KR20220004035A - 백신 전달을 위한 세포외 소포 - Google Patents

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KR20220004035A
KR20220004035A KR1020217034252A KR20217034252A KR20220004035A KR 20220004035 A KR20220004035 A KR 20220004035A KR 1020217034252 A KR1020217034252 A KR 1020217034252A KR 20217034252 A KR20217034252 A KR 20217034252A KR 20220004035 A KR20220004035 A KR 20220004035A
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KR
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scaffold
linked
antigen
adjuvant
luminal surface
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KR1020217034252A
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레이몬드 제이. 모니즈
루셀 이. 맥코넬
니키 로스
크리스틴 맥코이
티모시 제이. 수스
케 쓔
케 o
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코디악 바이오사이언시즈, 인크.
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Abstract

본 개시내용은 페이로드(예를 들어, 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제) 및/또는 표적화 모이어티를 포함하는 세포외 소포체(EV), 예를 들어 엑소좀에 관한 것이다. 본원에는 또한 EV(예를 들어, 엑소좀)를 제조하는 방법 및 질환 또는 장애, 예를 들어 암, 이식편 대 숙주 질환(GvHD), 자가면역 질환, 감염성 질환 또는 섬유증 질환을 치료하고/하거나 예방하기 위해 EV(예를 들어, 엑소좀)를 사용하는 방법이 제공된다.

Description

백신 전달을 위한 세포외 소포
관련 출원의 상호 참조
이 PCT 출원은 2019년 3월 21일에 출원된 미국 가출원 제62/822,008호; 2019년 4월 17일에 출원된 미국 가출원 제62/835,437호; 2019년 4월 29일에 출원된 미국 가출원 제62/840,348호; 2019년 8월 23일에 출원된 미국 가출원 제62/891,048호; 2019년 9월 16일에 출원된 미국 가출원 제62/901,166호; 2019년 12월 10일에 출원된 미국 가출원 제62/946,280호; 및 2020년 3월 2일에 출원된 미국 가출원 제62/984,146호의 우선권 이익을 주장하고, 이들의 각각은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
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본 출원에 제출된 전자로 제출된 서열 목록(명칭: 4000_032PC07_Sequencelisting_ST25.txt, 크기: 283,505 바이트; 및 생성일: 2020년 3월 20일)의 내용은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
기술분야
본 개시내용은 비제한적인 예로서 암, 이식편 대 숙주 질환(GvHD), 자가면역 질환, 감염성 질환 및 섬유증 질환을 포함하는 일련의 의학 장애를 치료하고/하거나 예방하기 위해 사용될 수 있는 백신으로서 유용한 변형된 세포외 소포체, 예를 들어 엑소좀(예를 들어, 하나 이상의 페이로드, 예를 들어 항원 및 아쥬반트/면역 조절제를 포함함)에 관한 것이다. 본 개시내용은 또한 이러한 EV, 예를 들어 엑소좀을 제조하는 방법 및 이의 용도에 관한 것이다.
EV, 예를 들어 엑소좀은 세포간 통신의 중요한 매개자이다. 이들은 암과 같은 많은 질환의 진단 및 예후에서 또한 중요한 바이오마커이다. 약물 전달 비히클로서, EV, 예를 들어 엑소좀은 많은 치료학적 분야에서 새로운 치료 양상으로서 전통적인 약물 전달 방법(예를 들어, 펩타이드 면역화, DNA 백신)에 비해 많은 이점을 제공한다. 그러나, 많은 EV, 예를 들어 엑소좀은 이의 이점에도 불구하고 제한된 임상 효능을 갖는다. 예를 들어, 수지상-세포 유래된 엑소좀(DEX)은 수술 불가능한 비소세포 폐암(NSCLC: non-small cell lung cancer)을 갖는 환자에서 제1선 화학요법 후 유지 면역요법으로서 II상 임상 실험에서 조사되었다. 그러나, 일차 종점(화학요법 중단 후 4개월에 진행무 생존(PFS)을 갖는 환자의 적어도 50%)이 도달되지 않았으므로, 그 실험이 종결되었다. Besse, B., 등, Oncoimmunology 5(4):e1071008 (2015).
따라서, EV-기반 기술의 치료학적 사용 및 다른 적용이 더 잘 가능하게 하는 데 새롭고 더 효과적인 조작된-EV, 예를 들어 엑소좀이 필요하다.
개시의 요약
본원에는 (i) 적어도 하나의 항원 및 (ii) 적어도 하나의 아쥬반트를 포함하는 단리된 EV, 예를 들어 엑소좀이 제공된다. 일부 양태에서, EV는 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 이것 초과의 상이한 항원을 포함한다. 일부 양태에서, EV는 적어도 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 이것 초과의 상이한 아쥬반트를 포함한다. 일부 양태에서, 항원은 MHC 클래스 I 및/또는 II 분자 상에 제시되지 않는다.
일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 자연에 존재하는 항원-제시 세포로부터 유래되지 않는다. 소정의 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 자연에 존재하는 수지상 세포, 자연에 존재하는 B 세포, 자연에 존재하는 비만 세포, 자연에 존재하는 대식세포, 자연에 존재하는 호중구, 자연에 존재하는 쿠퍼-브로비츠 세포, 이들 세포 중 어느 것으로부터 유래된 세포, 또는 임의의 이들의 조합으로부터 유래되지 않는다.
일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 세포 면역 반응, 체액 면역 반응, 또는 세포 면역 반응과 체액 면역 반응 둘 다를 유도한다. 소정의 양태에서, 세포 면역 반응, 체액 면역 반응, 또는 세포 면역 반응과 체액 면역 반응 둘 다의 유도는 (i) 아쥬반트 또는 항원을 포함하지 않는 상응하는 EV, 예를 들어 엑소좀 또는 (ii) EV가 없는 아쥬반트 또는 항원(즉, 비-EV 전달 비히클)과 비교하여 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 100% 또는 이것 초과만큼 증가한다.
일부 양태에서, 본원에 기재된 EV, 예를 들어 엑소좀은 CD4+ T 세포 반응, CD8+ T 세포 반응, 또는 CD4+ 세포 반응과 CD8+ T 세포 반응 둘 다를 유도한다. 소정의 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 T 세포의 T 세포 수용체(TCR: T Cell Receptor)와 직접 상호작용하지 않는다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 제1 스캐폴드 모이어티를 추가로 포함한다. 소정의 양태에서, 항원은 제1 스캐폴드 모이어티에 연결된다. 일부 양태에서, 아쥬반트는 제1 스캐폴드 모이어티에 연결된다. 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 제2 스캐폴드 모이어티를 추가로 포함한다. 소정의 양태에서, 항원은 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되고, 아쥬반트는 제2 스캐폴드 모이어티에 연결된다. 일부 양태에서, 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티는 동일하다. 다른 양태에서, 제1 스캐폴드 모이어티 및 제2 스캐폴드 모이어티는 상이하다.
일부 양태에서, 제1 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 X이다. 다른 양태에서, 제1 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 Y이다. 일부 양태에서, 제2 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 X이다. 소정의 양태에서, 제2 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 Y이다.
일부 양태에서, 스캐폴드 X는 (i) EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상에 항원을 앵커링할 수 있거나; (ii) EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상에 항원을 앵커링할 수 있거나; (iii) EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상에 아쥬반트를 앵커링할 수 있거나; (iv) EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상에 아쥬반트를 앵커링할 수 있거나; 또는 (v) 이들의 조합이다. 소정의 양태에서, 스캐폴드 X는 프로스타글란딘 F2 수용체 음성 조절자(PTGFRN 단백질); 바시긴(BSG 단백질); 면역글로불린 슈퍼패밀리 구성원 2(IGSF2 단백질); 면역글로불린 슈퍼패밀리 구성원 3(IGSF3 단백질); 면역글로불린 슈퍼패밀리 구성원 8(IGSF8 단백질); 인테그린 베타-1(ITGB1 단백질); 인테그린 알파-4(ITGA4 단백질); 4F2 세포-표면 항원 중쇄(SLC3A2 단백질); ATP 수송체 단백질의 클래스(ATP1A1, ATP1A2, ATP1A3, ATP1A4, ATP1B3, ATP2B1, ATP2B2, ATP2B3, ATP2B4 단백질), 및 임의의 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 양태에서, 스캐폴드 Y는 (i) EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상에 항원을 앵커링할 수 있거나; (ii) EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상에 아쥬반트를 앵커링할 수 있거나; 또는 (iii) 둘 다이다. 소정의 양태에서, 스캐폴드 Y는 미리스토일화된 알라닌 농후 단백질 키나제 C 기질(MARCKS 단백질); 미리스토일화된 알라닌 농후 단백질 키나제 C 기질 유사 1(MARCKSL1 단백질); 뇌 산 가용성 단백질 1(BASP1 단백질), 및 임의의 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 양태에서, 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀(예를 들어, 본원에 기재된 것)의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀(예를 들어, 본원에 기재된 것)의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 모이어티에 연결된다. 이러한 양태의 일부에서, (a) 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티의 각각은 스캐폴드 Y이거나; (b) 제1 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 Y이고, 제2 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 X이거나; (c) 제1 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 X이고, 제2 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 Y이거나; (d) 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티의 각각은 스캐폴드 X이다.
일부 양태에서, 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강에 있다. 소정의 양태에서, 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결된다. 추가의 양태에서, 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되고, 아쥬반트는 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 모이어티에 연결된다. 이러한 양태의 일부에서, (a) 제1 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 Y이고, 제2 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 X이거나; (b) 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티의 각각은 스캐폴드 X이다.
일부 양태에서, 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 모이어티에 연결된다. 소정의 이들 양태에서, (a) 제1 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 X이고, 제2 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 Y이거나; (b) 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티의 각각은 스캐폴드 X이다.
일부 양태에서, 항원은 내강에 있거나, EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면에 연결되고, 아쥬반트는 내강에 있거나 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면에 연결된다.
일부 양태에서, 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 모이어티에 연결된다. 이러한 양태의 일부에서, 제1 스캐폴드 및 제2 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 X이다.
일부 양태에서, 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다. 소정의 이들 양태에서, 제1 스캐폴드는 스캐폴드 X이다.
일부 양태에서, 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결된다. 이러한 양태의 일부에서, 제1 스캐폴드는 스캐폴드 X이다.
일부 양태에서, 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결된다. 소정의 양태에서, 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결된다. 이러한 양태의 일부에서, 제1 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 X이다.
일부 양태에서, (i) 항원은 링커에 의해 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되거나, (ii) 항원은 링커에 의해 제2 스캐폴드 모이어티에 연결되거나, (iii) 아쥬반트는 링커에 의해 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되거나, (iv) 아쥬반트는 링커에 의해 제2 모이어티에 연결되거나, (v) 이들의 조합이다. 소정의 양태에서, 링커는 폴리펩타이드이다. 다른 양태에서, 링커는 비폴리펩타이드 모이어티이다. 일부 양태에서, 링커는 말레이미드 모이어티를 포함한다. 일부 양태에서, 링커는 콜레스테롤 모이어티를 포함한다.
일부 양태에서, 제1 스캐폴드 모이어티 또는 제2 스캐폴드 모이어티는 PTGFRN 단백질이다. 소정의 양태에서, 제1 스캐폴드 모이어티 또는 제2 스캐폴드 모이어티는 서열 번호 33에 기재된 것과 같은 아미노산 서열을 포함한다. 추가의 양태에서, 제1 스캐폴드 모이어티 또는 제2 스캐폴드 모이어티는 서열 번호 1과 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 양태에서, 제1 스캐폴드 모이어티 또는 제2 스캐폴드 모이어티는 BASP1 단백질이다. 일부 양태에서, 제1 스캐폴드 모이어티 또는 제2 스캐폴드 모이어티는 (M)(G)(π)(X)(φ/π)(π)(+)(+) 또는 (G)(π)(X)(φ/π)(π)(+)(+)의 펩타이드를 포함하고, 각각의 삽입어구로 제시된 위치는 아미노산을 나타내고, π는 Pro, Gly, Ala 및 Ser로 이루어진 군으로부터 선택된 임의의 아미노산이고, X는 임의의 아미노산이고, φ는 Val, Ile, Leu, Phe, Trp, Tyr 및 Met로 이루어진 군으로부터 선택된 임의의 아미노산이고, (+)는 Lys, Arg 및 His로 이루어진 군으로부터 선택된 임의의 아미노산이고; 위치 5는 (+)가 아니고, 위치 6은 (+)도 (Asp 또는 Glu)도 아니다. 소정의 양태에서, 제1 스캐폴드 모이어티 또는 제2 스캐폴드 모이어티는 서열 번호 50 내지 서열 번호 155 중 어느 하나에 기재된 것과 같은 아미노산 서열을 포함한다. 추가의 양태에서, 제1 스캐폴드 모이어티 또는 제2 스캐폴드 모이어티는 서열 번호 3과 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본원에는 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하는 EV, 예를 들어 엑소좀이 또한 제공되고, 여기서 (a) 항원은 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 Y에 연결되거나; (b) 항원은 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있거나; (c) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나; (d) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나; (e) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나; (f) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나; (g) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나; (h) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나; (i) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되거나; (j) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나; (k) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있거나; (l) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나; (m) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되거나; (n) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나; (o) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있거나; (p) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되거나; (q) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되거나; (r) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면에 있거나; (s) 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면에 직접 연결되거나; (t) 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강에 있거나; (u) 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나; (v) 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나; (w) 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 아쥬반트는 EV의 외부 표면에 직접 연결되거나; (x) 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 아쥬반트는 EV의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나; (y) 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면에 직접 연결되거나; (z) 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 외부 표면에 직접 연결되거나; (aa) 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면에 직접 연결되거나; (bb) 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 외부 표면에 직접 연결되거나; (cc) 항원은 EV의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면에 직접 연결되거나; (dd) 항원은 EV의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV의 외부에 직접 연결된다.
일부 양태에서, 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)는 면역 조절제를 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 면역 조절제는 EV의 내강 표면 또는 외부 표면에 직접 연결된다. 소정의 양태에서, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 또는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결된다. 추가의 양태에서, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상에 있다.
일부 양태에서, EV는 항원, 아쥬반트 및 면역 조절제를 포함하고, (i) 항원은 링커에 의해 내강 표면에 직접 연결되거나, (ii) 아쥬반트는 링커에 의해 내강 표면에 직접 연결되거나, (iii) 면역 조절제는 링커에 의해 내강 표면에 직접 연결되거나, (iv) 항원은 링커에 의해 외부 표면에 직접 연결되거나, (v) 아쥬반트는 링커에 의해 외부 표면에 직접 연결되거나, (vi) 면역 조절제는 링커에 의해 외부 표면에 직접 연결되거나, (vii) 이들의 조합이다. 일부 양태에서, EV는 항원, 아쥬반트 및 면역 조절제를 포함하고, (i) 항원은 링커에 의해 스캐폴드 X에 연결되거나, (ii) 아쥬반트는 링커에 의해 스캐폴드 X에 연결되거나, (iii) 면역 조절제는 링커에 의해 스캐폴드 X에 연결되거나, (iv) 항원은 링커에 의해 스캐폴드 Y에 연결되거나, (v) 아쥬반트는 링커에 의해 스캐폴드 Y에 연결되거나, (vi) 면역 조절제는 링커에 의해 스캐폴드 Y에 연결되거나, (vii) 이들의 조합이다. 일부 양태에서, 면역 조절제는 EV의 내강에 있다.
일부 양태에서, 링커는 폴리펩타이드이다. 소정의 양태에서, 링커는 비폴리펩타이드 모이어티이다. 일부 양태에서, 링커는 말레이미드 모이어티를 포함한다. 일부 양태에서, 링커는 콜레스테롤 모이어티를 포함한다.
일부 양태에서, 면역 조절제는 음성 관문 조절제에 대한 억제제 또는 음성 관문 조절제의 결합 파트너에 대한 억제제를 포함한다. 소정의 양태에서, 음성 관문 조절제는 세포독성 T-림프구-연관된 단백질 4(CTLA-4: cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4), 예정 세포사 단백질 1(PD-1: programmed cell death protein 1), 림프구-활성화된 유전자 3(LAG-3: lymphocyte-activated gene 3), T-세포 면역글로불린 뮤신-함유 단백질 3(TIM-3: T-cell immunoglobulin mucin-containing protein 3), B 및 T 림프구 감쇠인자(BTLA: B and T lymphocyte attenuator), Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T 세포 면역수용체(TIGIT: T cell immunoreceptor with Ig and ITIM domain), T 세포 활성화의 V-도메인 Ig 억제인자(VISTA: V-domain Ig suppressor of T cell activation), 아데노신 A2a 수용체(A2aR: adenosine A2a receptor), 살해 세포 면역글로불린 유사 수용체(KIR: killer cell immunoglobulin like receptor), 인돌아민 2,3-디옥시게나제(IDO: indoleamine 2,3-dioxygenase), CD20, CD39, CD73, 또는 임의의 이들의 조합을 포함한다.
일부 양태에서, 면역 조절제는 양성 동시자극 분자에 대한 활성인자 또는 양성 동시자극 분자의 결합 파트너에 대한 활성인자를 포함한다. 소정의 양태에서, 양성 동시자극 분자는 TNF 수용체 슈퍼패밀리 구성원(예를 들어, CD120a, CD120b, CD18, OX40, CD40, Fas 수용체, M68, CD27, CD30, 4-1BB, TRAILR1, TRAILR2, TRAILR3, TRAILR4, RANK, OCIF, TWEAK 수용체, TACI, BAFF 수용체, ATAR, CD271, CD269, AITR, TROY, CD358, TRAMP 및 XEDAR)이다. 일부 양태에서, 양성 동시자극 분자에 대한 활성인자는 TNF 슈퍼패밀리 구성원(예를 들어, TNFα, TNF-C, OX40L, CD40L, FasL, LIGHT, TL1A, CD27L, Siva, CD153, 4-1BB 리간드, TRAIL, RANKL, TWEAK, APRIL, BAFF, CAMLG, NGF, BDNF, NT-3, NT-4, GITR 리간드 및 EDA-2)이다. 추가의 양태에서, 양성 동시자극 분자는 CD28-슈퍼패밀리 동시자극 분자(예를 들어, ICOS 또는 CD28)이다. 일부 양태에서, 양성 동시자극 분자에 대한 활성인자는 ICOSL, CD80 또는 CD86이다.
일부 양태에서, 면역 조절제는 사이토카인 또는 사이토카인의 결합 파트너를 포함한다. 소정의 양태에서, 사이토카인은 IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12, IL-15, IL-21, IFN-γ, IL-1α, IL-1β, IL-1ra, IL-18, IL-33, IL-36α, IL-36β, IL-36γ, IL-36ra, IL-37, IL-38, IL-3, IL-5, IL-6, IL-11, IL-13, IL-23, 과립구-대식세포 콜로니 자극 인자(GM-CSF: granulocyte-macrophage colony stimulating factor), 과립구-콜로니 자극 인자(G-CSF: granulocyte-colony stimulating factor), 백혈병 억제 인자(LIF: leukemia inhibitory factor), 줄기 세포 인자(SCF: stem cell factor), 트롬보포이에틴(TPO: thrombopoietin), 대식세포-콜로니 자극 인자(M-CSF: macrophage-colony stimulating factor), 에리스로포이에틴(EPO: erythropoieticn), Flt-3, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, IL-19, IL-20, IL-22, IL-24, TNF-α, TNF-β, BAFF, APRIL, 림프독소 베타(TNF-γ: lymphotoxin beta), IL-17A, IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17E, IL-17F, IL-25, TSLP, IL-35, IL-27, TGF-β, 또는 이들의 조합을 포함한다.
일부 양태에서, 면역 조절제는 배 중심 반응에 필요한 세포내 상호작용을 지지하는 단백질을 포함한다. 소정의 양태에서, 배 중심 반응에 필요한 세포내 상호작용을 지지하는 단백질은 신호전달 림프구 활성화 분자(SLAM: signaling lymphocyte activation molecule) 패밀리 구성원, SLAM-연관된 단백질(SAP: SLAM-associated protein), ICOS-ICOSL, CD40-40L, CD28/B7, PD-1/L1, IL-4/IL4R, IL21/IL21R, TLR4, TLR7, TLR8, TLR9, CD180, CD22, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 양태에서, SLAM 패밀리 구성원은 SLAM 패밀리 구성원 1, CD48, CD229(Ly9), Ly108, 2B4, CD84, NTB-A, CRACC, BLAME, CD2F-10, 또는 이들의 조합을 포함한다.
본원에는 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하는 단리된 EV, 예를 들어 엑소좀이 또한 제공되고, 여기서 (a) 항원은 EV의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 Y에 연결되거나; (b) 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강에 있거나; (c) 항원은 EV의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나; (d) 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나; (e) 항원은 EV의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나; (f) 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나; (g) 항원은 EV의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나; (h) 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나; (i) 항원은 EV의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되거나; (j) 항원은 EV의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나; (k) 항원은 EV의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강에 있거나; (l) 항원은 EV의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나; (m) 항원은 EV의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되거나; (n) 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나; (o) 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강에 있거나; (p) 항원은 EV의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되거나; (q) 항원은 EV의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되거나; (r) 항원은 EV의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV의 내강에 있거나; (s) 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면에 직접 연결되거나; (t) 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강에 있거나; (u) 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나; (v) 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나; (w) 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 면역 조절제는 EV의 외부에 직접 연결되거나; (x) 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 면역 조절제는 EV의 외부 상의 스캐폴드 X에 연결되거나; (y) 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면에 직접 연결되거나; (z) 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 외부에 직접 연결되거나; (aa) 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면에 직접 연결되거나; (bb) 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 외부에 직접 연결되거나; (cc) 항원은 EV의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면에 직접 연결되거나; (dd) 항원은 EV의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV의 외부에 직접 연결된다.
일부 양태에서, (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하는 EV, 예를 들어 엑소좀은 아쥬반트(예를 들어, 본원에 기재된 것)을 추가로 포함한다. 이러한 양태의 일부에서, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 또는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결된다. 이러한 양태의 일부에서, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결된다. 추가의 양태에서, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다. 일부 양태에서, 아쥬반트는 EV의 내강 표면 또는 외부 표면에 직접 연결된다.
일부 양태에서, 항원은 종양 항원이다. 일부 양태에서, 종양 항원은 알파-태아단백질(AFP: alpha-fetoprotein), 암배아 항원(CEA: carcinoembryonic antigen), 상피 종양 항원(ETA: epithelial tumor antigen), 뮤신 1(MUC1), Tn-MUC1, 뮤신 16(MUC16), 티로시나제, 흑색종-연관된 항원(MAGE: melanoma-associated antigen), 종양 단백질 p53(p53), CD4, CD8, CD45, CD80, CD86, 예정사 리간드 1(PD-L1), 예정사 리간드 2(PD-L2), NY-ESO-1, PSMA, TAG-72, HER2, GD2, cMET, EGFR, 메소텔린, VEGFR, 알파-엽산 수용체, CE7R, IL-3, 암-고환 항원, MART-1 gp100, TNF-관련된 아폽토시스 유도-리간드, 브라큐리(Brachyury)(예를 들어, 흑색종에서의 항원(PRAME)), 윌름스 종양 1(WT1: Wilms tumor 1), CD19, CD22, 또는 임의의 이들의 조합을 포함한다.
일부 양태에서, 항원은 박테리아, 바이러스, 진균, 원생동물, 또는 임의의 이들의 조합으로부터 유래된다. 소정의 양태에서, 항원은 종양발생 바이러스로부터 유래된다. 일부 양태에서, 항원은 인간 감마 헤르페스 바이러스 4(엡스타인-바 바이러스), 인플루엔자 A 바이러스, 인플루엔자 B 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 스타필로코커스 아우레우스, 마이코박테륨 투베쿨로시스, 클라미디아 트라초마티스, HIV(예를 들어, HIV-1, HIV-2), 코로나 바이러스(예를 들어, COVID-19, MERS-CoV 및 SARS CoV), 필로바이러스(예를 들어, 마르부르그 및 에볼라), 스트렙토코커스 피요게네스, 스트렙토코커스 뉴모니아에, 플라스모디아 종(예를 들어, 비박스 및 팔시파룸), 치쿤구니야 바이러스, 인간 유두종 바이러스(HPV: Human Papilloma virus), B형 간염, C형 간염, 인간 헤르페스 바이러스 8, 메르켈 세포 폴리오마바이러스(MCV: Merkel cell polyomavirus), 분야바이러스(예를 들어, 한타 바이러스), 아레나 바이러스(예를 들어, LCMV 및 라사 바이러스), 플라비바이러스(예를 들어, 뎅기, 지카, 일본 뇌염, 웨스트 나일 및 황열), 엔테로바이러스(예를 들어, 소아마비), 아스트로바이러스(예를 들어, 위장염), 랍도비리다에(예를 들어, 광견병), 보렐리아 부르그도르페리 및 부렐리아 메이요니(예를 들어, 라임병), 단순 포진 바이러스 2(HSV2), 클레브시엘라 종, 슈도모나스 아에루기노사, 엔테로코커스 종, 프로테우스 종, 엔테로박터 종, 악티노박터 종, 코아귤라제-음성 스타필로코커스(CoNS), 마이코플라스마 종, 아데노바이러스, 아데노-연관된 바이러스(AAV: Adeno-associated virus), 또는 이들의 조합으로부터 유래된다.
일부 양태에서, 아쥬반트는 인터페론 유전자의 자극제(STING: Stimulator of Interferon Genes) 작용제, 톨양 수용체(TLR: toll-like receptor) 작용제, 염증성 매개자, RIG-I 작용제, 알파-gal-cer(NKT 작용제), 열 충격 단백질(예를 들어, HSP65 및 HSP70), C형 렉틴 작용제(예를 들어, 베타 글루칸(덱틴 1), 키틴 및 쿠르들란), 또는 임의의 이들의 조합이다.
일부 양태에서, 아쥬반트는 STING 작용제이다. 소정의 양태에서, STING 작용제는 환식 디뉴클레오타이드 STING 작용제 또는 이환식 디뉴클레오타이드 STING 작용제를 포함한다.
일부 양태에서, 아쥬반트는 TLR 작용제이다. 소정의 양태에서, TLR 작용제는 TLR2 작용제(예를 들어, 리포테이코산, 비정형 LPS, MALP-2 및 MALP-404, OspA, 포린, LcrV, 리포만난, GPI 앵커, 리소포스파티딜세린, 리포포스포글리칸(LPG), 글리코포스파티딜이노시톨(GPI), 지모산, hsp60, gH/gL 당단백질, 헤마글루티닌), TLR3 작용제(예를 들어, 이중-가닥 RNA, 예를 들어 poly(I:C)), TLR4 작용제(예를 들어, 리포폴리사카라이드(LPS), 리포테이코산, β-데펜신 2, 피브로넥틴 EDA, HMGB1, 스나핀, 테나신 C), TLR5 작용제(예를 들어, 플라겔린), TLR6 작용제, TLR7/8 작용제(예를 들어, 단일-가닥 RNA, CpG-A, Poly G10, Poly G3, 레시퀴모드), TLR9 작용제(예를 들어, 비메틸화된 CpG DNA), 또는 임의의 이들의 조합을 포함한다.
일부 양태에서, 본원에 개시된 EV는 엑소좀이다.
일부 양태에서, 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)는 표적화 모이어티를 추가로 포함한다. 소정의 양태에서, 표적화 모이어티는 수지상 세포에 대한 마커에 특이적으로 결합한다. 소정의 양태에서, 마커는 수지상 세포에 오직 존재한다. 일부 양태에서, 수지상 세포는 형질세포양 수지상 세포(pDC), 골수성/종래의 수지상 세포 1(cDC1), 골수성/종래의 수지상 세포 2(cDC2), 염증성 단핵구 유래된 수지상 세포, 랑게르한스 세포, 진피 수지상 세포, 리소자임-발현 수지상 세포(LysoDC), 쿠퍼 세포, 또는 임의의 이들의 조합을 포함한다. 소정의 양태에서, 수지상 세포는 cDC1이다. 추가의 양태에서, 마커는 C형 렉틴 도메인 패밀리 9 구성원 A(Clec9a) 단백질, 수지상 세포-특이적 세포간 부착 분자-3-그래빙 비인테그린(DC-SIGN), CD207, CD40, Clec6, 수지상 세포 면역수용체(DCIR), DEC-205, 렉틴-유사 산화된 저밀도 지단백 수용체-1(LOX-1), MARCO, Clec12a, Clec10a, DC-아시알로당단백질 수용체(DC-ASGPR), DC 면역수용체 2(DCIR2), 덱틴-1, 대식세포 만노스 수용체(MMR), BDCA-1(CD303, Clec4c), 덱틴-2, Bst-2(CD317), 랑게린, CD206, CD11b, CD11c, CD123, CD304, XCR1, AXL, 시글렉 6, CD209, SIRPA, CX3CR1, GPR182, CD14, CD16, CD32, CD34, CD38, CD10, 또는 임의의 이들의 조합을 포함한다. 소정의 양태에서, 마커는 Clec9a 단백질이다.
일부 양태에서, 표적화 모이어티는 T 세포에 대한 마커에 특이적으로 결합한다. 소정의 양태에서, 마커는 CD3 분자를 포함한다.
일부 양태에서, 표적화 모이어티는 EV의 외부 표면에 직접 연결된다. 일부 양태에서, 표적화 모이어티는 EV의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 표적화 모이어티는 링커에 의해 EV의 외부 표면에 직접 연결된다. 일부 양태에서, 표적화 모이어티는 링커에 의해 스캐폴드 X에 연결된다. 소정의 양태에서, 링커는 폴리펩타이드이다. 일부 양태에서, 링커는 비폴리펩타이드 모이어티이다. 일부 양태에서, 링커는 말레이미드 모이어티를 포함한다. 일부 양태에서, 링커는 콜레스테롤 모이어티를 포함한다.
일부 양태에서, 본원에 기재된 EV(예를 들어, 엑소좀)의 스캐폴드 Y는 N 말단 도메인(ND) 및 효과기 도메인(ED)을 포함하고, ND 및/또는 ED는 EV의 내강 표면과 회합된다. 일부 양태에서, ND는 미리스토일화를 통해 엑소좀의 내강 표면과 회합된다. 일부 양태에서, ED는 이온성 상호작용에 의해 엑소좀의 내강 표면과 회합된다. 일부 양태에서, ED는 (i) 염기성 아미노산 또는 (ii) 서열에서 2개 이상의 염기성 아미노산을 포함하고, 여기서 염기성 아미노산은 Lys, Arg, His, 및 임의의 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 염기성 아미노산은 (Lys)n이고, 여기서 n은 1 내지 10의 정수이다. 일부 양태에서, ED는 Lys(K), KK, KKK, KKKK(서열 번호 205), KKKKK(서열 번호 206), Arg(R), RR, RRR, RRRR(서열 번호 207); RRRRR(서열 번호 208), KR, RK, KKR, KRK, RKK, KRR, RRK, (K/R)(K/R)(K/R)(K/R)(서열 번호 209), (K/R)(K/R)(K/R)(K/R)(K/R)(서열 번호 210), 또는 임의의 이들의 조합을 포함한다.
일부 양태에서, ND는 G:X2:X3:X4:X5:X6에 기재된 것과 같은 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 G는 Gly을 나타내고; ":"은 펩타이드 결합을 나타내고, X2 내지 X6의 각각은 독립적으로 아미노산이고; X6은 염기성 아미노산을 포함한다. 일부 양태에서,
(i) X2는 Pro, Gly, Ala 및 Ser로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
(ii) X4는 Pro, Gly, Ala, Ser, Val, Ile, Leu, Phe, Trp, Tyr, Gln 및 Met로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
(iii) X5는 Pro, Gly, Ala 및 Ser로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
(iv) X6은 Lys, Arg 및 His로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
(v) (i) 내지 (iv)의 임의의 조합이다.
일부 양태에서, ND는 G:X2:X3:X4:X5:X6의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서
(i) G는 Gly를 나타내고;
(ii) ":"은 펩타이드 결합을 나타내고;
(iii) X2는 Pro, Gly, Ala 및 Ser로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산이고;
(iv) X3은 아미노산이고;
(v) X4는 Pro, Gly, Ala, Ser, Val, Ile, Leu, Phe, Trp, Tyr, Gln 및 Met로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산이고;
(vi) X5는 Pro, Gly, Ala 및 Ser로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산이고;
(vii) X6은 Lys, Arg 및 His로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산이다.
일부 양태에서, X3은 Asn, Gln, Ser, Thr, Asp, Glu, Lys, His 및 Arg로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 양태에서, ND 및 ED는 링커에 의해 연결된다. 일부 양태에서, 링커는 하나 이상의 아미노산을 포함한다. 일부 양태에서, ND는 (i) GGKLSKK(서열 번호 211), (ii) GAKLSKK(서열 번호 212), (iii) GGKQSKK(서열 번호 213), (iv) GGKLAKK(서열 번호 214), (v) GGKLSK(서열 번호 215), 또는 (vi) 임의의 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양태에서, ND는 (i) GGKLSKKK(서열 번호 238), (ii) GGKLSKKS(서열 번호 239), (iii) GAKLSKKK(서열 번호 240), (iv) GAKLSKKS(서열 번호 241), (v) GGKQSKKK(서열 번호 242), (vi) GGKQSKKS(서열 번호 243), (vii) GGKLAKKK(서열 번호 244), (viii) GGKLAKKS(서열 번호 245) 및 (ix) 임의의 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양태에서, ND는 아미노산 서열 GGKLSKK(서열 번호 211)를 포함한다.
일부 양태에서, 스캐폴드 Y는 적어도 약 8개, 적어도 약 9개, 적어도 약 10개, 적어도 약 11개, 적어도 약 12개, 적어도 약 13개, 적어도 약 14개, 적어도 약 15개, 적어도 약 16개, 적어도 약 17개, 적어도 약 18개, 적어도 약 19개, 적어도 약 20개, 적어도 약 21개, 적어도 약 22개, 적어도 약 23개, 적어도 약 24개, 적어도 약 25개, 적어도 약 30개, 적어도 약 35개, 적어도 약 40개, 적어도 약 45개, 적어도 약 50개, 적어도 약 55개, 적어도 약 60개, 적어도 약 65개, 적어도 약 70개, 적어도 약 75개, 적어도 약 80개, 적어도 약 85개, 적어도 약 90개, 적어도 약 95개, 적어도 약 100개, 적어도 약 105개, 적어도 약 110개, 적어도 약 120개, 적어도 약 130개, 적어도 약 140개, 적어도 약 150개, 적어도 약 160개, 적어도 약 170개, 적어도 약 180개, 적어도 약 190개 또는 적어도 약 200개의 아미노산 길이이다. 일부 양태에서, 스캐폴드 Y는 (i) GGKLSKKKKGYNVN(서열 번호 246), (ii) GAKLSKKKKGYNVN(서열 번호 247), (iii) GGKQSKKKKGYNVN(서열 번호 248), (iv) GGKLAKKKKGYNVN(서열 번호 249), (v) GGKLSKKKKGYSGG(서열 번호 250), (vi) GGKLSKKKKGSGGS(서열 번호 251), (vii) GGKLSKKKKSGGSG(서열 번호 252), (viii) GGKLSKKKSGGSGG(서열 번호 253), (ix) GGKLSKKSGGSGGS(서열 번호 254), (x) GGKLSKSGGSGGSV(서열 번호 255) 또는 (xi) GAKKSKKRFSFKKS(서열 번호 256)를 포함한다. 소정의 양태에서, 스캐폴드 Y는 (i) GGKLSKKKKGYNVN(서열 번호 246), (ii) GAKLSKKKKGYNVN(서열 번호 247), (iii) GGKQSKKKKGYNVN(서열 번호 248), (iv) GGKLAKKKKGYNVN(서열 번호 249), (v) GGKLSKKKKGYSGG(서열 번호 250), (vi) GGKLSKKKKGSGGS(서열 번호 251), (vii) GGKLSKKKKSGGSG(서열 번호 252), (viii) GGKLSKKKSGGSGG(서열 번호 253), (ix) GGKLSKKSGGSGGS(서열 번호 254), (x) GGKLSKSGGSGGSV(서열 번호 255) 또는 (xi) GAKKSKKRFSFKKS(서열 번호 256)로 이루어진다.
일부 양태에서, 스캐폴드 Y는 N 말단에서 Met를 포함하지 않는다. 일부 양태에서, 스캐폴드 Y는 스캐폴드 단백질의 N 말단에서 미리스토일화된 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 양태에서, 스캐폴드 Y의 N 말단에서의 아미노산 잔기는 Gly이다. 일부 양태에서, 스캐폴드 Y의 N 말단에서의 아미노산 잔기는 합성이다. 일부 양태에서, 스캐폴드 Y의 N 말단에서의 아미노산 잔기는 글리신 유사체이다.
본원에는 본원에 기재된 EV, 예를 들어 엑소좀 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
본원에는 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀을 생산하는 세포가 제공된다. 본 개시내용은 하나 이상의 벡터를 포함하는 세포를 추가로 제공하고, 여기서 벡터는 (i) 항원(예를 들어, 본원에 기재된 것), (ii) 아쥬반트(예를 들어, 본원에 기재된 것), (iii) 면역 조절제, (iv) 표적화 모이어티(예를 들어, 본원에 기재된 것), 또는 (v) 이들의 조합을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다.
본원에는 본원에 기재된 EV, 예를 들어 엑소좀 및 사용 설명서를 포함하는 키트가 제공된다. 본원에는 본원에 기재된 임의의 EV(예를 들어, 엑소좀)를 포함하는 EV-약물 접합체가 또한 제공된다.
본원에는 적합한 조건 하에 본원에 개시된 세포를 배양하는 단계 및 EV, 예를 들어 엑소좀을 수득하는 단계를 포함하는 EV, 예를 들어 엑소좀을 제조하고 방법이 제공된다.
본원에는 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 면역 반응의 유도를 필요로 하는 대상체에서 면역 반응을 유도하는 방법이 제공된다.
본원에는 본원에 기재된 EV, 예를 들어 엑소좀을 투여하는 단계를 포함하는 질환의 예방 또는 치료를 필요로 하는 대상체에서 질환을 예방하거나 치료하는 방법이 제공되고, 여기서 질환은 항원과 연관된다. 소정의 양태에서, 질환은 암이다. 일부 양태에서, 암은 방광암, 자궁경부암, 신장 세포 암, 고환암, 결장직장암, 폐암, 두경부암, 난소, 림프종, 간암, 교모세포종, 흑색종, 골수종, 백혈병, 췌장암, 또는 이들의 조합을 포함한다. 추가의 양태에서, 질환은 감염이다.
일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 비경구로, 경구로, 정맥내로, 근육내로, 종양내로, 비강내로, 피하로 또는 복강내로 투여된다.
일부 양태에서, (예를 들어, 면역 반응을 유도하기 위한 또는 질환을 예방하거나 치료하기 위한) 본원에 개시된 방법은 추가 치료제를 투여하는 단계를 포함한다.
본원에는 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 암의 전이의 억제 또는 감소를 필요로 하는 대상체에서 암의 전이를 억제하거나 감소시키는 방법이 제공된다.
도 1a는 하나 이상의 항원, 하나 이상의 아쥬반트, 표적화 모이어티에 대한 하나 이상의 분자, 또는 임의의 이들의 조합을 포함하는 예시적인 EV를 보여준다.
도 1b는 항원 및 아쥬반트를 포함하는 EV, 예를 들어 엑소좀의 비제한적인 예(a 내지 r)를 보여준다. "Ag" 및 "AD"는 각각 항원 및 아쥬반트를 나타낸다. 화살촉은 스캐폴드 Y 모이어티를 나타낸다. "X"는 스캐폴드 X 모이어티를 나타낸다. 본 개시내용으로부터 명확한 것처럼, 도 1b에 도시된 EV(예를 들어, 엑소좀)는 다수의 항원, 다수의 아쥬반트, 또는 다수의 항원과 다수의 아쥬반트 둘 다를 포함할 수 있다. EV(예를 들어, 엑소좀)는 또한 하나 이상의 추가 모이어티(예를 들어, 면역 조절제 및/또는 표적화 모이어티)를 추가로 포함할 수 있다. 이러한 EV(예를 들어, 엑소좀)의 추가의 설명은 본 개시내용에 걸쳐 제공된다.
도 2는 항원 및 면역 조절제를 포함하는 엑소좀의 7개의 선택된 예를 보여준다. "Ag" 및 "IM"은 각각 항원 및 면역 조절제를 나타낸다. 화살촉은 스캐폴드 Y 모이어티를 나타낸다. "X"는 스캐폴드 X 모이어티를 나타낸다. 본 개시내용으로부터 명확한 것처럼, 도 2에 도시된 EV(예를 들어, 엑소좀)는 다수의 항원, 다수의 면역 조절제, 또는 다수의 항원과 다수의 면역 조절제 둘 다를 포함할 수 있다. EV(예를 들어, 엑소좀)는 또한 하나 이상의 추가 모이어티(예를 들어, 아쥬반트 및/또는 표적화 모이어티)를 추가로 포함할 수 있다. 이러한 EV(예를 들어, 엑소좀)의 추가의 설명은 본 개시내용에 걸쳐 제공된다.
도 3a 및 도 3b는 미경험 C57/BL6 마우스로 정맥내 투여한 후 OVA-특이적 CD8 T 세포 면역 반응을 유도하는 OVA-스캐폴드 Y 둘 다를 포함하고 STING 작용제가 로딩된 조작된-EV, 예를 들어 엑소좀("Py-OVA-exoSTING")의 능력을 보여준다. OVA-특이적 CD8 T 세포 면역 반응의 유도는 비장(도 3a) 및 풀링된 말초혈 단핵 세포(PBMC)(도 3b) 둘 다에서 도시되어 있다. 하기 작제물을 대조군으로서 사용하였다: (i) 가용성 OVA 단백질(EV, 예를 들어 엑소좀의 일부가 아님)과 조합된 항-CD40 항체("IP aCD40+OVA"); (ii) 가용성 OVA 단백질(EV, 예를 들어 엑소좀의 일부가 아님)과 조합된 cAIM(PS)2 Difluor(Rp/Sp)("CL656"; STING 작용제)("CL656+OVA"); (iii) 가용성 OVA 단백질(OVA는 EV, 예를 들어 엑소좀의 일부가 아님)과 조합된 STING 작용제가 로딩된 스캐폴드 X를 과발현하는 EV, 예를 들어 엑소좀("Px-exoSTING + OVA"); 및 (iv) OVA-스캐폴드 Y 융합 단백질을 오직 발현하는 EV, 예를 들어 엑소좀("Py-OVA"). 데이터는 개별적으로 및 평균 ± S.D.로 둘 다로 기재되어 있다. "***"은 1방향 ANOVA에 의해 p < 0.0005를 나타낸다.
도 4a 및 도 4b는 미경험 C57/BL6 마우스로 비강내 투여한 후 OVA-특이적 CD8 T 세포 면역 반응을 유도하는 OVA-스캐폴드 Y 둘 다를 포함하고 STING-작용제가 로딩된 조작된-EV, 예를 들어 엑소좀("Py-OVA-exoSTING")의 능력을 보여준다. OVA-특이적 CD8 T 세포 면역 반응의 유도는 비장(도 4a) 및 폐(도 4b) 둘 다에서 도시되어 있다. 하기 작제물을 대조군으로서 사용하였다: (i) 가용성 OVA 단백질(EV, 예를 들어 엑소좀의 일부가 아님)과 조합된 항-CD40 항체; (ii) 가용성 OVA 단백질과 조합된 cAIM(PS)2 Difluor(Rp/Sp)("CL656"; STING 작용제)("CL656+OVA"); (iii) 가용성 OVA 단백질(OVA는 EV, 예를 들어 엑소좀의 일부가 아님)과 조합된 STING 작용제가 로딩된 스캐폴드 X를 과발현하는 EV, 예를 들어 엑소좀("Px-exoSTING + OVA"); 및 (iv) OVA-스캐폴드 Y 융합 단백질을 오직 발현하는 EV, 예를 들어 엑소좀("Py-OVA"). 데이터는 개별적으로 및 평균 ± S.D.로 둘 다로 기재되어 있다. "**"은 1방향 ANOVA에 의해 p < 0.005를 나타낸다. "***"은 1방향 ANOVA에 의해 p < 0.0005를 나타낸다.
도 5a 및 도 5b는 OVA-스캐폴드 Y 둘 다를 포함하고 STING 작용제가 로딩된 조작된-EV, 예를 들어 엑소좀("Py-OVA-exoSTING")의 비강내 투여 후 마우스의 비장에서 OVA-특이적 T 세포 반응의 비교를 보여준다. 투여 후 1주에 IFN-γ ELISPOT 분석을 이용하여 OVA-특이적 T 세포 반응을 측정하였다. 도 5a는 CD8 T 세포 반응을 보여준다. 도 5b는 CD4 T 세포 반응을 보여준다. 대조군 동물은 하기 중 하나를 받았다: (i) 가용성 OVA 단백질 단독("OVA"); (ii) 가용성 OVA 단백질과 조합된 CL656("OVA+CL656"); (iii) OVA-스캐폴드 Y 융합 단백질을 오직 발현하는 EV, 예를 들어 엑소좀("Py-OVA"); (iv) OVA-스캐폴드 Y 융합 단백질을 오직 발현하는 EV, 예를 들어 엑소좀과 조합된 CL656("Py-OVA+CL656"). 데이터는 개별적으로 및 평균 ± S.D.로 둘 다로 기재되어 있다. "*"은 1방향 ANOVA에 의해 p < 0.05를 나타낸다.
도 6은 백신접종 모델에서 Clec9a 엑소좀의 효능을 평가하기 위한 실험 설계의 도식을 제공한다.
도 7a 및 도 7b는 조작된 EV, 예를 들어 엑소좀이 표준 백신 제제와 비교하여 더 우수한 CD8 T-세포 반응을 유도한다는 것을 보여준다. 도 7a는 피하로(SQ) 표준 백신(AddaVax)을 투여한 후 또는 피하로(SQ), 비강내로(IN) 또는 정맥내로(IV) 조작된 엑소좀을 투여한 후 더 우수한 효과기 기억, 특히 CD8 T-세포 반응을 보여준다. 도 7b는 표준 백신 또는 조작된 엑소좀에 의한 비강내 백신접종 후 폐(방어선)에서의 조직 상주 기억, 특히 T-세포 반응의 유도를 보여준다.
도 8은 EBV-이식 환자에서 이식 후 림프구증식 질환에 대한 표적화 항원으로서의 EBV BZLF1의 사용을 예시한다. 도 8은 아쥬반트(사이클릭 푸린 디뉴클레오타이드, 예를 들어 CDN)를 포함하는 조작된 EV, 예를 들어 엑소좀 및 EV의 내강 표면에 부착된 EBV BZLF1 항원의 도식적 표시이다.
도 9a 및 도 9b는 STING 아쥬반트를 갖거나 갖지 않는 가용성 또는 엑소좀 OVA에 의해 면역화된 야생형 마우스로부터의 CD4+(도 9a) 및 CD8+(도 9b) T 세포의 수의 비교를 제공한다. 야생형 마우스를 표시된 것처럼 가용성 OVA(난알부민); 가용성 OVA + CL656(STING 작용제); PyOVA(BASP1에 융합된 OVA의 엑소좀 내강 발현); PyOVA + 가용성 CL656; PyOVA exoVacc(CL656이 로딩된 PyOVA 엑소좀); 또는 가용성 OVA + 명반 아쥬반트로 면역화하였다(도 9a 및 도 9b). 항원-특이적 세포는 배경에 대해 공제(비항원-특이적 활성화) 후 100,000개의 비장세포당 IFN-g 양성 스팟 형성 단위(SFU: spot forming unit)의 수로서 표현되는 IFN-g 발현 및 데이터에 의해 확인되었다(x축, 도 9a 및 도 9b). "14일"은 단일 면역화 후 동물에서 관찰된 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 수를 나타낸다. "28일"은 제2 투여에 의한 부스트 후 동물에서 관찰된 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 수를 나타낸다.
도 10은 본원에 개시된 (예를 들어, OVA-스캐폴드 Y를 발현하고 STING 작용제 CL656이 로딩된) 엑소좀으로 치료된 마우스의 폐에서의 OVA-특이적 CD8+ T 세포의 수를 보여준다. "제1 용량"은 엑소좀의 단일 투여 후 관찰된 효과기 기억(TEM) CD8+ T 세포의 수를 나타낸다. "제2 용량"은 제2 투여에 의한 부스트 후 관찰된 효과기 기억 및/또는 상주 기억(TRM) CD8+ T 세포의 수를 나타낸다.
도 11a 및 도 11b는 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)에서 항-Clec9a 결합 모이어티를 발현하는 것의 효과를 보여준다. 도 11a는 마우스에 투여한 후 상이한 수지상 세포 집단에 의한 항-Clec9a 발현 엑소좀의 흡수를 보여준다. 도시된 수지상 세포 집단은 하기를 포함한다: (i) 종래의 DC 1("cDC1"), (ii) 종래의 DC 2("cDC2") 및 (iii) 형질세포양 DC("pDC"). 대조군 동물은 PBS 단독 또는 스캐폴드 X 단백질 단독을 발현하는 엑소좀("PrX EV") 중 어느 하나를 받았다. **** p < 0.0001. 도 11b는 3개의 상이한 용량(0.4 nM, 1 nM 또는 4 nM)에서 하기 중 하나로 자극한 후 마우스 수지상 세포에서의 STING 활성의 비교를 제공한다: (i) 가용성 STING 작용제("유리 STING"), (ii) 스캐폴드 X 단백질 단독을 발현하고 STING 작용제가 로딩된 EV(예를 들어, 엑소좀)(즉, 항-Clec9a 항체 단편 무)("PrX-STING"), (iii) 스캐폴드 X 단백질에 연결된 항-Clec9a 항체 단편을 발현하는 엑소좀("aClec9a-STING"); 및 (iv) 비관련 항체를 발현하고 STING 작용제가 로딩된 EV(예를 들어, 엑소좀)("아이소타입-STING"). DC에 의해 생성된 IL-12의 양에 의해 STING 활성이 나타난다.
도 12a 및 도 12b는 OVA-스캐폴드 Y를 발현하고 STING 작용제 CL656이 로딩된 조작된-엑소좀("Py-OVA exoVACC")에 의한 OVA-특이적 CD8+ TEM 세포의 유도에 대한 투여 경로의 효과를 보여준다. 기재된 투여 경로는 (i) 정맥내("IV"), (ii) 비강내("IN") 및 (iii) 피하("SQ")를 포함한다. "SubQ AV"는 상업적으로 이용 가능한 제제(ADDAVAX™, InvioGen)("SubQ AV")에서의 가용성 OVA로 치료된 동물에 상응한다. 도 12a는 결과의 평균을 보여주는 막대 그래프를 제공한다. ***, p = 0.0013; **, p = 0.0074; ns, 1방향 ANOVA에 의해 OVA + ADDAVAX™ 그룹과 비교하여 유의미하지 않음. 도 12b는 상이한 치료 그룹으로부터 대표적인 샘플의 유세포분석법 선도를 제공하다. 각각의 흐름 선도에서 상부 오른쪽 사분면에 제공된 백분율은 관찰된 % OVA-특이적 CD8+ TEM 세포 반응을 나타낸다. 상이한 치료 그룹은 각각의 흐름 선도에서 상부 왼쪽 사분면에 표시된다.
도 13a, 도 13b 및 도 13c는 OVA-스캐폴드 Y를 발현하고 STING 작용제 CL656이 로딩된 엑소좀("Py-OVA exoVACC")의 2의 투여를 받은 마우스의 폐에서의 OVA-특이적 상주 기억(TRM) CD8+ T 세포(도 13a) 및 CD4+ T 세포(도 13b)의 유도를 보여준다. 대조군 동물은 하기 중 하나를 받았다: (i) 가용성 OVA("OVA"), (ii) OVA-스캐폴드 Y 융합 단백질을 오직 발현하는 엑소좀("PyOVA"), (iii) 가용성 OVA + 가용성 poly I:C("OVA + poly I:C") 및 (iv) OVA-스캐폴드 Y 융합 단백질 + 가용성 poly I:C를 오직 발현하는 엑소좀("PyOVA + poly I:C"). 도 13c는 도 13a 및 도 13b에 도시된 데이터의 대표적인 샘플의 유세포분석법 선도를 제공하다. 상부 열은 CD8+ T 세포에 상응한다. 하부 열은 CD4+ T 세포에 상응한다.
도 14a, 도 14b, 도 14c, 도 14d, 도 14e, 도 14f, 도 14g, 도 14h, 도 14i, 도 14j, 도 14k, 도 14l, 도 14m 및 도 14n은 하기 중 하나를 받은 마우스에서의 항종양 면역 반응을 보여준다: (i) 비강내 투여를 통한 OVA-스캐폴드 Y를 발현하고 STING 작용제 CL656이 로딩된 엑소좀("exoVACC (IN)"), (ii) 피하 투여를 통한 OVA-스캐폴드 Y를 발현하고 STING 작용제 CL656이 로딩된 엑소좀("exoVACC(SQ)"), (iii) 비강내 투여를 통한 가용성 OVA + 가용성 poly I:C(IN)") 및 (iv) 피하 투여를 통한 가용성 OVA + 가용성 poly I:C("OVA + poly I:C(SC)"). 대조군으로서 비치료된 동물을 사용하였다. 도 14a는 실험 설계의 도식을 제공한다. 도 14b 및 도 14n은 2개의 독립 실험으로부터의 생존율 데이터를 제공한다. 도 14c 및 도 14i(비치료), 도 14d 및 도 14j(OVA + poly I:C(SC)), 도 14e 및 도 14l(exoVACC(SQ)), 도 14f 및 도 14k(OVA + poly I:C(IN)), 및 도 14g 및 도 14m(exoVACC(IN))은 2개의 독립 실험으로부터의 종양 용적 데이터를 제공한다. 도 14e 및 도 14g에 도시된 백분율은 완전히 보호된 (총 그룹의) 동물의 수를 나타낸다. 도 14h는 상이한 치료 각각의 그룹에서의 종양 성장의 속도를 보여준다. 도 14h에서, *, p = 0.028; ns, 1방향 ANOVA에 의해 비치료된 대조군과 비교하여 유의미하지 않음.
도 15a, 도 15b, 도 15c, 도 15d, 도 15e 및 도 15f는 비강내 투여 후 장간막 림프절로 이동하는 본원에 개시된 조작된 EV(예를 들어, 엑소좀)의 능력을 보여준다. 도 15a는 실험 설계의 도식을 제공한다. 도 15b, 도 15c 및 도 15d는 IFN-γ ELISPOT에 의해 측정된 각각 비장, 폐 및 장간막 림프절에서의 OVA-특이적 CD4+ T 세포(각각의 치료 그룹에서의 왼쪽 막대) 및 OVA-특이적 CD8+ T 세포(각각의 치료 그룹에서의 오른쪽 막대)의 빈도를 보여준다. 도 15e 및 도 15f는 유세포분석법에 의해 측정된 각각 폐 및 비장에서의 OVA-특이적 효과기 기억 CD8+ T 세포의 빈도를 보여준다.
도 16a, 도 16b 및 도 16c는 항원-특이적 면역 반응을 유도하는 스캐폴드 X를 포함하고 STING 작용제가 로딩된 표면-조작된 EV(예를 들어, 엑소좀)의 능력을 보여준다. 도 16a는 실험 설계의 도식을 제공한다. 도시된 것처럼, CD4 펩타이드(Itgb1) 및/또는 CD8 펩타이드(Lama4)는 EV(예를 들어, 엑소좀)의 스캐폴드 X에 연결되었다. 도 16b 및 도 16c는 IFN-γ ELISPOT에 의해 측정된 상이한 치료 그룹으로부터의 동물의 비장에서 각각 Itgb1-특이적 CD4+ T 세포 및 Lama4-특이적 CD8+ T 세포의 빈도를 보여준다.
도 17a, 도 17b 및 도 17c는 항원-특이적 면역 반응을 유도하는 스캐폴드 X를 포함하고 CpG 아쥬반트가 로딩된 표면-조작된 EV(예를 들어, 엑소좀)의 능력을 보여준다. 도 17a는 실험 설계의 도식을 제공한다. 도시된 것처럼, (i) CD8 펩타이드(Lama4) 단독(2 그룹) 또는 (ii) CD8 펩타이드 및 CD4 펩타이드(Itgb1) 둘 다(3 그룹) 중 어느 하나는 말레이미드 화학을 사용하여 스캐폴드 X에 연결되었다. 대조군 EV는 스캐폴드 X를 오직 발현하였다(즉, 펩타이드 무 및 CpG 아쥬반트 무)(1 그룹). 도 17b 및 도 17c는 IFN-γ ELISPOT에 의해 측정된 상이한 치료 그룹으로부터의 동물의 비장에서 각각 Itgb1-특이적 CD4+ T 세포 및 Lama4-특이적 CD8+ T 세포의 빈도를 보여준다.
도 18a, 도 18b, 도 18c, 도 18d, 도 18e, 도 18f, 도 18g, 도 18h, 도 18i, 도 18j, 도 18k 및 도 18l은 웨스턴 블롯에 의해 측정된 본원에 개시된 표면-조작된 EV(예를 들어, 엑소좀)에서 HPV16 및 HPV18의 E6 및 E7 단백질의 발현을 보여준다. 도 18a, 도 18b, 도 18c, 도 18d, 도 18e 및 도 18f에서, 293SF 세포를 하기 전체 길이 단백질 중 하나를 암호화하는 플라스미드로 형질주입하였다: (i) HPV16 E6, (ii) HPV16 E7, (iii) HPV16 E6/E7, (iv) HPV18 E6, (v) HPV18 E7 및 (vi) HPV18 E6/E7. 도 18g, 도 18h, 도 18i, 도 18j, 도 18k 및 도 18l에서, 분열 단백질 발현 조작을 사용하였다. 하기 플라스미드 중 하나에 의해 293SF 세포를 형질주입하였다: (i) pUC57-Kan-AAVS1HR-CAGGS-PTGFRN-FLAG-coHPV16nE6("pCB-2014"), (ii) pUC57-Kan-AAVS1HR-CAGGS-PTGFRN-FLAG-coHPV16cE6("pCB-2015"), (iii) pUC57-Kan-AAVS1HR-CAGGS-coHPV16nE6-FLAG-PTGFRN("pCB-2016"), (iv) pUC57-Kan-AAVS1HR-CAGGS-coHPV16cE6-FLAG-PTGFRN("pCB-2017"), (v) pUC57-Kan-AAVS1HR-CAGGS-PrY-FLAG-coHPV16nE6("pCB-2018") 및 (vi) pUC57-Kan-AAVS1HR-CAGGS-PrY-FLAG-coHPV16cE6("pCB-2019"). 플라스미드의 상세한 설명은 실시예 23에서 발견될 수 있다(또한 표 11 참조).
도 19a, 도 19b 및 도 19c는 STING 작용제가 로딩되고 (i) 스캐폴드 X에 연결된 항-Clec9A 표적화 모이어티 및 (ii) 스캐폴드 Y에 연결된 OVA를 발현하는 표면-조작된 EV(예를 들어, 엑소좀)의 능력을 보여준다. 도 19a는 실험 설계의 도식을 제공한다. 도 19b 및 도 19c는 도 19a에 도시된 상이한 치료 그룹으로부터의 동물의 비장에서 관찰된 OVA-특이적 CD8+ 효과기 기억 T 세포의 수를 보여준다. 도 19b는 단일 EV 투여 후 1주에서의 결과를 보여준다. 도 19c는 EV 투여의 제2 용량 후 1주에서의 결과를 보여준다.
도 20a, 도 20b 및 도 20c는 생체내 투여 후 항원-특이적 체액 면역 반응을 유도하는 OVA-스캐폴드 Y를 발현하고 STING 작용제가 로딩되도록 조작된 EV(예를 들어, 엑소좀)의 능력을 보여준다. 도 20a는 실험 설계의 도식을 제공한다. 도시된 것처럼, 동물은 하기 중 하나를 받았다: (i) 가용성 OVA 단독(1 그룹), (ii) 유리 STING 작용제와 조합된 가용성 OVA(2 그룹), (iii) OVA-스캐폴드 Y 단독을 발현하는 EV(예를 들어, 엑소좀)("PyOVA")(3 그룹), (iv) 유리 STING 작용제와 조합된 PyOVA(4 그룹), (v) OVA-스캐폴드 Y를 발현하고 STING 작용제 CL656이 로딩된 조작된-엑소좀("Py-OVA exoVACC")(5 그룹) 및 (vi) 명반과 조합된 가용성 OVA. 도 20b는 혈청에서의 OVA-특이적 IgG1 항체의 양의 비교를 제공한다. 도 20c는 혈청에서의 OVA-특이적 IgA 항체의 양의 비교를 제공한다.
도 21은 AM152(사이클로프로판카복실산, 1-[4'-[3-메틸-4-[[[(1R)-1-페닐에톡시]카보닐]아미노]-5-이속사졸릴][1,1'-바이페닐]-4-일]-) 및 AM095(1,1'-바이페닐]-4-아세트산, 4'-메틸-4-[[[(1R)-1-페닐에톡시]카보닐]아미노]-5-이속사졸릴[]-)의 화학적 구조를 보여준다. 1 및 2 표지된 화살표는 말레이미드 반응성 기를 도입하기 위한 유래에 적합한 위치(카복실산 및 카바메이트)를 포함한다. AM152에 표시된 상응하는 부위는 AM095에 또한 존재한다.
도 22는 표면에 복수의 LPA1 길항제 분자를 함유하는 엑소좀의 집단을 생성하도록 엑소좀에 대한 LPA1 길항제(AM152)의 접합을 보여주는 도식적 표시를 제공한다.
도 23은 말레이미드 반응성 기가 카복실산 기를 통해 AM152에 어떻게 첨가될 수 있는지의 예를 보여준다. 예는 말레이미드 기와 카복실산-반응성 클로로메틸 벤젠 기 사이에 끼워진 C5 스페이서 및 ala-val 절단성 링커를 포함하는 반응성 복합체의 일부로서 말레이미드 기를 보여준다.
도 24는 AM152를 유도체화하기 위해 사용될 수 있는 2개의 예시적인 시약을 보여준다. 상부 시약은 (i) AM152의 카복실산 기와 반응할 수 있는 클로로메틸 벤젠 기 및 (ii) 말레이미드 기를 포함하고; 절단성 cit-val 디펩타이드 및 C5 스페이서는 이들 사이에 끼워진다. 하부 시약은 (i) AM152의 카복실산 기와 반응할 수 있는 클로로메틸 벤젠 기 및 (ii) 말레이미드 기를 포함하고; 절단성 ala-val 디펩타이드 및 C5 스페이서는 이들 사이에 끼워진다.
도 25는 접합 생성물에서 (예를 들어, 카텝신 B에 의해) cit-val 또는 ala-val 디펩타이드를 절단하여 생기는 생성물을 보여준다. AM152 아닐린 에스테르인 생성물은 유리 산 AM152 생성물을 생성하도록 내인성 에스터라제에 의해 추가로 가공될 수 있다.
도 26 및 도 27은 유리 말레이미드 기 및 스페이서의 상이한 조합을 포함하는 몇몇 AM152 유도체를 보여준다.
도 28은 카복실산 기의 보호 후 카바메이트 기에서 AM152를 유도체화하기 위해 카복실산 기를 유도체화하도록 사용된 동일한 시약을 사용할 수 있다는 것을 보여준다. 생성된 생성물은 후속하여 카복실산 기를 유리시키도록 탈보호될 것이다.
도 29는 말레이미드 기와의 복합체가 링커를 통해 AM152의 카바메이트 기에 부착되는 예를 예시 보여준다. 적합한 링커는 본 명세서에 개시된 임의의 링커를 포함한다.
도 30은 AM152가 유도체화되고 후속하여 반응성 말레이미드 기를 통해 앵커링 모이어티에 부착되는 것 대신에 유도체화된 앵커링 모이어티에 부착될 수 있다는 것을 보여준다.
도 31은 예를 들어 본원에 기재된 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X 단백질 또는 이의 단편 또는 지질)를 통해 생물학적 활성 분자(BAM)를 EV(예를 들어, 엑소좀)에 화학적으로 연결하기 위해 말레이미드 화학이 어떻게 사용될 수 있는지를 보여주는 도식적 표시이다. 도면에 도시된 링커는 선택적이고 존재할 때 링커(예를 들어, 절단성 링커) 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다.
본 개시내용은 동일한 항원 제시 세포에 항원 및 아쥬반트를 동시에 전달하는 조작된 EV, 예를 들어 엑소좀에 관한 것이다. EV 플랫폼은 모듈식 백신접종 시스템을 생성하도록 설계된 항원의 내강 발현 및 면역 동시자극 분자의 표면 발현을 허용한다. 다양한 아쥬반트는 광범위한 항원에 대해 면역 반응을 향상시키도록 EV, 예를 들어 엑소좀으로 혼입될 수 있다. 조작된 EV는 하나 이상의 페이로드를 포함할 수 있고, EV의 적어도 하나의 특성(예를 들어, 예컨대 본원에 개시된 것) 및 이의 사용을 개선할 수 있다. 일부 양태에서, 하나 이상의 페이로드는 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제를 포함한다. 소정의 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 하나 이상의 추가 모이어티(예를 들어, 표적화 모이어티)를 포함한다. 일부 양태에서, 하나 이상의 페이로드(예를 들어, 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제) 및/또는 하나 이상의 추가 모이어티(예를 들어, 표적화 모이어티)는 EV, 예를 들어 엑소좀의 표면 상에 또는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상에 하나 이상의 스캐폴드 모이어티에 부착(또는 연결)될 수 있다. 따라서, 본 개시내용의 EV는 백신(즉, exoVACC™)을 위한 플랫폼 전달 비히클을 허용하고, 여기서 EV 상의 항원 및/또는 일부 양태에서 하나 이상의 페이로드, 예를 들어, 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제는 상이한 항원 및/또는 하나의 또는 아쥬반트 또는 면역 조절제로 특정 방식으로 조합되고/되거나 대체될 수 있다. 더 많은 추가 모이어티(예를 들어, 표적화 모이어티)는 EV의 외부 표면 및/또는 내강 표면(예를 들어, 엑소좀)에 직접 부착(또는 연결)될 수 있다. 다양한 양태의 비제한적인 예가 본 개시내용에 기재되어 있다.
I. 정의
본 설명이 보다 용이하게 이해될 수 있도록, 소정의 용어가 처음에 정의된다. 상세한 설명에 걸쳐 추가 정의가 기재되어 있다.
용어 "일" 또는 "하나" 집합체는 그 집합체의 하나 이상을 지칭한다는 것이 주목되어야 한다; 예를 들어, "뉴클레오타이드 서열"은 하나 이상의 뉴클레오타이드 서열을 나타내는 것으로 이해된다. 그러므로, "일"(또는 "하나"), "하나 이상" 및 "적어도 하나"라는 용어는 본원에서 상호교환 가능하게 사용될 수 있다.
더욱이, "및/또는"은 본원에 사용될 때 다른 것과 함께 또는 이것 없이 2개의 기술된 특징 또는 성분의 각각의 구체적인 개시내용으로 취해져야 한다. 이와 같이, 본원에서 "A 및/또는 B"와 같은 구절에 사용된 용어 "및/또는"은 "A 및 B", "A 또는 B", "A"(단독) 및 "B"(단독)을 포함하도록 의도된다. 마찬가지로, "A, B 및/또는 C"와 같은 구절에 사용된 용어 "및/또는"은 하기 양태의 각각을 포함하도록 의도된다: A, B와 C; A, B 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A와 C; A와 B; B와 C; A(단독); B(단독); 및 C(단독).
양태가 "포함하는"이라는 언어와 함께 본원에 어딘가에 기재되든, "이루어진" 및/또는 "본질적으로 이루어진"의 용어에 기재된 달리 유사한 양태가 또한 제공되는 것으로 이해된다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어는 본 개시내용이 관련된 분야의 당업자에 의해 흔히 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 예를 들어, the Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press; 및 the Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press는 기술자에게 본 개시내용에 사용된 많은 용어의 일반 사전을 제공한다.
단위, 접두사 및 기호는 이의 국제 단위계(SI:
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International de Unite) 허용 형태로 표시된다. 숫자 범위는 범위를 한정하는 숫자를 포함한다. 달리 표시되지 않는 한, 뉴클레오타이드 서열은 5'에서 3' 배향으로 왼쪽에서 오른쪽으로 쓰여진다. 아미노산 서열은 아미노에서 카복시 배향으로 왼쪽에서 오른쪽으로 쓰인다. 본원에 제공된 제목은 본 개시내용의 다양한 양태의 제한이 아니고, 이것은 전체로서 본 명세서에 참조될 수 있다. 따라서, 하기에 바로 정의된 용어는 그 전체가 본 명세서에 보다 완전히 참조된다.
"약"이라는 용어는 대략, 거의, 약 또는 범위에서를 의미하도록 본원에 사용된다. 용어 "약"은 숫자 범위와 연결되어 사용될 때, 이것은 기재된 숫자 값보다 크거나 적게 경계를 연장하여 그 범위를 수식한다. 일반적으로, 용어 "약"은 위로 또는 아래로(더 높거나 더 낮게) 예를 들어 10%의 변량에 의해 기술된 값보다 높고 낮은 숫자 값을 수식할 수 있다.
본원에 사용된 "세포외 소포체" 또는 "EV"라는 용어는 내부 공간을 둘러싸는 막을 포함하는 세포-유래된 소포체를 지칭한다. 세포외 소포체는 이것이 유래된 세포보다 더 작은 직경을 갖는 모든 막-결합된 소포체(예를 들어, 엑소좀, 나노소포체)를 포함한다. 일부 양태에서, 세포외 소포체는 직경이 20 nm 내지 1000 nm 범위이고, 세포외 소포체의 외부 표면 상에 디스플레이된 내부 공간(즉, 내강) 내에 및/또는 막에 걸쳐 어느 하나에서 다양한 거대분자 페이로드를 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 페이로드는 핵산, 단백질, 탄수화물, 지질, 소분자 및/또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 소정의 양태에서, 세포외 비히클은 스캐폴드 모이어티를 포함한다. 예로서 제한 없이, 세포외 소포체는 아폽토시스 바디, 세포의 단편, 직접 조작 또는 간접 조작에 의해(예를 들어, 연속 압출 또는 알칼리 용액에 의한 처리에 의해) 세포로부터 유래된 소포체, 소포성 세포기관, 및 살아 있는 세포에 의해(예를 들어, 직접적인 혈장 막 출아 또는 혈장 막과의 후기 엔도솜의 융합에 의해) 제조된 소포체를 포함한다. 세포외 소포체는 살아 있는 유기체 또는 죽은 유기체, 절제된 조직 또는 절제된 장기, 원핵 세포 또는 진핵 세포 및/또는 배양된 세포로부터 유래될 수 있다. 일부 양태에서, 세포외 소포체는 하나 이상의 전이유전자 산물을 발현하는 세포에 의해 제조된다.
본원에 사용된 "엑소좀"이라는 용어는 직경이 20 내지 300 nm(예를 들어, 40 내지 200 nm)인 세포외 소포체를 지칭한다. 엑소좀은 내부 공간(즉, 내강)을 둘러싸는 막을 포함하고, 일부 양태에서 직접적인 혈장 막 출아에 의해 또는 혈장 막과의 후기 엔도솜 또는 다중소포체의 융합에 의해 세포(예를 들어, 생산자 세포)로부터 생성될 수 있다. 소정의 양태에서, 엑소좀은 스캐폴드 모이어티를 포함한다. 하기에 기재된 것처럼, 엑소좀은 생산자 세포로부터 유래되고, 이의 크기, 밀도, 생화학적 매개변수, 또는 이들의 조합에 기초하여 생산자 세포로부터 단리될 수 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 하나 이상의 전이유전자 산물을 발현하는 세포에 의해 제조된다.
본원에 사용된 "나노소포체"라는 용어는 직경이 20 내지 250 nm(예를 들어, 30 내지 150 nm)인 세포외 소포체를 지칭하고, 나노소포체가 조작 없이 세포에 의해 생산되지 않도록 직접 조작 또는 간접 조작에 의해 세포(예를 들어, 생산자 세포)로부터 생성된다. 나노소포체를 생산하기 위한 세포의 적절한 조작은 연속 압출, 알칼리 용액에 의한 처리, 음파처리, 또는 이들의 조합을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 일부 양태에서, 나노소포체의 제조는 생산자 세포를 파괴시킬 수 있다. 일부 양태에서, 본원에 기재된 나노소포체의 집단은 혈장 막으로부터의 직접 출아 또는 혈장 막과의 후기 엔도솜의 융합의 방식으로 세포로부터 유래된 소포체가 실질적으로 없다. 소정의 양태에서, 나노소포체는 스캐폴드 모이어티를 포함한다. 생산자 세포로부터 일단 유래된 나노소포체는 이의 크기, 밀도, 생화학적 매개변수, 또는 이들의 조합에 기초하여 생산자 세포로부터 단리될 수 있다.
본원에 사용된 "표면-조작된 EV, 예를 들어 엑소좀"(예를 들어, 스캐폴드 X-조작된 EV, 예를 들어 엑소좀)이라는 용어는 조작된 EV, 예를 들어 엑소좀의 표면이 자연 발생 EV, 예를 들어 엑소좀의 변형 전의 EV, 예를 들어 엑소좀의 것과 다르도록 이의 조성이 변형된 EV, 예를 들어 엑소좀의 막 또는 표면을 갖는 EV, 예를 들어 엑소좀을 지칭한다. EV, 예를 들어 엑소좀의 표면이 변경되도록 EV, 예를 들어 엑소좀의 표면 상에, 또는 EV, 예를 들어 엑소좀의 막 내에 조작이 있을 수 있다. 예를 들어, 막은 단백질, 지질, 소분자, 탄수화물 등의 이의 조성이 변형된다. 상기 조성물은 화학적 방법, 물리적 방법 또는 생물학적 방법에 의해 또는 화학적 방법, 물리적 방법 또는 생물학적 방법에 의해 이전에 또는 동시에 변형된 세포로부터 제조됨으로써 변경될 수 있다. 구체적으로는, 상기 조성물은 유전 조작에 의해 또는 유전 조작에 의해 이전에 변형된 세포로부터 제조됨으로써 변경될 수 있다. 일부 양태에서, 표면-조작된 EV, 예를 들어 엑소좀은 EV, 예를 들어 엑소좀의 표면에 노출될 수 있거나, EV, 예를 들어 엑소좀의 표면에 노출된 모이어티에 대한 앵커링 점(부착)일 수 있는 외인성 단백질(즉, EV, 예를 들어 엑소좀이 자연적으로 발현하지 않는 단백질) 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함한다. 다른 양태에서, 표면-조작된 EV, 예를 들어 엑소좀은 EV, 예를 들어 엑소좀의 표면에 노출될 수 있거나, EV, 예를 들어 엑소좀의 표면에 노출된 모이어티에 대한 앵커링 점(부착)일 수 있는 천연 엑소좀 단백질(예를 들어, 스캐폴드 X) 또는 이의 단편 또는 변이체의 더 높은 발현(예를 들어, 더 많은 수)를 포함한다.
본원에 사용된 "내강-조작된 엑소좀"(예를 들어, 스캐폴드 Y-조작된 엑소좀)이라는 용어는 조작된 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강이 자연 발생 EV, 예를 들어 엑소좀의 변형 전의 EV, 예를 들어 엑소좀의 것과 다르도록 이의 조성이 변형된 EV, 예를 들어 엑소좀의 막 또는 내강을 갖는 EV, 예를 들어 엑소좀을 지칭한다. EV, 예를 들어 엑소좀의 내강이 변경되도록 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 내에서 또는 막 내에서 조작이 직접일 수 있다. 예를 들어, EV, 예를 들어 엑소좀의 내강이 변형되도록 막은 단백질, 지질, 소분자, 탄수화물 등의 이의 조성이 변형된다. 상기 조성물은 화학적 방법, 물리적 방법 또는 생물학적 방법에 의해 또는 화학적 방법, 물리적 방법 또는 생물학적 방법에 의해 이전에 변형된 세포로부터 제조됨으로써 변경될 수 있다. 구체적으로는, 상기 조성물은 유전 조작에 의해 또는 유전 조작에 의해 이전에 변형된 세포로부터 제조됨으로써 변경될 수 있다. 일부 양태에서, 내강-조작된 엑소좀은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에서 노출될 수 있거나 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 노출된 모이어티에 대한 앵커링 점(부착)일 수 있는 외인성 단백질(즉, EV, 예를 들어 엑소좀이 자연적으로 발현하지 않는 단백질) 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함한다. 다른 양태에서, 내강-조작된 EV, 예를 들어 엑소좀은 엑소좀의 내강에 노출될 수 있거나, 엑소좀의 내강에 노출된 모이어티에 대한 앵커링 점(부착)일 수 있는 천연 엑소좀 단백질(예를 들어, 스캐폴드 X 또는 스캐폴드 Y) 또는 이의 단편 또는 변이체의 더 높은 발현을 포함한다.
"변형된"이라는 용어는 본원에 기재된 EV, 예를 들어 엑소좀의 맥락에서 사용될 때 변형된 EV, 예를 들어 엑소좀이 자연 발생 EV, 예를 들어 엑소좀과 상이하도록 EV, 예를 들어 엑소좀 및/또는 이의 생산자 세포의 변경 또는 조작을 지칭한다. 일부 양태에서, 본원에 기재된 변형된 EV, 예를 들어 엑소좀은 천연 발생 EV, 예를 들어 엑소좀의 막과 비교하여 단백질, 지질, 소분자, 탄수화물 등의 조성이 다른 막을 포함한다(예를 들어, 막은 더 높은 밀도 또는 수의 천연 엑소좀 단백질을 포함하고/하거나 막은 엑소좀(예를 들어¸ 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제)에서 자연에서 발견되지 않는 단백질을 포함한다). 소정의 양태에서, 막에 대한 이러한 변형은 EV, 예를 들어 엑소좀(예를 들어, 본원에 기재된 표면-조작된 EV, 예를 들어 엑소좀)의 외부 표면을 변경한다. 소정의 양태에서, 막에 대한 이러한 변형은 EV, 예를 들어 엑소좀(예를 들어, 본원에 기재된 내강-조작된 EV, 예를 들어 엑소좀)의 내강을 변경한다.
본원에 사용된 "스캐폴드 모이어티"라는 용어는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상에 또는 외부 표면 상에 EV, 예를 들어 엑소좀에 페이로드 또는 임의의 다른 관심 화합물(예를 들어, 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제)을 앵커하도록 사용될 수 있는 분자를 지칭한다. 소정의 양태에서, 스캐폴드 모이어티는 합성 분자를 포함한다. 일부 양태에서, 스캐폴드 모이어티는 비폴리펩타이드 모이어티를 포함한다. 다른 양태에서, 스캐폴드 모이어티는 EV, 예를 들어 엑소좀에 자연에 존재하는 지질, 탄수화물 또는 단백질을 포함한다. 일부 양태에서, 스캐폴드 모이어티는 EV, 예를 들어 엑소좀에 자연에 존재하지 않는 지질, 탄수화물 또는 단백질을 포함한다. 소정의 양태에서, 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 X이다. 일부 양태에서, 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 Y이다. 추가의 양태에서, 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 X 및 스캐폴드 Y 둘 다를 포함한다. 본 개시내용과 사용될 수 있는 다른 스캐폴드 모이어티의 비제한적인 예는 아미노펩티다제 N(CD13); 네프릴리신, AKA 막 메탈로엔도펩티다제(MME); 엑토뉴클레오타이드 피로포스파타제/포스포디에스터라제 패밀리 구성원 1(ENPP1); 뉴로필린-1(NRP1); CD9, CD63, CD81, PDGFR, GPI 앵커 단백질, 락타드헤린, LAMP2 및 LAMP2B를 포함한다.
본원에 사용된 "스캐폴드 X"라는 용어는 엑소좀의 표면에서 최근에 확인된 엑소좀 단백질을 지칭한다. 예를 들어, 미국 특허 제10,195,290호를 참조하고, 이것은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다. 스캐폴드 X 단백질의 비제한적인 예는 프로스타글란딘 F2 수용체 음성 조절자("PTGFRN 단백질"); 바시긴("BSG 단백질"); 면역글로불린 슈퍼패밀리 구성원 2("IGSF2 단백질"); 면역글로불린 슈퍼패밀리 구성원 3("IGSF3 단백질"); 면역글로불린 슈퍼패밀리 구성원 8("IGSF8 단백질"); 인테그린 베타-1("ITGB1 단백질); 인테그린 알파-4("ITGA4 단백질"); 4F2 세포-표면 항원 중쇄("SLC3A2 단백질"); 및 ATP 수송체 단백질의 클래스("ATP1A1 단백질", "ATP1A2 단백질", "ATP1A3 단백질", "ATP1A4 단백질", "ATP1B3 단백질", "ATP2B1 단백질", "ATP2B2 단백질", "ATP2B3 단백질", "ATP2B 단백질")을 포함한다. 일부 양태에서, 스캐폴드 X 단백질은 전체 단백질 또는 이의 단편(예를 들어, 기능성 단편, 예를 들어 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 또는 내강 표면 상에 다른 모이어티를 앵커링할 수 있는 가장 작은 단편)일 수 있다. 일부 양태에서, 스캐폴드 X는 모이어티(예를 들어, 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제)를 엑소좀의 외부 표면 또는 내강 표면에 앵커링할 수 있다.
본원에 사용된 "스캐폴드 Y"라는 용어는 엑소좀의 내강 내에 새로 확인된 엑소좀 단백질을 지칭한다. 예를 들어, 국제 출원 PCT/US2018/061679호를 참조하고, 이것은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다. 스캐폴드 Y 단백질의 비제한적인 예는 미리스토일화된 알라닌 농후 단백질 키나제 C 기질("MARCKS 단백질"); 미리스토일화된 알라닌 농후 단백질 키나제 C 기질 유사 1("MARCKSL1 단백질"); 및 뇌 산 가용성 단백질 1("BASP1 단백질")을 포함한다. 일부 양태에서, 스캐폴드 Y 단백질은 전체 단백질 또는 이의 단편(예를 들어, 기능성 단편, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면에 모이어티를 앵커링할 수 있는 가장 작은 단편)일 수 있다. 일부 양태에서, 스캐폴드 Y는 모이어티(예를 들어, 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제)를 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면에 앵커링할 수 있다.
본원에 사용된 단백질(예를 들어, 치료학적 단백질, 스캐폴드 X 또는 스캐폴드 Y)의 "단편"이라는 용어는 천연 발생 단백질과의 비교에서 N-말단 및/또는 C-말단 결실된 천연 발생 서열, 또는 결실된 단백질의 임의의 부분보다 짧은 단백질의 아미노산 서열을 지칭한다. 본원에 사용된 "기능성 단편"이라는 용어는 단백질 기능을 보유하는 단백질 단편을 지칭한다. 따라서, 일부 양태에서, 스캐폴드 X 단백질의 기능성 단편은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 또는 외부 표면 상에 모이어티를 앵커링하는 능력을 보유한다. 유사하게, 소정의 양태에서, 스캐폴드 Y 단백질의 기능성 단편은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상에 모이어티를 앵커링하는 능력을 보유한다. 웨스턴 블롯, FACS 분석 및 예를 들어 GFP와 같은 자가형광 단백질에 의한 단편의 융합을 포함하는 EV, 예를 들어 엑소좀의 단백질 함량을 결정하기 위해 임의의 분야 공지된 방법에 의해 단편이 기능성 단편인지를 평가할 수 있다. 소정의 양태에서, 스캐폴드 X 단백질의 기능성 단편은 천연 발생 스캐폴드 X 단백질의 능력, 예를 들어 모이어티를 앵커링하는 능력의 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 100%를 보유한다. 일부 양태에서, 스캐폴드 Y 단백질의 기능성 단편은 천연 발생 스캐폴드 Y 단백질의 능력, 예를 들어 다른 분자를 앵커링하는 능력의 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 100%를 보유한다.
본원에 사용된 분자(예를 들어, 기능성 분자, 항원, 스캐폴드 X 및/또는 스캐폴드 Y)의 "변이체"라는 용어는 당해 분야에 공지된 방법에 의한 비교 시 다른 분자와 소정의 구조적 동일성 및 기능적 동일성을 공유하는 분자를 지칭한다. 예를 들어, 단백질의 변이체는 다른 단백질에서의 치환, 삽입, 결실, 프레임쉬프트 또는 재배열을 포함할 수 있다.
일부 양태에서, 스캐폴드 X의 변이체는 전체 길이, 성숙 PTGFRN, BSG, IGSF2, IGSF3, IGSF8, ITGB1, ITGA4, SLC3A2, 또는 ATP 수송체 단백질 또는 PTGFRN, BSG, IGSF2, IGSF3, IGSF8, ITGB1, ITGA4, SLC3A2 또는 ATP 수송체 단백질의 단편(예를 들어, 기능성 단편)과 적어도 약 70%의 동일성을 갖는 변이체를 포함한다. 일부 양태에서, PTGFRN의 변이체 또는 단편의 변이체는 서열 번호 1에 따른 PTGFRN 또는 이의 기능성 단편과 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성을 공유한다. 일부 양태에서, BSG의 변이체 또는 단편의 변이체는 서열 번호 9에 따른 BSG 또는 이의 기능성 단편과 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성을 공유한다. 일부 양태에서, IGSF2의 변이체 또는 단편의 변이체는 서열 번호 34에 따른 IGSF2 또는 이의 기능성 단편과 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성을 공유한다. 일부 양태에서, IGSF3의 변이체 또는 단편의 변이체는 서열 번호 20에 따른 IGSF3 또는 이의 기능성 단편과 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성을 공유한다. 일부 양태에서, IGSF8의 변이체 또는 단편의 변이체는 서열 번호 14에 따른 IGSF8 또는 이의 기능성 단편과 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성을 공유한다. 일부 양태에서, ITGB1의 변이체 또는 단편의 변이체는 서열 번호 21에 따른 ITGB1 또는 이의 기능성 단편과 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성을 공유한다. 일부 양태에서, ITGA4의 변이체 또는 단편의 변이체는 서열 번호 22에 따른 ITGA4 또는 이의 기능성 단편과 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성을 공유한다. 일부 양태에서, SLC3A2의 변이체 또는 단편의 변이체는 서열 번호 23에 따른 SLC3A2 또는 이의 기능성 단편과 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성을 공유한다. 일부 양태에서, ATP1A1의 변이체 또는 단편의 변이체는 서열 번호 24에 따른 ATP1A1 또는 이의 기능성 단편과 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성을 공유한다. 일부 양태에서, ATP1A2의 변이체 또는 단편의 변이체는 서열 번호 25에 따른 ATP1A2 또는 이의 기능성 단편과 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성을 공유한다. 일부 양태에서, ATP1A3의 변이체 또는 단편의 변이체는 서열 번호 26에 따른 ATP1A3 또는 이의 기능성 단편과 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성을 공유한다. 일부 양태에서, ATP1A4의 변이체 또는 단편의 변이체는 서열 번호 27에 따른 ATP1A4 또는 이의 기능성 단편과 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성을 공유한다. 일부 양태에서, ATP1B3의 변이체 또는 단편의 변이체는 서열 번호 28에 따른 ATP1B3 또는 이의 기능성 단편과 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성을 공유한다. 일부 양태에서, ATP2B1의 변이체 또는 단편의 변이체는 서열 번호 29에 따른 ATP2B1 또는 이의 기능성 단편과 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성을 공유한다. 일부 양태에서, ATP2B2의 변이체 또는 단편의 변이체는 서열 번호 30에 따른 ATP2B2 또는 이의 기능성 단편과 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성을 공유한다. 일부 양태에서, ATP2B3의 변이체 또는 단편의 변이체는 서열 번호 31에 따른 ATP2B3 또는 이의 기능성 단편과 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성을 공유한다. 일부 양태에서, ATP2B4의 변이체 또는 단편의 변이체는 서열 번호 32에 따른 ATP2B4 또는 이의 기능성 단편과 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성을 공유한다. 일부 양태에서, 본원에 개시된 스캐폴드 X 단백질의 변이체 또는 단편의 변이체는 EV, 예를 들어 엑소좀에 특이적으로 표적화되는 능력을 보유한다. 일부 양태에서, 스캐폴드 X는 하나 이상의 돌연변이, 예를 들어 보존적 아미노산 치환을 포함한다.
일부 양태에서, 스캐폴드 Y의 변이체는 MARCKS, MARCKSL1, BASP1과 적어도 약 70%의 동일성을 갖는 변이체 또는 MARCKS, MARCKSL1 또는 BASP1의 단편을 포함한다. 일부 양태에서, MARCKS의 변이체 또는 단편의 변이체는 서열 번호 47에 따른 MARCKS 또는 이의 기능성 단편과 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성을 공유한다. 일부 양태에서, MARCKSL1의 변이체 또는 단편의 변이체는 서열 번호 48에 따른 MARCKSL1 또는 이의 기능성 단편과 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성을 공유한다. 일부 양태에서, BASP1의 변이체 또는 단편의 변이체는 서열 번호 49에 따른 BASP1 또는 이의 기능성 단편과 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성을 공유한다. 일부 양태에서, 스캐폴드 Y 단백질의 변이체 또는 단편의 변이체는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면에 특이적으로 표적화되는 능력을 보유한다. 일부 양태에서, 스캐폴드 Y는 하나 이상의 돌연변이, 예를 들어 보존적 아미노산 치환을 포함한다.
"보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체된 것이다. 염기성 측쇄(예를 들어, 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 비하전된 극성 측쇄(예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 비극성 측쇄(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타 분지된 측쇄(예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄(예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 포함하는 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리가 당해 분야에 정의되어 있다. 이와 같이, 폴리펩타이드에서의 아미노산이 동일한 측쇄 패밀리로부터 다른 아미노산으로 대체되면, 치환은 보존적인 것으로 고려된다. 다른 양태에서, 아미노산의 스트링은 측쇄 패밀리 구성원의 순서 및/또는 조성이 다른 구조적으로 유사한 스트링으로 보존적으로 대체될 수 있다.
2개의 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드 서열 사이의 "퍼센트 서열 동일성" 또는 "퍼센트 동일성"이라는 용어는 2개의 서열의 최적 정렬을 위해 도입되어야 하는 부가 또는 결실(즉, 갭)을 고려하는 비교 창에 걸쳐 서열이 공유하는 동일한 일치된 위치의 수를 지칭한다. 일치된 위치는 동일한 뉴클레오타이드 또는 아미노산이 표적 서열 및 기준 서열 둘 다에 존재하는 임의의 위치이다. 갭이 뉴클레오타이드 또는 아미노산이 아니므로, 표적 서열에 존재하는 갭을 계수하지 않는다. 마찬가지로, 기준 서열로부터의 뉴클레오타이드 또는 아미노산이 아니라 표적 서열 뉴클레오타이드 또는 아미노산이 계수되므로, 기준 서열에 존재하는 갭은 계수되지 않는다.
일치된 위치의 수를 생성하도록 서열 둘 다에서 동일한 아미노산 잔기 또는 핵산 염기가 생기는 위치의 수를 결정하고, 비교 창에서 위치의 총 수에 의해 일치된 위치의 수를 나누고, 그 결과에 100을 곱하여 서열 동일성의 백분율을 생성함으로써 서열 동일성의 백분율을 계산한다. 온라인 사용 및 다운로드 둘 다를 위해 용이하게 이용 가능한 소프트웨어를 사용하여 2개의 서열 사이의 서열의 비교 및 퍼센트 서열 동일성의 결정이 달성될 수 있다. 적합한 소프트웨어 프로그램은 다양한 소스로부터 단백질 및 뉴클레오타이드 서열 둘 다의 정렬에 대해 이용 가능하다. 퍼센트 서열 동일성을 결정하기 위한 하나의 적합한 프로그램은 미국 정부의 국립 생명과학 정보 센터 BLAST 웹 사이트(blast.ncbi.nlm.nih.gov)로부터 이용 가능한 프로그램의 BLAST 스위트의 일부인 bl2seq이다. Bl2seq는 BLASTN 또는 BLASTP 알고리즘 중 어느 하나를 사용하여 2개의 서열 사이에 비교를 수행한다. BLASTN은 핵산 서열을 비교하도록 사용되지만, BLASTP는 아미노산 서열을 비교하도록 사용된다. 다른 적합한 프로그램은 예를 들어 bioinformatics 프로그램의 EMBOSS 스위트의 일부인 Needle, Stretcher, Water 또는 Matcher이고, www.ebi.ac.uk/Tools/psa에서 European Bioinformatics Institute(EBI)로부터 또한 이용 가능하다.
폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드 기준 서열과 정렬하는 단일 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드 표적 서열 내의 상이한 영역은 각각 이의 자체의 퍼센트 서열 동일성을 가질 수 있다. 퍼센트 서열 동일성 값이 10의 자리까지 반올림됨이 주목된다. 예를 들어, 80.11, 80.12, 80.13 및 80.14는 80.1로 반내림되는 반면, 80.15, 80.16, 80.17, 80.18 및 80.19는 80.2로 반올림된다. 길이 값이 항상 정수일 수 있다는 것이 또한 주목된다.
당업자는 퍼센트 서열 동일성의 계산을 위한 서열 정렬의 생성이 일차 서열 데이터에 의해 배타적으로 유발된 2진 서열-서열 비교로 제한되지 않는다는 것을 이해할 것이다. 다수의 서열 정렬로부터 서열 정렬이 유래될 수 있다. 다수의 서열 정렬을 생성하기 위한 하나의 적합한 프로그램은 www.clustal.org로부터 이용 가능한 ClustalW2이다. 다른 적합한 프로그램은 www.drive5.com/muscle/로부터 이용 가능한 MUSCLE이다. ClustalW2 및 MUSCLE는 대안적으로 예를 들어 EBI로부터 이용 가능하다.
서열 정렬은 서열 데이터를 이종 소스로부터의 데이터, 예컨대 구조적 데이터(예를 들어, 결정학적 단백질 구조), 기능성 데이터(예를 들어, 돌연변이의 위치) 또는 계통발생 데이터와 통합하여 생성될 수 있다고 또한 이해될 것이다. 다수의 서열 정렬을 생성하기 위한 이종 데이터를 통합한 적합한 프로그램은 worldwideweb.tcoffee.org에서 입수 가능하고, 대안적으로 예를 들어 EBI로부터 입수 가능한 T-Coffee이다. 퍼센트 서열 동일성을 계산하기 위해 사용된 최종 정렬이 자동으로 또는 수동으로 준비될 수 있다고 또한 이해될 것이다.
폴리뉴클레오타이드 변이체는 암호화 영역, 비암호화 영역 또는 둘 다에서의 변경을 함유할 수 있다. 일 양태에서, 폴리뉴클레오타이드 변이체는 침묵 치환, 부가 또는 결실을 생성하지만 암호화된 폴리펩타이드의 특성 또는 활성을 변경하지 않는 변경을 함유함다. 다른 양태에서, 뉴클레오타이드 변이체는 유전 코드의 축퇴성으로 인해 침묵 치환에 의해 생성된다. 다른 양태에서, 5개 내지 10개, 1개 내지 5개, 또는 1개 내지 2개의 아미노산이 임의의 조합으로 치환되거나 결실되거나 부가된 변이체. 예를 들어, 특정 숙주에 대한 코돈 발현을 최적화하기 위해(인간 mRNA에서 다른 것, 예를 들어 박테리아 숙주, 예컨대 이. 콜라이로의 변경 코돈) 다양한 이유에 대해 폴리뉴클레오타이드 변이체를 제조할 수 있다.
자연 발생 변이체는 "대립유전자 변이체"라 칭하고, 유기체의 염색체에서 소정의 유전좌위를 점유하는 유전자의 여러 대안적인 형태 중 하나를 지칭한다(Genes II, Lewin, B., ed., John Wiley & Sons, New York (1985)). 이 대립유전자 변이체는 폴리뉴클레오타이드 및/또는 폴리펩타이드 수준 중 어느 하나에서 변할 수 있고, 본 개시내용에 포함된다. 대안적으로, 비천연 발생 변이체는 돌연변이유발 기법에 의해 또는 직접적인 합성에 의해 제조될 수 있다.
단백질 조작 및 재조합 DNA 기술의 공지된 방법을 이용하여, 폴리펩타이드의 특징을 개선하고 변경하기 위해 변이체가 생성될 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 아미노산은 실질적인 생물학적 기능 소실 없이 분비된 단백질의 N-말단 또는 C-말단으로부터 결실될 수 있다. 본원에 그 전체가 참고로 포함된 Ron 등, J. Biol. Chem. 268: 2984-2988 (1993)은 3개, 8개 또는 27개의 아미노-말단 아미노산 잔기를 결실시킨 후에도 헤파린 결합 활성을 갖는 변이체 KGF 단백질을 보고하였다. 유사하게, 인터페론 감마는 이 단백질의 카복시 말단으로부터 8개 내지 10개의 아미노산 잔기를 결실시킨 후 10배 이하의 더 높은 활성을 나타냈다. (Dobeli 등, J. Biotechnology 7:199-216 (1988), 본원에 그 전체가 참고로 포함됨.)
더욱이, 충분한 증거는 변이체가 자연 발생 단백질의 생물학적 활성과 유사한 생물학적 활성을 대개 보유한다는 것을 입증한다. 예를 들어, Gayle 및 동료들(J. Biol. Chem 268:22105-22111 (1993), 본원에 그 전체가 참고로 포함됨)은 인간 사이토카인 IL-1a의 광범위한 돌연변이 분석을 수행하였다. 이들은 분자 전체 길이에 걸쳐 변이체당 평균 2.5개의 아미노산이 변하는 3,500개 초과의 개별 IL-1a 돌연변이체를 생성하도록 랜덤 돌연변이유발을 사용하였다. 모든 가능한 아미노산 위치에서 다수의 돌연변이를 검사하였다. 조사자들은 "대부분의 분자가 [결합 또는 생물학적 활성] 중 어느 하나에 대한 적은 효과로 변경될 수 있었다"는 것을 발견하였다(요약서 참조). 사실, 조사된 3,500개 초과의 뉴클레오타이드 서열 중에서 오직 23개의 고유한 아미노산 서열이 야생형과 활성이 상당히 다른 단백질을 생성하였다.
상기 기술된 것처럼, 폴리펩타이드 변이체는 예를 들어 변형된 폴리펩타이드를 포함한다. 변형은 예를 들어 아세틸화, 아실화, ADP-리보실화, 아미드화, 플라빈의 공유 부착, 헴 모이어티의 공유 부착, 뉴클레오타이드 또는 뉴클레오타이드 유도체의 공유 부착, 지질 또는 지질 유도체의 공유 부착, 포스포티딜이노시톨의 공유 부착, 가교결합, 고리화, 디설파이드 결합 형성, 탈메틸화, 공유 가교결합의 형성, 시스테인의 형성, 피로글루타메이트의 형성, 포밀화, 감마-카복실화, 글리코실화, GPI 앵커 형성, 하이드록실화, 요오드화, 메틸화, 미리스토일화, 산화, 페길화(Mei 등, Blood 116:270-79 (2010), 본원에 그 전체가 참고로 포함됨), 단백질분해 가공, 포스포릴화, 프레닐화, 라세미화, 셀레노일화, 황산화, 단백질에 대한 아미노산의 운반-RNA 매개된 부가, 예컨대 아르기닐화 및 유비퀴틴화를 포함한다. 일부 양태에서, 스캐폴드 X 및/또는 스캐폴드 Y는 임의의 종래의 위치에서 변형된다.
본원에 사용된 "연결된", "융합된" 또는 "접합된"이라는 용어는 상호교환 가능하게 사용되고, 세포외 소포체의 내강 표면 내에서 또는 외부 표면 상에서, 각각 제1 모이어티와 제2 모이어티, 예를 들어 스캐폴드 X 및 항원(또는 아쥬반트 또는 면역 조절제), 예를 들어 각각 세포외 소포체 내에 또는 상에 발현된 스캐폴드 모이어티와 항원, 예를 들어 스캐폴드 X(예를 들어, PTGFRN 단백질) 사이에 형성된 공유 결합 또는 비공유 결합을 지칭한다. 일부 양태에서, 본원에 개시된 페이로드(예를 들어, 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제) 및/또는 표적화 모이어티는 EV의 외부 표면 및/또는 내강 표면(예를 들어, 엑소좀)에 직접 연결될 수 있다. 본원에 사용된 "직접 연결된", "직접 융합된" 또는 "직접 접합된"이라는 용어는 본원에 개시된 스캐폴드 모이어티의 사용 없이 EV(예를 들어, 엑소좀)의 표면에 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)를 연결(융합 또는 접합)하는 프로세스을 지칭한다.
본원에 사용된 "융합 단백질"이라는 용어는 서로 연결되거나 접합된 2개 이상의 단백질을 지칭한다. 예를 들어, 일부 양태에서, 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)에서 발현될 수 있는 융합 단백질은 (i) 페이로드(예를 들어, 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제) 및 (ii) 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X 및/또는 스캐폴드 Y)를 포함한다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 EV(예를 들어, 엑소좀)에서 발현될 수 있는 융합 단백질은 (i) 표적화 모이어티 및 (ii) 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X 및/또는 스캐폴드 Y)를 포함한다. 본원에 기재된 것처럼, 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV(예를 들어, 엑소좀)는 다수의 융합 단백질을 발현할 수 있고, 여기서 제1 융합 단백질은 (i) 페이로드(예를 들어, 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제) 및 (ii) 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X 및/또는 스캐폴드 Y)를 포함하고, 제2 융합 단백질은 (i) 표적화 모이어티 및 (ii) 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X 및/또는 스캐폴드 Y)를 포함한다.
"캡슐화된"이라는 용어 또는 이 용어의 문법상 상이한 형태(예를 들어, 캡슐화 또는 캡슐화하는)는 2개의 모이어티를 화학적으로 또는 물리적으로 연결하지 않으면서 제2 모이어티(예를 들어, EV, 예를 들어 엑소좀) 내에 제1 모이어티(예를 들어, 항원, 아쥬반트 또는 면역 조절제)를 갖는 상태 또는 프로세스을 지칭한다. 일부 양태에서, "캡슐화된"이라는 용어는 "내강에서" 및 "로딩된"의 용어와 상호교환 가능하게 사용될 수 있다. 제2 모이어티(예를 들어, EV, 예를 들어 엑소좀)로의 제1 모이어티(예를 들어, 페이로드, 예를 들어 항원, 아쥬반트 또는 면역 조절제)의 캡슐화(또는 로딩)의 비제한적인 예는 본원에서 다른 곳에 개시되어 있다.
본원에 사용된 "생산자 세포"라는 용어는 EV, 예를 들어 엑소좀을 생성하기 위해 사용된 세포를 지칭한다. 생산자 세포는 시험관내 배양된 세포 또는 생체내 세포일 수 있다. 생산자 세포는 EV, 예를 들어 엑소좀을 생성하는 데 있어서 효과적인 것으로 공지된 세포, 예를 들어 HEK293 세포, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, 간엽성 줄기 세포(MSC), BJ 인간 포피 섬유아세포 세포, fHDF 섬유아세포 세포, AGE.HN® 뉴런 전구 세포, CAP® 양수세포 세포, 지방 간엽성 줄기 세포, RPTEC/TERT1 세포를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 소정의 양태에서, 생산자 세포는 항원 제시 세포가 아니다. 일부 양태에서, 생산자 세포는 수지상 세포, B 세포, 비만 세포, 대식세포, 호중구, 쿠퍼-브로비츠 세포, 이들 세포 중 어느 것으로부터 유래된 세포, 또는 임의의 이들의 조합이 아니다. 일부 양태에서, 생산자 세포는 자연에 존재하는 항원 제시 세포가 아니다(즉, 변형됨). 일부 양태에서, 생산자 세포는 자연에 존재하는 수지상 세포, B 세포, 비만 세포, 대식세포, 호중구, 쿠퍼-브로비츠 세포, 이들 세포 중 어느 것으로부터 유래된 세포, 또는 임의의 이들의 조합이 아니다. 이러한 생산자 세포와 관련된 추가 개시내용은 본 개시내용에서 다른 곳에 제공된다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 EV, 예를 들어 엑소좀은 EV, 예를 들어 엑소좀의 표면 상에서 발현된 MHC 클래스 I 또는 클래스 II 분자 상의 항원을 보유하지 않지만(즉, 항원은 클래스 I 또는 클래스 II 분자에 존재하지 않음), 대신에 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 내에서, 또는 스캐폴드 X 및/또는 스캐폴드 Y에 대한 부착에 의해 EV, 예를 들어 엑소좀의 표면 상에서 항원을 보유할 수 있다.
본원에 사용된 "MHC 클래스 I 분자"라는 용어는 MHC 클래스 I 분자를 암호화하는 야생형 또는 변이체 HLA 클래스 I 유전자의 단백질 산물을 지칭한다. 따라서, "HLA 클래스 I 분자" 및 "MHC 클래스 I 분자"는 본원에서 상호교환 가능하게 사용된다.
MHC 클래스 I 분자는 주요 조직접합성 복합체(MHC) 분자의 2개의 주요 클래스 중 하나(다른 것은 MHC 클래스 II임)이고, 턱이 있는 척추동물의 신체에서 모든 유핵 세포의 세포 표면에서 발견된다. 이들은 또한 적혈구가 아니라 혈소판에서 생긴다. 이의 기능은 세포 내로부터의 단백질의 펩타이드 단편을 세포독성 T 세포에 디스플레이하는 것이고, 이는 MHC 클래스 I 단백질의 도움으로 디스플레이된 특정한 비자가 항원에 대해 면역계로부터의 즉각적인 반응을 촉발할 것이다. MHC 클래스 I 분자가 세포액 단백질로부터 유래된 펩타이드를 제시하므로, MHC 클래스 I 제시의 경로는 대개 세포액 또는 내인성 경로라 칭한다.
인간에서, MHC 클래스 I에 상응하는 HLA는 HLA-A, HLA-B 및 HLA-C이다. MHC 클래스 I 분자는 알파 사슬 및 β2-마이크로글로불린(β2m) 사슬의 2개의 단백질 사슬을 포함한다. 인간 β2m은 B2M 유전자에 의해 암호화된다. 클래스 I MHC 분자는 프로테아솜에 의해 세포액 단백질의 분해로부터 주로 생성된 펩타이드에 결합한다. 이후, MHC I:펩타이드 복합체는 소포체를 통해 세포의 외부 혈장 막으로 삽입된다. 에피토프 펩타이드는 클래스 I MHC 분자의 세포외 부분에 결합된다. 이와 같이, 클래스 I MHC의 기능은 세포독성 T 세포(CTL)에 세포내 단백질을 디스플레이하는 것이다. 그러나, 클래스 I MHC는 교차제시로 알려진 프로세스에서 외인성 단백질로부터 생성된 펩타이드를 또한 제시할 수 있다.
정상 세포는 클래스 I MHC 상에 정상 세포 단백질 턴오버로부터 펩타이드를 디스플레이할 것이고, CTL은 중추 관용성 기전 및 말초 관용성 기전으로 인해 이들에 반응하여 활성화되지 않을 것이다. 세포가 외래 단백질을 발현할 때, 예컨대 바이러스 감염 후, 클래스 I MHC의 분획은 세포 표면 상에 이 펩타이드를 디스플레이할 것이다. 그 결과, MHC:펩타이드 복합체에 특이적인 CTL은 제시 세포를 인식하고 사멸할 것이다. 대안적으로, 클래스 I MHC 자체는 자연 살해 세포(NK)에 대한 억제 리간드로서 작용할 수 있다. CTL 반응을 피하도록 일부 바이러스 및 소정의 종양에 의해 사용된 기전인 표면 클래스 I MHC의 정상 수준의 감소는 NK 세포 사멸을 활성화한다.
본원에 사용된 "MHC 클래스 II 분자"라는 용어는 MHC 클래스 II 분자를 암호화하는 야생형 또는 변이체 HLA 클래스 II 유전자의 단백질 산물을 지칭한다. 따라서, "HLA 클래스 II 분자" 및 "MHC 클래스 II 분자"는 본원에서 상호교환 가능하게 사용된다.
MHC 클래스 II 분자는 전문 항원 제시 세포, 예컨대 수지상 세포, 단핵 포식세포, 일부 내피 세포, 흉선 상피 세포 및 B 세포에서 오직 보통 발견되는 주요 조직접합성 복합체(MHC) 분자의 클래스이다. 이 세포는 면역 반응을 개시하는 데 중요하다. 클래스 II 펩타이드에 의해 제시된 항원은 세포외 단백질로부터 유래된다(MHC 클래스 I에서처럼 세포액이 아님).
클래스 II 분자는 MHC 클래스 I 분자와 같이 또한 이종이합체이지만, 이 경우에 α 사슬과 β 사슬의 2개의 균질한 펩타이드로 이루어지고, 이들 둘 다는 MHC에서 암호화된다. α1, α2 등의 하위지칭은 HLA 유전자 내의 별개의 도메인을 지칭하고; 각각의 도메인은 보통 유전자 내의 상이한 엑손에 의해 암호화되고, 일부 유전자는 리더 서열, 막관통 서열 등을 암호화하는 추가의 도메인을 갖는다. 이들 분자는 세포외 영역뿐만 아니라 막관통 서열 및 세포질 꼬리 둘 다를 갖는다. 사슬의 α1 영역 및 β1 영역은 함께 막-원위 펩타이드-결합 도메인을 만들지만, 사슬의 남은 세포외 부분인 α2 영역 및 β2 영역은 막-근위 면역글로불린-유사 도메인을 형성한다. 항원 또는 펩타이드가 결합하는 항원 결합 홈은 2개의 α-나선 벽과 β-시트로 이루어진다. MHC 클래스 II 분자의 항원-결합 홈이 양 말단에 개방되지만 클래스 I 분자에서의 상응하는 홈은 각 말단에서 폐쇄되므로, MHC 클래스 II 분자에 의해 제시된 항원은 더 길고, 일반적으로 15개 내지 24개의 아미노산 잔기 길이이다. MHC 클래스 II 분자의 로딩은 식세포작용에 의해 발생하고; 세포외 단백질은 내포작용되고, 리소솜에서 분해되고, 생성된 에피토프 펩타이드 단편은 세포 표면으로의 이의 이동 전에 MHC 클래스 II 분자에 로딩된다. 인간에서, MHC 클래스 II 단백질 복합체는 인간 백혈구 항원 유전자 복합체(HLA)에 의해 암호화된다. MHC 클래스 II에 상응하는 HLA는 HLA-DP, HLA-DM, HLA-DOA, HLA-DOB, HLA-DQ 및 HLA-DR이다. HLA 유전자 복합체에서의 돌연변이는 MHC 클래스 II 결핍의 유형인 노출 림프구 증후군(BLS: bare lymphocyte syndrome)으로 이어질 수 있다.
본원에 사용된 "단리한다", "단리된" 및 "단리하는" 또는 "정제한다", "정제된" 및 "정제하는"뿐만 아니라 "추출된" 및 "추출하는"이라는 용어는 상호교환 가능하게 사용되고, 원하는 EV 제제의 정제, 예를 들어 선택 또는 농후화의 하나 이상의 프로세스를 겪은 원하는 EV의 준비 상태(예를 들어, 복수의 공지된 또는 비공지된 양 및/또는 농도)를 지칭한다. 일부 양태에서, 본원에 사용된 단리 또는 정제는 생산자 세포를 함유하는 샘플로부터 EV(예를 들어, 분획)를 외부로 꺼내는, 부분적으로 외부로 꺼내는 프로세스이다. 일부 양태에서, 단리된 EV 조성물은 검출 가능한 원치 않는 활성을 갖지 않거나, 대안적으로 원치 않는 활성의 수준 또는 양은 허용 가능한 수준 또는 양이거나 이보다 적다. 다른 양태에서, 단리된 EV 조성물은 허용 가능한 양 및/또는 농도이거나 이보다 많은 원하는 EV의 양 및/또는 농도를 갖는다. 다른 양태에서, 단리된 EV 조성물은 상기 조성물이 얻어지는 출발 물질(예를 들어, 생산자 세포 제제)과 비교하여 농후화된다. 이 농후화는 출발 물질과 비교하여 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.9%, 99.99%, 99.999%, 99.9999%, 또는 99.9999% 초과만큼일 수 있다. 일부 양태에서, 단리된 EV 제제는 잔류하는 생물학적 산물이 실질적으로 없다. 일부 양태에서, 단리된 EV 제제는 임의의 오염 생물학적 물질이 100% 없거나, 99% 없거나, 98% 없거나, 97% 없거나, 96% 없거나, 95% 없거나, 94% 없거나, 93% 없거나, 92% 없거나, 91% 없거나 90% 없다. 잔류하는 생물학적 산물은 무생물적 재료(화학물질을 포함) 또는 원치 않는 핵산, 단백질, 지질 또는 대사물질을 포함할 수 있다. 잔류하는 생물학적 산물이 실질적으로 없다는 것은 또한 EV 조성물이 검출 가능한 생산자 세포를 함유하지 않고, EV가 오직 검출 가능하다는 것을 의미할 수 있다.
본원에 사용된 "면역 조절제"라는 용어는 세포외 소포체와 접촉하고, 면역계를 조절하는 표적(예를 들어, 표적 세포)에 작용하는 작용제(즉, 페이로드)를 지칭한다. EV(예를 들어, 엑소좀) 및/또는 생산자 세포로 도입될 수 있는 면역 조절제의 비제한적인 예는 작용제, 예컨대, 관문 억제제의 조절제, 관문 억제제의 리간드, 사이토카인, 이들의 유도체, 또는 임의의 이들의 조합을 포함한다. 면역 조절제는 또한 작용제, 길항제, 항체, 항원-결합 단편, 폴리뉴클레오타이드, 예컨대 siRNA, 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 포스포로디아미데이트 모르폴리노 올리고머(PMO), 펩타이드-접합된 포스포로디아미데이트 모르폴리노 올리고머(PPMO), miRNA, lncRNA, mRNA DNA 또는 소분자를 포함할 수 있다.
본원에 사용된 "생체분포 변형제"라는 용어는 생체내 또는 시험관내 (예를 들어, 상이한 변종의 세포의 혼합된 배양물 중에) 세포외 소포체(예를 들어, 엑소좀, 나노소포체)의 분포를 변형시킬 수 있는 작용제(즉, 페이로드)를 지칭한다. 일부 양태에서, "표적화 모이어티"라는 용어는 생체분포 변형제의 용어와 상호교환 가능하게 사용될 수 있다. 일부 양태에서, 표적화 모이어티는 EV(예를 들어, 엑소좀)("친화성 모이어티")의 친화성을 변경한다. 본원에 사용된 "친화성 모이어티"라는 용어는 EV(예를 들어, 엑소좀)에서 발현될 때 EV의 자연 이동을 변경하고/하거나 향상시키는 표적화 모이어티를 지칭한다. 예를 들어, 일부 양태에서, 친화성 모이어티는 EV가 특정 세포, 조직 또는 장기에 의해 흡수되게 촉진할 수 있다. 본 개시내용과 사용될 수 있는 친화성 모이어티의 비제한적인 예는 수지상 세포(예를 들어, Clec9A 또는 DEC205) 또는 T 세포(예를 들어, CD3) 상에 특이적으로 발현되는 마커에 결합할 수 있는 것을 포함한다. 달리 표시되지 않는 한, 본원에 사용된 "표적화 모이어티"라는 용어는 친화성 모이어티를 포함한다. 생체분포제는 생물학적 분자, 예컨대 단백질, 펩타이드, 지질 또는 탄수화물, 또는 합성 분자일 수 있다. 예를 들어, 생체분포 변형제는 친화도 리간드(예를 들어, 항체, VHH 도메인, 파지 디스플레이 펩타이드, 피브로넥틴 도메인, 낙타, VNAR), 합성 중합체(예를 들어, PEG), 자연 리간드/분자(예를 들어, CD40L, 알부민, CD47, CD24, CD55, CD59), 재조합 단백질(예를 들어, XTEN)일 수 있지만, 이들로 제한되지는 않는다.
소정의 양태에서, 생체분포 변형제 및/또는 표적화 모이어티는 EV(예를 들어, 엑소좀)의 표면 상에 디스플레이된다. 생체분포 변형제는 (예를 들어, 유전 암호화된 융합 분자로서) 스캐폴드 단백질(예를 들어, 스캐폴드 X)에 융합됨으로써 EV 표면 상에 디스플레이될 수 있다. 일부 양태에서, 생체분포 변형제는 생체분포 변형제를 EV 표면 분자에 부착하는 화학적 반응에 의해 EV 표면 상에 디스플레이될 수 있다. 비제한적인 예는 PEG화이다. 일부 양태에서, 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)는 항원, 아쥬반트 또는 면역 조절제 이외에 생체분포 변형제를 추가로 포함할 수 있다. 본 개시내용과 사용될 수 있는 생체분포 변형제 또는 표적화 모이어티의 비제한적인 예는 C형 렉틴 도메인 패밀리 9 구성원 A(Clec9a) 단백질, 수지상 세포 특이적 세포간 부착 분자-3-그래빙 비인테그린(DC-SIGN), CD207, CD40, Clec6, 수지상 세포 면역수용체(DCIR), DEC-205, 렉틴-유사 산화된 저밀도 지단백 수용체-1(LOX-1), MARCO, Clec12a, DC-아시알로당단백질 수용체(DC-ASGPR), DC 면역수용체 2(DCIR2), 덱틴-1, 대식세포 만노스 수용체(MMR), BDCA-1(CD303, Clec4c), 덱틴-2, Bst-2(CD317), CD3, 또는 임의의 이들의 조합을 포함한다. 소정의 양태에서, 표적화 모이어티는 Clec9a 단백질이다. 일부 양태에서, 표적화 모이어티는 CD3 분자이다.
본원에 사용된 "C형 렉틴 도메인 패밀리 9 구성원 A"(Clec9a) 단백질이라는 용어는 활성화 수용체로서 작용하고 골수성 계통 세포(예를 들어, DC) 상에 발현된 V군 C형 렉틴-유사 수용체(CTLR)를 지칭한다. Huysamen 등, J Biol Chem 283(24):16693-701 (2008); 미국 특허 제9,988,431 B2호, 이들의 각각은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다. Clec9a의 동의어가 공지되어 있고, CD370, DNGR-1, 5B5, HEEE9341 및 C형 렉틴 도메인 함유 9A를 포함한다. 일부 양태에서, Clec9a 단백질은 인간 cDC1 세포 상에 발현된다. 일부 양태에서, Clec9a 단백질은 마우스 cDC1 및 pDC 세포 상에 발현된다. 달리 표시되지 않는 한, 본원에 사용된 Clec9a는 하나 이상의 종(예를 들어, 인간, 비인간 영장류, 개, 고양이, 기니아 피그, 토끼, 래트, 마우스, 말, 소 및 곰)으로부터의 Clec9a를 지칭할 수 있다.
본원에 사용된 "CD3" 또는 "분화 클러스터 3"이라는 용어는 T 세포 수용체(TCR)와 연관된 단백질 복합체를 지칭한다. CD3 분자는 4개의 구별되는 사슬로 이루어진다(CD3γ, CD3δ, 및 2개의 CD3ε 사슬). 이들 사슬은 T 림프구에서 활성화 신호를 생성하기 위해 T-세포 수용체(TCR) 및 ζ-사슬과 회합한다. TCR, ζ-사슬 및 CD3 분자는 함께 TCR 복합체를 구성한다. CD3 분자는 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포 둘 다를 포함하는 모든 T 세포 상에 발현된다. 달리 표시되지 않는 한, 본원에 사용된 CD3은 하나 이상의 종(예를 들어, 인간, 비인간 영장류, 개, 고양이, 기니아 피그, 토끼, 래트, 마우스, 말, 소 및 곰)으로부터의 CD3을 지칭할 수 있다.
본원에 사용된 "페이로드"라는 용어는 EV(예를 들어, 엑소좀)와 접촉된 표적(예를 들어, 표적 세포)에 작용하는 작용제를 지칭한다. 일부 양태에서, 달리 표시되지 않는 한, 페이로드라는 용어는 "생물학적 활성 분자"의 용어와 상호교환 가능하게 사용될 수 있다. EV, 예를 들어 엑소좀에 포함될 수 있는 페이로드의 비제한적인 예는 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제이다. EV, 예를 들어 엑소좀 및/또는 생산자 세포로 도입될 수 있는 페이로드는 작용제, 예컨대 뉴클레오타이드(예를 들어, 검출 가능한 모이어티 또는 독소를 포함하고 전사를 파괴하는 뉴클레오타이드), 핵산(예를 들어, 폴리펩타이드를 암호화하는 DNA 또는 mRNA 분자, 예컨대 효소, 또는 조절 기능을 갖는 RNA 분자, 예컨대 miRNA, dsDNA, lncRNA, siRNA, 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 포스포로디아미데이트 모르폴리노 올리고머(PMO), 또는 이들의 조합), 아미노산(예를 들어, 검출 가능한 모이어티를 포함하는 아미노산 또는 전사를 파괴하는 독소), 폴리펩타이드(예를 들어, 효소), 지질, 탄수화물 및 소분자(예를 들어, 소분자 약물 및 독소)를 포함한다. 소정의 양태에서, 페이로드는 항원을 포함한다. 본원에 사용된 "항원"이라는 용어는 대상체로 도입될 때 면역 반응(세포 또는 체액)을 자체에 유발하는 임의의 작용제를 지칭한다.
본원에 사용된 "친화도 리간드"라는 용어는 예를 들어 표적 세포 상에 발현된 특이적 마커에 선택적으로 및 우선적으로 결합할 수 있는 분자를 지칭한다. 본 개시내용과 사용될 수 있는 친화도 리간드의 비제한적인 예는 항체, 파지 디스플레이 펩타이드, 피브로넥틴 도메인, 낙타, VNAR, VHH 도메인, 및 이들의 조합을 포함한다. 본원에 사용된 "항체"라는 용어는 천연이든 또는 부분적으로 또는 완전히 합성으로 제조되든 면역글로불린, 및 이의 단편을 포함한다. 상기 용어는 또한 면역글로불린 결합 도메인과 상동성인 결합 도메인을 갖는 임의의 단백질을 포괄한다. "항체"는 항원에 특이적으로 결합하고 이를 인식하는 면역글로불린 유전자 또는 이의 단편으로부터의 프레임워크 영역을 포함하는 폴리펩타이드를 추가로 포함한다. 항체의 용어의 사용은 전체 항체, 다중클론성, 단일클론성 및 재조합 항체, 이의 단편을 포함하는 것으로 의도되고, 단일-사슬 항체, 인간화된 항체, 쥣과 항체, 키메라, 마우스-인간, 마우스-영장류, 영장류-인간 단일클론 항체, 항-이디오타입 항체, 항체 단편, 예를 들어 scFv, (scFv)2, Fab, Fab', 및 F(ab')2, F(ab1)2, Fv, dAb 등, 및 Fd 단편, 디아바디, 및 항체-관련 폴리펩타이드를 추가로 포함한다. 항체는 원하는 생물학적 활성 또는 기능을 나타내는 한 이중특이적 항체 및 다중특이적 항체를 포함한다.
"개체", "대상체", "숙주" 및 "환자"라는 용어는 본원에서 상호교환 가능하게 사용되고, 진단, 치료 또는 치료법이 원해지는 임의의 포유동물 대상체, 특히 인간을 지칭한다. 본원에 기재된 조성물 및 방법은 인간 치료 및 수의 분야 둘 다에 대해 적용 가능하다. 일부 양태에서, 대상체는 포유동물이고, 다른 양태에서, 대상체는 인간이다. 본원에 사용된 "포유동물 대상체"는 제한 없이 인간, 가축 동물(예를 들어, 개, 고양이 등), 농장 동물(예를 들어, 소, 양, 돼지, 말 등) 및 실험실 동물(예를 들어, 원숭이, 래트, 마우스, 토끼, 기니아 피그 등)을 포함하는 모든 포유동물을 포함한다.
본원에 사용된 "실질적으로 함유하지 않는"이라는 용어는 EV, 예를 들어 엑소좀을 포함하는 샘플이 질량/부피(m/v) 백분율 농도에 의해 거대분자의 약 10% 미만을 포함한다는 것을 의미한다. 일부 분획은 약 0.001% 미만, 약 0.01% 미만, 약 0.05% 미만, 약 0.1% 미만, 약 0.2% 미만, 약 0.3% 미만, 약 0.4% 미만, 약 0.5% 미만, 약 0.6% 미만, 약 0.7% 미만, 약 0.8% 미만, 약 0.9% 미만, 약 1% 미만, 약 2% 미만, 약 3% 미만, 약 4% 미만, 약 5% 미만, 약 6% 미만, 약 7% 미만, 약 8% 미만, 약 9% 미만 또는 약 10% 미만(m/v)의 거대분자를 함유할 수 있다.
본원에 사용된 "거대분자"라는 용어는 핵산, 오염물질 단백질, 지질, 탄수화물, 대사물질, 또는 이들의 조합을 지칭한다.
본원에 사용된 "종래의 엑소좀 단백질"이라는 용어는 비제한적인 예로서 CD9, CD63, CD81, PDGFR, GPI 앵커 단백질, 락타드헤린 LAMP2 및 LAMP2B, 이의 단편, 또는 이것에 결합하는 펩타이드를 포함하는 엑소좀에서 농후화된 것으로 이전에 공지된 단백질을 의미한다.
본원에 사용된 "투여하는"은 약제학적으로 허용 가능한 경로를 통해 본원에 개시된 EV, 예를 들어 엑소좀을 포함하는 조성물을 대상체에게 주는 것을 의미한다. 투여 경로는 정맥내, 예를 들어 정맥내 주사 및 정맥내 주입일 수 있다. 추가 투여 경로는 예를 들어 피하, 근육내, 경구, 비강 및 폐 투여를 포함한다. EV, 예를 들어 엑소좀은 적어도 하나의 부형제를 포함하는 약제학적 조성물의 일부로서 투여될 수 있다.
본원에 사용된 "면역 반응"은 외래 물질 또는 비정상, 예를 들어 암성 세포에 대해 척추동물 내의 생물학적 반응을 지칭하고, 이 반응은 이들 물질 및 이들에 의해 생긴 질환에 대해 유기체를 보호한다. 면역 반응은 면역계의 하나 이상의 세포(예를 들어, T 림프구, B 림프구, 자연 살해(NK) 세포, 대식세포, 호산구, 비만 세포, 수지상 세포 또는 호중구) 및 임의의 이들 세포 또는 간에 의해 생성된 가용성 거대분자(항체, 사이토카인 및 보체 포함)의 작용에 의해 매개되는데, 이는 침입 병원균, 병원균으로 감염된 세포 또는 조직, 암성 또는 다른 비정상 세포, 또는 자가면역 또는 병리학적 염증의 경우에는 정상 인간 세포 또는 조직의 척추동물의 신체로부터의 선택적 표적화, 이에 대한 결합, 이에 대한 손상, 이의 파괴 및/또는 이로부터의 제거를 발생시킨다. 면역 반응은 예를 들어 T 세포, 예를 들어 효과기 T 세포, Th 세포, CD4+ 세포, CD8+ T 세포 또는 Treg 세포의 활성화 또는 억제, 또는 면역계의 임의의 다른 세포, 예를 들어 NK 세포의 활성화 또는 억제를 포함한다. 따라서 면역 반응은 (예를 들어, B-세포에 의해 매개된) 체액 면역 반응, (예를 들어, T 세포에 의해 매개된) 세포 면역 반응, 또는 체액 면역 반응과 세포 면역 반응 둘 다를 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 면역 반응은 "억제" 면역 반응이다. "억제" 면역 반응은 자극(예를 들어, 항원)의 효과를 차단하거나 감소시키는 면역 반응이다. 소정의 양태에서, 억제 면역 반응은 자극에 대한 억제 항체의 생성을 포함한다. 일부 양태에서, 면역 반응은 "자극" 면역 반응이다. "자극" 면역 반응은 표적 항원(예를 들어, 종양 항원 또는 바이러스)을 피괴하고 깨끗히 할 수 있는 효과기 세포(예를 들어, 세포독성 T 림프구)를 생성시키는 면역 반응이다.
본원에 사용된 "세포 면역 반응"이라는 용어는 "세포 매개된 면역 반응"의 용어와 상호교환 가능하게 사용될 수 있고, 항체를 주로 수반하지 않는 면역 반응을 지칭한다. 대신에, 세포 면역 반응은 (예를 들어, 항원 자극을 통한) 활성화 시 다양한 효과기 분자(예를 들어, 사이토카인, 퍼포린, 그랜자임)를 생성하는 상이한 면역 세포(예를 들어, 포식세포 및 항원-특이적 세포독성 T-림프구)의 활성화를 수반한다. 본원에 사용된 "체액 면역 반응"이라는 용어는 분비된 항체, 보체 단백질 및 소정의 항균 펩타이드와 같은 세포외 유체에 발견되는 거대분자에 의해 주로 매개되는 면역 반응을 지칭한다. "항체 매개된 면역 반응"이라는 용어는 항체에 의해 매개되는 체액 면역 반응의 양태를 지칭한다.
본원에 사용된 "면역 세포"라는 용어는 면역 반응을 매개하는 데 관여된 면역계의 임의의 세포를 지칭한다. 면역 세포의 비제한적인 예는 T 림프구, B 림프구, 자연 살해(NK) 세포, 대식세포, 호산구, 비만 세포, 수지상 세포, 호중구, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 양태에서, 면역 세포는 CD3을 발현한다. 소정의 양태에서, CD3-발현 면역 세포는 T 세포(예를 들어, CD4+ T 세포 또는 CD8+ T 세포)이다. 일부 양태에서, 본원에 개시된 표적화 모이어티(예를 들어, 항-CD3)로 표적화될 수 있는 면역 세포는 미경험 CD4+ T 세포를 포함한다. 일부 양태에서, 면역 세포는 기억 CD4+ T 세포를 포함한다. 일부 양태에서, 면역 세포는 효과기 CD4+ T 세포를 포함한다. 일부 양태에서, 면역 세포는 미경험 CD8+ T 세포를 포함한다. 일부 양태에서, 면역 세포는 기억 CD8+ T 세포를 포함한다. 일부 양태에서, 면역 세포는 효과기 CD8+ T 세포를 포함한다. 일부 양태에서, 면역 세포는 수지상 세포이다. 소정의 양태에서, 수지상 세포는 형질세포양 수지상 세포(pDC), 종래의 수지상 세포 1(cDC1), 종래의 수지상 세포 2(cDC2), 염증성 단핵구 유래된 수지상 세포, 랑게르한스 세포, 진피 수지상 세포, 리소자임-발현 수지상 세포(LysoDC), 쿠퍼 세포, 또는 임의의 이들의 조합을 포함한다. 따라서, 소정의 양태에서, 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)가 특이적으로 표적화할 수 있는 면역 세포는 종래의 수지상 세포 1(cDC1) 및/또는 형질세포양 수지상 세포(pDC)를 포함한다.
본원에 사용된 "T 세포" 또는 "T-세포"라는 용어는 흉선에서 성숙하는 림프구의 유형을 지칭한다. T 세포는 세포 매개된 면역에서 중요한 역할을 하고, 세포 표면 상의 T-세포 수용체의 존재에 의해 다른 림프구, 예컨대 B 세포와 구별된다. T-세포는 T-헬퍼 세포(CD4+ 세포), 세포독성 T-세포(CD8+ 세포), 자연 살해 T-세포, T-조절성 세포(Treg) 및 감마-델타 T 세포를 포함하는 CD3을 발현하는 면역 세포의 모든 유형을 포함한다.
"미경험" T 세포는 면역학적으로 비분화(즉, 활성화되지 않음)되어 있는 성숙 T 세포를 지칭한다. 흉선에서 양성 선택 및 음성 선택 후, T 세포는 CD4+ 미경험 T 세포 또는 CD8+ 미경험 T 세포 중 어느 하나로 나타난다. 이의 미경험 상태에서, T 세포는 L-셀렉틴(CD62L+), IL-7 수용체-α(IL-7R-α) 및 CD132를 발현하지만, CD25, CD44, CD69 또는 CD45RO를 발현하지 않는다. 본원에 사용된 "미성숙"은 또한 미경험 T 세포 또는 미성숙 성숙 T 세포, 예컨대 TSCM 세포 또는 TCM 세포 중 어느 하나의 표현형 특징을 나타내는 T 세포를 지칭할 수 있다. 예를 들어, 미숙 T 세포는 L-셀렉틴(CD62L+), IL-7Rα, CD132, CCR7, CD45RA, CD45RO, CD27, CD28, CD95, CXCR3 및 LFA-1 중 하나 이상을 발현할 수 있다. 미경험 또는 미숙 T 세포는 말단 분화된 효과기 T 세포, 예컨대 TEM 세포 및 TEFF 세포와 대조될 수 있다.
본원에 사용된 "효과기" T 세포 또는 "T EFF " 세포라는 용어는 추가의 분화를 요하지 않으면서 병원균 또는 세포의 제거를 매개할 수 있는 T 세포를 지칭한다. 이와 같이, 효과기 T 세포는 미경험 T 세포 및 기억 T 세포와 구별되고, 이들 세포는 대개 효과기 세포가 되기 전 분화하고 증식해야 한다.
본원에 사용된 "기억" T 세포라는 용어는 이전에 이의 동족 항원에 마주치고 반응한 T 세포의 하위집단을 지칭한다. 일부 양태에서, 상기 용어는 "항원 경험한" T 세포와 동의어이다. 일부 양태에서, 기억 T 세포는 효과기 기억 T 세포 또는 중추 기억 T 세포일 수 있다. 일부 양태에서, 기억 T 세포는 조직 상주 기억 T 세포이다. 본원에 사용된 "조직-상주 기억 T 세포" 또는 "TRM 세포"라는 용어는 재순환 없이 조직(예를 들어, 피부, 폐, 위장관)을 점유하는 T 세포의 계통을 지칭한다. TRM 세포는 혈액, 이차 림프성 장기의 T 세포 구역, 림프 조직과 비림프성 조직 사이에 재순환하는 중추 기억 및 효과기 기억 T 세포와 전사적으로, 표현형적으로 그리고 기능적으로 구별된다. TRM 세포의 역할 중 하나는 림프구외 조직에서 감염에 대해 면역 보호를 제공하는 것이다.
본원에 사용된 "수지상 세포" 또는 "DC"라는 용어는 세포외 단백질 및 세포내 단백질을 가공할 수 있는 골수-유래된 면역 세포의 클래스 및 미경험 T 세포를 프라이밍하기 위해 MHC 분자의 맥락에서 항원을 제시하는 것을 지칭한다. 일부 양태에서, 수지상 세포는 추가의 하위유형, 예컨대 종래의 수지상 세포 1(cDC1), 종래의 수지상 세포 2(cDC2), 형질세포양 수지상 세포(pDC), 염증성 단핵구 유래된 수지상 세포, 랑게르한스 세포, 진피 수지상 세포, 리소자임 발현 수지상 세포(LysoDC), 쿠퍼 세포, 및 이들의 조합으로 나눠질 수 있다. 소정의 양태에서, 상이한 DC 하위집단은 이의 표현형 발현에 기초하여 구별될 수 있다. 예를 들어, 일부 양태에서, 인간 cDC1 세포는 CD1c- 및 CD141+이다. 일부 양태에서, 인간 cDC2 세포는 CD1c+ 및 CD141-이다. 일부 양태에서, 인간 pDC 세포는 CD123+이다. 일부 양태에서, 마우스 cDC1 세포는 XCR1+, Clec9a+ 및 Sirpa-이다. 일부 양태에서, 마우스 cDC2 세포는 CD8+, CD11b+, Sirpa+, XCR1- 및 CD1c,b+이다. 일부 양태에서, 마우스 pDC 세포는 CD137+, XCR1- 및 Sirpa-이다. 상이한 DC 하위집단을 구별하기 위한 다른 표현형 마커는 당해 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, Collin 등, Immunology 154(1): 3-20 (2018)을 참조한다. 일부 양태에서, 상이한 DC 하위집단은 이의 기능적 특성에 기초하여 구별될 수 있다. 예를 들어, 소정의 양태에서, pDC는 많은 양의 IFN-α를 생성하지만, cDC1 및 cDC2는 염증성 사이토카인, 예컨대 IL-12, IL-6 및 TNF-α를 생성한다. 상이한 DC 하위집단을 구별하는 다른 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 미국 특허 제8,426,565호 B2 및 9,988,431호를 참조하고, 이들의 각각은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
본원에 사용된 "면역접합체"와 같은 용어는 결합 분자(예를 들어, 항체) 및 결합 분자에 화학적으로 접합된 하나 이상의 모이어티, 예를 들어 치료학적 모이어티 또는 진단학적 모이어티를 포함하는 화합물을 지칭한다. 일반적으로, 면역접합체는 일반식 A-(L-M)n에 의해 정의되고, 여기서 A는 결합 분자(예를 들어, 항체)이고, L은 선택적인 링커이고, M은 예를 들어 치료제, 검출 가능한 라벨 등일 수 있는 이종성 모이어티이고, n은 정수이다. 일부 양태에서, 다수의 이종성 모이어티는 동일한 결합 분자(예를 들어, 항체)에서 상이한 부착 점에 화학적으로 접합될 수 있다. 다른 양태에서, 다수의 이종성 모이어티는 사슬연결되고, 결합 분자(예를 들어, 항체)에서 부착 점에 부착된다. 일부 양태에서, 다수의 이종성 모이어티(동일하거나 상이함)는 결합 분자(예를 들어, 항체)에 접합될 수 있다.
면역접합체는 또한 반대의 순서로 일반식에 의해 정의될 수 있다. 일부 양태에서, 면역접합체는 "항체-약물 접합체"("ADC")이다. 본 개시내용의 맥락에서, "면역접합체"라는 용어는 화학적으로 또는 효소적으로 접합체 분자로 제한되지 않는다. 본 개시내용에 사용된 "면역접합체"라는 용어는 또한 유전 융합을 포함한다. 본 개시내용의 일부 양태에서, 생물학적 활성 분자는 면역접합체이다. "항체-약물 접합체" 및 "ADC"라는 용어는 상호교환 가능하게 사용되고, 치료제(때때로 본원에서 작용제, 약물, 또는 활성 약제학적 성분이라 칭함) 또는 작용제에 연결된, 예를 들어 공유로 연결된 항체를 지칭한다. 본 개시내용의 일부 양태에서, 생물학적 활성 분자(즉, 페이로드)는 항체-약물 접합체이다.
본원에 사용된 "치료한다", "치료" 또는 "치료하는"은 질환 또는 병태를 반드시 치유함이 없이 예를 들어 질환 또는 병태의 중증도의 감소; 질환 과정의 지속기간의 감소; 질환 또는 병태와 연관된 하나 이상의 증상의 완화 또는 제거; 질환 또는 병태를 갖는 대상체에 대한 유리한 효과의 제공을 지칭한다. 상기 용어는 또한 질환 또는 병태 또는 이의 증상의 예방책 또는 예방을 포함한다. 일 양태에서, "치료하는" 또는 "치료"라는 용어는 항원에 대해 대상체에서 면역 반응을 유도함을 의미한다.
본원에 사용된 "예방한다" 또는 "예방하는"은 특정 결과의 발생 또는 중증도를 감소시키거나 줄이는 것을 지칭한다. 일부 양태에서, 예방학적 치료를 통해 결과를 방지하는 것이 달성된다.
II. 세포외 소포체, 예를 들어 엑소좀
본원에는 대상체의 면역계를 조절할 수 있는 EV, 예를 들어 엑소좀이 개시된다. 본 개시내용에 유용한 EV, 예를 들어 엑소좀은 함께 다수의 작용제(즉, 페이로드)를 생성하도록 조작된다(단일 작용제, 예를 들어 항원 단독, 아쥬반트 단독 또는 면역 조절제 단독 대신에, 예를 들어, 단일 EV, 예를 들어 엑소좀에서의 항원 및 아쥬반트; 단일 EV, 예를 들어 엑소좀에서의 항원 및 면역 조절제; 및 단일 EV, 예를 들어 엑소좀에서의 항원, 아쥬반트 및 면역 조절제). 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함한다. 다른 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함한다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함한다. 소정의 양태에서, 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)는 또한 추가 모이어티, 예컨대 표적화 모이어티를 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 항원은 주요 조직접합성 복합체 I 및/또는 II 분자 상에 발현되거나 제시되지 않는다. 다른 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀에서의 항원이 MHC 클래스 I 또는 II 복합체의 일부로서 발현되거나 제시되지 않지만, EV, 예를 들어 엑소좀은 EV, 예를 들어 엑소좀의 표면 상에 MHC 클래스 I/II 분자를 여전히 함유할 수 있다. 따라서, 소정의 양태에서, 본원에 개시된 EV, 예를 들어 엑소좀은 항원에 대해 면역 반응을 유도하도록 T 세포의 T-세포 수용체(TCR)와 직접적으로 상호작용하지 않는다. 유사하게, 소정의 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 크로스드레싱(cross-dressing)을 통해 표적 세포(예를 들어, 수지상 세포)의 표면에 직접적으로 항원을 이동시키지 않는다. "크로스드레싱"은 T 세포 활성화를 유도하도록 수지상 세포(DEX)로부터 유래된 EV, 예를 들어 엑소좀에 의해 흔히 사용되는 기전이다. Pitt, J.M., 등, J Clin Invest 126(4): 1224-32 (2016)를 참조한다. 다른 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 항원 제시 세포에 의해 둘러싸이고, MHC 클래스 I 복합체 및/또는 MHC 클래스 II 복합체로서 항원 제시 세포의 표면 상에 발현될 수 있다.
당업자에게 명확한 것처럼, 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)는 항원을 포함할 필요가 없고, 대신에 본원에 개시된 다수의 다른 페이로드를 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 다수의 상이한 아쥬반트를 포함할 수 있다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 다수의 상이한 면역 조절제를 포함할 수 있다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 하나 이상의 면역 조절제와 조합되어 하나 이상의 아쥬반트를 포함할 수 있다. 이러한 항원-부족 EV(예를 들어, 엑소좀)는 선천성 면역 반응을 유도하고/하거나 증가시키는 데 유용할 수 있다. 이러한 항원-부족 EV가 유용한 치료학적 환경의 비제한적인 예는 박테리아 및/또는 바이러스 감염, 예컨대 인공호흡기-연관된 폐렴에 대한 슈도모나스 아에루기노사, 인플루엔자 및 RSV, SARS/MER, 톡소플라스마, 패혈증, 황열, 및 수술 부위 감염에 대한 스타프 아우레우스를 치료하는 것을 포함한다. 소정의 양태에서, 이러한 항원-부족 EV(예를 들어, 엑소좀)는 하나 이상의 추가 치료제와 조합되어 사용될 수 있다. 일부 양태에서, 하나 이상의 추가 치료제는 항원을 포함하고, 여기서 항원은 EV(예를 들어, 엑소좀)(예를 들어, 항원의 가용성 형태)에서 발현되지 않는다. 달리 표시되지 않는 한, 본원에 제공된 관련 개시내용은 EV(예를 들어, 엑소좀)가 항원을 포함하는지 또는 아닌지와 무관하게 동등하게 적용 가능하다.
상기에 기재된 것처럼, 본원에 기재된 EV, 예를 들어 엑소좀은 약 20 내지 300 nm의 직경의 세포외 소포체이다. 소정의 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 직경이 약 20 내지 290 nm, 약 20 내지 280 nm, 약 20 내지 270 nm, 약 20 내지 260 nm, 약 20 내지 250 nm, 약 20 내지 240 nm, 약 20 내지 230 nm, 약 20 내지 220 nm, 약 20 내지 210 nm, 약 20 내지 200 nm, 약 20 내지 190 nm, 약 20 내지 180 nm, 약 20 내지 170 nm, 약 20 내지 160 nm, 약 20 내지 150 nm, 약 20 내지 140 nm, 약 20 내지 130 nm, 약 20 내지 120 nm, 약 20 내지 110 nm, 약 20 내지 100 nm, 약 20 내지 90 nm, 약 20 내지 80 nm, 약 20 내지 70 nm, 약 20 내지 60 nm, 약 20 내지 50 nm, 약 20 내지 40 nm, 약 20 내지30 nm, 약 30 내지300 nm, 약 30 내지 290 nm, 약 30 내지 280 nm, 약 30 내지 270 nm, 약 30 내지 260 nm, 약 30 내지 250 nm, 약 30 내지 240 nm, 약 30 내지 230 nm, 약 30 내지 220 nm, 약 30 내지 210 nm, 약 30 내지 200 nm, 약 30 내지 190 nm, 약 30 내지 180 nm, 약 30 내지 170 nm, 약 30 내지 160 nm, 약 30 내지 150 nm, 약 30 내지 140 nm, 약 30 내지 130 nm, 약 30 내지 120 nm, 약 30 내지 110 nm, 약 30 내지 100 nm, 약 30 내지 90 nm, 약 30 내지 80 nm, 약 30 내지 70 nm, 약 30 내지 60 nm, 약 30 내지 50 nm, 약 30 내지 40 nm, 약 40 내지300 nm, 약 40 내지 290 nm, 약 40 내지 280 nm, 약 40 내지 270 nm, 약 40 내지 260 nm, 약 40 내지 250 nm, 약 40 내지 240 nm, 약 40 내지 230 nm, 약 40 내지 220 nm, 약 40 내지 210 nm, 약 40 내지 200 nm, 약 40 내지 190 nm, 약 40 내지 180 nm, 약 40 내지 170 nm, 약 40 내지 160 nm, 약 40 내지 150 nm, 약 40 내지 140 nm, 약 40 내지 130 nm, 약 40 내지 120 nm, 약 40 내지 110 nm, 약 40 내지 100 nm, 약 40 내지 90 nm, 약 40 내지 80 nm, 약 40 내지 70 nm, 약 40 내지 60 nm, 약 40 내지 50 nm, 약 50 내지300 nm, 약 50 내지 290 nm, 약 50 내지 280 nm, 약 50 내지 270 nm, 약 50 내지 260 nm, 약 50 내지 250 nm, 약 50 내지 240 nm, 약 50 내지 230 nm, 약 50 내지 220 nm, 약 50 내지 210 nm, 약 50 내지 200 nm, 약 50 내지 190 nm, 약 50 내지 180 nm, 약 50 내지 170 nm, 약 50 내지 160 nm, 약 50 내지 150 nm, 약 50 내지 140 nm, 약 50 내지 130 nm, 약 50 내지 120 nm, 약 50 내지 110 nm, 약 50 내지 100 nm, 약 50 내지 90 nm, 약 50 내지 80 nm, 약 50 내지 70 nm, 약 50 내지 60 nm, 약 60 내지300 nm, 약 60 내지 290 nm, 약 60 내지 280 nm, 약 60 내지 270 nm, 약 60 내지 260 nm, 약 60 내지 250 nm, 약 60 내지 240 nm, 약 60 내지 230 nm, 약 60 내지 220 nm, 약 60 내지 210 nm, 약 60 내지 200 nm, 약 60 내지 190 nm, 약 60 내지 180 nm, 약 60 내지 170 nm, 약 60 내지 160 nm, 약 60 내지 150 nm, 약 60 내지 140 nm, 약 60 내지 130 nm, 약 60 내지 120 nm, 약 60 내지 110 nm, 약 60 내지 100 nm, 약 60 내지 90 nm, 약 60 내지 80 nm, 약 60 내지 70 nm, 약 70 내지 300 nm, 약 70 내지 290 nm, 약 70 내지 280 nm, 약 70 내지 270 nm, 약 70 내지 260 nm, 약 70 내지 250 nm, 약 70 내지 240 nm, 약 70 내지 230 nm, 약 70 내지 220 nm, 약 70 내지 210 nm, 약 70-200 nm, 약 70-190 nm, 약 70 내지 180 nm, 약 70 내지 170 nm, 약 70 내지 160 nm, 약 70 내지 150 nm, 약 70 내지 140 nm, 약 70 내지 130 nm, 약 70 내지 120 nm, 약 70 내지 110 nm, 약 70 내지 100 nm, 약 70 내지 90 nm, 약 70 내지 80 nm, 약 80 내지 300 nm, 약 80 내지 290 nm, 약 80 내지 280 nm, 약 80 내지 270 nm, 약 80 내지 260 nm, 약 80 내지 250 nm, 약 80 내지 240 nm, 약 80 내지 230 nm, 약 80 내지 220 nm, 약 80 내지 210 nm, 약 80 내지 200 nm, 약 80 내지 190 nm, 약 80 내지 180 nm, 약 80 내지 170 nm, 약 80 내지 160 nm, 약 80 내지 150 nm, 약 80 내지 140 nm, 약 80 내지 130 nm, 약 80 내지 120 nm, 약 80 내지 110 nm, 약 80 내지 100 nm, 약 80 내지 90 nm, 약 90 내지 300 nm, 약 90 내지 290 nm, 약 90 내지 280 nm, 약 90 내지 270 nm, 약 90 내지 260 nm, 약 90 내지 250 nm, 약 90 내지 240 nm, 약 90 내지 230 nm, 약 90 내지 220 nm, 약 90 내지 210 nm, 약 90 내지 200 nm, 약 90 내지 190 nm, 약 90 내지 180 nm, 약 90 내지 170 nm, 약 90 내지 160 nm, 약 90 내지 150 nm, 약 90 내지 140 nm, 약 90 내지 130 nm, 약 90 내지 120 nm, 약 90 내지 110 nm, 약 90 내지 100 nm, 약 100 내지 300 nm, 약 110 내지 290 nm, 약 120 내지 280 nm, 약 130 내지 270 nm, 약 140 내지 260 nm, 약 150 내지 250 nm, 약 160 내지 240 nm, 약 170 내지 230 nm, 약 180 내지 220 nm, 또는 약 190 내지 210 nm이다. 하기에 기재된 방법에 따라 본원에 기재된 EV, 예를 들어 엑소좀의 크기를 측정할 수 있다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 내부 표면 및 외부 표면을 포함하는 이중지질 막("EV, 예를 들어 엑소좀, 막")을 포함한다. 소정의 양태에서, 내부 표면은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내부 코어(즉, 내강)를 바라본다. 소정의 양태에서, 외부 표면은 생산자 세포 또는 표적 세포의 엔도솜, 다중소포체, 또는 막/세포질과 접촉될 수 있다.
일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀, 막은 지질 및 지방산을 포함한다. 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀, 막은 인지질, 당지질, 지방산, 스핑고지질, 포스포글리세라이드, 스테롤, 콜레스테롤 및 포스파티딜세린을 포함한다.
일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀, 막은 내부 리플렛 및 외부 리플렛을 포함한다. 당해 분야에 공지된 이중층경유 분포 검정에 의해 내부 리플렛 및 외부 리플렛의 조성이 결정될 수 있고, 예를 들어 Kuypers 등, Biohim Biophys Acta 1985 819:170을 참조한다. 일부 양태에서, 외부 리플렛의 조성은 대략 70% 내지 90%의 콜린 인지질, 대략 0% 내지 15%의 산성 인지질 및 대략 5% 내지 30%의 포스파티딜에탄올아민이다. 일부 양태에서, 외부 리플렛의 조성은 대략 15% 내지 40%의 콜린 인지질, 대략 10% 내지 50%의 산성 인지질 및 대략 30% 내지 60%의 포스파티딜에탄올아민이다.
일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀, 막은 하나 이상의 폴리사카라이드, 예컨대 글리칸을 포함한다.
일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀, 막은 하나 이상의 스캐폴드 모이어티를 추가로 포함하고, 이는 EV, 예를 들어 엑소좀에(예를 들어, 내강 표면 또는 외부 표면 둘 다 상에) 예를 들어 항원 및/또는 아쥬반트 및/또는 면역 조절제를 앵커링할 수 있다. 소정의 양태에서, 스캐폴드 모이어티는 폴리펩타이드("엑소좀 단백질")이다. 다른 양태에서, 스캐폴드 모이어티는 비폴리펩타이드 모이어티이다. 일부 양태에서, 엑소좀 단백질은 엑소좀 막에 농후화된 다양한 막 단백질, 예컨대 막관통 단백질, 통합 단백질 및 말초 단백질을 포함한다. 이들은 다양한 CD 단백질, 수송체, 인테그린, 렉틴 및 카드헤린을 포함할 수 있다. 소정의 양태에서, 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 엑소좀 단백질)는 스캐폴드 X를 포함한다. 다른 양태에서, 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 엑소좀 단백질)는 스캐폴드 Y를 포함한다. 추가의 양태에서, 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 엑소좀 단백질)는 스캐폴드 X 및 스캐폴드 Y 둘 다를 포함한다.
일부 양태에서, 본원에 개시된 EV, 예를 들어 엑소좀은 표적으로 페이로드(예를 들어, 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제)를 전달할 수 있다. 페이로드는 EV와 접촉한 표적(예를 들어, 표적 세포)에 작용하는 작용제이다. 시험관내 또는 대상체에서 접촉이 발생할 수 있다. EV로 도입될 수 있는 페이로드의 비제한적인 예는 작용제, 예컨대 뉴클레오타이드(예를 들어, 검출 가능한 모이어티 또는 독소를 포함하고 전사를 파괴하는 뉴클레오타이드), 핵산(예를 들어, 폴리펩타이드를 암호화하는 DNA 또는 mRNA 분자, 예컨대 효소, 또는 조절 기능을 갖는 RNA 분자, 예컨대 miRNA, dsDNA, lncRNA, siRNA, 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 포스포로디아미데이트 모르폴리노 올리고머(PMO) 또는 펩타이드-접합된 포스포로디아미데이트 모르폴리노 올리고머(PPMO)), 아미노산(예를 들어, 검출 가능한 모이어티를 포함하는 아미노산 또는 전사를 파괴하는 독소), 폴리펩타이드(예를 들어, 효소), 지질, 탄수화물 및 소분자(예를 들어, 소분자 약물 및 독소)를 포함한다.
본원에(예를 들어, 실시예 16 참조) 입증된 것처럼, 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV(예를 들어, 엑소좀)는 효과기 및 기억 T 세포를 유도할 수 있다. 소정의 양태에서, 기억 T 세포는 조직 상주 기억 T 세포이다. 이러한 EV(예를 들어, 엑소좀)는 소정의 감염성 질환에 대한 백신으로서 특히 유용할 수 있었다. 예를 들어, 대부분의 현재 이용 가능한 인플루엔자 백신은 불활성화되고, 소정의 인플루엔자 표면 항원(예를 들어, 헤마글루티닌(HA) 및 뉴라미나제(NA))에 대해 중화 항체를 생성함에 주로 초점을 둔다. Wang 등, Science 367(6480): 1-12 (Feb. 21, 2020)를 참조하고, 이것은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다. 그러나, 이러한 항원은 일정한 돌연변이를 겪어서 매년 업데이트되는 백신을 요한다. 연간 업데이트에 의해서도 백신 바이러스 균주 및 순환 중인 균주 사이에 비일치된 HA 및/또는 NA 항원성 때문에 인플루엔자 백신이 비효과적인 해가 있었다. 이들 모두가 체액 면역을 제외하고 조직(폐) 상주 기억 T 세포를 유도하므로, 넓은 면역력은 자연 바이러스 감염 또는 살아 있는 벡터-조작된 및 약독화된 백신에 의해 유발될 수 있다. 그러나, 이들 "복제" 백신의 안정성과 면역원성 사이에 균형이 부딪히고, 오직 일부 개체에 대개 적합하다. 본 개시내용의 EV(예를 들어, 엑소좀)는 이러한 제한을 공유하지 않는다. 따라서, 일부 양태에서, (예를 들어, 본원에 개시된 페이로드, 예를 들어 STING 작용제와 조합된 하나 이상의 인플루엔자 항원을 포함하는) 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)는 특정 병원균(예를 들어, 상이한 인플루엔자 하위유형)에 대한 "범용" 백신으로서 유용할 수 있다.
일부 양태에서, 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)는 본래 면역 반응에 관여된 신호전달 경로의 활성화를 유도할 수 있다. 소정의 양태에서, 면역 반응에 관여된 신호전달 경로는 톨양 수용체(TLR), 레티노이드산-유도성 유전자 I(RIG-I)-유사 수용체(RLR), 인터페론 유전자(STING) 경로의 자극자, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 양태에서, 이러한 신호전달 경로의 활성화는 I형 인터페론을 생성시킬 수 있다. 예를 들어, 소정의 양태에서, 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)의 이중지질 막은 (i) 불포화 지질 꼬리, (ii) 디하이드로이미다졸 링커, (iii) 사이클릭 아민 헤드 기 및 (iv) 이들의 조합의 특징 중 하나를 공유하는 하나 이상의 지질을 포함한다. 이러한 특징을 갖는 지질은 TLR/RLR 독립적 STING 경로를 활성화하는 것으로 나타났다. Miao 등, Nature Biotechnology 37:1174-1185 (Oct. 2019)를 참조하고, 이것은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
II.A 항원
일부 양태에서, 페이로드는 대상체에서 면역 반응을 유도할 수 있는 항원이다. 일부 양태에서, 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)는 단일 항원을 포함한다. 일부 양태에서, 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)는 다수의 항원을 포함한다. 소정의 양태에서, 다수의 항원의 각각은 상이하다. 일부 양태에서, 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)는 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 이것 초과의 상이한 항원을 포함한다. 본원에 개시된 것처럼, 항원은 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X 및/또는 스캐폴드 Y)를 사용하여 EV(예를 들어, 엑소좀)의 표면에 연결될 수 있다. 소정의 양태에서, 항원은 EV(예를 들어, 엑소좀)의 표면에 직접적으로(즉, 스캐폴드 모이어티의 사용 없이) 연결될 수 있다. 일부 양태에서, 항원은 EV(예를 들어, 엑소좀)의 내강에 있을 수 있다.
일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 본원에 기재된 하나 이상의 추가 페이로드(예를 들어, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제)와 조합되어 하나 이상의 항원을 포함한다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 하나 이상의 추가 모이어티(예를 들어, 표적화 모이어티)를 포함할 수 있다. 예를 들어, 소정의 양태에서, 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 하나 이상의 추가 항원, (ii) 하나 이상의 추가 페이로드(예를 들어, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제) 및 (iii) 하나 이상의 표적화 모이어티를 포함할 수 있다.
일부 양태에서, 항원은 종양 항원을 포함한다. 종양 항원의 비제한적인 예는 알파-태아단백질(AFP), 암배아 항원(CEA), 상피 종양 항원(ETA), 뮤신 1(MUC1), Tn-MUC1, 뮤신 16(MUC16), 티로시나제, 흑색종-연관된 항원(MAGE), 종양 단백질 p53(p53), CD4, CD8, CD45, CD80, CD86, 예정사 리간드 1(PD-L1), 예정사 리간드 2(PD-L2), NY-ESO-1, PSMA, TAG-72, HER2, GD2, cMET, EGFR, 메소텔린, VEGFR, 알파-엽산 수용체, CE7R, IL-3, 암-고환 항원(CTA), MART-1 gp100, TNF-관련된 아폽토시스 유도-리간드, 브라큐리(예를 들어, 흑색종에서의 항원(PRAME)), 윌름스 종양 1(WT1), CD19, CD22, 또는 임의의 이들의 조합을 포함한다.
일부 양태에서, 항원은 보편적 종양 항원이다. 본원에 사용된 "보편적 종양 항원"이라는 용어는 일반적으로 비종양 세포에서보다 종양 세포에서 더 높은 수준으로 발현되고 상이한 기원의 종양에서 또한 발현되는 단백질과 같은 면역학적 분자를 지칭한다. 일부 양태에서, 보편적 종양 항원은 약 30% 초과, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90% 또는 이것 초과의 암(예를 들어, 인간 암)에서 발현된다. 일부 양태에서, 보편적 종양 항원은 비종양 세포(예를 들어, 정상 세포)에서 발현되지만, 이것이 종양 세포에서 발현되는 것보다 더 낮은 수준으로 발현될 수 있다. 소정의 양태에서, 보편적 종양 항원의 발현 수준은 비종양 세포와 비교하여 종양 세포에 약 1배, 약 2배, 약 3배, 약 4배, 약 5배, 약 6배, 약 7배, 약 8배, 약 9배, 약 10배 또는 이것 초과보다 크다. 소정의 양태에서, 보편적 종양 항원은 정상 세포에서 발현되지 않고, 오직 종양 세포에서 발현된다. 본 개시내용과 사용될 수 있는 보편적 종양 항원의 비제한적인 예는 종양 맥관구조에서의 내피 라이닝 항원, 서비빈, 종양 단백질 D52(TPD52), 안드로겐 수용체 에피토프, 에프린 A형 수용체 2(EphA2), 인간 텔로머라제 역전사효소(hTERT), 서비빈, 마우스 이중 극미 2 동족체(MDM2), 사이토크롬 P450 1B1(CYP1B), HER2/neu, 윌름스 종양 유전자 1(WT1), 리빈(livin), 알파태아단백질(AFP), 암배아 항원(CEA), 뮤신 16(MUC16), MUC1, 전립선-특이적 막 항원(PSMA), p53 또는 사이클린(D1)을 포함한다.
추가의 양태에서, 항원은 신생항원을 포함할 수 있다. 본원에 사용된 "신생항원"이라는 용어는 종양-특이적 돌연변이된 유전자에 의해 암호화된 항원을 지칭한다.
일부 양태에서, 항원은 박테리아, 바이러스, 진균, 원생동물, 또는 임의의 이들의 조합으로부터 유래된다. 일부 양태에서, 항원은 종양발생 바이러스(본원에서 암 연관된 바이러스(CAV)라고도 칭함)로부터 유래된다. 추가의 양태에서, 항원은 인간 감마 헤르페스 바이러스 4(즉, 엡스타인-바 바이러스(EBV)), 인플루엔자 A 바이러스, 인플루엔자 B 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 스타필로코커스 아우레우스, 마이코박테륨 투베쿨로시스, 클라미디아 트라초마티스, HIV(예를 들어, HIV-2), 코로나 바이러스(예를 들어, COVID-19, MERS-CoV 및 SARS CoV), 필로바이러스(예를 들어, 마르부르그 및 에볼라), 스트렙토코커스 피요게네스, 스트렙토코커스 뉴모니아에, 플라스모디아 종(예를 들어, 비박스 및 팔시파룸), 치쿤구니야 바이러스, 인간 유두종 바이러스(HPV), B형 간염 바이러스(HBV), C형 간염 바이러스(HCV), 인간 T-림프친화성 바이러스(HTLV1), 인간 헤르페스 바이러스 8(HHV8), 메르켈 세포 폴리오마바이러스(MCV), 분야바이러스(예를 들어, 한타 바이러스), 아레나 바이러스(예를 들어, LCMV 및 라사 바이러스), 플라비바이러스(예를 들어, 뎅기, 지카, 일본 뇌염, 웨스트 나일 및 황열), 엔테로바이러스(예를 들어, 소아마비), 아스트로바이러스(예를 들어, 위장염), 랍도비리다에(예를 들어, 광견병), 보렐리아 부르그도르페리 및 부렐리아 메이요니(예를 들어, 라임병), 단순 포진 바이러스 2(HSV-2), 클레브시엘라 종, 슈도모나스 아에루기노사, 엔테로코커스 종, 프로테우스 종, 엔테로박터 종, 악티노박터 종, 코아귤라제-음성 스타필로코커스(CoNS), 마이코플라스마 종, 아데노바이러스, 아데노-연관된 바이러스(AAV), 또는 이들의 조합을 포함하는 군으로부터 유래되다.
일부 양태에서, EBV로부터 유래된 항원은 BZLF1이다. BZLF1(Zta 또는 EB1로도 공지됨)은 EBV의 급초기 바이러스 유전자이고, 이는 암을 유도하고 인간 집단의 95%의 B-세포를 주로 감염시킨다. 이 유전자는 (다른 것과 함께) 질환 진행의 다른 단계에서 다른 EBV 유전자의 발현을 생성하고, 바이러스가 잠복으로부터 용해로 전환하는 데 관여된다. ZEBRA(BamHI Z 엡스타인-바 바이러스 복제 활성인자, Zta 및 BZLF1로도 공지됨))는 BZLF1에 의해 암호화된 EBV의 초기 용해 단백질이다. Hartlage 등 (2015) Cancer Immunol. Res. 3(7): 787-94, 및 Rist 등(2015) J. Virology 70:703-12를 참조하고, 이들 둘 다는 본원에 그 전체가 참고로 포함된다. EBV 항원, 예를 들어 BZLF1을 포함하는 본원에 개시된 EV, 예를 들어 엑소좀은 예를 들어 이식 후 림프구증식 장애(PTLD)를 치료하기 위해 사용될 수 있다. 이러한 EV는 EBV 양성 이식물을 받는 EBV 음성 환자에게 투여될 수 있다. BZLF1은 PTLD 환자에서 오래 가는 관해와 연관된 우성 T 세포 항원이다. BZLF1을 포함하는 본원에 개시된 EV, 예를 들어 엑소좀은 BZLF1의 강력한 CD8 T-세포 매개된 면역을 유발할 수 있다. 따라서, 점막 면역 및 조직 상주 기억 세포(도 7a 및 도 7b 참조)는 환자가 PTLDF를 발생시키는 것을 보호할 수 있다. 비제한적인 예시적인 항원은 미국 특허 제8,617,564호 B2에 개시된 항원을 포함하지만 이들로 제한되지는 않고, 이것은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
일부 양태에서, 항원은 세포 면역 반응 및/또는 체액 면역 반응을 유도하도록 마이코박테륨 투베쿨로시스로부터 유래된다. 일부 양태에서, 항원은 마이코박테륨 투베쿨로시스(TB 항원)의 하나 이상의 에피토프를 포함한다. 다양한 항원은 ESAT-6, TB10.4, CFP10, Rv2031(hspX), Rv2654c(TB7.7) 및 Rv1038c(EsxJ)를 포함하는 마이코박테륨 투베쿨로시스 감염과 연관된다. 예를 들어, Lindestam 등, J. Immunol. 188(10):5020-31 (2012)을 참조하고, 이것은 본원에 그 전체가 포함된다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 항원은 ESAT6의 하나 이상의 에피토프를 포함한다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 항원은 TB10.4의 하나 이상의 에피토프를 포함한다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 항원은 CFP10의 하나 이상의 에피토프를 포함한다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 항원은 Rv2031(hspX)의 하나 이상의 에피토프를 포함한다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 항원은 Rv2654c(TB7.7)의 하나 이상의 에피토프를 포함한다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 항원은 Rv1038c(EsxJ)의 하나 이상의 에피토프를 포함한다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 항원은 ESAT6, TB10.4(ESAT-6-유사 단백질 EsxH; cfp7), CFP10, Rv2031(hspX), Rv2654c(TB7.7), Rv1038c(EsxJ), 및 임의의 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 에피토프를 포함한다.
일부 양태에서, TB 항원은 TB 항원의 특정한 에피토프, 예를 들어 ESAT6 또는 TB10.4의 특정한 에피토프를 포함한다. 일부 양태에서, ESAT6 항원은 MTEQQWNFAGIEAAASAIQGNVTSIHSLDEGKQSLTKLAAAWGGSGSEAYQGVQQKWDATATELNNALQNLARTISEAGQAMASTEGNVTGMFA(서열 번호 370)에 기재된 것과 같은 아미노산 서열의 적어도 3개의 아미노산, 적어도 4개의 아미노산, 적어도 5개의 아미노산, 적어도 6개의 아미노산, 적어도 7개의 아미노산, 적어도 8개의 아미노산, 적어도 9개의 아미노산, 적어도 10개의 아미노산, 적어도 11개의 아미노산, 적어도 12개의 아미노산, 적어도 13개의 아미노산, 적어도 14개의 아미노산, 적어도 15개의 아미노산을 갖는 에피토프를 포함한다. 일부 양태에서, TB10.4 항원은 MSQIMYNYPAMLGHAGDMAGYAGTLQSLGAEIAVEQAALQSAWQGDTGITYQAWQAQWNQAMEDLVRAYHAMSSTHEANTMAMMARDTAEAAKWGG(서열 번호 371)에 기재된 것과 같은 아미노산 서열의 적어도 3개의 아미노산, 적어도 4개의 아미노산, 적어도 5개의 아미노산, 적어도 6개의 아미노산, 적어도 7개의 아미노산, 적어도 8개의 아미노산, 적어도 9개의 아미노산, 적어도 10개의 아미노산, 적어도 11개의 아미노산, 적어도 12개의 아미노산, 적어도 13개의 아미노산, 적어도 14개의 아미노산, 적어도 15개의 아미노산을 갖는 에피토프를 포함한다.
일부 양태에서, 항원은 자가항원을 포함한다. 본원에 사용된 "자가항원"이라는 용어는 숙주 세포 또는 조직에 의해 발현되는 항원을 지칭한다. 이러한 항원은 정상의 건강한 상태 하에 신체에 의해 자가로 인식되고, 면역 반응을 유발하지 않는다. 그러나, 소정의 이환된 조건 하에, 신체 자체의 면역계는 자가항원을 외래로 인식하고 이들에 대해 면역 반응을 개시하여 자가면역을 생성시킬 수 있다. 소정의 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 자가-항원(즉, T 세포 반응이 유도되고 자가면역을 발생시키는 자가 (생식선) 단백질)을 포함할 수 있다. 이러한 EV, 예를 들어 엑소좀은 자가반응성 T 세포를 표적화하고 이의 활성을 억제하도록 사용될 수 있다. 자가항원(연관된 질환 또는 장애를 포함)의 비제한적인 예는 (i) 베타-세포 단백질, 인슐린, 섬 항원 2(IA-2), 글루탐산 데카복실라제(GAD65) 및 아연 수송체 8(ZNT8)(I형 당뇨병), (ii) 미엘린 희소돌기신경교 당단백질(MOG), 미엘린 염기성 단백질(MBP), 프로테오지질 단백질(PLP) 및 미엘린-연관된 당단백질(MAG)(다발성 경화증), (iii) 시트룰린화 항원 및 활막 단백질(류마티스성 관절염), (iv) 아쿠아포린-4(AQP4)(시신경 척수염), (v) 니코틴 아세틸콜린 수용체(nAChRs)(중증 근무력증), (vi) 데스모글레인-1(DSG1) 및 데소글레인-2(DSG2)(심상성 천포창), (v) 티로트로핀 수용체(그레이브병), (vi) IV형 콜라겐(굿패스쳐 증후군), (vii) 티로글로불린, 갑상선 과산화효소 및 갑상선 자극 호르몬 수용체(TSHR)(하시모토 갑상선염), 또는 (viii) 이들의 조합을 포함한다.
II.B 아쥬반트
상기에 기재된 것처럼, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (예를 들어, 본원에 개시된 항원 및/또는 다른 페이로드와 조합된) 아쥬반트를 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)는 다수의 아쥬반트를 포함한다. 소정의 양태에서, 다수의 아쥬반트의 각각은 상이하다. 일부 양태에서, 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)는 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 이것 초과의 상이한 아쥬반트를 포함한다. 본원에 개시된 것처럼, 아쥬반트는 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X 및/또는 스캐폴드 Y)를 사용하여 EV(예를 들어, 엑소좀)의 표면에 연결될 수 있다. 소정의 양태에서, 아쥬반트는 EV(예를 들어, 엑소좀)의 표면에 직접적으로(즉, 스캐폴드 모이어티의 사용 없이) 연결될 수 있다. 일부 양태에서, 아쥬반트는 EV(예를 들어, 엑소좀)의 내강에 있을 수 있다.
일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 하나 이상의 추가 페이로드(예를 들어, 항원 및/또는 면역 조절제)와 조합되어 하나 이상의 아쥬반트를 포함한다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 하나 이상의 추가 모이어티(예를 들어, 표적화 모이어티)를 포함할 수 있다. 예를 들어, 소정의 양태에서, 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 하나 이상의 추가 아쥬반트, (ii) 하나 이상의 추가 페이로드(예를 들어, 항원 및/또는 면역 조절제) 및 (iii) 하나 이상의 표적화 모이어티를 포함할 수 있다.
본원에 사용된 "아쥬반트"라는 용어는 페이로드의 치료학적 효과를 증대시키는(예를 들어, 항원에 대한 면역 반응을 증가시킴) 임의의 물질을 지칭한다. 따라서, 아쥬반트를 포함하는 본원에 기재된 EV, 예를 들어 엑소좀은 기준품(예를 들어, 아쥬반트가 없는 상응하는 EV 또는 단독으로 또는 아쥬반트와 조합하여 항원을 포함하는 비-EV 전달 비히클)과 비교하여 예를 들어 항원에 대한 면역 반응을 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 100%, 적어도 약 250%, 적어도 약 500%, 적어도 약 750%, 적어도 약 1,000% 또는 이것 초과 또는 초과만큼 증가시킬 수 있다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)에 본원에 개시된 아쥬반트를 혼입하는 것은 기준품(예를 들어, 항원 단독을 포함하는 상응하는 EV 또는 단독으로 또는 아쥬반트와 조합되어 항원을 포함하는 비-EV 전달 비히클)과 비교하여 예를 들어 항원에 대한 면역 반응을 적어도 약 1배, 적어도 약 2배, 적어도 약 3배, 적어도 약 4배, 적어도 약 5배, 적어도 약 6배, 적어도 약 7배, 적어도 약 8배, 적어도 약 9배, 적어도 약 10배, 적어도 약 20배, 적어도 약 30배, 적어도 약 40배, 적어도 약 50배, 적어도 약 60배, 적어도 약 70배, 적어도 약 80배, 적어도 약 90배, 적어도 약 100배, 적어도 약 200배, 적어도 약 300배, 적어도 약 400배, 적어도 약 500배, 적어도 약 600배, 적어도 약 700배, 적어도 약 800배, 적어도 약 900배, 적어도 약 1,000배, 적어도 약 2,000배, 적어도 약 3,000배, 적어도 약 4,000배, 적어도 약 5,000배, 적어도 약 6,000배, 적어도 약 7,000배, 적어도 약 8,000배, 적어도 약 9,000배, 적어도 약 10,000배 또는 이것 초과만큼 증가시킨다.
본 개시내용과 사용될 수 있는 아쥬반트의 비제한적인 예는 인터페론 유전자의 자극제(STING) 작용제, 톨양 수용체(TLR) 작용제, 염증성 매개자, RIG-I 작용제, 알파-gal-cer(NKT 작용제), 열 충격 단백질(예를 들어, HSP65 및 HSP70), C형 렉틴 작용제(예를 들어, 베타 글루칸(덱틴 1), 키틴 및 쿠르들란), 및 이들의 조합을 포함한다.
일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)에 아쥬반트(예를 들어, 예컨대 본원에 개시된 것)를 혼입하는 것은 EV에 의해 유도된 면역 반응을 넓힐 수 있다. 본원에 사용된 "면역 반응을 넓히는 것"은 면역 반응의 다양성을 향상시키는 것을 지칭한다. 일부 양태에서, 면역 반응의 다양성은 에피토프 분산(즉, 항원 상의 에피토프의 더 높은 수/다양성에 대해 면역 반응(세포 면역 반응 및/또는 체액 면역 반응)을 유도하고/하거나 증가시키는 것)을 통해 향상될 수 있다. 일부 양태에서, 면역 반응의 다양성은 상이한 및/또는 다수의 항체 아이소타입(예를 들어, IgG, IgA, IgD, IgM 및/또는 IgE)의 생성을 통해 향상될 수 있다.
일부 양태에서, 아쥬반트(예를 들어, 예컨대 본원에 개시된 것)는 EV(예를 들어, 엑소좀)에 의해 유도된 면역 반응의 유형을 조절하는 것을 또한 도울 수 있다. 예를 들어, 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)로의 아쥬반트의 혼입은 더 많은 Th1 표현형을 향해 면역 반응을 유도하는 것을 도울 수 있다. 본원에 사용된 "Th1" 면역 반응은 일반적으로 IFN-γ의 생성을 특징으로 하고, 이는 선천성 세포(예를 들어, 대식세포)의 살균 활성을 활성화하고, B 세포가 옵소닌작용(식세포작용에 대해 마킹) 및 보체-고정 항체를 만드는 것을 유도하고/하거나 세포 매개된 면역(즉, 항체에 의해 매개되지 않음)을 생성시키는 것을 도울 수 있다. 일반적으로, Th1 반응은 세포내 병원균(숙주 세포 내의 있는 바이러스 및 박테리아) 및/또는 암에 대해 더 효과적이다.
일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)로의 아쥬반트의 혼입은 더 많은 Th2 표현형을 향해 면역 반응을 유도하는 것을 도울 수 있다. 본원에 사용된 "Th2" 면역 반응은 (기생충의 청소에서 호산구를 유도하는) IL-5 및 (B 세포 아이소타입 스위칭을 용이하게 하는) IL-4와 같은 소정의 사이토카인의 방출을 특징으로 할 수 있다. 일반적으로, Th2 반응은 세포외 박테리아, 연충을 포함하는 기생충 및 독소에 대해 더 효과적이다.
일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)로의 아쥬반트의 혼입은 더 많은 Th17 표현형을 향해 면역 반응을 유도하는 것을 도울 수 있다. 본원에 사용된 "Th17" 면역 반응은 Th17 세포에 의해 매개된다. 본원에 사용된 "Th17 세포"는 전염증성 사이토카인, 예컨대 IL-17A, IL-17F, IL-21, IL-22, 및 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자(GM-CSF)의 생성을 특징으로 하는 CD4+ T 세포의 하위집단을 지칭한다. Th17 세포는 일반적으로 호중구 및 대식세포를 감염된 조직에 동원함으로써 감염에 대한 숙주 방어에서 중요한 역할을 하는 것으로 생각된다.
일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)로의 아쥬반트의 혼입은 (예를 들어, T-세포 매개된) 더 많은 세포 면역 반응을 향해 면역 반응을 유도하는 것을 도울 수 있다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)로의 아쥬반트의 혼입은 (예를 들어, 항체 매개된) 더 많은 체액 면역 반응을 향해 면역 반응을 유도하는 것을 도울 수 있다.
일부 양태에서, 아쥬반트는 세포액 패턴 인식 수용체의 활성화를 유도한다. 세포액 패턴 인식 수용체의 비제한적인 예는 인터페론 유전자의 자극인자(STING), 레티노산-유도성 유전자 I(RIG-1), 흑색종 분화-연관된 단백질 5(MDA5), 뉴클레오타이드-결합 올리고머화 도메인, 류신 농후 반복 및 피린 도메인 함유 (NLRP), 염증소체, 또는 이들의 조합을 포함한다. 소정의 양태에서, 아쥬반트는 STING 작용제이다. 인터페론 유전자의 자극인자(STING)는 박테리아에 의해 통상적으로 제조된 환식 디뉴클레오타이드의 세포액 센서이다. 활성화 시 이것은 I형 인터페론(예를 들어, IFN-α(알파), IFN-β(베타), IFN-κ(카파), IFN-δ(델타), IFN-ε(엡실론), IFN-τ(타우), IFN-ω(오메가) 및 IFN-ζ(제타, 리미틴으로도 공지됨))를 생성시키고 면역 반응을 개시한다. 소정의 양태에서, STING 작용제는 환식 디뉴클레오타이드 STING 작용제 또는 이환식 디뉴클레오타이드 STING 작용제를 포함한다. 본원에 기재된 것처럼, 일부 양태에서, STING 작용제는 EV(예를 들어, 엑소좀)의 내강에서 로딩된다. 일부 양태에서, 이러한 EV(예를 들어, 엑소좀)는 본원에서 "exoSTING"라 칭한다. exoSTING의 비제한적인 예는 국제 공보 WO 제2019183578호 A1에 제공되고, 이는 본원에 그 전체가 참고로 포함된다. 유용한 STING 작용제의 추가의 개시내용은 또한 본 개시내용에 걸쳐 제공된다.
비제한적인 예로서 cGMP, 환식 디-GMP(c-di-GMP), cAMP, 환식 디-AMP(c-디-AMP), 환식-GMP-AMP(cGAMP), 환식 디-IMP(c-di-IMP), 사이클릭 AMP-IMP(cAIMP), 및 임의의 이의 유사체와 같은 환식 푸린 디뉴클레오타이드는 환자에서 면역 또는 염증 반응을 자극하거나 향상시키는 것으로 공지되어 있다. CDN은 환식 디뉴클레오타이드를 연결하는 2'2', 2'3', 2'5', 3'3' 또는 3'5' 결합, 또는 임의의 이들의 조합을 가질 수 있다.
환식 푸린 디뉴클레오타이드는 푸린 디뉴클레오타이드의 유사체를 생성하기 위해 표준 유기 화학 기법을 통해 변형될 수 있다. 적합한 푸린 디뉴클레오타이드는 아데닌, 구아닌, 이노신, 하이폭산틴, 산틴, 이소구아닌, 또는 당해 분야에 공지된 임의의 다른 적절한 푸린 디뉴클레오타이드를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 환식 디뉴클레오타이드는 변형된 유사체일 수 있다. 비제한적인 예로서 포스포로티오에이트, 바이포스포로티오에이트, 플루오리네이트 및 디플루오리네이트 변형을 포함하는 당해 분야에 공지된 임의의 적합한 변형이 사용될 수 있다.
비환식 디뉴클레오타이드 작용제, 예컨대 5,6-디메틸잔테논-4-아세트산(DMXAA), 또는 당해 분야에 공지된 임의의 다른 비환식 디뉴클레오타이드 작용제가 또한 사용될 수 있다.
본 개시내용과 사용될 수 있는 STING 작용제의 비제한적인 예는 DMXAA, STING 작용제-1, ML RR-S2 CDA, ML RR-S2c-디-GMP, ML-RR-S2 cGAMP, 2'3'-c-디-AM(PS)2, 2'3'-cGAMP, 2'3'-cGAMPdFHS, 3'3'-cGAMP, 3'3'-cGAMPdFSH, cAIMP, cAIM(PS)2, 3'3'-cAIMP, 3'3'-cAIMPdFSH, 2'2'-cGAMP, 2'3'-cGAM(PS)2, 3'3'-cGAMP, 및 이들의 조합을 포함한다. STING 작용제의 비제한적인 예는 미국 특허 제9,695,212호, WO 2014/189805호 A1, WO 2014/179335호 A1, WO 2018/100558호 A1, 미국 특허 제10,011,630호 B2, WO 2017/027646호 A1, WO 2017/161349호 A1 및 WO 2016/096174호 A1에서 발견될 수 있고, 이들의 각각은 그 전체가 참고로 포함된다.
일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 하기 화학식을 갖는 화합물을 포함한다:
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
상기 식 중,
X1은 H, OH 또는 F이고;
X2는 H, OH 또는 F이고;
Z는 OH, OR1, SH 또는 SR1이고,
i) R1은 Na 또는 NH4이거나,
ii) R1은 피발로일옥시메틸과 같은 생체내 OH 또는 SH를 제공하는 효소 불안정 기이고;
Bi 및 B2는
Figure pct00005
,
Figure pct00006
또는
Figure pct00007
로부터 선택된 염기이고,
단,
- 화학식 (I)에서: X1 및 X2는 OH가 아니고,
- 화학식 (II)에서: X1 및 X2가 OH일 때, B1은 아데닌이 아니고, B2는 구아닌이 아니고,
- 화학식 (III)에서: X1 및 X2가 OH일 때, B1은 아데닌이 아니고, B2는 구아닌이 아니고, Z는 OH가 아니다. WO 2016/096174호를 참조하고, 이의 내용은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
및
이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함한다. WO 2016/096174호 A1을 참조하고, 이것은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
다른 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 하기 화학식을 갖는 화합물:
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
, 또는 이의 임의의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 하기 화학식을 갖는 화합물을 포함한다:
Figure pct00021
상기 식 중, 각각의 기호는 WO 2014/093936호에 정의되어 있고, 이의 내용은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 하기 화학식을 갖는 화합물을 포함한다:
Figure pct00022
상기 식 중, 각각의 기호는 WO 2014/189805호에 정의되어 있고, 이의 내용은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 하기 화학식을 갖는 화합물을 포함한다:
Figure pct00023
상기 식 중, 각각의 기호는 WO 2015/077354호에 정의되어 있고, 이의 내용은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다. 또한 Cell reports 11, 1018-1030 (2015)를 참조하고, 이것은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 WO 2013/185052호 및 Sci. Transl. Med. 283,283ra52 (2015)에 기재된 c-디-AMP, c-디-GMP, c-디-IMP, c-AMP-GMP, c-AMP-IMP 및 c-GMP-IMP를 포함하고, 이것은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 하기 화학식을 갖는 화합물을 포함한다:
Figure pct00024
상기 식 중, 각각의 기호는 WO 2014/189806호에 정의되어 있고, 이의 내용은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 하기 화학식을 갖는 화합물을 포함한다:
Figure pct00025
상기 식 중, 각각의 기호는 WO 2015/185565호에 정의되어 있고, 이의 내용은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 하기 화학식을 갖는 화합물을 포함한다:
Figure pct00026
상기 식 중, 각각의 기호는 WO 2014/179760호에 정의되어 있고, 이의 내용은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 하기 화학식을 갖는 화합물을 포함한다:
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
상기 식 중, 각각의 기호는 WO 2014/179335호에 정의되어 있고, 이의 내용은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 WO 2015/017652호에 기재된 하기 화학식을 갖는 화합물을 포함하고, 이의 내용은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다:
Figure pct00030
.
일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 WO 2016/096577호에 기재된 하기 화학식을 갖는 화합물을 포함하고, 이의 내용은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다:
Figure pct00031
.
일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 하기 화학식을 갖는 화합물을 포함한다:
Figure pct00032
상기 식 중, 각각의 기호는 WO 2016/120305호에 정의되어 있고, 이의 내용은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 하기 화학식을 갖는 화합물을 포함한다:
Figure pct00033
상기 식 중, 각각의 기호는 WO 2016/145102호에 정의되어 있고, 이의 내용은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 하기 화학식을 갖는 화합물을 포함한다:
Figure pct00034
상기 식 중, 각각의 기호는 WO 2017/027646호에 정의되어 있고, 이의 내용은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 하기 화학식을 갖는 화합물을 포함한다:
Figure pct00035
상기 식 중, 각각의 기호는 WO 2017/075477호에 정의되어 있고, 이의 내용은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 하기 화학식을 갖는 화합물을 포함한다:
Figure pct00036
상기 식 중, 각각의 기호는 WO 2017/027645호에 정의되어 있고, 이의 내용은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 하기 화학식을 갖는 화합물을 포함한다:
Figure pct00037
상기 식 중, 각각의 기호는 WO 2018/100558호에 정의되어 있고, 이의 내용은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 하기 화학식을 갖는 화합물을 포함한다:
Figure pct00038
상기 식 중, 각각의 기호는 WO 2017/175147호에 정의되어 있고, 이의 내용은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 하기 화학식을 갖는 화합물을 포함한다:
Figure pct00039
또는
Figure pct00040
상기 식 중, 각각의 기호는 WO 2017/175156호에 정의되어 있고, 이의 내용은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 CL606, CL611, CL602, CL655, CL604, CL609, CL614, CL656, CL647, CL626, CL629, CL603, CL632, CL633, CL659, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 CL606 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 CL611 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 CL602 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 CL655 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 CL604 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 CL609 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 CL614 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 CL656 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 CL647 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 CL626 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 CL629 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 CL603 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 CL632 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 CL633 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 STING 작용제는 CL659 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다.
일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 환식 디뉴클레오타이드 STING 작용제 및/또는 비환식 디뉴클레오타이드 STING 작용제를 포함한다. 일부 양태에서, 몇몇 환식 디뉴클레오타이드 STING 작용제가 본원에 개시된 EV, 예를 들어 엑소좀에 존재할 때, 이러한 STING 작용제는 동일할 수 있거나, 이들은 상이할 수 있다. 일부 양태에서, 몇몇 비환식 디뉴클레오타이드 STING 작용제가 존재할 때, 이러한 STING 작용제는 동일할 수 있거나, 이들은 상이할 수 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀, 조성물은 EV, 예를 들어 엑소좀의 2개 이상의 집단을 포함하고, EV, 예를 들어 엑소좀의 각각의 집단은 상이한 STING 작용제 또는 이들의 조합을 포함한다.
(예를 들어, 내강에서 비결합된) 세포외 소포체 또는 EV에서 작용제의 캡슐화(즉, 로딩)를 증가시키도록 STING 작용제가 또한 변형될 수 있다. 일부 양태에서, STING 작용제는 스캐폴드 모이어티, 예를 들어 스캐폴드 Y에 연결된다. 소정의 양태에서, 변형은 (예를 들어, 본원에 개시된 스캐폴드 모이어티, 예를 들어 스캐폴드 X에 연결된) EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상에서 STING 작용제의 더 양호한 발현을 허용한다. 이 변형은 작용제를 화학물질 또는 효소로 처리함으로써, 또는 STING 작용제의 극성 또는 전하를 물리적으로 또는 화학적으로 변경함으로써 지질 결합 태그의 첨가를 포함할 수 있다. 단일 처리, 또는 처리의 조합에 의해, 예를 들어 오직 지질 결합 태그를 첨가함으로써 또는 지질 결합 태그를 첨가하고 극성을 변경함으로써 STING 작용제가 변형될 수 있다. 이전의 예는 비제한적인 예시적인 경우인 것으로 의도된다. 변형의 임의의 조합이 실행될 수 있는 것으로 고려된다. 그 변형은 비변형된 작용제의 캡슐화(즉, 로딩)와 비교하여 약 2배 내지 약 10,000배, 약 10배 내지 약 1,000배, 또는 약 100배 내지 약 500배만큼 EV(예를 들어, 엑소좀)에서의 작용제의 캡슐화(즉, 로딩)를 증가시킬 수 있다. 그 변형은 비변형된 작용제의 캡슐화(즉, 로딩)와 비교하여 적어도 약 2배, 적어도 약 5배, 적어도 약 10배, 적어도 약 20배, 적어도 약 30배, 적어도 약 40배, 적어도 약 50배, 적어도 약 60배, 적어도 약 70배, 적어도 약 80배, 적어도 약 90배, 적어도 약 100배, 적어도 약 200배, 적어도 약 300배, 적어도 약 400배, 적어도 약 500배, 적어도 약 600배, 적어도 약 700배, 적어도 약 800배, 적어도 약 900배, 적어도 약 1,000배, 적어도 약,2000배, 적어도 약 3,000배, 적어도 약 4,000배, 적어도 약 5,000배, 적어도 약 6,000배, 적어도 약 7,000배, 적어도 약 8,000배, 적어도 약 9,000배, 또는 적어도 약 10,000배만큼 EV에서의 작용제의 캡슐화(즉, 로딩)를 증가시킬 수 있다.
일부 양태에서, STING 작용제는 EV의 표면((예를 들어, 본원에 개시된 스캐폴드 모이어티, 예를 들어 스캐폴드 X 및/또는 스캐폴드 Y에 연결된) 예를 들어 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 및/또는 내강 표면) 상에서 작용제의 더 양호한 발현을 허용하도록 변형될 수 있다. 상기에 기재된 임의의 변형이 사용될 수 있다. 그 변형은 비변형된 작용제의 상응하는 발현과 비교하여 약 2배 내지 10,000배, 약 10배 내지 1,000배, 또는 약 100배 내지 500배만큼 EV에서, 예를 들어 엑소좀의 표면 및/또는 내강 표면 상에서 작용제의 발현을 증가시킬 수 있다. 그 변형은 비변형된 작용제의 발현과 비교하여 적어도 약 2배, 적어도 약 5배, 적어도 약 10배, 적어도 약 20배, 적어도 약 30배, 적어도 약 40배, 적어도 약 50배, 적어도 약 60배, 적어도 약 70배, 적어도 약 80배, 적어도 약 90배, 적어도 약 100배, 적어도 약 200배, 적어도 약 300배, 적어도 약 400배, 적어도 약 500배, 적어도 약 600배, 적어도 약 700배, 적어도 약 800배, 적어도 약 900배, 적어도 약 1,000배, 적어도 약 2,000배, 적어도 약 3,000배, 적어도 약 4,000배, 적어도 약 5,000배, 적어도 약 6,000배, 적어도 약 7,000배, 적어도 약 8,000배, 적어도 약 9,000배 또는 적어도 약 10,000배만큼 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상에서 작용제의 발현을 증가시킬 수 있다. 그 변형은 비변형된 작용제의 발현과 비교하여 적어도 약 2배, 적어도 약 5배, 적어도 약 10배, 적어도 약 20배, 적어도 약 30배, 적어도 약 40배, 적어도 약 50배, 적어도 약 60배, 적어도 약 70배, 적어도 약 80배, 적어도 약 90배, 적어도 약 100배, 적어도 약 200배, 적어도 약 300배, 적어도 약 400배, 적어도 약 500배, 적어도 약 600배, 적어도 약 700배, 적어도 약 800배, 적어도 약 900배, 적어도 약 1,000배, 적어도 약 2,000배, 적어도 약 3,000배, 적어도 약 4,000배, 적어도 약 5,000배, 적어도 약 6,000배, 적어도 약 7,000배, 적어도 약 8,000배, 적어도 약 9,000배 또는 적어도 약 10,000배만큼 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상에서 작용제의 발현을 증가시킬 수 있다.
EV(예를 들어, 엑소좀)와 회합된 STING 작용제의 농도는 약 0.01 μM 내지 약 1000 μM일 수 있다. 회합된 STING 작용제의 농도는 약 0.01 내지 0.05 μM, 약 0.05 내지 0.1 μM, 약 0.1 내지 0.5 μM, 약 0.5 내지 1 μM, 약 1 내지 5 μM, 약 5 내지 10 μM, 약 10 내지 15 μM, 약 15 내지 20 μM, 약 20 내지 25 μM, 약 25 내지 30 μM, 약 30 내지 35 μM, 약 35 내지 40 μM, 약 45 내지 50 μM, 약 55 내지 60 μM, 약 65 내지 70 μM, 약 70 내지 75 μM, 약 75 내지 80 μM, 약 80 내지 85 μM, 약 85 내지 90 μM, 약 90 내지 95 μM, 약 95 내지 100 μM, 약 100 내지 150 μM, 약 150 내지 200 μM, 약 200 내지 250 μM, 약 250 내지 300 μM, 약 300 내지 350 μM, 약 250 내지 400 μM, 약 400 내지 450 μM, 약 450 내지 500 μM, 약 500 내지 550 μM, 약 550 내지 600 μM, 약 600 내지 650 μM, 약 650 내지 700 μM, 약 700 내지 750 μM, 약 750 내지 800 μM, 약 800 내지 850 μM, 약 805 내지 900 μM, 약 900 내지 950 μM, 또는 약 950 내지 1000 μM일 수 있다. 회합된 STING 작용제의 농도는 약 0.01 μM, 약 0.1 μM, 약 0.5 μM, 약 1 μM, 약 5 μM, 약 10 μM, 약 15 μM, 약 20 μM, 약 25 μM, 약 30 μM, 약 35 μM, 약 40 μM, 약 45 μM, 약 50 μM, 약 55 μM, 약 60 μM, 약 65 μM, 약 70 μM, 약 75 μM, 약 80 μM, 약 85 μM, 약 90 μM, 약 95 μM, 약 100 μM, 약 150 μM, 약 200 μM, 약 250 μM, 약 300 μM, 약 350 μM, 약 400 μM, 약 450 μM, 약 500 μM, 약 550 μM, 약 600 μM, 약 650 μM, 약 700 μM, 약 750 μM, 약 800 μM, 약 850 μM, 약 900 μM, 약 950 μM 또는 약 1,000 μM이거나 이것 초과일 수 있다.
일부 양태에서, 아쥬반트는 TLR 작용제이다. TLR 작용제의 비제한적인 예는 TLR2 작용제(예를 들어, 리포테이코산, 비정형 LPS, MALP-2 및 MALP-404, OspA, 포린, LcrV, 리포만난, GPI 앵커, 리소포스파티딜세린, 리포포스포글리칸(LPG), 글리코포스파티딜이노시톨(GPI), 지모산, hsp60, gH/gL 당단백질, 헤마글루티닌), TLR3 작용제(예를 들어, 이중-가닥 RNA, 예를 들어 poly(I:C)), TLR4 작용제(예를 들어, 리포폴리사카라이드(LPS), 리포테이코산, β-데펜신 2, 피브로넥틴 EDA, HMGB1, 스나핀, 테나신 C), TLR5 작용제(예를 들어, 플라겔린), TLR6 작용제, TLR7/8 작용제(예를 들어, 단일-가닥 RNA, CpG-A, Poly G10, Poly G3, 레시퀴모드), TLR9 작용제(예를 들어, 비메틸화된 CpG DNA), 및 이들의 조합을 포함한다. TLR 작용제의 비제한적인 예는 WO2008115319호 A2, US20130202707호 A1, US20120219615호 A1, US20100029585호 A1, WO2009030996호 A1, WO2009088401호 A2 및 WO2011044246호 A1에서 발견될 수 있고, 이들의 각각은 그 전체가 참고로 포함된다.
일부 양태에서, 아쥬반트는 염증성 매개자이다.
일부 양태에서, 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상에서 또는 내강 내에서(예를 들어, 내강 표면 상에서) 발현된다. 일부 양태에서, 아쥬반트는 지질 이중층에 직접 연결된 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상에서 또는 내강 표면 내에서 발현된다. 이러한 양태에서, 항원 및/또는 아쥬반트는 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X 및/또는 스캐폴드 Y)에 연결될 수 있다.
일부 양태에서, 본원에 기재된 EV, 예를 들어 엑소좀은 제1 스캐폴드 모이어티를 포함한다. 소정의 양태에서, 항원은 제1 스캐폴드 모이어티에 연결된다. 다른 양태에서, 아쥬반트는 제1 스캐폴드 모이어티에 연결된다. 추가의 양태에서, 항원 및 아쥬반트 둘 다는 제1 스캐폴드 모이어티에 연결된다. 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 제2 스캐폴드 모이어티를 추가로 포함한다. 소정의 양태에서, 항원은 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되고, 아쥬반트는 제2 스캐폴드 모이어티에 연결된다. 일부 양태에서, 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티는 동일하다(예를 들어, 스캐폴드 X 둘 다 또는 스캐폴드 Y 둘 다). 다른 양태에서, 제1 스캐폴드 모이어티 및 제2 스캐폴드 모이어티는 상이하다(예를 들어, 제1 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 X이고, 제2 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 Y이거나; 제1 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 Y이고, 제2 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 X임).
스캐폴드 X의 비제한적인 예는 프로스타글란딘 F2 수용체 음성 조절자(PTGFRN); 바시긴(BSG); 면역글로불린 슈퍼패밀리 구성원 2(IGSF2); 면역글로불린 슈퍼패밀리 구성원 3(IGSF3); 면역글로불린 슈퍼패밀리 구성원 8(IGSF8); 인테그린 베타-1(ITGB1); 인테그린 알파-4(ITGA4); 4F2 세포-표면 항원 중쇄(SLC3A2); 및 ATP 수송체 단백질의 클래스(ATP1A1, ATP1A2, ATP1A3, ATP1A4, ATP1B3, ATP2B1, ATP2B2, ATP2B3, ATP2B)를 포함한다. 소정의 양태에서, 스캐폴드 X는 전체 단백질이다. 다른 양태에서, 스캐폴드 X는 단백질 단편(예를 들어, 기능성 단편)이다.
다른 양태에서, 제1 스캐폴드 모이어티, 제2 스캐폴드 모이어티 및/또는 제3 스캐폴드 모이어티인 본 개시내용에 유용한 스캐폴드 모이어티는 비제한적인 예로서 테트라스파닌 분자(예를 들어, CD63, CD81, CD9 및 기타), 리소솜-연관된 막 단백질 2(LAMP2 및 LAMP2B), 혈소판-유래 성장 인자 수용체(PDGFR), GPI 앵커 단백질, 락타드헤린 및 이의 단편, 임의의 이들 단백질에 대한 친화도를 갖는 펩타이드 또는 이의 단편, 또는 임의의 이들의 조합을 포함하는 종래의 엑소좀 단백질을 포함한다.
스캐폴드 Y의 비제한적인 예는 미리스토일화된 알라닌 농후 단백질 키나제 C 기질(MARCKS) 단백질; 미리스토일화된 알라닌 농후 단백질 키나제 C 기질 유사 1(MARCKSL1) 단백질; 및 뇌 산 가용성 단백질 1(BASP1) 단백질을 포함한다. 일부 양태에서, 스캐폴드 Y는 전체 단백질이다. 소정의 양태에서, 스캐폴드 Y는 단백질 단편(예를 들어, 기능성 단편)이다.
일부 양태에서, 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다. 본원에 사용된 것처럼, 분자(예를 들어, 항원 또는 아쥬반트)가 예를 들어 EV, 예를 들어 엑소좀의 "내강"에 있는 것으로 기재될 때, 이것은 분자가 본원에 기재된 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않는다는 것을 의미한다. 일부 양태에서, 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결된다. 이러한 양태에서, 제1 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 X 또는 스캐폴드 Y일 수 있다.
일부 양태에서, 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 모이어티에 연결된다. 일부 양태에서, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되고, 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 모이어티에 연결된다. 이러한 양태에서, 제1 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 Y일 수 있고, 제2 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 X일 수 있다. 다른 양태에서, 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티의 각각은 스캐폴드 X일 수 있다.
일부 양태에서, 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 모이어티에 연결된다. 다른 양태에서, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되고, 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 모이어티에 연결된다. 이러한 양태에서, 제1 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 X이고, 제2 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 Y이거나; 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티의 각각은 스캐폴드 X이다.
일부 양태에서, 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다.
일부 양태에서, 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 모이어티에 연결된다. 다른 양태에서, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되고, 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 모이어티에 연결된다. 일부 양태에서, 제1 스캐폴드 모이어티 및 제2 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 X이다.
일부 양태에서, 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다. 일부 양태에서, 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결된다. 이러한 양태에서, 제1 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 X일 수 있다.
일부 양태에서, 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결된다. 다른 양태에서, 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결된다. 이들 양태에서, 제1 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 X일 수 있다.
특정 양태의 비제한적인 예는 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하는 EV, 예를 들어 엑소좀을 포함하고, 여기서
(a) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 Y에 연결되거나;
(b) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있거나;
(c) 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
(d) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
(e) 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
(f) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
(g) 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
(h) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
(i) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되거나;
(j) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
(k) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있거나;
(l) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
(m) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되거나;
(n) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
(o) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있거나;
(p) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되거나;
(q) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되거나;
(r) 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있거나;
(s) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면에 직접 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면에 직접 연결되거나;
(t) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면에 직접 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있거나;
(u) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면에서 직접 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
(v) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면에 직접 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
(w) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면에 직접 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부에 직접 연결되거나;
(x) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면에 직접 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
(y) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면에 직접 연결되거나;
(z) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부에 직접 연결되거나;
(aa) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면에 직접 연결되거나;
(bb) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부에 직접 연결되거나;
(cc) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면에 직접 연결되거나;
(dd) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부에 직접 연결된다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 Y에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하고, 여기서 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하고, 여기서 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하고, 여기서 항원은 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하고, 여기서 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하고, 여기서 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다. 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하고, 여기서 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하고, 여기서 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강에 있다. 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하고, 여기서 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결된다. 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하고, 여기서 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하고, 여기서 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 아쥬반트는 EV의 외부에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하고, 여기서 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 아쥬반트는 EV의 외부 상의 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하고, 여기서 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하고, 여기서 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 외부에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하고, 여기서 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하고, 여기서 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 외부에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하고, 여기서 항원은 EV의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하고, 여기서 항원은 EV의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV의 외부에 직접 연결된다.
일부 양태에서, 아쥬반트 및/또는 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀에서 캡슐화(즉, 로딩)를 증가시키도록 변형될 수 있다. 이 변형은 작용제(즉, 아쥬반트 및/또는 항원)를 화학물질 또는 효소로 처리함으로써, 또는 아쥬반트 및/또는 항원의 극성 또는 전하를 물리적으로 또는 화학적으로 변경함으로써 지질 결합 태그의 첨가를 포함할 수 있다. 아쥬반트 및/또는 항원은 단일 처리에 의해, 또는 처리의 조합에 의해, 예를 들어 오직 지질 결합 태그를 첨가함으로써, 또는 지질 결합 태그를 첨가하고 극성을 변경함으로써 변형될 수 있다. 이전의 예는 비제한적인 예시적인 경우인 것으로 의도된다. 변형의 임의의 조합이 실행될 수 있는 것으로 고려된다. 그 변형은 비변형된 작용제(즉, 아쥬반트 및/또는 항원)의 캡슐화(즉, 로딩)와 비교하여 약 2배 내지 약 10,000배, 약 10배 내지 1,000배, 또는 약 100배 내지 약 500배만큼 EV, 예를 들어 엑소좀에서의 아쥬반트 및/또는 항원의 캡슐화(즉, 로딩)를 증가시킬 수 있다. 그 변형은 비변형된 아쥬반트 및/또는 항원의 캡슐화(즉, 로딩)와 비교하여 적어도 약 2배, 약 5배, 약 10배, 약 20배, 약 30배, 약 40배, 약 50배, 약 60배, 약 70배, 약 80배, 약 90배, 약 100배, 약 200배, 약 300배, 약 400배, 약 500배, 약 600배, 약 700배, 약 800배, 약 900배, 약 1,000배, 약 2,000배, 약 3,000배, 약 4,000배, 약 5,000배, 약 6,000배, 약 7,000배, 약 8,000배, 약 9,000배, 또는 약 10,000배만큼 EV, 예를 들어 엑소좀에서의 아쥬반트 및/또는 항원의 캡슐화(즉, 로딩)를 증가시킬 수 있다.
일부 양태에서, 아쥬반트 및/또는 항원은 EV의 표면(예를 들어, 예를 들어, 본원에 개시된 스캐폴드 모이어티, 예를 들어 스캐폴드 X 및/또는 스캐폴드 Y에 연결된 EV의 외부 및/또는 내강 표면) 상에서 더 양호한 발현을 허용하도록 변형될 수 있다. 상기에 기재된 임의의 변형이 사용될 수 있다. 그 변형은 비변형된 작용제의 상응하는 발현과 비교하여 약 2배 내지 10,000배, 약 10배 내지 1,000배, 또는 약 100배 내지 500배만큼 EV에서, 예를 들어 엑소좀의 표면 및/또는 내강 표면 상에서 작용제의 발현은 증가시킬 수 있다. 그 변형은 비변형된 작용제의 발현과 비교하여 적어도 약 2배, 적어도 약 5배, 적어도 약 10배, 적어도 약 20배, 적어도 약 30배, 적어도 약 40배, 적어도 약 50배, 적어도 약 60배, 적어도 약 70배, 적어도 약 80배, 적어도 약 90배, 적어도 약 100배, 적어도 약 200배, 적어도 약 300배, 적어도 약 400배, 적어도 약 500배, 적어도 약 600배, 적어도 약 700배, 적어도 약 800배, 적어도 약 900배, 적어도 약 1,000배, 적어도 약 2,000배, 적어도 약 3,000배, 적어도 약 4,000배, 적어도 약 5,000배, 적어도 약 6,000배, 적어도 약 7,000배, 적어도 약 8,000배, 적어도 약 9,000배 또는 적어도 약 10,000배만큼 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상에서 작용제의 발현을 증가시킬 수 있다. 그 변형은 비변형된 작용제의 발현과 비교하여 적어도 약 2배, 적어도 약 5배, 적어도 약 10배, 적어도 약 20배, 적어도 약 30배, 적어도 약 40배, 적어도 약 50배, 적어도 약 60배, 적어도 약 70배, 적어도 약 80배, 적어도 약 90배, 적어도 약 100배, 적어도 약 200배, 적어도 약 300배, 적어도 약 400배, 적어도 약 500배, 적어도 약 600배, 적어도 약 700배, 적어도 약 800배, 적어도 약 900배, 적어도 약 1,000배, 적어도 약 2,000배, 적어도 약 3,000배, 적어도 약 4,000배, 적어도 약 5,000배, 적어도 약 6,000배, 적어도 약 7,000배, 적어도 약 8,000배, 적어도 약 9,000배 또는 적어도 약 10,000배만큼 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상에서 작용제의 발현을 증가시킬 수 있다.
일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 EV 흡수(예를 들어, 표적화 모이어티)를 지시하는 것, EV와 연관된 조합 효과(예를 들어, 엑소좀, 예를 들어 STING 작용제로 로딩된 페이로드의 효과)를 향상시키기 위해 세포 경로를 활성화하거나 차단하는 것을 도울 수 있는 추가 단백질(또는 이의 단편)을 디스플레이하도록 추가로 변형된다. 소정의 양태에서, 본원에 개시된 EV, 예를 들어 엑소좀은 생체내 또는 시험관내 EV의 분포를 변경시킬 수 있는 표적화 모이어티를 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 표적화 모이어티는 생물학적 분자, 예컨대 단백질, 펩타이드, 지질 또는 합성 분자일 수 있다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 표적화 모이어티는 수지상 세포에 대한 마커에 특이적으로 결합한다. 소정의 양태에서, 마커는 수지상 세포에서 오직 발현된다. 일부 양태에서, 수지상 세포는 전구세포(Pre) 수지상 세포, 염증성 모노 수지상 세포, 형질세포양 수지상 세포(pDC), 골수성/종래의 수지상 세포 1(cDC1), 골수성/종래의 수지상 세포 2(cDC2), 염증성 단핵구 유래된 수지상 세포, 랑게르한스 세포, 진피 수지상 세포, 리소자임-발현 수지상 세포(LysoDC), 쿠퍼 세포, 비전통적 단핵구, 또는 임의의 이들의 조합을 포함한다. 이 수지상 세포에서 발현된 마커는 당해 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, Collin 등, Immunology 154(1):3-20 (2018)을 참조한다. 일부 양태에서, 표적화 모이어티은 단백질이고, 단백질은 DEC205, CLEC9A, CLEC6, DCIR, DC-SIGN, LOX-1, MARCO, Clec12a, Clec10a, DC-아시알로당단백질 수용체(DC-ASGPR), DC 면역수용체 2(DCIR2), 덱틴-1, 대식세포 만노스 수용체(MMR), BDCA-2(CD303, Clec4c), 덱틴-2, Bst-2(CD317), 랑게린, CD206, CD11b, CD11c, CD123, CD304, XCR1, AXL, 시글렉 6, CD209, SIRPA, CX3CR1, GPR182, CD14, CD16, CD32, CD34, CD38, CD10, 또는 임의의 이들의 조합으로부터 선택된 마커에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 단편이다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 마커는 C형 렉틴 유사 도메인을 포함한다. 소정의 양태에서, 마커는 Clec9a이고, 수지상 세포는 cDC1이다.
일부 양태에서, 본원에 개시된 표적화 모이어티는 인간 및 마우스 Clec9a 둘 다, 및 임의의 이들의 변이체에 결합할 수 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 표적화 모이어티는 비제한적인 예로서 침팬지, 레서스 원숭이, 개, 소, 말 또는 래트를 포함하는 다른 종으로부터의 Clec9a에 결합할 수 있다. 이러한 Clec9a 단백질에 대한 서열은 당해 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 미국 특허 제8,426,565호 B2를 참조하고, 이것은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 표적화 모이어티는 T 세포에 대한 마커에 특이적으로 결합한다. 소정의 양태에서, T 세포는 CD4+ T 세포이다. 일부 양태에서, T 세포는 CD8+ T 세포이다.
일부 양태에서, 본원에 개시된 표적화 모이어티는 인간 CD3 단백질 또는 이의 단편에 결합한다. 인간 CD3 단백질에 대한 서열은 당해 분야에 공지되어 있다.
일부 양태에서, 본원에 개시된 표적화 모이어티는 인간 및 마우스 CD3 둘 다, 및 임의의 이들의 변이체에 결합할 수 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 표적화 모이어티는 비제한적인 예로서 침팬지, 레서스 원숭이, 개, 소, 말 또는 래트를 포함하는 다른 종으로부터의 CD3에 결합할 수 있다. CD3 단백질에 대한 서열은 또한 당해 분야에 공지되어 있다.
일부 양태에서, 본원에 개시된 표적화 모이어티는 표적화 모이어티에 특이적인 마커를 발현하는 세포(예를 들어, CD3: CD4+ T 세포 및/또는 CD8+ T 세포; Clec9a: 수지상 세포)에 의한 EV(예를 들어, 엑소좀)의 더 큰 흡수를 허용할 수 있다. 일부 양태에서, EV의 흡수는 기준품(예를 들어, 표적화 모이어티가 없는 상응하는 EV 또는 비-EV 전달 비히클)과 비교하여 적어도 약 1배, 적어도 약 2배, 적어도 약 3배, 적어도 약 4배, 적어도 약 5배, 적어도 약 6배, 적어도 약 7배, 적어도 약 8배, 적어도 약 9배, 적어도 약 10배, 적어도 약 20배, 적어도 약 30배, 적어도 약 40배, 적어도 약 50배, 적어도 약 60배, 적어도 약 70배, 적어도 약 80배, 적어도 약 90배, 적어도 약 100배, 적어도 약 200배, 적어도 약 300배, 적어도 약 400배, 적어도 약 500배, 적어도 약 600배, 적어도 약 700배, 적어도 약 800배, 적어도 약 900배, 적어도 약 1,000배, 적어도 약 2,000배, 적어도 약 3,000배, 적어도 약 4,000배, 적어도 약 5,000배, 적어도 약 6,000배, 적어도 약 7,000배, 적어도 약 8,000배, 적어도 약 9,000배, 적어도 약 10,000배 또는 이것 초과만큼 증가한다. 일부 양태에서, 기준품은 본원에 개시된 표적화 모이어티를 발현하지 않는 EV(예를 들어, 엑소좀)를 포함한다.
일부 양태에서, 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)의 흡수의 증가는 더 큰 면역 반응을 허용할 수 있다. 따라서, 소정의 양태에서, 본원에 개시된 표적화 모이어티를 발현하는 EV(예를 들어, 엑소좀)는 기준품(예를 들어, 표적화 모이어티가 없는 상응하는 EV 또는 비-EV 전달 비히클)과 비교하여 적어도 약 1배, 적어도 약 2배, 적어도 약 3배, 적어도 약 4배, 적어도 약 5배, 적어도 약 6배, 적어도 약 7배, 적어도 약 8배, 적어도 약 9배, 적어도 약 10배, 적어도 약 20배, 적어도 약 30배, 적어도 약 40배, 적어도 약 50배, 적어도 약 60배, 적어도 약 70배, 적어도 약 80배, 적어도 약 90배, 적어도 약 100배, 적어도 약 200배, 적어도 약 300배, 적어도 약 400배, 적어도 약 500배, 적어도 약 600배, 적어도 약 700배, 적어도 약 800배, 적어도 약 900배, 적어도 약 1,000배, 적어도 약 2,000배, 적어도 약 3,000배, 적어도 약 4,000배, 적어도 약 5,000배, 적어도 약 6,000배, 적어도 약 7,000배, 적어도 약 8,000배, 적어도 약 9,000배, 적어도 약 10,000배 또는 이것 초과만큼 (예를 들어, 엑소좀에 로딩된 종양 항원에 대해) 면역 반응을 증가시킬 수 있다. 일부 양태에서, 기준품은 본원에 개시된 표적화 모이어티를 발현하지 않는 EV(예를 들어, 엑소좀)를 포함한다. 소정의 양태에서, 면역 반응은 T 세포(예를 들어, CD8+ T 세포 또는 CD4+ T 세포) 및/또는 B 세포에 의해 매개된다.
상기에 기재된 것처럼, 본원에 개시된 표적화 모이어티는 펩타이드, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 화학적 화합물, 또는 임의의 이들의 조합을 포함할 수 있다.
일부 양태에서, 표적화 모이어티는 Clec9a에 특이적으로 결합할 수 있는 펩타이드이다. 예를 들어, Yan 등, Oncotarget 7(26): 40437-40450 (2016)을 참조한다. 예를 들어, 소정의 양태에서, 펩타이드는 Clec9a의 가용성 단편을 포함한다. 이러한 펩타이드의 비제한적인 예는 미국 특허 제9,988,431호 B2에 기재되어 있고, 이것은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다. 소정의 양태에서, 펩타이드는 Clec9a의 리간드(천연 또는 합성), 예컨대 Ahrens 등, Immunity 36(4): 635-45 (2012); 및 Zhang 등, Immunity 36(4): 646-57 (2012)에 개시된 것을 포함한다. Clec9a 리간드를 포함하는 펩타이드의 비제한적인 예는 국제 공보 WO 2013/053008호 A2에 기재되어 있고, 이것은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
일부 양태에서, 표적화 모이어티는 CD3에 특이적으로 결합할 수 있는 펩타이드이다. 예를 들어, 소정의 양태에서, 펩타이드는 CD3의 가용성 단편을 포함한다. 소정의 양태에서, 펩타이드는 CD3의 리간드(천연 또는 합성)를 포함한다.
일부 양태에서, 표적화 모이어티는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 소정의 양태에서, 표적화 모이어티는 단일-사슬 Fv 항체 단편이다. 소정의 양태에서, 표적화 모이어티는 단일-사슬 F(ab) 항체 단편이다. 소정의 양태에서, 표적화 모이어티는 나노바디이다. 소정의 양태에서, 표적화 모이어티는 모노바디이다.
일부 양태에서, 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)는 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 이것 초과) 표적화 모이어티를 포함한다. 소정의 양태에서, 하나 이상의 표적화 모이어티는 본원에 개시된 다른 외인성으로 생물학적 활성인 분자(예를 들어, 치료학적 분자, 아쥬반트 또는 면역 조절제)와 조합되어 발현된다. 일부 양태에서, 하나 이상의 표적화 모이어티는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상에서 발현될 수 있다. 따라서, 소정의 양태에서, 하나 이상의 표적화 모이어티는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)에 연결된다. 하나 이상의 표적화 모이어티가 다른 외인성으로 생물학적 활성인 분자(예를 들어, 치료학적 분자, 아쥬반트 또는 면역 조절제)와 조합되어 발현될 때, 다른 외인성으로 생물학적 활성인 분자는 EV, 예를 들어 엑소좀의 표면(예를 들어, 외부 표면 또는 내강 표면) 상에서 또는 내강 내에서 발현될 수 있다.
생산자 세포는 추가 단백질 또는 이의 단편을 암호화하는 추가 외인성 서열을 포함하도록 변형될 수 있다. 대안적으로, 추가 단백질 또는 이의 단편은 당해 분야에 공지된 임의의 적절한 연결 화학을 통해 EV, 예를 들어 엑소좀에 공유 연결되거나 접합될 수 있다. 적절한 연결 화학의 비제한적인 예는 아민-반응성 기, 카복실-반응성 기, 설프하이드릴-반응성 기, 알데하이드-반응성 기, 광 반응성 기, ClickIT 화학, 비오틴-스트렙타비딘 또는 다른 아비딘 접합, 또는 임의의 이들의 조합을 포함한다.
II.C 면역 조절제
일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (예를 들어, 본원에 개시된 항원 및/또는 다른 페이로드와 함께) 면역 조절제를 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)는 다수의 면역 조절제를 포함한다. 소정의 양태에서, 다수의 면역 조절제의 각각은 상이하다. 일부 양태에서, 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)는 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 이것 초과의 상이한 면역 조절제를 포함한다.
소정의 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 하나 이상의 추가 페이로드(예를 들어, 항원 및/또는 아쥬반트)와 조합되어 하나 이상의 면역 조절제를 포함한다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 하나 이상의 추가 모이어티(예를 들어, 표적화 모이어티)를 포함할 수 있다. 예를 들어, 소정의 양태에서, 본원에 기재된 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 하나 이상의 면역 조절제, (ii) 하나 이상의 추가 페이로드(예를 들어, 항원 및/또는 아쥬반트) 및 (iii) 하나 이상의 표적화 모이어티를 포함할 수 있다.
일부 양태에서, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 표면(예를 들어, 외부 표면 또는 내강 표면) 상에서 또는 내강 내에서 발현될 수 있다. 따라서, 소정의 양태에서, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상에서 또는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상에서 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)에 연결된다. 다른 양태에서, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 Y)에 연결된다. 추가의 양태에서, 면역 조절제는 엑소좀의 내강에 있다(즉, 스캐폴드 X 또는 스캐폴드 Y 중 어느 하나에 연결되지 않음). 일부 양태에서, 면역 조절제는 EV(예를 들어, 엑소좀)의 외부 표면 및/또는 내강 표면에 직접(즉, 스캐폴드 모이어티의 사용 없이) 연결될 수 있다.
이러한 양태의 비제한적인 예는 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하는 EV, 예를 들어 엑소좀을 포함하고, 여기서
(a) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 Y에 연결되고;
(b) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고;
(c) 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
(d) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
(e) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
(f) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
(g) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결된다.
특정 양태의 비제한적인 예는 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하는 EV, 예를 들어 엑소좀을 포함하고, 여기서
(a) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 Y에 연결되거나;
(b) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있거나;
(c) 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
(d) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
(e) 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
(f) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
(g) 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
(h) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
(i) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되거나;
(j) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
(k) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있거나;
(l) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
(m) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되거나;
(n) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
(o) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있거나;
(p) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되거나;
(q) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되거나;
(r) 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 면역 조절제는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있거나;
(s) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면에 직접 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면에 직접 연결되거나;
(t) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면에 직접 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있거나;
(u) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면에서 직접 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
(v) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면에 직접 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
(w) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면에 직접 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부에 직접 연결되거나;
(x) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면에 직접 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
(y) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면에 직접 연결되거나;
(z) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부에 직접 연결되거나;
(aa) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면에 직접 연결되거나;
(bb) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부에 직접 연결되거나;
(cc) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면에 직접 연결되거나;
(dd) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부에 직접 연결된다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 Y에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 면역 조절제는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다. 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강에 있다. 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결된다. 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 면역 조절제는 EV의 외부에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 면역 조절제는 EV의 외부 상의 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 외부에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 외부에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV의 외부에 직접 연결된다.
특정 양태의 비제한적인 예는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하는 EV, 예를 들어 엑소좀을 포함하고, 여기서
(a) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 (a1) 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있거나, (a2) 엑소좀의 외부 표면 상의 또는 엑소좀의 내강 내의 제3 스캐폴드 모이어티, 예를 들어 스캐폴드 X, 또는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
(b) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 내에 있고, 면역 조절제는 (b1) 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있거나, (b2) 엑소좀의 외부 표면 상의 또는 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 모이어티, 예를 들어 스캐폴드 X, 또는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
(c) 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 (c1) 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있거나, (c2) 엑소좀의 외부 표면 상의 또는 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 모이어티, 예를 들어 스캐폴드 X, 또는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
(d) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 (d1) 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있거나, (d2) 엑소좀의 외부 표면 상의 또는 엑소좀의 내강 표면 상의 제3 스캐폴드 모이어티, 예를 들어 스캐폴드 X, 또는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
(e) 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 (e1) 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있거나, (e2) 엑소좀의 표면 상의 또는 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 모이어티, 예를 들어 스캐폴드 X, 또는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
(f) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 (f1) 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있거나, (f2) 엑소좀의 외부 표면 상의 또는 엑소좀의 내강 표면 상의 제3 스캐폴드 모이어티, 예를 들어 스캐폴드 X, 또는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
(g) 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 (g1) 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있거나, (g2) 엑소좀의 외부 표면 상의 또는 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 모이어티, 예를 들어 스캐폴드 X, 또는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
(h) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 (h1) 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있거나, (h2) 엑소좀의 외부 표면 상의 또는 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 모이어티, 예를 들어 스캐폴드 X, 또는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
(i) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 (i1) 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있거나, (i2) 엑소좀의 외부 표면 상의 또는 엑소좀의 내강 표면 상의 제3 스캐폴드 모이어티, 예를 들어 스캐폴드 X, 또는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
(j) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 (j1) 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있거나, (j2) 엑소좀의 외부 표면 상의 또는 엑소좀의 내강 표면 상의 제3 스캐폴드 모이어티, 예를 들어 스캐폴드 X, 또는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
(k) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 면역 조절제는 (k1) 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있거나, (k2) 엑소좀의 외부 표면 상의 또는 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 모이어티, 예를 들어 스캐폴드 X, 또는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
(l) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 (l1) 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있거나, (l2) 엑소좀의 외부 표면 상의 또는 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 모이어티, 예를 들어 스캐폴드 X, 또는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
(m) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드에 연결되고, 면역 조절제는 (m1) 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있거나, (m2) 엑소좀의 외부 표면 상의 또는 엑소좀의 내강 표면 상의 제3 스캐폴드 모이어티, 예를 들어 스캐폴드 X, 또는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
(n) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 (n1) 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있거나, (n2) 엑소좀의 외부 표면 상의 또는 엑소좀의 내강 표면 상의 제3 스캐폴드 모이어티, 예를 들어 스캐폴드 X, 또는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
(o) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 면역 조절제는 (o1) 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있거나, (o2) 엑소좀의 외부 표면 상의 또는 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 모이어티, 예를 들어 스캐폴드 X, 또는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
(p) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 (p1) 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있거나, (p2) 엑소좀의 표면 상의 또는 엑소좀의 내강 내의 제3 스캐폴드 모이어티, 예를 들어 스캐폴드 X, 또는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
(q) 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 (q1) 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있거나, (q2) 엑소좀의 외부 표면 상의 또는 엑소좀의 내강 표면 상의 제3 스캐폴드 모이어티, 예를 들어 스캐폴드 X, 또는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
(r) 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 면역 조절제는 (r1) 엑소좀의 내강에 있거나, (r2) 엑소좀의 외부 표면 상의 또는 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 모이어티, 예를 들어 스캐폴드 X, 또는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결된다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제3 스캐폴드 Y에 연결된다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 면역 조절제는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 Y에 연결된다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 Y에 연결된다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 Y에 연결된다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결된다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 Y에 연결된다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결된다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결된다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제3 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제3 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결된다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 Y에 연결된다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 면역 조절제는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결된다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결된다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제3 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제3 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결된다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 Y에 연결된다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 면역 조절제는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결된다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제3 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제3 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결된다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제3 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제3 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결된다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 면역 조절제는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 엑소좀은 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 항원은 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 아쥬반트는 임의의 스캐폴드 모이어티에 연결되지 않으며 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결된다.
일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, (a2) 아쥬반트는 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, (a3) 면역 조절제는 EV의 내강 표면에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, (a2) 아쥬반트는 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, (a3) 면역 조절제는 EV의 외부 표면에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, (a2) 아쥬반트는 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, (a3) 면역 조절제는 EV의 내강 내의 스캐폴드 Y에 연결된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, (a2) 아쥬반트는 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, (a3) 면역 조절제는 EV의 내강 내의 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, (a2) 아쥬반트는 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, (a3) 면역 조절제는 EV의 외부 표면 내의 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, (a2) 아쥬반트는 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, (a3) 면역 조절제는 EV의 내강에 있다.
일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, (a2) 아쥬반트는 EV의 외부 표면에 직접 연결되고, (a3) 면역 조절제는 EV의 내강 표면에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, (a2) 아쥬반트는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, (a3) 면역 조절제는 EV의 내강 표면에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, (a2) 아쥬반트는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, (a3) 면역 조절제는 EV의 내강 표면에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, (a2) 아쥬반트는 EV의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, (a3) 면역 조절제는 EV의 내강 표면에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, (a2) 아쥬반트는 EV의 내강에 있고, (a3) 면역 조절제는 EV의 내강 표면에 직접 연결된다.
일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 외부 표면에 직접 연결되고, (a2) 아쥬반트는 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, (a3) 면역 조절제는 EV의 내강 표면에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, (a2) 아쥬반트는 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, (a3) 면역 조절제는 EV의 내강 표면에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, (a2) 아쥬반트는 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, (a3) 면역 조절제는 EV의 내강 표면에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, (a2) 아쥬반트는 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, (a3) 면역 조절제는 EV의 내강 표면에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 내강에 있고, (a2) 아쥬반트는 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, (a3) 면역 조절제는 EV의 내강 표면에 직접 연결된다.
일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 외부 표면에 직접 연결되고, (a2) 아쥬반트는 EV의 외부 표면에 직접 연결되고, (a3) 면역 조절제는 EV의 외부 표면에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 외부 표면에 직접 연결되고, (a2) 아쥬반트는 EV의 외부 표면에 직접 연결되고, (a3) 면역 조절제는 EV의 내강 표면에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 외부 표면에 직접 연결되고, (a2) 아쥬반트는 EV의 외부 표면에 직접 연결되고, (a3) 면역 조절제는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 외부 표면에 직접 연결되고, (a2) 아쥬반트는 EV의 외부 표면에 직접 연결되고, (a3) 면역 조절제는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 외부 표면에 직접 연결되고, (a2) 아쥬반트는 EV의 외부 표면에 직접 연결되고, (a3) 면역 조절제는 EV의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 외부 표면에 직접 연결되고, (a2) 아쥬반트는 EV의 외부 표면에 직접 연결되고, (a3) 면역 조절제는 EV의 내강에 있다.
일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 외부 표면에 직접 연결되고, (a2) 아쥬반트는 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, (a3) 면역 조절제는 EV의 외부 표면에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 외부 표면에 직접 연결되고, (a2) 아쥬반트는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, (a3) 면역 조절제는 EV의 외부 표면에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 외부 표면에 직접 연결되고, (a2) 아쥬반트는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, (a3) 면역 조절제는 EV의 외부 표면에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 외부 표면에 직접 연결되고, (a2) 아쥬반트는 EV의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, (a3) 면역 조절제는 EV의 외부 표면에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 외부 표면에 직접 연결되고, (a2) 아쥬반트는 EV의 내강에 있고, (a3) 면역 조절제는 EV의 외부 표면에 직접 연결된다.
일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, (a2) 아쥬반트는 EV의 외부 표면에 직접 연결되고, (a3) 면역 조절제는 EV의 외부 표면에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, (a2) 아쥬반트는 EV의 외부 표면에 직접 연결되고, (a3) 면역 조절제는 EV의 외부 표면에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, (a2) 아쥬반트는 EV의 외부 표면에 직접 연결되고, (a3) 면역 조절제는 EV의 외부 표면에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, (a2) 아쥬반트는 EV의 외부 표면에 직접 연결되고, (a3) 면역 조절제는 EV의 외부 표면에 직접 연결된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (i) 항원, (ii) 아쥬반트 및 (iii) 면역 조절제를 포함하고, 여기서 (a1) 항원은 EV의 내강에 있고, (a2) 아쥬반트는 EV의 외부 표면에 직접 연결되고, (a3) 면역 조절제는 EV의 외부 표면에 직접 연결된다.
일부 양태에서, 본원에 기재된 EV, 예를 들어 엑소좀과 사용될 수 있는 면역 조절제는 항종양 활성을 갖는다. 다른 양태에서, 본 개시내용에 유용한 면역 조절제는 관용원성 활성을 갖는다. 일부 양태에서, 면역 조절제는 선천성 면역 반응을 조절할 수 있다. 소정의 양태에서, 면역 조절제는 자연 살해 세포를 표적화하여 선천성 면역 반응을 조절한다. 일부 양태에서, 면역 조절제는 적응성 면역 반응을 조절할 수 있다. 일부 양태에서, 면역 조절제는 세포독성 T 세포를 표적화하여 적응성 면역 반응을 조절한다. 추가의 양태에서, 면역 조절제는 B 세포를 표적화하여 적응성 면역 반응을 조절한다. 소정의 양태에서, 본원에 개시된 면역 조절제는 세포독성 T 세포 또는 B 세포(즉, 생체분포 변형제)에 대한 엑소좀의 분포를 조절할 수 있다.
일부 양태에서, 면역 조절제는 음성 관문 조절제에 대한 억제제 또는 음성 관문 조절제의 결합 파트너에 대한 억제제를 포함한다. 소정의 양태에서, 음성 관문 조절제는 세포독성 T-림프구-연관된 단백질 4(CTLA-4), 예정 세포사 단백질 1(PD-1), 림프구-활성화된 유전자 3(LAG-3), T-세포 면역글로불린 뮤신-함유 단백질 3(TIM-3), B 및 T 림프구 감쇠인자(BTLA), Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T 세포 면역수용체(TIGIT), T 세포 활성화의 V-도메인 Ig 억제인자(VISTA), 아데노신 A2a 수용체(A2aR), 살해 세포 면역글로불린 유사 수용체(KIR), 인돌아민 2,3-디옥시게나제(IDO), CD20, CD39, CD73, 또는 임의의 이들의 조합을 포함한다.
일부 양태에서, 면역 조절제는 세포독성 T-림프구-연관 단백질 4(CTLA-4)의 억제제이다. 소정의 양태에서, CTLA-4 억제제는 CTLA-4의 단일클론 항체("항-CTLA-4 항체")이다. 소정의 양태에서, 억제제는 CTLA-4의 단일클론 항체의 단편이다. 소정의 양태에서, 항체 단편은 CTLA-4의 단일클론 항체의 scFv, (scFv)2, Fab, Fab', 및 F(ab')2, F(ab1)2, Fv, dAb 또는 Fd이다. 소정의 양태에서, 억제제는 CTLA-4에 대한 나노바디, 이중특이적 항체 또는 다중특이적 항체이다. 일부 양태에서, 항-CTLA-4 항체는 이필리무맙이다. 다른 양태에서, 항-CTLA-4 항체는 트레멜리무맙이다.
일부 양태에서, 면역 조절제는 예정 세포사 단백질 1(PD-1)의 억제제이다. 일부 양태에서, 면역 조절제는 예정사-리간드 1(PD-L1)의 억제제이다. 일부 양태에서, 면역 조절제는 예정사-리간드 2(PD-L2)의 억제제이다. 소정의 양태에서, PD-1, PD-L1 또는 PD-L2의 억제제는 PD-1의 단일클론 항체("항-PD-1 항체"), PD-L1의 단일클론 항체("항-PD-L1 항체") 또는 PD-L2의 단일클론 항체("항-PD-L2 항체")이다. 일부 양태에서, 억제제는 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체 또는 항-PD-L2 항체의 단편이다. 소정의 양태에서, 항체 단편은 PD-1, PD-L1 또는 PD-L2의 단일클론 항체의 scFv, (scFv)2, Fab, Fab', 및 F(ab')2, F(ab1)2, Fv, dAb 또는 Fd이다. 소정의 양태에서, 억제제는 PD-1, PD-L1 또는 PD-L2에 대한 나노바디, 이중특이적 항체 또는 다중특이적 항체이다. 일부 양태에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙이다. 일부 양태에서, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙이다. 일부 양태에서, 항-PD-1 항체는 피딜리주맙이다. 일부 양태에서, 항-PD-L1 항체는 아테졸리주맙이다. 다른 양태에서, 항-PD-L1 항체는 아벨루맙이다.
일부 양태에서, 면역 조절제는 림프구-활성화된 유전자 3(LAG3)의 억제제이다. 소정의 양태에서, LAG3의 억제제는 LAG3의 단일클론 항체("항-LAG3 항체")이다. 일부 양태에서, 억제제는 항-LAG3 항체의 단편, 예를 들어 scFv, (scFv)2, Fab, Fab', 및 F(ab')2, F(ab1)2, Fv, dAb 또는 Fd이다. 소정의 양태에서, 억제제는 LAG3에 대한 나노바디, 이중특이적 항체 또는 다중특이적 항체이다.
일부 양태에서, 면역 조절제는 T-세포 면역글로불린 뮤신-함유 단백질 3(TIM-3)의 억제제이다. 일부 양태에서, 면역 조절제는 B 및 T 림프구 감쇠인자(BTLA)의 억제제이다. 일부 양태에서, 면역 조절제는 Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T 세포 면역수용체(TIGIT)의 억제제이다. 일부 양태에서, 면역 조절제는 T 세포 활성화의 V-도메인 Ig 억제인자(VISTA)의 억제제이다. 일부 양태에서, 면역 조절제는 아데노신 A2a 수용체(A2aR)의 억제제이다. 일부 양태에서, 면역 조절제는 살해 세포 면역글로불린 유사 수용체(KIR)의 억제제이다. 일부 양태에서, 면역 조절제는 인돌아민 2,3-디옥시게나제(IDO)의 억제제이다. 일부 양태에서, 면역 조절제는 CD20, CD39 또는 CD73의 억제제이다.
일부 양태에서, 면역 조절제는 양성 동시자극 분자에 대한 활성인자 또는 양성 동시자극 분자의 결합 파트너에 대한 활성인자를 포함한다. 소정의 양태에서, 양성 동시자극 분자는 TNF 수용체 슈퍼패밀리 구성원(예를 들어, CD120a, CD120b, CD18, OX40, CD40, Fas 수용체, M68, CD27, CD30, 4-1BB, TRAILR1, TRAILR2, TRAILR3, TRAILR4, RANK, OCIF, TWEAK 수용체, TACI, BAFF 수용체, ATAR, CD271, CD269, AITR, TROY, CD358, TRAMP 및 XEDAR)을 포함한다. 일부 양태에서, 양성 동시자극 분자에 대한 활성인자는 TNF 슈퍼패밀리 구성원(예를 들어, TNFα, TNF-C, OX40L, CD40L, FasL, LIGHT, TL1A, CD27L, Siva, CD153, 4-1BB 리간드, TRAIL, RANKL, TWEAK, APRIL, BAFF, CAMLG, NGF, BDNF, NT-3, NT-4, GITR 리간드 및 EDA-2)이다.
일부 양태에서, 면역 조절제는 TNF 수용체 슈퍼패밀리 구성원 4(OX40)의 활성인자이다. 소정의 양태에서, OX40의 활성인자는 작용제성 항-OX40 항체이다. 추가의 양태에서, OX40의 활성인자는 OX40 리간드(OX40L)이다.
일부 양태에서, 면역 조절제는 CD27의 활성인자이다. 소정의 양태에서, CD27의 활성인자는 작용제성 항-CD27 항체이다. 다른 양태에서, CD27의 활성인자는 CD27 리간드(CD27L)이다.
일부 양태에서, 면역 조절제는 CD40의 활성인자이다. 소정의 양태에서, CD40의 활성인자는 작용제성 항-CD40 항체이다. 일부 양태에서, CD40의 활성인자는 CD40 리간드(CD40L)이다. 소정의 양태에서, CD40L은 단량체성 CD40L이다. 다른 양태에서, CD40L은 삼합체성 CD40L이다.
일부 양태에서, 면역 조절제는 글루코코르티코이드-유도된 TNFR-관련된 단백질(GITR)의 활성인자이다. 소정의 양태에서, GITR의 활성인자는 작용제성 항-GITR 항체이다. 다른 양태에서, GITR의 활성인자는 GITR의 천연 리간드이다.
일부 양태에서, 면역 조절제는 4-1BB의 활성인자이다. 구체적인 양태에서, 4-1BB의 활성인자는 작용제성 항-4-1BB 항체이다. 소정의 양태에서, 4-1BB의 활성인자는 4-1BB의 천연 리간드이다.
일부 양태에서, 면역 조절제는 Fas 수용체(Fas)이다. 이러한 양태에서, Fas 수용체는 EV, 예를 들어 엑소좀의 표면 상에서 디스플레이된다. 일부 양태에서, 면역 조절제는 Fas 리간드(FasL)이다. 소정의 양태에서, Fas 리간드는 EV, 예를 들어 엑소좀의 표면 상에서 디스플레이된다. 일부 양태에서, 면역 조절제는 항-Fas 항체 또는 항-FasL 항체이다.
일부 양태에서, 면역 조절제는 CD28-슈퍼패밀리 동시자극 분자의 활성인자이다. 소정의 양태에서, CD28-슈퍼패밀리 동시자극 분자는 ICOS 또는 CD28이다. 소정의 양태에서, 면역조절 성분은 ICOSL, CD80 또는 CD86이다.
일부 양태에서, 면역 조절제는 유도성 T 세포 동시자극자(ICOS)의 활성인자이다. 소정의 양태에서, ICOS의 활성인자는 작용제성 항-ICOS 항체이다. 다른 양태에서, ICOS의 활성인자는 ICOS 리간드(ICOSL)이다.
일부 양태에서, 면역 조절제는 CD28의 활성인자이다. 일부 양태에서, CD28의 활성인자는 작용제성 항-CD28 항체이다. 다른 양태에서, CD28의 활성인자는 CD28의 천연 리간드이다. 소정의 양태에서, CD28의 리간드는 CD80이다.
일부 양태에서, 면역 조절제는 사이토카인 또는 사이토카인의 결합 파트너를 포함한다. 일부 양태에서, 사이토카인은 (i) 사이토카인의 공통 감마 사슬 패밀리; (ii) 사이토카인의 IL-1 패밀리; (iii) 조혈 사이토카인; (iv) 인터페론(예를 들어, I형, II형 또는 III형); (v) 사이토카인의 TNF 패밀리; (vi) 사이토카인의 IL-17 패밀리; (vii) 손상-연관된 분자 패턴(DAMP); (viii) 관용원성 사이토카인; 또는 (ix) 이들의 조합으로부터 선택된다. 소정의 양태에서, 사이토카인은 IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12, IL-15, IL-21, IFN-γ, IL-1α, IL-1β, IL-1ra, IL-18, IL-33, IL-36α, IL-36β, IL-36γ, IL-36ra, IL-37, IL-38, IL-3, IL-5, IL-6, IL-11, IL-13, IL-23, 과립구-대식세포 콜로니 자극 인자(GM-CSF), 과립구-콜로니 자극 인자(G-CSF), 백혈병 억제 인자(LIF), 줄기 세포 인자(SCF), 트롬보포이에틴(TPO), 대식세포-콜로니 자극 인자(M-CSF), 에리스로포이에틴(EPO), Flt-3, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, IL-19, IL-20, IL-22, IL-24, TNF-α, TNF-β, BAFF, APRIL, 림프독소 베타(TNF-γ), IL-17A, IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17E, IL-17F, IL-25, TSLP, IL-35, IL-27, TGF-β, 또는 이들의 조합을 포함한다.
일부 양태에서, 면역 조절제는 케모카인을 포함한다. 소정의 양태에서, 케모카인은 (i) CC 케모카인(예를 들어, CCL1, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL6, CCL7, CCL8, CCL9, CCL10, CCL11, CCL12, CCL13, CCL14, CCL15, CCL16, CCL17, CCL18, CCL19, CCL20, CCL21, CCL22, CCL23, CCL24, CCL25, CCL26, CCL27, CCL28); (ii) CXC 케모카인(예를 들어, CXCL1, CXCL2, CXCL3, CXCL4, CXCL5, CXCL6, CXCL7, CXCL8, CXCL9, CXCL10, CXCL11, CXCL12, CXCL13, CXCL14, CXCL15, CXCL16, CXCL17); (iii) C 케모카인(예를 들어, XCL1, XCL2); (iv) CX3C 케모카인(예를 들어, CX3CL1); 또는 (v) 이들의 조합을 포함한다.
일부 양태에서, 면역 조절제는 리소포스파티드산(LPA)의 억제제를 포함한다. LPA는 예정 세포사로부터 세포를 보호하고 구제하는 고도로 강력한 내인성 지질 매개자이다. LPA는 이의 높은 친화도 LPA-1 수용체를 통해 섬유화의 중요한 매개자이다.
일부 양태에서, LPA-1 억제제는 AM095를 포함하고, 이는 IC50 값이 마우스 또는 재조합 인간 LPA-1에 대해 각각 0.73 및 0.98 μM인 LPA-1의 강력하고 경구로 생체이용 가능한 길항제이다. 시험관내에서, AM095는 0.78 μM 및 0.23 μM의 IC50 값으로 마우스 LPA-1/CHO 세포 및 인간 A2058 흑색종 세포 둘 다의 LPA-1-유도된 화학주성을 억제하는 것으로 나타났다. 생체내에서, AM095는 마우스에서 8.3 mg/kg의 ED50 값으로 LPA-유도된 히스타민 방출을 용량 독립적으로 차단할 수 있다. 추가적으로, AM095는 폐에서 10 mg/kg의 ED50 값으로 BALF 콜라겐 및 단백질을 현저하게 감소시키는 것으로 밝혀졌다. AM095는 마우스에서 블레오마이신에 의해 유도된 대식세포 및 림프구 침윤 둘 다를 감소시키는 것으로 또한 나타났다. Swaney 등 (2018) Mol. Can. Res. 16:1601-1613을 참조하고, 이것은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
일부 양태에서, LPA-1 억제제는 AM152(BMS-986020으로도 공지됨)를 포함한다. AM152는 IC50이 BSEP, MRP4 및 MDR3에 대해 각각 4.8 μM, 6.2 μM 및 7.5 μM인 담즙산 및 인지질 수송체를 억제하는 고친화도 LPA-1 길항제이다. AM152는 특발성 폐 섬유증(IPF)의 치료에 사용될 수 있다. Kihara 등 (2015) Exp. Cell Res. 333:171-7; Rosen 등 (2017) European Respiratory Journal 50:PA1038; 및, Palmer 등 (2018) Chest 154:1061-1069를 참조하고, 이들은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다. 방광 독성 및 간 독성 간 수송체(2개의 특정 수송체)의 초기 신호로 인해 (Palmer 2018에 기재된) AM152의 2상 연구가 조기에 종결되었다.
EV(예를 들어, 엑소좀)와 관련된 LPA-1 억제제를 포함하는 추가 개시내용은 본 개시내용에서 다른 곳에 제공된다(예를 들어, 실시예 24 참조).
일부 양태에서, 항원, 예를 들어 HSV-2 항원과 조합될 수 있는 면역 조절제는 IL-21이다. HSV-2 항원의 비제한적인 예는 본원에서 다른 곳에 개시되어 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 EV의 내강에서 IL-21 및 HSV-2 항원 둘 다를 포함한다. 다른 양태에서, EV는 제1 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면 상의 IL-21을 포함하고, 제2 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면 상의 HSV-2 항원을 포함하고, 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티는 동일하거나 상이하다. 다른 양태에서, EV는 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면 상의 IL-21을 포함하고, 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 내강 표면 상의 HSV-2 항원을 포함한다. 다른 양태에서, EV는 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면 상의 HSV-2 항원을 포함하고, 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 내강 표면 상의 IL-21을 포함한다. 다른 양태에서, EV는 제1 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면 상의 IL-21을 포함하고, 제2 스캐폴드 모이어티를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면(예를 들어, 스캐폴드 X 또는 스캐폴드 Y) 상의 HSV-2 항원을 포함하고, 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티는 동일하거나 상이하다. 다른 양태에서, EV는 제1 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면 상의 HSV-2 항원을 포함하고, 제2 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X 또는 스캐폴드 Y)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 내강 표면 상의 IL-21을 포함하고, 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티는 동일하거나 상이하다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV는 제1 스캐폴드 모이어티를 통해 선택적으로 연결된 EV의 내강 표면(예를 들어, 스캐폴드 X 또는 스캐폴드 Y) 상의 IL-21을 포함하고, 제2 스캐폴드 모이어티를 통해 선택적으로 연결된 EV의 내강 표면(예를 들어, 스캐폴드 X 또는 스캐폴드 Y) 상의 HSV-2 항원을 포함하고, 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티는 동일하거나 상이하다.
일부 양태에서, 항원, 예를 들어 HSV-2 항원과 조합될 수 있는 면역 조절제는 CD40L이다. HSV-2 항원의 비제한적인 예는 본원에서 다른 곳에 개시되어 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 EV의 내강에서 CD40L 및 HSV-2 항원 둘 다를 포함한다. 다른 양태에서, EV는 제1 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면 상의 CD40L을 포함하고, 제2 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면 상의 HSV-2 항원을 포함하고, 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티는 동일하거나 상이하다. 다른 양태에서, EV는 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면 상의 CD40L을 포함하고, 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 내강 표면 상의 HSV-2 항원을 포함한다. 다른 양태에서, EV는 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면 상의 HSV-2 항원을 포함하고, 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 내강 표면 상의 CD40L을 포함한다. 다른 양태에서, EV는 제1 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면 상의 CD40L을 포함하고, 제2 스캐폴드 모이어티를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면(예를 들어, 스캐폴드 X 또는 스캐폴드 Y) 상의 HSV-2 항원을 포함하고, 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티는 동일하거나 상이하다. 다른 양태에서, EV는 제1 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면 상의 HSV-2 항원을 포함하고, 제2 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X 또는 스캐폴드 Y)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 내강 표면 상의 CD40L을 포함하고, 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티는 동일하거나 상이하다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV는 제1 스캐폴드 모이어티를 통해 선택적으로 연결된 EV의 내강 표면(예를 들어, 스캐폴드 X 또는 스캐폴드 Y) 상의 CD40L을 포함하고, 제2 스캐폴드 모이어티를 통해 선택적으로 연결된 EV의 내강 표면(예를 들어, 스캐폴드 X 또는 스캐폴드 Y) 상의 HSV-2 항원을 포함하고, 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티는 동일하거나 상이하다.
일부 양태에서, (예를 들어, 본원에 개시된) HSV-2 항원 및 면역 조절제(예를 들어, IL-21 또는 CD40L)를 포함하는 EV(예를 들어, 엑소좀)는 아쥬반트를 추가로 포함할 수 있다. 본 개시내용과 사용될 수 있는 아쥬반트의 비제한적인 예는 본원에서 다른 곳에 기재되어 있다.
일부 양태에서, HSV-2 항원 및 하나 이상의 추가 페이로드(예를 들어, 상기에 기재된 면역 조절제 및/또는 아쥬반트)를 포함하는 EV(예를 들어, 엑소좀)는 기준품과 비교하여 HSV-2 항원에 대한 면역 반응을 향상시킬 수 있다. 일부 양태에서, 기준품은 HSV-2 항원만을 포함하는 EV(예를 들어, 엑소좀)를 포함한다. 다른 양태에서, 기준품은 (단독으로 또는 하나 이상의 추가 페이로드(예를 들어, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제)와 조합되어) 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)에서 연결되지 않거나 존재하지 않는 HSV-2 항원을 포함한다. 일부 양태에서, 면역 반응은 선천성 면역 반응, 체액 면역 반응, 세포-매개된 면역 반응, 또는 이들의 조합을 포함한다. 소정의 양태에서, 면역 반응은 기준품과 비교하여 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 100%, 적어도 약 250%, 적어도 약 500%, 적어도 약 750%, 적어도 약 1,000% 또는 이것 초과만큼 향상된다. 일부 양태에서, 면역 반응은 기준품(예를 들어, 표적화 모이어티가 없는 상응하는 EV 또는 비-EV 전달 비히클)과 비교하여 적어도 약 1배, 적어도 약 2배, 적어도 약 3배, 적어도 약 4배, 적어도 약 5배, 적어도 약 6배, 적어도 약 7배, 적어도 약 8배, 적어도 약 9배, 적어도 약 10배, 적어도 약 20배, 적어도 약 30배, 적어도 약 40배, 적어도 약 50배, 적어도 약 60배, 적어도 약 70배, 적어도 약 80배, 적어도 약 90배, 적어도 약 100배, 적어도 약 200배, 적어도 약 300배, 적어도 약 400배, 적어도 약 500배, 적어도 약 600배, 적어도 약 700배, 적어도 약 800배, 적어도 약 900배, 적어도 약 1,000배, 적어도 약 2,000배, 적어도 약 3,000배, 적어도 약 4,000배, 적어도 약 5,000배, 적어도 약 6,000배, 적어도 약 7,000배, 적어도 약 8,000배, 적어도 약 9,000배, 적어도 약 10,000배 또는 이것 초과만큼 향상된다.
일부 양태에서, HSV-2 항원 및 하나 이상의 추가 페이로드(예를 들어, 상기에 기재된 면역 조절제 및/또는 아쥬반트)를 포함하는 EV(예를 들어, 엑소좀)는 이를 필요로 하는 대상체에게 투여될 때 바이러스 배출을 감소시킬 수 있다. 소정의 양태에서, 바이러스 배출은 기준품(예를 들어, 항원 단독을 포함하는 상응하는 EV 또는 단독으로 또는 하나 이상의 추가 페이로드와 조합하여 항원을 포함하는 비-EV 전달 비히클)과 비교하여 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 100%만큼 감소한다. 일부 양태에서, HSV-2 항원 및 하나 이상의 추가 페이로드(예를 들어, 면역 조절제 및/또는 아쥬반트)를 포함하는 EV(예를 들어, 엑소좀)는 이를 필요로 하는 대상체에게 투여될 때 바이러스 제거를 증가시킬 수 있다. 소정의 양태에서, 바이러스 제거는 기준품(예를 들어, 항원 단독을 포함하는 상응하는 EV 또는 단독으로 또는 하나 이상의 추가 페이로드와 조합하여 항원을 포함하는 비-EV 전달 비히클)과 비교하여 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 100%, 적어도 약 250%, 적어도 약 500%, 적어도 약 750%, 적어도 약 1,000% 또는 이것 초과만큼 증가한다. 일부 양태에서, 바이러스 제거는 기준품(예를 들어, 항원 단독을 포함하는 상응하는 EV 또는 단독으로 또는 하나 이상의 추가 페이로드와 조합하여 항원을 포함하는 비-EV 전달 비히클)과 비교하여 적어도 약 1배, 적어도 약 2배, 적어도 약 3배, 적어도 약 4배, 적어도 약 5배, 적어도 약 6배, 적어도 약 7배, 적어도 약 8배, 적어도 약 9배, 적어도 약 10배, 적어도 약 20배, 적어도 약 30배, 적어도 약 40배, 적어도 약 50배, 적어도 약 60배, 적어도 약 70배, 적어도 약 80배, 적어도 약 90배, 적어도 약 100배, 적어도 약 200배, 적어도 약 300배, 적어도 약 400배, 적어도 약 500배, 적어도 약 600배, 적어도 약 700배, 적어도 약 800배, 적어도 약 900배, 적어도 약 1,000배, 적어도 약 2,000배, 적어도 약 3,000배, 적어도 약 4,000배, 적어도 약 5,000배, 적어도 약 6,000배, 적어도 약 7,000배, 적어도 약 8,000배, 적어도 약 9,000배, 적어도 약 10,000배 또는 이것 초과만큼 증가한다. 추가의 양태에서, HSV-2 항원 및 하나 이상의 추가 페이로드(예를 들어, 면역 조절제 및/또는 아쥬반트)를 포함하는 EV(예를 들어, 엑소좀)는 이를 필요로 하는 대상체에게 투여될 때 HSV-2 매개된 병변 형성을 감소시킬 수 있다. 소정의 양태에서, 병변 형성은 기준품(예를 들어, 항원 단독을 포함하는 상응하는 EV 또는 단독으로 또는 하나 이상의 추가 페이로드와 조합하여 항원을 포함하는 비-EV 전달 비히클)과 비교하여 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 100%만큼 감소한다.
일부 양태에서, 기준품은 HSV-2 항원만을 포함하는 EV(예를 들어, 엑소좀)를 포함한다. 다른 양태에서, 기준품은 (단독으로 아쥬반트 및/또는 면역 조절제와 조합되어) 본원에 개시된 EV에서 연결되지 않거나 존재하지 않는 HSV-2 항원을 포함한다.
일부 양태에서, 항원, 예를 들어 EBV 항원과 조합될 수 있는 면역 조절제는 IL-21이다. EBV 항원(예를 들어, BZLF1)의 비제한적인 예는 본원에서 다른 곳에 개시되어 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 EV의 내강에서 IL-21 및 EBV 항원(예를 들어, BZLF1) 둘 다를 포함한다. 다른 양태에서, EV는 제1 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면 상의 IL-21을 포함하고, 제2 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면 상의 EBV 항원(예를 들어, BZLF1)을 포함하고, 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티는 동일하거나 상이하다. 다른 양태에서, EV는 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면 상의 IL-21을 포함하고, 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 내강 표면 상의 EBV 항원(예를 들어, BZLF1)을 포함한다. 다른 양태에서, EV는 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면 상의 EBV 항원(예를 들어, BZLF1)을 포함하고, 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 내강 표면 상의 IL-21을 포함한다. 다른 양태에서, EV는 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면 상의 IL-21을 포함하고, 제2 스캐폴드 모이어티를 통해 선택적으로 연결된 EV의 내강 표면(예를 들어, 스캐폴드 X 또는 스캐폴드 Y) 상의 EBV 항원(예를 들어, BZLF1)을 포함하고, 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티는 동일하거나 상이하다. 다른 양태에서, EV는 제1 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면 상의 EBV 항원(예를 들어, BZLF1)을 포함하고, 제2 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X 또는 스캐폴드 Y)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 내강 표면 상의 IL-21을 포함하고, 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티는 동일하거나 상이하다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV는 제1 스캐폴드 모이어티를 통해 선택적으로 연결된 EV의 내강 표면(예를 들어, 스캐폴드 X 또는 스캐폴드 Y) 상의 IL-21을 포함하고, 제2 스캐폴드 모이어티를 통해 선택적으로 연결된 EV의 내강 표면(예를 들어, 스캐폴드 X 또는 스캐폴드 Y) 상의 EBV 항원(예를 들어, BZLF1)을 포함하고, 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티는 동일하거나 상이하다.
일부 양태에서, 항원, 예를 들어 EBV 항원(예를 들어, BZLF1)과 조합될 수 있는 면역 조절제는 CD40L이다. EBV 항원(예를 들어, BZLF1)의 비제한적인 예는 본원에서 다른 곳에 개시되어 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 EV의 내강에서 CD40L 및 EBV 항원(예를 들어, BZLF1) 둘 다를 포함한다. 다른 양태에서, EV는 제1 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면 상의 CD40L을 포함하고, 제2 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면 상의 EBV 항원(예를 들어, BZLF1)을 포함하고, 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티는 동일하거나 상이하다. 다른 양태에서, EV는 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면 상의 CD40L을 포함하고, 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 내강 표면 상의 EBV 항원(예를 들어, BZLF1)을 포함한다. 다른 양태에서, EV는 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면 상의 EBV 항원(예를 들어, BZLF1)을 포함하고, 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 내강 표면 상의 CD40L을 포함한다. 다른 양태에서, EV는 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면 상의 CD40L을 포함하고, 제2 스캐폴드 모이어티를 통해 선택적으로 연결된 EV의 내강 표면(예를 들어, 스캐폴드 X 또는 스캐폴드 Y) 상의 EBV 항원(예를 들어, BZLF1)을 포함하고, 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티는 동일하거나 상이하다. 다른 양태에서, EV는 제1 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면 상의 EBV 항원(예를 들어, BZLF1)을 포함하고, 제2 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X 또는 스캐폴드 Y)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 내강 표면 상의 CD40L을 포함하고, 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티는 동일하거나 상이하다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV는 제1 스캐폴드 모이어티를 통해 선택적으로 연결된 EV의 내강 표면(예를 들어, 스캐폴드 X 또는 스캐폴드 Y) 상의 CD40L을 포함하고, 제2 스캐폴드 모이어티를 통해 선택적으로 연결된 EV의 내강 표면(예를 들어, 스캐폴드 X 또는 스캐폴드 Y) 상의 EBV 항원(예를 들어, BZLF1)을 포함하고, 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티는 동일하거나 상이하다.
일부 양태에서, EBV 항원 및 면역 조절제(예를 들어, IL-21 또는 CD40L)를 포함하는 EV(예를 들어, 엑소좀)는 본원에 개시된 하나 이상의 추가 페이로드(예를 들어, 추가 항원, 추가 면역 조절제 및/또는 아쥬반트) 및/또는 하나 이상의 표적화 모이어티를 추가로 포함할 수 있다. 일부 양태에서, (예를 들어, 본원에 개시된) EBV 항원(예를 들어, BZLF1) 및 면역 조절제(예를 들어, IL-21 또는 CD40L)를 포함하는 EV(예를 들어, 엑소좀)는 아쥬반트를 추가로 포함할 수 있다. 본 개시내용과 사용될 수 있는 아쥬반트의 비제한적인 예는 본원에서 다른 곳에 기재되어 있다. 일부 양태에서, EV는 추가 항원(예를 들어, 상이한 EBV 항원)을 추가로 포함할 수 있다. 일부 양태에서, EV는 본원에 개시된 추가 면역 조절제(예를 들어, IL-21 또는 CD40L과 다름)를 추가로 포함할 수 있다.
일부 양태에서, EBV 항원(예를 들어, BZLF1) 및 하나 이상의 추가 페이로드(예를 들어, 상기에 기재된 면역 조절제 및/또는 아쥬반트)를 포함하는 EV(예를 들어, 엑소좀)는 기준품과 비교하여 EBV 항원(예를 들어, BZLF1)에 대한 면역 반응을 향상시킬 수 있다. 일부 양태에서, 기준품은 EBV 항원(예를 들어, BZLF1)만을 포함하는 EV(예를 들어, 엑소좀)를 포함한다. 다른 양태에서, 기준품은 (단독으로 아쥬반트 및/또는 면역 조절제와 조합되어) 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)에서 연결되지 않거나 존재하지 않는 EBV 항원(예를 들어, BZLF1)을 포함한다. 일부 양태에서, 면역 반응은 선천성 면역 반응, 체액 면역 반응, 세포-매개된 면역 반응, 또는 이들의 조합을 포함한다. 소정의 양태에서, 면역 반응은 기준품과 비교하여 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 100%, 적어도 약 250%, 적어도 약 500%, 적어도 약 750%, 적어도 약 1,000% 또는 이것 초과만큼 향상된다. 일부 양태에서, 면역 반응은 기준품과 비교하여 적어도 약 1배, 적어도 약 2배, 적어도 약 3배, 적어도 약 4배, 적어도 약 5배, 적어도 약 6배, 적어도 약 7배, 적어도 약 8배, 적어도 약 9배, 적어도 약 10배, 적어도 약 20배, 적어도 약 30배, 적어도 약 40배, 적어도 약 50배, 적어도 약 60배, 적어도 약 70배, 적어도 약 80배, 적어도 약 90배, 적어도 약 100배, 적어도 약 200배, 적어도 약 300배, 적어도 약 400배, 적어도 약 500배, 적어도 약 600배, 적어도 약 700배, 적어도 약 800배, 적어도 약 900배, 적어도 약 1,000배, 적어도 약 2,000배, 적어도 약 3,000배, 적어도 약 4,000배, 적어도 약 5,000배, 적어도 약 6,000배, 적어도 약 7,000배, 적어도 약 8,000배, 적어도 약 9,000배, 적어도 약 10,000배 또는 이것 초과만큼 향상된다.
일부 양태에서, EBV 항원(예를 들어, BZLF1) 및 하나 이상의 추가 페이로드(예를 들어, 상기에 기재된 면역 조절제 및/또는 아쥬반트)를 포함하는 EV(예를 들어, 엑소좀)는 이를 필요로 하는 대상체에게 투여될 때 바이러스 배출을 감소시킬 수 있다. 소정의 양태에서, 바이러스 배출은 기준품(예를 들어, 항원 단독을 포함하는 상응하는 EV 또는 단독으로 또는 하나 이상의 추가 페이로드와 조합하여 항원을 포함하는 비-EV 전달 비히클)과 비교하여 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 100%만큼 감소된다. 일부 양태에서, EBV 항원(예를 들어, BZLF1) 및 하나 이상의 추가 페이로드(예를 들어, 면역 조절제 및/또는 아쥬반트)를 포함하는 EV(예를 들어, 엑소좀)는 이를 필요로 하는 대상체에게 투여될 때 바이러스 제거를 증가시킬 수 있다. 소정의 양태에서, 바이러스 제거는 기준품(예를 들어, 항원 단독을 포함하는 상응하는 EV 또는 단독으로 또는 하나 이상의 추가 페이로드와 조합하여 항원을 포함하는 비-EV 전달 비히클)과 비교하여 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 100%, 적어도 약 250%, 적어도 약 500%, 적어도 약 750%, 적어도 약 1,000% 또는 이것 초과만큼 증가한다. 일부 양태에서, EBV 항원(예를 들어, BZLF1) 및 하나 이상의 추가 페이로드(예를 들어, 면역 조절제 및/또는 아쥬반트)를 포함하는 EV(예를 들어, 엑소좀)는 이를 필요로 하는 대상체에게 EBV-매개된 병변 형성을 감소시킬 수 있다. 소정의 양태에서, 병변 형성은 기준품(예를 들어, 항원 단독을 포함하는 상응하는 EV 또는 단독으로 또는 하나 이상의 추가 페이로드와 조합하여 항원을 포함하는 비-EV 전달 비히클)과 비교하여 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 100%만큼 감소한다.
일부 양태에서, 기준품은 EBV 항원(예를 들어, BZLF1)만을 포함하는 EV(예를 들어, 엑소좀)를 포함한다. 다른 양태에서, 기준품은 (단독으로 아쥬반트 및/또는 면역 조절제와 조합되어) 본원에 개시된 EV에서 연결되지 않거나 존재하지 않는 EBV 항원(예를 들어, BZLF1)을 포함한다.
일부 양태에서, 항원, 예를 들어 TB 항원과 조합될 수 있는 면역 조절제는 IL-12이다.
TB 항원의 비제한적인 예는 본원에서 다른 곳에 개시되어 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 EV의 내강에서 IL-12 및 TB 항원 둘 다를 포함한다. 다른 양태에서, EV는 제1 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면 상의 IL-12를 포함하고, 제2 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면 상의 TB 항원을 포함하고, 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티는 동일하거나 상이하다. 다른 양태에서, EV는 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면 상의 IL-12를 포함하고, 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 내강 표면 상의 TB 항원을 포함한다. 다른 양태에서, EV는 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면 상의 TB 항원을 포함하고, 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 내강 표면 상의 IL-12를 포함한다. 다른 양태에서, EV는 제1 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면 상의 IL-12를 포함하고, 제2 스캐폴드 모이어티를 통해 선택적으로 연결된 EV의 내강 표면(예를 들어, 스캐폴드 X 또는 스캐폴드 Y) 상의 TB 항원을 포함하고, 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티는 동일하거나 상이하다. 다른 양태에서, EV는 제1 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 외부 표면 상의 TB 항원을 포함하고, 제2 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X 또는 스캐폴드 Y)를 통해 선택적으로 연결된 EV의 내강 표면 상의 IL-12를 포함하고, 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티는 동일하거나 상이하다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV는 제1 스캐폴드 모이어티를 통해 선택적으로 연결된 EV의 내강 표면(예를 들어, 스캐폴드 X 또는 스캐폴드 Y) 상의 IL-12를 포함하고, 제2 스캐폴드 모이어티를 통해 선택적으로 연결된 EV의 내강 표면(예를 들어, 스캐폴드 X 또는 스캐폴드 Y) 상의 TB 항원을 포함하고, 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티는 동일하거나 상이하다.
IL-12 및 TB 항원을 포함하는 EV는 이를 필요로 하는 대상체에 대한 면역 반응을 유도할 수 있다. 일부 양태에서, 면역 반응은 CD4 T 세포 반응, CD8 T 세포 반응, 또는 CD4 세포 반응과 CD8 T 세포 반응 둘 다이다. 일부 양태에서, 면역 반응은 TB 항원, 예를 들어 ESAT6 항원에 특이적인 효과기 기능을 갖는 CD4 T-세포 면역 반응이다. 일부 양태에서, 면역 반응은 TB 항원, 예를 들어 TB10.4 항원에 특이적인 CD8 T-세포 면역 반응이다.
일부 양태에서, TB 항원 및 면역 조절제(예를 들어, IL-12)를 포함하는 EV(예를 들어, 엑소좀)는 본원에 개시된 하나 이상의 추가 페이로드(예를 들어, 추가 항원, 추가 면역 조절제 및/또는 아쥬반트)를 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 소정의 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 (예를 들어, 본원에 개시된 것과 같은) 아쥬반트를 추가로 포함할 수 있다. 일부 양태에서, EV는 추가 항원(예를 들어, 상이한 EBV 항원)을 추가로 포함할 수 있다. 일부 양태에서, EV는 본원에 개시된 추가 면역 조절제(예를 들어, IL-21 또는 CD40L과 다름)를 추가로 포함할 수 있다.
일부 양태에서, 본 개시내용과 사용될 수 있는 면역 조절제는 배 중심 반응에 필요한 세포내 상호작용을 지지하는 단백질을 포함한다. 소정의 양태에서, 이러한 단백질은 신호전달 림프구 활성화 분자(SLAM) 패밀리 구성원 또는 SLAM-연관된 단백질(SAP)을 포함한다. 일부 양태에서, SLAM 패밀리 구성원은 SLAM, CD48, CD229(Ly9), Ly108, 2B4, CD84, NTB-A, CRACC, BLAME, CD2F-10, 또는 이들의 조합을 포함한다. 배 중심 반응에서 역할을 할 수 있는 다른 면역 조절제의 비제한적인 예는 ICOS-ICOSL, CD40-40L, CD28/B7, PD-1/L1, IL-4/IL4R, IL21/IL21R, TLR4, TLR7, TLR8, TLR9, CD180, CD22, 및 이들의 조합을 포함한다.
일부 양태에서, 면역 조절제는 T-세포 수용체(TCR) 또는 이의 유도체를 포함한다. 소정의 양태에서, 면역 조절제는 TCR α-사슬 또는 이의 유도체이다. 다른 양태에서, 면역 조절제는 TCR β-사슬 또는 이의 유도체이다. 추가의 양태에서, 면역 조절제는 T-세포의 동시수용체 또는 이의 유도체이다.
일부 양태에서, 면역 조절제는 키메라 항원 수용체(CAR) 또는 이의 유도체를 포함한다. 소정의 양태에서, CAR은 본원에 개시된 항원(예를 들어, 종양 항원, 예를 들어 알파-태아단백질(AFP), 암배아 항원(CEA), 상피 종양 항원(ETA), 뮤신 1(MUC1), Tn-MUC1, 뮤신 16(MUC16), 티로시나제, 흑색종-연관된 항원(MAGE), 종양 단백질 p53(p53), CD4, CD8, CD45, CD80, CD86, 예정사 리간드 1(PD-L1), 예정사 리간드 2(PD-L2), NY-ESO-1, PSMA, TAG-72, HER2, GD2, cMET, EGFR, 메소텔린, VEGFR, 알파-엽산 수용체, CE7R, IL-3, 암-고환 항원, MART-1 gp100 및 TNF-관련된 아폽토시스 유도-리간드) 중 하나 이상에 결합한다.
일부 양태에서, 면역 조절제는 T-세포 수용체 또는 동시수용체의 활성인자를 포함한다. 소정의 양태에서, 면역조절 성분은 CD3의 활성인자이다. 소정의 양태에서, 활성인자는 CD3의 단일클론 항체의 단편이다. 소정의 양태에서, 항체 단편은 CD3에 대한 단일클론 항체의 scFv, (scFv)2, Fab, Fab', 및 F(ab')2, F(ab1)2, Fv, dAb 또는 Fd이다. 소정의 양태에서, 활성인자는 CD3에 대한 나노바디, 이중특이적 항체 또는 다중특이적 항체이다. 소정의 양태에서, 면역조절 성분은 CD28의 활성인자이다. 소정의 양태에서, 활성인자는 CD28의 단일클론 항체의 단편이다. 소정의 양태에서, 항체 단편은 CD28의 단일클론 항체의 scFv, (scFv)2, Fab, Fab', 및 F(ab')2, F(ab1)2, Fv, dAb 또는 Fd이다. 소정의 양태에서, 활성인자는 CD28에 대한 나노바디, 이중특이적 항체 또는 다중특이적 항체이다.
일부 양태에서, 면역 조절제는 관용성 유도제를 포함한다. 소정의 양태에서, 관용성 유도제는 NF-κB 억제제를 포함한다. 본 개시내용과 사용될 수 있는 NF-κB 억제제의 비제한적인 예는 IKK 복합체 억제제(예를 들어, TPCA-1, NF-κB 활성화 억제제 VI(BOT-64), BMS 345541, 암렉사녹스(Amlexanox), SC-514(GK 01140), IMD 0354, IKK-16), IκB 분해 억제제(예를 들어, BAY 11-7082, MG-115, MG-132, 락타시스틴, 에폭소미신, 파르테놀리드, 카르필조밉, MLN-4924(페보네디스타트)), NF-κB 핵 전좌 억제제(예를 들어, JSH-23, Rolipram), p65 아세틸화 억제제(예를 들어, 갈산, 아나카르드산), NF-κB-DNA 결합 억제제(예를 들어, GYY 4137, p-XSC, CV 3988, 프로스타글란딘 E2(PGE2)), NF-κB 전사촉진 억제제(예를 들어, LY 294002, 보르트만닌, 메살라민), 또는 이들의 조합을 포함한다. 또한 Gupta, S.C., 등, Biochim Biophys Acta 1799:775-787 (2010)을 참조하고, 이것은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다. 일부 양태에서, NF-κB 활성을 억제할 수 있고 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)와 사용될 수 있는 면역 조절제는 NF-κB를 특이적으로 표적화하는 안티센스-올리고뉴클레오타이드를 포함한다. 추가의 양태에서, 관용성을 유도할 수 있는 면역 조절제는 COX-2 억제제, mTOR 억제제(예를 들어, 라파마이신 및 유도체, 예를 들어 안티센스 올리고뉴클레오타이드 표적화 mTor), 프로스타글란딘, 비스테로이드성 소염제(NSAIDS), 안티류코트리엔, 아릴 탄화수소 수용체(AhR) 리간드, 비타민 D, 레티노산, 스테로이드, Fas 수용체/리간드, CD22 리간드, IL-10, IL-35, IL-27, 대사 조절제(예를 들어, 글루타메이트), 글리칸(예를 들어, ES62, LewisX, LNFPIII), 퍼옥시좀 증식자-활성화된 수용체(PPAR) 작용제, 수용체의 면역글로불린-유사 전사체(ILT) 패밀리(예를 들어, ILT3, ILT4, HLA-G, ILT-2), 미노사이클린, TLR4 작용제, 또는 이들의 조합을 포함한다.
일부 양태에서, 면역 조절제는 작용제이다. 소정의 양태에서, 작용제는 내인성 작용제, 예컨대 호르몬 또는 신경전달물질이다. 다른 양태에서, 작용제는 외인성 작용제, 예컨대 약물이다. 일부 양태에서, 작용제는 수용체에 대한 결합 없이 작용제 반응을 생성할 수 있는 물리적 작용제이다. 일부 양태에서, 작용제는 내인성 작용제보다 더 높은 최대 반응을 생성할 수 있는 슈퍼작용제이다. 소정의 양태에서, 작용제는 수용체에서 완전 효능을 갖는 완전 작용제이다. 다른 양태에서, 작용제는 완전 작용제에 비해 수용체에서 오직 부분 효능을 갖는 부분 작용제이다. 일부 양태에서, 작용제는 수용체의 구성적 활성을 억제할 수 있는 역작용제이다. 일부 양태에서, 작용제는 수용체에서 효과를 생성하기 위해 다른 동시작용제와 작동하는 동시작용제이다. 소정의 양태에서, 작용제는 공유 결합의 형성을 통해 수용체에 영구적으로 결합하는 가역적 작용제이다. 소정의 양태에서, 작용제는 수용체의 특이적 타입에 대한 선택적 작용제이다.
일부 양태에서, 면역 조절제는 길항제이다. 구체적인 양태에서, 길항제는 수용체를 활성화하지 않으면서 내인성 리간드 또는 작용제와 동일한 결합 부위에서 수용체에 가역적으로 결합하는 경쟁적 길항제이다. 경쟁적 길항제는 최대 반응을 달성하는 데 필요한 작용제의 양에 영향을 미칠 수 있다. 다른 양태에서, 길항제는 수용체의 활성 부위 또는 수용체의 알로스테릭 부위에 결합하는 비경쟁적 길항제이다. 비경쟁적 길항제는 임의의 양의 작용제에 의해 획득될 수 있는 최대 반응의 규모를 감소시킬 수 있다. 추가의 양태에서, 길항제는 별개의 알로스테릭 결합 부위에 대한 결합 전에 작용제에 의한 수용체 활성화를 요하는 비경쟁적 길항제이다.
일부 양태에서, 면역 조절제는 항체 또는 항원-결합 단편을 포함한다. 면역조절 성분은 전체 길이 단백질 또는 이의 단편일 수 있다. 항체 또는 항원-결합 단편은 천연 원천으로부터 유래되거나, 부분적으로 또는 전체로 합성으로 생산될 수 있다. 일부 양태에서, 항체는 단일클론 항체이다. 이러한 양태의 일부에서, 단일클론 항체는 IgG 항체이다. 소정의 양태에서, 단일클론 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4이다. 일부 다른 양태에서, 항체는 다중클론 항체이다. 소정의 양태에서, 항원-결합 단편은 Fab, Fab', 및 F(ab')2, F(ab1)2, Fv, dAb, 및 Fd 단편으로부터 선택된다. 소정의 양태에서, 항원-결합 단편은 scFv 또는 (scFv)2 단편이다. 소정의 다른 양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 NANOBODY®(단일-도메인 항체)이다. 일부 양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 이중특이적 또는 다중특이적 항체이다.
다양한 양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 완전히 인간이다. 일부 양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 인간화된다. 일부 양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 키메라이다. 이러한 양태의 일부에서, 키메라 항체는 비인간 V 영역 도메인 및 인간 C 영역 도메인을 갖는다. 일부 양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 비인간, 예컨대 쥣과 또는 수의학적이다.
소정의 양태에서, 면역조절 성분은 폴리뉴클레오타이드이다. 이러한 양태의 일부에서, 폴리뉴클레오타이드는 mRNA, miRNA, siRNA, 안티센스 올리고뉴클레오타이드(예를 들어, 안티센스 RNA 또는 안티센스 DNA), 포스포로디아미데이트 모르폴리노 올리고머(PMO), 펩타이드-접합된 포스포로디아미데이트 모르폴리노 올리고머(PPMO), shRNA, lncRNA, dsDNA, 및 이들의 조합을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 일부 양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 RNA(예를 들어, mRNA, miRNA, siRNA, 안티센스 올리고뉴클레오타이드(예를 들어, 안티센스 RNA), shRNA 또는 lncRNA)이다. 이러한 양태의 일부에서, 폴리뉴클레오타이드가 mRNA일 때, 이것은 원하는 폴리펩타이드로 번역될 수 있다. 일부 양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 마이크로RNA(miRNA) 또는 pre-miRNA 분자이다. 이러한 양태의 일부에서, miRNA 분자가 표적 세포에서 자연적 mRNA를 침묵화시킬 수 있도록 miRNA는 표적 세포의 세포질로 전달된다. 일부 양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 종양유전자 또는 다른 이상조절 폴리펩타이드의 발현을 방해할 수 있는 소간섭 RNA(siRNA) 또는 짧은 헤어핀 RNA(shRNA)이다. 이러한 양태의 일부에서, siRNA 분자가 표적 세포에서 자연적 mRNA를 침묵화시킬 수 있도록 siRNA는 표적 세포의 세포질로 전달된다. 일부 양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 mRNA에 상보성인 안티센스 올리고뉴클레오타이드(예를 들어, 안티센스 RNA)이다. 일부 양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 유전자 발현을 조절하고 질환을 조절할 수 있는 긴 비암호화 RNA(lncRNA)이다. 일부 양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 RNA로 전사될 수 있는 DNA이다. 이러한 양태의 일부에서, 전사된 RNA는 원하는 폴리펩타이드로 번역될 수 있다.
일부 양태에서, 면역조절 성분은 단백질, 펩타이드, 당지질 또는 당단백질이다.
다양한 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀) 조성물은 원자, 분자 등의 혼합물, 융합체, 조합 및 접합체를 포함하는 2개 이상의 상기 언급된 면역조절 성분을 포함한다. 일부 양태에서, 상기 조성물은 막과 연관되거나 세포외 소포(예를 들어, 엑소좀)의 둘러싸인 부피 내에 둘러싸인 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개 또는 12개의 상이한 면역조절 성분을 포함한다. 소정의 양태에서, 상기 조성물은 폴리펩타이드와 조합된 핵산을 포함한다. 소정의 양태에서, 상기 조성물은 서로에 접합된 2개 이상의 폴리펩타이드를 포함한다. 소정의 양태에서, 상기 조성물은 생물학적 활성 분자에 접합된 단백질을 포함한다. 이러한 양태의 일부에서, 생물학적 활성 분자는 프로드럭이다.
II.D 스캐폴드 X-조작된 EV, 예를 들어 엑소좀
일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 이의 조성이 변형된 막을 포함한다. 예를 들어, 이의 막 조성은 막의 단백질, 지질 또는 글리칸 함량을 변화시켜 변형될 수 있다.
일부 양태에서, 표면-조작된 EV, 예를 들어 엑소좀은 PEG-유도된 융합 및/또는 초음파 융합과 같은 화학적 방법 및/또는 물리적 방법에 의해 생성된다. 다른 양태에서, 표면-조작된 EV, 예를 들어 엑소좀은 유전자 조작에 의해 생성된다. 유전자-변형된 생산자 세포 또는 유전자-변형된 세포의 자손으로부터 생성된 EV, 예를 들어 엑소좀은 변형된 막 조성을 함유할 수 있다. 일부 양태에서, 표면-조작된 EV, 예를 들어 엑소좀은 더 높은 밀도 또는 더 낮은 밀도(예를 들어, 더 높은 수)에서 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 엑소좀 단백질, 예를 들어 스캐폴드 X)를 가질 수 있거나, 스캐폴드 모이어티의 변이체 또는 단편을 포함한다.
예를 들어, 표면(예를 들어, 스캐폴드 X)-조작된 EV는 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 엑소좀 단백질, 예를 들어 스캐폴드 X)를 암호화하는 외인성 서열 또는 이의 변이체 또는 단편으로부터 형질전환된 세포(예를 들어, HEK293 세포)로부터 생산될 수 있다. 외인성 서열로부터 발현된 스캐폴드 모이어티를 포함하는 EV는 변형된 막 조성을 포함할 수 있다.
스캐폴드 모이어티의 다양한 변형 또는 단편은 본 발명의 양태에 대해 사용될 수 있다. 예를 들어, 결합제에 향상된 친화도를 갖도록 변형된 스캐폴드 모이어티는 결합제를 사용하여 정제될 수 있는 표면-조작된 EV를 생성하기 위해 사용될 수 있다. EV 및/또는 막에 보다 효과적으로 표적화되도록 변형된 스캐폴드 모이어티가 사용될 수 있다. 엑소좀 막에 대한 특이적이고 효과적인 표적화에 필요한 최소 단편을 포함하도록 변형된 스캐폴드 모이어티가 또한 사용될 수 있다.
스캐폴드 모이어티는 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제에 대한 융합 분자, 예를 들어 스캐폴드 X의 융합 분자로서 발현되도록 조작될 수 있다. 예를 들어, 융합 분자는 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제에 연결된 본원에 개시된 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X, 예를 들어 PTGFRN, BSG, IGSF2, IGSF3, IGSF8, ITGB1, ITGA4, SLC3A2, ATP 수송체, 또는 이의 단편 또는 변이체)를 포함할 수 있다. 융합 분자의 경우에, 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제는 천연 펩타이드, 재조합 펩타이드, 합성 펩타이드, 또는 임의의 이들의 조합일 수 있다.
일부 양태에서, 본원에 기재된 표면(예를 들어, 스캐폴드 X)-조작된 EV는 당해 분야에 공지된 EV와 비교하여 더 우수한 특징을 나타낸다. 예를 들어, 표면(예를 들어, 스캐폴드 X)-조작은 천연 발생 EV 또는 종래의 엑소좀 단백질을 사용하여 제조된 EV보다 이의 표면에서 보다 고도로 농후화된 변형된 단백질을 함유한다. 더욱이, 본 발명의 표면(예를 들어, 스캐폴드 X)-조작된 EV는 자연 발생 EV 또는 종래의 엑소좀 단백질을 사용하여 제조된 EV와 비교하여 더 높은, 더 특이적인 또는 더 제어된 생물학적 활성을 가질 수 있다.
일부 양태에서, 스캐폴드 X는 프로스타글란딘 F2 수용체 음성 조절자(PTGFRN 폴리펩타이드)를 포함한다. PTGFRN 단백질은 CD9 파트너 1(CD9P-1), Glu-Trp-Ile EWI 모티프-함유 단백질 F(EWI-F), 프로스타글란딘 F2-알파 수용체 조절성 단백질, 프로스타글란딘 F2-알파 수용체-연관된 단백질 또는 CD315로 칭할 수도 있다. 인간 PTGFRN 단백질의 전체 길이 아미노산 서열(Uniprot 수탁 번호 Q9P2B2)은 표 7에 서열 번호 1에 기재되어 있다. PTGFRN 폴리펩타이드는 신호 펩타이드(서열 번호 1의 1번 내지 25번 아미노산), 세포외 도메인(서열 번호 1의 26번 내지 832번 아미노산), 막관통 도메인(서열 번호 1의 833번 내지 853번 아미노산) 및 세포질 도메인(서열 번호 1의 854번 내지 879번 아미노산)을 함유한다. 성숙 PTGFRN 폴리펩타이드는 신호 펩타이드, 즉 서열 번호 1의 26 내지 879번 아미노산이 없는 서열 번호 1로 이루어진다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 PTGFRN 폴리펩타이드 단편은 PTGFRN 폴리펩타이드의 막관통 도메인을 포함한다. 다른 양태에서, 본 개시내용에 유용한 PTGFRN 폴리펩타이드 단편은 PTGFRN 폴리펩타이드의 막관통 도메인 및 (i) 막관통 도메인의 N 말단에서 적어도 5개, 적어도 10개, 적어도 15개, 적어도 20개, 적어도 25개, 적어도 30개, 적어도 40개, 적어도 50개, 적어도 70개, 적어도 80개, 적어도 90개, 적어도 100개, 적어도 110개, 적어도 120개, 적어도 130개, 적어도 140개, 적어도 150개의 아미노산, (ii) 막관통 도메인의 C 말단에서 적어도 5개, 적어도 10개, 적어도 15개, 적어도 20개 또는 적어도 25개의 아미노산, 또는 (i) 및 (ii) 둘 다를 포함한다.
일부 양태에서, PTGFRN 폴리펩타이드의 단편은 하나 이상의 기능성 또는 구조적 도메인, 예컨대 IgV가 결여된다.
다른 양태에서, 스캐폴드 X는 서열 번호 1의 26번 내지 879번 아미노산과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 다른 양태에서, 스캐폴드 X는 서열 번호 33과 적어도 약 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 다른 양태에서, 스캐폴드 X는 1개의 아미노산 돌연변이, 2개의 아미노산 돌연변이, 3개의 아미노산 돌연변이, 4개의 아미노산 돌연변이, 5개의 아미노산 돌연변이, 6개의 아미노산 돌연변이 또는 7개의 아미노산 돌연변이를 제외하고 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함한다. 돌연변이는 치환, 삽입, 결실, 또는 임의의 이들의 조합일 수 있다. 일부 양태에서, 스캐폴드 X는 서열 번호 33의 아미노산 서열 및 서열 번호 33의 N 말단 및/또는 C 말단에서 1개의 아미노산, 2개의 아미노산, 3개의 아미노산, 4개의 아미노산, 5개의 아미노산, 6개의 아미노산, 7개의 아미노산, 8개의 아미노산, 9개의 아미노산, 10개의 아미노산, 11개의 아미노산, 12개의 아미노산, 13개의 아미노산, 14개의 아미노산, 15개의 아미노산, 16개의 아미노산, 17개의 아미노산, 18개의 아미노산, 19개의 아미노산 또는 20개의 아미노산, 또는 이것 초과를 포함한다.
다른 양태에서, 스캐폴드 X는 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6 또는 서열 번호 7과 적어도 약 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 다른 양태에서, 스캐폴드 X는 1개의 아미노산 돌연변이, 2개의 아미노산 돌연변이, 3개의 아미노산 돌연변이, 4개의 아미노산 돌연변이, 5개의 아미노산 돌연변이, 6개의 아미노산 돌연변이 또는 7개의 아미노산 돌연변이를 제외하고 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6 또는 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함한다. 돌연변이는 치환, 삽입, 결실, 또는 임의의 이들의 조합일 수 있다. 일부 양태에서, 스캐폴드 X는 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6 또는 서열 번호 7의 아미노산 서열 및 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4, 서열 번호 5, 서열 번호 6 또는 서열 번호 7의 N 말단 및/또는 C 말단에서 1개의 아미노산, 2개의 아미노산, 3개의 아미노산, 4개의 아미노산, 5개의 아미노산, 6개의 아미노산, 7개의 아미노산, 8개의 아미노산, 9개의 아미노산, 10개의 아미노산, 11개의 아미노산, 12개의 아미노산, 13개의 아미노산, 14개의 아미노산, 15개의 아미노산, 16개의 아미노산, 17개의 아미노산, 18개의 아미노산, 19개의 아미노산 또는 20개의 아미노산, 또는 이것 초과를 포함한다.
Figure pct00041
Figure pct00042
일부 양태에서, 스캐폴드 X는 서열 번호 9로 표시된 바시긴(BSG 단백질)을 포함한다. BSG 단백질은 5F7, 콜라겐분해효소 자극 인자, 세포외 매트릭스 금속단백분해효소 유도자(EMMPRIN), 백혈구 활성화 항원 M6, OK 혈액형 항원, 종양 세포-유래된 콜라겐분해효소 자극 인자(TCSF) 또는 CD147로도 공지되어 있다. 인간 BSG 단백질에 대한 Uniprot 번호는 P35613이다. BSG 단백질의 신호 펩타이드는 서열 번호 9의 1번 내지 21번 아미노산이다. 서열 번호 9의 138번 내지 323번 아미노산은 세포외 도메인이고, 324번 내지 344번 아미노산은 막관통 도메인이고, 서열 번호 9의 345번 내지 385번 아미노산은 세포질 도메인이다.
다른 양태에서, 스캐폴드 X는 서열 번호 9의 22번 내지 385번 아미노산과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양태에서, BSG 폴리펩타이드의 단편은 하나 이상의 기능성 또는 구조적 도메인, 예컨대 IgV, 예를 들어 서열 번호 9의 221번 내지 315번 아미노산이 결여된다. 다른 양태에서, 스캐폴드 X는 서열 번호 10, 서열 번호 11 또는 서열 번호 12와 적어도 약 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 다른 양태에서, 스캐폴드 X는 1개의 아미노산 돌연변이, 2개의 아미노산 돌연변이, 3개의 아미노산 돌연변이, 4개의 아미노산 돌연변이, 5개의 아미노산 돌연변이, 6개의 아미노산 돌연변이 또는 7개의 아미노산 돌연변이를 제외하고 서열 번호 10, 서열 번호 11 또는 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함한다. 돌연변이는 치환, 삽입, 결실, 또는 임의의 이들의 조합일 수 있다. 일부 양태에서, 스캐폴드 X는 서열 번호 10, 서열 번호 11 또는 서열 번호 12의 아미노산 서열 및 서열 번호 10, 서열 번호 11 또는 서열 번호 12의 N 말단 및/또는 C 말단에서 1개의 아미노산, 2개의 아미노산, 3개의 아미노산, 4개의 아미노산, 5개의 아미노산, 6개의 아미노산, 7개의 아미노산, 8개의 아미노산, 9개의 아미노산, 10개의 아미노산, 11개의 아미노산, 12개의 아미노산, 13개의 아미노산, 14개의 아미노산, 15개의 아미노산, 16개의 아미노산, 17개의 아미노산, 18개의 아미노산, 19개의 아미노산 또는 20개의 아미노산, 또는 이것 초과를 포함한다.
일부 양태에서, 스캐폴드 X는 CD81 파트너 3, Glu-Trp-Ile EWI 모티프-함유 단백질 2(EWI-2), 각질세포-연관된 막관통 단백질 4(KCT-4), LIR-D1, 프로스타글란딘 조절성-유사 단백질(PGRL) 또는 CD316로도 공지된 면역글로불린 슈퍼패밀리 구성원 8(IgSF8 또는 IGSF8 단백질)을 포함한다. 전체 길이 인간 IGSF8 단백질은 Uniprot에서 수탁 번호 Q969P0이고, 본원에서 서열 번호 14로 기재된다. 인간 IGSF8 단백질은 신호 펩타이드(서열 번호 14의 1번 내지 27번 아미노산), 세포외 도메인(서열 번호 14의 28번 내지 579번 아미노산), 막관통 도메인(서열 번호 14의 580번 내지 600번 아미노산) 및 세포질 도메인(서열 번호 14의 601번 내지 613번 아미노산)을 갖는다.
다른 양태에서, 스캐폴드 X는 서열 번호 14의 28번 내지 613번 아미노산과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양태에서, IGSF8 단백질은 하나 이상의 기능성 또는 구조적 도메인, 예컨대 IgV가 결여된다. 다른 양태에서, 스캐폴드 X는 서열 번호 15, 서열 번호 16, 서열 번호 17 또는 서열 번호 18과 적어도 약 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 다른 양태에서, 스캐폴드 X는 1개의 아미노산 돌연변이, 2개의 아미노산 돌연변이, 3개의 아미노산 돌연변이, 4개의 아미노산 돌연변이, 5개의 아미노산 돌연변이, 6개의 아미노산 돌연변이 또는 7개의 아미노산 돌연변이를 제외하고 서열 번호 15, 서열 번호 16, 서열 번호 17 또는 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함한다. 돌연변이는 치환, 삽입, 결실, 또는 임의의 이들의 조합일 수 있다. 일부 양태에서, 스캐폴드 X는 서열 번호 15, 서열 번호 16, 서열 번호 17 또는 서열 번호 18의 아미노산 서열 및 서열 번호 15, 서열 번호 16, 서열 번호 17 또는 서열 번호 18의 N 말단 및/또는 C 말단에서 1개의 아미노산, 2개의 아미노산, 3개의 아미노산, 4개의 아미노산, 5개의 아미노산, 6개의 아미노산, 7개의 아미노산, 8개의 아미노산, 9개의 아미노산, 10개의 아미노산, 11개의 아미노산, 12개의 아미노산, 13개의 아미노산, 14개의 아미노산, 15개의 아미노산, 16개의 아미노산, 17개의 아미노산, 18개의 아미노산, 19개의 아미노산 또는 20개의 아미노산, 또는 이것 초과를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시내용에 대한 스캐폴드 X는 Glu-Trp-Ile EWI 모티프 함유 단백질 3(EWI-3)으로도 공지되고, 서열 번호 20의 아미노산 서열로 기재된 면역글로불린 슈퍼패밀리 구성원 3(IgSF3 또는 IGSF3 단백질)을 포함한다. 인간 IGSF3 단백질은 신호 펩타이드(서열 번호 20의 1번 내지 19번 아미노산 ), 세포외 도메인(서열 번호 20의 20번 내지 1124번 아미노산), 막관통 도메인(서열 번호 20의 1125번 내지 1145번 아미노산) 및 세포질 도메인(서열 번호 20의 1146번 내지 1194번 아미노산)을 갖는다.
다른 양태에서, 스캐폴드 X는 서열 번호 20의 28번 내지 613번 아미노산과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양태에서, IGSF3 단백질은 하나 이상의 기능성 또는 구조적 도메인, 예컨대 IgV가 결여된다.
일부 양태에서, 본 개시내용에 대한 스캐폴드 X는 피브로넥틴 수용체 아단위 베타, 당단백질 IIa(GPIIA), VLA-4 아단위 베타 또는 CD29로도 공지되고, 서열 번호 21의 아미노산 서열로 기재된 인테그린 베타-1(ITGB1 단백질)을 포함한다. 인간 ITGB1 단백질은 신호 펩타이드(서열 번호 21의 1번 내지 20번 아미노산), 세포외 도메인(서열 번호 21의 21번 내지 728번 아미노산), 막관통 도메인(서열 번호 21의 729번 내지 751번 아미노산) 및 세포질 도메인(서열 번호 21의 752번 내지 798번 아미노산)을 갖는다.
다른 양태에서, 스캐폴드 X는 서열 번호 21의 21번 내지 798번 아미노산과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양태에서, ITGB1 단백질은 하나 이상의 기능성 또는 구조적 도메인, 예컨대 IgV가 결여된다.
다른 양태에서, 스캐폴드 X는 신호 펩타이드(서열 번호 22의 1번 내지 33번 아미노산)가 없는 서열 번호 22와 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ITGA4 단백질을 포함한다. 일부 양태에서, ITGA4 단백질은 하나 이상의 기능성 또는 구조적 도메인, 예컨대 IgV가 결여된다.
다른 양태에서, 스캐폴드 X는 신호 펩타이드가 없는 서열 번호 23과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 SLC3A2 단백질을 포함한다. 일부 양태에서, SLC3A2 단백질은 하나 이상의 기능성 또는 구조적 도메인, 예컨대 IgV가 결여된다.
다른 양태에서, 스캐폴드 X는 신호 펩타이드가 없는 서열 번호 24와 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ATP1A1 단백질을 포함한다. 일부 양태에서, ATP1A1 단백질은 하나 이상의 기능성 또는 구조적 도메인, 예컨대 IgV가 결여된다.
다른 양태에서, 스캐폴드 X는 신호 펩타이드가 없는 서열 번호 25와 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ATP1A2 단백질을 포함한다. 일부 양태에서, ATP1A2 단백질은 하나 이상의 기능성 또는 구조적 도메인, 예컨대 IgV가 결여된다.
다른 양태에서, 스캐폴드 X는 신호 펩타이드가 없는 서열 번호 26과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ATP1A3 단백질을 포함한다. 일부 양태에서, ATP1A3 단백질은 하나 이상의 기능성 또는 구조적 도메인, 예컨대 IgV가 결여된다.
다른 양태에서, 스캐폴드 X는 신호 펩타이드가 없는 서열 번호 27과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ATP1A4 단백질을 포함한다. 일부 양태에서, ATP1A4 단백질은 하나 이상의 기능성 또는 구조적 도메인, 예컨대 IgV가 결여된다.
다른 양태에서, 스캐폴드 X는 신호 펩타이드가 없는 서열 번호 28과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ATP1A5 단백질을 포함한다. 일부 양태에서, ATP1A5 단백질은 하나 이상의 기능성 또는 구조적 도메인, 예컨대 IgV가 결여된다.
다른 양태에서, 스캐폴드 X는 신호 펩타이드가 없는 서열 번호 29와 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ATP2B1 단백질을 포함한다. 일부 양태에서, ATP2B1 단백질은 하나 이상의 기능성 또는 구조적 도메인, 예컨대 IgV가 결여된다.
다른 양태에서, 스캐폴드 X는 신호 펩타이드가 없는 서열 번호 30과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ATP2B2 단백질을 포함한다. 일부 양태에서, ATP2B2 단백질은 하나 이상의 기능성 또는 구조적 도메인, 예컨대 IgV가 결여된다.
다른 양태에서, 스캐폴드 X는 신호 펩타이드가 없는 서열 번호 31과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ATP2B3 단백질을 포함한다. 일부 양태에서, ATP2B3 단백질은 하나 이상의 기능성 또는 구조적 도메인, 예컨대 IgV가 결여된다.
다른 양태에서, 스캐폴드 X는 신호 펩타이드가 없는 서열 번호 32와 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 ATP2B4 단백질을 포함한다. 일부 양태에서, ATP2B4 단백질은 하나 이상의 기능성 또는 구조적 도메인, 예컨대 IgV가 결여된다.
다른 양태에서, 스캐폴드 X는 신호 펩타이드가 없는 서열 번호 34와 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 IGSF2 단백질을 포함한다. 일부 양태에서, IGSF2 단백질은 하나 이상의 기능성 또는 구조적 도메인, 예컨대 IgV가 결여된다.
다른 스캐폴드 X 단백질의 비제한적인 예는 2019년 2월 5일에 등록된 미국 특허 US10195290B1에서 찾을 수 있고, 상기 문헌은 그 전체가 참고로 포함된다.
일부 양태에서, 서열은 자연적 단백질의 N-말단으로부터 적어도 5개, 10개, 50개, 100개, 200개, 300개, 400개, 500개, 600개, 700개 또는 800개의 아미노산이 결여된 스캐폴드 모이어티의 단편을 암호화한다. 일부 양태에서, 서열은 자연적 단백질의 C-말단으로부터 적어도 5개, 10개, 50개, 100개, 200개, 300개, 400개, 500개, 600개, 700개 또는 800개의 아미노산이 결여된 스캐폴드 모이어티의 단편을 암호화한다. 일부 양태에서, 서열은 자연적 단백질의 N-말단 및 C-말단으로부터 적어도 5개, 10개, 50개, 100개, 200개, 300개, 400개, 500개, 600개, 700개 또는 800개의 아미노산이 결여된 스캐폴드 모이어티의 단편을 암호화한다. 일부 양태에서, 서열은 자연적 단백질의 하나 이상의 기능성 또는 구조적 도메인이 결여된 스캐폴드 모이어티의 단편을 암호화한다.
일부 양태에서, 스캐폴드 모이어티, 예를 들어 스캐폴드 X, 예를 들어 PTGFRN 단백질은 하나 이상의 이종성 단백질에 연결된다. 하나 이상의 이종성 단백질은 스캐폴드 모이어티의 N-말단에 연결될 수 있다. 하나 이상의 이종성 단백질은 스캐폴드 모이어티의 C-말단에 연결될 수 있다. 일부 양태에서, 하나 이상의 이종성 단백질은 스캐폴드 모이어티의 N-말단 및 C-말단 둘 다에 연결된다. 일부 양태에서, 이종성 단백질은 포유동물 단백질이다. 일부 양태에서, 이종성 단백질은 인간 단백질이다.
일부 양태에서, 스캐폴드 X는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면에 및 외부 표면 상에 임의의 모이어티를 동시에 연결하도록 사용될 수 있다. 예를 들어, PTGFRN 폴리펩타이드는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 이외에 내강 내에서(예를 들어, 내강 표면 상에) 본원에 개시된 하나 이상의 페이로드(예를 들어, 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제)를 연결하도록 사용될 수 있다. 따라서, 소정의 양태에서, 스캐폴드 X는 이중 목적, 예를 들어 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 항원 및 외부 표면 상의 아쥬반트 또는 면역 조절제, EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면 상의 항원 및 내강 표면 상의 아쥬반트 또는 면역 조절제, EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 아쥬반트 및 외부 표면 상의 면역 조절제, 또는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상의 면역 조절제 및 외부 표면 상의 아쥬반트를 위해 사용될 수 있다.
II.E 스캐폴드 Y-조작된 EV, 예를 들어 엑소좀
일부 양태에서, 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 천연 발생 EV의 것과 상이한 내부 공간(즉, 내강)을 포함한다. 예를 들어, EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면에서의 조성물이 천연-발생 엑소좀의 것과 상이한 단백질, 지질 또는 글리칸 함량을 갖도록 EV가 변할 수 있다.
일부 양태에서, 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 엑소좀 단백질, 예를 들어 스캐폴드 Y)를 암호화하는 외인성 서열로 형질전환된 세포 또는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면의 조성 또는 함량을 변경하는 스캐폴드 모이어티의 변형 또는 단편으로부터 조작된 EV, 예를 들어 엑소좀을 제조할 수 있다. EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면 상에서 발현될 수 있는 엑소좀 단백질의 다양한 변형 또는 단편은 본 개시내용의 양태에 대해 사용될 수 있다.
일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면을 변경할 수 있는 엑소좀 단백질은 미리스토일화된 알라닌 농후 단백질 키나제 C 기질(MARCKS) 단백질, 미리스토일화된 알라닌 농후 단백질 키나제 C 기질 유사 1(MARCKSL1) 단백질, 뇌 산 가용성 단백질 1(BASP1) 단백질, 또는 임의의 이들의 조합을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
일부 양태에서, 스캐폴드 Y는 MARCKS 단백질(Uniprot 수탁 번호 P29966)을 포함한다. MARCKS 단백질은 단백질 키나제 C 기질, 80 kDa 단백질, 경쇄로도 알려져 있다. 전체 길이 인간 MARCKS 단백질은 332개의 아미노산 길이이고, 152번 내지 176번 아미노산 잔기에서의 칼모듈린-결합 도메인을 포함한다. 일부 양태에서, 스캐폴드 Y는 MARCKSL1 단백질(Uniprot 수탁 번호 P49006)을 포함한다. MARCKSL1 단백질은 MARCKS-유사 단백질 1 및 대식세포 미리스토일화된 알라닌-농후 C 키나제 기질로도 공지되어 있다. 전체 길이 인간 MARCKSL1 단백질은 195개의 아미노산 길이이다. MARCKSL1 단백질은 87번 내지 110번 아미노산 잔기에서 지질-결합 및 칼모듈린-결합에 관여된 효과기 도메인을 갖는다. 일부 양태에서, 스캐폴드 Y는 BASP1 단백질(Uniprot 수탁 번호 P80723)을 포함한다. BASP1 단백질은 22 kDa 뉴런 조직-농후화된 산성 단백질 또는 뉴런 축색돌기 막 단백질 NAP-22로도 공지되어 있다. 전체 길이 인간 BASP1 단백질 서열(이성질체 1)은 227개의 아미노산 길이이다. 대안적인 스플라이싱에 의해 제조된 이성질체는 서열 번호 49의 88번 내지 141번 아미노산이 분실된다(이성질체 1). 표 8은 본원에 개시된 예시적인 스캐폴드 Y(즉, MARCKS, MARCKSL1 및 BASP1 단백질)에 대한 전체-길이 서열을 제공한다.
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성숙 BASP1 단백질 서열은 서열 번호 49로부터 제1 Met가 분실되고, 이에 따라 서열 번호 49의 2번 내지 227번 아미노산을 함유한다. 유사하게, 성숙 MARCKS 및 MARCKSL1 단백질은 또한 각각 서열 번호 47 및 48로부터의 제1 Met가 결여된다. 따라서, 성숙 MARCKS 단백질은 서열 번호 47의 2번 내지 332번 아미노산을 함유한다. 성숙 MARCKSL1 단백질은 서열 번호 48의 2번 내지 227번 아미노산을 함유한다.
다른 양태에서, 본 개시내용에 유용한 스캐폴드 Y는 서열 번호 49의 2번 내지 227번 아미노산과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 다른 양태에서, 스캐폴드 Y는 서열 번호 50 내지 서열 번호 155 중 어느 하나와 적어도 약 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 다른 양태에서, 본 개시내용에 유용한 스캐폴드 Y는 1개의 아미노산 돌연변이, 2개의 아미노산 돌연변이, 3개의 아미노산 돌연변이, 4개의 아미노산 돌연변이, 5개의 아미노산 돌연변이, 6개의 아미노산 돌연변이 또는 7개의 아미노산 돌연변이를 제외하고 서열 번호 49의 아미노산 서열을 포함한다. 돌연변이는 치환, 삽입, 결실, 또는 임의의 이들의 조합일 수 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 스캐폴드 Y는 서열 번호 50 내지 서열 번호 155 중 어느 하나의 아미노산 서열 및 서열 번호 50 내지 서열 번호 155의 N 말단 및/또는 C 말단에서 1개의 아미노산, 2개의 아미노산, 3개의 아미노산, 4개의 아미노산, 5개의 아미노산, 6개의 아미노산, 7개의 아미노산, 8개의 아미노산, 9개의 아미노산, 10개의 아미노산, 11개의 아미노산, 12개의 아미노산, 13개의 아미노산, 14개의 아미노산, 15개의 아미노산, 16개의 아미노산, 17개의 아미노산, 18개의 아미노산, 19개의 아미노산 또는 20개의 아미노산, 또는 이것 초과를 포함한다.
일부 양태에서, 임의의 서열 번호 47 내지 155의 단백질 서열은 본 개시내용에 대한 스캐폴드 Y(예를 들어, 항원 및/또는 아쥬반트 및/또는 면역 조절제에 연결된 스캐폴드 모이어티)이기에 충분하다.
소정의 양태에서, 본 개시내용에 유용한 스캐폴드 Y는 MGXKLSKKK를 갖는 펩타이드를 포함하고, 여기서 X는 알라닌 또는 임의의 다른 아미노산(서열 번호 163)이다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 스캐폴드 Y는 GXKLSKKK (S를 갖는 펩타이드를 포함하고, 여기서 X는 알라닌 또는 임의의 다른 아미노산(서열 번호 372)이다. 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 (M)(G)(π)(ξ)(φ/π)(S/A/G/N)(+)(+) 또는 (G)(π)(ξ)(φ/π)(S/A/G/N)(+)(+)의 서열을 갖는 펩타이드를 포함하고, 여기서 각각의 삽입어구로 제시된 위치는 아미노산을 나타내고, π는 (Pro, Gly, Ala, Ser)로 이루어진 군으로부터 선택된 임의의 아미노산이고, ξ는 (Asn, Gln, Ser, Thr, Asp, Glu, Lys, His, Arg)로 이루어진 군으로부터 선택된 임의의 아미노산이고, φ는 (Val, Ile, Leu, Phe, Trp, Tyr, Met)로 이루어진 군으로부터 선택된 임의의 아미노산이고, (+)는 (Lys, Arg, His)로 이루어진 군으로부터 선택된 임의의 아미노산이고; 위치 5는 (+)가 아니고, 위치 6은 (+)도 (Asp 또는 Glu)도 아니다. 추가의 양태에서, 본원에 기재된 엑소좀(예를 들어, 조작된 엑소좀)은 (M)(G)(π)(X)(φ/π)(π)(+)(+) 또는 (G)(π)(X)(φ/π)(π)(+)(+)의 서열을 갖는 펩타이드를 포함하고, 여기서 각각의 삽입어구로 제시된 위치는 아미노산을 나타내고, π는 (Pro, Gly, Ala, Ser)로 이루어진 군으로부터 선택된 임의의 아미노산이고, X는 임의의 아미노산이고, φ는 (Val, Ile, Leu, Phe, Trp, Tyr, Met)로 이루어진 군으로부터 선택된 임의의 아미노산이고, (+)는 (Lys, Arg, His)로 이루어진 군으로부터 선택된 임의의 아미노산이고; 위치 5는 (+)가 아니고, 위치 6은 (+)도 (Asp 또는 Glu)도 아니다. 아미노산 명명법에 대해 Aasland 등, FEBS Letters 513 (2002) 141-144를 참조한다.
다른 양태에서, 스캐폴드 X는 서열 번호 47 내지 155 중 어느 하나와 적어도 약 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본원에 기재된 스캐폴드 Y-조작된 EV, 예를 들어 엑소좀은 서열 번호 47 내지 서열 번호 155에 기재된 서열로 형질전환된 세포로부터 제조될 수 있다.
일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 스캐폴드 Y 단백질은 "N-말단 도메인"(ND) 및 "효과기 도메인"(ED)을 포함하고, 여기서 ND 및/또는 ED는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면과 회합된다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 스캐폴드 Y 단백질은 세포내 도메인, 막관통 도메인 및 세포외 도메인을 포함하고; 여기서 세포내 도메인은 "N-말단 도메인"(ND) 및 "효과기 도메인"(ED)을 포함하고, ND 및/또는 ED는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면과 회합된다. 본원에 사용된 "회합된"이라는 용어는 막 성분에 대한 공유 연결을 수반하지 않는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면과의 스캐폴드 단백질 사이의 상호작용을 지칭한다. 예를 들어, 본 개시내용에 유용한 스캐폴드는 예를 들어 지질 앵커(예를 들어, 미리스트산) 및/또는 막 인지질의 음성으로 하전된 헤드와 정전식으로 상호작용하는 다중염기성 도메인을 통해 EV의 내강 표면과 회합될 수 있다. 다른 양태에서, 스캐폴드 Y 단백질은 N-말단 도메인(ND) 및 효과기 도메인(ED)을 포함하고, 여기서 ND는 EV의 내강 표면과 회합되고, ED는 이온성 상호작용에 의해 EV의 내강 표면과 회합되고, ED는 서열에서 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개 또는 적어도 7개의 인접한 염기성 아미노산, 예를 들어 리신(Lys)을 포함한다.
다른 양태에서, 스캐폴드 Y 단백질은 N-말단 도메인(ND) 및 효과기 도메인(ED)을 포함하고, 여기서 ND는 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면과 회합되고, ED는 이온성 상호작용에 의해 EV의 내강 표면과 회합되고, ED는 서열에서 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개 또는 적어도 7개의 인접한 염기성 아미노산, 예를 들어 리신(Lys)을 포함한다.
일부 양태에서, ND는 지질화를 통해, 예를 들어 미리스토일화를 통해 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면과 회합된다. 일부 양태에서, ND는 N 말단에서 Gly를 갖는다. 일부 양태에서, N-말단 Gly는 미리스토일화된다.
일부 양태에서, ED는 이온성 상호작용에 의해 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면과 회합된다. 일부 양태에서, ED는 정전식 상호작용, 특히 유인성 정전식 상호작용에 의해 EV, 예를 들어 엑소좀의 내강 표면과 회합된다.
일부 양태에서, ED는 (i) 염기성 아미노산(예를 들어, 리신), 또는 (ii) 폴리펩타이드 서열에서 서로의 옆에 2개 이상의 염기성 아미노산(예를 들어, 리신)을 포함한다. 일부 양태에서, 염기성 아미노산은 리신(Lys; K), 아르기닌(Arg, R) 또는 히스티딘(His, H)이다. 일부 양태에서, 염기성 아미노산은 (Lys)n이고, 여기서 n은 1 내지 10의 정수이다.
다른 양태에서, ED는 적어도 리신을 포함하고, ND는 ED의 N 말단이 ND의 C 말단에서 리신에 직접 연결되면 C 말단에서의 리신을 포함하고, 즉 리신은 ED의 N 말단에 있고, ND의 C 말단에서 리신에 융합된다. 다른 양태에서, ED의 N 말단이 링커, 예를 들어 하나 이상의 아미노산에 의해 ND의 C 말단에 연결될 때 ED는 적어도 2개의 리신, 적어도 3개의 리신, 적어도 4개의 리신, 적어도 5개의 리신, 적어도 6개의 리신 또는 적어도 7개의 리신을 포함한다.
일부 양태에서, ED는 K, KK, KKK, KKKK(서열 번호 205), KKKKK(서열 번호 206), R, RR, RRR, RRRR(서열 번호 207); RRRRR(서열 번호 208), KR, RK, KKR, KRK, RKK, KRR, RRK, (K/R)(K/R)(K/R)(K/R)(서열 번호 209), (K/R)(K/R)(K/R)(K/R)(K/R)(서열 번호 210), 또는 임의의 이들의 조합을 포함한다. 일부 양태에서, ED는 KK, KKK, KKKK(서열 번호 205), KKKKK(서열 번호 206), 또는 임의의 이들의 조합을 포함한다. 일부 양태에서, ND는 G:X2:X3:X4:X5:X6에 기재된 것과 같은 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 G는 Gly을 나타내고; ":"은 펩타이드 결합을 나타내고, X2 내지 X6의 각각은 독립적으로 아미노산을 나타내고; X6은 염기성 아미노산을 나타낸다. 일부 양태에서, X6 아미노산은 Lys, Arg 및 His로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, X5 아미노산은 Pro, Gly, Ala 및 Ser로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, X2 아미노산은 Pro, Gly, Ala 및 Ser로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, X4는 Pro, Gly, Ala, Ser, Val, Ile, Leu, Phe, Trp, Tyr, Gln 및 Met로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 양태에서, 스캐폴드 Y 단백질은 N-말단 도메인(ND) 및 효과기 도메인(ED)을 포함하고, 여기서 ND는 G:X2:X3:X4:X5:X6에 기재된 것과 같은 아미노산 서열을 포함하고, G는 Gly을 나타내고; ":"은 펩타이드 결합을 나타내고, X2 내지 X6의 각각은 독립적으로 아미노산이고; X6은 염기성 아미노산을 포함하고, ED는 펩타이드 결합에 의해 X6에 연결되고, ED의 N 말단에서 적어도 하나의 리신을 포함한다.
일부 양태에서, 스캐폴드 Y 단백질의 ND는 G:X2:X3:X4:X5:X6의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 G는 Gly를 나타내고; ":"는 펩타이드 결합을 나타내고; X2는 Pro, Gly, Ala 및 Ser로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산을 나타내고; X3은 임의의 아미노산을 나타내고; X4는 Pro, Gly, Ala, Ser, Val, Ile, Leu, Phe, Trp, Tyr, Gln 및 Met로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산을 나타내고; X5는 Pro, Gly, Ala 및 Ser로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산을 나타내고; X6은 Lys, Arg 및 His로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산을 나타낸다.
일부 양태에서, X3 아미노산은 Asn, Gln, Ser, Thr, Asp, Glu, Lys, His 및 Arg로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 양태에서, ND 및 ED는 링커에 의해 연결된다. 일부 양태에서, 링커는 하나 이상의 아미노산을 포함한다. 일부 양태에서, "링커"라는 용어는 펩타이드 또는 폴리펩타이드 서열(예를 들어, 합성 펩타이드 또는 폴리펩타이드 서열) 또는 비폴리펩타이드, 예를 들어 알킬 사슬을 지칭한다. 일부 양태에서, 2개 이상의 링커는 탠덤으로 연결될 수 있다. 일반적으로, 링커는 가요성을 제공하거나 입체 장해를 방지한다/개선한다. 링커는 전형적으로 절단되지 않지만, 소정의 양태에서 이러한 절단이 바람직할 수 있다. 따라서, 일부 양태에서, 링커는 하나 이상의 프로테아제-절단성 부위를 포함할 수 있는데, 이는 링커의 서열 내에 위치하거나 링커 서열의 어느 한 말단에서 링커를 측접시킬 수 있다. ND 및 ED가 링커에 의해 연결될 때, ED는 적어도 2개의 리신, 적어도 3개의 리신, 적어도 4개의 리신, 적어도 5개의 리신, 적어도 6개의 리신, 또는 적어도 7개의 리신을 포함한다.
일부 양태에서, 링커는 펩타이드 링커이다. 일부 양태에서, 펩타이드 링커는 적어도 약 2개, 적어도 약 3개, 적어도 약 4개, 적어도 약 5개, 적어도 약 10개, 적어도 약 15개, 적어도 약 20개, 적어도 약 25개, 적어도 약 30개, 적어도 약 35개, 적어도 약 40개, 적어도 약 45개, 적어도 약 50개, 적어도 약 55개, 적어도 약 60개, 적어도 약 65개, 적어도 약 70개, 적어도 약 75개, 적어도 약 80개, 적어도 약 85개, 적어도 약 90개, 적어도 약 95개 또는 적어도 약 100개의 아미노산을 포함할 수 있다.
일부 양태에서, 링커는 글리신/세린 링커이다. 일부 양태에서, 펩타이드 링커는 화학식 [(Gly)n-Ser]에 따른 글리신/세린 링커이고, 여기서 n은 1 내지 100의 임의의 정수이고, m은 1 내지 100의 임의의 정수이다. 다른 양태에서, 글리신/세린 링커는 화학식 [(Gly)x-Sery]z에 따르고, 여기서 x는 1 내지 4의 정수이고, y는 0 또는 1이고, z는 1 내지 50의 정수이다. 일부 양태에서, 펩타이드 링커는 서열 Gn을 포함하고, 여기서 n은 1 내지 100의 정수일 수 있다. 일부 양태에서, 펩타이드 링커는 서열 (GlyAla)n을 포함할 수 있고, 여기서 n은 1 내지 100의 정수이다. 다른 양태에서, 펩타이드 링커는 (GlyGlySer)n을 포함할 수 있고, 여기서 n은 1 내지 100의 정수이다.
일부 양태에서, 펩타이드 링커는 합성이고, 즉 비천연 발생이다. 일 양태에서, 펩타이드 링커는 펩타이드(또는 폴리펩타이드)(예를 들어, 천연 또는 비천연 발생 펩타이드)를 포함하고, 이는 아미노산의 제1 선형 서열을 이것이 자연적으로 연결되지 않거나 유전적으로 융합되지 않은 아미노산의 제2 선형 서열에 연결하거나 유전적으로 융합하는 아미노산 서열을 포함한다. 예를 들어, 일 양태에서, 펩타이드 링커는 비천연 발생 폴리펩타이드를 포함할 수 있고, 이는 천연 발생 폴리펩타이드의 변형된 형태(예를 들어, 돌연변이, 예컨대 부가, 치환 또는 결실을 포함)이다.
다른 양태에서, 펩타이드 링커는 비천연 발생 아미노산을 포함할 수 있다. 또 다른 양태에서, 펩타이드 링커는 자연에서 발생하지 않는 선형 서열에서 발생하는 자연 발생 아미노산을 포함할 수 있다. 또 다른 양태에서, 펩타이드 링커는 자연 발생 폴리펩타이드 서열을 포함할 수 있다.
본 개시내용은 또한 스캐폴드 Y 단백질에 연결된 생물학적 활성 분자(예를 들어, 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제)를 포함하는 단리된 세포외 소포체(EV), 예를 들어 엑소좀을 제공하고, 여기서 스캐폴드 Y 단백질은 ND-ED를 포함하고, ND는 G:X2:X3:X4:X5:X6을 포함하고; G는 Gly를 나타내고; ":"는 펩타이드 결합을 나타내고; X2는 Pro, Gly, Ala 및 Ser로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산을 나타내고; X3은 임의의 아미노산을 나타내고; X4는 Pro, Gly, Ala, Ser, Val, Ile, Leu, Phe, Trp, Tyr, Glu 및 Met로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산을 나타내고; X5는 Pro, Gly, Ala 및 Ser로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산을 나타내고; X6은 Lys, Arg 및 His로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산을 나타내고; "-"는 선택적인 링커를 나타내고; ED는 (i) 펩타이드 결합 또는 하나 이상의 아미노산에 의해 X6에 연결된 적어도 2개의 연속 리신(Lys) 또는 (ii) 펩타이드 결합에 의해 X6에 직접 연결된 적어도 하나의 리신을 포함하는 효과기 도메인이다.
일부 양태에서, X2 아미노산은 Gly 및 Ala로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, X3 아미노산은 Lys이다. 일부 양태에서, X4 아미노산은 Leu 또는 Glu이다. 일부 양태에서, X5 아미노산은 Ser 및 Ala로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, X6 아미노산은 Lys이다. 일부 양태에서, X2 아미노산은 Gly, Ala 또는 Ser이고; X3 아미노산은 Lys 또는 Glu이고; X4 아미노산은 Leu, Phe, Ser 또는 Glu이고; X5 아미노산은 Ser 또는 Ala이고; X6 아미노산은 Lys이다. 일부 양태에서, "-" 링커는 펩타이드 결합 또는 하나 이상의 아미노산을 포함한다.
일부 양태에서, 스캐폴드 단백질에서의 ED는 Lys(K), KK, KKK, KKKK(서열 번호 205), KKKKK(서열 번호 206), Arg(R), RR, RRR, RRRR(서열 번호 207); RRRRR(서열 번호 208), KR, RK, KKR, KRK, RKK, KRR, RRK, (K/R)(K/R)(K/R)(K/R)(서열 번호 209), (K/R)(K/R)(K/R)(K/R)(K/R)(서열 번호 210), 또는 임의의 이들의 조합을 포함한다.
일부 양태에서, 스캐폴드 Y 단백질은 (i) GGKLSKK(서열 번호 211), (ii) GAKLSKK(서열 번호 212), (iii) GGKQSKK(서열 번호 213), (iv) GGKLAKK(서열 번호 214), 또는 (v) 임의의 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 양태에서, 스캐폴드 Y 단백질에서의 ND는 (i) GGKLSK(서열 번호 215), (ii) GAKLSK(서열 번호 216), (iii) GGKQSK(서열 번호 217), (iv) GGKLAK(서열 번호 218), 또는 (v) 임의의 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 스캐폴드 단백질에서의 ED는 K, KK, KKK, KKKG(서열 번호 219), KKKGY(서열 번호 220), KKKGYN(서열 번호 221), KKKGYNV(서열 번호 222), KKKGYNVN(서열 번호 223), KKKGYS(서열 번호 224), KKKGYG(서열 번호 225), KKKGYGG(서열 번호 226), KKKGS(서열 번호 227), KKKGSG(서열 번호 228), KKKGSGS(서열 번호 229), KKKS(서열 번호 230), KKKSG(서열 번호 231), KKKSGG(서열 번호 232), KKKSGGS(서열 번호 233), KKKSGGSG(서열 번호 234), KKSGGSGG(서열 번호 235), KKKSGGSGGS(서열 번호 236), KRFSFKKS(서열 번호 237)을 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 스캐폴드 Y 단백질의 폴리펩타이드 서열은 (i) GGKLSKK(서열 번호 211), (ii) GAKLSKK(서열 번호 212), (iii) GGKQSKK(서열 번호 213), (iv) GGKLAKK(서열 번호 214), 또는 (v) 임의의 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열로 이루어진다.
일부 양태에서, 스캐폴드 Y 단백질은 (i) GGKLSKKK(서열 번호 238), (ii) GGKLSKKS(서열 번호 239), (iii) GAKLSKKK(서열 번호 240), (iv) GAKLSKKS(서열 번호 241), (v) GGKQSKKK(서열 번호 242), (vi) GGKQSKKS(서열 번호 243), (vii) GGKLAKKK(서열 번호 244), (viii) GGKLAKKS(서열 번호 245) 및 (ix) 임의의 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 스캐폴드 Y 단백질의 폴리펩타이드 서열은 (i) GGKLSKKK(서열 번호 238), (ii) GGKLSKKS(서열 번호 239), (iii) GAKLSKKK(서열 번호 240), (iv) GAKLSKKS(서열 번호 241), (v) GGKQSKKK(서열 번호 242), (vi) GGKQSKKS(서열 번호 243), (vii) GGKLAKKK(서열 번호 244), (viii) GGKLAKKS(서열 번호 245) 및 (ix) 임의의 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열로 이루어진다.
일부 양태에서, 스캐폴드 Y 단백질은 적어도 약 8개, 적어도 약 9개, 적어도 약 10개, 적어도 약 11개, 적어도 약 12개, 적어도 약 13개, 적어도 약 14개, 적어도 약 15개, 적어도 약 16개, 적어도 약 17개, 적어도 약 18개, 적어도 약 19개, 적어도 약 20개, 적어도 약 21개, 적어도 약 22개, 적어도 약 23개, 적어도 약 24개, 적어도 약 25개, 적어도 약 26개, 적어도 약 27개, 적어도 약 28개, 적어도 약 29개, 적어도 약 30, 적어도 31개, 적어도 약 32개, 적어도 약 33개, 적어도 약 34개, 적어도 약 35개, 적어도 약 36개, 적어도 약 37개, 적어도 약 38개, 적어도 약 39개, 적어도 약 39개, 적어도 약 40개, 적어도 약 41개, 적어도 약 42개, 적어도 약 43개, 적어도 약 44개, 적어도 약 50개, 적어도 약 46개, 적어도 약 47개, 적어도 약 48개, 적어도 약 49개, 적어도 약 50개, 적어도 약 55개, 적어도 약 60개, 적어도 약 65개, 적어도 약 70개, 적어도 약 75개, 적어도 약 80, 적어도 85개, 적어도 약 90개, 적어도 약 95개, 적어도 약 100개, 적어도 약 105개, 적어도 약 110개, 적어도 약 115개, 적어도 약 120개, 적어도 약 125개, 적어도 약 130개, 적어도 약 135개, 적어도 약 140개, 적어도 약 145개, 적어도 약 150개, 적어도 약 155개, 적어도 약 160개, 적어도 약 165개, 적어도 약 170개, 적어도 약 175개, 적어도 약 180개, 적어도 약 185개, 적어도 약 190개, 적어도 약 195개, 적어도 약 200개, 적어도 약 205개, 적어도 약 210개, 적어도 약 215개, 적어도 약 220개, 적어도 약 225개, 적어도 약 230개, 적어도 약 235개, 적어도 약 240개, 적어도 약 245개, 적어도 약 250개, 적어도 약 255개, 적어도 약 260개, 적어도 약 265개, 적어도 약 270개, 적어도 약 275개, 적어도 약 280개, 적어도 약 285개, 적어도 약 290개, 적어도 약 295개, 적어도 약 300개, 적어도 약 305개, 적어도 약 310개, 적어도 약 315개, 적어도 약 320개, 적어도 약 325개, 적어도 약 330개, 적어도 약 335개, 적어도 약 340개, 적어도 약 345개 또는 적어도 약 350개의 아미노산 길이이다.
일부 양태에서, 스캐폴드 Y 단백질은 약 5개 내지 약 10개, 약 10개 내지 약 20개, 약 20개 내지 약 30개, 약 30개 내지 약 40개, 약 40개 내지 약 50개, 약 50개 내지 약 60개, 약 60개 내지 약 70개, 약 70개 내지 약 80개, 약 80개 내지 약 90개, 약 90개 내지 약 100개, 약 100개 내지 약 110개, 약 110개 내지 약 120개, 약 120개 내지 약 130개, 약 130개 내지 약 140개, 약 140개 내지 약 150개, 약 150개 내지 약 160개, 약 160개 내지 약 170개, 약 170개 내지 약 180개, 약 180개 내지 약 190개, 약 190개 내지 약 200개, 약 200개 내지 약 210개, 약 210개 내지 약 220개, 약 220개 내지 약 230개, 약 230개 내지 약 240개, 약 240개 내지 약 250개, 약 250개 내지 약 260개, 약 260개 내지 약 270개, 약 270개 내지 약 280개, 약 280개 내지 약 290개, 약 290개 내지 약 300개, 약 300개 내지 약 310개, 약 310개 내지 약 320개, 약 320개 내지 약 330개, 약 330개 내지 약 340개, 또는 약 340개 내지 약 250개의 아미노산 길이이다.
일부 양태에서, 스캐폴드 Y 단백질은 (i) GGKLSKKKKGYNVN(서열 번호 246), (ii) GAKLSKKKKGYNVN(서열 번호 247), (iii) GGKQSKKKKGYNVN(서열 번호 248), (iv) GGKLAKKKKGYNVN(서열 번호 249), (v) GGKLSKKKKGYSGG(서열 번호 250), (vi) GGKLSKKKKGSGGS(서열 번호 251), (vii) GGKLSKKKKSGGSG(서열 번호 252), (viii) GGKLSKKKSGGSGG(서열 번호 253), (ix) GGKLSKKSGGSGGS(서열 번호 254), (x) GGKLSKSGGSGGSV(서열 번호 255), 또는 (xi) GAKKSKKRFSFKKS(서열 번호 256)를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 스캐폴드 Y 단백질의 폴리펩타이드 서열은 (i) GGKLSKKKKGYNVN(서열 번호 246), (ii) GAKLSKKKKGYNVN(서열 번호 247), (iii) GGKQSKKKKGYNVN(서열 번호 248), (iv) GGKLAKKKKGYNVN(서열 번호 249), (v) GGKLSKKKKGYSGG(서열 번호 250), (vi) GGKLSKKKKGSGGS(서열 번호 251), (vii) GGKLSKKKKSGGSG(서열 번호 252), (viii) GGKLSKKKSGGSGG(서열 번호 253), (ix) GGKLSKKSGGSGGS(서열 번호 254), (x) GGKLSKSGGSGGSV(서열 번호 255), 또는 (xi) GAKKSKKRFSFKKS(서열 번호 256)로 이루어진다.
본 개시내용에 유용한 스캐폴드 Y 단백질의 비제한적인 예는 하기에 기재되어 있다. 일부 양태에서, 스캐폴드 Y 단백질은 표 9에 기재된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 스캐폴드 Y 단백질은 표 9에 기재된 아미노산 서열로 이루어진다.
Figure pct00044
Figure pct00045
Figure pct00046
일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 스캐폴드 Y 단백질은 N-말단 Met를 함유하지 않는다. 일부 양태에서, 스캐폴드 Y 단백질은 지질 앵커로서 작용하는 스캐폴드 단백질의 N-말단에서 지질화된 아미노산, 예를 들어 미리스토일화된 아미노산을 포함한다. 일부 양태에서, 스캐폴드 단백질의 N-말단에서의 아미노산 잔기는 Gly이다. N-말단 Gly의 존재는 N-미리스토일화에 대한 절대 요건이다. 일부 양태에서, 스캐폴드 단백질의 N-말단에서의 아미노산 잔기는 합성이다. 일부 양태에서, 스캐폴드 단백질의 N-말단에서의 아미노산 잔기는 글리신 유사체, 예를 들어 알릴글리신, 부틸글리신 또는 프로파길글리신이다.
다른 양태에서, 지질 앵커는 당해 분야에 공지된 임의의 지질 앵커, 예를 들어 팔미트산 또는 글리코실포스파티딜이노시톨일 수 있다. 드문 상황 하에서, 예를 들어 미리스트산이 제한되는 배양 배지를 사용함으로써, 더 짧은 사슬 및 불포화를 포함하는 일부 다른 지방산은 N-말단 글리신에 부착될 수 있따. 예를 들어, BK 채널에서, 미리스테이트는 하이드록시에스테르 연결을 통해 내부 세린/트레오닌 또는 티로신 잔기에 번역후 부착되는 것으로 보고되었다. 당해 분야에 공지된 막 앵커는 하기 표에 제시된다:
Figure pct00047
II.F 접합된 EV(예를 들어, 엑소좀)
EV(예를 들어, 엑소좀)는 항체와 달리 예를 들어 EV(예를 들어, 엑소좀)당 수천 개 내지 수만 개의 분자의 차수로 이의 표면에 부착된 많은 수의 분자를 수용할 수 있다. EV(예를 들어, 엑소좀)-약물 접합체는 이에 같이 높은 농도의 치료학적 화합물을 별개의 세포 유형으로 전달함과 동시에 결국에는 오프-타깃 독성을 감소시키는 화합물에 대한 전체 전신 노출을 제한하기 위한 플랫폼을 나타낸다.
본 개시내용은 유리 티올 기를 포함하는 제1 분자 집합체를 말레이미드 기를 포함하는 제2 분자 집합체와 반응시켜 조작된 EV, 예를 들어 엑소좀을 제공하고, 여기서 말레이미드 모이어티는 도 31에 제시된 것과 같은 말레이미드 모이어티를 통해 제1 분자 집합체를 제2 분자 집합체와 공유 연결한다.
말레이미드 모이어티를 통해 EV(예를 들어, 엑소좀)에 부착될 수 있는 생물학적 활성 분자의 비제한적인 예는 뉴클레오타이드(예를 들어, 전사를 파괴하는 검출 가능한 모이어티 또는 독소를 포함하는 뉴클레오타이드), 핵산(예를 들어, 효소와 같은 폴리펩타이드를 암호화하는 DNA 또는 mRNA 분자, 또는 miRNA, dsDNA, lncRNA 또는 siRNA와 같은 조절 기능을 갖는 RNA 분자), 모르폴리노, 아미노산(예를 들어, 번역을 파괴하는 검출 가능한 모이어티 또는 독소를 포함하는 아미노산), 폴리펩타이드(예를 들어, 효소), 지질, 탄수화물, 소분자(예를 들어, 소분자 약물 및 독소), 항원(예를 들어, 백신 항원), 아쥬반트(예를 들어, 백신 아쥬반트) 등과 같은 작용제를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 EV(예를 들어, 엑소좀)는 생물학적 활성 분자의 하나 초과의 유형을 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 생물학적 활성 분자는 예를 들어 소분자, 예컨대 환식 디뉴클레오타이드, 독소, 예컨대 아우리스타틴(예를 들어, 모노에틸 아우리스타틴 E, MMAE), 항체(예를 들어, 네이키드 항체 또는 항체-약물 접합체), STING 작용제, 내성화제(tolerizing agent), 안티센스 올리고뉴클레오타이드, PROTAC, 모르폴리노, 리소포스파티드산 수용체 길항제(예를 들어, LPA1 길항제) 또는 임의의 이들의 조합일 수 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV(예를 들어, 엑소좀)는 예를 들어 백신 항원 및 선택적으로 백신 아쥬반트를 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV(예를 들어, 엑소좀)는 치료학적 페이로드(예를 들어, STING 또는 하기에 개시된 하나의 페이로드) 및 표적화 모이어티 및/또는 친화성 모이어티를 포함할 수 있다.
따라서, 일부 양태에서, 본 개시내용은 도 31에 제시된 것과 같은 분자 집합체를 제공하고, 여기서 EV(예를 들어, 엑소좀) 또는 임의의 이의 분자 성분, 예컨대 폴리펩타이드(예를 들어, 스캐폴드 X 단백질 또는 이의 단편), 지질, 지단백, 당단백질, 또는 EV(예를 들어, 엑소좀)에 위치한 천연 발생 또는 비천연 발생 단백질의 임의의 변이체 또는 유도체는 말레이미드 모이어티를 통해 생물학적 활성 분자, 예를 들어 치료학적 페이로드, 표적화 모이어티, 친화성 모이어티, 또는 임의의 이들의 조합에 화학적으로 연결될 수 있다. 도 31에 도시된 것처럼, 일부 양태에서, 설프하이드릴(티올) 기를 포함하는 EV(예를 들어, 엑소좀) 또는 이의 분자 성분은 생물학적 활성 모이어티에 부착된 말레이미드 기와 반응할 수 있다. 다른 양태에서, 말레이미드 기를 포함하는 EV(예를 들어, 엑소좀) 또는 이의 분자 성분은 생물학적 활성 모이어티에 존재하는 설프하이드릴(티올) 기와 반응할 수 있다. 둘 모두의 경우에, 최종 생성물은 티오에테르 결합을 통해 EV(예를 들어, 엑소좀)에 화학적으로 부착된 생물학적 활성 분자이다.
II.G 말레미드 모이어티
상기에 기재된 것처럼, 일부 양태에서, 본 개시내용과 사용될 수 있는 링커는 말레이미드 모이어티(즉, "말레이미드 링커")를 포함할 수 있다. 당해 분야에 공지된 기법(예를 들어, 화학적 접합, 재조합 기법 또는 펩타이드 합성)을 사용하여 링커를 말레이미드 모이어티로 도입할 수 있다. 일부 양태에서, 재조합 기법을 이용하여 링커를 도입할 수 있다. 다른 양태에서, 고상 펩타이드 합성을 사용하여 링커를 도입될 수 있다. 소정의 양태에서, 본원에 개시된 말레이미드 모이어티는 재조합 기법을 사용하여 도입된 하나 이상의 링커 및 고상 펩타이드 합성 또는 당해 분야에 공지된 화학적 접합의 방법을 사용하여 도입된 하나 이상의 링커를 동시에 함유할 수 있다.
따라서, 일부 양태에서, 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)는 하나 이상의 페이로드(예를 들어, 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제)를 포함할 수 있고, 여기서 페이로드 중 하나 이상은 말레이미드 링커를 통해 EV에 부착된다. 소정의 양태에서, 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)는 하나 이상의 표적화 모이어티를 추가로 포함할 수 있고, 여기서 표적화 모이어티 중 하나 이상은 말레이미드 링커를 통해 EV에 부착된다. 본원에 기재된 것처럼, 일부 양태에서, 페이로드 중 하나 이상 및/또는 표적화 모이어티 중 하나 이상은 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X 및/또는 스캐폴드 Y)를 통해 EV(예를 들어, 엑소좀)에 연결된다. 소정의 양태에서, 페이로드 중 하나 이상 및/또는 표적화 모이어티 중 하나 이상은 말레이미드 모이어티를 통해 스캐폴드 모이어티에 공유 부착된다. 일부 양태에서, 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 X 및/또는 스캐폴드 Y를 포함한다. 본 개시내용과 사용될 수 있는 다른 스캐폴드 모이어티의 비제한적인 예는 아미노펩티다제 N(CD13); 네프릴리신(막 메탈로엔도펩티다제; MME); 엑토뉴클레오타이드 피로포스파타제/포스포디에스터라제 패밀리 구성원 1(ENPP1); 뉴로필린-1(NRP1); CD9, CD63, CD81, PDGFR, GPI 앵커 단백질, 락타드헤린, LAMP2 및 LAMP2B, 이들의 단편, 및 임의의 이들의 조합을 포함한다.
본원에 사용된 "말레이미드 모이어티" 또는 "MM"이라는 용어는 EV, 예를 들어 엑소좀을 링커 또는 생물학적 활성 분자에 연결하는 이작용성 화학적 모이어티를 지칭하고, 말레이미드 기를 포함하고:
Figure pct00048
상기 식 중, *은 EV, 예를 들어 엑소좀에서 임의의 티올 기(예를 들어, 스캐폴드 X에 존재하는 유리 티올)에 대한 부착점을 나타내고, 물결선은 말레이미드 모이어티의 나머지에 대한 부착 부위를 나타낸다. 일부 양태에서, *은 페이로드 및/또는 표적화 모이어티에서 임의의 티올 기에 대한 부착점을 나타내고, 물결선은 EV, 예를 들어 엑소좀에 대한 말레이미드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X)의 나머지에 대한 부착 부위를 나타낸다.
일부 양태에서, 말레이미드 모이어티는 EV(예를 들어, 엑소좀)에 부착된 황 원자, 예를 들어 티올 기에서의 천연 발생 황 원자 또는 화학적 변형을 통해 또는 돌연변이를 통해 도입된 황 원자에 부착한다.
일부 양태에서, 말레이미드 모이어티는 화학식 (I)를 갖는다:
Figure pct00049
상기 식 중,
(i) R1은 -C1-10 알킬렌-, -C3-8 카보사이클로-, -O-(C1-8 알킬렌)-, -아릴렌-, -C1-10 알킬렌-아릴렌-, -아릴렌-C1-10 알킬렌-, -C1-10 알킬렌-(C3-8 카보사이클로)-, -(C3-8 카보사이클로)-C1-10 알킬렌-, -C3-8 헤테로사이클로-, -C1-10 알킬렌-(C3-8 헤테로사이클로)-, -(C3-8 헤테로사이클로)-C1-10 알킬렌-, -(CH2CH2O)r- 및 -(CH2CH2O)r-CH2-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
(ii) r은 예를 들어 1 내지 10의 정수이고;
(iii) *은 EV(예를 들어, 엑소좀)에 존재하는 임의의 이용 가능한 반응성 황 원자, 예를 들어 티올 기에서의 황에 대한 부착점을 나타내고;
(iv) 물결선은 생물학적 활성 분자(즉, 페이로드)에 대한 말레이미드 모이어티의 부착 부위를 나타낸다.
일부 양태에서, R1은 -C1-8 알킬렌-, -C3-6 카보사이클로-, -O-(C1-6 알킬렌)-, -아릴렌-, -C1-8 알킬렌-아릴렌-, -아릴렌-C1-8 알킬렌-, -C1-8 알킬렌-(C3-6 카보사이클로)-, -(C3-6 카보사이클로)-C1-8 알킬렌-, -C3-6 헤테로사이클로-, -C1-8 알킬렌-(C3-6 헤테로사이클로)-, -(C3-6 헤테로사이클로)-C1-8 알킬렌-, -(CH2CH2O)r- 및 -(CH2CH2O)r-CH2-이고; 여기서 r은 예를 들어 1 내지 10의 정수이다.
일부 양태에서, R1은 -(CH2)s-, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, -O-(CH2)s-, -페닐-, -CH2-페닐-, -페닐-CH2-, -CH2-사이클로펜틸-, -사이클로펜틸-CH2-, -CH2-사이클로헥실-, -사이클로헥실-CH2-, -(CH2CH2O)r- 및 -(CH2CH2O)r-CH2-이고; 여기서 r은 예를 들어 1 내지 6의 정수이다.
일부 양태에서, R1은 -(CH2)s-이고, 여기서 s는 예를 들어 4, 5 또는 6이다.
일부 양태에서, 말레이미드 모이어티는 화학식 (II)를 갖고, 여기서 R1은 -(CH2)5-이다:
Figure pct00050
.
일부 양태에서, 말레이미드 모이어티는 화학식 (III)을 갖고, 여기서 R1은 -(CH2CH2O)r-CH2-이고, r은 2이다:
Figure pct00051
.
일부 양태에서, 말레이미드 모이어티는 EV(예를 들어, 엑소좀)에 존재하는 작용기에 공유 연결되고, 여기서 작용기는 설프하이드릴(티올) 기이다. 일 양태에서, 설프하이드릴 기는 EV(예를 들어, 엑소좀)의 표면 상의 단백질, 예를 들어 스캐폴드 X, 또는 이의 변이체에 있다. 예를 들어, 일부 양태에서, 설프하이드릴 기는 티올 지질, 예를 들어 콜레스테롤-SH, DSPE-SH, 또는 이의 유도체, 예를 들어 콜레스테롤-PEG-SH 또는 DSPE-PEG-SH에 존재할 수 있다.
일부 양태에서, 말레이미드 모이어티는 말레이미드 모이어티를 제공하도록 화학적으로 유도체화된 EV(예를 들어, 엑소좀)에 존재하는 작용기에 공유 연결된다. 예를 들어, 소정의 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)에 존재하는 아민 작용기(예를 들어, 리신 또는 아르기닌의 측쇄에서의 아민 또는 단백질의 말단 아민 기)는 숙신이미드 모이어티 및 말레이미드 모이어티를 함유하는 이작용성 시약으로 이합체화될 수 있다.
일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)에 존재하는 카복실 작용기(예를 들어, 글루탐산 또는 아스파르트산의 측쇄에서의 카복실 또는 단백질의 말단 카복실 기)는 이소시아네이트 모이어티 및 말레이미드 모이어티를 포함하는 이작용성 시약으로 이합체화될 수 있다. 또 다른 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)에 존재하는 카보닐(산화된 탄수화물)은 히드라진 모이어티 및 말레이미드 모이어티를 포함하는 이작용성 시약으로 유도체화될 수 있다.
일반적으로, 본원에 제공된 개시내용은 임의의 시약, 예를 들어 이작용성 시약 또는 다작용성 시약을 사용하여 실행될 수 있고, 이 시약은 EV(예를 들어, 엑소좀)의 표면(외부 표면 또는 내강 표면)에 존재하는 분자(예를 들어, 단백질, 지질, 당)와 반응 시 적어도 하나의 말레이미드 모이어티를 포함하는 변형된 분자를 생성하도록 분자를 공유 변형시키거나 비공유 변형시킬 것이다. EV(예를 들어, 엑소좀)의 표면(외부 표면 또는 내강 표면)에 존재하는 분자는 자연 발생할 수 있거나, 이것은 비천연 발생일 수 있고, 즉 이것은 예를 들어 화학적 변형, 비천연 발생 분자를 포함하는 조성물과의 항온처리 또는 돌연변이를 통해(예를 들어, 돌연변이를 통해 단백질로 하나 이상의 시스테인 아미노산을 도입함으로써) 변형된다.
말레이미드 모이어티를 포함하는 이작용성 시약, 다수의 말레이미드-함유 단위가 다합체화할 수 있는 시약 또는 말레이미드 기를 통해 기능성 모이어티(예를 들어, PEG)를 추가할 수 있는 말레이미드-함유 시약은 예를 들어 히드라진 모이어티 및 말레이미드 모이어티를 포함하는 이작용성 시약, 이소시아네이트 모이어티 및 말레이미드 모이어티를 포함하는 이작용성 시약, N-하이드록시 숙신이미딜 에스테르 모이어티 및 말레이미드 모이어티를 포함하는 이작용성 시약, 숙신이미드 모이어티 및 말레이미드 모이어티를 포함하는 이작용성 시약, 비오틴-말레이미드, 스트렙타비딘-말레이미드, N-4-말레이미드 부티르산, N-(4-말레이미드부틸옥시) 숙신이미드, N-[5-(3'-말레이미드 프로필아미드)-1-카복시펜틸]이미노디아세트산, 말레이미드-PEG-숙신이미딜 에스테르(예를 들어, 말레이미드-PEG12-숙신이미딜 에스테르, 말레이미드-PEG2-숙신이미딜 에스테르, 말레이미드-PEG2000-숙신이미딜 에스테르, 말레이미드-PEG5000-숙신이미딜 에스테르 또는 말레이미드-PEGn-숙신이미딜 에스테르(여기서, 1 < n < 5000임), 말레이미드-PEG-말레이미드(예를 들어, 말레이미드-PEG12-말레이미드, 말레이미드-PEG2-말레이미드, 말레이미드-PEG2000-말레이미드, 말레이미드-PEG5000-말레이미드 또는 말레이미드-PEGn-말레이미드(여기서, 1 < n < 5000임), 말레이미드-OH, 말레이미드-PEGn-OH(여기서, 1 < n < 5000임), 말레이미드-폴리(에틸렌 글리콜)-b-폴리(ε-카프로락톤), (S)-(-)-N-(1-페닐에틸)말레이미드, N-(4-클로로페닐)말레이미드, N-(1-피레닐)말레이미드, 메톡시폴리에틸렌 글리콜 말레이미드, 폴리(에틸렌 글리콜) 메틸 에테르 말레이미드, N-(4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,9,9,10,10,11,11,11-헵타데카플루오로운데실)말레이미드, 데페록사민-말레이미드(즉, 킬레이터-말레이미드), 말레이미드 글리시딜 에테르, 이작용성 말레이미도 DTPA, 이작용성 NOTA-말레이미드 킬레이터, 호모이작용성 말레이미드 가교결합제(즉, 각각의 말단에서의 말레이미드 기를 갖는 것), 비스-말레이미도폴리알킬렌 글리콜, DBCO-말레이미드, 벤조트리아졸 말레이미드, 알킨 말레이미드, 말레이미드 작용기화된 지질, 말레이미드 작용기화된 PEG 지질, 및 일반적으로 적어도 하나의 말레이미드 모이어티 적어도 하나의 추가 반응성 모이어티(예를 들어, 말레이미드 또는 다른 반응성 기) 및 하나 이상의 선택적인 링커(예를 들어, PEG 또는 다른 중합체, 예컨대 폴리글리세롤)를 포함하는 임의의 분자를 포함한다.
II.H 링커
상기에 기재된 것처럼, 본 개시내용의 세포외 소포체(EV)(예를 들어, 엑소좀 및 나노소포체)는 EV에(예를 들어, 외부 표면에 또는 내강 표면 위에) 관심 분자(예를 들어, 항원, 아쥬반트 또는 면역 조절제)를 연결하는 하나 이상의 링커를 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 관심 분자(즉, 페이로드)(예를 들어, 항원, 아쥬반트 또는 면역 조절제)는 직접적으로 또는 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X 또는 스캐폴드 Y)를 통해 EV에 연결된다. 예를 들어, 소정의 양태에서, 페이로드(예를 들어, 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제)는 스캐폴드 X를 통해 엑소좀의 외부 표면에 연결된다. 추가의 양태에서, 페이로드(예를 들어, 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제)는 스캐폴드 X 또는 스캐폴드 Y를 통해 엑소좀의 내강 표면에 연결된다. 일부 양태에서, 페이로드(예를 들어, 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제)는 스캐폴드 X를 통해 엑소좀의 내강 표면에 연결된다. 일부 양태에서, 페이로드(예를 들어, 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제)는 스캐폴드 Y를 통해 엑소좀의 내강 표면에 연결된다. 일부 양태에서, 페이로드(예를 들어, 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제)는 스캐폴드 X 및 스캐폴드 Y를 통해 엑소좀의 내강 표면에 연결된다. 일부 양태에서, 페이로드(예를 들어, 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제)는 링커(예를 들어, 본원에 기재된 것)를 통해 스캐폴드 X에 접합된다. 소정의 양태에서, 페이로드(예를 들어, 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제)는 하나 초과의 링커(즉, "링커 조합")를 사용하여 스캐폴드 X에 접합된다. 일부 양태에서, 페이로드(예를 들어, 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제)는 링커(예를 들어, 본원에 기재된 것)를 통해 스캐폴드 Y에 접합된다. 소정의 양태에서, 페이로드(예를 들어, 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제)는 링커 조합을 사용하여 스캐폴드 Y에 접합된다. 일부 양태에서, 링커 조합은 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개 또는 적어도 6개, 또는 이것 초과의 본원에 개시된 상이한 링커를 포함한다. 일부 양태에서, 링커 조합에서의 링커는 에스테르 연결(예를 들어, 포스포디에스테르 또는 포스포로티오에이트 에스테르)에 의해 연결될 수 있다.
링커는 당해 분야에 공지된 임의의 화학적 모이어티일 수 있다.
본원에 사용된 "링커"라는 용어는 펩타이드 또는 폴리펩타이드 서열(예를 들어, 합성 펩타이드 또는 폴리펩타이드 서열) 또는 비폴리펩타이드, 예를 들어 알킬 사슬을 지칭한다. 일부 양태에서, 2개 이상의 링커는 탠덤으로 연결될 수 있다. 다수의 링커가 존재할 때, 각각의 링커는 동일하거나 상이할 수 있다. 일반적으로, 링커는 가요성을 제공하거나 입체 장해를 방지/개선한다. 링커는 전형적으로 절단되지 않지만, 소정의 양태에서 이러한 절단이 바람직할 수 있다. 따라서, 일부 양태에서, 링커는 하나 이상의 프로테아제-절단성 부위를 포함할 수 있는데, 이는 링커의 서열 내에 위치하거나 링커 서열의 어느 한 말단에서 링커를 측접시킬 수 있다.
일부 양태에서, 링커는 펩타이드 링커이다. 일부 양태에서, 펩타이드 링커는 적어도 약 2개, 적어도 약 3개, 적어도 약 4개, 적어도 약 5개, 적어도 약 10개, 적어도 약 15개, 적어도 약 20개, 적어도 약 25개, 적어도 약 30개, 적어도 약 35개, 적어도 약 40개, 적어도 약 45개, 적어도 약 50개, 적어도 약 55개, 적어도 약 60개, 적어도 약 65개, 적어도 약 70개, 적어도 약 75개, 적어도 약 80개, 적어도 약 85개, 적어도 약 90개, 적어도 약 95개 또는 적어도 약 100개의 아미노산을 포함할 수 있다.
일부 양태에서, 펩타이드 링커는 적어도 약 110개, 적어도 약 120개, 적어도 약 130개, 적어도 약 140개, 적어도 약 150개, 적어도 약 160개, 적어도 약 170개, 적어도 약 180개, 적어도 약 190개 또는 적어도 약 200개의 아미노산을 포함할 수 있다.
다른 양태에서, 펩타이드 링커는 적어도 약 200개, 적어도 약 300개, 적어도 약 400개, 적어도 약 500개, 적어도 약 600개, 적어도 약 700개, 적어도 약 800개, 적어도 약 900개 또는 적어도 약 1,000개의 아미노산을 포함할 수 있다. 펩타이드 링커는 1개 내지 약 5개의 아미노산, 1개 내지 약 10개의 아미노산, 1개 내지 약 20개의 아미노산, 약 10개 내지 약 50개의 아미노산, 약 50개 내지 약 100개의 아미노산, 약 100개 내지 약 200개의 아미노산, 약 200개 내지 약 300개의 아미노산, 약 300개 내지 약 400개의 아미노산, 약 400개 내지 약 500개의 아미노산, 약 500개 내지 약 600개의 아미노산, 약 600개 내지 약 700개의 아미노산, 약 700개 내지 약 800개의 아미노산, 약 800개 내지 약 900개의 아미노산, 또는 약 900개 내지 약 1000개의 아미노산을 포함할 수 있다.
본원에 기재된 것처럼, 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 링커는 글리신/세린 링커를 포함한다. 일부 양태에서, 펩타이드 링커는 화학식 [(Gly)n-Ser]m(서열 번호 374)에 따른 글리신/세린 링커이고, 여기서 n은 1 내지 100의 임의의 정수이고, m은 1 내지 100의 임의의 정수이다. 일부 양태에서, 글리신/세린 링커는 화학식 [(Gly)x-Sery]z(서열 번호 375)에 따르고, 여기서 x는 1 내지 4의 정수이고, y는 0 또는 1이고, z는 1 내지 50의 정수이다. 일부 양태에서, 펩타이드 링커는 서열 Gn(서열 번호 376)을 포함하고, 여기서 n은 1 내지 100의 정수일 수 있다. 일부 양태에서, 펩타이드 링커는 서열 (GlyAla)n(서열 번호 377)을 포함할 수 있고, 여기서 n은 1 내지 100의 정수이다. 일부 양태에서, 펩타이드 링커는 서열(GlyGlySer)n(서열 번호 378)을 포함할 수 있고, 여기서 n은 1 내지 100의 정수이다. 소정의 양태에서, 펩타이드 링커는 서열 GGGG(서열 번호 197)를 포함한다.
일부 양태에서, 펩타이드 링커는 서열(GGGS)n(서열 번호 203)을 포함한다. 소정의 양태에서, 펩타이드 링커는 서열(GGS)n(GGGGS)n(서열 번호 204)을 포함한다. 이러한 양태에서, n은 1 내지 100의 정수일 수 있다. 일부 양태에서, n은 1 내지 20의 정수, 즉 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20일 수 있다. 일부 양태에서, n은 1 내지 100의 정수이다.
본 개시내용에 유용한 링커의 예는 GGG, SGGSGGS(서열 번호 198), GGSGGSGGSGGSGGG(서열 번호 199), GGSGGSGGGGSGGGGS(서열 번호 200), GGSGGSGGSGGSGGSGGS(서열 번호 201) 또는 GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호 202)를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 일부 양태에서, 링커는 poly-G 서열 (GGGG)n(서열 번호 373)이고, 여기서 n은 1 내지 100의 정수일 수 있다.
일부 양태에서, 펩타이드 링커는 합성이고, 즉 비천연 발생이다. 일 양태에서, 펩타이드 링커는 펩타이드(또는 폴리펩타이드)(예를 들어, 천연 또는 비천연 발생 펩타이드)를 포함하고, 이는 아미노산의 제1 선형 서열을 이것이 자연적으로 자연에서 연결되거나 유전 융합되지 않은 아미노산의 제2 선형 서열에 연결시키거나 유전 융합하는 아미노산 서열을 포함한다. 예를 들어, 일 양태에서, 펩타이드 링커는 비천연 발생 폴리펩타이드를 포함할 수 있고, 이는 천연 발생 폴리펩타이드(예를 들어, 돌연변이, 예컨대 부가, 치환 또는 결실을 포함)의 변형된 형태이다.
일부 양태에서, 펩타이드 링커는 비천연 발생 아미노산을 포함할 수 있다. 또 다른 양태에서, 펩타이드 링커는 자연에서 발생하지 않는 선형 서열에서 발생하는 자연 발생 아미노산을 포함할 수 있다. 또 다른 양태에서, 펩타이드 링커는 자연 발생 폴리펩타이드 서열을 포함할 수 있다.
일부 양태에서, 링커는 비펩타이드 링커를 포함한다. 다른 양태에서, 링커는 비펩타이드 링커로 이루어진다. 일부 양태에서, 비펩타이드 링커는 예를 들어 말레이미도 카프로일(MC), 말레이미도 프로파노일(MP), 메톡실 폴리에틸렌글리콜(MPEG), 숙신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)-사이클로헥산-1-카복실레이트(SMCC), m-말레이미도벤조일-N-하이드록시숙신이미드 에스테르(MBS), 숙신이미딜 4-(p-말레이미도페닐)부티레이트(SMPB), N-숙신이미딜(4-요오도아세틸)아미노벤조네이트(SIAB), 숙신이미딜 6-[3-(2-피리딜디티오)-프로피온아미드]헥사노에이트(LC-SPDP), 4-숙신이미딜옥시카보닐-알파-메틸-알파-(2-피리딜디티오)톨루엔(SMPT) 등(예를 들어, 본원에 그 전체가 참고로 포함된 미국 특허 제7,375,078호 참조)일 수 있다.
일부 양태에서, 당해 분야에 공지된 기법(예를 들어, 화학적 접합, 재조합 기법 또는 펩타이드 합성)을 사용하여 본원에 개시된 링커를 말레이미드 모이어티로 도입할 수 있다. 일부 양태에서, 재조합 기법을 이용하여 링커를 도입할 수 있다. 다른 양태에서, 고상 펩타이드 합성을 사용하여 링커를 도입할 수 있다. 소정의 양태에서, 본원에 개시된 말레이미드 모이어티는 재조합 기법을 사용하여 도입된 하나 이상의 링커 및 당해 분야에 공지된 고상 펩타이드 합성 또는 화학적 접합의 방법을 사용하여 도입된 하나 이상의 링커를 동시에 함유할 수 있다. 일부 양태에서, 링커는 콜레스테롤 모이어티를 포함할 수 있다. 예를 들어, US 2008/0085869호 A1을 참조하고, 이것은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
링커는 절단("절단성 링커")에 민감하여 생물학적 활성 분자(예를 들어, 항원, 아쥬반트 또는 면역 조절제)의 방출을 용이하게 할 수 있다. 따라서, 일부 양태에서, 본 개시내용과 사용될 수 있는 링커는 절단성 링커를 포함한다. 이러한 절단성 링커는 생물학적 활성 분자가 활성으로 남이 있는 조건에서 예를 들어 산-유도된 절단, 광-유도된 절단, 펩티다제-유도된 절단, 에스터라제-유도된 절단 및 디설파이드 결합 절단에 민감할 수 있다. 일부 양태에서, 절단성 링커는 스페이서를 포함한다. 소정의 양태에서, 스페이서는 PEG를 포함한다.
일부 양태에서, 링커는 "환원-민감성 링커"이다. 일부 양태에서, 환원-민감성 링커는 디설파이드 결합을 함유한다. 일부 양태에서, 링커는 "산 불안정 링커"이다. 일부 양태에서, 산 불안정 링커는 하이드라존을 함유한다. 적합한 산 불안정 링커는 예를 들어 시스-아코니트산 링커, 하이드라지드 링커, 티오카바모일 링커, 또는 임의의 이들의 조합을 또한 포함한다.
일부 양태에서, 링커는 비절단성 링커(즉, 상주 또는 실질적으로 절단에 저항적)를 포함한다.
일부 양태에서, 본원에 개시된 링커 조합은 절단성 링커만을 포함한다. 일부 양태에서, 본원에 개시된 링커 조합은 비절단성 링커만을 포함한다. 일부 양태에서, 본원에 개시된 링커 조합은 절단성 링커 및 비절단성 링커 둘 다를 포함한다. 본 개시내용과 사용될 수 있는 절단성 링커 및 비절단성 링커와 관련된 추가 개시내용은 하기에 제공된다.
II.H.1 비절단성 링커
비절단성 링커는 안정한, 공유 방식으로 본 개시내용의 변형된 생물학적 활성 분자를 연결할 수 있는 임의의 화학적 모이어티(예를 들어, 생물학적 활성 분자 및 앵커링 모이어티; 생물학적 활성 분자 및 절단성 링커; 앵커링 모이어티 및 절단성 링커)이고, 절단성 링커에 대해 상기에 기재된 분류 하에 떨어지지 않는다. 이와 같이, 비절단성 링커는 산-유도된 절단, 광-유도된 절단, 펩티다제-유도된 절단, 에스터라제-유도된 절단 및 디설파이드 결합 절단에 실질적으로 내성이다.
더욱이, "비절단성"은 환식 디뉴클레오타이드 및/또는 항체가 이의 활성을 잃지 않는 조건에서 산, 광불안정-절단제, 펩티다제, 에스터라제, 또는 디설파이드 결합을 절단하는 화학적 또는 생리학적 화합물에 의해 유도된 절단을 견디는 링커에서의 화학적 결합 또는 링커에 대한 연결의 능력을 지칭한다. 일부 양태에서, 생물학적 활성 분자는 다른 링커, 예를 들어 자가희생 링커를 통해 링커에 부착된다.
일부 양태에서, 본원에 개시된 링커 조합은 예를 들어 테트라에틸렌 글리콜(TEG), 헥사에틸렌 글리콜(HEG), 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 숙신이미드, 또는 임의의 이들의 조합을 포함하는 비절단성 링커를 포함한다. 일부 양태에서, 비절단성 링커는 생물학적 활성 분자를 비절단성 링커에 연결하도록 스페이서 단위를 포함한다.
일부 양태에서, 하나 이상의 비절단성 링커는 함께 연결된 더 작은 단위(예를 들어, HEG, TEG, 글리세롤, C2 내지 C12 알킬 등)를 포함한다. 일부 양태에서, 연결은 에스테르 연결(예를 들어, 포스포디에스테르 또는 포스포로티오에이트 에스테르) 또는 다른 연결이다. 본 개시내용과 사용될 수 있는 비절단성 링커의 예는 당해 분야에 공지되어 있고, 예를 들어 미국 제7,569,657호 B2; 미국 제8,465,730호 B1; 미국 제7,087,229호 B2; 및 미국 공보 제2014/0193849호 A1을 참조하고, 이들의 각각은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
II.H.2 절단성 링커
본원에 기재된 것처럼, 관심 분자(예를 들어, 항원, 아쥬반트 또는 면역 조절제)를 EV(예를 들어, 엑소좀)에 연결하도록 사용될 수 있는 하나 이상의 링커(즉, 링커 조합)는 절단성 링커를 포함할 수 있다. "절단성 링커"라는 용어는 파괴되거나 절단될 수 있는 적어도 하나의 연결 또는 화학적 결합을 포함하는 링커를 지칭한다. 본원에 사용된 "절단한다"라는 용어는 2개 이상의 비교적 더 적은 분자를 생성하는 방식으로 비교적 큰 분자에서의 하나 이상의 화학적 결합의 파괴를 지칭한다. 예를 들어 뉴클레아제, 펩티다제, 프로테아제, 포스파타제, 산화효소 또는 환원효소에 의해 예를 들어 또는 특정한 이화학적 조건, 예를 들어 레독스 환경, pH, 반응성 산소 종의 존재, 또는 특정 광 파장에 의해 절단이 매개될 수 있다.
일부 양태에서, 본원에 사용된 "절단성"이라는 용어는 예를 들어 포스포디에스테르 및 디설파이드와 같은 예를 들어 빠르게 분해 가능한 링커를 지칭하지만, "비절단성"의 용어는 예를 들어 뉴클레아제 저항성 포스포로티오에이트와 같은 예를 들어 보다 안정한 연결을 지칭한다.
일부 양태에서, 절단성 링커는 디뉴클레오타이드 또는 트리뉴클레오타이드 링커, 디설파이드, 이민, 티오케탈, val-cit 디펩타이드, 또는 임의의 이들의 조합을 포함한다.
일부 양태에서, 절단성 링커는 발린-알라닌-p-아미노벤질카바메이트, 발린-시트룰린-p-아미노벤질카바메이트, 또는 둘 다를 포함한다.
일부 양태에서, 절단성 링커는 레독스 절단성 링커, 반응성 산소 종(ROS) 절단성 링커, pH 의존적 절단성 링커, 효소 절단성 링커, 프로테아제 절단성 링커, 에스터라제 절단성 링커, 포스파타제 절단성 링커, 광활성화된 절단성 링커, 자가 희생성 링커, 또는 이들의 조합을 포함한다. 이들 절단성 링커의 하나 이상에 관한 추가 개시내용은 하기 추가로 제공되고 당해 분야에 또한 공지되어 있고, 예를 들어 US 2018/0037639호 A1; Trout 등, 79 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 626-629 (1982); Umemoto 등 43 Int. J. Cancer, 677-684 (1989); Cancer Res. 77(24):7027-7037 (2017); Doronina 등 Nat. Biotechnol. 21:778-784 (2003); US 7,754,681호 B2; US 2006/0269480호; US 2010/0092496호; US 2010/0145036호; US 2003/0130189호; US 2005/0256030호를 참조하고, 이들의 각각은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
II.H.2.a 레독스 절단성 링커
일부 양태에서, 링커 조합은 레독스 절단성 링커를 포함한다. 소정의 양태에서, 이러한 링커는 환원 시 또는 산화 시 절단된 레독스 절단성 연결 기를 포함할 수 있다.
일부 양태에서, 레독스 절단성 링커는 디설파이드 결합을 함유하고, 즉 이것은 디설파이드 절단성 링커이다. 일부 양태에서, 레독스 절단성 링커는 예를 들어 세포내 머캅탄, 산화효소, 환원효소 또는 이들의 조합에 의해 환원될 수 있다.
II.H.2.b 반응성 산소 종(ROS) 절단성 링커
일부 양태에서, 링커 조합은 예를 들어 염증 프로세스, 예컨대 활성화된 호중구에 의해 생성된 반응성 산소 종(ROS), 예컨대 슈퍼옥사이드(Of) 또는 과산화수소(H2O2)에 의해 절단될 수 있는 절단성 링커를 포함할 수 있다. 일부 양태에서, ROS 절단성 링커는 티오케탈 절단성 링커이다. 예를 들어, 미국 특허 8,354,455호 B2를 참조하고, 이것은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
II.H.2.c pH 의존적 절단성 링커
일부 양태에서, 링커는 산 절단성 연결 기를 포함하는 산 불안정 링커이고, 이는 산성 조건(pH < 7) 하에 선택적으로 절단된 연결 기이다.
일부 양태에서, 산 절단성 연결 기는 산성 환경, 예를 들어 약 6.0, 약 5.5, 약 5.0 또는 이것 미만에서 절단된다. 일부 양태에서, pH는 약 6.5 이하이다. 일부 양태에서, 링커는 일반 산, 예를 들어 (기질 특이적일 수 있는) 펩티다제 또는 포스파타제로서 작용할 수 있는 효소와 같은 작용제에 의해 절단된다. 소정의 낮은 pH 세포소기관, 예컨대 엔도솜 및 리소솜은 세포 내에서 산 절단성 연결기 기에 절단 환경을 제공할 수 있다. 인간 혈청의 pH가 7.4이지만, 세포에서의 평균 pH는 약 7.1 내지 7.3의 범위로 약간 더 낮다. 엔도솜은 또한 5.5 내지 6.0의 산성 pH를 갖고, 리소솜은 심지어 더 산성인 pH에서 약 5.0이다. 따라서, pH 의존성 절단성 링커는 당해 분야에서 때때로 엔도솜으로 불안정한 링커라 칭한다.
일부 양태에서, 산 절단성 기는 일반식 -C=NN-, C(O)O 또는 -OC(O)를 가질 수 있다. 다른 비제한적인 예에서, 에스테르 산소에 부착된 탄소(알콕시 기)가 예를 들어 아릴 기, 치환된 알킬 기 또는 3차 알킬 기, 예컨대 디메틸 펜틸 또는 t-부틸에 부착될 때. 산 절단성 연결 기의 예는 아민, 이민, 아미노 에스테르, 벤조산 이민, 디오르토 에스테르, 폴리포스포에스테르, 폴리포스파젠, 아세탈, 비닐 에테르, 하이드라존, 시스-아코니테이트, 하이드라지드, 티오카바모일, 이미진, 아지도메틸-메틸말레산 무수물, 티오프로피오네이트, 마스킹된 엔도솜분해 물질, 시트라코닐 기, 또는 임의의 이들의 조합을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 디설파이드 연결은 또한 pH에 민감하다.
일부 양태에서, 링커는 낮은 pH 불안정 하이드라존 결합을 포함한다. 이러한 산 불안정 결합은 접합체, 예를 들어 항체-약물 접합체의 분야에서 광범위하게 사용되었다. 예를 들어, Zhou 등, Biomacromolecules 2011, 12, 1460-7; Yuan 등, Acta Biomater. 2008, 4, 1024-37; Zhang 등, Acta Biomater. 2007, 6, 838-50; Yang 등, J. Pharmacol. Exp. Ther. 2007, 321, 462-8; Reddy 등, Cancer Chemother. Pharmacol. 2006, 58, 229-36; Doronina 등, Nature Biotechnol. 2003, 21, 778-84를 참조하고, 이들의 각각은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
일부 양태에서, 링커는 하기로부터 선택된 낮은 pH 불안정 결합을 포함한다: 디올 및 케톤을 형성하도록 산성 환경(예를 들어, 7 미만, 약 4 초과의 pH)에서 불안정한 케탈; 디올 및 알데하이드를 형성하도록 산성 환경(예를 들어, 7 미만, 약 4 초과의 pH)에서 불안정한 아세탈; 아민 및 알데하이드 또는 케톤을 형성하도록 산성 환경(예를 들어, 7 미만, 약 4 초과의 pH)에서 불안정한 이민 또는 이미늄; 산성 조건 하에 불안정한 규소-산소-탄소 연결; 규소-질소(실라잔) 연결; 규소-탄소 연결(예를 들어, 아릴실란, 비닐실란 및 알릴실란); 말레아메이트(말레산 무수물 유도체 및 아민으로부터 합성된 아미드 결합); 오르토 에스테르; 하이드라존; 산 촉매화된 가수분해를 겪도록 설계된 활성화된 카복실산 유도체(예를 들어, 에스테르, 아미드); 또는 비닐 에테르.
추가의 예는 미국 특허 제9,790,494호 B2 및 제8,137,695호 B2에서 발견될 수 있고, 이들의 내용은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
II.H.2.d 효소 절단성 링커
일부 양태에서, 링커 조합은 세포내 효소 또는 세포외 효소, 예를 들어 프로테아제, 에스터라제, 뉴클레아제, 아미다데에 의해 절단 가능한 링커를 포함할 수 있다. 링커 조합에서 특이적 링커를 절단할 수 있는 효소의 범위는 특이적 결합 및 링커의 화학적 구조에 따라 달라진다. 따라서, 펩타이드 링커는 예를 들어 펩티다제에 의해 절단될 수 있고, 에스테르 연결을 함유하는 링커는 예를 들어 에스터라제에 의해 절단될 수 있고; 아미드 연결을 함유하는 링커는 예를 들어 아미다제에 의해 절단될 수 있고; 등등이다.
II.H.2.e 에스터라제 절단성 링커
일부 링커는 에스터라제("에스터라제 절단성 링커")에 의해 절단된다. 세포의 내부 또는 외부에 존재하는 에스터라제 및 아미다제에 의해 오직 소정의 에스테르가 절단될 수 있다. 에스테르는 카복실산 및 알콜의 축합에 의해 형성된다. 단순한 에스테르는 단순한 알코올, 예컨대 지방족 알코올, 및 작은 사이클릭 및 작은 방향족 알코올에 의해 생성된 에스테르이다. 에스테르계 절단성 연결 기의 예는 알킬렌, 알케닐렌 및 알키닐렌 기의 에스테르를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 에스테르 절단성 연결 기는 일반식 -C(O) O- 또는 -OC(O)-를 갖는다.
II.H.2.f 포스파타제 절단성 링커
일부 양태에서, 링커 조합은 포스페이트 기를 분해하거나 가수분해하는 작용제에 의해 절단된 포스페이트계 절단성 연결 기를 포함할 수 있다. 세포내 포스페이트 기를 절단하는 작용제의 예는 세포내 포스파타제와 같은 효소이다. 포스페이트계 연결 기의 예는 -O-P(O)(OR k)-O-, -O-P(S)(ORk)-O-, -O-P(S)(SRk)-O-, -S-P(O)(ORk)-O-, -O-P(O)(ORk)-S-, -S-P(O)(ORk)-S-, -O-P( S)(ORk)-S-, -SP(S)(ORk)-O-, -OP(O)(Rk)-O-, -OP(S)(Rk)-O-, -SP(O)(Rk)-O-, -SP(S)(Rk)-O-, -SP(O)(Rk)-S- 또는 -OP(S)(Rk)-S-이다.
일부 양태에서, Rk는 NH2, BH3, CH3, C1-6 알킬, C6-10 아릴, C1-6 알콕시 및 C6-10 아릴-옥시 중 어느 것이다. 일부 양태에서, C1-6 알킬 및 C6-10 아릴은 비치환된다. 추가의 비제한적인 예는 -O-P(O)(OH) -O-, -O-P(S)(OH) -O-, -O-P(S)(SH) -O-, -S-P(O)(OH) -O-, -O-P(O)(OH) -S-, -S-P(O)(OH) -S-, -O-P(S)( OH) -S-, -S-P(S)(OH) -O-, -O-P(O)(H) -O-, -O-P(S)(H) -O-, -S -P(O)(H) -O-, -SP(S)(H) -O-, -SP(O)(H) -S-, -OP(S)(H)-S- 또는 -O-P(O)(OH) -O-를 포함한다.
II.H.2.g 광활성화된 절단성 링커
일부 양태에서, 조합 링커는 광활성화된 절단성 링커, 예를 들어 니트로벤질 링커 또는 니트로벤질 반응성 기를 포함하는 링커를 포함한다.
종래의 백신은 여러 시험감염을 입증하였다. 일부 양태에서, 종래의 백신은 튼튼한 T 세포 반응을 유도할 수 없다. 더욱이, 종래의 백신에 의해 생성된 임의의 반응은 조직 특이적 반응으로 제한되고/되거나 항체 다양성이 결여될 수 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 유용한 항원을 포함하는 EV, 예를 들어 엑소좀은 항원(백신) 단독과 비교하여 유리한 특성을 나타낸다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV(예를 들어, 엑소좀)는 항원 단독과 비교하여 개선된 T 세포를 유도할 수 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV(예를 들어, 엑소좀)는 말초 조직에서 T 세포 반응을 유도할 수 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV(예를 들어, 엑소좀)는 향상된 항체 다양성 및/또는 결합도를 나타낸다.
종래의 백신, 예를 들어 항원은 또한 항원 제시 세포에 의한 불량한 흡수, 불량한 면역력 및/또는 제한된 복잡함의 문제에 직면한다. 종래의 항원과 비교하여, 본 개시내용의 EV(예를 들어, 엑소좀)는 EV(예를 들어, 엑소좀) 상에 다수의 항원을 제시하고/하거나 특이적 면역 세포(예를 들어, B 세포 및/또는 수지상 세포)에 대한 항원 노출을 조절할 수 있다.
종래의 백신에 대한 아쥬반트는 또한 도전을 갖는다. 예를 들어, 아쥬반트의 잠재적 독성은 아쥬반트의 투여 경로, 용량 및 조합을 제한한다. 게다가, RNA 및/또는 DNA는 불량한 아쥬반트이다. 본 개시내용의 EV(예를 들어, 엑소좀)는 이들 문제를 극복한다. 본 개시내용의 EV(예를 들어, 엑소좀)는 항원 제시 세포에 대한 항원(들) 및 아쥬반트(들)(및/또는 본원에 개시된 다른 페이로드)의 선택적 동시전달을 허용하고; 이는 아쥬반트 용량을 감소시킬 수 있고 조합이 가능하게 하여 백신의 전체 안전성을 개선한다.
III. 조작된 EV, 예를 들어 엑소좀의 제조를 위한 생산자 세포
본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀은 시험관내 성장한 세포 또는 대상체의 체액으로부터 제조될 수 있다. 시험관내 세포 배양으로부터 엑소좀이 제조될 때, 다양한 생산자 세포, 예를 들어 HEK293 세포, CHO 세포 및 MSC를 사용할 수 있다. 소정의 양태에서, 생산자 세포는 자연에 존재하는 수지상 세포, 대식세포, B 세포, 비만 세포, 호중구, 쿠퍼-브로비츠 세포, 이들 세포 중 어느 것으로부터 유래된 세포, 또는 임의의 이들의 조합이 아니다(즉, 자연에 존재하지 않는 생산자 세포). 본원에 사용된 "자연에 존재하지 않는 생산자 세포"라는 용어는 생산자 세포가 자연에 존재하는 대응물과 비교하여 구조 및/또는 기능이 다르도록 변형된 생산자 세포(예를 들어, 수지상 세포, 대식세포, B 세포, 비만 세포, 호중구, 쿠퍼-브로비츠 세포, 이들 세포 중 어느 것으로부터 유래된 세포, 또는 임의의 이들의 조합)를 지칭한다. 하기 더 기재된 것처럼, 일부 양태에서, 자연에 존재하지 않는 생산자 세포는 본원에 개시된 하나 이상의 페이로드(예를 들어, 항원, 면역 조절제 및/또는 아쥬반트)를 발현하도록 변형되었다. 소정의 양태에서, 자연에 존재하지 않는 생산자 세포는 본원에 개시된 하나 이상의 표적화 모이어티를 발현하도록 변형되었다. 일부 양태에서, 자연에 존재하지 않는 생산자 세포는 하나 이상의 본원에 개시된 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X 및/또는 스캐폴드 Y)를 발현하도록 변형되었다.
생산자 세포는 본원에 기재된 EV(예를 들어, 엑소좀)를 생성하도록 (예를 들어, 항원, 아쥬반트, 면역 조절제 및/또는 표적화 모이어티를 암호화하는) 하나 이상의 외인성 서열을 포함하도록 유전자 변형될 수 있다. 유전자 변형된 생산자 세포는 일시적인 또는 안정한 형질전환에 의해 외인성 서열을 함유할 수 있다. 외인성 서열은 플라스미드로서 형질전환될 수 있다. 외인성 서열은 표적화된 부위에서 또는 랜덤 부위에서 생산자 세포의 게놈 서열로 안정하게 통합될 수 있다. 일부 양태에서, 안정한 세포주는 내강-조작된 EV(예를 들어, 엑소좀)의 제조를 위해 생성된다.
외인성 서열은 EV(예를 들어, 엑소좀) 단백질을 암호화하는 내인성 서열의 상류(5'-말단) 또는 하류(3'-말단) 내에 위치한 생산자 세포의 게놈 서열로 삽입될 수 있다. 당해 분야에 공지된 다양한 방법은 생산자 세포로의 외인성 서열의 도입에 사용될 수 있다. 예를 들어, 다양한 유전자 편집 방법(예를 들어, 상동성 재조합, 트랜스폰-매개된 시스템, loxP-Cre 시스템, CRISPR/Cas9 또는 TALEN을 이용하는 방법)을 이용하여 변형된 세포는 본 개시내용의 범위 내에 있다.
외인성 서열은 본원에 개시된 스캐폴드 모이어티를 암호화하는 서열 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함할 수 있다. 스캐폴드 모이어티를 암호화하는 서열의 추가의 카피는 (예를 들어, EV, 예를 들어 엑소좀의 표면 상에 또는 내강 표면 상에 스캐폴드 모이어티의 더 높은 밀도를 갖는) 본원에 기재된 EV(예를 들어, 엑소좀)를 제조하도록 도입될 수 있다. 스캐폴드 모이어티의 변형 또는 단편을 암호화하는 외인성 서열은 스캐폴드 모이어티의 변형 또는 단편을 함유하는 내강-조작된 및/또는 표면-조작된 엑소좀을 제조하도록 도입될 수 있다.
일부 양태에서, 생산자 세포는 페이로드(예를 들어, 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제)에 연결된 스캐폴드 모이어티 및/또는 표적화 모이어티를 암호화하는 하나 이상의 벡터로 변형, 예를 들어 형질주입될 수 있다.
일부 양태에서, 본원에 개시된 생산자 세포는 추가 외인성 서열을 포함하도록 추가로 변형된다. 예를 들어, 추가 외인성 서열은 내인성 유전자 발현을 조절하도록 또는 페이로드(예를 들어, 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제) 및/또는 표적화 모이어티로서 소정의 폴리펩타이드를 포함하는 EV(예를 들어, 엑소좀)를 제조하도록 도입될 수 있다. 일부 양태에서, 생산자 세포는 2개의 외인성 서열을 포함하도록 변형되는데, 1개는 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X 및/또는 스캐폴드 Y), 또는 이의 변이체 또는 단편을 암호화하고, 다른 것은 페이로드 및/또는 표적화 모이어티를 암호화한다. 소정의 양태에서, 생산자 세포는 EV(예를 들어, 엑소좀)(예를 들어, 아쥬반트 또는 면역 조절제)에 추가 기능을 부여하는 추가 외인성 서열을 포함하도록 추가로 변형될 수 있다. 일부 양태에서, 생산자 세포는 2개의 외인성 서열을 포함하도록 변형되는데, 1개는 본원에 개시된 스캐폴드 모이어티, 또는 이의 변이체 또는 단편을 암호화하고, 다른 것은 EV(예를 들어, 엑소좀)(예를 들어, 아쥬반트 또는 면역 조절제)에 추가 기능을 부여하는 단백질을 암호화한다. 일부 양태에서, 생산자 세포는 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 또는 이것 초과의 추가 외인성 서열을 포함하도록 추가로 변형된다. 소정의 양태에서, 추가 외인성 서열은 본원에 개시된 페이로드(예를 들어, 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제) 및/또는 표적화 모이어티 중 어느 것을 암호화한다.
일부 양태에서, 본원에 개시된 전체-길이, 성숙 스캐폴드 모이어티 또는 페이로드에 연결된 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제) 및/또는 표적화 모이어티를 암호화하는 서열로 형질전환된 세포로부터 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀(예를 들어, 표면-조작된 및/또는 내강-조작된 엑소좀)이 제조될 수 있다. 본원에 기재된 임의의 스캐폴드 모이어티는 플라스미드, 게놈으로 삽입된 외인성 서열, 또는 다른 외인성 핵산, 예컨대 합성 메신저 RNA(mRNA)로부터 발현될 수 있다.
IV. 약제학적 조성물
본원에는 대상체에 대한 투여에 적합한 형태로 원하는 정도의 순도를 갖는 본 개시내용의 EV, 예를 들어 엑소좀, 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다. 약제학적으로 허용 가능한 부형제 또는 담체는 부분적으로 투여되는 특정 조성물뿐만 아니라 조성물을 투여하도록 사용된 특정 방법에 의해 결정될 수 있다. 따라서, 복수의 세포외 소포체를 포함하는 약제학적 조성물의 매우 다양한 적합한 제제가 있다. (예를 들어, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa. 21st ed. (2005)를 참조한다). 약제학적 조성물은 미국 식약청의 모든 우수 제조 기준(GMP: Good Manufacturing Practice) 규정을 완전히 준수하며 멸균으로 일반적으로 제제화된다.
일부 양태에서, 약제학적 조성물은 본원에 기재된 하나 이상의 치료제 및 엑소좀을 포함한다. 소정의 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 약제학적으로 허용 가능한 담체에서 하나 이상의 추가 치료제와 동시투여된다. 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀을 포함하는 약제학적 조성물은 추가 치료제의 투여 전에 투여된다. 다른 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀을 포함하는 약제학적 조성물은 추가 치료제의 투여 후에 투여된다. 추가의 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀을 포함하는 약제학적 조성물은 추가 치료제와 동시에 투여된다.
허용 가능한 담체, 부형제 또는 안정화제는 사용된 투여량 및 농도에서 수혜자(예를 들어, 동물 또는 인간)에게 비독성이고, 완충제, 예컨대 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기 산; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제(예컨대, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤잘코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레소르시놀; 사이클로헥사놀; 3-펜타놀; 및 m-크레솔); 저분자량(약 10개 미만의 잔기) 폴리펩타이드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신; 모노사카라이드, 디사카라이드 및 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 포함하는 다른 탄수화물; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염 형성 반대 이온, 예컨대 나트륨; 금속 착물(예를 들어, Zn-단백질 착물); 및/또는 비이온성 계면활성제, 예컨대 TWEEN™, PLURONICS™ 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함한다.
담체 또는 희석제의 예는 물, 식염수, 링거액, 덱스트로스 용액 및 5% 인간 혈청 알부민을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 약제학적 활성 물질을 위한 이러한 매질 및 화합물의 사용은 당해 분야에 잘 공지되어 있다. 임의의 종래의 매질 또는 화합물이 본원에 기재된 세포외 소포체와 부적합하는 한에 있어서는, 상기 조성물에서의 이의 사용이 고려된다. 상기 조성물로 보충 치료제를 또한 혼입할 수 있다. 통상적으로, 약제학적 조성물은 의도된 투여 경로에 맞도록 제제화된다. EV, 예를 들어 엑소좀은 비경구, 국소, 정맥내, 경구, 피하, 동맥내, 피내, 경피, 직장, 두개내, 복강내, 비강내, 종양내, 근육내 경로 또는 이식물로서 투여될 수 있다. 소정의 양태에서, 엑소좀을 포함하는 약제학적 조성물은 예를 들어 주사에 의해 정맥내로 투여된다. 적어도 부분적으로 EV, 예를 들어 엑소좀이 의도되는 질환, 장애 또는 병태를 치료하는 데 효과적인 다른 치료제와 조합되어 EV, 예를 들어 엑소좀이 선택적으로 투여될 수 있다.
용액 또는 현탁액은 하기 성분을 포함할 수 있다: 멸균 희석제, 예컨대 물, 식염수 용액, 고정유, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 다른 합성 용매; 항박테리아 화합물, 예컨대 벤질 알코올 또는 메틸 파라벤; 항산화제, 예컨대 아스코르브산 또는 아황산수소나트륨; 킬레이트화 화합물, 예컨대 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA); 완충제, 예컨대 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트, 및 등장성의 조정을 위한 화합물, 예컨대 염화나트륨 또는 덱스트로스. pH는 산 또는 염기, 예컨대 염산 또는 수산화나트륨에 의해 조정될 수 있다. 그 제제는 유리 또는 플라스틱으로 제조된 앰플, 일회용 주사기 또는 다중 용량 바이알에 밀봉될 수 있다.
주사용 사용에 적합한 약제학적 조성물은 멸균 수성 용액(수용성인 경우) 또는 분산액 및 멸균 분말을 포함한다. 정맥내 투여를 위해, 적합한 담체는 생리학적 식염수, 정균수, Cremophor EL™(BASF, 뉴저지주 파시파니) 또는 포스페이트 완충 식염수(PBS)를 포함한다. 상기 조성물은 일반적으로 멸균이고 용이한 주사가능성이 존재하는 정도로 유체이다. 담체는 예를 들어 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 및 이들의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 적정한 유동성은 예를 들어 레시틴과 같은 코팅의 사용에 의해, 분산액의 경우에 필요한 입자 크기의 유지에 의해 그리고 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 미생물의 작용의 방지는 다양한 항박테리아 및 항진균 화합물, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브산, 티메로살 등에 의해 달성될 수 있다. 원하면 등장성 화합물, 예를 들어 당, 다가알콜, 예컨대 만니톨, 소르비톨 및 염화나트륨을 상기 조성물에 첨가할 수 있다. 주사용 조성물의 연장된 흡수는 상기 조성물에 흡수를 지연시키는 화합물, 예를 들어 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 포함시켜 일어날 수 있다.
효과적인 양으로 적절한 용매 중에 원하는 대로 본원에 열거된 성분 중 하나 또는 이들의 조합에 의해 EV, 예를 들어 엑소좀을 혼입하여 멸균 주사용 용액이 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 염기성 분산 매질 및 임의의 원하는 다른 성분을 함유하는 멸균 비히클로 EV, 예를 들어 엑소좀을 혼입하여 제조된다. 무균 주사용 용액의 제조를 위한 무균 분말의 경우에, 제조 방법은 진공 건조 및 동결-건조이고, 이는 이의 이전에 멸균-여과된 용액으로부터 활성 성분과 임의의 추가의 원하는 성분의 분말을 생성시킨다. EV, 예를 들어 엑소좀의 지속적 방출 또는 박동성 방출을 허용하는 방식으로 제제화될 수 있는 데포 주사 또는 이식물 제제의 형태로 EV, 예를 들어 엑소좀을 투여할 수 있다.
엑소좀을 포함하는 조성물의 전신 투여는 또한 점막경유 수단에 의할 수 있다. 점막경유 투여를 위해, 침투되는 장벽에 적절한 침투제를 제제에서 사용한다. 이러한 침투제는 일반적으로 당해 분야에 공지되어 있고, 예를 들어 점막경유 투여를 위해 세제, 담즙염 및 푸시드산 유도체를 포함한다. 점막경유 투여는 예를 들어 비강 스프레이의 사용을 통해 달성될 수 있다.
소정의 양태에서, 엑소좀을 포함하는 약제학적 조성물은 약제학적 조성물로부터 이득을 받을 대상체의 정맥내로 투여된다. 소정의 다른 양태에서, 상기 조성물은 예를 들어 림프관내 주사 또는 절내 주사에 의해(예를 들어, Senti 등, PNAS 105( 46): 17908 (2008) 참조), 또는 근육내 주사에 의해, 피하 투여에 의해, 종양내 주사에 의해, 흉선 또는 간으로의 직접적인 주사에 의해 림프관계에 투여된다.
소정의 양태에서, 엑소좀을 포함하는 약제학적 조성물은 액체 현탁액으로서 투여된다. 소정의 양태에서, 약제학적 조성물은 투여 후 데포를 형성할 수 있는 제제로서 투여된다. 소정의 바람직한 양태에서, 데포는 EV, 예를 들어 엑소좀을 순환으로 천천히 방출하거나 데포 형태로 있는다.
통상적으로, 약제학적으로 허용 가능한 조성물은 오염물질이 없도록 고도로 정제되고, 생체적합성이고 비독성이며, 대상체에 대한 투여에 적합하다. 물이 담체의 성분이면, 물은 고도로 정제되고, 오염물질, 예를 들어 내독소가 없도록 가공된다.
약제학적으로 허용 가능한 담체는 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 소르비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 검, 인산칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산칼슘, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸하이드록시 벤조에이트, 프로필하이드록시 벤조에이트, 탈크, 스테아르산마그네슘 및/또는 광유일 수 있지만, 이들로 제한되지는 않는다. 약제학적 조성물은 활택제, 습윤제, 감미료, 향 증진제, 유화제, 현탁제 및/또는 보존제를 추가로 포함할 수 있다.
본원에 기재된 약제학적 조성물은 본원에 기재된 EV, 예를 들어 엑소좀 및 선택적으로 약제학적 활성제 또는 치료제를 포함한다. 치료제는 생물학적 물질, 소분자 물질 또는 핵산 물질일 수 있다.
본원에 기재된 EV, 예를 들어 엑소좀을 포함하는 약제학적 조성물을 포함하는 투여 형태가 제공된다. 일부 양태에서, 투여 형태는 정맥내 주사를 위한 액체 현탁액으로서 제제화된다. 일부 양태에서, 투여 형태는 종양내 주사를 위한 액체 현탁액으로서 제제화된다.
소정의 양태에서, 엑소좀의 제제는 잔류 복제-유능 핵산을 손상시키도록 방사선, 예를 들어 X선, 감마선, 베타 입자, 알파 입자, 중성자, 양성자, 원소 핵, UV 선으로 처리된다.
소정의 양태에서, 엑소좀의 제제는 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 초과 또는 100 kGy 초과의 조사 용량을 사용하여 감마 조사로 처리된다.
소정의 양태에서, 엑소좀의 제제는 0.1 초과, 0.5, 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, 7000, 8000, 9000, 10000 또는 10000 mSv 초과의 조사 용량을 사용하여 X선 조사로 처리된다.
V. 키트
본원에는 하나 이상의 본원에 기재된 엑소좀을 포함하는 키트가 또한 제공된다. 일부 양태에서, 본원에 기재된 약제학적 조성물의 하나 이상의 성분, 예컨대 하나 이상의 본원에 제공된 엑소좀으로 충전된 하나 이상의 용기, 선택적인 사용 설명서를 포함하는 약제학적 팩 또는 키트가 본원에 제공된다. 일부 양태에서, 키트는 본원에 기재된 약제학적 조성물 및 임의의 예방제 또는 치료제, 예컨대 본원에 기재된 것을 함유한다.
VI. EV, 예를 들어 엑소좀을 제조하는 방법
본 개시내용의 EV(예를 들어, 엑소좀)는 EV가 관심 모이어티(예를 들어, 항원, 아쥬반트, 면역 조절제 및/또는 표적화 모이어티)를 발현하도록 신속하게 조작될 수 있다는 점에서 전통적인 백신과 다르다. 본원에 기재된 것처럼, 관심 모이어티는 (i) EV의 표면(예를 들어, 외부 표면 및/또는 내강 표면)에 직접 연결될 수 있거나, (ii) 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X 및/또는 스캐폴드 Y)에 연결되고 이후 EV의 표면(예를 들어, 외부 표면 및/또는 내강 표면) 상에서 발현될 수 있거나, (iii) EV의 내강 내에서 발현될 수 있거나, 또는 (iv) 이들의 조합이다. 이러한 EV(예를 들어, 엑소좀)를 신속히 조작하는 능력은 EV(예를 들어, 엑소좀)-기반 백신을 개발하는 데 특히 유용하다. 예를 들어, 소정의 페이로드 및/또는 표적화 모이어티를 발현하도록 조작된 단일 EV(예를 들어, 엑소좀)는 단순히 관심 항원을 EV에 "플러깅"하여 넓은 범위의 질환 또는 장애를 치료하는 데 사용될 수 있다.
따라서, 일부 양태에서, 본 개시내용은 이러한 모듈식 또는 "플러그 및 플레이" EV(예를 들어, 엑소좀) 백신을 제조하는 방법에 관한 것이다. 소정의 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)-기반 백신을 제조하는 방법은 관심 항원이 조작된 EV에서 발현되도록 조작된 EV(예를 들어, 엑소좀)를 관심 항원과 혼합하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 조작된 EV(예를 들어, 엑소좀)는 하나 이상의 본원에 개시된 페이로드(예를 들어, 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제)를 포함한다. 소정의 양태에서, 조작된 EV(예를 들어, 엑소좀)는 하나 이상의 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X 및/또는 스캐폴드 Y)를 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 조작된 EV(예를 들어, 엑소좀)는 하나 이상의 표적화 모이어티를 추가적으로 포함한다. 일부 양태에서, 조작된 EV(예를 들어, 엑소좀)는 본원에 개시된 임의의 방법을 사용하여 제조될 수 있다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 또한 본원에 기재된 EV(예를 들어, 엑소좀)를 제조하는 방법에 관한 것이다. 일부 양태에서, 상기 방법은 생산자 세포로부터 EV, 예를 들어 엑소좀을 수득하는 방법이되, 생산자 세포는 EV, 예를 들어 엑소좀의 2개 이상의 성분(예를 들어, (i) 항원 및 아쥬반트, (ii) 항원 및 면역 조절제, (iii) 항원 및 표적화 모이어티, (iv) 항원, 아쥬반트 및 표적화 모이어티, (v) 항원, 면역 조절제 및 표적화 모이어티, (vi) 항원, 아쥬반트 및 면역 조절제, (vii) 항원, 아쥬반트, 면역 조절제 및 표적화 모이어티)을 함유하는 단계; 및 선택적으로 수득된 EV, 예를 들어 엑소좀을 단리하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 방법은 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)의 2개 이상의 성분(예를 들어, (i) 항원 및 아쥬반트, (ii) 항원 및 면역 조절제, (iii) 항원 및 표적화 모이어티, (iv) 항원, 아쥬반트 및 표적화 모이어티, (v) 항원, 면역 조절제 및 표적화 모이어티, (vi) 항원, 아쥬반트 및 면역 조절제, (vii) 항원, 아쥬반트, 면역 조절제 및 표적화 모이어티)을 도입하여 생산자 세포를 변형시키는 단계; 변형된 생산자 세포로부터 EV, 예를 들어 엑소좀을 수득하는 단계; 및 선택적으로 수득된 EV, 예를 들어 엑소좀을 단리시키는 단계를 포함한다. 추가의 양태에서, 상기 방법은 생산자 세포로부터 EV(예를 들어, 엑소좀)를 수득하는 단계; 수득된 EV(예를 들어, 엑소좀)를 단리하는 단계; 및 (예를 들어, 다수의 외인성 생물학적 활성 분자, 예를 들어 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제 및/또는 표적화 모이어티를 삽입함으로써) 단리된 EV(예를 들어, 엑소좀)를 변형시키는 단계를 포함한다. 소정의 양태에서, 상기 방법은 약제학적 조성물로 단리된 EV(예를 들어, 엑소좀)를 제제화하는 것을 추가로 포함한다.
VI.A 생산자 세포를 변형시키는 방법
상기에 기재된 것처럼, 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)를 제조하는 방법은 생산자 세포를 다수의(예를 들어, 2개 이상의) 관심 분자(예를 들어, 본원에 기재된 외인성 생물학적 활성 분자(예를 들어, 항원, 아쥬반트, 면역 조절제) 및/또는 표적화 모이어티)로 변형시키는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 본원에 개시된 생산자 세포는 본원에 개시된 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X 또는 스캐폴드 Y)로 추가로 변형될 수 있다.
일부 양태에서, 생산자 세포는 포유동물 세포주, 식물 세포주, 곤충 세포주, 진균 세포주 또는 원핵 세포주일 수 있다. 소정의 양태에서, 생산자 세포는 포유동물 세포주이다. 포유동물 세포주의 비제한적인 예는 인간 배아 신장(HEK) 세포주, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포주, HT-1080 세포주, HeLa 세포주, PERC-6 세포주, CEVEC 세포주, 섬유아세포 세포주, 양수세포 세포주, 상피 세포주, 간엽성 줄기 세포(MSC) 세포주, 및 이들의 조합을 포함한다. 소정의 양태에서, 포유동물 세포주는 HEK-293 세포, BJ 인간 포피 섬유아세포 세포, fHDF 섬유아세포 세포, AGE.HN® 뉴런 전구 세포, CAP® 양수세포 세포, 지방 간엽성 줄기 세포, RPTEC/TERT1 세포, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 양태에서, 생산자 세포는 일차 세포이다. 소정의 양태에서, 일차 세포는 일차 포유동물 세포, 일차 식물 세포, 일차 곤충 세포, 일차 진균 세포 또는 일차 원핵 세포일 수 있다.
일부 양태에서, 생산자 세포는 면역 세포, 이러한 항원 제시 세포, T 세포, B 세포, 자연 살해 세포(NK 세포), 대식세포, T 헬퍼 세포 또는 조절성 T 세포(Treg 세포)가 아니다. 다른 양태에서, 생산자 세포는 항원 제시 세포(예를 들어, 수지상 세포, 대식세포, B 세포, 비만 세포, 호중구, 쿠퍼-브로비츠 세포, 또는 임의의 이러한 세포로부터 유래된 세포)가 아니다. 일부 양태에서, 생산자 세포는 자연에 존재하는 항원-제시 세포가 아니다(즉, 변형됨). 일부 양태에서, 생산자 세포는 자연에 존재하는 수지상 세포, B 세포, 비만 세포, 대식세포, 호중구, 쿠퍼-브로비츠 세포, 이들 세포 중 어느 것으로부터 유래된 세포, 또는 임의의 이들의 조합이 아니다.
일부 양태에서, 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)는 전이유전자 또는 mRNA일 수 있고, 형질주입, 바이러스 형질도입, 전기천공, 압출, 음파처리, 세포 융합 또는 당업자에게 공지된 다른 방법에 의해 생산자 세포로 도입될 수 있다.
일부 양태에서, 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)는 형질주입에 의해 생산자 세포로 도입된다. 일부 양태에서, 합성 거대분자, 예컨대 양이온성 지질 및 중합체를 사용하여 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)를 적합한 생산자 세포로 도입할 수 있다(Papapetrou 등, Gene Therapy 12: S118-S130 (2005)). 일부 양태에서, 양이온성 지질은 전하 상호작용을 통해 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)와의 복합체를 형성한다. 이러한 양태의 일부에서, 양으로 하전된 복합체는 음으로 하전된 세포 표면에 결합하고, 내포작용에 의해 세포에 의해 채워진다. 일부 다른 양태에서, 양이온성 중합체는 생산자 세포를 형질주입하도록 사용될 수 있다. 이러한 양태의 일부에서, 양이온성 중합체는 폴리에틸렌이민(PEI)이다. 소정의 양태에서, 화학물질, 예컨대 인산칼슘, 사이클로덱스트린 또는 폴리브렌은 생산자 세포로 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)를 도입하도록 사용될 수 있다. 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)를 또한 물리적 방법, 예컨대 입자 매개된 형질주입, "유전자 총", 유전자총, 또는 입자 포격 기술을 이용하여 생산자 세포로 도입할 수 있다(Papapetrou 등, Gene Therapy 12: S118-S130 (2005)). 예를 들어 베타-갈락토시다제, 클로람페니콜 아세틸전환효소, 루시퍼라제 또는 녹색 형광 단백질과 같은 리포터 유전자는 생산자 세포의 형질주입 효율에 걸쳐 사용될 수 있다.
소정의 양태에서, 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)를 바이러스 형질도입에 의해 생산자 세포로 도입한다. 몰로니 쥣과 백혈병 바이러스(MMLV), 아데노바이러스, 아데노-연관된 바이러스(AAV), 단순 포진 바이러스(HSV), 렌티바이러스 및 스푸마바이러스를 포함하는 유전자 운반 비히클로서 다수의 바이러스를 사용할 수 있다. 바이러스 매개된 유전자 운반 비히클은 DNA 바이러스, 예컨대 아데노바이러스, 아데노-연관된 바이러스 및 헤르페스 바이러스에 기초한 벡터뿐만 아니라 레트로바이러스에 기초한 벡터를 포함한다.
소정의 양태에서, 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)를 전기천공에 의해 생산자 세포로 도입한다. 전기천공은 세포 막에서 일시적 기공을 생성하여서 세포로 다양한 분자를 도입하는 것을 허용한다. 일부 양태에서, DNA 및 RNA뿐만 아니라 폴리펩타이드 및 비폴리펩타이드 치료제를 전기천공에 의해 생산자 세포로 도입할 수 있다.
소정의 양태에서, 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)를 미량주사에 의해 생산자 세포로 도입한다. 일부 양태에서, 미시적 수준에서 생산자 세포로 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)를 주입하도록 유리 마이크로피펫을 사용할 수 있다.
소정의 양태에서, 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)를 압출에 의해 생산자 세포로 도입한다.
소정의 양태에서, 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)를 음파처리에 의해 생산자 세포로 도입한다. 일부 양태에서, 생산자 세포는 고강도 음파에 노출되어 세포 막의 일시적인 파괴를 야기하여 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)의 로딩을 허용한다.
소정의 양태에서, 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)를 세포 융합에 의해 생산자 세포로 도입한다. 일부 양태에서, 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)를 전기 세포 융합에 의해 도입한다. 다른 양태에서, 생산자 세포를 융합하도록 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 사용한다. 추가의 양태에서, 생산자 세포를 융합하도록 센다이 바이러스를 사용한다.
일부 양태에서, 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)를 저장성 용해에 의해 생산자 세포로 도입한다. 이러한 양태에서, 생산자 세포는 낮은 이온 농도의 완충제에 노출되어 이들이 터지게 하여 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)의 로딩을 허용할 수 있다. 다른 양태에서, 생산자 세포를 팽창시키고 생산자 세포 막에서 기공을 생성하도록 저장성 용액에 대한 제어된 투석을 이용할 수 있다. 후속하여, 막의 재실링을 허용하는 조건에 생산자 세포를 노출시킨다.
일부 양태에서, 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)를 세제 처리에 의해 생산자 세포로 도입한다. 소정의 양태에서, 기공을 생성하여 생산자 세포 막을 일시적으로 손상시키는 온화한 세제로 생산자 세포를 처리하여 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)의 로딩을 허용한다. 생산자 세포를 로딩한 후, 세제를 세척하여 막을 재실링한다.
일부 양태에서, 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)를 수용체 매개된 내포작용에 의해 생산자 세포로 도입한다. 소정의 양태에서, 생산자 세포는 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)의 결합 시 수용체 및 연관된 모이어티의 내제화를 유도하는 표면 수용체를 갖는다.
일부 양태에서, 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)를 여과에 의해 생산자 세포로 도입한다. 소정의 양태에서, 생산자 세포 및 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)는 생산자 세포보다 더 적은 기공 크기의 필터를 통해 강제될 수 있어서 생산자 세포 막을 일시적인 파괴하고 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)가 생산자 세포에 들어가게 한다.
일부 양태에서, 생산자 세포를 여러 동결 해동 사이클로 처리하여 세포 막을 파괴하여 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)의 로딩을 허용한다.
VI.B EV(예를 들어, 엑소좀)를 변형시키는 방법
일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)를 제조하는 방법은 EV(예를 들어, 엑소좀)로 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)를 직접 도입하여 단리된 EV(예를 들어, 엑소좀)를 변형시키는 단계를 포함한다. 소정의 양태에서, 하나 이상의 모이어티는 항원, 아쥬반트, 면역 조절제, 표적화 모이어티, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 양태에서, 하나 이상의 모이어티는 본원에 개시된 스캐폴드 모이어티(예를 들어, 스캐폴드 X 또는 스캐폴드 Y)를 포함한다.
소정의 양태에서, 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)를 형질주입에 의해 EV(예를 들어, 엑소좀)로 도입한다. 일부 양태에서, 합성 거대분자, 예컨대 양이온성 지질 및 중합체를 사용하여 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)를 EV(예를 들어, 엑소좀)로 도입할 수 있다(Papapetrou 등, Gene Therapy 12: S118-S130 (2005)). 소정의 양태에서, 화학물질, 예컨대 인산칼슘, 사이클로덱스트린 또는 폴리브렌은 EV(예를 들어, 엑소좀)에 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)를 도입하도록 사용될 수 있다.
소정의 양태에서, 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)를 전기천공에 의해 EV(예를 들어, 엑소좀)로 도입한다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 EV(예를 들어, 엑소좀) 막에서 일시적 홀을 야기하는 전기장에 노출되어 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)의 로딩을 허용한다.
소정의 양태에서, 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)를 미량주사에 의해 EV(예를 들어, 엑소좀)로 도입한다. 일부 양태에서, 미시적 수준에서 EV(예를 들어, 엑소좀)로 직접 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)를 주입하도록 유리 마이크로피펫을 사용할 수 있다.
소정의 양태에서, 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)를 압출에 의해 EV(예를 들어, 엑소좀)로 도입한다.
소정의 양태에서, 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)를 음파처리에 의해 EV(예를 들어, 엑소좀)로 도입한다.일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 고강도 음파에 노출되어 EV(예를 들어, 엑소좀) 막을 일시적으로 파괴하여 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)의 로딩을 허용한다.
일부 양태에서, 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)는 EV(예를 들어, 엑소좀)의 표면에 접합(즉, EV의 외부 표면 또는 EV의 내강 표면에 직접 접합 또는 연결)될 수 있다. 당해 분야에 공지된 방법에 의해 화학적으로 또는 효소적으로 접합이 달성될 수 있다.
일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 화학적으로 접합된 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)를 포함한다. 화학적 접합은 링커의 사용에 의해 또는 이것 없이 다른 분자에 대한 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)의 공유 결합에 의해 달성될 수 있다. 이러한 접합체의 형성은 당업자의 기술 내에 있고, 접합을 달성하기 위한 다양한 기법이 공지되어 있고, 특정 기법의 선택은 접합되는 재료에 의해 지도된다. 소정의 양태에서, 폴리펩타이드는 EV(예를 들어, 엑소좀)에 접합된다. 일부 양태에서, 비폴리펩타이드, 예컨대 지질, 탄수화물, 핵산 및 소분자는 EV(예를 들어, 엑소좀)에 접합된다.
일부 양태에서, 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)를 저장성 용해에 의해 EV(예를 들어, 엑소좀)로 도입한다. 이러한 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 낮은 이온 농도의 완충제에 노출되어 이들이 터지게 하여 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)의 로딩을 허용할 수 있다. 다른 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)를 팽창시키고 EV(예를 들어, 엑소좀) 막에서 기공을 생성하도록 저장성 용액에 대한 제어된 투석을 이용할 수 있다. 후속하여, 막의 재실링을 허용하는 조건에 EV(예를 들어, 엑소좀)를 노출시킨다.
일부 양태에서, 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)를 세제 처리에 의해 EV(예를 들어, 엑소좀)로 도입한다. 소정의 양태에서, 기공을 생성하여 EV(예를 들어, 엑소좀) 막을 일시적으로 손상시키는 온화한 세제로 세포외 소포체를 처리하여 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)의 로딩을 허용한다. EV(예를 들어, 엑소좀)를 로딩한 후, 세제를 세척하여 막을 재실링한다.
일부 양태에서, 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)를 수용체 매개된 내포작용에 의해 EV(예를 들어, 엑소좀)로 도입한다. 소정의 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)의 결합 시 수용체 및 연관된 모이어티의 내제화를 유도하는 표면 수용체를 갖는다.
일부 양태에서, 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)를 기계적 소성에 의해 EV(예를 들어, 엑소좀)로 도입한다. 소정의 양태에서, 세포외 소포체는 무거운 또는 하전된 입자, 예컨대 금 미세담체에 부착된 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)로 포격될 수 있다. 이러한 양태의 일부에서, 입자는 EV(예를 들어, 엑소좀) 막을 횡단하도록 기계적으로 또는 전기적으로 가속될 수 있다.
일부 양태에서, 세포외 소포체(예를 들어, 엑소좀)를 여러 동결 해동 사이클로 처리하여 EV(예를 들어, 엑소좀) 막을 파괴하여 하나 이상의 모이어티(예를 들어, 페이로드 및/또는 표적화 모이어티)의 로딩을 허용한다.
VI.C EV, 예를 들어 엑소좀을 단리하는 방법
일부 양태에서, 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)를 제조하는 방법은 생산자 세포로부터 EV(예를 들어, 엑소좀)를 단리하는 단계를 포함한다. 소정의 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 생산자 세포에 의해 세포 배양 배지로 방출된다. EV(예를 들어, 엑소좀)의 단리의 모든 공지된 방식이 본원에서 사용하기에 적합하다고 간주되는 것으로 고려된다. 예를 들어, 전기 전하(예를 들어, 전기영동 분리), 크기(예를 들어, 여과, 분자체 등), 밀도(예를 들어, 정기적 또는 구배 원심분리), 스베드베리 상수(Svedberg constant)(예를 들어, 외부 힘에 의한 또는 이것이 없는 침강 등)에 기초한 분리를 포함하는 배지 또는 다른 소스 재료로부터 이를 분리하도록 EV(예를 들어, 엑소좀)의 물리적 특성이 사용될 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 단리는 하나 이상의 생물학적 특성에 기초할 수 있고, (예를 들어, 침전, 고상에 대한 가역적 결합, FACS 분리, 특이적 리간드 결합, 비특이적 리간드 결합, 친화도 정제 등에 대해) 표면 마커를 이용할 수 있는 방법을 포함한다.
단리 및 농후화는 통상적으로 연속 원심분리를 포함하는 일반적이고 비선택적인 방식으로 수행될 수 있다. 대안적으로, 단리 및 농후화는 예컨대 EV(예를 들어, 엑소좀) 또는 생산자 세포-특이적 표면 마커를 사용하여 보다 특이적이고 선택적인 방식으로 수행될 수 있다. 예를 들어, 면역침전, FACS 분류, 친화도 정제 및 비드-결합된 리간드에 의한 자기 분리에서 특이적 표면 마커를 사용할 수 있다.
일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)를 단리하도록 크기 배제 크로마토그래피를 사용할 수 있다. 크기 배제 크로마토그래피 기법은 당해 분야에 공지되어 있다. 예시적인, 비제한적인 기법이 본원에 제공된다. 일부 양태에서, 보이드 부피 분획은 단리되고, 관심 EV(예를 들어, 엑소좀)를 포함한다. 추가로, 일부 양태에서, 일반적으로 당해 분야에 공지된 것처럼 (하나 이상의 크로마토그래피 분획의) 원심분리 기법에 의해 크로마토그래피 분리 후 EV(예를 들어, 엑소좀)를 추가로 단리할 수 있다. 일부 양태에서, 세포외 소포체를 추가로 단리하도록 예를 들어 밀도 구배 원심분리를 사용할 수 있다. 소정의 양태에서, 다른 기원의 EV(예를 들어, 엑소좀)로부터 생산자 세포-유래된 EV(예를 들어, 엑소좀)를 추가로 분리하는 것이 바람직할 수 있다. 예를 들어, 생산자 세포-유래된 EV(예를 들어, 엑소좀)는 생산자 세포에 특이적인 항원 항체를 사용하여 면역흡착 포획에 의해 비-생산자 세포-유래된 EV(예를 들어, 엑소좀)로부터 분리될 수 있다.
일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)의 단리는 비제한적인 예로서 차등 원심분리, 크기-기반 막 여과, 면역침전, FACS 분류 및 자기 분리를 포함하는 방법의 조합을 수반할 수 있다.
VII. 치료 방법
본 개시내용은 또한 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 이를 필요로 하는 대상체에서 질환 또는 장애를 예방하고/하거나 치료하는 방법을 제공한다. 일부 양태에서, 본 방법에 의해 치료될 수 있는 질환 또는 장애는 암, 이식편 대 숙주 질환(GvHD), 자가면역 질환, 감염성 질환 또는 섬유증 질환을 포함한다. 본 개시내용으로 치료될 수 있는 질환 또는 장애의 다른 비제한적인 예는 관용성, 알레르기, 아토피, 통증, 중독, 및 이들의 조합을 포함한다. 임의의 하나의 이론에 제한되지 않으면서, 일부 양태에서, 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)는 질환 또는 장애(예를 들어, 중독: 니코틴; 통증: CGRP 또는 물질 P)와 연관된 분자에 특이적으로 결합할 수 있는 중화 항체를 유도함으로써 이들 질환 또는 장애를 치료하고/하거나 예방할 수 있다. 예를 들어, 통증-매개된 신경펩타이드, 예컨대 물질-P, 신경 성장 인자, 브래디키닌 또는 칼시토닌-관련된 유전자 산물(CGRP)에 대한 체액 반응을 선호하는 EV(예를 들어, 엑소좀)는 통증 증후군을 치료하거나 예방하기 위해 이 표적에 대해 수동 항체 치료 대신에 사용될 수 있다. 편두통 치료를 위해 CGRP를 표적화하는 여러 예방적 수동 항체 치료의 최근의 규제 허가는 제안된 체액 활성 백신 접근법에 대한 강한 근거를 제공한다. EV(예를 들어, 엑소좀) 백신에서 발현된 단백질 또는 다른 분자에 불법 약물, 예컨대 니코틴, 코카인, 펜타닐, 헤로인, 메탐페타민 및 다른 것을 화학적으로 접합함으로써, 이들 소분자에 대해 항체 반응을 생성할 수 있다. 이러한 항약물 남용 백신은 남용된 물질의 뇌 노출을 제한하여 행복감 및 CNS 독성을 생성하는 이의 능력을 감소시킬 수 있다. 이와 같이, 강력한 TH2 배향 아쥬반트와 조합된 불법 약물 접합된 EV는 약물 오용 재활치료를 위한 백신 치료 전략을 제공할 수 있다. 일부 양태에서, 치료는 예방적이다. 다른 양태에서, 본 개시내용을 위한 EV(예를 들어, 엑소좀)는 면역 반응을 유도하도록 사용된다. 다른 양태에서, 본 개시내용을 위한 EV(예를 들어, 엑소좀)는 대상체를 백신접종하도록 사용된다.
일부 양태에서, 질환 또는 장애는 암이다. 소정의 양태에서, 본 개시내용의 EV는 암을 갖는 대상체에게 투여될 때, 면역 반응을 상향조절하고 대상체의 면역계의 종양 표적화를 향상시킬 수 있다. 일부 양태에서, 치료되는 암은 종양 미세환경, 또는 소위 "뜨거운 종양" 또는 "염증성 종양"으로의 백혈구(T-세포, B-세포, 대식세포, 수지상 세포, 단핵구)의 침윤을 특징으로 한다. 일부 양태에서, 치료되는 암은 종양 미세환경, 또는 소위 "차가운 종양" 또는 "비염증성 종양"으로의 백혈구 침윤의 낮은 수준 또는 검출 불가능한 수준을 특징으로 한다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 "차가운 종양"을 "뜨거운 종양"으로 전환하기에 충분한 양으로 및 그러한 시간 동안 투여되고, 즉 상기 투여는 종양 미세환경으로 백혈구(예컨대, T-세포)를 침윤시킨다. 소정의 양태에서, 암은 방광암, 자궁경부암, 신장 세포 암, 고환암, 결장직장암, 폐암, 두경부암 및 난소, 림프종, 간암, 교모세포종, 흑색종, 골수종, 백혈병, 췌장암, 또는 이들의 조합을 포함한다. 다른 용어에서, "근위 종양" 또는 "가까운 종양"은 원래의(또는 원발성) 종양에서 가까운 장기 또는 가까운 조직, 예를 들어 림프절로 퍼지는 종양을 지칭한다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV는 전이성 확산 후 종양을 치료한다.
일부 양태에서, 질환 또는 장애는 이식편 대 숙주 질환(GvHD)이다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 의해 치료될 수 있는 질환 또는 장애는 자가면역 질환이다. 자가면역 질환의 비제한적인 예는 다발성 경화증, 말초 신경통, 쇼그렌 증후군, 류마티스성 관절염, 탈모, 자가면역 췌장염, 베체트병, 수포성 유사천포창, 셀리악병, 데빅병(시신경 척수염), 사구체신염, IgA 신장병증, 각종 혈관염, 피부경화증, 당뇨병, 혈관염, 백반증, 궤양성 대장염, 자극성 장 증후군, 건선, 포도막염, 전신 홍반 루푸스, 그레이브병, 중증 근무력증, 심상성 천포창, 항사구체 기저막 질환(굿패스쳐 증후군), 하시모토 갑상선염, 자가면역 간염, 및 이들의 조합을 포함한다.
일부 양태에서, 질환 또는 장애는 감염성 질환이다. 소정의 양태에서, 질환 또는 장애는 종양발생 바이러스이다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 의해 치료될 수 있는 감염성 질환은 인간 감마 헤르페스 바이러스 4(엡스타인-바 바이러스), 인플루엔자 A 바이러스, 인플루엔자 B 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 스타필로코커스 아우레우스, 마이코박테륨 투베쿨로시스, 클라미디아 트라초마티스, HIV(예를 들어, HIV-2)), 코로나 바이러스(예를 들어, COVID-19, MERS-CoV 및 SARS CoV), 필로바이러스(예를 들어, 마르부르그 및 에볼라), 스트렙토코커스 피요게네스, 스트렙토코커스 뉴모니아에, 플라스모디아 종(예를 들어, 비박스 및 팔시파룸), 치쿤구니야 바이러스, 인간 유두종 바이러스(HPV), B형 간염, C형 간염, 인간 헤르페스 바이러스 8, 메르켈 세포 폴리오마바이러스(MCV), 분야바이러스(예를 들어, 한타 바이러스), 아레나 바이러스(예를 들어, LCMV 및 라사 바이러스), 플라비바이러스(예를 들어, 뎅기, 지카, 일본 뇌염, 웨스트 나일 및 황열), 엔테로바이러스(예를 들어, 소아마비), 아스트로바이러스(예를 들어, 위장염), 랍도비리다에(예를 들어, 광견병), 보렐리아 부르그도르페리 및 부렐리아 메이요니(예를 들어, 라임병), 단순 포진 바이러스 2(HSV2), 클레브시엘라 종, 슈도모나스 아에루기노사, 엔테로코커스 종, 프로테우스 종, 엔테로박터 종, 악티노박터 종, 코아귤라제-음성 스타필로코커스(CoNS), 마이코플라스마 종, 또는 이들의 조합을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
일부 양태에서, 질환 또는 장애는 통증을 포함한다. 본원에 사용된 "통증"이라는 용어는 비제한적인 예로서 신경병성 통증, 염증성 통증, 유해수용성 통증, 특발성 통증, 신경통성 통증, 구강안면 통증, 화상 통증, 구강 작열감 증후군, 신체화 통증, 내장 통증, 근막 통증, 치통, 암 통증, 화학요법 통증, 외상 통증, 수술 통증, 수술후 통증, 출산 통증, 분만 통증, 반사성 교감신경성 이영양증, 상완 신경총 손상, 신경인성 방광, 급성 통증(예를 들어, 근골격 및 수술후 통증), 만성 통증, 지속적 통증, 말초 매개된 통증, 중추 매개된 통증, 만성 두통, 편두통 두통, 가족성 편마비 편두통, 두부 통증과 연관된 병태, 부비강 두통, 긴장형 두통, 환상 사지 통증, 말초 신경 손상, 뇌졸중 후 통증, 시상 병변, 신경근병증, HIV(예를 들어, HIV-1, HIV-2) 통증, 대상포진후 통증, 비심장 흉통, 자극성 장 증후군 및 장 장애 및 소화불량과 연관된 통증, 마약성 약물 중독 금단과 연관된 통증, 및 이들의 조합을 포함하는 모든 통증 카테고리를 지칭한다.
일부 양태에서, 질환 또는 장애는 알레르기를 포함한다. 본원에 사용된 "알레르기"라는 용어는 보통 무해한 물질("알레르겐")에 대해 면역학적으로 매개된 불리한 반응을 발생시키는 획득된 가능성을 지칭한다. 알레르기의 비제한적인 예는 습진, 알레르기성 비염 또는 코감기, 건초열, 결막염, 기관지성 또는 알레르기성 천식, 심마진(두드러기), 음식 알레르기, 아토피성 피부염, 약물 알레르기, 혈관부종, 알레르기성 결막염, 과민증, 및 이들의 조합을 포함한다. 소정의 양태에서, 본 개시내용으로 치료될 수 있는 알레르기는 식품 알레르게(예를 들어, 땅콩, 우유, 계란, 조개류 및 낭욜매)(즉, 식품 알레르기)에 의해 야기된다. 일부 양태에서, 본 개시내용으로 치료될 수 있는 알레르기는 환경적 알레르게(예를 들어, 고양이 비듬, 돼지풀, 목초 꽃가루, 집먼지 진드기, 봉독, 라텍스 및 덩굴옻나무)에 의해 야기된다.
본 개시내용의 EV(예를 들어, 엑소좀)는 당해 분야에 공지된 임의의 유용한 방법 및/또는 경로에 의해 대상체에게 투여될 수 있다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 대상체의 순환계에 정맥내로 투여된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 적합한 액체에 주입되고 대상체의 정맥으로 투여된다.
일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 대상체의 순환계에 동맥내로 투여된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 적합한 액체에 주입되고 대상체의 동맥으로 투여된다.
일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 척추강내 투여에 의해 대상체에게 투여된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 이것이 뇌척수액(CSF)에 도달하도록 척추관 또는 지주막하 공간으로 주사를 통해 투여된다.
일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 대상체의 하나 이상의 종양에 종양내로 투여된다.
일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 비강내 투여에 의해 대상체에게 투여된다. 일부 양태에서, 국소 투여 또는 전신 투여 중 어느 하나의 형태로 EV(예를 들어, 엑소좀)가 코를 통해 통기될 수 있다. 소정의 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 비강 스프레이로서 투여된다. 일부 양태에서, 비강내 투여는 위장 조직으로의 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)의 효과적인 전달을 허용할 수 있다(예를 들어, 실시예 20 참조). 위장 조직에 전달된 이러한 EV(예를 들어, 엑소좀)는 다양한 장 연관된 병원균에 대해 보호를 제공하는 데 있어서 유용할 수 있었다.
일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 복강내 투여에 의해 대상체에게 투여된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 적합한 액체에 투여되고 대상체의 배막으로 투여된다. 일부 양태에서, 복강내 투여는 림프관에 대한 EV(예를 들어, 엑소좀)의 분포를 발생시킨다. 일부 양태에서, 복강내 투여는 흉선, 비장 및/또는 골수에 대한 EV(예를 들어, 엑소좀)의 분포를 발생시킨다. 일부 양태에서, 복강내 투여는 하나 이상의 림프절에 대한 EV(예를 들어, 엑소좀)의 분포를 발생시킨다. 일부 양태에서, 복강내 투여는 자궁경부 림프절, 서혜 림프절, 종격동 림프절 또는 흉골 림프절 중 하나에 대한 EV(예를 들어, 엑소좀)의 분포를 발생시킨다. 일부 양태에서, 복강내 투여는 췌장에 대한 EV(예를 들어, 엑소좀)의 분포를 발생시킨다.
일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 눈내 투여(예를 들어, 눈주위 투여)에 의해 대상체에게 투여된다. 일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀은 눈주위 조직으로 주사된다. 눈주위 약물 투여는 결막하, 전방 테논막하, 후방 테논막하 및 숨뇌뒤 투여의 경로를 포함한다.
본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)를 투여하기 위해 사용될 수 있는 다른 투여 경로의 비제한적인 예는 비경구, 국소, 경구, 피하, 피내, 경피, 직장, 복강내, 근육내, 설하, 또는 이들의 조합을 포함한다.
본원에 개시된 것처럼, 일부 양태에서, 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)는 하나 이상의 추가 치료제와 조합되어 대상체에게 투여될 수 있다. 소정의 양태에서, 하나 이상의 추가 치료제 및 EV(예를 들어, 엑소좀)는 동시에 투여된다. 일부 양태에서, 하나 이상의 추가 치료제 및 EV(예를 들어, 엑소좀)는 순차적으로 투여된다. 일부 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 하나 이상의 추가 치료제를 투여하기 전에 대상체에게 투여된다. 소정의 양태에서, EV(예를 들어, 엑소좀)는 하나 이상의 추가 치료제를 투여한 후 대상체에게 투여된다. 본원에 사용된 "치료제"라는 용어는 본원에 개시된 질환 또는 장애를 치료하는 데 사용될 수 있는 임의의 작용제(예를 들어, 암을 치료하기 위한 화학요법제 또는 면역 관문 억제제(예를 들어, 항-PD-1 항체))를 지칭한다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 EV(예를 들어, 엑소좀)와 조합되어 사용될 수 있는 하나 이상의 추가 치료제는 EV(예를 들어, 엑소좀)에서 발현되지 않는 페이로드(예를 들어, 항원, 아쥬반트 및/또는 면역 조절제)를 포함한다. 예를 들어, 본원에 개시된 치료 방법은 (i) 항원-부족 EV(예를 들어, 엑소좀) 및 (ii) EV에서 발현되지 않은 항원(예를 들어, 가용성 항원)을 이를 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함할 수 있다.
일부 양태에서, 본 개시내용으로 치료될 수 있는 대상체는 인간이다. 일부 양태에서, 대상체는 비인간 포유동물(예를 들어, 비인간 영장류, 개, 고양이, 기니아 피그, 토끼, 래트, 마우스, 말, 소, 닭, 조류 및 곰)이다. 따라서, 일부 양태에서, 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)는 동물(즉, 비인간 포유동물)의 건강을 개선하도록 사용될 수 있다.
본 개시내용의 실행은, 달리 표시되지 않는 한, 세포 생물학, 세포 배양, 분자 생물학, 유전자이식 생물학, 미생물학, 재조합 DNA 및 당해 분야의 기술 내에 있는 면역학의 종래의 기법을 이용할 것이다. 이러한 기법은 문헌에서 완전히 설명된다. 예를 들어, Sambrook 등, ed. (1989) Molecular Cloning A Laboratory Manual (2nd ed.; Cold Spring Harbor Laboratory Press); Sambrook 등, ed. (1992) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (Cold Springs Harbor Laboratory, NY); D. N. Glover ed., (1985) DNA Cloning, Volumes I and II; Gait, ed. (1984) Oligonucleotide Synthesis; Mullis 등 U.S. Pat. No. 4,683,195; Hames and Higgins, eds. (1984) Nucleic Acid Hybridization; Hames and Higgins, eds. (1984) Transcription And Translation; Freshney (1987) Culture Of Animal Cells (Alan R. Liss, Inc.); Immobilized Cells And Enzymes (IRL Press) (1986); Perbal (1984) A Practical Guide To Molecular Cloning; the treatise, Methods In Enzymology (Academic Press, Inc., N.Y.); Miller and Calos eds. (1987) Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells, (Cold Spring Harbor Laboratory); Wu 등, eds., Methods In Enzymology, Vols. 154 and 155; Mayer and Walker, eds. (1987) Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology (Academic Press, London); Weir and Blackwell, eds., (1986) Handbook Of Experimental Immunology, Volumes I-IV; Manipulating the Mouse Embryo, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., (1986); Crooke, Antisense drug Technology: Principles, Strategies and Applications, 2nd Ed. CRC Press (2007) 및 Ausubel 등 (1989) Current Protocols in Molecular Biology (John Wiley and Sons, Baltimore, Md.)를 참조한다.
상기 인용된 참고문헌의 모두뿐만 아니라, 본원에 인용된 참고문헌의 모두는 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
하기 실시예는 제한의 방식이 아니라 예시의 방식으로 제공된다.
실시예
실시예 1: 조작된-엑소좀의 생성
본원에 기재된 엑소좀을 생성하기 위해, 인간 배아 신장(HEK) 세포주(HEK293SF)를 사용하였다. 이후, 관심 작용제(예를 들어, 항원, 아쥬반트 또는 면역 조절제)에 연결된 스캐폴드 X 및/또는 스캐폴드 Y로 세포를 안정하게 형질주입하였다. 도 1a, 도 1b 및 도 2를 참조한다. 예를 들어, CD40L-발현 엑소좀은 CD40L-GFP PTGFRN 융합 분자로 HEK293SF 세포를 형질주입하여 생성되었고, 이 분자는 단량체(pCB-518 내지 pCB-526) 또는 강제된 삼합체(pCB-607 및 pCB-527)로서 발현되었다. 삼합체성 CD40L-GFP PTGFRN 융합 분자의 예는 도 1a에 도시되어 있다. 유사하게, 닭 난알부민(OVA) 발현 엑소좀을 생성하기 위해, BASP1의 1번 내지 10번 아미노산("BASP1(1-10)-OVA")에 대한 융합으로서 난알부민은 HEK293SF 세포에서 안정하게 발현되었다.
HEK293SF 세포는 형질주입 시 7일 동안 화학적으로 한정된 배지에서 고밀도로 성장하였다. 조건화된 세포 배양 배지를 수집하고, 300 내지 800 x g에서 실온에서 5분 동안 원심분리하여 세포 및 큰 부스러기를 제거하였다. 이후, 배지 상청액을 1000 U/L의 BENZONASE®로 보충하고, 물욕에서 37℃에서 1시간 동안 항온처리하였다. 상청액을 수집하고, 잔류 세포 부스러기 및 다른 큰 오염물질을 제거하기 위해 16,000 x g에서 4℃에서 30분 동안 원심분리하였다. 이후, 상청액을 133,900 x g에서 4℃에서 3시간 동안 초원심분리하여 엑소좀을 펠릿화하였다. 상청액을 버리고, 관의 바닥으로부터 임의의 잔류 배지를 흡인하였다. 펠릿을 200 내지 1000 μL의 PBS(-Ca -Mg)에 재현탁하였다.
엑소좀 집단을 추가로 농후화하기 위해, 밀도 구배 정제(수크로스 또는 OPTIPREP™)를 통해 펠릿을 가공하였다.
엑소좀 분획을 분리하도록 SW 41 Ti 회전자에 배치된 12 mL의 Ultra-Clear(344059) 관에서 200,000 x g에서 4℃에서 16시간 동안 구배를 스피닝하였다.
엑소좀 층을 상층으로부터 조심스럽게 외부로 꺼내고, 38.5 mL의 Ultra-Clear(344058) 관에서 약 32.5 mL의 PBS에 희석하고, 133,900 x g에서 4℃에서 3시간 동안 다시 초원심분리하여 정제된 엑소좀을 펠릿화하였다. 생성된 펠릿을 최소 부피(약 200 μL)의 PBS로 재현탁하고, 4℃에서 저장하였다.
OPTIPREP™ 구배에 대해, SW 41 Ti 회전자에 대해 12 mL의 Ultra-Clear(344059) 관에서 동일 부피의 10%, 30% 및 45% OPTIPREP™에 의해 3-단 멸균 구배를 제조하였다. 펠릿을 OPTIPREP™ 구배에 첨가하고, 엑소좀 분획을 분리하도록 200,000 x g에서 4℃에서 16시간 동안 초원심분리하였다. 이후, 관의 상부 약 3 mL로부터 엑소좀 층을 온화하게 수집하였다.
엑소좀 분획을 38.5 mL의 Ultra-Clear(344058) 관에서 약 32 mL의 PBS에 희석하고, 133,900 x g에서 4℃에서 3시간 동안 초원심분리하여 정제된 엑소좀을 펠릿화하였다. 이후, 펠릿화된 엑소좀을 최소 부피의 PBS(약 200 μL)에 재현탁하고, 사용에 준비될 때까지 4℃에서 저장하였다.
실시예 2: 항원-특이적 T 세포 반응을 유도하는 조작된-엑소좀의 효능
면역 반응을 유도하는 본원에 개시된 엑소좀의 능력을 평가하기 위해, OVA-스캐폴드 Y를 발현하고 STING 작용제 CL656이 로딩된 조작된-엑소좀("Py-OVA-exoSTING")을 정맥내 또는 비강내 어느 하나로 마우스에 투여하였다. 투여 후 1주에, 각각 정맥내 또는 비강내 투여 후 비장 및 혈액 또는 폐 및 비장의 효소 분리에 의해 유세포분석법 및/또는 IFN-γ ELISPOT 검정 둘 다를 통해 OVA에 반응성인 CD8+ T 세포의 빈도를 평가하였다. 대조군 동물은 하기 중 하나를 받았다: (i) 가용성 OVA 단백질(엑소좀의 일부가 아님)과 조합된 복강내 주사된 항-CD40 항체("IP aCD40+OVA"); (ii) 가용성 OVA 단백질(엑소좀의 일부가 아님)과 조합된 cAIM(PS)2 Difluor(Rp/Sp)("CL656"; STING 작용제)("CL656+OVA"); (iii) 가용성 OVA 단백질(OVA는 엑소좀의 일부가 아님)과 조합된 스캐폴드 X를 오직 과발현하고 STING 작용제가 로딩된 엑소좀("Px-exoSTING + OVA"); 및 (iv) OVA-스캐폴드 Y 융합 단백질을 오직 발현하는 엑소좀("Py-OVA").
도 3a 및 도 3b에 도시된 것처럼, 상이한 치료 그룹 중에서, Py-OVA-exoSTING 엑소좀의 정맥내 투여를 받은 동물은 비장 및 PBMC 둘 다에서 OVA-특이적 CD8 T 세포의 가장 큰 수를 가졌다. 비강내로 상이한 치료 섭생이 투여될 때 유사한 결과가 관찰되었다. (유세포분석법 분석에 대해 도 4a 및 도 4b를 참조하고, ELISPOT 결과에 대해 도 5a 및 도 5b를 참조한다). 이 결과는 본원에 개시된 엑소좀(즉, OVA-스캐폴드 Y 둘 다를 포함하고 STING 작용제가 로딩됨)이 관심 항원(예를 들어, 종양 또는 미생물 항원)에 대해 튼튼한 면역 반응을 유도하는 데 사용될 수 있다는 것을 입증한다.
실시예 3: 면역 관용성을 유도하는 조작된-엑소좀의 효능
본원에 개시된 엑소좀의 관용원성 가능성을 평가하기 위해, 자가면역 질환과 연관된 항원을 포함하는 조작된-엑소좀(예를 들어, 베타-세포 단백질(I형 당뇨병), 미엘린 희소돌기신경교 당단백질(MOG, 다발성 경화증) 또는 활막 단백질(류마티스성 관절염))이 작제될 것이다. 실시예 2에서처럼, 항원은 본원에 기재된 스캐폴드 Y 단백질에 연결될 것이다. 조작된-엑소좀의 일부는 NFkB 저해 클래스에서의 면역 조절제, 예컨대 라파마이신 및/또는 이의 유도체를 추가로 포함할 것이다. 이들 면역 조절제는 스캐폴드 X 단백질에 연결된 엑소좀(예를 들어, 본원에 기재된 것)에서 발현되거나 외인성으로 엑소좀으로 로딩될 것이다.
상기 조작된 엑소좀은 지연형 과민증(DTH) 또는 실험 자가면역 뇌척수염(EAE)에 대한 실험 동물 모델에 투여될 것이다. 이후, 유세포분석법 및 ELISPOT 검정과 같은 검정을 이용하여 동물에서 표적 항원에 대한 관용원성/조절성 T 세포 반응이 평가될 것이다.
실시예 4: 면역 반응을 유도하는 데 있어서 다른 항원-아쥬반트 조합과의 조작된-엑소좀의 비교
OVA-특이적 면역 반응(T 세포 및 B 세포 둘 다)을 유도하는 본원에 개시된 조작된-엑소좀의 능력(예를 들어, 실시예 2 참조)은 다른 공지된 항원-아쥬반트 조합과 비교될 것이다. 구체적으로는, 하기 항원-아쥬반트 조합에 대해 직접 헤드-대-헤드 비교가 수행될 것이다: 가용성 OVA(항원) 및 모노포스포릴 지질 A(MPLA), 물 에멀션 중의 스쿠알렌(AddaVax™), 사포닌계 백신(Quil-A®), 불완전 프로인트 아쥬반트(IFA) 및/또는 폴리이노신산-폴리시티딜산(poly I:C)에 의한 백신접종.
하기 종점이 분석될 것이다: (i) 유도된 T 세포 하위집단의 분포, 즉 단일 투여 후 1주 및 부스트 투여 후 1주(2의 용량, 2주 떨어짐)에 % OVA-반응성 CD8 및 CD4 T 세포; (ii) T 세포 효과기 분석: 상기와 동일, 그러나 CD4 및 CD8 구획에서 T 세포 반응의 유형을 조사. 시점은 상기와 동일할 것이고, 분석은 흐름에 의해 세포내 사이토카인 염색(ICS)일 것임; 및 (iii) 부스트 투여(제2 용량) 후 1주에 체액 반응: 이는 ELISA 또는 바이오층 간섭법(BLI)에 의한 OVA-특이적 항체 및 항체 종류에 대한 혈청의 분석뿐만 아니라 비오티닐화된 전체 OVA 항원에 대한 B 세포 반응성의 유동 기반 분석일 것임.
실시예 5: 내강 항원의 용량 반응 분석
효과적인 면역 반응을 개시하도록 본원에 개시된 조작된-엑소좀에 필요한 가장 적은 항원 양을 결정하기 위해 용량 반응 분석이 수행될 것이다. 연구는 동일량의 CL656 및 감소하는 양의 Py-OVA가 로딩된 Py-OVA:Py-GFP 혼합물(즉, 스캐폴드 Y 단백질에 둘 다 연결된 OVA 및 GFP를 발현하는 엑소좀)을 증가하는 양의 Py-GFP와 비교할 것이다. 표 10(하기)을 참조한다.
[표 10]
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실시예 2에 기재된 것처럼, 대략 투여 후 1주에, 동물은 희생될 것이고, 유세포분석법 및/또는 ELISPOT 검정을 이용하여 다양한 조직(예를 들어, 비장, 폐, 혈액)에서 항원-특이적 면역 반응이 평가될 것이다.
실시예 6: 면역 반응의 유도에 대한 투여 경로의 효과
데이터는 비강내, 정맥내, 피하, 복강내 및 근육내 투여 후 Py-OVA-exoSTING(실시예 2 참조)의 여러 용량을 비교할 것이다. 종점 분석은 (2주 떨어진) 단일 투여 및 이중 투여 후 1주에 비장 및 순환 (PBMC) OVA-반응성 CD4 및 CD8 T 세포를 포함할 것이다.
실시예 7: 점막 호밍의 유도
점막 조직 내에 면역 반응을 유도하는 본원에 개시된 엑소좀의 능력을 평가하기 위해, Py-OVA-exoSTING(실시예 2 참조)는 암컷 마우스에 비강내로 투여될 것이다. 1 또는 2 용량 후, 암컷 마우스는 MPLA 및 스쿠알렌의 질내 투여의 유도에 의해 시험감염될 것이다. 질내 시험감염 후 5일에 생식관은 수확되고, OVA-특이적 CD4 및 CD8 T 세포의 동원에 대해 평가될 것이다.
실시예 8: 정맥내 또는 비강내 백신접종 후 조직 상주 기억 T 세포 반응
순환 및/또는 조직 상주 기억 T 세포를 유도하는 본원에 개시된 조작된-엑소좀의 능력을 더 잘 규명하기 위해, 실시예 2에 기재된 것처럼 Py-OVA-exoSTING는 동물에게 투여될 것이다. 투여 후 1주에, (비강내 투여를 받은 동물로부터의) 폐 및/또는 (정맥내 투여를 받은 동물로부터의) 간은 가공되고 순환 및/또는 조직-상주 기억 T 세포에 대해 분석될 것이다.
실시예 9: 인간 헤르페스 바이러스 2(HSV2)에 대한 치료학적 백신접종
동물이 생식기 HSV2 감염을 갖는 HSV2 감염의 마우스 모델은 하기 중 하나로 비강내로 치료될 것이다: (i) 스캐폴드 Y에 연결되고 STING 작용제가 로딩된 HSV2 항원을 발현하는 엑소좀("Py-HSV2-exoSTING"), (ii) 스캐폴드 Y에 연결되고 STING 작용제가 로딩된 OVA 항원을 발현하는 엑소좀("Py-OVA-exoSTING") 또는 ACYCLOVIR™. Py-HSV2-exoSTING 작제물은 2개 내지 3개의 상이한 HSV2 항원을 발현할 것이다. 종점은 상이한 치료 섭생의 (2주마다의) 1 또는 2의 용량 후 바이러스 배출 및 마비를 측정할 것이다.
실시예 10: 인간 헤르페스 바이러스 2(HSV2)에 대한 예방학적 백신접종
실시예 9에 기재된 엑소좀 작제물을 사용하여, 미경험 마우스는 (2주마다) 1회 또는 2회 비강내로 백신접종되고 최종 투여 후 1주에 HSV2로 질내 시험감염될 것이다. 종점은 시험감염 후 3주에 걸쳐 바이러스 배출 및 마비의 측정을 포함할 것이다.
실시예 11: EG7-OVA 종양을 보유하는 마우스에 대한 치료학적 백신접종
마우스는 피하 EG7-OVA 종양이 접종될 것이다. 종양이 50 mm3에 도달할 때, 마우스는 Py-OVA-exoSTING(실시예 2 참조) 또는 적절한 대조군이 비강내로, 정맥내로 또는 피하로 백신접종될 것이다. 종점은 종양 성장 저해(TGI)로 표현된 종양 성장의 측정일 것이다.
실시예 12: Py-OVA-exoSTING과 비교된 CD40L-Px:Py-OVA-exoSTING에 의한 백신접종
면역 반응을 유도하는 Py-OVA-exoSTING(실시예 2 참조)의 능력은 (i) 스캐폴드 X에 연결된 CD40L, (ii) 스캐폴드 Y에 연결된 OVA를 발현하고, (iii) STING 작용제가 로딩된 엑소좀("CD40L-Px:Py-OVA-exoSTING")과 직접 비교될 것이다. 엑소좀은 미경험 동물에게 투여될 것이고, 이후 OVA-특이적 T 세포 반응은 실시예 2에 기재된 것처럼 투여 후 대략 1주에 다양한 조직에서 평가될 것이다.
실시예 13: 항-Clec9a EV(예를 들어, 엑소좀)에 의한 백신접종
동물 모델에서 면역 반응을 유도하는 STING 작용제가 로딩되고 항-Clec9a 모이어티를 발현하는 OVA-발현 EV(예를 들어, 엑소좀)("항-Clec9a EV")의 능력이 또한 평가될 것이다. 도 6은 제안된 실험 설계의 도식을 제공한다. 동물은 하기 중 하나로 치료될 것이다: (i) STING 작용제가 로딩되고 대조군 아이소타입 항체를 발현하는 OVA-발현 EV(예를 들어, 엑소좀); (ii) 대조군 아이소타입 항체 단독을 발현하는 OVA-발현 EV(예를 들어, 엑소좀); (iii) STING 작용제가 로딩되고 항-Clec9a 표적화 모이어티를 발현하는 OVA-발현 EV(예를 들어, 엑소좀); (iv) 항-Clec9a 표적화 모이어티를 발현하지만 STING 작용제가 로딩되지 않은 OVA-발현 EV(예를 들어, 엑소좀); 및 (v) OVA 단독을 발현하는 EV(예를 들어, 엑소좀). 비강내로 상이한 치료 섭생이 투여될 것이다. 이후, 동물의 일부는 희생될 것이고, OVA-특이적 T 세포 반응은 비장 및 폐에서 평가될 것이다. 동물의 일부는 초기 투여 후 대략 14일에 EV(예를 들어, 엑소좀)의 제2 투여를 받을 것이다. OVA-특이적 T 세포 반응은 부스트 후 추가로 평가될 것이다.
실시예 14: 항-EBV BZLF1 EV(예를 들어, 엑소좀)에 의한 백신접종
면역 반응을 유도하는 엡스타인-바 바이러스(EBV) BZLF1 항원이 로딩된 EV(예를 들어, 엑소좀)의 능력은 상기 개시된 방법 및 실험 설계에 따라 동물 모델에서 평가될 것이다(예를 들어, BZLF1에 의해 상기 개시된 항원을 대체). 도 8은 EV의 내강 표면 막에 부착된 BZLF1 항원을 함유하는 EV, 예를 들어 엑소좀의 도식적 표시를 보여준다.
실시예 15: 효과기 및 기억 T 세포(비장)를 유도하는 조작된-엑소좀의 효능
본원에 개시된 엑소좀에 의한 면역화 후 관찰된 T 세포 반응을 추가로 규명하기 위해(실시예 2 참조), 마우스에서 효과기 및 기억 T 세포 둘 다를 유도하는 엑소좀의 능력이 관찰되었다. 간단하게, OVA-스캐폴드 Y를 발현하고 STING 작용제 CL656이 로딩된 조작된-엑소좀("Py-OVA exoVACC")을 피하로 마우스에 투여하였다. 대조군 동물은 하기 중 하나를 받았다: (i) 가용성 OVA("OVA"), (ii) 가용성 OVA + CL656("OVA + STING"), (iii) OVA-스캐폴드 Y 융합 단백질을 오직 발현하는 엑소좀("PyOVA"), (iv) OVA-스캐폴드 Y 융합 단백질 + 가용성 CL656을 오직 발현하는 엑소좀(즉, STING 작용제는 엑소좀으로 로딩되지 않음)("PyOVA + STING") 및 (v) 가용성 OVA + 명반 아쥬반트("OVA + 명반").
투여 후 2주에, 동물의 일부를 희생하고, IFN-γ ELISPOT 검정을 이용하여 비장에서 OVA-특이적 T 세포(CD4+ 및 CD4+ T 세포 둘 다)의 빈도를 평가하였다. IFN-γ 생성을 유도하기 위해, CD4+ 및 CD8+ T 세포에 특이적인 OVA 펩타이드로 비장세포를 시험관내 자극하였다. 동일한 치료 섭생으로 남은 동물을 부스팅하였다(즉, 다시 면역화하였다). 이후, 초기 면역화 후 28일(또는 부스트 후 14일)에, 동물을 희생하고, IFN-γ ELISPOT 검정을 이용하여 비장에서 OVA-특이적 T 세포(CD4+ 및 CD4+ T 세포 둘 다)의 빈도를 또한 평가하였다.
도 9a 및 도 9b에 도시된 것처럼, 단일 피하 투여 후, Py-OVA exoVACC 엑소좀을 받은 동물은 비장에서 OVA-특이적 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 가장 큰 수를 가졌다. 이 CD4+ 및 CD8+ T 세포 수의 증가는 Py-OVA exoVACC 엑소좀을 받은 동물에서 부스트 후 추가로 증가하였다.
상기 데이터는 실시예 2로부터의 결과와 일치하고, 본원에 개시된 엑소좀(예를 들어, OVA-스캐폴드 Y를 발현하고 STING 작용제 CL656이 로딩된 조작된-엑소좀)이 피하로 투여될 때에도 관심 항원(예를 들어, 종양 또는 미생물 항원)에 대해 튼튼한 효과기 및 기억 T 세포를 유도하도록 사용될 수 있다는 것을 추가로 입증한다.
실시예 16: 효과기 및 기억 T 세포(폐)를 유도하는 조작된-엑소좀의 효능
실시예 15로부터의 결과가 또한 다른 조직(예를 들어, 점막 조직)에서 관찰되는지를 평가하기 위해, OVA-스캐폴드 Y를 발현하고 STING 작용제 CL656이 로딩된 조작된-엑소좀("Py-OVA exoVACC")을 비강내 투여를 통해 마우스에 투여하였다. 면역화 후 7일에, 동물의 일부를 희생하고, 유세포분석법을 이용하여 폐에서 OVA-특이적 CD8+ T 세포의 빈도를 평가하였다. 남은 마우스를 대신에 Py-OVA exoVACC의 제2 투여에 의해 부스팅하였다. 이들 동물을 나중에 1주일(즉, 초기 면역화 후 14일)에 희생하고, 유세포분석법을 이용하여 폐에서 OVA-특이적 CD8+ T 세포의 빈도를 평가하였다. 시점 둘 다에서, OVA-특이적 CD8+ T 세포는 효과기 기억(CD44+ 및 CD62L-) 또는 상주 기억(CD44+, CD62L-, 및 CD103+) T 세포로 추가로 분류되었다.
도 10에 도시된 것처럼, Py-OVA exoVACC의 단일 비강내 투여 후, 치료된 동물의 폐에서 튼튼한 OVA-특이적 효과기 기억 CD8+ T 세포가 관찰되었다. 부스트 후, OVA-특이적 CD8+ T 세포의 수가 더 증가하여서 튼튼한 효과기 및 기억 CD8+ T 세포를 생성시켰다.
본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)가 또한 튼튼한 상주 기억 CD4+ T 세포를 증가시킬 수 있는지를 평가하기 위해, 마우스는 하기 중 하나를 비강내 투여를 통해 받았다: (i) 가용성 OVA("OVA"), (ii) OVA-스캐폴드 Y 융합 단백질을 오직 발현하는 엑소좀("PyOVA"), (iii) OVA-스캐폴드 Y를 발현하고 STING 작용제 CL656이 로딩된 엑소좀("Py-OVA exoVACC"), (iv) 가용성 OVA + 가용성 poly I:C("OVA + poly I:C") 및 (v) OVA-스캐폴드 Y 융합 단백질 + 가용성 poly I:C를 오직 발현하는 엑소좀("PyOVA + poly I:C"). 초기 면역화 후 7일에, 동물은 동일한 치료의 제2 투여를 받았다. 이후, 동물을 나중에 1주일(즉, 초기 면역화 후 14일)에 희생하고, 유세포분석법을 이용하여 폐에서 OVA-특이적 CD8+ T 세포의 빈도를 평가하였다.
상기 결과와 일치하게, Py-OVA exoVACC로 치료된 동물은 폐 내의 튼튼한 상주 기억 CD8+ T 세포를 나타냈다(도 13a, 도 13b 및 도 13c). 상주 기억 CD4+ T 세포에 대해 유사한 결과가 관찰되었다.
총체적으로, 상기 데이터는 점막 조직(예를 들어, 폐)에서를 포함하여 튼튼한 효과기 및 기억 T 세포(CD8+ 및 CD4+ 둘 다)를 유도하는 본원에 개시된 엑소좀(예를 들어, OVA-스캐폴드 Y를 발현하고 STING 작용제 CL656이 로딩된 조작된-엑소좀)의 유효성을 추가로 입증한다.
실시예 17: EV(예를 들어, 엑소좀)를 발현하는 항-Clec9a의 친화성의 분석
상기 제공된 실시예 13에 더하여, EV(예를 들어, 엑소좀)는 표면 상의 스캐폴드 X 단백질에 연결된 항-Clec9a 항체 단편("항-Clec9a EV")을 발현하도록 조작되었다. 이전의 실시예에서처럼, 항-Clec9a EV는 STING 작용제 CL656이 로딩되었다.
항-Clec9a EV를 마우스에 투여하고, 이의 세포 특이적 친화성을 평가하였다. 대조군 동물은 PBS 단독("PBS") 또는 스캐폴드 X 단백질 단독을 발현하는 엑소좀("PrX EV") 중 어느 하나를 받았다. 도 11a에 도시된 것처럼, 비장 내의 종래의 수지상 세포 1("cDC1") 집단에 의한 항-Clec9a EV의 우선적 흡수가 있었다. 분석된 다른 수지상 세포(즉, 종래의 DC 2("cDC2") 및 형질세포양 DC("pDC")) 중에서, 대조군 엑소좀(PrX EV)과 비교하여 항-Clec9a EV의 흡수에서 인식 가능한 차이가 없었다.
다음에, cDC1에 대한 항-Clec9a EV의 향상된 친화성의 효과를 추가로 평가하기 위해, (야생형 마우스로부터 단리된) 비장 수지상 세포를 시험관내 항-Clec9a EV로 자극하고, DC 내의 STING 활성을 평가하였다. 다양한 농도의 항-Clec9a EV(즉, 0.4 nM, 1 nM 또는 4 nM)에 의해 DC를 자극하였다. 대조군 그룹에서의 DC를 하기 중 하나로 자극하였다: (i) 가용성 STING 작용제("유리 STING"), (ii) 스캐폴드 X 단백질 단독(즉, 항-Clec9a 항체 단편 무)을 발현하고 STING 작용제("PrX-STING")가 로딩된 EV(예를 들어, 엑소좀) 및 (iii) 비관련 항체를 발현하고 STING 작용제가 로딩된 EV(예를 들어, 엑소좀)("아이소타입-STING"). 상이한 DC에 의해 생성된 IL-12의 양에 의해 STING 활성을 평가하였다. 도 11b에 도시된 것처럼, 항-Clec9a EV에 의해 치료된 단리된 DC는 PrX-STING로 치료된 DC를 포함하는 다른 그룹과 비교하여 IL-12의 훨씬 더 많은 양을 생성하였다.
상기 결과는 항-Clec9a 표적화 모이어티를 발현하는 EV(예를 들어, 엑소좀)가 Clec9a-발현 세포, 예컨대 cDC1을 우선적으로 표적화할 수 있고, 이의 향상된 친화성이 수지상 세포 활성화를 증가시키는 것을 도울 수 있다는 것을 입증한다. 이러한 능력은 본 개시내용에 기재된 것처럼 백신접종의 맥락에서 유용할 수 있다.
실시예 18: 면역 반응을 유도하는 것에 대한 투여 경로의 효과
상기 제공된 실시예 6에 더하여, 면역 반응을 유도하는 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)의 능력에 대한 투여 경로의 효과를 추가로 평가하였다. 간단하게, OVA-스캐폴드 Y를 발현하고 STING 작용제 CL656이 로딩된 조작된-엑소좀("Py-OVA exoVACC")(1 μg의 OVA)을 (i) 정맥내("IV"), (ii) 비강내("IN") 및 (iii) 피하("SQ")의 투여 경로 중 하나를 통해 마우스에 투여하였다. 비교로서, 마우스의 일부는 상업적으로 이용 가능한 제제(ADDAVAX™, InvioGen)("SubQ AV")에서 가용성 OVA의 피하 투여를 받았다. 면역화 후 7일에, 모든 동물을 희생하고, 비장세포를 단리하고, 유세포분석법을 통해 OVA-특이적 효과기 기억 CD8+ T 세포(CD44+ 및 CD62L-)의 빈도를 평가하였다.
도 12a 및 도 12b에 도시된 것처럼, 투여 경로와 무관하게, Py-OVA exoVACC는 특히 상업적으로 이용 가능한 제제를 사용하여 전달된 OVA와 비교할 때 동물에서 튼튼한 OVA-특이적 효과기 기억 CD8+ T 세포를 유도할 수 있었다. 이 결과는 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)의 효능을 추가로 확인시켜주고, EV가 투여 경로와 무관하게 튼튼한 면역 반응을 유도하기 위해 사용될 수 있다는 것을 입증한다.
실시예 19: Py-OVA exoVACC EV(예를 들어, 엑소좀)의 항종양 효과
상기 제공된 실시예 11에 더하여, 마우스 모델에서 본원에 개시된 항종양 면역 반응을 유도하는 EV(예를 들어, 엑소좀)의 능력을 평가하였다. 간단하게, 마우스를 하기 중 하나로 치료하였다: (i) 비강내 투여를 통한 OVA-스캐폴드 Y를 발현하고 STING 작용제 CL656이 로딩된 엑소좀("Py-OVA exoVACC")("exoVACC(IN)"), (ii) 피하 투여를 통한 OVA-스캐폴드 Y를 발현하고 STING 작용제 CL656이 로딩된 엑소좀(Py-OVA exoVACC)("exoVACC(SQ)"), (iii) 비강내 투여를 통한 가용성 OVA + 가용성 poly I:C("OVA + poly I:C(IN)") 및 (iv) 피하 투여를 통한 가용성 OVA + 가용성 poly I:C("OVA + poly I:C(IN)"). 도 14a를 참조한다. 대조군으로서 비치료된 또는 PBS 단독 치료된 동물을 사용하였다. 이후, 면역화 후 7일에, EG7-OVA 종양 세포를 모든 동물에 피하로 이식하였다. 이후, 적어도 30일의 과정에 걸쳐 종양 용적 및 동물의 생존율 둘 다를 모니터링하였다.
도 14b, 도 14c, 도 14d 및 도 14f에 도시된 것처럼, 비치료되거나 OVA + poly I:C(비강내 투여 및 피하 투여 둘 다)에 의해 치료된 동물은 종양을 제어할 수 없었고, 종양 이식 후 약 30일에 질환에 굴복하였다. 그러나, exoVACC의 투여를 받은 동물에서, 개선된 항종양 면역 반응이 관찰되었다. exoVACC(SQ) 그룹에 대해, 25%의 동물은 종양을 효과적으로 제어하고, 실험 종료에 살아 남았다(도 14b 및 도 14e). exoVACC(IN) 그룹에 대해, 50%의 동물은 EG7-종양 세포에 대한 효과적인 항종양 면역 반응을 시작하였다(도 14b 및 도 14g). 도 14h에 도시된 것처럼, 개선된 항종양 면역 반응은 종양 성장의 속도의 증가와 상관되었다. 별개의 독립적인 실험에서, exoVACC(SQ) 그룹 및 exoVACC(IN) 그룹 둘 다로부터의 더 높은 백분율의 동물은 종양 성장을 제어하고, 전체 실험 기간에 살아 남았다(도 14l, 도 14m 및 도 14n 참조).
상기 결과는 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)가 소정의 암의 치료를 위해 백신으로서 사용될 수 있었다는 것을 입증한다.
실시예 20: 비강내 투여 후 장간막 림프절에서 항원-특이적 T 세포를 유도하는 Py-OVA exoVACC EV(예를 들어, 엑소좀)의 능력
점막 면역 반응을 유도하는 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)의 능력을 추가로 평가하기 위해, Py-OVA exoVACC(즉, OVA-스캐폴드 Y를 발현하고 STING 작용제 CL656이 로딩된 조작된-엑소좀)(도 15a에서 "5 그룹" 참조)의 비강내 투여 후 장간막 림프절(즉, 장 배수 림프절)에서의 항원-특이적 T 세포의 빈도를 평가하였다. 대조군 동물은 하기 중 하나를 받았다: (i) 스캐폴드 Y 단독을 발현하는 빈(즉, OVA 항원 무) 엑소좀("1 그룹"); (ii) 가용성 OVA("2 그룹"); (iii) 가용성 OVA + 가용성 STING 작용제("3 그룹"); 또는 (iv) OVA-스캐폴드 Y 융합 단백질을 오직 발현하는 엑소좀("4 그룹"). 백신접종 후 7일에, 동물을 희생하고, IFN-γ ELISPOT 및/또는 유세포분석법 둘 다를 사용하여 OVA-특이적 CD8+ T 세포의 빈도를 평가하였다.
도 15b, 도 15c, 도 15e 및 도 15f(그리고 초기 결과에 일치하여 - 예를 들어 실시예 2 참조)에 도시된 것처럼, Py-OVA exoVACC의 비강내 투여를 받은 동물은 비장 및 폐 둘 다에서 대조군 동물과 비교하여 OVA-특이적 CD4+ 및 OVA-특이적 CD8+ T 세포의 상당히 더 높은 수를 가졌다(예를 들어, 1 그룹 및 4 그룹). 장간막 림프절에서, 상이한 치료 그룹 중에서 CD4+ T 세포에 유의치가 관찰되지 않았다(도 15d 참조, 각각의 그룹에서 왼쪽 막대). 그러나, Py-OVA exoVACC로 치료된 동물의 장간막 림프절에서 OVA-특이적 CD8+ T 세포의 유의미한 수 증가가 관찰되었다(도 15d, 각각의 그룹에서 오른쪽 막대 참조). 이 결과는 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)(예를 들어, OVA-스캐폴드 Y를 포함하고 STING 작용제가 로딩됨)이 비강내로 투여될 때 튼튼한 점막 면역 반응을 유도하는 데 유용할 수 있다는 것을 확인시켜준다.
실시예 21: 항원-특이적 T 세포 반응을 유도하는 데 있어서 항원 및 STING 작용제를 포함하는 스캐폴드 X-조작된 EV(예를 들어, 엑소좀)의 효능
면역 반응을 유도하는 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)의 능력을 추가로 평가하기 위해, 스캐폴드 X("스캐폴드 X-조작된 EV")를 과발현하는 조작된 EV(예를 들어, 엑소좀)를 생성하였다(예를 들어, 실시예 1 참조). 조작된 EV의 표면 상에 발현된 스캐폴드 X에 말레이미드 링커를 함유하는 CD8 펩타이드(Lama4) 및/또는 CD4 펩타이드(Itgb1)를 가교결합하였다. CD8 펩타이드는 하기 구조를 가졌다: (말레이미드 링커)-QKISFFDGFE V GFNFRTLQPNGLLFYYT(서열 번호 379). 밑줄 표시된 아미노산은 돌연변이를 나타낸다. 볼드체의 잔기는 CD8+ T 세포 에피토프를 나타낸다. CD4 펩타이드는 하기 구조를 가졌다: (말레이미드 링커)- WFYFTYSVNGYNEAIVHVVETPD(서열 번호 380). 밑줄 표시된 아미노산은 돌연변이를 나타낸다. CD4+ T 세포 에피토프는 공지되어 있지 않다. 스캐폴드 X-조작된 EV는 STING 작용제(CL656)가 추가로 로딩되었다. 이후, 스캐폴드 X-조작된 EV를 도 16a에 도시된 것처럼 마우스에 투여하였다. 간단하게, 동물은 하기 중 하나를 받았다: (i) PBS 단독(즉, EV 무)(1 그룹); (ii) CD8 펩타이드(Lama4) 단독을 발현하는 스캐폴드 X-조작된 EV(2 그룹); (iii) CD4 펩타이드(Itgb1) 단독을 발현하는 스캐폴드 X-조작된 EV(3 그룹); 및 (iv) CD4 펩타이드 및 CD8 펩타이드 둘 다를 발현하는 스캐폴드 X-조작된 EV. 스캐폴드 X-조작된 EV를 동일한 양의 STING 작용제를 받는 동물을 생성시키는 용량에서 피하 투여를 통해 동물에 투여하였다. 각각의 동물은 관련 치료 섭생의 총 2의 용량(용량 사이에 1주)을 받았다. 제2 투여 후 7일에, 동물을 희생하고, IFN-γ ELISPOT를 사용하여 비장에서 항원-특이적 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 빈도를 평가하였다.
도 16b 및 도 16c에 도시된 것처럼, 각각 2 그룹(즉, CD8 펩타이드 단독을 발현하는 스캐폴드 X-조작된 EV를 받음) 및 3 그룹(즉, CD4 펩타이드 단독을 발현하는 스캐폴드 X-조작된 EV를 받음)으로부터의 동물에서 튼튼한 Itgb1 특이적 CD8+ T 세포 및 Lama4 특이적 CD4+ T 세포가 검출되었다. 유사하게, 동물에 대해 CD4 펩타이드 및 CD8 펩타이드 둘 다를 발현하는 스캐폴드 X-조작된 EV를 투여하는 것은 강한 항원-특이적 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포 면역 반응을 생성시켰다.
결과는 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)가 관심 항원(예를 들어, 종양)에 대한 튼튼한 면역 반응을 유도하기 위해 사용될 수 있다는 것을 추가로 확인시켜준다. 결과는 또한 예를 들어 EV 상에 다수의 항원을 발현시킴으로써 다수의 항원에 면역 반응을 유도하는 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)의 능력을 나타낸다.
실시예 22: 항원-특이적 T 세포 반응을 유도하는 데 있어서 항원 및 CpG 아쥬반트를 포함하는 스캐폴드 X-조작된 EV(예를 들어, 엑소좀)의 효능
본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)의 백신 능력을 추가로 평가하기 위해, 스캐폴드 X를 과발현하는 조작된 EV(예를 들어, 엑소좀)("스캐폴드 X-조작된 EV")를 다시 생성하였다(예를 들어, 실시예 1 참조). 실시예 21에 기재된 것처럼 조작된 EV의 표면 상에 발현된 스캐폴드 X에 말레이미드 링커를 함유하는 CD8 펩타이드(Lama4) 및/또는 CD4 펩타이드(Itgb1)를 다시 가교결합하였다. 현재의 실시예에서, 스캐폴드 X-조작된 EV는 STING 작용제의 대신에 CpG(즉, TLR9 작용제)가 추가로 로딩되었다. 이후, 스캐폴드 X-조작된 EV를 도 17a에 도시된 것처럼 마우스에 투여하였다. 간단하게, 동물은 하기 중 하나를 받았다: (i) 대조군 EV(즉, 스캐폴드 X 단독을 발현하는 EV)("빈 PrX exo")(1 그룹); (ii) CD8 펩타이드(Lama4) 단독을 발현하는 스캐폴드 X-조작된 EV("exoLama4-CpG")(2 그룹); 및 (iii) CD8 펩타이드(Lama4) 및 CD4 펩타이드(Itgb1) 둘 다를 발현하는 스캐폴드 X-조작된 EV("exoItgb1-Lama4-CpG")(3 그룹). 각각의 동물은 관련 치료 섭생의 2의 용량(용량 사이에 1주)을 받았다. 그리고, 제2 투여 후 7일에, 동물을 희생하고, IFN-γ ELISPOT를 사용하여 비장에서 항원-특이적 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 빈도를 평가하였다.
도 17b 및 도 17c에 도시된 것처럼, Lama4 단독을 발현하는 스캐폴드 X-조작된 EV("exoLama4-CpG")에 의해 동물을 치료하는 것은 Itgb1 펩타이드(도 17b 참조)가 아니라 Lama4(도 도 17c 참조)에 특이적인 강한 CD8+ T 세포 반응을 유도하였다. 이 결과는 스캐폴드 X-조작된 EV에 의해 유도된 CD8+ T 세포 반응의 특이성을 입증하다. 그리고, 실시예 21에 제공된 결과와 일치하게, Lama4 및 Itgb1 둘 다를 발현하는 스캐폴드 X-조작된 EV는 항원 둘 다에 대해 튼튼한 T 세포 반응을 유도할 수 있었다. 이 결과는 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)가 다양한 항원에 대해 면역 반응을 유도하는 데 유용할 수 있다는 것을 추가로 제시한다.
실시예 23: 표면-조작된 EV(예를 들어, 엑소좀)에서의 HPV 항원의 발현
본 개시내용의 EV(예를 들어, 엑소좀)에서 상이한 항원을 발현하는 능력을 추가로 평가하기 위해, HPV16 또는 HPV18의 E6 및/또는 E7 단백질을 발현하도록 293SF 세포를 형질주입하였다. 간단하게, 세포를 하기 전체 길이 단백질 중 하나를 암호화하는 플라스미드로 형질주입하였다: (i) HPV16 E6, (ii) HPV16 E7, (iii) HPV16 E6/E7, (iv) HPV18 E6, (v) HPV18 E7 및 (vi) HPV18 E6/E7. 배지 교환 후 대략 72시간에, 세포를 수확하고, 각각의 형질주입된 그룹으로부터 용해물을 만들었다. 음성 대조군으로서 비형질주입된 세포를 사용하였다. 이후, 약 5 μL의 각각의 용해물을 PAGE 겔에 로딩하고, 하기 항체로 블로팅하였다: (i) HPV16/18 항-E6(AbCam, 카탈로그 ab70호), (ii) HPV16 항-E7(AbCam, 카탈로그 1b30731호) 및 (iii) HPV18 항-E7(AbCam, 카탈로그 ab100953호).
도 18a 내지 도 18f는 결과를 제공한다. 도시된 것처럼, 아마도 HPV18 E7 단백질을 암호화하는 플라스미드로 형질주입된 세포를 제외하고, 형질주입된 세포는 웨스턴 블롯에 의해 측정된 것처럼 전체 길이 HPV16 또는 HPV18 단백질을 발현하지 못했다. 이 결과는 적어도 전체 길이 HPV16 E6, HPV16 및 HPV18 E6이 일시적으로 발현되지 않는다는 것을 제시하였다.
상기 문제를 해결하기 위해, 분열 단백질 발현 조작을 사용하였다. 간단하게, 158개의 아미노산 길이의 HPV E6 단백질은 중간에서 비구조화된 영역에서 반으로 절단되었다. 이는 (i) N-말단 nE6(1개 내지 88개의 aa) 및 (ii) C-말단 cE6(89개 내지 158개의 aa)의 2개의 펩타이드 단편을 생성하였다. 각각 N-말단 또는 C-말단에서 스캐폴드 X(예를 들어, PTGFRN) 및 C-말단에서 스캐폴드 Y에 융합된 분할 HPV E6을 발현하는 작제물을 어셈블링하도록 nE6 및 cE6 펩타이드 단편을 암호화하는 코돈 최적화된 DNA 서열을 사용하였다. 하기 플라스미드를 생성하였고, 이들은 293SF 세포를 형질주입하도록 사용되었다: (i) pUC57-Kan-AAVS1HR-CAGGS-PTGFRN-FLAG-coHPV16nE6("pCB-2014"), (ii) pUC57-Kan-AAVS1HR-CAGGS-PTGFRN-FLAG-coHPV16cE6("pCB-2015"), (iii) pUC57-Kan-AAVS1HR-CAGGS-coHPV16nE6-FLAG-PTGFRN("pCB-2016"), (iv) pUC57-Kan-AAVS1HR-CAGGS-coHPV16cE6-FLAG-PTGFRN("pCB-2017"), (v) pUC57-Kan-AAVS1HR-CAGGS-PrY-FLAG-coHPV16nE6("pCB-2018") 및 (vi) pUC57-Kan-AAVS1HR-CAGGS-PrY-FLAG-coHPV16cE6("pCB-2019"). (하기 표 11을 참조한다). 이후, (상기에 기재된 것처럼) 웨스턴 블롯에 의해 항-FLAG 항체를 사용하여 HPV16 및 HPV18의 E6 및 E7 단백질의 발현을 평가하였다.
[표 11]
Figure pct00053
도 18g 내지 도 18l에 도시된 것처럼, 단백질 발현 전략에 의해, 일시적 세포 용해물 및 안정한 세포 용해물 둘 다에서 시험된 각각의 HPV 단백질(즉, HPV16 E6, HPV16 E7, HPV18 E6, 및 HPV18 E7)이 발현되었다.
이 결과는 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)가 상이한 HPV 단백질을 포함하여 넓은 범위의 항원을 발현하도록 조작될 수 있다는 것을 추가로 확인시켜준다.
실시예 24: 항원-특이적 면역 반응을 유도하는 데 있어서 항-Clec9a 표적화 모이어티를 포함하는 스캐폴드 X-조작된 EV(예를 들어, 엑소좀)의 효능
상기 실시예 13 및 실시예 17에 더하여, 동물 모델에서 항원-특이적 면역 반응을 유도하는 aCLEC9A-Px-OVA exoVACC의 능력을 평가하였다. aCLEC9A-Px-OVA exoVACC는 STING 작용제가 로딩되고 하기를 발현하도록 조작된 EV(예를 들어, 엑소좀)이다: (i) aCLEC9A-Px(즉, 스캐폴드 X에 연결된 항-Clec9a 항체 단편) 및 (ii) OVA-Py(즉, 스캐폴드 Y에 연결된 OVA). 간단하게, 도 19a에 도시된 것처럼, 마우스는 하기 중 하나를 받았다: (i) STING 작용제가 로딩되고 대조군 아이소타입 항체를 발현하는 OVA-발현 EV(예를 들어, 엑소좀)("IgG-Px-OVA exoVACC")(1 그룹), (ii) aCLEC9A-Px-OVA exoVACC(2 그룹) 및 (iii) STING 작용제가 로딩된 OVA-발현 EV(예를 들어, 엑소좀)(즉, 스캐폴드 X를 발현하지 않음)("PyOVA exoVACC")(3 그룹). 동물의 일부는 단일 용량을 받고, 이후 나중의 주에 희생되었다. 다른 동물은 제2 용량(제1 용량 후 1주)을 받고, 이후 제2 용량 후 1주에 희생되었다. 희생된 동물로부터 비장세포를 수확하고, 이후 유세포분석법을 이용하여 OVA-특이적 CD8+ T 세포를 분석하였다.
도 19b에 도시된 것처럼, EV의 단일 투여 후, 비장에서 OVA-특이적 CD8+ 효과기 기억 T 세포의 수의 유의미한 차이가 없었다. 그러나, 제2 용량 후, 비장에서의 OVA-특이적 CD8+ 효과기 기억 T 세포의 수는 aCLEC9A-Px-OVA exoVACC로 치료된 동물에서 유의미하게 더 높았다(도 19c 참조). 이 결과는 질환 및 장애의 치료를 위해 EV(예를 들어, 엑소좀)를 설계하는 데 있어서 표적화 모이어티(예를 들어, 항-Clec9a 항체 단편)를 발현하는 이점을 강조한다.
실시예 25: 항원-특이적 항체 반응을 유도하는 조작된-EV(예를 들어, 엑소좀)의 효능
본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)가 또한 튼튼한 체액 면역 반응을 유도할 수 있는지를 결정하기 위해, 마우스에서 항원-특이적 항체를 유도하는 EV(예를 들어, 엑소좀)의 능력을 관찰하였다. 간단하게, OVA-스캐폴드 Y를 발현하고 STING 작용제 CL656이 로딩된 조작된-엑소좀("Py-OVA exoVACC")을 비강내로 마우스에 투여하였다. 대조군 동물은 하기 중 하나를 받았다: (i) 가용성 OVA("OVA")(비강내로), (ii) 가용성 OVA + CL656("OVA + STING")(비강내로), (iii) OVA-스캐폴드 Y 융합 단백질을 오직 발현하는 엑소좀("PyOVA")(비강내로), (iv) OVA-스캐폴드 Y 융합 단백질 + 가용성 CL656을 오직 발현하는 엑소좀(즉, STING 작용제는 엑소좀으로 로딩되지 않음)("PyOVA + STING")(비강내로) 및 (v) 가용성 OVA + 명반 아쥬반트("OVA + 명반")(피하로)(도 20a 참조). 총 2의 용량에 대해 각각의 치료 섭생이 (용량 사이에 2주 떨여져) 투여되었다. 이후, 마지막 투여 후 2주에, 동물로부터 혈청을 수집하고, ELISA 검정을 이용하여 OVA-특이적 IgG1 및 IgA 항체의 양을 결정하였다.
도 20a 및 도 20b에 도시된 것처럼, OVA-스캐폴드 Y(즉, 항원) 및 STING 작용제(즉, 아쥬반트)를 포함하는 EV(예를 들어, 엑소좀)는 혈청에서 항원-특이적 IgG1 및 IgA 둘 다를 유도할 수 있었다. 이 결과는 본원에 개시된 EV(예를 들어, 엑소좀)가 투여 후 항원-특이적 세포-매개된 면역 반응 및 항체-매개된 면역 반응 둘 다를 유도할 수 있다는 것을 입증한다.
실시예 26: LPA-1 억제제를 포함하는 표면-조작된 EV(예를 들어, 엑소좀)
본원에 기재된 것처럼, 본 개시내용의 EV(예를 들어, 엑소좀)는 EV의 표면 상에 LPA-1 억제제를 발현하도록 조작될 수 있다. 본 개시내용과 사용될 수 있는 LPA-1 억제제의 비제한적인 예는 AM152 및 AM095를 포함한다. AM152 및 AM095의 화학적 구조는 도 21에 제시되어 있다. 도면은 말레이미드-함유 시약이 AM152의 카복실산 및/또는 카바메이트 기에 접합될 수 있다는 것을 보여준다. 동일한 반응성 기가 AM095에 존재하므로, 동일한 접근법은 AM095를 유도체화하도록 사용될 수 있었다.
LPA-1 억제제, 예컨대 AM095 및 AM152는 본원에 개시된 방법을 사용하여 EV(예를 들어, 엑소좀)의 표면에 접합될 수 있다. 결과는 EV의 표면 상의 복수의 억제제를 포함하는 EV(예를 들어, 엑소좀)일 것이다. 도 22를 참조한다.
도 23은 말레이미드 반응성 기가 산 기를 통해 AM152에 어떻게 첨가될 수 있는지의 예를 보여준다. 실시예는 말레이미드 기와 카복실산-반응성 클로로메틸 벤젠 기 사이에 끼워진 ala-val 절단성 링커를 포함하는 복합체의 일부로서 말레이미드 기를 보여준다. 도 24는 AM152를 유도체화하기 위해 사용될 수 있는 2개의 예시적인 시약을 보여준다. 상부 시약은 (i) AM152의 카복실산 기와 반응할 수 있는 클로로메틸 벤젠 기 및 (ii) 말레이미드 기를 포함하고; 절단성 cit-val 디펩타이드 및 C5 스페이서는 이들 사이에 끼워진다. 하부 시약은 (i) AM152의 카복실산 기와 반응할 수 있는 클로로메틸 벤젠 기 및 (ii) 말레이미드 기를 포함하고; 절단성 ala-val 디펩타이드 및 C5 스페이서는 이들 사이에 끼워진다. 후속하여, 말레이미드 기는 (예를 들어, 본원에 개시된) 하나 이상의 스페이서 또는 링커를 통해 직접적으로 또는 간접적으로 AM152(또는 AM095)를 예를 들어 스캐폴드 모이어티에 부착하도록 사용될 것이다.
도 25는 접합 생성물에서 (예를 들어, 카텝신 B에 의해) cit-val 또는 ala-val 디펩타이드를 절단하여 생기는 생성물을 보여준다. AM152 아닐린 에스테르인 생성물은 유리 산 AM152 생성물을 생성하도록 내인성 에스터라제에 의해 추가로 가공될 수 있다.
도 26은 유리 말레이미드 기 및 스페이서의 상이한 조합을 포함하는 몇몇 AM152 유도체를 보여준다. 추가 유도체는 도 27에 도시되어 있다.
도 28은 카복실산 기의 보호 후 카바메이트 기에서 AM152를 유도체화하기 위해 카복실산 기를 유도체화하도록 사용된 동일한 시약을 사용할 수 있다는 것을 보여준다. 생성된 생성물은 후속하여 유리 카복실산 기로 탈보호될 것이다.
도 29는 말레이미드 기와의 복합체가 링커를 통해 AM152의 카바메이트 기에 부착되는 예를 예시한다. 적합한 링커는 본 명세서에 개시된 임의의 링커를 포함한다.
본 실시예에 개시된 프로세스는 유리 말레이미드 반응성 기를 포함하는 AM152 또는 AM095 유도체의 생성에 관한 것이고, 이것은 후속하여 하나 이상의 스페이서 또는 링커를 통해 직접적으로 또는 간접적으로 스캐폴드 모이어티와 반응할 것이다. 그 결과, AM152 또는 AM095는 EV, 예를 들어 엑소좀의 외부 표면에 부착될 것이다.
그러나, 도 30에 도시된 것처럼 처음에 앵커링 모이어티를 예를 들어 말레이미드를 포함하는 이작용성 기로 유도체화하고, 이후 예를 들어 유리 클로로메틸 벤젠 기를 갖는 유도체화된 앵커링 모이어티를 AM152의 카복실산 또는 카바메이트 기 중 어느 하나와 반응시켜 본 발명이 또한 실행될 수 있었다.
일부 양태에서, EV, 예를 들어 엑소좀의 표면에 AM152(또는 AM095)를 접합하는 것은 비접합된 AM152(또는 AM095)의 적어도 하나의 유리한 특성을 개선하고/하거나, 비접합된 AM152 또는 AM095의 적어도 하나의 해로운 특성(예를 들어, 독성, 예컨대 방광 독성 및/또는 간 독성)을 감소시킨다. 일부 양태에서, AM152(또는 AM095)를 EV, 예를 들어 엑소좀에 접합하는 것은 섬유증 질환, 예를 들어 폐 섬유증, 예컨대 IPF의 치료에서 (유리 AM152 또는 유리 AM095와 비교하여) AM512 또는 AM095의 효능을 개선한다.
참고로 포함됨
본 출원에 인용된 모든 공보, 특허, 특허 출원 및 다른 문헌은 모든 목적을 위해 참고로 포함된 것으로 개별적으로 표시된 것과 동일한 정도로 모든 목적을 위해 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.
균등물
다양한 구체적인 양태가 예시되고 기재되어 있지만, 상기 명세서는 제한이 아니다. 본 발명(들)의 정신 및 사상으로부터 벗어나지 않으면서 다양한 변경이 이루어질 수 있다고 이해될 것이다. 많은 변형이 본 명세서의 검토 시 당업자에게 명확해질 것이다.
SEQUENCE LISTING <110> CODIAK BIOSCIENCES, INC. <120> EXTRACELLULAR VESICLES FOR VACCINE DELIVERY <130> 4000.032PC07/C-K/DKC <150> US 62/822,008 <151> 2019-03-21 <150> US 62/835,437 <151> 2019-04-17 <150> US 62/840,348 <151> 2019-04-29 <150> US 62/891,048 <151> 2019-08-23 <150> US 62/901,166 <151> 2019-09-16 <150> US 62/946,280 <151> 2019-12-10 <150> US 62/984,146 <151> 2020-03-02 <160> 380 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 879 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Gly Arg Leu Ala Ser Arg Pro Leu Leu Leu Ala Leu Leu Ser Leu 1 5 10 15 Ala Leu Cys Arg Gly Arg Val Val Arg Val Pro Thr Ala Thr Leu Val 20 25 30 Arg Val Val Gly Thr Glu Leu Val Ile Pro Cys Asn Val Ser Asp Tyr 35 40 45 Asp Gly Pro Ser Glu Gln Asn Phe Asp Trp Ser Phe Ser Ser Leu Gly 50 55 60 Ser Ser Phe Val Glu Leu Ala Ser Thr Trp Glu Val Gly Phe Pro Ala 65 70 75 80 Gln Leu Tyr Gln Glu Arg Leu Gln Arg Gly Glu Ile Leu Leu Arg Arg 85 90 95 Thr Ala Asn Asp Ala Val Glu Leu His Ile Lys Asn Val Gln Pro Ser 100 105 110 Asp Gln Gly His Tyr Lys Cys Ser Thr Pro Ser Thr Asp Ala Thr Val 115 120 125 Gln Gly Asn Tyr Glu Asp Thr Val Gln Val Lys Val Leu Ala Asp Ser 130 135 140 Leu His Val Gly Pro Ser Ala Arg Pro Pro Pro Ser Leu Ser Leu Arg 145 150 155 160 Glu Gly Glu Pro Phe Glu Leu Arg Cys Thr Ala Ala Ser Ala Ser Pro 165 170 175 Leu His Thr His Leu Ala Leu Leu Trp Glu Val His Arg Gly Pro Ala 180 185 190 Arg Arg Ser Val Leu Ala Leu Thr His Glu Gly Arg Phe His Pro Gly 195 200 205 Leu Gly Tyr Glu Gln Arg Tyr His Ser Gly Asp Val Arg Leu Asp Thr 210 215 220 Val Gly Ser Asp Ala Tyr Arg Leu Ser Val Ser Arg Ala Leu Ser Ala 225 230 235 240 Asp Gln Gly Ser Tyr Arg Cys Ile Val Ser Glu Trp Ile Ala Glu Gln 245 250 255 Gly Asn Trp Gln Glu Ile Gln Glu Lys Ala Val Glu Val Ala Thr Val 260 265 270 Val Ile Gln Pro Ser Val Leu Arg Ala Ala Val Pro Lys Asn Val Ser 275 280 285 Val Ala Glu Gly Lys Glu Leu Asp Leu Thr Cys Asn Ile Thr Thr Asp 290 295 300 Arg Ala Asp Asp Val Arg Pro Glu Val Thr Trp Ser Phe Ser Arg Met 305 310 315 320 Pro Asp Ser Thr Leu Pro Gly Ser Arg Val Leu Ala Arg Leu Asp Arg 325 330 335 Asp Ser Leu Val His Ser Ser Pro His Val Ala Leu Ser His Val Asp 340 345 350 Ala Arg Ser Tyr His Leu Leu Val Arg Asp Val Ser Lys Glu Asn Ser 355 360 365 Gly Tyr Tyr Tyr Cys His Val Ser Leu Trp Ala Pro Gly His Asn Arg 370 375 380 Ser Trp His Lys Val Ala Glu Ala Val Ser Ser Pro Ala Gly Val Gly 385 390 395 400 Val Thr Trp Leu Glu Pro Asp Tyr Gln Val Tyr Leu Asn Ala Ser Lys 405 410 415 Val Pro Gly Phe Ala Asp Asp Pro Thr Glu Leu Ala Cys Arg Val Val 420 425 430 Asp Thr Lys Ser Gly Glu Ala Asn Val Arg Phe Thr Val Ser Trp Tyr 435 440 445 Tyr Arg Met Asn Arg Arg Ser Asp Asn Val Val Thr Ser Glu Leu Leu 450 455 460 Ala Val Met Asp Gly Asp Trp Thr Leu Lys Tyr Gly Glu Arg Ser Lys 465 470 475 480 Gln Arg Ala Gln Asp Gly Asp Phe Ile Phe Ser Lys Glu His Thr Asp 485 490 495 Thr Phe Asn Phe Arg Ile Gln Arg Thr Thr Glu Glu Asp Arg Gly Asn 500 505 510 Tyr Tyr Cys Val Val Ser Ala Trp Thr Lys Gln Arg Asn Asn Ser Trp 515 520 525 Val Lys Ser Lys Asp Val Phe Ser Lys Pro Val Asn Ile Phe Trp Ala 530 535 540 Leu Glu Asp Ser Val Leu Val Val Lys Ala Arg Gln Pro Lys Pro Phe 545 550 555 560 Phe Ala Ala Gly Asn Thr Phe Glu Met Thr Cys Lys Val Ser Ser Lys 565 570 575 Asn Ile Lys Ser Pro Arg Tyr Ser Val Leu Ile Met Ala Glu Lys Pro 580 585 590 Val Gly Asp Leu Ser Ser Pro Asn Glu Thr Lys Tyr Ile Ile Ser Leu 595 600 605 Asp Gln Asp Ser Val Val Lys Leu Glu Asn Trp Thr Asp Ala Ser Arg 610 615 620 Val Asp Gly Val Val Leu Glu Lys Val Gln Glu Asp Glu Phe Arg Tyr 625 630 635 640 Arg Met Tyr Gln Thr Gln Val Ser Asp Ala Gly Leu Tyr Arg Cys Met 645 650 655 Val Thr Ala Trp Ser Pro Val Arg Gly Ser Leu Trp Arg Glu Ala Ala 660 665 670 Thr Ser Leu Ser Asn Pro Ile Glu Ile Asp Phe Gln Thr Ser Gly Pro 675 680 685 Ile Phe Asn Ala Ser Val His Ser Asp Thr Pro Ser Val Ile Arg Gly 690 695 700 Asp Leu Ile Lys Leu Phe Cys Ile Ile Thr Val Glu Gly Ala Ala Leu 705 710 715 720 Asp Pro Asp Asp Met Ala Phe Asp Val Ser Trp Phe Ala Val His Ser 725 730 735 Phe Gly Leu Asp Lys Ala Pro Val Leu Leu Ser Ser Leu Asp Arg Lys 740 745 750 Gly Ile Val Thr Thr Ser Arg Arg Asp Trp Lys Ser Asp Leu Ser Leu 755 760 765 Glu Arg Val Ser Val Leu Glu Phe Leu Leu Gln Val His Gly Ser Glu 770 775 780 Asp Gln Asp Phe Gly Asn Tyr Tyr Cys Ser Val Thr Pro Trp Val Lys 785 790 795 800 Ser Pro Thr Gly Ser Trp Gln Lys Glu Ala Glu Ile His Ser Lys Pro 805 810 815 Val Phe Ile Thr Val Lys Met Asp Val Leu Asn Ala Phe Lys Tyr Pro 820 825 830 Leu Leu Ile Gly Val Gly Leu Ser Thr Val Ile Gly Leu Leu Ser Cys 835 840 845 Leu Ile Gly Tyr Cys Ser Ser His Trp Cys Cys Lys Lys Glu Val Gln 850 855 860 Glu Thr Arg Arg Glu Arg Arg Arg Leu Met Ser Met Glu Met Asp 865 870 875 <210> 2 <211> 731 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Pro Ser Ala Arg Pro Pro Pro Ser Leu Ser Leu Arg Glu Gly Glu Pro 1 5 10 15 Phe Glu Leu Arg Cys Thr Ala Ala Ser Ala Ser Pro Leu His Thr His 20 25 30 Leu Ala Leu Leu Trp Glu Val His Arg Gly Pro Ala Arg Arg Ser Val 35 40 45 Leu Ala Leu Thr His Glu Gly Arg Phe His Pro Gly Leu Gly Tyr Glu 50 55 60 Gln Arg Tyr His Ser Gly Asp Val Arg Leu Asp Thr Val Gly Ser Asp 65 70 75 80 Ala Tyr Arg Leu Ser Val Ser Arg Ala Leu Ser Ala Asp Gln Gly Ser 85 90 95 Tyr Arg Cys Ile Val Ser Glu Trp Ile Ala Glu Gln Gly Asn Trp Gln 100 105 110 Glu Ile Gln Glu Lys Ala Val Glu Val Ala Thr Val Val Ile Gln Pro 115 120 125 Ser Val Leu Arg Ala Ala Val Pro Lys Asn Val Ser Val Ala Glu Gly 130 135 140 Lys Glu Leu Asp Leu Thr Cys Asn Ile Thr Thr Asp Arg Ala Asp Asp 145 150 155 160 Val Arg Pro Glu Val Thr Trp Ser Phe Ser Arg Met Pro Asp Ser Thr 165 170 175 Leu Pro Gly Ser Arg Val Leu Ala Arg Leu Asp Arg Asp Ser Leu Val 180 185 190 His Ser Ser Pro His Val Ala Leu Ser His Val Asp Ala Arg Ser Tyr 195 200 205 His Leu Leu Val Arg Asp Val Ser Lys Glu Asn Ser Gly Tyr Tyr Tyr 210 215 220 Cys His Val Ser Leu Trp Ala Pro Gly His Asn Arg Ser Trp His Lys 225 230 235 240 Val Ala Glu Ala Val Ser Ser Pro Ala Gly Val Gly Val Thr Trp Leu 245 250 255 Glu Pro Asp Tyr Gln Val Tyr Leu Asn Ala Ser Lys Val Pro 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Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 67 Met Gly Gly Lys Gln Ser Lys Lys 1 5 <210> 68 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 68 Met Gly Gly Lys Gln Ala Lys Lys 1 5 <210> 69 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 69 Met Gly Gly Gln Leu Ser Lys Lys 1 5 <210> 70 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 70 Met Gly Gly Gln Leu Ala Lys Lys 1 5 <210> 71 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 71 Met Gly Gly Gln Phe Ser Lys Lys 1 5 <210> 72 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 72 Met Gly Gly Gln Phe Ala Lys Lys 1 5 <210> 73 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial 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acaaagaguc cgcacagggc ggcauaggcg aggcgaucgu cgacauuccu 300 gagauuccug gguucaagga cuuggagccc uuggagcagu ucaucgcaca ggucgaucug 360 uguguggacu gcacaacugg cugccucaaa gggcuugcca acgugcagug uucugaccug 420 cucaagaagu ggcugccgca acgcugugcg accuuugcca gcaagaucca gggccaggug 480 gacaagauca agggggccgg uggugacuaa ggauccaucg auaagcuuca ucgaaacaug 540 aggaucaccc auaucugcag ucgacaucga aacaugagga ucacccaugu cugcagucga 600 caucgaaaca ugaggaucac ccaugucugc agucgacauc gaaacaugag gaucacccau 660 gucugcaguc gacaucgaaa 680 <210> 162 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Any Naturally Occuring Amino Acid <400> 162 Met Gly Xaa Lys Leu Ser Lys Lys Lys 1 5 <210> 163 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> See specification as filed for detailed description of substitutions and preferred embodiments <400> 163 Met Gly Xaa Lys Leu Ser Lys Lys Lys 1 5 <210> 164 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Gly, Ala, or Ser <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Lys or Gln <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> Leu, Phe, Ser, or Gln <220> <221> MOD_RES <222> (6)..(6) <223> Ser or Ala <220> <221> MOD_RES <222> (6)..(6) <223> Ser or Ala, See specification as filed for detailed description of substitutions and preferred embodiments <400> 164 Met Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Lys Lys 1 5 <210> 165 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 165 tggaggtgct caaagagttg 20 <210> 166 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 166 ttgggcgtgc acttgat 17 <210> 167 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic probe <400> 167 gggcattggc ttc 13 <210> 168 <211> 60 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 168 Met Gly Gly Lys Leu Ser Lys Lys Lys Lys Gly Tyr Asn Val Asn Asp 1 5 10 15 Glu Lys Ala Lys Glu Lys Asp Lys Lys Ala Glu Gly Ala Ala Ser Ala 20 25 30 Gly Gly Gly Gly Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Gly Gly Gly 35 40 45 Gly Ser Val Ser Lys Gly Glu Glu Leu Phe Thr Gly 50 55 60 <210> 169 <211> 60 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 169 Met Ala Gly Lys Leu Ser Lys Lys Lys Lys Gly Tyr Asn Val Asn Asp 1 5 10 15 Glu Lys Ala Lys Glu Lys Asp Lys Lys Ala Glu Gly Ala Ala Ser Ala 20 25 30 Gly Gly Gly Gly Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Gly Gly Gly 35 40 45 Gly Ser Val Ser Lys Gly Glu Glu Leu Phe Thr Gly 50 55 60 <210> 170 <211> 60 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 170 Met Gly Ala Lys Leu Ser Lys Lys Lys Lys Gly Tyr Asn Val Asn Asp 1 5 10 15 Glu Lys Ala Lys Glu Lys Asp Lys Lys Ala Glu Gly Ala Ala Ser Ala 20 25 30 Gly Gly Gly Gly Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Gly Gly Gly 35 40 45 Gly Ser Val Ser Lys Gly Glu Glu Leu Phe Thr Gly 50 55 60 <210> 171 <211> 60 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 171 Met Ala Ala Lys Leu Ser Lys Lys Lys Lys Gly Tyr Asn Val Asn Asp 1 5 10 15 Glu Lys Ala Lys Glu Lys Asp Lys Lys Ala Glu Gly Ala Ala Ser Ala 20 25 30 Gly Gly Gly Gly Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Gly Gly Gly 35 40 45 Gly Ser Val Ser Lys Gly Glu Glu Leu Phe Thr Gly 50 55 60 <210> 172 <211> 57 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 172 Met Gly Gly Lys Leu Ser Lys Lys Lys Lys Gly Tyr Asn Val Asn Asp 1 5 10 15 Glu Lys Ala Lys Glu Lys Asp Lys Lys Ala Glu Ser Ala Gly Gly Gly 20 25 30 Gly Ser 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Gly Gly Lys Leu Ser Lys Lys Lys Lys Gly Tyr Asn Val Asn Asp 1 5 10 15 Glu Lys Ser Ala Gly Gly Gly Gly Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp 20 25 30 Lys Gly Gly Gly Gly Ser Val Ser Lys Gly Glu Glu Leu Phe Thr Gly 35 40 45 <210> 176 <211> 45 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 176 Met Gly Gly Lys Leu Ser Lys Lys Lys Lys Gly Tyr Asn Val Asn Ser 1 5 10 15 Ala Gly Gly Gly Gly Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Gly Gly 20 25 30 Gly Gly Ser Val Ser Lys Gly Glu Glu Leu Phe Thr Gly 35 40 45 <210> 177 <211> 42 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 177 Met Gly Gly Lys Leu Ser Lys Lys Lys Lys Gly Tyr Ser Ala Gly Gly 1 5 10 15 Gly Gly Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Gly Gly Gly Gly Ser 20 25 30 Val Ser Lys Gly Glu Glu Leu Phe Thr Gly 35 40 <210> 178 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic 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Sequence: Synthetic polypeptide <400> 188 Met Gly Gly Lys Leu Ser Ser Ala Gly Gly Gly Gly Ser Asp Tyr Lys 1 5 10 15 Asp Asp Asp Asp Lys Gly Gly Gly Gly Ser Val Ser Lys Gly 20 25 30 <210> 189 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 189 Met Gly Gly Lys Leu Asp Lys Lys Lys Lys Gly Tyr Asn Val Asn Asp 1 5 10 15 Glu Lys Ala Lys Glu Lys Asp Lys Lys Ala Glu Gly Ala Ala 20 25 30 <210> 190 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 190 Met Gly Gly Lys Leu Ala Lys Lys Lys Lys Gly Tyr Asn Val Asn Asp 1 5 10 15 Glu Lys Ala Lys Glu Lys Asp Lys Lys Ala Glu Gly Ala Ala 20 25 30 <210> 191 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 191 Met Gly Gly Lys Gln Ser Lys Lys Lys Lys Gly Tyr Asn Val Asn Asp 1 5 10 15 Glu Lys Ala Lys Glu Lys Asp Lys Lys Ala Glu Gly Ala Ala 20 25 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Glu Gln Gln Trp Asn Phe Ala Gly Ile Glu Ala Ala Ala Ser 1 5 10 15 Ala Ile Gln Gly Asn Val Thr Ser Ile His Ser Leu Asp Glu Gly Lys 20 25 30 Gln Ser Leu Thr Lys Leu Ala Ala Ala Trp Gly Gly Ser Gly Ser Glu 35 40 45 Ala Tyr Gln Gly Val Gln Gln Lys Trp Asp Ala Thr Ala Thr Glu Leu 50 55 60 Asn Asn Ala Leu Gln Asn Leu Ala Arg Thr Ile Ser Glu Ala Gly Gln 65 70 75 80 Ala Met Ala Ser Thr Glu Gly Asn Val Thr Gly Met Phe Ala 85 90 <210> 371 <211> 96 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TB10.4 Protein Sequence <400> 371 Met Ser Gln Ile Met Tyr Asn Tyr Pro Ala Met Leu Gly His Ala Gly 1 5 10 15 Asp Met Ala Gly Tyr Ala Gly Thr Leu Gln Ser Leu Gly Ala Glu Ile 20 25 30 Ala Val Glu Gln Ala Ala Leu Gln Ser Ala Trp Gln Gly Asp Thr Gly 35 40 45 Ile Thr Tyr Gln Ala Trp Gln Ala Gln Trp Asn Gln Ala Met Glu Asp 50 55 60 Leu Val Arg Ala Tyr His Ala Met Ser Ser Thr His Glu Ala Asn Thr 65 70 75 80 Met Ala Met Met Ala Arg Asp Thr Ala Glu Ala Ala Lys Trp Gly Gly 85 90 95 <210> 372 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Scaffold Y Sequence <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 372 Gly Xaa Lys Leu Ser Lys Lys Lys 1 5 <210> 373 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> wherein Xaa is any integer between 1-100 <400> 373 Gly Gly Gly Gly Xaa 1 5 <210> 374 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <220> <221> misc_Feature <222> (2)..(2) <223> Wherein Xaa is any integer from 1 to 100 <220> <221> misc_Feature <222> (4)..(4) <223> Wherein Xaa is any integer from 1 to 100 <400> 374 Gly Xaa Ser Xaa 1 <210> 375 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Wherein Xaa is any integer from 1 to 4 <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Wherein Xaa is 0 or 1 <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Wherein Xaa is any integer from 1 to 50 <400> 375 Gly Xaa Ser Xaa Xaa 1 5 <210> 376 <211> 2 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> wherein Xaa can be any integer between 1-100 <400> 376 Gly Asn 1 <210> 377 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> wherein Xaa is an integer between 1 and 100 <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 377 Gly Ala Xaa 1 <210> 378 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Wherein Xaa is an integer between 1 and 100 <400> 378 Gly Gly Ser Xaa 1 <210> 379 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lama4 Peptide <400> 379 Gln Lys Ile Ser Phe Phe Asp Gly Phe Glu Val Gly Phe Asn Phe Arg 1 5 10 15 Thr Leu Gln Pro Asn Gly Leu Leu Phe Tyr Tyr Thr 20 25 <210> 380 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Itgb1 Peptide <400> 380 Trp Phe Tyr Phe Thr Tyr Ser Val Asn Gly Tyr Asn Glu Ala Ile Val 1 5 10 15 His Val Val Glu Thr Pro Asp 20

Claims (150)

  1. 단리된 세포외 소포체(EV: extracellular vesicle)로서,
    (i) 적어도 하나의 항원 및 (ii) 적어도 하나의 아쥬반트를 포함하는 단리된 세포외 소포체.
  2. 제1항에 있어서, 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 이것 초과의 상이한 항원을 포함하는, EV.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 적어도 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 이것 초과의 상이한 아쥬반트를 포함하는, EV.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 항원은 MHC 클래스 I 및/또는 II 분자 상에 제시되지 않는, EV.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, EV는 자연에 존재하는 항원 제시 세포로부터 유래되지 않는, EV.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, EV는 자연에 존재하는 수지상 세포, 자연에 존재하는 B 세포, 자연에 존재하는 비만 세포, 자연에 존재하는 대식세포, 자연에 존재하는 호중구, 자연에 존재하는 쿠퍼-브로비츠(Kupffer-Browicz) 세포, 이들 세포 중 어느 것으로부터 유래된 세포, 또는 임의의 이들의 조합으로부터 유래되지 않는, EV.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 세포 면역 반응, 체액 면역 반응, 또는 세포 면역 반응과 체액 면역 반응 둘 다를 유도하는, EV.
  8. 제7항에 있어서, 세포 면역 반응, 체액 면역 반응, 또는 세포 면역 반응과 체액 면역 반응 둘 다의 유도는 (i) 아쥬반트 또는 항원을 포함하지 않는 상응하는 EV 또는 (ii) EV가 없는 아쥬반트 또는 항원과 비교하여 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 100% 또는 이것 초과만큼 증가하는, EV.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, CD4+ T 세포 반응, CD8+ T 세포 반응, 또는 CD4+ 세포 반응과 CD8+ T 세포 반응 둘 다를 유도하는, EV.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, EV는 T 세포의 T 세포 수용체와 직접 상호작용하지 않는, EV.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, EV는 제1 스캐폴드 모이어티를 추가로 포함하는, EV.
  12. 제11항에 있어서, 항원은 제1 스캐폴드 모이어티에 연결된, EV.
  13. 제11항 또는 제12항에 있어서, 아쥬반트는 제1 스캐폴드 모이어티에 연결된, EV.
  14. 제11항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, EV는 제2 스캐폴드 모이어티를 추가로 포함하는, EV.
  15. 제14항에 있어서, 항원은 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되고, 아쥬반트는 제2 스캐폴드 모이어티에 연결된, EV.
  16. 제14항 또는 제15항에 있어서, 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티는 동일한, EV.
  17. 제14항 또는 제15항에 있어서, 제1 스캐폴드 모이어티 및 제2 스캐폴드 모이어티는 상이한, EV.
  18. 제11항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 X인, EV.
  19. 제11항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 Y인, EV.
  20. 제14항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 Y인, EV.
  21. 제14항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 X인, EV.
  22. 제18항 또는 제21항에 있어서, 스캐폴드 X는 (i) EV의 내강 표면 상에 항원을 앵커링할 수 있거나; (ii) EV의 외부 표면 상에 항원을 앵커링할 수 있거나; (iii) EV의 내강 표면 상에 아쥬반트를 앵커링할 수 있거나; (iv) EV의 외부 표면 상에 아쥬반트를 앵커링할 수 있거나; 또는 (v) 이들의 조합인, EV.
  23. 제18항, 제21항 및 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 스캐폴드 X는 프로스타글란딘 F2 수용체 음성 조절자(PTGFRN 단백질); 바시긴(BSG 단백질); 면역글로불린 슈퍼패밀리 구성원 2(IGSF2 단백질); 면역글로불린 슈퍼패밀리 구성원 3(IGSF3 단백질); 면역글로불린 슈퍼패밀리 구성원 8(IGSF8 단백질); 인테그린 베타-1(ITGB1 단백질); 인테그린 알파-4(ITGA4 단백질); 4F2 세포-표면 항원 중쇄(SLC3A2 단백질); ATP 수송체 단백질의 클래스(ATP1A1, ATP1A2, ATP1A3, ATP1A4, ATP1B3, ATP2B1, ATP2B2, ATP2B3, ATP2B4 단백질), 및 임의의 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, EV.
  24. 제19항 또는 제20항에 있어서, 스캐폴드 Y는 (i) EV의 내강 표면 상에 항원을 앵커링할 수 있거나; (ii) EV의 내강 표면 상에 아쥬반트를 앵커링할 수 있거나; 또는 (iii) 이들의 조합인, EV.
  25. 제19항, 제20항 및 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 스캐폴드 Y는 미리스토일화된 알라닌 농후 단백질 키나제 C 기질(MARCKS 단백질); 미리스토일화된 알라닌 농후 단백질 키나제 C 기질 유사 1(MARCKSL1 단백질); 뇌 산 가용성 단백질 1(BASP1 단백질), 및 임의의 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, EV.
  26. 제11항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 항원은 EV의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 모이어티에 연결된, EV.
  27. 제26항에 있어서,
    a. 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티의 각각은 스캐폴드 Y이거나;
    b. 제1 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 Y이고, 제2 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 X이거나;
    c. 제1 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 X이고, 제2 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 Y이거나; 또는
    d. 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티의 각각은 스캐폴드 X인, EV.
  28. 제11항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 항원은 EV의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강에 있는, EV.
  29. 제11항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 항원은 EV의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결된, EV.
  30. 제11항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 항원은 EV의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 모이어티에 연결된, EV.
  31. 제28항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서,
    a. 제1 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 Y이고, 제2 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 X이거나; 또는
    b. 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티의 각각은 스캐폴드 X인, EV.
  32. 제11항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 항원은 EV의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 모이어티에 연결된, EV.
  33. 제32항에 있어서,
    a. 제1 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 X이고, 제2 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 Y이거나;
    b. 제1 스캐폴드 모이어티와 제2 스캐폴드 모이어티의 각각은 스캐폴드 X인, EV.
  34. 제11항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 항원은 EV의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV의 내강에 있는, EV.
  35. 제11항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 항원은 EV의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 모이어티에 연결된, EV.
  36. 제35항에 있어서, 제1 스캐폴드 및 제2 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 X인, EV.
  37. 제11항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 항원은 EV의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강에 있는, EV.
  38. 제37항에 있어서, 제1 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 X인, EV.
  39. 제11항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 항원은 EV의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결된, EV.
  40. 제39항에 있어서, 제1 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 X인, EV.
  41. 제11항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 항원은 EV의 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결된, EV.
  42. 제11항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 항원은 EV의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 모이어티에 연결된, EV.
  43. 제41항 또는 제42항에 있어서, 제1 스캐폴드 모이어티는 스캐폴드 X인, EV.
  44. 제11항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, (i) 항원은 링커에 의해 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되거나, (ii) 항원은 링커에 의해 제2 스캐폴드 모이어티에 연결되거나, (iii) 아쥬반트는 링커에 의해 제1 스캐폴드 모이어티에 연결되거나, (iv) 아쥬반트는 링커에 의해 제2 스캐폴드 모이어티에 연결되거나, (v) 이들의 조합인, EV.
  45. 제44항에 있어서, 링커는 폴리펩타이드인, EV.
  46. 제44항에 있어서, 링커는 비폴리펩타이드 모이어티인, EV.
  47. 제44항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 말레이미드 모이어티를 포함하는, EV.
  48. 제44항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 콜레스테롤 모이어티를 포함하는, EV.
  49. 제11항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 스캐폴드 모이어티 또는 제2 스캐폴드 모이어티는 PTGFRN 단백질인, EV.
  50. 제11항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 스캐폴드 모이어티 또는 제2 스캐폴드 모이어티는 서열 번호 33에 기재된 것과 같은 아미노산 서열을 포함하는, EV.
  51. 제11항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 스캐폴드 모이어티 또는 제2 스캐폴드 모이어티는 서열 번호 1과 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, EV.
  52. 제9항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 스캐폴드 모이어티 또는 제2 스캐폴드 모이어티는 BASP1 단백질인, EV.
  53. 제9항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 스캐폴드 모이어티 또는 제2 스캐폴드 모이어티는 (M)(G)(π)(X)(φ/π)(π)(+)(+) 또는 (G)(π)(X)(φ/π)(π)(+)(+)의 펩타이드를 포함하고, 각각의 삽입어구로 제시된 위치는 아미노산을 나타내고, π는 Pro, Gly, Ala 및 Ser로 이루어진 군으로부터 선택된 임의의 아미노산이고, X는 임의의 아미노산이고, φ는 Val, Ile, Leu, Phe, Trp, Tyr 및 Met로 이루어진 군으로부터 선택된 임의의 아미노산이고, (+)는 Lys, Arg 및 His로 이루어진 군으로부터 선택된 임의의 아미노산이고; 위치 5는 (+)가 아니고, 위치 6은 (+)도 (Asp 또는 Glu)도 아닌, EV.
  54. 제9항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 스캐폴드 모이어티 또는 제2 스캐폴드 모이어티는 서열 번호 50 내지 서열 번호 155 중 어느 하나에 기재된 아미노산 서열을 포함하는, EV.
  55. 제9항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 스캐폴드 모이어티 또는 제2 스캐폴드 모이어티는 서열 번호 3과 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, EV.
  56. (i) 항원 및 (ii) 아쥬반트를 포함하는 단리된 세포외 소포체로서,
    a. 항원은 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 Y에 연결되거나;
    b. 항원은 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강에 있거나;
    c. 항원은 EV의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
    d. 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
    e. 항원은 EV의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
    f. 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
    g. 항원은 EV의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
    h. 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
    i. 항원은 EV의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되거나;
    j. 항원은 EV의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
    k. 항원은 EV의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강에 있거나;
    l. 항원은 EV의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
    m. 항원은 EV의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되거나;
    n. 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
    o. 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강에 있거나;
    p. 항원은 EV의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되거나;
    q. 항원은 EV의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되거나;
    r. 항원은 EV의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV의 내강에 있거나;
    s. 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면에 직접 연결되거나;
    t. 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강에 있거나;
    u. 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
    v. 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
    w. 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 아쥬반트는 EV의 외부 표면에 직접 연결되거나;
    x. 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 아쥬반트는 EV의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
    y. 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면에 직접 연결되거나;
    z. 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 외부 표면에 직접 연결되거나;
    aa. 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면에 직접 연결되거나;
    bb. 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 아쥬반트는 EV의 외부 표면에 직접 연결되거나;
    cc. 항원은 EV의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV의 내강 표면에 직접 연결되거나; 또는
    dd. 항원은 EV의 내강에 있고, 아쥬반트는 EV의 외부에 직접 연결된 단리된 세포외 소포체.
  57. 제1항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, EV는 면역 조절제를 추가로 포함하는, EV.
  58. 제57항에 있어서, 면역 조절제는 EV의 내강 표면 또는 외부 표면에 직접 연결된, EV.
  59. 제57항 또는 제58항에 있어서, 면역 조절제는 EV의 외부 표면 상의 또는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결된, EV.
  60. 제57항 또는 제58항에 있어서, 면역 조절제는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결된, EV.
  61. 제56항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, (i) 항원은 링커에 의해 내강 표면에 직접 연결되거나, (ii) 아쥬반트는 링커에 의해 내강 표면에 직접 연결되거나, (iii) 면역 조절제는 링커에 의해 내강 표면에 직접 연결되거나, (iv) 항원은 링커에 의해 외부 표면에 직접 연결되거나, (v) 아쥬반트는 링커에 의해 외부 표면에 직접 연결되거나, (vi) 면역 조절제는 링커에 의해 외부 표면에 직접 연결되거나, 또는 (vii) 이들의 조합인, EV.
  62. 제56항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, (i) 항원은 링커에 의해 스캐폴드 X에 연결되거나, (ii) 아쥬반트는 링커에 의해 스캐폴드 X에 연결되거나, (iii) 면역 조절제는 링커에 의해 스캐폴드 X에 연결되거나, (iv) 항원은 링커에 의해 스캐폴드 Y에 연결되거나, (v) 아쥬반트는 링커에 의해 스캐폴드 Y에 연결되거나, (vi) 면역 조절제는 링커에 의해 스캐폴드 Y에 연결되거나, 또는 (vii) 이들의 조합인, EV.
  63. 제61항 또는 제62항에 있어서, 링커는 폴리펩타이드인, EV.
  64. 제61항 또는 제62항에 있어서, 링커는 비폴리펩타이드 모이어티인, EV.
  65. 제61항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 말레이미드 모이어티를 포함하는, EV.
  66. 제61항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 콜레스테롤 모이어티를 포함하는, EV.
  67. 제57항 또는 제58항에 있어서, 면역 조절제는 EV의 내강에 있는, EV.
  68. 제57항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 면역 조절제는 음성 관문 조절제에 대한 억제제 또는 음성 관문 조절제의 결합 파트너에 대한 억제제를 포함하는, EV.
  69. 제68항에 있어서, 음성 관문 조절제는 세포독성 T-림프구-연관된 단백질 4(CTLA-4: cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4), 예정 세포사 단백질 1(PD-1: programmed cell death protein 1), 림프구-활성화된 유전자 3(LAG-3: lymphocyte-activated gene 3), T-세포 면역글로불린 뮤신-함유 단백질 3(TIM-3: T-cell immunoglobulin mucin-containing protein 3), B 및 T 림프구 감쇠인자(BTLA: B and T lymphocyte attenuator), Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T 세포 면역수용체(TIGIT: T cell immunoreceptor with Ig and ITIM domain), T 세포 활성화의 V-도메인 Ig 억제인자(VISTA: V-domain Ig suppressor of T cell activation), 아데노신 A2a 수용체(A2aR: adenosine A2a receptor), 살해 세포 면역글로불린 유사 수용체(KIR: killer cell immunoglobulin like receptor), 인돌아민 2,3-디옥시게나제(IDO: indoleamine 2,3-dioxygenase), CD20, CD39, CD73, 또는 임의의 이들의 조합을 포함하는, EV.
  70. 제57항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 면역 조절제는 양성 동시자극 분자에 대한 활성인자 또는 양성 동시자극 분자의 결합 파트너에 대한 활성인자를 포함하는, EV.
  71. 제70항에 있어서, 양성 동시자극 분자는 TNF 수용체 슈퍼패밀리 구성원(예를 들어, CD120a, CD120b, CD18, OX40, CD40, Fas 수용체, M68, CD27, CD30, 4-1BB, TRAILR1, TRAILR2, TRAILR3, TRAILR4, RANK, OCIF, TWEAK 수용체, TACI, BAFF 수용체, ATAR, CD271, CD269, AITR, TROY, CD358, TRAMP 및 XEDAR)인, EV.
  72. 제70항에 있어서, 양성 동시자극 분자에 대한 활성인자는 TNF 슈퍼패밀리 구성원(예를 들어, TNFα, TNF-C, OX40L, CD40L, FasL, LIGHT, TL1A, CD27L, Siva, CD153, 4-1BB 리간드, TRAIL, RANKL, TWEAK, APRIL, BAFF, CAMLG, NGF, BDNF, NT-3, NT-4, GITR 리간드 및 EDA-2)인, EV.
  73. 제70항에 있어서, 양성 동시자극 분자는 CD28-슈퍼패밀리 동시자극 분자(예를 들어, ICOS 또는 CD28)인, EV.
  74. 제70항에 있어서, 양성 동시자극 분자에 대한 활성인자는 ICOSL, CD80 또는 CD86인, EV.
  75. 제57항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 면역 조절제는 사이토카인 또는 사이토카인의 결합 파트너를 포함하는, EV.
  76. 제75항에 있어서, 사이토카인은 IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12, IL-15, IL-21, IFN-γ, IL-1α, IL-1β, IL-1ra, IL-18, IL-33, IL-36α, IL-36β, IL-36γ, IL-36ra, IL-37, IL-38, IL-3, IL-5, IL-6, IL-11, IL-13, IL-23, 과립구-대식세포 콜로니 자극 인자(GM-CSF: granulocyte-macrophage colony stimulating factor), 과립구-콜로니 자극 인자(G-CSF: granulocyte-colony stimulating factor), 백혈병 억제 인자(LIF: leukemia inhibitory factor), 줄기 세포 인자(SCF: stem cell factor), 트롬보포이에틴(TPO: thrombopoietin), 대식세포-콜로니 자극 인자(M-CSF: macrophage-colony stimulating factor), 에리스로포이에틴(EPO: erythropoieticn), Flt-3, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, IL-19, IL-20, IL-22, IL-24, TNF-α, TNF-β, BAFF, APRIL, 림프독소 베타(TNF-γ: lymphotoxin beta), IL-17A, IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17E, IL-17F, IL-25, TSLP, IL-35, IL-27, TGF-β, 또는 이들의 조합을 포함하는, EV.
  77. 제57항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 면역 조절제는 배 중심 반응에 필요한 세포내 상호작용을 지지하는 단백질을 포함하는, EV.
  78. 제77항에 있어서, 배 중심 반응에 필요한 세포내 상호작용을 지지하는 단백질은 신호전달 림프구 활성화 분자(SLAM: signaling lymphocyte activation molecule) 패밀리 구성원, SLAM-연관된 단백질(SAP: SLAM-associated protein), ICOS-ICOSL, CD40-40L, CD28/B7, PD-1/L1, IL-4/IL4R, IL21/IL21R, TLR4, TLR7, TLR8, TLR9, CD180, CD22, 또는 이들의 조합을 포함하는, EV.
  79. 제78항에 있어서, SLAM 패밀리 구성원은 SLAM, CD48, CD229(Ly9), Ly108, 2B4, CD84, NTB-A, CRACC, BLAME, CD2F-10, 또는 이들의 조합을 포함하는, EV.
  80. (i) 항원 및 (ii) 면역 조절제를 포함하는 단리된 세포외 소포체로서,
    a. 항원은 EV의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 Y에 연결되거나;
    b. 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강에 있거나;
    c. 항원은 EV의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
    d. 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
    e. 항원은 EV의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
    f. 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
    g. 항원은 EV의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
    h. 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
    i. 항원은 EV의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되거나;
    j. 항원은 EV의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
    k. 항원은 EV의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강에 있거나;
    l. 항원은 EV의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
    m. 항원은 EV의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되거나;
    n. 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
    o. 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강에 있거나;
    p. 항원은 EV의 외부 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되거나;
    q. 항원은 EV의 내강 표면 상의 제1 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 외부 표면 상의 제2 스캐폴드 X에 연결되거나;
    r. 항원은 EV의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV의 내강에 있거나;
    s. 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면에 직접 연결되거나;
    t. 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강에 있거나;
    u. 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되거나;
    v. 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
    w. 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 면역 조절제는 EV의 외부에 직접 연결되거나;
    x. 항원은 EV의 내강 표면에 직접 연결되고, 면역 조절제는 EV의 외부 상의 스캐폴드 X에 연결되거나;
    y. 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면에 직접 연결되거나;
    z. 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 외부에 직접 연결되거나;
    aa. 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면에 직접 연결되거나;
    bb. 항원은 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 X에 연결되고, 면역 조절제는 EV의 외부에 직접 연결되거나;
    cc. 항원은 EV의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV의 내강 표면에 직접 연결되거나; 또는
    dd. 항원은 EV의 내강에 있고, 면역 조절제는 EV의 외부에 직접 연결된 단리된 세포외 소포체.
  81. 제80항에 있어서, 아쥬반트를 추가로 포함하는, EV.
  82. 제81항에 있어서, 아쥬반트는 EV의 내강 표면 또는 외부 표면에 직접 연결된, EV.
  83. 제81항에 있어서, 아쥬반트는 EV의 외부 표면 상의 또는 EV의 내강에서의 스캐폴드 X에 연결된, EV.
  84. 제81항에 있어서, 아쥬반트는 EV의 내강 표면 상의 스캐폴드 Y에 연결된, EV.
  85. 제81항에 있어서, 아쥬반트는 EV의 내강에 있는, EV.
  86. 제1항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 항원은 종양 항원인, EV.
  87. 제86항에 있어서, 종양 항원은 알파-태아단백질(AFP), 암배아 항원(CEA), 상피 종양 항원(ETA), 뮤신 1(MUC1), Tn-MUC1, 뮤신 16(MUC16), 티로시나제, 흑색종-연관된 항원(MAGE), 종양 단백질 p53(p53), CD4, CD8, CD45, CD80, CD86, 예정사 리간드 1(PD-L1), 예정사 리간드 2(PD-L2), NY-ESO-1, PSMA, TAG-72, HER2, GD2, cMET, EGFR, 메소텔린, VEGFR, 알파-엽산 수용체, CE7R, IL-3, 암-고환 항원, MART-1 gp100, TNF-관련된 아폽토시스 유도-리간드, 브라큐리(Brachyury)(예를 들어, 흑색종에서의 항원(PRAME)), 윌름스 종양 1(WT1), CD19, CD22, 또는 임의의 이들의 조합을 포함하는, EV.
  88. 제1항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 항원은 박테리아, 바이러스, 진균, 원생동물, 또는 임의의 이들의 조합으로부터 유래된, EV.
  89. 제88항에 있어서, 항원은 종양발생 바이러스로부터 유래된, EV.
  90. 제88항에 있어서, 항원은 인간 감마 헤르페스 바이러스 4(엡스타인-바 바이러스), 인플루엔자 A 바이러스, 인플루엔자 B 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 스타필로코커스 아우레우스, 마이코박테륨 투베쿨로시스, 클라미디아 트라초마티스, HIV(예를 들어, HIV-2), 코로나 바이러스(예를 들어, COVID-19, MERS-CoV 및 SARS CoV), 필로바이러스(예를 들어, 마르부르그 및 에볼라), 스트렙토코커스 피요게네스, 스트렙토코커스 뉴모니아에, 플라스모디아 종(예를 들어, 비박스 및 팔시파룸), 치쿤구니야 바이러스, 인간 유두종 바이러스(HPV), B형 간염, C형 간염, 인간 헤르페스 바이러스 8, 메르켈 세포 폴리오마바이러스(MCV), 분야바이러스(예를 들어, 한타 바이러스), 아레나 바이러스(예를 들어, LCMV 및 라사 바이러스), 플라비바이러스(예를 들어, 뎅기, 지카, 일본 뇌염, 웨스트 나일 및 황열), 엔테로바이러스(예를 들어, 소아마비), 아스트로바이러스(예를 들어, 위장염), 랍도비리다에(예를 들어, 광견병), 보렐리아 부르그도르페리 및 부렐리아 메이요니(예를 들어, 라임병), 단순 포진 바이러스 2(HSV2), 클레브시엘라 종, 슈도모나스 아에루기노사, 엔테로코커스 종, 프로테우스 종, 엔테로박터 종, 악티노박터 종, 코아귤라제-음성 스타필로코커스(CoNS), 마이코플라스마 종, 아데노바이러스, 아데노-연관된 바이러스(AAV), 또는 이들의 조합으로부터 유래된, EV.
  91. 제1항 내지 제79항 및 제81항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, 아쥬반트는 인터페론 유전자의 자극제(STING) 작용제, 톨양 수용체(TLR) 작용제, 염증성 매개자, RIG-I 작용제, 알파-gal-cer(NKT 작용제), 열 충격 단백질(예를 들어, HSP65 및 HSP70), C형 렉틴 작용제(예를 들어, 베타 글루칸(덱틴 1), 키틴 및 쿠르들란), 또는 임의의 이들의 조합인, EV.
  92. 제91항에 있어서, 아쥬반트는 STING 작용제인, EV.
  93. 제92항에 있어서, STING 작용제는 환식 디뉴클레오타이드 STING 작용제 또는 이환식 디뉴클레오타이드 STING 작용제를 포함하는, EV.
  94. 제91항에 있어서, 아쥬반트는 TLR 작용제인, EV.
  95. 제94항에 있어서, TLR 작용제는 TLR2 작용제(예를 들어, 리포테이코산, 비정형 LPS, MALP-2 및 MALP-404, OspA, 포린, LcrV, 리포만난, GPI 앵커, 리소포스파티딜세린, 리포포스포글리칸(LPG), 글리코포스파티딜이노시톨(GPI), 지모산, hsp60, gH/gL 당단백질, 헤마글루티닌), TLR3 작용제(예를 들어, 이중-가닥 RNA, 예를 들어 poly(I:C)), TLR4 작용제(예를 들어, 리포폴리사카라이드(LPS), 리포테이코산, β-데펜신 2, 피브로넥틴 EDA, HMGB1, 스나핀, 테나신 C), TLR5 작용제(예를 들어, 플라겔린), TLR6 작용제, TLR7/8 작용제(예를 들어, 단일-가닥 RNA, CpG-A, Poly G10, Poly G3, 레시퀴모드), TLR9 작용제(예를 들어, 비메틸화된 CpG DNA), 또는 임의의 이들의 조합을 포함하는, EV.
  96. 제1항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서, EV는 엑소좀인, EV.
  97. 제1항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 표적화 모이어티를 추가로 포함하는, EV.
  98. 제97항에 있어서, 표적화 모이어티는 수지상 세포에 대한 마커에 특이적으로 결합하는, EV.
  99. 제98항에 있어서, 마커는 수지상 세포에 오직 존재하는, EV.
  100. 제98항 또는 제99항에 있어서, 수지상 세포는 형질세포양 수지상 세포(pDC), 골수성/종래의 수지상 세포 1(cDC1), 골수성/종래의 수지상 세포 2(cDC2), 염증성 단핵구 유래된 수지상 세포, 랑게르한스 세포, 진피 수지상 세포, 리소자임-발현 수지상 세포(LysoDC), 쿠퍼 세포, 또는 임의의 이들의 조합을 포함하는, EV.
  101. 제100항에 있어서, 수지상 세포는 cDC1인, EV.
  102. 제98항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 마커는 C형 렉틴 도메인 패밀리 9 구성원 A(Clec9a) 단백질, 수지상 세포-특이적 세포간 부착 분자-3-그래빙 비인테그린(DC-SIGN), CD207, CD40, Clec6, 수지상 세포 면역수용체(DCIR), DEC-205, 렉틴-유사 산화된 저밀도 지단백 수용체-1(LOX-1), MARCO, Clec12a, Clec10a, DC-아시알로당단백질 수용체(DC-ASGPR), DC 면역수용체 2(DCIR2), 덱틴-1, 대식세포 만노스 수용체(MMR), BDCA-1(CD303, Clec4c), 덱틴-2, Bst-2(CD317), 랑게린, CD206, CD11b, CD11c, CD123, CD304, XCR1, AXL, 시글렉 6, CD209, SIRPA, CX3CR1, GPR182, CD14, CD16, CD32, CD34, CD38, CD10, 또는 임의의 이들의 조합을 포함하는, EV.
  103. 제102항에 있어서, 마커는 Clec9a 단백질인, EV.
  104. 제97항에 있어서, 표적화 모이어티는 T 세포에 대한 마커에 특이적으로 결합하는, EV.
  105. 제104항에 있어서, 마커는 CD3 분자를 포함하는, EV.
  106. 제97항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, 표적화 모이어티는 EV의 외부 표면에 직접 연결된, EV.
  107. 제97항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, 표적화 모이어티는 EV의 외부 표면 상의 스캐폴드 X에 연결된, EV.
  108. 제106항에 있어서, 표적화 모이어티는 링커에 의해 EV의 외부 표면에 직접 연결된, EV.
  109. 제107항에 있어서, 표적화 모이어티는 링커에 의해 스캐폴드 X에 연결된, EV.
  110. 제108항 또는 제109항에 있어서, 링커는 폴리펩타이드인, EV.
  111. 제108항 또는 제109항에 있어서, 링커는 비폴리펩타이드 모이어티인, EV.
  112. 제108항 내지 제111항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 말레이미드 모이어티를 포함하는, EV.
  113. 제108항 내지 제111항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 콜레스테롤 모이어티를 포함하는, EV.
  114. 약제학적 조성물로서, 제1항 내지 제113항 중 어느 한 항의 EV 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  115. 세포로서, 제1항 내지 제113항 중 어느 한 항의 EV를 생산하는 세포.
  116. 하나 이상의 벡터를 포함하는 세포로서, 벡터는 (i) 제1항 내지 제113항 중 어느 한 항의 항원, (ii) 제1항 내지 제79항 및 제81항 내지 제113항 중 어느 한 항의 아쥬반트, (iii) 제57항 내지 제113항 중 어느 한 항의 면역 조절제, (iv) 제97항 내지 제113항 중 어느 한 항의 표적화 모이어티, 또는 (v) 이들의 조합을 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 세포.
  117. 키트로서, 제1항 내지 제113항 중 어느 한 항의 EV 및 사용 설명서를 포함하는 키트.
  118. EV-약물 접합체로서, 제1항 내지 제113항 중 어느 한 항의 EV를 포함하는 EV-약물 접합체.
  119. EV를 제조하는 방법으로서, 적합한 조건 하에 제115항 또는 제116항의 세포를 배양하는 단계 및 EV를 얻는 단계를 포함하는 방법.
  120. 면역 반응의 유도를 필요로 하는 대상체에서 면역 반응을 유도하는 방법으로서,
    제1항 내지 제113항 중 어느 한 항의 EV를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  121. 질환의 예방 또는 치료를 필요로 하는 대상체에서 질환을 예방하거나 치료하는 방법으로서,
    제1항 내지 제113항 중 어느 한 항의 EV를 투여하는 단계를 포함하고, 질환은 항원과 연관된 방법.
  122. 제121항에 있어서, 질환은 암인, 방법.
  123. 제122항에 있어서, 암은 방광암, 자궁경부암, 신장 세포 암, 고환암, 결장직장암, 폐암, 두경부암, 난소, 림프종, 간암, 교모세포종, 흑색종, 골수종, 백혈병, 췌장암, 또는 이들의 조합을 포함하는, 방법.
  124. 제121항에 있어서, 질환은 감염인, 방법.
  125. 제120항 내지 제124항 중 어느 한 항에 있어서, EV는 비경구로, 경구로, 정맥내로, 근육내로, 종양내로, 비강내로, 피하로 또는 복강내로 투여되는, 방법.
  126. 제120항 내지 제125항 중 어느 한 항에 있어서, 추가 치료제를 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  127. 대상체에서 암의 전이를 억제하거나 감소시키는 방법으로서, 제1항 내지 제113항 중 어느 한 항의 EV를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  128. 스캐폴드 Y는 N 말단 도메인(ND) 및 효과기 도메인(ED)을 포함하고, ND 및/또는 ED는 EV의 내강 표면과 회합된, 제19항, 제20항 및 제24항 내지 제113항 중 어느 한 항의 EV, 제114항의 약제학적 조성물, 제115항 또는 제116항의 세포, 제117항의 키트, 제118항의 EV-약물 접합체, 또는 제119항 내지 제127항 중 어느 한 항의 방법.
  129. 제128항에 있어서, ND는 미리스토일화를 통해 엑소좀의 내강 표면과 회합된, EV, 약제학적 조성물, 세포, 키트 또는 방법.
  130. 제128항 또는 제129항에 있어서, ED는 이온성 상호작용에 의해 엑소좀의 내강 표면과 회합된, EV, 약제학적 조성물, 세포, 키트 또는 방법.
  131. 제128항 내지 제130항 중 어느 한 항에 있어서, ED는 (i) 염기성 아미노산 또는 (ii) 서열에서 2개 이상의 염기성 아미노산을 포함하고, 염기성 아미노산은 Lys, Arg, His, 및 임의의 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, EV, 약제학적 조성물, 세포, 키트 또는 방법.
  132. 제131항에 있어서, 염기성 아미노산은 (Lys)n이고, n은 1 내지 10의 정수인, EV, 약제학적 조성물, 세포, 키트 또는 방법.
  133. 제128항 내지 제132항 중 어느 한 항에 있어서, ED는 Lys(K), KK, KKK, KKKK(서열 번호 205), KKKKK(서열 번호 206), Arg(R), RR, RRR, RRRR(서열 번호 207); RRRRR(서열 번호 208), KR, RK, KKR, KRK, RKK, KRR, RRK, (K/R)(K/R)(K/R)(K/R)(서열 번호 209), (K/R)(K/R)(K/R)(K/R)(K/R)(서열 번호 210), 또는 임의의 이들의 조합을 포함하는, EV, 약제학적 조성물, 세포, 키트 또는 방법.
  134. 제128항 내지 제133항 중 어느 한 항에 있어서, ND는 G:X2:X3:X4:X5:X6에 기재된 것과 같은 아미노산 서열을 포함하고, G는 Gly을 나타내고; ":"은 펩타이드 결합을 나타내고, X2 내지 X6의 각각은 독립적으로 아미노산이고, X6은 염기성 아미노산을 포함하는, EV, 약제학적 조성물, 세포, 키트 또는 방법.
  135. 제134항에 있어서,
    (i) X2는 Pro, Gly, Ala 및 Ser로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
    (ii) X4는 Pro, Gly, Ala, Ser, Val, Ile, Leu, Phe, Trp, Tyr, Gln 및 Met로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
    (iii) X5는 Pro, Gly, Ala 및 Ser로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
    (iv) X6은 Lys, Arg 및 His로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
    (v) (i) 내지 (iv)의 임의의 조합인, EV, 약제학적 조성물, 세포, 키트 또는 방법.
  136. 제128항 내지 제135항 중 어느 한 항에 있어서, ND는 G:X2:X3:X4:X5:X6의 아미노산 서열을 포함하고,
    (i) G는 Gly를 나타내고;
    (ii) ":"은 펩타이드 결합을 나타내고;
    (iii) X2는 Pro, Gly, Ala 및 Ser로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산이고;
    (iv) X3은 아미노산이고;
    (v) X4는 Pro, Gly, Ala, Ser, Val, Ile, Leu, Phe, Trp, Tyr, Gln 및 Met로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산이고;
    (vi) X5는 Pro, Gly, Ala 및 Ser로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산이고;
    (vii) X6은 Lys, Arg 및 His로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산인, EV, 약제학적 조성물, 세포, 키트 또는 방법.
  137. 제134항 내지 제136항 중 어느 한 항에 있어서, X3은 Asn, Gln, Ser, Thr, Asp, Glu, Lys, His 및 Arg로 이루어진 군으로부터 선택되는, EV, 약제학적 조성물, 세포, 키트 또는 방법.
  138. 제128항 내지 제137항 중 어느 한 항에 있어서, ND 및 ED는 링커에 의해 연결된, EV, 약제학적 조성물, 세포, 키트 또는 방법.
  139. 제138항에 있어서, 링커는 하나 이상의 아미노산을 포함하는, EV, 약제학적 조성물, 세포, 키트 또는 방법.
  140. 제128항 내지 제139항 중 어느 한 항에 있어서, ND는 (i) GGKLSKK(서열 번호 211), (ii) GAKLSKK(서열 번호 212), (iii) GGKQSKK(서열 번호 213), (iv) GGKLAKK(서열 번호 214), (v) GGKLSK(서열 번호 215), 또는 (vi) 임의의 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는, EV, 약제학적 조성물, 세포, 키트 또는 방법.
  141. 제140항에 있어서, ND는 (i) GGKLSKKK(서열 번호 238), (ii) GGKLSKKS(서열 번호 239), (iii) GAKLSKKK(서열 번호 240), (iv) GAKLSKKS(서열 번호 241), (v) GGKQSKKK(서열 번호 242), (vi) GGKQSKKS(서열 번호 243), (vii) GGKLAKKK(서열 번호 244), (viii) GGKLAKKS(서열 번호 245) 및 (ix) 임의의 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는, EV, 약제학적 조성물, 세포, 키트 또는 방법.
  142. 제128항 내지 제141항 중 어느 한 항에 있어서, ND는 아미노산 서열 GGKLSKK(서열 번호 211)를 포함하는, EV, 약제학적 조성물, 세포, 키트 또는 방법.
  143. 제128항 내지 제142항 중 어느 한 항에 있어서, 스캐폴드 Y는 적어도 약 8개, 적어도 약 9개, 적어도 약 10개, 적어도 약 11개, 적어도 약 12개, 적어도 약 13개, 적어도 약 14개, 적어도 약 15개, 적어도 약 16개, 적어도 약 17개, 적어도 약 18개, 적어도 약 19개, 적어도 약 20개, 적어도 약 21개, 적어도 약 22개, 적어도 약 23개, 적어도 약 24개, 적어도 약 25개, 적어도 약 30개, 적어도 약 35개, 적어도 약 40개, 적어도 약 45개, 적어도 약 50개, 적어도 약 55개, 적어도 약 60개, 적어도 약 65개, 적어도 약 70개, 적어도 약 75개, 적어도 약 80개, 적어도 약 85개, 적어도 약 90개, 적어도 약 95개, 적어도 약 100개, 적어도 약 105개, 적어도 약 110개, 적어도 약 120개, 적어도 약 130개, 적어도 약 140개, 적어도 약 150개, 적어도 약 160개, 적어도 약 170개, 적어도 약 180개, 적어도 약 190개 또는 적어도 약 200개의 아미노산 길이인, EV, 약제학적 조성물, 세포, 키트, 또는 방법.
  144. 제128항 내지 제143항 중 어느 한 항에 있어서, 스캐폴드 Y는 (i) GGKLSKKKKGYNVN(서열 번호 246), (ii) GAKLSKKKKGYNVN(서열 번호 247), (iii) GGKQSKKKKGYNVN(서열 번호 248), (iv) GGKLAKKKKGYNVN(서열 번호 249), (v) GGKLSKKKKGYSGG(서열 번호 250), (vi) GGKLSKKKKGSGGS(서열 번호 251), (vii) GGKLSKKKKSGGSG(서열 번호 252), (viii) GGKLSKKKSGGSGG(서열 번호 253), (ix) GGKLSKKSGGSGGS(서열 번호 254), (x) GGKLSKSGGSGGSV(서열 번호 255) 또는 (xi) GAKKSKKRFSFKKS(서열 번호 256)를 포함하는, EV, 약제학적 조성물, 세포, 키트 또는 방법.
  145. 제128항 내지 제143항 중 어느 한 항에 있어서, 스캐폴드 Y는 (i) GGKLSKKKKGYNVN(서열 번호 246), (ii) GAKLSKKKKGYNVN(서열 번호 247), (iii) GGKQSKKKKGYNVN(서열 번호 248), (iv) GGKLAKKKKGYNVN(서열 번호 249), (v) GGKLSKKKKGYSGG(서열 번호 250), (vi) GGKLSKKKKGSGGS(서열 번호 251), (vii) GGKLSKKKKSGGSG(서열 번호 252), (viii) GGKLSKKKSGGSGG(서열 번호 253), (ix) GGKLSKKSGGSGGS(서열 번호 254), (x) GGKLSKSGGSGGSV(서열 번호 255) 또는 (xi) GAKKSKKRFSFKKS(서열 번호 256)로 이루어지는, EV, 약제학적 조성물, 세포, 키트 또는 방법.
  146. 제128항 내지 제145항 중 어느 한 항에 있어서, 스캐폴드 Y는 N 말단에서 Met를 포함하지 않는, EV, 약제학적 조성물, 세포, 키트 또는 방법.
  147. 제128항 내지 제146항 중 어느 한 항에 있어서, 스캐폴드 Y는 스캐폴드 단백질의 N 말단에서 미리스토일화된 아미노산 잔기를 포함하는, EV, 약제학적 조성물, 세포, 키트 또는 방법.
  148. 제147항에 있어서, 스캐폴드 Y의 N 말단에서의 아미노산 잔기는 Gly인, EV, 약제학적 조성물, 세포, 키트 또는 방법.
  149. 제147항 또는 제148항에 있어서, 스캐폴드 Y의 N 말단에서의 아미노산 잔기는 합성인, EV, 약제학적 조성물, 세포, 키트 또는 방법.
  150. 제147항 또는 제1482항에 있어서, 스캐폴드 Y의 N 말단에서의 아미노산 잔기는 글리신 유사체인, EV, 약제학적 조성물, 세포, 키트 또는 방법.
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102511500B1 (ko) * 2022-10-24 2023-03-21 동국대학교 산학협력단 파이브로넥틴 단편 단백질이 과발현된 세포외소포체 및 이의 약물 전달 용도
WO2023200257A1 (ko) * 2022-04-12 2023-10-19 (주)인엑소플랫 줄기세포로부터 분리된 세포외 소포체 및 이의 용도
WO2024014894A1 (ko) * 2022-07-13 2024-01-18 이화여자대학교 산학협력단 항원 단백질 또는 상기 단백질을 암호화하는 유전자를 포함하는 세포외소포체 및 그의 용도

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9816080B2 (en) 2014-10-31 2017-11-14 President And Fellows Of Harvard College Delivery of CAS9 via ARRDC1-mediated microvesicles (ARMMs)
US11730823B2 (en) 2016-10-03 2023-08-22 President And Fellows Of Harvard College Delivery of therapeutic RNAs via ARRDC1-mediated microvesicles
US20230241089A1 (en) * 2019-09-25 2023-08-03 Codiak Biosciences, Inc. Sting agonist comprising exosomes for treating neuroimmunological disorders
JP2023518414A (ja) 2020-03-20 2023-05-01 コディアック バイオサイエンシーズ， インコーポレイテッド 治療のための細胞外小胞
WO2022066898A2 (en) 2020-09-23 2022-03-31 Codiak Biosciences, Inc. Methods of producing extracellular vesicles
WO2022066883A1 (en) * 2020-09-23 2022-03-31 Codiak Biosciences, Inc. Extracellular vesicles comprising kras antigens and uses thereof
US20230391834A1 (en) * 2020-10-16 2023-12-07 President And Fellows Of Harvard College Ww-domain-activated extracellular vesicles targeting coronaviruses
CN112662695B (zh) * 2020-12-30 2021-11-26 中国医学科学院医学生物学研究所 一种细菌生物膜囊泡bbv作为疫苗载体的构建方法和应用
WO2022154149A1 (ko) * 2021-01-14 2022-07-21 (주)엑솔런스 세포외소포체를 이용한 백신 조성물
IT202100000569A1 (it) 2021-01-14 2022-07-14 Evobiotech S R L Composizione comprendente vescicole extracellulari vegetali ingegnerizzate e suo impiego come vaccino
CN117177739A (zh) 2021-02-17 2023-12-05 隆萨销售股份有限公司 负载细胞外囊泡的方法
WO2022192553A1 (en) * 2021-03-11 2022-09-15 North Carolina State University Therapeutic compositions and methods related to exosome eluting stents
CA3213217A1 (en) 2021-04-28 2022-11-03 Raphael Darteil Strong potentiation of tlr3 agonists effects using fxr agonists as a combined treatment
WO2022241463A1 (en) * 2021-05-12 2022-11-17 The University Of Chicago Methods and compositions for targeting of antigens and other polypeptides to first responder dendritic cells
CN113307886A (zh) * 2021-05-28 2021-08-27 苏州大学 一种编码线粒体定位的豆蔻酰化多肽及其制备方法与应用
AU2022386233A1 (en) * 2021-11-11 2024-06-06 Strm.Bio Incorporated Biomarkers of megakaryocyte-derived extracellular vesicles
WO2023119317A1 (en) * 2021-12-20 2023-06-29 Abhishek Dutta A target specific exosome based delivery vehicle and a bio-formulation to obtain the same
WO2023210661A1 (ja) * 2022-04-25 2023-11-02 国立大学法人金沢大学 ＣＡＲ－Ｔ細胞活性化、造血幹細胞増殖、ｉＰＳ細胞分化を制御する組成物およびその用途
WO2024039896A1 (en) * 2022-08-19 2024-02-22 Northeastern University Cationic peptide/protein-modified exosomes for applications in drug delivery
CN117442552B (zh) * 2023-11-20 2024-03-26 山东大学 一种淋巴结内t细胞区靶向纳米粒及其水凝胶

Family Cites Families (47)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US7091186B2 (en) 2001-09-24 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. p-Amidobenzylethers in drug delivery agents
US7087229B2 (en) 2003-05-30 2006-08-08 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Releasable polymeric conjugates based on aliphatic biodegradable linkers
US7375078B2 (en) 2004-02-23 2008-05-20 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
US7691962B2 (en) 2004-05-19 2010-04-06 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
TW200616604A (en) 2004-08-26 2006-06-01 Nicholas Piramal India Ltd Nitric oxide releasing prodrugs containing bio-cleavable linker
US20060269480A1 (en) 2005-05-31 2006-11-30 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Multi-triggered self-immolative dendritic compounds
US7601798B2 (en) 2005-10-04 2009-10-13 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Methods of preparing polymers having terminal amine groups using protected amine salts
WO2008022309A2 (en) 2006-08-18 2008-02-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Polyconjugates for in vivo delivery of polynucleotides
AU2007299705B2 (en) 2006-09-22 2012-09-06 Dharmacon, Inc. Duplex oligonucleotide complexes and methods for gene silencing by RNA interference
TWI412367B (zh) 2006-12-28 2013-10-21 Medarex Llc 化學鏈接劑與可裂解基質以及其之綴合物
PL2125007T3 (pl) 2007-02-07 2014-07-31 Univ California Koniugaty syntetycznych agonistów TLR i ich zastosowania
CN101970491A (zh) 2007-08-30 2011-02-09 沃尔特及伊莱萨霍尔医学研究院 树突状细胞标记物及其用途
WO2009030996A1 (en) 2007-09-05 2009-03-12 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Triazole compounds as toll-like receptor (tlr) agonists
EP2200639B1 (en) 2007-09-24 2016-03-30 Government of the USA, as Represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Immunostimulatory combinations of tlr3 ligands with tlr2 and tlr9 agonists and methods of use
US9370558B2 (en) 2008-02-13 2016-06-21 President And Fellows Of Harvard College Controlled delivery of TLR agonists in structural polymeric devices
ES2438496T3 (es) 2008-08-01 2014-01-17 Ventirx Pharmaceuticals, Inc. Formulaciones de agonistas de receptores de tipo toll y su uso
SG171985A1 (en) 2008-12-11 2011-07-28 Agency For Science Techonology And Res Glucose-peg conjugates for reducing glucose transport into a cell
WO2010135747A1 (en) 2009-05-22 2010-11-25 Genocea Biosciences Inc. Vaccines against herpes simplex virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response
CN104136614B (zh) 2009-10-06 2018-04-06 帕纳塞拉实验室有限责任公司 Toll‑样受体和激动剂用于治疗癌症的用途
SG189071A1 (en) 2010-10-01 2013-05-31 Ventirx Pharmaceuticals Inc Therapeutic use of a tlr agonist and combination therapy
WO2013053008A2 (en) 2011-10-14 2013-04-18 The Walter And Eliza Hall Institute Of Medical Research Molecules which bind clec9a
US8465730B1 (en) 2012-02-06 2013-06-18 Surfatech Corporation Polyglycerol polyesters
NZ702392A (en) 2012-06-08 2017-03-31 Aduro Biotech Compositions and methods for cancer immunotherapy
US20150247141A1 (en) 2012-09-14 2015-09-03 Rana Therapeutics, Inc. Multimeric oligonucleotide compounds
EA201590396A1 (ru) 2012-12-13 2015-12-30 Адуро Биотек, Инк. Композиция, содержащая циклические пуриновые динуклеотиды с определенной стереохимией, и способ ее получения и применения
JP2016524593A (ja) 2013-04-29 2016-08-18 メモリアル スローン−ケタリング キャンサー センター セカンドメッセンジャーのシグナル伝達を変えるための組成物及び方法
JP2016518140A (ja) 2013-05-03 2016-06-23 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア Ｉ型インターフェロンの環状ジヌクレオチド誘導法
MY175308A (en) 2013-05-18 2020-06-18 Aduro Biotech Inc Compositions and methods for activating "stimulator of interferon gene"-dependent signalling
CN105188373B (zh) 2013-05-18 2017-09-22 艾杜罗生物科技公司 抑制“干扰素基因刺激蛋白”依赖性信号传导的组合物和方法
EP3027227A4 (en) 2013-07-31 2018-05-23 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Sting crystals and modulators
WO2015077354A1 (en) 2013-11-19 2015-05-28 The University Of Chicago Use of sting agonist as cancer treatment
ES2692226T3 (es) 2014-06-04 2018-11-30 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Dinucleótidos cíclicos como moduladores de STING
US20170340658A1 (en) 2014-12-16 2017-11-30 Invivogen Combined use of a chemotherapeutic agent and a cyclic dinucleotide for cancer treatment
EP3546473A1 (en) 2014-12-16 2019-10-02 Kayla Therapeutics Cyclic [(2',5')p(3',5')p]-dinucleotides for cytokine induction
GB201501462D0 (en) 2015-01-29 2015-03-18 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Novel compounds
PE20171448A1 (es) 2015-03-10 2017-10-02 Aduro Biotech Inc Composiciones y metodos para activar la senalizacion dependiente del estimulador del gen de interferon
KR20170132154A (ko) 2015-03-31 2017-12-01 브이에이치스퀘어드 리미티드 프로테아제-절단가능 링커를 갖는 펩티드 구조물
EP3298031B1 (en) * 2015-05-18 2020-10-21 BiOMVis Srl Immunogenic compositions containing bacterial outer membrane vesicles and therapeutic uses thereof
MA42608A (fr) 2015-08-13 2018-06-20 Merck Sharp & Dohme Composés de di-nucléotide cyclique en tant qu'agonistes sting (stimulateur de gène interféron)
AU2016343993A1 (en) 2015-10-28 2018-05-10 Aduro Biotech, Inc. Compositions and methods for activating "stimulator of interferon gene"-dependent signalling
CN114230625A (zh) 2016-03-18 2022-03-25 免疫传感器公司 环二核苷酸化合物及使用方法
JP6746712B2 (ja) 2016-04-07 2020-08-26 グラクソスミスクライン、インテレクチュアル、プロパティー、ディベロップメント、リミテッドＧｌａｘｏｓｍｉｔｈｋｌｉｎｅ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｌｉｍｉｔｅｄ タンパク質調節因子として有用な複素環式アミド
SG11201808708RA (en) 2016-04-07 2018-11-29 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Heterocyclic amides useful as protein modulators
JOP20170192A1 (ar) 2016-12-01 2019-01-30 Takeda Pharmaceuticals Co داي نوكليوتيد حلقي
WO2019040920A1 (en) 2017-08-25 2019-02-28 Codiak Biosciences, Inc. PREPARATION OF THERAPEUTIC EXOSOMES USING MEMBRANE PROTEINS
CN112118866A (zh) 2018-03-23 2020-12-22 科迪亚克生物科学公司 包含sting激动剂的细胞外囊泡

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023200257A1 (ko) * 2022-04-12 2023-10-19 (주)인엑소플랫 줄기세포로부터 분리된 세포외 소포체 및 이의 용도
WO2024014894A1 (ko) * 2022-07-13 2024-01-18 이화여자대학교 산학협력단 항원 단백질 또는 상기 단백질을 암호화하는 유전자를 포함하는 세포외소포체 및 그의 용도
KR102511500B1 (ko) * 2022-10-24 2023-03-21 동국대학교 산학협력단 파이브로넥틴 단편 단백질이 과발현된 세포외소포체 및 이의 약물 전달 용도
WO2024090893A1 (ko) * 2022-10-24 2024-05-02 동국대학교 산학협력단 파이브로넥틴 단편 단백질이 과발현된 세포외소포체 및 이의 약물 전달 용도

Also Published As

Publication number Publication date
MX2021011241A (es) 2022-01-19
JP2022526127A (ja) 2022-05-23
US11992527B2 (en) 2024-05-28
AU2020240135A1 (en) 2021-10-14
TW202100164A (zh) 2021-01-01
CN114080232A (zh) 2022-02-22
US20220168415A1 (en) 2022-06-02
BR112021018694A2 (pt) 2021-11-30
CA3133311A1 (en) 2020-09-24
WO2020191361A2 (en) 2020-09-24
WO2020191361A3 (en) 2020-10-29
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