JP2022526127A - ワクチン送達のための細胞外小胞 - Google Patents

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Abstract

本開示は、ペイロード（例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤）及び／または標的化部分を含む、細胞外小胞（ＥＶ）、例えば、エキソソームに関する。本明細書ではまた、ＥＶ（例えば、エキソソーム）を生産するための方法、及びＥＶ（例えば、エキソソーム）を使用して、疾患または障害、例えば、がん、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）、自己免疫疾患、感染性疾患、または線維性疾患を処置及び／または予防するための方法も提供される。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
このＰＣＴ出願は、２０１９年３月２１日に出願された米国仮出願第６２／８２２，００８号、２０１９年４月１７日に出願された同第６２／８３５，４３７号、２０１９年４月２９日に出願された同第６２／８４０，３４８号、２０１９年８月２３日に出願された同第６２／８９１，０４８号、２０１９年９月１６日に出願された同第６２／９０１，１６６号、２０１９年１２月１０日に出願された同第６２／９４６，２８０号、及び２０２０年３月２日に出願された同第６２／９８４，１４６号の優先権の利益を主張するものであり、同文献の各々は参照によりその全体が本明細書に援用される。
ＥＦＳ－ＷＥＢを介して電子的に提出された配列表への参照
本願で提出された、電子的に提出された配列表（名称：４０００＿０３２ＰＣ０７＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、サイズ：２８３，５０５バイト、及び作成日：２０２０年３月２０日）の内容は、参照によりその全体が本明細書に援用される。
本開示は、がん、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）、自己免疫疾患、感染性疾患、及び線維性疾患を含むがこれらに限定されない様々な医的障害を処置及び／または予防するために使用することができるワクチンとして有用である、修飾された細胞外小胞、例えばエキソソーム（例えば、１つまたは複数のペイロード、例えば、抗原及びアジュバント／免疫調節剤を含む）に関する。本開示はまた、かかるＥＶ、例えばエキソソームを生産する方法、及びその使用に関する。
ＥＶ、例えばエキソソームは、細胞間コミュニケーションの重要なメディエーターである。それらはまた、がん等の多くの疾患の診断及び予後判定における重要なバイオマーカーでもある。薬物送達ビヒクルとして、ＥＶ、例えばエキソソームは、多くの治療分野における新たな治療法として、慣習的な薬物送達方法（例えば、ペプチド免疫化、ＤＮＡワクチン）に勝る多くの利点を提示する。しかしながら、その利点にもかかわらず、多くのＥＶ、例えばエキソソームは、限定された臨床有効性を有してきた。例えば、樹状細胞由来エキソソーム（ＤＥＸ）が、手術不能の非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する患者において第一選択の化学療法後の維持免疫療法として第ＩＩ相臨床試験で調査された。しかしながら、この試験は、主要評価項目（化学療法中止から４ヶ月後に少なくとも５０％の患者が無増悪生存期間（ＰＦＳ）を有する）が達成されなかったため、中止された。Ｂｅｓｓｅ，Ｂ．，ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５（４）：ｅ１０７１００８（２０１５）。
したがって、ＥＶに基づく技術の治療的使用及び他の用途をより可能なものとするために、新たでより有効な操作されたＥＶ、例えばエキソソームが必要である。
Ｂｅｓｓｅ，Ｂ．，ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５（４）：ｅ１０７１００８（２０１５）
本明細書では、（ｉ）少なくとも１つの抗原と、（ｉｉ）少なくとも１つのアジュバントとを含む、単離されたＥＶ、例えばエキソソームが提供される。一部の態様では、ＥＶは、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれよりも多くの異なる抗原を含む。一部の態様では、ＥＶは、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれよりも多くの異なるアジュバントを含む。一部の態様では、抗原は、ＭＨＣクラスＩ及び／またはＩＩ分子上には提示されない。
一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、天然に存在する抗原提示細胞には由来しない。ある特定の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、天然に存在する樹状細胞、天然に存在するＢ細胞、天然に存在する肥満細胞、天然に存在するマクロファージ、天然に存在する好中球、天然に存在するＫｕｐｆｆｅｒ－Ｂｒｏｗｉｃｚ細胞、これらの細胞のうちのいずれかに由来する細胞、またはそれらの任意の組み合わせには由来しない。
一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、細胞性免疫応答、体液性免疫応答、または細胞性免疫応答及び体液性免疫応答の両方を誘導する。ある特定の態様では、細胞性免疫応答、体液性免疫応答、または細胞性免疫応答及び体液性免疫応答の両方の誘導は、（ｉ）アジュバントもしくは抗原を含まない対応するＥＶ、例えばエキソソーム、または（ｉｉ）ＥＶを有しないアジュバントもしくは抗原（すなわち、非ＥＶ送達ビヒクル）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、またはそれを超えて増加する。
一部の態様では、本明細書に記載のＥＶ、例えばエキソソームは、ＣＤ４＋ Ｔ細胞応答、ＣＤ８＋ Ｔ細胞応答、またはＣＤ４＋ Ｔ細胞応答及びＣＤ８＋ Ｔ細胞応答の両方を誘導する。ある特定の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、Ｔ細胞のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）とは直接的に相互作用しない。
一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、第１の足場部分をさらに含む。ある特定の態様では、抗原は、第１の足場部分に連結されている。一部の態様では、アジュバントは、第１の足場部分に連結されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、第２の足場部分をさらに含む。ある特定の態様では、抗原は、第１の足場部分に連結されており、アジュバントは、第２の足場部分に連結されている。一部の態様では、第１の足場部分及び第２の足場部分は、同じである。他の態様では、第１の足場部分及び第２の足場部分は、異なる。
一部の態様では、第１の足場部分は、足場Ｘである。他の態様では、第１の足場部分は、足場Ｙである。一部の態様では、第２の足場部分は、足場Ｘである。ある特定の態様では、第２の足場部分は、足場Ｙである。
一部の態様では、足場Ｘは、（ｉ）抗原をＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に係留すること、（ｉｉ）抗原をＥＶ、例えばエキソソームの外表面上に係留すること、（ｉｉｉ）アジュバントをＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に係留すること、（ｉｖ）アジュバントをＥＶ、例えばエキソソームの外表面上に係留すること、または（ｖ）それらの組み合わせが可能である。ある特定の態様では、足場Ｘは、プロスタグランジンＦ２受容体の負の制御因子（ＰＴＧＦＲＮタンパク質）、ベイシジン（ＢＳＧタンパク質）、免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー２（ＩＧＳＦ２タンパク質）、免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー３（ＩＧＳＦ３タンパク質）、免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー８（ＩＧＳＦ８タンパク質）、インテグリンベータ－１（ＩＴＧＢ１タンパク質）、インテグリンアルファ－４（ＩＴＧＡ４タンパク質）、４Ｆ２細胞表面抗原重鎖（ＳＬＣ３Ａ２タンパク質）、ＡＴＰトランスポータータンパク質のクラス（ＡＴＰ１Ａ１、ＡＴＰ１Ａ２、ＡＴＰ１Ａ３、ＡＴＰ１Ａ４、ＡＴＰ１Ｂ３、ＡＴＰ２Ｂ１、ＡＴＰ２Ｂ２、ＡＴＰ２Ｂ３、ＡＴＰ２Ｂ４タンパク質）、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
一部の態様では、足場Ｙは、（ｉ）抗原をＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に係留すること、（ｉｉ）アジュバントをＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に係留すること、または（ｉｉｉ）両方が可能である。ある特定の態様では、足場Ｙは、ミリストイル化アラニンリッチタンパク質キナーゼＣ基質（ＭＡＲＣＫＳタンパク質）、ミリストイル化アラニンリッチタンパク質キナーゼＣ基質様１（ＭＡＲＣＫＳＬ１タンパク質）、脳酸可溶性タンパク質１（ＢＡＳＰ１タンパク質）、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
一部の態様では、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソーム（例えば、本明細書に記載されるもの）の内腔表面上の第１の足場部分に連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソーム（例えば、本明細書に記載されるもの）の内腔表面上の第２の足場部分に連結されている。かかる態様のうちの一部では、（ａ）第１の足場部分及び第２の足場部分の各々は、足場Ｙであるか、（ｂ）第１の足場部分は、足場Ｙであり、第２の足場部分は、足場Ｘであるか、（ｃ）第１の足場部分は、足場Ｘであり、第２の足場部分は、足場Ｙであるか、または（ｄ）第１の足場部分及び第２の足場部分の各々は、足場Ｘである。
一部の態様では、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場部分に連結されており、アジュバントは、ＥＶの内腔中にある。ある特定の態様では、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶの内腔表面上の第１の足場部分に連結されている。さらなる態様では、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場部分に連結されており、アジュバントは、エキソソームの外表面上の第２の足場部分に連結されている。これらの態様のうちの一部では、（ａ）第１の足場部分は、足場Ｙであり、第２の足場部分は、足場Ｘであるか、または（ｂ）第１の足場部分及び第２の足場部分の各々は、足場Ｘである。
一部の態様では、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場部分に連結されており、アジュバントは、ＥＶの内腔表面における第２の足場部分に連結されている。これらの態様のうちのある特定の場合では、（ａ）第１の足場部分は、足場Ｘであり、第２の足場部分は、足場Ｙであるか、または（ｂ）第１の足場部分及び第２の足場部分の各々は、足場Ｘである。
一部の態様では、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるかまたはその内腔表面に連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるかまたはその内腔表面に連結されている。
一部の態様では、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場部分に連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場部分に連結されている。かかる態様のうちの一部では、第１の足場及び第２の足場部分は、足場Ｘである。
一部の態様では、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場部分に連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。これらの態様のうちのある特定の場合では、第１の足場は、足場Ｘである。
一部の態様では、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場部分に連結されている。これらの態様のうちの一部では、第１の足場は、足場Ｘである。
一部の態様では、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの表面上の第１の足場部分に連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場部分に連結されている。ある特定の態様では、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場部分に連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場部分に連結されている。これらの態様のうちの一部では、第１の足場部分は、足場Ｘである。
一部の態様では、（ｉ）抗原は、リンカーによって第１の足場部分に連結されているか、（ｉｉ）抗原は、リンカーによって第２の足場部分に連結されているか、（ｉｉｉ）アジュバントは、リンカーによって第１の足場部分に連結されているか、（ｉｖ）アジュバントは、リンカーによって第２の部分に連結されているか、または（ｖ）それらの組み合わせである。ある特定の態様では、リンカーは、ポリペプチドである。他の態様では、リンカーは、非ポリペプチド部分である。一部の態様では、リンカーは、マレイミド部分を含む。一部の態様では、リンカーは、コレステロール部分を含む。
一部の態様では、第１の足場部分または第２の足場部分は、ＰＴＧＦＲＮタンパク質である。ある特定の態様では、第１の足場部分または第２の足場部分は、配列番号３３に定められるようなアミノ酸配列を含む。さらなる態様では、第１の足場部分または第２の足場部分は、配列番号１と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。
一部の態様では、第１の足場部分または第２の足場部分は、ＢＡＳＰ１タンパク質である。一部の態様では、第１の足場部分または第２の足場部分は、（Ｍ）（Ｇ）（π）（Ｘ）（Φ／π）（π）（＋）（＋）または（Ｇ）（π）（Ｘ）（Φ／π）（π）（＋）（＋）のペプチドを含み、ここで、各括弧付きの位置はアミノ酸を表し、πは、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択される任意のアミノ酸であり、Ｘは、任意のアミノ酸であり、Φは、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、及びＭｅｔからなる群から選択される任意のアミノ酸であり、（＋）は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、及びＨｉｓからなる群から選択される任意のアミノ酸であり、位置５は（＋）ではなく、かつ位置６は（＋）でも（ＡｓｐまたはＧｌｕ）でもない。ある特定の態様では、第１の足場部分または第２の足場部分は、配列番号５０～１５５のうちのいずれか１つに定められるアミノ酸配列を含む。さらなる態様では、第１の足場部分または第２の足場部分は、配列番号３と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。
本明細書ではまた、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含む、ＥＶ、例えばエキソソームも提供され、ここで、（ａ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、内腔表面上の第２の足場Ｙに連結されているか、（ｂ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、内腔中にあるか、（ｃ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、（ｄ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されているか、（ｅ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されているか、（ｆ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されているか、（ｇ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されているか、（ｈ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されているか、（ｉ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場Ｘに連結されているか、（ｊ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、（ｋ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるか、（ｌ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されているか、（ｍ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上における第２の足場Ｘに連結されているか、（ｎ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、（ｏ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるか、（ｐ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されているか、（ｑ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場Ｘに連結されているか、（ｒ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上にあるか、（ｓ）抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、アジュバントは、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されているか、（ｔ）抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、アジュバントは、ＥＶの内腔中にあるか、（ｕ）抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、アジュバントは、ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、（ｖ）抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、アジュバントは、ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されているか、（ｗ）抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、アジュバントは、ＥＶの外表面に直接的に連結されているか、（ｘ）抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、アジュバントは、ＥＶの外表面上の足場Ｘに連結されているか、（ｙ）抗原は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されているか、（ｚ）抗原は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、ＥＶの外表面に直接的に連結されているか、（ａａ）抗原は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されているか、（ｂｂ）抗原は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶの外表面に直接的に連結されているか、（ｃｃ）抗原は、ＥＶの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されているか、または（ｄｄ）抗原は、ＥＶの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶの外側に直接的に連結されている。
一部の態様では、本明細書に開示されるＥＶ、例えばエキソソームは、免疫調節剤をさらに含む。一部の態様では、免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面または外表面に直接的に連結されている。ある特定の態様では、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上、またはＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されている。さらなる態様では、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上にある。
一部の態様では、ＥＶは、抗原、アジュバント、及び免疫調節剤を含み、ここで、（ｉ）抗原は、リンカーによって内腔表面に直接的に連結されているか、（ｉｉ）アジュバントは、リンカーによって内腔表面に直接的に連結されているか、（ｉｉｉ）免疫調節剤は、リンカーによって内腔表面に直接的に連結されているか、（ｉｖ）抗原は、リンカーによって外表面に直接的に連結されているか、（ｖ）アジュバントは、リンカーによって外表面に直接的に連結されているか、（ｖｉ）免疫調節剤は、リンカーによって外表面に直接的に連結されているか、または（ｖｉｉ）それらの組み合わせである。一部の態様では、ＥＶは、抗原、アジュバント、及び免疫調節剤を含み、ここで、（ｉ）抗原は、リンカーによって足場Ｘに連結されているか、（ｉｉ）アジュバントは、リンカーによって足場Ｘに連結されているか、（ｉｉｉ）免疫調節剤は、リンカーによって足場Ｘに連結されているか、（ｉｖ）抗原は、リンカーによって足場Ｙに連結されているか、（ｖ）アジュバントは、リンカーによって足場Ｙに連結されているか、（ｖｉ）免疫調節剤は、リンカーによって足場Ｙに連結されており、または（ｖｉｉ）それらの組み合わせである。一部の態様では、免疫調節剤は、ＥＶの内腔中にある。
一部の態様では、リンカーは、ポリペプチドである。ある特定の態様では、リンカーは、非ポリペプチド部分である。一部の態様では、リンカーは、マレイミド部分を含む。一部の態様では、リンカーは、コレステロール部分を含む。
一部の態様では、免疫調節剤は、負のチェックポイント制御因子の阻害剤または負のチェックポイント制御因子の結合パートナーの阻害剤を含む。ある特定の態様では、負のチェックポイント制御因子は、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３）、Ｔ細胞免疫グロブリンムチン含有タンパク質３（ＴＩＭ－３）、Ｂリンパ球及びＴリンパ球減弱因子（ＢＴＬＡ）、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制因子（ＶＩＳＴＡ）、アデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ＣＤ２０、ＣＤ３９、ＣＤ７３、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
一部の態様では、免疫調節剤は、正の共刺激分子の活性化剤または正の共刺激分子の結合パートナーの活性化剤を含む。ある特定の態様では、正の共刺激分子は、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー（例えば、ＣＤ１２０ａ、ＣＤ１２０ｂ、ＣＤ１８、ＯＸ４０、ＣＤ４０、Ｆａｓ受容体、Ｍ６８、ＣＤ２７、ＣＤ３０、４－１ＢＢ、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＴＲＡＩＬＲ３、ＴＲＡＩＬＲ４、ＲＡＮＫ、ＯＣＩＦ、ＴＷＥＡＫ受容体、ＴＡＣＩ、ＢＡＦＦ受容体、ＡＴＡＲ、ＣＤ２７１、ＣＤ２６９、ＡＩＴＲ、ＴＲＯＹ、ＣＤ３５８、ＴＲＡＭＰ、及びＸＥＤＡＲ）である。一部の態様では、正の共刺激分子の活性化剤は、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦ－Ｃ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４０Ｌ、ＦａｓＬ、ＬＩＧＨＴ、ＴＬ１Ａ、ＣＤ２７Ｌ、Ｓｉｖａ、ＣＤ１５３、４－１ＢＢリガンド、ＴＲＡＩＬ、ＲＡＮＫＬ、ＴＷＥＡＫ、ＡＰＲＩＬ、ＢＡＦＦ、ＣＡＭＬＧ、ＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＮＴ－３、ＮＴ－４、ＧＩＴＲリガンド、及びＥＤＡ－２）である。さらなる態様では、正の共刺激分子は、ＣＤ２８スーパーファミリー共刺激分子（例えば、ＩＣＯＳまたはＣＤ２８）である。一部の態様では、正の共刺激分子の活性化剤は、ＩＣＯＳＬ、ＣＤ８０、またはＣＤ８６である。
一部の態様では、免疫調節剤は、サイトカインまたはサイトカインの結合パートナーを含む。ある特定の態様では、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－１ｒａ、ＩＬ－１８、ＩＬ－３３、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６β、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－３６ｒａ、ＩＬ－３７、ＩＬ－３８、ＩＬ－３、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、ＩＬ－１３、ＩＬ－２３、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、Ｆｌｔ－３、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１９、ＩＬ－２０、ＩＬ－２２、ＩＬ－２４、ＴＮＦ－α、ＴＮＦ－β、ＢＡＦＦ、ＡＰＲＩＬ、リンホトキシンベータ（ＴＮＦ－γ）、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１７Ｂ、ＩＬ－１７Ｃ、ＩＬ－１７Ｄ、ＩＬ－１７Ｅ、ＩＬ－１７Ｆ、ＩＬ－２５、ＴＳＬＰ、ＩＬ－３５、ＩＬ－２７、ＴＧＦ－β、またはそれらの組み合わせを含む。
一部の態様では、免疫調節剤は、胚中心応答に必要とされる細胞内相互作用を支持するタンパク質を含む。ある特定の態様では、胚中心応答に必要とされる細胞内相互作用を支持するタンパク質は、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭ）ファミリーメンバー、ＳＬＡＭ関連タンパク質（ＳＡＰ）、ＩＣＯＳ－ＩＣＯＳＬ、ＣＤ４０－４０Ｌ、ＣＤ２８／Ｂ７、ＰＤ－１／Ｌ１、ＩＬ－４／ＩＬ４Ｒ、ＩＬ２１／ＩＬ２１Ｒ、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＣＤ１８０、ＣＤ２２、またはそれらの組み合わせを含む。一部の態様では、ＳＬＡＭファミリーメンバーは、ＳＬＡＭファミリーメンバー１、ＣＤ４８、ＣＤ２２９（Ｌｙ９）、Ｌｙ１０８、２Ｂ４、ＣＤ８４、ＮＴＢ－Ａ、ＣＲＡＣＣ、ＢＬＡＭＥ、ＣＤ２Ｆ－１０、またはそれらの組み合わせを含む。
本明細書ではまた、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含む、単離されたＥＶ、例えばエキソソームも提供され、（ａ）抗原は、ＥＶの内腔表面上の第１の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面上の第２の足場Ｙに連結されているか、（ｂ）抗原は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの内腔中にあるか、（ｃ）抗原は、ＥＶの内腔中にあり、免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、（ｄ）抗原は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ外表面上の足場Ｘに連結されているか、（ｅ）抗原は、ＥＶの内腔中にあり、免疫調節剤は、ＥＶの外表面上の足場Ｘに連結されているか、（ｆ）抗原は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されているか、（ｇ）抗原は、ＥＶの内腔中にあり、免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されているか、（ｈ）抗原は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの外表面上の足場Ｘに連結されているか、（ｉ）抗原は、ＥＶの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの外表面上の第２の足場Ｘに連結されているか、（ｊ）抗原は、ＥＶの外表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、（ｋ）抗原は、ＥＶの外表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの内腔中にあるか、（ｌ）抗原は、ＥＶの外表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されているか、（ｍ）抗原は、ＥＶの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されているか、（ｎ）抗原は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、（ｏ）抗原は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの内腔中にあるか、（ｐ）抗原は、ＥＶの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されているか、（ｑ）抗原は、ＥＶの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの外表面上の第２の足場Ｘに連結されているか、（ｒ）抗原は、ＥＶの内腔中にあり、免疫調節剤は、ＥＶの内腔中にあるか、（ｓ）抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されているか、（ｔ）抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの内腔中にあるか、（ｕ）抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、（ｖ）抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されているか、（ｗ）抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの外側に直接的に連結されているか、（ｘ）抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの外側上の足場Ｘに連結されているか、（ｙ）抗原は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されているか、（ｚ）抗原は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの外側に直接的に連結されているか、（ａａ）抗原は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されているか、（ｂｂ）抗原は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの外側に直接的に連結されているか、（ｃｃ）抗原は、ＥＶの内腔中にあり、免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されているか、または（ｄｄ）抗原は、ＥＶの内腔中にあり、免疫調節剤は、ＥＶの外側に直接的に連結されている。
一部の態様では、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含む、ＥＶ、例えばエキソソームは、アジュバント（例えば、本明細書に記載されるもの）をさらに含む。これらの態様のうちの一部では、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上、またはＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されている。これらの態様のうちの一部では、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されている。さらなる態様では、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。一部の態様では、アジュバントは、ＥＶの内腔表面または外表面に直接的に連結されている。
一部の態様では、抗原は、腫瘍抗原である。一部の態様では、腫瘍抗原は、アルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、上皮性腫瘍抗原（ＥＴＡ）、ムチン１（ＭＵＣ１）、Ｔｎ－ＭＵＣ１、ムチン１６（ＭＵＣ１６）、チロシナーゼ、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）、腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、プログラム死リガンド２（ＰＤ－Ｌ２）、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ－７２、ＨＥＲ２、ＧＤ２、ｃＭＥＴ、ＥＧＦＲ、メソテリン、ＶＥＧＦＲ、アルファ－葉酸受容体、ＣＥ７Ｒ、ＩＬ－３、がん－精巣抗原、ＭＡＲＴ－１ ｇｐ１００、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド、ブラキュリ（例えば、黒色腫に発現する抗原（ＰＲＡＭＥ））、ウィルムス腫瘍１（ＷＴ１）、ＣＤ１９、ＣＤ２２、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
一部の態様では、抗原は、細菌、ウイルス、真菌、原虫、またはそれらの任意の組み合わせに由来する。ある特定の態様では、抗原は、発がんウイルスに由来する。一部の態様では、抗原は、ヒトガンマヘルペスウイルス４（エプスタイン・バールウイルス）、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、サイトメガロウイルス、ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、ＨＩＶ（例えば、ＨＩＶ－１、ＨＩＶ－２）、コロナウイルス（例えば、ＣＯＶＩＤ－１９、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、及びＳＡＲＳ ＣｏＶ）、フィロウイルス（例えば、マールブルグ及びエボラ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐｌａｓｍｏｄｉａ種（例えば、ｖｉｖａｘ及びｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、チクングニアウイルス、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ヒトヘルペスウイルス８、メルケル細胞ポリオーマウイルス（ＭＣＶ）、ブニヤウイルス（例えば、ハンタウイルス）、アレナウイルス（例えば、ＬＣＭＶ及びラッサウイルス）、フラビウイルス（例えば、デング熱、ジカ熱、日本脳炎、西ナイル熱、及び黄熱）、エンテロウイルス（例えば、ポリオ）、アストロウイルス（例えば、胃腸炎）、ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、狂犬病）、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ及びＢｕｒｒｅｌｉａ ｍａｙｏｎｉｉ（例えば、ライム病）、単純ヘルペスウイルス２（ＨＳＶ２）、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ属菌、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属菌、Ｐｒｏｔｅｕｓ属菌、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ属菌、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒ属菌、コアグラーゼ陰性ブドウ球菌（ＣｏＮＳ）、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ属菌、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、またはそれらの組み合わせに由来する。
一部の態様では、アジュバントは、インターフェロン遺伝子刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニスト、トル様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、炎症メディエーター、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、アルファ－ｇａｌ－ｃｅｒ（ＮＫＴアゴニスト）、熱ショックタンパク質（例えば、ＨＳＰ６５及びＨＳＰ７０）、Ｃ型レクチンアゴニスト（例えば、ベータグルカン（デクチン１）、キチン、及びカードラン）、またはそれらの任意の組み合わせである。
一部の態様では、アジュバントは、ＳＴＩＮＧアゴニストである。ある特定の態様では、ＳＴＩＮＧアゴニストは、環状ジヌクレオチドＳＴＩＮＧアゴニストまたは非環状ジヌクレオチドＳＴＩＮＧアゴニストを含む。
一部の態様では、アジュバントは、ＴＬＲアゴニストである。ある特定の態様では、ＴＬＲアゴニストは、ＴＬＲ２アゴニスト（例えば、リポタイコ酸、非定型ＬＰＳ、ＭＡＬＰ－２及びＭＡＬＰ－４０４、ＯｓｐＡ、ポリン、ＬｃｒＶ、リポマンナン、ＧＰＩアンカー、リゾホスファチジルセリン、リポホスホグリカン（ＬＰＧ）、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）、ザイモサン、ｈｓｐ６０、ｇＨ／ｇＬ糖タンパク質、ヘマグルチニン）、ＴＬＲ３アゴニスト（例えば、二本鎖ＲＮＡ、例えば、ポリ（Ｉ：Ｃ））、ＴＬＲ４アゴニスト（例えば、リポ多糖（ＬＰＳ）、リポタイコ酸、β－ディフェンシン２、フィブロネクチンＥＤＡ、ＨＭＧＢ１、スナピン、テネイシンＣ）、ＴＬＲ５アゴニスト（例えば、フラジェリン）、ＴＬＲ６アゴニスト、ＴＬＲ７／８アゴニスト（例えば、一本鎖ＲＮＡ、ＣｐＧ－Ａ、ポリＧ１０、ポリＧ３、レシキモド）、ＴＬＲ９アゴニスト（例えば、非メチル化ＣｐＧ ＤＮＡ）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
一部の態様では、本明細書に開示されるＥＶは、エキソソームである。
一部の態様では、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）は、標的化部分をさらに含む。ある特定の態様では、標的化部分は、樹状細胞のマーカーに特異的に結合する。ある特定の態様では、マーカーは、樹状細胞上にのみ存在する。一部の態様では、樹状細胞は、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）、骨髄系／古典的樹状細胞１（ｃＤＣ１）、骨髄系／古典的樹状細胞２（ｃＤＣ２）、炎症性単球由来樹状細胞、ランゲルハンス細胞、真皮樹状細胞、リゾチーム発現樹状細胞（ＬｙｓｏＤＣ）、クッパー細胞、またはそれらの任意の組み合わせを含む。ある特定の態様では、樹状細胞は、ｃＤＣ１である。さらなる態様では、マーカーは、Ｃ型レクチンドメインファミリー９メンバーＡ（Ｃｌｅｃ９ａ）タンパク質、樹状細胞特異的細胞間接着分子－３捕捉非インテグリン（ＤＣ－ＳＩＧＮ）、ＣＤ２０７、ＣＤ４０、Ｃｌｅｃ６、樹状細胞免疫受容体（ＤＣＩＲ）、ＤＥＣ－２０５、レクチン様酸化低密度リポタンパク質受容体－１（ＬＯＸ－１）、ＭＡＲＣＯ、Ｃｌｅｃ１２ａ、Ｃｌｅｃ１０ａ、ＤＣ－アシアロ糖タンパク質受容体（ＤＣ－ＡＳＧＰＲ）、ＤＣ免疫受容体２（ＤＣＩＲ２）、デクチン－１、マクロファージマンノース受容体（ＭＭＲ）、ＢＤＣＡ－１（ＣＤ３０３、Ｃｌｅｃ４ｃ）、デクチン－２、Ｂｓｔ－２（ＣＤ３１７）、ランゲリン、ＣＤ２０６、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１２３、ＣＤ３０４、ＸＣＲ１、ＡＸＬ、シグレック６、ＣＤ２０９、ＳＩＲＰＡ、ＣＸ３ＣＲ１、ＧＰＲ１８２、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ３２、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ１０、またはそれらの任意の組み合わせを含む。ある特定の態様では、マーカーは、Ｃｌｅｃ９ａタンパク質である。
一部の態様では、標的化部分は、Ｔ細胞のマーカーに特異的に結合する。ある特定の態様では、マーカーは、ＣＤ３分子を含む。
一部の態様では、標的化部分は、ＥＶの外表面に直接的に連結されている。一部の態様では、標的化部分は、ＥＶの外表面上の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、標的化部分は、リンカーによってＥＶの外表面に直接的に連結されている。一部の態様では、標的化部分は、リンカーによって足場Ｘに連結されている。ある特定の態様では、リンカーは、ポリペプチドである。一部の態様では、リンカーは、非ポリペプチド部分である。一部の態様では、リンカーは、マレイミド部分を含む。一部の態様では、リンカーは、コレステロール部分を含む。
一部の態様では、本明細書に記載のＥＶ（例えば、エキソソーム）の足場Ｙは、Ｎ末端ドメイン（ＮＤ）及びエフェクタードメイン（ＥＤ）を含み、該ＮＤ及び／または該ＥＤは、ＥＶの内腔表面に会合している。一部の態様では、ＮＤは、ミリストイル化を介してエキソソームの内腔表面に会合している。一部の態様では、ＥＤは、イオン性相互作用によってエキソソームの内腔表面に会合している。一部の態様では、ＥＤは、（ｉ）ある塩基性アミノ酸、または（ｉｉ）連続的に２つ以上の塩基性アミノ酸を含み、該塩基性アミノ酸は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。一部の態様では、塩基性アミノ酸は、（Ｌｙｓ）ｎであり、ここで、ｎは、１～１０の整数である。一部の態様では、ＥＤは、Ｌｙｓ（Ｋ）、ＫＫ、ＫＫＫ、ＫＫＫＫ（配列番号２０５）、ＫＫＫＫＫ（配列番号２０６）、Ａｒｇ（Ｒ）、ＲＲ、ＲＲＲ、ＲＲＲＲ（配列番号２０７）；ＲＲＲＲＲ（配列番号２０８）、ＫＲ、ＲＫ、ＫＫＲ、ＫＲＫ、ＲＫＫ、ＫＲＲ、ＲＲＫ、（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（配列番号２０９）、（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（配列番号２１０）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
一部の態様では、ＮＤは、Ｇ：Ｘ２：Ｘ３：Ｘ４：Ｘ５：Ｘ６に定められるようなアミノ酸配列を含み、ここで、Ｇは、Ｇｌｙを表し、「：」は、ペプチド結合を表し、Ｘ２～Ｘ６の各々は独立して、アミノ酸であり、Ｘ６は、塩基性アミノ酸を含む。一部の態様では、
（ｉ）Ｘ２は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択されるか、
（ｉｉ）Ｘ４は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｇｌｎ、及びＭｅｔからなる群から選択されるか、
（ｉｉｉ）Ｘ５は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択されるか、
（ｉｖ）Ｘ６は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、及びＨｉｓからなる群から選択されるか、または
（ｖ）（ｉ）～（ｉｖ）の任意の組み合わせである。
一部の態様では、ＮＤは、Ｇ：Ｘ２：Ｘ３：Ｘ４：Ｘ５：Ｘ６のアミノ酸配列を含み、ここで、
（ｉ）Ｇは、Ｇｌｙを表し、
（ｉｉ）「：」は、ペプチド結合を表し、
（ｉｉｉ）Ｘ２は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択されるアミノ酸であり、
（ｉｖ）Ｘ３は、アミノ酸であり、
（ｖ）Ｘ４は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｇｌｎ、及びＭｅｔからなる群から選択されるアミノ酸であり、
（ｖｉ）Ｘ５は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択されるアミノ酸であり、
（ｖｉｉ）Ｘ６は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、及びＨｉｓからなる群から選択されるアミノ酸である。
一部の態様では、Ｘ３は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、及びＡｒｇからなる群から選択される。
一部の態様では、ＮＤ及びＥＤは、リンカーによって結合している。一部の態様では、リンカーは、１つまたは複数のアミノ酸を含む。一部の態様では、ＮＤは、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫ（配列番号２１１）、（ｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫ（配列番号２１２）、（ｉｉｉ）ＧＧＫＱＳＫＫ（配列番号２１３）、（ｉｖ）ＧＧＫＬＡＫＫ（配列番号２１４）、（ｖ）ＧＧＫＬＳＫ（配列番号２１５）、または（ｖｉ）それらの任意の組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＮＤは、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫ（配列番号２３８）、（ｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＳ（配列番号２３９）、（ｉｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫＫ（配列番号２４０）、（ｉｖ）ＧＡＫＬＳＫＫＳ（配列番号２４１）、（ｖ）ＧＧＫＱＳＫＫＫ（配列番号２４２）、（ｖｉ）ＧＧＫＱＳＫＫＳ（配列番号２４３）、（ｖｉｉ）ＧＧＫＬＡＫＫＫ（配列番号２４４）、（ｖｉｉｉ）ＧＧＫＬＡＫＫＳ（配列番号２４５）、及び（ｉｘ）それらの任意の組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＮＤは、アミノ酸配列ＧＧＫＬＳＫＫ（配列番号２１１）を含む。
一部の態様では、足場Ｙは、長さが少なくとも約８、少なくとも約９、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約１６、少なくとも約１７、少なくとも約１８、少なくとも約１９、少なくとも約２０、少なくとも約２１、少なくとも約２２、少なくとも約２３、少なくとも約２４、少なくとも約２５、少なくとも約３０、少なくとも約３５、少なくとも約４０、少なくとも約４５、少なくとも約５０、少なくとも約５５、少なくとも約６０、少なくとも約６５、少なくとも約７０、少なくとも約７５、少なくとも約８０、少なくとも約８５、少なくとも約９０、少なくとも約９５、少なくとも約１００、少なくとも約１０５、少なくとも約１１０、少なくとも約１２０、少なくとも約１３０、少なくとも約１４０、少なくとも約１５０、少なくとも約１６０、少なくとも約１７０、少なくとも約１８０、少なくとも約１９０、または少なくとも約２００アミノ酸である。一部の態様では、足場Ｙは、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号２４６）、（ｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号２４７）、（ｉｉｉ）ＧＧＫＱＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号２４８）、（ｉｖ）ＧＧＫＬＡＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号２４９）、（ｖ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＳＧＧ（配列番号２５０）、（ｖｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＳＧＧＳ（配列番号２５１）、（ｖｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＳＧＧＳＧ（配列番号２５２）、（ｖｉｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＳＧＧＳＧＧ（配列番号２５３）、（ｉｘ）ＧＧＫＬＳＫＫＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号２５４）、（ｘ）ＧＧＫＬＳＫＳＧＧＳＧＧＳＶ（配列番号２５５）、または（ｘｉ）ＧＡＫＫＳＫＫＲＦＳＦＫＫＳ（配列番号２５６）を含む。ある特定の態様では、足場Ｙは、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号２４６）、（ｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号２４７）、（ｉｉｉ）ＧＧＫＱＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号２４８）、（ｉｖ）ＧＧＫＬＡＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号２４９）、（ｖ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＳＧＧ（配列番号２５０）、（ｖｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＳＧＧＳ（配列番号２５１）、（ｖｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＳＧＧＳＧ（配列番号２５２）、（ｖｉｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＳＧＧＳＧＧ（配列番号２５３）、（ｉｘ）ＧＧＫＬＳＫＫＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号２５４）、（ｘ）ＧＧＫＬＳＫＳＧＧＳＧＧＳＶ（配列番号２５５）、または（ｘｉ）ＧＡＫＫＳＫＫＲＦＳＦＫＫＳ（配列番号２５６）からなる。
一部の態様では、足場Ｙは、Ｎ末端にＭｅｔを含まない。一部の態様では、足場Ｙは、足場タンパク質のＮ末端にミリストイル化アミノ酸残基を含む。一部の態様では、足場ＹのＮ末端におけるアミノ酸残基は、Ｇｌｙである。一部の態様では、足場ＹのＮ末端におけるアミノ酸残基は、合成である。一部の態様では、足場ＹのＮ末端におけるアミノ酸残基は、グリシン類似体である。
本明細書では、本明細書に記載のＥＶ、例えばエキソソームと、薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物が提供される。
本明細書では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームを産生する細胞が提供される。本開示はさらに、１つまたは複数のベクターを含む細胞を提供し、該ベクターは、（ｉ）抗原（例えば、本明細書に記載されるもの）、（ｉｉ）アジュバント（例えば、本明細書に記載されるもの）、（ｉｉｉ）免疫調節剤、（ｉｖ）標的化部分（例えば、本明細書に記載されるもの）、または（ｖ）それらの組み合わせをコードする核酸配列を含む。
本明細書では、本明細書に記載のＥＶ、例えばエキソソームと、使用説明書とを含む、キットが提供される。本明細書ではまた、本明細書に記載のＥＶ（例えば、エキソソーム）のうちのいずれかを含む、ＥＶ－薬物コンジュゲートも提供される。
本明細書では、本明細書に開示される細胞を好適な条件下で培養することと、ＥＶ、例えばエキソソームを得ることとを含む、ＥＶ、例えばエキソソームを作製する方法が提供される。
本明細書では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームを対象に投与することを含む、免疫応答の誘導を必要とする対象において免疫応答を誘導する方法が提供される。
本明細書では、本明細書に記載のＥＶ、例えばエキソソームを投与することを含む、疾患の予防または処置を必要とする対象において疾患を予防または処置する方法が提供され、該疾患は、抗原に関連する。ある特定の態様では、疾患は、がんである。一部の態様では、がんは、膀胱癌、子宮頸癌、腎細胞癌、精巣癌、結腸直腸癌、肺癌、頭頸部癌、卵巣、リンパ腫、肝臓癌、膠芽腫、黒色腫、骨髄腫、白血病、膵臓癌、またはそれらの組み合わせを含む。さらなる態様では、疾患は、感染症である。
一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、非経口、経口、静脈内、筋肉内、腫瘍内、鼻腔内、皮下、または腹腔内投与される。
一部の態様では、本明細書に開示される方法（例えば、免疫応答を誘導する方法または疾患を予防もしくは処置する方法）は、追加の治療剤を投与することを含む。
本明細書では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームを対象に投与することを含む、がんの転移の阻害または低減を必要とする対象においてがんの転移を阻害または低減する方法が提供される。
１つもしくは複数の抗原、１つもしくは複数のアジュバント、標的化部分のための１つもしくは複数の分子、またはそれらの任意の組み合わせを含む、例となるＥＶを示す。 抗原及びアジュバントを含む、ＥＶ、例えばエキソソームの非限定的な例（ａ～ｒ）を示す。「Ａｇ」及び「ＡＤ」は、それぞれ抗原及びアジュバントを表す。矢印は、足場Ｙ部分を表す。「Ｘ」は、足場Ｘ部分を表す。本開示から明らかとなろうが、図１Ｂに示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）は、複数の抗原、複数のアジュバント、または複数の抗原及び複数のアジュバントの両方を含み得る。これらのＥＶ（例えば、エキソソーム）はまた、１つまたは複数の追加の部分（例えば、免疫調節剤及び／または標的化部分）をさらに含むことができる。かかるＥＶ（例えば、エキソソーム）のさらなる説明は、本開示全体を通して提供される。 抗原及び免疫調節剤を含むエキソソームの７つの選択された例を示す。「Ａｇ」及び「ＩＭ」は、それぞれ抗原及び免疫調節剤を表す。矢印は、足場Ｙ部分を表す。「Ｘ」は、足場Ｘ部分を表す。本開示から明らかとなろうが、図２に示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）は、複数の抗原、複数の免疫調節剤、または複数の抗原及び複数の免疫調節剤の両方を含み得る。これらのＥＶ（例えば、エキソソーム）はまた、１つまたは複数の追加の部分（例えば、アジュバント及び／または標的化部分）をさらに含むことができる。かかるＥＶ（例えば、エキソソーム）のさらなる説明は、本開示全体を通して提供される。 Ａ及びＢは、ＯＶＡ－足場Ｙ及びＳＴＩＮＧアゴニスト負荷の両方を含む操作されたＥＶ、例えばエキソソーム（「Ｐｙ－ＯＶＡ－エキソＳＴＩＮＧ」）がナイーブＣ５７／ＢＬ６マウスへの静脈内投与後にＯＶＡ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞免疫応答を誘導する能力を示す。ＯＶＡ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞免疫応答の誘導は、脾臓（Ａ）及びプールされた末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）（Ｂ）の両方で示される。以下の構築物を対照として使用した：（ｉ）可溶性ＯＶＡタンパク質（ＥＶ、例えばエキソソームの一部ではない）と組み合わせた抗ＣＤ４０抗体（「ＩＰ ａＣＤ４０＋ＯＶＡ」）、（ｉｉ）可溶性ＯＶＡタンパク質（ＥＶ、例えばエキソソームの一部ではない）と組み合わせたｃＡＩＭ（ＰＳ）２ジフルオル（Ｄｉｆｌｕｏｒ）（Ｒｐ／Ｓｐ）（「ＣＬ６５６」、ＳＴＩＮＧアゴニスト）（「ＣＬ６５６＋ＯＶＡ」）、（ｉｉｉ）可溶性ＯＶＡタンパク質（ＯＶＡは、ＥＶ、例えばエキソソームの一部ではない）と組み合わせた、足場Ｘを過剰発現しており、ＳＴＩＮＧアゴニストを負荷されたＥＶ、例えばエキソソーム（「Ｐｘ－エキソＳＴＩＮＧ＋ＯＶＡ」）、及び（ｉｖ）ＯＶＡ－足場Ｙ融合タンパク質のみを発現しているＥＶ、例えばエキソソーム（「Ｐｙ－ＯＶＡ」）。データは、個々に、及び平均値±標準偏差としての両方で示される。「＊＊＊」は、一元配置分散分析によるｐ＜０．０００５を示す。 Ａ及びＢは、ＯＶＡ－足場Ｙ及びＳＴＩＮＧアゴニスト負荷の両方を含む操作されたＥＶ、例えばエキソソーム（「Ｐｙ－ＯＶＡ－エキソＳＴＩＮＧ」）がナイーブＣ５７／ＢＬ６マウスへの鼻腔内投与後にＯＶＡ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞免疫応答を誘導する能力を示す。ＯＶＡ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞免疫応答の誘導は、脾臓（Ａ）及び肺（Ｂ）の両方で示される。以下の構築物を対照として使用した：（ｉ）可溶性ＯＶＡタンパク質（ＥＶ、例えばエキソソームの一部ではない）と組み合わせた抗ＣＤ４０抗体、（ｉｉ）可溶性ＯＶＡタンパク質と組み合わせたｃＡＩＭ（ＰＳ）２ジフルオル（Ｒｐ／Ｓｐ）（「ＣＬ６５６」、ＳＴＩＮＧアゴニスト）（「ＣＬ６５６＋ＯＶＡ」）、（ｉｉｉ）可溶性ＯＶＡタンパク質（ＯＶＡは、ＥＶ、例えばエキソソームの一部ではない）と組み合わせた、足場Ｘを過剰発現しており、ＳＴＩＮＧアゴニストを負荷されたＥＶ、例えばエキソソーム（「Ｐｘ－エキソＳＴＩＮＧ＋ＯＶＡ」）、及び（ｉｖ）ＯＶＡ－足場Ｙ融合タンパク質のみを発現しているＥＶ、例えばエキソソーム（「Ｐｙ－ＯＶＡ」）。データは、個々に、及び平均値±標準偏差としての両方で示される。「＊＊」は、一元配置分散分析によるｐ＜０．００５を示す。「＊＊＊」は、一元配置分散分析によるｐ＜０．０００５を示す。 Ａ及びＢは、ＯＶＡ－足場Ｙ及びＳＴＩＮＧアゴニスト負荷の両方を含む操作されたＥＶ、例えばエキソソーム（「Ｐｙ－ＯＶＡ－エキソＳＴＩＮＧ」）の鼻腔内投与後のマウスの脾臓におけるＯＶＡ特異的Ｔ細胞応答の比較を示す。ＯＶＡ特異的Ｔ細胞応答は、投与後１週間でＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＰＯＴ分析を使用して測定した。Ａは、ＣＤ８ Ｔ細胞応答を示す。Ｂは、ＣＤ４ Ｔ細胞応答を示す。対照動物は、以下のうちの１つを受けた：（ｉ）可溶性ＯＶＡタンパク質単独（「ＯＶＡ」）、（ｉｉ）可溶性ＯＶＡタンパク質と組み合わせたＣＬ６５６（「ＯＶＡ＋ＣＬ６５６」）、（ｉｉｉ）ＯＶＡ－足場Ｙ融合タンパク質のみを発現しているＥＶ、例えばエキソソーム（「Ｐｙ－ＯＶＡ」）、（ｉｖ）ＯＶＡ－足場Ｙ融合タンパク質のみを発現しているＥＶ、例えばエキソソームと組み合わせたＣＬ６５６（「Ｐｙ－ＯＶＡ＋ＣＬ６５６」）。データは、個々に、及び平均値±標準偏差としての両方で示される。「＊」は、一元配置分散分析によるｐ＜０．０５を示す。 ワクチン接種モデルにおいてＣｌｅｃ９ａエキソソームの有効性を評価するための実験設計の概略図を提供する。 操作されたＥＶ、例えばエキソソームが、標準的ワクチン製剤と比較したときにより優れたＣＤ８ Ｔ細胞応答を誘導することを示す。標準的ワクチン（ＡｄｄａＶａｘ）の皮下（ＳＱ）、または操作されたエキソソームの皮下（ＳＱ）、鼻腔内（ＩＮ）、もしくは静脈内（ＩＶ）投与後の、より優れたエフェクターメモリー、特にＣＤ８ Ｔ細胞の応答を示す。 操作されたＥＶ、例えばエキソソームが、標準的ワクチン製剤と比較したときにより優れたＣＤ８ Ｔ細胞応答を誘導することを示す。標準的ワクチンまたは操作されたエキソソームによる鼻腔内ワクチン接種後の、肺における組織常在性メモリー、特にＴ細胞の応答（防衛ライン）の誘導を示す。 ＥＢＶの移植患者における移植後リンパ増殖性疾患に対する標的化抗原としてのＥＢＶ ＢＺＬＦ１の使用を例示する。ＥＶの内腔表面に結合させたアジュバント（環状プリンジヌクレオチド、例えば、ＣＤＮ）及びＥＢＶ ＢＺＬＦ１抗原を含む、操作されたＥＶ、例えばエキソソームの略図である。 Ａ及びＢは、ＳＴＩＮＧアジュバントを含むまたは含まない可溶性ＯＶＡまたはエキソソームＯＶＡで免疫化した野生型マウス由来のＣＤ４＋Ｔ細胞（Ａ）及びＣＤ８＋Ｔ細胞（Ｂ）の数の比較を提供する。示されるように（Ａ及びＢ）、野生型マウスを可溶性ＯＶＡ（卵白アルブミン）、可溶性ＯＶＡ＋ＣＬ６５６（ＳＴＩＮＧアゴニスト）、ＰｙＯＶＡ（ＢＡＳＰ１に融合されたＯＶＡのエキソソーム内腔発現）、ＰｙＯＶＡ＋可溶性ＣＬ６５６、ＰｙＯＶＡエキソＶａｃｃ（ＣＬ６５６を負荷されたＰｙＯＶＡエキソソーム）、または可溶性ＯＶＡ＋ミョウバンアジュバントで免疫化した。抗原特異的細胞をＩＦＮ－ｇ発現によって特定し、データをバックグラウンド（非抗原特異的活性化）の減算後の脾細胞１００，０００個当たりのＩＦＮ－ｇ陽性スポット形成単位（ＳＦＵ）の数として表した（ｘ軸、Ａ及びＢ）。「１４日目」は、単回の免疫化後に動物において観察されたＣＤ４＋ Ｔ細胞及びＣＤ８＋ Ｔ細胞の数を表す。「２８日目」は、２回目の投与による追加免疫後に動物において観察されたＣＤ４＋ Ｔ細胞及びＣＤ８＋ Ｔ細胞の数を表す。 本明細書に開示される（例えば、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷された）エキソソームで処置されたマウスの肺におけるＯＶＡ特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の数を示す。「１回目の投薬」は、エキソソームの単回投与後に観察されたエフェクターメモリー（ＴＥＭ）ＣＤ８＋ Ｔ細胞の数を表す。「２回目の投薬」は、２回目の投与による追加免疫後に観察されたエフェクターメモリー及び／または常在性メモリー（ＴＲＭ）ＣＤ８＋ Ｔ細胞の数を表す。 Ａ及びＢは、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）において抗Ｃｌｅｃ９ａ結合部分を発現させることの効果を示す。Ａは、マウスへの投与後の異なる樹状細胞集団による抗Ｃｌｅｃ９ａ発現エキソソームの取り込みを示す。示される樹状細胞集団には以下のものが含まれる：（ｉ）古典的ＤＣ１（「ｃＤＣ１」）、（ｉｉ）古典的ＤＣ２（「ｃＤＣ２」）、及び（ｉｉｉ）形質細胞様ＤＣ（「ｐＤＣ」）。対照動物は、ＰＢＳ単独、または足場Ｘタンパク質を単独で発現しているエキソソーム（「ＰｒＸ ＥＶ」）のいずれかを受けた。＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。Ｂは、３つの異なる用量（０．４ｎＭ、１ｎＭ、または４ｎＭ）での以下のうちの１つで刺激した後のマウス樹状細胞におけるＳＴＩＮＧ活性の比較を提供する：（ｉ）可溶性ＳＴＩＮＧアゴニスト（「遊離ＳＴＩＮＧ」）、（ｉｉ）足場Ｘタンパク質を単独で発現するとともに（すなわち、抗Ｃｌｅｃ９ａ抗体断片なし）、ＳＴＩＮＧアゴニストを負荷されたＥＶ（例えば、エキソソーム）（「ＰｒＸ－ＳＴＩＮＧ」）、（ｉｉｉ）足場Ｘタンパク質に連結された抗Ｃｌｅｃ９ａ抗体断片を発現しているエキソソーム（「ａＣｌｅｃ９ａ－ＳＴＩＮＧ」）、及び（ｉｖ）非関連抗体を発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストを負荷されたＥＶ（例えば、エキソソーム）（「アイソタイプ－ＳＴＩＮＧ」）。ＳＴＩＮＧ活性は、ＤＣによって産生されるＩＬ－１２の量によって示される。 Ａ及びＢは、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷された操作されたエキソソーム（「Ｐｙ－ＯＶＡエキソＶＡＣＣ」）によるＯＶＡ特異的ＣＤ８＋ ＴＥＭ細胞の誘導に対する投与経路の効果を示す。示される投与経路には、（ｉ）静脈内（「ＩＶ」）、（ｉｉ）鼻腔内（「ＩＮ」）、及び（ｉｉｉ）皮下（「ＳＱ」）が含まれる。「ＳｕｂＱ ＡＶ」は、市販の製剤（ＡＤＤＡＶＡＸ（商標）、ＩｎｖｉｏＧｅｎ）中の可溶性ＯＶＡで処置された動物に対応する（「ＳｕｂＱ ＡＶ」）。Ａは、結果の平均値を示す棒グラフを提供する。＊＊＊、ｐ＝０．００１３；＊＊、ｐ＝０．００７４；ｎｓ、ＯＶＡ＋ＡＤＤＡＶＡＸ（商標）群と比較して有意差なし（一元配置分散分析による）。Ｂは、異なる処置群からの代表的な試料のフローサイトメトリープロットを提供する。フロープロットの各々における右上の象限に提供されるパーセンテージは、観察されたＯＶＡ特異的ＣＤ８＋ ＴＥＭ細胞応答％を表す。フロープロットの各々における左上の象限には異なる処置群が示される。 ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「Ｐｙ－ＯＶＡエキソＶＡＣＣ」）の２回の投与を受けたマウスの肺における、ＯＶＡ特異的常在性メモリー（ＴＲＭ）ＣＤ８＋ Ｔ細胞の誘導を示す。対照動物は、以下のうちの１つを受けた：（ｉ）可溶性ＯＶＡ（「ＯＶＡ」）、（ｉｉ）ＯＶＡ－足場Ｙ融合タンパク質のみを発現しているエキソソーム（「ＰｙＯＶＡ」）、（ｉｉｉ）可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ」）、及び（ｉｖ）ＯＶＡ－足場Ｙ融合タンパク質のみを発現しているエキソソーム＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＰｙＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ」）。 ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「Ｐｙ－ＯＶＡエキソＶＡＣＣ」）の２回の投与を受けたマウスの肺における、ＯＶＡ特異的常在性メモリー（ＴＲＭ）ＣＤ４＋ Ｔ細胞の誘導を示す。対照動物は、以下のうちの１つを受けた：（ｉ）可溶性ＯＶＡ（「ＯＶＡ」）、（ｉｉ）ＯＶＡ－足場Ｙ融合タンパク質のみを発現しているエキソソーム（「ＰｙＯＶＡ」）、（ｉｉｉ）可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ」）、及び（ｉｖ）ＯＶＡ－足場Ｙ融合タンパク質のみを発現しているエキソソーム＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＰｙＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ」）。 ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「Ｐｙ－ＯＶＡエキソＶＡＣＣ」）の２回の投与を受けたマウスの肺における、ＯＶＡ特異的常在性メモリー（ＴＲＭ）ＣＤ８＋ Ｔ細胞（図１３Ａ）及びＣＤ４＋ Ｔ細胞（図１３Ｂ）の誘導を示す。対照動物は、以下のうちの１つを受けた：（ｉ）可溶性ＯＶＡ（「ＯＶＡ」）、（ｉｉ）ＯＶＡ－足場Ｙ融合タンパク質のみを発現しているエキソソーム（「ＰｙＯＶＡ」）、（ｉｉｉ）可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ」）、及び（ｉｖ）ＯＶＡ－足場Ｙ融合タンパク質のみを発現しているエキソソーム＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＰｙＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ」）。図１３Ａ及び１３Ｂに示されるデータの代表的な試料のフローサイトメトリープロットを提供する。上段は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞に対応する。下段は、ＣＤ４＋ Ｔ細胞に対応する。 以下のうちの１つを受けたマウスにおける抗腫瘍免疫応答を示す：（ｉ）鼻腔内投与を介した、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「エキソＶＡＣＣ（ＩＮ）」）、（ｉｉ）皮下投与を介した、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「エキソＶＡＣＣ（ＳＱ）」）、（ｉｉｉ）鼻腔内投与を介した可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＩＮ）」）、及び（ｉｖ）皮下投与を介した可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＳＣ）」）。未処置の動物を対照として使用した。実験設計の概略図を提供する。 以下のうちの１つを受けたマウスにおける抗腫瘍免疫応答を示す：（ｉ）鼻腔内投与を介した、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「エキソＶＡＣＣ（ＩＮ）」）、（ｉｉ）皮下投与を介した、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「エキソＶＡＣＣ（ＳＱ）」）、（ｉｉｉ）鼻腔内投与を介した可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＩＮ）」）、及び（ｉｖ）皮下投与を介した可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＳＣ）」）。未処置の動物を対照として使用した。２つの独立した実験からの生存率データを提供する。 以下のうちの１つを受けたマウスにおける抗腫瘍免疫応答を示す：（ｉ）鼻腔内投与を介した、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「エキソＶＡＣＣ（ＩＮ）」）、（ｉｉ）皮下投与を介した、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「エキソＶＡＣＣ（ＳＱ）」）、（ｉｉｉ）鼻腔内投与を介した可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＩＮ）」）、及び（ｉｖ）皮下投与を介した可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＳＣ）」）。未処置の動物を対照として使用した。２つの独立した実験からの腫瘍体積データを提供する（未処置）。 以下のうちの１つを受けたマウスにおける抗腫瘍免疫応答を示す：（ｉ）鼻腔内投与を介した、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「エキソＶＡＣＣ（ＩＮ）」）、（ｉｉ）皮下投与を介した、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「エキソＶＡＣＣ（ＳＱ）」）、（ｉｉｉ）鼻腔内投与を介した可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＩＮ）」）、及び（ｉｖ）皮下投与を介した可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＳＣ）」）。未処置の動物を対照として使用した。２つの独立した実験からの腫瘍体積データを提供する（ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＳＣ））。 以下のうちの１つを受けたマウスにおける抗腫瘍免疫応答を示す：（ｉ）鼻腔内投与を介した、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「エキソＶＡＣＣ（ＩＮ）」）、（ｉｉ）皮下投与を介した、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「エキソＶＡＣＣ（ＳＱ）」）、（ｉｉｉ）鼻腔内投与を介した可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＩＮ）」）、及び（ｉｖ）皮下投与を介した可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＳＣ）」）。未処置の動物を対照として使用した。２つの独立した実験からの腫瘍体積データを提供する（エキソＶＡＣＣ（ＳＱ））。図に示されるパーセンテージは、完全に保護された（全群のうちの）動物の数を表す。 以下のうちの１つを受けたマウスにおける抗腫瘍免疫応答を示す：（ｉ）鼻腔内投与を介した、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「エキソＶＡＣＣ（ＩＮ）」）、（ｉｉ）皮下投与を介した、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「エキソＶＡＣＣ（ＳＱ）」）、（ｉｉｉ）鼻腔内投与を介した可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＩＮ）」）、及び（ｉｖ）皮下投与を介した可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＳＣ）」）。未処置の動物を対照として使用した。２つの独立した実験からの腫瘍体積データを提供する（ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＩＮ））。 以下のうちの１つを受けたマウスにおける抗腫瘍免疫応答を示す：（ｉ）鼻腔内投与を介した、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「エキソＶＡＣＣ（ＩＮ）」）、（ｉｉ）皮下投与を介した、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「エキソＶＡＣＣ（ＳＱ）」）、（ｉｉｉ）鼻腔内投与を介した可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＩＮ）」）、及び（ｉｖ）皮下投与を介した可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＳＣ）」）。未処置の動物を対照として使用した。２つの独立した実験からの腫瘍体積データを提供する（エキソＶＡＣＣ（ＩＮ））。図に示されるパーセンテージは、完全に保護された（全群のうちの）動物の数を表す。 以下のうちの１つを受けたマウスにおける抗腫瘍免疫応答を示す：（ｉ）鼻腔内投与を介した、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「エキソＶＡＣＣ（ＩＮ）」）、（ｉｉ）皮下投与を介した、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「エキソＶＡＣＣ（ＳＱ）」）、（ｉｉｉ）鼻腔内投与を介した可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＩＮ）」）、及び（ｉｖ）皮下投与を介した可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＳＣ）」）。未処置の動物を対照として使用した。異なる処置群の各々における腫瘍増殖の速度を示す。図において、＊、ｐ＝０．０２８；ｎｓ、未処置の対照と比較して有意差なし（一元配置分散分析による）。 以下のうちの１つを受けたマウスにおける抗腫瘍免疫応答を示す：（ｉ）鼻腔内投与を介した、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「エキソＶＡＣＣ（ＩＮ）」）、（ｉｉ）皮下投与を介した、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「エキソＶＡＣＣ（ＳＱ）」）、（ｉｉｉ）鼻腔内投与を介した可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＩＮ）」）、及び（ｉｖ）皮下投与を介した可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＳＣ）」）。未処置の動物を対照として使用した。２つの独立した実験からの腫瘍体積データを提供する（未処置）。 以下のうちの１つを受けたマウスにおける抗腫瘍免疫応答を示す：（ｉ）鼻腔内投与を介した、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「エキソＶＡＣＣ（ＩＮ）」）、（ｉｉ）皮下投与を介した、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「エキソＶＡＣＣ（ＳＱ）」）、（ｉｉｉ）鼻腔内投与を介した可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＩＮ）」）、及び（ｉｖ）皮下投与を介した可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＳＣ）」）。未処置の動物を対照として使用した。２つの独立した実験からの腫瘍体積データを提供する（ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＳＣ））。 以下のうちの１つを受けたマウスにおける抗腫瘍免疫応答を示す：（ｉ）鼻腔内投与を介した、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「エキソＶＡＣＣ（ＩＮ）」）、（ｉｉ）皮下投与を介した、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「エキソＶＡＣＣ（ＳＱ）」）、（ｉｉｉ）鼻腔内投与を介した可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＩＮ）」）、及び（ｉｖ）皮下投与を介した可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＳＣ）」）。未処置の動物を対照として使用した。２つの独立した実験からの腫瘍体積データを提供する（ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＩＮ））。 以下のうちの１つを受けたマウスにおける抗腫瘍免疫応答を示す：（ｉ）鼻腔内投与を介した、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「エキソＶＡＣＣ（ＩＮ）」）、（ｉｉ）皮下投与を介した、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「エキソＶＡＣＣ（ＳＱ）」）、（ｉｉｉ）鼻腔内投与を介した可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＩＮ）」）、及び（ｉｖ）皮下投与を介した可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＳＣ）」）。未処置の動物を対照として使用した。２つの独立した実験からの腫瘍体積データを提供する（エキソＶＡＣＣ（ＳＱ））。 以下のうちの１つを受けたマウスにおける抗腫瘍免疫応答を示す：（ｉ）鼻腔内投与を介した、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「エキソＶＡＣＣ（ＩＮ）」）、（ｉｉ）皮下投与を介した、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「エキソＶＡＣＣ（ＳＱ）」）、（ｉｉｉ）鼻腔内投与を介した可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＩＮ）」）、及び（ｉｖ）皮下投与を介した可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＳＣ）」）。未処置の動物を対照として使用した。２つの独立した実験からの腫瘍体積データを提供する（エキソＶＡＣＣ（ＩＮ））。 以下のうちの１つを受けたマウスにおける抗腫瘍免疫応答を示す：（ｉ）鼻腔内投与を介した、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「エキソＶＡＣＣ（ＩＮ）」）、（ｉｉ）皮下投与を介した、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「エキソＶＡＣＣ（ＳＱ）」）、（ｉｉｉ）鼻腔内投与を介した可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＩＮ）」）、及び（ｉｖ）皮下投与を介した可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＳＣ）」）。未処置の動物を対照として使用した。２つの独立した実験からの生存率データを提供する。 本明細書に開示される操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）が鼻腔内投与後に腸間膜リンパ節に移動する能力を示す。実験設計の概略図を提供する。 本明細書に開示される操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）が鼻腔内投与後に腸間膜リンパ節に移動する能力を示す。ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＰＯＴによって測定したときの、脾臓におけるＯＶＡ特異的ＣＤ４＋ Ｔ細胞（処置群の各々における左側のバー）及びＯＶＡ特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞（処置群の各々における右側のバー）の頻度を示す。 本明細書に開示される操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）が鼻腔内投与後に腸間膜リンパ節に移動する能力を示す。ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＰＯＴによって測定したときの、肺におけるＯＶＡ特異的ＣＤ４＋ Ｔ細胞（処置群の各々における左側のバー）及びＯＶＡ特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞（処置群の各々における右側のバー）の頻度を示す。 本明細書に開示される操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）が鼻腔内投与後に腸間膜リンパ節に移動する能力を示す。ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＰＯＴによって測定したときの、腸間膜リンパ節におけるＯＶＡ特異的ＣＤ４＋ Ｔ細胞（処置群の各々における左側のバー）及びＯＶＡ特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞（処置群の各々における右側のバー）の頻度を示す。 本明細書に開示される操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）が鼻腔内投与後に腸間膜リンパ節に移動する能力を示す。フローサイトメトリーによって測定したときの、肺におけるＯＶＡ特異的エフェクターメモリーＣＤ８＋ Ｔ細胞の頻度を示す。 本明細書に開示される操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）が鼻腔内投与後に腸間膜リンパ節に移動する能力を示す。フローサイトメトリーによって測定したときの、脾臓におけるＯＶＡ特異的エフェクターメモリーＣＤ８＋ Ｔ細胞の頻度を示す。 足場Ｘを含むとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストを負荷された、表面が操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）が抗原特異的免疫応答を誘導する能力を示す。実験設計の概略図を提供する。示されるように、ＣＤ４ペプチド（Ｉｔｇｂ１）及び／またはＣＤ８ペプチド（Ｌａｍａ４）をＥＶ（例えば、エキソソーム）の足場Ｘに連結した。 足場Ｘを含むとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストを負荷された、表面が操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）が抗原特異的免疫応答を誘導する能力を示す。ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＰＯＴによって測定したときの、異なる処置群からの動物の脾臓におけるＩｔｇｂ１特異的ＣＤ４＋ Ｔ細胞の頻度を示す。 足場Ｘを含むとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストを負荷された、表面が操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）が抗原特異的免疫応答を誘導する能力を示す。ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＰＯＴによって測定したときの、異なる処置群からの動物の脾臓におけるＬａｍａ４特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の頻度を示す。 足場Ｘを含むとともに、ＣｐＧアジュバントを負荷された、表面が操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）が抗原特異的免疫応答を誘導する能力を示す。Ａは、実験設計の概略図を提供する。示されるように、（ｉ）ＣＤ８ペプチド（Ｌａｍａ４）単独（群２）、または（ｉｉ）ＣＤ８ペプチド及びＣＤ４ペプチド（Ｉｔｇｂ１）の両方（群３）のいずれかを、マレイミド化学反応を使用して足場Ｘに連結した。対照ＥＶは、足場Ｘのみを発現した（すなわち、ペプチドなし、かつＣｐＧアジュバントなし）（群１）。Ｂ及びＣは、ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＰＯＴによって測定したときの、異なる処置群からの動物の脾臓における、それぞれＩｔｇｂ１特異的ＣＤ４＋ Ｔ細胞及びＬａｍａ４特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の頻度を示す。 ウェスタンブロットによって測定したときの、本明細書に開示される表面が操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）におけるＨＰＶ１６及びＨＰＶ１８のＥ６及びＥ７タンパク質の発現を示す。２９３ＳＦ細胞を、以下の完全長タンパク質のうちの１つをコードするプラスミドでトランスフェクトした：（ｉ）ＨＰＶ１６ Ｅ６、（ｉｉ）ＨＰＶ１６ Ｅ７、（ｉｉｉ）ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７、（ｉｖ）ＨＰＶ１８ Ｅ６、（ｖ）ＨＰＶ１８ Ｅ７、及び（ｖｉ）ＨＰＶ１８ Ｅ６／Ｅ７。 ウェスタンブロットによって測定したときの、本明細書に開示される表面が操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）におけるＨＰＶ１６及びＨＰＶ１８のＥ６及びＥ７タンパク質の発現を示す。２９３ＳＦ細胞を、以下の完全長タンパク質のうちの１つをコードするプラスミドでトランスフェクトした：（ｉ）ＨＰＶ１６ Ｅ６、（ｉｉ）ＨＰＶ１６ Ｅ７、（ｉｉｉ）ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７、（ｉｖ）ＨＰＶ１８ Ｅ６、（ｖ）ＨＰＶ１８ Ｅ７、及び（ｖｉ）ＨＰＶ１８ Ｅ６／Ｅ７。 ウェスタンブロットによって測定したときの、本明細書に開示される表面が操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）におけるＨＰＶ１６及びＨＰＶ１８のＥ６及びＥ７タンパク質の発現を示す。２９３ＳＦ細胞を、以下の完全長タンパク質のうちの１つをコードするプラスミドでトランスフェクトした：（ｉ）ＨＰＶ１６ Ｅ６、（ｉｉ）ＨＰＶ１６ Ｅ７、（ｉｉｉ）ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７、（ｉｖ）ＨＰＶ１８ Ｅ６、（ｖ）ＨＰＶ１８ Ｅ７、及び（ｖｉ）ＨＰＶ１８ Ｅ６／Ｅ７。 ウェスタンブロットによって測定したときの、本明細書に開示される表面が操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）におけるＨＰＶ１６及びＨＰＶ１８のＥ６及びＥ７タンパク質の発現を示す。２９３ＳＦ細胞を、以下の完全長タンパク質のうちの１つをコードするプラスミドでトランスフェクトした：（ｉ）ＨＰＶ１６ Ｅ６、（ｉｉ）ＨＰＶ１６ Ｅ７、（ｉｉｉ）ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７、（ｉｖ）ＨＰＶ１８ Ｅ６、（ｖ）ＨＰＶ１８ Ｅ７、及び（ｖｉ）ＨＰＶ１８ Ｅ６／Ｅ７。 ウェスタンブロットによって測定したときの、本明細書に開示される表面が操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）におけるＨＰＶ１６及びＨＰＶ１８のＥ６及びＥ７タンパク質の発現を示す。２９３ＳＦ細胞を、以下の完全長タンパク質のうちの１つをコードするプラスミドでトランスフェクトした：（ｉ）ＨＰＶ１６ Ｅ６、（ｉｉ）ＨＰＶ１６ Ｅ７、（ｉｉｉ）ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７、（ｉｖ）ＨＰＶ１８ Ｅ６、（ｖ）ＨＰＶ１８ Ｅ７、及び（ｖｉ）ＨＰＶ１８ Ｅ６／Ｅ７。 ウェスタンブロットによって測定したときの、本明細書に開示される表面が操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）におけるＨＰＶ１６及びＨＰＶ１８のＥ６及びＥ７タンパク質の発現を示す。２９３ＳＦ細胞を、以下の完全長タンパク質のうちの１つをコードするプラスミドでトランスフェクトした：（ｉ）ＨＰＶ１６ Ｅ６、（ｉｉ）ＨＰＶ１６ Ｅ７、（ｉｉｉ）ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７、（ｉｖ）ＨＰＶ１８ Ｅ６、（ｖ）ＨＰＶ１８ Ｅ７、及び（ｖｉ）ＨＰＶ１８ Ｅ６／Ｅ７。 ウェスタンブロットによって測定したときの、本明細書に開示される表面が操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）におけるＨＰＶ１６及びＨＰＶ１８のＥ６及びＥ７タンパク質の発現を示す。分割タンパク質発現戦略（ｓｐｌｉｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｓｔｒａｔｅｇｙ）を使用した。２９３ＳＦ細胞を以下のプラスミドのうちの１つでトランスフェクトした：（ｉ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ＰＴＧＦＲＮ－ＦＬＡＧ－ｃｏＨＰＶ１６ｎＥ６（「ｐＣＢ－２０１４」）、（ｉｉ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ＰＴＧＦＲＮ－ＦＬＡＧ－ｃｏＨＰＶ１６ｃＥ６（「ｐＣＢ－２０１５」）、（ｉｉｉ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ｃｏＨＰＶ１６ｎＥ６－ＦＬＡＧ－ＰＴＧＦＲＮ（「ｐＣＢ－２０１６」）、（ｉｖ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ｃｏＨＰＶ１６ｃＥ６－ＦＬＡＧ－ＰＴＧＦＲＮ（「ｐＣＢ－２０１７」）、（ｖ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ＰｒＹ－ＦＬＡＧ－ｃｏＨＰＶ１６ｎＥ６（「ｐＣＢ－２０１８」）、及び（ｖｉ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ＰｒＹ－ＦＬＡＧ－ｃｏＨＰＶ１６ｃＥ６（「ｐＣＢ－２０１９」）。プラスミドの詳細な説明は、実施例２３に見出すことができる（表１１も参照されたい）。 ウェスタンブロットによって測定したときの、本明細書に開示される表面が操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）におけるＨＰＶ１６及びＨＰＶ１８のＥ６及びＥ７タンパク質の発現を示す。２９３ＳＦ細胞を以下のプラスミドのうちの１つでトランスフェクトした：（ｉ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ＰＴＧＦＲＮ－ＦＬＡＧ－ｃｏＨＰＶ１６ｎＥ６（「ｐＣＢ－２０１４」）、（ｉｉ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ＰＴＧＦＲＮ－ＦＬＡＧ－ｃｏＨＰＶ１６ｃＥ６（「ｐＣＢ－２０１５」）、（ｉｉｉ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ｃｏＨＰＶ１６ｎＥ６－ＦＬＡＧ－ＰＴＧＦＲＮ（「ｐＣＢ－２０１６」）、（ｉｖ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ｃｏＨＰＶ１６ｃＥ６－ＦＬＡＧ－ＰＴＧＦＲＮ（「ｐＣＢ－２０１７」）、（ｖ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ＰｒＹ－ＦＬＡＧ－ｃｏＨＰＶ１６ｎＥ６（「ｐＣＢ－２０１８」）、及び（ｖｉ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ＰｒＹ－ＦＬＡＧ－ｃｏＨＰＶ１６ｃＥ６（「ｐＣＢ－２０１９」）。プラスミドの詳細な説明は、実施例２３に見出すことができる（表１１も参照されたい）。 ウェスタンブロットによって測定したときの、本明細書に開示される表面が操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）におけるＨＰＶ１６及びＨＰＶ１８のＥ６及びＥ７タンパク質の発現を示す。２９３ＳＦ細胞を以下のプラスミドのうちの１つでトランスフェクトした：（ｉ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ＰＴＧＦＲＮ－ＦＬＡＧ－ｃｏＨＰＶ１６ｎＥ６（「ｐＣＢ－２０１４」）、（ｉｉ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ＰＴＧＦＲＮ－ＦＬＡＧ－ｃｏＨＰＶ１６ｃＥ６（「ｐＣＢ－２０１５」）、（ｉｉｉ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ｃｏＨＰＶ１６ｎＥ６－ＦＬＡＧ－ＰＴＧＦＲＮ（「ｐＣＢ－２０１６」）、（ｉｖ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ｃｏＨＰＶ１６ｃＥ６－ＦＬＡＧ－ＰＴＧＦＲＮ（「ｐＣＢ－２０１７」）、（ｖ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ＰｒＹ－ＦＬＡＧ－ｃｏＨＰＶ１６ｎＥ６（「ｐＣＢ－２０１８」）、及び（ｖｉ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ＰｒＹ－ＦＬＡＧ－ｃｏＨＰＶ１６ｃＥ６（「ｐＣＢ－２０１９」）。プラスミドの詳細な説明は、実施例２３に見出すことができる（表１１も参照されたい）。 ウェスタンブロットによって測定したときの、本明細書に開示される表面が操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）におけるＨＰＶ１６及びＨＰＶ１８のＥ６及びＥ７タンパク質の発現を示す。２９３ＳＦ細胞を以下のプラスミドのうちの１つでトランスフェクトした：（ｉ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ＰＴＧＦＲＮ－ＦＬＡＧ－ｃｏＨＰＶ１６ｎＥ６（「ｐＣＢ－２０１４」）、（ｉｉ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ＰＴＧＦＲＮ－ＦＬＡＧ－ｃｏＨＰＶ１６ｃＥ６（「ｐＣＢ－２０１５」）、（ｉｉｉ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ｃｏＨＰＶ１６ｎＥ６－ＦＬＡＧ－ＰＴＧＦＲＮ（「ｐＣＢ－２０１６」）、（ｉｖ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ｃｏＨＰＶ１６ｃＥ６－ＦＬＡＧ－ＰＴＧＦＲＮ（「ｐＣＢ－２０１７」）、（ｖ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ＰｒＹ－ＦＬＡＧ－ｃｏＨＰＶ１６ｎＥ６（「ｐＣＢ－２０１８」）、及び（ｖｉ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ＰｒＹ－ＦＬＡＧ－ｃｏＨＰＶ１６ｃＥ６（「ｐＣＢ－２０１９」）。プラスミドの詳細な説明は、実施例２３に見出すことができる（表１１も参照されたい）。 ウェスタンブロットによって測定したときの、本明細書に開示される表面が操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）におけるＨＰＶ１６及びＨＰＶ１８のＥ６及びＥ７タンパク質の発現を示す。２９３ＳＦ細胞を以下のプラスミドのうちの１つでトランスフェクトした：（ｉ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ＰＴＧＦＲＮ－ＦＬＡＧ－ｃｏＨＰＶ１６ｎＥ６（「ｐＣＢ－２０１４」）、（ｉｉ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ＰＴＧＦＲＮ－ＦＬＡＧ－ｃｏＨＰＶ１６ｃＥ６（「ｐＣＢ－２０１５」）、（ｉｉｉ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ｃｏＨＰＶ１６ｎＥ６－ＦＬＡＧ－ＰＴＧＦＲＮ（「ｐＣＢ－２０１６」）、（ｉｖ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ｃｏＨＰＶ１６ｃＥ６－ＦＬＡＧ－ＰＴＧＦＲＮ（「ｐＣＢ－２０１７」）、（ｖ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ＰｒＹ－ＦＬＡＧ－ｃｏＨＰＶ１６ｎＥ６（「ｐＣＢ－２０１８」）、及び（ｖｉ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ＰｒＹ－ＦＬＡＧ－ｃｏＨＰＶ１６ｃＥ６（「ｐＣＢ－２０１９」）。プラスミドの詳細な説明は、実施例２３に見出すことができる（表１１も参照されたい）。 ウェスタンブロットによって測定したときの、本明細書に開示される表面が操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）におけるＨＰＶ１６及びＨＰＶ１８のＥ６及びＥ７タンパク質の発現を示す。２９３ＳＦ細胞を以下のプラスミドのうちの１つでトランスフェクトした：（ｉ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ＰＴＧＦＲＮ－ＦＬＡＧ－ｃｏＨＰＶ１６ｎＥ６（「ｐＣＢ－２０１４」）、（ｉｉ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ＰＴＧＦＲＮ－ＦＬＡＧ－ｃｏＨＰＶ１６ｃＥ６（「ｐＣＢ－２０１５」）、（ｉｉｉ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ｃｏＨＰＶ１６ｎＥ６－ＦＬＡＧ－ＰＴＧＦＲＮ（「ｐＣＢ－２０１６」）、（ｉｖ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ｃｏＨＰＶ１６ｃＥ６－ＦＬＡＧ－ＰＴＧＦＲＮ（「ｐＣＢ－２０１７」）、（ｖ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ＰｒＹ－ＦＬＡＧ－ｃｏＨＰＶ１６ｎＥ６（「ｐＣＢ－２０１８」）、及び（ｖｉ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ＰｒＹ－ＦＬＡＧ－ｃｏＨＰＶ１６ｃＥ６（「ｐＣＢ－２０１９」）。プラスミドの詳細な説明は、実施例２３に見出すことができる（表１１も参照されたい）。 Ａ、Ｂ、及びＣは、ＳＴＩＮＧアゴニストを負荷されたとともに、（ｉ）足場Ｘに連結された抗Ｃｌｅｃ９Ａ標的化部分、及び（ｉｉ）足場Ｙに連結されたＯＶＡを発現している、表面が操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）の能力を示す。Ａは、実験設計の概略図を提供する。Ｂ及びＣは、Ａに示される異なる処置群からの動物の脾臓において観察されたＯＶＡ特異的ＣＤ８＋エフェクターメモリーＴ細胞の数を示す。Ｂは、単回ＥＶ投与後１週間での結果を示す。Ｃは、ＥＶ投与の２回目の投薬後１週間での結果を示す。 Ａ、Ｂ、及びＣは、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するように操作されたとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストを負荷されたＥＶ（例えば、エキソソーム）がインビボ投与後に抗原特異的体液性免疫応答を誘導する能力を示す。Ａは、実験設計の概略図を提供する。示されるように、動物は、以下のうちの１つを受けた：（ｉ）可溶性ＯＶＡ単独（群１）、（ｉｉ）遊離ＳＴＩＮＧアゴニストと組み合わせた可溶性ＯＶＡ（群２）、（ｉｉｉ）ＯＶＡ－足場Ｙを単独で発現しているＥＶ（例えば、エキソソーム）（「ＰｙＯＶＡ」）（群３）、（ｉｖ）遊離ＳＴＩＮＧアゴニストと組み合わせたＰｙＯＶＡ（群４）、（ｖ）ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷された操作されたエキソソーム（「Ｐｙ－ＯＶＡエキソＶＡＣＣ」）（群５）、及び（ｖｉ）ミョウバンと組み合わせた可溶性ＯＶＡ。Ｂは、血清中のＯＶＡ特異的ＩｇＧ１抗体の量の比較を提供する。Ｃは、血清中のＯＶＡ特異的ＩｇＡ抗体の量の比較を提供する。 ＡＭ１５２（シクロプロパンカルボン酸、１－［４’－［３－メチル－４－［［［（１Ｒ）－１－フェニルエトキシ］カルボニル］アミノ］－５－イソオキサゾリル］［１，１’－ビフェニル］－４－イル］－）、及びＡＭ０９５（１，１’－ビフェニル］－４－酢酸、４’－［３－メチル－４－［［［（１Ｒ）－１－フェニルエトキシ］カルボニル］アミノ］－５－イソオキサゾリル［］－）の化学構造を示す。１及び２と標示される矢印は、マレイミド反応性基を導入するための誘導に好適な位置（カルボン酸及びカルバメート）を示す。ＡＭ１５２において示される対応する部位はまた、ＡＭ０９５にも存在する。 それらの表面上に複数のＬＰＡ１アンタゴニスト分子を含有するエキソソームの集団を生み出すための、エキソソームへのＬＰＡ１アンタゴニスト（ＡＭ１５２）のコンジュゲーションを示す略図を提供する。 マレイミド反応性基をどのようにＡＭ１５２に、そのカルボン酸基を介して付加することができるかについての実施例を示す。この実施例は、マレイミド基とカルボン酸反応性クロロメチルベンゼン基との間に介在するａｌａ－ｖａｌ切断可能リンカー及びＣ５スペーサーを含む反応性複合体の一部としてマレイミド基を示す。 ＡＭ１５２を誘導体化するために使用することができる２つの例となる試薬を示す。上の試薬は、（ｉ）ＡＭ１５２のカルボン酸基と反応することができるクロロメチルベンゼン基、及び（ｉｉ）マレイミド基を含み、それらの間には、切断可能なｃｉｔ－ｖａｌジペプチド及びＣ５スペーサーが介在する。下の試薬は、（ｉ）ＡＭ１５２のカルボン酸基と反応することができるクロロメチルベンゼン基、及び（ｉｉ）マレイミド基を含み、それらの間には、切断可能なａｌａ－ｖａｌジペプチド及びＣ５スペーサーが介在する。 コンジュゲーション生成物における（例えば、カテプシンＢによる）ｃｉｔ－ｖａｌまたはａｌａ－ｖａｌジペプチドの切断からもたらされよう生成物を示す。生成物ＡＭ１５２アニリンエステルは、内因性エステラーゼによってさらにプロセシングされて、遊離酸ＡＭ１５２生成物を生み出すことが可能であろう。 遊離マレイミド基及び異なるスペーサーの組み合わせを含むいくつかのＡＭ１５２誘導体を示す。 遊離マレイミド基及び異なるスペーサーの組み合わせを含むいくつかのＡＭ１５２誘導体を示す。 カルボン酸基の保護の後、カルボン酸基を誘導体化するために使用した同じ試薬を使用して、ＡＭ１５２をそのカルバメート基において誘導体化することが可能であることを示す。結果として得られる生成物は、その後、遊離カルボン酸基に脱保護されよう。 マレイミド基との複合体がリンカーを介してＡＭ１５２のカルバメート基に結合している実施例を例示する。好適なリンカーには、本明細書に開示されるリンカーのうちのいずれも含まれる。 ＡＭ１５２を誘導体化して、その後、反応性マレイミド基を介して係留部分に結合させる代わりに、それを誘導体化された係留部分に結合させることができることを示す。 マレイミド化学反応をどのように使用して、例えば、本明細書に記載の足場部分（例えば、足場Ｘタンパク質もしくはその断片または脂質）を介して、生物学的に活性な分子（ＢＡＭ）をＥＶ（例えば、エキソソーム）に化学的に連結することができるかを示す略図である。図面に図示されるリンカーは、任意選択的なものであり、存在する場合、リンカー（例えば、切断可能なリンカー）またはそれらの組み合わせを含み得る。
本開示は、抗原及びアジュバントを同じ抗原提示細胞に同時に送達する、操作されたＥＶ、例えばエキソソームを対象とする。ＥＶプラットフォームは、モジュール式ワクチン接種システムを創出するように設計された、抗原の内腔発現及び免疫共刺激分子の表面発現を可能にする。種々のアジュバントをＥＶ、例えばエキソソームに組み込んで、広範囲の抗原に対する免疫応答を強化することができる。操作されたＥＶは、１つまたは複数のペイロードを含むことができ、ＥＶの少なくとも１つの性質（例えば、本明細書に開示されるもの等）、及びその使用を改善することができる。一部の態様では、１つまたは複数のペイロードは、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤を含む。ある特定の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、１つまたは複数の追加の部分（例えば、標的化部分）を含む。一部の態様では、１つまたは複数のペイロード（例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤）及び／または１つもしくは複数の追加の部分（例えば、標的化部分）は、ＥＶ、例えばエキソソームの表面上、またはＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の１つまたは複数の足場部分に結合させる（または連結させる）ことができる。したがって、本開示のＥＶは、ワクチンのためのプラットフォーム送達ビヒクル（すなわち、エキソＶＡＣＣ（商標））を可能にし、ここで、ＥＶ上の抗原、及び／または一部の態様では、１つまたは複数のペイロード（例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤）は、特定の方式で組み合わせることができ、及び／または異なる抗原及び／その１つもしくはアジュバントもしくは免疫調節剤と置き換えることができる。さらなる追加の部分（例えば、標的化部分）を、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の外表面及び／または内腔表面に直接的に結合させる（または連結する）ことができる。種々の態様の非限定的な例が本開示に示される。
Ｉ．定義
本明細書がより容易に理解され得るように、ある特定の用語を最初に定義する。追加の定義は、発明を実施するための形態の全体を通して定められる。
「ａ」または「ａｎ」実体という用語は、１つまたは複数のその実体を指すことに留意されたく、例えば、「ヌクレオチド配列（ａ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）」は、１つまたは複数のヌクレオチド配列を表すことが理解される。したがって、「ａ」（または「ａｎ」）、「１つまたは複数」、及び「少なくとも１つ」という用語は、本明細書で互換的に使用され得る。
さらに、本明細書で使用される場合、「及び／または」は、２つの明記される特徴または構成要素の各々が、他方の有無にかかわらず具体的に開示されていると解釈されるべきである。故に、本明細書で「Ａ及び／またはＢ」等の語句において使用される「及び／または」という用語は、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、及び「Ｂ」（単独）を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」等の語句において使用される「及び／または」という用語は、以下の態様の各々、すなわち、Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）を包含することが意図される。
態様が「～を含む」という言い回しとともに本明細書に記載される場合はいずれも、「～からなる」及び／または「～から本質的になる」という用語で記載される、その他の点では類似した態様もまた提供されることが理解される。
別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が関連する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。例えば、Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ，２ｎｄ ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、及びＯｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ Ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、本開示で使用される用語の多くについての一般辞書を当業者に提供する。
単位、接頭辞、及び記号は、それらの国際単位系（ＳＩ）により承認される形態で表される。数値範囲は、その範囲を画定する数を含む。別途指示されない限り、ヌクレオチド配列は、５’から３’の向きで左から右に記載される。アミノ酸配列は、アミノからカルボキシの向きで左から右に記載される。本明細書に提供される見出しは、本開示の種々の態様の限定ではなく、そのような限定は、本明細書を全体として参照することによって得ることができる。したがって、すぐ下で定義される用語は、本明細書を全体的に参照することによってより十分に定義される。
「約」という用語は、本明細書で、およそ、大まかに、前後、またはその領域内を意味するように使用される。「約」という用語が数値範囲と併せて使用されるとき、それは、定められる数値を上回る境界、及び下回る境界を延長させることによってその範囲を修飾する。一般に、「約」という用語は、述べられる値を、例えば上下に１０パーセント（より高いまたはより低い）の変動幅で上回る数値及び下回る数値を修飾することができる。
本明細書で使用されるとき、「細胞外小胞」または「ＥＶ」という用語は、内部空間を取り囲む膜を含む細胞由来の小胞を指す。細胞外小胞は、それらが由来する細胞よりも小さい直径を有する全ての膜結合小胞（例えば、エキソソーム、ナノ小胞）を含む。一部の態様では、細胞外小胞は直径が２０ｎｍ～１０００ｎｍの範囲であり、内部空間（すなわち、内腔）内で、細胞外小胞の外部表面上に発現されて、及び／または膜をまたいでのいずれかで、種々の高分子ペイロードを含み得る。一部の態様では、ペイロードは、例えば、核酸、タンパク質、炭水化物、脂質、低分子、及び／またはそれらの組み合わせを含み得る。ある特定の態様では、細胞外ビヒクルは、足場部分を含む。例として、かつ限定することなく、細胞外小胞は、アポトーシス小体、細胞の断片、直接的操作または間接的操作による細胞由来の小胞（例えば、連続押出またはアルカリ溶液での処理による）、小胞化オルガネラ、及び生細胞により産生される小胞（例えば、原形質膜の直接出芽または後期エンドソームと原形質膜との融合による）を含む。細胞外小胞は、生きている生物もしくは死んだ生物、外植された組織もしくは臓器、原核細胞もしくは真核細胞、及び／または培養細胞に由来し得る。一部の態様では、細胞外小胞は、１つまたは複数の導入遺伝子産物を発現する細胞によって産生される。
本明細書で使用されるとき、「エキソソーム」という用語は、２０～３００ｎｍ（例えば、４０～２００ｎｍ）の直径を有する細胞外小胞を指す。エキソソームは、内部空間（すなわち、内腔）を取り囲む膜を含み、一部の態様では、原形質膜の直接出芽によって、または後期エンドソームもしくは多胞体と原形質膜との融合によって細胞（例えば、プロデューサー細胞）から生成され得る。ある特定の態様では、エキソソームは、足場部分を含む。上述したように、エキソソームは、プロデューサー細胞に由来し得、そのサイズ、密度、生化学的パラメータ、またはそれらの組み合わせに基づいてプロデューサー細胞から単離され得る。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、１つまたは複数の導入遺伝子産物を発現する細胞によって産生される。
本明細書で使用されるとき、「ナノ小胞」という用語は、２０ｎｍ～２５０ｎｍ（例えば、３０～１５０ｎｍ）の直径を有する細胞外小胞を指し、ナノ小胞が操作なしでは細胞によって産生されないような直接的操作または間接的操作によって細胞（例えば、プロデューサー細胞）から生成される。ナノ小胞を産生させるための細胞の適切な操作には、連続押出し、アルカリ溶液での処理、超音波処理、またはそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。一部の態様では、ナノ小胞の産生は、プロデューサー細胞の破壊をもたらし得る。一部の態様では、本明細書に記載のナノ小胞の集団は、原形質膜からの直接出芽または後期エンドソームと原形質膜との融合により細胞から得られる小胞を実質的に含まない。ある特定の態様では、ナノ小胞は、足場部分を含む。ナノ小胞は、ひとたびプロデューサー細胞から得られると、そのサイズ、密度、生化学的パラメータ、またはそれらの組み合わせに基づいてプロデューサー細胞から単離され得る。
本明細書で使用されるとき、「表面が操作されたＥＶ、例えばエキソソーム」（例えば、足場Ｘが操作されたＥＶ、例えばエキソソーム）という用語は、操作されたＥＶ、例えばエキソソームの表面が修飾前のＥＶ、例えばエキソソームまたは天然に存在するＥＶ、例えばエキソソームのそれとは異なるように、ＥＶ、例えばエキソソームの膜または表面の組成が修飾されたＥＶ、例えばエキソソームを指す。操作は、ＥＶ、例えばエキソソームの表面が変化するような、ＥＶ、例えばエキソソームの表面上またはＥＶ、例えばエキソソームの膜におけるものであり得る。例えば、膜は、タンパク質、脂質、低分子、炭水化物等の組成が修飾される。組成は、化学的、物理的、もしくは生物学的方法によって、または化学的、物理的、もしくは生物学的方法により事前にもしくは同時に修飾された細胞から産生させることによって変化させることができる。具体的には、組成は、遺伝子操作によって、または遺伝子操作により事前に修飾された細胞から産生させることによって変化させることができる。一部の態様では、表面が操作されたＥＶ、例えばエキソソームは、ＥＶ、例えばエキソソームの表面に露出させられ得るか、またはＥＶ、例えばエキソソームの表面上に露出させる部分のための係留点（結合）であり得る、外因性タンパク質（すなわち、ＥＶ、例えばエキソソームが天然では発現しないタンパク質）またはその断片もしくはバリアントを含む。他の態様では、表面が操作されたＥＶ、例えばエキソソームは、ＥＶ、例えばエキソソームの表面に露出させられ得るか、またはＥＶ、例えばエキソソームの表面上に露出させる部分のための係留点（結合）であり得る、天然エキソソームタンパク質（例えば、足場Ｘ）またはその断片もしくはバリアントのより高い発現（例えば、より多数）を含む。
本明細書で使用されるとき、「内腔が操作されたエキソソーム」（例えば、足場Ｙが操作されたエキソソーム）という用語は、操作されたＥＶ、例えばエキソソームの内腔が修飾前のＥＶ、例えばエキソソームまたは天然に存在するＥＶ、例えばエキソソームのそれとは異なるように、ＥＶ、例えばエキソソームの膜または内腔の組成が修飾された、ＥＶ、例えばエキソソームを指す。操作は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔が変化するように、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔または膜において直接的であり得る。例えば、膜は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔が修飾されるように、タンパク質、脂質、低分子、炭水化物等の組成が修飾される。組成は、化学的、物理的、もしくは生物学的方法によって、または化学的、物理的、もしくは生物学的方法により事前に修飾された細胞から産生させることによって変化させることができる。具体的には、組成は、遺伝子操作によって、または遺伝子操作により事前に修飾された細胞から産生させることによって変化させることができる。一部の態様では、内腔が操作されたエキソソームは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中に露出させられ得るか、またはＥＶ、例えばエキソソームの内層上に露出させる部分のための係留点（結合）であり得る、外因性タンパク質（すなわち、ＥＶ、例えばエキソソームが天然では発現しないタンパク質）またはその断片もしくはバリアントを含む。他の態様では、内腔が操作されたＥＶ、例えばエキソソームは、エキソソームの内腔に露出させられ得るか、またはエキソソームの内腔中に露出させる部分のための係留点（結合）であり得る、天然エキソソームタンパク質（例えば、足場Ｘまたは足場Ｙ）またはその断片もしくはバリアントのより高い発現を含む。
「修飾された」という用語は、本明細書に記載のＥＶ、例えばエキソソームの文脈で使用される場合、ＥＶ、例えばエキソソーム及び／またはそのプロデューサー細胞の改変または操作により、修飾されたＥＶ、例えばエキソソームが天然に存在するＥＶ、例えばエキソソームとは異なるようになることを指す。一部の態様では、本明細書に記載の修飾されたＥＶ、例えばエキソソームは、天然に存在するＥＶ、例えばエキソソームの膜と比較してタンパク質、脂質、低分子、炭水化物等の組成が異なる膜を含む（例えば、膜は、より高い密度もしくは数の天然エキソソームタンパク質を含む、及び／または膜は、エキソソームに天然に見出されないタンパク質（例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤）を含む。ある特定の態様では、膜に対するかかる修飾は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面を変化させる（例えば、本明細書に記載の表面が操作されたＥＶ、例えばエキソソーム）。ある特定の態様では、膜に対するかかる修飾は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔を変化させる（例えば、本明細書に記載の内腔が操作されたＥＶ、例えばエキソソーム）。
本明細書で使用されるとき、「足場部分」という用語は、ペイロードまたは目的とする任意の他の化合物（例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤）を、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上または外表面上のいずれかでＥＶ、例えばエキソソームに係留するために使用することができる分子を指す。ある特定の態様では、足場部分は、合成分子を含む。一部の態様では、足場部分は、非ポリペプチド部分を含む。他の態様では、足場部分は、ＥＶ、例えばエキソソームに天然に存在する脂質、炭水化物、またはタンパク質を含む。一部の態様では、足場部分は、ＥＶ、例えばエキソソームに天然に存在しない脂質、炭水化物、またはタンパク質を含む。ある特定の態様では、足場部分は、足場Ｘである。一部の態様では、足場部分は、足場Ｙである。さらなる態様では、足場部分は、足場Ｘ及び足場Ｙの両方を含む。本開示とともに使用することができる他の足場部分の非限定的な例としては、アミノペプチダーゼＮ（ＣＤ１３）；ネプリライシン、別名、膜メタロエンドペプチダーゼ（ＭＭＥ）；エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼファミリーメンバー１（ＥＮＰＰ１）；ニューロピリン－１（ＮＲＰ１）；ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＰＤＧＦＲ、ＧＰＩアンカータンパク質、ラクトアドヘリン、ＬＡＭＰ２、及びＬＡＭＰ２Ｂが挙げられる。
本明細書で使用されるとき、「足場Ｘ」という用語は、エキソソームの表面上で最近同定されたエキソソームタンパク質を指す。例えば、米国特許第１０，１９５，２９０号を参照されたく、同文献は参照によりその全体が本明細書に援用される。足場Ｘタンパク質の非限定的な例としては、プロスタグランジンＦ２受容体の負の制御因子（「ＰＴＧＦＲＮタンパク質」）、ベイシジン（「ＢＳＧタンパク質」）、免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー２（「ＩＧＳＦ２タンパク質」）、免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー３（「ＩＧＳＦ３タンパク質」）、免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー８（「ＩＧＳＦ８タンパク質」）、インテグリンベータ－１（「ＩＴＧＢ１タンパク質）、インテグリンアルファ－４（「ＩＴＧＡ４タンパク質」）、４Ｆ２細胞表面抗原重鎖（「ＳＬＣ３Ａ２タンパク質」）、及びＡＴＰトランスポータータンパク質のクラス（「ＡＴＰ１Ａ１タンパク質」、「ＡＴＰ１Ａ２タンパク質」、「ＡＴＰ１Ａ３タンパク質」、「ＡＴＰ１Ａ４タンパク質」、「ＡＴＰ１Ｂ３タンパク質」、「ＡＴＰ２Ｂ１タンパク質」、「ＡＴＰ２Ｂ２タンパク質」、「ＡＴＰ２Ｂ３タンパク質」、「ＡＴＰ２Ｂタンパク質」）が挙げられる。一部の態様では、足場Ｘタンパク質は、全タンパク質またはその断片（例えば、機能的断片、例えば、別の部分をＥＶ、例えばエキソソームの外表面上または内腔表面上で係留することが可能な最小断片）であり得る。一部の態様では、足場Ｘは、ある部分（例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤）をエキソソームの外部表面または内腔表面に係留することができる。
本明細書で使用されるとき、「足場Ｙ」という用語は、エキソソームの内腔内で新たに同定されたエキソソームタンパク質を指す。例えば、国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０６１６７９号を参照されたく、同文献は参照によりその全体が本明細書に援用される。足場Ｙタンパク質の非限定的な例としては、ミリストイル化アラニンリッチタンパク質キナーゼＣ基質（「ＭＡＲＣＫＳタンパク質」）、ミリストイル化アラニンリッチタンパク質キナーゼＣ基質様１（「ＭＡＲＣＫＳＬ１タンパク質」）、及び脳酸可溶性タンパク質１（「ＢＡＳＰ１タンパク質」）が挙げられる。一部の態様では、足場Ｙタンパク質は、全タンパク質またはその断片（例えば、機能的断片、例えば、ある部分をエキソソームの内腔表面上に係留することが可能な最小断片）であり得る。一部の態様では、足場Ｙは、ある部分（例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤）を、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に係留することができる。
本明細書で使用されるとき、タンパク質（例えば、治療用タンパク質、足場Ｘ、または足場Ｙ）の「断片」という用語は、天然に存在する配列よりも短いタンパク質、天然に存在するタンパク質と比較して当該タンパク質のＮ末端及び／またはＣ末端で欠失のある、または当該タンパク質の任意の部分に欠失のあるタンパク質の、アミノ酸配列を指す。本明細書で使用されるとき、「機能的断片」という用語は、タンパク質機能を保持するタンパク質断片を指す。したがって、一部の態様では、足場Ｘタンパク質の機能的断片は、ある部分を、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上及び／または外表面上で係留する能力を保持する。同様に、ある特定の態様では、足場Ｙタンパク質の機能的断片は、ある部分を、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上で係留する能力を保持する。断片が機能的断片であるかどうかは、ウェスタンブロット、ＦＡＣＳ解析、及び、例えばＧＦＰのような自家蛍光タンパク質との断片の融合を含めた、ＥＶ、例えばエキソソームのタンパク質含量を決定するための当該技術分野で既知の任意の方法によって評価することができる。ある特定の態様では、足場Ｘタンパク質の機能的断片は、天然に存在する足場Ｘタンパク質の能力、例えば、ある部分を係留する能力の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％を保持する。一部の態様では、足場Ｙタンパク質の機能的断片は、天然に存在する足場Ｙタンパク質の能力、例えば、別の分子を係留する能力の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％を保持する。
本明細書で使用されるとき、分子（例えば、機能的分子、抗原、足場Ｘ及び／または足場Ｙ）の「バリアント」という用語は、当該技術分野で既知の方法によって比較した際に、別の分子とある特定の構造的及び機能的同一性を共有する分子を指す。例えば、あるタンパク質のバリアントは、別のタンパク質における置換、挿入、欠失、フレームシフト、または再構成を含むことができる。
一部の態様では、足場Ｘのバリアントは、完全長の成熟ＰＴＧＦＲＮ、ＢＳＧ、ＩＧＳＦ２、ＩＧＳＦ３、ＩＧＳＦ８、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＡ４、ＳＬＣ３Ａ２、もしくはＡＴＰトランスポータータンパク質、またはＰＴＧＦＲＮ、ＢＳＧ、ＩＧＳＦ２、ＩＧＳＦ３、ＩＧＳＦ８、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＡ４、ＳＬＣ３Ａ２、もしくはＡＴＰトランスポータータンパク質の断片（例えば、機能的断片）に対して少なくとも約７０％の同一性を有するバリアントを含む。一部の態様では、ＰＴＧＦＲＮのバリアントまたはその断片のバリアントは、配列番号１によるＰＴＧＦＲＮまたはその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＢＳＧのバリアントまたはその断片のバリアントは、配列番号９によるＢＳＧまたはその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＩＧＳＦ２のバリアントまたはその断片のバリアントは、配列番号３４によるＩＧＳＦ２またはその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＩＧＳＦ３のバリアントまたはその断片のバリアントは、配列番号２０によるＩＧＳＦ３またはその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＩＧＳＦ８のバリアントまたはその断片のバリアントは、配列番号１４によるＩＧＳＦ８またはその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＩＴＧＢ１のバリアントまたはその断片のバリアントは、配列番号２１によるＩＴＧＢ１またはその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＩＴＧＡ４のバリアントまたはその断片のバリアントは、配列番号２２によるＩＴＧＡ４またはその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＳＬＣ３Ａ２のバリアントまたはその断片のバリアントは、配列番号２３によるＳＬＣ３Ａ２またはその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＡＴＰ１Ａ１のバリアントまたはその断片のバリアントは、配列番号２４によるＡＴＰ１Ａ１またはその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＡＴＰ１Ａ２のバリアントまたはその断片のバリアントは、配列番号２５によるＡＴＰ１Ａ２またはその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＡＴＰ１Ａ３のバリアントまたはその断片のバリアントは、配列番号２６によるＡＴＰ１Ａ３またはその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＡＴＰ１Ａ４のバリアントまたはその断片のバリアントは、配列番号２７によるＡＴＰ１Ａ４またはその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＡＴＰ１Ｂ３のバリアントまたはその断片のバリアントは、配列番号２８によるＡＴＰ１Ｂ３またはその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＡＴＰ２Ｂ１のバリアントまたはその断片のバリアントは、配列番号２９によるＡＴＰ２Ｂ１またはその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＡＴＰ２Ｂ２のバリアントまたはその断片のバリアントは、配列番号３０によるＡＴＰ２Ｂ２またはその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＡＴＰ２Ｂ３のバリアントまたはその断片のバリアントは、配列番号３１によるＡＴＰ２Ｂ３またはその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＡＴＰ２Ｂ４のバリアントまたはその断片のバリアントは、配列番号３２によるＡＴＰ２Ｂ４またはその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、本明細書に開示される足場Ｘタンパク質のバリアントまたはその断片のバリアントは、ＥＶ、例えばエキソソームに特異的に標的化される能力を保持する。一部の態様では、足場Ｘは、１つまたは複数の変異、例えば、保存的アミノ酸置換を含む。
一部の態様では、足場Ｙのバリアントは、ＭＡＲＣＫＳ、ＭＡＲＣＫＳＬ１、ＢＡＳＰ１、またはＭＡＲＣＫＳ、ＭＡＲＣＫＳＬ１、もしくはＢＡＳＰ１の断片に対して少なくとも約７０％の同一性を有するバリアントを含む。一部の態様では、ＭＡＲＣＫＳのバリアントまたはその断片のバリアントは、配列番号４７によるＭＡＲＣＫＳまたはその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＭＡＲＣＫＳＬ１のバリアントまたはその断片のバリアントは、配列番号４８によるＭＡＲＣＫＳＬ１またはその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＢＡＳＰ１のバリアントまたはその断片のバリアントは、配列番号４９によるＢＡＳＰ１またはその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、足場Ｙタンパク質のバリアントまたはその断片のバリアントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に特異的に標的化される能力を保持する。一部の態様では、足場Ｙは、１つまたは複数の変異、例えば、保存的アミノ酸置換を含む。
「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基と置き換えられている置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野において定義されており、これらには、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。故に、ポリペプチドにおけるアミノ酸が、同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸と置き換えられる場合、その置換は保存的と見なされる。別の態様では、あるアミノ酸の連なりが、側鎖ファミリーメンバーの順序及び／または組成が異なる構造的に類似した連なりと保存的に置き換えられ得る。
２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列間の「配列同一性パーセント」または「同一性パーセント」という用語は、２つの配列の最適なアライメントを得るために導入する必要のある付加または欠失（すなわち、ギャップ）を考慮した上で、比較ウィンドウにわたってそれらの配列によって共有される、同一のマッチした位置の数を指す。マッチした位置は、標的配列及び参照配列の両方において同一のヌクレオチドまたはアミノ酸が提示される、任意の位置である。ギャップはヌクレオチドでもアミノ酸でもないため、標的配列において提示されるギャップは計数されない。同様に、参照配列からのヌクレオチドまたはアミノ酸ではなく、標的配列のヌクレオチドまたはアミノ酸が計数されるため、参照配列において提示されるギャップは計数されない。
配列同一性のパーセンテージは、両方の配列において同一のアミノ酸残基または核酸塩基が生じる位置の数を決定して、マッチした位置の数を得、マッチした位置の数を比較ウィンドウ内にある位置の総数で除し、その結果に１００を乗じて、配列同一性のパーセンテージを得ることによって算出される。２つの配列間の配列の比較及び配列同一性パーセントの決定は、オンライン使用及びダウンロードの両方で容易に利用可能なソフトウェアを使用して遂行され得る。好適なソフトウェアプログラムが、種々のソースから、タンパク質及びヌクレオチド配列の両方のアライメントのために利用可能である。配列同一性パーセントを決定するための１つの好適なプログラムは、米国政府のＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ＢＬＡＳＴウェブサイト（ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）から利用可能なＢＬＡＳＴプログラム集の一部である、ｂｌ２ｓｅｑである。Ｂｌ２ｓｅｑは、ＢＬＡＳＴＮアルゴリズムまたはＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのいずれかを使用して２つの配列間の比較を行う。ＢＬＡＳＴＮは、核酸配列を比較するために使用される一方で、ＢＬＡＳＴＰは、アミノ酸配列を比較するために使用される。他の好適なプログラムは、例えば、ＥＭＢＯＳＳバイオインフォマティクスプログラム集の一部であり、またｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａにてＥｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＥＢＩ）からも利用可能な、Ｎｅｅｄｌｅ、Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ、Ｗａｔｅｒ、またはＭａｔｃｈｅｒである。
ポリヌクレオチドまたはポリペプチド参照配列と整列する、単一のポリヌクレオチドまたはポリペプチド標的配列内の異なる領域が各々、それらの独自の配列同一性パーセントを有することができる。配列同一性パーセント値は、小数第１位に丸められることに留意されたい。例えば、８０．１１、８０．１２、８０．１３、及び８０．１４は、８０．１に切り下げられる一方で、８０．１５、８０．１６、８０．１７、８０．１８、及び８０．１９は、８０．２に切り上げられる。また、長さの値は常に整数であることにも留意されたい。
当業者であれば、配列同一性パーセントの算出のための配列アライメントの生成が、もっぱら一次配列データによって駆動される配列対配列のバイナリ比較に限定されないことを理解しよう。配列アライメントは、多重配列アライメントから得ることができる。多重配列アライメントを生成するための１つの好適なプログラムは、ｗｗｗ．ｃｌｕｓｔａｌ．ｏｒｇから利用可能なＣｌｕｓｔａｌＷ２である。別の好適なプログラムは、ｗｗｗ．ｄｒｉｖｅ５．ｃｏｍ／ｍｕｓｃｌｅ／から利用可能なＭＵＳＣＬＥである。ＣｌｕｓｔａｌＷ２及びＭＵＳＣＬＥは、代替として、例えばＥＢＩから利用可能である。
また、配列アライメントは、配列データを、構造的データ（例えば、結晶学的タンパク質構造）、機能的データ（例えば、変異の箇所）、または系統発生学的データ等の異種の供給源からのデータと統合することによって生成され得ることも理解されよう。多重配列アライメントを生成するために異種データを統合する好適なプログラムは、ｗｏｒｌｄｗｉｄｅｗｅｂ．ｔｃｏｆｆｅｅ．ｏｒｇにて利用可能、また代替として、例えばＥＢＩから利用可能な、Ｔ－Ｃｏｆｆｅｅである。また、配列同一性パーセントを算出するために使用される最終的アライメントは、自動的にまたは手作業でのいずれかで精選され得ることも理解されよう。
ポリヌクレオチドバリアントは、コード領域、非コード領域、または両方における改変を含有することができる。一態様では、ポリヌクレオチドバリアントは、サイレント置換、付加、または欠失を生み出すが、コードされたポリペプチドの性質または活性を改変しない改変を含有する。別の態様では、ヌクレオチドバリアントは、遺伝コードの縮重に起因するサイレント置換によって生み出される。他の態様では、５～１０個、１～５個、または１～２個のアミノ酸が任意の組み合わせで置換、欠失、または付加されるバリアントである。ポリヌクレオチドバリアントは、様々な理由で、例えば、特定の宿主用にコドン発現を最適化する（ヒトｍＲＮＡにおけるコドンを他のもの、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ等の細菌宿主に変化させる）ために、生み出され得る。
天然に存在するバリアントは、「アレルバリアント」と呼ばれ、生物の染色体上の所与の遺伝子座を占める遺伝子のいくつかの代替形態のうちの１つを指す（Ｇｅｎｅｓ ＩＩ，Ｌｅｗｉｎ，Ｂ．，ｅｄ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８５））。これらのアレルバリアントは、ポリヌクレオチドレベル及び／またはポリペプチドレベルのいずれかで様々であり得、本開示に含まれる。代替として、天然に存在しないバリアントは、変異誘発技法によって、または直接的合成によって生み出され得る。
タンパク質操作及び組換えＤＮＡ技術の既知の方法を使用して、バリアントを生成して、ポリペプチドの特性を改善または改変することができる。例えば、生物学的機能の実質的な喪失を伴わずに、分泌されたタンパク質のＮ末端またはＣ末端から１つまたは複数のアミノ酸を欠失させることができる。Ｒｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：２９８４－２９８８（１９９３）（参照によりその全体が本明細書に援用される）は、アミノ末端の３個、８個、または２７個のアミノ酸残基を欠失させた後であってもヘパリン結合活性を有するバリアントＫＧＦタンパク質について報告した。同様に、インターフェロンガンマは、このタンパク質のカルボキシ末端から８～１０個のアミノ酸残基を欠失させた後に、最大で１０倍高い活性を示した（Ｄｏｂｅｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ７：１９９－２１６（１９８８）（参照によりその全体が本明細書に援用される））。
その上、バリアントは、天然に存在するタンパク質の生物学的活性と類似した生物学的活性を保持する場合が多いことを十分な証拠が実証している。例えば、Ｇａｙｌｅ及び共同研究者ら（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２６８：２２１０５－２２１１１（１９９３）（参照によりその全体が本明細書に援用される））は、ヒトサイトカインＩＬ－１ａの大規模な変異解析を実施した。同研究者らは、ランダム変異誘発を使用して、分子の全長にわたって１つのバリアント当たり平均２．５個のアミノ酸変化をもつ３，５００個を超える個々のＩＬ－１ａ変異体を生成した。可能なアミノ酸位置の各々で複数の変異を検査した。同研究者らは、「分子の［大半］が、［結合活性または生物学的活性］のいずれかに対する影響をほとんど伴わずに改変可能であった」ことを見出した（要約を参照されたい）。実際、検査した３，５００個を超えるヌクレオチド配列のうち、２３個の固有のアミノ酸配列のみが、野生型とは活性が顕著に異なるタンパク質をもたらした。
上述したように、ポリペプチドバリアントは、例えば、修飾ポリペプチドを含む。修飾には、例えば、アセチル化、アシル化、ＡＤＰリボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトール（ｐｈｏｓｐｈｏｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ）の共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合性架橋の形成、システインの形成、ピログルタミン酸の形成、ホルミル化、ガンマ－カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、ペグ化（Ｍｅｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １１６：２７０－７９（２０１０）（同文献は参照によりその全体が本明細書に援用される））、タンパク分解プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化（ｓｅｌｅｎｏｙｌａｔｉｏｎ）、硫酸化、アルギニル化（ａｒｇｉｎｙｌａｔｉｏｎ）等のタンパク質へのアミノ酸の転移ＲＮＡ媒介性付加、及びユビキチン化が含まれる。一部の態様では、足場Ｘ及び／または足場Ｙは、任意の好都合な箇所で修飾される。
本明細書で使用されるとき、「～に連結される」、「融合される」、または「～にコンジュゲートされる」という用語は、互換的に使用され、第１の部分と第２の部分、例えば、細胞外小胞の内腔表面におけるまたは外部表面上の、それぞれ、足場Ｘと抗原（またはアジュバントもしくは免疫調節剤）、例えば、それぞれ、細胞外小胞内または細胞外小胞上に発現された足場部分と抗原、例えば、足場Ｘ（例えば、ＰＴＧＦＲＮタンパク質）との間で形成される、共有結合または非共有結合を指す。一部の態様では、本明細書に開示されるペイロード（例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤）及び／または標的化部分は、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の外表面及び／または内腔表面に直接的に連結され得る。本明細書で使用されるとき、「直接的に連結される」、「直接的に融合される」、または「～に直接的にコンジュゲートされる」という用語は、本明細書に開示される足場部分を使用することなく、ある部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）をＥＶ（例えば、エキソソーム）の表面に連結する（融合するまたはコンジュゲートする）プロセスを指す。
本明細書で使用されるとき、「融合タンパク質」という用語は、互いに連結またはコンジュゲートされている２つ以上のタンパク質を指す。例えば、一部の態様では、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）において発現され得る融合タンパク質は、（ｉ）ペイロード（例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤）と、（ｉｉ）足場部分（例えば、足場Ｘ及び／または足場Ｙ）とを含む。一部の態様では、本開示に有用なＥＶ（例えば、エキソソーム）において発現され得る融合タンパク質は、（ｉ）標的化部分と、（ｉｉ）足場部分（例えば、足場Ｘ及び／または足場Ｙ）とを含む。本明細書に記載されるように、一部の態様では、本開示のＥＶ（例えば、エキソソーム）は、複数の融合タンパク質を発現することができ、ここで、第１の融合タンパク質は、（ｉ）ペイロード（例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤）と、（ｉｉ）足場部分（例えば、足場Ｘ及び／または足場Ｙ）とを含み、第２の融合タンパク質は、（ｉ）標的化部分と、（ｉｉ）足場部分（例えば、足場Ｘ及び／または足場Ｙ）とを含む。
「封入される」という用語、またはこの用語の文法的に異なる形態（例えば、封入、または封入すること）は、当該２つの部分の化学的または物理的連結を伴わずに、第１の部分（例えば、抗原、アジュバント、または免疫調節剤）を第２の部分（例えば、ＥＶ、例えばエキソソーム）の内部に有する状態またはそのプロセスを指す。一部の態様では、「封入される」という用語は、「～の内腔中にある」及び「負荷される」という用語と互換的に使用され得る。第１の部分（例えば、ペイロード、例えば、抗原、アジュバント、または免疫調節剤）を第２の部分（例えば、ＥＶ、例えばエキソソーム）中に封入すること（または負荷すること）の非限定的な例は、本明細書の他の箇所に開示される。
本明細書で使用されるとき、「プロデューサー細胞」という用語は、ＥＶ、例えばエキソソームの生成に使用される細胞を指す。プロデューサー細胞は、インビトロで培養された細胞、またはインビボの細胞であり得る。プロデューサー細胞には、ＥＶ、例えばエキソソームの生成に有効であることが知られる細胞、例えば、ＨＥＫ２９３細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、ＢＪヒト包皮線維芽細胞、ｆＨＤＦ線維芽細胞、ＡＧＥ．ＨＮ（登録商標）神経前駆体細胞、ＣＡＰ（登録商標）羊膜細胞、脂肪間葉系幹細胞、ＲＰＴＥＣ／ＴＥＲＴ１細胞が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の態様では、プロデューサー細胞は、抗原提示細胞ではない。一部の態様では、プロデューサー細胞は、樹状細胞、Ｂ細胞、肥満細胞、マクロファージ、好中球、Ｋｕｐｆｆｅｒ－Ｂｒｏｗｉｃｚ細胞、これらの細胞のうちのいずれかに由来する細胞、またはそれらの任意の組み合わせではない。一部の態様では、プロデューサー細胞は、天然に存在する抗原提示細胞ではない（すなわち、修飾されている）。一部の態様では、プロデューサー細胞は、天然に存在する樹状細胞、Ｂ細胞、肥満細胞、マクロファージ、好中球、Ｋｕｐｆｆｅｒ－Ｂｒｏｗｉｃｚ細胞、これらの細胞のうちのいずれかに由来する細胞、またはそれらの任意の組み合わせではない。かかるプロデューサー細胞に関する追加の開示は、本開示の他の箇所で提供される。一部の態様では、本開示で有用なＥＶ、例えばエキソソームは、ＥＶ、例えばエキソソームの表面上に露出した、ＭＨＣクラスＩまたはクラスＩＩ分子上には抗原を担持しないが（すなわち、抗原は、ＭＨＣクラスＩまたはクラスＩＩ分子上には提示されない）、代わりに、足場Ｘ及び／または足場Ｙへの結合によって、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中、またはＥＶ、例えばエキソソームの表面上に抗原を担持し得る。
本明細書で使用されるとき、「ＭＨＣクラスＩ分子」とは、ＭＨＣクラスＩ分子をコードする野生型またはバリアントＨＬＡクラスＩ遺伝子のタンパク質生成物を指す。したがって、「ＨＬＡクラスＩ分子」及び「ＭＨＣクラスＩ分子」は、本明細書で互換的に使用される。
ＭＨＣクラスＩ分子は、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子の２つの主要なクラスのうちの一方であり（他方はＭＨＣクラスＩＩである）、有顎脊椎動物の体内の全ての有核細胞の細胞表面上に見出される。それらは血小板上にも存在するが、赤血球上には存在しない。それらの機能は、細胞内に由来するタンパク質のペプチド断片を細胞傷害性Ｔ細胞へ提示することであり、これにより、ＭＨＣクラスＩタンパク質の一助により提示された特定の非自己抗原に対する免疫系からの即時の応答が誘発される。ＭＨＣクラスＩ分子は、サイトゾルタンパク質に由来するペプチドを提示するため、ＭＨＣクラスＩによる提示経路は、サイトゾル経路または内因性経路と呼ばれる場合が多い。
ヒトにおいては、ＭＨＣクラスＩに対応するＨＬＡは、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、及びＨＬＡ－Ｃである。ＭＨＣクラスＩ分子は、アルファ鎖及びβ２－ミクログロブリン（β２ｍ）鎖の２つのタンパク質鎖を含む。ヒトβ２ｍは、Ｂ２Ｍ遺伝子によってコードされる。クラスＩ ＭＨＣ分子は、主にプロテアソームによるサイトゾルタンパク質の分解から生成されたペプチドを結合する。次いで、ＭＨＣ Ｉ：ペプチド複合体は小胞体を介して細胞の外部原形質膜に挿入される。エピトープペプチドは、クラスＩ ＭＨＣ分子の細胞外部分上に結合している。故に、クラスＩ ＭＨＣの機能は、細胞内タンパク質を細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）へ提示することである。しかしながら、クラスＩ ＭＨＣはまた、交差提示として知られるプロセスにおいて、外因性タンパク質から生成されたペプチドも提示し得る。
正常細胞は、正常な細胞タンパク質のターンオーバーによるペプチドをそのクラスＩ ＭＨＣ上に提示し、ＣＴＬは、中枢性及び末梢性寛容機構に起因して、それらに応答して活性化されることはない。ウイルス感染後等に、細胞が外来性タンパク質を発現する場合、クラスＩ ＭＨＣのごく一部が、これらのペプチドを細胞表面上に提示することになる。結果として、ＭＨＣ：ペプチド複合体に特異的なＣＴＬが提示細胞を認識し、殺傷する。代替として、クラスＩ ＭＨＣ自体が、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）の阻害性リガンドとしての役目を果たし得る。ＣＴＬ応答を回避するために一部のウイルス及びある特定の腫瘍によって用いられる機構である、表面のクラスＩ ＭＨＣの正常なレベルの低減は、ＮＫ細胞による殺傷を活性化する。
本明細書で使用されるとき、「ＭＨＣクラスＩＩ分子」とは、ＭＨＣクラスＩＩ分子をコードする野生型またはバリアントＨＬＡクラスＩＩ遺伝子のタンパク質生成物を指す。したがって、「ＨＬＡクラスＩＩ分子」及び「ＭＨＣクラスＩＩ分子」は、本明細書で互換的に使用される。
ＭＨＣクラスＩＩ分子は、樹状細胞、単核貪食細胞、一部の内皮細胞、胸腺上皮細胞、及びＢ細胞等のプロフェッショナル抗原提示細胞上にのみ通常見出される主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子のクラスである。これらの細胞は、免疫応答を開始する際に重要である。クラスＩＩペプチドによって提示される抗原は、（ＭＨＣクラスＩのようにサイトゾル性ではなく）細胞外タンパク質に由来する。
ＭＨＣクラスＩ分子と同様に、クラスＩＩ分子もまたヘテロ二量体であるが、この場合はα鎖及びβ鎖の２つの均質なペプチドからなり、これらの両方がＭＨＣにおいてコードされる。α１、α２等のサブ表記は、ＨＬＡ遺伝子内の別個のドメインを指し、各ドメインは通常、遺伝子内の異なるエクソンによってコードされ、一部の遺伝子は、リーダー配列、膜貫通配列等をコードするさらなるドメインを有する。これらの分子は、細胞外領域ならびに膜貫通配列及び細胞質尾部の両方を有する。これらの鎖のα１領域及びβ１領域が一緒になって、膜遠位ペプチド結合ドメインを作り出す一方で、鎖の残りの細胞外部分であるα２及びβ２領域は、膜近位免疫グロブリン様ドメインを形成する。抗原またはペプチドが結合する抗原結合溝は、２つのαヘリックス壁、及びβシートから成り立つ。クラスＩ分子上の抗原結合溝が両端で閉じているのに対し、ＭＨＣクラスＩＩ分子の対応する溝は両端で開いているため、ＭＨＣクラスＩＩ分子によって提示される抗原はより長く、一般に１５～２４アミノ酸残基の長さである。ＭＨＣクラスＩＩ分子の負荷は食作用によって生じる。細胞外タンパク質が細胞内に取り込まれ、リソソームで消化され、結果として生じるエピトープ性ペプチド断片が、細胞表面へ移動する前にＭＨＣクラスＩＩ分子上に負荷される。ヒトにおいては、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質複合体は、ヒト白血球抗原遺伝子複合体（ＨＬＡ）によってコードされる。ＭＨＣクラスＩＩに対応するＨＬＡは、ＨＬＡ－ＤＰ、ＨＬＡ－ＤＭ、ＨＬＡ－ＤＯＡ、ＨＬＡ－ＤＯＢ、ＨＬＡ－ＤＱ、及びＨＬＡ－ＤＲである。ＨＬＡ遺伝子複合体の変異は、ＭＨＣクラスＩＩ欠損症の一種である裸リンパ球症候群（ＢＬＳ）につながり得る。
本明細書で使用されるとき、「単離する」、「単離された」、及び「単離すること」、または「精製する」、「精製された」、及び「精製すること」、ならびに「抽出された」及び「抽出すること」という用語は、互換的に使用され、精製、例えば、所望のＥＶ調製物の選択または濃縮の１つまたは複数のプロセスを経た所望のＥＶの調製物の状態（例えば、複数の既知または未知の量及び／または濃度）を指す。一部の態様では、本明細書で使用される、単離することまたは精製することとは、プロデューサー細胞を含有する試料からＥＶ（例えば、その画分）を取り出す、部分的に取り出すプロセスである。一部の態様では、単離されたＥＶ組成物は、検出可能な望まれない活性を有しないか、または、代替的には、望まれない活性のレベルもしくは量は、許容されるレベルもしくは量以下である。他の態様では、単離されたＥＶ組成物は、許容される量及び／または濃度以上の所望のＥＶの量及び／または濃度を有する。他の態様では、単離されたＥＶ組成物は、組成物が得られる出発材料（例えば、プロデューサー細胞調製物）と比較して濃縮されている。この濃縮は、出発材料と比較して１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、９９．９９％、９９．９９９％、９９．９９９９％、または９９．９９９９％超であり得る。一部の態様では、単離されたＥＶ調製物は、残留する生物由来物質を実質的に含まない。一部の態様では、単離されたＥＶ調製物は、いかなる混入生物物質も１００％含まないか、９９％含まないか、９８％含まないか、９７％含まないか、９６％含まないか、９５％含まないか、９４％含まないか、９３％含まないか、９２％含まないか、９１％含まないか、または９０％含まない。残留する生物由来物質には、非生物物質（化学物質を含む）または不要な核酸、タンパク質、脂質、もしくは代謝産物が含まれ得る。残留する生物由来物質を実質的に含まないことはまた、ＥＶ組成物が検出可能なプロデューサー細胞を含有しないこと、及びＥＶのみが検出可能であることを意味し得る。
本明細書で使用されるとき、「免疫調節剤」という用語は、細胞外小胞に接触させられる標的（例えば、標的細胞）に作用し、免疫系を制御する薬剤（すなわち、ペイロード）を指す。ＥＶ（例えば、エキソソーム）及び／またはプロデューサー細胞に導入され得る免疫調節剤の非限定的な例としては、チェックポイント阻害剤の調節剤、チェックポイント阻害剤のリガンド、サイトカイン、それらの誘導体、またはそれらの任意の組み合わせ等の薬剤が挙げられる。免疫調節剤にはまた、アゴニスト、アンタゴニスト、抗体、抗原結合断片、ポリヌクレオチド、例えば、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）、ペプチドコンジュゲートホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー（ＰＰＭＯ）、ｍｉＲＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、ｍＲＮＡ ＤＮＡ、または低分子も含まれ得る。
本明細書で使用されるとき、「生体内分布変更剤」という用語は、インビボまたはインビトロで（例えば、異なる種類の細胞の混合培養物中で）細胞外小胞（例えば、エキソソーム、ナノ小胞）の分布を変更することができる薬剤（すなわち、ペイロード）を指す。一部の態様では、「標的化部分」という用語は、生体内分布変更剤という用語と互換的に使用され得る。一部の態様では、標的化部分は、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の指向性を改変する（「指向性部分」）。本明細書で使用されるとき、「指向性部分」という用語は、ＥＶ（例えば、エキソソーム）上に発現される場合にＥＶの自然の移動を改変及び／または強化する、標的化部分を指す。例えば、一部の態様では、指向性部分は、ＥＶが特定の細胞、組織、または臓器によって取り込まれるのを促進し得る。本開示とともに使用することができる指向性部分の非限定的な例としては、樹状細胞上に特異的に発現するマーカー（例えば、Ｃｌｅｃ９ＡまたはＤＥＣ２０５）またはＴ細胞上に特異的に発現するマーカー（例えば、ＣＤ３）に結合し得るものが挙げられる。別途指示されない限り、本明細書で使用される「標的化部分」という用語は、指向性部分を包含する。生体内分布剤は、タンパク質、ペプチド、脂質、もしくは炭水化物等の生体分子、または合成分子であり得る。例えば、生体内分布変更剤は、親和性リガンド（例えば、抗体、ＶＨＨドメイン、ファージディスプレイペプチド、フィブロネクチンドメイン、ラクダ類、ＶＮＡＲ）、合成重合体（例えば、ＰＥＧ）、天然リガンド／分子（例えば、ＣＤ４０Ｌ、アルブミン、ＣＤ４７、ＣＤ２４、ＣＤ５５、ＣＤ５９）、組換えタンパク質（例えば、ＸＴＥＮ）であり得るが、これらに限定されない。
ある特定の態様では、生体内分布変更剤、及び／または標的化部分は、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の表面上に提示される。生体内分布変更剤は、（例えば、遺伝子にコードされた融合分子として）足場タンパク質（例えば、足場Ｘ）に融合されることによってＥＶ表面上に提示され得る。一部の態様では、生体内分布変更剤は、化学反応により生体内分布変更剤をＥＶ表面分子に結合させることによってＥＶ表面上に提示され得る。非限定的な例は、ＰＥＧ化である。一部の態様では、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）は、抗原、アジュバント、または免疫調節剤に加えて、生体内分布変更剤をさらに含み得る。本開示とともに使用することができる生体内分布変更剤または標的化部分の非限定的な例としては、Ｃ型レクチンドメインファミリー９メンバーＡ（Ｃｌｅｃ９ａ）タンパク質、樹状細胞特異的細胞間接着分子－３捕捉非インテグリン（ＤＣ－ＳＩＧＮ）、ＣＤ２０７、ＣＤ４０、Ｃｌｅｃ６、樹状細胞免疫受容体（ＤＣＩＲ）、ＤＥＣ－２０５、レクチン様酸化低密度リポタンパク質受容体－１（ＬＯＸ－１）、ＭＡＲＣＯ、Ｃｌｅｃ１２ａ、ＤＣ－アシアロ糖タンパク質受容体（ＤＣ－ＡＳＧＰＲ）、ＤＣ免疫受容体２（ＤＣＩＲ２）、デクチン－１、マクロファージマンノース受容体（ＭＭＲ）、ＢＤＣＡ－１（ＣＤ３０３、Ｃｌｅｃ４ｃ）、デクチン－２、Ｂｓｔ－２（ＣＤ３１７）、ＣＤ３、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。ある特定の態様では、標的化部分は、Ｃｌｅｃ９ａタンパク質である。一部の態様では、標的化部分は、ＣＤ３分子である。
本明細書で使用されるとき、「Ｃ型レクチンドメインファミリー９メンバーＡ」（Ｃｌｅｃ９ａ）タンパク質という用語は、活性化受容体として機能し、骨髄系列細胞（例えば、ＤＣ）上に発現しているＶ群Ｃ型レクチン様受容体（ｇｒｏｕｐ Ｖ Ｃ－ｔｙｐｅ ｌｅｃｔｉｎ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）（ＣＴＬＲ）を指す。Ｈｕｙｓａｍｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８３（２４）：１６６９３－７０１（２００８）、米国特許第９，９８８，４３１Ｂ２号（同文献の各々は参照によりその全体が本明細書に援用される）。Ｃｌｅｃ９ａの同義語が知られており、これにはＣＤ３７０、ＤＮＧＲ－１、５Ｂ５、ＨＥＥＥ９３４１、及びＣ型レクチンドメイン含有９Ａが含まれる。一部の態様では、Ｃｌｅｃ９ａタンパク質は、ヒトｃＤＣ１細胞上に発現している。一部の態様では、Ｃｌｅｃ９ａタンパク質は、マウスｃＤＣ１及びｐＤＣ細胞上に発現している。別途指定されない限り、本明細書で使用されるＣｌｅｃ９ａは、１つまたは複数の種（例えば、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシ、及びクマ）由来のＣｌｅｃ９ａを指し得る。
本明細書で使用されるとき、「ＣＤ３」または「分化抗原群３」という用語は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）と会合しているタンパク質複合体を指す。ＣＤ３分子は、４つの別々の鎖（ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、及び２つのＣＤ３ε鎖）から成り立つ。これらの鎖は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）及びζ鎖と会合して、Ｔリンパ球において活性化シグナルを生成する。ＴＣＲ、ζ鎖、及びＣＤ３分子は合わせて、ＴＣＲ複合体を構成する。ＣＤ３分子は、ＣＤ４＋ Ｔ細胞及びＣＤ８＋ Ｔ細胞の両方を含めた全てのＴ細胞上に発現している。別途指定されない限り、本明細書で使用されるＣＤ３は、１つまたは複数の種（例えば、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシ、及びクマ）由来のＣＤ３を指し得る。
本明細書で使用されるとき、「ペイロード」という用語は、ＥＶ（例えば、エキソソーム）に接触させられる標的（例えば、標的細胞）に作用する薬剤を指す。一部の態様では、別途指定されない限り、ペイロードという用語は、「生物学的に活性な分子」という用語と互換的に使用され得る。ＥＶ、例えばエキソソーム上に含めることができるペイロードの非限定的な例は、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤である。ＥＶ、例えばエキソソーム、及び／またはプロデューサー細胞に導入され得るペイロードには、ヌクレオチド（例えば、検出可能な部分もしくは毒素を含む、または転写を妨害するヌクレオチド）、核酸（例えば、酵素等のポリペプチドをコードするＤＮＡもしくはｍＲＮＡ分子、またはｍｉＲＮＡ、ｄｓＤＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ等の制御機能を有するＲＮＡ分子、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）、ペプチドコンジュゲートホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー（ＰＰＭＯ）、またはそれらの組み合わせ）、アミノ酸（例えば、検出可能な部分もしくは毒素を含む、または翻訳を妨害するアミノ酸）、ポリペプチド（例えば、酵素）、脂質、炭水化物、及び低分子（例えば、低分子薬及び毒素）等の薬剤が含まれる。ある特定の態様では、ペイロードは、抗原を含む。本明細書で使用されるとき、「抗原」という用語は、対象に導入された場合にそれ自体に対する免疫応答（細胞性または体液性）を誘発する、任意の薬剤を指す。
本明細書で使用されるとき、「親和性リガンド」という用語は、特定のマーカー、例えば、標的細胞上に発現しているマーカーに選択的かつ優先的に結合することができる分子を指す。本開示とともに使用することができる親和性リガンドの非限定的な例としては、抗体、ファージディスプレイペプチド、フィブロネクチンドメイン、ラクダ類、ＶＮＡＲ、ＶＨＨドメイン、及びそれらの組み合わせが挙げられる。本明細書で使用されるとき、「抗体」という用語は、天然であるか、または部分的もしくは全体的に合成的に生産されたかにかかわらず、免疫グロブリン、及びその断片を包含する。この用語はまた、免疫グロブリン結合ドメインに相同である結合ドメインを有する任意のタンパク質を網羅する。「抗体」は、抗原に特異的に結合し、それを認識する免疫グロブリン遺伝子またはその断片からのフレームワーク領域を含むポリペプチドをさらに含む。抗体という用語の使用は、全抗体、ポリクローナル、モノクローナル、及び組換え抗体、それらの断片を含むことが意図され、例えば、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ１）２、Ｆｖ、ｄＡｂ、及びＦｄ断片、ダイアボディ、及び抗体関連ポリペプチド等の、一本鎖抗体、ヒト化抗体、マウス抗体、キメラ、マウス－ヒト、マウス－霊長類、霊長類－ヒトモノクローナル抗体、抗イディオタイプ抗体、抗体断片をさらに含む。抗体は、それらが所望の生物学的活性または機能を表す限り、二重特異性抗体及び多重特異性抗体を含む。
「個体」、「対象」、「宿主」、及び「患者」という用語は、本明細書で互換的に使用され、診断、処置、または治療が所望される任意の哺乳類対象、特にヒトを指す。本明細書に記載の組成物及び方法は、ヒトの治療及び獣医学的用途の両方に適用可能である。一部の態様では、対象は哺乳動物であり、他の態様では、対象はヒトである。本明細書で使用されるとき、「哺乳類対象」は、限定されないが、ヒト、飼育動物（例えば、イヌ、ネコ等）、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ等）、及び実験動物（例えば、サル、ラット、マウス、ウサギ、モルモット等）を含む、全ての哺乳動物を含む。
本明細書で使用されるとき、「実質的に含まない」という用語は、ＥＶ、例えばエキソソームを含む試料が、質量／体積（ｍ／ｖ）パーセンテージ濃度に基づいて約１０％未満の高分子を含むことを意味する。一部の画分は、約０．００１％未満、約０．０１％未満、約０．０５％未満、約０．１％未満、約０．２％未満、約０．３％未満、約０．４％未満、約０．５％未満、約０．６％未満、約０．７％未満、約０．８％未満、約０．９％未満、約１％未満、約２％未満、約３％未満、約４％未満、約５％未満、約６％未満、約７％未満、約８％未満、約９％未満、または約１０％（ｍ／ｖ）未満の高分子を含有し得る。
本明細書で使用されるとき、「高分子」という用語は、核酸、混入タンパク質、脂質、炭水化物、代謝産物、またはそれらの組み合わせを意味する。
本明細書で使用されるとき、「従来のエキソソームタンパク質」という用語は、エキソソームにおいて濃縮されることが従来より知られているタンパク質を意味し、これには、ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＰＤＧＦＲ、ＧＰＩアンカータンパク質、ラクトアドヘリンＬＡＭＰ２、及びＬＡＭＰ２Ｂ、それらの断片、またはそれらに結合するペプチドが含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される「投与すること」とは、本明細書に開示されるＥＶ、例えばエキソソームを含む組成物を、薬学的に許容される経路を介して対象に与えることを意味する。投与経路は、静脈内、例えば、静脈内注射及び静脈内注入であり得る。追加の投与経路には、例えば、皮下、筋肉内、経口、鼻腔、及び肺内投与が含まれる。ＥＶ、例えばエキソソームは、少なくとも１つの賦形剤を含む薬学的組成物の一部として投与することができる。
本明細書で使用される「免疫応答」とは、外来性作用物質、または異常な（例えば、がん性）細胞に対する脊椎動物内の生物学的応答を指し、そのような応答は、これらの作用物質及びそれらによって引き起こされる疾患に対して生物を保護する。免疫応答は、免疫系の１つもしくは複数の細胞（例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、樹状細胞、または好中球）、及びこれらの細胞のうちのいずれかまたは肝臓によって産生される可溶性高分子（抗体、サイトカイン、及び補体を含む）の作用によって媒介され、これにより侵入病原体、病原体に感染した細胞もしくは組織、がん性もしくは他の異常な細胞、または、自己免疫状態もしくは病的炎症の場合には、正常なヒト細胞もしくは組織の選択的標的化、それへの結合、それへの損傷、その破壊、及び／または脊椎動物の身体からのその排除をもたらす。免疫反応には、例えば、Ｔ細胞、例えば、エフェクターＴ細胞、Ｔｈ細胞、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、もしくはＴｒｅｇ細胞の活性化もしくは阻害、または免疫系の任意の他の細胞、例えば、ＮＫ細胞の活性化もしくは阻害が含まれる。したがって、免疫応答は、体液性免疫応答（例えば、Ｂ細胞によって媒介される）、細胞性免疫応答（例えば、Ｔ細胞によって媒介される）、または体液性免疫応答及び細胞性免疫応答の両方を含み得る。一部の態様では、免疫応答は、「阻害性」免疫応答である。阻害性免疫応答は、刺激物質（例えば、抗原）の効果を遮断または減弱させる免疫応答である。ある特定の態様では、阻害性免疫応答は、刺激物質に対する阻害性抗体の産生を含む。一部の態様では、免疫応答は、「刺激性」免疫応答である。刺激性免疫応答は、標的抗原（例えば、腫瘍抗原またはウイルス）を破壊し、取り除くことができるエフェクター細胞（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球）の生成をもたらす免疫応答である。
本明細書で使用されるとき、「細胞性免疫応答」という用語は、「細胞媒介性免疫応答」という用語と互換的に使用され得、抗体が優勢的に関与しない免疫応答を指す。代わりに、細胞性免疫応答は、（例えば、抗原刺激を介して）活性化されると種々のエフェクター分子（例えば、サイトカイン、パーフォリン、グランザイム）を産生する、異なる免疫細胞（例えば、貪食細胞及び抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球）の活性化を伴う。本明細書で使用されるとき、「体液性免疫応答」という用語は、分泌抗体、補体タンパク質、及びある特定の抗菌ペプチド等の、細胞外液中に見出される高分子によって優勢的に媒介される免疫応答を指す。「抗体媒介性免疫応答」という用語は、抗体によって媒介される体液性免疫応答の側面を指す。
本明細書で使用されるとき、「免疫細胞」という用語は、免疫応答を媒介することに関与する免疫系の任意の細胞を指す。免疫細胞の非限定的な例としては、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、樹状細胞、好中球、またはそれらの組み合わせが挙げられる。一部の態様では、免疫細胞は、ＣＤ３を発現する。ある特定の態様では、ＣＤ３発現免疫細胞は、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋ Ｔ細胞またはＣＤ８＋ Ｔ細胞）である。一部の態様では、本明細書に開示される標的化部分（例えば、抗ＣＤ３）により標的化することができる免疫細胞は、ナイーブＣＤ４＋ Ｔ細胞を含む。一部の態様では、免疫細胞は、メモリーＣＤ４＋ Ｔ細胞を含む。一部の態様では、免疫細胞は、エフェクターＣＤ４＋ Ｔ細胞を含む。一部の態様では、免疫細胞は、ナイーブＣＤ８＋ Ｔ細胞を含む。一部の態様では、免疫細胞は、メモリーＣＤ８＋ Ｔ細胞を含む。一部の態様では、免疫細胞は、エフェクターＣＤ８＋ Ｔ細胞を含む。一部の態様では、免疫細胞は、樹状細胞である。ある特定の態様では、樹状細胞は、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）、古典的樹状細胞１（ｃＤＣ１）、古典的樹状細胞２（ｃＤＣ２）、炎症性単球由来樹状細胞、ランゲルハンス細胞、真皮樹状細胞、リゾチーム発現樹状細胞（ＬｙｓｏＤＣ）、クッパー細胞、またはそれらの任意の組み合わせを含む。したがって、ある特定の態様では、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）が特異的に標的とすることができる免疫細胞には、古典的樹状細胞１（ｃＤＣ１）及び／または形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）が含まれる。
本明細書で使用されるとき、「Ｔ細胞（Ｔ ｃｅｌｌ）」または「Ｔ細胞（Ｔ－ｃｅｌｌ）」という用語は、胸腺で成熟するリンパ球の種類を指す。Ｔ細胞は、細胞媒介性免疫において重要な役割を果たし、細胞表面上のＴ細胞受容体の存在によりＢ細胞等の他のリンパ球とは区別される。Ｔ細胞には、ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４＋細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８＋細胞）、ナチュラルキラーＴ細胞、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、及びガンマ－デルタＴ細胞を含めた、ＣＤ３を発現している全ての種類の免疫細胞が含まれる。
「ナイーブ」Ｔ細胞は、免疫学的に未分化のままである（すなわち、活性化されない）成熟Ｔ細胞を指す。胸腺における正の選択及び負の選択の後に、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋ナイーブＴ細胞またはＣＤ８＋ナイーブＴ細胞のいずれかとして出現する。それらのナイーブ状態では、Ｔ細胞は、Ｌ－セレクチン（ＣＤ６２Ｌ＋）、ＩＬ－７受容体－α（ＩＬ－７Ｒ－α）、及びＣＤ１３２を発現するが、それらは、ＣＤ２５、ＣＤ４４、ＣＤ６９、またはＣＤ４５ＲＯは発現しない。本明細書で使用されるとき、「未成熟」とはまた、ＴＳＣＭ細胞またはＴＣＭ細胞等の、ナイーブＴ細胞または未成熟Ｔ細胞のいずれかの表現型特性を表すＴ細胞を指し得る。例えば、未成熟Ｔ細胞は、Ｌ－セレクチン（ＣＤ６２Ｌ＋）、ＩＬ－７Ｒα、ＣＤ１３２、ＣＣＲ７、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ９５、ＣＸＣＲ３、及びＬＦＡ－１のうちの１つまたは複数を発現し得る。ナイーブまたは未成熟Ｔ細胞は、ＴＥＭ細胞及びＴＥＦＦ細胞等の最終分化型エフェクターＴ細胞と対比され得る。
本明細書で使用されるとき、「エフェクター」Ｔ細胞または「ＴＥＦＦ」細胞という用語は、さらなる分化を必要とすることなく病原体または細胞の除去を媒介することができるＴ細胞を指す。故に、エフェクターＴ細胞は、ナイーブＴ細胞及びメモリーＴ細胞とは区別され、これらの細胞は、多くの場合、エフェクター細胞となる前に分化及び増殖する必要がある。
本明細書で使用されるとき、「メモリー」Ｔ細胞という用語は、それらのコグネイト抗原に以前に遭遇し、それに応答したことがあるＴ細胞のサブセットを指す。一部の態様では、この用語は、「抗原経験」Ｔ細胞と同義である。一部の態様では、メモリーＴ細胞は、エフェクターメモリーＴ細胞またはセントラルメモリーＴ細胞であり得る。一部の態様では、メモリーＴ細胞は、組織常在性メモリーＴ細胞である。本明細書で使用されるとき、「組織常在性メモリーＴ細胞」または「ＴＲＭ細胞」という用語は、再循環することなく組織（例えば、皮膚、肺、胃腸管）を占有するＴ細胞の系列を指す。ＴＲＭ細胞は、血液、二次リンパ器官、リンパ及び非リンパ系組織のＴ細胞域の間で再循環するセントラルメモリーＴ細胞及びエフェクターメモリーＴ細胞とは転写的、表現型的、及び機能的に明確に異なる。ＴＲＭ細胞の役割のうちの１つは、リンパ球外組織において感染に対する免疫保護を提供することである。
本明細書で使用されるとき、「樹状細胞」または「ＤＣ」という用語は、細胞外及び細胞内タンパク質をプロセシングすることができ、ＭＨＣ分子の関連において抗原を提示してナイーブＴ細胞をプライミングする、骨髄由来免疫細胞のクラスを指す。一部の態様では、樹状細胞は、古典的樹状細胞１（ｃＤＣ１）、古典的樹状細胞２（ｃＤＣ２）、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）、炎症性単球由来樹状細胞、ランゲルハンス細胞、真皮樹状細胞、リゾチーム発現樹状細胞（ＬｙｓｏＤＣ）、クッパー細胞、及びそれらの組み合わせ等のさらなるサブタイプに分類され得る。ある特定の態様では、異なるＤＣサブセットは、それらの表現型発現に基づいて区別され得る。例えば、一部の態様では、ヒトｃＤＣ１細胞は、ＣＤ１ｃ－及びＣＤ１４１＋である。一部の態様では、ヒトｃＤＣ２細胞は、ＣＤ１ｃ＋及びＣＤ１４１－である。一部の態様では、ヒトｐＤＣ細胞は、ＣＤ１２３＋である。一部の態様では、マウスｃＤＣ１細胞は、ＸＣＲ１＋、Ｃｌｅｃ９ａ＋、及びＳｉｒｐａ－である。一部の態様では、マウスｃＤＣ２細胞は、ＣＤ８＋、ＣＤ１１ｂ＋、Ｓｉｒｐａ＋、ＸＣＲ１－、及びＣＤ１ｃ，ｂ＋である。一部の態様では、マウスｐＤＣ細胞は、ＣＤ１３７＋、ＸＣＲ１－、及びＳｉｒｐａ－である。異なるＤＣサブセットを区別するための他の表現型マーカーは、当該技術分野で既知である。例えば、Ｃｏｌｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １５４（１）：３－２０（２０１８）を参照されたい。一部の態様では、異なるＤＣサブセットは、それらの機能特性に基づいて区別され得る。例えば、ある特定の態様では、ｐＤＣは大量のＩＦＮ－αを産生する一方で、ｃＤＣ１及びｃＤＣ２は、ＩＬ－１２、ＩＬ－６、及びＴＮＦ－α等の炎症性サイトカインを産生する。異なるＤＣサブセットを区別する他の方法は、当該技術分野で既知である。例えば、米国特許第８，４２６，５６５Ｂ２号及び同第９，９８８，４３１号を参照されたく、同文献の各々は参照によりその全体が本明細書に援用される。
本明細書で使用される「イムノコンジュゲート」という用語は、結合分子（例えば、抗体）と、結合分子に化学的にコンジュゲートされた１つまたは複数の部分、例えば、治療部分または診断部分とを含む化合物を指す。一般に、イムノコンジュゲートは、一般式Ａ－（Ｌ－Ｍ）ｎにより定義され、式中、Ａは、結合分子（例えば、抗体）であり、Ｌは、任意選択的なリンカーであり、Ｍは、例えば治療剤、検出可能な標識等であり得る異種部分であり、ｎは、整数である。一部の態様では、複数の異種部分を、同じ結合分子（例えば、抗体）における異なる結合点に化学的にコンジュゲートすることができる。他の態様では、複数の異種部分を鎖状につなぎ、結合分子（例えば、抗体）における結合点に結合させることができる。一部の態様では、複数の異種部分（同じまたは異なる）を結合分子（例えば、抗体）にコンジュゲートすることができる。
イムノコンジュゲートはまた、逆順序での当該一般式によっても定義され得る。一部の態様では、イムノコンジュゲートは、「抗体－薬物コンジュゲート」（「ＡＤＣ」）である。本開示の文脈において、「イムノコンジュゲート」という用語は、化学的または酵素的コンジュゲート分子に限定されない。本開示で使用される「イムノコンジュゲート」という用語はまた、遺伝子融合体も含む。本開示の一部の態様では、生物学的に活性な分子は、イムノコンジュゲートである。「抗体－薬物コンジュゲート」及び「ＡＤＣ」という用語は、互換的に使用され、例えば共有結合性で、治療剤（本明細書で薬剤、薬物、または医薬品有効成分と称されることがある）または薬剤に連結された抗体を指す。本開示の一部の態様では、生物学的に活性な分子（すなわち、ペイロード）は、抗体－薬物コンジュゲートである。
本明細書で使用される「処置する」、「処置」、または「処置すること」とは、例えば、疾患または病態の重症度の低減；疾患過程の継続期間の低減；疾患または病態に関連する１つまたは複数の症状の改善または排除；疾患または病態の治癒を必ずしも伴わない、疾患または病態を有する対象への有益な効果の提供を指す。この用語はまた、疾患もしくは病態またはその症状の予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ）または予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）も含む。一態様では、「処置すること」または「処置」という用語は、対象において抗原に対する免疫応答を誘導することを意味する。
本明細書で使用される「予防する」または「予防すること」とは、特定の転帰の発生または重症度を減少または低減することを指す。一部の態様では、転帰の予防は、予防的処置により達成される。
ＩＩ．細胞外小胞、例えば、エキソソーム
本明細書では、対象の免疫系を制御することができるＥＶ、例えばエキソソームが開示される。本開示で有用なＥＶ、例えばエキソソームは、複数の薬剤（すなわち、ペイロード）を一緒に産生するように操作されている（例えば、単一の薬剤、例えば、抗原単独、アジュバント単独、または免疫調節剤単独の代わりに、単一のＥＶ、例えばエキソソームにおける抗原及びアジュバント；単一のＥＶ、例えばエキソソームにおける抗原及び免疫調節剤；ならびに単一のＥＶ、例えばエキソソームにおける抗原、アジュバント、及び免疫調節剤）。一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含む。他の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含む。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含む。ある特定の態様では、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）はまた、標的化部分等の追加の部分も含み得る。一部の態様では、抗原は、主要組織適合複合体Ｉ及び／またはＩＩ分子上には発現または提示されない。他の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームにおける抗原は、ＭＨＣクラスＩまたはＩＩ複合体の一部としては発現または提示されないが、ＥＶ、例えばエキソソームは依然として、ＥＶ、例えばエキソソームの表面上にＭＨＣクラスＩ／ＩＩ分子を含有し得る。したがって、ある特定の態様では、本明細書に開示されるＥＶ、例えばエキソソームは、抗原に対する免疫応答を誘導するのにＴ細胞のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）とは直接的に相互作用しない。同様に、ある特定の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、クロスドレッシングにより、抗原を標的細胞（例えば、樹状細胞）の表面に直接的に移動させる。「クロスドレッシング」とは、樹状細胞（ＤＥＸ）に由来するＥＶ、例えばエキソソームが、Ｔ細胞活性化を誘導するために一般的に使用する機構である。Ｐｉｔｔ，Ｊ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １２６（４）：１２２４－３２（２０１６）を参照されたい。他の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、抗原提示細胞によって貪食され、ＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩ複合体として抗原提示細胞の表面上に発現され得る。
当業者には明らかとなろうが、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）は、抗原を含む必要はなく、代わりに、本明細書に開示される複数の他のペイロードを含み得る。例えば、一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、複数の異なるアジュバントを含み得る。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、複数の異なる免疫調節剤を含み得る。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、１つまたは複数の免疫調節剤と組み合わせて１つまたは複数のアジュバントを含み得る。かかる無抗原ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、自然免疫応答を誘導する及び／または増加させる上で有用であり得る。かかる無抗原ＥＶが有用であり得る治療場面の非限定的な例としては、人工呼吸器関連肺炎におけるｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、インフルエンザ及びＲＳＶ、ＳＡＲＳ／ＭＥＲＳ、トキソプラズマ、敗血症、黄熱病、ならびに手術部位感染症におけるｓｔａｐｈ ａｕｒｅｕｓ等の、細菌及び／またはウイルス感染症を処置することが挙げられる。ある特定の態様では、かかる無抗原ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、１つまたは複数の追加の治療剤と組み合わせて使用することができる。一部の態様では、１つまたは複数の追加の治療剤は、抗原を含み、該抗原は、ＥＶ（例えば、エキソソーム）では発現されない（例えば、抗原の可溶性形態）。別途指定されない限り、本明細書に提供される関連する開示は、ＥＶ（例えば、エキソソーム）が抗原を含むか否かにかかわらず等しく適用可能である。
上記に記載したように、本明細書に記載のＥＶ、例えばエキソソームは、約２０～３００ｎｍの直径を有する細胞外小胞である。ある特定の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、約２０～２９０ｎｍ、約２０～２８０ｎｍ、約２０～２７０ｎｍ、約２０～２６０ｎｍ、約２０～２５０ｎｍ、約２０～２４０ｎｍ、約２０～２３０ｎｍ、約２０～２２０ｎｍ、約２０～２１０ｎｍ、約２０～２００ｎｍ、約２０～１９０ｎｍ、約２０～１８０ｎｍ、約２０～１７０ｎｍ、約２０～１６０ｎｍ、約２０～１５０ｎｍ、約２０～１４０ｎｍ、約２０～１３０ｎｍ、約２０～１２０ｎｍ、約２０～１１０ｎｍ、約２０～１００ｎｍ、約２０～９０ｎｍ、約２０～８０ｎｍ、約２０～７０ｎｍ、約２０～６０ｎｍ、約２０～５０ｎｍ、約２０～４０ｎｍ、約２０～３０ｎｍ、約３０～３００ｎｍ、約３０～２９０ｎｍ、約３０～２８０ｎｍ、約３０～２７０ｎｍ、約３０～２６０ｎｍ、約３０～２５０ｎｍ、約３０～２４０ｎｍ、約３０～２３０ｎｍ、約３０～２２０ｎｍ、約３０～２１０ｎｍ、約３０～２００ｎｍ、約３０～１９０ｎｍ、約３０～１８０ｎｍ、約３０～１７０ｎｍ、約３０～１６０ｎｍ、約３０～１５０ｎｍ、約３０～１４０ｎｍ、約３０～１３０ｎｍ、約３０～１２０ｎｍ、約３０～１１０ｎｍ、約３０～１００ｎｍ、約３０～９０ｎｍ、約３０～８０ｎｍ、約３０～７０ｎｍ、約３０～６０ｎｍ、約３０～５０ｎｍ、約３０～４０ｎｍ、約４０～３００ｎｍ、約４０～２９０ｎｍ、約４０～２８０ｎｍ、約４０～２７０ｎｍ、約４０～２６０ｎｍ、約４０～２５０ｎｍ、約４０～２４０ｎｍ、約４０～２３０ｎｍ、約４０～２２０ｎｍ、約４０～２１０ｎｍ、約４０～２００ｎｍ、約４０～１９０ｎｍ、約４０～１８０ｎｍ、約４０～１７０ｎｍ、約４０～１６０ｎｍ、約４０～１５０ｎｍ、約４０～１４０ｎｍ、約４０～１３０ｎｍ、約４０～１２０ｎｍ、約４０～１１０ｎｍ、約４０～１００ｎｍ、約４０～９０ｎｍ、約４０～８０ｎｍ、約４０～７０ｎｍ、約４０～６０ｎｍ、約４０～５０ｎｍ、約５０～３００ｎｍ、約５０～２９０ｎｍ、約５０～２８０ｎｍ、約５０～２７０ｎｍ、約５０～２６０ｎｍ、約５０～２５０ｎｍ、約５０～２４０ｎｍ、約５０～２３０ｎｍ、約５０～２２０ｎｍ、約５０～２１０ｎｍ、約５０～２００ｎｍ、約５０～１９０ｎｍ、約５０～１８０ｎｍ、約５０～１７０ｎｍ、約５０～１６０ｎｍ、約５０～１５０ｎｍ、約５０～１４０ｎｍ、約５０～１３０ｎｍ、約５０～１２０ｎｍ、約５０～１１０ｎｍ、約５０～１００ｎｍ、約５０～９０ｎｍ、約５０～８０ｎｍ、約５０～７０ｎｍ、約５０～６０ｎｍ、約６０～３００ｎｍ、約６０～２９０ｎｍ、約６０～２８０ｎｍ、約６０～２７０ｎｍ、約６０～２６０ｎｍ、約６０～２５０ｎｍ、約６０～２４０ｎｍ、約６０～２３０ｎｍ、約６０～２２０ｎｍ、約６０～２１０ｎｍ、約６０～２００ｎｍ、約６０～１９０ｎｍ、約６０～１８０ｎｍ、約６０～１７０ｎｍ、約６０～１６０ｎｍ、約６０～１５０ｎｍ、約６０～１４０ｎｍ、約６０～１３０ｎｍ、約６０～１２０ｎｍ、約６０～１１０ｎｍ、約６０～１００ｎｍ、約６０～９０ｎｍ、約６０～８０ｎｍ、約６０～７０ｎｍ、約７０～３００ｎｍ、約７０～２９０ｎｍ、約７０～２８０ｎｍ、約７０～２７０ｎｍ、約７０～２６０ｎｍ、約７０～２５０ｎｍ、約７０～２４０ｎｍ、約７０～２３０ｎｍ、約７０～２２０ｎｍ、約７０～２１０ｎｍ、約７０～２００ｎｍ、約７０～１９０ｎｍ、約７０～１８０ｎｍ、約７０～１７０ｎｍ、約７０～１６０ｎｍ、約７０～１５０ｎｍ、約７０～１４０ｎｍ、約７０～１３０ｎｍ、約７０～１２０ｎｍ、約７０～１１０ｎｍ、約７０～１００ｎｍ、約７０～９０ｎｍ、約７０～８０ｎｍ、約８０～３００ｎｍ、約８０～２９０ｎｍ、約８０～２８０ｎｍ、約８０～２７０ｎｍ、約８０～２６０ｎｍ、約８０～２５０ｎｍ、約８０～２４０ｎｍ、約８０～２３０ｎｍ、約８０～２２０ｎｍ、約８０～２１０ｎｍ、約８０～２００ｎｍ、約８０～１９０ｎｍ、約８０～１８０ｎｍ、約８０～１７０ｎｍ、約８０～１６０ｎｍ、約８０～１５０ｎｍ、約８０～１４０ｎｍ、約８０～１３０ｎｍ、約８０～１２０ｎｍ、約８０～１１０ｎｍ、約８０～１００ｎｍ、約８０～９０ｎｍ、約９０～３００ｎｍ、約９０～２９０ｎｍ、約９０～２８０ｎｍ、約９０～２７０ｎｍ、約９０～２６０ｎｍ、約９０～２５０ｎｍ、約９０～２４０ｎｍ、約９０～２３０ｎｍ、約９０～２２０ｎｍ、約９０～２１０ｎｍ、約９０～２００ｎｍ、約９０～１９０ｎｍ、約９０～１８０ｎｍ、約９０～１７０ｎｍ、約９０～１６０ｎｍ、約９０～１５０ｎｍ、約９０～１４０ｎｍ、約９０～１３０ｎｍ、約９０～１２０ｎｍ、約９０～１１０ｎｍ、約９０～１００ｎｍ、約１００～３００ｎｍ、約１１０～２９０ｎｍ、約１２０～２８０ｎｍ、約１３０～２７０ｎｍ、約１４０～２６０ｎｍ、約１５０～２５０ｎｍ、約１６０～２４０ｎｍ、約１７０～２３０ｎｍ、約１８０～２２０ｎｍ、または約１９０～２１０ｎｍの直径を有する。本明細書に記載のＥＶ、例えばエキソソームのサイズは、下記に記載される方法に従って測定することができる。
一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、内表面及び外表面を含む脂質二重膜（「ＥＶ膜、例えば、エキソソーム膜」）を含む。ある特定の態様では、内表面は、ＥＶ、例えばエキソソームの内部コア（すなわち、内腔）に面する。ある特定の態様では、外表面は、プロデューサー細胞または標的細胞のエンドソーム、多小胞体、または膜／細胞質と接触し得る。
一部の態様では、ＥＶ膜、例えば、エキソソーム膜は、脂質及び脂肪酸を含む。一部の態様では、ＥＶ膜、例えば、エキソソーム膜は、リン脂質、糖脂質、脂肪酸、スフィンゴ脂質、ホスホグリセリド、ステロール、コレステロール、及びホスファチジルセリンを含む。
一部の態様では、ＥＶ膜、例えば、エキソソーム膜は、内葉及び外葉を含む。内葉及び外葉の組成は、当該技術分野で既知の二重層間（ｔｒａｎｓｂｉｌａｙｅｒ）分布アッセイによって決定することができ、例えば、Ｋｕｙｐｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １９８５ ８１９：１７０を参照されたい。一部の態様では、外葉の組成は、およそ７０～９０％がコリンリン脂質、およそ０～１５％が酸性リン脂質、及びおよそ５～３０％がホスファチジルエタノールアミンである。一部の態様では、内葉の組成は、およそ１５～４０％がコリンリン脂質、およそ１０～５０％が酸性リン脂質、及びおよそ３０～６０％がホスファチジルエタノールアミンである。
一部の態様では、ＥＶ膜、例えば、エキソソーム膜は、グリカン等の１つまたは複数の多糖類を含む。
一部の態様では、ＥＶ膜、例えば、エキソソーム膜は、例えば、抗原及び／またはアジュバント及び／または免疫調節剤を、ＥＶ、例えばエキソソームに（例えば、内腔表面上または外表面上のいずれかで）係留することができる、１つまたは複数の足場部分をさらに含む。ある特定の態様では、足場部分は、ポリペプチド（「エキソソームタンパク質」）である。他の態様では、足場部分は、非ポリペプチド部分である。一部の態様では、エキソソームタンパク質には、エキソソーム膜上に濃縮された、膜貫通タンパク質、内在性タンパク質、及び表在性タンパク質等の種々の膜タンパク質が含まれる。それらには、種々のＣＤタンパク質、トランスポーター、インテグリン、レクチン、及びカドヘリンが含まれ得る。ある特定の態様では、足場部分（例えば、エキソソームタンパク質）は、足場Ｘを含む。他の態様では、足場部分（例えば、エキソソームタンパク質）は、足場Ｙを含む。さらなる態様では、足場部分（例えば、エキソソームタンパク質）は、足場Ｘ及び足場Ｙの両方を含む。
一部の態様では、本明細書に開示されるＥＶ、例えばエキソソームは、ペイロード（例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤）を標的に送達することができる。ペイロードは、ＥＶに接触させられる標的（例えば、標的細胞）に作用する薬剤である。接触は、インビトロで、または対象において生じることができる。ＥＶに導入され得るペイロードの非限定的な例としては、ヌクレオチド（例えば、検出可能な部分もしくは毒素を含む、または転写を妨害するヌクレオチド）、核酸（例えば、酵素等のポリペプチドをコードするＤＮＡもしくはｍＲＮＡ分子、またはｍｉＲＮＡ、ｄｓＤＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ等の制御機能を有するＲＮＡ分子、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）、ペプチドコンジュゲートホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー（ＰＰＭＯ））、アミノ酸（例えば、検出可能な部分または翻訳を妨害する毒素を含むアミノ酸）、ポリペプチド（例えば、酵素）、脂質、炭水化物、及び低分子（例えば、低分子薬及び毒素）等の薬剤が挙げられる。
本明細書で実証されるように（例えば、実施例１６を参照されたい）、一部の態様では、本開示のＥＶ（例えば、エキソソーム）は、エフェクターＴ細胞及びメモリーＴ細胞を誘導することができる。ある特定の態様では、メモリーＴ細胞は、組織常在性メモリーＴ細胞である。かかるＥＶ（例えば、エキソソーム）は、ある特定の感染性疾患に対するワクチンとして特に有用であり得る。例えば、現在利用可能なインフルエンザワクチンのうちのほとんどは、不活化されており、ある特定のインフルエンザ表面抗原（例えば、ヘマグルチニン（ＨＡ）及びノイラミニダーゼ（ＮＡ）に対する中和抗体を生成することに主として焦点を当てている。Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６７（６４８０）：１－１２（Ｆｅｂ．２１，２０２０）を参照されたく、同文献は参照によりその全体が本明細書に援用される）。しかしながら、かかる抗原は絶えず変異を経ているため、ワクチンを毎年更新することが必要とされる。毎年更新していても、インフルエンザワクチンが、ワクチンウイルス株と流行株との間のＨＡ及び／またはＮＡ抗原性のミスマッチのため無効であった年があった。天然のウイルス感染またはベクターで操作され、弱毒化された生ワクチンは、これらが全て、体液性免疫とは別に組織（肺）常在性メモリーＴ細胞を誘導するため、広範な免疫を惹起し得る。しかしながら、これらの「複製型」ワクチンの安全性と免疫原性との間で精妙な均衡が取られなければならず、多くの場合、一部の個体にのみ好適である。本開示のＥＶ（例えば、エキソソーム）は、かかる制限を共有しない。したがって、一部の態様では、本明細書に開示される（例えば、本明細書に開示されるペイロード、例えば、ＳＴＩＮＧアゴニストと組み合わせて１つまたは複数のインフルエンザ抗原を含む）ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、特定の病原体（例えば、異なるインフルエンザサブタイプ）に対する「普遍的」ワクチンとして有用であり得る。
一部の態様では、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）は、免疫応答に関与するシグナル伝達経路の活性化を本質的に誘導することができる。ある特定の態様では、免疫応答に関与するシグナル伝達経路は、トル様受容体（ＴＬＲ）、レチノイド酸（ｒｅｔｉｎｏｉｄ ａｃｉｄ）誘導性遺伝子Ｉ（ＲＩＧ－Ｉ）様受容体（ＲＬＲ）、インターフェロン遺伝子刺激因子（ＳＴＩＮＧ）経路、またはそれらの組み合わせを含む。一部の態様では、かかるシグナル伝達経路の活性化は、Ｉ型インターフェロンの産生をもたらし得る。例えば、ある特定の態様では、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）の脂質二重膜は、以下の特徴、すなわち、（ｉ）不飽和脂質尾部、（ｉｉ）ジヒドロイミダゾールリンカー、（ｉｉｉ）環状アミン頭部基、及び（ｉｖ）それらの組み合わせのうちの１つを共有する１つまたは複数の脂質を含む。かかる特徴を有する脂質は、ＴＬＲ／ＲＬＲ依存性のＳＴＩＮＧ経路を活性化することが示されてきた。Ｍｉａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３７：１１７４－１１８５（Ｏｃｔ．２０１９）を参照されたく、同文献は参照によりその全体が本明細書に援用される。
ＩＩ．Ａ．抗原
一部の態様では、ペイロードは、対象において免疫応答を誘導することができる抗原である。一部の態様では、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）は、単一の抗原を含む。一部の態様では、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）は、複数の抗原を含む。ある特定の態様では、複数の抗原の各々が異なる。一部の態様では、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれよりも多くの異なる抗原を含む。本明細書に開示されるように、抗原は、足場部分（例えば、足場Ｘ及び／または足場Ｙ）を使用してＥＶ（例えば、エキソソーム）の表面に連結され得る。ある特定の態様では、抗原は、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の表面に直接的に連結され得る（すなわち、足場部分を使用することなく）。一部の態様では、抗原は、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の内腔中にあり得る。
一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、本明細書に記載の１つまたは複数の追加のペイロード（例えば、アジュバント及び／または免疫調節剤）と組み合わせて１つまたは複数の抗原を含む。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、１つまたは複数の追加の部分（例えば、標的化部分）を含み得る。例えば、ある特定の態様では、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）１つまたは複数の追加の抗原と、（ｉｉ）１つまたは複数の追加のペイロード（例えば、アジュバント及び／または免疫調節剤）と、（ｉｉｉ）１つまたは複数の標的化部分とを含み得る。
一部の態様では、抗原は、腫瘍抗原を含む。腫瘍抗原の非限定的な例としては、アルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、上皮性腫瘍抗原（ＥＴＡ）、ムチン１（ＭＵＣ１）、Ｔｎ－ＭＵＣ１、ムチン１６（ＭＵＣ１６）、チロシナーゼ、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）、腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、プログラム死リガンド２（ＰＤ－Ｌ２）、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ－７２、ＨＥＲ２、ＧＤ２、ｃＭＥＴ、ＥＧＦＲ、メソテリン、ＶＥＧＦＲ、アルファ－葉酸受容体、ＣＥ７Ｒ、ＩＬ－３、がん－精巣抗原（ＣＴＡ）、ＭＡＲＴ－１ ｇｐ１００、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド、ブラキュリ（黒色腫で優先的に発現する抗原（ＰＲＡＭＥ））、ウィルムス腫瘍１（ＷＴ１）、ＣＤ１９、ＣＤ２２、またはそれらの組み合わせが挙げられる。
一部の態様では、抗原は、普遍的腫瘍抗原である。本明細書で使用されるとき、「普遍的な腫瘍抗原」という用語は一般に、非腫瘍細胞におけるよりも腫瘍細胞において高いレベルで発現し、また異なる起源の腫瘍でも発現する、タンパク質等の免疫原性分子を指す。一部の態様では、普遍的な腫瘍抗原は、約３０％超、約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、またはそれよりも多くのがん（例えば、ヒトがん）に発現する。一部の態様では、普遍的な腫瘍抗原は、非腫瘍細胞（例えば、正常な細胞）に発現する場合があるが、腫瘍細胞でそれが発現するレベルよりも低い。ある特定の態様では、普遍的な腫瘍抗原の発現レベルは、非腫瘍細胞と比較して腫瘍細胞上で約１倍超、約２倍超、約３倍超、約４倍超、約５倍超、約６倍超、約７倍超、約８倍超、約９倍超、約１０倍超であるか、またはそれよりも高い。ある特定の態様では、普遍的な腫瘍抗原は、正常な細胞では発現せず、腫瘍細胞でのみ発現する。本開示とともに使用することができる普遍的な腫瘍抗原の非限定的な例としては、腫瘍血管系における内皮を裏打ちする抗原、サバイビン、腫瘍タンパク質Ｄ５２（ＴＰＤ５２）、アンドロゲン受容体エピトープ、エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、サバイビン、マウス二重微小染色体２ホモログ（ＭＤＭ２）、シトクロムＰ４５０ １Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ）、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ウィルムス腫瘍遺伝子１（ＷＴ１）、リビン、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ムチン１６（ＭＵＣ１６）、ＭＵＣ１、前立腺特異膜抗原（ＰＳＭＡ）、ｐ５３またはサイクリン（Ｄ１）が挙げられる。
さらなる態様では、抗原は、新生抗原を含み得る。本明細書で使用されるとき、「新生抗原」という用語は、腫瘍特異的変異遺伝子によってコードされる抗原を指す。
一部の態様では、抗原は、細菌、ウイルス、真菌、原虫、またはそれらの任意の組み合わせに由来する。一部の態様では、抗原は、発がんウイルス（本明細書でがん関連ウイルス（ＣＡＶ）とも称される）に由来する。さらなる態様では、抗原は、ヒトガンマヘルペスウイルス４（すなわち、エプスタイン・バールウイルス（ＥＢＶ））、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、サイトメガロウイルス、ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、ＨＩＶ（例えば、ＨＩＶ－２）、コロナウイルス（例えば、ＣＯＶＩＤ－１９、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、及びＳＡＲＳ ＣｏＶ）、フィロウイルス（例えば、マールブルグ及びエボラ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐｌａｓｍｏｄｉａ種（例えば、ｖｉｖａｘ及びｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、チクングニアウイルス、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒトＴリンパ好性ウイルス（ＨＴＬＶ１）、ヒトヘルペスウイルス８（ＨＨＶ８）、メルケル細胞ポリオーマウイルス（ＭＣＶ）、ブニヤウイルス（例えば、ハンタウイルス）、アレナウイルス（例えば、ＬＣＭＶ及びラッサウイルス）、フラビウイルス（例えば、デング熱、ジカ熱、日本脳炎、西ナイル熱、及び黄熱）、エンテロウイルス（例えば、ポリオ）、アストロウイルス（例えば、胃腸炎）、ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、狂犬病）、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ及びＢｕｒｒｅｌｉａ ｍａｙｏｎｉｉ（例えば、ライム病）、単純ヘルペスウイルス２（ＨＳＶ－２）、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ属菌、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属菌、Ｐｒｏｔｅｕｓ属菌、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ属菌、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒ属菌、コアグラーゼ陰性ブドウ球菌（ＣｏＮＳ）、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ属菌、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、またはそれらの組み合わせを含む群に由来する。
一部の態様では、ＥＢＶに由来する抗原は、ＢＺＬＦ１である。ＢＺＬＦ１（別名ＺｔａまたはＥＢ１）は、がんを誘導し、主としてヒト集団の９５％のＢ細胞に感染する、ＥＢＶの最初期ウイルス遺伝子である。この遺伝子（他の遺伝子とともに）は、他の疾患進行段階において他のＥＢＶ遺伝子の発現をもたらし、潜伏形態から溶解形態へのウイルスの変換に関与する。ＺＥＢＲＡ（ＢａｍＨＩ Ｚエプスタイン・バールウイルス複製活性化因子、別名Ｚｔａ及びＢＺＬＦ１））は、ＢＺＬＦ１によってコードされるＥＢＶの初期溶解タンパク質である。Ｈａｒｔｌａｇｅ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．３（７）：７８７－９４、及びＲｉｓｔ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７０：７０３－１２を参照されたく、同文献の両方は参照によりそれらの全体が本明細書に援用される。ＥＢＶ抗原、例えば、ＢＺＬＦ１を含む、本明細書に開示されるＥＶ、例えばエキソソームを使用して、例えば、移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）を処置することができる。かかるＥＶは、ＥＢＶ陽性移植を受けているＥＢＶ陰性患者に投与することができる。ＢＺＬＦ１は、ＰＴＬＤ患者における恒久的な寛解に関連するＴ細胞の優勢な抗原である。ＢＺＬＦ１を含む、本明細書に開示されるＥＶ、例えばエキソソームは、ＢＺＬＦ１の強力なＣＤ８ Ｔ細胞媒介性免疫を誘発することができる。したがって、粘膜免疫及び組織常在性メモリー細胞（図７Ａ及び７Ｂを参照されたい）は、ＰＴＬＤＦの発症から患者を保護することができる。非限定的な例となる抗原には、米国特許第８，６１７，５６４Ｂ２号に開示される抗原が含まれるが、これらに限定されず、同文献は参照によりその全体が本明細書に援用される。
一部の態様では、抗原は、細胞性及び／または体液性免疫応答を誘導するためにＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓから得られる。一部の態様では、抗原は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（ＴＢ抗原）の１つまたは複数のエピトープを含む。ＥＳＡＴ－６、ＴＢ１０．４、ＣＦＰ１０、Ｒｖ２０３１（ｈｓｐＸ）、Ｒｖ２６５４ｃ（ＴＢ７．７）、及びＲｖ１０３８ｃ（ＥｓｘＪ）を含む、種々の抗原が、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染に関連する。例えば、Ｌｉｎｄｅｓｔａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８８（１０）：５０２０－３１（２０１２）を参照されたく、同文献は参照によりその全体が本明細書に援用される。一部の態様では、本開示に有用な抗原は、ＥＳＡＴ６の１つまたは複数のエピトープを含む。一部の態様では、本開示に有用な抗原は、ＴＢ１０．４の１つまたは複数のエピトープを含む。一部の態様では、本開示に有用な抗原は、ＣＦＰ１０の１つまたは複数のエピトープを含む。一部の態様では、本開示に有用な抗原は、Ｒｖ２０３１（ｈｓｐＸ）の１つまたは複数のエピトープを含む。一部の態様では、本開示に有用な抗原は、Ｒｖ２６５４ｃ（ＴＢ７．７）の１つまたは複数のエピトープを含む。一部の態様では、本開示に有用な抗原は、Ｒｖ１０３８ｃ（ＥｓｘＪ）の１つまたは複数のエピトープを含む。一部の態様では、本開示に有用な抗原は、ＥＳＡＴ６、ＴＢ１０．４（ＥＳＡＴ－６様タンパク質ＥｓｘＨ；ｃｆｐ７）、ＣＦＰ１０、Ｒｖ２０３１（ｈｓｐＸ）、Ｒｖ２６５４ｃ（ＴＢ７．７）、Ｒｖ１０３８ｃ（ＥｓｘＪ）、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるエピトープを含む。
一部の態様では、ＴＢ抗原は、ＴＢ抗原の特定のエピトープ、例えば、ＥＳＡＴ６またはＴＢ１０．４の特定のエピトープを含む。一部の態様では、ＥＳＡＴ６抗原は、ＭＴＥＱＱＷＮＦＡＧＩＥＡＡＡＳＡＩＱＧＮＶＴＳＩＨＳＬＤＥＧＫＱＳＬＴＫＬＡＡＡＷＧＧＳＧＳＥＡＹＱＧＶＱＱＫＷＤＡＴＡＴＥＬＮＮＡＬＱＮＬＡＲＴＩＳＥＡＧＱＡＭＡＳＴＥＧＮＶＴＧＭＦＡ（配列番号３７０）に定められるようなアミノ酸配列の少なくとも３個のアミノ酸、少なくとも４個のアミノ酸、少なくとも５個のアミノ酸、少なくとも６個のアミノ酸、少なくとも７個のアミノ酸、少なくとも８個のアミノ酸、少なくとも９個のアミノ酸、少なくとも１０個のアミノ酸、少なくとも１１個のアミノ酸、少なくとも１２個のアミノ酸、少なくとも１３個のアミノ酸、少なくとも１４個のアミノ酸、少なくとも１５個のアミノ酸を有するエピトープを含む。一部の態様では、ここで、ＴＢ１０．４抗原は、ＭＳＱＩＭＹＮＹＰＡＭＬＧＨＡＧＤＭＡＧＹＡＧＴＬＱＳＬＧＡＥＩＡＶＥＱＡＡＬＱＳＡＷＱＧＤＴＧＩＴＹＱＡＷＱＡＱＷＮＱＡＭＥＤＬＶＲＡＹＨＡＭＳＳＴＨＥＡＮＴＭＡＭＭＡＲＤＴＡＥＡＡＫＷＧＧ（配列番号３７１）に定められるようなアミノ酸配列の少なくとも３個のアミノ酸、少なくとも４個のアミノ酸、少なくとも５個のアミノ酸、少なくとも６個のアミノ酸、少なくとも７個のアミノ酸、少なくとも８個のアミノ酸、少なくとも９個のアミノ酸、少なくとも１０個のアミノ酸、少なくとも１１個のアミノ酸、少なくとも１２個のアミノ酸、少なくとも１３個のアミノ酸、少なくとも１４個のアミノ酸、少なくとも１５個のアミノ酸を有するエピトープを含む。
一部の態様では、抗原は、自己抗原を含む。本明細書で使用されるとき、「自己抗原」という用語は、宿主細胞または組織により発現される抗原を指す。通常の健康な状態では、かかる抗原は、身体によって自己と認識され、免疫応答を誘発しない。しかしながら、ある特定の病的状態では、身体自身の免疫系が自己抗原を外来性と認識し、それらに対する免疫応答を発動して、自己免疫状態をもたらし得る。ある特定の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、自己抗原（すなわち、Ｔ細胞応答が誘導され、自己免疫状態をもたらしている自己（生殖細胞系）タンパク質）を含み得る。かかるＥＶ、例えばエキソソームを使用して、自己反応性Ｔ細胞を標的化し、それらの活性を抑制することができる。自己抗原（関連する疾患または障害を含む）の非限定的な例としては、（ｉ）ベータ細胞タンパク質、インスリン、膵島抗原２（ＩＡ－２）、グルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ６５）、及び亜鉛トランスポーター８（ＺＮＴ８）（Ｉ型糖尿病）、（ｉｉ）ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、プロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）、及びミエリン関連糖タンパク質（ＭＡＧ）（多発性硬化症）、（ｉｉｉ）シトルリン化抗原及び滑膜タンパク質（関節リウマチ）、（ｉｖ）アクアポリン－４（ＡＱＰ４）（視神経脊髄炎）、（ｖ）ニコチン性アセチルコリン受容体（ｎＡＣｈＲｓ）（重症筋無力症）、（ｖｉ）デスモグレイン－１（ＤＳＧ１）及びデスモグレイン－２（ＤＳＧ２）（尋常性天疱瘡）、（ｖ）チロトロピン受容体（グレーブス病）、（ｖｉ）ＩＶ型コラーゲン（グッドパスチャー症候群）、（ｖｉｉ）サイログロブリン、甲状腺ペルオキシターゼ、及び甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）（橋本甲状腺炎）、または（ｖｉｉｉ）それらの組み合わせが挙げられる。
ＩＩ．Ｂ．アジュバント
上記に記載したように、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、アジュバント（例えば、本明細書に開示される抗原及び／または他のペイロードと組み合わせて）を含み得る。一部の態様では、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）は、複数のアジュバントを含む。ある特定の態様では、複数のアジュバントの各々が異なる。一部の態様では、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれよりも多くの異なるアジュバントを含む。本明細書に開示されるように、アジュバントは、足場部分（例えば、足場Ｘ及び／または足場Ｙ）を使用してＥＶ（例えば、エキソソーム）の表面に連結され得る。ある特定の態様では、アジュバントは、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の表面に直接的に連結され得る（すなわち、足場部分を使用することなく）。一部の態様では、アジュバントは、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の内腔中にあり得る。
一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、１つまたは複数の追加のペイロード（例えば、抗原、及び／または免疫調節剤）と組み合わせて１つまたは複数のアジュバントを含む。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、１つまたは複数の追加の部分（例えば、標的化部分）を含み得る。例えば、ある特定の態様では、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）１つまたは複数の追加のアジュバントと、（ｉｉ）１つまたは複数の追加のペイロード（例えば、抗原及び／または免疫調節剤）と、（ｉｉｉ）１つまたは複数の標的化部分とを含み得る。
本明細書で使用されるとき、「アジュバント」という用語は、ペイロードの治療効果を強化する（例えば、抗原に対する免疫応答を増加させる）任意の物質を指す。したがって、アジュバントを含む、本明細書に記載のＥＶ、例えばエキソソームは、例えば抗原に対する、免疫応答を、参照物（例えば、アジュバントを含まない対応するＥＶ、または抗原を単独でもしくはアジュバントと組み合わせて含む非ＥＶ送達ビヒクル）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約２５０％、少なくとも約５００％、少なくとも約７５０％、少なくとも約１，０００％以上、またはそれを超えて増加させ得る。一部の態様では、本明細書に開示されるアジュバントのＥＶ（例えば、エキソソーム）への組み込みは、例えば抗原に対する、免疫応答を、参照物（例えば、抗原を単独で含む対応するＥＶ、または抗原を単独でもしくはアジュバントと組み合わせて含む非ＥＶ送達ビヒクル）と比較して、少なくとも約１倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約６０倍、少なくとも約７０倍、少なくとも約８０倍、少なくとも約９０倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約３００倍、少なくとも約４００倍、少なくとも約５００倍、少なくとも約６００倍、少なくとも約７００倍、少なくとも約８００倍、少なくとも約９００倍、少なくとも約１，０００倍、少なくとも約２，０００倍、少なくとも約３，０００倍、少なくとも約４，０００倍、少なくとも約５，０００倍、少なくとも約６，０００倍、少なくとも約７，０００倍、少なくとも約８，０００倍、少なくとも約９，０００倍、少なくとも約１０，０００倍、またはそれを超えて増加させ得る。
本開示とともに使用することができるアジュバントの非限定的な例としては、インターフェロン遺伝子刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニスト、トル様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、炎症メディエーター、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、アルファ－ｇａｌ－ｃｅｒ（ＮＫＴアゴニスト）、熱ショックタンパク質（例えば、ＨＳＰ６５及びＨＳＰ７０）、Ｃ型レクチンアゴニスト（例えば、ベータグルカン（デクチン１）、キチン、及びカードラン）、及びそれらの組み合わせが挙げられる。
一部の態様では、アジュバント（例えば、本明細書に開示されるもの等）のＥＶ（例えば、エキソソーム）への組み込みは、ＥＶによって誘導される免疫応答の幅を広げることができる。本明細書で使用されるとき、「免疫応答の幅を広げる」とは、免疫応答の多様性を増大させることを指す。一部の態様では、免疫応答の多様性は、エピトープ拡大（ｅｐｉｔｏｐｅ ｓｐｒｅａｄｉｎｇ）（すなわち、抗原上のより多くの数／種類のエピトープに対する免疫応答（細胞性免疫応答及び／または体液性免疫応答）を誘導する及び／または増加させること）により増大させることができる。一部の態様では、免疫応答の多様性は、異なる及び／または複数の抗体アイソタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＭ、及び／またはＩｇＥ）の産生により増大させることができる。
一部の態様では、アジュバント（例えば、本明細書に開示されるもの等）はまた、ＥＶ（例えば、エキソソーム）によって誘導される免疫応答の種類を制御する一助となり得る。例えば、一部の態様では、アジュバントのＥＶ（例えば、エキソソーム）への組み込みは、免疫応答をよりＴｈ１の表現型の方向へ導く一助となり得る。本明細書で使用されるとき、「Ｔｈ１」免疫応答は一般に、自然細胞（例えば、マクロファージ）の殺菌活性を活性化し得、Ｂ細胞がオプソニン化（食作用のためのマーキング）及び補体結合抗体を作り出すのを誘導する一助となり得、及び／または細胞媒介性免疫（すなわち、抗体によって媒介されない）につながり得る、ＩＦＮ－γの産生を特徴とする。一般に、Ｔｈ１応答は、細胞内の病原体（宿主細胞の内部にあるウイルス及び細菌）及び／またはがんに対してより有効である。
一部の態様では、アジュバントのＥＶ（例えば、エキソソーム）への組み込みは、免疫応答をよりＴｈ２の表現型の方向へ導く一助となり得る。本明細書で使用されるとき、「Ｔｈ２」免疫応答は、ＩＬ－５（寄生虫の排除において好酸球を誘導する）及びＩＬ－４（Ｂ細胞アイソタイプスイッチングを容易にする）等のある特定のサイトカインの放出を特徴とし得る。一般に、Ｔｈ２応答は、細胞外細菌、蠕虫を含めた寄生虫、及び毒素に対してより有効である。
一部の態様では、アジュバントのＥＶ（例えば、エキソソーム）への組み込みは、免疫応答をよりＴｈ１７の表現型の方向へ導く一助となり得る。本明細書で使用されるとき、「Ｔｈ１７」免疫応答は、Ｔｈ１７細胞によって媒介される本明細書で使用されるとき、「Ｔｈ１７細胞」とは、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１７Ｆ、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、及び顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）等の炎症促進性サイトカインの産生を特徴とするＣＤ４＋ Ｔ細胞のサブセットを指す。Ｔｈ１７細胞は一般に、好中球及びマクロファージを感染組織に動員することによって、感染症に対する宿主防衛において重要な役割を果たすと考えられている。
一部の態様では、アジュバントのＥＶ（例えば、エキソソーム）への組み込みは、免疫応答をより細胞性の免疫応答（例えば、Ｔ細胞媒介性）の方向へ導く一助となり得る。一部の態様では、アジュバントのＥＶ（例えば、エキソソーム）への組み込みは、免疫応答をより体液性の免疫応答（例えば、抗体媒介性）の方向へ導く一助となり得る。
一部の態様では、アジュバントは、サイトゾルのパターン認識受容体の活性化を誘導する。サイトゾルのパターン認識受容体の非限定的な例としては、インターフェロン遺伝子刺激因子（ＳＴＩＮＧ）、レチノイン酸誘導性遺伝子Ｉ（ＲＩＧ－１）、黒色腫分化関連タンパク質５（ＭＤＡ５）、ヌクレオチド結合オリゴマー形成ドメイン、ロイシンリッチリピート及びピリンドメイン含有（ＮＬＲＰ）、インフラマソーム、またはそれらの組み合わせが挙げられる。ある特定の態様では、アジュバントは、ＳＴＩＮＧアゴニストである。インターフェロン遺伝子刺激因子（ＳＴＩＮＧ）は、典型的には細菌によって産生される、環状ジヌクレオチドのサイトゾルセンサーである。活性化されると、それはＩ型インターフェロン（例えば、ＩＦＮ－α（アルファ）、ＩＦＮ－β（ベータ）、ＩＦＮ－κ（カッパ）、ＩＦＮ－δ（デルタ）、ＩＦＮ－ε（イプシロン）、ＩＦＮ－τ（タウ）、ＩＦＮ－ω（オメガ）、及びＩＦＮ－ζ（ゼータ、別名リミチン））の産生をもたらし、免疫応答を開始する。ある特定の態様では、ＳＴＩＮＧアゴニストは、環状ジヌクレオチドＳＴＩＮＧアゴニストまたは非環状ジヌクレオチドＳＴＩＮＧアゴニストを含む。本明細書に記載されるように、一部の態様では、ＳＴＩＮＧアゴニストは、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の内腔中に負荷される。一部の態様では、かかるＥＶ（例えば、エキソソーム）は、本明細書で「エキソＳＴＩＮＧ」と称される。エキソＳＴＩＮＧの非限定的な例は、国際公開第ＷＯ２０１９１８３５７８Ａ１号に提供され、同文献は参照によりその全体が本明細書に援用される。また、有用なＳＴＩＮＧアゴニストのさらなる開示が本開示全体を通して提供される。
限定されないが、ｃＧＭＰ、環状ジ－ＧＭＰ（ｃ－ジ－ＧＭＰ）、ｃＡＭＰ、環状ジ－ＡＭＰ（ｃ－ジ－ＡＭＰ）、環状－ＧＭＰ－ＡＭＰ（ｃＧＡＭＰ）、環状ジ－ＩＭＰ（ｃ－ジ－ＩＭＰ）、環状ＡＭＰ－ＩＭＰ（ｃＡＩＭＰ）、及びその任意の類似体等の環状プリンジヌクレオチドは、患者における免疫応答または炎症応答を刺激または強化することが知られている。ＣＤＮは、環状ジヌクレオチドを連結する２’２’、２’３’、２’５’、３’３’、もしくは３’５’結合、またはそれらの任意の組み合わせを有し得る。
環状プリンジヌクレオチドを、標準的な有機化学技法を介して修飾して、プリンジヌクレオチドの類似体を生み出すことができる。好適なプリンジヌクレオチドには、アデニン、グアニン、イノシン、ヒポキサンチン、キサンチン、イソグアニン、または当該技術分野で既知の任意の他の適切なプリンジヌクレオチドが含まれるが、これらに限定されない。環状ジヌクレオチドは、修飾された類似体であり得る。ホスホロチオエート、ビホスホロチオエート（ｂｉｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅ）、フッ素化、及び二フッ素化修飾を含むがこれらに限定されない、当該技術分野で既知の任意の好適な修飾を使用することができる。
５，６－ジメチルキサンテノン－４－酢酸（ＤＭＸＡＡ）、または当該技術分野で既知の任意の他の非環状ジヌクレオチドアゴニスト等の、非環状ジヌクレオチドアゴニストもまた使用することができる。
本開示とともに使用することができるＳＴＩＮＧアゴニストの非限定的な例としては、ＤＭＸＡＡ、ＳＴＩＮＧアゴニスト－１、ＭＬ ＲＲ－Ｓ２ ＣＤＡ、ＭＬ ＲＲ－Ｓ２ｃ－ジ－ＧＭＰ、ＭＬ－ＲＲ－Ｓ２ ｃＧＡＭＰ、２’３’－ｃ－ジ－ＡＭ（ＰＳ）２、２’３’－ｃＧＡＭＰ、２’３’－ｃＧＡＭＰｄＦＨＳ、３’３’－ｃＧＡＭＰ、３’３’－ｃＧＡＭＰｄＦＳＨ、ｃＡＩＭＰ、ｃＡＩＭ（ＰＳ）２、３’３’－ｃＡＩＭＰ、３’３’－ｃＡＩＭＰｄＦＳＨ、２’２’－ｃＧＡＭＰ、２’３’－ｃＧＡＭ（ＰＳ）２、３’３’－ｃＧＡＭＰ、及びそれらの組み合わせが挙げられる。ＳＴＩＮＧアゴニストの非限定的な例は、米国特許第９，６９５，２１２号、ＷＯ２０１４／１８９８０５Ａ１、ＷＯ２０１４／１７９３３５Ａ１、ＷＯ２０１８／１００５５８Ａ１、米国特許第１０，０１１，６３０Ｂ２号、ＷＯ２０１７／０２７６４６Ａ１、ＷＯ２０１７／１６１３４９Ａ１、及びＷＯ２０１６／０９６１７４Ａ１で見出すことができ、同文献の各々は参照によりその全体が本明細書に援用される。
一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、以下の式を有する化合物、
Figure 2022526127000001
 を含み、式中、
Ｘ１は、Ｈ、ＯＨ、またはＦであり、
Ｘ２は、Ｈ、ＯＨ、またはＦであり、
Ｚは、ＯＨ、ＯＲ１、ＳＨ、またはＳＲ１であり、ここで、
ｉ）Ｒ１は、ＮａもしくはＮＨ４であるか、または
ｉｉ）Ｒ１は、ピバロイルオキシメチル等の、インビボでＯＨまたはＳＨをもたらす酵素に不安定な基であり、
Ｂｉ及びＢ２は、下記から選定される塩基であるが、
Figure 2022526127000002
 但し、
－式（Ｉ）において、Ｘ１及びＸ２がＯＨではなく、
－式（ＩＩ）において、Ｘ１及びＸ２がＯＨであるとき、Ｂ１がアデニンではなく、かつＢ２がグアニンではなく、かつ
－式（ＩＩＩ）において、Ｘ１及びＸ２がＯＨであるとき、Ｂ１がアデニンではなく、Ｂ２がグアニンではなく、かつＺがＯＨではないことを条件とする。ＷＯ２０１６／０９６１７４を参照されたく、同文献の内容は参照によりその全体が本明細書に援用される。
一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、
Figure 2022526127000003
Figure 2022526127000004
 その薬学的に許容される塩を含む。ＷＯ２０１６／０９６１７４Ａ１号を参照されたく、同文献は参照によりその全体が本明細書に援用される。
他の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、以下の式を有する化合物、
Figure 2022526127000005
Figure 2022526127000006
Figure 2022526127000007
 、またはその任意の薬学的に許容される塩を含む。
一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、以下の式を有する化合物、
Figure 2022526127000008
 を含み、式中、各記号はＷＯ２０１４／０９３９３６に定義され、同文献の内容は参照によりその全体が本明細書に援用される。
一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、以下の式を有する化合物、
Figure 2022526127000009
 を含み、式中、各記号はＷＯ２０１４／１８９８０５に定義され、同文献の内容は参照によりその全体が本明細書に援用される。
一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、以下の式を有する化合物、
Figure 2022526127000010
 を含み、式中、各記号はＷＯ２０１５／０７７３５４に定義され、同文献の内容は参照によりその全体が本明細書に援用される。また、Ｃｅｌｌ ｒｅｐｏｒｔｓ １１，１０１８－１０３０（２０１５）も参照されたく、同文献は参照によりその全体が本明細書に援用される。
一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＷＯ２０１３／１８５０５２及びＳｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．２８３，２８３ｒａ５２（２０１５）に記載される、ｃ－ジ－ＡＭＰ、ｃ－ジ－ＧＭＰ、ｃ－ジ－ＩＭＰ、ｃ－ＡＭＰ－ＧＭＰ、ｃ－ＡＭＰ－ＩＭＰ、及びｃ－ＧＭＰ－ＩＭＰを含み、同文献は参照によりそれらの全体が本明細書に援用される。
一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、以下の式を有する化合物、
Figure 2022526127000011
 を含み、式中、各記号はＷＯ２０１４／１８９８０６に定義され、同文献の内容は参照によりその全体が本明細書に援用される。
一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、以下の式を有する化合物、
Figure 2022526127000012
 を含み、式中、各記号はＷＯ２０１５／１８５５６５に定義され、同文献の内容は参照によりその全体が本明細書に援用される。
一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、以下の式を有する化合物、
Figure 2022526127000013
 を含み、式中、各記号はＷＯ２０１４／１７９７６０に定義され、同文献の内容は参照によりその全体が本明細書に援用される。
一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、以下の式を有する化合物、
Figure 2022526127000014
 を含み、式中、各記号はＷＯ２０１４／１７９３３５に定義され、同文献の内容は参照によりその全体が本明細書に援用される。
一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＷＯ２０１５／０１７６５２に記載される、以下の式を有する化合物、
Figure 2022526127000015
 を含み、同文献の内容は参照によりその全体が本明細書に援用される。
一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＷＯ２０１６／０９６５７７に記載される、以下の式を有する化合物、
Figure 2022526127000016
 を含み、同文献の内容は参照によりその全体が本明細書に援用される。
一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、以下の式を有する化合物、
Figure 2022526127000017
 を含み、式中、各記号はＷＯ２０１６／１２０３０５に定義され、同文献の内容は参照によりその全体が本明細書に援用される。
一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、以下の式を有する化合物、
Figure 2022526127000018
 を含み、式中、各記号はＷＯ２０１６／１４５１０２に定義され、同文献の内容は参照によりその全体が本明細書に援用される。
一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、以下の式を有する化合物、
Figure 2022526127000019
 を含み、式中、各記号はＷＯ２０１７／０２７６４６に定義され、同文献の内容は参照によりその全体が本明細書に援用される。
一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、以下の式を有する化合物、
Figure 2022526127000020
 を含み、式中、各記号はＷＯ２０１７／０７５４７７に定義され、同文献の内容は参照によりその全体が本明細書に援用される。
一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、以下の式を有する化合物、
Figure 2022526127000021
 を含み、式中、各記号はＷＯ２０１７／０２７６４５に定義され、同文献の内容は参照によりその全体が本明細書に援用される。
一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、以下の式を有する化合物、
Figure 2022526127000022
 を含み、式中、各記号はＷＯ２０１８／１００５５８に定義され、同文献の内容は参照によりその全体が本明細書に援用される。
一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、以下の式を有する化合物、
Figure 2022526127000023
 を含み、式中、各記号はＷＯ２０１７／１７５１４７に定義され、同文献の内容は参照によりその全体が本明細書に援用される。
一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、以下の式を有する化合物、
Figure 2022526127000024
 を含み、式中、各記号はＷＯ２０１７／１７５１５６に定義され、同文献の内容は参照によりその全体が本明細書に援用される。
一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６０６、ＣＬ６１１、ＣＬ６０２、ＣＬ６５５、ＣＬ６０４、ＣＬ６０９、ＣＬ６１４、ＣＬ６５６、ＣＬ６４７、ＣＬ６２６、ＣＬ６２９、ＣＬ６０３、ＣＬ６３２、ＣＬ６３３、ＣＬ６５９、またはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６０６またはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６１１またはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６０２またはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６５５またはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６０４またはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６０９またはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６１４またはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６５６またはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６４７またはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６２６またはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６２９またはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６０３またはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６３２またはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６３３またはその薬学的に許容される塩である。一部の態様では、本開示に有用なＳＴＩＮＧアゴニストは、ＣＬ６５９またはその薬学的に許容される塩である。
一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、環状ジヌクレオチドＳＴＩＮＧアゴニスト及び／または非環状ジヌクレオチドＳＴＩＮＧアゴニストを含む。一部の態様では、いくつかの環状ジヌクレオチドＳＴＩＮＧアゴニストが、本明細書に開示されるＥＶ、例えばエキソソーム上に存在するとき、かかるＳＴＩＮＧアゴニストは同じであり得るか、またはそれらは異なり得る。一部の態様では、いくつかの非環状ジヌクレオチドＳＴＩＮＧアゴニストが存在するとき、かかるＳＴＩＮＧアゴニストは同じであり得るか、またはそれらは異なり得る。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームの組成物は、ＥＶ、例えばエキソソームの２つ以上の集団を含むことができ、ここで、ＥＶ、例えばエキソソームの各集団は、異なるＳＴＩＮＧアゴニストまたはそれらの組み合わせを含む。
ＳＴＩＮＧアゴニストはまた、細胞外小胞またはＥＶ中（例えば、いずれも内腔中で未結合で）のアゴニストの封入（すなわち、負荷）を増加させるように修飾され得る。一部の態様では、ＳＴＩＮＧアゴニストは、足場部分、例えば、足場Ｙに連結されている。ある特定の態様では、当該修飾は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上でのＳＴＩＮＧアゴニストのよりよい発現を可能にする（例えば、本明細書に開示される足場部分、例えば、足場Ｘに連結されて）。この修飾は、アゴニストを化学物質もしくは酵素で処理することによる、またはＳＴＩＮＧアゴニストの極性もしくは電荷を物理的もしくは化学的に改変することによる、脂質結合タグの付加を含むことができる。ＳＴＩＮＧアゴニストは、単一の処理によって、または処理の組み合わせによって、例えば、脂質結合タグを付加することのみ、または脂質結合タグを付加するとともに、極性を改変することによって、修飾され得る。先の例は、非限定的な例示的事例であることを意図する。修飾の任意の組み合わせが実施され得ることが企図される。当該修飾は、ＥＶ（例えば、エキソソーム）中のアゴニストの封入（すなわち、負荷）を、未修飾アゴニストの封入（すなわち、負荷）と比較して、約２倍～約１０，０００倍、約１０倍～約１，０００倍、または約１００倍～約５００倍増加させ得る。当該修飾は、ＥＶ中のアゴニストの封入（すなわち、負荷）を、未修飾アゴニストの封入（すなわち、負荷）と比較して、少なくとも約２倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約６０倍、少なくとも約７０倍、少なくとも約８０倍、少なくとも約９０倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約３００倍、少なくとも約４００倍、少なくとも約５００倍、少なくとも約６００倍、少なくとも約７００倍、少なくとも約８００倍、少なくとも約９００倍、少なくとも約１，０００倍、少なくとも約，２０００倍、少なくとも約３，０００倍、少なくとも約４，０００倍、少なくとも約５，０００倍、少なくとも約６，０００倍、少なくとも約７，０００倍、少なくとも約８，０００倍、少なくとも約９，０００倍、または少なくとも約１０，０００倍増加させ得る。
一部の態様では、ＳＴＩＮＧアゴニストは、ＥＶの表面（例えば、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面及び／または内腔表面（例えば、本明細書に開示される足場部分、例えば、足場Ｘ及び／または足場Ｙに連結されて））上でのアゴニストのよりよい発現を可能にするように修飾され得る。上述の修飾のうちのいずれかを使用することができる。当該修飾は、ＥＶ中での、例えば、エキソソームの表面及び／または内腔表面上でのアゴニストの発現を、未修飾アゴニストの対応する発現と比較して、約２倍～１０，０００倍、約１０倍～１，０００倍、または約１００倍～５００倍増加させ得る。当該修飾は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上でのアゴニストの発現を、未修飾アゴニストの発現と比較して、少なくとも約２倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約６０倍、少なくとも約７０倍、少なくとも約８０倍、少なくとも約９０倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約３００倍、少なくとも約４００倍、少なくとも約５００倍、少なくとも約６００倍、少なくとも約７００倍、少なくとも約８００倍、少なくとも約９００倍、少なくとも約１，０００倍、少なくとも約２，０００倍、少なくとも約３，０００倍、少なくとも約４，０００倍、少なくとも約５，０００倍、少なくとも約６，０００倍、少なくとも約７，０００倍、少なくとも約８，０００倍、少なくとも約９，０００倍、または少なくとも約１０，０００倍増加させ得る。当該修飾は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上でのアゴニストの発現を、未修飾アゴニストの発現と比較して、少なくとも約２倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約６０倍、少なくとも約７０倍、少なくとも約８０倍、少なくとも約９０倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約３００倍、少なくとも約４００倍、少なくとも約５００倍、少なくとも約６００倍、少なくとも約７００倍、少なくとも約８００倍、少なくとも約９００倍、少なくとも約１，０００倍、少なくとも約２，０００倍、少なくとも約３，０００倍、少なくとも約４，０００倍、少なくとも約５，０００倍、少なくとも約６，０００倍、少なくとも約７，０００倍、少なくとも約８，０００倍、少なくとも約９，０００倍、または少なくとも約１０，０００倍増加させ得る。
ＥＶ（例えば、エキソソーム）に会合しているＳＴＩＮＧアゴニストの濃度は、約０．０１μＭ～約１０００μＭであり得る。会合したＳＴＩＮＧアゴニストの濃度は、約０．０１～０．０５μＭ、約０．０５～０．１μＭ、約０．１～０．５μＭ、約０．５～１μＭ、約１～５μＭ、約５～１０μＭ、約１０～１５μＭ、約１５～２０μＭ、約２０～２５μＭ、約２５～３０μＭ、約３０～３５μＭ、約３５～４０μＭ、約４５～５０μＭ、約５５～６０μＭ、約６５～７０μＭ、約７０～７５μＭ、約７５～８０μＭ、約８０～８５μＭ、約８５～９０μＭ、約９０～９５μＭ、約９５～１００μＭ、約１００～１５０μＭ、約１５０～２００μＭ、約２００～２５０μＭ、約２５０～３００μＭ、約３００～３５０μＭ、約２５０～４００μＭ、約４００～４５０μＭ、約４５０～５００μＭ、約５００～５５０μＭ、約５５０～６００μＭ、約６００～６５０μＭ、約６５０～７００μＭ、約７００～７５０μＭ、約７５０～８００μＭ、約８００～８５０μＭ、約８０５～９００μＭ、約９００～９５０μＭ、または約９５０～１０００μＭであり得る。会合したＳＴＩＮＧアゴニストの濃度は、約０．０１μＭ以上、約０．１μＭ以上、約０．５μＭ以上、約１μＭ以上、約５μＭ以上、約１０μＭ以上、約１５μＭ以上、約２０μＭ以上、約２５μＭ以上、約３０μＭ以上、約３５μＭ以上、約４０μＭ以上、約４５μＭ以上、約５０μＭ以上、約５５μＭ以上、約６０μＭ以上、約６５μＭ以上、約７０μＭ以上、約７５μＭ以上、約８０μＭ以上、約８５μＭ以上、約９０μＭ以上、約９５μＭ以上、約１００μＭ以上、約１５０μＭ以上、約２００μＭ以上、約２５０μＭ以上、約３００μＭ以上、約３５０μＭ以上、約４００μＭ以上、約４５０μＭ以上、約５００μＭ以上、約５５０μＭ以上、約６００μＭ以上、約６５０μＭ以上、約７００μＭ以上、約７５０μＭ以上、約８００μＭ以上、約８５０μＭ以上、約９００μＭ以上、約９５０μＭ以上、または約１，０００μＭ以上であり得る。
一部の態様では、アジュバントは、ＴＬＲアゴニストである。ＴＬＲアゴニストの非限定的な例としては、ＴＬＲ２アゴニスト（例えば、リポタイコ酸、非定型ＬＰＳ、ＭＡＬＰ－２及びＭＡＬＰ－４０４、ＯｓｐＡ、ポリン、ＬｃｒＶ、リポマンナン、ＧＰＩアンカー、リゾホスファチジルセリン、リポホスホグリカン（ＬＰＧ）、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）、ザイモサン、ｈｓｐ６０、ｇＨ／ｇＬ糖タンパク質、ヘマグルチニン）、ＴＬＲ３アゴニスト（例えば、二本鎖ＲＮＡ、例えば、ポリ（Ｉ：Ｃ））、ＴＬＲ４アゴニスト（例えば、リポ多糖（ＬＰＳ）、リポタイコ酸、β－ディフェンシン２、フィブロネクチンＥＤＡ、ＨＭＧＢ１、スナピン、テネイシンＣ）、ＴＬＲ５アゴニスト（例えば、フラジェリン）、ＴＬＲ６アゴニスト、ＴＬＲ７／８アゴニスト（例えば、一本鎖ＲＮＡ、ＣｐＧ－Ａ、ポリＧ１０、ポリＧ３、レシキモド）、ＴＬＲ９アゴニスト（例えば、非メチル化ＣｐＧ ＤＮＡ）、及びそれらの組み合わせが挙げられる。ＴＬＲアゴニストの非限定的な例は、ＷＯ２００８１１５３１９Ａ２、ＵＳ２０１３０２０２７０７Ａ１、ＵＳ２０１２０２１９６１５Ａ１、ＵＳ２０１０００２９５８５Ａ１、ＷＯ２００９０３０９９６Ａ１、ＷＯ２００９０８８４０１Ａ２、及びＷＯ２０１１０４４２４６Ａ１で見出すことができ、同文献の各々は参照によりその全体が援用される。
一部の態様では、アジュバントは、炎症メディエーターである。
一部の態様では、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上または内腔中（例えば、内腔表面上）に発現される。一部の態様では、アジュバントは、脂質二重層に直接的につなげられて、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上または内腔表面において発現される。かかる態様では、抗原及び／またはアジュバントは、足場部分（例えば、足場Ｘ及び／または足場Ｙ）に連結され得る。
一部の態様では、本明細書に記載のＥＶ、例えばエキソソームは、第１の足場部分を含む。ある特定の態様では、抗原は、第１の足場部分に連結されている。他の態様では、アジュバントは、第１の足場部分に連結されている。さらなる態様では、抗原及びアジュバントの両方が、第１の足場部分に連結されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、第２の足場部分をさらに含む。ある特定の態様では、抗原は、第１の足場部分に連結されており、アジュバントは、第２の足場部分に連結されている。一部の態様では、第１の足場部分及び第２の足場部分は、同じである（例えば、両方とも足場Ｘまたは両方とも足場Ｙ）。他の態様では、第１の足場部分及び第２の足場部分は、異なる（例えば、第１の足場部分は、足場Ｘであり、第２の足場部分は、足場Ｙであるか、または第１の足場部分は、足場Ｙであり、第２の足場部分は、足場Ｘである）。
足場Ｘの非限定的な例としては、プロスタグランジンＦ２受容体の負の制御因子（ＰＴＧＦＲＮ）、ベイシジン（ＢＳＧ）、免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー２（ＩＧＳＦ２）、免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー３（ＩＧＳＦ３）、免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー８（ＩＧＳＦ８）、インテグリンベータ－１（ＩＴＧＢ１）、インテグリンアルファ－４（ＩＴＧＡ４）、４Ｆ２細胞表面抗原重鎖（ＳＬＣ３Ａ２）、及びＡＴＰトランスポータータンパク質のクラス（ＡＴＰ１Ａ１、ＡＴＰ１Ａ２、ＡＴＰ１Ａ３、ＡＴＰ１Ａ４、ＡＴＰ１Ｂ３、ＡＴＰ２Ｂ１、ＡＴＰ２Ｂ２、ＡＴＰ２Ｂ３、ＡＴＰ２Ｂ）が挙げられる。ある特定の態様では、足場Ｘは、全タンパク質である。他の態様では、足場Ｘは、タンパク質断片（例えば、機能的断片）である。
他の態様では、本開示に有用な足場部分、第１の足場部分、第２の足場部分、及び／または第３の足場部分は、テトラスパニン分子（例えば、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＣＤ９、及びその他）、リソソーム関連膜タンパク質２（ＬＡＭＰ２及びＬＡＭＰ２Ｂ）、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、ＧＰＩアンカータンパク質、ラクトアドヘリン及びその断片、これらのタンパク質もしくはその断片のうちのいずれかに対して親和性を有するペプチド、またはそれらの任意の組み合わせを含むがこれらに限定されない、従来のエキソソームタンパク質を含む。
足場Ｙの非限定的な例としては、ミリストイル化アラニンリッチタンパク質キナーゼＣ基質（ＭＡＲＣＫＳ）タンパク質、ミリストイル化アラニンリッチタンパク質キナーゼＣ基質様１（ＭＡＲＣＫＳＬ１）タンパク質、及び脳酸可溶性タンパク質１（ＢＡＳＰ１）タンパク質が挙げられる。一部の態様では、足場Ｙは、全タンパク質である。ある特定の態様では、足場Ｙは、タンパク質断片（例えば、機能的断片）である。
一部の態様では、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場部分に連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。本明細書で使用されるとき、分子（例えば、抗原またはアジュバント）が、ＥＶ、例えばエキソソームの「内腔中にある」として記載される場合、それは、当該分子が、本明細書に記載の足場部分に連結されていないことを意味する。一部の態様では、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場部分に連結されている。かかる態様では、第１の足場部分は、足場Ｘまたは足場Ｙであり得る。
一部の態様では、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場部分に連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場部分に連結されている。一部の態様では、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場部分に連結されており、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場部分に連結されている。これらの態様では、第１の足場部分は、足場Ｙであり得、第２の足場部分は、足場Ｘであり得る。他の態様では、第１の足場部分及び第２の足場部分の各々は、足場Ｘであり得る。
一部の態様では、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場部分に連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場部分に連結されている。他の態様では、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場部分に連結されており、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場部分に連結されている。かかる態様では、第１の足場部分は、足場Ｘであり、第２の足場部分は、足場Ｙであるか、または第１の足場部分及び第２の足場部分の各々は、足場Ｘである。
一部の態様では、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。
一部の態様では、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場部分に連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場部分に連結されている。他の態様では、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場部分に連結されており、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場部分に連結されている。一部の態様では、第１の足場部分及び第２の足場部分は、足場Ｘである。
一部の態様では、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場部分に連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。一部の態様では、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場部分に連結されている。かかる態様では、第１の足場部分は、足場Ｘであり得る。
一部の態様では、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場部分に連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場部分に連結されている。他の態様では、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場部分に連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場部分に連結されている。これらの態様では、第１の足場部分は、足場Ｘであり得る。
具体的な態様の非限定的な例としては、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含む、ＥＶ、例えばエキソソームが挙げられ、ここで、
（ａ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｙに連結されているか、
（ｂ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるか、
（ｃ）抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
（ｄ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されているか、
（ｅ）抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されているか、
（ｆ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されているか、
（ｇ）抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されているか、
（ｈ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されているか、
（ｉ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場Ｘに連結されているか、
（ｊ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
（ｋ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるか、
（ｌ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されているか、
（ｍ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されているか、
（ｎ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
（ｏ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるか、
（ｐ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されているか、
（ｑ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場Ｘに連結されているか、
（ｒ）抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるか、
（ｓ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に直接的に連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に直接的に連結されているか、
（ｔ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に直接的に連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるか、
（ｕ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に直接的に連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
（ｖ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に直接的に連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されているか、
（ｗ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に直接的に連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外側に直接的に連結されているか、
（ｘ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に直接的に連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外側上の足場Ｘに連結されているか、
（ｙ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に直接的に連結されているか、
（ｚ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外側に直接的に連結されているか、
（ａａ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に直接的に連結されているか、
（ｂｂ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外側に直接的に連結されているか、
（ｃｃ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に直接的に連結されているか、または
（ｄｄ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外側に直接的に連結されている。
一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｙに連結されている。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含み、ここで、抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されている。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含み、ここで、抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含み、ここで、抗原は、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含み、ここで、抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されている。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されている。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含み、ここで、抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含み、ここで、抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、アジュバントは、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含み、ここで、抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、アジュバントは、ＥＶの内腔中にある。一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含み、ここで、抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、アジュバントは、ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含み、ここで、抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、アジュバントは、ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含み、ここで、抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、アジュバントは、ＥＶの外側に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含み、ここで、抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、アジュバントは、ＥＶの外側上の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含み、ここで、抗原は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含み、ここで、抗原は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、ＥＶの外側に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含み、ここで、抗原は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含み、ここで、抗原は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶの外側に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含み、ここで、抗原は、ＥＶの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含み、ここで、抗原は、ＥＶの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶの外側に直接的に連結されている。
一部の態様では、アジュバント及び／または抗原は、ＥＶ、例えばエキソソーム中の封入（すなわち、負荷）を増加させるように修飾され得る。当該修飾は、アゴニスト（すなわち、アジュバント及び／または抗原）を化学物質もしくは酵素で処理することによる、またはアジュバント及び／または抗原の極性もしくは電荷を物理的もしくは化学的に改変することによる、脂質結合タグの付加を含むことができる。アジュバント及び／または抗原は、単一の処理によって、または処理の組み合わせによって、例えば、脂質結合タグを付加することのみ、または脂質結合タグを付加するとともに、極性を改変することによって、修飾され得る。先の例は、非限定的な例示的事例であることを意図する。修飾の任意の組み合わせが実施され得ることが企図される。当該修飾は、ＥＶ、例えばエキソソーム中のアジュバント及び／または抗原の封入（すなわち、負荷）を、未修飾アゴニスト（すなわち、アジュバント及び／または抗原）の封入（すなわち、負荷）と比較して、約２倍～約１０，０００倍、約１０倍～１，０００倍、または約１００倍～約５００倍増加させ得る。当該修飾は、ＥＶ、例えばエキソソーム中のアジュバント及び／または抗原の封入（すなわち、負荷）を、未修飾アジュバント及び／または抗原の封入（すなわち、負荷）と比較して、少なくとも約２倍、約５倍、約１０倍、約２０倍、約３０倍、約４０倍、約５０倍、約６０倍、約７０倍、約８０倍、約９０倍、約１００倍、約２００倍、約３００倍、約４００倍、約５００倍、約６００倍、約７００倍、約８００倍、約９００倍、約１，０００倍、約２，０００倍、約３，０００倍、約４，０００倍、約５，０００倍、約６，０００倍、約７，０００倍、約８，０００倍、約９，０００倍、または約１０，０００倍増加させ得る。
一部の態様では、アジュバント及び／または抗原は、ＥＶの表面（例えば、本明細書に開示される足場部分、例えば、足場Ｘ及び／または足場Ｙに連結されて、例えば、ＥＶの外表面及び／または内腔表面）上でのよりよい発現を可能にするように修飾され得る。上述の修飾のうちのいずれかを使用することができる。当該修飾は、ＥＶ中での、例えば、エキソソームの表面及び／または内腔表面上でのアゴニストの発現を、未修飾アゴニストの対応する発現と比較して、約２倍～１０，０００倍、約１０倍～１，０００倍、または約１００倍～５００倍増加させ得る。当該修飾は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上でのアゴニストの発現を、未修飾アゴニストの発現と比較して、少なくとも約２倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約６０倍、少なくとも約７０倍、少なくとも約８０倍、少なくとも約９０倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約３００倍、少なくとも約４００倍、少なくとも約５００倍、少なくとも約６００倍、少なくとも約７００倍、少なくとも約８００倍、少なくとも約９００倍、少なくとも約１，０００倍、少なくとも約２，０００倍、少なくとも約３，０００倍、少なくとも約４，０００倍、少なくとも約５，０００倍、少なくとも約６，０００倍、少なくとも約７，０００倍、少なくとも約８，０００倍、少なくとも約９，０００倍、または少なくとも約１０，０００倍増加させ得る。当該修飾は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上でのアゴニストの発現を、未修飾アゴニストの発現と比較して、少なくとも約２倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約６０倍、少なくとも約７０倍、少なくとも約８０倍、少なくとも約９０倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約３００倍、少なくとも約４００倍、少なくとも約５００倍、少なくとも約６００倍、少なくとも約７００倍、少なくとも約８００倍、少なくとも約９００倍、少なくとも約１，０００倍、少なくとも約２，０００倍、少なくとも約３，０００倍、少なくとも約４，０００倍、少なくとも約５，０００倍、少なくとも約６，０００倍、少なくとも約７，０００倍、少なくとも約８，０００倍、少なくとも約９，０００倍、または少なくとも約１０，０００倍増加させ得る。
一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、ＥＶに関連する組み合わせ効果（例えば、エキソソーム中に負荷されるペイロード、例えばＳＴＩＮＧアゴニストの効果）を強化するために、ＥＶの取り込みを導き（例えば、標的化部分）、細胞経路を活性化するか、または遮断する一助となり得る追加のタンパク質（またはその断片）を提示するようにさらに修飾される。ある特定の態様では、本明細書に開示されるＥＶ、例えばエキソソームは、インビボまたはインビトロでＥＶの分布を変更することができる標的化部分をさらに含む。一部の態様では、標的化部分は、タンパク質、ペプチド、脂質、または合成分子等の生体分子であり得る。
一部の態様では、本開示の標的化部分は、樹状細胞のマーカーに特異的に結合する。ある特定の態様では、マーカーは、樹状細胞上にのみ発現している。一部の態様では、樹状細胞は、前駆（Ｐｒｅ）樹状細胞、炎症性単球由来樹状細胞（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍｏｎｏ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ）、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）、骨髄系／古典的樹状細胞１（ｃＤＣ１）、骨髄系／古典的樹状細胞２（ｃＤＣ２）、炎症性単球由来樹状細胞、ランゲルハンス細胞、真皮樹状細胞、リゾチーム発現樹状細胞（ＬｙｓｏＤＣ）、クッパー細胞、非古典的単球、またはそれらの任意の組み合わせを含む。これらの樹状細胞上に発現しているマーカーは、当該技術分野で既知である。例えば、Ｃｏｌｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １５４（１）：３－２０（２０１８）を参照されたい。一部の態様では、標的化部分は、タンパク質であり、該タンパク質は、ＤＥＣ２０５、ＣＬＥＣ９Ａ、ＣＬＥＣ６、ＤＣＩＲ、ＤＣ－ＳＩＧＮ、ＬＯＸ－１、ＭＡＲＣＯ、Ｃｌｅｃ１２ａ、Ｃｌｅｃ１０ａ、ＤＣ－アシアロ糖タンパク質受容体（ＤＣ－ＡＳＧＰＲ）、ＤＣ免疫受容体２（ＤＣＩＲ２）、デクチン－１、マクロファージマンノース受容体（ＭＭＲ）、ＢＤＣＡ－２（ＣＤ３０３、Ｃｌｅｃ４ｃ）、デクチン－２、Ｂｓｔ－２（ＣＤ３１７）、ランゲリン、ＣＤ２０６、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１２３、ＣＤ３０４、ＸＣＲ１、ＡＸＬ、シグレック６、ＣＤ２０９、ＳＩＲＰＡ、ＣＸ３ＣＲ１、ＧＰＲ１８２、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ３２、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ１０、またはそれらの任意の組み合わせから選択されるマーカーに特異的に結合することができる抗体またはその断片である。一部の態様では、本開示に有用なマーカーは、Ｃ型レクチン様ドメインを含む。ある特定の態様では、マーカーは、Ｃｌｅｃ９ａであり、樹状細胞は、ｃＤＣ１である。
一部の態様では、本明細書に開示される標的化部分は、ヒトＣｌｅｃ９ａ及びマウスＣｌｅｃ９ａ（それらの任意のバリアントを含む）の両方に結合することができる。一部の態様では、本開示の標的化部分は、チンパンジー、アカゲザル、イヌ、ウシ、ウマ、またはラットを含むがこれらに限定されない他の種由来のＣｌｅｃ９ａに結合することができる。かかるＣｌｅｃ９ａタンパク質の配列は、当該技術分野で既知である。例えば、米国特許第８，４２６，５６５Ｂ２号を参照されたく、同文献は参照によりその全体が本明細書に援用される。
一部の態様では、本開示の標的化部分は、Ｔ細胞のマーカーに特異的に結合する。ある特定の態様では、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋ Ｔ細胞である。一部の態様では、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞である。
一部の態様では、本明細書に開示される標的化部分は、ヒトＣＤ３タンパク質またはその断片に結合する。ヒトＣＤ３タンパク質の配列は、当該技術分野で既知である。
一部の態様では、本明細書に開示される標的化部分は、ヒトＣＤ３及びマウスＣＤ３（それらの任意のバリアントを含む）の両方に結合することができる。一部の態様では、本開示の標的化部分は、チンパンジー、アカゲザル、イヌ、ウシ、ウマ、またはラットを含むがこれらに限定されない他の種由来のＣＤ３に結合することができる。かかるＣＤ３タンパク質の配列もまた、当該技術分野で既知である。
一部の態様では、本明細書に開示される標的化部分は、標的化部分に特異的なマーカーを発現している細胞（例えば、ＣＤ３：ＣＤ４＋ Ｔ細胞及び／またはＣＤ８＋ Ｔ細胞；Ｃｌｅｃ９ａ：樹状細胞）によるＥＶ（例えば、エキソソーム）のより高い取り込みを可能にし得る。一部の態様では、ＥＶの取り込みは、参照物（例えば、標的化部分を含まない対応するＥＶまたは非ＥＶ送達ビヒクル）と比較して、少なくとも約１倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約６０倍、少なくとも約７０倍、少なくとも約８０倍、少なくとも約９０倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約３００倍、少なくとも約４００倍、少なくとも約５００倍、少なくとも約６００倍、少なくとも約７００倍、少なくとも約８００倍、少なくとも約９００倍、少なくとも約１，０００倍、少なくとも約２，０００倍、少なくとも約３，０００倍、少なくとも約４，０００倍、少なくとも約５，０００倍、少なくとも約６，０００倍、少なくとも約７，０００倍、少なくとも約８，０００倍、少なくとも約９，０００倍、少なくとも約１０，０００倍、またはそれを超えて増加する。一部の態様では、参照物は、本明細書に開示される標的化部分を発現しないＥＶ（例えば、エキソソーム）を含む。
一部の態様では、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）の取り込みの増加は、より高い免疫応答を可能にし得る。したがって、ある特定の態様では、本明細書に開示される標的化部分を発現しているＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（例えば、エキソソーム上に負荷された腫瘍抗原に対する）免疫応答を、参照物（例えば、標的化部分を含まない対応するＥＶまたは非ＥＶ送達ビヒクル）と比較して、少なくとも約１倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約６０倍、少なくとも約７０倍、少なくとも約８０倍、少なくとも約９０倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約３００倍、少なくとも約４００倍、少なくとも約５００倍、少なくとも約６００倍、少なくとも約７００倍、少なくとも約８００倍、少なくとも約９００倍、少なくとも約１，０００倍、少なくとも約２，０００倍、少なくとも約３，０００倍、少なくとも約４，０００倍、少なくとも約５，０００倍、少なくとも約６，０００倍、少なくとも約７，０００倍、少なくとも約８，０００倍、少なくとも約９，０００倍、少なくとも約１０，０００倍、またはそれを超えて増加させ得る。一部の態様では、参照物は、本明細書に開示される標的化部分を発現しないＥＶ（例えば、エキソソーム）を含む。ある特定の態様では、免疫応答は、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋ Ｔ細胞またはＣＤ４＋ Ｔ細胞）及び／またはＢ細胞によって媒介される。
上記に記載したように、本明細書に開示される標的化部分は、ペプチド、抗体もしくはその抗原結合断片、化学化合物、またはそれらの任意の組み合わせを含み得る。
一部の態様では、標的化部分は、Ｃｌｅｃ９ａに特異的に結合することができるペプチドである。例えば、Ｙａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ ７（２６）：４０４３７－４０４５０（２０１６）を参照されたい。例えば、ある特定の態様では、ペプチドは、Ｃｌｅｃ９ａの可溶性断片を含む。かかるペプチドの非限定的な例は、米国特許第９，９８８，４３１Ｂ２号に記載され、同文献は参照によりその全体が本明細書に援用される。ある特定の態様では、ペプチドは、Ａｈｒｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３６（４）：６３５－４５（２０１２）、及びＺｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３６（４）：６４６－５７（２０１２）に記載されるもの等の、Ｃｌｅｃ９ａのリガンド（天然または合成）を含む。Ｃｌｅｃ９ａリガンドを含むペプチドの非限定的な例は、国際公開第ＷＯ２０１３／０５３００８ Ａ２号に記載され、同文献は参照によりその全体が本明細書に援用される。
一部の態様では、標的化部分は、ＣＤ３に特異的に結合することができるペプチドである。例えば、ある特定の態様では、ペプチドは、ＣＤ３の可溶性断片を含む。ある特定の態様では、ペプチドは、ＣＤ３のリガンド（天然または合成）を含む。
一部の態様では、標的化部分は、抗体またはその抗原結合断片である。ある特定の態様では、標的化部分は、一本鎖Ｆｖ抗体断片である。ある特定の態様では、標的化部分は、一本鎖Ｆ（ａｂ）抗体断片である。ある特定の態様では、標的化部分は、ナノボディである。ある特定の態様では、標的化部分は、モノボディである。
一部の態様では、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）は、１つまたは複数（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、またはそれよりも多く）の標的化部分を含む。ある特定の態様では、１つまたは複数の標的化部分は、本明細書に開示される生物学的に活性な他の外因性分子（例えば、治療分子、アジュバント、または免疫調節剤）と組み合わせて発現される。一部の態様では、１つまたは複数の標的化部分は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上に発現され得る。したがって、ある特定の態様では、１つまたは複数の標的化部分は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場部分（例えば、足場Ｘ）に連結されている。１つまたは複数の標的化部分が、生物学的に活性な他の外因性分子（例えば、治療分子、アジュバント、または免疫調節剤）と組み合わせて発現される場合、生物学的に活性な他の外因性分子は、ＥＶ、例えばエキソソームの表面（例えば、外表面または内腔表面）上または内腔中に発現され得る。
プロデューサー細胞は、追加のタンパク質またはその断片をコードする追加の外因性配列を含むように修飾され得る。代替として、追加のタンパク質またはその断片は、当該技術分野で既知の任意の適切な連結化学反応を介して、ＥＶ、例えばエキソソームに共有結合性で連結またはコンジュゲートされ得る。適切な連結化学反応の非限定的な例としては、アミン反応性基、カルボキシル反応性基、スルフヒドリル反応性基、アルデヒド反応性基、光反応性基、クリックＩＴケミストリー（ＣｌｉｃｋＩＴ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、ビオチン－ストレプトアビジンもしくは他のアビジンコンジュゲーション、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。
ＩＩ．Ｃ．免疫調節剤
一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、免疫調節剤を（例えば、本明細書に開示される抗原及び／または他のペイロードとともに）含み得る。一部の態様では、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）は、複数の免疫調節剤を含む。ある特定の態様では、複数の免疫調節剤の各々が異なる。一部の態様では、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれよりも多くの異なる免疫調節剤を含む。
ある特定の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、１つまたは複数の追加のペイロード（例えば、抗原及び／またはアジュバント）と組み合わせて１つまたは複数の免疫調節剤を含む。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、１つまたは複数の追加の部分（例えば、標的化部分）を含み得る。例えば、ある特定の態様では、本明細書に記載の開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）１つまたは複数の免疫調節剤と、（ｉｉ）１つまたは複数の追加のペイロード（例えば、抗原及び／またはアジュバント）と、（ｉｉｉ）１つまたは複数の標的化部分とを含み得る。
一部の態様では、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの表面（例えば、外表面または内腔表面）上または内腔中に発現され得る。したがって、ある特定の態様では、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上、またはＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場部分（例えば、足場Ｘ）に連結されている。他の態様では、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場部分（例えば、足場Ｙ）に連結されている。さらなる態様では、免疫調節剤は、エキソソームの内腔中にある（すなわち、足場Ｘまたは足場Ｙのいずれにも連結されていない）。一部の態様では、免疫調節剤は、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の外表面及び／または内腔表面に直接的に連結され得る（すなわち、足場部分を使用することなく）。
かかる態様の非限定的な例としては、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含む、ＥＶ、例えばエキソソームが挙げられ、ここで、
（ａ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｙに連結されているか、
（ｂ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるか、
（ｃ）抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
（ｄ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソーム外表面上の足場Ｘに連結されているか、
（ｅ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
（ｆ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、または
（ｇ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されている。
具体的な態様の非限定的な例としては、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含む、ＥＶ、例えばエキソソームが挙げられ、ここで、
（ａ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｙに連結されているか、
（ｂ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるか、
（ｃ）抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
（ｄ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されているか、
（ｅ）抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されているか、
（ｆ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されているか、
（ｇ）抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されているか、
（ｈ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されているか、
（ｉ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場Ｘに連結されているか、
（ｊ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
（ｋ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるか、
（ｌ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されているか、
（ｍ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されているか、
（ｎ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
（ｏ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるか、
（ｐ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されているか、
（ｑ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場Ｘに連結されているか、
（ｒ）抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるか、
（ｓ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に直接的に連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に直接的に連結されているか、
（ｔ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に直接的に連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるか、
（ｕ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に直接的に連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
（ｖ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に直接的に連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されているか、
（ｗ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に直接的に連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外側に直接的に連結されているか、
（ｘ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に直接的に連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外側上の足場Ｘに連結されているか、
（ｙ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に直接的に連結されているか、
（ｚ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外側に直接的に連結されているか、
（ａａ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に直接的に連結されているか、
（ｂｂ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外側に直接的に連結されているか、
（ｃｃ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に直接的に連結されているか、または
（ｄｄ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外側に直接的に連結されている。
一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｙに連結されている。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されている。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されている。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されている。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの内腔中にある。一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの外側に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの外側上の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの外側に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶの外側に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶの内腔中にあり、免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶの内腔中にあり、免疫調節剤は、ＥＶの外側に直接的に連結されている。
具体的な態様の非限定的な例としては、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含む、ＥＶ、例えばエキソソームが挙げられ、ここで、
（ａ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、（ａ１）いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるか、または（ａ２）第３の足場部分、例えば、エキソソームの外表面上もしくはエキソソームの内腔中の足場Ｘ、またはＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
（ｂ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、（ｂ１）いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるか、または（ｂ２）足場部分、例えば、エキソソームの外表面上もしくはエキソソームの内腔表面上の足場Ｘ、またはＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
（ｃ）抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、（ｃ１）いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるか、または（ｃ２）足場部分、例えば、エキソソームの外表面上もしくはエキソソームの内腔表面上の足場Ｘ、またはＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
（ｄ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、（ｄ１）いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるか、または（ｄ２）第３の足場部分、例えば、エキソソームの外表面上もしくはエキソソームの内腔表面上の足場Ｘ、またはＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
（ｅ）抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、（ｅ１）いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるか、または（ｅ２）足場部分、例えば、エキソソームの表面上もしくはエキソソームの内腔表面上の足場Ｘ、またはＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
（ｆ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、（ｆ１）いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるか、または（ｆ２）第３の足場部分、例えば、エキソソームの外表面上もしくはエキソソームの内腔表面上の足場Ｘ、またはＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
（ｇ）抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、（ｇ１）いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるか、または（ｇ２）足場部分、例えば、エキソソームの外表面上もしくはエキソソームの内腔表面上の足場Ｘ、またはＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
（ｈ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、（ｈ１）いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるか、または（ｈ２）足場部分、例えば、エキソソームの外表面上もしくはエキソソームの内腔表面上の足場Ｘ、またはＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
（ｉ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、（ｉ１）いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるか、または（ｉ２）第３の足場部分、例えば、エキソソームの外表面上もしくはエキソソームの内腔表面上の足場Ｘ、またはＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
（ｊ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、（ｊ１）いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるか、または（ｊ２）第３の足場部分、例えば、エキソソームの外表面上もしくはエキソソームの内腔表面上の足場Ｘ、またはＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
（ｋ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、（ｋ１）いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるか、または（ｋ２）足場部分、例えば、エキソソームの外表面上もしくはエキソソームの内腔表面上の足場Ｘ、またはＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
（ｌ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、（ｌ１）いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるか、または（ｌ２）足場部分、例えば、エキソソームの外表面上もしくはエキソソームの内腔表面上の足場Ｘ、またはＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
（ｍ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場に連結されており、免疫調節剤は、（ｍ１）いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるか、または（ｍ２）第３の足場部分、例えば、エキソソームの外表面上もしくはエキソソームの内腔表面上の足場Ｘ、またはＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
（ｎ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、（ｎ１）いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるか、または（ｎ２）第３の足場部分、例えば、エキソソームの外表面上もしくはエキソソームの内腔表面上の足場Ｘ、またはＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
（ｏ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、（ｏ１）いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるか、または（ｏ２）足場部分、例えば、エキソソームの外表面上もしくはエキソソームの内腔表面上の足場Ｘ、またはＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
（ｐ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、（ｐ１）いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるか、または（ｐ２）第３の足場部分、例えば、エキソソームの表面上もしくはエキソソームの内腔中の足場Ｘ、またはＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
（ｑ）抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、（ｑ１）いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあるか、または（ｑ２）第３の足場部分、例えば、エキソソームの外表面上もしくはエキソソームの内腔表面上の足場Ｘ、またはＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、あるいは
（ｒ）抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、（ｒ１）エキソソームの内腔中にあるか、または（ｒ２）足場部分、例えば、エキソソームの外表面上もしくはエキソソームの内腔表面上の足場Ｘ、またはＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されている。
一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第３の足場Ｙに連結されている。
一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｙに連結されている。
一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｙに連結されている。
一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｙに連結されている。
一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されている。
一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｙに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｙに連結されている。
一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されている。
一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されている。
一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第３の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第３の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されている。
一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｙに連結されている。
一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されている。
一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されている。
一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第３の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第３の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されている。
一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｙに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｙに連結されている。
一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されている。
一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第３の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第３の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されている。
一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第３の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第３の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、アジュバントは、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の第２の足場Ｘに連結されており、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されている。
一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にある。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、本開示のエキソソームは、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、抗原は、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、アジュバントは、いずれの足場部分にも連結されずに、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔中にあり、免疫調節剤は、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の足場Ｙに連結されている。
一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの外表面に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの内腔中の足場Ｙに連結されている。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの内腔中の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの外表面における足場Ｘに連結されている。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの内腔中にある。
一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの外部表面に直接的に連結されており、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの外表面上の足場Ｘに連結されており、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの内腔中にあり、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されている。
一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの外部表面に直接的に連結されており、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの外表面上の足場Ｘに連結されており、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの内腔中にあり、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されている。
一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの外表面に直接的に連結されており、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの外表面に直接的に連結されており、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの外表面に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの外表面に直接的に連結されており、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの外表面に直接的に連結されており、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの外表面に直接的に連結されており、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの外表面に直接的に連結されており、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されている。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの外表面に直接的に連結されており、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの外表面に直接的に連結されており、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの外表面に直接的に連結されており、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの外表面に直接的に連結されており、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの外表面上の足場Ｘに連結されている。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの外表面に直接的に連結されており、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの外表面に直接的に連結されており、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの内腔中にある。
一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの外表面に直接的に連結されており、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの外表面に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの外表面に直接的に連結されており、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの外表面に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの外表面に直接的に連結されており、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの外表面に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの外表面に直接的に連結されており、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの外表面上の足場Ｘに連結されており、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの外表面に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの外表面に直接的に連結されており、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの内腔中にあり、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの外表面に直接的に連結されている。
一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの外表面に直接的に連結されており、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの外表面に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの外表面に直接的に連結されており、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの外表面に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの外表面に直接的に連結されており、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの外表面に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの外表面上の足場Ｘに連結されており、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの外表面に直接的に連結されており、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの外表面に直接的に連結されている。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、（ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントと、（ｉｉｉ）免疫調節剤とを含み、ここで、（ａ１）抗原は、ＥＶの内腔中にあり、（ａ２）アジュバントは、ＥＶの外表面に直接的に連結されており、（ａ３）免疫調節剤は、ＥＶの外表面に直接的に連結されている。
一部の態様では、本明細書に記載のＥＶ、例えばエキソソームとともに使用することができる免疫調節剤は、抗腫瘍活性を有する。他の態様では、本開示に有用な免疫調節剤は、寛容原性活性を有する。一部の態様では、免疫調節剤は、自然免疫応答を制御し得る。ある特定の態様では、免疫調節剤は、ナチュラルキラー細胞を標的とすることによって自然免疫応答を制御する。一部の態様では、免疫調節剤は、適応免疫応答を制御し得る。一部の態様では、免疫調節剤は、細胞傷害性Ｔ細胞を標的とすることによって適応免疫応答を制御する。さらなる態様では、免疫調節剤は、Ｂ細胞を標的とすることによって適応免疫応答を制御する。ある特定の態様では、本明細書に開示される免疫調節剤は、細胞傷害性Ｔ細胞またはＢ細胞へのエキソソームの分布を調節し得る（すなわち、生体内分布変更剤）。
一部の態様では、免疫調節剤は、負のチェックポイント制御因子の阻害剤または負のチェックポイント制御因子の結合パートナーの阻害剤を含む。ある特定の態様では、負のチェックポイント制御因子は、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３）、Ｔ細胞免疫グロブリンムチン含有タンパク質３（ＴＩＭ－３）、Ｂリンパ球及びＴリンパ球減弱因子（ＢＴＬＡ）、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制因子（ＶＩＳＴＡ）、アデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ＣＤ２０、ＣＤ３９、ＣＤ７３、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
一部の態様では、免疫調節剤は、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）の阻害剤である。ある特定の態様では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、ＣＴＬＡ－４のモノクローナル抗体（「抗ＣＴＬＡ－４抗体」）である。ある特定の態様では、阻害剤は、ＣＴＬＡ－４のモノクローナル抗体の断片である。ある特定の態様では、抗体断片は、ＣＴＬＡ－４のモノクローナル抗体のｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ１）２、Ｆｖ、ｄＡｂ、またはＦｄである。ある特定の態様では、阻害剤は、ＣＴＬＡ－４に対するナノボディ、二重特異性抗体、または多重特異性抗体である。一部の態様では、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、イピリムマブである。他の態様では、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、トレメリムマブである。
一部の態様では、免疫調節剤は、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）の阻害剤である。一部の態様では、免疫調節剤は、プログラム死－リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の阻害剤である。一部の態様では、免疫調節剤は、プログラム死－リガンド２（ＰＤ－Ｌ２）の阻害剤である。ある特定の態様では、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、またはＰＤ－Ｌ２の阻害剤は、ＰＤ－１のモノクローナル抗体（「抗ＰＤ－１抗体」）、ＰＤ－Ｌ１のモノクローナル抗体（「抗ＰＤ－Ｌ１抗体」）、またはＰＤ－Ｌ２のモノクローナル抗体（「抗ＰＤ－Ｌ２抗体」）である。一部の態様では、阻害剤は、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、または抗ＰＤ－Ｌ２抗体の断片である。ある特定の態様では、抗体断片は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、またはＰＤ－Ｌ２のモノクローナル抗体のｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ１）２、Ｆｖ、ｄＡｂ、またはＦｄである。ある特定の態様では、阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、またはＰＤ－Ｌ２に対するナノボディ、二重特異性抗体、または多重特異性抗体である。一部の態様では、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブである。一部の態様では、抗ＰＤ－１抗体は、ペムブロリズマブである。一部の態様では、抗ＰＤ－１抗体は、ピディリズマブである。一部の態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブである。他の態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アベルマブである。
一部の態様では、免疫調節剤は、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）の阻害剤である。ある特定の態様では、ＬＡＧ３の阻害剤は、ＬＡＧ３のモノクローナル抗体である（「抗ＬＡＧ３抗体」）。一部の態様では、阻害剤は、抗ＬＡＧ３抗体の断片、例えば、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ１）２、Ｆｖ、ｄＡｂ、またはＦｄである。ある特定の態様では、阻害剤は、ＬＡＧ３に対するナノボディ、二重特異性抗体、または多重特異性抗体である。
一部の態様では、免疫調節剤は、Ｔ細胞免疫グロブリンムチン含有タンパク質３（ＴＩＭ－３）の阻害剤である。一部の態様では、免疫調節剤は、Ｂリンパ球及びＴリンパ球減弱因子（ＢＴＬＡ）の阻害剤である。一部の態様では、免疫調節剤は、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の阻害剤である。一部の態様では、免疫調節剤は、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制因子（ＶＩＳＴＡ）の阻害剤である。一部の態様では、免疫調節剤は、アデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）の阻害剤である。一部の態様では、免疫調節剤は、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）の阻害剤である。一部の態様では、免疫調節剤は、インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）の阻害剤である。一部の態様では、免疫調節剤は、ＣＤ２０、ＣＤ３９、またはＣＤ７３の阻害剤である。
一部の態様では、免疫調節剤は、正の共刺激分子の活性化剤または正の共刺激分子の結合パートナーの活性化剤を含む。ある特定の態様では、正の共刺激分子は、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー（例えば、ＣＤ１２０ａ、ＣＤ１２０ｂ、ＣＤ１８、ＯＸ４０、ＣＤ４０、Ｆａｓ受容体、Ｍ６８、ＣＤ２７、ＣＤ３０、４－１ＢＢ、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＴＲＡＩＬＲ３、ＴＲＡＩＬＲ４、ＲＡＮＫ、ＯＣＩＦ、ＴＷＥＡＫ受容体、ＴＡＣＩ、ＢＡＦＦ受容体、ＡＴＡＲ、ＣＤ２７１、ＣＤ２６９、ＡＩＴＲ、ＴＲＯＹ、ＣＤ３５８、ＴＲＡＭＰ、及びＸＥＤＡＲ）を含む。一部の態様では、正の共刺激分子の活性化剤は、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦ－Ｃ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４０Ｌ、ＦａｓＬ、ＬＩＧＨＴ、ＴＬ１Ａ、ＣＤ２７Ｌ、Ｓｉｖａ、ＣＤ１５３、４－１ＢＢリガンド、ＴＲＡＩＬ、ＲＡＮＫＬ、ＴＷＥＡＫ、ＡＰＲＩＬ、ＢＡＦＦ、ＣＡＭＬＧ、ＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＮＴ－３、ＮＴ－４、ＧＩＴＲリガンド、及びＥＤＡ－２）である。
一部の態様では、免疫調節剤は、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー４（ＯＸ４０）の活性化剤である。ある特定の態様では、ＯＸ４０の活性化剤は、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体である。さらなる態様では、ＯＸ４０の活性化剤は、ＯＸ４０リガンド（ＯＸ４０Ｌ）である。
一部の態様では、免疫調節剤は、ＣＤ２７の活性化剤である。ある特定の態様では、ＣＤ２７の活性化剤は、アゴニスト抗ＣＤ２７抗体である。他の態様では、ＣＤ２７の活性化剤は、ＣＤ２７リガンド（ＣＤ２７Ｌ）である。
一部の態様では、免疫調節剤は、ＣＤ４０の活性化剤である。ある特定の態様では、ＣＤ４０の活性化剤は、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体である。一部の態様では、ＣＤ４０の活性化剤は、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）である。ある特定の態様では、ＣＤ４０Ｌは、単量体ＣＤ４０Ｌである。他の態様では、ＣＤ４０Ｌは、三量体ＣＤ４０Ｌである。
一部の態様では、免疫調節剤は、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）の活性化剤である。ある特定の態様では、ＧＩＴＲの活性化剤は、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体である。他の態様では、ＧＩＴＲの活性化剤は、ＧＩＴＲの天然リガンドである。
一部の態様では、免疫調節剤は、４－１ＢＢの活性化剤である。具体的な態様では、４－１ＢＢの活性化剤は、アゴニスト抗４－１ＢＢ抗体である。ある特定の態様では、４－１ＢＢの活性化剤は、４－１ＢＢの天然リガンドである。
一部の態様では、免疫調節剤は、Ｆａｓ受容体（Ｆａｓ）である。かかる態様では、Ｆａｓ受容体は、ＥＶ、例えばエキソソームの表面上に提示される。一部の態様では、免疫調節剤は、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）である。ある特定の態様では、Ｆａｓリガンドは、ＥＶ、例えばエキソソームの表面上に提示される。一部の態様では、免疫調節剤は、抗Ｆａｓ抗体または抗ＦａｓＬ抗体である。
一部の態様では、免疫調節剤は、ＣＤ２８－スーパーファミリー共刺激分子の活性化剤である。ある特定の態様では、ＣＤ２８－スーパーファミリー共刺激分子は、ＩＣＯＳまたはＣＤ２８である。ある特定の態様では、免疫調節成分は、ＩＣＯＳＬ、ＣＤ８０、またはＣＤ８６である。
一部の態様では、免疫調節剤は、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）の活性化剤である。ある特定の態様では、ＩＣＯＳの活性化剤は、アゴニスト抗ＩＣＯＳ抗体である。他の態様では、ＩＣＯＳの活性化剤は、ＩＣＯＳリガンド（ＩＣＯＳＬ）である。
一部の態様では、免疫調節剤は、ＣＤ２８の活性化剤である。一部の態様では、ＣＤ２８の活性化剤は、アゴニスト抗ＣＤ２８抗体である。他の態様では、ＣＤ２８の活性化剤は、ＣＤ２８の天然リガンドである。ある特定の態様では、ＣＤ２８のリガンドは、ＣＤ８０である。
一部の態様では、免疫調節剤は、サイトカインまたはサイトカインの結合パートナーを含む。一部の態様では、サイトカインは、（ｉ）共通ガンマ鎖ファミリーのサイトカイン、（ｉｉ）ＩＬ－１ファミリーのサイトカイン、（ｉｉｉ）造血サイトカイン、（ｉｖ）インターフェロン（例えば、Ｉ型、ＩＩ型、またはＩＩＩ型）、（ｖ）ＴＮＦファミリーのサイトカイン、（ｖｉ）ＩＬ－１７ファミリーのサイトカイン、（ｖｉｉ）損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）、（ｖｉｉｉ）寛容原性サイトカイン、または（ｉｘ）それらの組み合わせから選択される。ある特定の態様では、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－１ｒａ、ＩＬ－１８、ＩＬ－３３、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６β、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－３６ｒａ、ＩＬ－３７、ＩＬ－３８、ＩＬ－３、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、ＩＬ－１３、ＩＬ－２３、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、Ｆｌｔ－３、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１９、ＩＬ－２０、ＩＬ－２２、ＩＬ－２４、ＴＮＦ－α、ＴＮＦ－β、ＢＡＦＦ、ＡＰＲＩＬ、リンホトキシンベータ（ＴＮＦ－γ）、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１７Ｂ、ＩＬ－１７Ｃ、ＩＬ－１７Ｄ、ＩＬ－１７Ｅ、ＩＬ－１７Ｆ、ＩＬ－２５、ＴＳＬＰ、ＩＬ－３５、ＩＬ－２７、ＴＧＦ－β、またはそれらの組み合わせを含む。
一部の態様では、免疫調節剤は、ケモカインを含む。ある特定の態様では、ケモカインは、（ｉ）ＣＣケモカイン（例えば、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９、ＣＣＬ１０、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８）、（ｉｉ）ＣＸＣケモカイン（例えば、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＬ１７）、（ｉｉｉ）Ｃケモカイン（例えば、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２）、（ｉｖ）ＣＸ３Ｃケモカイン（例えば、ＣＸ３ＣＬ１）、（ｖ）またはそれらの組み合わせを含む。
一部の態様では、免疫調節剤は、リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）の阻害剤を含む。ＬＰＡは、プログラム細胞死から細胞を保護及び救済する非常に強力な内因性脂質メディエーターである。ＬＰＡは、その高親和性のＬＰＡ－１受容体を介して、線維形成の重要なメディエーターである。
一部の態様では、ＬＰＡ－１阻害剤は、マウスＬＰＡ－１または組換えヒトＬＰＡ－１に対してそれぞれ０．７３及び０．９８μＭのＩＣ５０値を有する、ＬＰＡ－１の強力かつ経口で生物学的に利用可能なアンタゴニストであるＡＭ０９５を含む。インビトロで、ＡＭ０９５は、０．７８μＭ及び０．２３μＭのＩＣ５０値で、マウスＬＰＡ－１／ＣＨＯ細胞及びヒトＡ２０５８黒色腫細胞の両方のＬＰＡ－１により誘導される走化性を阻害することが示されている。インビボで、ＡＭ０９５は、マウスにおいて８．３ｍｇ／ｋｇのＥＤ５０値で、ＬＰＡにより誘導されるヒスタミン放出を用量依存的に遮断し得る。さらに、ＡＭ０９５は、肺において１０ｍｇ／ｋｇのＥＤ５０値で、ＢＡＬＦコラーゲン及びタンパク質を著しく低減することが明らかとなっている。ＡＭ０９５はまた、マウスにおいてブレオマイシンによって誘導されるマクロファージ及びリンパ球の両方の浸潤を減少させることも示されている。Ｓｗａｎｅｙ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｍｏｌ．Ｃａｎ．Ｒｅｓ．１６：１６０１－１６１３を参照されたく、同文献は参照によりその全体が本明細書に援用される。
一部の態様では、ＬＰＡ－１阻害剤は、ＡＭ１５２（別名ＢＭＳ－９８６０２０）を含む。ＡＭ１５２は、ＢＳＥＰ、ＭＲＰ４、及びＭＤＲ３に対してそれぞれ４．８μＭ、６．２μＭ、及び７．５μＭのＩＣ５０で胆汁酸及びリン脂質トランスポーターを阻害する、高親和性のＬＰＡ－１アンタゴニストである。ＡＭ１５２は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）の処置に使用することができる。Ｋｉｈａｒａ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．３３３：１７１－７、Ｒｏｓｅｎ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｊｏｕｒｎａｌ ５０：ＰＡ１０３８、及びＰａｌｍｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｃｈｅｓｔ １５４：１０６１－１０６９を参照されたく、これらの文献は参照によりそれらの全体が本明細書に援用される。ＡＭ１５２の第２相試験（Ｐａｌｍｅｒ ２０１８に記載される）は、胆嚢毒性、及び肝毒性肝トランスポーター（２つの特異的トランスポーター）の早期徴候のため、早期に中止された。
ＬＰＡ－１阻害剤を含むＥＶ（例えば、エキソソーム）に関する追加の開示は、本開示の他の箇所で提供される（例えば、実施例２４を参照されたい）。
一部の態様では、抗原、例えば、ＨＳＶ－２抗原と組み合わせることができる免疫調節剤は、ＩＬ－２１である。ＨＳＶ－２抗原の非限定的な例は、本明細書の他の箇所に開示される。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、ＥＶの内腔中にＩＬ－２１及びＨＳＶ－２抗原の両方を含む。他の態様では、ＥＶは、ＥＶの外表面上に、任意選択で第１の足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＩＬ－２１、及びＥＶの外表面上に、任意選択で第２の足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＨＳＶ－２抗原を含み、ここで、第１の足場部分及び第２の足場部分は、同じであるか、または異なる。他の態様では、ＥＶは、ＥＶの外表面上に、任意選択で足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＩＬ－２１、及びＥＶの内腔表面上に、任意選択で足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＨＳＶ－２抗原を含む。他の態様では、ＥＶは、ＥＶの外表面上に、任意選択で足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＨＳＶ－２抗原、及びＥＶの内腔表面上に、任意選択で足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＩＬ－２１を含む。他の態様では、ＥＶは、ＥＶの外表面上に、任意選択で第１の足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＩＬ－２１、及びＥＶの内腔表面（例えば、足場Ｘまたは足場Ｙ）上に、任意選択で第２の足場部分を介して連結されるＨＳＶ－２抗原を含み、ここで、第１の足場部分及び第２の足場部分は、同じであるか、または異なる。他の態様では、ＥＶは、ＥＶの外表面上に、任意選択で第１の足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＨＳＶ－２抗原、及びＥＶの内腔表面上に、任意選択で第２の足場部分（例えば、足場Ｘまたは足場Ｙ）を介して連結されるＩＬ－２１を含み、ここで、第１の足場部分及び第２の足場部分は、同じであるか、または異なる。一部の態様では、本開示のＥＶは、ＥＶの内腔表面（例えば、足場Ｘまたは足場Ｙ）上に、任意選択で第１の足場部分を介して連結されるＩＬ－２１、及びＥＶの内腔表面（例えば、足場Ｘまたは足場Ｙ）上に、任意選択で第２の足場部分を介して連結されるＨＳＶ－２抗原を含み、ここで、第１の足場部分及び第２の足場部分は、同じであるか、または異なる。
一部の態様では、抗原、例えば、ＨＳＶ－２抗原と組み合わせることができる免疫調節剤は、ＣＤ４０Ｌである。ＨＳＶ－２抗原の非限定的な例は、本明細書の他の箇所に開示される。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、ＥＶの内腔中にＣＤ４０Ｌ及びＨＳＶ－２抗原の両方を含む。他の態様では、ＥＶは、ＥＶの外表面上に、任意選択で第１の足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＣＤ４０Ｌ、及びＥＶの外表面上に、任意選択で第２の足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＨＳＶ－２抗原を含み、ここで、第１の足場部分及び第２の足場部分は、同じであるか、または異なる。他の態様では、ＥＶは、ＥＶの外表面上に、任意選択で足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＣＤ４０Ｌ、及びＥＶの内腔表面上に、任意選択で足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＨＳＶ－２抗原を含む。他の態様では、ＥＶは、ＥＶの外表面上に、任意選択で足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＨＳＶ－２抗原、及びＥＶの内腔表面上に、任意選択で足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＣＤ４０Ｌを含む。他の態様では、ＥＶは、ＥＶの外表面上に、任意選択で第１の足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＣＤ４０Ｌ、及びＥＶの内腔表面（例えば、足場Ｘまたは足場Ｙ）上に、任意選択で第２の足場部分を介して連結されるＨＳＶ－２抗原を含み、ここで、第１の足場部分及び第２の足場部分は、同じであるか、または異なる。他の態様では、ＥＶは、ＥＶの外表面上に、任意選択で第１の足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＨＳＶ－２抗原、及びＥＶの内腔表面上に、任意選択で第２の足場部分（例えば、足場Ｘまたは足場Ｙ）を介して連結されるＣＤ４０Ｌを含み、ここで、第１の足場部分及び第２の足場部分は、同じであるか、または異なる。一部の態様では、本開示のＥＶは、ＥＶの内腔表面（例えば、足場Ｘまたは足場Ｙ）上に、任意選択で第１の足場部分を介して連結されるＣＤ４０Ｌ、及びＥＶの内腔表面（例えば、足場Ｘまたは足場Ｙ）上に、任意選択で第２の足場部分を介して連結されるＨＳＶ－２抗原を含み、ここで、第１の足場部分及び第２の足場部分は、同じであるか、または異なる。
一部の態様では、ＨＳＶ－２抗原（例えば、本明細書に開示される）及び免疫調節剤（例えば、ＩＬ－２１またはＣＤ４０Ｌ）を含むＥＶ（例えば、エキソソーム）は、アジュバントをさらに含み得る。本開示とともに使用することができるアジュバントの非限定的な例は、本明細書の他の箇所に記載される。
一部の態様では、ＨＳＶ－２抗原及び１つまたは複数の追加のペイロード（例えば、上述の免疫調節剤及び／またはアジュバント）を含むＥＶ（例えば、エキソソーム）は、参照物と比較してＨＳＶ－２抗原に対する免疫応答を強化し得る。一部の態様では、参照物は、ＨＳＶ－２抗原のみを含むＥＶ（例えば、エキソソーム）を含む。他の態様では、参照物は、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）において連結されていないかまたは存在しないＨＳＶ－２抗原（単独で、または１つもしくは複数の追加のペイロード（例えば、アジュバント及び／または免疫調節剤）と組み合わせて）を含む。一部の態様では、免疫応答は、自然免疫応答、体液性免疫応答、細胞媒介性免疫応答、またはそれらの組み合わせを含む。ある特定の態様では、免疫応答は、参照物と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約２５０％、少なくとも約５００％、少なくとも約７５０％、少なくとも約１，０００％、またはそれを超えて強化される。一部の態様では、免疫応答は、参照物（例えば、標的化部分を含まない対応するＥＶまたは非ＥＶ送達ビヒクル）と比較して、少なくとも約１倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約６０倍、少なくとも約７０倍、少なくとも約８０倍、少なくとも約９０倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約３００倍、少なくとも約４００倍、少なくとも約５００倍、少なくとも約６００倍、少なくとも約７００倍、少なくとも約８００倍、少なくとも約９００倍、少なくとも約１，０００倍、少なくとも約２，０００倍、少なくとも約３，０００倍、少なくとも約４，０００倍、少なくとも約５，０００倍、少なくとも約６，０００倍、少なくとも約７，０００倍、少なくとも約８，０００倍、少なくとも約９，０００倍、少なくとも約１０，０００倍、またはそれを超えて強化される。
一部の態様では、ＨＳＶ－２抗原及び１つまたは複数の追加のペイロード（例えば、上述の免疫調節剤及び／またはアジュバント）を含むＥＶ（例えば、エキソソーム）は、ウイルス排出を必要とする対象に投与されたときに、ウイルス排出を低減し得る。ある特定の態様では、ウイルス排出は、参照物（例えば、抗原を単独で含む対応するＥＶ、あるいは抗原を単独でまたは１つもしくは複数の追加のペイロードと組み合わせて含む非ＥＶ送達ビヒクル）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％低減される。一部の態様では、ＨＳＶ－２抗原及び１つまたは複数の追加のペイロード（例えば、免疫調節剤及び／またはアジュバント）を含むＥＶ（例えば、エキソソーム）は、ウイルス排除を必要とする対象に投与されたときに、ウイルス排除を増加させ得る。ある特定の態様では、ウイルス排除は、参照物（例えば、抗原を単独で含む対応するＥＶ、あるいは抗原を単独でまたは１つもしくは複数の追加のペイロードと組み合わせて含む非ＥＶ送達ビヒクル）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約２５０％、少なくとも約５００％、少なくとも約７５０％、少なくとも約１，０００％、またはそれを超えて増加する。一部の態様では、ウイルス排除は、参照物（例えば、抗原を単独で含む対応するＥＶ、あるいは抗原を単独でまたは１つもしくは複数の追加のペイロードと組み合わせて含む非ＥＶ送達ビヒクル）と比較して、少なくとも約１倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約６０倍、少なくとも約７０倍、少なくとも約８０倍、少なくとも約９０倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約３００倍、少なくとも約４００倍、少なくとも約５００倍、少なくとも約６００倍、少なくとも約７００倍、少なくとも約８００倍、少なくとも約９００倍、少なくとも約１，０００倍、少なくとも約２，０００倍、少なくとも約３，０００倍、少なくとも約４，０００倍、少なくとも約５，０００倍、少なくとも約６，０００倍、少なくとも約７，０００倍、少なくとも約８，０００倍、少なくとも約９，０００倍、少なくとも約１０，０００倍、またはそれを超えて増加する。さらなる態様では、ＨＳＶ－２抗原及び１つまたは複数の追加のペイロード（例えば、免疫調節剤及び／またはアジュバント）を含むＥＶ（例えば、エキソソーム）は、ＨＳＶ－２媒介性の病変形成の低減を必要とする対象に投与されたときに、ＨＳＶ－２媒介性の病変形成を低減し得る。ある特定の態様では、病変形成は、参照物（例えば、抗原を単独で含む対応するＥＶ、あるいは抗原を単独でまたは１つもしくは複数の追加のペイロードと組み合わせて含む非ＥＶ送達ビヒクル）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％低減される。
一部の態様では、参照物は、ＨＳＶ－２抗原のみを含むＥＶ（例えば、エキソソーム）を含む。他の態様では、参照物は、本明細書に開示されるＥＶにおいて連結されていないかまたは存在しないＨＳＶ－２抗原（単独で、またはアジュバント及び／または免疫調節剤と組み合わせて）を含む。
一部の態様では、抗原、例えば、ＥＢＶ抗原と組み合わせることができる免疫調節剤は、ＩＬ－２１である。ＥＢＶ抗原（例えば、ＢＺＬＦ１）の非限定的な例は、本明細書の他の箇所に開示される。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、ＥＶの内腔中にＩＬ－２１及びＥＢＶ抗原（例えば、ＢＺＬＦ１）の両方を含む。他の態様では、ＥＶは、ＥＶの外表面上に、任意選択で第１の足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＩＬ－２１、及びＥＶの外表面上に、任意選択で第２の足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＥＢＶ抗原（例えば、ＢＺＬＦ１）を含み、ここで、第１の足場部分及び第２の足場部分は、同じであるか、または異なる。他の態様では、ＥＶは、ＥＶの外表面上に、任意選択で足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＩＬ－２１、及びＥＶの内腔表面上に、任意選択で足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＥＢＶ抗原（例えば、ＢＺＬＦ１）を含む。他の態様では、ＥＶは、ＥＶの外表面上に、任意選択で足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＥＢＶ抗原（例えば、ＢＺＬＦ１）、及びＥＶの内腔表面上に、任意選択で足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＩＬ－２１を含む。他の態様では、ＥＶは、ＥＶの外表面上に、任意選択で第１の足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＩＬ－２１、及びＥＶの内腔表面（例えば、足場Ｘまたは足場Ｙ）上に、任意選択で第２の足場部分を介して連結されるＥＢＶ抗原（例えば、ＢＺＬＦ１）を含み、ここで、第１の足場部分及び第２の足場部分は、同じであるか、または異なる。他の態様では、ＥＶは、ＥＶの外表面上に、任意選択で第１の足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＥＢＶ抗原（例えば、ＢＺＬＦ１）、及びＥＶの内腔表面上に、任意選択で第２の足場部分（例えば、足場Ｘまたは足場Ｙ）を介して連結されるＩＬ－２１を含み、ここで、第１の足場部分及び第２の足場部分は、同じであるか、または異なる。一部の態様では、本開示のＥＶは、ＥＶの内腔表面（例えば、足場Ｘまたは足場Ｙ）上に、任意選択で第１の足場部分を介して連結されるＩＬ－２１、及びＥＶの内腔表面（例えば、足場Ｘまたは足場Ｙ）上に、任意選択で第２の足場部分を介して連結されるＥＢＶ抗原（例えば、ＢＺＬＦ１）を含み、ここで、第１の足場部分及び第２の足場部分は、同じであるか、または異なる。
一部の態様では、抗原、例えば、ＥＢＶ抗原（例えば、ＢＺＬＦ１）と組み合わせることができる免疫調節剤は、ＣＤ４０Ｌである。ＥＢＶ抗原（例えば、ＢＺＬＦ１）の非限定的な例は、本明細書の他の箇所に開示される。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、ＥＶの内腔中にＣＤ４０Ｌ及びＥＢＶ抗原（例えば、ＢＺＬＦ１）の両方を含む。他の態様では、ＥＶは、ＥＶの外表面上に、任意選択で第１の足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＣＤ４０Ｌ、及びＥＶの外表面上に、任意選択で第２の足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＥＢＶ抗原（例えば、ＢＺＬＦ１）を含み、ここで、第１の足場部分及び第２の足場部分は、同じであるか、または異なる。他の態様では、ＥＶは、ＥＶの外表面上に、任意選択で足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＣＤ４０Ｌ、及びＥＶの内腔表面上に、任意選択で足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＥＢＶ抗原（例えば、ＢＺＬＦ１）を含む。他の態様では、ＥＶは、ＥＶの外表面上に、任意選択で足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＥＢＶ抗原（例えば、ＢＺＬＦ１）、及びＥＶの内腔表面上に、任意選択で足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＣＤ４０Ｌを含む。他の態様では、ＥＶは、ＥＶの外表面上に、任意選択で第１の足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＣＤ４０Ｌ、及びＥＶの内腔表面（例えば、足場Ｘまたは足場Ｙ）上に、任意選択で第２の足場部分を介して連結されるＥＢＶ抗原（例えば、ＢＺＬＦ１）を含み、ここで、第１の足場部分及び第２の足場部分は、同じであるか、または異なる。他の態様では、ＥＶは、ＥＶの外表面上に、任意選択で第１の足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＥＢＶ抗原（例えば、ＢＺＬＦ１）、及びＥＶの内腔表面上に、任意選択で第２の足場部分（例えば、足場Ｘまたは足場Ｙ）を介して連結されるＣＤ４０Ｌを含み、ここで、第１の足場部分及び第２の足場部分は、同じであるか、または異なる。一部の態様では、本開示のＥＶは、ＥＶの内腔表面（例えば、足場Ｘまたは足場Ｙ）上に、任意選択で第１の足場部分を介して連結されるＣＤ４０Ｌ、及びＥＶの内腔表面（例えば、足場Ｘまたは足場Ｙ）上に、任意選択で第２の足場部分を介して連結されるＥＢＶ抗原（例えば、ＢＺＬＦ１）を含み、ここで、第１の足場部分及び第２の足場部分は、同じであるか、または異なる。
一部の態様では、ＥＢＶ抗原及び免疫調節剤（例えば、ＩＬ－２１またはＣＤ４０Ｌ）を含むＥＶ（例えば、エキソソーム）は、本明細書に開示される１つまたは複数の追加のペイロード（例えば、追加の抗原、追加の免疫調節剤、及び／またはアジュバント）及び／または１つもしくは複数の標的化部分をさらに含み得る。一部の態様では、ＥＢＶ抗原（例えば、ＢＺＬＦ１）（例えば、本明細書に開示される）及び免疫調節剤（例えば、ＩＬ－２１またはＣＤ４０Ｌ）を含むＥＶ（例えば、エキソソーム）は、アジュバントをさらに含み得る。本開示とともに使用することができるアジュバントの非限定的な例は、本明細書の他の箇所に記載される。一部の態様では、ＥＶは、追加の抗原（例えば、異なるＥＢＶ抗原）をさらに含み得る。一部の態様では、ＥＶは、本明細書に開示される追加の免疫調節剤（例えば、ＩＬ－２１またはＣＤ４０Ｌとは異なる）をさらに含み得る。
一部の態様では、ＥＢＶ抗原（例えば、ＢＺＬＦ１）及び１つまたは複数の追加のペイロード（例えば、上述の免疫調節剤及び／またはアジュバント）を含むＥＶ（例えば、エキソソーム）は、参照物と比較してＥＢＶ抗原（例えば、ＢＺＬＦ１）に対する免疫応答を強化し得る。一部の態様では、参照物は、ＥＢＶ抗原（例えば、ＢＺＬＦ１）のみを含むＥＶ（例えば、エキソソーム）を含む。他の態様では、参照物は、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）において連結されていないかまたは存在しないＥＢＶ抗原（例えば、ＢＺＬＦ１）（単独で、またはアジュバント及び／または免疫調節剤と組み合わせて）を含む。一部の態様では、免疫応答は、自然免疫応答、体液性免疫応答、細胞媒介性免疫応答、またはそれらの組み合わせを含む。ある特定の態様では、免疫応答は、参照物と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約２５０％、少なくとも約５００％、少なくとも約７５０％、少なくとも約１，０００％、またはそれを超えて強化される。一部の態様では、免疫応答は、参照物と比較して、少なくとも約１倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約６０倍、少なくとも約７０倍、少なくとも約８０倍、少なくとも約９０倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約３００倍、少なくとも約４００倍、少なくとも約５００倍、少なくとも約６００倍、少なくとも約７００倍、少なくとも約８００倍、少なくとも約９００倍、少なくとも約１，０００倍、少なくとも約２，０００倍、少なくとも約３，０００倍、少なくとも約４，０００倍、少なくとも約５，０００倍、少なくとも約６，０００倍、少なくとも約７，０００倍、少なくとも約８，０００倍、少なくとも約９，０００倍、少なくとも約１０，０００倍、またはそれを超えて強化される。
一部の態様では、ＥＢＶ抗原（例えば、ＢＺＬＦ１）及び１つまたは複数の追加のペイロード（例えば、上述の免疫調節剤及び／またはアジュバント）を含むＥＶ（例えば、エキソソーム）は、ウイルス排出を必要とする対象に投与されたときに、ウイルス排出を低減し得る。ある特定の態様では、ウイルス排出は、参照物（例えば、抗原を単独で含む対応するＥＶ、あるいは抗原を単独でまたは１つもしくは複数の追加のペイロードと組み合わせて含む非ＥＶ送達ビヒクル）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％低減される。一部の態様では、ＥＢＶ抗原（例えば、ＢＺＬＦ１）及び１つまたは複数の追加のペイロード（例えば、免疫調節剤及び／またはアジュバント）を含むＥＶ（例えば、エキソソーム）は、ウイルス排除を必要とする対象に投与されたときに、ウイルス排除を増加させ得る。ある特定の態様では、ウイルス排除は、参照物（例えば、抗原を単独で含む対応するＥＶ、あるいは抗原を単独でまたは１つもしくは複数の追加のペイロードと組み合わせて含む非ＥＶ送達ビヒクル）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約２５０％、少なくとも約５００％、少なくとも約７５０％、少なくとも約１，０００％、またはそれを超えて増加する。一部の態様では、ＥＢＶ抗原（例えば、ＢＺＬＦ１）及び１つまたは複数の追加のペイロード（例えば、免疫調節剤及び／またはアジュバント）を含むＥＶ（例えば、エキソソーム）は、ＥＢＶ媒介性の病変形成の低減を必要とする対象に投与されたときに、ＥＢＶ媒介性の病変形成を低減し得る。ある特定の態様では、病変形成は、参照物（例えば、抗原を単独で含む対応するＥＶ、あるいは抗原を単独でまたは１つもしくは複数の追加のペイロードと組み合わせて含む非ＥＶ送達ビヒクル）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％低減される。
一部の態様では、参照物は、ＥＢＶ抗原（例えば、ＢＺＬＦ１）のみを含むＥＶ（例えば、エキソソーム）を含む。他の態様では、参照物は、本明細書に開示されるＥＶにおいて連結されていないかまたは存在しないＥＢＶ抗原（例えば、ＢＺＬＦ１）（単独で、またはアジュバント及び／または免疫調節剤と組み合わせて）を含む。
一部の態様では、抗原、例えば、ＴＢ抗原と組み合わせることができる免疫調節剤は、ＩＬ－１２である。
ＴＢ抗原の非限定的な例は、本明細書の他の箇所に開示される。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、ＥＶの内腔中にＩＬ－１２及びＴＢ抗原の両方を含む。他の態様では、ＥＶは、ＥＶの外表面上に、任意選択で第１の足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＩＬ－１２、及びＥＶの外表面上に、任意選択で第２の足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＴＢ抗原を含み、ここで、第１の足場部分及び第２の足場部分は、同じであるか、または異なる。他の態様では、ＥＶは、ＥＶの外表面上に、任意選択で足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＩＬ－１２、及びＥＶの内腔表面上に、任意選択で足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＴＢ抗原を含む。他の態様では、ＥＶは、ＥＶの外表面上に、任意選択で足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＴＢ抗原、及びＥＶの内腔表面上に、任意選択で足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＩＬ－１２を含む。他の態様では、ＥＶは、ＥＶの外表面上に、任意選択で第１の足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＩＬ－１２、及びＥＶの内腔表面（例えば、足場Ｘまたは足場Ｙ）上に、任意選択で第２の足場部分を介して連結されるＴＢ抗原を含み、ここで、第１の足場部分及び第２の足場部分は、同じであるか、または異なる。他の態様では、ＥＶは、ＥＶの外表面上に、任意選択で第１の足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結されるＴＢ抗原、及びＥＶの内腔表面上に、任意選択で第２の足場部分（例えば、足場Ｘまたは足場Ｙ）を介して連結されるＩＬ－１２を含み、ここで、第１の足場部分及び第２の足場部分は、同じであるか、または異なる。一部の態様では、本開示のＥＶは、ＥＶの内腔表面（例えば、足場Ｘまたは足場Ｙ）上に、任意選択で第１の足場部分を介して連結されるＩＬ－１２、及びＥＶの内腔表面（例えば、足場Ｘまたは足場Ｙ）上に、任意選択で第２の足場部分を介して連結されるＴＢ抗原を含み、ここで、第１の足場部分及び第２の足場部分は、同じであるか、または異なる。
ＩＬ－１２及びＴＢ抗原を含むＥＶは、免疫応答を必要とする対象に対して免疫応答を誘導し得る。一部の態様では、免疫応答は、ＣＤ４ Ｔ細胞応答、ＣＤ８ Ｔ細胞応答、またはＣＤ４ Ｔ細胞応答及びＣＤ８ Ｔ細胞応答の両方である。一部の態様では、免疫応答は、ＴＢ抗原、例えば、ＥＳＡＴ６抗原に特異的であるエフェクター機能を有するＣＤ４ Ｔ細胞免疫応答である。一部の態様では、免疫応答は、ＴＢ抗原、例えば、ＴＢ１０．４抗原に特異的であるＣＤ８ Ｔ細胞免疫応答である。
一部の態様では、ＴＢ抗原及び免疫調節剤（例えば、ＩＬ－１２）を含むＥＶ（例えば、エキソソーム）は、本明細書に開示される１つまたは複数の追加のペイロード（例えば、追加の抗原、追加の免疫調節剤、及び／またはアジュバント）をさらに含み得る。例えば、ある特定の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、アジュバント（例えば、本明細書に開示されるもの等）をさらに含み得る。一部の態様では、ＥＶは、追加の抗原（例えば、異なるＥＢＶ抗原）をさらに含み得る。一部の態様では、ＥＶは、本明細書に開示される追加の免疫調節剤（例えば、ＩＬ－２１またはＣＤ４０Ｌとは異なる）をさらに含み得る。
一部の態様では、本開示とともに使用することができる免疫調節剤は、胚中心応答に必要とされる細胞内相互作用を支持するタンパク質を含む。ある特定の態様では、かかるタンパク質は、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭ）ファミリーメンバーまたはＳＬＡＭ関連タンパク質（ＳＡＰ）を含む。一部の態様では、ＳＬＡＭファミリーメンバーは、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ２２９（Ｌｙ９）、Ｌｙ１０８、２Ｂ４、ＣＤ８４、ＮＴＢ－Ａ、ＣＲＡＣＣ、ＢＬＡＭＥ、ＣＤ２Ｆ－１０、またはそれらの組み合わせを含む。胚中心応答において役割を果たすことができる他の免疫調節剤の非限定的な例としては、ＩＣＯＳ－ＩＣＯＳＬ、ＣＤ４０－４０Ｌ、ＣＤ２８／Ｂ７、ＰＤ－１／Ｌ１、ＩＬ－４／ＩＬ４Ｒ、ＩＬ２１／ＩＬ２１Ｒ、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＣＤ１８０、ＣＤ２２、及びそれらの組み合わせが挙げられる。
一部の態様では、免疫調節剤は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはその誘導体を含む。ある特定の態様では、免疫調節剤は、ＴＣＲ α鎖またはその誘導体である。他の態様では、免疫調節剤は、ＴＣＲ β鎖またはその誘導体である。さらなる態様では、免疫調節剤は、Ｔ細胞の共受容体またはその誘導体である。
一部の態様では、免疫調節剤は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはその誘導体を含む。ある特定の態様では、ＣＡＲは、本明細書に開示される抗原（例えば、腫瘍抗原、例えば、アルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、上皮性腫瘍抗原（ＥＴＡ）、ムチン１（ＭＵＣ１）、Ｔｎ－ＭＵＣ１、ムチン１６（ＭＵＣ１６）、チロシナーゼ、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）、腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、プログラム死リガンド２（ＰＤ－Ｌ２）、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ－７２、ＨＥＲ２、ＧＤ２、ｃＭＥＴ、ＥＧＦＲ、メソテリン、ＶＥＧＦＲ、アルファ－葉酸受容体、ＣＥ７Ｒ、ＩＬ－３、がん－精巣抗原、ＭＡＲＴ－１ ｇｐ１００、及びＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド）のうちの１つまたは複数に結合する。
一部の態様では、免疫調節剤は、Ｔ細胞受容体または共受容体の活性化剤を含む。ある特定の態様では、免疫調節成分は、ＣＤ３の活性化剤である。ある特定の態様では、活性化剤は、ＣＤ３のモノクローナル抗体の断片である。ある特定の態様では、抗体断片は、ＣＤ３に対するモノクローナル抗体のｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ１）２、Ｆｖ、ｄＡｂ、またはＦｄである。ある特定の態様では、活性化剤は、ＣＤ３に対するナノボディ、二重特異性抗体、または多重特異性抗体である。ある特定の態様では、免疫調節成分は、ＣＤ２８の活性化剤である。ある特定の態様では、活性化剤は、ＣＤ２８のモノクローナル抗体の断片である。ある特定の態様では、抗体断片は、ＣＤ２８のモノクローナル抗体のｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ１）２、Ｆｖ、ｄＡｂ、またはＦｄである。ある特定の態様では、活性化剤は、ＣＤ２８に対するナノボディ、二重特異性抗体、または多重特異性抗体である。
一部の態様では、免疫調節剤は、寛容誘導剤を含む。ある特定の態様では、寛容誘導剤は、ＮＦ－κＢ阻害剤を含む。本開示とともに使用することができるＮＦ－κＢ阻害剤の非限定的な例としては、ＩＫＫ複合体阻害剤（例えば、ＴＰＣＡ－１、ＮＦ－κＢ活性化阻害剤ＶＩ（ＢＯＴ－６４）、ＢＭＳ ３４５５４１、アンレキサノクス、ＳＣ－５１４（ＧＫ ０１１４０）、ＩＭＤ ０３５４、ＩＫＫ－１６）、ＩκＢ分解阻害剤（例えば、ＢＡＹ １１－７０８２、ＭＧ－１１５、ＭＧ－１３２、ラクタシスチン、エポキソミシン、パルテノライド、カーフィルゾミブ、ＭＬＮ－４９２４（ペボネジスタット））、ＮＦ－κＢ核移行阻害剤（例えば、ＪＳＨ－２３、ロリプラム）、ｐ６５アセチル化阻害剤（例えば、没食子酸、アナカルジン酸）、ＮＦ－κＢ－ＤＮＡ結合阻害剤（例えば、ＧＹＹ ４１３７、ｐ－ＸＳＣ、ＣＶ ３９８８、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２））、ＮＦ－κＢトランス活性化阻害剤（例えば、ＬＹ ２９４００２、ウォルトマンニン、メサラミン）、またはそれらの組み合わせが挙げられる。また、Ｇｕｐｔａ，Ｓ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １７９９：７７５－７８７（２０１０）も参照されたく、同文献は参照によりその全体が本明細書に援用される。一部の態様では、ＮＦ－κＢ活性を阻害することができ、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）とともに使用することができる免疫調節剤は、ＮＦ－κＢを特異的に標的とするアンチセンス－オリゴヌクレオチドを含む。さらなる態様では、寛容性を誘導することができる免疫調節剤は、ＣＯＸ－２阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、ラパマイシン及び誘導体、例えば、ｍＴｏｒを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチド）、プロスタグランジン、非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤＳ）、抗ロイコトリエン、アリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）リガンド、ビタミンＤ、レチノイン酸、ステロイド、Ｆａｓ受容体／リガンド、ＣＤ２２リガンド、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＩＬ－２７、代謝調節因子（例えば、グルタメート）、グリカン（例えば、ＥＳ６２、ＬｅｗｉｓＸ、ＬＮＦＰＩＩＩ）、ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体（ＰＰＡＲ）アゴニスト、免疫グロブリン様転写物（ＩＬＴ）ファミリーの受容体（例えば、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４、ＨＬＡ－Ｇ、ＩＬＴ－２）、ミノサイクリン、ＴＬＲ４アゴニスト、またはそれらの組み合わせを含む。
一部の態様では、免疫調節剤は、アゴニストである。ある特定の態様では、アゴニストは、ホルモンまたは神経伝達物質等の内因性アゴニストである。他の態様では、アゴニストは、薬物等の外因性アゴニストである。一部の態様では、アゴニストは、受容体に結合することなくアゴニスト応答を生み出すことができる物理的アゴニストである。一部の態様では、アゴニストは、内因性アゴニストよりも大きな最大応答を生じさせることができるスーパーアゴニストである。ある特定の態様では、アゴニストは、受容体で完全な効力を有する完全アゴニストである。他の態様では、アゴニストは、完全アゴニストと比べて、受容体で部分的効力のみを有する部分アゴニストである。一部の態様では、アゴニストは、受容体の構成的活性を阻害することができる逆アゴニストである。一部の態様では、アゴニストは、受容体に対する効果を生じさせるために他のコアゴニストと協働するコアゴニストである。ある特定の態様では、アゴニストは、共有結合の形成により受容体に永久的に結合する不可逆的アゴニストである。ある特定の態様では、アゴニストは、特定の受容体型に対する選択的アゴニストである。
一部の態様では、免疫調節剤は、アンタゴニストである。具体的な態様では、アンタゴニストは、受容体を活性化することなく内因性リガンドまたはアゴニストと同じ結合部位で受容体に可逆的に結合する、競合的アンタゴニストである。競合的アンタゴニストは、最大応答を達成するために必要なアゴニストの量に影響を及ぼし得る。他の態様では、アンタゴニストは、受容体の活性部位または受容体のアロステリック部位に結合する、非競合的アンタゴニストである。非競合的アンタゴニストは、任意の量のアゴニストによって達成され得る最大応答の規模を低減し得る。さらなる態様では、アンタゴニストは、別個のアロステリック結合部位へのその結合の前にアゴニストによる受容体活性化を必要とする、不競合的アンタゴニストである。
一部の態様では、免疫調節剤は、抗体または抗原結合断片を含む。免疫調節成分は、完全長タンパク質またはその断片であり得る。抗体または抗原結合断片は、天然の供給源に由来し得るか、または部分的もしくは全体的に合成的に生産され得る。一部の態様では、抗体は、モノクローナル抗体である。これらの態様のうちの一部では、モノクローナル抗体は、ＩｇＧ抗体である。ある特定の態様では、モノクローナル抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４である。一部の他の態様では、抗体は、ポリクローナル抗体である。ある特定の態様では、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ１）２、Ｆｖ、ｄＡｂ、及びＦｄ断片から選択される。ある特定の態様では、抗原結合断片は、ｓｃＦｖまたは（ｓｃＦｖ）２断片である。ある特定の他の態様では、抗体または抗原結合断片は、ナノボディ（登録商標）（単一ドメイン抗体）である。一部の態様では、抗体または抗原結合断片は、二重特異性または多重特異性抗体である。
種々の態様では、抗体または抗原結合断片は、完全ヒト型である。一部の態様では、抗体または抗原結合断片は、ヒト化される。一部の態様では、抗体または抗原結合断片は、キメラである。これらの態様のうちの一部では、キメラ抗体は、非ヒトＶ領域ドメイン及びヒトＣ領域ドメインを有する。一部の態様では、抗体または抗原結合断片は、マウスまたは獣医学的なもの等の非ヒト型である。
ある特定の態様では、免疫調節成分は、ポリヌクレオチドである。これらの態様のうちの一部では、ポリヌクレオチドには、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、アンチセンスＲＮＡまたはアンチセンスＤＮＡ）、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）、ペプチドコンジュゲートホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー（ＰＰＭＯ）、ｓｈＲＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、ｄｓＤＮＡ、及びそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。一部の態様では、ポリヌクレオチドは、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、アンチセンスＲＮＡ）、ｓｈＲＮＡ、またはｌｎｃＲＮＡ）である。これらの態様のうちの一部では、ポリヌクレオチドがｍＲＮＡである場合、それは所望のポリペプチドに翻訳され得る。一部の態様では、ポリヌクレオチドは、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）またはｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ分子である。これらの態様のうちの一部では、ｍｉＲＮＡ分子が標的細胞において天然ｍＲＮＡをサイレンシングすることができるように、ｍｉＲＮＡは、標的細胞の細胞質に送達される。一部の態様では、ポリヌクレオチドは、がん遺伝子または他の調節不全ポリペプチドの発現に干渉することができる低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）または短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）である。これらの態様のうちの一部では、ｓｉＲＮＡ分子が標的細胞において天然ｍＲＮＡをサイレンシングすることができるように、ｓｉＲＮＡは、標的細胞の細胞質に送達される。一部の態様では、ポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡに相補的であるアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、アンチセンスＲＮＡ）である。一部の態様では、ポリヌクレオチドは、遺伝子発現を制御し、疾患を調節することができる長い非コードＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）である。一部の態様では、ポリヌクレオチドは、ＲＮＡに転写され得るＤＮＡである。これらの態様のうちの一部では、転写されたＲＮＡは、所望のポリペプチドに翻訳され得る。
一部の態様では、免疫調節成分は、タンパク質、ペプチド、糖脂質、または糖タンパク質である。
種々の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）組成物は、原子、分子等の混合物、融合体、組み合わせ、及びコンジュゲートを含む、２つ以上の上述の免疫調節成分を含む。一部の態様では、組成物は、細胞外小胞（例えば、エキソソーム）の膜と会合したまたはその囲い込まれた体積内に封入された１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２個の異なる免疫調節成分を含む。ある特定の態様では、組成物は、ポリペプチドと組み合わされた核酸を含む。ある特定の態様では、組成物は、互いにコンジュゲートされた２つ以上のポリペプチドを含む。ある特定の態様では、組成物は、生物学的に活性な分子にコンジュゲートされたタンパク質を含む。これらの態様のうちの一部では、生物学的に活性な分子は、プロドラッグである。
ＩＩ．Ｄ．足場Ｘが操作されたＥＶ、例えばエキソソーム
一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、その組成が修飾された膜を含む。例えば、それらの膜組成は、膜のタンパク質、脂質、またはグリカン含量を変化させることによって修飾され得る。
一部の態様では、表面が操作されたＥＶ、例えばエキソソームは、ＰＥＧ誘導融合及び／または超音波融合等の化学的方法及び／または物理的方法によって生成される。他の態様では、表面が操作されたＥＶ、例えばエキソソームは、遺伝子操作によって生成される。遺伝子改変されたプロデューサー細胞または遺伝子改変された細胞の子孫から産生されたＥＶ、例えばエキソソームは、修飾された膜組成を含有し得る。一部の態様では、表面が操作されたＥＶ、例えばエキソソームは、足場部分（例えば、エキソソームタンパク質、例えば、足場Ｘ）をより高いもしくはより低い密度（例えば、より多い数）で有するか、または足場部分のバリアントもしくは断片を含む。
例えば、表面（例えば、足場Ｘ）が操作されたＥＶは、足場部分（例えば、エキソソームタンパク質、例えば、足場Ｘ）またはそのバリアントもしくは断片をコードする外因性配列で形質転換された細胞（例えば、ＨＥＫ２９３細胞）から産生され得る。外因性配列から発現された足場部分を含むＥＶは、修飾された膜組成を含み得る。
足場部分の種々の修飾体または断片を本発明の態様に使用することができる。例えば、結合剤に対して強化された親和性を有するように修飾された足場部分を、結合剤を使用して精製され得る、表面が操作されたＥＶを生成するために使用することができる。ＥＶ及び／または膜により有効に標的化されるように修飾された足場部分を使用することができる。エキソソーム膜への特異的かつ有効な標的化に必要とされる最小限の断片を含むように修飾された足場部分もまた使用することができる。
足場部分は、融合分子、例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤との足場Ｘの融合分子として発現されるように操作され得る。例えば、融合分子は、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤に連結された、本明細書に開示される足場部分（例えば、足場Ｘ、例えば、ＰＴＧＦＲＮ、ＢＳＧ、ＩＧＳＦ２、ＩＧＳＦ３、ＩＧＳＦ８、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＡ４、ＳＬＣ３Ａ２、ＡＴＰトランスポーター、またはその断片もしくはバリアント）を含み得る。融合分子の場合、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤は、天然のペプチド、組換えペプチド、合成ペプチド、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。
一部の態様では、本明細書に記載の表面（例えば、足場Ｘ）が操作されたＥＶは、当該技術分野で既知のＥＶと比較してより優れた特性を示す。例えば、表面（例えば、足場Ｘ）が操作されたものは、それらの表面上に、天然に存在するＥＶ、または従来のエキソソームタンパク質を使用して生産されたＥＶよりも高度に濃縮された修飾タンパク質を含有する。その上、本発明の表面（例えば、足場Ｘ）が操作されたＥＶは、天然に存在するＥＶ、または従来のエキソソームタンパク質を使用して生産されたＥＶと比較して、より高い、より特異的な、またはより制御された生物学的活性を有し得る。
一部の態様では、足場Ｘは、プロスタグランジンＦ２受容体の負の制御因子（ＰＴＧＦＲＮポリペプチド）を含む。ＰＴＧＦＲＮタンパク質はまた、ＣＤ９パートナー１（ＣＤ９Ｐ－１）、Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｉｌｅ ＥＷＩモチーフ含有タンパク質Ｆ（ＥＷＩ－Ｆ）、プロスタグランジンＦ２－アルファ受容体制御タンパク質、プロスタグランジンＦ２－アルファ受容体関連タンパク質、またはＣＤ３１５とも称され得る。ヒトＰＴＧＦＲＮタンパク質の完全長アミノ酸配列（Ｕｎｉｐｒｏｔ受託番号Ｑ９Ｐ２Ｂ２）は、表７で配列番号１として示される。ＰＴＧＦＲＮポリペプチドは、シグナルペプチド（配列番号１のアミノ酸１～２５）、細胞外ドメイン（配列番号１のアミノ酸２６～８３２）、膜貫通ドメイン（配列番号１のアミノ酸８３３～８５３）、及び細胞質ドメイン（配列番号１のアミノ酸８５４～８７９）を含有する。成熟ＰＴＧＦＲＮポリペプチドは、シグナルペプチドを含めない配列番号１、すなわち、配列番号１のアミノ酸２６～８７９からなる。一部の態様では、本開示に有用なＰＴＧＦＲＮポリペプチド断片は、ＰＴＧＦＲＮポリペプチドの膜貫通ドメインを含む。他の態様では、本開示に有用なＰＴＧＦＲＮポリペプチド断片は、ＰＴＧＦＲＮポリペプチドの膜貫通ドメイン、ならびに（ｉ）膜貫通ドメインのＮ末端に少なくとも５個、少なくとも１０個、少なくとも１５個、少なくとも２０個、少なくとも２５個、少なくとも３０個、少なくとも４０個、少なくとも５０個、少なくとも７０個、少なくとも８０個、少なくとも９０個、少なくとも１００個、少なくとも１１０個、少なくとも１２０個、少なくとも１３０個、少なくとも１４０個、少なくとも１５０個のアミノ酸、（ｉｉ）膜貫通ドメインのＣ末端に少なくとも５個、少なくとも１０個、少なくとも１５個、少なくとも２０個、または少なくとも２５個のアミノ酸、または（ｉ）及び（ｉｉ）の両方を含む。
一部の態様では、ＰＴＧＦＲＮポリペプチドの断片は、ＩｇＶ等の１つまたは複数の機能的または構造的ドメインを欠いている。
他の態様では、足場Ｘは、配列番号１のアミノ酸２６～８７９と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。他の態様では、足場Ｘは、配列番号３３と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。他の態様では、足場Ｘは、１つのアミノ酸変異、２つのアミノ酸変異、３つのアミノ酸変異、４つのアミノ酸変異、５つのアミノ酸変異、６つのアミノ酸変異、または７つのアミノ酸変異を除いて、配列番号３３のアミノ酸配列を含む。変異は、置換、挿入、欠失、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。一部の態様では、足場Ｘは、配列番号３３のアミノ酸配列、ならびに配列番号３３のＮ末端及び／またはＣ末端に１個のアミノ酸、２個のアミノ酸、３個のアミノ酸、４個のアミノ酸、５個のアミノ酸、６個のアミノ酸、７個のアミノ酸、８個のアミノ酸、９個のアミノ酸、１０個のアミノ酸、１１個のアミノ酸、１２個のアミノ酸、１３個のアミノ酸、１４個のアミノ酸、１５個のアミノ酸、１６個のアミノ酸、１７個のアミノ酸、１８個のアミノ酸、１９個のアミノ酸、もしくは２０個のアミノ酸、またはそれよりも長いアミノ酸を含む。
他の態様では、足場Ｘは、配列番号２、３、４、５、６、または７と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。他の態様では、足場Ｘは、１つのアミノ酸変異、２つのアミノ酸変異、３つのアミノ酸変異、４つのアミノ酸変異、５つのアミノ酸変異、６つのアミノ酸変異、または７つのアミノ酸変異を除いて、配列番号２、３、４、５、６、または７のアミノ酸配列を含む。変異は、置換、挿入、欠失、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。一部の態様では、足場Ｘは、配列番号２、３、４、５、６、または７のアミノ酸配列、ならびに配列番号２、３、４、５、６、または７のＮ末端及び／またはＣ末端に１個のアミノ酸、２個のアミノ酸、３個のアミノ酸、４個のアミノ酸、５個のアミノ酸、６個のアミノ酸、７個のアミノ酸、８個のアミノ酸、９個のアミノ酸、１０個のアミノ酸、１１個のアミノ酸、１２個のアミノ酸、１３個のアミノ酸、１４個のアミノ酸、１５個のアミノ酸、１６個のアミノ酸、１７個のアミノ酸、１８個のアミノ酸、１９個のアミノ酸、もしくは２０個のアミノ酸、またはそれよりも長いアミノ酸を含む。
Figure 2022526127000025
Figure 2022526127000026
Figure 2022526127000027
一部の態様では、足場Ｘは、配列番号９によって表される、ベイシジン（ＢＳＧタンパク質）を含む。ＢＳＧタンパク質は、５Ｆ７、コラゲナーゼ刺激因子、細胞外マトリックスメタロプロテイナーゼ誘導物質（ＥＭＭＰＲＩＮ）、白血球活性化抗原Ｍ６、ＯＫ血液型抗原、腫瘍細胞由来コラゲナーゼ刺激因子（ＴＣＳＦ）、またはＣＤ１４７としても知られている。ヒトＢＳＧタンパク質のＵｎｉｐｒｏｔ番号は、Ｐ３５６１３である。ＢＳＧタンパク質のシグナルペプチドは、配列番号９のアミノ酸１～２１である。配列番号９のアミノ酸１３８～３２３は、細胞外ドメインであり、アミノ酸３２４～３４４は、膜貫通ドメインであり、配列番号９のアミノ酸３４５～３８５は、細胞質ドメインである。
他の態様では、足場Ｘは、配列番号９のアミノ酸２２～３８５と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＢＳＧポリペプチドの断片は、ＩｇＶ、例えば、配列番号９のアミノ酸２２１～３１５等の、１つまたは複数の機能的または構造的ドメインを欠いている。他の態様では、足場Ｘは、配列番号１０、１１、または１２と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。他の態様では、足場Ｘは、１つのアミノ酸変異、２つのアミノ酸変異、３つのアミノ酸変異、４つのアミノ酸変異、５つのアミノ酸変異、６つのアミノ酸変異、または７つのアミノ酸変異を除いて、配列番号１０、１１、または１２のアミノ酸配列を含む。変異は、置換、挿入、欠失、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。一部の態様では、足場Ｘは、配列番号１０、１１、または１２のアミノ酸配列、ならびに配列番号１０、１１、または１２のＮ末端及び／またはＣ末端に１個のアミノ酸、２個のアミノ酸、３個のアミノ酸、４個のアミノ酸、５個のアミノ酸、６個のアミノ酸、７個のアミノ酸、８個のアミノ酸、９個のアミノ酸、１０個のアミノ酸、１１個のアミノ酸、１２個のアミノ酸、１３個のアミノ酸、１４個のアミノ酸、１５個のアミノ酸、１６個のアミノ酸、１７個のアミノ酸、１８個のアミノ酸、１９個のアミノ酸、もしくは２０個のアミノ酸、またはそれよりも長いアミノ酸を含む。
一部の態様では、足場Ｘは、免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー８（ＩｇＳＦ８またはＩＧＳＦ８タンパク質）を含み、これはＣＤ８１パートナー３、Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｉｌｅ ＥＷＩモチーフ含有タンパク質２（ＥＷＩ－２）、ケラチノサイト関連膜貫通型タンパク質４（ＫＣＴ－４）、ＬＩＲ－Ｄ１、プロスタグランジン制御様タンパク質（ＰＧＲＬ）、またはＣＤ３１６としても知られている。完全長ヒトＩＧＳＦ８タンパク質は、Ｕｎｉｐｒｏｔにおいて受託番号Ｑ９６９Ｐ０であり、本明細書で配列番号１４として示される。ヒトＩＧＳＦ８タンパク質は、シグナルペプチド（配列番号１４のアミノ酸１～２７）、細胞外ドメイン（配列番号１４のアミノ酸２８～５７９）、膜貫通ドメイン（配列番号１４のアミノ酸５８０～６００）、及び細胞質ドメイン（配列番号１４のアミノ酸６０１～６１３）を有する。
他の態様では、足場Ｘは、配列番号１４のアミノ酸２８～６１３と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＩＧＳＦ８タンパク質は、ＩｇＶ等の１つまたは複数の機能的または構造的ドメインを欠いている。他の態様では、足場Ｘは、配列番号１５、１６、１７、または１８と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。他の態様では、足場Ｘは、１つのアミノ酸変異、２つのアミノ酸変異、３つのアミノ酸変異、４つのアミノ酸変異、５つのアミノ酸変異、６つのアミノ酸変異、または７つのアミノ酸変異を除いて、配列番号１５、１６、１７、または１８のアミノ酸配列を含む。変異は、置換、挿入、欠失、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。一部の態様では、足場Ｘは、配列番号１５、１６、１７、または１８のアミノ酸配列、ならびに配列番号１５、１６、１７、または１８のＮ末端及び／またはＣ末端に１個のアミノ酸、２個のアミノ酸、３個のアミノ酸、４個のアミノ酸、５個のアミノ酸、６個のアミノ酸、７個のアミノ酸、８個のアミノ酸、９個のアミノ酸、１０個のアミノ酸、１１個のアミノ酸、１２個のアミノ酸、１３個のアミノ酸、１４個のアミノ酸、１５個のアミノ酸、１６個のアミノ酸、１７個のアミノ酸、１８個のアミノ酸、１９個のアミノ酸、もしくは２０個のアミノ酸、またはそれよりも長いアミノ酸を含む。
一部の態様では、本開示のための足場Ｘは、免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー３（ＩｇＳＦ３またはＩＧＳＦ３タンパク質）を含み、これはＧｌｕ－Ｔｒｐ－Ｉｌｅ ＥＷＩモチーフ含有タンパク質３（ＥＷＩ－３）としても知られ、配列番号２０のアミノ酸配列として示される。ヒトＩＧＳＦ３タンパク質は、シグナルペプチド（配列番号２０のアミノ酸１～１９）、細胞外ドメイン（配列番号２０のアミノ酸２０～１１２４）、膜貫通ドメイン（配列番号２０のアミノ酸１１２５～１１４５）、及び細胞質ドメイン（配列番号２０のアミノ酸１１４６～１１９４）を有する。
他の態様では、足場Ｘは、配列番号２０のアミノ酸２８～６１３と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＩＧＳＦ３タンパク質は、ＩｇＶ等の１つまたは複数の機能的または構造的ドメインを欠いている。
一部の態様では、本開示のための足場Ｘは、インテグリンベータ１（ＩＴＧＢ１タンパク質）を含み、これは、フィブロネクチン受容体サブユニットベータ、糖タンパク質ＩＩａ（ＧＰＩＩＡ）、ＶＬＡ－４サブユニットベータ、またはＣＤ２９としても知られ、配列番号２１のアミノ酸配列として示される。ヒトＩＴＧＢ１タンパク質は、シグナルペプチド（配列番号２１のアミノ酸１～２０）、細胞外ドメイン（配列番号２１のアミノ酸２１～７２８）、膜貫通ドメイン（配列番号２１のアミノ酸７２９～７５１）、及び細胞質ドメイン（配列番号２１のアミノ酸７５２～７９８）を有する。
他の態様では、足場Ｘは、配列番号２１のアミノ酸２１～７９８と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＩＴＧＢ１タンパク質は、ＩｇＶ等の１つまたは複数の機能的または構造的ドメインを欠いている。
他の態様では、足場Ｘは、ＩＴＧＡ４タンパク質を含み、これは、シグナルペプチド（配列番号２２のアミノ酸１～３３）を含めない配列番号２２と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＩＴＧＡ４タンパク質は、ＩｇＶ等の１つまたは複数の機能的または構造的ドメインを欠いている。
他の態様では、足場Ｘは、ＳＬＣ３Ａ２タンパク質を含み、これは、シグナルペプチドを含めない配列番号２３と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＳＬＣ３Ａ２タンパク質は、ＩｇＶ等の１つまたは複数の機能的または構造的ドメインを欠いている。
他の態様では、足場Ｘは、ＡＴＰ１Ａ１タンパク質を含み、これは、シグナルペプチドを含めない配列番号２４と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＡＴＰ１Ａ１タンパク質は、ＩｇＶ等の１つまたは複数の機能的または構造的ドメインを欠いている。
他の態様では、足場Ｘは、ＡＴＰ１Ａ２タンパク質を含み、これは、シグナルペプチドを含めない配列番号２５と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＡＴＰ１Ａ２タンパク質は、ＩｇＶ等の１つまたは複数の機能的または構造的ドメインを欠いている。
他の態様では、足場Ｘは、ＡＴＰ１Ａ３タンパク質を含み、これは、シグナルペプチドを含めない配列番号２６と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＡＴＰ１Ａ３タンパク質は、ＩｇＶ等の１つまたは複数の機能的または構造的ドメインを欠いている。
他の態様では、足場Ｘは、ＡＴＰ１Ａ４タンパク質を含み、これは、シグナルペプチドを含めない配列番号２７と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＡＴＰ１Ａ４タンパク質は、ＩｇＶ等の１つまたは複数の機能的または構造的ドメインを欠いている。
他の態様では、足場Ｘは、ＡＴＰ１Ａ５タンパク質を含み、これは、シグナルペプチドを含めない配列番号２８と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＡＴＰ１Ａ５タンパク質は、ＩｇＶ等の１つまたは複数の機能的または構造的ドメインを欠いている。
他の態様では、足場Ｘは、ＡＴＰ２Ｂ１タンパク質を含み、これは、シグナルペプチドを含めない配列番号２９と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＡＴＰ２Ｂ１タンパク質は、ＩｇＶ等の１つまたは複数の機能的または構造的ドメインを欠いている。
他の態様では、足場Ｘは、ＡＴＰ２Ｂ２タンパク質を含み、これは、シグナルペプチドを含めない配列番号３０と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＡＴＰ２Ｂ２タンパク質は、ＩｇＶ等の１つまたは複数の機能的または構造的ドメインを欠いている。
他の態様では、足場Ｘは、ＡＴＰ２Ｂ３タンパク質を含み、これは、シグナルペプチドを含めない配列番号３１と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＡＴＰ２Ｂ３タンパク質は、ＩｇＶ等の１つまたは複数の機能的または構造的ドメインを欠いている。
他の態様では、足場Ｘは、ＡＴＰ２Ｂ４タンパク質を含み、これは、シグナルペプチドを含めない配列番号３２と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＡＴＰ２Ｂ４タンパク質は、ＩｇＶ等の１つまたは複数の機能的または構造的ドメインを欠いている。
他の態様では、足場Ｘは、ＩＧＳＦ２タンパク質を含み、これは、シグナルペプチドを含めない配列番号３４と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＩＧＳＦ２タンパク質は、ＩｇＶ等の１つまたは複数の機能的または構造的ドメインを欠いている。
他の足場Ｘタンパク質の非限定的な例は、２０１９年２月５日に発行された米国特許第ＵＳ１０１９５２９０Ｂ１号で見出すことができ、同文献は参照によりその全体が援用される。
一部の態様では、当該配列は、天然タンパク質のＮ末端から少なくとも５個、１０個、５０個、１００個、２００個、３００個、４００個、５００個、６００個、７００個、または８００個のアミノ酸を欠いた足場部分の断片をコードする。一部の態様では、当該配列は、天然タンパク質のＣ末端から少なくとも５個、１０個、５０個、１００個、２００個、３００個、４００個、５００個、６００個、７００個、または８００個のアミノ酸を欠いた足場部分の断片をコードする。一部の態様では、当該配列は、天然タンパク質のＮ末端及びＣ末端の両方から少なくとも５個、１０個、５０個、１００個、２００個、３００個、４００個、５００個、６００個、７００個、または８００個のアミノ酸を欠いた足場部分の断片をコードする。一部の態様では、当該配列は、天然タンパク質の１つまたは複数の機能的または構造的ドメインを欠いた足場部分の断片をコードする。
一部の態様では、足場部分、例えば、足場Ｘ、例えば、ＰＴＧＦＲＮタンパク質は、１つまたは複数の異種タンパク質に連結されている。１つまたは複数の異種タンパク質は、足場部分のＮ末端に連結され得る。１つまたは複数の異種タンパク質は、足場部分のＣ末端に連結され得る。一部の態様では、１つまたは複数の異種タンパク質は、足場部分のＮ末端及びＣ末端の両方に連結されている。一部の態様では、異種タンパク質は、哺乳類タンパク質である。一部の態様では、異種タンパク質は、ヒトタンパク質である。
一部の態様では、足場Ｘを使用して、任意の部分をＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面及び外表面上に同時に連結することができる。例えば、ＰＴＧＦＲＮポリペプチドを使用して、本明細書に開示される１つまたは複数のペイロード（例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤）を、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面に加えて、内腔の内側（例えば、内腔表面上）に連結することができる。したがって、ある特定の態様では、足場Ｘは、二重目的で、例えば、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の抗原及び外表面上のアジュバントもしくは免疫調節剤、ＥＶ、例えばエキソソームの外表面上の抗原及び内腔表面上のアジュバントもしくは免疫調節剤、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上のアジュバント及び外表面上の免疫調節剤、またはＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上の免疫調節剤及び外表面上のアジュバントのために、使用することができる。
ＩＩ．Ｅ．足場Ｙが操作されたＥＶ、例えばエキソソーム
一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、天然に存在するＥＶの内部空間（すなわち、内腔）とは異なる内部空間（すなわち、内腔）を含む。例えば、ＥＶは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面の組成が、天然に存在するエキソソームのタンパク質、脂質、またはグリカン含量とは異なるタンパク質、脂質、またはグリカン含量を有するように、変化させられ得る。
一部の態様では、操作されたＥＶ、例えばエキソソームは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面の組成または含量を変化させる、足場部分（例えば、エキソソームタンパク質、例えば、足場Ｙ）または足場部分の修飾体もしくは断片をコードする外因性配列で形質転換された細胞から産生され得る。ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面上に発現され得る、エキソソームタンパク質の種々の修飾体または断片を本開示の態様に使用することができる。
一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面を変化させることができるエキソソームタンパク質には、ミリストイル化アラニンリッチタンパク質キナーゼＣ基質（ＭＡＲＣＫＳ）タンパク質、ミリストイル化アラニンリッチタンパク質キナーゼＣ基質様１（ＭＡＲＣＫＳＬ１）タンパク質、脳酸可溶性タンパク質１（ＢＡＳＰ１）タンパク質、またはそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
一部の態様では、足場Ｙは、ＭＡＲＣＫＳタンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔ受託番号Ｐ２９９６６）を含む。ＭＡＲＣＫＳタンパク質は、タンパク質キナーゼＣ基質、８０ｋＤａのタンパク質、軽鎖としても知られている。完全長ヒトＭＡＲＣＫＳタンパク質は、長さが３３２アミノ酸であり、アミノ酸残基１５２～１７６にてカルモジュリン結合ドメインを含む。一部の態様では、足場Ｙは、ＭＡＲＣＫＳＬ１タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔ受託番号Ｐ４９００６）を含む。ＭＡＲＣＫＳＬ１タンパク質は、ＭＡＲＣＫＳ様タンパク質１、及びマクロファージミリストイル化アラニンリッチＣキナーゼ基質としても知られている。完全長ヒトＭＡＲＣＫＳＬ１タンパク質は、長さが１９５アミノ酸である。ＭＡＲＣＫＳＬ１タンパク質は、アミノ酸残基８７～１１０にて、脂質結合及びカルモジュリン結合に関与するエフェクタードメインを含む。一部の態様では、足場Ｙは、ＢＡＳＰ１タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔ受託番号Ｐ８０７２３）を含む。ＢＡＳＰ１タンパク質は、２２ｋＤａの神経組織濃縮酸性タンパク質（ｎｅｕｒｏｎａｌ ｔｉｓｓｕｅ－ｅｎｒｉｃｈｅｄ ａｃｉｄｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ）または神経軸索膜タンパク質（ｎｅｕｒｏｎａｌ ａｘｏｎａｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ）ＮＡＰ－２２としても知られている。完全長ヒトＢＡＳＰ１タンパク質配列（異性体１）は、長さが２２７アミノ酸である。選択的スプライシングによって生み出される異性体は、配列番号４９（異性体１）からアミノ酸８８～１４１が欠損している。表８は、本明細書に開示される例となる足場Ｙ（すなわち、ＭＡＲＣＫＳ、ＭＡＲＣＫＳＬ１、及びＢＡＳＰ１タンパク質）の完全長配列を提供する。
Figure 2022526127000028
成熟ＢＡＳＰ１タンパク質配列は、配列番号４９から最初のＭｅｔが欠損しており、故に、配列番号４９のアミノ酸２～２２７を含有する。同様に、成熟ＭＡＲＣＫＳ及びＭＡＲＣＫＳＬ１タンパク質もまた、それぞれ配列番号４７及び４８から最初のＭｅｔを欠いている。したがって、成熟ＭＡＲＣＫＳタンパク質は、配列番号４７のアミノ酸２～３３２を含有する。成熟ＭＡＲＣＫＳＬ１タンパク質は、配列番号４８のアミノ酸２～２２７を含有する。
他の態様では、本開示に有用な足場Ｙは、配列番号４９のアミノ酸２～２２７と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。他の態様では、足場Ｙは、配列番号５０～１５５のうちのいずれか１つと少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。他の態様では、本開示に有用な足場Ｙは、１つのアミノ酸変異、２つのアミノ酸変異、３つのアミノ酸変異、４つのアミノ酸変異、５つのアミノ酸変異、６つのアミノ酸変異、または７つのアミノ酸変異を除いて、配列番号４９のアミノ酸配列を含む。変異は、置換、挿入、欠失、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。一部の態様では、本開示に有用な足場Ｙは、配列番号５０～１５５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、ならびに配列番号５０～１５５のＮ末端及び／またはＣ末端に１個のアミノ酸、２個のアミノ酸、３個のアミノ酸、４個のアミノ酸、５個のアミノ酸、６個のアミノ酸、７個のアミノ酸、８個のアミノ酸、９個のアミノ酸、１０個のアミノ酸、１１個のアミノ酸、１２個のアミノ酸、１３個のアミノ酸、１４個のアミノ酸、１５個のアミノ酸、１６個のアミノ酸、１７個のアミノ酸、１８個のアミノ酸、１９個のアミノ酸、もしくは２０個のアミノ酸、またはそれよりも長いアミノ酸を含む。
一部の態様では、配列番号４７～１５５のうちのいずれかのタンパク質配列が、本開示のための足場Ｙ（例えば、抗原及び／またはアジュバント及び／または免疫調節剤に連結された足場部分）となるのに十分である。
ある特定の態様では、本開示に有用な足場Ｙは、ＭＧＸＫＬＳＫＫＫを有するペプチドを含み、ここで、Ｘは、アラニンまたは任意の他のアミノ酸である（配列番号１６３）。一部の態様では、本開示に有用な足場Ｙは、ＧＸＫＬＳＫＫＫを有するペプチドを含む（Ｓ、ここで、Ｘは、アラニンまたは任意の他のアミノ酸である（配列番号３７２）。一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、（Ｍ）（Ｇ）（π）（ξ）（Φ／π）（Ｓ／Ａ／Ｇ／Ｎ）（＋）（＋）または（Ｇ）（π）（ξ）（Φ／π）（Ｓ／Ａ／Ｇ／Ｎ）（＋）（＋）の配列を有するペプチドを含み、ここで、括弧付きの各位置はアミノ酸を表し、πは、（Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ）からなる群から選択される任意のアミノ酸であり、ξは、（Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ａｒｇ）からなる群から選択される任意のアミノ酸であり、Φは、（Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ）からなる群から選択される任意のアミノ酸であり、（＋）は、（Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ）からなる群から選択される任意のアミノ酸であり、位置５は（＋）ではなく、かつ位置６は（＋）でも（ＡｓｐまたはＧｌｕ）でもない。さらなる態様では、本明細書に記載のエキソソーム（例えば、操作されたエキソソーム）は、（Ｍ）（Ｇ）（π）（Ｘ）（Φ／π）（π）（＋）（＋）または（Ｇ）（π）（Ｘ）（Φ／π）（π）（＋）（＋）の配列を有するペプチドを含み、ここで、括弧付きの各位置はアミノ酸を表し、πは、（Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ）からなる群から選択される任意のアミノ酸であり、Ｘは、任意のアミノ酸であり、Φは、（Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ）からなる群から選択される任意のアミノ酸であり、（＋）は、（Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ）からなる群から選択される任意のアミノ酸であり、位置５は（＋）ではなく、かつ位置６は（＋）でも（ＡｓｐまたはＧｌｕ）でもない。アミノ酸命名法については、Ａａｓｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ５１３（２００２）１４１－１４４を参照されたい。
他の態様では、足場Ｘは、配列番号４７～１５５のうちのいずれか１つと少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の足場Ｙが操作されたＥＶ、例えばエキソソームは、配列番号４７～１５５に定められる配列で形質転換された細胞から産生され得る。
一部の態様では、本開示に有用な足場Ｙタンパク質は、「Ｎ末端ドメイン」（ＮＤ）及び「エフェクタードメイン」（ＥＤ）を含み、該ＮＤ及び／または該ＥＤは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に会合している。一部の態様では、本開示に有用な足場Ｙタンパク質は、細胞内ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞外ドメインを含み、該細胞内ドメインは、「Ｎ末端ドメイン」（ＮＤ）及び「エフェクタードメイン」（ＥＤ）を含み、該ＮＤ及び／または該ＥＤは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に会合している。本明細書で使用されるとき、「～に会合する」という用語は、膜構成成分への共有結合性の連結を伴わない、足場タンパク質と、ＥＶ、例えば、及びエキソソームの内腔表面との間の相互作用を指す。例えば、本開示に有用な足場は、例えば、脂質アンカー（例えば、ミリスチン酸）、及び／または負に帯電した膜リン脂質の頭部と静電的に相互作用する多塩基性ドメインを介して、ＥＶの内腔表面に会合し得る。他の態様では、足場Ｙタンパク質は、Ｎ末端ドメイン（ＮＤ）及びエフェクタードメイン（ＥＤ）を含み、該ＮＤは、ＥＶの内腔表面に会合しており、該ＥＤは、イオン性相互作用によってＥＶの内腔表面に会合しており、該ＥＤは、連続的に少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、または少なくとも７つの連続した塩基性アミノ酸、例えば、リジン（Ｌｙｓ）を含む。
他の態様では、足場Ｙタンパク質は、Ｎ末端ドメイン（ＮＤ）及びエフェクタードメイン（ＥＤ）を含み、該ＮＤは、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に会合しており、該ＥＤは、イオン性相互作用によってＥＶの内腔表面に会合しており、該ＥＤは、連続的に少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、または少なくとも７つの連続した塩基性アミノ酸、例えば、リジン（Ｌｙｓ）を含む。
一部の態様では、ＮＤは、脂質化を介して、例えば、ミリストイル化を介して、ＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に会合している。一部の態様では、ＮＤは、Ｎ末端にＧｌｙを有する。一部の態様では、Ｎ末端のＧｌｙは、ミリストイル化されている。
一部の態様では、ＥＤは、イオン性相互作用によってＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に会合している。一部の態様では、ＥＤは、静電相互作用、特に引力静電相互作用によってＥＶ、例えばエキソソームの内腔表面に会合している。
一部の態様では、ＥＤは、ポリペプチド配列内に（ｉ）ある塩基性アミノ酸（例えば、リジン）、または（ｉｉ）互いに隣り合った２つ以上の塩基性アミノ酸（例えば、リジン）を含む。一部の態様では、塩基性アミノ酸は、リジン（Ｌｙｓ；Ｋ）、アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）、またはヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）である。一部の態様では、塩基性アミノ酸は、（Ｌｙｓ）ｎであり、ここで、ｎは、１～１０の整数である。
他の態様では、ＥＤのＮ末端がＮＤのＣ末端におけるリジンに直接的に連結されている場合、ＥＤは、少なくとも１つのリジン（ａｔ ｌｅａｓｔ ａ ｌｙｓｉｎｅ）を含み、ＮＤは、Ｃ末端にリジンを含み、すなわち、該リジンは、ＥＤのＮ末端にあり、ＮＤのＣ末端におけるリジンに融合されている。他の態様では、ＥＤのＮ末端が、リンカー、例えば、１つまたは複数のアミノ酸によってＮＤのＣ末端に連結されている場合、ＥＤは、少なくとも２つのリジン、少なくとも３つのリジン、少なくとも４つのリジン、少なくとも５つのリジン、少なくとも６つのリジン、または少なくとも７つのリジンを含む。
一部の態様では、ＥＤは、Ｋ、ＫＫ、ＫＫＫ、ＫＫＫＫ（配列番号２０５）、ＫＫＫＫＫ（配列番号２０６）、Ｒ、ＲＲ、ＲＲＲ、ＲＲＲＲ（配列番号２０７）；ＲＲＲＲＲ（配列番号２０８）、ＫＲ、ＲＫ、ＫＫＲ、ＫＲＫ、ＲＫＫ、ＫＲＲ、ＲＲＫ、（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（配列番号２０９）、（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（配列番号２１０）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。一部の態様では、ＥＤは、ＫＫ、ＫＫＫ、ＫＫＫＫ（配列番号２０５）、ＫＫＫＫＫ（配列番号２０６）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。一部の態様では、ＮＤは、Ｇ：Ｘ２：Ｘ３：Ｘ４：Ｘ５：Ｘ６に定められるようなアミノ酸配列を含み、ここで、Ｇは、Ｇｌｙを表し、「：」は、ペプチド結合を表し、Ｘ２～Ｘ６の各々は独立して、アミノ酸を表し、Ｘ６は、塩基性アミノ酸を表す。一部の態様では、Ｘ６アミノ酸は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、及びＨｉｓからなる群から選択される。一部の態様では、Ｘ５アミノ酸は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択される。一部の態様では、Ｘ２アミノ酸は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択される。一部の態様では、Ｘ４は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｇｌｎ、及びＭｅｔからなる群から選択される。
一部の態様では、足場Ｙタンパク質は、Ｎ末端ドメイン（ＮＤ）及びエフェクタードメイン（ＥＤ）を含み、該ＮＤは、Ｇ：Ｘ２：Ｘ３：Ｘ４：Ｘ５：Ｘ６（ここで、Ｇは、Ｇｌｙを表し、「：」は、ペプチド結合を表し、Ｘ２～Ｘ６の各々は独立して、アミノ酸であり、Ｘ６は、塩基性アミノ酸を含む）に定められるようなアミノ酸配列を含み、該ＥＤは、ペプチド結合によってＸ６に連結されており、該ＥＤのＮ末端に少なくとも１つのリジンを含む。
一部の態様では、足場Ｙタンパク質のＮＤは、Ｇ：Ｘ２：Ｘ３：Ｘ４：Ｘ５：Ｘ６のアミノ酸配列を含み、ここで、Ｇは、Ｇｌｙを表し、「：」は、ペプチド結合を表し、Ｘ２は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択されるアミノ酸を表し、Ｘ３は、任意のアミノ酸を表し、Ｘ４は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｇｌｎ、及びＭｅｔからなる群から選択されるアミノ酸を表し、Ｘ５は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択されるアミノ酸を表し、Ｘ６は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、及びＨｉｓからなる群から選択されるアミノ酸を表す。
一部の態様では、Ｘ３アミノ酸は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、及びＡｒｇからなる群から選択される。
一部の態様では、ＮＤ及びＥＤは、リンカーによって結合している。一部の態様では、リンカーは、１つまたは複数のアミノ酸を含む。一部の態様では、「リンカー」という用語は、ペプチドもしくはポリペプチド配列（例えば、合成ペプチドまたはポリペプチド配列）、または非ポリペプチド、例えば、アルキル鎖を指す。一部の態様では、２つ以上のリンカーがタンデムで連結され得る。一般に、リンカーは、柔軟性を提供するか、または立体障害を阻止／改善する。リンカーは典型的には切断されないが、ある特定の態様では、かかる切断が望ましい場合がある。したがって、一部の態様では、リンカーは、プロテアーゼにより切断可能な１つまたは複数の部位を含むことができ、これらの部位は、リンカーの配列内に位置し得るか、またはリンカー配列のそれぞれの末端でリンカーに隣接し得る。ＮＤ及びＥＤがリンカーによって結合している場合、ＥＤは、少なくとも２つのリジン、少なくとも３つのリジン、少なくとも４つのリジン、少なくとも５つのリジン、少なくとも６つのリジン、または少なくとも７つのリジンを含む。
一部の態様では、リンカーは、ペプチドリンカーである。一部の態様では、ペプチドリンカーは、少なくとも約２個、少なくとも約３個、少なくとも約４個、少なくとも約５個、少なくとも約１０個、少なくとも約１５個、少なくとも約２０個、少なくとも約２５個、少なくとも約３０個、少なくとも約３５個、少なくとも約４０個、少なくとも約４５個、少なくとも約５０個、少なくとも約５５個、少なくとも約６０個、少なくとも約６５個、少なくとも約７０個、少なくとも約７５個、少なくとも約８０個、少なくとも約８５個、少なくとも約９０個、少なくとも約９５個、または少なくとも約１００個のアミノ酸を含み得る。
一部の態様では、リンカーは、グリシン／セリンリンカーである。一部の態様では、ペプチドリンカーは、式［（Ｇｌｙ）ｎ－Ｓｅｒ］ｍによるグリシン／セリンリンカーであり、式中、ｎは、１～１００の任意の整数であり、ｍは、１～１００の任意の整数である。他の態様では、グリシン／セリンリンカーは、式［（Ｇｌｙ）ｘ－Ｓｅｒｙ］ｚによるものであり、式中、ｘは、１～４の整数であり、ｙは、０または１であり、ｚは、１～５０の整数である。一部の態様では、ペプチドリンカーは、配列Ｇｎを含み、式中、ｎは、１～１００の整数であり得る。一部の態様では、ペプチドリンカーは、配列（ＧｌｙＡｌａ）ｎを含み得、式中、ｎは、１～１００の整数である。他の態様では、ペプチドリンカーは、配列（ＧｌｙＧｌｙＳｅｒ）ｎを含み得、式中、ｎは、１～１００の整数である。
一部の態様では、ペプチドリンカーは、合成であり、すなわち、天然に存在しない。一態様では、ペプチドリンカーは、アミノ酸の第１の直鎖状配列を、それが自然界で天然には連結または遺伝的に融合されないアミノ酸の第２の直鎖状配列に連結または遺伝的に融合するアミノ酸配列を含む、ペプチド（またはポリペプチド）（例えば、天然のまたは天然に存在しないペプチド）を含む。例えば、一態様では、ペプチドリンカーは、天然に存在するポリペプチドの修飾形態である（例えば、付加、置換、または欠失等の変異を含む）天然に存在しないポリペプチドを含み得る。
他の態様では、ペプチドリンカーは、天然に存在しないアミノ酸を含み得る。なおも他の態様では、ペプチドリンカーは、自然界では存在しない直鎖状配列で存在する、天然に存在するアミノ酸を含み得る。依然として他の態様では、ペプチドリンカーは、天然に存在するポリペプチド配列を含み得る。
本開示はまた、足場Ｙタンパク質に連結された生物学的に活性な分子（例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤）を含む、単離された細胞外小胞（ＥＶ）、例えばエキソソームも提供し、該足場Ｙタンパク質は、ＮＤ－ＥＤを含み、ここで、ＮＤは、Ｇ：Ｘ２：Ｘ３：Ｘ４：Ｘ５：Ｘ６（ここで、Ｇは、Ｇｌｙを表し、「：」は、ペプチド結合を表し、Ｘ２は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択されるアミノ酸を表し、Ｘ３は、任意のアミノ酸を表し、Ｘ４は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｇｌｕ、及びＭｅｔからなる群から選択されるアミノ酸を表し、Ｘ５は、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択されるアミノ酸を表し、Ｘ６は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、及びＨｉｓからなる群から選択されるアミノ酸を表す）を含み、「－」は、任意選択的なリンカーを表し、ＥＤは、（ｉ）ペプチド結合または１つもしくは複数のアミノ酸によってＸ６に連結されている少なくとも２つの連続したリジン（Ｌｙｓ）、または（ｉｉ）ペプチド結合によってＸ６に直接的に連結されている少なくとも１つのリジンを含む、エフェクタードメインである。
一部の態様では、Ｘ２アミノ酸は、Ｇｌｙ及びＡｌａからなる群から選択される。一部の態様では、Ｘ３アミノ酸は、Ｌｙｓである。一部の態様では、Ｘ４アミノ酸は、ＬｅｕまたはＧｌｕである。一部の態様では、Ｘ５アミノ酸は、Ｓｅｒ及びＡｌａからなる群から選択される。一部の態様では、Ｘ６アミノ酸は、Ｌｙｓである。一部の態様では、Ｘ２アミノ酸は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、またはＳｅｒであり、Ｘ３アミノ酸は、ＬｙｓまたはＧｌｕであり、Ｘ４アミノ酸は、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、またはＧｌｕであり、Ｘ５アミノ酸は、ＳｅｒまたはＡｌａであり、Ｘ６アミノ酸は、Ｌｙｓである。一部の態様では、「－」リンカーは、ペプチド結合または１つもしくは複数のアミノ酸を含む。
一部の態様では、足場タンパク質におけるＥＤは、Ｌｙｓ（Ｋ）、ＫＫ、ＫＫＫ、ＫＫＫＫ（配列番号２０５）、ＫＫＫＫＫ（配列番号２０６）、Ａｒｇ（Ｒ）、ＲＲ、ＲＲＲ、ＲＲＲＲ（配列番号２０７）；ＲＲＲＲＲ（配列番号２０８）、ＫＲ、ＲＫ、ＫＫＲ、ＫＲＫ、ＲＫＫ、ＫＲＲ、ＲＲＫ、（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（配列番号２０９）、（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（配列番号２１０）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
一部の態様では、足場Ｙタンパク質は、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫ（配列番号２１１）、（ｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫ（配列番号２１２）、（ｉｉｉ）ＧＧＫＱＳＫＫ（配列番号２１３）、（ｉｖ）ＧＧＫＬＡＫＫ（配列番号２１４）、または（ｖ）それらの任意の組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
一部の態様では、足場Ｙタンパク質におけるＮＤは、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫ（配列番号２１５）、（ｉｉ）ＧＡＫＬＳＫ（配列番号２１６）、（ｉｉｉ）ＧＧＫＱＳＫ（配列番号２１７）、（ｉｖ）ＧＧＫＬＡＫ（配列番号２１８）、または（ｖ）それらの任意の組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、足場タンパク質におけるＥＤは、Ｋ、ＫＫ、ＫＫＫ、ＫＫＫＧ（配列番号２１９）、ＫＫＫＧＹ（配列番号２２０）、ＫＫＫＧＹＮ（配列番号２２１）、ＫＫＫＧＹＮＶ（配列番号２２２）、ＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号２２３）、ＫＫＫＧＹＳ（配列番号２２４）、ＫＫＫＧＹＧ（配列番号２２５）、ＫＫＫＧＹＧＧ（配列番号２２６）、ＫＫＫＧＳ（配列番号２２７）、ＫＫＫＧＳＧ（配列番号２２８）、ＫＫＫＧＳＧＳ（配列番号２２９）、ＫＫＫＳ（配列番号２３０）、ＫＫＫＳＧ（配列番号２３１）、ＫＫＫＳＧＧ（配列番号２３２）、ＫＫＫＳＧＧＳ（配列番号２３３）、ＫＫＫＳＧＧＳＧ（配列番号２３４）、ＫＫＳＧＧＳＧＧ（配列番号２３５）、ＫＫＫＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号２３６）、ＫＲＦＳＦＫＫＳ（配列番号２３７）を含む。
一部の態様では、本開示に有用な足場Ｙタンパク質のポリペプチド配列は、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫ（配列番号２１１）、（ｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫ（配列番号２１２）、（ｉｉｉ）ＧＧＫＱＳＫＫ（配列番号２１３）、（ｉｖ）ＧＧＫＬＡＫＫ（配列番号２１４）、または（ｖ）それらの任意の組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸配列からなる。
一部の態様では、足場Ｙタンパク質は、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫ（配列番号２３８）、（ｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＳ（配列番号２３９）、（ｉｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫＫ（配列番号２４０）、（ｉｖ）ＧＡＫＬＳＫＫＳ（配列番号２４１）、（ｖ）ＧＧＫＱＳＫＫＫ（配列番号２４２）、（ｖｉ）ＧＧＫＱＳＫＫＳ（配列番号２４３）、（ｖｉｉ）ＧＧＫＬＡＫＫＫ（配列番号２４４）、（ｖｉｉｉ）ＧＧＫＬＡＫＫＳ（配列番号２４５）、及び（ｉｘ）それらの任意の組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
一部の態様では、本開示に有用な足場Ｙタンパク質のポリペプチド配列は、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫ（配列番号２３８）、（ｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＳ（配列番号２３９）、（ｉｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫＫ（配列番号２４０）、（ｉｖ）ＧＡＫＬＳＫＫＳ（配列番号２４１）、（ｖ）ＧＧＫＱＳＫＫＫ（配列番号２４２）、（ｖｉ）ＧＧＫＱＳＫＫＳ（配列番号２４３）、（ｖｉｉ）ＧＧＫＬＡＫＫＫ（配列番号２４４）、（ｖｉｉｉ）ＧＧＫＬＡＫＫＳ（配列番号２４５）、及び（ｉｘ）それらの任意の組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸配列からなる。
一部の態様では、足場Ｙタンパク質は、長さが少なくとも約８、少なくとも約９、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約１６、少なくとも約１７、少なくとも約１８、少なくとも約１９、少なくとも約２０、少なくとも約２１、少なくとも約２２、少なくとも約２３、少なくとも約２４、少なくとも約２５、少なくとも約２６、少なくとも約２７、少なくとも約２８、少なくとも約２９、少なくとも約３０、少なくとも３１、少なくとも約３２、少なくとも約３３、少なくとも約３４、少なくとも約３５、少なくとも約３６、少なくとも約３７、少なくとも約３８、少なくとも約３９、少なくとも約３９、少なくとも約４０、少なくとも約４１、少なくとも約４２、少なくとも約４３、少なくとも約４４、少なくとも約５０、少なくとも約４６、少なくとも約４７、少なくとも約４８、少なくとも約４９、少なくとも約５０、少なくとも約５５、少なくとも約６０、少なくとも約６５、少なくとも約７０、少なくとも約７５、少なくとも約８０、少なくとも８５、少なくとも約９０、少なくとも約９５、少なくとも約１００、少なくとも約１０５、少なくとも約１１０、少なくとも約１１５、少なくとも約１２０、少なくとも約１２５、少なくとも約１３０、少なくとも約１３５、少なくとも約１４０、少なくとも約１４５、少なくとも約１５０、少なくとも約１５５、少なくとも約１６０、少なくとも約１６５、少なくとも約１７０、少なくとも約１７５、少なくとも約１８０、少なくとも約１８５、少なくとも約１９０、少なくとも約１９５、少なくとも約２００、少なくとも約２０５、少なくとも約２１０、少なくとも約２１５、少なくとも約２２０、少なくとも約２２５、少なくとも約２３０、少なくとも約２３５、少なくとも約２４０、少なくとも約２４５、少なくとも約２５０、少なくとも約２５５、少なくとも約２６０、少なくとも約２６５、少なくとも約２７０、少なくとも約２７５、少なくとも約２８０、少なくとも約２８５、少なくとも約２９０、少なくとも約２９５、少なくとも約３００、少なくとも約３０５、少なくとも約３１０、少なくとも約３１５、少なくとも約３２０、少なくとも約３２５、少なくとも約３３０、少なくとも約３３５、少なくとも約３４０、少なくとも約３４５、または少なくとも約３５０アミノ酸である。
一部の態様では、足場Ｙタンパク質は、長さが約５～約１０、約１０～約２０、約２０～約３０、約３０～約４０、約４０～約５０、約５０～約６０、約６０～約７０、約７０～約８０、約８０～約９０、約９０～約１００、約１００～約１１０、約１１０～約１２０、約１２０～約１３０、約１３０～約１４０、約１４０～約１５０、約１５０～約１６０、約１６０～約１７０、約１７０～約１８０、約１８０～約１９０、約１９０～約２００、約２００～約２１０、約２１０～約２２０、約２２０～約２３０、約２３０～約２４０、約２４０～約２５０、約２５０～約２６０、約２６０～約２７０、約２７０～約２８０、約２８０～約２９０、約２９０～約３００、約３００～約３１０、約３１０～約３２０、約３２０～約３３０、約３３０～約３４０、または約３４０～約２５０アミノ酸である。
一部の態様では、足場Ｙタンパク質は、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号２４６）、（ｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号２４７）、（ｉｉｉ）ＧＧＫＱＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号２４８）、（ｉｖ）ＧＧＫＬＡＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号２４９）、（ｖ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＳＧＧ（配列番号２５０）、（ｖｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＳＧＧＳ（配列番号２５１）、（ｖｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＳＧＧＳＧ（配列番号２５２）、（ｖｉｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＳＧＧＳＧＧ（配列番号２５３）、（ｉｘ）ＧＧＫＬＳＫＫＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号２５４）、（ｘ）ＧＧＫＬＳＫＳＧＧＳＧＧＳＶ（配列番号２５５）、または（ｘｉ）ＧＡＫＫＳＫＫＲＦＳＦＫＫＳ（配列番号２５６）を含む。
一部の態様では、本開示に有用な足場Ｙタンパク質のポリペプチド配列は、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号２４６）、（ｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号２４７）、（ｉｉｉ）ＧＧＫＱＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号２４８）、（ｉｖ）ＧＧＫＬＡＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号２４９）、（ｖ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＳＧＧ（配列番号２５０）、（ｖｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＳＧＧＳ（配列番号２５１）、（ｖｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＳＧＧＳＧ（配列番号２５２）、（ｖｉｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＳＧＧＳＧＧ（配列番号２５３）、（ｉｘ）ＧＧＫＬＳＫＫＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号２５４）、（ｘ）ＧＧＫＬＳＫＳＧＧＳＧＧＳＶ（配列番号２５５）、または（ｘｉ）ＧＡＫＫＳＫＫＲＦＳＦＫＫＳ（配列番号２５６）からなる。
本開示に有用な足場Ｙタンパク質の非限定的な例は、下記に列挙される。一部の態様では、足場Ｙタンパク質は、表９に定められるアミノ酸配列を含む。一部の態様では、足場Ｙタンパク質は、表９に定められるアミノ酸配列からなる。
Figure 2022526127000029
Figure 2022526127000030
Figure 2022526127000031
一部の態様では、本開示に有用な足場Ｙタンパク質は、Ｎ末端のＭｅｔを含有しない。一部の態様では、足場Ｙタンパク質は、足場タンパク質のＮ末端に、脂質アンカーとして機能する脂質化アミノ酸、例えば、ミリストイル化アミノ酸を含む。一部の態様では、足場タンパク質のＮ末端におけるアミノ酸残基は、Ｇｌｙである。Ｎ末端のＧｌｙの存在は、Ｎ－ミリストイル化のための絶対条件である。一部の態様では、足場タンパク質のＮ末端におけるアミノ酸残基は、合成である。一部の態様では、足場タンパク質のＮ末端におけるアミノ酸残基は、グリシン類似体、例えば、アリルグリシン、ブチルグリシン、またはプロパルギルグリシンである。
他の態様では、脂質アンカーは、当該技術分野で既知の任意の脂質アンカー、例えば、パルミチン酸またはグリコシルホスファチジルイノシトールであり得る。例えば、ミリスチン酸が制限される培養液を使用することによる、特殊な状況下では、短鎖脂肪酸及び不飽和脂肪酸を含む何らかの他の脂肪酸を、Ｎ末端グリシンに結合させることができる。例えば、ＢＫチャネルにおいて、ミリステートが、ヒドロキシエステル結合を介して内部セリン／トレオニンまたはチロシン残基に翻訳後に結合させられることが報告されている。当該技術分野で既知の膜アンカーが、以下の表に提示される。
Figure 2022526127000032
ＩＩ．Ｆ．コンジュゲートされたＥＶ（例えば、エキソソーム）
抗体とは異なり、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、例えば１つのＥＶ（例えば、エキソソーム）当たりおよそ数千から数万個の分子である、多数の分子をそれらの表面に結合させて受け入れることができる。故に、ＥＶ（例えば、エキソソーム）－薬物コンジュゲートは、高濃度の治療用化合物を個別的な細胞種に送達しながら、同時に化合物への全体的な全身曝露を制限することにより、ひいてはオフターゲット毒性を低減する、プラットフォームを表す。
本開示は、遊離チオール基を含む第１の分子実体を、マレイミド基を含む第２の分子実体と反応させることによって操作されたＥＶ、例えばエキソソームを提供し、該マレイミド部分は、図３１に提示されるように、マレイミド部分を介して第１の分子実体を第２の分子実体と共有結合性で連結する。
マレイミド部分を介してＥＶ（例えば、エキソソーム）に結合させることができる生物学的に活性な分子の非限定的な例としては、ヌクレオチド（例えば、検出可能な部分もしくは毒素を含む、または転写を妨害するヌクレオチド）、核酸（例えば、酵素等のポリペプチドをコードするＤＮＡもしくはｍＲＮＡ分子、またはｍｉＲＮＡ、ｄｓＤＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、もしくはｓｉＲＮＡ等の制御機能を有するＲＮＡ分子）、モルホリノ、アミノ酸（例えば、検出可能な部分または翻訳を妨害する毒素を含むアミノ酸）、ポリペプチド（例えば、酵素）、脂質、炭水化物、低分子（例えば、低分子薬及び毒素）、抗原（例えば、ワクチン抗原）、アジュバント（例えば、ワクチンアジュバント）等といった薬剤が挙げられる。
一部の態様では、本開示のＥＶ（例えば、エキソソーム）は、１つよりも多くの種類の生物学的に活性な分子を含み得る。一部の態様では、生物学的に活性な分子は、例えば、環状ジヌクレオチド等の低分子、アウリスタチン（例えば、モノエチルアウリスタチンＥ、ＭＭＡＥ）等の毒素、抗体（例えば、裸の抗体または抗体－薬物コンジュゲート）、ＳＴＩＮＧアゴニスト、寛容化剤、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ＰＲＯＴＡＣ、モルホリノ、リゾホスファチジン酸受容体アンタゴニスト（例えば、ＬＰＡ１アンタゴニスト）、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。一部の態様では、本開示のＥＶ（例えば、エキソソーム）は、例えば、ワクチン抗原及び任意選択でワクチンアジュバントを含み得る。一部の態様では、本開示のＥＶ（例えば、エキソソーム）は、治療的ペイロード（例えば、ＳＴＩＮＧ、または下記に開示される１つのペイロード）ならびに標的化部分及び／または指向性部分を含み得る。
したがって、一部の態様では、本開示は、図３１に提示されるような分子実体を提供し、ここで、ＥＶ（例えば、エキソソーム）、またはポリペプチド（例えば、足場Ｘタンパク質またはその断片）、脂質、リポタンパク質、糖タンパク質、もしくはＥＶ（例えば、エキソソーム）上に位置する天然に存在するもしくは天然に存在しないタンパク質の任意のバリアントもしくは誘導体等のその任意の分子構成成分は、マレイミド部分を介して、生物学的に活性な分子、例えば、治療的ペイロード、標的化部分、指向性部分、またはそれらの任意の組み合わせに化学的に連結され得る。図３１に図示されるように、一部の態様では、スルフヒドリル（チオール）基を含むＥＶ（例えば、エキソソーム）またはその分子構成成分は、生物学的に活性な部分に結合しているマレイミド基と反応することができる。他の態様では、マレイミド基を含むＥＶ（例えば、エキソソーム）またはその分子構成成分は、生物学的に活性な部分に存在するスルフヒドリル（チオール）基と反応することができる。いずれの場合も、最終生成物は、チオエーテル結合を介してＥＶ（例えば、エキソソーム）に化学的に結合している生物学的に活性な分子である。
ＩＩ．Ｇ．マレイミド部分
上述したように、一部の態様では、本開示とともに使用することができるリンカーは、マレイミド部分を含み得る（すなわち、「マレイミドリンカー」）。リンカーは、当該技術分野で既知の技法（例えば、化学的コンジュゲーション、組換え技法、またはペプチド合成）を使用して、マレイミド部分に導入され得る。一部の態様では、リンカーは、組換え技法を使用して導入され得る。他の態様では、リンカーは、固相ペプチド合成を使用して導入され得る。ある特定の態様では、本明細書に開示されるマレイミド部分は、当該技術分野で既知の組換え技法を使用して導入された１つまたは複数のリンカー、及び固相ペプチド合成または化学的コンジュゲーション法を使用して導入された１つまたは複数のリンカーを同時に含有し得る。
したがって、一部の態様では、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）は、１つまたは複数のペイロード（例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤）を含み得、ここで、ペイロードのうちの１つまたは複数が、マレイミドリンカーを介してＥＶに結合している。ある特定の態様では、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）は、１つまたは複数の標的化部分をさらに含み得、ここで、標的化部分のうちの１つまたは複数が、マレイミドリンカーを介してＥＶに結合している。本明細書に記載されるように、一部の態様では、ペイロードのうちの１つもしくは複数及び／または標的化部分のうちの１つもしくは複数が、足場部分（例えば、足場Ｘ及び／または足場Ｙ）を介してＥＶ（例えば、エキソソーム）に連結されている。ある特定の態様では、ペイロードのうちの１つもしくは複数及び／または標的化部分のうちの１つもしくは複数が、マレイミド部分を介して足場部分に共有結合性で結合している。一部の態様では、足場部分は、足場Ｘ及び／または足場Ｙを含む。本開示とともに使用することができる他の足場部分の非限定的な例としては、アミノペプチダーゼＮ（ＣＤ１３）；ネプリライシン（膜メタロエンドペプチダーゼ；ＭＭＥ）；エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼファミリーメンバー１（ＥＮＰＰ１）；ニューロピリン－１（ＮＲＰ１）；ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＰＤＧＦＲ、ＧＰＩアンカータンパク質、ラクトアドヘリン、ＬＡＭＰ２、及びＬＡＭＰ２Ｂ、それらの断片、ならびにそれらの任意の組み合わせが挙げられる。
本明細書で使用されるとき、「マレイミド部分」または「ＭＭ」という用語は、ＥＶ、例えばエキソソームをリンカーまたは生物学的に活性な分子に連結する二官能性化学部分を指し、また下記のマレイミド基を含み、
Figure 2022526127000033
 ここで、＊は、ＥＶ、例えばエキソソーム上の任意のチオール基（例えば、足場Ｘタンパク質に存在する遊離チオール）への結合点を示し、波線は、マレイミド部分の残部への結合部位を示す。一部の態様では、＊は、ペイロード及び／または標的化部分上の任意のチオール基への結合点を示し、波線は、ＥＶ、例えばエキソソーム（例えば、足場Ｘ）へのマレイミド部分の残部への結合部位を示す。
一部の態様では、マレイミド部分は、ＥＶ（例えば、エキソソーム）に結合している硫黄原子、例えば、チオール基に天然に存在する硫黄原子または化学修飾を介してもしくは変異を介して導入された硫黄原子に結合する。
一部の態様では、マレイミド部分は、式（Ｉ）を有し、
Figure 2022526127000034
 式中、
（ｉ）Ｒ１は、－Ｃ１－１０アルキレン－、－Ｃ３－８カルボシクロ－、－Ｏ－（Ｃ１－８アルキレン）－、－アリーレン－、－Ｃ１－１０アルキレン－アリーレン－、－アリーレン－Ｃ１－１０アルキレン－、－Ｃ１－１０アルキレン－（Ｃ３－８カルボシクロ）－、－（Ｃ３－８カルボシクロ）－Ｃ１－１０アルキレン－、－Ｃ３－８ヘテロシクロ－、－Ｃ１－１０アルキレン－（Ｃ３－８ヘテロシクロ）－、－（Ｃ３－８ヘテロシクロ）－Ｃ１－１０アルキレン－、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ－、及び－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ－ＣＨ２－からなる群から選択され、
（ｉｉ）ｒは、例えば、１～１０の整数であり、
（ｉｉｉ）＊は、任意の利用可能な反応性硫黄原子、例えば、ＥＶ（例えば、エキソソーム）上に存在するチオール基における硫黄への結合点を示し、
（ｉｖ）波線は、生物学的に活性な分子（すなわち、ペイロード）へのマレイミド部分の結合部位を示す。
一部の態様では、Ｒ１は、－Ｃ１－８アルキレン－、－Ｃ３－６カルボシクロ－、－Ｏ－（Ｃ１－６アルキレン）－、－アリーレン－、－Ｃ１－８アルキレン－アリーレン－、－アリーレン－Ｃ１－８アルキレン－、－Ｃ１－８アルキレン－（Ｃ３－６カルボシクロ）－、－（Ｃ３－６カルボシクロ）－Ｃ１－８アルキレン－、－Ｃ３－６ヘテロシクロ－、－Ｃ１－８アルキレン－（Ｃ３－６ヘテロシクロ）－、－（Ｃ３－６ヘテロシクロ）－Ｃ１－８アルキレン－、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ－、及び－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ－ＣＨ２－であり、ここで、ｒは、例えば、１～１０の整数である。
一部の態様では、Ｒ１は、－（ＣＨ２）ｓ－、シクロペンチル、シクロヘキシル、－Ｏ－（ＣＨ２）ｓ－、－フェニル－、－ＣＨ２－フェニル－、－フェニル－ＣＨ２－、－ＣＨ２－シクロペンチル－、－シクロペンチル－ＣＨ２－、－ＣＨ２－シクロヘキシル－、－シクロヘキシル－ＣＨ２－、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ－、及び－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ－ＣＨ２－であり、ここで、ｒは、例えば、１～６の整数である。
一部の態様では、Ｒ１は、－（ＣＨ２）ｓ－であり、ここで、ｓは、例えば、４、５、または６である。
一部の態様では、マレイミド部分は、式（ＩＩ）を有し、式中、Ｒ１は、－（ＣＨ２）５－である。
Figure 2022526127000035
一部の態様では、マレイミド部分は、式（ＩＩＩ）を有し、式中、Ｒ１は、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ－ＣＨ２－であり、ここで、ｒは、２である。
Figure 2022526127000036
一部の態様では、マレイミド部分は、ＥＶ（例えば、エキソソーム）上に存在する官能基に共有結合性で連結され、該官能基は、スルフヒドリル（チオール）基である。一態様では、スルフヒドリル基は、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の表面上のタンパク質、例えば、足場Ｘ、またはそのバリアント上にある。例えば、一部の態様では、スルフヒドリル基は、チオール脂質、例えば、コレステロール－ＳＨ、ＤＳＰＥ－ＳＨ、またはその誘導体、例えば、コレステロール－ＰＥＧ－ＳＨまたはＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＳＨ上に存在し得る。
一部の態様では、マレイミド部分は、マレイミド部分を提供するように化学的に誘導体化された、ＥＶ（例えば、エキソソーム）上に存在する官能基に共有結合性で連結されている。例えば、ある特定の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）上に存在するアミン官能基（例えば、リジンもしくはアルギニンの側鎖上のアミン、またはタンパク質の末端アミン基）が、スクシンイミド部分及びマレイミド部分を含む二官能性試薬で誘導体化され得る。
一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）上に存在するカルボキシル官能基（例えば、グルタミン酸もしくはアスパラギン酸の側鎖上のカルボキシル、またはタンパク質の末端カルボキシル基）が、イソシアネート部分及びマレイミド部分を含む二官能性試薬で誘導体化され得る。なおも他の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）上に存在するカルボニル（酸化された炭水化物）が、ヒドラジン部分及びマレイミド部分を含む二官能性試薬で誘導体化され得る。
一般に、本明細書に提供される本開示は、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の表面（外部表面または内腔表面）上に存在する分子（例えば、タンパク質、脂質、糖）と反応すると、分子を共有結合性または非共有結合性で修飾して、少なくとも１つのマレイミド部分を含む修飾された分子を生み出す、任意の試薬、例えば、二官能性または多官能性試薬を使用して実施することができる。ＥＶ（例えば、エキソソーム）の表面（外部表面または内腔表面）上に存在する分子は、天然に存在するものであり得るか、またはそれは天然に存在しないものであり得、すなわち、それは、例えば、化学修飾、天然に存在しない分子を含む組成物とのインキュベーションを介して、もしくは変異を介して（例えば、変異を介して１つまたは複数のシステインアミノ酸をタンパク質に導入することによって）、修飾されている。
マレイミド部分を含む二官能性試薬、すなわち、いくつかのマレイミド含有単位が多量体化し得る試薬、またはマレイミド基を介して官能性部分（例えば、ＰＥＧ）を付加することができるマレイミド含有試薬には、例えば、ヒドラジン部分及びマレイミド部分を含む二官能性試薬、イソシアネート部分及びマレイミド部分を含む二官能性試薬、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジルエステル部分及びマレイミド部分を含む二官能性試薬、スクシンイミド部分及びマレイミド部分を含む二官能性試薬、ビオチン－マレイミド、ストレプトアビジン－マレイミド、Ｎ－４－マレイミド酪酸、Ｎ－（４－マレイミドブチルオキシ）スクシンイミド、Ｎ－［５－（３’－マレイミドプロピルアミド）－１－カルボキシペンチル］イミノ二酢酸、マレイミド－ＰＥＧ－スクシンイミジルエステル（例えば、マレイミド－ＰＥＧ１２－スクシンイミジルエステル、マレイミド－ＰＥＧ２－スクシンイミジルエステル、マレイミド－ＰＥＧ２０００－スクシンイミジルエステル、マレイミド－ＰＥＧ５０００－スクシンイミジルエステル、またはマレイミド－ＰＥＧｎ－スクシンイミジルエステル（ここで、１＜ｎ＜５０００である））、マレイミド－ＰＥＧ－マレイミド（例えば、例えば、マレイミド－ＰＥＧ１２－マレイミド、マレイミド－ＰＥＧ２－マレイミド、マレイミド－ＰＥＧ２０００－マレイミド、マレイミド－ＰＥＧ５０００－マレイミド、またはマレイミド－ＰＥＧｎ－マレイミド（ここで、１＜ｎ＜５０００である））、マレイミド－ＯＨ、マレイミド－ＰＥＧｎ－ＯＨ（ここで、１＜ｎ＜５０００である）、マレイミド－ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（ε－カプロラクトン）、（Ｓ）－（－）－Ｎ－（１－フェニルエチル）マレイミド、Ｎ－（４－クロロフェニル）マレイミド、Ｎ－（１－ピレニル）マレイミド、メトキシポリエチレングリコールマレイミド、ポリ（エチレングリコール）メチルエーテルマレイミド、Ｎ－（４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１１，１１，１１－ヘプタデカフルオロウンデシル）マレイミド、デフェロキサミン－マレイミド（すなわち、キレート剤－マレイミド）、マレイミドグリシジルエーテル、二官能性マレイミドＤＴＰＡ、二官能性ＮＯＴＡ－マレイミドキレート剤、ホモ二官能性マレイミド架橋剤（すなわち、各末端にマレイミド基を有するもの）、ビス－マレイミドポリアルキレングリコール、ＤＢＣＯ－マレイミド、ベンゾトリアゾールマレイミド、アルキンマレイミド、マレイミド官能基化脂質、マレイミド官能基化ＰＥＧ脂質、ならびに一般に、少なくとも１つのマレイミド部分、少なくとも１つの追加の反応性部分（例えば、マレイミド基または別の反応性基）及び１つまたは複数の任意選択的なリンカー（例えば、ＰＥＧ、またはポリグリセロール等の別の重合体）を含む任意の分子が含まれる。
ＩＩ．Ｈ．リンカー
上記に記載したように、本開示の細胞外小胞（ＥＶ）（例えば、エキソソーム及びナノ小胞）は、目的とする分子（例えば、抗原、アジュバント、または免疫調節剤）をＥＶに（例えば、外表面または内腔表面上に）連結する１つまたは複数のリンカーを含み得る。一部の態様では、目的とする分子（すなわち、ペイロード）（例えば、抗原、アジュバント、または免疫調節剤）は、ＥＶに直接的にまたは足場部分（例えば、足場Ｘまたは足場Ｙ）を介して連結されている。例えば、ある特定の態様では、ペイロード（例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤）は、足場Ｘを介してエキソソームの外表面に連結されている。さらなる態様では、ペイロード（例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤）は、足場Ｘまたは足場Ｙを介してエキソソームの内腔表面に連結されている。一部の態様では、ペイロード（例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤）は、足場Ｘを介してエキソソームの内腔表面に連結されている。一部の態様では、ペイロード（例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤）は、足場Ｙを介してエキソソームの内腔表面に連結されている。一部の態様では、ペイロード（例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤）は、足場Ｘ及び足場Ｙを介してエキソソームの内腔表面に連結されている。一部の態様では、ペイロード（例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤）は、リンカー（例えば、本明細書に記載されるもの）を介して足場Ｘにコンジュゲートされている。ある特定の態様では、ペイロード（例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤）は、１つよりも多くのリンカー（すなわち、「リンカーの組み合わせ」）を使用して足場Ｘにコンジュゲートされている。一部の態様では、ペイロード（例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤）は、リンカー（例えば、本明細書に記載されるもの）を介して足場Ｙにコンジュゲートされている。ある特定の態様では、ペイロード（例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤）は、リンカーの組み合わせを使用して足場Ｙにコンジュゲートされている。一部の態様では、リンカーの組み合わせは、本明細書に開示される少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、もしくは少なくとも６つ、またはそれよりも多くの異なるリンカーを含む。一部の態様では、リンカーの組み合わせにおけるリンカーは、エステル結合（例えば、ホスホジエステルまたはホスホロチオエートエステル）によって連結され得る。
リンカーは、当該技術分野で既知の任意の化学部分であり得る。
本明細書で使用されるとき、「リンカー」という用語は、ペプチドもしくはポリペプチド配列（例えば、合成ペプチドまたはポリペプチド配列）、または非ポリペプチド、例えば、アルキル鎖を指す。一部の態様では、２つ以上のリンカーがタンデムで連結され得る。複数のリンカーが存在する場合、リンカーの各々は、同じであることも、または異なることもできる。一般に、リンカーは、柔軟性を提供するか、または立体障害を阻止／改善する。リンカーは典型的には切断されないが、ある特定の態様では、かかる切断が望ましい場合がある。したがって、一部の態様では、リンカーは、プロテアーゼにより切断可能な１つまたは複数の部位を含むことができ、これらの部位は、リンカーの配列内に位置し得るか、またはリンカー配列のそれぞれの末端でリンカーに隣接し得る。
一部の態様では、リンカーは、ペプチドリンカーである。一部の態様では、ペプチドリンカーは、少なくとも約２個、少なくとも約３個、少なくとも約４個、少なくとも約５個、少なくとも約１０個、少なくとも約１５個、少なくとも約２０個、少なくとも約２５個、少なくとも約３０個、少なくとも約３５個、少なくとも約４０個、少なくとも約４５個、少なくとも約５０個、少なくとも約５５個、少なくとも約６０個、少なくとも約６５個、少なくとも約７０個、少なくとも約７５個、少なくとも約８０個、少なくとも約８５個、少なくとも約９０個、少なくとも約９５個、または少なくとも約１００個のアミノ酸を含み得る。
一部の態様では、ペプチドリンカーは、少なくとも約１１０個、少なくとも約１２０個、少なくとも約１３０個、少なくとも約１４０個、少なくとも約１５０個、少なくとも約１６０個、少なくとも約１７０個、少なくとも約１８０個、少なくとも約１９０個、または少なくとも約２００個のアミノ酸を含み得る。
他の態様では、ペプチドリンカーは、少なくとも約２００個、少なくとも約３００個、少なくとも約４００個、少なくとも約５００個、少なくとも約６００個、少なくとも約７００個、少なくとも約８００個、少なくとも約９００個、または少なくとも約１，０００個のアミノ酸を含み得る。ペプチドリンカーは、１～約５個のアミノ酸、１～約１０個のアミノ酸、１～約２０個のアミノ酸、約１０～約５０個のアミノ酸、約５０～約１００個のアミノ酸、約１００～約２００個のアミノ酸、約２００～約３００個のアミノ酸、約３００～約４００個のアミノ酸、約４００～約５００個のアミノ酸、約５００～約６００個のアミノ酸、約６００～約７００個のアミノ酸、約７００～約８００個のアミノ酸、約８００～約９００個のアミノ酸、または約９００～約１０００個のアミノ酸を含み得る。
本明細書に記載されるように、一部の態様では、本開示に有用なリンカーは、グリシン／セリンリンカーを含む。一部の態様では、ペプチドリンカーは、式［（Ｇｌｙ）ｎ－Ｓｅｒ］ｍ（配列番号３７４）によるグリシン／セリンリンカーであり、式中、ｎは、１～１００の任意の整数であり、ｍは、１～１００の任意の整数である。一部の態様では、グリシン／セリンリンカーは、式［（Ｇｌｙ）ｘ－Ｓｅｒｙ］ｚ（配列番号３７５）によるものであり、式中、ｘは、１～４の整数であり、ｙは、０または１であり、ｚは、１～５０の整数である。一部の態様では、ペプチドリンカーは、配列Ｇｎ（配列番号３７６）を含み、式中、ｎは、１～１００の整数であり得る。一部の態様では、ペプチドリンカーは、配列（ＧｌｙＡｌａ）ｎ（配列番号３７７）を含み得、式中、ｎは、１～１００の整数である。一部の態様では、ペプチドリンカーは、配列（ＧｌｙＧｌｙＳｅｒ）ｎ（配列番号３７８）を含み得、式中、ｎは、１～１００の整数である。ある特定の態様では、ペプチドリンカーは、配列ＧＧＧＧ（配列番号１９７）を含む。
一部の態様では、ペプチドリンカーは、配列（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２０３）を含む。ある特定の態様では、ペプチドリンカーは、配列（ＧＧＳ）ｎ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２０４）を含む。かかる態様では、ｎは、１～１００の整数であり得る。一部の態様では、ｎは、１～２０の整数、すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０であり得る。一部の態様では、ｎは、１～１００の整数である。
本開示に有用であるリンカーの例としては、ＧＧＧ、ＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号１９８）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＧ（配列番号１９９）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２００）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号２０１）、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２０２）が挙げられるが、これらに限定されない。一部の態様では、リンカーは、ポリ－Ｇ配列（ＧＧＧＧ）ｎ（配列番号３７３）であり、式中、ｎは、１～１００の整数であり得る。
一部の態様では、ペプチドリンカーは、合成であり、すなわち、天然に存在しない。一態様では、ペプチドリンカーは、アミノ酸の第１の直鎖状配列を、それが自然界で天然には連結または遺伝的に融合されないアミノ酸の第２の直鎖状配列に連結または遺伝的に融合するアミノ酸配列を含む、ペプチド（またはポリペプチド）（例えば、天然のまたは天然に存在しないペプチド）を含む。例えば、一態様では、ペプチドリンカーは、天然に存在するポリペプチドの修飾形態である（例えば、付加、置換、または欠失等の変異を含む）、天然に存在しないポリペプチドを含み得る。
一部の態様では、ペプチドリンカーは、天然に存在しないアミノ酸を含み得る。なおも他の態様では、ペプチドリンカーは、自然界では存在しない直鎖状配列で存在する、天然に存在するアミノ酸を含み得る。依然として他の態様では、ペプチドリンカーは、天然に存在するポリペプチド配列を含み得る。
一部の態様では、リンカーは、非ペプチドリンカーを含む。他の態様では、リンカーは、非ペプチドリンカーからなる。一部の態様では、非ペプチドリンカーは、例えば、マレイミドカプロイル（ＭＣ）、マレイミドプロパノイル（ＭＰ）、メトキシルポリエチレングリコール（ＭＰＥＧ）、スクシンイミジル４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、スクシンイミジル４－（ｐ－マレイミドフェニル）ブチレート（ＳＭＰＢ）、Ｎ－スクシンイミジル（４－ヨードアセチル）アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、スクシンイミジル６－［３－（２－ピリジルジチオ）－プロピオンアミド］ヘキサノエート（ＬＣ－ＳＰＤＰ）、４－スクシンイミジルオキシカルボニル－アルファ－メチル－アルファ－（２－ピリジルジチオ）トルエン（ＳＭＰＴ）等であり得る（例えば、米国特許第７，３７５，０７８号を参照されたく、同文献は参照によりその全体が本明細書に援用される）。
一部の態様では、本明細書に開示されるリンカーは、当該技術分野で既知の技法（例えば、化学的コンジュゲーション、組換え技法、またはペプチド合成）を使用して、マレイミド部分に導入され得る。一部の態様では、リンカーは、組換え技法を使用して導入され得る。他の態様では、リンカーは、固相ペプチド合成を使用して導入され得る。ある特定の態様では、本明細書に開示されるマレイミド部分は、当該技術分野で既知の組換え技法を使用して導入された１つまたは複数のリンカー、及び固相ペプチド合成または化学的コンジュゲーション法を使用して導入された１つまたは複数のリンカーを同時に含有し得る。一部の態様では、リンカーは、コレステロール部分を含み得る。例えば、ＵＳ２００８／００８５８６９Ａ１を参照されたく、同文献は参照によりその全体が本明細書に援用される。
リンカーは、切断に感受性がある場合があり（「切断可能なリンカー」）、それによって、生物学的に活性な分子（例えば、抗原、アジュバント、または免疫調節剤）の放出を容易にする。したがって、一部の態様では、本開示とともに使用することができるリンカーは、切断可能なリンカーを含む。かかる切断可能なリンカーは、生物学的に活性な分子が活性なままである条件下で、例えば、酸誘導性の切断、光誘導性の切断、ペプチダーゼ誘導性の切断、エステラーゼ誘導性の切断、及びジスルフィド結合の切断に感受性がある場合がある。一部の態様では、切断可能なリンカーは、スペーサーを含む。ある特定の態様では、スペーサーは、ＰＥＧを含む。
一部の態様では、リンカーは、「還元感受性リンカー」である。一部の態様では、還元感受性リンカーは、ジスルフィド結合を含有する。一部の態様では、リンカーは、「酸に不安定なリンカー」である。一部の態様では、酸に不安定なリンカーは、ヒドラゾンを含有する。好適な酸に不安定なリンカーにはまた、例えば、シス－アコニット酸リンカー、ヒドラジドリンカー、チオカルバモイルリンカー、またはそれらの任意の組み合わせも含まれる。
一部の態様では、リンカーは、切断不可能なリンカー（すなわち、切断に耐性または実質的に耐性）を含む。
一部の態様では、本明細書に開示されるリンカーの組み合わせは、切断可能なリンカーのみを含む。一部の態様では、本明細書に開示されるリンカーの組み合わせは、切断不可能なリンカーのみを含む。一部の態様では、本明細書に開示されるリンカーの組み合わせは、切断可能なリンカー及び切断不可能なリンカーの両方を含む。本開示とともに使用することができる切断可能なリンカー及び切断不可能なリンカーに関する追加の開示は、下記に提供される。
ＩＩ．Ｈ．１．切断不可能なリンカー
切断不可能なリンカーは、本開示の修飾された生物学的に活性な分子の２つ以上の構成成分（例えば、生物学的に活性な分子及び係留部分；生物学的に活性な分子及び切断可能なリンカー；係留部分及び切断可能なリンカー）を安定な共有結合性の様態で連結することが可能な任意の化学部分であり、切断可能なリンカーに関して上記に列挙されるカテゴリーには該当しない。故に、切断不可能なリンカーは、酸誘導性の切断、光誘導性の切断、ペプチダーゼ誘導性の切断、エステラーゼ誘導性の切断、及びジスルフィド結合の切断に実質的に耐性である。
さらに、「切断不可能」とは、リンカー内またはリンカーに隣接する化学結合が、環状ジヌクレオチド及び／または抗体がその活性を喪失しない条件下で、酸、光に不安定な切断剤、ペプチダーゼ、エステラーゼ、またはジスルフィド結合を切断する化学的もしくは生理学的化合物によって誘導される切断に耐える能力を指す。一部の態様では、生物学的に活性な分子は、別のリンカー、例えば、自壊性リンカーを介してリンカーに結合している。
一部の態様では、本明細書に開示されるリンカーの組み合わせは、例えば、テトラエチレングリコール（ＴＥＧ）、ヘキサエチレングリコール（ＨＥＧ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、スクシンイミド、またはそれらの任意の組み合わせを含む、切断不可能なリンカーを含む。一部の態様では、切断不可能なリンカーは、生物学的に活性な分子を切断不可能なリンカーに連結するスペーサー単位を含む。
一部の態様では、１つまたは複数の切断不可能なリンカーは、一緒に連結されたより小さい単位（例えば、ＨＥＧ、ＴＥＧ、グリセロール、Ｃ２～Ｃ１２アルキル等）を含む。一部の態様では、結合は、エステル結合（例えば、ホスホジエステルまたはホスホロチオエートエステル）または他の結合である。本開示とともに使用することができる切断不可能なリンカーの例は、当該技術分野で既知であり、例えば、ＵＳ７，５６９，６５７Ｂ２、ＵＳ８，４６５，７３０Ｂ１、ＵＳ７，０８７，２２９Ｂ２、及び米国公開第２０１４／０１９３８４９Ａ１号を参照されたく、同文献の各々は参照によりその全体が本明細書に援用される。
ＩＩ．Ｈ．２．切断可能なリンカー
本明細書に記載されるように、目的とする分子（例えば、抗原、アジュバント、または免疫調節剤）をＥＶ（例えば、エキソソーム）に連結するために使用することができる１つまたは複数のリンカー（すなわち、リンカーの組み合わせ）は、切断可能なリンカーを含み得る。「切断可能なリンカー」という用語は、破断または切断され得る少なくとも１つの結合または化学結合を含むリンカーを指す。本明細書で使用されるとき、「切断」という用語は、比較的大きな分子における、２つ以上の比較的より小さな分子をもたらす様態での１つまたは複数の化学結合の破断を指す。例えば、切断は、例えば、ヌクレアーゼ、ペプチダーゼ、プロテアーゼ、ホスファターゼ、オキシダーゼ、もしくはレダクターゼによって、または特定の物理化学的条件、例えば、レドックス環境、ｐＨ、活性酸素種の存在、もしくは特定の光の波長によって媒介され得る。
一部の態様では、本明細書で使用される「切断可能な」という用語は、例えば、ホスホジエステル及びジスルフィド等の、例えば、迅速に分解可能なリンカーを指す一方で、「切断不可能な」という用語は、例えば、ヌクレアーゼ耐性ホスホロチオエート等の、例えば、より安定な結合を指す。
一部の態様では、切断可能なリンカーは、ジヌクレオチドもしくはトリヌクレオチドリンカー、ジスルフィド、イミン、チオケタール、ｖａｌ－ｃｉｔジペプチド、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
一部の態様では、切断可能なリンカーは、バリン－アラニン－ｐ－アミノベンジルカルバメート、バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルカルバメート、または両方を含む。
一部の態様では、切断可能なリンカーは、レドックスで切断可能なリンカー、活性酸素種（ＲＯＳ）で切断可能なリンカー、ｐＨ依存性で切断可能なリンカー、酵素で切断可能なリンカー、プロテアーゼで切断可能なリンカー、エステラーゼで切断可能なリンカー、ホスファターゼで切断可能なリンカー、光活性化される切断可能なリンカー、自壊性リンカー、またはそれらの組み合わせを含む。これらの切断可能なリンカーのうちの１つまたは複数に関する追加の開示は、下記でさらに提供され、また、当該技術分野で既知であり、例えば、ＵＳ２０１８／００３７６３９Ａ１、Ｔｒｏｕｔ ｅｔ ａｌ．，７９ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，６２６－６２９（１９８２）、Ｕｍｅｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．４３ Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，６７７－６８４（１９８９）、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７７（２４）：７０２７－７０３７（２０１７）、Ｄｏｒｏｎｉｎａ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１：７７８－７８４（２００３）、ＵＳ７，７５４，６８１Ｂ２、ＵＳ２００６／０２６９４８０、ＵＳ２０１０／００９２４９６、ＵＳ２０１０／０１４５０３６、ＵＳ２００３／０１３０１８９、ＵＳ２００５／０２５６０３０を参照されたく、同文献の各々は参照によりその全体が本明細書に援用される。
ＩＩ．Ｈ．２．ａ．レドックスで切断可能なリンカー
一部の態様では、リンカーの組み合わせは、レドックスで切断可能なリンカーを含む。ある特定の態様では、かかるリンカーは、還元時または酸化時に切断されるレドックスで切断可能な連結基を含み得る。
一部の態様では、レドックスで切断可能なリンカーは、ジスルフィド結合を含有し、すなわち、それはジスルフィドで切断可能なリンカーである。一部の態様では、レドックスで切断可能なリンカーは、例えば、細胞内メルカプタン、オキシダーゼ、レダクターゼ、またはそれらの組み合わせによって還元され得る。
ＩＩ．Ｈ．２．ｂ．活性酸素種（ＲＯＳ）で切断可能なリンカー
一部の態様では、リンカーの組み合わせは、例えば、活性化した好中球等の炎症プロセスによって生成される、スーパーオキシド（Ｏｆ）または過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）等の活性酸素種（ＲＯＳ）によって切断され得る、切断可能なリンカーを含み得る。一部の態様では、ＲＯＳで切断可能なリンカーは、チオケタールで切断可能なリンカーである。例えば、米国特許８，３５４，４５５Ｂ２号を参照されたく、同文献は参照によりその全体が本明細書に援用される。
ＩＩ．Ｈ．２．ｃ．ｐＨ依存性で切断可能なリンカー
一部の態様では、リンカーは、酸性条件下（ｐＨ＜７）で選択的に切断される連結基である酸で切断可能な連結基を含む、酸に不安定なリンカーである。
一部の態様では、酸で切断可能な連結基は、酸性環境、例えば、約６．０、約５．５、約５．０、またはそれ未満で切断される。一部の態様では、ｐＨは、約６．５以下である。一部の態様では、リンカーは、一般酸として作用し得る酵素、例えば、ペプチダーゼ（これは基質特異的であり得る）またはホスファターゼ等の薬剤によって切断される。細胞内で、エンドソーム及びリソソーム等のある特定の低ｐＨオルガネラは、酸で切断可能な連結基に切断環境を提供することができる。ヒト血清のｐＨは７．４であるものの、細胞内の平均ｐＨは、約７．１～７．３の範囲で若干より低い。また、エンドソームは、５．５～６．０の範囲の酸性ｐＨを有し、リソソームは、さらにより酸性ｐＨで約５．０である。したがって、ｐＨ依存性で切断可能なリンカーは、当該技術分野で、エンドソームで不安定なリンカーと呼ばれることがある。
一部の態様では、酸で切断可能な基は、一般式－Ｃ＝ＮＮ－、Ｃ（Ｏ）Ｏ、または－ＯＣ（Ｏ）を有し得る。別の非限定的な例では、エステル酸素に結合している炭素（アルコキシ基）が、アリール基に結合している場合、例えば、置換アルキル基、またはジメチルペンチルもしくはｔ－ブチル等の三級アルキル基。酸で切断可能な連結基の例としては、アミン、イミン、アミノエステル、安息香酸イミン（ｂｅｎｚｏｉｃ ｉｍｉｎｅ）、ジオルトエステル（ｄｉｏｒｔｈｏ ｅｓｔｅｒ）、ポリホスホエステル、ポリホスファゼン、アセタール、ビニルエーテル、ヒドラゾン、シス－アコニット酸、ヒドラジド、チオカルバモイル、イミジン、アジドメチル－メチルマレイン酸無水物、チオプロピオネート、マスクされたエンドソーム分解（ｅｎｄｏｓｏｍｏｌｙｔｉｃ）剤、シトラコニル（ｃｉｔｒａｃｏｎｙｌ）基、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。ジスルフィド結合もまた、ｐＨに感受性がある。
一部の態様では、リンカーは、低ｐＨに不安定なヒドラゾン結合を含む。かかる酸に不安定な結合は、コンジュゲート、例えば、抗体－薬物コンジュゲートの分野で広範囲に使用されてきた。例えば、Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０１１，１２，１４６０－７、Ｙｕａｎ ｅｔ ａｌ，Ａｃｔａ Ｂｉｏｍａｔｅｒ．２００８，４，１０２４－３７、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ，Ａｃｔａ Ｂｉｏｍａｔｅｒ．２００７，６，８３８－５０、Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．２００７，３２１，４６２－８、Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００６，５８，２２９－３６、Ｄｏｒｏｎｉｎａ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００３，２１，７７８－８４を参照されたく、同文献の各々は参照によりその全体が本明細書に援用される。
一部の態様では、リンカーは、以下のもの、すなわち、酸性環境（例えば、７未満、約４超のｐＨ）で不安定で、ジオール及びケトンを形成するケタール；酸性環境（例えば、７未満、約４超のｐＨ）で不安定で、ジオール及びアルデヒドを形成するアセタール；酸性環境（例えば、７未満、約４超のｐＨ）で不安定で、アミン及びアルデヒドもしくはケトンを形成するイミンもしくはイミニウム；酸性条件下で不安定であるケイ素－酸素－炭素結合；ケイ素－窒素（シラザン）結合；ケイ素－炭素結合（例えば、アリールシラン、ビニルシラン、及びアリルシラン）；マレアメート（ｍａｌｅａｍａｔｅ）（無水マイレン酸誘導体及びアミンから合成されるアミド結合）；オルトエステル；ヒドラゾン；酸触媒加水分解を経るように設計された活性化カルボン酸誘導体（例えば、エステル、アミド））；またはビニルエーテルから選択される、低ｐＨに不安定な結合を含む。
さらなる例は、米国特許第９，７９０，４９４Ｂ２号及び同第８，１３７，６９５Ｂ２号に見出すことができ、同文献の内容は参照によりそれらの全体が本明細書に援用される。
ＩＩ．Ｈ．２．ｄ．酵素で切断可能なリンカー
一部の態様では、リンカーの組み合わせは、細胞内または細胞外酵素、例えば、プロテアーゼ、エステラーゼ、ヌクレアーゼ、アミダーゼ（ａｍｉｄａｄｅ）によって切断可能なリンカーを含み得る。リンカーの組み合わせにおいて特定のリンカーを切断することができる酵素の範囲は、リンカーの特定の結合及び化学構造に依存する。したがって、ペプチド性リンカーは、例えば、ペプチダーゼ（ｐｅｐｔｉｄａｄｅ）によって切断され得、エステル結合を含有するリンカーは、例えば、エステラーゼによって切断され得、アミド結合を含有するリンカーは、例えば、アミダーゼ（ａｍｉｄａｄｅ）によって切断され得る、等である。
ＩＩ．Ｈ．２．ｅ．エステラーゼで切断可能なリンカー
一部のリンカーは、エステラーゼによって切断される（「エステラーゼで切断可能なリンカー」）。ある特定のエステルのみが、細胞の内側または外側に存在するエステラーゼ及びアミダーゼによって切断され得る。エステルは、カルボン酸及びアルコールの縮合によって形成される。単純エステルは、単純アルコール、例えば、脂肪族アルコール、ならびに小環状及び小芳香族アルコールにより生成されるエステルである。エステルに基づく切断可能な連結基の例としては、アルキレン、アルケニレン、及びアルキニレン基のエステルが挙げられるが、これらに限定されない。エステルで切断可能な連結基は、一般式－Ｃ（Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（Ｏ）－を有する。
ＩＩ．Ｈ．２．ｆ．ホスファターゼで切断可能なリンカー
一部の態様では、リンカーの組み合わせは、リン酸基を分解または加水分解する薬剤によって切断される、リン酸に基づく切断可能な連結基を含み得る。細胞内リン酸基を切断する薬剤の例は、細胞内ホスファターゼ等の酵素である。リン酸に基づく連結基の例は、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ ｋ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＯＲｋ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＳＲｋ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲｋ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲｋ）－Ｓ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲｋ）－Ｓ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＯＲｋ）－Ｓ－、－ＳＰ（Ｓ）（ＯＲｋ）－Ｏ－、－ＯＰ（Ｏ）（Ｒｋ）－Ｏ－、－ＯＰ（Ｓ）（Ｒｋ）－Ｏ－、－ＳＰ（Ｏ）（Ｒｋ）－Ｏ－、－ＳＰ（Ｓ）（Ｒｋ）－Ｏ－、－ＳＰ（Ｏ）（Ｒｋ）－Ｓ－、または－ＯＰ（Ｓ）（Ｒｋ）－Ｓ－である。
一部の態様では、Ｒｋは、以下、すなわち、ＮＨ２、ＢＨ３、ＣＨ３、Ｃ１－６アルキル、Ｃ６－１０アリール、Ｃ１－６アルコキシ、及びＣ６－１０アリール－オキシのうちのいずれかである。一部の態様では、Ｃ１－６アルキル及びＣ６－１０アリールは、非置換である。さらなる非限定的な例としては、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＯＨ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＳＨ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｓ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｓ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＯＨ）－Ｓ－、－Ｓ－Ｐ（Ｓ）（ＯＨ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（Ｈ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（Ｈ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（Ｈ）－Ｏ－、－ＳＰ（Ｓ）（Ｈ）－Ｏ－、－ＳＰ（Ｏ）（Ｈ）－Ｓ－、－ＯＰ（Ｓ）（Ｈ）－Ｓ－、または－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｏ－が挙げられる。
ＩＩ．Ｈ．２．ｇ．光活性化される切断可能なリンカー
一部の態様では、組み合わせのリンカーは、光活性化される切断可能なリンカー、例えば、ニトロベンジルリンカーまたはニトロベンジル反応性基を含むリンカーを含む。
従来のワクチンは、いくつかの課題を示してきた。一部の態様では、従来のワクチンは、強固なＴ細胞応答を誘導することができない。その上、従来のワクチンによって生成されるいずれの応答も、組織特異的応答に限定される及び／または抗体多様性を欠いている場合がある。一部の態様では、本開示に有用な抗原を含むＥＶ、例えばエキソソームは、抗原（ワクチン）単独と比較して有利な性質を表す。一部の態様では、本開示のＥＶ（例えば、エキソソーム）は、抗原単独と比較して改善された、Ｔ細胞により導かれる免疫応答を誘導することができる。一部の態様では、本開示のＥＶ（例えば、エキソソーム）は、末梢組織においてＴ細胞応答を誘導することができる。一部の態様では、本開示のＥＶ（例えば、エキソソーム）は、強化された抗体多様性及び／または結合活性を表す。
従来のワクチン、例えば、抗原はまた、抗原提示細胞による不十分な取り込み、不十分な免疫原性、及び／または限定された複雑性という問題にも直面する。従来の抗原と比較して、本開示のＥＶ（例えば、エキソソーム）は、ＥＶ（例えば、エキソソーム）上に複数の抗原を提示する及び／または特定の免疫細胞（例えば、Ｂ細胞及び／または樹状細胞）への抗原曝露を調節することができる。
従来のワクチンのためのアジュバントもまた課題を有する。例えば、アジュバントの潜在的な毒性が、その投与経路、アジュバントの用量、及び組み合わせを制限する。加えて、ＲＮＡ及び／またはＤＮＡは、良好でないアジュバントである。本開示のＥＶ（例えば、エキソソーム）は、これらの問題を克服する。本開示のＥＶ（例えば、エキソソーム）は、抗原提示細胞への抗原（複数可）及びアジュバント（複数可）（及び／または本明細書に開示される他のペイロード）の選択的な共送達を可能にする。これにより、アジュバントの用量を低減することができ、組み合わせが可能となり、それによってワクチンの全体的な安全性が改善される。
ＩＩＩ．操作されたＥＶ、例えばエキソソームの産生のためのプロデューサー細胞
本開示のＥＶ、例えばエキソソームは、インビトロで増殖させた細胞、または対象の体液から産生され得る。エキソソームをインビトロ細胞培養物から産生させる場合、種々のプロデューサー細胞、例えば、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＨＯ細胞、及びＭＳＣを使用することができる。ある特定の態様では、プロデューサー細胞は、天然に存在する樹状細胞、マクロファージ、Ｂ細胞、肥満細胞、好中球、Ｋｕｐｆｆｅｒ－Ｂｒｏｗｉｃｚ細胞、これらの細胞のうちのいずれかに由来する細胞、またはそれらの任意の組み合わせではない（すなわち、天然に存在しないプロデューサー細胞）。本明細書で使用されるとき、「天然に存在しないプロデューサー細胞」という用語は、プロデューサー細胞の構造及び／または機能が天然に存在する対応物と比較して異なるように修飾された、プロデューサー細胞（例えば、樹状細胞、マクロファージ、Ｂ細胞、肥満細胞、好中球、Ｋｕｐｆｆｅｒ－Ｂｒｏｗｉｃｚ細胞、これらの細胞のうちのいずれかに由来する細胞、またはそれらの任意の組み合わせ）を指す。下記にさらに記載されるように、一部の態様では、天然に存在しないプロデューサー細胞は、本明細書に開示される１つまたは複数のペイロード（例えば、抗原、免疫調節剤、及び／またはアジュバントを発現するように修飾されている。ある特定の態様では、天然に存在しないプロデューサー細胞は、本明細書に開示される１つまたは複数の標的化部分を発現するように修飾されている。一部の態様では、天然に存在しないプロデューサー細胞は、本明細書に開示される１つまたは複数の足場部分（例えば、足場Ｘ及び／または足場Ｙ）を発現するように修飾されている。
プロデューサー細胞は、本明細書に記載のＥＶ（例えば、エキソソーム）を産生させるために、１つまたは複数の外因性配列（例えば、抗原、アジュバント、免疫調節剤、及び／または標的化部分をコードする）を含むように遺伝子改変され得る。遺伝子改変されたプロデューサー細胞は、一過性または安定な形質転換によって外因性配列を含有し得る。外因性配列は、プラスミドとして形質転換を行うことができる。外因性配列は、標的とする部位でまたはランダムな部位において、プロデューサー細胞のゲノム配列に安定に組み込まれ得る。一部の態様では、内腔が操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）の産生のために、安定な細胞株が生成される。
外因性配列は、ＥＶ（例えば、エキソソーム）タンパク質をコードする内因性配列内、その上流（５’末端）または下流（３’末端）に位置する、プロデューサー細胞のゲノム配列に挿入され得る。当該技術分野で既知の種々の方法を、外因性配列のプロデューサー細胞への導入に使用することができる。例えば、種々の遺伝子編集法（例えば、相同組換え、トランスポゾン媒介系、ｌｏｘＰ－Ｃｒｅ系、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、またはＴＡＬＥＮを使用する方法）を使用して修飾された細胞が、本開示の範囲内にある。
外因性配列は、本明細書に開示される足場部分またはその断片もしくはバリアントをコードする配列を含み得る。足場部分をコードする配列の余分のコピーを導入して、（例えば、ＥＶ、例えばエキソソームの表面上または内腔表面上により高い密度の足場部分を有する）本明細書に記載のＥＶ（例えば、エキソソーム）を生産することができる。足場部分の修飾体または断片をコードする外因性配列を導入して、足場部分の修飾体または断片を含有する内腔が操作された及び／または表面が操作されたエキソソームを生産することができる。
一部の態様では、プロデューサー細胞は、ペイロード（例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤）及び／または標的化部分に連結された足場部分をコードする１つまたは複数のベクターで修飾、例えば、トランスフェクトされ得る。
一部の態様では、本明細書に開示されるプロデューサー細胞は、追加の外因性配列を含むようにさらに修飾される。例えば、追加の外因性配列を導入して、内因性遺伝子発現を調節するか、または、ペイロード（例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤）及び／または標的化部分としてある特定のポリペプチドを含むＥＶ（例えば、エキソソーム）を生産することができる。一部の態様では、プロデューサー細胞は、一方が足場部分（例えば、足場Ｘ及び／または足場Ｙ）またはそのバリアントもしくは断片をコードし、他方がペイロード及び／または標的化部分をコードする、２つの外因性配列を含むように修飾される。ある特定の態様では、プロデューサー細胞は、ＥＶ（例えば、エキソソーム）に追加の機能性（例えば、アジュバントまたは免疫調節剤）を付与する追加の外因性配列を含むようにさらに修飾され得る。一部の態様では、プロデューサー細胞は、一方が本明細書に開示される足場部分またはそのバリアントもしくは断片をコードし、他方がＥＶ（例えば、エキソソーム）に追加の機能性（例えば、アジュバントまたは免疫調節剤）を付与するタンパク質をコードする、２つの外因性配列を含むように修飾される。一部の態様では、プロデューサー細胞は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０個、またはそれよりも多くの追加の外因性配列を含むようにさらに修飾される。ある特定の態様では、追加の外因性配列は、本明細書に開示されるペイロード（例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤）及び／または標的化部分のうちのいずれかをコードする。
一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエキソソーム（例えば、表面が操作された及び／または内腔が操作されたエキソソーム）は、本明細書に開示される完全長の成熟した足場部分、またはペイロード（例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤）及び／または標的化部分に連結された足場部分をコードする配列で形質転換された細胞から産生され得る。本明細書に記載の足場部分のうちのいずれも、プラスミド、ゲノムに挿入された外因性配列、または合成メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）等の他の外因性核酸から発現され得る。
ＩＶ．薬学的組成物
本明細書では、対象への投与に好適な形態で、所望の程度の純度を有する本開示のＥＶ、例えばエキソソームと、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む、薬学的組成物が提供される。薬学的に許容される賦形剤または担体は、部分的には、投与されようとしている特定の組成物によって、ならびに組成物を投与するために使用される特定の方法によって決定され得る。したがって、複数の細胞外小胞を含む薬学的組成物の多種多様な好適な製剤が存在する（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．２１ｓｔ ｅｄ．（２００５）を参照されたい）。薬学的組成物は一般に、滅菌され、かつ米国食品医薬品局の全ての適正製造基準（ＧＭＰ）規制に完全に準拠して製剤化される。
一部の態様では、薬学的組成物は、１つまたは複数の治療剤と、本明細書に記載のエキソソームとを含む。ある特定の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、薬学的に許容される担体中で１つまたは複数の追加の治療剤と共投与される。一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームを含む薬学的組成物は、追加の治療剤の投与前に投与される。他の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームを含む薬学的組成物は、追加の治療剤の投与後に投与される。さらなる態様では、ＥＶ、例えばエキソソームを含む薬学的組成物は、追加の治療剤と同時に投与される。
許容される担体、賦形剤、または安定剤は、レシピエント（例えば、動物またはヒト）に対し、用いられる投薬量及び濃度で無毒であり、これには、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸等の緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含めた酸化防止剤；防腐剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール；メチルパラベンもしくはプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾール等）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性重合体；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジン等のアミノ酸；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含めた単糖類、二糖類、及び他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトール等の糖；ナトリウム等の塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；及び／またはＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤が含まれる。
担体または希釈剤の例としては、水、食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、及び５％ヒト血清アルブミンが挙げられるが、これらに限定されない。薬学的活性物質のためのかかる媒体及び化合物の使用は、当該技術分野で周知である。いずれかの従来の媒体または化合物が本明細書に記載の細胞外小胞と不適合性でない限り、組成物中でのそれらの使用が企図される。補助的な治療剤もまた、組成物に組み込まれ得る。典型的には、薬学的組成物は、その意図される投与経路と適合性であるように製剤化される。ＥＶ、例えばエキソソームは、非経口、局所、静脈内、経口、皮下、動脈内、皮内、経皮、直腸、頭蓋内、腹腔内、鼻腔内、腫瘍内、筋肉内経路によって、または吸入剤として投与することができる。ある特定の態様では、エキソソームを含む薬学的組成物は、例えば、注射によって、静脈内投与される。ＥＶ、例えばエキソソームは、任意選択で、ＥＶ、例えばエキソソームが意図される疾患、障害、または病態を処置する上で少なくとも部分的に有効である他の治療剤と組み合わせて投与することができる。
溶液または懸濁液は、以下の成分、すなわち、水、食塩液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の合成溶媒等の滅菌希釈剤、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン等の抗菌化合物、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム等の酸化防止剤、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）等のキレート化合物、酢酸塩、クエン酸塩、またはリン酸塩等の緩衝液、及び塩化ナトリウムまたはデキストロース等の浸透圧の調整のための化合物を含むことができる。ｐＨは、塩酸または水酸化ナトリウム等の酸または塩基で調整され得る。調製物は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジ、または複数回用量バイアルに封入され得る。
注射用の使用に好適な薬学的組成物は、滅菌水溶液（水溶性の場合）または分散液及び滅菌粉末を含む。静脈内投与の場合、好適な担体は、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．）、またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を含む。組成物は一般に、滅菌されており、容易なシリンジ注入性（ｓｙｒｉｎｇｅａｂｉｌｉｔｙ）が存在する程度に流動的である。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール等）、及びそれらの好適な混合物を含有する、溶媒または分散媒体であり得る。適正な流動性は、例えば、レシチン等のコーティングの使用によって、分散液の場合には必要とされる粒径の維持によって、及び界面活性剤の使用によって、維持され得る。微生物の作用の阻止は、種々の抗菌化合物及び抗真菌化合物、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサール等によって達成され得る。所望であれば、等張化合物、例えば、糖、マンニトール、ソルビトール等のポリアルコール、及び塩化ナトリウムが、組成物に添加され得る。注射用組成物の長期吸収は、吸収を遅延させる化合物、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを組成物中に含めることによってもたらされ得る。
滅菌注射液は、ＥＶ、例えばエキソソームを、有効量で、所望に応じて本明細書に列挙される成分のうちの１つまたは組み合わせを含む適切な溶媒に組み込むことによって、調製され得る。一般に、分散液は、ＥＶ、例えばエキソソームを、基本的な分散媒及び任意の所望の他の成分を含有する滅菌ビヒクル中に組み込むことによって、調製される。滅菌注射液の調製のための滅菌粉末の場合、調製方法は、活性成分と、事前に滅菌濾過されたその溶液からの任意の追加的な所望の成分との粉末をもたらす、真空乾燥及び凍結乾燥である。ＥＶ、例えばエキソソームは、ＥＶ、例えばエキソソームの持続放出またはパルス放出を可能にするような様態で製剤化され得る、デポー注射または埋込調製物の形態で投与することができる。
エキソソームを含む組成物の全身投与は、経粘膜手段によることもできる。経粘膜投与の場合、浸透すべき障壁に適切な浸透剤が製剤中で使用される。かかる浸透剤は、当該技術分野で一般に既知であり、例えば、経粘膜投与の場合、洗剤、胆汁酸塩、及びフシジン酸誘導体を含む。経粘膜投与は、例えば、点鼻薬の使用により達成され得る。
ある特定の態様では、エキソソームを含む薬学的組成物は、当該薬学的組成物が有益であろう対象に静脈内投与される。ある特定の他の態様では、組成物は、例えば、リンパ内注射によってもしくはリンパ節内（ｉｎｔｒａｎｏｄａｌ）注射によってリンパ系に（例えば、Ｓｅｎｔｉ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ １０５（４６）：１７９０８（２００８）を参照されたい）、または筋肉内注射によって、皮下投与によって、腫瘍内注射によって、胸腺もしくは肝臓への直接注射によって投与される。
ある特定の態様では、エキソソームを含む薬学的組成物は、液体懸濁液として投与される。ある特定の態様では、薬学的組成物は、投与後にデポーを形成することができる製剤として投与される。ある特定の好ましい態様では、デポーは、ＥＶ、例えばエキソソームを循環中に緩徐に放出するか、またはデポー形態のまま留まる。
典型的には、薬学的に許容される組成物は、夾雑物を含まないように高度に精製され、生体適合性かつ無毒であり、対象への投与に適している。水が担体の構成成分である場合、水は高度に精製され、夾雑物、例えば、内毒素を含まないように処理される。
薬学的に許容される担体は、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アラビアゴム、リン酸カルシウム、アルギネート、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、メチルセルロース、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、及び／または鉱油であり得るが、これらに限定されない。薬学的組成物は、滑沢剤、湿潤剤、甘味剤、風味増強剤、乳化剤、懸濁剤、及び／または防腐剤をさらに含み得る。
本明細書に記載の薬学的組成物は、本明細書に記載のＥＶ、例えばエキソソームと、任意選択で薬学的に活性な薬剤または治療剤とを含む。治療剤は、生物学的薬剤、低分子薬剤、または核酸薬剤であり得る。
本明細書に記載のＥＶ、例えばエキソソームを含む薬学的組成物を含む剤形が提供される。一部の態様では、剤形は、静脈内注射用の液体懸濁液として製剤化される。一部の態様では、剤形は、腫瘍内注射用の液体懸濁液として製剤化される。
ある特定の態様では、エキソソームの調製物は、複製能のある残留核酸に損傷を与えるために、例えば、Ｘ線、ガンマ線、ベータ粒子、アルファ粒子、中性子、陽子、元素核、紫外線に曝される。
ある特定の態様では、エキソソームの調製物は、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００ｋＧｙ超、または１００ｋＧｙ超の照射線量を使用してガンマ照射に曝される。
ある特定の態様では、エキソソームの調製物は、０．１、０．５、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、１００００ｍＳｖ超、または１００００ｍＳｖ超の照射線量を使用してＸ線照射に曝される。
Ｖ．キット
本明細書ではまた、本明細書に記載の１つまたは複数のエキソソームを含むキットも提供される。一部の態様では、本明細書では、本明細書に提供される１つまたは複数のエキソソーム等の本明細書に記載の薬学的組成物の成分のうちの１つまたは複数が充填された１つまたは複数の容器、任意選択的な使用説明書を含む、医薬品パックまたはキットが提供される。一部の態様では、キットは、本明細書に記載の薬学的組成物、及び本明細書に記載されるもの等の任意の予防剤または治療剤を収容する。
ＶＩ．ＥＶ、例えばエキソソームを生産する方法
本開示のＥＶ（例えば、エキソソーム）は、ＥＶが目的とする部分（例えば、抗原、アジュバント、免疫調節剤、及び／または標的化部分）を発現するように迅速に操作され得るという点で、慣習的なワクチンとは異なる。本明細書に記載されるように、目的とする部分は、（ｉ）ＥＶの表面（例えば、外表面及び／または内腔表面）に直接的に連結され得る、（ｉｉ）足場部分（例えば、足場Ｘ及び／または足場Ｙ）に連結され、次いでＥＶの表面（例えば、外表面及び／または内腔表面）上に発現され得る、（ｉｉｉ）ＥＶの内腔中に発現され得る、または（ｉｖ）それらの組み合わせである。ＥＶ（例えば、エキソソーム）を迅速に操作するそのような能力は、ＥＶ（例えば、エキソソーム）に基づくワクチンの開発において特に有用である。例えば、目的とする抗原をＥＶに単に「差し込む」ことによって、ある特定のペイロード及び／または標的化部分を発現するように操作された単一のＥＶ（例えば、エキソソーム）を広範囲の疾患または障害の処置において使用することができる。
したがって、一部の態様では、本開示は、かかるモジュール式または「プラグアンドプレイ」ＥＶ（例えば、エキソソーム）ワクチンを生産する方法を対象とする。ある特定の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）に基づくワクチンを生産する方法は、操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）を目的とする抗原と混合して、操作されたＥＶにおいて目的とする抗原が発現されるようにすることを含む。一部の態様では、操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）は、本明細書に開示されるペイロード（例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤）のうちの１つまたは複数を含む。ある特定の態様では、操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）は、１つまたは複数の足場部分（例えば、足場Ｘ及び／または足場Ｙ）をさらに含む。一部の態様では、操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）は、１つまたは複数の標的化部分を追加で含む。一部の態様では、操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）は、本明細書に開示される方法のうちのいずれかを使用して生産することができる。
一部の態様では、本開示はまた、本明細書に記載のＥＶ（例えば、エキソソーム）を生産する方法も対象とする。一部の態様では、該方法は、プロデューサー細胞からＥＶ、例えばエキソソームを得ることと（該プロデューサー細胞は、ＥＶ、例えばエキソソームの２つ以上の構成成分（例えば、（ｉ）抗原及びアジュバント、（ｉｉ）抗原及び免疫調節剤、（ｉｉｉ）抗原及び標的化部分、（ｉｖ）抗原、アジュバント、及び標的化部分、（ｖ）抗原、免疫調節剤、及び標的化部分、（ｖｉ）抗原、アジュバント、及び免疫調節剤、（ｖｉｉ）抗原、アジュバント、免疫調節剤、及び標的化部分）を含有する）、任意選択で、得られたＥＶ、例えばエキソソームを単離することとを含む。一部の態様では、該方法は、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）の２つ以上の構成成分（例えば、（ｉ）抗原及びアジュバント、（ｉｉ）抗原及び免疫調節剤、（ｉｉｉ）抗原及び標的化部分、（ｉｖ）抗原、アジュバント、及び標的化部分、（ｖ）抗原、免疫調節剤、及び標的化部分、（ｖｉ）抗原、アジュバント、及び免疫調節剤、（ｖｉｉ）抗原、アジュバント、免疫調節剤、及び標的化部分）を導入することによってプロデューサー細胞を修飾することと、修飾されたプロデューサー細胞からＥＶ、例えばエキソソームを得ることと、任意選択で、得られたＥＶ、例えばエキソソームを単離することとを含む。さらなる態様では、該方法は、プロデューサー細胞からＥＶ（例えば、エキソソーム）を得ることと、得られたＥＶ（例えば、エキソソーム）を単離することと、単離されたＥＶ（例えば、エキソソーム）を（例えば、複数の生物学的に活性な外因性分子、例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤、及び／または標的化部分を挿入することによって）修飾することとを含む。ある特定の態様では、該方法は、単離されたＥＶ（例えば、エキソソーム）を薬学的組成物に製剤化することをさらに含む。
ＶＩ．Ａ．プロデューサー細胞の修飾方法
上記に記載したように、一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）を生産する方法は、プロデューサー細胞を複数の（例えば、２つ以上の）目的とする分子（例えば、本明細書に記載の生物学的に活性な外因性分子（例えば、抗原、アジュバント、免疫調節剤）、及び／または標的化部分）で修飾することを含む。一部の態様では、本明細書に開示されるプロデューサー細胞は、本明細書に開示される足場部分（例えば、足場Ｘまたは足場Ｙ）でさらに修飾され得る。
一部の態様では、プロデューサー細胞は、哺乳類細胞株、植物細胞株、昆虫細胞株、真菌細胞株、または原核細胞株であり得る。ある特定の態様では、プロデューサー細胞は、哺乳類細胞株である。哺乳類細胞株の非限定的な例としては、ヒト胎児腎（ＨＥＫ）細胞株、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株、ＨＴ－１０８０細胞株、ＨｅＬａ細胞株、ＰＥＲＣ－６細胞株、ＣＥＶＥＣ細胞株、線維芽細胞株、羊膜細胞株、上皮細胞株、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）細胞株、及びそれらの組み合わせが挙げられる。ある特定の態様では、哺乳類細胞株は、ＨＥＫ－２９３細胞、ＢＪヒト包皮線維芽細胞、ｆＨＤＦ線維芽細胞、ＡＧＥ．ＨＮ（登録商標）神経前駆体細胞、ＣＡＰ（登録商標）羊膜細胞、脂肪間葉系幹細胞、ＲＰＴＥＣ／ＴＥＲＴ１細胞、またはそれらの組み合わせを含む。一部の態様では、プロデューサー細胞は、初代細胞である。ある特定の態様では、初代細胞は、初代哺乳類細胞、初代植物細胞、初代昆虫細胞、初代真菌細胞、または初代原核細胞であり得る。
一部の態様では、プロデューサー細胞は、抗原提示細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、マクロファージ、ヘルパーＴ細胞、または制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞）等の免疫細胞ではない。他の態様では、プロデューサー細胞は、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞、マクロファージ、Ｂ細胞、肥満細胞、好中球、Ｋｕｐｆｆｅｒ－Ｂｒｏｗｉｃｚ細胞、またはいずれのかかる細胞に由来する細胞）ではない。一部の態様では、プロデューサー細胞は、天然に存在する抗原提示細胞ではない（すなわち、修飾されている）。一部の態様では、プロデューサー細胞は、天然に存在する樹状細胞、Ｂ細胞、肥満細胞、マクロファージ、好中球、Ｋｕｐｆｆｅｒ－Ｂｒｏｗｉｃｚ細胞、これらの細胞のうちのいずれかに由来する細胞、またはそれらの任意の組み合わせではない。
一部の態様では、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）は、導入遺伝子またはｍＲＮＡであり得、トランスフェクション、ウイルス形質導入、エレクトロポレーション、押出し、超音波処理、細胞融合、または当業者に既知の他の方法によってプロデューサー細胞に導入され得る。
一部の態様では、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）は、トランスフェクションによってプロデューサー細胞に導入される。一部の態様では、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）は、カチオン性脂質及び重合体等の合成高分子を使用して、好適なプロデューサー細胞に導入され得る（Ｐａｐａｐｅｔｒｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １２：Ｓ１１８－Ｓ１３０（２００５））。一部の態様では、カチオン性脂質は、電荷相互作用を通して１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）と複合体を形成する。これらの態様のうちの一部では、正に荷電した複合体は、負に荷電した細胞表面に結合し、エンドサイトーシスによって細胞により取り込まれる。一部の他の態様では、カチオン重合体を使用して、プロデューサー細胞をトランスフェクトすることができる。これらの態様のうちの一部では、カチオン重合体は、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）である。ある特定の態様では、リン酸カルシウム、シクロデキストリン、またはポリブレン等の化学物質を使用して、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）をプロデューサー細胞に導入することができる。１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）はまた、粒子媒介性トランスフェクション、「遺伝子銃」、微粒子銃、または粒子衝撃技術（Ｐａｐａｐｅｔｒｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １２：Ｓ１１８－Ｓ１３０（２００５））等の物理的方法を使用してプロデューサー細胞に導入され得る。例えば、ベータ－ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、ルシフェラーゼ、または緑色蛍光タンパク質等のレポーター遺伝子を使用して、プロデューサー細胞のトランスフェクション効率を評価することができる。
ある特定の態様では、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）は、ウイルス形質導入によってプロデューサー細胞に導入される。モロニーマウス白血病ウイルス（ＭＭＬＶ）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、レンチウイルス、及びスプマウイルスを含めたいくつかのウイルスが、遺伝子導入ビヒクルとして使用され得る。ウイルス媒介性遺伝子導入ビヒクルは、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、及びヘルペスウイルス等のＤＮＡウイルスに基づくベクター、ならびにレトロウイルスに基づくベクターを含む。
ある特定の態様では、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）は、エレクトロポレーションによってプロデューサー細胞に導入される。エレクトロポレーションは、細胞膜に一時的な孔を作成して、細胞中への種々の分子の導入を可能にする。一部の態様では、ポリペプチド及び非ポリペプチド治療剤と同様にＤＮＡ及びＲＮＡも、エレクトロポレーションによってプロデューサー細胞に導入され得る。
ある特定の態様では、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）は、微量注射によってプロデューサー細胞に導入される。一部の態様では、ガラス製マイクロピペットを使用して、微視的レベルで１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）をプロデューサー細胞に注射することができる。
ある特定の態様では、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）は、押出しによってプロデューサー細胞に導入される。
ある特定の態様では、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）は、超音波処理によってプロデューサー細胞に導入される。一部の態様では、プロデューサー細胞は、高強度の音波に曝露されることにより細胞膜の一時的な破壊を引き起こして、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）の負荷を可能にする。
ある特定の態様では、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）は、細胞融合によってプロデューサー細胞に導入される。一部の態様では、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）は、電気的細胞融合によって導入される。他の態様では、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が、プロデューサー細胞を融合するために使用される。さらなる態様では、センダイウイルスが、プロデューサー細胞を融合するために使用される。
一部の態様では、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）は、低張性溶解によってプロデューサー細胞に導入される。かかる態様では、プロデューサー細胞は、低イオン強度緩衝液に曝露されることによりそれらの破裂を引き起こして、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）の負荷を可能にすることができる。他の態様では、低張液に対する制御された透析を使用して、プロデューサー細胞を膨潤させ、プロデューサー細胞膜に孔を作成することができる。プロデューサー細胞は、その後、膜の再封止を可能にする条件に曝露される。
一部の態様では、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）は、洗剤処理によってプロデューサー細胞に導入される。ある特定の態様では、プロデューサー細胞は、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）の負荷を可能にする孔を作成することによってプロデューサー細胞膜を一時的に損なう穏やかな洗剤で処理される。プロデューサー細胞が負荷された後、洗剤は洗い流され、それによって膜が再封止される。
一部の態様では、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）は、受容体媒介性エンドサイトーシスによってプロデューサー細胞に導入される。ある特定の態様では、プロデューサー細胞は、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）が結合すると受容体及び会合した部分の内部移行を誘導する、表面受容体を有する。
一部の態様では、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）は、濾過によってプロデューサー細胞に導入される。ある特定の態様では、プロデューサー細胞及び１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）は、プロデューサー細胞よりも小さい孔径のフィルターに強制的に通すことにより、プロデューサー細胞膜の一時的な破壊を引き起こし、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）がプロデューサー細胞に入ることを可能にすることができる。
一部の態様では、プロデューサー細胞は、数回の凍結融解サイクルに供されることにより細胞膜の破壊をもたらして、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）の負荷を可能にする。
ＶＩ．Ｂ．ＥＶ（例えば、エキソソーム）の修飾方法
一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）を生産する方法は、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）をＥＶ（例えば、エキソソーム）に直接的に導入することによって、単離されたＥＶ（例えば、エキソソーム）を修飾することを含む。ある特定の態様では、１つまたは複数の部分は、抗原、アジュバント、免疫調節剤、標的化部分、またはそれらの組み合わせを含む。一部の態様では、１つまたは複数の部分は、本明細書に開示される足場部分（例えば、足場Ｘまたは足場Ｙ）を含む。
ある特定の態様では、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）は、トランスフェクションによってＥＶ（例えば、エキソソーム）に導入される。一部の態様では、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）は、カチオン性脂質及び重合体等の合成高分子を使用して、ＥＶ（例えば、エキソソーム）に導入され得る（Ｐａｐａｐｅｔｒｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １２：Ｓ１１８－Ｓ１３０（２００５））。ある特定の態様では、リン酸カルシウム、シクロデキストリン、またはポリブレン等の化学物質を使用して、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）をＥＶ（例えば、エキソソーム）に導入することができる。
ある特定の態様では、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）は、エレクトロポレーションによってＥＶ（例えば、エキソソーム）に導入される。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、ＥＶ（例えば、エキソソーム）膜に一時的な穴を引き起こす電界に曝露されることにより、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）の負荷を可能にする。
ある特定の態様では、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）は、微量注射によってＥＶ（例えば、エキソソーム）に導入される。一部の態様では、ガラス製マイクロピペットを使用して、微視的レベルで１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）をＥＶ（例えば、エキソソーム）に直接的に注射することができる。
ある特定の態様では、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）は、押出しによってＥＶ（例えば、エキソソーム）に導入される。
ある特定の態様では、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）は、超音波処理によってＥＶ（例えば、エキソソーム）に導入される。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、高強度の音波に曝露されることによりＥＶ（例えば、エキソソーム）膜の一時的な破壊を引き起こして、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）の負荷を可能にする。
一部の態様では、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）は、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の表面にコンジュゲート（すなわち、ＥＶの外表面またはＥＶの内腔表面に直接的にコンジュゲートまたは連結）され得る。コンジュゲーションは、当該技術分野で既知の方法によって、化学的または酵素的に達成され得る。
一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、化学的にコンジュゲートされている１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）を含む。化学的コンジュゲーションは、リンカーの使用の有無にかかわらず、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）を別の分子に共有結合させることによって遂行され得る。かかるコンジュゲートの形成は当業者の技能の範囲内にあり、コンジュゲーションを遂行するための種々の技法が知られており、このうち特定の技法の選定は、コンジュゲートされる材料によって導かれる。ある特定の態様では、ポリペプチドが、ＥＶ（例えば、エキソソーム）にコンジュゲートされている。一部の態様では、脂質、炭水化物、核酸、及び低分子等の非ポリペプチドが、ＥＶ（例えば、エキソソーム）にコンジュゲートされている。
一部の態様では、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）は、低張性溶解によってＥＶ（例えば、エキソソーム）に導入される。かかる態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、低イオン強度緩衝液に曝露されることによりそれらの破裂を引き起こして、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）の負荷を可能にすることができる。他の態様では、低張液に対する制御された透析を使用して、ＥＶ（例えば、エキソソーム）を膨潤させ、ＥＶ（例えば、エキソソーム）膜に孔を作成することができる。ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、その後、膜の再封止を可能にする条件に曝露される。
一部の態様では、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）は、洗剤処理によってＥＶ（例えば、エキソソーム）に導入される。ある特定の態様では、細胞外小胞は、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）の負荷を可能にする孔を作成することによってＥＶ（例えば、エキソソーム）膜を一時的に損なう穏やかな洗剤で処理される。ＥＶ（例えば、エキソソーム）が負荷された後、洗剤は洗い流され、それによって膜が再封止される。
一部の態様では、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）は、受容体媒介性エンドサイトーシスによってＥＶ（例えば、エキソソーム）に導入される。ある特定の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）が結合すると受容体及び会合した部分の内部移行を誘導する、表面受容体を有する。
一部の態様では、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）は、機械的発火（ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｆｉｒｉｎｇ）によってＥＶ（例えば、エキソソーム）に導入される。ある特定の態様では、細胞外小胞は、金マイクロキャリア等の重粒子または荷電粒子に結合させた１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）により衝撃を与えられ得る。これらの態様のうちの一部では、粒子は、粒子がＥＶ（例えば、エキソソーム）膜を横断するように機械的または電気的に加速され得る。
一部の態様では、細胞外小胞（例えば、エキソソーム）は、数回の凍結融解サイクルに供されることによりＥＶ（例えば、エキソソーム）膜の破壊をもたらして、１つまたは複数の部分（例えば、ペイロード及び／または標的化部分）の負荷を可能にする。
ＶＩ．Ｃ．ＥＶ、例えばエキソソームの単離方法
一部の態様では、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）を生産する方法は、プロデューサー細胞からＥＶ（例えば、エキソソーム）を単離することを含む。ある特定の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、プロデューサー細胞によって細胞培養液中に放出される。ＥＶ（例えば、エキソソーム）の単離の全ての既知の様態が、本明細書における使用に好適であると見なされることが企図される。例えば、電荷（例えば、電気泳動分離）、サイズ（例えば、濾過、分子ふるい等）、密度（例えば、通常遠心分離または勾配遠心分離）、Ｓｖｅｄｂｅｒｇ定数（例えば、外力を伴うまたは伴わない沈降等）に基づく分離を含めて、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の物理的性質が、培地または他の供給源材料からそれらを分離するために用いられてもよい。代替として、または追加として、単離は、１つまたは複数の生物学的性質に基づくことができ、表面マーカーを用い得る方法を含むことができる（例えば、沈殿、固相への可逆的結合、ＦＡＣＳ分離、特異的リガンド結合、非特異的リガンド結合、親和性精製等のため）。
単離及び濃縮は、典型的には連続遠心分離を含む、一般的かつ非選択的様態で行われ得る。代替として、単離及び濃縮は、ＥＶ（例えば、エキソソーム）またはプロデューサー細胞特異的表面マーカーを使用する等、より特異的かつ選択的な様態で行われ得る。例えば、特異的表面マーカーが、免疫沈降、ＦＡＣＳ選別、親和性精製、及びビーズ結合リガンドを用いた磁気分離において使用され得る。
一部の態様では、サイズ排除クロマトグラフィーを利用して、ＥＶ（例えば、エキソソーム）を単離することができる。サイズ排除クロマトグラフィー技法は、当該技術分野で既知である。例となる、非限定的な技法が本明細書に提供される。一部の態様では、ボイド容積の画分が単離され、これは目的とするＥＶ（例えば、エキソソーム）を含む。さらに、一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、当該技術分野で一般に既知であるように、クロマトグラフーでの分離後に（１つまたは複数のクロマトグラフィー画分の）遠心分離技法によってさらに単離され得る。一部の態様では、例えば、密度勾配遠心分離を利用して、細胞外小胞をさらに単離することができる。ある特定の態様では、プロデューサー細胞由来のＥＶ（例えば、エキソソーム）を、他の起源のＥＶ（例えば、エキソソーム）からさらに分離することが望ましい場合がある。例えば、プロデューサー細胞由来のＥＶ（例えば、エキソソーム）は、プロデューサー細胞に特異的な抗原抗体を使用した免疫吸着剤捕捉により、非プロデューサー細胞由来のＥＶ（例えば、エキソソーム）から分離され得る。
一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）の単離は、分画遠心、サイズに基づく膜濾過、免疫沈降、ＦＡＣＳ選別、及び磁気分離を含むがこれらに限定されない方法の組み合わせを伴い得る。
ＶＩＩ．処置方法
本開示はまた、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）を対象に投与することを含む、疾患または障害の予防及び／または処置を必要とする対象において疾患または障害を予防及び／または処置する方法を提供する。一部の態様では、本方法で処置され得る疾患または障害は、がん、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）、自己免疫疾患、感染性疾患、または線維性疾患を含む。本開示で処置され得る疾患または障害の他の非限定的な例としては、寛容性、アレルギー、アトピー、疼痛、依存症、及びそれらの組み合わせが挙げられる。いずれの１つの理論にも拘束されることを望むものではないが、一部の態様では、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）は、疾患または障害に関連する分子（例えば、依存症：ニコチン、疼痛：ＣＧＲＰまたはサブスタンスＰ）に特異的に結合することができる中和抗体を誘導することによって、これらの疾患または障害を処置及び／または予防することができる。例えば、サブスタンスＰ、神経成長因子、ブラジキニン、またはカルシトニン関連遺伝子生成物（ＣＧＲＰ）等の疼痛媒介性神経ペプチドに対する体液性応答に有利なＥＶ（例えば、エキソソーム）をこれらの標的に対する受動的抗体療法の代わりに使用して、疼痛症候群を処置または予防することができる。偏頭痛処置に対するＣＧＲＰを標的とするいくつかの予防的な受動的抗体療法の最近の規制上の承認は、提案される体液性の能動的なワクチン方策に対する強力な根拠を提供する。ニコチン、コカイン、フェンタニル、ヘロイン、メタンフェタミン等といった不正薬物を、ＥＶ（例えば、エキソソーム）ワクチン上に発現させたタンパク質または他の分子に化学的にコンジュゲートすることによって、これらの低分子に対する抗体応答を生成することが可能である。かかる抗薬物乱用ワクチンは、乱用物質の脳内曝露を制限し、それによって、多幸感及びＣＮＳ毒性を生み出すその能力を低減することができる。故に、強力なＴＨ２指向性アジュバントと組み合わされた、不正薬物にコンジュゲートされたＥＶは、薬物乱用リハビリテーションのためのワクチン処置戦略を提供し得る。一部の態様では、処置は、予防的である。他の態様では、本開示のためのＥＶ（例えば、エキソソーム）は、免疫応答を誘導するために使用される。他の態様では、本開示のためのＥＶ（例えば、エキソソーム）は、対象にワクチンを接種するために使用される。
一部の態様では、疾患または障害は、がんである。がんを有する対象に投与されるとき、ある特定の態様では、本開示のＥＶは、免疫応答を上方制御し、対象の免疫系の腫瘍標的化を強化することができる。一部の態様では、処置されているがんは、白血球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、樹状細胞、単球）の腫瘍微小環境への浸潤、またはいわゆる「熱い腫瘍（ｈｏｔ ｔｕｍｏｒ）」もしくは「炎症性腫瘍」を特徴とする。一部の態様では、処置されているがんは、腫瘍微小環境への低レベルもしくは検出不能なレベルの白血球浸潤、またはいわゆる「冷たい腫瘍（ｃｏｌｄ ｔｕｍｏｒ）」もしくは「非炎症性腫瘍」を特徴とする。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、「冷たい腫瘍」を「熱い腫瘍」に変換するのに十分な量及び時間投与され、すなわち、該投与は、白血球（Ｔ細胞等）の腫瘍微小環境への浸潤をもたらす。ある特定の態様では、がんは、膀胱癌、子宮頸癌、腎細胞癌、精巣癌、結腸直腸癌、肺癌、頭頸部癌、及び卵巣、リンパ腫、肝臓癌、膠芽腫、黒色腫、骨髄腫、白血病、膵臓癌、またはそれらの組み合わせを含む。「遠位腫瘍」または「遠隔腫瘍」という他の用語では、元の（または原発）腫瘍から遠隔臓器または遠隔組織、例えば、リンパ節に広がった腫瘍を指す。一部の態様では、本開示のＥＶは、転移性で広がった後の腫瘍を処置する。
一部の態様では、疾患または障害は、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）である。一部の態様では、本開示で処置され得る疾患または障害は、自己免疫疾患である。自己免疫疾患の非限定的な例としては、多発性硬化症、末梢神経炎、シェーグレン症候群、関節リウマチ、脱毛症、自己免疫性膵炎、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、セリアック病、デビック病（視神経脊髄炎）、糸球体腎炎、ＩｇＡ腎症、各種血管炎、強皮症、糖尿病、動脈炎、白斑症、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、乾癬、ブドウ膜炎、全身性エリテマトーデス、グレーブス病、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、抗糸球体基底膜抗体病（グッドパスチャー症候群）、橋本甲状腺炎、自己免疫性肝炎、及びそれらの組み合わせが挙げられる。
一部の態様では、疾患または障害は、感染性疾患である。ある特定の態様では、疾患または障害は、発がんウイルスである。一部の態様では、本開示で処置され得る感染性疾患には、ヒトガンマヘルペスウイルス４（エプスタイン・バールウイルス）、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、サイトメガロウイルス、ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、ＨＩＶ（例えば、ＨＩＶ－２））、コロナウイルス（例えば、ＣＯＶＩＤ－１９、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、及びＳＡＲＳ ＣｏＶ）、フィロウイルス（例えば、マールブルグ及びエボラ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐｌａｓｍｏｄｉａ種（例えば、ｖｉｖａｘ及びｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、チクングニアウイルス、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ヒトヘルペスウイルス８、メルケル細胞ポリオーマウイルス（ＭＣＶ）、ブニヤウイルス（例えば、ハンタウイルス）、アレナウイルス（例えば、ＬＣＭＶ及びラッサウイルス）、フラビウイルス（例えば、デング熱、ジカ熱、日本脳炎、西ナイル熱、及び黄熱）、エンテロウイルス（例えば、ポリオ）、アストロウイルス（例えば、胃腸炎）、ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、狂犬病）、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ及びＢｕｒｒｅｌｉａ ｍａｙｏｎｉｉ（例えば、ライム病）、単純ヘルペスウイルス２（ＨＳＶ２）、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ属菌、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属菌、Ｐｒｏｔｅｕｓ属菌、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ属菌、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒ属菌、コアグラーゼ陰性ブドウ球菌（ＣｏＮＳ）、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ属菌、またはそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
一部の態様では、疾患または障害には、疼痛が含まれる。本明細書で使用されるとき、「疼痛」という用語は、全てのカテゴリーの疼痛を指し、神経障害性疼痛、炎症性疼痛、侵害受容性疼痛、特発性疼痛、神経痛、口腔顔面痛、熱傷痛、口腔灼熱症候群、体性疼痛、内臓痛、筋膜性（ｍｙｏｆａｃｉａｌ）疼痛、歯痛、がん性疼痛、化学療法性疼痛、外傷性疼痛、手術疼痛、術後疼痛、出産時疼痛、陣痛、反射性交感神経性ジストロフィー、腕神経叢剥離、神経因性膀胱、急性疼痛（例えば、筋骨格及び術後疼痛）、慢性疼痛、持続性疼痛、末梢媒介性疼痛、中枢媒介性疼痛、慢性頭痛、偏頭痛、家族性片麻痺性偏頭痛、頭部痛に関連する病態、副鼻腔炎性頭痛、緊張性頭痛、幻肢痛、末梢神経損傷、脳卒中後の疼痛、視床病変、神経根症、ＨＩＶ（例えば、ＨＩＶ－１、ＨＩＶ－２）疼痛、ヘルペス後疼痛、非心臓性胸痛、過敏性腸症候群ならびに腸障害及び消化不良に関連する疼痛、麻薬依存症禁断に関連する疼痛、ならびにそれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない。
一部の態様では、疾患または障害には、アレルギーが含まれる。本明細書で使用されるとき、「アレルギー」という用語は、通常は無害の物質（「アレルゲン」）に対する免疫学的に媒介される有害反応を発現する獲得型の可能性を指す。アレルギーの非限定的な例としては、湿疹、アレルギー性鼻炎または鼻感冒、花粉症、結膜炎、気管支喘息またはアレルギー性喘息、蕁麻疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）（じんましん（ｈｉｖｅｓ））、食物アレルギー、アトピー性皮膚炎、薬物アレルギー、血管浮腫、アレルギー性結膜炎、過敏症、及びそれらの組み合わせが挙げられる。ある特定の態様では、本開示で処置され得るアレルギーは、食物アレルゲン（例えば、ピーナッツ、乳、卵、貝類、及びツリーナッツ）によって引き起こされる（すなわち、食物アレルギー）。一部の態様では、本開示で処置され得るアレルギーは、環境アレルゲン（例えば、ネコの皮屑、ブタクサ、牧草花粉、チリダニ、ハチ毒、ラテックス、及びツタウルシ）によって引き起こされる。
本開示のＥＶ（例えば、エキソソーム）は、当該技術分野で既知の任意の有用な方法及び／または経路によって対象に投与することができる。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、対象の循環系に静脈内投与される。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、好適な液体に注入され、対象の静脈中に投与される。
一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、対象の循環系に動脈内投与される。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、好適な液体に注入され、対象の動脈中に投与される。
一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、髄腔内投与によって対象に投与される。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、それが脳脊髄液（ＣＳＦ）に到達するように、脊柱管またはくも膜下腔への注射を介して投与される。
一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、対象の１つまたは複数の腫瘍中に腫瘍内投与される。
一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、鼻腔内投与によって対象に投与される。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、局所投与または全身投与のいずれかの形態で、鼻を通して吹送され得る。ある特定の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、点鼻薬として投与される。一部の態様では、鼻腔内投与は、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）の、胃腸組織への有効な送達を可能にし得る（例えば、実施例２０を参照されたい）。胃腸組織に送達されるかかるＥＶ（例えば、エキソソーム）は、種々の腸関連病原体に対する保護を提供する上で有用であり得る。
一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、腹腔内投与によって対象に投与される。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、好適な液体に注入され、対象の腹膜中に投与される。一部の態様では、腹腔内投与は、リンパ管へのＥＶ（例えば、エキソソーム）の分布をもたらす。一部の態様では、腹腔内投与は、胸腺、脾臓、及び／または骨髄へのＥＶ（例えば、エキソソーム）の分布をもたらす。一部の態様では、腹腔内投与は、１つまたは複数のリンパ節へのＥＶ（例えば、エキソソーム）の分布をもたらす。一部の態様では、腹腔内投与は、頸部リンパ節、鼠径部リンパ節、縦隔リンパ節、または胸骨リンパ節のうちの１つまたは複数へのＥＶ（例えば、エキソソーム）の分布をもたらす。一部の態様では、腹腔内投与は、膵臓へのＥＶ（例えば、エキソソーム）の分布をもたらす。
一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、眼内投与（例えば、眼周囲投与）によって対象に投与される。一部の態様では、ＥＶ、例えばエキソソームは、眼周囲組織中に注射される。眼周囲薬物投与には、結膜下、前テノン嚢下、後テノン嚢下、及び眼球後投与の経路が含まれる。
本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）を投与するために使用することができる他の投与経路の非限定的な例としては、非経口、局所、経口、皮下、皮内、経皮、直腸、腹腔内、筋肉内、舌下、またはそれらの組み合わせが挙げられる。
本明細書に開示されるように、一部の態様では、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）は、１つまたは複数の追加の治療剤と組み合わせて対象に投与することができる。ある特定の態様では、１つまたは複数の追加の治療剤及びＥＶ（例えば、エキソソーム）は、同時に投与される。一部の態様では、１つまたは複数の追加の治療剤及びＥＶ（例えば、エキソソーム）は、順次に投与される。一部の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、１つまたは複数の追加の治療剤を投与する前に対象に投与される。ある特定の態様では、ＥＶ（例えば、エキソソーム）は、１つまたは複数の追加の治療剤を投与した後に対象に投与される。本明細書で使用されるとき、「治療剤」という用語は、本明細書に開示される疾患または障害を処置する際に使用することができる任意の薬剤を指す（例えば、がんの処置のための化学療法または免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体））。一部の態様では、本開示のＥＶ（例えば、エキソソーム）と組み合わせて使用することができる１つまたは複数の追加の治療剤には、ＥＶ（例えば、エキソソーム）では発現されないペイロード（例えば、抗原、アジュバント、及び／または免疫調節剤）が含まれる。例えば、本明細書に開示される処置方法は、それを必要とする対象に、（ｉ）無抗原ＥＶ（例えば、エキソソーム）、及び（ｉｉ）ＥＶでは発現されない抗原（例えば、可溶性抗原）を投与することを含み得る。
一部の態様では、本開示で処置され得る対象は、ヒトである。一部の態様では、対象は、非ヒト哺乳動物（例えば、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシ、ニワトリ、トリ、及びクマ）である。したがって、一部の態様では、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）を使用して、動物（すなわち、非ヒト哺乳動物）の健康を改善することができる。
本開示の実施は、別途指示されない限り、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、トランスジェニック生物学、微生物学、組換えＤＮＡ、及び免疫学の従来の技法を用いることになり、これらは当業者の技能の範囲内にある。かかる技法は、文献において完全に説明される。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ ｅｄ．；Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．（１９９２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＮＹ）、Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ ｅｄ．，（１９８５）ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ ａｎｄ ＩＩ；Ｇａｉｔ，ｅｄ．（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｍｕｌｌｉｓらの米国特許第４，６８３，１９５号、Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．（１９８４）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ、Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．（１９８４）Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ、Ｆｒｅｓｈｎｅｙ（１９８７）Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．）、Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ Ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ）（１９８６）、Ｐｅｒｂａｌ（１９８４）Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ；ｔｈｅ ｔｒｅａｔｉｓｅ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．）、Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｃａｌｏｓ ｅｄｓ．（１９８７）Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．１５４ ａｎｄ １５５、Ｍａｙｅｒ ａｎｄ Ｗａｌｋｅｒ，ｅｄｓ．（１９８７）Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｃｅｌｌ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ）、Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，（１９８６）Ｈａｎｄｂｏｏｋ Ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＶ、Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｏｕｓｅ Ｅｍｂｒｙｏ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，（１９８６）、Ｃｒｏｏｋｅ，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｄｒｕｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，２ｎｄ Ｅｄ．ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ（２００７）、及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．）を参照されたい。
上記に引用される参考文献の全て、ならびに本明細書に引用される全ての参考文献は、参照によりそれらの全体が本明細書に援用される。
以下の実施例は、限定するものではなく、例示説明として提供される。
実施例１：操作されたエキソソームの生成
本明細書に記載のエキソソームを生成するために、ヒト胎児腎（ＨＥＫ）細胞株（ＨＥＫ２９３ＳＦ）を使用した。次いで、細胞を、目的とする薬剤（例えば、抗原、アジュバント、または免疫調節剤）に連結された足場Ｘ及び／または足場Ｙで安定にトランスフェクトした。図１Ａ、１Ｂ、及び２を参照されたい。例えば、ＨＥＫ２９３ＳＦ細胞を、単量体として（ｐＣＢ－５１８～ｐＣＢ－５２６）または強制的三量体（ｆｏｒｃｅｄ ｔｒｉｍｅｒ）として（ｐＣＢ－６０７及びｐＣＢ－５２７）発現させたＣＤ４０Ｌ－ＧＦＰ ＰＴＧＦＲＮ融合分子でトランスフェクトすることによって、ＣＤ４０Ｌ発現エキソソームを生成した。三量体ＣＤ４０Ｌ－ＧＦＰ ＰＴＧＦＲＮ融合分子の例が、図１Ａに示される。同様に、ニワトリ卵白アルブミン（ＯＶＡ）発現エキソソームを生成するために、ＨＥＫ２９３ＳＦ細胞において卵白アルブミンをＢＡＳＰ１のアミノ酸１～１０への融合体（「ＢＡＳＰ１（１－１０）－ＯＶＡ」）として安定に発現させた。
トランスフェクション後すぐに、ＨＥＫ２９３ＳＦ細胞を既知組成培地中で７日間、高密度になるまで増殖させた。馴化細胞培養液を収集し、３００～８００×ｇで、室温で５分間遠心分離して、細胞及び大きな破片を除去した。次いで、培地上清に１０００Ｕ／ＬのＢＥＮＺＯＮＡＳＥ（登録商標）を補充し、水浴中、３７℃で１時間インキュベートした。上清を収集し、１６，０００×ｇで、４℃で３０分間遠心分離して、残留細胞破片及び他の大きな夾雑物を除去した。次いで、上清を１３３，９００×ｇで、４℃で３時間超遠心分離して、エキソソームをペレット状にした。上清を破棄し、いずれの残留培地も管の底から吸引した。ペレットを２００～１０００μＬのＰＢＳ（－Ｃａ－Ｍｇ）中に再懸濁した。
エキソソーム集団をさらに濃縮するために、ペレットを、密度勾配精製（スクロースまたはＯＰＴＩＰＲＥＰ（商標））を介して処理した。
勾配液を、ＳＷ ４１ Ｔｉローターに配置した１２ｍＬ Ｕｌｔｒａ－Ｃｌｅａｒ（３４４０５９）管中、２００，０００×ｇで、４℃で１６時間スピンして、エキソソーム画分を分離させた。
エキソソーム層を上層から穏やかに取り出し、３８．５ｍＬ Ｕｌｔｒａ－Ｃｌｅａｒ（３４４０５８）管中、約３２．５ｍＬのＰＢＳ中に希釈し、１３３，９００×ｇで、４℃で３時間再び超遠心分離して、精製エキソソームをペレット状にした。結果として得られたペレットを最小体積のＰＢＳ（約２００μＬ）中に再懸濁し、４℃で貯蔵した。
ＯＰＴＩＰＲＥＰ（商標）勾配の場合、ＳＷ ４１ Ｔｉローター用の１２ｍＬ Ｕｌｔｒａ－Ｃｌｅａｒ（３４４０５９）管中、等体積の１０％、３０％、及び４５％ＯＰＴＩＰＲＥＰ（商標）により３段の滅菌勾配液を調製する。ペレットをＯＰＴＩＰＲＥＰ（商標）勾配液に添加し、２００，０００×ｇで、４℃で１６時間超遠心分離して、エキソソーム画分を分離させた。次いで、エキソソーム層を管の上層約３ｍＬから穏やかに回収した。
エキソソーム画分を３８．５ｍＬ Ｕｌｔｒａ－Ｃｌｅａｒ（３４４０５８）管中、約３２ｍＬのＰＢＳ中に希釈し、１３３，９００×ｇで、４℃で３時間超遠心分離して、精製エキソソームをペレット状にした。次いで、ペレット状にしたエキソソームを最小体積のＰＢＳ（約２００μＬ）中に再懸濁し、使用準備ができるまで４℃で貯蔵した。
実施例２：抗原特異的Ｔ細胞応答を誘導する操作されたエキソソームの有効性
本明細書に開示されるエキソソームが免疫応答を誘導する能力を評価するために、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷された操作されたエキソソーム（「Ｐｙ－ＯＶＡ－エキソＳＴＩＮＧ」）をマウスに静脈内または鼻腔内のいずれかから投与した。投与から１週間後、ＯＶＡに反応性のＣＤ８＋ Ｔ細胞の頻度を、フローサイトメトリー及び／またはＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＰＯＴアッセイの両方を介して、それぞれ静脈内または鼻腔内投与後の脾臓及び血液または肺及び脾臓の酵素的解離によって評価した。対照動物は、以下のうちの１つを受けた：（ｉ）腹腔内に注射した、可溶性ＯＶＡタンパク質（エキソソームの一部ではない）と組み合わせた抗ＣＤ４０抗体（「ＩＰ ａＣＤ４０＋ＯＶＡ」）、（ｉｉ）可溶性ＯＶＡタンパク質（エキソソームの一部ではない）と組み合わせたｃＡＩＭ（ＰＳ）２ジフルオル（Ｒｐ／Ｓｐ）（「ＣＬ６５６」、ＳＴＩＮＧアゴニスト）（「ＣＬ６５６＋ＯＶＡ」）、（ｉｉｉ）可溶性ＯＶＡタンパク質（ＯＶＡは、エキソソームの一部ではない）と組み合わせた、足場Ｘのみを過剰発現しており、ＳＴＩＮＧアゴニストを負荷されたエキソソーム（「Ｐｘ－エキソＳＴＩＮＧ＋ＯＶＡ」）、及び（ｉｖ）ＯＶＡ－足場Ｙ融合タンパク質のみを発現しているエキソソーム（「Ｐｙ－ＯＶＡ」）。
図３Ａ及び３Ｂに示されるように、異なる処置群の中で、Ｐｙ－ＯＶＡ－エキソＳＴＩＮＧエキソソームの静脈内投与を受けた動物が、脾臓及びＰＢＭＣの両方において最多数のＯＶＡ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を有した。異なる処置レジメンを鼻腔内投与したときに同様の結果が観察された。（フローサイトメトリー解析については図４Ａ及び４Ｂ、ＥＬＩＳＰＯＴの結果については図５Ａ及び５Ｂを参照されたい）。これらの結果は、本明細書に開示される（すなわち、ＯＶＡ－足場Ｙ及びＳＴＩＮＧアゴニスト負荷の両方を含む）エキソソームを使用して、目的とする抗原（例えば、腫瘍または微生物抗原）に対する強固な免疫応答を誘導することができることを実証する。
実施例３：免疫寛容を誘導する操作されたエキソソームの有効性
本明細書に開示されるエキソソームの寛容原性の可能性を評価するために、自己免疫疾患に関連する抗原（例えば、ベータ細胞タンパク質（Ｉ型糖尿病）、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ、多発性硬化症）、または滑膜タンパク質（関節リウマチ））を含む操作されたエキソソームを構築する。実施例２にあるように、抗原は、本明細書に記載の足場Ｙタンパク質に連結される。操作されたエキソソームのうちの一部は、ラパマイシン及び／またはその誘導体等のＮＦｋＢ阻害クラスの免疫調節剤をさらに含む。これらの免疫調節剤は、エキソソームにおいて足場Ｘタンパク質（例えば、本明細書に記載されるもの）に連結されて発現されるか、またはエキソソーム中に外因性で負荷される。
上記の操作されたエキソソームを遅延型過敏症（ＤＴＨ）または実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）のための実験動物モデルに投与する。次いで、フローサイトメトリー及びＥＬＩＳＰＯＴアッセイ等のアッセイを使用して、標的抗原に対する寛容原性／制御性Ｔ細胞応答を動物において評価する。
実施例４：免疫応答の誘導における操作されたエキソソームと他の抗原－アジュバントの組み合わせとの比較
本明細書に開示される操作されたエキソソーム（例えば、実施例２を参照されたい）がＯＶＡ特異的免疫応答（Ｔ細胞及びＢ細胞の両方）を誘導する能力を、他の既知の抗原－アジュバントの組み合わせと比較する。具体的に述べると、以下の抗原－アジュバントの組み合わせに対して直接的な突き合わせた比較を行う：可溶性ＯＶＡ（抗原）及びモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）、水乳濁液中のスクアレン（ＡｄｄａＶａｘ（商標））、サポニンベースのワクチン（Ｑｕｉｌ－Ａ（登録商標））、フロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）、及び／またはポリイノシン・ポリシチジン酸（ポリＩ：Ｃ）によるワクチン接種。
以下の評価項目を分析する：（ｉ）単回投与から１週間後ならびに追加免疫投与（２回投薬、２週間間隔）から１週間後の誘導されたＴ細胞サブセットの分布、すなわち、ＯＶＡ反応性のＣＤ８ Ｔ細胞及びＣＤ４ Ｔ細胞％、（ｉｉ）Ｔ細胞エフェクター分析（上記と同じであるが、ＣＤ４及びＣＤ８コンパートメントにおけるＴ細胞応答の種類を検査する。時点は上記と同一となり、分析は、フローによる細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）となる）、ならびに（ｉｉｉ）追加免疫投与（２回目の投薬）から１週間後の体液性応答（これは、ＥＬＩＳＡまたはバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によるＯＶＡ特異的抗体及び抗体クラスについての血清の分析、ならびにビオチン標識された全ＯＶＡ抗原に対するＢ細胞反応性のフローベースの分析となる）。
実施例５：内腔抗原の用量応答分析
本明細書に開示される操作されたエキソソームが有効な免疫応答を発動するのに必要とされる最低量の抗原を決定するために、用量応答分析を行う。この研究は、等量のＣＬ６５６、及び漸減量のＰｙ－ＯＶＡと漸増量のＰｙ－ＧＦＰを負荷されたＰｙ－ＯＶＡ：Ｐｙ－ＧＦＰ混合物（すなわち、いずれも足場Ｙタンパク質に連結されたＯＶＡ及びＧＦＰを発現しているエキソソーム）を比較する。表１０（下記）を参照されたい。
Figure 2022526127000037
実施例２に記載されるように、投与からおよそ１週間後、動物を屠殺し、フローサイトメトリー及び／またはＥＬＩＳＰＯＴアッセイを使用して、抗原特異的免疫応答を種々の組織（例えば、脾臓、肺、血液）において評価する。
実施例６：免疫応答の誘導に対する投与経路の効果
データは、鼻腔内、静脈内、皮下、腹腔内、及び筋肉内投与後のＰｙ－ＯＶＡ－エキソＳＴＩＮＧ（実施例２を参照されたい）のいくつかの用量を比較する。評価項目分析は、単回及び２回（２週間間隔）投与から１週間後の脾臓及び循環（ＰＢＭＣ）におけるＯＶＡ反応性のＣＤ４ Ｔ細胞及びＣＤ８ Ｔ細胞を含む。
実施例７：粘膜ホーミングの誘導
本明細書に開示されるエキソソームが粘膜組織内で免疫応答を誘導する能力を評価するために、Ｐｙ－ＯＶＡ－エキソＳＴＩＮＧ（実施例２を参照されたい）を雌性マウスに鼻腔内投与する。１回または２回投薬後、雌性マウスをＭＰＬＡ及びスクアレンの膣内投与の誘導によってチャレンジする。膣内チャレンジから５日後、生殖器を採取し、ＯＶＡ特異的ＣＤ４ Ｔ細胞及びＣＤ８ Ｔ細胞の動員に関して評価した。
実施例８：静脈内または鼻腔内ワクチン接種後の組織常在性メモリーＴ細胞応答
本明細書に開示される操作されたエキソソームが循環及び／または組織常在性メモリーＴ細胞を誘導する能力をよりよく特性評価するために、Ｐｙ－ＯＶＡ－エキソＳＴＩＮＧを実施例２に記載されるように動物に投与する。投与後１週間で、肺（鼻腔内投与を受けた動物から）及び／または肝臓（静脈内投与を受けた動物から）を処理し、循環及び／または組織常在性メモリーＴ細胞に関して分析する。
実施例９：ヒトヘルペスウイルス２（ＨＳＶ２）に対する治療的ワクチン接種
動物が性器ＨＳＶ２感染症を有する、ＨＳＶ２感染症のマウスモデルを以下のうちの１つにより鼻腔内から処置する：（ｉ）足場Ｙに連結されたＨＳＶ２抗原を発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストを負荷されたエキソソーム（「Ｐｙ－ＨＳＶ２－エキソＳＴＩＮＧ」）、（ｉｉ）足場Ｙに連結されたＯＶＡ抗原を発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニスト（「Ｐｙ－ＯＶＡ－エキソＳＴＩＮＧ」）、またはＡＣＹＣＬＯＶＩＲ（商標）を負荷されたエキソソーム。Ｐｙ－ＨＳＶ２－エキソＳＴＩＮＧ構築物は、２～３つの異なるＨＳＶ２抗原を発現する。評価項目は、異なる処置レジメンの１回または２回（隔週）投薬後のウイルス排出及び麻痺を測定する。
実施例１０：ヒトヘルペスウイルス２（ＨＳＶ２）に対する予防的ワクチン接種
実施例９に記載されるエキソソーム構築物を使用して、ナイーブマウスにワクチンを鼻腔内から１回または２回（隔週）接種し、最終投与から１週間後、ＨＳＶ２により膣内からチャレンジする。評価項目は、チャレンジ後３週間にわたるウイルス排出及び麻痺の測定を含む。
実施例１１：ＥＧ７－ＯＶＡ腫瘍を担持するマウスに対する治療ワクチン接種
マウスにＥＧ７－ＯＶＡ腫瘍を皮下接種する。腫瘍が５０ｍｍ３に達したとき、マウスにＰｙ－ＯＶＡ－エキソＳＴＩＮＧ（実施例２を参照されたい）または適切な対照によるワクチンを鼻腔内、静脈内、または皮下から接種する。評価項目は、腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）として表される腫瘍増殖の測定を含む。
実施例１２：Ｐｙ－ＯＶＡ－エキソＳＴＩＮＧと比較したＣＤ４０Ｌ－Ｐｘ：Ｐｙ－ＯＶＡ－エキソＳＴＩＮＧによるワクチン接種
Ｐｙ－ＯＶＡ－エキソＳＴＩＮＧ（実施例２を参照されたい）が免疫応答を誘導する能力を、（ｉ）足場Ｘに連結されたＣＤ４０Ｌ、（ｉｉ）足場Ｙに連結されたＯＶＡを発現し、（ｉｉｉ）ＳＴＩＮＧアゴニストを負荷された、エキソソーム（「ＣＤ４０Ｌ－Ｐｘ：Ｐｙ－ＯＶＡ－エキソＳＴＩＮＧ」）と直接比較する。エキソソームをナイーブ動物に投与し、次いで、実施例２に記載されるように、投与からおよそ１週間後、ＯＶＡ特異的Ｔ細胞応答を種々の組織において評価する。
実施例１３：抗Ｃｌｅｃ９ａ ＥＶ（例えば、エキソソーム）によるワクチン接種
ＳＴＩＮＧアゴニストを負荷されたとともに、抗Ｃｌｅｃ９ａ部分を発現しているＯＶＡ発現ＥＶ（例えば、エキソソーム）（「抗Ｃｌｅｃ９ａ ＥＶ」）が免疫応答を誘導する能力もまた動物モデルにおいて評価する。図６は、提案される実験設計の概略図を提供する。動物を以下のうちの１つで処置する：（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニストを負荷されたとともに、対照アイソタイプ抗体を発現しているＯＶＡ発現ＥＶ（例えば、エキソソーム）、（ｉｉ）対照アイソタイプ抗体を単独で発現しているＯＶＡ発現ＥＶ（例えば、エキソソーム）、（ｉｉｉ）ＳＴＩＮＧアゴニストを負荷されたとともに、抗Ｃｌｅｃ９ａ標的化部分を発現しているＯＶＡ発現ＥＶ（例えば、エキソソーム）、（ｉｖ）抗Ｃｌｅｃ９ａ標的化部分を発現しているが、ＳＴＩＮＧアゴニストを負荷されていないＯＶＡ発現ＥＶ（例えば、エキソソーム）、及び（ｖ）ＯＶＡを単独で発現しているＥＶ（例えば、エキソソーム）。異なる処置レジメンを鼻腔内投与する。次いで、動物のうちの一部を屠殺し、ＯＶＡ特異的Ｔ細胞応答を脾臓及び肺において評価する。動物のうちの一部は、初回投与からおよそ１４日後にＥＶ（例えば、エキソソーム）の２回目の投与を受ける。追加免疫後にＯＶＡ特異的Ｔ細胞応答をさらに評価する。
実施例１４：抗ＥＢＶ ＢＺＬＦ１ ＥＶ（例えば、エキソソーム）によるワクチン接種
エプスタイン・バールウイルス（ＥＢＶ）ＢＺＬＦ１抗原を負荷されたＥＶ（例えば、エキソソーム）が免疫応答を誘導する能力を、上記に開示される方法及び実験設計に従って（例えば、上記に開示される抗原をＢＺＬＦ１と置き換えて）動物モデルにおいて評価する。図８は、ＥＶの内腔表面膜に結合しているＢＺＬＦ１抗原を含有するＥＶ、例えばエキソソームの略図を示す。
実施例１５：エフェクターＴ細胞及びメモリーＴ細胞（脾臓）を誘導する操作されたエキソソームの有効性
本明細書に開示されるエキソソーム（実施例２を参照されたい）での免疫化後に観察されるＴ細胞応答をさらに特性評価するために、エキソソームがエフェクターＴ細胞及びメモリーＴ細胞の両方を誘導する能力をマウスにおいて観察した。簡潔に述べると、マウスに、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷された操作されたエキソソーム（「Ｐｙ－ＯＶＡエキソＶＡＣＣ」）を皮下投与した。対照動物は、以下のうちの１つを受けた：（ｉ）可溶性ＯＶＡ（「ＯＶＡ」）、（ｉｉ）可溶性ＯＶＡ＋ＣＬ６５６（「ＯＶＡ＋ＳＴＩＮＧ」）、（ｉｉｉ）ＯＶＡ－足場Ｙ融合タンパク質のみを発現しているエキソソーム（「ＰｙＯＶＡ」）、（ｉｖ）ＯＶＡ－足場Ｙ融合タンパク質のみを発現しているエキソソーム＋可溶性ＣＬ６５６（すなわち、ＳＴＩＮＧアゴニストは、エキソソーム中に負荷されない）（「ＰｙＯＶＡ＋ＳＴＩＮＧ」）、及び（ｖ）可溶性ＯＶＡ＋ミョウバンアジュバント（「ＯＶＡ＋ミョウバン」）。
投与から２週間後、動物のうちの一部を屠殺し、ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＰＯＴアッセイを使用して、脾臓におけるＯＶＡ特異的Ｔ細胞（ＣＤ４＋ Ｔ細胞及びＣＤ４＋ Ｔ細胞の両方）の頻度を評価した。ＩＦＮ－γ産生を誘導するために、脾細胞をＣＤ４＋ Ｔ細胞及びＣＤ８＋ Ｔ細胞に特異的なＯＶＡペプチドによりインビトロで刺激した。残りの動物を同じ処置レジメンにより追加免疫した（すなわち、再び免疫化した）。次いで、初回免疫化後２８日目（または追加免疫後１４日目）に、動物を屠殺し、ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＰＯＴアッセイを使用して、脾臓におけるＯＶＡ特異的Ｔ細胞（ＣＤ４＋ Ｔ細胞及びＣＤ４＋ Ｔ細胞の両方）の頻度をまた評価した。
図９Ａ及び９Ｂに示されるように、単回皮下投与後、Ｐｙ－ＯＶＡエキソＶＡＣＣエキソソームを受けた動物は、脾臓において最多数のＯＶＡ特異的ＣＤ４＋ Ｔ細胞及びＣＤ８＋ Ｔ細胞を有した。ＣＤ４＋ Ｔ細胞及びＣＤ８＋ Ｔ細胞数のこの増加は、Ｐｙ－ＯＶＡエキソＶＡＣＣエキソソームを受けた動物において追加免疫後にさらに増加した。
上記のデータは、実施例２からの結果と一致しており、本明細書に開示されるエキソソーム（例えば、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷された操作されたエキソソーム）を使用して、皮下投与した場合であっても、目的とする抗原（例えば、腫瘍または微生物抗原）に対する強固なエフェクターＴ細胞及びメモリーＴ細胞を誘導することができることをさらに実証する。
実施例１６：エフェクターＴ細胞及びメモリーＴ細胞（肺）を誘導する操作されたエキソソームの有効性
実施例１５からの結果が他の組織（例えば、粘膜組織）においても観察されるかどうかを評価するために、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷された操作されたエキソソーム（「Ｐｙ－ＯＶＡエキソＶＡＣＣ」）を、鼻腔内投与を介してマウスに投与した。免疫化後７日目に、動物のうちの一部を屠殺し、フローサイトメトリーを使用して、ＯＶＡ特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の頻度を肺において評価した。残りのマウスには、代わりに、Ｐｙ－ＯＶＡエキソＶＡＣＣの２回目の投与により追加免疫した。これらの動物を１週間後（すなわち、初回免疫化後１４日目）に屠殺し、フローサイトメトリーを使用して、ＯＶＡ特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の頻度を肺において評価した。両時点で、ＯＶＡ特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞をエフェクターメモリー（ＣＤ４４＋及びＣＤ６２Ｌ－）Ｔ細胞または常在性メモリー（ＣＤ４４＋、ＣＤ６２Ｌ－、及びＣＤ１０３＋）Ｔ細胞としてさらに分類した。
図１０に示されるように、Ｐｙ－ＯＶＡエキソＶＡＣＣの単回鼻腔内投与後、強固なＯＶＡ特異的エフェクターメモリーＣＤ８＋ Ｔ細胞が処置動物の肺において観察された。追加免疫後、ＯＶＡ特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の数はさらに増加して、強固なエフェクター及びメモリーＣＤ８＋ Ｔ細胞をもたらした。
本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）が強固な常在性メモリーＣＤ４＋ Ｔ細胞もまた発動することができるかどうかを評価するために、マウスに鼻腔内投与を介して以下のうちの１つを投与した：（ｉ）可溶性ＯＶＡ（「ＯＶＡ」）、（ｉｉ）ＯＶＡ－足場Ｙ融合タンパク質のみを発現しているエキソソーム（「ＰｙＯＶＡ」）、（ｉｉｉ）ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「Ｐｙ－ＯＶＡエキソＶＡＣＣ」）、（ｉｖ）可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ」）、及び（ｖ）ＯＶＡ－足場Ｙ融合タンパク質のみを発現しているエキソソーム＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＰｙＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ」）。初回免疫化後７日目に、動物は、同じ処置の２回目の投与を受けた。次いで、動物を１週間後（すなわち、初回免疫化後１４日目）に屠殺し、フローサイトメトリーを使用して、ＯＶＡ特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の頻度を肺において評価した。
上記の結果と一致するように、Ｐｙ－ＯＶＡエキソＶＡＣＣで処置された動物は、肺内で強固な常在性メモリーＣＤ８＋ Ｔ細胞を表した（図１３Ａ、１３Ｂ、及び１３Ｃ）。常在性メモリーＣＤ４＋ Ｔ細胞に関して同様の結果が観察された。
まとめると、上記のデータは、本明細書に開示されるエキソソーム（例えば、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷された操作されたエキソソーム）が、粘膜組織（例えば、肺）内を含めて、強固なエフェクターＴ細胞及びメモリーＴ細胞（ＣＤ８＋及びＣＤ４＋の両方）を誘導する有効性をさらに実証する。
実施例１７：抗Ｃｌｅｃ９ａ発現ＥＶ（例えば、エキソソーム）の指向性の分析
上述の実施例１３にさらに付け加えて、ＥＶ（例えば、エキソソーム）を、それらの表面上の足場Ｘタンパク質に連結された抗Ｃｌｅｃ９ａ抗体断片を発現するように操作した（「抗Ｃｌｅｃ９ａ ＥＶ」）。先の実施例にあるように、抗Ｃｌｅｃ９ａ ＥＶにＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷した。
抗Ｃｌｅｃ９ａ ＥＶをマウスに投与し、それらの細胞特異的指向性を評価した。対照動物は、ＰＢＳ単独（「ＰＢＳ」）、または足場Ｘタンパク質を単独で発現しているエキソソーム（「ＰｒＸ ＥＶ」）のいずれかを受けた。図１１Ａに示されるように、脾臓内で古典的樹状細胞１（「ｃＤＣ１」）集団による抗Ｃｌｅｃ９ａ ＥＶの優先的な取り込みが存在した。分析した他の樹状細胞（すなわち、古典的ＤＣ２（「ｃＤＣ２」）及び形質細胞様ＤＣ（「ｐＤＣ」））の中では、対照エキソソーム（ＰｒＸ ＥＶ）と比較して抗Ｃｌｅｃ９ａ ＥＶの取り込みに顕著な差異は存在しなかった。
次に、ｃＤＣ１に対する抗Ｃｌｅｃ９ａ ＥＶの強化された指向性の効果をさらに評価するために、脾臓における樹状細胞（野生型マウスから単離）を抗Ｃｌｅｃ９ａ ＥＶによりインビトロで刺激し、ＤＣ内のＳＴＩＮＧ活性を評価した。ＤＣを様々な濃度の抗Ｃｌｅｃ９ａ ＥＶ（すなわち、０．４ｎＭ、１ｎＭ、または４ｎＭ）で刺激した。対照群におけるＤＣを以下のうちの１つで刺激した：（ｉ）可溶性ＳＴＩＮＧアゴニスト（「遊離ＳＴＩＮＧ」）、（ｉｉ）足場Ｘタンパク質を単独で発現するとともに（すなわち、抗Ｃｌｅｃ９ａ抗体断片なし）、ＳＴＩＮＧアゴニストを負荷されたＥＶ（例えば、エキソソーム）（「ＰｒＸ－ＳＴＩＮＧ」）、及び（ｉｉｉ）非関連抗体を発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストを負荷されたＥＶ（例えば、エキソソーム）（「アイソタイプ－ＳＴＩＮＧ」）。異なるＤＣによって産生されたＩＬ－１２の量を測定することによって、ＳＴＩＮＧ活性を評価した。図１１Ｂに示されるように、抗Ｃｌｅｃ９ａ ＥＶで処理した単離ＤＣは、ＰｒＸ－ＳＴＩＮＧで処理したＤＣを含む他の群と比較して、はるかにより高い量のＩＬ－１２を産生した。
上記の結果は、抗Ｃｌｅｃ９ａ標的化部分を発現しているＥＶ（例えば、エキソソーム）が、ｃＤＣ１等のＣｌｅｃ９ａ発現細胞を優先的に標的とし得ること、及びこの強化された指向性が、樹状細胞活性化を増加させる一助となり得ることを実証する。かかる能力は、本開示に記載されるように、ワクチン接種の関連において有用であり得る。
実施例１８：免疫応答の誘導に対する投与経路の効果
上記に提供される実施例６にさらに付け加えて、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）が免疫応答を誘導する能力に対する投与経路の効果をさらに評価した。簡潔に述べると、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷された操作されたエキソソーム（「Ｐｙ－ＯＶＡエキソＶＡＣＣ」）（１μｇ ＯＶＡ）を、以下の投与経路、すなわち、（ｉ）静脈内（「ＩＶ」）、（ｉｉ）鼻腔内（「ＩＮ」）、及び（ｉｉｉ）皮下（「ＳＱ」）のうちの１つを介してマウスに投与した。比較として、マウスのうちの一部は、市販の製剤（ＡＤＤＡＶＡＸ（商標）、ＩｎｖｉｏＧｅｎ）中の可溶性ＯＶＡの皮下投与（「ＳｕｂＱ ＡＶ」）を受けた。免疫化後７日目に、全ての動物を屠殺し、脾細胞を単離し、フローサイトメトリーを介して、ＯＶＡ特異的エフェクターメモリーＣＤ８＋ Ｔ細胞（ＣＤ４４＋及びＣＤ６２Ｌ－）の頻度を評価した。
図１２Ａ及び１２Ｂに示されるように、投与経路にかかわらず、Ｐｙ－ＯＶＡエキソＶＡＣＣは、特に市販の製剤を使用して送達されたＯＶＡと比較したときに、動物において強固なＯＶＡ特異的エフェクターメモリーＣＤ８＋ Ｔ細胞を誘導することが可能であった。これらの結果は、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）の有効性をさらに裏付けるものであり、投与経路にかかわらず、ＥＶを使用して、強固な免疫応答を誘導することが可能であろうことを実証する。
実施例１９：Ｐｙ－ＯＶＡエキソＶＡＣＣ ＥＶ（例えば、エキソソーム）の抗腫瘍効果
上記に提供される実施例１１にさらに付け加えて、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）が抗腫瘍免疫応答を誘導する能力をマウスモデルにおいて評価した。簡潔に述べると、マウスを以下のうちの１つで処置した：（ｉ）鼻腔内投与を介した、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（「Ｐｙ－ＯＶＡエキソＶＡＣＣ」）（「エキソＶＡＣＣ（ＩＮ）」）、（ｉｉ）皮下投与を介した、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷されたエキソソーム（Ｐｙ－ＯＶＡエキソＶＡＣＣ）（「エキソＶＡＣＣ（ＳＱ）」）、（ｉｉｉ）鼻腔内投与を介した可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＩＮ）」）、及び（ｉｖ）皮下投与を介した可溶性ＯＶＡ＋可溶性ポリＩ：Ｃ（「ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（ＩＮ）」）。図１４Ａを参照されたい。未処置またはＰＢＳのみで処置された動物を対照として使用した。次いで、免疫化後７日目に、ＥＧ７－ＯＶＡ腫瘍細胞を全ての動物に皮下移植した。次いで、腫瘍体積及び動物の生存率の両方を少なくとも３０日の過程にわたって監視した。
図１４Ｂ、１４Ｃ、１４Ｄ、及び１４Ｆに示されるように、未処置の動物またはＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃで処置した（鼻腔内投与及び皮下投与の両方）動物のいずれも、腫瘍の制御に至らず、腫瘍移植後約３０日目までに疾患のため死亡した。しかしながら、エキソＶＡＣＣの投与を受けた動物においては、改善された抗腫瘍免疫応答が観察された。エキソＶＡＣＣ（ＳＱ）群については、動物の２５％で腫瘍が有効に制御され、実験の終わりまで生き延びた（図１４Ｂ及び１４Ｅ）。エキソＶＡＣＣ（ＩＮ）群については、動物の５０％でＥＧ７腫瘍細胞に対する有効な抗腫瘍免疫応答が発動された（図１４Ｂ及び１４Ｇ）。図１４Ｈに示されるように、改善された抗腫瘍免疫応答は、腫瘍増殖の速度の減少と相関があった。別個の独立した実験では、エキソＶＡＣＣ（ＳＱ）群及びエキソＶＡＣＣ（ＩＮ）群の両方からの動物で、腫瘍増殖が制御され、実験の全継続期間を生き延びたパーセンテージがより高かった（図１４Ｌ、１４Ｍ、及び１４Ｎを参照されたい）。
上記の結果は、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）を、ある特定のがんの処置のためのワクチンとして使用することが可能であることを実証する。
実施例２０：Ｐｙ－ＯＶＡエキソＶＡＣＣ ＥＶ（例えば、エキソソーム）が鼻腔内投与後に腸間膜リンパ節において抗原特異的Ｔ細胞を誘導する能力
本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）が粘膜免疫応答を誘導する能力をさらに評価するために、腸間膜リンパ節（すなわち、腸の流入領域リンパ節）における抗原特異的Ｔ細胞の頻度を、Ｐｙ－ＯＶＡエキソＶＡＣＣ（すなわち、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷された操作されたエキソソーム）の鼻腔内投与後に評価した（図１５Ａにおける「群５」を参照されたい）。対照動物は、以下のうちの１つを受けた：（ｉ）足場Ｙを単独で発現している空の（すなわち、ＯＶＡ抗原なし）エキソソーム（「群１」）、（ｉｉ）可溶性ＯＶＡ（「群２」）、（ｉｉｉ）可溶性ＯＶＡ＋可溶性ＳＴＩＮＧアゴニスト（「群３」）、または（ｉｖ）ＯＶＡ－足場Ｙ融合タンパク質のみを発現しているエキソソーム（「群４」）。ワクチン接種後７日目に、動物を屠殺し、ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＰＯＴ及び／またはフローサイトメトリーの両方を使用して、ＯＶＡ特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の頻度を評価した。
図１５Ｂ、１５Ｃ、１５Ｅ、及び１５Ｆに示されるように（また、先の結果と一致するように（例えば、実施例２を参照されたい））、Ｐｙ－ＯＶＡエキソＶＡＣＣの鼻腔内投与を受けた動物は、脾臓及び肺の両方において、対照動物（例えば、群１及び群４）と比較して有意により高い数のＯＶＡ特異的ＣＤ４＋及びＯＶＡ特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞を有した。腸間膜リンパ節において、ＣＤ４＋ Ｔ細胞について異なる処置群の中で有意差は観察されなかった（図１５Ｄ、群の各々における左側のバーを参照されたい）。しかしながら、Ｐｙ－ＯＶＡエキソＶＡＣＣで処置された動物の腸間膜リンパ節においては、ＯＶＡ特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の数の有意な増加が観察された（図１５Ｄ、群の各々における右側のバーを参照されたい）。これらの結果は、本明細書に開示される（例えば、ＯＶＡ－足場Ｙを含むとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストを負荷された）ＥＶ（例えば、エキソソーム）が、鼻腔内投与されたときに強固な粘膜免疫応答を誘導する上で有用であり得ることを裏付ける。
実施例２１：抗原特異的Ｔ細胞応答を誘導する上での抗原及びＳＴＩＮＧアゴニストを含む足場Ｘが操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）の有効性
本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）が免疫応答を誘導する能力をさらに評価するために、足場Ｘを過剰発現している操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）（「足場Ｘが操作されたＥＶ」）を生成した（例えば、実施例１を参照されたい）。マレイミドリンカーを含有するＣＤ８ペプチド（Ｌａｍａ４）及び／またはＣＤ４ペプチド（Ｉｔｇｂ１）を、操作されたＥＶの表面上に発現される足場Ｘに架橋結合した。ＣＤ８ペプチドは、以下の構造を有した：（マレイミドリンカー）－
Figure 2022526127000038
 （配列番号３７９）。下線付きのアミノ酸は、変異を示す。太字の残基は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞エピトープを表す。ＣＤ４ペプチドは、以下の構造を有した：（マレイミドリンカー）－
Figure 2022526127000039
 （配列番号３８０）。下線付きのアミノ酸は、変異を示す。ＣＤ４＋ Ｔ細胞エピトープは不明であった。足場Ｘが操作されたＥＶにＳＴＩＮＧアゴニスト（ＣＬ６５６）をさらに負荷した。次いで、足場Ｘが操作されたＥＶを、図１６Ａに示されるようにマウスに投与した。簡潔に述べると、動物は、以下のうちの１つを受けた：（ｉ）ＰＢＳ単独（すなわち、ＥＶなし）（群１）、（ｉｉ）ＣＤ８ペプチド（Ｌａｍａ４）を単独で発現している足場Ｘが操作されたＥＶ（群２）、（ｉｉｉ）ＣＤ４ペプチド（Ｉｔｇｂ１）を単独で発現している足場Ｘが操作されたＥＶ（群３）、ならびに（ｉｖ）ＣＤ４ペプチド及びＣＤ８ペプチドの両方を発現している足場Ｘが操作されたＥＶ。足場Ｘが操作されたＥＶを、動物が同量のＳＴＩＮＧアゴニストを受けることになるような用量で、皮下投与を介して動物に投与した。動物の各々は、関連する処置レジメンの総計２回の投薬（１週間の投薬間隔）を受けた。２回目の投与後７日目に、動物を屠殺し、ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＰＯＴを使用して、脾臓における抗原特異的ＣＤ４＋ Ｔ細胞及びＣＤ８＋ Ｔ細胞の頻度を評価した。
図１６Ｂ及び１６Ｃに示されるように、群２からの（すなわち、ＣＤ８ペプチドを単独で発現している足場Ｘが操作されたＥＶを受けた）動物及び群３からの（すなわち、ＣＤ４ペプチドを単独で発現している足場Ｘが操作されたＥＶを受けた）動物において、それぞれ強固なＩｔｇｂ１特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞及びＬａｍａ４特異的ＣＤ４＋ Ｔ細胞が検出された。同様に、ＣＤ４ペプチド及びＣＤ８ペプチドの両方を発現している足場Ｘが操作されたＥＶの動物への投与は、強力な抗原特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞及びＣＤ４＋ Ｔ細胞免疫応答をもたらした。
これらの結果は、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）を使用して、目的とする抗原（例えば、腫瘍）に対する強固な免疫応答を誘導することができることをさらに裏付ける。これらの結果はまた、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）が、例えば、ＥＶ上に複数の抗原を発現させることによって、複数の抗原に対する免疫応答を誘導する能力も実証する。
実施例２２：抗原特異的Ｔ細胞応答を誘導する上での抗原及びＣｐＧアジュバントを含む足場Ｘが操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）の有効性
本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）のワクチン性能をさらに評価するために、足場Ｘを過剰発現している操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）（「足場Ｘが操作されたＥＶ」）を再び生成した（例えば、実施例１を参照されたい）。実施例２１に記載されるように、マレイミドリンカーを含有するＣＤ８ペプチド（Ｌａｍａ４）及び／またはＣＤ４ペプチド（Ｉｔｇｂ１）を再び、操作されたＥＶの表面上に発現された足場Ｘに架橋結合した。本実施例では、足場Ｘが操作されたＥＶに、ＳＴＩＮＧアゴニストの代わりにＣｐＧ（すなわち、ＴＬＲ９アゴニスト）をさらに負荷した。次いで、足場Ｘが操作されたＥＶを、図１７Ａに示されるようにマウスに投与した。簡潔に述べると、動物は、以下のうちの１つを受けた：（ｉ）対照ＥＶ（すなわち、足場Ｘを単独で発現しているＥＶ）（「空のＰｒＸエキソ」）（群１）、（ｉｉ）ＣＤ８ペプチド（Ｌａｍａ４）を単独で発現している足場Ｘが操作されたＥＶ（「エキソＬａｍａ４－ＣｐＧ」）（群２）、ならびに（ｉｉｉ）ＣＤ８ペプチド（Ｌａｍａ４）及びＣＤ４ペプチド（Ｉｔｇｂ１）の両方を発現している足場Ｘが操作されたＥＶ（「エキソＩｔｇｂ１－Ｌａｍａ４－ＣｐＧ」）（群３）。動物の各々は、関連する処置レジメンの２回投薬（１週間の投薬間隔）を受けた。そして、２回目の投与後７日目に、動物を屠殺し、ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＰＯＴを使用して、脾臓における抗原特異的ＣＤ４＋ Ｔ細胞及びＣＤ８＋ Ｔ細胞の頻度を評価した。
図１７Ｂ及び１７Ｃに示されるように、Ｌａｍａ４を単独で発現している足場Ｘが操作されたＥＶ（「エキソＬａｍａ４－ＣｐＧ」）での動物の処置は、Ｌａｍａ４に特異的な強力なＣＤ８＋ Ｔ細胞応答の誘導をもたらしたが（図１７Ｃを参照されたい）、Ｉｔｇｂ１ペプチドに対してはその限りでなかった（図１７Ｂを参照されたい）。この結果は、足場Ｘが操作されたＥＶによって誘導されるＣＤ８＋ Ｔ細胞応答の特異性を実証する。そして、実施例２１に提供される結果と一致するように、Ｌａｍａ４及びＩｔｇｂ１の両方を発現している足場Ｘが操作されたＥＶは、両方の抗原に対する強固なＴ細胞応答を誘導することが可能であった。これらの結果は、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）が、様々な抗原に対する免疫応答を誘導する上で有用であり得ることをさらに示唆する。
実施例２３：表面が操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）におけるＨＰＶ抗原の発現
本開示のＥＶ（例えば、エキソソーム）における異なる抗原を発現する能力をさらに評価するために、２９３ＳＦ細胞を、ＨＰＶ１６またはＨＰＶ１８のＥ６及び／またはＥ７タンパク質を発現するようにトランスフェクトした。簡潔に述べると、細胞を、以下の完全長タンパク質のうちの１つをコードするプラスミドでトランスフェクトした：（ｉ）ＨＰＶ１６ Ｅ６、（ｉｉ）ＨＰＶ１６ Ｅ７、（ｉｉｉ）ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７、（ｉｖ）ＨＰＶ１８ Ｅ６、（ｖ）ＨＰＶ１８ Ｅ７、及び（ｖｉ）ＨＰＶ１８ Ｅ６／Ｅ７。培地交換からおよそ７２時間後、細胞を採取し、トランスフェクトした群の各々からライセートを作製した。トランスフェクトされていない細胞を陰性対照として使用した。次いで、約５μＬのライセートの各々をＰＡＧＥゲル上にローディングし、以下の抗体でブロットした：（ｉ）ＨＰＶ１６／１８抗Ｅ６（ＡｂＣａｍ、カタログ番号ａｂ７０）、（ｉｉ）ＨＰＶ１６抗Ｅ７（ＡｂＣａｍ、カタログ番号１ｂ３０７３１）、及び（ｉｉｉ）ＨＰＶ１８抗Ｅ７（ＡｂＣａｍ、カタログ番号ａｂ１００９５３）。
図１８Ａ～１８Ｆに結果を提供する。示されるように、ＨＰＶ１８ Ｅ７タンパク質をコードするプラスミドでトランスフェクトされた細胞を恐らくは除いて、トランスフェクトされた細胞は、ウェスタンブロットによって測定したとき、完全長ＨＰＶ１６またはＨＰＶ１８タンパク質の発現に至らなかった。この結果は、少なくとも完全長ＨＰＶ１６ Ｅ６、ＨＰＶ１６、及びＨＰＶ１８ Ｅ６が一過性で発現されないことを示唆していた。
上記の問題に対処するために、分割タンパク質発現戦略を使用した。簡潔に述べると、１５８アミノ酸長のＨＰＶ Ｅ６タンパク質を、中間にある構造化されていない領域で半分に分割した。これにより下記の２つのペプチド断片が生成された：（ｉ）Ｎ末端側ｎＥ６（１～８８ａａ）及び（ｉｉ）Ｃ末端側ｃＥ６（８９～１５８ａａ）。ｎＥ６ペプチド断片及びｃＥ６ペプチド断片をコードするコドン最適化されたＤＮＡ配列を使用して、それぞれ、Ｎ末端またはＣ末端で足場Ｘ（例えば、ＰＴＧＦＲＮ）に融合された分割ＨＰＶ Ｅ６を発現している構築物、及びＣ末端で足場Ｙに融合された分割ＨＰＶ Ｅ６を発現している構築物を組み立てた。以下のプラスミドを生成し、これを使用して、２９３ＳＦ細胞をトランスフェクトした：（ｉ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ＰＴＧＦＲＮ－ＦＬＡＧ－ｃｏＨＰＶ１６ｎＥ６（「ｐＣＢ－２０１４」）、（ｉｉ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ＰＴＧＦＲＮ－ＦＬＡＧ－ｃｏＨＰＶ１６ｃＥ６（「ｐＣＢ－２０１５」）、（ｉｉｉ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ｃｏＨＰＶ１６ｎＥ６－ＦＬＡＧ－ＰＴＧＦＲＮ（「ｐＣＢ－２０１６」）、（ｉｖ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ｃｏＨＰＶ１６ｃＥ６－ＦＬＡＧ－ＰＴＧＦＲＮ（「ｐＣＢ－２０１７」）、（ｖ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ＰｒＹ－ＦＬＡＧ－ｃｏＨＰＶ１６ｎＥ６（「ｐＣＢ－２０１８」）、及び（ｖｉ）ｐＵＣ５７－Ｋａｎ－ＡＡＶＳ１ＨＲ－ＣＡＧＧＳ－ＰｒＹ－ＦＬＡＧ－ｃｏＨＰＶ１６ｃＥ６（「ｐＣＢ－２０１９」）（下記の表１１を参照されたい）。次いで、ＨＰＶ１６及びＨＰＶ１８のＥ６及びＥ７タンパク質の発現を、ウェスタンブロットによって（上述したように）及び抗ＦＬＡＧ抗体を使用して評価した。
Figure 2022526127000040
図１８Ｇ～１８Ｌに示されるように、分割タンパク質発現戦略を用いて、試験されたＨＰＶタンパク質の各々（すなわち、ＨＰＶ１６ Ｅ６、ＨＰＶ１６ Ｅ７、ＨＰＶ１８ Ｅ６、及びＨＰＶ１８ Ｅ７）が一過性細胞ライセート及び安定な細胞ライセートの両方において発現された。
これらの結果は、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）が、異なるＨＰＶタンパク質を含めた広範囲の抗原を発現するように操作され得ることをさらに裏付ける。
実施例２４：抗原特異的免疫応答を誘導する上での抗Ｃｌｅｃ９ａ標的化部分を含む足場Ｘが操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）の有効性
上記の実施例１３及び１７にさらに付け加えて、ａＣＬＥＣ９Ａ－Ｐｘ－ＯＶＡエキソＶＡＣＣが抗原特異的免疫応答を誘導する能力を動物モデルにおいて評価した。ａＣＬＥＣ９Ａ－Ｐｘ－ＯＶＡエキソＶＡＣＣは、ＳＴＩＮＧアゴニストを負荷されたとともに、以下のものを発現するように操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）である：（ｉ）ａＣＬＥＣ９Ａ－Ｐｘ（すなわち、足場Ｘに連結された抗Ｃｌｅｃ９ａ抗体断片）及び（ｉｉ）ＯＶＡ－Ｐｙ（すなわち、足場Ｙに連結されたＯＶＡ）。簡潔に述べると、図１９Ａに示されるように、マウスは、以下のうちの１つを受けた：（ｉ）ＳＴＩＮＧアゴニストを負荷されたとともに、対照アイソタイプ抗体を発現しているＯＶＡ発現ＥＶ（例えば、エキソソーム）（「ＩｇＧ－Ｐｘ－ＯＶＡエキソＶＡＣＣ」）（群１）、（ｉｉ）ａＣＬＥＣ９Ａ－Ｐｘ－ＯＶＡエキソＶＡＣＣ（群２）、及び（ｉｉｉ）ＳＴＩＮＧアゴニストを負荷された（すなわち、足場Ｘを発現しない）ＯＶＡ発現ＥＶ（例えば、エキソソーム）（「ＰｙＯＶＡエキソＶＡＣＣ」）（群３）。動物のうちの一部は単回投薬を受け、次いで１週間後に屠殺された。他の動物は、２回目の投薬（１回目の投薬から１週間後）を受け、次いで２回目の投薬から１週間後に屠殺された。屠殺された動物から脾細胞を採取し、次いでフローサイトメトリーを使用して、ＯＶＡ特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞を分析した。
図１９Ｂに示されるように、ＥＶの単回投与後に、脾臓においてＯＶＡ特異的ＣＤ８＋エフェクターメモリーＴ細胞の数の有意差は存在しなかった。しかしながら、２回目の投薬後には、脾臓におけるＯＶＡ特異的ＣＤ８＋エフェクターメモリーＴ細胞の数は、ａＣＬＥＣ９Ａ－Ｐｘ－ＯＶＡエキソＶＡＣＣで処置された動物において有意により高かった（図１９Ｃを参照されたい）。この結果は、疾患及び障害の処置のためにＥＶ（例えば、エキソソーム）の設計において標的化部分（例えば、抗Ｃｌｅｃ９ａ抗体断片）を発現させることの有益性を強調する。
実施例２５：抗原特異的抗体応答を誘導する操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）の有効性
本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）が強固な体液性免疫応答もまた誘導することができるかどうかを決定するために、ＥＶ（例えば、エキソソーム）が抗原特異的抗体を誘導する能力をマウスにおいて観察した。簡潔に述べると、マウスに、ＯＶＡ－足場Ｙを発現するとともに、ＳＴＩＮＧアゴニストＣＬ６５６を負荷された操作されたエキソソーム（「Ｐｙ－ＯＶＡエキソＶＡＣＣ」）を鼻腔内投与した。対照動物は、以下のうちの１つを受けた：（ｉ）可溶性ＯＶＡ（「ＯＶＡ」）（鼻腔内）、（ｉｉ）可溶性ＯＶＡ＋ＣＬ６５６（「ＯＶＡ＋ＳＴＩＮＧ」）（鼻腔内）、（ｉｉｉ）ＯＶＡ－足場Ｙ融合タンパク質のみを発現しているエキソソーム（「ＰｙＯＶＡ」）（鼻腔内）、（ｉｖ）ＯＶＡ－足場Ｙ融合タンパク質のみを発現しているエキソソーム＋可溶性ＣＬ６５６（すなわち、ＳＴＩＮＧアゴニストは、エキソソーム中に負荷されない）（「ＰｙＯＶＡ＋ＳＴＩＮＧ」）（鼻腔内）、及び（ｖ）可溶性ＯＶＡ＋ミョウバンアジュバント（「ＯＶＡ＋ミョウバン」）（皮下）（図２０Ａを参照されたい）。処置レジメンの各々を総計２回投薬（２週間の投薬間隔）で投与した。次いで、最終投与から２週間後、動物から血清を収集し、ＥＬＩＳＡアッセイを使用して、ＯＶＡ特異的ＩｇＧ１及びＩｇＡ抗体の量を決定した。
図２０Ａ及び２０Ｂに見られるように、ＯＶＡ－足場Ｙ（すなわち、抗原）及びＳＴＩＮＧアゴニスト（すなわち、アジュバント）を含むＥＶ（例えば、エキソソーム）は、血清中で抗原特異的ＩｇＧ１及びＩｇＡの両方を誘導することができた。この結果は、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エキソソーム）が、投与後に抗原特異的な細胞媒介性免疫応答及び抗体媒介性免疫応答の両方を誘導することができることを実証する。
実施例２６：ＬＰＡ－１阻害剤を含む表面が操作されたＥＶ（例えば、エキソソーム）
本明細書に記載されるように、本開示のＥＶ（例えば、エキソソーム）は、ＥＶの表面上にＬＰＡ－１阻害剤を発現するように操作され得る。本開示とともに使用することができるＬＰＡ－１阻害剤の非限定的な例としては、ＡＭ１５２及びＡＭ０９５が挙げられる。ＡＭ１５２及びＡＭ０９５の化学構造は、図２１に提示される。この図は、マレイミド含有試薬がＡＭ１５２のカルボン酸基及び／またはカルバメート基にコンジュゲートされ得ることを示す。同じ反応性基がＡＭ０９５に存在することから、同じ手法を使用して、ＡＭ０９５を誘導体化することが可能であろう。
ＡＭ０９５及びＡＭ１５２等のＬＰＡ－１阻害剤は、本明細書に開示される方法を使用してＥＶ（例えば、エキソソーム）の表面にコンジュゲートされ得る。その結果は、ＥＶの表面上に複数の阻害剤を含むＥＶ（例えば、エキソソーム）であろう。図２２を参照されたい。
図２３は、マレイミド反応性基をどのようにＡＭ１５２に、酸基を介して付加することができるかについての実施例を示す。この実施例は、マレイミド基とカルボン酸反応性クロロメチルベンゼン基との間に介在するａｌａ－ｖａｌ切断可能リンカーを含む複合体の一部としてマレイミド基を示す。図２４は、ＡＭ１５２を誘導体化するために使用することができる２つの例となる試薬を示す。上の試薬は、（ｉ）ＡＭ１５２のカルボン酸基と反応することができるクロロメチルベンゼン基、及び（ｉｉ）マレイミド基を含み、それらの間には、切断可能なｃｉｔ－ｖａｌジペプチド及びＣ５スペーサーが介在する。下の試薬は、（ｉ）ＡＭ１５２のカルボン酸基と反応することができるクロロメチルベンゼン基、及び（ｉｉ）マレイミド基を含み、それらの間には、切断可能なａｌａ－ｖａｌジペプチド及びＣ５スペーサーが介在する。その後、マレイミド基を使用して、ＡＭ１５２（またはＡＭ０９５）を、例えば足場部分に、直接的にまたは１つもしくは複数の（例えば、本明細書に開示される）スペーサーもしくはリンカーを介して間接的に結合させることになろう。
図２５は、コンジュゲーション生成物における（例えば、カテプシンＢによる）ｃｉｔ－ｖａｌまたはａｌａ－ｖａｌジペプチドの切断からもたらされよう生成物を示す。生成物ＡＭ１５２アニリンエステルは、内因性エステラーゼによってさらにプロセシングされて、遊離酸ＡＭ１５２生成物を生み出すことが可能であろう。
図２６は、遊離マレイミド基及び異なるスペーサーの組み合わせを含むいくつかのＡＭ１５２誘導体を示す。追加の誘導体が、図２７に示される。
図２８は、カルボン酸基の保護の後、カルボン酸基を誘導体化するために使用した同じ試薬を使用して、ＡＭ１５２をそのカルバメート基において誘導体化することが可能であることを示す。結果として得られる生成物は、その後、遊離カルボン酸基に脱保護されよう。
図２９は、マレイミド基との複合体がリンカーを介してＡＭ１５２のカルバメート基に結合している実施例を例示する。好適なリンカーには、本明細書に開示されるリンカーのうちのいずれも含まれる。
この実施例に開示されるプロセスは、遊離マレイミド反応性基を含むＡＭ１５２またはＡＭ０９５誘導体の生成に関し、これはその後、直接的にまたは１つもしくは複数のスペーサーもしくはリンカーを介して間接的にのいずれかで、足場部分と反応することが可能であろう。結果として、ＡＭ１５２またはＡＭ０９５は、ＥＶ、例えばエキソソームの外部表面に結合させられよう。
しかしながら、本発明はまた、図３０に示されるように、例えば、マレイミドを含む二官能性基により、係留部分を最初に誘導体化し、次いで、例えば、遊離クロロメチルベンゼン基を有する誘導体化された係留部分を、ＡＭ１５２のカルボン酸基またはカルバメート基のいずれかと反応させることによっても実施することが可能であろう。
一部の態様では、ＡＭ１５２（またはＡＭ０９５）をＥＶ、例えばエキソソームの表面にコンジュゲートすることにより、コンジュゲートされていないＡＭ１５２（またはＡＭ０９５）の少なくとも１つの有益な性質が改善され、及び／またはコンジュゲートされていないＡＭ１５２もしくはＡＭ０９５の少なくとも１つの有害な性質（例えば、胆嚢毒性及び／または肝毒性等の毒性）が低減される。一部の態様では、ＡＭ１５２（またはＡＭ０９５）をＥＶ、例えばエキソソームにコンジュゲートすることにより、線維性疾患、例えば、ＩＰＦ等の肺線維症の処置におけるＡＭ５１２またはＡＭ０９５の有効性が（遊離ＡＭ１５２または遊離ＡＭ０９５と比較して）改善される。
参照による援用
本出願に引用された全ての刊行物、特許、特許出願、及び他の文献は、あたかも各個別の刊行物、特許、特許出願、または他の文献が参照によりあらゆる目的で援用されるように個別に示されるのと同じ程度まで、参照によりそれらの全体があらゆる目的で本明細書に援用される。
均等物
種々の具体的な態様が例示され、説明されたが、上記の明細書は制限的ではない。本発明（複数可）の趣旨及び範囲から逸脱することなく、種々の変更を行うことができることが理解されよう。本明細書を査読すれば、当業者には多くの変形形態が明らかとなろう。

Claims (150)

  1. （ｉ）少なくとも１つの抗原と、（ｉｉ）少なくとも１つのアジュバントとを含む、単離された細胞外小胞（ＥＶ）。
  2. 少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれよりも多くの異なる抗原を含む、請求項１に記載のＥＶ。
  3. 少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれよりも多くの異なるアジュバントを含む、請求項１または２に記載のＥＶ。
  4. 前記抗原が、ＭＨＣクラスＩ及び／またはＩＩ分子上には提示されない、請求項１～３のいずれか１項に記載のＥＶ。
  5. 前記ＥＶが、天然に存在する抗原提示細胞には由来しない、請求項１～４のいずれか１項に記載のＥＶ。
  6. 前記ＥＶが、天然に存在する樹状細胞、天然に存在するＢ細胞、天然に存在する肥満細胞、天然に存在するマクロファージ、天然に存在する好中球、天然に存在するＫｕｐｆｆｅｒ－Ｂｒｏｗｉｃｚ細胞、これらの細胞のうちのいずれかに由来する細胞、またはそれらの任意の組み合わせには由来しない、請求項１～５のいずれか１項に記載のＥＶ。
  7. 細胞性免疫応答、体液性免疫応答、または細胞性免疫応答及び体液性免疫応答の両方を誘導する、請求項１～６のいずれか１項に記載のＥＶ。
  8. 前記細胞性免疫応答、前記体液性免疫応答、または前記細胞性免疫応答及び前記体液性免疫応答の両方の前記誘導が、（ｉ）前記アジュバントもしくは前記抗原を含まない対応するＥＶ、または（ｉｉ）前記ＥＶを有しない前記アジュバントもしくは前記抗原と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、またはそれを超えて増加する、請求項７に記載のＥＶ。
  9. ＣＤ４＋ Ｔ細胞応答、ＣＤ８＋ Ｔ細胞応答、またはＣＤ４＋ Ｔ細胞応答及びＣＤ８＋ Ｔ細胞応答の両方を誘導する、請求項１～８のいずれか１項に記載のＥＶ。
  10. 前記ＥＶが、Ｔ細胞のＴ細胞受容体とは直接的に相互作用しない、請求項１～９のいずれか１項に記載のＥＶ。
  11. 前記ＥＶが、第１の足場部分をさらに含む、請求項１～１０のいずれか１項に記載のＥＶ。
  12. 前記抗原が、前記第１の足場部分に連結されている、請求項１１に記載のＥＶ。
  13. 前記アジュバントが、前記第１の足場部分に連結されている、請求項１１または１２に記載のＥＶ。
  14. 前記ＥＶが、第２の足場部分をさらに含む、請求項１１～１３のいずれか１項に記載のＥＶ。
  15. 前記抗原が、前記第１の足場部分に連結されており、前記アジュバントが、前記第２の足場部分に連結されている、請求項１４に記載のＥＶ。
  16. 前記第１の足場部分及び前記第２の足場部分が同じである、請求項１４または１５に記載のＥＶ。
  17. 前記第１の足場部分及び前記第２の足場部分が異なる、請求項１４または１５に記載のＥＶ。
  18. 前記第１の足場部分が足場Ｘである、請求項１１～１７のいずれか１項に記載のＥＶ。
  19. 前記第１の足場部分が足場Ｙである、請求項１１～１７のいずれか１項に記載のＥＶ。
  20. 前記第２の足場部分が足場Ｙである、請求項１４～１９のいずれか１項に記載のＥＶ。
  21. 前記第２の足場部分が足場Ｘである、請求項１４～１９のいずれか１項に記載のＥＶ。
  22. 前記足場Ｘが、（ｉ）前記抗原を前記ＥＶの内腔表面上に係留すること、（ｉｉ）前記抗原を前記ＥＶの外表面上に係留すること、（ｉｉｉ）前記アジュバントを前記ＥＶの内腔表面上に係留すること、（ｉｖ）前記アジュバントを前記ＥＶの外表面上に係留すること、または（ｖ）それらの組み合わせが可能である、請求項１８または２１に記載のＥＶ。
  23. 前記足場Ｘが、プロスタグランジンＦ２受容体の負の制御因子（ＰＴＧＦＲＮタンパク質）、ベイシジン（ＢＳＧタンパク質）、免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー２（ＩＧＳＦ２タンパク質）、免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー３（ＩＧＳＦ３タンパク質）、免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー８（ＩＧＳＦ８タンパク質）、インテグリンベータ－１（ＩＴＧＢ１タンパク質）、インテグリンアルファ－４（ＩＴＧＡ４タンパク質）、４Ｆ２細胞表面抗原重鎖（ＳＬＣ３Ａ２タンパク質）、ＡＴＰトランスポータータンパク質のクラス（ＡＴＰ１Ａ１、ＡＴＰ１Ａ２、ＡＴＰ１Ａ３、ＡＴＰ１Ａ４、ＡＴＰ１Ｂ３、ＡＴＰ２Ｂ１、ＡＴＰ２Ｂ２、ＡＴＰ２Ｂ３、ＡＴＰ２Ｂ４タンパク質）、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１８、２１、及び２２のいずれか１項に記載のＥＶ。
  24. 前記足場Ｙが、（ｉ）前記抗原を前記ＥＶの内腔表面上に係留すること、（ｉｉ）前記アジュバントを前記ＥＶの内腔表面上に係留すること、または（ｉｉｉ）両方が可能である、請求項１９または２０に記載のＥＶ。
  25. 前記足場Ｙが、ミリストイル化アラニンリッチタンパク質キナーゼＣ基質（ＭＡＲＣＫＳタンパク質）、ミリストイル化アラニンリッチタンパク質キナーゼＣ基質様１（ＭＡＲＣＫＳＬ１タンパク質）、脳酸可溶性タンパク質１（ＢＡＳＰ１タンパク質）、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１９、２０、及び２４のいずれか１項に記載のＥＶ。
  26. 前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面上の第１の足場部分に連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの内腔表面上の第２の足場部分に連結されている、請求項１１～２５のいずれか１項に記載のＥＶ。
  27. ａ．前記第１の足場部分及び前記第２の足場部分の各々が足場Ｙであるか、
    ｂ．前記第１の足場部分が足場Ｙであり、前記第２の足場部分が足場Ｘであるか、
    ｃ．前記第１の足場部分が足場Ｘであり、前記第２の足場部分が足場Ｙであるか、または
    ｄ．前記第１の足場部分及び前記第２の足場部分の各々が足場Ｘである、
    請求項２６に記載のＥＶ。
  28. 前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面上の第１の足場部分に連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの内腔中にある、請求項１１～２５のいずれか１項に記載のＥＶ。
  29. 前記抗原が、前記ＥＶの内腔中にあり、前記アジュバントが、前記ＥＶの内腔表面上の第１の足場部分に連結されている、請求項１１～２５のいずれか１項に記載のＥＶ。
  30. 前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面上の第１の足場部分に連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの外表面上の第２の足場部分に連結されている、請求項１１～２５のいずれか１項に記載のＥＶ。
  31. ａ．前記第１の足場部分が足場Ｙであり、前記第２の足場部分が足場Ｘであるか、または
    ｂ．前記第１の足場部分及び前記第２の足場部分の各々が足場Ｘである、
    請求項２８～３０のいずれか１項に記載のＥＶ。
  32. 前記抗原が、前記ＥＶの外表面上の第１の足場部分に連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの内腔表面上の第２の足場部分に連結されている、請求項１１～２５のいずれか１項に記載のＥＶ。
  33. ａ．前記第１の足場部分が足場Ｘであり、前記第２の足場部分が足場Ｙであるか、または
    ｂ．前記第１の足場部分及び前記第２の足場部分の各々が足場Ｘである、
    請求項３２に記載のＥＶ。
  34. 前記抗原が、前記ＥＶの内腔中にあり、前記アジュバントが、前記ＥＶの内腔中にある、請求項１１～２５のいずれか１項に記載のＥＶ。
  35. 前記抗原が、前記ＥＶの外表面上の第１の足場部分に連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの外表面上の第２の足場部分に連結されている、請求項１１～２５のいずれか１項に記載のＥＶ。
  36. 前記第１の足場及び前記第２の足場部分が足場Ｘである、請求項３５に記載のＥＶ。
  37. 前記抗原が、前記ＥＶの外表面上の第１の足場部分に連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの内腔中にある、請求項１１～２５のいずれか１項に記載のＥＶ。
  38. 前記第１の足場部分が足場Ｘである、請求項３７に記載のＥＶ。
  39. 前記抗原が、前記ＥＶの内腔中にあり、前記アジュバントが、前記ＥＶの外表面上の第１の足場部分に連結されている、請求項１１～２５のいずれか１項に記載のＥＶ。
  40. 前記第１の足場部分が足場Ｘである、請求項３９に記載のＥＶ。
  41. 前記抗原が、前記ＥＶの前記表面上の第１の足場部分に連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの内腔表面上の前記第１の足場部分に連結されている、請求項１１～２５のいずれか１項に記載のＥＶ。
  42. 前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面上の第１の足場部分に連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの外表面上の前記第１の足場部分に連結されている、請求項１１～２５のいずれか１項に記載のＥＶ。
  43. 前記第１の足場部分が足場Ｘである、請求項４１または４２に記載のＥＶ。
  44. （ｉ）前記抗原が、リンカーによって前記第１の足場部分に連結されているか、（ｉｉ）前記抗原が、リンカーによって前記第２の足場部分に連結されているか、（ｉｉｉ）前記アジュバントが、リンカーによって前記第１の足場部分に連結されているか、（ｉｖ）前記アジュバントが、リンカーによって前記第２の足場部分に連結されているか、または（ｖ）それらの組み合わせである、請求項１１～４３のいずれか１項に記載のＥＶ。
  45. 前記リンカーが、ポリペプチドである、請求項４４に記載のＥＶ。
  46. 前記リンカーが、非ポリペプチド部分である、請求項４４に記載のＥＶ。
  47. 前記リンカーが、マレイミド部分を含む、請求項４４～４６のいずれか１項に記載のＥＶ。
  48. 前記リンカーが、コレステロール部分を含む、請求項４４～４７のいずれか１項に記載のＥＶ。
  49. 前記第１の足場部分または前記第２の足場部分が、ＰＴＧＦＲＮタンパク質である、請求項１１～４８のいずれか１項に記載のＥＶ。
  50. 前記第１の足場部分または前記第２の足場部分が、配列番号３３に定められるようなアミノ酸配列を含む、請求項１１～４８のいずれか１項に記載のＥＶ。
  51. 前記第１の足場部分または前記第２の足場部分が、配列番号１と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１１～４９のいずれか１項に記載のＥＶ。
  52. 前記第１の足場部分または前記第２の足場部分が、ＢＡＳＰ１タンパク質である、請求項９～５１のいずれか１項に記載のＥＶ。
  53. 前記第１の足場部分または前記第２の足場部分が、（Ｍ）（Ｇ）（π）（Ｘ）（Φ／π）（π）（＋）（＋）または（Ｇ）（π）（Ｘ）（Φ／π）（π）（＋）（＋）のペプチドを含み、ここで、各括弧付きの位置がアミノ酸を表し、πが、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択される任意のアミノ酸であり、Ｘが、任意のアミノ酸であり、Φが、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、及びＭｅｔからなる群から選択される任意のアミノ酸であり、（＋）が、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、及びＨｉｓからなる群から選択される任意のアミノ酸であり、位置５が（＋）ではなく、かつ位置６が（＋）でも（ＡｓｐまたはＧｌｕ）でもない、請求項９～５１のいずれか１項に記載のＥＶ。
  54. 前記第１の足場部分または前記第２の足場部分が、配列番号５０～１５５のうちのいずれか１つに定められるアミノ酸配列を含む、請求項９～５１のいずれか１項に記載のＥＶ。
  55. 前記第１の足場部分または前記第２の足場部分が、配列番号３と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む、請求項９～５４のいずれか１項に記載のＥＶ。
  56. （ｉ）抗原と、（ｉｉ）アジュバントとを含む、単離された細胞外小胞であって、
    ａ．前記抗原が、内腔表面上の第１の足場Ｙに連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの内腔表面上の第２の足場Ｙに連結されているか、
    ｂ．前記抗原が、内腔表面上の足場Ｙに連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの内腔中にあるか、
    ｃ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔中にあり、前記アジュバントが、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
    ｄ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの外表面上の足場Ｘに連結されているか、
    ｅ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔中にあり、前記アジュバントが、前記ＥＶの外表面上の足場Ｘに連結されているか、
    ｆ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されているか、
    ｇ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔中にあり、前記アジュバントが、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されているか、
    ｈ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの外表面上の前記足場Ｘに連結されているか、
    ｉ．前記抗原が、前記ＥＶの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの外表面上の第２の足場Ｘに連結されているか、
    ｊ．前記抗原が、前記ＥＶの外表面上の足場Ｘに連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
    ｋ．前記抗原が、前記ＥＶの外表面上の足場Ｘに連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの内腔中にあるか、
    ｌ．前記抗原が、前記ＥＶの外表面上の足場Ｘに連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの内腔表面上の前記足場Ｘに連結されているか、
    ｍ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されているか、
    ｎ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
    ｏ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの内腔中にあるか、
    ｐ．前記抗原が、前記ＥＶの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されているか、
    ｑ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの外表面上の第２の足場Ｘに連結されているか、
    ｒ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔中にあり、前記アジュバントが、前記ＥＶの内腔中にあるか、
    ｓ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの内腔表面に直接的に連結されているか、
    ｔ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの内腔中にあるか、
    ｕ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
    ｖ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されているか、
    ｗ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの外表面に直接的に連結されているか、
    ｘ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの外表面上の足場Ｘに連結されているか、
    ｙ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの内腔表面に直接的に連結されているか、
    ｚ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの外表面に直接的に連結されているか、
    ａａ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの内腔表面に直接的に連結されているか、
    ｂｂ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、前記アジュバントが、前記ＥＶの外表面に直接的に連結されているか、
    ｃｃ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔中にあり、前記アジュバントが、前記ＥＶの内腔表面に直接的に連結されているか、または
    ｄｄ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔中にあり、前記アジュバントが、前記ＥＶの外側に直接的に連結されている、
    前記単離された細胞外小胞。
  57. 前記ＥＶが、免疫調節剤をさらに含む、請求項１～５６のいずれか１項に記載のＥＶ。
  58. 前記免疫調節剤が、前記ＥＶの内腔表面または外表面に直接的に連結されている、請求項５７に記載のＥＶ。
  59. 前記免疫調節剤が、前記ＥＶの外表面上または前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されている、請求項５７または５８に記載のＥＶ。
  60. 前記免疫調節剤が、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されている、請求項５７または５８に記載のＥＶ。
  61. （ｉ）前記抗原が、リンカーによって内腔表面に直接的に連結されているか、（ｉｉ）前記アジュバントが、リンカーによって内腔表面に直接的に連結されているか、（ｉｉｉ）前記免疫調節剤が、リンカーによって内腔表面に直接的に連結されているか、（ｉｖ）前記抗原が、リンカーによって外表面に直接的に連結されているか、（ｖ）前記アジュバントが、リンカーによって外表面に直接的に連結されているか、（ｖｉ）前記免疫調節剤が、リンカーによって外表面に直接的に連結されているか、または（ｖｉｉ）それらの組み合わせである、請求項５６～６０のいずれか１項に記載のＥＶ。
  62. （ｉ）前記抗原が、リンカーによって足場Ｘに連結されているか、（ｉｉ）前記アジュバントが、リンカーによって足場Ｘに連結されているか、（ｉｉｉ）前記免疫調節剤が、リンカーによって足場Ｘに連結されているか、（ｉｖ）前記抗原が、リンカーによって足場Ｙに連結されているか、（ｖ）前記アジュバントが、リンカーによって足場Ｙに連結されているか、（ｖｉ）前記免疫調節剤が、リンカーによって足場Ｙに連結されているか、または（ｖｉｉ）それらの組み合わせである、請求項５６～６１のいずれか１項に記載のＥＶ。
  63. 前記リンカーが、ポリペプチドである、請求項６１または６２に記載のＥＶ。
  64. 前記リンカーが、非ポリペプチド部分である、請求項６１または６２に記載のＥＶ。
  65. 前記リンカーが、マレイミド部分を含む、請求項６１～６４のいずれか１項に記載のＥＶ。
  66. 前記リンカーが、コレステロール部分を含む、請求項６１～６４のいずれか１項に記載のＥＶ。
  67. 前記免疫調節剤が、前記ＥＶの内腔中にある、請求項５７または５８に記載のＥＶ。
  68. 前記免疫調節剤が、負のチェックポイント制御因子の阻害剤または負のチェックポイント制御因子の結合パートナーの阻害剤を含む、請求項５７～６７のいずれか１項に記載のＥＶ。
  69. 前記負のチェックポイント制御因子が、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３）、Ｔ細胞免疫グロブリンムチン含有タンパク質３（ＴＩＭ－３）、Ｂリンパ球及びＴリンパ球減弱因子（ＢＴＬＡ）、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制因子（ＶＩＳＴＡ）、アデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ＣＤ２０、ＣＤ３９、ＣＤ７３、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項６８に記載のＥＶ。
  70. 前記免疫調節剤が、正の共刺激分子の活性化剤または正の共刺激分子の結合パートナーの活性化剤を含む、請求項５７～６７のいずれか１項に記載のＥＶ。
  71. 前記正の共刺激分子が、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー（例えば、ＣＤ１２０ａ、ＣＤ１２０ｂ、ＣＤ１８、ＯＸ４０、ＣＤ４０、Ｆａｓ受容体、Ｍ６８、ＣＤ２７、ＣＤ３０、４－１ＢＢ、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＴＲＡＩＬＲ３、ＴＲＡＩＬＲ４、ＲＡＮＫ、ＯＣＩＦ、ＴＷＥＡＫ受容体、ＴＡＣＩ、ＢＡＦＦ受容体、ＡＴＡＲ、ＣＤ２７１、ＣＤ２６９、ＡＩＴＲ、ＴＲＯＹ、ＣＤ３５８、ＴＲＡＭＰ、及びＸＥＤＡＲ）である、請求項７０に記載のＥＶ。
  72. 正の共刺激分子の前記活性化剤が、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦ－Ｃ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４０Ｌ、ＦａｓＬ、ＬＩＧＨＴ、ＴＬ１Ａ、ＣＤ２７Ｌ、Ｓｉｖａ、ＣＤ１５３、４－１ＢＢリガンド、ＴＲＡＩＬ、ＲＡＮＫＬ、ＴＷＥＡＫ、ＡＰＲＩＬ、ＢＡＦＦ、ＣＡＭＬＧ、ＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＮＴ－３、ＮＴ－４、ＧＩＴＲリガンド、及びＥＤＡ－２）である、請求項７０に記載のＥＶ。
  73. 前記正の共刺激分子が、ＣＤ２８－スーパーファミリー共刺激分子（例えば、ＩＣＯＳまたはＣＤ２８）である、請求項７０に記載のＥＶ。
  74. 正の共刺激分子の前記活性化剤が、ＩＣＯＳＬ、ＣＤ８０、またはＣＤ８６である、請求項７０に記載のＥＶ。
  75. 前記免疫調節剤が、サイトカインまたはサイトカインの結合パートナーを含む、請求項５７～６７のいずれか１項に記載のＥＶ。
  76. 前記サイトカインが、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－１ｒａ、ＩＬ－１８、ＩＬ－３３、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６β、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－３６ｒａ、ＩＬ－３７、ＩＬ－３８、ＩＬ－３、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、ＩＬ－１３、ＩＬ－２３、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、Ｆｌｔ－３、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１９、ＩＬ－２０、ＩＬ－２２、ＩＬ－２４、ＴＮＦ－α、ＴＮＦ－β、ＢＡＦＦ、ＡＰＲＩＬ、リンホトキシンベータ（ＴＮＦ－γ）、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１７Ｂ、ＩＬ－１７Ｃ、ＩＬ－１７Ｄ、ＩＬ－１７Ｅ、ＩＬ－１７Ｆ、ＩＬ－２５、ＴＳＬＰ、ＩＬ－３５、ＩＬ－２７、ＴＧＦ－β、またはそれらの組み合わせを含む、請求項７５に記載のＥＶ。
  77. 前記免疫調節剤が、胚中心応答に必要とされる細胞内相互作用を支持するタンパク質を含む、請求項５７～６７のいずれか１項に記載のＥＶ。
  78. 胚中心応答に必要とされる細胞内相互作用を支持する前記タンパク質が、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭ）ファミリーメンバー、ＳＬＡＭ関連タンパク質（ＳＡＰ）、ＩＣＯＳ－ＩＣＯＳＬ、ＣＤ４０－４０Ｌ、ＣＤ２８／Ｂ７、ＰＤ－１／Ｌ１、ＩＬ－４／ＩＬ４Ｒ、ＩＬ２１／ＩＬ２１Ｒ、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＣＤ１８０、ＣＤ２２、またはそれらの組み合わせを含む、請求項７７に記載のＥＶ。
  79. 前記ＳＬＡＭファミリーメンバーが、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ２２９（Ｌｙ９）、Ｌｙ１０８、２Ｂ４、ＣＤ８４、ＮＴＢ－Ａ、ＣＲＡＣＣ、ＢＬＡＭＥ、ＣＤ２Ｆ－１０、またはそれらの組み合わせを含む、請求項７８に記載のＥＶ。
  80. （ｉ）抗原と、（ｉｉ）免疫調節剤とを含む、単離された細胞外小胞であって、
    ａ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面上の第１の足場Ｙに連結されており、前記免疫調節剤が、前記ＥＶの内腔表面上の第２の足場Ｙに連結されているか、
    ｂ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、前記免疫調節剤が、前記ＥＶの内腔中にあるか、
    ｃ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔中にあり、前記免疫調節剤が、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
    ｄ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、前記免疫調節剤が、外表面前記ＥＶ上の足場Ｘに連結されているか、
    ｅ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔中にあり、前記免疫調節剤が、前記ＥＶの外表面上の足場Ｘに連結されているか、
    ｆ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、前記免疫調節剤が、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されているか、
    ｇ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔中にあり、前記免疫調節剤が、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されているか、
    ｈ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、前記免疫調節剤が、前記ＥＶの外表面上の前記足場Ｘに連結されているか、
    ｉ．前記抗原が、前記ＥＶの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、前記免疫調節剤が、前記ＥＶの外表面上の第２の足場Ｘに連結されているか、
    ｊ．前記抗原が、前記ＥＶの外表面上の足場Ｘに連結されており、前記免疫調節剤が、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
    ｋ．前記抗原が、前記ＥＶの外表面上の足場Ｘに連結されており、前記免疫調節剤が、前記ＥＶの内腔中にあるか、
    ｌ．前記抗原が、前記ＥＶの外表面上の足場Ｘに連結されており、前記免疫調節剤が、前記ＥＶの内腔表面上の前記足場Ｘに連結されているか、
    ｍ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、前記免疫調節剤が、前記ＥＶの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されているか、
    ｎ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、前記免疫調節剤が、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
    ｏ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、前記免疫調節剤が、前記ＥＶの内腔中にあるか、
    ｐ．前記抗原が、前記ＥＶの外表面上の第１の足場Ｘに連結されており、前記免疫調節剤が、前記ＥＶの内腔表面上の第２の足場Ｘに連結されているか、
    ｑ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面上の第１の足場Ｘに連結されており、前記免疫調節剤が、前記ＥＶの外表面上の第２の足場Ｘに連結されているか、
    ｒ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔中にあり、前記免疫調節剤が、前記ＥＶの内腔中にあるか、
    ｓ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、前記免疫調節剤が、前記ＥＶの内腔表面に直接的に連結されているか、
    ｔ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、前記免疫調節剤が、前記ＥＶの内腔中にあるか、
    ｕ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、前記免疫調節剤が、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されているか、
    ｖ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、前記免疫調節剤が、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されているか、
    ｗ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、前記免疫調節剤が、前記ＥＶの外側に直接的に連結されているか、
    ｘ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面に直接的に連結されており、前記免疫調節剤が、前記ＥＶの外側上の足場Ｘに連結されているか、
    ｙ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、前記免疫調節剤が、前記ＥＶの内腔表面に直接的に連結されているか、
    ｚ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されており、前記免疫調節剤が、前記ＥＶの外側に直接的に連結されているか、
    ａａ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、前記免疫調節剤が、前記ＥＶの内腔表面に直接的に連結されているか、
    ｂｂ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｘに連結されており、前記免疫調節剤が、前記ＥＶの外側に直接的に連結されているか、
    ｃｃ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔中にあり、前記免疫調節剤が、前記ＥＶの内腔表面に直接的に連結されているか、または
    ｄｄ．前記抗原が、前記ＥＶの内腔中にあり、前記免疫調節剤が、前記ＥＶの外側に直接的に連結されている、
    前記単離された細胞外小胞。
  81. アジュバントをさらに含む、請求項８０に記載のＥＶ。
  82. 前記アジュバントが、前記ＥＶの内腔表面または外表面に直接的に連結されている、請求項８１に記載のＥＶ。
  83. 前記アジュバントが、前記ＥＶの外表面上の足場Ｘに連結されているか、または前記ＥＶの内腔中にある、請求項８１に記載のＥＶ。
  84. 前記アジュバントが、前記ＥＶの内腔表面上の足場Ｙに連結されている、請求項８１に記載のＥＶ。
  85. 前記アジュバントが、前記ＥＶの内腔中にある、請求項８１に記載のＥＶ。
  86. 前記抗原が、腫瘍抗原である、請求項１～８５のいずれか１項に記載のＥＶ。
  87. 前記腫瘍抗原が、アルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、上皮性腫瘍抗原（ＥＴＡ）、ムチン１（ＭＵＣ１）、Ｔｎ－ＭＵＣ１、ムチン１６（ＭＵＣ１６）、チロシナーゼ、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）、腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、プログラム死リガンド２（ＰＤ－Ｌ２）、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ－７２、ＨＥＲ２、ＧＤ２、ｃＭＥＴ、ＥＧＦＲ、メソテリン、ＶＥＧＦＲ、アルファ－葉酸受容体、ＣＥ７Ｒ、ＩＬ－３、がん－精巣抗原、ＭＡＲＴ－１ ｇｐ１００、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド、ブラキュリ（例えば、黒色腫における抗原（ＰＲＡＭＥ））、ウィルムス腫瘍１（ＷＴ１）、ＣＤ１９、ＣＤ２２、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項８６に記載のＥＶ。
  88. 前記抗原が、細菌、ウイルス、真菌、原虫、またはそれらの任意の組み合わせに由来する、請求項１～８５のいずれか１項に記載のＥＶ。
  89. 前記抗原が、発がんウイルスに由来する、請求項８８に記載のＥＶ。
  90. 前記抗原が、ヒトガンマヘルペスウイルス４（エプスタイン・バールウイルス）、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、サイトメガロウイルス、ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、ＨＩＶ（例えば、ＨＩＶ－２）、コロナウイルス（例えば、ＣＯＶＩＤ－１９、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、及びＳＡＲＳ ＣｏＶ）、フィロウイルス（例えば、マールブルグ及びエボラ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐｌａｓｍｏｄｉａ種（例えば、ｖｉｖａｘ及びｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、チクングニアウイルス、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ヒトヘルペスウイルス８、メルケル細胞ポリオーマウイルス（ＭＣＶ）、ブニヤウイルス（例えば、ハンタウイルス）、アレナウイルス（例えば、ＬＣＭＶ及びラッサウイルス）、フラビウイルス（例えば、デング熱、ジカ熱、日本脳炎、西ナイル熱、及び黄熱）、エンテロウイルス（例えば、ポリオ）、アストロウイルス（例えば、胃腸炎）、ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、狂犬病）、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ及びＢｕｒｒｅｌｉａ ｍａｙｏｎｉｉ（例えば、ライム病）、単純ヘルペスウイルス２（ＨＳＶ２）、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ属菌、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属菌、Ｐｒｏｔｅｕｓ属菌、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ属菌、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒ属菌、コアグラーゼ陰性ブドウ球菌（ＣｏＮＳ）、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ属菌、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、またはそれらの組み合わせに由来する、請求項８８に記載のＥＶ。
  91. 前記アジュバントが、インターフェロン遺伝子刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニスト、トル様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、炎症メディエーター、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、アルファ－ｇａｌ－ｃｅｒ（ＮＫＴアゴニスト）、熱ショックタンパク質（例えば、ＨＳＰ６５及びＨＳＰ７０）、Ｃ型レクチンアゴニスト（例えば、ベータグルカン（デクチン１）、キチン、及びカードラン）、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項１～７９及び８１～９０のいずれか１項に記載のＥＶ。
  92. 前記アジュバントが、ＳＴＩＮＧアゴニストである、請求項９１に記載のＥＶ。
  93. 前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、環状ジヌクレオチドＳＴＩＮＧアゴニストまたは非環状ジヌクレオチドＳＴＩＮＧアゴニストを含む、請求項９２に記載のＥＶ。
  94. 前記アジュバントが、ＴＬＲアゴニストである、請求項９１に記載のＥＶ。
  95. 前記ＴＬＲアゴニストが、ＴＬＲ２アゴニスト（例えば、リポタイコ酸、非定型ＬＰＳ、ＭＡＬＰ－２及びＭＡＬＰ－４０４、ＯｓｐＡ、ポリン、ＬｃｒＶ、リポマンナン、ＧＰＩアンカー、リゾホスファチジルセリン、リポホスホグリカン（ＬＰＧ）、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）、ザイモサン、ｈｓｐ６０、ｇＨ／ｇＬ糖タンパク質、ヘマグルチニン）、ＴＬＲ３アゴニスト（例えば、二本鎖ＲＮＡ、例えば、ポリ（Ｉ：Ｃ））、ＴＬＲ４アゴニスト（例えば、リポ多糖（ＬＰＳ）、リポタイコ酸、β－ディフェンシン２、フィブロネクチンＥＤＡ、ＨＭＧＢ１、スナピン、テネイシンＣ）、ＴＬＲ５アゴニスト（例えば、フラジェリン）、ＴＬＲ６アゴニスト、ＴＬＲ７／８アゴニスト（例えば、一本鎖ＲＮＡ、ＣｐＧ－Ａ、ポリＧ１０、ポリＧ３、レシキモド）、ＴＬＲ９アゴニスト（例えば、非メチル化ＣｐＧ ＤＮＡ）、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項９４に記載のＥＶ。
  96. 前記ＥＶが、エキソソームである、請求項１～９５のいずれか１項に記載のＥＶ。
  97. 標的化部分をさらに含む、請求項１～９６のいずれか１項に記載のＥＶ。
  98. 前記標的化部分が、樹状細胞のマーカーに特異的に結合する、請求項９７に記載のＥＶ。
  99. 前記マーカーが、前記樹状細胞上にのみ存在する、請求項９８に記載のＥＶ。
  100. 前記樹状細胞が、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）、骨髄系／古典的樹状細胞１（ｃＤＣ１）、骨髄系／古典的樹状細胞２（ｃＤＣ２）、炎症性単球由来樹状細胞、ランゲルハンス細胞、真皮樹状細胞、リゾチーム発現樹状細胞（ＬｙｓｏＤＣ）、クッパー細胞、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項９８または９９に記載のＥＶ。
  101. 前記樹状細胞がｃＤＣ１である、請求項１００に記載のＥＶ。
  102. 前記マーカーが、Ｃ型レクチンドメインファミリー９メンバーＡ（Ｃｌｅｃ９ａ）タンパク質、樹状細胞特異的細胞間接着分子－３捕捉非インテグリン（ＤＣ－ＳＩＧＮ）、ＣＤ２０７、ＣＤ４０、Ｃｌｅｃ６、樹状細胞免疫受容体（ＤＣＩＲ）、ＤＥＣ－２０５、レクチン様酸化低密度リポタンパク質受容体－１（ＬＯＸ－１）、ＭＡＲＣＯ、Ｃｌｅｃ１２ａ、Ｃｌｅｃ１０ａ、ＤＣ－アシアロ糖タンパク質受容体（ＤＣ－ＡＳＧＰＲ）、ＤＣ免疫受容体２（ＤＣＩＲ２）、デクチン－１、マクロファージマンノース受容体（ＭＭＲ）、ＢＤＣＡ－１（ＣＤ３０３、Ｃｌｅｃ４ｃ）、デクチン－２、Ｂｓｔ－２（ＣＤ３１７）、ランゲリン、ＣＤ２０６、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１２３、ＣＤ３０４、ＸＣＲ１、ＡＸＬ、シグレック６、ＣＤ２０９、ＳＩＲＰＡ、ＣＸ３ＣＲ１、ＧＰＲ１８２、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ３２、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ１０、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項９８～１０１のいずれか１項に記載のＥＶ。
  103. 前記マーカーが、Ｃｌｅｃ９ａタンパク質である、請求項１０２に記載のＥＶ。
  104. 前記標的化部分が、Ｔ細胞のマーカーに特異的に結合する、請求項９７に記載のＥＶ。
  105. 前記マーカーが、ＣＤ３分子を含む、請求項１０４に記載のＥＶ。
  106. 前記標的化部分が、前記ＥＶの外表面に直接的に連結されている、請求項９７～１０５のいずれか１項に記載のＥＶ。
  107. 前記標的化部分が、前記ＥＶの外表面上の足場Ｘに連結されている、請求項９７～１０５のいずれか１項に記載のＥＶ。
  108. 前記標的化部分が、リンカーによって前記ＥＶの外表面に直接的に連結されている、請求項１０６に記載のＥＶ。
  109. 前記標的化部分が、リンカーによって前記足場Ｘに連結されている、請求項１０７に記載のＥＶ。
  110. 前記リンカーが、ポリペプチドである、請求項１０８または１０９に記載のＥＶ。
  111. 前記リンカーが、非ポリペプチド部分である、請求項１０８または１０９に記載のＥＶ。
  112. 前記リンカーが、マレイミド部分を含む、請求項１０８～１１１のいずれか１項に記載のＥＶ。
  113. 前記リンカーが、コレステロール部分を含む、請求項１０８～１１１のいずれか１項に記載のＥＶ。
  114. 請求項１～１１３のいずれか１項に記載のＥＶと、薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物。
  115. 請求項１～１１３のいずれか１項に記載のＥＶを産生する細胞。
  116. １つまたは複数のベクターを含む細胞であって、前記ベクターが、（ｉ）請求項１～１１３のいずれか１項に記載の抗原、（ｉｉ）請求項１～７９及び８１～１１３のいずれか１項に記載のアジュバント、（ｉｉｉ）請求項５７～１１３のいずれか１項に記載の免疫調節剤、（ｉｖ）請求項９７～１１３のいずれか１項に記載の標的化部分、または（ｖ）それらの組み合わせをコードする核酸配列を含む、前記細胞。
  117. 請求項１～１１３のいずれか１項に記載のＥＶと、使用説明書とを含む、キット。
  118. 請求項１～１１３のいずれか１項に記載のＥＶを含む、ＥＶ－薬物コンジュゲート。
  119. ＥＶを作製する方法であって、請求項１１５または１１６に記載の細胞を好適な条件下で培養することと、前記ＥＶを得ることとを含む、前記方法。
  120. 免疫応答の誘導を必要とする対象において前記免疫応答を誘導する方法であって、請求項１～１１３のいずれか１項に記載のＥＶを前記対象に投与することを含む、前記方法。
  121. 疾患の予防または処置を必要とする対象において前記疾患を予防または処置する方法であって、請求項１～１１３のいずれか１項に記載のＥＶ投与することを含み、前記疾患が、前記抗原に関連する、前記方法。
  122. 前記疾患が、がんである、請求項１２１に記載の方法。
  123. 前記がんが、膀胱癌、子宮頸癌、腎細胞癌、精巣癌、結腸直腸癌、肺癌、頭頸部癌、卵巣、リンパ腫、肝臓癌、膠芽腫、黒色腫、骨髄腫、白血病、膵臓癌、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１２２に記載の方法。
  124. 前記疾患が、感染症である、請求項１２１に記載の方法。
  125. 前記ＥＶが、非経口、経口、静脈内、筋肉内、腫瘍内、鼻腔内、皮下、または腹腔内投与される、請求項１２０～１２４のいずれか１項に記載の方法。
  126. 追加の治療剤を投与することを含む、請求項１２０～１２５のいずれか１項に記載の方法。
  127. 対象においてがんの転移を阻害または低減する方法であって、前記方法が、それを必要とする前記対象に、請求項１～１１３のいずれか１項に記載のＥＶを投与することを含む、前記方法。
  128. 前記足場Ｙが、Ｎ末端ドメイン（ＮＤ）及びエフェクタードメイン（ＥＤ）を含み、前記ＮＤ及び／または前記ＥＤが、前記ＥＶの内腔表面に会合している、請求項１９、２０、及び２４～１１３のいずれか１項に記載のＥＶ、請求項１１４に記載の薬学的組成物、請求項１１５もしくは１１６に記載の細胞、請求項１１７に記載のキット、請求項１１８に記載のＥＶ－薬物コンジュゲート、または請求項１１９～１２７のいずれか１項に記載の方法。
  129. 前記ＮＤが、ミリストイル化を介して前記エキソソームの内腔表面に会合している、請求項１２８に記載のＥＶ、薬学的組成物、細胞、キット、または方法。
  130. 前記ＥＤが、イオン性相互作用によって前記エキソソームの内腔表面に会合している、請求項１２８または１２９に記載のＥＶ、薬学的組成物、細胞、キット、または方法。
  131. 前記ＥＤが、（ｉ）ある塩基性アミノ酸、または（ｉｉ）連続的に２つ以上の塩基性アミノ酸を含み、前記塩基性アミノ酸が、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１２８～１３０のいずれか１項に記載のＥＶ、薬学的組成物、細胞、キット、または方法。
  132. 前記塩基性アミノ酸が、（Ｌｙｓ）ｎであり、ここで、ｎが、１～１０の整数である、請求項１３１に記載のＥＶ、薬学的組成物、細胞、キット、または方法。
  133. 前記ＥＤが、Ｌｙｓ（Ｋ）、ＫＫ、ＫＫＫ、ＫＫＫＫ（配列番号２０５）、ＫＫＫＫＫ（配列番号２０６）、Ａｒｇ（Ｒ）、ＲＲ、ＲＲＲ、ＲＲＲＲ（配列番号２０７）；ＲＲＲＲＲ（配列番号２０８）、ＫＲ、ＲＫ、ＫＫＲ、ＫＲＫ、ＲＫＫ、ＫＲＲ、ＲＲＫ、（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（配列番号２０９）、（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）（配列番号２１０）、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１２８～１３２のいずれか１項に記載のＥＶ、薬学的組成物、細胞、キット、または方法。
  134. 前記ＮＤが、Ｇ：Ｘ２：Ｘ３：Ｘ４：Ｘ５：Ｘ６に定められるようなアミノ酸配列を含み、ここで、Ｇが、Ｇｌｙを表し、「：」が、ペプチド結合を表し、前記Ｘ２～前記Ｘ６の各々が独立して、アミノ酸であり、前記Ｘ６が、塩基性アミノ酸を含む、請求項１２８～１３３のいずれか１項に記載のＥＶ、薬学的組成物、細胞、キット、または方法。
  135. （ｉ）前記Ｘ２が、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択されるか、
    （ｉｉ）前記Ｘ４が、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｇｌｎ、及びＭｅｔからなる群から選択されるか、
    （ｉｉｉ）前記Ｘ５が、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択されるか、
    （ｉｖ）前記Ｘ６が、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、及びＨｉｓからなる群から選択されるか、または
    （ｖ）（ｉ）～（ｉｖ）の任意の組み合わせである、
    請求項１３４に記載のＥＶ、薬学的組成物、細胞、キット、または方法。
  136. 前記ＮＤが、Ｇ：Ｘ２：Ｘ３：Ｘ４：Ｘ５：Ｘ６のアミノ酸配列を含み、ここで、
    （ｉ）Ｇが、Ｇｌｙを表し、
    （ｉｉ）「：」が、ペプチド結合を表し、
    （ｉｉｉ）前記Ｘ２が、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択されるアミノ酸であり、
    （ｉｖ）前記Ｘ３が、アミノ酸であり、
    （ｖ）前記Ｘ４が、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｇｌｎ、及びＭｅｔからなる群から選択されるアミノ酸であり、
    （ｖｉ）前記Ｘ５が、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、及びＳｅｒからなる群から選択されるアミノ酸であり、
    （ｖｉｉ）前記Ｘ６が、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、及びＨｉｓからなる群から選択されるアミノ酸である、
    請求項１２８～１３５のいずれか１項に記載のＥＶ、薬学的組成物、細胞、キット、または方法。
  137. 前記Ｘ３が、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、及びＡｒｇからなる群から選択される、請求項１３４～１３６のいずれか１項に記載のＥＶ、薬学的組成物、細胞、キット、または方法。
  138. 前記ＮＤ及び前記ＥＤが、リンカーによって結合している、請求項１２８～１３７のいずれか１項に記載のＥＶ、薬学的組成物、細胞、キット、または方法。
  139. 前記リンカーが、１つまたは複数のアミノ酸を含む、請求項１３８に記載のＥＶ、薬学的組成物、細胞、キット、または方法。
  140. 前記ＮＤが、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫ（配列番号２１１）、（ｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫ（配列番号２１２）、（ｉｉｉ）ＧＧＫＱＳＫＫ（配列番号２１３）、（ｉｖ）ＧＧＫＬＡＫＫ（配列番号２１４）、（ｖ）ＧＧＫＬＳＫ（配列番号２１５）、または（ｖｉ）それらの任意の組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１２８～１３９のいずれか１項に記載のＥＶ、薬学的組成物、細胞、キット、または方法。
  141. 前記ＮＤが、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫ（配列番号２３８）、（ｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＳ（配列番号２３９）、（ｉｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫＫ（配列番号２４０）、（ｉｖ）ＧＡＫＬＳＫＫＳ（配列番号２４１）、（ｖ）ＧＧＫＱＳＫＫＫ（配列番号２４２）、（ｖｉ）ＧＧＫＱＳＫＫＳ（配列番号２４３）、（ｖｉｉ）ＧＧＫＬＡＫＫＫ（配列番号２４４）、（ｖｉｉｉ）ＧＧＫＬＡＫＫＳ（配列番号２４５）、及び（ｉｘ）それらの任意の組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１４０に記載のＥＶ、薬学的組成物、細胞、キット、または方法。
  142. 前記ＮＤが、アミノ酸配列ＧＧＫＬＳＫＫ（配列番号２１１）を含む、請求項１２８～１４１のいずれか１項に記載のＥＶ、薬学的組成物、細胞、キット、または方法。
  143. 前記足場Ｙが、長さが少なくとも約８、少なくとも約９、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約１６、少なくとも約１７、少なくとも約１８、少なくとも約１９、少なくとも約２０、少なくとも約２１、少なくとも約２２、少なくとも約２３、少なくとも約２４、少なくとも約２５、少なくとも約３０、少なくとも約３５、少なくとも約４０、少なくとも約４５、少なくとも約５０、少なくとも約５５、少なくとも約６０、少なくとも約６５、少なくとも約７０、少なくとも約７５、少なくとも約８０、少なくとも約８５、少なくとも約９０、少なくとも約９５、少なくとも約１００、少なくとも約１０５、少なくとも約１１０、少なくとも約１２０、少なくとも約１３０、少なくとも約１４０、少なくとも約１５０、少なくとも約１６０、少なくとも約１７０、少なくとも約１８０、少なくとも約１９０、または少なくとも約２００アミノ酸である、請求項１２８～１４２のいずれか１項に記載のＥＶ、薬学的組成物、細胞、キット、または方法。
  144. 前記足場Ｙが、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号２４６）、（ｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号２４７）、（ｉｉｉ）ＧＧＫＱＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号２４８）、（ｉｖ）ＧＧＫＬＡＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号２４９）、（ｖ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＳＧＧ（配列番号２５０）、（ｖｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＳＧＧＳ（配列番号２５１）、（ｖｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＳＧＧＳＧ（配列番号２５２）、（ｖｉｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＳＧＧＳＧＧ（配列番号２５３）、（ｉｘ）ＧＧＫＬＳＫＫＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号２５４）、（ｘ）ＧＧＫＬＳＫＳＧＧＳＧＧＳＶ（配列番号２５５）、または（ｘｉ）ＧＡＫＫＳＫＫＲＦＳＦＫＫＳ（配列番号２５６）を含む、請求項１２８～１４３のいずれか１項に記載のＥＶ、薬学的組成物、細胞、キット、または方法。
  145. 前記足場Ｙが、（ｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号２４６）、（ｉｉ）ＧＡＫＬＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号２４７）、（ｉｉｉ）ＧＧＫＱＳＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号２４８）、（ｉｖ）ＧＧＫＬＡＫＫＫＫＧＹＮＶＮ（配列番号２４９）、（ｖ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＹＳＧＧ（配列番号２５０）、（ｖｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＧＳＧＧＳ（配列番号２５１）、（ｖｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＫＳＧＧＳＧ（配列番号２５２）、（ｖｉｉｉ）ＧＧＫＬＳＫＫＫＳＧＧＳＧＧ（配列番号２５３）、（ｉｘ）ＧＧＫＬＳＫＫＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号２５４）、（ｘ）ＧＧＫＬＳＫＳＧＧＳＧＧＳＶ（配列番号２５５）、または（ｘｉ）ＧＡＫＫＳＫＫＲＦＳＦＫＫＳ（配列番号２５６）からなる、請求項１２８～１４３のいずれか１項に記載のＥＶ、薬学的組成物、細胞、キット、または方法。
  146. 前記足場Ｙが、前記Ｎ末端にＭｅｔを含まない、請求項１２８～１４５のいずれか１項に記載のＥＶ、薬学的組成物、細胞、キット、または方法。
  147. 前記足場Ｙが、足場タンパク質の前記Ｎ末端にミリストイル化アミノ酸残基を含む、請求項１２８～１４６のいずれか１項に記載のＥＶ、薬学的組成物、細胞、キット、または方法。
  148. 前記足場Ｙの前記Ｎ末端における前記アミノ酸残基が、Ｇｌｙである、請求項１４７に記載のＥＶ、薬学的組成物、細胞、キット、または方法。
  149. 前記足場Ｙの前記Ｎ末端における前記アミノ酸残基が、合成である、請求項１４７または１４８に記載のＥＶ、薬学的組成物、細胞、キット、または方法。
  150. 前記足場Ｙの前記Ｎ末端における前記アミノ酸残基が、グリシン類似体である、請求項１４７または１４８２に記載のＥＶ、薬学的組成物、細胞、キット、または方法。
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