TW202100164A

TW202100164A - 用於疫苗遞送之細胞外囊泡

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Publication number: TW202100164A
Application number: TW109109629A
Authority: TW
Inventors: 雷蒙莫尼茲; 羅素麥克康尼; 妮琪羅絲; 克莉絲汀麥考依; 蒂索斯; 許可
Original assignee: 美商科迪亞克生物科學公司
Priority date: 2019-03-21
Filing date: 2020-03-23
Publication date: 2021-01-01
Also published as: US11992527B2; IL286556A; US20220168415A1; JP2022526127A; KR20220004035A; CN114080232A; CO2021013895A2; US20230263885A1; SG11202109702QA; EP3941937A2; WO2020191361A2; WO2020191361A3; BR112021018694A2; AU2020240135A1; MX2021011241A; CA3133311A1

Abstract

本揭示案係關於細胞外囊泡(EV)，例如胞外體，其包含有效載荷(例如抗原、佐劑及/或免疫調節劑)及/或靶向部分。本文亦提供產生該等EV(例如胞外體)之方法及使用該等EV(例如胞外體)治療及/或預防疾病或病症之方法，該等疾病或病症例如癌症、移植物抗宿主病(GvHD)、自體免疫疾病、傳染病或纖維變性疾病。

Description

用於疫苗遞送之細胞外囊泡

相關申請案之交叉參考

此PCT申請案主張以下美國臨時申請案之優先權權益：2019年3月21日提出申請之第62/822,008號；2019年4月17日提出申請之第62/835,437號；2019年4月29日提出申請之第62/840,348號；2019年8月23日提出申請之第62/891,048號；2019年9月16日提出申請之第62/901,166號；2019年12月10日提出申請之第62/946,280號；及2020年3月2日提出申請之第62/984,146號；其各自係以全文引用的方式併入本文中。經由EFS-WEB以電子方式提交之序列表之參考

在本申請案中提交之電子提交序列表(名稱：4000_032PC07_Sequencelisting_ST25.txt，大小：283,505個位元組；及創建日期：2020年3月20日)之內容係以全文引用的方式併入本文中。

本揭示案係關於經修飾之細胞外囊泡，例如胞外體(例如包含一或多個有效載荷，例如抗原及佐劑/免疫調節劑)，其可用作可用於治療及/或預防一系列醫學病症之疫苗，該等醫學病症包括(但不限於)癌症、移植物抗宿主病(GvHD)、自體免疫疾病、傳染病及纖維變性疾病。本揭示案亦係關於產生此等EV (例如胞外體)之方法及其用途。

EV (例如胞外體)係細胞間通訊之重要介體。其亦係許多疾病(諸如癌症)之診斷及預後中之重要生物標記物。作為藥物遞送媒介，EV (例如胞外體)在許多治療領域中作為新的治療方式，提供許多優於傳統藥物遞送方法(例如肽免疫、DNA疫苗)之優點。然而，儘管該治療方式具有優點，但許多EV (例如胞外體)具有有限之臨床效能。舉例而言，樹突細胞源性胞外體(DEX)在一項II期臨床試驗中係作為患有不能動手術之非小細胞肺癌(NSCLC)之患者在進行一線化學療法後之維持免疫療法進行研究。然而，由於未達到主要終點(在化學療法停止後4個月至少50%之患者無進展存活(PFS))，因此該試驗被終止。Besse, B.等人，Oncoimmunology 5(4):e1071008 (2015)。

因此，需要新的且更有效的工程改造EV (例如胞外體)以更佳地實現基於EV之技術之治療用途及其他應用。

本文提供經分離之EV (例如胞外體)，其包含(i)至少一種抗原及(ii)至少一種佐劑。在一些態樣中，EV包含至少2種、3種、4種、5種、6種、7種、8種、9種、10種或更多種不同抗原。在一些態樣中，EV包含至少2種、3種、4種、5種、6種、7種、8種、9種、10種或更多種不同佐劑。在一些態樣中，抗原不存在於I類及/或II類MHC分子上。

在一些態樣中，EV (例如胞外體)並非源自天然存在之抗原呈遞細胞。在某些態樣中，EV (例如胞外體)並非源自天然存在之樹突細胞、天然存在之B細胞、天然存在之肥胖細胞、天然存在之巨噬細胞、天然存在之嗜中性球、天然存在之庫弗氏-布洛維奇氏細胞(Kupffer-Browicz cell)、源自該等細胞中之任一者之細胞或其任何組合。

在一些態樣中，EV (例如胞外體)誘導細胞免疫反應、體液免疫反應或細胞及體液免疫反應二者。在某些態樣中，與(i)不包含佐劑或抗原之相應EV (例如胞外體)或(ii)沒有EV之佐劑或抗原(亦即非EV遞送媒介)相比，對細胞免疫反應、體液免疫反應或細胞及體液免疫反應二者之誘導增加至少約5%、至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約100%或更多。

在一些態樣中，本文所闡述之EV (例如胞外體)誘導CD4+ T細胞反應、CD8+ T細胞反應或CD4+及CD8+ T細胞反應二者。在某些態樣中，EV (例如胞外體)不直接與T細胞之T細胞受體(TCR)相互作用。

在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)進一步包含第一支架部分。在某些態樣中，抗原連接至該第一支架部分。在一些態樣中，佐劑連接至該第一支架部分。在一些態樣中，EV (例如胞外體)進一步包含第二支架部分。在某些態樣中，抗原連接至該第一支架部分，且佐劑連接至該第二支架部分。在一些態樣中，該第一支架部分與該第二支架部分相同。在其他態樣中，該第一支架部分與該第二支架部分不同。

在一些態樣中，第一支架部分係支架X。在其他態樣中，第一支架部分係支架Y。在一些態樣中，第二支架部分係支架X。在某些態樣中，第二支架部分係支架Y。

在一些態樣中，支架X能夠：(i)將抗原錨定至EV (例如胞外體)之腔表面；(ii)將抗原錨定在EV (例如胞外體)之外表面上；(iii)將佐劑錨定至EV (例如胞外體)之腔表面；(iv)將佐劑錨定在EV (例如胞外體)之外表面上；或(v)其組合。在某些態樣中，支架X係選自由以下組成之群：前列腺素F2受體負調控劑(PTGFRN蛋白)；基礎免疫球蛋白(BSG蛋白)；免疫球蛋白超家族成員2 (IGSF2蛋白)；免疫球蛋白超家族成員3 (IGSF3蛋白)；免疫球蛋白超家族成員8 (IGSF8蛋白)；整聯蛋白β-1 (ITGB1蛋白)；整聯蛋白α-4 (ITGA4蛋白)；4F2細胞表面抗原重鏈(SLC3A2蛋白)；一類ATP轉運蛋白(ATP1A1、ATP1A2、ATP1A3、ATP1A4、ATP1B3、ATP2B1、ATP2B2、ATP2B3、ATP2B4蛋白)及其任何組合。

在一些態樣中，支架Y能夠：(i)將抗原錨定至EV (例如胞外體)之腔表面；(ii)將佐劑錨定至EV (例如胞外體)之腔表面；或(iii)二者。在某些態樣中，支架Y係選自由以下組成之群：肉豆蔻醯化之富含丙胺酸之蛋白激酶C受質(MARCKS蛋白)；肉豆蔻醯化之富含丙胺酸之蛋白激酶C受質樣1 (MARCKSL1蛋白)；腦酸溶性蛋白1 (BASP1蛋白)及其任何組合。

在一些態樣中，抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架部分(例如本文所闡述之彼等抗原)，且佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第二支架部分(例如本文所闡述之彼等佐劑)。在此等態樣中之一些態樣中，(a)該第一支架部分及該第二支架部分中之每一者均係支架Y；(b)該第一支架部分係支架Y，且該第二支架部分係支架X；(c)該第一支架部分係支架X，且該第二支架部分係支架Y；或(d)該第一支架部分及該第二支架部分中之每一者均係支架X。

在一些態樣中，抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架部分，且佐劑係在EV之腔中。在某些態樣中，抗原係在EV (例如胞外體)之腔中，且佐劑連接至EV之腔表面上之第一支架部分。在其他態樣中，抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架部分，且佐劑連接至胞外體之外表面上之第二支架部分。在該等態樣中之一些態樣中，(a)該第一支架部分係支架Y，且該第二支架部分係支架X；或(b)該第一支架部分及該第二支架部分中之每一者均係支架X。

在一些態樣中，抗原連接至EV (例如胞外體)之外表面上之第一支架部分，且佐劑連接至EV之腔表面中之第二支架部分。在某些該等態樣中，(a)該第一支架部分係支架X，且該第二支架部分係支架Y；或(b)該第一支架部分及該第二支架部分中之每一者均係支架X。

在一些態樣中，抗原係在EV (例如胞外體)之腔中或連接至EV (例如胞外體)之腔表面，且佐劑係在EV (例如胞外體)之腔中或連接至EV (例如胞外體)之腔表面。

在一些態樣中，抗原連接至EV (例如胞外體)之外表面上之第一支架部分，且佐劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上之第二支架部分。在此等態樣中之一些態樣中，該第一支架及該第二支架部分均係支架X。

在一些態樣中，抗原連接至EV (例如胞外體)之外表面上之第一支架部分，且佐劑係在EV (例如胞外體)之腔中。在某些該等態樣中，該第一支架係支架X。

在一些態樣中，抗原係在EV (例如胞外體)之腔中，且佐劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上之第一支架部分。在該等態樣中之一些態樣中，該第一支架係支架X。

在一些態樣中，抗原連接至EV (例如胞外體)之表面上之第一支架部分，且佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架部分。在某些態樣中，抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架部分，且佐劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上之第一支架部分。在該等態樣中之一些態樣中，第一支架部分係支架X。

在一些態樣中，(i)抗原藉由連接體連接至第一支架部分，(ii)抗原藉由連接體連接至第二支架部分，(iii)佐劑藉由連接體連接至第一支架部分，(iv)佐劑藉由連接體連接至第二部分，或(v)其組合。在某些態樣中，連接體係多肽。在其他態樣中，連接體係非多肽部分。在一些態樣中，連接體包含馬來醯亞胺部分。在一些態樣中，連接體包含膽固醇部分。

在一些態樣中，第一支架部分或第二支架部分係PTGFRN蛋白。在某些態樣中，第一支架部分或第二支架部分包含如SEQ ID NO: 33中所示之胺基酸序列。在其他態樣中，第一支架部分或第二支架部分包含與SEQ ID NO: 1至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或約100%一致之胺基酸序列。

在一些態樣中，第一支架部分或第二支架部分係BASP1蛋白。在一些態樣中，第一支架部分或第二支架部分包含(M)(G)(π)(X)(Φ/π)(π)(+)(+)或(G)(π)(X)(Φ/π)(π)(+)(+)之肽，其中每一括號位置均代表一胺基酸，且其中π係選自由Pro、Gly、Ala及Ser組成之群之任一胺基酸，X係任一胺基酸，Φ係選自由Val、Ile、Leu、Phe、Trp、Tyr及Met組成之群之任一胺基酸，且(+)係選自由Lys、Arg及His組成之群之任一胺基酸；且其中位置5不係(+)且位置6既不係(+)，亦不係(Asp或Glu)。在某些態樣中，第一支架部分或第二支架部分包含SEQ ID NO: 50-155中之任一者中所示之胺基酸序列。在其他態樣中，第一支架部分或第二支架部分包含與SEQ ID NO: 3至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或約100%一致之胺基酸序列。

本文亦提供EV (例如胞外體)，其包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中：(a)該抗原連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架Y，且該佐劑連接至腔表面上之第二支架Y；(b)該抗原連接至腔表面上之支架Y，且該佐劑係在該EV (例如胞外體)之腔中；(c)該抗原係在該EV (例如胞外體)之腔中，且該佐劑連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y；(d)該抗原連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，且該佐劑連接至該EV (例如胞外體)之外表面上之支架X；(e)該抗原係在該EV (例如胞外體)之腔中，且該佐劑連接至該EV (例如胞外體)之外表面上之支架X；(f)該抗原連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，且該佐劑連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X；(g)該抗原係在該EV (例如胞外體)之腔中，且該佐劑連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X；(h)該抗原連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X，且該佐劑連接至該EV (例如胞外體)之外表面上之該支架X；(i)該抗原連接至該EV (例如胞外體)之外表面上之第一支架X，且該佐劑連接至該EV (例如胞外體)之外表面上之第二支架X；(j)該抗原連接至該EV (例如胞外體)之外表面上之支架X，且該佐劑連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y；(k)該抗原連接至該EV (例如胞外體)之外表面上之支架X，且該佐劑係在EV (例如胞外體)之腔中；(l)該抗原連接至該EV (例如胞外體)之外表面上之支架X，且該佐劑連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之該支架X；(m)該抗原連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架X，且該佐劑連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之第二支架X；(n)該抗原連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X，且該佐劑連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y；(o)該抗原連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X，且該佐劑係在該EV (例如胞外體)之腔中；(p)該抗原連接至該EV (例如胞外體)之外表面上之第一支架X，且該佐劑連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之第二支架X；(q)該抗原連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架X，且該佐劑連接至該EV (例如胞外體)之外表面上之第二支架X；(r)該抗原係在該EV (例如胞外體)之腔中，且該佐劑係在該EV (例如胞外體)之腔表面上；(s)該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該佐劑直接連接至該EV之腔表面；(t)該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該佐劑係在該EV之腔中；(u)該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該佐劑連接至該EV之上腔表面上之支架Y；(v)該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該佐劑連接至該EV之腔表面上之支架X；(w)該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該佐劑直接連接至該EV之外表面；(x)該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該佐劑連接至該EV之外表面上之支架X；(y)該抗原連接至該EV之腔表面上之支架Y，且該佐劑直接連接至該EV之腔表面；(z)該抗原連接至該EV之腔表面上之支架Y，且該佐劑直接連接至該EV之外表面；(aa)該抗原連接至該EV之腔表面上之支架X，且該佐劑直接連接至該EV之腔表面；(bb)該抗原連接至該EV之腔表面上之支架X，且該佐劑直接連接至該EV之外表面；(cc)該抗原係在該EV之腔中，且該佐劑直接連接至該EV之腔表面；或(dd)該抗原係在該EV之腔中，且該佐劑直接連接至該EV之外部。

在一些態樣中，本文所揭示之EV (例如胞外體)進一步包含免疫調節劑。在一些態樣中，免疫調節劑直接連接至EV之腔表面或外表面。在某些態樣中，免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上或EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X。在一些態樣中，免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y。在其他態樣中，免疫調節劑係在EV (例如胞外體)之腔表面上。

在一些態樣中，EV包含抗原、佐劑及免疫調節劑，其中：(i)該抗原藉由連接體直接連接至腔表面，(ii)該佐劑藉由連接體直接連接至腔表面，(iii)該免疫調節劑藉由連接體直接連接至腔表面，(iv)該抗原藉由連接體直接連接至外表面，(v)該佐劑藉由連接體直接連接至外表面，(vi)該免疫調節劑藉由連接體直接連接至外表面，或(vii)其組合。在一些態樣中，EV包含抗原、佐劑及免疫調節劑，其中：(i)該抗原藉由連接體連接至支架X，(ii)該佐劑藉由連接體連接至支架X，(iii)該免疫調節劑藉由連接體連接至支架X，(iv)該抗原藉由連接體連接至支架Y，(v)該佐劑藉由連接體連接至支架Y，(vi)該免疫調節劑藉由連接體連接至支架Y，或(vii)其組合。在一些態樣中，免疫調節劑係在EV之腔中。

在一些態樣中，連接體係多肽。在某些態樣中，連接體係非多肽部分。在一些態樣中，連接體包含馬來醯亞胺部分。在一些態樣中，連接體包含膽固醇部分。

在一些態樣中，免疫調節劑包含負性檢查點調控劑之抑制劑或負性檢查點調控劑之結合搭配物之抑制劑。在某些態樣中，負性檢查點調控劑包含細胞毒性T淋巴球相關蛋白4 (CTLA-4)、程式化細胞死亡蛋白1 (PD-1)、淋巴球活化基因3 (LAG-3)、含T細胞免疫球蛋白黏蛋白之蛋白質3 (TIM-3)、B及T淋巴球衰減蛋白(BTLA)、具有Ig及ITIM結構域之T細胞免疫受體(TIGIT)、T細胞活化V結構域Ig抑制劑(VISTA)、腺苷A2a受體(A2aR)、殺手細胞免疫球蛋白樣受體(KIR)、吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)、CD20、CD39、CD73或其任何組合。

在一些態樣中，免疫調節劑包含正性共刺激分子之活化劑或正性共刺激分子之結合搭配物之活化劑。在某些態樣中，正性共刺激分子係TNF受體超家族成員(例如CD120a、CD120b、CD18、OX40、CD40、Fas受體、M68、CD27、CD30、4-1BB、TRAILR1、TRAILR2、TRAILR3、TRAILR4、RANK、OCIF、TWEAK受體、TACI、BAFF受體、ATAR、CD271、CD269、AITR、TROY、CD358、TRAMP及XEDAR)。在一些態樣中，正性共刺激分子之活化劑係TNF超家族成員(例如TNFα、TNF-C、OX40L、CD40L、FasL、LIGHT、TL1A、CD27L、Siva、CD153、4-1BB配位體、TRAIL、RANKL、TWEAK、APRIL、BAFF、CAMLG、NGF、BDNF、NT-3、NT-4、GITR配位體及EDA-2)。在其他態樣中，正性共刺激分子係CD28超家族共刺激分子(例如ICOS或CD28)。在一些態樣中，正性共刺激分子之活化劑係ICOSL、CD80或CD86。

在一些態樣中，免疫調節劑包含細胞介素或細胞介素之結合搭配物。在某些態樣中，細胞介素包含IL-2、IL-4、IL-7、IL-10、IL-12、IL-15、IL-21、IFN-γ、IL-1α、IL-1β、IL-1ra、IL-18、IL-33、IL-36α、IL-36β、IL-36γ、IL-36ra、IL-37、IL-38、IL-3、IL-5、IL-6、IL-11、IL-13、IL-23、顆粒球-巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF)、顆粒球-群落刺激因子(G-CSF)、白血病抑制因子(LIF)、幹細胞因子(SCF)、促血小板生成素(TPO)、巨噬細胞-群落刺激因子(M-CSF)、促紅血球生成素(EPO)、Flt-3、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IL-19、IL-20、IL-22、IL-24、TNF-α、TNF-β、BAFF、APRIL、淋巴毒素β (TNF-γ)、IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E、IL-17F、IL-25、TSLP、IL-35、IL-27、TGF-β或其組合。

在一些態樣中，免疫調節劑包含支持生發中心反應所需之細胞內相互作用之蛋白質。在某些態樣中，支持生發中心反應所需之細胞內相互作用之蛋白質包含信號傳導淋巴球活化分子(SLAM)家族成員、SLAM相關蛋白(SAP)、ICOS-ICOSL、CD40-40L、CD28/B7、PD-1/L1、IL-4/IL4R、IL21/IL21R、TLR4、TLR7、TLR8、TLR9、CD180、CD22或其組合。在一些態樣中，SLAM家族成員包含SLAM家族成員1、CD48、CD229 (Ly9)、Ly108、2B4、CD84、NTB-A、CRACC、BLAME、CD2F-10或其組合。

本文亦提供經分離之EV (例如胞外體)，其包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中：(a)該抗原連接至該EV之腔表面上之第一支架Y，且該免疫調節劑連接至該EV之腔表面上之第二支架Y；(b)該抗原連接至該EV之腔表面上之支架Y，且該免疫調節劑係在該EV之腔中；(c)該抗原係在該EV之腔中，且該免疫調節劑連接至該EV之腔表面上之支架Y；(d)該抗原連接至該EV之腔表面上之支架Y，且該免疫調節劑連接至該EV之外表面上之支架X；(e)該抗原係在該EV之腔中，且該免疫調節劑連接至該EV之外表面上之支架X；(f)該抗原連接至該EV之腔表面上之支架Y，且該免疫調節劑連接至該EV之腔表面上之支架X；(g)該抗原係在該EV之腔中，且該免疫調節劑連接至該EV之腔表面上之支架X；(h)該抗原連接至該EV之腔表面上之支架X，且該免疫調節劑連接至該EV之外表面上之該支架X；(i)該抗原連接至該EV之外表面上之第一支架X，且該免疫調節劑連接至該EV之外表面上之第二支架X；(j)該抗原連接至該EV之外表面上之支架X，且該免疫調節劑連接至該EV之腔表面上之支架Y；(k)該抗原連接至該EV之外表面上之支架X，且該免疫調節劑係在該EV之腔中；(l)該抗原連接至該EV之外表面上之支架X，且該免疫調節劑連接至該EV之腔表面上之該支架X；(m)該抗原連接至該EV之腔表面上之第一支架X，且該免疫調節劑連接至該EV之腔表面上之第二支架X；(n)該抗原連接至該EV之腔表面上之支架X，且該免疫調節劑連接至該EV之腔表面上之支架Y；(o)該抗原連接至該EV之腔表面上之支架X，且該免疫調節劑係在該EV之腔中；(p)該抗原連接至該EV之外表面上之第一支架X，且該免疫調節劑連接至該EV之腔表面上之第二支架X；(q)該抗原連接至該EV之腔表面上之第一支架X，且該免疫調節劑連接至該EV之外表面上之第二支架X；(r)該抗原係在該EV之腔中，且該免疫調節劑係在該EV之腔中；(s)該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該免疫調節劑直接連接至該EV之腔表面；(t)該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該免疫調節劑係在該EV之腔中；(u)該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該免疫調節劑連接至該EV之腔表面上之支架Y；(v)該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該免疫調節劑連接至該EV之腔表面上之支架X；(w)該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該免疫調節劑直接連接至該EV之外部；(x)該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該免疫調節劑連接至該EV外部上之支架X；(y)該抗原連接至該EV之腔表面上之支架Y，且該免疫調節劑直接連接至該EV之腔表面；(z)該抗原連接至該EV之腔表面上之支架Y，且該免疫調節劑直接連接至該EV之外部；(aa)該抗原連接至該EV之腔表面上之支架X，且該免疫調節劑直接連接至該EV之腔表面；(bb)該抗原連接至該EV之腔表面上之支架X，且該免疫調節劑直接連接至該EV之外部；(cc)該抗原係在該EV之腔中，且該免疫調節劑直接連接至該EV之腔表面；或(dd)該抗原係在該EV之腔中，且該免疫調節劑直接連接至該EV之外部。

在一些態樣中，包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑之EV (例如胞外體)進一步包含佐劑(例如本文所闡述之彼等佐劑)。在該等態樣中之一些態樣中，佐劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上或EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X。在該等態樣中之一些態樣中，佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y。在其他態樣中，佐劑係在EV (例如胞外體)之腔中。在一些態樣中，佐劑直接連接至EV之腔表面或外表面。

在一些態樣中，抗原係腫瘤抗原。在一些態樣中，腫瘤抗原包含α-胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、上皮腫瘤抗原(ETA)、黏蛋白1 (MUC1)、Tn-MUC1、黏蛋白16 (MUC16)、酪胺酸酶、黑色素瘤相關抗原(MAGE)、腫瘤蛋白p53 (p53)、CD4、CD8、CD45、CD80、CD86、程式化死亡配位體1 (PD-L1)、程式化死亡配位體2 (PD-L2)、NY-ESO-1、PSMA、TAG-72、HER2、GD2、cMET、EGFR、間皮素、VEGFR、α-葉酸受體、CE7R、IL-3、癌睪丸抗原、MART-1 gp100、TNF相關之細胞凋亡誘導配位體、Brachyury (例如黑色素瘤中之表現抗原(PRAME))、威爾姆氏瘤1 (Wilms tumor 1，WT1)、CD19、CD22或其任何組合。

在一些態樣中，抗原源自細菌、病毒、真菌、原生動物或其任何組合。在某些態樣中，抗原源自致癌病毒。在一些態樣中，抗原源自人類γ疱疹病毒4 (艾伯斯坦-巴爾病毒(Epstein Barr virus))、A型流行性感冒病毒、B型流行性感冒病毒、巨細胞病毒、金黃色葡萄球菌(staphylococcus aureus)、結核分枝桿菌(mycobacterium tuberculosis)、沙眼披衣菌(chlamydia trachomatis)、HIV (例如HIV-1、HIV-2)、冠狀病毒(例如COVID-19、MERS-CoV及SARS CoV)、線狀病毒(例如馬爾堡病毒(Marburg)及伊波拉病毒(Ebola))、釀膿鏈球菌(Streptococcus pyogenes)、肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)、瘧原蟲(Plasmodia)屬(例如間日瘧原蟲(Plasmodia vivax)及惡性瘧原蟲(Plasmodia falciparum))、屈公病病毒(Chikungunya virus)、人類乳頭瘤病毒(HPV)、B型肝炎、C型肝炎、人類疱疹病毒8、默克爾細胞多瘤病毒(Merkel cell polyomavirus，MCV)、布尼亞病毒(bunyavirus)(例如漢坦病毒(hanta virus))、沙粒病毒(arena virus)(例如LCMV及賴薩病毒(Lassa virus))、黃病毒(flavivirus)(例如登革熱(dengue)、茲卡病毒(Zika)、日本腦炎、西尼羅河病毒(west nile)及黃熱病)、腸病毒(例如小兒麻痺症)、星狀病毒(例如胃腸炎)、彈狀病毒科(rhabdoviridae)(例如狂犬病)、伯氏疏螺旋體(Borrelia burgdorferi)及梅氏疏螺旋體(Borrelia mayonii)(例如萊姆病(Lyme disease))、單純疱疹病毒2 (HSV2)、克雷伯氏菌屬(Klebsiella sp.)、綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa)、腸球菌屬(Enterococcus sp.)、變形桿菌屬(Proteus sp.)、腸桿菌屬(Enterobacter sp.)、放線菌屬(Actinobacter sp.)、凝固酶陰性葡萄球菌(coagulase-negative staphylococci，CoNS)、黴漿菌屬(Mycoplasma sp.)、腺病毒、腺相關病毒(AAV)或其組合。

在一些態樣中，佐劑係干擾素基因刺激蛋白(STING)促效劑、類鐸受體(TLR)促效劑、發炎介質、RIG-I促效劑、半乳糖苷神經醯胺(α-gal-cer) (NKT促效劑)、熱休克蛋白(例如HSP65及HSP70)、C型凝集素促效劑(例如β葡聚糖(Dectin 1)、幾丁質及卡特蘭多糖(curdlan))或其任何組合。

在一些態樣中，佐劑係STING促效劑。在某些態樣中，STING促效劑包含環狀二核苷酸STING促效劑或非環狀二核苷酸STING促效劑。

在一些態樣中，佐劑係TLR促效劑。在某些態樣中，TLR促效劑包含TLR2促效劑(例如脂磷壁酸、非典型LPS、MALP-2及MALP-404、OspA、孔蛋白、LcrV、脂甘露聚糖、GPI錨、溶血磷脂醯絲胺酸、脂磷聚糖(LPG)、糖磷脂醯肌醇(GPI)、酵母聚糖、hsp60、gH/gL糖蛋白、血球凝集素)、TLR3促效劑(例如雙股RNA，例如聚(I:C))、TLR4促效劑(例如脂多糖(LPS)、脂磷壁酸、β-防禦素2、纖連蛋白EDA、HMGB1、snapin、生腱蛋白C)、TLR5促效劑(例如鞭毛蛋白)、TLR6促效劑、TLR7/8促效劑(例如單股RNA、CpG-A、聚G10、聚G3、雷西莫特(Resiquimod))、TLR9促效劑(例如未甲基化之CpG DNA)或其任何組合。

在一些態樣中，本文所揭示之EV係胞外體。

在一些態樣中，本文所揭示之EV (例如胞外體)進一步包含靶向部分。在某些態樣中，該靶向部分特異性結合至樹突細胞之標記物。在某些態樣中，標記物僅存在於樹突細胞上。在一些態樣中，樹突細胞包含漿細胞樣樹突細胞(pDC)、髓樣/常規樹突細胞1 (cDC1)、髓樣/常規樹突細胞2 (cDC2)、發炎性單核球源性樹突細胞、朗格漢斯細胞(Langerhans cell)、真皮樹突細胞、表現溶菌酶之樹突細胞(LysoDC)、庫弗氏細胞(Kupffer cell)或其任何組合。在某些態樣中，樹突細胞係cDC1。在其他態樣中，標記物包含C型凝集素結構域家族9成員A (Clec9a)蛋白、樹突細胞特異性細胞間黏著分子-3-結合非整聯蛋白(DC-SIGN)、CD207、CD40、Clec6、樹突細胞免疫受體(DCIR)、DEC-205、凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體-1 (LOX-1)、MARCO、Clec12a、Clec10a、DC-去唾液酸糖蛋白受體(DC-ASGPR)、DC免疫受體2 (DCIR2)、Dectin-1、巨噬細胞甘露糖受體(MMR)、BDCA-1 (CD303、Clec4c)、Dectin-2、Bst-2 (CD317)、朗格漢斯蛋白(Langerin)、CD206、CD11b、CD11c、CD123、CD304、XCR1、AXL、Siglec 6、CD209、SIRPA、CX3CR1、GPR182、CD14、CD16、CD32、CD34、CD38、CD10或其任何組合。在某些態樣中，標記物係Clec9a蛋白。

在一些態樣中，靶向部分特異性結合至T細胞之標記物。在某些態樣中，標記物包含CD3分子。

在一些態樣中，靶向部分直接連接至EV之外表面。在一些態樣中，靶向部分連接至EV之外表面上之支架X。在一些態樣中，靶向部分藉由連接體直接連接至EV之外表面。在一些態樣中，靶向部分藉由連接體連接至支架X。在某些態樣中，連接體係多肽。在一些態樣中，連接體係非多肽部分。在一些態樣中，連接體包含馬來醯亞胺部分。在一些態樣中，連接體包含膽固醇部分。

在一些態樣中，本文所闡述EV (例如胞外體)之支架Y包含N末端結構域(ND)及效應結構域(ED)，其中該ND及/或該ED與EV之腔表面締合。在一些態樣中，ND經由肉豆蔻醯化與胞外體之腔表面締合。在一些態樣中，ED藉由離子相互作用與胞外體之腔表面締合。在一些態樣中，ED在序列中包含(i)一鹼性胺基酸或(ii)兩個或更多個鹼性胺基酸，其中該鹼性胺基酸係選自由以下組成之群：Lys、Arg、His及其任何組合。在一些態樣中，鹼性胺基酸係(Lys)n，其中n係介於1與10之間的整數。在一些態樣中，ED包含Lys (K)、KK、KKK、KKKK (SEQ ID NO: 205)、KKKKK (SEQ ID NO: 206)、Arg (R)、RR、RRR、RRRR (SEQ ID NO: 207)；RRRRR (SEQ ID NO: 208)、KR、RK、KKR、KRK、RKK、KRR、RRK、(K/R)(K/R)(K/R)(K/R) (SEQ ID NO: 209)、(K/R)(K/R)(K/R)(K/R)(K/R) (SEQ ID NO: 210)或其任何組合。

在一些態樣中，ND包含如G:X2:X3:X4:X5:X6中所示之胺基酸序列，其中G代表Gly；其中「:」代表肽鍵，其中X2至X6中之每一者獨立地係胺基酸，且其中X6包含鹼性胺基酸。在一些態樣中， (i) X2係選自由以下組成之群：Pro、Gly、Ala及Ser； (ii) X4係選自由以下組成之群：Pro、Gly、Ala、Ser、Val、Ile、Leu、Phe、Trp、Tyr、Gln及Met； (iii) X5係選自由以下組成之群：Pro、Gly、Ala及Ser； (iv) X6係選自由以下組成之群：Lys、Arg及His；或 (v) (i)至(iv)之任何組合。

在一些態樣中，ND包含G:X2:X3:X4:X5:X6之胺基酸序列，其中 (i) G代表Gly； (ii) 「:」代表肽鍵； (iii) X2係選自由Pro、Gly、Ala及Ser組成之群之胺基酸； (iv) X3係胺基酸； (v) X4係選自由Pro、Gly、Ala、Ser、Val、Ile、Leu、Phe、Trp、Tyr、Gln及Met組成之群之胺基酸； (vi) X5係選自由Pro、Gly、Ala及Ser組成之群之胺基酸；且 (vii) X6係選自由Lys、Arg及His組成之群之胺基酸。

在一些態樣中，X3係選自由以下組成之群：Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、Lys、His及Arg。

在一些態樣中，ND與ED藉由連接體接合。在一些態樣中，連接體包含一或多個胺基酸。在一些態樣中，ND包含選自由以下組成之群之胺基酸序列：(i) GGKLSKK (SEQ ID NO: 211)、(ii) GAKLSKK (SEQ ID NO: 212)、(iii) GGKQSKK (SEQ ID NO: 213)、(iv) GGKLAKK (SEQ ID NO: 214)、(v) GGKLSK (SEQ ID NO: 215)或(vi)其任何組合。在一些態樣中，ND包含選自由以下組成之群之胺基酸序列：(i) GGKLSKKK (SEQ ID NO: 238)、(ii) GGKLSKKS (SEQ ID NO: 239)、(iii) GAKLSKKK (SEQ ID NO: 240)、(iv) GAKLSKKS (SEQ ID NO: 241)、(v) GGKQSKKK (SEQ ID NO: 242)、(vi) GGKQSKKS (SEQ ID NO: 243)、(vii) GGKLAKKK (SEQ ID NO: 244)、(viii) GGKLAKKS (SEQ ID NO: 245)及(ix)其任何組合。在一些態樣中，ND包含胺基酸序列GGKLSKK (SEQ ID NO: 211)。

在一些態樣中，支架Y之長度為至少約8個、至少約9個、至少約10個、至少約11個、至少約12個、至少約13個、至少約14個、至少約15個、至少約16個、至少約17個、至少約18個、至少約19個、至少約20個、至少約21個、至少約22個、至少約23個、至少約24個、至少約25個、至少約30個、至少約35個、至少約40個、至少約45個、至少約50個、至少約55個、至少約60個、至少約65個、至少約70個、至少約75個、至少約80個、至少約85個、至少約90個、至少約95個、至少約100個、至少約105個、至少約110個、至少約120個、至少約130個、至少約140個、至少約150個、至少約160個、至少約170個、至少約180個、至少約190個或至少約200個胺基酸。在一些態樣中，支架Y包含(i) GGKLSKKKKGYNVN (SEQ ID NO: 246)、(ii) GAKLSKKKKGYNVN (SEQ ID NO: 247)、(iii) GGKQSKKKKGYNVN (SEQ ID NO: 248)、(iv) GGKLAKKK KGYNVN (SEQ ID NO: 249)、(v) GGKLSKKKKGYSGG (SEQ ID NO: 250)、(vi) GGKLSKKKKGSGGS (SEQ ID NO: 251)、(vii) GGKLSKKKKSGGSG (SEQ ID NO: 252)、(viii) GGKLSKKKSGGSGG (SEQ ID NO: 253)、(ix) GGKLSKKSG GSGGS (SEQ ID NO: 254)、(x) GGKLSKSGGSGGSV (SEQ ID NO: 255)或(xi) GAKKSKKRFSFKKS (SEQ ID NO: 256)。在某些態樣中，支架Y係由以下組成：(i) GGKLSK KKKGYNVN (SEQ ID NO: 246)、(ii) GAKLSKKKKGYNVN (SEQ ID NO: 247)、(iii) GGKQSKKKKGYNVN (SEQ ID NO: 248)、(iv) GGKLAKKKKGYNVN (SEQ ID NO: 249)、(v) GGKLSKKKKGYSGG (SEQ ID NO: 250)、(vi) GGKLSK KKKGSGGS (SEQ ID NO: 251)、(vii) GGKLSKKKKSGGSG (SEQ ID NO: 252)、(viii) GGKLSKKKSGGSGG (SEQ ID NO: 253)、(ix) GGKLSKKSGGSGGS (SEQ ID NO: 254)、(x) GGKLSKSGGSGGSV (SEQ ID NO: 255)或(xi) GAKKSK KRFSFKKS (SEQ ID NO: 256)。

在一些態樣中，支架Y在N末端不包含Met。在一些態樣中，支架Y在支架蛋白之N末端包含肉豆蔻醯化之胺基酸殘基。在一些態樣中，在支架Y之N末端之胺基酸殘基係Gly。在一些態樣中，在支架Y之N末端之胺基酸殘基係合成的。在一些態樣中，在支架Y之N末端之胺基酸殘基係甘胺酸類似物。

本文提供醫藥組合物，其包含本文所闡述之EV (例如胞外體)及醫藥學上可接受之載劑。

本文提供產生本揭示案之EV (例如胞外體)之細胞。本揭示案進一步提供包含一或多個載體之細胞，其中該等載體包含編碼以下之核酸序列：(i)抗原(例如本文所闡述之彼等抗原)、(ii)佐劑(例如本文所闡述之彼等佐劑)、(iii)免疫調節劑、(iv)靶向部分(例如本文所闡述之彼等靶向部分)或(v)其組合。

本文提供套組，其包含本文所闡述之EV (例如胞外體)及使用說明書。本文亦提供EV藥物結合物，其包含本文所闡述之任一EV (例如胞外體)。

本文提供製備EV (例如胞外體)之方法，其包括在適宜條件下培養本文所揭示之細胞及獲得EV (例如胞外體)。

本文提供誘導有需要個體之免疫反應之方法，其包括向該個體投與本揭示案之EV (例如胞外體)。

本文提供預防或治療有需要個體之疾病之方法，其包括投與本文所闡述之EV (例如胞外體)，其中該疾病與抗原相關。在某些態樣中，該疾病係癌症。在一些態樣中，癌症包含膀胱癌、子宮頸癌、腎細胞癌、睪丸癌、結腸直腸癌、肺癌、頭頸癌、卵巢癌、淋巴瘤、肝癌、神經膠母細胞瘤、黑色素瘤、骨髓瘤、白血病、胰臟癌或其組合。在其他態樣中，該疾病係感染。

在一些態樣中，EV (例如胞外體)係以非經腸、經口、靜脈內、肌內、腫瘤內、鼻內、皮下或腹膜內方式投與。

在一些態樣中，本文所揭示之方法(例如誘導免疫反應之方法或預防或治療疾病之方法)包括投與另一治療劑。

本文提供抑制或降低有需要個體之癌症轉移之方法，其包括向該個體投與本揭示案之EV (例如胞外體)。

本揭示案係關於工程改造EV (例如胞外體)，其將抗原及佐劑同時遞送至相同的抗原呈遞細胞。該EV平台容許抗原之腔內表現及免疫共刺激分子之表面表現，此經設計以產生模組化之疫苗接種系統。可將各種佐劑納入至EV (例如胞外體)中，以增強針對眾多種抗原之免疫反應。該等工程改造EV可包含一或多個有效載荷且可改良EV之至少一種性質(例如本文所揭示之彼等性質)及其用途。在一些態樣中，該一或多個有效載荷包含抗原、佐劑及/或免疫調節劑。在某些態樣中，EV (例如胞外體)包含一或多個其他部分(例如靶向部分)。在一些態樣中，該一或多個有效載荷(例如抗原、佐劑及/或免疫調節劑)及/或該一或多個其他部分(例如靶向部分)可連接(attach或link)至EV (例如胞外體)之表面上或EV (例如胞外體)之腔表面上之一或多個支架部分。因此，本揭示案之EV容許用於疫苗之平台遞送媒介(亦即exoVACC™)，其中EV上之抗原及/或在一些態樣中，該一或多個有效載荷(例如抗原、佐劑及/或免疫調節劑可以特定方式組合)及/或經不同抗原及/一個或佐劑或免疫調節劑替代。多個其他部分(例如靶向部分)可直接連接(attach或link)至EV (例如胞外體)之外表面及/或腔表面。各個態樣之非限制性實例示於本揭示案中。I. 定義

為使本說明書更容易地理解，首先對某些術語進行定義。其他定義在整個詳細說明書中予以闡述。

應注意，術語「一(a或an)」實體係指一或多個該實體；舉例而言，「一核苷酸序列」應理解為代表一或多個核苷酸序列。因此，術語「一(a)」(或「一(an)」)、「一或多個」及「至少一個」在本文中可互換使用。

此外，「及/或」在本文中使用時應視為兩種指定特徵或組分中之每一者具有或不具有另一者之具體揭示內容。因此，如本文中諸如「A及/或B」之片語中所用之術語「及/或」意欲包括「A及B」、「A或B」、「A」(單獨)及「B」(單獨)。同樣，如諸如「A、B及/或C」之片語中所用之術語「及/或」意欲涵蓋以下態樣中之每一者：A、B及C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A及C；A及B；B及C；A (單獨)；B (單獨)；及C (單獨)。

應理解，無論本文中何處以言語「包含」闡述態樣，亦提供以「由......組成」及/或「基本上由......組成」之術語闡述之其他類似態樣。

除非另有定義，否則本文中所使用之所有技術及科學術語均具有熟習本揭示案相關領域技術者所通常理解之相同含義。舉例而言，Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show，第2版，2002, CRC Press；The Dictionary of Cell and Molecular Biology，第3版，1999, Academic Press；及Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology，修訂版，2000, Oxford University Press向熟習此項技術者提供本揭示案中所使用許多術語之一般性字典。

單位、前綴及符號係以其國際單位制(Système International de Unites，SI)接受之形式來表示。數字範圍包括界定該範圍之數字。除非另外指示，否則核苷酸序列係以5'至3'定向自左向右書寫。胺基酸序列係以胺基至羧基定向自左向右書寫。本文提供之標題並不限制本揭示案之各個態樣，該等態樣可參照整體說明書來掌握。因此，下文即將定義之術語係參照說明書全文更全面地定義。

本文所用之術語「約」意指大約、大致、左右或在附近。當術語「約」結合一數字範圍使用時，其藉由將邊界延伸至高於及低於所述數值來修改該範圍。一般而言，術語「約」可修改數值為高於及低於所述值，相差例如10%上或下(較高或較低)。

如本文所用，術語「細胞外囊泡 」或「EV 」係指細胞源性囊泡，其包含包圍內部空間之膜。細胞外囊泡包含直徑小於其所源自細胞之所有膜結合囊泡(例如胞外體、奈米囊泡)。在一些態樣中，細胞外囊泡之直徑範圍為20 nm至1000 nm，且可包含各種大分子有效載荷，該等有效載荷係在內部空間(亦即腔)內、展示在細胞外囊泡之外表面上及/或跨膜。在一些態樣中，有效載荷可包含核酸、蛋白質、碳水化合物、脂質、小分子及/或其組合。在某些態樣中，細胞外媒介包含支架部分。作為實例且無限制，細胞外囊泡包括凋亡體、細胞碎片、藉由直接或間接操縱(例如藉由連續擠壓或利用鹼性溶液處理)源自細胞之囊泡、成囊泡之細胞器及由活細胞產生之囊泡(例如藉由直接質膜出芽或晚期胞內體與質膜之融合)。細胞外囊泡可源自活的或死亡的生物體、外植組織或器官、原核或真核細胞及/或經培養細胞。在一些態樣中，細胞外囊泡係由表現一或多種轉殖基因產物之細胞產生。

如本文所用，術語「胞外體 」係指直徑介於20-300 nm之間(例如介於40-200 nm之間)的細胞外囊泡。胞外體包含包圍內部空間(亦即腔)之膜，且在一些態樣中，可藉由直接質膜出芽或藉由晚期胞內體或多囊泡體與質膜之融合自細胞(例如生產細胞)產生。在某些態樣中，胞外體包含支架部分。如下文所闡述，胞外體可源自生產細胞，且可基於其大小、密度、生物化學參數或其組合自生產細胞分離出來。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)係由表現一或多種轉殖基因產物之細胞產生。

如本文所用，術語「奈米囊泡 」係指直徑介於20-250 nm之間(例如介於30-150 nm之間)的細胞外囊泡，且其係藉由直接或間接操縱自細胞(例如生產細胞)產生，使得在沒有操縱之情形下細胞將不會產生奈米囊泡。細胞產生奈米囊泡之適當操縱包括(但不限於)連續擠壓、利用鹼性溶液處理、音波處理或其組合。在一些態樣中，奈米囊泡之產生可導致生產細胞之破壞。在一些態樣中，本文所闡述之奈米囊泡群體實質上不含藉助自質膜直接出芽或晚期胞內體與質膜之融合而源自細胞之囊泡。在某些態樣中，奈米囊泡包含支架部分。奈米囊泡一旦源自生產細胞，則可基於其大小、密度、生物化學參數或其組合自該生產細胞分離出來。

如本文所用，術語「表面工程改造 EV ( 例如胞外體 ) 」(例如支架X工程改造EV (例如胞外體))係指EV (例如胞外體)之膜或表面在其組成上經改質，使得工程改造EV (例如胞外體)之表面不同於改質之前EV (例如胞外體)之表面或不同於天然EV (例如胞外體)之表面之EV (例如胞外體)。工程改造可在EV (例如胞外體)之表面上或在EV (例如胞外體)之膜中進行，使得EV (例如胞外體)之表面經改變。舉例而言，膜之蛋白質、脂質、小分子、碳水化合物等之組成經改質。組成可藉由化學、物理或生物方法而改變或藉由自先前或同時經化學、物理或生物方法修飾之細胞產生而改變。具體而言，組成可藉由遺傳工程而改變或藉由自先前經遺傳工程修飾之細胞產生而改變。在一些態樣中，表面工程改造EV (例如胞外體)包含外源性蛋白質(亦即EV (例如胞外體)不天然表現之蛋白質)或其片段或變異體，該外源性蛋白質或其片段或變異體可暴露於EV (例如胞外體)之表面或可係暴露於EV (例如胞外體)表面上之部分之錨定點(連接)。在其他態樣中，表面工程改造EV (例如胞外體)包含表現更高(例如數量更高)之天然胞外體蛋白質(例如支架X)或其片段或變異體，該天然胞外體蛋白質(例如支架X)或其片段或變異體可暴露於EV (例如胞外體)之表面或可係暴露於EV (例如胞外體)表面上之部分之錨定點(連接)。

如本文所用，術語「腔工程改造胞外體 」(例如支架Y工程改造胞外體)係指EV (例如胞外體)之膜或腔在其組成上經改質，使得工程改造EV (例如胞外體)之腔不同於改質之前EV (例如胞外體)之腔或不同於天然EV (例如胞外體)之腔之EV (例如胞外體)。工程改造可直接在EV (例如胞外體)之腔中或膜中進行，使得EV (例如胞外體)之腔經改變。舉例而言，膜之蛋白質、脂質、小分子、碳水化合物等之組成經改質，使得EV (例如胞外體)之腔經改質。組成可藉由化學、物理或生物方法而改變或藉由自先前藉由化學、物理或生物方法修飾之細胞產生而改變。具體而言，組成可藉由遺傳工程而改變或藉由自先前經遺傳工程修飾之細胞產生而改變。在一些態樣中，腔工程改造胞外體包含外源性蛋白質(亦即EV (例如胞外體)不天然表現之蛋白質)或其片段或變異體，該外源性蛋白質或其片段或變異體可暴露於EV (例如胞外體)之腔內或可係暴露於EV (例如胞外體)內層上之部分之錨定點(連接)。在其他態樣中，腔工程改造EV (例如胞外體)包含表現更高之天然胞外體蛋白質(例如支架X或支架Y)或其片段或變異體，該天然胞外體蛋白質(例如支架X或支架Y)或其片段或變異體可暴露於胞外體之腔或可係暴露於胞外體腔內之部分之錨定點(連接)。

當在本文所闡述之EV (例如胞外體)之上下文中使用時，術語「修飾」係指對EV (例如胞外體)及/或其生產細胞之改變或工程改造，使得經修飾之EV (例如胞外體)不同於天然EV (例如胞外體)。在一些態樣中，與天然EV (例如胞外體)之膜(例如包含更高密度或數量之天然胞外體蛋白質之膜)及/或包含在胞外體中非天然發現之蛋白質(例如抗原、佐劑及/或免疫調節劑)之膜相比，本文所闡述之經修飾EV (例如胞外體)包含在蛋白質、脂質、小分子、碳水化合物等之組成方面有所不同之膜。在某些態樣中，此等對膜之修飾改變EV (例如胞外體)之外表面(例如本文所闡述之表面工程改造EV (例如胞外體))。在某些態樣中，此等對膜之修飾改變EV (例如胞外體)之腔(例如本文所闡述之腔工程改造EV (例如胞外體))。

如本文所用，術語「支架部分 」係指可用於將有效載荷或任一其他相關化合物(例如抗原、佐劑及/或免疫調節劑)在EV (例如胞外體)之腔表面上或外表面上錨定至EV (例如胞外體)之分子。在某些態樣中，支架部分包含合成分子。在一些態樣中，支架部分包含非多肽部分。在其他態樣中，支架部分包含天然存在於EV (例如胞外體)中之脂質、碳水化合物或蛋白質。在一些態樣中，支架部分包含不天然存在於EV (例如胞外體)中之脂質、碳水化合物或蛋白質。在某些態樣中，支架部分係支架X。在一些態樣中，支架部分係支架Y。在其他態樣中，支架部分包含支架X及支架Y二者。本揭示案可使用之其他支架部分之非限制性實例包括：胺基肽酶N (CD13)；腦啡肽酶、AKA膜金屬肽鏈內切酶(MME)；外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶家族成員1 (ENPP1)；神經纖毛蛋白-1 (NRP1)；CD9、CD63、CD81、PDGFR、GPI錨定蛋白、乳凝集素、LAMP2及LAMP2B。

如本文所用，術語「支架 X 」係指最近在胞外體表面上鑑別出之胞外體蛋白質。例如，參見美國專利第10,195,290號，該專利係以全文引用的方式併入本文中。支架X蛋白之非限制性實例包括：前列腺素F2受體負調控劑(「PTGFRN蛋白」)；基礎免疫球蛋白(「BSG蛋白」)；免疫球蛋白超家族成員2 (「IGSF2蛋白」)；免疫球蛋白超家族成員3 (「IGSF3蛋白」)；免疫球蛋白超家族成員8 (「IGSF8蛋白」)；整聯蛋白β-1 (「ITGB1蛋白)；整聯蛋白α-4 (「ITGA4蛋白」)；4F2細胞表面抗原重鏈(「SLC3A2蛋白」)；及ATP轉運蛋白類(「ATP1A1蛋白」、「ATP1A2蛋白」、「ATP1A3蛋白」、「ATP1A4蛋白」、「ATP1B3蛋白」、「ATP2B1蛋白」、「ATP2B2蛋白」、「ATP2B3蛋白」、「ATP2B蛋白」)。在一些態樣中，支架X蛋白可係全蛋白或其片段(例如功能片段，例如能夠將另一部分錨定在EV (例如胞外體)之外表面上或腔表面上之最小片段)。在一些態樣中，支架X可將部分(例如抗原、佐劑及/或免疫調節劑)錨定至胞外體之外表面或腔表面。

如本文所用，術語「支架 Y 」係指在胞外體之腔內新近鑑別出之胞外體蛋白質。例如，參見國際申請案第PCT/US2018/061679號，該申請案係以全文引用的方式併入本文中。支架Y蛋白之非限制性實例包括：肉豆蔻醯化之富含丙胺酸之蛋白激酶C受質(「MARCKS蛋白」)；肉豆蔻醯化之富含丙胺酸之蛋白激酶C受質樣1 (「MARCKSL1蛋白」)；及腦酸溶性蛋白1 (「BASP1蛋白」)。在一些態樣中，支架Y蛋白可係全蛋白或其片段(例如功能片段，例如能夠將部分錨定至胞外體之腔表面之最小片段)。在一些態樣中，支架Y可將部分(例如抗原、佐劑及/或免疫調節劑)錨定至EV (例如胞外體)之腔表面。

如本文所用，術語蛋白質(例如治療蛋白、支架X或支架Y)之「片段」係指蛋白質中較天然序列短、與天然蛋白質相比N末端及/或C末端缺失或蛋白質之任一部分缺失之胺基酸序列。如本文所用，術語「功能片段 」係指保留蛋白質功能之蛋白質片段。因此，在一些態樣中，支架X蛋白之功能片段保留將部分錨定在EV (例如胞外體)之腔表面上或外表面上之能力。類似地，在某些態樣中，支架Y蛋白之功能片段保留將部分錨定在EV (例如胞外體)之腔表面上之能力。片段是否係功能片段可藉由任何業內已知之測定EV (例如胞外體)之蛋白質含量之方法來評價，包括西方墨點、FACS分析及片段與自身螢光性蛋白(如例如GFP)之融合。在某些態樣中，支架X蛋白之功能片段保留至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%或至少約100%之天然支架X蛋白之能力，例如錨定部分之能力。在一些態樣中，支架Y蛋白之功能片段保留至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%或至少約100%之天然支架Y蛋白之能力，例如錨定另一分子之能力。

如本文所用，術語分子(例如功能分子、抗原、支架X及/或支架Y)之「變異體 」係指在藉由此項技術中已知之方法進行比較後，與另一分子共有某些結構及功能一致性之分子。舉例而言，蛋白質之變異體可包括另一蛋白質中之取代、插入、缺失、框移或重排。

在一些態樣中，支架X之變異體包含與全長之成熟PTGFRN、BSG、IGSF2、IGSF3、IGSF8、ITGB1、ITGA4、SLC3A2或ATP轉運蛋白或PTGFRN、BSG、IGSF2、IGSF3、IGSF8、ITGB1、ITGA4、SLC3A2或ATP轉運蛋白之片段(例如功能片段)具有至少約70%一致性之變異體。在一些態樣中，PTGFRN之變異體或PTGFRN片段之變異體與根據SEQ ID NO: 1之PTGFRN或與其功能片段共有至少約70%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%之序列一致性。在一些態樣中，BSG之變異體或BSG片段之變異體與根據SEQ ID NO: 9之BSG或與其功能片段共有至少約70%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%之序列一致性。在一些態樣中，IGSF2之變異體或IGSF2片段之變異體與根據SEQ ID NO: 34之IGSF2或與其功能片段共有至少約70%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%之序列一致性。在一些態樣中，IGSF3之變異體或IGSF3片段之變異體與根據SEQ ID NO: 20之IGSF3或與其功能片段共有至少約70%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%之序列一致性。在一些態樣中，IGSF8之變異體或IGSF8片段之變異體與根據SEQ ID NO: 14之IGSF8或與其功能片段共有至少約70%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%之序列一致性。在一些態樣中，ITGB1之變異體或ITGB1片段之變異體與根據SEQ ID NO: 21之ITGB1或與其功能片段共有至少約70%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%之序列一致性。在一些態樣中，ITGA4之變異體或ITGA4片段之變異體與根據SEQ ID NO: 22之ITGA4或與其功能片段共有至少約70%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%之序列一致性。在一些態樣中，SLC3A2之變異體或SLC3A2片段之變異體與根據SEQ ID NO: 23之SLC3A2或與其功能片段共有至少約70%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%之序列一致性。在一些態樣中，ATP1A1之變異體或ATP1A1片段之變異體與根據SEQ ID NO: 24之ATP1A1或與其功能片段共有至少約70%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%之序列一致性。在一些態樣中，ATP1A2之變異體或ATP1A2片段之變異體與根據SEQ ID NO: 25之ATP1A2或與其功能片段共有至少約70%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%之序列一致性。在一些態樣中，ATP1A3之變異體或ATP1A3片段之變異體與根據SEQ ID NO: 26之ATP1A3或與其功能片段共有至少約70%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%之序列一致性。在一些態樣中，ATP1A4之變異體或ATP1A4片段之變異體與根據SEQ ID NO: 27之ATP1A4或與其功能片段共有至少約70%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%之序列一致性。在一些態樣中，ATP1B3之變異體或ATP1B3片段之變異體與根據SEQ ID NO: 28之ATP1B3或與其功能片段共有至少約70%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%之序列一致性。在一些態樣中，ATP2B1之變異體或ATP2B1片段之變異體與根據SEQ ID NO: 29之ATP2B1或與其功能片段共有至少約70%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%之序列一致性。在一些態樣中，ATP2B2之變異體或ATP2B2片段之變異體與根據SEQ ID NO: 30之ATP2B2或與其功能片段共有至少約70%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%之序列一致性。在一些態樣中，ATP2B3之變異體或ATP2B3片段之變異體與根據SEQ ID NO: 31之ATP2B3或與其功能片段共有至少約70%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%之序列一致性。在一些態樣中，ATP2B4之變異體或ATP2B4片段之變異體與根據SEQ ID NO: 32之ATP2B4或與其功能片段共有至少約70%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%之序列一致性。在一些態樣中，本文所揭示之支架X蛋白之變異體或支架X蛋白片段之變異體保留特異性靶向至EV (例如胞外體)之能力。在一些態樣中，支架X包括一或多個突變，例如保守胺基酸取代。

在一些態樣中，支架Y之變異體包含與MARCKS、MARCKSL1、BASP1或MARCKS、MARCKSL1或BASP1之片段具有至少約70%一致性之變異體。在一些態樣中，MARCKS之變異體或MARCKS片段之變異體與根據SEQ ID NO: 47之MARCKS或與其功能片段共有至少約70%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%之序列一致性。在一些態樣中，MARCKSL1之變異體或MARCKSL1片段之變異體與根據SEQ ID NO: 48之MARCKSL1或與其功能片段共有至少約70%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%之序列一致性。在一些態樣中，BASP1之變異體或BASP1片段之變異體與根據SEQ ID NO: 49之BASP1或與其功能片段共有至少約70%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%之序列一致性。在一些態樣中，支架Y蛋白之變異體或支架Y蛋白片段之變異體保留特異性靶向至EV (例如胞外體)之腔表面之能力。在一些態樣中，支架Y包括一或多個突變，例如保守胺基酸取代。

「保守胺基酸取代 」係其中胺基酸殘基經具有相似側鏈之胺基酸殘基替代之取代。此項技術中已定義具有相似側鏈之胺基酸殘基家族，該等側鏈包括鹼性側鏈(例如離胺酸、精胺酸、組胺酸)、酸性側鏈(例如天冬胺酸、麩胺酸)、不帶電荷之極性側鏈(例如甘胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸)、非極性側鏈(例如丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸、色胺酸)、β-具支鏈側鏈(例如蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸)及芳香族側鏈(例如酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸)。因此，若多肽中之胺基酸經來自相同側鏈家族之另一胺基酸替代，則取代視為保守的。在另一態樣中，一串胺基酸可保守地經側鏈家族成員之順序及/或組成不同的結構相似之串替代。

術語兩個多核苷酸或多肽序列之間的「序列一致性百分比 」或「一致性百分比 」係指計及必須引入以獲得該兩個序列之最佳比對之添加或缺失(亦即空位)，比較窗內之序列所共有之一致匹配位置之數量。匹配位置係靶標及參照序列二者中呈現一致核苷酸或胺基酸之任一位置。由於空位不係核苷酸或胺基酸，故靶序列中所呈現之空位不計算在內。同樣，參照序列中所呈現之空位不計算在內，此乃因計算的是靶序列核苷酸或胺基酸，而非來自參照序列之核苷酸或胺基酸。

序列一致性百分比係藉由以下方式來計算：測定兩個序列中出現一致胺基酸殘基或核酸鹼基之位置數以得到匹配位置數，用匹配位置數除以比較窗中位置之總數，且將結果乘以100以得到序列一致性百分比。兩個序列之間的序列比較及序列一致性百分比測定可使用供在線使用及供下載之容易獲得之軟體來完成。適宜軟體程式可自各種來源獲得，且用於比對蛋白質及核苷酸序列二者。測定序列一致性百分比之一個適宜程式係bl2seq，其係可自美國政府之國家生物技術資訊中心(National Center for Biotechnology Information) BLAST網站(blast.ncbi.nlm.nih.gov)獲得之BLAST程式套件之一部分。Bl2seq使用BLASTN或BLASTP算法實施兩個序列之間的比較。BLASTN用於比較核酸序列，而BLASTP用於比較胺基酸序列。其他適宜程式係(例如) Needle、Stretcher、Water或Matcher，其係EMBOSS生物資訊學程式套件之一部分且亦可自歐洲生物資訊學研究所(European Bioinformatics Institute，EBI)在www.ebi.ac.uk/Tools/psa獲得。

與多核苷酸或多肽參照序列比對之單一多核苷酸或多肽靶序列內之不同區域可各自具有其自身的序列一致性百分比。應注意，序列一致性百分比值捨入至小數點後一位。舉例而言，將80.11、80.12、80.13及80.14向下捨入至80.1，而將80.15、80.16、80.17、80.18及80.19向上捨入至80.2。亦應注意，長度值將始終為整數。

熟習此項技術者應瞭解，用於計算序列一致性百分比之序列比對之生成並不限於僅由一級序列資料驅動之二元序列-序列比較。序列比對可源自多個序列比對。生成多個序列比對之一個適宜程式係ClustalW2，其可自www.clustal.org.獲得。另一適宜程式係MUSCLE，其可自www.drive5.com/muscle/獲得。ClustalW2及MUSCLE或者可自(例如) EBI獲得。

亦應瞭解，序列比對可藉由將序列資料與來自異源來源之資料(諸如結構資料(例如結晶蛋白結構)、功能資料(例如突變位置)或譜系學資料)整合來生成。整合異源資料以生成多個序列比對之適宜程式係T-Coffee，其可在worldwideweb.tcoffee.org獲得且或者可自(例如) EBI獲得。亦應瞭解，用於計算序列一致性百分比之最終比對可自動或手動進行。

多核苷酸變異體可在編碼區、非編碼區或編碼區及非編碼區二者中含有改變。在一態樣中，多核苷酸變異體含有產生沈默取代、增加或缺失，但不改變所編碼多肽之性質或活性之改變。在另一態樣中，由於遺傳密碼之簡併性，核苷酸變異體係由沈默取代產生。在其他態樣中，變異體中5至10、1至5或1至2個胺基酸以任何組合經取代、缺失或增加。多核苷酸變異體可出於多種原因而產生，例如以最佳化特定宿主之密碼子表現(將人類mRNA中之密碼子變為其他密碼子，例如細菌宿主(諸如大腸桿菌(E. coli ))中之密碼子)。

天然變異體稱為「等位基因變異體 」，且係指佔據生物體之染色體上給定基因座之基因的若干種替代形式之一(Genes II, Lewin, B.編輯，John Wiley & Sons, New York (1985))。該等等位基因變異體可在多核苷酸及/或多肽層面上變化，且包括在本揭示案中。或者，可藉由誘變技術或藉由直接合成來產生非天然變異體。

使用已知之蛋白質工程方法及重組DNA技術，可產生變異體以改良或改變多肽之特性。舉例而言，可自分泌蛋白之N末端或C末端缺失一或多個胺基酸，而實質上不喪失生物功能。Ron等人，J. Biol. Chem. 268: 2984-2988 (1993)係以全文引用的方式併入本文中，其報導變異體KGF蛋白，該等變異體KGF蛋白即使在缺失3、8或27個胺基末端胺基酸殘基之後亦具有肝素結合活性。類似地，在自干擾素γ之羧基末端缺失8至10個胺基酸殘基之後，此蛋白展現最高高10倍之活性。(Dobeli等人，J. Biotechnology 7 :199-216 (1988)，其係以全文引用的方式併入本文中。)

此外，充分證據展示，變異體通常保留與天然蛋白質相似之生物活性。舉例而言，Gayle及同事(J. Biol. Chem 268 :22105-22111 (1993)，其係以全文引用的方式併入本文中)進行了人類細胞介素IL-1a之廣泛突變分析。其使用隨機誘變產生超過3,500個個別IL-1a突變體，在整個分子長度上每個變異體平均有2.5個胺基酸變化。在每個可能的胺基酸位置檢查多個突變。研究人員發現，「分子之大部分可經改變，而對[結合或生物活性]幾乎沒有效應」。(參見摘要。)實際上，在所檢查之3,500個以上之核苷酸序列中，僅23個獨特胺基酸序列產生活性顯著不同於野生型之蛋白質。

如上所述，多肽變異體包括(例如)經修飾之多肽。修飾包括(例如)乙醯化、醯化、ADP核糖基化、醯胺化、黃素之共價連接、血基質部分之共價連接、核苷酸或核苷酸衍生物之共價連接、脂質或脂質衍生物之共價連接、磷脂醯肌醇之共價連接、交聯、環化、二硫鍵形成、去甲基化、共價交聯之形成、半胱胺酸之形成、焦麩胺酸鹽之形成、甲醯化、γ-羧化、糖基化、GPI錨形成、羥基化、碘化、甲基化、肉豆蔻醯化、氧化、聚乙二醇化(Mei等人，Blood 116: 270-79 (2010)，其係以全文引用的方式併入本文中)、蛋白水解處理、磷酸化、異戊二烯化、外消旋化、硒醯化、硫酸化、轉移RNA介導之胺基酸添加至蛋白質(諸如精胺醯化)及泛素化。在一些態樣中，支架X及/或支架Y在任一便捷位置經修飾。

如本文所用，術語「連接至 」、「融合」或「結合至 」可互換使用，且係指在第一部分與第二部分之間形成共價或非共價鍵，例如分別在支架X與抗原(或佐劑或免疫調節劑)之間形成，例如在細胞外囊泡中或在細胞外囊泡上表現之支架部分(例如分別在細胞外囊泡之腔表面中或在細胞外囊泡之外表面上之支架X (例如PTGFRN蛋白))與抗原之間形成。在一些態樣中，本文所揭示之有效載荷(例如抗原、佐劑及/或免疫調節劑)及/或靶向部分可直接連接至EV (例如胞外體)之外表面及/或腔表面。如本文所用，術語「直接連接 」、「直接融合 」或「直接結合至 」係指在不使用本文所揭示之支架部分之情形下，將部分(例如有效載荷及/或靶向部分)連接(融合或結合)至EV (例如胞外體)表面之過程。

如本文所用，術語「融合蛋白 」係指彼此連接或結合之兩種或更多種蛋白質。舉例而言，在一些態樣中，可在本文所揭示之EV (例如胞外體)中表現之融合蛋白包含(i)有效載荷(例如抗原、佐劑及/或免疫調節劑)及(ii)支架部分(例如支架X及/或支架Y)。在一些態樣中，可在可用於本揭示案之EV (例如胞外體)中表現之融合蛋白包含(i)靶向部分及(ii)支架部分(例如支架X及/或支架Y)。如本文所闡述，在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)可表現多種融合蛋白，其中第一融合蛋白包含(i)有效載荷(例如抗原、佐劑及/或免疫調節劑)及(ii)支架部分(例如支架X及/或支架Y)，且其中第二融合蛋白包含(i)靶向部分及(ii)支架部分(例如支架X及/或支架Y)。

術語「包封 (encapsulated) 」或該術語在文法上之不同形式(例如包封(encapsulation或encapsulating))係指使第一部分(例如抗原、佐劑或免疫調節劑)在第二部分(例如EV (例如胞外體))內部，而不將該兩個部分化學或物理連接之狀態或過程。在一些態樣中，術語「包封」可與術語「在 …… 之腔中 」及「裝載」互換使用。將第一部分(例如有效載荷，例如抗原、佐劑或免疫調節劑)包封(或裝載)至第二部分(例如EV (例如胞外體))中之非限制性實例係在本文中別處揭示。

如本文所用，術語「生產細胞 」係指用於產生EV (例如胞外體)之細胞。生產細胞可係在活體外培養之細胞或活體內細胞。生產細胞包括(但不限於)已知有效產生EV (例如胞外體)之細胞，例如HEK293細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、間充質幹細胞(MSC)、BJ人類包皮纖維母細胞、fHDF纖維母細胞、AGE.HN^® 神經元前體細胞、CAP^® 羊水細胞、脂肪間充質幹細胞、RPTEC/TERT1細胞。在某些態樣中，生產細胞不係抗原呈遞細胞。在一些態樣中，生產細胞不係樹突細胞、B細胞、肥胖細胞、巨噬細胞、嗜中性球、庫弗氏-布洛維奇氏細胞、源自該等細胞中之任一者之細胞或其任何組合。在一些態樣中，生產細胞不係天然存在之抗原呈遞細胞(亦即已經修飾)。在一些態樣中，生產細胞不係天然存在之樹突細胞、B細胞、肥胖細胞、巨噬細胞、嗜中性球、庫弗氏-布洛維奇氏細胞、源自該等細胞中之任一者之細胞或其任何組合。與此等生產細胞相關之其他揭示內容在本揭示案中別處提供。在一些態樣中，可用於本揭示案中之EV (例如胞外體)不在暴露於EV (例如胞外體)表面上之I類或II類MHC分子上攜載抗原(亦即抗原不在I類或II類MHC分子上呈遞)，而是可在EV (例如胞外體)之腔中或EV (例如胞外體)之表面上藉由連接至支架X及/或支架Y攜載抗原。

如本文所用，「I 類 MHC 分子」係指編碼I類MHC分子之野生型或變異體I類HLA基因之蛋白質產物。因此，「I 類 HLA 分子」及「I 類 MHC 分子」在本文中可互換使用。

I類MHC分子係主要組織相容性複合體(MHC)分子之兩種主要類別之一(另一種為II類MHC)，且在有頜脊椎動物體內之所有有核細胞之細胞表面上發現。其亦存在於血小板上，但不存在於紅血球上。其功能係將來自細胞內之蛋白質之肽片段展示給細胞毒性T細胞；此將觸發免疫系統針對藉助I類MHC蛋白展示之特定非自身抗原之即時反應。由於I類MHC分子呈遞源自胞質蛋白之肽，因此I類MHC呈遞路徑通常稱為胞質或內源性路徑。

在人類中，對應於I類MHC之HLA係HLA-A、HLA-B及HLA-C。I類MHC分子包含兩條蛋白質鏈：α鏈及β2-微球蛋白(β2m)鏈。人類β2m係由B2M基因編碼。I類MHC分子結合主要由蛋白酶體降解胞質蛋白所產生之肽。MHC I:肽複合體接著經由內質網插入至細胞之外質膜中。抗原決定基肽結合在I類MHC分子之細胞外部分上。因此，I類MHC之功能係將細胞內蛋白質展示給細胞毒性T細胞(CTL)。然而，I類MHC亦可在稱為交叉呈遞之過程中呈遞自外源性蛋白質所產生之肽。

正常細胞將在其I類MHC上展示來自正常細胞蛋白質轉換之肽，且由於中樞及外周耐受機制，CTL將不會因應該等肽而活化。當細胞表現外源蛋白質時(諸如在病毒感染後)，一部分I類MHC將在細胞表面上展示該等肽。因此，對MHC:肽複合體具有特異性之CTL將識別且殺死呈遞細胞。或者，I類MHC自身可用作天然殺手細胞(NK)之抑制性配位體。表面I類MHC之正常水準降低(一些病毒及某些腫瘤用以逃避CTL反應之一種機制)激活NK細胞殺死。

如本文所用，「II 類 MHC 分子」係指編碼II類MHC分子之野生型或變異體II類HLA基因之蛋白質產物。因此，「II 類 HLA 分子」及「II 類 MHC 分子」在本文中可互換使用。

II類MHC分子係一類主要的組織相容性複合體(MHC)分子，其通常僅在諸如樹突細胞、單核吞噬細胞、一些內皮細胞、胸腺上皮細胞及B細胞等專門抗原呈遞細胞上發現。該等細胞在起始免疫反應中係重要的。由II類肽呈遞之抗原源自細胞外蛋白質(而非如I類MHC之胞質)。

如同I類MHC分子，II類分子亦係異二聚體，但在此情形下係由兩個同源肽(α及β鏈)組成，該兩者均在MHC中編碼。子名稱α1、α2等係指HLA基因內之單獨結構域；每一結構域通常由基因內之不同外顯子編碼，且一些基因具有編碼前導序列、跨膜序列等之其他結構域。該等分子具有兩個細胞外區域以及跨膜序列及胞質尾。鏈之α1及β1區域在一起形成膜遠端肽結合結構域，而鏈之其餘細胞外部分α2及β2區域形成膜近端免疫球蛋白樣結構域。結合抗原或肽之抗原結合槽係由兩個α螺旋壁與β褶疊構成。由於II類MHC分子之抗原結合槽在兩端係開放的，而I類分子上之相應槽在每一端係封閉的，因此由II類MHC分子呈遞之抗原更長，長度通常介於15與24個胺基酸殘基之間。II類MHC分子之裝載藉由吞噬作用發生；細胞外蛋白質被內吞，在溶酶體中消化，且所產生之抗原決定基肽片段在其遷移至細胞表面之前裝載至II類MHC分子上。在人類中，II類MHC蛋白複合體係由人類白血球抗原基因複合體(HLA)編碼。對應於II類MHC之HLA係HLA-DP、HLA-DM、HLA-DOA、HLA-DOB、HLA-DQ及HLA-DR。HLA基因複合體中之突變可導致裸淋巴球症候群(BLS)，其係一種類型之II類MHC缺陷。

如本文所用，術語「分離 (isolate 、 isolated 及isolating )」或「純化 (purify 、 purified 及purifying )」以及「提取 (extracted 及extracting )」可互換使用，且係指已經歷一或多個純化製程之期望EV之製劑狀態(例如多個已知或未知量及/或濃度)，該一或多個純化製程係例如期望EV製劑之選擇或富集。在一些態樣中，如本文所用之分離或純化係自含有生產細胞之樣品去除EV、部分地去除EV (例如一部分)之製程。在一些態樣中，經分離之EV組合物不具有可偵測到之不期望活性，或者不期望活性之水準或量處於可接受之水準或量或低於可接受之水準或量。在其他態樣中，經分離之EV組合物之期望EV之量及/或濃度處於可接受之量及/或濃度或高於可接受之量及/或濃度。在其他態樣中，與自其獲得組合物之起始材料(例如生產細胞製劑)相比，經分離之EV組合物被富集。與起始材料相比，此富集可為10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、99.9%、99.99%、99.999%、99.9999%或大於99.9999%。在一些態樣中，經分離之EV製劑實質上不含殘餘生物產物。在一些態樣中，經分離之EV製劑100%不含、99%不含、98%不含、97%不含、96%不含、95%不含、94%不含、93%不含、92%不含、91%不含或90%不含任何污染性生物物質。殘餘生物產物可包括非生物性材料(包括化學品)或不需要之核酸、蛋白質、脂質或代謝物。實質上不含殘餘生物產物亦可意味EV組合物不含可偵測到之生產細胞及僅可偵測到EV。

如本文所用，術語「免疫調節劑 」係指作用於與細胞外囊泡接觸之靶標(例如靶細胞)且調控免疫系統之劑(亦即有效載荷)。可引入至EV (例如胞外體)及/或生產細胞中之免疫調節劑之非限制性實例包括諸如以下等劑：檢查點抑制劑之調節劑、檢查點抑制劑之配位體、細胞介素、其衍生物或其任何組合。免疫調節劑亦可包括促效劑、拮抗劑、抗體、抗原結合片段、多核苷酸(諸如siRNA)、反義寡核苷酸、磷醯二胺嗎啉基寡聚物(PMO)、肽結合之磷醯二胺嗎啉基寡聚物(PPMO)、miRNA、lncRNA、mRNA DNA或小分子。

如本文所用，術語「生物分佈改質劑 」係指可使細胞外囊泡(例如胞外體、奈米囊泡)在活體內或活體外(例如在不同品種細胞之混合培養物中)之分佈改質之劑(亦即有效載荷)。在一些態樣中，術語「靶向部分 」可與術語生物分佈改質劑互換使用。在一些態樣中，靶向部分改變EV (例如胞外體)之向性(「向性部分」)。如本文所用，術語「向性部分 」係指當在EV (例如胞外體)上表現時改變及/或增強EV之天然運動之靶向部分。舉例而言，在一些態樣中，向性部分可促使EV被特定細胞、組織或器官吸收。本揭示案可使用之向性部分之非限制性實例包括可結合至樹突細胞上(例如Clec9A或DEC205)或T細胞上(例如CD3)所特異性表現之標記物之彼等向性部分。除非另外指示，否則如本文所用之術語「靶向部分」涵蓋向性部分。生物分佈劑可係諸如蛋白質、肽、脂質或碳水化合物等生物分子，或係合成分子。舉例而言，生物分佈改質劑可係親和配位體(例如抗體、VHH結構域、噬菌體展示肽、纖連蛋白結構域、駱駝科動物抗體(camelid)、VNAR)、合成聚合物(例如PEG)、天然配位體/分子(例如CD40L、白蛋白、CD47、CD24、CD55、CD59)、重組蛋白質(例如XTEN)，但不限於此。

在某些態樣中，生物分佈改質劑及/或靶向部分展示在EV (例如胞外體)之表面上。生物分佈改質劑可藉由融合至支架蛋白(例如支架X)而展示在EV表面上(例如作為遺傳編碼之融合分子)。在一些態樣中，生物分佈改質劑可藉由將生物分佈改質劑連接至EV表面分子之化學反應而展示在EV表面上。非限制性實例係聚乙二醇化。在一些態樣中，除抗原、佐劑或免疫調節劑以外，本文所揭示之EV (例如胞外體)亦可進一步包含生物分佈改質劑。本揭示案可使用之生物分佈改質劑或靶向部分之非限制性實例包括C型凝集素結構域家族9成員A (Clec9a)蛋白、樹突細胞特異性細胞間黏著分子-3-結合非整聯蛋白(DC-SIGN)、CD207、CD40、Clec6、樹突細胞免疫受體(DCIR)、DEC-205、凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體-1 (LOX-1)、MARCO、Clec12a、DC-去唾液酸糖蛋白受體(DC-ASGPR)、DC免疫受體2 (DCIR2)、Dectin-1、巨噬細胞甘露糖受體(MMR)、BDCA-1 (CD303、Clec4c)、Dectin-2、Bst-2 (CD317)、CD3或其任何組合。在某些態樣中，靶向部分係Clec9a蛋白。在一些態樣中，靶向部分係CD3分子。

如本文所用，術語「C 型凝集素結構域家族 9 成員 A 」(Clec9a) 蛋白係指起活化性受體之作用且在髓系細胞(例如DC)上表現之V族C型凝集素樣受體(CTLR)。Huysamen等人，J Biol Chem 283(24):16693-701 (2008)；美國專利第9,988,431 B2號，其各自係以全文引用的方式併入本文中。Clec9a之同義詞係已知的，且包括CD370、DNGR-1、5B5、HEEE9341及含有C型凝集素結構域之9A。在一些態樣中，Clec9a蛋白在人類cDC1細胞上表現。在一些態樣中，Clec9a蛋白在小鼠cDC1及pDC細胞上表現。除非另外指示，否則如本文所用之Clec9a可係指來自一或多個物種(例如人類、非人類靈長類動物、狗、貓、天竺鼠、兔、大鼠、小鼠、馬、牛及熊)之Clec9a。

如本文所用，術語「CD3 」或「分化簇 3 」係指與T細胞受體(TCR)締合之蛋白質複合體。CD3分子係由四條不同鏈(CD3γ、CD3δ及兩條CD3ε鏈)構成。該等鏈與T細胞受體(TCR)及ζ鏈締合以在T淋巴球中產生活化信號。TCR、ζ鏈及CD3分子一起構成TCR複合體。CD3分子在所有T細胞上表現，包括CD4+ T細胞及CD8+ T細胞二者。除非另外指示，否則如本文所用之CD3可係指來自一或多個物種(例如人類、非人類靈長類動物、狗、貓、天竺鼠、兔、大鼠、小鼠、馬、牛及熊)之CD3。

如本文所用，術語「有效載荷 」係指作用於與EV (例如胞外體)接觸之靶標(例如靶細胞)之劑。在一些態樣中，除非另外指示，否則術語有效載荷可與術語「生物活性分子 」互換使用。可包括在EV (例如胞外體)上之有效載荷之非限制性實例係抗原、佐劑及/或免疫調節劑。可引入至EV (例如胞外體)及/或生產細胞中之有效載荷包括諸如以下等劑：核苷酸(例如包含可偵測部分或毒素之核苷酸或破壞轉錄之核苷酸)、核酸(例如編碼多肽(諸如酶)之DNA或mRNA分子或具有調控功能之RNA分子(諸如miRNA)、dsDNA、lncRNA、siRNA、反義寡核苷酸、磷醯二胺嗎啉基寡聚物(PMO)、肽結合之磷醯二胺嗎啉基寡聚物(PPMO)或其組合)、胺基酸(例如包含可偵測部分或毒素之胺基酸或破壞轉譯之胺基酸)、多肽(例如酶)、脂質、碳水化合物及小分子(例如小分子藥物及毒素)。在某些態樣中，有效載荷包含抗原。如本文所用，術語「抗原」係指在引入至個體中時引發對該抗原自身之免疫反應(細胞性或體液性)之任何劑。

如本文所用，術語「親和配位體 」係指可選擇性地且優先結合至特異性標記物(例如表現在靶細胞上)之分子。本揭示案可使用之親和配位體之非限制性實例包括抗體、噬菌體展示肽、纖連蛋白結構域、駱駝科動物抗體、VNAR、VHH結構域及其組合。如本文所用，術語「抗體」涵蓋天然抑或部分或全部以合成方式產生之免疫球蛋白及其片段。該術語亦覆蓋具有與免疫球蛋白結合結構域同源之結合結構域之任何蛋白質。「抗體」進一步包括包含來自免疫球蛋白基因或其片段之框架區之多肽，該多肽特異性結合且識別抗原。術語抗體之使用意欲包括全抗體、多株、單株及重組抗體、其片段，且進一步包括單鏈抗體、人類化抗體、鼠類抗體、嵌合、小鼠-人類、小鼠-靈長類動物、靈長類動物-人類單株抗體、抗個體遺傳型抗體、抗體片段(諸如scFv、(scFv)₂ 、Fab、Fab'及F(ab')₂ 、F(ab1)₂ 、Fv、dAb及Fd片段)、雙價抗體及抗體相關之多肽。抗體包括雙特異性抗體及多特異性抗體，只要其展現期望生物活性或功能即可。

術語「個體 (individual 、subject )」、「宿主」及「患者」在本文中可互換使用，且係指期望診斷、治療或療法之任何哺乳動物個體、特定而言人類。本文所闡述之組合物及方法適用於人類療法及獸醫應用二者。在一些態樣中，個體係哺乳動物，且在其他態樣中，個體係人類。如本文所用，「哺乳動物個體」包括所有哺乳動物，包括(但不限於)人類、家畜(例如狗、貓及諸如此類)、農場動物(例如牛、綿羊、豬、馬及諸如此類)及實驗室動物(例如猴、大鼠、小鼠、兔、天竺鼠及諸如此類)。

如本文所用，術語「實質上不含 」意指包含EV (例如胞外體)之樣品包含以質量/體積(m/v)百分比濃度計少於約10%之大分子。一些級分可含有少於約0.001%、少於約0.01%、少於約0.05%、少於約0.1%、少於約0.2%、少於約0.3%、少於約0.4%、少於約0.5%、少於約0.6%、少於約0.7%、少於約0.8%、少於約0.9%、少於約1%、少於約2%、少於約3%、少於約4%、少於約5%、少於約6%、少於約7%、少於約8%、少於約9%或少於約10% (m/v)之大分子。

如本文所用，術語「大分子 」意指核酸、污染性蛋白質、脂質、碳水化合物、代謝物或其組合。

如本文所用，術語「常規胞外體蛋白質 」意指先前已知在胞外體中富集之蛋白質，包括(但不限於) CD9、CD63、CD81、PDGFR、GPI錨定蛋白、乳凝集素LAMP2及LAMP2B、其片段或與胞外體結合之肽。

如本文所用，「投與」意指經由醫藥學上可接受之途徑將包含本文所揭示之EV (例如胞外體)之組合物給予個體。投與途徑可為靜脈內，例如靜脈內注射及靜脈內輸注。其他投與途徑包括(例如)皮下、肌內、經口、經鼻及經肺投與。EV (例如胞外體)可作為包含至少一種賦形劑之醫藥組合物之一部分來投與。

如本文所用，「免疫反應 」係指脊椎動物體內針對外源劑或異常(例如癌性)細胞之生物反應，該反應保護生物體免受該等劑及由其所引起疾病之影響。免疫反應係由免疫系統之一或多個細胞(例如T淋巴球、B淋巴球、天然殺手(NK)細胞、巨噬細胞、嗜酸性球、肥胖細胞、樹突細胞或嗜中性球)及由該等細胞中之任一者或肝臟產生之可溶性大分子(包括抗體、細胞介素及補體)的作用來介導，該作用導致選擇性靶向、結合、損害、破壞及/或自脊椎動物身體消除侵襲性病原體、感染病原體之細胞或組織、癌性或其他異常細胞或在自體免疫或病理性發炎之情形下正常人類細胞或組織。免疫反應包括(例如) T細胞(例如效應T細胞、Th細胞、CD4+細胞、CD8+ T細胞或Treg細胞)之活化或抑制，或免疫系統之任一其他細胞(例如NK細胞)之活化或抑制。因此，免疫反應可包含體液免疫反應(例如由B細胞介導)、細胞免疫反應(例如由T細胞介導)或體液及細胞免疫反應二者。在一些態樣中，免疫反應係「抑制性」免疫反應。「抑制性 」免疫反應係阻斷或減少刺激物(例如抗原)之效應之免疫反應。在某些態樣中，抑制性免疫反應包含產生針對刺激物之抑制性抗體。在一些態樣中，免疫反應係「刺激性」免疫反應。「刺激性 」免疫反應係導致產生可破壞且清除靶抗原(例如腫瘤抗原或病毒)之效應細胞(例如細胞毒性T淋巴球)之免疫反應。

如本文所用，術語「細胞免疫反應 」可與術語「細胞介導之免疫反應 」互換使用，且係指主要不涉及抗體之免疫反應。相反，細胞免疫反應涉及不同免疫細胞(例如吞噬細胞及抗原特異性細胞毒性T淋巴球)之活化，該等細胞在活化(例如經由抗原刺激)時產生各種效應分子(例如細胞介素、穿孔蛋白、顆粒酶)。如本文所用，術語「體液免疫反應 」係指主要由在細胞外液中發現之大分子(諸如分泌抗體、補體蛋白質及某些抗微生物肽)介導之免疫反應。術語「抗體介導之免疫反應 」係指由抗體介導之體液免疫反應之態樣。

如本文所用，術語「免疫細胞 」係指免疫系統中參與介導免疫反應之任何細胞。免疫細胞之非限制性實例包括T淋巴球、B淋巴球、天然殺手(NK)細胞、巨噬細胞、嗜酸性球、肥胖細胞、樹突細胞、嗜中性球或其組合。在一些態樣中，免疫細胞表現CD3。在某些態樣中，表現CD3之免疫細胞係T細胞(例如CD4+ T細胞或CD8+ T細胞)。在一些態樣中，本文所揭示之靶向部分(例如抗CD3)可靶向之免疫細胞包含原初CD4+ T細胞。在一些態樣中，免疫細胞包含記憶CD4+ T細胞。在一些態樣中，免疫細胞包含效應CD4+ T細胞。在一些態樣中，免疫細胞包含原初CD8+ T細胞。在一些態樣中，免疫細胞包含記憶CD8+ T細胞。在一些態樣中，免疫細胞包含效應CD8+ T細胞。在一些態樣中，免疫細胞係樹突細胞。在某些態樣中，樹突細胞包含漿細胞樣樹突細胞(pDC)、常規樹突細胞1 (cDC1)、常規樹突細胞2 (cDC2)、發炎性單核球源性樹突細胞、朗格漢斯細胞、真皮樹突細胞、表現溶菌酶之樹突細胞(LysoDC)、庫弗氏細胞或其任何組合。因此，在某些態樣中，本文所揭示之EV (例如胞外體)可特異性靶向之免疫細胞包括常規樹突細胞1 (cDC1)及/或漿細胞樣樹突細胞(pDC)。

如本文所用，術語「T 細胞 (T cell 或T-cell )」係指在胸腺中成熟之一類淋巴球。T細胞在細胞介導之免疫中起重要作用，且藉由細胞表面上T細胞受體之存在與其他淋巴球(諸如B細胞)相區分。T細胞包括表現CD3之所有類型之免疫細胞，包括T輔助細胞(CD4+細胞)、細胞毒性T細胞(CD8+細胞)、天然殺手T細胞、T調控細胞(Treg)及γ-δ T細胞。

「原初」 T細胞係指在免疫學上保持未分化(亦即未活化)之成熟T細胞。在胸腺中進行正性及負性選擇後，T細胞以CD4+或CD8+原初T細胞形式出現。在其原初狀態下，T細胞表現L-選滯蛋白(CD62L+)、IL-7受體-α (IL-7R-α)及CD132，但其不表現CD25、CD44、CD69或CD45RO。如本文所用，「不成熟 」亦可係指展現原初T細胞或不成熟T細胞之表型特性之T細胞，諸如TSCM細胞或TCM細胞。舉例而言，不成熟T細胞可表現以下中之一或多者：L-選滯蛋白(CD62L+)、IL-7Rα、CD132、CCR7、CD45RA、CD45RO、CD27、CD28、CD95、CXCR3及LFA-1。原初或不成熟之T細胞可與終末分化之效應T細胞(諸如T_EM 細胞及T_EFF 細胞)形成對比。

如本文所用，術語「效應」T 細胞或「T_EFF 」細胞係指可介導病原體或細胞之去除而不需要進一步分化之T細胞。因此，效應T細胞與原初T細胞及記憶T細胞相區分，且該等細胞在成為效應細胞之前通常必須進行分化及增殖。

如本文所用，術語「記憶」T細胞係指先前已遇到其同源抗原且對該同源抗原有反應之T細胞子集。在一些態樣中，該術語與「經歷抗原 」之T細胞同義。在一些態樣中，記憶T細胞可係效應記憶T細胞或中央記憶T細胞。在一些態樣中，記憶T細胞係組織駐留記憶T細胞。如本文所用，術語「組織駐留記憶 T 細胞」或「TRM 細胞」係指佔據組織(例如皮膚、胃、胃腸道)而不會再循環之T細胞譜系。TRM細胞在轉錄上、表型上及功能上不同於在血液、次級淋巴器官之T細胞區、淋巴及非淋巴組織之間再循環之中央記憶及效應記憶T細胞。TRM細胞之作用之一係提供針對淋巴外組織感染之免疫保護。

如本文所用，術語「樹突細胞 」或「DC 」係指一類骨髓源性免疫細胞，其能夠處理細胞外及細胞內蛋白質，且在MHC分子之情形中呈遞抗原以激活原初T細胞。在一些態樣中，可將樹突細胞分成其他亞型，諸如常規樹突細胞1 (cDC1)、常規樹突細胞2 (cDC2)、漿細胞樣樹突細胞(pDC)、發炎性單核球源性樹突細胞、朗格漢斯細胞、真皮樹突細胞、表現溶菌酶之樹突細胞(LysoDC)、庫弗氏細胞及其組合。在某些態樣中，不同DC子集可基於其表型表現而區分。舉例而言，在一些態樣中，人類cDC1細胞係CD1c^- 及CD141⁺ 。在一些態樣中，人類cDC2細胞係CD1c⁺ 及CD141^- 。在一些態樣中，人類pDC細胞係CD123⁺ 。在一些態樣中，小鼠cDC1細胞係XCR1⁺ 、Clec9a⁺ 及Sirpa^- 。在一些態樣中，小鼠cDC2細胞係CD8⁺ 、CD11b⁺ 、Sirpa⁺ 、XCR1^- 及CD1c,b⁺ 。在一些態樣中，小鼠pDC細胞係CD137⁺ 、XCR1^- 及Sirpa^- 。用於區分不同DC子集之其他表型標記物為此項技術中所已知。例如，參見Collin等人，Immunology 154(1): 3-20 (2018)。在一些態樣中，不同DC子集可基於其功能性質而區分。舉例而言，在某些態樣中，pDC產生大量之IFN-α，而cDC1及cDC2產生發炎性細胞介素，諸如IL-12、IL-6及TNF-α。區分不同DC子集之其他方法為此項技術中所已知。例如，參見美國專利第8,426,565 B2號及第9,988,431號，其各自係以全文引用的方式併入本文中。

如本文所用，術語「免疫結合物 」係指包含結合分子(例如抗體)及一或多個化學結合至該結合分子之部分(例如治療或診斷部分)之化合物。一般而言，免疫結合物係由通式A-(L-M)n定義，其中A係結合分子(例如抗體)，L係視情況存在之連接體，且M係可為(例如)治療劑、可偵測標記等之異源部分，且n係整數。在一些態樣中，可將多個異源部分化學結合至同一結合分子(例如抗體)中之不同連接點。在其他態樣中，可將多個異源部分連結及連接至結合分子(例如抗體)中之連接點。在一些態樣中，可將多個異源部分(相同或不同)結合至結合分子(例如抗體)。

免疫結合物亦可由相反順序之該通式定義。在一些態樣中，免疫結合物係「抗體 - 藥物結合物 」(「ADC 」)。在本揭示案之情形中，術語「免疫結合物」不限於化學或酶促結合之分子。如本揭示案中所用之術語「免疫結合物」亦包括遺傳融合物。在本揭示案之一些態樣中，生物活性分子係免疫結合物。術語「抗體 - 藥物結合物 」及「ADC 」可互換使用，且係指連接(例如共價連接)至治療劑(在本文中有時稱為劑、藥物或活性醫藥成分)或劑之抗體。在本揭示案之一些態樣中，生物活性分子(亦即有效載荷)係抗體-藥物結合物。

如本文所用，「治療 (treat 、treatment 或treating )」係指例如降低疾病或疾患之嚴重程度；縮短疾病過程之持續時間；改善或消除與疾病或疾患相關之一或多種症狀；向患有疾病或疾患之個體提供有益效應，而不一定治癒該疾病或疾患。該術語亦包括預防(prophylaxis或prevention)疾病或疾患或其症狀。在一態樣中，術語「治療(treating或treatment)」意指在個體中誘導針對抗原之免疫反應。

如本文所用，「預防 (prevent 或preventing )」係指減少或降低特定後果之發生或其嚴重程度。在一些態樣中，經由預防性治療達成對後果之預防。II. 細胞外囊泡 ( 例如胞外體 )

本文揭示能夠調控個體免疫系統之EV (例如胞外體)。可用於本揭示案中之EV (例如胞外體)已經工程改造以一起產生多種劑(亦即有效載荷) (例如單一EV (例如胞外體)中之抗原及佐劑；單一EV (例如胞外體)中之抗原及免疫調節劑；及單一EV (例如胞外體)中之抗原、佐劑及免疫調節劑；而非單一劑，例如單獨之抗原、單獨之佐劑或單獨之免疫調節劑)。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑。在其他態樣中，EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑。在某些態樣中，本文所揭示之EV (例如胞外體)亦可包含其他部分，諸如靶向部分。在一些態樣中，抗原不在主要組織相容性複合體I及/或II分子上表現或呈遞。在其他態樣中，雖然EV (例如胞外體)中之抗原不作為I類或II類MHC複合體之一部分表現或呈遞，但EV (例如胞外體)仍可在EV (例如胞外體)之表面上含有I/II類MHC分子。因此，在某些態樣中，本文所揭示之EV (例如胞外體)不直接與T細胞之T細胞受體(TCR)相互作用以誘導針對抗原之免疫反應。類似地，在某些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)不會經由變裝(Cross-dressing )直接將抗原轉移至靶細胞(例如樹突細胞)之表面。「變裝」係源自樹突細胞之EV (例如胞外體) (DEX)常用之誘導T細胞活化之機制。參見Pitt, J.M.等人，J Clin Invest 126(4): 1224-32 (2016)。在其他態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)被抗原呈遞細胞吞沒，且可作為I類MHC及/或II類MHC複合體在抗原呈遞細胞之表面上表現。

如熟習此項技術者將明瞭，本文所揭示之EV (例如胞外體)不需要包含抗原，而是可包含本文所揭示之多種其他有效載荷。舉例而言，在一些態樣中，EV (例如胞外體)可包含多種不同的佐劑。在一些態樣中，EV (例如胞外體)可包含多種不同的免疫調節劑。在一些態樣中，EV (例如胞外體)可包含一或多種佐劑與一或多種免疫調節劑之組合。此等無抗原EV (例如胞外體)可用於誘導及/或提高先天性免疫反應。此等無抗原EV可能有用之治療背景之非限制性實例包括：治療細菌及/或病毒感染，諸如呼吸機相關性肺炎之綠膿桿菌、流行性感冒及RSV、SARS/MERs、弓蟲、敗血症、黃熱病及手術部位感染之金黃色葡萄球菌(staph aureus)。在某些態樣中，此等無抗原EV (例如胞外體)可與一或多種其他治療劑組合使用。在一些態樣中，該一或多種其他治療劑包含抗原，其中該抗原不在EV (例如胞外體)中表現(例如抗原之可溶形式)。除非另外指示，否則本文所提供之相關揭示內容同樣適用，而不管EV (例如胞外體)是否包含抗原。

如上所述，本文所闡述之EV (例如胞外體)係直徑介於約20-300 nm之間的細胞外囊泡。在某些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)之直徑介於約20-290 nm之間、介於約20-280 nm之間、介於約20-270 nm之間、介於約20-260 nm之間、介於約20-250 nm之間、介於約20-240 nm之間、介於約20-230 nm之間、介於約20-220 nm之間、介於約20-210 nm之間、介於約20-200 nm之間、介於約20-190 nm之間、介於約20-180 nm之間、介於約20-170 nm之間、介於約20-160 nm之間、介於約20-150 nm之間、介於約20-140 nm之間、介於約20-130 nm之間、介於約20-120 nm之間、介於約20-110 nm之間、介於約20-100 nm之間、介於約20-90 nm之間、介於約20-80 nm之間、介於約20-70 nm之間、介於約20-60 nm之間、介於約20-50 nm之間、介於約20-40 nm之間、介於約20-30 nm之間、介於約30-300 nm之間、介於約30-290 nm之間、介於約30-280 nm之間、介於約30-270 nm之間、介於約30-260 nm之間、介於約30-250 nm之間、介於約30-240 nm之間、介於約30-230 nm之間、介於約30-220 nm之間、介於約30-210 nm之間、介於約30-200 nm之間、介於約30-190 nm之間、介於約30-180 nm之間、介於約30-170 nm之間、介於約30-160 nm之間、介於約30-150 nm之間、介於約30-140 nm之間、介於約30-130 nm之間、介於約30-120 nm之間、介於約30-110 nm之間、介於約30-100 nm之間、介於約30-90 nm之間、介於約30-80 nm之間、介於約30-70 nm之間、介於約30-60 nm之間、介於約30-50 nm之間、介於約30-40 nm之間、介於約40-300 nm之間、介於約40-290 nm之間、介於約40-280 nm之間、介於約40-270 nm之間、介於約40-260 nm之間、介於約40-250 nm之間、介於約40-240 nm之間、介於約40-230 nm之間、介於約40-220 nm之間、介於約40-210 nm之間、介於約40-200 nm之間、介於約40-190 nm之間、介於約40-180 nm之間、介於約40-170 nm之間、介於約40-160 nm之間、介於約40-150 nm之間、介於約40-140 nm之間、介於約40-130 nm之間、介於約40-120 nm之間、介於約40-110 nm之間、介於約40-100 nm之間、介於約40-90 nm之間、介於約40-80 nm之間、介於約40-70 nm之間、介於約40-60 nm之間、介於約40-50 nm之間、介於約50-300 nm之間、介於約50-290 nm之間、介於約50-280 nm之間、介於約50-270 nm之間、介於約50-260 nm之間、介於約50-250 nm之間、介於約50-240 nm之間、介於約50-230 nm之間、介於約50-220 nm之間、介於約50-210 nm之間、介於約50-200 nm之間、介於約50-190 nm之間、介於約50-180 nm之間、介於約50-170 nm之間、介於約50-160 nm之間、介於約50-150 nm之間、介於約50-140 nm之間、介於約50-130 nm之間、介於約50-120 nm之間、介於約50-110 nm之間、介於約50-100 nm之間、介於約50-90 nm之間、介於約50-80 nm之間、介於約50-70 nm之間、介於約50-60 nm之間、介於約60-300 nm之間、介於約60-290 nm之間、介於約60-280 nm之間、介於約60-270 nm之間、介於約60-260 nm之間、介於約60-250 nm之間、介於約60-240 nm之間、介於約60-230 nm之間、介於約60-220 nm之間、介於約60-210 nm之間、介於約60-200 nm之間、介於約60-190 nm之間、介於約60-180 nm之間、介於約60-170 nm之間、介於約60-160 nm之間、介於約60-150 nm之間、介於約60-140 nm之間、介於約60-130 nm之間、介於約60-120 nm之間、介於約60-110 nm之間、介於約60-100 nm之間、介於約60-90 nm之間、介於約60-80 nm之間、介於約60-70 nm之間、介於約70-300 nm之間、介於約70-290 nm之間、介於約70-280 nm之間、介於約70-270 nm之間、介於約70-260 nm之間、介於約70-250 nm之間、介於約70-240 nm之間、介於約70-230 nm之間、介於約70-220 nm之間、介於約70-210 nm之間、介於約70-200 nm之間、介於約70-190 nm之間、介於約70-180 nm之間、介於約70-170 nm之間、介於約70-160 nm之間、介於約70-150 nm之間、介於約70-140 nm之間、介於約70-130 nm之間、介於約70-120 nm之間、介於約70-110 nm之間、介於約70-100 nm之間、介於約70-90 nm之間、介於約70-80 nm之間、介於約80-300 nm之間、介於約80-290 nm之間、介於約80-280 nm之間、介於約80-270 nm之間、介於約80-260 nm之間、介於約80-250 nm之間、介於約80-240 nm之間、介於約80-230 nm之間、介於約80-220 nm之間、介於約80-210 nm之間、介於約80-200 nm之間、介於約80-190 nm之間、介於約80-180 nm之間、介於約80-170 nm之間、介於約80-160 nm之間、介於約80-150 nm之間、介於約80-140 nm之間、介於約80-130 nm之間、介於約80-120 nm之間、介於約80-110 nm之間、介於約80-100 nm之間、介於約80-90 nm之間、介於約90-300 nm之間、介於約90-290 nm之間、介於約90-280 nm之間、介於約90-270 nm之間、介於約90-260 nm之間、介於約90-250 nm之間、介於約90-240 nm之間、介於約90-230 nm之間、介於約90-220 nm之間、介於約90-210 nm之間、介於約90-200 nm之間、介於約90-190 nm之間、介於約90-180 nm之間、介於約90-170 nm之間、介於約90-160 nm之間、介於約90-150 nm之間、介於約90-140 nm之間、介於約90-130 nm之間、介於約90-120 nm之間、介於約90-110 nm之間、介於約90-100 nm之間、介於約100-300 nm之間、介於約110-290 nm之間、介於約120-280 nm之間、介於約130-270 nm之間、介於約140-260 nm之間、介於約150-250 nm之間、介於約160-240 nm之間、介於約170-230 nm之間、介於約180-220 nm之間或介於約190-210 nm之間。本文所闡述之EV (例如胞外體)之大小可根據下文所闡述之方法來量測。

在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含雙脂質膜(「EV ( 例如胞外體 ) 膜」)，其包含內表面及外表面。在某些態樣中，內表面面向EV (例如胞外體)之內核(亦即腔)。在某些態樣中，外表面可與生產細胞或靶細胞之胞內體、多泡體或膜/細胞質接觸。

在一些態樣中，EV (例如胞外體)膜包含脂質及脂肪酸。在一些態樣中，EV (例如胞外體)膜包含磷脂、糖脂、脂肪酸、神經鞘脂、磷酸甘油酯、固醇、膽固醇及磷酯醯絲胺酸。

在一些態樣中，EV (例如胞外體)膜包含內葉及外葉。內葉及外葉之組成可藉由此項技術中已知之跨雙層分佈分析來測定，例如參見Kuypers等人，Biohim Biophys Acta 1985 819:170。在一些態樣中，外葉之組成為介於大約70%-90%之間的膽鹼磷脂、介於大約0%-15%之間的酸性磷脂及介於大約5%-30%之磷脂醯乙醇胺。在一些態樣中，內葉之組成為介於大約15%-40%之間的膽鹼磷脂、介於大約10%-50%之間的酸性磷脂及介於大約30%-60%之間的磷脂醯乙醇胺。

在一些態樣中，EV (例如胞外體)膜包含一或多種多糖，諸如聚糖。

在一些態樣中，EV (例如胞外體)膜進一步包含一或多個支架部分，其能夠將(例如)抗原及/或佐劑及/或免疫調節劑錨定至EV (例如胞外體) (例如在腔表面上或在外表面上)。在某些態樣中，支架部分係多肽(「胞外體蛋白質」)。在其他態樣中，支架部分係非多肽部分。在一些態樣中，胞外體蛋白質包括富集在胞外體膜上之各種膜蛋白質，諸如跨膜蛋白質、整合蛋白質及外周蛋白質。其可包括各種CD蛋白、轉運蛋白、整聯蛋白、凝集素及鈣黏蛋白。在某些態樣中，支架部分(例如胞外體蛋白質)包含支架X。在其他態樣中，支架部分(例如胞外體蛋白質)包含支架Y。在其他態樣中，支架部分(例如胞外體蛋白質)包含支架X及支架Y二者。

在一些態樣中，本文所揭示之EV (例如胞外體)能夠將有效載荷(例如抗原、佐劑及/或免疫調節劑)遞送至靶標。有效載荷係作用於與EV接觸之靶標(例如靶細胞)之劑。接觸可發生在活體外或個體中。可引入至EV中的有效載荷之非限制性實例包括諸如以下等劑：核苷酸(例如包含可偵測部分或毒素之核苷酸或破壞轉錄之核苷酸)、核酸(例如編碼多肽(諸如酶)之DNA或mRNA分子或具有調控功能之RNA分子(諸如miRNA)、dsDNA、lncRNA、siRNA、反義寡核苷酸、磷醯二胺嗎啉基寡聚物(PMO)或肽結合之磷醯二胺嗎啉基寡聚物(PPMO))、胺基酸(例如包含可偵測部分或毒素之胺基酸或破壞轉譯之胺基酸)、多肽(例如酶)、脂質、碳水化合物及小分子(例如小分子藥物及毒素)。

如本文所展示(例如參見實例16)，在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)能夠誘導效應及記憶T細胞。在某些態樣中，記憶T細胞係組織駐留記憶T細胞。此等EV (例如胞外體)作為某些傳染病之疫苗可尤其有用。舉例而言，目前可獲得之大多數流行性感冒疫苗係不活化的，且主要專注於產生針對某些流行性感冒表面抗原(例如血球凝集素(HA)及神經胺酸酶(NA))之中和性抗體。參見Wang等人，Science 367(6480): 1-12 (2020年2月21日)，其係以全文引用的方式併入本文中。)。然而，此等抗原不斷經歷突變，從而需要每年對疫苗進行更新。即使在每年更新之情形下，由於疫苗病毒株與流通株之間HA及/或NA抗原性不匹配，亦有年份流行性感冒疫苗係無效的。天然病毒感染或經活載體工程改造且減毒之疫苗可引起廣泛免疫，此乃因該等感染或疫苗除體液免疫以外亦均誘導組織(肺)駐留記憶T細胞。然而，必須在該等「複製型」疫苗之安全性與免疫原性之間達成微妙的平衡，且該等疫苗通常僅適於一些個體。本揭示案之EV (例如胞外體)不具有此等限制。因此，在一些態樣中，本文所揭示之EV (例如胞外體)(例如包含一或多種流行性感冒抗原與本文所揭示有效載荷(例如STING促效劑)之組合)可用作針對特定病原體(例如不同流行性感冒亞型)之「通用」疫苗。

在一些態樣中，本文所揭示之EV (例如胞外體)能夠固有地誘導參與免疫反應之信號傳導路徑之活化。在某些態樣中，參與免疫反應之信號傳導路徑包含類鐸受體(TLR)、維甲酸誘導型基因I (RIG-I)樣受體(RLR)、干擾素基因刺激蛋白(STING)路徑或其組合。在一些態樣中，此信號傳導路徑之活化可導致產生I型干擾素。舉例而言，在某些態樣中，本文所揭示EV (例如胞外體)之雙脂質膜包含一或多種具有以下特徵中之一者之脂質：(i)不飽和脂質尾、(ii)二氫咪唑連接體、(iii)環胺首基及(iv)其組合。具有此等特徵之脂質已顯示使TLR/RLR獨立性STING路徑活化。參見Miao等人，Nature Biotechnology 37:1174-1185 (2019年10月)，其係以全文引用的方式併入本文中。II.A 抗原

在一些態樣中，有效載荷係抗原，其能夠在個體中誘導免疫反應。在一些態樣中，本文所揭示之EV (例如胞外體)包含單一抗原。在一些態樣中，本文所揭示之EV (例如胞外體)包含多種抗原。在某些態樣中，該多種抗原中之每一者係不同的。在一些態樣中，本文所揭示之EV (例如胞外體)包含至少2種、3種、4種、5種、6種、7種、8種、9種、10種或更多種不同抗原。如本文所揭示，可使用支架部分(例如支架X及/或支架Y)將抗原連接至EV (例如胞外體)之表面。在某些態樣中，可將抗原直接連接(亦即不使用支架部分)至EV (例如胞外體)之表面。在一些態樣中，抗原可在EV (例如胞外體)之腔中。

在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含一或多種抗原與一或多種本文所闡述之其他有效載荷(例如佐劑及/或免疫調節劑)之組合。在一些態樣中，EV (例如胞外體)可包含一或多個其他部分(例如靶向部分)。舉例而言，在某些態樣中，本文所揭示之EV (例如胞外體)可包含(i)一或多種其他抗原，(ii)一或多種其他有效載荷(例如佐劑及/或免疫調節劑)及(iii)一或多個靶向部分。

在一些態樣中，抗原包含腫瘤抗原。腫瘤抗原之非限制性實例包括：α-胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、上皮腫瘤抗原(ETA)、黏蛋白1 (MUC1)、Tn-MUC1、黏蛋白16 (MUC16)、酪胺酸酶、黑色素瘤相關抗原(MAGE)、腫瘤蛋白p53 (p53)、CD4、CD8、CD45、CD80、CD86、程式化死亡配位體1 (PD-L1)、程式化死亡配位體2 (PD-L2)、NY-ESO-1、PSMA、TAG-72、HER2、GD2、cMET、EGFR、間皮素、VEGFR、α-葉酸受體、CE7R、IL-3、癌睪丸抗原(CTA)、MART-1 gp100、TNF相關之細胞凋亡誘導配位體、Brachyury (在黑色素瘤中優先表現之抗原(PRAME))、威爾姆氏瘤1 (WT1)、CD19、CD22或其組合。

在一些態樣中，抗原係通用腫瘤抗原。如本文所用，術語「通用腫瘤抗原 」係指在腫瘤細胞中之表現水準通常高於非腫瘤細胞且亦在不同起源之腫瘤中表現之免疫原性分子，諸如蛋白質。在一些態樣中，通用腫瘤抗原在超過約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%或更多之癌症(例如人類癌症)中表現。在一些態樣中，通用腫瘤抗原可在非腫瘤細胞(例如正常細胞)中表現，但表現水準低於其在腫瘤細胞中之表現水準。在某些態樣中，通用腫瘤抗原在腫瘤細胞上之表現水準與非腫瘤細胞相比大於約1倍、約2倍、約3倍、約4倍、約5倍、約6倍、約7倍、約8倍、約9倍、約10倍或更多。在某些態樣中，通用腫瘤抗原不在正常細胞中表現且僅在腫瘤細胞中表現。本揭示案可使用之通用腫瘤抗原之非限制性實例包括腫瘤脈管系統中之內皮內層抗原、存活素、腫瘤蛋白D52 (TPD52)、雄激素受體抗原決定基、A型肝配蛋白受體2 (EphA2)、人類端粒酶反轉錄酶(hTERT)、存活素、小鼠雙微體2同系物(MDM2)、細胞色素P450 1B1 (CYP1B)、HER2/neu、威爾姆氏瘤基因1 (WT1)、livin、α胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、黏蛋白16 (MUC16)、MUC1、前列腺特異性膜抗原(PSMA)、p53或週期蛋白(D1)。

在其他態樣中，抗原可包含新抗原。如本文所用，術語「新抗原 」係指由腫瘤特異性突變基因編碼之抗原。

在一些態樣中，抗原源自細菌、病毒、真菌、原生動物或其任何組合。在一些態樣中，抗原源自致癌病毒(在本文中亦稱為癌症相關病毒(CAV))。在其他態樣中，抗原源自包含以下之群：人類γ疱疹病毒4 (亦即艾伯斯坦-巴爾病毒(EBV))、A型流行性感冒病毒、B型流行性感冒病毒、巨細胞病毒、金黃色葡萄球菌、結核分枝桿菌、沙眼披衣菌、HIV (例如HIV-2)、冠狀病毒(例如COVID-19、MERS-CoV及SARS CoV)、線狀病毒(例如馬爾堡病毒及伊波拉病毒)、釀膿鏈球菌、肺炎鏈球菌、瘧原蟲屬(例如間日瘧原蟲及惡性瘧原蟲)、屈公病病毒、人類乳頭瘤病毒(HPV)、B型肝炎病毒(HBV)、C型肝炎病毒(HCV)、人類嗜T淋巴球病毒(HTLV1)、人類疱疹病毒8 (HHV8)、默克爾細胞多瘤病毒(MCV)、布尼亞病毒(例如漢坦病毒)、沙粒病毒(例如LCMV及賴薩病毒)、黃病毒(例如登革熱、茲卡病毒、日本腦炎、西尼羅河病毒及黃熱病)、腸病毒(例如小兒麻痺症)、星狀病毒(例如胃腸炎)、彈狀病毒科(例如狂犬病)、伯氏疏螺旋體及梅氏疏螺旋體(例如萊姆病)、單純疱疹病毒2 (HSV-2)、克雷伯氏菌屬、綠膿桿菌、腸球菌屬、變形桿菌屬、腸桿菌屬、放線菌屬、凝固酶陰性葡萄球菌(CoNS)、黴漿菌屬、腺病毒、腺相關病毒(AAV)或其組合。

在一些態樣中，源自EBV之抗原係BZLF1。BZLF1 (亦稱為Zta或EB1)係EBV之立即早期病毒基因，其誘發癌症且主要感染95%人類群體之B細胞。此基因(連同其他基因)在疾病進展之其他階段產生其他EBV基因之表現，且參與使病毒自潛伏形式轉化為溶解形式。ZEBRA (BamHI Z艾司坦-巴爾病毒複製活化劑，亦稱為Zta及BZLF1))係由BZLF1編碼之EBV之早期溶解蛋白。參見Hartlage等人(2015) Cancer Immunol. Res. 3(7): 787-94，及Rist等人(2015) J. Virology 70:703-12，該二者均係以全文引用的方式併入本文中。包含EBV抗原(例如BZLF1)之本文所揭示EV (例如胞外體)可用於例如治療移植後淋巴增生性病症(PTLD)。可向接受EBV陽性移植物之EBV陰性患者投與此EV。BZLF1係與PTLD患者之持久緩解相關之主要T細胞抗原。包含BZLF1之本文所揭示EV (例如胞外體)可引發強效之CD8 T細胞介導之BZLF1免疫。因此，黏膜免疫及組織駐留記憶細胞(參見圖7A及圖7B)可保護患者免於發生PTLDF。非限制性例示性抗原包括(但不限於)美國專利第8,617,564 B2號中所揭示之抗原，該美國專利係以全文引用的方式併入本文中。

在一些態樣中，抗原源自結核分枝桿菌以誘導細胞及/或體液免疫反應。在一些態樣中，抗原包含結核分枝桿菌之一或多個抗原決定基(TB抗原)。各種抗原與結核分枝桿菌感染相關，包括ESAT-6、TB10.4、CFP10、Rv2031 (hspX)、Rv2654c (TB7.7)及Rv1038c (EsxJ)。例如，參見Lindestam等人，J. Immunol. 188(10) :5020-31 (2012)，其係以全文併入本文中。在一些態樣中，可用於本揭示案之抗原包含ESAT6之一或多個抗原決定基。在一些態樣中，可用於本揭示案之抗原包含TB10.4之一或多個抗原決定基。在一些態樣中，可用於本揭示案之抗原包含CFP10之一或多個抗原決定基。在一些態樣中，可用於本揭示案之抗原包含Rv2031 (hspX)之一或多個抗原決定基。在一些態樣中，可用於本揭示案之抗原包含Rv2654c (TB7.7)之一或多個抗原決定基。在一些態樣中，可用於本揭示案之抗原包含Rv1038c (EsxJ)之一或多個抗原決定基。在一些態樣中，可用於本揭示案之抗原包含選自由以下組成之群之抗原決定基：ESAT6、TB10.4 (ESAT-6樣蛋白EsxH；cfp7)、CFP10、Rv2031 (hspX)、Rv2654c (TB7.7)、Rv1038c (EsxJ)及其任何組合。

在一些態樣中，TB抗原包含TB抗原之特定抗原決定基，例如ESAT6或TB10.4之特定抗原決定基。在一些態樣中，ESAT6抗原包含具有如MTEQQWNFAGIEAA ASAIQGNVTSIHSLDEGKQSLTKLAAAWGGSGSEAYQGVQQKWDATATELNNALQNLARTISEAGQAMASTEGNVTGMFA (SEQ ID NO: 370)中所示之胺基酸序列中之至少3個胺基酸、至少4個胺基酸、至少5個胺基酸、至少6個胺基酸、至少7個胺基酸、至少8個胺基酸、至少9個胺基酸、至少10個胺基酸、至少11個胺基酸、至少12個胺基酸、至少13個胺基酸、至少14個胺基酸、至少15個胺基酸之抗原決定基。在一些態樣中，其中TB10.4抗原包含具有如MSQIMYNYPAMLGHAGDMAGYAGTLQSLGAEIAVEQAALQSAWQGDTGITYQAWQAQWNQAMEDLVRAYHAMSSTHEANTMAMMARDTAEAAKWGG (SEQ ID NO: 371)中所示之胺基酸序列中之至少3個胺基酸、至少4個胺基酸、至少5個胺基酸、至少6個胺基酸、至少7個胺基酸、至少8個胺基酸、至少9個胺基酸、至少10個胺基酸、至少11個胺基酸、至少12個胺基酸、至少13個胺基酸、至少14個胺基酸、至少15個胺基酸之抗原決定基。

在一些態樣中，抗原包含自體抗原。如本文所用，術語「自體抗原 」係指由宿主細胞或組織表現之抗原。在正常健康狀態下，此等抗原由身體識別為自體抗原，且不會引發免疫反應。然而，在某些患病狀態下，身體自身之免疫系統可將自體抗原識別為外源抗原且針對其產生免疫反應，從而導致自體免疫。在某些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)可包含自體抗原(亦即已誘導T細胞反應且導致自體免疫之自體(生殖系)蛋白質)。此等EV (例如胞外體)可用於靶向自體反應性T細胞且抑制其活性。自體抗原(包括相關之疾病或病症)之非限制性實例包括：(i) β細胞蛋白質、胰島素、胰島抗原2 (IA-2)、麩胺酸去羧酶(GAD65)及鋅轉運蛋白8 (ZNT8) (I型糖尿病)，(ii)髓鞘少突膠質細胞糖蛋白(MOG)、髓鞘鹼性蛋白(MBP)、蛋白脂質蛋白(PLP)及髓鞘相關糖蛋白(MAG) (多發性硬化)，(iii)瓜胺酸化抗原及滑液蛋白質(類風濕性關節炎)，(iv) 水孔蛋白-4 (AQP4) (視神經脊髓炎)，(v)菸鹼型乙醯膽鹼受體(nAChR) (重症肌無力)，(vi)橋粒芯糖蛋白-1 (DSG1)及橋粒芯糖蛋白-2 (DSG2) (尋常天疱瘡)，(v)促甲狀腺素受體(格雷氏病(Graves' disease))，(vi) IV型膠原(古巴士德氏症候群(Goodpasture syndrome))，(vii)甲狀腺球蛋白、甲狀腺過氧化酶及甲狀腺刺激激素受體(TSHR) (橋本氏甲狀腺炎(Hashimoto's thyroiditis))或(viii)其組合。II.B 佐劑

如上所述，本揭示案之EV (例如胞外體)可包含佐劑(例如與本文所揭示之抗原及/或其他有效載荷組合)。在一些態樣中，本文所揭示之EV (例如胞外體)包含多種佐劑。在某些態樣中，該多種佐劑中之每一者係不同的。在一些態樣中，本文所揭示之EV (例如胞外體)包含至少2種、3種、4種、5種、6種、7種、8種、9種、10種或更多種不同佐劑。如本文所揭示，可使用支架部分(例如支架X及/或支架Y)將佐劑連接至EV (例如胞外體)之表面。在某些態樣中，可將佐劑直接連接(亦即不使用支架部分)至EV (例如胞外體)之表面。在一些態樣中，佐劑可在EV (例如胞外體)之腔中。

在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含一或多種佐劑與一或多種其他有效載荷(例如抗原及/或免疫調節劑)之組合。在一些態樣中，EV (例如胞外體)可包含一或多個其他部分(例如靶向部分)。舉例而言，在某些態樣中，本文所揭示之EV (例如胞外體)可包含(i)一或多種其他佐劑，(ii)一或多種其他有效載荷(例如抗原及/或免疫調節劑)，及(iii)一或多個靶向部分。

如本文所用，術語「佐劑」係指增強有效載荷之治療效應(例如提高對抗原之免疫反應)之任何物質。因此，與參照(例如不含佐劑之相應EV或包含僅抗原或其與佐劑之組合之非EV遞送媒介)相比，包含佐劑之本文所闡述之EV (例如胞外體)能夠將例如對抗原之免疫反應提高至少約5%、至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約100%、至少約250%、至少約500%、至少約750%、至少約1,000%或更多。在一些態樣中，與參照(例如包含僅抗原之相應EV或包含僅抗原或其與佐劑之組合之非EV遞送媒介)相比，將本文所揭示之佐劑納入至EV (例如胞外體)可將例如對抗原之免疫反應提高至少約1倍、至少約2倍、至少約3倍、至少約4倍、至少約5倍、至少約6倍、至少約7倍、至少約8倍、至少約9倍、至少約10倍、至少約20倍、至少約30倍、至少約40倍、至少約50倍、至少約60倍、至少約70倍、至少約80倍、至少約90倍、至少約100倍、至少約200倍、至少約300倍、至少約400倍、至少約500倍、至少約600倍、至少約700倍、至少約800倍、至少約900倍、至少約1,000倍、至少約2,000倍、至少約3,000倍、至少約4,000倍、至少約5,000倍、至少約6,000倍、至少約7,000倍、至少約8,000倍、至少約9,000倍、至少約10,000倍或更多。

本揭示案可使用之佐劑之非限制性實例包括：干擾素基因刺激蛋白(STING)促效劑、類鐸受體(TLR)促效劑、發炎介質、RIG-I促效劑、半乳糖苷神經醯胺(NKT促效劑)、熱休克蛋白(例如HSP65及HSP70)、C型凝集素促效劑(例如β葡聚糖(Dectin 1)、幾丁質及卡特蘭多糖)及其組合。

在一些態樣中，將佐劑(例如本文所揭示之彼等佐劑)納入至EV (例如胞外體)可擴大由EV誘導之免疫反應。如本文所用，「擴大免疫反應 」係指增強免疫反應之多樣性。在一些態樣中，免疫反應之多樣性可經由抗原決定基擴散(亦即誘導及/或提高針對抗原上更大數量/種類之抗原決定基之免疫反應(細胞及/或體液免疫反應))來增強。在一些態樣中，免疫反應之多樣性可經由產生不同及/或多種抗體同型(例如IgG、IgA、IgD、IgM及/或IgE)來增強。

在一些態樣中，佐劑(例如本文所揭示之彼等佐劑)亦可有助於調控由EV (例如胞外體)誘導之免疫反應之類型。舉例而言，在一些態樣中，將佐劑納入至EV (例如胞外體)可有助於驅使免疫反應朝向偏Th1之表型。如本文所用，「Th1 」免疫反應之特徵通常在於產生IFN-γ，其可激活先天細胞(例如巨噬細胞)之殺菌活性、有助於誘導B細胞產生調理性(吞噬作用之標記)及補體結合抗體及/或導致細胞介導之免疫(亦即不由抗體介導)。一般而言，Th1反應對細胞內病原體(宿主細胞內部之病毒及細菌)及/或癌症更有效。

在一些態樣中，將佐劑納入至EV (例如胞外體)可有助於驅使免疫反應朝向偏Th2之表型。如本文所用，「Th2 」免疫反應之特徵可在於釋放某些細胞介素，諸如IL-5 (誘導嗜酸性球以清除寄生蟲)及IL-4 (促進B細胞同型轉換)。一般而言，Th2反應對細胞外細菌、寄生蟲(包括蠕蟲)及毒素更有效。

在一些態樣中，將佐劑納入至EV (例如胞外體)可有助於驅使免疫反應朝向偏Th17之表型。如本文所用，「Th17 」免疫反應由Th17細胞介導。如本文所用，「Th17 細胞」係指特徵在於產生促發炎性細胞介素(諸如IL-17A、IL-17F、IL-21、IL-22及顆粒球-巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF))之CD4+ T細胞子集。通常認為Th17細胞藉由將嗜中性球及巨噬細胞募集至受感染組織而在宿主防禦感染中起重要作用。

在一些態樣中，將佐劑納入至EV (例如胞外體)可有助於驅使免疫反應朝向偏細胞之免疫反應(例如T細胞介導之細胞免疫反應)。在一些態樣中，將佐劑納入至EV (例如胞外體)可有助於驅使免疫反應朝向偏體液之免疫反應(例如抗體介導之體液免疫反應)。

在一些態樣中，佐劑誘導胞質模式識別受體之活化。胞質模式識別受體之非限制性實例包括：干擾素基因刺激蛋白(STING)；視黃酸誘導型基因I (RIG-1)；黑色素瘤分化相關蛋白5 (MDA5)；含核苷酸結合寡聚化結構域、富含白胺酸之重複序列及Pyrin結構域(NLRP)；發炎體；或其組合。在某些態樣中，佐劑係STING促效劑。干擾素基因刺激蛋白(STING)係環狀二核苷酸之胞質感測蛋白，其通常由細菌產生。STING在活化後導致產生I型干擾素(例如IFN-α (阿爾法)、IFN-β (貝塔)、IFN-κ (卡帕)、IFN-δ (德爾塔)、IFN-ε (艾普斯龍)、IFN-τ (陶)、IFN-ω (亞米茄)及IFN-ζ (仄他，亦稱為limitin))，且起始免疫反應。在某些態樣中，STING促效劑包含環狀二核苷酸STING促效劑或非環狀二核苷酸STING促效劑。如本文所闡述，在一些態樣中，STING促效劑裝載在EV (例如胞外體)之腔中。在一些態樣中，此等EV (例如胞外體)在本文中稱為「exoSTING 」。exoSTING之非限制性實例提供於國際公開案第WO 2019183578A1號中，該公開案係以全文引用的方式併入本文中。在整個本揭示案中亦提供可用STING促效劑之其他揭示內容。

已知諸如(但不限於) cGMP、環狀二GMP (c-二GMP)、cAMP、環狀二AMP (c-二AMP)、環狀GMP-AMP (cGAMP)、環狀二IMP (c-二IMP)、環狀AMP-IMP (cAIMP)及其任何類似物等環狀嘌呤二核苷酸刺激或增強患者之免疫或發炎反應。CDN可具有連接環狀二核苷酸之2'2'、2'3'、2'5'、3'3'或3'5'鍵或其任何組合。

可經由標準有機化學技術對環狀嘌呤二核苷酸進行修飾以產生嘌呤二核苷酸之類似物。適宜嘌呤二核苷酸包括(但不限於)腺嘌呤、鳥嘌呤、肌苷、次黃嘌呤、黃嘌呤、異鳥嘌呤或此項技術中已知之任何其他適當嘌呤二核苷酸。環狀二核苷酸可係經修飾之類似物。可使用此項技術中已知之任何適宜修飾，包括(但不限於)硫代磷酸酯、雙硫代磷酸酯、氟化及二氟化修飾。

亦可使用非環狀二核苷酸促效劑，諸如5,6-二甲基呫噸酮-4-乙酸(DMXAA)，或此項技術中已知之任何其他非環狀二核苷酸促效劑。

本揭示案可使用之STING促效劑之非限制性實例包括：DMXAA、STING促效劑-1、ML RR-S2 CDA、ML RR-S2c-二-GMP、ML-RR-S2 cGAMP、2'3'-c-二-AM(PS)2、2'3'-cGAMP、2'3'-cGAMPdFHS、3'3'-cGAMP、3'3'-cGAMPdFSH、cAIMP、cAIM(PS)2、3'3'-cAIMP、3'3'-cAIMPdFSH、2'2'-cGAMP、2'3'-cGAM(PS)2、3'3'-cGAMP及其組合。STING促效劑之非限制性實例可參見美國專利第9,695,212號、WO 2014/189805 A1、WO 2014/179335 A1、WO 2018/100558 A1、美國專利第10,011,630 B2號、WO 2017/027646 A1、WO 2017/161349 A1及WO 2016/096174 A1，其各自係以全文引用的方式併入。

在一些態樣中，可用於本揭示案之STING促效劑包含具有下式之化合物：

其中： X₁ 係H、OH或F； X₂ 係H、OH或F； Z係OH、OR₁ 、SH或SR₁ ，其中： i) R₁ 係Na或NH₄ ，或 ii) R₁ 係酶不穩定基團，其在活體內提供OH或SH，諸如三甲基乙醯基氧基甲基； B1及B2係選自以下之鹼基：

條件係： - 在式(I)中：X₁ 及X₂ 不係OH， - 在式(II)中：當X₁ 及X₂ 係OH時，B₁ 不係腺嘌呤且B₂ 不係鳥嘌呤，且 - 在式(III)中：當X₁ 及X₂ 係OH時，B₁ 不係腺嘌呤，B₂ 不係鳥嘌呤且Z不係OH。參見WO 2016/096174，其內容係以全文引用的方式併入本文中。

在一些態樣中，可用於本揭示案之STING促效劑包含：

其醫藥學上可接受之鹽。參見WO 2016/096174 A1，其係以全文引用的方式併入本文中。

在其他態樣中，可用於本揭示案之STING促效劑包含具有下式之化合物：

、

、

，或其任何醫藥學上可接受之鹽。

其中每一符號定義於WO 2014/093936中，其內容係以全文引用的方式併入本文中。

其中每一符號定義於WO 2014/189805中，其內容係以全文引用的方式併入本文中。

其中每一符號定義於WO 2015/077354中，其內容係以全文引用的方式併入本文中。亦參見Cell reports 11, 1018-1030 (2015)，其係以全文引用的方式併入本文中。

在一些態樣中，可用於本揭示案之STING促效劑包含c-二AMP、c-二GMP、c-二IMP、c-AMP-GMP、c-AMP-IMP及c-GMP-IMP，其闡述於WO 2013/185052及Sci. Transl. Med. 283,283ra52 (2015)中，該等文獻係以全文引用的方式併入本文中。

其中每一符號定義於WO 2014/189806中，其內容係以全文引用的方式併入本文中。

其中每一符號定義於WO 2015/185565中，其內容係以全文引用的方式併入本文中。

或

其中每一符號定義於WO 2014/179760中，其內容係以全文引用的方式併入本文中。

其中每一符號定義於WO 2014/179335中，其內容係以全文引用的方式併入本文中。

該式闡述於WO 2015/017652中，其內容係以全文引用的方式併入本文中。

該式闡述於WO 2016/096577中，其內容係以全文引用的方式併入本文中。

其中每一符號定義於WO 2016/120305中，其內容係以全文引用的方式併入本文中。

其中每一符號定義於WO 2016/145102中，其內容係以全文引用的方式併入本文中。

其中每一符號定義於WO 2017/027646中，其內容係以全文引用的方式併入本文中。

其中每一符號定義於WO 2017/075477中，其內容係以全文引用的方式併入本文中。

其中每一符號定義於WO 2017/027645中，其內容係以全文引用的方式併入本文中。

其中每一符號定義於WO 2018/100558中，其內容係以全文引用的方式併入本文中。

其中每一符號定義於WO 2017/175147中，其內容係以全文引用的方式併入本文中。

或

其中每一符號定義於WO 2017/175156中，其內容係以全文引用的方式併入本文中。

在一些態樣中，可用於本揭示案之STING促效劑係CL606、CL611、CL602、CL655、CL604、CL609、CL614、CL656、CL647、CL626、CL629、CL603、CL632、CL633、CL659或其醫藥學上可接受之鹽。在一些態樣中，可用於本揭示案之STING促效劑係CL606或其醫藥學上可接受之鹽。在一些態樣中，可用於本揭示案之STING促效劑係CL611或其醫藥學上可接受之鹽。在一些態樣中，可用於本揭示案之STING促效劑係CL602或其醫藥學上可接受之鹽。在一些態樣中，可用於本揭示案之STING促效劑係CL655或其醫藥學上可接受之鹽。在一些態樣中，可用於本揭示案之STING促效劑係CL604或其醫藥學上可接受之鹽。在一些態樣中，可用於本揭示案之STING促效劑係CL609或其醫藥學上可接受之鹽。在一些態樣中，可用於本揭示案之STING促效劑係CL614或其醫藥學上可接受之鹽。在一些態樣中，可用於本揭示案之STING促效劑係CL656或其醫藥學上可接受之鹽。在一些態樣中，可用於本揭示案之STING促效劑係CL647或其醫藥學上可接受之鹽。在一些態樣中，可用於本揭示案之STING促效劑係CL626或其醫藥學上可接受之鹽。在一些態樣中，可用於本揭示案之STING促效劑係CL629或其醫藥學上可接受之鹽。在一些態樣中，可用於本揭示案之STING促效劑係CL603或其醫藥學上可接受之鹽。在一些態樣中，可用於本揭示案之STING促效劑係CL632或其醫藥學上可接受之鹽。在一些態樣中，可用於本揭示案之STING促效劑係CL633或其醫藥學上可接受之鹽。在一些態樣中，可用於本揭示案之STING促效劑係CL659或其醫藥學上可接受之鹽。

在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含環狀二核苷酸STING促效劑及/或非環狀二核苷酸STING促效劑。在一些態樣中，當本文所揭示之EV (例如胞外體)上存在若干種環狀二核苷酸STING促效劑時，此等STING促效劑可係相同的或其可係不同的。在一些態樣中，當存在若干種非環狀二核苷酸STING促效劑時，此等STING促效劑可係相同的或其可係不同的。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)組合物可包含兩個或更多個EV (例如胞外體)群體，其中每一EV (例如胞外體)群體包含不同的STING促效劑或其組合。

STING促效劑亦可經修飾以增加該促效劑在細胞外囊泡或EV中之包封(亦即裝載)(例如在腔中未結合)。在一些態樣中，STING促效劑連接至支架部分，例如支架Y。在某些態樣中，修飾容許STING促效劑在EV (例如胞外體)外表面上更佳地表現(例如連接至本文所揭示之支架部分，例如支架X)。此修飾可包括藉由利用化學品或酶處理促效劑來添加脂質結合標籤，或藉由以物理或化學方式改變STING促效劑之極性或電荷。STING促效劑可藉由單一處理或藉由組合處理來修飾，例如僅添加脂質結合標籤或添加脂質結合標籤且改變極性。先前實例意欲為非限制性說明性實例。預期可實踐修飾之任何組合。與未修飾之促效劑之包封(亦即裝載)相比，修飾可將促效劑在EV (例如胞外體)中之包封(亦即裝載)增加約2倍至約10,000倍、約10倍至約1,000倍或約100倍至約500倍。與未修飾之促效劑之包封(亦即裝載)相比，修飾可將促效劑在EV中之包封(亦即裝載)增加至少約2倍、至少約5倍、至少約10倍、至少約20倍、至少約30倍、至少約40倍、至少約50倍、至少約60倍、至少約70倍、至少約80倍、至少約90倍、至少約100倍、至少約200倍、至少約300倍、至少約400倍、至少約500倍、至少約600倍、至少約700倍、至少約800倍、至少約900倍、至少約1,000倍、至少約2,000倍、至少約3,000倍、至少約4,000倍、至少約5,000倍、至少約6,000倍、至少約7,000倍、至少約8,000倍、至少約9,000倍或至少約10,000倍。

在一些態樣中，STING促效劑可經修飾以容許促效劑在EV表面上更佳地表現(例如EV (例如胞外體)之外表面及/或腔表面，(例如連接至本文所揭示之支架部分，例如支架X及/或支架Y))。可使用上文所闡述修飾中之任一者。與未修飾之促效劑之相應表現相比，修飾可將促效劑在EV中(例如在胞外體之表面及/或腔表面上)之表現增加約2倍至10,000倍、約10倍至1,000倍或約100倍至500倍。與未修飾之促效劑之表現相比，修飾可將促效劑在EV (例如胞外體)之外表面上之表現增加至少約2倍、至少約5倍、至少約10倍、至少約20倍、至少約30倍、至少約40倍、至少約50倍、至少約60倍、至少約70倍、至少約80倍、至少約90倍、至少約100倍、至少約200倍、至少約300倍、至少約400倍、至少約500倍、至少約600倍、至少約700倍、至少約800倍、至少約900倍、至少約1,000倍、至少約2,000倍、至少約3,000倍、至少約4,000倍、至少約5,000倍、至少約6,000倍、至少約7,000倍、至少約8,000倍、至少約9,000倍或至少約10,000倍。與未修飾之促效劑之表現相比，修飾可將促效劑在EV (例如胞外體)之腔表面上之表現增加至少約2倍、至少約5倍、至少約10倍、至少約20倍、至少約30倍、至少約40倍、至少約50倍、至少約60倍、至少約70倍、至少約80倍、至少約90倍、至少約100倍、至少約200倍、至少約300倍、至少約400倍、至少約500倍、至少約600倍、至少約700倍、至少約800倍、至少約900倍、至少約1,000倍、至少約2,000倍、至少約3,000倍、至少約4,000倍、至少約5,000倍、至少約6,000倍、至少約7,000倍、至少約8,000倍、至少約9,000倍或至少約10,000倍。

與EV (例如胞外體)締合之STING促效劑之濃度可為約0.01 µM至約1000 µM。所締合STING促效劑之濃度可介於約0.01-0.05 µM之間、介於約0.05-0.1 µM之間、介於約0.1-0.5 µM之間、介於約0.5-1 µM之間、介於約1-5 µM之間、介於約5-10 µM之間、介於約10-15 µM之間、介於約15-20 µM之間、介於約20-25 µM之間、介於約25-30 µM之間、介於約30-35 µM之間、介於約35-40 µM之間、介於約45-50 µM之間、介於約55-60 µM之間、介於約65-70 µM之間、介於約70-75 µM之間、介於約75-80 µM之間、介於約80-85 µM之間、介於約85-90 µM之間、介於約90-95 µM之間、介於約95-100 µM之間、介於約100-150 µM之間、介於約150-200 µM之間、介於約200-250 µM之間、介於約250-300 µM之間、介於約300-350 µM之間、介於約250-400 µM之間、介於約400-450 µM之間、介於約450-500 µM之間、介於約500-550 µM之間、介於約550-600 µM之間、介於約600-650 µM之間、介於約650-700 µM之間、介於約700-750 µM之間、介於約750-800 µM之間、介於約800-850 µM之間、介於約805-900 µM之間、介於約900-950 µM之間或介於約950-1000 µM之間。所締合STING促效劑之濃度可等於或大於約0.01 µM、約0.1 µM、約0.5 µM、約1 µM、約5 µM、約10 µM、約15 µM、約20 µM、約25 µM、約30 µM、約35 µM、約40 µM、約45 µM、約50 µM、約55 µM、約60 µM、約65 µM、約70 µM、約75 µM、約80 µM、約85 µM、約90 µM、約95 µM、約100 µM、約150 µM、約200 µM、約250 µM、約300 µM、約350 µM、約400 µM、約450 µM、約500 µM、約550 µM、約600 µM、約650 µM、約700 µM、約750 µM、約800 µM、約850 µM、約900 µM、約950 µM或約1,000 µM。

在一些態樣中，佐劑係TLR促效劑。TLR促效劑之非限制性實例包括：TLR2促效劑(例如脂磷壁酸、非典型LPS、MALP-2及MALP-404、OspA、孔蛋白、LcrV、脂甘露聚糖、GPI錨、溶血磷脂醯絲胺酸、脂磷聚糖(LPG)、糖磷脂醯肌醇(GPI)、酵母聚糖、hsp60、gH/gL糖蛋白、血球凝集素)、TLR3促效劑(例如雙股RNA，例如聚(I:C))、TLR4促效劑(例如脂多糖(LPS)、脂磷壁酸、β-防禦素2、纖連蛋白EDA、HMGB1、snapin、生腱蛋白C)、TLR5促效劑(例如鞭毛蛋白)、TLR6促效劑、TLR7/8促效劑(例如單股RNA、CpG-A、聚G10、聚G3、雷西莫特)、TLR9促效劑(例如未甲基化之CpG DNA)及其組合。TLR促效劑之非限制性實例可參見WO2008115319A2、US20130202707A1、US20120219615A1、US20100029585A1、WO2009030996A1、WO2009088401A2及WO2011044246A1，其各自係以全文引用的方式併入。

在一些態樣中，佐劑係發炎介質。

在一些態樣中，抗原在EV (例如胞外體)之外表面上或腔中(例如在腔表面上)表現。在一些態樣中，佐劑在EV (例如胞外體)之外表面上或腔表面中表現，其直接連結至脂質雙層。在此等態樣中，抗原及/或佐劑可連接至支架部分(例如支架X及/或支架Y)。

在一些態樣中，本文所闡述之EV (例如胞外體)包含第一支架部分。在某些態樣中，抗原連接至該第一支架部分。在其他態樣中，佐劑連接至該第一支架部分。在其他態樣中，抗原及佐劑二者均連接至該第一支架部分。在一些態樣中，EV (例如胞外體)進一步包含第二支架部分。在某些態樣中，抗原連接至該第一支架部分，且佐劑連接至該第二支架部分。在一些態樣中，該第一支架部分及該第二支架部分係相同的(例如兩者均為支架X或兩者均為支架Y)。在其他態樣中，該第一支架部分及該第二支架部分係不同的(例如第一支架部分係支架X且第二支架部分係支架Y；或第一支架部分係支架Y且第二支架部分係支架X)。

支架X之非限制性實例包括：前列腺素F2受體負調控劑(PTGFRN)；基礎免疫球蛋白(BSG)；免疫球蛋白超家族成員2 (IGSF2)；免疫球蛋白超家族成員3 (IGSF3)；免疫球蛋白超家族成員8 (IGSF8)；整聯蛋白β-1 (ITGB1)；整聯蛋白α-4 (ITGA4)；4F2細胞表面抗原重鏈(SLC3A2)；及ATP轉運蛋白類(ATP1A1、ATP1A2、ATP1A3、ATP1A4、ATP1B3、ATP2B1、ATP2B2、ATP2B3、ATP2B)。在某些態樣中，支架X係全蛋白。在其他態樣中，支架X係蛋白質片段(例如功能片段)。

在其他態樣中，可用於本揭示案之支架部分(第一支架部分、第二支架部分及/或第三支架部分)包括常規胞外體蛋白質，包括(但不限於)四跨膜蛋白分子(例如CD63、CD81、CD9及其他)、溶酶體相關之膜蛋白2 (LAMP2及LAMP2B)、血小板源性生長因子受體(PDGFR)、GPI錨定蛋白、乳凝集素及其片段、對該等蛋白質或其片段中之任一者具有親和力之肽或其任何組合。

支架Y之非限制性實例包括：肉豆蔻醯化之富含丙胺酸之蛋白激酶C受質(MARCKS)蛋白；肉豆蔻醯化之富含丙胺酸之蛋白激酶C受質樣1 (MARCKSL1)蛋白；及腦酸溶性蛋白1 (BASP1)蛋白。在一些態樣中，支架Y係全蛋白。在某些態樣中，支架Y係蛋白質片段(例如功能片段)。

在一些態樣中，抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架部分，且佐劑係在EV (例如胞外體)之腔中。如本文所用，當分子(例如抗原或佐劑)闡述為「在例如 EV ( 例如胞外體 ) 之腔中 」時，其意指該分子不連接至本文所闡述之支架部分。在一些態樣中，抗原係在EV (例如胞外體)之腔中，且佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架部分。在此等態樣中，該第一支架部分可係支架X或支架Y。

在一些態樣中，抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架部分，且佐劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上之第二支架部分。在一些態樣中，佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架部分，且抗原連接至EV (例如胞外體)之外表面上之第二支架部分。在該等態樣中，該第一支架部分可係支架Y，且該第二支架部分可係支架X。在其他態樣中，該第一支架部分及該第二支架部分中之每一者可係支架X。

在一些態樣中，抗原連接至EV (例如胞外體)之外表面上之第一支架部分，且佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第二支架部分。在其他態樣中，佐劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上之第一支架部分，且抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第二支架部分。在此等態樣中，該第一支架部分係支架X，且該第二支架部分係支架Y；或該第一支架部分及該第二支架部分中之每一者均係支架X。

在一些態樣中，抗原係在EV (例如胞外體)之腔中，且佐劑係在EV (例如胞外體)之腔中。

在一些態樣中，抗原連接至EV (例如胞外體)之外表面上之第一支架部分，且佐劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上之第二支架部分。在其他態樣中，佐劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上之第一支架部分，且抗原連接至EV (例如胞外體)之外表面上之第二支架部分。在一些態樣中，該第一支架部分及該第二支架部分係支架X。

在一些態樣中，抗原連接至EV (例如胞外體)之外表面上之第一支架部分，且佐劑係在EV (例如胞外體)之腔中。在一些態樣中，抗原係在EV (例如胞外體)之腔中，且佐劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上之第一支架部分。在此等態樣中，該第一支架部分可係支架X。

在一些態樣中，抗原連接至EV (例如胞外體)之外表面上之第一支架部分，且佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之該第一支架部分。在其他態樣中，抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架部分，且佐劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上之該第一支架部分。在該等態樣中，該第一支架部分可係支架X。

具體態樣之非限制性實例包括包含(i)抗原及(ii)佐劑之EV (例如胞外體)，其中： (a) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架Y，且該佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第二支架Y； (b) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，且該佐劑係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分； (c) 該抗原係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，且該佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y； (d) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，且該佐劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上之支架X； (e) 該抗原係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，且該佐劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上之支架X； (f) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，且該佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X； (g) 該抗原係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，且該佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X； (h) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X，且該佐劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上之該支架X； (i) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之外表面上之第一支架X，且該佐劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上之第二支架X； (j) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之外表面上之支架X，且該佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y； (k) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之外表面上之支架X，且該佐劑係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分； (l) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之外表面上之支架X，且該佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之該支架X； (m) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架X，且該佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第二支架X； (n) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X，且該佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y； (o) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X，且該佐劑係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分； (p) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之外表面上之第一支架X，且該佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第二支架X； (q) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架X，且該佐劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上之第二支架X； (r) 該抗原係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，且該佐劑係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分； (s) 該抗原直接連接至EV (例如胞外體)之腔表面，且該佐劑直接連接至EV (例如胞外體)之腔表面； (t) 該抗原直接連接至EV (例如胞外體)之腔表面，且該佐劑係在EV (例如胞外體)之腔中； (u) 該抗原直接連接至EV (例如胞外體)之腔表面，且該佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y； (v) 該抗原直接連接至EV (例如胞外體)之腔表面，且該佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X； (w) 該抗原直接連接至EV (例如胞外體)之腔表面，且該佐劑直接連接至EV (例如胞外體)之外部； (x) 該抗原直接連接至EV (例如胞外體)之腔表面，且該佐劑連接至EV (例如胞外體)外部上之支架X； (y) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，且該佐劑直接連接至EV (例如胞外體)之腔表面； (z) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，且該佐劑直接連接至EV (例如胞外體)之外部； (aa) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X，且該佐劑直接連接至EV (例如胞外體)之腔表面； (bb) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X，且該佐劑直接連接至EV (例如胞外體)之外部； (cc) 該抗原係在EV (例如胞外體)之腔中，且該佐劑直接連接至EV (例如胞外體)之腔表面；或 (dd) 該抗原係在EV (例如胞外體)之腔中，且該佐劑直接連接至EV (例如胞外體)之外部。

在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中該抗原連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架Y，且該佐劑連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之第二支架Y。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中該抗原連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，且該佐劑係在該EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中該抗原係在該EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，且該佐劑連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中該抗原連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，且該佐劑連接至該EV (例如胞外體)之外表面上之支架X。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中該抗原係在該EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，且該佐劑連接至該EV (例如胞外體)之外表面上之支架X。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中該抗原連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，且該佐劑連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中該抗原係在該EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，且該佐劑連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中該抗原連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X，且該佐劑連接至該EV (例如胞外體)之外表面上之該支架X。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中該抗原連接至該EV (例如胞外體)之外表面上之第一支架X，且該佐劑連接至該EV (例如胞外體)之外表面上之第二支架X。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中該抗原連接至該EV (例如胞外體)之外表面上之支架X，且該佐劑連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中該抗原連接至該EV (例如胞外體)之外表面上之支架X，且該佐劑係在該EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中該抗原連接至該EV (例如胞外體)之外表面上之支架X，且該佐劑連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之該支架X。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中該抗原連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架X，且該佐劑連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之第二支架X。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中該抗原連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X，且該佐劑連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中該抗原連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X，且該佐劑係在該EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中該抗原連接至該EV (例如胞外體)之外表面上之第一支架X，且該佐劑連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之第二支架X。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中該抗原連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架X，且該佐劑連接至該EV (例如胞外體)之外表面上之第二支架X。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中該抗原係在該EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，且該佐劑係在該EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該佐劑直接連接至該EV之腔表面。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該佐劑係在該EV之腔中。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該佐劑連接至該EV之腔表面上之支架Y。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該佐劑連接至該EV之腔表面上之支架X。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該佐劑直接連接至該EV之外部。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該佐劑連接至該EV外部上之支架X。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中該抗原連接至該EV之腔表面上之支架Y，且該佐劑直接連接至該EV之腔表面。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中該抗原連接至該EV之腔表面上之支架Y，且該佐劑直接連接至該EV之外部。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中該抗原連接至該EV之腔表面上之支架X，且該佐劑直接連接至該EV之腔表面。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中該抗原連接至該EV之腔表面上之支架X，且該佐劑直接連接至該EV之外部。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中該抗原係在該EV之腔中，且該佐劑直接連接至該EV之腔表面。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)佐劑，其中該抗原係在該EV之腔中，且該佐劑直接連接至該EV之外部。

在一些態樣中，佐劑及/或抗原可經修飾以增加在EV (例如胞外體)中之包封(亦即裝載)。此修飾可包括藉由利用化學品或酶處理促效劑(亦即佐劑及/或抗原)來添加脂質結合標籤，或藉由以物理或化學方式改變佐劑及/或抗原之極性或電荷。佐劑及/或抗原可藉由單一處理或藉由組合處理來修飾，例如僅添加脂質結合標籤或添加脂質結合標籤且改變極性。先前實例意欲為非限制性說明性實例。預期可實踐修飾之任何組合。與未修飾之促效劑(亦即佐劑及/或抗原)之包封(亦即裝載)相比，修飾可將佐劑及/或抗原在EV (例如胞外體)中之包封(亦即裝載)增加約2倍至約10,000倍、約10倍至1,000倍或約100倍至約500倍。與未修飾之佐劑及/或抗原之包封(亦即裝載)相比，修飾可將佐劑及/或抗原在EV (例如胞外體)中之包封(亦即裝載)增加至少約2倍、約5倍、約10倍、約20倍、約30倍、約40倍、約50倍、約60倍、約70倍、約80倍、約90倍、約100倍、約200倍、約300倍、約400倍、約500倍、約600倍、約700倍、約800倍、約900倍、約1,000倍、約2,000倍、約3,000倍、約4,000倍、約5,000倍、約6,000倍、約7,000倍、約8,000倍、約9,000倍或約10,000倍。

在一些態樣中，佐劑及/或抗原可經修飾以容許在EV表面上更佳地表現(例如EV之外表面及/或腔表面，例如連接至本文所揭示之支架部分，例如支架X及/或支架Y)。可使用上文所闡述修飾中之任一者。與未修飾之促效劑之相應表現相比，修飾可將促效劑在EV中(例如在胞外體之表面及/或腔表面上)之表現增加約2倍至10,000倍、約10倍至1,000倍或約100倍至500倍。與未修飾之促效劑之表現相比，修飾可將促效劑在EV (例如胞外體)之外表面上之表現增加至少約2倍、至少約5倍、至少約10倍、至少約20倍、至少約30倍、至少約40倍、至少約50倍、至少約60倍、至少約70倍、至少約80倍、至少約90倍、至少約100倍、至少約200倍、至少約300倍、至少約400倍、至少約500倍、至少約600倍、至少約700倍、至少約800倍、至少約900倍、至少約1,000倍、至少約2,000倍、至少約3,000倍、至少約4,000倍、至少約5,000倍、至少約6,000倍、至少約7,000倍、至少約8,000倍、至少約9,000倍或至少約10,000倍。與未修飾之促效劑之表現相比，修飾可將促效劑在EV (例如胞外體)之腔表面上之表現增加至少約2倍、至少約5倍、至少約10倍、至少約20倍、至少約30倍、至少約40倍、至少約50倍、至少約60倍、至少約70倍、至少約80倍、至少約90倍、至少約100倍、至少約200倍、至少約300倍、至少約400倍、至少約500倍、至少約600倍、至少約700倍、至少約800倍、至少約900倍、至少約1,000倍、至少約2,000倍、至少約3,000倍、至少約4,000倍、至少約5,000倍、至少約6,000倍、至少約7,000倍、至少約8,000倍、至少約9,000倍或至少約10,000倍。

在一些態樣中，EV (例如胞外體)經進一步修飾以展示另一蛋白質(或其片段)，該蛋白質(或其片段)可有助於引導EV攝取(例如靶向部分)、活化或阻斷細胞路徑以增強與EV相關之組合效應(例如裝載至胞外體中之有效載荷(例如STING促效劑)之效應)。在某些態樣中，本文所揭示之EV (例如胞外體)進一步包含可使EV在活體內或活體外之分佈改質之靶向部分。在一些態樣中，該靶向部分可係生物分子，諸如蛋白質、肽、脂質或合成分子。

在一些態樣中，本揭示案之靶向部分特異性結合至樹突細胞之標記物。在某些態樣中，該標記物僅在樹突細胞上表現。在一些態樣中，樹突細胞包含祖(前)樹突細胞、發炎性單樹突細胞、漿細胞樣樹突細胞(pDC)、髓樣/常規樹突細胞1 (cDC1)、髓樣/常規樹突細胞2 (cDC2)、發炎性單核球源性樹突細胞、朗格漢斯細胞、真皮樹突細胞、表現溶菌酶之樹突細胞(LysoDC)、庫弗氏細胞、非典型單核球或其任何組合。在該等樹突細胞上表現之標記物為此項技術中所已知。例如，參見Collin等人，Immunology 154(1):3-20 (2018)。在一些態樣中，靶向部分係蛋白質，其中該蛋白質係可特異性結合至選自以下之標記物之抗體或其片段：DEC205、CLEC9A、CLEC6、DCIR、DC-SIGN、LOX-1、MARCO、Clec12a、Clec10a、DC-去唾液酸糖蛋白受體(DC-ASGPR)、DC免疫受體2 (DCIR2)、Dectin-1、巨噬細胞甘露糖受體(MMR)、BDCA-2 (CD303、Clec4c)、Dectin-2、Bst-2 (CD317)、朗格漢斯蛋白、CD206、CD11b、CD11c、CD123、CD304、XCR1、AXL、Siglec 6、CD209、SIRPA、CX3CR1、GPR182、CD14、CD16、CD32、CD34、CD38、CD10或其任何組合。在一些態樣中，可用於本揭示案之標記物包含C型凝集素樣結構域。在某些態樣中，標記物係Clec9a，且樹突細胞係cDC1。

在一些態樣中，本文所揭示之靶向部分可結合至人類及小鼠Clec9a二者、包括其任何變異體。在一些態樣中，本揭示案之靶向部分可結合至來自其他物種之Clec9a，該等其他物種包括(但不限於)黑猩猩、恆河猴、狗、牛、馬或大鼠。此Clec9a蛋白之序列為此項技術中所已知。例如，參見美國專利第8,426,565 B2號，該專利係以全文引用的方式併入本文中。

在一些態樣中，本揭示案之靶向部分特異性結合至T細胞之標記物。在某些態樣中，T細胞係CD4+ T細胞。在一些態樣中，T細胞係CD8+ T細胞。

在一些態樣中，本文所揭示之靶向部分結合至人類CD3蛋白或其片段。人類CD3蛋白之序列為此項技術中所已知。

在一些態樣中，本文所揭示之靶向部分可結合至人類及小鼠CD3二者、包括其任何變異體。在一些態樣中，本揭示案之靶向部分可結合至來自其他物種之CD3，該等其他物種包括(但不限於)黑猩猩、恆河猴、狗、牛、馬或大鼠。此CD3蛋白之序列亦為此項技術中所已知。

在一些態樣中，本文所揭示之靶向部分可容許表現靶向部分特異性標記物之細胞更大程度地攝取EV (例如胞外體) (例如CD3：CD4+ T細胞及/或CD8+ T細胞；Clec9a：樹突細胞)。在一些態樣中，與參照(例如不含靶向部分之相應EV或非EV遞送媒介)相比，EV之攝取增加至少約1倍、至少約2倍、至少約3倍、至少約4倍、至少約5倍、至少約6倍、至少約7倍、至少約8倍、至少約9倍、至少約10倍、至少約20倍、至少約30倍、至少約40倍、至少約50倍、至少約60倍、至少約70倍、至少約80倍、至少約90倍、至少約100倍、至少約200倍、至少約300倍、至少約400倍、至少約500倍、至少約600倍、至少約700倍、至少約800倍、至少約900倍、至少約1,000倍、至少約2,000倍、至少約3,000倍、至少約4,000倍、至少約5,000倍、至少約6,000倍、至少約7,000倍、至少約8,000倍、至少約9,000倍、至少約10,000倍或更多。在一些態樣中，參照包含不表現本文所揭示之靶向部分之EV (例如胞外體)。

在一些態樣中，本文所揭示EV (例如胞外體)之攝取增加可容許更大之免疫反應。因此，在某些態樣中，與參照(例如不含靶向部分之相應EV或非EV遞送媒介)相比，表現本文所揭示之靶向部分之EV (例如胞外體)可使免疫反應(例如針對裝載至胞外體上之腫瘤抗原)增加至少約1倍、至少約2倍、至少約3倍、至少約4倍、至少約5倍、至少約6倍、至少約7倍、至少約8倍、至少約9倍、至少約10倍、至少約20倍、至少約30倍、至少約40倍、至少約50倍、至少約60倍、至少約70倍、至少約80倍、至少約90倍、至少約100倍、至少約200倍、至少約300倍、至少約400倍、至少約500倍、至少約600倍、至少約700倍、至少約800倍、至少約900倍、至少約1,000倍、至少約2,000倍、至少約3,000倍、至少約4,000倍、至少約5,000倍、至少約6,000倍、至少約7,000倍、至少約8,000倍、至少約9,000倍、至少約10,000倍或更多。在一些態樣中，參照包含不表現本文所揭示之靶向部分之EV (例如胞外體)。在某些態樣中，免疫反應係由T細胞(例如CD8+ T細胞或CD4+ T細胞)及/或B細胞介導。

如上所述，本文所揭示之靶向部分可包含肽、抗體或其抗原結合片段、化合物或其任何組合。

在一些態樣中，靶向部分係可特異性結合至Clec9a之肽。例如，參見Yan等人，Oncotarget 7(26): 40437-40450 (2016)。舉例而言，在某些態樣中，該肽包含Clec9a之可溶性片段。此一肽之非限制性實例闡述於美國專利第9,988,431 B2號中，該專利係以全文引用的方式併入本文中。在某些態樣中，該肽包含Clec9a之配位體(天然或合成)，諸如Ahrens等人，Immunity 36(4): 635-45 (2012)；及Zhang等人，Immunity 36(4): 646-57 (2012)中所闡述之彼等配位體。包含Clec9a配位體之肽之非限制性實例闡述於國際公開案第WO 2013/053008 A2號中，該公開案係以全文引用的方式併入本文中。

在一些態樣中，靶向部分係可特異性結合至CD3之肽。舉例而言，在某些態樣中，該肽包含CD3之可溶性片段。在某些態樣中，該肽包含CD3之配位體(天然或合成)。

在一些態樣中，靶向部分係抗體或其抗原結合片段。在某些態樣中，靶向部分係單鏈Fv抗體片段。在某些態樣中，靶向部分係單鏈F(ab)抗體片段。在某些態樣中，靶向部分係奈米抗體。在某些態樣中，靶向部分係單價抗體。

在一些態樣中，本文所揭示之EV (例如胞外體)包含一或多個(例如2、3、4、5或更多個)靶向部分。在某些態樣中，該一或多個靶向部分與本文所揭示之其他外源性生物活性分子(例如治療分子、佐劑或免疫調節劑)組合表現。在一些態樣中，該一或多個靶向部分可在EV (例如胞外體)之外表面上表現。因此，在某些態樣中，該一或多個靶向部分連接至EV (例如胞外體)之外表面上之支架部分(例如支架X)。當該一或多個靶向部分與其他外源性生物活性分子(例如治療分子、佐劑或免疫調節劑)組合表現時，該等其他外源性生物活性分子可在EV (例如胞外體)之表面(例如外表面或腔表面)上或腔中表現。

生產細胞可經修飾以包含編碼額外蛋白質或其片段之額外外源性序列。或者，該額外蛋白質或其片段可經由此項技術中已知之任何適當連接化學共價連接或結合至EV (例如胞外體)。適當連接化學之非限制性實例包括胺反應性基團、羧基反應性基團、硫氫基反應性基團、醛反應性基團、光反應性基團、ClickIT化學、生物素-鏈黴抗生物素蛋白或其他抗生物素蛋白結合或其任何組合。II.C 免疫調節劑

在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)可包含免疫調節劑(例如連同本文所揭示之抗原及/或其他有效載荷)。在一些態樣中，本文所揭示之EV (例如胞外體)包含多種免疫調節劑。在某些態樣中，該多種免疫調節劑中之每一者係不同的。在一些態樣中，本文所揭示之EV (例如胞外體)包含至少2種、3種、4種、5種、6種、7種、8種、9種、10種或更多種不同的免疫調節劑。

在某些態樣中，EV (例如胞外體)包含一或多種免疫調節劑與一或多種其他有效載荷(例如抗原及/或佐劑)之組合。在一些態樣中，EV (例如胞外體)可包含一或多個其他部分(例如靶向部分)。舉例而言，在某些態樣中，本文所揭示闡述之EV (例如胞外體)可包含(i)一或多種免疫調節劑，(ii)一或多種其他有效載荷(例如抗原及/或佐劑)及(iii)一或多個靶向部分。

在一些態樣中，免疫調節劑可在EV (例如胞外體)之表面(例如外表面或腔表面)上或腔中表現。因此，在某些態樣中，免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上或EV (例如胞外體)之腔表面上之支架部分(例如支架X)。在其他態樣中，免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架部分(例如支架Y)。在其他態樣中，免疫調節劑係在胞外體之腔中(亦即不連接至支架X或支架Y)。在一些態樣中，免疫調節劑可直接連接(亦即不使用支架部分)至EV (例如胞外體)之外表面及/或腔表面。

此等態樣之非限制性實例包括包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑之EV (例如胞外體)，其中： (a) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架Y，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第二支架Y； (b) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，且該免疫調節劑係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分； (c) 該抗原係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y； (d) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上之支架X； (e) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y； (f) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y；或 (g) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之外表面上之支架X，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y。

具體態樣之非限制性實例包括包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑之EV (例如胞外體)，其中： (a) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架Y，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第二支架Y； (b) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，且該免疫調節劑係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分； (c) 該抗原係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y； (d) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上之支架X； (e) 該抗原係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上之支架X； (f) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X； (g) 該抗原係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X； (h) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上之該支架X； (i) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之外表面上之第一支架X，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上之第二支架X； (j) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之外表面上之支架X，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y； (k) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之外表面上之支架X，且該免疫調節劑係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分； (l) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之外表面上之支架X，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之該支架X； (m) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架X，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第二支架X； (n) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y； (o) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X，且該免疫調節劑係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分； (p) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之外表面上之第一支架X，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第二支架X； (q) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架X，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上之第二支架X； (r) 該抗原係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，且該免疫調節劑係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分； (s) 該抗原直接連接至EV (例如胞外體)之腔表面，且該免疫調節劑直接連接至EV (例如胞外體)之腔表面； (t) 該抗原直接連接至EV (例如胞外體)之腔表面，且該免疫調節劑係在EV (例如胞外體)之腔中； (u) 該抗原直接連接至EV (例如胞外體)之腔表面，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y； (v) 該抗原直接連接至EV (例如胞外體)之腔表面，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X； (w) 該抗原直接連接至EV (例如胞外體)之腔表面，且該免疫調節劑直接連接至EV (例如胞外體)之外部； (x) 該抗原直接連接至EV (例如胞外體)之腔表面，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)外部上之支架X； (y) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，且該免疫調節劑直接連接至EV (例如胞外體)之腔表面； (z) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，且該免疫調節劑直接連接至EV (例如胞外體)之外部； (aa) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X，且該免疫調節劑直接連接至EV (例如胞外體)之腔表面； (bb) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X，且該免疫調節劑直接連接至EV (例如胞外體)之外部； (cc) 該抗原係在EV (例如胞外體)之腔中，且該免疫調節劑直接連接至EV (例如胞外體)之腔表面；或 (dd) 該抗原係在EV (例如胞外體)之腔中，且該免疫調節劑直接連接至EV (例如胞外體)之外部。

在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中該抗原連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架Y，且該免疫調節劑連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之第二支架Y。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中該抗原連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，且該免疫調節劑係在該EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中該抗原係在該EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，且該免疫調節劑連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中該抗原連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，且該免疫調節劑連接至該EV (例如胞外體)之外表面上之支架X。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中該抗原係在該EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，且該免疫調節劑連接至該EV (例如胞外體)之外表面上之支架X。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中該抗原連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，且該免疫調節劑連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中該抗原係在該EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，且該免疫調節劑連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中該抗原連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X，且該免疫調節劑連接至該EV (例如胞外體)之外表面上之該支架X。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中該抗原連接至該EV (例如胞外體)之外表面上之第一支架X，且該免疫調節劑連接至該EV (例如胞外體)之外表面上之第二支架X。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中該抗原連接至該EV (例如胞外體)之外表面上之支架X，且該免疫調節劑連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中該抗原連接至該EV (例如胞外體)之外表面上之支架X，且該免疫調節劑係在該EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中該抗原連接至該EV (例如胞外體)之外表面上之支架X，且該免疫調節劑連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之該支架X。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中該抗原連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架X，且該免疫調節劑連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之第二支架X。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中該抗原連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X，且該免疫調節劑連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中該抗原連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X，且該免疫調節劑係在該EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中該抗原連接至該EV (例如胞外體)之外表面上之第一支架X，且該免疫調節劑連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之第二支架X。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中該抗原連接至該EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架X，且該免疫調節劑連接至該EV (例如胞外體)之外表面上之第二支架X。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中該抗原係在該EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，且該免疫調節劑係在該EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該免疫調節劑直接連接至該EV之腔表面。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該免疫調節劑係在該EV之腔中。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該免疫調節劑連接至該EV之腔表面上之支架Y。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該免疫調節劑連接至該EV之腔表面上之支架X。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該免疫調節劑直接連接至該EV之外部。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該免疫調節劑連接至該EV外部上之支架X。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中該抗原連接至該EV之腔表面上之支架Y，且該免疫調節劑直接連接至該EV之腔表面。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中該抗原連接至該EV之腔表面上之支架Y，且該免疫調節劑直接連接至該EV之外部。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中該抗原連接至該EV之腔表面上之支架X，且該免疫調節劑直接連接至該EV之腔表面。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中該抗原連接至該EV之腔表面上之支架X，且該免疫調節劑直接連接至該EV之外部。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中該抗原係在該EV之腔中，且該免疫調節劑直接連接至該EV之腔表面。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑，其中該抗原係在該EV之腔中，且該免疫調節劑直接連接至該EV之外部。

具體態樣之非限制性實例包括包含(i)抗原，(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑之EV (例如胞外體)，其中： (a) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架Y，該佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第二支架Y，且該免疫調節劑(a1)係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，或(a2)連接至第三支架部分，例如胞外體外表面上或胞外體腔中之支架X或EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y； (b) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，該佐劑係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，且該免疫調節劑(b1)係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，或(b2)連接至支架部分，例如胞外體外表面上或胞外體腔表面上之支架X或EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y； (c) 該抗原係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，該佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，且該免疫調節劑(c1)係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，或(c2)連接至支架部分，例如胞外體外表面上或胞外體腔表面上之支架X或EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y； (d) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，該佐劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上之支架X，且該免疫調節劑(d1)係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，或(d2)連接至第三支架部分，例如胞外體外表面上或胞外體腔表面上之支架X或EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y； (e) 該抗原係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，該佐劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上之支架X，且該免疫調節劑(e1)係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，或(e2)連接至支架部分，例如胞外體表面上或胞外體腔表面上之支架X或EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y； (f) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，該佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X，且該免疫調節劑(f1)係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，或(f2)連接至第三支架部分，例如胞外體外表面上或胞外體腔表面上之支架X或EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y； (g) 該抗原係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，該佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X，且該免疫調節劑(g1)係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，或(g2)連接至支架部分，例如胞外體外表面上或胞外體腔表面上之支架X或EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y； (h) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X，該佐劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上之該支架X，且該免疫調節劑(h1)係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，或(h2)連接至支架部分，例如胞外體外表面上或胞外體腔表面上之支架X或EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y； (i) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之外表面上之第一支架X，該佐劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上之第二支架X，且該免疫調節劑(i1)係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，或(i2)連接至第三支架部分，例如胞外體外表面上或胞外體腔表面上之支架X或EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y； (j) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之外表面上之支架X，該佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，且該免疫調節劑(j1)係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，或(j2)連接至第三支架部分，例如胞外體外表面上或胞外體腔表面上之支架X或EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y； (k) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之外表面上之支架X，該佐劑係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，且該免疫調節劑(k1)係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，或(k2)連接至支架部分，例如胞外體外表面上或胞外體腔表面上之支架X或EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y； (l) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之外表面上之支架X，該佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之該支架X，且該免疫調節劑(l1)係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，或(l2)連接至支架部分，例如胞外體外表面上或胞外體腔表面上之支架X或EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y； (m) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架X，該佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第二支架，且該免疫調節劑(m1)係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，或(m2)連接至第三支架部分，例如胞外體外表面上或胞外體腔表面上之支架X或EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y； (n) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X，該佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，且該免疫調節劑(n1)係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，或(n2)連接至第三支架部分，例如胞外體外表面上或胞外體腔表面上之支架X或EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y； (o) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X，該佐劑係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，且該免疫調節劑(o1)係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，或(o2)連接至支架部分，例如胞外體外表面上或胞外體腔表面上之支架X或EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y； (p) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之外表面上之第一支架X，該佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第二支架X，且該免疫調節劑(p1)係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，或(p2)連接至第三支架部分，例如胞外體表面上或胞外體腔中之支架X或EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y； (q) 該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架X，該佐劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上之第二支架X，且該免疫調節劑(q1)係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，或(q2)連接至第三支架部分，例如胞外體外表面上或胞外體腔表面上之支架X或EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y；或 (r) 該抗原係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，該佐劑係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，且該免疫調節劑(r1)係在胞外體之腔中或(r2)連接至支架部分，例如胞外體外表面上或胞外體腔表面上之支架X或EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y。

在一些態樣中，本揭示案之胞外體包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架Y，該佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第二支架Y，且該免疫調節劑係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分。在一些態樣中，本揭示案之胞外體包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架Y，該佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第二支架Y，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上之支架X。在一些態樣中，本揭示案之胞外體包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架Y，該佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第二支架Y，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X。在一些態樣中，本揭示案之胞外體包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架Y，該佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第二支架Y，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第三支架Y。

在一些態樣中，本揭示案之胞外體包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，該佐劑係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，且該免疫調節劑係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分。在一些態樣中，本揭示案之胞外體包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，該佐劑係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上之支架X。在一些態樣中，本揭示案之胞外體包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，該佐劑係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X。在一些態樣中，本揭示案之胞外體包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中該抗原連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架Y，該佐劑係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第二支架Y。

在一些態樣中，本揭示案之胞外體包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中該抗原係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，該佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，且該免疫調節劑係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分。在一些態樣中，本揭示案之胞外體包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中該抗原係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，該佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上之支架X。在一些態樣中，本揭示案之胞外體包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中該抗原係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，該佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X。在一些態樣中，本揭示案之胞外體包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中該抗原係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，該佐劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第一支架Y，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之第二支架Y。

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在一些態樣中，本揭示案之胞外體包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中該抗原係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，該佐劑係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，且該免疫調節劑係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分。在一些態樣中，本揭示案之胞外體包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中該抗原係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，該佐劑係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之外表面上之支架X。在一些態樣中，本揭示案之胞外體包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中該抗原係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，該佐劑係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架X。在一些態樣中，本揭示案之胞外體包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中該抗原係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，該佐劑係在EV (例如胞外體)之腔中，不連接至任何支架部分，且該免疫調節劑連接至EV (例如胞外體)之腔表面上之支架Y。

在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原直接連接至該EV之腔表面，(a2)該佐劑直接連接至該EV之腔表面，且(a3)該免疫調節劑直接連接至該EV之腔表面。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原直接連接至該EV之腔表面，(a2)該佐劑直接連接至該EV之腔表面，且(a3)該免疫調節劑直接連接至該EV之外表面。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原直接連接至該EV之腔表面，(a2)該佐劑直接連接至該EV之腔表面，且(a3)該免疫調節劑連接至該EV之腔中之支架Y。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原直接連接至該EV之腔表面，(a2)該佐劑直接連接至該EV之腔表面，且(a3)該免疫調節劑連接至該EV之腔中之支架X。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原直接連接至該EV之腔表面，(a2)該佐劑直接連接至該EV之腔表面，且(a3)該免疫調節劑連接至該EV之外表面中之支架X。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原直接連接至該EV之腔表面，(a2)該佐劑直接連接至該EV之腔表面，且(a3)該免疫調節劑係在該EV之腔中。

在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原直接連接至該EV之腔表面，(a2)該佐劑直接連接至該EV之外表面，且(a3)該免疫調節劑直接連接至該EV之腔表面。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原直接連接至該EV之腔表面，(a2)該佐劑連接至該EV之腔表面上之支架Y，且(a3)該免疫調節劑直接連接至該EV之腔表面。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原直接連接至該EV之腔表面，(a2)該佐劑連接至該EV之腔表面上之支架X，且(a3)該免疫調節劑直接連接至該EV之腔表面。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原直接連接至該EV之腔表面，(a2)該佐劑連接至該EV之外表面上之支架X，且(a3)該免疫調節劑直接連接至該EV之腔表面。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原直接連接至該EV之腔表面，(a2)該佐劑係在該EV之腔中，且(a3)該免疫調節劑直接連接至該EV之腔表面。

在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原直接連接至該EV之外表面，(a2)該佐劑直接連接至該EV之腔表面，且(a3)該免疫調節劑直接連接至該EV之腔表面。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原連接至該EV之腔表面上之支架Y，(a2)該佐劑直接連接至該EV之腔表面，且(a3)該免疫調節劑直接連接至該EV之腔表面。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原連接至該EV之腔表面上之支架X，(a2)該佐劑直接連接至該EV之腔表面，且(a3)該免疫調節劑直接連接至該EV之腔表面。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原連接至該EV之外表面上之支架X，(a2)該佐劑直接連接至該EV之腔表面，且(a3)該免疫調節劑直接連接至該EV之腔表面。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原係在該EV之腔中，(a2)該佐劑直接連接至該EV之腔表面，且(a3)該免疫調節劑直接連接至該EV之腔表面。

在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原直接連接至該EV之外表面，(a2)該佐劑直接連接至該EV之外表面，且(a3)該免疫調節劑直接連接至該EV之外表面。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原直接連接至該EV之外表面，(a2)該佐劑直接連接至該EV之外表面，且(a3)該免疫調節劑直接連接至該EV之腔表面。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原直接連接至該EV之外表面，(a2)該佐劑直接連接至該EV之外表面，且(a3)該免疫調節劑連接至該EV之腔表面上之支架Y。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原直接連接至該EV之外表面，(a2)該佐劑直接連接至該EV之外表面，且(a3)該免疫調節劑連接至該EV之腔表面上之支架X。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原直接連接至該EV之外表面，(a2)該佐劑直接連接至該EV之外表面，且(a3)該免疫調節劑連接至該EV之外表面上之支架X。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原直接連接至該EV之外表面，(a2)該佐劑直接連接至該EV之外表面，且(a3)該免疫調節劑係在該EV之腔中。

在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原直接連接至該EV之外表面，(a2)該佐劑直接連接至該EV之腔表面，且(a3)該免疫調節劑直接連接至該EV之外表面。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原直接連接至該EV之外表面，(a2)該佐劑連接至該EV之腔表面上之支架Y，且(a3)該免疫調節劑直接連接至該EV之外表面。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原直接連接至該EV之外表面，(a2)該佐劑連接至該EV之腔表面上之支架X，且(a3)該免疫調節劑直接連接至該EV之外表面。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原直接連接至該EV之外表面，(a2)該佐劑連接至該EV之外表面上之支架X，且(a3)該免疫調節劑直接連接至該EV之外表面。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原直接連接至該EV之外表面，(a2)該佐劑係在該EV之腔中，且(a3)該免疫調節劑直接連接至該EV之外表面。

在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原直接連接至該EV之腔表面，(a2)該佐劑直接連接至該EV之外表面，且(a3)該免疫調節劑直接連接至該EV之外表面。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原連接至該EV之腔表面上之支架Y，(a2)該佐劑直接連接至該EV之外表面，且(a3)該免疫調節劑直接連接至該EV之外表面。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原連接至該EV之腔表面上之支架X，(a2)該佐劑直接連接至該EV之外表面，且(a3)該免疫調節劑直接連接至該EV之外表面。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原連接至該EV之外表面上之支架X，(a2)該佐劑直接連接至該EV之外表面，且(a3)該免疫調節劑直接連接至該EV之外表面。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含：(i)抗原、(ii)佐劑及(iii)免疫調節劑，其中(a1)該抗原係在該EV之腔中，(a2)該佐劑直接連接至該EV之外表面，且(a3)該免疫調節劑直接連接至該EV之外表面。

在一些態樣中，本文所闡述之EV (例如胞外體)可使用之免疫調節劑具有抗腫瘤活性。在其他態樣中，可用於本揭示案之免疫調節劑具有致耐受性活性。在一些態樣中，免疫調節劑可調控先天性免疫反應。在某些態樣中，免疫調節劑藉由靶向天然殺手細胞來調控先天性免疫反應。在一些態樣中，免疫調節劑可調控適應性免疫反應。在一些態樣中，免疫調節劑藉由靶向細胞毒性T細胞來調控適應性免疫反應。在其他態樣中，免疫調節劑藉由靶向B細胞來調控適應性免疫反應。在某些態樣中，本文所揭示之免疫調節劑可調節胞外體至細胞毒性T細胞或B細胞之分佈(亦即生物分佈改質劑)。

在一些態樣中，免疫調節劑係細胞毒性T淋巴球相關蛋白4 (CTLA-4)之抑制劑。在某些態樣中，CTLA-4抑制劑係CTLA-4之單株抗體(「抗CTLA-4抗體」)。在某些態樣中，該抑制劑係CTLA-4之單株抗體之片段。在某些態樣中，該抗體片段係CTLA-4之單株抗體之scFv、(scFv)₂ 、Fab、Fab'及F(ab')₂ 、F(ab1)₂ 、Fv、dAb或Fd。在某些態樣中，該抑制劑係針對CTLA-4之奈米抗體、雙特異性抗體或多特異性抗體。在一些態樣中，抗CTLA-4抗體係伊匹單抗(ipilimumab)。在其他態樣中，抗CTLA-4抗體係曲美目單抗(tremelimumab)。

在一些態樣中，免疫調節劑係程式化細胞死亡蛋白1 (PD-1)之抑制劑。在一些態樣中，免疫調節劑係程式化死亡配位體1 (PD-L1)之抑制劑。在一些態樣中，免疫調節劑係程式化死亡配位體2 (PD-L2)之抑制劑。在某些態樣中，PD-1、PD-L1或PD-L2之抑制劑係以下之單株抗體：PD-1 (「抗PD-1抗體」)、PD-L1 (「抗PD-L1抗體」)或PD-L2 (「抗PD-L2抗體」)。在一些態樣中，該抑制劑係抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體或抗PD-L2抗體之片段。在某些態樣中，該抗體片段係PD-1、PD-L1或PD-L2之單株抗體之scFv、(scFv)₂ 、Fab、Fab'及F(ab')₂ 、F(ab1)₂ 、Fv、dAb或Fd。在某些態樣中，該抑制劑係針對PD-1、PD-L1或PD-L2之奈米抗體、雙特異性抗體或多特異性抗體。在一些態樣中，抗PD-1抗體係尼沃魯單抗(nivolumab)。在一些態樣中，抗PD-1抗體係派姆單抗(pembrolizumab)。在一些態樣中，抗PD-1抗體係匹利珠單抗(pidilizumab)。在一些態樣中，抗PD-L1抗體係阿替珠單抗(atezolizumab)。在其他態樣中，抗PD-L1抗體係阿維魯單抗(avelumab)。

在一些態樣中，免疫調節劑係淋巴球活化基因3 (LAG3)之抑制劑。在某些態樣中，LAG3之抑制劑係LAG3之單株抗體(「抗LAG3抗體」)。在一些態樣中，該抑制劑係抗LAG3抗體之片段，例如scFv、(scFv)₂ 、Fab、Fab'及F(ab')₂ 、F(ab1)₂ 、Fv、dAb或Fd。在某些態樣中，該抑制劑係針對LAG3之奈米抗體、雙特異性抗體或多特異性抗體。

在一些態樣中，免疫調節劑係含T細胞免疫球蛋白黏蛋白之蛋白質3 (TIM-3)之抑制劑。在一些態樣中，免疫調節劑係B及T淋巴球衰減蛋白(BTLA)之抑制劑。在一些態樣中，免疫調節劑係具有Ig及ITIM結構域之T細胞免疫受體(TIGIT)之抑制劑。在一些態樣中，免疫調節劑係T細胞活化V結構域Ig抑制劑(VISTA)之抑制劑。在一些態樣中，免疫調節劑係腺苷A2a受體(A2aR)之抑制劑。在一些態樣中，免疫調節劑係殺手細胞免疫球蛋白樣受體(KIR)之抑制劑。在一些態樣中，免疫調節劑係吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)之抑制劑。在一些態樣中，免疫調節劑係CD20、CD39或CD73之抑制劑。

在一些態樣中，免疫調節劑包含正性共刺激分子之活化劑或正性共刺激分子之結合搭配物之活化劑。在某些態樣中，正性共刺激分子包含TNF受體超家族成員(例如CD120a、CD120b、CD18、OX40、CD40、Fas受體、M68、CD27、CD30、4-1BB、TRAILR1、TRAILR2、TRAILR3、TRAILR4、RANK、OCIF、TWEAK受體、TACI、BAFF受體、ATAR、CD271、CD269、AITR、TROY、CD358、TRAMP及XEDAR)。在一些態樣中，正性共刺激分子之活化劑係TNF超家族成員(例如TNFα、TNF-C、OX40L、CD40L、FasL、LIGHT、TL1A、CD27L、Siva、CD153、4-1BB配位體、TRAIL、RANKL、TWEAK、APRIL、BAFF、CAMLG、NGF、BDNF、NT-3、NT-4、GITR配位體及EDA-2)。

在一些態樣中，免疫調節劑係TNF受體超家族成員4 (OX40)之活化劑。在某些態樣中，OX40之活化劑係促效性抗OX40抗體。在其他態樣中，OX40之活化劑係OX40配位體(OX40L)。

在一些態樣中，免疫調節劑係CD27之活化劑。在某些態樣中，CD27之活化劑係促效性抗CD27抗體。在其他態樣中，CD27之活化劑係CD27配位體(CD27L)。

在一些態樣中，免疫調節劑係CD40之活化劑。在某些態樣中，CD40之活化劑係促效性抗CD40抗體。在一些態樣中，CD40之活化劑係CD40配位體(CD40L)。在某些態樣中，CD40L係單體CD40L。在其他態樣中，CD40L係三聚體CD40L。

在一些態樣中，免疫調節劑係糖皮質激素誘導之TNFR相關蛋白(GITR)之活化劑。在某些態樣中，GITR之活化劑係促效性抗GITR抗體。在其他態樣中，GITR之活化劑係GITR之天然配位體。

在一些態樣中，免疫調節劑係4-1BB之活化劑。在具體態樣中，4-1BB之活化劑係促效性抗4-1BB抗體。在某些態樣中，4-1BB之活化劑係4-1BB之天然配位體。

在一些態樣中，免疫調節劑係Fas受體(Fas)。在此等態樣中，Fas受體展示在EV (例如胞外體)之表面上。在一些態樣中，免疫調節劑係Fas配位體(FasL)。在某些態樣中，Fas配位體展示在EV (例如胞外體)之表面上。在一些態樣中，免疫調節劑係抗Fas抗體或抗FasL抗體。

在一些態樣中，免疫調節劑係CD28超家族共刺激分子之活化劑。在某些態樣中，CD28超家族共刺激分子係ICOS或CD28。在某些態樣中，免疫調節組分係ICOSL、CD80或CD86。

在一些態樣中，免疫調節劑係誘導性T細胞共刺激分子(ICOS)之活化劑。在某些態樣中，ICOS之活化劑係促效性抗ICOS抗體。在其他態樣中，ICOS之活化劑係ICOS配位體(ICOSL)。

在一些態樣中，免疫調節劑係CD28之活化劑。在一些態樣中，CD28之活化劑係促效性抗CD28抗體。在其他態樣中，CD28之活化劑係CD28之天然配位體。在某些態樣中，CD28之配位體係CD80。

在一些態樣中，免疫調節劑包含細胞介素或細胞介素之結合搭配物。在一些態樣中，細胞介素係選自(i)共用γ鏈細胞介素家族；(ii) IL-1細胞介素家族；(iii)造血細胞介素；(iv)干擾素(例如I型、II型或III型)；(v) TNF細胞介素家族；(vi) IL-17細胞介素家族；(vii)損傷相關分子模式(DAMP)；(viii)致耐受性細胞介素；或(ix)其組合。在某些態樣中，細胞介素包含IL-2、IL-4、IL-7、IL-10、IL-12、IL-15、IL-21、IFN-γ、IL-1α、IL-1β、IL-1ra、IL-18、IL-33、IL-36α、IL-36β、IL-36γ、IL-36ra、IL-37、IL-38、IL-3、IL-5、IL-6、IL-11、IL-13、IL-23、顆粒球-巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF)、顆粒球-群落刺激因子(G-CSF)、白血病抑制因子(LIF)、幹細胞因子(SCF)、促血小板生成素(TPO)、巨噬細胞-群落刺激因子(M-CSF)、促紅血球生成素(EPO)、Flt-3、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IL-19、IL-20、IL-22、IL-24、TNF-α、TNF-β、BAFF、APRIL、淋巴毒素β (TNF-γ)、IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E、IL-17F、IL-25、TSLP、IL-35、IL-27、TGF-β或其組合。

在一些態樣中，免疫調節劑包含趨化介素。在某些態樣中，趨化介素包含(i) CC趨化介素(例如CCL1、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL6、CCL7、CCL8、CCL9、CCL10、CCL11、CCL12、CCL13、CCL14、CCL15、CCL16、CCL17、CCL18、CCL19、CCL20、CCL21、CCL22、CCL23、CCL24、CCL25、CCL26、CCL27、CCL28)；(ii) CXC趨化介素(例如CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL4、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL12、CXCL13、CXCL14、CXCL15、CXCL16、CXCL17)；(iii) C趨化介素(例如XCL1、XCL2)；(iv) CX3C趨化介素(例如CX3CL1)；(v)或其組合。

在一些態樣中，免疫調節劑包含溶血磷脂酸(LPA)之抑制劑。LPA係高效內源性脂質介質，其保護且挽救細胞免於程式化細胞死亡。LPA經由其高親和力LPA-1受體係纖維發生之重要介質。

在一些態樣中，LPA-1抑制劑包含AM095，其係強效且口服生物可利用之LPA-1拮抗劑，對於小鼠或重組人類LPA-1之IC₅₀ 值分別為0.73 μM及0.98 μM。在活體外，AM095已顯示抑制LPA-1誘導之小鼠LPA-1/CHO細胞及人類A2058黑色素瘤細胞二者之趨化性，IC₅₀ 值為0.78 μM及0.23 μM。在活體內，AM095可劑量依賴性地阻斷小鼠中LPA誘導之組織胺釋放，其ED₅₀ 值為8.3 mg/kg。另外，已揭露AM095顯著地降低肺中之BALF膠原及蛋白質，其ED₅₀ 值為10 mg/kg。AM095亦已顯示減少小鼠博來黴素(bleomycin)誘導之巨噬細胞及淋巴球二者之浸潤。參見Swaney等人(2018) Mol. Can. Res. 16:1601-1613，其係以全文引用的方式併入本文中。

在一些態樣中，LPA-1抑制劑包含AM152 (亦稱為BMS-986020)。AM152係高親和性LPA-1拮抗劑，其抑制膽汁酸及磷脂轉運蛋白，對於BSEP、MRP4及MDR3之IC₅₀ 分別為4.8 µM、6.2 µM及7.5 µM。AM152可用於治療特發性肺纖維化(IPF)。參見Kihara等人(2015) Exp. Cell Res. 333:171-7；Rosen等人(2017) European Respiratory Journal 50:PA1038；及Palmer等人(2018) Chest 154:1061-1069，該等文獻係以全文引用的方式併入本文中。由於膽囊毒性及肝毒性肝轉運蛋白(2種特異性轉運蛋白)之早期徵象，AM152之2期研究(在Palmer 2018中予以闡述)被提前終止。

與包含LPA-1抑制劑之EV (例如胞外體)相關之其他揭示內容在本揭示案中之別處提供(例如參見實例24)。

在一些態樣中，可與抗原(例如HSV-2抗原)組合之免疫調節劑係IL-21。HSV-2抗原之非限制性實例在本文中別處揭示。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)在EV之腔中包含IL-21及HSV-2抗原二者。在其他態樣中，EV包含EV外表面上之IL-21，其視情況經由第一支架部分(例如支架X)連接，及EV外表面上之HSV-2抗原，其視情況經由第二支架部分(例如支架X)連接，其中該第一支架部分與該第二支架部分相同或不同。在其他態樣中，EV包含EV外表面上之IL-21，其視情況經由支架部分(例如支架X)連接，及EV腔表面上之HSV-2抗原，其視情況經由該支架部分(例如支架X)連接。在其他態樣中，EV包含EV外表面上之HSV-2抗原，其視情況經由支架部分(例如支架X)連接，及EV腔表面上之IL-21，其視情況經由該支架部分(例如支架X)連接。在其他態樣中，EV包含EV外表面上之IL-21，其視情況經由第一支架部分(例如支架X)連接，及EV腔表面上之HSV-2抗原，其視情況經由第二支架部分(例如支架X或支架Y)連接，其中該第一支架部分與該第二支架部分相同或不同。在其他態樣中，EV包含EV外表面上之HSV-2抗原，其視情況經由第一支架部分(例如支架X)連接，及EV腔表面上之IL-21，其視情況經由第二支架部分(例如支架X或支架Y)連接，其中該第一支架部分與該第二支架部分相同或不同。在一些態樣中，本揭示案之EV包含EV腔表面上之IL-21，其視情況經由第一支架部分(例如支架X或支架Y)連接，及EV腔表面上之HSV-2抗原，其視情況經由第二支架部分(例如支架X或支架Y)連接，其中該第一支架部分與該第二支架部分相同或不同。

在一些態樣中，可與抗原(例如HSV-2抗原)組合之免疫調節劑係CD40L。HSV-2抗原之非限制性實例在本文中別處揭示。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)在EV之腔中包含CD40L及HSV-2抗原二者。在其他態樣中，EV包含EV外表面上之CD40L，其視情況經由第一支架部分(例如支架X)連接，及EV外表面上之HSV-2抗原，其視情況經由第二支架部分(例如支架X)連接，其中該第一支架部分與該第二支架部分相同或不同。在其他態樣中，EV包含EV外表面上之CD40L，其視情況經由支架部分(例如支架X)連接，及EV腔表面上之HSV-2抗原，其視情況經由該支架部分(例如支架X)連接。在其他態樣中，EV包含EV外表面上之HSV-2抗原，其視情況經由支架部分(例如支架X)連接，及EV腔表面上之CD40L，其視情況經由該支架部分(例如支架X)連接。在其他態樣中，EV包含EV外表面上之CD40L，其視情況經由第一支架部分(例如支架X)連接，及EV腔表面上之HSV-2抗原，其視情況經由第二支架部分(例如支架X或支架Y)連接，其中該第一支架部分與該第二支架部分相同或不同。在其他態樣中，EV包含EV外表面上之HSV-2抗原，其視情況經由第一支架部分(例如支架X)連接，及EV腔表面上之CD40L，其視情況經由第二支架部分(例如支架X或支架Y)連接，其中該第一支架部分與該第二支架部分相同或不同。在一些態樣中，本揭示案之EV包含EV腔表面上之CD40L，其視情況經由第一支架部分(例如支架X或支架Y)連接，及EV腔表面上之HSV-2抗原，其視情況經由第二支架部分(例如支架X或支架Y)連接，其中該第一支架部分與該第二支架部分相同或不同。

在一些態樣中，包含HSV-2抗原(例如本文所揭示)及免疫調節劑(例如IL-21或CD40L)之EV (例如胞外體)可進一步包含佐劑。本揭示案可使用之佐劑之非限制性實例在本文中別處闡述。

在一些態樣中，與參照相比，包含HSV-2抗原及一或多種其他有效載荷(例如上文所闡述之免疫調節劑及/或佐劑)之EV (例如胞外體)可增強對HSV-2抗原之免疫反應。在一些態樣中，參照包含僅包含HSV-2抗原之EV (例如胞外體)。在其他態樣中，參照包含在本文所揭示之EV (例如胞外體)中不連接或不存在之HSV-2抗原(單獨或與一或多種其他有效載荷(例如佐劑及/或免疫調節劑)組合)。在一些態樣中，免疫反應包含先天性免疫反應、體液免疫反應、細胞介導之免疫反應或其組合。在某些態樣中，與參照相比，免疫反應增強至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約100%、至少約250%、至少約500%、至少約750%、至少約1,000%或更多。在一些態樣中，與參照(例如不含靶向部分之相應EV或非EV遞送媒介)相比，免疫反應增強至少約1倍、至少約2倍、至少約3倍、至少約4倍、至少約5倍、至少約6倍、至少約7倍、至少約8倍、至少約9倍、至少約10倍、至少約20倍、至少約30倍、至少約40倍、至少約50倍、至少約60倍、至少約70倍、至少約80倍、至少約90倍、至少約100倍、至少約200倍、至少約300倍、至少約400倍、至少約500倍、至少約600倍、至少約700倍、至少約800倍、至少約900倍、至少約1,000倍、至少約2,000倍、至少約3,000倍、至少約4,000倍、至少約5,000倍、至少約6,000倍、至少約7,000倍、至少約8,000倍、至少約9,000倍、至少約10,000倍或更多。

在一些態樣中，包含HSV-2抗原及一或多種其他有效載荷(例如上文所闡述之免疫調節劑及/或佐劑)之EV (例如胞外體)在向有需要之個體投與時可降低病毒脫落。在某些態樣中，與參照(例如包含僅抗原之相應EV或包含僅抗原或抗原與一或多種其他有效載荷之組合之非EV遞送媒介)相比，病毒脫落降低至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%或至少約100%。在一些態樣中，包含HSV-2抗原及一或多種其他有效載荷(例如免疫調節劑及/或佐劑)之EV (例如胞外體)在向有需要之個體投與時可增加病毒清除。在某些態樣中，與參照(例如包含僅抗原之相應EV或包含僅抗原或抗原與一或多種其他有效載荷之組合之非EV遞送媒介)相比，病毒清除增加至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約100%、至少約250%、至少約500%、至少約750%、至少約1,000%或更多。在一些態樣中，與參照(例如包含僅抗原之相應EV或包含僅抗原或抗原與一或多種其他有效載荷之組合之非EV遞送媒介)相比，病毒清除增加至少約1倍、至少約2倍、至少約3倍、至少約4倍、至少約5倍、至少約6倍、至少約7倍、至少約8倍、至少約9倍、至少約10倍、至少約20倍、至少約30倍、至少約40倍、至少約50倍、至少約60倍、至少約70倍、至少約80倍、至少約90倍、至少約100倍、至少約200倍、至少約300倍、至少約400倍、至少約500倍、至少約600倍、至少約700倍、至少約800倍、至少約900倍、至少約1,000倍、至少約2,000倍、至少約3,000倍、至少約4,000倍、至少約5,000倍、至少約6,000倍、至少約7,000倍、至少約8,000倍、至少約9,000倍、至少約10,000倍或更多。在其他態樣中，包含HSV-2抗原及一或多種其他有效載荷(例如免疫調節劑及/或佐劑)之EV (例如胞外體)在向有需要之個體投與時可降低HSV-2介導之病灶形成。在某些態樣中，與參照(例如包含僅抗原之相應EV或包含僅抗原或抗原與一或多種其他有效載荷之組合之非EV遞送媒介)相比，病灶形成降低至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%或至少約100%。

在一些態樣中，參照包含僅包含HSV-2抗原之EV (例如胞外體)。在其他態樣中，參照包含在本文所揭示之EV中不連接或不存在之HSV-2抗原(單獨或與佐劑及/或免疫調節劑組合)。

在一些態樣中，可與抗原(例如EBV抗原)組合之免疫調節劑係IL-21。EBV抗原(例如BZLF1)之非限制性實例在本文中別處揭示。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)在EV之腔中包含IL-21及EBV抗原(例如BZLF1)二者。在其他態樣中，EV包含EV外表面上之IL-21，其視情況經由第一支架部分(例如支架X)連接，及EV外表面上之EBV抗原(例如BZLF1)，其視情況經由第二支架部分(例如支架X)連接，其中該第一支架部分與該第二支架部分相同或不同。在其他態樣中，EV包含EV外表面上之IL-21，其視情況經由支架部分(例如支架X)連接，及EV腔表面上之EBV抗原(例如BZLF1)，其視情況經由該支架部分(例如支架X)連接。在其他態樣中，EV包含EV外表面上之EBV抗原(例如BZLF1)，其視情況經由支架部分(例如支架X)連接，及EV腔表面上之IL-21，其視情況經由該支架部分(例如支架X)連接。在其他態樣中，EV包含EV外表面上之IL-21，其視情況經由第一支架部分(例如支架X)連接，及EV腔表面上之EBV抗原(例如BZLF1)，其視情況經由第二支架部分(例如支架X或支架Y)連接，其中該第一支架部分與該第二支架部分相同或不同。在其他態樣中，EV包含EV外表面上之EBV抗原(例如BZLF1)，其視情況經由第一支架部分(例如支架X)連接，及EV腔表面上之IL-21，其視情況經由第二支架部分(例如支架X或支架Y)連接，其中該第一支架部分與該第二支架部分相同或不同。在一些態樣中，本揭示案之EV包含EV腔表面上之IL-21，其視情況經由第一支架部分(例如支架X或支架Y)連接，及EV腔表面上之EBV抗原(例如BZLF1)，其視情況經由第二支架部分(例如支架X或支架Y)連接，其中該第一支架部分與該第二支架部分相同或不同。

在一些態樣中，可與抗原(例如EBV抗原(例如BZLF1))組合之免疫調節劑係CD40L。EBV抗原(例如BZLF1)之非限制性實例在本文中別處揭示。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)在EV之腔中包含CD40L及EBV抗原(例如BZLF1)二者。在其他態樣中，EV包含EV外表面上之CD40L，其視情況經由第一支架部分(例如支架X)連接，及EV外表面上之EBV抗原(例如BZLF1)，其視情況經由第二支架部分(例如支架X)連接，其中該第一支架部分與該第二支架部分相同或不同。在其他態樣中，EV包含EV外表面上之CD40L，其視情況經由支架部分(例如支架X)連接，及EV腔表面上之EBV抗原(例如BZLF1)，其視情況經由該支架部分(例如支架X)連接。在其他態樣中，EV包含EV外表面上之EBV抗原(例如BZLF1)，其視情況經由支架部分(例如支架X)連接，及EV腔表面上之CD40L，其視情況經由該支架部分(例如支架X)連接。在其他態樣中，EV包含EV外表面上之CD40L，其視情況經由第一支架部分(例如支架X)連接，及EV腔表面上之EBV抗原(例如BZLF1)，其視情況經由第二支架部分(例如支架X或支架Y)連接，其中該第一支架部分與該第二支架部分相同或不同。在其他態樣中，EV包含EV外表面上之EBV抗原(例如BZLF1)，其視情況經由第一支架部分(例如支架X)連接，及EV腔表面上之CD40L，其視情況經由第二支架部分(例如支架X或支架Y)連接，其中該第一支架部分與該第二支架部分相同或不同。在一些態樣中，本揭示案之EV包含EV腔表面上之CD40L，其視情況經由第一支架部分(例如支架X或支架Y)連接，及EV腔表面上之EBV抗原(例如BZLF1)，其視情況經由第二支架部分(例如支架X或支架Y)連接，其中該第一支架部分與該第二支架部分相同或不同。

在一些態樣中，包含EBV抗原及免疫調節劑(例如IL-21或CD40L)之EV (例如胞外體)可進一步包含本文所揭示之一或多種其他有效載荷(例如其他抗原、其他免疫調節劑及/或佐劑)及/或一或多個靶向部分。在一些態樣中，包含EBV抗原(例如BZLF1) (例如本文所揭示)及免疫調節劑(例如IL-21或CD40L)之EV (例如胞外體)可進一步包含佐劑。本揭示案可使用之佐劑之非限制性實例在本文中別處闡述。在一些態樣中，EV可進一步包含另一抗原(例如不同EBV抗原)。在一些態樣中，EV可進一步包含本文所揭示之另一免疫調節劑(例如不同於IL-21或CD40L)。

在一些態樣中，與參照相比，包含EBV抗原(例如BZLF1)及一或多種其他有效載荷(例如上文所闡述之免疫調節劑及/或佐劑)之EV (例如胞外體)可增強對EBV抗原(例如BZLF1)之免疫反應。在一些態樣中，參照包含僅包含EBV抗原(例如BZLF1)之EV (例如胞外體)。在其他態樣中，參照包含在本文所揭示之EV (例如胞外體)中不連接或不存在之EBV抗原(例如BZLF1) (單獨或與佐劑及/或免疫調節劑組合)。在一些態樣中，免疫反應包含先天性免疫反應、體液免疫反應、細胞介導之免疫反應或其組合。在某些態樣中，與參照相比，免疫反應增強至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約100%、至少約250%、至少約500%、至少約750%、至少約1,000%或更多。在一些態樣中，與參照相比，免疫反應增強至少約1倍、至少約2倍、至少約3倍、至少約4倍、至少約5倍、至少約6倍、至少約7倍、至少約8倍、至少約9倍、至少約10倍、至少約20倍、至少約30倍、至少約40倍、至少約50倍、至少約60倍、至少約70倍、至少約80倍、至少約90倍、至少約100倍、至少約200倍、至少約300倍、至少約400倍、至少約500倍、至少約600倍、至少約700倍、至少約800倍、至少約900倍、至少約1,000倍、至少約2,000倍、至少約3,000倍、至少約4,000倍、至少約5,000倍、至少約6,000倍、至少約7,000倍、至少約8,000倍、至少約9,000倍、至少約10,000倍或更多。

在一些態樣中，包含EBV抗原(例如BZLF1)及一或多種其他有效載荷(例如上文所闡述之免疫調節劑及/或佐劑)之EV (例如胞外體)在向有需要之個體投與時可降低病毒脫落。在某些態樣中，與參照(例如包含僅抗原之相應EV或包含僅抗原或抗原與一或多種其他有效載荷之組合之非EV遞送媒介)相比，病毒脫落降低至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%或至少約100%。在一些態樣中，包含EBV抗原(例如BZLF1)及一或多種其他有效載荷(例如免疫調節劑及/或佐劑)之EV (例如胞外體)在向有需要之個體投與時可增加病毒清除。在某些態樣中，與參照(例如包含僅抗原之相應EV或包含僅抗原或抗原與一或多種其他有效載荷之組合之非EV遞送媒介)相比，病毒清除增加至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約100%、至少約250%、至少約500%、至少約750%、至少約1,000%或更多。在一些態樣中，包含EBV抗原(例如BZLF1)及一或多種其他有效載荷(例如免疫調節劑及/或佐劑)之EV (例如胞外體)在向有需要之個體投與時可降低EBV介導之病灶形成。在某些態樣中，與參照(例如包含僅抗原之相應EV或包含僅抗原或抗原與一或多種其他有效載荷之組合之非EV遞送媒介)相比，病灶形成降低至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%或至少約100%。

在一些態樣中，參照包含僅包含EBV抗原(例如BZLF1)之EV (例如胞外體)。在其他態樣中，參照包含在本文所揭示之EV中不連接或不存在之EBV抗原(例如BZLF1) (單獨或與佐劑及/或免疫調節劑組合)。

在一些態樣中，可與抗原(例如TB抗原)組合之免疫調節劑係IL-12。

TB抗原之非限制性實例在本文中別處揭示。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)在EV之腔中包含IL-12及TB抗原二者。在其他態樣中，EV包含EV外表面上之IL-12，其視情況經由第一支架部分(例如支架X)連接，及EV外表面上之TB抗原，其視情況經由第二支架部分(例如支架X)連接，其中該第一支架部分與該第二支架部分相同或不同。在其他態樣中，EV包含EV外表面上之IL-12，其視情況經由支架部分(例如支架X)連接，及EV腔表面上之TB抗原，其視情況經由該支架部分(例如支架X)連接。在其他態樣中，EV包含EV外表面上之TB抗原，其視情況經由支架部分(例如支架X)連接，及EV腔表面上之IL-12，其視情況經由該支架部分(例如支架X)連接。在其他態樣中，EV包含EV外表面上之IL-12，其視情況經由第一支架部分(例如支架X)連接，及EV腔表面上之TB抗原，其視情況經由第二支架部分(例如支架X或支架Y)連接，其中該第一支架部分與該第二支架部分相同或不同。在其他態樣中，EV包含EV外表面上之TB抗原，其視情況經由第一支架部分(例如支架X)連接，及EV腔表面上之IL-12，其視情況經由第二支架部分(例如支架X或支架Y)連接，其中該第一支架部分與該第二支架部分相同或不同。在一些態樣中，本揭示案之EV包含EV腔表面上之IL-12，其視情況經由第一支架部分(例如支架X或支架Y)連接，及EV腔表面上之TB抗原，其視情況經由第二支架部分(例如支架X或支架Y)連接，其中該第一支架部分與該第二支架部分相同或不同。

包含IL-12及TB抗原之EV可誘導對需要其之個體之免疫反應。在一些態樣中，該免疫反應係CD4 T細胞反應、CD8 T細胞反應或CD4及CD8 T細胞反應二者。在一些態樣中，該免疫反應係CD4 T細胞免疫反應，其效應功能對TB抗原(例如ESAT6抗原)具有特異性。在一些態樣中，該免疫反應係CD8 T細胞免疫反應，其對TB抗原(例如TB10.4抗原)具有特異性。

在一些態樣中，包含TB抗原及免疫調節劑(例如IL-12)之EV (例如胞外體)可進一步包含本文所揭示之一或多種其他有效載荷(例如其他抗原、其他免疫調節劑及/或佐劑)。舉例而言，在某些態樣中，該EV (例如胞外體)可進一步包含佐劑(例如本文所揭示之彼等佐劑)。在一些態樣中，該EV可進一步包含另一抗原(例如不同的EBV抗原)。在一些態樣中，該EV可進一步包含本文所揭示之另一免疫調節劑(例如不同於IL-21或CD40L)。

在一些態樣中，本揭示案可使用之免疫調節劑包含支持生發中心反應所需之細胞內相互作用之蛋白質。在某些態樣中，此一蛋白質包含信號傳導淋巴球活化分子(SLAM)家族成員或SLAM相關蛋白(SAP)。在一些態樣中，SLAM家族成員包含SLAM、CD48、CD229 (Ly9)、Ly108、2B4、CD84、NTB-A、CRACC、BLAME、CD2F-10或其組合。可在生發中心反應中起作用之其他免疫調節劑之非限制性實例包括：ICOS-ICOSL、CD40-40L、CD28/B7、PD-1/L1、IL-4/IL4R、IL21/IL21R、TLR4、TLR7、TLR8、TLR9、CD180、CD22及其組合。

在一些態樣中，免疫調節劑包含T細胞受體(TCR)或其衍生物。在某些態樣中，免疫調節劑係TCR α鏈或其衍生物。在其他態樣中，免疫調節劑係TCR β鏈或其衍生物。在其他態樣中，免疫調節劑係T細胞之輔受體或其衍生物。

在一些態樣中，免疫調節劑包含嵌合抗原受體(CAR)或其衍生物。在某些態樣中，CAR結合至本文所揭示抗原中之一或多者(例如腫瘤抗原，例如α-胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、上皮腫瘤抗原(ETA)、黏蛋白1 (MUC1)、Tn-MUC1、黏蛋白16 (MUC16)、酪胺酸酶、黑色素瘤相關抗原(MAGE)、腫瘤蛋白p53 (p53)、CD4、CD8、CD45、CD80、CD86、程式化死亡配位體1 (PD-L1)、程式化死亡配位體2 (PD-L2)、NY-ESO-1、PSMA、TAG-72、HER2、GD2、cMET、EGFR、間皮素、VEGFR、α-葉酸受體、CE7R、IL-3、癌睪丸抗原、MART-1 gp100及TNF相關之細胞凋亡誘導配位體)。

在一些態樣中，免疫調節劑包含T細胞受體或輔受體之活化劑。在某些態樣中，免疫調節組分係CD3之活化劑。在某些態樣中，該活化劑係CD3之單株抗體片段。在某些態樣中，該抗體片段係針對CD3之單株抗體之scFv、(scFv)₂ 、Fab、Fab'及F(ab')₂ 、F(ab1)₂ 、Fv、dAb或Fd。在某些態樣中，該活化劑係針對CD3之奈米抗體、雙特異性抗體或多特異性抗體。在某些態樣中，免疫調節組分係CD28之活化劑。在某些態樣中，該活化劑係CD28之單株抗體片段。在某些態樣中，該抗體片段係CD28之單株抗體之scFv、(scFv)₂ 、Fab、Fab'及F(ab')₂ 、F(ab1)₂ 、Fv、dAb或Fd。在某些態樣中，該活化劑係針對CD28之奈米抗體、雙特異性抗體或多特異性抗體。

在一些態樣中，免疫調節劑包含耐受性誘導劑。在某些態樣中，耐受性誘導劑包含NF-κB抑制劑。本揭示案可使用之NF-κB抑制劑之非限制性實例包括：IKK複合體抑制劑(例如TPCA-1、NF-κB活化抑制劑VI (BOT-64)、BMS 345541、氨來占諾(Amlexanox)、SC-514 (GK 01140)、IMD 0354、IKK-16)、IκB降解抑制劑(例如BAY 11-7082、MG-115、MG-132、乳胞素、環氧酶素(Epoxomicin)、小白菊內酯(Parthenolide)、卡非佐米(Carfilzomib)、MLN-4924 (匹甕司他(Pevonedistat)))、NF-κB核易位抑制劑(例如JSH-23、咯利普蘭(Rolipram))、p65乙醯化抑制劑(例如五倍子酸、檟如子酸(Anacardic acid))、NF-κB-DNA結合抑制劑(例如GYY 4137、p-XSC、CV 3988、前列腺素E2 (PGE2))、NF-κB反式活化抑制劑(例如LY 294002、渥曼青黴素(Wortmannin)、美沙拉明(Mesalamine))或其組合。亦參見Gupta, S.C.等人，Biochim Biophys Acta 1799:775-787 (2010)，其係以全文引用的方式併入本文中。在一些態樣中，可抑制NF-κB活性且可用於本文所揭示之EV (例如胞外體)之免疫調節劑包含特異性靶向NF-κB之反義寡核苷酸。在其他態樣中，能夠誘導耐受性之免疫調節劑包含COX-2抑制劑、mTOR抑制劑(例如雷帕黴素(rapamycin)及衍生物，例如靶向mTor之反義寡核苷酸)、前列腺素、非類固醇抗發炎劑(NSAIDS)、抗白三烯、芳烴受體(AhR)配位體、維生素D、視黃酸、類固醇、Fas受體/配位體、CD22配位體、IL-10、IL-35、IL-27、代謝調控劑(例如麩胺酸鹽)、聚糖(例如ES62、路易斯X (LewisX)、LNFPIII)、過氧化體增殖物活化受體(PPAR)促效劑、免疫球蛋白樣轉錄物(ILT)受體家族(例如ILT3、ILT4、HLA-G、ILT-2)、米諾四環素(minocycline)、TLR4促效劑或其組合。

在一些態樣中，免疫調節劑係促效劑。在某些態樣中，促效劑係內源性促效劑，諸如激素或神經傳遞質。在其他態樣中，促效劑係外源性促效劑，諸如藥物。在一些態樣中，促效劑係物理促效劑，其可在不結合至受體之情形下產生促效劑反應。在一些態樣中，促效劑係超促效劑，其可產生大於內源性促效劑之最大反應。在某些態樣中，促效劑係對受體具有完全效能之完全促效劑。在其他態樣中，促效劑係部分促效劑，其相對於完全促效劑對受體僅具有部分效能。在一些態樣中，促效劑係反向促效劑，其可抑制受體之組成型活性。在一些態樣中，促效劑係與其他共促效劑一起起作用以對受體產生效應之共促效劑。在某些態樣中，促效劑係經由形成共價鍵永久結合至受體之不可逆促效劑。在某些態樣中，促效劑係針對特定類型受體之選擇性促效劑。

在一些態樣中，免疫調節劑係拮抗劑。在具體態樣中，拮抗劑係競爭性拮抗劑，其在與內源性配位體或促效劑相同之結合位點可逆地結合至受體而不使受體活化。競爭性拮抗劑可影響達成最大反應所需之促效劑之量。在其他態樣中，拮抗劑係非競爭性拮抗劑，其結合至受體之活性位點或受體之別位位點。非競爭性拮抗劑可降低任何量之促效劑可達到之最大反應之量級。在其他態樣中，拮抗劑係無競爭性拮抗劑，其在結合至單獨的別位結合位點之前需要促效劑對受體進行活化。

在一些態樣中，免疫調節劑包含抗體或抗原結合片段。免疫調節組分可係全長蛋白質或其片段。抗體或抗原結合片段可源自天然來源，或部分或全部合成產生。在一些態樣中，抗體係單株抗體。在該等態樣中之一些態樣中，單株抗體係IgG抗體。在某些態樣中，單株抗體係IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。在一些其他態樣中，抗體係多株抗體。在某些態樣中，抗原結合片段係選自Fab、Fab'及F(ab')₂ 、F(ab1)₂ 、Fv、dAb及Fd片段。在某些態樣中，抗原結合片段係scFv或(scFv)₂ 片段。在某些其他態樣中，抗體或抗原結合片段係NANOBODY^® (單一結構域抗體)。在一些態樣中，抗體或抗原結合片段係雙特異性或多特異性抗體。

在各個態樣中，抗體或抗原結合片段係完全人類的。在一些態樣中，抗體或抗原結合片段係人類化的。在一些態樣中，抗體或抗原結合片段係嵌合的。在該等態樣中之一些態樣中，嵌合抗體具有非人類V區結構域及人類C區結構域。在一些態樣中，抗體或抗原結合片段係非人類的，諸如鼠類或獸類。

在某些態樣中，免疫調節組分係多核苷酸。在該等態樣中之一些態樣中，多核苷酸包括(但不限於) mRNA、miRNA、siRNA、反義寡核苷酸(例如反義RNA或反義DNA)、磷醯二胺嗎啉基寡聚物(PMO)、肽結合之磷醯二胺嗎啉基寡聚物(PPMO)、shRNA、lncRNA、dsDNA及其組合。在一些態樣中，多核苷酸係RNA (例如mRNA、miRNA、siRNA、反義寡核苷酸(例如反義RNA)、shRNA或lncRNA)。在該等態樣中之一些態樣中，當多核苷酸係mRNA時，其可轉譯成期望多肽。在一些態樣中，多核苷酸係微小RNA (miRNA)或前miRNA分子。在該等態樣中之一些態樣中，將miRNA遞送至靶細胞之細胞質，使得miRNA分子可使靶細胞中之天然mRNA沈默。在一些態樣中，多核苷酸係能夠干擾致癌基因或其他失調多肽之表現之小干擾RNA (siRNA)或短髮夾RNA (shRNA)。在該等態樣中之一些態樣中，將siRNA遞送至靶細胞之細胞質，使得siRNA分子可使靶細胞中之天然mRNA沈默。在一些態樣中，多核苷酸係與mRNA互補之反義寡核苷酸(例如反義RNA)。在一些態樣中，多核苷酸係能夠調控基因表現且調節疾病之長的非編碼RNA (lncRNA)。在一些態樣中，多核苷酸係可轉錄成RNA之DNA。在該等態樣中之一些態樣中，轉錄的RNA可轉譯成期望多肽。

在一些態樣中，免疫調節組分係蛋白質、肽、糖脂或糖蛋白。

在各個態樣中，EV (例如胞外體)組合物包含兩種或更多種上文所提及之免疫調節組分，包括原子、分子等之混合物、融合物、組合及結合物。在一些態樣中，該組合物包含1種、2種、3種、4種、5種、6種、7種、8種、9種、10種、11種或12種與膜締合或包圍在細胞外囊泡(例如胞外體)之包圍體積內之不同免疫調節組分。在某些態樣中，該組合物包含與多肽組合之核酸。在某些態樣中，該組合物包含彼此結合之兩種或更多種多肽。在某些態樣中，該組合物包含結合至生物活性分子之蛋白質。在該等態樣中之一些態樣中，該生物活性分子係前藥。II.D 支架 X 工程改造 EV ( 例如胞外體 )

在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含在組成上經改質之膜。舉例而言，可藉由改變膜之蛋白質、脂質或聚糖含量來使其膜組成經改質。

在一些態樣中，表面工程改造EV (例如胞外體)係藉由化學及/或物理方法來產生，諸如PEG誘導之融合及/或超音融合。在其他態樣中，表面工程改造EV (例如胞外體)係藉由遺傳工程來產生。自經遺傳修飾之生產細胞或遺傳修飾細胞之後代產生的EV (例如胞外體)可含有經改質之膜組成。在一些態樣中，表面工程改造EV (例如胞外體)具有更高或更低密度(例如更高數量)之支架部分(例如胞外體蛋白質，例如支架X)，或包括支架部分之變異體或片段。

舉例而言，表面(例如支架X)工程改造EV可自經編碼支架部分(例如胞外體蛋白質，例如支架X)或其變異體或片段之外源性序列轉型之細胞(例如HEK293細胞)產生。包括自外源性序列表現之支架部分之EV可包括經改質之膜組成。

支架部分之各種修飾或片段可用於本發明之態樣。舉例而言，經修飾以對結合劑具有增強的親和力之支架部分可用於產生可使用該結合劑進行純化之表面工程改造EV。可使用經修飾以更有效地靶向至EV及/或膜之支架部分。亦可使用經修飾以包含特異性且有效靶向至胞外體膜所需最小片段之支架部分。

支架部分可經工程改造以表現為融合分子，例如支架X與抗原、佐劑及/或免疫調節劑之融合分子。舉例而言，融合分子可包含連接至抗原、佐劑及/或免疫調節劑之本文所揭示之支架部分(例如支架X，例如PTGFRN、BSG、IGSF2、IGSF3、IGSF8、ITGB1、ITGA4、SLC3A2、ATP轉運蛋白或其片段或變異體)。在融合分子之情形中，抗原、佐劑及/或免疫調節劑可係天然肽、重組肽、合成肽或其任何組合。

在一些態樣中，本文所闡述之表面(例如支架X)工程改造EV與此項技術中已知之EV相比展示優異特性。舉例而言，相較於天然EV或使用習用胞外體蛋白質產生之EV，表面(例如支架X)工程改造EV在其表面上含有更加高度富集之經修飾蛋白質。此外，與天然EV或使用常規胞外體蛋白質產生之EV相比，本發明之表面(例如支架X)工程改造EV可具有更大、更具特異性或更受控之生物活性。

在一些態樣中，支架X包含前列腺素F2受體負調控劑(PTGFRN多肽)。PTGFRN蛋白亦可稱為CD9搭配物1 (CD9P-1)、含Glu-Trp-Ile EWI基元之蛋白質F (EWI-F)、前列腺素F2-α受體調控蛋白、前列腺素F2-α受體相關蛋白或CD315。人類PTGFRN蛋白(Uniprot登錄號Q9P2B2)之全長胺基酸序列在表7中示為SEQ ID NO: 1。PTGFRN多肽含有信號肽(SEQ ID NO: 1之胺基酸1至25)、細胞外結構域(SEQ ID NO: 1之胺基酸26至832)、跨膜結構域(SEQ ID NO: 1之胺基酸833至853)及細胞質結構域(SEQ ID NO: 1之胺基酸854至879)。成熟PTGFRN多肽係由沒有信號肽之SEQ ID NO: 1組成，亦即SEQ ID NO: 1之胺基酸26至879。在一些態樣中，可用於本揭示案之PTGFRN多肽片段包含PTGFRN多肽之跨膜結構域。在其他態樣中，可用於本揭示案之PTGFRN多肽片段包含PTGFRN多肽之跨膜結構域及(i)在跨膜結構域N末端之至少5、至少10、至少15、至少20、至少25、至少30、至少40、至少50、至少70、至少80、至少90、至少100、至少110、至少120、至少130、至少140、至少150個胺基酸、(ii)在跨膜結構域C末端之至少5、至少10、至少15、至少20或至少25個胺基酸或(i)及(ii)二者。

在一些態樣中，PTGFRN多肽之片段缺少一或多個功能性或結構性結構域，諸如IgV。

在其他態樣中，支架X包含與SEQ ID NO: 1之胺基酸26至879至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%一致之胺基酸序列。在其他態樣中，支架X包含與SEQ ID NO: 33至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%一致之胺基酸序列。在其他態樣中，支架X包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列，1個胺基酸突變、2個胺基酸突變、3個胺基酸突變、4個胺基酸突變、5個胺基酸突變、6個胺基酸突變或7個胺基酸突變除外。該等突變可係取代、插入、缺失或其任何組合。在一些態樣中，支架X包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列及在SEQ ID NO: 33之N末端及/或C末端之1個胺基酸、2個胺基酸、3個胺基酸、4個胺基酸、5個胺基酸、6個胺基酸、7個胺基酸、8個胺基酸、9個胺基酸、10個胺基酸、11個胺基酸、12個胺基酸、13個胺基酸、14個胺基酸、15個胺基酸、16個胺基酸、17個胺基酸、18個胺基酸、19個胺基酸或20個胺基酸或更長。

在其他態樣中，支架X包含與SEQ ID NO: 2、3、4、5、6或7至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%一致之胺基酸序列。在其他態樣中，支架X包含SEQ ID NO: 2、3、4、5、6或7之胺基酸序列，1個胺基酸突變、2個胺基酸突變、3個胺基酸突變、4個胺基酸突變、5個胺基酸突變、6個胺基酸突變或7個胺基酸突變除外。該等突變可係取代、插入、缺失或其任何組合。在一些態樣中，支架X包含SEQ ID NO: 2、3、4、5、6或7之胺基酸序列及在SEQ ID NO: 2、3、4、5、6或7之N末端及/或C末端之1個胺基酸、2個胺基酸、3個胺基酸、4個胺基酸、5個胺基酸、6個胺基酸、7個胺基酸、8個胺基酸、9個胺基酸、10個胺基酸、11個胺基酸、12個胺基酸、13個胺基酸、14個胺基酸、15個胺基酸、16個胺基酸、17個胺基酸、18個胺基酸、19個胺基酸或20個胺基酸或更長。

在一些態樣中，支架X包含基礎免疫球蛋白(BSG蛋白)，其由SEQ ID NO: 9代表。BSG蛋白亦稱為5F7、膠原酶刺激因子、細胞外基質金屬蛋白酶誘導物(EMMPRIN)、白血球活化抗原M6、OK血型抗原、腫瘤細胞源性膠原酶刺激因子(TCSF)或CD147。人類BSG蛋白之Uniprot編號係P35613。BSG蛋白之信號肽係SEQ ID NO: 9之胺基酸1至21。SEQ ID NO: 9之胺基酸138至323係細胞外結構域，胺基酸324至344係跨膜結構域，且SEQ ID NO: 9之胺基酸345至385係細胞質結構域。

在其他態樣中，支架X包含與SEQ ID NO: 9之胺基酸22至385至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%一致之胺基酸序列。在一些態樣中，BSG多肽之片段缺少一或多個功能性或結構性結構域，諸如IgV，例如SEQ ID NO: 9之胺基酸221至315。在其他態樣中，支架X包含與SEQ ID NO: 10、11或12至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%一致之胺基酸序列。在其他態樣中，支架X包含SEQ ID NO: 10、11或12之胺基酸序列，1個胺基酸突變、2個胺基酸突變、3個胺基酸突變、4個胺基酸突變、5個胺基酸突變、6個胺基酸突變或7個胺基酸突變除外。該等突變可係取代、插入、缺失或其任何組合。在一些態樣中，支架X包含SEQ ID NO: 10、11或12之胺基酸序列及在SEQ ID NO: 10、11或12之N末端及/或C末端之1個胺基酸、2個胺基酸、3個胺基酸、4個胺基酸、5個胺基酸、6個胺基酸、7個胺基酸、8個胺基酸、9個胺基酸、10個胺基酸、11個胺基酸、12個胺基酸、13個胺基酸、14個胺基酸、15個胺基酸、16個胺基酸、17個胺基酸、18個胺基酸、19個胺基酸或20個胺基酸或更長。

在一些態樣中，支架X包含免疫球蛋白超家族成員8 (IgSF8或IGSF8蛋白)，其亦稱為CD81搭配物3、含Glu-Trp-Ile EWI基元之蛋白質2 (EWI-2)、角質細胞相關跨膜蛋白質4 (KCT-4)、LIR-D1、前列腺素調控樣蛋白質(PGRL)或CD316。全長人類IGSF8蛋白在Uniprot中為登錄號Q969P0，且在本文中示為SEQ ID NO: 14。人類IGSF8蛋白具有信號肽(SEQ ID NO: 14之胺基酸1至27)、細胞外結構域(SEQ ID NO: 14之胺基酸28至579)、跨膜結構域(SEQ ID NO: 14之胺基酸580至600)及細胞質結構域(SEQ ID NO: 14之胺基酸601至613)。

在其他態樣中，支架X包含與SEQ ID NO: 14之胺基酸28至613至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%一致之胺基酸序列。在一些態樣中，IGSF8蛋白缺少一或多個功能性或結構性結構域，諸如IgV。在其他態樣中，支架X包含與SEQ ID NO: 15、16、17或18至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%一致之胺基酸序列。在其他態樣中，支架X包含SEQ ID NO: 15、16、17或18之胺基酸序列，1個胺基酸突變、2個胺基酸突變、3個胺基酸突變、4個胺基酸突變、5個胺基酸突變、6個胺基酸突變或7個胺基酸突變除外。該等突變可係取代、插入、缺失或其任何組合。在一些態樣中，支架X包含SEQ ID NO: 15、16、17或18之胺基酸序列及在SEQ ID NO: 15、16、17或18之N末端及/或C末端之1個胺基酸、2個胺基酸、3個胺基酸、4個胺基酸、5個胺基酸、6個胺基酸、7個胺基酸、8個胺基酸、9個胺基酸、10個胺基酸、11個胺基酸、12個胺基酸、13個胺基酸、14個胺基酸、15個胺基酸、16個胺基酸、17個胺基酸、18個胺基酸、19個胺基酸或20個胺基酸或更長。

在一些態樣中，本揭示案之支架X包含免疫球蛋白超家族成員3 (IgSF3或IGSF3蛋白)，其亦稱為含Glu-Trp-Ile EWI基元之蛋白質3 (EWI-3)，且示為SEQ ID NO: 20之胺基酸序列。人類IGSF3蛋白具有信號肽(SEQ ID NO: 20之胺基酸1至19)、細胞外結構域(SEQ ID NO: 20之胺基酸20至1124)、跨膜結構域(SEQ ID NO: 20之胺基酸1125至1145)及細胞質結構域(SEQ ID NO: 20之胺基酸1146至1194)。

在其他態樣中，支架X包含與SEQ ID NO: 20之胺基酸28至613至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%一致之胺基酸序列。在一些態樣中，IGSF3蛋白缺少一或多個功能性或結構性結構域，諸如IgV。

在一些態樣中，本揭示案之支架X包含整聯蛋白β-1 (ITGB1蛋白)，其亦稱為纖連蛋白受體亞單元β、糖蛋白IIa (GPIIA)、VLA-4亞單元β或CD29，且示為SEQ ID NO: 21之胺基酸序列。人類ITGB1蛋白具有信號肽(SEQ ID NO: 21之胺基酸1至20)、細胞外結構域(SEQ ID NO: 21之胺基酸21至728)、跨膜結構域(SEQ ID NO: 21之胺基酸729至751)及細胞質結構域(SEQ ID NO: 21之胺基酸752至798)。

在其他態樣中，支架X包含與SEQ ID NO: 21之胺基酸21至798至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%一致之胺基酸序列。在一些態樣中，ITGB1蛋白缺少一或多個功能性或結構性結構域，諸如IgV。

在其他態樣中，支架X包含ITGA4蛋白，該ITGA4蛋白包含與沒有信號肽(SEQ ID NO: 22之胺基酸1至33)之SEQ ID NO: 22至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%一致之胺基酸序列。在一些態樣中，ITGA4蛋白缺少一或多個功能性或結構性結構域，諸如IgV。

在其他態樣中，支架X包含SLC3A2蛋白，該SLC3A2蛋白包含與沒有信號肽之SEQ ID NO: 23至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%一致之胺基酸序列。在一些態樣中，該SLC3A2蛋白缺少一或多個功能性或結構性結構域，諸如IgV。

在其他態樣中，支架X包含ATP1A1蛋白，該ATP1A1蛋白包含與沒有信號肽之SEQ ID NO: 24至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%一致之胺基酸序列。在一些態樣中，該ATP1A1蛋白缺少一或多個功能性或結構性結構域，諸如IgV。

在其他態樣中，支架X包含ATP1A2蛋白，該ATP1A2蛋白包含與沒有信號肽之SEQ ID NO: 25至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%一致之胺基酸序列。在一些態樣中，該ATP1A2蛋白缺少一或多個功能性或結構性結構域，諸如IgV。

在其他態樣中，支架X包含ATP1A3蛋白，該ATP1A3蛋白包含與沒有信號肽之SEQ ID NO: 26至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%一致之胺基酸序列。在一些態樣中，該ATP1A3蛋白缺少一或多個功能性或結構性結構域，諸如IgV。

在其他態樣中，支架X包含ATP1A4蛋白，該ATP1A4蛋白包含與沒有信號肽之SEQ ID NO: 27至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%一致之胺基酸序列。在一些態樣中，該ATP1A4蛋白缺少一或多個功能性或結構性結構域，諸如IgV。

在其他態樣中，支架X包含ATP1A5蛋白，該ATP1A5蛋白包含與沒有信號肽之SEQ ID NO: 28至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%一致之胺基酸序列。在一些態樣中，該ATP1A5蛋白缺少一或多個功能性或結構性結構域，諸如IgV。

在其他態樣中，支架X包含ATP2B1蛋白，該ATP2B1蛋白包含與沒有信號肽之SEQ ID NO: 29至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%一致之胺基酸序列。在一些態樣中，該ATP2B1蛋白缺少一或多個功能性或結構性結構域，諸如IgV。

在其他態樣中，支架X包含ATP2B2蛋白，該ATP2B2蛋白包含與沒有信號肽之SEQ ID NO: 30至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%一致之胺基酸序列。在一些態樣中，該ATP2B2蛋白缺少一或多個功能性或結構性結構域，諸如IgV。

在其他態樣中，支架X包含ATP2B3蛋白，該ATP2B3蛋白包含與沒有信號肽之SEQ ID NO: 31至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%一致之胺基酸序列。在一些態樣中，該ATP2B3蛋白缺少一或多個功能性或結構性結構域，諸如IgV。

在其他態樣中，支架X包含ATP2B4蛋白，該ATP2B4蛋白包含與沒有信號肽之SEQ ID NO: 32至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%一致之胺基酸序列。在一些態樣中，該ATP2B4蛋白缺少一或多個功能性或結構性結構域，諸如IgV。

在其他態樣中，支架X包含IGSF2蛋白，該IGSF2蛋白包含與沒有信號肽之SEQ ID NO: 34至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%一致之胺基酸序列。在一些態樣中，該IGSF2蛋白缺少一或多個功能性或結構性結構域，諸如IgV。

其他支架X蛋白之非限制性實例可參見2019年2月5日頒予之美國專利第US10195290B1號，其係以全文引用的方式併入。

在一些態樣中，序列編碼支架部分之片段，該片段自天然蛋白質之N末端缺少至少5、10、50、100、200、300、400、500、600、700或800個胺基酸。在一些態樣中，序列編碼支架部分之片段，該片段自天然蛋白質之C末端缺少至少5、10、50、100、200、300、400、500、600、700或800個胺基酸。在一些態樣中，序列編碼支架部分之片段，該片段自天然蛋白質之N末端及C末端兩者缺少至少5、10、50、100、200、300、400、500、600、700或800個胺基酸。在一些態樣中，序列編碼支架部分之片段，該片段缺少天然蛋白質之一或多個功能性或結構性結構域。

在一些態樣中，支架部分(例如支架X，例如PTGFRN蛋白)連接至一或多種異源蛋白質。該一或多種異源蛋白質可連接至支架部分之N末端。該一或多種異源蛋白質可連接至支架部分之C末端。在一些態樣中，該一或多種異源蛋白質連接至支架部分之N末端及C末端兩者。在一些態樣中，該異源蛋白質係哺乳動物蛋白質。在一些態樣中，該異源蛋白質係人類蛋白質。

在一些態樣中，支架X可用於將任何部分同時連接至EV (例如胞外體)之腔表面及外表面上。舉例而言，除EV (例如胞外體)之外表面以外，PTGFRN多肽亦可用於將本文所揭示之一或多個有效載荷(例如抗原、佐劑及/或免疫調節劑)連接在腔內部(例如腔表面上)。因此，在某些態樣中，支架X可用於雙重目的，例如抗原在EV (例如胞外體)之腔表面上且佐劑或免疫調節劑在外表面上，抗原在EV (例如胞外體)之外表面上且佐劑或免疫調節劑在腔表面上，佐劑在EV (例如胞外體)之腔表面上且免疫調節劑在外表面上，或免疫調節劑在EV (例如胞外體)之腔表面上且佐劑在外表面上。II.E 支架 Y 工程改造 EV ( 例如胞外體 )

在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)包含與天然EV不同之內部空間(亦即腔)。舉例而言，EV可經改變以使得EV (例如胞外體)之腔表面中之組成具有與天然胞外體不同之蛋白質、脂質或聚糖含量。

在一些態樣中，工程改造EV (例如胞外體)可自經外源性序列轉型之細胞產生，該外源性序列編碼支架部分(例如胞外體蛋白質，例如支架Y)或該支架部分的使EV (例如胞外體)之腔表面之組成或含量發生改變之修飾或片段。可在EV (例如胞外體)之腔表面上表現的胞外體蛋白質之各種修飾或片段可用於本揭示案之態樣。

在一些態樣中，可改變EV (例如胞外體)之腔表面之胞外體蛋白質包括(但不限於)肉豆蔻醯化之富含丙胺酸之蛋白激酶C受質(MARCKS)蛋白、肉豆蔻醯化之富含丙胺酸之蛋白激酶C受質樣1 (MARCKSL1)蛋白、腦酸溶性蛋白1 (BASP1)蛋白或其任何組合。

在一些態樣中，支架Y包含MARCKS蛋白(Uniprot登錄號P29966)。MARCKS蛋白亦稱為蛋白激酶C受質80 kDa蛋白質輕鏈。全長人類MARCKS蛋白之長度為332個胺基酸，且在胺基酸殘基152至176處包含攜鈣蛋白結合結構域。在一些態樣中，支架Y包含MARCKSL1蛋白(Uniprot登錄號P49006)。MARCKSL1蛋白亦稱為MARCKS樣蛋白1及巨噬細胞肉豆蔻醯化之富含丙胺酸之C激酶受質。全長人類MARCKSL1蛋白之長度為195個胺基酸。MARCKSL1蛋白在胺基酸殘基87至110處具有參與脂質結合及攜鈣蛋白結合之效應結構域。在一些態樣中，支架Y包含BASP1蛋白(Uniprot登錄號P80723)。BASP1蛋白亦稱為22 kDa神經元組織富集之酸性蛋白質或神經元軸突膜蛋白NAP-22。全長人類BASP1蛋白序列(異構物1)之長度為227個胺基酸。藉由選擇性剪接產生之異構物缺失SEQ ID NO: 49之胺基酸88至141 (異構物1)。表8提供本文所揭示之例示性支架Y (亦即MARCKS、MARCKSL1及BASP1蛋白)之全長序列。

成熟BASP1蛋白序列缺失SEQ ID NO: 49之第一Met，且因此含有SEQ ID NO: 49之胺基酸2至227。類似地，成熟MARCKS及MARCKSL1蛋白亦分別缺少SEQ ID NO: 47及48之第一Met。因此，成熟MARCKS蛋白含有SEQ ID NO: 47之胺基酸2至332。成熟MARCKSL1蛋白含有SEQ ID NO: 48之胺基酸2至227。

在其他態樣中，可用於本揭示案之支架Y包含與SEQ ID NO: 49之胺基酸2至227至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%一致之胺基酸序列。在其他態樣中，支架Y包含與SEQ ID NO: 50至155中之任一者至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%一致之胺基酸序列。在其他態樣中，可用於本揭示案之支架Y包含SEQ ID NO: 49之胺基酸序列，1個胺基酸突變、2個胺基酸突變、3個胺基酸突變、4個胺基酸突變、5個胺基酸突變、6個胺基酸突變或7個胺基酸突變除外。該等突變可係取代、插入、缺失或其任何組合。在一些態樣中，可用於本揭示案之支架Y包含SEQ ID NO: 50至155中任一者之胺基酸序列及在SEQ ID NO: 50至155之N末端及/或C末端之1個胺基酸、2個胺基酸、3個胺基酸、4個胺基酸、5個胺基酸、6個胺基酸、7個胺基酸、8個胺基酸、9個胺基酸、10個胺基酸、11個胺基酸、12個胺基酸、13個胺基酸、14個胺基酸、15個胺基酸、16個胺基酸、17個胺基酸、18個胺基酸、19個胺基酸或20個胺基酸或更長。

在一些態樣中，SEQ ID NO: 47至155中任一者之蛋白質序列均足以作為本揭示案之支架Y (例如連接至抗原及/或佐劑及/或免疫調節劑之支架部分)。

在某些態樣中，可用於本揭示案之支架Y包含具有MGXKLSKKK之肽，其中X係丙胺酸或任一其他胺基酸(SEQ ID NO: 163)。在一些態樣中，可用於本揭示案之支架Y包含具有GXKLSKKK (S之肽，其中X係丙胺酸或任一其他胺基酸(SEQ ID NO: 372)。在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含具有(M)(G)(π)(ξ)(Φ/π)(S/A/G/N)(+)(+)或(G)(π)(ξ)(Φ/π)(S/A/G/N)(+)(+)之序列之肽，其中每一括號位置均代表一胺基酸，且其中π係選自由(Pro、Gly、Ala、Ser)組成之群之任一胺基酸，ξ係選自由(Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、Lys、His、Arg)組成之群之任一胺基酸，Φ係選自由(Val、Ile、Leu、Phe、Trp、Tyr、Met)組成之群之任一胺基酸，且(+)係選自由(Lys、Arg、His)組成之群之任一胺基酸；且其中位置5不係(+)且位置6既不係(+)，亦不係(Asp或Glu)。在其他態樣中，本文所闡述之胞外體(例如工程改造胞外體)包含具有(M)(G)(π)(X)(Φ/π)(π)(+)(+)或(G)(π)(X)(Φ/π)(π)(+)(+)之序列之肽，其中每一括號位置均代表一胺基酸，且其中π係選自由(Pro、Gly、Ala、Ser)組成之群之任一胺基酸，X係任一胺基酸，Φ係選自由(Val、Ile、Leu、Phe、Trp、Tyr、Met)組成之群之任一胺基酸，且(+)係選自由(Lys、Arg、His)組成之群之任一胺基酸；且其中位置5不係(+)且位置6既不係(+)，亦不係(Asp或Glu)。關於胺基酸命名法，參見Aasland等人，FEBS Letters 513 (2002) 141-144。

在其他態樣中，支架X包含與SEQ ID NO: 47至155中之任一者至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%一致之胺基酸序列。

本文所闡述之支架Y工程改造EV (例如胞外體)可自經SEQ ID NO: 47至155中所示序列轉型之細胞產生。

在一些態樣中，可用於本揭示案之支架Y蛋白包含「N末端結構域」(ND)及「效應結構域」(ED)，其中該ND及/或該ED與EV (例如胞外體)之腔表面締合。在一些態樣中，可用於本揭示案之支架Y蛋白包含細胞內結構域、跨膜結構域及細胞外結構域；其中該細胞內結構域包含「N末端結構域」(ND)及「效應結構域」(ED)，其中該ND及/或該ED與EV (例如胞外體)之腔表面締合。如本文所用，術語「與……締合」係指支架蛋白與EV(例如胞外體)之腔表面之間的相互作用，其不涉及與膜組分之共價連接。舉例而言，可用於本揭示案之支架可與EV之腔表面締合，例如經由脂質錨(例如肉豆蔻酸)及/或與膜磷脂之帶負電荷之頭部靜電相互作用之多元結構域。在其他態樣中，支架Y蛋白包含N末端結構域(ND)及效應結構域(ED)，其中該ND與EV之腔表面締合且該ED藉由離子相互作用與EV之腔表面締合，其中該ED在序列中包含至少2個、至少3個、至少4個、至少5個、至少6個或至少7個鄰接鹼性胺基酸，例如離胺酸(Lys)。

在其他態樣中，支架Y蛋白包含N末端結構域(ND)及效應結構域(ED)，其中該ND與EV (例如胞外體)之腔表面締合，且該ED藉由離子相互作用與EV之腔表面締合，其中該ED在序列中包含至少2個、至少3個、至少4個、至少5個、至少6個或至少7個鄰接鹼性胺基酸，例如離胺酸(Lys)。

在一些態樣中，ND經由脂化(例如經由肉豆蔻醯化)與EV (例如胞外體)之腔表面締合。在一些態樣中，ND在N末端具有Gly。在一些態樣中，N末端Gly經肉豆蔻醯化。

在一些態樣中，ED藉由離子相互作用與EV (例如胞外體)之腔表面締合。在一些態樣中，ED藉由靜電相互作用、尤其具有吸引力之靜電相互作用與EV (例如胞外體)之腔表面締合。

在一些態樣中，ED在多肽序列中包含(i)一鹼性胺基酸(例如離胺酸)，或(ii)兩個或更多個彼此相鄰之鹼性胺基酸(例如離胺酸)。在一些態樣中，鹼性胺基酸係離胺酸(Lys；K)、精胺酸(Arg，R)或組胺酸(His，H)。在一些態樣中，鹼性胺基酸係(Lys)n，其中n係介於1與10之間的整數。

在其他態樣中，ED包含至少一個離胺酸，且若ED之N末端直接連接至ND之C末端處之離胺酸，則ND在C末端包含離胺酸，亦即離胺酸係在ED之N末端中且與ND之C末端中之離胺酸融合。在其他態樣中，當ED之N末端藉由連接體(例如一或多個胺基酸)連接至ND之C末端時，ED包含至少2個離胺酸、至少3個離胺酸、至少4個離胺酸、至少5個離胺酸、至少6個離胺酸或至少7個離胺酸。

在一些態樣中，ED包含K、KK、KKK、KKKK (SEQ ID NO: 205)、KKKKK (SEQ ID NO: 206)、R、RR、RRR、RRRR (SEQ ID NO: 207)；RRRRR (SEQ ID NO: 208)、KR、RK、KKR、KRK、RKK、KRR、RRK、(K/R)(K/R)(K/R)(K/R) (SEQ ID NO: 209)、(K/R)(K/R) (K/R)(K/R)(K/R) (SEQ ID NO: 210)或其任何組合。在一些態樣中，ED包含KK、KKK、KKKK (SEQ ID NO: 205)、KKKKK (SEQ ID NO: 206)或其任何組合。在一些態樣中，ND包含如G:X2:X3:X4:X5:X6中所示之胺基酸序列，其中G代表Gly；其中「:」代表肽鍵；其中X2至X6中之每一者獨立地代表胺基酸；且其中X6代表鹼性胺基酸。在一些態樣中，X6胺基酸係選自由以下組成之群：Lys、Arg及His。在一些態樣中，X5胺基酸係選自由以下組成之群：Pro、Gly、Ala及Ser。在一些態樣中，X2胺基酸係選自由以下組成之群：Pro、Gly、Ala及Ser。在一些態樣中，X4係選自由以下組成之群：Pro、Gly、Ala、Ser、Val、Ile、Leu、Phe、Trp、Tyr、Gln及Met。

在一些態樣中，支架Y蛋白包含N末端結構域(ND)及效應結構域(ED)，其中該ND包含如G:X2:X3:X4:X5:X6中所示之胺基酸序列，其中G代表Gly；其中「:」代表肽鍵；其中X2至X6中之每一者獨立地係胺基酸；其中X6包含鹼性胺基酸，且其中該ED藉由肽鍵連接至X6且在該ED之N末端包含至少一個離胺酸。

在一些態樣中，支架Y蛋白之ND包含G:X2:X3:X4:X5:X6之胺基酸序列，其中G代表Gly；「:」代表肽鍵；X2代表選自由Pro、Gly、Ala及Ser組成之群之胺基酸；X3代表任一胺基酸；X4代表選自由Pro、Gly、Ala、Ser、Val、Ile、Leu、Phe、Trp、Tyr、Gln及Met組成之群之胺基酸；X5代表選自由Pro、Gly、Ala及Ser組成之群之胺基酸；且X6代表選自由Lys、Arg及His組成之群之胺基酸。

在一些態樣中，X3胺基酸係選自由以下組成之群：Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、Lys、His及Arg。

在一些態樣中，ND與ED藉由連接體接合。在一些態樣中，連接體包含一或多個胺基酸。在一些態樣中，術語「連接體」係指肽或多肽序列(例如合成肽或多肽序列)或係指非多肽，例如烷基鏈。在一些態樣中，兩個或更多個連接體可串聯連接。通常，連接體提供撓性或防止/改善空間位阻。連接體通常不被裂解；然而，在某些態樣中，此裂解可係合意的。因此，在一些態樣中，連接體可包含一或多個蛋白酶可裂解位點，該等位點可位於連接體之序列內或在連接體序列之任一端側接連接體。當ND與ED藉由連接體接合時，ED包含至少2個離胺酸、至少3個離胺酸、至少4個離胺酸、至少5個離胺酸、至少6個離胺酸或至少7個離胺酸。

在一些態樣中，連接體係肽連接體。在一些態樣中，肽連接體可包含至少約2個、至少約3個、至少約4個、至少約5個、至少約10個、至少約15個、至少約20個、至少約25個、至少約30個、至少約35個、至少約40個、至少約45個、至少約50個、至少約55個、至少約60個、至少約65個、至少約70個、至少約75個、至少約80個、至少約85個、至少約90個、至少約95個或至少約100個胺基酸。

在一些態樣中，連接體係甘胺酸/絲胺酸連接體。在一些態樣中，肽連接體係根據式[(Gly)n-Ser]m之甘胺酸/絲胺酸連接體，其中n係1至100之任一整數且m係1至100之任一整數。在其他態樣中，甘胺酸/絲胺酸連接體係根據式[(Gly)x-Sery]z，其中x係1至4之整數，y係0或1，且z係1至50之整數。在一些態樣中，肽連接體包含序列Gn，其中n可係1至100之整數。在一些態樣中，肽連接體可包含序列(GlyAla)n，其中n係介於1與100之間的整數。在其他態樣中，肽連接體可包含序列(GlyGlySer)n，其中n係介於1與100之間的整數。

在一些態樣中，肽連接體係合成的，亦即非天然的。在一態樣中，肽連接體包括肽(或多肽) (例如天然或非天然肽)，其包含將第一胺基酸線性序列連接或遺傳融合至在自然界中其不會天然連接或遺傳融合之第二胺基酸線性序列之胺基酸序列。舉例而言，在一態樣中，肽連接體可包含非天然多肽，其係天然多肽之經修飾形式(例如包含諸如增加、取代或缺失等突變)。

在其他態樣中，肽連接體可包含非天然胺基酸。在其他態樣中，肽連接體可包含以在自然界中不存在之線性序列存在之天然胺基酸。在其他態樣中，肽連接體可包含天然多肽序列。

本揭示案亦提供經分離之細胞外囊泡(EV)，例如胞外體，其包含連接至支架Y蛋白之生物活性分子(例如抗原、佐劑及/或免疫調節劑)，其中該支架Y蛋白包含ND—ED，其中：ND包含G:X2:X3:X4:X5:X6；其中：G代表Gly；「:」代表肽鍵；X2代表選自由Pro、Gly、Ala及Ser組成之群之胺基酸；X3代表任一胺基酸；X4代表選自由Pro、Gly、Ala、Ser、Val、Ile、Leu、Phe、Trp、Tyr、Glu及Met組成之群之胺基酸；X5代表選自由Pro、Gly、Ala及Ser組成之群之胺基酸；X6代表選自由Lys、Arg及His組成之群之胺基酸；「—」代表視情況存在之連接體；且ED係效應結構域，該效應結構域包含(i)至少兩個鄰接離胺酸(Lys)，其藉由肽鍵或一或多個胺基酸連接至X6或(ii)至少一個離胺酸，其藉由肽鍵直接連接至X6。

在一些態樣中，X2胺基酸係選自由Gly及Ala組成之群。在一些態樣中，X3胺基酸係Lys。在一些態樣中，X4胺基酸係Leu或Glu。在一些態樣中，X5胺基酸係選自由Ser及Ala組成之群。在一些態樣中，X6胺基酸係Lys。在一些態樣中，X2胺基酸係Gly、Ala或Ser；X3胺基酸係Lys或Glu；X4胺基酸係Leu、Phe、Ser或Glu；X5胺基酸係Ser或Ala；且X6胺基酸係Lys。在一些態樣中，「—」連接體包含肽鍵或一或多個胺基酸。

在一些態樣中，支架蛋白中之ED包含Lys (K)、KK、KKK、KKKK (SEQ ID NO: 205)、KKKKK (SEQ ID NO: 206)、Arg (R)、RR、RRR、RRRR (SEQ ID NO: 207)；RRRRR (SEQ ID NO: 208)、KR、RK、KKR、KRK、RKK、KRR、RRK、(K/R)(K/R)(K/R)(K/R) (SEQ ID NO: 209)、(K/R)(K/R)(K/R)(K/R)(K/R) (SEQ ID NO: 210)或其任何組合。

在一些態樣中，支架Y蛋白包含選自由以下組成之群之胺基酸序列：(i) GGKLSKK (SEQ ID NO: 211)、(ii) GAKLSKK (SEQ ID NO: 212)、(iii) GGKQSKK (SEQ ID NO: 213)、(iv) GGKLAKK (SEQ ID NO: 214)或(v)其任何組合。

在一些態樣中，支架Y蛋白中之ND包含選自由以下組成之群之胺基酸序列：(i) GGKLSK (SEQ ID NO: 215)、(ii) GAKLSK (SEQ ID NO: 216)、(iii) GGKQSK (SEQ ID NO: 217)、(iv) GGKLAK (SEQ ID NO: 218)或(v)其任何組合，且支架蛋白中之ED包含K、KK、KKK、KKKG (SEQ ID NO: 219)、KKKGY (SEQ ID NO: 220)、KKKGYN (SEQ ID NO: 221)、KKKGYNV (SEQ ID NO: 222)、KKKGYNVN (SEQ ID NO: 223)、KKKGYS (SEQ ID NO: 224)、KKKGYG (SEQ ID NO: 225)、KKKGYGG (SEQ ID NO: 226)、KKKGS (SEQ ID NO: 227)、KKKGSG (SEQ ID NO: 228)、KKKGSGS (SEQ ID NO: 229)、KKKS (SEQ ID NO: 230)、KKKSG (SEQ ID NO: 231)、KKKSGG (SEQ ID NO: 232)、KKKSGGS (SEQ ID NO: 233)、KKKSGGSG (SEQ ID NO: 234)、KKSGGSGG (SEQ ID NO: 235)、KKKSGGSGGS (SEQ ID NO: 236)、KRFSFKKS (SEQ ID NO: 237)。

在一些態樣中，可用於本揭示案之支架Y蛋白之多肽序列係由選自由以下組成之群之胺基酸序列組成：(i) GGKLSKK (SEQ ID NO: 211)、(ii) GAKLSKK (SEQ ID NO: 212)、(iii) GGKQSKK (SEQ ID NO: 213)、(iv) GGKLAKK (SEQ ID NO: 214)或(v)其任何組合。

在一些態樣中，支架Y蛋白包含選自由以下組成之群之胺基酸序列：(i) GGKLSKKK (SEQ ID NO: 238)、(ii) GGKLSKKS (SEQ ID NO: 239)、(iii) GAKLSKKK (SEQ ID NO: 240)、(iv) GAKLSKKS (SEQ ID NO: 241)、(v) GGKQSKKK (SEQ ID NO: 242)、(vi) GGKQSKKS (SEQ ID NO: 243)、(vii) GGKLAKKK (SEQ ID NO: 244)、(viii) GGKLAKKS (SEQ ID NO: 245)及(ix)其任何組合。

在一些態樣中，可用於本揭示案之支架Y蛋白之多肽序列係由選自由以下組成之群之胺基酸序列組成：(i) GGKLSKKK (SEQ ID NO: 238)、(ii) GGKLSKKS (SEQ ID NO: 239)、(iii) GAKLSKKK (SEQ ID NO: 240)、(iv) GAKLSKKS (SEQ ID NO: 241)、(v) GGKQSKKK (SEQ ID NO: 242)、(vi) GGKQSKKS (SEQ ID NO: 243)、(vii) GGKLAKKK (SEQ ID NO: 244)、(viii) GGKLAKKS (SEQ ID NO: 245)及(ix)其任何組合。

在一些態樣中，支架Y蛋白之長度為至少約8個、至少約9個、至少約10個、至少約11個、至少約12個、至少約13個、至少約14個、至少約15個、至少約16個、至少約17個、至少約18個、至少約19個、至少約20個、至少約21個、至少約22個、至少約23個、至少約24個、至少約25個、至少約26個、至少約27個、至少約28個、至少約29個、至少約30個、至少31個、至少約32個、至少約33個、至少約34個、至少約35個、至少約36個、至少約37個、至少約38個、至少約39個、至少約39個、至少約40個、至少約41個、至少約42個、至少約43個、至少約44個、至少約50個、至少約46個、至少約47個、至少約48個、至少約49個、至少約50個、至少約55個、至少約60個、至少約65個、至少約70個、至少約75個、至少約80個、至少85個、至少約90個、至少約95個、至少約100個、至少約105個、至少約110個、至少約115個、至少約120個、至少約125個、至少約130個、至少約135個、至少約140個、至少約145個、至少約150個、至少約155個、至少約160個、至少約165個、至少約170個、至少約175個、至少約180個、至少約185個、至少約190個、至少約195個、至少約200個、至少約205個、至少約210個、至少約215個、至少約220個、至少約225個、至少約230個、至少約235個、至少約240個、至少約245個、至少約250個、至少約255個、至少約260個、至少約265個、至少約270個、至少約275個、至少約280個、至少約285個、至少約290個、至少約295個、至少約300個、至少約305個、至少約310個、至少約315個、至少約320個、至少約325個、至少約330個、至少約335個、至少約340個、至少約345個或至少約350個胺基酸。

在一些態樣中，支架Y蛋白之長度介於約5與約10、介於約10與約20、介於約20與約30、介於約30與約40、介於約40與約50、介於約50與約60、介於約60與約70、介於約70與約80、介於約80與約90、介於約90與約100、介於約100與約110、介於約110與約120、介於約120與約130、介於約130與約140、介於約140與約150、介於約150與約160、介於約160與約170、介於約170與約180、介於約180與約190、介於約190與約200、介於約200與約210、介於約210與約220、介於約220與約230、介於約230與約240、介於約240與約250、介於約250與約260、介於約260與約270、介於約270與約280、介於約280與約290、介於約290與約300、介於約300與約310、介於約310與約320、介於約320與約330、介於約330與約340或介於約340與約250個胺基酸之間。

在一些態樣中，支架Y蛋白包含(i) GGKLSK KKKGYNVN (SEQ ID NO: 246)、(ii) GAKLSKKKKGYNVN (SEQ ID NO: 247)、(iii) GGKQSKKKKGYNVN (SEQ ID NO: 248)、(iv) GGKLAKKKKGYNVN (SEQ ID NO: 249)、(v) GGKLSKKKKGYSGG (SEQ ID NO: 250)、(vi) GGKLSK KKKGSGGS (SEQ ID NO: 251)、(vii) GGKLSKKKKSGGSG (SEQ ID NO: 252)、(viii) GGKLSKKKSGGSGG (SEQ ID NO: 253)、(ix) GGKLSKKSGGSGGS (SEQ ID NO: 254)、(x) GGKLSKSGGSGGSV (SEQ ID NO: 255)或(xi) GAKKSK KRFSFKKS (SEQ ID NO: 256)。

在一些態樣中，可用於本揭示案之支架Y蛋白之多肽序列係由以下組成：(i) GGKLSKKKKGYNVN (SEQ ID NO: 246)、(ii) GAKLSKKKKGYNVN (SEQ ID NO: 247)、(iii) GGKQSKKKKGYNVN (SEQ ID NO: 248)、(iv) GGKLAKKKKGYNVN (SEQ ID NO: 249)、(v) GGKLSKKK KGYSGG (SEQ ID NO: 250)、(vi) GGKLSKKKKGSGGS (SEQ ID NO: 251)、(vii) GGKLSKKKKSGGSG (SEQ ID NO: 252)、(viii) GGKLSKKKSGGSGG (SEQ ID NO: 253)、(ix) GGKLSKKSGGSGGS (SEQ ID NO: 254)、(x) GGKLSKSGG SGGSV (SEQ ID NO: 255)或(xi) GAKKSKKRFSFKKS (SEQ ID NO: 256)。

可用於本揭示案之支架Y蛋白之非限制性實例列示於下文中。在一些態樣中，支架Y蛋白包含表9中所示之胺基酸序列。在一些態樣中，支架Y蛋白係由表9中所示之胺基酸序列組成。

在一些態樣中，可用於本揭示案之支架Y蛋白不含N末端Met。在一些態樣中，支架Y蛋白在支架蛋白之N末端包含脂化胺基酸，例如肉豆蔻醯化之胺基酸，其起脂質錨之作用。在一些態樣中，在支架蛋白之N末端之胺基酸殘基係Gly。N末端Gly之存在係N-肉豆蔻醯化之絕對要求。在一些態樣中，在支架蛋白之N末端之胺基酸殘基係合成的。在一些態樣中，在支架蛋白之N末端之胺基酸殘基係甘胺酸類似物，例如烯丙基甘胺酸、丁基甘胺酸或炔丙基甘胺酸。

在其他態樣中，脂質錨可係此項技術中已知之任何脂質錨，例如棕櫚酸或糖基磷脂醯肌醇。在不尋常之情況下，例如藉由使用肉豆蔻酸受限之培養基，可將一些其他脂肪酸(包括較短鏈且不飽和之脂肪酸) 連接至N末端甘胺酸。舉例而言，在BK通道中，已報導肉豆蔻酸酯經由羥基酯鍵聯在轉譯後連接至內部絲胺酸/蘇胺酸或酪胺酸殘基。下表中呈現此項技術中已知之膜錨：

II.F 結合之 EV ( 例如胞外體 )

與抗體不同，EV (例如胞外體)可容納大量連接至其表面之分子，例如每個EV (例如胞外體)可容納大約數千至數萬個分子。因此，EV (例如胞外體)-藥物結合物代表如下平台：將高濃度之治療化合物遞送至離散細胞類型，同時限制對該化合物之整體全身性暴露，此進而降低脫靶毒性。

本揭示案提供藉由使包含游離硫醇基團之第一分子實體與包含馬來醯亞胺基團之第二分子實體反應而經工程改造之EV (例如胞外體)，其中如圖31中所呈現，經由馬來醯亞胺部分，馬來醯亞胺部分將該第一分子實體與該第二分子實體共價連接。

可經由馬來醯亞胺部分連接至EV (例如胞外體)之生物活性分子之非限制性實例包括諸如以下等劑：核苷酸(例如包含可偵測部分或毒素之核苷酸或破壞轉錄之核苷酸)、核酸(例如編碼多肽(諸如酶)之DNA或mRNA分子或具有調控功能之RNA分子(諸如miRNA)、dsDNA、lncRNA或siRNA)、嗎啉基、胺基酸(例如包含可偵測部分或毒素之胺基酸或破壞轉譯之胺基酸)、多肽(例如酶)、脂質、碳水化合物、小分子(例如小分子藥物及毒素)、抗原(例如疫苗抗原)、佐劑(例如疫苗佐劑)等。

在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)可包含一種以上類型之生物活性分子。在一些態樣中，生物活性分子可係(例如)小分子，諸如環狀二核苷酸；毒素，諸如奧里斯他汀(auristatin)(例如單乙基奧里斯他汀E，MMAE)；抗體(例如裸抗體或抗體-藥物結合物)；STING促效劑；耐受劑；反義寡核苷酸；PROTAC；嗎啉基；溶血磷脂酸受體拮抗劑(例如LPA1拮抗劑)；或其任何組合。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)可包含(例如)疫苗抗原及視情況疫苗佐劑。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)可包含治療性有效載荷(例如STING或下文所揭示之一種有效載荷)及靶向部分及/或向性部分。

因此，在一些態樣中，本揭示案提供如圖31中所呈現之分子實體，其中EV (例如胞外體)或其任何分子組分(諸如多肽(例如支架X蛋白或其片段)、脂質、脂蛋白、糖蛋白或位於EV (例如胞外體)上之天然或非天然蛋白質之任何變異體或衍生物)可經由馬來醯亞胺部分化學連接至生物活性分子，例如治療性有效載荷、靶向部分、向性部分或其任何組合。如圖31中所繪示，在一些態樣中，包含硫氫基(硫醇)基團之EV (例如胞外體)或其分子組分可與連接至生物活性部分之馬來醯亞胺基團反應。在其他態樣中，包含馬來醯亞胺基團之EV (例如胞外體)或其分子組分可與生物活性部分中所存在之硫氫基(硫醇)基團反應。在該兩種情形中，最終產物係經由硫醚鍵化學連接至EV (例如胞外體)之生物活性分子。 II.G 馬來醯亞胺部分

如上文所闡述，在一些態樣中，本揭示案可使用之連接體可包含馬來醯亞胺部分(亦即「馬來醯亞胺連接體 」)。可使用此項技術中已知之技術(例如化學結合、重組技術或肽合成)將連接體引入至馬來醯亞胺部分中。在一些態樣中，可使用重組技術引入連接體。在其他態樣中，可使用固相肽合成引入連接體。在某些態樣中，本文所揭示之馬來醯亞胺部分可同時含有一或多個使用重組技術引入之連接體及一或多個使用固相肽合成或此項技術中已知之化學結合方法引入之連接體。

因此，在一些態樣中，本文所揭示之EV (例如胞外體)可包含一或多個有效載荷(例如抗原、佐劑及/或免疫調節劑)，其中該等有效載荷中之一或多者經由馬來醯亞胺連接體連接至該EV。在某些態樣中，本文所揭示之EV (例如胞外體)可進一步包含一或多個靶向部分，其中該等靶向部分中之一或多者經由馬來醯亞胺連接體連接至該EV。如本文所闡述，在一些態樣中，該等有效載荷中之一或多者及/或該等靶向部分中之一或多者經由支架部分(例如支架X及/或支架Y)連接至EV (例如胞外體)。在某些態樣中，該等有效載荷中之一或多者及/或該等靶向部分中之一或多者經由馬來醯亞胺部分共價連接至支架部分。在一些態樣中，支架部分包含支架X及/或支架Y。本揭示案可使用之其他支架部分之非限制性實例包括：胺基肽酶N (CD13)；腦啡肽酶(膜金屬肽鏈內切酶；MME)；外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶家族成員1 (ENPP1)；神經纖毛蛋白-1 (NRP1)；CD9、CD63、CD81、PDGFR、GPI錨定蛋白、乳凝集素、LAMP2及LAMP2B、其片段及其任何組合。

如本文所用，術語「馬來醯亞胺部分 」或「MM 」係指將EV (例如胞外體)連接至連接體或生物活性分子之雙官能化學部分，且其包含馬來醯亞胺基團：

其中*指示與EV (例如胞外體)上之任一硫醇基團(例如支架X中所存在之游離硫醇)之連接點，且波形線指示與馬來醯亞胺部分之其餘部分之連接位點。在一些態樣中，*指示與有效載荷及/或靶向部分上之任一硫醇基團之連接點，且波形線指示與至EV (例如胞外體) (例如支架X)之馬來醯亞胺部分之其餘部分之連接位點。

在一些態樣中，馬來醯亞胺部分連接至與EV (例如胞外體)連接之硫原子，例如硫醇基團中之天然硫原子或經由化學修飾或經由突變引入之硫原子。

在一些態樣中，馬來醯亞胺部分具有式(I)：

(I)，其中 (i) R¹ 係選自由以下組成之群：-C_1-10 伸烷基-、-C_3-8 碳環基-、-O-(C_1-8 伸烷基)-、-伸芳基-、-C_1-10 伸烷基-伸芳基-、-伸芳基-C_1-10 伸烷基-、-C_1-10 伸烷基-(C_3-8 碳環基)-、 -(C_3-8 碳環基)-C_1-10 伸烷基-、-C_3-8 雜環基-、-C_1-10 伸烷基-(C_3-8 雜環基)-、-(C_3-8 雜環基)-C_1-10 伸烷基-、-(CH₂ CH₂ O)_r -及-(CH₂ CH₂ O)_r -CH₂ -； (ii) r係整數，例如1至10； (iii) *指示與任一可用反應性硫原子(例如EV (例如胞外體)上存在之硫醇基團中之硫)之連接點；且 (iv)波形線指示馬來醯亞胺部分與生物活性分子(亦即有效載荷)之連接位點。

在一些態樣中，R¹ 係-C_1-8 伸烷基-、-C_3-6 碳環基-、-O-(C_1-6 伸烷基)-、-伸芳基-、-C_1-8 伸烷基-伸芳基-、-伸芳基-C_1-8 伸烷基-、-C_1-8 伸烷基-(C_3-6 碳環基)-、 -(C_3-6 碳環基)-C_1-8 伸烷基-、-C_3-6 雜環基-、-C_1-8 伸烷基-(C_3-6 雜環基)-、-(C_3-6 雜環基)-C_1-8 伸烷基-、-(CH₂ CH₂ O)_r -及-(CH₂ CH₂ O)_r -CH₂ -；其中r係整數，例如1至10。

在一些態樣中，R¹ 係-(CH₂ )_s -、環戊基、環己基、-O-(CH₂ )_s -、-苯基-、-CH₂ -苯基-、-苯基-CH₂ -、 -CH₂ -環戊基-、-環戊基-CH₂ -、-CH₂ -環己基-、-環己基-CH₂ -、-(CH₂ CH₂ O)_r -及-(CH₂ CH₂ O)_r -CH₂ -；其中r係整數，例如1至6。

在一些態樣中，R¹ 係-(CH₂ )_s -，其中s係(例如) 4、5或6。

在一些態樣中，馬來醯亞胺部分具有式(II)，其中R¹ 係-(CH₂ )₅ -：

(II)。

在一些態樣中，馬來醯亞胺部分具有式(III)，其中R¹ 係-(CH₂ CH₂ O)_r -CH₂ -，且其中r係2：

(III)。

在一些態樣中，馬來醯亞胺部分共價連接至EV (例如胞外體)上存在之官能基，其中該官能基係硫氫基(硫醇)基團。在一態樣中，硫氫基係在EV (例如胞外體)之表面上之蛋白質(例如支架X)或其變異體上。舉例而言，在一些態樣中，硫氫基可存在於硫醇脂質上，例如膽固醇-SH、DSPE-SH或其衍生物，例如膽固醇-PEG-SH或DSPE-PEG-SH。

在一些態樣中，馬來醯亞胺部分共價連接至EV (例如胞外體)上存在之官能基，該官能基已經化學衍生以提供馬來醯亞胺部分。舉例而言，在某些態樣中，可利用包含琥珀醯亞胺部分及馬來醯亞胺部分之雙官能試劑來衍生EV (例如胞外體)上存在之胺官能基(例如離胺酸或精胺酸側鏈上之胺，或蛋白質之末端胺基)。

在一些態樣中，可利用包含異氰酸酯部分及馬來醯亞胺部分之雙官能試劑來衍生EV (例如胞外體)上存在之羧基官能基(例如麩胺酸或天冬胺酸側鏈上之羧基，或蛋白質之末端羧基)。在其他態樣中，可利用包含肼部分及馬來醯亞胺部分之雙官能試劑來衍生EV (例如胞外體)上存在之羰基(經氧化之碳水化合物)。

一般而言，本文所提供之揭示內容可使用任何試劑(例如雙官能或多官能試劑)來實踐，該試劑在與存在於EV (例如胞外體)表面(外表面或腔表面)上之分子(例如蛋白質、脂質、糖)反應時將共價或非共價地修飾該分子以產生包含至少一個馬來醯亞胺部分之經修飾分子。存在於EV (例如胞外體)表面(外表面或腔表面)上之分子可係天然的，或其可係非天然的，亦即其已經修飾，例如經由化學修飾、與包含非天然分子之組合物一起培育或經由突變(例如經由突變將一或多個半胱胺酸胺基酸引入至蛋白質中)。

包含馬來醯亞胺部分之雙官能試劑、其中多個含馬來醯亞胺之單元可多聚化之試劑或可經由馬來醯亞胺基團添加功能性部分(例如PEG)之含馬來醯亞胺之試劑包括(例如)包含肼部分及馬來醯亞胺部分之雙官能試劑、包含異氰酸酯部分及馬來醯亞胺部分之雙官能試劑、包含N-羥基琥珀醯亞胺基酯部分及馬來醯亞胺部分之雙官能試劑、包含琥珀醯亞胺部分及馬來醯亞胺部分之雙官能試劑、生物素-馬來醯亞胺、鏈黴抗生物素蛋白-馬來醯亞胺、N-4-馬來醯亞胺丁酸、N-(4-馬來醯亞胺丁基氧基)琥珀醯亞胺、N-[5-(3′-馬來醯亞胺丙醯胺)-1-羧基戊基]亞胺基二乙酸、馬來醯亞胺-PEG-琥珀醯亞胺基酯(例如馬來醯亞胺-PEG₁₂ -琥珀醯亞胺基酯、馬來醯亞胺-PEG₂ -琥珀醯亞胺基酯、馬來醯亞胺-PEG₂₀₀₀ -琥珀醯亞胺基酯、馬來醯亞胺-PEG₅₀₀₀ -琥珀醯亞胺基酯或馬來醯亞胺-PEG_n -琥珀醯亞胺基酯(其中1＜n＜5000))、馬來醯亞胺-PEG-馬來醯亞胺(例如馬來醯亞胺-PEG₁₂ -馬來醯亞胺、馬來醯亞胺-PEG₂ -馬來醯亞胺、馬來醯亞胺-PEG₂₀₀₀ -馬來醯亞胺、馬來醯亞胺-PEG₅₀₀₀ -馬來醯亞胺或馬來醯亞胺-PEG_n -馬來醯亞胺(其中1＜n＜5000))、馬來醯亞胺-OH、馬來醯亞胺-PEG_n -OH (其中1＜n＜5000)、馬來醯亞胺-聚(乙二醇)-b-聚(ε-己內酯)、(S )-(−)-N -(1-苯基乙基)馬來醯亞胺、N-(4-氯苯基)馬來醯亞胺、N-(1-芘基)馬來醯亞胺、甲氧基聚乙二醇馬來醯亞胺、聚(乙二醇)甲醚馬來醯亞胺、N -(4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,9,9,10,10,11,11,11-十七氟十一烷基)馬來醯亞胺、去鐵胺-馬來醯亞胺(亦即螯合劑-馬來醯亞胺)、馬來醯亞胺縮水甘油基醚、雙官能馬來醯亞胺基DTPA、雙官能NOTA-馬來醯亞胺螯合劑、同雙官能馬來醯亞胺交聯劑(亦即在每一端均具有馬來醯亞胺基團之彼等交聯劑)、雙馬來醯亞胺基聚伸烷基二醇、DBCO-馬來醯亞胺、苯并三唑馬來醯亞胺、炔烴馬來醯亞胺、馬來醯亞胺官能化脂質、馬來醯亞胺官能化PEG脂質及通常包含至少一個馬來醯亞胺部分、至少一個其他反應性部分(例如馬來醯亞胺或另一反應性基團)及一或多個視情況存在之連接體(例如PEG或另一聚合物(諸如聚甘油))之任何分子。 II.H 連接體

如上所述，本揭示案之細胞外囊泡(EV) (例如胞外體及奈米囊泡)可包含一或多個將相關分子(例如抗原、佐劑或免疫調節劑)連接至EV (例如至外表面或在腔表面上)之連接體。在一些態樣中，相關分子(亦即有效載荷) (例如抗原、佐劑或免疫調節劑)直接或經由支架部分(例如支架X或支架Y)連接至EV。舉例而言，在某些態樣中，有效載荷(例如抗原、佐劑及/或免疫調節劑)經由支架X連接至胞外體之外表面。在其他態樣中，有效載荷(例如抗原、佐劑及/或免疫調節劑)經由支架X或支架Y連接至胞外體之腔表面。在一些態樣中，有效載荷(例如抗原、佐劑及/或免疫調節劑)經由支架X連接至胞外體之腔表面。在一些態樣中，有效載荷(例如抗原、佐劑及/或免疫調節劑)經由支架Y連接至胞外體之腔表面。在一些態樣中，有效載荷(例如抗原、佐劑及/或免疫調節劑)經由支架X及支架Y連接至胞外體之腔表面。在一些態樣中，有效載荷(例如抗原、佐劑及/或免疫調節劑)經由連接體(例如本文所闡述之彼等連接體)結合至支架X。在某些態樣中，有效載荷(例如抗原、佐劑及/或免疫調節劑)使用一個以上之連接體(亦即「連接體組合 」)結合至支架X。在一些態樣中，有效載荷(例如抗原、佐劑及/或免疫調節劑)經由連接體(例如本文所闡述之彼等連接體)結合至支架Y。在某些態樣中，有效載荷(例如抗原、佐劑及/或免疫調節劑)使用連接體組合結合至支架Y。在一些態樣中，連接體組合包含至少2個、至少3個、至少4個、至少5個或至少6個或更多個本文所揭示之不同連接體。在一些態樣中，連接體組合中之連接體可藉由酯鍵聯(例如磷酸二酯或硫代磷酸酯)連接。

連接體可係此項技術中已知之任何化學部分。

如本文所用，術語「連接體 」係指肽或多肽序列(例如合成肽或多肽序列)或係指非多肽，例如烷基鏈。在一些態樣中，兩個或更多個連接體可串聯連接。當存在多個連接體時，該等連接體中之每一者可相同或不同。通常，連接體提供撓性或防止/改善空間位阻。連接體通常不被裂解；然而，在某些態樣中，此裂解可係合意的。因此，在一些態樣中，連接體可包含一或多個蛋白酶可裂解位點，該等位點可位於連接體之序列內或在連接體序列之任一端側接連接體。

在一些態樣中，肽連接體可包含至少約110個、至少約120個、至少約130個、至少約140個、至少約150個、至少約160個、至少約170個、至少約180個、至少約190個或至少約200個胺基酸。

在其他態樣中，肽連接體可包含至少約200個、至少約300個、至少約400個、至少約500個、至少約600個、至少約700個、至少約800個、至少約900個或至少約1,000個胺基酸。肽連接體可包含1至約5個胺基酸、1至約10個胺基酸、1至約20個胺基酸、約10至約50個胺基酸、約50至約100個胺基酸、約100至約200個胺基酸、約200至約300個胺基酸、約300至約400個胺基酸、約400至約500個胺基酸、約500至約600個胺基酸、約600至約700個胺基酸、約700至約800個胺基酸、約800至約900個胺基酸或約900至約1000個胺基酸。

如本文所闡述，在一些態樣中，可用於本揭示案之連接體包含甘胺酸/絲胺酸連接體。在一些態樣中，肽連接體係根據式[(Gly)n-Ser]m (SEQ ID NO: 374)之甘胺酸/絲胺酸連接體，其中n係1至100之任一整數且m係1至100之任一整數。在一些態樣中，甘胺酸/絲胺酸連接體係根據式[(Gly)x-Sery]z (SEQ ID NO: 375)，其中x係1至4之整數，y係0或1，且z係1至50之整數。在一些態樣中，肽連接體包含序列Gn (SEQ ID NO: 376)，其中n可係1至100之整數。在一些態樣中，肽連接體可包含序列(GlyAla)n (SEQ ID NO: 377)，其中n係介於1與100之間的整數。在一些態樣中，肽連接體可包含序列(GlyGlySer)n (SEQ ID NO: 378)，其中n係介於1與100之間的整數。在某些態樣中，肽連接體包含序列GGGG (SEQ ID NO: 197)。

在一些態樣中，肽連接體包含序列(GGGS)n (SEQ ID NO: 203)。在某些態樣中，肽連接體包含序列(GGS)n(GGGGS)n (SEQ ID NO: 204)。在此等態樣中，n可係1至100之整數。在一些態樣中，n可係1至20之整數，亦即1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。在一些態樣中，n係1至100之整數。

可用於本揭示案之連接體之實例包括(但不限於) GGG、SGGSGGS (SEQ ID NO: 198)、GGSGGSGGSG GSGGG (SEQ ID NO: 199)、GGSGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 200)、GGSGGSGGSGGSGGSGGS (SEQ ID NO: 201)或GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 202)。在一些態樣中，連接體係聚G序列(GGGG)n (SEQ ID NO: 373)，其中n可係1至100之整數。

在一些態樣中，肽連接體可包含非天然胺基酸。在其他態樣中，肽連接體可包含以在自然界中不存在之線性序列存在之天然胺基酸。在其他態樣中，肽連接體可包含天然多肽序列。

在一些態樣中，連接體包含非肽連接體。在其他態樣中，連接體係由非肽連接體組成。在一些態樣中，非肽連接體可係(例如)馬來醯亞胺基己醯基(MC)、馬來醯亞胺基丙醯基(MP)、甲氧基聚乙二醇(MPEG)、4-(N-馬來醯亞胺基甲基)-環己烷-1-甲酸琥珀醯亞胺基酯(SMCC)、間馬來醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基琥珀醯亞胺酯(MBS)、4-(對馬來醯亞胺基苯基)丁酸琥珀醯亞胺基酯(SMPB)、(4-碘乙醯基)胺基苯甲酸N-琥珀醯亞胺基酯(SIAB)、6-[3-(2-吡啶基二硫基)-丙醯胺]己酸琥珀醯亞胺基酯(LC-SPDP)、4-琥珀醯亞胺基氧基羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基二硫基)甲苯(SMPT)等。(例如，參見美國專利第7,375,078號，其係以全文引用的方式併入本文中)。

在一些態樣中，可使用此項技術中已知之技術(例如化學結合、重組技術或肽合成)將本文所揭示之連接體引入至馬來醯亞胺部分中。在一些態樣中，可使用重組技術引入連接體。在其他態樣中，可使用固相肽合成引入連接體。在某些態樣中，本文所揭示之馬來醯亞胺部分可同時含有一或多個使用重組技術引入之連接體及一或多個使用固相肽合成或此項技術中已知之化學結合方法引入之連接體。在一些態樣中，連接體可包含膽固醇部分。例如，參見US 2008/0085869 A1，其係以全文引用的方式併入本文中。

連接體可易受裂解影響(「可裂解連接體 」)，藉此促進生物活性分子(例如抗原、佐劑或免疫調節劑)之釋放。因此，在一些態樣中，本揭示案可使用之連接體包含可裂解連接體。在生物活性分子保持活性之條件下，此等可裂解連接體可易受(例如)以下之影響：酸誘導之裂解、光誘導之裂解、肽酶誘導之裂解、酯酶誘導之裂解及二硫鍵裂解。在一些態樣中，可裂解連接體包含間隔體。在某些態樣中，間隔體包含PEG。

在一些態樣中，連接體係「還原敏感性連接體 」。在一些態樣中，還原敏感性連接體含有二硫鍵。在一些態樣中，連接體係「酸不穩定連接體 」。在一些態樣中，酸不穩定連接體含有腙。適宜酸不穩定連接體亦包括(例如)順式烏頭酸連接體、醯肼連接體、硫代胺甲醯基連接體或其任何組合。

在一些態樣中，連接體包含不可裂解連接體(亦即對裂解具有抗性或實質上具有抗性)。

在一些態樣中，本文所揭示之連接體組合僅包含可裂解連接體。在一些態樣中，本文所揭示之連接體組合僅包含不可裂解連接體。在一些態樣中，本文所揭示之連接體組合包含可裂解及不可裂解連接體二者。下文提供本揭示案可使用之與可裂解及不可裂解連接體相關之其他揭示內容。 II.H.1 不可裂解連接體

不可裂解連接體係能夠將本揭示案之經修飾生物活性分子之兩個或更多個組分(例如生物活性分子及錨定部分；生物活性分子及可裂解連接體；錨定部分及可裂解連接體)以穩定的共價方式連接且不屬於上文針對可裂解連接體所列示之類別之任何化學部分。因此，不可裂解連接體對酸誘導之裂解、光誘導之裂解、肽酶誘導之裂解、酯酶誘導之裂解及二硫鍵裂解實質上具有抗性。

此外，「不可裂解 」係指在環狀二核苷酸及/或抗體不喪失其活性之條件下，連接體中或與連接體鄰接之化學鍵抵抗由酸、光不穩定裂解劑、肽酶、酯酶或裂解二硫鍵之化學或生理化合物誘導之裂解之能力。在一些態樣中，生物活性分子經由另一連接體(例如自消性連接體)連接至連接體。

在一些態樣中，本文所揭示之連接體組合包含不可裂解連接體，該不可裂解連接體包含(例如)四乙二醇(TEG)、六乙二醇(HEG)、聚乙二醇(PEG)、琥珀醯亞胺或其任何組合。在一些態樣中，不可裂解連接體包含間隔體單元以將生物活性分子連接至不可裂解連接體。

在一些態樣中，一或多個不可裂解連接體包含連接在一起之較小單元(例如HEG、TEG、甘油、C2至C12烷基及諸如此類)。在一些態樣中，鍵聯係酯鍵聯(例如磷酸二酯或硫代磷酸酯)或其他鍵聯。本揭示案可使用之不可裂解連接體之實例為此項技術中所已知，例如參見US 7,569,657 B2；US 8,465,730 B1；US 7,087,229 B2；及美國公開案第2014/0193849 A1號，其各自係以全文引用的方式併入本文中。 II.H.2 可裂解連接體

如本文所闡述，可用於將相關分子(例如抗原、佐劑或免疫調節劑)連接至EV (例如胞外體)之一或多個連接體(亦即連接體組合)可包含可裂解連接體。術語「可裂解連接體 」係指包含至少一個可斷裂或裂解之鍵聯或化學鍵之連接體。如本文所用，術語「裂解」係指以產生兩個或更多個相對較小分子之方式來使相對較大分子中之一或多個化學鍵斷裂。裂解可例如藉由核酸酶、肽酶、蛋白酶、磷酸酶、氧化酶或還原酶介導，或藉由特定物理化學條件介導，例如氧化還原環境、pH、活性含氧物之存在或光之特定波長。

在一些態樣中，如本文所用，術語「可裂解 」係指例如可快速降解之連接體，諸如磷酸二酯及二硫化物，而術語「不可裂解」係指例如更穩定之鍵聯，諸如核酸酶抗性硫代磷酸酯。

在一些態樣中，可裂解連接體包含二核苷酸或三核苷酸連接體、二硫化物、亞胺、硫縮酮、val-cit二肽或其任何組合。

在一些態樣中，可裂解連接體包含纈胺酸-丙胺酸-對胺基苄基胺基甲酸酯、纈胺酸-瓜胺酸-對胺基苄基胺基甲酸酯或該兩者。

在一些態樣中，可裂解連接體包含氧化還原可裂解連接體、活性含氧物(ROS)可裂解連接體、pH依賴性可裂解連接體、酶可裂解連接體、蛋白酶可裂解連接體、酯酶可裂解連接體、磷酸酶可裂解連接體、光活化之可裂解連接體、自消性連接體或其組合。下文進一步提供與該等可裂解連接體中之一或多者相關之其他揭示內容，且其亦為此項技術中所已知，例如參見US 2018/0037639 A1；Trout等人，79 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 626-629 (1982)；Umemoto等人，43 Int. J. Cancer, 677-684 (1989)；Cancer Res. 77(24):7027-7037 (2017)；Doronina等人，Nat. Biotechnol. 21:778-784 (2003)；US 7,754,681 B2；US 2006/0269480；US 2010/0092496；US 2010/0145036；US 2003/0130189；US 2005/0256030，其各自係以全文引用的方式併入本文中。 II.H.2.a 氧化還原可裂解連接體

在一些態樣中，連接體組合包含氧化還原可裂解連接體。在某些態樣中，此一連接體可包含在還原時或在氧化時裂解之氧化還原可裂解連接基團。

在一些態樣中，氧化還原可裂解連接體含有二硫鍵，亦即其係二硫化物可裂解連接體。在一些態樣中，氧化還原可裂解連接體可例如由細胞內硫醇、氧化酶、還原酶或其組合還原。 II.H.2.b 活性含氧物(ROS)可裂解連接體

在一些態樣中，連接體組合可包含可裂解連接體，其可由例如發炎過程(諸如活化嗜中性球)產生之活性含氧物(ROS)(諸如超氧化物(Of)或過氧化氫(H2O2))裂解。在一些態樣中，ROS可裂解連接體係硫縮酮可裂解連接體。例如，參見美國專利8,354,455B2，其係以全文引用的方式併入本文中。 II.H.2.c pH依賴性可裂解連接體

在一些態樣中，該連接體係包含酸可裂解連接基團之酸不穩定連接體，該酸可裂解連接基團係在酸性條件(pH＜7)下選擇性地裂解之連接基團。

在一些態樣中，酸可裂解連接基團在例如約6.0、約5.5、約5.0或更低之酸性環境中裂解。在一些態樣中，pH為約6.5或更低。在一些態樣中，連接體由可作為通用酸之劑(諸如酶)裂解，該酶例如肽酶(其可係受質特異性的)或磷酸酶。在細胞內，某些低pH細胞器(諸如胞內體及溶酶體)可為酸可裂解連接基團提供裂解環境。儘管人類血清之pH為7.4，但細胞中之平均pH略低，範圍為約7.1至7.3。胞內體亦具有酸性pH，範圍為5.5至6.0，且溶酶體具有甚至更高的酸性pH，為約5.0。因此，在此項技術中，pH依賴性可裂解連接體有時稱為胞內體不穩定之連接體。

在一些態樣中，酸可裂解基團可具有通式-C = NN-、C (O) O或-OC (O)。在另一非限制性實例中，當連接至酯氧(烷氧基)之碳連接至芳基、經取代烷基或第三烷基(諸如二甲基戊基或第三丁基)時。酸可裂解連接基團之實例包括(但不限於)胺、亞胺、胺基酯、苯甲醯亞胺、二原酸酯、聚磷酸酯、聚磷腈、縮醛、乙烯醚、腙、順式烏頭酸酯、醯肼、硫代胺甲醯基、丙咪嗪(imizine)、疊氮基甲基-甲基馬來酸酐、硫代丙酸酯、經遮蔽之胞內體溶解劑、檸康醯基或其任何組合。二硫鍵聯亦易受pH影響。

在一些態樣中，連接體包含低pH不穩定性腙鍵。此等酸不穩定鍵已在結合物(例如抗體-藥物結合物)領域中廣泛使用。例如，參見Zhou等人，Biomacromolecules 2011, 12, 1460-7；Yuan等人，Acta Biomater. 2008, 4, 1024-37；Zhang等人，Acta Biomater. 2007, 6, 838-50；Yang等人，J. Pharmacol. Exp. Ther. 2007, 321, 462-8；Reddy等人，Cancer Chemother. Pharmacol. 2006, 58, 229-36；Doronina等人，Nature Biotechnol. 2003, 21, 778-84，其各自係以全文引用的方式併入本文中。

在一些態樣中，連接體包含選自以下之低pH不穩定性鍵：在酸性環境(例如小於7、大於約4之pH)中不穩定以形成二醇及酮之縮酮；在酸性環境(例如小於7、大於約4之pH)中不穩定以形成二醇及醛之縮醛；在酸性環境(例如小於7、大於約4之pH)中不穩定以形成胺及醛或酮之亞胺或亞胺離子；在酸性條件下不穩定之矽-氧-碳鍵聯；矽-氮(矽氮烷)鍵聯；矽-碳鍵聯(例如芳基矽烷、乙烯基矽烷及烯丙基矽烷)；馬來醯胺酸酯(自馬來酸酐衍生物及胺合成之醯胺鍵)；原酸酯；腙；經設計以經歷酸催化水解之活化羧酸衍生物(例如酯、醯胺)；或乙烯醚。

其他實例可參見美國專利第9,790,494 B2號及第8,137,695 B2號，該等專利之內容係以全文引用的方式併入本文中。 II.H.2.d 酶可裂解連接體

在一些態樣中，連接體組合可包含能夠由細胞內或細胞外酶(例如蛋白酶、酯酶、核酸酶、醯胺酶)裂解之連接體。可將連接體組合中之特定連接體裂解之酶的範圍取決於該連接體之特定鍵及化學結構。因此，肽連接體可例如由肽酶裂解，含有酯鍵聯之連接體可例如由酯酶裂解；含有醯胺鍵聯之連接體可例如由醯胺酶裂解等。 II.H.2.e 酯酶可裂解連接體

一些連接體由酯酶裂解(「酯酶可裂解連接體」)。僅某些酯可由存在於細胞內部或外部之酯酶及醯胺酶裂解。酯係藉由羧酸與醇之縮合而形成的。簡單酯係利用簡單醇(諸如脂肪醇以及小的環狀及小的芳香醇)產生之酯。基於酯之可裂解連接基團之實例包括(但不限於)伸烷基、伸烯基及伸炔基之酯。酯可裂解連接基團具有通式-C (O) O-或-OC (O)-。 II.H.2.f 磷酸酶可裂解連接體

在一些態樣中，連接體組合可包括基於磷酸酯之可裂解連接基團，其由降解或水解磷酸酯基團之劑裂解。裂解細胞內磷酸酯基團之劑的實例係酶，諸如細胞內磷酸酶。基於磷酸酯之連接基團之實例係—O—P (O) (OR k) —O—、—O—P (S) (OR_k ) —O—、—O—P (S) (SR_k ) — O-、-S-P (O) (OR_k ) -O-、-O-P (O) (OR_k ) -S-、-S-P (O) (OR_k ) -S-、-O-P ( S) (OR_k ) -S-、-SP (S) (OR_k ) -O-、-OP (O) (R_k ) -O-、-OP (S) (R_k ) -O- 、-SP (O) (R_k ) -O-、-SP (S) (R_k ) -O-、-SP (O) (R_k ) -S-或-OP (S) (R_k ) -S-。

在一些態樣中，R_k 係以下中之任一者：NH₂ 、BH₃ 、CH₃ 、C_1-6 烷基、C_6-10 芳基、C_1-6 烷氧基及C_6-10 芳基-氧基。在一些態樣中，C_1-6 烷基及C_6-10 芳基未經取代。其他非限制性實例包括-O-P (O) (OH) -O-、-O-P (S) (OH) -O-、-O-P (S) (SH) -O-、-S-P (O) (OH) -O-、-O-P (O) (OH) -S-、-S-P (O) (OH) -S-、-O-P (S) ( OH) -S-、-S-P (S) (OH) -O-、-O-P (O) (H) -O-、-O-P (S) (H) -O-、-S -P (O) (H) -O-、-SP (S) (H) -O-、-SP (O) (H) -S-、-OP (S) (H)-S-或-O-P (O) (OH) -O-。 II.H.2.g 光活化之可裂解連接體

在一些態樣中，組合連接體包含光活化之可裂解連接體，例如硝基苄基連接體或包含硝基苄基反應性基團之連接體。

常規疫苗已展示出一些挑戰。在一些態樣中，常規疫苗不能誘導強勁之T細胞反應。此外，常規疫苗所產生之任何反應可限於組織特異性反應及/或缺少抗體多樣性。在一些態樣中，與單獨之抗原(疫苗)相比，包含抗原之可用於本揭示案之EV (例如胞外體)展現有利性質。在一些態樣中，與單獨之抗原相比，本揭示案之EV (例如胞外體)能夠誘導改良之T細胞定向免疫反應。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)能夠誘導外周組織中之T細胞反應。在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)展現增強之抗體多樣性及/或親合力。

常規疫苗(例如抗原)亦面臨抗原呈遞細胞攝取差、免疫原性差及/或複雜性有限之問題。與常規抗原相比，本揭示案之EV (例如胞外體)能夠在EV (例如胞外體)上呈遞多種抗原及/或調節對特定免疫細胞(例如B細胞及/或樹突細胞)之抗原暴露。

常規疫苗之佐劑亦有挑戰。舉例而言，佐劑之潛在毒性限制其投與途徑、劑量及佐劑組合。另外，RNA及/或DNA係較差佐劑。本揭示案之EV (例如胞外體)克服該等問題。本揭示案之EV (例如胞外體)容許將抗原及佐劑(及/或本文所揭示之其他有效載荷)選擇性共遞送至抗原呈遞細胞；此可降低佐劑劑量且能夠實現組合，藉此改良疫苗之整體安全性。III. 用於產生工程改造 EV ( 例如胞外體 ) 之生產細胞

本揭示案之EV (例如胞外體)可自活體外生長之細胞或個體之體液產生。當自活體外細胞培養物產生胞外體時，可使用各種生產細胞，例如HEK293細胞、CHO細胞及MSC。在某些態樣中，生產細胞不係天然存在之樹突細胞、巨噬細胞、B細胞、肥胖細胞、嗜中性球、庫弗氏-布洛維奇氏細胞、源自該等細胞中之任一者之細胞或其任何組合(亦即非天然存在之生產細胞)。如本文所用，術語「非天然存在之生產細胞 」係指已經修飾之生產細胞(例如樹突細胞、巨噬細胞、B細胞、肥胖細胞、嗜中性球、庫弗氏-布洛維奇氏細胞、源自該等細胞中之任一者之細胞或其任何組合)，使得該生產細胞與天然存在之對應細胞相比在結構及/或功能上有所不同。如下文進一步闡述，在一些態樣中，非天然存在之生產細胞已經修飾以表現一或多個本文所揭示之有效載荷(例如抗原、免疫調節劑及/或佐劑)。在某些態樣中，非天然存在之生產細胞已經修飾以表現一或多個本文所揭示之靶向部分。在一些態樣中，非天然存在之生產細胞已經修飾以表現一或多個本文所揭示之支架部分(例如支架X及/或支架Y)。

生產細胞可經遺傳修飾以包含一或多個外源性序列(例如編碼抗原、佐劑、免疫調節劑及/或靶向部分)，以產生本文所闡述之EV (例如胞外體)。經遺傳修飾之生產細胞可藉由瞬時或穩定轉型而含有外源性序列。外源性序列可作為質體轉型。外源性序列可在靶向位點或在隨機位點中穩定地整合至生產細胞之基因體序列中。在一些態樣中，產生穩定細胞株以用於生產腔工程改造EV (例如胞外體)。

可將外源性序列插入至生產細胞之基因體序列內，其位於編碼EV (例如胞外體)蛋白質之內源性序列之內部、上游(5'端)或下游(3'端)。可使用此項技術中已知之各種方法來將外源性序列引入至生產細胞中。舉例而言，使用各種基因編輯方法(例如使用同源重組、轉位子介導之系統、loxP-Cre系統、CRISPR/Cas9或TALEN之方法)修飾之細胞係在本揭示案之範圍內。

外源性序列可包含編碼本文所揭示之支架部分或其片段或變異體之序列。可引入編碼支架部分之序列之額外拷貝以產生本文所闡述之EV (例如胞外體) (例如在EV (例如胞外體)之表面上或腔表面上具有更高密度之支架部分)。可引入編碼支架部分之修飾或片段之外源性序列以產生含有該支架部分之修飾或片段之腔工程改造及/或表面工程改造胞外體。

在一些態樣中，生產細胞可經一或多個載體修飾(例如轉染)，該一或多個載體編碼連接至有效載荷(例如抗原、佐劑及/或免疫調節劑)及/或靶向部分之支架部分。

在一些態樣中，本文所揭示之生產細胞經進一步修飾以包含另一外源性序列。舉例而言，可引入另一外源性序列以調節內源性基因表現，或產生包括某一多肽作為有效載荷(例如抗原、佐劑及/或免疫調節劑)及/或靶向部分之EV (例如胞外體)。在一些態樣中，生產細胞經修飾以包含兩個外源性序列，一個編碼支架部分(例如支架X及/或支架Y)或其變異體或片段，且另一個編碼有效載荷及/或靶向部分。在某些態樣中，生產細胞可經進一步修飾以包含賦予EV (例如胞外體)其他功能之另一外源性序列(例如佐劑或免疫調節劑)。在一些態樣中，生產細胞經修飾以包含兩個外源性序列，一個編碼本文所揭示之支架部分或其變異體或片段，且另一個編碼賦予EV (例如胞外體)其他功能之蛋白質(例如佐劑或免疫調節劑)。在一些態樣中，生產細胞經進一步修飾以包含1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個或10個或更多個其他外源性序列。在某些態樣中，該等其他外源性序列編碼本文所揭示之有效載荷(例如抗原、佐劑及/或免疫調節劑)及/或靶向部分中之任一者。

在一些態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體) (例如表面工程改造及/或腔工程改造胞外體)可自經編碼本文所揭示之全長成熟支架部分或連接至有效載荷(例如抗原、佐劑及/或免疫調節劑)及/或靶向部分之支架部分的序列轉型之細胞產生。本文所闡述支架部分中之任一者可自質體、插入至基因體中之外源性序列或其他外源性核酸(諸如合成信使RNA (mRNA))表現。IV. 醫藥組合物

本文提供包含具有期望純度之本揭示案之EV (例如胞外體)及醫藥學上可接受之載劑或賦形劑之醫藥組合物，其呈適於向個體投與之形式。醫藥學上可接受之賦形劑或載劑可部分地由所投與之特定組合物以及由用於投與該組合物之特定方法來確定。因此，存在眾多種包含複數個細胞外囊泡之醫藥組合物之適宜調配物。(例如，參見Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa.，第21版(2005))。醫藥組合物通常調配為無菌的，且完全符合美國食品藥品管理局(U.S. Food and Drug Administration)之所有優良製造規範(Good Manufacturing Practice，GMP)法規。

在一些態樣中，醫藥組合物包含一或多種治療劑及本文所闡述之胞外體。在某些態樣中，EV (例如胞外體)與一或多種其他治療劑一起於醫藥學上可接受之載劑中共投與。在一些態樣中，包含EV (例如胞外體)之醫藥組合物係在投與其他治療劑之前投與。在其他態樣中，包含EV (例如胞外體)之醫藥組合物係在投與其他治療劑之後投與。在其他態樣中，包含EV (例如胞外體)之醫藥組合物係與其他治療劑同時投與。

可接受之載劑、賦形劑或穩定劑在所採用之劑量及濃度下對接受者(例如動物或人類)無毒，且包括緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(諸如十八烷基二甲基苄基氯化銨；氯化六甲雙銨；苯紮氯銨(benzalkonium chloride)、苄索氯銨(benzethonium chloride)；苯酚、丁醇或苄醇；對羥基苯甲酸烷基酯，諸如對羥基苯甲酸甲基酯或對羥基苯甲酸丙基酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量(小於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯基吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單糖、二糖及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成鹽相對離子，諸如鈉；金屬錯合物(例如Zn-蛋白質錯合物)；及/或非離子表面活性劑，諸如TWEEN™、PLURONICS™或聚乙二醇(PEG)。

載劑或稀釋劑之實例包括(但不限於)水、鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)、右旋糖溶液及5%人類血清白蛋白。用於醫藥活性物質之此等介質及化合物之使用為此項技術中所熟知。除非任何習用介質或化合物與本文所闡述之細胞外囊泡不相容，否則預期其在組合物中之用途。亦可將補充治療劑納入至組合物中。通常，將醫藥組合物調配為與其預期投與途徑相容。EV (例如胞外體)可藉由非經腸、局部、靜脈內、經口、皮下、動脈內、真皮內、經皮、經直腸、顱內、腹膜內、鼻內、腫瘤內、肌內途徑或作為吸入劑投與。在某些態樣中，包含胞外體之醫藥組合物係以靜脈內方式例如藉由注射投與。EV (例如胞外體)可視情況與至少部分地有效治療該等EV (例如胞外體)所意欲針對之疾病、病症或疾患之其他治療劑組合投與。

溶液或懸浮液可包括以下組分：無菌稀釋劑，諸如水、鹽水溶液、不揮發性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶劑；抗細菌化合物，諸如苄醇或對羥基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，諸如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合化合物，諸如乙二胺四乙酸(EDTA)；緩衝劑，諸如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；及用於調整張力之化合物，諸如氯化鈉或右旋糖。pH可經諸如鹽酸或氫氧化鈉等酸或鹼調整。可將製劑包封在安瓿、拋棄式注射器或由玻璃或塑膠製得之多劑量小瓶中。

適於可注射使用之醫藥組合物包括無菌水溶液(若為水溶性)或分散液及無菌粉末。對於靜脈內投與，適宜載劑包括生理鹽水、抑菌水、Cremophor EL™ (BASF, Parsippany, N.J.)或磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)。組合物通常係無菌的，且流動程度使其具有易注射性。載劑可為含有(例如)水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇及液體聚乙二醇及諸如此類)以及其適宜混合物之溶劑或分散介質。可(例如)藉由使用諸如卵磷脂等包衣、藉由維持所需粒徑(在分散液之情形中)或藉由使用表面活性劑來維持適當流動性。可藉由各種抗細菌及抗真菌化合物來達成對微生物作用之預防，例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗壞血酸、硫柳汞(thimerosal)及諸如此類。若期望，可將等滲化合物(例如糖、諸如甘露醇、山梨醇等多元醇及氯化鈉)添加至組合物。可藉由將延遲吸收之化合物(例如單硬脂酸鋁及明膠)納入組合物中來達成可注射組合物之延長吸收。

可視期望將有效量之EV (例如胞外體)與本文所列舉之一種成分或成分組合納入在適當溶劑中來製備無菌可注射溶液。通常，分散液係藉由將EV (例如胞外體)納入至含有基本分散介質及任何期望之其他成分之無菌媒劑中來製備。在用於製備無菌可注射溶液之無菌粉末之情形中，製備方法為真空乾燥及冷凍乾燥，該等方法自先前經無菌過濾之溶液產生活性成分加上任何額外期望成分之粉末。EV (例如胞外體)可以儲積注射或植入物製劑之形式投與，其可以允許EV (例如胞外體)之持續或脈衝式釋放之形式來調配。

包含胞外體之組合物之全身投與亦可藉由經黏膜方式進行。對於經黏膜投與，在調配物中使用適合於欲滲透障壁之滲透劑。此等滲透劑通常為此項技術中所已知，且包括(例如對於經黏膜投與而言)清潔劑、膽汁鹽及梭鏈孢酸衍生物。經黏膜投與可經由使用(例如)鼻用噴霧來完成。

在某些態樣中，將包含胞外體之醫藥組合物靜脈內投與至將受益於該醫藥組合物之個體。在某些其他態樣中，例如藉由淋巴內注射或藉由結內注射來將組合物投與至淋巴系統(例如，參見Senti等人，PNAS 105( 46): 17908 (2008))，或藉由肌內注射、藉由皮下投與、藉由腫瘤內注射、藉由直接注射至胸腺中或直接注射至肝中。

在某些態樣中，包含胞外體之醫藥組合物係以液體懸浮液形式投與。在某些態樣中，醫藥組合物係以能夠在投與後形成儲積物之調配物形式來投與。在某些較佳態樣中，儲積物將EV (例如胞外體)緩慢釋放至循環中，或保持儲積物形式。

通常，醫藥學上可接受之組合物係高度純化成不含污染物，係生物相容且無毒的，且適於投與個體。若水係載劑之成分，則將水高度純化且處理成不含污染物(例如內毒素)。

醫藥學上可接受之載劑可係乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、澱粉、阿拉伯樹膠、磷酸鈣、海藻酸鹽、明膠、矽酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯基吡咯啶酮、纖維素、水、糖漿、甲基纖維素、羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸鎂及/或礦物油，但不限於此。醫藥組合物可進一步包括潤滑劑、潤濕劑、甜味劑、增味劑、乳化劑、懸浮劑及/或防腐劑。

本文所闡述之醫藥組合物包含本文所闡述之EV (例如胞外體)及視情況醫藥活性劑或治療劑。治療劑可係生物劑、小分子劑或核酸劑。

提供包含醫藥組合物之劑型，該醫藥組合物包含本文所闡述之EV (例如胞外體)。在一些態樣中，將劑型調配為用於靜脈內注射之液體懸浮液。在一些態樣中，將劑型調配為用於腫瘤內注射之液體懸浮液。

在某些態樣中，使胞外體製劑經受輻射，例如X射線、γ射線、β粒子、α粒子、中子、質子、元素核、UV射線，以便破壞殘餘之複製勝任核酸。

在某些態樣中，使用大於1 kGy、5 kGy、10 kGy、15 kGy、20 kGy、25 kGy、30 kGy、35 kGy、40 kGy、50 kGy、60 kGy、70 kGy、80 kGy、90 kGy、100 kGy或大於100 kGy之輻照劑量，使胞外體製劑經受γ輻照。

在某些態樣中，使用大於0.1 mSv、0.5 mSv、1 mSv、5 mSv、10 mSv、15 mSv、20 mSv、25 mSv、30 mSv、35 mSv、40 mSv、50 mSv、60 mSv、70 mSv、80 mSv、90 mSv、100 mSv、200 mSv、300 mSv、400 mSv、500 mSv、600 mSv、700 mSv、800 mSv、900 mSv、1000 mSv、2000 mSv、3000 mSv、4000 mSv、5000 mSv、6000 mSv、7000 mSv、8000 mSv、9000 mSv、10000 mSv或大於10000 mSv之輻照劑量，使胞外體製劑經受X射線輻照。V. 套組

本文亦提供包含一或多種本文所闡述胞外體之套組。在一些態樣中，本文提供醫藥包裝或套組，其包含一或多個填充有本文所闡述醫藥組合物之一或多種成分(諸如一或多種本文所提供之胞外體)之容器、視情況存在之使用說明書。在一些態樣中，套組含有本文所闡述之醫藥組合物及任何預防劑或治療劑，諸如本文所闡述之彼等預防劑或治療劑。VI. 產生 EV ( 例如胞外體 ) 之方法

本揭示案之EV (例如胞外體)與傳統疫苗之不同之處在於，該等EV可經快速工程改造以表現相關部分(例如抗原、佐劑、免疫調節劑及/或靶向部分)。如本文所闡述，相關部分(i)可直接連接至EV之表面(例如外表面及/或腔表面)，(ii)可連接至支架部分(例如支架X及/或支架Y)，且接著在EV之表面(例如外表面及/或腔表面)上表現，(iii)可在EV之腔中表現，或(iv)其組合。此快速工程改造EV (例如胞外體)之能力尤其可用於開發基於EV (例如胞外體)之疫苗。舉例而言，經工程改造以表現某些有效載荷及/或靶向部分之單一EV (例如胞外體)可藉由簡單地將相關抗原「插入(plugging)」至EV中而用於治療寬範圍之疾病或病症。

因此，在一些態樣中，本揭示案係關於產生此等模組化或「即插即用(plug and play)」EV (例如胞外體)疫苗之方法。在某些態樣中，產生基於EV (例如胞外體)之疫苗之方法包括將工程改造EV (例如胞外體)與相關抗原混合，使得該相關抗原在工程改造EV中表現。在一些態樣中，工程改造EV (例如胞外體)包含本文所揭示有效載荷中之一或多者(例如抗原、佐劑及/或免疫調節劑)。在某些態樣中，工程改造EV (例如胞外體)進一步包含一或多個支架部分(例如支架X及/或支架Y)。在一些態樣中，工程改造EV (例如胞外體)另外包含一或多個靶向部分。在一些態樣中，工程改造EV (例如胞外體)可使用本文所揭示之任一方法來產生。

在一些態樣中，本揭示案亦係關於產生本文所闡述EV (例如胞外體)之方法。在一些態樣中，該方法包括：自生產細胞獲得EV (例如胞外體)，其中該生產細胞含有EV (例如胞外體)之兩種或更多種組分(例如(i)抗原及佐劑，(ii)抗原及免疫調節劑，(iii)抗原及靶向部分，(iv)抗原、佐劑及靶向部分，(v)抗原、免疫調節劑及靶向部分，(vi)抗原、佐劑及免疫調節劑，(vii)抗原、佐劑、免疫調節劑及靶向部分)；及視情況分離所獲得之EV (例如胞外體)。在一些態樣中，該方法包括：藉由引入本文所揭示EV (例如胞外體)之兩種或更多種組分(例如(i)抗原及佐劑，(ii)抗原及免疫調節劑，(iii)抗原及靶向部分，(iv)抗原、佐劑及靶向部分，(v)抗原、免疫調節劑及靶向部分，(vi)抗原、佐劑及免疫調節劑，(vii)抗原、佐劑、免疫調節劑及靶向部分)來修飾生產細胞；自經修飾之生產細胞獲得EV (例如胞外體)；及視情況分離所獲得之EV (例如胞外體)。在其他態樣中，該方法包括：自生產細胞獲得EV (例如胞外體)；分離所獲得之EV (例如胞外體)；及修飾經分離之EV (例如胞外體) (例如藉由插入多種外源性生物活性分子，例如抗原、佐劑及/或免疫調節劑及/或靶向部分)。在某些態樣中，該方法進一步包括將經分離之EV (例如胞外體)調配成醫藥組合物。VI.A 修飾生產細胞之方法

如上文所闡述，在一些態樣中，產生EV (例如胞外體)之方法包括利用多種(例如兩種或更多種)相關分子(例如本文所闡述之外源性生物活性分子(例如抗原、佐劑、免疫調節劑)及/或靶向部分)來修飾生產細胞。在一些態樣中，本文所揭示之生產細胞可進一步經本文所揭示之支架部分(例如支架X或支架Y)修飾。

在一些態樣中，生產細胞可係哺乳動物細胞株、植物細胞株、昆蟲細胞株、真菌細胞株或原核細胞株。在某些態樣中，生產細胞係哺乳動物細胞株。哺乳動物細胞株之非限制性實例包括：人類胚腎(HEK)細胞株、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞株、HT-1080細胞株、HeLa細胞株、PERC-6細胞株、CEVEC細胞株、纖維母細胞細胞株、羊水細胞株、上皮細胞株、間充質幹細胞(MSC)細胞株及其組合。在某些態樣中，哺乳動物細胞株包含HEK-293細胞、BJ人類包皮纖維母細胞、fHDF纖維母細胞、AGE.HN^® 神經元前體細胞、CAP^® 羊水細胞、脂肪間充質幹細胞、RPTEC/TERT1細胞或其組合。在一些態樣中，生產細胞係原代細胞。在某些態樣中，原代細胞可係原代哺乳動物細胞、原代植物細胞、原代昆蟲細胞、原代真菌細胞或原代原核細胞。

在一些態樣中，生產細胞不係諸如抗原呈遞細胞、T細胞、B細胞、天然殺手細胞(NK細胞)、巨噬細胞、T輔助細胞或調控T細胞(Treg細胞)等免疫細胞。在其他態樣中，生產細胞不係抗原呈遞細胞(例如樹突細胞、巨噬細胞、B細胞、肥胖細胞、嗜中性球、庫弗氏-布洛維奇氏細胞或源自任一此等細胞之細胞)。在一些態樣中，生產細胞不係天然存在之抗原呈遞細胞(亦即已經修飾)。在一些態樣中，生產細胞不係天然存在之樹突細胞、B細胞、肥胖細胞、巨噬細胞、嗜中性球、庫弗氏-布洛維奇氏細胞、源自該等細胞中之任一者之細胞或其任何組合。

在一些態樣中，一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)可係轉殖基因或mRNA，且藉由轉染、病毒轉導、電穿孔、擠壓、音波處理、細胞融合或熟習此項技術者已知之其他方法引入至生產細胞中。

在一些態樣中，藉由轉染將一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)引入至生產細胞。在一些態樣中，可使用諸如陽離子脂質及聚合物等合成大分子將一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)引入至適宜生產細胞中(Papapetrou等人，Gene Therapy 12: S118-S130 (2005))。在一些態樣中，陽離子脂質經由電荷相互作用與一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)形成複合體。在該等態樣中之一些態樣中，帶正電荷之複合體結合至帶負電荷之細胞表面，且由細胞藉由胞吞作用吸收。在一些其他態樣中，陽離子聚合物可用於轉染生產細胞。在該等態樣中之一些態樣中，陽離子聚合物係聚乙烯亞胺(PEI)。在某些態樣中，可使用諸如磷酸鈣、環糊精或聚凝胺等化學品將一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)引入至生產細胞。亦可使用物理方法將一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)引入至生產細胞中，該物理方法諸如粒子介導之轉染、「基因槍」、生物彈道學或粒子轟擊技術(Papapetrou等人，Gene Therapy 12: S118-S130 (2005))。諸如β-半乳糖苷酶、氯黴素乙醯基轉移酶、螢光素酶或綠色螢光蛋白等報導基因可用於評價生產細胞之轉染效率。

在某些態樣中，藉由病毒轉導將一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)引入至生產細胞。多種病毒可用作基因轉移媒介，包括莫洛尼鼠類白血病病毒(moloney murine leukemia virus，MMLV)、腺病毒、腺相關病毒(AAV)、單純疱疹病毒(HSV)、慢病毒及泡沫病毒。病毒介導之基因轉移媒介包含基於DNA病毒(諸如腺病毒、腺相關病毒及疱疹病毒)之載體，以及基於反轉錄病毒之載體。

在某些態樣中，藉由電穿孔將一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)引入至生產細胞。電穿孔在細胞膜中產生瞬時孔，此容許將各種分子引入至細胞中。在一些態樣中，可藉由電穿孔將DNA及RNA以及多肽及非多肽治療劑引入至生產細胞中。

在某些態樣中，藉由顯微注射將一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)引入至生產細胞。在一些態樣中，可使用玻璃微量吸量管在微觀層面上將一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)注射至生產細胞中。

在某些態樣中，藉由擠壓將一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)引入至生產細胞。

在某些態樣中，藉由音波處理將一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)引入至生產細胞。在一些態樣中，使生產細胞暴露於高強度聲波，此引起細胞膜之瞬時破壞，從而容許裝載一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)。

在某些態樣中，藉由細胞融合將一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)引入至生產細胞。在一些態樣中，藉由電細胞融合引入一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)。在其他態樣中，使用聚乙二醇(PEG)來融合生產細胞。在其他態樣中，使用仙台病毒(sendai virus)來融合生產細胞。

在一些態樣中，藉由低滲溶解將一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)引入至生產細胞。在此等態樣中，可使生產細胞暴露於低離子強度緩衝液，此使其破裂，從而容許裝載一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)。在其他態樣中，在低滲溶液中之受控透析可用於使生產細胞溶脹且在生產細胞膜中產生孔。隨後使生產細胞暴露於容許膜重新密封之條件下。

在一些態樣中，藉由清潔劑處理將一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)引入至生產細胞。在某些態樣中，利用溫和清潔劑處理生產細胞，該溫和清潔劑藉由產生孔而使生產細胞膜短暫受損，從而容許裝載一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)。在生產細胞中裝載後，將清潔劑洗掉，藉此使膜重新密封。

在一些態樣中，藉由受體介導之胞吞作用將一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)引入至生產細胞。在某些態樣中，生產細胞具有表面受體，該表面受體在結合一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)時誘導該受體及所締合部分之內化。

在一些態樣中，藉由過濾將一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)引入至生產細胞。在某些態樣中，可迫使生產細胞及一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)穿過孔徑小於生產細胞之過濾器，此引起生產細胞膜之瞬時破壞且容許該一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)進入生產細胞。

在一些態樣中，使生產細胞經受若干次冷凍解凍循環，此導致細胞膜破壞，從而容許裝載一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)。VI.B 修飾 EV ( 例如胞外體 ) 之方法

在一些態樣中，產生EV (例如胞外體)之方法包括藉由將一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)直接引入至EV (例如胞外體)中來修飾經分離之EV (例如胞外體)。在某些態樣中，該一或多個部分包含抗原、佐劑、免疫調節劑、靶向部分或其組合。在一些態樣中，該一或多個部分包含本文所揭示之支架部分(例如支架X或支架Y)。

在某些態樣中，藉由轉染將一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)引入至EV (例如胞外體)。在一些態樣中，可使用諸如陽離子脂質及聚合物等合成大分子將一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)引入至EV (例如胞外體)中(Papapetrou等人，Gene Therapy 12: S118-S130 (2005))。在某些態樣中，可使用諸如磷酸鈣、環糊精或聚凝胺等化學品將一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)引入至EV (例如胞外體)。

在某些態樣中，藉由電穿孔將一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)引入至EV (例如胞外體)。在一些態樣中，使EV (例如胞外體)暴露於電場，此在EV (例如胞外體)膜中引起瞬時洞，從而容許裝載一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)。

在某些態樣中，藉由顯微注射將一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)引入至EV (例如胞外體)。在一些態樣中，可使用玻璃微量吸量管在微觀層面上將一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)直接注射至EV (例如胞外體)中。

在某些態樣中，藉由擠壓將一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)引入至EV (例如胞外體)。

在某些態樣中，藉由音波處理將一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)引入至EV (例如胞外體)。在一些態樣中，使EV (例如胞外體)暴露於高強度聲波，此引起EV (例如胞外體)膜之瞬時破壞，從而容許裝載一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)。

在一些態樣中，可使一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)結合至EV (例如胞外體)之表面(亦即結合或直接連接至EV之外表面或EV之腔表面)。結合可藉由此項技術中已知之方法以化學或酶促方式達成。

在一些態樣中，EV (例如胞外體)包含一或多個以化學方式結合之部分(例如有效載荷及/或靶向部分)。化學結合可藉由在使用或不使用連接體之情形下將一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)共價鍵結至另一分子來完成。此等結合物之形成係在技術人員之能力範圍內，且已知用於實現結合之各種技術，其中特定技術之選擇係由欲結合之材料指導。在某些態樣中，將多肽結合至EV (例如胞外體)。在一些態樣中，將非多肽(諸如脂質、碳水化合物、核酸及小分子)結合至EV (例如胞外體)。

在一些態樣中，藉由低滲溶解將一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)引入至EV (例如胞外體)。在此等態樣中，可使EV (例如胞外體)暴露於低離子強度緩衝液，此使其破裂，從而容許裝載一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)。在其他態樣中，在低滲溶液中之受控透析可用於使EV (例如胞外體)溶脹且在EV (例如胞外體)膜中產生孔。隨後使EV (例如胞外體)暴露於容許膜重新密封之條件下。

在一些態樣中，藉由清潔劑處理將一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)引入至EV (例如胞外體)。在某些態樣中，利用溫和清潔劑處理細胞外囊泡，該溫和清潔劑藉由產生孔而使EV (例如胞外體)膜短暫受損，從而容許裝載一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)。在EV (例如胞外體)中裝載後，將清潔劑洗掉，藉此使膜重新密封。

在一些態樣中，藉由受體介導之胞吞作用將一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)引入至EV (例如胞外體)。在某些態樣中，EV (例如胞外體)具有表面受體，該表面受體在結合一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)時誘導該受體及所締合部分之內化。

在一些態樣中，藉由機械發射將一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)引入至EV (例如胞外體)。在某些態樣中，可利用一或多個連接至重的或帶電粒子(諸如金微載體)之部分(例如有效載荷及/或靶向部分)來轟擊細胞外囊泡。在該等態樣中之一些態樣中，可對粒子進行機械或電加速，使得其穿過EV (例如胞外體)膜。

在一些態樣中，使細胞外囊泡(例如胞外體)經受若干次冷凍解凍循環，此導致EV (例如胞外體)膜破壞，從而容許裝載一或多個部分(例如有效載荷及/或靶向部分)。VI.C 分離 EV ( 例如胞外體 ) 之方法

在一些態樣中，產生本文所揭示EV (例如胞外體)之方法包括自生產細胞分離EV (例如胞外體)。在某些態樣中，EV (例如胞外體)由生產細胞釋放至細胞培養基中。預期所有已知之分離EV (例如胞外體)之方式均視為適用於本文。舉例而言，可採用EV (例如胞外體)之物理性質來將其自培養基或其他來源材料分離，包括基於電荷(例如電泳分離)、大小(例如過濾、分子篩分等)、密度(例如常規離心或梯度離心)、斯維德貝格(Svedberg)常數(例如在有或沒有外力情形下之沈降等)之分離。或者或另外，分離可基於一或多種生物性質，且包括可採用表面標記物之方法(例如用於沈澱、可逆結合至固相、FACS分離、特異性配位體結合、非特異性配位體結合、親和純化等)。

分離及富集可以一般及非選擇性方式進行，通常包括連續離心。或者，分離及富集可以更特異及選擇性之方式進行，諸如使用EV (例如胞外體)或生產細胞特異性表面標記物。舉例而言，特異性表面標記物可用於免疫沈澱、FACS分選、親和純化及利用珠粒結合配位體之磁力分離中。

在一些態樣中，可利用粒徑篩析層析來分離EV (例如胞外體)。粒徑篩析層析技術為此項技術中所已知。本文提供例示性之非限制性技術。在一些態樣中，分離空隙體積部分且其包含相關EV (例如胞外體)。此外，在一些態樣中，如此項技術中所通常已知，可在層析分離後藉由(一或多個層析級分)之離心技術進一步分離EV (例如胞外體)。在一些態樣中，舉例而言，可利用密度梯度離心來進一步分離細胞外囊泡。在某些態樣中，可期望將生產細胞源性EV (例如胞外體)與其他起源之EV (例如胞外體)進一步分離。舉例而言，可藉由使用對生產細胞特異之抗原抗體之免疫吸附捕獲將生產細胞源性EV (例如胞外體)與非生產細胞源性EV (例如胞外體)分離。

在一些態樣中，EV (例如胞外體)之分離可涉及方法之組合，其包括(但不限於)差速離心、基於大小之膜過濾、免疫沈澱、FACS分選及磁力分離。 VII. 治療方法

本揭示案亦提供預防及/或治療有需要個體之疾病或病症之方法，其包括向該個體投與本文所揭示之EV (例如胞外體)。在一些態樣中，可利用本發明方法治療之疾病或病症包含癌症、移植物抗宿主病(GvHD)、自體免疫疾病、傳染病或纖維變性疾病。可利用本揭示案治療之疾病或病症之其他非限制性實例包括耐受性、過敏、特異反應性、疼痛、成癮及其組合。不受任一理論束縛，在一些態樣中，本文所揭示之EV (例如胞外體)可藉由誘導中和性抗體來治療及/或預防該等疾病或病症，該等中和性抗體可特異性結合至與疾病或病症相關之分子(例如成癮：尼古丁(nicotine)；疼痛：CGRP或物質P)。舉例而言，可使用有利於針對調介疼痛之神經肽(諸如物質P、神經生長因子、緩激肽或降血鈣素相關之基因產物(CGRP))進行體液反應之EV (例如胞外體)代替針對該等靶標之被動抗體療法以治療或預防疼痛症候群。最近對用於偏頭痛治療之若干種靶向CGRP之預防性被動抗體療法之監管批准為所提出之體液主動性疫苗方法提供強有力之理論基礎。藉由將非法藥物(諸如尼古丁、古柯鹼(cocaine)、芬太尼(fentanyl)、海洛因(heroin)、甲基安非他命(methamphetamine)及其他非法藥物)化學結合至在EV (例如胞外體)疫苗上表現之蛋白質或其他分子，有可能產生針對該等小分子之抗體反應。此等抗藥物濫用疫苗可限制所濫用物質之腦暴露，藉此降低其產生欣快感及CNS毒性之能力。因此，非法藥物結合之EV與強效TH2定向佐劑組合可為藥物濫用康復提供疫苗治療策略。在一些態樣中，治療係預防性的。在其他態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)用於誘導免疫反應。在其他態樣中，本揭示案之EV (例如胞外體)用於為個體接種疫苗。

在一些態樣中，疾病或病症係癌症。當向患有癌症之個體投與時，在某些態樣中，本揭示案之EV可上調免疫反應且增強個體免疫系統之腫瘤靶向性。在一些態樣中，所治療癌症之特徵在於白血球(T細胞、B細胞、巨噬細胞、樹突細胞、單核球)浸潤至腫瘤微環境中，或所謂的「熱腫瘤 」或「發炎性腫瘤 」。在一些態樣中，所治療癌症之特徵在於低水準或偵測不到水準之白血球浸潤至腫瘤微環境中，或所謂的「冷腫瘤 」或「非發炎性腫瘤 」。在一些態樣中，投與EV (例如胞外體)之量及時間足以將「冷腫瘤」轉化成「熱腫瘤」，亦即該投與使得白血球(諸如T細胞)浸潤至腫瘤微環境中。在某些態樣中，癌症包含膀胱癌、子宮頸癌、腎細胞癌、睪丸癌、結腸直腸癌、肺癌、頭頸癌及卵巢癌、淋巴瘤、肝癌、神經膠母細胞瘤、黑色素瘤、骨髓瘤、白血病、胰臟癌或其組合。換言之，「遠端腫瘤 」或「遠處腫瘤 」係指已自原始(或原發性)腫瘤擴散至遠處器官或遠處組織(例如淋巴結)之腫瘤。在一些態樣中，本揭示案之EV治療轉移擴散後之腫瘤。

在一些態樣中，疾病或病症係移植物抗宿主病(GvHD)。在一些態樣中，可利用本揭示案治療之疾病或病症係自體免疫疾病。自體免疫疾病之非限制性實例包括：多發性硬化、外周神經炎、薛格連氏症候群(Sjogren's syndrome)、類風濕性關節炎、脫髪、自體免疫胰臟炎、貝賽特氏病(Behcet's disease)、大疱性類天疱瘡、乳糜瀉、德維克氏病(Devic's disease)(視神經脊髓炎)、腎小球性腎炎、IgA腎病變、混雜性血管炎、硬皮症、糖尿病、動脈炎、白斑病、潰瘍性結腸炎、腸易激症候群、牛皮癬、眼色素層炎、全身性紅斑狼瘡、格雷氏病、重症肌無力、尋常天疱瘡、抗腎小球基底膜病(古巴士德氏症候群)、橋本氏甲狀腺炎、自體免疫性肝炎及其組合。

在一些態樣中，疾病或病症係傳染病。在某些態樣中，疾病或病症係致癌病毒。在一些態樣中，可利用本揭示案治療之傳染病包括(但不限於)人類γ疱疹病毒4 (艾伯斯坦-巴爾病毒)、A型流行性感冒病毒、B型流行性感冒病毒、巨細胞病毒、金黃色葡萄球菌、結核分枝桿菌、沙眼披衣菌、HIV(例如HIV-2)、冠狀病毒(例如COVID-19、MERS-CoV及SARS CoV)、線狀病毒(例如馬爾堡病毒及伊波拉病毒)、釀膿鏈球菌、肺炎鏈球菌、瘧原蟲屬(例如間日瘧原蟲及惡性瘧原蟲)、屈公病病毒、人類乳頭瘤病毒(HPV)、B型肝炎、C型肝炎、人類疱疹病毒8、默克爾細胞多瘤病毒(MCV)、布尼亞病毒(例如漢坦病毒)、沙粒病毒(例如LCMV及賴薩病毒)、黃病毒(例如登革熱、茲卡病毒、日本腦炎、西尼羅河病毒及黃熱病)、腸病毒(例如小兒麻痺症)、星狀病毒(例如胃腸炎)、彈狀病毒科(例如狂犬病)、伯氏疏螺旋體及梅氏疏螺旋體(例如萊姆病)、單純疱疹病毒2 (HSV2)、克雷伯氏菌屬、綠膿桿菌、腸球菌屬、變形桿菌屬、腸桿菌屬、放線菌屬、凝固酶陰性葡萄球菌(CoNS)、黴漿菌屬或其組合。

在一些態樣中，疾病或病症包括疼痛。如本文所用，術語「疼痛」係指所有類別之疼痛，包括(但不限於)神經病性疼痛、發炎性疼痛、傷害感受性疼痛、特發性疼痛、神經病變性疼痛、頜面疼痛、燒傷痛、灼口症候群、軀體疼痛、內臟疼痛、肌筋膜疼痛、牙痛、癌症疼痛、化學療法疼痛、創傷疼痛、手術疼痛、手術後疼痛、分娩疼痛、陣痛、反射性交感神經營養不良、臂叢神經撕脫、神經性膀胱障礙、急性疼痛(例如肌肉骨骼及手術後疼痛)、慢性疼痛、持續性疼痛、外周介導之疼痛、中樞介導之疼痛、慢性頭痛、偏頭痛、家族性偏癱性偏頭痛、與頭痛相關之疾患、竇性頭痛、緊張性頭痛、幻肢痛、周圍神經損傷、中風後疼痛、丘腦損傷、神經根病變、HIV (例如HIV-1、HIV-2)疼痛、疱疹後疼痛、非心源性胸痛、腸易激症候群以及與腸病症及消化不良相關之疼痛、與麻醉藥物成癮戒斷相關之疼痛及其組合。

在一些態樣中，疾病或病症包括過敏。如本文所用，術語「過敏」係指對通常無害之物質(「過敏原 」)發生免疫介導之不良反應之獲得性潛能。過敏之非限制性實例包括濕疹、過敏性鼻炎或鼻傷風、花粉熱、結膜炎、支氣管或過敏性氣喘、蕁麻疹(urticaria、hives)、食物過敏、異位性皮膚炎、藥物過敏、血管性水腫、過敏性結膜炎、超敏性及其組合。在某些態樣中，可利用本揭示案治療之過敏係由食物過敏原(例如花生、乳品、蛋、貝類及樹堅果)引起的(亦即食物過敏)。在一些態樣中，可利用本揭示案治療之過敏係由環境過敏原(例如貓皮屑、豚草、草花粉、屋塵蟎、蜂毒、乳膠及野葛)引起的。

本揭示案之EV (例如胞外體)可藉由此項技術中已知之任何可用方法及/或途徑投與個體。在一些態樣中，將EV (例如胞外體)靜脈內投與至個體之循環系統。在一些態樣中，將EV (例如胞外體)於適宜液體中輸注且投與至個體之靜脈中。

在一些態樣中，將EV (例如胞外體)動脈內投與至個體之循環系統。在一些態樣中，將EV (例如胞外體)於適宜液體中輸注且投與至個體之動脈中。

在一些態樣中，藉由鞘內投與向個體投與EV (例如胞外體)。在一些態樣中，經由注射至椎管中或蛛網膜下空間中來投與EV (例如胞外體)，使得其到達腦脊髓液(CSF)。

在一些態樣中，將EV (例如胞外體)腫瘤內投與至個體之一或多個腫瘤中。

在一些態樣中，藉由鼻內投與向個體投與EV (例如胞外體)。在一些態樣中，可以局部投與或全身投與之形式經由鼻吹入EV (例如胞外體)。在某些態樣中，EV (例如胞外體)係以鼻用噴霧形式投與。在一些態樣中，鼻內投與可容許本文所揭示之EV (例如胞外體)有效遞送至胃腸組織(例如參見實例20)。遞送至胃腸組織之此等EV (例如胞外體)可用於提供針對各種腸相關病原體之保護。

在一些態樣中，藉由腹膜內投與向個體投與EV (例如胞外體)。在一些態樣中，將EV (例如胞外體)於適宜液體中輸注且注射至個體之腹膜中。在一些態樣中，腹膜內投與使得EV (例如胞外體)分佈至淋巴管。在一些態樣中，腹膜內投與使得EV (例如胞外體)分佈至胸腺、脾臟及/或骨髓。在一些態樣中，腹膜內投與使得EV (例如胞外體)分佈至一或多個淋巴結。在一些態樣中，腹膜內投與使得EV (例如胞外體)分佈至頸部淋巴結、腹股溝淋巴結、縱膈淋巴結或胸骨淋巴結中之一或多者。在一些態樣中，腹膜內投與使得EV (例如胞外體)分佈至胰臟。

在一些態樣中，藉由眼內投與(例如眼周投與)向個體投與EV (例如胞外體)。在一些態樣中，將EV (例如胞外體)注射至眼周組織中。眼周藥物投與包括以下途徑：結膜下、前部特農囊(Tenon)下、後部特農囊下及眼球後投與。

可用於投與本文所揭示EV (例如胞外體)之其他投與途徑之非限制性實例包括非經腸、局部、經口、皮下、真皮內、經皮、經直腸、腹膜內、肌內、舌下或其組合。

如本文所揭示，在一些態樣中，本文所揭示之EV (例如胞外體)可與一或多種其他治療劑組合投與個體。在某些態樣中，同時投與一或多種其他治療劑及EV (例如胞外體)。在一些態樣中，依序投與一或多種其他治療劑及EV (例如胞外體)。在一些態樣中，在投與一或多種其他治療劑之前向個體投與EV (例如胞外體)。在某些態樣中，在投與一或多種其他治療劑之後向個體投與EV (例如胞外體)。如本文所用，術語「治療劑 」係指可用於治療本文所揭示之疾病或病症之任何劑(例如用於治療癌症之化學療法或免疫檢查點抑制劑(例如抗PD-1抗體))。在一些態樣中，可與本揭示案之EV (例如胞外體)組合使用之一或多種其他治療劑包括不在EV (例如胞外體)中表現之有效載荷(例如抗原、佐劑及/或免疫調節劑)。舉例而言，本文所揭示之治療方法可包括向有需要之個體投與(i)無抗原EV (例如胞外體)及(ii)不在EV中表現之抗原(例如可溶性抗原)。

在一些態樣中，可利用本揭示案治療之個體係人類。在一些態樣中，個體係非人類哺乳動物(例如非人類靈長類動物、狗、貓、天竺鼠、兔、大鼠、小鼠、馬、牛、雞、鳥及熊)。因此，在一些態樣中，本文所揭示之EV (例如胞外體)可用於改善動物(亦即非人類哺乳動物)之健康。

除非另外指示，否則本揭示案之實踐將採用細胞生物學、細胞培養、分子生物學、基因轉殖生物學、微生物學、重組DNA及免疫學之習用技術，該等技術為熟習此項技術者所熟知。此等技術在文獻中予以充分解釋。例如，參見Sambrook等人編輯，(1989) Molecular Cloning A Laboratory Manual (第2版；Cold Spring Harbor Laboratory Press)；Sambrook等人編輯，(1992) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (Cold Springs Harbor Laboratory, NY)；D. N. Glover編輯，(1985) DNA Cloning，第I卷及第II卷；Gait編輯，(1984) Oligonucleotide Synthesis；Mullis等人，美國專利第4,683,195號；Hames及Higgins編輯，(1984) Nucleic Acid Hybridization；Hames及Higgins編輯，(1984) Transcription And Translation；Freshney (1987) Culture Of Animal Cells (Alan R. Liss, Inc.)；Immobilized Cells And Enzymes (IRL Press) (1986)；Perbal (1984) A Practical Guide To Molecular Cloning; the treatise, Methods In Enzymology (Academic Press, Inc., N.Y.)；Miller及Calos編輯，(1987) Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells, (Cold Spring Harbor Laboratory)；Wu等人編輯，Methods In Enzymology，第154卷及第155卷；Mayer及Walker編輯，(1987) Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology (Academic Press, London)；Weir及Blackwell編輯，(1986) Handbook Of Experimental Immunology，第I卷至第IV卷；Manipulating the Mouse Embryo, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., (1986)；Crooke，Antisense drug Technology: Principles, Strategies and Applications，第2版CRC Press (2007)及Ausubel等人，(1989) Current Protocols in Molecular Biology (John Wiley and Sons, Baltimore, Md.)。

上文所引用之所有參考文獻以及本文所引用之所有參考文獻均係以全文引用的方式併入本文中。

以下實例係以說明方式而非限制方式提供。實例實例1：工程改造胞外體之產生

為產生本文所闡述之胞外體，使用人類胚腎(HEK)細胞株(HEK293SF)。接著利用連接至相關劑(例如抗原、佐劑或免疫調節劑)之支架X及/或支架Y穩定地轉染細胞。參見圖1A、圖1B及圖2。舉例而言，藉由利用CD40L-GFP PTGFRN融合分子轉染HEK293SF細胞來產生表現CD40L之胞外體，該等融合分子表現為單體(pCB-518至pCB-526)或強制三聚體(pCB-607及pCB-527)。三聚體CD40L-GFP PTGFRN融合分子之實例示於圖1A中。類似地，為產生表現雞卵白蛋白(OVA)之胞外體，使卵白蛋白在HEK293SF細胞中穩定地表現為與BASP1之胺基酸1至10之融合物(「BASP1(1-10)-OVA」)。

轉染後，經7天使HEK293SF細胞在化學成分確定之培養基中生長至高密度。收集條件化細胞培養基，且在室溫下以300 - 800 x g離心5分鐘以去除細胞及大碎片。接著向培養基上清液中補充1000 U/L BENZONASE^® ，且於水浴中在37℃下培育1小時。收集上清液，且在4℃下以16,000 x g離心30分鐘以去除殘餘細胞碎片及其他大的污染物。接著使上清液在4℃下以133,900 x g超離心3小時以使胞外體沈澱。棄掉上清液，且自管底部吸出任何殘餘培養基。將沈澱物重新懸浮於200 - 1000 µL PBS (-Ca -Mg)中。

為進一步富集胞外體群體，經由密度梯度純化(蔗糖或OPTIPREP^™ )處理沈澱物。

在置於SW 41 Ti轉子中之12 mL Ultra-Clear (344059)管中，使梯度在4℃下以200,000 x g旋轉16小時以分離胞外體級分。

自頂層輕輕地移除胞外體層且使其在38.5 mL Ultra-Clear (344058)管中稀釋於約32.5 mL PBS中，且再次在4℃下以133,900 x g超離心3小時以使經純化之胞外體沈澱。將所得沈澱物重新懸浮於最少體積之PBS (約200 µL)中且在4℃下儲存。

對於OPTIPREP^™ 梯度，在SW 41 Ti轉子之12 mL Ultra-Clear (344059)管中，利用等體積之10%、30%及45% OPTIPREP^™ 製備3層無菌梯度。將沈澱物添加至OPTIPREP^™ 梯度，且在4℃下以200,000 x g超離心16小時以分離胞外體級分。接著自管頂部約3 mL輕輕地收集胞外體層。

於38.5 mL Ultra-Clear (344058)管中將胞外體級分稀釋於約32 mL PBS中，且在4℃下以133,900 x g超離心3小時以使經純化之胞外體沈澱。接著將沈澱之胞外體重新懸浮於最少體積之PBS (約200 µL)中，且在4℃下儲存直至準備使用。實例2：工程改造胞外體誘導抗原特異性T細胞反應之效能

為評價本文所揭示之胞外體誘導免疫反應之能力，將表現OVA-支架Y且裝載有STING促效劑CL656之工程改造胞外體(「Py-OVA-exoSTING」)靜脈內或鼻內投與小鼠。投與後1週，藉由對分別靜脈內或鼻內投與後脾臟及血液或肺及脾臟之酶促解離，經由流式細胞術及/或IFN-γ ELISPOT分析二者評價對OVA有反應之CD8+ T細胞之頻率。對照動物接受以下中之一者：(i)腹膜內注射之抗CD40抗體與可溶性OVA蛋白(不係胞外體之一部分)之組合(「IP aCD40+OVA」)；(ii) cAIM(PS)2 Difluor (Rp/Sp) (「CL656」；STING促效劑)與可溶性OVA蛋白(不係胞外體之一部分)之組合(「CL656+OVA」)；(iii)僅過表現支架X且裝載有STING促效劑之胞外體與可溶性OVA蛋白(OVA不係胞外體之一部分)之組合(「Px-exoSTING + OVA」)；及(iv)僅表現OVA-支架Y融合蛋白之胞外體(「Py-OVA」)。

如圖3A及圖3B中所示，在不同治療組中，接受Py-OVA-exoSTING胞外體之靜脈內投與之動物在脾臟及PBMC二者中均具有最大數量之OVA特異性CD8 T細胞。當鼻內投與該等不同治療方案時，觀察到相似結果。(參見圖4A及圖4B之流式細胞術分析及圖5A及圖5B之ELISPOT結果)。該等結果展示，本文所揭示之胞外體(亦即包含OVA-支架Y二者且裝載有STING促效劑)可用於誘導針對相關抗原(例如腫瘤或微生物抗原)之強勁免疫反應。實例3：工程改造胞外體誘導免疫耐受性之效能

為評價本文所揭示胞外體之致耐受性潛能，將構築包含與自體免疫疾病相關之抗原(例如β細胞蛋白質(I型糖尿病)、髓鞘少突膠質細胞糖蛋白(MOG，多發性硬化)或滑液蛋白質(類風濕性關節炎))之工程改造胞外體。如同實例2，抗原將連接至本文所闡述之支架Y蛋白。一些工程改造胞外體將進一步包含NFkB抑制類之免疫調節劑，諸如雷帕黴素及/或其衍生物。該等免疫調節劑將在胞外體中表現為連接至支架X蛋白(例如本文所闡述之彼等免疫調節劑)或外源性地裝載至胞外體中。

將上述工程改造胞外體投與給遲發型超敏反應(DTH)或實驗性自體免疫性腦脊髓炎(EAE)之實驗動物模型。接著，使用諸如流式細胞術及ELISPOT分析等分析來評價動物對靶抗原之致耐受性/調控性T細胞反應。實例4：工程改造胞外體與其他抗原-佐劑組合在誘導免疫反應中之比較

將本文所揭示之工程改造胞外體誘導OVA特異性免疫反應(T及B細胞二者)之能力(例如參見實例2)與其他已知抗原-佐劑組合進行比較。具體而言，將針對以下抗原-佐劑組合進行面對面的直接比較：利用可溶性OVA (抗原)及單磷醯脂質A (MPLA)、角鯊烯水乳液(AddaVax™)、基於皂素之疫苗(Quil-A®)、不完全弗氏佐劑(incomplete Freund's adjuvant，IFA)及/或聚肌胞苷酸(聚I:C)進行疫苗接種。

將對以下終點進行分析：(i)在單次投與後一週以及加強投與(兩個劑量，間隔兩週)後一週所誘導之T細胞亞群之分佈，亦即OVA反應性CD8及CD4 T細胞%；(ii) T細胞效應分析：同上，但檢查CD4及CD8區室中之T細胞反應類型。時間點將與上述時間點相同，且分析將係藉由流式之細胞內細胞介素染色(ICS)；及(iii)加強投與(第2劑)後一週之體液反應：此將係藉由ELISA或生物層干涉術(BLI)對血清中OVA特異性抗體及抗體類別之分析，以及基於流式之對B細胞對生物素化全OVA抗原之反應性之分析。實例5：腔抗原之劑量反應分析

將進行劑量反應分析以確定本文所揭示之工程改造胞外體產生有效免疫反應所需之最低抗原量。該研究將比較裝載等量CL656及漸減量之Py-OVA與漸增量之Py-GFP之Py-OVA:Py-GFP混合物(亦即表現OVA及GFP之胞外體，OVA及GFP二者均連接至支架Y蛋白)。參見表10 (下文)。

如實例2中所闡述，在投與後大約一週，將動物處死且使用流式細胞術及/或ELISPOT分析評價各種組織(例如脾臟、肺、血液)中之抗原特異性免疫反應。實例6：投與途徑對誘導免疫反應之效應

將對若干個劑量之Py-OVA-exoSTING (參見實例2)在鼻內、靜脈內、皮下、腹膜內及肌內投與後之數據進行比較。終點分析將包括在單次及雙次(間隔兩週)投與後一週之脾臟及循環(PBMC) OVA反應性CD4及CD8 T細胞。實例7：黏膜歸巢之誘導

為評價本文所揭示之胞外體在黏膜組織內誘導免疫反應之能力，向雌性小鼠鼻內投與Py-OVA-exoSTING (參見實例2)。在一個或兩個劑量之後，雌性小鼠將受到陰道內投與MPLA及角鯊烯之誘導之攻擊。陰道內攻擊後5天，採集生殖道且評價OVA特異性CD4及CD8 T細胞之募集。實例8：在靜脈內或鼻內疫苗接種後之組織駐留記憶T細胞反應

為更佳地表徵本文所揭示之工程改造胞外體誘導循環及/或組織駐留記憶T細胞之能力，如實例2中所闡述，向動物投與Py-OVA-exoSTING。在投與後一週，對肺(來自接受鼻內投與之動物)及/或肝(來自接受靜脈內投與之動物)進行處理且進行循環及/或組織駐留記憶T細胞分析。實例9：針對人類疱疹病毒2 (HSV2)之治療性疫苗接種

將利用以下中之一者對HSV2感染之小鼠模型(其中動物患有生殖器HSV2感染)進行鼻內治療：(i)表現連接至支架Y之HSV2抗原且裝載有STING促效劑之胞外體(「Py-HSV2-exoSTING」)、(ii)表現連接至支架Y之OVA抗原且裝載有STING促效劑之胞外體(「Py-OVA-exoSTING」)或ACYCLOVIR™。Py-HSV2-exoSTING 構築體將表現兩種至三種不同的HSV2抗原。終點將量測1或2個(每兩週一次)劑量之不同治療方案後之病毒脫落及麻痹。實例10：針對人類疱疹病毒2 (HSV2)之預防性疫苗接種

使用實例9中所闡述之胞外體構築體，以鼻內方式對未經治療過的小鼠進行一次或兩次(每兩週一次)疫苗接種，且在最後一次投與後一週利用HSV2進行陰道內攻擊。終點將包括對直至攻擊後三週之病毒脫落及麻痹之量測。實例11：針對荷有EG7-OVA腫瘤之小鼠的治療性疫苗接種

小鼠將接種皮下EG7-OVA腫瘤。當腫瘤達到50 mm³ 時，以鼻內、靜脈內或皮下方式利用Py-OVA-exoSTING (參見實例2)或適當對照對小鼠進行疫苗接種。終點將係以腫瘤生長抑制(TGI)表示之腫瘤生長之量度。實例12：利用CD40L-Px:Py-OVA-exoSTING與Py-OVA-exoSTING進行疫苗接種之比較

將Py-OVA-exoSTING誘導免疫反應之能力(參見實例2)與表現(i)連接至支架X之CD40L、(ii)連接至支架Y之OVA及(iii)裝載有STING促效劑之胞外體(「CD40L-Px:Py-OVA-exoSTING」)進行直接比較。如實例2中所闡述，將胞外體投與給未經治療過的動物，且接著在投與後大約一週評價各種組織中之OVA特異性T細胞反應。實例13：利用抗Clec9a EV (例如胞外體)進行疫苗接種

亦在動物模型中評價裝載有STING促效劑且表現抗Clec9a部分之OVA表現EV (例如胞外體) (「抗Clec9a EV」)誘導免疫反應之能力。圖6提供所提出之實驗設計之示意圖。將利用以下中之一者對動物進行治療：(i)裝載有STING促效劑且表現對照同型抗體之OVA表現EV (例如胞外體)；(ii)僅表現對照同型抗體之OVA表現EV (例如胞外體)；(iii)裝載有STING促效劑且表現抗Clec9a靶向部分之OVA表現EV (例如胞外體)；(iv)表現抗Clec9a靶向部分但不裝載STING促效劑之OVA表現EV (例如胞外體)；及(v)僅表現OVA之EV (例如胞外體)。該等不同治療方案將以鼻內方式投與。接著，將一些動物處死且評價脾臟及肺中之OVA特異性T細胞反應。在初次投與後大約14天，一些動物將接受EV (例如胞外體)之第二次投與。在加強投與後將進一步評價OVA特異性T細胞反應。實例14：利用抗EBV BZLF1 EV (例如胞外體)進行疫苗接種

將根據上文所揭示之方法及實驗設計(例如用BZLF1替代上文所揭示之抗原)，在動物模型中評價裝載有艾伯斯坦-巴爾病毒(EBV) BZLF1抗原之EV (例如胞外體)誘導免疫反應之能力。圖8顯示EV (例如胞外體)之示意圖示，該EV (例如胞外體)含有連接至EV膜之腔表面之BZLF1抗原。實例15：工程改造胞外體誘導效應及記憶T細胞之效能(脾臟)

為進一步表徵在利用本文所揭示之胞外體免疫後所觀察到之T細胞反應(參見實例2)，在小鼠中觀察該等胞外體誘導效應及記憶T細胞二者之能力。簡言之，向小鼠皮下投與表現OVA-支架Y且裝載有STING促效劑CL656之工程改造胞外體(「Py-OVA exoVACC」)。對照動物接受以下中之一者：(i)可溶性OVA (「OVA」)、(ii)可溶性OVA + CL656 (「OVA + STING」)、(iii)僅表現OVA-支架Y融合蛋白之胞外體(「PyOVA」)、(iv)僅表現OVA-支架Y融合蛋白之胞外體+可溶性CL656 (亦即STING促效劑不裝載至胞外體中)(「PyOVA + STING」)及(v)可溶性OVA +氫氧化鋁佐劑(「OVA +氫氧化鋁」)。

投與後兩週，將一些動物處死，且使用IFN-γ ELISPOT分析評價脾臟中OVA特異性T細胞(CD4+及CD4+ T細胞二者)之頻率。為誘導IFN-γ產生，在活體外利用對CD4+及CD8+ T細胞具有特異性之OVA肽刺激脾細胞。其餘動物利用相同治療方案進行加強免疫(亦即再次免疫)。接著，在初次免疫後第28天(或在加強免疫後第14天)，將動物處死，且亦使用IFN-γ ELISPOT分析評價脾臟中OVA特異性T細胞(CD4+及CD4+ T細胞二者)之頻率。

如圖9A及圖9B中所示，在單次皮下投與後，接受Py-OVA exoVACC胞外體之動物在脾臟中具有最大數量之OVA特異性CD4+及CD8+ T細胞。接受Py-OVA exoVACC胞外體之動物在加強免疫後，CD4+及CD8+ T細胞數量之此增加進一步增加。

上述數據與實例2之結果一致，且進一步展示本文所揭示之胞外體(例如表現OVA-支架Y且裝載有STING促效劑CL656之工程改造胞外體)即使在皮下投與時亦可用於誘導強勁之針對相關抗原(例如腫瘤或微生物抗原)之效應及記憶T細胞。實例16：工程改造胞外體誘導效應及記憶T細胞之效能(肺)

為評價實例15之結果是否亦在其他組織(例如黏膜組織)中觀察到，經由鼻內投與向小鼠投與表現OVA-支架Y且裝載有STING促效劑CL656之工程改造胞外體(「Py-OVA exoVACC」)。在免疫後第7天，將一些動物處死，且使用流式細胞術評價肺中OVA特異性CD8+ T細胞之頻率。其餘小鼠則利用第二次投與Py-OVA exoVACC進行加強免疫。一週後(亦即初次免疫後第14天)將該等動物處死，且使用流式細胞術評價肺中OVA特異性CD8+ T細胞之頻率。在該兩個時間點，將OVA特異性CD8+ T細胞進一步分類為效應記憶(CD44+及CD62L-)或駐留記憶(CD44+、CD62L-及CD103+) T細胞。

如圖10中所示，在單次鼻內投與Py-OVA exoVACC後，在經治療動物之肺中觀察到強勁之OVA特異性效應記憶CD8+ T細胞。在加強免疫後，OVA特異性CD8+ T細胞之數量進一步增加，從而產生強勁之效應及記憶CD8+ T細胞。

為評價本文所揭示之EV (例如胞外體)是否亦可產生強勁之駐留記憶CD4+ T細胞，經由鼻內投與以下中之一者向小鼠進行投與：(i)可溶性OVA (「OVA」)、(ii)僅表現OVA-支架Y融合蛋白之胞外體(「PyOVA」)、(iii)表現OVA-支架Y且裝載有STING促效劑CL656之胞外體(「Py-OVA exoVACC」)、(iv)可溶性OVA +可溶性聚I:C (「OVA +聚I:C」)及(v)僅表現OVA-支架Y融合蛋白之胞外體+可溶性聚I:C (「PyOVA +聚I:C」)。在初次免疫後第7天，動物接受相同治療之第二次投與。一週後(亦即初次免疫後第14天)接著將動物處死，且使用流式細胞術評價肺中OVA特異性CD8+ T細胞之頻率。

與上述結果一致，經Py-OVA exoVACC治療之動物在肺內展現強勁之駐留記憶CD8+ T細胞(圖13A、圖13B及圖13C)。對於駐留記憶CD4+ T細胞，觀察到相似結果。

總體而言，上述數據進一步展示本文所揭示之胞外體(例如表現OVA-支架Y且裝載有STING促效劑CL656之工程改造胞外體)誘導強勁之效應及記憶T細胞(CD8+及CD4+二者)之效力，包括在黏膜組織(例如肺)中。實例17：抗Clec9a表現EV (例如胞外體) 之向性分析

繼上文所闡述實例13，對EV (例如胞外體)進行工程改造以表現與其表面上之支架X蛋白連接之抗Clec9a抗體片段(「抗Clec9a EV」)。如同在先前實例中，抗Clec9a EV裝載有STING促效劑CL656。

將抗Clec9a EV投與給小鼠，且評價該等抗Clec9a EV之細胞特異性向性。對照動物接受僅PBS (「PBS」)或僅表現支架X蛋白之胞外體(「PrX EV」)。如圖11A中所示，脾臟內之常規樹突細胞1 (「cDC1」)群體優先攝取抗Clec9a EV。在所分析之其他樹突細胞(亦即常規DC 2 (「cDC2」)及漿細胞樣DC (「pDC」))中，與對照胞外體(PrX EV)相比，抗Clec9a EV之攝取無明顯差異。

接下來，為進一步評價抗Clec9a EV至cDC1之增強向性之效果，在活體外利用抗Clec9a EV刺激脾臟樹突細胞(自野生型小鼠分離)，且評價DC內之STING活性。利用不同濃度之抗Clec9a EV (亦即0.4 nM、1 nM或4 nM)刺激DC。利用以下中之一者刺激對照組中之DC：(i)可溶性STING促效劑(「游離STING」)、(ii)僅表現支架X蛋白(亦即無抗Clec9a抗體片段)且裝載有STING促效劑之EV (例如胞外體) (「PrX-STING」)及(iii)表現非相關抗體且裝載有STING促效劑之EV (例如胞外體) (「同型-STING」)。藉由量測不同DC所產生的IL-12之量來評價STING活性。如圖11B中所示，與其他組(包括利用PrX-STING處理之DC)相比，經抗Clec9a EV處理之經分離DC產生顯著更大量之IL-12。

上述結果展示，表現抗Clec9a靶向部分之EV (例如胞外體)可優先靶向Clec9a表現細胞，諸如cDC1，且此增強之向性可有助於增加樹突細胞之活化。如本揭示案中所闡述，此等能力在疫苗接種之情形中可係有用的。實例18：投與途徑對誘導免疫反應之效應

繼上文所提供之實例6，進一步評價投與途徑對本文所揭示之EV (例如胞外體)誘導免疫反應之能力之效應。簡言之，經由以下投與途徑中之一者向小鼠投與表現OVA-支架Y且裝載有STING促效劑CL656之工程改造胞外體(「Py-OVA exoVACC」) (1 µg OVA)：(i)靜脈內(「IV」)、(ii)鼻內(「IN」)及(iii)皮下(「SQ」)。作為比較，一些小鼠接受可溶性OVA於市售調配物(ADDAVAX^™ , InvioGen)中之皮下投與(「SubQ AV」)。在免疫後第7天，將所有動物處死，分離脾細胞，且經由流式細胞術評價OVA特異性效應記憶CD8+ T細胞(CD44+及CD62L-)之頻率。

如圖12A及圖12B中所示，無論投與途徑如何，Py-OVA exoVACC均能夠在動物中誘導強勁之OVA特異性效應記憶CD8+ T細胞，尤其是在與使用市售調配物遞送之OVA相比時。該等結果進一步證實本文所揭示之EV (例如胞外體)之效能，且展示無論投與途徑如何，該等EV均可用於誘導強勁之免疫反應。實例19：Py-OVA exoVACC EV (例如胞外體)之抗腫瘤效應

繼上文所提供之實例11，在小鼠模型中評價本文所揭示之EV (例如胞外體)誘導抗腫瘤免疫反應之能力。簡言之，利用以下中之一者治療小鼠：(i)經由鼻內投與表現OVA-支架Y且裝載有STING促效劑CL656之胞外體(「Py-OVA exoVACC」) (「exoVACC (IN)」)、(ii)經由皮下投與表現OVA-支架Y且裝載有STING促效劑CL656之胞外體(Py-OVA exoVACC) (「exoVACC (SQ)」)、(iii)經由鼻內投與可溶性OVA +可溶性聚I:C (「OVA +聚I:C (IN)」)及(iv)經由皮下投與可溶性OVA +可溶性聚I:C (「OVA +聚I:C (IN)」)。參見圖14A。使用未經治療或僅經PBS治療之動物作為對照。接著，在免疫後第7天，將EG7-OVA腫瘤細胞皮下植入至所有動物中。接著，在至少30天之時程內監測動物之腫瘤體積及存活二者。

如圖14B、圖14C、圖14D及圖14F中所示，未經治療或經OVA +聚I:C治療(鼻內及皮下投與)之動物未能控制腫瘤，且在腫瘤植入後約第30天死於該疾病。然而，在接受exoVACC之投與之動物中，觀察到改良之抗腫瘤免疫反應。在exoVACC (SQ)組中，25%的動物有效地控制腫瘤且存活至實驗結束(圖14B及圖14E)。在exoVACC (IN)組中，50%的動物產生有效之針對EG7腫瘤細胞之抗腫瘤免疫反應(圖14B及圖14G)。如圖14H中所示，抗腫瘤免疫反應之改良與腫瘤生長速率之降低相關。在單獨之獨立實驗中，來自exoVACC (SQ)組及exoVACC (IN)組二者之動物中有較大百分比控制腫瘤生長，且在整個實驗持續時間中存活(參見圖14L、圖14M及圖14N)。

上述結果展示，本文所揭示之EV (例如胞外體)可用作用於治療某些癌症之疫苗。實例20：Py-OVA exoVACC EV (例如胞外體)在鼻內投與後誘導腸系膜淋巴結中之抗原特異性T細胞之能力

為進一步評價本文所揭示之EV (例如胞外體)誘導黏膜免疫反應之能力，在鼻內投與Py-OVA exoVACC (亦即表現OVA-支架Y且裝載有STING促效劑CL656之工程改造胞外體) (參見圖15A中之「組5」)後，評價腸系膜淋巴結(亦即腸引流淋巴結)中抗原特異性T細胞之頻率。對照動物接受以下中之一者：(i)僅表現支架Y之空(亦即無OVA抗原)胞外體(「組1」)；(ii)可溶性OVA (「組2」)；(iii)可溶性OVA +可溶性STING促效劑(「組3」)；或(iv)僅表現OVA-支架Y融合蛋白之胞外體(「組4」)。在疫苗接種後第7天，將動物處死，且使用IFN-γ ELISPOT及/或流式細胞術二者評價OVA特異性CD8+ T細胞之頻率。

如圖15B、圖15C、圖15E及圖15F中所示(且與先前結果一致，例如參見實例2)，與對照動物(例如組1及組4)相比，接受Py-OVA exoVACC之鼻內投與之動物在脾臟及肺二者中具有顯著更大數量之OVA特異性CD4+及OVA特異性CD8+ T細胞。在腸系膜淋巴結中，不同治療組之間未觀察到CD4+ T細胞之顯著差異(參見圖15D，每一組中之左側條形圖)。然而，在經Py-OVA exoVACC治療之動物之腸系膜淋巴結中觀察到OVA特異性CD8+ T細胞數量之顯著增加(參見圖15D，每一組中之右側條形圖)。該等結果證實，本文所揭示之EV (例如胞外體) (例如包含OVA-支架Y且裝載有STING促效劑)在鼻內投與時可用於誘導強勁之黏膜免疫反應。實例21：包含抗原及STING促效劑之支架X工程改造EV (例如胞外體)誘導抗原特異性T細胞反應之效能

為進一步評價本文所揭示之EV (例如胞外體)誘導免疫反應之能力，產生過表現支架X之工程改造EV (例如胞外體) (「支架X工程改造EV」) (例如參見實例1)。將含有馬來醯亞胺連接體之CD8肽(Lama4)及/或CD4肽(Itgb1)交聯至在工程改造EV之表面上表現之支架X。CD8肽具有以下結構：(馬來醯亞胺連接體)-QKISFFDGFE V GFNFRTL QPNGLLFYYT (SEQ ID NO: 379)。加下劃線之胺基酸指示突變。粗體殘基代表CD8+ T細胞抗原決定基。CD4肽具有以下結構：(馬來醯亞胺連接體)-WFYFTYSVNGY NEAIVHVVETPD (SEQ ID NO: 380)。加下劃線之胺基酸指示突變。CD4+ T細胞抗原決定基未知。支架X工程改造EV進一步裝載有STING促效劑(CL656)。接著如圖16A中所示，向小鼠投與支架X工程改造EV。簡言之，動物接受以下中之一者：(i)僅PBS (亦即無EV) (組1)；(ii)僅表現CD8肽(Lama4)之支架X工程改造EV (組2)；(iii)僅表現CD4肽(Itgb1)之支架X工程改造EV (組3)；及(iv)表現CD4肽及CD8肽二者之支架X工程改造EV。經由皮下投與向動物投與支架X工程改造EV，其劑量使得動物將接受相同量之STING促效劑。每一動物接受總計兩個劑量(各劑量間隔一週)之相關治療方案。在第二次投與後第7天，將動物處死，且使用IFN-γ ELISPOT評價脾臟中抗原特異性CD4+及CD8+ T細胞之頻率。

如圖16B及圖16C中所示，在分別來自組2 (亦即接受僅表現CD8肽之支架X工程改造EV)及組3 (亦即接受僅表現CD4肽之支架X工程改造EV)之動物中偵測到強勁之Itgb1特異性CD8+ T細胞及Lama4特異性CD4+ T細胞。類似地，向動物投與表現CD4肽及CD8肽二者之支架X工程改造EV產生強烈之抗原特異性CD8+ T細胞及CD4+ T細胞免疫反應。

結果進一步證實，本文所揭示之EV (例如胞外體)可用於誘導針對相關抗原(例如腫瘤)之強勁免疫反應。結果亦展示本文所揭示之EV (例如胞外體)誘導對多種抗原之免疫反應之能力，例如藉由在該等EV上表現多種抗原。實例22：包含抗原及CpG佐劑之支架X工程改造EV (例如胞外體)誘導抗原特異性T細胞反應之效能

為進一步評價本文所揭示之EV (例如胞外體)之疫苗能力，再次產生過表現支架X之工程改造EV (例如胞外體) (「支架X工程改造EV」) (例如參見實例1)。如實例21中所闡述，將含有馬來醯亞胺連接體之CD8肽(Lama4)及/或CD4肽(Itgb1)再次交聯至在工程改造EV之表面上表現之支架X。在當前實例中，支架X工程改造EV進一步裝載有CpG (亦即TLR9促效劑)而非STING促效劑。接著如圖17A中所示，向小鼠投與支架X工程改造EV。簡言之，動物接受以下中之一者：(i)對照EV (亦即僅表現支架X之EV) (「空PrX exos」) (組1)；(ii)僅表現CD8肽(Lama4)之支架X工程改造EV (「exoLama4-CpG」) (組2)；及(iii)表現CD8肽(Lama4)及CD4肽(Itgb1)二者之支架X工程改造EV (「exoItgb1-Lama4-CpG」) (組3)。每一動物接受兩個劑量(各劑量間隔一週)之相關治療方案。而且，在第二次投與後第7天，將動物處死，且使用IFN-γ ELISPOT評價脾臟中抗原特異性CD4+及CD8+ T細胞之頻率。

如圖17B及圖17C中所示，利用僅表現Lama4之支架X工程改造EV (「exoLama4-CpG」)治療動物導致誘導對Lama4具有特異性之強烈CD8+ T細胞反應(參見圖17C)，但不誘導對Itgb1肽之反應(參見圖17B)。此結果展示由支架X工程改造EV誘導之CD8+ T細胞反應之特異性。而且，與實例21中所提供之結果一致，表現Lama4及Itgb1二者之支架X工程改造EV能夠誘導針對該兩種抗原之強勁T細胞反應。該等結果進一步表明，本文所揭示之EV (例如胞外體)可用於誘導針對各種抗原之免疫反應。實例23：HPV抗原在表面工程改造EV (例如胞外體)中之表現

為進一步評價在本揭示案之EV (例如胞外體)中表現不同抗原之能力，轉染293SF細胞以表現HPV16或HPV18之E6及/或E7蛋白。簡言之，利用編碼以下全長蛋白質中之一者之質體轉染細胞：(i) HPV16 E6、(ii) HPV16 E7、(iii) HPV16 E6/E7、(iv) HPV18 E6、(v) HPV18 E7及(vi) HPV18 E6/E7。在培養基更換後大約72小時，收穫細胞且自每一轉染組製備溶解物。使用未經轉染之細胞作為陰性對照。接著，將約5 µL之每一溶解物裝載於PAGE凝膠上且利用以下抗體進行印漬：(i) HPV16/18抗E6 (AbCam，目錄號ab70)、(ii) HPV16抗E7 (AbCam，目錄號1b30731)及(iii) HPV18抗E7 (AbCam，目錄號ab100953)。

圖18A至圖18F提供結果。如所示，如藉由西方墨點所量測，轉染細胞無法表現全長HPV16或HPV18蛋白質，經編碼HPV18 E7蛋白之質體轉染的細胞另當別論。此結果表明，至少全長之HPV16 E6、HPV16及HPV18 E6不係瞬時表現的。

為解決上述問題，使用拆分蛋白質表現策略。簡言之，將158個胺基酸長之HPV E6蛋白在中間的非結構化區域分成兩半。此產生兩個肽片段：(i) N末端nE6 (1-88aa)及(ii) C末端cE6 (89-158aa)。使用編碼nE6及cE6肽片段之密碼子最佳化之DNA序列來組裝構築體，該等構築體表現分別在N末端或C末端與支架X (例如PTGFRN)融合及在C末端與支架Y融合之拆分HPV E6。產生以下質體，其用於轉染293SF細胞：(i) pUC57-Kan-AAVS1HR-CAGGS-PTGFRN-FLAG-coHPV16nE6 (「pCB-2014」)、(ii) pUC57-Kan-AAVS1HR-CAGGS-PTGFRN-FLAG-coHPV16cE6 (「pCB-2015」)、(iii) pUC57-Kan-AAVS1HR-CAGGS-coHPV16nE6-FLAG-PTGFRN (「pCB-2016」)、(iv) pUC57-Kan-AAVS1HR-CAGGS-coHPV16cE6-FLAG-PTGFRN (「pCB-2017」)、(v) pUC57-Kan-AAVS1HR-CAGGS-PrY-FLAG-coHPV16nE6 (「pCB-2018」)及(vi) pUC57-Kan-AAVS1HR-CAGGS-PrY-FLAG-coHPV16cE6 (「pCB-2019」)。(參見下表11)。接著，藉由西方墨點(如上文所闡述)且使用抗FLAG抗體評價HPV16及HPV18之E6及E7蛋白之表現。

如圖18G至圖18L中所示，利用拆分蛋白質表現策略，所測試之每一HPV蛋白質(亦即HPV16 E6、HPV16 E7、HPV18 E6及HPV18 E7)均在瞬時及穩定之細胞溶解物二者中表現。

該等結果進一步證實，本文所揭示之EV (例如胞外體)可經工程改造以表現寬範圍之抗原，包括不同的HPV蛋白質。實例24：包含抗Clec9a靶向部分之支架X工程改造EV (例如胞外體)誘導抗原特異性免疫反應之效能

繼上文之實例13及17，在動物模型中評價aCLEC9A-Px-OVA exoVACC誘導抗原特異性免疫反應之能力。該aCLEC9A-Px-OVA exoVACC係裝載有STING促效劑且經工程改造以表現以下各項之EV (例如胞外體)：(i) aCLEC9A-Px (亦即連接至支架X之抗Clec9a抗體片段)及(ii) OVA-Py (亦即連接至支架Y之OVA)。簡言之，如圖19A中所示，小鼠接受以下中之一者：(i)裝載有STING促效劑且表現對照同型抗體之OVA表現EV (例如胞外體) (「IgG-Px-OVA exoVACC」) (組1)、(ii) aCLEC9A-Px-OVA exoVACC (組2)及(iii)裝載有STING促效劑(亦即不表現支架X)之OVA表現EV (例如胞外體) (「PyOVA exoVACC」) (組3)。一些動物接受單次劑量且接著在一週後處死。其他動物接受第二劑量(在第一劑量之後一週)，且接著在第二劑量之後一週處死。自處死動物收穫脾細胞，且接著使用流式細胞術分析OVA特異性CD8+ T細胞。

如圖19B中所示，在單次投與EV之後，脾臟中OVA特異性CD8+效應記憶T細胞之數量無顯著差異。然而，在第二劑量之後，在經aCLEC9A-Px-OVA exoVACC治療之動物中，脾臟中OVA特異性CD8+效應記憶T細胞之數量顯著更高(參見圖19C)。此結果突出在設計用於治療疾病及病症之EV (例如胞外體)中表現靶向部分(例如抗Clec9a抗體片段)之益處。實例25：工程改造EV (例如胞外體)誘導抗原特異性抗體反應之效能

為確定本文所揭示之EV (例如胞外體)是否亦能夠誘導強勁之體液免疫反應，在小鼠中觀察EV (例如胞外體)誘導抗原特異性抗體之能力。簡言之，向小鼠鼻內投與表現OVA-支架Y且裝載有STING促效劑CL656之工程改造胞外體(「Py-OVA exoVACC」)。對照動物接受以下中之一者：(i)可溶性OVA (「OVA」) (鼻內)、(ii)可溶性OVA + CL656 (「OVA + STING」) (鼻內)、(iii)僅表現OVA-支架Y融合蛋白之胞外體(「PyOVA」) (鼻內)、(iv)僅表現OVA-支架Y融合蛋白之胞外體+可溶性CL656 (亦即STING促效劑不裝載至胞外體中) (「PyOVA + STING」) (鼻內)及(v)可溶性OVA +氫氧化鋁佐劑(「OVA +氫氧化鋁」) (皮下) (參見圖20A)。每一治療方案投與總計兩個劑量(各劑量之間間隔兩週)。接著，在最後一次投與後兩週，自動物收集血清且使用ELISA分析測定OVA特異性IgG1及IgA抗體之量。

如圖20A及圖20B中可見，包含OVA-支架Y (亦即抗原)及STING促效劑(亦即佐劑)之EV (例如胞外體)能夠在血清中誘導抗原特異性IgG1及IgA二者。此結果展示，本文所揭示之EV (例如胞外體)能夠在投與後誘導抗原特異性細胞介導及抗體介導之免疫反應二者。實例26：包含LPA-1抑制劑之表面工程改造EV (例如胞外體)

如本文所闡述，本揭示案之EV (例如胞外體)可經工程改造以在EV之表面上表現LPA-1抑制劑。本揭示案可使用之LPA-1抑制劑之非限制性實例包括AM152及AM095。AM152及AM095之化學結構呈現在圖21中。該圖顯示，含有馬來醯亞胺之試劑可結合至AM152之羧酸及/或胺基甲酸酯基團。由於AM095中存在相同反應性基團，故可使用相同方法來衍生AM095。

可使用本文所揭示之方法，將諸如AM095及AM152等LPA-1抑制劑結合至EV (例如胞外體)之表面。結果將係在EV表面上包含複數種抑制劑之EV (例如胞外體)。參見圖22。

圖23顯示如何經由酸基將馬來醯亞胺反應性基團添加至AM152之實例。該實例顯示馬來醯亞胺基團作為複合體之一部分，該複合體包含插入在馬來醯亞胺基團與羧酸反應性氯甲基苯基之間的ala-val可裂解連接體。圖24顯示可用於衍生AM152之兩種例示性試劑。頂部試劑包含(i)可與AM152之羧酸基團反應之氯甲基苯基及(ii)馬來醯亞胺基團；且其間插入可裂解之cit-val二肽及C5間隔體。底部試劑包含(i)可與AM152之羧酸基團反應之氯甲基苯基及(ii)馬來醯亞胺基團，且其間插入可裂解之ala-val二肽及C5間隔體。馬來醯亞胺基團隨後將用於使AM152 (或AM095)直接或經由一或多個間隔體或連接體(例如本文所揭示)間接地連接至例如支架部分。

圖25顯示由裂解結合產物中之cit-val或ala-val二肽(例如藉由細胞自溶酶B)而產生之產物。該產物AM152苯胺酯可由內源性酯酶進一步處理以產游離酸AM152產物。

圖26顯示若干種包含游離馬來醯亞胺基團及不同間隔體組合之AM152衍生物。其他衍生物示於圖27中。

圖28顯示在保護羧酸基團之後，可使用用於衍生羧酸基團之相同試劑來在胺基甲酸酯基處衍生AM152。隨後將使所得產物去保護以釋放羧酸基團。

圖29圖解說明經由連接體將具有馬來醯亞胺基團之複合體連接至AM152之胺基甲酸酯基之實例。適宜連接體包括本說明書中所揭示之任一連接體。

此實例中所揭示之製程係關於包含游離馬來醯亞胺反應性基團之AM152或AM095衍生物之產生，該游離馬來醯亞胺反應性基團可隨後直接或經由一或多個間隔體或連接體間接地與支架部分反應。因此，AM152或AM095將連接至EV (例如胞外體)之外表面。

然而，如圖30中所示，本發明亦可藉由以下方式來實踐：首先例如利用包含馬來醯亞胺之雙官能基團來衍生錨定部分，且接著使衍生之錨定部分(例如具有游離氯甲基苯基)與AM152之羧酸基團或胺基甲酸酯基反應。

在一些態樣中，將AM152 (或AM095)結合至EV (例如胞外體)之表面改良未結合之AM152 (或AM095)之至少一種有益性質及/或減少未結合之AM152或AM095之至少一種有害性質(例如毒性，諸如膽囊毒性及/或肝毒性)。在一些態樣中，將AM152 (或AM095)結合至EV (例如胞外體)改良AM512或AM095 (與游離AM152或游離AM095相比)治療纖維變性疾病(例如肺纖維化，諸如IPF)之效能。以引用方式併入

本申請案中所引用之所有公開案、專利、專利申請案及其他文件出於所有目的均係以全文引用的方式併入本文中，其併入程度如同每一個別公開案、專利、專利申請案或其他文件出於所有目的個別地指示以引用的方式併入一般。等效內容

儘管已圖解說明且闡述各個具體態樣，但上述說明書並不係限制性的。應瞭解，在不背離本發明之精神及範圍之情形下，可作出各種改變。在閱讀本說明書後，許多變化形式將對熟習此項技術者變得顯而易見。

[圖 1A ]顯示例示性EV，其包含一或多種抗原、一或多種佐劑、一或多種靶向部分分子或其任何組合。

[圖 1B ]顯示包含抗原及佐劑之EV (例如胞外體)之非限制性實例(a至r)。「Ag」及「AD」分別代表抗原及佐劑。箭頭代表支架Y部分。「X」代表支架X部分。自本揭示案將顯而易見，圖 1B 中所示之EV (例如胞外體)可包含多種抗原、多種佐劑或多種抗原及多種佐劑二者。該等EV (例如胞外體)亦可進一步包含一或多個其他部分(例如免疫調節劑及/或靶向部分)。整個本揭示案中提供對此等EV (例如胞外體)之進一步闡述。

[圖 2 ]顯示包含抗原及免疫調節劑之胞外體之7種所選實例。「Ag」及「IM」分別代表抗原及免疫調節劑。箭頭代表支架Y部分。「X」代表支架X部分。自本揭示案將顯而易見，圖 2 中所示之EV (例如胞外體)可包含多種抗原、多種免疫調節劑或多種抗原及多種免疫調節劑二者。該等EV (例如胞外體)亦可進一步包含一或多個其他部分(例如佐劑及/或靶向部分)。整個本揭示案中提供對此等EV (例如胞外體)之進一步闡述。

[圖 3A 及圖 3B ]顯示包含OVA-支架Y二者且裝載有STING促效劑之工程改造EV (例如胞外體) (「Py-OVA-exoSTING」)在靜脈內投與至未經治療過的C57/BL6小鼠中後誘導OVA特異性CD8 T細胞免疫反應之能力。在脾臟(圖 3A )及合併之外周血單核細胞(PBMC) (圖 3B )二者中均顯示出對OVA特異性CD8 T細胞免疫反應之誘導。使用以下構築體作為對照：(i)抗CD40抗體與可溶性OVA蛋白(不係EV (例如胞外體)之一部分)之組合(「IP aCD40+OVA」)；(ii) cAIM(PS)2 Difluor (Rp/Sp) (「CL656」；STING促效劑)與可溶性OVA蛋白(不係EV (例如胞外體)之一部分)之組合(「CL656+OVA」)；(iii)過表現支架X、裝載有STING促效劑之EV (例如胞外體)與可溶性OVA蛋白(OVA不係EV (例如胞外體)之一部分)之組合(「Px-exoSTING + OVA」)；及(iv)僅表現OVA-支架Y融合蛋白之EV (例如胞外體) (「Py-OVA」)。數據個別地示出且顯示為平均值± S.D.。「***」指示藉由單因子ANOVA，p ＜ 0.0005。

[圖 4A 及圖 4B ]顯示包含OVA-支架Y二者且裝載有STING促效劑之工程改造EV (例如胞外體) (「Py-OVA-exoSTING」)在鼻內投與至未經治療過的C57/BL6小鼠中後誘導OVA特異性CD8 T細胞免疫反應之能力。在脾臟(圖 4A )及肺(圖 4B )二者中均顯示出對OVA特異性CD8 T細胞免疫反應之誘導。使用以下構築體作為對照：(i)抗CD40抗體與可溶性OVA蛋白(不係EV (例如胞外體)之一部分)之組合；(ii) cAIM(PS)2 Difluor (Rp/Sp) (「CL656」；STING促效劑)與可溶性OVA蛋白之組合(「CL656+OVA」)；(iii)過表現支架X、裝載有STING促效劑之EV (例如胞外體)與可溶性OVA蛋白(OVA不係EV (例如胞外體)之一部分)之組合(「Px-exoSTING + OVA」)；及(iv)僅表現OVA-支架Y融合蛋白之EV (例如胞外體) (「Py-OVA」)。數據個別地示出且顯示為平均值± S.D.。「**」指示藉由單因子ANOVA，p ＜ 0.005。「***」指示藉由單因子ANOVA，p ＜ 0.0005。

[圖 5A 及圖 5B ]顯示在鼻內投與包含OVA-支架Y二者且裝載有STING促效劑之工程改造EV (例如胞外體) (「Py-OVA-exoSTING」)之後，對小鼠脾臟中之OVA特異性T細胞反應之比較。在投與後一週，使用IFN-γ ELISPOT分析來量測OVA特異性T細胞反應。圖 5A 顯示CD8 T細胞反應。圖 5B 顯示CD4 T細胞反應。對照動物接受以下中之一者：(i)僅可溶性OVA蛋白(「OVA」)；(ii) CL656與可溶性OVA蛋白之組合(「OVA+CL656」)；(iii)僅表現OVA-支架Y融合蛋白之EV (例如胞外體) (「Py-OVA」)；(iv) CL656與僅表現OVA-支架Y融合蛋白之EV (例如胞外體)之組合(「Py-OVA+CL656」)。數據個別地示出且顯示為平均值± S.D.。「*」指示藉由單因子ANOVA，p ＜ 0.05。

[圖 6 ]提供用於評價Clec9a胞外體在疫苗接種模型中之效能之實驗設計之示意圖。

[圖 7A 及圖 7B ]顯示與標準疫苗調配物相比，工程改造EV (例如胞外體)誘導優異之CD8 T細胞反應。圖 7A 顯示在皮下(SQ)投與標準疫苗(AddaVax)或皮下(SQ)、鼻內(IN)或靜脈內(IV)投與工程改造胞外體後之優異效應記憶、特定而言CD8 T細胞反應。圖 7B 顯示在利用標準疫苗或工程改造胞外體進行鼻內疫苗接種後，對肺中之組織駐留記憶、特定而言T細胞反應之誘導(防線)。

[圖 8 ]圖解說明EBV BZLF1作為針對EBV移植患者之移植後淋巴球增生性疾病之靶向抗原之用途。圖8係工程改造EV (例如胞外體)之示意圖示，該工程改造EV (例如胞外體)包含佐劑(環狀嘌呤二核苷酸，例如CDN)及連接至EV腔表面之EBV BZLF1抗原。

[圖 9A 及圖 9B ]提供對來自用可溶性或胞外體性OVA在存在或不存在STING佐劑之情形下免疫之野生型小鼠的CD4+ (圖 9A )及CD8+ (圖 9B ) T細胞數量之比較。如指示(圖 9A 及圖 9B )，利用以下對野生型小鼠進行免疫：可溶性OVA (卵白蛋白)；可溶性OVA + CL656 (STING促效劑)；PyOVA (與BASP1融合之OVA之胞外體腔表現)；PyOVA +可溶性CL656；PyOVA exoVacc (裝載有CL656之PyOVA胞外體)；或可溶性OVA +氫氧化鋁佐劑。藉由IFN-g表現來鑑別抗原特異性細胞，且數據表示為在減去背景(非抗原特異性活化)後，每100,000個脾細胞中IFN-g陽性斑點形成單位(SFU)之數量(x軸，圖 9A 及圖 9B )。「第14天」代表在單次免疫後，在動物中觀察到的CD4+及CD8+ T細胞之數量。「第28天」代表在利用第二次投與進行加強免疫之後，在動物中觀察到的CD4+及CD8+ T細胞之數量。

[圖 10 ]顯示經本文所揭示之胞外體(例如表現OVA-支架Y且裝載有STING促效劑CL656)治療之小鼠肺中之OVA特異性CD8+ T細胞之數量。「第1劑」代表在單次投與胞外體之後所觀察到的效應記憶(T_EM ) CD8+ T細胞之數量。「第2劑」代表在利用第二次投與進行加強免疫之後所觀察到的效應記憶及/或駐留記憶(T_RM ) CD8+ T細胞之數量。

[圖 11A 及圖 11B ]顯示在本文所揭示之EV (例如胞外體)中表現抗Clec9a結合部分之效果。圖 11A 顯示在投與至小鼠中後，不同樹突細胞群體對抗Clec9a表現胞外體之攝取。所顯示之樹突細胞群體包括以下：(i)常規DC 1 (「cDC1」)、(ii)常規DC 2 (「cDC2」)及(iii)漿細胞樣DC (「pDC」)。對照動物接受僅PBS或僅表現支架X蛋白之胞外體(「PrX EV」)。**** p ＜ 0.0001。圖 11B 提供在利用以下中之一者以三種不同劑量(0.4 nM、1 nM或4 nM)刺激之後，對小鼠樹突細胞中STING活性之比較：(i)可溶性STING促效劑(「游離STING」)、(ii)僅表現支架X蛋白(亦即無抗Clec9a抗體片段)且裝載有STING促效劑之EV (例如胞外體) (「PrX-STING」)、(iii)表現連接至支架X蛋白之抗Clec9a抗體片段之胞外體(「aClec9a-STING」)；及(iv)表現非相關性抗體且裝載有STING促效劑之EV (例如胞外體) (「同型-STING」)。STING活性係由DC所產生之IL-12之量來顯示。

[圖 12A 及圖 12B ]顯示投與途徑對表現OVA-支架Y且裝載有STING促效劑CL656之工程改造胞外體(「Py-OVA exoVACC」)誘導OVA特異性CD8⁺ T_EM 細胞之效應。所顯示之投與途徑包括：(i)靜脈內(「IV」)、(ii)鼻內(「IN」)及(iii)皮下(「SQ」)。「SubQ AV」對應於利用於市售調配物(ADDAVAX^™ , InvioGen)中之可溶性OVA (「SubQ AV」)治療之動物。圖 12A 提供顯示結果平均值之條形圖。藉由單因子ANOVA，***，p=0.0013；**，p=0.0074；ns，與OVA + ADDAVAX^™ 組相比不顯著。圖 12B 提供來自不同治療組之代表性樣品之流式細胞術圖。每一流式圖中之右上象限中所提供之百分比代表所觀察到之OVA特異性CD8⁺ T_EM 細胞反應%。不同治療組指示在每一流式圖中之左上象限中。

[圖 13A 、圖 13B 及圖 13C ]顯示接受表現OVA-支架Y且裝載有STING促效劑CL656之胞外體(「Py-OVA exoVACC」)之兩次投與之小鼠肺中對OVA特異性駐留記憶(T_RM ) CD8+ T細胞(圖 13A )及CD4+ T細胞(圖 13B )之誘導。對照動物接受以下中之一者：(i)可溶性OVA (「OVA」)、(ii)僅表現OVA-支架Y融合蛋白之胞外體(「PyOVA」)、(iii)可溶性OVA +可溶性聚I:C (「OVA +聚I:C」)及(iv)僅表現OVA-支架Y融合蛋白之胞外體+可溶性聚I:C (「PyOVA +聚I:C」)。圖 13C 提供圖 13A 及圖 13B 中所示數據之代表性樣品之流式細胞術圖。頂列對應於CD8+ T細胞。底列對應於CD4+ T細胞。

[圖 14A 、圖 14B 、圖 14C 、圖 14D 、圖 14E 、圖 14F 、圖14G 、圖 14H 、圖 14I 、圖 14J 、圖 14K 、圖 14L 、圖 14M 及圖 14N ]顯示接受以下中之一者之小鼠的抗腫瘤免疫反應：(i)經由鼻內投與之表現OVA-支架Y且裝載有STING促效劑CL656之胞外體(「exoVACC (IN)」)、(ii)經由皮下投與之表現OVA-支架Y且裝載有STING促效劑CL656之胞外體(「exoVACC (SQ)」)、(iii)經由鼻內投與之可溶性OVA +可溶性聚I:C (「OVA +聚I:C (IN)」)及(iv)經由皮下投與之可溶性OVA +可溶性聚I:C (「OVA +聚I:C (SC)」)。使用未經治療之動物作為對照。圖 14A 提供實驗設計之示意圖。圖 14B 及圖 14N 提供來自兩個獨立實驗之存活數據。圖 14C 及圖 14I (未經治療)、圖 14D 及圖 14J (OVA +聚I:C (SC))、圖 14E 及圖 14L (exoVACC (SQ))、圖 14F 及圖 14K (OVA +聚I:C (IN))以及圖 14G 及圖 14M (exoVACC (IN))提供來自兩個獨立實驗之腫瘤體積數據。圖 14E 及圖 14G 中所示之百分比代表(總組中)完全受保護之動物之數量。圖 14H 顯示每一不同治療組中之腫瘤生長速率。在圖 14H 中，藉由單因子ANOVA，*，p=0.028；ns，與未經治療之對照相比不顯著。

[圖 15A 、圖 15B 、圖 15C 、圖 15D 、圖 15E 及圖 15F ]顯示本文所揭示之工程改造EV (例如胞外體)在鼻內投與後遷移至腸系膜淋巴結之能力。圖 15A 提供實驗設計之示意圖。圖 15B 、圖 15C 及圖 15D 分別顯示如藉由IFN-γ ELISPOT所量測，脾臟、肺及腸系膜淋巴結中OVA特異性CD4+ T細胞(每一治療組中之左側條形圖)及OVA特異性CD8+ T細胞(每一治療組中之右側條形圖)之頻率。圖 15E 及圖 15F 分別顯示如藉由流式細胞術所量測，肺及脾臟中OVA特異性效應記憶CD8+ T細胞之頻率。

[圖 16A 、圖 16B 及圖 16C ]顯示包含支架X且裝載有STING促效劑之表面工程改造EV (例如胞外體)誘導抗原特異性免疫反應之能力。圖 16A 提供實驗設計之示意圖。如所示，CD4肽(Itgb1)及/或CD8肽(Lama4)連接至EV (例如胞外體)之支架X。圖 16B 及圖 16C 分別顯示如藉由IFN-γ ELISPOT所量測，來自不同治療組之動物脾臟中Itgb1特異性CD4+ T細胞及Lama4特異性CD8+ T細胞之頻率。

[圖 17A 、圖 17B 及圖 17C ]顯示包含支架X且裝載有CpG佐劑之表面工程改造EV (例如胞外體)誘導抗原特異性免疫反應之能力。圖 17A 提供實驗設計之示意圖。如所示，使用馬來醯亞胺化學將(i)僅CD8肽(Lama4) (組2)或(ii) CD8肽及CD4肽(Itgb1)二者(組3)連接至支架X。對照EV僅表現支架X (亦即無肽且無CpG佐劑) (組1)。圖 17B 及圖 17C 分別顯示如藉由IFN-γ ELISPOT所量測，來自不同治療組之動物脾臟中Itgb1特異性CD4+ T細胞及Lama4特異性CD8+ T細胞之頻率。

[圖 18A 、圖 18B 、圖 18C 、圖 18D 、圖 18E 、圖 18F 、圖 18G 、圖 18H 、圖 18I 、圖 18J 、圖 18K 及圖 18L ]顯示如藉由西方墨點(Western Blot)所量測，HPV16及HPV18之E6及E7蛋白在本文所揭示之表面工程改造EV (例如胞外體)中之表現。在圖 18A 、圖 18B 、圖 18C 、圖 18D 、圖 18E 及圖 18F 中，利用編碼以下全長蛋白質中之一者之質體轉染293SF細胞：(i) HPV16 E6、(ii) HPV16 E7、(iii) HPV16 E6/E7、(iv) HPV18 E6、(v) HPV18 E7及(vi) HPV18 E6/E7。在圖 18G 、圖 18H 、圖 18I 、圖 18J 、圖 18K 及圖 18L 中，使用拆分蛋白質表現策略。利用以下質體中之一者轉染293SF細胞：(i) pUC57-Kan-AAVS1HR-CAGGS-PTGFRN-FLAG-coHPV16nE6 (「pCB-2014」)、(ii) pUC57-Kan-AAVS1HR-CAGGS-PTGFRN-FLAG-coHPV16cE6 (「pCB-2015」)、(iii) pUC57-Kan-AAVS1HR-CAGGS-coHPV16nE6-FLAG-PTGFRN (「pCB-2016」)、(iv) pUC57-Kan-AAVS1HR-CAGGS-coHPV16cE6-FLAG-PTGFRN (「pCB-2017」)、(v) pUC57-Kan-AAVS1HR-CAGGS-PrY-FLAG-coHPV16nE6 (「pCB-2018」)及(vi) pUC57-Kan-AAVS1HR-CAGGS-PrY-FLAG-coHPV16cE6 (「pCB-2019」)。質體之詳細闡述可參見實例23 (亦參見表11)。

[圖 19A 、圖 19B 及圖 19C ]顯示裝載有STING促效劑且表現(i)連接至支架X之抗Clec9靶向部分及(ii)連接至支架Y之OVA的表面工程改造EV (例如胞外體)之能力。圖 19A 提供實驗設計之示意圖。圖 19B 及圖 19C 顯示在來自圖 19A 中所示之不同治療組之動物脾臟中所觀察到之OVA特異性CD8+效應記憶T細胞之數量。圖 19B 顯示在單次EV投與後一週之結果。圖 19C 顯示在第二劑量之EV投與後一週之結果。

[圖 20A 、圖 20B 及圖 20C ]顯示經工程改造以表現OVA-支架Y且裝載有STING促效劑之EV (例如胞外體)在活體內投與後誘導抗原特異性體液免疫反應之能力。圖 20A 提供實驗設計之示意圖。如所示，動物接受以下中之一者：(i)僅可溶性OVA (組1)、(ii)可溶性OVA與游離STING促效劑之組合(組2)、(iii)僅表現OVA-支架Y之EV (例如胞外體) (「PyOVA」) (組3)、(iv) PyOVA與游離STING促效劑之組合(組4)、(v)表現OVA-支架Y且裝載有STING促效劑CL656之工程改造胞外體(「Py-OVA exoVACC」) (組5)及(vi)可溶性OVA與氫氧化鋁之組合。圖 20B 提供對血清中OVA特異性IgG1抗體之量之比較。圖 20C 提供對血清中OVA特異性IgA抗體之量之比較。

[圖 21 ]顯示AM152 (環丙烷甲酸,1-[4'-[3-甲基-4-[[[(1R)-1-苯基乙氧基]羰基]胺基]-5-異噁唑基][1,1'-聯苯基]-4-基]-)及AM095 (1,1′-聯苯基]-4-乙酸,4′-[3-甲基-4-[[[(1R)-1-苯基乙氧基]羰基]胺基]-5-異噁唑基[]-)之化學結構。標記為1及2之箭頭指示適於衍生以引入馬來醯亞胺反應性基團之位置(羧酸及胺基甲酸酯)。AM152中所指示之相應位點亦存在於AM095中。

[圖 22 ]提供顯示將LPA1拮抗劑(AM152)結合至胞外體以產生在其表面上含有複數個LPA1拮抗劑分子之胞外體群體之示意圖示。

[圖 23 ]顯示如何經由AM152之羧酸基團將馬來醯亞胺反應性基團添加至AM152之實例。該實例顯示馬來醯亞胺基團作為反應性複合體之一部分，該反應性複合體包含插入在馬來醯亞胺基團與羧酸反應性氯甲基苯基之間的ala-val可裂解連接體及C5間隔體。

[圖 24 ]顯示可用於衍生AM152之兩種例示性試劑。頂部試劑包含(i)可與AM152之羧酸基團反應之氯甲基苯基及(ii)馬來醯亞胺基團；且其間插入可裂解之cit-val二肽及C5間隔體。底部試劑包含(i)可與AM152之羧酸基團反應之氯甲基苯基及(ii)馬來醯亞胺基團，且其間插入可裂解之ala-val二肽及C5間隔體。

[圖 25 ]顯示由裂解結合產物中之cit-val或ala-val二肽(例如藉由細胞自溶酶B)而產生之產物。該產物AM152苯胺酯可由內源性酯酶進一步處理以產游離酸AM152產物。

[圖 26 及圖 27 ]顯示若干種包含游離馬來醯亞胺基團及不同間隔體組合之AM152衍生物。

[圖 28 ]顯示在保護羧酸基團之後，可使用用於衍生羧酸基團之相同試劑來在胺基甲酸酯基處衍生AM152。隨後使所得產物去保護以釋放羧酸基團。

[圖 29 ]顯示圖解說明經由連接體將具有馬來醯亞胺基團之複合體連接至AM152之胺基甲酸酯基之實例。適宜連接體包括本說明書中所揭示之任一連接體。

[圖 30 ]顯示可將AM152連接至經衍生之錨定部分，而非使AM152經衍生且隨後經由反應性馬來醯亞胺基團連接至錨定部分。

[圖 31 ]係顯示如何可例如經由本文所闡述之支架部分(例如支架X蛋白或其片段或脂質)，使用馬來醯亞胺化學將生物活性分子(BAM)化學連接至EV (例如胞外體)之示意圖示。該圖中所繪示之連接體視情況存在，且當存在時可包含連接體(例如可裂解連接體)或其組合。

Claims

一種經分離之細胞外囊泡(EV)，其包含(i)至少一種抗原及(ii)至少一種佐劑。
如請求項1之EV，其包含至少2種、3種、4種、5種、6種、7種、8種、9種、10種或更多種不同抗原。
如請求項1或2之EV，其包含至少2種、3種、4種、5種、6種、7種、8種、9種、10或更多種不同佐劑。
如請求項1至3中任一項之EV，其中該抗原不在I類及/或II類MHC分子上呈遞。
如請求項1至4中任一項之EV，其中該EV並非源自天然存在之抗原呈遞細胞。
如請求項1至5中任一項之EV，其中該EV並非源自天然存在之樹突細胞、天然存在之B細胞、天然存在之肥胖細胞、天然存在之巨噬細胞、天然存在之嗜中性球、天然存在之庫弗氏-布洛維奇氏細胞(Kupffer-Browicz cell)、源自該等細胞中之任一者之細胞或其任何組合。
如請求項1至6中任一項之EV，其誘導細胞免疫反應、體液免疫反應或細胞及體液免疫反應二者。
如請求項7之EV，其中與(i)不包含佐劑或抗原之相應EV或(ii)沒有EV之佐劑或抗原相比，對細胞免疫反應、體液免疫反應或細胞及體液免疫反應二者之該誘導增加至少約5%、至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約100%或更多。
如請求項1至8中任一項之EV，其誘導CD4+ T細胞反應、CD8+ T細胞反應或CD4+及CD8+ T細胞反應二者。
如請求項1至9中任一項之EV，其中該EV不直接與T細胞之T細胞受體相互作用。
如請求項1至10中任一項之EV，其中該EV進一步包含第一支架部分。
如請求項11之EV，其中該抗原連接至該第一支架部分。
如請求項11或12之EV，其中該佐劑連接至該第一支架部分。
如請求項11至13中任一項之EV，其中該EV進一步包含第二支架部分。
如請求項14之EV，其中該抗原連接至該第一支架部分，且該佐劑連接至該第二支架部分。
如請求項14或15之EV，其中該第一支架部分與該第二支架部分相同。
如請求項14或15之EV，其中該第一支架部分與該第二支架部分不同。
如請求項11至17中任一項之EV，其中該第一支架部分係支架X。
如請求項11至17中任一項之EV，其中該第一支架部分係支架Y。
如請求項14至19中任一項之EV，其中該第二支架部分係支架Y。
如請求項14至19中任一項之EV，其中該第二支架部分係支架X。
如請求項18或21之EV，其中該支架X能夠：(i)將該抗原錨定在該EV之腔表面上；(ii)將該抗原錨定在該EV之外表面上；(iii)將該佐劑錨定在該EV之腔表面上；(iv)將該佐劑錨定在該EV之外表面上；或(v)其組合。
如請求項18、21及22中任一項之EV，其中該支架X係選自由以下組成之群：前列腺素F2受體負調控劑(PTGFRN蛋白)；基礎免疫球蛋白(BSG蛋白)；免疫球蛋白超家族成員2 (IGSF2蛋白)；免疫球蛋白超家族成員3 (IGSF3蛋白)；免疫球蛋白超家族成員8 (IGSF8蛋白)；整聯蛋白β-1 (ITGB1蛋白)；整聯蛋白α-4 (ITGA4蛋白)；4F2細胞表面抗原重鏈(SLC3A2蛋白)；一類ATP轉運蛋白(ATP1A1、ATP1A2、ATP1A3、ATP1A4、ATP1B3、ATP2B1、ATP2B2、ATP2B3、ATP2B4蛋白)及其任何組合。
如請求項19或20之EV，其中該支架Y能夠：(i)將該抗原錨定在該EV之腔表面上；(ii)將該佐劑錨定在該EV之腔表面上；或(iii)兩者。
如請求項19、20及24中任一項之EV，其中該支架Y係選自由以下組成之群：肉豆蔻醯化之富含丙胺酸之蛋白激酶C受質(MARCKS蛋白)；肉豆蔻醯化之富含丙胺酸之蛋白激酶C受質樣1 (MARCKSL1蛋白)；腦酸溶性蛋白1 (BASP1蛋白)及其任何組合。
如請求項11至25中任一項之EV，其中該抗原連接至該EV之腔表面上之第一支架部分，且該佐劑連接至該EV之腔表面上之第二支架部分。
如請求項26之EV，其中 a. 該第一支架部分及該第二支架部分中之每一者均係支架Y； b. 該第一支架部分係支架Y，且該第二支架部分係支架X； c. 該第一支架部分係支架X，且該第二支架部分係支架Y；或 d. 該第一支架部分及該第二支架部分中之每一者均係支架X。
如請求項11至25中任一項之EV，其中該抗原連接至該EV之腔表面上之第一支架部分，且該佐劑係在該EV之腔中。
如請求項11至25中任一項之EV，其中該抗原係在該EV之腔中，且該佐劑連接至該EV之腔表面上之第一支架部分。
如請求項11至25中任一項之EV，其中該抗原連接至該EV之腔表面上之第一支架部分且該佐劑連接至該EV之外表面上之第二支架部分。
如請求項28至30中任一項之EV，其中： a. 該第一支架部分係支架Y，且該第二支架部分係支架X；或 b. 該第一支架部分及該第二支架部分中之每一者均係支架X。
如請求項11至25中任一項之EV，其中該抗原連接至該EV之外表面上之第一支架部分，且該佐劑連接至該EV之腔表面上之第二支架部分。
如請求項32之EV，其中： a. 該第一支架部分係支架X，且該第二支架部分係支架Y；或 b. 該第一支架部分及該第二支架部分中之每一者均係支架X。
如請求項11至25中任一項之EV，其中該抗原係在該EV之腔中且該佐劑係在該EV之腔中。
如請求項11至25中任一項之EV，其中該抗原連接至該EV之外表面上之第一支架部分且該佐劑連接至該EV之外表面上之第二支架部分。
如請求項35之EV，其中該第一支架及該第二支架部分係支架X。
如請求項11至25中任一項之EV，其中該抗原連接至該EV之外表面上之第一支架部分且該佐劑係在該EV之腔中。
如請求項37之EV，其中該第一支架部分係支架X。
如請求項11至25中任一項之EV，其中該抗原係在該EV之腔中且該佐劑連接至該EV之外表面上之第一支架部分。
如請求項39之EV，其中該第一支架部分係支架X。
如請求項11至25中任一項之EV，其中該抗原連接至該EV之表面上之第一支架部分且該佐劑連接至該EV之腔表面上之該第一支架部分。
如請求項11至25中任一項之EV，其中該抗原連接至該EV之腔表面上之第一支架部分且該佐劑連接至該EV之外表面上之該第一支架部分。
如請求項41或42之EV，其中該第一支架部分係支架X。
如請求項11至43中任一項之EV，其中：(i)該抗原藉由連接體連接至該第一支架部分，(ii)該抗原藉由連接體連接至該第二支架部分，(iii)該佐劑藉由連接體連接至該第一支架部分，(iv)該佐劑藉由連接體連接至該第二支架部分，或(v)其組合。
如請求項44之EV，其中該連接體係多肽。
如請求項44之EV，其中該連接體係非多肽部分。
如請求項44至46中任一項之EV，其中該連接體包含馬來醯亞胺部分。
如請求項44至47中任一項之EV，其中該連接體包含膽固醇部分。
如請求項11至48中任一項之EV，其中該第一支架部分或該第二支架部分係PTGFRN蛋白。
如請求項11至48中任一項之EV，其中該第一支架部分或該第二支架部分包含如SEQ ID NO: 33中所示之胺基酸序列。
如請求項11至49中任一項之EV，其中該第一支架部分或該第二支架部分包含與SEQ ID NO: 1至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或約100%一致之胺基酸序列。
如請求項9至51中任一項之EV，其中該第一支架部分或該第二支架部分係BASP1蛋白。
如請求項9至51中任一項之EV，其中該第一支架部分或該第二支架部分包含(M)(G)(π)(X)(Φ/π)(π)(+)(+)或(G)(π)(X)(Φ/π)(π)(+)(+)之肽，其中每一括號位置代表一胺基酸，且其中π係選自由Pro、Gly、Ala及Ser組成之群之任一胺基酸，X係任一胺基酸，Φ係選自由Val、Ile、Leu、Phe、Trp、Tyr及Met組成之群之任一胺基酸，且(+)係選自由Lys、Arg及His組成之群之任一胺基酸；且其中位置5不係(+)且位置6既不係(+)，亦不係(Asp或Glu)。
如請求項9至51中任一項之EV，其中該第一支架部分或該第二支架部分包含SEQ ID NO: 50-155中之任一者中所示之胺基酸序列。
如請求項9至54中任一項之EV，其中該第一支架部分或該第二支架部分包含與SEQ ID NO: 3至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或約100%一致之胺基酸序列。
一種包含(i)抗原及(ii)佐劑之經分離之細胞外囊泡，其中： a. 該抗原連接至該EV之腔表面上之第一支架Y，且該佐劑連接至該腔表面上之第二支架Y； b. 該抗原連接至該腔表面上之支架Y，且該佐劑係在該EV之腔中； c. 該抗原係在該EV之腔中，且該佐劑連接至該EV之腔表面上之支架Y； d. 該抗原連接至該EV之腔表面上之支架Y，且該佐劑連接至該EV之外表面上之支架X； e. 該抗原係在該EV之腔中，且該佐劑連接至該EV之外表面上之支架X； f. 該抗原連接至該EV之腔表面上之支架Y，且該佐劑連接至該EV之腔表面上之支架X； g. 該抗原係在該EV之腔中，且該佐劑連接至該EV之腔表面上之支架X； h. 該抗原連接至該EV之腔表面上之支架X，且該佐劑連接至該EV之外表面上之該支架X； i. 該抗原連接至該EV之外表面上之第一支架X，且該佐劑連接至該EV之外表面上之第二支架X； j. 該抗原連接至該EV之外表面上之支架X，且該佐劑連接至該EV之腔表面上之支架Y； k. 該抗原連接至該EV之外表面上之支架X，且該佐劑係在該EV之腔中； l. 該抗原連接至該EV之外表面上之支架X，且該佐劑連接至該EV之腔表面上之該支架X； m. 該抗原連接至該EV之腔表面上之第一支架X，且該佐劑連接至該EV之腔表面上之第二支架X； n. 該抗原連接至該EV之腔表面上之支架X，且該佐劑連接至該EV之腔表面上之支架Y； o. 該抗原連接至該EV之腔表面上之支架X，且該佐劑係在該EV之腔中； p. 該抗原連接至該EV之外表面上之第一支架X，且該佐劑連接至該EV之腔表面上之第二支架X； q. 該抗原連接至該EV之腔表面上之第一支架X，且該佐劑連接至該EV之外表面上之第二支架X； r. 該抗原係在該EV之腔中，且該佐劑係在該EV之腔中； s. 該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該佐劑直接連接至該EV之腔表面； t. 該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該佐劑係在該EV之腔中； u. 該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該佐劑連接至該EV之腔表面上之支架Y； v. 該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該佐劑連接至該EV之腔表面上之支架X； w. 該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該佐劑直接連接至該EV之外表面； x. 該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該佐劑連接至該EV之外表面上之支架X； y. 該抗原連接至該EV之腔表面上之支架Y，且該佐劑直接連接至該EV之腔表面； z. 該抗原連接至該EV之腔表面上之支架Y，且該佐劑直接連接至該EV之外表面； aa. 該抗原連接至該EV之腔表面上之支架X，且該佐劑直接連接至該EV之腔表面； bb. 該抗原連接至該EV之腔表面上之支架X，且該佐劑直接連接至該EV之外表面； cc. 該抗原係在該EV之腔中，且該佐劑直接連接至該EV之腔表面；或 dd. 該抗原係在該EV之腔中，且該佐劑直接連接至該EV之外部。
如請求項1至56中任一項之EV，其中該EV進一步包含免疫調節劑。
如請求項57之EV，其中該免疫調節劑直接連接至該EV之腔表面或外表面。
如請求項57或58之EV，其中該免疫調節劑連接至該EV之外表面上或該EV之腔表面上之支架X。
如請求項57或58之EV，其中該免疫調節劑連接至該EV之腔表面上之支架Y。
如請求項56至60中任一項之EV，其中：(i)該抗原藉由連接體直接連接至腔表面，(ii)該佐劑藉由連接體直接連接至腔表面，(iii)該免疫調節劑藉由連接體直接連接至腔表面，(iv)該抗原藉由連接體直接連接至外表面，(v)該佐劑藉由連接體直接連接至外表面，(vi)該免疫調節劑藉由連接體直接連接至外表面，或(vii)其組合。
如請求項56至61中任一項之EV，其中：(i)該抗原藉由連接體連接至支架X，(ii)該佐劑藉由連接體連接至支架X，(iii)該免疫調節劑藉由連接體連接至支架X，(iv)該抗原藉由連接體連接至支架Y，(v)該佐劑藉由連接體連接至支架Y，(vi)該免疫調節劑藉由連接體連接至支架Y，或(vii)其組合。
如請求項61或62之EV，其中該連接體係多肽。
如請求項61或62之EV，其中該連接體係非多肽部分。
如請求項61至64中任一項之EV，其中該連接體包含馬來醯亞胺部分。
如請求項61至64中任一項之EV，其中該連接體包含膽固醇部分。
如請求項57或58之EV，其中該免疫調節劑係在該EV之腔中。
如請求項57至67中任一項之EV，其中該免疫調節劑包含負性檢查點調控劑之抑制劑或負性檢查點調控劑之結合搭配物之抑制劑。
如請求項68之EV，其中該負性檢查點調控劑包含細胞毒性T淋巴球相關蛋白4 (CTLA-4)、程式化細胞死亡蛋白1 (PD-1)、淋巴球活化基因3 (LAG-3)、含T細胞免疫球蛋白黏蛋白之蛋白質3 (TIM-3)、B及T淋巴球衰減蛋白(BTLA)、具有Ig及ITIM結構域之T細胞免疫受體(TIGIT)、T細胞活化V結構域Ig抑制劑(VISTA)、腺苷A2a受體(A2aR)、殺手細胞免疫球蛋白樣受體(KIR)、吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)、CD20、CD39、CD73或其任何組合。
如請求項57至67中任一項之EV，其中該免疫調節劑包含正性共刺激分子之活化劑或正性共刺激分子之結合搭配物之活化劑。
如請求項70之EV，其中該正性共刺激分子係TNF受體超家族成員(例如CD120a、CD120b、CD18、OX40、CD40、Fas受體、M68、CD27、CD30、4-1BB、TRAILR1、TRAILR2、TRAILR3、TRAILR4、RANK、OCIF、TWEAK受體、TACI、BAFF受體、ATAR、CD271、CD269、AITR、TROY、CD358、TRAMP及XEDAR)。
如請求項70之EV，其中該正性共刺激分子之活化劑係TNF超家族成員(例如TNFα、TNF-C、OX40L、CD40L、FasL、LIGHT、TL1A、CD27L、Siva、CD153、4-1BB配位體、TRAIL、RANKL、TWEAK、APRIL、BAFF、CAMLG、NGF、BDNF、NT-3、NT-4、GITR配位體及EDA-2)。
如請求項70之EV，其中該正性共刺激分子係CD28超家族共刺激分子(例如ICOS或CD28)。
如請求項70之EV，其中該正性共刺激分子之活化劑係ICOSL、CD80或CD86。
如請求項57至67中任一項之EV，其中該免疫調節劑包含細胞介素或細胞介素之結合搭配物。
如請求項75之EV，其中該細胞介素包含IL-2、IL-4、IL-7、IL-10、IL-12、IL-15、IL-21、IFN-γ、IL-1α、IL-1β、IL-1ra、IL-18、IL-33、IL-36α、IL-36β、IL-36γ、IL-36ra、IL-37、IL-38、IL-3、IL-5、IL-6、IL-11、IL-13、IL-23、顆粒球-巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF)、顆粒球-群落刺激因子(G-CSF)、白血病抑制因子(LIF)、幹細胞因子(SCF)、促血小板生成素(TPO)、巨噬細胞-群落刺激因子(M-CSF)、促紅血球生成素(EPO)、Flt-3、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IL-19、IL-20、IL-22、IL-24、TNF-α、TNF-β、BAFF、APRIL、淋巴毒素β (TNF-γ)、IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E、IL-17F、IL-25、TSLP、IL-35、IL-27、TGF-β或其組合。
如請求項57至67中任一項之EV，其中該免疫調節劑包含支持生發中心反應所需之細胞內相互作用之蛋白質。
如請求項77之EV，其中該支持生發中心反應所需之細胞內相互作用之蛋白質包含信號傳導淋巴球活化分子(SLAM)家族成員、SLAM相關蛋白(SAP)、ICOS-ICOSL、CD40-40L、CD28/B7、PD-1/L1、IL-4/IL4R、IL21/IL21R、TLR4、TLR7、TLR8、TLR9、CD180、CD22或其組合。
如請求項78之EV，其中該SLAM家族成員包含SLAM、CD48、CD229 (Ly9)、Ly108、2B4、CD84、NTB-A、CRACC、BLAME、CD2F-10或其組合。
一種包含(i)抗原及(ii)免疫調節劑之經分離之細胞外囊泡，其中： a. 該抗原連接至該EV之腔表面上之第一支架Y，且該免疫調節劑連接至該EV之腔表面上之第二支架Y； b. 該抗原連接至該EV之腔表面上之支架Y，且該免疫調節劑係在該EV之腔中； c. 該抗原係在該EV之腔中，且該免疫調節劑連接至該EV之腔表面上之支架Y； d. 該抗原連接至該EV之腔表面上之支架Y，且該免疫調節劑連接至該EV之外表面上之支架X； e. 該抗原係在該EV之腔中，且該免疫調節劑連接至該EV之外表面上之支架X； f. 該抗原連接至該EV之腔表面上之支架Y，且該免疫調節劑連接至該EV之腔表面上之支架X； g. 該抗原係在該EV之腔中，且該免疫調節劑連接至該EV之腔表面上之支架X； h. 該抗原連接至該EV之腔表面上之支架X，且該免疫調節劑連接至該EV之外表面上之該支架X； i. 該抗原連接至該EV之外表面上之第一支架X，且該免疫調節劑連接至該EV之外表面上之第二支架X； j. 該抗原連接至該EV之外表面上之支架X，且該免疫調節劑連接至該EV之腔表面上之支架Y； k. 該抗原連接至該EV之外表面上之支架X，且該免疫調節劑係在該EV之腔中； l. 該抗原連接至該EV之外表面上之支架X，且該免疫調節劑連接至該EV之腔表面上之該支架X； m. 該抗原連接至該EV之腔表面上之第一支架X，且該免疫調節劑連接至該EV之腔表面上之第二支架X； n. 該抗原連接至該EV之腔表面上之支架X，且該免疫調節劑連接至該EV之腔表面上之支架Y； o. 該抗原連接至該EV之腔表面上之支架X，且該免疫調節劑係在該EV之腔中； p. 該抗原連接至該EV之外表面上之第一支架X，且該免疫調節劑連接至該EV之腔表面上之第二支架X； q. 該抗原連接至該EV之腔表面上之第一支架X，且該免疫調節劑連接至該EV之外表面上之第二支架X； r. 該抗原係在該EV之腔中，且該免疫調節劑係在該EV之腔中； s. 該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該免疫調節劑直接連接至該EV之腔表面； t. 該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該免疫調節劑係在該EV之腔中； u. 該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該免疫調節劑連接至該EV之腔表面上之支架Y； v. 該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該免疫調節劑連接至該EV之腔表面上之支架X； w. 該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該免疫調節劑直接連接至該EV之外部； x. 該抗原直接連接至該EV之腔表面，且該免疫調節劑連接至該EV外部上之支架X； y. 該抗原連接至該EV之腔表面上之支架Y，且該免疫調節劑直接連接至該EV之腔表面； z. 該抗原連接至該EV之腔表面上之支架Y，且該免疫調節劑直接連接至該EV之外部； aa. 該抗原連接至該EV之腔表面上之支架X，且該免疫調節劑直接連接至該EV之腔表面； bb. 該抗原連接至該EV之腔表面上之支架X，且該免疫調節劑直接連接至該EV之外部； cc. 該抗原係在該EV之腔中，且該免疫調節劑直接連接至該EV之腔表面；或 dd. 該抗原係在該EV之腔中，且該免疫調節劑直接連接至該EV之外部。
如請求項80之EV，其進一步包含佐劑。
如請求項81之EV，其中該佐劑直接連接至該EV之腔表面或外表面。
如請求項81之EV，其中該佐劑連接至該EV之外表面上之支架X或在該EV之腔中。
如請求項81之EV，其中該佐劑連接至該EV之腔表面上之支架Y。
如請求項81之EV，其中該佐劑係在該EV之腔中。
如請求項1至85中任一項之EV，其中該抗原係腫瘤抗原。
如請求項86之EV，其中該腫瘤抗原包含α-胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、上皮腫瘤抗原(ETA)、黏蛋白1 (MUC1)、Tn-MUC1、黏蛋白16 (MUC16)、酪胺酸酶、黑色素瘤相關抗原(MAGE)、腫瘤蛋白p53 (p53)、CD4、CD8、CD45、CD80、CD86、程式化死亡配位體1 (PD-L1)、程式化死亡配位體2 (PD-L2)、NY-ESO-1、PSMA、TAG-72、HER2、GD2、cMET、EGFR、間皮素、VEGFR、α-葉酸受體、CE7R、IL-3、癌睪丸抗原、MART-1 gp100、TNF相關之細胞凋亡誘導配位體、Brachyury (例如黑色素瘤中之抗原(PRAME))、威爾姆氏瘤1 (Wilms tumor 1，WT1)、CD19、CD22或其任何組合。
如請求項1至85中任一項之EV，其中該抗原源自細菌、病毒、真菌、原生動物或其任何組合。
如請求項88之EV，其中該抗原源自致癌病毒。
如請求項88之EV，其中該抗原源自人類γ疱疹病毒4 (艾伯斯坦-巴爾病毒(Epstein Barr virus))、A型流行性感冒病毒、B型流行性感冒病毒、巨細胞病毒、金黃色葡萄球菌(staphylococcus aureus)、結核分枝桿菌(mycobacterium tuberculosis)、沙眼披衣菌(chlamydia trachomatis)、HIV (例如HIV-2)、冠狀病毒(例如COVID-19、MERS-CoV及SARS CoV)、線狀病毒(例如馬爾堡病毒(Marburg)及伊波拉病毒(Ebola))、釀膿鏈球菌(Streptococcus pyogenes)、肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)、瘧原蟲(Plasmodia)屬(例如間日瘧原蟲(Plasmodia vivax)及惡性瘧原蟲(Plasmodia falciparum))、屈公病病毒(Chikungunya virus)、人類乳頭瘤病毒(HPV)、B型肝炎、C型肝炎、人類疱疹病毒8、默克爾細胞多瘤病毒(Merkel cell polyomavirus，MCV)、布尼亞病毒(bunyavirus)(例如漢坦病毒(hanta virus))、沙粒病毒(arena virus)(例如LCMV及賴薩病毒(Lassa virus))、黃病毒(flavivirus)(例如登革熱(dengue)、茲卡病毒(Zika)、日本腦炎、西尼羅河病毒(west nile)及黃熱病)、腸病毒(例如小兒麻痺症)、星狀病毒(例如胃腸炎)、彈狀病毒科(rhabdoviridae)(例如狂犬病)、伯氏疏螺旋體(Borrelia burgdorferi)及梅氏疏螺旋體(Burrelia mayonii)(例如萊姆病(Lyme disease))、單純疱疹病毒2 (HSV2)、克雷伯氏菌屬(Klebsiella sp.)、綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa)、腸球菌屬(Enterococcus sp.)、變形桿菌屬(Proteus sp.)、腸桿菌屬(Enterobacter sp.)、放線菌屬(Actinobacter sp.)、凝固酶陰性葡萄球菌(coagulase-negative staphylococci，CoNS)、黴漿菌屬(Mycoplasma sp.)、腺病毒、腺相關病毒(AAV)或其組合。
如請求項1至79及81至90中任一項之EV，該佐劑係干擾素基因刺激蛋白(STING)促效劑、類鐸受體(TLR)促效劑、發炎介質、RIG-I促效劑、半乳糖苷神經醯胺(α-gal-cer) (NKT促效劑)、熱休克蛋白(例如HSP65及HSP70)、C型凝集素促效劑(例如β葡聚糖(Dectin 1)、幾丁質及卡特蘭多糖(curdlan))或其任何組合。
如請求項91之EV，其中該佐劑係STING促效劑。
如請求項92之EV，其中該STING促效劑包含環狀二核苷酸STING促效劑或非環狀二核苷酸STING促效劑。
如請求項91之EV，其中該佐劑係TLR促效劑。
如請求項94之EV，其中該TLR促效劑包含TLR2促效劑(例如脂磷壁酸、非典型LPS、MALP-2及MALP-404、OspA、孔蛋白、LcrV、脂甘露聚糖、GPI錨、溶血磷脂醯絲胺酸、脂磷聚糖(LPG)、糖磷脂醯肌醇(GPI)、酵母聚糖、hsp60、gH/gL糖蛋白、血球凝集素)、TLR3促效劑(例如雙股RNA，例如聚(I:C))、TLR4促效劑(例如脂多糖(LPS)、脂磷壁酸、β-防禦素2、纖連蛋白EDA、HMGB1、snapin、生腱蛋白C)、TLR5促效劑(例如鞭毛蛋白)、TLR6促效劑、TLR7/8促效劑(例如單股RNA、CpG-A、聚G10、聚G3、雷西莫特(Resiquimod))、TLR9促效劑(例如未甲基化之CpG DNA)或其任何組合。
如請求項1至95中任一項之EV，其中該EV係胞外體。
如請求項1至96中任一項之EV，其進一步包含靶向部分。
如請求項97之EV，其中該靶向部分特異性結合至樹突細胞之標記物。
如請求項98之EV，其中該標記物僅存在於樹突細胞上。
如請求項98或99之EV，其中該樹突細胞包含漿細胞樣樹突細胞(pDC)、髓樣/常規樹突細胞1 (cDC1)、髓樣/常規樹突細胞2 (cDC2)、發炎性單核球源性樹突細胞、朗格漢斯細胞(Langerhans cell)、真皮樹突細胞、表現溶菌酶之樹突細胞(LysoDC)、庫弗氏細胞(Kupffer cell)或其任何組合。
如請求項100之EV，其中該樹突細胞係cDC1。
如請求項98至101中任一項之EV，其中該標記物包含C型凝集素結構域家族9成員A (Clec9a)蛋白、樹突細胞特異性細胞間黏著分子-3-結合非整聯蛋白(DC-SIGN)、CD207、CD40、Clec6、樹突細胞免疫受體(DCIR)、DEC-205、凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體-1 (LOX-1)、MARCO、Clec12a、Clec10a、DC-去唾液酸糖蛋白受體(DC-ASGPR)、DC免疫受體2 (DCIR2)、Dectin-1、巨噬細胞甘露糖受體(MMR)、BDCA-1 (CD303、Clec4c)、Dectin-2、Bst-2 (CD317)、朗格漢斯蛋白(Langerin)、CD206、CD11b、CD11c、CD123、CD304、XCR1、AXL、Siglec 6、CD209、SIRPA、CX3CR1、GPR182、CD14、CD16、CD32、CD34、CD38、CD10或其任何組合。
如請求項102之EV，其中該標記物係Clec9a蛋白。
如請求項97之EV，其中該靶向部分特異性結合至T細胞之標記物。
如請求項104之EV，其中該標記物包含CD3分子。
如請求項97至105中任一項之EV，其中該靶向部分直接連接至該EV之外表面。
如請求項97至105中任一項之EV，其中該靶向部分連接至該EV之外表面上之支架X。
如請求項106之EV，其中該靶向部分藉由連接體直接連接至該EV之外表面。
如請求項107之EV，其中該靶向部分藉由連接體連接至該支架X。
如請求項108或109之EV，其中該連接體係多肽。
如請求項108或109之EV，其中該連接體係非多肽部分。
如請求項108至111中任一項之EV，其中該連接體包含馬來醯亞胺部分。
如請求項108至111中任一項之EV，其中該連接體包含膽固醇部分。
一種醫藥組合物，其包含如請求項1至113中任一項之EV及醫藥學上可接受之載劑。
一種細胞，其產生如請求項1至113中任一項之EV。
一種包含一或多個載體之細胞，其中該等載體包含編碼以下之核酸序列：(i)請求項1至113中之任一項中之抗原、(ii)請求項1至79及81至113中之任一項中之佐劑、(iii)請求項57至113中之任一項中之免疫調節劑、(iv)請求項97至113中之任一項中之靶向部分或(v)其組合。
一種套組，其包含如請求項1至113中任一項之EV及使用說明書。
一種EV藥物結合物，其包含如請求項1至113中任一項之EV。
一種製備EV之方法，其包括在適宜條件下培養如請求項115或116之細胞及獲得該等EV。
一種誘導有需要個體之免疫反應之方法，其包括向該個體投與如請求項1至113中任一項之EV。
一種預防或治療有需要個體之疾病之方法，其包括投與如請求項1至113中任一項之EV，其中該疾病與抗原相關。
如請求項121之方法，其中該疾病係癌症。
如請求項122之方法，其中該癌症包含膀胱癌、子宮頸癌、腎細胞癌、睪丸癌、結腸直腸癌、肺癌、頭頸癌、卵巢癌、淋巴瘤、肝癌、神經膠母細胞瘤、黑色素瘤、骨髓瘤、白血病、胰臟癌或其組合。
如請求項121之方法，其中該疾病係感染。
如請求項120至124中任一項之方法，其中該EV係以非經腸、經口、靜脈內、肌內、腫瘤內、鼻內、皮下或腹膜內方式投與。
如請求項120至125中任一項之方法，其包括投與另一治療劑。
一種抑制或降低個體之癌症轉移之方法，該方法包括向有需要之該個體投與如請求項1至113中任一項之EV。
如請求項19、20及24至113中任一項之EV、如請求項114之醫藥組合物、如請求項115或116之細胞、如請求項117之套組、如請求項118之EV藥物結合物或如請求項119至127中任一項之方法，其中該支架Y包含N末端結構域(ND)及效應結構域(ED)，其中該ND及/或該ED與該EV之腔表面締合。
如請求項128之EV、醫藥組合物、細胞、套組或方法，其中該ND經由肉豆蔻醯化與胞外體之腔表面締合。
如請求項128或129之EV、醫藥組合物、細胞、套組或方法，其中該ED藉由離子相互作用與胞外體之腔表面締合。
如請求項128至130中任一項之EV、醫藥組合物、細胞、套組或方法，其中該ED在序列中包含(i)一鹼性胺基酸或(ii)兩個或更多個鹼性胺基酸，其中該鹼性胺基酸係選自由以下組成之群：Lys、Arg、His及其任何組合。
如請求項131之EV、醫藥組合物、細胞、套組或方法，其中該鹼性胺基酸係(Lys)n，其中n係介於1與10之間的整數。
如請求項128至132中任一項之EV、醫藥組合物、細胞、套組或方法，其中該ED包含Lys (K)、KK、KKK、KKKK (SEQ ID NO: 205)、KKKKK (SEQ ID NO: 206)、Arg (R) 、RR、RRR、RRRR (SEQ ID NO: 207)；RRRRR (SEQ ID NO: 208)、KR、RK、KKR、KRK、RKK、KRR、RRK、(K/R)(K/R)(K/R)(K/R) (SEQ ID NO: 209)、(K/R)(K/R)(K/R)(K/R)(K/R) (SEQ ID NO: 210)或其任何組合。
如請求項128至133中任一項之EV、醫藥組合物、細胞、套組或方法，其中該ND包含如G:X2:X3:X4:X5:X6中所示之胺基酸序列，其中G代表Gly；其中「:」代表肽鍵，其中該X2至該X6中之每一者獨立地係胺基酸，且其中該X6包含鹼性胺基酸。
如請求項134之EV、醫藥組合物、細胞、套組或方法，其中： (i) 該X2係選自由以下組成之群：Pro、Gly、Ala及Ser； (ii) 該X4係選自由以下組成之群：Pro、Gly、Ala、Ser、Val、Ile、Leu、Phe、Trp、Tyr、Gln及Met； (iii) 該X5係選自由以下組成之群：Pro、Gly、Ala及Ser； (iv) 該X6係選自由以下組成之群：Lys、Arg及His；或 (v) (i)至(iv)之任何組合。
如請求項128至135中任一項之EV、醫藥組合物、細胞、套組或方法，其中該ND包含G:X2:X3:X4:X5:X6之胺基酸序列，其中 (i) G代表Gly； (ii) 「:」代表肽鍵； (iii) 該X2係選自由Pro、Gly、Ala及Ser組成之群之胺基酸； (iv) 該X3係胺基酸； (v) 該X4係選自由Pro、Gly、Ala、Ser、Val、Ile、Leu、Phe、Trp、Tyr、Gln及Met組成之群之胺基酸； (vi) 該X5係選自由Pro、Gly、Ala及Ser組成之群之胺基酸；且 (vii) 該X6係選自由Lys、Arg及His組成之群之胺基酸。
如請求項134至136中任一項之EV、醫藥組合物、細胞、套組或方法，其中該X3係選自由以下組成之群：Asn、Gln、Ser、Thr、Asp、Glu、Lys、His及Arg。
如請求項128至137中任一項之EV、醫藥組合物、細胞、套組或方法，其中該ND與該ED藉由連接體接合。
如請求項138之EV、醫藥組合物、細胞、套組或方法，其中該連接體包含一或多個胺基酸。
如請求項128至139中任一項之EV、醫藥組合物、細胞、套組或方法，其中該ND包含選自由以下組成之群之胺基酸序列：(i) GGKLSKK (SEQ ID NO: 211)、(ii) GAKLSKK (SEQ ID NO: 212)、(iii) GGKQSKK (SEQ ID NO: 213)、(iv) GGKLAKK (SEQ ID NO: 214)、(v) GGKLSK (SEQ ID NO: 215)或(vi)其任何組合。
如請求項140之EV、醫藥組合物、細胞、套組或方法，其中該ND包含選自由以下組成之群之胺基酸序列：(i) GGKLSKKK (SEQ ID NO: 238)、(ii) GGKLSKKS (SEQ ID NO: 239)、(iii) GAKLSKKK (SEQ ID NO: 240)、(iv) GAKLSKKS (SEQ ID NO: 241)、(v) GGKQSKKK (SEQ ID NO: 242)、(vi) GGKQSKKS (SEQ ID NO: 243)、(vii) GGKLAKKK (SEQ ID NO: 244)、(viii) GGKLAKKS (SEQ ID NO: 245)及(ix)其任何組合。
如請求項128至141中任一項之EV、醫藥組合物、細胞、套組或方法，其中該ND包含胺基酸序列GGKLSKK (SEQ ID NO: 211)。
如請求項128至142中任一項之EV、醫藥組合物、細胞、套組或方法，其中該支架Y之長度為至少約8個、至少約9個、至少約10個、至少約11個、至少約12個、至少約13個、至少約14個、至少約15個、至少約16個、至少約17個、至少約18個、至少約19個、至少約20個、至少約21個、至少約22個、至少約23個、至少約24個、至少約25個、至少約30個、至少約35個、至少約40個、至少約45個、至少約50個、至少約55個、至少約60個、至少約65個、至少約70個、至少約75個、至少約80個、至少約85個、至少約90個、至少約95個、至少約100個、至少約105個、至少約110個、至少約120個、至少約130個、至少約140個、至少約150個、至少約160個、至少約170個、至少約180個、至少約190個或至少約200個胺基酸。
如請求項128至143中任一項之EV、醫藥組合物、細胞、套組或方法，其中該支架Y包含(i) GGKLSKKKKGYNVN (SEQ ID NO: 246)、(ii) GAKLSKKK KGYNVN (SEQ ID NO: 247)、(iii) GGKQSKKKKGYNVN (SEQ ID NO: 248)、(iv) GGKLAKKKKGYNVN (SEQ ID NO: 249)、(v) GGKLSKKKKGYSGG (SEQ ID NO: 250)、(vi) GGKLSKKKKGSGGS (SEQ ID NO: 251)、(vii) GGKLSKKK KSGGSG (SEQ ID NO: 252)、(viii) GGKLSKKKSGGSGG (SEQ ID NO: 253)、(ix) GGKLSKKSGGSGGS (SEQ ID NO: 254)、(x) GGKLSKSGGSGGSV (SEQ ID NO: 255)或(xi) GAKKSKKRFSFKKS (SEQ ID NO: 256)。
如請求項128至143中任一項之EV、醫藥組合物、細胞、套組或方法，其中該支架Y係由以下組成：(i) GGKLSKKKKGYNVN (SEQ ID NO: 246)、(ii) GAKLSKKKKGYNVN (SEQ ID NO: 247)、(iii) GGKQSKKK KGYNVN (SEQ ID NO: 248)、(iv) GGKLAKKKKGYNVN (SEQ ID NO: 249)、(v) GGKLSKKKKGYSGG (SEQ ID NO: 250)、(vi) GGKLSKKKKGSGGS (SEQ ID NO: 251)、(vii) GGKLSKKKKSGGSG (SEQ ID NO: 252)、(viii) GGKLSKK KSGGSGG (SEQ ID NO: 253)、(ix) GGKLSKKSGGSGGS (SEQ ID NO: 254)、(x) GGKLSKSGGSGGSV (SEQ ID NO: 255)或(xi) GAKKSKKRFSFKKS (SEQ ID NO: 256)。
如請求項128至145中任一項之EV、醫藥組合物、細胞、套組或方法，其中該支架Y在N末端不包含Met。
如請求項128至146中任一項之EV、醫藥組合物、細胞、套組或方法，其中該支架Y在支架蛋白之N末端包含肉豆蔻醯化之胺基酸殘基。
如請求項147之EV、醫藥組合物、細胞、套組或方法，其中在該支架Y之N末端之胺基酸殘基係Gly。
如請求項147或148之EV、醫藥組合物、細胞、套組或方法，其中在該支架Y之N末端之胺基酸殘基係合成的。
如請求項147或1482之EV、醫藥組合物、細胞、套組或方法，其中在該支架Y之N末端之胺基酸殘基係甘胺酸類似物。