JP2022081510A - HbA1cデヒドロゲナーゼ - Google Patents
HbA1cデヒドロゲナーゼ Download PDFInfo
- Publication number
- JP2022081510A JP2022081510A JP2022025320A JP2022025320A JP2022081510A JP 2022081510 A JP2022081510 A JP 2022081510A JP 2022025320 A JP2022025320 A JP 2022025320A JP 2022025320 A JP2022025320 A JP 2022025320A JP 2022081510 A JP2022081510 A JP 2022081510A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amino acid
- seq
- acid sequence
- amadriase
- hba1c
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 title claims abstract description 206
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 61
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 claims abstract description 36
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 claims abstract description 36
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims abstract description 21
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 21
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 20
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 claims abstract description 18
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims abstract description 17
- 241001327444 Coniochaeta Species 0.000 claims abstract description 16
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 267
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 246
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 221
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 164
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 162
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 102
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 claims description 96
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 claims description 96
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 74
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 74
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 74
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 71
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 70
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 claims description 70
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 68
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 claims description 68
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 68
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Chemical group CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 58
- 235000005772 leucine Nutrition 0.000 claims description 58
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 55
- 235000006109 methionine Nutrition 0.000 claims description 51
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims description 51
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 47
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 claims description 39
- 235000014304 histidine Nutrition 0.000 claims description 39
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical group CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 37
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 claims description 37
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 37
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 36
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 36
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 35
- 235000002374 tyrosine Nutrition 0.000 claims description 35
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 34
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 33
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 33
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 claims description 33
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical group C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 32
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 28
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 27
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 25
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 25
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 claims description 25
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 25
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 24
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 claims description 24
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 claims description 23
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 claims description 23
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 22
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 21
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 20
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 20
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 20
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims description 19
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 19
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 claims description 19
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical group CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 235000014393 valine Nutrition 0.000 claims description 18
- 239000004474 valine Chemical group 0.000 claims description 18
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 claims description 17
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical group CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 16
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 16
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 16
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 claims description 16
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical group CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 15
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 15
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims description 15
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 claims description 15
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 claims description 15
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 15
- 235000014705 isoleucine Nutrition 0.000 claims description 15
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Chemical group CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 claims description 15
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 235000008729 phenylalanine Nutrition 0.000 claims description 15
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 13
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 claims description 13
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 10
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 10
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 claims description 10
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 claims description 10
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 9
- 241000555275 Phaeosphaeria Species 0.000 claims description 6
- 238000002848 electrochemical method Methods 0.000 claims description 6
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 claims description 6
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 claims description 5
- 241000171738 Arthrinium Species 0.000 claims description 5
- 241000186063 Arthrobacter Species 0.000 claims description 5
- 241000221955 Chaetomium Species 0.000 claims description 5
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 claims description 5
- 241000223208 Curvularia Species 0.000 claims description 5
- 241000228138 Emericella Species 0.000 claims description 5
- 241001149562 Gelasinospora Species 0.000 claims description 5
- 241000228456 Leptosphaeria Species 0.000 claims description 5
- 241000223609 Microascus Species 0.000 claims description 5
- 241000124176 Neocosmospora Species 0.000 claims description 5
- 241000190509 Ophiobolus Species 0.000 claims description 5
- 241000235648 Pichia Species 0.000 claims description 5
- 241000812330 Pyrenochaeta Species 0.000 claims description 5
- 241000266300 Ulocladium Species 0.000 claims description 5
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 claims description 4
- 241001337994 Cryptococcus <scale insect> Species 0.000 claims description 4
- 241000235035 Debaryomyces Species 0.000 claims description 4
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 claims description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 4
- 241001136503 Pleospora Species 0.000 claims description 4
- 241001494489 Thielavia Species 0.000 claims description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 claims description 4
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 claims description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 2
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 108010078123 amadoriase Proteins 0.000 abstract description 32
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 abstract description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 abstract description 2
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 abstract 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 68
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 56
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 45
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 42
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 40
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 38
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 28
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 26
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 23
- 230000008859 change Effects 0.000 description 22
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 20
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 19
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 19
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 19
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 18
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 description 15
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 description 15
- 241001225321 Aspergillus fumigatus Species 0.000 description 14
- 229940091771 aspergillus fumigatus Drugs 0.000 description 14
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 14
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- -1 α-fructosylvalyl histidine Chemical compound 0.000 description 12
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 11
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 11
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 10
- 108010085186 Peroxisomal Targeting Signals Proteins 0.000 description 9
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 9
- 108010006172 fructosyl-peptide oxidase Proteins 0.000 description 9
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 9
- 241000351920 Aspergillus nidulans Species 0.000 description 8
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241000741763 Coniochaeta sp. Species 0.000 description 8
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 8
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 241001465318 Aspergillus terreus Species 0.000 description 7
- 241000223221 Fusarium oxysporum Species 0.000 description 7
- 102000017011 Glycated Hemoglobin A Human genes 0.000 description 7
- 241000235061 Pichia sp. Species 0.000 description 7
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 7
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 7
- 108091005995 glycated hemoglobin Proteins 0.000 description 7
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 7
- 238000011160 research Methods 0.000 description 7
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 7
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000235036 Debaryomyces hansenii Species 0.000 description 6
- 241000124340 Penicillium terrenum Species 0.000 description 6
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 6
- 229910021607 Silver chloride Inorganic materials 0.000 description 6
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 6
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 6
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 6
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 6
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 6
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 6
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 6
- HKZLPVFGJNLROG-UHFFFAOYSA-M silver monochloride Chemical compound [Cl-].[Ag+] HKZLPVFGJNLROG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 201000007336 Cryptococcosis Diseases 0.000 description 5
- 241000221204 Cryptococcus neoformans Species 0.000 description 5
- 241000371652 Curvularia clavata Species 0.000 description 5
- 241001423728 Fusarium neocosmosporiellum Species 0.000 description 5
- 241000228129 Penicillium janthinellum Species 0.000 description 5
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 5
- 241001335053 Pyrenochaeta sp. Species 0.000 description 5
- 241000952055 Ulocladium sp. Species 0.000 description 5
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 108091005996 glycated proteins Proteins 0.000 description 5
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 5
- 241001373664 Arthrinium sp. Species 0.000 description 4
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000736122 Parastagonospora nodorum Species 0.000 description 4
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 4
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 4
- HHLFWLYXYJOTON-UHFFFAOYSA-N glyoxylic acid Chemical compound OC(=O)C=O HHLFWLYXYJOTON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- JEQHVKBNRPNQDY-UTINFBMNSA-N (2s)-3-methyl-2-[[(3s,4r,5r)-3,4,5,6-tetrahydroxy-2-oxohexyl]amino]butanoic acid Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NCC(=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO JEQHVKBNRPNQDY-UTINFBMNSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001340163 Coniochaetidium Species 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102220611592 Protein MTSS 2_H99S_mutation Human genes 0.000 description 3
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- NLEBIOOXCVAHBD-QKMCSOCLSA-N dodecyl beta-D-maltoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OCCCCCCCCCCCC)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 NLEBIOOXCVAHBD-QKMCSOCLSA-N 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 238000013537 high throughput screening Methods 0.000 description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 3
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 3
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 3
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 3
- IRQRBVOQGUPTLG-UHFFFAOYSA-M sodium;3-(n-ethyl-3-methylanilino)-2-hydroxypropane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].[O-]S(=O)(=O)CC(O)CN(CC)C1=CC=CC(C)=C1 IRQRBVOQGUPTLG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 238000012036 ultra high throughput screening Methods 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 102220557008 F-box/LRR-repeat protein 12_L63H_mutation Human genes 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KVUAQCKXYIJBCP-BIIVNPBRSA-N OC[C@]1([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O Chemical compound OC[C@]1([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O KVUAQCKXYIJBCP-BIIVNPBRSA-N 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004082 amperometric method Methods 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000012407 engineering method Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- KTWOOEGAPBSYNW-UHFFFAOYSA-N ferrocene Chemical compound [Fe+2].C=1C=C[CH-]C=1.C=1C=C[CH-]C=1 KTWOOEGAPBSYNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 229910021397 glassy carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 108010004903 glycosylated serum albumin Proteins 0.000 description 2
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 2
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 description 2
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 description 2
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 2
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- ODUCDPQEXGNKDN-UHFFFAOYSA-N nitroxyl Chemical compound O=N ODUCDPQEXGNKDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052762 osmium Inorganic materials 0.000 description 2
- SYQBFIAQOQZEGI-UHFFFAOYSA-N osmium atom Chemical compound [Os] SYQBFIAQOQZEGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 238000007639 printing Methods 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 102220226324 rs1064794702 Human genes 0.000 description 2
- 102220089047 rs145186308 Human genes 0.000 description 2
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 2
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 2
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 2
- WEEMDRWIKYCTQM-UHFFFAOYSA-N 2,6-dimethoxybenzenecarbothioamide Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(N)=S WEEMDRWIKYCTQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UCSRLIHIVSZSGK-UHFFFAOYSA-N 3-(n-ethyl-3-methylanilino)-2-hydroxypropane-1-sulfonic acid;sodium Chemical compound [Na].OS(=O)(=O)CC(O)CN(CC)C1=CC=CC(C)=C1 UCSRLIHIVSZSGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DBOOMZAMPJBDOE-UHFFFAOYSA-N 4-[2-(2,4-dinitrophenyl)-3-(4-iodophenyl)-1h-tetrazol-5-yl]benzene-1,3-disulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC(S(=O)(=O)O)=CC=C1C1=NN(C=2C=CC(I)=CC=2)N(C=2C(=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)[N+]([O-])=O)N1 DBOOMZAMPJBDOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- LQLQRFGHAALLLE-UHFFFAOYSA-N 5-bromouracil Chemical compound BrC1=CNC(=O)NC1=O LQLQRFGHAALLLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001327415 Achaetomium Species 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 102000015295 Cysteine Dioxygenase Human genes 0.000 description 1
- 108010039724 Cysteine dioxygenase Proteins 0.000 description 1
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 description 1
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 description 1
- 108020005199 Dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004278 EU approved seasoning Substances 0.000 description 1
- 101000925662 Enterobacteria phage PRD1 Endolysin Proteins 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 241001522878 Escherichia coli B Species 0.000 description 1
- 241000672609 Escherichia coli BL21 Species 0.000 description 1
- 241000620209 Escherichia coli DH5[alpha] Species 0.000 description 1
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 108010074122 Ferredoxins Proteins 0.000 description 1
- 108010051815 Glutamyl endopeptidase Proteins 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine Chemical compound ON AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 229910021578 Iron(III) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012218 Kunkel's method Methods 0.000 description 1
- QLROSWPKSBORFJ-BQBZGAKWSA-N L-Prolyl-L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 QLROSWPKSBORFJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108700020962 Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- PCNDJXKNXGMECE-UHFFFAOYSA-N Phenazine Natural products C1=CC=CC2=NC3=CC=CC=C3N=C21 PCNDJXKNXGMECE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 1
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 239000012564 Q sepharose fast flow resin Substances 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical class [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N Sulfurous acid Chemical compound OS(O)=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 150000001323 aldoses Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 238000002819 bacterial display Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- GTKRFUAGOKINCA-UHFFFAOYSA-M chlorosilver;silver Chemical compound [Ag].[Ag]Cl GTKRFUAGOKINCA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 229920001940 conductive polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 238000003869 coulometry Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- ZOMNIUBKTOKEHS-UHFFFAOYSA-L dimercury dichloride Chemical class Cl[Hg][Hg]Cl ZOMNIUBKTOKEHS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000011194 food seasoning agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000012215 gene cloning Methods 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 239000010439 graphite Substances 0.000 description 1
- 229910002804 graphite Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007646 gravure printing Methods 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 description 1
- 150000004678 hydrides Chemical class 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011147 magnesium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 210000002824 peroxisome Anatomy 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 150000002988 phenazines Chemical class 0.000 description 1
- 125000001484 phenothiazinyl group Chemical class C1(=CC=CC=2SC3=CC=CC=C3NC12)* 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000000206 photolithography Methods 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 1
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000007686 potassium Nutrition 0.000 description 1
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010070643 prolylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 229950008679 protamine sulfate Drugs 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 238000002818 protein evolution Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000012521 purified sample Substances 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 150000004053 quinones Chemical class 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000002804 saturated mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 238000007650 screen-printing Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000002174 soft lithography Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 229960002385 streptomycin sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/32—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving dehydrogenase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/001—Enzyme electrodes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/001—Enzyme electrodes
- C12Q1/005—Enzyme electrodes involving specific analytes or enzymes
- C12Q1/006—Enzyme electrodes involving specific analytes or enzymes for glucose
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
- C12M1/40—Apparatus specially designed for the use of free, immobilised, or carrier-bound enzymes, e.g. apparatus containing a fluidised bed of immobilised enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0012—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7)
- C12N9/0036—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on NADH or NADPH (1.6)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/28—Electrolytic cell components
- G01N27/30—Electrodes, e.g. test electrodes; Half-cells
- G01N27/327—Biochemical electrodes, e.g. electrical or mechanical details for in vitro measurements
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/28—Electrolytic cell components
- G01N27/30—Electrodes, e.g. test electrodes; Half-cells
- G01N27/327—Biochemical electrodes, e.g. electrical or mechanical details for in vitro measurements
- G01N27/3271—Amperometric enzyme electrodes for analytes in body fluids, e.g. glucose in blood
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/416—Systems
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/483—Physical analysis of biological material
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/483—Physical analysis of biological material
- G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material
- G01N33/49—Blood
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
- G01N33/721—Haemoglobin
- G01N33/723—Glycosylated haemoglobin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/88—Lyases (4.)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/795—Porphyrin- or corrin-ring-containing peptides
- G01N2333/805—Haemoglobins; Myoglobins
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Electrochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Ecology (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
Description
[1] 試料にヘモグロビンA1cに直接作用するHbA1cデヒドロゲナーゼを作用させ、その作用によって生じる過酸化水素ではない還元型電子メディエーターもしくは消費される酸素ではない酸化型電子メディエーターを測定することを含む、試料中のヘモグロビンA1cの測定方法。
[2] 測定がHbA1cデヒドロゲナーゼ、HbA1cデヒドロゲナーゼを含む酵素電極、又は該酵素電極を作用電極として有する酵素センサー、及び酸素ではない電子メディエーターを用いる電気化学的測定であるか、或いは、HbA1cデヒドロゲナーゼ、発色基質、及び、酸素ではない電子メディエーターを用いる吸光度測定である、1に記載の測定方法。
[3] 改変前のヘモグロビンA1cに直接作用する(親)アマドリアーゼと比較して、オキシダーゼ活性とデヒドロゲナーゼ活性の比(OX/DH)が低減されたHbA1cに直接作用するデヒドロゲナーゼであって、
(i) アマドリアーゼのアミノ酸配列を、配列番号1記載のアミノ酸配列とアライメントしたときに、配列番号1に示すアミノ酸配列における280位、269位、54位、241位及び267位からなる群より選択される位置に対応する位置の1以上のアミノ酸が置換されており、ヘモグロビンA1cに直接作用し、かつデヒドロゲナーゼ活性を有するHbA1cデヒドロゲナーゼ、
(ii) 前記(i)のHbA1cデヒドロゲナーゼにおいて、配列番号1に示すアミノ酸配列における280位、269位、54位、241位及び267位に対応する位置以外の位置における1又は数個のアミノ酸が置換、欠失又は付加されたアミノ酸配列からなり、ヘモグロビンA1cに直接作用し、かつデヒドロゲナーゼ活性を有するHbA1cデヒドロゲナーゼ、
(iii) 前記(i)のHbA1cデヒドロゲナーゼにおいて、当該アマドリアーゼの全長アミノ酸配列が配列番号1、配列番号3-14のいずれかのアミノ酸配列と70%以上の配列同一性を有し、かつ、配列番号1の相同性領域におけるアミノ酸配列と当該アマドリアーゼの対応する相同性領域におけるアミノ酸配列とが90%以上の配列同一性を有し、ここで配列番号1の相同性領域は配列番号1の第10位~32位、36~41位、49~52位、54~58位、63~65位、73~75位、84~86位、88~90位、120~122位、145~150位、156~162位、164~170位、180~182位、202~205位、207~211位、214~224位、227~230位、236~241位、243~248位、258~261位、266~268位、270~273位、275~287位、295~297位、306~308位、310~316位、324~329位、332~334位、341~344位、346~355位、357~363位、370~383位、385~387位、389~394位、405~410位及び423~431位のアミノ酸配列からなるものであり、ヘモグロビンA1cに直接作用し、かつデヒドロゲナーゼ活性を有するHbA1cデヒドロゲナーゼ、
(iv) 前記(i)のHbA1cデヒドロゲナーゼにおいて、当該アマドリアーゼの全長アミノ酸配列が配列番号1、配列番号3-14のいずれかのアミノ酸配列と80%以上の配列同一性を有し、ヘモグロビンA1cに直接作用し、かつデヒドロゲナーゼ活性を有するHbA1cデヒドロゲナーゼ、或いは
(v) 前記(i)のHbA1cデヒドロゲナーゼにおいて、配列番号1の保存領域におけるアミノ酸配列と当該アマドリアーゼの由来する天然アマドリアーゼの対応する保存領域におけるアミノ酸配列とが90%以上の配列同一性を有し、ここで配列番号1の保存領域は配列番号1の第11、12、13、15、17、18、20、22、23、24、25、27、29、31、36、37、41、46、47、50、51、52、54、56、57、58、75、79、82、84、85、93、95、149、158、159、162、165、166、177、180、202、208、218、220、221、222、224、228、233、239、243、246、250、255、258、260、266、267、270、272、277、278、280、281、282、284、285、286、318、321、326、329、334、339、346、347、348、351、352、354、358、359、362、363、370、373、376、382、385、386、389、406、407、409、418、425及び427位からなるものであり、ヘモグロビンA1cに直接作用し、かつデヒドロゲナーゼ活性を有するHbA1cデヒドロゲナーゼ。
[4] 配列番号1に示すアミノ酸配列における280位に対応する位置のアミノ酸が、グルタミン、セリン、トレオニン及びアスパラギンからなる群より選択される極性アミノ酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン、及びヒスチジンからなる群より選択される荷電アミノ酸、又はメチオニン、プロリン、フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファンからなる群より選択されるアミノ酸に置換されている、
配列番号1に示すアミノ酸配列における269位に対応する位置のアミノ酸が、メチオニン、ロイシン、チロシン、イソロイシン、トリプトファン、バリン又はアラニンに置換されている、
配列番号1に示すアミノ酸配列における54位に対応する位置のアミノ酸が、アスパラギン、アラニン、グルタミン、ヒスチジン、グリシン又はバリンからなる群より選択されるアミノ酸に置換されている、
配列番号1に示すアミノ酸配列における241位に対応する位置のアミノ酸が、グルタミン、リシン、グルタミン酸、アスパラギン、アルギニン、アスパラギン酸又はヒスチジンからなる群より選択されるアミノ酸に置換されている、或いは
配列番号1に示すアミノ酸配列における267位に対応する位置のアミノ酸が、メチオニン、ロイシン、チロシン、イソロイシン、トリプトファン、バリン又はアラニンに置換されている、
3に記載のHbA1cデヒドロゲナーゼ。
[5] 配列番号1に示すアミノ酸配列における280位に対応する位置のアミノ酸が、グルタミン、セリン、ヒスチジン、トレオニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン又はメチオニンに置換されている、
配列番号1に示すアミノ酸配列における269位に対応する位置のアミノ酸が、メチオニン、ロイシン、チロシン、イソロイシン又はトリプトファンに置換されている、
配列番号1に示すアミノ酸配列における54位に対応する位置のアミノ酸が、アスパラギン又はアラニンに置換されている、
配列番号1に示すアミノ酸配列における241位に対応する位置のアミノ酸が、グルタミン、グルタミン酸又はリシンに置換されている、或いは
配列番号1に示すアミノ酸配列における267位に対応する位置のアミノ酸が、メチオニン、ロイシン、チロシン、イソロイシン又はトリプトファンに置換されている、
4に記載のHbA1cデヒドロゲナーゼ。
[6] 配列番号1に示すアミノ酸配列における280位に対応する位置のアミノ酸が、グルタミン、セリン、ヒスチジン、トレオニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン又はメチオニンに置換されている、
配列番号1に示すアミノ酸配列における269位に対応する位置のアミノ酸が、メチオニン、ロイシン又はチロシンに置換されている、
配列番号1に示すアミノ酸配列における54位に対応する位置のアミノ酸が、アスパラギン又はアラニンに置換されている、
配列番号1に示すアミノ酸配列における241位に対応する位置のアミノ酸が、グルタミン、グルタミン酸又はリシンに置換されている、或いは
配列番号1に示すアミノ酸配列における267位に対応する位置のアミノ酸が、メチオニン、ロイシン又はチロシンに置換されている、
5に記載のHbA1cデヒドロゲナーゼ。
[7] 配列番号1に示すアミノ酸配列における280位に対応する位置のアミノ酸が、グルタミン、又はセリンに置換されている、
配列番号1に示すアミノ酸配列における269位に対応する位置のアミノ酸が、メチオニン、ロイシン又はチロシンに置換されている、
配列番号1に示すアミノ酸配列における241位に対応する位置のアミノ酸が、グルタミンに置換されている、或いは
配列番号1に示すアミノ酸配列における267位に対応する位置のアミノ酸が、メチオニン、ロイシン又はチロシンに置換されている、
5に記載のHbA1cデヒドロゲナーゼ。
[8] 配列番号1に示すアミノ酸配列における280位に対応する位置のアミノ酸が、グルタミン又はヒスチジンに置換されている、
配列番号1に示すアミノ酸配列における269位に対応する位置のアミノ酸が、メチオニン又はロイシンに置換されている、或いは
配列番号1に示すアミノ酸配列における267位に対応する位置のアミノ酸が、メチオニン又はロイシンに置換されている、
5に記載のHbA1cデヒドロゲナーゼ。
[9] 配列番号1に示すアミノ酸配列における280位に対応する位置のアミノ酸が、グルタミンに置換されている、
配列番号1に示すアミノ酸配列における269位に対応する位置のアミノ酸が、メチオニン又はロイシンに置換されている、或いは
配列番号1に示すアミノ酸配列における267位に対応する位置のアミノ酸が、メチオニン又はロイシンに置換されている、
5に記載のHbA1cデヒドロゲナーゼ。
[10] オキシダーゼ活性が改変前のアマドリアーゼ(100%)と比較して60%未満に低減されている、又は、オキシダーゼ活性とデヒドロゲナーゼ活性の比(OX/DH)が改変前のアマドリアーゼ(100%)と比較して40%未満に低減されている、3~9のいずれか1項に記載のHbA1cデヒドロゲナーゼ。
[11] 前記アマドリアーゼが、コニオカエタ(Coniochaeta)属、ユーペニシリウム(Eupenicillium)属、ピレノケータ(Pyrenochaeta)属、アルスリニウム(Arthrinium)属、カーブラリア(Curvularia)属、ネオコスモスポラ(Neocosmospora)属、クリプトコッカス(Cryptococcus)属、フェオスフェリア(Phaeosphaeria)属、アスペルギルス(Aspergillus)属、エメリセラ(Emericella)属、ウロクラディウム(Ulocladium)属、ペニシリウム(Penicillium)属、フザリウム(Fusarium)属、アカエトミエラ(Achaetomiella)属、アカエトミウム(Achaetomium)属、シエラビア(Thielavia)属、カエトミウム(Chaetomium)属、ゲラシノスポラ(Gelasinospora)属、ミクロアスカス(Microascus)属、レプトスフェリア(Leptosphaeria)属、オフィオボラス(Ophiobolus)属、プレオスポラ(Pleospora)属、コニオケチジウム(Coniochaetidium)属、ピチア(Pichia)属、デバリオマイセス(Debaryomyces)属、コリネバクテリウム(Corynebacterium)属、アグロバクテリウム(Agrobacterium)属、又はアルスロバクター(Arthrobacter)属由来である、3~10のいずれか1項に記載のHbA1cデヒドロゲナーゼ。
[12] 配列番号1、配列番号3-14、又は16-26のいずれかに示すアミノ酸配列を有し、3~9のいずれかに規定したアミノ酸置換を有する、3~11のいずれか1項に記載のHbA1cデヒドロゲナーゼ。
[13] さらに、HbA1cデヒドロゲナーゼのアミノ酸配列を、配列番号1記載のアミノ酸配列とアライメントしたときに、配列番号1に示すアミノ酸配列における以下からなる群より選択される位置に対応する位置にアミノ酸置換又は欠失を1以上有し、ヘモグロビンA1cに直接作用し、かつデヒドロゲナーゼ活性を有する、3~12のいずれか1項に記載のHbA1cデヒドロゲナーゼ、
(A)62位、63位、102位、106位、110位、113位、355位、419位、68位、356位、64位、及び/又は99位への置換、
(B)262位、257位、249位、253位、337位、340位、232位、129位、132位、133位、44位、256位、231位及び/又は81位への置換、並びに
(C)カルボキシル末端の435位、436位及び437位の3アミノ酸残基の欠失。
[14] さらに、HbA1cデヒドロゲナーゼのアミノ酸配列を、配列番号1記載のアミノ酸配列とアライメントしたときに、配列番号1に示すアミノ酸配列における以下からなる群より選択される位置に対応する位置のアミノ酸の1以上が、以下からなる群より選択されるアミノ酸に置換されており又は欠失しており、ヘモグロビンA1cに直接作用し、かつデヒドロゲナーゼ活性を有する、13に記載のHbA1cデヒドロゲナーゼ、
(A)62位のアルギニンに対応する位置のアミノ酸の、アラニン、アスパラギン又はアスパラギン酸への置換、
63位のロイシンに対応する位置のアミノ酸の、ヒスチジン又はアラニンへの置換、
102位のグルタミン酸に対応する位置のアミノ酸の、リジンへの置換
106位のアスパラギン酸に対応する位置のアミノ酸の、アラニン、リジン、又はアルギニンへの置換、
110位のグルタミンに対応する位置のアミノ酸のロイシン又はチロシンへの置換、
113位のアラニンに対応する位置のアミノ酸のリジン又はアルギニンへの置換、
355位のアラニンに対応する位置のアミノ酸のセリンへの置換、
419位のアラニンに対応する位置のアミノ酸のリジンへの置換、
68位のアスパラギン酸に対応する位置のアミノ酸のアスパラギンへの置換、
356位のアラニンに対応する位置のアミノ酸のトレオニンへの置換、
64位のアルギニンに対応する位置のアミノ酸のグリシン、セリン、メチオニン、ロイシン、トレオニン、バリン、又はイソロイシンへの置換、
99位のヒスチジンに対応する位置のアミノ酸のセリンへの置換、
(B)262位のアスパラギンに対応する位置のアミノ酸のヒスチジンへの置換、
257位のバリンに対応する位置のアミノ酸のシステイン、セリン、トレオニンへの置換、
249位のグルタミン酸に対応する位置のアミノ酸のリジン、アルギニンへの置換、
253位のグルタミン酸に対応する位置のアミノ酸のリジン、アルギニンへの置換、
337位のグルタミンに対応する位置のアミノ酸のリジン、アルギニンへの置換、
340位のグルタミン酸に対応する位置のアミノ酸のプロリンへの置換、
232位のアスパラギン酸に対応する位置のアミノ酸のリジン、アルギニンへの置換、
129位のアスパラギン酸に対応する位置のアミノ酸のリジン、アルギニンへの置換、
132位のアスパラギン酸に対応する位置のアミノ酸のリジン、アルギニンへの置換、
133位のグルタミン酸に対応する位置のアミノ酸のアラニン、メチオニン、リジン、アルギニンへの置換、
44位のグルタミン酸に対応する位置のアミノ酸のプロリンへの置換、
256位のグリシンに対応する位置のアミノ酸のリジン、アルギニンへの置換、
231位のグルタミン酸に対応する位置のアミノ酸のリジン、アルギニンへの置換、
81位のグルタミン酸に対応する位置のアミノ酸のリジン、アルギニンへの置換、並びに(C)435位のプロリン、436位のリジン及び437位のロイシンに対応する位置のカルボキシル末端3アミノ酸の欠失。
[15] 3~14のいずれか1項に記載のHbA1cデヒドロゲナーゼを含むHbA1c測定試薬キット。
[16] 3~14のいずれか1項に記載のHbA1cデヒドロゲナーゼを含む酵素電極。
[17] 16に記載の酵素電極を作用電極として有する酵素センサー。
[18] HbA1cデヒドロゲナーゼが3~14のいずれか1項に記載のHbA1cデヒドロゲナーゼである、1又は2に記載の測定方法。
本明細書は本願の優先権の基礎となる日本国特許出願番号2016-086592号の開示内容を包含する。
本発明のアマドリアーゼは糖化タンパク質や糖化ペプチドを基質としうる。
本発明における糖化タンパク質とは、非酵素的に糖化されたタンパク質を指す。糖化タンパク質は生体内、外を問わず存在し、生体内に存在する例としては、血液中の糖化ヘモグロビン、糖化アルブミンなどがあり、糖化ヘモグロビンの中でもヘモグロビンのβ鎖アミノ末端のバリンが糖化された糖化ヘモグロビンを特にヘモグロビンA1c(HbA1c)と言う。生体外に存在する例としては、タンパク質やペプチドと糖が共存する液状調味料などの飲食品や輸液などがある。
本発明における糖化ペプチドとは、糖化タンパク質由来の非酵素的に糖化されたペプチドを指し、ペプチドが直接非酵素的に糖化されたものや、プロテアーゼ等により糖化タンパク質が分解された結果生じたものや糖化タンパク質を構成する(ポリ)ペプチドが糖化されたものが含まれる。糖化ペプチドをフルクトシルペプチドと表記することもある。糖化タンパク質において、糖化を受けるペプチド側のアミノ基としては、アミノ末端のα-アミノ基、ペプチド内部のリジン残基側鎖のε-アミノ基などが挙げられるが、本発明における糖化ペプチドとは、より具体的には、α-糖化ペプチド(α-フルクトシルペプチド)である。α-糖化ペプチドは、N末端のα-アミノ酸が糖化された糖化タンパク質から何らかの手段、例えば、プロテアーゼによる限定分解などにより遊離させて形成される。例えば、対象の糖化タンパク質がヘモグロビンA1c(HbA1c)である場合、該当するα-糖化ペプチドは、N末端が糖化されているHbA1cのβ鎖から切り出される糖化されたペプチドを指す。146残基のアミノ酸により構成されているHbA1cのβ鎖もまたα-糖化ペプチドに該当する(αF146P)。
アマドリアーゼは、ケトアミンオキシダーゼ、フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ、フルクトシルペプチドオキシダーゼ、フルクトシルアミンオキシダーゼ等とも称され、酸素の存在下で、イミノ2酢酸またはその誘導体(アマドリ化合物)を酸化して、グリオキシル酸またはα-ケトアルデヒド、アミノ酸またはペプチドおよび過酸化水素を生成する反応を触媒する酵素のことをいう。アマドリアーゼは、自然界に広く分布しており、微生物や、動物または植物起源の酵素を探索することにより、得ることができる。微生物においては、例えば、糸状菌、酵母または細菌等から得ることができる。
種々のアマドリアーゼのうちHbA1cそのものを基質として認識し、HbA1cを直接酸化する活性を有するものを本明細書においてHbA1cオキシダーゼといい、これをA1cOXと記載することがある。HbA1cに直接作用するアマドリアーゼは、例えば国際公開第2015/060429号の記載に基づき取得することができる。またこれは国際公開第2015/005257号の記載に基づき取得することもできる。参照によりそれらの全内容を本明細書に組み入れる。HbA1cオキシダーゼは、このような公知文献に記載された一又は複数のアミノ酸置換を有しうる。また公知のHbA1cオキシダーゼにさらに基質特異性を改変する変異等が導入されてもよい。
(a)62位(アルギニン)
(b)63位(ロイシン)
(c)102位(グルタミン酸)
(d)106位(アスパラギン酸)
(e)110位(グルタミン)
(f)113位(アラニン)
(g)355位(アラニン)
(h)419位(アラニン)
(i)68位(アスパラギン酸)
(j)356位(アラニン)
(k)64位(アルギニン)
(l)99位(ヒスチジン)
この場合、好ましくは、(a)配列番号1の62位に対応する位置のアミノ酸は、アスパラギン、アラニン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、バリン、ロイシン、イソロイシン、システイン、セリン、メチオニン、スレオニン又はプロリンへと置換され得る。好ましくは(b)配列番号1の63位に対応する位置のアミノ酸は、ヒスチジン、アラニン又はグリシンへと置換され得る。好ましくは(c)配列番号1の102位に対応する位置のアミノ酸は、リジンへと置換され得る。好ましくは(d)配列番号1の106位に対応する位置のアミノ酸は、アラニン、リジン、又はアルギニンへと置換され得る。好ましくは(e)配列番号1の110位に対応する位置のアミノ酸はロイシン、チロシン、フェニルアラニン又はヒスチジンへと置換され得る。好ましくは(f)配列番号1の113位に対応する位置のアミノ酸はリジン又はアルギニンへと置換され得る。好ましくは(g)配列番号1の355位に対応する位置のアミノ酸はセリンへと置換され得る。場合により(h)配列番号1の419位に対応する位置のアミノ酸はリジンへと置換されていてもよい。場合により(i)配列番号1の68位に対応する位置のアミノ酸はアスパラギンへと置換されてもよい。場合により(j)配列番号1の356位に対応する位置のアミノ酸はスレオニンへと置換されてもよい。場合により(k)配列番号1の64位に対応する位置のアミノ酸はグリシン、セリン、メチオニン、ロイシン、トレオニン、バリン、又はイソロイシンへと置換され得る。場合により(l)配列番号1の99位に対応する位置のアミノ酸はセリンへと置換され得る。
(l)配列番号1の67位、
(m)配列番号1の72位、
(n)配列番号1の76位、
(o)配列番号1の96位、
(p)配列番号1の109位、
(q)配列番号1の116位
場合により(l)配列番号1の67位に対応する位置のアミノ酸はヒスチジンでありうる。場合により(m)配列番号1の72位に対応する位置のアミノ酸はセリンでありうる。場合により(n)配列番号1の76位に対応する位置のアミノ酸はアラニンまたはフェニルアラニンでありうる。場合により(o)配列番号1の96位に対応する位置のアミノ酸はグルタミン酸でありうる。場合により(p)配列番号1の109位に対応する位置のアミノ酸はアルギニンまたはリジンでありうる。場合により(q)配列番号1の116位に対応する位置のアミノ酸はアルギニンでありうる。
ある実施形態において、本発明はHbA1cデヒドロゲナーゼを提供する。HbA1cデヒドロゲナーゼは、アマドリアーゼに本発明の変異を導入することにより作製しうる。ある実施形態において、HbA1cデヒドロゲナーゼはHbA1cオキシダーゼ(A1cOX)に基づき取得することができる。HbA1cオキシダーゼとしては上記のものが例示されるがこれに限られず、HbA1cを基質として認識しHbA1cを直接酸化するものであればどのようなものでもよい。別の実施形態ではアマドリアーゼに本発明の変異を導入してデヒドロゲナーゼ活性の向上したアマドリアーゼを作製し、次いでこれに基質特異性を改変する変異を導入してHbA1cに直接作用する、HbA1cデヒドロゲナーゼを作製しうる。
デヒドロゲナーゼ活性の向上及び/又はオキシダーゼ活性の低減をもたらすアミノ酸の置換として、配列番号1のアミノ酸配列における以下の位置に対応する位置のアミノ酸置換が挙げられる。これらを本発明のデヒドロゲナーゼ活性を向上させる変異、本発明のオキシダーゼ活性を低減させる変異、本発明のデヒドロゲナーゼ活性を向上させ及び/又はオキシダーゼ活性を低減させる変異、或いは単に本発明の変異又は本発明の置換ということがある。
(2)267位に対応する位置の置換、例えばチロシン、ロイシン、メチオニン、トリプトファン、イソロイシン、バリン、システイン又はアラニンからなる群より選択される疎水性アミノ酸残基への置換。
(3)269位に対応する位置の置換、例えばチロシン、ロイシン、メチオニン、トリプトファン、イソロイシン、バリン、システイン又はアラニンからなる群より選択される疎水性アミノ酸残基への置換。
(4)54位に対応する位置の置換、例えばアスパラギン、アラニン、グルタミン、ヒスチジン、グリシン又はバリンへの置換。
(5)241位に対応する位置の置換、例えばグルタミン、リシン、グルタミン酸、アスパラギン、アスパラギン酸、アルギニン又はヒスチジンへの置換。
(2)267位に対応する位置の置換、例えばチロシン、ロイシン又はメチオニンへの置換。
(3)269位に対応する位置の置換、例えばチロシン、ロイシン又はメチオニンへの置換。
(4)54位に対応する位置の置換、例えばアスパラギン、アラニンへの置換。
(5)241位に対応する位置の置換、例えばグルタミン、リシン、又はグルタミン酸への置換。
(アマドリアーゼの界面活性剤耐性を向上させるアミノ酸置換について)
本発明者らは、アマドリアーゼのアミノ酸残基を置換することによりその界面活性剤耐性を向上させることができること報告した。例えば国際公開第2015/020200号明細書を参照のこと。参照によりその全内容を本明細書に組み入れる。
(ii)257位、
(iii)249位
(iv)253位、
(v)337位、
(vi)340位、
(vii)232位、
(viii)129位、
(ix)132位、
(x)133位、
(xi)44位、
(xii)256位、
(xiii)231位、及び
(xiv)81位
場合により262位に対応する位置のアミノ酸はヒスチジンへと置換されてもよい。場合により257位に対応する位置のアミノ酸はシステイン、セリン、トレオニンへと置換されてもよい。場合により249位に対応する位置のアミノ酸はリジン、アルギニンへと置換されてもよい。場合により253位に対応する位置のアミノ酸はリジン、アルギニンへと置換されてもよい。場合により337位に対応する位置のアミノ酸はリジン、アルギニンへと置換されてもよい。場合により340位に対応する位置のアミノ酸はプロリンへと置換されてもよい。場合により232位に対応する位置のアミノ酸はリジン、アルギニンへと置換されてもよい。場合により129位に対応する位置のアミノ酸はリジン、アルギニンへと置換されてもよい。場合により132位に対応する位置のアミノ酸はリジン、アルギニンへと置換されてもよい。場合により133位に対応する位置のアミノ酸はアラニン、メチオニン、リジン、アルギニンへと置換されてもよい。場合により44位に対応する位置のアミノ酸はプロリンへと置換されてもよい。場合により256位に対応する位置のアミノ酸はリジン、アルギニンへと置換されてもよい。場合により231位に対応する位置のアミノ酸はリジン、アルギニンへと置換されてもよい。場合により81位に対応する位置のアミノ酸はリジン、アルギニンへと置換されてもよい。
本発明者らは以前に、アマドリアーゼのカルボキシル末端から、3アミノ酸残基を欠失させることにより、その熱安定性を向上させうることを報告した(国際公開第2013/100006号明細書を参照のこと。参照によりその全内容を本明細書に組み入れる)。ある実施形態において、本発明のアマドリアーゼは上記の置換に加え、さらにカルボキシル末端からの3アミノ酸残基を欠失していてもよい。本明細書においてカルボキシル末端からの3アミノ酸残基の欠失を、熱安定性を向上させる欠失と呼ぶことがある。
これらのアマドリアーゼをコードする本発明の遺伝子(以下、単に「アマドリアーゼ遺伝子」ともいう。)を得るには、通常一般的に用いられている遺伝子のクローニング方法が用いられる。例えば、アマドリアーゼ生産能を有する微生物菌体や種々の細胞から常法、例えば、Current Protocols in Molecular Biology(WILEY Interscience,1989)記載の方法により、染色体DNAまたはmRNAを抽出することができる。さらにmRNAを鋳型としてcDNAを合成することができる。このようにして得られた染色体DNAまたはcDNAを用いて、染色体DNAまたはcDNAのライブラリーを作製することができる。
本発明において用いることのできるベクターとしては、上記プラスミドに限定されることなくそれ以外の、例えば、バクテリオファージ、コスミド等の当業者に公知の任意のベクターを用いることができる。具体的には、例えば、pBluescriptII SK+(STRATAGENE社製)等が好ましい。
アマドリアーゼ遺伝子の変異処理は、企図する変異形態に応じた、公知の任意の方法で行うことができる。すなわち、アマドリアーゼ遺伝子あるいは当該遺伝子の組み込まれた組換え体DNAと変異原となる薬剤とを接触・作用させる方法;紫外線照射法;遺伝子工学的手法;またはタンパク質工学的手法を駆使する方法等を広く用いることができる。
上述の如くして得られたアマドリアーゼ遺伝子を、常法により、バクテリオファージ、コスミド、または原核細胞もしくは真核細胞の形質転換に用いられるプラスミド等のベクターに組み込み、各々のベクターに対応する宿主を常法により、形質転換または形質導入をすることができる。例えば、得られた組換え体DNAを用いて、任意の宿主、例えば、エッシェリシア属に属する微生物、具体例としては大腸菌K-12株、好ましくは大腸菌JM109株、大腸菌DH5α株(ともにタカラバイオ社製)や大腸菌B株、好ましくは大腸菌BL21株(ニッポンジーン社製)等を形質転換またはそれらに形質導入してそれぞれの菌株を得ることができる。
アミノ酸配列の同一性又は類似性は、GENETYX Ver.11(ゼネティックス社製)のマキシマムマッチングやサーチホモロジー等のプログラムまたはDNASIS Pro(日立ソリューションズ社製)のマキシマムマッチングやマルチプルアライメント等のプログラムにより計算することができる。アミノ酸配列同一性を計算するために、2以上のアマドリアーゼをアライメントしたときに、該2以上のアマドリアーゼにおいて同一であるアミノ酸の位置を調べることができる。こうした情報を基に、アミノ酸配列中の同一領域を決定できる。
本明細書において、ある位置に「対応する位置」とは、特に断らない限り、配列番号1に示すConiochaeta属由来のアマドリアーゼのアミノ酸配列における特定の位置に対応する他の生物種由来のアマドリアーゼのアミノ酸配列における位置をいう。本明細書において対応する位置を相当する位置ということがある。また特定の位置に「対応する位置のアミノ酸」を対応アミノ酸ということがある。
本発明において、「配列番号1のアミノ酸配列の280位に対応する位置のアミノ酸」とは、確定したアマドリアーゼのアミノ酸配列を、配列番号1に示されるConiochaeta属由来のアマドリアーゼのアミノ酸配列と比較した場合に、配列番号1のアマドリアーゼの280位に対応する位置におけるアミノ酸を意味する。これは、上記の「対応する位置」を特定する方法でアミノ酸配列を整列させた図1又は図2より特定することができる。以下の、配列番号1に示すアミノ酸配列の267位、269位、54位及び241位に対応する位置のアミノ酸についてもそれぞれ同様である。
本明細書において、「配列番号1のアミノ酸配列の62位に対応する位置」のアミノ酸とは、確定したアマドリアーゼのアミノ酸配列を、配列番号1のアミノ酸配列と比較した場合に、配列番号1の62位に対応する位置のアミノ酸を意味する。これは、上記の方法でアミノ酸配列を整列させた図1又は図2より特定することができる。以下の、配列番号1に示すアミノ酸配列の63位、102位、106位、110位、113位、355位、419位、68位、356位、64位及び99位、さらには下記の262位、257位、249位、253位、337位、340位、232位、129位、132位、133位、44位、256位、231位、及び81位に対応する位置のアミノ酸についてもそれぞれ同様である。
本明細書において「配列番号1のアマドリアーゼのカルボキシル末端からの3アミノ酸残基に対応する位置」とは、対象となるアマドリアーゼのアミノ酸配列を、配列番号1のアミノ酸配列と比較した場合に、配列番号1記載のアミノ酸配列のカルボキシル末端からの3アミノ酸残基に対応する3アミノ酸残基の位置を意味する。Coniochaeta属由来のアマドリアーゼにおける、この位置の3残基の配列は、435位のプロリン、436位のリジン及び437位のロイシンからなり、これらに対応する位置のアミノ酸配列も、上記の方法でアミノ酸配列を整列させた図1又は図2より特定することができる。
上記のようにして得られたアマドリアーゼの生産能を有する菌株を用いて、当該アマドリアーゼを生産するには、この菌株を通常の固体培養法で培養してもよいが、可能な限り液体培養法を採用して培養するのが好ましい。
また、培養は任意の条件を用いることができるが、例えば、20~42℃の培養温度、好ましくは30℃前後の培養温度で4~24時間、さらに好ましくは30℃前後の培養温度で8~16時間、通気攪拌深部培養、振盪培養、静置培養等により実施することができる。
本発明のアマドリアーゼは、遺伝子改変等により、そのアミノ酸配列に変異を生じた結果、改変前のものと比較してオキシダーゼ活性が低下し、かつ/又はデヒドロゲナーゼ活性が向上している。具体的には、改変前のものと比較して、「デヒドロゲナーゼ活性」に対する「オキシダーゼ活性」の割合が低減していることを特徴とする。オキシダーゼ活性とは、基質を酸化する際、酸素分子に電子を受け渡す活性をいう。デヒドロゲナーゼ活性とは、基質を酸化する際、ヒドリド(H-)を電子アクセプターに受け渡す活性をいう。
アマドリアーゼは、機能性アマドリアーゼ変異体、例えばさらなるHbA1cデヒドロゲナーゼを取得するためにハイスループットスクリーニングに供することができる。例えば変異導入したアマドリアーゼ遺伝子を有する形質転換又は形質導入株のライブラリーを作製し、これをマイクロタイタープレートに基づくハイスループットスクリーニングに供してもよく、または液滴型マイクロ流体に基づく超ハイスループットスクリーニングに供してもよい。例としてはバリアントをコードする変異遺伝子のコンビナトリアルライブラリーを構築し、次いでファージディスプレイ(例えばChem. Rev. 105 (11): 4056-72, 2005)、イーストディスプレイ(例えばComb Chem High Throughput Screen. 2008;11(2): 127-34)、バクテリアルディスプレイ(例えばCurr Opin Struct Biol 17: 474-80, 2007)等を用いて、変異アマドリアーゼの大きな集団をスクリーニングする方法が挙げられる。またAgresti et al, "Ultrahigh-throughput screening in drop-based microfluidics for directed evolution" Proceedings of the National Academy of Sciences 107 (9): 4004-4009 (Mar, 2010)を参照のこと。アマドリアーゼバリアントのスクリーニングに使用しうる超ハイスループットスクリーニング手法についての同文献の記載を参照により本明細書に組み入れる。例えばエラープローンPCR法によりライブラリーを構築することができる。また飽和突然変異誘発を用いて、本明細書に記載の位置又はそれに対応する位置を標的として変異導入しライブラリーを構築してもよい。ライブラリーを用いて電気コンピテントEBY-100細胞等の適当な細胞を形質転換し、約10の7乗の変異体を取得しうる。該ライブラリーで形質転換した酵母細胞を次いでセルソーティングに供しうる。標準ソフトリトグラフィー法を用いて作製したポリジメトキシルシロキサン(PDMS)マイクロ流体デバイスを用いてもよい。フローフォーカスデバイスを用いて単分散の液滴を形成することができる。個別の変異体を含有する形成された液滴を適当なソーティングデバイスに供しうる。細胞を選別する際にはデヒドロゲナーゼ活性の有無を利用しうる。変異導入と選別は複数回反復してもよい。
アマドリアーゼの活性は、オキシダーゼ活性とデヒドロゲナーゼ活性があり、これらは種々の方法により測定できる。以下に、アマドリアーゼ活性の測定方法を例示する。
以下、αF6Pを基質として用いるオキシダーゼ活性測定を記載する。ある実施形態において、酵素力価は、αF6Pを基質としたときの、1分間に1μmolの過酸化水素を生成する酵素量を1Uと定義することができる。なお、これは酵素の特性評価や測定方法上の便宜であって、本発明のHbA1cデヒドロゲナーゼがαF6Pのみを基質とすることを意味するものではない。デヒドロゲナーゼ活性測定法についても同様である。
(試薬1):5U/ml パーオキシダーゼ、0.49mM 4-アミノアンチピリンを含む0.1M リン酸緩衝液 pH6.5
5kUのパーオキシダーゼ(キッコーマン社製)、100mgの4-アミノアンチピリン(和光純薬工業社製)を0.1Mのリン酸カリウム緩衝液(pH6.5)に溶解し、1000mlに定容する。
(試薬2):15mM TOOS溶液
500mgのTOOS(N-エチル-N-(2-ヒドロキシ-3-スルホプロピル)-m-トルイジンナトリウム、同仁化学研究所製)をイオン交換水に溶解し、100mlに定容する。
(試薬3):基質溶液(30mM; 終濃度1mM)
αF6P(ペプチド研究所製) 257.1mgをイオン交換水に溶解し、10mlに定容する。
675μlの試薬1、25μlの試薬2、および25μlの酵素液を混和し、37℃で5分間予備加温する。その後、試薬3を25μl加えて良く混ぜた後、分光光度計(U-3010、日立ハイテクノロジーズ社製)により、555nmにおける吸光度の経時変化を観測し、555nmにおける吸光度の1分間あたりの変化量(ΔAs)を測定する。なお、対照液は、25μlの試薬3の代わりに25μlのイオン交換水を加える以外は前記と同様にして、555nmにおける吸光度の1分間あたりの変化量(ΔA0)を測定する。オキシダーゼ活性(U/ml)は下記の式に従って算出する。
オキシダーゼ活性(U/ml)={(ΔAs-ΔA0)×0.75×df}÷(39.2×0.5×0.025)
ΔAs:反応液の1分間あたりの吸光度変化
ΔA0:対照液の1分間あたりの吸光度変化
39.2:反応により生成されるキノイミン色素のミリモル吸光係数(mM-1・cm-1)
0.5:1 molの過酸化水素による生成されるキノイミン色素のmol数
df:希釈係数。
以下、αF6Pを基質として用いるデヒドロゲナーゼ活性測定法を記載する。ある実施形態において、酵素力価は、αF6Pを基質としたときの、1分間に1μmolのホルマザン色素を生成する酵素量を1Uと定義することができる。
(試薬4):0.25M リン酸緩衝液(pH6.5)
(試薬5):10mM WST-3溶液
690mgのWST-3(2-(4-Iodophenyl)-3-(2,4-dinitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium, monosodium salt、同仁化学研究所製)をイオン交換水に溶解し、100mLに定容する。
(試薬6):5.4mM mPMS溶液
180mgのmPMS(1-Methoxy-5-methylphenazinium methylsulfate、同仁化学研究所製)をイオン交換水に溶解し、100mlに定容する。
270μlの試薬4、150μlの試薬5,25μlの試薬6、255μlのイオン交換水、および25μlの酵素液を混和し、37℃で5分間予備加温する。その後、試薬3を25μl加えてよく混ぜた後、分光光度計(U-3010、日立ハイテクノロジーズ社製)により、433nmにおける吸光度を測定する。なお対照液は、25μlの酵素液の代わりに25μlのイオン交換水を加える以外は前記と同様に調製する。デヒドロゲナーゼ活性(U/ml)は下記の式に従って算出する。
デヒドロゲナーゼ活性(U/ml)= {(ΔAs-ΔA0)×0.75×df}÷(31×0.025)
ΔAs:反応液の1分間あたりの吸光度変化
ΔA0:対照液の1分間あたりの吸光度変化
31:反応により生成されるWST-3のホルマザン色素のミリモル吸光係数(mM-1・cm-1)
df:希釈係数。
以下、HbA1cを基質として用いるデヒドロゲナーゼ活性測定法を記載する。ある実施形態において、酵素力価は、HbA1cを基質としたときの、1分間に1μmolのホルマザン色素を生成する酵素量を1Uと定義することができる。
(試薬7):1.84mg/ml HbA1c溶液
(試薬8):10% n-ドデシル-β-D-マルトシド
(試薬9):185mM リン酸緩衝液 pH6.0
(試薬5):10mM WST-3溶液
まず、540μlの試薬7と60μlの試薬8を混合して、98℃で5分間加熱して、HbA1c試料前処理液を調製する。続いて、305μlの試薬9に125μlの試薬5、62.5μlの酵素液、および7.5μlのイオン交換水を混和し、37℃で5分間予備加温する。その後、HbA1c試料前処理液を125μl加えて撹拌した後、分光光度計により433nmにおける吸光度を測定する。対照実験は、62.5μlの酵素液の代わりに、62.5μlのHbA1cに作用しないアマドリアーゼを添加して実施する。デヒドロゲナーゼ活性(U/ml)は下記の式に従って算出する。
デヒドロゲナーゼ活性(U/ml)={(ΔAs-ΔA0)×0.625×df}÷(31×0.0625)
ΔAs:反応液の1分間あたりの吸光度変化
ΔA0:対照液の1分間あたりの吸光度変化
31:反応により生成されるWST-3のホルマザン色素のミリモル吸光係数(mM-1・cm-1)
df:希釈係数。
ある実施形態において、本発明は、HbA1cデヒドロゲナーゼを含む、HbA1c測定キット及びHbA1c測定装置を提供する。このキット又は装置は、場合により電子メディエーターを含んでもよい。ある実施形態において、本発明はHbA1cデヒドロゲナーゼを用いるHbA1cの測定方法を提供する。
別の実施形態では、本発明の酵素電極を利用し、試料中のアマドリ化合物の濃度を、酵素反応により生じる電流を測定することにより決定することができる。一例として、酵素電極を作用電極とし、これを対電極及び参照電極と共に使用する。対電極は例えば白金電極とすることができ、参照電極は例えばAg/AgCl電極とすることができる。温度を一定に保ち、電極をメディエーターを含む緩衝液中に挿入する。作用電極に電圧を印加し、試料を添加後、電流の変化を測定する。
以下、実施例により、本発明をさらに具体的に説明する。ただし、本発明の技術的範囲は、それらの例により何ら限定されるものではない。
(デヒドロゲナーゼ活性向上型変異について)
(1)組換え体プラスミドpKK223-3-CFP-T7-H38 DNAの調製
配列番号14はConiochaeta sp.由来フルクトシルペプチドオキシダーゼを、フルクトシルヘキサペプチドに作用するように改変した酵素(CFP-T7-H37)のアミノ酸配列である。CFP-T7-H37遺伝子(配列番号15)を含む組換え体プラスミドを有する大腸菌JM109(pKK223-3-CFP-T7-H37)株(国際公開2015/060429号参照)を、LB-amp培地[1%(W/V) バクトトリプトン、0.5%(W/V) ペプトン、0.5%(W/V) NaCl、50μg/ml Ampicilin]2.5mlに接種して、37℃で20時間振とう培養し、培養物を得た。
得られた組換え体プラスミドpKK223-3-CFP-T7-H37 DNAを鋳型として、配列番号27、28の合成オリゴヌクレオチド、KOD-Plus-(東洋紡社製)を用い、以下の条件でPCR反応を行った。
上記の手順により得られた上記組換え体プラスミドを保持するそれぞれの大腸菌JM109株を、0.1mMのIPTGを添加したLB-amp培地4mlにおいて、25℃で16時間培養した。その後、各菌体をpH7.5の10mMリン酸緩衝液で懸濁し、菌体を超音波破砕し、15,000rpmで10分間遠心分離し、各粗酵素液0.5mlを調製した。
このようにして調製した各粗酵素液をサンプルとし、αF6Pを基質とし、下記のオキシダーゼ活性測定法およびデヒドロゲナーゼ活性測定法に従って、各種改変型アマドリアーゼのオキシダーゼ活性とデヒドロゲナーゼ活性の評価を行った。
試薬の調製
(試薬1):5U/ml パーオキシダーゼ(キッコーマン製)、0.49mM 4-アミノアンチピリン(和光純薬工業製)を含む0.1M リン酸緩衝液 pH6.5
(試薬2):15mM TOOS(同仁化学研究所製)溶液
(試薬3):30mM αF6P(ペプチド研究所製)溶液(終濃度1mM)
オキシダーゼ活性(U/ml)={(ΔAs-ΔA0)×0.75×df}÷(39.2×0.5×0.025)
ΔAs:反応液の1分間あたりの吸光度変化
ΔA0:対照液の1分間あたりの吸光度変化
39.2:反応により生成されるキノイミン色素のミリモル吸光係数(mM-1・cm-1)
0.5:1 molの過酸化水素による生成されるキノイミン色素のmol数
df:希釈係数。
試薬の調製
(試薬3):30mM αF6P(ペプチド研究所製)溶液(終濃度1mM)
(試薬4):0.25M リン酸緩衝液(pH6.5)
(試薬5):10mM WST-3(同仁化学研究所製)溶液
(試薬6):5.4mM mPMS(同仁化学研究所製)溶液
デヒドロゲナーゼ活性(U/ml)={(ΔAs-ΔA0)×0.75×df}÷(31×0.025)
ΔAs:反応液の1分間あたりの吸光度変化
ΔA0:対照液の1分間あたりの吸光度変化
31:反応により生成されるWST-3のホルマザン色素のミリモル吸光係数(mM-1・cm-1)
df:希釈係数。
(CFP-H38-dh3の生産および精製)
大腸菌JM109(CFP-H38-dh3)株を、終濃度0.1mMとなるようにIPTGを添加したLB-amp培地200mlに植菌し、25℃で16時間培養した。得られた各培養菌体を10mM リン酸カリウム緩衝液(pH7.0)で洗浄した後、同緩衝液に菌体を懸濁して超音波破砕処理を行い、20,000×gで10分間遠心分離し、粗酵素液40mlを調製した。
(CFP-H38-dh3の、HbA1cに対するデヒドロゲナーゼ活性の評価)
分光光度計U-3010(日立ハイテクノロジーズ製)を利用して、下記の通りCFP-H38-dh3のHbA1cに対するデヒドロゲナーゼ活性の評価を実施した。
(試薬7):1.84mg/ml HbA1c溶液(BBI solution製)
(試薬8):10% n-ドデシル-β-D-マルトシド(同仁化学研究所製)
(試薬9):185mM リン酸緩衝液 pH6.0
(試薬5):10mM WST-3溶液
(試薬10):8.8mg/ml(4.1U/ml) CFP-H38-dh3溶液
(Uは1mMのαF6Pを基質とした時のデヒドロゲナーゼ活性を示す。)
(試薬11):8.8mg/ml CFP-T7溶液
(印刷電極によるHbA1cの定量)
まず、実施例3で調製したHbA1c試料前処理液を用いて、20mM リン酸緩衝液(pH6.5)、1M KCl、0.65% n-ドデシル-β-D-マルトシドを含むHbA1c溶液を調製した。HbA1c濃度は83、166、249、332μg/mlの4レベルとした。スクリーン印刷カーボン電極(DRP-110、DropSens製)上に、調製済みのHbA1c溶液10μlおよび500mMのRuCl3(東京化成工業製)を4μl添加して混合した。スクリーン印刷カーボン電極を繋ぎケーブル(CAC、DropSens製)を介して、ALS電気化学アナライザー814D(BAS製)に接続した後、38.4mg/ml(17.8U/ml)のCFP-H38-dh3溶液6μlを電極上に添加し、+200mV(vs. Ag/AgCl)の電圧を印加して反応させ、60秒後の電流値を測定した。各HbA1c濃度における電流応答値をプロットした結果を図5に示す。
配列の簡単な説明
配列番号1 Coniochaeta属由来のアマドリアーゼ(CFP-T7)
配列番号2 CFP-T7遺伝子配列
配列番号3 Eupenicillium terrenum由来のアマドリアーゼ
配列番号4 Pyrenochaeta sp.由来のケトアミンオキシダーゼ
配列番号5 Arthrinium sp.由来のケトアミンオキシダーゼ
配列番号6 Curvularia clavata由来のケトアミンオキシダーゼ
配列番号7 Neocosmospora vasinfecta由来のケトアミンオキシダーゼ
配列番号8 Cryptococcus neoformans由来のフルクトシルアミノ酸オキシダーゼ
配列番号9 Phaeosphaeria nodorum由来のフルクトシルペプチドオキシダーゼ
配列番号10 Aspergillus nidulans由来のフルクトシルアミノ酸オキシダーゼ
配列番号11 Emericella nidulans由来のフルクトシルペプチドオキシダーゼ
配列番号12 Ulocladium sp.由来のフルクトシルアミノ酸オキシダーゼ
配列番号13 Penicillium janthinellum由来のフルクトシルアミノ酸オキシダーゼ
配列番号14 CFP-T7-R62D/L63H/E102K/D106K/Q110L/A113K/A355S/D68N/A356T(CFP-T7-H37)のアミノ酸配列
配列番号15 CFP-T7-H37塩基配列
配列番号16 CFP-T7-H38 アミノ酸配列(CFP-T7-H37-R64G)
配列番号17 CFP-T7-H39 アミノ酸配列(CFP-T7-H37-R64G/L110Y)
配列番号18 CFP-T7-H40 アミノ酸配列(CFP-T7-H37-R64G/L110Y/H99S)
配列番号19 Ao2 (Aspergillus oryzae由来、別称FaoAo2)
配列番号20 Af2 (Aspergillus fumigatus由来、別称AmadoriaseII)
配列番号21 At (Aspergillus terreus由来、別称FAOD-A)
配列番号22 Fo (Fusarium oxysporum由来)
配列番号23 Ao1 (Aspergillus oryzae由来、別称FaoAo 1)
配列番号24 Af1 (Aspergillus fumigatus由来、別称AmadoriaseI)
配列番号25 Pi (Pichia sp.由来)
配列番号26 Dh (Debaryomyces hansenii由来)
配列番号27 プライマー配列(R64G導入用)
配列番号28 プライマー配列(R64G導入用)
配列番号29 プライマー配列(L110Y導入用)
配列番号30 プライマー配列(L110Y導入用)
配列番号31 プライマー配列(H99S導入用)
配列番号32 プライマー配列(H99S導入用)
配列番号33 プライマー配列(F269M導入用)
配列番号34 プライマー配列(F269M導入用)
配列番号35 プライマー配列(F269L導入用)
配列番号36 プライマー配列(C280Q導入用)
配列番号37 プライマー配列(C280Q導入用)
Claims (18)
- 試料にヘモグロビンA1cに直接作用するHbA1cデヒドロゲナーゼを作用させ、その作用によって生じる過酸化水素ではない還元型電子メディエーターもしくは消費される酸素ではない酸化型電子メディエーターを測定することを含む、試料中のヘモグロビンA1cの測定方法。
- 測定がHbA1cデヒドロゲナーゼ、HbA1cデヒドロゲナーゼを含む酵素電極、又は該酵素電極を作用電極として有する酵素センサー、及び酸素ではない電子メディエーターを用いる電気化学的測定であるか、或いは、HbA1cデヒドロゲナーゼ、発色基質、及び、酸素ではない電子メディエーターを用いる吸光度測定である、請求項1に記載の測定方法。
- 改変前のヘモグロビンA1cに直接作用するアマドリアーゼと比較して、オキシダーゼ活性とデヒドロゲナーゼ活性の比(OX/DH)が低減されたHbA1cに直接作用するデヒドロゲナーゼであって、
(i) アマドリアーゼのアミノ酸配列を、配列番号1記載のアミノ酸配列とアライメントしたときに、配列番号1に示すアミノ酸配列における280位、269位、54位、241位及び267位からなる群より選択される位置に対応する位置の1以上のアミノ酸が置換されており、ヘモグロビンA1cに直接作用し、かつデヒドロゲナーゼ活性を有するHbA1cデヒドロゲナーゼ、
(ii) 前記(i)のHbA1cデヒドロゲナーゼにおいて、配列番号1に示すアミノ酸配列における280位、269位、54位、241位及び267位に対応する位置以外の位置における1又は数個のアミノ酸が置換、欠失又は付加されたアミノ酸配列からなり、ヘモグロビンA1cに直接作用し、かつデヒドロゲナーゼ活性を有するHbA1cデヒドロゲナーゼ、
(iii) 前記(i)のHbA1cデヒドロゲナーゼにおいて、当該アマドリアーゼの全長アミノ酸配列が配列番号1、配列番号3-14のいずれかのアミノ酸配列と70%以上の配列同一性を有し、かつ、配列番号1の相同性領域におけるアミノ酸配列と当該アマドリアーゼの対応する相同性領域におけるアミノ酸配列とが90%以上の配列同一性を有し、ここで配列番号1の相同性領域は配列番号1の第10位~32位、36~41位、49~52位、54~58位、63~65位、73~75位、84~86位、88~90位、120~122位、145~150位、156~162位、164~170位、180~182位、202~205位、207~211位、214~224位、227~230位、236~241位、243~248位、258~261位、266~268位、270~273位、275~287位、295~297位、306~308位、310~316位、324~329位、332~334位、341~344位、346~355位、357~363位、370~383位、385~387位、389~394位、405~410位及び423~431位のアミノ酸配列からなるものであり、ヘモグロビンA1cに直接作用し、かつデヒドロゲナーゼ活性を有するHbA1cデヒドロゲナーゼ、
(iv) 前記(i)のHbA1cデヒドロゲナーゼにおいて、当該アマドリアーゼの全長アミノ酸配列が配列番号1、配列番号3-14のいずれかのアミノ酸配列と80%以上の配列同一性を有し、ヘモグロビンA1cに直接作用し、かつデヒドロゲナーゼ活性を有するHbA1cデヒドロゲナーゼ、或いは
(v) 前記(i)のHbA1cデヒドロゲナーゼにおいて、配列番号1の保存領域におけるアミノ酸配列と当該アマドリアーゼの由来する天然アマドリアーゼの対応する保存領域におけるアミノ酸配列とが90%以上の配列同一性を有し、ここで配列番号1の保存領域は配列番号1の第11、12、13、15、17、18、20、22、23、24、25、27、29、31、36、37、41、46、47、50、51、52、54、56、57、58、75、79、82、84、85、93、95、149、158、159、162、165、166、177、180、202、208、218、220、221、222、224、228、233、239、243、246、250、255、258、260、266、267、270、272、277、278、280、281、282、284、285、286、318、321、326、329、334、339、346、347、348、351、352、354、358、359、362、363、370、373、376、382、385、386、389、406、407、409、418、425及び427位からなるものであり、ヘモグロビンA1cに直接作用し、かつデヒドロゲナーゼ活性を有するHbA1cデヒドロゲナーゼ。 - 配列番号1に示すアミノ酸配列における280位に対応する位置のアミノ酸が、グルタミン、セリン、トレオニン及びアスパラギンからなる群より選択される極性アミノ酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン、及びヒスチジンからなる群より選択される荷電アミノ酸、又はメチオニン、プロリン、フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファンからなる群より選択されるアミノ酸に置換されている、
配列番号1に示すアミノ酸配列における269位に対応する位置のアミノ酸が、メチオニン、ロイシン、チロシン、イソロイシン、トリプトファン、バリン又はアラニンに置換されている、
配列番号1に示すアミノ酸配列における54位に対応する位置のアミノ酸が、アスパラギン、アラニン、グルタミン、ヒスチジン、グリシン又はバリンからなる群より選択されるアミノ酸に置換されている、
配列番号1に示すアミノ酸配列における241位に対応する位置のアミノ酸が、グルタミン、リシン、グルタミン酸、アスパラギン、アルギニン、アスパラギン酸又はヒスチジンからなる群より選択されるアミノ酸に置換されている、或いは
配列番号1に示すアミノ酸配列における267位に対応する位置のアミノ酸が、メチオニン、ロイシン、チロシン、イソロイシン、トリプトファン、バリン又はアラニンに置換されている、
請求項3に記載のHbA1cデヒドロゲナーゼ。 - 配列番号1に示すアミノ酸配列における280位に対応する位置のアミノ酸が、グルタミン、セリン、ヒスチジン、トレオニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン又はメチオニンに置換されている、
配列番号1に示すアミノ酸配列における269位に対応する位置のアミノ酸が、メチオニン、ロイシン、チロシン、イソロイシン又はトリプトファンに置換されている、
配列番号1に示すアミノ酸配列における54位に対応する位置のアミノ酸が、アスパラギン又はアラニンに置換されている、
配列番号1に示すアミノ酸配列における241位に対応する位置のアミノ酸が、グルタミン、グルタミン酸又はリシンに置換されている、或いは
配列番号1に示すアミノ酸配列における267位に対応する位置のアミノ酸が、メチオニン、ロイシン、チロシン、イソロイシン又はトリプトファンに置換されている、
請求項4に記載のHbA1cデヒドロゲナーゼ。 - 配列番号1に示すアミノ酸配列における280位に対応する位置のアミノ酸が、グルタミン、セリン、ヒスチジン、トレオニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン又はメチオニンに置換されている、
配列番号1に示すアミノ酸配列における269位に対応する位置のアミノ酸が、メチオニン、ロイシン又はチロシンに置換されている、
配列番号1に示すアミノ酸配列における54位に対応する位置のアミノ酸が、アスパラギン又はアラニンに置換されている、
配列番号1に示すアミノ酸配列における241位に対応する位置のアミノ酸が、グルタミン、グルタミン酸又はリシンに置換されている、或いは
配列番号1に示すアミノ酸配列における267位に対応する位置のアミノ酸が、メチオニン、ロイシン又はチロシンに置換されている、
請求項5に記載のHbA1cデヒドロゲナーゼ。 - 配列番号1に示すアミノ酸配列における280位に対応する位置のアミノ酸が、グルタミン、又はセリンに置換されている、
配列番号1に示すアミノ酸配列における269位に対応する位置のアミノ酸が、メチオニン、ロイシン又はチロシンに置換されている、
配列番号1に示すアミノ酸配列における241位に対応する位置のアミノ酸が、グルタミンに置換されている、或いは
配列番号1に示すアミノ酸配列における267位に対応する位置のアミノ酸が、メチオニン、ロイシン又はチロシンに置換されている、
請求項5に記載のHbA1cデヒドロゲナーゼ。 - 配列番号1に示すアミノ酸配列における280位に対応する位置のアミノ酸が、グルタミン又はヒスチジンに置換されている、
配列番号1に示すアミノ酸配列における269位に対応する位置のアミノ酸が、メチオニン又はロイシンに置換されている、或いは
配列番号1に示すアミノ酸配列における267位に対応する位置のアミノ酸が、メチオニン又はロイシンに置換されている、
請求項5に記載のHbA1cデヒドロゲナーゼ。 - 配列番号1に示すアミノ酸配列における280位に対応する位置のアミノ酸が、グルタミンに置換されている、
配列番号1に示すアミノ酸配列における269位に対応する位置のアミノ酸が、メチオニン又はロイシンに置換されている、或いは
配列番号1に示すアミノ酸配列における267位に対応する位置のアミノ酸が、メチオニン又はロイシンに置換されている、
請求項5に記載のHbA1cデヒドロゲナーゼ。 - オキシダーゼ活性が改変前のアマドリアーゼ(100%)と比較して60%未満に低減されている、又は、オキシダーゼ活性とデヒドロゲナーゼ活性の比(OX/DH)が改変前のアマドリアーゼ(100%)と比較して40%未満に低減されている、請求項3~9のいずれか1項に記載のHbA1cデヒドロゲナーゼ。
- 前記アマドリアーゼが、コニオカエタ(Coniochaeta)属、ユーペニシリウム(Eupenicillium)属、ピレノケータ(Pyrenochaeta)属、アルスリニウム(Arthrinium)属、カーブラリア(Curvularia)属、ネオコスモスポラ(Neocosmospora)属、クリプトコッカス(Cryptococcus)属、フェオスフェリア(Phaeosphaeria)属、アスペルギルス(Aspergillus)属、エメリセラ(Emericella)属、ウロクラディウム(Ulocladium)属、ペニシリウム(Penicillium)属、フザリウム(Fusarium)属、アカエトミエラ(Achaetomiella)属、アカエトミウム(Achaetomium)属、シエラビア(Thielavia)属、カエトミウム(Chaetomium)属、ゲラシノスポラ(Gelasinospora)属、ミクロアスカス(Microascus)属、レプトスフェリア(Leptosphaeria)属、オフィオボラス(Ophiobolus)属、プレオスポラ(Pleospora)属、コニオケチジウム(Coniochaetidium)属、ピチア(Pichia)属、デバリオマイセス(Debaryomyces)属、コリネバクテリウム(Corynebacterium)属、アグロバクテリウム(Agrobacterium)属、又はアルスロバクター(Arthrobacter)属由来である、請求項3~10のいずれか1項に記載のHbA1cデヒドロゲナーゼ。
- 配列番号1、配列番号3-14、又は16-26のいずれかに示すアミノ酸配列を有し、請求項3~9のいずれかに規定したアミノ酸置換を有する、請求項3~11のいずれか1項に記載のHbA1cデヒドロゲナーゼ。
- さらに、HbA1cデヒドロゲナーゼのアミノ酸配列を、配列番号1記載のアミノ酸配列とアライメントしたときに、配列番号1に示すアミノ酸配列における以下からなる群より選択される位置に対応する位置にアミノ酸置換又は欠失を1以上有し、ヘモグロビンA1cに直接作用し、かつデヒドロゲナーゼ活性を有する、請求項3~12のいずれか1項に記載のHbA1cデヒドロゲナーゼ、
(A)62位、63位、102位、106位、110位、113位、355位、419位、68位、356位、64位、及び/又は99位への置換、
(B)262位、257位、249位、253位、337位、340位、232位、129位、132位、133位、44位、256位、231位及び/又は81位への置換、並びに
(C)カルボキシル末端の435位、436位及び437位の3アミノ酸残基の欠失。 - さらに、HbA1cデヒドロゲナーゼのアミノ酸配列を、配列番号1記載のアミノ酸配列とアライメントしたときに、配列番号1に示すアミノ酸配列における以下からなる群より選択される位置に対応する位置のアミノ酸の1以上が、以下からなる群より選択されるアミノ酸に置換されており又は欠失しており、ヘモグロビンA1cに直接作用し、かつデヒドロゲナーゼ活性を有する、請求項13に記載のHbA1cデヒドロゲナーゼ、
(A)62位のアルギニンに対応する位置のアミノ酸の、アラニン、アスパラギン又はアスパラギン酸への置換、
63位のロイシンに対応する位置のアミノ酸の、ヒスチジン又はアラニンへの置換、
102位のグルタミン酸に対応する位置のアミノ酸の、リジンへの置換
106位のアスパラギン酸に対応する位置のアミノ酸の、アラニン、リジン、又はアルギニンへの置換、
110位のグルタミンに対応する位置のアミノ酸のロイシン又はチロシンへの置換、
113位のアラニンに対応する位置のアミノ酸のリジン又はアルギニンへの置換、
355位のアラニンに対応する位置のアミノ酸のセリンへの置換、
419位のアラニンに対応する位置のアミノ酸のリジンへの置換、
68位のアスパラギン酸に対応する位置のアミノ酸のアスパラギンへの置換、
356位のアラニンに対応する位置のアミノ酸のトレオニンへの置換、
64位のアルギニンに対応する位置のアミノ酸のグリシン、セリン、メチオニン、ロイシン、トレオニン、バリン、又はイソロイシンへの置換、
99位のヒスチジンに対応する位置のアミノ酸のセリンへの置換、
(B)262位のアスパラギンに対応する位置のアミノ酸のヒスチジンへの置換、
257位のバリンに対応する位置のアミノ酸のシステイン、セリン、トレオニンへの置換、
249位のグルタミン酸に対応する位置のアミノ酸のリジン、アルギニンへの置換、
253位のグルタミン酸に対応する位置のアミノ酸のリジン、アルギニンへの置換、
337位のグルタミンに対応する位置のアミノ酸のリジン、アルギニンへの置換、
340位のグルタミン酸に対応する位置のアミノ酸のプロリンへの置換、
232位のアスパラギン酸に対応する位置のアミノ酸のリジン、アルギニンへの置換、
129位のアスパラギン酸に対応する位置のアミノ酸のリジン、アルギニンへの置換、
132位のアスパラギン酸に対応する位置のアミノ酸のリジン、アルギニンへの置換、
133位のグルタミン酸に対応する位置のアミノ酸のアラニン、メチオニン、リジン、アルギニンへの置換、
44位のグルタミン酸に対応する位置のアミノ酸のプロリンへの置換、
256位のグリシンに対応する位置のアミノ酸のリジン、アルギニンへの置換、
231位のグルタミン酸に対応する位置のアミノ酸のリジン、アルギニンへの置換、
81位のグルタミン酸に対応する位置のアミノ酸のリジン、アルギニンへの置換、並びに(C)435位のプロリン、436位のリジン及び437位のロイシンに対応する位置のカルボキシル末端3アミノ酸の欠失。 - 請求項3~14のいずれか1項に記載のHbA1cデヒドロゲナーゼを含むHbA1c測定試薬キット。
- 請求項3~14のいずれか1項に記載のHbA1cデヒドロゲナーゼを含む酵素電極。
- 請求項16に記載の酵素電極を作用電極として有する酵素センサー。
- HbA1cデヒドロゲナーゼが請求項3~14のいずれか1項に記載のHbA1cデヒドロゲナーゼである、請求項1又は2に記載の測定方法。
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2016086592 | 2016-04-22 | ||
JP2016086592 | 2016-04-22 | ||
JP2018513229A JP7471772B2 (ja) | 2016-04-22 | 2017-04-21 | HbA1cデヒドロゲナーゼ |
PCT/JP2017/016058 WO2017183717A1 (ja) | 2016-04-22 | 2017-04-21 | HbA1cデヒドロゲナーゼ |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018513229A Division JP7471772B2 (ja) | 2016-04-22 | 2017-04-21 | HbA1cデヒドロゲナーゼ |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2022081510A true JP2022081510A (ja) | 2022-05-31 |
Family
ID=60116110
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018513229A Active JP7471772B2 (ja) | 2016-04-22 | 2017-04-21 | HbA1cデヒドロゲナーゼ |
JP2022025320A Pending JP2022081510A (ja) | 2016-04-22 | 2022-02-22 | HbA1cデヒドロゲナーゼ |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018513229A Active JP7471772B2 (ja) | 2016-04-22 | 2017-04-21 | HbA1cデヒドロゲナーゼ |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11111517B2 (ja) |
EP (1) | EP3447132B1 (ja) |
JP (2) | JP7471772B2 (ja) |
KR (1) | KR102596402B1 (ja) |
CN (1) | CN109312312B (ja) |
WO (1) | WO2017183717A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP7226955B2 (ja) * | 2017-10-02 | 2023-02-21 | アークレイ株式会社 | 糖化蛋白質の測定 |
US11747348B2 (en) | 2021-09-29 | 2023-09-05 | Orange Biomed Ltd., Co. | Apparatus for measuring glycation of red blood cells and glycated hemoglobin level using physical and electrical characteristics of cells, and related methods |
US11852577B2 (en) | 2021-09-29 | 2023-12-26 | Orange Biomed Ltd., Co. | Apparatus for measuring properties of particles in a solution and related methods |
Family Cites Families (39)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS61280297A (ja) | 1985-06-04 | 1986-12-10 | Noda Sangyo Kagaku Kenkyusho | アマドリ化合物の定量法及びその定量用試薬 |
GB9116315D0 (en) | 1991-07-29 | 1991-09-11 | Genzyme Ltd | Assay |
JP3586500B2 (ja) | 1995-06-26 | 2004-11-10 | 日本国土開発株式会社 | 大断面アーチ形トンネルの掘進工法 |
WO1997013872A1 (fr) | 1995-10-12 | 1997-04-17 | Kyoto Daiichi Kagaku Co., Ltd. | Procede pour doser les composes d'amadori |
JP3949854B2 (ja) | 1999-10-01 | 2007-07-25 | キッコーマン株式会社 | 糖化蛋白質の測定方法 |
JP4231668B2 (ja) | 2001-09-04 | 2009-03-04 | キッコーマン株式会社 | 新規なフルクトシルペプチドオキシダーゼ |
JP2004104203A (ja) | 2002-09-05 | 2004-04-02 | Toshiba Corp | 固体撮像装置 |
DE60326259D1 (de) | 2002-10-23 | 2009-04-02 | Daiichi Pure Chemicals Co Ltd | Neue fructosylpeptidoxidase und deren nutzung |
JP4227820B2 (ja) | 2003-03-12 | 2009-02-18 | 旭化成ファーマ株式会社 | 新規な酵素 |
JP4248900B2 (ja) | 2003-03-14 | 2009-04-02 | イチビキ株式会社 | 新規なフルクトシルアミンオキシダーゼをコードする遺伝子及びそれを用いての該フルクトシルアミンオキシダーゼの製造方法 |
DE602004030328D1 (de) | 2003-05-21 | 2011-01-13 | Asahi Kasei Pharma Corp | Verfahren zur messung von glykoliertem hämoglobin a1c, dafür zu verwendendes enzym und verfahren zur herstellung davon |
JP4544517B2 (ja) | 2003-07-15 | 2010-09-15 | 三菱レイヨン株式会社 | 光源装置 |
KR100969762B1 (ko) | 2003-10-07 | 2010-07-13 | 삼성전자주식회사 | 부호 분할 액세스 이동 통신 시스템에서 고속 페이징 방법 |
ATE509119T1 (de) | 2003-11-19 | 2011-05-15 | Sekisui Medical Co Ltd | Verfahren zum testen von glykosyliertem protein |
JP2008076143A (ja) * | 2006-09-20 | 2008-04-03 | Citizen Holdings Co Ltd | ヘモグロビン濃度測定装置 |
JP4589909B2 (ja) | 2006-10-27 | 2010-12-01 | 株式会社日立メディアエレクトロニクス | 対物レンズ駆動装置 |
JP5442432B2 (ja) | 2007-03-05 | 2014-03-12 | キッコーマン株式会社 | 糖化ヘキサペプチドの測定方法 |
TWI405472B (zh) | 2008-07-31 | 2013-08-11 | Htc Corp | 電子裝置及其電聲換能器 |
JP5350762B2 (ja) | 2008-08-04 | 2013-11-27 | 東洋紡株式会社 | フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ、およびその利用法 |
JP5243878B2 (ja) | 2008-08-04 | 2013-07-24 | 東洋紡株式会社 | フルクトシルバリルヒスチジン測定用酵素、およびその利用法 |
JP5075757B2 (ja) | 2008-08-05 | 2012-11-21 | オリンパス株式会社 | 画像処理装置、画像処理プログラム、画像処理方法、および電子機器 |
CN102232111B (zh) | 2008-10-09 | 2014-12-03 | 协和梅迪克斯株式会社 | 果糖基肽氧化酶 |
US8993255B2 (en) | 2008-10-10 | 2015-03-31 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | Protein having fructosyl valyl histidine oxidase activity, modified protein, and use of the protein or the modified protein |
JP2011015325A (ja) | 2009-07-06 | 2011-01-20 | Mitsubishi Electric Corp | 監視画像記録装置 |
EP2281900A1 (en) | 2009-08-03 | 2011-02-09 | Roche Diagnostics GmbH | Fructosyl peptidyl oxidase and sensor for assaying a glycated protein |
EP2287295A1 (en) | 2009-08-03 | 2011-02-23 | Roche Diagnostics GmbH | Mutant Fructosyl amino acid oxidase |
JP5927771B2 (ja) | 2010-04-09 | 2016-06-01 | 東洋紡株式会社 | ヘモグロビンA1cの測定方法 |
JP5854265B2 (ja) | 2011-11-08 | 2016-02-09 | 株式会社ジェイテクト | 操舵機構の制御装置 |
EP2808386B1 (en) | 2011-12-28 | 2018-11-28 | Kikkoman Corporation | Amadoriase having improved thermal stability, gene and recombinant dna of same, and method for producing amadoriase having improved thermal stability |
JP6010305B2 (ja) | 2012-02-07 | 2016-10-19 | 東京エレクトロン株式会社 | 誘導結合プラズマ用アンテナユニット、誘導結合プラズマ処理装置および誘導結合プラズマ処理方法 |
EP2843050B1 (en) | 2012-04-27 | 2019-03-13 | Kikkoman Corporation | Modified amadoriase capable of acting on fructosyl hexapeptide |
JP5981394B2 (ja) | 2013-06-24 | 2016-08-31 | 日本電信電話株式会社 | センサインタフェース回路及び制御方法 |
JP5713056B2 (ja) | 2013-06-24 | 2015-05-07 | 横河電機株式会社 | プロセス制御装置及びシステム並びにその更新方法 |
JP6623488B2 (ja) * | 2013-07-09 | 2019-12-25 | 日立化成ダイアグノスティックス・システムズ株式会社 | 糖化ヘモグロビンの測定方法 |
US9944970B2 (en) | 2013-07-09 | 2018-04-17 | Kyowa Medex Co., Ltd. | Glycated hexapeptide oxidase and use thereof |
JP6005614B2 (ja) | 2013-09-19 | 2016-10-12 | Kddi株式会社 | 情報取得システム及び情報取得方法 |
EP3061819B1 (en) * | 2013-10-25 | 2023-05-24 | Kikkoman Corporation | HEMOGLOBIN A1c MEASUREMENT METHOD AND MEASUREMENT KIT |
EP3211079B1 (en) | 2014-10-24 | 2020-12-02 | Kikkoman Corporation | Amadoriase having enhanced dehydrogenase activity |
WO2016159384A1 (ja) * | 2015-04-03 | 2016-10-06 | キッコーマン株式会社 | 比活性が向上したアマドリアーゼ |
-
2017
- 2017-04-21 CN CN201780037943.3A patent/CN109312312B/zh active Active
- 2017-04-21 WO PCT/JP2017/016058 patent/WO2017183717A1/ja active Application Filing
- 2017-04-21 KR KR1020187029386A patent/KR102596402B1/ko active IP Right Grant
- 2017-04-21 US US16/094,924 patent/US11111517B2/en active Active
- 2017-04-21 EP EP17786054.1A patent/EP3447132B1/en active Active
- 2017-04-21 JP JP2018513229A patent/JP7471772B2/ja active Active
-
2022
- 2022-02-22 JP JP2022025320A patent/JP2022081510A/ja active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPWO2017183717A1 (ja) | 2019-02-28 |
EP3447132A1 (en) | 2019-02-27 |
US20190119715A1 (en) | 2019-04-25 |
EP3447132B1 (en) | 2022-05-18 |
CN109312312A (zh) | 2019-02-05 |
CN109312312B (zh) | 2023-06-02 |
KR20180136946A (ko) | 2018-12-26 |
WO2017183717A1 (ja) | 2017-10-26 |
US11111517B2 (en) | 2021-09-07 |
JP7471772B2 (ja) | 2024-04-22 |
KR102596402B1 (ko) | 2023-10-31 |
EP3447132A4 (en) | 2019-10-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5438020B2 (ja) | 新規なフルクトシルバリルヒスチジンオキシダーゼ活性を有するタンパク質及びその改変体、並びにその利用 | |
JP5243878B2 (ja) | フルクトシルバリルヒスチジン測定用酵素、およびその利用法 | |
EP2462223B1 (en) | Fructosyl amino acid oxidase | |
JP2022081510A (ja) | HbA1cデヒドロゲナーゼ | |
JP5350762B2 (ja) | フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ、およびその利用法 | |
JP6856344B2 (ja) | 変異グルコース脱水素酵素およびその利用 | |
EP2602318A1 (en) | Amadoriase having altered substrate specificity | |
JP5476021B2 (ja) | フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ改変体およびその利用 | |
JP6980383B2 (ja) | デヒドロゲナーゼ活性の向上したアマドリアーゼ | |
JP7084867B2 (ja) | フラビン結合型グルコースデヒドロゲナーゼ改変体 | |
JP5465415B2 (ja) | フルクトシルアミノ酸測定用酵素、およびその利用法 | |
JP5465427B2 (ja) | フルクトシル−l−バリルヒスチジン測定用酵素、およびその利用法 | |
US9708586B2 (en) | Amadoriase having altered substrate specificity | |
WO2012043601A1 (ja) | アマドリアーゼ改変体 | |
US20180282705A1 (en) | Compositions and methods for measuring blood glucose levels | |
JPWO2009154247A1 (ja) | 耐熱性1,5−アンヒドログルシトール脱水素酵素及びそれを用いた1,5−アンヒドログルシトールの測定法 | |
WO2020003752A1 (ja) | フルクトシルバリルヒスチジンオキシダーゼ活性を有するタンパク質 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220324 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20220324 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20221206 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20230206 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230403 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230620 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20230711 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20231219 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20240319 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20240325 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20240423 |