CN105209618A

CN105209618A - 改进的伤口愈合组合物和治疗

Info

Publication number: CN105209618A
Application number: CN201480028508.0A
Authority: CN
Inventors: 安东尼·菲利普斯; 大卫·艾森巴德; 斯科特·班南; 大卫·普尔; 格罗夫·马特索卡; 特蕾西·森德兰; 布拉德福德·杜夫特
Original assignee: CoDa Therapeutics Inc
Current assignee: CoDa Therapeutics Inc
Priority date: 2013-03-15
Filing date: 2014-03-15
Publication date: 2015-12-30
Also published as: WO2014145342A2; AU2014233101A1; WO2014145342A3; CA2907349A1; US20140275209A1; EP2970967A2; US9937197B2; US20160264977A1; US9290554B2; EA201500940A1; KR20160026838A; JP2016517444A; EP2970967A4; US9156896B2; US20140275218A1; US20160339052A1

Abstract

本发明涉及通过给予抗连接蛋白的药剂、特别是抗连接蛋白43反义多核苷酸治疗慢性伤口的改进的方法、用途和试剂盒。本发明的方法、用途和试剂盒是基于在预处理阶段在尺寸方面增加或减少没有超过预定量的慢性伤口比在预处理阶段其尺寸变化超出目标范围之外的伤口更适合成功治疗的令人惊讶和意想不到的发现。

Description

改进的伤口愈合组合物和治疗

序列表

本申请包含序列表，其已经以ASCII格式电子提交并由此以其全部内容通过引用结合于此。所述ASCII副本，创建于2014年6月17日，命名为E3697-00329_SL.txt并且大小1,925个字节。

技术领域

本发明涉及识别和治疗按预期的速率不愈的难愈性慢性伤口的方法，以及剂量方案和含有适用于治疗那些伤口的间隙连接调节剂的制造制品。

背景技术

以下包括可以用于理解本发明的信息。这并非承认本文所提供的任何信息是目前描述或要求保护的发明的现有技术，或是与其相关的，或者承认专门或隐含参考的任何公开或文件是现有技术。

在人和其他哺乳动物中，伤口损伤触发细胞和生化事件的组织化复杂级联，这在大多数情况下会使得伤口愈合。理想愈合的伤口是在细胞、组织、器官和生物体水平上恢复正常解剖结构、功能和外观。伤口愈合，与是由外伤、微生物或是异物所致无关，会经由包括许多重叠阶段的复杂过程而进展，包括发炎、上皮形成、血管生成和基质沉积。通常情况下，这些过程会导致成熟伤口和一定程度的瘢痕形成。虽然发炎和修复大多沿着规定的过程发生，但这个过程的敏感性取决于各种伤口愈合调节因子的平衡，包括例如调节性细胞因子和生长因子的复杂网络。

间隙连接是促进直接细胞间通信的细胞膜结构。间隙连接通道由两个连接子(半通道)组成，每一个由六个连接蛋白亚单位组成。每个六聚体连接子与在相对的膜中连接子对接(dock)而形成单间隙连接。据报道间隙连接通道发现于整个身体中。

连接蛋白为蛋白家族，通常根据其分子量命名或基于系统发生分类成α，β和γ亚类。已确定至少20种人类和19种小鼠的同种型。据报道不同组织和细胞类型具有特征的连接蛋白表达的模式。

反义技术已经报道用于调节涉及病毒、真菌和代谢性疾病的基因的表达。参见例如美国专利号5,166,195、5,004,810。反义技术也已经开发用于调节连接蛋白和治疗伤口。参见例如美国专利号7,098,190、7,879,811、7,902、164、7,919,474、8,034,789、8,059,486、8,063,023、8,181,580和8,314,074。间隙连接和半通道的肽抑制剂也有报道。参见例如WO2006/134494，公开的美国专利申请出版号20100279921。

尽管在伤口愈合过程所经历的原理的理解上取得了进展，但在慢性伤口护理的合适治疗选项上仍然存在显著未满足的需要。这些发明解决这个持续的需求。

发明内容

在本文中描述并要求保护的本发明具有许多属性和实施方式，包括但不限于，在本发明内容部分中阐述或描述或引用的那些，其并不旨在是包容一切的。在本文中描述并要求保护的本发明并不限于或受限于本发明内容部分中确定的所述特性或实施方式，将其包括在内目的仅仅在于概述举例说明而非进行限制。

本公开涉及识别和治疗难愈性慢性伤口的方法，以及剂量方案和适用于治疗那些伤口的制造制品。含有制造制品、并适用于本文中公开的方法的药物组合物含有连接蛋白26、连接蛋白30和/或连接蛋白43，以及本文中公开的其他连接蛋白的有效剂量的抗连接蛋白多核苷酸(例如，连接蛋白反义寡脱氧核苷酸，如单链抗连接蛋白寡脱氧核苷酸)。

正如本文中所用，在本发明的一个实施方式中，并举例而言，难愈性伤口是慢性伤口，或按预期的速率不愈的伤口，如延迟愈合的伤口和不完全愈合伤口，其在标准护理治疗期内例如，在二至四周内使用加压包扎或减压设备，在尺寸方面不降低超过约30％(+30％)，并且在伤口尺寸方面其不增加超过15％(-15％)。这种标准护理治疗期也可以称之为"磨合(run-in)"或"预处理"期。伤口尺寸的增加或减少可以统称为“表面面积减少”(也称为“SAR”)。在磨合期内SAR范围例如-15％至+30％，可以称为磨合期SAR范围。一旦出现针对治疗的慢性伤口，提供标准护理持续二至四周的一段时间。出现之后(uponpresentation)和在磨合期结束时的伤口尺寸的估计和/或正式测量被用于通过评估它是否随着指定的SAR磨合期范围下降以确定伤口是否对于标准护理治疗是难愈性的。在一些方面中例如磨合期内的标准护理是多层加压包扎(compressionbandaging)。在其他方面中，标准护理例如是减压(off-loading)。在一些实施方式中，磨合期内的标准护理治疗是单层加压包扎，或压缩绷带包扎(stocking)。加压包扎通常约每周一次更换或重新应用。在其他的实施方式中，磨合期内的标准护理治疗是减少压力，或减压。足压力、震动、和剪切可以随着经适当和适的鞋、鞋垫、和袜子降低。使用轮椅或拐杖的总非重支承是另一种有效的缓解压力方法。其他的减压标准护理方式包括全接触石膏，去除石膏和可去除石膏助行架。

在其他实施方式中，难愈性伤口是慢性伤口，或按预期的速率不愈的伤口，如延迟愈合的伤口和不完全愈合伤口，其在标准护理治疗期内在二至四周内使用加压包扎在尺寸方面不降低超过约30％(+30％)。

在还有的其他实施方式中，难愈性伤口是慢性伤口，或按预期的速率不愈的伤口，如延迟愈合的伤口和不完全愈合伤口，其在标准护理治疗期内使用加压包扎在尺寸方面不降低超过约35％(+35％)其在伤口尺寸方面不增加超过15％(-15％)。

在进一步实施方式中，难愈性伤口是慢性伤口，或按预期的速率不愈的伤口，如延迟愈合的伤口和不完全愈合伤口，其在标准护理治疗期内使用二至四周加压包扎在尺寸方面增加或降低不超过约-5％/+30％、-10％/+30％、-15％/+30％、-20％/+30％、25％/+30％或-30％/+30％。

令人惊讶的是，据观察，难愈性慢性伤口易感于给予这样的药物组合物：其含有适合于局部给予的药用载体和例如约0.5mg/mL至约40mg/mL、或举其他实例而言约1至30mg/mL的抗连接蛋白26、抗连接蛋白30或抗连接蛋白43的多核苷酸。

因此，在一个方面中，本公开涉及一种治疗难愈性伤口的方法，方法包括：

确定用于治疗的慢性伤口的初始出现后的尺寸以获得第一尺寸测量结果或估算值；

向伤口给予标准护理，如例如加压包扎和/或减压；

在给予所述标准护理之后约二至四周确定伤口的尺寸以获得第二尺寸测量结果；

确定伤口的第二尺寸指标处于第一尺寸测量结果的预定范围(例如，-15％至+30％/-35％至+30％)之内，或通过更多预定量(例如，超过约+30％-35％的伤口SAR)而不治愈，由此识别出难愈性伤口；和

向伤口处或伤口附近给予含有例如有效量的抗连接蛋白43多核苷酸的药物组合物。合适剂量、剂量用量和剂量浓度和制剂的实例在本文中进行了描述。

可以通过本领域内已知的各种方法，包括例如通过测定或合理估算或近似伤口的任何物理尺寸，如表面面积、最长直径的长度和/或最长直径的较长垂直平分线的长度测定伤口的尺寸。对于具有相对小的表面面积的深伤口，如糖尿病性足溃疡，体积也可以作为尺寸测量。其他已知的伤口测量方法包括测面法、伤口示踪法、数字化技术和立体光学测定法(stereophotograrometry)，以及简单的基于标尺的方法。三种市售伤口测量技术包括维斯特拉克(Visitrak)系统(SmithandNephewHealthcare，Hull，U.K.)，数字摄影和图像处理系统(Analyze，version6.0；AnalyzeDirect，Lenexa，KS)，和使用计算椭圆面积的标准公式(πab)的椭圆测量方法。

在另一方面中，本公开涉及检测易感于通过含有例如约0.5mg/mL至约40mg/mL或约1至30mg/mL的例如抗连接蛋白43多核苷酸的药物组合物的治疗的难愈性慢性伤口的方法，方法包括

测定进行治疗的伤口初始出现后的尺寸指标以获得第一尺寸测量结果；

向伤口给予标准护理，如例如加压包扎和/或减压；

在给予初始标准护理治疗之后约二至四周测定伤口面积以获得第二尺寸测量结果；

确定伤口的第二尺寸指标处于本文内描述的第一尺寸测量结果的预定范围之内，由此检测易感于通过给予含有治疗有效量的例如抗连接蛋白43多核苷酸的药物组合物的治疗的进展缓慢或难愈性的创伤。其他连接蛋白靶按照本文中也是设想的。

在另一方面中，本公开涉及适用于治疗具有难愈性伤口的受试者的试剂盒、包装和/或制造制品，包括包含药物组合物的容器；和如本文中描述和要求保护的组合物的使用说明书，该药物组合物包含以治疗有效量或浓度例如1.0至3.0至约30.0至100mg/mL存在的抗连接蛋白43反义寡脱氧核苷酸，和药用载体例如非离子聚环氧乙烷-聚环氧丙烷共聚物。这种药物包括如本文中用于治疗受试者的那些。

在另一方面中，本发明涉及一种在向伤口局部给予含有非离子聚环氧乙烷-聚环氧丙烷共聚物例如泊洛沙姆407(以例如约15％-30％，如25％-27％的浓度)和例如以约3.0至约30mg/mL，或约1.0至约100mg/mL的浓度存在的单链抗连接蛋白43反义寡脱氧核苷酸的组合物之后、采用完全愈合的增加的可能性来检测难愈性伤口的方法，例如，方法包括：

向伤口给予标准护理，如例如加压包扎和/或减压；

测定在开始标准护理治疗之后约2-4周伤口的尺寸指标以获得第二尺寸测量结果；和

检测伤口面积处于的预定尺寸范围之内，例如在磨合期之后其尺寸的约-15％至+30％，由此确定在向难愈性伤口局部给予含有所述抗连接蛋白43反义寡脱氧核苷酸的组合物之后完全愈合的增加的可能性。

在一些实施方式中，药物组合物包含有效量的3-30mg/mL或1-100mg/mL或本文中公开的其他合适剂量的抗连接蛋白43多核苷酸。药物组合物可以进一步包含一种或多种适合于局部给予的药物载体。在一个实施方式中，药物组合物可以包含约20％-30％的非离子聚环氧乙烷-聚环氧丙烷共聚物，和/或本文中公开的其他药物载体。

在一个方面中，抗连接蛋白多核苷酸可以以约3.0至约30mg/mL，或约1.0至约100mg/mL的浓度存在于药物组合物中。在一些方面中，抗连接蛋白多核苷酸可以以约3、约5、约10、或约30mg/ml、或最高达约100mg/mL的任何量的浓度存在。在其他方面中，抗连接蛋白多核苷酸可以例如以约100μΜ至约5000uM的浓度存在于药物组合物中。在一些实施方式中，本发明的治疗有效量的组合物含有药用载体和以约0.5至约40mg/mL(mL；mg/mL)或约3至约30mg/mL，或约100μΜ至约5000μΜ的浓度存在的抗连接蛋白的药剂如单链抗连接蛋白43寡脱氧核苷酸。

一种或多种剂量可以给予至具有难愈性伤口的受试者。在一些实施方式中，可以按照合适或所需的间隔反复给予一种或多种剂量的药物组合物。在一些实施方式中，药物组合物可以例如每日、或每周一至六次反复给予。例如，本文中所描述的含抗连接蛋白的药剂的组合物和制剂能够按照所需每周一次给予直至观察到愈合进展或完全。本发明的组合物可以更加频繁地施用，例如两或三次/周。它们也可以每两周、或每月施用。给予的频率和剂量可以在治疗过程中随着伤口面积和体积的变化而变化。此外，在伤口愈合再次变得停滞不前或延迟的情况下能够进行进一步的一次或多次施用。

根据本发明的另一方面，促进了伤口再上皮化和/或肉芽组织的形成。促进皮肤伤口再上皮化的方法包括以有效促进再上皮化的量向具有按照预期速率不愈合的伤口，包括例如延迟愈合或不完全愈合伤口或慢性伤口的受试者给予抗连接蛋白的药剂例如抗连接蛋白多核苷酸。类似的方法可以用于调节上皮基础细胞分裂和生长。

令人惊讶地观察到，难愈性伤口易感于在其之上或附近给予例如含有0.5至40mg/mL或更高浓度的抗连接蛋白多核苷酸和适合于局部给予的药用载体的药物组合物。举例而言，检测难愈性伤口可以有利地用于识别服从于采用含有0.5至40mg/mL抗连接蛋白多核苷酸、例如3至30mg/mL的抗连接蛋白43ODN的药物组合物治疗的患者。本文中提供了其他合适剂量和剂量浓度。

在本发明的方法的一些方面中，如上所述，通过确定伤口的长度、宽度、深度、评估、边缘周长、体积、或表面面积，或它们的函数评估患者伤口的大小。可以使用任何合适方法，包括直接手动测量、激光扫描、成像装置如相机、平板电脑或PDA、表面映射等。对于伤口尺寸目前优选的度量是伤口表面面积，优选作为伤口长度乘以宽度伤口的乘积，伤口示踪法，或通过测面法获得。

令人惊讶和出乎意料地已经发现，磨合期内的尺寸变化范围为例如在磨合期内在伤口尺寸方面不超过约30％的增加至在伤口尺寸方面不超过15％的降低，和如前提及的其他范围和/或阈值量。优选的磨合阶段范围为约7至约30天，优选约7天至约21天，更优选约7天至约14天。优选14天的磨合。

以下提供的本发明的这些和其他方面，不限于或不受限于本发明内容中的信息。

附图说明

图1A-图1C显示了在10周治疗期之后在磨合期内使用-40％至+40％伤口尺寸变化的2B期临床研究的结果。图1A显示了在每个研究组中患者的％完全伤口封闭的作图：标准护理(SOC)，仅媒介物，和低剂量(1mg)或高剂量(1mg)的示例性抗连接蛋白43多核苷酸。图1B显示了每个研究小组中患者伤口表面面积降低的作图。图1C显示了基于磨合期内-40％至+40％伤口尺寸变化选择的患者并未在表面面积减少终点和完全伤口愈合次要终点的背景中表现出统计上的显著响应。

图2显示了来自满足-15％至+30％伤口尺寸变化标准的研究的每个小组中2B期研究的患者亚群体数据的重新分析的在第10周的％完全伤口封闭的作图。

图3显示了基于来自针对在研究每个小组中满足-15％至+30％伤口尺寸变化标准的患者亚群的2B期研究的数据的重新分析的表面面积减少的作图。。

图4表明满足-15％至+30％伤口尺寸变化标准的患者亚群体在表面面积减少终点和完全伤口愈合次要终点的背景中表现出统计显著性(P<0.05)响应。

具体实施方式

按预期的速率不愈的伤口，包括愈合缓慢伤口、愈合延迟伤口、不完全愈合伤口、裂开性伤口以及慢性伤口，往往会造成感染，并可能导致截肢或死亡。通过间隙连接的细胞间通信在伤口愈合中起着关键作用。据发现，使用某些化合物，即抗连接蛋白的药剂，包括本文中描述或所提及或另外现在已知或以后开发的那些，可以阻断、抑制或改变细胞通信以促进按预期的速率不愈的伤口包括愈合缓慢伤口、愈合延迟伤口、不完全愈合伤口、裂开性伤口、以及慢性伤口的封闭和愈合。此外，如本文中的描述，令人惊奇和出乎意料的是，据发现，通过给予例如连接蛋白26(Cx26)、连接蛋白30(Cx30)或连接蛋白43(Cx43)的一种或多种抗连接蛋白的药剂，通过向其一个或多个慢性伤口在标准护理(预处理)磨合阶段期间内维持于某尺寸范围内的患者给予所需的抗连接蛋白的药剂可以进一步促进难愈性慢性伤口的愈合。其他连接蛋白靶包括连接蛋白30.3(Cx30.3)、连接蛋白31(Cx31)、连接蛋白31.1(Cx31.1)、连接蛋白32(Cx32)、连接蛋白37(Cx37)、连接蛋白40(Cx40)和连接蛋白45(Cx45)，即，是抗连接蛋白26、30、30.3、31、31.1、32、37、40、43、或45的多核苷酸。优选的是，在约1至约30天、优选约5天至约20天、更加优选约7天至约14天的预处理阶段的期间内，待治疗的伤口在尺寸方面增加不超过约30％，例如，或作为另一实例在尺寸方面增加不超过约35％，或例如，在尺寸方面增加不超过约30％或在尺寸方面降低不超过约15％。

令人惊讶的是，据观察，在尺寸方面不增加约30％或在尺寸方面不降低约15％的难愈性伤口易感于向伤口处或伤口附近给予含有约0.5mg/mL至约40mg/mL，或约1至30mg/mL的抗连接蛋白多核苷酸和适合于局部给予的药用载体的药物组合物。在其他实施方式中，难愈性伤口是慢性伤口，或按预期的速率不愈的伤口，如延迟愈合的伤口和不完全愈合伤口，其在标准护理治疗期内使用例如在二至四周内加压包扎或减压设备在尺寸方面不降低超过约30％(+30％)。在还有的其他实施方式中，难愈性伤口是慢性伤口，或按预期的速率不愈的伤口，如延迟愈合的伤口和不完全愈合伤口，其在标准护理治疗期内使用例如加压包扎或减压设备在尺寸方面不降低超过约35％(+35％)，其在伤口尺寸增加不超过15％(-15％)。在进一步实施方式中，难愈性伤口是慢性伤口，或按预期的速率不愈的伤口，如延迟愈合的伤口和不完全愈合伤口，其在标准护理治疗期内使用例如在二至四周内加压包扎或减压设备在尺寸方面不增加或降低超过约-5％/+30％、-10％/+30％、-15％/+30％、-20％/+30％、25％/+30％或-30％/+30％。在其他实施方式中，磨合期内标准护理治疗是降低压力，或减压。可以采用适当合适的鞋、鞋垫和袜子降低足压、冲击和剪切。使用轮椅或拐杖的总非重支承(Totalnon-weightbearing)是另一种有效的缓解压力方法。其他的减压标准护理方式包括全接触石膏、去除石膏和可去除石膏助行架。

在一些实施方式中，治疗有效量的本发明组合物含有药用载体和以约0.5至约40.0mg/mL(mL；mg/mL)或约3至约30mg/mL的浓度存在的抗连接蛋白的药剂如单链抗连接蛋白43寡脱氧核苷酸。优选的浓度范围为约1.5至约30mg/mL(mg/mL)、约1.5至约10mg/mL、或约3、约5、约10、或约30mg/mL。在一些方面中给予的抗连接蛋白多核苷酸的总剂量可以为约100μg至约30mg。

尤其优选的连接蛋白反义多核苷酸(例如，单链抗连接蛋白43寡脱氧核苷酸)的浓度范围为约150μΜ至约10,000μΜ。从另一方面而言，根据本发明通过给予约150μg至约10,000μg的连接蛋白反义多核苷酸(例如，单链抗连接蛋白43寡脱氧核苷酸)/平方厘米的伤口表面面积可以有效治疗难愈性慢性皮肤伤口。

定义

正如本文中所用，“病症”是将受益于促进对标准护理治疗是难愈性的慢性或愈合延迟伤口的愈合、和/或当治疗这种伤口时减少瘢痕形成的药剂的任何病症、疾病或病状。例如，包括与神经性、缺血性和微血管病变关联的伤口相关异常；骨区[尾骨(骶骨)、髋关节(转子骨)、臀部(坐骨)、或足跟]内压力；再灌注损伤；和与瓣膜回流病因及相关病症有关的病症。

正如本文中所用，“受试者”是指任何哺乳动物，包括人、家畜和农场动物和动物园、运动或宠物动物，如狗、马、猫、羊、猪、牛等。本文中优选的哺乳动物是人，包括成人、儿童和老人。

正如本文中所用，“预防”是指整体或部分预防，或缓解或控制。

正如本文中所用，所指本发明化合物或组合物的“治疗有效量”是指足以引起所期望的生物、药物或治疗效果的量。效果可以是缓解疾病或病症或病状的病征、症状或病因，或任何其他所需的生物学系统的改变。在本发明中，效果将全部或部分涉及促进和/或改善伤口愈合，包括伤口愈合速率和伤口的封闭。其他受益全部或部分包括降低肿胀、发炎和/或瘢痕形成。

正如本文中所用，术语“治疗”是指治疗性治疗和预防或预防性措施。

正如本文中所用，“同时”用于表示一种或多种抗连接蛋白的药剂(例如，抗连接蛋白多核苷酸例如反义多核苷酸)被同时给予，而术语“组合”则用于表示它们进行给予时，如果不是同时或物理组合，则时间框架内“按序”它们都可以用于发挥治疗作用。因此，“按序”给予可以允许一种药物在另一种之后几分钟(例如，1、2、3、4、5、10、15、20、25、30)或几小时、天、周或月内给予，条件是一种或多种抗连接蛋白多核苷酸同时以有效量存在。给予组分之间的时间延迟将根据组分的精确性质、它们之间的相互作用以及它们各自的半衰期而变化。

正如本文中所用，“抗连接蛋白的药剂”降低或抑制连接蛋白mRNA、前mRNA(pre-mRNA)和/或连接蛋白蛋白质的表达。抗连接蛋白的药剂包括抗连接蛋白多核苷酸，包括但不限于，反义化合物如反义多核苷酸，其他多核苷酸(如具有siRNA或核酶功能的多核苷酸)，肽模拟物和其他会干扰连接蛋白蛋白质活性、功能、转运、定位等的化合物。抗连接蛋白多核苷酸的合适实例包括靶向连接蛋白mRNA的反义多核苷酸。因此，合适的抗连接蛋白多核苷酸包括例如调节所选组织、细胞和受试者中连接蛋白和间隙连接的表达或活性的反义多核苷酸(例如，Cx43反义多核苷酸)。

术语“伤口敷料”是指用于局部施用到伤口并排除适合于全身性给予的组合物之外的敷料。例如，一种或多种抗连接蛋白的药剂(如抗连接蛋白多核苷酸)可以分散于伤口接触材料如织造或无纺织物材料的固体薄板之内或之上，或可以分散于泡沫如聚氨酯层泡沫的层中，或水凝胶如聚氨酯水凝胶、聚丙烯酸酯水凝胶、明胶、羧甲基纤维素、果胶、藻酸盐和/或透明质酸水凝胶中，例如在凝胶或膏剂内。在某些实施方式中，一种或多种抗连接蛋白的药剂分散于提供向伤口缓释活性成分的可生物降解片材例如冻干胶原片材、冻干胶原或/藻酸盐混合物(以注册商标FIBRACOL获自Johnson&JohnsonMedicalLimited)或冻干胶原/氧化再生纤维素(以注册商标PROMOGRAN获自Johnson&JohnsonMedicalLimited)之上或之内。

正如本文中所用，“伤口促进基质”包括例如合成或天然存在的基质如胶原蛋白、无细胞(脱细胞，acellular)基质、交联生物支架分子、基于组织的生物工程化的结构框架、生物生产的生物假体，以及其他植入结构，如例如，适合于细胞渗透和增殖而用于促进伤口愈合的血管移植物。其他合适的生物基质材料可以包括化学修饰的胶原组织以减少抗原性和免疫原性。其他合适的实例包括用于伤口敷料的胶原薄片、无抗原或抗原减少的无细胞基质(Wilson，etal.(1990)，TransAmSocArtifIntern36:340至343)或已经工程化以降低对异种移植物材料的抗原反应的其他生物基质。适用于促进伤口愈合的其他基质可以包括例如，含有不溶性胶原和弹性蛋白的加工牛心包蛋白(Courtman，etal.(1994)，JBiomedMaterRes28:655-666)和其他可以用于提供宿主细胞迁移而加速组织再生的天然微环境的无细胞组织(MaloneJMetal.(1984)JVaseSurg1:181-91)。本发明设想了含有本文中所描述的一种或多种抗连接蛋白的药剂的合成或天然基质。

正如本文中所用，术语“伤口”包括任何组织的损伤，包括例如，延迟或难以愈合的伤口，以及慢性伤口。伤口的实例包括开放和封闭的伤口。术语“伤口”还可以包括例如，以不同的方式(例如，长期卧床休息的褥疮和外伤引起的伤口)引起的和具有不同特点的皮肤和皮下组织损伤。根据伤口深度，可以将伤口分类至四个等级之一中：i)I级伤口，限于上皮；ii)II级伤口，延伸到真皮内；iii)III级伤口，延伸到皮下组织内；和iv)IV级(或全层伤口)伤口，其中骨头是暴露的(例如，骨压点如大转子骨或骶骨)。

术语“部分厚度伤口”是指涵盖I至III级的伤口。部分厚度伤口的实例包括褥疮、静脉淤积溃疡和糖尿病性溃疡。本发明设想治疗所有按预期的速率不愈的伤口类型，包括，延迟愈合的伤口、不完全愈合伤口以及慢性伤口。

“按照预期速率不愈合的伤口”是指任何组织的损伤，包括延迟的或难以愈合的伤口(包括延迟或不完全愈合的伤口)，以及慢性伤口。按照预期速率不愈合的伤口的实例包括溃疡，如糖尿病性溃疡、糖尿病性足溃疡、脉管炎性溃疡、动脉性溃疡、静脉性溃疡、静脉淤积溃疡、压力性溃疡、褥疮溃疡、感染性溃疡、创伤引起的溃疡、烧伤性溃疡、与坏疽性脓皮病有关的溃疡形成(ulceration)和混合溃疡。其他按预期的速率不愈的伤口包括裂开性伤口。

正如本文中所用，“延迟”或“难以愈合的”伤口可以包括例如至少部分特征在于以下的伤口：1)延长的发炎期，2)细胞外基质形成缓慢和/或3)上皮化或封闭速率降低。

术语“慢性伤口”通常是指还没有愈合的伤口。例如三个月内不愈合的伤口则认为是慢性的。慢性伤口包括静脉性溃疡、静脉淤积溃疡、动脉性溃疡、压力性溃疡、糖尿病性溃疡、糖尿病性足溃疡、脉管炎性溃疡、褥疮溃疡、烧伤性溃疡、创伤引起的溃疡、感染性溃疡、混合溃疡和坏疽性脓皮病。慢性伤口可能是动脉性溃疡，其包括由完全或部分动脉堵塞所致的溃疡形成。慢性伤口可以是静脉或静脉淤积溃疡，其包括由静脉瓣和相关血管疾病功能障碍所致的溃疡形成。在某些实施方式中，提供了治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口特征在于压力性溃疡的一个或多个以下AHCPR阶段：阶段1，阶段2，阶段3和/或阶段4。

正如本文中所用，慢性伤口可以是指例如至少部分特征在于以下一个或多个的伤口：(1)伤口发炎的慢性自我持续状态，(2)有缺陷和有缺损的伤口胞外基质，(3)不良反应(衰老)伤口细胞，尤其是成纤维细胞，限制性胞外基质生产和/或(4)部分由于缺乏必需要的胞外基质协作和缺乏迁移支架所致的再上皮化失败。慢性伤口的特征也可能在于1)延长的发炎和蛋白水解活性使得溃疡性病变，包括例如，糖尿病性、压力(褥疮)、静脉和动脉的溃疡，2)受影响区域内基质的逐步沉积，3)更长的修复时间，4)伤口收缩不足，5)再上皮化缓慢和6)肉芽组织厚度增加。

术语“难愈性”慢性伤口或“难愈性”伤口是指按预期的速率不愈的伤口，如延迟愈合的伤口、不完全愈合伤口、以及慢性伤口，并且例如，在2至4周的磨合期期间内在伤口尺寸方面增加不超过约30％(对于给予标准护理是完全难愈性的)并且其在伤口尺寸方面降低不超过15％(-15％)(对于给予标准护理是完全难愈性的)。在出现进行治疗的按照预期速率不愈合的伤口之后，使用标准护理治疗使用例如加压包扎或减压设备预处理伤口。在一些实施方式中，难愈性伤口是按预期的速率不愈的伤口并且其在磨合期期间内在伤口尺寸方面增加不超过约30％，并且在尺寸方面降低不超过约20％、25％、30％或35％。在其他实施方式中，难愈性伤口是慢性伤口或按预期的速率不愈的伤口，如延迟愈合的伤口和不完全愈合伤口，其在标准护理治疗期内使用例如加压包扎或减压设备，在二至四周内伤口在尺寸方面降低不超过约30％(+30％)。在还有的其他实施方式中，难愈性伤口是慢性伤口或按预期的速率不愈的伤口，如延迟愈合的伤口和不完全愈合伤口，其在标准护理治疗期内使用例如加压包扎或减压设备，在伤口尺寸方面降低不超过约35％(+35％)，在伤口尺寸方面增加不超过15％(-15％)。在进一步实施方式中，难愈性伤口是慢性伤口或按预期的速率不愈的伤口，如延迟愈合的伤口和不完全愈合伤口，其在标准护理治疗期内使用例如加压包扎或减压设备，在二至四周内尺寸增加或降低不超过约-5％/+30％、-10％/+30％、-15％/+30％、-20％/+30％、25％/+30％或-30％/+30％)。在本公开一些方面中，难愈性伤口可能是例如难愈性皮肤溃疡，如静脉性腿溃疡或糖尿病性足溃疡。在还有的另一方面中，本发明包括治疗患有或怀疑患有完全或部分特征在于慢性伤口或延迟或不完全伤口愈合的任何疾病、病症和/或病状或其他按预期速率不愈的伤口的受试者的方法。在一些实施方式中，患者患有糖尿病性溃疡、糖尿病性足溃疡、脉管炎性溃疡、静脉性溃疡、静脉淤积溃疡、动脉性溃疡、压力性溃疡、褥疮溃疡、感染性溃疡、创伤引起的溃疡、烧伤性溃疡、与坏疽性脓皮病相关的溃疡形成、或混合的一种或多种溃疡。

在本发明的上下文中，抗连接蛋白的药剂优选局部给予(于待治疗位置处和/或周围)。合适的是，抗连接蛋白的药剂例如抗连接蛋白反义多核苷酸于药用载体、赋形剂或稀释剂组合以提供药物组合物。

示例性的慢性伤口可以包括“压力性溃疡。”基于AHCPR(AgencyforHealthCarePolicyandResearch，U.S.DepartmentofHealthandHumanServices)准则示例性压力性溃疡可以分为4个阶段。阶段I的压力性溃疡是完整皮肤的显著的压力相关改变，相比于身体上邻近或相对区域其指标可以包括以下中的一种或多种变化：皮肤温度(发热或冰凉)、组织一致性(结实或松软触感)和/或知觉(疼痛、发痒)。溃疡表现为轻度着色的皮肤内限定区域的持续发红，而在较深色的皮肤色调(tone)中，溃疡可以出现持续性红色、蓝色或紫色色彩(hue)。阶段1溃疡可以包括完整皮肤的发白红斑和皮肤溃疡的前驱病变。在较深皮肤的个人中，皮肤变色、发热、水肿、硬结或发硬也可以是阶段1溃疡的指标。阶段2溃疡可能特征在于涉及表皮、真皮或两者的部分厚度皮肤缺失。溃疡是浅表的，并在临床上表现为擦伤、水泡或浅弧坑。阶段3溃疡可能特征在于涉及伤及皮下组织或延伸到底层筋膜但并未穿过的皮下组织坏死的全厚度皮肤缺失。溃疡临床表现为有或没有破坏邻近组织的深弧坑。阶段4溃疡可能特征在于具有广泛破坏、组织坏死或伤及肌肉、骨骼或支持结构(例如，腱、关节囊)的全层皮肤缺失。在某些实施方式中，提供了治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于压力性溃疡的以下AHCPR阶段中的一个或多个：阶段1、阶段2、阶段3和/或阶段4。

示例性的慢性伤口可以还包括“褥疮溃疡。”示例性褥疮溃疡可以由于导致局部缺血的骨性突出上长期且未释放的压力而出现。伤口往往会发生于无法自己重新定位以减除重量的患者，如瘫痪、无意识或严重虚弱的人。正如美国卫生和人类服务部(U.S.DepartmentofHealthandHumanServices)的限定，主要预防措施包括识别高危病人；经常评估；和预防措施，如计划性重新定位、适当的降压铺床、防潮垫和足够的营养状况。治疗选项可以包括例如，减压、手术和酶清创、潮湿伤口护理以及细菌负荷的控制。在某些实施方式中提供了治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于褥疮溃疡或溃疡，其是由导致局部缺血的骨性突出上长期且未释放的压力所致。

慢性伤口还可以包括“动脉性溃疡”。慢性动脉性溃疡通常理解为伴随动脉硬化和高血压心血管疾病的溃疡形成。它们是疼痛的、边界清晰的，并且经常发现于外侧下肢和脚趾。动脉性溃疡可以特征在于完全或部分动脉堵塞，这可能会使得组织坏死和/或溃疡。动脉性溃疡的体征可以包括例如肢体无脉动；溃疡疼痛；通常是边界清楚的小点状溃疡；凉或冷的皮肤；延迟的毛细管反流时间(简单地推压脚趾末端并释放，正常的颜色应该在约3秒或更少内返回到脚趾)；萎缩性外观皮肤(例如，发亮的、薄、干燥)；和指和足毛发的脱失。在某些实施方式中，提供了治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口特征在于由于完全或部分动脉堵塞导致的动脉性溃疡或溃疡形成(ulcersorulcerations)。

示例性的慢性伤口可以包括“静脉性溃疡”。示例性静脉性溃疡是影响下肢的最常见溃疡类型并可能特征在于静脉瓣的功能障碍。正常静脉具有的瓣膜可以避免血液回流。当这些瓣膜变得失效时，静脉血液回流会引起静脉充血。红血细胞的血红蛋白逃逸并渗漏到血管外空间中，引起通常提及的褐色变色。已经证明，包围静脉性溃疡的皮肤的透皮氧压降低，提示存在阻碍区域的正常血管分布的力量。淋巴排泄和流动也在这些溃疡中发挥作用。静脉性溃疡可以出现于内踝附近并通常与水肿和硬化的下肢结合出现；它可以是浅表的，不太疼痛的，并从影响位置出现滴泪式外流。在某些实施方式中，提供了治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口特征在于由于静脉瓣膜功能失调和相关脉管疾病所致的静脉性溃疡或溃疡形成。在某些实施方式中，提供了治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口特征在于由于完全或部分动脉堵塞所致的动脉性溃疡或溃疡形成。

示例性的慢性伤口可以包括“静脉淤积(阻塞，stasis)溃疡”。淤积溃疡是与静脉机能不全相关的病变，较为普遍出现于内踝，通常具有凹陷性水肿、静脉曲张、斑驳的色素沉着、红斑以及不可触及的瘀点和紫癜。淤积性皮炎和溃疡通常搔痒而不是疼痛。示例性静脉淤积溃疡可能特征在于下肢的慢性被动性静脉充血，使得局部缺氧。这些伤口发病的一个可能机制包括氧跨越厚血管周纤维蛋白套扩散进入组织受阻。另一种机制是，大分子泄漏到维持皮肤完整性所需的血管周围组织阱生长因子中。此外，由于静脉充血、阻塞毛细血管、变得激活和损害血管内皮，大白血细胞的流动减慢，诱发溃疡形成。在某些实施方式中，提供了治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于由于静脉瓣的功能障碍和相关血管疾病所致的静脉性溃疡或溃疡形成。在某些实施方式中，提供了治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于由于下肢的慢性被动静脉充血和/或所产生的局部缺氧所致的静脉淤积溃疡或溃疡形成。

示例性的慢性伤口可以包括“糖尿病性溃疡”。糖尿病患者很容易发生由于神经并发症和血管并发症二者所致的溃疡形成，包括足溃疡形成。外周神经病变可以引起足和/或腿部感觉改变或完全丧失。高级神经病变的糖尿病患者会损失锐-钝辨析的所有能力。足上的任何割伤或外伤对于神经病变的患者可能完全忽视长达数天或数周。在实际上溃疡已存在相当长的一段时间时神经病变的患者注意溃疡“刚刚出现”并不罕见的。对于神经病变的患者，已经证明严格的血糖控制可以减缓疾病的进展。也可能由于感觉减退而出现夏科氏足畸形。当在足部区域放置太大的压力时，在其足部具有“正常”感觉的人具有自动感知的能力。一旦觉察，我们的身体本能地移动位置而缓解这种压力。患有高级神经病变的病人会失去这种感知持续压力侵犯的能力，因此会发生组织缺血，坏死而导致例如足底溃疡。此外，足骨中的微裂缝，如果不注意和及时治疗可能会导致畸形、慢性肿胀和其他骨突起。微血管病变是糖尿病的显著并发症之一，其也可以导致溃疡形成。在某些实施方式中，提供了治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于由于糖尿病的神经并发症和血管并发症所致的糖尿病性足溃疡和/或溃疡形成。

示例性的慢性伤口可以包括“外伤性溃疡”。外伤性溃疡的形成可能是身体的外伤的结果。这些损伤包括例如累及动脉、静脉或淋巴系统；骨骼的骨结构的变化；组织层-表皮、真皮、皮下软组织、肌肉或骨的缺失；身体部位或器官损伤以及身体部位或器官的缺失。在某些实施方式中，提供了治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于与身体外伤损伤有关的溃疡形成。

示例性的慢性伤口可以包括“烧伤性溃疡”，包括第一度烧伤(即皮肤的表浅、发红区域)；第二度烧伤(在去除水泡液体之后可以自发愈合的起水泡的损伤部位)；第三度烧伤(烧穿整个皮肤并且通常需要对伤口愈合进行手术干预)；烫伤(可能会发生于滚烫的热水、油脂或散热器流体)；热烫伤(可能发生于火焰，通常是深度烧伤)；化学烧伤(可能来自酸和碱，通常是深度烧伤)；电烧伤(房子周围的低压或工作中的高电压)；爆闪(通常是浅表伤)；和接触灼伤(一般很深并可能发生于消声器尾管、热熨斗和火炉)。在某些实施方式中，提供了治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于与对身体的烧伤相关的溃疡形成。

示例性的慢性伤口可以包括“脉管炎性溃疡”。脉管炎性溃疡同样发生于下肢并是疼痛的，边界清晰的病变，其可以具有相关可触知的紫癜和出血性大疱。胶原疾病、败血症以及各种血液学病症(例如，血小板减少症，蛋白异常血症)可能是这种严重的急性病症的病因。

示例性的慢性伤口可以包括坏疽性脓皮病。坏疽性脓皮病作为下肢的单个或多个非常轻的溃疡出现。深红到发紫的，破坏的边界包围着化脓性中心缺陷。活检通常不能揭示血管炎。在一半的患者中它与全身性疾病如溃疡性结肠炎、节段性回肠炎或白血病相关。在某些实施方式中，提供了治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于与坏疽性脓皮病相关的溃疡形成。

示例性的慢性伤口可以包括感染性溃疡。感染性溃疡跟随各种生物的直接接种，并可以与显著的区域性淋巴结肿大相关。分枝杆菌感染、炭疽、白喉、芽生菌病(blastomyosis)、孢子丝菌病、野兔病以及猫抓热是实例。一期梅毒的生殖器溃疡一般无触痛，具有干净结实的基部。软下疳和腹股沟肉芽肿的那些往往是粗糙的、脏的并更糜烂的病变。在某些实施方式中，提供了治疗慢性伤口的方法，其中慢性伤口的特征在于感染有关的溃疡形成。

正如本文中所用，术语“裂开性伤口”是指通常是外科手术伤口，其已破裂或裂开的伤口。在某些实施方式中，提供了治疗按照预期速率不愈合的伤口的方法，其中伤口的特征在于裂开。

抗连接蛋白的药剂

抗连接蛋白多核苷酸

抗连接蛋白多核苷酸包括连接蛋白反义多核苷酸以及具有使之可以下调连接蛋白的表达(例如，通过下调mRNA的转录或翻译)的功能的多核苷酸。在下调的情况下，这具有在连接蛋白表达下调的部位处降低通过间隙连接的直接细胞-细胞通信的效应。

本发明总体涉及使用抗连接蛋白的药剂，优选抗连接蛋白多核苷酸，包括例如抗连接蛋白寡脱氧核苷酸(ODN)，定向至编码连接蛋白蛋白质的信使RNA(mRNA)或其前体。在本公开的方法和制造制品中使用的代表性的抗连接蛋白多核苷酸包括连接蛋白反义多核苷酸，以及RNAi多核苷酸、siRNA多核苷酸、shRNA多核苷酸、核酶、DNA酶和其他靶向连接蛋白信使RNA(mRNA)或其前体的抗连接蛋白多核苷酸。本发明范围内的其他抗连接蛋白的药剂包括拟肽和连接蛋白磷酰化药剂。

在抗连接蛋白多核苷酸的情况下，这种分子优选是单链多核苷酸，尽管在生理条件下所有或部分这种分子可以包括一种或多种部分或完全双链配对区域。这种多核苷酸包括具有修饰和/或未修饰的骨架，并可以通过重组或合成化学生产的那些。

在另一实施方式中，抗连接蛋白多核苷酸可以是抗连接蛋白43、抗连接蛋白26和抗连接蛋白30多核苷酸，例如ODN，如连接蛋白26、连接蛋白30或连接蛋白43的单链抗连接蛋白寡脱氧核苷酸。在一些实施方式中，抗连接蛋白多核苷酸是抗连接蛋白43多核苷酸。在一个实施方式中，抗连接蛋白多核苷酸是连接蛋白43反义寡脱氧核苷酸如连接蛋白的单链抗连接蛋白寡脱氧核苷酸。

在某些其他实施方式中，抗连接蛋白的药剂是靶向连接蛋白mRNA或其前体(即，前mRNA)的抗连接蛋白多核苷酸，尤其是为连接蛋白43(Cx43)、连接蛋白26(Cx26)、连接蛋白37(Cx37)、连接蛋白30(Cx30)、连接蛋白30.3(Cx30.3)、连接蛋白31(Cx31)、连接蛋白31.1(Cx31.1)或连接蛋白32(Cx32)、连接蛋白40(Cx40)和连接蛋白45(Cx45)编码的mRNA或前mRNA，即，是抗连接蛋白43、26、37、30、30.3、31、31.1、32、40或45多核苷酸。

尤其优选的抗连接蛋白多核苷酸包括抗连接蛋白寡脱氧核苷酸如抗连接蛋白43寡脱氧核苷酸。优选的抗连接蛋白多核苷酸含有约18至约32个多核苷酸。

因此，在另一方面中，本发明提供了含有至少一种抗连接蛋白的药剂例如连接蛋白反义多核苷酸、连同药用载体或媒介物的制剂。在一种优选的形式中，这种制剂含有靶向单个连接蛋白mRNA物种(最优选的是，连接蛋白43mRNA或前mRNA)的连接蛋白反义多核苷酸。可替代地，制剂可以含有靶向多于一种连接蛋白mRNA物种(例如为Cx43编码的mRNA物种以及为Cx30，Cx26，Cx37，Cx31.1或Cx32以及本文中提及的其他连接蛋白编码的mRNA物种)的抗连接蛋白的药剂例如连接蛋白反义多核苷酸。

根据一个方面，连接蛋白表达的下调可以总体上基于使用反义多核苷酸(如DNA或RNA多核苷酸)的反义方法，并且更具体而言基于反义寡脱氧核苷酸(ODN)的使用。这些多核苷酸(例如，ODN)靶向待下调的一种或多种连接蛋白蛋白质。通常多核苷酸是单链的，但可以是双链的。

反义多核苷酸可以抑制连接蛋白的转录和/或翻译。优选多核苷酸是连接蛋白基因或mRNA转录和/或翻译的特异性抑制剂，而不抑制其他基因或mRNA的转录和/或翻译。产物可以结合至连接蛋白基因或mRNA，亦或(i)编码序列的5'，和/或(ii)至编码序列和/或(iii)编码序列的3'。

反义多核苷酸通常反义于连接蛋白mRNA。这种多核苷酸可能能够杂交至连接蛋白mRNA并由此可以通过干涉连接蛋白mRNA代谢的一个或多个方面抑制连接蛋白的表达，mRNA代谢包括转录、mRNA加工、从细胞核的mRNA运输、翻译或mRNA降解。反义多核苷酸通常杂交至连接蛋白mRNA以形成双链体，其可以引起mRNA的翻译的直接抑制和/或失稳。这种双链体可以易感于核酸酶的降解作用。

反义多核苷酸可以杂交至连接蛋白mRNA的全部或部分。通常情况下，反义多核苷酸杂交至连接蛋白mRNA的核糖体结合区或编码区。多核苷酸可以互补于连接蛋白mRNA的全部或连接蛋白mRNA的区域。例如，多核苷酸可以是所有或部分连接蛋白mRNA的精确互补物。然而，并不需要绝对互补性，并且在生理条件下具有超过约20℃、30℃或40℃的熔融温度(解链温度，meltingtemperature)、具有足够的互补以形成双链体的多核苷酸尤其适合于在本发明中使用。

因此，多核苷酸通常是互补于mRNA的序列的同源物。多核苷酸可以是在中等至高度严格的条件下(如0.03M氯化钠和0.03M柠檬酸钠在约50至约60℃)杂交至连接蛋白mRNA的多核苷酸。

对于某些方面，合适的多核苷酸通常是约6至40个核苷酸长度。优选多核苷酸可以是约12至约35个核苷酸长度，或可替代地约12至约20个核苷酸长度或更优选约18至约32个核苷酸长度。根据一个可替代的方面，多核苷酸可以是至少40个核苷酸长度。

本发明包括包含以下的药物组合物：(a)治疗有效量的药用抗连接蛋白的药剂(例如，抗连接蛋白43寡脱氧核苷酸)和(b)药用载体或稀释剂。治疗有效剂量和剂量浓度如本文中的描述。在一些实施方式中，本发明的组合物或治疗方案包括包含多种抗连接蛋白的药剂物种(例如，两种或更多种抗连接蛋白多核苷酸物种，其中每种物种靶向不同的连接蛋白mRNA或前mRNA物种；因为在由抗连接蛋白多核苷酸靶向的不同连接蛋白mRNA或前mRNA物种的至少一部分范围内的保守序列同一性而可以靶向两种或更多种不同连接蛋白mRNA或前mRNA物种的抗连接蛋白多核苷酸；等)的组合物。

本发明的抗连接蛋白的药剂可以包括能够诱导连接蛋白氨基酸残基上的磷酰化以诱导间隙连接或半通道闭合的那些药剂或化合物。磷酰化的示例性位点包括连接蛋白蛋白质上的一个或多个酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸残基。在某些实施方式中，磷酰化的调节可以发生于一种或多种连接蛋白蛋白质上的一个或多个残基。示例性间隙连接磷酰化药剂在本领域内是众所周知的，并且可以包括例如c-Src酪氨酸激酶或其他G蛋白质-偶联的受体激动剂。参见GiepmansB，J.Biol.Chem.，Vol.276，Issue11，8544-8549，March16，2001。在一个实施方式中，在一种或多种这些残基上磷酰化的调节，尤其是通过封闭半通道，影响半通道功能。在另一实施方式中，在一种或多种这些残基上的磷酰化的调节，尤其是通过封闭间隙连接，影响间隙连接功能。靶向连接蛋白43间隙连接和半通道的封闭的间隙连接磷酰化药剂是优选的。

还有的其他抗连接蛋白的药剂包括连接蛋白羧基末端多肽。参见Gourdieetal，WO2006/069181。

在某个另一方面中，间隙连接修饰药物可以包括例如脂族醇；辛醇；庚醇；麻醉药(例如，氟烷)、氨氟醚、氟烷、丙泊酚和硫喷妥钠；花生四烯酸乙醇胺；芳基氨基苯甲酸酯(FFA：氟灭酸和亲脂的类似的衍生物)；甘珀酸；查耳酮：(2',5'-二羟基查耳酮)；CHF(氯代羟基呋喃酮)；CMCF(3-氯-4-(氯甲基)-5-羟基-2(5H)-呋喃酮)；地塞米松；多柔比星(以及其他蒽醌衍生物)；类花生酸血栓烷A(2)(TXA(2))模拟物；NO(一氧化氮)；脂肪酸(例如，花生四烯酸、油酸和脂氧合酶代谢产物；芬那酸酯类(氟灭酸(FFA)、尼氟灭(NFA)和甲氯芬那酸(MFA))；染料木黄酮；甘草次酸(GA)：18a-甘草次酸和18-β-甘草次酸和它们的衍生物；林丹；溶血磷脂酸；甲氟喹；甲萘醌；2-甲基-1,4-萘醌，维生素K(3)；萘酚平；冈田酸；油酸酰胺；油酸；PH，胞内酸化的选通；例如，酸化剂；多不饱和脂肪酸；脂肪酸GJIC抑制剂(例如，油酸和花生四烯酸)；奎尼丁；奎宁；所有反式视黄酸；和他莫昔芬。

本发明的抗连接蛋白的药剂，尤其是抗连接蛋白多核苷酸如连接蛋白反义多核苷酸(例如，连接蛋白反义寡脱氧核苷酸如单链抗连接蛋白43寡脱氧核苷酸)，可以用于通过向这种伤口给予包含在药用载体中的约0.001毫克(mg)至约10、1、0.1或0.01mg抗连接蛋白的药剂/千克(kg)体重的组合物实施慢性皮肤伤口的治疗。在这种组合物中抗连接蛋白的药剂(例如，单链抗连接蛋白43寡脱氧核苷酸)的优选含量包括约0.01mg至约10mg/kg体重(mg/kg)、约0.01mg至约10mgkg和约0.5至约1.0mg/kg。剂量也可以为约0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0、12.0、13.0、14.0、15.0、16.0、17.0、18.0、19.0、20.0、21.0、22.0、23.0、24.0、25.0、26.0、27.0、28.0、29.0、30.0、31.0、32.0、33.0、34.0、35.0、36.0、37.0、38.0、39.0、40.0、41.0、42.0、43.0、44.0、45.0、46.0、47.0、48.0、49.0、50.0、52.5、55.0、57.5、60.0、62.5、65.0、67.5、70.0、72.5、75.0、77.5、80.0、82.5、85.0、87.5、90.0、92.5、95.0、97.5或约100.0mg/kg体重或任何两个所引述的剂量之间的任何范围或子范围或落入约0.1至约100mg/kg体重的范围之内的任何剂量。

在一些实施方式中，可以按照合适的间隔进行给予一种或多种剂量的药物组合物。在一些方面中，给予至难愈性伤口的抗连接蛋白多核苷酸的总剂量(重量)可以为约100μg至约1mg。在一些方面中，所给予的抗连接蛋白多核苷酸的总剂量(w)可以为100μg、200Mg、300μg、400μg、500μg、600μg、700μg、800μg、900μg、1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、6mg、7mg、8mg、9mg、10mg、11mg、12mg、13mg、14mg、15mg、16mg、17mg、18mg、19mg、20mg、21mg、22mg、23mg、24mg、25mg、26mg、27mg、28mg、29mg或约30mg或介于任何那些剂量之间的任何含量。在其他实施方式中、剂量将为约10.0、11.0、12.0、13.0、14.0、15.0、16.0、17.0、18.0、19.0、20.0、21.0、22.0、23.0、24.0、25.0、26.0、27.0、28.0、29.0、30.0、31.0、32.0、33.0、34.0、35.0、36.0、37.0、38.0、39.0、40.0、41.0、42.0、43.0、44.0、45.0、46.0、47.0、48.0、49.0、50.0、52.5、55.0、57.5、60.0、62.5、65.0、67.5、70.0、72.5、75.0、77.5、80.0、82.5、85.0、87.5、90.0、92.5、95.0、97.5、100.0、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、65、170、175、180、185、190、195、200、210、220、230、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490或约500毫克/平方厘米或任何两个所引述的剂量之间的任何范围或子范围或落入约1.0至约500毫克/平方厘米的范围之内的任何剂量。

在一些方面中，以约25μL至约3mL的体积进行给予抗连接蛋白多核苷酸的剂量。包含药用载体和0.5至约1.0mg抗连接蛋白的药剂(例如，单链抗连接蛋白43寡脱氧核苷酸)的组合物的优选剂量体积范围为约25至100微升(μL)，约100至200μL，约200至500μL或约500至1000μL。

在其他实施方式中，以约20μΜ、30μΜ、40μΜ、50μΜ、60μΜ、70μΜ、80μΜ、90μΜ、100μΜ、10至200μΜ、200至300μΜ、300至400μΜ、400至500μΜ、500至600μΜ、600至700μΜ、700至800μΜ、800至900μΜ、900至1000或1000至1500μΜ或1500μΜ至2000μΜ、2000μΜ至3000μΜ、3000μΜ至4000μΜ、4000μΜ至5000μΜ、5000μΜ至6000μΜ、6000μΜ至7000μΜ、7000μΜ至8000μΜ、8000μΜ-9000μΜ、9000μΜ至10,000μΜ、10,000μΜ至11,000μΜ、11,000μΜ至12,000μΜ、12,000μΜ至13,000μΜ、13,000μΜ至14,000μΜ、14,000μΜ至15,000μΜ、15,000μΜ至20,000μΜ、20,000μΜ至30,000μΜ、30,000μΜ至50,000μΜ或更高或任何两个所引述的剂量之间的任何范围或子范围，或落入约20μΜ至约50,000μΜ的范围之内的任何剂量施用抗连接蛋白的药剂。

由多核苷酸靶向的一种或多种连接蛋白蛋白质将取决于要实施下调的位点。这反映了整个身体中在连接蛋白亚单位组合物方面间隙连接的不均匀组成。连接蛋白是在一个方面中天然存在于人或动物内或天然产生于其中连接蛋白的表达或活性要降低的组织内的连接蛋白。连接蛋白基因(包括编码序列)通常具有与一种或多种本文中提及的特异性连接蛋白的编码序列同源性或核苷酸序列同一性。连接蛋白通常是α-或β-连接蛋白。优选地，连接蛋白是α连接蛋白并表达于要进行治疗的组织中。

然而，在组织中的分布方面，一些连接蛋白蛋白质是比其他的连接蛋白更为普遍。最广泛分布的之一是连接蛋白43。靶向连接蛋白43的多核苷酸尤其适用于本发明。在其他方面中，其他连接蛋白被靶向。在一个优选的方面中，反义多核苷酸靶向仅仅一个连接蛋白蛋白质的mRNA。最优选的是，这个连接蛋白蛋白质是连接蛋白43。在另一方面中，连接蛋白蛋白质是连接蛋白Cx26、Cx30、Cx30.3、Cx31、Cx31.1、Cx32、Cx37、Cx40或Cx45。在其他方面中，连接蛋白蛋白质是连接蛋白26或30。

还设想的是，组合使用靶向独立连接蛋白蛋白质的多核苷酸(例如可以靶向1、2、3、4或更多不同连接蛋白)。例如，靶向连接蛋白43和一种或多种连接蛋白家族的其他成员(如连接蛋白Cx26、Cx30、Cx30.3、Cx31、Cx31.1、Cx32、Cx37、Cx40或Cx45)的多核苷酸可以进行组合使用。

可替代地，抗连接蛋白多核苷酸可以是可以含有多于一种连接蛋白蛋白质的多核苷酸的组合物的部分。优选的是，多核苷酸指向的连接蛋白蛋白质之一是连接蛋白43。寡多核苷酸指向的其他连接蛋白蛋白质可以包括例如连接蛋白Cx26、Cx30、Cx30.3、Cx31、Cx31.1、Cx32、Cx37、Cx40或Cx45。

各个抗连接蛋白的药剂对于具体的连接蛋白可以是特异性的或可以靶向1、2、3或更多不同的连接蛋白。在一些实施方式中，特异性的多核苷酸将会靶向靶连接蛋白基因、mRNA或在连接蛋白之间并不保守的前mRNA的序列，而多特异性的多核苷酸将会靶向各种连接蛋白的保守序列。

适用于本发明的多核苷酸可以适当地是未修饰的磷酸二酯寡聚物。这种寡脱氧核苷酸在长度上可以变化。已经发现30聚体的多核苷酸据是特别合适的。

参照寡脱氧核苷酸描述本发明的许多方面。然而，应该理解的是，其他合适的多核苷酸(如RNA多核苷酸)和抗连接蛋白的药剂都可以用于这些方面中。

抗连接蛋白多核苷酸可以是化学修饰的。这可以增强它们对核酸酶的抗性并可以增强它们进入细胞的能力。例如，可以使用硫代磷酸酯寡核苷酸。其他脱氧核苷酸类似物包括甲基磷酸酯、氨基磷酸酯、二硫代磷酸酯N3'P5'-氨基磷酸酯和寡核糖核苷酸硫代磷酸酯及它们的2'-O-烷基类似物和2'-O-甲基核糖核苷酸甲基磷酸酯。可替代地，可以使用混合的骨架寡核苷酸("MBO")。MBO含有硫代磷酸酯寡脱氧段核苷酸的区段(segment)和修饰的寡脱氧核苷酸或寡核糖核苷酸的适当放置的区段。MBO具有硫代磷酸酯连接基的区段和其他修饰的寡核苷酸如非离子型的非常耐核酸酶的甲基磷酸酯或2'-O-寡核糖核苷酸的其他区段。制备修饰的骨架和混合的骨架的寡核苷酸的方法在本领域内是公知的。

本发明中使用的代表性的优选反义多核苷酸的精确序列将取决于靶连接蛋白蛋白质。如上所述，合适的连接蛋白反义多核苷酸可以包括多核苷酸如寡脱氧核苷酸。

用于制备本文中所描述的混合的多核苷酸组合物的合适多核苷酸包括例如连接蛋白43的多核苷酸和连接蛋白26、30、31.1、32和37的多核苷酸。

尽管本发明中使用的抗连接蛋白多核苷酸的精确序列将会取决于靶连接蛋白蛋白质，已经发现对于连接蛋白43，具有以下序列的反义多核苷酸是特别合适的：

SEQ.ID.NO:1:5'-GTAATTGCGGCAAGAAGAATTGTTTCTGTC-3'

SEQ.ID.NO:2:5'-GTAATTGCGGCAGGAGGAATTGTTTCTGTC-3'

SEQ.ID.NO:3:5'-GGCAAGAGACACCAAAGACACTACCAGCAT-3'

SEQ.ID.NO:7:5'-GACAGAAACAATTCCTCCTGCCGCATTTAC-3'

连接蛋白26、31.1和32的合适反义多核苷酸具有以下的序列：

SEQ.ID.NO:4(Cx26):5'-TCCTGAGCAATACCTAACGAACAAATA-3'

SEQ.ID.NO:5(Cx31.1):5'-CGTCCGAGCCCAGAAAGATGAGGTC-3'

SEQ.ID.NO:6(Cx32):5'-TTTCTTTTCTATGTGCTGTTGGTGA-3'

靶向连接蛋白蛋白质的多核苷酸，包括ODN，可以根据其核苷酸序列通过任何方便的传统方法选择。例如，计算机程序MacVector和OligoTech(获自Oligosetc.Eugene，Oreg.，USA)就可以使用。一旦选择，ODN就可以使用DNA合成器进行合成。

多核苷酸同源物

在本文中描述了同源性、同源物和核苷酸序列同一性(例如，多核苷酸可以是连接蛋白mRNA中序列的补体的同源物)。这种多核苷酸通常具有与相关序列例如在(同源物序列的)至少约15、至少约20、至少约40、至少约100个以上邻接的核苷酸的区域内，至少约70％的核苷酸序列同一性、优选至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％的序列同一性。可以基于本领域内的任何方法计算同源性或序列同一性。

例如，BLAST算法实施两个序列之间相似性的统计分析；参见例如KarlinandAltschul(1993)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:5873-5787。由BLAST算法提供的一种相似性测定是最小总和概率(P(N))，其提供了两个核苷酸或氨基酸序列之间将发生偶然匹配的概率指示。例如，如果第一序列对比于第二序列的最小总和概率小于约1、优选小于约0.1、更优选小于约0.01、并最优选小于约0.001，则认为序列与另一序列相似。

同源序列通常不同于相关序列至少约(或不超过约)2、5、10、15、20或更多个突变(其可以是取代、缺失或插入)。这些突变可以跨越任何以上提及的区域相关于计算序列同一性进行测定。

同源序列通常以显著高于背景的水平选择性杂交于原始序列。通常使用中等至高度严格的条件(例如，0.03M氯化钠和0.03M柠檬酸钠在约50至约60℃下)实现选择性杂交。然而，可以在本领域公知的任何合适的条件下进行这种杂交(参见Sambrook，etal.(1989)，MolecularCloning:ALaboratoryManual)。例如，如果需要高严格性，则合适的条件包括在60℃下的0.2×SSC。如果要求较低严格性，合适的条件包括在60℃下的2×SSC。

剂型和制剂与给予

本发明的抗连接蛋白的药剂可以给予至需要治疗的受试者，如具有任何本文中提及的伤口的受试者。受试者的病状可以得到改善。抗连接蛋白的药剂可以用于通过疗法治疗受试者。它们可以在治疗本文提及的任何伤口的药物的制造中使用。

抗连接蛋白的药剂(例如，抗连接蛋白多核苷酸)可以以基本分离的形式存在。应该理解的是，产品可以与不干扰产品预期目的的载体或稀释剂混合，并仍然认为是基本上分离的。本发明的产品还可以是基本纯化的形式，在这种情况下，它一般包含约80％、85％或90％，包括例如至少约95％、至少约98％或至少约99％的多核苷酸或制剂的干重。

取决于预期的给予途径，本发明的药物产品、药物组合物、组合制剂和药物可以例如采取溶液、悬浮剂、滴注剂、喷雾剂、油膏剂、霜剂、凝胶剂、泡沫、软膏剂、乳剂、洗剂、涂剂、缓释制剂或粉末的形式，并且通常含有约0.01％至约1％的一种或多种活性成分、约1％至50％的一种或多种活性成分、约2％至60％的一种或多种活性成分、约2％至70％的一种或多种活性成分或高达约90％的一种或多种活性成分。其他合适制剂包括基于普兰尼克凝胶的制剂、基于羧甲基纤维素(CMC)的制剂和基于羧丙基甲基纤维素(HPMC)的制剂。其他有用的制剂包括缓慢或延迟释放的制剂。

可以使用合适的胶凝剂包括但不限于，明胶、黄芪胶或纤维素衍生物制备凝胶剂或凝胶并可以包括甘油作为保湿剂、润肤剂(emollient)和防腐剂。软膏剂是半固体制剂，由引入到脂肪、蜡质或合成的基础中的活性成分构成。合适的霜剂的实例包括但不限于，油包水(water-in-oil)和水包油(oil-in-water)乳剂。可以通过使用具有类似但不限于脂肪醇如鲸蜡醇或鲸蜡硬脂醇和乳化蜡的性质的合适乳化剂配制油包水霜剂。可以使用乳化剂如聚西托醇(西土马哥，cetomacrogol)乳化蜡配制水包油霜剂。合适的性质包括在宽的pH值范围内改变乳剂粘度和物理和化学稳定性的能力。水溶性或混溶的霜剂基础可以含有防腐剂体系并也可以是缓冲的以维持可接受的生理pH。

泡沫制剂可以配制成从加压气溶胶罐，经由合适施用器，使用惰性推进剂递送。泡沫基础制剂的合适赋形剂包括但不限于，丙二醇、乳化蜡、十六醇以及硬脂酸甘油酯。潜在的防腐剂包括对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯。

适用于实施本发明的优选抗连接蛋白的药剂与药用载体或稀释剂组合以生产药物组合物。合适的载体和稀释剂包括等渗盐溶液，例如磷酸盐缓冲的盐水。合适稀释剂和赋形剂还包括例如盐水、葡萄糖、甘油等，以及它们的组合。此外，如果需要，诸如湿润剂或乳化剂，稳定剂或pH缓冲剂的物质也可以存在。

术语“药用载体”是指本身并不诱导产生有害于接受组合物的个体的抗体，并且可以给予而无过度毒性的任何药物载体。合适的载体可以是大的、代谢缓慢的大分子，如蛋白质、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚合氨基酸以及氨基酸共聚物。

药用盐也可以存在例如无机酸盐，如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐，等；以及有机酸的盐，如乙酸盐、丙酸盐、丙二酸盐、苯甲酸盐等。

适用于本公开的方法和制造制品的药物组合物中的药物载体可以是一种或多种适合于局部给予的药物载体。在一个实施方式中，药物载体可以是非离子聚环氧乙烷-聚环氧丙烷共聚物，也称之为泊洛沙姆。药物载体可以以5％和25％至30％之间的水平存在于药物组合物中。例如，药物载体可以以20％(w/w)存在于药物组合物中。在另一实施方式中，药物载体可以以约22.0％存在于药物组合物中。优选的泊洛沙姆是泊洛沙姆407，也称之为普兰尼克F-127(BASF)。

适用于本文中公开的方法和试剂盒和制造制品的药物组合物可以配制于用于具有完全或部分特征在于延迟或不完全伤口愈合的伤口或其他按预期速率不愈的伤口的受试者的延迟释放制剂、慢释制剂、延释制剂、控释制剂和/或反复作用制剂中。这种制剂对于按预期的速率不愈的伤口，如慢性伤口尤其有利。

合适的载体材料包括通常用作局部给予的霜剂、洗剂、喷雾剂、泡沫、凝胶剂、乳剂、洗剂或涂剂的基础的任何载体或赋形剂。实例包括乳化剂，惰性载体包括烃基础，乳化基础，非毒性溶剂或水溶性基础。特别合适的实例包括普兰尼克、HPMC、CMC和其他纤维素类组分、羊毛脂、硬石蜡、液体石蜡、黄色软石蜡或白色软石蜡、白蜂蜡、黄蜂蜡、鲸蜡硬脂醇、鲸蜡醇、二甲基聚硅氧烷、乳化蜡、肉豆蔻酸异丙酯、微晶蜡、油醇和硬脂醇。

其中的抗连接蛋白的药剂随时间释放的慢释凝胶剂被优选用于局部施用。因此，在优选的实施方式中，可以配制药物组合物以提供抗连接蛋白的药剂例如抗连接蛋白反义多核苷酸的缓释。优选的抗连接蛋白多核苷酸包括抗连接蛋白43多核苷酸，尤其是抗连接蛋白43反义多核苷酸。

优选的是，药用载体或媒介物是凝胶，合适地是非离子聚环氧乙烷-聚环氧丙烷共聚物凝胶例如普兰尼克凝胶，优选普兰尼克F-127(BASFCorp.)。这种凝胶可以在低温作为液体使用但在生理温度下快速固化，这可以有助于约束抗连接蛋白的药剂、尤其是抗连接蛋白反义多核苷酸(例如，ODN)活性成分的释放至施用位点或紧邻位点之处。

适用于本公开的制造制品和方法的其他药用载体包括藻酸盐、聚乙烯醇、水凝胶，包括包含以下的水凝胶：纤维素衍生物和/或聚丙烯酸；纤维素类载体，包括羟乙基纤维素、羟甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素和它们的混合物。

其他合适制剂包括基于普兰尼克凝胶的制剂、基于羧甲基纤维素(CMC)的制剂和基于羟丙基甲基纤维素(HPMC)的制剂。组合物可以配制用于任何所需的递送形式，包括局部施用、滴注剂、肠胃外、皮下或透皮给予。其他有用的制剂包括缓慢释放或延迟释放制剂。

给予的制剂可以包含转染剂。这种试剂的实例包括阳离子剂(例如，磷酸钙和DEAE-葡聚糖)和Lipofectants(例如，Lipofectam.TM.andTransfectam.TM.)和表面活性剂。

在一些实施方式中，制剂进一步包括辅助多核苷酸细胞渗透的表面活性剂，或制剂可以包含任何合适的负载剂。可以包括任何合适非毒性表面活性剂，如DMSO。可替代地，可以包括透皮渗透剂如脲。

在一些实施方式中，对于给定受试者的有效剂量，优选处于对于至少50％的群体是治疗有效的并在此水平下表现出极少或没有毒性的剂量之内。

本发明方法和组合物中采用的每一抗连接蛋白的药剂可以根据许多因素而变化，包括使用的一种或多种具体抗连接蛋白的药剂，一种或多种给予方式、给予频率、所治疗的伤口、所治疗伤口的严重程度、给予途径、治疗患者亚群的需要、或可能由于年龄、性别、体重或患者特异性的相关医疗伤口所致不同需要的各个患者的需求。

合适剂量可以是约0.001mg/kg至约10mg/kg体重，如约0.01mg/kg至约0.1至1.0mg/kg体重。然而，合适剂量可以为约0.001mg/kg至约0.1mg/kg体重，如约0.01mg/kg至约0.050mg/kg体重。约1至100、200、300、400和500微克(μg)的剂量都可以使用，而约30μg至约500μg的剂量是优选的。在其他实施方式中，剂量将为约10.0、11.0、12.0、13.0、14.0、15.0、16.0、17.0、18.0、19.0、20.0、21.0、22.0、23.0、24.0、25.0、26.0、27.0、28.0、29.0、30.0、31.0、32.0、33.0、34.0、35.0、36.0、37.0、38.0、39.0、40.0、41.0、42.0、43.0、44.0、45.0、46.0、47.0、48.0、49.0、50.0、52.5、55.0、57.5、60.0、62.5、65.0、67.5、70.0、72.5、75.0、77.5、80.0、82.5、85.0、87.5、90.0、92.5、95.0、97.5、100.0、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、65、170、175、180、185、190、195、200、210、220、230、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490或约500毫克/平方厘米或任何两个所引述的剂量之间的任何范围或子范围，或落入约1.0至约500毫克/平方厘米的范围之内的任何剂量。正如本文中所提及的，设想了重复施用。重复施用通常约每周一次或当伤口愈合可能看起来停滞或减缓时进行实施。

还有的其他有用的剂量水平包括具有约1纳克(ng)/kg至约1mg/kg体重/天的本文中所描述的抗连接蛋白的药剂的那些。在某些实施方式中，每一主题化合物的剂量一般处于约1ng/kg至约1μg/kg体重、约1ng/kg至约0.1μg/kg体重、约1ng/kg至约10ng/kg体重、约10ng/kg至约0.1μg/kg体重、约0.1μg/kg至约1μg/kg体重、约20ng/kg至约100ng/kg体重、约0.001mg/kg至约100mg/kg体重、约0.01mg/kg至约10mg/kg体重或约0.1mg/kg至约1mg/kg体重的范围内。在某些实施方式中，抗连接蛋白的药剂的剂量一般处于约0.001mg/kg至约0.01mg/kg体重、约0.01mg/kg至约0.1mg/kg体重、约0.1mg/kg至约1mg/kg体重或约1mg/kg体重的范围内。如果使用多于一种抗连接蛋白的药剂，则每种抗连接蛋白的药剂的剂量不需要处于与其他抗连接蛋白的药剂相同的范围内。例如，一种抗连接蛋白的药剂的剂量可以是约0.01mg/kg至约1mg/kg体重，而另一种抗连接蛋白的药剂的剂量可以是约0.1mg/kg至约1mg/kg体重。剂量也可以为约0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0、12.0、13.0、14.0、15.0、16.0、17.0、18.0、19.0、20.0、21.0、22.0、23.0、24.0、25.0、26.0、27.0、28.0、29.0、30.0、31.0、32.0、33.0、34.0、35.0、36.0、37.0、38.0、39.0、40.0、41.0、42.0、43.0、44.0、45.0、46.0、47.0、48.0、49.0、50.0、52.5、55.0、57.5、60.0、62.5、65.0、67.5、70.0、72.5、75.0、77.5、80.0、82.5、85.0、87.5、90.0、92.5、95.0、97.5或约100.0mg/kg体重或任何两个所引述的剂量之间的任何范围或子范围，或落入约0.1至约100mg/kg体重的范围之内的任何剂量。正如本文中所提及，设想了重复施用。

其他有用的剂量范围为约1至约10μg/平方厘米(μg/cm²)伤口尺寸。某些剂量将为约1至2、约1至5、约2至4、约5至7和约8-10μg/cm²伤口尺寸。其他有用的剂量为超过约10μg/cm²伤口尺寸，包括约15μg/cm²伤口尺寸、约20μg/cm²伤口尺寸、约25μg/cm²伤口尺寸、约30μg/cm²伤口尺寸、约35μg/cm²伤口尺寸、约40μg/cm²伤口尺寸、约50μg/cm²伤口尺寸和约100μg/cm²伤口尺寸。其他有用的剂量为约150μg/cm²伤口尺寸、约200μg/cm²伤口尺寸、约250μg/cm²伤口尺寸或约500μg/cm²伤口尺寸。正如本文中提及，设想了重复施用。

例如，在某些实施方式中，抗连接蛋白的药剂组合物可以按照约50μΜ至约5000μΜ最终浓度施用于治疗位点和/或治疗位点邻接之处。优选的是，抗连接蛋白的药剂组合物按照约100μΜ至约3000μΜ最终浓度施用，而更优选的是，抗连接蛋白多核苷酸组合物按照约150μΜ至约3000μΜ最终浓度施用，而更优选的是，抗连接蛋白多核苷酸组合物按照约150μΜ至约3300μΜ最终浓度施用。另外，抗连接蛋白多核苷酸组合物按照约150μΜ至约3000μΜ最终浓度施用，而可替代地抗连接蛋白多核苷酸组合物按照约250μΜ至约1000μΜ最终浓度或按照约300至约1000μΜ最终浓度施用。在某些其他实施方式中，抗连接蛋白多核苷酸按照约100μΜ、200μΜ、300μΜ、400μΜ、500μΜ、600μΜ、700μΜ、800μΜ、900μΜ、1000μΜ、1100μΜ、1200μΜ、1300μΜ、1400μΜ、1500μΜ、1600μΜ、1700μΜ、1800μΜ、1900μΜ、2000μΜ、2100μΜ、2200μΜ、2300μΜ、2400μΜ、2500μΜ、2600μΜ、2700μΜ、2800μΜ、2900μΜ或约3000μΜ最终浓度或任何两个这些浓度之间的任何范围的浓度施用。在其他实施方式中，抗连接蛋白的药剂按照约20μΜ、30μΜ、40μΜ、50μΜ、60μΜ、70μΜ、80μΜ、90μΜ、100μΜ.、10至200μΜ、200至300μΜ、300至400μΜ、400至500μΜ、500至600μΜ、600至700μΜ、700至800μΜ、800至900μΜ、900至1000或1000至1500μΜ或1500μΜ至2000μΜ、2000μΜ至3000μΜ、3000μΜ至4000μΜ、4000μΜ至5000μΜ、5000μΜ至6000μΜ、6000μΜ至7000μΜ、7000μΜ至8000μΜ、8000μΜ至9000μΜ、9000μΜ至10,000μΜ、10,000μΜ至11,000μΜ、11,000μΜ至12,000μΜ、12,000μΜ至13,000μΜ、13,000μΜ至14,000μΜ、14,000μΜ至15,000μΜ、15,000μΜ至20,000μΜ、20,000μΜ至30,000μΜ、30,000μΜ至50,000μΜ或更高或任何两个所引述的剂量之间的任何范围或子范围，或落入约20μΜ至约50,000μΜ的范围之内的任何剂量施用。

抗连接蛋白多核苷酸剂量之量包括例如约0.1至1、1至2、2至3、3至4或4至5微克(μg)、约5至约10μg、约10至约15μg约15至约20μg约20至约30μg约30至约40μg约40至约50μg约50至约75μg约75至约100μg、约100μg至约250μg和250μg至约500μg。也提供了0.5至约1.0毫克(mg)或更高的剂量之量，如上所提及的。剂量体积将取决于待治疗的位点的尺寸，并且范围可以为例如约25至100微升(μL)至约100至200μL、约200至500μL、至约500至1000μL的剂量也适合于较大的治疗位点。正如本文中提及，设想了重复施用。

方便的是，抗连接蛋白的药剂按照足够的用量进行给予以下调连接蛋白蛋白质的表达或调节间隙连接的形成持续给予后至少约0.5至1h、至少约1至2h、至少约2至4h、至少约4至6h、至少约6至8h、至少约8至10h、至少约12h或至少约24h。

也可以通过参考相对于将其要施用的区域的尺寸、长度、深度、面积或体积的组合物浓度确定根据主题发明的每一抗连接蛋白的药剂的剂量。例如，在某些局部和其他应用中例如滴注剂，可以基于药物组合物中的质量(例如，微克)或浓度(例如，μg/L)/施用区域的长度、深度、面积或体积来计算药物组合物的剂量。

给予的初始和任何后续剂量将取决于本文中提及的因素。取决于寡核苷酸，剂量和给予方案将会有所不同，并且剂量也将取决于所选的给予方法例如局部或局域给予。

剂量可以以单一的或分开的施用进行给予。剂量可以一次给予或可以重复施用。

可以通过相同或不同途径给予一种或多种抗连接蛋白的药剂。本发明的各种试剂可以在治疗过程中不同时间独立给予或同时以分开的或单一组合形式给予。

优选通过局部给予(外周地或直接地施用于位点)递送适用于伤口愈合的一种或多种抗连接蛋白的药剂，局部给予包括但不限于，使用固体载体(如敷料和其他基质)和药物制剂(如凝胶剂、混合物、悬浮剂和软膏剂)局部给予。在一些实施方式中，固体支撑物(support)包括进入治疗部位的生物相容性膜或插入物。在另一实施方式中，固体支撑物含有敷料或基质。在本发明的一个实施方式中，固体支撑物组合物可以是慢释固体支撑物组合物，其中，适用于伤口愈合的一种或多种抗连接蛋白的药剂分散于缓释固体基质如藻酸盐、胶原蛋白或合成的生物可吸收性聚合物的基质中。优选的是，固体支撑物组合物是无菌的或低生物负荷。在一个实施方式中，可以使用含有一种或多种抗连接蛋白多核苷酸的洗涤溶液。

一种或多种剂量可以给予至患有难愈性伤口的受试者。在一些实施方式中，可以按照合适的间隔给予含有的药物组合物的一种或多种剂量。在一些实施方式中，药物组合物可以每日、2至6次/周或每周给予。例如，含有抗连接蛋白的药剂(例如，抗连接蛋白多核苷酸)的组合物可以给予，递送或以其他方式暴露于待治疗的伤口长达一段有效的时间例如至少约0.5h、约1至2h、约2至4h、约4至6h、约6至8h或更长时间例如高达24小时或更长。每次施用或递送暴露约1至2小时、2至3小时和4至8h目前是优选的。可替代地，可以重复给予本文中所描述的含抗连接蛋白的药剂的组合物和制剂，例如按照所需，每周一次直至观察到愈合进展或完全。例如，本发明的组合物可以更加频繁地施用，2至3次/周。它们也可以每周、每两周或每月施用。每周施用一次或两次目前是优选的。给予频率和剂量可以在治疗过程中随着伤口面积和体积变化而变化。此外，可以在伤口愈合再次停滞或延迟的情况下实施进一步的一次或多次施用。

尽管递送周期将取决于需要诱导下调的位点和所需的治疗效果，但还是提供了约0.5h、约1至2h、约2至4h、约4至6h、约6至8h或约24h或更长的时间的连续或缓释递送。按照本发明，这可以通过将一种或多种抗连接蛋白的药剂连同药用载体或媒介物包含于制剂中，特别是以用于连续释放或缓释给予的制剂形式而实现。

如前提及的，所描述的一种或多种抗连接蛋白的药剂例如可以在出伤口之前、期间或出现之时立即给予，或例如在出现伤口的约180或更长、约120、约90、约60或约30天内给予。

本文中所描述的给予路径和剂量预想仅作为一个指南，因为熟练的医师将会确定对于任何具体患者和伤口的给予最佳途径和剂量。

治疗患有或怀疑患有疾病、病症和/或伤口的受试者的任何方法，本文中所指和描述的，都可以利用本文中的任何剂量、剂型、制剂和/或组合物进行给予。

伤口处理

在组织损伤的情况下(特别是具有特征在于延迟愈合和慢性伤口的伤口)，据发现根据本发明适用的制剂对于促进伤口愈合过程、减少发炎和在最小化疤痕组织的形成中均有效。因此，制剂在治疗无论是外伤所致或是疾病状态(如糖尿病性溃疡)或病症(如静脉性溃疡、动脉性溃疡和脉管炎性疗溃疡)或物理过程(如压力性溃疡)所致的按预期速率不愈的伤口中具有明显受益。

在一个方面中，本发明涉及促进或改善患有慢性伤口、患延迟愈合伤口或不完全愈合伤口或其他按预期的速率不愈的伤口的受试者中伤口愈合的方法，包括给予治疗有效量的一种或多种抗连接蛋白的药剂。在某些实施方式中，给予一种或多种抗连接蛋白的药剂对于降低肉芽组织沉积、促进细胞迁移而加速伤口愈合和愈合，以促进上皮生长或其任何组合是有效的。

在一个方面中本发明涉及促进或改善受试者中伤口愈合的方法，包括以有效调节慢性伤口、延迟愈合伤口或不完全愈合伤口或其他按预期的速率不愈的伤口中上皮基质细胞分裂和生长的量的给予一种或多种抗连接蛋白的药剂。在一个实施方式中，抗连接蛋白的药剂是有效调节上皮基质细胞分裂和生长的抗连接蛋白反义多核苷酸。在一些实施方式中，抗连接蛋白反义多核苷酸是抗连接蛋白26反义多核苷酸、抗连接蛋白43反义多核苷酸或它们的混合物。

在一个方面中，本发明涉及促进或改善伤口愈合的方法，包括以有效调节慢性伤口、延迟愈合伤口或不完全愈合伤口或其他按预期的速率不愈的伤口中外层角蛋白分泌的量给予一种或多种抗连接蛋白的药剂。在一些实施方式中，抗连接蛋白的药剂是有效调节外层角蛋白分泌的抗连接蛋白反义多核苷酸。在一个实施方式中，连接蛋白反义多核苷酸是抗连接蛋白43反义多核苷酸、抗连接蛋白31.1反义多核苷酸或它们的混合物。

在一个方面中，本发明涉及降低、预防或缓解患有慢性伤口、延迟愈合伤口或不完全愈合伤口或其他按预期速率不愈的伤口的受试者中组织损伤的方法，包括给予一种或多种抗连接蛋白的药剂。

在一个方面中，本发明涉及持续给予一种或多种抗连接蛋白的药剂。在一些实施方式中，抗连接蛋白的药剂给予持续至少约1至24小时、至少约0.5小时、至少约1小时、至少约2小时、至少约3小时、至少约4小时、至少约5小时、至少约6小时、至少约7小时、至少约8小时、至少约9小时、至少约10小时、至少约11小时、至少约12小时或至少约24小时。在一些实施方式中，连接蛋白表达在一段持续时间内下调。优选的是，连接蛋白43表达下调长达一段持续的时间。方便的是，连接蛋白43表达下调持续至少约0.5、1、2、4、6、8、10、12或24小时。连接蛋白表达的完全恢复一般发生于下调表达之后至少约48至72小时。根据本发明进行治疗的合适受试者包括糖尿病性受试者或其他具有按照预期速率不愈的伤口的受试者。

在一个方面中，本发明提供了治疗患有慢性伤口、延迟愈合伤口或不完全愈合伤口或其他按预期速率不愈的伤口的受试者的方法，其包括持续给予有效量的一种或多种抗连接蛋白的药剂。在进一步的方面中，本发明提供了促进或改善受试者中伤口愈合的方法，其包括向慢性伤口、延迟愈合伤口或不完全愈合伤口或其他按预期速率不愈的伤口持续给予一种或多种抗连接蛋白的药剂。

根据另一其他方面，本发明提供了促进或改善患有慢性伤口、延迟愈合伤口或不完全愈合伤口或其他按预期速率不愈的伤口的受试者中伤口愈合的方法，其包括向伤口区域以有效提高伤口区域内再上皮化速率的剂量持续给予一种或多种抗连接蛋白的药剂。在一些实施方式中，这种方法包括持续给予抗连接蛋白43反义多核苷酸和/或抗连接蛋白31.1反义多核苷酸。在一些实施方式中，以持续释放制剂给予一种或多种组合物。在其他实施方式中，一种或多种组合物给予长达一段持续的时间。方便的是，组合物可以有效降低连接蛋白43和/或31.1水平或表达持续至少约24小时。可以治疗的受试者包括糖尿病受试者或患有按照预期速率不愈的伤口的其他受试者。

在还有的另一方面中，本发明提供了在患有慢性伤口、延迟愈合伤口或不完全愈合伤口或其他按预期速率不愈的伤口的受试者中促进或改善伤口愈合的方法，其包括向伤口区域以有效调节上皮基质细胞分裂和生长和/或有效调节外层角蛋白分泌的剂量持续给予一种或多种抗连接蛋白的药剂。在一个实施方式中，组合物包含有效调节上皮基底细胞分裂或生长的抗连接蛋白反义多核苷酸例如优选抗连接蛋白26反义多核苷酸、抗连接蛋白43反义多核苷酸、抗连接蛋白30反义多核苷酸或它们的混合物。在一些实施方式中，组合物包含有效调节外层角质化的抗连接蛋白反义多核苷酸，优选抗连接蛋白31.1反义多核苷酸。在一些实施方式中，以持续释放制剂给予一种或多种组合物。在其他实施方式中，给予一种或多种组合物一段持续的时间。方便的是，组合物有效降低连接蛋白43、26和/或30水平或表达持续至少约24h。可以治疗的受试者包括糖尿病受试者。

在一个方面中，本发明涉及治疗或预防皮肤伤口，包括难愈性慢性伤口、难愈性延迟愈合伤口或难愈性不完全愈合伤口或其他按照预定速率不愈的难愈性伤口的方法，包括向需要其的受试者给予有效量的抗连接蛋白的药剂给予至所述伤口或与所述伤口相关的组织。在一些实施方式中，将本公开的组合物给予至皮肤或与受试者皮肤相关的组织持续一段有效时间。方便的是，组合物有效降低连接蛋白43水平或阻断或降低连接蛋白43半通道开口，持续至少约0.5小时、约1至2小时、约2至4小时、约4至6小时、约4至8小时、约12小时、约18小时或约24小时。适合于治疗的慢性皮肤伤口可以例如选自由压力性溃疡、糖尿病性溃疡、静脉性溃疡、动脉性溃疡、脉管炎性溃疡和混合溃疡组成的组。慢性伤口可以是动脉性溃疡，其可以是由完全或部分动脉堵塞所致的溃疡形成。慢性伤口可以是静脉淤积溃疡，其包括由静脉瓣膜功能障碍和相关血管疾病所致的溃疡形成。慢性伤口可以是创伤引起的溃疡。也可以治疗患有其他溃疡的受试者，包括具有静脉性溃疡和本文中所描述和本领域已知的其他溃疡的那些。

组合物

本发明涉及药物组合物、制剂，及其生产和使用的方法，其中这组合物含有治疗有效量的抗连接蛋白的药剂，包括例如抗连接蛋白多核苷酸，包括抗连接蛋白反义多核苷酸。组合物适用于增强或促进按照预定速率不愈的伤口愈合，包括可能对传统伤口处理或伤口愈合促进治疗愈合缓慢或难愈的伤口。

在一种优选的形式中，这种组合物含有仅仅针对一种连接蛋白蛋白质的mRNA或前mRNA的一种或多种抗连接蛋白的药剂物种例如抗连接蛋白反义多核苷酸。最优选的是，这种连接蛋白蛋白质是连接蛋白43。可替代地，组合物可以包含针对多于一种连接蛋白蛋白质的药剂，尤其是多核苷酸。优选的是，这种药剂指向的连接蛋白蛋白质之一是连接蛋白43。抗连接蛋白的药剂可以指向的其他连接蛋白蛋白质包括例如连接蛋白26、30、30.3、31、31.1、32、37、40和45。指向各种连接蛋白的合适示例性多核苷酸(和ODN)是在本文中别的地方提及的。

参照抗连接蛋白多核苷酸，尤其是寡脱氧核苷酸描述本发明的许多方面。然而，应该理解的是，其他合适多核苷酸(如RNA多核苷酸)可以用于这些方面。其他抗连接蛋白寡核苷酸是RNAi、siRNA和shRNA寡核苷酸。

因此，在一个方面中，本发明提供了适用于治疗性治疗中使用的组合物，其包含至少一种抗连接蛋白的药剂，优选抗连接蛋白43多核苷酸。在某些优选的实施方式中，这种组合物进一步含有药用载体或媒介物。

试剂盒，药物和生产者的制品

可选地，一种或多种抗连接蛋白的药剂也可以适用于在药物的生产中使用。在一个实施方式中，药物含有治疗有效量的抗连接蛋白的药剂，优选抗连接蛋白43多核苷酸，和药用载体。

正如所描述的，本发明的试剂盒和包装包括一种含有一个或多个盛装足够量的一种或多种所需抗连接蛋白的药剂的容器或器皿的制造制品而使治疗有效量的一种或多种这种药剂可以递送至患有延迟愈合或其他慢性皮肤伤口的患者，这些伤口例如慢性静脉性溃疡、静脉淤积溃疡、动脉性溃疡、压力性溃疡、糖尿病性溃疡、糖尿病性足溃疡、脉管炎性溃疡、褥疮溃疡、烧伤性溃疡、创伤引起的溃疡、感染性溃疡、混合溃疡或坏疽性脓皮病。这种试剂盒也包括使用一种或多种这种药剂的说明书。例如，这种说明书可以包括关于治疗患有慢性伤口或特征在于延迟愈合的伤口的受试者用法的说明指导。说明书可以包括说明书关于向按预期的速率不愈的伤口，如延迟愈合伤口、不完全愈合伤口和慢性伤口的用法的指导说明。这种说明书提供了关于对治疗的患者在磨合期内的观察而确定是否伤口是难愈性慢性伤口以及，如果确实如此，关于给予试剂盒内治疗有效量的含有抗连接蛋白的药剂非组合物而对患者伤口实施治疗的指导。

在一个方面中，本发明提供了包含一种或多种本文中所描述的组合物或制剂的试剂盒。例如，试剂盒可以包括包含有效量的一种或多种抗连接蛋白43反义多核苷酸的组合物。

还提供了制造制品，包含含有本文中所描述的根据本发明适用的组合物或制剂的容器和用于受试者治疗的使用说明书。例如，在优选的实施方式中，制造制品包含含有抗连接蛋白的药剂的容器和用于患有慢性的、延迟愈合的或不完全愈合的伤口或其他按预期速率不愈的伤口的受试者治疗的使用说明书。

本发明还涉及单独或与可以粘附或可替代地与受试者皮肤相关的透皮贴，敷料，绷带，基质，纱包组合使用抗连接蛋白的药剂，如抗连接蛋白多核苷酸。正如应该理解的是，这种组合物和制品能够将治疗有效量的一种或多种抗连接蛋白的药剂，例如抗连接蛋白多核苷酸如抗Cx43反义ODN递送至延迟愈合或慢性伤口或这种伤口附近的皮肤。

在另一方面中，本发明包括制造制品，包含含有治疗有效量的一种或多种抗连接蛋白的药剂的容器和用法说明书，包括用于治疗患有慢性伤口或延迟或不完全愈合伤口或其他按预期速率不愈的伤口、或特征在于完全或部分慢性伤口或延迟或不完全伤口愈合或其他按预期速率不愈的伤口的疾病、病症和/或病状的受试者的用法。

正如所提及的，据报道伤口愈合在糖尿病中是缓慢的，往往会导致感染或可能导致截肢的慢性伤口。通过间隙连接蛋白质连接蛋白43的细胞间通信和连接蛋白43表达的动态调节在伤口愈合中发挥关键作用。在正常组织中，如皮肤中，在出现伤口之后第一个24小时内，在伤口边缘处在角质形成细胞中由于它们采取迁徙表型连接蛋白43通常是下调的而连接蛋白26是上调的。然而，一般来说在糖尿病性组织中，以及具体而言在皮肤中，据发现，在出现伤口后连接蛋白43会立即上调。

以下实施例描述的令人惊讶和意外的发现是，在预处理阶段期间保持在一定尺寸范围(即，”目标尺寸范围”)的伤口可以比在预处理期间尺寸更大程度增加或降低的伤口更有效且高效能地进行治疗。具体而言，提供有效疗法的预处理阶段期间的目标尺寸范围令人惊讶而出乎意料地据发现是在预处理阶段期间在伤口尺寸方面增加不超过约30％至在伤口尺寸方面降低不超过35％的范围。优选的预处理阶段范围为约1至约30天，优选约5天至约20天，更加优选约7天至约14天。

现在将参照以下实施例描述本发明的各方面，这些实施例应该理解为仅仅以举例说明的方式提供而不应该构成对本发明范围的限制。

实施例

实施例1—在慢性静脉性腿溃疡中抗连接蛋白制剂的阳性2期疗效

这实施例描述了CoDa治疗的成功2b期临床试验结果。2b期研究是一项随机化的、平行组、剂量划范围、受控的、双盲的2b期临床研究，以评价含有在22.6％非离子聚环氧乙烷-聚环氧丙烷共聚物中的单链抗连接蛋白43寡脱氧核糖核苷酸的药物制剂(抗连接蛋白制剂)(在10周的治疗期内局部施用于患有静脉性腿溃疡(VLU)的患者的疗效和安全性。活性药物成分是具有SEQIDNO:1的核苷酸序列的Cx43asODN。该项研究的主要目的是确定它们是否可以改善患有VLU的患者愈合疗效。次要目标包括确定高或低剂量的抗连接蛋白制剂对于VLU患者是否是安全的和可耐受的、确定哪一种抗连接蛋白制剂剂量浓度在治疗患有VLU的患者中更有效以及评价单独抗连接蛋白制剂媒介物的安全性和可耐受性(以确定仅媒介物对加压包扎，标准护理(SOC)没有负面影响)。

在2b期研究中，在多个站点招募年龄18岁或以上的313例男性和女性患者，并按照1:1:1:1的比例随机化分入四个治疗组之一：低(1mg/mL)或高(3mg/mL)剂量的抗连接蛋白制剂治疗，包括加压包扎(标准护理(SOC))；除SOC外仅媒介物；或仅SOC。一旦33名患者随机分入仅仅SOC组，则该小组就封闭而不再招募并且此后受试者以1:1:1的基础随机化分入该项研究的高或低抗连接蛋白制剂或媒介物组。三个治疗组中的患者接受抗连接蛋白制剂或媒介物+SOC，每周一次施用，在10周的治疗期内或直至首次评估100％VLU再上皮化，无论哪一组首先出现。参比VLU(RVLU)完全封闭被限定为间隔14天的两次访视之后确证100％再上皮化而无外流。例如，当首次在一个具体患者中观察到RVLU完全封闭时(即，VLU表现出100％再上皮化)，则RVLU必须保持封闭至少另一个14天以确认为完成封闭。

主要研究终点评价为在10周治疗期内RVLU表面面积方面的百分比(％)变化，这通过摄影测面法确定。次要研究终点为：10周治疗期内RVLU完全封闭的时间；10周治疗期内RVLU完全封闭的发生率；10周治疗期内每次访视时RVLU完全封闭的发生率；10周治疗期内每次访视时RVLU表面面积降低(SAR)的百分比；在后治疗期期间溃疡复发的发生率；和10周治疗期内每次访视时RVLU中疼痛情况，每个都通过研究者评价进行确定，除了疼痛评价之外，这通过具体缓则在明确的尺度上进行评价。

安全评估基于不良事件的发生率，这通过研究者评价确定；RVLU感染发生率，这通过研究者评估确定；实验室结果；和体检。

该项研究分为三各阶段，2周筛选或“磨合”期(研究访视S1，S2和S3)，最高达10周的治疗期(研究访视T0至T10)和最高达12周的治疗后期(研究访视P0至P5)。筛选期旨在确定受试者是否对于该项研究的治疗阶段是合格的。在10周治疗期期间，使用约0.1mL(100μL)/1cm²VLU表面面积的剂量体积每周施用高和低剂量的抗连接蛋白制剂或媒介物+SOC。对于给定的受试者，治疗停止于第一次出现10次抗连接蛋白制剂或载体给予或RVLU的100％再上皮化，此时受试者过渡到治疗后期。未能在T10访视时达到她/他RVLU的100％再上皮化的受试者就从研究中退出，并在此后联系30天以评估严重的不良事件。治疗后期旨在确认RVLU完全封闭，评估封闭耐久性，并在停止治疗之后30天内继续监测严重不良事件。如果到P2访视患者的RVLU还未100％封闭，则她/他恢复治疗。如果到P3、P4或P5访视患者的RVLU还未100％封闭，则她/他在此之后就退出该项研究。

在第一次筛选期访视(S1)之前之时，获得书面知情同意。在对每个患者的S1访视时，研究的研究人者选择单个慢性RVLU，即，在S1访视之前持续至少30天。通过静脉双重超声显示超过0.5秒的静脉回流支持任何RVLU临床诊断。RVLU必须是全层厚度的，具有明显边界的边界清楚病灶。在筛选期结束时(S3)，RVLU必须具有干净的伤口基部而无非活组织。每个RVLU必须通过医疗监测器审查伤口照片进行确认。在S1访视时或在S1访视之前3个月内进行测定时患者必须具有超过0.80的踝臂指数。在S3访视结束时清创之后，任何RVLU在伤口床和任何周围皮肤破裂处、伤口或溃疡之间必须具有至少1.5cm健康皮肤的边界。在S3访视结束时RVLU必须具有2cm²至20cm²之间的估算的表面面积，如通过尺子测量法确定的(使用最长长度和垂直于最长长度的最长宽度进行计算)。在筛选期(访视S1-S3)内，每个患者都必须能够耐受高加压包扎(在脚踝处40mmHg)并必须遵从标准化的加压包扎。

如果在2周筛选期期间内受试者在估计RVLU表面面积方面具有超过40％的降低或增加，则她/他就不符合招募条件(以分别消除“快速愈合者”或不可能受益于治疗的那些)；超过75％的RVLU是在踝(malleous)上或低于踝；在S1访视之前就已经采用连续高压缩治疗RVLU超过一年；RVLU伤口床已经暴露骨头、肌腱或筋膜；在筛选期期间RVLU具有临床感染的迹象和/或超过10⁵生物/g组织的活检证明；在筛选期期间受试者在RVLU腿上具有蜂窝组织炎；RVLU在S1访视时具有大量渗出物，则需要超过一个高压缩绷带/周；或受试者患有骨髓炎。还应用其他标准排除标准，包括癌、妊娠或哺乳、近期PDGF-BB、真皮替代物或活皮肤治疗、不能行走等。

研究结果显示于图1A-图1C中。这些结果表明，当考虑全研究队列(组群，cohort)时，在仅媒介物组中观察到高于预期的响应速度。事实上，与对于低剂量抗连接蛋白制剂组观察到的相比，仅媒介物+SOC受试者的结果显示出更完全的伤口封闭并且更大的RVLU表面降低。相对于FDS准则，数据重分析意外发现，RVLUSAR的+40％至-40％的增加或降低惊人地导致入选到研究群体中的“快速愈合者”(即，无药物干预需要而愈合的那些)。当利用不同范围的RVLUSAR增加或降低时，即-15％至+30％，确定178个患者的亚群在主SAR终点和完全伤口愈合次要终点的情况下表现出统计学显著的(P＜0.05)响应。这些结果如图2，图3和图4中所示。这表明，患有难愈性慢性伤口的患者对于采用抗连接蛋白制剂的治疗具有统计上显著性的反应。对于在标准护理治疗期内使用加压包扎两周内尺寸降低不超过约30％(+30％)的伤口和在两个周的压缩期内伤口尺寸降低不超过约35％(+35％)的伤口，在两周标准护理治疗期使用加压包扎伤口尺寸增加或降低不超过约-5％/+30％、-10％/+30％、-15％/+30％、-20％/+30％、25％/+30％或-30％/+30％的伤口中，观察到类似的疗效反应。

总之，结果表明，筛选进行抗连接蛋白制剂治疗的患者受益于在预处理或“磨合”期期间识别出其慢性伤口(在这种情况下是VLU)具有维持于预定目标尺寸范围内(优选在“磨合”期期间表面面积降低或增加例如-15％至+30％)的表面面积的患者的预筛选预期患者。在本文中和以上内容中描述了其他范围。具有慢性伤口例如VLU(其在“磨合”期期间、2至4周内尺寸增加和/或尺寸降低幅度不太大)的患者，当给予抗连接蛋白组合物例如在这种情况下抗连接蛋白43制剂时，可以预期有益地响应治疗例如会经历完全伤口封闭和/或经历比其他方式预期的伤口更大程度的伤口封闭。

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所参考或提及的所有专利、出版物、科学论文、网址和其他文献和材料都指示本发明所属本领域内那些技术人员的技术水平，并且每一这种所参考的文献和材料都如同它以其各自的全文通过引用结合于此或以其全部内容陈述于本文中的相同程度通过引用结合于此。本发明人(或其受让人)保留将任何和所有来自任何这种专利、出版物、科技论文、网址、可用电子信息和其他参考资料或文献的任何和所有材料和信息物理地结合到本说明书中的权利。

本文中所描述的具体方法和组合物代表优选实施方式，并是示例性的而并非预想作为对本发明的范围的限制。其他目的、方面和实施方式对于本领域那些技术人员而言一旦考虑到本说明书都会想到，并都涵盖于权利要求范围限定的本发明的精神中。这对于本领域那些技术人员将显而易见的是，可以对本文中公开的本发明作出替换和修改变化而不背离本发明的范围和精神。本文中举例说明地描述的本发明可以在缺少本文中并未专门公开为必不可少的任何元件或要素或限制或局限之下进行适当实施。因此例如在本文中的每种情况下，在本发明的实施方式或实施例中，任何术语“含有”，“基本上由…构成”和“包含”在本说明书内可以与其他两个术语之一替换。同时，术语”含有”，“包括”，“包含”，等，都将广泛而无限制地进行理解。

可以按照不同的步骤顺序进行实施本文中举例说明地描述的方法和工艺过程，并且它们不一定会受限于本文和权利要求书中指出的步骤顺序。还应该理解的是，正如本文和附加权利要求中所用，除非上下文另有明确规定，单数形式“一种”、“一个”和“这种”，都包括复数指示物。在任何情况下，本专利都不应该解释仅限于本文中专门公开的具体实施例或实施方式或方法。除非在代表发明人的应答书信中专门而无明显限制或保留地采纳这些陈述，在任何情况下，本专利都不应该解释为受限于由专利和商标局的任何审查员或任何其他官方或员工所作的任何陈述。

已经采用的术语和表达用作描述的术语而非限制的术语，而在使用这些术语和表达中没有意图排除本文中描述和显示的任何等效的功能或其部分，但应该认识到，各种各样的修改在本发明权利要求保护的本发明范围内都是可能的。因此，应该理解的是，虽然本发明通过优选实施方式和可选的功能特征进行专门公开，但本文中公开的概念的修改和变化都可以由本领域内那些技术员想到，而这种修改和变化都认为是在附加权利要求限定的本发明范围内。

本发明已经广泛而总体地进行了描述。落入一般公开内容之内的每一较窄的物种和亚属组也构成了本发明的部分。这包括本发明的通用描述，条件是或阴性限制从属中移除了任何主题物质，无论训练材料是否引述于本文中。

其他实施方式都在以下权利要求之中。此外，在本发明的功能和方面都依据马库什组进行描述的情况下，本领域内的技术人员会认识到，本发明也由此依据于马库什组的任何各个组员或子组成员进行了描述。

Claims

1.一种治疗难愈性伤口的方法，包括：

a.测定用于治疗的皮肤伤口的初始出现后的尺寸以获得第一尺寸测量结果；

b.向伤口给予标准护理如加压包扎和/或减压；

c.在给予所述标准护理2-4周之后测定所述伤口的尺寸以获得第二尺寸测量结果；

d.确定伤口的第二尺寸指标处于所述第一尺寸测量结果的约-30％至约+35％的预定范围之内，由此识别出难愈性伤口；和

e.向所述难愈性伤口给予药物组合物，所述药物组合物含有适合于局部给予选自连接蛋白26、连接蛋白30和连接蛋白43的连接蛋白的抗连接蛋白多核苷酸的药物载体。

2.一种治疗难愈性静脉性腿溃疡的方法，包括向所述溃疡给予适合于局部给予的药物载体和约3-30mg/mL的选自连接蛋白26、连接蛋白30和连接蛋白43的连接蛋白的抗连接蛋白多核苷酸。

3.一种用于在治疗难愈性伤口中使用的制造制品，包括装有组合物的容器，和通过向所述伤口局部给予或在所述伤口附近局部给予所述组合物而治疗所述难愈性伤口的说明书，所述组合物含有具有约20-23％的非离子聚环氧乙烷-聚环氧丙烷的适合于局部给予的药物载体和约3-30mg/mL的选自连接蛋白26、连接蛋白30和连接蛋白43的连接蛋白的抗连接蛋白寡脱氧核苷酸。

4.一种检测难愈性伤口的方法，在向所述难愈性伤口局部给予含有适合于局部给予的药物载体的选自连接蛋白26、连接蛋白30和连接蛋白43的连接蛋白的抗连接蛋白寡脱氧核苷酸的组合物之后，所述难愈性伤口具有完全封闭的增加的可能性，所述方法包括：

b.向伤口给予标准护理，如加压包扎和/或减压；

c.在给予所述标准护理约2-4周之后测定所述皮肤伤口的尺寸以获得第二尺寸测量结果；

d.检测所述第二尺寸测量结果处于所述第一尺寸测量结果的-30％至+35％之内，由此在向所述难愈性伤口局部给予含有具有约20％-23％的非离子聚环氧乙烷-聚环氧丙烷的适合于局部给予的药物载体和约3-30mg/mL的选自连接蛋白26、连接蛋白30和连接蛋白43的连接蛋白的抗连接蛋白寡脱氧核苷酸的药物组合物之后检测具有完全封闭的增加的可能性的难愈性伤口；和

e.向所述伤口给予所述药物组合物。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中测定第一尺寸指标或第二尺寸指标进一步包括使用测面法、数字化技术、立体摄影测量法、标尺法、伤口示踪法、手持式激光扫描仪或照相机。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述慢性伤口选自由以下组成的组：静脉性溃疡、静脉淤积溃疡、动脉性溃疡、压力性溃疡、糖尿病性溃疡、糖尿病性足溃疡、脉管炎性溃疡、褥疮溃疡、烧伤性溃疡、创伤引起的溃疡、感染性溃疡、混合溃疡和坏疽性脓皮病。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述慢性伤口是静脉性腿溃疡。

8.根据权利要求1所述的方法，包括多次给予所述药物组合物。

9.根据权利要求8所述的方法，其中反复施用所述药物组合物直至实现伤口封闭。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述给予是定期的。

11.根据权利要求10所述的方法，其中定期给予以均匀的预定间隔出现，可选地为每日、隔日、每周两次、每周、每月两次和每月。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述定期给予每周一次出现直至实现伤口封闭。

13.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗连接蛋白43的药剂是抗连接蛋白43多核苷酸。

14.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗连接蛋白43多核苷酸，可选地是寡脱氧核苷酸或修饰的寡脱氧核苷酸，含有约18至约32个核苷酸。

15.根据权利要求1所述的方法，其中所述受试者是哺乳动物，可选地是人。

16.根据权利要求1所述的方法，其中所述磨合期范围为约14天至约28天。

17.一种用于治疗难愈性伤口的试剂盒，包括装有治疗剂量的抗连接蛋白43的药剂的容器和在实施根据权利要求1所述的方法中使用所述抗连接蛋白43的药剂的说明书。

18.根据权利要求1-4所述的方法，其中所述药物组合物含有药用载体和以选自以下的浓度存在的抗连接蛋白43多核苷酸：约10-200μΜ、200-300μΜ、300-400μΜ、400-500μΜ、500-600μΜ、600-700μΜ、700-800μΜ、800-900μΜ、900-1000或1000-1500μΜ、或1500μΜ-2000μΜ、2000μΜ-3000μΜ、3000μΜ-4000μΜ、4000μΜ-5000μΜ、5000μΜ-6000μΜ、6000μΜ-7000μΜ、7000μΜ-8000μΜ、8000μΜ-9000μΜ、9000μΜ-10,000μΜ、10,000μΜ-11,000μΜ、11,000μΜ-12,000μΜ、12,000μΜ-13,000μΜ、13,000μΜ-14,000μΜ、14,000μΜ-15,000μΜ、15,000μΜ-20,000μΜ、20,000μΜ-30,000μΜ，或约30,000μΜ-50,000μΜ。

19.根据权利要求13所述的方法，其中所述抗连接蛋白43多核苷酸选自：寡脱氧核苷酸、修饰的寡脱氧核苷酸、未修饰的寡脱氧核苷酸、反义多核苷酸、未修饰的反义多核苷酸和修饰的反义多核苷酸。

20.根据权利要求13所述的方法，其中所述抗连接蛋白43多核苷酸是选自SEQIDNO:1-3的序列，或具有互补于SEQ.ID.NO.134或SEQ.ID.NO.135的序列的最高达约100核苷酸的序列。

21.根据权利要求13所述的方法，其中所述抗连接蛋白43多核苷酸是选自SEQIDNO:1和2的序列。

22.根据权利要求13所述的方法，其中所述抗连接蛋白43多核苷酸是具有与SEQIDNO:1和2至少约70％同源性的反义多核苷酸。

23.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述抗连接蛋白43多核苷酸是在中等至高度严格的条件下杂交于连接蛋白43mRNA的反义多核苷酸。

24.根据权利要求23所述的方法，其中所述反义多核苷酸具有选自SEQ.ID.NO:1-3的序列，或具有互补于SEQ.ID.NO.134或SEQ.ID.NO.135的序列的最高达约40个核苷酸的序列。

25.根据权利要求23所述的方法，其中所述反义多核苷酸选自：

GTAATTGCGGCAAGAAGAATTGTTTCTGTC(SEQIDNO:1)；和

GTAATTGCGGCAGGAGGAATTGTTTCTGTC(SEQIDNO:2)

GGCAAGAGACACCAAAGACACTACCAGCAT(SEQIDNO:3)。

26.根据权利要求23所述的方法，其中所述反义多核苷酸具有约15至约35个核苷酸并足以互补于连接蛋白43mRNA以形成在生理条件下具有超过20℃的熔点的双链体。

27.根据权利要求所述的方法23，其中所述反义多核苷酸具有约15至约35个核苷酸并具有与连接蛋白43mRNA的反义序列至少约70％同源性。

28.根据权利要求13所述的方法，其中所述抗连接蛋白的药剂是RNAi或siRNA多核苷酸。

29.根据权利要求1-16或18-28中任一项所述的方法，其被配制成凝胶。

30.根据权利要求13所述的方法，其中所述药物制剂被局部给予。

31.根据权利要求13或30中任一项所述的方法，其中所述凝胶是基于聚环氧乙烷-聚环氧丙烷共聚物的凝胶或羧甲基纤维素类凝胶。

32.根据权利要求13或30中任一项所述的方法，其中所述凝胶是普兰尼克凝胶。

33.根据权利要求13或30中任一项根据权利要求67或85所述的方法，其中所述凝胶是普兰尼克F-127。

34.根据权利要求13或30中任一项所述的方法，其中所述药用载体包含藻酸盐。

35.根据权利要求13或中任一项所述的方法，其中所述药用载体含有水凝胶。

36.根据权利要求13或30中任一项所述的方法，其中所述药用载体包括选自由含纤维素衍生物的水凝胶和含聚丙烯酸的水凝胶组成的组中的水凝胶。

37.根据权利要求13或30中任一项所述的方法，其中所述药用载体是纤维素类载体。

38.根据权利要求13或30中任一项所述的方法，其中所述药用载体含有选自由羟乙基纤维素、羟甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素和它们的混合物组成的组中的纤维素类载体。

39.根据权利要求13或30中任一项所述的方法，其中配制所述组合物用于缓释。

40.根据权利要求13或30中任一项所述的方法，其中配制所述组合物用于慢释、延释或控释。

41.根据权利要求13或30中任一项所述的方法，其中所述组合物是霜剂、软膏剂、乳剂、洗剂、喷雾剂、油膏剂、泡沫或涂剂。

42.一种包括装有适于在根据权利要求13所述的方法中使用的组合物连同适用于在治疗难愈性慢性伤口中使用的说明书的包装材料的试剂盒或制造制品。

43.根据权利要求42所述的制造制品，其中所述伤口至少部分特征在于连接蛋白43的增加的表达。

44.根据权利要求42所述的制造制品，其中所述伤口至少部分特征在于发炎。

45.根据权利要求42所述的制造制品，其中所述伤口是裂开性伤口。

46.根据权利要求42所述的制造制品，其中所述伤口是静脉性溃疡。

47.根据权利要求42所述的制造制品，其中所述伤口是糖尿病性溃疡。

48.根据权利要求42所述的制造制品，其中所述伤口是糖尿病性足溃疡。

49.根据权利要求42所述的制造制品，其中所述伤口是压力性溃疡。

50.根据权利要求42所述的制造制品，其中伤口是动脉性溃疡。

51.根据权利要求42所述的制造制品，其中所述伤口是脉管炎性溃疡。

52.根据权利要求42所述的制造制品，其中所述伤口是由外伤或烧伤所致的皮肤溃疡。

53.根据权利要求42所述的制造制品，其中所述受试者是糖尿病受试者。

54.根据权利要求42所述的制造制品，其中所述受试者患有静脉瓣功能失调和/或静脉机能不全。

55.根据权利要求42所述的制造制品，其中所述受试者患有动脉堵塞。

56.根据权利要求42所述的制造制品，其中多于一次施用所述组合物。

57.根据权利要求42所述的制造制品，其中所述说明书提供用于给予所述组合物约每周一次。

58.根据权利要求42所述的制造制品，其中所述说明书提供用于每两周一次给予所述组合物。

59.根据权利要求42所述的制造制品，其中所述说明书提供用于每3-7天给予所述组合物。

60.根据权利要求42所述的制造制品，其中所述说明书记载了在伤口愈合缓慢或停止的情况下可以重复施用所述组合物。

61.根据权利要求42所述的制造制品，其中所述受试者是人。

62.根据权利要求42所述的制造制品，其中所述受试者是非人动物。

63.一种治疗具有按照预期的速率不愈合的伤口的受试者的方法，包括向所述伤口给予含有抗连接蛋白43多核苷酸和药用载体的组合物，其中给予至所述伤口的所述抗连接蛋白43多核苷酸的量范围为约30至约500μg/平方厘米的所述伤口，改善包括在2-4周的磨合期内确定伤口愈合是否超过约30％-35％，在所述磨合期期间，所述伤口通过加压治疗并且，如果不是的话，向所述伤口施用所述抗连接蛋白43组合物。

64.一种明确实现于非暂时性计算机可读介质上的指令程序，所述指令程序用于通过计算机执行来以测面法、立体摄影测量法、计算机、平板、或PDA、或手持式激光仪进行伤口测定方法用于测定伤口的尺寸指标，所述计算机具有配置以确定慢性伤口是否具有完全封闭的增加的可能性的处理器，所述程序提供：

a.在给予第一次治疗之前在所述计算机上对所述伤口的尺寸指标的测量结果的接收；

b.在2-4周的磨合期之后在所述计算机上对所述伤口的尺寸指标的测量结果的接收；

c.对比来自步骤a)和b)的尺寸指标测量结果并检测所述伤口面积处于其在给予所述第一次治疗之前的面积的-15％至+30％之内，由此测定在向所述难愈性伤口局部给予含有约20-23％的非离子聚环氧乙烷-聚环氧丙烷共聚物和以3.0至约500.0mg/mL的浓度存在的单链抗连接蛋白43反义寡脱氧核苷酸的组合物之后完全封闭的增加的可能性。