JP2022058414A - 抗ｃｄ１５４抗体及びこれを使用する方法 - Google Patents

抗ｃｄ１５４抗体及びこれを使用する方法 Download PDF

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Fransson Johan
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スリ，アニシュ
Suri Anish
テン，ファン
Fang Teng
テプリアコフ，アレクシー
Teplyakov Alexey
ゾウ，ホン
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Abstract

【課題】安全性及び有効性プロファイルの向上した、ＣＤ１５４に特異的に結合するアンタゴニスト抗体を提供する。【解決手段】ヒトＣＤ１５４に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原結合部分であって、ある特定のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１（ＳＹＧＩＳ）と、別のある特定のアミノ酸配列のＨＣＤＲ２（ＷＩＳＰＩＦＧＮＴＮＹＡＱＫＦＱＧ）と、他のある特定のアミノ酸配列のＨＣＤＲ３（ＳＲＹＹＧＤＬＤＹ）とを含む、単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原結合部分である。【選択図】なし

Description

（関連出願の相互参照）
本出願は、米国特許仮出願第６２／３６７，６６０号（２０１６年７月２８日出願）及
び米国特許仮出願第６２／２０１，１５０号（２０１５年８月５日出願）の利益を主張し
、前述の各特許出願の全内容を参照により本明細書に組み込む。
（発明の分野）
本発明は、ＣＤ１５４に特異的に結合する抗体、かかる抗体又は断片をコードしている
ポリヌクレオチド、並びに前述のものを作製及び使用する方法に関する。
ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）、ｇｐ３９、ＴＮＦ関連活性化タンパク質（ＴＲＡＰ
）、５ｃ８抗原、又はＴ－ＢＡＭとしても既知であるＣＤ１５４は、腫瘍壊死因子（ＴＮ
Ｆ）スーパーファミリーの三量体膜貫通タンパク質である。ＣＤ１５４は、ＣＤ４＋Ｔ細
胞表面で、活性化に応じ時間に制限のある様式で発現される。ＣＤ１５４は、ＣＤ８＋Ｔ
細胞、好塩基球、肥満細胞、好酸球、ナチュラルキラー細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、
樹状細胞、及び血小板のセブセットでも活性化により発現される。ＣＤ１５４は、血中に
可溶型としても存在する。
ＣＤ１５４は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上のＣＤ４０に結合し、標的とする細胞の種類
に応じ様々な応答を引き起こす。ＣＤ４０～ＣＤ１５４相互作用は、共刺激の増大、Ｔ細
胞プライミング、サイトカイン産生、抗体のクラススイッチ及び親和性成熟、並びに抗体
及び自己抗体の産生などといった、Ｔ細胞とＢ細胞との正常な相互作用に必須である。
ＣＤ１５４阻害によるＣＤ４０／ＣＤ１５４経路の遮断は、全身性エリテマトーデス（
ＳＬＥ）、関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、Ｉ
型糖尿病（Ｔ１Ｄ）、及び同種移植片拒絶などといった自己免疫疾患においてその有効性
が示されている。ヒトでは、ＣＤ４０又はＣＤ１５４のいずれかにおける変異により、Ｉ
ｇＧ又はＩｇＡのアイソタイプの欠損を特徴とする高ＩｇＭ症候群が生じる（Ａｒｕｆｆ
ｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ７２：２９１，１９９３）。
抗ＣＤ１５４抗体は、例えば、国際公開第１９９３／０８２０７号、同第１９９４／１
０３０８号、同第１９９６／４０９１８号、同第１９９３／００９８１２号、同第１９９
９／０５１２５８号、同第１９９５／００６４８０号、同第１９９５／００６４８１号、
同第１９９５／００６６６６号、同第２００１／００２０５７号、同第１９９７／０１７
４４６号、同第１９９９／０１２５６６号、同第２００１／０６８８６０号、同第２００
５／００３１７５号、同第２００６／０３３７０２号、同第２００６／０３０２２０号、
同第２００８／１１８３５６号、同第２０１２／０５２２０５号、同第２０１２／１３８
７６８号、同第２０１２／１３８７６８号、同第２０１３／０５５７４５号、及び同第２
０１３／０５６０６８号に記載されている。
抗ＣＤ１５４抗体は、ヒトにおける自己免疫疾患の治療において有効であることが示さ
れている。しかしながら、治療時に観察される、血小板の活性化による血栓塞栓症により
、臨床開発の継続が阻まれていた。血小板上のＦｃγＲＩＩａの関与が、抗ＣＤ１５４抗
体５ｃ８による血小板活性化の原因となることが示されている（Ｘｉｅ ｅｔ ａｌ．，
Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９２：４０８３～４０９２，２０１４）。
したがって、安全性及び有効性プロファイルの向上した、更なる抗ＣＤ１５４抗体が必
要とされている。
本発明は、配列番号１のヒトＣＤ１５４に特異的に結合するアンタゴニスト抗体又はそ
の抗原結合部分であって、配列番号１７の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１（ＳＹＧＩ
Ｓ）と、配列番号２３のＨＣＤＲ２（ＷＩＳＰＩＦＧＮＴＮＹＡＱＫＦＱＧ）と、配列番
号３０のＨＣＤＲ３（ＳＲＹＹＧＤＬＤＹ）とを含み、場合により、
ＨＣＤＲ１残基Ｓ１が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、又は
Ｖに変異しており、
ＨＣＤＲ１残基Ｉ４が、Ｍ、Ｌ、又はＶに変異しており、
ＨＣＤＲ１残基Ｓ５が、Ａに変異しており、
ＨＣＤＲ２残基Ｓ３が、Ａ、Ｔ、又はＶに変異しており、
ＨＣＤＲ２残基Ｐ４が、Ｖ、Ｔ、Ｌ Ｑ、又はＥに変異しており、
ＨＣＤＲ２残基Ｎ８が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、
Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ＨＣＤＲ２残基Ｔ９が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、
Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ＨＣＤＲ２残基Ｎ１０が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｒ、Ｓ
、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ＨＣＤＲ３残基Ｓ１が、Ａ又はＭに変異しており、
ＨＣＤＲ３残基Ｒ２が、Ａ、Ｓ、Ｑ、又はＫに変異しており、かつ
ＨＣＤＲ３残基Ｌ７が、Ｍに変異している、
アンタゴニスト抗体又はその抗原結合部分を提供する。
本発明は、配列番号１のＣＤ１５４に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体
も提供し、かかる抗体は、本明細書に記載のとおりの特定のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を
含む。
本発明は、配列番号１のＣＤ１５４に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体
も提供し、かかる抗体は、本明細書に記載のとおりの特定のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、Ｈ
ＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。
本発明は、
それぞれ配列番号１７、２３、３０、３７、４４、及び５２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２
、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
配列番号５９のＶＨ及び配列番号６６のＶＬ；又は
配列番号８０の重鎖及び配列番号８１の軽鎖
を含み、かつ配列番号１のＣＤ１５４に特異的に結合する、単離されたアンタゴニスト
抗体も提供する。
本発明は、配列番号１のＣＤ１５４に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体
又はその抗原結合部分も提供し、ここで、ＣＤ１５４はホモ三量体であり、抗体は、ホモ
三量体中の第１のＣＤ１５４モノマーについてはＣＤ１５４のアミノ酸残基１８２～２０
７内で結合し、ホモ三量体中の第２のＣＤ１５４モノマーについてはＣＤ１５４のアミノ
酸残基１７６～２５３内で結合し、ここで、残基付番は配列番号１に準拠する。
本発明は、治療薬又は造影剤に結合させた本発明の抗体又は抗体の抗原結合部分を含む
、免疫複合体も提供する。
本発明は、本発明の抗体と、医薬的に許容され得る担体と、を含む、医薬組成物も提供
する。
本発明は、本発明の抗体ＶＨ、本発明の抗体ＶＬ、又は本発明の抗体ＶＨ及びＶＬをコ
ードしているポリヌクレオチドも提供する。
本発明は、本発明のポリヌクレオチドを含むベクターも提供する。
本発明は、本発明のベクターを含む宿主細胞も提供する。
本発明は、抗体が発現される条件下で本発明の宿主細胞を培養することと、宿主細胞よ
り産生された抗体を回収することと、を含む、抗体の産生方法も提供する。
本発明は、治療有効量の本発明の単離された抗体又は本発明の医薬組成物を、疾患を治
療するのに十分な時間にわたって、疾患の治療を必要としている患者に投与することを含
む、自己免疫疾患又は免疫介在性炎症性疾患の治療方法も提供する。
本発明は、本発明の抗体に結合する抗イディオタイプ抗体も提供する。
本発明は、本発明の抗体を含むキットも提供する。
ＣＤ１５４：抗体免疫複合体（ＩＣ）による血小板活性化に対する抗体Ｆｃの効果を示す図。可溶性ヒトＣＤ１５４（図中、ｓＣＤ４０Ｌとして示すｓｈＣＤ１５４）と抗ＣＤ１５４抗体５ｃ８（ＩｇＧ１アイソタイプ）（５ｃ８ＩｇＧ１ ＩＣ）とのＩＣは血小板を活性化したのに対し、ｓｈＣＤ１５４と、機能を欠失させたＩｇＧ１骨格のＩｇＧ１σ、ＩｇＧ１σ－ＹＴＥ、ＩｇＧ２σ、又はＩｇＧ２σ－ＹＴＥにクローン化した５ｃ８（それぞれ５ｃ８ＩｇＧ１ｚ、５ｃ８ＩｇＧ１ｚ－ＹＴＥ、５ｃ８ＩｇＧ２ｚ、又は５ｃ８ＩｇＧ２ｚ－ＹＴＥ）とのＩＣは効果を有しなかった。血小板活性化は、ＰＡＣ－１（ＰＡＣ－１抗体は、活性型のαＩＩｂβ３インテグリンの立体構造を特異的に認識する）及びＣＤ６２ｐ（Ｐ－セレクチンの表面への発現）を発現している血小板の合計の割合（％）として評価した。ＡＤＰ：陽性対照。ＰＢＳ：陰性対照。血小板の活性化について、５名の提供者を評価した。結果を各実験の平均±ＳＤとして示す。 ｓｈＣＤ１５４（図中ｓＣＤ４０Ｌ）と、エフェクター機能を欠失している（effector silent）ＩｇＧ２σ／κ抗ＣＤ１５４抗体Ｃ４ＬＢ５、Ｃ４ＬＢ８９、Ｃ４ＬＢ１８９、Ｃ４ＬＢ１９１、Ｃ４ＬＢ１９９、及びＣ４ＬＢ１５０との免疫複合体（ＩＣ）は血小板を活性化しないことを示す。血小板活性化を、ＰＡＣ－１及びＣＤ６２ｐを発現している血小板の合計の割合（％）として評価した。ｓｈＣＤ１５４と５ｃ８ＩｇＧ１（５ｃ８ＩｇＧ１ ＩＣ）とのＩＣは血小板を活性化した。ＡＤＰ：陽性対照。血小板の活性化について、５名の提供者を評価した。結果を各試験の平均±ＳＤとして示す。 ｓｈＣＤ１５４（ｓＣＤ４０Ｌ）と抗ＣＤ１５４抗体Ｃ４ＬＢ８９（ＩｇＧ２σ／κ）、Ｃ４ＬＢ２３１（ＩｇＧ１σ／κ）、及びＣ４ＬＢ２３２（ＩｇＧ１σ／κ）との免疫複合体（ＩＣ）は血小板を活性化しないことを示す。血小板活性化を、ＰＡＣ－１及びＣＤ６２ｐを発現している血小板の合計の割合（％）として評価した。５ｃ８－ＩｇＧ１ ＩＣは血小板を活性化した。この活性化は抗ＦｃγＩＩａ抗体により阻害されたことから、ＣＤ１５４／５ｃ８－ＩｇＧ１ ＩＣの血小板活性化は血小板上のＦｃγＲＩＩａにより介在されることが示される。ＡＤＰ：陽性対照。ＰＢＳ：陰性対照。血小板の活性化について、５名の提供者を評価した。結果を各試験の平均±ＳＤとして示す。 ＣＤ１５４及びＣ４ＬＢ８９の相互作用面を示す。ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３における芳香族残基Ｆ５５、Ｙ１０１、及びＹ１０２は、ほとんどの相互作用に関与する（残基付番は配列番号５９に従う）。Ｃ４ＬＢ８９の軽鎖は結合には関与しない。 Ｃ４ＬＢ８９と複合体形成したマーモセットＣＤ１５４の結晶構造から特定された、エピトープ及びパラトープの残基の二次元図面を示す。エピトープの残基を楕円で囲み、重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３におけるパラトープ残基を示す（図中、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３として示す）。抗体は、２つのＣＤ１５４モノマーＡ及びＢに同時に結合する。エピトープの残基付番はヒトＣＤ１５４（配列番号１）に準拠し、抗原結合部位の残基付番はＣ４ＬＢ８９（配列番号５９）の重鎖可変領域に準拠する。 ヒトＣＤ１５４（配列番号１、一番上の列）及びマーモセットＣＤ１５４（配列番号２、一番下の列）の第１～１８０残基のアラインメントを示す。このアラインメントにより、Ｃ４ＬＢ８９のエピトープ残基が、ヒト及びマーモセットのＣＤ１５１４間で保存されていることが示される。ＣＤ１５４モノマー１上のエピトープ残基には下線を付して、モノマー２上のエピトープ残基には二重下線を付している。 ヒトＣＤ１５４（配列番号１、一番上の列）及びマーモセットＣＤ１５４（配列番号２、一番下の列）の第１８１～２６１残基のアラインメントを示す。このアラインメントにより、Ｃ４ＬＢ８９のエピトープ残基が、ヒト及びマーモセットのＣＤ１５１４間で保存されていることが示される。ＣＤ１５４モノマー１上のエピトープ残基には下線を付して、モノマー２上のエピトープ残基には二重下線を付している。 ｓｈＣＤ１５４（図中ｓＣＤ４０Ｌ）と、ＩｇＧ１／κ抗ＣＤ１５４抗体Ｃ４ＬＢ２３７との免疫複合体（ＩＣ）は血小板を活性化しない一方、ｓｈＣＤ１５４と別のＩｇＧ１抗体５ｃ８は血小板を活性化することを示す。抗体単独では血小板活性化の効果を有しないことを、ＰＡＣ－１及びＣＤ６２ｐを発現している血小板の合計の割合（％）として評価した。ＡＤＰ：陽性対照。ＰＢＳ：陰性対照。血小板の活性化について、５名の提供者を評価した。結果を、各実験の平均±ＳＤとして示す。各群はｎ＝４とした。 ｓｈＣＤ１５４（図中ｓＣＤ４０Ｌ）と、Ｆｃ機能を欠失させたＣ４ＬＢ１１９との免疫複合体（ＩＣ）が、ＦｃγＲＩＩａに依存した方法で血小板を活性化させる一方、ｓｈＣＤ１５４と、ＩｇＧ１上に発現するＣ４ＬＢ１１９ ＶＨ／ＶＬドメイン（Ｃ４ＬＢ２８７）を有する抗体とのＩＣが、ＦｃγＲＩＩａに依存した方法で血小板を活性化したことを示す。ＡＤＰ：陽性対照。ＰＢＳ：陰性対照。 ｓｈＣＤ１５４（図中ｓＣＤ４０Ｌ）と、Ｆｃ機能を欠失させたＣ４ＬＢ９４との免疫複合体（ＩＣ）が、ＦｃγＲＩＩａに依存した方法で血小板を活性化させる一方、ｓｈＣＤ１５４と、ＩｇＧ１上に発現するＣ４ＬＢ９４ ＶＨ／ＶＬドメイン（Ｃ４ＬＢ２８９）を有する抗体とのＩＣが、ＦｃγＲＩＩａに依存した方法で血小板を活性化したことを示す。ＡＤＰ：陽性対照。ＰＢＳ：陰性対照。 ｓｈＣＤ１５４（図中ｓＣＤ４０Ｌ）と、Ｆｃ機能を欠失させたＣ４ＬＢ８３との免疫複合体（ＩＣ）が、中程度に血小板を活性化させる一方、ｓｈＣＤ１５４と、ＩｇＧ１（Ｃ４ＬＢ２８８）上に発現するＣ４ＬＢ８３ ＶＨ／ＶＬドメインを有する抗体とのＩＣが、ＦｃγＲＩＩａに依存した方法で血小板を活性化したことを示す。ＡＤＰ：陽性対照。ＰＢＳ：陰性対照。
本明細書に引用される特許及び特許出願を含む（ただしそれらに限定されない）全ての
刊行物は、参照によりそれらの全体が記載されているのと同様に、本明細書に援用される
。
本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を記載する目的でのみ使用され、限定を
意図するものではないと理解すべきである。特に断らない限り、本明細書において使用さ
れる全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野における当業者によって一
般的に理解されているものと同じ意味を有する。
本明細書及び特許請求の範囲において使用するところの単数形「ａ」、「ａｎｄ」、及
び「ｔｈｅ」は、文脈よりそうでない旨が明確に示されない限り、複数の対象物を含む。
本明細書に記載されているものと同様又は同等の任意の方法及び材料を、本発明の試験
を実施するために使用できるが、例示となる材料及び方法を本明細書に記載する。本発明
を説明及び特許請求する上で以下の用語が用いられる。
「特異的結合」又は「特異的に結合する」又は「結合する」とは、抗体が抗原又はかか
る抗原内部のエピトープに、他の抗原に対するより高い親和性で結合することを指す。典
型的には、抗体は、約１×１０－８Ｍ以下、例えば約１×１０－９Ｍ以下、約１×１０－
１０Ｍ以下、約１×１０－１１Ｍ以下、約１×１０－１１Ｍ以下、又は約１×１０－１２
Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）で抗原又はかかる抗原内部のエピトープに結合し、非特異的抗
原（例えばＢＳＡカゼイン）への結合に関しては、典型的には、そのＫＤより少なくとも
１００倍小さいＫＤで結合する。解離定数は標準的手法を用いて測定することができる。
しかし、抗原又は抗原内部のエピトープと特異的に結合する抗体は、他の関連抗原、例え
ばヒト又はサル、例えばカニクイザル（Macaca fascicularis）又はチンパンジー（Pan t
roglodytes）、又はコモンマーモセット（Callithrix jacchus）などの他の種由来の同様
の抗原（ホモログ）に対して交差反応性を有する可能性がある。単一特異性の抗体は、１
つの抗原又は１つのエピトープに特異的に結合するのに対し、二重特異性抗体は、２つの
異なるエピトープに特異的に結合する。
「中和」又は「中和する」又は「中和抗体」又は「抗体アンタゴニスト」又は「アンタ
ゴニスト」又は「拮抗性の」とは、ヒトＣＤ１５４の生物活性を部分的又は完全に阻害す
る抗体又は抗体の抗原結合部分を指す。中和抗体は、本明細書に記載のとおりのＣＤ１５
４の生物活性用のアッセイを用いて特定することができる。ヒトＣＤ１５４に特異的に結
合するアンタゴニスト抗体は、ヒトＣＤ１５４の生物活性を約２０％、３０％、４０％、
５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、
９８％、９９％、又は１００％阻害し得る。
「ＣＤ１５４」は、ヒトＣＤ１５４（ｈＣＤ１５４）（例えば、ヒトＣＤ４０Ｌ）タン
パク質を指す。ヒトＣＤ１５４の完全長のタンパク質のアミノ酸配列を配列番号１に示す
。ヒトＣＤ１５４は、細胞膜上ではＩＩ型膜タンパク質として、血漿中では可溶型として
の存在が確認されている。膜結合型のＣＤ１５４（membrane bound form）は、残基２３
～４６の間に位置する膜貫通ドメインと、の残基４７～２６１に及ぶ細胞外ドメインと、
を備える、配列番号１の残基１～２６１からなる。可溶型のヒトＣＤ１５４（ｓｈＣＤ１
５４）は、膜結合型がタンパク質分解によるプロセシングを受けることにより形成される
ものであり、配列番号１の残基１１３～２６１を含む（ｓｈＣＤ１５４アミノ酸配列を配
列番号４に示す）。膜結合型及び可溶型ＣＤ１５４はいずれも生理活性を有する三量体を
形成する。「ＣＤ１５４」は、単量体、二量体、三量体、膜結合型、及び可溶型、並びに
ヒトＣＤ１５４の天然に生じる変異体を含む、ＣＤ１５４の様々な形態を包含する。ヒト
ＣＤ１５４の可溶型タイマー（ｓｈＣＤ１５４タイマー（timer））は、それぞれが配列
番号４のアミノ酸配列を有する３つのポリペプチド鎖から構成される。
本明細書で使用される「抗体」は、広義が意図され、マウス、ヒト、ヒト化、及びキメ
ラモノクローナル抗体を含むモノクローナル抗体、抗体断片、二重特異性抗体又は多重特
異性抗体、二量体の、四量体の若しくは多量体の抗体、一本鎖抗体、抗体ドメイン、及び
必要とされる特異性の抗原結合部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の修飾された構
造も含む、免疫グロブリン分子を含む。「完全な抗体分子」は、複数のジスルフィド結合
により分子間が連結されている２本の重鎖（ＨＣ）及び２本の軽鎖（ＬＣ）、並びにそれ
らの多量体（例えば、ＩｇＭ）から構成される。各重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び重
鎖定常領域（ドメインＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３からなる）から構成される。各軽鎖は
、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び軽鎖定常領域（ＣＬ）から構成される。ＶＨ領域及びＶＬ領
域は、フレームワーク領域（ＦＲ）が散在しており相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼称され
る超可変領域位にさらに分類され得る。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末
端に向かって次の順：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、そして
ＦＲ４、と並ぶ３つのＣＤＲと４つのＦＲ断片とからなる。
「相補性決定領域（ＣＤＲ）」は、抗体における「抗原結合部位」である。ＣＤＲは、
様々な用語を用いて定義され得る：（ｉ）ＶＨ内に３つ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣ
ＤＲ３）及びＶＬ内に３つ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）存在する配列多様性
に基づく相補性決定領域（ＣＤＲ）（Ｗｕ ａｎｄ Ｋａｂａｔ，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ１
３２：２１１～５０，１９７０；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ
Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ
Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔ
ｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１）。（ｉｉ）ＶＨ
内に３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及びＶＬ内に３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）存在する「超可変
領域」、「ＨＶＲ」又は「ＨＶ」は、Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ（Ｃｈｏｔｈｉ
ａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１～１７，１９８７）により定
義される構造において超可変性である抗体可変ドメインの領域を指す。Ｉｎｔｅｒｎａｔ
ｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）データベース（ｈｔｔｐ：／／
ｗｗｗ＿ｉｍｇｔ＿ｏｒｇ）は、抗原結合部位についての標準化付番及び定義を提供する
。ＣＤＲ、ＨＶ、及びＩＭＧＴの表記間の対応関係については、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ
ａｌ．，Ｄｅｖ Ｃｏｍｐａｒａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２７：５５～７７，２００３に記
載されている。用語「ＣＤＲ」、「ＨＣＤＲ１」、「ＨＣＤＲ２」、「ＨＣＤＲ３」、「
ＬＣＤＲ１」、「ＬＣＤＲ２」、及び「ＬＣＤＲ３」は、本明細書において別途記載のな
い限り、上掲のＫａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、又はＩＭＧＴにより記載される方法のいず
れかにより定義されるＣＤＲを含む。
免疫グロブリンは、重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、５つの主要なクラス、
すなわちＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭに割り当てられ得る。ＩｇＡ及び
ＩｇＧは、アイソタイプＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇ
Ｇ４にさらに下位分類される。任意の脊椎動物種の抗体軽鎖は、その定常領域ドメインの
アミノ酸配列をもとに、２種類の明確に異なる種類、すなわちκ（カッパ）及びλ（ラム
ダ）のいずれかに分類され得る。
「抗体断片」又は「抗体の抗原結合部分」は、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、２
、及び３、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、２、及び３、重鎖可変領域（ＶＨ）、又
は軽鎖可変領域（ＶＬ）などといった、重鎖及び／又は軽鎖抗原結合部位を保持する免疫
グロブリン分子の部分を指す。抗体断片としては、よく知られているＦａｂ、Ｆ（ａｂ’
）２、Ｆｄ、及びＦｖ断片、並びに１つのＶＨドメインを構成するドメイン抗体（ｄＡｂ
）が挙げられる。ＶＨドメイン及びＶＬドメインは、合成リンカーを介して１つに連結さ
れることにより様々な種類の一本鎖抗体の設計を形成可能であり、ここでＶＨ／ＶＬドメ
インは、分子内で対形成するか、又はＶＨドメイン及びＶＬドメインが別々の一本鎖抗体
構築物によって発現される場合には分子間で対形成して、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）などの
一価の抗原結合部位又は二重特異性抗体を形成する。例えば、国際公開第１９９８／４４
００１号、同第１９８８／０１６４９号、同第１９９４／１３８０４号、同第１９９２／
０１０４７号に記載される。
「モノクローナル抗体」は、抗体重鎖からのＣ末端リシンの除去などの潜在的なよく知
られた代替物を除き、それぞれの重鎖及びそれぞれの軽鎖において単一のアミノ酸組成を
有する抗体集団を指す。モノクローナル抗体は、２つの異なる抗原エピトープに結合する
二重特異性のモノクローナル抗体以外は典型的には１つの抗原エピトープに結合する。モ
ノクローナル抗体は、抗体集団内に不均一なグリコシル化を有し得る。モノクローナル抗
体は、単一特異性若しくは多重特異性、又は一価、二価、若しくは多価であり得る。二価
抗体は、モノクローナル抗体という用語に含まれる。
「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体又
は抗体断片を指す（例えば、ＣＤ１５４に特異的に結合する単離された抗体は、ＣＤ１５
４以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。「単離された抗体」は、純
度８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％
、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％
、又は１００％などといった高純度に単離された抗体を包含する。
「Ｃｈｏｔｈｉａ残基」は、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ
ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２７３：９２７～４８，１９９７）に準拠して付番さ
れた抗体ＶＬ残基及びＶＨ残基である。
「ヒト化抗体」とは、抗原結合部位がヒト以外の種に由来しかつ可変領域フレームワー
クがヒト免疫グロブリン配列に由来する、抗体を指す。ヒト化抗体はフレームワーク領域
内に置換を含む可能性があることから、かかるフレームワークは、発現したヒト免疫グロ
ブリン又は生殖細胞系列遺伝子配列の完全な複製物でなくてもよい。
「ヒト抗体」とは、フレームワーク及び抗原結合部位の両方がヒト起源の配列に由来す
る重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を有する抗体を指す。抗体が定常領域又は定常領域の一
部を含む場合、定常領域もヒト起源の配列に由来する。
ヒト抗体は、抗体の可変領域がヒト生殖系列免疫グロブリン又は再編成された免疫グロ
ブリン遺伝子を使用する系から得られた場合のヒト起源の配列に「由来する」重鎖可変領
域又は軽鎖可変領域を含む。そのような系の代表的なものには、ファージ上に提示された
ヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリ、及び本明細書に記載されるヒト免疫グロブリン遺
伝子座を保有するマウス又はラットなどといったヒト以外の遺伝子導入動物を含む。「ヒ
ト抗体」は、例えば天然に存在する体細胞突然変異、又はフレームワーク若しくは抗原結
合部位、若しくはそれらの両方への意図的な置換の導入により、ヒト生殖系列又は再編成
された免疫グロブリン配列と比較したときにアミノ酸の相違を含み得る。典型的には、ヒ
ト抗体は、アミノ酸配列において、ヒト生殖系列又は再編成された免疫グロブリン遺伝子
によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８
４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９
４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である。いくつかの
場合では、「ヒト抗体」は、例えばＫｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏ
ｌ ２９６：５７～８６，２０００に記載されるヒトフレームワーク配列分析から得られ
たコンセンサスフレームワーク配列、又は例えばＳｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂ
ｉｏｌ ３９７：３８５～９６，２０１０及び国際公開第２００９／０８５４６２号）に
記載される、ファージ上に提示されたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリに組み込まれ
た合成ＨＣＤＲ３を含み得る。
単離されたヒト化抗体は合成品である。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列に由来す
るが、ファージディスプレイ組み込み合成ＣＤＲ及び／若しくは合成フレームワークなど
の系を用いて作製され得るものであり、又はインビトロ変異導入により抗体特性を向上さ
せることで、インビボでのヒト抗体生殖系列レパートリーでは発現されない抗体を得るこ
ともできる。
抗原結合部位がヒト以外の種に由来する抗体は、ヒト抗体の定義には含まれない。
「組換え抗体」としては、組換え法によって調製、発現、作製、又は単離される抗体及
びその他のタンパク質を含む。
本明細書で使用するとき、「エピトープ」は、抗体が特異的に結合する抗原の部分を指
す。エピトープは通常、アミノ酸又は多糖類側鎖のような部位の化学的に活性な（極性、
非極性又は疎水性など）表面基からなり、特定の三次元構造特性及び特定の電荷特性を有
し得る。エピトープは、立体配座の空間単位を形成する連続した及び／又は連続していな
いアミノ酸からなり得る。非連続的なエピトープでは、抗原の直鎖配列の異なる部分のア
ミノ酸が、タンパク質分子の折り畳みにより三次元空間で近接する。
「パラトープ」は、抗原に特異的に結合する抗体の部分を指す。パラトープは元々一つ
ながりのものであってもよく、又は一つながりの連続するアミノ酸ではなく抗体の隣接し
ていないアミノ酸同士の空間的な関係によって形成される非連続なものであってもよい。
「軽鎖パラトープ」及び「重鎖パラトープ」又は「軽鎖パラトープのアミノ酸残基」及び
「重鎖パラトープのアミノ酸残基」はそれぞれ、抗原と接触する抗体の軽鎖残基及び重鎖
残基を指し、あるいは概して「抗体パラトープ残基」は、抗原と接触するこれらの抗体ア
ミノ酸を指す。
「二重特異性」とは、２種の異なる抗原と特異的に結合する抗体、又は同じ抗原内の２
箇所の異なるエピトープと結合する抗体を指す。二重特異性抗体は、その他の関連する抗
原に対し交差反応性を有し得る、あるいは２つ以上の異なる抗原間で共有されるエピトー
プに結合し得る。
「多重特異性」とは、少なくとも２種の異なる抗原と特異的に結合する抗体、又は同じ
抗原内の少なくとも２箇所の異なるエピトープと結合する抗体を指す。多重特異性抗体は
、例えば、２種、３種、４種、若しくは５種の異なる抗原、又は同じ抗原内の異なるエピ
トープに結合し得る。
「～と併用して」は、薬剤又は治療薬を、ヒトなどの対象に混合物の状態で一緒に、単
独の薬剤として同時に、又は単独の薬剤として任意の順番で順次に投与できることを意味
する。
「ＣＤ１５４生物活性」は、ＣＤ１５４がその受容体ＣＤ４０に結合した結果として生
じる、任意の活性を指す。ＣＤ１５４生物活性には、例えば、ＣＤ１５４介在性のＣＤ４
０＋Ｂ細胞若しくは樹状細胞（ＤＣ）の活性化、又はＣＤ４０シグナル伝達経路の下流の
活性化があり得る。ＣＤ１５４生物活性は、ＩＣＡＭ－１の上方制御又はＢ細胞によるサ
イトカイン産生の増大、ＤＣ細胞によるＣＤ８０及び／若しくはＣＤ８６の表面発現の増
大又はサイトカイン分泌を評価することによるＣＤ１５４介在性のＤＣ活性化、あるいは
ＮＦ－κＢ－誘導性プロモーターの制御下で分泌型胎盤性アルカリホスファターゼ（ＳＥ
ＡＰ）を発現している細胞によるＳＥＡＰの分泌を測定するなどの、レポーター遺伝子ア
ッセイにより評価されるＣＤ４０シグナル伝達経路の活性化、を評価することによるＣＤ
１５４介在性のＢ細胞の増殖又はＢ細胞の活性化を測定するなどといった、周知の方法及
び本明細書に記載の方法を用い測定可能である。
「ベクター」は、生物システム内で複製可能な、又はこうした系間を移動することがで
きるポリヌクレオチドを意味する。ベクターポリヌクレオチドは、典型的には、生物シス
テム内でこれらのポリヌクレオチドの複製又は維持を促進するように機能する複製起点、
ポリアデニル化シグナル又は選択マーカーなどの要素を含んでいる。そのような生物シス
テムの例としては、細胞、ウイルス、動物、植物、及びベクターの複製を可能にする生物
学的要素を利用して再構成された生物システムを挙げることができる。ベクターを構成す
るポリヌクレオチドは、ＤＮＡ若しくはＲＮＡ分子又はこれらのハイブリッド分子であっ
てもよい。
「発現ベクター」は、発現ベクター中に存在するポリヌクレオチド配列によってコード
されるポリペプチドの翻訳を指示するために、生物システム又は再構成された生物システ
ムにおいて利用可能なベクターを意味する。
「ポリヌクレオチド」は、糖－リン酸骨格鎖又は他の同等の共有結合化学を介して共有
結合されたヌクレオチド鎖を含む分子を意味する。二本鎖及び一本鎖のＤＮＡ及びＲＮＡ
が、ポリヌクレオチドの典型例である。
「ポリペプチド」又は「タンパク質」は、ペプチド結合により連結されてポリペプチド
を形成する少なくとも２つのアミノ酸残基を含む分子を意味する。５０個未満のアミノ酸
からなる小分子ポリペプチドを「ペプチド」と呼称する場合もある。
本明細書では、表１に示すような従来の１文字及び３文字のアミノ酸コードを使用する
。
Figure 2022058414000001
組成物
本発明は、高親和性でＣＤ１５４に特異的に結合して、ＣＤ１５４の生物活性を効果的
に中和する、アンタゴニスト抗体を提供する。本発明は、ＣＤ１５４に特異的に結合する
抗体が血小板上のＦｃγＲＩＩａに対し結合すると血小板の活性化及び凝集、並びにそれ
に続く血栓塞栓症が生じるという現在の理解とは異なり、血小板活性化は、かかる抗体の
結合するＣＤ１５４エピトープにも依存することが本明細書において発見されたことに少
なくとも一部基づく。本明細書では、ＦｃγＲＩＩａに働きかけることが可能なＣＤ１５
４上の特定のエピトープに結合する本発明の抗体は、血小板の活性化を介在させないよう
に機能し得ることが発見されている。さらに、本発明の抗体は、所望により、望ましくな
い免疫賦活機能がさらに発動するのを防止するよう設計されたＦｃである。そのため、本
発明の抗体は、臨床環境下において、ＣＤ１５４に特異的に結合する既存の抗体と比較し
てより望ましい安全性プロファイルを有し得る。
ＣＤ１５４は、マウス、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）、及びヒトにおける自己免疫疾患、移
植片拒絶、及びその他の免疫関連性疾患において標的とされる。複数の第ＩＩ相試験にお
いて、ＣＤ１５４に特異的に結合する抗体は、インビボにおけるＣＤ１５４活性を有効に
ブロックし、疾患を寛解することが示されている。ＣＤ１５４アンタゴニストは、免疫応
答に対するその影響が他の全ての治療薬と異なる。ＣＤ１５４アンタゴニストだけが、マ
ウス及びサルの両方で実証されたとおり、機能的な免疫寛容を誘導し得る治療薬である。
マウスでは、実質的に全ての自己免疫疾患モデルがＣＤ１５４アンタゴニストにより有効
に寛解され得、長期寛解が観察された（Ｎｏｅｌｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ Ｎ Ｙ
Ａｃａｄ Ｓｃｉ ８１５：３８４～３９１，１９９７；Ｍａｃｋｅｙ ｅｔ ａｌ．，
Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ ６３：４１８～４２８，１９９８；Ｎｏｅｌｌｅ，Ａｇｅ
ｎｔｓ Ａｃｔｉｏｎｓ Ｓｕｐｐｌ ４９：１７～２２，１９９８；Ｑｕｅｚａｄａ
ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２２：３０７～３２８，２００４）
。
本発明は、配列番号１のＣＤ１５４に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体
又はその抗原結合部分を提供する。
本発明は、ＣＤ１５４に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原
結合部分も提供し、かかるＣＤ１５４はホモ三量体であり、抗体は、ホモ三量体中の第１
のＣＤ１５４モノマーについてはＣＤ１５４のアミノ酸残基１８２～２０７内で結合し、
ホモ三量体中の第２のＣＤ１５４モノマーについてはＣＤ１５４のアミノ酸残基１７６～
２５３内で結合し、ここで、残基付番は配列番号１に準拠する。
このような例となる抗体が抗体Ｃ４ＬＢ８９である。抗体Ｃ４ＬＢ２３５及びＣ４ＬＢ
２３６の可変領域は、Ｃ４ＬＢ８９の可変領域と比較すると、ＬＣＤＲ２においてアミノ
酸残基が１個異なることから、並びに、Ｃ４ＬＢ２３１及びＣ４ＬＢ２３２はＣ４ＬＢ８
９と同一のＶＨ／ＶＬ配列を有することから、これらの抗体がＣ４ＬＢ８９と同一のＣＤ
１５４エピトープにも結合することが予想される。残基１８２～２０７及び１７６～２５
３内でＣＤ１５４に結合する抗体は、ＦｃγＲＩＩａを含むＦｃγＲと協働する能力を有
する場合でさえ、血小板を活性化することが能力を有しない。したがって、これらの抗体
は、ＣＤ１５４に特異的に結合するその他のアンタゴニスト抗体と比較した場合に改良さ
れた安全性プロファイルを有し得る。
本発明は、配列番号１のヒトＣＤ１５４に特異的に結合するアンタゴニスト抗体又はそ
の抗原結合部分であって、配列番号１７の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１（ＳＹＧＩ
Ｓ）と、配列番号２３のＨＣＤＲ２（ＷＩＳＰＩＦＧＮＴＮＹＡＱＫＦＱＧ）と、配列番
号３０のＨＣＤＲ３（ＳＲＹＹＧＤＬＤＹ）とを含み、場合により、
ＨＣＤＲ１残基Ｓ１が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、又は
Ｖに変異しており、
ＨＣＤＲ１残基Ｉ４が、Ｍ、Ｌ、又はＶに変異しており、
ＨＣＤＲ１残基Ｓ５が、Ａに変異しており、
ＨＣＤＲ２残基Ｓ３が、Ａ、Ｔ、又はＶに変異しており、
ＨＣＤＲ２残基Ｐ４が、Ｖ、Ｔ、Ｌ Ｑ、又はＥに変異しており、
ＨＣＤＲ２残基Ｎ８が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、
Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ＨＣＤＲ２残基Ｔ９が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、
Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ＨＣＤＲ２残基Ｎ１０が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｒ、Ｓ
、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ＨＣＤＲ３残基Ｓ１が、Ａ又はＭに変異しており、
ＨＣＤＲ３残基Ｒ２が、Ａ、Ｓ、Ｑ、又はＫに変異しており、かつ
ＨＣＤＲ３残基Ｌ７が、Ｍに変異している、アンタゴニスト抗体又はその抗原結合部分
を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号３７の軽鎖相補性決定領域（ＬＣ
ＤＲ）１（ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ）と、配列番号４４のＬＣＤＲ２（ＹＡＮＳＬＱＳ）
と、配列番号５２のＬＣＤＲ３（ＱＱＳＤＳＩＰＷＴ）とを含み、場合により、
ＬＣＤＲ１残基Ｑ４が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｒ、Ｓ、
Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ＬＣＤＲ１残基Ｓ５が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、
Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ＬＣＤＲ１残基Ｓ７が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、
Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ＬＣＤＲ１残基Ｓ８が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、
Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ＬＣＤＲ２残基Ａ２が、Ｓに変異しており、
ＬＣＤＲ２残基Ｎ３が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、
Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ＬＣＤＲ２残基Ｓ４が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、
Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ＬＣＤＲ２残基Ｌ５が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、
Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ＬＣＤＲ２残基Ｑ６が、Ｅ、Ｄ、又はＮに変異しており、
ＬＣＤＲ２残基Ｓ７が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、
Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ＬＣＤＲ３残基Ｓ３が、Ａに変異しており、
ＬＣＤＲ３残基Ｄ４が、Ｎに変異しており、
ＬＣＤＲ３残基Ｓ５が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、
Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、かつ
ＬＣＤＲ３残基Ｉ６が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、又は
Ｖに変異している。
抗体Ｃ４ＬＢ８９とＣＤ１５４との複合体の結晶構造により、抗体はＶＨ残基のみでＣ
Ｄ１５４に結合することが明らかとなった。更なる分析により、上掲のとおり、抗体のＣ
ＤＲにおける特定の置換（表１９及び表２０に掲示）が、全ての複合体構造に、ひいては
抗体の特性に影響を与えることが予想外にも示された。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、
それぞれ、配列番号３６、４３、及び５１、
それぞれ、配列番号３７、４４、及び５２、
それぞれ、配列番号３８、４５、及び５３、
それぞれ、配列番号３９、４６、及び５４、
それぞれ、配列番号４０、４７、及び５５、
それぞれ、配列番号４１、４７、及び５６、
それぞれ、配列番号４２、４８、及び５７、
それぞれ、配列番号３７、４９、及び５２、又は
それぞれ、配列番号３７、５０、及び５２、の、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、
ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、それぞれ配列番号３７、４４、及び５２の
ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、それぞれ配列番号１７、２３、３０、３７
、４４、及び５２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及
びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、それぞれ配列番号１７、２３、３０、３７
、４９、及び５２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及
びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、それぞれ配列番号１７、２３、３０、３７
、５０、及び５２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及
びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体と、可溶性ヒトＣＤ１５４（ｓｈＣＤ１５４）
との免疫複合体は、血小板を活性化せず、ここで、血小板活性化は、血小板上のＰ－セレ
クチン表面発現により測定される。
血小板の活性化は、滑らかで非接着性の血小板を、生物学的に活性な物質を放出及び発
現して血漿タンパク質のフィブリノーゲンに対する結合能を獲得する、粘着性で突起を形
成した粒子へと変換する、よく知られているプロセスである。活性化は、重症動脈狭窄部
位で見られるような、高流体せん断ストレスによる物理的刺激の結果としても生じる（Ｑ
ｕｉｎｎ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ：ａｓｓｅｓ
ｓｍｅｎｔ，ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅ
ｓｓ，ｐｐ．３～２０）。血小板の活性化は、細胞内シグナル伝達経路の活性化をもたら
し、その結果、血小板表面のＰ－セレクチンの発現が上方制御され、フィブリノーゲンの
インテグリン受容体αＩＩｂβ３に対する結合親和性が増大する。したがって、血小板の
活性化は、Ｐ－セレクチンの表面発現の増大、又はプローブリガンド、例えば、ＰＡＣ－
１の、血小板上αＩＩｂβ３インテグリンに対する結合を、例えばフローサイトメトリー
を用い測定することにより測定され得る。本発明の抗体は、ｓｈＣＤ１５４と複合体を形
成しているかかる抗体が、Ｐ－セレクチンの表面発現を増大させない場合、又は、ｓｈＣ
Ｄ１５４により誘導されるプローブリガンド（例えば、ＰＡＣ－１）のαＩＩｂβ３イン
テグリンに対する結合を増加させる場合と比較して、Ｐ－セレクチンの表面発現と比較し
て統計的に有意な様式でプローブリガンド（例えば、ＰＡＣ－１）のαＩＩｂβ３インテ
グリンに対する結合を上昇させない場合に、ヒト血小板を活性化させない。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、次の特性のうちの少なくとも１つを有する
。
０．０３％のポリソルベートＰ２０及び１００μｇ／ｍＬのウシ血清アルブミンを含有
しているダルベッコリン酸緩衝生理食塩水にて、２５℃下でＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６
システムを用いＫＤを測定したときに、約５×１０－９Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）でＣＤ
１５４に結合する。
ＣＤ１５４介在性のヒトＢ細胞の増殖を、約２．７×１０－９Ｍ以下のＩＣ５０値で阻
害する。又は
分泌型胎盤性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）及びヒトＣＤ４０を安定的に発現す
るＨＥＫ２９３細胞において、ＮＦ－κＢ－誘導性インターフェロン－β（ＩＦＮ－β）
ミニマルプロモーター下、約２．１×１０－８Ｍ以下のＩＣ５０値で、ＳＥＡＰのＣＤ１
５４介在性の発現を阻害する。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、約５×１０－９Ｍ以下、約１×１０－９Ｍ
以下、約５×１０－１０Ｍ以下、約１×１０－１０Ｍ以下、約５×１０－１１Ｍ以下、又
は約１×１０－１１Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）でＣＤ１５４に結合する。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１５４に特異的に結合する抗体は、カニクイザル（Maca
ca fascicularis）ＣＤ１５４又はマーモセット（Callithrix jacchus）ＣＤ１５４と交
差反応する。
ヒト、カニクイザル又はマーモセットＣＤ１５４に対する抗体の親和性は、任意の好適
な方法を用い実験により測定することができる。こうした方法では、ＰｒｏｔｅＯｎ Ｘ
ＰＲ３６、Ｂｉａｃｏｒｅ ３０００又はＫｉｎＥｘＡ装置、ＥＬＩＳＡ、若しくは当業
者には周知である競合的結合アッセイを使用することができる。特定の抗体のＣＤ１５４
に対する親和性についての測定値は、異なる条件（例えば、容量オスモル濃度、ｐＨ）下
で測定した場合に異なり得る。したがって、親和性及び他の結合パラメータ（例えば、Ｋ
Ｄ、Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ）の測定は、典型的には、標準的な条件及び本明細書に記載される
緩衝液などの標準化緩衝液を用いて行われる。例えばＢｉａｃｏｒｅ ３０００又はＰｒ
ｏｔｅＯｎを用いた親和性測定での内部エラー（標準偏差（ＳＤ）として測定されるもの
）は典型的に、典型的な検出範囲内で測定した場合、５～３３％の範囲内であり得ること
が当業者には分かるであろう。したがって、用語「約」は、アッセイにおける典型的な標
準偏差を表す。例えば、ＫＤが１×１０－９Ｍの場合の典型的なＳＤは、±０．３３×１
０－９Ｍ以下である。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ＣＤ１５４介在性のヒトＢ細胞の増殖を、
約２．７×１０－９Ｍ以下のＩＣ５０値に阻害する。
Ｂ細胞の増殖アッセイでは、１×１０５個のヒト扁桃体Ｂ細胞を、１００ｎｇ／ｍＬの
組換ヒトＩＬ－２１と、ロイシンジッパー融合タンパク質として発現させた０．５μｇ／
ｍＬの三量体型組換可溶性ヒトＣＤ１５４と、最終容量２００μＬ／ウェルで０．０００
０６４～２５μｇ／ｍＬの範囲の抗ＣＤ１５４抗体と、を用い培養することができる。２
日間のインキュベート後、メチル（－３Ｈ）－チミジン（０．５μＣｉ／ウェル）を培養
物に添加し、終夜インキュベートした後、抗体のヒトＢ細胞の増殖に対する影響を測定す
ることができる。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、分泌型胎盤性アルカリホスファターゼ（Ｓ
ＥＡＰ）及びヒトＣＤ４０を安定的に発現するＨＥＫ２９３細胞において、ＮＦ－κＢ－
誘導性インターフェロン－β（ＩＦＮ－β）ミニマルプロモーター下、約２．１×１０－
８Ｍ以下のＩＣ５０値で、ＳＥＡＰのＣＤ１５４介在性の発現を阻害する。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、分泌型胎盤性アルカリホスファターゼ（Ｓ
ＥＡＰ）及びヒトＣＤ４０を安定的に発現するＨＥＫ２９３細胞において、ＮＦ－κＢ－
誘導性ＩＦＮ－βミニマルプロモーター下、約２．１×１０－８Ｍ～５．４×１０－１０
Ｍ以下のＩＣ５０値で、ＳＥＡＰのＣＤ１５４介在性の発現を阻害する。
使用可能な細胞は、例えば、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ細胞（Ｉｎｖｉｖｏ
Ｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）である。ヒトＣＤ１５４は、三量体型可溶性ＣＤ１
５４－ロイシンジッパー融合タンパク質として提供され得る。よく知られている方法を用
い、分泌型アルカリホスファターゼ由来のシグナルを検出することができ、並びに阻害に
ついてＩＣ５０を計算することもできる。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ＣＤ１５４ホモ三量体において、第１のＣ
Ｄ１５４モノマーと第２のＣＤ１５４モノマーとに同時に結合する。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号１のＣＤ１５４のアミノ酸残基１
８２～２０７内の、第１のＣＤ１５４モノマー中の少なくとも１、２、３、４、５、６、
７、又は８個のＣＤ１５４残基に結合する。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号１のＣＤ１５４のアミノ酸残基１
７６～２５３内の、第２のＣＤ１５４モノマー中の少なくとも１、２、３、４、５、６、
７、又は８個のＣＤ１５４残基に結合する。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、第１のＣＤ１５４モノマー内の残基Ｅ１８
２、Ｓ１８５、Ｑ１８６、Ａ１８７、Ｐ１８８、Ｓ２１４、Ａ２１５、及びＲ２０７に結
合し、ここで残基付番は配列番号１に準拠する。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、第２のＣＤ１５４モノマー中の残基Ｔ１７
６、Ｆ１７７、Ｃ１７８、Ｑ２２０、Ｓ２４８、Ｈ２４９、Ｇ２５０、及びＦ２５３に結
合し、ここで残基付番は配列番号１に準拠する。
「内の」は、抗体が、一つづきのアミノ酸１８２～２０７、１７６～３５４、又は１８
２～２０７、及び１７６～３５４内の残基のみに結合することを意味する。
このような例となる抗体が抗体Ｃ４ＬＢ８９である。抗体Ｃ４ＬＢ２３５及びＣ４ＬＢ
２３６の可変領域は、Ｃ４ＬＢ８９の可変領域と比較すると、ＬＣＤＲ２においてアミノ
酸残基が１個異なることから、並びに、Ｃ４ＬＢ２３１及びＣ４ＬＢ２３２はＣ４ＬＢ８
９と同一のＶＨ／ＶＬ配列を有することから、これらの抗体がＣ４ＬＢ８９と同一のＣＤ
１５４エピトープにも結合することが予想される。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、抗体のＶＨ中の残基であるパラトープ残基
によりヒトＣＤ１５４に結合する。
「パラトープ残基」は、抗体ＶＨ又はＶＬにおいてＣＤ１５４の残基から４Å以内に存
在する残基である。パラトープ残基は、抗体とＣＤ１５４との複合体の結晶構造から特定
できる。
抗原との接触により、ＶＬは関係なくＶＨ抗原結合部位残基のみでＣＤ１５４と結合す
る代表的な抗体は、抗体Ｃ４ＬＢ８９のＶＨ及びＶＬを含む抗体である。Ｃ４ＬＢ２３５
及びＣ４ＬＢ２３６の可変領域は、Ｃ４ＬＢ８９と比較すると、ＬＣＤＲ２においてアミ
ノ酸残基が１個異なることから、並びに、Ｃ４ＬＢ２３１及びＣ４ＬＢ２３２はＣ４ＬＢ
８９と同一のＶＨ／ＶＬ配列を有することから、これらの抗体がＶＨ残基のみでＣＤ１５
４に結合することも予想される。配列番号１の残基１８２～２０７若しくは１７６～３５
４内で、又はＣＤ１５４ホモ三量体中の第１のＣＤ１５４モノマー内の残基Ｅ１８２、Ｓ
１８５、Ｑ１８６、Ａ１８７、Ｐ１８８、Ｓ２１４、Ａ２１５及びＲ２０７、並びに第２
のＣＤ１５４モノマー内の残基Ｔ１７６、Ｆ１７７、Ｃ１７８、Ｑ２２０、Ｓ２４８、Ｈ
２４９、Ｇ２５０及びＦ２５３内でＣＤ１５４に結合する抗体は、ＦｃγＲＩＩａを含む
ＦｃγＲと協働する能力を有していたとしても血小板を活性化する能力を有しない。した
がって、これらの抗体は、ＣＤ１５４に特異的に結合するその他の抗体と比較して、より
向上された安全性を有し得る。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号５９の重鎖可変領域（ＶＨ）を含
み、場合により、ＶＨは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１
３、１４、又は１５個のアミノ酸置換を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号５９の重鎖可変領域（ＶＨ）を含
む。
それぞれ配列番号１７、２３、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を
含む抗体、又は配列番号５９のＶＨのＨＣＤＲ若しくは配列番号５９のＶＨを有する抗体
は、抗体ＶＨのみでＣＤ１５４と結合する。したがって、それぞれ配列番号５９のＶＨ、
又は配列番号１７、２３、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含むＶ
Ｈを任意の軽鎖可変領域（ＶＬ）配列と組み合わせることができ、得られる抗体のＣＤ１
５４に対する結合を本明細書に記載のアッセイを用い試験して、ＣＤ１５４に特異的に結
合する抗体を作製することができる。
例えば、それぞれ配列番号１７、２３、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣ
ＤＲ３を含むＶＨ、又は配列番号５９のＶＨを使用して、ＣＤ１５４に結合可能な２ドメ
イン特異的抗原結合断片を形成可能であるＶＬドメインをスクリーニングすることができ
る。スクリーニングは、例えば、国際公開第１９９２／０１０４７号に開示される階層的
２重コンビナトリアルアプローチを用いたファージディスプレイスクリーニング法によっ
て実現することが可能である。このアプローチでは、Ｈ鎖（例えば配列番号５９のＶＨ）
又はＬ鎖のいずれかのクローンを含む個別のコロニーを用いて、他方の鎖（Ｌ又はＨ）を
コードするクローンの完全なライブラリに感染させ、得られた２鎖特異的抗原結合ドメイ
ンを、本明細書に記載のものなどのファージディスプレイ法に基づきＣＤ１５４に対する
結合性及び拮抗活性についてスクリーニングする。
あるいは、配列番号５９のＶＨ、又はそれぞれ配列番号１７、２３、及び３０のＨＣＤ
Ｒ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含むＶＨを、既存のＣＤ１５４抗体又は本明細書に
記載のＣＤ１５４抗体のＶＬドメインと組み合わせてもよく、得られる抗体は、ＣＤ１５
４に対する結合性及び拮抗活性について試験される。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６５、６６、６７、６８、６９、
７０、７１、７２、又は７３の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、場合により、ＶＬは、１、
２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ
酸置換を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号５９のＶＨと、配列番号６５、６
６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、又は７３のＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６６、７２、又は７３の軽鎖可変
領域（ＶＬ）を含み、場合により、ＶＬは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０
、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸置換を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号５９のＶＨと、配列番号６６のＶ
Ｌとを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号５９のＶＨと、配列番号７２のＶ
Ｌとを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号５９のＶＨと、配列番号７３のＶ
Ｌとを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体はＦｃ領域に少なくとも１つの置換を含み、か
かる抗体はヒト血小板を活性化しない。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩ
Ｉｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、又はＦｃγＲＩＩＩｂに対する結合が低減されている。
「結合が低減されている」は、Ｆｃ領域に少なくとも１つの置換を有する本発明の抗体
のＦｃγＲ受容体に対する結合が、置換を有していない親抗体の、同じＦｃγＲ受容体に
対する結合と比較して、低減されていることを指す。「結合が低減されている」とは、結
合が少なくとも約１／１００、少なくとも約１／５００、少なくとも約１／１０００、少
なくとも約１／５０００、少なくとも約１／１０，０００、又は少なくとも約１／２０，
０００に低減されていることであり得る。実際には、特定のＦｃγＲに対する「結合の低
減」を示す抗体は、特定のＦｃγＲにより介在される統計的に有意なエフェクター機能を
有する抗体を指す。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、Ｆｃ領域に少なくとも１つの置換を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域における少なくとも１つの置換は、置換Ｌ２３４Ａ
、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｈ２６
８Ａ、Ａ３３０Ｓ、又はＰ３３１Ｓであり、残基付番はＥＵインデックスに準拠する。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、Ｆｃ領域に置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、
Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ａ３３０Ｓ、又はＰ３３１Ｓを含み、残基付番は
ＥＵインデックスに準拠する。
いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域における少なくとも１つの置換は、置換Ｖ２３４Ａ
、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０
９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、又はＰ３３１Ｓであり、残基付番はＥＵインデックスに準拠する。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、Ｆｃ領域に置換Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、
Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、又はＰ３３１Ｓを含み、残基付番は
ＥＵインデックスに準拠する。
本発明は、配列番号８０の重鎖と配列番号８１の軽鎖とを含み配列番号１のＣＤ１５４
に特異的に結合する、アンタゴニスト抗体、又はその抗原結合部分も提供する。
本発明は、配列番号８２の重鎖と配列番号８１の軽鎖とを含み配列番号１のＣＤ１５４
に特異的に結合するアンタゴニスト抗体、又はその抗原結合部分も提供する。
本発明は、配列番号８３の重鎖と配列番号８１の軽鎖とを含み配列番号１のＣＤ１５４
に特異的に結合するアンタゴニスト抗体、又はその抗原結合部分も提供する。
配列番号８０（ＩｇＧ１σ：Ｃ４ＬＢ２３１ ＨＣのＣ４ＬＢ８９のＶＨ）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＧＩＳＷＶＲＱ
ＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＳＰＩＦＧＮＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡ
ＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＲＹＹＧＤＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡ
ＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷ
ＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹ
ＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＳ
ＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＡＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹ
ＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥ
ＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭ
ＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬ
ＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱ
ＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号８１（Ｃ４ＬＢ８９及びＣ４ＬＢ２３１の軽鎖）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫ
ＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＡＮＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱ
ＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＤＳＩＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰ
ＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳ
ＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱ
ＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号８２（ＩｇＧ１σＹＴＥのＣ４ＬＢ８９のＶＨ）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＧＩＳＷＶＲＱ
ＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＳＰＩＦＧＮＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡ
ＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＲＹＹＧＤＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡ
ＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷ
ＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹ
ＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＳ
ＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＹＩＴＲＥＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＡＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹ
ＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥ
ＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭ
ＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬ
ＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱ
ＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号８３（ＩｇＧ２σのＣ４ＬＢ８９のＶＨ）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＧＩＳＷＶＲＱ
ＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＳＰＩＦＧＮＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡ
ＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＲＹＹＧＤＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡ
ＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷ
ＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹ
ＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＡＡＡＳＳＶＦＬ
ＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＡＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶ
ＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫ
ＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱ
ＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧ
ＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳ
ＬＳＰＧＫ
本発明の抗体の免疫エフェクターの特性は、当業者には既知の技術により、Ｆｃ修飾に
よって強化又はサイレンシングすることが可能である。例えば、Ｃ１ｑ結合、補体依存性
細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、貧食、細胞表面受容
体（例えば、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ））の下方制御などのＦｃエフェクター機能は、これ
らの活性に関与するＦｃの残基を修飾することによって提供及び／又は調節され得る。例
えば、Ｆｃ置換Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｈ２６
８Ｑ、Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１、又はＶ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／
Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ（国際公開第１１／０６
６５０１号）又はＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３
３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓを本発明の抗体に導入することもできる。
本発明の抗体の、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、
及びＦｃγＲＩＩＩｂに対する結合は、Ｆｃγ受容体の可溶性組換体又は細胞に伴う形態
を用い評価され得る。例えば、本発明の抗体の様々なＦｃγＲに対する相対的親和性及び
結合活性を評価する際、直接的又は間接的測定（例えば、競合的結合測定）を行うことが
できる。代表的なアッセイでは、プレート上に捕捉した可溶性ＦｃγＲに結合する被検抗
体は、１μｇ／ｍＬのビオチニル化ヒトＩｇＧ１と、抗原と予め複合体を形成させた被検
抗体の段階希釈物との競合的な結合を用い評価される。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依
存性細胞貪食（「ＡＤＣＰ」）及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）が低減されてい
る。
「抗体依存性細胞傷害」、「抗体依存性細胞介在性細胞傷害」、又は「ＡＤＣＣ」は、
エフェクター細胞で発現されるＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）を介し、抗体被覆標的細胞の、
ナチュラルキラー細胞、単球、マクロファージ、及び好中球などの溶解活性を有するエフ
ェクター細胞との相互作用に基づき、細胞死を誘導する機構である。例えば、ＮＫ細胞は
ＦｃγＲＩＩＩａを発現し、一方単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩ
ａを発現する。本発明の抗体のＡＤＣＣ活性を評価する際、抗体を免疫エフェクター細胞
と組み合わせて標的細胞に添加することもでき、免疫エフェクター細胞が抗原抗体複合体
により活性化されることで、標的細胞の細胞溶解が生じ得る。細胞溶解は、通常、溶解し
た細胞からの標識（例えば、放射性基質、蛍光染料、又は天然の細胞内タンパク質）の放
出によって検出される。そのようなアッセイ用のエフェクター細胞の例としては、末梢血
単核球（ＰＢＭＣ）及びＮＫ細胞が挙げられる。代表的な標的細胞としては、Ｄ１．１
Ｊｕｒｋａｔ細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－１０９１５（商標））又はＣＤ１５４
発現Ｔ細胞が挙げられる。
「抗体依存性細胞貪食作用」（「ＡＤＣＰ」）とは、例えばマクロファージ又は樹状細
胞などの貪食細胞による取り込みを通じ、抗体により被覆された標的細胞を排除する機構
を指す。ＡＤＣＰは、単球由来マクロファージをエフェクター細胞として用い、ＧＦＰ又
はその他の標識された分子を発現するよう設計されたＣＤ１５４を発現するＤ１．１ Ｊ
ｕｒｋａｔ細胞を標的細胞として用いることで評価できる。エフェクター細胞：標的細胞
比は例えば４：１とすることができる。エフェクター細胞を、標的細胞と共に、抗ＣＤ１
５４抗体を添加し又は添加せずに４時間インキュベートすることができる。インキュベー
ション後、細胞は、Ａｃｃｕｔａｓｅを用い剥離できる。マクロファージは、蛍光標識に
結合した抗ＣＤ１１ｂ抗体及び抗ＣＤ１４抗体により識別され得るが、貪食作用の割合（
％）は、標準的な方法を用いて、ＣＤ１１＋及びＣＤ１４＋マクロファージにおけるＧＦ
Ｐ蛍光の割合（％）に基づいて決定され得る。
「補体依存性細胞傷害」又は「ＣＤＣ」は、標的結合抗体のＦｃエフェクタードメイン
が補体成分Ｃ１ｑに結合してこれを活性化し、かかる補体成分Ｃ１ｑが次に補体カスケー
ドを活性化して標的細胞の細胞死を導く、細胞死を誘導する機構を指す。補体の活性化は
また、標的細胞表面に対する補体成分の沈着を生じさせて、白血球への補体受容体（例え
ば、ＣＲ３）の結合によって、ＡＤＣＣを容易にする。ＣＤ１５４発現細胞によるＣＤＣ
は、例えば、適切な培地にＪｕｒｋａｔ細胞を播種し、抗ＣＤ１５４抗体を混合物に添加
した後、プールしたヒト血清を添加することにより測定することができる。インキュベー
ト時間後、溶解した細胞の割合（％）は、標準法を用いＦＡＣＳアッセイにおいてヨウ化
プロピジウム染色細胞の割合（％）として検出することができる。
「ＡＤＣＣの低減」、「ＣＤＣの低減」、及び「ＡＤＣＰの低減」は、抗体により誘導
されるＡＤＣＣ、ＣＤＣ、及び／又はＡＤＣＰを指し、本明細書に記載のアッセイ及び米
国特許第８，８７１，２０４号に記載のアッセイなどのＡＤＣＣ、ＣＤＣ、及び／又はＡ
ＤＣＰを測定する標準アッセイ法において統計的に有意である。
所望の親和性及び中和プロファイルを有する本発明の抗体は、ヒトＣＤ１５４又はマー
モセットＣＤ１５４でのパニングによる、及び場合により更なる抗体親和性成熟による変
異体又は断片のライブラリから選択され得る。代表的なパニングキャンペーンにおいて、
ファージライブラリはマーモセットＣＤ１５４によりパニングされ得る。あるいは、本発
明の抗体は、ヒトＣＤ１５４若しくはマーモセットＣＤ１５４、又はこれらの両方により
マウスを免疫し、ヒトＣＤ１５４に対する結合についてハイブリドーマをスクリーニング
し、続いて本明細書に記載の方法を用い抗体の拮抗特性を評価することにより作製するこ
ともできる。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号５９のＶＨと、配列番号６６のＶ
Ｌとを含む抗体によるＣＤ１５４に対する結合に競合する。
特定のＶＨ及びＶＬ配列を含む本発明の抗体とのＣＤ１５４への特異的結合についての
競合は、周知の方法を用いてインビトロでアッセイすることができる。例えば、非標識抗
体の存在下での、ＭＳＤ Ｓｕｌｆｏタグ（商標）ＮＨＳ－エステル標識抗体の、ＣＤ１
５４への結合は、ＥＬＩＳＡ法によって評価することができ、又はＢｉａｃｏｒｅ分析法
若しくはフローサイトメトリーを用いて本発明の抗体との競合を示すことも可能である。
かかる抗体は、かかる抗体が、参照抗体のＣＤ１５４に対する結合を８０％以上、例えば
、８５％以上、９０％以上、又は９５％以上阻害するとき、ＣＤ１５４に対する結合につ
いて参照抗体（例えば、配列番号５９のＶＨと配列番号６６のＶＬとを含む抗体）と競合
する。
いくつかの実施形態では、配列番号５９のＶＨを国際公開第１９９３／０８２０７号、
国際公開第１９９４／１０３０８号、国際公開第１９９６／４０９１８号、国際公開第１
９９３／００９８１２号、国際公開第１９９９／０５１２５８号、国際公開第１９９５／
００６４８０号、国際公開第１９９５／００６４８１号、国際公開第１９９５／００６６
６６号、国際公開第２００１／００２０５７号、国際公開第１９９７／０１７４４６号、
国際公開第１９９９／０１２５６６号、国際公開第２００１／０６８８６０号、国際公開
第２００５／００３１７５号、国際公開第２００６／０３３７０２号、国際公開第２００
６／０３０２２０号、国際公開第２００８／１１８３５６号、国際公開第２０１２／０５
２２０５号、国際公開第２０１２／１３８７６８号、国際公開第２０１２／１３８７６８
号、国際公開第２０１３／０５５７４５号、国際公開第２０１３／０５６０６８号のいず
れかに記載のＶＬと組み合わせて、拮抗性の抗ＣＤ１５４抗体を作製することもできる。
得られる抗体の結合活性及び拮抗活性は、本明細書に記載のアッセイ及びプロトコルを用
い試験することができる。
本発明は、
それぞれ、配列番号１６、２２、及び２９、
それぞれ、配列番号１７、２３、及び３０、
それぞれ、配列番号１６、２４、及び３１、
それぞれ、配列番号１８、２５、及び３２、
それぞれ、配列番号１９、２６、及び３３、
それぞれ、配列番号２０、２７、及び３４、又は
それぞれ、配列番号２１、２８、及び３５
の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む、配列番号１のＣＤ１５４に特異
的に結合するアンタゴニスト抗体も提供する。
本発明は、
それぞれ、配列番号１６、２２、及び２９、
それぞれ、配列番号１７、２３、及び３０、
それぞれ、配列番号１６、２４、及び３１、
それぞれ、配列番号１８、２５、及び３２、
それぞれ、配列番号１９、２６、及び３３、
それぞれ、配列番号２０、２７、及び３４、又は
それぞれ、配列番号２１、２８、及び３５、
それぞれ、配列番号３６、４３、及び５１、
それぞれ、配列番号３７、４４、及び５２、
それぞれ、配列番号３８、４５、及び５３、
それぞれ、配列番号３９、４６、及び５４、
それぞれ、配列番号４０、４７、及び５５、
それぞれ、配列番号４１、４７、及び５６、
それぞれ、配列番号４２、４８、及び５７、
それぞれ、配列番号３７、４９、及び５２、又は
それぞれ、配列番号３７、５０、及び５２、の、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、
ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、それぞれ配列番号１６、２２、及び２９の
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３と、それぞれ配列番号３６、４３、及び５１の
ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３とを含み、あるいは配列番号５８のＶＨと、配
列番号６５のＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、それぞれ配列番号１７、２３、及び３０の
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３と、それぞれ配列番号３７、４４、及び５２の
ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３とを含み、あるいは配列番号５９のＶＨと、配
列番号６６のＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、それぞれ配列番号１６、２４、及び３１の
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３と、それぞれ配列番号３８、４５、及び５３の
ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３とを含み、あるいは配列番号６０のＶＨと、配
列番号６７のＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、それぞれ配列番号１８、２５、及び３２の
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３と、それぞれ配列番号３９、４６、及び５４の
ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３とを含み、あるいは配列番号６１のＶＨと、配
列番号６８のＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、それぞれ配列番号１９、２６、及び３３の
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３と、それぞれ配列番号４０、４７、及び５５の
ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３とを含み、あるいは配列番号６２のＶＨと、配
列番号６９のＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、それぞれ配列番号２０、２７、及び３４の
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３と、それぞれ配列番号４１、４７、及び５６の
ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３とを含み、あるいは配列番号６３のＶＨと、配
列番号７０のＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、それぞれ配列番号２１、２８、及び３５の
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３と、それぞれ配列番号４２、４８、及び５７の
ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３とを含み、あるいは配列番号６４のＶＨと、配
列番号７１のＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、それぞれ配列番号１７、２３、及び３０の
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３と、それぞれ配列番号３７、４９、及び５２の
ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３とを含み、あるいは配列番号５９のＶＨと、配
列番号７２のＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、それぞれ配列番号１７、２３、及び３０の
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３と、それぞれ配列番号３７、５０、及び５２の
ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３とを含み、あるいは配列番号５９のＶＨと、配
列番号７３のＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ＶＨ及びＶＬを含み、ＶＨは、配列番号５
８、５９、６０、６１、６２、６３、又は６４を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ＶＨ及びＶＬを含み、ＶＬは、配列番号６
５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、又は７３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号５８、５９、６０、６１、６２、
６３、又は６４のＶＨと、配列番号６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、
又は７３のＶＬとを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６５、６６、６７、６８、６９、
７０、７１、７２、又は７３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３アミノ酸
配列と、配列番号６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、又は７３のＶＬの
ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列と、を含み、ここでＣＤＲは、Ｋ
ａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ及び／又はＩＭＧＴにより定義されるものである。
表８、表９、及び表１４に示すＶＨ又はＶＬアミノ酸配列を含む本発明の抗体の変異体
は、本発明の範囲内のものである。例えば、変異体は、抗体特性に悪影響を及ぼさないＶ
Ｈ及び／又はＶＬ中に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、
１４、又は１５個のアミノ酸置換を含み得る。いくつかの実施形態では、配列相同性は、
本発明のＶＨ又はＶＬアミノ酸配列に対して約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％
、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％であり得る。
２つの配列間の同一性パーセントは、ギャップ数及び各ギャップの長さを考慮して、配
列により共有される同一の位置の数の関数である（すなわち、相同性の割合（％）＝同一
位置数／位置の総数×１００）。同一性パーセントは、２つの配列の最適なアライメント
を導くのに必要である。
２つのアミノ酸配列間の相同性（％）は、例えば、Ｅ．Ｍｅｙｅｒｓ ａｎｄ Ｗ．（
Ｍｉｌｌｅｒ，Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ ４，１１～１７（１９８８）の
アルゴリズムを使用して求めることもできる。同アルゴリズムは、ＡＬＩＧＮプログラム
（バージョン２．０）に組み込まれており、ＰＡＭ１２０重み付け残基テーブル、ギャッ
プ長ペナルティ１２、及びギャップペナルティ４を用いる。さらに、２つのアミノ酸配列
間の配列相同性は、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／＿ｗｗｗ＿ｇｃｇ＿
ｃｏｍで入手可能）のＧＡＰプログラムに組み込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎ及びＷｕ
ｎｓｃｈのアルゴリズム（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４～４５３（１９７０））
を、Ｂｌｏｓｓｕｍ ６２マトリックス又はＰＡＭ２５０マトリックスのいずれかで、ギ
ャップ重み（gap weight）１６、１４、１２、１０、８、６、又は４、長さ重み（length
weight）１、２、３、４、５、又は６で用い、求めることができる。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号５８、５９、６０、６１、６２、
６３、又は６４のＶＨと少なくとも９０％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、
９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％相同であるＶＨを含み、ここで、抗体は
、次の特性のうちの１つ以上を示す；
抗体と、ｓｈＣＤ１５４との免疫複合体が血小板を活性化せず、ここで、血小板活性化
は、血小板上のＰ－セレクチン表面発現により測定される；
実施例１の親和性測定に記載の実験デザインを用い、ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６シス
テムを用いＫＤを測定したときに、約５×１０－９Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）でＣＤ１５
４に結合する；
ＣＤ１５４介在性のヒトＢ細胞の増殖を、約２．７×１０－９Ｍ以下のＩＣ５０値で阻
害する。又は
分泌型胎盤性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）及びヒトＣＤ４０を安定的に発現す
るＨＥＫ２９３細胞において、ＮＦ－κＢ－誘導性インターフェロン－β（ＩＦＮ－β）
ミニマルプロモーター下、約２．１×１０－８Ｍ以下のＩＣ５０値で、ＳＥＡＰのＣＤ１
５４介在性の発現を阻害する。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６５、６６、６７、６８、６９、
７０、７１、７２、又は７３のＶＬと少なくとも９０％、９０％、９２％、９３％、９４
％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％が相同であるＶＬを含み、
ここで、抗体は、次の特性のうちの１つ以上を示す。
抗体と、ｓｈＣＤ１５４との免疫複合体が血小板を活性化せず、ここで、血小板活性化
は、血小板上のＰ－セレクチン表面発現により測定される；
実施例１の親和性測定に記載の実験デザインを用い、ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６シス
テムを用いＫＤを測定したときに、約５×１０－９Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）でＣＤ１５
４に結合する；
ＣＤ１５４介在性のヒトＢ細胞の増殖を、約２．７×１０－９Ｍ以下のＩＣ５０値で阻
害する。又は
分泌型胎盤性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）及びヒトＣＤ４０を安定的に発現す
るＨＥＫ２９３細胞において、ＮＦ－κＢ－誘導性インターフェロン－β（ＩＦＮ－β）
ミニマルプロモーター下、約２．１×１０－８Ｍ以下のＩＣ５０値で、ＳＥＡＰのＣＤ１
５４介在性の発現を阻害する。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号５８、５９、６０、６１、６２、
６３、又は６４のＶＨと少なくとも９０％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、
９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％相同であるＶＨと、少なくとも配列番号
６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、又は７３のＶＬと少なくとも９０％
、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１
００％相同であるＶＬと、を含み、ここで、抗体は、次の特性のうち１つ以上を示す：
抗体と、ｓｈＣＤ１５４との免疫複合体が血小板を活性化せず、ここで、血小板活性化
は、血小板上のＰ－セレクチン表面発現により測定される；
実施例１の親和性測定に記載の試験デザインを用い、ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６シス
テムを用いＫＤを測定したときに、約５×１０－９Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）でＣＤ１５
４に結合する；
ＣＤ１５４介在性のヒトＢ細胞の増殖を、約２．７×１０－９Ｍ以下のＩＣ５０値で阻
害する。又は
分泌型胎盤性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）及びヒトＣＤ４０を安定的に発現す
るＨＥＫ２９３細胞において、ＮＦ－κＢ－誘導性インターフェロン－β（ＩＦＮ－β）
ミニマルプロモーター下、約２．１×１０－８Ｍ以下のＩＣ５０値で、ＳＥＡＰのＣＤ１
５４介在性の発現を阻害する。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号５８のＶＨと少なくとも９０％、
９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１０
０％相同であるＶＨを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号５９のＶＨと少なくとも９０％、
９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１０
０％相同であるＶＨを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６０のＶＨと少なくとも９０％、
９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１０
０％相同であるＶＨを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６１のＶＨと少なくとも９０％、
９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１０
０％相同であるＶＨを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６２のＶＨと少なくとも９０％、
９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１０
０％相同であるＶＨを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６３のＶＨと少なくとも９０％、
９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１０
０％相同であるＶＨを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６４のＶＨと少なくとも９０％、
９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１０
０％相同であるＶＨを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６５のＶＬと少なくとも９０％、
９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１０
０％相同であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６６のＶＬと少なくとも９０％、
９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１０
０％相同であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６７のＶＬと少なくとも９０％、
９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１０
０％相同であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６８のＶＬと少なくとも９０％、
９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１０
０％相同であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６９のＶＬと少なくとも９０％、
９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１０
０％相同であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号７０のＶＬと少なくとも９０％、
９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１０
０％相同であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号７１のＶＬと少なくとも９０％、
９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１０
０％相同であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号７２のＶＬと少なくとも９０％、
９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１０
０％相同であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号７３のＶＬと少なくとも９０％、
９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１０
０％相同であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、抗体（the antibody the invention）本発明は、配列番号５
８のＶＨと配列番号６５のＶＬとを含み、ここで、場合により、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及
びＶＬの両方は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４
、又は１５個のアミノ酸置換を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号５９のＶＨと配列番号６６のＶＬ
とを含み、ここで、場合により、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、１、２、３、
４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸置換を
含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６０のＶＨと配列番号６７のＶＬ
とを含み、ここで、場合により、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、１、２、３、
４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸置換を
含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６１のＶＨと配列番号６８のＶＬ
とを含み、ここで、場合により、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、１、２、３、
４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸置換を
含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６２のＶＨと配列番号６９のＶＬ
とを含み、ここで、場合により、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、１、２、３、
４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸置換を
含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６３のＶＨと配列番号７０のＶＬ
とを含み、ここで、場合により、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、１、２、３、
４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸置換を
含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６４のＶＨと配列番号７１のＶＬ
とを含み、ここで、場合により、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、１、２、３、
４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸置換を
含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号５９のＶＨと配列番号７２のＶＬ
とを含み、ここで、場合により、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、１、２、３、
４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸置換を
含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号５９のＶＨと配列番号７３のＶＬ
とを含み、ここで、場合により、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、１、２、３、
４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸置換を
含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、表８、表９、及び表１４に示すＨＣＤＲ１
、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列、又
はそれらの保存的改変を含み、ここで抗体は、ＣＤ１５４に特異的に結合するアンタゴニ
スト抗体に望ましい官能特性を保持する。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、それぞれ配列番号１６、２２、及び２９の
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びにそれらの保存的改変を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、それぞれ配列番号１７、２３、及び３０の
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びにそれらの保存的改変を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、それぞれ配列番号１６、２４、及び３１の
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びにそれらの保存的改変を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、それぞれ配列番号１８、２５、及び３２の
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びにそれらの保存的改変を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、それぞれ配列番号１９、２６、及び３３の
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びにそれらの保存的改変を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、それぞれ配列番号２０、２７、及び３４の
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びにそれらの保存的改変を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、それぞれ配列番号（EQ ID）２１、２８、
及び３５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びにそれらの保存的改変を含む
。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、それぞれ配列番号３６、４３、及び５１の
ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びにそれらの保存的改変を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、それぞれ配列番号３７、４４、及び５２の
ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びにそれらの保存的改変を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、それぞれ配列番号３８、４５、及び５３の
ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びにそれらの保存的改変を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、それぞれ配列番号３９、４６、及び５４の
ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びにそれらの保存的改変を含む。
いくつかの実施形態では、抗体（the antibody the invention）本発明は、それぞれ配
列番号４０、４７、及び５５のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びにそれら
の保存的改変を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、それぞれ配列番号４１、４７、及び５６の
ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びにそれらの保存的改変を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、それぞれ配列番号４２、４８、及び５７の
ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びにそれらの保存的改変を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、それぞれ配列番号３７、４９、及び５２の
ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びにそれらの保存的改変を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、それぞれ配列番号３７、５０、及び５２の
ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びにそれらの保存的改変を含む。
特定のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ
３の配列と、これらの保存的改変とを含む本発明の抗体は、
次の特性のうちの１つ以上を示す：
抗体と、ｓｈＣＤ１５４との免疫複合体が血小板を活性化せず、ここで、血小板活性化
は、血小板上のＰ－セレクチン表面発現により測定される；
実施例１の親和性測定に記載の試験デザインを用い、ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６シス
テムを用いＫＤを測定したときに、約５×１０－９Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）でＣＤ１５
４に結合する；
ＣＤ１５４介在性のヒトＢ細胞の増殖を約２．７×１０－９Ｍ以下のＩＣ５０値で阻害
する；又は
分泌型胎盤性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）及びヒトＣＤ４０を安定的に発現す
るＨＥＫ２９３細胞において、ＮＦ－κＢ－誘導性インターフェロン－β（ＩＦＮ－β）
ミニマルプロモーター下、約２．１×１０－８Ｍ以下のＩＣ５０値で、ＳＥＡＰのＣＤ１
５４介在性の発現を阻害する。
「保存的改変」は、アミノ酸配列を含む抗体の結合特性に有意に影響しない又はかかる
結合特性を変更しないアミノ酸改変を指す。保存的改変は、アミノ酸置換、付加、及び欠
失を含む。保存的置換は、アミノ酸が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基に置き換えられ
る置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、明確に定義されており
、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、塩基性側鎖（例えば、リシン、
アルギニン、ヒスチジン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロ
イシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシ
ン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシン、トリプト
ファン）、芳香族側鎖（例えば、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン、チロ
シン）、脂肪族側鎖（例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、
セリン、スレオニン）、アミド（例えば、アスパラギン、グルタミン）、β分岐側鎖（例
えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、及び含硫黄側鎖（システイン、メチオニン
）を有する、アミノ酸を含む。さらに、アラニン・スキャニング変異導入法についてこれ
までに述べられているように（ＭａｃＬｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｐｈｙｓ
ｉｏｌ．Ｓｃａｎｄ．Ｓｕｐｐｌ．６４３：５５～６７，１９９８；Ｓａｓａｋｉ ｅｔ
ａｌ．，Ａｄｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．３５：１～２４，１９９８）、ポリペプチド内の任
意の天然残基をアラニンで置換することもできる。本発明の抗体へのアミノ酸置換は、例
えば、ＰＣＲによる変異導入（米国特許第４，６８３，１９５号）によるものなどの、よ
く知られている方法によって行われ得る。あるいは、変異体のライブラリは、例えば、ラ
ンダムコドン（ＮＮＫ）又は非ランダムコドン、例えば１１個のアミノ酸（Ａｌａ、Ｃｙ
ｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｌｙｓ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ）をコ
ードするＤＶＫコドンを用いる既知の手法を用い作製することができる。結果として生じ
る抗体変異体は、それらの特性に関して、本明細書に記載のアッセイを用いて試験するこ
とができる。
実施例で説明する実施形態は、１つが重鎖に由来し、１つが軽鎖に由来する１対の可変
領域を有しているが、当業者であれば代替的な実施形態は、１つの重鎖又は軽鎖の可変領
域を有してもよいということを認識するであろう。１つの可変領域を用いることで、例え
ばＣＤ１５４に特異的に結合可能な２ドメイン特異的抗原結合フラグメントを形成できる
可変ドメインについてスクリーニングを行うことができる。スクリーニングは、例えば、
本明細書に記載されるとおり国際公開第１９９２／０１０４７号に開示される階層的２重
コンビナトリアルアプローチを用いたファージディスプレイスクリーニング法によって実
現することが可能である。
本発明の抗体は、様々な技術を用い作製可能である。例えばＫｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍ
ｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５，１９７５のハイブリドーマ法を用いモ
ノクローナル抗体を作製することができる。ハイブリドーマ法において、ハムスター、ラ
ット、又はサルなどのマウス又は他の宿主動物を、可溶型のＣＤ１５４などのヒト、マー
モセット、又はカニクイザルＣＤ１５４若しくはＣＤ１５４断片で免疫し、続いて標準的
な方法を用いて免疫した動物由来の脾臓細胞を骨髄腫細胞と融合させてハイブリドーマ細
胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎ
ｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９～１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐ
ｒｅｓｓ，１９８６））。１個の不死化したハイブリドーマ細胞から発生したコロニーを
、結合特異性、交差反応性又はその欠如、及び抗原の親和性などの所望の特性を有する抗
体の生成についてスクリーニングする。
様々な宿主動物を使用して、本発明の抗体を生成することができる。例えば、Ｂａｌｂ
／ｃマウスを使用して、抗体を作製することができる。Ｂａｌｂ／ｃマウス及び他のヒト
以外の動物において作製された抗体を、様々な技術を用いてヒト化して、よりヒトに近い
配列を作製することもできる。ヒト受容体フレームワークの選択を含む例示的なヒト化技
術は既知であり、ＣＤＲ移植（米国特許第５，２２５，５３９号）、ＳＤＲ移植（米国特
許第６，８１８，７４９号）、リサーフェーシング（Resurfacing）（Ｐａｄｌａｎ，Ｍ
ｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２８：４８９～４９９，１９９１）、特異性決定残基リサーフェ
ーシング（米国特許公開第２０１００２６１６２０号）、ヒト適応（又はヒトフレームワ
ーク適応）（米国特許公開第２００９／０１１８１２７号）、超ヒト化（米国特許第７，
７０９，２２６号）、及びガイド選択（（Ｏｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ（２００５）Ｍｅ
ｔｈｏｄｓ ３６：６１～６８，２００５、米国特許第５，５６５，３３２号）を含む。
これらの方法では、親抗体のＣＤＲが、フレームワークＣＤＲの長さ、相同性、若しくは
カノニカル構造の情報、又はこれらの組み合わせに基づいた、親フレームワークに対する
総合的な相同性をもとに選択され得る、ヒトフレームワーク上に移植される。
ヒト化抗体は、国際公開第９０／００７８６１号及び国際公開第９２／２２６５３号に
記載される開示物などの技術により、結合親和性を保存するよう改変した、フレームワー
ク支持残基を組み込むことによって（復帰変異）、所望の抗原に対するそれらの選択性若
しくは親和性を向上させるようにさらに最適化させることもでき、又は任意のＣＤＲに変
異を導入して例えば抗体の親和性を向上させることにより、さらに最適化させることもで
きる。
それらのゲノムにヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子座を保有するトランスジェニック
マウスを使用して、標的タンパク質に対するヒト抗体を作製することができ、例えば、国
際公開第９０／０４０３６号、米国第６，１５０，５８４号、国際公開第９９／４５９６
２号、国際公開第０２／０６６６３０号、国際公開第０２／４３４７８号、Ｌｏｎｂｅｒ
ｇ ｅｔ ａｌ（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６～９；Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａ
ｌ（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．７：１３～２１；Ｇｒｅｅｎ ＆ Ｊａｋｏ
ｂｏｖｉｔｓ（１９９８）Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８：４８３～９５；Ｌｏｎｂｅｒｇ ａ
ｎｄ Ｈｕｓｚａｒ（１９９５）Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５～９３；
Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ（１９９１）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：１
３２３～１３２６；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ（１９９６）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ
ｎｏｌ．１４：８４５～８５１；Ｍｅｎｄｅｚ ｅｔ ａｌ（１９９７）Ｎａｔ．Ｇｅｎ
ｅｔ．１５：１４６～１５６；Ｇｒｅｅｎ（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ ２３１：１１～２３；Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ（１９９９）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．
５９：１２３６～１２４３；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ａｎｄ Ｔａｕｓｓｉｇ（１９９７
）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：４５５～４５８；国際公開第０２／
０４３４７８号）に記載されている。そのようなマウスにおける内因性免疫グロブリン遺
伝子座は、破壊又は欠失されてよく、相同又は非相同組換え、導入染色体（transchromos
ome）、又はミニ遺伝子を使用して、少なくとも１つの完全な又は部分的なヒト免疫グロ
ブリン遺伝子座をマウスゲノム内に挿入することができる。Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ（ｈｔｔ
ｐ：／／＿ｗｗｗ＿ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ＿ｃｏｍ）、Ｈａｒｂｏｕｒ Ａｎｔｉｂｏｄｉ
ｅｓ（ｈｔｔｐ：／／＿ｗｗｗ＿ｈａｒｂｏｕｒａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ＿ｃｏｍ）、Ｏｐ
ｅｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（ＯＭＴ）（ｈｔｔｐ：
／／＿ｗｗｗ＿ｏｍｔｉｎｃ＿ｎｅｔ）、ＫｙＭａｂ（ｈｔｔｐ：／／＿ｗｗｗ＿ｋｙｍ
ａｂ＿ｃｏｍ）、Ｔｒｉａｎｎｉ（ｈｔｔｐ：／／＿ｗｗｗ．ｔｒｉａｎｎｉ＿ｃｏｍ）
、及びＡｂｌｅｘｉｓ（ｈｔｔｐ：／／＿ｗｗｗ＿ａｂｌｅｘｉｓ＿ｃｏｍ）などの企業
は、上記の技術を用い、選択抗原を標的としたヒト抗体を提供するべく取り組んでいる。
ヒト抗体はファージディスプレイライブラリから選択することができ、ここでかかるフ
ァージは、ヒト免疫グロブリン、あるいは例えばＦａｂ、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、又は非
対化若しくは対化抗体可変領域などのそれらの部分を発現するよう改変されている（Ｋｎ
ａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２９６：５７～８６，２０００；Ｋ
ｒｅｂｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈ ２５４：６７～８４，２００
１；Ｖａｕｇｈａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４
：３０９～３１４，１９９６；Ｓｈｅｅｔｓ ｅｔ ａｌ．，ＰＩＴＡＳ（ＵＳＡ）９５
：６１５７～６１６２，１９９８；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ
Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２２７：３８１，１９９１；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ
Ｂｉｏｌ ２２２：５８１，１９９１）。本発明の抗体は、例えば、Ｓｈｉ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３９７：３８５～９６，２０１０及び国際公開第０９／０
８５４６２号）に記載されるバクテリオファージｐＩＸ被覆タンパク質との融合タンパク
質として抗体の重鎖及び軽鎖可変領域を発現するファージディスプレイライブラリから単
離され得る。ライブラリをヒト、マーモセット、及び／又はカニクイザルＣＤ１５４の結
合についてスクリーニングして、得られた陽性クローンの特性評価をさらに行い、Ｆａｂ
をクローンの溶解物から単離し、完全長のＩｇＧとして発現させることができる。ヒト抗
体を単離するためのかかるファージディスプレイ法は、例えば、米国特許第５，２２３，
４０９号、同第５，４０３，４８４号、及びＬａｄｎｅｒ ｅｔ ａｌ．の同第５，５７
１，６９８号、Ｄｏｗｅｒｅｔ ａｌ．の米国特許第５，４２７，９０８号、及び同第５
，５８０，７１７号、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙｅｔ ａｌ．の米国特許第５，９６９，１０
８号及び同第６，１７２，１９７号、並びにＧｒｉｆｆｉｔｈｓｅｔ ａｌ．の米国特許
第５，８８５，７９３号、同第６，５２１，４０４号、同第６，５４４，７３１号、同第
６，５５５，３１３号、同第６，５８２，９１５号及び同第６，５９３，０８１号に記載
されている。
免疫原性抗原の調製及びモノクローナル抗体の産生は、組換えタンパク質産生等の任意
の好適な技術を用いて実施することができる。免疫原性抗原は、精製タンパク質の形態、
又は全細胞又は細胞若しくは組織抽出物を含むタンパク質混合物の形態で動物に投与され
るか、あるいは抗原は、動物の身体内で、該抗原又はその一部をコードする核酸から新規
に形成されてよい。
本発明の抗体は、ヒト抗体又はヒト化抗体であってもよい。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ヒト生殖細胞系列遺伝子ＶＨ１＿１－６９
、ＶＨ４＿４－３９、ＶＨ１＿１－０２、又はＶＨ４＿４－５９に由来するＶＨフレーム
ワークを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ヒト生殖細胞系列遺伝子ＶＫＩＶ＿Ｂ３、
ＶＫＩ＿Ｏ１２、又はＶＬ３＿３Ｒに由来するＶＬフレームワークを含む。
本発明の抗体は、ＩｇＡ型、ＩｇＤ型、ＩｇＥ型、ＩｇＧ型又はＩｇＭ型であってもよ
い。本発明の抗体は、ＩｇＧ１型、ＩｇＧ２型、ＩｇＧ３型、ＩｇＧ４型であってもよい
。
本発明の抗体をさらに改変して、親抗体と比較して特性が類似している又は変更されて
いる改変抗体を作製することもできる。本発明の抗体では、ＶＨ、ＶＬ、ＶＨ及びＶＬ、
定常領域、ＶＨフレームワーク、ＶＬフレームワーク、又は６つのうち任意の若しくは全
てのＣＤＲを改変することもできる。
本発明の抗体は、ＣＤＲグラフトにより改変することもできる。本発明の抗体の１つ以
上のＣＤＲ配列を異なるフレームワーク配列にグラフトしてもよい。ＣＤＲグラフトは、
本明細書に記載の方法を用い行なうこともできる。いくつかの実施形態では、本発明の抗
体は、配列番号１６、１７、１８、１９、２０、又は２１のＨＤＣＲ１、配列番号２２、
２３、２４、２５、２６、２７、又は２８のＨＣＤＲ２、配列番号２９、３０、３１、３
２、３３、３４、又は３５のＨＣＤＲ３、を含むＶＨと、配列番号３６、３７、３８、３
９、４０、４１、又は４２のＬＣＤＲ１、配列番号４３、４４、４５、６、４７、４８、
４９、又は５０のＬＣＤＲ２及び／あるいは配列番号５１、５２、５３、５４、５５、５
６、又は５７のＬＣＤＲ３を含むＶＬと、を含み、ここで、ＶＨフレームワークはＶＨ１
＿１－６９、ＶＨ４＿４－３９、ＶＨ１＿１－０２、又はＶＨ４＿４－５９に由来せず、
ＶＬフレームワークはＶＫＩＶ＿Ｂ３、ＶＫＩ＿Ｏ１２、又はＶＬ３＿３Ｒに由来しない
。使用するフレームワーク配列は、生殖系列の抗体遺伝子配列を含む公的なＤＮＡデータ
ベース又は公開されているレファレンスから得ることもできる。例えば、ヒト重鎖及び軽
鎖可変領域遺伝子に関し、生殖系列ＤＮＡ及びコードされるタンパク質配列は、ＩＭＧＴ
（登録商標）、ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏ
ｒｍａｔｉｏｎシステム（登録商標）ｈｔｔｐ：／／＿ｗｗｗ－ｉｍｇｔ＿ｏｒｇに見る
ことができる。本発明の抗体において既存のフレームワーク配列と置き換えて使用するこ
とのできるフレームワーク配列は、Ｃ４ＬＢ５、Ｃ４ＬＢ８９、Ｃ４ＬＢ９４、Ｃ４ＬＢ
１５０、Ｃ４ＬＢ１８９、Ｃ４ＬＢ１９１、Ｃ４ＬＢ１９９、Ｃ４ＬＢ２３１、Ｃ４ＬＢ
２３２、Ｃ４ＬＢ３５、及びＣ４ＬＢ２５６に対し最も高い相同性（％）を示すものであ
る。
親抗体及び改変抗体のフレームワーク配列は、例えば、米国特許第６，１８０，３７０
号に記載のとおり、得られた抗体の抗原への結合を回復及び／又は向上させる復帰変異に
よりさらに改変され得る。親抗体及び改変抗体のフレームワーク配列は、フレームワーク
領域内の１つ以上の残基又はさらには１つ以上のＣＤＲ領域に変異を導入することにより
さらに改変してＴ細胞エピトープを除去することで、抗体のもつ潜在的な免疫原性を除去
することもできる。このアプローチは「脱免疫」とも呼ばれ、米国特許公開第２００３０
１５３０４３号に詳述されている。
本発明の抗体のＣＤＲ残基を変異させて、対象とする抗体の結合特性のうち１つ以上を
向上させることもできる。部位特異的変異導入又はＰＣＲ介在性変異導入を実施して、変
異（複数可）を導入することもでき、抗体の結合、又は他の対象とする機能特性に対する
影響は、本明細書に記載のとおり、かつ実施例において提供されるとおり、インビトロ又
はインビボで評価することができる。導入可能な代表的な置換は、上掲のとおり保存的な
改変である。さらに、典型的には、ＣＤＲ領域内の１、２、３、４、又は５個以上の残基
が変更される。
本発明の抗体にＦｃ置換を行い抗体の半減期を調節することもできる。例えば、置換Ｍ
２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅのうち１つ以上を導入して、得られる抗体の半減
期を延長することもできる（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈ
ｅｍ ２８１：２３５１４～２４０，２００６）。
さらに、本発明の抗体を、グリコシル化、異性化、脱グリコシル化等の反応によって、
あるいはポリエチレングリコール部分の付加（ＰＥＧ化）及び脂質化等の自然界では生じ
ない共有結合修飾等の反応によって翻訳後修飾してもよい。こうした修飾はインビボある
いはインビトロで行われ得る。例えば、本発明の抗体にポリエチレングリコールを融合さ
せる（ＰＥＧ化）することによって薬物動態のプロファイルを向上させることができる。
融合は当業者に既知の方法によって行われ得る。治療用抗体をＰＥＧと融合させると、機
能は干渉されずに薬物動態が強化されることが示されている（Ｋｎｉｇｈ ｅｔ ａｌ．
，Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ １５：４０９～１８，２００４；Ｌｅｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃ
ｙｔｏｋｉｎｅ １６：１０６～１９，２００１；Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅ
ｉｎ Ｅｎｇ．１６：７６１～７０，２００３）。
安定性、選択性、交差反応性、親和性、免疫原性、又は他の望ましい生物学的若しくは
生物物理学的特性を改善するように修飾される、本発明の抗体又はその断片は発明の範囲
内である。抗体の安定性は、分子内力及び分子間力の中でも特に（１）固有の安定性に影
響を及ぼす個々のドメインのコアパッキング、（２）ＨＣとＬＣとのペアリングに影響す
るタンパク質／タンパク質の界面相互作用、（３）極性及び荷電残基の埋め込み、（４）
極性及び荷電残基の水素（Ｈ）結合ネットワーク、並びに（５）表面電荷及び極性残基の
分布、などの多くの因子によって影響される（Ｗｏｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂ
ｉｏｌ ３０５：９８９～１０１０，２００１）。ある場合においては、構造を不安定化
させる可能性のある残基は、抗体の結晶構造に基づいて、あるいは場合によっては分子モ
デリングによって特定することが可能であり、また、抗体の安定性に対するこれらの残基
の作用は、特定された残基に変異を含む変異体を作製及び評価することにより試験するこ
とができる。示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）で測定する場合、抗体の安定性を高める方法
の１つは、変性の中点温度（Ｔｍ）を高くすることである。一般に、タンパク質のＴｍは
、その安定性と相関し、溶液中でのアンフォールディングし易さ及び変性し易さ、並びに
そのタンパク質のアンフォールディングし易さに応じた分解プロセスとは逆相関する（Ｒ
ｅｍｍｅｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｐｈａｒｍ．，１３：３６～４６，２０００）。多
数の研究では、ＤＳＣで熱安定性として測定された配合物の物理的安定性のランク付けと
他の方法で測定された物理的安定性との間に相関があることが発見されている（Ｇｕｐｔ
ａ ｅｔ ａｌ．，ＡＡＰＳ ＰｈａｒｍＳｃｉ ５Ｅ８，２００３；Ｚｈａｎｇ ｅｔ
ａｌ．，Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ ９３：３０７６～８９，２００４；Ｍａａ ｅｔ
ａｌ．，Ｉｎｔ Ｊ Ｐｈａｒｍ １４０：１５５～６８，１９９６；Ｂｅｄｕ－Ａｄｄ
ｏ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ ２１：１３５３～６１，２００４；Ｒｅｍｍｅ
ｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ １５：２００～８，１９９７）。配合研究で
は、ＦａｂのＴｍが、対応するｍＡｂの長期物理的安定性と密接な関係があることを示唆
している。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、二重特異性抗体である。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、多重特異性抗体である。
ＣＤ１５４に特異的に結合する本発明の単一特異性抗体は、二重特異性抗体として設計
することもでき、このような抗体も本発明の範囲内に包含される。本発明の抗体のＶＬ領
域及び／又はＶＨ領域は、公開された方法を用いて、ＴａｎｄＡｂ（登録商標）などの構
造として一本鎖二重特異性抗体（国際公開第１９９９／５７１５０号、米国特許公開第２
０１１／０２０６６７２号）、又は米国特許第５，８６９，６２０号、国際公開第１９９
５／１５３８８号、同第１９９７／１４７１９号、又は同第２０１１／０３６４６０号に
開示されるものなどの構造として二重特異的ｓｃＦｖとして設計することもできる。
本発明の抗体のＶＬ領域及び／又はＶＨ領域を、二重特異性の完全長の抗体として設計
することも可能であり、かかる抗体の結合手はそれぞれ別個の抗原又はエピトープに結合
する。このような二重特異性抗体は、米国特許第７，６９５，９３６号、国際公開第２０
０４／１１１２３３号、米国特許出願公開第２０１０／００１５１３３号、同第２００７
／０２８７１７０号、国際公開第２００８／１１９３５３号、米国特許出願公開第２００
９／０１８２１２７号、同第２０１０／０２８６３７４号、同第２０１１／０１２３５３
２号、国際公開第２０１１／１３１７４６号、国際公開第２０１１／１４３５４５号、又
は米国特許出願公開第２０１２／０１４９８７６号に記載のものなどの技法を用い、２つ
の抗体重鎖間のＣＨ３相互作用を調節して二重特異性抗体を生成することにより作製する
こともできる。
例えば、二重特異性抗体は、国際公開第２０１１／１３１７４６号に記載の方法に従っ
て、無細胞環境下、インビトロにおいて、２つの単一特異性ホモ二量体抗体のＣＨ３領域
中にそれぞれに異なる（asymmetrical）変異を導入し、ジスルフィド結合を異性化させる
還元条件下において、２つの親単一特異性ホモ二量体抗体から二重特異性ヘテロ二量体抗
体を形成することにより生成されてもよい。この方法では、２つの単一特異性の二価抗体
が、ＣＨ３ドメインにヘテロ二量体の安定性を増進させる特定の置換を有するよう設計す
る。これらの抗体を、ヒンジ領域におけるシステインがジスルフィド結合異性化を受ける
のに十分な還元条件下において共にインキュベートすることで、Ｆａｂアーム交換により
二重特異性抗体が作製される。インキュベート条件は、最適には、非還元条件に戻されて
もよい。使用され得る例示的な還元剤は、２－メルカプトエチルアミン（２－ＭＥＡ）、
ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、ジチオエリスリトール（ＤＴＥ）、グルタチオン、トリ
ス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、Ｌ－システイン、及びβ－メルカ
プトエタノールであり、好ましくは、２－メルカプトエチルアミン、ジチオスレイトール
、及びトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンからなる群から選択される還元剤であ
る。例えば、少なくとも２０℃の温度において、少なくとも２５ｍＭの２－ＭＥＡの存在
下又は少なくとも０．５ｍＭのジチオスレイトールの存在下で、ｐＨ５～８、例えば、ｐ
Ｈ７．０又はｐＨ７．４において、少なくとも９０分のインキュベートを用いることがで
きる。
二重特異性抗体の第１の重鎖及び第２の重鎖に使用され得るＣＨ３の変異の例は、Ｋ４
０９Ｒ及び／又はＦ４０５Ｌである。
本発明の抗体のＶＬ及び／又はＶＨ領域が組み込まれ得る更なる二重特異性の構造は、
例えば、二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ）（国際公開第２００９／１３４７７
６号）であり、あるいは様々な二量体形成ドメインを含みロイシンジッパー又はコラーゲ
ン二量体形成ドメインなどの異なる特異性を有する２つの抗体アームにコネクトする構造
（国際公開第２０１２／０２２８１１号、米国特許第５，９３２，４４８号、米国特許第
６，８３３，４４１号）である。ＤＶＤは、ＶＨ１－リンカー－ＶＨ２－ＣＨ構造を有す
る重鎖と、ＶＬ１－リンカー－ＶＬ２－ＣＬ構造を有する軽鎖とを含む完全長の抗体であ
り、リンカーは任意のものである。
本発明は、特定のＶＨ配列及びＶＬ配列を有する配列番号１のＣＤ１５４に特異的に結
合するアンタゴニスト抗体も提供し、ここで、抗体ＶＨは第１のポリヌクレオチドにより
コードされ、抗体ＶＬは第２の合成ポリヌクレオチドによりコードされる。ポリヌクレオ
チドは相補的デオキシ核酸（complementary deoxynucleic acid）（ｃＤＮＡ）であって
よく、好適な宿主における発現のためコドン最適化することができる。コドン最適化はよ
く知られている技術である。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体ＶＨ又はＶＬをコードしているポリヌクレオチ
ドは、配列番号７６、７７、７８、又は７９の配列を含む。
配列番号７６（Ｃ４ＬＢ２３１のＶＨをコードしている）
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＧＣＣ
ＡＧＣＧＴＧＧＧＣＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＣＧＧＧＣＣＡＧＣＣ
ＡＧＡＧＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＴＡＣＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣ
ＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＣＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＴＡＣＧＣＣＡＡＣＡＧＣ
ＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＴ
ＣＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣ
ＣＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＡＧＣＧＡＣＡＧＣ
ＡＴＣＣＣＣＴＧＧＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡ
ＡＧ
配列番号７７（Ｃ４ＬＢ２３１のＶＬをコードしている）
ＣＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＣＧＣＣＧＡＡＧＴＧＡＡＧＡＡＡ
ＣＣＣＧＧＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＧ
ＧＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＡＧＣＴＡＣＧＧＣＡＴＣＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣ
ＣＣＣＡＧＧＡＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＣＴＧＧＡＴＣＡＧＣＣＣＣ
ＡＴＣＴＴＣＧＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＣＴＡＣＧＣＣＣＡＧＡＡＡＴＴＣＣＡＧＧＧＣＡ
ＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＧＣＣＧＡＣＧＡＧＡＧＣＡＣＣＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡ
ＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＧＧＡＧＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧ
ＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＧＡＡＧＣＣＧＧＴＡＣＴＡＣＧＧＣＧＡＣＣＴＧＧＡＣＴ
ＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＧＴＣＣＴＣＴ
配列番号７８（Ｃ４ＬＢ１９１のＶＨをコードしている）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＴＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧ
ＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＣＧＣＣＧＡＡＧＴＧＡＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＧＣＣＡＧＣＡ
ＴＧＡＡＧＧＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＧＡ
ＣＴＡＣＴＡＣＡＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＧＧＣＣＣＣＡＧＧＣＣＡＧＧＧＡ
ＣＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴＧＧＧＡＣＧＧＴＴＣＡＡＣＣＣＣＡＡＣＡＧＣＧＧＣＧＡＣＡ
ＣＣＡＡＣＧＧＣＧＣＣＣＡＧＡＡＡＴＴＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＧＡＣ
ＣＣＧＧＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＴＣＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＡＣＣ
ＣＧＧＣＴＧＣＧＧＡＧＣＧＡＣＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＣＡＣＴＧＴＧＣＣＡ
ＧＡＧＡＧＧＧＣＧＡＧＣＴＧＧＣＣＧＧＣＡＴＣＴＴＣＴＴＣＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧ
ＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣＡＧＴＧＴＣＣＡＧＣ
配列番号７９（Ｃ４ＬＢ１９１のＶＬをコードしている）
ＡＧＣＴＡＣＧＡＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＣＡＧＣＧＴＧＴＣＣＧＴＧＴＣＴ
ＣＣＴＧＧＣＣＡＧＡＣＣＧＣＣＡＧＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＡＧＣＧＧＣＧＡＣＡＡＧＣ
ＴＧＧＧＣＧＡＣＡＡＡＴＡＣＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＣＣＡＣＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧ
ＣＣＡＧＡＧＣＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＴＧＡＴＣＴＡＣＣＡＧＧＡＣＣＧＧＡＡＧＡＧＧ
ＣＣＣＡＧＣＧＧＣＡＴＣＣＣＣＧＡＧＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＡＡＣＡＧＣＧ
ＧＣＡＡＣＡＣＣＧＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＣＡＧＧＣＣＡＴ
ＧＧＡＣＧＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＧＣＡＧＣ
ＡＣＣＧＴＧＧＴＧＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧ
本発明は、本発明の抗体重鎖可変領域、抗体軽鎖可変領域、抗体重鎖、及び／又は抗体
軽鎖のいずれかをコードしているポリヌクレオチド単離物も提供する。特定の代表的なポ
リヌクレオチドを本明細書に開示するが、遺伝コードの縮重又は所与の発現系におけるコ
ドンの好ましさを考慮すると、本発明の抗体をコードする他のポリヌクレオチドも本発明
の範囲内に含まれる。代表的なポリヌクレオチドは、例えば、配列番号７６、７７、７８
、及び７９に示す配列を有するポリヌクレオチドである。本発明の抗体のＶＨ若しくはＶ
Ｌ又はそれらの断片をコードするポリヌクレオチド配列は、意図される宿主細胞における
ヌクレオチド配列の発現を可能にする、プロモーター又はエンハンサーなどの１つ又は２
つ以上の制御因子に操作可能に連結され得る。ポリヌクレオチドはｃＤＮＡであってよい
。
本発明は、本発明のポリヌクレオチドを含むベクターも提供する。そのようなベクター
は、プラスミドベクター、ウイルスベクター、バキュロウイルス発現ベクター、トランス
ポゾンベースのベクター、又は任意の手段によって所与の生物又は遺伝子的バックグラウ
ンドに本発明の合成ポリヌクレオチドを導入するのに適した任意の他のベクターであって
よい。例えば、任意に定常領域に連結される本発明の抗体の軽鎖及び／又は重鎖可変領域
をコードするポリヌクレオチドは、発現ベクターに挿入される。軽鎖及び／又は重鎖は、
同じ又は異なる発現ベクターにクローン化され得る。免疫グロブリン鎖をコードするＤＮ
Ａセグメントは、免疫グロブリンポリペプチドの発現を確実にする発現ベクター（複数可
）内の制御配列に操作可能に連結されてよい。そのような制御配列は、シグナル配列、プ
ロモーター（例えば、天然に会合する又は異種プロモーター）、エンハンサー因子、及び
転写終結配列を含み、抗体を発現するように選択された宿主細胞と適合性があるように選
択される。ベクターを適切な宿主内に組み込んだなら、組み込んだポリヌクレオチドがコ
ードしているタンパク質を高レベルで発現させるのに適した条件下で宿主を維持する。
好適な発現ベクターは、典型的には、エピソームとして、又は宿主染色体ＤＮＡの不可
欠な部分として、宿主生物において複製可能である。通常、発現ベクターは、所望のＤＮ
Ａ配列で形質転換されたこれらの細胞の検出を可能にするため、アンピシリン耐性、ヒグ
ロマイシン耐性、テトラサイクリン耐性、カナマイシン耐性、又はネオマイシン耐性など
の選択マーカーを含む。
好適なプロモーター及びエンハンサー因子は、当該技術分野において既知である。真核
細胞における発現について、例示的なプロモーターとしては、軽鎖及び／又は重鎖免疫グ
ロブリン遺伝子プロモーター及びエンハンサー因子、サイトメガロウイルス最初期プロモ
ーター（cytomegalovirus immediate early promoter）、単純ヘルペスウイルスチミジン
キナーゼプロモーター、ＳＶ４０初期及び後期プロモーター、レトロウイルス由来の長鎖
末端反復配列に存在するプロモーター、マウスメタロチオネイン－Ｉプロモーター、並び
に様々な当該技術分野に既知の組織特異的プロモーターが挙げられる。適切なベクター及
びプロモーターの選択は、当業者の技量の範囲内である。
数多くの好適なベクター及びプロモーターが当業者に既知であり、多くは、対象とする
組換え構築物を作製するために市販されている。例えば以下のベクターを提供する。細菌
系：ｐＢｓ、ｐｈａｇｅｓｃｒｉｐｔ、ＰｓｉＸ１７４、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ
、ｐＢｓ ＫＳ、ｐＮＨ８ａ、ｐＮＨ１６ａ、ｐＮＨ１８ａ、ｐＮＨ４６ａ（Ｓｔｒａｔ
ａｇｅｎｅ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃａｌｉｆ．，ＵＳＡ）；ｐＴｒｃ９９Ａ、ｐＫＫ２２
３－３、ｐＫＫ２３３－３、ｐＤＲ５４０、及びｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｕｐ
ｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）。真核細胞系：ｐＷＬｎｅｏ、ｐＳＶ２ｃａｔ、ｐＯＧ４４
、ＰＸＲ１、ｐＳＧ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）ｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧ、及びｐ
ＳＶＬ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）。
本発明は、本発明の１つ以上のベクターを含む宿主細胞も提供する。「宿主細胞」は、
ベクターが導入された細胞を指す。当然のことながら、用語「宿主細胞」は、対象とする
特定の細胞だけでなく、そのような細胞の子孫並びに対象とする特定の細胞から作製され
た安定な細胞株をも指すものと理解される。変異又は環境による影響のいずれかにより、
後の世代において特定の修飾が生じる可能性があるため、そのような後代は親細胞と同一
ではない可能性があるが、本明細書で使用される用語「宿主細胞」の範囲内には依然とし
て含まれる。そのような宿主細胞は、真核細胞、原核細胞、植物細胞、又は古細菌（arch
eal）細胞であってよい。
原核宿主細胞の例は、大腸菌、バチルス・ズブチルス（Bacillus subtilis）などの桿
菌、及びサルモネラ（Salmonella）、セラチア（Serratia）、並びに様々なシュードモナ
ス（Pseudomonas）種などの他の腸内細菌科のものである。酵母などの他の微生物も発現
に有用である。好適な酵母宿主細胞の例は、サッカロミセス（Saccharomyces）（例えば
、Ｓ．セレビジアエ（S. cerevisiae））及びピキア（Pichia）である。例示的な真核細
胞は、哺乳動物、昆虫、鳥類、又は他の動物由来のものであってもよい。哺乳類真核細胞
としては、不死化細胞株（例えばハイブリドーマ）又は骨髄腫細胞株（例えばＳＰ２／０
（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）、
Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＣＲＬ－１５８１）、ＮＳ０（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅ
ｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）、Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ，
Ｗｉｌｔｓｈｉｒｅ，ＵＫ、ＥＣＡＣＣ Ｎｏ．８５１１０５０３）、ＦＯ（ＡＴＣＣ
ＣＲＬ－１６４６）及びＡｇ６５３（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８０）マウス細胞株）が挙
げられる。例示的なヒト骨髄腫細胞株は、Ｕ２６６（ＡＴＴＣ ＣＲＬ－ＴＩＢ－１９６
）である。他の有用な細胞系としては、ＣＨＯ－Ｋ１ＳＶ（Ｌｏｎｚａ Ｂｉｏｌｏｇｉ
ｃｓ（Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ））、ＣＨＯ－Ｋ１（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－６１）
、又はＤＧ４４などの、チャイニーズハムスターの卵巣（ＣＨＯ）細胞に由来するものが
挙げられる。
本発明は、抗体が発現される条件下で本発明の宿主細胞を培養することと、かかる宿主
細胞より産生された抗体を回収することと、を含む、本発明の抗体の産生方法も提供する
。抗体を製造して精製する方法は当該技術分野において周知である。合成されたら（化学
的又は組換えのいずれか）、全抗体、それらの二量体、個々の軽鎖及び／若しくは重鎖、
又はＶＨ及び／若しくはＶＬなどの他の抗体断片を、硫酸アンモニウム沈殿、親和性カラ
ム、カラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）精製、ゲル電
気泳動など（一般に、Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ（Ｓｐ
ｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎ．Ｙ．，（１９８２）を参照）などの標準的な手順によ
り精製することができる。対象とする抗体は、実質的に純粋なものであってよく、例えば
、細胞残屑、対象抗体以外の巨大分子などの混入物を含まず、例えば、純度が少なくとも
約８０％～８５％、純度が少なくとも約８５％～９０％、純度が少なくとも約９０％～９
５％、又は純度が少なくとも約９８％～９９％以上であり得る。
本発明は、
抗体のＶＨをコードしている第１のポリヌクレオチドと、抗体のＶＬをコードしている
第２のポリヌクレオチドと、を発現ベクターに組み込むことと、
宿主細胞を発現ベクターで形質転換させることと、
ＶＬ及びＶＨが発現し、抗体を形成する条件下で、培養培地中で宿主細胞を培養するこ
とと、
宿主細胞又は培養培地からかかる抗体を回収することと、を含む、配列番号１のＣＤ１
５４に特異的に結合する拮抗性抗体を産生する方法も提供する。
本発明の特定のＶＨ配列又はＶＬ配列をコードしているポリヌクレオチドを、標準的な
分子生物学的手法を用いベクターに組み込むこともできる。宿主細胞の形質転換、培養、
抗体発現、及び精製は、周知の方法を用いて行われる。
治療方法
本発明のＣＤ１５４に特異的に結合するアンタゴニスト抗体、例えば、抗体Ｃ４ＬＢ５
、Ｃ４ＬＢ８９、Ｃ４ＬＢ９４、Ｃ４ＬＢ１５０、Ｃ４ＬＢ１８９、Ｃ４ＬＢ１９１、Ｃ
４ＬＢ１９９、Ｃ４ＬＢ２３１、Ｃ４ＬＢ２３２、Ｃ４ＬＢ３５、及びＣ４ＬＢ２３６を
、任意の状態又は疾患の治療及び／又は予防に使用することもでき、ここで、ＣＤ１５４
の作用を拮抗することは、治療上有効であり得るものであり、かつ疾患の症状を低減し得
るものである。これらの例としては、アレルギー、自己免疫、癌、移植、ＧＶＨＤ、炎症
及びその他の状態、特に、耐性の誘導及び／又は液性免疫の抑制が治療として望ましい治
療が挙げられる。本発明の抗体により治療され得る疾患は、関節炎、全身性エリテマトー
デス（ＳＬＥ）、炎症性腸疾患、移植、腎移植、皮膚移植、骨髄移植、移植片対宿主病（
ＧＶＨＤ）、免疫性血小板減少症（ＩＴＰ）、多発性硬化症、甲状腺炎、Ｉ型糖尿病、又
はアテローム性動脈硬化症などの免疫介在性炎症性疾患又は自己免疫疾患である。
ＣＤ１５４－ＣＤ４０相互作用の単なるブロッキングを超えて、抗ＣＤ１５４療法は免
疫寛容の誘導を導く（Ｇｏｒｄｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ ４７：１１９９
～１２０６，１９８８）；Ｍａｒｋｅｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉ
ｏｎ ６４：３２９～３３５，１９９７；Ｊａｒｖｉｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓ
ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ７６：１３７５～１３７９，２００３；Ｑｕｅｚａｄａ ｅｔ
ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０２：１９２０～１９２６，２００３；Ｆｒｌｅｔａ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ２６：７２～８４，２００３；Ｅｌｓｔｅｒ ｅｔ
ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ７２：１４７３～１４７８，２００１；Ｂｅ
ｎｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ １１：７１５～７
２０，２００２；Ｗｅｋｅｒｌｅ ａｎｄ Ｓｙｋｅｓ，Ａｎｎｕａｌ ｒｅｖｉｅｗ
ｏｆ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２００１．５２：３５３～３７０１９；Ｃａｍｉｒａｎｄ ｅ
ｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ７３：４５３～４６１，２００２）。
本発明は、治療有効量の本発明の抗体を、免疫介在性炎症性疾患又は自己免疫疾患を治
療するのに十分な時間にわたって、免疫介在性炎症性疾患又は自己免疫疾患の治療を必要
としている対象に投与することを含む、免疫介在性炎症性疾患又は自己免疫疾患の治療方
法も提供する。
本発明は、治療有効量の本発明の抗体を、関節炎を治療するのに十分な時間にわたって
、関節炎の治療を必要としている対象に投与することを含む、関節炎の治療方法も提供す
る。
いくつかの実施形態では、関節炎は、若年性関節炎、関節リウマチ、乾癬性関節炎、ラ
イター症候群、強直性脊椎炎、又は痛風性関節炎である。
本発明は、治療有効量の本発明の抗体を、狼瘡を治療するのに十分な時間にわたって、
狼瘡の治療を必要としている対象に投与することを含む、狼瘡の治療方法も提供する。
いくつかの実施形態では、狼瘡は、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）又は皮膚エリテ
マトーデス（ＣＬＥ）である。
いくつかの実施形態では、対象はループス腎炎を有する。
本発明は、治療有効量の本発明の抗体を、炎症性腸疾患を治療するのに十分な時間にわ
たって、炎症性腸疾患の治療を必要としている対象に投与することを含む、炎症性腸疾患
の治療方法も提供する。
いくつかの実施形態では、炎症性腸疾患は、クローン病である。
いくつかの実施形態では、炎症性腸疾患は、潰瘍性大腸炎である。
「治療」は、治癒を目的とした処置（therapeutic treatment）を指す。治療を必要と
している個体としては、障害又は障害の兆候を有するとして診断された対象が挙げられる
。治療され得る対象としては、障害を有する傾向があるもの又は障害に対し感受性を有す
るもののうち、かかる障害が予防され得るものも挙げることができる。有益な又は所望の
臨床結果としては、検出可能であろうと又は検出不可能であろうと、症状の緩和、疾患の
程度の軽減、安定した（すなわち、悪化しない）疾患状態、疾患の進行の遅延又は鈍化、
疾患状態の改善又は緩和、及び寛解（部分的であろうと又は全体的であろうと）が挙げら
れる。有益な臨床結果としては、治療を受けた対象における、例えば、Ｂ細胞又は樹状細
胞の増殖の低減、炎症性サイトカイン、接着分子、プロテアーゼ、免疫グロブリン（例え
ば、ＣＤ４０を担持する細胞はＢ細胞である場合）、これらの組み合わせの減少、抗炎症
性タンパク質の産生増大、自己反応性細胞数の低減、免疫寛容の増強、自己反応性細胞の
生存阻害、及び／又はＣＤ４０を発現している細胞がＣＤ１５４による刺激を受けること
で介在される１種以上の症状の低減が挙げられる。
臨床応答は、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）スキャン、Ｘ線透視撮影、コンピューター断層撮
影（ＣＴ）スキャン、フローサイトメトリー、又は蛍光標示式細胞分取器（ＦＡＣＳ）分
析、組織診断、肉眼所見、及びＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、及びクロマトグラフィーなどにより
検出可能な変化を含むがこれらに限定されない血液化学法などといった、スクリーニング
技法を用い評価され得る。
本発明の方法に使用され得る抗体の例は、表２、表３、表４、表５、表６、表７、表８
、表９、表１３、及び表１４に示すとおりのＶＨ、ＶＬ、ＨＣＤＲ及び／又はＬＣＤＲ領
域と、抗体Ｃ４ＬＢ５、Ｃ４ＬＢ８９、Ｃ４ＬＢ９４、Ｃ４ＬＢ１５０、Ｃ４ＬＢ１８９
、Ｃ４ＬＢ１９１、Ｃ４ＬＢ１９９、Ｃ４ＬＢ２３１、Ｃ４ＬＢ２３２、Ｃ４ＬＢ３５、
及びＣ４ＬＢ２３６と、を含む。
本発明の方法を用いて任意の動物分類に属する対象を治療することができる。治療され
得る対象の例としては、ヒト、齧歯類、イヌ、ネコ、及び家畜などの哺乳動物が挙げられ
る。
本発明の抗体はまた、かかる治療のための薬剤の調製においても有用であり得るもので
あり、薬剤は、本明細書に定められる投薬量で投与するために調製される。
本発明の抗体は、第２の治療薬と併用して投与され得る。
第２の治療薬は、有用であることが既知であるあらゆる薬剤又は薬剤の組み合わせ、あ
るいはこれまで自己免疫疾患及び炎症性疾患の治療に使用されてきた又は現在使用されて
いるものなどの、自己免疫疾患及び炎症性疾患のためのあらゆる既知の治療薬であり得る
。このような治療法及び治療薬としては、外科術又は外科手技（例えば、脾摘出、リンパ
節郭清、甲状腺摘除術、プラズマフェレーシス、白血球アフェレーシス（leukophoresis
）、細胞、組織又は臓器移植、消化器外科手術（intestinal procedures）、及び臓器か
ん流など）、放射線療法、例えば、ステロイド療法及び非ステロイド療法、ホルモン療法
、サイトカイン療法、皮膚病薬による治療（例えば、アレルギー、接触性皮膚炎、及び乾
癬などの皮膚の状態の治療に使用される外用薬）、免疫抑制療法、並びにその他の抗炎症
性モノクローナル抗体療法などの治療法が挙げられる。
第２の治療薬は、コルチコステロイド、抗マラリア薬、免疫抑制剤、細胞毒性剤、又は
Ｂ細胞調製剤であり得る。
いくつかの実施形態では、第２の治療薬は、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプ
レドニゾロン、デフラザコート、ヒドロキシクロロキン、アザチオプリン、メトトレキサ
ート、シクロホスファミド、ミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）、ミコフェノール酸
ナトリウム、シクロスポリン、レフルノミド、タクロリムス、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標
）（リツキシマブ）、又はＢＥＮＬＹＳＴＡ（登録商標）（ベリムマブ）である。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体を第２の治療薬と組み合わせて投与する。代表
的な第２の治療薬は、コルチコステロイド、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、サ
リチレート、ヒドロキシクロロキン、スルファサラジン、細胞毒性剤、免疫抑制剤、免疫
調節機能のある抗体、メトトレキサート、シクロホスファミド、ミゾリビン、クロラムブ
シル、シクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ５０６；ＰｒｏＧｒａｆｒＭ）、ミコフェノ
ール酸モフェチル、及びアザチオプリン（６－メルカプトプリン）、シロリムス（ラパマ
イシン）、デオキシスパガリン、レフルノミド、及びそのマロノニトリロアミド（malono
nitriloamide）類似体、抗ＣＴＬＡ４抗体及びＩｇ融合体、抗Ｂリンパ球刺激因子抗体（
例えば、ＬＹＭＰＨＯＳＴＡＴ－ＢＴＭ）及びＣＴＬＡ４－Ｉｇ融合（ＢＬｙＳ－ｌｇ）
、抗ＣＤ８０抗体、抗Ｔ細胞抗体、例えば、抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４、コルチコ
ステロイド、例えば、クロベタゾール、ハロベタゾール、ヒドロコルチゾン、トリアムシ
ノロン、ベタメタゾン、フルオシノール（fluocinole）、フルオシノニド、プレドニゾン
、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、例
えば、スルファサラジン、メサラミン含有薬剤（５－ＡＳＡ剤として知られる）、セレコ
キシブ、ジクロフェナク、エトドラク、フェノプロフェン（fenprofen）、フルルビプロ
フェン、イブプロフェン、ケトプロフェン、メクロフェナマート（meclofamate）、メロ
キシカム、ナブメトン、ナプロキセン、オキサプロジン、ピロキシカム、ロフェコキシブ
、サリチラート、スリンダク、及びトルメチン、ホスホジエステラーゼ－４阻害剤、抗Ｔ
ＮＦα抗体ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標）（インフリキシマブ）、ＳＩＭＰＯＮＩ（登録
商標）（ゴリムマブ）、及びＨＵＭＩＲＡ（登録商標）（アダリムマブ）、サリドマイド
、又はレナリドミドである。
本発明の抗体を、第２の治療剤と組み合わせて、同時、順次、又は別々に投与すること
もできる。
治療効果又はＲＡ（Treatment effectiveness or RA）は、米国リウマチ学会による診
断基準、欧州リウマチ学会による診断基準、又は任意の他の診断基準により定義される臨
床応答に基づき測定されるとおりの有効性を用い、評価することができる。例えば、Ｆｅ
ｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．３８：７２７～
３５ ａｎｄ ｖａｎ Ｇｅｓｔｅｌ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ
Ｒｈｅｕｍ．３９：３４～４０を参照されたい。
投与／医薬組成物
本発明は、本発明のＣＤ１５４に特異的に結合するアンタゴニスト抗体及び医薬的に許
容される担体の医薬組成物を提供する。治療用途では、抗体本発明（the antibodies the
invention）は、医薬的に許容され得る担体中の活性成分として有効量の抗体を含有する
医薬組成物として調製することができる。用語「担体」は、活性化合物と共に投与される
希釈剤、補助剤、賦形剤、又はビヒクルを指す。そのようなビヒクルは、落花生油、大豆
油、鉱物油、ゴマ油などの、石油、動物、植物、又は合成物起源のものを含む、水及び油
などの液体であってよい。例えば、０．４％生理食塩水及び０．３％グリシンを用いるこ
とができる。これらの溶液は滅菌され、一般には粒子状物質を含まない。これらは、通常
の周知の滅菌法（例えば、濾過）によって滅菌することができる。この組成物には、生理
学的条件に近づけるために必要とされる医薬的に許容される補助物質、例えばｐＨ調整剤
及び緩衝剤、安定化剤、増粘剤、潤滑剤及び着色剤などを含有させることができる。その
ような医薬製剤中の本発明の分子又は抗体の濃度は幅広く異なってもよく、即ち約０．５
重量％未満から、通常は少なくとも約１重量％まで、最大で５重量％、１０重量％、１５
重量％、２０重量％、２５重量％、３０重量％、３５重量％、４０重量％、４５重量％、
又は５０重量％までであってよく、また、選択される具体的な投与方法に従って、必要と
される用量、流体体積、粘度などに主に基づいて選択される。好適なビヒクル及び製剤（
他のヒトタンパク質、例えばヒト血清アルブミンを含む）は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏ
ｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２
１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔｒｏｙ，Ｄ．Ｂ．ｅｄ．，Ｌｉｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉ
ａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ ２００６，Ｐａｒ
ｔ ５，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ ｐｐ６９１～１
０９２に記載され、特にｐｐ．９５８～９８９を参照されたい。
本発明の方法における本発明の抗体の投与方法は、当該技術分野においてよく知られて
いるように、非経口投与、例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内若しくは皮下、経粘膜
（経口、鼻腔内、膣内、直腸）、又は当業者に理解される他の手段などの任意の好適な経
路であり得る。
本発明の抗体を、例えば、静脈内（ＩＶ）注入又はボーラス注射により非経口的に、筋
肉内又は皮下又は腹腔内になど任意の適当な経路によって対象に投与することができる。
静脈内注入は、例えば、１５、３０、６０、９０、１２０、１８０、又は２４０分にわた
って、あるいは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２時間与えら
れてもよい。
免疫介在性炎症性疾患又は関節リウマチなどの自己免疫疾患を有する患者に与える用量
は、治療される疾患を緩和するか又は少なくとも部分的に停止するのに十分（「治療的に
有効な量」）であり、時として、０．００５ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、例えば、
約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ又は約０．１ｍｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ、又は約
１ｍｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ、又は約４ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約１６ｍｇ／ｋｇ、
又は約２４ｍｇ／ｋｇ、あるいは、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０
ｍｇ／ｋｇであってもよいが、さらにより高い量、例えば、約１５、１６、１７、１８、
１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９
０、又は１００ｍｇ／ｋｇであってもよい。
例えば、５０、１００、２００、５００、若しくは１０００ｍｇの固定単位用量を与え
ても、又は患者の表面積に基づいて例えば、５００、４００、３００、２５０、２００、
若しくは１００ｍｇ／ｍ２の用量で与えてもよい。通常、１～８用量（例えば、１、２、
３、４、５、６、７、又は８）が関節リウマチなどの免疫介在性炎症性疾患を治療するた
めに投与されるが、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９
、２０、又はそれよりも多い用量を与えてもよい。
本発明の抗体の投与は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週
間、１ヶ月、５週間、６週間、７週間、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月後に、
又はそれ以上後に繰り返すことができる。治療過程を繰り返すことも可能であり、長期に
わたる投与も同様に可能である。繰り返し投与は、同一用量であるか、又は異なる用量で
あってよい。例えば、本発明の抗体は、０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ
、８ｍｇ／ｋｇ、又は１６ｍｇ／ｋｇで１週間間隔で８週間にわたり投与され、８ｍｇ／
ｋｇ又は少なくとも１６ｍｇ／ｋｇで２週間毎にさらに１６週間の投与が続き、その後、
４週間毎に８ｍｇ／ｋｇ又は１６ｍｇ／ｋｇの静脈内注入による投与を続けて行うことが
できる。
本発明の抗体は、例えば、６ケ月以上の期間にわたり週１回など、維持療法により提供
されてもよい。
例えば、本発明の抗体は、単回投与、若しくは、２４、１２、８、６、４、若しくは２
時間毎の分割投与を用いて、又はこれらの併用を用いて、約０．１～１００ｍｇ／ｋｇの
量の１日用量として、例えば、１日当たり０．５、０．９、１．０、１．１、１．５、２
、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１
８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０
、４５、５０、６０、７０、８０、９０、又は１００ｍｇ／ｋｇで、治療開始後、１、２
、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１
８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１
、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、又は４０日目のうちの少なくとも
１日に、あるいは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１
４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０週目のうちの少なくとも１週に、あるいは
これらの組み合わせで提供されてもよい。
本発明の抗体は、関節炎若しくは関節リウマチなどの自己免疫疾患の免疫介在性炎症性
疾患の発症リスクの低減、及び／あるいは自己免疫疾患のうち免疫介在性炎症性疾患の発
症の遅延を目的として予防的に投与されてもよい。
したがって、筋肉内注射用の本発明の医薬組成物は、１ｍＬの滅菌緩衝水と、約１ｎｇ
～約１００ｍｇ／ｋｇ、例えば約５０ｎｇ～約３０ｍｇ／ｋｇ、又はより好ましくは約５
ｍｇ～約２５ｍｇ／ｋｇの本発明の抗体と、を含むように調製することができる。
例えば、本発明の抗体を含む静脈内注入用の医薬組成物は、８０ｋｇの患者に投与する
際には、約２００ｍＬの減菌リンガー液と、約８ｍｇ～約２４００ｍｇ、約４００ｍｇ～
約１６００ｍｇ、又は約４００ｍｇ～約８００ｍｇの本発明の抗体とを含むように調製す
ることができる。非経口的に投与可能な組成物を調製する方法は周知のものであり、例え
ば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ」（１
５ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐ
Ａ）に、より詳細に記載されている。
免疫介在性炎症性疾患又は自己免疫疾患の治療に有効な本発明の抗体の「治療有効量」
は、標準的な研究手法によって決定することができる。例えば、インビトロアッセイを採
用して至適用量範囲を特定する手立てとすることもできる。所望により、関節炎又は関節
リウマチなどの免疫介在性炎症性疾患又は自己免疫疾患の治療において有効であろう本発
明の抗体の投与量は、当該技術分野でよく知られる関連する動物モデルに抗体を投与する
ことによって決定することができる。具体的な有効量の選択は、当業者であれば幾つかの
因子を考慮し（例えば臨床試験によって）決定することができる。このような因子には、
治療又は予防しようとする疾患、疾患症状、患者の体重、患者の免疫状態、及び当業者に
は公知のその他の因子が含まれる。製剤に用いられる正確な用量は、投与経路、及び疾患
の重篤度によって決まり、医師の判断及び各患者の状況に基づいて決定されなければなら
ない。有効量は、インビトロ又は動物モデル試験系から導出される用量反応曲線から推定
することができる。本発明の抗体の有効性及び有効量について、本明細書に記載したモデ
ルのいずれかを用いて試験することができる。
本発明の抗体を、保管のために凍結乾燥し、使用前に好適な担体に溶解させてもよい。
この技法は、通常のタンパク調製物に関して有効であることが示されており、周知の凍結
乾燥法及び再構成法を用いることができる。
抗イディオタイプ抗体
本発明は、本発明の抗体に結合する抗イディオタイプ抗体を提供する。
本発明は、配列番号５８のＶＨと、配列番号６５のＶＬとを含む抗体に特異的に結合す
る抗イディオタイプ抗体も提供する。
本発明は、配列番号５９のＶＨと、配列番号６６のＶＬとを含む抗体に特異的に結合す
る抗イディオタイプ抗体も提供する。
本発明は、配列番号６０のＶＨと、配列番号６７のＶＬとを含む抗体に特異的に結合す
る抗イディオタイプ抗体も提供する。
本発明は、配列番号６１のＶＨと、配列番号６８のＶＬとを含む抗体に特異的に結合す
る抗イディオタイプ抗体も提供する。
本発明は、配列番号６２のＶＨと、配列番号６９のＶＬとを含む抗体に特異的に結合す
る抗イディオタイプ抗体も提供する。
本発明は、配列番号６３のＶＨと、配列番号７０のＶＬとを含む抗体に特異的に結合す
る抗イディオタイプ抗体も提供する。
本発明は、配列番号６４のＶＨと、配列番号７１のＶＬとを含む抗体に特異的に結合す
る抗イディオタイプ抗体も提供する。
本発明は、配列番号５９のＶＨと、配列番号７２のＶＬとを含む抗体に特異的に結合す
る抗イディオタイプ抗体も提供する。
本発明は、配列番号５９のＶＨと、配列番号７３のＶＬとを含む抗体に特異的に結合す
る抗イディオタイプ抗体も提供する。
抗イディオタイプ（Ｉｄ）抗体は、抗体の抗原決定基（例えば、パラトープ又はＣＤＲ
）を認識する抗体である。Ｉｄ抗体は、抗原をブロッキングするものであっても、しない
ものであってもよい。抗原をブロッキングするＩｄを使用して、サンプル中の未結合の抗
体（例えば、本明細書に記載の本発明のＣＤ１５４抗体）を検出することもできる。ブロ
ッキングしないＩｄを使用して、サンプル中の全ての抗体（未結合のもの、抗原に一部結
合しているもの、又は抗原に完全に結合しているもの）を検出することもできる。Ｉｄ抗
体は、抗Ｉｄが調製されるよう、かかる抗体で動物を免疫することにより調製することが
できる。
抗Ｉｄ抗体を、さらに別の動物で免疫応答を誘導する免疫原として使用して、いわゆる
抗－抗Ｉｄ抗体を産生させてもよい。抗－抗Ｉｄは、抗Ｉｄを誘導する元のｍＡｂとエピ
トープが同一であってもよい。したがって、ｍＡｂのイディオタイプ決定基に対する抗体
を使用することによって、同じ特異性の抗体を発現する他のクローンを同定することが可
能である。抗Ｉｄ抗体は様々であってよく（これにより抗Ｉｄ抗体変異体が産生される）
、及び／又はＨＬＡ－ＤＲ抗体に特異的に結合する抗体を本明細書の他の箇所に記載のも
のなどの任意の好適な手法により誘導体化してもよい。
免疫複合体（Immunoconjugates）
「免疫複合体」は、１つ以上の異種分子（複数可）と融合させた本発明の抗体を指す。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体を、１つ以上の細胞毒性剤と融合させる。この
ような細胞毒性剤の例としては、化学療法剤又は薬剤、増殖阻害剤、毒素（例えば、タン
パク質毒素、細菌、真菌、植物、若しくは動物由来の酵素活性を有する毒素、又はそれら
の断片）、及び放射性同位体が挙げられる。
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、抗体－薬剤複合体（ＡＤＣ）であり、ここで
、本発明の抗体は、マイタンシノイド（例えば、米国特許第５，２０８，０２０号、同第
５，４１６，０６号を参照されたい）；モノメチルオーリスタチン薬剤部分ＤＥ及びＤＦ
（ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）などのオーリスタチン（例えば、米国特許第５，６３５，４８
３号、及び同第５，７８０，５８８号、及び同第７，４９８，２９８号）、ドラスタチン
、カリチアマイシン、又はこれらの誘導体（例えば、米国特許第５，７１２，３７４号、
同第５，７１４，５８６号、同第５，７３９，１１６号、同第５，７６７，２８５号、同
第５，７７０，７０１号、同第５，７７０，７１０号、同第５，７７３，００１号、及び
同第５，８７７，２９６号；Ｈｉｎｍａｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ ５３：３３３６～３３４２；ａｎｄ Ｌｏｄｅ ｅｔ ａｌ．，（１９９８）Ｃ
ａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５８：２９２５～２９２８を参照されたい）；ダウノマイシン又は
ドキソルビシンなどのアントラサイクリン（例えば、Ｋｒａｔｚ ｅｔ ａｌ．，（２０
０６）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ １３：４７７～５２３；Ｊｅｆｆｒｅｙ ｅ
ｔ ａｌ．，（２００６）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔｅｒ
ｓ １６：３５８～３６２；Ｔｏｒｇｏｖ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｂｉｏｃｏｎｊ
Ｃｈｅｍ １６：７１７～７２１；Ｎａｇｙ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｐｒｏｃ
Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９７：８２９～８３４；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ ｅ
ｔ ａｌ，Ｂｉｏｏｒｇ．＆ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １２：１５２９～１
５３２（２００２）；Ｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ４
５：４３３６～４３４３；並びに米国特許第６，６３０，５７９号を参照されたい）、メ
トトレキサート、ビンデシン、タキサン、例えば、ドセタキセル、パクリタキセル、ラロ
タキセル、テセタキセル、及びオルタタキセルなどの１つ以上の薬剤と融合される。
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の未結合活
性断片、エキソトキシンＡ鎖（シュードモナス・エルジノーサ（Pseudomonas aeruginosa
））、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、α－サルシン、シナアブラギリ（Aleu
rites fordii）タンパク質、ジアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウ（Phytolaca am
ericana）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ－Ｓ）、ニガウリ（momordica
charantia）阻害剤、クルシン、クロチン、サボン草（sapaonaria officinalis）阻害剤
、ゲロニン、マイトジェリン（mitogellin）、レストリクトシン、フェノマイシン、エノ
マイシン、並びにトリコテセン（tricothecenes）などといった酵素活性を有する毒素又
はそれらの断片と融合している本発明の抗体を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体を放射性原子と複合させて、放射性複合体を形
成させる。放射性複合体の産生には様々な放射性同位体を使用することができる。例とし
ては、Ａｔ２１１、１１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３
、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体が挙げられる。検出に放射
性複合体を使用する場合、シンチグラフ検査のため、例えば、ｔｃ９９ｍ若しくは１１２
３の放射性原子、又は例えば、ヨウ素－１２３アゲイン（iodine-123 again）、ヨウ素－
１３１、インジウム－Ｉ１、フッ素－１９、炭素－１３、窒素－１５、酸素－１７、ガド
リニウム、マンガン、又は鉄などといった、核磁気共鳴（ＮＭＲ）イメージング（磁気共
鳴画像としても既知、ｍｒｉ）用のスピン標識を含み得る。
本発明の抗体と、細胞毒性剤との複合体は、例えば、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２
－ピリジルジチオ）プロピオナート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイ
ミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（Ｉ
Ｔ）、イミドエステルの二官能性誘導体（ジメチルアジピミダートＨＱなど）、活性エス
テル（例えば、ジスクシンイミジル基質）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビ
ス－アジド化合物（例えば、ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス－
ジアゾニウム誘導体（例えば、ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）エチレンジアミン
）、ジイソシアネート（例えば、トルエン－２，６－ジイソシアネート）、及びビス活性
（bis-active）フッ素化合物（例えば、１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼン
）などの様々な二官能性タンパク質カップリング剤を用い作製することができる。例えば
、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，（１９８７）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２
３８：１０９８に記載のとおりに調製できる。炭素１４で標識した１－イソチオシアナト
ベンジル－３－メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ－ＤＴＰＡ）は放射性核種を抗
体に融合させるにあたり代表的なキレート剤である。例えば、国際公開第９４／１１０２
６号を参照されたい。リンカーは、細胞中で細胞毒性剤を放出するのを促進する「分解可
能なリンカー（cleavable linker）」とすることができる。例えば、酸不安定性リンカー
、ペプチダーゼ感受性リンカー、光不安定性リンカー、ジメチルリンカー、又はジスルフ
ィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５
２：１２７～１３１；米国特許第５，２０８，０２０号）を使用することができる。
免疫複合体又はＡＤＣは、市販（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
，Ｉｎｃ．，（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ．，Ｕ．Ｓ．Ａ））のＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭ
ＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ－ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、Ｓ
ＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ－ＥＭＣＳ、スルホ－ＧＭＢＳ、スルホ－ＫＭＵＳ
、スルホ－ＭＢＳ、スルホ－ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＭＣＣ、及びスルホ－ＳＭＰＢ、並び
にＳＶＳＢ（スクシンイミジル－（４－ビニルスルホン）ベンゾアート）などの架橋剤に
より調製することができる。
本発明は、治療薬又は造影剤に結合させた、配列番号１のＣＤ１５４に特異的に結合す
る抗体を含む、免疫複合体も提供する。
本発明の更なる実施形態
以下に、本明細書の他の箇所の開示に従う、本発明の更なる実施形態を列挙する。本明
細書に開示される本発明に関連するものとして上述された本発明の実施形態の特徴は、こ
れらの番号付けされた更なる実施形態のうちの１つ１つにもまた関係する。
１）配列番号１のヒトＣＤ１５４に特異的に結合するアンタゴニスト抗体又はその抗原
結合部分であって、配列番号１７の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１（ＳＹＧＩＳ）と
、配列番号２３のＨＣＤＲ２（ＷＩＳＰＩＦＧＮＴＮＹＡＱＫＦＱＧ）と、配列番号３０
のＨＣＤＲ３（ＳＲＹＹＧＤＬＤＹ）とを含み、場合により、
ａ）ＨＣＤＲ１残基Ｓ１が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｔ
、又はＶに変異しており、
ｂ）ＨＣＤＲ１残基Ｉ４が、Ｍ、Ｌ、又はＶに変異しており、
ｃ）ＨＣＤＲ１残基Ｓ５が、Ａに変異しており、
ｄ）ＨＣＤＲ２残基Ｓ３が、Ａ、Ｔ、又はＶに変異しており、
ｅ）ＨＣＤＲ２残基Ｐ４が、Ｖ、Ｔ、Ｌ Ｑ、又はＥに変異しており、
ｆ）ＨＣＤＲ２残基Ｎ８が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｒ
、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ｇ）ＨＣＤＲ２残基Ｔ９が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｒ
、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ｈ）ＨＣＤＲ２残基Ｎ１０が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、
Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ｉ）ＨＣＤＲ３残基Ｓ１が、Ａ、又はＭに変異しており、
ｊ）ＨＣＤＲ３残基Ｒ２が、Ａ、Ｓ、Ｑ、又はＫに変異しており、
ｋ）ＨＣＤＲ３残基Ｌ７が、Ｍに変異している、アンタゴニスト抗体又はその抗原結
合部分。
２）配列番号３７の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１（ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ）と
、配列番号４４のＬＣＤＲ２（ＹＡＮＳＬＱＳ）と、配列番号５２のＬＣＤＲ３（ＱＱＳ
ＤＳＩＰＷＴ）と、を含む請求項１に記載の抗体であって、所望により、
ａ）ＬＣＤＲ１残基Ｑ４が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｒ
、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ｂ）ＬＣＤＲ１残基Ｓ５が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ
、Ｒ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ｃ）ＬＣＤＲ１残基Ｓ７が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ
、Ｒ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ｄ）ＬＣＤＲ１残基Ｓ８が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ
、Ｒ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ｅ）ＬＣＤＲ２残基Ａ２が、Ｓに変異しており、
ｆ）ＬＣＤＲ２残基Ｎ３が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｒ
、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ｇ）ＬＣＤＲ２残基Ｓ４が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ
、Ｒ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ｈ）ＬＣＤＲ２残基Ｌ５が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ
、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ｉ）ＬＣＤＲ２残基Ｑ６が、Ｅ、Ｄ、又はＮに変異しており、
ｊ）ＬＣＤＲ２残基Ｓ７が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ
、Ｒ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ｋ）ＬＣＤＲ３残基Ｓ３が、Ａに変異しており、
ｌ）ＬＣＤＲ３残基Ｄ４が、Ｎに変異しており、
ｍ）ＬＣＤＲ３残基Ｓ５が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ
、Ｒ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ｎ）ＬＣＤＲ３残基Ｉ６が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ
、Ｖに変異している、抗体。
３）配列番号１７のＨＣＤＲ１（ＳＹＧＩＳ）と、配列番号２３のＨＣＤＲ２（ＷＩＳ
ＰＩＦＧＮＴＮＹＡＱＫＦＱＧ）と、配列番号３０のＨＣＤＲ３（ＳＲＹＹＧＤＬＤＹ）
と、配列番号３７のＬＣＤＲ１（ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ）と、配列番号４４のＬＣＤＲ
２（ＹＡＮＳＬＱＳ）と、配列番号５２のＬＣＤＲ３（ＱＱＳＤＳＩＰＷＴ）とを含む、
実施形態１又は２に記載の抗体。
４）
ａ）配列番号５９のＶＨ及び配列番号６６のＶＬ、又は
ｂ）配列番号８０の重鎖及び配列番号８１の軽鎖を含む、実施形態１～３のいずれか
１つに記載の抗体。
５）配列番号４の可溶性ヒトＣＤ１５４（ｓｈＣＤ１５４）に特異的に結合する単離さ
れたアンタゴニスト抗体。
６）Ｆｃ領域に少なくとも１つの置換を含む、実施形態１～５のいずれか１つに記載の
抗体。
７）抗体がヒト血小板を活性化させない、実施形態１～６のいずれか１つに記載の抗体
。
８）実施例１の親和性測定に記載の試験デザインを用い、ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６
システムを用いＫＤを測定したときに、約５×１０－９Ｍ以下、約１×１０－９Ｍ以下、
約５×１０－１０Ｍ以下、約１×１０－１０Ｍ以下、約５×１０－１１Ｍ以下、又は約１
×１０－１１Ｍ以下の解離定数ＫＤでｓｈＣＤ１５４に結合する、実施形態１～７のいず
れか１つに記載の抗体。
９）かかる抗体が、約７．０×１０－１１Ｍ～約６×１０－１０ＭのＩＣ５０値でｓｈ
ＣＤ１５４介在性のヒトＢ細胞の増殖を阻害する、実施形態１～８のいずれか１つに記載
の抗体。
１０）かかる抗体が、分泌型胎盤性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）及びヒトＣＤ
４０を安定的に発現するＨＥＫ２９３細胞において、ＮＦ－κＢ－誘導性インターフェロ
ン－β（ＩＦＮ－β）ミニマルプロモーター下、約２．１×１０－８Ｍ以下のＩＣ５０値
で、ＳＥＡＰのｓｈＣＤ１５４介在性の発現を阻害する、実施形態１～９のいずれか１つ
に記載の抗体。
１１）かかる抗体が、ｓｈＣＤ１５４に対する結合に関し、重鎖可変領域（ＶＨ）と軽
鎖可変領域（ＶＬ）とを含む抗体と競合し、ここで、かかるＶＨが配列番号５９の配列を
含み、かかるＶＬが配列番号６６の配列を含む、実施形態１～１０のいずれか１つに記載
の抗体。
１２）かかる抗体が、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、２（ＨＣＤＲ２）、及び
／又は３（ＨＣＤＲ３）における保存的アミノ酸置換を場合により１つ、２つ、又は３つ
有する、配列番号５８、５９、６０、６１、６２、６３、又は６４のＶＨのＨＣＤＲ１、
ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ここで、ＨＣＤＲが、Ｋａｂａｔ、
Ｃｈｏｔｈｉａ、又はＩＭＧＴにより定義されるものである、実施形態１～１１のいずれ
か１つに記載の抗体。
１３）かかる抗体が、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、２（ＬＣＤＲ２）、及び
／又は３（ＬＣＤＲ３）における保存的アミノ酸置換を場合により１つ、２つ、又は３つ
有する、配列番号６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、又は７３のＶＨの
ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ここで、ＬＣＤＲが、
Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、又はＩＭＧＴにより定義されるものである、実施形態１～
１２のいずれか１つに記載の抗体。
１４）
ａ）それぞれ配列番号１６、２２、及び２９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤ
Ｒ３アミノ酸配列と、それらの保存的改変、
ｂ）それぞれ配列番号１７、２３、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤ
Ｒ３アミノ酸配列と、それらの保存的改変、
ｃ）それぞれ配列番号１６、２４、及び３１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤ
Ｒ３アミノ酸配列と、それらの保存的改変、
ｄ）それぞれ配列番号１８、２５、及び３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤ
Ｒ３アミノ酸配列と、それらの保存的改変、
ｅ）それぞれ配列番号１９、２６、及び３３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤ
Ｒ３アミノ酸配列と、それらの保存的改変、
ｆ）それぞれ配列番号２０、２７、及び３４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤ
Ｒ３アミノ酸配列と、それらの保存的改変、又は
ｇ）それぞれ配列番号２１、２８、及び３５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤ
Ｒ３アミノ酸配列と、それらの保存的改変
を含む、実施形態１～１３のいずれか１つに記載の抗体。
１５）
ａ）それぞれ配列番号３６、４３、及び５１のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤ
Ｒ３アミノ酸配列と、それらの保存的改変、
ｂ）それぞれ配列番号３７、４４、及び５２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤ
Ｒ３アミノ酸配列と、それらの保存的改変、
ｃ）それぞれ配列番号３８、４５、及び５３のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤ
Ｒ３アミノ酸配列と、それらの保存的改変、
ｄ）それぞれ配列番号３９、４６、及び５４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤ
Ｒ３アミノ酸配列と、それらの保存的改変、
ｅ）それぞれ配列番号４０、４７、及び５５のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤ
Ｒ３アミノ酸配列と、それらの保存的改変、
ｆ）それぞれ配列番号４１、４７、及び５６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤ
Ｒ３アミノ酸配列と、それらの保存的改変、
ｇ）それぞれ配列番号４２、４８、及び５７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤ
Ｒ３アミノ酸配列と、それらの保存的改変、
ｈ）それぞれ配列番号３７、４９、及び５２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤ
Ｒ３アミノ酸配列と、それらの保存的改変、又は
ｉ）それぞれ配列番号３７、５０、及び５２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤ
Ｒ３アミノ酸配列と、それらの保存的改変
を含む、実施形態１～１０のいずれか１つに記載の抗体。
１６）
ａ）それぞれ、配列番号１６、２２、及び２９、
ｂ）それぞれ、配列番号１７、２３、及び３０、
ｃ）それぞれ、配列番号１６、２４、及び３１、
ｄ）それぞれ、配列番号１８、２５、及び３２、
ｅ）それぞれ、配列番号１９、２６、及び３３、
ｆ）それぞれ、配列番号２０、２７、及び３４、又は
それぞれ、配列番号２１、２８、及び３５
の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む、実施形態１～１５のいずれか１
つに記載の抗体。
１７）
ａ）それぞれ、配列番号３６、４３、及び５１、
ｂ）それぞれ、配列番号３７、４４、及び５２、
ｃ）それぞれ、配列番号３８、４５、及び５３、
ｄ）それぞれ、配列番号３９、４６、及び５４、
ｅ）それぞれ、配列番号４０、４７、及び５５、
ｆ）それぞれ、配列番号４１、４７、及び５６、
ｇ）それぞれ、配列番号４２、４８、及び５７、
ｈ）それぞれ、配列番号３７、４９、及び５２、又は
ｉ）それぞれ、配列番号３７、５０、及び５２
の、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態１～１６のいずれか１
つに記載の抗体。
１８）それぞれ配列番号１６、２２、及び２９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤ
Ｒ３と、それぞれ配列番号３６、４３、及び５１のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤ
Ｒ３とを含む実施形態１～１７のいずれか１つに記載の抗体。
１９）それぞれ配列番号１７、２３、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤ
Ｒ３と、それぞれ配列番号３７、４４、及び５２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤ
Ｒ３とを含む実施形態１～１７のいずれか１つに記載の抗体。
２０）それぞれ配列番号１６、２４、及び３１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤ
Ｒ３と、それぞれ配列番号３８、４５、及び５３のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤ
Ｒ３とを含む実施形態１～１７のいずれか１つに記載の抗体。
２１）それぞれ配列番号１８、２５、及び３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤ
Ｒ３と、それぞれ配列番号３９、４６、及び５４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤ
Ｒ３とを含む実施形態１～１７のいずれか１つに記載の抗体。
２２）それぞれ配列番号１９、２６、及び３３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤ
Ｒ３と、それぞれ配列番号４０、４７、及び５５のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤ
Ｒ３とを含む実施形態１～１７のいずれか１つに記載の抗体。
２３）それぞれ配列番号２０、２７、及び３４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤ
Ｒ３と、それぞれ配列番号４１、４７、及び５６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤ
Ｒ３とを含む実施形態１～１７のいずれか１つに記載の抗体。
２４）それぞれ配列番号２１、２８、及び３５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤ
Ｒ３と、それぞれ配列番号４２、４８、及び５７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤ
Ｒ３とを含む実施形態１～１７のいずれか１つに記載の抗体。
２５）それぞれ配列番号１７、２３、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤ
Ｒ３と、それぞれ配列番号３７、４９、及び５２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤ
Ｒ３とを含む実施形態１～１７のいずれか１つに記載の抗体。
２６）それぞれ配列番号１７、２３、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤ
Ｒ３と、それぞれ配列番号３７、５０、及び５２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤ
Ｒ３とを含む実施形態１～１７のいずれか１つに記載の抗体。
２７）配列番号５８、５９、６０、６１、６２、６３、又は６４のＶＨと少なくとも９
０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又
は１００％相同であるＶＨを含む、実施形態１～２６のいずれか１つに記載の抗体。
２８）配列番号６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、又は７３のＶＬと
少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％
、９９％、又は１００％相同であるＶＬを含む、実施形態１～２７のいずれか１つに記載
の抗体。
２９）配列番号５８のＶＨと配列番号６５のＶＬとを含み、ここで、場合により、ＶＨ
、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方が、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１
、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸置換を含む、実施形態１～２８のいずれか１
つに記載の抗体。
３０）配列番号５９のＶＨと配列番号６６のＶＬとを含み、ここで、場合により、ＶＨ
、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方が、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１
、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸置換を含む、実施形態１～２８のいずれか１
つに記載の抗体。
３１）配列番号６０のＶＨと配列番号６７のＶＬとを含み、ここで、場合により、ＶＨ
、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方が、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１
、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸置換を含む、実施形態１～２８のいずれか１
つに記載の抗体。
３２）配列番号６１のＶＨと配列番号６８のＶＬとを含み、ここで、場合により、ＶＨ
、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方が、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１
、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸置換を含む、実施形態１～２８のいずれか１
つに記載の抗体。
３３）配列番号６２のＶＨと配列番号６９のＶＬとを含み、ここで、場合により、ＶＨ
、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方が、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１
、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸置換を含む、実施形態１～２８のいずれか１
つに記載の抗体。
３４）配列番号６３のＶＨと配列番号７０のＶＬとを含み、ここで、場合により、ＶＨ
、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方が、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１
、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸置換を含む、実施形態１～２８のいずれか１
つに記載の抗体。
３５）配列番号６４のＶＨと配列番号７１のＶＬとを含み、ここで、場合により、ＶＨ
、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方が、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１
、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸置換を含む、実施形態１～２８のいずれか１
つに記載の抗体。
３６）配列番号５９のＶＨと配列番号７２のＶＬとを含み、ここで、場合により、ＶＨ
、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方が、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１
、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸置換を含む、実施形態１～２８のいずれか１
つに記載の抗体。
３７）配列番号５９のＶＨと配列番号７３のＶＬとを含み、ここで、場合により、ＶＨ
、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方が、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１
、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸置換を含む、実施形態１～２８のいずれか１
つに記載の抗体。
３８）Ｆｃ領域に少なくとも１つの置換を含む、実施形態１～３７のいずれか１つに記
載の抗体。
３９）Ｆｃ領域における少なくとも１つの置換が、置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２
３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓであり、ここで、残基付
番はＥＵインデックスに準拠する、実施形態１～３８のいずれか１つに記載の抗体。
４０）Ｆｃ領域における少なくとも１つの置換が、置換Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２
３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓであり、ここで、残基付
番はＥＵインデックスに準拠する、実施形態１～３８のいずれか１つに記載の抗体。
４１）かかる抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４のアイソタイプで
ある、実施形態１～４０のいずれか１つに記載の抗体。
４２）抗体パラトープ残基の全てがＶＨに存在する、実施形態１～４１のいずれか１つ
に記載の抗体。
４３）かかる抗体が、可溶性ヒトＣＤ１５４三量体内の、第１のＣＤ１５４モノマー及
び第２のＣＤ１５４モノマーに同時に結合する、実施形態１～４２のいずれか１つに記載
の抗体。
４４）かかる抗体が、配列番号１のＣＤ１５４のアミノ酸残基１８２～２０７内の、第
１のＣＤ１５４モノマー中の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、又は８個のＣＤ１
５４残基に結合し、ここで、残基付番は配列番号１に準拠する、実施形態４３に記載の抗
体。
４５）かかる抗体が、配列番号１のＣＤ１５４のアミノ酸残基１７６～２５３内の、第
２のＣＤ１５４モノマー中の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、又は８個のＣＤ１
５４残基に結合し、ここで、残基付番は配列番号１に準拠する、実施形態４３又は４４に
記載の抗体。
４６）かかる抗体が、第１のＣＤ１５４モノマー中の残基Ｅ１８２、Ｓ１８５、Ｑ１８
６、Ａ１８７、Ｐ１８８、Ｓ２１４、Ａ２１５、及びＲ２０７に結合し、ここで、残基付
番は配列番号１に準拠する、実施形態４３～４５のいずれか１つに記載の抗体。
４７）かかる抗体が、第２のＣＤ１５４モノマー中の残基Ｔ１７６、Ｆ１７７、Ｃ１７
８、Ｑ２２０、Ｓ２４８、Ｈ２４９、Ｇ２５０、及びＦ３５３に結合し、ここで、残基付
番は配列番号１に準拠する、実施形態４３～４６のいずれか１つに記載の抗体。
４８）異なる結合特異性を有する第２の抗原結合分子に結合している実施形態１～４７
のいずれか１つに記載の抗体又はその抗原結合部分を含む二重特異性分子。
４９）
ａ）ｓｈＣＤ１５４との免疫複合体においてヒト血小板を活性化しない、
ｂ）解離定数ＫＤ約５×１０－９Ｍ以下でｓｈＣＤ１５４に結合する、
ｃ）ｓｈＣＤ１５４介在性のヒトＢ細胞の増殖を阻害する、又は
ｄ）ＮＦ－κＢ－ＳＥＡＰレポーター遺伝子アッセイにおいてＣＤ１５４生物活性を阻
害する、実施形態１～４７のいずれか一項に記載の抗体又は請求項４８に記載の二重特異
性分子。
５０）治療薬又は造影剤に結合させた実施形態１～４７のいずれか１つに記載の抗体又
はその抗原結合部分を含む免疫複合体。
５１）実施形態１～４７のいずれか１つに記載の抗体と、医薬的に許容される担体とを
含む、医薬組成物。
５２）実施形態１～４７のいずれか１つに記載の抗体ＶＨ、抗体ＶＬ、又は抗体ＶＨと
抗体ＶＬとをコードしているポリヌクレオチド。
５３）実施形態５２に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
５４）実施形態５３に記載のベクターを含む宿主細胞。
５５）抗体が発現される条件下で実施形態５４に記載の宿主細胞を培養することと、宿
主細胞より産生された抗体を回収することと、を含む、抗体の産生方法。
５６）自己免疫疾患又は免疫介在性炎症性疾患の治療に使用するための、実施形態１～
４７のいずれかに記載の抗体、又は実施形態５１に記載の医薬組成物。
５７）関節炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、炎症性腸疾患、移植、腎移植、皮
膚移植、骨髄移植、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、免疫性血小板減少症（ＩＴＰ）、多発
性硬化症、甲状腺炎、１型糖尿病、又はアテローム性動脈硬化症に使用するための、実施
形態１～４７のいずれか１つに記載の抗体。
５８）関節リウマチの治療に使用するための実施形態１～４７のいずれか１つに記載の
抗体。
５９）狼瘡の治療に使用するための実施形態１～４７のいずれか１つに記載の抗体。
６０）移植の処置（treatment of transplantation）に使用するための実施形態１～４
７のいずれか１つに記載の抗体。
６１）炎症性腸疾患の治療に使用するための実施形態１～４７のいずれか１つに記載の
抗体。
６２）実施形態５６～６１のいずれの記載に従って第２の治療薬と組み合わせて使用す
るための実施形態１～４７のいずれかに記載の抗体。
６３）第２の治療薬が、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、サリチラート、ヒド
ロキシクロロキン、スルファサラジン、コルチコステロイド、細胞毒性剤、免疫抑制剤、
及び／又は抗体である、実施形態６２に記載の抗体。
本発明は、配列番号１のヒトＣＤ１５４に特異的に結合する単離された抗体又はその抗
原結合部分であって、配列番号１７の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１（ＳＹＧＩＳ）
と、配列番号２３のＨＣＤＲ２（ＷＩＳＰＩＦＧＮＴＮＹＡＱＫＦＱＧ）と、配列番号３
０のＨＣＤＲ３（ＳＲＹＹＧＤＬＤＹ）と、配列番号３７の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤ
Ｒ）１（ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ）と、配列番号４４のＬＣＤＲ２（ＹＡＮＳＬＱＳ）と
、配列番号５２のＬＣＤＲ３（ＱＱＳＤＳＩＰＷＴ）と、を含む単離された抗体又はその
抗原結合部分も提供する。
本発明は、配列番号１７のＨＣＤＲ１（ＳＹＧＩＳ）と、配列番号２３のＨＣＤＲ２（
ＷＩＳＰＩＦＧＮＴＮＹＡＱＫＦＱＧ）と、配列番号３０のＨＣＤＲ３（ＳＲＹＹＧＤＬ
ＤＹ）と、配列番号３７のＬＣＤＲ１（ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ）と、配列番号４４のＬ
ＣＤＲ２（ＹＡＮＳＬＱＳ）と、配列番号５２のＬＣＤＲ３（ＱＱＳＤＳＩＰＷＴ）と、
を含む、配列番号４の可溶性のヒトＣＤ１５４（ｓｈＣＤ１５４）に特異的に結合する単
離されたアンタゴニスト抗体も提供する。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号５９のＶＨと配列番号６６のＶＬとを含む
。
いくつかの実施形態では、かかる抗体は、実施例１の親和性測定に記載の試験デザイン
を用い、ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６システムを用いＫＤを測定したときに、約５×１０
－９Ｍ以下、約１×１０－９Ｍ以下、約５×１０－１０Ｍ以下、約１×１０－１０Ｍ以下
、約５×１０－１１Ｍ以下、又は約１×１０－１１Ｍ以下の解離定数ＫＤでｓｈＣＤ１５
４に結合する。
いくつかの実施形態では、かかる抗体は、約７．０×１０－１１Ｍ～約６×１０－１０
ＭのＩＣ５０値でｓｈＣＤ１５４介在性のヒトＢ細胞の増殖を阻害する。
いくつかの実施形態では、抗体は、分泌型胎盤性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）
及びヒトＣＤ４０を安定的に発現するＨＥＫ２９３細胞において、ＮＦ－κＢ－誘導性イ
ンターフェロン－β（ＩＦＮ－β）ミニマルプロモーター下、約２．１×１０－８Ｍ以下
のＩＣ５０値で、ＳＥＡＰのｓｈＣＤ１５４介在性の発現を阻害する。
いくつかの実施形態では、抗体はＩｇＧ１アイソタイプであり、場合により、野生型Ｉ
ｇＧ１と比較して重鎖置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８
Ａ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓを含む。
いくつかの実施形態では、抗体は配列番号５９のＶＨと、配列番号６６のＶＬとを含み
、かつＩｇＧ１アイソタイプであり、所望により、野生型ＩｇＧ１と比較して重鎖置換Ｌ
２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３
１Ｓを含む。
いくつかの実施形態では、抗体は配列番号５９のＶＨと、配列番号６６のＶＬとを含み
、かつＩｇＧ１／κアイソタイプであり、野生型ＩｇＧ１と比較して重鎖置換Ｌ２３４Ａ
、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓを含
む。
いくつかの実施形態では、抗体はＩｇＧ２アイソタイプであり、所望により、野生型Ｉ
ｇＧ２と比較して重鎖置換Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９
Ｌ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓを含む。
いくつかの実施形態では、抗体は配列番号５９のＶＨと、配列番号６６のＶＬとを含み
、かつＩｇＧ２／κアイソタイプであり、野生型ＩｇＧ２と比較して重鎖置換Ｖ２３４Ａ
、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓを含
む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号８０の重鎖（ＨＣ）と、配列番号８１の軽
鎖（ＬＣ）とを含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号８０の重鎖（ＨＣ）と、配列番号８１の軽
鎖（ＬＣ）とを含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、二重特異性の抗体である。
抗体は、治療、例えば、自己免疫疾患の治療に使用するのに好適である。
抗体は、治療、例えば、免疫介在性炎症性疾患の治療に使用するのに好適である。
抗体は、治療、例えば、関節炎の治療に使用するのに好適である。
抗体は、治療、例えば、全身性紅斑性狼瘡の治療に使用するのに好適である。
抗体は、治療、例えば、炎症性腸疾患の治療に使用するのに好適である。
抗体は、処置、例えば、移植の処置に使用するのに好適である。
抗体は、治療、例えば、腎移植の処置に使用するのに好適である。
抗体は、治療、例えば、皮膚移植の処置に使用するのに好適である。
抗体は、治療、例えば、骨髄移植の処置に使用するのに好適である。
抗体は、治療、例えば、移植片対宿主病の治療に使用するのに好適である。
抗体は、治療、例えば、免疫性血小板減少の治療に使用するのに好適である。
抗体は、治療、例えば、多発性硬化症の治療に使用するのに好適である。
抗体は、治療、例えば、甲状腺炎の治療に使用するのに好適である。
抗体は、治療、例えば、１型糖尿病の治療に使用するのに好適である。
抗体は、治療、例えば、アテローム性動脈硬化症の治療に使用するのに好適である。
抗体は、治療、例えば、関節リウマチの治療に使用するのに好適である。
抗体は、治療、例えば、クローン病の治療に使用するのに好適である。
抗体は、治療、例えば、潰瘍性大腸炎の治療に使用するのに好適である。
抗体は、治療、例えば、炎症性腸疾患の治療に第２の治療薬と組み合わせて使用するの
に好適である。
次に、本発明を以下の特定の非限定的な実施例を参照して説明する。
実施例１．材料及び方法
使用するタンパク質の生成
内因性ＣＤ１５４シグナルは三量体であることから、組換ＣＤ１５４を様々な方法で発
現させて機能性の組換三量体を得た。可溶性ヒトＣＤ１５４（ｓｈＣＤ１５４；配列番号
４）、コモンマーモセット（Callithrix jacchus）（本明細書においてマーモセットとし
て呼称）の可溶性ＣＤ１５４（ｓｍＣＤ１５４；配列番号５）又はカニクイザル（Macaca
fascicularis）（本明細書においてカニクイザルとして呼称）の可溶性ＣＤ１５４（ｓ
ｃＣＤ１５４；配列番号６）をクローニングし、Ｈｉｓ６（配列番号１０）融合体（ｓｈ
ＣＤ１５４－ｈｉｓ，配列番号７；ｓｍＣＤ１５４－ｈｉｓ，配列番号８；ｓｃＣＤ１５
４－ｈｉｓ，配列番号９）として、又はロイシンジッパー（ＩＬＺ）（配列番号１１）と
の融合体（ｓｈＣＤ１５４－ＩＬＺ，配列番号１２；ｓｍＣＤ１５４－ＩＬＺ，配列番号
１３；ｓｃＣＤ１５４－ＩＬＺ，配列番号１４）として発現させた。標準法を用いクロー
ニング、発現、及びタンパク質精製を行った。Ｈｉｓ融合体及びＩＬＺ融合体のいずれも
ほとんどが三量体であった。ＥＺ－Ｌｉｎｋ（商標）スルホ－ＮＨＳ－ＬＣ－ビオチンと
、標識キット（Ｔｈｅｒｍｏ，カタログ番号２１３２７）を用いｓｍＣＤ１５４及びｓｍ
ＣＤ１５４－ＩＬＺをビオチニル化した。ビオチニル化の成功をＨＡＢＡ－アビジンアッ
セイ（Ｔｈｅｒｍｏ，カタログ番号４６６１０）及びＯｃｔｅｔにより分析した。ヒトＣ
Ｄ４０（配列番号１５）を発現している細胞をいくつかのアッセイに使用した。ヒトＣＤ
１５４を内因的に発現しているＤ１．１ Ｊｕｒｋａｔ細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲ
Ｌ－１０９１５（商標）をいくつかのアッセイに使用した。
ヒトＣＤ１５４；配列番号１
ＭＩＥＴＹＮＱＴＳＰＲＳＡＡＴＧＬＰＩＳＭＫＩＦＭＹＬＬＴＶＦＬＩＴＱＭＩＧＳ
ＡＬＦＡＶＹＬＨＲＲＬＤＫＩＥＤＥＲＮＬＨＥＤＦＶＦＭＫＴＩＱＲＣＮＴＧＥＲＳＬ
ＳＬＬＮＣＥＥＩＫＳＱＦＥＧＦＶＫＤＩＭＬＮＫＥＥＴＫＫＥＮＳＦＥＭＱＫＧＤＱＮ
ＰＱＩＡＡＨＶＩＳＥＡＳＳＫＴＴＳＶＬＱＷＡＥＫＧＹＹＴＭＳＮＮＬＶＴＬＥＮＧＫ
ＱＬＴＶＫＲＱＧＬＹＹＩＹＡＱＶＴＦＣＳＮＲＥＡＳＳＱＡＰＦＩＡＳＬＣＬＫＳＰＧ
ＲＦＥＲＩＬＬＲＡＡＮＴＨＳＳＡＫＰＣＧＱＱＳＩＨＬＧＧＶＦＥＬＱＰＧＡＳＶＦＶ
ＮＶＴＤＰＳＱＶＳＨＧＴＧＦＴＳＦＧＬＬＫＬ
マーモセットＣＤ１５４；配列番号２
ＭＩＥＴＹＮＱＰＶＰＲＳＡＡＴＧＰＰＶＳＭＫＩＦＭＹＬＬＴＶＦＬＩＴＱＭＩＧＳ
ＡＬＦＡＶＹＬＨＲＲＬＤＫＩＥＤＥＲＮＬＨＥＤＦＶＦＭＫＴＩＱＲＣＮＴＧＥＲＳＬ
ＳＬＬＮＣＥＥＩＫＳＱＦＥＧＦＶＫＤＩＭＬＮＫＥＥＫＫＫＥＮＳＦＥＭＱＫＧＤＱＮ
ＰＱＩＡＡＨＶＩＳＥＡＳＳＫＴＴＳＶＬＱＷＡＥＫＧＹＹＴＭＳＮＮＬＶＴＬＥＮＧＫ
ＱＬＴＶＫＲＱＧＬＹＹＩＹＡＱＶＴＦＣＳＮＲＥＡＳＳＱＡＰＦＩＡＳＬＣＬＫＰＰＮ
ＲＦＥＲＩＬＬＲＡＡＮＴＨＳＳＡＫＰＣＧＱＱＳＩＨＬＧＧＩＦＥＬＱＰＧＡＳＶＦＶ
ＮＶＴＤＰＳＱＶＳＨＧＴＧＦＴＳＦＧＬＬＫＬ
カニクイザルＣＤ１５４；配列番号３
ＭＩＥＴＹＮＱＰＳＰＲＳＡＡＴＧＬＰＶＲＭＫＩＦＭＹＬＬＴＩＦＬＩＴＱＭＩＧＳ
ＡＬＦＡＶＹＬＨＲＲＬＤＫＩＥＤＥＲＮＬＨＥＤＦＶＦＭＫＴＩＱＲＣＮＴＧＥＲＳＬ
ＳＬＬＮＣＥＥＩＫＳＱＦＥＧＦＶＫＤＩＭＬＮＫＥＥＫＫＫＥＮＳＦＥＭＱＫＧＤＱＮ
ＰＱＩＡＡＨＶＩＳＥＡＳＳＫＴＴＳＶＬＱＷＡＥＫＧＹＹＴＭＳＮＮＬＶＴＬＥＮＧＫ
ＱＬＴＶＫＲＱＧＬＹＹＩＹＡＱＶＴＦＣＳＮＲＥＡＳＳＱＡＰＦＩＡＳＬＣＬＫＳＰＧ
ＲＦＥＲＩＬＬＲＡＡＮＴＨＳＳＡＫＰＣＧＱＱＳＩＨＬＧＧＶＦＥＬＱＰＧＡＳＶＦＶ
ＮＶＴＤＰＳＱＶＳＨＧＴＧＦＴＳＦＧＬＬＫＬ
ｓｈＣＤ１５４；配列番号４
ＭＱＫＧＤＱＮＰＱＩＡＡＨＶＩＳＥＡＳＳＫＴＴＳＶＬＱＷＡＥＫＧＹＹＴＭＳＮＮ
ＬＶＴＬＥＮＧＫＱＬＴＶＫＲＱＧＬＹＹＩＹＡＱＶＴＦＣＳＮＲＥＡＳＳＱＡＰＦＩＡ
ＳＬＣＬＫＳＰＧＲＦＥＲＩＬＬＲＡＡＮＴＨＳＳＡＫＰＣＧＱＱＳＩＨＬＧＧＶＦＥＬ
ＱＰＧＡＳＶＦＶＮＶＴＤＰＳＱＶＳＨＧＴＧＦＴＳＦＧＬＬＫＬ
ｓｍＣＤ１５４；配列番号５
ＭＱＫＧＤＱＮＰＱＩＡＡＨＶＩＳＥＡＳＳＫＴＴＳＶＬＱＷＡＥＫＧＹＹＴＭＳＮＮ
ＬＶＴＬＥＮＧＫＱＬＴＶＫＲＱＧＬＹＹＩＹＡＱＶＴＦＣＳＮＲＥＡＳＳＱＡＰＦＩＡ
ＳＬＣＬＫＰＰＮＲＦＥＲＩＬＬＲＡＡＮＴＨＳＳＡＫＰＣＧＱＱＳＩＨＬＧＧＩＦＥＬ
ＱＰＧＡＳＶＦＶＮＶＴＤＰＳＱＶＳＨＧＴＧＦＴＳＦＧＬＬＫＬ
ｓｃＣＤ１５４；配列番号６
ＭＱＫＧＤＱＮＰＱＩＡＡＨＶＩＳＥＡＳＳＫＴＴＳＶＬＱＷＡＥＫＧＹＹＴＭＳＮＮ
ＬＶＴＬＥＮＧＫＱＬＴＶＫＲＱＧＬＹＹＩＹＡＱＶＴＦＣＳＮＲＥＡＳＳＱＡＰＦＩＡ
ＳＬＣＬＫＳＰＧＲＦＥＲＩＬＬＲＡＡＮＴＨＳＳＡＫＰＣＧＱＱＳＩＨＬＧＧＶＦＥＬ
ＱＰＧＡＳＶＦＶＮＶＴＤＰＳＱＶＳＨＧＴＧＦＴＳＦＧＬＬＫＬ
ｓｈＣＤ１５４－ｈｉｓ；配列番号７
ＧＳＨＨＨＨＨＨＧＧＧＳＭＱＫＧＤＱＮＰＱＩＡＡＨＶＩＳＥＡＳＳＫＴＴＳＶＬＱ
ＷＡＥＫＧＹＹＴＭＳＮＮＬＶＴＬＥＮＧＫＱＬＴＶＫＲＱＧＬＹＹＩＹＡＱＶＴＦＣＳ
ＮＲＥＡＳＳＱＡＰＦＩＡＳＬＣＬＫＳＰＧＲＦＥＲＩＬＬＲＡＡＮＴＨＳＳＡＫＰＣＧ
ＱＱＳＩＨＬＧＧＶＦＥＬＱＰＧＡＳＶＦＶＮＶＴＤＰＳＱＶＳＨＧＴＧＦＴＳＦＧＬＬ
ＫＬ
ｓｍＣＤ１５４－ｈｉｓ；配列番号８
ＧＳＨＨＨＨＨＨＧＧＧＳＭＱＫＧＤＱＮＰＱＩＡＡＨＶＩＳＥＡＳＳＫＴＴＳＶＬＱ
ＷＡＥＫＧＹＹＴＭＳＮＮＬＶＴＬＥＮＧＫＱＬＴＶＫＲＱＧＬＹＹＩＹＡＱＶＴＦＣＳ
ＮＲＥＡＳＳＱＡＰＦＩＡＳＬＣＬＫＰＰＮＲＦＥＲＩＬＬＲＡＡＮＴＨＳＳＡＫＰＣＧ
ＱＱＳＩＨＬＧＧＩＦＥＬＱＰＧＡＳＶＦＶＮＶＴＤＰＳＱＶＳＨＧＴＧＦＴＳＦＧＬＬ
ＫＬ
ｓｃＣＤ１５４－ｈｉｓ；配列番号９
ＧＳＨＨＨＨＨＨＧＧＧＳＭＱＫＧＤＱＮＰＱＩＡＡＨＶＩＳＥＡＳＳＫＴＴＳＶＬＱ
ＷＡＥＫＧＹＹＴＭＳＮＮＬＶＴＬＥＮＧＫＱＬＴＶＫＲＱＧＬＹＹＩＹＡＱＶＴＦＣＳ
ＮＲＥＡＳＳＱＡＰＦＩＡＳＬＣＬＫＳＰＧＲＦＥＲＩＬＬＲＡＡＮＴＨＳＳＡＫＰＣＧ
ＱＱＳＩＨＬＧＧＶＦＥＬＱＰＧＡＳＶＦＶＮＶＴＤＰＳＱＶＳＨＧＴＧＦＴＳＦＧＬＬ
ＫＬ
Ｈｉｓ６；配列番号１０
ＨＨＨＨＨＨ
ＩＬＺ；配列番号１１
ＲＭＫＱＩＥＤＫＩＥＥＩＬＳＫＩＹＨＩＥＮＥＩＡＲＩＫＫＬＩＧＥＲ
ｓｈＣＤ１５４－ＩＬＺ；配列番号１２
ＧＳＨＨＨＨＨＨＧＧＧＳＲＭＫＱＩＥＤＫＩＥＥＩＬＳＫＩＹＨＩＥＮＥＩＡＲＩＫ
ＫＬＩＧＥＲＧＧＧＳＭＱＫＧＤＱＮＰＱＩＡＡＨＶＩＳＥＡＳＳＫＴＴＳＶＬＱＷＡＥ
ＫＧＹＹＴＭＳＮＮＬＶＴＬＥＮＧＫＱＬＴＶＫＲＱＧＬＹＹＩＹＡＱＶＴＦＣＳＮＲＥ
ＡＳＳＱＡＰＦＩＡＳＬＣＬＫＳＰＧＲＦＥＲＩＬＬＲＡＡＮＴＨＳＳＡＫＰＣＧＱＱＳ
ＩＨＬＧＧＶＦＥＬＱＰＧＡＳＶＦＶＮＶＴＤＰＳＱＶＳＨＧＴＧＦＴＳＦＧＬＬＫＬ
ｓｍＣＤ１５４－ＩＬＺ；配列番号１３
ＧＳＨＨＨＨＨＨＧＧＧＳＲＭＫＱＩＥＤＫＩＥＥＩＬＳＫＩＹＨＩＥＮＥＩＡＲＩＫ
ＫＬＩＧＥＲＧＧＧＳＭＱＫＧＤＱＮＰＱＩＡＡＨＶＩＳＥＡＳＳＫＴＴＳＶＬＱＷＡＥ
ＫＧＹＹＴＭＳＮＮＬＶＴＬＥＮＧＫＱＬＴＶＫＲＱＧＬＹＹＩＹＡＱＶＴＦＣＳＮＲＥ
ＡＳＳＱＡＰＦＩＡＳＬＣＬＫＰＰＮＲＦＥＲＩＬＬＲＡＡＮＴＨＳＳＡＫＰＣＧＱＱＳ
ＩＨＬＧＧＩＦＥＬＱＰＧＡＳＶＦＶＮＶＴＤＰＳＱＶＳＨＧＴＧＦＴＳＦＧＬＬＫＬ
ｓｃＣＤ１５４－ＩＬＺ；配列番号１４
ＧＳＨＨＨＨＨＨＧＧＧＳＲＭＫＱＩＥＤＫＩＥＥＩＬＳＫＩＹＨＩＥＮＥＩＡＲＩＫ
ＫＬＩＧＥＲＧＧＧＳＭＱＫＧＤＱＮＰＱＩＡＡＨＶＩＳＥＡＳＳＫＴＴＳＶＬＱＷＡＥ
ＫＧＹＹＴＭＳＮＮＬＶＴＬＥＮＧＫＱＬＴＶＫＲＱＧＬＹＹＩＹＡＱＶＴＦＣＳＮＲＥ
ＡＳＳＱＡＰＦＩＡＳＬＣＬＫＳＰＧＲＦＥＲＩＬＬＲＡＡＮＴＨＳＳＡＫＰＣＧＱＱＳ
ＩＨＬＧＧＶＦＥＬＱＰＧＡＳＶＦＶＮＶＴＤＰＳＱＶＳＨＧＴＧＦＴＳＦＧＬＬＫＬ
ヒトＣＤ４０；配列番号１５
ＭＶＲＬＰＬＱＣＶＬＷＧＣＬＬＴＡＶＨＰＥＰＰＴＡＣＲＥＫＱＹＬＩＮＳＱＣＣＳ
ＬＣＱＰＧＱＫＬＶＳＤＣＴＥＦＴＥＴＥＣＬＰＣＧＥＳＥＦＬＤＴＷＮＲＥＴＨＣＨＱ
ＨＫＹＣＤＰＮＬＧＬＲＶＱＱＫＧＴＳＥＴＤＴＩＣＴＣＥＥＧＷＨＣＴＳＥＡＣＥＳＣ
ＶＬＨＲＳＣＳＰＧＦＧＶＫＱＩＡＴＧＶＳＤＴＩＣＥＰＣＰＶＧＦＦＳＮＶＳＳＡＦＥ
ＫＣＨＰＷＴＳＣＥＴＫＤＬＶＶＱＱＡＧＴＮＫＴＤＶＶＣＧＰＱＤＲＬＲＡＬＶＶＩＰ
ＩＩＦＧＩＬＦＡＩＬＬＶＬＶＦＩＫＫＶＡＫＫＰＴＮＫＡＰＨＰＫＱＥＰＱＥＩＮＦＰ
ＤＤＬＰＧＳＮＴＡＡＰＶＱＥＴＬＨＧＣＱＰＶＴＱＥＤＧＫＥＳＲＩＳＶＱＥＲＱ
親和性の測定
ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６システム（ＢｉｏＲａｄ）使用して表面プラズモン共鳴（
ＳＰＲ）を用い、親和性測定を実施した。アミンカップリング化学反応についての製造元
の使用説明書を用い、抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ（Ｊａｃｋｓｏｎカタログ番号１０９～００５
～０９８）を、ＧＬＣチップ（ＢｉｏＲａｄ，カタログ番号１７６～５０１１）の加工ア
ルギン酸ポリマー層にカップリングさせて、バイオセンサー表面を調製した。約４７００
ＲＵ（レスポンスユニット）の被検抗体を固定した。速度論的実験を、ランニングバッ
ファー（ＤＰＢＳ＋０．０３％ポリソルベートＰ２０＋１００μｇ／ｍＬ ＢＳＡ）で２
５℃にて実施した。速度論的実験を実施するにあたり、０．３９１ｎＭ～１００ｎＭ（４
倍段階希釈）の範囲の濃度の分析種（ｓｈＣＤ１５４－ｈｉｓ及びｓｍＣＤ１５４－ｈｉ
ｓ）の注入後１００ ＲＵの抗体を捕捉した。５０μＬ／分で３分間会合段階をモニター
した後、１５分間緩衝液を流した（解離段階）。１００μＬ／分で１００ｍＭ Ｈ３ＰＯ
４（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号７９６１）を１８秒間ずつ２回流してチップ表面を再生し
た。
回収したデータはＰｒｏｔｅＯｎ Ｍａｎａｇｅｒソフトウェアを用い加工した。まず
、インタースポットを用いバックグラウンドについてデータを補正した。次に、分析物の
注入のため緩衝液注入を用い、データのダブルリファレンスサブトラクション（double r
eference subtraction）を行った。ラングミュア型の１：１結合モデルを用い、データの
速度論的分析を実施した。
ＣＤ１５４により誘導されるＲａｍｏｓ細胞活性化
細胞活性化のマーカーとしてＣＤ５４を用い、抗ＣＤ１５４抗体がＲａｍｏｓ細胞の活
性化を阻害する能力を評価した。供給元のプロトコルに準拠して維持したＲａｍｏｓ細胞
（バーキットリンパ腫細胞，ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－１５９６（商標））を、１０
０μＬ／ウェルの完全増殖培地を入れた９６ウェルＶ底プレートに２．０×１０５個／ウ
ェルで播種した。０．２、２、又は２０μｇ／ｍＬの被検抗体を、４０ｎｇ／ｍＬ ｓｍ
ＣＤ１５４－ｈｉｓと室温で１時間プレインキュベートした後、細胞に加えた。プレート
をカバーし終夜インキュベートした（３７℃，５％ ＣＯ２）。翌日、アッセイプレート
をスピンダウンし、使用済みの処理培地を除去した。得られた細胞ペレットを冷ＰＢＳ／
２％ ＦＢＳで洗浄した後、かかる細胞を、ＰＥ標識した抗ＣＤ５４（ＩＣＡＭ－１）抗
体又は適切な対照アイソタイプにより４℃で１時間染色した。細胞を冷ＰＢＳ／２％ Ｆ
ＢＳで洗浄し、１００μＬ／ウェルにて冷ＰＢＳ／２％ ＦＢＳに再懸濁し、フローサイ
トメーターで蛍光シグナル（黄色チャネル）を測定した。次の基準、「５Ｃ８抗体と比較
したときの％力価が５Ｃ８の力価の５％を超過している」を満たしたとき、抗体はアンタ
ゴニストであるものと判定された。ここで、％力価とは、試験した中で最も高濃度の５Ｃ
８と比較して正規化した阻害率（％）を指す。
ＮＦ－κＢ－ＳＥＡＰレポーター遺伝子アッセイ
抗ＣＤ１５４抗体が、ＣＤ１５４により誘導されるＣＤ４０下流のシグナル伝達経路を
阻害する能力を、ヒトＣＤ４０を発現するよう改変したＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４
０Ｌ細胞（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）を用い評価して、ＮＦ－κＢ－誘導性プロモーター（Ｉ
ＦＮ－κミニマルプロモーター）の制御下、分泌型胎盤性アルカリホスファターゼ（ＳＥ
ＡＰ）レポーター遺伝子を導入した。細胞を、ヒト若しくはカニクイザルＣＤ１５４のい
ずれか、又はＪｕｒｋａｔ細胞により刺激した。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ細
胞を供給元のプロトコルに準拠して維持し、全ての活性アッセイを、１０％ウシ胎仔血清
（熱失活）と１倍濃度のＧｌｕｔａｍａｘとを添加したＤＭＥＭで行った。細胞を、１ウ
ェル当たり２．５又は５×１０４個の細胞密度、１００μＬ用量で９６ウェル組織培養プ
レートに播種し、終夜インキュベートした（３７℃，５％ ＣＯ２）。翌日、ｓｈＣＤ１
５４－Ｈｉｓ若しくはｓｈＣＤ１５４－ＩＬＺ、又はＤ１．１Ｊｕｒｋａｔ細胞の４倍濃
度の溶液を、抗ＣＤ１５４抗体の４倍濃度の溶液（適した濃度にて）と１：１の割合でプ
レインキュベートして、２倍濃度のＣＤ１５４：抗体のプレ複合体混合物溶液を得た。Ｃ
Ｄ１５４：抗体混合物は室温で１時間インキュベートし、一方Ｄ１．１Ｊｕｒｋａｔ：ｍ
Ａｂ混合物は３７℃かつ５％ ＣＯ２で１時間インキュベートした。プレ複合体インキュ
ベート時間の終了時に、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ細胞を入れた９６ウェルア
ッセイプレートに２倍濃度のプレ複合体溶液１００μＬ／ウェルを添加した。最終アッセ
イ用量は、最終濃度８０ｎｇ／ｍＬのｓｈＣＤ１５４－Ｈｉｓ、若しくは４０ｎｇ／ｍＬ
のｓｈＣＤ１５４－ＩＬＺのＣＤ１５４、若しくは２．５～６．０×１０４個のＤ１．１
Ｊｕｒｋａｔ細胞で２００μＬ／ウェルとした。１６～２４時間の処理時間後（３７℃，
５％ ＣＯ２）、４０μＬ／ウェルの上清を１６０μＬ／ウェルのＱＵＡＮＴＩ－Ｂｌｕ
ｅ（商標）（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）と３７℃で３０～６０インキュベートし、吸光度（６
５０ｎｍ）を測定することにより、上清のホスファターゼ活性を分析した（ＳＥＡＰ）。
Ｊｕｒｋａｔ細胞介在性の樹状細胞活性化アッセイ
抗ＣＤ１５４抗体によるＪｕｒｋａｔ細胞介在性のＤＣ活性化阻害能を、ＤＣによる各
種サイトカインの産生低下を測定することにより評価した。ヒト単球（Ｂｉｏｌｏｇｉｃ
Ｓｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ）を５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－４及びＧＭ－ＣＳＦと共に６日間
培養した。細胞には３日目に新しい培地（ＩＬ－４及びＧＭ－ＣＳＦ添加）を補充した。
６日目の細胞アッセイには未成熟なＤＣｓ（ｉＤＣｓ）（ＣＤ１ａ＋ＣＤ１４ｌｏｗ Ｃ
Ｄ８３－）を使用した。２．５×１０５個のＤ１．１ Ｊｕｒｋａｔ細胞（１０００ｒａ
ｄで放射線照射）を０．００００６４～２５μｇ／ｍＬ μｇ／ｍＬの抗ＣＤ１５４抗体
と共に１５～２０分間インキュベートした後、９６ウェル丸底プレートで、２００μＬ／
ウェルの最終用量にて２．５×１０４個のｉＤＣと共培養した。４８時間のインキュベー
ト後、サイトカイン分析のため上清を回収した。
Ｊｕｒｋａｔ細胞介在性のＢ細胞活性化アッセイ
抗ＣＤ１５４抗体によるＪｕｒｋａｔ細胞介在性Ｂ細胞活性化阻害能を、Ｂ細胞の増殖
に対する抗体の作用を評価することにより評価した。１×１０５個のＤ１．１ Ｊｕｒｋ
ａｔ細胞（５０００ｒａｄで放射線照射）を、ＩＬ－２１（１００ｎｇ／ｍＬ）及び０．
００７７ｎｇ／ｍＬ－１５μｇ／ｍＬの抗ＣＤ１５４抗体の存在下、９６ウェル丸底プレ
ートで２００μＬ／ウェルの最終用量にて、１×１０５個のヒト扁桃体Ｂ細胞と共培養し
た。２日間のインキュベート後、メチル（－３Ｈ）－チミジン（０．５μＣｉ／ウェル）
を培養物に添加し、終夜インキュベートした後、ヒトＢ細胞の増殖を測定した。
ＣＤ１５４介在性のＢ細胞活性化アッセイ
抗ＣＤ１５４抗体による組換ＣＤ１５４介在性Ｂ細胞活性化阻害能を、ヒト又はカニク
イザルのＢ細胞において評価した。１×１０５個のヒト扁桃体Ｂ細胞又はカニクイザル脾
臓細胞を、９６ウェル丸底プレートで２００μＬ／ウェルの最終用量にて１００ｎｇ／ｍ
ＬのｒｈＩＬ－２１、０．５μｇ／ｍＬのｓｈＣＤ１５４－ＩＬＺ、及び０．００７７ｎ
ｇ／ｍＬ～１５μｇ／ｍＬの抗ＣＤ１５４抗体を用い培養した。２日間のインキュベート
後、メチル（－３Ｈ）－チミジン（０．５μＣｉ／ウェル）を培養物に添加し、終夜イン
キュベートした後、ヒトＢ細胞の増殖を測定した。
実施例２．ファージディスプレイライブラリからの抗ＣＤ１５４抗体の単離
ＣＤ１５４結合性のＦａｂを、Ｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３９７
：３８５～９６，２０１０、国際公開第２００９／０８５４６２号、米国特許出願公開第
２０１０／００２１４７７号）に記載のものなどの新規のｐＩＸファージディスプレイか
らスクリーニングした。簡潔に言えば、ライブラリは、ヒトスキャフォールドを多様化す
ることによって作製されたものであり、生殖細胞系列ＶＨ遺伝子であるＩＧＨＶ１－６９
＊０１、ＩＧＨＶ３－２３＊０１及びＩＧＨＶ５－５１＊０１をＨ３ループを介してヒト
ＩＧＨＪ－４ミニ遺伝子で組み替え、そしてヒト生殖細胞系列ＶＬκ遺伝子であるＯ１２
（ＩＧＫＶ１－３９＊０１）、Ｌ６（ＩＧＫＶ３－１１＊０１）、Ａ２７（ＩＧＫＶ３－
２０＊０１）及びＢ３（ＩＧＫＶ４－１＊０１）をＩＧＫＪ－１ミニ遺伝子で組み替える
ことで、完全なＶＨ及びＶＬドメインを構築した。多様化に際し、重鎖及び軽鎖可変領域
内の、タンパク質抗原及びペプチド抗原と高頻度に接していると確認された位置に相当す
るＨ１、Ｈ２、Ｌ１、Ｌ２及びＬ３ループ周辺の位置を選択した。選択した位置での配列
多様性は、それぞれのＩＧＨＶ又はＩＧＬＶ遺伝子のＩＧＨＶ又はＩＧＬＶ生殖系列遺伝
子ファミリーのそれぞれの位置で見られる残基に制限した。長さがアミノ酸７～１４個分
の単鎖～中鎖型の合成ループを用いることで、Ｈ３ループにおいて多様性が発生した。Ｈ
３でのアミノ酸分布は、ヒト抗体において観察されるアミノ酸の変動を模倣するよう設計
された。ライブラリ設計の詳細は、Ｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３９
７：３８５～９６，２０１０に記載されている。ライブラリを生成するために利用した足
場は、これらの由来するヒトＶＨ及びＶＬ生殖系列遺伝子に準じて命名した。ｓｍＣＤ１
５４又は完全長のカニクイザルＣＤ１５４を発現している細胞に対するパニング実験にあ
たって、３つの重鎖ライブラリを、４個の生殖系列軽鎖又は生殖系列軽鎖ライブラリと組
み合わせることで１２とおりの固有の組み合わせのＶＨ：ＶＬを作製した。
このライブラリを、ＣＨＯ－ｓ細胞、又はビオチニル化及び非ビオチニル化ｓｍＣＤ１
５４（配列番号５）のいずれかにおいて安定的に発現させた完全長のカニクイザルＣＤ１
５４（配列番号３）に対しパニングした。数回のパニング後、ｓｍＣＤ１５４を抗原とし
て用いるポリクローナルファージＥＬＩＳＡを行い、各パニング実験について特異的な集
積（enrichment）を検出した。各Ｆａｂクローンから発現したＦａｂタンパク質をプレー
ト上に直接コートした非ビオチニル化ｓｍＣＤ１５４に対する結合分子として使用するモ
ノクローナルＦａｂ ＥＬＩＳＡにより、上記のパニング実験から回収されｓｍＣＤ１５
４に対する結合分子が集積していることが確認されたファージをさらにスクリーニングし
た。陰性対照Ｆａｂと比較して結合シグナルが４倍高いＦａｂクローンを選択し、完全Ｉ
ｇＧフォーマット内でスクリーニングしたの。スクリーニングしたＦａｂをＩｇＧ２σ／
κ骨格にクローン化し、さらにこれを用いＤ１．１ Ｊｕｒｋａｔ細胞に対する結合につ
いて特性評価した。ＩｇＧ２σは、機能を欠失させたＦｃ（silent Fc）であり、野生型
ＩｇＧ２と比較して置換Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ
、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓを有する。ＩｇＧ２σは、米国特許第８，９６１，９６７
号に記載されている。
実施例３．ラットにおける抗ＣＤ１５４抗体の作製
ヒト免疫グロブリンの遺伝子座を発現しているトランスジェニックラット、ＯｍｎｉＲ
ａｔ（登録商標）；ＯＭＴ，Ｉｎｃを使用して、抗ＣＤ１５４抗体を作製した。Ｏｍｎｉ
Ｒａｔ（登録商標）の内在性イムノグロブリン遺伝子座は、ラットＣＨ遺伝子座に連結さ
せたヒトＩｇκ及びＩｇλ遺伝子座と、ヒト由来のＶセグメント、Ｄセグメント、及びＪ
セグメントを有するヒト／ラットキメラＩｇＨ遺伝子座とにより置き換えられている。か
かるＩｇＨ遺伝子座は、２２個のヒトＶＨセグメントと、全てのヒトＤセグメント及びＪ
Ｈセグメントとを天然の構成でラットＣＨ遺伝子座に連結して含有する。ＯｍｎｉＲａｔ
（登録商標）の作製及び特性評価は、Ｏｓｂｏｒｎ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ
１９０：１４８１～１４９０，２０１３、及び国際公開第２０１４／０９３９０８号に記
載されている。
複数箇所における反復免疫（repetitive immunization at multiple sites）（ＲＩＭ
ＭＳ）プロトコルにより、ＯｍｎｉＲａｔ（登録商標）をｓｍＣＤ１５４で免疫した。４
５日間の免疫レジメン後、４匹のラット全てからリンパ節を摘出し、ハイブリドーマの作
製に使用した。ｓｍＣＤ１５４への結合を示したｍＡｂを特定する結合ＥＬＩＳＡにより
、９６ウェルプレートでハイブリドーマの上清をスクリーニングし、陰性対照の平均値よ
りも３倍超も高いアッセイシグナルを示すハイブリドーマ上清をスクリーニングした。
スクリーニングした抗体を完全長のＩｇＧ２σ／λとしてクローン化した。ＣＤ１５４
誘導性のＲａｍｏｓ細胞活性化においてアンタゴニスト活性を示す抗体を更なる特性評価
のためスクリーニングした。
実施例４．抗体の特性評価
ファージディスプレイ又はヒトイムノグロブリン遺伝子座を発現する遺伝子導入マウス
により得られ、実施例２及び３に記載のとおりのアンタゴニスト活性を示したいくつかの
抗ＣＤ１５４抗体を配列決定し、さらにヒト及びカニクイザル樹状細胞に対する結合、ヒ
ト及びカニクイザル樹状細胞及びＢ細胞に対する機能阻害能、並びに抗体エフェクター機
能について特性評価した。標準的な方法を用い、抗体のＶＨ領域及びＶＬ領域を配列決定
した。
表２は、選択抗体のＨＣＤＲ１アミノ酸配列を示す。
表３は、選択抗体のＨＣＤＲ２アミノ酸配列を示す。
表４は、選択抗体のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を示す。
表５は、選択抗体のＬＣＤＲ１アミノ酸配列を示す。
表６は、選択抗体のＬＣＤＲ２アミノ酸配列を示す。
表７は、選択抗体のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を示す。
表８は、選択抗体のＶＨアミノ酸配列を示す。
表９は、選択抗体のＶＬアミノ酸配列を示す。
Figure 2022058414000002
Figure 2022058414000003
Figure 2022058414000004
Figure 2022058414000005
Figure 2022058414000006
Figure 2022058414000007
Figure 2022058414000008
Figure 2022058414000009
ＮＦ－κＢ ＳＥＡＰレポーター遺伝子アッセイを用い測定されたとおり、抗体は、Ｊ
ｕｒｋａｔ細胞（表１０中、Ｄ１．１ Ｊｕｒｋａｔ細胞）により提供される内因性ＣＤ
１５４及び組換えにより発現されたヒトＣＤ１５４三量体（ｓｈＣＤ１５４－ＩＬＺ又は
ｓｈＣＤ１５４－ｈｉｓとして発現）のいずれについても機能を阻害した。抗体は、０．
０８～２１．１５ｎＭの範囲のＩＣ５０値でシグナル伝達を阻害された。アッセイにおい
てスクリーニングされた抗体のＩＣ５０を表１０に示す。表中、各抗体についてのＩＣ５
０値の範囲は、別個の実験より得られたＩＣ５０値のうち最低値と最高値を表す一方、単
一の値は、その抗体に対し行われた実験が１回であったこと、あるいは得られた有効なＩ
Ｃ５０値が１つのみであったことを意味する。
Figure 2022058414000010
ＤＣ活性化についてのマーカーとしてＩＬ－１２ｐ４０分泌を用い、抗体の、樹状細胞
活性化阻害能を評価した。抗体は、０．０２～０．４９ｎＭの範囲のＩＣ５０値でＪｕｒ
ｋａｔ細胞により提供される内因性ＣＤ１５４により誘導されるＤＣ活性化を阻害した。
表１１は、アッセイにおける、スクリーニングされた抗体のＩＣ５０値を示す。表中、Ｉ
Ｃ５０範囲は、２～４名の提供者に対し、１～６回繰り返した別個の実験から得られたＩ
Ｃ５０値のうち最低値と最高値を表す。
Figure 2022058414000011
Ｂ細胞の増殖をリードアウトとして用い、かかる抗体のヒト又はカニクイザルＢ細胞活
性化に対する阻害能を測定した。内因性ＣＤ１５４（Ｄ１．１ Ｊｕｒｋａｔ細胞）及び
組換ヒトＣＤ１５４三量体（ｓｈＣＤ１５４－ＩＬＺ）の両方を阻害した抗体では、０．
０１～５．３５ｎＭの範囲のＩＣ５０値で増殖が誘導された。表１２は、ヒト又はカニク
イザルＢ細胞活性化アッセイにおいて得られた様々な抗体についてのＩＣ５０値を示す。
表中、ＩＣ５０範囲は、２～４名の提供者に対し、１～６回繰り返した別個の実験から得
られたＩＣ５０値のうち最低値と最高値を表す。表中、単一のＩＣ５０値は、得られた有
効なＩＣ５０値が１つであったことを意味する。
Figure 2022058414000012
実施例５．翻訳後改変リスクを最小限に抑えるための抗体エンジニアリング
抗体Ｃ４ＬＢ８９のＶＬは、ＬＣＤＲ２に推定脱アミノ化部位を含んでいた（軽鎖Ｃ４ＬＬ４９中Ｎ５２～Ｓ５３，配列番号６６）。ＶＬ中各位置（Ｎ５２Ｓ及びＳ５３Ｔ）に対する置換は別個に行った。変異した軽鎖を親重鎖Ｃ４ＬＨ１６５（配列番号５９）と同時発現させて、抗体Ｃ４ＬＢ２３５及びＣ４ＬＢ２３６をＩｇＧ２σ／κとして作製した。Ｃ４ＬＢ２３５及びＣ４ＬＢ２３６のＬＣＤＲ２及びＶＬのアミノ酸配列をそれぞれ表１３及び表１４に示す。Ｃ４ＬＢ２３５は、配列番号１７、２３、及び３０のＨＣＤＲ、配列番号３７、４９、及び５２のＬＣＤＲ、配列番号５９のＶＨ、並びに配列番号７２のＶＬを含む。Ｃ４ＬＢ２３６は、配列番号１７、２３、及び３０のＨＣＤＲ、配列番号３７、５０、及び５２のＬＣＤＲ、配列番号５９のＶＨ、並びに配列番号７３のＶＬを含む。
Figure 2022058414000013
Figure 2022058414000014
両方の抗体を、カニクイザルＢ細胞の増殖に対する阻害能について試験した。Ｃ４ＬＢ
２３５はＣ４ＬＢ８９と同様の力価を示したのに対し、Ｃ４ＬＢ２３６は、Ｃ４ＬＢ８９
と比較して力価の低減を示した。
実施例６．エフェクター機能を欠失させた抗ＣＤ１５４抗体は血小板活性化を誘導しな
い
抗ＣＤ１５４抗体は、臨床における自己免疫疾患患者においてポジティブな結果伴い開
発されてきたものの、血栓塞栓症（ＴＥ）が随伴することより、かかる抗体の更なる臨床
開発は中断された。ヒト化５ｃ８抗体（ＩｇＧ１／κ）は、臨床的に誘導されたＴＥにお
ける抗ＣＤ１５４抗体である（Ｙａｚｄａｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｌｕｐｕｓ １３：３７
７～３８０，２００４）。ヒト化５ｃ８により介在される血栓塞栓症（ＴＥ）は、Ｆｃを
血小板ＦｃγＲＩＩａ受容体に結合させることにより血小板を架橋するハイオーダーでの
抗ＣＤ１５４／ＣＤ１５４免疫複合体（ＩＣ）の形成による血小板活性化及び凝集の結果
として生じることが仮定される。インビトロでは、ＦｃγＲＩＩａ受容体結合能を欠いて
いる機能欠失Ｆｃ（ＩｇＧ１中Ｄ２６５Ａ置換）を有するよう設計した５ｃ８抗体は血小
板を活性化させなかった（Ｘｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９２：４０８
３～４０９２，２０１４）。
少なくともＦｃγＲＩＩａに対する結合能が破壊されており、エフェクター機能が低下
している抗ＣＤ１５４抗体は、したがって、ＴＥのリスクを低減させた治療法としてより
好適であり得る。
最終的に、様々なＦｃ置換によりエフェクター機能を欠失させた抗ＣＤ１５４抗体を作
製し、血小板活性化に対するその効果を試験した。
ヒト化５ｃ８抗体ＶＨ及びＶＬ（Ｋａｒｐｕｓａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒ
ｅ ９：３２１～３２９，２００１）を、ＩｇＧ１σ／κ、ＩｇＧ１σＹＴＥ／κ、Ｉｇ
Ｇ２σ／κ、又はＩｇＧ２σＹＴＥ／κとしてクローン化し、血小板活性化におけるＦｃ
の効果を評価した；得られた抗体は５ｃ８ＩｇＧ１σ、５ｃ８ＩｇＧ１σＹＴＥ、５ｃ８
ＩｇＧ２σ、及び５ｃ８ＩｇＧ２σＹＴＥ）と命名した。ＩｇＧ１σは、野生型ＩｇＧ１
と比較して置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ａ３３
０Ｓ、及びＰ３３１Ｓを含む。ＩｇＧ１σＹＴＥは、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７
Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ Ｈ２６８Ａ、Ａ３３０Ｓ、及び
Ｐ３３１Ｓという置換を含む。ＩｇＧ２σは、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ
２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓという置換を含む。ＩｇＧ２σＹＴ
Ｅは、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｈ
２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓという置換を含む。残基付番はＥＵ
インデックスに準拠する。ＩｇＧ２σ骨格を有する抗体は、米国特許第８，９６１，９６
７号に記載のとおりエフェクター機能及びＦｃγＲに対する結合能を欠失している。ＹＴ
Ｅ置換（Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４、Ｔ２５６Ｅ）はＤａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，
Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８１：２３５１４～２４，２００６に記載されている。
それぞれ配列番号７４及び７５におけるヒト化５ｃ８のＶＨドメイン及びＶＬドメイン
を示す。
配列番号７４
ｑｖｑｌｖｑｓｇａｅｖｖｋｐｇａｓｖｋｌｓｃｋａｓｇｙｉｆｔｓｙｙｍｙｗｖｋｑ
ａｐｇｑｇｌｅｗｉｇｅｉｎｐｓｎｇｄｔｎｆｎｅｋｆｋｓｋａｔｌｔｖｄｋｓａｓｔａ
ｙｍｅｌｓｓｌｒｓｅｄｔａｖｙｙｃｔｒｓｄｇｒｎｄｍｄｓｗｇｑｇｔｌｖｔｖｓｓ
配列番号７５
ｄｉｖｌｔｑｓｐａｔｌｓｖｓｐｇｅｒａｔｉｓｃｒａｓｑｒｖｓｓｓｔｙｓｙｍｈｗ
ｙｑｑｋｐｇｑｐｐｋｌｌｉｋｙａｓｎｌｅｓｇｖｐａｒｆｓｇｓｇｓｇｔｄｆｔｌｔｉ
ｓｓｖｅｐｅｄｆａｔｙｙｃｑｈｓｗｅｉｐｐｔｆｇｇｇｔｋｌｅｉｋ
血小板活性化における効果について、５ｃ８ＩｇＧ１σ、５ｃ８ＩｇＧ１σＹＴＥ、５
ｃ８ＩｇＧ２σ、及び５ｃ８ＩｇＧ２σＹＴＥを試験した。
ｓｈＣＤ１５４単独に対する応答性の低さについて予めスクリーニングした健常なヒト
提供者由来の血液を使用した。血小板の活性化は、有効性が確認されている血小板活性化
マーカーＰＡＣ－１（活性化ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ）及びＣＤ６２ｐ（Ｐ－セレクチン）
を用い、フローサイトメトリーにより評価した。簡潔に言うと、１ｍＭ ＣａＣｌ２を含
有させた改変タイロード－ＨＥＰＥＳ緩衝液に全血（ＷＢ）を添加した。抗ＰＡＣ１及び
抗ＣＤ６２ｐ抗体にＦｃγＲＩＩａブロッキング抗体（クローンＩＶ．３，ＳｔｅｍＣｅ
ｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ＃６００１２）を合わせて、又は合わせずに、かかる混
合物に添加し、２５分間インキュベートした。ＣＤ１５４：抗ＣＤ１５４のモル比を３：
１で予め形成させた、可溶性ＣＤ１５４（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ，カタログ番号３１０～０
２；配列番号４又はＴｏｎｂｏ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号２１～７０８８
）／抗体の免疫複合体をかかる混合物に加え、さらに２０分間インキュベートした。血小
板を１％ホルマリンで固定した後、ＦＡＣＳ解析を行った。各条件についての血小板活性
化を、ＰＡＣ－１及びＣＤ６２ｐを発現しているとしてゲーティングされた血小板の割合
（％）（ＣＤ６１陽性イベント）として評価した。５０００ ＣＤ６１を発現しているイ
ベント（血小板）を捕捉し、各処理条件について解析した。実験結果を図１に示す。ＣＤ
１５４／５ｃ８ＩｇＧ１（野生型ＩｇＧ１）ＩＣは血小板を活性化させたのに対し、５ｃ
８－ＩｇＧ１σ、５ｃ８ＩｇＧ１σＹＴＥ、５ｃ８ＩｇＧ２σ、及び５ｃ８ＩｇＧ２σ－
ＹＴＥを有するＣＤ１５４ ＩＣは血小板を活性化させなかった。ＡＤＰによる血小板活
性化は、免疫複合体により阻害されなかった（データ非掲載）。単独で血小板を活性化さ
せた抗体はなかった（データ非掲載）。
抗ＣＤ１５４抗体のＣ４ＬＢ５、Ｃ４ＬＢ８９、Ｃ４ＬＢ９４、Ｃ４ＬＢ１５０、Ｃ４
ＬＢ１８９、Ｃ４ＬＢ１９１、Ｃ４ＬＢ１９９（全てのＩｇＧ２σはエフェクターを欠失
しているｍＡｂである）を血小板活性化アッセイでも試験して、かかる抗体ではＦｃγＲ
ＩＩａに対する結合能が破壊されていること、並びに血小板を活性化しなかったことを確
認した。図２は、Ｃ４ＬＢ５、Ｃ４ＬＢ８９、Ｃ４ＬＢ１５０、Ｃ４ＬＢ１８９、Ｃ４Ｌ
Ｂ１９１、又はＣ４ＬＢ１９９と複合体を形成しているＣＤ１５４の免疫複合体は血小板
を活性化できないことを実証する実験結果を示す。ＣＤ１５４／Ｃ４ＬＢ９４ ＩＣは血
小板に対しＰＡＣ－１を誘導した。結果は、概して、ＩｇＧ１σ、ＩｇＧ１σＹＴＥ、Ｉ
ｇＧ２σ、又はＩｇＧ２σＹＴＥアイソタイプを有する抗ＣＤ１５４抗体が、血小板を活
性化し得ないこと、ひいては野生型ＩｇＧ１をもつ抗体よりも安全性プロファイルが改善
されていることを実証する。
実施例７：アイソタイプのスイッチングが抗体特性に及ぼす効果
抗体Ｃ４ＬＢ８９の可変領域を、ＩｇＧ１σ／及びＩｇＧ１σＹＴＥアイソタイプとし
てクローン化して、機能性及び開発有効性（developability）における潜在的な差異を評
価した。新しい抗体をＣ４ＬＢ２３１（ＩｇＧ１σ）及びＣ４ＬＢ２３２（ＩｇＧ１σＹ
ＴＥ）と命名した。
得られるＩｇＧ１σ及びＩｇＧ１σＹＴＥ抗体をそれらの機能性について親抗体と比較
した。Ｃ４ＬＢ２３１及びＣ４ＬＢ２３２の機能は親Ｃ４ＬＢ８９と同等であった。表１
５は、表中に示すとおりの機能性アッセイにおける各抗体のＩＣ５０値又はＩＣ５０値範
囲を示す。表中、ＩＣ５０範囲は、２～４名の提供者に対し、１～６回繰り返した実験か
ら得られたＩＣ５０値のうち最低値と最高値を表す。表中、単一のＩＣ５０値は、得られ
た有効なＩＣ５０値が１つであったことを意味する。
Figure 2022058414000015
Ｃ４ＬＢ２３１及びＣ４ＬＢ２３２についても血小板に対するそれらの効果を試験した
。ｓｈＣＤ１５４：Ｃ４ＬＢ２３１又はｓｈＣＤ１５４：Ｃ４ＬＢ２３２ ＩＣのいずれ
も、ベースラインを超えて血小板を活性化しない。ＣＤ１５４／５ｃ８ＩｇＧ１ ＩＣは
血小板を活性化し、この活性化はＩＶ．３の存在下では阻害されたことから、血小板活性
化はＩＣのＦｃγＲＩＩａに対する結合により介在されることが実証された。図３は実験
結果を示す。
実施例８．抗ＣＤ１５４抗体は高親和性でヒトＣＤ１５４に結合する
ＰｒｏｔｅＯｎを用い、実施例１に記載のとおり親和性測定を行った。会合速度（on-r
ate）、解離速度（off-rate）及び親和性を表１６に示す。この表中に報告したパラメー
ターは、２相結合モデルを適用したＣ４ＬＢ９４及びＣ４ＬＢ１５０を除き全てのサンプ
ルについてラングミュア型の１：１結合モデルにより得られた。
Figure 2022058414000016
実施例９．マーモセットＣＤ１５４とＣ４ＬＢ８９との複合体の結晶構造
Ｘ線結晶構造解析を用い、抗体Ｃ４ＬＢ８９のエピトープを同定した。Ｈｉｓタグを付
与したＣ４ＬＢ８９のＦａｂ断片と、Ｈｉｓタグを付与した可溶型のマーモセットＣＤ４
０Ｌ（ｓｍＣＤ１５４－ｈｉｓ）とをＨＥＫ２９３ ＧｎＴＩ細胞で発現させて、親和性
及びサイズ排除クロマトグラフィーを用い精製した。ｓｍＣＤ１５４：Ｃ４ＬＢ８９複合
体を４℃で終夜インキュベートし、濃縮し、サイズ排除クロマトグラフィーを用いて複合
体を形成していない分析種から分離した。１６％ ＰＥＧ ３３５０、０．２Ｍ クエン
酸アンモニウム、０．１Ｍ ＭＥＳ（ｐＨ６．５）を含む溶液から蒸気拡散法によりこの
複合体を結晶化した。この結晶は１６２．１Åの単位格子乗数で立方晶系空間群Ｐ２１３
に属する。複合体の構造は、検索モデルとしてＣ４ＬＢ８９ Ｆａｂ及びＣＤ４０Ｌ（Ｐ
ＤＢ ｅｎｔｒｙ １ＡＬＹ）の結晶構造を用いる分子置換モデルにより決定した。
ｓｍＣＤ１５４：Ｃ４ＬＢ８９複合体は、結晶学的な３回軸に位置する、対称性の三量
体である。Ｃ４ＬＢ８９は、細胞表面からの末端の２つのサブユニットとの接触面でｍＣ
Ｄ１５４に結合する。エピトープは、２つのＣＤ１５４サブユニットのそれぞれから８残
基ずつ、１６残基を含む。エピトープの残基は、第１のＣＤ１５４サブユニットにおいて
Ｅ１８２、Ｓ１８５、Ｑ１８６、Ａ１８７、Ｐ１８８、Ｓ２１４、Ａ２１５、及びＲ２０
７と、第２のＣＤ１５４サブユニットにおいてＴ１７６、Ｆ１７７、Ｃ１７８、Ｑ２２０
、Ｓ２４８、Ｈ２４９、Ｇ２５０、及びＦ２５３と、を含む。エピトープの残基付番は配
列番号１の完全長のヒトＣＤ１５４に準拠する。パラトープは、ＣＤ１５４残基から４Å
以内の抗体残基として定義した。Ｃ４ＬＢ８９の抗原結合部位は、Ｃ４ＬＢ８９の重鎖の
うち９残基：ＨＣＤＲ１からＳ３１、及びＹ３２と、ＨＣＤＲ２からＳ５２、Ｉ５４、Ｆ
５５、及びＮ５７と、ＨＣＤＲ３からＲ１００、Ｙ１０１、及びＹ１０２と、を含む。パ
ラトープの残基付番は、配列番号５９のＣ４ＬＢ８９ ＶＨに準拠する。軽鎖はｍＣＤ１
５４との接触には関与しない。接触数から、ＨＣＤＲ２におけるＦ５５は重要な抗原認識
要素である。Ｆ５５は、ＣＤ１５４残基Ｔ１７６、Ｆ１７７、Ｃ１７８、Ｑ２２０、Ｓ２
４８、Ｈ２４９、Ｇ２５０、及びＦ２５３を接触させる。ＨＣＤＲ３残基Ｙ１０１及びＹ
１０２も結合に関与する。図４はＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３の接触残基と、ＬＣのＣＤ１
５４に対する結合能の欠失とを示す。図５は、エピトープ及びパラトープの残基について
カトゥーンを示す。
ヒト及びマーモセットの可溶性ＣＤ１５４タンパク質間の違いは、アミノ酸にしてわず
か８残基であった。全てのｍＣＤ１５４ Ｃ４ＬＢ８９エピトープ残基はヒトにおいて保
存されている。したがって、エピトープはマーモセット及びヒトのＣＤ１５４間で保存さ
れていることが期待される。ヒト及びマーモセットの完全長のＣＤ１５４タンパク質のア
ラインメントを図６に示す。
実施例１０．抗ＣＤ１５４抗体による血小板活性化はエピトープに依存する
Ｃ４ＬＢ８９可変領域（配列番号５９のＶＨ及び配列番号６６のＶＬ）をＩｇＧ１／κ
としてクローン化し、Ｃ４ＬＢ２３７抗体を得た。実施例１に記載のとおりにＰｒｏｔｅ
Ｏｎを用いて測定したとき、Ｃ４ＬＢ２３７はヒトＣＤ１５４（表１７）結合能を保持し
ていることが確認された。Ｃ４ＬＢ２３７のヒトＣＤ１５４に対する親和性は２３．６±
５．４ｐＭであった。ＩｇＧ２σ由来のＣ４ＬＢ８９から誘導されるＶＨ／ＶＬのアイソ
タイプのＩｇＧ１へのスイッチは、得られた抗体の結合親和性を変えるようである。
期待されたとおり、Ｃ４ＬＢ２３７はヒトＦｃγＲＩＩａ及びＦｃγＲＩＩＩａに対し
、それぞれＫＤ０．９９４μＭ及び０．１４６μＭで結合した。Ｃ４ＬＢ２３７は、ＮＦ
－κＢ ＳＥＡＰレポーター遺伝子アッセイにおいて、ｓｈＣＤ１５４－ｈｉｓを使用し
てシグナル伝達を誘導した場合に、Ｃ４ＬＢ２３１と同等の力価を示し、かつＣ４ＬＢ８
９を上回る力価を示した（表１８）。
Ｃ４ＬＢ２３７を血小板活性化に対する効果について試験した。図７に示すとおり、ｓ
ｈＣＤ１５４：Ｃ４ＬＢ２３７ ＩＣはベースラインを超えて血小板を活性化しなかった
。この結果から、Ｆｃに加えて抗体のエピトープが抗体の血小板活性化能の有無に関係す
ることが示唆された。
Figure 2022058414000017
Figure 2022058414000018
実施例１１．Ｃ４ＬＢ８９における中立変異の設計
ＣＤ１５４と複合体を形成しているＣ４ＬＢ８９の結晶構造解析により、Ｃ４ＬＢ８９
のＣＤＲにおける、複合体の全体構造に影響を及ぼさずに変異を導入可能であり、ひいて
はＣ４ＬＢ８９抗体の特性に影響しないことが予想される部分が明らかとなった。軽鎖Ｃ
ＤＲにおけるこれらの中立変異を表１９に掲載し、重鎖ＣＤＲについては表２０に掲載す
る。変異を導入可能な残基付番を、各ＣＤＲ及びＶＬ又はＶＨの両方に対し示す。例えば
、配列番号３７のＬＣＤＲ１上の残基Ｑ４（ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ）は、抗体の特性を
実質的に変化させずにＡ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、
Ｖ、Ｗ、又はＹへと変異誘導可能である。配列番号６６のＶＬにおける対応する残基はＱ
２７である。
表１９又は表２０に示す変異は、標準法を用い、単一のものとして、あるいは組み合わ
せてＣ４ＬＢ８９に対しなすことができる。得られるＶＨ／ＶＬ対を、本明細書に記載の
方法を用いて発現させ、変異を導入した抗体を単離し、特性評価する。
Figure 2022058414000019
Figure 2022058414000020
実施例１２．血小板活性化及びよりハイオーダーの免疫複合体形成の評価
Ｆａｂ領域と、Ｃ４ＬＢ２３１及び５Ｃ８ＩｇＧ１のｓｈＣＤ１５４との結晶構造デー
タの評価、ＳＣ－ＨＰＬＣ及びＤＬＳによる上記の実験、並びに血小板活性化データのレ
ビューに関する評価をもとに、抗ＣＤ１５４抗体とｓｈＣＤ１５４三量体との結合におけ
るわずかな差が、ハイオーダーの免疫複合体形成を促進し得るとの仮説を立てた。１）Ｃ
４ＬＢ２３１ Ｆａｂは、ｓＣＤ１５４三量体の２つのサブユニット間に結合する一方で
、５Ｃ８ Ｆａｂは、ｓＣＤ１５４の１つのサブユニットに結合する。２）Ｃ４ＬＢ２３
１ Ｆａｂは、５ｃ８ Ｆａｂと比較して、立体構造がより安定であり、かつ３）抗ＣＤ
１５４抗体とのｓＣＤ１５４結合角度がより安定なようである。
抗体のエピトープの介在する血小板活性化の役割、及びハイオーダーでのｓｈＣＤ１５
４との免疫複合体形成をさらに評価する目的で、様々な抗ＣＤ１５４抗体のＶＨ及びＶＬ
をクローン化し、Ｆｃの機能を欠失させたＩｇＧ２σ及びＩｇＧ１σアイソタイプとして
、又はＩｇＧ１として発現させた。作製された抗体を表２１に示す。実施例６に記載のと
おりに血小板活性化アッセイを行った。サイズ排除高性能液体クロマトグラフィー（ＳＥ
－ＨＰＬＣ）及び動的光散乱（ＤＬＳ）による、よりハイオーダーでの免疫複合体形成に
ついての評価にあたり、モル濃度比１：１（あるいは１０：１０とも表記可能）及び１０
：１で抗体をｓｈＣＤ１５４と複合体化させて、免疫複合体形成における濃度依存性の差
異が存在するかを評価した。
Figure 2022058414000021
配列番号８４ Ｃ４ＬＢ１１９のＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＹＩＳＷＶＲＱ
ＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＩＤＰＹＦＧＹＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡ
ＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＴＧＬＮＹＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号８５ Ｃ４ＬＢ１１９のＶＬ
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫ
ＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥ
ＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号８６ Ｃ４ＬＢ８３のＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳＷＶＲＱ
ＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＩＰＩＦＧＮＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡ
ＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＫＤＦＲＧＹＴＫＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶ
ＳＳ
配列番号８７ Ｃ４ＬＢ８３のＶＬ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＮＮＷＬＮＷＹＱＱＫ
ＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱ
ＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＦＳＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
実施例１に記載のプロトコルを用いて、Ｃ４ＬＢ８３及びＣ４ＬＢ１１９の結合特性と
機能性を評価し、表２２に示す。
Figure 2022058414000022
方法
ＳＥ－ＨＰＬＣ
表２１に示す抗体と、Ａｌｅｘａｆｌｕｏ－４４８標識ｓｈＣＤ１５４との免疫複合体
を、１１０μＬの１ｘＰＢＳで、抗体：ｓｈＣＤ１５４のモル比を１：１及び１０：１で
調製し、３７℃で３０分間インキュベートした。各測定にあたり、５μｇのＡＦ４８８標
識ｓｈＣＤ１５４と、１５μｇ（１：１比）又は１５０μｇ（１０：１比）の抗ＣＤ１５
４ｍＡｂとを含有する１００μＬの各サンプルをカラムに注入した（Ａｇｉｌｅｎｔ，１
１００／１２００システム）。標準の保持時間をもとに分子量を計算した（Ｂｉｏ－Ｒａ
ｄ）。タンパク質の分子量と保持時間との関係は次式を満たす。
ｌｏｇ（Ｍ）＝ｂ－ｃＴ，
式中、Ｍは分子量であり、Ｔは保持時間であり、かつｂ及びｃは定数である。ｌｏｇ（
Ｍ）及びＴの線形曲線（linear curve）は、Ｒ２＝０．９９２８とした最小二乗法により
標準ＳＥ－ＨＰＬＣクロマトグラムから得た。
ＤＬＳ
ＤＬＳ測定は、光散乱の原理と、分子運動又はブラウン運動とに基づくものである。ブ
ラウン運動、典型的には、溶液中の分子挙動は、相の内外の両方で光散乱を招き、建設的
干渉及び破壊的干渉を生じる。その結果が、時間に伴う散乱光の強度の変動である。ＤＬ
Ｓ又はＱＥＬＳ（順弾性光散乱）解析中、散乱光強度におけるこの時間依存性の変動は高
速光子カウンターにより捕捉される。この変動は、分散速度に正比例する。ストークス・
アインシュタインの式を用いた相関データの分析により、流体力学的半径を得た。サンプ
ルの分析により単量体及び二量体を識別可能なＳＥＣ－ＭＡＬＳ又はＳＥＣとは異なり、
ＤＬＳは約４のサイズファクター（size factor）により分類される分析種の分析のみが
可能であり、したがって、単量体及び四量体が分析されはじめる。しかしながら、単量体
と二量体とは識別されず、混合物の重量平均が報告されることになる。
ストークス・アインシュタインの式：Ｒｈ＝ｋＴ／６πηＤ；式中、
Ｄ＝拡散係数、
ｋ＝ボルツマン定数
Ｔ＝温度
η＝粘度
１０μＭの抗体単独、又は表２１に示す抗体とｓｈＣＤ１５４との免疫複合体、及び、
抗体：ｓｈＣＤ１５４（１０μＭ抗体と１μＭ又は１０μＭ ｓｈＣＤ１５４のいずれか
）のモル濃度１０：１又は１０：１０でＰＢＳで調製した。全てのサンプルは、バイアル
インサート（ポリマーフィートを施した２５０μＬの不活性化ガラス，Ａｇｉｌｅｎｔカ
タログ番号５１８１～８８７２）を入れたガラスバイアルで調製し、ＰＢＳ、ｍＡｂ、ｓ
ｈＣＤ１５４の順でサンプルを加えた。サンプルを穏やかにボルテックスにかけて混合し
た後、ｒｏｃｋｉｎｇ（Ｎｕｔａｔｉｎｇ Ｍｉｘｅｒ（ＶＷＲ）約３０ｒｅｖ／ｍｉｎ
で室温で２３時間インキュベートした。必要な場合、標準法を用い最初に抗体を濃縮した
。
２３℃にてＤｙｎａＰｒｏ Ｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ ＤＬＳ機器（Ｗｙａｔｔ Ｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用し、全てのサンプルにおいて
粒子径及び分析種分布（species distribution）を求めた。まずはＢＳＡを用いＤＬＳの
一貫性を確認した（データ非掲載）。３重測定のため、３つのウェルのそれぞれに３０μ
Ｌのサンプルを入れ測定を行った。ＤｙｎａＰｒｏプレートリーダーでＤＬＳ測定値を取
得した。各サンプルに対し２５秒間のデータ取得を行った。レーザーの出力は装置により
自動的に調節した。データ解析に使用するパラメーターには、ＰＢＳの粘度は、２３℃下
では１．０１９ｃＰであるというものと、ＰＢＳの屈折率は５８９ｎｍ、かつ２３℃下で
は１．３３３であるというものを含めた。プログラムには球状タンパク質モデルを使用し
た。シグナルを各ピークに割り当てた。ここで、ピーク１は０．１～１０ｎｍ、ピーク２
は１０～１００ｎｍ、ピーク３は１００～１０００ｎｍ、及びピーク４は１０００～５０
００ｎｍであった。サンプル中に沈殿物（形成される場合）が視認される場合、それにつ
いて記録した。Ｄｙｎａｍｉｃｓソフトウェア（Ｗｙａｔｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉ
ｎｃ．）を用いデータ解析を行った。質量％の分析種半径（Ｒｈ）に対するプロットを作
製した。ピーク半径、多分散性、質量％、及び％強度を計算し、記録した。
結果
血小板活性化
ｓｈＣＤ１５４と、Ｆｃを欠失させたＩｇＧ２σ若しくはＩｇＧ１σとして、又は野生
型ＩｇＧ１として発現させた抗体との免疫複合体による血小板活性化能を評価した。様々
なＩｇＧ足場に対しクローン化した５ｃ８抗体を対照として使用した。図３は、抗Ｆｃγ
ＲＩＩａ抗体が５ｃ８ＩｇＧ１介在性の血小板活性化を阻害したことから、５ｃ８ＩｇＧ
１：ｓｈＣＤ１５４免疫複合体がＦｃγＲＩＩａに依存した方法で血小板を活性化したこ
とを示す。エフェクターを欠失させたＦｃ、ＩｇＧ１σ、又はＩｇＧ２σでクローン化し
た５ｃ８ ＶＨ／ＶＬ領域は、それらの血小板活性化能を失っていた（図１）。これらの
結果は、これまでに記載した内容と一致している。しかしながら、予想外にも、実施例１
０で実施した実験により、野生型ＩｇＧ１抗体との免疫複合体（Ｃ４ＬＢＢ２３７：ｓｈ
ＣＤ１５４）は血小板（図７）を活性化しないことが示され、可能性のある、エピトープ
に依存性の血小板活性化に研究をさらに進めた。
エピトープ及び／又はＦｃが血小板活性化並びにハイオーダーでの免疫複合体の形成に
対し及ぼす効果を評価することを目的として、４個の別個の抗体のＶＨ／ＶＬ領域をＩｇ
Ｇ２σ、ＩｇＧ１σ、又は野生型ＩｇＧ１としてクローン化した。これまでに文献におい
て開示されていることとは反対に、いくつかの場合では、血小板の活性化はＦｃγＲＩＩ
ａ介在性の架橋とは独立して抗体のエピトープにより介在されることが判明した。
図８Ａ、図８Ｂ、及び図８Ｃに分析の要約を示す。抗ＦｃγＲＩＩａ抗体により予めブ
ロッキングすると血小板活性化の阻害が生じないことから、Ｆｃ機能を欠失させた抗体Ｃ
４ＬＢ１１９（図８Ａ）及びＣ４ＬＢ９４（図８Ｂ）の免疫複合体は、ＦｃγＲＩＩａに
依存した方法で血小板を活性化した。同様にしてＦｃ機能を欠失させた抗体Ｃ４ＬＢ８３
のＩＣは、血小板をわずかに活性化した（図８Ｃ）。野生型ＩｇＧ１でクローン化したも
のと同じＶＨ／ＶＬドメインを有する抗体のＩＣは、各場合でＦｃγＲＩＩａ介在性の方
法で血小板を活性化した（図８Ａ中Ｃ４ＬＢ２７８、図８Ｂ中Ｃ４ＬＢ２８９、及び図８
Ｃ中Ｃ４ＬＢ２８８）。したがって、機能を欠失させたＦｃを有しているのにもかかわら
ず血小板の活性化を介在したいくつかの抗体が特定された。１つのＶＨ／ＶＬドメイン対
は、機能を欠失させたＩｇＧ１（Ｃ４ＬＢ２３１）又は野生型ＩｇＧ１（Ｃ４ＬＢ２３７
）のいずれでも血小板の活性化を介在しなかったことが特定された。これらのデータは、
抗体のエピトープが、血小板凝集の介在において役割を果たすことを示す。
よりハイオーダーの免疫複合体形成
ＳＥ－ＨＰＬＣ及びＤＬＳを使用して、ハイオーダーの免疫複合体の形成の存在、並び
にこれらの、表２１に示す抗ＣＤ１５４抗体とｓｈＣＤ１５４との免疫複合体の適切な大
きさと、をさらに評価した。ｓｈＣＤ１５４は溶液中で三量体であることから、溶液中の
抗体：ｓｈＣＤ１５４三量体に見込まれる化学量論は３：１である。カラムから溶出不能
であり、低収率（％）が確認されている非常に大きい免疫複合体とを例外として、ＳＥ－
ＨＰＬＣに関しては、免疫複合体が重くなるほど、ひいては大きくなるほど保持時間が短
くなる一方で、免疫複合体が軽くなるほど、ひいては小さくなるほど保持時間が長くなる
。ＤＬＳの場合、半径（Ｒｈ）値が大きくなるほど免疫複合体が大きくなる。プレートＤ
ＬＳ法では、ＩｇＧ単量体、二量体、三量体、及び四量体を識別できない。したがって、
得られるＲｈ値は単量体－三量体の重量平均となり、Ｒｈ値が６．５に近くなるほど、ｍ
Ａｂ溶液がハイオーダーの分析種を、典型的には二量体を含有していることを表し得る。
ｍＡｂのｓｈＣＤ１５４に対する結合が化学量論的なものである場合、２種類の分析種は
、３：１複合体（約５００ｋＤａ）と、未結合の抗体（約１５０ｋＤａ）とで表されるこ
とになり、この場合、約８．８ｎｍ及び５～６．５ｎｍのＲｈ値がそれぞれ３：１複合体
及び未結合のｍＡｂに相当する。いずれの技法でも、免疫複合体の分子量を正確に分類で
きないものの、相対的な大きさでの分類も可能である。表２３は、保持時間及び流体力学
的半径とおよその分子量との関係を示す。
Figure 2022058414000023
ＤＬＳ
ＣＤ１５４を含まないｍＡｂ、及び抗体：ｓｈＣＤ１５４免疫複合体の大きさを、抗体
（１０：１モル比）過剰、及び等濃度（１：１モル比）で抗体：ｓｈＣＤ１５４複合体が
形成される条件下で評価した。抗体が過剰な条件下では、抗体は、典型的には、ＣＤ１５
４部位飽和させて免疫複合体を形成し、未結合の過剰な抗体が存在する。等濃度下では、
未結合の抗体又は未結合のｓｈＣＤ１５４は存在しない。ｓｈＣＤ１５４の非存在下、及
びモル濃度比１０：１及び１０：１０でのｓｈＣＤ１５４の存在下で、各ｍＡｂについて
得られたＲｈ値を表２４に示す。
公称分子量１５０ｋＤａの典型的なｍＡｂでは、５．０～６．５ｎｍのＲｈ値が得られ
る。多くの場合、サイズ排除クロマトグラフィー中に見られるＩｇＧ二量体は、プレート
ＤＬＳ法では分離できない。得られるＲｈ値は単量体－三量体の重量平均となり、Ｒｈ値
が６．５に近くなるほど、ｍＡｂ溶液がハイオーダーで抗体分子種を、典型的には二量体
を含有していることを表し得る。
ＣＤ１５４の存在しないｍＡｂに関しては、Ｒｈ値がそれぞれ６．９ｎｍ及び７．１ｎ
ｍであったＣ４ＬＢ２８７及びＣ４ＬＢ２３４を除く全てのｍＡｂで、５．５～６．３ｎ
ｍの見込みＲｈ値が観察されたことから、これらの抗体が元々の凝集傾向を有しているこ
とが示された。
１０：１比で形成された抗体：ｓｈＣＤ１５４複合体のＲｈ値は概して約８．８ｎｍ未
満であり、ハイオーダーの免疫複合体が形成されたことを示す５ｃ８ＩｇＧ２σ（Ｃ４Ｌ
Ｂ７１）及びＣ４ＬＢ２３４（Ｒｈ値はそれぞれ８．９及び９．３ｎｍ）を除き、化学量
論比３：１の複合体ではハイオーダーの免疫複合体の形成はなかったことが示唆される。
ｓｈＣＤ１５４濃度を１０μＭに上昇させると、１μＭ ＣＤ１５４（１０：１の抗体
：ＣＤ１５４比）との複合体と比較して抗体：ｓｈＣＤ１５４免疫複合体のＲｈは高くな
った。抗体：ｓｈＣＤ１５４複合体の一部では、高分子量を有する第２の分析種が全質量
の７～２５％の範囲で存在することが実証された。Ｃ４ＬＢ７１、５Ｃ８ＩｇＧ１、Ｃ４
ＬＢ８９、Ｃ４ＬＢ１１９、Ｃ４ＬＢ９４、Ｃ４ＬＢ２３４、及びＣ４ＬＢ２８９のＩＣ
Ｒｈ値は、それぞれ、２２．１、６１５、５６．３、４５．０、１８．３、１８．７、
及び１９．６ｎｍであった。さらに、Ｃ４ＬＢ８９、Ｃ４ＬＢ１１９、Ｃ４ＬＢ８３、Ｃ
４ＬＢ２２８も９００～４０００ｎｍの分析種を形成し、Ｃ４ＬＢ８９及びＣ４ＬＢ１１
９は、非常に大型の免疫複合体を示す沈殿物を形成した。Ｒｈ１２ｎｍ付近の分析種は、
典型的には約１，０００ｋＤａの質量に相当するため、これらのｍＡｂは、これらの条件
下ではＣＤ１５４と非常に大型の免疫複合体を形成する。
Figure 2022058414000024
ＳＥ－ＨＰＬＣ
表２５は、ＳＥ－ＨＰＬＣ分析により得られた、抗ＣＤ１５４抗体単独、及びｓｈＣＤ
１５４との免疫複合体の保持時間、回収率、及び推定分子量（ＭＷ）を示す。典型的な抗
体は、約１５０ｋＤのＭＷを有し、ｓｈＣＤ１５４三量体は約５０ｋＤａのＭＷを有する
。したがって、化学量論比が３：１であるｍＡｂ：ｓｈＣＤ１５４三量体複合体の有する
推定分子量は約５００ｋＤａである。
Figure 2022058414000025
全ての抗体はｓｈＣＤ１５４と免疫複合体を形成した。Ｃ４ＬＢ２３１、Ｃ４ＬＢ２３
７、Ｃ４ＬＢ２９０、Ｃ４ＬＢ２８７（全てのＩｇＧ１σ）は、ｓＣＤ１５４と免疫複合
体を形成し、７．０分の時点で溶出したものの、Ｃ４ＬＢ２９０及びＣ４ＬＢ２８７の収
率（％）は、１：１条件下では１０：１条件下と比較して低かったのに対し、Ｃ４ＬＢ２
３１及びＣ４ＬＢ２３７では収率が高かった（８０％超）。Ｃ４ＬＢ２８９（ＩｇＧ１）
、Ｃ４ＬＢ２３４（ＩｇＧ１σ）、５ｃ８ＩｇＧ１σ（Ｃ４ＬＢ７１）、及びＣ４ＬＢＢ
９４（ＩｇＧ２σ）は、６．２～６．５分とより早い時点で溶出したことから、前述のｍ
Ａｂよりも大型の複合体が形成されていたことが示唆される。５ｃ８ＩｇＧ１は、３：１
のｍＡｂ：ｓｈＣＤ１５４三量体免疫複合体に見込まれる保持時間でブロードのピークを
有していたものの、ブロードのピーク及び低収率（１：１条件下で５６％）により、カラ
ムと相互作用し得る、又はカラムに入らないよりハイオーダーの免疫複合体が形成されて
いた可能性があることが示唆された。Ｃ４ＬＢ８９及びＣ４ＬＢ１１９（いずれもＩｇＧ
２σ）はｓｈＣＤ１５４と複合体を形成し、ブロードのピークでもって溶出し、収率は非
常に低かった（１：１条件下で６～１７％）。これはカラムに入らない大型の複合体が形
成されたためである可能性がある。概して、ＩｇＧ２σアイソタイプの抗体は、ＩｇＧ１
σ又はＩｇＧ１の抗体と比較して、より大型の免疫複合体を形成した。
表２６は、抗体の特性評価の要約を示す。最終的に、血小板活性化データ、ＳＥ－ＨＰ
ＬＣ及びＤＬＳデータ共に、血小板活性化は活性型Ｆｃによってのみ起因するものではな
いことを示唆する。かかるデータは、ＩｇＧ１σ及びＩｇＧ２σなどの機能を欠失したＦ
ｃを有する抗体が、ｍＡｂとｓｈＣＤ１５４三量体が３：１の、予想される複合体よりも
大型の免疫複合体を形成可能であること、並びにＦｃの機能を欠失している抗体のうちい
くつかが血小板活性化能を有していることを示唆する。このデータにより、ＶＨ／ＶＬド
メイン（例えば、抗体が結合するエピトープ）と、ハイオーダーの免疫複合体形成の両方
が血小板活性化に関与するという結論が裏付けられた。
Figure 2022058414000026
Figure 2022058414000038
本発明は、以下の態様を包含し得る。
［１］
配列番号１のヒトＣＤ１５４に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原結合部分であって、配列番号１７の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１（ＳＹＧＩＳ）と、配列番号２３のＨＣＤＲ２（ＷＩＳＰＩＦＧＮＴＮＹＡＱＫＦＱＧ）と、配列番号３０のＨＣＤＲ３（ＳＲＹＹＧＤＬＤＹ）とを含み、場合により、
ａ）前記ＨＣＤＲ１残基Ｓ１が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、又はＶに変異しており、
ｂ）前記ＨＣＤＲ１残基Ｉ４が、Ｍ、Ｌ、又はＶに変異しており、
ｃ）前記ＨＣＤＲ１残基Ｓ５が、Ａに変異しており、
ｄ）前記ＨＣＤＲ２残基Ｓ３が、Ａ、Ｔ、又はＶに変異しており、
ｅ）前記ＨＣＤＲ２残基Ｐ４が、Ｖ、Ｔ、Ｌ Ｑ、又はＥに変異しており、
ｆ）前記ＨＣＤＲ２残基Ｎ８が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ｇ）前記ＨＣＤＲ２残基Ｔ９が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ｈ）前記ＨＣＤＲ２残基Ｎ１０が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ｉ）前記ＨＣＤＲ３残基Ｓ１が、Ａ、又はＭに変異しており、
ｊ）前記ＨＣＤＲ３残基Ｒ２が、Ａ、Ｓ、Ｑ、又はＫに変異しており、および、
ｋ）前記ＨＣＤＲ３残基Ｌ７が、Ｍに変異している、単離されたアンタゴニスト抗体又
はその抗原結合部分。
［２］
配列番号３７の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１（ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ）と、配列番号４４のＬＣＤＲ２（ＹＡＮＳＬＱＳ）と、配列番号５２のＬＣＤＲ３（ＱＱＳＤＳＩＰＷＴ）と、を含み、場合により、
ａ）前記ＬＣＤＲ１残基Ｑ４が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ｂ）前記ＬＣＤＲ１残基Ｓ５が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ｃ）前記ＬＣＤＲ１残基Ｓ７が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ｄ）前記ＬＣＤＲ１残基Ｓ８が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ｅ）前記ＬＣＤＲ２残基Ａ２が、Ｓに変異しており、
ｆ）前記ＬＣＤＲ２残基Ｎ３が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ｇ）前記ＬＣＤＲ２残基Ｓ４が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ｈ）前記ＬＣＤＲ２残基Ｌ５が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ｉ）前記ＬＣＤＲ２残基Ｑ６が、Ｅ、Ｄ、又はＮに変異しており、
ｊ）前記ＬＣＤＲ２残基Ｓ７が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
ｋ）前記ＬＣＤＲ３残基Ｓ３が、Ａに変異しており、
ｌ）前記ＬＣＤＲ３残基Ｄ４が、Ｎに変異しており、
ｍ）前記ＬＣＤＲ３残基Ｓ５が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、および、
ｎ）前記ＬＣＤＲ３残基Ｉ６が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖに変異している、上記［１］に記載の抗体。
［３］
ａ）それぞれ、配列番号３６、４３、及び５１、
ｂ）それぞれ、配列番号３７、４４、及び５２、
ｃ）それぞれ、配列番号３８、４５、及び５３、
ｄ）それぞれ、配列番号３９、４６、及び５４、
ｅ）それぞれ、配列番号４０、４７、及び５５、
ｆ）それぞれ、配列番号４１、４７、及び５６、
ｇ）それぞれ、配列番号４２、４８、及び５７、
ｈ）それぞれ、配列番号３７、４９、及び５２、又は
ｉ）それぞれ、配列番号３７、５０、及び５２
の、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、上記［１］に記載の抗体。
［４］
前記配列番号１７のＨＣＤＲ１（ＳＹＧＩＳ）と、前記配列番号２３のＨＣＤＲ２（ＷＩＳＰＩＦＧＮＴＮＹＡＱＫＦＱＧ）と、前記配列番号３０のＨＣＤＲ３（ＳＲＹＹＧＤＬＤＹ）と、前記配列番号３７のＬＣＤＲ１（ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ）と、前記配列番号４４のＬＣＤＲ２（ＹＡＮＳＬＱＳ）と、前記配列番号５２のＬＣＤＲ３（ＱＱＳＤＳＩＰＷＴ）とを含む、上記［２］に記載の抗体。
［５］
前記抗体が、以下の特性：
ａ）前記抗体と、可溶性ヒトＣＤ１５４（ｓｈＣＤ１５４）との免疫複合体が、血小板を活性化せず、ここで、血小板活性化は、血小板上のＰ－セレクチン表面発現により測定される；
ｂ）０．０３％のポリソルベートＰ２０及び１００μｇ／ｍＬのウシ血清アルブミンを含有しているダルベッコリン酸緩衝生理食塩水にて、２５℃下でＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６システムを用いＫ Ｄ を測定したときに、約５×１０ －９ Ｍ以下の解離定数（Ｋ Ｄ ）でＣＤ１５４に結合する；
ｃ）ＣＤ１５４介在性のヒトＢ細胞の増殖を約２．７×１０ －９ Ｍ以下のＩＣ ５０ 値で阻害する；又は
ｄ）分泌型胎盤性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）及びヒトＣＤ４０を安定的に発現するＨＥＫ２９３細胞において、ＮＦ－κＢ－誘導性インターフェロン－β（ＩＦＮ－β）ミニマルプロモーター下、約２．１×１０ －８ Ｍ以下のＩＣ ５０ 値で、ＳＥＡＰのＣＤ１５４介在性の発現を阻害する；
のうちの少なくとも１つを有する、上記［２］に記載の抗体。
［６］
ＣＤ１５４がホモ三量体であり、前記抗体が、前記ホモ三量体中の第１のＣＤ１５４モノマーにＣＤ１５４のアミノ酸残基１８２～２０７内で結合し、前記ホモ三量体中の第２のＣＤ１５４モノマーにＣＤ１５４のアミノ酸残基１７６～２５３内で結合し、ここで、残基付番は配列番号１に準拠する、上記［２］に記載の抗体。
［７］
前記抗体が、前記第１のＣＤ１５４モノマー中の残基Ｅ１８２、Ｓ１８５、Ｑ１８６、Ａ１８７、Ｐ１８８、Ｓ２１４、Ａ２１５、及びＲ２０７に結合し、ここで残基付番は配列番号１に準拠する、上記［６］に記載の抗体。
［８］
前記抗体が、前記第２のＣＤ１５４モノマー中の残基Ｔ１７６、Ｆ１７７、Ｃ１７８、Ｑ２２０、Ｓ２４８、Ｈ２４９、Ｇ２５０、及びＦ３５３に結合し、ここで残基付番は配列番号１に準拠する、上記［６］に記載の抗体。
［９］
配列番号５９の重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、場合により、前記ＶＨは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸置換を含む、上記［２］に記載の抗体。
［１０］
配列番号６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、又は７３の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、場合により、前記ＶＬは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸置換を含む、上記［９］に記載の抗体。
［１１］
配列番号６６、７２、又は７３の前記ＶＬを含む、上記［１０］に記載の抗体。
［１２］
配列番号５９の前記ＶＨ、及び配列番号６６の前記ＶＬを含む、上記［１１］に記載の抗体。
［１３］
配列番号５９の前記ＶＨ、及び配列番号７２の前記ＶＬを含む、上記［１１］に記載の抗体。
［１４］
配列番号５９の前記ＶＨ、及び配列番号７３の前記ＶＬを含む、上記［１１］に記載の抗体。
［１５］
前記抗体が、ＩｇＧ１型、ＩｇＧ２型、ＩｇＧ３型、又はＩｇＧ４型アイソタイプである、上記［２］に記載の抗体。
［１６］
Ｆｃ領域に少なくとも１つの置換を含む、上記［１５］に記載の抗体。
［１７］
前記Ｆｃ領域における少なくとも１つの置換が、置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｈ２６８Ａ、Ａ３３０Ｓ、又はＰ３３１Ｓであり、残基付番がＥＵインデックスに準拠する、上記［１６］に記載の抗体。
［１８］
前記Ｆｃ領域に置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ａ３３０Ｓ、又はＰ３３１Ｓを含み、残基付番がＥＵインデックスに準拠する、上記［１７］に記載の抗体。
［１９］
前記Ｆｃ領域における少なくとも１つの置換が、置換Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、又はＰ３３１Ｓであり、残基付番がＥＵインデックスに準拠する、上記［１６］に記載の抗体。
［２０］
前記Ｆｃ領域に置換Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓを含み、残基付番がＥＵインデックスに準拠する、上記［１９］に記載の抗体。
［２１］
ａ）それぞれ、配列番号８０及び８１、
ｂ）それぞれ、配列番号８２及び８１、又は
ｃ）それぞれ、配列番号８３及び８１
の、重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）を含む、上記［１６］に記載の抗体。
［２２］
前記抗体が多重特異性である、上記［２］に記載の抗体。
［２３］
配列番号１のＣＤ１５４に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原結合部分であって、
ａ）それぞれ配列番号１７、２３、３０、３７、４４、及び５２の前記ＨＣＤＲ１、前記ＨＣＤＲ２、前記ＨＣＤＲ３、前記ＬＣＤＲ１、前記ＬＣＤＲ２、及び前記ＬＣＤＲ３、
ｂ）配列番号５９の前記ＶＨ及び配列番号６６の前記ＶＬ、又は
ｃ）配列番号８０の前記重鎖及び配列番号８１の前記軽鎖
を含む、単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原結合部分。
［２４］
配列番号１のＣＤ１５４に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原結合部分であって、ＣＤ１５４がホモ三量体であり、前記抗体が、前記ホモ三量体中の第１のＣＤ１５４モノマーにＣＤ１５４のアミノ酸残基１８２～２０７内で結合し、前記ホモ三量体中の第２のＣＤ１５４モノマーにＣＤ１５４のアミノ酸残基１７６～２５３内で結合し、ここで、残基付番は配列番号１に準拠する、単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原結合部分。
［２５］
治療薬又は造影剤に結合させた上記［２］に記載の抗体を含む免疫複合体。
［２６］
上記［２］に記載の抗体と、医薬的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
［２７］
前記配列番号５９の抗体ＶＨをコードしているポリヌクレオチド。
［２８］
前記配列番号６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、又は７３の抗体ＶＬをコードしているポリヌクレオチド。
［２９］
配列番号７６、７７、７８、又は７９のポリヌクレオチド配列を含む、ポリヌクレオチド。
［３０］
前記配列番号５９の抗体ＶＨと、前記配列番号６６の抗体ＶＬとをコードしているポリヌクレオチド。
［３１］
上記［２７］、［２８］、［２９］、又は［３０］に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
［３２］
上記［３１］に記載のベクターを含む、宿主細胞。
［３３］
配列番号１のＣＤ１５４に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原結合部分の製造方法であって、
前記抗体が発現される条件下で上記［３２］に記載の宿主細胞を培養することと、前記宿主細胞より産生された前記抗体を回収することと、を含む、方法。
［３４］
自己免疫疾患又は免疫介在性炎症性疾患の治療方法であって、
治療有効量の上記［２］に記載の単離された抗体又は上記［２６］に記載の医薬組成物を、前記自己免疫疾患又は前記免疫介在性炎症性疾患を治療するのに十分な時間にわたって、前記自己免疫疾患又は前記免疫介在性炎症性疾患の治療を必要としている患者に投与することを含む、方法。
［３５］
前記免疫介在性炎症性疾患又は前記自己免疫疾患が、関節炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、炎症性腸疾患、移植、腎移植、皮膚移植、骨髄移植、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、免疫性血小板減少症（ＩＴＰ）、多発性硬化症、甲状腺炎、１型糖尿病、又はアテローム性動脈硬化症である、上記［３４］に記載の方法。
［３６］
関節炎が、関節リウマチ、若年性関節炎、乾癬性関節炎、ライター症候群、強直性脊椎炎、又は痛風性関節炎である、上記［３５］に記載の方法。
［３７］
前記自己免疫疾患又は前記免疫介在性炎症性疾患が、狼瘡である、上記［３４］に記載の方法。
［３８］
前記自己免疫疾患又は前記免疫介在性炎症性疾患が、移植である、上記［３４］に記載の方法。
［３９］
前記自己免疫疾患又は前記免疫介在性炎症性疾患が、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）である、上記［３４］に記載の方法。
［４０］
ＩＢＤがクローン病又は潰瘍性大腸炎である、上記［３９］に記載の方法。
［４１］
第２の治療剤をさらに投与する、上記［３４］に記載の方法。
［４２］
前記第２の治療薬が、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、サリチラート、ヒドロキシクロロキン、スルファサラジン、コルチコステロイド、細胞毒性剤、免疫抑制剤、及び／又は抗体である、上記［４１］に記載の抗体。
［４３］
治療に使用するための、上記［２］に記載の抗体又は上記［２５］に記載の医薬組成物。
［４４］
配列番号１のＣＤ１５４に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体であって、
ａ）それぞれ、配列番号１６、２２、及び２９、
ｂ）それぞれ、配列番号１７、２３、及び３０、
ｃ）それぞれ、配列番号１６、２４、及び３１、
ｄ）それぞれ、配列番号１８、２５、及び３２、
ｅ）それぞれ、配列番号１９、２６、及び３３、
ｆ）それぞれ、配列番号２０、２７、及び３４、又は
ｇ）それぞれ、配列番号２１、２８、及び３５
の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、場合により、前記ＨＣＤＲ１、前記ＨＣＤＲ２及び／又は前記ＨＣＤＲ３における保存的アミノ酸置換を１つ、２つ、又は３つ有し、
ここで、前記ＨＣＤＲ１、前記ＨＣＤＲ２、及び前記ＨＣＤＲ３が、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、又はＩＭＧＴにより定義されるものである、単離されたアンタゴニスト抗体。
［４５］
ａ）それぞれ、配列番号３６、４３、及び５１、
ｂ）それぞれ、配列番号３７、４４、及び５２、
ｃ）それぞれ、配列番号３８、４５、及び５３、
ｄ）それぞれ、配列番号３９、４６、及び５４、
ｅ）それぞれ、配列番号４０、４７、及び５５、
ｆ）それぞれ、配列番号４１、４７、及び５６、
ｇ）それぞれ、配列番号４２、４８、及び５７、
ｈ）それぞれ、配列番号３７、４９、及び５２、又は
ｉ）それぞれ、配列番号３７、５０、及び５２
の、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、場合により、前記ＬＣＤＲ１、前記ＬＣＤＲ２及び／又は前記ＬＣＤＲ３における保存的アミノ酸置換を１つ、２つ、又は３つ有し、
ここで、前記ＬＣＤＲ１、前記ＬＣＤＲ２、及び前記ＬＣＤＲ３が、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、又はＩＭＧＴにより定義されるものである、上記［４４］に記載の抗体。
［４６］
ａ）それぞれ配列番号１６、２２、及び２９の前記ＨＣＤＲ１、前記ＨＣＤＲ２、及び前記ＨＣＤＲ３と、それぞれ配列番号３６、４３、及び５１の前記ＬＣＤＲ１、前記ＬＣＤＲ２、及び前記ＬＣＤＲ３とを含む、又は
ｂ）配列番号５８の前記ＶＨと配列番号６５の前記ＶＬとを含む、上記［４５］に記載の抗体。
［４７］
ａ）それぞれ配列番号１７、２３、及び３０の前記ＨＣＤＲ１、前記ＨＣＤＲ２、及び前記ＨＣＤＲ３と、それぞれ配列番号３７、４４、及び５２の前記ＬＣＤＲ１、前記ＬＣＤＲ２、及び前記ＬＣＤＲ３と、を含む、又は
ｂ）配列番号５９の前記ＶＨと配列番号６６の前記ＶＬとを含む、上記［４５］に記載の抗体。
［４８］
ａ）それぞれ配列番号１６、２４、及び３１の前記ＨＣＤＲ１、前記ＨＣＤＲ２、及び前記ＨＣＤＲ３と、それぞれ配列番号３８、４５、及び５３の前記ＬＣＤＲ１、前記ＬＣＤＲ２、及び前記ＬＣＤＲ３と、を含む、又は
ｂ）配列番号６０の前記ＶＨと配列番号６７の前記ＶＬとを含む、上記［４５］に記載の抗体。
［４９］
ａ）それぞれ配列番号１８、２５、及び３２の前記ＨＣＤＲ１、前記ＨＣＤＲ２、及び前記ＨＣＤＲ３と、それぞれ配列番号３９、４６、及び５４の前記ＬＣＤＲ１、前記ＬＣＤＲ２、及び前記ＬＣＤＲ３と、を含む、又は
ｂ）配列番号６１の前記ＶＨと配列番号６８の前記ＶＬとを含む、上記［４５］に記載の抗体。
［５０］
ａ）それぞれ配列番号１９、２６、及び３３の前記ＨＣＤＲ１、前記ＨＣＤＲ２、及び前記ＨＣＤＲ３と、それぞれ配列番号４０、４７、及び５５の前記ＬＣＤＲ１、前記ＬＣＤＲ２、及び前記ＬＣＤＲ３と、を含む、又は
ｂ）配列番号６２の前記ＶＨと配列番号６９の前記ＶＬとを含む、上記［４５］に記載の抗体。
［５１］
ａ）それぞれ配列番号２０、２７、及び３４の前記ＨＣＤＲ１、前記ＨＣＤＲ２、及び前記ＨＣＤＲ３と、それぞれ配列番号４１、４７、及び５６の前記ＬＣＤＲ１、前記ＬＣＤＲ２、及び前記ＬＣＤＲ３と、を含む、又は
ｂ）配列番号６３の前記ＶＨと配列番号７０の前記ＶＬとを含む、上記［４５］に記載の抗体。
［５２］
ａ）それぞれ配列番号２１、２８、及び３５の前記ＨＣＤＲ１、前記ＨＣＤＲ２、及び前記ＨＣＤＲ３と、それぞれ配列番号４２、４８、及び５７の前記ＬＣＤＲ１、前記ＬＣＤＲ２、及び前記ＬＣＤＲ３と、を含む、又は
ｂ）配列番号６４の前記ＶＨと配列番号７１の前記ＶＬとを含む、上記［４５］に記載の抗体。
［５３］
ａ）それぞれ配列番号１７、２３、及び３０の前記ＨＣＤＲ１、前記ＨＣＤＲ２、及び前記ＨＣＤＲ３と、それぞれ配列番号３７、４９、及び５２の前記ＬＣＤＲ１、前記ＬＣＤＲ２、及び前記ＬＣＤＲ３と、を含む、又は
ｂ）配列番号５９の前記ＶＨと配列番号７２の前記ＶＬとを含む、上記［４５］に記載の抗体。
［５４］
ａ）それぞれ配列番号１７、２３、及び３０の前記ＨＣＤＲ１、前記ＨＣＤＲ２、及び前記ＨＣＤＲ３と、それぞれ配列番号３７、５０、及び５２の前記ＬＣＤＲ１、前記ＬＣＤＲ２、及び前記ＬＣＤＲ３と、を含む、又は
ｂ）配列番号５９の前記ＶＨと配列番号７３の前記ＶＬとを含む、上記［４５］に記載の抗体。
［５５］
前記抗体が、ＩｇＧ１型、ＩｇＧ２型、ＩｇＧ３型、又はＩｇＧ４型アイソタイプである、上記［４５］に記載の抗体。
［５６］
Ｆｃ領域に少なくとも１つの置換を含む、上記［５５］に記載の抗体。
［５７］
前記Ｆｃ領域における少なくとも１つの置換が、置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｈ２６８Ａ、Ａ３３０Ｓ、又はＰ３３１Ｓであり、残基付番がＥＵインデックスに準拠する、上記［５６］に記載の抗体。
［５８］
前記Ｆｃ領域に置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓを含み、残基付番がＥＵインデックスに準拠する、上記［５７］に記載の抗体。
［５９］
前記Ｆｃ領域における少なくとも１つの置換が、置換Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、又はＰ３３１Ｓであり、残基付番がＥＵインデックスに準拠する、上記［５６］に記載の抗体。
［６０］
前記Ｆｃ領域に置換Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓを含み、残基付番がＥＵインデックスに準拠する、上記［５９］に記載の抗体。
［６１］
前記抗体が多重特異性である、上記［４５］に記載の抗体。
［６２］
前記抗体が、以下の特性：
ａ）前記抗体と、可溶性ヒトＣＤ１５４（ｓｈＣＤ１５４）との免疫複合体は、血小板を活性化せず、ここで、血小板活性化は、血小板上のＰ－セレクチン表面発現により測定される；
ｂ）０．０３％のポリソルベートＰ２０及び１００μｇ／ｍＬのウシ血清アルブミンを含有しているダルベッコリン酸緩衝生理食塩水にて、２５℃下でＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６システムを用いＫ Ｄ を測定したときに、約５×１０ －９ Ｍ以下の解離定数（Ｋ Ｄ ）でＣＤ１５４に結合する；
ｃ）ＣＤ１５４介在性のヒトＢ細胞の増殖を約２．７×１０ －９ Ｍ以下のＩＣ ５０ 値で阻害する；又は
ｄ）分泌型胎盤性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）及びヒトＣＤ４０を安定的に発現するＨＥＫ２９３細胞において、ＮＦ－κＢ－誘導性インターフェロン－β（ＩＦＮ－β）ミニマルプロモーター下、約２．１×１０ －８ Ｍ以下のＩＣ ５０ 値で、ＳＥＡＰのＣＤ１５４介在性の発現を阻害する；
のうちの少なくとも１つを有する、上記［４５］に記載の抗体。
［６３］
治療薬又は造影剤に結合させた上記［４５］に記載の抗体を含む免疫複合体。
［６４］
上記［４５］に記載の抗体と、医薬的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
［６５］
上記［４５］に記載の抗体ＶＨ、抗体ＶＬ、又は抗体ＶＨと抗体ＶＬとをコードしているポリヌクレオチド。
［６６］
上記［６５］に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
［６７］
上記［６６］に記載のベクターを含む、宿主細胞。
［６８］
配列番号１のＣＤ１５４に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原結合部分の製造方法であって、
前記抗体が発現される条件下で上記［６７］に記載の宿主細胞を培養することと、前記宿主細胞より産生された前記抗体を回収することと、を含む、方法。
［６９］
自己免疫疾患又は免疫介在性炎症性疾患の治療方法であって、
治療有効量の上記［４５］に記載の単離された抗体又は上記［６４］に記載の医薬組成物を、前記自己免疫疾患又は前記免疫介在性炎症性疾患を治療するのに十分な時間にわたって、前記自己免疫疾患又は前記免疫介在性炎症性疾患の治療を必要としている患者に投与することを含む、方法。
［７０］
前記免疫介在性炎症性疾患又は前記自己免疫疾患が、関節炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、炎症性腸疾患、移植、腎移植、皮膚移植、骨髄移植、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、免疫性血小板減少症（ＩＴＰ）、多発性硬化症、甲状腺炎、１型糖尿病、又はアテローム性動脈硬化症である、上記［６９］に記載の方法。
［７１］
関節炎が、関節リウマチである、上記［７０］に記載の方法。
［７２］
前記自己免疫疾患又は前記免疫介在性炎症性疾患が、狼瘡である、上記［６９］に記載の方法。
［７３］
前記自己免疫疾患又は前記免疫介在性炎症性疾患が、移植である、上記［６９］に記載の方法。
［７４］
前記自己免疫疾患又は前記免疫介在性炎症性疾患が、炎症性腸疾患である、上記［６９］に記載の方法。
［７５］
ＩＢＤがクローン病又は潰瘍性大腸炎である、上記［７４］に記載の方法。
［７６］
第２の治療剤をさらに投与する、上記［６９］に記載の方法。
［７７］
前記第２の治療薬が、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、サリチラート、ヒドロキシクロロキン、スルファサラジン、コルチコステロイド、細胞毒性剤、免疫抑制剤、及び／又は抗体である、上記［７６］に記載の抗体。
［７８］
治療に使用するための、上記［４５］に記載の抗体又は上記［６４］に記載の医薬組成物。
［７９］
上記［２］に記載の抗体に結合する抗イディオタイプ抗体。
［８０］
上記［２］に記載の抗体を含むキット。
［８１］
前記抗体を検出するための試薬及び使用説明書を更に含む、上記［８０］に記載のキット。

Claims (81)

  1. 配列番号１のヒトＣＤ１５４に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体又はそ
    の抗原結合部分であって、配列番号１７の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１（ＳＹＧＩ
    Ｓ）と、配列番号２３のＨＣＤＲ２（ＷＩＳＰＩＦＧＮＴＮＹＡＱＫＦＱＧ）と、配列番
    号３０のＨＣＤＲ３（ＳＲＹＹＧＤＬＤＹ）とを含み、場合により、
    ａ）前記ＨＣＤＲ１残基Ｓ１が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、
    Ｔ、又はＶに変異しており、
    ｂ）前記ＨＣＤＲ１残基Ｉ４が、Ｍ、Ｌ、又はＶに変異しており、
    ｃ）前記ＨＣＤＲ１残基Ｓ５が、Ａに変異しており、
    ｄ）前記ＨＣＤＲ２残基Ｓ３が、Ａ、Ｔ、又はＶに変異しており、
    ｅ）前記ＨＣＤＲ２残基Ｐ４が、Ｖ、Ｔ、Ｌ Ｑ、又はＥに変異しており、
    ｆ）前記ＨＣＤＲ２残基Ｎ８が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、
    Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
    ｇ）前記ＨＣＤＲ２残基Ｔ９が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、
    Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
    ｈ）前記ＨＣＤＲ２残基Ｎ１０が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｑ
    、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
    ｉ）前記ＨＣＤＲ３残基Ｓ１が、Ａ、又はＭに変異しており、
    ｊ）前記ＨＣＤＲ３残基Ｒ２が、Ａ、Ｓ、Ｑ、又はＫに変異しており、および、
    ｋ）前記ＨＣＤＲ３残基Ｌ７が、Ｍに変異している、単離されたアンタゴニスト抗体又
    はその抗原結合部分。
  2. 配列番号３７の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１（ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ）と、配
    列番号４４のＬＣＤＲ２（ＹＡＮＳＬＱＳ）と、配列番号５２のＬＣＤＲ３（ＱＱＳＤＳ
    ＩＰＷＴ）と、を含み、場合により、
    ａ）前記ＬＣＤＲ１残基Ｑ４が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、
    Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
    ｂ）前記ＬＣＤＲ１残基Ｓ５が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、
    Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
    ｃ）前記ＬＣＤＲ１残基Ｓ７が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、
    Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
    ｄ）前記ＬＣＤＲ１残基Ｓ８が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、
    Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
    ｅ）前記ＬＣＤＲ２残基Ａ２が、Ｓに変異しており、
    ｆ）前記ＬＣＤＲ２残基Ｎ３が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、
    Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
    ｇ）前記ＬＣＤＲ２残基Ｓ４が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、
    Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
    ｈ）前記ＬＣＤＲ２残基Ｌ５が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、
    Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
    ｉ）前記ＬＣＤＲ２残基Ｑ６が、Ｅ、Ｄ、又はＮに変異しており、
    ｊ）前記ＬＣＤＲ２残基Ｓ７が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、
    Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、
    ｋ）前記ＬＣＤＲ３残基Ｓ３が、Ａに変異しており、
    ｌ）前記ＬＣＤＲ３残基Ｄ４が、Ｎに変異しており、
    ｍ）前記ＬＣＤＲ３残基Ｓ５が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、
    Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹに変異しており、および、
    ｎ）前記ＬＣＤＲ３残基Ｉ６が、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、
    Ｔ、Ｖに変異している、請求項１に記載の抗体。
  3. ａ）それぞれ、配列番号３６、４３、及び５１、
    ｂ）それぞれ、配列番号３７、４４、及び５２、
    ｃ）それぞれ、配列番号３８、４５、及び５３、
    ｄ）それぞれ、配列番号３９、４６、及び５４、
    ｅ）それぞれ、配列番号４０、４７、及び５５、
    ｆ）それぞれ、配列番号４１、４７、及び５６、
    ｇ）それぞれ、配列番号４２、４８、及び５７、
    ｈ）それぞれ、配列番号３７、４９、及び５２、又は
    ｉ）それぞれ、配列番号３７、５０、及び５２
    の、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、請求項１
    に記載の抗体。
  4. 前記配列番号１７のＨＣＤＲ１（ＳＹＧＩＳ）と、前記配列番号２３のＨＣＤＲ２（Ｗ
    ＩＳＰＩＦＧＮＴＮＹＡＱＫＦＱＧ）と、前記配列番号３０のＨＣＤＲ３（ＳＲＹＹＧＤ
    ＬＤＹ）と、前記配列番号３７のＬＣＤＲ１（ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ）と、前記配列番
    号４４のＬＣＤＲ２（ＹＡＮＳＬＱＳ）と、前記配列番号５２のＬＣＤＲ３（ＱＱＳＤＳ
    ＩＰＷＴ）とを含む、請求項２に記載の抗体。
  5. 前記抗体が、以下の特性：
    ａ）前記抗体と、可溶性ヒトＣＤ１５４（ｓｈＣＤ１５４）との免疫複合体が、血小板
    を活性化せず、ここで、血小板活性化は、血小板上のＰ－セレクチン表面発現により測定
    される；
    ｂ）０．０３％のポリソルベートＰ２０及び１００μｇ／ｍＬのウシ血清アルブミンを
    含有しているダルベッコリン酸緩衝生理食塩水にて、２５℃下でＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ
    ３６システムを用いＫＤを測定したときに、約５×１０－９Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）で
    ＣＤ１５４に結合する；
    ｃ）ＣＤ１５４介在性のヒトＢ細胞の増殖を約２．７×１０－９Ｍ以下のＩＣ５０値で
    阻害する；又は
    ｄ）分泌型胎盤性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）及びヒトＣＤ４０を安定的に発
    現するＨＥＫ２９３細胞において、ＮＦ－κＢ－誘導性インターフェロン－β（ＩＦＮ－
    β）ミニマルプロモーター下、約２．１×１０－８Ｍ以下のＩＣ５０値で、ＳＥＡＰのＣ
    Ｄ１５４介在性の発現を阻害する；
    のうちの少なくとも１つを有する、請求項２に記載の抗体。
  6. ＣＤ１５４がホモ三量体であり、前記抗体が、前記ホモ三量体中の第１のＣＤ１５４モ
    ノマーにＣＤ１５４のアミノ酸残基１８２～２０７内で結合し、前記ホモ三量体中の第２
    のＣＤ１５４モノマーにＣＤ１５４のアミノ酸残基１７６～２５３内で結合し、ここで、
    残基付番は配列番号１に準拠する、請求項２に記載の抗体。
  7. 前記抗体が、前記第１のＣＤ１５４モノマー中の残基Ｅ１８２、Ｓ１８５、Ｑ１８６、
    Ａ１８７、Ｐ１８８、Ｓ２１４、Ａ２１５、及びＲ２０７に結合し、ここで残基付番は配
    列番号１に準拠する、請求項６に記載の抗体。
  8. 前記抗体が、前記第２のＣＤ１５４モノマー中の残基Ｔ１７６、Ｆ１７７、Ｃ１７８、
    Ｑ２２０、Ｓ２４８、Ｈ２４９、Ｇ２５０、及びＦ３５３に結合し、ここで残基付番は配
    列番号１に準拠する、請求項６に記載の抗体。
  9. 配列番号５９の重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、場合により、前記ＶＨは、１、２、３、
    ４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸置換を
    含む、請求項２に記載の抗体。
  10. 配列番号６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、又は７３の軽鎖可変領域
    （ＶＬ）を含み、場合により、前記ＶＬは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０
    、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸置換を含む、請求項９に記載の抗体。
  11. 配列番号６６、７２、又は７３の前記ＶＬを含む、請求項１０に記載の抗体。
  12. 配列番号５９の前記ＶＨ、及び配列番号６６の前記ＶＬを含む、請求項１１に記載の抗
    体。
  13. 配列番号５９の前記ＶＨ、及び配列番号７２の前記ＶＬを含む、請求項１１に記載の抗
    体。
  14. 配列番号５９の前記ＶＨ、及び配列番号７３の前記ＶＬを含む、請求項１１に記載の抗
    体。
  15. 前記抗体が、ＩｇＧ１型、ＩｇＧ２型、ＩｇＧ３型、又はＩｇＧ４型アイソタイプであ
    る、請求項２に記載の抗体。
  16. Ｆｃ領域に少なくとも１つの置換を含む、請求項１５に記載の抗体。
  17. 前記Ｆｃ領域における少なくとも１つの置換が、置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３
    ７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｈ２６８Ａ、Ａ３３０Ｓ、又
    はＰ３３１Ｓであり、残基付番がＥＵインデックスに準拠する、請求項１６に記載の抗体
    。
  18. 前記Ｆｃ領域に置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、
    Ａ３３０Ｓ、又はＰ３３１Ｓを含み、残基付番がＥＵインデックスに準拠する、請求項１
    ７に記載の抗体。
  19. 前記Ｆｃ領域における少なくとも１つの置換が、置換Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３
    ８Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、又
    はＰ３３１Ｓであり、残基付番がＥＵインデックスに準拠する、請求項１６に記載の抗体
    。
  20. 前記Ｆｃ領域に置換Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、
    Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓを含み、残基付番がＥＵインデックスに準拠する、請求項１
    ９に記載の抗体。
  21. ａ）それぞれ、配列番号８０及び８１、
    ｂ）それぞれ、配列番号８２及び８１、又は
    ｃ）それぞれ、配列番号８３及び８１
    の、重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）を含む、請求項１６に記載の抗体。
  22. 前記抗体が多重特異性である、請求項２に記載の抗体。
  23. 配列番号１のＣＤ１５４に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原
    結合部分であって、
    ａ）それぞれ配列番号１７、２３、３０、３７、４４、及び５２の前記ＨＣＤＲ１、前
    記ＨＣＤＲ２、前記ＨＣＤＲ３、前記ＬＣＤＲ１、前記ＬＣＤＲ２、及び前記ＬＣＤＲ３
    、
    ｂ）配列番号５９の前記ＶＨ及び配列番号６６の前記ＶＬ、又は
    ｃ）配列番号８０の前記重鎖及び配列番号８１の前記軽鎖
    を含む、単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原結合部分。
  24. 配列番号１のＣＤ１５４に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗
    原結合部分であって、ＣＤ１５４がホモ三量体であり、前記抗体が、前記ホモ三量体中の
    第１のＣＤ１５４モノマーにＣＤ１５４のアミノ酸残基１８２～２０７内で結合し、前記
    ホモ三量体中の第２のＣＤ１５４モノマーにＣＤ１５４のアミノ酸残基１７６～２５３内
    で結合し、ここで、残基付番は配列番号１に準拠する、単離されたアンタゴニスト抗体又
    はその抗原結合部分。
  25. 治療薬又は造影剤に結合させた請求項２に記載の抗体を含む免疫複合体。
  26. 請求項２に記載の抗体と、医薬的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
  27. 前記配列番号５９の抗体ＶＨをコードしているポリヌクレオチド。
  28. 前記配列番号６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、又は７３の抗体ＶＬ
    をコードしているポリヌクレオチド。
  29. 配列番号７６、７７、７８、又は７９のポリヌクレオチド配列を含む、ポリヌクレオチ
    ド。
  30. 前記配列番号５９の抗体ＶＨと、前記配列番号６６の抗体ＶＬとをコードしているポリ
    ヌクレオチド。
  31. 請求項２７、２８、２９、又は３０に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
  32. 請求項３１に記載のベクターを含む、宿主細胞。
  33. 配列番号１のＣＤ１５４に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗
    原結合部分の製造方法であって、
    前記抗体が発現される条件下で請求項３２に記載の宿主細胞を培養することと、前記宿
    主細胞より産生された前記抗体を回収することと、を含む、方法。
  34. 自己免疫疾患又は免疫介在性炎症性疾患の治療方法であって、
    治療有効量の請求項２に記載の単離された抗体又は請求項２６に記載の医薬組成物を、
    前記自己免疫疾患又は前記免疫介在性炎症性疾患を治療するのに十分な時間にわたって、
    前記自己免疫疾患又は前記免疫介在性炎症性疾患の治療を必要としている患者に投与する
    ことを含む、方法。
  35. 前記免疫介在性炎症性疾患又は前記自己免疫疾患が、関節炎、全身性エリテマトーデス
    （ＳＬＥ）、炎症性腸疾患、移植、腎移植、皮膚移植、骨髄移植、移植片対宿主病（ＧＶ
    ＨＤ）、免疫性血小板減少症（ＩＴＰ）、多発性硬化症、甲状腺炎、１型糖尿病、又はア
    テローム性動脈硬化症である、請求項３４に記載の方法。
  36. 関節炎が、関節リウマチ、若年性関節炎、乾癬性関節炎、ライター症候群、強直性脊椎
    炎、又は痛風性関節炎である、請求項３５に記載の方法。
  37. 前記自己免疫疾患又は前記免疫介在性炎症性疾患が、狼瘡である、請求項３４に記載の
    方法。
  38. 前記自己免疫疾患又は前記免疫介在性炎症性疾患が、移植である、請求項３４に記載の
    方法。
  39. 前記自己免疫疾患又は前記免疫介在性炎症性疾患が、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）である、
    請求項３４に記載の方法。
  40. ＩＢＤがクローン病又は潰瘍性大腸炎である、請求項３９に記載の方法。
  41. 第２の治療剤をさらに投与する、請求項３４に記載の方法。
  42. 前記第２の治療薬が、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、サリチラート、ヒドロ
    キシクロロキン、スルファサラジン、コルチコステロイド、細胞毒性剤、免疫抑制剤、及
    び／又は抗体である、請求項４１に記載の抗体。
  43. 治療に使用するための、請求項２に記載の抗体又は請求項２５に記載の医薬組成物。
  44. 配列番号１のＣＤ１５４に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体であって、
    ａ）それぞれ、配列番号１６、２２、及び２９、
    ｂ）それぞれ、配列番号１７、２３、及び３０、
    ｃ）それぞれ、配列番号１６、２４、及び３１、
    ｄ）それぞれ、配列番号１８、２５、及び３２、
    ｅ）それぞれ、配列番号１９、２６、及び３３、
    ｆ）それぞれ、配列番号２０、２７、及び３４、又は
    ｇ）それぞれ、配列番号２１、２８、及び３５
    の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、場合により、前記ＨＣＤＲ１、前
    記ＨＣＤＲ２及び／又は前記ＨＣＤＲ３における保存的アミノ酸置換を１つ、２つ、又は
    ３つ有し、
    ここで、前記ＨＣＤＲ１、前記ＨＣＤＲ２、及び前記ＨＣＤＲ３が、Ｋａｂａｔ、Ｃｈ
    ｏｔｈｉａ、又はＩＭＧＴにより定義されるものである、単離されたアンタゴニスト抗体
    。
  45. ａ）それぞれ、配列番号３６、４３、及び５１、
    ｂ）それぞれ、配列番号３７、４４、及び５２、
    ｃ）それぞれ、配列番号３８、４５、及び５３、
    ｄ）それぞれ、配列番号３９、４６、及び５４、
    ｅ）それぞれ、配列番号４０、４７、及び５５、
    ｆ）それぞれ、配列番号４１、４７、及び５６、
    ｇ）それぞれ、配列番号４２、４８、及び５７、
    ｈ）それぞれ、配列番号３７、４９、及び５２、又は
    ｉ）それぞれ、配列番号３７、５０、及び５２
    の、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、場合により、前記ＬＣＤＲ１、前
    記ＬＣＤＲ２及び／又は前記ＬＣＤＲ３における保存的アミノ酸置換を１つ、２つ、又は
    ３つ有し、
    ここで、前記ＬＣＤＲ１、前記ＬＣＤＲ２、及び前記ＬＣＤＲ３が、Ｋａｂａｔ、Ｃｈ
    ｏｔｈｉａ、又はＩＭＧＴにより定義されるものである、請求項４４に記載の抗体。
  46. ａ）それぞれ配列番号１６、２２、及び２９の前記ＨＣＤＲ１、前記ＨＣＤＲ２、及び
    前記ＨＣＤＲ３と、それぞれ配列番号３６、４３、及び５１の前記ＬＣＤＲ１、前記ＬＣ
    ＤＲ２、及び前記ＬＣＤＲ３とを含む、又は
    ｂ）配列番号５８の前記ＶＨと配列番号６５の前記ＶＬとを含む、請求項４５に記載の
    抗体。
  47. ａ）それぞれ配列番号１７、２３、及び３０の前記ＨＣＤＲ１、前記ＨＣＤＲ２、及び
    前記ＨＣＤＲ３と、それぞれ配列番号３７、４４、及び５２の前記ＬＣＤＲ１、前記ＬＣ
    ＤＲ２、及び前記ＬＣＤＲ３と、を含む、又は
    ｂ）配列番号５９の前記ＶＨと配列番号６６の前記ＶＬとを含む、請求項４５に記載の
    抗体。
  48. ａ）それぞれ配列番号１６、２４、及び３１の前記ＨＣＤＲ１、前記ＨＣＤＲ２、及び
    前記ＨＣＤＲ３と、それぞれ配列番号３８、４５、及び５３の前記ＬＣＤＲ１、前記ＬＣ
    ＤＲ２、及び前記ＬＣＤＲ３と、を含む、又は
    ｂ）配列番号６０の前記ＶＨと配列番号６７の前記ＶＬとを含む、請求項４５に記載の
    抗体。
  49. ａ）それぞれ配列番号１８、２５、及び３２の前記ＨＣＤＲ１、前記ＨＣＤＲ２、及び
    前記ＨＣＤＲ３と、それぞれ配列番号３９、４６、及び５４の前記ＬＣＤＲ１、前記ＬＣ
    ＤＲ２、及び前記ＬＣＤＲ３と、を含む、又は
    ｂ）配列番号６１の前記ＶＨと配列番号６８の前記ＶＬとを含む、請求項４５に記載の
    抗体。
  50. ａ）それぞれ配列番号１９、２６、及び３３の前記ＨＣＤＲ１、前記ＨＣＤＲ２、及び
    前記ＨＣＤＲ３と、それぞれ配列番号４０、４７、及び５５の前記ＬＣＤＲ１、前記ＬＣ
    ＤＲ２、及び前記ＬＣＤＲ３と、を含む、又は
    ｂ）配列番号６２の前記ＶＨと配列番号６９の前記ＶＬとを含む、請求項４５に記載の
    抗体。
  51. ａ）それぞれ配列番号２０、２７、及び３４の前記ＨＣＤＲ１、前記ＨＣＤＲ２、及び
    前記ＨＣＤＲ３と、それぞれ配列番号４１、４７、及び５６の前記ＬＣＤＲ１、前記ＬＣ
    ＤＲ２、及び前記ＬＣＤＲ３と、を含む、又は
    ｂ）配列番号６３の前記ＶＨと配列番号７０の前記ＶＬとを含む、請求項４５に記載の
    抗体。
  52. ａ）それぞれ配列番号２１、２８、及び３５の前記ＨＣＤＲ１、前記ＨＣＤＲ２、及び
    前記ＨＣＤＲ３と、それぞれ配列番号４２、４８、及び５７の前記ＬＣＤＲ１、前記ＬＣ
    ＤＲ２、及び前記ＬＣＤＲ３と、を含む、又は
    ｂ）配列番号６４の前記ＶＨと配列番号７１の前記ＶＬとを含む、請求項４５に記載の
    抗体。
  53. ａ）それぞれ配列番号１７、２３、及び３０の前記ＨＣＤＲ１、前記ＨＣＤＲ２、及び
    前記ＨＣＤＲ３と、それぞれ配列番号３７、４９、及び５２の前記ＬＣＤＲ１、前記ＬＣ
    ＤＲ２、及び前記ＬＣＤＲ３と、を含む、又は
    ｂ）配列番号５９の前記ＶＨと配列番号７２の前記ＶＬとを含む、請求項４５に記載の
    抗体。
  54. ａ）それぞれ配列番号１７、２３、及び３０の前記ＨＣＤＲ１、前記ＨＣＤＲ２、及び
    前記ＨＣＤＲ３と、それぞれ配列番号３７、５０、及び５２の前記ＬＣＤＲ１、前記ＬＣ
    ＤＲ２、及び前記ＬＣＤＲ３と、を含む、又は
    ｂ）配列番号５９の前記ＶＨと配列番号７３の前記ＶＬとを含む、請求項４５に記載の
    抗体。
  55. 前記抗体が、ＩｇＧ１型、ＩｇＧ２型、ＩｇＧ３型、又はＩｇＧ４型アイソタイプであ
    る、請求項４５に記載の抗体。
  56. Ｆｃ領域に少なくとも１つの置換を含む、請求項５５に記載の抗体。
  57. 前記Ｆｃ領域における少なくとも１つの置換が、置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３
    ７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｈ２６８Ａ、Ａ３３０Ｓ、又
    はＰ３３１Ｓであり、残基付番がＥＵインデックスに準拠する、請求項５６に記載の抗体
    。
  58. 前記Ｆｃ領域に置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、
    Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓを含み、残基付番がＥＵインデックスに準拠する、請求項５
    ７に記載の抗体。
  59. 前記Ｆｃ領域における少なくとも１つの置換が、置換Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３
    ８Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、又
    はＰ３３１Ｓであり、残基付番がＥＵインデックスに準拠する、請求項５６に記載の抗体
    。
  60. 前記Ｆｃ領域に置換Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、
    Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓを含み、残基付番がＥＵインデックスに準拠する、請求項５
    ９に記載の抗体。
  61. 前記抗体が多重特異性である、請求項４５に記載の抗体。
  62. 前記抗体が、以下の特性：
    ａ）前記抗体と、可溶性ヒトＣＤ１５４（ｓｈＣＤ１５４）との免疫複合体は、血小板
    を活性化せず、ここで、血小板活性化は、血小板上のＰ－セレクチン表面発現により測定
    される；
    ｂ）０．０３％のポリソルベートＰ２０及び１００μｇ／ｍＬのウシ血清アルブミンを
    含有しているダルベッコリン酸緩衝生理食塩水にて、２５℃下でＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ
    ３６システムを用いＫＤを測定したときに、約５×１０－９Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）で
    ＣＤ１５４に結合する；
    ｃ）ＣＤ１５４介在性のヒトＢ細胞の増殖を約２．７×１０－９Ｍ以下のＩＣ５０値で
    阻害する；又は
    ｄ）分泌型胎盤性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）及びヒトＣＤ４０を安定的に発
    現するＨＥＫ２９３細胞において、ＮＦ－κＢ－誘導性インターフェロン－β（ＩＦＮ－
    β）ミニマルプロモーター下、約２．１×１０－８Ｍ以下のＩＣ５０値で、ＳＥＡＰのＣ
    Ｄ１５４介在性の発現を阻害する；
    のうちの少なくとも１つを有する、請求項４５に記載の抗体。
  63. 治療薬又は造影剤に結合させた請求項４５に記載の抗体を含む免疫複合体。
  64. 請求項４５に記載の抗体と、医薬的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
  65. 請求項４５に記載の抗体ＶＨ、抗体ＶＬ、又は抗体ＶＨと抗体ＶＬとをコードしている
    ポリヌクレオチド。
  66. 請求項６５に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
  67. 請求項６６に記載のベクターを含む、宿主細胞。
  68. 配列番号１のＣＤ１５４に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗
    原結合部分の製造方法であって、
    前記抗体が発現される条件下で請求項６７に記載の宿主細胞を培養することと、前記宿
    主細胞より産生された前記抗体を回収することと、を含む、方法。
  69. 自己免疫疾患又は免疫介在性炎症性疾患の治療方法であって、
    治療有効量の請求項４５に記載の単離された抗体又は請求項６４に記載の医薬組成物を
    、前記自己免疫疾患又は前記免疫介在性炎症性疾患を治療するのに十分な時間にわたって
    、前記自己免疫疾患又は前記免疫介在性炎症性疾患の治療を必要としている患者に投与す
    ることを含む、方法。
  70. 前記免疫介在性炎症性疾患又は前記自己免疫疾患が、関節炎、全身性エリテマトーデス
    （ＳＬＥ）、炎症性腸疾患、移植、腎移植、皮膚移植、骨髄移植、移植片対宿主病（ＧＶ
    ＨＤ）、免疫性血小板減少症（ＩＴＰ）、多発性硬化症、甲状腺炎、１型糖尿病、又はア
    テローム性動脈硬化症である、請求項６９に記載の方法。
  71. 関節炎が、関節リウマチである、請求項７０に記載の方法。
  72. 前記自己免疫疾患又は前記免疫介在性炎症性疾患が、狼瘡である、請求項６９に記載の
    方法。
  73. 前記自己免疫疾患又は前記免疫介在性炎症性疾患が、移植である、請求項６９に記載の
    方法。
  74. 前記自己免疫疾患又は前記免疫介在性炎症性疾患が、炎症性腸疾患である、請求項６９
    に記載の方法。
  75. ＩＢＤがクローン病又は潰瘍性大腸炎である、請求項７４に記載の方法。
  76. 第２の治療剤をさらに投与する、請求項６９に記載の方法。
  77. 前記第２の治療薬が、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、サリチラート、ヒドロ
    キシクロロキン、スルファサラジン、コルチコステロイド、細胞毒性剤、免疫抑制剤、及
    び／又は抗体である、請求項７６に記載の抗体。
  78. 治療に使用するための、請求項４５に記載の抗体又は請求項６４に記載の医薬組成物。
  79. 請求項２に記載の抗体に結合する抗イディオタイプ抗体。
  80. 請求項２に記載の抗体を含むキット。
  81. 前記抗体を検出するための試薬及び使用説明書を更に含む、請求項８０に記載のキット
    。
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