CN101835476B

CN101835476B - 作为受损伤口愈合组合物的抗连接蛋白多核苷酸

Info

Publication number: CN101835476B
Application number: CN200780051207.XA
Authority: CN
Inventors: 戴维·L·贝克尔; 科林·R·格林; 布拉德福德·J·杜夫特
Original assignee: CoDa Therapeutics Inc
Current assignee: Medical Treatment Co Ltd
Priority date: 2006-12-11
Filing date: 2007-12-11
Publication date: 2016-08-17
Anticipated expiration: 2027-12-11
Also published as: US9637745B2; AU2007333535B2; US8685940B2; KR20090118910A; CA2672220A1; CN101835476A; KR101521306B1; US20170240905A1; JP5911454B2; CN103520197A; RU2009126594A; US8063023B2; JP5431949B2; DK2101791T3; US20080242631A1; WO2008073479A2; US20150315598A1; EP2543377A1; EP2543378A1; PT2101791E

Abstract

本发明涉及用于治疗不以预期速率愈合的伤口，包括延迟愈合伤口、不完全愈合伤口、以及慢性伤口的连接蛋白调节，以及有关的方法、组合物和制品。

Description

作为受损伤口愈合组合物的抗连接蛋白多核苷酸

技术领域

本发明涉及间隙连接以及伤口和伤口愈合，具体地涉及不以预期速率愈合的伤口，如延迟愈合伤口、不完全愈合伤口、慢性伤口、以及裂开伤口。

背景技术

以下包括可能有益于理解本发明的信息。这并不是承认，本文提供的任何信息是现有技术，或与目前描述的或要求保护的发明有关，或具体或含蓄提及的任何出版物或文献是现有技术。

在人类和其他哺乳动物中，伤口损伤触发细胞和生化事件的有组织的复杂级联，其在大多数情况下将导致愈合伤口。理想的愈合伤口是这样的一种愈合伤口，其可以在细胞、组织、器官、和生物体水平恢复正常解剖结构、功能、以及外观。伤口愈合，不管是由创伤、微生物还是异物(或杂质，foreign materials)所引起的，其借助于复杂过程来进行，该复杂过程涵盖许多重叠阶段，包括发炎、上皮形成、血管生成以及基质沉积。通常，这些过程导致成熟的伤口和一定程度的瘢痕形成。虽然炎症和修复大多数沿着规定历程发生，但过程的敏感性依赖于各种伤口愈合调节因子的平衡，包括例如，调节细胞因子和生长因子的复杂网络。

间隙连接是促进直接的细胞间通信的细胞膜结构。间隙连接通道由两个连接子(半通道)形成，每个连接子由6个连接蛋白亚单位组成。每个六聚体连接子停靠于在相对膜中的连接子以形成单间隙连接。间隙连接通道被报道为存在于整个体内。组织如角膜上皮，例如，具有6至8个细胞层，而在不同层中表现不同的间隙连接通道，其中连接蛋白43在基底层中而连接蛋白26在基底至中间翼细胞层(wing cell layer)中。通常，连接蛋白是通常按照它们的分子量命名或在系统发育的基础上分为α、β、以及γ亚类的蛋白质家族。已鉴定了至少20种人和19种小鼠同种型。不同的组织和细胞类型被报道为具有连接蛋白表达的特征模式并且组织如角膜已表明在损伤或移植以后可以改变连接蛋白表达模式(Qui et al.(2003)Current Biology，13：1967-1703；Brander et al.(2004)，J.InvestDermatol.122：1310-20)。

已经报道了，异常的连接蛋白功能可能与某些疾病状态(例如心脏病)有关(A.C.de Carvalho，et al.(1994)J CardiovascElectrophysiol 5：686)。在某些连接蛋白中，通过加入外源剂(exogenous agent)可以诱导周转和运输性能的改变，其中外源剂可以影响间隙连接细胞间通信的水平(Darrow et al.(1995)Circ Res76：381；Lin et al.(2001)J Cell Biol 154(4)：815)。还报道了反义技术已用于调节与病毒、真菌和代谢性疾病有关的基因的表达。参见例如，美国专利第5,166,195号(HIV的寡核苷酸抑制剂(oligonucleotideinhibitors of HIV))、美国专利第5,004,810号(低聚物，用于杂交于单纯疱疹病毒Vmw65 mRNA和抑制复制(oligomers for hybridizingto herpes simplexvirus Vmw65 mRNA and inhibiting replication))。还参见授权给Becker和Green的美国专利第7,098,190号(包含连接蛋白的反义核苷酸的制剂(formulations comprisingantisensenucleotides to connexins))。还已经报道了间隙连接和半通道的肽抑制剂。参见例如，Berthoud et al.(2000)Am J.Physiol.Lung Cell Mol.Physiol.279：L619-L622；Evans，W.H.and Boitano，S.Biochem.Soc.Trans.29：606-612，以及De Vriese A.S.，etal.(2001)Kidney Int.61：177-185。还参见Green and Becker，WO2006/134494(“抗连接蛋白化合物和应用方法(Anti-connexin compounds and methods ofuse)”)。

虽然在理解构成伤口愈合过程基础的原理方面有进展，但在用于伤口护理，包括不以预期速率愈合的伤口，如延迟愈合的伤口、不完全愈合伤口、以及慢性伤口的适宜的治疗选择方面仍然存在显著的未满足的需要。本文描述了并要求保护这样的治疗组合物以及治疗。

发明内容

本文描述和要求保护的发明具有许多特性和实施方式，包括但不限于在本发明内容部分列出的或描述的或提及的那些。本文描述的并要求保护的发明不限于本发明内容中限定的特点或实施方式或者被本发明内容中限定的特点或实施方式限制，使用这些特点和实施方式仅仅是为了说明的目的而非限制的目的。

本发明通常涉及包括例如连接蛋白反义多核苷酸的抗连接蛋白多核苷酸、以及组合物和方法在用于治疗不以预期速率愈合的伤口，如延迟愈合的伤口、不完全愈合伤口、以及慢性伤口中的应用。

通过使用一种或多种连接蛋白反义多核苷酸，本发明用来提高和改善不以预期速率愈合的伤口如延迟愈合的伤口、不完全愈合伤口、以及慢性伤口的愈合。

它们还涉及与敷料、绷带、基质以及覆盖物组合来使用抗连接蛋白多核苷酸。在一个方面，本发明包括一种合成或天然存在的伤口愈合基质，其包含抗连接蛋白多核苷酸。在某些实施方式中，抗连接蛋白多核苷酸是抗连接蛋白43多核苷酸，例如，抗连接蛋白43多核苷酸。优选的抗连接蛋白多核苷酸包括抗连接蛋白寡脱氧核苷酸，如抗连接蛋白43寡脱氧核苷酸。

它们还涉及在重复应用(例如，每周一次)中单独或与敷料、绷带、基质以及覆盖物组合来使用抗连接蛋白多核苷酸直到愈合完全或如达到所期望的。

描述和要求保护本发明的组合物和方法，其采用包括连接蛋白反义多核苷酸的抗连接蛋白多核苷酸。

在一个方面，本发明提供了一种药物组合物，该药物组合物包含一种或多种连接蛋白反义多核苷酸。优选地，该药物组合物进一步包含药用载体、稀释剂或赋形剂。例如，本发明包括药物组合物，其包含(a)治疗有效量的药用连接蛋白反义多核苷酸以及(b)药用载体或稀释剂。

在一个方面，本发明包括药物组合物，该药物组合物包括局部递送形式和制剂(剂型，formulations)，其包含药用载体和治疗有效量的抗连接蛋白多核苷酸，优选连接蛋白反义多核苷酸，并且最优选连接蛋白43反义多核苷酸。

连接蛋白反义多核苷酸的实例包括抗连接蛋白寡脱氧核苷酸(ODN)，其包括反义(包括修饰和未修饰的主链反义(backboneantisense)；例如，结合于连接蛋白mRNA的DNA反义多核苷酸)、RNAi、以及siRNA多核苷酸。

适宜的连接蛋白反义多核苷酸包括例如，相对于连接蛋白43(Cx43)、连接蛋白26(Cx26)、连接蛋白37(Cx37)、连接蛋白30(Cx30)、连接蛋白31.1(Cx31.1)以及连接蛋白32(Cx32)的反义ODN。在某些实施方式中，适合的组合物包括组合的多种连接蛋白反义多核苷酸，其包括例如，靶向Cx43、26、30、以及31.1的多核苷酸。优选的连接蛋白反义多核苷酸靶向连接蛋白43。

因此，在另一个方面，本发明提供了一种制剂，其包含相对于连接蛋白的至少一种连接蛋白反义多核苷酸以及药用载体或媒介物(vehicle)。在一种优选的形式中，该制剂包含仅相对于一种连接蛋白(connexin protein)的多核苷酸。最优选地，这种连接蛋白是连接蛋白43。可替换地，该制剂包含相对于多于一种的连接蛋白的寡脱氧核苷酸。

本发明包括一种制剂，该制剂包含可有效促进受治疗者伤口愈合的量的药用抗连接蛋白多核苷酸，例如，连接蛋白反义多核苷酸，其中受治疗者具有慢性伤口或特征为延迟愈合的伤口、或不以预期速率愈合的其他伤口。这样的制剂包括，例如，局部递送形式和制剂(或剂型，formulations)。优选的抗连接蛋白多核苷酸和连接蛋白反义多核苷酸是抗连接蛋白43多核苷酸和连接蛋白43反义多核苷酸。

优选地，寡脱氧核苷酸导向(direct to)的连接蛋白之一是连接蛋白43。寡脱氧核苷酸导向的其他连接蛋白包括连接蛋白26、连接蛋白31.1以及连接蛋白32。

适宜地，对于连接蛋白43的寡脱氧核苷酸选自：GTA ATT GCGGCA AGA AGA ATTGTT TCT GTC(SEQ.ID.NO：1)；GTA ATT GCGGCA GGA GGA ATT GTT TCT GTC(SEQ.ID.NO：2)；GGC AAGAGA CAC CAA AGA CAC TAC CAG CAT(SEQ.ID.NO：3)，与SEQ.ID.NO：1、2、或3具有至少约70％的同源性的多核苷酸或在中等至高度严格的条件下杂交于连接蛋白43mRNA的多核苷酸。

适宜地，对于连接蛋白26的寡脱氧核苷酸是：TCC TGA GCAATA CCT AAC GAA CAAATA(SEQ.ID.NO：4)，与SEQ.ID.NO：4具有至少约70％的同源性的多核苷酸；或在中等至高度严格条件下杂交于连接蛋白26mRNA的多核苷酸。适宜地，对于连接蛋白31.1的寡脱氧核苷酸是：CGT CCG AGC CCA GAA AGA TGA GGT C(SEQ.ID.NO：9)，与SEQ.ID.NO：9具有至少约70％的同源性的多核苷酸；或在中等至高度严格条件下杂交于连接蛋白31.1mRNA的多核苷酸。适宜地，对于连接蛋白32的寡脱氧核苷酸是：TTT CTT TTCTAT GTG CTG TTG GTG A(SEQ.ID.NO：12)，与SEQ.ID.NO：12具有至少约70％的同源性的多核苷酸；或在中等至高度严格条件下杂交于连接蛋白32mRNA的多核苷酸。根据本发明的方法可用的其他连接蛋白反义多核苷酸序列包括：

5′CAT CTC CTT GGT GCT CAA CC 3′(连接蛋白37)(SEQ IDNO：5)

5′CTG AAG TCG ACT TGG CTT GG 3′(连接蛋白37)(SEQ IDNO：6)

5′CTC AGA TAG TGG CCA GAA TGC 3′(连接蛋白30)(SEQID NO：7)

5′TTG TCC AGG TGA CTC CAA GG 3′(连接蛋白30)(SEQ IDNO：8)

5′AGA GGC GCA CGT GAG ACA C 3′(连接蛋白31.1)(SEQ IDNO：10)

5′TGA AGA CAA TGA AGA TGT T 3′(连接蛋白31.1)(SEQ IDNO：11)

优选局部给予反义多核苷酸(在待治疗部位和/或在待治疗部位周围)。适当地，使反义多核苷酸与药用载体、媒介物或稀释剂组合以提供药物组合物。

适合的药用载体或媒介物包括常用于局部给予的那些中的任意一种。局部制剂可以为，例如，乳膏剂、软膏剂、凝胶剂、乳剂、洗剂、喷雾剂、泡沫或涂剂的形式。本发明的制剂还可以浸渍敷料的形式存在。

优选地，药用载体或媒介物是凝胶，适当地为非离子型聚氧化乙烯-聚氧化丙烯共聚物凝胶，例如，Pluronic凝胶，优选Pluronic F-127(BASF Corp.)。该凝胶在低温下可以作为液体使用，但在生理温度下快速凝结，其可以有助于将抗连接蛋白寡核苷酸成分的释放限制于施加部位或紧靠该部位。其中抗连接蛋白寡核苷酸随时间被释放的缓释凝胶剂优选用于局部施加。因此，可以配制药物组合物以提供抗连接蛋白多核苷酸例如反义多核苷酸的持续释放。优选的抗连接蛋白多核苷酸和连接蛋白反义多核苷酸是抗连接蛋白43多核苷酸和连接蛋白43反义多核苷酸。

在另一个方面，本发明包括用于将治疗有效量的一种或多种药用连接蛋白反义多核苷酸给予受治疗者的方法，其中一种或多种药用连接蛋白反义多核苷酸配制在延迟释放配制物、缓释配制物、延长释放配制物、控释配制物、和/或重复作用配制物中，并且其中受治疗者患有全部或部分特征在于延迟或不完全伤口愈合的伤口、或不以预期速率愈合的其他伤口。这样的制剂特别有利于不以预期速率愈合的伤口，如慢性伤口。

在某些其他方面，本发明还涉及应用这样的组合物来治疗受治疗者的方法，其中受治疗者患有与不以预期速率愈合的伤口如延迟愈合伤口、不完全愈合伤口、或慢性伤口有关的各种疾病、障碍和病症。在又一方面，本发明包括用于治疗受治疗者的方法，其中受治疗者患有或怀疑患有全部或部分特征在于慢性伤口或延迟或不完全伤口愈合、或不以预期速率愈合的其他伤口的任何疾病、障碍和/或病症。这样的组合物包括，例如，局部递送形式和制剂。优选的抗连接蛋白多核苷酸和连接蛋白反义多核苷酸是抗连接蛋白43多核苷酸和连接蛋白43反义多核苷酸。

在另一方面，本发明包括透皮贴剂、敷料、垫(或护垫，pads)、包裹物、基质以及绷带，其能够附着于或以其他方式结合于受治疗者的皮肤，并且所述制品能够递送治疗有效量的一种或多种药用抗连接蛋白多核苷酸，例如，连接蛋白反义多核苷酸。

本发明包括包含治疗有效量的一种或多种药用抗连接蛋白多核苷酸例如连接蛋白反义多核苷酸的装置，例如，封装药物贮器(reservoir)的速率控制膜和整体基质装置(monolithic matrixdevice)。这些装置可以用于治疗需要其的受治疗者，如本文所披露的。适当地，提供伤口敷料或基质，其包括固体基质(或基层，substrate)的形式，其中抗连接蛋白多核苷酸，例如，连接蛋白反义多核苷酸，分散在固体基质上或固体基质中。在一种实施方式中，与伤口敷料或伤口愈合促进基质组合提供了本发明的药物产品。优选的抗连接蛋白多核苷酸和连接蛋白反义多核苷酸是抗连接蛋白43多核苷酸和连接蛋白43反义多核苷酸。

在另一个方面，本发明提供了一种在具有延迟愈合伤口或慢性伤口的患者中促进伤口愈合的方法，该方法包括以下步骤：将如本文所定义的制剂以在所述伤口部位和紧邻所述伤口部位可有效地负调节(或下调)连接蛋白表达的量给予所述伤口。重复施加(或应用，applications)包括在本发明内。连接蛋白43的负调节是优选的。

本发明的一个方面涉及一种治疗具有延迟愈合或慢性伤口、或不以预期速率愈合的其他伤口的受治疗者的方法，该方法包括给予有效量的抗连接蛋白多核苷酸，例如，抗连接蛋白多核苷酸。适合的抗连接蛋白多核苷酸可以选自由连接蛋白反义多核苷酸(例如，结合于连接蛋白mRNA的DNA反义多核苷酸)、RNAi多核苷酸、以及siRNA多核苷酸构成的组。优选的抗连接蛋白多核苷酸可以阻止或抑制连接蛋白43的表达。重复施加包括在本发明内。

在一个方面，本发明提供了一种对具有延迟或不完全愈合伤口或慢性伤口、或不以预期速率愈合的其他伤口的受治疗者进行治疗的方法，该方法包括将有效量的连接蛋白43反义多核苷酸持续给予伤口。适宜地，给予或递送反义多核苷酸至少约0.5小时、约1-2小时、约2-4小时、约4-6小时、或约6-8小时，但可以给予更长时间，例如，长达24小时，或更长时间。1-2小时、2-3小时、以及4-8小时施加或递送目前是优选的。根据一种实施方式，受治疗者是糖尿病患者。在其他实施方式中，患者(病人)患有糖尿病性溃疡、糖尿病性足溃疡、血管炎性溃疡、静脉性溃疡、静脉淤滞性溃疡(venous stasis ulcer)、动脉性溃疡、压力(或压迫)性溃疡、褥疮性溃疡、感染性溃疡、创伤引发性溃疡、烧伤性溃疡、与坏疽性脓皮病有关的溃疡、或混合性溃疡或多种溃疡。重复施加包括在本发明内。优选的是重复施加直到看到伤口闭合正进行，接着在伤口愈合再次变得停顿或延迟的情况下重复施加一次(或施加多次)。

根据一个可替换的方面，本发明提供了一种对具有延迟或不完全愈合伤口或慢性伤口、或不以预期速率愈合的其他伤口的受治疗者进行治疗的方法，该方法包括将连接蛋白43反义多核苷酸持续给予伤口(或伤口区域内或周围的区域)，从而在一段持续时间内负调节(下调)连接蛋白43的表达。适宜地，连接蛋白43表达被负调节至少约0.5小时、约1-2小时、约2-4小时、约4-6小时、或约6-8小时，但可以给予更长时间，例如，长达24小时，或更长时间。0.5小时、1-2小时、以及4-8小时持续给予目前是优选的。适合的受治疗者包括糖尿病受治疗者。在其他实施方式中，患者患有糖尿病性溃疡、糖尿病性足溃疡、血管炎性溃疡、静脉性溃疡、静脉淤滞性溃疡、动脉性溃疡、压力(或压迫)性溃疡、褥疮性溃疡、感染性溃疡、创伤引发性溃疡、烧伤性溃疡、与坏疽性脓皮病有关的溃疡、或混合性溃疡或多种溃疡。重复施加包括在本发明内。优选的是重复施加直至看到伤口闭合正进行，接着在伤口愈合再次变得停顿或延迟的情况下重复施加一次(或施加多次)。

根据另一方面，提供了将可在一段持续时间内有效负调节连接蛋白43表达的量的连接蛋白43反义多核苷酸持续给予伤口。另外根据该方面，可以促进不以预期速率愈合的伤口包括延迟愈合伤口、受损愈合伤口、以及慢性伤口的伤口愈合。在一种实施方式中，伤口是糖尿病性溃疡、糖尿病性足溃疡、血管炎性溃疡、静脉性溃疡、静脉淤滞性溃疡、动脉性溃疡、压力(压迫)性溃疡、褥疮性溃疡、感染性溃疡、创伤引发性溃疡、烧伤性溃疡、与坏疽性脓皮病有关的溃疡、或混合性溃疡或多种溃疡。重复施加包括在本发明内。优选的是重复施加直至看到伤口闭合正进行，接着在伤口愈合再次变得停顿或延迟的情况下重复施加一次(或施加多次)。

根据本发明的其他方面，可以促进伤口再上皮化(再上皮形成，re-epithelialization)和/或肉芽组织的形成。

在另外的方面，本发明提供了一种在具有不以预期速率愈合的伤口(包括延迟愈合伤口或不完全愈合伤口或慢性伤口)的受治疗者中促进伤口愈合的方法，该方法包括持续给予连接蛋白43反义多核苷酸和连接蛋白31.1反义多核苷酸。重复施加包括在本发明内。

本发明的一个可替换方面涉及一种促进皮肤伤口的再上皮化的方法，该方法包括将可有效促进再上皮化的量的抗连接蛋白多核苷酸，例如，抗连接蛋白多核苷酸给予患有不以预期速率愈合的伤口(包括，例如，延迟愈合或不完全愈合伤口或慢性伤口)的受治疗者。抗连接蛋白多核苷酸可以靶向选自连接蛋白26、连接蛋白30、连接蛋白31.1以及连接蛋白43的连接蛋白。适合的多核苷酸可以选自修饰或未修饰的主链连接蛋白反义多核苷酸(例如，结合于连接蛋白mRNA的DNA反义多核苷酸)、RNAi多核苷酸以及siRNA多核苷酸。重复施加包括在本发明内。连接蛋白43目前是优选的靶标。

在另外的方面，本发明提供了一种在具有不以预期速率愈合的伤口(包括，例如，延迟愈合伤口或不完全愈合伤口或慢性伤口)的受治疗者中促进伤口愈合的方法，该方法包括持续给予可有效调节上皮基底细胞分裂和生长的抗连接蛋白多核苷酸，例如，连接蛋白反义多核苷酸；以及可有效调节外层角蛋白分泌的抗连接蛋白多核苷酸，例如，连接蛋白反义多核苷酸。在一种实施方式中，可有效调节上皮基底细胞分裂或生长的抗连接蛋白多核苷酸，例如，连接蛋白反义多核苷酸是连接蛋白26反义多核苷酸或连接蛋白43反义多核苷酸或它们的混合物。根据一种可替换的实施方式，被给予以调节外层角质化的抗连接蛋白多核苷酸(例如，连接蛋白反义多核苷酸)是连接蛋白31.1反义多核苷酸。重复施加包括在本发明内。

在另一种实施方式中，慢性伤口是慢性皮肤伤口并且将抗连接蛋白多核苷酸给予所述受治疗者的皮肤或与皮肤有关的组织有效的一段时间。适合于治疗的慢性皮肤伤口可以，例如，选自压力(压迫)性溃疡、褥疮性溃疡、糖尿病性溃疡、糖尿病性足溃疡、静脉性溃疡、静脉淤滞性溃疡、动脉性溃疡、血管炎性溃疡、感染性溃疡、创伤引发性溃疡、烧伤性溃疡、与坏疽性脓皮病有关的溃疡、以及混合性溃疡构成的组。慢性伤口可以是动脉性溃疡，其包括由完全或部分动脉阻塞引起的溃疡。慢性伤口可以是静脉性溃疡或静脉淤滞性溃疡，其包括由静脉瓣功能障碍以及关联的血管疾病引起的溃疡。慢性伤口可以是创伤引发性溃疡。重复施加包括在本发明内。

根据另一个方面，本发明提供了一种在具有不以预期速率愈合的伤口(包括延迟愈合伤口、不完全愈合伤口、以及慢性伤口)的受治疗者中提高伤口愈合或闭合速率的方法，该方法包括给予受治疗者有效量的抗连接蛋白多核苷酸。适合的多核苷酸选自连接蛋白反义多核苷酸(例如，结合于连接蛋白mRNA的DNA反义多核苷酸)、RNA多核苷酸以及siRNA多核苷酸。适合的连接蛋白反义多核苷酸是连接蛋白43多核苷酸。特别适合的多核苷酸具有约18至约32个核苷酸。重复施加包括在本发明内。一种目前优选的寡核苷酸是SEQ.ID.NO：1。

本发明包括在药物或剂型制备中使用治疗有效量的一种或多种药用抗连接蛋白多核苷酸(包括连接蛋白反义多核苷酸)的方法。这样的药物、制剂和剂型包括，例如，局部递送形式和制剂。这样的药物包括那些用于治疗如本文所披露的受治疗者的药物。优选的抗连接蛋白多核苷酸和连接蛋白反义多核苷酸是抗连接蛋白43多核苷酸和连接蛋白43反义多核苷酸。优选地，药物、制剂或剂型是泡沫、乳膏剂、喷雾剂或凝胶剂。

在另一个方面，本发明包括一种制品(article ofmanufacture)，该制品包括容器，其包含治疗有效量的一种或多种药用抗连接蛋白多核苷酸，例如，连接蛋白反义多核苷酸，以及使用说明书。这样的说明书可以包括关于用于治疗患有慢性伤口或特征在于延迟愈合的伤口的受治疗者的说明书。说明书可以包括针对不以预期速率愈合的伤口(如延迟愈合伤口、不完全愈合伤口以及慢性伤口)的使用说明书。优选的抗连接蛋白多核苷酸和连接蛋白反义多核苷酸是抗连接蛋白43多核苷酸和连接蛋白43反义多核苷酸。

本发明包括一种制品，该制品包括包装材料，其包含一种或多种剂型，该剂型包含一种或多种药用抗连接蛋白多核苷酸，例如，连接蛋白反义多核苷酸，其中包装材料具有标签，其说明该剂型可以用于这样的受治疗者，其患有或怀疑患有或易患本文描述或提及的任何疾病、障碍和/或病症，包括全部或部分特征在于受损或延迟伤口愈合或慢性伤口、或不以预期速率愈合的其他伤口的疾病、障碍和/或病症。这样的剂型包括，例如，局部递送形式和剂型制剂。优选的抗连接蛋白多核苷酸和连接蛋白反义多核苷酸是抗连接蛋白43多核苷酸和连接蛋白43反义多核苷酸。

在某个其他方面，本发明提供了一种包装，该包装包括抗连接蛋白多核苷酸，例如，连接蛋白反义多核苷酸，以及用于促进(例如，减少愈合时间、使伤口结果更好)延迟或不完全愈合伤口或慢性伤口的伤口愈合的使用说明书。

在本发明的所有方面，抗连接蛋白多核苷酸优选是抗连接蛋白43多核苷酸，连接蛋白反义多核苷酸优选是连接蛋白43反义多核苷酸，并且连接蛋白反义寡脱氧核苷酸优选是连接蛋白43寡脱氧核苷酸。

以下提供了本发明的这些和其他方面，其并不限于在本发明内容中的信息或受本发明内容中的信息所限制。

附图说明

图1A至图1D示出了在真皮成纤维细胞、毛囊、血管以及附属物(appendage)中的连接蛋白免疫染色。图1A示出了在诱导糖尿病后两周，在正常(空心柱)和糖尿病性皮肤(实心柱)表皮和真皮中连接蛋白43的染色以及表皮中连接蛋白26的染色。图1B示出了在STZ诱导糖尿病以后8周对连接蛋白表达的影响。图1C示出了在8周在对照(C)和糖尿病患者(D)中的连接蛋白免疫染色，其中箭头表示表皮和真皮之间的边界。图1D示出了在非糖尿病性(空心柱)和糖尿病性(实心柱)表皮和真皮中在5分钟内间隙连接持久染料通过组织的染料转移的距离的定量。

图2A至图2D示出了通过在受伤后测量连接蛋白染色所获得的再上皮化率以及连接蛋白43和连接蛋白26蛋白水平的反应。图2A示出了其中量化了在角质细胞中的连接蛋白染色的区域：伤口边缘(WE)、离开500μm的邻近区(AD)以及前沿(leading edge，LE)。在受伤后一天和两天，对在WE和AD处的连接蛋白染色进行量化。在5天后，对LE角质细胞进行成像。图2B示出了在对照(C)和糖尿病性(D)皮肤中在受伤后的第1、2以及5天的再上皮化率。图2C示出了在对照(空心柱)和糖尿病性(实心柱)动物中，在受伤后的第1、2以及5天，在WE、AD以及LE中的连接蛋白43染色。图2D示出了在对照(空心柱)和糖尿病性(实心柱)动物中，在受伤后的第1、2以及5天，在WE、AD以及LE区中的连接蛋白26染色。

图3a至图3f以及图3a’至图3f’示出了在对照和糖尿病动物中，在受伤后第1、2以及5天的连接蛋白染色。图3a、图3c和图3e(对照)以及图3a’、图3c’和3e’(糖尿病患者)示出了受伤后第1天(图3a和图3a’)、第2天(图3c和图3c’)以及第5天(图3e和图3e’)的连接蛋白43染色。图3b、图3d和图3f(对照)以及图3b’、3d’和图3f’(糖尿病患者)示出了在受伤后的第1天(图3b和图3b’)、第2天(图3d和图3d’)以及第5天(图3f和图3f’)的连接蛋白26染色。

图4A至图4C示出了施加连接蛋白43反义寡脱氧核苷酸组合物对连接蛋白43表达和伤口愈合的影响。图4A(正义对照)和图4B(连接蛋白43反义)示出了在糖尿病性WE角质细胞中连接蛋白43的表达。图4C示出了在对照(C)和糖尿病性(D)伤口中，在受伤后的第1、2以及5天的再上皮化百分比，其中用正义(“s”)和连接蛋白43反义(“as”)多核苷酸加以治疗。

具体实施方式

不以预期速率愈合的伤口(包括慢愈合伤口、延迟愈合伤口、不完全愈合伤口、裂开伤口、以及慢性伤口)经常导致感染并可能导致截肢或死亡。通过间隙连接的细胞间通信在伤口愈合中起关键作用。已发现，使用某些化合物(其包括本文中所描述或提及的那些化合物)可以阻断、抑制、或改变细胞通信，其促进不以预期速率愈合的伤口(包括慢愈合伤口、延迟愈合伤口、不完全愈合伤口、裂开伤口、以及慢性伤口)的闭合和愈合。对于所有应用，连接蛋白43间隙连接调节剂是优选的。

定义

如在本文中所使用的，“障碍”是任何将受益于促进伤口愈合和/或减少瘢痕形成的药剂(agent)的障碍、疾病、或病症。例如，包括与神经病、缺血病、以及微血管病病理学有关的伤口相关性异常；对骨区域[尾骨(骶骨)、髋关节(转子的)、臀(坐骨的)、或足跟]的压力(压迫)；再灌注损伤；以及与瓣膜反流病因和相关病症有关的病症。

如在本文中所使用的，“受治疗者”是指任何哺乳动物，包括人类、家养和农场动物(或家畜)、以及动物园动物、体育动物、或宠物，如狗、马、猫、羊、猪、牛等。本文中优选的哺乳动物是人，包括成人、儿童、以及老人。

如在本文中所使用的，“预防”是指预防(全部或部分地)、或改善或控制。

如在本文中所使用的，关于本发明的化合物或组合物的“治疗有效量”是指足以诱导所期望的生物、药物、或治疗结果的量。所述结果可以是疾病或障碍或病症的征兆、症状、或原因的减轻，或生物系统的任何其他期望的改变。在本发明中，结果将涉及伤口愈合，包括伤口愈合率和伤口的闭合(全部或部分)的促进和/或改善。其他益处包括肿胀、炎症和/或瘢痕形成的全部或部分减小。

如在本文中所使用的，术语“治疗”是指治疗性治疗和预防性(prophylactic orpreventative)措施。

如在本文中所使用的，“同时”用来指同时给予一种或多种抗连接蛋白多核苷酸，例如，反义多核苷酸，而术语“组合(incombination)”用来指在一段时间范围内“顺序地”给予它们(如果不是同时或以物理组合方式)，使得它们均可有效发挥治疗作用。因此，“顺序地”给予可以允许在给予其他制剂以后在数分钟(例如，1、2、3、4、5、10、15、20、25、30分钟)或大约数小时、数天、数周或数月内给予一种药剂(agent)，只要一种或多种抗连接蛋白多核苷酸同时以有效量存在。给予成分之间的时间延迟将根据成分的确切性质、成分之间的相互作用、以及它们相应的半衰期而变化。

如在本文中所使用的，“抗连接蛋白多核苷酸”减少或抑制连接蛋白mRNA和/或蛋白质的表达。抗连接蛋白多核苷酸包括但不限于反义化合物如反义多核苷酸、其他多核苷酸(如具有siRNA或核酶功能的多核苷酸)。抗连接蛋白多核苷酸的适合实例包括连接蛋白的反义多核苷酸。因此，适合的抗连接蛋白多核苷酸包括，例如，反义多核苷酸(例如，连接蛋白43反义多核苷酸)，其在所选组织、细胞、以及受治疗者中调节连接蛋白和间隙连接的表达或活性。

术语“伤口敷料”是指用于局部施加到伤口的敷料并且排除适合于系统给予的组合物。例如，可以将一种或多种抗连接蛋白多核苷酸(如连接蛋白反义多核苷酸)分散在伤口接触材料如编织或非编织纺织材料的固体片材之中或之上，或分散在泡沫如聚氨酯泡沫层中，或分散在水凝胶如聚氨酯水凝胶、聚丙烯酸酯水凝胶、明胶、羧甲基纤维素、果胶、藻酸盐、和/或透明质酸水凝胶中，例如分散在凝胶或软膏中。在某些实施方式中，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸被分散在生物可降解的片材(其提供活性组分持续释放到伤口中)之中或之上，例如冻干胶原、冻干胶原/藻酸盐混合物(可获自Johnson & Johnson MedicalLimited，注册商标为FIBRACOL)或冻干胶原/氧化再生纤维素(可获自Johnson & JohnsonMedicalLimited，注册商标为PROMOGRAN)片材。

如在本文中所使用的，“伤口促进基质”包括例如，合成或天然存在的基质如胶原、非细胞基质、交联生物支架分子、基于组织的生物工程结构框架、生物制备的生物假体、以及其他植入结构如例如，适合于细胞浸润和增殖的血管移植物，其可用于促进伤口愈合。另外适合的生物基质材料可以包括化学修饰的胶原组织以降低抗原性和免疫原性。其他适合的实例包括用于伤口敷料的胶原片材、无抗原或抗原减少的非细胞基质(Wilson G J etal.(1990)TransAm Soc Artif Intern 36：340-343)或其他生物基质，其已被设计成降低对异种移植材料的抗原反应。可用于促进伤口愈合的其他基质可以包括例如，经加工的牛心包蛋白，其包括不溶性胶原和弹性蛋白(Courtman DW et al.(1994)J Biomed MaterRes 28：655-666)和其他非细胞组织，其可以用于为宿主细胞迁移提供自然微环境以加速组织再生(Malone J M et al.(1984)J Vasc Surg 1：181-91)。本发明设想合成或天然基质，其包含本文所描述的一种或多种抗连接蛋白多肽，包括抗连接蛋白43多肽。连接蛋白43反义寡脱氧核苷酸是优选的。

如在本文中所使用的，术语“伤口”包括对任何组织的损伤，其包括例如，延迟或难以愈合伤口、以及慢性伤口。伤口的实例可以包括开放性和闭合性伤口。术语“伤口”还可以包括例如对皮肤和皮下组织的损伤，其是以不同方式引发的(例如，起因于长期卧床休息的褥疮以及由创伤引起的伤口)并具有不同特性。取决于伤口的深度，伤口可归类于四个等级之一：i)等级I(I级)伤口，限于上皮；ii)等级II伤口，延伸到真皮；iii)等级III伤口，延伸到皮下组织；以及iv)等级IV(或全厚度伤口，full-thickness wounds)伤口，其中骨头外露(例如，骨压点如更大转子或骶骨)。

术语“部分厚度伤口”是指包括等级I-III的伤口。部分厚度伤口的实例包括褥疮、静脉淤滞性溃疡、以及糖尿病性溃疡。本发明设想治疗不以预期速率愈合类型的所有伤口，其包括延迟愈合伤口、不完全愈合伤口、以及慢性伤口。

“不以预期速率愈合的伤口”是指对任何组织的损伤，其包括延迟或难以愈合伤口(包括延迟或不完全愈合伤口)、以及慢性伤口。不以预期速率愈合的伤口的实例包括溃疡，如糖尿病性溃疡、糖尿病性足溃疡、血管炎性溃疡(脉管炎性溃疡，vascultic ulcers)、动脉性溃疡、静脉性溃疡、静脉淤滞性溃疡、压力性溃疡、褥疮性溃疡、感染性溃疡、创伤引发性溃疡、烧伤性溃疡、与坏疽性脓皮病有关的溃疡、以及混合性溃疡。不以预期速率愈合的其他伤口包括裂开伤口。

如在本文中所使用的，延迟或难以愈合伤口可以包括，例如，这样的伤口，其至少部分特征在于：1)长期炎症阶段，2)缓慢形成细胞外基质，和/或3)降低的上皮形成或闭合率。

术语“慢性伤口”通常是指没有愈合的伤口。在三个月内还未愈合的伤口例如被认为是慢性的。慢性伤口包括静脉性溃疡、静脉淤滞性溃疡、动脉性溃疡、压力性溃疡、糖尿病性溃疡、糖尿病性足溃疡、血管炎性溃疡、褥疮性溃疡、烧伤性溃疡、创伤引发性溃疡、感染性溃疡、混合性溃疡、以及坏疽性脓皮病。慢性伤口可以是动脉性溃疡，其包括起因于完全或部分动脉阻塞的溃疡。慢性伤口可以是静脉性或静脉淤滞性溃疡，其包括起因于静脉瓣功能障碍和有关血管疾病的溃疡。在某些实施方式中，提供了一种治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于以下压力性溃疡的AHCPR阶段中的一个或多个：阶段1、阶段2、阶段3、和/或阶段4。

如在本文中所使用的，慢性伤口可以指，例如，这样的伤口，其特征至少部分在于以下中的一种或多种：(1)伤口炎症的慢性自保持(或自身延续，self-perpetuating)状态，(2)不足和缺陷的伤口细胞外基质，(3)不良反应(衰老)的伤口细胞，尤其是成纤维细胞，其限制细胞外基质产生，和/或(4)再上皮化的失败，部分起因于缺乏必要的细胞外基质编排(matrixorchestration)和缺乏用于迁移的支架。慢性伤口的特征还在于：1)长期的炎症和蛋白水解活性，其导致溃疡性病变，包括例如，糖尿病性、压力性(褥疮性)、静脉性、以及动脉性溃疡；2)基质在受影响区域中的逐步沉积，3)更长的修复时间，4)更小伤口收缩，5)更慢的再上皮化，以及6)增加的肉芽组织厚度。

示例性的慢性伤口可以包括“压力性(压迫性)溃疡”。基于AHCPR(卫生保健政策与研究署(Agency for Health Care Policy andResearch)，美国卫生与公众服务部(U.S.Department of Health andHuman Services))准则，示例性的压力性溃疡可分为4个阶段。阶段I压力性溃疡是完好皮肤的明显的压力相关改变，与身体上的相邻或相对区域相比，其指标可以包括以下一种或多种的变化：皮肤温度(温暖或凉爽)、组织坚稠度(坚实或软而湿的感觉)和/或感觉(疼痛、瘙痒)。溃疡在浅色素皮肤中显示为持续发红的限定区域，而在较深的肤色中溃疡可以显示为持久的红色、蓝色、或紫色色调。阶段1溃疡可以包括完好皮肤的不可褪色的红斑和皮肤溃疡的前驱病变。在具有较深肤色的个体中，皮肤变色、温暖、水肿、硬化、或硬度也可以是阶段1溃疡的指标。阶段2溃疡的特点可以是部分厚度皮肤损失，其涉及表皮、真皮、或两者。该溃疡是表面的并且临床表现为擦伤、水疱、或浅口(或浅凹陷)。阶段3溃疡的特点可以是全厚度皮肤损失，其涉及皮下组织的损伤或坏死，其可以向下延伸到、但不穿过基本筋膜。该溃疡临床上表现为存在或不存在相邻组织破坏的深口(或深凹陷)。阶段4溃疡的特点可以是全厚度皮肤损失，其具有广泛的破坏、组织坏死、或对肌肉、骨骼、或支撑结构(例如，腱、关节囊)的损伤。在某些实施方式中，提供了一种治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于压力性溃疡的以下AHCPR阶段中的一个或多个：阶段1、阶段2、阶段3、和/或阶段4。

示例性的慢性伤口还可以包括“褥疮性溃疡”。示例性的褥疮性溃疡可以由对骨隆起(bony prominence)的长期和未缓解压力(其导致缺血)所引起。该伤口倾向于在不能改变本身的位置以卸下重量的患者中发生，如瘫痪、无意识或严重残疾的人。如由美国卫生与公众服务部(U.S.Department of Health and Human Services)所定义的，主要预防措施包括高危患者的确定；经常评估；以及预防措施如定期改变位置、适当的减压寝具、防湿层、以及适当的营养状况。治疗选项可以包括例如，减压、手术和酶促清创、潮湿伤口护理、以及细菌负荷的控制。在某些实施方式中，提供了一种治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于褥疮性溃疡或溃疡形成，其来自对骨隆起的长期、未缓解的压力(其导致缺血)。

慢性伤口还可以包括“动脉性溃疡”。慢性动脉性溃疡通常应理解为伴随动脉硬化和高血压心血管疾病的溃疡。它们是疼痛的、尖锐边缘的(sharply marginated)，并且经常存在于侧下肢和脚趾。动脉性溃疡的特点可以是完全或部分动脉阻塞，其可以导致组织坏死和/或溃疡。动脉性溃疡的征兆可以包括，例如，四肢无脉；疼痛的溃疡；小、点状溃疡，其通常被很好地限定范围；凉或冷皮肤；延迟的毛细管返回时间(快速挤压脚趾末端并释放，正常的颜色应在约3秒或更短时间内返回到脚趾)；萎缩外观皮肤(例如，发亮、薄、干)；以及手指和足毛发的损失。在某些实施方式中，提供了一种治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特点是由完全或部分动脉阻塞引起的动脉性溃疡或溃疡形成。

示例性的慢性伤口可以包括“静脉性溃疡”。示例性的静脉性溃疡是最常见类型的影响下肢的溃疡并且其特征可以在于静脉瓣功能障碍。正常静脉具有防止血液回流的瓣膜。当这些瓣膜能力丧失时，静脉血的回流引起静脉充血。来自红细胞的血红蛋白逃逸并渗漏到血管外腔隙中，引起通常注意到的褐色变色。已表明，静脉性溃疡周围的皮肤的经皮氧压力被降低，这提示存在阻碍该区域正常血管分布的力。淋巴引流和流动也在这些溃疡中起作用。静脉性溃疡可以出现在内踝附近并且通常与水肿和硬结性下肢结合出现；它可以较浅、不太疼并且可以呈现为从受影响部位的漏液排出。在某些实施方式中，提供了一种治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于由静脉瓣功能障碍和有关血管疾病引起的静脉性溃疡或溃疡形成。在某些实施方式中，提供了一种治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于由完全或部分动脉阻塞引起的动脉性溃疡或溃疡形成。

示例性的慢性伤口可以包括“静脉淤滞性溃疡”。淤滞性溃疡是与静脉功能不全有关的病变，并且更通常存在于内踝上，通常具有压凹性水肿、静脉曲张、斑点状色素沉着、红斑、以及不可触及的瘀点和紫癜。淤滞性皮炎和溃疡通常是搔痒而不是疼痛的。示例性的静脉淤滞性溃疡的特点可以是下肢的慢性被动性静脉充血，其导致局部缺氧。这些伤口的一种可能的发病机制包括阻碍氧穿过厚血管周围纤维蛋白套囊扩散到组织中。另一种机制是，渗漏到血管周围组织中的大分子捕获为保持皮肤完整性所需要的生长因子。另外，由于静脉充血，较大白细胞的流动会减慢，从而阻断毛细血管，成为激活状态，并损伤血管内皮，从而倾向于溃疡形成。在某些实施方式中，提供了一种治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于由静脉瓣功能障碍和相关血管疾病引起的静脉性溃疡或溃疡形成。在某些实施方式中，提供了一种治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于由下肢的慢性被动性静脉充血和/或形成的局部缺氧引起的静脉淤滞性溃疡或溃疡形成。

示例性的慢性伤口可以包括“糖尿病性溃疡”。糖尿病患者易患溃疡，包括足部溃疡，这起因于神经和血管并发症。周围神经病变可以引起脚和/或腿部改变的或完全丧失的感觉。患有晚期神经病变的糖尿病患者减弱所有敏捷-迟钝辨别的能力。在神经病变患者中对足部的任何创口或创伤可能会完全被忽视数天或数周。并不少见的是，当事实上溃疡已存在相当长的一段时间时，神经病变患者才注意到溃疡“刚刚出现”。对于神经病变患者，已表明严格的血糖控制可以减慢该疾病的进展。由于降低感觉，夏尔科(Charcot)足部畸形还可以发生。在其足部具有“正常”感觉的人具有自动感觉何时太大的压力正施加于足部区域的能力。一旦确定，我们的身体本能地移动位置以释放该应力。患有晚期神经病变的患者会减弱这种感觉持续的压力损害的能力，因而，可以发生组织缺血和坏死，导致例如足底溃疡。另外，在足骨中的微小骨折，如果未注意且未治疗，可以导致外形损伤、慢性肿胀以及另外的骨隆起。微血管疾病是糖尿病患者的重大并发症之一，其还可以导致溃疡形成。在某些实施方式中，提供了一种治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于由糖尿病的神经和血管并发症引起的糖尿病性足溃疡和/或溃疡形成。

示例性的慢性伤口可以包括“创伤性溃疡”。创伤性溃疡的形成可以起因于对身体的创伤性损伤。这些损伤包括，例如，对动脉、静脉或淋巴系统的损害；对骨骼的骨结构的改变；组织层表皮、真皮、皮下软组织、肌肉或骨的损失；对身体部位或器官的损害以及身体部位或器官的损失。在某些实施方式中，提供了一种治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于与对身体的创伤性损伤有关的溃疡形成。

示例性的慢性伤口可以包括“烧伤性溃疡”，其包括I度烧伤(即，皮肤的表面的、变红区域)；II度烧伤(水疱损伤部位，在已除去水疱液以后，其可以自发治愈)；III度烧伤(贯穿整个皮肤的烧伤并且通常需要外科干预用于伤口愈合)；烫伤(可以起因于滚烫的热水、油脂或散热器液)；热烧伤(可以起因于火焰，通常是深度烧伤)；化学烧伤(可以起因于酸和碱，通常是深度烧伤)；电烧伤(房屋周围的低电压或工作中的高压)；爆炸焰(通常是表面损伤)；以及接触烧伤(通常是深度烧伤并且可以起因于消声器尾管(muffler tail pipes)、热熨斗以及炉灶)。在某些实施方式中，提供了一种治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于与对身体的烧伤性损伤有关的溃疡形成。

示例性的慢性伤口可以包括“血管炎性溃疡”。血管炎性溃疡还发生在下肢上并且是疼痛的、尖锐边缘的病变，其可以具有有关的可触知的紫癜以及出血性大疱。胶原疾病、败血症、以及各种血液疾病(例如，血小板减少症、异常蛋白血症)可以是这种严重的、急性病症的原因。

示例性的慢性伤口可以包括坏疽性脓皮病。坏疽性脓皮病以小腿的单个或多个非常未成熟溃疡的形式存在。深红色至紫色的破坏边界围绕化脓性中央缺损。活组织检查通常不能揭示血管炎。在一半患者中，它伴随全身性疾病如溃疡性结肠炎、节段性回肠炎、或白血病。在某些实施方式中，提供了一种治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于与坏疽性脓皮病有关的溃疡形成。

示例性的慢性伤口可以包括感染性溃疡。感染性溃疡在直接接种各种生物体后发生并且可以伴随重要的区域腺病。实例是分枝杆菌感染、炭疽病、白喉症、皮炎芽生菌病(blastomyosis)、孢子丝菌病、兔热病、以及猫抓热。一期梅毒的生殖器溃疡通常为非触痛性的并具有清洁的、坚实的基础。软下疳和腹股沟肉芽肿的那些生殖器溃疡倾向于是粗糙的、肮脏的、以及更加过度(extravagant)的病变。在某些实施方式中，提供了一种治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于与感染有关的溃疡形成。

如在本文中所使用的，术语“裂开伤口”是指具有破裂或裂开的开口的伤口，通常是手术伤口。在某些实施方式中，提供了一种治疗不以预期速率愈合的伤口的方法，其中伤口的特征在于裂开。

抗连接蛋白多核苷酸

抗连接蛋白多核苷酸包括连接蛋白反义多核苷酸以及具有功能性可使它们能够负调节连接蛋白表达(例如，通过负调节mRNA转录或翻译)的多核苷酸。在负调节的情况下，通过在连接蛋白表达被负调节的部位的间隙连接，这将具有减少直接的细胞间通信的效果。

适合的抗连接蛋白多核苷酸包括RNAi多核苷酸和siRNA多核苷酸。

反义多核苷酸和其他抗连接蛋白多核苷酸如RNAi、siRNA、以及核酶多核苷酸以及具有修饰和混合主链的多核苷酸的合成，是本领域技术人员已知的。参见例如，SteinC.A.and Krieg A.M.(eds)，Applied Antisense Oligonucleotide Technology，1998(Wiley-Liss)。

根据一个方面，连接蛋白表达的负调节可以通常基于利用反义多核苷酸(如DNA或RNA多核苷酸)的反义方法，并且更特别地基于使用反义寡脱氧核苷酸(ODN)。这些多核苷酸(例如，ODN)靶向待负调节的(一种或多种)连接蛋白。通常多核苷酸是单链的，但可以是双链的。

反义多核苷酸可以抑制连接蛋白的转录和/或翻译。优选地，多核苷酸是来自连接蛋白基因或mRNA的转录和/或翻译的特异性抑制剂，但并不抑制来自其他基因或mRNA的转录和/或翻译。产物可以结合至连接蛋白基因或mRNA，(i)5′至编码序列、和/或(ii)至编码序列，和/或(iii)3′至编码序列。

反义多核苷酸相对于连接蛋白mRNA通常是反义的。这样的多核苷酸可能能够杂交于连接蛋白mRNA并且因此可能抑制连接蛋白的表达，其中通过干扰连接蛋白mRNA代谢的一个或多个方面，其包括转录、mRNA加工、从细胞核的mRNA转运、翻译或mRNA降解。反义多核苷酸通常杂交于连接蛋白mRNA以形成双链体，其可以引起mRNA的翻译和/或去稳定作用的直接抑制。这样的双链体可能易于被核酸酶降解。

反义多核苷酸可以杂交于所有或部分的连接蛋白mRNA。通常反义多核苷酸杂交于连接蛋白mRNA的核糖体结合区或编码区。多核苷酸可以互补于连接蛋白mRNA的全部或一个区域。例如，多核苷酸可以是所有或部分连接蛋白mRNA的精确互补体。然而，并不需要完全互补性，并且具有足够互补性以形成在生理条件下解链温度大于约20℃、30℃或40℃的双链体的多核苷酸特别适用于本发明。

因此多核苷酸通常是互补于mRNA的序列的同源物(或同系物，homologue)。多核苷酸可以是在中等至高度严格的条件如0.03M氯化钠和0.03M柠檬酸钠下、在约50℃至约60℃下杂交于连接蛋白mRNA的多核苷酸。

对于某些方面，适合的多核苷酸的长度通常为约6至40个核苷酸。优选地多核苷酸的长度可以为约12至约35个核苷酸，或可替换地长度为约12至约20个核苷酸，或更优选长度为约18至约32个核苷酸。根据一个可替换方面，多核苷酸的长度可以为至少约40个，例如至少约60个或至少约80个核苷酸以及多达约100个、约200个、约300个、约400个、约500个、约1000个、约2000个或约3000个或更多个核苷酸。

由多核苷酸靶向的一种或多种连接蛋白将取决于要实施负调节的位点。就连接蛋白亚单位组成而论，这反映了整个身体中在不同位点的(一个或多个)间隙连接的非均匀构造(构成)。连接蛋白是在一个方面自然发生在人或动物中或自然发生在其中要降低连接蛋白表达或活性的组织中的连接蛋白。连接蛋白基因(包括编码序列)通常与本文提及的特定连接蛋白中的一个或多个的编码序列具有同源性，如与表2所示的连接蛋白43编码序列的同源性。连接蛋白通常是α或β连接蛋白。优选地，连接蛋白是α连接蛋白并且表达在要治疗的组织中。

然而，就在组织中的分布而论，某些连接蛋白(connexinproteins)比其他连接蛋白更普遍存在。最广泛存在的连接蛋白之一是连接蛋白43。靶向连接蛋白43的多核苷酸特别适用于本发明。在其他方面，靶向其他连接蛋白。

在一个优选的方面，反义多核苷酸仅靶向一种连接蛋白的mRNA。最优选地，这种连接蛋白是连接蛋白43。在另一个方面，连接蛋白是连接蛋白26、30、31.1、32、36、37、40、或45。在其他方面，连接蛋白是连接蛋白30.3、31、40.1、或46.6。

还设想，组合使用靶向单独的连接蛋白的多核苷酸(例如，可以靶向1、2、3、4或更多种不同的连接蛋白)。例如，可以组合使用靶向连接蛋白43、以及连接蛋白家族的一个或更多其他成员(如连接蛋白26、30、30.3、31.1、32、36、37、40、40.1、45、以及46.6)的多核苷酸。

可替换地，反义多核苷酸可以是组合物的一部分，其可以包含靶向多于一种的连接蛋白的多核苷酸。优选地，多核苷酸所导向的连接蛋白之一是连接蛋白43。寡脱氧核苷酸导向的其他连接蛋白可以包括，例如，连接蛋白26、30、30.3、31.1、32、36、37、40、40.1、45、以及46.6。导向各种连接蛋白的适合的示例性多核苷酸(以及ODN)列在表1中。

单独的反义多核苷酸对于特定的连接蛋白可以是特异性的，或可以靶向1、2、3或更多种不同的连接蛋白。特异性多核苷酸将通常靶向连接蛋白基因或mRNA中的序列，其在连接蛋白之间不是保守的，而非特异性多核苷酸将靶向各种连接蛋白的保守序列。

用于本发明的多核苷酸可以适当地是未修饰的磷酸二酯低聚物。这样的寡脱氧核苷酸在长度上可以不同。已发现，一种30聚体多核苷酸是特别适合的。

描述本发明中关于寡脱氧核苷酸的许多方面。然而，应当理解，其他适合的多核苷酸(如RNA多核苷酸)可以用于这些方面。

可以化学修饰反义多核苷酸。这可以增强它们对核酸酶的抗性并且可以增强它们进入细胞的能力。例如，可以使用硫代磷酸寡核苷酸。其他脱氧核苷酸类似物包括甲基膦酸酯、氨基磷酸酯、二硫代磷酸酯、N3′P5′-氨基磷酸酯和寡核糖核苷酸硫代磷酸酯以及它们的2′-O-烷基类似物和2′-O-甲基核糖核苷酸甲基膦酸酯。可替换地，可以使用混合的主链寡核苷酸(“MBO”)。MBO包含硫代磷酸酯寡脱氧核苷酸的节段以及适当位置的修饰寡脱氧核苷酸或寡核糖核苷酸的节段。MBO具有硫代磷酸酯键的节段和其他修饰的寡核苷酸的其他节段，如甲基膦酸酯，其是非离子型的，并且非常耐核酸酶或2′-O-烷基寡核糖核苷酸。制备修饰主链和混合主链寡核苷酸的方法在本领域是已知的。

本发明中使用的反义多核苷酸的精确序列将取决于靶连接蛋白。在一种实施方式中，适合的连接蛋白反义多核苷酸可以包括多核苷酸如寡脱氧核苷酸，其选自以下表1中所列出的序列：

表1

5’GTA ATT GCG GCA AGA AGA ATT GTT TCTGTC 3’	(连接蛋白43)	(SEQ.ID.NO：1)
			5’GTA ATT GCG GCA GGA GGA ATT GTT TCTGTC 3’	(连接蛋白43)	(SEQ.ID.NO：2)
5’GGC AAG AGA CAC CAA AGA CAC TAC CAGCAT 3’	(连接蛋白43)	(SEQ.ID.NO：3)
			5’TCC TGA GCA ATA CCT AAC GAA CAA ATA 3’	(连接蛋白26)	(SEQ.ID.NO：4)
5’CAT CTC CTT GGT GCT CAA CC 3’	(连接蛋白37)	(SEQ.ID.NO：5)
			5’CTG AAG TCG ACT TGG CTT GG 3’	(连接蛋白37)	(SEQ.ID.NO：6)
5’CTC AGA TAG TGG CCA GAA TGC 3’	(连接蛋白30)	(SEQ.ID.NO：7)
			5’TTG TCC AGG TGA CTC CAA GG 3’	(连接蛋白30)	(SEQ.ID.NO：8)
5’CGT CCG AGC CCA GAA AGA TGA GGT C 3’	(连接蛋白31.1)	(SEQ.ID.NO：9)
			5’AGA GGC GCA CGT GAG ACA C 3’	(连接蛋白31.1)	(SEQ.ID.NO：10)
5’TGA AGA CAA TGA AGA TGT T 3’	(连接蛋白31.1)	(SEQ.ID.NO：11)
			5’TTT CTT TTC TAT GTG CTG TTG GTG A 3’	(连接蛋白32)	(SEQ.ID.NO：12)

用于制备本文描述的组合多核苷酸组合物的适合的多核苷酸包括例如，用于连接蛋白43的多核苷酸以及用于连接蛋白26、30、31.1、32以及37的多核苷酸，如在上面表1中所描述的。

虽然在本发明中使用的反义多核苷酸的精确序列将取决于靶连接蛋白，但对于连接蛋白43，已发现具有以下序列的反义多核苷酸是特别适合的：GTA ATT GCG GCA AGA AGAATT GTT TCTGTC(SEQ.ID.NO：1)；GTA ATT GCG GCA GGA GGA ATT GTT TCTGTC(SEQ.ID.NO：2)；以及GGC AAG AGA CAC CAA AGA CACTAC CAG CAT(SEQ.ID.NO：3)。

例如，用于连接蛋白26、31.1以及32的适合的反义多核苷酸具有以下序列：5′TCCTGA GCA ATA CCT AAC GAA CAA ATA(连接蛋白26)(SEQ.ID.NO：4)；5′CGT CCG AGC CCAGAA AGA TGAGGT C(连接蛋白31.1)(SEQ.ID.NO：9)；以及5′TTT CTT TTC TATGTG CTG TTGGTG A(连接蛋白32)(SEQ.ID.NO：12)。

根据本发明的方法有用的其他连接蛋白反义多核苷酸序列包括：

5′CAT CTC CTT GGT GCT CAA CC 3′(连接蛋白37)(SEQ.ID.NO：5)；

5′CTG AAG TCG ACT TGG CTT GG 3′(连接蛋白37)(SEQ.ID.NO：6)；

5′CTC AGA TAG TGG CCA GAA TGC 3′(连接蛋白30)(SEQ.ID.NO：7)；

5′TTG TCC AGG TGA CTC CAA GG 3′(连接蛋白30)(SEQ.ID.NO：8)；

5′AGA GGC GCA CGT GAG ACA C 3′(连接蛋白31.1)(SEQ.ID.NO：10)；以及

5′TGA AGA CAA TGA AGA TGT T 3′(连接蛋白31.1)(SEQ.ID.NO：11)。

就它们的核苷酸序列而论，可以通过任何方便和常规的方式来选择导向连接蛋白的多核苷酸，包括ODN。例如，可以使用计算机程序MacVector和OligoTech(来自Oligos等，尤金，俄勒冈，美国)。在选择以后，可以利用DNA合成仪来合成ODN。

多核苷酸同源物

本文讨论了同源性和同源物(例如，多核苷酸可以是连接蛋白mRNA中序列的互补体的同源物)。这样的多核苷酸与相关序列通常具有至少约70％的同源性、优选至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％的同源性，例如在至少约15、至少约20、至少约40、至少约100个更多(同源序列的)连续核苷酸的区域上。

可以基于本领域的任何方法来计算同源性。例如UWGCGPackage提供了BESTFIT程序，其可以用来计算同源性(例如基于其默认设置使用)(Devereux et al.(1984)NucleicAcids Research12，p387-395)。PILEUP和BLAST算法可以用来计算同源性或对齐序列(通常基于它们的默认设置)，例如如在Altschul S.F.(1993)J MolEvol 36：290-300；Altschul，S，F et al(1990)J Mol Biol 215：403-10中所描述的。

通过美国国家生物技术信息中心(National Center forBiotechnologyInformation)(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)可公开获得用于进行BLAST分析的软件。该算法涉及当与数据库序列中的相同长度的字串(word)进行序列对比时通过确定在查询序列(其匹配或满足一定的正值阈值评分T)中的长度W的短字串来首先确定高得分序列对(HSP)。T称作相邻字串得分阈值(Altschul et al，上文)。这些最初的相邻字串匹配(或字串命中，word hits)作为开始搜索的种子以发现包含它们的HSP。沿着每个序列在两个方向延伸字串匹配直到可以增加累积对齐评分。当累积对齐评分偏离其获得的最大值为量X时；当累计评分变成零以下时(这是由于一个或多个负得分残基对齐的积累)；或当达到任一序列的末端时，停止在每个方向的字串匹配的延伸。

BLAST算法参数W、T以及X决定了序列对比的敏感性和速度。BLAST程序使用作为默认值的字串长度(W)，BLOSUM62得分矩阵(参见Henikoff and Henikoff(1992)Proc.Natl.Acad.Sci USA89：10915-10919)，50个序列对比(B)，10的期望值(E)、M＝5、N＝4，以及两种链的比较。

BLAST算法进行两个序列之间的相似性的统计分析；参见例如，Karlin andAltschul(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：5873-5787。由BLAST算法提供的相似性的一种度量是最小和概率(或最小概率总和，smallest sum probability)(P(N))，其提供概率的一种指示，两个核苷酸或氨基酸序列之间的匹配将以此概率偶然发生。例如，如果第一序列与第二序列相比，最小和概率小于约1，优选小于约0.1，更优选小于约0.01，以及最优选小于约0.001，则认为一个序列类似于另一个序列。

同源序列通常与相关序列相差至少约(或相差不大于约)2个、5个、10个、15个、20个更多突变(其可以是取代、缺失或插入)。可以在上面提及的与计算同源性有关的任何区域上来测量这些突变。

同源序列通常在显著高于本底的水平选择性地杂交于原始序列。通常利用中等至高度严格条件(例如0.03M氯化钠和0.03M柠檬酸钠，约50℃至约60℃)来实现选择性杂交。然而，可以在本领域已知的任何适合条件下进行这样的杂交(参见Sambrook et al.(1989)，Molecular Cloning：A Laboratory Manual)。例如，如果需要高度严格性，则适合的条件包括在60℃下的0.2×SSC。如果需要较低严格性，则适合的条件包括在60℃下的2×SSC。

剂型和制剂以及给药

可以将本发明的药剂给予需要治疗的受治疗者，如患有任何本文所提及伤口的受治疗者。因此可以改善受治疗者的病症。通过治疗，抗连接蛋白多核苷酸可以用于受治疗者身体的治疗。它们可以用于制备用来治疗任何本文所提及的伤口的药物。

抗连接蛋白多核苷酸可以以基本上分离的形式存在。应当理解，产品可以与载体或稀释剂混合，所述载体或稀释剂将不会干扰产品所期望的用途，并且仍然被看作是基本上分离的。本发明的产品还可以具有基本上纯化的形式，在这种情况下，它将通常包括约80％、85％、或90％，其中包括，例如，至少约95％、至少约98％或至少约99％的多核苷酸或制剂的干重(dry mass)。

取决于预定的给予途径，本发明的医药产品(pharmaceuticalproduct)、药物组合物、复合制备物(combined preparation)以及药物可以，例如，采取溶液、混悬剂、滴注剂、喷雾剂、软膏(salve)、乳膏剂、凝胶剂、泡沫、软膏剂、乳剂、洗剂、涂剂、缓释制剂、或散剂的形式，并且通常包含约0.01％至约1％的(一种或多种)活性组分、约1％-50％的(一种或多种)活性组分、约2％-60％的(一种或多种)活性组分、约2％-70％的(一种或多种)活性组分、或多达约90％的(一种或多种)活性组分。其他适合的制剂包括基于pluronic凝胶的制剂、基于羧甲基纤维素(CMC)的制剂、以及基于羟丙基甲基纤维素(HPMC)的制剂。其他有用的制剂包括缓释制备物或延迟释放制备物。

可以利用适合的胶凝剂来制备凝胶剂或胶冻剂，其中适合的胶凝剂包括但不限于明胶、黄蓍胶、或纤维素衍生物，并且可以包括甘油作为保湿剂、软化剂、以及防腐剂。软膏剂是半固体制剂，其由加入到脂肪、蜡、或合成基质中的活性组分组成。适合的乳膏剂的实例包括但不限于油包水和水包油乳剂。油包水乳膏剂可以通过使用适合的乳化剂加以配制，其中乳化剂的性能类似于但不限于脂肪醇(如十六醇或鲸硬脂醇(C18-16脂肪醇，cetostearyl alcohol))和乳化蜡的性能。水包油乳膏剂可以利用乳化剂如聚西托醇乳化蜡来配制。适合的性能包括能够改善乳剂的粘度以及在广泛的pH范围内的物理和化学稳定性。水溶性或可混溶性膏基(膏用底物)可以包含防腐剂系统并且还可以进行缓冲以保持可接受的生理pH。

可以配制泡沫制剂以借助于适合的施加器并利用惰性推进剂从加压气雾罐进行递送。用于配制泡沫基质的适合的赋形剂包括但不限于丙二醇、乳化蜡、十六醇、以及硬脂酸甘油酯。潜在的防腐剂包括对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯。

优选地，本发明的药剂与药用载体或稀释剂组合以产生药物组合物。适合的载体和稀释剂包括等渗盐水溶液，例如磷酸缓冲盐溶液。适合的稀释剂和赋形剂还包括，例如，水、盐水、葡萄糖、甘油等、以及它们的组合。此外，如果期望，还可以存在诸如润湿剂或乳化剂、稳定剂或pH缓冲剂的物质。

术语“药用载体”是指任何药物载体，其本身并不诱导对接受组合物的个体有害的抗体的产生，并且其可以被给予而没有不适当的毒性。适合的载体可以是较大的、缓慢代谢的大分子如蛋白质、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚合氨基酸、以及氨基酸共聚物。

药用盐也可以存在，例如，无机酸盐如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐等；以及有机酸的盐如醋酸盐、丙酸盐、丙二酸盐、苯甲酸盐等。

适合的载体材料包括任何载体或媒介物，其通常用作乳膏剂、洗剂、喷雾剂、泡沫、凝胶剂、乳剂、洗剂或涂剂(用于局部给予)的基质。实例包括乳化剂、惰性载体(包括碳氢化合物基质)、乳化基质、非毒性溶剂或水溶性基质。特别适合的实例包括pluronics、HPMC、CMC以及其他纤维素基组分、羊毛脂、硬石蜡、液体石蜡、软黄石蜡或软白石蜡、白蜂蜡、黄蜂蜡、鲸硬脂醇(cetostearyl)、十六醇、二甲硅油、乳化蜡、十四酸异丙酯(肉豆蔻酸异丙酯)、微晶蜡、油醇以及硬脂醇。

优选地，药用载体或媒介物是凝胶，适宜地为非离子型聚氧化乙烯-聚氧化丙烯共聚物凝胶，例如，Pluronic凝胶，优选PluronicF-127(BASF Corp.)。该凝胶是特别优选的，因为它在低温下是液体，但在生理温度下快速凝结，其将制剂的释放限制于施加部位或紧靠于该部位。

助剂如酪蛋白、明胶、白蛋白、胶、海藻酸钠、羧甲基纤维素、甲基纤维素、羟乙基纤维素或聚乙烯醇也可以包括在本发明的制剂中。

其他适合的制剂包括基于pluronic凝胶的制剂、基于羧甲基纤维素(CMC)的制剂、以及基于羟丙基甲基纤维素(HPMC)的制剂。组合物可以配制用于任何期望的递送形式，其包括局部给予、滴注给予、胃肠道外给予、肌内给予、皮下给予、或透皮给予。其他有用的制剂包括缓释制备物或延迟释放制备物。

给予的制剂可以包含转染剂。这样的制剂的实例包括阳离子剂(例如磷酸钙和DEAE-右旋糖酐)和脂转染剂(lipofectant)(例如lipofectam^TM和transfectam^TM)，以及表面活性剂。

在一种实施方式中，制剂进一步包括表面活性剂以帮助多核苷酸细胞渗透或者制剂可以包含任何适合的填充剂(或负荷剂，loading agent)。可以包括任何适合的非毒性表面活性剂，如DMSO。可替换地，可以包括透皮渗透剂如尿素。

用于给定受治疗者的有效剂量优选处于这样的剂量内，其对于至少50％群体是治疗有效的，并且其在该水平呈现很少毒性或没有毒性。

在本发明的方法和组合物中采用的每种抗连接蛋白多核苷酸的有效剂量可以根据多种因素而变化，这些因素包括所采用的特定的抗连接蛋白多核苷酸、给予方式、给予频率、待治疗的伤口、待治疗伤口的严重性、给予途径、待治疗患者亚群体的需要或个别患者的需要，其不同的需要可以起因于年龄、性别、体重、患者特有的相关医学伤口。

适合的剂量可以是约0.001至约1mg/kg体重如约0.01至约0.4mg/kg体重。然而，适合的剂量可以是约0.001至约0.1mg/kg体重如约0.01至约0.050mg/kg体重。约1至100、200、300、400、以及500微克的剂量是合适的。如本文所述，可以设想重复施加。通常每周采用重复施加约一次，或当伤口愈合可能显示为停顿或放慢时进行重复施加。

本文还描述了每种制剂在约1纳克(ng)/kg到约1mg/kg体重/天之间的其他剂量水平。在某些实施方式中，每种主题化合物的剂量将通常在约1ng至约1微克/kg体重、约1ng至约0.1微克/kg体重、约1ng至约10ng/kg体重、约10ng至约0.1微克/kg体重、约0.1微克至约1微克/kg体重、约20ng至约100ng/kg体重、约0.001mg至约100mg/kg体重、约0.01mg至约10mg/kg体重、或约0.1mg至约1mg/kg体重的范围内。在某些实施方式中，每种主题化合物的剂量将通常在约0.001mg至约0.01mg/kg体重、约0.01mg至约0.1mg/kg体重、约0.1mg至约1mg/kg体重、或约1mg/kg体重的范围内。如果使用多于一种的抗连接蛋白多核苷酸，则每种抗连接蛋白多核苷酸的剂量无需与其他抗连接蛋白多核苷酸在相同的范围内。例如，一种抗连接蛋白多核苷酸的剂量可以在约0.01mg至约1mg/kg体重之间，而另一种抗连接蛋白多核苷酸的剂量可以在约0.1mg至约1mg/kg体重之间。如本文所述，可以设想重复施加。通常每周采用重复施加约一次，或当伤口愈合可能显示为停顿或放慢时进行重复施加。

其他有用的剂量范围是约1至约10微克/平方厘米伤口大小。某些剂量将是约1-2、约1-5、约2-4、约5-7、以及约8-10微克/平方厘米伤口大小。其他有用的剂量是大于约10微克/平方厘米伤口大小，包括约15微克/平方厘米伤口大小、约20微克/平方厘米伤口大小、约25微克/平方厘米伤口大小、约30微克/平方厘米伤口大小、约35微克/平方厘米伤口大小、约40微克/平方厘米伤口大小、约50微克/平方厘米伤口大小、以及约100微克/平方厘米伤口大小。其他有用的剂量是约150微克/平方厘米伤口大小、约200微克/平方厘米伤口大小、约250微克/平方厘米伤口大小、或约500微克/平方厘米伤口大小。如本文所述，可以设想重复施加。通常每周采用重复施加约一次，或当伤口愈合可能显示为停顿或放慢时进行重复施加。

例如，在某些实施方式中，可以在治疗部位和/或邻近治疗部位以约0.01微摩尔(μM)或0.05μM至约200μM终浓度施加抗连接蛋白多核苷酸组合物。优选地，以约0.05μM至约100μM终浓度施加反义多核苷酸组合物，更优选地，以约1.0μM至约50μM终浓度施加抗连接蛋白多核苷酸组合物，以及更优选地，以约5-10μM至约30-50μM终浓度施加抗连接蛋白多核苷酸组合物。另外，以约8μM至约20μM终浓度施加抗连接蛋白多核苷酸组合物，以及可替换地以约10μM至约20μM终浓度、或以约10至约15μM终浓度施加抗连接蛋白多核苷酸组合物。在某些其他实施方式中，以约10μM终浓度施加抗连接蛋白多核苷酸。在又一种实施方式中，以约1-15μM终浓度施加抗连接蛋白多核苷酸组合物。抗连接蛋白多核苷酸剂量包括，例如，约0.1-1、1-2、2-3、3-4、或4-5微克(μg)、约5至约10μg、约10至约15μg、约15至约20μg、约20至约30μg、约30至约40μg、约40至约50μg、约50至约75μg、约75至约100μg、约100μg至约250μg、以及250μg至约500μg。如上所述，还提供了0.5至约1.0毫克或更大的剂量。剂量容积将取决于待治疗部位的大小，并且可以是，例如，约25-100μL至约100-200μL、约200-500μL至约500-1000μL。(微升)剂量也适用于更大的治疗部位。如本文所述，可以设想重复施加。通常每周采用重复施加约一次，或当伤口愈合可能显示为停顿或放慢时进行重复施加。

适宜地，给予足够量的抗连接蛋白多核苷酸以在给予后负调节连接蛋白的表达，或调节间隙连接形成至少约0.5至1小时、至少约1-2小时、至少约2-4小时、至少约4-6小时、至少约6-8小时、至少约8-10小时、至少约12小时、或至少约24小时。

在本发明的组合物和方法中的每种抗连接蛋白多核苷酸的剂量还可以通过参照相对于将施加区域的大小、长度、深度、面积或容积的组合物浓度加以确定。例如，在某些局部和其他用途，例如，滴注中，药物组合物的剂量可以基于每施加区域的长度、深度、面积、或容积的药物组合物的质量(例如微克)或浓度(例如μg/μl)加以计算。

给予的最初和任何其后剂量将取决于本文所述的因素。取决于寡核苷酸，用于给予的剂量和方案将会变化，并且剂量还将取决于所选择的给予方法，例如，局部(local ortopical)给予。

可以以单次或分开施加方式来给予剂量。可以一次给予剂量，或可以重复施加。

可以通过相同或不同的途径来给予一种或多种抗连接蛋白多核苷酸。本发明的各种制剂可以在治疗过程中的不同时间分开给予，或以分开或单一组合形式同时给予。

优选地，可用于伤口愈合的一种或多种抗连接蛋白多核苷酸通过局部给予(外周或直接到某个部位)来递送，其包括但不限于利用固体载体(如敷料和其他基质)和药用制剂(如凝胶剂、合剂、混悬剂以及软膏剂)来局部给予。在一种实施方式中，固体载体包括进入治疗部位的生物相容性膜或插入物。在另一种实施方式中，固体载体包括敷料或基质。在本发明的一种实施方式中，固体载体组合物可以是缓释固体载体组合物，其中可用于伤口愈合的一种或多种抗连接蛋白多核苷酸被分散在缓释固体基质中如藻酸盐、胶原、或合成生物可吸收聚合物的基质。优选地，固体载体组合物是无菌的或低生物负载。在一种实施方式中，可以使用包括一种或多种抗连接蛋白多核苷酸的洗涤溶液。

一种或多种抗连接蛋白多核苷酸的递送可以发生在一段时间内，在某些情况下约0.5小时、1-2小时、约2-4小时、约4-6小时、约6-8小时、或约24小时或更长时间，对于更严重的伤口可以是特别有利的。在某些情况下，细胞损失可以延伸超过操作部位至周围细胞。这样的损失可以发生在最初操作的24小时内并由间隙连接细胞间通信所介导。(一种或多种)抗连接蛋白多核苷酸的给予将调节细胞间通信并将另外的细胞损失或损伤或损伤的结果降至最小程度。

虽然递送时间将取决于要诱导负调节的部位和所期望的治疗效果，但提供了持续或缓释递送约0.5小时、约1-2小时、约2-4小时、约4-6小时、约6-8小时、或约24小时或更长时间。根据本发明，这可以通过在制剂中包括抗连接蛋白多核苷酸以及药用载体或媒介物来实现，尤其是以用于持续或缓释给予的制剂形式。

如所指出的，例如，可以在受伤以前、受伤期间、紧接着在受伤以后，或者例如在受伤的约180或更长、约120、约90、约60、或约30天内，给予本发明的一种或多种制剂。

本文描述的给予途径和剂量仅作为指导，因为熟练的医生将针对任何特定的患者和伤口决定给予的最佳途径和剂量。

本文提及或描述的治疗患有或怀疑患有疾病、障碍、和/或伤口的受治疗者的任何方法可以利用给予本文描述的任何剂量、剂型、制剂、和/或组合物。

敷料和基质

在一个方面，以敷料或基质形式提供了一种或多种抗连接蛋白多核苷酸。在某些实施方式中，以液体、半固体或固体组合物的形式提供了本发明的一种或多种制剂，用于直接施用，或将组合物施加至固体接触层(如敷料纱布或基质)的表面或加入固体接触层中。可以，例如，以液体或凝胶的形式提供敷料组合物。可以与常规药物赋形剂结合提供一种或多种抗连接蛋白多核苷酸，用于局部施加。适合的载体包括：Pluronic凝胶、Polaxamer凝胶、包含纤维素衍生物的水凝胶，其中纤维素衍生物包括羟乙基纤维素、羟甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素以及它们的混合物；以及包含聚丙烯酸的水凝胶(Carbopols)。适合的载体还包括用于局部药物制备物的乳膏/软膏，例如，基于聚西托醇乳化软膏的乳膏。上述载体可以包括藻酸盐(作为增稠剂或刺激剂)、防腐剂如苯甲醇、用来控制pH的缓冲剂如磷酸氢二钠/磷酸二氢钠、用来调节渗量的制剂如氯化钠、以及稳定剂如EDTA。

在一种实施方式中，在天然或合成基质上给予一种或多种抗连接蛋白多核苷酸，例如连接蛋白43反义多核苷酸，优选连接蛋白43反义寡脱氧核苷酸。

适合的敷料或基质可以包括，例如，以下具有一种或多种抗连接蛋白多核苷酸的敷料或基质。抗连接蛋白43寡核苷酸是优选的，例如抗连接蛋白43反义寡核苷酸：

1)吸收剂：适合的吸收剂可以包括，例如，吸收性敷料，该吸收性敷料可以提供，例如，半粘附质量或非粘附层，其结合于纤维的高度吸收层，如例如，纤维素、棉花或人造丝。可替换地，吸收剂可以用作主要或辅助敷料。

2)藻酸盐：适的藻酸盐包括，例如，敷料，该敷料是非编织、非粘着垫和带状物，其由天然多糖纤维或干凝胶(衍生自海藻)组成。适合的藻酸盐敷料可以例如在与渗出物接触以后通过离子交换过程形成湿凝胶。在某些实施方式中，藻酸盐敷料被设计成柔软可适应的，易于包扎、塞进或施用于不规则形状区域。在某些实施方式中，藻酸盐敷料可以与第二敷料一起使用。

3)抗微生物敷料：适合的抗微生物敷料可以包括，例如，可以促进生物活性剂递送的敷料，如，例如，银和聚六亚甲基双胍(PHMB)，以保持抵抗感染的效力(在需要或期望的情况下)。在某些实施方式中，适合的抗微生物敷料可以为例如，海绵、浸渍编织纱布、薄膜敷料、吸收性产品、岛状敷料(island dressings)、尼龙织物、非粘附阻挡层(或隔离物)、或材料的组合。

4)生物和生物合成材料(biosynthetics)：适合宜的生物敷料或生物合成敷料可以包括，例如，凝胶、溶液或来自天然来源的半渗透片材。在某些实施方式中，将凝胶或溶液施加于治疗部位并用用于屏障保护的敷料覆盖。在另一种实施方式中，原位放置片材，其可以作为膜，从而在单次施加以后保留在适当位置。

5)胶原：适合的胶原敷料可以包括，例如，凝胶、垫、颗粒、糊状物、粉末、片材或溶液，其衍生自例如，牛、猪或鸟来源或其他天然来源或供体。在某些实施方式中，胶原敷料可以与治疗部位渗出物相互作用以形成凝胶。在某些实施方式中，可以与辅助敷料组合来使用胶原敷料。

6)复合材料：适合的复合敷料可以包括例如将物理上不同成分结合成单一产品以提供多种功能的敷料，如，例如，细菌屏障、吸收和粘附。在某些实施方式中，复合敷料由例如多层组成，并结合有半粘附或非粘附垫。在某些实施方式中，复合材料还可以包括例如，非编织织物带或透明薄膜的胶接边界(adhesive border)。

7)接触层：适合的接触层敷料可以包括，例如，放置在区域上的薄的、非粘附片材，以保护组织免于例如，直接与施加至治疗部位的其他制剂或敷料接触。在某些实施方式中，接触层可以被展开以符合治疗部位区域的形状并且是多孔的以使渗出物可以穿过从而由叠加的辅助敷料吸收。

8)弹性绷带：适合的弹性绷带可以包括例如伸展并符合身体轮廓的敷料。在某些实施方式中，织物成分可以包括例如，棉花、聚酯、人造丝或尼龙。在某些其他实施方式中，弹性绷带可以例如，作为第二层或敷料，提供吸收，以将覆盖物保持在适当位置，施加压力或缓和治疗部位。

9)泡沫：适合的泡沫敷料可以包括，例如，片材和其他形状的发泡聚合物溶液(包括聚氨酯)，其具有能够容纳流体的较小的敞开的单元。示例性的泡沫可以例如，浸渍有或层合于其他材料。在某些实施方式中，吸收能力可以基于泡沫的厚度和组成加以调节。在某些其他实施方式中，与治疗部位接触的区域可以是非粘着的，以易于除去。在又一种实施方式中，泡沫可以与胶接边界和/或透明薄膜涂层(其可以作为抗感染阻挡层)组合使用。

10)纱布和非编织敷料：适合的纱布敷料和编织敷料可以包括，例如，干编织或非编织海绵和包裹物，其具有不同程度的吸收性。示例性的织物成分可以包括，例如，棉花、聚酯或人造丝。在某些实施方式中，纱布和非编织敷料可以是无菌或非无菌散装的并且具有或没有胶接边界。示例性的纱布敷料和编织敷料可以用于清洁、包扎和覆盖各种伤口治疗部位。

11)水胶体：适合的水胶体敷料可以包括，例如，干胶片(wafer)、粉末或糊状物，其由明胶、果胶或羧甲基纤维素组成。在某些实施方式中，干胶片是自粘附的并且具有或没有胶接边界以及具有各种各样的形状和大小。示例性的水胶体可用于需要轮廓的区域。在某些实施方式中，粉末和糊状物水胶体可以与辅助敷料组合使用。

12)水凝胶(无定形)：适合的无定形水凝胶敷料可以包括，例如，水、聚合物以及其他组分的制剂，其没有任何形状，被设计为用来给予水分并保持潮湿的愈合环境和/或再水化治疗部位。在某些实施方式中，可以与辅助敷料覆盖物组合来使用水凝胶。

13)水凝胶：浸渍敷料：适合的浸渍水凝胶敷料可以包括，例如，用无定形水凝胶饱和的纱布和非编织海绵、绳(rope)以及条。无定形水凝胶可以包括例如，水、聚合物以及其他组分的制剂，其没有形状，被设计为用来将水分给予干燥治疗部位以及保持潮湿的愈合环境。

14)水凝胶片材：适合的水凝胶片材可以包括例如，交联亲水聚合物的三维网络，其不溶于水并且通过溶胀与水溶液相互作用。示例性的水凝胶是高度可适应和可渗透的并且可以吸收不同的排水量，这取决于它们的组成。在某些实施方式中，水凝胶相对于治疗部位是非粘着的，或处理以易于除去。

15)浸渍敷料：适合的浸渍敷料可以包括，例如，用溶液、乳液、油、凝胶或某些其他药物活性化合物或载体剂，包括例如，盐水、油、锌盐、凡士林、三溴酚铋和猩红以及本文描述的化合物饱和的纱布和非编织海绵、绳(rope)以及条。

16)硅凝胶片材：适合的硅凝胶片材敷料可以包括，例如，由交联聚合物组成的软覆盖物，其中交联聚合物增强有或结合于网状物或织物。

17)溶液：适合的液体敷料可以包括，例如，多蛋白材料和在细胞外基质中发现的其他元素的混合物。在某些实施方式中，可以在清创和清洁以后将示例性的溶液施用至治疗部位，然后用吸水性敷料或非粘附垫覆盖。

18)透明薄膜：适合的透明薄膜敷料可以包括利用粘合剂涂布在一侧上的不同厚度的聚合物膜。在某些实施方式中，透明薄膜对于液体、水以及细菌是不可渗透的，但对于水汽和大气是可渗透的。在某些实施方式中，透明性使得可以对治疗部位实现可视化。

19)填料：适合的填料敷料可以包括，例如，珠、乳膏、泡沫、凝胶、软膏、垫、糊状物、枕袋(或枕垫，pillows)、粉末、丝状体(strands)或其他制剂。在某些实施方式中，填料是非粘附的并且可以包括定时释放的抗微生物剂。示例性的填料可以用来保持潮湿环境，处置渗出物，以及用于治疗例如，部分和完全厚度伤口、感染伤口、引流伤口(draining wound)以及需要包扎的深伤口。

因此，根据本发明，提供了制剂，通过该制剂可以以瞬时和部位特异性方式负调节细胞间通信，用于治疗不以预期速率愈合的伤口。因此这些制剂可应用于治疗方法中。

伤口治疗

在组织损伤(尤其是特征在于延迟愈合的伤口和慢性伤口)的情况下，已发现，本发明的制剂在促进伤口愈合过程、减少炎症以及使瘢痕组织形成降至最小程度方面是有效的。因此这些制剂可明显有利于治疗不以预期速率愈合的伤口，不管是外部创伤的结果、还是疾病状态(如糖尿病性溃疡)或病症(如静脉性溃疡、动脉性溃疡、以及血管炎性溃疡)或物理过程(如压力性溃疡)的结果。

在一个方面，本发明涉及一种在患有慢性伤口、延迟愈合伤口或不完全愈合伤口、或不以预期速率愈合的其他伤口的受治疗者中促进或改善伤口愈合的方法，该方法包括给予治疗有效量的一种或多种抗连接蛋白多核苷酸。在某些实施方式中，给予一种或多种抗连接蛋白多核苷酸可有效减少肉芽组织沉积，促进细胞迁移以加速伤口闭合和愈合，促进上皮生长，或它们的任何组合。

在一个方面，本发明涉及一种在受治疗者中促进或改善伤口愈合的方法，该方法包括以可有效在慢性伤口、延迟愈合伤口或不完全愈合伤口、或不以预期速率愈合的其他伤口中调节上皮基底细胞分裂和生长的量给予一种或多种抗连接蛋白多核苷酸。在一种实施方式中，抗连接蛋白多核苷酸是连接蛋白反义多核苷酸，其有效调节上皮基底细胞分裂和生长。在一种实施方式中，连接蛋白反义多核苷酸是连接蛋白26反义多核苷酸、连接蛋白43反义多核苷酸或它们的混合物。

在一个方面，本发明涉及一种促进或改善伤口愈合的方法，该方法包括以可有效在慢性伤口、延迟愈合伤口或不完全愈合伤口、或不以预期速率愈合的其他伤口中调节外层角蛋白分泌的量给予一种或多种抗连接蛋白多核苷酸。在一种实施方式中，抗连接蛋白多核苷酸是可有效调节外层角蛋白分泌的连接蛋白反义多核苷酸。在一种实施方式中，连接蛋白反义多核苷酸是连接蛋白43反义多核苷酸、31.1反义多核苷酸、或它们的混合物。

在一个方面，本发明涉及一种在患有慢性伤口、延迟愈合伤口或不完全愈合伤口、或不以预期速率愈合的其他伤口的受治疗者中减少、预防或改善组织损伤的方法，该方法包括给予一种或多种抗连接蛋白多核苷酸。

在一个方面，本发明涉及持续给予一种或多种抗连接蛋白多核苷酸。在一种实施方式中，给予抗连接蛋白多核苷酸至少约1-24小时、至少约0.5小时、至少约1小时、至少约2小时、至少约3小时、至少约4小时、至少约5小时、至少约6小时、至少约7小时、至少约8小时、至少约9小时、至少约10小时、至少约11小时、至少约12小时或至少约24小时。在一种实施方式中，在一段持续时间内对连接蛋白表达进行负调节。优选地，在一段持续时间内对连接蛋白43表达进行负调节。适宜地，连接蛋白43表达被负调节至少约0.5、1、2、4、6、8、10、12、或24小时。在对表达进行负调节以后，完全连接蛋白恢复(recovery)通常是在至少约48-72小时内。适合的受治疗者包括糖尿病受治疗者或患有不以预期速率愈合的伤口的其他受治疗者。

在一个方面，本发明提供了一种对患有慢性伤口、延迟愈合伤口或不完全愈合伤口、或不以预期速率愈合的其他伤口的受治疗者进行治疗的方法，该方法包括持续给予有效量的一种或多种抗连接蛋白多核苷酸。在另一方面，本发明提供了一种在受治疗者中促进或改善伤口愈合的方法，该方法包括将一种或多种抗连接蛋白多核苷酸持续给予慢性伤口、延迟愈合伤口或不完全愈合伤口、或不以预期速率愈合的其他伤口。

根据另一个方面，本发明提供了一种在具有慢性伤口、延迟愈合伤口或不完全愈合伤口、或不以预期速率愈合的其他伤口的受治疗者中促进或改善伤口愈合的方法，该方法包括以可有效在伤口区域增加再上皮化率(或再上皮形成率，re-epithlializationrates)的量将一种或多种抗连接蛋白多核苷酸持续给予伤口区域。在一种实施方式中，该方法包括持续给予连接蛋白43反义多核苷酸、和/或连接蛋白31.1反义多核苷酸。在一种实施方式中，以缓释制剂给予组合物或多种组合物。在另一种实施方式中，给予组合物或多种组合物持续一段时间。适宜地，组合物可有效降低连接蛋白43和/或31.1水平或表达至少约24小时。可治疗的受治疗者包括糖尿病受治疗者或患有不以预期速率愈合的伤口的其他受治疗者。

在又一方面，本发明提供了一种在具有慢性伤口、延迟愈合伤口或不完全愈合伤口、或不以预期速率愈合的其他伤口的受治疗者中促进或改善伤口愈合的方法，该方法包括将可有效调节上皮基底细胞分裂和生长和/或可有效调节外层角蛋白分泌的量的一种或多种抗连接蛋白多核苷酸持续给予伤口区域。在一种实施方式中，组合物包含可有效调节上皮基底细胞分裂或生长的连接蛋白反义多核苷酸，优选连接蛋白26反义多核苷酸、连接蛋白43反义多核苷酸、或它们的混合物。在一种实施方式中，组合物包含可有效调节外层角质化的连接蛋白反义多核苷酸，优选连接蛋白31.1反义多核苷酸。在一种实施方式中，以缓释制剂给予组合物或多种组合物。在另一种实施方式中，给予组合物或多种组合物持续一段时间。适宜地，该组合物可有效降低连接蛋白43、26、和/或31.1水平或表达至少约24小时。可治疗的受治疗者包括糖尿病受治疗者。

在一个方面，本发明涉及一种用于治疗或预防慢性伤口、延迟愈合伤口或不完全愈合伤口、或不以预期速率愈合的其他伤口的方法，该方法包括将有效量的抗连接蛋白多核苷酸给予需要其的受治疗者，其中将有效量的抗连接蛋白多核苷酸给予所述伤口或与所述伤口有关的组织。在另一种实施方式中，慢性伤口是慢性皮肤伤口并且将本发明的组合物给予所述受治疗者的皮肤或与皮肤有关的组织有效的一段时间。适宜地，组合物可有效降低连接蛋白43水平，或阻断或减小连接蛋白43半通道开放(hemichannel openning)，至少约0.5小时、约1-2小时、约2-4小时、约4-6小时、约4-8小时、约12小时、约18小时、或约24小时。适合于治疗的慢性皮肤伤口可以，例如，选自由压力性溃疡、糖尿病性溃疡、静脉性溃疡、动脉性溃疡、血管炎性溃疡、以及混合性溃疡构成的组。慢性伤口可以是动脉性溃疡，其包括起因于完全或部分动脉阻塞的溃疡。慢性伤口可以是静脉淤滞性溃疡，其包括起因于静脉瓣功能障碍和相关血管疾病的溃疡。慢性伤口可以是创伤诱导的溃疡。受治疗者患有其他溃疡，包括静脉性溃疡以及本文描述和本领域已知的其他溃疡。

组合物

本发明涉及药物组合物、制剂、以及它们的制备方法和应用，其中组合物包含治疗有效量的抗连接蛋白多核苷酸，其包括，例如，连接蛋白反义多核苷酸。该组合物可用来增强或促进不以预期速率愈合的伤口的愈合，包括对于常规伤口治疗或伤口愈合促进疗法来说可能是缓慢愈合或难治愈的伤口。

在一种优选的形式中，该组合物包含针对仅一种连接蛋白(connexin protein)的mRNA的一种或多种抗连接蛋白多核苷酸，例如连接蛋白反义多核苷酸。最优选地，这种连接蛋白是连接蛋白43。

可替换地，该组合物可以包含针对多于一种的连接蛋白的多核苷酸。优选地，多核苷酸导向的连接蛋白之一是连接蛋白43。寡脱氧核苷酸导向的其他连接蛋白可以包括，例如，连接蛋白26、30、31.1、32、以及37。导向各种连接蛋白的适合的示例性多核苷酸(以及ODN)列在表1中。

本发明的许多方面是参照寡脱氧核苷酸加以描述的。然而，应当理解，在这些方面中可以使用其他适合的多核苷酸(如RNA多核苷酸)。其他抗连接蛋白寡核苷酸是RNAi和siRNA寡核苷酸。

因此，在一个方面，本发明提供了用于治疗性治疗的组合物，其包含至少一种抗连接蛋白多核苷酸，优选抗连接蛋白43多核苷酸。在优选的实施方式中，组合物进一步包含药用载体或媒介物。

试剂盒、药物以及制品

可选地，一种或多种抗连接蛋白多核苷酸还可以用于制备药物。在一种实施方式中，药物包含治疗有效量的抗连接蛋白多核苷酸，优选抗连接蛋白43多核苷酸、以及药用载体。

在一个方面，本发明提供了一种试剂盒，该试剂盒包含所描述的一种或多种组合物或制剂。例如，试剂盒可以包括一种组合物，该组合物包含有效量的一种或多种连接蛋白43反义多核苷酸。

还提供了制品，该制品包括容器，其包含如本文所描述的本发明的组合物或制剂、以及用于治疗受治疗者的使用说明书。例如，一种制品，其包括容器，该容器包含连接蛋白反义多核苷酸，以及用于治疗患有慢性、延迟愈合、或不完全愈合伤口、或不以预期速率愈合的其他伤口的受治疗者的使用说明书。

在另一个方面，本发明包括一种制品，该制品包括容器，该容器包含治疗有效量的一种或多种抗连接蛋白多核苷酸，以及使用说明书，包括用于治疗患有慢性伤口或延迟或不完全愈合伤口、或不以预期速率愈合的其他伤口的受治疗者。在另一个方面，本发明包括一种制品，该制品包括容器，其包含治疗有效量的一种或多种抗连接蛋白多核苷酸，以及使用说明书，包括用于治疗患有或怀疑患有全部或部分特征在于慢性伤口或延迟或不完全伤口愈合、或不以预期速率愈合的其他伤口的任何疾病、障碍和/或病症的受治疗者。

如所指出的，已报道，在糖尿病患者中，伤口愈合是缓慢的，经常导致感染或慢性伤口，其可能导致截肢。通过间隙连接蛋白连接蛋白43的细胞间通信和连接蛋白43表达的动态调节被报道为在伤口愈合中起关键作用。在正常组织如皮肤中，在受伤后的最初24小时，在伤口边缘处在角质细胞中连接蛋白43通常被负调节而连接蛋白26被正调节，因为它们采用迁移表型。然而，通常，在糖尿病组织中、并且尤其是在皮肤中，我们已发现，在受伤以后，连接蛋白43被立即正调节。

在糖尿病大鼠中的伤口愈合已用作慢性受伤的一个模型。实施例1说明了在糖尿病大鼠中使用抗连接蛋白寡核苷酸来改善受损的伤口愈合。在实施例1中，在大鼠中的急性、链脲佐菌素诱发的糖尿病会改变皮肤中的连接蛋白表达，减少在表皮中的连接蛋白43和连接蛋白26蛋白以及通信，以及增加真皮中的连接蛋白43蛋白和通信。实施例1表明糖尿病会改变与伤口愈合有关的连接蛋白的动态变化。在24小时内，在伤口边缘处在角质细胞的增厚球状物(thickened bulb)中连接蛋白43被正调节(而不是被负调节，如在对照中，其形成移动细胞的薄化进程(thin process))。连接蛋白43衰退被延迟直到48小时，其时开始再上皮化。虽然在糖尿病中连接蛋白26照常被正调节，但其在伤口边缘的分布是异常的、更广泛。实施例1进一步表明连接蛋白43表达的异常动态与延迟再上皮化之间的相关性，如通过将连接蛋白43特异性反义凝胶施加至糖尿病性伤口(与通过施加具有相应正义寡脱氧核苷酸的凝胶相比)所证实的。这种治疗预防连接蛋白43的异常正调节并和对照(非糖尿病)水平相比再上皮化率加倍且更高。

在实施例1中报道的结果支持以下设想，连接蛋白表达动态的糖尿病诱导变化有助于延迟的伤口愈合，以及靶向连接蛋白43表达作为促进糖尿病性伤口和其他慢性伤口愈合的方式具有潜在的治疗价值。

实施例2表明抗连接蛋白43寡核苷酸成功用来在人受治疗者中促进不愈合皮肤溃疡的愈合。

实施例3表明抗连接蛋白43寡核苷酸成功用来在人受治疗者中促进不愈合静脉性溃疡的愈合。

现在将参照以下实施例来描述本发明的各个方面，以下实施例将理解为仅以举例的方式提供而不用来构成对本发明范围的限制。

实施例

实施例1

制备具有以下序列的寡脱氧核苷酸：GTA ATT GCG GCA GGAGGA ATT GTT TCT CTC(连接蛋白43)(SEQ.ID.NO：2)、GAC AGAAAC AAT TCC TCC TGC CGC ATT TAC(正义对照)(SEQ.ID.NO：7)。通过单次腹腔内注射在柠檬酸缓冲液中的链脲佐菌素，65mg/kg，以在成年斯-道鼠(Sprague-Dawley rats)(350-400g)中诱导糖尿病(Shotton HR，et al.(2003)Diabetes.52：157-64)(N＝6个糖尿病，6个对照)。已在糖尿病诱导后两周进行了大部分糖尿病性伤口愈合研究并且相同时间点用于该伤口愈合研究。然而，在8周还检查了在糖尿病大鼠皮肤中的连接蛋白表达(N＝6个糖尿病，6个对照)，以证实在两周检测的变化保持不变。切除正常背部皮肤，冷冻切片，免疫染色(用于连接蛋白)，通过共聚焦显微术加以成像，以及将染色量化，如在Saitongdee et al.(2000).CardiovascularRes.47，108-115中。

用氟烷麻醉大鼠并刮取它们的背部。制得两对5×5mm全厚度切除伤口，然后将在Pluronic F-127凝胶中的10μM连接蛋白43特异性反义寡脱氧核苷酸施加于一个伤口并将对照(正义)凝胶施加于另一伤口(Qiu C，et al.(2003)Cell Biol.Int.27：525-541)。在受伤后的第1、2、5、10和15天收集组织，并在制备物中切片，用于连接蛋白免疫组织化学或H&E染色(同前)。连接蛋白表达的动态变化与伤口愈合过程中的关键事件有关。N＝6只糖尿病、6只对照大鼠/时间点。

通过将在明胶海绵的小拭子中的Lucifer Yellow CH(Sigma)的4％溶液施加到新鲜、全厚度皮肤切口中来评估细胞间通信。在除去凝胶泡沫和固定组织以前，使染料转移5分钟。将进入受伤细胞但不穿过间隙连接的10kD Kd FITC-右旋糖酐用作对照。组织被冷冻切片，然后在Leica SP2UV上通过共聚焦显微术进行成像(Leica，Milton Keynes，UK；N＝4个糖尿病和4个对照)。

利用共聚焦显微镜检查转移的染料和连接蛋白免疫染色。预先设置最佳增益(gain)和偏置(offset)并在图像采集期间保持恒定。获得一系列单光学断面图像(singleoptical section image)以产生来自切口的皮肤的剪辑(montage)。数字图像是8位(或比特，bit)并利用Image-J软件(NIH)进行分析。为了评估染料转移，将1500×30像素感兴趣区域框从切口边缘放置在中部真皮中并产生穿过该框的图像强度图。灰度级强度下降低于50被任意取作LuciferYellow已移动的点。类似地，在表皮中，记录离Lucifer Yellow信号下降低于50的切口的距离。分析来自每只动物的最少三个图像。为了比较连接蛋白(connexinprotein)的水平，从每个伤口的不同切片获得真皮或表皮的6个单光学断面图像。对于对照和糖尿病组，激光功率、针孔、增益/偏置以及物镜所有的参数保持不变。与在Saitongdee等人(2000)(上文)中一样，利用ImageJ软件(NIH)来量化连接蛋白表达。设置阀值以检测具有最小背景噪声的间隙连接斑块，然后对于所有图像保持不变。对于每个图像记录连接蛋白斑块的数目和大小，并且表示为每100μm的表皮或10000μm²的真皮。这种方式已证明比蛋白质印迹更准确，因为它在细胞水平产生关于蛋白表达的信息。蛋白质印迹将不能区别表皮和真皮细胞或检测与伤口边缘的邻近效应。利用这种方式，在受伤后一天或两天，能够量化在伤口边缘(WE)区以及在离开500μm(AD)区中角质细胞中的连接蛋白水平。在受伤后的第5天，新生表皮的前沿(LE)的另外的区域也被成像。利用Leica DMLFS显微镜并借助于DC300F数码相机，获得H&E染色的图像。先前(Qiu C，et al.(2003)上文)已详细地描述了再上皮化率的测量结果。利用威氏配对符号秩次检验(Wilcoxon matched-pairs signed-rankstest)，检验了治疗之间的所有数值差异的显著性，如在Statview 5.0.1.中所实施的。

图1A和图1B示出了在诱导糖尿病以后的第2周(图1A)和第8周(图1B)在正常和STZ糖尿病大鼠皮肤中的连接蛋白43和26染色。图表示出了在表皮和真皮中的斑块数目。在糖尿病表皮中连接蛋白43和连接蛋白26染色被显著降低，而在真皮中早在诱导糖尿病后的两周连接蛋白43染色被增加，并且在第8周没有进一步的变化。图1C示出了在对照C，以及糖尿病D皮肤中，在第8周，典型的连接蛋白43和连接蛋白26免疫染色的图像，其中箭头表示表皮和真皮之间的边界。比例条(scale bar)25μm。图1D示出了间隙连接持久染料，LuciferYellow，在对照和糖尿病大鼠的表皮和真皮中，在5分钟内移动的距离的量化。在糖尿病表皮中染料转移被显著降低，但在糖尿病真皮中则被显著增加。

通常，在表皮的基底层、以及在真皮成纤维细胞、毛囊、血管和附属物(appendage)中发现点状连接蛋白43免疫染色(图1A至图1D)。然而，在糖尿病性皮肤中，就间隙连接斑块的大小和数目而论，在表皮中，连接蛋白43染色被显著降低(图1A)。在糖尿病表皮中，在表皮上层中的连接蛋白26的染色类似地被显著降低(图1A)。然而，这不是响应糖尿病的连接蛋白的全局负调节，因为在真皮成纤维细胞中观察到对比效应；其中，观察到连接蛋白43阳性斑块大小和数目的明显增加。在STZ诱导糖尿病后的两周和8周的皮肤中观察到对连接蛋白表达的类似效应(图1B)。

为了评估在糖尿病表皮和真皮中的细胞间通信，检查了间隙连接持久染料Lucifer Yellow在5分钟内通过组织的转移程度。这揭示了，在糖尿病表皮中显著降低的通信，但在真皮中显著增强的通信(图1D)，这与连接蛋白表达的变化一致。已报道，在人糖尿病成纤维细胞中，连接蛋白43蛋白的表达升高和通信增加(AbdullahKM，et al.(1999)Endocrine 10：35-41.)以及在肾系统(Zhang J，HillCE.(2005)Kidney Int.68：1171-1185.)和膀胱(Poladia DP，et al.(2005)Acta Diabetol.42：147-152.))中已注意到不同连接蛋白对糖尿病的混合反应。

图2A至图2D示出了在对照和糖尿病表皮中在损伤以后的再上皮化率以及连接蛋白43和连接蛋白26蛋白水平的反应。受伤后第一天和第二天，在伤口边缘(WE)的表皮内和邻近(AD)表皮(离开500μm)通过计数斑块来量化染色(图2A)。在第五天，量化在新生表皮的前沿(LE)处的另外的区并且也包括其数据。与对照(C)相比，在所有时间点：受伤后的第一天、第二天以及第五天，在糖尿病大鼠(D)中再上皮化率显著降低(图2B)。在损伤以后的最初24小时内，在WE区中的连接蛋白43染色通常降低，但在糖尿病性皮肤中它显著增加，在2dpw以前返回到近对照水平，并且在所有三个区5dpw发现显著降低的水平(图2C)。连接蛋白26对损伤的正常反应是增加WE中的染色水平，并且这在1dpw发生在对照和糖尿病动物中(图2D)。然而，在2dpw，在糖尿病性皮肤中，在WE和AD区观测到连接蛋白26染色被显著提高，仅在5dpw在这些区中显著降低。

图3a至图3f以及图3a′至图3f示出了在伤口愈合过程中在对照和糖尿病性皮肤的表皮伤口边缘，连接蛋白43(a、a′、c、c′、e、e′)以及连接蛋白26(b、b′、d、d′、f、f′)染色(绿色)和核染色(蓝色)。在第一天，在对照大鼠的前沿角质细胞中连接蛋白43蛋白表达被负调节(图3a)，但在糖尿病动物中在该区域已被正调节，其表现为肿胀(swollen)(图3a′)。在对照(图3b)和糖尿病(图3b′)表皮中，可以观测到连接蛋白26类似地正调节。在第二天，在糖尿病前沿角质细胞中，连接蛋白43染色已减少(图3c′)并类似于对照的连接蛋白43染色(图3c)，而在所有糖尿病角质细胞中连接蛋白26已持续增加(图3d′)至比对照显著更高的水平(图3d)。在受伤后的第五天，对照(图3e)和糖尿病(图3e′)的新生表皮在角质细胞之间显示非常少的点状连接蛋白43染色，而与对照伤口(图3f)相比，在糖尿病性伤口(图3f’)中连接蛋白26染色被少量降低。箭头表示伤口边缘。比例条a、c、e，50μm，b、d、f，100μm。

为了确定连接蛋白表达对损伤的动态响应，在受伤后的第一天和第二天，量化了在伤口边缘(WE)和在邻近区(离开500μm)(AD)在角质细胞中的连接蛋白染色，而在五天以后对前沿(LE)角质细胞(图2A)进行成像。受伤后一天，与AD相比，发现在WE区中对照角质细胞中的连接蛋白43染色显著减少(图2C、图3a以及图3a′)。形成鲜明对比，在糖尿病动物中，与AD相比，发现在WE中连接蛋白43染色显著增加。这相反于正常伤口愈合反应并且是出人意外的，因为在完整的糖尿病性皮肤中连接蛋白43水平被显著降低。在糖尿病和对照皮肤中，连接蛋白26的动态反应是类似的，其中在WE区中染色显著增加(图2D、图3b以及图3b′)，虽然，在糖尿病性皮肤中，连接蛋白26染色的提高并不限于WE区(如在对照中)，而是延伸一定距离进入AD区，这意味着对损伤的反应的更大扩散。此外，发现在伤口边缘的角质细胞在糖尿病组织中形成增厚球状物，而在对照中它们在缓慢地向前移动以闭合伤口以前会变薄。

两天对照伤口开始再上皮化(闭合12％)，但糖尿病性伤口被延缓(闭合5％)，仅最近采用迁移形态。伴随这种糖尿病角质细胞形状变化，在WE区内存在连接蛋白43染色的显著减少，其通过该阶段类似于对照(图2C、图3c以及图3c′)。然而，在糖尿病性皮肤伤口中，在WE和AD区中，连接蛋白26染色的水平均持续升高(图2D、图3d以及图3d′)，这表明对损伤的更广泛的组织反应。

在第五天，在糖尿病和对照组中再上皮化均在顺利进行，虽然糖尿病性伤口被显著延缓(与对照的33％相比，闭合20％；P＜0.008；威氏配对符号秩次检验；图2C)。在糖尿病和对照组中，均可以清楚地看到LE角质细胞包含很少连接蛋白43染色。在WE和AD区中，连接蛋白43染色显著上升，但在糖尿病性皮肤中较少，其与完好皮肤一样，比对照表达更少的连接蛋白43(图2C、图3e以及图3e′)。在该阶段，在糖尿病和对照皮肤中，在LE中的连接蛋白26染色被类似地提高(图2D、图3f以及图3f’)。在糖尿病WE和AD区中先前提高的连接蛋白26染色返回到更正常的水平。在对照和糖尿病动物中，到第十天，当在增生、过度增厚表皮中可以看到高水平的连接蛋白43时，再上皮化均是完全的。

图4A至图4C示出了与连接蛋白43正义寡脱氧核苷酸对照(“sODN”)相比，连接蛋白43反义寡脱氧核苷酸(“Cx43asODN”)治疗对连接蛋白43表达(受伤后一天)的影响以及对再上皮化率(在一、二以及五天)的影响。在糖尿病性伤口边缘1dpw，在肿胀表皮球状物中可以看到升高水平的连接蛋白43染色(绿色点)(图4A)。然而，通过用连接蛋白43asODN进行治疗可以防止连接蛋白43蛋白表达的这种提高，这还导致形成更薄的角质细胞层，其似乎更象对照动物而不是细胞的球状物(图4B)。治疗在用asODN或对照sODN的对照和糖尿病性皮肤中的伤口对导致在asODN施加以后在检查的所有时间点使再上皮化率加倍(图4C)。糖尿病性asODN治疗的皮肤的再上皮化率在1dpw和2dpw近似于sODN治疗的对照皮肤的再上皮化率，但在5dpw显著更快。比例条50μm。

鉴于已观察到糖尿病性伤口中的连接蛋白免疫染色、间隙连接通信以及形态响应的这些异常模式，通过用连接蛋白43特异性反义凝胶(在损伤时施加至伤口)防止增加来评估在糖尿病WE角质细胞中连接蛋白43蛋白的异常增加的影响。这有效地防止了连接蛋白43的增加(图4A)，并且还改善了伤口愈合率(其加倍)，从而达到未治疗的对照水平或更高(图4B)，虽然在对照大鼠的反义治疗伤口中愈合率甚至更高。

借此糖尿病改变连接蛋白表达的机制(其对于不同的连接蛋白具有不同影响)是未知的。高血糖症和/或由高血糖症诱导的氧化应激已与糖尿病的其他并发症的发展有关，如神经病和血管病(American Diabetes Association(1999)Consensusdevelopmentconference on diabetic foot wound care：7-8 April 1999，Boston，Massachussets)。已报道，在各种不同细胞类型中，高葡萄糖和氧化应激均体外改变连接蛋白表达和/或间隙连接通信(Fukuda T，et al.(2000)J.Gastroenterol 35：361-368；ChoJH，et al.(2002)，Carcinogenesis.Jul；23(7)：1163-9；Rouach N，et al.(2004)Glia.1；45(1)：28-38)，并且已知连接蛋白43和连接蛋白26具有不同的启动子(Hennemann H，etal.(1992)Eur.J.Cell Biol.58(1)：81-9)；ChenZQ，et al.(1995)J Biol Chem.270(8)：3863-8)。

然而，在大鼠中早在诱导糖尿病以后一周并在神经病或血管病发展以前，已显示受损的伤口愈合(Witte MB，et al.(2002)Br.J.Surg.89：1594-1601)；Shi HP，et al.(2003)Wound Repair Regen.11：198-203)。因此，在两周内在这些实验中观察到的变化很可能是糖尿病状态的直接后果而不是长期糖尿病并发症的继发性后果。

一个重要发现是在糖尿病的表皮伤口边缘中连接蛋白43的异常正调节。这具有以不同方式影响伤口闭合过程的潜力。已提出，在再生表皮内通信区室(communicationcompartments)的形成在伤口愈合中起作用(Martin P(1997)Science 276：75-81)；LampePD，etal.(1998)J Cell Biol.143(6)：1735-47；Hodgins M(2004)J.Invest.Dermatol.122：commentary)。在正常条件下通过在前沿细胞中表达连接蛋白26和除去连接蛋白43可以有效地产生区室化(compartmentalization)，因为这些连接蛋白并不彼此形成连接。因此，在糖尿病中伤口愈合的延迟可以反映连接蛋白43表达负调节到可以发生这样的区室化的程度所需要的另外的时间。可替换地，已知连接蛋白43的C-尾与细胞骨架成分或与P120ctn/Rho GTP酶相互作用，所以连接蛋白43的负调节可以是在伤口边缘改变角质细胞的能动性所必要的，从而使它们可以迁移并闭合伤口(Wei CJ，et al.(2004)Annu Rev Cell Dev Biol.20：811-38)。在这点上，值得注意的是，在受伤后一天，当它们的连接蛋白43表达较高时，糖尿病角质细胞在伤口边缘形成增厚球状物而不是渐平以及开始缓慢地向前移动穿过伤口。

本文中我们已经表明，在受伤时通过单次施加连接蛋白43特异性反义凝胶降低连接蛋白43表达可以使整个过程(从最初迁移到完全伤口闭合)以正常和更高速率发生，尽管糖尿病状态持续存在。因此，抗连接蛋白寡核苷酸治疗，例如，反义治疗，具有相当大的潜力作为新途径来治疗不以预期速率愈合的伤口，其中包括在糖尿病及其他患者中的慢性伤口。

实施例2

基于有同情心的使用，本发明已成功地用来治疗患有较大慢性伤口的人受治疗者，在这种情况下为血管(脉管)炎性溃疡。

患有基本周围血管疾病的49岁男性首先呈现并发症，其产生自非闭合腿部伤口。该患者在创伤后已经历左膝下截肢，由于摔倒的结果，该伤口随后裂开。在大于6个月的时间内，伤口对所有形式的已建立的护理没有反应。该患者经历多种局部治疗，以试图愈合伤口，包括施用生长因子、抗微生物敷料、VAC(真空辅助闭合)、异种移植物敷料，没有显著变化。然后该患者摔倒并进一步损害伤口部位。其后是多次手术清创和更换异种移植物。伤口的大小持续增加并被认为已开始威胁肢体。

因此，由于伤口特性以及截肢的水平和类型，认为患者除了经受膝盖以上截肢以外没有可替换的治疗选择。FDA的皮肤学部门(Dermatology Division)批准申请人的实验药物(SEQ ID NO：1)在Emergency Use IND下可用于该患者。随后用在pluronic凝胶中的SEQ ID NO：1的2mL的20μM制品来治疗伤口(总剂量400μg)。在施用时伤口为大约7cm×5cm(约35cm²)，其中深度为大约3-4mm。因此，给予约12μg/cm²的SED ID NO：1。包扎伤口并保持覆盖7天时间。当在第7天拆开时，医生报道，水肿和红斑均不再存在并且伤口似乎已开始形成肉芽，虽然尺寸(长度和宽度)在该阶段近似相同。

进行第二次治疗(总剂量400μg)。在该治疗以后，伤口持续愈合并且随后报道病变的深度为1mm(3至4倍降低)，并在所有侧面有1-1.5cm的新组织。伤口是清洁的并且肉芽组织的外观是“健康的”。如果其他组织，例如，大腿组织可以用于移植，则认为患者“准备好移植”。然而，由于他的基本周围血管疾病，因此并不认为这是用于该患者的选择。

在这种实验治疗以后，没有明显的安全问题或没有报道安全问题。在两个月再次对患者进行评估，并且伤口的大小已持续减小。伤口的近似大小已减小7倍，至5cm²，并且评估伤口的医务人员得出的结论是，它将继续进行至完全闭合。确定不再需要膝盖以上截肢。

实施例3

本发明已成功用来治疗具有静脉性慢性伤口的人受治疗者。一位患有基本周围水肿的86岁男性呈现起因于5个月之久的不愈合慢性静脉性溃疡的并发症。在该期间伤口对所有形式的在社区已建立的护理没有反应。患者经历多种局部治疗以试图愈合伤口，包括抗菌剂和施用压迫绷带以减少水肿。在该期间，伤口的大小持续增大。患者已制定计划进行膝置换手术，但被告知在有开放性慢性伤口存在的情况下不能进行该手术。

因此，由于伤口的特性，其在伤口床内以及尤其是在边缘还发炎和肿胀，患者被看作同情使用病例并且获得知情同意以便治疗该患者。随后用在pluronic凝胶中的200μL的SEQ ID NO：1的10μM制品治疗伤口(总剂量为约20μg)。在施用时伤口为约3cm×3cm(约9cm²)。其中深度为约2-3mm。因此，施用的总剂量约为2.2μg/cm²。然后用非粘着敷料包扎伤口24小时。

当在24小时拆开时，炎症和肿胀不再存在并且伤口正干燥。然后拆开伤口直到治疗后72小时，其时先前非愈合皮肤溃疡伤口被完全干燥并且在整个伤口上已形成痂。随后包扎伤口并在一周后再检查，其时伤口尺寸(长度和宽度)已显著减小，炎症和肿胀仍然不存在，并且伤口正愈合以及逐渐趋向闭合。

在对伤口的进一步损伤(其已导致朝向闭合的停止)以后一个月，进行第二次治疗(总剂量为大约20μg的SEQ.ID.NO：1)。在该治疗以后，施加压迫绷带以减少水肿，并且伤口快速开始再次愈合。病变(或损伤，lesion)的深度、宽度和长度减小，并且在伤口愈合处的新皮肤的外观是健康的。

在这种实验治疗以后，没有明显的安全问题或没有报道安全问题。在第6周再次对患者进行评估。伤口的大小已减小至最初大小的大约四分之一，并正逐步闭合。

表2

表2A

人连接蛋白43，来自基因库登录号(GenBank Accession No.)M65188(SEQ.ID.NO： 13)

1 ggcttttagc gtgaggaaag taccaaacag cagcggagtt ttaaacttta aatagacagg

61 tctgagtgcc tgaacttgcc ttttcatttt acttcatcct ccaaggagtt caatcacttg

121 gcgtgacttc actactttta agcaaaagag tggtgcccag gcaacatggg tgactggagc

181 gccttaggca aactccttga caaggttcaa gcctactcaa ctgctggagg gaaggtgtgg

241 ctgtcagtac ttttcatttt ccgaatcctg ctgctgggga cagcggttga gtcagcctgg

301 ggagatgagc agtctgcctt tcgttgtaac actcagcaac ctggttgtga aaatgtctgc

361 tatgacaagt ctttcccaat ctctcatgtg cgcttctggg tcctgcagat catatttgtg

421 tctgtaccca cactcttgta cctggctcat gtgttctatg tgatgcgaaa ggaagagaaa

481 ctgaacaaga aagaggaaga actcaaggtt gcccaaactg atggtgtcaa tgtggacatg

541 cacttgaagc agattgagat aaagaagttc aagtacggta ttgaagagca tggtaaggtg

601 aaaatgcgag gggggttgct gcgaacctac atcatcagta tcctcttcaa gtctatcttt

661 gaggtggcct tcttgctgat ccagtggtac atctatggat tcagcttgag tgctgtttac

721 acttgcaaaa gagatccctg cccacatcag gtggactgtt tcctctctcg ccccacggag

781 aaaaccatct tcatcatctt catgctggtg gtgtccttgg tgtccctggc cttgaatatc

841 attgaactct tctatgtttt cttcaagggc gttaaggatc gggttaaggg aaagagcgac

901 ccttaccatg cgaccagtgg tgcgctgagc cctgccaaag actgtgggtc tcaaaaatat

961 gcttatttca atggctgctc ctcaccaacc gctcccctct cgcctatgtc tcctcctggg

1021 tacaagctgg ttactggcga cagaaacaat tcttcttgcc gcaattacaa caagcaagca

1081 agtgagcaaa actgggctaa ttacagtgca gaacaaaatc gaatggggca ggcgggaagc

1141 accatctcta actcccatgc acagcctttt gatttccccg atgataacca gaattctaaa

1201 aaactagctg ctggacatga attacagcca ctagccattg tggaccagcg accttcaagc

1261 agagccagca gtcgtgccag cagcagacct cggcctgatg acctggagat ctag

表2B

人连接蛋白43(SEO.ID.NO：14)

1 atgggtgact ggagcgcctt aggcaaactc cttgacaagg ttcaagccta ctcaactgct

61 ggagggaagg tgtggctgtc agtacttttc attttccgaa tcctgctgct ggggacagcg

121 gttgagtcag cctggggaga tgagcagtct gcctttcgtt gtaacactca gcaacctggt

181 tgtgaaaatg tctgctatga caagtctttc ccaatctctc atgtgcgctt ctgggtcctg

241 cagatcatat ttgtgtctgt acccacactc ttgtacctgg ctcatgtgtt ctatgtgatg

301 cgaaaggaag agaaactgaa caagaaagag gaagaactca aggttgccca aactgatggt

361 gtcaatgtgg acatgcactt gaagcagatt gagataaaga agttcaagta cggtattgaa

421 gagcatggta aggtgaaaat gcgagggggg ttgctgcgaa cctacatcat cagtatcctc

481 ttcaagtcta tctttgaggt ggccttcttg ctgatccagt ggtacatcta tggattcagc

541 ttgagtgctg tttacacttg caaaagagat ccctgcccac atcaggtgga ctgtttcctc

601 tctcgcccca cggagaaaac catcttcatc atcttcatgc tggtggtgtc cttggtgtcc

661 ctggccttga atatcattga actcttctat gttttcttca agggcgttaa ggatcgggtt

721 aagggaaaga gcgaccctta ccatgcgacc agtggtgcgc tgagccctgc caaagactgt

781 gggtctcaaa aatatgctta tttcaatggc tgctcctcac caaccgctcc cctctcgcct

841 atgtctcctc ctgggtacaa gctggttact ggcgacagaa acaattcttc ttgccgcaat

901 tacaacaagc aagcaagtga gcaaaactgg gctaattaca gtgcagaaca aaatcgaatg

961 gggcaggcgg gaagcaccat ctctaactcc catgcacagc cttttgattt ccccgatgat

1021 aaccagaatt ctaaaaaact agctgctgga catgaattac agccactagc cattgtggac

1081 cagcgacctt caagcagagc cagcagtcgt gccagcagca gacctcggcc tgatgacctg

1141 gagatctag

本文参考或提及的所有专利、出版物、科学文章、网站、以及其他文献和材料都表示本发明所属技术领域技术人员的技术水平，因此每个这样的参考文献和材料以引用方式结合于本文，结合的程度如同其各自以全文方式引用或以全文方式列在本文中一样。申请人保留将任何和全部来自任何这样的专利、出版物、科学文献、网站、可得到的电子信息及其他参考材料或文献的材料和信息自然结合于本说明书中的权利。

本文描述的具体方法和组合物表示优选的实施方式并且是示例性的，并不作为对本发明范围的限制。在考虑本说明书的基础上，本领域技术人员将会想到其他目的、方面、以及实施方式，并且它们都包括在如权利要求的范围所限定的本发明的精神内。对于本领域技术人员来说，显而易见的是，在不偏离本发明的范围和精神的情况下，可以对本文披露的发明进行各种替换和更改。本文说明性地描述的发明可以适当地在没有任何要素或多种要素、或限制或多种限制(其不是本文必要的专门批露的)的情况下加以实施。因此，例如，在本文的每种情况下，在本发明的实施方式或实施例中，术语“包含”、“基本上由……组成”和“由……组成”中的任一个在本说明书中都可以由其他两个术语中的任一个代替。此外，术语“包含”、“包括”、“含有”等都可以广义地理解并且没有限制。本文说明性地描述的方法和过程可以适当地以不同的步骤顺序加以实施，并且它们不必限于在本文中或在权利要求中示出的步骤的顺序。此外，如在本文中和所附权利要求中所使用的，除非上下文另有明确指明，否则单数形式“一个”、“一种”以及“该”包括复数形式。在任何情况下，本专利不可以解释为限于本文具体披露的具体实施例或实施方式或方法。在任何情况下，本专利决不解释为受到任何审查员或任何其他官方或专利和商标局员工的陈述的限制，除非这样的陈述是明确的而且没有规定或保守表达地适用于申请人的答辩。

已采用的术语和表达被用作描述而不是限制的术语，而且这样的术语和表达的使用也不是倾向于排除任何表现和描述的等同特征或其部分，但在本发明要求保护的范围内，各种修改都被认为是可能的。因此，可以理解，虽然本发明已经通过优选的实施方式和可选的特征明确地公开，但是本领域技术人员可以采用本文公开的构思的修改和变更，并且这样的修改和变更被认为在如由所附权利要求所限定的本发明的范围内。

这里已经宽泛且一般地描述了本发明。每个更窄的种类和落入批露类的亚类都构成本发明的一部分。这包括本发明的附带条件或消极限制的一般描述，其从类属中去除了任何主题，而不论去除内容是否在本文中明确地列举出来。

其他的实施方式在所附的权利要求内。另外，在根据马库什类描述本发明的特征或方面的情况下，本领域的技术人员将认识到，本发明因此也能够根据任何马库什类的个别成员或亚组成员来加以描述。

Claims

1.包括抗连接蛋白43多核苷酸和药用载体的组合物在制备用于治疗具有不以预期速率愈合的伤口的受治疗者的药物中的应用，其中，给予所述伤口的所述抗连接蛋白43多核苷酸的量为所述伤口中25-100μL、100-200μL、200-500μL或500-1000μL的剂量容积中存在100μg至250μg、250μg至500μg或0.5至1.0毫克的单链抗连接蛋白43多核苷酸，且其中，所述不以预期速率愈合的伤口是糖尿病性溃疡、血管炎性溃疡、动脉性溃疡、静脉性溃疡、压力性溃疡、感染性溃疡、创伤引发性溃疡、烧伤性溃疡、与坏疽性脓皮病有关的溃疡、或混合性溃疡，其中，所述抗连接蛋白43多核苷酸包括选自SEQ.ID.NO.:1或2的序列。

2.根据权利要求1所述的应用，其中，所述抗连接蛋白43多核苷酸是连接蛋白43反义多核苷酸。

3.根据权利要求1所述的应用，其中，所述抗连接蛋白43多核苷酸是未修饰的多核苷酸。

4.根据权利要求1所述的应用，其中，所述抗连接蛋白43多核苷酸是siRNA多核苷酸或RNAi多核苷酸。

5.根据权利要求1所述的应用，其中，给予所述抗连接蛋白43多核苷酸至少0.5小时、至少1-2小时、至少2-4小时、至少4-6小时、或至少6-8小时。

6.根据权利要求1所述的应用，其中，所述伤口是裂开伤口。

7.根据权利要求1所述的应用，其中，所述伤口是延迟或不完全愈合伤口。

8.根据权利要求1所述的应用，其中，所述伤口是慢性伤口。

9.根据权利要求1所述的应用，其中，所述伤口是血管炎性溃疡。

10.根据权利要求1所述的应用，其中，所述伤口是静脉性溃疡。

11.根据权利要求1所述的应用，其中，所述伤口是动脉性溃疡。

12.根据权利要求1所述的应用，其中，所述伤口是压力性溃疡。

13.根据权利要求1所述的应用，其中，所述伤口是糖尿病性溃疡。

14.根据权利要求1所述的应用，其中，所述伤口是由创伤引起的皮肤溃疡。

15.根据权利要求1所述的应用，其中，所述伤口是由烧伤引起的皮肤溃疡。

16.根据权利要求1所述的应用，其中，所述受治疗者是糖尿病患者。

17.根据权利要求1所述的应用，其中，所述受治疗者是人。

18.根据权利要求1所述的应用，其中，所述受治疗者是非人动物。

19.根据权利要求18所述的应用，其中，所述动物是马。

20.根据权利要求18所述的应用，其中，所述动物是狗。

21.根据权利要求18所述的应用，其中，所述动物是猫。

22.根据权利要求1所述的应用，其中，所述抗连接蛋白43多核苷酸以每平方厘米伤口大小30至500μg范围的量给予。

23.根据权利要求1-22中任一项所述的应用，其中，重复给予所述抗连接蛋白43多核苷酸。

24.根据权利要求1-22中任一项所述的应用，其中，重复给予所述抗连接蛋白43多核苷酸每周一次，由此促进伤口愈合。

25.包括连接蛋白43反义多核苷酸和药用载体的组合物在制备用于治疗具有延迟愈合、不完全愈合、或慢性伤口的受治疗者的药物中的应用，其中，给予所述伤口的所述连接蛋白43反义多核苷酸的量为至少30微克/平方厘米所述伤口，且其中，所述伤口是糖尿病性溃疡、血管炎性溃疡、动脉性溃疡、静脉性溃疡、压力性溃疡、感染性溃疡、创伤引发性溃疡、烧伤性溃疡、与坏疽性脓皮病有关的溃疡、或混合性溃疡，其中，所述连接蛋白43反义多核苷酸包括选自SEQ.ID.NO.:1或2的序列。

26.根据权利要求25所述的应用，其中，对连接蛋白43表达进行负调节至少0.5小时、至少1-2小时、至少2-4小时、至少4-6小时、或至少6-8小时。

27.包括药用载体和在25-100μL、100-200μL、200-500μL或500-1000μL的剂量容积中存在100μg至250μg、250μg至500μg或0.5至1.0毫克抗连接蛋白43药剂的连接蛋白43反义多核苷酸的组合物在制备用于治疗具有延迟愈合、不完全愈合或慢性伤口的受治疗者的药物中的应用，其中，所述延迟愈合、不完全愈合或慢性伤口是糖尿病性溃疡、血管炎性溃疡、动脉性溃疡、静脉性溃疡、压力性溃疡、感染性溃疡、创伤引发性溃疡、烧伤性溃疡、与坏疽性脓皮病有关的溃疡、或混合性溃疡，其中，所述连接蛋白43反义多核苷酸包括选自SEQ.ID.NO.:1或2的序列。

28.包括连接蛋白43反义多核苷酸和药用载体的组合物在制备用于在具有延迟愈合、不完全愈合或慢性伤口的受治疗者中促进伤口愈合的药物中的应用，所述药用载体是聚氧化乙烯-聚氧化丙烯共聚物，其中，给予所述伤口的所述抗连接蛋白43多核苷酸的量为至少30微克/平方厘米所述伤口，且其中，所述延迟愈合、不完全愈合或慢性伤口是糖尿病性溃疡、血管炎性溃疡、动脉性溃疡、静脉性溃疡、压力性溃疡、感染性溃疡、创伤引发性溃疡、烧伤性溃疡、与坏疽性脓皮病有关的溃疡、或混合性溃疡，其中，所述连接蛋白43反义多核苷酸包括选自SEQ.ID.NO.:1或2的序列。

29.根据权利要求28所述的应用，其中，对连接蛋白43表达进行负调节至少0.5小时、至少1-2小时、至少2-4小时、至少4-6小时、或至少6-8小时。

30.包括连接蛋白43反义多核苷酸和药用载体的组合物在制备用于在具有延迟愈合、不完全愈合或慢性伤口的受治疗者中促进伤口愈合的药物中的应用，其中，所述连接蛋白43反义多核苷酸的量有效提高在所述伤口区域中的再上皮化率，其中，给予所述伤口的所述连接蛋白43反义多核苷酸的量为至少30微克/平方厘米所述伤口，且其中，所述延迟愈合、不完全愈合或慢性伤口是糖尿病性溃疡、血管炎性溃疡、动脉性溃疡、静脉性溃疡、压力性溃疡、感染性溃疡、创伤引发性溃疡、烧伤性溃疡、与坏疽性脓皮病有关的溃疡、或混合性溃疡，其中，所述连接蛋白43反义多核苷酸包括选自SEQ.ID.NO.:1或2的序列。

31.根据权利要求25、27、28或30所述的应用，其中，以持续释放制剂给予所述反义多核苷酸。

32.根据权利要求1、25、27、28或30所述的应用，其中，在一段持续时间内给予所述多核苷酸。

33.根据权利要求30所述的应用，其中，所述反义多核苷酸有效降低连接蛋白43水平至少0.5小时、至少1-2小时、至少2-4小时、至少4-6小时、或至少6-8小时。

34.包括药用载体和有效促进再上皮化的量的抗连接蛋白43多核苷酸的组合物在制备用于在具有延迟愈合、不完全愈合或慢性伤口的受治疗者中促进皮肤伤口的再上皮化的药物中的应用，其中，给予所述伤口的所述抗连接蛋白43多核苷酸的量为25-100μL、100-200μL、200-500μL或500-1000μL的剂量容积中存在100μg至250μg、250μg至500μg或0.5至1.0毫克的抗连接蛋白43药剂，且其中，所述延迟愈合、不完全愈合或慢性伤口是糖尿病性溃疡、血管炎性溃疡、动脉性溃疡、静脉性溃疡、压力性溃疡、感染性溃疡、创伤引发性溃疡、烧伤性溃疡、与坏疽性脓皮病有关的溃疡、或混合性溃疡，其中，所述抗连接蛋白43多核苷酸包括选自SEQ.ID.NO.:1或2的序列。

35.根据权利要求34所述的应用，其中，所述抗连接蛋白43多核苷酸是连接蛋白43反义多核苷酸。

36.包含连接蛋白43反义多核苷酸、药用载体和连接蛋白31.1反义多核苷酸的药物组合物在制备用于在具有延迟愈合、不完全愈合或慢性伤口的受治疗者中促进伤口愈合的药物中的应用，其中，给予所述伤口的所述连接蛋白43反义多核苷酸的量为25-100μL、100-200μL、200-500μL或500-1000μL的剂量容积中存在100μg至250μg、250μg至500μg或0.5至1.0毫克的抗连接蛋白43药剂，且其中，所述延迟愈合、不完全愈合或慢性伤口是糖尿病性溃疡、血管炎性溃疡、动脉性溃疡、静脉性溃疡、压力性溃疡、感染性溃疡、创伤引发性溃疡、烧伤性溃疡、与坏疽性脓皮病有关的溃疡、或混合性溃疡，其中，所述连接蛋白43反义多核苷酸包括选自SEQ.ID.NO.:1或2的序列。

37.包括抗连接蛋白43多核苷酸和药用载体的组合物在制备用于在具有伤口的糖尿病受治疗者中提高伤口愈合速率的药物中的应用，其中，给予所述伤口的所述抗连接蛋白43多核苷酸的量为25-100μL、100-200μL、200-500μL或500-1000μL的剂量容积中存在100μg至250μg、250μg至500μg或0.5至1.0毫克的抗连接蛋白43药剂，且其中，所述糖尿病受治疗者中的伤口是糖尿病性溃疡、血管炎性溃疡、动脉性溃疡、静脉性溃疡、压力性溃疡、感染性溃疡、创伤引发性溃疡、烧伤性溃疡、与坏疽性脓皮病有关的溃疡、或混合性溃疡，其中，所述抗连接蛋白43多核苷酸包括选自SEQ.ID.NO.:1或2的序列。

38.根据权利要求37所述的应用，其中，所述抗连接蛋白43多核苷酸是RNAi多核苷酸。

39.根据权利要求37所述的应用，其中，所述抗连接蛋白43多核苷酸是siRNA多核苷酸。

40.根据权利要求27、28、34、36或37所述的应用，其中，所述抗连接蛋白43多核苷酸是连接蛋白43反义多核苷酸。

41.根据权利要求1、25、27、28、30、34、36或37所述的应用，其中，所述多核苷酸具有18至32个核苷酸。

42.根据权利要求41所述的应用，其中，所述多核苷酸是寡脱氧核苷酸。

43.包括药用载体和抗连接蛋白43多核苷酸的组合物在制备用于在具有伤口的糖尿病受治疗者中提高伤口愈合速率的药物中的应用，其中所述抗连接蛋白43多核苷酸的量有效减少所述伤口或伤口区域中的异常连接蛋白43调节，其中，给予所述伤口的所述抗连接蛋白43多核苷酸的量为至少30微克/平方厘米所述伤口，且其中，所述糖尿病受治疗者中的伤口是糖尿病性溃疡、血管炎性溃疡、动脉性溃疡、静脉性溃疡、压力性溃疡、感染性溃疡、创伤引发性溃疡、烧伤性溃疡、与坏疽性脓皮病有关的溃疡、或混合性溃疡，其中，所述抗连接蛋白43多核苷酸包括选自SEQ.ID.NO.:1或2的序列。

44.根据权利要求43所述的应用，其中，所述抗连接蛋白43多核苷酸是RNAi多核苷酸。

45.根据权利要求43所述的应用，其中，所述抗连接蛋白43多核苷酸是siRNA多核苷酸。

46.根据权利要求43所述的应用，其中，所述抗连接蛋白43多核苷酸是连接蛋白43反义多核苷酸。

47.根据权利要求46所述的应用，其中，所述连接蛋白43反义多核苷酸是连接蛋白43寡脱氧核苷酸。

48.根据权利要求46所述的应用，其中，所述多核苷酸具有18至32个核苷酸。

49.包括药用载体和抗连接蛋白43多核苷酸的组合物在制备用于在具有伤口的糖尿病受治疗者中改善伤口闭合的药物中的应用，其中，给予所述伤口的所述抗连接蛋白43多核苷酸的量为25-100μL、100-200μL、200-500μL或500-1000μL的剂量容积中存在100μg至250μg、250μg至500μg或0.5至1.0毫克的抗连接蛋白43药剂，且其中，所述糖尿病受治疗者中的伤口是糖尿病性溃疡、血管炎性溃疡、动脉性溃疡、静脉性溃疡、压力性溃疡、感染性溃疡、创伤引发性溃疡、烧伤性溃疡、与坏疽性脓皮病有关的溃疡、或混合性溃疡，其中，所述抗连接蛋白43多核苷酸包括选自SEQ.ID.NO.:1或2的序列。

50.根据权利要求49所述的应用，其中，所述抗连接蛋白43多核苷酸是RNAi多核苷酸。

51.根据权利要求49所述的应用，其中，所述抗连接蛋白43多核苷酸是siRNA多核苷酸。

52.根据权利要求49所述的应用，其中，所述抗连接蛋白43多核苷酸是连接蛋白43反义多核苷酸。

53.根据权利要求49所述的应用，其中，所述连接蛋白43反义多核苷酸具有18至32个核苷酸。

54.根据权利要求49所述的应用，其中，所述多核苷酸是寡脱氧核苷酸。

55.根据权利要求1、25、27、28、30、34、36、37、43或49中任一项所述的应用，其中，所述连接蛋白43反义多核苷酸在中等至高度严格条件下杂交于连接蛋白43mRNA。

56.一种包括药用载体和浓度为30μM至200μM的抗连接蛋白43反义多核苷酸的组合物在制备用于治疗糖尿病性溃疡、血管炎性溃疡、动脉性溃疡、静脉性溃疡、压力性溃疡、感染性溃疡、创伤引发性溃疡、烧伤性溃疡、与坏疽性脓皮病有关的溃疡、或混合性溃疡的药物中的应用，其中，所述抗连接蛋白43反义多核苷酸包括选自SEQ.ID.NO.:1或2的序列。

57.根据权利要求56所述的应用，其中，所述抗连接蛋白多核苷酸是寡脱氧核苷酸。

58.根据权利要求57所述的应用，其中，所述抗连接蛋白寡脱氧核苷酸是连接蛋白43反义寡脱氧核苷酸。

59.根据权利要求1、25、27、28、30、34、36、37、43或49中任一项所述的应用，其中，给予的抗连接蛋白43多核苷酸的量的范围是50至500μg/平方厘米所述伤口。

60.根据权利要求1、25、27、28、30、34、36、37、43或49中任一项所述的应用，其中，给予的抗连接蛋白43多核苷酸的量的范围是100至500μg/平方厘米所述伤口。

61.根据权利要求1、25、27、28、30、34、36、37、43或49中任一项所述的应用，其中，给予的抗连接蛋白43多核苷酸的量的范围是150至500μg/平方厘米所述伤口。

62.根据权利要求1、25、27、28、30、34、36、37、43或49中任一项所述的应用，其中，给予的抗连接蛋白43多核苷酸的量的范围是200至500μg/平方厘米所述伤口。

63.根据权利要求1、25、27、28、30、34、36、37、43或49中任一项所述的应用，其中，给予的抗连接蛋白43多核苷酸的量的范围是250至500μg/平方厘米所述伤口。

64.根据权利要求1、25、27、28、30、34、36、37、43或49中任一项所述的应用，其中，给予的抗连接蛋白43多核苷酸的量的范围是100至250μg/平方厘米所述伤口。

65.根据权利要求27所述的应用，其中，所述抗连接蛋白43多核苷酸以30μM至100μM的浓度范围存在。

66.根据权利要求27所述的应用，其中，所述抗连接蛋白43多核苷酸以30μM至50μM的浓度范围存在。

67.根据权利要求27所述的应用，其中，所述抗连接蛋白43多核苷酸以100μM的浓度存在。

68.根据权利要求1、25、27、30、34、36、37、43或49中任一项所述的应用，其中，所述药用载体包括聚氧化乙烯-聚氧化丙烯共聚物。

69.根据权利要求1、25、27、28、30、34、36、37、43或49中任一项所述的应用，其中，所述药用载体包括Pluronic F-127。

70.根据权利要求1、25、27、30、34、36、37、43或49中任一项所述的应用，其中，所述药用载体包括藻酸盐。

71.根据权利要求1、25、27、30、34、36、37、43或49中任一项所述的应用，其中，所述药用载体包括水凝胶。

72.根据权利要求1、25、27、30、34、36、37、43或49中任一项所述的应用，其中，所述药用载体包括选自由包含纤维素衍生物的水凝胶和包含聚丙烯酸的水凝胶所构成的组中的水凝胶。

73.根据权利要求1、25、27、30、34、36、37、43或49中任一项所述的应用，其中，所述药用载体是纤维素基载体。

74.根据权利要求1、25、27、30、34、36、37、43或49中任一项所述的应用，其中，所述药用载体包括选自由羟乙基纤维素、羟甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素以及它们的混合物所构成的组中的纤维素基载体。

75.根据权利要求56-58中任一项所述的应用，其中，所述抗连接蛋白43反义多核苷酸以30-50μM的浓度存在。

76.根据权利要求56所述的应用，其中，所述抗连接蛋白43反义多核苷酸以30-200μM的浓度存在。

77.根据权利要求56所述的应用，其中，所述抗连接蛋白43反义多核苷酸以100μM的浓度存在。

78.根据权利要求56所述的应用，其中，所述抗连接蛋白43反义多核苷酸以200μM的浓度存在。

79.根据权利要求1、25、27、30、34、36、37、43、49、76-78中任一项所述的应用，其中所述糖尿病性溃疡是糖尿病性足溃疡。

80.根据权利要求25、27、30、34、36、37、43、49、76-78中任一项所述的应用，其中所述静脉性溃疡是静脉淤滞性溃疡。

81.根据权利要求25、27、30、34、36、37、43、49、76-78中任一项所述的应用，其中所述压力性溃疡是褥疮性溃疡。

82.根据权利要求36和77-78中任一项所述的应用，其中，以持续释放制剂给予所述反义多核苷酸。

83.根据权利要求34、36、37、43、49、77-78中任一项所述的应用，其中，在一段持续时间内给予所述多核苷酸。

84.根据权利要求34、36、37、43、49、77-78中任一项所述的应用，其中，所述抗连接蛋白43多核苷酸是连接蛋白43反义多核苷酸。

85.根据权利要求43、49、77-78中任一项所述的应用，其中，所述多核苷酸具有18至32个核苷酸。

86.根据权利要求77-78中任一项所述的应用，其中，所述连接蛋白43反义多核苷酸在中等至高度严格条件下杂交于连接蛋白43mRNA。

87.根据权利要求76-78中任一项所述的应用，其中，给予的抗连接蛋白43多核苷酸的量的范围是50至500μg/平方厘米所述伤口。

88.根据权利要求76-78中任一项所述的应用，其中，给予的抗连接蛋白43多核苷酸的量的范围是100至500μg/平方厘米所述伤口。

89.根据权利要求76-78中任一项所述的应用，其中，给予的抗连接蛋白43多核苷酸的量的范围是150至500μg/平方厘米所述伤口。

90.根据权利要求76-78中任一项所述的应用，其中，给予的抗连接蛋白43多核苷酸的量的范围是200至500μg/平方厘米所述伤口。

91.根据权利要求76-78中任一项所述的应用，其中，给予的抗连接蛋白43多核苷酸的量的范围是250至500μg/平方厘米所述伤口。

92.根据权利要求76-78中任一项所述的应用，其中，给予的抗连接蛋白43多核苷酸的量的范围是100至250μg/平方厘米所述伤口。

93.根据权利要求76-78中任一项所述的应用，其中，所述药用载体包括聚氧化乙烯-聚氧化丙烯共聚物。

94.根据权利要求76-78中任一项所述的应用，其中，所述药用载体包括Pluronic F-127。

95.根据权利要求76-78中任一项所述的应用，其中，所述药用载体包括藻酸盐。

96.根据权利要求76-78中任一项所述的应用，其中，所述药用载体包括水凝胶。

97.根据权利要求76-78中任一项所述的应用，其中，所述药用载体包括选自由包含纤维素衍生物的水凝胶和包含聚丙烯酸的水凝胶所构成的组中的水凝胶。

98.根据权利要求76-78中任一项所述的应用，其中，所述药用载体是纤维素基载体。

99.根据权利要求76-78中任一项所述的应用，其中，所述药用载体包括选自由羟乙基纤维素、羟甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素以及它们的混合物所构成的组中的纤维素基载体。

100.根据权利要求1、27、34、36、37或49中任一项所述的应用，其中，所述抗连接蛋白43多核苷酸以0.5至40.0mg/ml的浓度存在。

101.根据权利要求1、27、34、36、37或49中任一项所述的应用，其中，所述抗连接蛋白43多核苷酸以0.5至2.0mg/ml的浓度存在。

102.根据权利要求1、27、34、36、37或49中任一项所述的应用，其中，所述抗连接蛋白43多核苷酸以1至5mg/ml的浓度存在。

103.根据权利要求1、27、34、36、37或49中任一项所述的应用，其中，所述抗连接蛋白43多核苷酸以1.5至10mg/ml的浓度存在。

104.根据权利要求1、27、34、36、37或49中任一项所述的应用，其中，所述抗连接蛋白43多核苷酸以5至40mg/ml的浓度存在。

105.根据权利要求1所述的应用，其中，所述伤口是静脉淤滞性溃疡。

106.根据权利要求1所述的应用，其中，所述伤口是褥疮性溃疡。

107.根据权利要求1所述的应用，其中，以持续释放制剂给予所述抗连接蛋白43多核苷酸。

108.根据权利要求34、37、43和49中任一项所述的应用，其中，以持续释放制剂给予所述抗连接蛋白43多核苷酸。