンチセンス化合物は、配列番号２１７、または配列番号２８３～２８７の中の１つ以上のチミンヌクレオチドを、１個以上のウリジンヌクレオチド残基に置換することによって修飾されてもよい。
眼もしくは血管中の任意の他のコネキシンに対する、修飾もしくは未修飾Ｃｘ２６ポリヌクレオチド、Ｃｘ３１．１ポリヌクレオチド、Ｃｘ３６ポリヌクレオチド、Ｃｘ３７ポリヌクレオチド、Ｃｘ４０ポリヌクレオチド、Ｃｘ５０ポリヌクレオチド、またはＣｘ５７ポリヌクレオチド、あるいは修飾または未修飾アンチセンスポリヌクレオチドも、本明細書に取り上げられる方法のうちのいずれかにおける使用のために取り上げられる。本明細書に取り上げられる使用のうちのいずれかのための本発明の薬学的組成物は、パネキシンチャネル、例えば、Ｐａｎｘ１、またはＰａｎｘ２、またはＰａｎｘ３を抑制し得るパネキシンアンチセンスポリヌクレオチド調節剤も含んでもよい。いくつかの実施形態において、本調節剤は、前述のもののうちのいずれかを含んでもよいか、または含まなくてもよい。
本発明のいくつかの態様において、コネキシン４３アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドは、配列番号１～１７から選択される配列を有するポリヌクレオチドに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の相同性を有する。オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドであるコネキシンまたはパネキシンは、これらのそれぞれの配列の８～８０個のヌクレオチド部分に対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の相同性を有してもよい。例えば、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドであるコネキシン４５調節剤が、配列番号２１７の８～８０個のヌクレオチド部分に対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％相同性を有してもよい一方で、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドであるパネキシン調節剤は、配列番号２８３（Ｐａｎｘ１ポリヌクレオチド）、（Ｐａｎｘ１ポリヌクレオチドＲｅｆＳｅｑ番号ＮＭ＿０１５３６８．３）、配列番号２８
４（Ｐａｎｘ２ポリヌクレオチド）、（変異体１の場合、Ｐａｎｘ２ポリヌクレオチドＲｅｆＳｅｑ番号ＮＭ＿０５２８３９．３）、配列番号２８５（Ｐａｎｘ２ポリヌクレオチド変異体２の場合、ＲｅｆＳｅｑ番号ＮＭ＿００１１６０３００．１）、配列番号２８６（Ｐａｎｘ２ポリヌクレオチド変異体３の場合、ＲｅｆＳｅｑ番号ＮＲ＿０２７６９１．１）、もしくは配列番号２８７（Ｐａｎｘ３ポリヌクレオチド）（Ｐａｎｘ３ポリヌクレオチドＲｅｆＳｅｑ番号ＮＭ＿０５２９５９．２）、またはこれらの変異体の８～８０個のヌクレオチド部分に対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の相同性を有してもよい。いくつかの態様において、パネキシン調節剤は、パネキシンペプチド配列を含んでもよいか、または含まなくてもよい。パネキシンペプチド配列は、ポリペプチド配列番号２８８（Ｐａｎｘ１ペプチド）、配列番号２８９（Ｐａｎｘ２ペプチド）、もしくは配列番号２９０（Ｐａｎｘ３ペプチド）、またはこれらの変異体の８～４０個の連続したアミノ酸、細胞外ドメイン、細胞内ドメイン、カルボキシ末端部、またはアミノ末端部を含み得る。いくつかの実施形態において、本調節剤は、前述のもののうちのいずれかを含んでもよいか、または含まなくてもよい。
他の実施形態において、ギャップ結合調節剤またはコネキシン調節剤は、時折、抗コネキシンペプチドまたはペプチド模倣薬と称される、コネキシンペプチドまたはペプチド模倣薬、例えば、抗コネキシンヘミチャネル遮断ペプチドまたはペプチド模倣薬、例えば、コネキシン細胞外ドメイン、膜貫通領域、及びコネキシンカルボキシ末端ペプチドを含む修
飾または未修飾ペプチドもしくはペプチド模倣薬）である。ギャップ結合調節剤、または抗コネキシンヘミチャネル遮断ペプチドもしくはペプチド模倣薬は、修飾されていてもよいか、または修飾されていなくてもよい。ギャップ結合調節剤、及び抗コネキシンヘミチャネル遮断ペプチドまたはペプチド模倣薬は、化学的、合成的に作製されるか、さもなければ製造される。いくつかの実施形態において、ギャップ結合調節剤またはコネキシン調節剤は、Ｃｘ４３ペプチドまたはペプチド模倣薬である。いくつかの態様において、治療上有効な修飾または未修飾ペプチドもしくはペプチド摸倣薬は、Ｃｘ４３またはＣｘ４５等のコネキシンの細胞外ドメインまたは膜貫通ドメインの一部分を含む。他の実施形態において、パネキシンまたはパネキシンチャネル調節剤は、時折、抗パネキシンペプチドまたはペプチド模倣薬と称される、パネキシンペプチドまたはペプチド模倣薬、例えば、修飾または未修飾ペプチドもしくはペプチド模倣薬である。
いくつかの実施形態において、本発明の調節剤は、抗Ｃｘ４３ペプチドまたはペプチド模倣薬、例えば、治療上有効、例えば、本明細書に記載される神経障害性の眼の障害のうちのいずれかを治癒するのに有効な、本発明の方法で有用な、コネキシンの細胞外ドメインの一部分を含むペプチド、及びコネキシンのカルボキシ末端の一部分を含むペプチドを含む、本明細書に記載されるペプチドのうちのいずれかを含む。いくつかの態様において、治療上有効な修飾または未修飾ペプチドまたはペプチド摸倣薬は、Ｃｘ４３等のコネキシンの細胞外ドメインまたは膜貫通ドメインの一部分を含む。
いくつかの実施形態において、調節剤は、ギャップ結合閉鎖化合物及びヘミチャネル閉鎖化合物でもよい。いくつかの実施形態において、ギャップ結合閉鎖化合物及びヘミチャネル閉鎖化合物は、コネキシン４３ギャップ結合閉鎖化合物及びコネキシン４３ヘミチャネル閉鎖化合物である。好ましいコネキシンカルボキシ末端ポリペプチドは、コネキシン４３カルボキシ末端ポリペプチドである。
他の実施形態において、ギャップ結合調節剤は、時折、抗ギャップ結合ペプチドまたはペプチド模倣薬と称される、ギャップ結合ペプチドまたはペプチド模倣薬、例えば、抗ギャップ結合もしくはヘミチャネル遮断ペプチドまたはペプチド模倣薬、例えば、細胞外ドメイン、膜貫通領域、またはＣｘ４３、Ｃｘ２６、Ｃｘ３０、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ４５、Ｃｘ５０、及びＣｘ５７を含む、眼内のギャップ結合を含むタンパク質のコネキシンカルボキシ末端ペプチドを含む修飾または未修飾ペプチドもしくはペプチド模倣薬である。抗ギャップ結合もしくはヘミチャネル遮断ペプチド、またはペプチド模倣薬は、修飾されていてもよいか、または修飾されていなくてもよい。抗ギャップ結合もしくはヘミチャネル遮断ペプチドまたはペプチド模倣薬は、化学的、合成的に作製されるか、さもなければ製造される。いくつかの実施形態において、ギャップ結合調節剤は、Ｃｘ４３、Ｃｘ２６、Ｃｘ３０、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ４５、Ｃｘ５０、及びＣｘ５７ペプチドまたはペプチド模倣薬である。
本明細書に記載される眼の病態のうちのいずれか、例えば、緑内障、ＤＭＥ、眼線維症、ＡＭＤ、または本発明の１つ以上の薬学的組成物、例えば、コネキシンヘミチャネル遮断剤等の抗コネキシンＯＤＮ及びギャップ結合調節剤、例えば、ペプチドもしくはペプチド摸倣薬、または第１の抗コネキシン剤及び第２の抗コネキシン剤と共に本明細書に参照される他の眼の障害の対象の治療は、これらの同時投与、個別投与、連続的投与、または持続的投与を含んでもよい。
本発明のいくつかの態様において、調節剤は、トナベルサット等の、ギャップ結合閉鎖もしくは遮断化合物、またはヘミチャネル閉鎖もしくは遮断化合物である。いくつかの実施形態において、ギャップ結合調節剤は、本明細書で抗コネキシンまたはコネキシン調節剤とも称される小分子でもよい。いくつかの態様において、抗コネキシン調節剤薬物は、式
Ｉ：
Figure 2023022154000001
の構造を有し得、式中、ＹはＣ－Ｒ１であり、
Ｒ１は、アセチルであり、
Ｒ２は、水素、Ｃ３－８シクロアルキル、任意選択的に酸素によって中断されているか、もしくはヒドロキシによって置換されたＣ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシもしくは置換アミノカルボニル、Ｃ１－６アルキルカルボニル、Ｃ１－６アルコキシカルボニル、Ｃ１－６アルキルカルボニルオキシ、Ｃ１－６アルコキシ、ニトロ、シアノ、ハロ、トリフルオロメチル、またはＣＦ３Ｓ；あるいは基であるＣＦ３－Ａ－（式中、Ａは、－ＣＦ２－である）、
－ＣＯ－、－ＣＨ２－、ＣＨ（ＯＨ）、ＳＯ２、ＳＯ、ＣＨ２－Ｏ、もしくはＣＯＮＨ；あるいは基であるＣＦ２Ｈ－Ａ′－（式中、Ａ′は、酸素、硫黄、ＳＯ、ＳＯ２、ＣＦ２、もしくはＣＦＨである）；いずれかの芳香族部分が任意選択的に置換される、トリフルオロメトキシ、Ｃ１－６アルキルスルフィニル、ペルフルオロＣ２－６アルキルスルホニル、Ｃ１－６アルキルスルホニル、Ｃ１－６アルコキシスルフィニル、Ｃ１－６アルコキシスルホニル、アリール、ヘテロアリール、アリールカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ホスホノ、アリールカルボニルオキシ、ヘテロアリールカルボニルオキシ、アリールスルフィニル、ヘテロアリールスルフィニル、アリールスルホニル、もしくはヘテロアリールスルホニル；いずれかのアミノ部分が任意選択的に１つもしくは２つのＣ１－６アルキル基、またはＣ１－６アルキルスルフィニルアミノ、Ｃ１－６アルキルスルホニルアミノ、Ｃ１－６アルコキシスルフィニルアミノまたはＣ１－６アルコキシスルホニルアミノ、あるいはＣ１－６アルキルカルボニル、ニトロもしくはシアノ、または－Ｃ（Ｃ１－６アルキル）ＮＯＨまたは－Ｃ（Ｃ１－６アルキル）ＮＮＨ２によって末端置換されたエチレニルによって置換された、Ｃ１－６アルキルカルボニルアミノ、Ｃ１－６アルコキシカルボニルアミノ、Ｃ１－６アルキル－チオカルボニル、Ｃ１－６アルコキシ－チオカルボニル、Ｃ１－６アルキル－チオカルボニルオキシ、１－メルカプトＣ２－７アルキル、ホルミル、もしくはアミノスルフィニル、アミノスルホニルまたはアミノカルボニル；または任意選択的に１つまたは２つのＣ１－６アルキルによって、またはＣ２－７アルカノイルによって置換されたアミノ；Ｒ３及びＲ４のうちの１つは水素またはＣ１－４アルキルであり、他のものはＣ１－４アルキル、ＣＦ３であるか、またはＣＨ２Ｘａは、任意選択的に１つまたは２つのＣ１－４アルキル基、シアノ、またはＣ１－４アルコキシカルボニルによって置換されたフルオロ、クロロ、ブロモ、ヨード、Ｃ１－４アルコキシ、ヒドロキシ、Ｃ１－４アルキルカルボニルオキシ、－Ｓ－Ｃ１－４アルキル、ニトロ、アミノ；あるいはＲ３及びＲ４は共に、任意選択的にＣ１－４アルキルによって置換されたＣ２
－５ポリメチレンであり、
Ｒ５は、Ｃ１－６アルキルカルボニルオキシ、ベンゾイルオキシ、ＯＮＯ２、ベンジルオキシ、フェニルオキシまたはＣ１－６アルコキシであり、Ｒ６及びＲ９は、水素であるか、またはＲ５は、ヒドロキシであり、Ｒ６は、水素またはＣ１－２アルキルであり、Ｒ９は水素であり、
Ｒ７は、ヘテロアリールまたはフェニルであり、任意選択的にこれらの両方が、任意選択的に、Ｃ１－４アルキル、シアノ、アジド、Ｃ１－４アルコキシ、トリフルオロメトキシ、及びトリフルオロメチルによって１回または２回置換されたクロロ、フルオロ、ブロモ、ヨード、ニトロ、アミノから選択される基または原子で１回以上時間依存的に置換され、
Ｒ８は、水素、Ｃ１－６アルキル、ＯＲ１１、またはＮＨＣＯＲ１０であり、Ｒ１１は、水素、Ｃ１－６アルキル、ホルミル、Ｃ１－６アルカノイル、アロイル、またはアリール－Ｃ１－６アルキルであり、Ｒ１０は、水素、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシ、モノもしくはジＣ．ｓｕｂ．１－６アルキルアミノ、アミノ、アミノ－Ｃ．ｓｕｂ．１－６アルキル、ヒドロキシ－Ｃ１－６アルキル、ハロ－Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６アシルオキシ－Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシカルボニル－Ｃ１－６－アルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、Ｒ８－Ｎ－ＣＯ－Ｒ７基は、Ｒ５基に対してシス形であり、Ｘは、酸素またはＮＲ１２であり、Ｒ１２は、水素またはＣ１－６アルキルである。
いくつかの実施形態において、上記のマーカッシュ群のうちのいずれかに関して、各群は、その群について列挙される種のうちのいずれかを含んでもよいか、または含まなくてもよい。
いくつかの実施形態において、小分子コネキシン調節剤は、トナベルサット、カラベルサット、またはＳＢ－２０４２６９であり得る。ＳＢ－２０４２６９は、（トランス－（＋）－６－アセチル－４Ｓ－（４－フルオロベンゾイルアミノ）－３、４－ジヒドロ－２，２－ジメチル－２Ｈ－ベンゾ［ｂ］ピラン－３Ｒ－オール）としても知られる。カラベルサットは、Ｎ－［（３Ｒ，４Ｓ）－６－アセチル－３－ヒドロキシ－２，２－ジメチル－３，４－ジヒドロ－２Ｈ－クロメン－４－イル］－４－フルオロベンズアミドとしても知られる。トナベルサットは、Ｎ－（６－アセチル－３－ヒドロキシ－２，２－ジメチル－３，４－ジヒドロ－２Ｈ－クロメン－４－イル）－３－クロロ－４－フルオロベンズアミドとしても知られる。
上記のマーカッシュ群のうちのいずれかに関して、その群は、その群について列挙される種のうちのいずれかを含んでもよいか、または含まなくてもよい。
いくつかの実施形態において、コネキシン調節剤は、本発明で使用するための任意の化合物のプロドラッグでもよい。一態様において、本発明のコネキシン調節剤プロドラッグは、式ＩＩの化合物：
Figure 2023022154000002
でもよく、式中、
Ｑは、Ｏまたはオキシムであり、
Ｒ２は、Ｈであり、
Ａは、直接結合、－Ｃ（Ｏ）Ｏ＊－、－Ｃ（Ｒ３）（Ｒ４）Ｏ＊－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－Ｃ（Ｒ３）（Ｒ４）Ｏ＊－、または－Ｃ（Ｒ３）（Ｒ４）ＯＣ（Ｏ）Ｏ＊－であり、＊と印が付けられた原子は、Ｒ１に直接結合し、Ｒ３及びＲ４は独立して、Ｈ、フルオロ、Ｃ１－４アルキル、またはＣ１－４フルオロアルキルから選択されるか、またはＲ３及びＲ４共に、これらがシクロプロピル基を結合形成する原子、
Ｒ１は、基［１］、［２］、［２Ａ］、［３］、［４］、［５］、または［６］から選択され、＊＊と印が付けられた原子は、Ａに直接結合し、
Figure 2023022154000003
 Ｒ５及びＲ６は各々独立して、Ｈ、Ｃ１－４アルキル、Ｃ１－４フルオロアルキル、また
はベンジルから選択され、
Ｒ７は独立して、Ｈ、Ｃ１－４アルキル、またはＣ１－４フルオロアルキルから選択され、
Ｒ８は、 （ｉ）Ｈ、Ｃ１－４アルキル、もしくはＣ１－４フルオロアルキル、あるい
は
（ｉｉ）天然もしくは非天然アルファ－アミノ酸の側鎖、または本明細書に記載されるペプチド、あるいは
（ｉｉｉ）ビオチンまたはビオチンに化学的に結合することから選択され、
Ｒ９は、Ｈ、－Ｎ（Ｒ）（Ｒ１２）、または－Ｎ＋（Ｒｌ）（Ｒ１２）（Ｒ１３）Ｘ－、または－Ｎ（Ｒｌｌ）Ｃ（Ｏ）Ｒ１４から選択され、
Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３は独立して、Ｈ、Ｃ１－４アルキル、またはＣ１－４フルオロアルキルから選択され、 Ｒ１４は、Ｈ、Ｃ１－４アルキル、またはＣ１－４フルオロアルキルであり、
Ｒ１０及びＲ１５は独立して、Ｃ１－４アルキルまたはＣ１－４フルオロアルキルから選択され、
Ｘは、薬学的に許容されるアニオンである。
いくつかの態様において， Ｒ２はＢ－Ｒ２１であり、式中、
Ｂは、直接結合、－Ｃ（Ｏ）Ｏ＊－、－Ｃ（Ｒ２３）（Ｒ２４）Ｏ＊、Ｃ（Ｏ）Ｏ Ｃ（Ｒ２３）（Ｒ２４）＊、または
Ｃ（Ｒ２３）（Ｒ２４）ＯＣ（Ｏ）Ｏ＊であり、＊と印が付けられた原子は、Ｒ２１に直接結合し、
Ｒ２３及びＲ２４は独立して、Ｈ、フルオロ、Ｃ１－４アルキル、またはＣ１－４フルオロアルキルから選択され、
Ｒ２１は、基［２１］、［２２］、［２２Ａ］、［２３］、［２４］、［２５］、及び［２６］から選択され、＊＊と印が付けられた原子は、Ｂに直接結合し、
Figure 2023022154000004
 Ｒ２５及びＲ２６は各々独立して、Ｈ、Ｃ１－４アルキル、Ｃ１－４フルオロアルキル、またはベンジルから選択され、
Ｒ２７は独立して、Ｈ、Ｃ１－４アルキル、Ｃ１－４フルオロアルキルから選択され、
Ｒ２８は、
（ｉ）Ｈ、Ｃ１－４アルキル、もしくはＣ１－４フルオロアルキル、あるいは
（ｉｉ）天然もしくは非天然アルファ－アミノ酸の側鎖、または本明細書に記載されるペプチド、あるいは
（ｉｉｉ）ビオチンまたはビオチンに化学的に結合することから選択され、
Ｒ２９は、Ｈ、－Ｎ（Ｒ３１）（Ｒ３２）、または－Ｎ＊（Ｒ３１）（Ｒ３２）（Ｒ３３）Ｘ－、または－Ｎ（Ｒ３１）Ｃ（Ｏ）Ｒ３４から選択され、 Ｒ３１、Ｒ３２、及びＲ３３は独立して、Ｈ、Ｃ１－４アルキル、またはＣ１－４フルオロアルキルから選択され、
Ｒ３４は、Ｈ、Ｃ１－４アルキル、またはＣ１－４フルオロアルキルであり、
Ｘは、薬学的に許容されるアニオンであり、
Ｒ３０及びＲ３５は独立して、Ｃ１－４アルキルまたはＣ１－４フルオロアルキルである。
上記のマーカッシュ群のうちのいずれかに関して、その群は、その群について列挙される種のうちのいずれかを含んでもよいか、または含まなくてもよい。
いくつかの態様において、本明細書に記載されるペプチドは、コネキシン調節剤、カルモジュリン調節剤、またはパネキシン調節剤でもよい。
いくつかの態様において， Ｑは、式＝ＮＨＯＲ４３のオキシムであり、式中、Ｒ４３は、
（ｉ）Ｈ、Ｃ１－４フルオロアルキル、もしくは任意選択的に置換されたＣ１－４アルキルから選択されるか、または、
（ｉｉ）－Ａ３００－Ｒ３００であり、
Ａ３００は、直接結合、－Ｃ（Ｏ）Ｏ＊－、－Ｃ（Ｒ３）（Ｒ４）Ｏ＊－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－Ｃ（Ｒ３）（Ｒ４）Ｏ＊－、または－Ｃ（Ｒ３）（Ｒ４）ＯＣ（Ｏ）Ｏ＊－であり、＊と印が付けられた原子は、Ｒ３０に直接結合し、
Ｒ３及びＲ４は独立して、Ｈ、フルオロ、Ｃ１－４アルキル、もしくはＣ１－４フルオロアルキルから選択されるか、または
Ｒ３及びＲ４共に、これらがシクロプロピル基を結合形成する原子、
Ｒ３００は、基［１］、［２］、［２Ａ］、［３］、［４］、［５］、または［６］から選択され、＊＊と印が付けられた原子は、Ａ３００に直接結合し、
Figure 2023022154000005
Ｒ５及びＲ６は各々独立して、Ｈ、Ｃ１－４アルキル、Ｃ１－４フルオロアルキル、またはベンジルから選択され、 Ｒ７は独立して、Ｈ、Ｃ１－４アルキル、またはＣ１－４フルオロアルキルから選択され、
Ｒ８は、
（ｉｉｉ）Ｈ、Ｃ１－４アルキル、もしくはＣ１－４フルオロアルキル、あるいは
（ｉｖ）天然もしくは非天然アルファ－アミノ酸の側鎖、または本明細書に記載されるペプチド、あるいは
（ｖ）ビオチンまたはビオチンに化学的に結合することから選択され、
Ｒ９は、Ｈ、－Ｎ（Ｒ）（Ｒ１２）、または－Ｎ＋（Ｒ１ｌ）（Ｒ１２）（Ｒ１３）Ｘ－、または－Ｎ（Ｒｌｌ）Ｃ（Ｏ）Ｒ１４から選択され、
Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３は独立して、Ｈ、Ｃ１－４アルキル、またはＣ１－４フルオロアルキルから選択され、
Ｒ１４は、Ｈ、Ｃ１－４アルキル、またはＣ１－４フルオロアルキルであり、
Ｒ１０及びＲ１５は独立して、Ｃ１－４アルキルまたはＣ１－４フルオロアルキルから選択され、
Ｘは、薬学的に許容されるアニオンである。
ある実施形態において、Ｒ４３、任意選択的にリン酸基（Ｐ（Ｏ）ＯＲ６１Ｒ６２）で置換されたＣ１－４アルキルである。そのような実施形態の実施例において、ＯＲ４３は、－ＯＣＨ２Ｐ（Ｏ）ＯＲ６１ＯＲ６２であり、式中、Ｒ６１及びＲ６２は独立して、ＨまたはＣ１－４アルキルである。
別の実施形態において、Ｒ４３は、Ｃ（Ｏ）ＣＨ（Ｒ１００）ＮＨ２の構造を有するアミノ酸誘導体であり、式中、基であるＲ１００は、天然もしくは非天然アミノ酸の側鎖、または本明細書に記載されるペプチドである。
ある実施形態において、ＯＲ４３は、－ＯＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ（ＣＨ３）２）ＮＨ２である。
いくつかの実施形態において、上記のマーカッシュ群のうちのいずれかに関して、各群は、その群について列挙される種のうちのいずれかを含んでもよいか、または含まなくてもよい。
いくつかの態様において、本明細書に記載されるペプチドは、本明細書に開示されるペプチドまたはペプチド摸倣薬調節剤、例えば、ペプチドまたはペプチド摸倣コネキシン調節剤もしくはパネキシン調節剤のうちのいずれかでもよい。いくつかの態様において、ペプチドコネキシン調節剤は、配列番号１４０～２００、２３７～３１３、及び３４３～３５６のうちのいずれかでもよい。
本明細書に記載される組成物は、本明細書に記載されるものを含むか、または含まない眼の病態に使用することができる。
いくつかの態様において、プロドラッグは、国際公開第２０１４／００６４０７合に記載されるものでもよく、本明細書に参照により組み込まれる。いくつかの態様において、コネキシン調節剤のプロモイエティは、眼の１つ以上の領域または構造体を標的とするシャペロン部分を含んでもよい。プロモイエティは、本開示の任意のペプチド摸倣薬またはペプチド拮抗薬でもよい。いくつかの実施形態において、プロモイエティは、任意選択的に単一のアミノ酸の官能基上で保護される単一のアミノ酸であり得る。いくつかの実施形態において、プロモイエティは、標的種であり得る。いくつかの態様において、プロモイエティは、細胞膜上の内向き流束または外向き流束トランスポータの基質でもよい。プロモ
イエティは、例えば、化学結合したビオチンでもよい。プロモイエティは、例えば、化学結合したＤ－セリンでもよい。
本発明の方法の一態様において、本明細書に記載される１つ以上のギャップ結合調節剤、１つ以上のパネキシンチャネル調節剤、１つ以上のヘミチャネル調節剤、１つ以上のコネキシン調節剤、または１つ以上のパネキシン調節剤は、例えば、緑内障、眼線維症、眼低酸素症、ＡＭＤ、ＤＭＥ、眼低酸素症、及び／または眼の神経障害性障害を含む眼の障害を治療するのに有用な１つまたは複数の眼治療薬と組み合わせて投与されてもよい。本発明のいくつかの態様において、眼の障害、例えば、湿潤型ＡＭＤもしくは乾燥型ＡＭＤ、神経障害性の眼の障害、例えば、眼内網膜神経節細胞の喪失、緑内障性眼神経障害、及び／または眼圧関連神経障害の治療のために投与される１つ以上のコネキシン調節剤またはパネキシン調節剤は、眼治療薬と一緒に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、１つ以上のギャップ結合調節剤、１つ以上のパネキシンチャネル調節剤、１つ以上のヘミチャネル調節剤、１つ以上のコネキシン調節剤、またはより多くのパネキシン調節剤は、１つ以上のギャップ結合調節剤、１つ以上のパネキシンチャネル調節剤、１つ以上のヘミチャネル調節剤、１つ以上のコネキシン調節剤、またはより多くのパネキシン調節剤、及び眼治療薬を含む製剤で共投与されてもよい。
本発明の１つ以上のギャップ結合調節剤、１つ以上のパネキシンチャネル調節剤、１つ以上のヘミチャネル調節剤、１つ以上のコネキシン調節剤、または１つ以上のパネキシン調節剤と組み合わせて使用するための眼治療薬には、例えば、ＶＥＧＦ拮抗薬等の抗ＶＥＧＦ調節剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＰＤＧＦ拮抗薬等のＰＤＧＦ調節剤、Ｓ１Ｐ産生の阻害剤、スクアラミン、ＰＥＤＦ産生物質、チューブリン結合剤、インテグリン阻害剤、または、例えば、新生血管形成（ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒａｔｉｏｎ）ＡＭＤもしくは湿潤型ＡＭＤの治療において有用な他の治療薬が含まれる。好ましくは、本発明の調節剤のうちの１つ以上と組み合わせて使用するための眼治療薬は、ＰＤＧＦ調節剤である。いくつかの態様において、調節剤は、前述のもののうちのいずれかを含んでもよいか、または含まなくてもよい。
いくつかの態様において、ＶＥＧＦ調節剤は、ＶＥＧＦを抑制及び／もしくは阻害するか、またはＶＥＧＦの上流作用薬（ｕｐｓｔｒｅａｍ ａｇｏｎｉｓｔ）を抑制及び／もしくは遮断する拮抗薬でもよい。いくつかの態様において、ＶＥＧＦ拮抗薬には、例えば、ＶＥＧＦに結合し、抑制する拮抗薬、ＶＥＧＦの発現を抑制する化合物、及び／あるいはＶＥＧＦ阻害剤を含むか、またはＶＥＧＦを遮断もしくは抑制するタンパク質もしくはアンチセンスポリヌクレオチドをコードするウイルスベクターが含まれる。いくつかの態様において、ＶＥＧＦを抑制する種及び／またはＶＥＧＦの上流作用薬は、抗体または抗体断片、ナノボディ、ペプチドもしくはペプチド模倣薬、受容体断片、遺伝子組換え融合タンパク質、アプタマー、小分子、または一本鎖可変領域断片（ｓｃＦｖ）でもよい。いくつかの態様において、ＶＥＧＦ拮抗薬抗体は、例えば、Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（商標）（ラニビズマブ）、及び／またはＡｖａｓｔｉｎ（商標）（ベバシズマブ）でもよい。
細胞におけるｍＴＯＲ活性の増加は、血管細胞におけるｍＴＯＲ活性を増加させることによって血管形成を促進するＶＥＧＦ及びＰＤＧＦの分泌をもたらし得る。本発明のいくつかの態様において、ＶＥＧＦ調節剤は、ＶＥＧＦ－ＲまたはｍＴＯＲの活性を減少させ、それにより血管形成を減少させる。いくつかの態様において、ＶＥＧＦ結合相手の上流作用薬を抑制及び／または遮断し、ＶＥＧＦを抑制するＶＥＧＦ拮抗薬は、ＲＴＰ８０１阻害剤または遮断薬でもよい。さらに細胞におけるｍＴＯＲ活性の増加は、血管細胞におけるｍＴＯＲ活性を増加させることによって血管形成を促進するＶＥＧＦ及びＰＤＧＦの分泌をもたらし得る。したがって、いくつかの態様において、ＶＥＧＦ調節剤は、ｍＴＯＲ阻害剤、例えば、マクロライドまたは小分子でもよい。
本発明のギャップ結合調節剤、１つ以上のパネキシンチャネル調節剤、１つ以上のヘミチャネル調節剤、１つ以上のコネキシン調節剤、または１つ以上のパネキシン調節剤のうちの１つ以上と組み合わせて使用するための眼治療薬には、例えば、補体調節剤、ならびに、例えば、地図状萎縮、乾燥型ＡＭＤ、非滲出型ＡＭＤ、及び／またはドルーゼン発生の治療において有用な他の治療薬も含まれる。補体調節剤は、例えば、コンプスタチン、ＴＰ１０、エクリズマブ、ＡＲＣ１９０５、ＪＰＥ－１３７５、ＰＭＸ５３、ランパリズマブ、またはｒｈＣＦＨｐでもよい。
いくつかの態様において、本発明のギャップ結合調節剤、１つ以上のパネキシンチャネル調節剤、１つ以上のヘミチャネル調節剤、１つ以上のコネキシン調節剤、または１つ以上のパネキシン調節剤のうちの１つ以上と組み合わせて使用するための眼治療薬は、ＴＮＦ－アルファ阻害剤、Ｃ－ｒａｆキナーゼ阻害剤、ＮＳＡＩＤ、またはｎＡＣｈＲ阻害剤を含み得る。
本発明の投与、共投与、組成物、キット、または治療の方法のうちのいずれかで使用される抗コネキシン調節剤は、Ｃｘ４３調節剤、Ｃｘ４５調節剤、Ｃｘ２６、Ｃｘ３０、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ５０、及びＣｘ５７の調節剤、または眼（もしくは他の）血管中に存在する任意のコネキシンの調節剤でもよい。
緑内障及び／もしくは網膜潅流障害、湿潤型及び／もしくは乾燥型ＡＭＤ等の眼の障害、または本明細書に示される任意の他の眼の障害の治療において有用な眼治療薬は、例えば、ブリモニジン等のアルファ２作用薬、炭酸アニヒドラーゼ（ａｎｙｈｙｄｒａｓｅ）阻害剤、ベータ遮断薬、Ｆ２αプロスタグランジン類似体、抗アポトーシス剤、Ｎ－メチル－Ｄ－アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体拮抗薬、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤、またはグルタミン酸放出阻害剤であり得る。眼治療薬は、例えば、チモロール＆トラボプロストまたはチモロール＆ドルゾラミド等のベータ遮断薬及び炭酸脱水酵素阻害剤、ブリモニジン及びチモロール等のアルファ２作用薬とベータ遮断薬との組み合わせ、またはブリンゾラミド及びブリモニジン等のアルファ２作用薬と炭酸アニヒドラーゼ（ａｎｙｈｙｄｒａｓｅ）阻害剤との組み合わせを含んでもよいか、または含まなくてもよい２つ以上の眼治療薬を投与することを含む、複合療法でもよい。いくつかの態様において、眼治療薬は、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤を含んでもよいか、または含まなくてもよい。他の態様において、眼治療薬は、アデノシン摸倣物でもよい。他の眼治療薬は、毛様体神経栄養因子（ｃｉｌｉａｒｙ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｉｃ ｆａｃｔｏｒ）または神経成長因子等の神経栄養因子（ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎ）を含んでもよい。いくつかの態様において、眼治療薬は、アリベルセプト（ａｌｉｂｅｒｃｅｐｔ）、ランパリズマブ、ソネプシズマブ、フェンレチニド、ラニビズマブ（例えば、Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（商標））、ベバシズマブ（例えば、Ａｖａｓｔｉｎ（商標））、タンパク質毛様体神経栄養因子、血管内皮成長因子調節化合物、及び低酸素誘導因子１－アルファ調節化合物、ならびにこれらの任意の混合物のうちの１つ以上を含んでもよいか、または含まなくてもよい。一態様において、単独で、または１つ以上の眼治療薬と組み合わせて投与されるギャップ結合調節剤、パネキシンチャネル調節剤、ヘミチャネル調節剤、コネキシン調節剤、またはパネキシン調節剤は、修飾されていてもよいか、または修飾されていなくてもよい。本発明のいくつかの態様において、修飾コネキシンまたはパネキシン調節剤は、修飾及び未修飾ヌクレオチドまたは修飾及び未修飾アミノ酸等の修飾及び未修飾部分を含んでもよい。いくつかの態様において、コネキシンまたは他の調節剤は、例えば、本明細書に記載される修飾オリゴヌクレオチド、修飾ポリヌクレオチド、または修飾ペプチド、もしくはペプチド摸倣薬でもよい。いくつかの態様において、コネキシン調節剤は、１つ以上の眼治療薬の前、それと一緒に、もしくはそれの後に、またはそれと同じもしくは並行した投与スケジュールで、あるいはそれと同じ製剤中で共投与されてもよい。いくつかの態様において、パネキシンまたは他の調節剤
は、例えば、本明細書に記載される修飾オリゴヌクレオチド、修飾ポリヌクレオチド、または修飾ペプチドもしくはペプチド摸倣薬でもよい。いくつかの態様において、パネキシンまたは他の調節剤は、１つ以上の眼神経障害の治療と一緒にもしくはそれの後に、またはそれと同じもしくは並行した投与スケジュールで投与されてもよい。いくつかの態様において、パネキシンまたは他の調節剤は、例えば、本明細書に記載される修飾オリゴヌクレオチド、修飾ポリヌクレオチド、または修飾ペプチドもしくはペプチド摸倣薬でもよい。いくつかの態様において、パネキシンまたは他の調節剤は、１つ以上の眼神経障害の治療と一緒にもしくはそれの後に、またはそれと同じもしくは並行した投与スケジュールで投与されてもよい。
本発明の方法のいくつかの態様において、２つ以上のギャップ結合調節剤、ヘミチャネル調節剤、または本明細書に記載される２つ以上のコネキシン調節剤等が、投与されてもよく、これらは、同じまたは異なる種類の調節剤、例えば、２つ以上のポリヌクレオチド、２つ以上のペプチドもしくはペプチド摸倣化合物、または２つ以上の化合物でもよい。例えば、本発明の方法のいくつかの態様において、本明細書に記載される２つ以上のＣｘ４３調節剤が、投与されてもよく、これらは、同じまたは異なる種類の調節剤、例えば、２つ以上のポリヌクレオチド、２つ以上のペプチドもしくはペプチド摸倣化合物、または２つ以上の化合物でもよい。いくつかの実施形態において、例えば、１つ以上のＣｘ４３ポリヌクレオチドは、１つ以上のＣｘ４３ペプチドもしくはペプチド模倣薬、及び／または１つ以上の抗コネキシン化合物、あるいはこれらの任意の副組み合わせと一緒に共投与されてもよい。いくつかの態様において、本発明の方法は、タンパク質発現を調節することによって、ギャップ結合チャネルを一時的に調節するための、コネキシンアンチセンスポリヌクレオチドの投与を含んでもよく、ギャップ結合チャネル機能を直接かつより早急に調節するための、コネキシンペプチドまたはペプチド摸倣薬の投与をさらに含む。例えば、本発明の方法は、タンパク質発現を調節することによって、ギャップ結合チャネルを一時的に調節するための、Ｃｘ４３アンチセンスポリヌクレオチドの投与を含んでもよく、ギャップ結合チャネル機能を直接調節するための、Ｃｘ４３ペプチドまたはペプチド摸倣薬の投与をさらに含む。調節剤は、Ｃｘ４３、Ｃｘ４５、及び／またはパネキシン等の同じまたは異なるタンパク質も標的としてもよい。コネキシン調節剤及び／または遮断薬、パネキシン調節剤及び／または遮断薬、ギャップ結合調節剤、ヘミチャネル調節剤及び／または遮断薬は、修飾されていてもよいか、または修飾されていなくてもよい。
本発明の方法のいくつかの態様において、本明細書に記載される１つ以上のギャップ結合調節剤及び／またはコネキシン調節剤は、パネキシン調節剤と一緒に投与されてもよく、これらは、同じまたは異なる種類の調節剤、例えば、２つ以上のポリヌクレオチド、２つ以上のペプチドもしくはペプチド摸倣化合物、または２つ以上の化合物でもよい。いくつかの態様において、コネキシン調節剤は、Ｃｘ４３調節剤である。
本発明の方法のいくつかの態様において、本明細書に記載される２つ以上のパネキシン調節剤またはパネキシンチャネル調節剤が、投与されてもよく、これらは同じまたは異なる種類の調節剤、例えば、２つ以上のポリヌクレオチド、２つ以上のペプチドもしくはペプチド摸倣化合物、または２つ以上の化合物でもよい。
本明細書でさらに説明されるように、修飾オリゴヌクレオチドは、次の選択された構成成分：修飾ヌクレオシド間結合、例えば、ホスホロチオエート結合、及び修飾糖部分、例えば、立体配座的に緊張させた糖類、例えば、ＬＮＡまたはＢＮＡのうちの１つ以上をさらに含む。
本発明のいくつかの態様において、コネキシン調節剤（例えば、Ｃｘ２６、Ｃｘ３０、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ４３、Ｃｘ４５、Ｃｘ５０、もしくは
Ｃｘ５７調節剤）または本発明のパネキシン調節剤は、薬学的に許容される担体または希釈剤と合わせられて、薬学的組成物を産生する。いくつかの態様において、好適な担体及び希釈剤としては、緩衝化した水溶液、等張食塩水液、例えば、リン酸緩衝食塩水、等張水等が挙げられる。
別の態様において、Ｐ２Ｘ７受容体拮抗薬は、本明細書に示される疾患、障害、及び病態を治療するために、単独で、またはギャップ結合調節剤、パネキシンチャネル調節剤、ヘミチャネル調節剤、コネキシン調節剤、及び／もしくはパネキシン調節剤と一緒に投与される。Ｐ２Ｘ７拮抗薬には、ＮＦ２７９スラミン類似体）、カルミダゾリウム（カルモジュリン拮抗薬）、ＫＮ－６２（ＣａＭキナンゼ（ｋｉｎａｎｓｅ）ＩＩ拮抗薬）、亜鉛、カルシウム、マグネシウム、及び銅が含まれる。
様々な好ましい実施形態は、本明細書に示される疾患、障害、及び病態を治療
するための、単独で、またはパネキシンチャネル開口を遮断もしくは改善するか、さもなければ拮抗もしくは抑制する小分子と一緒に、ヘミチャネル開口を遮断または改善するか、さもなければ拮抗または抑制する小分子の使用を含む。様々な好ましい実施形態において、ヘミチャネル開口を遮断または改善もしくは抑制する小分子は、トナベルサットもしくはその類似体、またはこれらのいずれかのプロドラッグである。様々な実施形態において、パネキシンチャネル開口を遮断または改善もしくは抑制する小分子は、プロベネシドもしくはその類似体、またはこれらのいずれかのプロドラッグである。様々な好ましい実施形態において、疾患、障害、または病態は、眼新生血管疾患、眼の浮腫、眼の微小血管障害、及び糖尿病性の眼の疾患である。ある特定の実施形態において、疾患、障害、または病態は、糖尿病性網膜症、虚血性網膜症、脈絡膜血管新生、虹彩血管新生、角膜血管新生、網膜血管新生、眼内血管新生、湿潤型老人性黄斑変性、乾燥型老人性黄斑変性、眼の地図状萎縮、糖尿病性黄斑浮腫、糖尿病性網膜症、糖尿病性網膜虚血、増殖性糖尿病性網膜症、コーツ病、網膜中心静脈閉塞（ＣＲＶＯ）、分岐網膜中心静脈閉塞（ＢＲＶＯ）、未熟児の網膜症（ＲＯＰ）、結膜下出血、及び高血圧性網膜症、ぶどう膜炎または白内障である。
他の好ましい実施形態において、疾患、障害、または病態は、開放隅角緑内障、閉塞隅角緑内障、及び正常眼圧緑内障と、続発緑内障、色素性緑内障、偽落屑緑内障、外傷性緑内障、血管新生緑内障及び虹彩角膜内皮症候群（ＩＣＥ）、ならびに血管新生緑内障等の開放隅角緑内障ならびに閉塞隅角緑内障の変異形と、を含む緑内障である。別の好ましい実施形態において、疾患、障害、または病態は、ドライアイ疾患である。別の実施形態において、疾患、障害、または病態は、眼内及び角膜の持続性の上皮欠損である。さらに他の好ましい実施形態において、疾患、障害、または病態は、慢性皮膚創傷、糖尿病性足部潰瘍、静脈下腿潰瘍、及び褥瘡を含む潰瘍または潰瘍性病変である。別の好ましい実施形態において、疾患、障害、または病態は、脊髄損傷及び視神経損傷を含むＣＮＳ外傷である。本発明は、新生血管障害と診断されたか、または新生血管障害発症のリスクがある患者を治療するための方法も取り上げ、単独で、またはパネキシンチャネル開口を遮断もしくは改善するか、さもなければ拮抗もしくは抑制する小分子と一緒に、ヘミチャネル開口を遮断または改善するか、さもなければ拮抗または抑制する小分子の投与に加えて、本方法は、治療処置として患者に、抗ＶＥＧＦ剤及び／または抗ＰＤＧＦ剤を投与することも含む。一態様において、ＰＤＧＦ拮抗薬及び／またはＶＥＧＦ拮抗薬は、患者における新生血管障害を抑制するのに十分な量で、ヘミチャネル拮抗薬及び／もしくはパネキシンチャネル拮抗薬の投与と同時に、または約１～５、１０、もしくは９０日以内に投与される。本発明の方法の特定の実施形態において、ＰＤＧＦ拮抗薬及び／またはＶＥＧＦ拮抗薬は、ヘミチャネル拮抗薬もしくは阻害剤、及び／またはパネキシンチャネル拮抗薬もしくは阻害剤と同時に投与される。一実施形態において、ＰＤＧＦ拮抗薬は、ＰＤＧＦ－Ｂ拮抗薬である。別の実施形態において、ＶＥＧＦ拮抗薬は、ＶＥＧＦ－Ａ拮抗薬である。ある
特定の実施形態において、ＰＤＧＦ拮抗薬は、核酸分子、アプタマー、アンチセンスＲＮＡ分子、リボザイム、ＲＮＡｉ分子、タンパク質、ペプチド、環状ペプチド、抗体、抗体断片の結合断片、糖類、ポリマー、または小分子である。別の実施形態において、ＶＥＧＦ拮抗薬は、核酸分子、アプタマー、アンチセンスＲＮＡ分子、リボザイム、ＲＮＡｉ分子、タンパク質、ペプチド、環状ペプチド、抗体、抗体断片の結合断片、糖類、ポリマー、または小分子である。特定の実施形態において、本発明の本方法は、ＥＹＥ００１アプタマー等のアプタマーであるＶＥＧＦ拮抗薬の投与を伴う。別の実施形態において、本発明の本方法は、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）（ベバシズマブ）またはＬｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標）（ラニビズマブ）等の、抗体またはその結合断片であるＶＥＧＦ拮抗薬の投与を伴う。特定の実施形態において、本発明の本方法は、アプタマー、抗体、またはこれらの結合断片であるＰＤＧＦ拮抗薬の投与を伴う。別の特定の実施形態において、本発明の本方法は、アンチセンスオリゴヌクレオチドであるＰＤＧＦ拮抗薬の投与を伴う。本発明のこの態様のなおも別の実施形態において、ＰＤＧＦ拮抗薬及び／またはＶＥＧＦ拮抗薬は、プロドラッグである。別の実施形態において、本発明の本方法は、眼新生血管障害を抑制または治療するための手段を提供する。いくつかの実施形態において、本発明の方法による治療または抑制に適している眼新生血管障害には、虚血性網膜症、虹彩血管新生、眼内血管新生、老人性黄斑変性、角膜血管新生、網膜血管新生、脈絡膜血管新生、糖尿病性網膜虚血、または増殖性糖尿病性網膜症が挙げられる。さらに別の実施形態において、本発明の方法は、乾癬またはリウマチ性関節炎を、治療を必要とする患者、またはそのような障害と診断されたか、もしくはそのような障害を発症するリスクのある患者において、抑制または治療するための手段を提供する。本発明は、単独で、またはパネキシンチャネル開口を遮断もしくは改善するか、さもなければ拮抗もしくは抑制する小分子と一緒に、ヘミチャネル開口を遮断または改善するか、さもなければ拮抗または抑制する小分子のうちの１つ以上と共に、ＰＤＧＦ拮抗薬及び／またはＶＥＧＦ拮抗薬を含む薬学的組成物、ならびに薬学的に許容される担体も提供する。この態様において、ＰＤＧＦ及び／またはＶＥＧＦ拮抗薬は、患者における新生血管障害を抑制するのに十分な量（複数可）で存在する。本発明のこの薬学的組成物は、ミクロスフェア、ナノ粒子、またはヒドロゲル配合物を含む薬学的に許容される担体を含んでもよい。本発明のこの態様の別の実施形態は、単独で、またはパネキシンチャネル開口を遮断もしくは改善するか、さもなければ拮抗もしくは抑制する小分子と一緒に、ヘミチャネル開口を遮断または改善するか、さもなければ拮抗または抑制する小分子と共に、ＰＤＧＦ拮抗薬及び／またはＶＥＧＦ拮抗薬を含む医薬パックを提供する。この態様の一実施形態において、医薬パックは、ＰＤＧＦ－Ｂ拮抗薬であるＰＤＧＦ拮抗薬を含む。この態様の別の実施形態において、医薬パックは、ＶＥＧＦ－Ａ拮抗薬であるＶＥＧＦ拮抗薬を含む。別の実施形態において、医薬パックのＰＤＧＦ拮抗薬及びＶＥＧＦ拮抗薬は、別個に、かつ個々の投与量で製剤化される。さらに別の実施形態において、医薬パックのＰＤＧＦ拮抗薬及びＶＥＧＦ拮抗薬は、一緒に製剤化される。抗ＶＥＧＦ剤及び／または抗ＰＤＧＦ剤の組み合わせも、眼新生血管疾患の治療のための、驚くほどの相助作用的治療効果を提供することができることが理解されるであろう。
ギャップ結合のカップリングレベルの指標として、隣接ｈＣＭＶＥＣ細胞に拡散するルシファーイエローを使用したスクレープ負荷研究。無治療群において、染料は、隣接細胞にすぐに拡散する。１００μＭのより低い投与量でのペプチド５は、カップリングにほとんど影響を与えなかったが、より高い５００μＭの投与量では、拡散が即時に減少した。時間と共に、両方のペプチド濃度が、ギャップ結合のアンカップリングを２時間遅くする。グラフは、ペプチド５の遮断有効性（即時の遮断、５００μＭ）を、非特異的ギャップ結合チャネル遮断薬であるカルベノキソロンと比較した、類似した実験の定量化を示す。 ギャップ結合のカップリングレベルの指標として、隣接ｈＣＭＶＥＣ細胞に拡散するルシファーイエローを使用したスクレープ負荷研究。無治療群において、染料は、隣接細胞にすぐに拡散する。１００μＭのより低い投与量でのペプチド５は、カップリングにほとんど影響を与えなかったが、より高い５００μＭの投与量では、拡散が即時に減少した。時間と共に、両方のペプチド濃度が、ギャップ結合のアンカップリングを２時間遅くする。グラフは、ペプチド５の遮断有効性（即時の遮断、５００μＭ）を、非特異的ギャップ結合チャネル遮断薬であるカルベノキソロンと比較した、類似した実験の定量化を示す。 様々な期間に、５０μＭのトナベルサットで治療したｈＣＭＶＥＣ細胞において拡散するスクレープ負荷した染料の定量化。トナベルサットは、いくらか即時的なチャネル遮断効果を有し、その有効性は、時間とともに上昇する。＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．００１、＊＊＊＝ｐ＜０．００１。 用量依存的様式での、ＡＰＲＥ－１９細胞におけるＣｘ４３のトナベルサットノックダウン。対照媒体中、ならびに５０及び１００マイクロモルの濃度でのトナベルサットを用いたプレインキュベーションの６時間後のＡＲＰＥ－１９細胞。細胞は、コネキシン４３に対して標識される。対照細胞内で、ギャップ結合は、細胞間接触面で明らかに局在化されるか、５０マイクロモルのトナベルサットを用いての６時間後、大部分の結合が内部移行されるか、または失われる。より高い１００マイクロモルのトナベルサット中での６時間で、ほんの少しのコネキシン４３標識化が残る。 ＡＲＰＥ－１９細胞中のギャップ結合タンパク質コネキシン４３におけるＤＡＰＩ（核染色）および標識（左のパネル）、ならびに一致するコネキシン４３のみの標識（右手のパネル）。未処理細胞内のギャップ結合標識は、主に細胞間接触面にある（上部パネル）。ペプチド５（５００μＭ）で１時間処理した細胞内で、細胞間接触面は依然として明らかであるが、ギャップ結合の大部分が内部移行されている（下方パネル）。 コネキシン４３遺伝子導入ＨｅＬａ細胞（上部出力記録）及びコネキシン欠損ＨｅＬａ細胞（下部出力記録）における電気生理学的記録。電圧ステップが上げられるに従い、チャネル活性の増加が遺伝子導入細胞内で認められたが、コネキシン欠損細胞内には存在しない。したがって、遺伝子導入細胞内のチャネル活性は、コネキシン４３ヘミチャネル開口の結果である。 非特異的チャネル遮断薬カルベノキソロン及びＬａＣｌ３で、ならびにペプチド５（１００μＭ）で処理されたコネキシン４３遺伝子導入ＨｅＬａ細胞からの電気生理学的出力記録。非特異的チャネル遮断薬は、（図７の未処理ＨｅＬａ細胞と比較して）実質上完全なヘミチャネル遮断を示し、チャネル活性がほとんど残らない。ペプチド５も、かなりのヘミチャネル遮断を示す。 電気生理学的出力記録は、図５及び６に示されるものと同等の実験を形成する。この場合、ＨＣＭＶＥＣ細胞は、トナベルサット（５０μＭ）の添加前（上部パネル）、トナベルサットでのインキュベーションの間（中央パネル）、及び洗い出しの３分後（下部パネル）に示される。これらの結果は、トナベルサットがヘミチャネル活性をほぼ完全に消失させ、活性の徴候が洗い出しの後に戻ることを示し、トナベルサットが非常に有効であり、直接的ヘミチャネル遮断薬であることを示す。 トナベルサットは、損傷したｈＣＭＶＥＣ細胞からのヘミチャネル媒介ＡＴＰ放出を制御する。試験管内での損傷への２時間の暴露後に、ｈＣＭＶＥＣ細胞から放出されたＡＴＰ。総細胞外ＡＴＰ放出の定量化を、各治療群について、損傷対照群のパーセントとして示す。ＡＴＰの大幅な減少は、損傷対照群と比較して、すべての治療群：１００μＭのＣＢＸ、１００μＭのペプチド５及び１ｍＭのプロベネシド、ならびに１ｍＭのプロベネシドと組み合わせた１００μＭのペプチド５にわたって存在し、後者の組み合わせは、総ＡＴＰ放出をＣＢＸと同じレベルにまで減少させた。値は、平均±標準誤差を表す。＊＊＊損傷対照群に対してＰ＜０．００１。 トナベルサットは、損傷したｈＣＭＶＥＣ細胞からのヘミチャネル媒介ＡＴＰ放出を制御する。総細胞外ＡＴＰ放出の定量化を、各治療群について、損傷対照群のパーセントとして示す。ＡＴＰの大幅な減少は、損傷対照群と比較して、すべての治療群：１００μＭのＣＢＸ、１ｍＭのプロベネシドと組み合わせた０．１μＭ～１００μＭのトナベルサットにわたって存在した。値は、平均±標準誤差を表す。＊＊＊損傷対照群に対してＰ＜０．００１。 トナベルサットは、損傷したｈＣＭＶＥＣ細胞からのヘミチャネル媒介ＡＴＰ放出を制御する。この実験において、トナベルサットは、１ｍＭのプロベネシド（ｐ＞０．０９）一元配置分散分析、テューキーの多重比較検定の非存在下で、ｈＣＭＶＥＣ細胞からのＡＴＰ放出を減少させなかった。値は、平均±標準誤差を表す。＊＊＊損傷対照群に対してＰ＜０．００１。 低酸素症再潅流：試験管内で損傷への２時間の暴露、続いて再潅流への２時間の暴露後に、サブコンフルエントｈＣＭＶＥＣ細胞から放出されたＡＴＰ。ＡＴＰを、傷害再潅流（ＩＲ）制御群のパーセントとして定量化する。ＡＴＰの大幅な減少は、１００μＭのＣＢＸ、１００μＭのペプチド５、及び１００μＭのペプチド５ならびに１ｍＭのプロベネシドでは認められたが、１ｍＭのプロベネシドそれだけでは認められなかった。ＡＴＰの大幅な減少は、１０μＭのトナベルサットでも認められた。値は、平均±標準誤差を表す。一元配置分散分析テューキーの多重比較検定＊ＩＲ対照群に対してＰ＜０．０５。 トナベルサットでの１時間の治療は、ＡＲＰＥ－１９細胞内のリソソーム分解経路を介して、Ｃｘ４３ ＧＪプラークを下方制御する。血清補充媒体中で、１００μＭのトナベルサット（上）、及び１００μＭのトナベルサット＋ＮＨ４Ｃｌ中での１時間のＣｘ４３の免疫標識（ｎ＝３つのウェル、２つの独立した実験）。 トナベルサット（５～５００μＭ）で１時間治療した後の、１個の細胞当たりのＣｘ４３プラークの総面積の定量化。 ＮＨ４Ｃｌと一緒にトナベルサット（５０～５００μＭ）で６時間治療した後の、１個の細胞当たりのＣｘ４３プラークの総面積の定量化。Ｂ及びＣを、非治療制御群に正規化する。有意な差異は、＊＊＊ｐ＜．０００１と表す。バーは、平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ及び間の差異を表す。スケールバー＝３０μｍ。 トナベルサットは、ＡＲＰＥ－１９細胞内のＣｘ４３ ＧＪプラークを内部移行し、下方制御する。Ａ．血清補充媒体中で、非治療群（上）、１００μＭのトナベルサット（下）中での１時間のＣｘ４３の免疫標識（ｎ＝３つのウェル、２つの独立した実験）。Ｂ．トナベルサット（５～５００μＭ）で１時間治療した後の、１個の細胞当たりのＣｘ４３プラークの総面積の定量化。トナベルサット（５～５００μＭ）で６時間治療した後の、１個の細胞当たりのＣｘ４３プラークの総面積の定量化。Ｂ及びＣを、非治療制御群に正規化する。バーは、平均±Ｓ．Ｅ．Ｍを表し、有意な差異は、＊＊＊ｐ＜．０００１を表す。統計的検定一元配置分散分析、スケールバー＝３０μｍ。 トナベルサットは、ＡＲＰＥ－１９細胞内のＣｘ４３ ＧＪプラークを内部移行し、下方制御する。Ａ．血清補充媒体中で、非治療群（上）、１００μＭのトナベルサット（下）中での１時間のＣｘ４３の免疫標識（ｎ＝３つのウェル、２つの独立した実験）。Ｂ．トナベルサット（５～５００μＭ）で１時間治療した後の、１個の細胞当たりのＣｘ４３プラークの総面積の定量化。トナベルサット（５～５００μＭ）で６時間治療した後の、１個の細胞当たりのＣｘ４３プラークの総面積の定量化。Ｂ及びＣを、非治療制御群に正規化する。バーは、平均±Ｓ．Ｅ．Ｍを表し、有意な差異は、＊＊＊ｐ＜．０００１を表す。統計的検定一元配置分散分析、スケールバー＝３０μｍ。 トナベルサットは、ＡＲＰＥ－１９細胞内のＣｘ４３ ＧＪプラークを内部移行し、下方制御する。Ａ．血清補充媒体中で、非治療群（上）、１００μＭのトナベルサット（下）中での１時間のＣｘ４３の免疫標識（ｎ＝３つのウェル、２つの独立した実験）。Ｂ．トナベルサット（５～５００μＭ）で１時間治療した後の、１個の細胞当たりのＣｘ４３プラークの総面積の定量化。トナベルサット（５～５００μＭ）で６時間治療した後の、１個の細胞当たりのＣｘ４３プラークの総面積の定量化。Ｂ及びＣを、非治療制御群に正規化する。バーは、平均±Ｓ．Ｅ．Ｍを表し、有意な差異は、＊＊＊ｐ＜．０００１を表す。統計的検定一元配置分散分析、スケールバー＝３０μｍ。 トナベルサットでの６時間の治療は、ＡＲＰＥ－１９細胞内のリソソーム分解経路を介してＣｘ４３ ＧＪプラークを下方制御する。血清補充媒体中で、１００μＭのトナベルサット（上）、及び１００μＭのトナベルサット＋ＮＨ４Ｃｌ中での６時間のＣｘ４３の免疫標識（ｎ＝３つのウェル、２つの独立した実験）。 トナベルサットでの６時間の治療は、ＡＲＰＥ－１９細胞内のリソソーム分解経路を介してＣｘ４３ ＧＪプラークを下方制御する。トナベルサット（５～５００μＭ）で１時間治療した後の、１個の細胞当たりのＣｘ４３プラークの総面積の定量化。 トナベルサットでの６時間の治療は、ＡＲＰＥ－１９細胞内のリソソーム分解経路を介してＣｘ４３ ＧＪプラークを下方制御する。ＮＨ４Ｃｌと一緒にトナベルサット（５０～５００μＭ）で６時間治療した後の、１個の細胞当たりのＣｘ４３プラークの総面積の定量化。Ｂ及びＣを、非治療制御群に正規化する。有意な差異＊＊＊ｐ＜．０００１。バーは、平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ及び間の差異を表す。スケールバー＝３０μｍ。 ＤＭＳＯ（溶媒対照群）、または５０μＭのトナベルサットで１時間インキュベートしたＡＲＰＥ－１９細胞のコンフルエントな単層中のＣｘ４３ ｍＲＮＡレベル。バーは、平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ（ｎ＝３）を表す。非治療群（ｐ＝０．７５７２）及び溶媒対照群（ｐ＝０．１０２４５）の両方と比較して、５０μＭのトナベルサットでの治療後のＡＲＰＥ－１９細胞内のＣｘ４３ ｍＲＮＡに優位な差異は存在しなかった。一元配置分散分析テューキーの多重比較検定。 様々な治療群に関する、対照群に対する、ＡＴＰ濃度。 様々な治療群に関する、対照群に対する、％細胞生存率の比較。 ６０分間の１２０ｍｍ Ｈｇでの網膜虚血の７日後の網膜神経節細胞密度。虚血眼及び対側性眼の両方の結果を示す。平均±標準誤差。Ｎ＝２、６、６、６、５、４、４。ＮＴ、非治療；Ｔ、トナベルサット。統計学的に有意な（ｐ＜０．０１）ＲＧＣの３１％の喪失が、正常対照群（２４２５５８±１５８４０個の細胞／ｃｍ２）と比較して、非治療での虚血眼に見出された（１６７１１１±１４１８８個の細胞／ｃｍ２、平均±標準誤差）。統計学的に有意な（ｐ＝０．０３）３５％のＲＧＣ喪失が、１０ｍｇ／ｋｇのトナベルサットで治療した虚血眼に見出された（１５８７３９±２６３７０個の細胞／ｃｍ２）。しかしながら、１ｍｇ／ｋｇのトナベルサットで治療した虚血眼は、他の群より少ない細胞喪失を維持した（１８％、１９９９２７±２６０５８個の細胞／ｃｍ２）。この群と正常対照群との間の差異は、傾向（ｐ＝０．１７）であった。ＲＧＣの喪失は、すべての対側性眼に見出されなかった。 試験管内での、ｈＣＭＶＥＣ細胞内の細胞間通信へのトナベルサットの機能的影響。溶媒対照群において、ＬＹ染料は、カップリングしたＧＪを介して隣接細胞にすぐに拡散する。即時または２時間のトナベルサット治療（５０μＭ）は、ＧＪがアンカップリングされるに従い、ＬＹ染料移動の減少を引き起こす。 試験管内での、ｈＣＭＶＥＣ細胞内の細胞間通信へのトナベルサットの機能的影響。即時から２４時間の時間間隔で、５０μＭのトナベルサットで治療したＬＹ陽性ｈＣＭＶＥＣ細胞の定量化。ＧＪのトナベルサット媒介アンカップリングは、時間とともに上昇する。 試験管内での、ｈＣＭＶＥＣ細胞内の細胞間通信へのトナベルサットの機能的影響。より低い濃度のトナベルサット（１０μＭ、１μＭ、０．１μＭ）は、この実験において２時間後、ＧＪアンカップリングを引き起こさなかった。バーは、平均±Ｓ．Ｅ．Ｍを表す（一元配置分散分析、続いてテューキーの事後の検定）ｎ＝３つのウェル、３つの独立した実験。＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．００１、＊＊＊＝ｐ＜０．００１。 試験管内での、ｈＣＭＶＥＣ細胞内の細胞間通信へのトナベルサットの機能的影響。より低い濃度のトナベルサット（１０μＭ、１μＭ、０．１μＭ）は、この実験において２４時間後に、ＧＪアンカップリングを引き起こさなかった。バーは、平均±Ｓ．Ｅ．Ｍを表す（一元配置分散分析、続いてテューキーの事後の検定）ｎ＝３つのウェル、３つの独立した実験。＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．００１、＊＊＊＝ｐ＜０．００１。 複数の選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチドの遺伝子導入取り込みのＦＡＣＳデータ。 ＨＵＶＥＣ細胞（遺伝子導入後４時間）内でＦＡＭ標識ＳＥＱ４－ＰＴＯの取り込み（修飾）を示す、共焦点顕微鏡法による生細胞の画像。緑は、オリゴ配列１－Ｏ（ＦＡＭ標識）を表し、青は、ＤＡＰＩによって染色された細胞核を表す。 緑は、オリゴＳＥＱ１－Ｏ（ＦＡＭ標識）を表し、青は、ＤＡＰＩによって染色された細胞核を表す。 ｑＰＣＲで測定した、コネキシン４３のノックダウン効率を示す。データは、３つの複製物の標準偏差を示す。 ウェスタンブロット法（ｎ＝３）によって測定したコネキシン４３のノックダウン効率。データは、３つの複製物の標準偏差を示す。 遺伝子導入の４時間後の時点でｑＰＣＲによって測定した修飾（ＰＴＯ）及び未修飾配列のノックダウン効率。オリゴ濃度：（１）＝２００ｎＭ、（３／４）＝１５０ｎＭ、（１／２）＝１００ｎＭ、Ｃ：ＳＥＱ１、ＳＥＱ４：３７５０１、Ｃｓｃｒ：ＳＥＱ１組み換え、ＬＰ２ｓｃｒ：ＳＥＱ４組み換え、橙色の棒：陰性対照群。（各結果に関してｎ＝３）。 遺伝子導入の８時間後の時点でｑＰＣＲによって測定した修飾（ＰＴＯ）及び未修飾配列のノックダウン効率。オリゴ濃度：（１）＝２００ｎＭ、（３／４）＝１５０ｎＭ、（１／２）＝１００ｎＭ、Ｃ：ＳＥＱ１、ＳＥＱ４：３７５０１、Ｃｓｃｒ：ＳＥＱ１組み換え、ＬＰ２ｓｃｒ：ＳＥＱ４組み換え、橙色の棒：陰性対照群。（各結果に関してｎ＝３）。 ウェスタンブロット法で測定したノックダウン効率。データは、３つの複製物の標準偏差を示す。ウェスタンブロット法（ｎ＝３）で測定したノックダウン効率。オリゴ濃度：（１）＝２００ｎＭ；（３／４）＝１５０ｎＭ；（１／２）＝１００ｎＭ；Ｃ：ＳＥＱ１；ＳＥＱ４：３７５０１；Ｃｓｃｒ：ＳＥＱ１組み換え；ＬＰ２ｓｃｒ：ＳＥＱ４組み換え；橙色バー：陰性対照群 異なる配列のコネキシン４３のノックダウン効率に関してｑＰＣＲによって分析した異なる配列。Ｃｓｃｒ：ＳＥＱ１組み換え、Ｃｓｅｎ：ＳＥＱ１センス鎖、ＬＰ２ｓｃｒ２：ＳＥＱ４組み換え、ＬＰ２ｓｅｎ：ＳＥＱ４センス鎖、４７００１ｓｃｒ２：ＳＥＱ５組み換え、４７００１ｓｅｎ：ＳＥＱ５センス鎖、ＮＣ１：全称否定１、ＮＣ２：全称否定２ 異なる配列のコネキシン４３のノックダウン効率に関してウェスタンブロット法によって分析した異なる配列。Ｃｓｃｒ：ＳＥＱ１組み換え、Ｃｓｅｎ：ＳＥＱ１センス鎖、ＬＰ２ｓｃｒ２：ＳＥＱ４組み換え、ＬＰ２ｓｅｎ：ＳＥＱ４センス鎖、４７００１ｓｃｒ２：ＳＥＱ５組み換え、４７００１ｓｅｎ：ＳＥＱ５センス鎖、ＮＣ１：全称否定１、ＮＣ２：全称否定２． 異なる細胞型におけるオリゴヌクレオチド配列のＣｘｎ４３ノックダウンの結果。Ｈ：ヒト、Ｐ：ｐｉｇ、ＬＰ２：ＳＥＱ４、Ｃ：ＳＥＱ１、Ｃｓｃｒ：ＳＥＱ１組み換え、Ｃｓｅｎ：ＳＥＱ１センス鎖、４７００１ｓｃｒ２：ＳＥＱ５組み換え、４７００１ｓｅｎ：ＳＥＱ５センス鎖、他の数字は、本明細書に記載されるコネキシン４３に対する他のアンチセンス配列を表す。 様々なオリゴヌクレオチド配列に関する、ｑＰＣＲによるＨＵＶＥＣ細胞における用量反応性能（ｄｏｓｅ－ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ）。ＬＰ２：ＳＥＱ４、Ｃｏｄａ：ＳＥＱ１、４７００１ｓｃｒ２：ＳＥＱ５組み換え、他の数字は、本明細書に記載されるコネキシン４３に対する他のアンチセンス配列を表す。 ｑＰＣＲによって測定した未修飾配列（骨格中にホスホロチオエート結合がない）によるＣｘｎ４３のノックダウン効率。オリゴ濃度：（１）＝２００ｎＭ；（２）＝４００ｎＭ；（３）＝６００ｎＭＣ：ＳＥＱ１；ＳＥＱ４：３７５０１；Ｃｓｃｒ：ＳＥＱ１組み換え；ＬＰ２ｓｃｒ：ＳＥＱ４組み換え。 ｑＰＣＲによって測定した未修飾配列（骨格中にホスホロチオエート結合がない）によるＣｘｎ４３のノックダウン効率。オリゴ濃度：（１）＝２００ｎＭ；（２）＝４００ｎＭ；（３）＝６００ｎＭＣ：ＳＥＱ１；ＳＥＱ４：３７５０１；Ｃｓｃｒ：ＳＥＱ１組み換え；ＬＰ２ｓｃｒ：ＳＥＱ４組み換え。 （全チオホスホリエート（ｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒｉａｔｅ）骨格）修飾配列のノックダウン効率比較。オリゴ濃度：（１）＝２００ｎＭ；（２）＝４００ｎＭ；（３）＝６００ｎＭＣ：ＳＥＱ１；ＳＥＱ４：３７５０１；Ｃｓｃｒ：ＳＥＱ１組み換え；ＬＰ２ｓｃｒ：ＳＥＱ４組み換え。 未修飾オリゴ配列の試験管内でのノックダウン。Ｃｓｃｒ：ＳＥＱ１組み換え；１３３７０４：コネキシン４３に対する別のアンチセンスオリゴ。 未修飾オリゴ配列の試験管内でのノックダウン。Ｃｓｃｒ：ＳＥＱ１組み換え；１３３７０４：コネキシン４３に対する別のアンチセンスオリゴ。 表４からのＡＳＮの比較ノックダウン活性。 表４からのＡＳＮの比較ノックダウン活性。 候補コネキシン４３アンチセンスオリゴヌクレオチドの用量反応曲線。 虚血再潅流後にコネキシン４３をマッピングするための、虚血後のエバンスブルー染料の染料潅流。 虚血再潅流後の時間の関数としての染料漏出の（本明細書に記載されるＩｍａｇｅＪを介して）計算された面積。これらの結果は、染料漏出のベースライン性能を示す。 虚血再潅流後の時間の関数としてのコネキシン４３スポット計数の（本明細書に記載されるＩｍａｇｅＪを介して）計算された面積。これらの結果は、染料漏出のベースライン性能を示す。 Ｃｘｎ４３調節剤での治療、及びＣｘｎ４３調節剤なしでの治療後の総染料漏出への影響。 特定のコア配列の異形と比較した、Ｃｘｎ４３の発現（Ｙ軸）を遅延させる能力。ペプチド５＝配列番号１６８、Ｍｏｄ１＝配列番号１７１、Ｍｏｄ２＝配列番号１７２、Ｍｏｄ３＝配列番号１７３、Ｍｏｄ４＝配列番号１７４、Ｍｏｄ５＝配列番号１７５、Ｍｏｄ６＝配列番号１７６。 特定のコア配列の異形と比較した、Ｃｘｎ４３の発現（Ｙ軸）を遅延させる能力。ペプチド５＝配列番号１６８、Ｍｏｄ１＝配列番号１７１、Ｍｏｄ２＝配列番号１７２、Ｍｏｄ３＝配列番号１７３、Ｍｏｄ４＝配列番号１７４、Ｍｏｄ５＝配列番号１７５、Ｍｏｄ６＝配列番号１７６。 放出媒体中で、３日前（パネルＡ及びＢ）、ならびに３日後（パネルＣ及びＤ）の、ナノ粒子のＳＥＭ画像（Ｎｐｓ、パネルＡ及びＣ）及びミクロ粒子（Ｍｐｓ、パネルＢ及びＤ）。 微粒子製剤からのコネキシン４３調節剤の試験管内放出研究（データ点は、平均値±ＳＤを表す、ｎ＝３）。 未修飾（Ｃｘｎ４３ ＭＰ）及び化学修飾（Ｃ１２－Ｃ１２ Ｃｘｎ４３ ＭＰ）コネキシン４３調節剤ペプチドの、虚血後の血管漏出の測定。 染色された組織代表的な画像、及び未修飾ペプチドよりもさらに化学修飾（Ｃ１２－Ｃ１２ Ｃｘｎ４３ ＭＰ）コネキシン４３調節剤ペプチドで低減されるスポット計数の定量化。 送達のためのナノ粒子を伴う製剤が、ナノ粒子を含まない製剤よりも低いＣｘｎ４３発現を引き起こした染色された組織の代表的な画像及び定量化。 化学修飾ペプチド治療が、治療を受けたなかった眼の７０％未満と比較して、２８日後に９３％超のＲＧＣ生存をもたらした、染色された組織の代表的な画像及び定量化（虚血のみ）。 ＡＭＤを有さない若年（２９歳）の提供者（Ａ）、及びＡＭＤと診断された老齢の提供者（Ｂ）の脈絡膜内に位置する、Ｃｘｎ４３分布を示す染色された組織の代表的な画像。若年の提供者においてＣｘｎ４３標識（赤、「ＲＰＥ」の標識下）は、ブルッフ膜と隣接して特に密であり、標識は、主に内皮細胞間のギャップ結合の境界を画定する（白い矢印）。核マーカーＤＡＰＩで染色された慎重された核は、内皮細胞核である。スケールバーは、２０μｍを表す。 死去したヒトの網膜試料の出血近くで撮影された網膜画像におけるＣｘｎ４３発現プロファイルを示す染色された組織の代表的な画像。ＤＡＰＩで染色した核（青）とＣｘｎ４３ギャップ結合プラーク（赤）との統合画像。 死去したヒトの網膜試料の出血近くで撮影された網膜画像におけるＣｘｎ４３発現プロファイルを示す染色された組織の代表的な画像。図は、ＤＡＰＩで染色した核（青）とＣｘｎ４３ギャップ結合プラーク（赤）との統合画像を示す。 ＡＲＰＥ－１９細胞内のＣｘｎ４３発現プロファイルを示す網膜の代表的な共焦点顕微鏡画像。天然ペプチドへの８時間の暴露後（Ｂ）、ＡＲＰＥ－１９細胞内のＣｘｎ４３レベルが、若干低減された一方で、２４時間後（Ｃ）、Ｃｘｎ４３は、正常に戻った（Ａ）。Ｎｐｓ（Ｄ）及びＭｐｓ（Ｆ）での８時間のインキュベーション後に、Ｃｘｎ４３標識における有意な差異が存在しなかった一方で、２４時間の暴露後、Ｎｐｓ（Ｅ）及びＭｐｓ（Ｇ）群の両方が、持続的ペプチド放出を示すＣｘｎ４３レベルのかなりの低減を呈し、したがって、これらの粒子でのより長期の治療の潜在力は、新しいギャップ結合チャネル形成を低減する可能性がある。図は、ＤＡＰＩで染色した核（青）とＣｘｎ４３ギャップ結合プラーク（赤）との統合画像を示す（スケールバーは、５０μｍを表す）。 ＧＦＡＰ（赤）、Ｃｘｎ４３（緑）、及びＤＡＰＩ（青）を標識する網膜の代表的な共焦点顕微鏡画像。虚血再潅流の２８日後、Ｃｘ４３及びＧＦＡＰは、非治療群（Ｂ）において大幅に上方制御された。溶液中の天然Ｃｘｎ４３ＭＰの硝子体内注射は、２８日後に限られたＣｘｎ４３上方制御を示した（Ｃ）。Ｎｐｓ－Ｃｘｎ４３ ＭＰ治療群が、損傷後２８日目にＣｘｎ４３上方制御の大幅な減少に終わった一方で（Ｄ）、Ｍｐｓ－Ｃｘｎ４３ ＭＰは、虚血再潅流後２８日目（Ｅ）及び９０日目（Ｆ）に、類似したＣｘｎ４３及びＧＦＡＰレベルを呈した（スケールバーは、５０μｍを表す）。 （Ｇ）非損傷対照網膜において、ならびに治療なし、及び治療をした虚血再潅流後の平均Ｃｘｎ４３スポット計数。星は、各群間の統計学的優位性を意味する（ｎ＝３、平均±ＳＤ、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）。 虚血再潅流後のＢｒｎ３ａ標識ＲＧＣを有する、平坦に乗せられた網膜（赤）の代表的な共焦点顕微鏡画像。ＲＧＣ分布は、非治療網膜における血管描写のほぼ完全消失で、大幅に減少される（Ｂ）。溶液中のＣｘｎ４３ ＭＰ、及びＮｐｓ－Ｃｘｎ４３ ＭＰで治療した眼は、ＲＧＣ喪失のより少ない斑を呈した（Ｃ及びＤ）。Ｍｐｓで治療した眼は、依然として２８日目（Ｅ）及び９０日目（Ｅ）にいくらかのＲＧＣ喪失を呈した。スケールバー＝３００ｌｍ。 （Ｇ）ＲＧＣの平均密度。（Ｈ）星は、各群間の統計学的優位性を意味する（ｎ＝６、平均±ＳＤ、＊＊ｐ＜０．０１、＊ｐ＜０．０５）。
詳細な開示
本発明は、ギャップ結合チャネルの調節剤、ヘミチャネルの調節剤、パネキシンチャネルの調節剤、パネキシン転写、翻訳、機能、及び／または活性の調節剤、ならびに小分子調節剤を含む、コネキシン転写、翻訳、機能及び／または活性の調節剤に関する。調節剤は、前眼部、後眼部における、ならびに網膜、脈絡膜、及び脈絡毛細管板内を含む血管内における眼の疾患、障害、または病態を含む、本明細書に記載される疾患、障害、または病態を治療するために、単独で、または組み合わせて使用され得る。
トナベルサット、ベンゾイルアミノベンゾピランは、中枢神経系特異的であり、コネキシン２６及び／またはｐ３８発現の下方制御のレベルで作用することが報告されている。本発明者は、驚くべきことに、トナベルサット等のギャップ結合チャネル調節剤が、中枢神経系に限定されないいくつかの異なる細胞型において、かつ、（コネキシン２６等の）特定のコネキシンに特異的ではない様式で、ギャップ結合チャネル及びヘミチャネルの活性を調節することができることを確認した。具体的には、本発明者は、トナベルサットがコネキシン４３を含むヘミチャネルの活性を調節することができることを示す。任意の特定の理論に束縛されることを所望しない一方で、本発明者は、驚くべきことに、トナベルサットが、細胞受容体を通して間接的に作用するかまたはコネキシン（例えば、コネキシン２６）及び／もしくはｐ３８の発現に影響を与えることによってよりもむしろ、ギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネルに直接作用することを見出した。
ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤が、本明細書に詳細に説明されるように、損傷の間、及び損傷の後、例えば、虚血の間及び低酸素症再潅流において、Ｃｘ４３ヘミチャネル活性及び／またはＡＴＰ放出を抑制することが示されている。プロベネシド等のパネキシン調節剤が、損傷誘発ＡＴＰ放出、例えば、虚血の間のＡＴＰ放出を抑制することも示されている。
本発明は、特に、（１）ギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネルの調節のための方法と、（２）ギャップ結合及び／またはヘミチャネルの調節のための薬剤の製造における、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤、及び／もしくはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体もしくはプロドラッグ、ならびに／あるいはパネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及び／もしくはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１、もしくはこれらのいずれかの類似体の使用と、（３）ギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネルを調節するための、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤、及び／もしくはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合のうちのいずれかの類似体もしくはプロドラッグ、ならびに／あるいは、パネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及び／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１、もしくはこれらのいずれかの類似体と、（４）ギャップ結合チャネル、ヘミチャネル、及び／またはパネキシンチャネルの調節が、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤、及び／もしくはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体もしくはプロドラッグ、ならびに／あるいは、パネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及び／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１、またはこれらのいずれかの類似体を投与することによって有益であり得る障害の治療のための方法と、（５）ギャップ結合チャネル、ヘミチャネル、及び／またはパネキシンチャネルの調節が有益であり得る障害の治療のための薬剤の製造における、ペプチド５、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤、及び／もしくはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体もしくはプロドラッグ、ならびに／あるいは、パネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及び／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば
、１０Ｐａｎｘ１、またはこれらのいずれかの類似体の使用と、（６）ギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネルの調節が有益であり得る障害の治療における使用のための、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤、及び／もしくはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体もしくはプロドラッグ、ならびに／あるいは、パネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及び／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１、またはこれらのいずれかの類似体と、を提供する。
いくつかの実施形態において、本発明は、単独で、または本開示ギャップ結合チャネル調節剤と組み合わせてのいずれかでの、これらの目的よりも多いうちの１つのための、パネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及び／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１、またはこれらのいずれかの類似体の使用に関する。
ある特定の実施形態において、本発明者は、以下の方法：対象に、単独で、またはギャップ結合チャネル調節剤と組み合わせてのいずれかで、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤、及び／もしくはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体もしくはプロドラッグを投与すること、ならびに／あるいは、パネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及び／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１、またはこれらのいずれかの類似体を投与することを含む方法、外科的処置を受ける対象における異常または過剰な瘢痕形成を防ぐかまたは減少させるための方法、瘢痕を切除し、次いで、対象に、単独で、またはギャップ結合チャネル調節剤と組み合わせてのいずれかで切除の部位に、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤、及び／もしくはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体もしくはプロドラッグを投与し、かつ／あるいは、パネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及び／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１、またはこれらのいずれかの類似体を投与することにより、異常瘢痕化を有する対象を治療するための方法、以下の方法：対象の組織における拘縮を防ぐかまたは減少させ、それによって線維症を軽減させる方法、眼科的処置に関連する組織工学のための方法、眼または眼と関連した組織内への上皮細胞の蓄積を促進する方法、眼または眼と関連した組織内の細胞過形成を抑制する方法、病変拡大を予防、低減、減少させる方法、血管漏出、または血管漏出が関係する任意の障害の治療のための方法、（例えば、周産期虚血、皮膚虚血及び心虚血を含む）虚血、脳卒中、仮死、脳外傷、脊髄損傷、心臓発作、（例えば、心膜炎を含む）炎症性心臓障害、（例えば、手術または移植後の心臓再潅流、手術または移植後の肝臓再潅流を含む）再潅流傷害のうちの１つ以上の治療のための方法、（例えば、化学療法、放射線療法、整形手術を含む、及び例えば、口内炎または発疹と関連したそのような治療を含む）外科的処置または医学的処置と関連した損傷、組織の損傷、または炎症を治療するための方法、（例えば、角膜の持続性上皮欠損、潰瘍、熱傷、乾癬を含む）外傷または病変を治療するための方法、聴覚障害の治療のための方法、（例えば、網膜静脈または動脈閉塞、緑内障、網膜発作、眼圧上昇を引き起こす外傷、糖尿病性網膜症、嚢胞様黄斑浮腫、老人性黄斑変性、感染症、（例えば、化学火傷及び温度熱傷を含む）熱傷を含む）眼の障害の治療のための方法、癲癇、パーキンソン病の治療のための方法、ならびに、（例えば、血管出血、浮腫、病変、病変拡大、及び／または炎症と関連した外傷を含む）外傷の治療のための方法のうちのいずれかで、単独で、またはギャップ結合チャネル調節剤と組み合わせてのいずれかでの、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤、及び／またはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体もしくはプロドラッグの使用、及び／またはパネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及び／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１、またはこれらのいずれかの類似体の投与のうちの１つ以上を提供する発明を企図する。さらに、本発明者は、本明細書に記載される障害の治療のための薬剤の製造における、ペプチド
５等のギャップ結合チャネル調節剤、及び／もしくはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体もしくはプロドラッグ、ならびに／あるいはパネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及び／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１、またはこれらのいずれかの類似体、ならびに／あるいは、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤、及び／もしくはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体もしくはプロドラッグの使用、ならびに／あるいはパネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及び／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１、またはこれらのいずれかの類似体の投与を含む、線維症または他の障害を予防及び／または治療するための包帯を提供する発明を企図する。
いくつかの実施形態において、本発明は、Ｃｘ４３ヘミチャネルを直接かつ即時に遮断し、ＧＪカップリングにおける濃度及び時間依存の減少を引き起こすための、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体もしくはプロドラッグの使用を取り上げる。いくつかの態様において、低濃度の式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体もしくはプロドラッグは、本発明の治療の方法または使用のうちのいずれかにおいて使用され得る。いくつかの実施形態において、低用量の式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体もしくはプロドラッグは、本発明の治療の方法または使用のうちのいずれかにおいて、パネキシンチャネル調節剤と合わせられてもよい。いくつかの実施形態において、低用量の式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体もしくはプロドラッグは、例えば、網膜虚血後の損傷からＲＧＣを保護するため、または網膜虚血もしくは眼線維症を治療するため、または本発明の治療の方法もしくは使用のうちのいずれかにおいて、虚血性損傷の間の有効な治療として使用され得るパネキシンチャネル調節剤と合わせられてもよい。
チャネル調節剤
例として、トナベルサットは、Ｎ－［（３Ｓ，４Ｓ）－６－アセチル－３－ヒドロキシ－２，２－ジメチル－３，４－ジヒドロクロメン－４－イル］－３－クロロ－４－フルオロベンズアミドまたは（３Ｓ－ｃｉｓ）－Ｎ－（６－アセチル－３，４－ジヒドロ－３－ヒドロキシ－２，２－（ジメチル－ｄ６）－２Ｈ－１－ベンゾピラン－４－イル）－３－クロロ－４－フルオロベンズアミドのＩＵＰＡＣ名で知られている場合がある。
一実施形態において、トナベルサット及び／またはその類似体もしくはプロドラッグは、式Ｉ：
Figure 2023022154000006
 を有する化合物の群から選択され、Ｙは、Ｃ－Ｒ１であり、
Ｒ１は、アセチルであり、
Ｒ２は水素、Ｃ３－８シクロアルキル、任意選択的に酸素によって中断されているか、またはヒドロキシによって置換されたＣ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシまたは置換アミノカルボニル、Ｃ１－６アルキルカルボニル、Ｃ１－６アルコキシカルボニル、Ｃ１－６アルキルカルボニルオキシ、Ｃ１－６アルコキシ、ニトロ、シアノ、ハロ、トリフルオロメチル、もしくはＣＦ３Ｓ；または基であるＣＦ３－Ａ－（式中、Ａは、－ＣＦ２－、－ＣＯ－、－ＣＨ２－、ＣＨ（ＯＨ）、ＳＯ２、ＳＯ、ＣＨ２－Ｏ－、もしくはＣＯＮＨである）、または基であるＣＦ２Ｈ－Ａ′－（式中、Ａ′は、酸素、硫黄、ＳＯ、ＳＯ２、ＣＦ２もしくはＣＦＨである）；いずれかの芳香族部分が任意選択的に置換された、トリフルオロメトキシ、Ｃ１－６アルキルスルフィニル、ペルフルオロＣ２－６アルキルスルホニル、Ｃ１－６アルキルスルホニル、Ｃ１－６アルコキシスルフィニル、Ｃ１－６アルコキシスルホニル、アリール、ヘテロアリール、アリールカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ホスホノ、アリールカルボニルオキシ、ヘテロアリールカルボニルオキシ、アリールスルフィニル、ヘテロアリールスルフィニル、アリールスルホニル、またはヘテロアリールスルホニル；いずれかのアミノ部分が任意選択的に１つまたは２つのＣ１－６アルキル基、またはＣ１－６アルキルスルフィニルアミノ、Ｃ１－６アルキルスルホニルアミノ、Ｃ１－６アルコキシスルフィニルアミノまたはＣ１－６アルコキシスルホニルアミノ、あるいはＣ１－６アルキルカルボニル、ニトロまたはシアノ、または－Ｃ（Ｃ１－６アルキル）ＮＯＨまたは－Ｃ（Ｃ１－６アルキル）ＮＮＨ２によって末端置換されたエチレニルによって置換された、Ｃ１－６アルキルカルボニルアミノ、Ｃ１－６アルコキシカルボニルアミノ、Ｃ１－６アルキル－チオカルボニル、Ｃ１－６アルコキシ－チオカルボニル、Ｃ１－６アルキル－チオカルボニルオキシ、１－メルカプトＣ２－７アルキル、ホルミル、もしくはアミノスルフィニル、アミノスルホニルまたはアミノカルボニル；または任意選択的に１つまたは２つのＣ１－６アルキルによって、またはＣ２－７アルカノイルによって置換されたアミノ；Ｒ３及びＲ４のうちの１つは水素またはＣ１－４アルキルであり、他のものはＣ１－４アルキル、ＣＦ３であるか、またはＣＨ２Ｘａは、任意選択的に１つまたは２つのＣ１－４アルキル基、シアノまたはＣ１－４アルコキシカルボニルによって置換されたフルオロ、クロロ、ブロモ、ヨード、Ｃ１－４アルコキシ、ヒドロキシ、Ｃ１－４アルキルカルボニルオキシ、－Ｓ－Ｃ１－４アルキル、ニトロ、アミノ；あるいはＲ３及びＲ４共に、任意選択的にＣ１－４アルキルによって置換されたＣ２－５ポリメチレンであり、
Ｒ５は、Ｃ１－６アルキルカルボニルオキシ、ベンゾイルオキシ、ＯＮＯ２、ベンジルオキシ、フェニルオキシまたはＣ１－６アルコキシであり、Ｒ６及びＲ９は、水素であるか、またはＲ５は、ヒドロキシであり、Ｒ６は、水素またはＣ１－２アルキルであり、Ｒ９は水素であり、
Ｒ７は、ヘテロアリールまたはフェニルであり、任意選択的にこれらの両方が、任意選択的に、Ｃ１－４アルキル、シアノ、アジド、Ｃ１－４アルコキシ、トリフルオロメトキシ、及びトリフルオロメチルによって１回または２回置換されたクロロ、フルオロ、ブロモ、ヨード、ニトロ、アミノから選択される基または原子で１回以上時間依存的に置換され、
Ｒ８は、水素、Ｃ１－６アルキル、ＯＲ１１、またはＮＨＣＯＲ１０であり、Ｒ１１は、水素、Ｃ１－６アルキル、ホルミル、Ｃ１－６アルカノイル、アロイル、またはアリール－Ｃ１－６アルキルであり、Ｒ１０は、水素、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシ、モノもしくはジＣ１－６アルキルアミノ、アミノ、アミノ－Ｃ．ｓｕｂ．１－６アルキル、ヒドロキシ－Ｃ１－６アルキル、ハロ－Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６アシルオキシ－Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシカルボニル－Ｃ１－６－アルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、Ｒ８－Ｎ－ＣＯ－Ｒ７基は、Ｒ５基に対してシス形であり、Ｘ
は、酸素またはＮＲ１２であり、Ｒ１２は、水素またはＣ１－６アルキルである。
上記のマーカッシュ群のうちのいずれかに関して、その群は、その群について列挙される種のうちのいずれかを含んでもよいか、または含まなくてもよい。
トナベルサットは、Ｎ－［（３Ｓ，４Ｓ）－６－アセチル－３－ヒドロキシ－２，２－ジメチル－３，４－ジヒドロクロメン－４－イル］－３－クロロ－４－フルオロベンズアミドまたは（３Ｓ－ｃｉｓ）－Ｎ－（６－アセチル－３，４－ジヒドロ－３－ヒドロキシ－２，２－（ジメチル－ｄ６）－２Ｈ－１－ベンゾピラン－４－イル）－３－クロロ－４－フルオロベンズアミドというＩＵＰＡＣ名で知られている場合もある。
実施形態において、式１の類似体は、化合物カラベルサット（Ｎ－［（３Ｒ，４Ｓ）－６－アセチル－３－ヒドロキシ－２，２－ジメチル－３，４－ジヒドロクロメン－４－イル］－４－フルオロベンズアミド）またはトランス－（＋）－６－アセチル－４－（Ｓ）－（４－フルオロベンゾイルアミノ）－３，４－ジヒドロ－２，２－ジメチル－２Ｈ－１－ベンゾ［ｂ］ピラン－３Ｒ－オール、半水和物である。
ある特定の実施形態において、トナベルサット及び／または遊離塩基もしくは薬学的に許容される塩の形態であるその類似体である。例として、薬学的に許容される塩には、限定されないが、１－ヒドロキシ－２－ナフトエ酸、２，２－ジクロロ酢酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、２－オキソグルタル酸、４－アセトアミド安息香酸、４－アミノサルチル酸、酢酸、アジピン酸、アスコルビン酸（Ｌ）、アスパラギン酸（Ｌ）、ベンゼンスルホン酸（ベシル酸）、安息香酸、樟脳酸（＋）、ショウノウ－１０－スルホン酸（＋）、カプリン酸（デカン酸）、カプロン酸（ヘキサン酸）、カプリル酸（オクタン酸）、炭酸、桂皮酸、クエン酸、シクラミン酸、ドデシル硫酸、エタン－１，２－ジスルホン酸、エタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチジン酸、グルコへプトン酸（Ｄ）、グルコン酸（Ｄ）、グルクロン酸（Ｄ）、グルタミン、グルタル酸、グリセロリン、グリコール酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩酸、イソ酪酸、乳酸（ＤＬ）、ラクトビオン酸、ラウリン酸、マレイン酸、リンゴ酸（－Ｌ）、マロン酸、マンデル酸（ＤＬ）、メタンスルホン酸（メシル酸塩）、ナフタレン－１，５－ジスルホン酸、ナフタレン－２－スルホン酸、ニコチン酸、硝酸、オレイン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、リン酸、プロピオン酸、ピログルタミン酸（－Ｌ）、サリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸（＋Ｌ）、チオシアン酸、トルエンスルホン酸（ｐ）、及びウンデシレン酸を含む、酸から誘導される塩酸塩及び塩が含まれる。一実施形態において、塩は、塩酸塩である。
他の実施形態において、トナベルサット及び／またはその類似体の１つ以上の多形体、１つ以上の異性体、及び／または１つ以上の溶媒和化合物が使用されても良よい。
ペプチド５
様々な小有機分子が、ギャップ結合またはヘミチャネル電流の抑制において活性を有することが報告されている。これらには、トリアリールメタン（ＴＲＡＭ）、キニン、メフロキン、フェナム酸、２－アミノフェノキシボレート及び誘導体、グリチルレチン酸及び誘導体、ハロタン及びエタン等の揮発性麻酔薬、長鎖アルコール（例えば、ヘプタノール及びオクタノール）等の親油性化合物、オレアミドを含む脂肪酸アミド、シクロデキストリン、シスプラチン、ポリアミン、及びテトラアリルアンモニウム（ｔｅｔｒａａｌｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ）イオンが含まれる。ますます多くの研究もまた、Ｅ１（Ｇａｐ２６ペプチド）の保存ＱＰＧ及びＳＨＶＲモチーフ、ならびにＥ２（Ｇａｐ２７ペプチド）中のＳＲＰＴＥＫモチーフを伴う細胞外ループＥ１及びＥ２内と、細胞質ループ（Ｇａｐ１９ペプチド）内と、の特定の配列に対応するペプチドを使用した、ギャップ結合チャネル及
びヘミチャネルの抑制を報告している。最も効き目があるそのようなペプチド摸倣薬は、ペプチド５（ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ）（配列番号１６８）である。
いくつかの実施形態において、ギャップ結合チャネル調節剤は、時折、抗コネキシンペプチドまたはペプチド模倣薬と称されるコネキシンペプチドまたはペプチド模倣薬、例えば、抗コネキシンヘミチャネル遮断ペプチドまたはペプチド模倣薬、例えば、コネキシン細胞外ドメイン、膜貫通領域、及びコネキシンカルボキシ末端ペプチドを含む修飾または未修飾ペプチドもしくはペプチド模倣薬）である。抗コネキシンヘミチャネル遮断ペプチドまたはペプチド模倣薬は、修飾されていてもよいか、または修飾されていなくてもよい。抗コネキシンヘミチャネル遮断ペプチドまたはペプチド模倣薬は、化学的、合成的に作製されるか、さもなければ製造される。いくつかの実施形態において、ギャップ結合チャネル調節剤は、コネキシン４３ペプチドまたはペプチド模倣薬である。いくつかの態様において、治療上有効な修飾または未修飾ペプチドまたはペプチド摸倣薬は、コネキシン４３またはコネキシン４５等のコネキシンの細胞外ドメインまたは膜貫通ドメインの一部分を含む。いくつかの態様においてペプチドまたはペプチド摸倣薬は、コネキシンＣｘ２６、Ｃｘ３０、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ５０、Ｃｘ５７、または眼もしくは血管中の任意の他のコネキシンの細胞外ドメインもしくは膜貫通ドメインの一部分を含む。
いくつかの実施形態において、本発明の調節剤は、抗コネキシン４３ペプチドまたはペプチド模倣薬、例えば、治療上有効、例えば、本明細書に記載される神経障害性の眼の障害のうちのいずれかを治癒するのに有効な、本発明の方法で有用な、コネキシンの細胞外ドメインの一部分を含むペプチド、及びコネキシンのカルボキシ末端の一部分を含むペプチドを含む、本明細書に記載されるペプチドのうちのいずれかを含む。いくつかの態様において、治療上有効な修飾または未修飾ペプチドまたはペプチド摸倣薬は、コネキシン４３またはコネキシン４５等のコネキシン、好ましくはコネキシン４３の細胞外ドメインの一部分を含む。
ペプチド５は、用量依存的様式で動作することができる確立されたギャップ結合チャネル遮断薬であり、より少ない容量は、ギャップ結合ヘミチャネル開口を遮断し、より高い容量は、細胞間のギャップ結合をアンカップリングする。例えば、Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌ ｅｔ ａｌ，２００８を参照されたい。ペプチド５の持続的低用量適用で、（通常の代謝回転の間の既存のギャップ結合の徐々の解除と並行して）ヘミチャネルドッキングへのペプチド干渉と考えられるギャップ結合カップリングの徐々の喪失が存在する。ペプチド５は、特に、ギャップ結合をアンカップリングせずに、ヘミチャネルを遮断する容量で使用されるとき、いくつかの試験管内、生体外、及び生体内（動物）研究で、有効であることが証明されている（例えば、Ｄａｖｉｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ，２０１２；Ｄａｎｅｓｈ－Ｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ，２０１２；Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌ ｅｔ ａｌ，２０１３を参照されたい）。Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌ ｅｔ ａｌ，２００８における結果は、低濃度または高濃度のペプチド５が、ヘミチャネルを遮断するが、高濃度でギャップ結合を直接アンカップリングすることを示す。ペプチド５データは、トナベルサットとの比較のためにここに示される。
パネキシン調節の化合物は、式ＶＩの化合物：
Figure 2023022154000007
 ＜ｔ０／＞でもよく、式中、
Ｚ１及びＺ２は独立して、（Ｃ１－Ｃ４）アルキル、ハロ（Ｃ１－Ｃ４）アルキル、（Ｃ１－Ｃ４）アルコキシ、ハロ（Ｃ１－Ｃ４）、（Ｃ１－Ｃ４）シクロアルキル、（Ｃ１－Ｃ４）アルキル－Ｓ－、（Ｃ１－Ｃ４）アルキルアミノ、（Ｃ１－Ｃ４）シクロアルキルアミノ、ジ（Ｃ１－Ｃ４）アルキルアミノ、及びアミノ（Ｃ１－Ｃ４）アルキルから選択され、
Ｙは、水素、ハロ、シアノ、ヒドロキシ、（Ｃ１－Ｃ４）アルキル、ハロ（Ｃ１－Ｃ４）アルキル、（Ｃ１－Ｃ４）アルコキシ、ハロ（Ｃ１－Ｃ４）アルコキシ、シアノ（Ｃ１－Ｃ４）アルキル、アミノ、（Ｃ１－Ｃ４）アルキルアミノ、ジ（Ｃ１－Ｃ４）アルキルアミノ、アミノ（Ｃ１－Ｃ４）アルキル、（Ｃ１－Ｃ４）アルキルアミノ（Ｃ１－Ｃ４）アルキル、ジ［（Ｃ１－Ｃ４）アルキル］アミノ（Ｃ１－Ｃ４）アルキル、トリフルオロメチルチオ、ヒドロキシ（Ｃ１－Ｃ４）アルキル、（Ｃ１－Ｃ４）アルコキシ（Ｃ１－Ｃ４）アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｒ１、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ１、－Ｃ（Ｏ）－Ｎ（Ｒ１）２、－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）Ｒ１、－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、－ＣＨ２－ＯＣ（Ｏ）Ｒ１、－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｎ（Ｒ１）２、Ｓ（Ｏ）２Ｒ１、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１）２、（Ｃ３－Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ３－Ｃ８）シクロアルキル（Ｃ１－Ｃ４）アルキル、ＳＯ３Ｈ、及びＳＯ４Ｈから選択され、
Ｒ１は、水素、ＮＨ２、ＮＲ２Ｒ３、ＯＨ、－ＣＨ２ＯＨ、及び－ＣＨ２ＣＨ２ＯＨから選択され、
Ｒ２及びＲ３は独立して、水素、（Ｃ１－Ｃ４）アルキル、（Ｃ１－Ｃ４）アルコキシ、及び（Ｃ１－Ｃ４）シクロアルキルから選択され、
ハロは、塩素、臭素、ヨウ素、またはフッ素である。
例えば、式ＶＩの化合物は、以下に示される、プロベネシドでもよい。
Figure 2023022154000008
プロベネシドは、ｐ－［ジプロピルスルファモイル］安息香酸のＩＵＰＡＣ名で知られる
場合があり、上記の構造を有する。
ある特定の実施形態において、プロベネシド及び／またはその類似体は、非イオン性であり、遊離塩基、遊離酸、または薬学的に許容される塩の形態である。例として、薬学的に許容される塩は、限定されないが、臭化水素酸、リン酸、酢酸、フマル酸、マレイン酸、サリチル酸、クエン酸、シュウ酸、乳酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、及びｐ－トルエンスルホン酸を含む酸から誘導された塩酸塩（単数または複数）、それ自体の塩を含む。一実施形態において、塩は、塩酸塩である。他の実施形態において、プロベネシド及び／またはその類似体の１つ以上の多形体、１つ以上の異性体、及び／または１つ以上の溶媒和化合物が使用されても良よい。
Ｐａｎｘ１
いくつかの態様において、パネキシン調節剤は、パネキシンペプチド配列を含んでもよいか、または含まなくてもよい。パネキシンペプチド配列は、ポリペプチドＰａｎｘ１、Ｐａｎｘ２、もしくはＰａｎｘ３の８～４０個の連続したアミノ酸、細胞外ドメイン、細胞内ドメイン、カルボキシ末端部、またはアミノ末端部を含み得る。いくつかの実施形態において、パネキシン調節剤は、Ｐａｎｘ１、２、または３の細胞外ループの一部分を含んでもよい。いくつかの実施形態において、例えば、パネキシン調節剤は、例えば、Ｐａｎｘ１摸倣物遮断ペプチド１０Ｐａｎｘ１（ＷＲＱＡＡＦＶＤＳＹ）を含んでもよい。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドであるパネキシン調節剤は、配列番号２８３（Ｐａｎｘ１ポリヌクレオチド）、（Ｐａｎｘ１ポリヌクレオチドＲｅｆＳｅｑ番号ＮＭ＿０１５３６８．３）、配列番号２８４（Ｐａｎｘ２ポリヌクレオチド）、（変異体１の場合、Ｐａｎｘ２ポリヌクレオチドＲｅｆＳｅｑ番号ＮＭ＿０５２８３９．３）、配列番号２８５（Ｐａｎｘ２ポリヌクレオチド変異体２の場合、ＲｅｆＳｅｑ番号ＮＭ＿００１１６０３００．１）、配列番号２８６（Ｐａｎｘ２ポリヌクレオチド変異体３の場合、ＲｅｆＳｅｑ番号ＮＲ＿０２７６９１．１）、または配列番号２８７（Ｐａｎｘ３ポリヌクレオチド）（Ｐａｎｘ３ポリヌクレオチドＲｅｆＳｅｑ番号ＮＭ＿０５２９５９．２）の８～８０個のヌクレオチド部分に対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の相同性を有してもよい。いくつかの態様において、パネキシン調節剤は、パネキシンペプチド配列を含んでもよいか、または含まなくてもよい。パネキシンペプチド配列は、ポリペプチド配列番号２８８（Ｐａｎｘ１ペプチド）、配列番号２８９（Ｐａｎｘ２ペプチド）、もしくは配列番号２９０（Ｐａｎｘ３ペプチド）、またはこれらの変異体の８～４０個の連続したアミノ酸、細胞外ドメイン、細胞内ドメイン、カルボキシ末端部、またはアミノ末端部を含み得る。Ｐａｎｘ１、２、及び３ポリペプチドの配列を、以下に示す。
配列番号２８８（Ｐａｎｘ１） 配列表１
Figure 2023022154000009
配列番号２８９（Ｐａｎｘ２） 配列表２
Figure 2023022154000010
配列番号２９０（Ｐａｎｘ３） 配列表３
Figure 2023022154000011
パネキシンをコードするｍＲＮＡの配列を、以下に示す。
配列番号２８３（Ｐａｎｘ１ ｍＲＮＡ） 配列表４－１
Figure 2023022154000012
 配列表４－２
Figure 2023022154000013
 配列表４－３
Figure 2023022154000014
配列番号２８４（Ｐａｎｘ２ ｍＲＮＡ、転写変異体１） 配列表５－１
Figure 2023022154000015
 配列表５－２
Figure 2023022154000016
 配列表５－３
Figure 2023022154000017
配列番号２８５（Ｐａｎｘ２ ｍＲＮＡ、転写変異体２） 配列表６－１
Figure 2023022154000018
 配列表６－２
Figure 2023022154000019
 配列表６－３
Figure 2023022154000020
配列番号２８６（Ｐａｎｘ２ ｍＲＮＡ、転写変異体３） 配列表７－１
Figure 2023022154000021
 配列表７－２
Figure 2023022154000022
配列番号２８７（Ｐａｎｘ３ ｍＲＮＡ） 配列表８
Figure 2023022154000023
コネキシン及びパネキシンは、脊椎動物において、ヘミチャネル形成タンパク質である。一態様において本発明は、前記対象の眼に治療的に有効な量の少なくとも１つのコネキシン調節剤を投与することによって、眼及び他の障害、例えば、緑内障、ＤＭＥ、ＡＭＤ、ＤＲ、眼線維症、眼低酸素症、網膜潅流障害、及び／または神経障害性の眼の障害を治療するための薬学的組成物、製造品、及び方法に関する。いくつかの態様において、神経障害性の眼の障害は、例えば、網膜神経節細胞の喪失及び／または緑内障性視神経障害であり得る。いくつかの態様において、網膜神経節細胞の喪失を停止、予防、または治療するのに有効である治療的に有効な量の少なくとも１つのコネキシン調節剤の投与は、緑内障性視神経内の神経栄養因子を上昇させ、かつ硝子体のグルタミン酸濃度を低減させるのにさらに有用である。
大部分の緑内障の主な危険因子は、眼圧の上昇、すなわち高眼圧である。眼圧は、眼の毛様体突起による液状の房水の生成、及び小柱網をとおる房水の排出の機能である。房水は、毛様体突起から、水晶体及び総腱輪の毛様小体によって後側に、かつ虹彩によって前側に結び付けられた後眼房内へと流れる。次いで、房水は、虹彩の瞳孔をとおって、虹彩によって後側に、かつ角膜によって前側に結び付けられた前眼房内へと流れる。ここから、小柱網はシュレム管を介して強膜神経叢及び前進の血流内へと房水を排出する。しかしながら、他の緑内障患者において、正常眼圧緑内障が存在し得る。
開放隅角緑内障／広隅角緑内障において、流れは、もともとの機能は房水を吸収することである小柱網の変性及び遮断に起因して、小柱網をとおって低減される。房水吸収の喪失は、抵抗の増加、したがって、眼内の圧力の慢性の無痛上昇をもたらす。閉塞隅角緑内障／狭隅角緑内障において、虹彩角膜角は、最終回旋（ｆｉｎａｌ ｒｏｌｌ）及び角膜に
接する虹彩の根部の前方移動のための完全に閉鎖され、房水が後部から前眼房に、次いで、小柱網から流れ出ることができない結果となる。この房水の蓄積は、急性の圧力上昇及び疼痛を引き起こす。
高眼圧と緑内障との一貫性のない関係は、解剖学的構造、眼発生、神経圧迫外傷、視神経血流、興奮性神経伝達物質、栄養素、網膜神経節細胞／軸索変性、グリア支持細胞、免疫システム、ニューロン喪失の老化機構、及び強膜の端の神経線維の切断に関する研究に駆り立てている。いくつかの実施形態において、本明細書で取り上げられるように、本明細書で取り上げられるギャップ結合、コネキシン、及び／またはパネキシン調節剤は、例えば、高血圧性及び正常眼圧緑内障等の病態を含む、本明細書に開示される眼の障害の治療もしくは予防、ならびに本明細書で取り上げられる他の使用、ＤＭＥまたは眼線維症の治療もしくは予防、あるいはＡＭＤを、その最初期からその後期までずっと治療するのに有用である。
老人性黄斑変性（ＡＲＭＤまたはＡＭＤ）は、不可逆的視覚障害の別の主な原因、及び先進国の６１歳以上の人々における視覚障害の別の主な原因である。ＡＭＤは、微細かつ詳細な視覚を補助する網膜の領域である、黄斑に最も一般的に影響を与える（しかしながら、黄斑に制限されない場合もある）。米国において、５０歳以上の人口の７人に１人が新生血管ＡＭＤ及び／または地図状萎縮を示し、１８０万の国民がＡＭＤを有する（２０２０年までに３００万人にまで増加することが見込まれる）。Ｆｒｉｅｄｍａｎ，ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ ｏｆ ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｍａｃｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ，Ａｒｃｈ
Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ １２２：５６４－５７２。ＡＭＤの発生率は、年齢とともに劇的に上昇するが、８１歳以上の白人女性の１５％超が、新生血管ＡＭＤ及び／または地図状萎縮を有する。世界的なＡＭＤの費用は、毎年３４５０億ドルと推定され、そのうちの２５５０億ドルが直接医療費である。ＡＭＤは、満足できる治療選択肢がない疾患として、世界保健機関によって２０１０年眼疾患優先度リストに含められた。
ＡＭＤの病因は、おそらく、代謝性、遺伝性、及び環境要因の複雑な相互作用が関与する多因子性である。ＡＭＤの従来の理解は、ＡＭＤが、光受容体、ＲＰＥ、ブルッフ膜、及び脈絡毛細管板の、眼内の４つの機能的に相互に関連する層に影響を与えることである。Ｓｈｅｌｌｅｙ，ｅｔ ａｌ． （２００９） Ｃｏｎｅ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ａｇｉｎｇ ａｎｄ ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｍａｃｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，Ａｒｃｈ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ １２７： ４８３－４９２． 研究は、主に、光受容体への不可逆的損傷をもたらすＲＰＥの変性に焦点が合わせられている。Ｎｏｗａｋ （２００６） Ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｍａｃｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ （ＡＭＤ）： ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｙ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｐ ５８： ３５３－３６３． この変性と共に、沈着物（ドルーゼン）がＲＰＥ及びブルッフ膜内に蓄積し得る。これらの沈着物は、異常血管上皮増殖と関連し得、これは、次いで、黄斑での漏出、出血、及び最終的に瘢痕形成につながり得る。ｄｅ Ｊｏｎｇ ＰＴ （２００６） Ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｍａｃｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３５５： １４７４－１４８５； Ｆｉｎｇｅｒ，ｅｔ ａｌ． （１９９９） Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ ｐｌａｑｕｅ ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｍａｃｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｕｂｒｅｔｉｎａｌ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ，Ａｍ Ｊ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ １２７： １７０－１７７を参照されたい。
一態様において本発明は、例えば、前記対象の眼に治療的に有効な量の少なくとも１つのコネキシン調節剤及び／または少なくとも１つのパネキシン調節剤を投与することによっ
て、眼の障害、例えば、緑内障、ＤＭＥ、ＡＭＤ、ＤＲ眼線維症、および／もしくは眼低酸素症、ならびに／または網膜潅流障害、及び／もしくは神経障害性の眼の障害眼圧関連神経障害を治療するための薬学的組成物、製造品、及び方法に関する。一態様において、本発明は、例えば、緑内障を治療するための薬学的組成物及び方法に関する。本明細書における方法は、眼圧を減少させるのに十分な量での、緑内障等の眼圧関連視神経障害の治療を提供する。いくつかの態様において、コネキシン調節剤は、眼圧の上昇と関連した外傷の治療に有用である。いくつかの態様において、コネキシン調節剤は、コネキシン４３調節剤である。いくつかの態様において、本発明の組成物及び方法は、眼圧を正常レベル、例えば、２１ｍｍ Ｈｇ未満に、例えば、２１、２０、または１９ｍｍ Ｈｇ未満に、例えば、約８～約２１ｍｍ Ｈｇのレベルに減少させるのに有用である。
本明細書に記載される組成物、製造品、及び方法は、一態様において、毒性副作用なしに緑内障を治療するのに有用である。いくつかの態様において、緑内障は、開放隅角緑内障または閉塞隅角緑内障であり得る。いくつかの態様において、治療的に有効な量の少なくとも１つのパネキシン調節剤及び／または少なくとも１つのコネキシン調節剤、例えば、コネキシン４３チャネル調節剤を必要とする眼組織に、それらを投与することは、小柱網をとおる流れを増加させる。ギャップ結合調節剤、パネキシンチャネル調節剤、及びヘミチャネル調節剤も有用である。いくつかの態様において、本発明の組成物は、線維柱帯切除術の成功率を向上させるためのアジュバントとして有用である。
眼の前方は、眼の前方部分内の構造体に栄養を供給する明澄な流体である房水で満たされている。この流体は、眼の水晶体を取り囲む毛様体によって絶えず産生されている。房水は、瞳孔をとおり、眼の排液隅角と称される、角膜が虹彩に付着する接合部に位置する小柱網チャネルをとおって眼から流れ出る。本発明のいくつかの態様において、１つ以上のギャップ結合もしくはコネキシン調節剤、またはパネキシン（ｐａｎｅｎｘｉｎ）調節剤、例えば、コネキシン４３調節剤は、小柱網もしくは毛様体に、またはこれらの近くに投与される。ギャップ結合調節剤、パネキシンチャネル調節剤、及びヘミチャネル調節剤も有用である。
本発明の一態様において、内網膜内の炎症を軽減するのに有効な、治療的に有効な量のギャップ結合調節剤及び／もしくはコネキシン調節剤、ならびに／またはパネキシン調節剤もしくはパネキシンチャネル調節剤、を投与することを含む、対象における網膜潅流障害、網膜虚血性疾患、または眼虚血性疾患を治療するための、組成物、製造品、及び方法も取り上げられる。いくつかの態様において、網膜虚血性疾患は、網膜動脈閉塞、または網膜中心静脈閉塞である。いくつかの態様において、眼虚血性疾患（ｏｐｔｉｃ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ）は、例えば、前部虚血性視神経障害である。いくつかの態様において、コネキシン調節剤は、Ｃｘ４３、Ｃｘ２６、Ｃｘ３０、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ４５、Ｃｘ５０、Ｃｘ５７、または眼もしくは血管中の任意の他のコネキシンの調節剤である。いくつかの態様において、コネキシン調節剤は、Ｃｘ４３調節剤、例えば、Ｃｘ４３ヘミチャネル調節剤である。いくつかの態様において、調節剤は、前述のもののうちのいずれかを含んでもよいか、または含まなくてもよい。
本発明は、対象の脈絡膜に、脈絡膜潅流の障害及び／もしくは脈絡膜炎、または脈絡膜過剰潅流及び／または内網膜内の炎症を低減させるのに有効な量のギャップ結合調節剤及び／もしくはコネキシン調節剤、ならびに／またはパネキシン調節剤もしくはパネキシンチャネル調節剤を投与することを含む、例えば、対象における脈絡膜潅流の障害及び／もしくは脈絡膜炎、または脈絡膜過剰潅流を減少させることによって、眼の障害、例えば、緑内障、ＡＭＤ、眼線維症、及び／もしくは眼低酸素症、ならびに／または網膜潅流障害、及び／もしくは神経障害性の眼の障害眼圧関連神経障害、を治療するための組成物、製造品、及び方法も取り上げる。本発明のいくつかの態様において、対象の脈絡膜に、脈絡膜
潅流の障害及び／もしくは脈絡膜炎、または脈絡膜過剰潅流を低減させるのに有効な、治療的に有効な量のギャップ結合調節剤及び／またはコネキシン調節剤の投与は、脈絡毛細管板内皮細胞喪失及び／または脈絡毛細管板脱落も低減させる。いくつかの態様において、脈絡膜潅流の障害及び／もしくは脈絡膜炎、または脈絡膜過剰潅流の低減は、網膜色素上皮変性及び／またはドルーゼン発生も低減し、さもなければ、乾燥型黄斑変性または湿潤型黄斑変性であり得る黄斑変性または黄斑ジストロフィの進行を改善、停止、減速、及び／または逆戻りさせる。脈絡膜潅流の障害及び／もしくは脈絡膜炎、または脈絡膜過剰潅流を低減させるためのコネキシン調節剤またはパネキシン調節剤は、眼治療薬と一緒に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、脈絡膜潅流の障害及び／もしくは脈絡膜炎、または脈絡膜過剰潅流を低減させるための調節剤は、Ｃｘ４３調節剤、ヘミチャネル調節剤、パネキシン調節剤、またはパネキシンチャネル調節剤である。
本発明の方法のいくつかの態様において、ギャップ結合調節剤及び／もしくはコネキシン調節剤、またはパネキシン調節剤もしくはパネキシンチャネル調節剤は、眼に眼内注射、または硝子体内注射によって投与されてもよい。ギャップ結合調節剤及び／またはコネキシン調節剤、パネキシンもしくはパネキシンチャネル調節剤は、１回または２回以上投与されてもよい。調節剤投与の他の方法を、本明細書に取り上げる。
いくつかの実施形態において、本発明のコネキシン調節剤は、コネキシンアンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはポリヌクレオチド等のコネキシンオリゴヌ
クレオチドもしくはポリヌクレオチド、またはコネキシンペプチドもしくはペプチド模倣薬等のコネキシンペプチドもしくはペプチド模倣薬を含む。コネキシンペプチドまたはペプチド模倣薬は、例えば、コネキシンの細胞外ドメインの一部分を含むペプチド、及びコネキシンまたはギャップ結合閉鎖化合物のカルボキシ末端部分の一部分を含むペプチドを含む本明細書に記載されるペプチドのうちのいずれか、ならびに本明細書に記載される眼の障害のうちのいずれかの治癒等の、発明の方法で有用なヘミチャネル閉鎖化合物を含む。
いくつかの実施形態において、本発明のコネキシンタンパク質調節剤は、本明細書に記載される神経障害性の眼の障害のうちのいずれかの治癒等の、本発明の方法で有用なコネキシン４３アンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはポリヌクレオチド等のコネキシン４３オリゴヌクレオチドもしくはポリヌクレオチド、または抗コネキシン４３ペプチドもしくはペプチド模倣薬、例えば、コネキシンの細胞外ドメインの一部分を含むペプチド、及びコネキシンまたはギャップ結合閉鎖化合物のカルボキシ末端部分の一部分を含むペプチドを含む、本明細書に記載されるペプチドのうちのいずれか、ならびにヘミチャネル閉鎖化合物を含む。
いくつかの実施形態において、本発明のパネキシン調節剤は、本明細書に記載される神経障害性の眼の障害等の眼の障害のうちのいずれかの治癒等の、本発明の方法で有用なパネキシンアンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはポリヌクレオチド等のパネキシンオリゴヌクレオチドもしくはポリヌクレオチド、または緑内障、ＡＭＤ、眼線維症、ＤＭＥ、眼低酸素症、及び／もしくは抗パネキシンペプチドもしくはペプチド模倣薬を含む。
いくつかの実施形態において、「プロモイエティ」は、官能基を活性剤内に遮蔽し、それにより、活性剤をプロドラッグへと変換する保護基として作用する種を指す。活性剤は、本明細書に開示される調節剤または眼の治療薬のうちのいずれかでもよい。典型的に、プロモイエティは、生体内で酵素的手段または非酵素的手段によって開裂され、それによりプロドラッグをその活性形態に変換させる結合（複数可）を介して薬物に結合する。いくつかの実施形態において、プロモイエティは、活性剤でもよい。いくつかの実施形態において、プロモイエティは、ギャップ結合調節剤、コネキシン調節剤、またはパネキシン調
節剤と結合していてもよい。いくつかの実施形態において、プロモイエティは、ポリヌクレオチド、ペプチドまたはペプチド模倣薬、小分子拮抗薬及び／または本明細書に開示される眼の治療薬のうちのいずれかと結合していてもよい。いくつかの実施形態において、プロモイエティは、式Ｉの化合物と結合していてもよく、いくつかの実施形態において、プロドラッグは、式ＩＩの化合物でもよい。
いくつかの実施形態において、プロモイエティは、本開示の任意のペプチド摸倣薬またはペプチド拮抗薬でもよい。いくつかの実施形態において、プロモイエティは、任意選択的に単一のアミノ酸の官能基上で保護される単一のアミノ酸である。いくつかの実施形態において、プロモイエティは、標的種である。いくつかの態様において、プロモイエティは、細胞膜上の内向き流束または外向き流束トランスポータの基質、例えば、Ｇａｕｄａｎａ，Ｒ．ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ＡＡＰＳ Ｊｏｕｒｎａｌ，１２：３，３４８－３６０（２０１２）に記載されるものである。プロモイエティは、例えば、化学結合したビオチンでもよい。プロモイエティは、例えば、化学結合したＤ－セリンでもよい。
いくつかの実施形態において、本発明のパネキシン調節剤は、本明細書に記載される眼低酸素症または神経障害性の眼の障害のうちのいずれかの治癒等の、本発明の方法で有用な、パネキシンアンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはポリヌクレオチド等のパネキシンオリゴヌクレオチドもしくはポリヌクレオチド、または抗パネキシンペプチドもしくはペプチド模倣薬を含む。
定義 「小分子」は、本明細書で、約６００ダルトン未満の分子量を有し、概して有機
化合物であると定義される。小分子は、プロドラッグの活性剤でもよい。
本明細書において使用する場合、「治療」（及び「治療する（ｔｒｅａｔ）」または「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」等のその文法的変異）は、治療される個人、組織、または細胞の自然経過を変える試みにおける臨床的介入を指し、予防のため、または臨床病理の経過の間のいずれかで行なわれ得る。治療の望ましい効果としては、疾患、障害、病態の発生または再発の予防、徴候または症状の軽減、疾患のあらゆる直接的または間接的病理学的帰結の減少、疾患進行率の減少、病状の改善または緩和、及び寛解または改善された予後が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本発明の化合物、方法、及び組成物は、疾患、障害、または病態の発症を遅延させるか、または疾患、障害、または病態の進行を遅らせるために使用されてもよい。この用語は、対象が全快するまで治療されることを必ずしも意味しない。したがって、「治療」には、特定の疾患、障害、もしくは病態の症状もしくは重症度を減少、緩和、もしくは改善するか、または特定の疾患、障害、もしくは病態の発症のリスクをの予防、もしくはさもなければ低減が含まれる。「治療」は、病状の緩和の完全または部分的な状態の維持または促進も含まれ得る。
用語、疾患及び病態を含む「眼の障害の治療」等は、例えば、眼内のニューロン脱落及び／または神経障害、血管漏出及び／または出血、血管新生、炎症及び／または浮腫等の眼の障害、疾患、または病態の予防、遅延、軽減、減少、停止、及び／または逆戻りを指し得る。
用語「予防する」は、全体的に、もしくは部分的に防ぐか、または改善もしくは制御することを意味する。
本明細書において使用する場合、「有効量」は、必要な用量及び期間で、所望の治療または予防結果を達成するのに有効な量を指す。例えば、かつ制限としてではなく、「有効量」は、疾患、障害、または病態の徴候及び／もしくは症状を治療することができる、本明
細書に開示される化合物または組成物の量を指し得る。
本明細書において使用する場合、本発明の物質／分子、作用薬、または拮抗薬の「治療的に有効な量」は、その個人の病状、年齢、性別、及び体重、ならびにその個人において所望の反応を引き起こす物質／分子、作用薬、または拮抗薬の能力等の要因に従って変更されてもよい。治療的に有効な量は、好ましくは、治療上有益な効果が、物質／分子、作用薬、または拮抗薬のいずれかの有毒または有害な効果を上回り得るものである。
本明細書において使用する場合、「予防的有効量」は、必要な用量及び期間で、所望の予防結果を達成するのに有効な量を指す。必然的でないが一般的に、予防用量は、疾患、障害、もしくは病態の前、またはこれらのより早い段階で対象に使用されるため、予防的有効量は、治療的に有効な量より少なくなる。
用語「医薬製剤」は、有効になるように、その中に含有される活性成分の生物活性を許容するような形態で、かつ調製物が投与される対象にとって許容できないほど有毒である追加の構成成分を含有しない製剤を指す。
「薬学的に許容される担体」は、本明細書において使用する場合、対象に安全に投与することができる、活性成分以外の、医薬製剤内の成分を指す。薬学的に許容される担体としては、緩衝液、賦形剤、安定剤、または保存剤が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書において使用する場合、「個人」及び「患者」を含む、用語「対象」等は、これらのすべてが本明細書で同じ意味で使用され得、ヒト、イヌ、ウマ、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウシ等の家畜（ｄｏｍｅｓｔｉｃ ａｎｉｍａｌ）及び家畜（ｆａｒｍ ａｎｉｍａｌ）、ならびに動物園、野生動物パーク、スポーツ、またはペットの動物を含む、あらゆる哺乳動物を指す。本明細書における好ましい哺乳動物は、成人、小児、及び高齢者を含むヒトである。好ましいスポーツ動物は、ウマ及びイヌである。好ましいペット動物は、イヌ及びネコである。対象は、例えば、イルカ、クジラ、アシカ、またはセイウチ等のアクアティックパーク動物でもよい。ある特定の実施形態において、対象、個人、または患者は、ヒトである。
本発明は、ペプチド５等の調節剤及び／またはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体もしくはプロドラッグを含むギャップ結合チャネル調節剤の使用、ならびに／あるいはパネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及び／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１、またはこれらのいずれかの類似体の使用を参照して、本明細書に記載される。ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤及び／またはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体もしくはプロドラッグ、ならびに／あるいはパネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及び／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１、またはいずれかの類似体の１つ以上の塩、多形体、溶媒和化合物及び／または異性体も、本発明で使用され得ることが理解されるべきである。したがって、「トナベルサット及び／もしくはその類似体」、「ペプチド５及び／もしくはその類似体」、「プロベネシド及び／もしくはその類似体」、または「１０Ｐａｎｘ１、もしくはこれらのいずれかの類似体」への参照は、前述の化合物のうちのいずれかの任意の１つ以上の塩、溶媒和化合物、多形体、及び／または異性体への参照を含むと見なされるべきである。
本発明の方法、使用、及び組成物は、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、ならびに／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体及びこれらの１つ以上の類似体、ペプチ
ド５及びその１つ以上の類似体、プロベネシド及びその１つ以上の類似体、または１０Ｐａｎｘ１及びその１つ以上の類似体の組み合わせ、あるいはこれらの類似体のうちの１つ以上の組み合わせの使用を含んでもよい。したがって、本明細書における「式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／もしくは類似体」、「ペプチド５及び／もしくはその類似体」、「式ＶＩの化合物、例えば、プロベネシド、及び／もしくはその類似体」、または「１０Ｐａｎｘ１、もしくはこれらのいずれかの類似体」への参照は、そのような組み合わせへの参照を含むとみなされるべきである。
本明細書において使用する場合、用語「ヘミチャネル」は、ギャップ結合（２つのヘミチャネルまたはコネクソンが隣接した細胞間の細胞間隙を越えて接続して、ギャップ結合を形成する）の一部であり、いくつかのコネキシンタンパク質、典型的に、２つの隣接した細胞の細胞質間のギャップ結合の細孔を形成するコネキシンタンパク質のホモマーまたはヘテロマーの６量体を含む。ヘミチャネルは、結合の片側上の細胞によって供給され、対向する細胞からの２つのヘミチャネルが、通常一体となって、完全な細胞間ギャップ結合チャネルを形成する。しかしながら、一部の細胞において、及びある状況下の細胞において、ヘミチャネル自体が細胞質と細胞外間隙との間の導管として有効であり、イオン及び小分子の移動を可能にする。
式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び／または前述の化合物のうちのいずれかの類似体もしくはプロドラッグは、ヘミチャネル、好ましくは任意の種類のコネキシンタンパク質を含むヘミチャネルの機能及び／または活性を調節することができる。したがって、「ヘミチャネル」への参照は、文脈が求めない限り、いくつかの異なるコネキシンタンパク質のうちの任意の１つ以上を含むヘミチャネルを含むと広く見なされるべきである。しかしながら、例として、ヘミチャネルは、コネキシン２３、
２５、２６、３０、３０．２、３０．３、３１、３１．１、３１．９、３２、３６、３７、４０、４０．１、４３、４５、４６、４７、５０、５９、及び６２のうちの１つ以上を含んでもよい。一実施形態において、ヘミチャネルは、前述のコネキシンのうちの１つからなる。一実施形態において、ヘミチャネルは、コネキシン２６、３０、３２、３６、３７、４０、４５、及び４７のうちの１つ以上を含む。一実施形態において、ヘミチャネルは、コネキシン２６、３０、３２、３６、３７、４０、４５、または４７のうちの１つからなる。１つの特定の実施形態において、ヘミチャネルは、コネキシン３０及びコネキシン４３のうちの１つ以上を含む。１つの特定の実施形態において、ヘミチャネルは、コネキシン３０またはコネキシン４３のうちの１つからなる。１つの特定の実施形態において、ヘミチャネルは、コネキシン４５またはコネキシン４６またはコネキシン５０のうちの１つからなり、一実施形態において、ヘミチャネルは、コネキシン２６を除く１つ以上のコネキシンを含む。
本明細書において使用する場合、用語「ギャップ結合チャネル」は、隣接した細胞間の細胞間隙を越えて接続し、ある特定の分子がこれらの細胞の間を流れることを可能にする２つのヘミチャネルを含む。
ヘミチャネル及びギャップ結合チャネルは、あらゆる種類の細胞内に存在し得る。したがって、「ヘミチャネル」または「ギャップ結合チャネル」への参照は、文脈が求めない限り、あらゆる細胞型内に存在するヘミチャネルまたはギャップ結合チャネルへの参照を含むと見なされるべきである。本発明の一実施形態において、ヘミチャネルまたはギャップ結合チャネルは、中枢神経系の外の細胞内に存在する。一実施形態において、ヘミチャネルまたはギャップ結合チャネルは、コネキシン２６以外の１つ以上のコネキシンを含み、中枢神経系の外の細胞内に存在する。本発明の一実施形態において、ヘミチャネルまたはギャップ結合チャネルは、眼内の細胞内に存在する。本発明の一実施形態において、ヘミチャネルまたはギャップ結合チャネルは、眼の前部、すなわち、前眼部内の細胞内に存在
する。本発明の一実施形態において、ヘミチャネルまたはギャップ結合チャネルは、眼の後方、すなわち、後眼部内の細胞内に存在する。本発明の一実施形態において、ヘミチャネルまたはギャップ結合チャネルは、ブドウ膜内の細胞内に存在する。本発明の一実施形態において、ヘミチャネルまたはギャップ結合チャネルは、視神経内の細胞内に存在する。本発明の一実施形態において、ヘミチャネルまたはギャップ結合チャネルは、眼の微小血管系内の細胞内に存在する。本発明の一実施形態において、ヘミチャネルまたはギャップ結合チャネルは、脈絡膜内の細胞内に存在する。本発明の一実施形態において、ヘミチャネルまたはギャップ結合チャネルは、脈絡毛細管板内の細胞内に存在する。
本明細書において使用する場合、「ヘミチャネル及び／またはギャップ結合チャネルの調節」は、ヘミチャネル及び／またはギャップ結合チャネルの１つ以上の機能及び／または活性の調節である。そのような機能及び活性は、例えば、ギャップ結合チャネルを形成するための隣接した細胞及び開口上へのヘミチャネルのドッキングを含み得る。これらは、細胞間の細胞間通信、及びギャップ結合チャネルをとおる細胞間の分子の流れも含み得る。そのような機能及び活性は、例えば、細胞外間隙または環境からヘミチャネルをとおる、細胞内への分子の流れ、及び／または細胞内間隙または細胞の環境からヘミチャネルをとおる、細胞外間隙または環境内への分子の流れを含み得る。
ヘミチャネル及び／またはギャップ結合チャネルの機能の調節は、任意の手段によって起こり得る。しかしながら、ほんの一例として、調節は、ヘミチャネルドッキングによるギャップ結合の形成を妨げるか、遮断するか、抑制するか、または減少させること、ヘミチャネルの閉鎖を誘発するか、または促進すること、ヘミチャネル開口を妨げるか、遮断するか、抑制するか、または減少させること、ヘミチャネル間のカップリングの喪失を誘発するか、または促進すること、ヘミチャネル及び／またはギャップ結合の細胞内移行を引き起こすか、誘発するか、または促進することのうちの１つ以上によって起こり得る。「遮断する」、「抑制する」、「妨げる」、「減少させる」、及び「拮抗する」等の語の使用は、完全な遮断、抑制、阻止、または拮抗を意味すると見なされるべきではないが、これが好ましい場合があり、少なくともヘミチャネル及び／またはギャップ結合チャネルの機能または活性を減少させるための部分的遮断、抑制、阻止、または拮抗を含むと見なされるべきである。同様に、「誘発する」または「促進する」は、カップリングの完全な喪失、あるいはヘミチャネル及び／もしくはギャップ結合（またはヘミチャネル及び／もしくはギャップ結合の群）の完全な内部移行を意味すると見なされるべきではなく、少なくともヘミチャネル及び／またはギャップ結合チャネルの機能または活性を減少させるためのカップリングの部分的喪失または部分的内部移行を含むと見なされるべきである。
本明細書において使用する場合、用語「ギャップ結合チャネル調節剤」は、例えば、コネキシンタンパク質の発現、その輸送及び／または構築を含む、ヘミチャネル及び／またはギャップ結合の発現、活性、及び／または形成の阻止、抑制、及び／または減少を含む、ギャップ結合チャネルの機能もしくは活性、またはギャップ結合ヘミチャネルの機能もしくは活性を一緒に、または別個に阻止、抑制、及び／もしくは減少させる化合物である。機能または活性の阻止、抑制、及び／または減少は、直接的または間接的であり得る（例えば、限定されないが、チャネルを直接遮断するか、立体配座の変化を誘発するか、またはコネキシンリン酸化状態を変える）。ギャップ結合チャネル遮断薬は、任意の化学的性質のものでもよい。しかしながら、例として、作用剤は、（アンチセンス分子、ＲＮＡｉ分子、モルホリノ、及び本明細書に記載される他の核酸を含む）核酸、ペプチド、小分子、化学元素、ホルモン、抗体、抗体断片、または代謝物でもよい。ある特定の実施形態において、作用剤は、ギャップ結合の活性、発現、輸送及び／または構築を抑制または遮断するための、コネキシン、（コネクソンとしても知られる）ヘミチャネルを含むギャップ結合の１つ以上の構成成分を標的とする化合物である。「抑制する」または「遮断する」は、コネキシン、ヘミチャネル、またはギャップ結合の活性、発現、輸送、及び／または
構築が完全に抑制または遮断されることを意味すると見なされるべきではないが、これが好ましい場合があり、しかしながら、コネキシン、ヘミチャネル、またはギャップ結合の活性、発現、輸送、及び／または構築のあらゆる減少を含むと見なされるべきである。
本明細書において使用する場合、用語「ギャップ結合ヘミチャネル及び／またはギャップ結合チャネルの調節が有益であり得る障害」には、ギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネルの機能または活性が疾患、障害、または病態の発病、進行、または持続性に関連付けられ得るあらゆる疾患、障害、または病態が含まれ得る。一実施形態において、疾患、障害、または病態は、コネキシン２３、２５、２６、３０、３０．２、３０．３、３１、３１．１、３１．９、３２、３６、３７、４０、４０．１、４３、４５、４６、４７、５０、５９、及び６２のうちの１つ以上を含むギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネルの機能または活性が関連付けられるものである。一実施形態において、疾患、障害、または病態は、前述のコネキシンのうちの１つからなるギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネルの機能または活性が関連付けられるものである。一実施形態において、疾患、障害、または病態は、コネキシン２６、３０、３２、３６、３７、４０、４５、及び４７のうちの１つ以上を含むギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネルの機能または活性が関連付けられるものである。一実施形態において、疾患、障害、または病態は、コネキシン２６、３０、３２、３６、３７、４０、４５、または４７のうちの１つからなるギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネルの機能または活性が関連付けられるものである。１つの特定の実施形態において、疾患、障害、または病態は、コネキシン３０及びコネキシン４３のうちの１つ以上を含むギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネルの機能または活性が関連付けられるものである。１つの特定の実施形態において、疾患、障害、または病態は、コネキシン３０またはコネキシン４３またはコネキシン４５またはコネキシン４６またはコネキシン５０のうちの１つからなるギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネルの機能または活性が関連付けられるものである。一実施形態において、疾患、障害、または病態は、コネキシン２６を除く１つ以上のコネキシンを含むギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネルの機能または活性が関連付けられるものである。一実施形態において、疾患、障害、または病態は、中枢神経系の外の細胞内に存在するギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネルの機能または活性が関連付けられるものである。一実施形態において、疾患、障害、または病態は、コネキシン２６を除く１つ以上のコネキシンを含み、かつ、中枢神経系の外の細胞内に存在するギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネルの機能または活性が関連付けられるものである。本発明の一実施形態において、疾患、障害、または病態は、調節されるヘミチャネルまたはギャップ結合チャネルの機能または活性が眼内の細胞内に存在するものである。本発明の一実施形態において、疾患、障害、または病態は、調節されるヘミチャネルまたはギャップ結合チャネルの機能または活性が、眼の前部、すなわち、前眼部内の細胞内に存在するものである。本発明の一実施形態において、疾患、障害、または病態は、調節されるヘミチャネルまたはギャップ結合チャネルの機能または活性が、眼の後方、すなわち、後眼部内の細胞内に存在するものである。本発明の一実施形態において、疾患、障害、または病態は、調節されるヘミチャネルまたはギャップ結合チャネルの機能または活性が、ブドウ膜内の細胞内に存在するものである。本発明の一実施形態において、疾患、障害、または病態は、調節されるヘミチャネルまたはギャップ結合チャネルの機能または活性が、視神経内の細胞内に存在するものである。本発明の一実施形態において、疾患、障害、または病態は、調節されるヘミチャネルまたはギャップ結合チャネルの機能または活性が、脈絡膜内の細胞内に存在するものである。本発明の一実施形態において、疾患、障害、または病態は、調節されるヘミチャネルまたはギャップ結合チャネルの機能または活性が、脈絡毛細管板内の細胞内に存在するものである。本発明の一実施形態において、疾患、障害、または病態は、調節されるヘミチャネルまたはギャップ結合チャネルの機能または活性が、眼の微小血管系内の細胞内に存在するものである。一実施形態において、組成物は、前述のものの任意のギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネル調節剤を含んでもよいか
、または含まなくてもよい。
本明細書において使用する場合、用語「パネキシンチャネルの調節が有益であり得る障害」は、パネキシンまたはパネキシンチャネルの機能または活性が疾患、障害、または病態の発病、進行、または持続性に関連付けられ得るあらゆる障害を含むと見なされるべきである。一実施形態において、疾患、障害、または病態は、パネキシンチャネルの機能または活性がパネキシンの３つのアイソフォームのうちの１つ以上を含むものである。一実施形態において、疾患、障害、または病態は、調節されるパネキシンチャネルの機能または活性が、パネキシン１を含むものである。一実施形態において、疾患、障害、または病態は、調節されるパネキシンチャネルの機能または活性が、眼の表面、網膜、及び眼と関連しているか、ま
たは眼を含む血管を含む、眼内また眼の上にあるものである。
「慢性創傷」、「期待される速度で治癒しない創傷」、及び「裂開性創傷」類似の用語及び表現は、本明細書において使用する場合、これは、参照により本明細書に組み込まれ、本発明が適用され得る創傷の種類のいくつかの例を含む米国第２０１１／０３００１３０号に提供されるとおりの意味を有する。しかしながら、例として、そのような創傷は、（例えば、糖尿病性足部潰瘍を含む）糖尿病性潰瘍、静脈性潰瘍、静脈うっ血性潰瘍、褥瘡、褥瘡性潰瘍、血管炎性潰瘍、動脈性潰瘍、感染性潰瘍、褥瘡、熱傷性潰瘍、外傷性潰瘍または外傷誘発潰瘍、炎症性潰瘍、壊疽性膿皮症と関連した潰瘍形成、持続性上皮欠損を含む眼の潰瘍、混合潰瘍を含み得る。
「線維症」及び「線維性疾患、障害、もしくは病態」または類似の用語及び表現は、本明細書において使用する場合、参照により本明細書に組み込まれ、本発明が適用され得る線維症、疾患、障害、または病態のいくつかの例を含む米国第２０１１／００９２４４９号に提供されるとおりの意味を有する。しかしながら、例として、そのような線維症、線維性疾患、障害、または病態には、肝臓線維症、心臓線維症、（例えば、ケイ肺症、石綿症、特発性肺線維症を含む）肺線維症、（例えば、口腔粘膜下線維症を含む）口腔線維症、後腹膜線維症、三角筋線維症、心内膜心筋線維症、（例えば、糖尿病性腎障害を含む）腎臓線維症、糸球体硬化症、急性線維症が含まれ得る。一実施形態において、肝臓線維症は、慢性肝臓損傷から生じるか、または血色素症、ウィルソン病、アルコール中毒、住血吸虫症、ウイルス性肝炎、胆道閉塞症、毒素への暴露、及び／または代謝障害と関連している。一実施形態において、心臓線維症は、心内膜線維症または心内膜心筋線維症である。一実施形態において、急性線維症は、事故による傷害、感染症、ならびに／または放射線及び／もしくは化学療法治療を関連付けられる。一実施形態において、線維症は、強皮症、膵炎、炎症性腸疾患、クローン病、結節性筋膜炎、及び／または好酸球性筋膜炎を含む群から選択される疾患、障害、または病態を有する対象において起こり得る。一実施形態において、強皮症は、斑状強皮症、全身性斑状強皮症、または線状強皮症であり得る。
「異常または過剰な瘢痕化」等は、本明細書において使用する場合、参照により本明細書に組み込まれ、本発明が適用され得る異常または過剰な瘢痕化のいくつかの例を含む、米国第２０１１／０１３０７１０号に提供されるとおりの意味を有する。しかしながら、例として、異常または過剰な瘢痕化には、皮膚内または皮膚上に存在する瘢痕、眼内又は眼の上の瘢痕、ケロイド瘢痕、肥厚性瘢痕、萎縮性瘢痕、広範囲にわたる瘢痕が含まれ得る。
「血管障害」及び類似の用語または表現は、本明細書において使用する場合、参照により本明細書に組み込まれ、本発明が適用され得る血管障害のいくつかの例を含む、欧州第２５１０９３９号に提供されるとおりの意味を有する。しかしながら、例として、血管障害には、アテローム性動脈硬化症、微小血管障害、大血管障害、血栓症、外傷に起因する血
管障害、血管損傷、糖尿病性網膜症、臓器虚血、内皮細胞破壊、四肢の血管疾患が含まれ得る。
「整形外科的疾患または障害」及び類似の表現、本明細書において使用する場合、参照により本明細書に組み込まれ、本発明が適用され得るいくつかの整形外科的疾患または障害例を含む、欧州第２２３８２５０号に提供されるとおりの意味を有する。しかしながら、例として、整形外科的疾患または障害には、関節内及び／または関節周囲の異常組織形成を全体的または部分的に特徴とするもの、例えば、代謝障害、虚血、外傷、関節、莢膜、骨、軟骨、腱、靱帯、もしくは筋肉への傷害、骨折、亜脱臼、脱臼、圧挫損傷、長期にわたる固定（例えば、ギプス包帯もしくはそえ木内の関節の固定）、ならびに／または麻痺等の様々な傷害及び病態と関連しているか、あるいはこれらによって引き起こされ得る、変えられたか、もしくは異常な関節可動性または関節構造と関連するものが含まれる。
表現「整形外科的手術または処置」及び類似の表現は、本明細書において使用する場合、当業者によって容易に理解されるであろう。しかしながら、例として、「整形外科的手術または処置」及び類似の表現は、欧州第２２４２８４４号に概説されるいずれかの手術または処置を含むと見なされるべきである。そのような処置からの回復の「向上」も、広く見なされるべきであり、例えば、疼痛の軽減、ならびに可動性及び／または回復時間の向上を含み得る。
「整形外科的手術後関節拘縮」は、本明細書において使用する場合、参照により本明細書に組み込まれる欧州第２２４２８４４号に提供されるとおりの意味を有する。
「癒着」及び類似の表現は、本明細書において使用する場合、参照により本明細書に組み込まれる欧州第２２５２６９０号に提供されるとおりの意味を有する。しかしながら、例として、「癒着」には、外科手術上の癒着ならびに上皮、結合組織、筋肉、及び組織を含むあらゆる組織内に形成する癒着が含まれ得る。
「組織の損傷」、「眼科の処置と関連した組織の損傷」、及び類似の表現及び用語は、本明細書において使用する場合、参照により本明細書に組み込まれ、本発明が適用され得る組織の損傷のいくつかの例を含む、米国第２０１２／００９３７６８号に提供されるとおりの意味を有する。しかしながら、例として、組織の損傷は、組織修復プロセスの促進及び／または組織の損傷の改善を含み得る。
「炎症性障害」、「炎症性疾患」、及び類似の表現は、本明細書において使用する場合、参照により本明細書に組み込まれ、本発明が適用され得る障害のいくつかの例を含む、国際公開第２０１３／１４８７３６号に提供される内に提供されるとおりの意味を有する。一実施形態において、ヘミチャネル及びパネキシン調節剤は、１つ以上のインフラマソームの活性化を抑制するために、単独で、または一緒に使用される。一実施形態において、ヘミチャネル及びパネキシン調節剤またはパネキシンチャネル調節剤を含む調節剤は、インフラマソームによる炎症性カスケードの活性化を抑制するために、単独で、または一緒に使用される。一実施形態において、ギャップ結合、ヘミチャネル及びパネキシン及び／またはパネキシンチャネル調節剤を含む調節剤は、少なくとも部分的に、１つ以上のインフラマソームの活性化、及び／またはインフラマソームによる炎症性カスケードの活性化を特徴とする疾患、障害、または病態の対象を治療するために、単独で、または一緒に使用される。一実施形態において、ギャップ結合、ヘミチャネル、パネキシンチャネル、コネキシン及びパネキシン調節剤は、ＮＬＲＰ３インフラマソームの活性を調節するために、単独で、または一緒に使用される。
インフラマソームは、カスパーゼ１、ＰＹＣＡＲＤ、ＮＡＬＰ、及び任意選択的に、（カ
スパーゼ１１またはＩＣＨ－３としても知られる）カスパーゼ５を含む多タンパク質複合体である。インフラマソームの正確な組成物は、インフラマソーム構築を開始する活性剤に依存する。例えば、ｄｓＲＮＡが、１つのインフラマソーム組成物をもたらすのに対して、石綿は、異なる変異体を構築する。インフラマソームは、炎症性サイトカインインターロイキン１β（ＩＬ－１β）及びインターロイキン１８（ＩＬ－１８）の成熟を促進する。インフラマソームは、炎症過程の活性化に関与し、アポトーシスとは異なるプログラムされた細胞死のプロセスである細胞ピロトーシスを誘発することが示されている。ＮＬＲＰ３インフラマソーム遮断は、ＶＥＧＦ－Ａ－誘発老人性黄斑変性を抑制する。
用語ギャップ結合チャネル、ヘミチャネル、パネキシンまたはパネキシンチャネル、またはコネキシン機能または活性の「調節剤」、「調節剤」、及び「調節」は、その様々な形態で本明細書において使用する場合、全体的または部分的なコネキシンもしくはコネキシンヘミチャネルもしくはコネキシンギャップ結合、あるいはパネキシンもしくはパネキシンチャネルの発現、作用、または活性の全体的または部分的な抑制を指し、ギャップ結合調節剤としてを含む抗コネキシン剤として、及びパネキシンチャネル調節剤としてを含む抗パネキシン作用剤として機能し得る。いくつかの態様において、ギャップ結合調節剤及び／またはコネキシン調節剤は、血管中に存在するコネキシンの調節剤、例えば、コネキシン４３調節剤及び／またはコネキシン４５調節剤でもよい。したがって、本明細書において使用する場合、用語「コネキシン調節剤」は、概してコネキシン調節剤を指すが、別段の定めがない限り、具体的にコネキシン４３調節剤及びコネキシン４５調節剤（ならびにＣｘ４３及びＣｘ４５ヘミチャネル調節剤）と、他の血管コネキシン及びヘミチャネルの調節剤と、も指す。いくつかの態様において、コネキシン調節剤は、コネキシン４３調節剤、例えば、ヘミチャネル開口を遮断するコネキシン４３ヘミチャネル調節剤である。いくつかの態様において、ギャップ結合調節剤には、Ｃｘ２６、Ｃｘ３０、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ５０、及びＣｘ５７等の眼中に見られる他のコネキシン、ならびにこれらのヘミチャネル及びギャップ結合の調節剤も含まれる。いくつかの態様において、パネキシン及び／またはパネキシンチャネル調節剤は、パネキシン１の調節剤、具体的には、パネキシン１チャネル開口の調節剤でもよい。いくつかの態様において、調節剤は、前述のもののうちのいずれかを含んでもよいか、または含まなくてもよい。
いくつかの実施形態において、「眼の障害」には、高血圧性緑内障及び正常眼圧緑内障を含む緑内障、臨床的地図状萎縮；乾燥型ＡＭＤ及び滲出型ＡＭＤ、異常、もしくは障害を含むＡＭＤ、慢性黄斑虚血、眼の線維症、特発性ポリープ状脈絡膜血管症（ＩＰＣ）；糖尿病性黄斑症、糖尿病性網膜症；高血圧性網膜症、炎症性ＣＮＶ；中心性漿液性網膜脈絡膜症（ＣＳＲ）；黄斑部毛細血管拡張症；パターンジストロフィ；網膜下／サブＰＲＤ（ｓｕｂＰＲＤ）血管新生；網膜神経感覚上皮の漿液性剥離；ＲＰＥ剥離；（硝子体への破綻出血を含む、網膜下色素上皮、網膜下、網膜内、もしくは網膜前）出血；網膜上、網膜内、網膜下、もしくは色素上皮下の瘢痕／グリア組織または線維素様の沈着；網膜線維症、網膜血管腫増殖及び網膜脈絡膜吻合；脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）；嚢胞性黄斑障害；網膜肥厚；非滲出型ＡＭＤ；、及び網膜瘢痕化、後部ぶどう膜炎を含むぶどう膜炎、強膜炎、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）網膜炎を含む上強膜炎ウイルス性網膜炎、未熟児の網膜症、網膜低酸素症、びまん性脈絡膜硬化症、脈絡毛細管板の硬化症、ドライアイ、眼及び角膜の持続性上皮欠損、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、神経障害性の眼の障害、外傷によって誘発された眼圧の低下、上皮基底膜ジストロフィ、ならびに／または、本明細書の他所で述べられるものを含む他の眼の障害が含まれるか、または含まれない。
本明細書において使用する場合、「眼神経障害」または「神経障害性の眼の障害」は、ＲＧＣの喪失、または他の眼のニューロンもしくは構造体の損傷もしくは喪失の停止もしくは低減、あるいは失われたＲＧＣまたは他の眼の構造体またはニューロンの修復等の、眼
のニューロン脱落を治療する作用剤から恩恵を受けるあらゆる眼の障害、疾患、または病態である。脈絡膜または網膜潅流障害、高眼圧症、脈絡膜もしくは内網膜または眼の他の内部組織の炎症、あるいは網膜静脈または動脈閉塞に起因し得る、眼の神経障害性、虚血性潅流障害、炎症性または微小血管性病変に関連する傷害も含まれる。いくつかの実施形態において、脈絡膜または網膜潅流障害は、眼低酸素症を引き起こし得る。眼の血管またはニューロン内に存在するコネキシンの発現高進を特徴とする、あらゆる眼疾患、障害、及び病態も含まれる。望ましくないパネキシン
活性を特徴とする眼疾患、障害、及び病態も含まれる。望ましくないＺＯ－１タンパク質もしくはＺＯ－１タンパク質活性を特徴とするか、またはＺＯ－１タンパク質もしくはＺＯ－１タンパク質活性の減少から恩恵を受ける疾患、障害、及び病態も含まれる。望ましくないより低いＲａｃ１もしくはＲａｃ１活性を特徴とするか、またはＲａｃ１もしくはＲａｃ１活性の増加から恩恵を受ける疾患、障害、及び病態も含まれるＲｈｏＡ ＧＴＰａｓｅもしくはＲｈｏＡ ＧＴＰａｓｅ活性の望ましくない減少を特徴とするか、またはＲｈｏＡ ＧＴＰａｓｅもしくはＲｈｏＡ ＧＴＰａｓｅ活性の減少から恩恵を受ける疾患、障害、及び病態も含まれる。
「緑内障性眼神経障害」は、緑内障と関連したあらゆる「眼神経障害」、例えば、緑内障と関連した網膜神経節細胞（ＲＰＧ）への神経障害性損傷及び緑内障性視神経障害を指す。いくつかの実施形態において、緑内障性視神経障害は、眼圧の上昇または脈絡膜もしくは網膜潅流障害と関連している場合があるか、または関連していない場合がある。いくつかの実施形態において、血管新生緑内障を治療する方法は、ギャップ結合調節剤、パネキシン調節剤、パネキシンチャネル調節剤、及び／またはコネキシン調節剤を含む調節剤を投与することによる治療を含む。
用語「眼圧関連神経障害」は、高眼圧、すなわち、眼圧の上昇と関連した緑内障の視神経障害を指す。
用語「眼低酸素症」は、例えば、眼内の虚血、ならびに／または血管漏出及び／もしくは血管破綻を含む、脈絡膜または網膜潅流障害、高血圧症、または眼への血流及び／もしくは酸素流の断絶を含む低酸素症に起因する、あらゆる眼の病態または障害を指す。眼低酸素症に起因する病態には、例えば、緑内障、緑内障性眼神経障害、眼圧関連神経障害、眼神経障害、臨床的地図状萎縮、ＤＭＥ、脈絡毛細管板脱落、及び／もしくは脈絡膜における毛細血管の破綻、または本明細書及び以下に記載される他の病態が含まれる。
臨床的地図状萎縮（ＧＡ）
ＧＡの症状は、通常潜行性であり、多くの場合、定期眼底検査の間に発見される。ＧＡが両側性であり、両方の眼の中心窩に関与するとき、患者は、中心視覚の低下を訴え得る。症状の一般的な状態は、初めは、最小サイズの印刷物、次いで、後に、より大きい印刷物及び／または字を読むのが困難になることである。ＧＡの診断の確認は、ステレオ生体顕微鏡検査の高解像度眼底レンズを使用した臨床検査によってである。これは、または明瞭かつホタテガイの縁のように波を打った縁を有する退色の特性領域（単数または複数）を見せる。ＧＡの領域が５００マイクロメートルよりも大きいとき、大きい脈絡膜血管が退色の領域内にはっきりと見える。
通常、ドルーゼン及び限局性色素沈着過度の領域は、ＧＡの斑に隣接した網膜内に見える。いくつかの撮像モダリティ、具体的には、眼底自発蛍光が、ＧＡの評価において有用であり得る。スペクトルドメインＯＣＴと併せた眼底自発蛍光は、これらの撮像モダリティが生体顕微鏡検査では臨床的に見えない場合があるＧＡの領域を見せることができるため、ＧＡの診断をより簡単にした。
地図状萎縮は、乾燥型ＡＭＤの進行した（後期の）形態である。これより、萎縮は、網膜の最深細胞の変性を指す。通常、色素沈着減少のあらゆるはっきりとした輪郭をした円形もしくは楕円形の領域、または脈絡膜血管が周囲の領域内よりも見える網膜色素上皮（ＲＰＥ）の明らかな不存在と定義される。ＧＡにつながる事象の最も一般的な連鎖は、時折、屈折性沈着物の出現より始まる、網膜及び下部の脈絡毛細管板の萎縮領域の発生を伴う、大きなドルーゼンの色素沈着過度への進行、続いて、ドルーゼンの退縮、色素沈着減少、及び最終的にはＲＰＥ細胞死である。
いくつかの実施形態において、調節剤、例えば、ギャップ結合調節剤及び／またはコネキシン調節剤、またはパネキシン調節剤またはパネキシンチャネル調節剤は、脈絡膜血管の炎症を防ぎ、網膜色素上皮細胞層を維持し、ならびに／または網膜及び下部の脈絡毛細管板の領域内の萎縮を防ぐ。
滲出型老人性黄斑変性（ＡＭＤ）
滲出型ＡＭＤの発病に典型的な最大の症状は、中心視覚のぼやけ及び歪みである。大部分の患者は、直線が湾曲または波状に見えると訴えるようになる。患者は、第１の眼が影響を受けるときには視覚症状に気づかない場合がある。滲出型ＡＭＤが第２の眼で生じると、患者は、読んだり、運転したり、また顔の表情や特徴などの細部を見たりすることが突然できなくなる。夜間に気づくが患者らが慣れるにつれて数分以内に解消される視野における中心の暗い斑のＡＭＤを患う多数の患者によって説明されるこの症状。この症状は、必ずしも滲出型ＡＭＤを発症するとは限らないＡＭＤを患う患者においても存在し得る。
黄斑の検査は、通常、ドルーゼン及び色素異常等の初期ＡＭＤの他の特徴と併せた滲出型黄斑病変を明らかにする。これらの後者の特徴は、滲出型ＡＭＤが併発した後は目に見えない場合がある。しかしながら、他眼は、進行した疾患がない場合に、これらの早期の臨床兆候の一部またはすべてを呈することになる場合が多く、これらの存在は、新生血管病変がＡＭＤに起因するという診断の裏付けに有用である。細隙灯生体顕微鏡検査の後、次の兆候の存否に留意するべきである：（１）灰緑色の病変として目に見える場合がある網膜下またはＲＰＥ下の血管新生（ときに、この病変は、膜の縁におけるＲＰＥの増殖に起因すると考えられる色素の濃い縁を有することになる）、網膜神経感覚上皮の漿液性剥離、（３）ＲＰＥ剥離、（４）出血－網膜色素上皮下、網膜下、網膜内、または網膜前（硝子体への破綻出血も生じ得る）、（５）上記のうちのいずれかに関し、他の網膜血管疾患に関しない、黄斑性領域内の硬性白斑（脂質）、（６）網膜上、網膜内、網膜下、若しくは色素上皮下の瘢痕／グリア組織または線維素様の沈着、（７）網膜血管腫増殖及び網膜脈絡膜吻合。この障害は、本明細書に記載されるように、調節剤、例えば、ギャップ結合調節剤及び／若しくはコネキシン調節剤、またはパネキシン調節剤若しくはパネキシンチャネル調節剤で治療され得る。
特発性ポリープ状脈絡膜血管症（ＩＰＣ）
これは、新生血管ＡＭＤの典型的な形態であり、これにおいては、急な壁に囲まれた（ｓｔｅｅｐ ｗａｌｌｅｄ）出血性色素上皮剥離を伴う高度に滲出型の病変が、最も典型的には視神経乳頭に隣接して見られるが、黄斑内及びさらには黄斑外のいずれの場所でも生じ得る。高速フルオレセインまたはインドシアニングリーン血管造影により、典型的には、血管造影の後期に漏出する脈絡膜血管の過蛍光性拡張複合体（分岐している血管網）が明らかとなる。これらの拡張複合体は、ポリープまたはブドウのように見え、これが名前の由来である。これは、元々は中年黒人集団において説明され、女性においてより一般的に見られた。ＩＰＣは、ＡＭＤのスペクトルの一部と見なされ、高血圧及び虚血性心疾患との強い関連性が説明されている。共焦点高速撮像デバイスを使用することで、ＩＰＣをより頻繁に診断することが可能となり、ＩＰＣは、アジア系集団の高齢者における漿液
血液黄斑症の３分の１超、及び白色人種で見られるものの８～１３％を占める。この障害も、本明細書に記載されるように、調節剤、例えば、ギャップ結合調節剤及び／若しくはコネキシン調節剤、またはパネキシン調節剤若しくはパネキシンチャネル調節剤で治療され得る。
眼線維症
血管漏出、出血、及び併発線維症によって起きる眼中の高秩序組織構造の分断は、視軸の機械的分断及び／または生物学的機能不全につながり得る。眼線維症はまた、例えば、水晶体、黄斑、または網膜の線維症を含み得、かつ例えば、進行性網膜下線維症及び黄斑前線維症（ＰＭＦ）を含んでもよい。黄斑線維症は、損傷または傷害に応答して、線維性瘢痕組織の薄板が黄斑の上部に形成するときに発生する。黄斑への損傷は、眼外傷、網膜裂孔若しくは剥離、硝子体の収縮、または糖尿病若しくは高血圧等の全身性疾患に起因して生じ得る。黄斑線維症は、黄斑ひだ形成症、網膜上膜、またはセロファン黄斑症とも称され得る。網膜下線維症は、次第に拡大及び癒着する線維性網膜下病変をもたらす慢性硝子体炎症と関連し得、嚢胞様黄斑浮腫と関連し得る。網膜の前側で黄斑に影響するＰＭＦ、一方で黄斑変性は網膜の下側に影響する。ＰＭＦの一次症状は、発症に数週間から数カ月かかり得る、片眼における視覚の歪みの段階的な発症である。この障害は、調節剤、例えば、本明細書に記載されるギャップ結合調節剤及び／若しくはコネキシン調節剤、またはパネキシン調節剤若しくはパネキシンチャネル調節剤で治療することができる。
ぶどう膜炎
ぶどう膜炎は、眼の中間層であるブドウ膜の炎症である。ブドウ膜は、眼の中間の色素性血管構造からなり、虹彩、脈絡膜、及び毛様体を含む。脈絡膜は、網膜と白眼（強膜）との間に挟まれ、網膜の深層に血流を提供する。ぶどう膜炎は、虹彩炎（前部ぶどう膜炎）と呼ばれる虹彩の炎症を含み得る。この障害も、本明細書に記載されるように、調節剤、例えば、ギャップ結合調節剤及び／若しくはコネキシン調節剤、またはパネキシン調節剤若しくはパネキシンチャネル調節剤で治療されてもよい。
糖尿病性黄斑症
これは、高齢者における最も一般的な滲出型中心黄斑障害である。糖尿病を患う患者は、多くの場合に黄斑浮腫の背景において、網膜毛細血管瘤、出血、及び滲出液を呈する頻度が高い。静脈充血またはビーズ形成と併せた黄斑アーケードの外でのより甚大な血管所見の存在は、臨床医に糖尿病性黄斑症の診断を警告するだろう。視覚機能の低減は、中心窩が関与するＣＮＶを患う眼と比較して、糖尿病性黄斑症を患う眼においてより明らかではない。黄斑付近の血管は、流体またはタンパク質を黄斑へと漏出させる。フルオレセイン血管造影が、脈絡膜血管新生及びＲＰＥ下の病的状態がないことを確認するために必要とされる。滲出型ＡＭＤ及び糖尿病性黄斑症は、これらの両方が共通の状態であるため、共存し得る。この障害は、脈絡膜血管新生と関連した強度近視のように、本明細書に記載されるように、調節剤、例えば、ギャップ結合調節剤及び／若しくはコネキシン調節剤、またはパネキシン調節剤若しくはパネキシンチャネル調節剤で治療することができる。
強度近視は、脈絡膜血管新生と関連し得る。これらの新生血管複合体は、脈絡膜血管の網膜下空間へのアクセスを許す薄化したブルッフ膜における微小亀裂の発現の結果として生じると考えられる。
糖尿病性黄斑浮腫
糖尿病性黄斑浮腫は、黄斑内における血管からの流体の漏出に起因する、糖尿病を患う対象における網膜の腫脹である。黄斑は、網膜の中心部分であり、これは、色を検知し昼間視力が依存する分化した神経終末である錐体視細胞が豊富な小さい領域である。黄斑浮腫が発症するにつれ、中心視野の真ん中において、またはちょうどその側部にぼやけが生
じる。糖尿病性黄斑浮腫に由来する視力喪失は、数カ月間にわたって進行し、焦点をはっきりと合わせることを不可能にし得る。糖尿病において共通の黄斑浮腫。糖尿病患者が黄斑浮腫を発現する生涯リスクは約１０％である。この状態は、糖尿病性網膜症（網膜疾患）の程度と密接に関連している。高血圧（血圧が高いこと）及び体液鬱滞も、流体を血管内から網膜中に至らせる毛細血管内の静水圧を増加させる。糖尿病患者における体液鬱滞の一般的な原因は、尿中のタンパク質の喪失（タンパク尿）を伴う腎臓疾患である。糖尿病性黄斑浮腫は、限局型及びびまん型に分類される。これは、この２つの型の治療法が異なるため、重要な差異である。限局性黄斑浮腫は、流体を漏出させる傾向にある血管異常の病巣、主に網膜毛細血管瘤によって引き起こされ、一方でびまん性黄斑浮腫は、網膜における拡張した網膜毛細血管によって引き起こされる。この障害も、本明細書に記載されるように、調節剤、例えば、ギャップ結合調節剤及び／若しくはコネキシン調節剤、またはパネキシン調節剤若しくはパネキシンチャネル調節剤で治療されてもよい。
糖尿病性網膜症
糖尿病性網膜症は、最終的に失明につながり得る。これは、全身性疾患の眼症状発現であり、少なくとも１０年間糖尿病を患っている全患者の最大８０％を苦しめている。糖尿病性網膜症性高血糖は、血管壁の障害につながる周皮細胞死滅及び基底膜肥厚を誘導する。この損傷は、血液網膜関門を改変して、網膜血管を透過性にする。眼中のもの等の微小血管は、不良な血糖制御に特に弱い。糖尿病における異常なコネキシン発現は、皮膚、腎臓、膀胱、神経周膜、水晶体、及び心臓７６を含むいくつかの組織における合併症と関連する。網膜において、高血糖は、背景にある糖尿病性網膜症の特質である血管ドロップアウト及び周皮細胞喪につながるアポトーシスを誘導することが知られている。最近の知見は、Ｃｘｎ４３発現の減少がアポトーシス及び血管恒常性の崩壊を始動することを示す（Ｂｏｂｂｉｅ ＭＷ，Ｒｏｙ Ｓ，Ｔｒｕｄｅａｕ Ｋ，Ｍｕｎｇｅｒ ＳＪ，Ｓｉｍｏｎ ＡＭ，Ｒｏｙ Ｓ，Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ．；５１（７）：３７５８－６３，２０１０）。しかしながら、上の記述は、大部分は非増殖性糖尿病性網膜症の初期段階における疾患の根底にある背景を指し、一部の患者は損傷した血管が流体及び脂質を黄斑へと漏出させるときに黄斑性浮腫を発症することになるが、ほとんどの患者はその視覚のいずれの変化にも気づかない。疾患が進行するにつれて、糖尿病性網膜症は、血管増殖段階に入る。網膜中の低い酸素レベルのせいで、新たな血管は、脆弱であり、網膜に沿って硝子体液中へと成長する。これらの血管は、出血し、視覚を曇らせ、網膜を破壊し得る。線維血管増殖は、網膜剥離を引き起こし得、血管は、眼の前眼房の隅角の中へも成長して、血管新生緑内障を引き起こし得る。糖尿病性網膜症は、慢性かつ無症候性の炎症の際立った特徴を有する（Ｚｈａｎｇ Ｗ，Ｌｉｕ Ｈ，Ｒｏｊａｓ
Ｍ，Ｃａｌｄｗｅｌｌ ＲＷ，Ｃａｌｄｗｅｌｌ ＲＢ，Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，３（５）：６０９－２８，２０１１）。この障害は、調節剤、例えば、本明細書に記載されるギャップ結合調節剤及び／若しくはコネキシン調節剤、またはパネキシン調節剤若しくはパネキシンチャネル調節剤で治療することができる。いくつかの実施形態において、本調節剤は、この糖尿病性網膜症の炎症期を治療することもできる。
炎症性ＣＮＶ
いくつかの脈絡膜炎症性白点症候群（例えば、推定眼ヒストプラスマ症、点状脈絡膜内層症、多病巣性脈絡膜内層症）は、炎症性脈絡膜血管新生と関連し得る。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される調節剤は、脈絡膜の炎症を防ぎ、それにより炎症性ＣＮＶを防ぐ。
中心性漿液性網膜脈絡膜症（ＣＳＲ）
中心性漿液性網膜脈絡膜症は、血管新生のあらゆる痕跡のない網膜神経感覚上皮下内の漿液の集積を特徴とする。慢性ＣＳＲは、時折、ＡＭＤと混同され、重ねて病歴、症状、及び網膜撮像の組み合わせが、通常これら２つを区別するのに役立つ。ＣＮＶ及びＩＰＣ
Ｖは、慢性ＣＳＲの合併症として起こり得る。慢性ＣＳＲは、中央黄斑の下に蓄積する傾向がある網膜下の流体の漏出を特徴とする。これは、脈絡膜液が網膜下腔内へと漏出することを許容する。流出の蓄積は、網膜色素上皮内の小さい裂のために起こる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される調節剤は、脈絡膜の炎症を防ぐか、もしくはさもなければ改善し、かつ／または脈絡膜毛細血管脱落を防ぐか、もしくは改善する。脈絡膜の維持は、網膜下腔内への脈絡膜液の漏出を防ぎ得る。
黄斑部毛細血管拡張症
時折、周中心窩末梢血管拡張または傍中心窩末梢血管拡張とも称される特発性黄斑部毛細血管拡張症（ＭＡＣＴＥＬ）は、特にｎ ＡＭＤのＲＡＰ形態を有するｎＡＭＤと区別することが困難であり得る。２つの種類の毛細血管拡張症が説明されており、１型ＭＡＣＴＥＬは、中年の人々において起こり、病態は、通常片眼性であり、血管が漏出性、かつ網膜内液の蓄積が嚢胞性黄斑障害及び周囲の滲出とともに起こる滲出性特徴を呈する。２型ＭＡＣＴＥＬは、より高齢の人々において起こり、中心窩への明らかな経時的、かつ周中心窩領域全体に広がる クリスタリン沈着、色素変化、及びの直角の細静脈の痕跡を伴う、通常両側性である 。漏出がフルオレセイン血管造影で検出可能な一方、網膜肥厚の上昇の痕跡は存在しない。嚢胞性腔は、ＯＣＴを使用した網膜内の痕跡であり、これらの腔は、網膜組織の喪失を反映すると考えられている。時折、網膜下血管新生は、網膜循環から発症し、生じる。黄斑部毛細血管拡張症は、黄斑の中心である中心窩の周囲の小さい血管に問題があるとき、発症する。２つの種類の黄斑部毛細血管拡張症が存在し、各々が別に発症する。２型黄斑部毛細血管拡張症：黄斑部毛細血管拡張症の最も一般的な形態は、中心窩周囲の小さい血管が漏出し、拡張する（広がる）か、またはこれらの両方である、２型黄斑部毛細血管拡張症である。いくつかの事例では、新しい血管が網膜下に形成し、これらは、破れるかまたは漏出し得る。漏出血管からの流体は、中心視覚に影響を与える黄斑浮腫と呼ばれる病態である、黄斑の腫れまたは肥厚を引き起こす。また、瘢痕組織は、時折黄斑及び中心窩上に形成し得、細部の視覚の喪失を引き起こす。２方は、両方の眼に発症するが、必ずしも同じ重症度ではない。１型黄斑部毛細血管拡張症：１型黄斑部毛細血管拡張症において、血管が拡張して小さい動脈瘤を形成し、腫れ及び黄斑細胞の損傷を引き起こす。この疾患は、ほぼ常に１つの眼に起こり、これが２型との違いをつける。これらの障害も、調節剤、例えば、本明細書に記載されるギャップ結合調節剤及び／もしくはコネキシン調節剤、またはパネキシン調節剤もしくはパネキシンチャネル調節剤で治療され得る。
パターンジストロフィ（ＰＤ）
ＰＤは、黄斑を冒し、非滲出型ＡＭＤと間違われ得る。見られるＰＤの最も一般的な種類は、成人卵黄状黄斑ジストロフィ（ＡＶＭＤ）であり、より一般的でないのは、蝶型パターンジストロフィである。ＰＤは、遺伝的基盤を有する病態であるが、家族歴は多くの場合存在しない。ＰＤは通常、脈絡膜血管新生または萎縮性変化によって合併しない限り、ＡＭＤよりも良好な視覚の結果と関連する。ＡＶＭＤを、特にＡＭＤと区別することは、困難であり得る。症状は、 特に、ＣＮＶまたは萎縮がＰＤを合併した場合、類似し得るが、多くの場合、ＡＶＭＤは、定期的な眼底検査で無症状の個人において識別される。眼底自家蛍光画像が、特に光干渉断層撮影と組み合わせたとき、ＰＤをＡＭＤと区別するのに役立つ。フルオレセイン血管造影は、ＡＶＭＤにおける典型的な「冠状徴候（ｃｏｒｏｎａ ｓｉｇｎ）」を示すことができ、蝶型ＰＤに見られる分岐線は、血管造影の段階を通して漏出を示さない、沈着の面積に分散した過蛍光と関連付けられる。時折、卵黄状病変の蛍光眼底造影染色は、ＣＮＶからの活発な漏出と間違えられ得る。この障害は、調節剤、例えば、本明細書に記載されるギャップ結合調節剤及び／若しくはコネキシン調節剤、またはパネキシン調節剤若しくはパネキシンチャネル調節剤で治療することができる。
網膜下／サブＰＲＤ（ｓｕｂＰＲＤ）血管新生
網膜下血管新生は、脈絡膜内における新しい血管の形成からなる病理学的プロセスである。ＡＭＤの湿潤型において、異常な血管が、黄斑下に成長し、流体及び血液を漏出させる。網膜下血管新生と呼ばれるこの異常な血管も、網膜を持ち上げ得る。この障害は、調節剤、例えば、本明細書に記載されるギャップ結合調節剤及び／若しくはコネキシン調節剤、またはパネキシン調節剤若しくはパネキシンチャネル調節剤で治療することができる。
網膜神経感覚上皮の漿液性剥離
網膜剥離は、網膜下液が網膜神経感覚上皮と網膜色素上皮との間に蓄積したときに起こる。このプロセスは、３つの手段で起こり得る。１つの機構は、硝子体が網膜下腔に直接入ることを許容する網膜内の裂を伴う。これは、裂孔原性網膜剥離として知られている。第２の機構は、網膜または硝子体の表面上の増殖性膜を伴う。これらの膜は、網膜神経感覚上皮上で牽引し、網膜神経感覚上皮と網膜色素上皮との間の物理的分離を引き起こす。これは、牽引性網膜剥離と呼ばれる。網膜剥離の第３の機構は、炎症性介在物質または腫瘤病変からの流体の滲出に起因する網膜下液の蓄積に起因する。この機構は、漿液性網膜剥離または滲出性網膜剥離として知られる。漿液性剥離は、サルコイドーシスまたは脈絡膜新生物等のいくつかの炎症性、または滲出性網膜疾患プロセスによって引き起こされる。いくつかの態様において、本明細書に記載される調節剤は、下部の脈絡毛細管板における炎症を制御するために使用され、網膜下液の蓄積を制御し、かつ／または例えば、網膜神経感覚上皮の漿液性剥離につながり得る網膜下液の蓄積を防ぐ。
ＲＰＥ剥離
ＲＰＥ剥離は、ＲＰＥの基底膜とブルッフ膜の内部コラーゲン層との間の正常な結合を妨害する、任意の数の脈絡膜障害に起因し得る非特異的解剖学的変化である。この妨害は、下部の脈絡毛細管板からの漿液が網膜下色素上皮腔内へのアクセスを得ることを許容する。老人性黄斑変性、脈絡膜新生血管膜、強度近視、色素線条、遺伝性脈絡膜変性、ＰＯＨＳ、及び脈絡膜の腫瘍がすべて、ＲＰＥ剥離の発症における誘発病態として確認されている。この障害は、調節剤、例えば、本明細書に記載されるギャップ結合調節剤及び／若しくはコネキシン調節剤、またはパネキシン調節剤若しくはパネキシンチャネル調節剤で治療することができる。
出血－硝子体への破綻出血を含む、網膜下色素上皮、網膜下、網膜内、または網膜前出血
網膜出血は、出血が眼の後壁上のリテンシティブ組織（ｒｅｔｅｎｓｉｔｉｖｅ ｔｉｓｓｕｅ）内へ起こる眼の傷害である。網膜出血は、高血圧、網膜静脈閉塞（網膜静脈の閉塞）、または（容易に損傷を受ける小さい脆弱な血管の形成を引き起こす）真性糖尿病によって引き起こされ得る。網膜出血、特に慢性疾患と関連しない軽度のものは、通常治療しなくても再吸収する。レーザ手術は、治療オプションであり、これは、レーザ光線を使用して、網膜内の損傷を受けた血管を封鎖する。この障害は、調節剤、例えば、本明細書に記載されるギャップ結合調節剤及び／若しくはコネキシン調節剤、またはパネキシン調節剤若しくはパネキシンチャネル調節剤で治療することができる。
網膜上、網膜内、網膜下、もしくは色素上皮下の瘢痕／グリア組織または線維素様の沈着
いくつかの態様において、コネキシン調節剤は、瘢痕化、炎症、及び線維素形成の生成を防ぐことができる。したがって、コネキシン調節剤は、網膜上、網膜内、網膜下、もしくは色素上皮下の瘢痕／グリア組織、または線維素様の沈着を防ぐことができる。この障害は、調節剤、例えば、本明細書に記載されるギャップ結合調節剤及び／若しくはコネキシン調節剤、またはパネキシン調節剤若しくはパネキシンチャネル調節剤で治療することができる。
網膜血管腫増殖及び網膜脈絡膜吻合
網膜脈絡膜吻合は、網膜と脈絡膜循環との間の通信を表し、新生血管老人性黄斑変性（ＡＭＤ）を有する患者のサブセットで記載される。網膜血管腫増殖は、円盤状の瘢痕を有する眼における網膜循環と脈絡膜循環との間の吻合の存在によって証明される。この障害は、調節剤、例えば、本明細書に記載されるギャップ結合調節剤及び／若しくはコネキシン調節剤、またはパネキシン調節剤若しくはパネキシンチャネル調節剤で治療することができる。
脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）
脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）は、眼の脈絡膜層における新しい血管の生成である。これは、変性黄斑症湿潤型ＡＭＤ（老人性黄斑変性）の一般的な徴候である。ＣＮＶは、脈絡膜の最内層であるブルッフ膜に欠損がある個人において急速に起こり得る。ＣＮＶは、過剰な量の血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）とも関連付けられている。湿潤型ＡＭＤと同様に、ＣＮＶは、しばしばまれな遺伝性疾患である弾力線維性仮性黄色腫と共に、及びまれにより一般的な視神経乳頭ドルーゼンと共にも起こり得る。ＣＮＶは、極度近視または悪性近視変性とも関連付けられており、脈絡膜血管新生においてラッカークラックとして知られる、網膜（特異的）黄斑組織内のクラックの存在下で主に起こる。この障害は、調節剤、例えば、本明細書に記載されるギャップ結合調節剤及び／若しくはコネキシン調節剤、またはパネキシン調節剤若しくはパネキシンチャネル調節剤で治療することができる。
嚢胞性黄斑障害
嚢胞性黄斑障害は、黄斑内または黄斑周囲の嚢胞であり、調節剤、例えば、本明細書に記載されるギャップ結合調節剤及び／もしくはコネキシン調節剤、またはパネキシン調節剤もしくはパネキシンチャネル調節剤で治療することができる。
網膜肥厚
黄斑肥厚（浮腫）は、中心視覚に関与している網膜の一部の腫れまたは肥厚である。いくつかの態様において、本明細書に記載される調節剤は、脈絡毛細管板破綻を制御することができ、これにより、網膜の肥厚を防ぐ。このように、調節剤は、網膜肥厚を治療することができる。網膜肥厚は、調節剤、例えば、本明細書に記載されるギャップ結合調節剤及び／もしくはコネキシン調節剤、またはパネキシン調節剤もしくはパネキシンチャネル調節剤で治療することができる。
非滲出型ＡＭＤ
非滲出型ＡＭＤ（「乾燥型ＡＭＤ」）は、網膜色素上皮（ＲＰＥ）の徐々の破綻、ドルーゼン沈着物の蓄積、及び覆っている光受容体の機能の喪失に起因する。いくつかの態様において、上述のように、調節剤、例えば、ギャップ結合またはコネキシン調節剤は、単独で、または本明細書に記載されるパネキシン調節剤またはパネキシンチャネル調節剤と一緒に、非滲出型ＡＭＤを治療することができる。
網膜瘢痕化
網膜瘢痕化は、眼の後部の重要な構造体である網膜上、網膜内、または網膜下の瘢痕組織の進行である。軽度の瘢痕化は、重大な医学的問題ではない場合があるが、大きい瘢痕は、視覚の歪み及び最終的な視覚喪失を引き起こし得る。介添人が、程度を判定し、治療オプションに関するアドバイスを提供するために、網膜瘢痕化を有する患者を評価してもよい。この病態の治療は、侵襲的であり得、医師は、利益以上に害に利益をもたらし得る処置を提案することを望まない。患者は、極めて重度の近視、眼ヒストプラズマ症症候群、及び湿潤型老人性黄斑変性を含むいくつかの理由のために、網膜瘢痕化を発症し得る。網膜瘢痕化は、炎症を引き起こす網膜への刺激から始まり、組織における変化をもたらす。これが反復的に起こる場合、これは、患者にとって重大な問題を引き起こし始め得る。
これは、網膜の表面にしわを作り得るか、または網膜の腫れを引き起こし得る。時折、網膜瘢痕化は、網膜剥離を引き起こす。いくつかの態様において、調節剤、例えば、ギャップ結合調節剤及び／もしくはコネキシン調節剤、ならびに／またはパネキシン調節剤もしくはパネキシンチャネル調節剤は、網膜瘢痕化及び網膜炎症を制御または抑制することができ、これが組織変化を制御し、それにより網膜瘢痕化を予防または改善する。
眼低酸素症
網膜低酸素症を含む眼低酸素症は、いくつかの種類の緑内障、網膜中心動脈閉塞、虚血性網膜中心静脈血栓症、糖尿病性眼疾患の合併症（例えば、ＤＭＥ）、ＡＭＤ、及び眼の線維症を含むいくつかの視覚を脅かす障害が内在する、潜在的に失明させる機構である。低酸素症は、そのような病態で起こる網膜神経節細胞（ＲＧＣ）の喪失に関連付けられている。ＲＧＣの死は、アポトーシスまたはネクローシスによって起こる。低酸素症虚血は、低酸素誘導因子－１α、ならびに血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）及び一酸化窒素合成酵素（ＮＯＳ）等のその標的遺伝子の発現を誘発する。ＶＥＧＦの産生の増加は、網膜浮腫につながる血液網膜関門の妨害を引き起こす。ＮＯＳの発現増強は、細胞にとって有毒であり得、細胞の死を引き起こす一酸化窒素の産生の増加を引き起こす。低酸素虚血状態における過剰なグルタミン酸放出は、イオンチャネル型グルタミン酸受容体及び代謝型グルタミン酸受容体活性化によって、ＲＧＣへの興奮毒性損傷を引き起こす。グルタミン酸受容体の活性化は、ニューロンＮＯＳ活性化等の生化学的影響のカスケードによって網膜における損傷を開始すると考えられており、細胞内Ｃａ２＋の上昇は、ＲＧＣ喪失への主な要因である。眼の後眼部において、糖尿病関連網膜低酸素症は、進行した糖尿病性網膜症（ＤＲ）の合併症である線維症及び牽引性網膜剥離につながり得る。網膜下で、類似した線維症が、新生血管老人性黄斑変性（ＡＭＤ）と関連した網膜下出血の後に起こり得る。治療的に有効な量の調節剤、例えば、コネキシン４３調節剤等のコネキシン調節剤は、眼神経障害を減速、停止、もしくは逆戻りさせるか、または本明細書に記載される眼の障害のうちのいずれかを治療するのに有効な任意の量である。
ギャップ結合及び／またはコネキシンポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドは、例えば、修飾または未修飾コネキシン４３アンチセンスポリヌクレオチドもしくはオリゴヌクレオチド等の、修飾または未修飾コネキシンポリヌクレオチドもしくはオリゴヌクレオチドから選択されてもよい。いくつかの実施形態において、修飾コネキシンアンチセンスポリヌクレオチド、またはオリゴヌクレオチド、またはポリヌクレオチドは、修飾及び未修飾ヌクレオチドの混合物を含む。いくつかの態様において、本明細書の方法で使用されるコネキシン４３アンチセンス化合物は、天然型核酸塩基及び未修飾ヌクレオシド間結合を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドでる。
いくつかの態様において、ギャップ結合、コネキシン、及び／またはパネキシン調節剤は、ギャップ結合、コネキシン、及び／もしくはパネキシンを抑制及び／もしくは遮断するか、またはギャップ結合、コネキシン、及び／もしくはパネキシンの上流作用薬を抑制及び／もしくは遮断する拮抗薬である。いくつかの態様において、ギャップ結合、コネキシン、及び／またはパネキシン拮抗薬には、例えば、ギャップ結合、コネキシン、及び／もしくはパネキシンに結合し、抑制する拮抗薬、ギャップ結合、コネキシン、及び／もしくはパネキシンの発現を抑制する化合物、ならびに／あるいはギャップ結合、コネキシン及び／もしくはパネキシン阻害剤を含むか、またはギャップ結合、コネキシン、及び／もしくはパネキシンを遮断もしくは抑制するタンパク質もしくはアンチセンスポリヌクレオチドをコードするウイルスベクターが含まれる。いくつかの態様において、ギャップ結合、コネキシン、及び／もしくはパネキシン、ならびに／またはギャップ結合、コネキシン、及び／もしくはパネキシンの上流作用薬を抑制する種は、抗体もしくは抗体断片、ナノボディ、ペプチドもしくはペプチド模倣薬、受容体断片、遺伝子組換え融合タンパク質、アプタマー、小分子、または一本鎖可変領域断片（ｓｃＦｖ）でもよい。
本明細書における方法は、眼圧を減少させるのに十分な量での、緑内障等の眼圧関連視神経障害の治療を提供する。いくつかの態様において、パネキシン調節剤及びコネキシン調節剤は、眼圧の上昇と関連した外傷の治療に有用である。いくつかの態様において、本発明の組成物、製造品、及び方法は、眼圧を正常レベル、例えば、２１ｍｍ Ｈｇ未満、例えば、２１、２０、または１９ｍｍ Ｈｇ未満に減少させるのに有用である。いくつかの態様において、例えば、本発明のコネキシン調節剤及びパネキシン調節剤ならびに方法は、眼圧を、例えば、約８～約２１ｍｍ Ｈｇに、約１０～約２２ｍｍ Ｈｇ、約１０～２１ｍｍ Ｈｇ、または約１２～約２１ｍｍ Ｈｇに減少させるのに有用である。いくつかの態様において、本発明の組成物及び方法はまた、高眼圧がない場合でさえ、緑内障性視神経障害を治療するのに有用である。いくつかの実施形態において、コネキシン調節剤は、例えば、コネキシン４３調節剤またはコネキシン４５調節剤、好ましくはコネキシン４３調節剤である。いくつかの態様において、コネキシン調節剤は、Ｃｘ２６、Ｃｘ３０、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ５０、Ｃｘ５７、または眼もしくは血管中の任意の他のコネキシンの調節剤である。いくつかの態様において、コネキシン調節剤は、前述のもののうちのいずれかを含んでもよいか、または含まなくてもよい。
少なくとも１個の未修飾ヌクレオチドを含むコネキシンまたはパネキシンアンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはポリヌクレオチドが本発明に取り上げられる。一態様において、コネキシンアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドは、少なくとも１個の修飾ヌクレオチドを含んでもよい、かつ／または少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間結合、及び／もしくは少なくとも１つの修飾糖部分を有してもよい。修飾ヌクレオシド間結合は、例えば、ホスホロチオエート結合でもよい。いくつかの態様において、例えば、コネキシン４３ポリヌクレオチドは、立体配座的に緊張させたヌクレオチド、例えば、ロックド核酸（ＬＮＡ）または架橋核酸（ＢＮＡ）を含む少なくとも１個のヌクレオチドを含んでもよい。ロックトヌクレオチドは、例えば、２′－Ｏ－ＣＨ２－４′（オキシ－ＬＮＡ）、２′－ＣＨ２－ＣＨ２－４′（メチレン－ＬＮＡ）、２′－ＮＨ－ＣＨ２－４′（アミノ－ＬＮＡ）、２′－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２－４′（メチルアミノ－ＬＮＡ）、２′－Ｓ－ＣＨ２－４′（チオ－ＬＮＡ）、及び２′－Ｓｅ－ＣＨ２－４′（セレノ－ＬＮＡ）の種類のうちの１つから選択されてもよい。いくつかの態様において、修飾ヌクレオチドは、ロックド核酸またはアンロックド核酸でもよい。いくつかの実施形態において、コネキシンアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドは、例えば、コネキシン４３アンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはポリヌクレオチド、またはコネキシン４５アンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはポリヌクレオチド、好ましくは、コネキシン４３アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、コネキシンアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドは、例えば、Ｃｘ２６、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ５０、Ｃｘ５７、または眼もしくは血管中の任意の他のコネキシンの調節剤である。
ヌクレオチド配列を含むか、もしくは配列番号１～１６から選択されるヌクレオチド配列から修飾され、かつ／または本開示の方法、組成物、キット、及び製造品から含められ得るか、もしくは除外され得る、例となる修飾または未修飾コネキシン４３アンチセンス化合物も、本明細書に取り上げられる。本発明のポリヌクレオチドは、８０ヌクレオチド長未満、例えば、１２～１８から約５０～８０ヌクレオチド長、好ましくは、約３０ヌクレオチド長以下、例えば、１２～約３０ヌクレオチド長、より好ましくは、約１５～約３０ヌクレオチド長を有する合成ポリヌクレオチドを含む。一例において、ポリヌクレオチドは、３０個のヌクレオチドを有する。いくつかの態様において、本発明の方法は、配列番号１～１７から選択されるヌクレオチド配列を含むか、または配列番号１７の約８～４０個のヌクレオチドを含む、最大４０ヌクレオチド長、例えば、１５～４０ヌクレオチド長のコネキシン４３アンチセンス化合物の使用を取り上げる。
Figure 2023022154000024
Figure 2023022154000025
表１は、例となるコネキシン４３ポリヌクレオチド調節剤のポリヌクレオチド配列を列挙する。配列番号１～１６等の配列が提供されるとき、これらは、修飾及び未修飾オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの両方を表す。いくつかの実施形態において、ヌクレオチド間の結合、及びヌクレオチドの糖部分の構造体は、修飾されていてもよい。いくつかの実施形態において、いずれかの２個のヌクレオチド間のヌクレオシド間結合は、標準ホスホジエステル結合でもよい。いくつかの実施形態において、いずれかの２個のヌクレオチド間のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合でもよい。例えば、配列番号１は、次の選択された構造：ＧｓＴｓＡｓＡｓＴＴＧＣＧＧＣＡＡＧＡＡＧＡＡＴＴＧＴＴＴＣｓＴｓＧｓＴｓＣのうちの１つでもよく、式中、「ｓ」は、２個のヌクレオチド間
のホスホロチオエート結合を示す。別の非限定的な例として、配列番号１は、（Ｇ）（Ｔ）（Ａ）（Ａ）ＴＴＧＣＧＧＣＡＡＧＡＡＧＡＡＴＴＧＴＴＴＣ（Ｔ）（Ｇ）（Ｔ）（Ｃ）でもよく、挿入ヌクレオチドは、以下に記載されるように、修飾糖類部分を有する。
例となる配列は、表２に示し、これらは、望ましくないＺＯ－１タンパク質もしくはＺＯ－１タンパク質活性を特徴とするか、またはＺＯ－１タンパク質もしくはＺＯ－１タンパク質活性の減少から恩恵を受ける眼疾患、障害、及び病態の治療において有用である。
Figure 2023022154000026
Figure 2023022154000027
表２は、ＺＯ－１ ＡＳ ＯＤＮ（アンチセンスオリゴデオキシリボヌクレオチド）、ｓｈＲＮＡ（小ヘアピンＲＮＡ分子）、及びｓｉＲＮＡ（小干渉ＲＮＡ分子）のポリヌクレオチド配列を列挙する。
ＺＯ－１は、当初は、細胞内のネットワークを形成する密着結合で確認された。この構造体は、細胞間接触帯の２つの細胞間の交差にのみ存在する。ＺＯ－１は、膜貫通タンパク質であるクローディン及びオクルディンと共存する２２０－ｋＤａ膜タンパク質である。後に、ＺＯ－１は、細胞を一緒に締め、それにより細胞及び組織極性を維持する接着結合に示され、確認された。これらの結合は、細胞骨格も固定し、形質膜の大きな複合体の形成を可能にする。
ＺＯ－１，５’－ＣＴＧＣＴＴＴＣＴＧＴＴＧＡＧＡＧＧＣＴ－３’（配列番号３２５）を標的とするアンチセンスポリヌクレオチドの合成のために選択される１つの配列は、ＭＵＳＺＯ１受入番号Ｄ１４３４０Ｉの塩基ペア３１５４～３１６９からのセグメントと一致する。
いくつかの態様において、コネキシン４３アンチセンス化合物は、配列番号１７から選択される核酸塩基配列を有するコネキシンをコードする核酸分子の少なくとも約８つの核酸塩基に向けられるポリヌクレオチド及びオリゴヌクレオチド、例えば、コネキシン４３ア
ンチセンス化合物は、配列番号１７、もしくはそれと相互補完的である配列の約８～約２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５５、６０、６５、７０、７５、または約８０個のヌクレオチドを有してもよく、及び／またはアンチセンスポリヌクレオチドもしくはオリゴヌクレオチドは、列挙される長さのうちの任意の２つの間の長さの任意の範囲を含んでもよい。本発明のポリヌクレオチドは、８０ヌクレオチド長未満、例えば、１２～１８から約５０～８０ヌクレオチド長、好ましくは、約３０ヌクレオチド長以下、例えば、１２～約３０ヌクレオチド長、より好ましくは、約１５～約３０ヌクレオチド長を有する合成ポリヌクレオチドを含む。一例において、ポリヌクレオチドは、３０個のヌクレオチドを有する。いくつかの態様において、あ本発明の方法は、配列番号１～１７から選択されるヌクレオチド配列を含む、最大４０ヌクレオチド長、例えば、１５～４０ヌクレオチド長のコネキシン４３アンチセンス化合物の使用を取り上げる。いくつかの態様において、本発明の方法は、配列番号４～１７から選択されるヌクレオチド配列を含む、最大４０ヌクレオチド長、例えば、１５～４０ヌクレオチド長のコネキシン４３アンチセンス化合物の使用を取り上げる。
ヒトＣｘ４３、α１（配列番号１７） 遺伝子座 ＮＭ＿０００１６５ ３０８８ｂ
ｐ ｍＲＮＡ直鎖ＰＲＩ ２６－ＯＣＴ－２００４
定義 ホモサピエンスギャップ結合タンパク質、アルファ１、４３ｋＤａ（コネキシン４３）
（ＧＪＡ１）、ｍＲＮＡ。
配列表９－１
Figure 2023022154000028
 配列表９－２
Figure 2023022154000029
いくつかの実施形態において、糖部分は、修飾糖部分でもよい。いくつかの実施形態において、修飾糖部分は、立体配座的に緊張させた糖類である糖部分でもよい。いくつかの実施形態において、立体配座的に緊張させた糖類は、ロックトヌクレオチド（ロックド核酸、またはＬＮＡ）でもよい。いくつかの実施形態において、ロックトヌクレオチドは、２′－Ｏ－ＣＨ２－４′（オキシ－ＬＮＡ）、２′－ＣＨ２－ＣＨ２－４′（メチレン－ＬＮＡ）、２′－ＮＨ－ＣＨ２－４′（アミノ－ＬＮＡ）、２′－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２－４′（メチルアミノ－ＬＮＡ）、２′－Ｓ－ＣＨ２－４′（チオ－ＬＮＡ）、及び２′－Ｓｅ－ＣＨ２－４′（セレノ－ＬＮＡ）のうちの１つから選択されてもよい。いくつかの実施形態において、立体配座的に緊張させた糖類は、架橋核酸でもよい。（ＢＮＡ）。
式ＩＩＩに示されるように、立体配座的に緊張させた糖類は、ロックド核酸でもよい。いくつかの態様において、ヌクレオシド化合物の糖部分は、リボフラノースでもよい。したがって、特に好適な置換基Ｘは、酸素である。しかしながら、他の様々な代替糖類部分もまた適切であり、概して、修飾糖類及び炭素環部分も本明細書の使用に好適であると見なされることを企図する。したがって、Ｘは、酸素以外の原子または基も含んでもよく特に企図される代替基Ｘとしては、糖類が硫黄糖であるＳ、糖類が炭素環化合物であるＣＨ２
、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝ＣＨ２、または共有結合、ならびに糖類がアミノ糖であるＮＲ（Ｒは水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、及びアシルからなる群から選択される）が挙げられる。基であるＹ及びＺもまた、変化し得る。いくつかの態様において、置換基Ｙ及びＺは、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２、ＮＲ、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝ＣＨ２、または共有結合からなる群から選択され得、式中Ｒは、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、及びアシルからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、Ｑは、なし、Ｏ、Ｓ、ＮＨＲ、またはＣＨ２から選択されてもよく、式中、Ｒは、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、及びアシルからなる群から選択される。
Figure 2023022154000030
いくつかの実施形態において、Ｂは、次の種類の塩基：置換及び非置換デアザプリン、アザプリン、デアザピリミジン、プリン、ピリミジン、及びアザピリミジンのうちの１つから選択される塩基でもよい。用語「置換された」は、本明細書において使用する場合、１つ以上の官能基の追加を指し、特に企図される官能基としては、求核基（例えば、－ＮＨ２、－ＯＨ、－ＳＨ、及び－ＮＣ）ならびにび求電子基（例えば、Ｃ（Ｏ）ＯＲ、及びＣ（Ｘ）ＯＨ）、極性基、非極性基（例えば、アリール、アルキル、アルケニル、またはアルキニル）、イオン基（例えば、－ＮＨ３ ＋）、ならびにハロゲン（－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｉ、－Ｂｒ）と、これらのすべての化学的に適切な組み合わせと、が挙げられる。いくつかの態様において、Ｂは、アデノシン、チミン、ウラシル、グアニン、及びシトシンのうちの１つから選択される。
基であるＲ１、Ｒ２、及びＲ３は、なし、－Ｈ、－ＯＨ、－ＯＣＨ３、アルキル、及び特にメチル、－Ｏ－アシル、－Ｎ３、－ＣＮ、及びハロゲンからなる群から選択されてもよい。さらに、企図されるヌクレオシド類似体が、リン酸、ホスホネート基、またはホスホロチオエート基を含む場合、特に好適なＲ１及び／またはＲ２基には、一リン酸、二リン酸、三リン酸、モノホスホネート、ジホスホネート、トリホスホネート、ホスホロチオエート、糖ＯＨ基を有するアミノ酸エステル、または一リン酸、二リン酸、三リン酸、モノホスホネート、ジホスホネート、トリホスホネート、もしくはホスホロチオエートのプロドラッグが含まれることが企図される。
式ＩＶに示されるように、ロックド核酸の構造体は、酸素（「Ｏ」）としてのＺをさらに含むことができ、ＹはＣＨ２であり、Ｑはなく、Ｒ３はない。基であるＢ、Ｒ１、及びＲ２は、上述の基から選択されてもよい。
いくつかの実施形態において、上記のマーカッシュ群のうちのいずれかに関して、各群は、その群について列挙される種のうちのいずれかを含んでもよいか、または含まなくてもよい。
Figure 2023022154000031
式Ｖに示されるように、立体配座的に緊張させたヌクレオチドの構造体は、架橋核酸（ＢＮＡ）でもよい。基であるＸ、Ｙ、Ｚ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＢは、上述の基から選択されてもよい。
Figure 2023022154000032
いくつかの実施形態において、コネキシン４３調節剤は、ペプチドを含んでもよい。ペプチド配列は、例えば、次の配列：ＳＲＰＴＥＫＴ「Ｍｏｄ３」、（配列番号１７３）、「ペプチド１」ＡＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号２９１）、「ペプチド２」ＶＡＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号２９２）、「ペプチド１１」ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＡＫＴ（配列番号２９３）、「ペプチド１２」ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＡＴ（配列番号２９４）、「ペプチド５」ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号１６８）、「Ｍｏｄ１」ＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号１７１）、「Ｍｏｄ２」ＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号１７２）のうちの１つ以上を含んでもよい。いくつかの実施形態において、カルボキシ末端は、修飾されていてもよい。いくつかの態様において、カルボキシ末端修飾は、任意選択的に、水素または他の部分とさらに結合され得るｎ－アルキル鎖を含んでもよい。いくつかの実施形態において、コネキシン４３ペプチドは、上に列挙されるか、または本明細書に開示されるペプチドのうちのいずれかを含んでもよいか、または含まなくてもよい。
本発明のいくつかの態様において、コネキシン４３アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドは、配列番号１～６４から選択される配列を有するポリヌクレオチドに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の相同性を有する。
配列番号２１７の８～約８０個のヌクレオチドを含む修飾または未修飾コネキシン４５アンチセンスポリヌクレオチド、ならびに配列番号２７９の８～約８０個のヌクレオチドを
含む修飾及び未修飾パネキシンアンチセンスポリヌクレオチドも本明細書に取り上げる。本発明のポリヌクレオチドは、８０ヌクレオチド長未満、例えば、１２～１８から約５０～８０ヌクレオチド長、好ましくは、約３０ヌクレオチド長以下、例えば、１２～約３０ヌクレオチド長、より好ましくは、約１５～約３０ヌクレオチド長を有する合成ポリヌクレオチドを含む。一例において、ポリヌクレオチドは、３０個のヌクレオチドを有する。本発明の方法は、いくつかの態様において、最大４０ヌクレオチド長、例えば、１５～４０ヌクレオチド長、例えば、配列番号２１７の約８～約４０個または約１５～約４０個のヌクレオチドを含むコネキシン４５アンチセンス化合物の使用を取り上げる。本発明の方法は、いくつかの態様において、最大４０ヌクレオチド長、例えば、１５～４０ヌクレオチド長、例えば、配列番号２８３～２８７の約８～約４０個または約１５～約４０個のヌクレオチドを含むパネキシンアンチセンス化合物の使用を取り上げる。いくつかの実施形態において、コネキシン４５またはパネキシンアンチセンス化合物は、配列番号２１７、または配列番号２８３～２８７の中の１つ以上のチミンヌクレオチドを、１個以上のウリジンヌクレオチド残基に置換することによって修飾されてもよい。
ヒトＣｘ４５、α７（配列番号２１７） 遺伝子座 ＮＭ＿００５４９７ １１９１
ｂｐ ｍＲＮＡ直鎖ＰＲＩ ２３－ＤＥＣ－２００３
定義 ホモサピエンスギャップ結合タンパク質、アルファ７、４５ｋＤａ（コネキシン４５）
（ＧＪＡ７）、ｍＲＮＡ．
配列表１０
Figure 2023022154000033
本発明のいくつかの態様において、コネキシン４３アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドは、配列番号１～１７から選択される配列を有するポリヌクレオチドに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の相同性を有する。オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドであるコネキシンまたはパネキシンは、これらのそれぞれの配列の８～８０個のヌクレオチド部分に対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の相同性を有してもよい。例えば、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドであるコネキシン４５調節剤が、配列番号２１７の８～８０個のヌクレオチド部分に対して、少なくとも約
８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％相同性を有してもよい一方で、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドであるパネキシン調節剤は、配列番号２８３（Ｐａｎｘ１ポリヌクレオチド）、（Ｐａｎｘ１ポリヌクレオチドＲｅｆＳｅｑ番号ＮＭ＿０１５３６８．３）、配列番号２８４（Ｐａｎｘ２ポリヌクレオチド）、（変異体１の場合、Ｐａｎｘ２ポリヌクレオチドＲｅｆＳｅｑ番号ＮＭ＿０５２８３９．３）、配列番号２８５（Ｐａｎｘ２ポリヌクレオチド変異体２の場合、ＲｅｆＳｅｑ番号ＮＭ＿００１１６０３００．１）、配列番号２８６（Ｐａｎｘ２ポリヌクレオチド変異体３の場合、ＲｅｆＳｅｑ番号ＮＲ＿０２７６９１．１）、または配列番号２８７（Ｐａｎｘ３ポリヌクレオチド）（Ｐａｎｘ３ポリヌクレオチドＲｅｆＳｅｑ番号ＮＭ＿０５２９５９．２）の８～８０個のヌクレオチド部分に対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の相同性を有してもよい。
いくつかの態様において、パネキシン調節剤は、パネキシンペプチド配列を含んでもよいか、または含まなくてもよい。パネキシンペプチド配列は、ポリペプチド配列番号２８８、Ｐａｎｘ１ペプチド）、配列番号２８９、Ｐａｎｘ２ペプチド）、または配列番号２９０、Ｐａｎｘ３ペプチド）の８～４０個の連続したアミノ酸、細胞外ドメイン、細胞内ドメイン、カルボキシ末端部、またはアミノ末端部を含み得る。
他の実施形態において、コネキシン調節剤は、時折、抗コネキシンペプチドまたはペプチド模倣薬と称されるコネキシンペプチドまたはペプチド模倣薬、例えば、抗コネキシンヘミチャネル遮断ペプチドまたはペプチド模倣薬、例えば、コネキシン細胞外ドメイン、膜貫通領域、及びコネキシンカルボキシ末端ペプチドを含む修飾または未修飾ペプチドもしくはペプチド模倣薬）である。抗コネキシンヘミチャネル遮断ペプチドまたはペプチド模倣薬は、修飾されていてもよいか、または修飾されていなくてもよい。抗コネキシンヘミチャネル遮断ペプチドまたはペプチド模倣薬は、化学的、合成的に作製されるか、さもなければ製造される。いくつかの実施形態において、コネキシン調節剤は、コネキシン４３ペプチドまたはペプチド模倣薬である。いくつかの態様において、治療上有効な修飾または未修飾ペプチドまたはペプチド摸倣薬は、コネキシン４３またはコネキシン４５等のコネキシンの細胞外ドメインまたは膜貫通ドメインの一部分を含む。いくつかの態様においてペプチドまたはペプチド摸倣薬は、コネキシンＣｘ２６、Ｃｘ３０、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ５０、Ｃｘ５７、または眼もしくは血管中の任意の他のコネキシンの細胞外ドメインもしくは膜貫通ドメインの一部分を含む。他の実施形態において、調節剤は、時折抗パネキシンペプチドまたはペプチド模倣薬と称される、パネキシンペプチドまたはペプチド模倣薬、例えば、修飾または未修飾ペプチドもしくはペプチド模倣薬である。他の実施形態において、調節剤は、時折抗パネキシンパネキシンまたはペプチド模倣薬と称される、パネキシンペプチドまたはペプチド模倣薬、例えば、修飾または未修飾ペプチドもしくはペプチド模倣薬である。いくつかの態様において、コネキシン調節剤は、前述のもののうちのいずれかを含んでもよいか、または含まなくてもよい。
いくつかの実施形態において、本発明のコネキシン調節剤は、抗コネキシン４３ペプチドまたはペプチド模倣薬、例えば、治療上有効、例えば、本明細書に記載される神経障害性の眼の障害のうちのいずれかを治癒するのに有効な、本発明の方法で有用な、コネキシンの細胞外ドメインの一部分を含むペプチド、及びコネキシンのカルボキシ末端の一部分を含むペプチドを含む、本明細書に記載されるペプチドのうちのいずれかを含む。いくつかの態様において、治療上有効な修飾または未修飾ペプチドまたはペプチド摸倣薬は、コネキシン４３またはコネキシン４５等のコネキシン、好ましくはコネキシン４３の細胞外ドメインの一部分を含む。コネキシン４３のタンパク質配列を、以下に示す。コネキシン４３（配列番号：１９）
配列表１１－１
Figure 2023022154000034
 配列表１１－２
Figure 2023022154000035
表３は、コネキシン４３及びコネキシン４５の細胞外ループを示す。いくつかの実施形態において、治療上有効な修飾または未修飾ペプチドまたはペプチド摸倣薬は、コネキシン４３またはコネキシン４５等のコネキシン、好ましくはコネキシン４３のＥ２細胞外ドメインの一部分を含む。いくつかの実施形態において、治療上有効な修飾または未修飾ペプチドまたはペプチド摸倣薬は、コネキシン４３またはコネキシン４５等のコネキシン、好ましくはコネキシン４３のＣ末端ドメインの一部分を含む。ペプチドまたはペプチド摸倣薬調節剤が、コネキシンの細胞内ドメインの一部分を含む場合、いくつかの実施形態において、ペプチドは、細胞内部移行トランスポータと複合化し得、いくつかの事例で、コネキシン４３と結合しているｚｏｎａ ｏｃｃｌｕｄｅｎｓ（ＺＯ－１）を遮断し得る。
Figure 2023022154000036
異なるコネキシンアイソタイプのＥ２ドメインの配列は、表４に太字で示されるペプチド配列番号３５及びペプチド配列番号３６に相同なアミノ酸とともに示される。ペプチド配列番号３６の最後の４個のアミノ酸は、４番目の膜ドメインに一部であることに留意されたい。
表４は、本明細書に記載されるペプチド阻害剤を開発するために使用される、コネキシンファミリーメンバーの細胞外ドメインを提供する。ある特定の非限定的な実施形態において、ペプチド及び表４に提供されるもの、ならびにこれらの断片は、ペプチド阻害剤として使用される。他の非限定的な実施形態において、約８～約１５個を含むペプチド、この表のペプチドの約１１～約１３個のアミノ連続アミノ酸のペプチドが、本発明のペプチド阻害剤である。他の実施形態において、控えめなアミノ酸変化が、ペプチドまたはその断片に加えられる。
Figure 2023022154000037
コネキシン活性を調節することができるコネキシン間結合を抑制することで知られる他のペプチド配列は、コネキシン４３（アミノ酸１１９－１４４）Ｌ２ペプチドの細胞質ループ及びコネキシン４３のＬ２ペプチドのサブパーツである。いくつかの実施形態において、これらのペプチドは、例えば、Ｇａｐ１９の９個のアミノ酸配列、ＫＱＩＥＩＫＫＦＫ（配列番号２９９）；天然Ｇａｐ１９配列、ＤＧＶＮＶＥＭＨＬＫＱＩＥＩＫＫＦＫＹＧＩＥＥＨＧＫ（配列番号３００）；Ｓｈｉｂａｙａｍａ（Ｓｈｉｂａｙａｍａ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．９１，４０５４０４０６３，２００６）によって報告されたＧａｐ１９のＨｉｓ１４４→Ｇｌｕ Ｌ２誘導体、ＤＧＶＮＶＥＭＨＬＫＱＩＥＩＫＫＦＫＹＧＩＥＥＱＧＫ（配列番号３０１）；ＴＡＴ－Ｇａｐ１９配列、ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＫＱＩＥＩＫＫＦＫ（配列番号３０２）；ＳＨ３結合ドメイン、ＣＳＳＰＴＡＰＬＳＰＭＳＰＰＧＹＫ（配列番号３０３）、もしくはそのサブパーツＰＴＡＰＬＳＰＭＳＰＰ（配列番号３０４）；細胞透過を上昇させるためのＴＡＴリーダー配列の有無にかかわらないＣＴ９もしくはＣＴ１０ペプチドのＣ末端配列、ＲＰＲＤＤＥＩ（配列番号３
０５）、ＳＲＰＲＤＤＬＥＩ（配列番号３０７）、ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＳＲＰＲＤＤＥＩ（配列番号３０６）、またはＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＲＰＲＤＤＥＩ（配列番号３０８）を含んでもよいか、または含まなくてもよい。本明細書に開示される組成物、方法、キット、または製造品内に含められてもよいか、または含められなくてもよい他のペプチド摸倣薬の配列は、Ｄｈｅｉｎ（Ｄｈｅｉｎ，Ｓ．，Ｎａｕｎｙｎ－Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇの Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍ．，３５０：１７４－１８４，１９９４）によって報告されたもの；ＡＡＰ１０ペプチド、Ｈ２Ｎ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－４Ｈｙｐ－Ｐｒｏ
Ｔｙｒ－ＣＯＮＨ２（配列番号３０９）、及びＺＰ１２３ペプチド（ロチガペプチド（ｒｏｔｉｇａｐｅｐｔｉｄｅ））、Ａｃ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｐｒｏ－Ｄ－４Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｄ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－ＮＨ２（配列番号３１０）、（Ｄｈｅｉｎ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ Ｃｏｍｍｕｎ． Ａｄｈｅｓ． １０，３７１－３７８，２０１３）である。ロチガペプチド（ｒｏｔｉｇａｐｅｐｔｉｄｅ）は、天然Ｌ型ペプチドへの有効性を改善するために、Ｄ型ペプチドを含む。
抗パネキシン剤の例は、以下に記載される抗パネキシンアンチセンスオリゴデオキシヌクレオチド（「ＯＤＮ」）を含む、抗パネキシンポリヌクレオチドである。抗パネキシンポリヌクレオチドの例には、（修飾及び未修飾骨格アンチセンスを含む）アンチセンス、ＲＮＡｉ、ならびにｍｉＲＮＡ及びｓｉＲＮＡを含む抗パネキシンオリゴデオキシヌクレオチドが含まれる。好適な抗パネキシンペプチドには、例えば、パネキシン細胞外ドメイン、またはパネキシン細胞内ドメインを結合させるペプチドが含まれる。好適な抗パネキシン剤には、例えば、Ｐａｎｘ１に対するアンチセンスＯＤＮ、ペプチド、及びペプチド模倣薬が含まれる。ペプチドまたはペプチド模倣薬には、抗パネキシンペプチドまたはペプチド模倣薬、例えば、パネキシン複合体遮断ペプチド（例えば、抗パネキシン抗体及び抗体結合断片）またはペプチド模倣薬（例えば、パネキシンの１つ以上の細胞外もしくは細胞内領域に向けられたペプチド模倣薬）が含まれる。ペプチド模倣薬は、細胞内パネキシン領域及びドメインの結合のための膜輸送を促進するために、１つ以上の他の作用剤、例えば、アンテナペディアに対して複合体化されてもよい。
用語「ペプチド」、「ペプチド摸倣薬」、及び「摸倣物」には、これらが模倣するタンパク質領域の実質的に同じ構造的及び機能的性質を有し得る合成または遺伝子改変の化学化合物が含まれる。コネキシンの場合、これらは、例えば、コネクソン間ドッキング及び細胞間チャネル形成、ならびに／またはヘミチャネルコネキシンの細胞外ループに関与する拮抗するコネキシンの細胞外ループを模倣し得る。
本明細書において使用する場合、用語「ペプチド類似体」は、テンプレートペプチドの特性と類似した特性を有し、非ペプチド薬物でもよい化合物を指す。ペプチド及びペプチド系化合物を含む（ペプチド摸倣物としても知られる）「ペプチド模倣薬」には、ペプチド類似体等のそのような非ペプチド系化合物も含まれる。治療上有用なペプチドに構造的に類似したペプチド模倣薬は、同等または改善された治療効果または予防効果を産生するために使用され得る。いくつかの態様において、ペプチド及びペプチド模倣薬は、修飾されていてもよいか、または修飾されていなくてもよい。一般に、ペプチド模倣薬は、パラダイムポリペプチド（すなわち、生物学的または薬理学的機能もしくは活性を有するポリペプチド）に対する構造的または機能的模倣物（例えば、同一または類似している）であるが、任意選択的に、例えば、－ＣＨ２ＮＨ－、－ＣＨ２Ｓ－、－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＨ＝ＣＨ－（シス及びトランス）、－ＣＯＣＨ２－、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２－、ならびに－ＣＨ２ＳＯ－からなる群から選択される結合によって置き換えられた１つ以上のペプチド結合も有してもよい。摸倣物は、天然アミノ酸、合成化学化合物、アミノ酸の非天然類似体で完全に構成され得るか、または部分的天然ペプチドアミノ酸及びアミノ酸の部分的非天然類似体のキメラ分子であるかのいずれかである。摸倣物は、そのような置換も摸倣物活性を実質的に変化させない限り、任意の量の天然アミノ酸の保存的置換も含んでもよ
い。コネキシンの場合、これらは、例えば、コネクソン間ドッキング及び細胞間チャネル形成に関与する拮抗するコネキシンの細胞外ループを模倣し得る。例えば、摸倣組成物は、例えば、ギャップ結合媒介細胞間通信を形成するためのコネクソンのドッキングを妨げるか、または細胞質を細胞外環境に暴露するためのコネクソンの開口を妨げる等の、生物学的作用またはコネクソンの活性を下方制御し得る場合、ギャップ結合調節剤として有用であり得る。ペプチド模倣薬は、本明細書に記載されるもの、及び現在既知であるか、または後に開発されるかに関わらず、当分野で既知であり得るものを包含する。ペプチド及びペプチド模倣薬コネキシン調節剤も、安定性を上昇させ、生物学的利用能を改善し、かつ／または細胞膜透過性を上昇させるために、改質されてもよい。
本発明のいくつかの態様において、コネキシン調節剤は、ペプチドまたはペプチド摸倣薬である。本開示のある特定の実施形態において、含められてもよいか、含められなくてもよい、例となるコネキシン４３（Ｃｘ４３）、またはＣｘ２６、Ｃｘ３０、Ｃｘ３０．３、Ｃｘ３１、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３２、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０．１、Ｃｘ４３、Ｃｘ４６、Ｃｘ４６．６、もしくはＣｘ４０ペプチド調節剤は、以下の表６４に提供される（Ｅ２及びＴ２は、例えば、第２の細胞外ドメインまたは第２の膜貫通ドメイン内のペプチドの位置を指す）。

Figure 2023022154000038
Figure 2023022154000039
Figure 2023022154000040
Figure 2023022154000041
Figure 2023022154000042
いくつかの実施形態において、コネキシン４３調節剤は、例えば、例えば、配列番号１７３（ＳＲＰＴＥＫＴ）を含むペプチドまたはペプチド摸倣薬を含んでもよい。ペプチドまたはペプチド摸倣薬は、例えば、配列番号１６８（ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ）も含んでもよい。ペプチドは、１つ以上の修飾アミノ酸、アミノ酸類似体を含んでもよいか、またはさもなければ、生物学的利用能を改善するか、もしくは細胞膜を超える透過率を上昇させるために修飾されてもよい。例えば、配列番号１６８を修飾して、配列番号３００～３０６を得てもよい。いくつかの態様において、例えば、配列番号１７３（ＳＲＰＴＥＫＴ）または配列番号１６８（ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ）を含むペプチドまたはペプチド摸倣薬は、７～４０個のアミノ酸またはアミノ酸類似体を含み、かつＣ末端ペプチドを含まない。いくつかの実施形態において、ペプチドは、プロモイエティとして使用されてもよい。
いくつかの態様において、コネキシン４５調節剤は、コネキシン間の相互作用を拮抗もしくは抑制、または遮断するコネキシン４５タンパク質の部分を含むペプチドまたはペプチド模倣薬でもよい。コネキシン４５ペプチド及びペプチド摸倣薬調節剤の例となるペプチド配列は、表６３に提供される。
Figure 2023022154000043
Figure 2023022154000044
いくつかの実施形態において、コネキシン４５調節剤は、例えば、例えば、配列番号２８０（ＳＲＰＴＥＫＴ）を含むコネキシン４５のＥ２またはＣ末端ドメインの一部分を含むペプチドまたはペプチド摸倣薬を含んでもよい。ペプチドまたはペプチド摸倣薬は、例えば、配列番号２７９（ＤＣＦＩＳＲＰＴＥＫＴ）も含んでもよい。いくつかの実施形態において、ペプチドは、ＳＲＬ、ＰＣＨ、ＬＣＰ、ＣＨＰ、ＩＹＹ、ＳＫＦ、ＱＰＣ、Ｖ
ＣＹ、ＡＰＬ、ＨＶＲ以上を含む、わずか３アミノ酸長でもよい。
いくつかの態様において、コネキシン４０調節剤は、コネキシン間の相互作用を拮抗もしくは抑制、または遮断するコネキシン４０タンパク質の部分を含むペプチドまたはペプチド模倣薬でもよい。
ペプチド化学的改変
ある特定の実施形態において、本発明のコネキシン４３調節剤ペプチドは、アミノまたはカルボキシ末端で細胞内移行トランスポータと結合し得る。本発明のコネキシン４３調節剤ペプチドと結合している細胞内移行トランスポータは、当分野で既知、もしくは新規に見出される任意の内部移行配列でもよいか、またはその保存的変異形でもよい。細胞内移行トランスポータ及び配列の非限定的な例としては、アンテナペディア配列、ＴＡＴ、ＨＩＶ－Ｔａｔ、ペネトラチン、Ａｎｔｐ－３Ａ（Ａｎｔｐ変異体）、ブフォニンＩＩ、トランスポータン、ＭＡＰ（モデル両親媒性ペプチド）、Ｋ－ＦＧＦ、Ｋｕ７０、プリオン、ｐＶＥＣ、Ｐｅｐ－１、ＳｙｎＢ１、Ｐｅｐ－７、ＨＮ－１、ＢＧＳＣ（ビス－グアニジニウム－スペルミジン－コレステロール、及びＢＧＴＣ（ビスグアニジニウム－トレン－コレステロール）が挙げられる。
例となる細胞内移行ペプチドの配列は、以下の表６５に提供される。
Figure 2023022154000045
Figure 2023022154000046
表６５は、例となる細胞内移行トランスポータの配列を列挙する。
いくつかの実施形態において、コネキシン、パネキシン及び／またはパネキシン調節剤ペプチドは、標的細胞内への透過率を上昇させるために、融合されて、輸送ペプチドになる。いくつかの実施形態において、輸送ペプチドは、細胞透過のためのウイルスコーティングの一部であり得る。いくつかの実施形態において、輸送ペプチドは、カルボキシ末端ま
たはアミノ末端で融合されて、コネキシン及び／またはパネキシン調節剤ペプチドになり得る。輸送ペプチドは、次のペプチド：ＡＮＴＰ、ＨＩＶ－ＴＡＴ、トランスポータン、ブフォニンＩＩ、Ｔａｔ、ペネトラチン、ＭＡＰ、Ｋ－ＦＧＦ、Ｋｕ７０、プリオン、ｐＶＥＣ、Ｐｅｐ－１、ＳｙｎＢ１、Ｐｅｐ－７、ＲＧＤ、またはＨＮ－１のうちの１つから選択され得る。いくつかの実施形態において、コネキシン、パネキシン、及び／またはパネキシン調節剤ペプチドは、前述のもののうちのいずれかを含んでもよいか、または含まなくてもよい。
本発明の一実施形態において、コネキシン４３調節剤ペプチドのアミノ酸配列は、本明細書に列挙される任意のペプチド配列番号、またはその保存的変異形からなる群から選択され得る。本発明のさらなる実施形態において、コネキシン４３調節剤ペプチドは、配列番号１４０～２００のアミノ酸配列を含み得る。本発明の別の実施形態において、コネキシン４３調節剤ペプチドは、細胞内移行トランスポータをさらに含む。さらなる実施形態において、コネキシン４３調節剤ペプチドは、アミノ末端で細胞内移行トランスポータと結合し得る。
特定のタンパク質が本明細書で示されるとき、誘導体、変異体、及び断片が企図される。タンパク質誘導体及び変異体は、当業者によく理解され、アミノ酸配列の改変を伴い得る。例えば、アミノ酸配列改変は、挿入変異体、置換変異体、または欠損変異体の３つのクラスのうちの１つ以上に分類され得る。挿入には、アミノ及び／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。挿入は、例えば、１～４個の残基のような、アミノまたはカルボキシル末端融合の挿入より小さい挿入であり得る。欠損は、タンパク質配列（複数可）からの１つ以上のアミノ酸残基の除去を特徴とする。置換、欠損、挿入、またはこれらの任意の組み合わせは、最終構築物に到達するために、組み合わせられてもよい。置換変異体は、少なくとも１つの残基が除去され、異なる残基がその場所に挿入されたものである。そのような置換は、保存的置換と称される。１つのアミノ酸残基の、生物学的及び／または化学的に類似した別のものとの置き換えは、当業者に保存的置換として知られている。保存的置換は、１つの疎水性残基を別のものに、または１つの極性残基を別のものに置き換え得る。各々が明確に開示される配列の保存的置換変異体は、本明細書に提供されるペプチド内に含まれる。保存的置換は、典型的に、得られるポリペプチドの生物活性にほとんど影響を与えない。保存的置換は、ペプチドの生物学的機能に実質的に影響を与えない、ペプチド内のアミノ酸置換でもよい。ペプチドは、１つ以上のアミノ酸置換、２～１０個の保存的置換、２～５個の保存的置換、または４～９個の保存的置換を含み得る。
化学構造改変
ある特定の実施形態において、ペプチドまたはペプチド模倣薬の化学構造は、ペプチドの遺伝子導入取り込みを増加させるために合成修飾されてもよい。いくつかの実施形態において、例えば、ペプチドまたはペプチド摸倣薬は、リンカー部分をとおして、ペプチドを疎水性化合物と複合化させることによって修飾されてもよい。疎水性化合物は、例えば、１つ以上のｎ－アルキル基でもよく、これは、例えば、Ｃ６－Ｃ１４アルキル基でもよい。いくつかの実施形態において、ペプチドは、参照により本明細書に組み込まれる、Ｃｈｅｎ，ＹＳ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ． Ｓｃｉ．，１０２：２３２２－２３３１（２０１３）に記載されるように、Ｎ末端で１つまたは２つのドデシル（Ｃ１２）基と複合化してもよい。一実施形態において、ペプチド配列ＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴまたはＶＤ
ＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴは、２つのドデシル基と複合化して、コネキシン４３、「Ｃ１２－Ｃ１２－Ｃｘｎ４３ ＭＰ」（配列番号３２６）を調節することができる修飾ペプチドを生じ得る。その得られる構造を、図８０に示す。
Figure 2023022154000047
 図８０。Ｃ１２－Ｃ１２－Ｃｘｎ４３ ＭＰ（配列番号３２６）の構造。Ｒ１及びＲ２は、水素またはアルキル基でもよい。いくつかの態様において、Ｒ１＝Ｒ２＝ｎ－ドデシル鎖である。
抗コネキシン調節剤薬物
いくつかの実施形態において、ギャップ結合調節剤は、抗コネキシン調節剤薬物である小分子でもよい。いくつかの態様において、抗コネキシン調節剤薬物は、本明細書に記載される式Ｉの構造を有し得る。
パネキシン、パネキシンチャネル調節剤、及び他のギャップ結合調節剤
コネキシン調節剤もしくはパネキシン調節剤の代わりに、またはそれに加えて、本明細書に記載される組成物、キット、及び方法のうちのいずれかで使用され得るパネキシン及びパネキシンチャネル調節剤、ならびにギャップ結合調節剤またはコネキシン調節剤薬物を含む調節剤も、本発明の方法で有用である。
本明細書に取り上げられる使用のうちのいずれかのための本発明の調節剤は、Ｃｘ２６、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ５０、Ｃｘ５７、または眼もしくは血管中の任意の他のコネキシンを抑制、または遮断し得るギャップ結合調節剤も含んでもよい。本明細書に取り上げられる用途のうちのいずれかのための本発明の薬学的組成物は、例えば、パネキシンチャネルを抑制または遮断し得るパネキシン調節剤も含んでもよい。
ギャップ結合調節剤には、コネキシン調節剤及びギャップ結合薬物が含まれる。したがって、コネキシン調節剤は、必ずしもギャップ結合薬物調節剤ではなく、すべてのギャップ結合薬物調節剤がコネキシン調節剤とは限らない。トナベルサット、カラベルサット、及び式Ｉの化合物は、コネキシン調節剤である。
ギャップ結合薬物は、例えば、マイコトキシン、グリチルレチン酸及びグリチルレチン酸誘導体、ホルボールエステル、ＤＤＴ、トリフェニルメタン、トリフェニルエタン、長鎖アルコール、麻酔薬、脂肪酸アミド、フェナム酸、キニン及びキニン誘導体、２－ＡＰＢ及び２－ＡＰＢ誘導体、ポリアミン、シクロデキストリン、ならびに上で論じられていないペプチドでもよい。
いくつかの実施形態において、ギャップ結合薬物は、カルバマゼピン、オクタノール、ビスフェノール－Ａ、ヘプタノール、４－（２－ブチル－６，７－ジクロロ－２－シクロペンチル－インダン－１－オン－５－イル）オキソ酪酸（ＤＣＰＩＢ）、カラベルサット、ゲニステイン、トランス－レスベラトロール、カルベノキソロン、ＨＭＧ－ＣｏＡレダクターゼ阻害剤ロバスタチン、ロチガプチド、メトプロロール、ホルスコリン、アイゲニン、タンゲリチン、ハロタン、オクラトキシンＡマイコトキシン、パツリンマイコトキシン、オカダ酸、１８－アルファ－及び１８－ベータ－グリチルレチン酸、１７－ベータ－エ
ストラジオールメチルエステル、テストステロンメチルエステル、１２－Ｏ－テトラデカノイルホルボール－１３－酢酸塩（ＴＰＡ）、ホルボールエステル、１，１，１－トリクロロ－２，２－ビス（ｐ－クロロフェニル）エタン、トリフェニルメタン、トリス（４－クロロフェニル）メタノール、（２－クロロフェニル）（ジフェニル）メタン、トリフェニルメチルクロリド、テトラフェニルホウ酸ナトリウム、タモキシフェン、クロミフェン、エンフルラン、オレアミド、アナンダミド、メクロフェナム酸及びフルフェナム酸等のアリールアミノベンゾエート、ニフルム酸、５－ニトロ－２－（３－フェニルプロピルミノ（ｐｈｅｎｙｌｐｒｏｐｙｌｍｉｎｏ））安息香酸（ＮＰＰＢ）、キニン、キニジン、メフロキン、ＰＱ１（メフロキンのプリマキン誘導体）、２－アミノフェノキシボレート（２－ＡＰＢ）、スペルミジン、スペルミン、シクロデキストリンを含有する６つ、７つ、または８つのグリコピラノース単位、Ｇａｐ２６ペプチド（Ｖａｌ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－Ａｓｐ－Ｌｙｓ－Ｓｅｒ－Ｐｈｅ－Ｐｒｏ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｈｉｓ－Ｖａｌ－Ａｒｇ）、ならびにＧａｐ２７ペプチド（Ｓｅｒ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－Ｔｈｒ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ｉｌｅ）のうちの１つから選択されてもよい。
パネキシン発現を妨害するのに好適な領域を標的とする任意のアンチセンス分子またはｓｈＲＮＡが、本発明の実践に有用である。いくつかの態様において、本発明は、パネキシンへのＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を取り上げる。多くの他の遺伝子の発現と同様に、パネキシン発現は、ＲＮＡｉの使用によって生体内または試験管内でノックダウンされ得る。ＲＮＡｉのために使用され得る分子の代表的なクラスは、短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）である。１つのそのような抗パネキシンｓｈＲＮＡ分子は、ｐＳｕｐｅｒ－Ｎｃａｄと称されるベクターを使用して、以下のように構築され得る。
ヒトパネキシンを標的とするアンチセンス及び短ヘアピンＲＮＡには、特定配列を標的とするものも含まれる。パネキシン発現、例えば、Ｐａｎｘ１またはＰａｎｘ２またはＰａｎｘ３の発現を妨害するのに好適な領域を標的とする任意のアンチセンス分子またはｓｈＲＮＡが、本発明の実践に有用である。いくつかの態様において、本発明は、Ｐａｎｘ１またはＰａｎｘ２またはＰａｎｘ３へのＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を取り上げる。多くの他の遺伝子の発現と同様に、Ｐａｎｘ１またはＰａｎｘ２またはＰａｎｘ３発現は、ＲＮＡｉの使用によって生体内または試験管内でノックダウンされ得る。ＲＮＡｉのために使用され得る分子の代表的なクラスは、短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）である。Ｐａｎｘ１の阻害剤には、プロベネシド、メフロキン、及びカルベノキソロン、または抗ペプチドが含まれ得る。
化学物質送達改変
本発明のギャップ結合、コネキシン、及び／またはパネキシンならびにパネキシンチャネル調節剤を含む調節剤は、ミクロ粒子（ミクロスフェア、Ｍｐｓ）もしくはナノ粒子（ナノスフェア、Ｎｐｓ）製剤、またはこれらの両方にも製剤化され得る。微粒子眼薬物送達系には、ナノ粒子（１～１，０００ｎｍ）及びミクロ粒子（１～１，０００μｍ）が含まれ、これらは、ナノスフェア及びミクロスフェアならびにナノカプセル及びマイクロカプスにさらに分類される。ナノカプセル及びマイクロカプセルにおいて、薬物粒子または液滴が、ポリマー膜内に封入される。微粒子系は、注射による眼内送達の利点を有し、これらのサイズ及びポリマー組成物は、生体内でのこれらの生物学的挙動に明らかに影響を与える。ミクロスフェアは、ナノスフェアよりもはるかに長期間硝子体内にとどまることができ、したがって、ミクロ粒子は、硝子体内注射後に貯蔵部の様に機能する。ナノ粒子は、急速に拡散し、眼組織、ならびに前眼部及び後眼部の細胞内に内部移行する。
薬学的組成物は、共投与のために組み合わせた調製物の形態で、例えば、２つ以上の調節剤、例えば、修飾されていてもよいか、修飾されていなくてもよいギャップ結合、コネキシン、及び／もしくはパネキシン調節剤、またはパネキシンチャネル調節剤、例えば、１
つ以上のギャップ結合、コネキシン、及び／もしくはパネキシン調節剤、またはパネキシンチャネル調節剤ポリヌクレオチドと、１つ以上のギャップ結合、コネキシン、及び／もしくはパネキシン調節剤、またはパネキシンチャネル調節剤ペプチドもしくはペプチド模倣薬と、の混合物としても提供される。
用語「組み合わせた調製物」は、薬学的形態、もしくは包帯／マトリックスの形態で、またはこれらの両方でかに関わらず、先に定義された組み合わせパートナーが、独立して、または異なる量の組み合わせパートナー（ａ）及び（ｂ）を用いた異なる所定の組み合わせの使用によって、すなわち同時、別個に、または順次投薬され得るという意味では、「キットオブパーツ」または「製造品」を含む。次いで、パーツのキットは、例えば、同時に投与され得るか、またはキットオブパーツの任意のパーツに関して、異なる時点で、かつ等しいもしくは異なる時間間隔で経時的にずらされ得る。
一実施形態において、組み合わせた調製物は、投与され、２つ以上の別個の調節剤組成物が対象に投与され、第１の組成物は、ギャップ結合、コネキシン、及び／またはパネキシン調節剤、例えば、抗コネキシン４３ポリヌクレオチド、ペプチド、もしくはペプチド摸倣薬、またはヘミチャネル閉鎖化合物等の治療的に有効な量の調節剤を含み、第２の組成物は、ギャップ結合、コネキシン、及び／もしくはパネキシン調節剤、または眼治療薬、例えば、抗コネキシン４３ポリヌクレオチド、ペプチド、もしくはペプチド摸倣薬、ヘミチャネル閉鎖化合物、及び／または眼治療薬等の治療的に有効な量の第２の調節剤を含む。別の実施形態において、１つ以上の抗コネキシンポリヌクレオチド、ペプチド、もしくはペプチド模倣薬、ヘミチャネル閉鎖化合物、及び／または眼治療薬を含む第３の組成物が、投与される。
薬学的組成物は、単回投与、併用投与、同時投与、個別投与、逐次投与、または持続的投与のために提供される。一実施形態において、１つ以上のギャップ結合、コネキシン、及び／またはパネキシン調節剤ポリヌクレオチドを含む組成物は、それ内以上の所望の投与量で、１回以上で投与される。別の実施形態において、１つ以上のギャップ結合、コネキシン、及び／またはパネキシン調節剤を含む組成物は、１つ以上のペプチドまたはペプチド摸倣薬ギャップ結合、コネキシン、及び／またはパネキシン調節剤とほぼ同じ頃に投与される。２つの組成物が異なる時間に投与されるとき、これらは、例えば、３０分、１時間、１日、１週間、または１カ月部分、または列挙される期間のうちの任意の２つ間の任意の時間間隔以内に投与されてもよい。一実施形態において、例えば、１つ以上の抗コネキシンポリヌクレオチドを含む組成物は、１つ以上の抗コネキシンペプチドまたはペプチド模倣薬とほぼ同じ頃に投与される。一実施形態において、１つ以上のギャップ結合、コネキシン、及び／またはパネキシン調節剤ポリヌクレオチドを含む組成物は、１つ以上のギャップ結合、コネキシン、及び／またはパネキシン調節剤ペプチドの少なくとも約３０分以内に投与される。一実施形態において、１つ以上のギャップ結合、コネキシン、及び／またはパネキシン調節剤ポリヌクレオチドを含む組成物は、１つ以上のギャップ結合、コネキシン、及び／もしくはパネキシン調節剤ペプチド、またはペプチド模倣薬の少なくとも１時間以内に投与される。一実施形態において、１つ以上のギャップ結合、コネキシン、及び／またはパネキシン調節剤ポリヌクレオチドを含む組成物は、１つ以上のギャップ結合、コネキシン、及び／もしくはパネキシン調節剤ペプチド、またはペプチド模倣薬の少なくとも１２時間以内に投与される。一実施形態において、１つ以上のギャップ結合、コネキシン、及び／またはパネキシン調節剤ポリヌクレオチドを含む組成物は、１つ以上のギャップ結合、コネキシン、及び／もしくはパネキシン調節剤ペプチド、またはペプチド模倣薬の少なくとも２４時間以内に投与される。別の実施形態において、抗コネキシンポリヌクレオチドならびにギャップ結合、コネキシン、及び／またはパネキシン調節剤ペプチドもしくはペプチド摸倣薬は、互いの約１時間以内、互いの約１日以内、または互いの約１週間以内に投与される。他の実施形態は、１つ以上のギャップ結合、コネキシン
、及び／もしくはパネキシン調節剤ポリヌクレオチド、ならびに／または１つ以上の抗コネキシンペプチドもしくはペプチド模倣薬（例えば、創傷の治癒に有用な、コネキシン細胞外及び／またはコネキシンカルボキシ末端ペプチドを含む抗コネキシンペプチドまたはペプチド模倣薬）、及び創傷の治癒に有用な１つ以上のギャップ結合閉鎖化合物、創傷の治癒に有用な１つ以上のヘミチャネル閉鎖化合物、ならびに／または創傷の治癒に有用な１つ以上のコネキシンカルボキシ末端ポリペプチドの投与を含む。調節剤投薬は、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、または１週間に１回の投薬、例えば、週４回、週２回、週１回投与されてもよい。これらは、ＰＲＮ、及び睡眠前にも投与されてもよい。
投薬形態及び製剤及び投与
特に明示的に述べない限り、投薬に関するすべての説明は、ギャップ結合調節剤、パネキシンチャネル調節剤、コネキシン調節剤及びパネキシン調節剤を含む本発明の調節剤に適用される。
本発明のヘミチャネル、ギャップ結合、及び／またはパネキシン調節剤を含む調節剤は、本明細書に記載されるように投薬、投与、または配合され得る。
本発明のヘミチャネル、ギャップ結合、及び／またはパネキシン調節剤を含む調節剤は、眼神経障害を有する、治療を必要とする対象に投与され得る。したがって、本発明にしたがって、パネキシン及び／またはコネキシン、例えば、コネキシン４３またはコネキシン４５が調節され得、かつ／または細胞間通信が一時的かつ部位特異的な様式で下方制御され得る製剤が提供される。
ギャップ結合、コネキシン、及び／またはパネキシン及びパネキシンチャネル調節剤を含む調節剤は、実質的に単離された形態で、製剤内に存在し得る。産生物は、産生物の意図される目的に干渉しない担体または希釈剤と混合されてもよく、依然として、実質的に単離されていると見なされ得ることが理解されるであろう。本発明の産生物は、実質的に生成された形態であってもよく、この場合、産生物は、一般に、約８０％、８５％、または９０％、例えば、少なくとも約８８％、少なくとも約９０、９５、または９８％、または少なくとも約９９％の、例えば、ポリヌクレオチド（もしくは、コネキシン４３調節剤等の他のコネキシン調節剤）、または調製物の乾燥質量を含む。
一実施形態において、ギャップ結合、コネキシン、及び／または調節剤は、修飾または未修飾コネキシン４３もしくは４５アンチセンスポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド、修飾または未修飾コネキシンペプチドまたは抗コネキシン４３もしくは４５ペプチド摸倣薬である。いくつかの実施形態において、コネキシン調節剤は、ヘミチャネル開口を遮断または減少させ得る。いくつかの実施形態において、修飾または未修飾コネキシンペプチドまたはペプチド摸倣薬は、例えば、コネキシンタンパク質発現の下方制御により、ヘミチャネルまたはギャップ結合機能を遮断し、かつ／あるいは、コネキシン発現またはヘミチャネルもしくはギャップ結合の形成を減少させる制御効果を与えるために投与される。いくつかの実施形態において、修飾または未修飾コネキシンペプチドまたはペプチド摸倣薬は、ポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドによるコネキシンタンパク質発現の下方制御の前に、ヘミチャネルまたはギャップ結合機能を遮断するために、修飾または未修飾抗コネキシンポリヌクレオチドもしくはオリゴヌクレオチドの投与前に投与される。いくつかの実施形態において、コネキシン調節剤は、コネキシン４３調節剤である。
本発明の医薬製剤は、ギャップ結合、コネキシン、及び／またはパネキシン、ならびにパネキシンチャネル調節剤を含む調節剤を眼に送達するのに好適な１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を、さらに含んでもよい。いくつかの態様において、対象の眼への、パネキシン調節剤、またはコネキシン調節剤（例えば、コネキシン４３調節剤またはコネキシン
４５調節剤、好ましくはコネキシン４３調節剤）の投与は、眼または眼の特定の区画に治療的に有効な量のコネキシン調節剤またはパネキシン調節剤を提供する。いくつかの事例において、ギャップ結合、コネキシン及び／または、パネキシン調節剤は、局所的、角膜、硝子体内、結膜下、または眼周囲の投与によって投与されてもよい。いくつかの態様において、投与は、腹腔内投与または非経口投与でもよいが、但し、治療上有効な投与量が眼と接触することを条件とする。本発明の方法のいくつかの態様において、ギャップ結合、コネキシン、及び／またはパネキシン調節剤は、注射によって、例えば、眼内注射、硝子体内注射によって、または結膜下、球後、眼球周囲、及び後部テノン嚢下注射を含む眼周囲の投与経路によって眼に投与されてもよい。いくつかの態様において、ギャップ結合、コネキシン、及び／またはパネキシン調節剤は、小柱網に提供されてもよいか、または小柱網内もしくは小柱網の周囲に直接注射されてもよい。いくつかの態様において、結膜下投与は、投薬頻度を最小化する一方で、持続的送達を提供し得る。いくつかの実施形態において、結膜下投与は、結膜上皮を透過する必要がないため、親水性薬物の生物学的利用能を上昇させ得る。いくつかの実施形態において、マイクロニードル、針、イオン泳動デバイスまたはインプラントが、コネキシン調節剤またはパネキシン調節剤の投与のために使用されてもよい。インプラントは、例えば、Ｓ．Ｐｆｌｕｇｆｅｌｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＡＣＳ Ｎａｎｏ，９（２），ｐｐ１７４９－１７５８（２０１５）に記載されているもの等の溶解可能ディスク材料でもよい。調節剤、例えば、本発明のギャップ結合、コネキシン、及び／もしくはパネキシン調節剤、またはパネキシンチャネル調節剤は、ギャップ結合、コネキシン、及び／もしくはパネキシン調節剤、またはパネキシンチャネル調節剤が小柱網及び／または毛様体それぞれに接触するように、小柱網もしくは毛様体に、または小柱網もしくは毛様体の周囲にも投与されてもよい。調節剤、例えば、ギャップ結合、コネキシン、ならびに／またはパネキシン及び／もしくはパネキシンチャネル調節剤は、１回、２回以上投与されてもよい。コネキシン調節剤は、例えば、コネキシン４３調節剤またはコネキシン４５調節剤、好ましくは、コネキシン４３調節剤でもよい。いくつかの実施形態において、マイクロニードルが、脈絡膜に本発明の組成物のうちのいずれかを送達するために使用されてもよい。
例えば、いくつかの実施形態において、コネキシン４３調節剤等の調節剤を、対象、例えば、対象の眼に投与し、眼または眼の特定の区画に治療的に有効な量の調節剤を提供してもよい。いくつかの事例において、調節剤、例えば、コネキシン４３またはパネキシン１もしくはパネキシン１チャネル調節剤が、局所的、角膜、硝子体内、結膜下、または眼周囲の投与によって投与されてもよい。いくつかの態様において、投与は、腹腔内投与でもよい。いくつかの実施形態において、マイクロニードル、針、イオン泳動デバイス、またはインプラントが、調節剤、例えば、コネキシン４３調節剤の投与のために使用されてもよい。調節剤、例えば、本発明のコネキシン４３調節剤は、小柱網または毛様体にも投与されてもよい。いくつかの態様において、調節剤、例えば、本発明のコネキシン４３調節剤は、脳室内、及び／または髄腔内、及び／または硬膜外、及び／または硬膜下、及び／または硬膜外経路を介して投与されてもよい。
調節剤、例えば、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤及び／もしくはその類似体またはプロドラッグ、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体もしくはプロドラッグ、ならびに／またはパネキシン調節剤もしくはパネキシンチャネル調節剤、例えば、式ＶＩの化合物、例えば、プロベネシド及びその類似体もしくはプロドラッグ、ならびに／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１もしくはその類似体またはプロドラッグは、単独で、または１つ以上の追加の成分と組み合わせて投与されてもよく、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、及び／または担体を含む薬学的組成物に製剤化されてもよい。
「薬学的に許容される希釈剤、担体、及び／または賦形剤」は、式Ｉの化合物、例えば、
トナベルサット及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体と共投与されてもよい一方で、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体が意図される機能を行うことを許容し、概して安全、無毒であり、生物学的薬学的組成物または望ましくない薬学的組成物のいずれでもない薬学的組成物の調製において有用な物質を含むことを意図する。薬学的に許容される希釈剤、担体、及び／または賦形剤には、獣医学的使用及びヒトの薬学的使用に好適なものが含まれる。好適な担体及び／または賦形剤は、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体の性質を考慮して、当業者によって容易に理解されるであろう。しかしながら、例として、希釈剤、担体、及び／または賦形剤には、溶液、溶媒、分散媒、遅延剤、ポリマー及び脂質の作用剤、ならびにエマルション等が含まれる。さらなる例として、特に注射可能な溶液に好適な液体担体としては、水、生理食塩水溶液、デキストロース溶液等が挙げられ、等張液は、静脈内、脊髄内、及び嚢内投与に好ましく、リポソーム等のビヒクルは、作用剤の投与にも特に好適である。
組成物は、錠剤、丸薬、カプセル、半固体、粉末、持続的放出製剤、溶液、懸濁液、エリキシル剤、エアロゾル、注射のための液体、ゲル、クリーム、経皮送達デバイス（例えば、経皮パッチ）、眼の挿入物等の挿入物、または任意の他の適切な組成物を含む、任意の標準の既知の投薬形態の形態を取り得る。本発明に関連する当業者は、あらゆる不要な実験をすることなく、治療される病態及び使用される活性剤の性質を考慮して、最も適切な投薬形態を容易に理解するであろう。ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤及び／もしくはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体、ならびに／またはパネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及びその類似体、ならびに／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１もしくはその類似体のうちの１つ以上は、単一の組成物に製剤化されてもよいことが理解されるべきである。ある特定の実施形態において、好ましい投薬形態には、注射可能な溶液及び経口製剤が含まれる。
本発明の組成物は、投薬形態及び投与の様式を考慮した、調節剤、例えば、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤及び／もしくはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体、ならびに／またはパネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及びその類似体、ならびに／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１もしくはその類似体の任意の適切なレベルを含有し得る。しかしながら、例として、本発明における使用の組成物は、投与の方法に応じて、おおよそ０．１重量％～おおよそ９９重量％、好ましくはおおよそ１重量％～おおよそ６０重量％の式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体を含有してもよい。
標準希釈剤、担体、及び／または賦形剤に加えて、本発明に従った組成物は、例えば、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤及び／もしくはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体、ならびに／またはパネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及びその類似体、ならびに／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１もしくはその類似体の活性または生物学的利用能を向上させ、一体性を保護するか、またはその半減期もしくは貯蔵寿命を延ばすのを助けるか、対象への投与後に緩徐放出を可能にするか、あるいは他の望ましい利点を提供するように、１つ以上の追加の成分と一緒に、またはそのような様式で製剤化されてもよい。例えば、緩徐放出ビヒクルとしては、マクロマ、ポリ（エチレングリコール）、ヒアルロン酸、ポリ（ビニルピロリドン）、またはヒドロゲルが挙げられる。さらなる例として、本組成物は、保存剤、可溶化剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、甘味剤、着色剤、香味剤、コーティング剤、緩衝液等も含んでもよい。本発明が関連する当業者は、特定の目的に望ましくあり得るさらなる添加剤を容易に特定するであろう。
式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体は、持続的放出系によって投与されてもよ
い。持続的放出組成物の好適な例には、成型された物品、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルの形態の半透過性ポリマーマトリックスが含まれる。持続的放出マトリックスには、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号、欧州第５８，４８１号）、Ｌ－グルタミン酸とガンマ－エチル－Ｌ－グルタミン酸とのコポリマー、ポリ（２－ヒドロキシエチルメタクリル酸）、エチレン酢酸ビニル、またはポリ－Ｄ－（－）－３－ヒドロキシ酪酸（欧州第１３３，９８８号）が含まれる。持続的放出組成物は、リポソーム的に封入された化合物も含む。式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体を含むリポソームは、例えば、独国第３，２１８，１２１号、欧州第５２，３２２号、同第３６，６７６号、同第８８，０４６号、同第１４３，９４９号、同第１４２，６４１号、日本特許出願第８３－１１８００８号、米国特許第４，４８５，０４５号及び同第４，５４４，５４５号、ならびに欧州第１０２，３２４号に記載されるものを含む、既知の方法によって調製されてもよい。通常、リポソームは、脂質含有量が約３０モルパーセント超のコレステロールである小さい（または約２００～８００オングストローム）単層型のものであり、選択された割合は、最も効き目がある療法のために調整される。例えば、ＰＧＬＡナノ粒子もしくはミクロ粒子、または原位置イオン活性化ゲル化系を使用した緩徐放出送達もまた使用され得る。
さらに、本発明に従った薬学的組成物が、治療のものまたは特定の事例において対象にとって他の利益があり得る追加の活性成分または作用剤と一緒に製剤化されてもよいことが企図される。本発明が関連する当業者は、本明細書の発明の説明及び治療される障害の性質を考慮して、好適な追加の活性成分を容易に理解するであろう。
本組成物は、例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ ＡＲ：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００のような標準参照に見出され得る標準の技法に従って製剤化されてもよい。しかしながら、さらなる例として、米国第２０１３／０２８１５２４号または同第５９４８８１１号に提供される情報が使用されてもよい。
ある特定の実施形態において、本発明は、（ａ）式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体、ならびに（ｂ）１つ以上の追加の活性剤を含む組み合わせ産生物を提供し、構成成分（ａ）及び（ｂ）は、同時または順次の投与に適合される。
本発明の特定の実施形態において、本発明に従った組み合わせ産生物は、他の構成成分が治療される対象に依然として影響を与えている間に、構成成分のうちの少なくとも１つが投与されるような様式で使用される。
ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤及び／もしくはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体、ならびに／またはパネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及びその類似体、ならびに／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１もしくはその類似体と、１つ以上の追加の活性剤と、が、（例えば、作用剤または薬学的組成物として）対象に直接投与するのに好適な形態で製剤化されてもよい。あるいは、組み合わせ産生物は、１つ以上の別個の容器内の１つ以上の薬学的担体組成物を含んでもよく、作用剤（複数可）は、投与前に１つ以上の薬学的担体組成物と混合される。
式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体、ならびに１つ以上の追加の活性剤は、同じもしくは１つ以上の異なる容器内に入れられ、別個に投与されてもよいか、または任意の組み合わせで一緒に混合され、一斉に投与されてもよい。
組み合わせ産生物は、特定の用途に必要であり得る、さらなる別個の容器内の追加の作用剤及び組成物も含んでもよい。
薬学的組成物の保管及び／または投与に好適な任意の容器が、本発明の組み合わせ産生物において使用され得る。好適な容器は、当業者によって理解されるであろう。例として、そのような容器としては、バイアル及び注射器が挙げられる。容器は、好適に滅菌され、密閉されていてもよい。
そのような組み合わせ産生物は、本明細書に提供される方法及び指針、ならびに当分野で既知の方法及び指針に従って製造されてもよい。
本明細書に記載される方法で使用される組み合わせ産生物も提供される。
本発明の薬学的組成物は、例えば、眼送達形態及び製剤を含む。そのような送達形態及び製剤には、本明細書に開示される対象の治療のためのものが含まれる。本発明の医薬製剤は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤をさらに含んでもよい。眼投与のための薬学的に許容される賦形剤は、眼科学的に許容される賦形剤でもよい。いくつかの態様において、製剤は、選択された眼部または眼の区画にコネキシン調節剤及び／または眼治療薬の持続的送達を提供し得る。いくつかの態様において、製剤は、高い眼の薬物生物学的利用能を提供し得、安全かつ無毒であり得、かつ／または全身性副作用もしくは投与の部位の合併症をほとんど有し得ない。本発明の方法で使用するための例となるポリヌクレオチド製剤は、局所的送達の容易さ、投与の容易さ、及び「副作用なし」のプロファイルを有する。
いくつかの実施形態において、本発明の医薬製剤は、調節剤、例えば、本明細書に記載されるギャップ結合調節剤及び／もしくはコネキシン調節剤、またはパネキシン調節剤、例えば、修飾または未修飾コネキシン４３アンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはポリヌクレオチド、あるいは修飾または未修飾コネキシン４３ペプチドもしくはペプチド摸倣薬のうちのいずれかを含んでもよい。いくつかの実施形態において、製剤中に含められるコネキシン４３アンチセンスオリゴヌクレオチドは、未修飾コネキシン４３アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドまたは修飾コネキシン４３アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドでもよい。いくつかの態様において、薬学的組成物は、前述のもののうちのいずれかを含んでもよいか、または含まなくてもよい。
いくつかの態様において、対象も眼への、調節剤、例えば、コネキシン調節剤、パネキシン調節剤、及び／またはギャップ結合調節剤（例えば、コネキシン４３調節剤またはＣｘ４５、Ｃｘ２６、Ｃｘ３０、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ４５、Ｃｘ５０、Ｃｘ５７、もしくは眼内の任意の他のコネキシン）の投与は、眼または眼の特定の区画に、治療的に有効な量のコネキシン調節剤またはパネキシン調節剤を提供する。コネキシン調節剤は、好ましくは、コネキシン４３調節剤であり得る。いくつかの事例において、パネキシン調節剤またはコネキシン調節剤は、局所的、硝子体内、結膜下、または眼周囲の投与によって投与されてもよい。いくつかの態様において、投与は、腹腔内投与または非経口投与でもよいが、但し、治療上有効な投与量が眼と接触することを条件とする。本発明の方法のいくつかの態様において、コネキシン調節剤またはパネキシン調節剤は、注射によって、例えば、眼内注射、硝子体内注射によって、または結膜下、球後、
眼球周囲、及び後部テノン嚢下注射を含む眼周囲の投与経路によって眼に投与されてもよい。いくつかの態様において、コネキシン調節剤は、小柱網内に直接、または小柱網の周囲に注射されてもよい。いくつかの態様において、結膜下投与は、投薬頻度を最小化する一方で、持続的送達を提供し得る。いくつかの実施形態において、結膜下投与は、結膜上皮を透過する必要がないため、親水性薬物の生物学的利用能を上昇させ得る。いくつかの実施形態において、マイクロニードル、針、またはインプラントが、コネキシン調節剤の投与のために使用されてもよい。本発明のコネキシン調節剤は、毛様体にも投与されてもよい。コネキシン調節剤は、１回または２回以上投与されてもよい。コネキシン調節剤は、例えば、本明細書に記載されるコネキシン調節剤のうちのいずれかでもよい。いくつかの態様において、コネキシンまたはパネキシン調節剤は、前述のもののうちのいずれかを含んでもよいか、または含まなくてもよい。
本発明のコネキシン及びパネキシンチャネル調節剤は、小柱網または毛様体にも投与されてもよい。
本発明のコネキシン及びパネキシンチャネル調節剤は、小柱網または毛様体にも投与されてもよい。
いくつかの態様において、ギャップ結合、コネキシン、ヘミチャネル、及び／またはパネキシン調節剤、例えば、コネキシン４３調節剤及びパネキシン１調節剤は、眼内の投与部位に制御及び／または区画化放出を提供するように製剤化され得る。本発明のいくつかの態様において、本製剤は、即時、もしくは長期にわたるか、または持続的放出投薬形態でもよい。いくつかの態様において、投薬形態は、長期にわたり、かつ／または持続的放出投薬形態と組み合わせた、即時放出投薬形態の両方を含んでもよい。いくつかの態様において、コネキシンまたはパネキシン調節剤の即時及び持続的ならびに／または長期にわたる放出の両方は、即時放出形態の修飾または未修飾ペプチドもしくはペプチド摸倣薬と一緒に、修飾あるいは未修飾コネキシンまたはパネキシンアンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはポリヌクレオチドを組み合わせることによって得ることができる。本発明のいくつかの態様において、コネキシン調節剤は、例えば、コネキシン４３調節剤または本開示の他のコネキシン調節剤である。本発明のいくつかの態様において、投薬形態は、眼のインプラント、例えば、生分解性または非生分解性インプラントでもよい。
本発明のいくつかの態様において、カデリン（ｃａｄｅｒｉｎ）調節剤またはギャップ結合調節剤及び／もしくはコネキシン調節剤、例えば、コネキシン４３調節剤は、例えば、粒子のサイズまたはコーティングの調整による調節剤の区画化放出のために製剤化されてもよい。例えば、いくつかの態様において、カデリン（ｃａｄｅｒｉｎ）調節剤またはコネキシン調節剤、例えば、コネキシン４３調節剤の粒子製剤が、本発明の方法における使用のために投与され得る。いくつかの態様において、粒子を含む眼薬物送達系は、１，０００ｎｍ未満、例えば、１～１０００ｎｍの平均直径を有するナノ粒子、及び／または１～１，０００μｍの平均直径を有するミクロ粒子を含んでもよい。ナノ粒子またはミクロ粒子は、例えば、コネキシン調節剤がポリマーコーティング内に被包される、ナノスフェアもしくはミクロスフェア、または被包されたナノカプセル及びマイクロカプセルでもよい。粒子製剤は、リポソームも含んでもよい。いくつかの態様において、コネキシン調節剤は、コネキシン４５、Ｃｘ２６、Ｃｘ３０、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ５０、もしくは、Ｃｘ５７または眼もしくは血管中の任意の他のコネキシン調節剤を含んでもよいか、または含まなくてもよい。
いくつかの態様において、ギャップ結合調節剤及び／またはコネキシン調節剤もしくはパネキシン調節剤は、末梢性投与、例えば、静脈内または腹腔内投与後の脈絡膜及び／または網膜への標的化送達のために製剤化されてもよい。いくつかの態様において、コネキシ
ン調節剤は、例えば、コネキシン４３調節剤または本開示の他のコネキシン調節剤でもよい。
いくつかの態様において、脈絡膜及び／または網膜への標的化送達のための製剤は、粒子の表面上の眼の標的部分を示す、ギャップ結合調節剤及び／またはコネキシン調節剤もしくはパネキシン調節剤注入粒子の投与を含み得る。
本発明は、ギャップ結合チャネル及び／またはヘミチャネルの機能を調節するため、ならびに様々な障害の治療のための方法
を含む。そのような方法は、生体内、生体外、及び／または試験管内で、適切であるように行なわれてもよいことが理解されるべきである。ある特定の実施形態において、本方法は、実験的及び／または非実験的目的のために行なわれてもよい。ある特定の実施形態において、そのような方法は、試験管内または生体外で、１つ以上の細胞または１つ以上の細胞を含む試料に、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤及び／もしくはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット、及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体、ならびに／またはパネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及びその類似体、ならびに／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１もしくはその類似体を投与するステップを含んでもよい。他の実施形態において、そのような方法は、対象に、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤及び／もしくはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体、ならびに／またはパネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及びその類似体、ならびに／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１もしくはその類似体を投与するステップを含んでもよい。
本発明の方法は、調節剤、例えば、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤及び／もしくはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体、ならびに／またはパネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及びその類似体、ならびに／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１もしくはその類似体を、単独で、または所望される場合（例えば、活性剤を含む）１つ以上の他の作用剤もしくは療法と組み合わせて投与することを含む。
調節剤、例えば、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤及び／もしくはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体、ならびに／またはパネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及びその類似体、ならびに／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１もしくはその類似体の対象への投与は、対象の身体内の標的部位に作用剤を送達し得る任意の手段によって起こってもよい。例として、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤及び／もしくはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体、ならびに／またはパネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及びその類似体、ならびに／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１もしくはその類似体は、経口、局所的、全身性（例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、経皮、鼻腔内、または坐薬によって）、非経口（例えば、筋肉内、皮下、または静脈内もしくは動脈内の注射）、インプランテーションによって、及び浸透圧ポンプのようなデバイスをとおして注入により、経皮パッチ等の経路のうちの１つによって投与されてもよい。当業者は、他の適切な投与経路を特定し得る。例となる投与経路は、Ｂｉｎｇｈｅ，Ｗ．ａｎｄ Ｂ．Ｗａｎｇ（２００５）． Ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ：ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ
ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｂｉｎｇｈｅ Ｗａｎｇ，Ｔｅｒｕｎａ Ｓｉａｈａａｎ，Ｒｉｃｈａｒｄ Ｓｏｌｔｅｒｏ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，Ｎ．Ｊ． Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，ｃ２００５にも概説される。一実施形態において、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤及び／もしくはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、
トナベルサット、及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体、ならびに／またはパネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及びその類似体、ならびに／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１もしくはその類似体は、全身的に投与される。別の実施形態において、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤及び／もしくはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体、ならびに／またはパネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及びその類似体、ならびに／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１もしくはその類似体は、経口で投与される。別の実施形態において、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤及び／もしくはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体、ならびに／またはパネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及びその類似体、ならびに／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１もしくはその類似体は、局所的に投与される。
別の実施形態において、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体は、最終循環濃度が、おおよそ０．００１～おおよそ１５０マイクロモル以上、最大２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、または１０００マイクロモルになるように、静脈内、動脈内、または腹腔内投与等によって全身的に投与される。最終循環濃度は、０．００１、０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２．、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、もしくは１５０マイクロモル、または２つの列挙される数字のうちのいずれか間の任意の濃度、あるいは先に記載されるように、これらの濃度以上、及び述べられる範囲内の任意の濃度でもよい。本明細書で言及されるように、本発明は、１つ以上の追加の活性剤も対象に投与される複合療法も含む。当業者は、その作用剤の性質及び先に本明細書で論じられる指針を考慮して、１つ以上の活性剤の望ましい投与量を理解するであろう。
調節剤、例えば、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤及び／もしくはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体、ならびに／またはパネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及びその類似体、ならびに／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１もしくはその類似体は、単独で、または特定の障害の治療において使用するための１つ以上の追加の作用剤もしくは組成物と組み合わせて、本発明で使用されてもよい。共投与は、１つ以上の症
状の改善された軽減もしくは改善、疾患の長さもしくは程度の減少、疾患の進行の遅延もしくは減速、病状の改善、緩和、もしくは安定化、部分的もしくは完全寛解、長期の生存、及び／または他の有益な治療結果を可能にし得る。そのような治療は、投与間の期間を用いて、任意の順序で同時または順次投与されてもよい。当業者は、同時または順次の、作用剤の投与の方法または療法、及び投与間の可能な期間を容易理に理解するであろう。療法は、同じまたは異なる経路によって投与されてもよい。
ある特定の実施形態において、本発明に従った治療は、対象への１つ以上の他の作用剤の投与を伴い得る。例えば、対象の健康全般の促進、または療法の１つ以上の副作用の軽減において使用する１つ以上の作用剤が、投与され得る。当業者は、例えば、治療される疾患を考慮して、投与するのに有益であり得る様々な作用剤を、容易に理解するであろう。パネキシン調節剤がギャップ結合チャネル調節剤と一緒に最初に共投与されるいくつかの実施形態において、ギャップ結合チャネル調節剤の投与を継続する一方で、パネキシン調節剤の投与を、停止または徐々に減らしてもよい。いくつかの実施形態において、パネキシン調節剤が、虚血傷害直後、または虚血傷害の後間もなく投与されてもよい一方で、ギャップ結合チャネル調節剤は、虚血後に投与されてもよい。
調節剤、例えば、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤及び／もしくはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体、ならびに／またはパネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及びその類似体、ならびに／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１もしくはその類似体と、任意選択的に１つ以上の他の活性剤の投与は、障害の進行の間の任意の時点、または障害もしくは障害の１つ以上の症状の発症前もしくは発症後に起こってもよい。一実施形態において、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤及び／もしくはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体、ならびに／またはパネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及びその類似体、ならびに／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１もしくはその類似体は、症状の進行中の管理を支援するために、長期間、毎日のように投与される。別の実施形態において、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤及び／もしくはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体、ならびに／またはパネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及びその類似体、ならびに／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１もしくはその類似体は、障害の発症を防ぐか、または遅延させるために、長期間または生涯にわたり、毎日のように投与される。
好ましくは、調節剤、例えば、本発明のギャップ結合、コネキシン、及び／もしくはパネキシン調節剤、またはパネキシンチャネル調節剤は、薬学的に許容される担体または希釈剤と組み合わせられて、薬学的組成物を生成する。用語「薬学的に許容される担体」は、それ自体は組成物を摂る個人にとって有害である抗体の産生を誘導せず、かつ適切でない毒性なしに投与され得る任意の薬学的担体を指す。
眼投与のための「薬学的に許容される担体」は、眼科的に許容される担体である。
薬学的に許容される塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩等の鉱酸塩、及びクエン酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩、安息香酸塩等の有機酸の塩も、存在し得る。
好適な担体及び希釈剤としては、緩衝化した水溶液、生理的食
塩水、デキストロース、グリセロール、等張食塩水液、例えば、リン酸緩衝食塩水、等張水等、及びこれらの組み合わせが挙げられる。いくつかの実施形態において、担体は、プ
ロピレングリコール、ジメチルイソソルビド、及び水、よりさらに具体的には、リン酸塩緩衝液、等張水、脱イオン水、単官能アルコール、及び対称アルコールを含み得る。いくつかの実施形態において、薬学的に許容される担体または希釈剤は、（温度に応じて液体またはゲルであり得る）熱硬化性ポロクサマー、カルボキシセルロース（例えば、カルボキシメチルセルロース）、コラーゲン（例えば、Ｉ型コラーゲン）、トロポコラーゲンを含むコラーゲン性物質、ヒアルロナン、もしくは誘導ヒアルロン酸、及び／または油（例えば、エミュー油）であってもよいか、またはこれらを含有してもよい。好適な担体は、タンパク質、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマーアミノ酸、及びアミノ酸コポリマー等の、大きい緩徐に代謝される巨大分子であり得る。本発明の薬学的組成物は、唯一のビヒクルとして、滅菌水中にコネキシン調節剤を含まない。いくつかの実施形態において、本製剤は、パネキシンまたはコネキシン調節剤、例えば、コネキシン４３調節剤、例えば、いくつかの実施形態において、未修飾または修飾コネキシン４３アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドであり得る製剤中に含まれる４３アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。
一態様において、逆熱硬化性ゲルは、低温、例えば、２～８℃で液体であり得、これは、おおよそ１５℃超の温度で、可逆的な液体からゲルへの転移が起きる。したがって、いくつかの実施形態において、担体は、おおよそ１５℃未満の温度で液体であり得るが、室温または体温等のおおよそ１５℃超の温度でゲルを形成し得る。いくつかの事例において、ゲルは、非イオン性ポリオキシエチレン－ポリオキシプロピレンコポリマーゲルである。いくつかの実施形態において、ゲルは、ｐｌｕｒｏｎｉｃゲルである。ｐｌｕｒｏｎｉｃゲルは、例えば、時折Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ－１２７（ＢＡＳＦ）とも称されるポロクサマー４０７でもよい。いくつかの実施形態において、本発明の製剤は、約１５～約３０％（ｗ／ｖ）のゲルを含んでもよい。いくつかの実施形態において、本発明の製剤は、約２０～約２５％（ｗ／ｖ）のゲルを含んでもよい。いくつかの実施形態において、本発明の製剤は、約２２．６％（ｗ／ｖ）のポロクサマー４０７ゲルを含んでもよい。他の好適な製剤としては、ｐｌｕｒｏｎｉｃゲル系製剤、ヒドロキシメチルセルロース製剤、ヒドロキシエチルセルロース製剤、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）系製剤、及びヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）系製剤が挙げられる。組成物は、局所的、点眼、非経口、筋肉内、皮下、または経皮投与を含む、送達の任意の所望される形態のために製剤化されてもよい。他の有用な製剤には、緩徐または遅延放出調製物が含まれる。
さらに、所望により、湿潤剤もしくは乳化剤、安定化剤もしくはｐＨ緩衝剤、または保存剤等の物質も存在してもよい。いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、及びこれらの混合物等の好適な眼科的に許容される緩衝液を含む。いくつかの実施形態において、本発明で有用な緩衝液としては、ホウ酸、ホウ酸ナトリウム、リン酸ナトリウム一塩基一水和物及びリン酸ナトリウム二塩基七水和物等の、一塩基、二塩基、及び三塩基リン酸を含むリン酸ナトリウム、ならびにこれらの混合物が挙げられる。いくつかの実施形態において、保存剤は、安定化した二酸化塩素、カチオンポリマー、または第４級アンモニウム化合物でもよい。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、湿潤剤、栄養、粘度上昇剤、酸化防止剤等、例えば、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム、アルカリ金属ヘキサメタリン酸塩、クエン酸、クエン酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、Ｎ－アセチルシステイン、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、ポリビニルアルコール、ポリオクサマー（ｐｏｌｙｏｘａｍｅｒ）、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロプルメチルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、及びこれらの混合物及びこれらの混合物も含んでもよい。いくつかの実施形態において、本発明の医薬製剤は、保存剤を含まない。
調節剤、例えば、ギャップ結合、コネキシン、及び／もしくはパネキシン調節剤、または
パネキシンチャネル調節剤がポリヌクレオチド等の核酸である場合、哺乳類の細胞による核酸の取り込みは、いくつかの既知の遺伝子導入技法、例えば、遺伝子導入剤の使用を含む技法によって向上される。そのような技法は、ポリヌクレオチドを含むある特定の抗コネキシン剤と一緒に使用され得る。投与される製剤は、そのような遺伝子導入剤を含んでもよい。これらの遺伝子導入剤の例には、カチオン剤（例えば、リン酸カルシウム及びＤＥＡＥ－デキストラン）、ならびにリポフェクタント（例えば、ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍＴＭ及びｔｒａｎｓｆｅｃｔａｍＴＭ）と、界面活性剤と、が含まれる。
ギャップ結合、コネキシン、及び／またはパネキシン調節剤が、ポリヌクレオチドを含む場合、好都合に、製剤は、細胞透過を補助するための作用剤をさらに含むか、または製剤は、界面活性剤、アンテナペプチド（ａｎｔｅｎｎａ ｐｅｐｔｉｄｅ）等のシグナル分子等の任意の好適な増量剤、もしくは眼への投与に好適な任意の他の作用剤を含んでもよい。
本発明の一実施形態において、調節剤、例えば、本発明のギャップ結合、コネキシン、及び／もしくはパネキシン調節剤、またはパネキシンチャネル調節剤は、局所的に投与される。ギャップ結合、コネキシン、及び／またはパネキシン調節剤の局所的製剤は、軟膏、ゲルを含み得、これらは、例えば、熱硬化性ゲル、滴薬、噴霧剤、液体、及び粉末、または持続的もしくは非持続的放出投薬形態でもよい。
いくつかの実施形態において、調節剤、例えば、ギャップ結合、コネキシン、及び／もしくはパネキシン調節剤、またはパネキシンチャネル調節剤、例えば、コネキシン４３調節剤は、１つまたは複数の粒子を含む薬学的組成物として投与され得る。いくつかの態様において、薬学的組成物は、例えば、即時放出製剤または制御放出製剤、例えば、遅延放出粒子でもよい。
いくつかの態様において、調節剤、例えば、パネキシンまたはコネキシン調節剤、例えば、コネキシン４３及びパネキシン１調節剤、ギャップ結合調節剤等は、治療される生理学的領域への選択的送達のための微粒子製剤１つまたは複数の粒子に製剤化され得る。いくつかの実施形態において、粒子は、例えば、ナノ粒子、ナノスフェア、ナノカプセル、リポソーム、ポリマーミセル、またはデンドリマーであり得る。いくつかの実施形態において、粒子は、ミクロ粒子であり得る。ナノ粒子またはミクロ粒子は、生分解性ポリマーを含み得る。
いくつかの態様において、調節剤、例えば、パネキシンまたはコネキシン調節剤、例えば、コネキシン４３及びパネキシン１調節剤、ギャップ結合調節剤等は、投与の部位への区画化放出を提供するように製剤化される。本発明のいくつかの態様において、調節剤は、例えば、粒子のサイズまたはコーティングを調整することによる、調節剤の区画化放出のために製剤化され得る。例えば、いくつかの態様において、コネキシン４３調節剤もしくはパネキシン１調節剤、またはヘミチャネル調節剤、またはギャップ結合調節剤の粒子製剤は、本発明の方法で使用するために投与され得る。粒子を含む眼の薬物送達系は、いくつかの態様において、例えば、走査電子顕微鏡法によって決定して、１，０００ｎｍ未満の平均直径のナノ粒子、または１～１，０００μｍのミクロ粒子を含んでもよい。ナノ粒子またはミクロ粒子は、例えば、コネキシン調節剤がポリマーまたは脂質コーティング内に被包される、ナノスフェアもしくはミクロスフェア、または被包されたナノカプセル及びマイクロカプセルでもよい。限定されないが、光散乱、ゼータ電位分析、クールター計数（電気的検知帯法）、及び光学顕微鏡法を含む他の方法が、粒径を測定するために採用されてもよい。
ナノ粒子またはミクロ粒子は、ギャップ結合、コネキシン、及び／またはパネキシン調節
剤、例えば、コネキシン４３調節剤を負荷したポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸）（「ＰＬＧＡ」）を含み得る。調節剤は、粒子体積内、粒子の外面上、またはこれらの両方に負荷され得る。
いくつかの実施形態において、生分解性粒子は、次の粒子の種類：ポリラクチド（ＰＬＡ）ナノ粒子、ポリ－ＤＬ－乳酸（ＰＤＬＬＡ）ミクロスフェアまたはナノスフェア、ポリ（乳酸）ナノ粒子またはミクロ粒子、キトサン－修飾ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－グリコリド）ナノスフェア及びミクロスフェア（ＣＳ－ＰＬＧＡ ＮＳ）、キトサン－アルギン酸でコーティングされたナノ粒子またはミクロ粒子、固形脂質ナノ粒子またはミクロ粒子（ＳＬＮ）、ケイ素ナノ粒子またはミクロ粒子、ポリ乳酸－ｃｏ－グリコール酸（ＰＬＧＡ）ナノ粒子またはミクロ粒子、ポリ乳酸－ｃｏ－グリコール酸（ＰＬＧＡ）ナノ粒子またはミクロ粒子、ｐＨ感応Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｐ－４１３５Ｆナノ粒子またはミクロ粒子、ポリマーポリ－ＰＡＤＴ（１、４－フェニレンアセトンジメチレンチオケタール）でできているチオケタールナノ粒子またはミクロ粒子（ＴＫＮ）、リポ多糖（ＬＰＳ）、アルギン酸ナノ粒子またはミクロ粒子、リン脂質ナノ粒子またはミクロ粒子、ならびにポリ（ｅ－カプロラクトン）（ＰＣＬ）ミクロスフェア及びナノスフェア内に封入されたＢ型ゼラチンのうちの１つから選択される粒子であり得る。いくつかの実施形態において、粒子は、ポリ乳酸－ｃｏ－グリコール酸（ＰＬＧＡ）ナノ粒子またはミクロ粒子である。コネキシン４３調節剤は、例えば、コアセルベーション技法によって、または界面重合によって調製されたマイクロカプセルもしくはナノカプセル（例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチンマイクロカプセル及びポリ－（メチルメタシレート（ｍｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｃｙｌａｔｅ））マイクロカプセル）内、コロイド状の薬物送達系（例えば、ポリマーミセル、リポソーム及びペグ化リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子、及びナノカプセル）内、またはマクロエマルション内にも封入されてもよい。そのような技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９８０）１６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．に開示され、参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの態様において、脈絡膜及び／または網膜への標的化送達のための製剤は、調節剤、例えば、粒子の表面上の標的部分を示す、ギャップ結合調節剤及び／またはコネキシン調節剤もしくはパネキシン調節剤注入粒子の投与を含み得る。いくつかの態様において、表面上の標的部分は、ＥＤＡＣカップリング（Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ’－エチルカルボジイミド塩酸塩）トランスフェリンタンパク質によって共有結合され得る。いくつかの態様において、表面上の標的部分は、（ペプチド配列ＧＲＧＤＳＰＫ、配列番号３２２と）共有結合したＲＧＤペプチドであり得る。粒子は、ナノ粒子またはミクロ粒子であり得る。いくつかの態様において、ナノ粒子は、直径が約２００ｎｍ～４５０ｎｍであり得る。いくつかの態様において、粒子は、上述のように、ポリマーを含み得る。いくつかの態様において、粒子は、ポリ－（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）を含み得る。いくつかの実施形態において、ギャップ結合及び／またはコネキシン調節剤は、粒子がエマルション調製を介して合成されるに従い、粒子内へと注入され得る。いくつかの実施形態において、ギャップ結合及び／またはコネキシンまたはパネキシン調節剤は、粒子が粒子内への拡散によって合成された
後、Ｓｉｎｇｈ，Ｓ．Ｒ． ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，１６：６４５－６５９（２００９）及び参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように、粒子内に注入され得る。
いくつかの実施形態において、粒子は、標的化送達のための脈絡膜及び／または網膜への標的化送達のためのペプチド、及び細胞内移行トランスポータとして使用するためのペプチドの両方を含んでもよい。粒子は、本明細書に記載されるミクロ粒子またはナノ粒子であり得る。脈絡膜及び／または網膜への標的化送達のためのペプチドは、本明細書に記載
される粒子と共有結合したＲＧＤペプチドであり得る。細胞内移行トランスポータとして使用するためのペプチドは、ギャップ結合調節剤及び／またはコネキシン調節剤と融合したとき、粒子の外面または粒子内に存在し得る。融合は、共有結合、水素結合（単数または複数）、静電相互作用、またはファンデルワールス相互作用を介してでもよい。細胞内移行トランスポータとして使用するためのペプチドは、本開示の表６５に列挙される任意のペプチドでもよい。
いくつかの実施形態において、調節剤、例えば、末梢性投与後の脈絡膜及び／または網膜への標的化送達のために製剤化されたギャップ結合調節剤及び／またはコネキシン調節剤、パネキシン調節剤またはパネキシンチャネル調節剤は、静脈内または腹腔内注射によって投与され得る。いくつかの態様において、コネキシン調節剤は、例えば、コネキシン４３調節剤でもよい。いくつかの態様において、末梢性投与後の脈絡膜及び／または網膜への標的化送達のために製剤化されたギャップ結合調節剤及び／またはコネキシン調節剤もしくはパネキシン調節剤は、眼への眼周囲の送達によって投与され得る。いくつかの態様において、特定の送達のための製剤は、ギャップ結合調節剤及び／またはコネキシン調節剤もしくはパネキシン調節剤製剤が注入された、点眼薬もしくはゲル、またはコンタクトレンズの形態であり得る。
いくつかの実施形態において、調節剤、例えば、ギャップ結合調節剤及び／またはコネキシン調節剤、パネキシン調節剤またはパネキシン調節剤は、脈絡膜または網膜標的作用剤と一緒に複合体を形成することにより、標的化送達のために製剤化され得る。複合体は、共有結合、水素結合（単数または複数）、静電相互作用、またはファンデルワールス相互作用によって形成され得る。
いくつかの態様において、調節剤、本発明の例えば、ギャップ結合、コネキシン、もしくはパネキシン調節剤、またはパネキシンチャネル調節剤は、脈絡膜及びまたは網膜を標的とするか、または細胞内部移行トランスポータとして機能する化合物に直接結合し得る。
対象の眼への調節剤、例えば、コネキシン調節剤、例えば、コネキシン４３調節剤を投与することは、眼または眼の特定の区画に治療的に有効な量のコネキシン４３調節剤を提供するために、対象に調節剤を投与することを意味する。いくつかの事例において、コネキシン調節剤、例えば、コネキシン４３調節剤は、局所的、角膜、硝子体内、結膜下、または眼周囲の投与によって投与されてもよい。いくつかの態様において、投与は、腹腔内投与でもよい。いくつかの実施形態において、マイクロニードル、針、またはインプラントが、コネキシン４３調節剤の投与のために使用されてもよい。本発明のコネキシン４３調節剤は、毛様体にも投与されてもよい。いくつかの態様において、本発明のコネキシン４３調節剤は、脳室内、及び／または髄腔内、及び／または硬膜外、及び／または硬膜下、及び／または硬膜外経路を介して投与されてもよい。
いくつかの態様において、調節剤、例えば、本発明のギャップ結合、コネキシン４３、パネキシン１、及びパネキシンチャネル調節剤は、眼の投与のために製剤化される。いくつかの態様において、調節剤、例えば、コネキシン４３及び他の調節剤は、投与後に制御放出及び／または区画化放出を提供するように製剤化されてもよい。いくつかの態様において、本製剤は、即時、もしくは長期にわたるか、または持続的放出投薬形態でもよい。いくつかの態様において、投薬形態は、長期にわたり、かつ／または持続的放出投薬形態と組み合わせた、即時放出投薬形態の両方を含んでもよい。いくつかの態様において、調節剤、例えば、コネキシン４３調節剤の即時及び持続的ならびに／または長期にわたる放出の両方は、即時放出形態の修飾または未修飾ペプチドもしくはペプチド摸倣薬と一緒に、修飾あるいは未修飾コネキシン４３アンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはポリヌクレ
オチドを組み合わせることによって得ることができる。いくつかの態様において、投薬形態は、埋め込み式でもよい。
いくつかの実施形態において、本組成物は、眼の流体と等張であり、少なくとも約２００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、好ましくは約２００～約３５０の範囲、または約４００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇの重量オスモル濃度を有してもよい。本組成物は、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、及び／または塩化マグネシウムを含んでもよい。
いくつかの実施形態において、調節剤、例えば、コネキシン４３及びパネキシン１チャネル調節剤等の本開示のギャップ結合チャネル、パネキシンチャネル、パネキシン、またはコネキシン調節剤のうちのいずれかは、投与の部位に区画化放出を提供するように製剤化される。本発明のいくつかの態様において、パネキシンまたはコネキシン調節剤は、例えば、粒子のサイズまたはコーティングを調整することによる、調節剤の区画化放出のために製剤化され得る。例えば、いくつかの態様において、調節剤、例えば、パネキシン調節剤またはコネキシン調節剤、例えば、コネキシン４３調節剤の粒子製剤は、本発明の方法における使用のために投与され得る。いくつかの態様において、粒子を含む眼薬物送達系は、１，０００ｎｍ未満、例えば、１～１０００ｎｍの平均直径を有するナノ粒子、及び／または１～１，０００μｍの平均直径を有するミクロ粒子を含んでもよい。ナノ粒子またはミクロ粒子は、例えば、調節剤、例えば、コネキシン調節剤がポリマー及び／または脂質コーティング内に被包される、ナノスフェアもしくはミクロスフェア、または被包されたナノカプセル及びマイクロカプセルでもよい。
いくつかの実施形態において、製剤化された調節剤は、コネキシン４３またはコネキシン４５調節剤、好ましくは、コネキシン４３調節剤である。
本明細書に記載される任意の製剤、投与量、または送達方法の他の実施形態において、調節剤は、パネキシンチャネル調節剤、好ましくはパネキシン１チャネル調節剤である。本明細書に記載される任意の製剤、投与量、または送達方法のさらに別の実施形態において、調節剤は、ギャップ結合またはヘミチャネルチャネル調節剤、好ましくは、いくつかの実施形態において、コネキシン４３もしくはコネキシン４３ギャップ結合チャネル、またはヘミチャネル調節剤である。
粒子製剤は、例えば、眼内、硝子体内、結膜下、または眼球周囲に注射によって、投与されてもよい。粒子のサイズ及びポリマー組成物は、粒子からの調節剤、例えば、コネキシン４３調節剤の放出、例えば、タイミング及び調節剤の放出場所を制御するように選択され得る。例えば、本発明のいくつかの態様において、調節剤、例えば、ポリ－乳酸（ＰＬＡ）ミクロスフェアとして製剤化されたコネキシン４３ヘミチャネルまたはパネキシン１チャネル調節剤は、１、２、３、４、５、６、または７日間超、もしくは１週間超、１０日間超、２、３、４、５、または６週間超、あるいはそれよりも長く、調節剤が投与された眼の区画内に留まってもよい。いくつかの態様において、注射またはマイクロニードルによって硝子体内に送達された調節剤ミクロ粒子は、調節剤の持続的放出を提供してもよい。他の態様において、調節剤を含むナノ粒子等のより小さい粒子は、眼の一区画から別の区画へ急速に拡散され得、いずれかは、眼組織及びその眼の前眼部及び後眼部の細胞内に直ぐに内部移行され得る。本発明のいくつかの態様において、コネキシン４３または他の調節剤を含むポリラクチドナノ粒子の硝子体内送達は、１、２、３、４、５、６、または７日間、１週間超、１０日間超、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６週間超、網膜色素上皮細胞内の優先的な局在化で、網膜の至る所に送達を提供する。いくつかの態様において、コネキシン４３または他の調節剤の、ナノスフェア及びミクロスフェア眼薬物の送達製剤は、細胞透過率を向上させ、例えば、分解に対して保護することにより生物学的利用能を改善し、かつ／または持続的送達
を提供することができる。いくつかの実施形態において、より大きいナノ粒子（１５０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００ｎｍ超）、あるいはミクロ粒子、例えば、１５０ｎｍ～９ミクロン、もしくは１～９ミクロン、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８ミクロン、または列挙される平均直径のうちのいずれか２つの間の任意の範囲の平均直径を有する粒子を含む製剤が、このサイズの粒子からのより緩徐な放出及び／または拡散の結果として、区画化眼投与に好適であり得る。
コネキシン４３調節剤等の本開示のパネキシン、またはコネキシン調節剤のうちのいずれかの粒子製剤は、リポソームも含んでもよい。いくつかの態様において、リポソームは、５０ｎｍ～数ミクロンにわたる直径を有し得る。いくつかの態様において、リポソームは、眼部または眼の区画に、局所的または結膜下に注射または適用され得、いくつかの実施形態において、比較的不活性の投薬形態からの緩徐な薬物放出を提供し得る。リポソーム製剤はまた、限定された量のコネキシン４３作用剤または他の眼治療化合物だけが眼組織と直接接触するため、より小さな副作用を有し得る。
前眼部内への角膜の透過率の上昇は、薬物製剤への浸透性増強剤の添加で達成され得る。細胞透過剤は、眼内のＲＧＣニューロンまたは他の細胞へのコネキシン４３調節剤の送達を向上させるためにも使用されてもよい。製剤は、例えば、界面活性剤、胆汁酸、キレート剤、及び／または保存剤も含んでもよい。いくつかの実施形態において、硝子体内投与のための製剤は、保存剤を含まなくてもよい。
本明細書において使用する場合、「マトリックス」は、例えば、ポリマーマトリックス、生分解性または非生分解性マトリックス等のマトリックス、ならびにコネキシン調節剤及び／または眼神経障害性治療薬を送達するためのインプラントまたは適用構造体を作製するのに有用な他の担体を含む。
眼インプラント
いくつかの実施形態において、本発明の投薬形態は、眼インプラントでもよい。いくつかの実施形態において、インプラントは、例えば、硝子体内、脈絡膜上、強膜内、または結膜下に埋め込まれてもよい。眼インプラントは、所望の眼の部位に持続的レベルの調節剤、例えば、コネキシン及び／またはパネキシン調節剤を送達し、血液脳関門をバイパスする。インプラントは、例えば、結膜下に、強膜上または強膜内腔内に、強膜と接触して、硝子体腔内に埋め込まれてもよい。いくつかの実施形態において、本発明のコネキシン調節剤と一緒に使用するための強膜内投与は、結膜下、または眼球周囲の投与よりも低い、調節剤の全身性吸収で、眼の後眼部への送達に有用であり得る。インプラントは、眼の後眼部への送達を可能にする硝子体内も置かれてもよい。いくつかの実施形態において、インプラントは、強膜切開術によって硝子体内、例えば、毛様体扁平部上に挿入されてもよい。
結膜下インプラントは、小さい切開によって結膜内に挿入され、強膜と接触して置かれてもよい。総強膜厚の半分の小さい強膜ポケット内に埋め込まれる強膜内デバイスも、使用されてもよく、結膜下または眼球周囲注射よりも少ない薬物の全身性吸収で、眼の後部に送達するのに有用である。
眼インプラントの硝子体内配置は、後眼部の標的組織に直接薬物を送達することも可能にする。インプラントは、例えば、強膜切開術によって硝子体内へ挿入されてもよいか、またはアプリケータを使用して注入されてもよい。インプランテーションの部位は、一般に、網膜の挿入の前方、かつ水晶体の後方である毛様体扁平部上であり、これは、これらの構造体への損傷を最小化するためである。
投薬形態がインプラントであるいくつかの実施形態において、インプラントは、いくつかの実施形態において、コネキシン４３調節剤ならびに生分解性及び生体適合性コポリマーを含む少なくとも１つのコポリマーコーティングと、生分解性ポリエステル及びコネキシン４３調節剤を含む少なくとも１つのコーティングと、を含んでもよい。いくつかの実施形態において、投薬形態は、生分解性ポリエステル及びコネキシン４３調節剤を含む内部コーティングと、コネキシン４３調節剤ならびに生分解性及び生体適合性コポリマーを含む外部コーティングと、を有し得る。
投薬形態コアまたはインプラントは、生分解性ポリマーとブレンドした結合組織を含んでもよい。いくつかの実施形態において、結合組織は、次の結合組織：コラーゲン、エラスチン、及びコンドロイチン－４－硫酸のうちの１つ以上を含んでもよい。いくつかの実施形態において、結合組織は、約５０～９９％のコラーゲン（ｗ／ｗ）の量で存在してもよい。いくつかの実施形態において、生分解性ポリマーは、生分解性ポリエステルポリマーを含んでもよい。いくつかの実施形態において、ポリエステルポリマーは、次の選択される生分解性ポリエステルポリマー：ポリ（Ｌ－ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ＤＬ－ラクチド）、ポリ（ジオキサノン）、ポリ（ＤＬ－ラクチド－ｃｏ－Ｌ－ラクチド）、ポリ（ＤＬ－ラクチド－ｃｏ－グリコリド）、ポリ（グリコリド－ｃｏ－トリメチレンカーボネート）、及びポリ（カプロラクトン）（「ポリカプロラクトン」）のうちの１つ以上を含んでもよい。いくつかの実施形態において、ポリエステルポリマーは、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）を含んでもよい。いくつかの実施形態において、ポリカプロラクトンの量は、約１～５０％のポリカプロラクトン（ｗ／ｗ）の量で存在してもよい。いくつかの実施形態において、ポリカプロラクトンの分子量は、１０，０００Ｄａ～３，０００，０００Ｄａの範囲にわたってもよい。
いくつかの実施形態において、インプラントを含むコラーゲン及びポリマーは、インプラントもしくはコア、または所望のインプラント形態が得られ得る足場シート（ｓｃａｆｆｏｌｄ ｓｈｅｅｔ）を作製するための、繊維になった静電紡糸でもよい。あるいは、堆積の間に繊維配向を制御することにより、所望の形状を有する三次元インプラントが製造され得る。３次元印刷もまた、本発明の埋込み式投薬形態のためのコアを得るために使用されてもよい。あるいは、足場基質は、もしかしたら、天然源から抽出され、限定されないが、クラゲを含む海洋生物から、または限定されないが、ウシ、ウマ、ヒツジ源を含む哺乳類源から抽出されたコラーゲン性の物質等の好適なマトリックスに処理された後に、それ自体を再構成する。
いくつかの実施形態において、インプラントは、調節剤、例えば、コネキシンまたはパネキシンチャネル調節剤、例えば、コネキシン４３またはヘミチャネル調節剤を含む混合物でコーティングされてもよい。この混合物は、調節剤、例えば、パネキシンまたはコネキシンチャネル調節剤を、インプラントに一時的に結合させるポリマー（「結合ポリマー」、または「溶出ポリマー」）も含んでもよい。そのようなポリマーには、限定されないが、次のホモポリマーまたは次の選択されたポリマー：ポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸（ＰＬＧＡ）、ポリ（Ｌ－ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ＤＬ－ラクチド）、ポリ（ジオキサノン）、ポリ（ＤＬ－ラクチド－ｃｏ－Ｌ－ラクチド）、ポリ（ＤＬ－ラクチド－ｃｏ－グリコリド）、ポリ（グリコリド－ｃｏ－トリメチレンカーボネート）、及びポリカプロラクトン（ＰＣＬ）のコポリマーのうちの１つ以上が含まれ得、複数のコーティングが、コネキシン４３調節剤の所望の溶出プロファイルを達成するために、インプラントに適用されてもよい。いくつかの実施形態において、核コーティング層は、溶解した結合ポリマー及び調節剤、例えば、コネキシンまたはパネキシンチャネル調節剤、例えば、コネキシン４３ヘミチャネルまたはギャップ結合調節剤の溶液中に、コアまたは埋め込み式形態を浸漬することによって適用され得る。次いで、コアまたは埋め込み式形態は、溶媒を除去するために、除去され、凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｉｅｄ）（凍結乾燥
（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ））されてもよい。あるいは、コアまたは埋込み式形態は、除去され、真空チャンバ内にコアまたは埋込み式形態を置くことによって急速蒸発に供されてもよい。続いて、第１の結合ポリマー層を含むコアまたは埋込み式形態は、同じまたは別のコネキシンまたはパネキシン調節剤、例えば、調節剤、例えば、コネキシン４３及び／またはパネキシン１チャネル調節剤を含み、先の浸漬で使用したのと同じ結合ポリマー、または異なる結合ポリマーをさらに含む、先の浸漬で使用したものとは別の溶液内に浸漬されてもよい。浸漬及び凍結乾燥のステップは、最大２０回繰り返されて、コアまたは埋込み式形態上にコーティングの１つ以上の層及び／または１つ以上のコーティングを作成してもよい。
当分野の実務者は、抗コネキシン剤をコアまたは埋込み式形態に一時的に結合させるポリマーが、インプラントにおける薬物溶出に好適な任意のポリマーを含んでもよいことを理解するであろう。そのようなポリマーは、無毒である（これらの有益な効果に釣り合っている）、直接代謝されるか、またはこれらの加水分解生成物が代謝される、及び容易に滅菌され得るという特性を呈する。そのような適用可能な物質の再考察は、Ｊ．Ｃ．Ｍｉｄｄｌｅｔｏｎ，Ａ．Ｊ． Ｔｉｐｔｏｎ，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，２１（２０００），２３３５－２３４６に見出され、参照により本明細書に組み込まれる。
制御または持続的放出のための非生分解性または生分解性ポリマーデバイスも、本発明の方法で使用されてもよい。非生分解性インプラントは、所望の調節剤（複数可）の定常の制御された放出を提供することができる。生分解性インプラントは、所望の形状に製造され得、オフィスまたは外来患者処置で注射され得、除去を必要としない。
非生分解性（貯蔵部）インプラント
貯蔵部インプラントは、一般にケイ素、エチレン酢酸ビニル（ＥＶＡ）、またはポリビニルアルコール（ＰＶＡ）等の非官能性物質で取り囲まれたペレット状の薬物コアで作られており、これらのインプラントは非生分解性であり、かつ数カ月間から数年間、連続的量の薬物を送達することができる
いくつかの実施形態において、本発明の調節剤は、持続的期間、例えば、１カ月超、または２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、３０カ月超、または３６ヶ月超、コネキシン調節剤を、単独で、または他の眼神経障害性治療薬、と組み合わせて送達するのに好適な埋め込み式の非生分解性貯蔵部投薬形態として製剤化され得る。いくつかの実施形態において、貯蔵部投薬形態は、本明細書に記載される１つ以上の調節剤を、単独で、または本明細書に記載される他の眼神経障害性治療薬と組み合わせて含む、ポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）等のケイ素、エチレン酢酸ビニル（ＥＶＡ）、またはポリビナイルアルコール（ｐｏｌｙｖｉｎａｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ）（ＰＶＡ）を含む非反応性コーティングで取り囲まれたコアを含んでもよい。
生分解性マトリックスインプラント
本発明の投薬形態は、最大６カ月以上持続する持続的期間にわたる、調節剤、例えば、コネキシン及び／またはパネキシンチャネル調節剤の負荷投与量、ならびに調節剤の徐々に少なくなる投与量の送達において有用なコポリマーインプラントも含み得る。コポリマーインプラントは、水及び二酸化炭素に対して生分解性である、コポリマーであるポリ－乳酸（ＰＬＡ）及び／またはポリ－乳酸－グリコール酸（ＰＬＧＡ）から作成されてもよい。インプラントからの調節剤の放出の速度及び程度は、ラクチド（より緩徐な放出）及びグリコリド（より早い放出）の相対濃度を変えることによって、ポリマー重量比を変えることによって、ポリマーの追加のコーティングを追加することによって減少させることができる。非生分解性インプラントとは異なり、生分解性インプラントは、除去を必要と
せず、ポリマーＰＬＡ／ＰＬＧＡの比率に応じて、投与量と、数週間の持続期間から、数カ月から数年以上のより持続的な放出までの治療と、に柔軟性を提供するいくつかの態様において、生分解性投薬形態は、対象の疾患の進行によって個人化され得る。いくつかの態様において、生分解性マトリックスインプラントは、例えば、Ｓ．Ｐｆｌｕｇｆｅｌｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＡＣＳ Ｎａｎｏ，９（２），ｐｐ１７４９－１７５８（２０１５）に記載されるもの等の溶解可能なディスク材料であり得る。
マイクロニードル
いくつかの実施形態において、本発明の調節剤化合物及び製剤は、マイクロニードルを介して投与され得る。マイクロニードルは、Ｋｉｍ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ．
Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．Ｎｏｖｅｍｂｅｒ １３，２０１４ ｖｏｌ． ５５ ｎｏ． １１ ７３７６－７３８６に記載されるとおり、個々の針またはミクロンサイズの針のアレイである。いくつかの実施形態において、マイクロニードルは、長さが５００～７５０ミクロンであり得、本明細書に記載される製剤でコーティングされ得る。マイクロニードルのアレイは、本発明の製剤の投与のために使用され得る。中実マイクロニードルのシャフトは、本発明の製剤でコーティングされ得、次いでこれは、挿入後に眼の領域内で溶解する。
いくつかの実施形態において、調節剤、例えば、コネキシン４３及び／またはパネキシン１チャネル調節剤は、例えば、対象に投与され、眼または眼の特定の区画に治療的に有効な量のコネキシン４３調節剤を提供する。いくつかの事例において、調節剤（複数可）は、局所的、硝子体内、結膜下、または眼周囲のテノン嚢下投与によって投与されてもよい。いくつかの態様において、投与はまた、腹腔内または全身投与の他の形態でもよい。いくつかの実施形態において、マイクロニードル、マイクロニードルアレイ、針、またはインプラントが、調節剤（複数可）の投与のために使用されてもよい。いくつかの実施形態において、マイクロニードルは、眼、あるいは眼の特定の区画または構造体、例えば、脈絡膜、脈絡膜上の腔、または網膜、もしくは強膜に、本明細書に記載される調節剤、例えば、コネキシン４３調節剤、パネキシンチャネル調節剤、ギャップ結合調節剤、及び／またはパネキシン調節剤を投与するために使用されてもよい。例えば、中空マイクロニードルが、強膜、脈絡膜上の腔内に挿入されてもよく、調節剤が眼のその場所または区画に投与及び／または注入されてもよい。いくつかの実施形態において、脈絡膜への投与は、注入された薬物が脈絡膜上の腔内で円周方向に、脈絡膜、網膜、黄斑、視神経、ならびに眼の後部の他の構造体及び区画に向かって流れる脈絡膜上の腔に、調節剤を投与することによって行なわれてもよい。いくつかの実施形態において、マイクロニードルは、脈絡膜を穿通せずに強膜をとおって脈絡膜上の腔内へ挿入されてもよい。いくつかの実施形態において、マイクロニードルは、注入後に引っ込められてもよい。いくつかの実施形態において、マイクロニードルの穿通は、眼の組織、脂質、及び／または区画内の所望の深度に制御されてもよい。いくつかの実施形態において、マイクロニードルも、本発明の調節剤または他の眼薬物作用剤でコーティングされてもよい。いくつかの態様において、マイクロニードルによって投与される調節剤及び／または眼薬物作用剤の体積は、約１から、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０ ４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５５、２６０、２６５、２７０、２７５、２８０、２９５、もしくは３００μｌ、または列挙される番号のうちのいずれか２つの間の体積の任意の範囲、または任意の２つの列挙される番号の間の任意の体積でもよい。例えば、ナノ粒子またはミク
ロ粒子製剤、またはマイクロニードルによって注射可能な他の製剤を含む、本発明の任意の好適な製剤は、マイクロニードル注射によって投与されてもよい。
いくつかの態様において、マイクロニードルは、基部を含み、これから、典型的に基部と垂直の方向に１つ以上のマイクロニードルが延在する。マイクロニードルは、中実または中空であり得る。中空マイクロニードルは、例えば、マイクロニードルの中心をとおる単一の真っ直ぐな内径、または複数の内径を含み得る。いくつかの実施形態において、中空マイクロニードルは、マイクロニードルをとおる複雑な経路をたどる内径、内径（複数可）からの複数の入口点及び出口点、ならびにマイクロニードルの基部からシャフトの出口点及び／またはマイクロニードルの先端部までの１つ以上の連続した経路を形成する交差する内径または内径のネットワークを含んでもよい。例えば、米国特許第７，９１８，８１４号、同第８，１９７，４３５号、同第８，６３６，７１３号、及び同第８，８０８，２２５号を参照されたい。いくつかの実施形態において、マイクロニードルは、長さが５０～２０００ミクロン、幅（直径）が５０～５００ミクロンであり得、本明細書に記載される製剤でコーティングされ得る。マイクロニードルは、シャフト及び先端部を含み得る。シャフト及び先端部は、接触していてもよい。マイクロニードルの先端部は、直線、または先細になり得る。先細のマイクロニードル先端部は、尖った先端、または尖っていない端であり得る。いくつかの実施形態において、ドリルマイクロニードルも、使用されてもよい。例えば、米国公開第２００５０１３７５２５号を参照されたい。他のマイクロニードルは、例えば、米国特許公開第２００６／００８６６８９号、同第２００６／００８４９４２号、同第２００５／０２０９５６５号、同第２００２／００８２５４３号、米国特許第６，３３４，８５６号、同第６，６１１，７０７号、及び同第６，７４３，２１１号に記載されている。
マイクロニードル及び／または眼インプラントは、金属、ガラス、半導体材料、セラミック、またはポリマー、例えば、薬学的等級のステンレススチール、キン、チタン、ニッケル、鉄、金、スズ、クロム、銅、及びこれらの合金を含む１つ以上の好適な生体適合性材料を含み得る。マイクロニードル及び／または眼インプラントで使用するためのポリマーは、生分解性または非生分解性であり得る。好適な生体適合性、生分解性ポリマーの例としては、ポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸（ＰＬＧＡ）、ポリ（Ｌ－ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ＤＬ－ラクチド）、ポリ（ジオキサノン）、ポリ（ＤＬ－ラクチド－ｃｏ－Ｌ－ラクチド）、ポリ（ＤＬ－ラクチド－ｃｏ－グリコリド）、ポリ（グリコリド－ｃｏ－トリメチレンカーボネート）、及びポリカプロラクトン（ＰＣＬ）、ポリ無水物、ポリオルトエステル、ポリエーテルエステル、ポリエステルアミド、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、ポリアクリルアミド、ポリアクリレート、ポリウレタン、ならびにこれらのコポリマー及びブレンド及び架橋変異体が挙げられる。マイクロニードルは、本発明の製剤の投与のための１つ以上のシャフトを含み得る。シャフトは、多孔質または非多孔質であり得る。シャフトは、中空または中実であり得る。マイクロニードルは、シャフトとは異なる材料で構成される先端部をさらに含み得る。マイクロニードルの先端部は、（デュロメータによって測定して）マイクロニードルのシャフトとは異なる硬度のものでもよい。マイクロニードルの先端部またはシャフトまたはこれらの両方は、生分解性または非生分解性であり得る。非生分解性マイクロニードル先端部またはシャフトは、金属、ガラス、半導体材料、セラミック、またはポリマーで構成され得る。好適な金属の例としては、薬学的等級のステンレススチール、チタン、金、銀、ニッケル、鉄、金、スズ、クロム、銅、及びこれらの合金が得られる。代表的な非生分解性ポリマーには、ＦＤＡ認可済み医療デバイスの製造で既知の様々な熱可塑性または他のポリマー構造材料が含まれる。例には、ナイロン、ポリエステル、ポリカーボネート、ポリアクリレート、エチレン－酢酸ビニル及び他のアシル置換酢酸セルロースのポリマー、非生分解性ポリウレタン、ポリスチレン、ポリビニルクロリド、ポリビニルフッ化物、ポリ（ビニルイミダゾール）、クロロスルホネートポリオレフィン、エチレンオキシド、これらのブレンド及びコポリマー
及び架橋変異体が含まれる。生分解性マイクロニードル先端部またはシャフトは、投与部位に存在し得る任意の残留マイクロニードル材料が対象の体内で溶解し得るように、本明細書に記載される製剤の投与後に溶解するように製剤化され得る。例えば、マイクロニードルは、注射の間、（任意選択的に、温度に応じて）固形材料であり、注射後（及び任意選択的に対象の温度に暴露した後）部分的または完全に分解するように配合される材料でできてい得る。そのようなマイクロニードルは、任意選択的に、水溶性ポリマー、有機物質中で水溶性、または氷でできてい得る。生分解性マイクロニードルは、たとえ眼組織内へ不用意に折れて取れたとしても、本質的に無害であるように、非生分解性のものと比較して安全性のレベルの上昇を提供し得る。
マイクロニードルは、本明細書に記載される調節剤化合物及び製剤を投与するために、眼の任意区画または構造体に挿入され得る。マイクロニードルは、本明細書に記載される製剤の投与のために、脈絡膜、網膜、強膜、脈絡膜上の腔、ブルッフ膜、網膜色素上皮、網膜下腔、黄斑、視神経乳頭、視神経、毛様体、小柱網、房水、またはガラス体液のうちの１つ以上内へ挿入され得る。例えば、マイクロニードルは、強膜内へ垂直に挿入され得、短い穿通の距離で脈絡膜上の腔に達する。脈絡膜上領域内への本明細書に記載される製剤の送達は、大きい組織面積上への製剤の送達を可能にし、単一のカニューレ針投与と比較して、単回投与で組織を標的とするのが困難な標的指向化を提供する。一実施形態において、投与は、眼の１つの特定の構造体または区画に制限され得る。マイクロニードル投与が限局化される眼の特定の構造体または区画は、脈絡膜、網膜、強膜、脈絡膜上の腔、ブルッフ膜、網膜色素上皮、網膜下腔、黄斑、視神経乳頭、視神経、毛様体、小柱網、房水、またはガラス体液のうちの１つであり得る。理論に束縛されるものではないが、脈絡膜上の腔に入ったら、投与された製剤は、挿入部位から、眼の後眼部内の網膜脈絡膜組織及び視神経に向かって、ならびにブドウ膜及び毛様体に向かって前側に円周方向に流れると考えられる。さらに、投与された製剤の一部分は、マイクロニードル挿入部位近くの強膜内に残り得、その後脈絡膜上の腔及び他の隣接した組織内へ拡散し得る、投与された製剤の追加貯蔵部の役割を果たす。本明細書で定義される場合、上脈絡膜層（ｓｕｐｒａｃｈｏｒｏｉｄ）または上脈絡膜層（ｓｕｐｒａｃｈｏｒｏｉｄｉａ）としても知られる「脈絡膜上の腔」は、強膜と脈絡膜との間に設けられた眼の領域内の潜在的腔を描写する。
マイクロニードルを使用した本明細書に記載される製剤の投与は、眼の標的領域または構造体内での調節剤、例えば、コネキシンまたはパネキシンチャネル調節剤の長期にわたる持続期間を提供し得る。マイクロニードル送達方法は、製剤が眼組織に製剤の局所的適用を介して投与された場合よりも長い、投与された製剤の持続時間を提供する。
マイクロニードルを用いた眼の眼の組織または区画への本発明の調節剤及び／または眼薬物作用剤の投与は、眼組織内へマイクロニードルを挿入し、眼組織内へ薬物製剤を沈着させることを含んでもよい。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのマイクロニードルは、組織脂質を越えて穿通せずに、眼の組織内へ挿入される。一実施形態において、投与の方法は、挿入ステップ後、ならびに薬物製剤の沈着の前及び／またはその間に、中空マイクロニードルを部分的に引っ込めることをさらに含み得、投与の方法は、いくつかの実施形態において、調節剤及び／または眼薬物作用剤の注入のための空間を形成し得る。いくつかの実施形態において、調節剤は、例えば、コネキシン調節剤、ギャップ結合調節剤、ま
たはパネキシン調節剤もしくはパネキシンチャネル調節剤である。
マイクロニードルを介した投与は、注入圧を制御することによって制御され得る。注入圧は、送達される薬物の量を併せて決定する。いくつかの実施形態において、注入圧は、少なくとも１２５ｋＰａ、少なくとも１５０ｋＰａ、少なくとも１７５ｋＰａ、少なくとも２００ｋＰａ、少なくとも２５０ｋＰａ、または少なくとも３００ｋＰａでもよい。マイ
クロニードルをとおる注入圧は、拡散、細管作用、機械的ポンプ、電気浸透、電気泳動、対流、または他の推進力によって生成され得る。注入圧は、任意選択的に連続圧力を制御するために、背圧を測定することによって監視され得る。注入圧は、任意選択的に、マイクロコントローラ、センサ、機械力フィードバック回路、アクチュエータ、弁、またはポンプによって制御され得る。
コネキシンまたはパネキシン調節剤と、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤または他の作用剤との組み合わせ
開放隅角緑内障は、眼からの流体（房水）排出に対する異常に高い抵抗を特徴とする。正常な抵抗は、眼の一体性のために、眼の形状を維持するのに十分な眼圧を提供するために必要である。この抵抗は、密なアクトミオシン細胞骨格網、コラーゲンの梁、及び細胞外マトリックスを有する特定の細胞からなる複雑な多層状組織である、小柱網によって提供される。緑内障性眼において、房水産生の速度が一定のままである一方で、流出に対する抵抗の上昇が、眼圧の上昇の要因である。Ｒｈｏ－キナーゼは、Ｒｈｏの重要な下流介在物質として機能し、広範に発現する。Ｒｈｏ－キナーゼ酵素は、挙げられる、モエシン、ナトリウムイオン－プロトンイオン交換体１（ＮＨＥｌ）、ＬＩＭ－キナーゼ、及びビメンチン等の細胞骨格タンパク質と、ミオシン軽鎖ホスファターゼ結合サブユニット（ＭＹＰＴ－Ｉ）、ＣＰＩ－１７、ミオシン軽鎖、及びカルポニン等の収縮性タンパク質と、タウ及びＭＡＰ－２、等の微小管関連タンパク質と、ＣＲＭＰ－２、等の神経細胞成長円すい関連タンパク質と、血清応答因子等の転写因子と、を含むいくつかの基質の機能を制御するセリンキナーゼ／トレオニンキナーゼである（Ｌｏｉｒａｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｃｉｒｃ． Ｒｅｓ． ９８：３２２－３３４（２００６））。Ｒｈｏ－キナーゼは、ＲｈｏＡによって誘導される細胞形質転換にも必要である。Ｒｈｏ－キナーゼは、複数のシグナル経路の中間物であり、細胞骨格再配列、アクチンストレス線維形成、増殖、走化性、細胞質分裂、サイトカイン及びケモカイン分泌、内皮または上皮細胞結合一体性、アポトーシス、転写活性化、及び平滑筋収縮を含む様々な細胞現象を制御する。これらの細胞作用の結果として、ｒｈｏ－キナーゼ酵素は、血管収縮、気管支収縮、組織リモデリング、炎症、浮腫、血小板凝集、及び増殖性障害等の生理的プロセスを制御する。Ｒｈｏキナーゼは、ＩＯＰを維持するために小柱網に作用する。したがって、Ｒｈｏキナーゼの抑制は、小柱網をとおる流出量を上昇させ、したがって、ＩＯＰを減少させるためのコネキシン及び／もしくはパネキシン、またはヘミチャネル及び／もしくはパネキシンチャネル調節とは異なる機構を介してＩＯＰを減少させる。
いくつかの実施形態において、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤は、正常眼圧緑内障を治療するために使用される。
Ｒｈｏキナーゼの阻害剤は、小柱網をとおる房水排出を上昇させることにより、哺乳動物におけるＩＯＰを減少させることが示されている（Ｔｉａｎ ａｎｄ Ｋａｕｆｍａｎ，Ａｒｃｈ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． １２２：１１７１－１１７８，２００４）。発明者は、調節剤、例えば、コネキシンまたはパネキシンチャネル調節剤とのＲｈｏキナーゼ阻害剤の共投与が対象においてＩＯＰを減少させるための２つの独立した機構に作用し、それによりあらゆる単剤よりも効き目がある治療をもたらすことを理解している。
調節剤、例えば、コネキシンまたはパネキシンチャネル調節剤との共投与のための追加の作用剤は、限定されないが、ランタノプロスト（ｌａｎｔａｎｏｐｒｏｓｔ）、抗ＶＥＧＦ化合物、チモロール、ブリモニジン、ブリモニジンタルタレート（Ｂｒｉｍｏｎｉｄｉｎｅ ｔａｒｔａｒａｔｅ）、レスキュラ（ウノプロストンイソプロピル眼科用液剤、０．１５％）、ドルゾラミド、Ｒｏｃｌａｔａｎ、及びＡＲ－１３５３３（Ａｅｒｉｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｂｅｄｍｉｎｓｔｅｒ，ＮＪ）を含む、さもなければＩＯＰを減少させる他の治療を含み得る。コネキシンまたはパネキシンチャネル調節以外の
機構に作用することにより、眼の障害を治療するための多剤の共投与は、（１）投与量全体の減少、（２）副作用全体の軽減、（３）治療頻度全体の低減、及び（４）患者順守の上昇、したがって治療の有効性の上昇等の相乗効果をもたらし得る。
いくつかの態様において、本発明で使用するためのＶＥＧＦ調節剤は、ＶＥＧＦを抑制及び／もしくは遮断するか、またはＶＥＧＦの上流作用薬を抑制及び／もしくは遮断する拮抗薬である。いくつかの態様において、ＶＥＧＦ拮抗薬には、例えば、ＶＥＧＦに結合し、抑制する拮抗薬、ＶＥＧＦの発現を抑制する化合物、及び／あるいはＶＥＧＦ阻害剤を含むか、またはＶＥＧＦを遮断もしくは抑制するタンパク質もしくはアンチセンスポリヌクレオチドをコードするウイルスベクターが含まれる。いくつかの態様において、ＶＥＧＦ及び／またはＶＥＧＦの上流作用薬を抑制する種は、例えば、抗体もしくは抗体断片、ナノボディ、ペプチドもしくはペプチド模倣薬、受容体断片、遺伝子組換え融合タンパク質、アプタマー、小分子、または一本鎖可変領域断片（ｓｃＦｖ）である。いくつかの態様において、ＶＥＧＦ拮抗薬抗体は、例えば、Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標）（ラニビズマブ）、及び／またはＡｖａｓｔｉｎ（商標）（ベバシズマブ）である。
いくつかの態様において、ＶＥＧＦ拮抗薬は、ＶＥＧＦに対する抗体、例えば、Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（商標）（ラニビズマブ）、またはＡｖａｓｔｉｎ（商標）（ベバシズマブ）であり得る。
いくつかの態様において、ＶＥＧＦに結合し、したがってＶＥＧＦを抑制するＶＥＧＦ種の上流作用薬に対するアンチセンスであるＶＥＧＦ拮抗薬は、ＲＴＰ８０１阻害剤またはＲＥＤＤ１遮断薬であり得る。いくつかの態様において、ＲＴＰ８０１阻害剤またはＲＥＤＤ１遮断薬は、ＲＥＤＤ１４ＮＰまたはＲＴＰ８０１ｉ）としても知られる（Ｑｕａｒｋ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ及びＰｆｉｚｅｒ製の）ＰＦ－６５５であり得る。いくつかの態様において、ＲＥＤＤ１遮断薬は、ｍＲＮＡ配列５’－ＡＧＣＵＧＣＡＵＣＡＧＧＵＵＧＧＣＡＣ－３’（配列番号３２３）を有し得る。
本発明のいくつかの態様において、ＶＥＧＦ拮抗薬は、例えば、ペプチドまたはペプチド摸倣薬、例えば、ペガプタニブナトリウム（Ｍａｃｕｇｅｎ（商標））、及びＡＧＮ－１５０９９８である。Ｍａｃｕｇｅｎ（商標）は、修飾ＲＮＡ配列、α，α’－［４，１２－ジオキソ－６－［［［５－（ホスホオノキシ（ｐｈｏｓｐｈｏｏｎｏｘｙ））ペンチル］アミノ］カルボニル］－３，１３－ジオキサ－５，１１－ジアザ－１，１５－ペンタデカンジイル］ビス［ω－メトキシポリ（オキシ－１，２－エタンジイル）］，ナトリウム塩を有する（（２’－デオキシ－２’－フルオロ）Ｃ－Ｇｍ－Ｇｍ－Ａ－Ａ－（２’－デオキシ－２’－フルオロ）Ｕ－（２’－デオキシ－２’－フルオロ）Ｃ－Ａｍ－Ｇｍ－（２’－デオキシ－２’－フルオロ）Ｕ－Ｇｍ－Ａｍ－Ａｍ－（２’－デオキシ－２’－フルオロ）Ｕ－Ｇｍ－（２’－デオキシ－２’－フルオロ）Ｃ－（２’－デオキシ－２’－フルオロ）Ｕ－（２’－デオキシ－２’－フルオロ）Ｕ－Ａｍ－（２’－デオキシ－２’－フルオロ）Ｕ－Ａｍ－（２’－デオキシ－２’－フルオロ）Ｃ－Ａｍ－（２’－デオキシ－２’－フルオロ）Ｕ－（２’－デオキシ－２’－フルオロ）Ｃ－（２’－デオキシ－２’－フルオロ）Ｃ－Ｇｍ－（３’→３’）－ｄＴ），５’－エステル（配列番号３２４）である。ＡＧＮ－１５０９９８／ＭＰ０１１２は、ＶＥＧＦと結合する小タンパク質である、抗ＶＥＧＦ ＤＡＲＰｉｎである。
本発明のいくつかの態様において、ＶＥＧＦ拮抗薬は、例えば、アフリベルセプト（Ｅｙｅｌｅａ（商標））またはコンベルセプト等の遺伝子組換え融合タンパク質である。アフリベルセプトは、ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分と融合したヒトＶＥＧＦ受容体１及び２細胞外ドメインの部分からなる遺伝子組換え融合タンパク質である。コンベルセプトは、遺伝子組換え融合タンパク質は、ヒトＩｇＧ１の定常領域（Ｆｃ）に対するＶＥＧＦＲ１の第２
のＩｇドメイン、ならびにＶＥＧＦＲ２の第３及び第４Ｉｇドメインで構成される。
いくつかの態様において、ｓｃＦｖ ＶＥＧＦ拮抗薬は、例えば、ＥＳＢＡ１００８である。ＥＳＢＡ１００８は、ＶＥＧＦＡを標的とするヒト化モノクローナル抗体単鎖ＦＶ（ｓｃＦｖ）抗体断片である。
いくつかの態様において、ウイルスベクターＶＥＧＦ拮抗薬は、（「ＡＶＡ－１０１」としても知られる）ＡＡＶ－ｓＦＬＴ０１であり得る。ＡＡＶ２－ｓＦｌｔ０１は、ＶＥＧＦと結合する分泌されたキメラタンパク質であるｓＦＬＴ０１のために構築される遺伝子を担持するアデノ随伴ウイルスベクターである。ｓＦＬＴ０１は、ＡＡＶ２－ｓＦｌｔ０１を産生するためにアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）と組み合わせた、ヒト免疫グロブリンＧ１重鎖Ｆｃ断片（ｓＦｌｔ０１）と結合したＦｌｔ－１のドメイン２からなるＶＥＧＦ結合タンパク質である。
本発明のいくつかの態様において、ＶＥＧＦ拮抗薬は、小分子、例えば、バタラニブ、セジラニブ、ＡＬ３９３２４、パゾパニブ、ＴＧ１００５７２、またはＴＧ１００８０１であるバタラニブ（Ｎ－（４－クロロフェニル）－４－（ピリジン－４－イルメチル）フタラジン－１－アミン）は、ＰＴＫ７８７、ＰＴＫ／ＺＫ、またはＣＧＰ ７９７８７としても知られる。ＡＺＤ ２１７１、Ｒｅｃｅｎｔｉｎ（登録商標）、ＺＤ ２１７１、またはＣＡＳ番号２８８３８３－２０－０としても知られるセジラニブは、４－［（４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－インドール－５－イル）オキシ］－６－メトキシ－７－［３－（１－ピロリジニル）プロポキシ］－キナゾリンとしても知られる。Ｌｉｎｉｆａｎｉｂ、ＣＡＳ番号７９６９６７－１６－３、（ＨＣｌ塩として）１１４５６５５－５８－８、または（トリフルオロ酢酸塩として）７９６９６７－１７－４としても知られるＡＬ３９３２４は、１－［４－（３－アミノ－１Ｈ－インダゾール－４－イル）フェニル］－３－（２－フルオロ－５－メチルフェニル）尿素としても知られる。Ｖｏｔｒｉｅｎｔ（登録商標）、Ａｒｍａｌａ（登録商標）、またはＰａｔｏｒｍａ（登録商標）としても知られるパゾパニブは、５－［［４－［（２，３－ジメチル－２Ｈ－インダゾール－６－イル）メチルアミノ］－２－ピリミジニル］アミノ］－２－メチルベンゼンスルホンアミド一塩酸塩としても知られる。ＴＧ１００８０１は、ＴＧ１００５７２のプロドラッグ版であり、４－クロロ－３－（５－メチル－３－（（４－（２－（ピロリジン－１－イル）エトキシ）フェニル）－アミノ）ベンゾ［ｅ］［１，２，４］トリアジン－７－イル）ｐ；４－クロロ－３－［５－メチル－３－［［４－［２－（１－ピロリジニル）エトキシ］フェニル］アミノ］－１，２，４－ベンゾトリアジン－７－イル］フェノール１－安息香酸としても知られる。
いくつかの態様において、本発明の方法で使用するためのｍＴＯＲ阻害剤は、例えば、マクロライドまたは小分子である。いくつかの実施形態で、マクロライドｍＴＯＲ阻害剤は、例えば、テムシロリムス、シロリムス、またはエベロリムスである。Ｔｏｒｉｓｅｌ（商標）、またはＣＣＩ－７７９としても知られるテムシロリムスは、（１Ｒ，２Ｒ，４Ｓ）－４－｛（２Ｒ）－２－［（３Ｓ，６Ｒ，７Ｅ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１４Ｓ，１５Ｅ，１７Ｅ，１９Ｅ，２１Ｓ，２３Ｓ，２６Ｒ，２７Ｒ，３４ａＳ）－９，２７－ジヒドロキシ－１０，２１－ジメトキシ－６，８，１２，１４，２０，２６－ヘキサメチル－１，５，１１，２８，２９－ペンタオキソ－１，４，５，６，９，１０，１１，１２，１３，１４，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，２８，２９，３１，３２，３３，３４，３４ａ－テトラコサヒドロ－３Ｈ－２３，２７－エポキシピリド［２，１－ｃ］［１，４］オキサザシクロヘントリアコンチン（ｏｘａｚａｃｙｃｌｏｈｅｎｔｒｉａｃｏｎｔｉｎ）－３－イル］プロピル｝－２－メトキシシクロヘキシル３－ヒドロキシ－２－（ヒドロキシメチル）－２－メチルプロパノエートとしても知られる。シロリムスは、ラパマイシン、Ｒａｐａｍｕｎｅ（商標）、ＡＹ－２２９８９、Ｐｅｒｃｅｉｖａ（商標）
、ＷＹ－０９０２１７、または（３Ｓ，６Ｒ，７Ｅ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１４Ｓ，１５Ｅ，
１７Ｅ，１９Ｅ，２１Ｓ，２３Ｓ、２６Ｒ，２７Ｒ，３４ａＳ）－９，１０，１２，１３，１４，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，３２，３３，３４，３４ａ－ヘキサデカヒドロ－９，２７－ジヒドロキシ－３－［（１Ｒ）－２－［（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－３－メトキシシクロヘキシル］－１－メチルエチル］－１０，２１－ジメトキシ－６，８，１２，１４，２０，２６－ヘキサメチル－２３，２７－エポキシ－３Ｈ－ピリド［２，１－ｃ］［１，４］－オキサアザシクロヘントリアコンチン－１，５，１１，２８，２９（４Ｈ，６Ｈ，３１Ｈ）－ペントンとしても知られる。Ａｆｉｎｉｔｏｒ（商標）、Ｃｅｒｔｉｃａｎ（商標）、Ｖｏｔｕｂｉａ（商標）、またはＺｏｒｔｒｅｓｓ（商標）としても知られるエベロリムスは、ジヒドロキシ－１２－［（２Ｒ）－１－［（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ）－４－（２－ヒドロキシエトキシ）－３－メトキシシクロヘキシル］プロパン－２－イル］－１９，３０－ジメトキシ－１５，１７，２１，２３，２９，３５－ヘキサメチル－１１，３６－ジオキサ－４－アザトリシクロ［３０．３．１．０ヘキサトリアコンタ－１６，２４，２６，２８－テトラエン－２，３，１０，１４，２０－ペントンとしても知られる。本発明は、例えば、パロミド５２９、ＸＬ３８８、またはダクトリシブ等の小分子ｍＴＯＲ阻害剤も取り上げる。パロミド５２９は、３－（４－メトキシベンジルオキシ）－８－（１－ヒドロキシエチル）－２－メトキシ－６Ｈ－ベンゾ［ｃ］クロメン－６－オンとしても知られる。ＸＬ３８８は、［７－（６－アミノ－３－ピリジニル）－２，３－ジヒドロ－１，４－ベンゾオキサゼピン－４（５Ｈ）－イル］［３－フルオロ－２－メチル－４－（メチルスルホニル）フェニル］－メタノンとしても知られる。ＢＥＺ２３５、またはＮＶＰ－ＢＥＺ２３５としても知られるダクトリシブは、２－メチル－２－（４－（３－メチル－２－オキソ－８－（キノリン－３－イル）－２，３－ジヒドロイミダゾ［４，５－ｃ］ｑｕｉｎｏｌｉｎ－１－イル）フェニル）プロパンニトリルとしても知られる。
いくつかの態様において、本明細書の方法で使用するためのＰＤＧＦ調節剤には、例えば、（Ｅ－１００３０としても知られる）Ｆｏｖｉｓｔａ（商標）、抗血小板誘導成長因子（抗ＰＤＧＦ－Ｂ）アプタマーが含まれる。
いくつかの態様において、本明細書の方法で使用するためのＰＥＤＦ調節剤には、例えば、ＡｄＧＶＰＥＤＦ．１１Ｄ（ＧｅｎＶｅｃ）が含まれる。ＡｄＧＶＰＥＤＦ．１１Ｄは、ＰＥＤＦに対する遺伝子を含むアデノウイルスベクターである。ＡｄＧＶＰＥＤＦ．１１Ｄは、アデノベクターを使用して、標的細胞にＰＥＤＦ遺伝子を送達し、治療された眼でＰＥＤＦの局部的産生を引き起こす。色素上皮誘導因子（ＰＥＤＦ）は、新しい血管増殖の強力阻害剤である。ＰＥＤＦは、セルピンＦ１としても知られる。
いくつかの態様において、本明細書の方法で使用するためのＳ１Ｐ産生遮断薬には、例えば、ＬＴ１００９、Ａｓｏｎｅｐ、Ｓｐｈｉｎｇｏｍａｂ（商標）、またはｉＳＯＮＥＰ（商標）としても知られるソネプシズマブが挙げられる。ｉＳＯＮＥＰ（商標）は、スフィンゴシン１－リン酸塩（Ｓ１Ｐ）と結合するヒト化モノクローナル抗体である。
いくつかの態様において、調節剤、例えば、本発明のギャップ結合、コネキシン、及び／またはパネキシンチャネル調節剤のうちの１つ以上と組み合わせて使用するための眼治療薬は、例えば、スクアラミンである。スクアラミンは、Ｅｖｉｚｏｎ（商標）、または（１Ｓ，２Ｓ，５Ｓ，７Ｒ，９Ｒ，１０Ｒ，１１Ｓ，１４Ｒ，１５Ｒ）－Ｎ－｛３－［（４－アミノブチル）アミノ］プロピル｝－９－ヒドロキシ－２，１５－ジメチル－１４－［（２Ｒ，５Ｒ）－６－メチル－５－（スルホオキシ）ヘプタン－２－イル］テトラシクロ［８．７．０．０＾｛２，７｝．０＾｛１１，１５｝］ヘプタデカン－５－アミニウムとしても知られる。
いくつかの態様において、本明細書の方法で使用するためのチューブリン結合剤には、例えば、コンブレタスタチン、コンブレタスタチンＡ－４リン酸塩、コンブレスタチン（ｃｏｍｂｒｅｓｔａｓｔｉｎ）誘導体、またはＯＣ－１０Ｘが含まれる。コンブレタスタチンは、２－メトキシ－５－［（Ｚ）－２－（３，４，５－トリメトキシ－フェニル）－ビニル］－フェノールとしても知られる。ＯＣ－１０Ｘ（ＯｃｕＣｕｒｅ，Ｒｏａｎｏｋｅ，ＶＡ）は、低分子量キナゾリノンである。チューブリン結合剤は、Ｏ’Ｂｏｙｌｅ，Ｎ．ｅｔ ａｌ．． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ５３（２４）：８５６９－８５８４，２０１０． ｄｏｉ：１０．１０２１／ｊｍ１０１１１５ｕ． ＰＭＩＤ ２１０８０７２５に記載されるように、コンブレスタチン（ｃｏｍｂｒｅｓｔａｓｔｉｎ）のベータ－ラクタム系誘導体であり得これは、参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの態様において、本明細書の方法で使用するためのインテグリン阻害剤には、例えば、ＡＬＧ－１００１、ボロシキシマブ、またはＪＮＪ－２６０７６７１３が含まれる。ＡＬＧ－１００１（Ａｌｌｅｇｒｏ Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃｓ）は、小ペプチドである。Ｍ２００、またはＯｐｔｈｏｔｅｃ（商標）としても知られるボロシキシマブは、α５β１インテグリンと結合し、α５β１インテグリンの機能的活性を抑制するキメラモノクローナル抗体である。ＪＮＪ－２６０７６７１３は、テトラヒドロキノリン含有αＶβ３／αＶβ５インテグリン拮抗薬であり、３－キノリンプロパン酸、１，２，３，４－テトラヒドロ－ベータ－（（１－（１－オキソ－３－（１，５，６，７－テトラヒドロ－１，８－ナフチリジン－２－イル）プロピル）－４－ピペリジニル）メチル）－、（ベータＳ，３Ｓ）－としても知られる。
調節剤、例えば、本発明のギャップ結合、コネキシン、及び／もしくはパネキシン調節剤、またはパネキシンチャネル調節剤のうちの１つ以上と組み合わせて使用するための眼治療薬には、例えば、補体調節剤、ならびに例えば、地図状萎縮、乾燥型ＡＭＤ、非滲出型ＡＭＤ、及び／またはドルーゼン発生の治療に有用な他の治療薬も含まれる。
１つ以上の調節剤、例えば、ギャップ結合、コネキシン、及び／もしくはパネキシン調節剤、またはパネキシンチャネル調節剤と組み合わせて眼治療薬として使用するための補体調節剤は、例えば、コンプスタチン、ＴＰ１０、エクリズマブ、ＡＲＣ１９０５、ＪＰＥ－１３７５、ＰＭＸ５３、ランパリズマブ、またはｒｈＣＦＨｐである。ＡＬ－７８８９８ＡまたはＰＯＴ－４としても知られるコンプスタチンは、配列－［ＩＣＶＶＱＤＷＧＨＨＲＣＴ］－を有する環状ペプチドである。ＴＰ１０（Ａｖａｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）は、遺伝子組み換えタンパク質であり、可溶性補体受容体１（ｓＣＲ１）の阻害剤である。Ｓｏｌｉｒｉｓ（商標）、またはＳｏｌａｒｉｓ（商標）としても知られるエクリズマブは、ヒト化モノクローナル抗体である。Ｚｉｍｕｒａ（商標）としても知られるＡＲＣ１９０５は、補体因子Ｃ５を標的とするペグ化された安定化アプタマーである。ＪＰＥ－１３７５は、補体因子Ｃ５ａに対する受容体であるＣ５ａＲを標的とする小分子ペプチド摸倣薬拮抗薬である。ＰＭＸ５３は、配列Ａｃｅ－Ｐｈｅ－［Ｏｒｎ－Ｐｒｏ－ｄＣｈａ－Ｔｒｐ－Ａｒｇ］を有する環状ヘキサペプチドである。抗因子Ｄ、またはＦＣＦＤ４５１４Ｓとしても知られるランパリズマブは、補体因子Ｄを抑制するモノクローナル抗体である。ｒｈＣＦＨｐは、異常因子Ｈ活性を矯正するための、完全長の因子Ｈの遺伝子組換え融合タンパク質形態の保護にある完全長の因子Ｈの遺伝子組換え融合タンパク質形態である。
いくつかの態様において、調節剤、例えば、本発明のギャップ結合、コネキシン、及び／もしくはパネキシン調節剤、またはパネキシンチャネル調節剤のうちの１つ以上と組み合わせて使用するための眼治療薬には、ＴＮＦ－アルファ阻害剤、Ｃ－ｒａｆキナーゼ阻害
剤、ＮＳＡＩＤ、またはｎＡＣｈＲ阻害剤が含まれる。いくつかの実施形態において、ＴＮＦ－アルファ阻害剤は、アダリムマブまたはインフリキシマブであり得る。いくつかの実施形態において、Ｃ－ｒａｆキナーゼ阻害剤は、ｉＣｏ－００７であり得る。いくつかの実施形態において、ＮＳＡＩＤは、ブロフェナク（ｂｒｏｆｅｎａｃ）であり得る。いくつかの実施形態において、ｎＡＣｈＲ阻害剤は、メカミルアミンであり得る。
調節剤、例えば、本発明のギャップ結合、コネキシン、及び／もしくはパネキシン調節剤、またはパネキシンチャネル調節剤のうちの１つ以上と組み合わせて使用するための眼治療薬には、ベルテポルフィン（例えば、Ｃｈｌｏｒｉｎ（商標）、ビスダイン、タラポルフィンナトリウム（例えば、Ａｐｔｏｃｉｎｅ（商標）、Ｌａｓｅｒｐｈｙｒｉｎ（商標）、Ｌｉｔｘ（商標））、イソプロピルウノプロストン（例えば、Ｏｃｕｓｅｖａ（商標）、Ｒｅｓｃｕｌａ（商標））、インターフェロンベータ（例えば、Ｆｅｒｏｎ（商標））、フルオシノロンアセトニド（例えば、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ ＴＤ（商標）、Ｒｅｔｉｓｅｒｔ（商標））、デキサメタゾン（例えば、Ｏｓｕｒｄｅｘ（商標）、Ｏｚｕｒｄｅｘ（商標）、Ｐｏｓｕｒｄｅｘ（商標）、Ｓｕｒｏｄｅｘ（商標））、カナキヌマブ（例えば、Ｉｌａｒｉｓ（商標））、ブロムフェナク（Ｂｒｏｍｄａｙ（商標））、眼科の治療薬（例えば、Ｂｒｏｎａｃ（商標）、Ｂｒｏｎｕｃｋ（商標）、Ｘｉｂｒｏｍ（商標）、Ｙｅｌｌｏｘ（商標））、ブリモニジン（例えば、Ａｌｐｈａｇａｎ（商標）、Ｂｒｏｍｏｘｉｄｉｎｅ（商標）、Ｅｎｉｄｉｎ（商標））、アネコルタブ酢酸エステル（例えば、Ｒｅｔａａｎｅ（商標）、Ｅｄｅｘ（商標）、Ｐｒｏｓｔａｖａｓｉｎ（商標）、Ｒｉｇｉｄｕｒ（商標）、Ｖａｓｏｐｒｏｓｔ（商標）、Ｖｉｒｉｄａｌ（商標））、ＶＥＧＦ－Ｔｒａｐ－Ｅｙｅ（商標）、オクリプラスミン（例えば、Ｉｌｕｖｉｅｎ（商標）、Ｍｅｄｉｄｕｒ（商標）、Ｍｅｄｉｄｕｒ ＦＡ（商標））、ＮＴ－５０１、ＫＨ－９０２、フォスブレタブリントロメタミン（例えば、Ｚｙｂｒｅｓｔａｔ（商標））、ＡＬ－８３０９、アガニルセン（ａｇａｎｉｒｓｅｎ）（例えば、Ｎｏｒｖｅｓｓ（商標））、ボロシキシマブ（例えば、Ｏｐｔｈｏｔｅｃ（商標））、トリアムシノロン（例えば、Ｉｃｏｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＴＲＣ－ １０５、ブリキサフォル（Ｂｕｒｉｘａｆｏｒ）（例えば、ＴＧ－００５４）、ＴＢ－４０３（例えば、Ｒ－７３３４）、ＳＢ－６２３、Ｓ－６４６２４０、ＲＴＰ－８０１Ｉ－１４（例えば、ＰＦ－４５２３６５５）、ＲＧ－７４１７（例えば、ＦＣＦＤ－４５１４Ｓ）、ＰＧ－１１０４７（例えば、ＣＧＣ－１１０４７）、パデリポルフィン（ｐａｄｅｌｉｐｏｒｆｉｎ）（例えば、Ｓｔａｋｅｌ（商標））、ＯＴ－５５１、オンテシズマブ、ＮＯＸ－Ａ１２、ｈＣＮＳ－ＳＣ、Ｎｅｕ－２０００、ＮＡＦＢ００１、ＭＡ０９－ｈＲＰＥ、ＬＦＧ－３１６、ｉＣｏ－００７（例えば、ＩＳＩＳ－１３６５０）、ｈｌ－ｃｏｎｌ、ＧＳＫ－９３３７７６Ａ、ＧＳ－６６２４（例えば、ＡＢ－００２４）、エピタロン、ダランテルセプト、ＭＰ－０１１２、ＣＮＴＯ－２４７６、ＣＥＲＥ－１２０、ＣＣＸ－１６８、ブリモニジン－ＤＤＳ、ベバシラニブナトリウム（例えば、Ｃａｎｄ５）、ベルチリムマブ（Ｂｅｒｔｉｌｉｍｕｍａｂ）、ＡＣＵ－４４２９、Ａ６（例えば、Ｐａｒａｌｉｔ（商標））、ＴＴ－３０、ｓＦＬＴ－０１遺伝子治療薬、ＲｅｔｉｎｏＳｔａｔ（商標）、ＰＲＳ－０５０（例えば、Ａｎｇｉｏｃａｌ（商標））、ＰＦ－４３８２９２３、ＭＣ－１１０１、ＧＷ－８２４５７５、Ｄｚｌ３（例えば、ＴＲＣ－０９３）、Ｄ９３、ＡＴＬ－１１０３、ＸＶ－６１５、ｐＳｉｖｉｄａ、ＶＥＧＦ／ｒＧｅｌ、ＶＡＲ－１０２００、ＶＡＬ－５６６－６２０－ＭＵＬＴＩ、ＴＫＩ、ＴＫ－００１、
ＳＴＰ－６０１、乾燥型ＡＭＤ幹細胞治療薬（例えば、ＥｙｅＣｙｔｅ）、ＯｐＲｅｇｅｎ、ＳＭＴ－Ｄ００４、ＳＡＲ－３９７７６９、ＲＴＵ－００７、ＲＳＴ－００１、ＲＧＮＸ－００４、ＲＦＥ－００７－ＣＡＩ、ＭＣ－２００２、クコ抗血管新生抑制プロテオグリカン、ＩＸＳＶＥＧＦ、インテグリン阻害剤、ＧＷ－７７１８０６、ＧＢＳ－００７、Ｅｏｓ－０１３、ＥＣ－４００、乾燥型ＡＭＤ治療薬（例えば、Ｎｅｕｒｏｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、ＣＧＥＮ－２５０１７、ＣＥＲＥ－１４０、ＡＰ－２０２、ＡＣ－３０１、４－ＩＰ、亜鉛－モノシステイン複合体（例えば、Ａｄｅｏｎａ）、プリノマスタット、
Ｎｅｏｖａｓｔａｔ、メカミルアミン、ＣｅｒｅＣＲＩＢ、ＢＡ－２８５、ＡＴＸ－Ｓ１０、ＡＧ－１３９５８、ベルテポルフィン／アルファｖＢ３複合体、ＶＥＧＦ／ｒＧｅｌ、ＶＥＧＦ－サポリン、ＶＥＧＦ－Ｒ２拮抗薬（例えば、Ａｌｌｏｓｔｅｒａ）、ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、Ｓａｎｔｅｎ）、ＶＥＧＦ拮抗薬（例えば、Ａｒｋ）、Ｖａｎｇｉｏｌｕｘ（商標）、トリフェニルメタン（例えば、Ａｌｉｍｅｒａ）、ＴＧ－１００－８０１、ＴＧ－１００－５７２、ＴＡ－１０６、Ｔ２－ＴｒｐＲＳ、ＳＵ－０８７９、ＳＨＥＦ－１、ロスタポルフィン（例えば、Ｐｈｏｔｒｅｘ（商標）、Ｐｕｒｌｙｔｉｎ（商標）、ＳｎＥＴ２）、ｒｅｔｉｎｏ－ＮＰＹ、ＰＪ－３４、ＰＩ３Ｋ複合体（例えば、Ｓｅｍａｆｏｒｅ）、ＰｈｏｔｏＰｏｉｎｔ、ＰＡＮ－９０８０６、Ｏｐｔ－２１、ＯＰＫ－ＨＶＢ－０１０、ＯＰＫ－ＨＶＢ－００４、眼科学の治療薬（例えば、Ｃｅｌｌ ＮｅｔｗｏＲｘ）、ＯｃｕＸａｎ、ＮＴＣ－２００、ＮＴ－５０２、ＮＯＶＡ－２１０１２、Ｎｅｕｒｏｓｏｌｖｅ（商標）、神経保護治療薬（例えば、ＢＤＳＩ）、ＭＥＤＩ－５４８、ＭＣＴ－３５５、ＭｃＥｙｅ（商標）、ＬｅｎｔｉＶｕｅ（商標）、ＬＹＮ－００２、ＬＸ－２１３、ルテチウムテキサフィリン（例えば、Ａｎｔｒｉｎ（商標））、ＬＧ－３３９阻害剤（例えば、Ｌｅｘｉｃｏｎ）、ＫＤＲキナーゼ阻害剤（例えば、Ｍｅｒｃｋ）、ＩＳＶ－６１６、ＩＮＤＵＳ－８１５Ｃ、ＩＣＡＭ－１アプタマー（例えば、Ｅｙｅｔｅｃｈ）、ＧＴｘ－８２２、ＧＳ－１０２、Ｇｒａｎｚｙｍｅ Ｂ／ＶＥＧＦ（商標）、遺伝子治療薬（例えば、ＥｙｅＧａｔｅ）、ＧＣＳ－ｌＯＯ類似体プログラム、ＦＯＶ－ＲＤ－２７、線維芽細胞成長因子（例えば、Ｒａｍｏｔ）、Ｐａｎｚｅｍ ＳＲ（商標）、ＥＴＸ－６９９１、ＥＴＸ－６２０１、ＥＧ－３３０６、Ｄｚ－１３、ジスルフィラム（例えば、ＯＲＡ－１０２）、ジクロフェナク（例えば、Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｐｈａｒｍａ）、ＡＣＵ－０２、ＣＬＴ－０１０、ＣＬＴ－００９、ＣＬＴ－００８、ＣＬＴ－００７、ＣＬＴ－００６、ＣＬＴ－００５、ＣＬＴ－００４、ＣＬＴ－００３（例えば、Ｃｈｉｒｏｖｉｓ（商標））、ＣＬＴ－００１、Ｃｅｔｈｒｉｎ（商標）（例えば、ＢＡ－２１０）、セレコキシブ、ＣＤ９１拮抗薬（例えば、Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｐｈａｒ）、ＣＢ－４２、ＢＮＣ－４、ベストロフィン、バチマスタット、ＢＡ－１０４９、ＡＶＴ－２、ＡＶＴ－１、ａｔｕ０１２、Ａｐｅｌプログラム（例えば、ＡｐｅＸ－２）、抗ＶＥＧＦ（例えば、Ｇｒｙｐｈｏｎ）、ＡＭＤ ＺＦＰ（例えば、ＴｏｏｌＧｅｎ）、ＡＭ－１１０１、ＡＬＮ－ＶＥＧ０１、ＡＫ－１００３、ＡＧＮ－２１１７４５、ＡＣＵ－ＸＳＰ－００１（例えば、Ｅｘｃｅｌｌａｉｒ（商標））、ＡＣＵ－ＨＴＲ－０２８、ＡＣＵ－ＨＨＹ－０１１、ＡＣＴ－ＭＤ（例えば、ＮｅｗＮｅｕｒａｌ）、ＡＢＣＡ４調節剤（例えば、Ａｃｔｉｖｅ Ｐａｓｓ）、Ａ３６（例えば、Ａｎｇｓｔｒｏｍ）、２６７２６８（例えば、ＳＢ－２６７２６８）、１３１－ＴＴＭ－６０１、バンデタニブ（例えば、Ｃａｐｒｅｌｓａ（商標）、Ｚａｃｔｉｍａ（商標）、Ｚｉｃｔｉｆａ（商標））、リンゴ酸スニチニブ（例えば、Ｓｕｔｅｎｅ（商標）、Ｓｕｔｅｎｔ（商標））、ソラフェニブ（例えば、Ｎｅｘａｖａｒ（商標））、アキシチニブ（例えば、Ｉｎｌｙｔａ（商標））、チボザニブ、ＸＬ－６４７、ＲＡＦ－２６５、ペグジネタニブ（例えば、Ａｎｇｉｏｃｅｐｔ（商標））、ＭＧＣＤ－２６５、イクルクマブ、フォレチニブ、ＥＮＭＤ－２０７６、ＢＭＳ－６９０５１４、レゴラフェニブ、ラムシルマブ、プリチデプシン（例えば、Ａｐｌｉｄｉｎ（商標））、オランチニブ、ニンテダニブ（例えば、Ｖａｒｇａｔｅｆ（商標））、モンテサニブ、ミドスタウリン、リニファニブ、テラチニブ、レンバチニブ、エルパモチド、ドビチニブ、セジラニブ（例えば、Ｒｅｃｅｎｔｉｎ（商標））、ＪＩ－１０１、カボザンチニブ、ブリバニブ、アパチニブ、Ａｎｇｉｏｚｙｍｅ（商標）、Ｘ－８２、ＳＲ－１０６４６２、レバスチニブ、ＰＦ－３３７２１０、ＩＭＣ－３Ｃ５、ＣＹＣ１１６、ＡＬ－３８１８、ＶＥＧＦＲ２阻害剤（例えば、ＡＢ Ｓｃｉｅｎｃｅ）、ＶＥＧＦ／ｒＧｅｌ（例えば、Ｃｌａｙｔｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＴＬＫ－６０５９６、ＴＬＫ－６０４０４、Ｒ８４抗体（例えば、Ｐｅｒｅｇｒｉｎｅ）、ＭＧ－５１６、ＦＬＴ４キナーゼ阻害剤（例えば、Ｓａｒｅｕｍ）、ｆｌｔ－４キナーゼ阻害剤、Ｓａｒｅｕｍ、ＤＣＣ－２６１８、ＣＨ－３３０３３１、ＸＬ－９９９、ＸＬ－８２０、バタラニブ、ＳＵ－１４８１３、セマクサニブ、ＫＲＮ－６３３、ＣＥＰ－７０５５
、ＣＥＰ－５２１４、ＺＫ－ＣＤＫ、ＺＫ－２６１９９１、ＹＭ－３５９４４５、ＹＭ－２３１１４６、ＶＥＧＦＲ２キナーゼ阻害剤（例えば、Ｔａｋｅｄａ）、ＶＥＧＦＲ－２キナーゼ阻害剤（例えば、Ｈａｎｍｉ）、ＶＥＧＦＲ－２拮抗薬（例えば、Ａｆｆｙｍａｘ）、ＶＥＧＦ／ｒＧｅｌ（例えば、Ｔａｒｇａ）、ＶＥＧＦ－ＴＫ阻害剤（例えば、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、レスベラトロール、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、Ａｂｂｏｔｔ）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、Ａｂｂｏｔｔ）、Ｔｉｅ－２キナーゼ阻害剤（例えば、ＧＳＫ）、ＳＵ－０８７９、ＳＰ－５．２、ソラフェニブビーズ（例えば、Ｎｅｘａｖａｒ（商標）ビーズ）、ＳＡＲ－１３１６７５、Ｒｏ－４３８３５９６、Ｒ－１５３０、ファーマプロジェクツ（Ｐｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔｓ）番号６０５９、ＯＳＩ－９３０、ＯＳＩ－８１７、ＯＳＩ－６３２、ＭＥＤ－Ａ３００、Ｌ－００００２１６４９、ＫＭ－２５５０、キナーゼ阻害剤（例えば、ＭｅｔｈｙｌＧｅｎｅ）、キナーゼ阻害剤（例えば、Ａｍｇｅｎ）、Ｋｉ－８７５１、ＫＤＲキナーゼ阻害剤（例えば、Ｃｅｌｌｔｅｃｈ）、ＫＤＲキナーゼ阻害剤（例えば、Ｍｅｒｃｋ）、ＫＤＲキナーゼ阻害剤（例えば、Ａｍｇｅｎ）、ＫＤＲ阻害剤（例えば、Ａｂｂｏｔｔ）、ＫＤＲ阻害剤（例えば、ＬＧＬＳ）、ＪＮＪ－１７０２９２５９、及びＩＭＣ－１Ｃ１１等の医薬品も含まれ得る。
いくつかの実施形態において、調節剤、例えば、コネキシンまたはパネキシンチャネル調節剤、及び眼治療薬は、共投与のために共製剤化され得る。いくつかの態様において、調節剤、例えば、コネキシンまたはパネキシンチャネル調節剤、及び眼治療薬の製剤は、丸薬、溶液、ゲル、事前に充填された注射器、錠剤、点眼薬、または粒子系製剤の一部であり得る。いくつかの態様において、ＩＯＰを減少させるための異なる機構によって作用する化合物は、Ｒｈｏｐｒｅｓｓａであり得る。いくつかの実施形態において、ＩＯＰを減少させるための異なる機構によって作用する化合物は、Ｒｏｃｌａｔａｎであり得る。いくつかの態様において、ＩＯＰを減少させるための異なる機構によって作用する化合物は、アデノシン模倣薬であり得る。いくつかの実施形態において、アデノシン摸倣物は、Ｔｒａｂｏｄｅｎｏｓｏｎ（Ｎ－シクロペンチルアデノシン５’－ナイトレート）であり得る。
いくつかの実施形態において、細胞または媒体中でＲｈｏキナーゼ及びコネキシンまたはパネキシンチャネル活性の作用を調節及び／または抑制する方法が提供される。細胞は、身体の生体内、または生体の生体内、または試験管内でもよい。媒体には、アッセイ媒体が含まれ得る。本方法は、媒体に適用するか、または細胞を有効量のＲｈｏキナーゼ阻害剤及び調節剤、例えば、コネキシンもしくはパネキシンチャネル調節剤と接触させることを含んでもよい。
いくつかの実施形態において、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤は、ｄｅＬｏｎｇらのアミノイソキノリルアミドまたはアミノベンズアミジルアミド（米国特許第８，７１６，３１０号、及び参照により本明細書に組み込まれる）、Ｂｏｓａｎａｃらの２Ｈ－イソキノリン－１－オン及び３Ｈ－イソキノリン－４－オン誘導体（米国特許第８，８０９，３２６号）、ｄｅＬｏｎｇの６－アミノイソキノリン誘導体（米国特許公開第２０１３／０１３７７２１号）、ｄｅＬｏｎｇのベータ及びガンマ－アミノイソキノリンアミド化合物ならびに置換ベンズアミド化合物（米国特許公開第２０１４／０２４９２０１号）、Ｋｏｐｃｚｙｎｓｋｉのプロスタグランジンまたはプロスタグランジン類似体と共有結合しているイソキノリン化合物（米国特許公開第２０１４／０２７５１６１号及び米国特許公開第２０１４／０２７５１６０号）、ｄｅＬｏｎｇのイソキノリン化合物（米国特許第８，０３４，９４３号）、ｄｅＬｏｎｇのキノリン化合物（米国特許第７６７１２０５号、同第７４７０７８７号、同第８４５５５１３号、同第８４５０３４４号、同第８３５７６９９号、同第８４５５６４７号、及び同第８４５５５１４号）、ＲｉｃｈａｒｄｓのＲｈｏｐｒｅｓｓａ、Ｒｏｃｌａｔａｎ、または化合物及び製剤（ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０４
７１０８号）であり得る。
いくつかの実施形態において、疾患、障害、または病態を治療する方法が提供される。本方法は、対象にＲｈｏキナーゼ及び調節剤、例えば、コネキシン及び／またはパネキシンチャネル調節剤を投与することを含んでもよい。本方法は、対象にＲｈｏキナーゼ阻害剤化合物及び調節剤、例えば、コネキシン及び／またはパネキシンチャネル調節剤、ならびに薬学的に許容される担体を含む組成物を投与することを含んでもよい。疾患、障害、または病態には、Ｒｈｏキナーゼ活性と関連した眼疾患もしくは病態、またはＲｈｏキナーゼによって発症した眼疾患もしくは病態が含まれ得る。例えば、疾患は、緑内障、湿潤型ＡＭＤ、乾燥型ＡＭＤ（炎症）、及びＤＭＥからなる群から選択され得る。Ｒｈｏキナーゼ阻害剤の調節剤、例えば、本発明のコネキシン及び／またはパネキシンチャネル調節剤との組み合わせは、眼圧を上昇させるのにも有用であり得る。したがって、これらの製剤は、高血圧性緑内障または正常眼圧緑内障等の緑内障の治療に有用であり得る。Ｒｈｏキナーゼ阻害剤及び調節剤、例えば、コネキシン及び／またはパネキシンチャネル調節剤は、個別投与のための異なる種として、または共同投与のための混合物として製剤化され得る。Ｒｈｏキナーゼ阻害剤の個別投与に関して、眼疾患を治療するための投与の経路は、局所的、腹腔内、硝子体内、または全身的であり得る。Ｒｈｏキナーゼ阻害剤及び調節剤の共同投与に関して、眼疾患を治療するための投与の経路は、局所的、腹腔内、硝子体内、または全身的であり得る。いくつかの実施形態において、別個または共同投与に関して、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤またはその誘導体の製剤は、静脈内、皮下、筋肉内、及び関節内投与等の経路によって非経口送達のために製剤化されてもよい。これらの製剤は、液体または凍結乾燥物のいずれかである。液体または凍結乾燥製剤は、１～５０％のＲｈｏキナーゼ阻害剤またはその誘導体、本明細書に記載される調節剤の投与量の範囲、ならびに可溶化剤、安定剤、緩衝液、浸透圧調節剤、増量剤、粘度増強剤／減力剤、界面活性剤、キレート剤、及びアジュバントから選択される残りの成分を含み得る。これらの成分は、当業者に周知である。凍結乾燥製剤は、投与前にもどされる必要がある。液体製剤は、任意選択的に、５％のデキストロース注射、ＵＳＰまたは０．９％の塩化ナトリウム注射、ＵＳＰ等の薬学的に許容される希釈剤で希釈される。
これらの製剤は、好ましくは注入によって投与されるが、ボーラス投与も可能である。
Ｒｈｏキナーゼ阻害剤と、調節剤、例えば、コネキシンまたはパネキシンチャネル調節剤との個別投与（共投与）に関して、投与は、連続的または同時であり得る。連続投与に関して、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤及びコネキシンまたはパネキシン調節剤は、互いの１時間以内、互いの１日以内、互いの１週間以内、または互いの１カ月以内に投与され得る。同時投与（共投与）に関して、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤及び調節剤は、混合物として、またはＲｈｏキナーゼ阻害剤及び調節剤、例えば、コネキシンまたはパネキシンチャネル調節剤の両方を含む製剤として一緒に投与され得る。
いくつかの態様において、本発明は、Ｒｈｏキナーゼ活性及びコネキシンまたはパネキシンチャネル活性を調節する方法を提供し、本方法は、細胞を、Ｒｈｏキナーゼ活性を調節するのに有効な量のＲｈｏキナーゼ阻害剤と接触させること、及び細胞を、例えば、コネキシン及び／またはパネキシンチャネル活性を調節するのに有効な量のコネキシン及び／またはパネキシンチャネル調節剤を接触させることを含む。
いくつかの態様において、本発明は、眼圧を減少させる方法を提供し、本方法は、細胞を、眼圧を減少させるのに有効な量のＲｈｏキナーゼ阻害剤及び調節剤、例えば、本明細書に記載されるコネキシンまたはパネキシンチャネル調節剤と接触させることを含む。
個別投与または共同投与に関して、全身投与のためのＲｈｏキナーゼ阻害剤の投与量範囲は、１日当たり、体重１ｋｇ当たり約０．００１～約１００ｍｇ、好ましくは、体重１ｋ
ｇ当たり約０．０１～約１０ｍｇ、最も好ましくは、体重１ｋｇ当たり約０．０５～約５ｍｇである。Ｒｈｏキナーゼ阻害剤投与量は、体重１ｋｇ当たり０．００１、０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２．、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００ｍｇ、または列挙される投与量のうちのいずれか２つの間の任意の範囲、もしくは任意の２つの列挙される数の間の任意の投与量であり得る。個別投与または共同投与に関して、調節剤、例えば、コネキシンまたはパネキシンチャネル調節剤の投与量の範囲は、体重１ｋｇ当たり約１．０ｎｇ、体重１ｋｇ当たり１０ｍｇ、または体重１ｋｇ当たり約１ｕｇ～約５ｍｇ、または体重１ｋｇ当たり約５０ｕｇ～約１ｍｇである。調節剤、例えば、コネキシン及び／またはパネキシンチャネル調節剤投与量は、体重１ｋｇ当たり１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、もしくは１００ｎｇ、体重１ｋｇ当たり１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、
７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、もしくは１００ｕｇ、体重１ｋｇ当たり１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、もしくは１００ｍｇ、または体重１ｋｇ当たり１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、もしくは２５ｇであり得る。
個別投与または共同投与に関して、製剤は、急速もしくは緩徐な放出、即時、遅延した、指定時刻に作動する、もしくは持続的放出、またはこれらの組み合わせを提供するように調製されてもよい。製剤は、液体、溶液、懸濁液、エマルション、エリキシル剤、シロップ、舐剤、（限定されないが点眼薬を含む）滴薬、錠剤、顆粒、粉末、ロゼンジ、トローチ、カプセル、ゲル、軟膏、クリーム、ローション、油、泡、噴霧剤、霧、またはエアロゾルの形態でもよい。追加の実施形態として、医薬製剤は、眼上に置かれるコンタクトレンズ内に含まれるか、コンタクトレンズによって送達されるか、またはコンタクトレンズに付着し得る。
コネキシンまたはパネキシン調節剤とＲｈｏキナーゼ阻害剤または他の作用剤との組み合わせの製造品／キット
本発明の別の実施形態において、上述の疾患及び障害を治療するのに有用な物質を含む
製造品または「キット」が提供される。キットは、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤及び調節剤、例えば、コネキシン及び／またはパネキシンチャネル調節剤を含む容器を備える。キットは、容器上に、または容器と関連したラベルまたは添付文書をさらに備えてもよい。用語「添付文書」は、そのような治療製品の使用に関する指示、用法、投与量、投与、禁忌、及び／または注意についての情報を含む、治療製品のコマーシャルパッケージ内に含まれる習慣的使用説明書を指すために使用される。好適な容器には、例えば、ビン、バイアル、注射器、ブリスターパック等が含まれる。容器は、ガラスまたはプラスチック等の様々な材料から形成されてもよい。容器は、病態を治療するのに有効であるＲｈｏキナーゼ阻害剤及び調節剤、例えば、コネキシン及び／もしくはパネキシンチャネル調節剤、またはこれらの製剤を保持することができ、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針によって突き刺すことが可能なストッパを有する静脈内溶液袋またはバイアルでもよい）。本組成物中の少なくとも１つの活性剤は、調節剤、例えば、コネキシン及び／またはパネキシンチャネル調節剤である。ラベルまたは添付文書は、本組成物が高血圧性もしくは正常眼圧緑内障、ＤＭＥ、眼線維症、湿潤型ＡＭＤもしくは乾燥型ＡＭＤ、または上述の眼の障害のうちのいずれか等の最適な病態を治療するために使用されることを示す。ラベルまたは添付文書は、本組成物が他の障害を治療するために使用され得ることも示してもよい。あるいは、または加えて、製造品は、注射のための静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液、及びデキストロース溶液等の薬学的に許容される緩衝液を備える第２の容器をさらに備えてもよい。製造品は、他の緩衝液、希釈剤、フィルタ、針、及び注射器を含む、商業的及び使用者の観点から望ましい他の物質をさらに含んでもよい。
キットは、調節剤、例えば、コネキシン及び／またはパネキシンチャネル調節剤、ならびに存在する場合、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤、または本明細書に記載される、ＩＯＰを減少させるためにコネキシン及び／もしくはパネキシンチャネル調節とは別個の機構で作用する他の作用剤の投与のための指示書をさらに備えてもよい。例えば、キットが、コネキシンまたはパネキシン調節剤を含む第１の組成物、及び第２の医薬製剤を備える場合、キットは、投与を必要とする患者に、第１及び第２の薬学的組成物の同時、連続的、または個別投与のための指示書をさらに備えてもよい。
キットが調節剤、例えば、コネキシン及び／またはパネキシンチャネル調節剤、ならびにＲｈｏキナーゼ阻害剤、または例えば、本明細書に記載される、ＩＯＰを減少させるためにコネキシン及び／またはパネキシンチャネル調節とは別個の機構で作用する他の作用剤を備え得るある特定の他の実施形態において、キットは、分割されたビンまたは分割されたホイルポケット等の別個の組成物を含むための容器を備えてもよいが、別個の組成物は、単一の分割されていない容器内に含まれてもよい。一般に、キットは、構成成分の投与のための指示書を備える。キット形態は、個々の構成成分が、好ましくは異なる投薬形態（例えば、眼及び非経口）で投与されたとき、異なる投薬間隔で投与されたとき、または組み合わせの個々の構成成分の滴定が処方医師によって所望されるとき、特に有利である。
本発明は、調節剤、例えば、コネキシン及び／またはパネキシンチャネル調節剤、ならびにＲｈｏキナーゼ阻害剤、または本明細書に記載される、ＩＯＰを減少させるためにコネキシン及び／もしくはパネキシンチャネル調節とは別個の機構で作用する他の作用剤を含む１つ以上の投薬形態を含む包装材料を備える製造品を含み、包装材料は、投薬形態が、疾患、障害、及び／または本明細書に記載または示される病態のうちのいずれかを有するか、これらを有することが疑われるか、もしくはこれらに掛かりやすい対象に対して使用され得ることを示すラベルを有する。そのような投薬形態には、例えば、非経口及び眼の送達形態、ならびに製剤のための、錠剤、カプセル、溶液、及び懸濁液が含まれる。
いくつかの態様において、キットは、個別投与のために、調節剤、例えば、コネキシン及び／またはパネキシンチャネル調節剤とは異なる区画内に区画化されたＲｈｏキナーゼ阻害剤を備え得る。区画は、別個のバイアル、別個の注射器、別個のコンタクトレンズ、別個の溶液、または上述の作用剤が注入された別個の粒子であり得る。いくつかの態様において、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤が、眼の前方への送達のために区画化され得る一方で、コネキシン及び／またはパネキシンチャネル調節剤は、例えば、眼の後眼部（網膜、脈絡膜、ＲＰＥ、ブルッフ膜）への送達のために区画化され得る。いくつかの態様において、コネキシン及び／またはパネキシンチャネル調節剤が、例えば、眼の後部への持続的送達のために、本明細書に記載されるナノ粒子の形態またはミクロ粒子形態で区画化され得る一方で、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤は、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤が注入された点眼薬またはコンタクトレンズの形態で、眼の前方への即時または持続的送達のために区画化され得る。
一態様において、キットは、注射のための静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液、及びデキストロース溶液等の薬学的に許容される緩衝液備える第３の容器をさらに備えてもよい。製造品は、他の緩衝液、希釈剤、フィルタ、針、及び注射器を含む、商業的及び使用者の観点から望ましい他の物質をさらに含んでもよい。
いくつかの態様において、キットの第１及び第２（及び任意選択的に第３）の組成物は、組み合わせて投与され得るか、同時に投与され得るか、個別に投与され得るか、順次投与され得るか、または持続的様式で投与され得る。
イオン泳動
本発明のコネキシン調節剤製剤は、薬物透過が少しの電流を加えることにより強化される、非侵襲的手法であるイオン泳動によっても、投与されてもよい。調節剤、例えば、コネキシン及び／またはパネキシンチャネル調節剤は、薬物と同じ電荷を有する電極を用いて適用され、反対の電荷である接地電極が回路を完成させるために、身体上の他の部分に置かれる。調節剤は、組織をとおる電流の伝導を助ける。経強膜のイオン泳動は、網膜及び脈絡膜に治療レベルの生理活性ポリヌクレオチド及びペプチドを送達するために使用され得る。
投与量、量、及び濃度
理解されるように、投与される調節剤、例えば、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤及び／もしくはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体、ならびに／またはパネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及びその類似体、ならびに／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１もしくはその類似体の投与量と、投与の期間と、投与管理体制全般と、は、調節剤が送達される標的部位、治療される対象の任意の症状の重症度、治療される障害の種類、単位投与量のサイズ、選択された投与の様式、ならびに対象の年齢、性別、及び／または健康全般と、当業者に既知の他の要因と、のような可変の要因に応じて対象間で異なってもよい。
細胞培養アッセイ及び動物研究から得られたデータは、ヒトにおいて使用するための投与量の範囲を配合するために使用され得る。調節剤投与量は、使用される投薬形態及び利用される投与の経路に応じて、この範囲内で変わり得る。本発明の方法で使用される任意の作用剤に関して、治療上有効な投与量は、細胞培養アッセイから最初に推定され得る。投与量は、細胞培養で決定される、ＩＣ５０を含む細胞濃度範囲（すなわち、症状の最大半量の抑制を達成する試験化合物の濃度）を達成するために、細胞培養または動物モデルに配合されてもよい。そのような情報は、ヒトにおける有用な投与量をより正確に決定するために使用され得る。正確な配合、投与の経路、及び投与量は、患者の病態を考慮した上で、個々の医師によって選択され得る。（例えば、Ｆｉｎｇｌ ｅｔ ａｌ．，１９７５
，Ｉｎ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｃｈ．１，ｐ．１を参照されたい）。投与量は、投与される濃度（マイクロモル）または投与される量（ｍｇ）からｍｇ／ｋｇの単位で投与量を決定するために、投与される量の濃度、試験される動物モデルの予測される質量（生体ウィスターラットのラット当たり２００～３００ｇ）から決定され得る。
緑内障眼低酸素症、網膜潅流障害、ＡＭＤ、ＤＭＥ、眼線維症、及び／もしくは眼神経障害、または本明細書に記載される任意の他の眼の障害等の眼の障害の治療のために使用され得る有効な投与量の例は、本明細書に記載され、特許請求される。いくつかの態様において、眼の障害、例えば、高眼圧症、緑内障、ＡＭＤ、ＤＭＥ、眼線維症、緑内障性眼神経障害、ＲＧＣ喪失、脈絡膜潅流の障害、脈絡膜炎、脈絡膜過剰潅流、及び／または脈絡毛細管板脱落を治療するのに有効な、治療的に有効な量の調節剤、例えば、コネキシン調節剤、及び／またはパネキシンチャネル調節剤、例えば、コネキシン４３またはコネキシン４３ヘミチャネル調節剤は、約０．００１～約１．０マイクログラム／ｍｌ、または約０．００１～約０．０１ｍｇ／ｍｌ、もしくは約０．１ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬ以上の濃度、あるいは列挙される投与量のうちのいずれか２つの間の任意の範囲、または任意の２つの列挙される数の間の任意の投与量である。投与量は、０．００１、０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２．、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、もしくは１００ｍｇ／ｍｌ、または列挙される投与量のうちのいずれか２つの間の任意の範囲、もしくは任意の２つの列挙される数の間の任意の投与量であり得る。いくつかの実施形態において、治療的に有効な量の調節剤、例えば、コネキシン及び／またはパネキシンチャネル調節剤タンパク質調節剤は、約０．５～約５０ｍｇ／ｍＬの範囲にわたる濃度で存在する。いくつかの実施形態において、調節剤は、約０．３～約３０ｍｇ／ｍＬの範囲にわたる濃度で存在する。いくつかの実施形態において、調節剤は、約０．１または１．０～約１０ｍｇ／ｍＬの範囲にわたる濃度で存在する。いくつかの実施形態において、調節剤は、約０．１または１．０～約０．３または３．０ｍｇ／ｍＬの範囲にわたる濃度で存在する。いくつかの実施形態において、調節剤は、約３．０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。これらの態様のうちのいずれかにおいて、調節剤は、コネキシンタンパク質アンチセンスオリゴヌクレオチドでもよい。調節剤が、半減期の増加のための修飾アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば、骨格修飾オリゴヌクレオチド、または化学修飾オリゴヌクレオチドであるとき、上述の投薬濃度は、同じでもよいか、または例えば、有効性及び特異性に応じて、必要に応じて減少または上昇させてもよい。これらの態様のうちのいずれかに
おいて、担体（ビヒクル）は、薬学的に許容される担体でもよい。
いくつかの態様において調節剤、例えば、コネキシン調節剤及び／またはパネキシンチャネル調節剤は、約０．００１～約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．００１～約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１～約０．１ｍｇ／ｋｇ、０．１～約１ｍｇ／ｋｇ、約１～約１０ｍｇ／ｋｇ、もしくは約１０～約１００ｍｇ／ｋｇの、または任意の２つの列挙される投与量間の任意の範囲、もしくは任意の２つの列挙される投与量間の任意の投与量の、治療上有効な投与量で投与されてもよい。いくつかの態様において、投与量は、０．００１、０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２．、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、もしくは１００ｍｇ／ｍｌ、または列挙される投与量のうちのいずれか２つの間の任意の範囲、もしくは任意の２つの列挙される数の間の任意の投与量であり得る。
本発明のいくつかの態様において、先に例示される本発明で使用するための治療上有効な濃度、量、または投与量の各々が、上述の治療上有効な濃度、量、または投与量の各々について、修飾または未修飾核酸調節剤、修飾または未修飾ペプチドもしくはペプチド摸倣薬調節剤、あるいは小分子調節剤に関して有用であり得るが、ペプチドまたはペプチド摸倣薬コネキシン調節剤またはパネキシン調節剤の投与量は、列挙される濃度、量または投与量のうちのいずれかの１／１０～１／１００、または１／１００～１／１０００であり得る。さらに、いくつかの態様において、修飾調節剤、例えば、コネキシン調節剤、パネキシン調節剤、またはパネキシンチャネル調節剤の治療上有効な濃度、量、または投与量は、列挙される濃度、量、もしくは投与量の１／１０～１／１００、もしくは１／１００～１／１０００、または任意の２つの列挙される投与量間の任意の範囲、もしくは任意の２つの列挙される投与量間の任意の投与量であり得る。
投与には、必要に応じて１日１回用量、いくつかの不連続の分けられた投与量の投与、または連続投与が含まれ得ることが理解されるべきである。例として、単位投与量は、所望の総１日用量を達成するために、１日１回、または２回以上、例えば、１日１、２、３、４、５、または６回投与されてもよい。例として、例えば、ペプチド５及び／もしくはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体、ならびに／またはパネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及びその類似体、ならびに／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１もしくはその類似体等のギャップ結合チャネル調節剤の単位用量は、おおよそ０．１～１０ｍｇ
、１０～１００ｍｇ、１００～１０００ｍｇ、１０００～２０００ｍｇ、または２０００ｍｇ～５０００ｍｇ、０．１～おおよそ２０００ｍｇ、おおよそ０．１～おおよそ１０００ｍｇ、おおよそ１～おおよそ５００ｍｇ、おおよそ１～おおよそ２００ｍｇ、おおよそ１～おおよそ１００ｍｇ、おおよそ１～おおよそ５０ｍｇ、もしくはおおよそ１～おおよそ２５ｍｇ、または任意の２つの列挙される投与量間の任意の範囲、もしくは任意の２つの列挙される投与量間の任意の投与量の１日用量を達成するために、１日１回用量もしくはいくつかの別個の投与量で、または連続的に投与されてもよい。
さらなる例として、調節剤、例えば、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤、トナベルサット、及び／もしくはこれらのいずれかの類似体、ならびに／またはパネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及びその類似体、ならびに／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１もしくはその類似体の単位用量は、総１日用量が（７０ｋｇの成人の場合）おおよそ１～おおよそ１０００ｍｇ、例えば、おおよそ１～おおよそ５００ｍｇ、または５００ｍｇ～１０００ｍｇ、１０００～２０００ｍｇ、または２０００ｍｇ～５０００ｍｇの範囲内、または任意の２つの列挙される投与量間の任意の範囲内、もしくは任意の２つの列挙される投与量間
の任意の投与量であるように、１日１回または２回以上（例えば、１日１、２、３、４、５、または６回、典型的には１～４回）投与されてもよい。例えば、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤及び／もしくはその類似体、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体、ならびに／またはパネキシン調節剤、例えば、プロベネシド及びその類似体、ならびに／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１もしくはその類似体は、対象におおよそ０．０１～おおよそ１５ｍｇ／ｋｇ／日、例えば、おおよそ０．１～おおよそ６ｍｇ／ｋｇ／日、例えば、おおよそ１～おおよそ６ｍｇ／ｋｇ／日、例えば、６ｍｇ／ｋｇ／日～１００ｍｇ／ｋｇ／日の投与量範囲、または任意の２つの列挙される投与量間の任意の範囲、もしくは任意の２つの列挙される投与量間の任意の投与量で投与されてもよい。一実施形態において、トナベルサットは、おおよそ２ｍｇ～おおよそ４０ｍｇの投与量で、１日一回経口で投与されてもよい。
一実施形態において、式Ｉの化合物、例えば、トナベルサット及び前述の化合物のうちのいずれかの類似体の投与量は、作用部位でおおよそ０．００１マイクロモル～０．１マイクロモル、０．１マイクロモル、及び最大おおよそ２００マイクロモル以上、あるいは作用部位でこれらの濃度を達成するために循環内ではこれ以上である。例として、投与量は、限定されないが、約０．００１、０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２．、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６
７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、または５００マイクロモルの最終循環濃度、または任意の２つの列挙される濃度間の任意の範囲、もしくは任意の２つの列挙される数間の任意の濃度でもよい。ヘミチャネルを遮断するが、ギャップ結合をアンカップリングしないことが見込まれる投与量のさらなる例は、Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌ ｅｔ ａｌ，２００８に記載され、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態において、トナベルサットは、より低用量、例えば、０．００１～２０マイクロモルで使用され得る。低用量は、０．００１、０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２．、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０マイクロモルであり得る。驚くべきことに、例えば、より低用量のトナベルサットが再潅流の間のＣｘ４３ヘミチャネル媒介ＡＴＰ放出を抑制するのに有用であることが見つけ出された。単独またはパネキシン調節剤と組み合わせた、本発明の方法及び使用におけるそのようなより低用量のトナベルサットの使用は、トナベルサットの副作用を軽減するのにも有利である。
他の態様において、Ｃｘ４３の上昇に対する一時的な反作用、及びそれによるＧＪヘミチャネルの新たな形成に関するトナベルサットの時間依存の作用は、例えば、傷害後のコネキシン４３チャネルの一時的な調節を制御しながら、有毒な代謝物の堆積を防ぎ、特に中枢神経系の傷害後に組織を同期化するための「空間的緩衝」効果の完全な除去を最小限に抑えるために利用され得る。
一実施形態において、調節剤、例えば、ペプチド５等のギャップ結合チャネル調節剤及び／もしくはその類似体、ならびに／またはパネキシンチャネル調節剤、例えば、プロベネシド及びその類似体、ならびに／またはパネキシン１の合成模倣ペプチド遮断薬、例えば、１０Ｐａｎｘ１もしくはその類似体の投与量は、作用部位でおおよそ０．００１マイクロモル及び最大おおよそ２００マイクロモル、もしくは２００～２０００、または５０００マイクロモル、あるいは作用部位でこれらの濃度を達成するために循環内ではこれ以上である。例として、投与量は、限定されないが、約１、５、１０、２０、５０、１００、２００、２５０、５００、１０００、２０００、３０００、４０００、または５０００マイクロモルの最終循環濃度、または任意の２つの列挙される投与量間の任意の範囲、もしくは任意の２つの列挙される投与量間の任意の投与量でもよい。ヘミチャネルを遮断するが、ギャップ結合をアンカップリングしないのに有効なペプチド５の投与量は、Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌ ｅｔ ａｌ，２００８で論じられている。いくつかの実施形態において、トナベルサットは、より低用量、例えば、１～２０マイクロモル、１～５０マイクロモル、
２０～３０、３０～４０、または４０～５０マイクロモルで使用され得る。低用量は、０．００１、０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２．、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０マイクロモルであり得る。驚くべきことに、例えば、より低用量のトナベルサットが虚血再潅流の間のＣｘ４３ヘミチャネル媒介ＡＴＰ放出を抑制することが見つけ出された。驚くべきことに、ある特定の用量のトナベルサットが、ヘミチャネル形成を抑制し、これにより虚血後の再潅流を治療することが見つけ出された。
いくつかの実施形態において、調節剤、例えば、コネキシン調節剤もしくはパネキシン調節剤、またはこれらのチャネル調節剤の好適な治療上有効な投与量は、少なくとも約１．０ｍｇ／ｍＬの調節剤、例えば、コネキシン調節剤、またはパネキシンもしくはチャネル調節剤であり得る。いくつかの実施形態において、調節剤、例えば、コネキシン調節剤及び／またはパネキシン調節剤、及びこれらのチャネルの治療上有効な投与量は、約０．００１ｍｇ／ｍＬ～０．０１ｍｇ／ｍＬ、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．１ｍｇ／ｍＬ、または約０．１ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬであり得る。いくつかの実施形態において、コネキシン調節剤またはパネキシン調節剤の好適な治療上有効な投与量は、約約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０、７．０、８．０、９．０、１０．０、１１．０、１２．０、１３．０、１４．０、１５．０、１６．０、１７．０、１８．０、１９．０、２０．０、２１．０、２２．０、２３．０、２４．０、２５．０、２６．０、２７．０、２８．０、２９．０、３０．０、３１．０、３２．０、３３．０、３４．０、３５．０、３６．０、３７．０、３８．０、３９．０、４０．０、４１．０、４２．０、４３．０、４４．０、４５．０、４６．０、４７．０、４８．０、４９．０、５０．０、５２．５、５５．０、５７．５、６０．０、６２．５、６５．０、６７．５、７０．０、７２．５、７５．０、７７．５、８０．０、８２．５、８５．０、８７．５、９０．０、９２．５、９５．０、９７．５、もしくは約１００．０ｕｇ／ｍＬ、または列挙される投与量のうちのいずれか２つ間の任意の範囲または副範囲、もしくは約０．１～約１００ｕｇ／ｍＬの範囲内に含まれる任意の投与量であり得る。いくつかの実施形態において、抗コネキシン剤の好適な治療上有効な投与量は、約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０、７．０、８．０、９．０、１０．０、１１．０、１２．０、１３．０、１４．０、１５．０、１６．０、１７．０、１８．０、１９．０、２０．０、２１．０、２２．０、２３．０、２４．０、２５．０、２６．０、２７．０、２８．０、２９．０、３０．０、３１．０、３２．０、３３．０、３４．０、３５．０、３６．０、３７．０、３８．０、３９．０、４０．０、４１．０、４２．０、４３．０、４４．０、４５．０、４６．０、４７．０、４８．０、４９．０、５０．０、５２．５、５５．０、５７．５、６０．０、６２．５、６５．０、６７．５、７０．０、７２．５、７５．０、７７．５、８０．０、８２．５、８５．０、８７．５、９０．０、９２．５、９５．０、９７．５、もしくは約１
００．０ｍｇ／ｍＬ、または列挙される投与量のうちのいずれか２つ間の任意の範囲また
は副範囲、もしくは約０．１～約１００ｍｇ／ｍＬの範囲内に含まれる任意の投与量であり得る。いくつかの実施形態において、調節剤、例えば、コネキシン調節剤及び／またはパネキシンチャネル調節剤は、約０．５～約５０ｍｇ／ｍＬの範囲にわたる濃度で存在する。他の実施形態において、調節剤、例えば、コネキシン調節剤及び／またはパネキシンチャネル調節剤は、約０．３～約３０ｍｇ／ｍＬの範囲にわたる濃度で存在する。他の実施形態において、調節剤は、約０．１または１．０～約１０ｍｇ／ｍＬの範囲にわたる濃度で存在する。他の実施形態において、調節剤は、約０．１、または１．０～約０．３、または３．０ｍｇ／ｍＬの範囲にわたる濃度で存在する。他の実施形態において、調節剤、例えば、コネキシン４３調節剤、及び／またはコネキシン４５調節剤等のコネキシン調節剤またはパネキシン調節剤は、約３．０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。これらの態様のうちのいずれかにおいて、調節剤、例えば、コネキシン調節剤は、コネキシン４３、またはコネキシン４５調節剤、例えば、コネキシン４３またはコネキシン４５アンチセンスオリゴヌクレオチド、好ましくはコネキシン４３調節剤、例えば、コネキシン４３アンチセンスオリゴヌクレオチドでもよい。調節剤が修飾コネキシンまたはパネキシンアンチセンスオリゴヌクレオチドであるとき、上述の投薬濃度は、例えば、約２～約１０倍に上昇され得る。調節剤が修飾または未修飾ペプチドもしくはペプチド摸倣薬であるとき、投与量は、１０、１００、または１０００倍に減少され得る。
ある特定の実施形態において、コネキシンまたはパネキシン調節剤、例えば、コネキシン４３調節剤は、治療部位に、及び／または治療部位と隣接して、約０．００１マイクロモル（μＭ）、もしくは０．０５μＭ～約２００μＭ、または最大３００μＭ、もしくは最大１０００μＭ、もしくは最大２０００μＭ、もしくは最大３２００μＭ以上、例えば、最大約１０ｍＭ、２０ｍＭ、もしくは３０ｍＭの最終濃度、ならびにこれらの投与量数内の任意の投与量及び投与量範囲で投与され得る。一実施形態において、コネキシン調節剤（抗コネキシン剤）組成物は、約１０００μＭ超で適用される。好ましくは、アンチセンスポリヌクレオチド組成物は、約１０００μＭ～約１０ｍＭの最終濃度で適用され、より好ましくは、抗コネキシン剤組成物は、約３ｍＭ～約１０ｍＭの最終濃度で適用され、より好ましくは、抗コネキシン剤組成物は、約１～３ｍＭから約５～１０ｍＭの最終濃度で適用される。コネキシン調節剤濃度は、０．００１、０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２．、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、もしくは１００マイクロモル、または０．００１、０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０
５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２．、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、もしくは１００ミリモル、あるいは列挙される投与量のうちのいずれか２つの間の任意の範囲、または任意の２つの列挙される数の間の任意の投与量であり得る。
さらに、調節剤、例えば、コネキシン及びパネキシンチャネル調節剤、例えば、コネキシン４３調節剤は、製剤中に約１μＭ～約２０μＭの最終濃度で存在し得、あるいは、コネキシン４３調節剤は、約５μＭ～約２０μＭの最終濃度、または約１０～約１５μＭの最終濃度で存在する。ある特定の他の実施形態において、調節剤は、約１０μＭの最終濃度で存在する。なおも別の実施形態において、調節剤は、約１～１５μＭの最終濃度で存在する。他の実施形態において、調節剤は、約２０μＭ、３０μＭ、４０μＭ、５０μＭ、６０μＭ、７０μＭ、８０μＭ、９０μＭ、１００μＭ、１０～２００μＭ、２００～３００μＭ、３００～４００μＭ、４００～５００μＭ、５００～６００μＭ、６００～７００μＭ、７００～８００μＭ、８００～９００μＭ、９００～１０００または１０００～１５００μＭ、または１５００μＭ～２０００μＭ、２０００μＭ～３０００μＭ、３０００μＭ～４０００μＭ、４０００μＭ～５０００μＭ、５０００μＭ～６０００μＭ、６０００μＭ～７０００μＭ、７０００μＭ～８０００μＭ、８０００μＭ～９０００μＭ、９０００μＭ～１０，０００μＭ、１０，０００μＭ～１１，０００μＭ、１１，０００μＭ～１２，０００μＭ、１２，０００μＭ～１３，０００μＭ、１３，０００μＭ～１４，０００μＭ、１４，０００μＭ～１５，０００μＭ、１５，０００μＭ～２０，０００μＭ、２０，０００μＭ～３０，０００μＭ、３０，０００μＭ～５０，０００μＭ超、または列挙される投与量のうちのいずれか２つ間の任意の範囲または副範囲、もしくは約２０μＭ～約５０，０００μＭの範囲内に含まれる任意の投与量で存在する。
さらに他の投与量は、１日当たり、体重１ｋｇ当たり約１ナノグラム（ｎｇ）～約１ｍｇの本明細書に記載される調節剤の各々を等しくする。ある特定の実施形態において、対象化合物の各々の投与量は、一般に、体重１ｋｇ当たり約１ｎｇ～約１マイクログラム、体重１ｋｇ当たり約１ｎｇ～約０．１マイクログラム、体重１ｋｇ当たり約１ｎｇ～約１０ｎｇ、体重１ｋｇ当たり約１０ｎｇ～約０．１マイクログラム、体重１ｋｇ当たり約０．１マイクログラム～約１マイクログラム、体重１ｋｇ当たり約２０ｎｇ～約１００ｎｇ、体重１ｋｇ当たり約０．００１ｍｇ～約０．０１ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ～約０．１ｍｇ、または体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ～約１ｍｇの範囲内である。ある特定の実施形態において、対象化合物の各々の投与量は、一般に、体重１ｋｇ当たり約０．００１ｍｇ～約０．０１ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ～約０．１ｍｇ、体重
１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ～約１ｍｇの範囲内である。２つ以上の調節剤、例えば、コネキシン及び／またはパネキシンチャネル調節剤が使用される場合、各調節剤の投与量は、他の範囲と同じ範囲内である必要はない。例えば、１つのコネキシンまたはパネキシンチャネル調節剤の投与量は、体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ～約１０ｍｇであり得、別のコネキシンまたはパネキシンチャネル調節剤の投与量は、体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ～約１ｍｇ、体重１ｋｇ当たり０．１～約１０、０．１～約２０、０．１～約３０、０．１～約４０、または約０．１～約５０ｍｇであり得る。投与量はまた、体重１ｋｇ当たり約０．００１、０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２．、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、もしくは１００ｍｇ、または列挙される投与量のうちのいずれか２つ間の任意の範囲または副範囲、もしくは体重１ｋｇ当たり約０．００１～約１００ｍｇの範囲内に含まれる任意の投与量であり得る。
一実施形態において、１つ以上の調節剤、例えば、コネキシン、ヘミチャネル、パネキシンもしくはパネキシンチャネル調節剤ポリヌクレオチド、あるいは１つ以上のコネキシ
ンまたはパネキシン調節剤ペプチドもしくはペプチド模倣薬の組み合わせ使用は、前記作用剤が単独で使用されたときの有効投与量と比較して、任意のそのような作用剤の有効投与量を減少させる。ある特定の実施形態において、併用する場合の薬剤の有効量は、単独で使用する場合の薬剤の用量の約１／１５～約１／２、約１／１０～約１／３、約１／８～約１／６、約１／５、約１／４、約１／３、または約１／２である。別の好ましい実施形態において、１つ以上の抗コネキシンポリヌクレオチド、及び１つ以上の抗コネキシンペプチドもしくはペプチド模倣薬、または他の抗コネキシン剤のいずれかまたは両方と組み合わせた組み合わせ使用は、前記作用剤が単独で投与された時の頻度と比較して、前記作用剤が投与される頻度を低減する。したがって、これらの組み合わせは、所望の治療目標を達成するのに以前必要だった用量よりも低い及び／または少ない用量の各作用剤の使用を可能にする。
一実施形態において、コネキシンまたはパネキシン調節剤ペプチドまたはペプチド摸倣薬の投与量は、本明細書に記載される列挙される投与量のうちのいずれかよりも１０、１００、または１０００倍低くあり得る。
好都合に、調節剤は、そのそれぞれのタンパク質の発現を下方制御するのに十分な量で投与される。コネキシン調節剤、例えば、コネキシン４３または４５調節剤は、投与後少な
くとも約０．５～１時間、少なくとも約１～２時間、少なくとも約２～４時間、少なくとも約４～６時間、少なくとも約６～８時間、少なくとも約８～１０時間、少なくとも約１２時間、または少なくとも約２４時間、コネキシン４３の発現を下方制御するか、またはギャップ結合形成もしくはコネクソン開口を調節するのに十分な量で投与される。
コネキシン４３または４５調節剤等のコネキシンまたはパネキシンチャネル調節剤の投与量は、単一または分けた適用で投与され得る。投与量は、一回で投与されてもよいか、または適用は反復されてもよい。典型的に、適用は、眼神経障害、または本明細書に記載される任意の眼の病態を予防するか、減速させるか、または治療するために必要に応じて、毎週、隔週、もしくは３週間に１回、月に１回、または２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４ヶ月以上に１回、反復される。投薬は、ニューロン脱落が上昇または減少した場合、反復、及び／または増加、または減少させてもよい。投薬は、１２時間毎～７日以上間隔で適用されてもよい。例えば、投薬は、１２時間、または１、２、３、４、５、６、または７日間隔で、またはこれらの時間のうちのいずれか２つ間、もしくは１２時間～７日に含まれる任意の時間間隔で適用されてもよい。コネキシン４３調節剤は、最大４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、または２６週間投与されてもよい。ある特定の眼の使用等の一部の適用に関して、最大１時間毎のより頻繁な投薬が採用され得る。
キット、薬剤、及び製造品
任意選択的に、１つ以上の調節剤、例えば、コネキシンもしくはパネキシン調節剤ポリヌクレオチド、及び／あるいは１つ以上のコネキシンもしくはパネキシン調節剤ペプチドまたはペプチド模倣薬、ならびに／あるいはギャップ結合もしくはヘミチャネルリン酸化剤またはコネキシンカルボキシ末端ポリペプチド、または小分子調節剤等の他の抗コネキシン剤は、単独で、または調節剤、もしくは他の耐性創傷治癒剤のうちのいずれかと組み合わせて、薬剤の製造、またはキットでも使用され得る。好適な抗コネキシンタンパク質調節剤、ポリヌクレオチドまたはペプチドは、抗コネキシン４３、３０、または２６調節剤、ポリヌクレオチドまたはペプチドであり得る。いくつかの態様において、これらのコネキシン調節剤のうちのいずれかは、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ４５、Ｃｘ５０、Ｃｘ５７、または眼もしくは血管中の任意の他のコネキシンの調節剤である。
一態様において、本発明は、記載される１つ以上の組成物または製剤を備える製造品またはキットを提供する。例えば、キットは、有効量の１つ以上のコネキシンもしくはパネキシン調節剤ポリヌクレオチド、及び／あるいは１つ以上のコネキシンもしくはパネキシン調節剤ペプチドまたはペプチド模倣薬、ならびに／あるいはギャップ結合またはヘミチャネルリン酸化剤またはコネキシンカルボキシ末端ポリペプチド等の他の抗コネキシン剤を、単独で、あるいはコネキシンもしくはパネキシン調節剤、または他の眼治療薬のうちのいずれかと組み合わせて含む医薬製剤を含み得る。いくつかの実施形態において、キットは、有効量の１つ以上の抗コネキシン４３ポリヌクレオチド、及び／あるいは１つ以上の抗コネキシン４３ペプチドもしくはペプチド模倣薬、ならびに／あるいはギャップ結合もしくはヘミチャネルリン酸化剤、またはコネキシンカルボキシ末端ポリペプチド等の他の抗コネキシン剤を、単独で、または抗コネキシン４３調節剤、もしくは他の眼治療薬のうちのいずれかと組み合わせて含む医薬製剤を含み得る。いくつかの態様において、キットが備え得る任意のものは、Ｃｘ２６、Ｃｘ３０、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ４５、Ｃｘ５０、Ｃｘ５７、または眼もしくは血管中の任意の他のコネキシンの調節剤である。
キットは、包装材及び使用のための使用説明書と一緒に、別個の容器、または分割した容
器内の１つ以上の薬学的組成物をを備えてもよい。キットは、薬学的に許容される担体も備えてもよい。いくつかの実施形態において、キットは、薬学的組成物を投与するための構成要素、例えば、注射器、針、マイクロニードル、充填済みインプラント、またはイオン泳動デバイスも含んでもよい。コネキシンまたはパネキシン調節剤及び本明細書に記載される眼治療パートナーは、薬学的形態か、包帯／マトリックス携帯か、またはこれらの両方に関わらず、独立して、または優れた量の組み合わせパートナー（ａ）及び（ｂ）を用いた異なる所定の組み合わせの使用によって、すなわち同時、別個に、または順次投与され得る。次いで、パーツのキットは、例えば、同時に投与され得るか、またはキットオブパーツの任意のパーツに関して、異なる時点で、かつ等しいもしくは異なる時間間隔で経時的にずらされ得る。
本明細書に記載される本発明の化合物、組成物、または製剤、及び対象の治療のために使用するための使用説明書を含む容器を備える製造業者の物品も、提供される。例えば、別の態様において、本発明は、対象の治療のための使用を含む使用のための使用説明書と一緒に、治療的に有効な量の１つ以上のコネキシンもしくはパネキシン調節剤ポリヌクレオチド、及び／あるいは１つ以上のコネキシンもしくはパネキシン調節剤ペプチドまたはペプチド模倣薬、ならびに／あるいはギャップ結合もしくはヘミチャネルリン酸化剤、またはコネキシンカルボキシ末端ポリペプチド等の他の抗コネキシン剤を、単独で、または抗コネキシンタンパク質調節剤、または他の耐性創傷治癒剤のうちのいずれかと組み合わせて含む容器を備える製造品を含む。好適な抗コネキシンタンパク質調節剤、ポリヌクレオチドまたはペプチドは、コネキシン４３または４５調節剤、ポリヌクレオチドまたはペプチドであり得る。
いくつかの態様において、製造品は、１つ以上のコネキシンもしくはパネキシン調節剤ペプチド、またはペプチド模倣薬、あるいはギャップ結合もしくはヘミチャネルリン酸化剤、またはコネキシンカルボキシ末端ポリペプチド等の他の眼治療薬または抗コネキシン剤を、単独で、または抗コネキシン４３調節剤、もしくは他の耐性創傷治癒剤のうちのいずれかと組み合わせて含むマトリックスを含んでもよく、好適なコネキシンもしくはパネキシン調節剤作用剤、ポリヌクレオチド、またはペプチドは、抗コネキシン４３または４５調節剤、ポリヌクレオチドまたはペプチドであり得る。
コネキシン調節剤 本明細書に記載されるコネキシン調節剤、例えば、コネキシン４３
またはコネキシン４５調節剤は、例えば、細胞内へ、及び細胞からの分子の輸送を遮断または抑制することによって、（例えば、細胞から細胞への）細胞通信を調節する。コネキシン調節剤は、細胞質と細胞膜周辺間隙または細胞外間隙との間の分子の伝達に影響を与える。そのような調節剤は、一般的に、（コネクソンとも呼ばれる）ヘミチャネルを標的とし、これらは独立して、細胞質と細胞外間隙または組織との間の小分子の交換に関与し得る。したがって、本明細書に提供される化合物は、（ギャップ結合を介した）細胞間、または（ヘミチャネルを介した）細胞と細胞外間隙または組織との間のカップリングを間接的、または直接的に減少させることができ、細胞から細胞外間隙内への分子の輸送の調節は、本発明のある特定の化合物及び実施形態の範囲内にある。いくつかの態様において、コネキシン調節剤は、Ｃｘ２６、Ｃｘ３０、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ４３、Ｃｘ４５、Ｃｘ５０、Ｃｘ５７、または眼もしくは血管中の任意の他のコネキシンの調節剤である。
眼血管内のギャップ結合またはコネキシンヘミチャネルをとおる分子通過（例えば、輸送）の所望の抑制を引き起こし得る任意の調節剤が、本発明の実施形態で使用され得る。ギャップ結合またはコネキシンヘミチャネルをとおる分子の通過を調節する任意のコネキシン作用剤も、特定の実施形態で提供される（例えば、細胞の細胞質から細胞外間隙または隣接する細胞質内への分子の通過を調節、遮断、または減らすもの）。そのような抗コネ
キシン剤は、ギャップ結合アンカップリングの有無に関わらず、ギャップ結合またはコネキシンヘミチャネルをとおる分子の通過を調節し得る（ギャップ結合をとおる分子の輸送を遮断する）。そのような化合物には、例えば、結合タンパク質、ポリペプチド、及び例えば、全体的または部分的にギャップ結合またはヘミチャネルの機能または活性を遮断することができる他の有機化合物が含まれる。いくつかの実施形態において、抗コネキシン調節剤は、抗コネキシン４３調節剤または抗コネキシン４５調節剤でもよい。いくつかの態様においてコネキシン調節剤は、Ｃｘ２６、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ５０、Ｃｘ５７、または眼もしくは血管中の任意の他のコネキシン調節剤である。
コネキシン４３またはコネキシン４５調節剤等のある特定のコネキシン調節剤は、（例えば、ｍＲＮＡ転写または翻訳の下方制御による）コネキシン発現の下方制御を提供するか、さもなければコネキシンタンパク質、コネキシンヘミチャネルまたはギャップ結合の活性を減少または抑制する。下方制御の場合、これは、コネキシン発現が下方制御された部位で、ギャップ結合による直接細胞間通信の減少、またはヘミチャネルによる細胞質の細胞外間隙への暴露の影響がある。
ある特定の実施形態において、抗コネキシン剤は、ヘミチャネルまたはギャップ結合の活性または機能を妨げるか、減少させるか、または変える。本明細書において使用する場合、抗コネキシン剤によるギャップ結合活性または機能の調節には、ギャップ結合の閉鎖、ヘミチャネルの閉鎖、ならびに／またはギャップ結合及び／またはヘミチャネルをとおる分子もしくはイオンの通過が含まれ得る。
パネキシンまたはコネキシン調節剤には、アンチセンスポリヌクレオチドもしくはオリゴヌクレオチド、例えば、コネキシン４３オリゴデオキシヌクレオチド及び（ｓｉＲＮＡもしくはリボザイム官能基を有するポリヌクレオチド等の）他のポリヌクレオチド等の抗コネキシン、または抗パネキシンポリヌクレオチドと、コネキシンタンパク質及びパネキシン、ならびにヘミチャネルまたはギャップ結合活性もしくは機能を調節するコネキシンペプチド模倣薬及びペプチド類似体を含む、パネキシンまたはコネキシンペプチド及びポリペプチドを結合させるその抗体及び結合断片と、他のギャップ結合阻害剤及びギャップ結合タンパク質リン酸化剤と、が含まれる。コネキシンタンパク質ペプチド及びポリペプチドは、例えば、その機能を抑制するためにコネキシンタンパク質と結合してもよいか、または他のギャップ結合タンパク質へのその結合を抑制するもしくは妨害するためにコネキシンタンパク質の領域を模倣することによってコネキシン機能を抑制してもよい。
パネキシンペプチド及びポリペプチドは、例えば、パネキシンチャネル抑制するまたは妨害し得る。
他の実施形態において、コネキシン調節剤は、抗コネキシン４３ペプチドまたはペプチド模倣薬、例えば、抗コネキシン４３ヘミチャネル遮断ペプチドまたはペプチド模倣薬、例えば、コネキシン細胞外ドメイン、膜貫通領域、及びコネキシンカルボキシ末端ペプチド）を含む修飾または未修飾ペプチドもしくはペプチド模倣薬である。抗コネキシンヘミチャネル遮断ペプチドまたはペプチド模倣薬は、修飾されていてもよいか、または修飾されていなくてもよい。抗コネキシンヘミチャネル遮断ペプチドまたはペプチド模倣薬は、化学的、合成的に作製されるか、さもなければ製造される。
いくつかの実施形態において、本発明のコネキシン調節剤には、抗コネキシンペプチドまたはペプチド模倣薬、例えば、コネキシン４３ペプチドまたはペプチド模倣薬、例えば、例えば、本明細書に記載される神経障害性の眼の障害のうちのいずれかを治癒するのに有効な、治療上有効な本発明の方法で有用なコネキシンの細胞外ドメインの一部分を含むペ
プチド、及びコネキシンのカルボキシ末端部分の一部分を含むペプチドを含む、本明細書に記載されるペプチドのうちのいずれかが含まれる。いくつかの態様において、治療上有効な修飾または未修飾ペプチドもしくはペプチド摸倣薬は、コネキシン４３等のコネキシンの細胞外ドメインまたは膜貫通ドメインの一部分を含む。
抗体及び結合断片、ならびにペプチド模倣薬及びペプチド類似体を含むペプチド及びポリペプチドを合成する方法はまた、好適な方法を使って行なわれ得る。例えば、Ｌｉｈｕ Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１；９５（１８）：１０８３６－１０８４１（Ｓｅｐｔ １ １９９８）；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８８）“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕｅｌ”Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９９９）“Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕｅｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照されたい。
コネキシンポリヌクレオチド及びオリゴヌクレオチド
本発明のいくつかの態様において、コネキシン調節剤は、ペプチドまたはペプチド摸倣薬である。コネキシン調節剤には、例えば、コネキシン４３またはコネキシン４５ペプチドまたはペプチド摸倣薬、好ましくはコネキシン４３ペプチドまたはペプチド摸倣薬が含まれ得る。いくつかの態様において、コネキシンペプチドまたはペプチド摸倣薬は、Ｃｘ２６、Ｃｘ３０、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ５０、Ｃｘ５７ペプチドまたはペプチド摸倣薬であり得る。いくつかの態様において、コネキシン調節剤は、前述のもののうちのいずれかを含んでもよいか、または含まなくてもよい。
いくつかの実施形態において、コネキシン４３調節剤は、例えば、リンカーによってＮ末端で２つのドデシル基と複合化している配列番号１７３（ＳＲＰＴＥＫＴ）、配列番号１６８（ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ）、または配列番号１６８を含み得る。ペプチドは、１つ以上の修飾アミノ酸、アミノ酸類似体を含み得るか、またはさもなければ修飾され得る、例えば、細胞内部移行トランスポータと複合化もしくは結合し得る。
別の非限定的だが好ましい実施形態において、抗コネキシン化合物は、コネキシン４３もしくはコネキシン４５、またはＣｘ２６、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ５０、Ｃｘ５７、あるいは眼もしくは血管中の任意の他のコネキシン等のコネキシンの膜貫通領域の一部分と対応するアミノ酸配列を含むペプチドを含む。特定の非限定的な実施形態において、抗コネキシン化合物は、コネキシン、例えば、コネキシン４３または４５タンパク質配列の約３～約３０個の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、コネキシン、例えば、コネキシン４３または４５タンパク質配列の約５～約２０個の連続アミノ酸、コネキシン、例えば、コネキシン４３または４５タンパク質配列の約８～約１５個の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、またはコネキシン４３または４５タンパク質配列の約１１、１２、または１３個の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドを含むアミノ酸配列を有するペプチドである。他の非限定的な実施形態には、コネキシン４３または４５タンパク質配列の少なくとも約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、または３０個の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドである抗コネキシン化合物が含まれる。いくつかの態様において、コネキシン調節剤（抗コネキシン化合物）は、前述のもののうちのいずれかを含んでもよいか、または含まなくてもよい。
他の抗コネキシン化合物中、模倣ペプチドは、コネキシン４３タンパク質配列の３７～７６及び１７８～２０８位のアミノ酸に対応するコネキシン４３の細胞外ドメインに基づく。したがって、本明細書に記載されるある特定のペプチドは、コネキシン４３タンパク質
配列の３７～７６及び１７８～２０８位の領域に対応するアミノ酸配列を有する。ペプチドは、コネキシン４３タンパク質配列の部分と同一のアミノ酸配列を有する必要はなく、保存的アミノ酸変化は、ペプチドが本明細書に記載され、さもなければ当分野で既知のアッセイで結合活性または機能的活性を保持するようにされ得る。他の実施形態において、模倣ペプチドは、細胞外ドメイン以外のコネキシンタンパク質内のペプチド標的領域（例えば、３７～７６及び１７８～２０８位に対応しないコネキシン４３タンパク質配列の部分）に基づく。
いくつかの実施形態において、コネキシン４５調節剤は、例えば、ペプチドを含んでもよい。ペプチドは、１つ以上の修飾アミノ酸、アミノ酸類似体を含み得るか、またはさもなければ修飾され得る、例えば、細胞内部移行トランスポータまたは生物学的利用能剤と複合化もしくは結合し得る。
非限定的だが好ましい実施形態において、コネキシン調節剤は、コネキシン４５の膜貫通領域またはコネキシン４５のＣ末端領域の一部分に対応するアミノ酸配列を含むペプチドを含む。特定の非限定的な実施形態において、例えば、抗コネキシン化合物は、既知のコネキシン４５配列の約３～約３０個の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、既知のコネキシン４５配列の約５～約２０個の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、既知のコネキシン４５配列の約８～約１５個の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、または既知のコネキシン４５配列の約１１、１２、または１３個の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドである。他の非限定的な実施形態は、既知のコネキシン４５配列の少なくとも約３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、または３０個の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドである抗コネキシン化合物を含む。本明細書に提供されるある特定の抗コネキシン化合物中、模倣ペプチドは、既知のコネキシン４５配列の４６～７５及び１９９～２２８位のアミノ酸に対応するコネキシン４５の細胞外ドメインに基づく。したがって、本明細書に記載されるある特定のペプチドは、既知のコネキシン４５配列の４６～７５及び１９９～２２８位の領域に対応するアミノ酸配列を有する。ペプチドは、既知のコネキシン４５配列のこれらの部分と同一のアミノ酸配列を有する必要はなく、保存的アミノ酸変化は、ペプチドが本明細書に記載され、さもなければ当分野で既知のアッセイで結合活性または機能的活性を保持するようにされ得る。他の実施形態において、模倣ペプチドは、細胞外ドメイン以外のコネキシンタンパク質内のペプチド標的領域（例えば、４６～７５及び１９９～２２８位に対応しない既知のコネキシン４５配列の部分）に基づく。様々なコネキシン配列を開示する国際公開第２００６／１３４４９４号は、参照により組み込まれる。いくつかの態様において、コネキシン調節剤は、前述のもののうちのいずれかを含んでもよいか、または含まなくてもよい。
いくつかの態様において、本発明の治療の方法のうちのいずれかで使用される抗コネキシン調節剤は、コネキシン調節剤、例えば、コネキシン４５またはコネキシン４３調節剤である。いくつかの実施形態においてコネキシン調節剤は、コネキシン４３オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドであり、これらは、例えば、コネキシン４３アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドであり得る。本発明のオリゴヌクレオチド及びポリヌクレオチドは、化学的、合成的に作製されるか、さもなければ製造される。一実施形態において、コネキシン調節剤は、化学修飾または未修飾であるかに関わらず、コネキシンタンパク質アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドである。本発明は、例えば、修飾または未修飾コネキシン４３ポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドから選択されるコネキシン４３調節剤を取り上げる。いくつかの態様において、本発明は、修飾または未修飾コネキシン４３アンチセンスオリゴヌクレオチド及び修飾もしくは未修飾コネキシン４３アンチセンスポリヌクレオチド、または修飾及び未修飾ヌクレオチドの混合物を含むオリゴヌクレオチドもしくはポリヌクレオチド等のコネキシンアンチセンス化合物に関
する。いくつかの態様において、本明細書の方法で使用されるコネキシン４３アンチセンス化合物は、天然型核酸塩基及び未修飾ヌクレオシド間結合を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドでる。典型的に、ポリヌクレオチドは、一本鎖であるが、二本鎖でもあり得る。
配列番号１～１６から選択される核酸塩基配列を含む修飾または未修飾コネキシン４３アンチセンス化合物も、本明細書に取り上げられる。本発明のポリヌクレオチドは、８０ヌクレオチド長未満、例えば、１２～１８から約５０～８０ヌクレオチド長、好ましくは、約３０ヌクレオチド長以下、例えば、１２～約３０ヌクレオチド長、より好ましくは、約１５～約３０ヌクレオチド長を有する合成ポリヌクレオチドを含む。一例において、ポリヌクレオチドは、３０個のヌクレオチドを有する。いくつかの態様において、本発明の方法は、配列番号１～１６から選択されるヌクレオチド配列を含むか、または配列番号１７の約８～４０個のヌクレオチドを含む、最大４０ヌクレオチド長、例えば、１５～４０ヌクレオチド長のコネキシン４３アンチセンス化合物の使用を取り上げる。
本発明のいくつかの態様において、コネキシン４３アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドは、配列番号１～１６または配列番号１７の一部分から選択される配列を有するポリヌクレオチドに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の相同性を有する。
ある特定の実施形態において提供され、使用されるものを含むコネキシン調節剤は、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アンチセンスポリヌクレオチド、デオキシリボザイム、モルホリノオリゴヌクレオチド、ＲＮＡｉ分子、ｓｉＲＮＡ分子、ＰＮＡ分子、ＤＮＡｚｙｍｅ、及び５’末端突然変異Ｕ１核内低分子ＲＮＡ、ならびに前述のものの類似体からなる群から選択される１つまたはポリヌクレオチドを含み得る。これらの化合物及び他の化合物は、単独で、またはあともう１つの摸倣物もしくは他の結合ペプチドと組み合わせて使用され得る。
少なくとも１個の未修飾ヌクレオチドを含むコネキシンアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドが、本発明に取り上げられる。一態様において、コネキシンアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドは、少なくとも１個の修飾ヌクレオチドを含んでもよい、かつ／または少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間結合、及び／もしくは少なくとも１つの修飾糖部分を有してもよい。修飾ヌクレオシド間結合は、例えば、ホスホロチオエート結合でもよい。いくつかの態様において、例えば、コネキシンポリヌクレオチドは、立体配座的に緊張させたヌクレオチド、例えば、ロックド核酸（ＬＮＡ）または架橋核酸（ＢＮＡ）を含む少なくとも１個のヌクレオチドを含んでもよい。ロックトヌクレオチドは、例えば次の種類：２′－Ｏ－ＣＨ２－４′（オキシ－ＬＮＡ）、２′－ＣＨ２－ＣＨ２－４′（メチレン－ＬＮＡ）、２′－ＮＨ－ＣＨ２－４′（アミノ－ＬＮＡ）、２′－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２－４′（メチルアミノ－ＬＮＡ）、２′－Ｓ－ＣＨ２－４′（チオ－ＬＮＡ）、及び２′－Ｓｅ－ＣＨ２－４′（セレノ－ＬＮＡ）のうちの２つから選択されてもよい。いくつかの態様において、修飾ヌクレオチドは、ロックド核酸またはアンロックド核酸でもよい。いくつかの態様において、コネキシンアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドは、コネキシン４３アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドである。
ＲＮＡｉ、ｓｉＲＮＡ、及びリボザイムポリヌクレオチド、ならびに修飾骨格及び混合骨格を有するポリヌクレオチド等のアンチセンスポリヌクレオチド及び他の抗コネキシンポリヌクレオチドの合成が、行なわれ得る。例えば、Ｓｔｅｉｎ Ｃ．Ａ． ａｎｄ Ｋｒｉｅｇ Ａ．Ｍ．（ｅｄｓ），Ａｐｐｌｉｅｄ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９８（Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ）を参照され
たい。
アンチセンスポリヌクレオチドは、コネキシン４３またはコネキシン４５等のコネキシンタンパク質の転写及び／または翻訳を抑制し得る。アンチセンスポリヌクレオチドは、一般に、コネキシンタンパク質ｍＲＮＡ、例えば、コネキシン４３に対するアンチセンスである。そのようなポリヌクレオチドは、コネキシンタンパク質ｍＲＮＡへとハイブリッド形成する能力があり得、したがって、転写、ｍＲＮＡプロセシング、核からのｍＲＮＡ輸送、翻訳、またはｍＲＮＡ分解を含むコネキシンタンパク質ｍＲＮＡ代謝の１つ以上の態様を妨げることによって、コネキシンの発現を抑制し得る。アンチセンスポリヌ
クレオチドは、典型的に、コネキシンｍＲＮＡへとハイブリッド形成して、ｍＲＮＡの翻訳及び／または不安定化の直接抑制を引き起こし得る二重鎖を形成する。そのような二重鎖は、ヌクレアーゼによる分解の影響を受けやすい場合がある。好ましくは，ポリヌクレオチドは、コネキシン４３遺伝子またはｍＲＮＡからの転写及び／または翻訳の特異的阻害剤であり、他の遺伝子またはｍＲＮＡｓからの転写及び／または翻訳を抑制しない。特異性に関するヒトゲノム配列データベースにおけるポリヌクレオチド配列のスクリーニングも、行なわれてもよい。産生物は、（ｉ）コード配列に対して５’、及び／または（ｉｉ）コード配列に対して、及び／または（ｉｉｉ）コード配列に対して３’のいずれかで、コネキシン４３遺伝子またはｍＲＮＡと結合することができる。
アンチセンスポリヌクレオチドは、コネキシン４３ｍＲＮＡ等のコネキシンタンパク質ｍＲＮＡの一部分へとハイブリッド形成してもよい。典型的に、アンチセンスポリヌクレオチドは、コネキシンタンパク質ｍＲＮＡのリボソーム結合領域またはコーディング領域へとハイブリッド形成する。ポリヌクレオチドは、コネキシンｍＲＮＡの一領域に対して相補的であり得る。例えば、ポリヌクレオチドは、コネキシンｍＲＮＡの一部の的確な補体であり得る。しかしながら、絶対的相補性は必要ではなく、生理学的条件下で約２０℃、３０℃、または４０℃超の融解温度を有する二重鎖を形成するのに十分な相補性を有するポリヌクレオチドは、本発明における使用に特に好適である。
したがって、ポリヌクレオチドは、典型的に、ｍＲＮＡに対して相補的である配列の相同体である。ポリヌクレオチドは、約５０℃～約６０℃で０．０３Ｍの塩化ナトリウム及び０．０３Ｍのクエン酸ナトリウム等の中から高ストリンジェンシーの条件下で、コネキシンタンパク質ｍＲＮＡへとハイブリッド形成するポリヌクレオチドであり得る。
本発明のある特定の実施形態において、８０ヌクレオチド長未満、例えば、１２～１８、または１５～１８から約５０～８０ヌクレオチド長、好ましくは、約３０ヌクレオチド長以下、例えば、１２～約３０ヌクレオチド長、より好ましくは、約１５～約２０、または約１５～約３０ヌクレオチド長を有する合成ポリヌクレオチドを含む。一例において、ポリヌクレオチドは、３０個のヌクレオチドを有する。いくつかの態様において、本発明の方法は、配列番号１～１６から選択されるヌクレオチド配列を含むか、または配列番号１７の約８～４０個のヌクレオチドを含む、最大４０ヌクレオチド長、例えば、１５～４０ヌクレオチド長のコネキシン４３アンチセンス化合物の使用を取り上げる。
あるいは、アンチセンスポリヌクレオチドは、２つ以上のコネキシンタンパク質にポリヌクレオチドを含んでもよい組成物の一部であり得る。好ましくは、ポリヌクレオチドが向けられるコネキシンタンパク質は、コネキシン４３である。様々なコネキシンに向けられる好適な例となるポリヌクレオチド（及びＯＤＮ）は、表１に記載される。
本発明で使用するためのポリヌクレオチドは、好適に未修飾ホスホジエステルオリゴマーであり得るか、または修飾されていてもよい。そのようなオリゴデオキシヌクレオチドは、長さが異なり得る。３０塩基長ポリヌクレオチドが、好適であることが見出されている
が、１５～３０個以下のヌクレオチドを有するポリヌクレオチドも好適である。
本発明の多くの態様は、オリゴデオキシヌクレオチドを参照して記載される。しかしながら、（ＲＮＡポリヌクレオチド等の）他の好適なポリヌクレオチドが、これらの態様において使用され得ることが理解される。
アンチセンスポリヌクレオチドは、化学修飾されてもよい。化学修飾は、ヌクレアーゼに対するアンチセンスポリヌクレオチドの耐性を強化することができ、細胞に入るアンチセンスポリヌクレオチドの能力を強化することができる。例えば、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドが、使用され得る。他のデオキシヌクレオチド類似体には、メチルホスホネート、ホスホロアミデート、ホスホロジチオエート、Ｎ３’Ｐ５’－ホスホロアミデート、及びオリゴリボヌクレオチドホスホロチオエート、ならびにこれらの２’－Ｏ－アルキル類似体及び２’－Ｏ－メチルリボヌクレオチドメチルホスホネートが含まれる。あるいは、混合骨格オリゴヌクレオチド（「ＭＢＯ」）が使用されてもよい。ＭＢＯは、ホスホチオエートオリゴデオキシヌクレオチのセグメント、及び修飾オリゴデオキシヌクレオチドまたはオリゴリボヌクレオチドの適切に置かれたセグメントを含む。ＭＢＯは、ホスホロチオエート結合のセグメント、及び非イオン性、かつヌクレアーゼまたは２’－Ｏ－アルキルオリゴリボヌクレオチドに高い耐性を示すメチルホスホネート等の他の修飾オリゴヌクレオチドの他のセグメントを有する。修飾骨格及び混合骨格オリゴヌクレオチドを調製する方法は、当分野で既知である。
少なくとも１個の未修飾ヌクレオチドを含むコネキシン４３アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドが、本発明に取り上げられる。一態様において、コネキシン４３アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドは、少なくとも１個の修飾ヌクレオチドを含んでもよく、かつ／または少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間結合、及び／もしくは少なくとも１つの修飾糖部分を有してもよい。修飾ヌクレオシド間結合は、例えば、ホスホロチオエート結合でもよい。いくつかの態様において、例えば、コネキシン４３ポリヌクレオチドは、立体配座的に緊張させたヌクレオチド、例えば、ロックド核酸（ＬＮＡ）または架橋核酸（ＢＮＡ）を含む少なくとも１個のヌクレオチドを含んでもよい。ロックトヌクレオチドは、例えば、次の種類：２′－Ｏ－ＣＨ２－４′（オキシ－ＬＮＡ）、２′－ＣＨ２－ＣＨ２－４′（メチレン－ＬＮＡ）、２′－ＮＨ－ＣＨ２－４′（アミノ－ＬＮＡ）、２′－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２－４′（メチルアミノ－ＬＮＡ）、２′－Ｓ－ＣＨ２－４′（チオ－ＬＮＡ）、及び２′－Ｓｅ－ＣＨ２－４′（セレノ－ＬＮＡ）のうちの１つから選択されてもよい。いくつかの態様において、修飾ヌクレオチドは、ロックド核酸またはアンロックド核酸でもよい。
本発明のいくつかの態様において、コネキシン４３アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドは、配列番号１～６４から選択される配列を有するポリヌクレオチドに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の相同性を有する。
他のコネキシン４３調節剤
コネキシン調節剤、例えば、コネキシン４３または４５調節剤を含むペプチド、ペプチド模倣薬、抗体、抗体断片等は、ギャップ結合及びヘミチャネルの好適な調節剤でもある。例となるギャップ結合調節剤には、これらに限定されない、ポリペプチド（例えば、抗体、その結合断片、及び合成構築物）、ならびに他のギャップ結合阻害剤、ならびにギャップ結合タンパク質リン酸化剤を含む。いくつかの態様においてコネキシン調節剤は、Ｃｘ２６、Ｃｘ３０、Ｃｘ３１．１、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ４３、Ｃｘ５０、Ｃｘ５７、または眼もしくは血管中の任意の他のコネキシンの調節剤である。
コネキシン調節剤、例えば、コネキシン４３または４５調節剤には、例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片を含む）；一本鎖抗体；一本鎖Ｆｖｓ；及び一本鎖結合分子、例えば、結合ドメイン、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含むもの、特定の抗体または他の結合分子と接触する抗原決定基（すなわち、一般にエピトープと呼ばれる分子の一部）に結合することができる組換え抗体および抗体断片が含まれる。・・真希さんの最終的なものと確認抗体及び抗結合抗体断片等を含むこれらの結合タンパク質は、キメラまたはヒト化してもよく、さもなければ、それらが投与される対象において免疫原性が低くなるように作製してもよく、合成するか、組み換え的に産生させるか、発現ライブラリー中で産生させてもよい。当分野で既知であるかまたは後に発見されるいずれの結合分子、例えば、本明細書中で参照され、かつ／または当分野でより詳細に説明されている結合分子も想定している。例えば、結合タンパク質には、抗体等だけでなく、標的（例えば、パネキシンタンパク質）に結合するリガンド、受容体、ペプチド模倣薬、または他の結合断片もしくは分子（例えば、コネキシン、ヘミチャネル、または関連分子）が含まれる。
結合分子は、一般に、結合特異性が含まれるがこれに限定されない所望の特異性、及び所望の親和性を有することになる。親和性は、例えば、約１０４Ｍ－１以上、約１０６Ｍ－１以上、約１０７Ｍ－１以上、約１０８Ｍ－１以上のＫａであってもよい。さらに約１０８Ｍ－１を超える親和性が好適であり、これは例えば、約１０９Ｍ－１以上、約１０１０Ｍ－１、約１０１１Ｍ－１、及び約１０１２Ｍ－１である。本発明に従う結合タンパク質の親和性は、従来技法、例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ ｅｔ ａｌ．，（１９４９）Ａｎｎ． Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．５１：６６０によって記載されるものを使用して容易に決定され得る。
ギャップ結合を閉鎖するために使用される例となる化合物（例えば、リン酸化コネキシン４３チロシン及び／またはセリン残基）は、米国特許第７，１５３，８２２号及び米国特許第７，２５０，３９７号に報告されている。例となるペプチド及びペプチド模倣薬は、Ｇｒｅｅｎらの国際公開第２００６１３４４９４号に報告されている。国際公開第２００６０６９１８１号及び国際公開第２００３０３２９６４号も参照されたい。ギャップ結合を閉鎖するために使用される他の作用剤の例には、抗コネキシン剤、例えば、抗コネキシンポリヌクレオチド（例えば、アルファ－ｌコネキシンオリゴデオキシヌクレオチド等のコネキシン阻害剤）、抗コネキシンペプチド（例えば、抗体及び抗体結合断片）、ならびにペプチド模倣薬（例えば、アルファ－ｌ抗コネキシンペプチドまたはペプチド模倣薬）、ギャップ結合閉鎖または阻害化合物、ヘミチャネル閉鎖または遮断化合物、ならびにコネキシンカルボキシ末端ポリペプチド、例えば、ＺＯ－１またはＺＯ－１の結合部位に結合するポリペプチド、抗ＺＯ－１ポリヌクレオチドが含まれる。
疎水性プロットから得られたデータを使用することにより、コネキシンが４つの膜貫通領域及び２つの短い細胞外ループを含むことが唱えられている。コネキシンの第１及び第２の細胞外領域の配置は、スプリットギャップ結合上の対応するエピトープの免疫局在のために使用される抗ペプチド抗体の報告された産生をさらに特徴とした。Ｇｏｏｄｅｎｏｕｇｈ Ｄ．Ａ． Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １０７：１８１７－１８２４（１９８８）；Ｍｅｙｅｒ Ｒ．Ａ．，Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １１９：１７９－１８９（１９９２）。
２つの隣接した細胞によって貢献されたヘミチャネルの細胞外ドメインは、互いと「ドッキング」して、完全なギャップ結合チャネルを形成する。これらの細胞外ドメインの相互作用を妨げる試薬は、細胞間通信を損なう。ギャップ結合及びヘミチャネルのペプチド阻害剤が報告されている。例えば、Ｂｅｒｔｈｏｕｄ，Ｖ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ． Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ． Ｐｈｙｓｉｏｌ． ２７９：Ｌ６１
９－Ｌ６２２（２０００）、Ｅｖａｎｓ，Ｗ．Ｈ． ａｎｄ Ｂｏｉｔａｎｏ，Ｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． Ｔｒａｎｓ． ２９：６０６－６１２、及びＤｅ Ｖｒｉｅｓｅ Ａ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ． ６１：１７７－１８５（２００１）を参照されたい。コネキシンの細胞外ループ内の配列に対応する短鎖ペプチドは、細胞間通信を抑制すると言われている。Ｂｏｉｔａｎｏ Ｓ．ａｎｄ Ｅｖａｎｓ Ｗ．Ａｍ
Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２７９：Ｌ６２３－Ｌ６３０（２０００）。一対のアフリカツメガエル卵細胞内に発現したコネキシン（Ｃｘ）３２によって産生された細胞間チャネル形成の阻害剤としてのペプチドの使用も、報告されている。Ｄａｈｌ Ｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｊ ６７：１８１６－１８２２（１９９４）。Ｂｅｒｔｈｏｕｄ，Ｖ．Ｍ．及びＳｅｕｌ，Ｋ．Ｈ．は、これらの結果の一部を要約した。Ａｍ Ｊ．，Ｐｈｙｓｉｏｌ． Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ． Ｐｈｙｓｉｏｌ． ２７９：Ｌ６１９－Ｌ６２２（２０００）。
抗コネキシン剤には、コネキシン４３（配列番号１９）等のコネキシンタンパク質の約５～２０個の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、コネキシン４３の約８～１５個の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、またはコネキシン４３の約１１～１３個の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドが含まれる。他の抗コネキシン剤には、コネキシン４３の少なくとも約５、少なくとも約６、少なくとも約７、少なくとも約８、少なくとも約９、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、または少なくとも約３０個の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドが含まれる。他の抗コネキシン４３調節剤には、コネキシン４３の細胞外ドメイン、例えば、ＳＲＰＴＥＫＴまたはＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴを含むペプチドまたはペプチド摸倣薬が含まれる。他の抗コネキシン４３調節剤は、コネキシン４３のＣ末端領域を含み、国際公開第２００６／０６９１８１号、またはその修正版を参照されたい。
一態様において本発明は、前記対象の眼に治療的に有効な量の少なくとも１つのコネキシンまたはパネキシン調節剤を投与することにより、神経障害性の眼の障害を治療するための薬学的組成物、製造品、及び方法に関する。いくつかの態様において、神経障害性の眼の障害は、例えば、網膜神経節細胞の喪失及び／または緑内障性視神経障害であり得る。いくつかの態様において、網膜神経節細胞の喪失を停止、予防、または治療するのに有効である治療的に有効な量の少なくとも１つのコネキシン調節剤の投与は、緑内障性視神経内の神経栄養因子を上昇させ、かつ硝子体のグルタミン酸濃度を低減させるのにさらに有用である。
ある特定の別の態様において、ギャップ結合修飾剤には、例えば、式Ｉまたは式ＩＩの化合物が含まれる。ある特定の別の態様において、ギャップ結合修飾剤には、例えば、脂肪族アルコール；オクタノール；ヘプタノール；麻酔薬（例えば、ハロタン）、エトレン、フローセン、プロポフォール、及びチオペンタール；アナンダミド；アリールアミノベンゾエート（ＦＦＡ：フルフェナム酸及び親油性である類似の誘導体）；カルベノキソロン；カルコン：（２’，５’－ジヒドロキシカルコン）；ＣＨＦ（クロロヒドロキシフラノン）；ＣＭＣＦ（３－クロロ－４－（クロロメチル）－５－ヒドロキシ－２（５Ｈ）－フラノン）；デキサメタゾン；ドキソルビシン（及び他のアントラキノン誘導体）；エイコサノイドトロンボキサンＡ（２）（ＴＸＡ（２））摸倣物；ＮＯ（一酸化窒素）；脂肪酸（例えば、アラキドン酸、オレイン酸及びリポキシゲナーゼ代謝物；フェナム酸（フルフェナム酸（ＦＦＡ）、ニフルミン酸（ＮＦＡ）、及びメクロフェナム酸（ＭＦＡ））；ゲニステイン；グリチルレチン酸（ＧＡ）：１８ａ－グリチルレチン酸及び１８－ベータ－グリチルレチン酸、ならびにこれらの誘導体；リンデン；リゾホスファチジン酸；メフロキン；メナジオン；２－メチル－１，４－ナフトキノン、ビタミンＫ（３）；ナフェノピン；オカダ酸；オレアミド；オレイン酸；ＰＨ、細胞内酸性化によりゲーティング；例え
ば、酸性化剤；多価不飽和脂肪酸；脂肪酸ＧＪＩＣ阻害剤（例えば、オレイン酸及びアラキドン酸）；キニジン；キニン；全トランス型レチノイン酸；ならびにタモキシフェンが含まれ得る。
ポリヌクレオチド相同体
相同性及び相同体が本明細書で考察される（例えば、ポリヌクレオチドは、パネキシンｍＲＮＡにおける配列に対する補体の相同体であってもよい）。そのようなポリヌクレオチドは、典型的には、例えば、（相同配列の）少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、少なくとも約３０、少なくとも約４０、少なくとも約５０、または少なくとも約１００のより連続したヌクレオチドの領域にわたって、関連配列と少なくとも約７０％の相同性、好ましくは、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、または少なくとも約９９％の相同性を有する。
相同性または配列同一性は、当分野の任意の方法に基づいて計算し得る。例えば、ＵＷＧＣＧパッケージは、相同性を計算するために使用することができるＢＥＳＴＦＩＴプログラムを提供する（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，ｅｔ ａｌ．（１９８４）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １２，ｐ３８７－３９５）。また、例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ． Ｆ．（１９９３），Ｊ Ｍｏｌ Ｅｖｏｌ ３６：２９０－３００、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ（１９９０），Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２１５：４０３－１０に記載のように、ＰＩＬＥＵＰ及びＢＬＡＳＴアルゴリズムを使用して、配列同一性を計算するか、または配列を整列させることができる。ＢＬＡＳＴ分析を実施するためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）から一般に利用可能である。ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、２配列間の類似性の統計分析を行う。例えば、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３－５７８７を参照されたい。相同配列は、典型的には、少なくとも約（またはそれ以下で）２、５、１０、１５、２０、またはそれ以上のヌクレオチド差異（置換、欠失、または挿入であり得る）で関連配列と異なる。これらの差異を、配列同一性または相同性の計算に関して上述した領域のうちのいずれかにわたって測定することができる。
相同配列は、典型的には、バックグラウンドを有意に超えるレベルで元の配列と選択的にハイブリッド形成する。選択的ハイブリッド形成は、典型的には、中～高ストリンジェンシー条件（例えば、約５０℃～約６０℃で０．０３Ｍ塩化ナトリウム及び０．０３Ｍクエン酸ナトリウム）を使用して達成する。しかしながら、そのようなハイブリッド形成は、当分野で既知の任意の好適な条件下で行ってもよい（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．（１９８９），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌを参照されたい）。例えば、高ストリンジェンシーが必要な場合、好適な条件としては、６０℃での０．２×ＳＳＣが挙げられる。より低いストリンジェンシーが必要な場合、好適な条件としては、６０℃での２×ＳＳＣが挙げられる。
ペプチド及びポリペプチド抗パネキシン剤
ペプチド、ペプチド模倣薬、抗体、抗原結合抗体断片等を含む、パネキシン結合タンパク質も、接着結合の好適な調節剤である。
結合タンパク質には、例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片を含む）；一本鎖抗体；一本鎖Ｆｖ；及び一本鎖結合分子、例えば、結合ドメイン、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインを含むもの、ならびに特定の抗体または他の結合分子と接触する抗原決定基（すなわち、一般にエピトープと呼ばれる分子の一部）に結合することができる組み換え抗体及び抗体
断片が含まれる。抗体及び抗結合抗体断片等を含むこれらの結合タンパク質は、キメラまたはヒト化してもよく、さもなければ、それらが投与される対象において免疫原性が低くなるように作製してもよく、合成するか、組み換え的に産生させるか、発現ライブラリー中で産生させてもよい。当分野で既知であるかまたは後に発見されるいずれの結合分子、例えば、本明細書中で参照され、かつ／または当分野でより詳細に説明されている結合分子も想定している。例えば、結合タンパク質には、抗体等だけでなく、標的（例えば、パネキシンタンパク質）に結合するリガンド、受容体、ペプチド模倣薬、または他の結合断片若しくは分子（例えば、ファージディスプレイによって産生される）が含まれる。
結合分子は、一般に、結合特異性が含まれるがこれに限定されない所望の特異性、及び所望の親和性を有することになる。親和性は、例えば、約１０４Ｍ－１以上、約１０６Ｍ－１以上、約１０７Ｍ－１以上、約１０８Ｍ－１以上のＫａであってもよい。さらに約１０８Ｍ－１を超える親和性が好適であり、これは例えば、１０９Ｍ－１、約１０１０Ｍ－１、約１０１１Ｍ－１、及び約１０１２Ｍ－１である。本発明に従う結合タンパク質の親和性は、従来技法、例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ，ｅｔ ａｌ．，１９４９ Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．５１：６６０によって記載されるものを使用して容易に決定され得る。
抗パネキシン剤には、パネキシンタンパク質由来のパネキシンドメインモチーフ（例えば、パネキシン１、パネキシン２、パネキシン３等）に対応するアミノ酸配列を含むペプチドが含まれる。他の実施形態は、パネキシン遺伝子、例えば、以下の実施例１に示すパネキシン１遺伝子をコードする、少なくとも約５、少なくとも約６、少なくとも約７、少なくとも約８、少なくとも約９、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、または少なくとも約３０個の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドである抗コネキシン剤を対象とする。本明細書で提供されるある特定の抗コネキシン剤においては、パネキシン１の細胞外ドメインを使用して、特定のペプチド配列を発生させてもよい。ペプチドは、天然型パネキシンのこれらの部分と同一のアミノ酸配列を有する必要はなく、ペプチドが結合活性または機能活性を保持するように保存的にアミノ酸を変化させてもよい。あるいは、ペプチドは、細胞外ドメインの他の領域を標的にしてもよい。
抗パネキシンペプチドは、ペプチドが機能的に活性な抗パネキシン剤であるような保存的アミノ酸置換を持つパネキシン細胞外ドメインの一部分に対応する配列を含み得る。例となる保存的アミノ酸置換には、例えば、非極性アミノ酸の別の非極性アミノ酸による置換、芳香族アミノ酸の別の芳香族アミノ酸による置換、脂肪族アミノ酸の別の脂肪族アミノ酸による置換、極性アミノ酸の別の極性アミノ酸による置換、酸性アミノ酸の別の酸性アミノ酸による置換、塩基性アミノ酸の別の塩基性アミノ酸による置換、イオン性アミノ酸の別のイオン性アミノ酸による置換が含まれる。
製造及び安定性
本発明のポリヌクレオチドは、オリゴヌクレオチド合成のための固相化学を使用して製造することができる。一態様において、本発明の製剤は、本発明のポリヌクレオチドのナトリウム塩等の本発明のポリヌクレオチドの塩を含むことになる。一実施形態において、本製剤は、例えば、配列番号１～１６のうちのいずれか１つまたは配列番号１７の一部分を有するポリヌクレオチドのナトリウム塩を含んでもよい。いくつかの実施形態において、配列番号１～１６のいずれか１つを有するポリヌクレオチドは、配列番号１～１６のいずれか１つまたは配列番号１７の一部分を有する修飾オリゴデオキシヌクレオチドであってもよい。
いくつかの実施形態において、本発明の製剤は、実質的に純粋である。実質的に純粋とは、製剤が、いずれのヌクレオチドまたは非ヌクレオチド不純物も、約１０％、５％、または１％未満、好ましくは約０．１％未満で含むことを意味する。いくつかの実施形態において、コネキシン４３調節剤の代謝物を含む総不純物は、１５％以下となる。いくつかの実施形態において、コネキシン４３調節剤の代謝物を含む総不純物は、１２％以下となる。いくつかの実施形態において、コネキシン４３調節剤の代謝物を含む総不純物は、１１％以下となる。他の実施形態において、コネキシン４３調節剤の代謝物を含む総不純物は、１０％以下となる。
いくつかの実施形態において、本発明の製剤の純度は、アニオン交換ＨＰＬＣ（ＡＥＸ－ＨＰＬＣ）または質量分析から選択される方法を使用して測定され得る。質量分析としては、ＬＣ／ＭＳまたはＬＣ／ＭＳ／ＭＳを挙げることができる。このアッセイは、いくつかの実施形態において、ＡＥＸ－ＨＰＬＣとＬＣ／ＭＳとの両方を含んでもよい。
滅菌組成物は、抗コネキシン調節剤を製剤ビヒクル中に溶解させることによる無菌処理を使用して調製した本発明のコネキシン４３調節剤を含む。一実施形態において、本製剤はまた、濾過によって滅菌してもよい。本発明の製剤の製造に使用される賦形剤は、医薬製品において広く使用され、薬局方に収載されている基準に公開されている。
様々な小有機分子が、ギャップ結合またはヘミチャネル電流の抑制において活性を有することが報告されている。これらには、トリアリールメタン（ＴＲＡＭ）、キニン、メフロキン、フェナム酸、２－アミノフェノキシボレート及び誘導体、グリチルレチン酸及び誘導体、ハロタン及びエタン等の揮発性麻酔薬、長鎖アルコール（例えば、ヘプタノール及びオクタノール）等の親油性化合物、オレアミドを含む脂肪酸アミド、シクロデキストリン、シスプラチン、ポリアミン、及びテトラアリルアンモニウム（ｔｅｔｒａａｌｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ）イオンが含まれる。ますます多くの研究もまた、Ｅ１（Ｇａｐ２６ペプチド）の保存ＱＰＧ及びＳＨＶＲモチーフ、ならびにＥ２（Ｇａｐ２７ペプチド）中のＳＲＰＴＥＫモチーフを伴う細胞外ループＥ１及びＥ２内と、細胞質ループ（Ｇａｐ１９ペプチド）内と、の特定の配列に対応するペプチドを使用した、ギャップ結合チャネル及びヘミチャネルの抑制を報告している。最も効き目があるそのようなペプチド摸倣薬は、ペプチド５（ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ）である。
ペプチド５は、用量依存的様式で動作することができる確立されたギャップ結合チャネル遮断薬であり、より少ない用量は、ギャップ結合ヘミチャネル開口を遮断し、より高い用量は、細胞間のギャップ結合をアンカップリングする。例えば、Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌ ｅｔ ａｌ，２００８を参照されたい。ペプチド５の持続的低用量適用で、（通常の代謝回転の間の既存のギャップ結合の徐々の解除と並行して）ヘミチャネルドッキングへのペプチド干渉と考えられるギャップ結合カップリングの徐々の喪失が存在する。ペプチド５は、特に、ギャップ結合をアンカップリングせずに、ヘミチャネルを遮断する用量で使用されるとき、いくつかの試験管内、生体外、及び生体内（動物）研究で、有効であることが証明されている（例えば、Ｄａｖｉｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ，２０１２、Ｄａｎｅｓｈ－Ｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ，２０１２、Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌ ｅｔ ａｌ，２０１３を参照されたい）。Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌ ｅｔ ａｌ，２００８における結果は、低濃度または高濃度のペプチド５が、ヘミチャネルを遮断するが、高濃度でギャップ結合を直接アンカップリングすることを示す。ペプチド５データは、トナベルサットとの比較のためにここに示される。
実施例１：ｈＣＭＶＥＣ及びＡＲＰＥ－１９細胞研究のための方法及び材料
ヒト脳微小血管内皮細胞（ｈＣＭＶＥＣ）を使用する以下の実施例２、４、５、８、及
び１０では、細胞を、１０％のＦＣＳ、１μｇ／ｍＬのヒドロコルチゾン、３ｎｇ／ｍＬのｈＦＧＦ、１ｎｇ／ｍＬのｈＥＧＦ、１０μｇ／ｍＬのヘパリン、１倍のペニシリンストレプトマイシンネオマイシン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、及びｃＡＭＰ（１００ｍＬの培地に対して１００μＬの１００％ｃＡＭＰ）を補充したＭｅｄｉｕｍ Ｍ１９９中に維持した、コラーゲンで被覆した（３０μｇ／ｍＬ）Ｔ２５またはＴ７５フラスコ中で成長させることによって調製した。細胞を、９５％のＯ２ 及び５％のＣＯ２を用いて３７℃に維持した。
ヒト網膜上皮（ＡＲＰＥ－１９）細胞を使用する以下の実施例３、６、及び７では、細胞を、１０％のウシ胎仔血清（ＦＣＳ）、１００単位／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、及び０．２５μｇ／ｍＬのＦｕｎｇｉｚｏｎｅ（登録商標）抗真菌薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を補充したＤＭＥＭ／Ｆ：１２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で成長させた。
これらの研究中で使用した化学物質については、トナベルサット（Ｍｅｄｃｈｅｍｅｘｐｒｅｓｓ，ＵＳＡ）を１００ｍＭの原液濃度でジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に溶解させた。塩化アンモニウム（ＮＨ４Ｃｌ、Ｓｉｇｍａ）を１００ｍＭの原液濃度でｄＨ２０中に溶解させた。コネキシン４３模倣ペプチド（ペプチド５、配列ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ（配列番号１６８））（Ａｕｓｐｅｐ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）及びペプチド８（ＣＤＥＱＳＡＦＲＣＮＴＱＱ（配列番号３３０））を９５％超の純度で合成し、１０ｍＭの濃度でｄＨ２０中に溶解させた。プロベネシド（Ｃ１３Ｈ１９ＮＯ４Ｓ、Ｓｉｇｍａ）を５０ｍｇ／ｍＬの濃度で１ＭのＮａＯＨにおいて可溶化した。
すべての動物モデルの手順は、ＡＲＶＯ Ｓｔａｔｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｕｓｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌｓ ｉｎ Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ ａｎｄ Ｖｉｓｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈを順守して実施し、Ａｎｉｍａｌ Ｅｔｈｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ａｕｃｋｌａｎｄによって認可されていた。体重２４０～２６０ｇの雄の成体ウィスターラットを１７匹 Ｖｅｒｎｏｎ Ｊｅｎｓｏｎ Ｕｎｉｔ
ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ａｕｃｋｌａｎｄから入手し、１２時間の明暗サイクルで飼育し、飼料及び水を不断給餌した。
実施例２：スクレープ負荷アッセイ この実施例では、ヒト脳微小血管内皮細胞（ｈＣ
ＭＶＥＣ）を、５％のＣＯ２を用いた３７℃での加湿雰囲気において、１０％のＦＢＳ、１μｇ／ｍＬのヒドロコルチゾン、３ｎｇ／ｍＬのｈＦＧＦ、１ｎｇ／ｍＬのｈＥＧＦ、１０μｇ／ｍＬのヘパリン、及びｃＡＭＰ（１００ｍＬの培地に対して１００μＬの１００％ｃＡＭＰ）を補充したＭｅｄｉｕｍ Ｍ１９９中に維持した、コラーゲンで被覆した（１μｇ／ｍＬ）Ｔ２５フラスコ中で成長させた。実験の１日前に、これらの細胞をトリプシン処理し、同じ培地中のコラーゲンで被覆した１２ウェルプレートに４×１０５細胞／ウェルの密度で蒔いた。治療のために、細胞を、スクレープ染料負荷の前にそれぞれの時間間隔で、ペプチド５、対照ギャップ結合チャネル遮断薬（カルベノキソロン）、またはトナベルサットの存在下で培養した。遮断薬も、それぞれのスクレープ負荷溶液中に存在した。
スクレープ負荷のために、ｈＣＭＶＥＣ細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（二価カチオンなし）で３回洗浄した。ＰＢＳに０．０５％のルシファーイエローを加えた溶液を細胞に添加した。次に、細胞に、サイズ１０の炭素鋼製外科用ブレードを使用して単層へのスクレープを施し、５分間５％のＣＯ２を用いて３７℃で暗所において培養した。細胞をＰＢＳで４回洗浄した後、蛍光顕微鏡法のために１ｍＬのＰＢＳを添加した。
次に、生細胞を、５％のＣＯ２を用いて３７℃に加熱したチャンバ中に維持しながら、Ｎ
ｉｋｏｎ ＴＥ２０００Ｅ蛍光顕微鏡で撮像した。全細胞及び蛍光画像を見るために３つの画像対を相差画像の各々について１０倍の倍率で得て、４８８ｎｍの励起及びＧＦＰフィルタブロックを使用してルシファーイエローを視覚化した。ギャップ結合通信をルシファーイエロー陽性細胞の数を計数することによって決定し、対照群の陽性細胞に対する比率として提示した。データを、Ｐｒｉｓｍ ｖ５．０２ソフトウェアを使用して平均＋平均の標準誤差としてグラフ化した。有意性を、スチューデントの両側、対応のないｔ検定によって決定した。＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．００１、＊＊＊＝ｐ＜０．００１。
図１の結果（ペプチド５を例として使用）は、スクレープに隣接した細胞によって取り込まれた染料が近隣の細胞に広がることを示す。スクレープの直前に添加した１００μＭの濃度のペプチド５は、ギャップ結合をとおした染料の細胞間移動にそれほど影響を与えない。より高い５００μＭの濃度のペプチド５は、染料移動の際立った低減をもたらした。より長い２時間の培養では、染料移動は、両方の濃度のペプチド５で低減した。このことは、ペプチド５がより高い濃度で即時にギャップ結合を阻止できること、及び持続的治療によって低用量の適用がギャップ結合カップリングの低減をもたらすこと（後者はヘミチャネルドッキングへのペプチド干渉（通常の代謝回転の間の既存のギャップ結合の徐々の解除と並行した）と考えられる）を所与として、ペプチド５を用量依存的様式で使用できることを示す。図３の右側のグラフは、ペプチド５遮断の有効性（高用量）を非特異的ギャップ結合チャネル遮断薬カルベノキソロンと比較する。
図３は、５０μＭの濃度のトナベルサットについての同等のスクレープ負荷染料移動を示す。即時に添加したトナベルサットは、１分以内に統計学的に有意なギャップ結合アンカップリング効果を有するが、時間依存性の様式での増加を遮断し、これは、トナベルサットもペプチド５と同様の様式で作用していることを示す。いずれの特定の理論にも束縛されることを意図するものではないが、発明者らは、ヘミチャネルドッキングへのペプチド干渉、または通常の代謝回転の間の既存のギャップ結合の徐々の解除と並行したヘミチャネルの内部移行、ギャップ結合の内部移行の誘引の結果であり得ると考える（図４を参照されたい）。
実施例３：ペプチド５及びトナベルサットで治療したＡＲＰＥ－１９網膜上皮細胞の免疫組織化学 細胞を、８ウェルの滅菌ガラス顕微鏡チャンバスライド（Ｆａｌｃｏｎ、Ｃ
ｏｒｎｉｎｇ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）にウェルあたり０．０５×１０６で播種し、単層を、約９０～１００％のコンフルエンスにあるコネキシン発現について標識した。以下のステップは室温で実施した。細胞を、１０分間、０．１ｍＭのＣａＣｌ２を含むＰＢＳ中の４％のパラホルムアルデヒド（Ｐ６１４８、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）中で固定し、０．１ｍＭのＣａＣｌ２を含むＰＢＳ中で３回洗浄した。０．１ｍＭのＣａＣｌ２を伴うＰＢＳ中の１０％の正常なヤギ血清における１時間の遮断の後、細胞を、０．１ｍＭのＣａＣｌ２含むＰＢＳ中で希釈した一次抗体溶液（ウサギ抗Ｃｘ４３、Ｓｉｇｍａ
Ｃ６２１９）中で一晩インキュベートした。その後、チャンバスライドを、１０分間、０．１ｍＭのＣａＣｌ２を含有するＰＢＳで３回洗浄し、さらに４５分間、ヤギ抗ウサギＡｌｅｘａ ５６８と複合させた二次抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃Ａ１１０３６）中でインキュベートした。細胞を５分間ＤＡＰＩで対比染色し、０．１ｍＭのＣａＣｌ２を含有するＰＢＳで３回洗浄した。チャンバウェルを除去し、細胞を退色防止媒体（Ｃｉｔｉｆｌｏｕｒ ＡＦ－１）に載せた。指定の一次抗体及び二次抗体の希釈率を製造業者の推奨に従って使用した。
図４は、ギャップ結合タンパク質コネキシン４３のＤＡＰＩ（核染色）及び標識化（左のパネル）及び対応するコネキシン４３のみの標識化（右手のパネル）を示す。未処理細胞では、ギャップ結合標識化は、細胞間接触面にて最上であった（上部パネル）。ペプチド
５（５００μＭ）で１時間処理した細胞を示す下部パネルでは、依然として細胞間接触面が明白であるが、ギャップ結合の大半が内部移行しており、標識は細胞質性である。これは、ペプチドがギャップ結合をアンカップリングすると、それが内部移行及び結合分解を誘引することを示す。図３は、非治療細胞及びトナベルサットで治療した細胞（５０μＭ、６時間）による同等の実験を示す。経時的なトナベルサット治療は、細胞間接触面での全ギャップ結合喪失をもたらす。
実施例２におけるスクレープ負荷実験がギャップ結合の機能喪失を示したため、この実施例３は、これがどのように発生し得るのか、すなわち、細胞間のギャップ結合の喪失によって発生し得ることを説明する。
実施例４：ギャップ結合ヘミチャネルの電気生理学 全細胞電圧固定研究を、コネキシ
ン欠乏ＨｅＬａ細胞、コネキシン４３遺伝子導入ＨｅＬａ細胞、及び単離したヒト脳微小血管内皮細胞（ｈＣＭＶＥＣ）に対して実施した。
ＨｅＬａ細胞を、各実験の１６～２４時間前に、１８ｍｍのラットコラーゲンＩ被覆カバースリップ上に０．０４５×１０６細胞／ｍＬで播種した。Ｃｘ４３ＩＲＥＳｅＧＦＰ ＨｅＬａ細胞を、９５％のＯ２及び５％のＣＯ２で３７℃にて、１０％のＦＣＳ及び１μｇ／ｍＬのＰｕｒｏｍｙｃｉｎを補充したＤＭＥＭ中で一晩培養した。対照Ｃｘ欠乏細胞を１０％のＦＣＳを補充したＤＭＥＭ中に維持した。カバースリップをチャンバに移し、このチャンバには、１４０のＮａＣｌ、５．４のＫＣｌ、１のＭｇＣｌ２、１０ｍＭのＨｅｐｅｓ（ｍＭ単位）を含有し、ｐＨを７．４に調整した室温の修飾クレブス－リンゲル溶液を継続的に潅流した。内部ピペット溶液は、ｐＨ７．２で、１３０のＫＣｌ、１０のアスパラギン酸ナトリウム、０．２６のＣａＣｌ２、２のＥＧＴＡ、５のテトラエチルアンモニウム－Ｃｌ、１のＭｇＣｌ、３のＭｇＡＴＰ、及び５のＨｅｐｅｓを含有し、これを氷上に保った。溶液は、Ｃｏｎｔｒｅｒａｓ ＪＥ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｄｈｅｓｉｏｎ（２００３），１０：２４５－２４９で説明されている。全細胞遠心分離における単流を解決するために、電気容量が低い（＜１０ｐＦ）細胞、及びシール抵抗が（＞５ＧＯｈｍ）である高抵抗ピペット（６～１０ｍＯｈｍ）を、記録及分析用に選択した。
ＨＣＭＶＥＣ細胞を、温度３７℃、ｐＨ７．３８５の、１４４のＮａＣｌ、３．３のＫＣｌ、１．８のＣａＣｌ２、１．８のＭｇＣｌ２、１０ｍＭのグルコース（ｍＭ単位）を含有する、細胞外人工脳脊髄溶液中に配置した。細胞内ピペット溶液は、ｐＨ７．２で、１３０のＫＣｌ、１０のアスパラギン酸ナトリウム、０．２６のＣａＣｌ２、２のＥＧＴＡ、５のテトラエチルアンモニウム－Ｃｌ、１のＭｇＣｌ２、３のＭｇＡＴＰ、５のＨｅｐｅｓ（ｍＭ単位）を含有し、これを氷上に保ってＭｇＡＴＰの分解を防止した。ピペット抵抗は３．４ＭΩであり、シール抵抗は１．３ＧΩであった。細胞に継続的に潅流しながら、電圧プロトコル及び潅流プロトコルを同時に実施した。トナベルサット灌流前、最中、及び洗い出し後に、分析のために記録を取った。チャネル遮断研究のため、５０μＭのトナベルサットを記録の前に３分間洗浄し、続いて洗い出し記録を取る前に３分間洗浄した。
図５は、コネキシン４３遺伝子導入ＨｅＬａ細胞（上部出力記録）及びコネキシン欠損ＨｅＬａ細胞（下部出力記録）における記録を示す。電圧ステップが上げられるに従い、チャネル活性の増加が遺伝子導入細胞内で認められ、これはコネキシン欠損細胞内には存在しない。したがって、遺伝子導入細胞内のチャネル活性は、コネキシン４３ヘミチャネル開口の結果である。図６は、非特異的チャネル遮断薬カルベノキソロン及び
ＬａＣｌ３で、ならびにペプチド５（１００μＭ）で処理されたコネキシン４３遺伝子導入ＨｅＬａ細胞からの出力記録を示す。非特異的チャネル遮断薬は、実質上完全なヘミチ
ャネル遮断を示し、チャネル活性がほとんど残らない。ペプチド５も、かなりのヘミチャネル遮断を示す。
図７は、トナベルサット（５０μＭ）の添加前、トナベルサットでの培養の間、及び洗い出しの３分後のＨＣＭＶＥＣ細胞における同等の実験を示す。トナベルサットはヘミチャネル活性をほぼ完全に消失させ、いくらかの活性が洗い出しの後に戻る。これらの結果は、トナベルサットが非常に有効なヘミチャネル遮断薬であること、使用した濃度でペプチド５の有効性を超越し得ること、及び活性ヘミチャネルが回復可能であることを示す。
考察 発明者らは、驚くべきことに、確立されているコネキシン４３チャネル遮断薬ペ
プチド５とトナベルサットとが、同様の作用様式を呈すると決定した。高濃度の場合、ペプチド５は、コネキシン４３ヘミチャネルを遮断することができ、かつコネキシン４３のギャップ結合をアンカップリングすることができる。より低い投与量では、ペプチド５は、コネキシン４３ヘミチャネルを遮断するが、ギャップ結合カップリングにはすぐに影響しない。ペプチド５の持続的低用量適用で、（通常の代謝回転の間の既存のギャップ結合の徐々の解除と並行して）細胞間接触面にてギャップ結合の徐々の喪失が存在し、これは、ペプチドがヘミチャネルドッキングを妨げていることを示す。本明細書の結果は、トナベルサットが、主にヘミチャネル遮断薬であり、ギャップ結合チャネルを遮断することもでき、ペプチド５と同様に、ことによると代謝回転中にヘミチャネルドッキングに代わりのギャップ結合チャネルを形成させないことによって、または原形質膜からの内部移行を引き起こすことによって、ギャップ結合カップリングを減少させるために使用できることを示す。これらの実験において、トナベルサットは、１分以内にコネキシンヘミチャネルを遮断し、また１分以内に細胞間カップリングを減少させることが示された。
トナベルサットは、特異的受容体及びｐ３８経路をとおして中枢神経系におけるコネキシン２６発現を低減させることができる。発明者らは、驚くべきことに、トナベルサットが、内皮細胞を含むいくつかの細胞型（ｈＣＭＶＥＣ、ＨｅＬａ、ＡＲＰＥ）においてヘミチャネルを遮断するために使用できることを発見した。したがって、発明者らは、驚くべきことに、トナベルサットが中枢神経系に特異的ではないことを発見した。これらの結果はまた、トナベルサットが、コネンキシン４３ヘミチャネルの遮断においてかなりの有効性を有すること、及びコネキシン４３のギャップ結合をアンカップリングするために使用できることを示す。したがって、トナベルサットは、コネキシンアイソフォームにも特異的ではない。
結果は、トナベルサットが、主にコネキシンヘミチャネル遮断薬であるが、より高い用量で使用することでギャップ結合をアンカップリングすることができるという発明者らの観察を支持する。そのヘミチャネル遮断有効性及び作用速度、ならびに３分以内に洗い出されてチャネル活性を修復し得るという事実は、それが、ｍＲＮＡまたはタンパク質発現に影響するより遅い経路とは対照的に、ヘミチャネルに直接的に影響することを示唆する。
実施例５：コネキシン４３ヘミチャネル及びパネキシンチャネルはインビトロでの虚血傷害－再潅流中にＡＴＰを放出する インビトロでの虚血傷害モデルを使用して、Ｃｘ４
３ヘミチャネル及びパネキシンチャネル媒介性ＡＴＰ放出を、１００μＭの濃度のコネキシンヘミチャネル遮断性模倣ペプチド５（Ｓ．Ｊ．Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ ＆ ａｄｈｅｓｉｏｎ １５，２７（Ｍａｙ，２００８））及び１ｍＭのプロベネシド（Ｗ．Ｒ．Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２８４，１８１４３（Ｊｕｌ ３，２００９））を使用して差別化した。
インビトロでの虚血傷害－再潅流ＡＴＰアッセイ ヒト脳微小血管内皮細胞（ｈＣＭＶ
ＥＣ）をトリプシン処理し（ＴｒｙｐＬＥ Ｅｘｐｒｅｓｓ，Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、実験の１日前に、コラーゲンで被覆した１２ウェルプレート（１μｇ／ｃｍ２）にウェルあたり０．０２５×１０６細胞の密度で蒔いた。細胞を一晩培地において培養した。低酸素虚血性脳における間質腔のイオン濃度及び酸塩基シフトを模倣する低酸素であり酸性のイオンシフトしたリンゲル傷害溶液（Ａ．Ｂｏｎｄａｒｅｎｋｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｉａ ３４，１４３（Ａｐｒ １５，２００１））を使用して、ヘミチャネル開口を引き起こした。傷害溶液（ｍＭ単位）：３８のＮａＣｌ、１３のＮａＨＣＯ３、３のＮａ－グルコン酸塩、６５のＫ－グルコン酸塩、３８のＮＭＤＧ－Ｃｌ、１のＮａＨ２ＰＯ４、１．５のＭｇＣｌ２を、Ｎ２ガス（純度９９％超、２０Ｌ／分）中で５分間バブリングし、５ＭのＨＣｌを使用して、ｐＨを６．６に調整した。生理学的状態を模倣する対照溶液は（ｍＭ単位）、１２４のＮａＣｌ、３のＫＣｌ、２６のＮａＨＣＯ３、２６のＮａＨＣＯ３、１のＮａＨ２ＰＯ４、１．３のＣａＣｌ２、１．５のＭｇＣｌ２、及び１０のグルコースを含有し、５ＭのＨＣｌを使用してｐＨ７．４に調整した（Ｂｏｎｄａｒｅｎｋｏ，２００１）。傷害モデルにおいて、ｈＣＭＶＥＣ細胞を、５００μＬの対照溶液、または傷害溶液、またはトナベルサット（０．１～５０μＭ）＋／－プロベネシド（１ｍＭ）を溶解させた傷害溶液中で、９５％のＯ２及び５％のＣＯ２において３７℃で２時間培養した。２時間の傷害の後、溶液を即時に氷上に配置した。傷害及び再潅流モデルにおいて、ｈＣＭＶＥＣ細胞を、５００μＬの正常溶液または傷害溶液中で９５％のＯ２及び５％のＣＯ２において３７℃で２時間培養した。２時間の傷害の後、この溶液を廃棄し、５００μＬの正常溶液、または正常溶液中に溶解させたトナベルサット（１０μＭ）で置き換え、９５％のＯ２及び５％のＣＯ２において３７℃で２時間培養した。その後、これらの溶液も即時に氷上に配置した。ペプチド５（１００μＭ）＋／－プロベネシド（１ｍＭ）を傷害モデル及び傷害－再潅流モデルの両方についての対照として使用した。試料中のＡＴＰ濃度を、ルシフェリン／ルシフェラーゼ生物発光反応（ＡＴＰ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ Ｋｉｔ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）を使用して決定し、発光プレートリーダ（ＶＩＣＴＯＲ Ｘ、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ ＃２０３０－００１０）を使用して検出した。標準曲線をＡＴＰ標準（５００ｎＭ）から各実験において生成し、試験試料中のＡＴＰの濃度を定量化した。データを、傷害または傷害－再潅流対照と比べた平均±標準誤差として表す。試料間の統計学的に有意な差異を、一元配置分散分析及び テューキーの多重比較試験を使用して特定した。
図８は、インビトロの損傷モデルにおける２時間後のヒト脳微小血管内皮細胞（ｈＣＭＶＥＣ）のサブコンフルエント培養物から放出された総ＡＴＰを要約する。傷害群（１００±２．２％）と比較したとき、無損傷対照群から放出されたＡＴＰは、基礎レベルが３５±２．６％であり、これは、損傷の前の正常な細胞活性及び／または死細胞を反映し得る。細胞外ＡＴＰにおける有意な差異が、無損傷対照群と損傷対照群との間で観察された（ｐ＜０．０００１）（図１０Ａ）。損傷（１００±２．２％）と比較して、ペプチド５は、ＡＴＰを７３．９±２．１％まで顕著に低下させ（ｐ＜０．０００１）、プロベネシドもＡＴＰを８３．１±４．５％まで顕著に減少させた（ｐ＜０．００１）（図１０Ａ）。興味深いことに、ペプチド５とプロベネシドとの併用治療により、ＡＴＰは、Ｃｘ４３ヘミチャネルとパネキシンチャネルとの両方を遮断する非特異的遮断薬であるカルベノキソロン（ＣＢＸ）１００μＭに相当するレベルまで減少し、これら２つの群の間で有意な差異は観察されなかった（ｐ＝０．２８）。これらの実験からのデータは、コネキシンヘミチャネルとパネキシンチャネルとの両方が虚血条件下で開放することを示す。
トナベルサットによるＣｘ４３ヘミチャネルの抑制は濃度依存性であるが、これは、インビトロの損傷中にパネキシンチャネル活性が不在である場合のみである。 以下の実験を行って、損傷したｈＣＭＶＥＣ細胞からのＣｘ４３ ＨＣ媒介性ＡＴＰ放出が、トナベルサットの濃度の増加につれて減少することを実証した。図８Ａにおける損傷モデルを利用
して、トナベルサットがＣｘ４３ ＨＣ媒介性ＡＴＰ放出に与える影響を、Ｐａｎｘチャネルを抑制するためにプロベネシドを使用して特定した。損傷（１００±１．２％）と比較すると、ＡＴＰ放出は、１ｍＭのプロベネシドと組み合わせた、０．１μＭ（８５．９±２．４％）、１μＭ（７５．９±２．３％）、１０μＭ（５８．５±１．９％）、及び１００μＭ（７０．５±３．９％）のトナベルサット濃度で顕著に低減した（図１０Ｂ）。トナベルサットの濃度を増加させることで（０．１μＭから１０μＭ）、Ｃｘ４３ ＨＣ媒介性ＡＴＰ放出が顕著に低減した（図８Ｂ）。最大の抑制は１０μＭのトナベルサットで達成され、これは、１００μＭの最高濃度よりも１２．１±３．２％で顕著に優れていた（ｐ＝０．００５）（図８Ｂ）。しかしながら、ＣＢＸと１ｍＭのプロベネシド中の１０μＭのトナベルサットとの間には１４．９±４％の有意な差異が依然として存在した（ｐ＝０．００５９）（図１０Ｂ）。トナベルサット（０．１μＭから１００μＭ）により、Ｃｘ４３ ＨＣ媒介性ＡＴＰ放出は、プロベネシドと組み合わせた場合に、損傷と比較して顕著に低減したが、トナベルサットは、１ｍＭのプロベネシドの非存在下では、ｈＣＭＶＥＣ細胞からのＡＴＰ放出を低減させなかった（ｐ＞０．０９）（図８Ｃ）。
コネキシン４３ヘミチャネルはインビトロの再潅流中にＡＴＰを放出するが、パネキシンチャネルはしない。 虚血後の再潅流期間中のＣｘ４３ヘミチャネル及びパネキシンチ
ャネルの役割（ＨＡＩＲ溶液中で２時間後に正常媒体に戻る）を、さらに特性評価した。無損傷－再潅流（無ＩＲ）及び傷害－再潅流対照（ＩＲ）間のＡＴＰ放出における顕著な差異（ｐ＝０．０００６）が観察された（図１）。ペプチド５がＡＴＰ放出を７０．３±４．４％まで顕著に低下させる（ｐ＝０．０１９６）一方、プロベネシドは、再潅流傷害と比較して、ＡＴＰを顕著には低減しなかった（９９．３±４．４％、ｐ＞０．９９）（図９）。ペプチド５とプロベネシドとの併用治療も、再潅流傷害と比較してＡＴＰを顕著に低減した（７１．１±７．４％、ｐ＝０．０２５）が、これは、単独のペプチド５治療と同程度であった（図１１）。傷害のみ（図１０Ｂ）とは対照的に、ＣＢＸは、ペプチド５のみ（ｐ＝０．０１２７）と比較して、ＡＴＰ放出をさらに３３．８±３３．５％まで顕著に低下させた（図９）。
低濃度のトナベルサットは、インビトロの再潅流中のＣｘ４３ヘミチャネル媒介性ＡＴＰ放出を抑制する。 虚血再潅流アッセイは、プロベネシドが再潅流中のｈＣＭＶＥＣ細
胞からのＡＴＰの放出に顕著な影響を与えなかったことを示した（図９）。単独の１０μＭの低用量のトナベルサットは、インビトロでｈＣＭＶＥＣ細胞から放出されるＡＴＰを抑制するのに十分となり、抑制のレベルは、ペプチド５と同等となる。１０μＭのトナベルサットの存在下でのＡＴＰの顕著な減少が観察され（６８．９±６．９％、ｐ＝０．０２）、これは、インビトロの再潅流傷害中の１００μＭのペプチド５と同等であった（図９）。
実施例６：高濃度のトナベルサットは、ＡＲＰＥ－１９細胞においてＣｘ４３プラークの内部移行を引き起こす Ｃｘ４３プラークの免疫細胞化学及び定量化 ＡＲＰＥ－１９細
胞を、８ウェルガラスチャンバスライド（ＢＤ Ｆａｌｃｏｎ）においてコンフルエントまで成長さ
せた。ＡＲＰＥ－１９細胞のコンフルエントな単層を、１時間または６時間、培地中で、５～５００μＭのトナベルサット及び／または１０ｍＭのＮＨ４Ｃｌの最終濃度でインキュベートした（Ｈ．Ｑｉｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７８，３０００５（Ａｕｇ ８，２００３））。細胞を室温で１０分間ｐＨ７．４にて４％のＰＦＡ（ＰｒｏＳｃｉＴｅｃｈ）中に固定し、ＰＢＳ中の０．０５％のＴｒｉｔｏｎ－Ｘ１００によって透過処理し、１０％の正常なヤギ血清中でインキュベートして、非特異的標識化を遮断した。細胞を、固定化ステップ、透過処理ステップ、及び遮断ステップの各々の間に、０．１ｍＭのＣａＣｌ２を含有するＰＢＳで３回漱いだ。Ｃｘ４３ポリクローナルウサギ抗体（Ｃ６２１９、Ｓｉｇｍａ、１
：２０００）を２４ 時間、その後、ヤギ抗ウサギＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５６８二次抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１：２００）を４５分間、適用した。核を、５分間１０，０００倍希釈のＤＡＰＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で対比染色し、Ｃｉｔｉｆｌｕｏｒ（商標）封入剤で封入した。画像を、Ｏｌｙｍｐｕｓ ＦＶ１０００正立共焦点レーザ走査型顕微鏡鏡及びソフトウェア上で６３倍の油浸レンズを使用して視覚化及び捕捉した。ＭｅｔａＸｐｒｅｓｓ（登録商標）Ｉｍａｇｅ捕捉及び分析ソフトウェア（Ｖｅｒｓｉｏｎ ５．３．０．１、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）におけるＴｒａｎｓｆｌｕｏｒ機能を使用して、画像あたりのＣｘ４３プラークの総面積を自動化及び定量化した。結果は平均±標準誤差を表し、統計的検定を、一元配置分散分析及びテューキーの多重比較検定を使用して実施した。
上記の免疫細胞化学を使用して、Ｃｘ４３の発現が豊富であると報告される天然ヒト細胞株、網膜色素性上皮細胞（ＡＲＰＥ－１９）におけるＣｘ４３ ＧＪプラークの分布及びサイズを視覚化した（Ｃ．Ｍ．Ｈｕｔｎｉｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ ＆ ｖｉｓｕａｌ ｓｃｉｅｎｃｅ ４９，８００（Ｆｅｂ，２００８））。基礎条件下で規則的なタイル様のパターンで標識された、細胞間接触部の間のＣｘ４３プラークが観察された（図１３Ａ）。Ｃｘ４３標識化も特定の領域において可視であり、これはゴルジ装置においてＣｘ４３の細胞内プールを示した（Ｊ．Ｄａｓ Ｓａｒｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃｅｌｌ ｓｃｉｅｎｃｅ
１１４、４０１３（Ｎｏｖ，２００１））。しかしながら、正常対照群と比較して、１００μＭ（５２．８±５．６％、ｐ＝０．００１２）、２００μＭ（６３．２±５．６％、ｐ＝０．０２８６）、及び５００μＭ（６３．２±５．６％、ｐ＝０．０４２０）の濃度でのトナベルサットへの１時間の暴露の後に、Ｃｘ４３プラークの顕著な低減が観察された（図１３Ｂ）。Ｃｘ４３プラークの減少が細胞間接触部と細胞内プールとの間で可視であった（図１０Ａ、上部の画像）。しかしながら、対照と比較して、５μＭ（ｐ＝０．９９）、１０μＭ（ｐ＝０．５７７７）、または５０μＭ（ｐ＝０．１４６）のより低い濃度では、Ｃｘ４３プラークは顕著に低減しなかった（図１１Ｂ）。
結果は、トナベルサットが形質膜からのＣｘ４３ ＧＪの内部移行を引き起こすことを示す。Ｃｘ４３プラークの低減は、ＡＲＰＥ－１９細胞を６時間という長期間トナベルサット（５０から５００μＭ）中に暴露することによって、時間依存性であることが示された。図１０と同様に、トナベルサットにおける６時間の治療はまた、細胞間接触部と細胞内プールとの間のＣｘ４３標識の減少をもたらした（図１２Ａ）。さらに、Ｃｘ４３プラークの総面積も、１００μＭ（６６．５±５．４％、ｐ＜０．０００１）、２００μＭ（６２．５±２．３％、ｐ＜０．０００１）、及び５００μＭ（６０．２±１３．６％、ｐ＜０．０００１）で顕著に低減した。
トナベルサットは、リソソーム経路を介した分解のために内部移行したＣｘ４３プラークを標的にする。 ギャップ結合を内部移行させるだけであるペプチド５と対照的に、ト
ナベルサットが形質膜からのＣｘ４３プラークの代謝回転を促進することも示された。図１１を参照されたい。ＡＲＰＥ－１９細胞におけるリソソーム分解経路を、弱塩基リソソーム阻害剤である塩化アンモニウム（ＮＨ４Ｃｌ）を使用して固定化した（Ｈ．Ｑｉｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７８，３０００５（Ａｕｇ ８，２００３））。トナベルサット及び１０ｍＭのＮＨ４Ｃｌにおける１時間の治療の後、Ｃｘ４３プラークを細胞間接触部から除去したが、これは、形質膜直下の細胞内領域に沿って発現された点状標識を伴って細胞質中に留まった。加えて、ここで、密な標識化が核周囲の周りで可視となった（ゴルジ体であるように見える）（図１４Ａ、下部の画像）。ＮＨ４Ｃｌを伴うトナベルサットにおいて、Ｃｘ４３標識化は、単独の１００μＭのトナベルサットと比較して顕著に多く（最大１０４．８％）（ｐ＜０．００１）、単独の２００μＭのトナベルサットと比較した場合、最大で
６５．４％多かった（ｐ＝０．０００２）（図１０Ｃ）。
トナベルサット及び１０ｍＭのＮＨ４Ｃｌにおける６時間の治療の後、点状のＣｘ４３標識が細胞全体にわたって分布した（図１５Ａ、下部の画像）。１時間と対照的に、細胞間接触部の間のＣｘ４３標識は、トナベルサット及びＮＨ４Ｃｌにおける治療の後、可視ではなかった（図１５Ａ、下部の画像）。しかしながら、ＮＨ４Ｃｌは、Ｃｘ４３標識の量（総面積）を、単独のトナベルサットによる治療と比較した場合、トナベルサット５０μＭにおいて最大６７．９％５（ｐ＝０．００１５）、１００μＭにおいて最大８０．３％（ｐ＝０．０００１）、及び２００μＭにおいて最大８７．９％（ｐ＝０．００６２）、顕著に増加させた（図１２Ｃ）。インキュベーションから１時間後及び６時間後、非治療、ＤＭＳＯ（溶媒対照群）、またはＮＨ４Ｃｌのみの対照の間で、細胞あたりのＣｘ４３プラークの総面積における有意な差異はなかった（図１０Ｂ及び１２Ｂ）。
実施例７：トナベルサットはＣｘ４３ ｍＲＮＡ転写または翻訳に影響しない トナベ
ルサットは、出版されている文献中で示されているように、Ｃｘ４３ ｍＲＮＡ転写または翻訳に影響しない。むしろ、観察されたＣｘ４３のトナベルサット媒介性下方制御は、内部移行及び分解経路の活性化によって引き起こされる。
リアルタイム逆転写ＰＣＲ
リアルタイム逆転写ＰＣＲを使用して、Ｃｘ４３ ｍＲＮＡの相対レベルを決定した。ＡＲＰＥ－１９細胞のコンフルエントな単層を、１時間トナベルサットで処理した。細胞をＴＲＩｚｏｌ（登録商標）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によって採取し、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＩＩ Ｆｉｒｓｔ Ｓｔｒａｎｄキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を製造業者の使用説明に従って使用して、総ＲＮＡを単離した。全ＲＮＡ 試料を、ナノドロップ１０００微体積分光光度計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して定量化した。ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（登録商標）ＩＩＩ Ｆｉｒｓｔ－Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ＳｕｐｅｒＭｉｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を製造業者の使用説明に従って使用して、試料由来のｃＤＮＡを合成した。ｈＣｘ４３についてのプライマー配列、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号Ｍ６５１８８．１を、Ｈａｒｖａｒｄ ＰｒｉｍｅｒＢａｎｋから入手した。ヒトＣｘ４３についての配列は、正方向５’－ＴＧＧＴＡＡＧＧＴＧＡＡＡＡＴＧＣＧＡＧＧ－３’（配列番号３３１）及び逆方向５’－ＧＣＡＣＴＣＡＡＧＣＴＧＡＡＴＣＣＡＴＡＧＡＴ－３’（配列番号３３２）であった。Ｃｘ４３ ｍＲＮＡの相対的フォールド差異に対する使用に適切な参照遺伝子を、一般に使用されるハウスキーピング遺伝子、β－アクチン［ＡＣＴＢ］、ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ１［ＨＰＲＴ１］、ペプチジルプロリルイソメラーゼＡ［ＰＰＩＡ］、及びグリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ［ＧＡＰＤＨ］をスクリーニングすることによって決定した。ベータ－アクチンを、それが治療群の間で発現における有意な差異を示さなかったため、対照遺伝子として選択した。すべてのＰＣＲ反応を、Ｒｏｔｏｒ ｇｅｎｅ６００（Ｑｉａｇｅｎ）上で、相対的定量化のための閾値サイクル（Ｃｔ）を生成するために、２分間５０℃、その後２分間９５℃；１５秒間９５℃及び６０℃の４０回の繰り返し；１５秒間９５℃、１５秒間６０℃、１５秒間９５℃のサイクルプログラムを使用して行った。Ｃｘ４３ ｍＲＮＡ発現の相対的変化を、２－ΔΔＣｔ法を使用してβ－アクチンに対するフォールド差異として計算した。結果は平均±標準誤差を表し、統計的検定を、一元配置分散分析、続いてテューキーの多重比較検定を使用して実施した。
図１０及び１２において見られたＣｘ４３プラークのトナベルサット媒介性の減少がＣｘ４３ ｍＲＮＡ転写の下方制御によって引き起こされた可能性を試験するために、リアルタイム逆転写ＰＣＲを使用して、トナベルサットによる１時間の治療後のＣｘ４３ ｍＲＮＡの相対的差異を比較した。５０μＭのトナベルサットによる治療の後、非治療群（ｐ
＝０．７５７２）と溶媒対照群（ｐ＝０．１０２４５）との両方と比較して、ＡＲＰＥ－１９細胞におけるＣｘ４３ ｍＲＮＡの有意な差異はなかった（図１３）。
実施例８：トナベルサットはｈＣＭＶＥＣ細胞生存率に影響しない 細胞生存率について
のＭＴＴアッセイ ＭＴＴ原液を、５ｍｇを１ｍＬのＰＢＳ中に溶解させて５ｍｇ／ｍ
Ｌの濃度にすることによって調製した。９６ウェルプレートに播種した細胞（１×１０４細胞／ウェル）の治療インキュベーション期間の後、培地を除去し、１００μＬのＰＢＳで置き換えた。１０μＬのＭＴＴの原液を、ブランクとして使用したウェルを除いて各ウェルに加え、４時間３７℃でインキュベートさせ、この時点で溶液を各ウェルから吸引した。次に、５０μＬのＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ）を各ウェルに加えて、結晶性産出物を溶解させた。紫色の結晶産出物の吸光度を測定することによって、生存率を決定した。これを、プレートリーダにおいて５９５ｎｍでの吸光度を読み取ることによって測定し、データを内部標準として各対照に対して標準化した。統計的にを一元配置分散分析及びテューキーの事後検定を使用して調査した（＊ｐ＜０．０５）。
トナベルサット（０．２μＭから２００μＭ）が２４時間にわたってｈＣＭＶＥＣ細胞生存率に与える影響を検査した。トナベルサット（２００μＭ）は、２４時間の治療の後で細胞生存率を顕著に低減させず（ｐ＝０．３７８）、これは毒性の欠如を示す。さらに、ビヒクル（０．２％のＤＭＳＯ）またはカルベノキソロン（２００μＭ）に応答する細胞生存率は、顕著に低減しなかった（ｐ＝０．９０２９、ｐ＝０．４７１９）（図１４Ｂ）。
実施例９：トナベルサットは網膜虚血再潅流における網膜神経節細胞喪失を防止する。
インビボでの網膜虚血－再潅流モデル及び治療 動物をケタミン（６０ｍｇ／ｋｇ）及
びメデトミジン塩酸塩（０．４ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内注射によって麻酔し、角膜をオキシブプロカイン塩酸塩（０．４％）で麻酔した。網膜虚血－再潅流の技法は、これまでに説明されている（Ｄ．Ｓｕｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ５０５，１１４（Ｎｏｖ １，２００７））。簡潔に言えば、０．９％の滅菌生理食塩水の貯蔵部とシリコーン管によって接続している３０ゲージの注入針を、左の前眼房にカニューレ挿入した。カニューレ挿入は、角膜内皮、虹彩、または水晶体への傷害を回避するために、定位固定操作器アームを使用して行った。カニューレ挿入した眼の眼圧を、生理的食塩水貯蔵部を持ち上げることによって６０分間で１２０ｍｍＨｇに上昇させ
た。網膜虚血－再潅流を後眼部の退色によって確認した。６０分後にカニューレを除去し、網膜血管の再潅流を検眼鏡検査によって確認した。３つの実験用アームを、６０分の虚血の終了時に適用した。これらは、非治療（ｎ＝６）、１０ｍｇ／ｋｇのトナベルサット（ｎ＝６）、または１ｍｇ／ｋｇのトナベルサット（ｎ＝４）を含んだ。４０％がＰＥＧ、６０％がシクロデキストリンである溶液中で希釈した０．２５ｍＬの１０ｍｇ／ｍｌまたは１ｍｇ／ｍｌのトナベルサット溶液の全身送達を、再潅流の開始時の腹腔内送達によって達成した。２０ｍＬの血液量及びペプチドの総全身取り込みを仮定して、０．３１９ｍＭまたは０．０３１９ｍＭの最終血中トナベルサット濃度が表された。動物を、再潅流から７日後にＣＯ２で麻酔した。１匹の非傷害動物を麻酔して、非傷害網膜を正常対照群として得た。
麻酔後、眼を摘出し、角膜、水晶体、及び硝子体液を除去した。配向を保持するために網膜背面に刻み目を入れた。網膜及び強膜を、室温（ＲＴ）で６０分間、ＰＢＳ中の４％のＰＦＡにおいて固定した。次に、網膜を強膜から慎重に除去し、－８０℃で１５分間、ＰＢＳ溶液中の０．５％のＴｒｉｔｏｎ－Ｘ１００によって透過処理した。ＰＢＳによる徹底した洗浄に続いて、浮遊網膜を、ＰＢＳ溶液中の２％のウマ血清及び２％のＴｒｉｔｏｎ－Ｘ１００中のヤギ抗Ｂｒｎ３ａ一次抗体（ＳＣ－３１９８４、Ｓａｎｔａ－Ｃｒｕｚ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１：１００）において、４℃で一晩インキュベートした。網膜をＰＢＳでさらに洗浄した後で、ロバ抗ヤギＣｙ３二次抗体（７０５－１６５－１４７、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１：５００）溶液をＲＴで２時間適用した。網膜を、Ｃｉｔｉｆｌｕｏｒ封止剤を使用してＳｕｐｅｒＦｒｏｓｔ Ｐｌｕｓスライド上に封止し、撮像した。
撮像及び定量化 各網膜の各四半部における２つの領域を撮像し、網膜１つあたり合計
８枚の画像を得た。この方法により、異なる眼の間で同様の場所を評定し、網膜中に存在する起こり得るいかなる面積の偏りも回避したことが確実となった。網膜神経節細胞（ＲＧＣ）標識化を１０倍の倍率で撮像した。個々の抗体標識化を最良に差別化し、画像の彩度過剰を回避するように、電圧及びオフセット設定を調整した。ＮＩＨ ＩｍａｇｅＪソフトウェアにおいて自動スポット計数を使用して定量化を行った。ＲＧＣ定量化のために、各画像をまず鮮明化フィルタによってフィルタリングして細胞の輪郭を描出した後、３３の閾値を使用して二値画像に変換した。明らかに元のＲＧＣではないノイズ及びアーチファクトに起因する１つまたは２つの画素のスポットを粒子計数中に除外した。ＲＧＣ密度を１ｃｍ２あたりのＲＧＣの数として計算した。
網膜虚血再潅流における網膜神経節細胞喪失の防止 低濃度のトナベルサットは、網膜
虚血再潅流の確立されたインビボモデルが示すように、網膜細胞死を防ぐ（Ｈ．Ｖ．Ｄａｎｅｓｈ－Ｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒａｉｎ １３５，５０６（Ｆｅｂ，２０１２）。統計学的に有意な（ｐ＜０．０１）３１％のＲＧＣの喪失が、正常対照群（２４２５５８±１５８４０細胞／ｃｍ２）と比較して、治療していない虚血眼に見出された（１６７１１１±１４１８８細胞／ｃｍ２、平均±標準誤差）（図１５）。統計学的に有意な（ｐ＝０．０３）３５％のＲＧＣ喪失が、１０ｍｇ／ｋｇのトナベルサットで治療した虚血眼に見出された（１５８７３９±２６３７０細胞／ｃｍ２）。しかしながら、１ｍｇ／ｋｇのトナベルサットで処理した虚血眼は、他の群と比較して、ニューロン脱落を減少させた（１８％、１９９９２７±２６０５８細胞／ｃｍ２）。損傷しているが非治療である眼と比べた向上についての統計学的差異には達しなかったが、この群と正常対照群との間の差異は、もはや統計学的に有意（ｐ＝０．１７）ではなかった。ＲＧＣの喪失は、すべての対側性眼に見出されなかった。
実施例１０：トナベルサットは、濃度及び時間依存性の様式でギャップ結合をアンカップリングできる カップリングされたＧＪのみによって移動される蛍光性染料である細胞
外ルシファーイエロー（ＬＹ）によるインビトロスクレープ負荷アッセイを行って、トナベルサットがＧＪ通信を抑制するかどうかを試験した（Ｍ．Ｈ．ｅｌ－Ｆｏｕｌｙ，ｅｔ
ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｃｅｌｌ ｒｅｓｅａｒｃｈ １６８，４２２（Ｆｅｂ，１９８７））。１つのスクレープ創傷をｈＣＭＶＥＣ細胞のコンフルエントな単層に作製して、ＬＹ染料が創傷した領域の縁にて細胞の細胞質にアクセスできるようにし、染料がＧＪによって隣接した細胞に移動できるようにした。予期したとおり、溶媒対照群におけるＬＹの移動が観察され（図１６Ａ）、これは、カップリングされたＧＪを介した機能的細胞間通信を示す（ｅｌ－Ｆｏｕｌｙ，１９８７）。広域ギャップ結合遮断薬であるカルベノキソロンは、ＧＪ通信を、対照と比較して７７．８±７．４％まで顕著に低減させた（ｐ＜０．０００１）（図１６Ｂ）。トナベルサットにおいては、ＧＪアンカップリングの程度は経時的に増加した（図１６Ｂ）。ＬＹ陽性細胞は、対照と比較して、２時間の時点で７２．５±７．４％まで顕著に下がり（ｐ＝０．０１３２）、６時間までに６２．８±７．４％に低減した（ｐ＝０．０００３）。ＬＹ陽性細胞は、５０μＭのトナベルサット中で２４時間までに、対照と比較して５０．５±８．４％に最大限に低減した（ｐ＜０．０００１）（図１２Ｂ）。１００μＭのより高い濃度のトナベルサットでは、ＬＹ陽性細胞は、４６．７±７．８％までさらに顕著に低減した（ｐ＜０．０００１）。しかしながら、アッセイの直前（ｐ＝０．９８６）または１時間前（ｐ＝０．０５４）の
５０μＭのトナベルサットは、対照と比較したとき、ＧＪカップリングを顕著に減少させなかった（図１６Ｂ）。より低いトナベルサット濃度（０．１、１、及び１０μＭ）では、対照と比較して、ＬＹ陽性細胞は、２時間（ｐ＞０．７）及び２４時間（ｐ＞０．３）の両方で顕著に低減しなかった（図１６Ｃ、Ｄ）。総合すると、これらの結果は、トナベルサット媒介性アンカップリングＧＪが濃度依存性（≧５０μＭ）であり、このアンカップリングの程度がトナベルサット治療の期間に依存すること（より高いアンカップリング用量にて）を示す。
考察
これらの例は、直接的かつ即時的なＣｘ４３ヘミチャネルの遮断、ならびにＧＪカップリングの濃度及び時間依存性の低減を伴う、トナベルサットの新規の作用機序の発見を示す。ある特定のより低い濃度のトナベルサット（１０μＭ）への短期的な暴露により、インビトロでの傷害及び再潅流中にＣｘ４３ヘミチャネル媒介性ＡＴＰ放出が効果的に抑制され、これは、確立されたインビボでの網膜虚血－再潅流モデルにおけるＲＧＣ喪失の減少と一貫した。しかしながら、より高い濃度のトナベルサット（＜１００μＭ）への暴露は、ＧＪをアンカップリングしただけでなく、より持続的な長期間の治療は、リソソーム経路を介したＣｘ４３プラークの標的化した内部移行及び分解を励起することができる。
驚くべきことに、トナベルサットがコネキシンヘミチャネルの濃度依存性抑制を呈することを発見した。より低い１０μＭの濃度は、ヘミチャネル抑制のためにより効果的なトナベルサット濃度であり、これは、本研究で使用したペプチド５の有効性を超過した。さらに、抑制は、トナベルサットの阻害効果を観察するために組み合わせのプロベネシド治療が必要であったため、ヘミチャネル媒介性ＡＴＰ放出に選択的であった（図８Ｂ）。これらのデータは、トナベルサットがヘミチャネルを効果的に阻害する一方で、トナベルサット及びその類似体ならびに他の式Ｉの化合物が、虚血傷害においてパネキシンチャネルから放出されるＡＴＰを抑制する可能性が低いことを示す。コネキシンヘミチャネルとパネキシンチャネルとの両方を効果的に抑制したとすれば、抑制のレベルは、ペプチド５及びプロベネシドの併用治療またはＣＢＸと同等であっただろう（それぞれ、５５％ｖｓ６５％）。逆に、単独のトナベルサット治療は、顕著ではないが、単独の傷害と比較して、ＡＴＰにおけるわずかな増加を誘導した。１００μＭのトナベルサットが、これらの実験において、１０μＭのトナベルサットほどＡＴＰの低下に効果的ではなかったことにも注目すべきである。より高いトナベルサット濃度は細胞毒性に関係しなかったことから（図１４）、トナベルサットは、傷害中に二重の影響を有し得、これにより、ヘミチャネルは抑制の標的となるが、パネキシンチャネルは、標的外の影響で開放するように誘引され得る。これらのデータは、プロベネシド等のパネキシンチャネル遮断薬と組み合わせた中等度の用量／濃度のトナベルサットが、虚血、ならびに少なくとも部分的に虚血を特徴とする疾患、状態、及び傷害の治療として効果的となることを示す。
治療モデルのインビトロでの虚血後（再潅流）状態が、ＨＡＩＲ溶液中で２時間後に正常な生理学的条件に戻ったことも、本明細書で示された。インビトロモデルにより、発明者らは、ａ）虚血傷害だけでなく虚血後におけるコネキシン及びパネキシンチャネルの寄与、ｂ）虚血及び虚血後におけるトナベルサット治療の効果の試験を行うことができるようになった。虚血後の間、コネキシンヘミチャネルは、１００μＭのペプチド５及び１ｍＭのプロベネシドによって示されるように、ＡＴＰ放出のほぼすべてを担った（図９）。重要なことに、濃度１０μＭのトナベルサットは、１００μＭのペプチド５と同等の有効性を示した。これらのデータは、より低い濃度のトナベルサットが、虚血後のコネキシンヘミチャネル媒介性ＡＴＰ放出を抑制することを示す。
さらに、驚くべきことに、コネキシンヘミチャネル開口及びパネキシンチャネルの両方が
ＡＴＰ放出を媒介することによって虚血傷害（図８）に寄与するが、再潅流の後は、パネキシンチャネルが閉鎖し得、コネキシンヘミチャネルのみがこれらの２つのチャネル型をとおしたＡＴＰ放出のほぼすべてを担うようであることも発見した（図９）。パネキシンチャネルは虚血依存性機序（すなわちＮＭＤＡＲ）で開放し得るが、これらの刺激も消失する再潅流の直後に閉鎖し得る。対照的に、Ｃｘ４３発現は４時間にピークを迎え、ペプチド５が網膜虚血から４時間後及び２４時間後に血管損傷を低減させることを示した（Ｈ．Ｖ．Ｄａｎｅｓｈ－Ｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒａｉｎ：ａ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ １３５，５０６（Ｆｅｂ，２０１２））。このことは、出産間近のヒツジ胎仔において虚血の１時間前または最中に送達されたペプチド５が、最小限の治療的利益しか有しなかったのに対し（Ｊ．Ｏ． Ｄａｖｉｄｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ２４８，３０１（Ｏｃｔ，２０１３））、虚血後のペプチド５は、ＥＥＧ活性及び睡眠周期の回復を顕著に向上させ、発作を顕著に低減させたという報告によって支持される。
これまでの研究では、血液脳関門の破損及び血管内皮の浮腫が炎症応答を示しＲＧＣ死滅を引き起こす、網膜虚血再潅流傷害のモデルを調査した（Ｈ．Ｖ．Ｄａｎｅｓｈ－Ｍｅｙｅｒ（２０１２））。傷害の原因は開放したＣｘ４３のＨＣに起因し、これは、Ｃｘ４３のＧＪではなくＨＣを標的化したＣｘ４３模倣ペプチド５の投薬（Ｓ．Ｊ．Ｏ’Ｃａｒｒｏｌｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ ＆ ａｄｈｅｓｉｏｎ
１５，２７（Ｍａｙ，２００８））が、血管漏出及びＲＧＣ細胞死を顕著に低減させたことを所与とする。
本明細書の実施例は、Ｄａｎｅｓｈ－Ｍｅｙｅｒら（２０１２）によって実行されたように、インビボの網膜虚血再潅流傷害モデルを含み、トナベルサットが、網膜虚血再潅流傷害の後のＲＧＣ喪失に対して保護的であることを示した。これは、インビトロでコネキシンヘミチャネル媒介性ＡＴＰ放出を抑制するのに使用される１０μＭと同等である
、３２μＭの低い循環濃度で達成された。
トナベルサットは、大部分の臨床試験第２相において、偏頭痛（Ａ．Ｗ．Ｈａｕｇｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ．Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ８，７１８（Ａｕｇ，２００９））、及び癲癇（Ａ．Ａ．Ｐａｒｓｏｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒｉｔｉｓｈ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ １３２，１５４９（Ａｐｒ，２００１）、Ｎ． Ｕｐｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒｉｔｉｓｈ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ １２１，１６７９（Ａｕｇ，１９９７））に対して、１日１回２０～８０ｍｇで投与されてきた。しかしながら、これらの臨床結果は結論には達していない（Ｈａｕｇｅ，２００９）。対照的に、驚くべきことに、傷害の最中及び後、特に虚血の後で、またはパネキシンチャネル遮断薬と組み合わせて、ヘミチャネルを標的化することによって治療的利益が達成され得ることが、本明細書で示された。臨床的失敗は、パネキシンチャネルにも影響したトナベルサットの使用に起因し得る。
Ｃｘ４３アイソフォーム特異的アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチド（Ｃｘ４３ ＡｓＯＤＮ）の一時的な下方制御は、顕著に血管保護を提供し、治癒しない眼創傷における機能転帰を向上させる（Ｏｒｍｏｎｄｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｍｅｍｂｒ．Ｂｉｏｌ．（２０１２） ２４５（７）：３８１－８８）。この文脈において、空間的緩衝効果を不可逆的に犠牲にすることのない、Ｃｘ４３の上昇に対する一時的な反作用、及びそれによるＧＪヘミチャネルの新たな形成が有益であった。驚くべきことに、傷害の後のＣｘの一時的な調節を制御しながら、「空間的緩衝」効果の完全な除去を最低限に抑えるために、トナベルサットの時間依存性作用を利用し得ることが、本明細書で発見された。
本開示はまた、トナベルサットがＣｘ４３を形質膜から除去することを示す（図１６）。
発明者らは、驚くべきことに、Ｃｘ４３プラークの全発現の低減（図１６）を発見し、これは、トナベルサットがＣｘ４３合成と分解との間の均衡を改変する傾向にあることを示す。このように、トナベルサットが標的とする内部移動したＣｘ４３チャネルは、リソソーム経路を介して分解へと送られる。
コネキシンチャネルの分解のための主要な経路は、リソソーム経路及びプロテアソーム経路の２つである。リソソーム経路を検査する論拠は、形質膜コネキシンがリソソームのみによって分解される一方で、細胞質及び核コネキシンはプロテアソームによって分解されるという考えに基づく。リソソーム阻害剤の存在下での細胞質Ｃｘ４３の蓄積は、トナベルサットが分解のためにＣｘ４３を標的化することを示す。Ｃｘ４３の核周辺の局在化は、ゴルジにおける新たなタンパク質の蓄積を示し、これは、トナベルサットが細胞表面Ｃｘ４３チャネルの分解を改善する一方で、それは新たなタンパク質のＣｘ４３転写または翻訳には影響しないという考えをさらに支持する。ＰＣＲデータも、トナベルサットがＣｘ４３ ｍＲＮＡ転写を制御せず、その代わり、観察されたＣｘ４３の低減が、内部移行及び分解によるタンパク質代謝回転のレベルで生じることを示唆する。
結論として、発明者らは、驚くべきことに、他のものの中でも、直接的かつ即時のコネキシンヘミチャネルの遮断、ならびにより高い濃度では、Ｃｘ４３ ＧＪカップリングの濃度及び時間依存性の抑制を含む、トナベルサットの新規の作用機序を発見した。高濃度のトナベルサットへの暴露は、ＧＪをアンカップリングするだけでなく、持続的な長期間の治療により、Ｃｘ４３プラークがリソソーム経路を介した内部移行及び分解を標的化するようにした。本開示では、コネキシンヘミチャネル及びパネキシンチャネルの両方が虚血傷害中にＡＴＰ放出を媒介することができ、コネキシンヘミチャネルは損傷後のＡＴＰ漏出の主要な誘因であることが示された。より低い濃度のトナベルサットへの短期的な暴露は、傷害の間、特にインビトロでの再潅流の間に、Ｃｘ４３ヘミチャネル媒介性ＡＴＰ放出を効果的に抑制し、これは、インビボの網膜虚血再潅流モデルにおけるＲＧＣ創出の低減と一貫するため、トナベルサットは、これまでに推測されてきたようなＣＮＳ特異性ではなく、Ｃｘ２６調節に制限されず、かつＣｘ４３タンパク質合成に影響しないが、その代わりに、コネキシンヘミチャネルに直接的に、または接続内部移行をとおして作用する。
実施例１１：コネキシン４３アンチセンス化合物の未修飾及び化学修飾されたオリゴヌクレオチド構造の遺伝子導入インビトロアッセイ ＨＵＶＥＣ細胞（Ｃ－００３－５Ｃ、
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、一次ヒト内皮細胞）を使用して、コネキシン４３アンチセンス化合物の化学修飾された骨格の遺伝子導入を試験した。細胞に、無血清培地中で４時間及び１２時間、製造業者推奨のプロトコルを使用してＯｌｉｇｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）によって遺伝子導入した。アンチセンス濃度は緩衝液中２００ｎＭであった。使用したアンチセンス化合物は、未修飾（Ｏ）骨格または完全に修飾された（ＰＴＯ）骨格であり、修飾された骨格はすべて、ヌクレオチド間のチオホスホリエート（ｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒｉａｔｅ）結合を有した。未修飾配列である配列１－Ｏは、配列ＧＴＡＡＴＴＧＣＧＧＣＡＡＧＡＡＧＡＡＴＴＧＴＴＴＣＴＧＴを有し得る。修飾された配列である配列１－ＰＴＯは、ＧｓＴｓＡｓＡｓＴｓＴｓＧｓＣｓＧｓＧｓＣｓＡｓＡｓＧｓＡｓＡｓＧｓＡｓＡｓＴｓＴｓＧｓＴｓＴｓＴｓＣｓＴｓＧｓＴの配列を有し得、配列中、下付き文字「ｓ」は、２つのヌクレオチド間のチオホスホリエート（ｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒｉａｔｅ）結合を示す。同様に、配列４－Ｏ及び配列４－２ＰＴＯについての未修飾及び修飾された配列は、それぞれ、ＡＣＣＣＡＴＧＴＴＧＣＣＴＧＧＧＣＡＣＣ、及び ＡｓＣｓＣｓＣｓＡｓＴｓＧｓＴｓＴｓＧｓＣｓＣｓＴｓＧｓＧｓＧｓＣｓＡｓＣｓＣであり得る。遺伝子導入研究のためのすべての配列は、蛍光標識化用のＦＡＭで標識した。遺伝子導入細胞を、ＦＡＣＳ（蛍光活性化セルソーティング）及び共焦点顕微鏡法によって分析した。
結果：
９５％超の遺伝子導入効率がすべてのオリゴヌクレオチド型で観察された。細胞は、非修飾オリゴヌクレオチドと比較してＰＴＯ－オリゴヌクレオチドでより蓄積した。表４０に要約するように、アンチセンスオリゴヌクレオチドの最大取り込みは４時間以内に生じた。
Figure 2023022154000048
Figure 2023022154000049
図１７は、いくつかの選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチドの遺伝子導入取り込みのＦＡＣＳデータを示す。
共焦点顕微鏡法による生細胞の画像は、図１８及び１９に示されるように、ＨＵＶＥＣ細胞（遺伝子導入後４時間）内でＦＡＭ標識ＳＥＱ１－Ｏ（未修飾）の取り込みを示す。図１８は、ＨＵＶＥＣ細胞（遺伝子導入後４時間）内でＦＡＭ標識ＳＥＱ４－ＰＴＯ（修飾）の取り込みを示す、共焦点顕微鏡法による生細胞の画像を示す。緑は、オリゴ配列１－Ｏ（ＦＡＭ標識）を表し、青は、ＤＡＰＩによって染色された細胞核を表す。図１８に見ることができるように、標識コネキシン４３調節剤は、図１８に示すように、核に近接し、時には核内にある。
図１８及び１９に示すように、オリゴヌクレオチド（緑）が核（青）中に蓄積するのが観察される。図１９では、緑はオリゴＳＥＱ１－Ｏ（ＦＡＭ標識）を表し、青はＤＡＰＩによって染色した細胞核を表す。
次に、ＨＵＶＥＣ細胞中のコネキシン４３のノックダウン効率を、配列が同じであるがオリゴヌクレオチド骨格へのＰＴＯ修飾の数が異なるオリゴヌクレオチドシリーズについて、ｑＰＣＲによって測定した。試験した配列は、骨格におけるホスホロチオエート結合がないか、２つであるか、またはすべてである、ＳＥＱ１及びＳＥＱ４であった。骨格におけるホスホロチオエート結合が２つである配列については、ホスホロチオエート結合は、配列の各側の末端にある最後のヌクレオチド結合の間にあった。配列は、ＳＥＱ１－２ＰＴＯ及びＳＥＱ４－２ＰＴＯについて、それぞれ、ＧｓＴＡＡＴＴＧＣＧＧＣＡＡＧＡＡ
ＧＡＡＴＴＧＴＴＴＣＴＧｓＴ及びＡｓＣＣＣＡＴＧＴＴＧＣＣＴＧＧＧＣＡＣｓＣである。全オリゴ溶液の濃度は２００ｎＭであった。
図２０は、ｑＰＣＲ（ｎ＝３）によって測定したコネキシン４３のノックダウン効率を示す。データは、３つの複製物の標準偏差を示す。図２１は、ウェスタンブロットによって測定したコネキシン４３のノックダウン効率を示す。データは、３つの複製物の標準偏差を示す。
結果は、完全なＰＴＯ骨格が、ｑＰＣＲ及びウェスタンブロット分析の両方によって、最大のＣｘｎ４３ノックダウンを呈したことを示す。さらに、アンチセンスを両端において１つのＰＴＯ（２－ＰＴＯ）で保護することにより、ある程度のＣｘｎ４３ノックダウンがもたらされた。未修飾（Ｏ）骨格オリゴヌクレオチドは、全ＰＴＯ－骨格オリゴヌクレオチドよりもはるかに低いレベルのＣｘｎ４３ノックダウン効率をもたらした。
共に完全な無損傷の配列及び組み換え配列に対する、修飾（ＰＴＯ）及び未修飾配列のノックダウン効率を経時的に観察した。ノックダウン効率を図２２に示すようにｑＰＣＲによって測定した。データは、３つの複製物の標準偏差を示す。
図２２Ａ及びＢは、それぞれ、遺伝子導入後４時間及び８時間でｑＰＣＲによって測定した修飾（ＰＴＯ）及び未修飾配列のノックダウン効率を示す。オリゴ濃度：（１）＝２００ｎＭ、（３／４）＝１５０ｎＭ、（１／２）＝１００ｎＭ、Ｃ：ＳＥＱ１、ＳＥＱ４：３７５０１、Ｃｓｃｒ：ＳＥＱ１組み換え、ＬＰ２ｓｃｒ：ＳＥＱ４組み換え、橙色の棒：陰性対照群。（各結果に関してｎ＝３）。結果は、遺伝子導入後４時間に検出されたより低い非特異性陰性対照の効果を示し、１５０ｎＭのオリゴは、その対応する陰性対照から最も離れた距離を呈した。
図 ２３ ｓｈｏｗｓ ｔｈｅ ノックダウン 効率 ａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ウェスタンブロット法 ． データは、３つの複製物の標準偏差を示す。結果は、遺伝子導入後４時間及び８時間が非常にわずかなノックダウンを呈し、より少ない非特異性陰性対照の効果が遺伝子導入後１２時間で検出され、１５０ｎＭの濃度のオリゴがその対応する陰性対照からの最大距離を呈したことを示す。
図２４に示すように、異なる配列を、そのコネキシン４３のノックダウン効率についてｑＰＣＲによって分析し、センス鎖及び他のアンチセンス鎖をＣｘｎ４３と比較した。
図２５に示すように、配列を、ノックダウン効率についてウェスタンブロット（ＷＢ）によっても分析した。結果は、すべてのアンチセンスオリゴが陰性対照群よりも高いコネキシン４３のノックダウン効率を有したことを示す。ノックダウン効率結果から、コネキシン４３をノックダウンし得る様々な他の配列（すべて、骨格全体におけるチオホスホリエート（ｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒｉａｔｅ）結合がすべてであるもの）を特定した。表６８は、ＳＥＱ１と比較したその相対的ノックダウン差異を示す。
Figure 2023022154000050
次に、オリゴヌクレオチド配列を、初代細胞とした別の細胞型：ブタ大動脈内皮細胞であるＰＡＯＥＣ（Ｐ３０４－０５、Ｃｅｌｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｉｎｃ．）におけるそのノックダウン効率について試験した。細胞を、実験の前に５０～８０％のコンフルエンスに達するまで２４時間播種した。細胞に、無血清培地中で４時間、２００ｎＭのオリゴ濃度で、推奨されるプロトコルを使用してＯｌｉｇｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）によって遺伝子導入した。試料を、８時間（ｑＰＣＲ分析用）及び１２時間（ウェスタンブロット分析用）で採取した。図２６はノックダウン結果を示す。
図２６中の破線は、平均の陰性対照の効果（約１２％）を示す。結果は、概して、ブタ版アンチセンスオリゴが、対応するヒト版よりも良好に機能したことを示す。
次に、選択したオリゴを、ｑＰＣＲによって、ＨＵＶＥＣ細胞におけるその用量反応性能について分析した。試験した濃度は、図２７に示すように、１、５、１０、２５、５０、１００、及び２００ｎＭであった。結果によると、組み換え配列（コネキシン４３のためのアンチセンス）はいずれの用量反応も有しなかったが、選択したアンチセンス オリゴ配列（すべてホスホロチオエート骨格を持つ）は用量反応を呈したことをが示された。
未修飾配列（骨格におけるホスホロチオエート結合なし）によるＣｘｎ４３のノックダウン効率を、図２８Ａ及びＢに示すように、いくつかの配列についてｑＰＣＲによって測定した。結果は、ノックダウンが遺伝子導入後４時間で検出されるが、８時間では検出されないことを示す。アンチセンスコネキシン４３オリゴは、配列４及び１３３７０４について用量反応を呈した。配列１は、すべての濃度について、４時間で約１０％を超えるノックダウン効果を呈さなかった。陰性対照群は、溶媒対照群と比較して、より高いＣｘｎ４３ ｍＲＮＡレベルを呈した。
修飾配列（すべてのチオホスホリエート（ｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒｉａｔｅ）骨格で）のノックダウン効率を、図２９に示すように、４００ｎＭ及び１５０ｎＭの両方で未修飾配列と比較した。
結果は、２００ｎＭでは、ＡＳＮ治療によってそれほどのノックダウン（ＫＤ）は検出されないが、４００ｎＭでは、低レベルのノックダウンが一部のＡＳＮ配列について検出されることを示す。全体として、未修飾オリゴ配列は、図３０に示すように、インビトロのノックダウンを誘導し得るが、その程度は小さく、ｔ実験ごとに変動する。
結果は、修飾オリゴ骨格（ＰＴＯ－ＡＳＮ）が、はるかに高い用量の未修飾オリゴを使用したにもかかわらず、対応する未修飾オリゴ（Ｏ－ＡＳＮ）よりもはるかに優れたノックダウン効率を呈したことを示す。
実施例１２．コネキシン４３に対する他の効果的なアンチセンスオリゴヌクレオチドを特定するための一連のスクリーニング事象によって特定された他の配列
目的とする標的のＤＮＡ配列をＮＣＢＩデータベース（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）から入手した。大腸菌細胞を使用する増幅のために、ＤＮＡを合成し、ｐＤＯＮＲ２２１クローニングベクターに挿入した。続いて、標的ＤＮＡを含むベクターを大腸菌細胞から抽出し、制限酵素を使用して標的ＤＮＡを単離した。標的ＤＮＡをインビトロでの転写のための鋳型として使用して対応するＲＮＡを生成し、ＲＮＡｓｅ Ｈ及びＤＮＡｚｙｍｅアッセイを行うために使用した。
ＲＮＡｓｅ Ｈアッセイのため、標的ＲＮＡを一端において３２Ｐで標識し、ＲＮＡｓｅ
Ｈ酵素の存在下で１２－ヌクレオチドランダム化オリゴヌクレオチドライブラリーによってプローブした。続いて、部分消化された試料産生物を、変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動を行うことによって分析した。標準的なラダーと比較したＲＮＡｓｅ Ｈ開裂によって生成された断片のサイズは、ＲＮＡの標識した端部からの対応する近接性領域の距離を示した。ＲＮＡの未翻訳端部に位置した領域は、ゲルの分解能の限界に起因して決定されなかった。
ＤＮＡｚｙｍｅアッセイについては、特定のアクセス可能な部位をプローブするために、標的ＲＮＡ上のプリン（Ａ、Ｇ）及びピリミジン（Ｃ、Ｔ）対の酵素標的を探すことによって２０－ヌクレオチドＤＮＡｚｙｍｅを設計した。続いて、試料を、非変性アガロースゲル電気泳動及びＲＮＡゲル染色を行うことによって分析した。ＤＮＡｚｙｍｅ開裂によって生成された断片のサイズにより、特定の近接性部位を確認した。ＲＮＡの未翻訳端部に位置した部位は、ゲルの分解能の限界に起因して決定されなかった。
活性ＤＮＡｚｙｍｅの標的結合アームの配列を使用して、ホスホロチオエート（ＰＴＯ）骨格を持つアンチセンスオリゴヌクレオチドを合成した後、これを、細胞培養アッセイにおいて、ウェスタンブロットによりタンパク質のノックダウンについて、ｑＰＣＲによりＲＮＡのノックダウンについてスクリーニングした。
細胞を６ウェル培養プレート中で２４時間成長させると、遺伝子導入剤Ｏｌｉｇｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）を使用するアンチセンスオリゴヌクレオチド治療の前に５０～７０％のコンフルエンスに達した。細胞を、遺伝子導入後４時間～２４時間の間にｑＰＣＲ及びウェスタンブロット分析のために採取した。
ｑＰＣＲを行って、標的ＲＮＡのノックダウンにおけるアンチセンスオリゴヌクレオチドの有効性を決定した。簡潔に言えば、遺伝子導入後に全ＲＮＡを細胞から抽出した。単離したＲＮＡをＤＮＡｓｅで処理し、ｃＤＮＡに逆転写した。次に、ｃＤＮＡをｑＰＣＲ熱サイクルに供した。ｑＰＣＲから得たＣｔ値（蛍光強度が設定閾値を超えるために必要なサイクルの数）を、ＲＮＡの相対的存在度に変換した。標的のＲＮＡレベルを、選択した参照遺伝子に対して正規化し、アンチセンスオリゴヌクレオチド治療対ビヒクル治療を比較した。
またウェスタンブロットを行って、標的タンパク質のノックダウンにおけるアンチセンスオリゴヌクレオチドの有効性を決定した。簡潔に言えば、遺伝子導入に全タンパク質を細胞から抽出し、濃度を、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）アッセイを行うことによって決定した。続いて、等量の全タンパク質をゲル電気泳動のためにロードし、ニトロセルロース膜上にブロットした後、これを、標的タンパク質に対して特異的抗体を用いてプローブした。密度測定を使用して、標的タンパク質の帯強度を定量化した。ノックダウンを、アンチセンスオリゴヌクレオチド治療対ビヒクル治療を比較することによって定量化した。参照に
より本明細書に組み込まれる出願番号第６２／０８０，２１７号、同第６２／０８５，２２６号、同第６２／１４６，１２８号、及び同第６２／１４７，４８８号中の別表に示される表５６は、試験したすべてのＡＳＮ及び要約した試験結果を示している。
表６７は、ＲＮＡａｓｅ酵素活性が見られた部位を示し、近接性の一般的領域を表す。これらを、これらの領域にわたるＤＮＡｚｙｍｅ歩行によって緻密化した。これからＡＳＮの範囲を設計し試験した。
表６８は、その後ノックダウン活性について細胞に対して試験したすべてのＡＳＮを列挙する。
表６１は、発明者らがさらに発達させ特性評価している現在の先導ＡＳＮ配列を列挙する。
結果
これらのＡＳＮ配列は、ＲＮＡｓｅ Ｈアッセイによって特定した８つの近接性領域の周囲で設計したＤＮＡｚｙｍｅに由来し、これは、表５７に列挙するとおりである。
Figure 2023022154000051
Figure 2023022154000052
その後、さらなる分析に進めるためにＡＳＮのサブセットを選択した。他のＡＳＮは、予備細胞スクリーニングアッセイにおいてより低いレベルのノックダウンを示すこと、及び／または高い交差反応が他の既知のヒト遺伝子との配列整列によって検出されたかどうかに基づいて、サブセットから排除した。
Figure 2023022154000053
Figure 2023022154000054
アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＮ）の相対的ＲＮＡノックダウン活性を図３１に示す。アンチセンスオリゴヌクレオチドのウェスタンブロット分析から得た相対的タンパク質ノックダウン活性を図３２に示す。結果は、ＨＵＶＥＣ細胞における２つの複製実験からのものである。（ｎ＝２）黄色の棒（「４７００１ｓｃｒ２」）は、陰性対照オリゴヌクレオチドの活性を示す。結果は、他のＡＳＮがＣｘｎ４３活性の制御に極めて効果的であることを示す。
細胞スクリーニング実験を、各実験において２つの生物学的複製物を用い、ＨＵＶＥＣ細胞（ヒト臍静脈内皮細胞、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して行った。「ＣＯＤＡ」の識別子は配列１であり、「ＬＰ２」は配列４である。
以下の上位ＡＳＮ候補を、ｑＰＣＲ及びウェスタンブロット分析の両方において検出された上位１０％以内のノックダウン率を出したものから選択し、これは表６１に示すとおりである。
Figure 2023022154000055
Figure 2023022154000056
図３３は、細胞への投与後４時間でＣｘｎ４３ ＲＮＡのノックダウンを誘導するための一部の選択されたＡＳＮの用量反応曲線を示す。このスクリーニング結果は、ＨＵＶＥＣ細胞における１つの実験からのものである。（ｎ＝２つの生物学的複製物）。灰色の線
（「４７００１ｓｃｒ２」）は、陰性対照オリゴヌクレオチドを示す。ＡＳＮ濃度は、１、５、１０、２５、５０、１００、及び２００ｎＭであった。「ＫＤ％」という用語は、Ｃｘｎ４３ ＲＮＡレベルにおけるノックダウンの比率である。「Ｃｏｄａ」という表示は、臨床開発中のＣｏＤａ００１ヒトコネキシン４３ＡＳＮであり、「ｓｃｒ２」という表示は、Ｃｘｎ４３ノックダウン活性を有することが予期されない組み換えＡＳＮ対照である。
実施例１３．虚血再潅流傷害後に血管漏出を防止するためのペプチドを調節するコネキシン４３の使用 ペプチドを調節するコネキシン４３（Ｃｘｎ４３）を使用して、虚血灌
流によって誘導されるモデルの眼圧の増加を制御した。使用したペプチド配列は、以下に記載の用量の配列ｐｅｐｔ５（配列番号１６８）であった。マウスを虚血灌流に供した後、腹腔内注射によってエバンスブルー染料で処理し、モデルのベースラインを監視した。０．９％の生理食塩水中の１００ｍｇ／ｍｌのエバンスブルーを体重１００ｇあたり１ｍｌの用量でマウスに導入した。注射を腹腔内で行った。虚血再潅流後に、染料漏出の量を、コネキシン４３スポット計数と同様に測定した。図３４は、虚血再潅流後のコネキシン４３をマッピングするための虚血後のエバンスブルー染料の染料灌流を示す。
図３５は、虚血再潅流後の時間の関数としての染料漏出の（本明細書に記載されるＩｍａｇｅＪを介して）計算された面積またはコネキシン４３スポット計数を示す。これらの結果は、染料漏出のベースライン性能を示す。
虚血再潅流モデルの治療を分析して、コネキシン４３調節剤による治療の効果を決定した。図３６は、Ｃｘｎ４３調節剤による治療及びＣｘｎ４３調節剤によらない治療の後の総染料漏出に対する影響を示す。この研究で使用したＣｘｎ４３調節剤は、配列番号１６８（「ペプチド５」）であった。注射は腹腔内注射であった。２ｍＭのＣｘｎ４３調節剤ペプチド１ｍＬを０．９％の生理食塩水として使用した。最終血中ペプチド濃度は１００ｕＭであった。
ペプチド断片の効率も、共通のペプチド配列コア上の種々の配列異形について監視した。図３７に示すように、Ｃｘｎ４３の発現（Ｙ軸）を遅延させる能力を、特定のコア配列の異形と比較した。結果は、配列が、Ｃｘｎ４３活性の遅延における活性を保持するためにカルボキシ末端にてＫＴを保持する必要があることを示す。ペプチドを１００ｕＭの濃度で投与した。
図３７中の配列は、ペプチド５＝配列番号１６８、Ｍｏｄ １＝配列番号１７１、Ｍｏｄ
２＝配列番号１７２、Ｍｏｄ ３＝配列番号１７３、Ｍｏｄ ４＝配列番号１７４、Ｍｏｄ ５＝配列番号１７５、Ｍｏｄ ６＝配列番号１７６である。
実施例１４：ナノ粒子（Ｎｐ）及びミクロ粒子（ＭＰ）調製及び分析 粒子調製 水－油－水（二重）エマルションは、ＰＬＧＡを使用して疎水性及び親水性薬物をマイクロまたはナノスケール形態にカプセル化することができる１つの方法である。簡潔に言えば、ＰＬＧＡ（ポリ（Ｄ，Ｌ－乳酸－グリコール酸共重合体）（ＰＬＧＡ ５０：５０、ＭＷ １３，６００、固有粘度０．１９ｄｌ／ｇ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を、界面活性剤または安定剤（水）によって乳化させる有機相（油）中に溶解させた。疎水性形態のコネキシン４３調節剤は、直接油相に添加し、一方で親水性形態のコネキシン４３調節剤は、粒子形成前にポリマー溶液で乳化させてもよい。高い強度の超音波バーストにより、小型のポリマー液滴の形成を促進された。その後、結果として生じるエマルションを、より大きい水相に添加し、数時間撹拌することで、溶媒を蒸発させた。硬化したナノ粒子を収集し遠心分離によって洗浄した。
Ｃｘｎ４３調節剤を含有するＰＬＧＡ Ｎｐ及びＭｐ ＰＬＧＡ Ｎｐ及びＭｐの調製及び特性評価を、二重エマルション溶媒蒸発法を使用して行った（Ｙ．－Ｓ．Ｃｈｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．１８（２０１）４９３－５０）。簡潔に言えば、Ｎｐについては、５ｍＭのＣｘｎ４３ ＭＰ（素またはＦＩＴＣ標識化）水溶液を、３０ｍｇ／ｍｌのＰＬＧＡを含有するＤＣＭ（ジクロロメタン、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）中で、プローブソニケータ（Ｈｉｅｌｓｃｈｅｒ，Ｔｅｌｔｏｗ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を１分間氷浴上で５０Ｗの振幅及び０．６秒のデューティサイクルで使用して乳化させ、一次水／油エマルションを形成した。結果として得られる一次水／油エマルションを、３％ｗ／ｖのＰＶＡ（ポリビニルアルコール（ＰＶＡ、ＭＷ １３０，０００、加水分解度９５～９７％、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）の水溶液中でさらに乳化させて、複数の水／油／水エマルションを形成した。これを続いて５０ｍｌのＰＶＡ水溶液（０．１％ｗ／ｖ）に注ぎ入れて、蒸発プロセス中の二重エマルションを安定化させ、結果として得られるＮｐを、４℃３０，０００ｒｐｍでの超遠心分離（ＰｒｏｔｅｏｍｅＬａｂ（商標）ＸＬ－Ａ／ＸＬ－Ｉ、Ｔｙｐｅ ７０ Ｔｉ ｒｏｔｏｒ、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ａｕｃｋｌａｎｄ，Ｎｅｗ Ｚｅａｌａｎｄ）によって回収した。Ｍｐについては、１０ｍＭのＣｘｎ４３ ＭＰ水溶液を、１００ｍｇ／ｍｌのＰＬＧＡを含有するＤＣＭ中で乳化させた。形成された一次水／油エマルションをＰＶＡ溶液（５％ｗ／ｖ）中でさらに乳化させ、続いて５分間８０００ｒｐｍで均質化（ＩＫＡ ｗｏｒｋｓ、Ｕｌｔｒａ－Ｔｕｒｒａｘ Ｔ１０、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＵＳＡ）した後、これを５０ｍｌの０．１％ｗ／ｖのＰＶＡ溶液中に注ぎ入れ、有機相を室温で蒸発させた。
その後、Ｎｐ及びＭｐを２４時間凍結乾燥させ（ＶｉｒＴｉｓ、ＳＰ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｇａｒｄｉｎｅｒ、ＮＹ，ＵＳＡ）、粒子形態を、走査電子顕微鏡法（ＳＥＭ）（Ｐｈｉｌｉｐｓ ＸＬ３０Ｓ ＦＥＧ、Ｅｉｎｄｈｏｖｅｎ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して調査し、同時に、粒径、ゼータ電位（ＺＰ）、及び多分散性指数（ＰＤＩ）を、それぞれ、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ及びＭａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ，ＵＫ）を使用して決定した。
封入効率、及びＰＬＧＡ Ｎｐ及びＭｐからのインビトロのＣｘｎ４３ ＭＰ放出
ＦＩＴＣで標識したＣｘｎ４３ ＭＰを充填したＮｐ及びＭｐの２．５ｍｇ塊を０．２５ｍｌのＤＭＳＯに添加して、ポリマー溶解させた。続いて、０．５ｍｌの水を添加し、混合物を１５分間室温で放置した後、３０分間加振して、ＦＩＴＣで標識したＣｘｎ４３ ＭＰの水相への抽出を促進した。試料を５分間１３，０００ｒｐｍ及び４℃で遠心分離し、上清中のＣｘｎ４３ ＭＰ濃度を、マイクロプレートリーダ（Ｓｐｅｃｔｒａ Ｍａｘ
Ｍ２ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｉｌｉｃｏｎ Ｖａｌｌｅｙ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して定量化した。インビトロの放出研究のために、１５ｍｇのＦＩＴＣで標識したＣｘｎ４３ ＭＰを充填したＮｐ及びＭｐを、０．７ｍｌのＰＢＳ中に懸濁させ、放出実験の期間中、１００ｒｐｍ及び３７℃で加振した。０．６ｍｌの体積の上清を所定の時点にて取り出し、新たな媒体で置き換えて、シンク条件を維持した。試料を１３，０００ｒｐｍで遠心分離し、上清を、上記のように蛍光光度計を使用して、ＦＩＴＣで標識したＣｘｎ４３ ＭＰについてアッセイした。放出されたＣｘｎ４３ ＭＰの累積量を計算し、各研究を３連で行った。
Ｃｘｎ４３ヘミチャネルドッキングのインビトロでの遮断
ＡＲＰＥ－１９細胞（Ｐ９－１２、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ）をＣｘｎ４３タンパク質の発現について最初に評定した。細胞を、５％のＣＯ２及び９５％の相対湿度によって
３７℃で、１０％のＦＣＳを含有するＤＭＥＭ／Ｆ１２（Ｇｉｂｃｏ、ＮＺ）中で通常どおりに培養した。コンフルエント時に、細胞をＴｒｙｐＬＥ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓによって採取し、ウェルあたり１×１０５細胞／ｍｌの密度でカバースリップ上に播種した。４８時間の癒着の後、各ウェルをＰＢＳで３回洗浄し、次に、Ｃｘｎ４３ ＭＰの最終濃度を５マイクロモル（既に確認した封入効率にしたがう）に保った、凍結乾燥させた粒子を細胞成長培地と混合することによって新たに調製した１ｍｌのＦＩＴＣ－Ｃｘｎ４３ ＭＰ溶液またはＦＩＴＣ－Ｃｘｎ４３ ＭＰを充填したＭｐ及びＮｐ懸濁液を添加した。所定の時点（８時間及び２４時間）にて、懸濁液を除去し、細胞を慎重にＰＢＳで３回洗浄して、あらゆる残留粒子を除去した。細胞を、４％の冷ＰＦＡによって２０分間室温で固定した後、一晩４℃でウサギ抗Ｃｘｎ４３抗体（Ｃ６２１９、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、１：２０００）と共にインキュベートした。一次抗体を除去した後、細胞を、Ａｌｅｘａ ５６８（Ａ１１０１１、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１：５００）で標識したヤギ抗ウサギ二次抗体と共に２時間インキュベートした。核をＤＡＰＩ（４’，６－ジアミジノ－２－フェニルインドール、ＰＢＳ中１００ｎＭ）で対比染色した後、細胞を、Ｃｉｔｉｆｌｕｏｒ封止剤（ＡＦ１、ＰｒｏＳｃｉＴｅｃｈ，Ｓｙｄｎｅｙ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）を使用してスライド上に封止した。
インビボの網膜虚血－再潅流ラットモデル
すべての手順は、ＡＲＶＯ Ｓｔａｔｅｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｓｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌｓ ｉｎ Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ ａｎｄ Ｖｉｓｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈを順守しており、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ａｕｃｋｌａｎｄ Ａｎｉｍａｌ Ｅｔｈｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって認可されていた。体重２００～３００ｇの雄の成体ウィスターラットを１２時間の明暗サイクルで飼育し、飼料及び水を不断給餌した。動物を再潅流後の飼育期間及び適用した製剤に従ってグループ分けした（表１０９）。
Figure 2023022154000057
Figure 2023022154000058
表 １０９． Ｃｘｎ４３ＭＰ、コネキシン４３模倣ペプチド； Ｎｐ、ナノ粒子；Ｍｐ、ミクロ粒子；ＧＦＡＰ、グリア線維性酸性タンパク質；Ｂｒｎ３ａ、脳特異的－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ホメオボックス／ＰＯＵドメイン タンパク質３Ａ。
ラットを、ケタミン（１００ｍｇ／ｍｌ、Ｐａｒｎｅｌｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ａｕｃｋｌａｎｄ，Ｎｅｗ Ｚｅａｌａｎｄ）及びドミトール（メタドミジン塩酸塩１ｍｇ／ｍｌ、Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ａｎｉｍａｌ Ｈｅａｌｔｈ、Ｓｙｄｎｅｙ，Ａｕｓｔｒ
ａｌｉａ）の６：４の割合の筋肉内注射（体重１００ｇあたり０．１ｍｌ／１００ｇ）で麻酔した。局所麻酔薬（Ｍｉｎｉｍｓオキシブプロカイン塩酸塩０．４％ｗ／ｖ、Ｂａｕｓｃｈ ＆ Ｌｏｍｂ、Ｓｕｒｒｅｙ，ＵＫ）を左眼に適用して、カニューレ挿入の前に角膜反射を除去し、一方でＲｅｆｒｅｓｈ Ｔｅａｒ Ｐｌｕｓ点眼薬（Ａｌｌｅｒｇａｎ、Ａｕｃｋｌａｎｄ，Ｎｅｗ Ｚｅａｌａｎｄ）を右眼（対照）に投与して、乾燥を防止した。網膜虚血を、３０Ｇ針を縁の約１ｍｍ前方の左眼の前眼房に挿入する前眼房へのカニューレ挿入によって達成した。シリコーン管に接続した針を、０．９％の滅菌生理食塩水の持ち上げた注入ラインに取り付け、生理食塩水の高さは、１２０ｍｍＨｇを産出するように較正した。この状態を１時間維持した後、カニューレを除去して、ＩＯＰの正常化及び網膜の再潅流が引き起こした。水晶体損傷または多量出血等の何らかの眼科系合併症が本手順の結果として生じた場合、その動物を研究から除外した。
Ｃｘｎ４３ ＭＰ製剤の硝子体内注射 硝子体内注射を虚血－再潅流の直後に行った。
３０Ｇ針付きのＨａｍｉｌｔｏｎ注射器（Ｍｏｄｅｌ ７０１ ＬＴ ＳＹＲ、Ｈａｍｉｌｔｏｎ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｒｅｎｏ，ＮＶ，ＵＳＡ）を、水晶体嚢との接触を回避し、内容物を硝子体チャンバに導くために、上側網膜における縁の前方に４５℃の角度で挿入した。各ラットに、０．９％生理食塩水中で希釈した５８０マイクロモルのＣｘｎ４３ ＭＰを２μｌ与えた。５０μｌの硝子体体積を仮定して、２０マイクロモルの最終ペプチド濃度が表された。次に、生理食塩水中の体重１００ｇあたり０．１ｍｌの体積のＡｎｔｉｓｅｄａｎ（アチパメゾール５ｍｇ／ｍＬ、Ｐｆｉｚｅｒ、Ａｕｃｋｌａｎｄ，Ｎｅｗ
Ｚｅａｌａｎｄ）（１：９）を皮下注射して動物を回復させた。
網膜断面におけるＣｘｎ４３及びＧＦＡＰ標識化
再潅流の２８日後、ラットをＣＯ２によって安楽死させ、眼を摘出した（１群あたりｎ＝３）。眼を３０分間４％のＰＦＡ中に浸漬することによって即時に固定した後、スクロースを１０％から３０％に徐々に増加させることで一晩凍結保護した。その後、眼を最適切削温度（ＯＣＴ）化合物（ＰｒｏＳｃｉＴｅｃｈ、Ｓｙｄｎｅｙ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）中に包埋させ、液体窒素によって瞬間凍結させた。厚さ２０ミクロンの切片をスライドに載せ、２０℃のエタノール中で１０分間さらに固定した後、室温にて１時間、遮断緩衝液（１０％の正常なヤギ血清（Ｇｉｂｃｏ、ＮＺ）及びＰＢＳ中の０．１％のＴｒｉｔｏｎ
Ｘ－１００）と共にインキュベートした。１０％の正常なヤギ血清及び２％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００中のＣｙ３（Ｃ９２０５、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、１：１０００）一次抗体と複合させたウサギ抗Ｃｘｎ４３（Ｃ６２１９、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、１：２０００）及びマウス抗ＧＦＡＰを一晩４℃で適用した。組織を１５分間３回ＰＢＳで洗浄した。Ｃｘｎ４３を視覚化するための１０％の正常なヤギ血清中のヤギ抗ウサギＡｌｅｘａ４８８二次抗体（Ａ１１０３４、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１：１０００）を、室温の暗闇で２時間適用した後、切片を載せた。
網膜全組織標本におけるＲＧＣ標識化
再潅流の２８日及び９０日後、ラットをＣＯ２によって安楽死させ、眼を摘出した（１群あたりｎ＝６）。後眼部を角膜強膜縁結合に沿って切断した後で慎重に除去し、網膜、強膜、及び視神経を、１時間かけて０．０１ＭのＰＢＳ中の４％のＰＦＡ中で固定した。上側の四半部に目印を付けるために小さい切り込みを入れ、４つの放射状の切り込みを外周に作製して、上側、下側、側頭側、及び鼻側の網膜四半部を分割し、平坦な載積を可能にした。次に、視神経及び強膜を優しく引き離し、遊離している網膜をスライド上で慎重に平坦化した。ＲＧＣを生き残ったものを、一晩４℃で、ＰＢＳ中の２％のウマ血清（Ｇｉｂｃｏ、Ａｕｃｋｌａｎｄ，Ｎｅｗ Ｚｅａｌａｎｄ）及び２％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００中のヤギ抗Ｂｒｎ３ａ一次抗体（ＳＣ－３１９８４、Ｓａｎｔａ－Ｃｒｕｚ Ｂｉｏ
ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１：１００）を適用することによって標識した。組織をＰＢＳで１５分間３回ＰＢＳで洗浄した後、２％のウマ血清中のロバ抗ヤギＣｙ３でタグ付けした二次抗体（７０５－１６５－１４７，Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１：５００）を、室温の暗闇にて２時間適用した。ＰＢＳでさらに洗浄した後、網膜を平置きし、撮像まで４℃で貯蔵した。
共焦点顕微鏡法及び画像分析
免疫標識を共焦点レーザ走査型顕微鏡鏡（ＦＶ１０００、Ｏｌｙｍｐｕｓ、Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）によって撮像した。網膜断面におけるＣｘｎ４３及びＧＦＡＰ標識化については、眼１つあたり６つのセクションを用いて、試料あたり８枚の画像を撮った。網膜全組織標本におけるＲＧＣ標識化については、１群あたり６つの網膜を用いて、各網膜の四半部あたり２つの領域を撮像した。この方法により、各眼において同様の領域を評定し、起こり得るいかなる面積の偏見も回避したことが確実となった。個々の抗体標識化を最良に差別化し、画像の彩度過剰を回避するように、ゲイン（電圧）及びオフセット設定を調整した。ＩｍａｇｅＪにおいて自動スポット計数を使用して定量化を行った。断面におけるＣｘｎ４３の定量化のために、各画像を、４５の閾値を使用して二値画像に変換した。３画素より少ないスポットはノイズと見なし、計数しなかった。全組織標本におけるＲＧＣの定量化のために、各画像を、２３の閾値を使用して二値画像に変換した。クラスタを分離するために、流域アルゴリズムを適用した。２０画素より少ないスポットはノイズと見なし、粒子計数から排除した。
統計分析 結果を標準偏差（ＳＤ）と共に平均値として表した。テューキー・クレーマ
ー比較を用いた分散分析（一元配置分散分析）を使用して、群間の有意な差異（ｐ＜０．０５）について試験した。全データ分析を、Ｍｉｎｉｔａｂ＃ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ
Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｖｅｒｓｉｏｎ １５（Ｍｉｎｉｔａｂ Ｉｎｃ．、Ｓｔａｔｅ Ｃｏｌｌｅｇｅ，ＰＡ，ＵＳＡ）を使用して実行した。
ＰＬＧＡ Ｎｐ及びＭｐの特性評価 二重エマルション及び溶媒蒸発法を使用して、粒
径分布の狭い所望の粒径のＣｘｎ４３ ＭＰを充填したＰＬＧＡ Ｎｐ及びＭｐを得た（図１１０）。図１１０は、調製直後の凍結乾燥したＮｐ（Ａ）及びＭｐ（Ｂ）の形態、ならびに放出媒体中の３日後の表面形態及び多孔性における変化を示す（それぞれ、Ｄ（Ｎｐ）及びＣ（Ｍｐ））。示されるように、Ｎｐ及びＭｐの両方は、調製後、球形構造及び比較的平滑で均一な表面形態を呈した（図１１０Ａ及びＢ）。いくらかの凝集体の形成が観察されたが、遊離薬物結晶は存在せず、これは、Ｃｘｎ４３ ＭＰがＰＬＧＡマトリックスに完全に充填されたことを示す。放出媒体中での３日間の後、Ｍｐは粒子表面におけるわずかな孔形成を呈し（図１Ｃ）、一方でＮｐはほぼ完全に浸食され、主に粒子カプセルが残った（図１Ｄ）。
粒径は、主にＰＬＧＡ濃度によって影響を受けた。使用したＰＬＧＡ濃度が高いほど、より大きい粒径のＭｐで見られるように得られた平均径は大きくなった。これは、より小さいポリマー凝集体がより濃縮された溶液中で癒着し、それにより、より大きい液滴につながる確率がより高いことに起因する可能性が高い。さらに、有機相の増加していく粘度に起因して乳化プロセス中に必要となるより高い剪断力により、ＰＬＧＡ溶液の水相への不良な分散性が生じた可能性がある。
Ｎｐの平均ＺＰ（ゼータ電位）は－３１．３±０．９４ｍＶであり、Ｃｘｎ４３ ＭＰがｐＨ７．４で中性であるため、負電荷はＰＬＧＡに起因した。ＺＰは、粒子安定性及び粘膜癒着の両方に影響するため、重要な物理化学的特性である。高度に正または負であるＺＰ値は粒子間の反発を引き起こすため、凝集を防止し、それにより、理論的には粒子懸濁
を安定させる傾向にある。眼硝子体は、９８％が水からなり、コラーゲン及びヒアルロン酸分子が２つの主な個体構成成分をなす。アニオン性粒子は、その粒径が立体的捕捉を回避するのに十分に小さい場合は、粒子と負に帯電した硝子体メッシュワークとの間の静電反発力によって、硝子体をとおして自由に拡散し得る。ウシ硝子体のメッシュワークの細孔径は、１～２μｍであることが示されている（Ｌ．Ｃｈｅｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２２ （２００２） ３９７７－３９８６）。したがって、Ｎｐは、硝子体を通って網膜へと自由に拡散することになり、一方でＭｐは、そのより大きい粒径に起因してメッシュワーク中に捕捉され得る。
ＰＬＧＡ Ｎｐ及びＭｐからの封入効率及びインビトロのＣｘｎ４３ ＭＰ放出 ＦＩ
ＴＣで標識したＣｘｎ４３ ＭＰを充填したＰＬＧＡ Ｎｐ及びＭｐの封入効率（ＥＥ）を図１１０に列挙する。負荷量が示すように、方法の再現性は良好であり、封入効率の計算を同一条件下で調製した群あたり３つのバッチに対して実行した。高い収率（≧９０％）が両方の粒子について得られ、Ｃｘｎ４３ ＭＰ ＥＥは、はるかに小さいＮｐ（≧７０％）と比較してより大きいＭｐについてより高く（≧９７％）、ほぼ完全なペプチドカプセル化がＭｐについて得られた。Ｍｐに使用した比較的高濃度のＰＬＧＡは、処理中の活性物質の外部水相への拡散率を低下させることによって高ＥＥに寄与した。
粒径分析 走査電子顕微鏡法（ＳＥＭ）のための試料を撮像当日に調製した。一片の両
面カーボンテープをＳＥＭスタブに貼付した。少量の凍結乾燥させた粒子をテープの表面に適用し、テープ表面を窒素流に穏やかに供して、遊離している粒子を除去した。次に、試料を、３０～１２０秒間、金または金－パラジウムでスパッタ被覆した。その後、ＳＥＭスタブを分析のためにＳＥＭに配置した。粒子可視化のための典型的なパラメータは、５～１５ｍｍの作動距離、５～１２ｋＶのビーム強度、及び１～３マイクロメートルのスポットサイズであった。ミクロ粒子は１００倍の倍率で観察し、ナノ粒子は３，０００倍の倍率で識別可能であった。粒径及び形態の代表試料を得るために、バッチあたり少なくとも３枚の画像を収集した。測定値は、ＩｍａｇｅＪの「測定」機能を使用して、ＳＥＭ画像から直接取った。視野からランダムに選択した粒子の直径の最低で１５０の測定値を取り、代表サイズ分布を取得した。ミクロ粒子及びナノ粒子の代表画像を図３８に示す。
限定されないが、光散乱、ゼータ電位分析、クールター計数（電気的検知帯法）、及び光学顕微鏡法を含む他の方法が、粒径を測定するために採用されてもよい。
実施例１５．コネキシン調節剤の徐放製剤のためのミクロ粒子及びナノ粒子の使用
上記のものと同様の方法によって、ミクロ粒子及びナノ粒子に化学修飾したＣ１２－Ｃ１２－配列－Ｐｅｐｔ５コネキシン４３調節ペプチド（配列番号３２６）を充填した。放出媒体の後の粒子の代表画像を得るために、各粒子型のアリコートを、３日間、１倍ＰＢＳ緩衝液に添加した。粒子を、上記のものと同様の方法によって収集し、放出後に撮像した。画像を上の図１１０に示す。出来上がった状態の粒子（放出媒体にまだ供していないもの）についての粒径分析（複数のＳＥＭ画像のＩｍａｇｅＪ粒子定寸を使用する上記の方法によって決定）を、図３８の下部に付与する。
コネキシン４３調節剤の粒子からのインビトロ放出を、粒子に対する溶液のＵＶ可視によって監視した。粒子を放出媒体である１倍ＰＢＳ緩衝液に添加し、緩衝溶液のアリコートをＵＶ可視によって監視して、放出されたペプチドの量を決定した。結果を図３９に示す。
インビトロの放出結果は、微粒子製剤が経時的なコネキシン４３調節剤の持続的放出を呈することを示す。放出された調節剤の初期バーストは、粒子表面に物理吸着した調節剤に
起因する可能性が高く、一方で調節剤の持続的放出は、粒子のコアからの調節剤の拡散に起因する可能性が高い。粒径はここでは重要なパラメータであり、Ｍｐは、増加した粒径との表面積対体積比の減少に起因して、Ｎｐと比べて比較的小さい初期バーストを呈する。これは、媒体が粒子中に透過しポリマーを浸食するために利用可能な表面積の低減をもたらし、それによりＣｘｎ４３ ＭＰの放出速度を遅延させた。
実施例１６．緑内障モデル化眼を治療するための化学修飾ペプチド及び微粒子持続的放出製剤
化学修飾及び微粒子製剤送達の効果を、網膜虚血再潅流を伴う緑内障についてモデル化したラットで測定した。まず、網膜虚血再潅流モデルを創出した。体重２００～３００ｇの雄の成体ウィスターラットを合計１２１匹、研究に使用した。右眼を対照として、網膜虚血を左眼においてモデル化し（６０分間１２０ｍｍＨｇ）、次に、コネキシン４３調節剤ペプチド製剤を１倍ＰＢＳ送達剤中の溶液として即時に硝子体内注射した。使用したコネキシン４３調節剤ペプチドは、未修飾形態及び化学修飾形態（ジドデシル）の両方の配列－Ｐｅｐｔ５であった。使用した製剤は、ナノ粒子またはミクロ粒子の生（１倍ＰＢＳ送達媒体中で希釈しただけ）の溶液であった。再潅流後、エバンスブルー染料を再潅流から４時間後に腹腔内注射し、共焦点顕微鏡法を使用して血管漏出を視覚化した。網膜全組織標本を、Ｃｘｎ４３定量化のために８時間及び２８日目に収集し、ガングリオール細胞（ＲＧＣ）密度定量化のために２８日目及び９０日目に収集した。
図４０に示す結果は、虚血後４時間の後の血管漏出が、試験したコネキシン４３調節剤のうちのいずれかで治療した目の網膜において顕著に低減したことを示す。結果はまた、未修飾ペプチド（Ｃｘｎ４３ ＭＰ）（配列－Ｐｅｐｔ５、配列番号１６８）と比較して、配列－Ｐｅｐｔ５（Ｃ１２－Ｃ１２ Ｃｘｎ４３ ＭＰ）（配列番号３２６）の化学修飾（ジドデシル）形態に対して血管漏出の低減を示した。
スポット計数を、両方の形態のコネキシン４３調節剤ペプチドで治療したモデルについて測定した。図４１に示すように、結果は、スポット計数が、未修飾ペプチドよりも化学修飾（Ｃ１２－Ｃ１２ Ｃｘｎ４３ ＭＰ）コネキシン４３調節剤ペプチドでなおさら低減したことを示した。最低のスポット計数が虚血後８時間で観察された。
虚血後２８日の後、組織の断面を、共焦点顕微鏡法によって観察し、平均のＣｘｎ４３計数をエバンスブルー染料で染色した試料について測定した。結果は、図４２に示すように、送達のためにナノ粒子を伴う製剤が、ナノ粒子を持たない製剤、またはさらにはミクロ粒子を持つ製剤よりも低いＣｘｎ４３発現をもたらしたことを示す。また、長期間にわたって、微粒子製剤の両方が、初期虚血時点と比較してＣｘｎ４３発現の低減を生んだ。
網膜神経節細胞計数も、ナノ粒子を伴う製剤、ミクロ粒子を伴う製剤、または生の製剤を用いて、及び未修飾及び化学修飾ペプチドを用いて治療したモデルについて監視した。結果は、図４３に示すように、化学修飾ペプチド治療が、７０％未満であった非治療眼（虚血のみ）と比較して、２８日後に９３％超のＲＧＣ生存をもたらしたことを示す。
実施例１７．コネキシン４３はＡＭＤと診断されたヒトの網膜において上方制御される
脈絡膜灌流の障害及び／若しくは脈絡膜炎、または脈絡膜過剰灌流は、脈絡膜及びブルッフ膜における血管漏出を誘導し、網膜色素上皮における内皮細胞喪失をもたらす。脈絡膜灌流の障害及び／若しくは脈絡膜炎、または脈絡膜過剰灌流及び脈絡毛細管板脱落は、コネキシン４３の上方制御に起因し、コネキシン４３の上方制御は、ＡＭＤの寄与原因であり得る。脈管構造が、Ｃｘｎ４３発現における変化と関連したＡＭＤ臓器提供者の網膜の脈絡膜に認められ、ＡＭＤにおけるコネキシン４３の上方制御の役割を裏付けた。これは、網膜色素上皮変性及びドルーゼン発生が、ＡＭＤの主因であるというよりはＡＭＤの
後段の結果である可能性があることを示す。脈絡膜血流及び脈絡膜灌流の障害及び／若しくは脈絡膜炎、または脈絡膜過剰灌流における改変は、ＡＭＤへの寄与因子にすぎない。血管漏出及び炎症は、ＡＭＤ脈絡膜変化と関連し、これはその後続いて網膜血管新生と関連する。
図４４に示すように、ＡＭＤを患うヒトドナーの染色した試料において観察されたコネキシン４３発現は、脈絡膜、網膜色素上皮、及びブルッフ膜に隣接した関連領域の複数の領域において上方制御された。図４４のパネルＡで観察されるように、非ＡＭＤドナーは、網膜色素上皮に限定されたＣｘｎ４３発現を有した。網膜色素上皮において顕著なＣｘｎ４３標識が存在したが、これは、色素自体の自己蛍光によって隠された。図４４のパネルＢで観察されるように、ＡＭＤと診断されたドナーにおいて、広範囲のＣｘｎ４３標識が血管の外側（細胞外マトリックスの内側）で観察された。この種類の標識は、細胞外マトリックス線維芽細胞及び炎症細胞クラスタと関連し、これは、より密度の高い結合組織堆積の領域内で明らかであった。
発明者らは、驚くべきことに、網膜におけるＣｘｎ４３の制御がＡＭＤのための見込みある治療であることを発見した。
実施例１８．抗ＶＥＧＦ化合物をコネキシン４３調節剤共投与した急性黄斑変性（ＡＭＤ）の治療
ＡＭＤを治療するために現在使用されている抗ＶＥＧＦ試薬の過剰な使用は脈絡毛細管板脱落につながるため、疾患の発生率を増加させる。これは、ＡｖａｓｔｉｎまたはＬｕｃｅｎｔｉｓで長期間治療を受けた患者における新たな地図状萎縮の発生率の増加を示すＣＡＴＴ ２研究によって裏付けられた（Ｍａｒｔｉｎ ＤＦ，Ｍａｇｕｉｒｅ ＭＧ，Ｆｉｎｅ ＳＬ，Ｙｉｎｇ ＧＳ，Ｊａｆｆｅ ＧＪ，Ｇｒｕｎｗａｌｄ ＪＥ，ｅｔ ａｌ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ；１１９（７）：１３８８－９８，２０１２）。より小さいルセンティス分子（脈絡膜へのより優れた浸透が期待され得る）による治療を毎月受けた患者（２年にわたり平均で２３回の注射）における発生率は、Ａｖａｓｔｉｎによる治療を受けた患者を上回った（それぞれ、２９．４％対１９．５％）。必要に応じて治療を受けた患者（それぞれ、２年にわたり平均で１２回または２４回の注射）は、より低いレベルの新たな地図状萎縮を有した（それぞれ、１６％及び１４％）。したがって、ＡＭＤ治療の脈絡膜への浸透は、脈絡膜炎、及び網膜を育てる血管床への損傷につながり、制御されない脈絡膜炎に舞い戻る。発明者らは、驚くべきことに、この慢性サイクルが疾患進行の遮断に最も重要であることを発見した。抗ＶＥＧＦ試薬の過剰な使用も、毛細血管床、特に毛様体で見られるようなもの等の開窓を有する毛細血管の変性につながり得る（Ｆｏｒｄ，Ｋ．Ｍ．，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．５３：７５２０－７５２７，２０１２）。抗癌療法におけるＶＥＧＦ遮断は、脳腫瘍の局所的治療を受けた人々において腎臓の毛細血管及び甲状腺機能を損傷することが分かっている（前掲）。
現在のＡＭＤ療法（例えば、Ａｖａｓｔｉｎ及びＬｕｃｅｎｔｉｓ）は、ＡＭＤの症状を治療して血管新生を低減させるために主に使用される。ＲＧＣの喪失を伴うＡＭＤなどの慢性疾患について、発明者らは、治療の二段階戦略が単独の療法よりも好ましいことを理解した。まず、内網膜自体における脈絡膜炎症の進行及びＲＧＣ喪失を改善する必要がある。次に、下層の脈絡膜組織等の隣接した構造における脈絡膜炎を直接的に標的化し得る。
抗ＶＥＧＦ及びコネキシン４３調節剤の組み合わせによる共投与治療は、単剤療法と比べて向上した利益を患者にもたらす。共投与の利益は、投薬の頻度がより低いこと（患者の服用順守及び忍容性の増加をもたらす）、及び副作用がより少ないこと（新たな地図状萎
縮等）である。本明細書ではＬｕｃｅｎｔｉｓを使用するが、他の抗ＶＥＧＦ化合物または眼治療を本発明の方法において使用してもよく、これらは、例えば、Ａｖａｓｔｉｎ、Ｅｙｌｅａ（アフリベルセプト）、補体因子Ｄ（ランパリズマブ）、抗Ｓ１Ｐ（ｉＳＯＮＥＰ、ソネプシズマブ）、及び上記のＡＭＤ治療薬である。
共投与治療は、ラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ）をコネキシン４３調節剤投与の同日及びその前に硝子体内注射によって投与することによって達成される。ベバシズマブを含むバイアルを４℃に維持し、使用前に少なくとも１分間加振する。眼を洗浄し、通常の滅菌様式でドレープする。局所麻酔をし、検鏡を十分な露出に配置した。臨床医が注射四半部を選択し、注射用部位は縁の３．０～４．０ｍｍ前方で測定する。２８または３０ゲージの針を使用して、１０ｍｇ／ｍｌの濃度のベバシズマブ製剤の５０μＬ注射（０．５ｍｇ）を投与する。注射後、臨床医の裁量で穿刺術を行い、検鏡を除去する。投薬を１カ月に１回適用する。
次に、コネキシン４３調節剤を含む製剤を、硝子体内若しくは眼内注射によって、または本明細書に記載される他の投与方法によって投与する。２８または３０ゲージの針を使用して、コネキシン４３調節剤製剤の５０μＬ注射を投与する。コネキシン４３製剤は、配列／Ｐｅｐｔ５（「ペプチド５」）（配列番号１６８）であり、１０ｍｇ／ｍｌの濃度で送達媒体中に溶解させ、０．５ｍｇ（５０ｕｌ）送達する。投与中の物質の還流は、緩慢で一定した速度の投与を使用することによって、ならびに物質の投与及びカニューレの引き抜き中に逆圧装置（ＣＰＤ）によって穏やかな圧力を適用することによって、最低限に抑えるかまたは防止することができる。投薬は１カ月に１回（投与と同日に）適用する。用量は、０．１ｕｇ／ｍｌ、０．５ｕｇ／ｍｌ、１ｕｇ／ｍｌ、５ｕｇ／ｍｌ、２．５ｕｇ／ｍｌ、１０ｕｇ／ｍｌ、５０ｕｇ／ｍｌ、１００ｕｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌ、２．５ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌ、２５０ｍｇ／ｍｌ、または５００ｍｇ／ｍｌであることもできる。送達媒体は、１倍ＰＢＳ、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、またはホウ酸塩系緩衝液であることもでき、等張性のために、ＮａＣｌ濃度は、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％である。ｐＨは、３、３．５、４、５、６、６．５、７、７．４、または８であることもできる。
患者を光干渉断層撮影及び視力基準によって監視して、共投与治療の効果を決定する。共投与治療によって治療した患者コホートを、Ｌｕｃｅｎｔｉｓのみで治療した患者群と比較すると、共投与によって治療した患者コホートは、Ｌｕｃｅｎｔｉｓのみで治療した患者コホートよりも優れた視力を呈した。共投与プロトコルで治療した患者コホートは、光干渉断層撮影によって監視して、コイロイドにおける回復を呈した。
実施例１９：Ｒｈｏキナーゼ阻害剤を用いたコネキシンまたはパネキシン調節剤の製剤化
本発明は、眼表面滞留時間及び前眼房の房水における生物学的利用能を改善するように、また全身暴露を低減させるようにｐＨを調整した水性媒体中で製剤化された別個または共通の投与のためのＲｈｏキナーゼ阻害剤化合物及びコネキシンまたはパネキシン調節剤の眼科用特性を改善する１つ以上の薬剤を含有する製剤を提供する。本発明は、治療的使用に好適であり、長期間の通常の使用貯蔵条件下で安定なままである、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤化合物及びコネキシンまたはパネキシン調節剤の水性製剤を提供する。製剤は、哺乳動物における眼圧の低下に有用である。局所投与については、１～２滴のこれらの製剤を、１日１～４回、眼の表面に送達することができる。本発明の水性眼科用製剤は、眼表面上での滞留時間及び／または房水濃度の増加を、全身濃度を付随して増加させることなく有する。
Ｒｈｏキナーゼ阻害剤化合物及びコネキシンまたはパネキシン調節剤の別個または共通の
投与に対しては、水性医薬製剤は、０．００１～２％のＲｈｏキナーゼ阻害剤化合物、１．０～５０，０００μＭのコネキシンまたはパネキシン調節剤、約６．３～７．８のｐＨを維持するのに好適な緩衝液１～１００ｍＭ、０．０１～２％の界面活性剤、及び約２００～３６０ｍＯｓｍ／ｋｇの張性を維持するための等張化剤を含み得る（「約」は、本明細書において使用する場合、±１５％を指す）。ｐＨは約６．３～７．５であり、好ましくは、ｐＨは約６．３～７．３である。組成物は、さらに、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、及び／または塩化マグネシウムを含むことができる。
Ｒｈｏキナーゼ阻害剤化合物及びコネキシンまたはパネキシン調節剤の別個または共通の投与に対しては、水性製剤中のＲｈｏキナーゼ阻害剤の濃度は、概して、０．００１～２％、好ましくは０．０１～０．５％、より好ましくは０．０１～０．４％、より好ましくは０．０３～０．２％、より好ましくは０．０３～０．１５、または０．０３～０．１％（ｗ／ｖ）である。６．３～７．８のｐＨを維持するのに好適な緩衝液としては、クエン酸塩、リン酸塩、マレイン酸塩、またはこれらの組み合わせが挙げられる。好適な緩衝液濃度は、１～１００ｍＭ、好ましくは５～５０ｍＭ、より好ましくは５～２５ｍＭ、最も好ましくは１０～２０ｍＭである。
コネキシン調節剤がコネキシン４３調節剤である、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤化合物及びコネキシン調節剤の別個または共通の投与については、コネキシン４３調節剤は、約８μＭ～約２０μＭの最終濃度で製剤中に存在してもよく、あるいはコネキシン４３調節剤は、約１０μＭ～約２０μＭの最終濃度で、または約１０～約１５μＭの最終濃度で存在する。ある特定の他の実施形態において、コネキシン４３調節剤は、約１０μＭの最終濃度で存在する。なおも別の実施形態において、コネキシン４３調節剤は、約１～１５μＭの最終濃度で存在する。他の実施形態において、コネキシン４３調節剤は、約２０μＭ、３０μＭ、４０μＭ、５０μＭ、６０μＭ、７０μＭ、８０μＭ、９０μＭ、１００μＭ、１０～２００μＭ、２００～３００μＭ、３００～４００μＭ、４００～５００μＭ、５００～６００μＭ、６００～７００μＭ、７００～８００μＭ、８００～９００μＭ、９００～１０００若しくは１０００～１５００μＭ、または１５００μＭ～２０００μＭ、２０００μＭ～３０００μＭ、３０００μＭ～４０００μＭ、４０００μＭ～５０００μＭ、５０００μＭ～６０００μＭ、６０００μＭ～７０００μＭ、７０００μＭ～８０００μＭ、８０００μＭ～９０００μＭ、９０００μＭ～１０，０００μＭ、１０，０００μＭ～１１，０００μＭ、１１，０００μＭ～１２，０００μＭ、１２，０００μＭ～１３，０００μＭ、１３，０００μＭ～１４，０００μＭ、１４，０００μＭ～１５，０００μＭ、１５，０００μＭ～２０，０００μＭ、２０，０００μＭ～３０，０００μＭ、３０，０００μＭ～５０，０００μＭ、またはそれ以上、あるいは列挙した用量のうちのいずれか２つの間のいずれかの範囲若しくは部分範囲、または約２０μＭ～約５０，０００μＭの範囲内に入るいずれかの用量で、存在する。
コネキシン調節剤がコネキシン４３調節剤である、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤化合物及びコネキシン調節剤の別個または共通の投与については、コネキシン調節剤は、上記のペプチド配列またはポリヌクレオチド配列のうちのいずれかである。いくつかの態様において、コネキシン調節剤は、ポリヌクレオチド 配列番号１であり得る。いくつかの態様において、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤化合物は、アミノイソキノリルアミドＲｈｏｐｒｅｓｓａであり得る。
Ｒｈｏキナーゼ阻害剤との別個または共通の共投与におけるコネキシン調節剤またはパネキシン調節剤の各々の、１日あたり体重１ｋｇあたり約１ナノグラム（ｎｇ）～約１ｍｇのさらに他の用量レベルが、本明細書に記載される。ある特定の実施形態において、対象化合物の各々の投与量は、一般に、体重１ｋｇ当たり約１ｎｇ～約１マイクログラム、体重１ｋｇ当たり約１ｎｇ～約０．１マイクログラム、体重１ｋｇ当たり約１ｎｇ～約１０
ｎｇ、体重１ｋｇ当たり約１０ｎｇ～約０．１マイクログラム、体重１ｋｇ当たり約０．１マイクログラム～約１マイクログラム、体重１ｋｇ当たり約２０ｎｇ～約１００ｎｇ、体重１ｋｇ当たり約０．００１ｍｇ～約０．０１ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ～約０．１ｍｇ、または体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ～約１ｍｇの範囲内である。ある特定の実施形態において、対象化合物の各々の投与量は、一般に、体重１ｋｇ当たり約０．００１ｍｇ～約０．０１ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ～約０．１ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ～約１ｍｇの範囲内である。１つ超のコネキシンまたはパネキシン調節剤を使用する場合、各抗コネキシン剤の用量は、他方と同じ範囲である必要はない。例えば、１つのコネキシン調節剤またはパネキシン調節剤の用量は、体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇ～約１０ｍｇであってもよく、別のコネキシン調節剤またはパネキシン調節剤の用量は、体重１ｋｇあたり約０．１ｍｇ～約１ｍｇ、体重１ｋｇあたり０．１～約１０、０．１～約２０、０．１～約３０、０．１～約４０、または約０．１～約５０ｍｇであってもよい。用量はまた、体重１ｋｇあたり約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０、７．０、８．０、９．０、１０．０、１．０、１２．０、１３．０、１４．０、１５．０、１６．０、１７．０、１８．０、１９．０、２０．０、２１．０、２２．０、２３．０、２４．０、２５．０、２６．０、２７．０、２８．０、２９．０、３０．０、３１．０、３２．０、３３．０、３４．０、３５．０、３６．０、３７．０、３８．０、３９．０、４０．０、４１．０、４２．０、４３．０、４４．０、４５．０、４６．０、４７．０、４８．０、４９．０、５０．０、５２．５、５５．０、５７．５、６０．０、６２．５、６５．０、６７．５、７０．０、７２．５、７５．０、７７．５、８０．０、８２．５、８５．０、８７．５、９０．０、９２．５、９５．０、９７．５、または約１００．０ｍｇ、あるいは列挙した用量のうちのいずれか２つの間のいずれかの範囲若しくは部分範囲、または体重１ｋｇあたり約０．１～約１００ｍｇの範囲内に入るいずれかの用量であってもよい。
Ｒｈｏキナーゼ阻害剤化合物及びコネキシンまたはパネキシン調節剤の別個または共通の投与については、一実施形態において、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤化合物及びコネキシンまたはパネキシン調節剤の併用により、いずれかのそのような薬剤の有効量が、該薬剤を単独で投与する場合の有効量と比較して低減する。ある特定の実施形態において、併用する場合の薬剤の有効量は、単独で使用する場合の薬剤の用量の約１／１５～約１／２、約１／１０～約１／３、約１／８～約１／６、約１／５、約１／４、約１／３、または約１／２である。別の好ましい実施形態において、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤化合物及びコネキシンまたはパネキシン調節剤の併用により、該薬剤を投与する頻度が、該薬剤を単独で投与する場合の頻度と比較して低減する。したがって、これらの組み合わせは、所望の治療目標を達成するのに以前必要だった用量よりも低い及び／または少ない用量の各作用剤の使用を可能にする。
一実施形態において、別個または共通の投与として共投与する場合のＲｈｏキナーゼ阻害剤化合物及びコネキシンまたはパネキシン調節剤の用量は、本明細書に示す列挙した用量のうちのいずれかよりも、１０、１００、または１０００倍低くてもよい。
本発明に好適な界面活性剤（表面活性化剤）または可溶化剤は、眼科調製物における使用に許容可能なものである。界面活性剤は、イオン性または非イオン性であることができる。好ましくは、この界面活性剤は非イオン性である。有用な界面活性剤としては、ポリソルベート８０、ステアリン酸ポリオキシル、チロキサポール、ポリエトキシル化ヒマシ油、ポロキサマー、ポラキサミン（ｐｏｌａｘａｍｉｎｅ）、中鎖及び長鎖脂肪酸、ならびにリン脂質が挙げられるが、これらに限定されない。製剤中の界面活性剤の濃度は、約０．０１～３％、好ましくは０．０１～２％、より好ましくは０．１～１％ｗ／ｖである。
等張剤は、２２０～３６０ｍＯｓｍ／ｋＧ、好ましくは２５０～３４０ｍＯｓｍ／ｋＧ、最も好ましくは２６０～３２０の最終製剤張性を達成する量で存在する。等張剤は、イオン性または非イオン性であることができる。非イオン性等張剤としては、グリセロール、マンニトール、エリトリトール等の１，２－ジオールを含む化合物、及びデキストロース等の糖類が挙げられる。ポリエチレングリコール及びプロピレングリコール等の、共溶媒としても機能する他の非イオン性等張剤を使用することもできる。非イオン性等張剤は、０～２０％、好ましくは０～１０％、より好ましくは０～５％の量で存在し得る。非イオン性薬剤は、２～６％の量で、グリセロール、マンニトール、及びデキストロースから選択することができる。
等張剤は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、平衡塩類溶液、リン酸ナトリウム、またはクエン酸ナトリウム等のイオン性薬剤でもあり得る。イオン性等張剤は、０．３～１．５％、好ましくは０．６～０．９％の量で存在し得る。
界面活性剤、等張剤、緩衝液、及び製剤に導入される任意の他の成分は、良好な水への溶解度を有し、製剤中の他の構成成分との相溶性を有することが好ましい。様々な国における保健規制は、多回投薬の眼科調製物は保存剤を含むものとしている。一実施形態において、塩化ベンザルコニウムが安全な保存剤として用いられ、塩化ベンザルコニウムは、キレート剤であるエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム（ＥＤＴＡ）と共に使用して、その抗菌活性を改善し得る。他の好適な保存剤としては、ベンジルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、ホウ酸塩、クロロブタノール、及び塩化ベンゼトニウムが挙げられる。典型的には、そのような保存剤は、０．００１～１％、好ましくは０．００１～０．２５％、最も好ましくは０．００１～０．２％のレベルで用いられる。
任意選択的に、本製剤は、眼表面上の本製剤の滞留時間を増加させるために粘度向上剤を含み得る。非限定的な例として、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを本発明のための粘土向上剤として使用することができる。
実施例２０：コネキシン４３調節剤（配列番号１）及びＲｈｏキナーゼ阻害剤の組み合わせによる緑内障の治療方法
使用したコネキシン４３調節剤はポリヌクレオチド配列番号１である。使用したＲｈｏキナーゼ阻害剤はＲｈｏｐｒｅｓｓａである。コネキシン４３調節剤（配列番号１）を、溶液中の全コネキシン４３調節剤濃度１００μＭで、上記のようにナノ粒子送達製剤として製剤化する。水性製剤中のＲｈｏキナーゼ阻害剤の濃度は、０．０３～０．１％（ｗ／ｖ）であり、上記のように製剤化する。
雄の成体ウィスターラットを、網膜虚血再潅流による緑内障についてのモデルとする。右眼を対照として、網膜虚血を左眼においてモデル化し（６０分間１２０ｍｍＨｇ）、次にコネキシン４３調節剤製剤（生、及び上記のように粒子中に注入したもの）を１倍ＰＢＳ送達剤中の溶液として即時に硝子体内に注射する。その後、１時間以内に、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤を点眼薬（５０ｕＬ）の投与によって添加する。再潅流後、エバンスブルー染料を再潅流から４時間後に腹腔内注射し、共焦点顕微鏡法及び光干渉断層撮影を使用して血管漏出を視覚化する。網膜全組織標本を、Ｃｘｎ４３定量化のために８時間及び２８日目に収集し、ガングリオール細胞（ＲＧＣ）密度定量化のために２８日目及び９０日目に収集する。組み合わせ共投与で使用するものと同じ濃度で、ラットの他のコホートをコネキシン４３調節剤のみで治療し、ラットの他のコホートをＲｈｏキナーゼ阻害剤のみで治療する。
結果は、虚血後４時間の血管漏出が、対照と比較して、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤及びコネキ
シン４３調節剤の組み合わせで治療した目のレイナルにおいて顕著に低減することを示すことになる。驚くべきことに、コネキシン４３調節剤がＲｈｏキナーゼ阻害剤の存在下で作用することが示されることになる。結果はまた、単剤治療だけによるいずれの眼とも比較して、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤及びコネキシン４３調節剤の組み合わせで治療した目について血管漏出の驚くべき低減を示すことになる。
スポット計数も、すべてのコホートモデルについて測定した。スポット計数が、いずれの単剤治療よりもなおさら組み合わせ治療でより低減したことが示される。
虚血後２８日の後、組織の断面を、共焦点顕微鏡法及び干渉断層撮影によって観察する。平均Ｃｘｎ４３計数を、エバンスブルー染料で染色した試料について測定する。結果は、組み合わせ製剤がいずれの単剤投与製剤よりも低いＣｘｎ４３発現をもたらすであろうことを示すことになる。
網膜神経節細胞計数をモデルについて監視する。結果は、驚くべきことに、いずれの単剤投与治療を受けた眼及び治療を受けない眼（虚血のみ）と比べても、共投与治療についてより優れたＲＧＣ生存を示すことになる。
実施例２１：コネキシン４３は糖尿病のヒトにおいて出血後に上方制御される
ヒト網膜試料をヒトドナーから得た。図４５及び４６は、Ｃｘｎ４３（赤）及びＤＡＰＩ（青）を標識した、出血近くで撮影した２枚のヒト糖尿病性網膜症網膜の画像を示し、桿体及び錐体が図４５の下部に写っている。
傷害の際、Ｃｘｎ４３レベルＣｘｎ４３は、傷害の結果として、皮膚において見られるような基準物におけるものをさらに上回る程度に上昇する（糖尿病ラットは治癒がより緩慢であるため）。糖尿病性網膜症において、これは、高いＣｘｎ４３及び血管漏出を伴う炎症領域をもたらす。
ＲＧＣ星状膠細胞層の肥厚、小血管の蓄積、ならびにこれら及び星状膠細胞と関連した高レベルのＣｘｎ４３があるように見受けられる。糖尿病患者は、Ｃｘｎ４３の低減及び血管喪失を有するが、出血及び血管新生の領域においてではなく、これは、炎症部位にてＣｘｎ４３レベルがより高いように見受けられるためである。発明者らは、驚くべきことに、糖尿病性網膜症におけるＣｘｎ４３制御が実行可能な薬物標的であることを発見した。
実施例２２．粒子製剤によるＣｘｎ４３ヘミチャネルドッキングのインビトロの遮断
ナノ粒子またはミクロ粒子において製剤化したＣｘｎ４３調節剤の遮断能力をインビトロで分析して、本製剤がＣｘｎ４３活性を調節する能力を立証した。ミクロ粒子（ＭＰ）及びナノ粒子（Ｎｐ）製剤を上記のように調製した。
Ｃｘｎ４３ヘミチャネルの遮断からのインビトロの結果を図４７に示す。Ｃｘｎ４３ ＭＰの溶液に８時間暴露した後、ＡＲＰＥ－１９細胞におけるＣｘｎ４３標識は低減した（図４７Ｂ）が、レベルは２４時間後に正常に戻った（図４７Ｃ）。しかしながら、Ｃｘｎ４３ ＭＰを充填したＮｐ及びＭｐで治療した細胞は、８時間での評価と比較してより遅い時点で低減したＣｘｎ４３標識を呈した。Ｎｐ（図４７Ｄ）及びＭｐ（図４７Ｆ）による８時間のインキュベーション後に、Ｃｘｎ４３標識化における差異は存在しなかった一方で、２４時間の暴露後、Ｎｐ（図４７Ｅ）及びＭｐ（図４７Ｇ）群の両方が、低減したＣｘｎ４３標識を呈し、遅延放出、及びそれに従うＣｘｎ４３ ＭＰの活性を裏付けた。各群が対照と比較して同様の細胞密度を呈し、使用した濃度ではヘミチャネル遮断に起因して生じる細胞毒性がなかったことを示した。
天然アミノ酸からなるミクロ粒子（ＭＰ）製剤は、長期にわたる細胞培養の際に分解することで、その活性を失い得る。ウシ硝子体における天然Ｃｘｎ４３ ＭＰの半減期は約２時間であり、このことは、Ｃｘｎ４３ ＭＰが、保護されていない場合、１４時間後に完全に分解するはずであることを予測する。これは、Ｃｘｎ４３ヘミチャネルが単純なＣｘｎ４３ ＭＰ溶液によるインキュベーションの最初の数時間以内に遮断されながら、対照（図４７Ａ）と比較して２４時間後（図４７Ｃ）の同じ治療群におけるＣｘｎ４３標識のレベルに差異がなかった理由を説明する。溶液中の天然Ｃｘｎ４３ ＭＰは、その時点で完全に分解していた可能性が高く、既存のＣｘｎ４３ヘミチャネルは、連続的に新たなもので置き換えられていただろう。反対に、Ｃｘｎ４３ ＭＰを充填したＮｐ及びＭｐ群については、２つの群の間の差異は明白ではないながら、２４時間でＣｘｎ４３プラーク発現が漸進的に低減した（図４７Ｅ及び４７）。両方の粒子がＣｘｎ４３ ＭＰを分解から保護し、その放出、及びそれに従う長期にわたるその活性を持続させたようであったが、恐らくその時点でのＣｘｎ４３ ＭＰの放出が不十分であったことに起因して、８時間以内には効果が見られなかった。しかしながら、２４時間後により大きい濃度のＣｘｎ４３
ＭＰが利用可能となり、これは、ヘミチャネル遮断の増加及びＣｘｎ４３ギャップ結合プラーク標識の低減と相関した。
実施例２３．網膜断面におけるＧＦＡＰ標識化によって観察されたＣｘｎ４３粒子製剤によるＣｘｎ４３上方制御の治療
網膜断面におけるＧＦＡＰ標識化によって観察されたように、上記のミクロ粒子（ＭＰ）及びナノ粒子（Ｎｐ）製剤を使用して、動物モデルにおけるＣｘｎ４３上方制御を調節した。
網膜毛細管に関連するＣｘｎ４３及びＧＦＡＰ発現の定性的変化が網膜虚血の後に観察された（図４８）。再潅流後２８日で、Ｃｘｎ４３は顕著に上方制御され、主にＧＦＡＰと共局在化した（図４８Ｂ）。虚血領域において際立った星状細胞増加があり、星状細胞足突起はその正常な組織立った外観を失った。Ｃｘｎ４３ ＭＰを充填したＮｐの硝子体内注射により、２８日目にあったＣｘｎ４３上方制御の顕著な（ｐ＜０．０１）低減がもたらされた（図４８Ｄ）。２８日目及び９０日目の溶液中の天然Ｃｘｎ４３ ＭＰ及びＣｘｎ４３ ＭＰを充填したＭｐは同様の結果を呈し、この結果においては、Ｃｘｎ４３発現が低減され、これと同時に、星状細胞がその突起を延在させ、軸索周囲のエリアの中へと増殖した（図４８Ｃ～Ｆ）。星状細胞増加と相関するＣｘｎ４３スポット計数を行うと（図４８Ｇ）、網膜Ｃｘｎ４３も、非傷害網膜（８．９±１．３）と比較して、虚血－再潅流後２８日目（８０．７±７．９）に、正常レベルを顕著に（ｐ＜０．０１）超えたことが明らかとなった。溶液中の天然Ｃｘｎ４３ ＭＰによる治療は、２８日目に２１．７±５．２へと顕著に低減したＣｘｎ４３スポット計数（ｐ＜０．０１）につながったが、対照（ｐ＜０．０５）と比較すると顕著に増加したままであった。しかしながら、Ｃｘｎ４３ ＭＰを充填したＮｐは、Ｃｘｎ４３スポット計数が２８日後に１０．４±７．５まで下がり、非傷害対照（ｐ＞０．０５）と比較して有意な差異がないという最も優れた効果を示し、その保護的及び持続的放出特性を裏付けた。Ｃｘｎ４３ ＭＰを充填したＭｐも、非治療の虚血眼（ｐ＜０．０１）と比較して、２８日後（１５．４±３．２）及び９０日後（１９．９±１．４）に見られたＣｘｎ４３発現の制限が可能であり、ここでも、この時点での安定したＣｘｎ４３ ＭＰの利用能を裏付けた。
これらの結果は、ミクロ粒子（ＭＰ）及びナノ粒子（Ｎｐ）製剤が、哺乳動物の虚血誘導性モデルにおいて持続的様式でＣｘｎ４３上方制御を調節し得ることを示す。
実施例２４．網膜全組織標本におけるＲＧＣ喪失によって観察されたＣｘｎ４３粒子製剤によるＣｘｎ４３上方制御の治療
網膜全組織標本におけるＲＧＣ喪失によって観察されたように、上記のミクロ粒子（ＭＰ）及びナノ粒子（Ｎｐ）製剤を使用して、Ｃｘｎ４３上方制御を調節した。
非傷害網膜の平置きにおける網膜ガンルギオン細胞（ＲＧＣ）の正常な分布を図４９Ａに示し、この図では、高い細胞密度及び輪郭が明確な網膜脈管構造が可視であった。非治療の虚血網膜におけるＲＧＣ変性パターンの例を図４９Ｂに示し、虚血－再潅流後２８日のＲＧＣ分布は、血管描写のほぼ完全消失及び多くの領域で目に留まるＲＧＣを欠く大型の斑を伴って大幅に減少される。これは、網膜が、ヘミチャネル媒介性血管透過性の増加に続く神経変性を伴う虚血性損傷に応答したことを示す。溶液中の天然Ｃｘｎ４３ ＭＰ（図４９Ｃ）及びＮｐ－Ｃｘｎ４３ ＭＰ（図４９Ｄ）で治療した眼は、より少ないＲＧＣ喪失の斑を呈した。図４９Ｅ及びＦは、いくらかのＲＧＣ喪失が明らかな、Ｍｐ－Ｃｘｎ４３ ＭＰで治療した眼における２８日目及び９０日目でのＲＧＣ分布を例解する。ＲＧＣ密度（数／ｍｍ２）の要約を図４９Ｇに描出する。虚血－再潅流の後、ＲＧＣ密度は、２８日目で、非傷害対照（２２８３±１３９）と比較して治療を受けていない動物（１６０５±１００）において顕著に低減（ｐ＜０．０１）し、細胞の７０％のみが生存した。Ｎｐ－Ｃｘｎ４３ ＭＰ群（１９６４±１９４）における密度は、溶液治療中のＣｘｎ４３ ＭＰのものと同様であった一方、Ｍｐ－Ｃｘｎ４３ ＭＰ治療後のＲＧＣ計数（２８日目で１６７０±１４８、及び９０日目で１７２７±２２１）は、ＲＧＣ温存への傾向を呈したが、非治療の眼と比較して顕著な変化は呈しなかった。
虚血－再潅流傷害は、非傷害の対照と比較して、２８日目で網膜におけるＲＧＣの顕著な喪失につながり、溶液中のＣｘｎ４３ ＭＰ（ｐ＜０．０５）またはＮｐ－Ｃｘｎ４３ ＭＰ（ｐ＜０．０１）の硝子体内注射は、非治療と比較してＲＧＣ死滅を顕著に低減し、これは、Ｃｘｎ４３標識の低減と相関する。より緩慢なＣｘｎ４３ ＭＰのＭｐからの放出も、虚血－再潅流後２８日目及び９０日目でＣｘｎ４３レベルを減少させたが、この治療群は、ＲＧＣを救うことに失敗した。これは、傷害後の即時の急性期中のＭＰからの不十分な初期Ｃｘｎ４３ ＭＰ放出に起因し得る。加えて、Ｍｐは、Ｎｐと比較してより大きいその粒径に起より網目構造中に捕捉され得るため、放出されたＣｘｎ４３ ＭＰは、網膜へとより長い距離拡散しなければならず、これは、酵素分解の危険性を増加させる。したがって、結果は、ＲＧＣ救出効果が、継続的な徐放よりもＣｘｎ４３ ＭＰの初期バーストの方に起因し得ることを示唆し、これは、Ｃｘｎ４３ヘミチャネルの虚血後の遮断が早ければ早いほど良いことを示唆する。発明者らは、９０日目の治療を受けていない傷害動物からのいずれのＣｘｎ４３及びＲＧＣ計数データも有しないが、これまでの研究は、時間と共にＲＧＣの死滅が顕著に増加し、５６日後に５０％超が喪失したことを示している（Ｓ．Ｓ．Ｌ．Ｃｈｅｗ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．５２ （２０１） ３６２０－３６２９．）。したがって、粒子治療は、調査した時点でのＲＧＣ生存に関して溶液中のペプチドと比較して顕著な利点を示さなかったが、持続的Ｃｘｎ４３ ＭＰ送達の効果は、長期的なＲＧＣ層の保存に対しては依然として有益であり得る。
実施例２６．ナノ粒子及びミクロ粒子の調製のための代替方法
ナノ粒子及びミクロ粒子の産生のための代替経路は、以下のとおりである。１００ｍｇのポリ（乳酸－グリコール酸共重合体）（ＰＬＧＡ）を試験管に配置した後、１ｍｌのジクロロメタン溶媒を添加する。次に、試験管を封止し、ポリマーを一晩かけて溶解させる。別の試験管に、０．３％ｗ／ｗのＤ－α－トコフェロールポリエチレングリコール１０００コハク酸塩（Ｖｉｔａｍｉｎ Ｅ－ＴＰＧＳ、Ｓｉｇｍａ ５７６６８）乳化剤の水中の溶液を２ｍｌ調製する。添加するポリマーの量が粒径を決定することになる。
疎水性形態のコネキシン４３調節剤については、５μｇのコネキシン４３調節剤を乾燥形態でＰＬＧＡ溶液に添加する。試験管を、溶液が目視検査によって均質となるまでボルテ
ックスする。
親水性形態のコネキシン４３調節剤については、５０ｕｌの水溶液（１倍ＰＢＳ緩衝液中のコネキシン４３調節剤濃度１０ｕＭにて）をＰＬＧＡ溶液に添加する。試験管を３０秒間氷上に配置することで溶液を予冷した後、１０秒間超音波処理して溶液中でコネキシン４３調節剤を乳化させ、均質で不透明な溶液を獲得する（ＶＷＲ＃９７０４３－９６０）。試験管を氷上に戻す。
両方の形態のコネキシン４３調節剤については、ビタミンＥ－ＴＰＧＳの試験管を、１ｍｌのＰＬＧＡ－調節剤溶液を滴加しながら、卓上ボルテックス器（ＶＷＲ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＃ ５８８１６－１２１）を使用して高いボルテックスル速度でボルテックスする。ボルテックスを１５秒間継続する。
氷水をソニケータ中に配置する。次に、エマルションを、１０秒間のバースト３回（７００Ｗのソニケータに対して４０％の振幅）で超音波処理する。試験管を溶液中で動かして、均一な超音波処理を確実にする。各超音波処理は、溶液を冷却させるために５秒間隔で行う。
次に、水中の１ｍｌの０．３％ビタミンＥ－ＴＰＧＳをガラスピペットによってエマルションに添加する。次に、エマルションを、３６０ｒｐｍで磁気撹拌する４５ｍｌの０．３％ｗ／ｖのビタミンＥ－ＴＰＧＳに滴状で移す。溶液を３時間撹拌する。
次に、結果として得られる溶液を遠心分離管に移し、固定角ロータ遠心分離器において１７，０００ｘｇで１５分間遠心分離する。上清を廃棄する。次に、１５ｍｌのジＨ２Ｏを添加し、試験管をボルテックスして粒子を完全に再懸濁させる。これらのステップを４回繰り返す。最後のペレット懸濁液の液量は４～５ｍｌである。重量比１：２のトレハロース：ポリマーを添加する（しかしながら、粒子の小さいアリコートは、ＳＥＭ撮像のためにトレハロースなしで調製する）。
その後、ナノ粒子を事前の秤量した５ｍｌの遠心分離管に移し、最低３０分間－８０℃で凍結させる。続いて、ナノ粒子を５ｍｌの体積に７２時間凍結乾燥させた後、－８０℃で貯蔵する。 ＊ ＊ ＊
本明細書にて記載され特許請求される発明は、本詳細な開示において示されるか、または記載されるか、または参照されるものを含むがこれらに限定されない、多くの特質及び実施形態を有する。総括的であることは意図しておらず、本明細書にて記載され特許請求される本発明は、例示目的のみを意図する限定的ではない本詳細な開示において特定される特徴または実施形態に、またはそれらよって、限定されない。当業者は、構成成分及びパラメータの多くが、本発明の範囲から逸脱することなく、ある程度に変化若しくは改変され得るか、または既知の等価物に置き換えられ得ることを容易に認識するであろう。そのような改変及び透過物は、個々に示されるのと同じように、本明細書に組み込まれることを理解されたい。本発明はまた、本明細書で言及されるかまたは示されるステップ、特徴、組成物、及び化合物のすべてを、個々にまたは集団で、また該ステップまたは特徴のうちのいずれか２つ以上のありとあらゆる組み合わせを含む。
本明細書で参照または言及される、すべての特許、出版物、科学論文、ウェブサイト、ならびに他の文書及び資料は、本発明が属する分野の当業者の技術レベルを示し、そのような参照文書及び資料の各々は、個々に全体が参照により本明細書に組み込まれるかまたは全体が本明細書に示されるのと同じ程度に、参照により本明細書に組み込まれる。出願者らは、いずれのそのような特許、出版物、科学論文、ウェブサイト、電子的に利用可能な
情報、及び他の参照資料または文書からのありとあらゆる資料及び情報も、本明細書に物理的に組み込む権利を有する。本明細書におけるいずれの出願、特許、及び出版物への参照も、それらが有効な先行技術を構成するかまたは世界中のいずれの国においても共通である一般知識の一部を形成するという同意またはいずれの形の示唆としても受け取られず、またそのように受け取られるべきではない。
本明細書に記載される特定の方法及び組成物は、好ましい実施形態の代表であり、例示的なものであり、本発明の範囲に対する制限とは意図されない。当業者であれば、他の目的、態様、及び実施形態が、本明細書を熟慮する際に思いつくことになり、これらは、特許請求の範囲によって定義される本発明の趣旨の内に包含される。多様な置き換え及び改変を本発明の範囲及び趣旨から逸脱することなく本明細書に開示の発明に行い得ることは、当業者には容易に明らかとなる。本明細書に例解として好適に記載される発明は、必須物として本明細書で具体的に開示されない、いずれの要素（単数または複数）または限定（単数または複数）の非存在下でも実施し得る。したがって、例えば、本明細書の各例において、本発明の実施形態または実施例において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「本質的に～からなる」、及び「からなる」という用語のいずれも、本明細書において他の２つの用語で代置されてもよい。また、「含む（「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」、「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ」、「ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ」）」等の用語は、広範かつ非限定的に読まれるべきである。本明細書に例解として好適に記載される方法及びプロセスは、異なる順序のステップで実施してもよく、これらは、必ずしも本明細書または特許請求の範囲において示されるステップの順序に限定されるものではない。また、本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、 及び「ｔｈｅ」は、文脈によって別途明確に指示されない限り、複数の指示対象を含む。いかなる状況においても、本特許は、本明細書に具体的に開示される特定の実施例または実施形態または方法に限定されると解釈されるものではない。いかなる状況においても、本特許は、特許商標局の審査官または任意の他の職員若しくは従業員によってなされるいずれの声明によっても限定されると解釈されるものではないが、これは、そのような声明が、出願者による回答書面において具体的かつ条件または留保なく明確に承認される場合は除く。さらに、表題または見出し等は、読者の本文書の理解を向上させるために提供され、本発明の範囲を制限するものとして読まれるべきではない。本明細書で言及される本発明の態様、実施形態、または構成要素のいずれの例も、非限定的であると見なされるべきである。
用いられてきた用語及び表現は、説明用語として使用されるのであって限定的ではなく、そのような用語及び表現の使用が、示され記載される特徴またはその一部のいずれの等価物をも除外するという意図はないが、様々な改変が特許請求される本発明の範囲内で可能であることが認識される。したがって、本発明を好ましい 実施形態及び任意選択的な特徴によって具体的に開示してきたが、本明細書で開示する構想の改変及び変形は、当業者に訴えるものであり得ること、ならびにそのような改変及び変形が、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内であると見なされることが理解されるであろう。
本発明は、本明細書において幅広く一般的に説明されてきた。一般的な開示の範囲に入るより狭い種及び亜属のグルーピングの各々も、本発明の一部を形成する。これは、削除されたものが本明細書において具体的に列挙されているか否かにかかわらず、その属からのいずれの対象も除去する条件または否定的限定を伴う本発明の一般的な説明を含む。
他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内である。加えて、本発明の特徴または態様がマーカッシュ群に関して説明される場合、当業者は、本発明がしたがってマーカッシュ群のいずれの個々のメンバーまたはメンバーの亜群に関しても説明されることを認識するであろう。

Claims (73)

  1. 緑内障、ＤＭＥ、眼線維症、網膜潅流障害、または眼低酸素症の対象を治療するための方法であって、前記対象の眼に治療的に有効な量のギャップ結合調節剤、コネキシン調節剤、パネキシン調節剤、またはパネキシンチャネル調節剤を投与することを含む、方法。
  2. 前記緑内障は、緑内障性眼神経障害及び／または眼圧関連神経障害を特徴とする、請求項１に記載の方法。
  3. 前記コネキシン調節剤は、コネキシン４３調節剤である、請求項１または２に記載の方法。
  4. 前記緑内障は、眼圧関連神経障害である、請求項３に記載の方法。
  5. 前記緑内障は、開放隅角緑内障または閉塞隅角緑内障である、請求項４に記載の方法。
  6. 網膜神経節細胞の喪失が治療される、請求項５に記載の方法。
  7. 内網膜内の炎症が軽減される、請求項１に記載の方法。
  8. 小柱網を通る流動が増加される、請求項１に記載の方法。
  9. 前記ギャップ結合調節剤、コネキシン調節剤、またはパネキシン調節剤調節剤は、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤、プロスタグランジン、プロスタグランジン類似体、炭酸アニヒドラーゼ（ａｎｙｈｙｄｒａｓｅ）阻害剤、アルファ２作用薬、ベータ遮断薬、Ｆ２αプロスタグランジン類似体、抗アポトーシス剤、Ｎ－メチル－Ｄ－アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体拮抗薬、及びグルタミン酸放出阻害剤のうちの１つ以上と組み合わせて投与される、請求項１に記載の方法。
  10. 前記ギャップ結合調節剤は、Ｒｈｏキナーゼ阻害剤と組み合わせて投与されるコネキシン調節剤である、請求項９に記載の方法。
  11. 眼低酸素症の治療は、脈絡膜炎を軽減する、請求項１に記載の方法。
  12. 前記コネキシン調節剤は、コネキシン４３調節剤である、請求項１１に記載の方法。
  13. 前記コネキシン調節剤は、コネキシン４３調節剤であり、前記コネキシン４３調節剤は、眼治療薬と組み合わせて投与される、請求項１１に記載の方法。
  14. 脈絡毛細管板内皮細胞喪失及び／または脈絡毛細管板脱落が減少される、請求項１１に記載の方法。
  15. 脈絡膜炎が軽減される、請求項１１に記載の方法。
  16. 脈絡毛細管板内皮細胞喪失が減速されるか、または予防される、請求項１２に記載の方法。
  17. 網膜動脈閉塞または網膜中心静脈閉塞の対象を治療するための方法であって、前記対象の眼に、治療的に有効な量のコネキシン調節剤またはパネキシン調節剤を投与することを含む、方法。
  18. 前記ギャップ結合調節剤、コネキシン調節剤、またはパネキシン調節剤は、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アンチセンスポリヌクレオチド、式Ｉの化合物、及び式ＶＩの化合物からなる群から選択される、請求項１、３、１１、または１７のいずれか１項に記載の方法。
  19. 前記オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドのうちの少なくとも１個のヌクレオチドが修飾される、請求項１８に記載の方法。
  20. 前記オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドのうちの少なくとも１個のヌクレオチドは、少なくとも１つの立体配座的に緊張させたヌクレオチド、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間結合、少なくとも１つの修飾糖部分、及び／または少なくとも１つの修飾核酸塩基を含む、請求項１８に記載の方法。
  21. 前記立体配座的に緊張させたヌクレオチドは、ロックトヌクレオチド（ＬＮＡ）である、請求項１９に記載の方法。
  22. 前記立体配座的に緊張させたヌクレオチドは、架橋核酸（ＢＮＡ）である、請求項１９に記載の方法。（ＢＮＡ）。
  23. 前記ロックトヌクレオチドは、次の種類：２′－Ｏ－ＣＨ２－４′（オキシ－ＬＮＡ）、２′－ＣＨ２－ＣＨ２－４′（メチレン－ＬＮＡ）、２′－ＮＨ－ＣＨ２－４′（アミノ－ＬＮＡ）、２′－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２－４′（メチルアミノ－ＬＮＡ）、２′－Ｓ－ＣＨ２－４′（チオ－ＬＮＡ）、及び２′－Ｓｅ－ＣＨ２－４′（セレノ－ＬＮＡ）のうちの１つから選択される、請求項２１に記載の方法。
  24. 前記アンチセンス化合物は、天然型核酸塩基及び未修飾ヌクレオシド間結合を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項１９に記載の方法。
  25. 前記アンチセンス化合物は、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間結合を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項１８に記載の方法。
  26. 前記修飾ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である、請求項２５に記載の方法。
  27. 前記アンチセンス化合物は、少なくとも１つの修飾糖部分または少なくとも１つの修飾核酸塩基を含むオリゴヌクレオチドである、請求項１９に記載の方法。
  28. 前記アンチセンス化合物は、配列番号１～１６から選択されるオリゴヌクレオチド配列を含み、前記オリゴヌクレオチドは、４０ヌクレオチド長以下である、請求項１８に記載の方法。
  29. 前記アンチセンス化合物は、配列番号１７から選択される配列を有するコネキシンをコードする核酸分子の少なくとも約８個のヌクレオチドを標的とする、請求項１８に記載の方法。
  30. 前記アンチセンス化合物は、約１５～約３５ヌクレオチド長、または約１５～約４０ヌクレオチド長のアンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項１、３、１１、または１８～２９のいずれか１項に記載の方法。
  31. 前記アンチセンス化合物は、配列番号１～１６、または配列番号１７のある領域から選択される、４０ヌクレオチド長以下である核酸塩基配列を含む、請求項１８に記載の方法。
  32. 前記コネキシン調節剤は、局所、角膜、眼内、硝子体内、結膜下、または眼周囲投与によって投与される、請求項１、３、１１、１３、１７、または１８のいずれか１項に記載の方法。
  33. 前記コネキシン調節剤は、眼内注射によって、または硝子体内注射によって投与される、請求項３２に記載の方法。
  34. 前記アンチセンス化合物は、１回投与される、請求項３２または３３に記載の方法。
  35. 前記対象は、ヒトである、請求項１～３４のいずれか１項に記載の方法。
  36. 前記アンチセンス化合物は、配列番号１～１６または配列番号１７のある領域から選択される配列を有するポリヌクレオチドに対して、少なくとも約８０パーセント、少なくとも約９０パーセント、少なくとも約９５パーセント、または少なくとも約９７パーセントの相同性を有する、請求項２８に記載の方法。
  37. 前記眼治療薬は、抗ＶＥＧＦ調節剤、ｍＴＯＲ阻害剤、補体調節剤、ＰＤＧＦ拮抗薬等のＰＤＧＦ調節剤、Ｓ１Ｐ産生の阻害剤、スクアラミン、ＰＥＤＦ産生物質、チューブリン結合剤、インテグリン阻害剤、及びこれらの任意の混合物から選択される、請求項１３に記載の方法。
  38. 前記眼治療薬は、次の眼治療薬：アリベルセプト（ａｌｉｂｅｒｃｅｐｔ）、ランパリズマブ、ソネプシズマブ、フェンレチニド、ラニビズマブ、ビバシズマブ（ｂｉｖａｃｉｚｕｍａｂ）、タンパク質毛様体神経栄養因子、血管内皮成長因子調節化合物、及び低酸素誘導因子１－アルファ調節化合物、ブリモニジン、チモロール、トラボプロスト、ドルゾラミド、炭酸アニヒドラーゼ（ａｎｙｈｙｄｒａｓｅ）阻害剤、ベータ遮断薬、プロスタグランダイン（ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄａｉｎ）類似体、抗アポトーシス剤、Ｎ－メチル－Ｄ－アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体拮抗薬、またはグルタミン酸放出阻害剤、アルファ２作用薬及びベータ遮断薬の組み合わせ、アルファ２作用薬及び炭酸アニヒドラーゼ（ａｎｙｈｙｄｒａｓｅ）阻害剤の組み合わせ、ならびにこれらの任意の混合物のうちの１つ以上から選択される、請求項３７に記載の方法。
  39. 脈絡毛細管板脱落が、前記眼治療薬単独を用いた単剤療法で治療した対象と比較して低減される、請求項３８に記載の方法。
  40. 前記コネキシン４３調節剤は、配列番号１～１６、または配列番号１７のある領域から選択される、４０ヌクレオチド長以下であるヌクレオチド配列を含む抗コネキシン４３アンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項３９に記載の方法。
  41. 前記抗コネキシン４３アンチセンスオリゴヌクレオチドは、天然型ヌクレオチド及び未修飾ヌクレオシド間結合をさらに含む、請求項４０に記載の方法。
  42. 前記抗コネキシン４３アンチセンスオリゴヌクレオチドは、修飾されている、請求項４０に記載の方法。
  43. 前記修飾オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間結合、少なくと
    も１つの修飾糖部分、もしくは少なくとも１つの修飾核酸塩基、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項４２に記載の方法。
  44. 前記コネキシン調節剤は、式Ｉによる化合物である、請求項１、３、１１、１３、１７、または３８に記載の方法。
  45. 前記コネキシン調節剤は、式ＩＩによる化合物である、請求項１、３、１１、１３、１７、または３８に記載の方法。
  46. 前記コネキシン調節剤は、トナベルサットである、請求項１、３、１１、１３、１７、または３８に記載の方法。
  47. 前記コネキシン４３調節剤は、配列番号１７３（ＳＲＰＴＥＫＴ）を含むペプチドである、請求項１、３、１１、１３、１７、または３８のいずれか１項に記載の方法。
  48. 前記コネキシン４３ペプチドは、配列番号１６８（ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ）をさらに含む、請求項１、３、１１、１３、１７、３８、及び４７のいずれか１項に記載の方法。
  49. 前記コネキシン４３ペプチドは、修飾されている、請求項４８に記載の方法。
  50. 前記コネキシン４３ペプチド修飾は、２つのＣ１２アルキル基の配列番号３２６（Ｃ１２－Ｃ１２－ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ）を含む、請求項４９に記載の方法。
  51. 前記コネキシン調節剤は、局所、角膜、局部、眼内、硝子体内、結膜下、イオン泳動、または眼周囲投与によって投与される、請求項３８～５０のいずれか１項に記載の方法。
  52. 前記コネキシン調節剤は、眼内注射によって、または硝子体内注射によって投与される、請求項５１に記載の方法。
  53. 前記アンチセンス化合物は、１回投与される、請求項５１または５２に記載の方法。
  54. 前記アンチセンス化合物は、２回以上投与される、請求項５１または５２に記載の方法。
  55. 前記アンチセンス化合物は、前記眼治療薬の投与前、投与と一緒に、または投与後に投与される、請求項５１または５２に記載の方法。
  56. 前記アンチセンス化合物は、眼科用水性製剤、ミクロスフェア、ナノスフェア、またはインプラントとして製剤化される、請求項５１または５２に記載の方法。
  57. 前記ミクロスフェアまたはナノスフェアは、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－グリコール酸）を含む、請求項５６に記載の方法。
  58. 前記ナノスフェアは、１００～１４０ｎｍの平均粒径を有する、請求項５６に記載の方法。
  59. 前記ミクロスフェアは、６～１２ミクロンの平均粒径を有する、請求項５６に記載の方法。
  60. 前記ミクロスフェア、ナノスフェア、またはインプラントは、５０％超の封入効率を含む、請求項５６に記載の方法。
  61. 前記ミクロスフェア、ナノスフェア、またはインプラントは、６５％超の封入効率を含む、請求項６０に記載の方法。
  62. 前記ミクロスフェア、ナノスフェア、またはインプラントは、１．５％超の負荷量を含む、請求項５６に記載の方法。
  63. ミクロスフェア、ナノスフェア、またはインプラントは、１．７％超の負荷量を含む、請求項６２に記載の方法。
  64. 前記コネキシン調節剤は、非経口投与のために製剤化される、請求項５１に記載の方法。
  65. 前記コネキシン調節剤は、静脈内または腹腔内投与のために製剤化される、請求項６４に記載の方法。
  66. ＡＭＤ、臨床的地図状萎縮、慢性黄斑虚血、眼の線維症、特発性ポリープ状脈絡膜血管症（ＩＰＣ）、糖尿病性黄斑症、糖尿病性網膜症、高血圧性網膜症、炎症性ＣＮＶ、中心性漿液性網膜脈絡膜症（ＣＳＲ）、黄斑部毛細血管拡張症、パターンジストロフィ、網膜下／サブＰＲＤ（ｓｕｂＰＲＤ）血管新生、網膜神経感覚上皮の漿液性剥離、ＲＰＥ剥離、（硝子体への破綻出血を含む、網膜下色素上皮、網膜下、網膜内、または網膜前）出血、網膜上、網膜内、網膜下、もしくは色素上皮下の瘢痕／グリア組織または線維素様の沈着、網膜線維症、網膜血管腫増殖及び網膜脈絡膜吻合、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、嚢胞性黄斑障害、網膜肥厚、網膜瘢痕化、（後部ぶどう膜炎を含む）ぶどう膜炎、強膜炎、（サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）性網膜炎を含む）上強膜炎ウイルス性網膜炎、未熟児の網膜症、網膜低酸素症、びまん性脈絡膜硬化症、脈絡毛細管板の硬化症、ドライアイ、神経障害性眼の障害、外傷によって誘発された眼圧の低下、あるいは上皮基底膜ジストロフィの対象を治療するための方法であって、治療的に有効な量のコネキシン調節剤を投与することを含む、方法。
  67. 前記コネキシン調節剤は、式Ｉの化合物、式ＩＩの化合物、トナベルサット、ペプチド、及び修飾ペプチドから選択される、請求項６６に記載の方法。
  68. 前記ペプチドは、配列番号１７３（ＳＲＰＴＥＫＴ）を含むペプチドである、請求項６７に記載の方法。
  69. 前記ペプチドは、配列番号１６８（ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ）をさらに含むペプチドである、請求項６８に記載の方法。
  70. 前記修飾ペプチドは、配列番号３２６（Ｃ１２－Ｃ１２－ＶＤＣＦＬＳＲＰＴＥＫＴ）である、請求項６７に記載の方法。
  71. 抗コネキシン４３化合物の組み合わせを含む薬学的組成物であって、前記化合物は、ペプチドを修飾するコネキシン－４３と、
    次の化合物：アリベルセプト（ａｌｉｂｅｒｃｅｐｔ）、ランパリズマブ、ソネプシズマブ、フェンレチニド、ラニビズマブ、ビバシズマブ（ｂｉｖａｃｉｚｕｍａｂ）、タンパク質毛様体神経栄養因子、Ｒｈｏキナーゼ、及びアデノシン摸倣物、血管内皮成長因子調節化合物、及び低酸素誘導因子１－アルファ調節化合物、ブリモニジン、チモロール、
    トラボプロスト、ドルゾラミド、炭酸アニヒドラーゼ（ａｎｙｈｙｄｒａｓｅ）阻害剤、ベータ遮断薬、プロスタグランダイン（ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄａｉｎ）類似体、抗アポトーシス剤、Ｎ－メチル－Ｄ－アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体拮抗薬、またはグルタミン酸放出阻害剤、アルファ２作用薬とベータ遮断薬との組み合わせ、アルファ２作用薬と炭酸アニヒドラーゼ（ａｎｙｈｙｄｒａｓｅ）阻害剤との組み合わせ、ならびにこれらの任意の混合物のうちの１つから選択される化合物と、を含む、薬学的組成物。
  72. 抗コネキシン４３アンチセンス化合物の組み合わせを含む薬学的組成物であって、前記アンチセンス化合物は、次の選択された構成成分：ホスホロチオエート結合であるヌクレオシド間結合、及び立体配座的に緊張させた糖類である修飾糖部分と、
    次の化合物：アリベルセプト（ａｌｉｂｅｒｃｅｐｔ）、ランパリズマブ、ソネプシズマブ、フェンレチニド、ラニビズマブ、ビバシズマブ（ｂｉｖａｃｉｚｕｍａｂ）、タンパク質毛様体神経栄養因子、血管内皮成長因子調節化合物、及び低酸素誘導因子１－アルファ調節化合物、ならびにこれらの任意の混合物のうちの１つから選択される化合物と、のうちの１つ以上を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む、薬学的組成物。
  73. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１～１６、または配列番号１７のある領域から選択される、４０ヌクレオチド長以下である核酸塩基配列を含む、請求項７２に記載の組成物。
JP2022187091A 2014-08-22 2022-11-24 チャネル調節剤 Pending JP2023022154A (ja)

Applications Claiming Priority (13)

Application Number Priority Date Filing Date Title
NZ62863014 2014-08-22
NZ628630 2014-08-22
US201462080217P 2014-11-14 2014-11-14
US62/080,217 2014-11-14
US201462085226P 2014-11-26 2014-11-26
US62/085,226 2014-11-26
US201562146128P 2015-04-10 2015-04-10
US62/146,128 2015-04-10
US201562147488P 2015-04-14 2015-04-14
US62/147,488 2015-04-14
NZ709673 2015-07-02
NZ70967315 2015-07-02
JP2020054620A JP7185655B2 (ja) 2014-08-22 2020-03-25 チャネル調節剤

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2020054620A Division JP7185655B2 (ja) 2014-08-22 2020-03-25 チャネル調節剤

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2023022154A true JP2023022154A (ja) 2023-02-14

Family

ID=55351389

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2017511777A Active JP6683686B2 (ja) 2014-08-22 2015-08-21 チャネル調節剤
JP2022187091A Pending JP2023022154A (ja) 2014-08-22 2022-11-24 チャネル調節剤

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2017511777A Active JP6683686B2 (ja) 2014-08-22 2015-08-21 チャネル調節剤

Country Status (8)

Country Link
US (5) US10465188B2 (ja)
EP (1) EP3183346A4 (ja)
JP (2) JP6683686B2 (ja)
CN (2) CN114010788A (ja)
AU (3) AU2015305269B2 (ja)
CA (1) CA2958879A1 (ja)
EA (1) EA201790434A1 (ja)
WO (1) WO2016029191A2 (ja)

Families Citing this family (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9833614B1 (en) 2012-06-22 2017-12-05 Nevro Corp. Autonomic nervous system control via high frequency spinal cord modulation, and associated systems and methods
HK1243457A1 (zh) * 2014-08-22 2018-07-13 Auckland Uniservices Ltd 通道調節劑
EP4335418A3 (en) 2015-06-06 2024-05-22 Cloudbreak Therapeutics, LLC Compositions and methods for treating pterygium
CN105536093B (zh) * 2016-03-10 2019-05-03 京东方科技集团股份有限公司 智能输液系统以及使用智能输液系统的输液方法
CA3022763A1 (en) * 2016-05-03 2017-11-09 University Of Auckland Novel peptides and peptidomimetics
KR20240052865A (ko) * 2016-06-02 2024-04-23 에이디에스 테라퓨틱스 엘엘씨 녹내장 수술 성공을 개선하기 위해 닌테다닙을 사용하는 조성물 및 방법
CN110167564B (zh) 2016-09-14 2023-10-17 新加坡科技研究局 调节tjp1表达以调节心脏细胞的再生
CA3061738A1 (en) * 2017-04-28 2018-11-01 Auckland Uniservices Limited Methods of treatment and novel constructs
ES2870106T3 (es) * 2017-05-05 2021-10-26 Zealand Pharma As Moduladores de la comunicación intercelular de uniones comunicantes y su uso para el tratamiento de la enfermedad del ojo diabético
CN108976288B (zh) * 2017-06-05 2021-09-21 复旦大学 基于野生型穿膜肽penetratin的亲脂性衍生物
WO2019018691A1 (en) 2017-07-19 2019-01-24 Auckland Uniservices Limited MODULATION OF CYTOKINE
WO2019060409A1 (en) * 2017-09-19 2019-03-28 The Cleveland Clinic Foundation INHIBITION OF CONNEXIN 46 TO TREAT A GLIOBLASTOMA AND OTHER STATES
CN108066744A (zh) * 2017-12-29 2018-05-25 于海龙 细胞连接蛋白43模拟肽Gap19在制备治疗脑出血药物中的用途
JP2021519632A (ja) 2018-03-29 2021-08-12 ネヴロ コーポレイション ２型糖尿病を含む血糖異常を治療する、および／またはＨｂＡ１ｃレベルを低下させるための治療的調節、ならびに関連するシステムおよび方法
US11253395B2 (en) 2018-06-01 2022-02-22 Aurora Tears Technology, Inc. Systems and methods for generating and applying biomimicry tear films
CN112566542A (zh) * 2018-06-01 2021-03-26 奥罗拉的眼泪科技有限公司 一种用于产生和施加仿生泪膜的系统和方法
AU2019337636A1 (en) * 2018-09-12 2021-03-25 Xequel Bio, Inc. Nanoparticle formulations and methods of use for alpha connexin c-terminal peptides
CN109799216B (zh) * 2018-12-29 2021-11-12 佛山科学技术学院 一种基于吲哚箐绿纳米的荧光oct双模成像方法和装置
EP3920969A4 (en) * 2019-02-04 2022-11-30 Alamab Therapeutics, Inc. CONNEXIN 43 ANTIBODIES AND THEIR USE
CN209330231U (zh) * 2019-02-15 2019-08-30 广州视源电子科技股份有限公司 网络摄像机及录播系统
US11717506B2 (en) 2019-05-07 2023-08-08 The Johns Hopkins University Neuroprotective compounds for amyotrophic lateral sclerosis
JP7393780B2 (ja) * 2019-08-19 2023-12-07 学校法人順天堂 ギャップ結合機能制御剤のスクリーニング方法
EP4027992A4 (en) * 2019-09-13 2023-11-29 Auckland Uniservices Limited COMPOSITIONS AND METHODS FOR SAVING RETINAL AND CHOROIDAL STRUCTURE AND FUNCTION
KR20220113355A (ko) * 2019-10-02 2022-08-12 알라맵 테라퓨틱스, 인크. 항-코넥신 항체 제제
CN110859826B (zh) * 2019-12-09 2022-04-05 深圳先进技术研究院 一种脑肿瘤靶向的仿生载药纳米颗粒及其制备方法和用途
MX2022016085A (es) * 2020-06-19 2023-02-02 Endogena Therapeutics Inc Nuevos compuestos y su uso a manera de principios terapeuticamente activos en el tratamiento y/o prevencion contra enfermedades relacionadas con el epitelio pigmentario retiniano.
CN116234576A (zh) 2020-07-31 2023-06-06 阿拉玛布治疗学股份有限公司 抗-连接蛋白抗体制剂
TWI769506B (zh) * 2020-08-26 2022-07-01 長庚大學 用以治療因發炎體激活所致相關疾病的方法
US20220280473A1 (en) * 2021-03-02 2022-09-08 Auckland Uniservices Limited Compositions and methods for modulating epithelial-mesenchymal transition
WO2023105417A1 (en) * 2021-12-06 2023-06-15 Breye Therapeutics Aps Danegaptide formulation for applicatoin in the eye
WO2023212727A1 (en) * 2022-04-29 2023-11-02 Board Of Regents, The University Of Texas System Compositions and methods for treating eye diseases
US11986657B2 (en) 2022-07-01 2024-05-21 Nevro Corp. Neurostimulation for treating sensory deficits, and associated systems and methods
WO2024030766A1 (en) * 2022-07-21 2024-02-08 Ophthalmic Therapeutic Innovation Llc Methods and compositions for the treatment of glaucoma and related conditions
CN116655740B (zh) * 2023-05-26 2023-12-08 海南大学 一种赭曲霉毒素a的抗原模拟肽及编码核酸分子和应用

Family Cites Families (120)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3687808A (en) 1969-08-14 1972-08-29 Univ Leland Stanford Junior Synthetic polynucleotides
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US4263428A (en) 1978-03-24 1981-04-21 The Regents Of The University Of California Bis-anthracycline nucleic acid function inhibitors and improved method for administering the same
DE3169595D1 (en) 1980-11-10 1985-05-02 Gersonde Klaus Method of preparing lipid vesicles by ultrasonic treatment, the use of this method and apparatus for its application
IE52535B1 (en) 1981-02-16 1987-12-09 Ici Plc Continuous release pharmaceutical compositions
US4485045A (en) 1981-07-06 1984-11-27 Research Corporation Synthetic phosphatidyl cholines useful in forming liposomes
DE3374837D1 (en) 1982-02-17 1988-01-21 Ciba Geigy Ag Lipids in the aqueous phase
DE3218121A1 (de) 1982-05-14 1983-11-17 Leskovar, Peter, Dr.-Ing., 8000 München Arzneimittel zur tumorbehandlung
EP0102324A3 (de) 1982-07-29 1984-11-07 Ciba-Geigy Ag Lipide und Tenside in wässriger Phase
US4544545A (en) 1983-06-20 1985-10-01 Trustees University Of Massachusetts Liposomes containing modified cholesterol for organ targeting
HUT35524A (en) 1983-08-02 1985-07-29 Hoechst Ag Process for preparing pharmaceutical compositions containing regulatory /regulative/ peptides providing for the retarded release of the active substance
ATE159858T1 (de) 1983-09-26 1997-11-15 Ehrenfeld Udo Mittel und erzeugnis für die diagnose und therapie von tumoren sowie zur behandlung von schwächen der zelligen und humoralen immunabwehr
EP0143949B1 (en) 1983-11-01 1988-10-12 TERUMO KABUSHIKI KAISHA trading as TERUMO CORPORATION Pharmaceutical composition containing urokinase
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
US4861757A (en) 1986-11-14 1989-08-29 Institute Of Molecular Biology Wound healing and bone regeneration using PDGF and IGF-I
JPH0539594Y2 (ja) 1988-08-05 1993-10-07
US5234809A (en) 1989-03-23 1993-08-10 Akzo N.V. Process for isolating nucleic acid
US5166195A (en) 1990-05-11 1992-11-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense inhibitors of the human immunodeficiency virus phosphorothioate oligonucleotides
GB9206861D0 (en) 1992-03-28 1992-05-13 Univ Manchester Wound healing and treatment of fibrotic disorders
GB2273932A (en) 1992-11-24 1994-07-06 Stiefel Laboratories Stable oligonucleotides
NZ258611A (en) 1992-12-11 1997-07-27 Smithkline Beecham Plc 4-benzoyl(or heteroarylcarbonyl)amino-3,4-dihydro- 3-hydroxy-2h-benzo[b]pyran derivatives;benzopyrano[4,3-d]oxazole intermediates
GB9425930D0 (en) 1994-12-22 1995-02-22 Procter & Gamble Silicone compositions
US6752987B1 (en) 1995-02-28 2004-06-22 The Regents Of The University Of California Adenovirus encoding human adenylylcyclase (AC) VI
US20030148968A1 (en) 1995-02-28 2003-08-07 Hammond H. Kirk Techniques and compositions for treating cardiovascular disease by in vivo gene delivery
IL117645A (en) 1995-03-30 2005-08-31 Genentech Inc Vascular endothelial cell growth factor antagonists for use as medicaments in the treatment of age-related macular degeneration
US6566339B1 (en) 1995-08-04 2003-05-20 Renovo Limited Pharmaceutical composition
GB2304047A (en) 1995-08-09 1997-03-12 Univ Manchester Pharmaceutical compositions containing cytokines
EP1486565B1 (en) 1995-10-11 2007-11-21 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Combination of PDGF, KGF, IGF, and IGFBP for wound healing
ATE279916T1 (de) 1996-07-22 2004-11-15 Renovo Ltd Verwendung von substanzen, die die östrogen wirkung fördern, zur behandlung von wunden
EP0950060A4 (en) 1996-12-02 2000-07-05 Dyad Pharmaceutical Corp COUNTERSTRAIN INHIBITION OF HUMAN ADHESION MOLECULES
GB9702943D0 (en) 1997-02-13 1997-04-02 Univ Manchester Wound healing
WO1999007844A2 (en) 1997-08-07 1999-02-18 The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Methods and compositions for treatment of restenosis
CA2313348A1 (en) 1997-12-09 1999-06-17 Children's Medical Center Corporation Soluble inhibitors of vascular endothelial growth factor and use thereof
US6506559B1 (en) 1997-12-23 2003-01-14 Carnegie Institute Of Washington Genetic inhibition by double-stranded RNA
US6503231B1 (en) 1998-06-10 2003-01-07 Georgia Tech Research Corporation Microneedle device for transport of molecules across tissue
US6855505B2 (en) 1998-06-26 2005-02-15 Renovo Limited Method for quantifying TGF-β
AU766826B2 (en) 1998-07-30 2003-10-23 Government of The United States of America, as represented by The Secretary Department of Health & Human Services, The National Institutes of Health, The Thymosin beta4 promotes wound repair
HUP0104302A3 (en) 1998-11-06 2002-11-28 Abbott Gmbh & Co Kg Inhibition of the formation of vascular hyperpermeability
JP4994533B2 (ja) 1999-01-27 2012-08-08 デイビツド・エル・ベツカー コネキシンに対するアンチセンスヌクレオチドを含む配合物
GB9903598D0 (en) 1999-02-18 1999-04-07 Univ Manchester Connective tissue healing
US5998148A (en) 1999-04-08 1999-12-07 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of microtubule-associated protein 4 expression
WO2000069897A2 (en) 1999-05-14 2000-11-23 Arbor Vita Corporation Modulation of glgf motif (dhr/pdz) containing proteins interaction with cd3n in t lymphocytes
US6743211B1 (en) 1999-11-23 2004-06-01 Georgia Tech Research Corporation Devices and methods for enhanced microneedle penetration of biological barriers
US6611707B1 (en) 1999-06-04 2003-08-26 Georgia Tech Research Corporation Microneedle drug delivery device
US6256533B1 (en) 1999-06-09 2001-07-03 The Procter & Gamble Company Apparatus and method for using an intracutaneous microneedle array
US20020063763A1 (en) 2000-11-29 2002-05-30 Mantell David Allen Apparatus and method for removing air bubbles from an ink jet printhead
US7250397B2 (en) 2000-02-23 2007-07-31 Zealand Pharma A/S Antiarrhythmic peptides
EP1938799B1 (en) 2000-03-10 2013-05-08 Insite Vision Incorporated Compositions for treating and preventing posterior segment ophthalmic disorders and use thereof
WO2002032940A2 (en) 2000-10-18 2002-04-25 Children's Medical Center Corporation Osteopontin-coated surfaces and methods of use
EP1387692A4 (en) 2000-11-11 2004-07-21 Arbor Vita Corp MOLECULAR INTERACTIONS IN HEMATOPOETIC CELLS
US9302903B2 (en) 2000-12-14 2016-04-05 Georgia Tech Research Corporation Microneedle devices and production thereof
CN101684158A (zh) 2001-01-17 2010-03-31 特鲁比昂药品公司 结合域-免疫球蛋白融合蛋白
WO2002088370A2 (en) 2001-04-30 2002-11-07 Protiva Biotherapeutics Inc. Autogene nucleic acids encoding a secretable rna polymerase
US20050053918A1 (en) 2001-05-16 2005-03-10 Technion Research & Development Foundation Ltd. Method of identifying peptides capable of binding to MHC molecules, peptides identified thereby and their uses
US6867283B2 (en) 2001-05-16 2005-03-15 Technion Research & Development Foundation Ltd. Peptides capable of binding to MHC molecules, cells presenting such peptides, and pharmaceutical compositions comprising such peptides and/or cells
US20050119211A1 (en) 2001-05-18 2005-06-02 Sirna Therapeutics, Inc. RNA mediated inhibition connexin gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US6685971B2 (en) 2001-06-28 2004-02-03 Rongxiang Xu Method and composition for repairing and promoting regeneration of mucosal tissue in the gastrointestinal tract
CN1827766B (zh) 2001-06-28 2010-08-25 徐荣祥 体外细胞的培养方法
AU2002321903A1 (en) 2001-08-03 2003-02-24 Arbor Vita Corporation Molecular interactions in cells
EP1435925A2 (en) 2001-10-17 2004-07-14 University of Wales College of Medicine Gap junctions and edhf
KR20040094677A (ko) 2002-01-29 2004-11-10 와이어쓰 코넥신 헤미채널 조절을 위한 조성물 및 방법
JP2003238441A (ja) 2002-02-08 2003-08-27 英行 ▲高▼野 血管新生抑制剤
US20030215424A1 (en) 2002-05-15 2003-11-20 Seul Kyung Hwan Method of modulating angiogenesis
WO2004021861A2 (en) 2002-09-03 2004-03-18 Vit Lauermann Targeted release
WO2006006948A2 (en) 2002-11-14 2006-01-19 Dharmacon, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR SELECTING siRNA OF IMPROVED FUNCTIONALITY
WO2005000223A2 (en) * 2003-06-04 2005-01-06 Children's Medical Center Corporation Method of treating retinopathies and disorders associated with blood vessel loss
WO2005000382A2 (en) 2003-06-04 2005-01-06 Georgia Tech Research Corporation Drilling microneedle device
EP1514929A1 (en) 2003-09-12 2005-03-16 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Antisense oligonucleotides for prevention of metastasis formation of cancer cells
AU2004294824A1 (en) 2003-12-03 2005-06-16 Coda Therapeutics (Nz) Ltd Antisense compounds targeted to connexins and methods of use thereof
DE102004027422A1 (de) 2004-06-04 2005-12-29 Boehringer Ingelheim Microparts Gmbh Vorrichtung zur Aufnahme von Blut und Abtrennung von Blutbestandteilen
GB0420888D0 (en) 2004-09-20 2004-10-20 Photopharmica Ltd Compounds and uses
US7627938B2 (en) 2004-10-15 2009-12-08 Board Of Regents, The Univeristy Of Texas System Tapered hollow metallic microneedle array assembly and method of making and using the same
US7097776B2 (en) 2004-10-22 2006-08-29 Hewlett-Packard Development Company, L.P. Method of fabricating microneedles
RU2438696C2 (ru) 2004-12-21 2012-01-10 Маск Фаундейшн Фор Рисерч Дивелопмент Композиции и способы, используемые для ускорения заживления ран и регенерации тканей
EP2662088A3 (en) 2005-02-03 2014-02-19 Coda Therapeutics Limited Anti-connexin compounds and uses thereof
WO2007008926A1 (en) 2005-07-11 2007-01-18 Aerie Pharmaceuticals, Inc. Isoquinoline compounds
WO2007009062A2 (en) 2005-07-13 2007-01-18 Anthrogenesis Corporation Treatment of leg ulcers using placenta derived collagen biofabric
US20080159979A1 (en) 2005-08-04 2008-07-03 Moore Emma E Treatment of wounds using il-17b
FR2891149B1 (fr) 2005-09-26 2007-11-30 Biodex Sarl Composition pharmaceutique a action cicatrisante comprenant un derive de dextrane soluble et un facteur de croissance derive des plaquettes.
CA2632876A1 (en) 2005-12-16 2007-06-21 Arla Foods Amba Bovine osteopontin formulations for the improvement of the wound healing process
US7918814B2 (en) 2006-05-02 2011-04-05 Georgia Tech Research Corporation Method for drug delivery to ocular tissue using microneedle
US8197435B2 (en) 2006-05-02 2012-06-12 Emory University Methods and devices for drug delivery to ocular tissue using microneedle
CN101448468B (zh) 2006-05-19 2011-10-12 马科外科公司 用于验证外科手术装置的校准的系统和方法
CA2664335C (en) 2006-09-20 2014-12-02 Boehringer Ingelheim International Gmbh Rho kinase inhibitors
JP4616237B2 (ja) 2006-11-07 2011-01-19 日本電信電話株式会社 シリコン化合物薄膜の形成方法
EP2091557A2 (en) 2006-11-15 2009-08-26 Coda Therapeutics, INC. Improved methods and compositions for wound healing
CN101835476B (zh) 2006-12-11 2016-08-17 科达治疗公司 作为受损伤口愈合组合物的抗连接蛋白多核苷酸
US8455513B2 (en) 2007-01-10 2013-06-04 Aerie Pharmaceuticals, Inc. 6-aminoisoquinoline compounds
AU2008223817A1 (en) 2007-03-02 2008-09-12 National University Of Ireland, Galway Osteopontin for the prediction and treatment of cardiovascular diseases
KR20100050443A (ko) 2007-05-31 2010-05-13 안테리오스, 인코퍼레이티드 핵산 나노입자 및 이의 용도
DK2166845T3 (en) 2007-06-21 2016-02-01 Musc Found For Res Dev ALFA-connexin C-terminal (ACT) peptides FOR THE TREATMENT OF AGE-related macular degeneration
EP2628747A1 (en) 2007-12-11 2013-08-21 Coda Therapeutics, Inc. Impaired wound healing compositions and treatments
CN102920996A (zh) 2007-12-11 2013-02-13 科达治疗公司 受损伤口愈合的药物组合物
EP2252320A2 (en) 2007-12-21 2010-11-24 Coda Therapeutics, Inc. Use of anti-connexin polynucleotides and peptides for the treatment of abnormal or excessive scars
AU2008343758A1 (en) 2007-12-21 2009-07-09 Coda Therapeutics, Inc. Use of anti-connexin 43 polynucleotides for the treatment of abnormal or excessive scars
WO2009085273A2 (en) 2007-12-21 2009-07-09 Coda Therapeutics, Inc. Use of anti-connexin polynucleotides for the treatment of surgical adhesions
EP2242844A2 (en) 2007-12-21 2010-10-27 Coda Therapeutics, Inc. Use of anti-connexin peptides, alone or in combination with anti-connexin polynucleotides, for the treatment of orthopedic conditions
EP2237786A2 (en) 2007-12-21 2010-10-13 Coda Therapeutics, Inc. Use of inhibitors of connexin43 for treatment of fibrotic conditions
US20110092449A1 (en) 2007-12-21 2011-04-21 Bradford James Duft Treatment of fibrotic conditions
JP2011507599A (ja) 2007-12-21 2011-03-10 コーダ セラピューティクス， インコーポレイテッド 改良医療デバイス
EP2238250B1 (en) 2007-12-21 2017-07-19 CoDa Therapeutics, Inc. Use of anti-connexin 43 polynucleotides, peptides or antibodies for the treatment of orthopedic conditions
AU2008343839A1 (en) 2007-12-21 2009-07-09 Coda Therapeutics, Inc. Use of anti-connexin peptides, alone or in combination with anti-connexin polynucleotides, for the treatment of surgical adhesions
US20100297181A1 (en) * 2007-12-26 2010-11-25 Eisai R&D Management Co., Ltd. AMPA Receptor Antagonists for Epilepsy, Mental Disorders or Deficits in Sensory Organ
WO2009097077A2 (en) 2008-01-07 2009-08-06 Coda Therapeutics, Inc. Wound healing compositions and treatments
US8455514B2 (en) 2008-01-17 2013-06-04 Aerie Pharmaceuticals, Inc. 6-and 7-amino isoquinoline compounds and methods for making and using the same
US9173896B2 (en) * 2008-02-15 2015-11-03 Arrowhead Research Corporation RNAi-mediated inhibition of connexin 43 for treatment of IOP-related conditions
CN102099475A (zh) 2008-06-04 2011-06-15 科达治疗公司 用间隙连接调节化合物治疗疼痛
US20110319482A1 (en) 2008-06-05 2011-12-29 Peter Blower Novel treatments
WO2009147442A1 (en) * 2008-06-05 2009-12-10 Minster Research Limited Novel treatments
EP2299820A4 (en) 2008-06-18 2012-11-14 Inspire Pharmaceuticals Inc OPHTHALMOLOGICAL FORMULATION OF RHO KINASE INHIBITOR COMPOUND
US8450344B2 (en) 2008-07-25 2013-05-28 Aerie Pharmaceuticals, Inc. Beta- and gamma-amino-isoquinoline amide compounds and substituted benzamide compounds
EP3828172A1 (en) 2009-05-01 2021-06-02 Aerie Pharmaceuticals, Inc. Dual mechanism inhibitors for the treatment of disease
US20110016548A1 (en) * 2009-07-16 2011-01-20 University Of Southern California Control of endogenous dnmt1 gene expression by exogenous binary regulatory systems
RU2012124837A (ru) * 2009-12-03 2014-01-10 Проксимэджен ЛТД Лечение аллодинии и гипералгезии
WO2011072091A1 (en) * 2009-12-09 2011-06-16 Quark Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating diseases, disorders or injury of the cns
EP3248982A1 (en) 2011-07-19 2017-11-29 Wave Life Sciences Ltd. Thiosulfonate reagents for the synthesis of functionalized nucleic acids
WO2013148736A1 (en) 2012-03-27 2013-10-03 Coda Therapeutics, Inc. Compositions and treatments based on cadherin modulation
JP2015515282A (ja) 2012-04-25 2015-05-28 エムユーエスシー ファウンデーション フォー リサーチ ディベロップメント 創傷治癒および組織修復のための組成物および方法
US20140011773A1 (en) 2012-07-03 2014-01-09 Proximagen Limited Pro-drug Compounds
ES2852377T3 (es) 2013-03-15 2021-09-13 Aerie Pharmaceuticals Inc Sales dimesilato de 4-(3-amino-1-(isoquinolin-6-ilamino)-1-oxopropan-2-il)bencilo, sus combinaciones con prostaglandinas y el uso de las mismas en el tratamiento de trastornos oculares

Also Published As

Publication number Publication date
US10465188B2 (en) 2019-11-05
CA2958879A1 (en) 2016-02-25
CN107109410A (zh) 2017-08-29
CN114010788A (zh) 2022-02-08
US11401516B2 (en) 2022-08-02
AU2024201060A1 (en) 2024-03-14
US20160177298A1 (en) 2016-06-23
CN107109410B (zh) 2021-11-02
WO2016029191A3 (en) 2016-08-18
EA201790434A1 (ru) 2017-07-31
AU2015305269A1 (en) 2017-03-23
US20200239889A1 (en) 2020-07-30
EP3183346A2 (en) 2017-06-28
US20230174980A1 (en) 2023-06-08
US20200263175A1 (en) 2020-08-20
EP3183346A4 (en) 2018-10-24
JP2017526687A (ja) 2017-09-14
AU2021282410A1 (en) 2021-12-23
US20210115445A1 (en) 2021-04-22
JP6683686B2 (ja) 2020-04-22
AU2015305269B2 (en) 2021-12-23
WO2016029191A2 (en) 2016-02-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2023022154A (ja) チャネル調節剤
ES2385924T3 (es) Inhibidores de la actividad de CXCR4 para su uso en el tratamiento de trastornos oculares
EP3233056B1 (en) Sunitinib formulations and methods for use thereof in treatment of ocular disorders
JP2024069363A (ja) 翼状片を治療するための組成物及び方法
JP2019508405A (ja) 改良された硝子体内半減期を有する組成物およびその使用
EP1970078A1 (en) Composition inhibiting the expression of target gene in eyeball and remedy for disease in eyeball
JP7185655B2 (ja) チャネル調節剤
JP2023027172A (ja) ノリン誘発性の遺伝子発現および疾患を処置するためのその使用
KR20210088446A (ko) 세포 투과성 핵산 복합체를 유효성분으로 함유하는 황반변성의 예방 또는 치료용 조성물
ES2750125T3 (es) ARNip y su uso en métodos y composiciones para el tratamiento y/o la prevención de afecciones oculares
US11066671B2 (en) Use of therapeutic agents
Shastri et al. Ocular Delivery of Therapeutic Proteins: A Review. Pharmaceutics 2023, 15, 205
EP4088742A2 (en) Composition for preventing or treating macular degeneration, containing cell permeable nucleic acid complex as active ingredient
WO2011043739A1 (en) Methods and compositions for maintenance of a functional wound
US20110305710A1 (en) Novel compounds for the treatment of glaucoma or ocular hypertension
WO2023091955A1 (en) Compositions and methods for the treatment of ocular diseases and injuries
WO2020120480A1 (en) Vasodilators for use in the treatment of a retinal ischemic disorder

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20221220

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20221220

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20230119

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20231212

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20240311

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20240612