JP2022526463A - 二元複合発酵剤及びその使用 - Google Patents
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Abstract
Description
複合菌剤Iは、ラクトバチルス・ヘルヴェティクスCGMCC12225、ラクトバチルス・ファーメンタムCGMCC12226、ラクトバチルス・アセトトレランスCGMCC16938、バチルス・ソノレンシCGMCC15824、バチルス・コアグランスCGMCC17801、耐酸性中温α-アミラーゼ、プルラナーゼ、グルコアミラーゼ、セルラーゼ、及び酸性プロテアーゼを含み、
複合菌剤IIは、アセトバクター・パスツリアヌスCGMCC17802、グルコナセトバクター・ユーロペウスCGMCC16345、及びグルコースを含む、を含むことを特徴とする。
複合菌剤IIは、アセトバクター・パスツリアヌスCGMCC17802 35~55重量部、グルコナセトバクター・ユーロペウスCGMCC16345 2~10重量部、グルコース40~60重量部を含む。
(1)本発明の二元複合発酵剤は、固体食酢発酵剤又は液体食酢発酵剤として、単独で又は種醪と組み合わせて使用することができる。
(2)本発明の二元複合発酵剤は、固体食酢発酵に適用すると、不揮発性酸、アミノ酸態窒素、エステル類などの風味物質の含有量を著しく高めることができ、液体食酢発酵に適用すると、不揮発性酸やエステル類風味物質の含有量を著しく高めることができる。
本実施例において、炭酸カルシウム、グルコース、寒天粉、無水エタノール、酢酸及び水酸化ナトリウムはいずれも国薬集団化学試薬有限公司から購入し、酵母エキスは英国OXOID社から購入した。
鎮江香酢の醪サンプル10gを採取し、滅菌された生理食塩水90mlに加え、シェーカーで均一に振った後、100μlのサンプルを採取し、900μlの生理食塩水に加え、ボルテック振とう器で均一に混合し、その後、勾配希釈を行った。均一に混合して、炭酸カルシウム20gを添加した固体培地(1L当たりグルコース20g、酵母エキス10g、寒天粉末15gを含有、121℃で20min殺菌後冷却し、3%エタノールを添加)に順次塗布し、30℃で3日間培養した。平板上に透明ループがあるかどうかを観察し、該当する菌株を選別した。
一次スクリーニングした菌株を、二次スクリーニング用固体平板(グルコース20g、酵母エキス10g、酢酸30ml、及びエタノール30ml、寒天粉末15g/L添加)に接種し、30℃で3日間培養した後、透明ループが最大となる菌株を選別した。
測定された16SrDNA配列をNCBIデータベースで比較分析し、生理学的・生化学的特徴を組み合わせて、本発明の菌株をアセトバクター・パスツリアヌスHSCY1085(Acetobacter pasteurianus)と命名し、16SrDNA配列をSEQ IDNo.1に示す。
本実施例は、従来の種醪及び接種方式を用いずに、本発明の二元複合発酵剤のみを鎮江香酢の醸造に適用することを提供する。
(1)400kgのかめを9個準備し、もち米50kgに水を加えて一晩浸した。もち米を蒸気で蒸し、約40℃の温度になるまで冷水をかけて酒薬0.3kgを加え、よく混ぜた後、かめに入れてラッパ状の穴を作った。
(1)対照群1
上記ステップ(3)の400kgのかめのうち3個のそれぞれに酒もろみ200kg、ふすま80kg、米ぬか45kgを加え、酒もろみと穀物を均一に混合した(酢醪)。かめごとに市販の光明牌醸造酢酢酸菌剤を、酒もろみの質量の0.5‰(w/w)の添加量で加え、30℃の酒もろみ約1000gを小桶に加えてよく混ぜた後、酢醪の上部に散布し、手を表面から約10cm深く入れてよく混ぜ、最後に上部に米ぬかを被せて保温し、次のステップは上記のステップ(5)と同じであった。
上記ステップ(3)の400kgのかめのうち3個のそれぞれに酒もろみ200kg、ふすま80kg、米ぬか45kgを加え、酒もろみと穀物を均一に混合した(酢醪)。伝統的な種醪26kgを酢醪の上部に取り、米ぬかを被せて保温し、次のステップは上記のステップ(5)と同じであった。
本実施例は、伝統的な種醪及び接種方式を保持しながら、本発明の二元複合発酵剤を強化のために鎮江香酢の醸造に使用することを提供する。
(1)400kgのかめを9個準備し、もち米50kgに水を加えて一晩浸した。もち米を蒸気で蒸し、約40℃の温度になるまで冷水をかけて酒薬0.3kgを加え、よく混ぜた後、かめに入れてラッパ状の穴を作った。
(1)対照群1
上記ステップ(3)の400kgのかめのうち3個のそれぞれに酒もろみ200kg、ふすま80kg、米ぬか45kgを加え、酒もろみと穀物を均一に混合した(酢醪)。種醪26kgを酢醪の上部に取り、米ぬかを被せて保温し、次のステップは上記のステップ(5)と同じであった。
上記ステップ(3)の400kgのかめのうち3個のそれぞれに酒もろみ200kg、ふすま80kg、米ぬか45kgを加え、酒もろみと穀物を均一に混合した(酢醪)。種醪26kgを酢醪の上部に取り、かめごとに市販の光明牌醸造酢酢酸菌剤を種醪に均一に混ぜた後、米ぬかを被せて保温し、添加量は酒もろみの質量の0.3‰(w/w)とし、次のステップは上記のステップ(5)と同じであった。
本実施例は、従来の種子醪及び播種方式を用いずに、本発明の複合発酵剤のみを山西老陳酢の醸造に適用することを提供する。
(1)コウリャンを5~10部分に粉砕した後、ぬるま湯を加え、1~2h煮込んだ後、コウリャン100kg当たり62.5kgの大麹粉を加えて均一に混合した。
(1)対照群
上記ステップ(2)の400kgのかめのうち3個のそれぞれに酒もろみ200kg、ふすま90kg、穀糠100kgを加え、酒もろみと穀粒を均一に混合した。市販の光明牌醸造酢酢酸菌剤40gを、酒もろみの質量の0.5‰(w/w)の添加量で加え、30℃の酒もろみ約2000gを小桶に加えてよく混ぜた後、それぞれのかめ内の酢醪の上部に散布してよく混ぜ、山西老陳酢のプロセスに従って切り返しを行い、次のステップは上記のステップ(4)と同じであった。
本実施例は、米酢の醸造における本発明の二元複合発酵剤の使用を提供する。
(1)粒がリッチでいて、かびのないもち米を選んで、ほこりを除去した後、粉砕機でもち米を粉砕して70~80メッシュの微粉末にした。粉砕したもち米粉と水とを、もち米粉:水=1:5(w/w)の割合で糊化槽に入れた。高温α-アミラーゼ2.5万U/mlをもち米1トン当たり0.4~0.5L加えた。同時に90~95℃に昇温し、30~40min保温した。
(1)対照群
上記ステップ(3)の500L発酵槽を1つ選び、フィルタープレスで濾過した清澄酒液200Lを加え、市販の光明板醸造酢酢酸菌剤を、酒もろみの質量の0.7‰(w/w)の添加量で加え、通気量0.3~0.4vvm、撹拌速度250r/minに調整して酢酸発酵を行い、次のステップは上記ステップ(5)と同じであった。
本実施例は、リンゴ酢の醸造における本発明の複合発酵剤の使用を提供する。
(1)2つの500L発酵槽に、糖含有量16~18%(w/w)、pH4.5~5.0に調整したリンゴジュースをそれぞれ200L添加し、酵母菌(CICCから購入、菌株寄託番号CICC1001)を5%(v/v)で接種し、28~30℃でアルコール度約4%volまで発酵させた。
(1)対照群
上記ステップ(1)の発酵槽を1つ選び、発酵槽の温度を30℃、圧力を0.05Mpa、撹拌速度を60r/minに維持し、アルコール度約7%volまで発酵させ、次に、市販の光明牌醸造酢酢酸菌剤を、酒もろみの質量の0.5‰(w/w)の添加量で加え、通気量を0.3~0.4vvm、撹拌速度を250r/minに調整して酢酸発酵を行い、次のステップは上記ステップ(4)と同じであった。
本実施例は、本発明の二元複合発酵剤の処方及び添加方法の比較を提供し、さらに、本発明の二元複合発酵剤の処方組成及びその添加方法の使用効果の重要性を説明する。
(1)400kgのかめを24個準備し、もち米50kgに水を加えて一晩浸した。もち米を蒸気で蒸し、約40℃になるまで冷水で冷却し、酒薬0.3kgを加え、よく混ぜた後、かめに入れてラッパ状の穴を作った。
(1)対照群A
上記ステップ(3)の400kgのかめのうち3個のそれぞれに酒もろみ200kgを加え、本発明の複合菌剤I(ラクトバチルス・ファーメンタムCGMCC12226 15部、ラクトバチルス・アセトトレランスCGMCC16938 20部、、ラクトバチルス・コアグランスCGMCC17801 10部、耐酸性中温α-アミラーゼ13部、プルラナーゼ3部、グルコアミラーゼ5部、セルラーゼ9部、及び酸性プロテアーゼ5部)を、酒もろみの質量の0.15‰(w/w)の添加量で加え、よく混ぜた後、ふすま80kg、米ぬか45kgを加え、酒もろみと穀物を均一に混合した(酢醪)。本発明の複合菌剤II(アセトバクター・パスツリアヌスCGMCC17802 55部、グルコナセトバクター・ユーロペウスCGMCC16345 10部、及びグルコース60部)を、酒もろみの質量の0.1‰(w/w)の添加量で加え、30℃の酒もろみ約1000gを小桶に加えてよく混ぜた後、それぞれのかめ内の酢醪の上部に散布し、手を表面から約10cm深く入れてよく混ぜ、最後に上部に米ぬかを被せて保温し、次のステップは上記のステップ(5)と同じであった。
上記ステップ(3)の400kgのかめのうち3個のそれぞれに酒もろみ200kgを加え、本発明の複合菌剤I(ラクトバチルス・ヘルヴェティクスCGMCC122 25部、ラクトバチルス・ファーメンタムCGMCC12226 15部、バチルス・ソノレンシCGMCC15824 15部、耐酸性中温α-アミラーゼ13部、プルラナーゼ3部、グルコアミラーゼ5部、セルラーゼ9部、及び酸性プロテアーゼ5部)を、酒もろみの質量の0.15‰(w/w)の添加量で加え、よく混ぜた後、ふすま80kg、米ぬか45kgを加え、酒もろみと穀物を均一に混合した(酢醪)。本発明の複合菌剤II(アセトバクター・パスツリアヌスCGMCC17802 55部、グルコナセトバクター・ユーロペウスCGMCC16345 10部、及びグルコース60部)を、酒もろみの質量の0.1‰(w/w)の添加量で加え、30℃の酒もろみ約1000gを小桶に加えてよく混ぜた後、それぞれのかめ内の酢醪の上部に散布し、手を表面から約10cm深く入れてよく混ぜ、最後に上部に米ぬかを被せて保温した。
上記ステップ(3)の400kgのかめのうち3個のそれぞれに酒もろみ200kgを加え、本発明の複合菌剤I(ラクトバチルス・ヘルヴェティクスCGMCC12225 25部、ラクトバチルス・ファーメンタムCGMCC12226 15部、ラクトバチルス・アセトトレランスCGMCC16938 20部、ラクトバチルス・ソノレンシCGMCC15824 15部、ラクトバチルス・コアグランスCGMCC17801 10部、耐酸性中温α-アミラーゼ13部、プルラナーゼ3部、グルコアミラーゼ5部、セルラーゼ9部、及び酸性プロテアーゼ5部)を、酒もろみの質量の0.15‰(w/w)の添加量で加え、よく混ぜた後、ふすま80kg、米ぬか45kgを加え、酒もろみと穀物を均一に混合した(酢醪)。本発明の複合菌剤II(アセトバクター・パスツリアヌスPGMCC17802 55部、及びグルコース60部)を、酒もろみの質量の0.1‰(w/w)の添加量で加え、30℃の酒もろみ約1000gを小桶に加えてよく混ぜた後、それぞれのかめ内の酢醪の上部に散布し、手を表面から約10cm深く入れてよく混ぜ、最後に米ぬかを被せて保温した。次のステップは上記のステップ(5)と同じであった。
上記のステップ(3)の400kgのかめのうち3個のそれぞれに酒もろみ200kgを加え、本発明の複合菌剤I(ラクトバチルス・ヘルヴェティクスCGMCC12225 25部、ラクトバチルス・ファーメンタムCGMCC12226 15部、ラクトバチルス・アセトトレランスCGMCC16938 20部、バチルス・ソノレンシCGMCC15824 15部、バチルス・コアグランスCGMCC17801 10部、プルラナーゼ3部、セルラーゼ9部、及び酸性プロテアーゼ5部)を、酒もろみの質量の0.15‰(w/w)の添加量で加え、よく混ぜた後、ふすま80kg、米ぬか45kgを加え、酒もろみと穀物を均一に混合した(酢醪)。本発明の複合菌剤II(アセトバクター・パスツリアヌスCGMCC17802 55部、グルコナセトバクター・ユーロペウスCGMCC16345 10部、及びグルコース60部)を、酒もろみの質量の0.1‰(w/w)の添加量で加え、30℃の酒もろみ約1000gを小桶に加えてよく混ぜた後、それぞれのかめ内の酢醪の上部に散布し、手を表面から約10cm深く入れてよく混ぜ、最後に上部に米ぬかを被せて保温し、次のステップは上記ステップ(5)と同じであった。
上記のステップ(3)の400kgのかめのうち3個のそれぞれに酒もろみ200kgを加え、本発明の複合菌剤I(ラクトバチルス・ヘルヴェティクスCGMCC12225 25部、ラクトバチルス・ファーメンタムCGMCC12226 15部、ラクトバチルス・アセトトレランスCGMCC16938 15部、バチルス・ソノレンシCGMCC15824 15部、バチルス・コアグランスCGMCC17801 10部、耐酸性中温α-アミラーゼ 13部、プルラナーゼ3部、グルコアミラーゼ5部、及び酸性プロテアーゼ5部)を、酒もろみの質量の0.15‰(w/w)の添加量で加え、よく混ぜた後、ふすま80kg、米ぬか45kgを加え、酒もろみと穀物を均一に混合した(酢醪)。本発明の複合菌剤II(アセトバクター・パスツリアヌスCGMCC17802 55部、グルコナセトバクター・ユーロペウスCGMCC16345 10部、及びグルコース60部)を、酒もろみの質量の0.1‰(w/w)の添加量で加え、30℃の酒もろみ約1000gを小桶に加えてよく混ぜた後、それぞれのかめ内の酢醪の上部に散布し、手を表面から約10cm深く入れて混ぜ、最後に上部に米ぬかを被せて保温し、次のステップは上記ステップ(5)と同じであった。
上記のステップ(3)の400kgのかめのうち3個のそれぞれに酒もろみ200kgを加え、本発明の複合菌剤I(ラクトバチルス・ヘルヴェティクスCGMCC12225 25部、ラクトバチルス・ファーメンタムCGMCC12226 15部、ラクトバチルス・アセトトレランスCGMCC16938 20部、バチルス・ソノレンシCGMCC15824 15部、バチルス・コアグランスCGMCC17801 10部、耐酸性中温α-アミラーゼ13部、プルラナーゼ3部、グルコアミラーゼ5部、セルラーゼ9部、及び酸性プロテアーゼ5部)を、酒もろみの質量の0.15‰(w/w)の添加量で加え、本発明の複合菌剤II(アセトバクター・パスツリアヌスGMCC17802 55部、グルコナセトバクター・ユーロペウスCGMCC16345 10部、及びグルコース60部)を、酒もろみの質量の0.1‰(w/w)の添加量で加え、ふすま80kg、米ぬか45kgを加え、酒もろみと穀物を均一に混合し(酢醪)、最後に上部に米ぬかを被せて保温し、次のステップは上記ステップ(5)と同じであった。
上記のステップ(3)の400kgのかめのうち3個のそれぞれに酒もろみ200kg、ふすま80kg、米ぬか45kgを加え、酒もろみと穀物を均一に混合した(酢醪)。本発明の複合菌剤I(ラクトバチルス・ヘルヴェティクスCGMCC12225 25部、ラクトバチルス・ファーメンタムCGMCC12226 15部、ラクトバチルス・アセトトレランスCGMCC16938 20部、バチルス・ソノレンシCGMCC15824 15部、バチルス・コアグランスCGMCC17801 10部、耐酸性中温α-アミラーゼ 13部、プルラナーゼ3部、グルコアミラーゼ5部、セルラーゼ9部、及び酸性プロテアーゼ5部)を、酒もろみの質量の0.15‰(w/w)の添加量で加え、また、本発明の複合菌剤II(アセトバクター・パスツリアヌスCGMCC17802 55部、グルコナセトバクター・ユーロペウスCGMCC16345 10部、及びグルコース60部)を、酒もろみの質量の0.1‰(w/w)の添加量で加え、30℃の酒もろみ約1000gを小桶に加えてよく混ぜた後、それぞれのかめ内の酢醪の上部に散布し、手を表面から約10cm深く入れてよく混ぜ、最後に上部に米ぬかを被せて保温した。次のステップは上記のステップ(5)と同じであった。
Claims (10)
- 複合菌剤Iと複合菌剤IIとを含む二元複合発酵剤であって、
複合菌剤Iは、ラクトバチルス・ヘルヴェティクスCGMCC12225、ラクトバチルス・ファーメンタムCGMCC12226、ラクトバチルス・アセトトレランスCGMCC16938、バチルス・ソノレンシCGMCC15824、バチルス・コアグランスCGMCC17801、耐酸性中温α-アミラーゼ、プルラナーゼ、グルコアミラーゼ、セルラーゼ、及び酸性プロテアーゼを含み、
複合菌剤IIは、アセトバクター・パスツリアヌスCGMCC17802、グルコナセトバクター・ユーロペウスCGMCC16345、及びグルコースを含む、を含むことを特徴とする二元複合発酵剤。 - 前記複合菌剤Iは、ラクトバチルス・ヘルヴェティクスCGMCC12225 10~25重量部、ラクトバチルス・ファーメンタムCGMCC12226 5~15重量部、ラクトバチルス・アセトトレランスCGMCC16938 5~20重量部、バチルス・ソノレンシCGMCC15824 3~15重量部、バチルス・コアグランスCGMCC17801 2~10重量部、耐酸性中温α-アミラーゼ5~13重量部、プルラナーゼ1~3重量部、グルコアミラーゼ2~5重量部、セルラーゼ3~9重量部、及び酸性プロテアーゼ1~5重量部を含み、
複合菌剤IIは、アセトバクター・パスツリアヌスCGMCC17802 35~55重量部、グルコナセトバクター・ユーロペウスCGMCC16345 2~10重量部、及びグルコース40~60重量部を含む、ことを特徴とする請求項1に記載の二元複合発酵剤。 - 前記複合菌剤Iにおけるラクトバチルス・ヘルヴェティクスCGMCC12225、ラクトバチルス・ファーメンタムCGMCC12226、ラクトバチルス・アセトトレランスCGMCC16938、バチルス・ソノレンシCGMCC15824、及びバチルス・コアグランスCGMCC17801の生菌数がいずれも1.0×108~1.0×1010CFU/gであり、耐酸性中温α-アミラーゼ、プルラナーゼ、グルコアミラーゼ、セルラーゼ、及び酸性プロテアーゼの酵素活性がいずれも2~10万U/gである、ことを特徴とする請求項1に記載の二元複合発酵剤。
- 前記複合菌剤IIにおけるアセトバクター・パスツリアヌスCGMCC17802及びグルコナセトバクター・ユーロペウスCGMCC16345の生菌数が1.0×107~1.0×109CFU/gである、ことを特徴とする請求項1に記載の二元複合発酵剤。
- 食酢の醸造における請求項1~4のいずれかに記載の二元複合発酵剤の使用。
- 前記複合菌剤Iは酢酸発酵前に添加され、前記複合菌剤IIは酢酸発酵段階で添加される、ことを特徴とする請求項5に記載の使用。
- 前記二元複合発酵剤は種醪と併用される、ことを特徴とする請求項5に記載の使用。
- 前記食酢の醸造は、固体食酢発酵又は液体食酢発酵である、ことを特徴とする請求項5に記載の使用。
- 前記二元複合発酵剤は、直投方式で添加される、ことを特徴とする請求項5に記載の使用。
- 前記食酢は、鎮江香酢、山西老陳酢、米酢又はリンゴ酢である、ことを特徴とする請求項5に記載の使用。
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