CN108066744A - 细胞连接蛋白43模拟肽Gap19在制备治疗脑出血药物中的用途 - Google Patents
细胞连接蛋白43模拟肽Gap19在制备治疗脑出血药物中的用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108066744A CN108066744A CN201711476992.5A CN201711476992A CN108066744A CN 108066744 A CN108066744 A CN 108066744A CN 201711476992 A CN201711476992 A CN 201711476992A CN 108066744 A CN108066744 A CN 108066744A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- gap19
- cerebral hemorrhage
- simulating peptide
- purposes
- preparing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
Abstract
本发明公开了属于脑出血技术领域的一种细胞连接蛋白43模拟肽Gap19在制备治疗脑出血药物中的用途。所述模拟肽Gap19为一个序列为KQIEIKKFK的九肽。本发明阐述的Gap19属于小分子肽类，可以用作活性成分应用于水剂中，开拓了该通道特异性阻断剂的新用途，为脑出血后神经损伤的保护提供了新的选择。本发明的产品是体内常见蛋白Cx43的模拟肽，因此安全性得以保证。发明人在实验过程中对设定正常老鼠的注药组，未出现老鼠的死亡及神经功能缺损，Gap19对脑出血后的神经保护应用是该产品在可能实现的新用途。
Description
技术领域
本发明属于脑出血技术领域，具体涉及一种细胞连接蛋白43模拟肽Gap19在制备治疗脑出血药物中的用途。
背景技术
细胞连接蛋白43(Connexin 43，Cx43)是广泛存在于神经系统内的缝隙连接蛋白，参与形成缝隙连接(gap junction，GJ)和半通道(Hemichannel,Hc)，对神经血管单元各组分间的交流起重要作用。生理状态下，缝隙连接保持开放状态，参与生长因子、各种离子和小分子物质的交换，传递化学信号，而半通道则处于关闭状态。当机体受到损伤刺激后，半通道大量开放，引起谷氨酸、ATP的释放，Ca2+超载，离子失衡，细胞肿胀甚至死亡等。以往研究已发现多种Cx43阻断剂，包括甘草次酸衍生物、Cx43模拟肽Gap26和Gap27等，但由于其对GJ和Hc均有阻断作用，这种完全性的阻断同时也阻断了有益细胞因子的传递。而目前已知的特异性阻断剂钆(Gd3+)、镧(La3+)，由于对神经元的生长有副作用而使用受限。最新的研究表明，使用gap26选择性阻断Cx43Hc对脑组织缺血性损伤有保护作用(《Glia》,2015,63(9):1553)。新近发现的Gap19是Cx43胞内环的模拟肽，是一个序列为KQIEIKKFK的九肽，能特异性阻断半通道而不影响缝隙连接的开放。
尽管Cx43半通道阻断剂在脑缺血治疗中已有大量研究证实其有保护作用，但将其使用于脑出血的治疗研究甚少。曾有研究使用该Cx43相关通路非特异性阻断剂甘珀酸治疗脑出血，发现短期72h内并没有体现出保护作用，究其原因可能与该阻断剂同时阻断了对脑损伤有益的Cx43全通道有关。目前没有任何研究证实Cx43半通道特异阻断剂如Gap19对脑出血的神经损伤及远期功能改善有恢复作用。
发明内容
本发明的目的是提供Cx43细胞半通道特异性阻断剂的新用途。本发明适用Gap19干预脑出血，可以有效减轻出血后的神经损伤，减少出血周围坏死体积；本发明提供了Gap19在未来治疗脑出血后神经功能损伤药品制备中的应用。
将Cx43半通道抑制剂Gap19制备为水剂，通过小剂量侧脑室给药的方式，在脑出血前1小时将其注射入小鼠的胶原酶脑出血模型中，其可以有效减轻小鼠的脑水肿程度，减轻老鼠的神经功能缺损。在脑出血时，脑出血后1小时，脑出血后3小时侧脑室注射该药物水剂，用药老鼠的脑水肿及神经功能缺损均好于单纯脑出血未干预的老鼠。
Gap19具备穿过血脑屏障的能力，发明人在脑出血后1小时我们使用尾静脉注射的方式，将Gap19的水剂注入脑出血小鼠体内，发现该干预手段对脑出血的神经损伤仍具有保护作用。
发明人对该神经保护的机制进行了研究，发现Gap19可以有效抑制脑出血后神经组织的凋亡反应，具体表现为使用Gap19干预后Western blot测定的凋亡标志蛋白明显下降。脑组织损伤后抑制神经细胞凋亡可以保护神经组织，减轻神经功能缺损这一结论是公知的。因此Gap19对脑出血后神经细胞凋亡的抑制是控制脑出血后神经功能缺损发生和发展的关键。
本发明所涉及的物质Gap19在脑出血前和脑出血后注入动物体内，均起到了很好的神经保护作用，这涉及了该药物对脑出血后神经损伤的预防和治疗双方面的治疗作用。Gap19可以通过直接靶点注射和静脉注射的用药途径对脑出血后神经损伤进行干预，尤其静脉注射剂型更加适合临床的运用。所以在本发明的工业实施中可将药品制成适应以上用药途径的各种剂型。
本发明的有益效果：本发明阐述的Gap19属于小分子肽类，可以用作活性成分应用于水剂中，开拓了该通道特异性阻断剂的新用途，为脑出血后神经损伤的保护提供了新的选择。本产品是体内常见蛋白Cx43的模拟肽，因此安全性得以保证。发明人在实验过程中对设定正常老鼠的注药组，未出现老鼠的死亡及神经功能缺损。综上，Gap19对脑出血后的神经保护应用是该产品在可能实现的新用途。
附图说明
图1为Gap19对小鼠脑出血后脑水肿的影响。
图2为Gap19对小鼠脑出血损伤体积的影响，左侧为出血组大脑，右侧为Gap19组大脑。
图3为Gap19对小鼠脑出血损伤体积的影响。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明做进一步说明。
实施例1对小鼠脑出血后水肿的作用
Gap19，批号：5353，使用时以无菌水配制成所需浓度。试验动物为雄性ICR小鼠，非近交系封闭群，体重25-30g，合格证号：医动字01-300l，由中国扬州大学比较医学院实验动物中心提供。实验室室温20-22℃，相对湿度40％-60％，换气扇通气，自然光源12h/日，笼养，每笼8只，每三日清扫笼舍一次。
用10％水合氯醛(400mg/kg)将小鼠腹腔麻醉后，将其俯卧位固定在脑立体定位仪上，消毒小鼠头部毛发，剪开皮肤，分离硬脑膜，在左侧纹状体部位，即前囟前0.5mm，左侧2mm，深度3mm，注射1μl胶原酶Ⅳ型(vetec，用生理盐水1:2配制)，建立脑出血模型，术后将小鼠放置于加热毯(37.0±0.5℃)保温直至麻醉清醒，置于动物房饲养。实验组小鼠在建立脑出血模型前半小时经侧脑室，即前囟后0.5mm，右侧1mm，深度2.5mm，注射Gap19 10μl(1μg/只)。
48小时后断头取脑，取前囟前3mm，后2mm脑组织，分左右半球，分别迅速置于提前烘干称重的称量纸上称重，此重量减去称量纸重量即为湿重，随后放入烘箱中在60℃条件下烘48h后再次称重，此重量减去称量纸重量即为干重，脑水肿指数即可用下述公式求得。脑水肿指数＝[(湿重-干重)/湿重]×100％。
本试验数据均以Excel软件处理。实验数据结果见表1：
表1Gap19对小鼠脑出血后水肿的作用(％)
两组相比：P<0.05；n＝7实验结果显示，两组小鼠出血对侧水肿指数无明显差异，出血侧水肿有明显差异，提示Gap19可明显减轻小鼠脑出血后脑水肿体积，具有保护作用(图1)。
实施例2：对小鼠脑出血后神经行为学评分的影响
Gap19，批号：5353，使用时以无菌水配制成所需浓度。试验动物为雄性ICR小鼠，非近交系封闭群，体重25-30g，合格证号：医动字01-300l，由中国扬州大学比较医学院实验动物中心提供。实验室室温20-22℃，相对湿度40％-60％，换气扇通气，自然光源12h/日，笼养，每笼8只，每三日清扫笼舍一次。
用10％水合氯醛(400mg/kg)将小鼠腹腔麻醉后，将其俯卧位固定在脑立体定位仪上，消毒小鼠头部毛发，剪开皮肤，分离硬脑膜，在左侧纹状体部位，即前囟前0.5mm，左侧2mm，深度3mm，注射1μl胶原酶Ⅳ型(vetec，用生理盐水1:2配制)，建立脑出血模型，术后将小鼠放置于加热毯(37.0±0.5℃)保温直至麻醉清醒，置于动物房饲养。实验组小鼠在建立脑出血模型前半小时经侧脑室，即前囟后0.5mm，右侧1mm，深度2.5mm，注射Gap19 10μl(1μg/只)。假手术组只在颅骨钻孔不予其他处理，假手术加药组只予Gap19 10μl。
48h后，由一由一不了解分组情况的观察者对小鼠进行神经行为学评分，包括longa评分、平衡木试验、mNSS评分，而后进行统计学分析。
Longa评分：无神经功能缺损症状；1分：不能完全伸展对侧前肢；2分：行走时向对侧旋转，出现“追尾”现象；3分：站立不稳，向对侧倾倒；4分：不能自发行走，意识障碍。
平衡木试验:将小鼠置于长50cm，宽2.5cm的水平木(用纸胶带包裹利于小鼠抓住)上，分成5段，每段10cm，高于地面60cm放置。5min内进行3次实验，记录最高分。将小鼠置于平衡木中间，身体与纵轴垂直。4分：行走超过20cm；3分：行走10-20cm；2分：行走超过10cm，但在60s内坠落；1分：在平衡木上超过60s，但行走小于10cm；0分：行走不到10cm就坠落。
mNSS评分:mNSS评分由运动、感觉、反射和平衡检测组成。1分代表不能完成检测或者缺少反射，分数越高代表缺损越严重。神经功能评分在0-18(正常为0，最大缺损为18)
本试验数据均以Excel软件处理。实验数据结果见表2、3、4：
表2
假手术组与假手术加药组相比无统计学差异，与出血组或加药组相比P<0.05，n＝7，均有统计学差异。出血组与加药组相比P<0.05，n＝7。
表3
假手术组与假手术加药组相比无统计学差异，与出血组或加药组相比P<0.05，n＝7，均有统计学差异。出血组与加药组相比P<0.05，n＝7。
表4
假手术组与假手术加药组相比无统计学差异，与出血组或加药组相比P<0.05，n＝7，均有统计学差异。出血组与加药组相比P<0.05，n＝7。
上述三项神经行为学评分均提示Gap19预处理后可以减轻脑出血小鼠的神经功能缺损，对预后有一定的保护作用。
实施例3：对小鼠脑出血损伤体积的影响
Gap19，批号：5353，使用时以无菌水配制成所需浓度。试验动物为雄性ICR小鼠，非近交系封闭群，体重25-30g，合格证号：医动字01-300l，由中国扬州大学比较医学院实验动物中心提供。实验室室温20-22℃，相对湿度40％-60％，换气扇通气，自然光源12h/日，笼养，每笼8只，每三日清扫笼舍一次。
用10％水合氯醛(400mg/kg)将小鼠腹腔麻醉后，将其俯卧位固定在脑立体定位仪上，消毒小鼠头部毛发，剪开皮肤，分离硬脑膜，在左侧纹状体部位，即前囟前0.5mm，左侧2mm，深度3mm，注射1μl胶原酶Ⅳ型(vetec，用生理盐水1:2配制)，建立脑出血模型，术后将小鼠放置于加热毯(37.0±0.5℃)保温直至麻醉清醒，置于动物房饲养。实验组小鼠在建立脑出血模型前半小时经侧脑室，即前囟后0.5mm，右侧1mm，深度2.5mm，注射Gap19 10μl(1μg/只)。
48小时后麻醉小鼠，经心脏灌注生理盐水及多聚甲醛固定，仔细剥离全脑，与多聚甲醛中固定2天，蔗糖中脱水2天，制作冰冻切片，厚度为50μm，收集前囟前1.32mm至前囟后1.64mm的脑组织贴片，每只小鼠3张脑片，进行Luxol fast blue/Cresyl violet染色，使用Image J软件计算脑出血损伤体积(图2，图3)。公式为：损伤体积＝各切片损伤面积之和x总切片厚度。
本试验数据均以Excel软件处理。实验数据结果见表5：
表5
两组相比：P<0.05；n＝3
实验结果显示，实验组小鼠脑出血体积较单纯出血组减少，提示Gap19可明显减轻小鼠脑出血损伤体积。
Claims (5)
1.细胞连接蛋白43模拟肽Gap19在制备治疗脑出血药物中的用途。
2.根据权利要求1所述细胞连接蛋白43模拟肽Gap19在制备治疗脑出血药物中的用途，其特征在于，所述模拟肽Gap19为一个序列为KQIEIKKFK的九肽。
3.根据权利要求1所述细胞连接蛋白43模拟肽Gap19在制备治疗脑出血药物中的用途，其特征在于，所述治疗脑出血药物为含有模拟肽Gap19的水剂。
4.根据权利要求1所述细胞连接蛋白43模拟肽Gap19在制备治疗脑出血药物中的用途，其特征在于，所述模拟肽Gap19的作用为减少脑出血后神经组织死亡。
5.根据权利要求1所述细胞连接蛋白43模拟肽Gap19在制备治疗脑出血药物中的用途，其特征在于，所述模拟肽Gap19的作用为减轻脑出血后脑组织水肿，减轻神经功能缺损。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711476992.5A CN108066744A (zh) | 2017-12-29 | 2017-12-29 | 细胞连接蛋白43模拟肽Gap19在制备治疗脑出血药物中的用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711476992.5A CN108066744A (zh) | 2017-12-29 | 2017-12-29 | 细胞连接蛋白43模拟肽Gap19在制备治疗脑出血药物中的用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108066744A true CN108066744A (zh) | 2018-05-25 |
Family
ID=62156256
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201711476992.5A Pending CN108066744A (zh) | 2017-12-29 | 2017-12-29 | 细胞连接蛋白43模拟肽Gap19在制备治疗脑出血药物中的用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108066744A (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101573131A (zh) * | 2005-02-03 | 2009-11-04 | 科达治疗有限公司 | 抗-连接蛋白化合物及其治疗应用 |
| CN107109410A (zh) * | 2014-08-22 | 2017-08-29 | 奥克兰联合服务有限公司 | 通道调节剂 |
-
2017
- 2017-12-29 CN CN201711476992.5A patent/CN108066744A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101573131A (zh) * | 2005-02-03 | 2009-11-04 | 科达治疗有限公司 | 抗-连接蛋白化合物及其治疗应用 |
| CN107109410A (zh) * | 2014-08-22 | 2017-08-29 | 奥克兰联合服务有限公司 | 通道调节剂 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| TAO HONG 等: "Effects of gap junctional blockers on cerebral vasospasm after subarachnoid hemorrhage in rabbits", 《NEUROLOGICAL RESEARCH》 * |
| 叶新运 等: "实验性蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛兔基底动脉Cx43蛋白表达的时相变化", 《中风与神经疾病杂志》 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ritter et al. | Induction of Fos-like immunoreactivity (Fos-li) and stimulation of feeding by 2, 5-anhydro-D-mannitol (2, 5-AM) require the vagus nerve | |
| WO2021103581A1 (zh) | 具有促进伤口愈合和/或疤痕修复功效的皮肤外用组合物 | |
| CN104306358B (zh) | 止痒祛疤涂膜剂 | |
| CN102416023A (zh) | 美洲大蠊凝胶外用药组合物、其制备方法及其在制备治疗烫伤外用药方面的应用 | |
| WO2021244010A1 (zh) | 热休克因子2结合蛋白在肝脏缺血再灌注损伤、药物性肝损伤中的应用 | |
| Jiang et al. | Nobiletin enhances the survival of random pattern skin flaps: involvement of enhancing angiogenesis and inhibiting oxidative stress | |
| KR20070008089A (ko) | 댕댕이나무 추출물을 포함하는 간 질환 예방 및 치료효과를 가지는 약제학적 조성물 | |
| Schwartz et al. | Actinomycin D: effects on Ridgway osteogenic sarcoma in mice | |
| CN111388467A (zh) | 靛蓝的新应用 | |
| CN108066744A (zh) | 细胞连接蛋白43模拟肽Gap19在制备治疗脑出血药物中的用途 | |
| CN104703596A (zh) | 用于治疗子宫内膜异位的绿茶表没食子儿茶素-3-没食子酸酯的前药(pro-egcg) | |
| Yao et al. | Pretreatment with intravenous FGF-13 reduces infarct volume and ameliorates neurological deficits following focal cerebral ischemia in rats | |
| CN101820756A (zh) | 保护免受细胞损伤和炎症且促进星形胶质细胞增殖的蛋白激酶C-δ抑制剂 | |
| CN110038056A (zh) | 一种治疗宠物肢体炎性肿胀的复方五倍子软膏及其制备方法 | |
| CN102697835B (zh) | 治疗皮肤疾病的外用药剂 | |
| CN112402428B (zh) | 瑞马唑仑在制备治疗阿片类药物诱发的术后痛觉过敏的药物中的应用 | |
| CN108078868A (zh) | 一种用于护肤品的抗过敏组合物 | |
| US9364510B2 (en) | Botanical composition and methods of manufacture and use | |
| KR100860350B1 (ko) | 생약추출물을 함유하는 모발생장촉진용 화장료 조성물 | |
| Song et al. | The flower of Abelmoschus manihot (L.) medik exerts antioxidant effects by regulating the Nrf2 signalling pathway in scald injury | |
| CN110393772A (zh) | 一种促进放疗患者皮肤伤口愈合的药物组合物及制备方法 | |
| KR100860349B1 (ko) | 생약추출물을 함유하는 모발생장촉진용 조성물 | |
| CN108524886A (zh) | 一种手足癣药贴及其制备方法 | |
| AU2021105462A4 (en) | Use of fructus corni nano-powder in resisting type 2 diabetes mellitus | |
| Wang et al. | Liposome Nanoparticles Loaded with Paeoniflorin Protect Neuronal Damage in Parkinson’s Disease by Regulating miR-135a |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20180525 |