JP2022050389A - 一本鎖オリゴヌクレオチド - Google Patents

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Abstract

【課題】高効率に標的遺伝子を制御し、容易に製造することが可能な一本鎖オリゴヌクレオチドを提供する。【解決手段】式Ｘ－Ｌ－Ｙで表され、ＸとＹとが第一ヌクレオチド配列部分と第二ヌクレオチド配列部分とでハイブリダイズする一本鎖オリゴヌクレオチドである。Ｘは、少なくとも１個の修飾ヌクレオチドを含み、第二オリゴヌクレオチドとのハイブリダイズを可能とし、ＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む第一ヌクレオチド配列を有する。Ｙは、前記第一オリゴヌクレオチドとのハイブリダイズを可能とし、少なくとも１個のリボヌクレオチドを含む第二ヌクレオチド配列を有する。ヌクレオチド配列Ｘ及びＹの少なくとも一方が、標的ＲＮＡとのハイブリダイズを可能とするアンチセンス配列を有する。Ｌは、生理的条件で分解される第三オリゴヌクレオチドに由来する基である。【選択図】なし

Description

本発明は、一本鎖オリゴヌクレオチドに関する。
アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）は、標的遺伝子のｍＲＮＡ、ｍＲＮＡ前駆体又はリボソームＲＮＡ、転移ＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ等のｎｃＲＮＡ（ノンコーディングＲＮＡ）に対して相補的なオリゴヌクレオチドであり、約８～３０塩基からなる１本鎖のＤＮＡ、ＲＮＡ及び／又はそれらの構造類似体である。ＡＳＯは、該アンチセンスオリゴヌクレオチドが標的とするｍＲＮＡ、ｍＲＮＡ前駆体、又はｎｃＲＮＡと二本鎖を形成することによりｍＲＮＡ、ｍＲＮＡ前駆体又はｎｃＲＮＡの働きを抑制する。
しかし、ＡＳＯは、生体内のヌクレアーゼにより分解されやすく、また標的細胞への取り込み効率が低いため、実用化は難しい。これら２つの大きな問題点を克服するために、有効成分であるオリゴヌクレオチド自体の化学修飾と、オリゴヌクレオチドを標的細胞内へ送達させるドラッグデリバリーシステム（ＤＤＳ）の研究が長年行われている。
ＡＳＯ自体の化学修飾の例としては、リン酸部分が修飾されているＳ－オリゴ（ホスホロチオエート）、糖部分が修飾されている２’，４’－ＢＮＡ（ｂｒｉｄｇｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ）／ＬＮＡ（ｌｏｃｋｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ）（特許文献１～５参照）等が知られている。
ＤＤＳの例としては、カチオン性リポソームや高分子ミセル等のキャリアを利用する方法等が知られている。また、特許文献６にはアシアロ糖タンパク質受容体と相互作用を有する糖誘導体であるＧａｌＮａｃ（Ｎ－アセチルガラクトサミン）誘導体がリンカーを介して結合しているＡＳＯが記載されており、該ＡＳＯを投与すると、肝臓での標的遺伝子の発現が抑制されたことが記載されている。
特許文献７及び非特許文献１には、ＡＳＯと相補的なＲＮＡオリゴヌクレオチドを含む二本鎖オリゴヌクレオチド（ＨＤＯ）にトコフェロール（Ｔｏｃ）を結合させることにより、マウスにおいて、ＡＳＯと比較して、効率よく肝臓に送達、集積され、肝臓での標的遺伝子の発現が抑制されたことが記載されている。特許文献８には、ＨＤＯにＧａｌＮａｃ誘導体がリンカーを介して結合しているＡＳＯが記載されており、該アンチセンスオリゴヌクレオチドを皮下投与すると、トコフェロール（Ｔｏｃ）修飾体より効率的に発現が抑制されたことが記載されている。
特許文献９には、ＤＮＡとＲＮＡの二本鎖オリゴヌクレオチドユニットのＲＮＡ鎖末端にＡＳＯが結合したオリゴヌクレオチド（ＨＣＤＯ）が、ＡＳＯと比較して効率よく標的ＲＮＡを抑制することが記載されている。
ネイチャー コミュニケーションズ、６巻、アーティクル ナンバー ７９６９（２０１５年）
国際公開第９８／３９３５２号 国際公開第２００５／０２１５７０号 国際公開第２００３／０６８７９５号 国際公開第２０１１／０５２４３６号 国際公開第２０１１／１５６２０２号 国際公開第２０１４／１７９６２０号 国際公開第２０１３／０８９２８３号 国際公開第２０１５／１０５０８３号 国際公開第２０１４／１９２３１０号
医薬品として臨床現場にてヒトを含む哺乳動物に適応する場合においては、効率的に標的遺伝子の発現を制御できる新たなる核酸医薬品が望まれていた。また、二本鎖オリゴヌクレオチド（例えば、前記ＨＤＯ、ＨＣＤＯ）を製造する場合、アンチセンス鎖と相補的なＲＮＡ鎖を別々に合成した上で、最後にこれらの鎖をハイブリダイズする工程が必要となる。さらに動物や細胞に投与する際には、一本鎖への解離を抑制した状態とする必要があり、その取扱い条件の設定にも労力を要する場合が想定される。
本発明の目的は、高効率に標的遺伝子の発現を制御できる新たなるオリゴヌクレオチドを提供することを目的とする。また、二本鎖オリゴヌクレオチドよりも容易に製造することが可能なオリゴヌクレオチドを提供することを目的とする。
本発明者らは、オリゴデオキシリボヌクレオチドとそれに対するＲＮＡを含む相補鎖とを、ＤＮＡ、ＲＮＡなど生理的条件で分解されるリンカーで連結させ、分子内で部分的にハイブリダイズする構造を有する一本鎖オリゴヌクレオチドとし、該一本鎖オリゴヌクレオチドが、標的遺伝子の発現を制御可能なアンチセンス配列を有することで、二本鎖オリゴヌクレオチドと同等以上のアンチセンス効果を示すことを見出した。また、当該一本鎖オリゴヌクレオチドは、一本鎖であるため、二本鎖を形成させるハイブリダイズ工程がなく、効率よく製造可能である。本発明は以下の様態を包含する。
１. 式
Ｘ－Ｌ－Ｙ
（式中、Ｘは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択され、糖部、塩基部及びリン酸部の少なくとも１つが修飾されたヌクレオチドの少なくとも１個を含む７～１００個のヌクレオチドからなる第一オリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択され、４～１００個のヌクレオチドからなる第二オリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌは、その両端で前記第一オリゴヌクレオチド及び第二オリゴヌクレオチドとそれぞれ共有結合し、生理的条件で分解される第三オリゴヌクレオチドに由来する基であり、
前記第一オリゴヌクレオチドはヌクレオチド配列Ｘを有し、前記第二オリゴヌクレオチドはヌクレオチド配列Ｙを有し、
前記ヌクレオチド配列Ｘは、第二オリゴヌクレオチドの少なくとも一部とのハイブリダイズを可能とし、ＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む第一ヌクレオチド配列を含み、
前記ヌクレオチド配列Ｙは、第一オリゴヌクレオチドの少なくとも一部とのハイブリダイズを可能とし、少なくとも１個のリボヌクレオチドを含む第二ヌクレオチド配列を含み、
前記ヌクレオチド配列Ｘ及びヌクレオチド配列Ｙの少なくとも一方が、標的ＲＮＡとのハイブリダイズを可能にする少なくとも１つのアンチセンス配列を含み、
前記アンチセンス配列を２以上有する場合、それぞれのアンチセンス配列部分がハイブリダイズする標的ＲＮＡは同一でも異なっていてもよい。）
で表され、ＸとＹとが第一ヌクレオチド配列部分と第二ヌクレオチド配列部分とでハイブリダイズする一本鎖オリゴヌクレオチド。
２． Ｘが、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、前記第一ヌクレオチド配列が、前記アンチセンス配列であり、前記標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列である、１．に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
３． Ｘが３’側でＬに結合し、Ｙが５’側でＬに結合する、１．又は２．に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
４． Ｘが５’側でＬに結合し、Ｙが３’側でＬに結合する、１．又は２．に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
５． 第三オリゴヌクレオチドに含まれるヌクレオチドが、ホスホジエステル結合で互いに連結されている、１．から４．のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
６． 第三オリゴヌクレオチドが、ＤＮＡ又はＲＮＡである、１．から５．のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
７． 第一オリゴヌクレオチドは、第一ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドを含む、１．から６．のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
８． 第一オリゴヌクレオチドは、第一ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドを含む、１．から７．のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
９． 第一オリゴヌクレオチドが、ホスホロチオエート結合を含む、１．から８．のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１０． 第一ヌクレオチド配列が、少なくとも１個のデオキシリボヌクレオチドを含む４～２０個のヌクレオチドからなる配列である、１．から９．のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１１． 第二ヌクレオチド配列は、ＲＮａｓｅＨによって切断される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列である、１．から１０．のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１２． 第二オリゴヌクレオチドが、第二ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドを含む、１１．に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１３． 第二ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方が、隣接するヌクレオチドとホスホロチオエート結合で連結されている、１１．又は１２．に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１４． 前記ヌクレオチド配列Ｙが、少なくとも１つのアンチセンス配列を含む、１．から１３．のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１５． 前記Ｙは、前記第二ヌクレオチド配列部分を前記アンチセンス配列部分とＬとの間に有する、１４．に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１６． 前記ヌクレオチド配列Ｙが含むアンチセンス配列が、標的ＲＮＡとハイブリダイズした際に、ＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列である、１４．又は１５．に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１７． 前記Ｙが含むアンチセンス配列部分は、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まない、１４．又は１５．に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１８． 前記ヌクレオチド配列Ｘが、前記Ｙが含むアンチセンス配列部分の少なくとも一部とのハイブリダイズを可能とし、ＲＮａｓｅＨによって切断される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列を含む、１６．又は１７．に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１９． Ｘが、５’末端又は３’末端を含む、１．から１８．のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
２０． 式
Ｘ’－Ｌ’－
（式中、Ｘ’は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択され、糖部、塩基部及びリン酸部の少なくとも１つが修飾されたヌクレオチドの少なくとも１個を含む７～１００個のヌクレオチドからなる第四オリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌ’は、その両端で前記第一オリゴヌクレオチド及び第四オリゴヌクレオチドとそれぞれ共有結合し、生理的条件で分解される第五オリゴヌクレオチドに由来する基であり、
前記第四オリゴヌクレオチドは、標的ＲＮＡとのハイブリダイズを可能にするアンチセンス配列を有する。）
で表される基をさらに含む、１．から１８．のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
２１． Ｘ’が、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、
前記第四オリゴヌクレオチドが有するアンチセンス配列は、標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される、少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列である、２０．に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
２２． 前記第四オリゴヌクレオチドが含むアンチセンス配列部分は、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まない、２０．に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
２３． 前記第四オリゴヌクレオチドが含むアンチセンス配列部分は、前記第二オリゴヌクレオチドの少なくとも一部とハイブリダイズする、２１．又は２２．に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
２４． 第五オリゴヌクレオチドに含まれるヌクレオチドが、ホスホジエステル結合で互いに連結されている、２０．から２３．のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
２５． 第五オリゴヌクレオチドが、ＤＮＡ又はＲＮＡである、２０．から２４．のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
２６． 前記アンチセンス配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドを含む、１．から２５．のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
２７． 前記アンチセンス配列部分の５’側及び３’側に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドを含む、１．から２６．のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
２８． 前記アンチセンス配列が、少なくとも１個のデオキシリボヌクレオチドを含む４～２０個のヌクレオチドからなる配列である、１．から２７．のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
２９． 前記アンチセンス配列部分が、ホスホロチオエート結合を含む、１．から２８．のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
３０． Ｙが、５’末端又は３’末端を含む、１．から２９．のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
３１． 標識機能、精製機能及び標的部位への送達機能からなる群から選択される少なくとも1種の機能を有する機能性分子に由来する基をさらに含む、１．から３０．のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
３２． 前記機能性分子が、糖、脂質、ペプチド及びタンパク質並びにそれらの誘導体からなる群から選択される、３１．に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
３３． 前記機能性分子が、コレステロール、トコフェロール及びトコトリエノールからなる群から選択される脂質である、３１．又は３２．に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
３４． 前記機能性分子が、アシアロ糖タンパク質受容体と相互作用する糖誘導体である、３１．又は３２．に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
３５． 前記機能性分子が、受容体のリガンド及び抗体からなる群から選択される、ペプチド又はタンパク質である、３１．又は３２．に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
３６． １．から３５．のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチドと、薬理学上許容される担体とを含む、医薬組成物。
３７． １．から３５．のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチドと細胞とを接触させる工程を含む、標的ＲＮＡの機能を制御する方法。
３８． １．から３５．のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物を、哺乳動物に投与する工程を含む、該哺乳動物における標的ＲＮＡの機能を制御する方法。
３９． 哺乳動物において、標的ＲＮＡの機能を制御するための、１．から３５．のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチドの使用。
４０． １．から３５．のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチドの製造方法であって、Ｘ、Ｌ及びＹの少なくとも１つを含むオリゴヌクレオチドの３’末端又は５’末端でヌクレオチド鎖を伸長する工程を含む、製造方法。
本発明によれば、高効率で標的遺伝子の発現を制御できるオリゴヌクレオチドを提供することができる。また、二本鎖オリゴヌクレオチド（例えば、ＨＤＯ、ＨＣＤＯ）よりも容易に製造することが可能なオリゴヌクレオチドを提供することができる。
本発明の一本鎖オリゴヌクレオチドは、その構成要素であるアンチセンスオリゴヌクレオチドによって標的遺伝子の発現を効果的に制御することが可能であり、核酸医薬品として有用である。
本実施形態の一例である一本鎖オリゴヌクレオチドの第一ヌクレオチド配列部分Ｘ２と第二ヌクレオチド配列部分Ｙ２とが分子内でハイブリダイズする一様態を表す概念図である。 本実施形態の一例である一本鎖オリゴヌクレオチドの第一ヌクレオチド配列部分Ｘ２と第二ヌクレオチド配列部分Ｙ２とが分子内でハイブリダイズする一様態を表す概念図である。 本実施形態の一例である一本鎖オリゴヌクレオチドの第一ヌクレオチド配列部分Ｘ２と第二ヌクレオチド配列部分Ｙ２とが分子内でハイブリダイズする一様態を表す概念図である。 本実施形態の一例である一本鎖オリゴヌクレオチドの第一ヌクレオチド配列部分Ｘ２と第二ヌクレオチド配列部分Ｙ２とが分子内でハイブリダイズする一様態を表す概念図である。 本実施形態の一例である一本鎖オリゴヌクレオチドの第一ヌクレオチド配列部分Ｘ２及びＸ’が含むアンチセンス配列部分Ｘ’２がそれぞれ、第二ヌクレオチド配列部分及び第六ヌクレオチド配列部分を含むＹ２と分子内でハイブリダイズする一様態を表す概念図である。 本実施形態の一例である一本鎖オリゴヌクレオチドの第一ヌクレオチド配列部分Ｘ２及びＸ’が含むアンチセンス配列部分Ｘ’２がそれぞれ、第二ヌクレオチド配列部分及び第六ヌクレオチド配列部分を含むＹ２と分子内でハイブリダイズする一様態を表す概念図である。 本実施形態の一例である一本鎖オリゴヌクレオチドの第一ヌクレオチド配列部分Ｘ２と第二ヌクレオチド配列部分Ｙ０とが分子内でハイブリダイズする一様態を表す概念図である。 本実施形態の一例である一本鎖オリゴヌクレオチドの第一ヌクレオチド配列部分Ｘ２と第二ヌクレオチド配列部分Ｙ０とが分子内でハイブリダイズする一様態を表す概念図である。 本実施形態の一例である一本鎖オリゴヌクレオチドの第一ヌクレオチド配列部分Ｘ２と第二ヌクレオチド配列部分Ｙ０とが分子内でハイブリダイズする一様態を表す概念図である。 本実施形態の一例である一本鎖オリゴヌクレオチドの第一ヌクレオチド配列部分Ｘ２と第二ヌクレオチド配列部分Ｙ０とが分子内でハイブリダイズし、Ｙが含むアンチセンス配列部分ＹＺ ２とＸが含むヌクレオチド配列部分Ｘ５とが分子内でハイブリダイズする一様態を表す概念図である。 本実施形態の一例である一本鎖オリゴヌクレオチドの第一ヌクレオチド配列部分Ｘ２と第二ヌクレオチド配列部分Ｙ０とが分子内でハイブリダイズし、Ｙが含むアンチセンス配列部分ＹＺ ２とＸが含むヌクレオチド配列部分Ｘ５とが分子内でハイブリダイズする一様態を表す概念図である。 本実施形態の一例である一本鎖オリゴヌクレオチドの第一ヌクレオチド配列部分Ｘ２と第二ヌクレオチド配列部分Ｙ０とが分子内でハイブリダイズし、Ｙが含むアンチセンス配列部分ＹＺ ２とＸが含むヌクレオチド配列部分Ｘ５とが分子内でハイブリダイズする一様態を表す概念図である。 本実施形態の一例である一本鎖オリゴヌクレオチドの第一ヌクレオチド配列部分Ｘ２と第二ヌクレオチド配列部分Ｙ０とが分子内でハイブリダイズし、Ｙが含むアンチセンス配列部分ＹＺ ２とＸが含むヌクレオチド配列部分Ｘ５とが分子内でハイブリダイズする一様態を表す概念図である。 本実施形態の一例である一本鎖オリゴヌクレオチドの第一ヌクレオチド配列部分Ｘ２と第二ヌクレオチド配列部分Ｙ２とが分子内でハイブリダイズする一様態を表す概念図である。 本実施形態の一例である一本鎖オリゴヌクレオチドの第一ヌクレオチド配列部分Ｘ２と第二ヌクレオチド配列部分Ｙ２とが分子内でハイブリダイズする一様態を表す概念図である。 本実施形態に係る一本鎖オリゴヌクレオチドのマウス脳内皮細胞におけるＰＴＥＮの発現レベルへの影響を示すグラフである。 本実施形態に係る一本鎖オリゴヌクレオチドのヒト肝癌由来細胞におけるＰＴＥＮの発現レベルへの影響を示すグラフである。 本実施形態に係る一本鎖オリゴヌクレオチドのヒト肝癌由来細胞におけるＡｐｏＢの発現レベルへの影響を示すグラフである。 本実施形態に係る一本鎖オリゴヌクレオチドのマウス脳内皮細胞におけるＰＴＥＮの発現レベルへの影響を示すグラフである。 本実施形態に係る一本鎖オリゴヌクレオチドのヒト肝癌由来細胞におけるＰＴＥＮの発現レベルへの影響を示すグラフである。 本実施形態に係る一本鎖オリゴヌクレオチドのヒト肝癌由来細胞におけるＡｐｏＢの発現レベルへの影響を示すグラフである。 本実施形態に係る一本鎖オリゴヌクレオチドのマウス脳内皮細胞におけるＰＴＥＮの発現レベルへの影響を示すグラフである。 本実施形態に係る一本鎖オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーション処理前後のゲル電気泳動結果である。 本実施形態に係る一本鎖オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーション処理前後のゲル電気泳動結果である。 本実施形態に係る一本鎖オリゴヌクレオチドのヒト肝癌由来細胞におけるＰＴＥＮの発現レベルへの影響を示すグラフである。 本実施形態に係る一本鎖オリゴヌクレオチドのヒト肝癌由来細胞におけるＡｐｏＢの発現レベルへの影響を示すグラフである。 本実施形態に係る一本鎖オリゴヌクレオチドのヒト肝癌由来細胞におけるＰＴＥＮの発現レベルへの影響を示すグラフである。 本実施形態に係る一本鎖オリゴヌクレオチドのマウスにおけるＡｐｏＢの発現レベルへの影響を示すグラフである。 本実施形態に係る一本鎖オリゴヌクレオチドのマウスにおける血漿総コレステロール値への影響を示すグラフである。 本実施形態に係る一本鎖オリゴヌクレオチドのヒト肝癌由来細胞におけるＡｌｄｏｌａｓｅ Ａの発現レベルへの影響を示すグラフである。 本実施形態に係る一本鎖オリゴヌクレオチドを投与したＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの肝臓におけるＡｐｏＢの発現レベルへの影響を示すグラフである。 本実施形態に係る一本鎖オリゴヌクレオチドを投与したＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの血漿における総コレステロール値への影響を示すグラフである。 本実施形態に係る一本鎖オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーション処理前後のゲル電気泳動結果である。
本明細書において使用される用語は、特に言及する場合を除いて、当該分野で通常用いられる意味で用いられる。以下に、本明細書中で使用する各用語を説明する。なお、本明細書中、各用語は単独で使用されている場合も、又は他の用語と一緒になって使用されている場合も、特に記載の無い限り、同一の意義を有する。
「アンチセンス効果」とは、標的遺伝子に対応して選択される標的ＲＮＡと、例えば、その部分配列に相補的な配列を有するオリゴヌクレオチドとがハイブリダイズすることによって、標的ＲＮＡの機能が制御されることを意味する。例えば、標的ＲＮＡがｍＲＮＡの場合、ハイブリダイゼーションにより前記標的ＲＮＡの翻訳が阻害されること、エキソンスキッピング等のスプライシング機能変換効果、ハイブリダイズした部分が認識されることにより前記標的ＲＮＡが分解されること等を意味する。前記アンチセンス効果が生じるオリゴヌクレオチドとしては、例えば、ＤＮＡ及びオリゴデオキシリボヌクレオチド等が挙げられるが、アンチセンス効果が生じるオリゴヌクレオチドは、これらに限定されず、ＲＮＡ、オリゴリボヌクレオチド又はアンチセンス効果が通常生じるように設計されたオリゴヌクレオチド等でもよい。
「標的ＲＮＡ」は、ｍＲＮＡ、ｍＲＮＡ前駆体又はｎｃＲＮＡを意味し、標的遺伝子をコードするゲノムＤＮＡから転写されたｍＲＮＡ、塩基の修飾を受けていないｍＲＮＡ、スプライシングを受けていないｍＲＮＡ前駆体及びｎｃＲＮＡ等を含む。アンチセンス効果によって機能が制御される「標的ＲＮＡ」としては、特に制限はなく、各種疾患において発現が亢進する遺伝子に関連するＲＮＡが挙げられる。「標的ＲＮＡ」は、ＤＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼによって合成されるいかなるＲＮＡでもよく、好ましくはｍＲＮＡ又はｍＲＮＡ前駆体である。より好ましくは、哺乳動物のｍＲＮＡ又はｍＲＮＡ前駆体であり、更に好ましくは、ヒトのｍＲＮＡ又はｍＲＮＡ前駆体である。
「ハイブリダイズ」とは、相補的な配列を含むオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドに由来する基同士で二重鎖を形成させる行為、及び相補的な配列を含むオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドに由来する基同士が二重鎖を形成する現象を意味する。
「相補的」とは、２つの核酸塩基が、水素結合を介して、ワトソン－クリック型塩基対（天然型塩基対）又は非ワトソン－クリック型塩基対（フーグスティーン型塩基対等）を形成できることを意味する。２つのオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドに由来する基は、それらの配列が相補的である場合に「ハイブリダイズ」し得る。２つのオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドに由来する基がハイブリダイズするために、それらが完全に相補的である必要はないが、２つのオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドに由来する基がハイブリダイズするための相補性は、好ましくは７０％以上であり、より好ましくは８０％以上であり、さらに好ましくは９０％以上（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％以上）である。配列の相補性は、オリゴヌクレオチドの部分配列を自動的に同定するコンピュータープログラムを利用することにより決定することができる。例えば、ＯｌｉｇｏＡｎａｌｙｚｅｒは、そのようなソフトウエアの１つであり、Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社が提供している。このプログラムは、ウェブサイトでも利用することができる。当業者は、２つのオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドに由来する基がハイブリダイズできる条件（温度、塩濃度等）を容易に決定することができる。また、当業者は、例えば、標的ＲＮＡのヌクレオチド配列の情報に基づいて、ＢＬＡＳＴプログラム等を利用することにより、標的ＲＮＡに相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドを容易に設計することができる。ＢＬＡＳＴプログラムについては、プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンスィズ・オブ・ザ・ユナイテッド・ステイツ・オブ・アメリカ（１９９０年、８７巻、２２６４～６８頁；１９９３年、９０巻、５８７３～７７頁）、及びジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（１９９０年、２１５巻、４０３頁）等を参照できる。
「オリゴヌクレオチドに由来する基」は、オリゴヌクレオチドの３’末端及び５’末端の少なくとも一方から水素原子、ヒドロキシ基等を取り除いて形成される、オリゴヌクレオチドの部分構造を意味し、オリゴヌクレオチドの３’末端及び５’末端の少なくとも一方が他の基（例えば、オリゴヌクレオチドに由来する基等）に共有結合する。
「ヌクレオチド配列」は、オリゴヌクレオチドを構成するヌクレオチドの塩基配列を意味する。
「ヌクレオチド配列部分」は、オリゴヌクレオチド鎖のうち、前記ヌクレオチド配列を有する領域の部分構造を意味する。
なお、本明細書において、「ヌクレオチド配列」が、ヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチド鎖を含む又は含まないこと等は、対応する「ヌクレオチド配列部分」が、該ヌクレオチド若しくは該オリゴヌクレオチド鎖を含む又は含まないこと等と同様の意味を有する。また、該「ヌクレオチド配列」は、該ヌクレオチド若しくは該オリゴヌクレオチド鎖等を含む又は含まない「ヌクレオチド配列部分」の塩基配列と同様の意味を有する。
「配列部分」は、オリゴヌクレオチド鎖の部分構造を意味する。例えば、ヌクレオチドを含む配列部分は、オリゴヌクレオチド鎖のうち、該ヌクレオチドを含む領域の部分構造である。
ヌクレオチド配列が、ヌクレオチドから選ばれる配列、ヌクレオチドが連続する配列等であることは、対応するヌクレオチド配列部分が、それぞれ、該ヌクレオチドから選ばれる配列部分、該ヌクレオチドが連続する配列部分等であることと、同様の意味を有する。
「ＲＮａｓｅＨ」は、一般的には、ＤＮＡとＲＮＡとがハイブリダイズした二重鎖を認識して、そのＲＮＡを切断し一本鎖ＤＮＡを生じさせるリボヌクレアーゼとして知られている。ＲＮａｓｅＨは、ＤＮＡとＲＮＡがハイブリダイズした二重鎖に限らず、ＤＮＡ及びＲＮＡの少なくとも一方の、塩基部分、ホスホジエステル結合部分及び糖部分の少なくとも１つが修飾された二重鎖をも認識し得る。例えば、オリゴデオキシリボヌクレオチドとオリゴリボヌクレオチドがハイブリダイズした二重鎖をも認識し得る。
よって、ＤＮＡは、ＲＮＡとハイブリダイズした際に、ＲＮａｓｅＨによって認識され得る。ＤＮＡ及びＲＮＡの少なくとも一方において、塩基部分、ホスホジエステル結合部分及び糖部分の少なくとも１つが修飾された場合も、同様である。例えば、代表的なものとして、ＤＮＡのホスホジエステル結合部分が、ホスホロチオエートに修飾されたオリゴヌクレオチド等が挙げられる。
ＲＮＡは、ＤＮＡとハイブリダイズした際に、ＲＮａｓｅＨによって切断され得る。ＤＮＡ及びＲＮＡの少なくとも一方において、塩基部分、ホスホジエステル結合部分及び糖部分の少なくとも１つが修飾された場合も、同様である。
ＲＮａｓｅＨによって認識され得るＤＮＡ及び／又はＲＮＡの修飾例は、例えば、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ（２０１４年、４２巻、８号、５３７８～８９頁）、バイオオーガニック・アンド・メディシナル・ケミストリー・レターズ（２００８年、１８巻、２２９６～２３００頁）、モレキュラー・バイオシステムズ（２００９年、５巻、８３８～８４３頁）、ヌクレイック・アシッド・セラピューティクス（２０１５年、２５巻、５号、２６６～２７４頁）、ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（２００４年、２７９巻、３５号、３６３１７～３６３２６頁）等に記載されている。
本発明に用いられるＲＮａｓｅＨは、好ましくは哺乳動物のＲＮａｓｅＨであり、より好ましくはヒトのＲＮａｓｅＨであり、特に好ましくはヒトＲＮａｓｅＨ１である。
「デオキシリボヌクレオチド」は、２’－デオキシリボースの１’位の炭素原子に塩基が結合し、３’位又は５’位にリン酸基を有する分子である。本発明におけるデオキシリボヌクレオチドは、天然に存在するデオキシリボヌクレオチドであっても、天然に存在するデオキシリボヌクレオチドの塩基部分若しくはホスホジエステル結合部分が修飾されたデオキシリボヌクレオチドであってもよい。塩基部分の修飾やホスホジエステル結合部位の修飾は１つのデオキシリボヌクレオチドに対して、複数種組み合わせて施されてもよい。前記修飾されたデオキシリボヌクレオチドは、例えばジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（２０１６年、５９巻、２１号、９６４５－９６６７頁）、メディシナル・ケミストリー・コミュニケーションズ（２０１４年、５巻、１４５４－１４７１頁）、フューチャー・メディシナル・ケミストリー（２０１１年、３巻、３号、３３９－３６５頁）等に記載されている。本発明における「デオキシリボヌクレオチド」は、「糖部デオキシリボヌクレオチド」又は「糖部デオキシリボースヌクレオチド」等とも言うことができる。
前記「デオキシリボヌクレオチド」が本発明の一本鎖オリゴヌクレオチド分子を構成する際、通常、デオキシリボヌクレオチドの３’位がホスホジエステル結合又は修飾されたホスホジエステル結合で他のヌクレオチドと連結され、デオキシリボヌクレオチドの５’位がホスホジエステル結合又は修飾されたホスホジエステル結合で別のヌクレオチドと連結されている。本発明の一本鎖オリゴヌクレオチド分子の３’末端のデオキシリボヌクレオチドは、その３’位に、好ましくはヒドロキシ基又はリン酸基を有し、５’位は前述の通りである。一本鎖オリゴヌクレオチド分子の５’末端のデオキシリボヌクレオチドは、その５’位に、好ましくはヒドロキシ基又はリン酸基を有し、３’位は前述の通りである。
「オリゴデオキシリボヌクレオチド」は、前記デオキシリボヌクレオチドにより構成されるオリゴヌクレオチドを意味する。オリゴデオキシリボヌクレオチドを構成するデオキシリボヌクレオチドは、それぞれ同一であっても異なっていてもよい。
「ＤＮＡ」は、天然のデオキシリボヌクレオチドにより構成されるオリゴヌクレオチドを意味する。ＤＮＡを構成する天然のデオキシリボヌクレオチドは、それぞれ同一であっても異なっていてもよい。
「リボヌクレオチド」は、リボースの１’位の炭素原子に塩基が結合し、２’位、３’位又は５’位にリン酸基を有する分子である。本発明におけるリボヌクレオチドは、天然に存在するリボヌクレオチドであっても、天然に存在するリボヌクレオチドの塩基部分若しくはホスホジエステル結合部分が修飾されたリボヌクレオチドであってもよい。塩基部分の修飾やホスホジエステル結合部位の修飾は１つのリボヌクレオチドに対して、複数種組み合わせて施されてもよい。前記修飾されたリボヌクレオチドは、例えばジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（２０１６年、５９巻、２１号、９６４５－９６６７頁）、メディシナル・ケミストリー・コミュニケーションズ（２０１４年、５巻、１４５４－１４７１頁）、フューチャー・メディシナル・ケミストリー（２０１１年、３巻、３号、３３９－３６５頁）等に記載されている。本発明における「リボヌクレオチド」は、「糖部リボヌクレオチド」又は「糖部リボースヌクレオチド」等とも言うことができる。
前記「リボヌクレオチド」が本発明の一本鎖オリゴヌクレオチド分子を構成する際、典型的には、リボヌクレオチドの３’位がホスホジエステル結合又は修飾されたホスホジエステル結合で他のヌクレオチドと連結され、リボヌクレオチドの５’位がホスホジエステル結合又は修飾されたホスホジエステル結合で別のヌクレオチドと連結されている。本発明の一本鎖オリゴヌクレオチド分子の３’末端のリボヌクレオチドは、その３’位に、好ましくはヒドロキシ基又はリン酸基を有し、５’位は前述の通りである。一本鎖オリゴヌクレオチド分子の５’末端のリボヌクレオチドは、その５’位に、好ましくはヒドロキシ基又はリン酸基を有し、３’位は前述の通りである。
「オリゴリボヌクレオチド」は、前記リボヌクレオチドにより構成されるオリゴヌクレオチドを意味する。オリゴリボヌクレオチドを構成するリボヌクレオチドは、それぞれ同一であっても異なっていてもよい。
「ＲＮＡ」は、天然のリボヌクレオチドにより構成されるオリゴヌクレオチドを意味する。ＲＮＡを構成する天然のリボヌクレオチドは、それぞれ同一であっても異なっていてもよい。
「糖部修飾ヌクレオチド」は、前記デオキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチドの糖部分が、部分的に１つ以上の置換基によって置換されているか、又はその糖骨格全体がリボース及び２’－デオキシリボースとは異なる糖骨格（例えば、ヘキシトール、トレオース等の５から６員の糖骨格）に置き換えられているか、又はその糖骨格全体が５から６員の飽和若しくは不飽和環（例えば、シクロヘキサン、シクロヘキセン、モルホリン等）又は５から６員の環を水素結合によって形成し得る部分構造（例えば、ペプチド構造）に置き換えられているヌクレオチドを意味する。「糖部修飾ヌクレオチド」の塩基部分は、天然に存在する塩基であっても修飾された塩基であってもよい。また、「糖部修飾ヌクレオチド」のホスホジエステル結合部分は、ホスホジエステル結合であっても修飾されたホスホジエステル結合であってもよい。塩基部分の修飾やホスホジエステル結合部位の修飾は１つの糖部修飾ヌクレオチドに対して、複数種組み合わせて施されてもよい。
「糖部修飾ヌクレオチド」は、架橋化ヌクレオチドであっても、非架橋化ヌクレオチドであってもよい。糖部修飾ヌクレオチドとしては、例えば、特開平１０－３０４８８９号公報、国際公開第２００５／０２１５７０号、特開平１０－１９５０９８号公報、特表２００２－５２１３１０号公報、国際公開第２００７／１４３３１５号、国際公開第２００８／０４３７５３号、国際公開第２００８／０２９６１９号及び国際公開第２００８／０４９０８５号（以下、これら文献を「アンチセンス法に関する文献」と称する）等において、アンチセンス法に好適に用いられるとして開示されているヌクレオチド等が挙げられる。前記文献には、ヘキシトールヌクレオチド（ＨＮＡ）、シクロヘキセンヌクレオチド（ＣｅＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、トレオヌクレオチド（ＴＮＡ）、モルホリノ核酸、トリシクロ－ＤＮＡ（ｔｃＤＮＡ）、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド、２’－ＭＯＥ（２’－Ｏ－メトキシエチル）化ヌクレオチド、２’－ＡＰ（２’－Ｏ－アミノプロピル）化ヌクレオチド、２’－フルオロ化ヌクレオチド、２’－Ｆ－アラビノヌクレオチド（２’－Ｆ－ＡＮＡ）、架橋化ヌクレオチド（ＢＮＡ（Ｂｒｉｄｇｅｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ））、２’－Ｏ－メチルカルバモイルエチル化ヌクレオチド（ＭＣＥ）等のヌクレオチドが開示されている。また、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（２０１６年、５９巻、２１号、９６４５－９６６７頁）、メディシナル・ケミストリー・コミュニケーションズ（２０１４年、５巻、１４５４－１４７１頁）、フューチャー・メディシナル・ケミストリー（２０１１年、３巻、３号、３３９－３６５頁）等にも、糖部修飾ヌクレオチドが開示されている。
前記「糖部修飾ヌクレオチド」が本発明の一本鎖オリゴヌクレオチド分子を構成する際、例えば、該糖部修飾ヌクレオチドの３’位がホスホジエステル結合又は修飾されたホスホジエステル結合で他のヌクレオチドと連結され、該糖部修飾ヌクレオチドの５’位がホスホジエステル結合又は修飾されたホスホジエステル結合で別のヌクレオチドと連結されている。本発明の一本鎖オリゴヌクレオチド分子の３’末端の糖部修飾ヌクレオチドは、例えば、その３’位に、好ましくはヒドロキシ基又はリン酸基を有し、５’位は前述の通りである。一本鎖オリゴヌクレオチド分子の５’末端の糖部修飾ヌクレオチドは、例えば、その５’位に、好ましくはヒドロキシ基又はリン酸基を有し、３’位は前述の通りである。
デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドにおける塩基部分は、好ましくは、アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、ウラシル（Ｕ）及び５－メチルシトシン（５－ｍｅ－Ｃ）からなる群から選ばれる少なくとも１種である。
デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドにおける塩基部分の修飾の例としては、ハロゲン化、メチル化、エチル化、ｎ－プロピル化、イソプロピル化、シクロプロピル化、ｎ－ブチル化、イソブチル化、ｓ－ブチル化、ｔ－ブチル化、シクロブチル化、水酸化、アミノ化、チオ化及びデメチル化等が挙げられる。より具体的には、シトシンの５－メチル化、５－フルオロ化、５－ブロモ化、５－ヨード化及びＮ４－メチル化；チミンの２－チオ化、５－デメチル化、５－フルオロ化、５－ブロモ化及び５－ヨード化；ウラシルの２－チオ化、５－フルオロ化、５－ブロモ化及び５－ヨード化；アデニンのＮ６－メチル化及び８－ブロモ化；グアニンのＮ２－メチル化及び８－ブロモ化等が挙げられる。また、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（２０１６年、５９巻、２１号、９６４５－９６６７頁）、メディシナル・ケミストリー・コミュニケーションズ（２０１４年、５巻、１４５４－１４７１頁）、フューチャー・メディシナル・ケミストリー（２０１１年、３巻、３号、３３９－３６５頁）に、ヌクレオチドにおける塩基部分の修飾の例が開示されており、これらをデオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドにおける塩基部分に用いることができる。
デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドにおけるホスホジエステル結合部分の修飾の例としては、例えば、ホスホロチオエート化、メチルホスホネート化（キラル－メチルホスホネート化を含む）、メチルチオホスホネート化、ホスホロジチオエート化、ホスホロアミデート化、ホスホロジアミデート化、ホスホロアミドチオエート化及びボラノホスフェート化等が挙げられる。
デオキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチドの糖部分が、部分的に１個の置換基によって置換されている修飾の例としては、例えば、２’－Ｏ－メチル化、２’－Ｏ－メトキシエチル（ＭＯＥ）化、２’－Ｏ－アミノプロピル（ＡＰ）化、２’－フルオロ化及び２’－Ｏ－メチルカルバモイルエチル（ＭＣＥ）化等が挙げられる。
「架橋化ヌクレオチド」とは、糖部分における２箇所の置換によって架橋ユニットが置換された糖部修飾ヌクレオチドであり、例えば、２’位と４’位が架橋したヌクレオチドが挙げられる。
２’位と４’位が架橋したヌクレオチド（２’，４’－ＢＮＡ）としては、２’位の炭素原子と４’位の炭素原子とが、２以上の原子によって架橋されている糖部分を有するヌクレオチドであればよく、例えば、Ｃ２－６アルキレン基（該アルキレン基は無置換であるか、又はハロゲン原子、オキソ基又はチオキソ基からなる群から選択される１個以上の置換基で置換されている。また、該アルキレン基の１若しくは２つのメチレン基は、置き換えられていないか、又は独立して－Ｏ－、－ＮＲ１－（Ｒ１は水素原子、Ｃ１－６アルキル基又はハロＣ１－６アルキル基を示す）及び－Ｓ－からなる群から選択される基で置き換えられている）で架橋された糖部分を有するヌクレオチドが挙げられる。
前記置換と置き換えを組み合わせて、２’，４’－ＢＮＡの２’位と４’位を架橋する基は、－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ１－（Ｒ１は水素原子、Ｃ１－６アルキル基又はハロＣ１－６アルキル基を示す）、－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ１－（Ｒ１は水素原子、Ｃ１－６アルキル基又はハロＣ１－６アルキル基を示す）、－Ｃ（Ｓ）－ＮＲ１－（Ｒ１は水素原子、Ｃ１－６アルキル基又はハロＣ１－６アルキル基を示す）等で表される基を含んでいてもよい。ここで、－Ｃ（Ｓ）－ＮＲ１－を含む糖部修飾ヌクレオチドは、－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ１－を含む糖部修飾ヌクレオチド又はその中間体から、チオカルボニル化試薬（例えばローソン試薬等）を用いて、必要に応じて保護反応及び脱保護反応を行って、合成することができる。
このようなＢＮＡとしては、例えば、ＬＮＡとも称されるロックド核酸（Ｌｏｃｋｅｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ（登録商標）、α－Ｌ－メチレンオキシ（４’－ＣＨ２－Ｏ－２’）ＢＮＡ又はβ－Ｄ－メチレンオキシ（４’－ＣＨ２－Ｏ－２’）ＢＮＡ、ＥＮＡとも称されるエチレンオキシ（４’－（ＣＨ２）２－Ｏ－２’）ＢＮＡ）、β－Ｄ－チオ（４’－ＣＨ２－Ｓ－２’）ＢＮＡ、アミノオキシ（４’－ＣＨ２－Ｏ－Ｎ（Ｒ１１）－２’）ＢＮＡ（Ｒ１１は、Ｈ又はＣＨ３）、２’，４’－ＢＮＡＮＣとも称されるオキシアミノ（４’－ＣＨ２－Ｎ（Ｒ１２）－Ｏ－２’）ＢＮＡ（Ｒ１２は、Ｈ又はＣＨ３）、２’，４’－ＢＮＡＣＯＣ、３’－アミノ－２’，４’－ＢＮＡ、５’－メチルＢＮＡ、ｃＥｔ－ＢＮＡとも称される（４’－ＣＨ（ＣＨ３）－Ｏ－２’）ＢＮＡ、ｃＭＯＥ－ＢＮＡとも称される（４’－ＣＨ（ＣＨ２ＯＣＨ３）－Ｏ－２’）ＢＮＡ、ＡｍＮＡとも称されるアミド型ＢＮＡ（４’－Ｃ（Ｏ）－Ｎ（Ｒ１３）－２’）ＢＮＡ（Ｒ１３は、Ｈ又はＣＨ３）、当業者に知られた他のＢＮＡ等が挙げられる。
「オリゴヌクレオチド」は、１つ以上のヌクレオチドが重合した構造を有する分子である。「オリゴヌクレオチド」が１つのヌクレオチドからなるとき、そのオリゴヌクレオチドは、「ヌクレオチド」と言うことができる。
「ヌクレオチド」は、核酸（オリゴヌクレオチド）の構成単位となりうる分子を意味し、通常、構成要素として塩基を有する。ヌクレオチドは、例えば、糖、塩基及びリン酸から構成される。ヌクレオチドは、前記デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドを含む。本発明の一本鎖オリゴヌクレオチド分子が含むヌクレオチドは、それぞれ独立して、互いにホスホジエステル結合又は前記修飾されたホスホジエステル結合で連結されている。本発明の一本鎖オリゴヌクレオチド分子の３’末端のヌクレオチドは、その３’位に、好ましくはヒドロキシ基又はリン酸基を有し、より好ましくはヒドロキシ基を有し、通常はヒドロキシ基を有する。一本鎖オリゴヌクレオチド分子の５’末端のヌクレオチドは、その５’位に、好ましくはヒドロキシ基又はリン酸基を有し、より好ましくはヒドロキシ基を有し、通常はヒドロキシ基を有する。
「糖部、塩基部及びリン酸部の少なくとも１つが修飾されたヌクレオチド」は、天然に存在するデオキシリボヌクレオチドの塩基部及びリン酸部の少なくとも１つが修飾されたデオキシリボヌクレオチド、天然に存在するリボヌクレオチドの塩基部及びリン酸部の少なくとも１つが修飾されたリボヌクレオチド又は糖部修飾ヌクレオチドを意味する。
「ＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」は、４個以上の連続するヌクレオチドを含み、ＲＮａｓｅＨによって認識される限り特に限定されないが、連続するヌクレオチドは、好ましくはデオキシリボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選ばれ、より好ましくは、デオキシリボヌクレオチドから独立して選ばれる。この連続するヌクレオチドは、それぞれ同一であっても、異なっていてもよい。
「ＲＮａｓｅＨによって切断される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」は、４個の連続するヌクレオチドを含み、ＲＮａｓｅＨによって切断される限り特に限定されないが、少なくとも１個のリボヌクレオチドを含む。また、オリゴリボヌクレオチドを含むことが好ましく、ＲＮＡを含むことがより好ましい。該連続するヌクレオチドは、リボヌクレオチドから独立して選ばれることがさらに好ましい。また、該連続するヌクレオチドは、互いにホスホジエステル結合で連結されていることがさらに好ましい。この連続するヌクレオチドは、それぞれ同一であっても、異なっていてもよい。
「Ｃ１－６アルキル基」とは、炭素数が１から６の直鎖又は分枝状の飽和炭化水素基を意味し、例えば、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓ－ブチル基、ｔ－ブチル基、ｎ－ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｎ－ヘキシル基及びイソヘキシル基等が挙げられる。
「Ｃ１－６アルキレン基」とは、前記「Ｃ１－６アルキル基」から任意の位置の水素原子を１個取り除いた２価の置換基を意味し、例えば、メチレン基、エチレン（エタンジイル）基、プロパン－１，３－ジイル基、プロパン－２，２－ジイル基、２，２－ジメチル－プロパン－１，３－ジイル基、ヘキサン－１，６－ジイル基及び３－メチルブタン－１，２－ジイル基等が挙げられる。
「Ｃ２－６アルキレン基」とは、前記「Ｃ１－６アルキレン基」のうち、炭素数が２から６の直鎖又は分枝状の２価の置換基を意味し、例えば、エチレン（エタンジイル）基、プロパン－１，３－ジイル基、２，２－ジメチル－プロパン－１，３－ジイル基、ヘキサン－１，６－ジイル基及び３－メチルブタン－１，２－ジイル基等が挙げられる。
「ｎ－」はノルマル、「ｓ－」はセカンダリー、「ｔ－」はターシャリーを意味する。
「Ｃ２－２０アルキレン基」とは、炭素数が２から２０の直鎖又は分枝状の飽和炭化水素基から任意の位置の水素原子を１個取り除いた２価の置換基を意味する。
「Ｃ８－１２アルキレン基」とは、炭素数が８から１２の直鎖又は分枝状の飽和炭化水素基から任意の位置の水素原子を１個取り除いた２価の置換基を意味する。
「Ｃ２－２０アルケニレン基」とは、炭素数が２から２０の直鎖又は分枝状の不飽和炭化水素基から任意の位置の水素原子を１個取り除いた２価の置換基を意味する。
「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子を意味する。
「ハロＣ１－６アルキル基」とは、前記「Ｃ１－６アルキル基」の任意の位置の水素原子が、フッ素原子、塩素原子、臭素原子及びヨウ素原子からなる置換基群より独立して選択される１個以上のハロゲン原子で置換された置換基を意味する。
「オキソ基」とは、酸素原子が二重結合を介して置換する置換基（＝Ｏ）を示す。オキソ基が炭素原子に置換した場合は当該炭素原子と一緒となってカルボニル基を形成する。
「チオキソ基」とは、酸素原子が二重結合を介して置換する置換基（＝Ｓ）を示す。チオキソ基が炭素原子に置換した場合は当該炭素原子と一緒となってチオカルボニル基を形成する。
糖部修飾ヌクレオチドは、ここで例示されたものに限定されるわけではない。多数の糖部修飾ヌクレオチドが当該分野では知られており、例えば、Ｔａｃｈａｓらの米国特許第８２９９０３９号明細書（特に１７から２２欄）、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（２０１６年、５９巻、２１号、９６４５－９６６７頁）、メディシナル・ケミストリー・コミュニケーションズ（２０１４年、５巻、１４５４－１４７１頁）又はフューチャー・メディシナル・ケミストリー（２０１１年、３巻、３号、３３９－３６５頁）等に記載の糖部修飾ヌクレオチドを、本発明の実施態様として利用することもできる。
当業者であれば、このような糖部修飾ヌクレオチドの中から、アンチセンス効果、標的ＲＮＡの部分配列に対する親和性、核酸分解酵素に対する耐性等の観点を考慮し、適宜糖部修飾ヌクレオチドを選択して利用することができる。
次に本発明におけるアンチセンス配列、アンチセンス配列部分、アンチセンス配列と分子内でハイブリダイズするヌクレオチド配列部分について説明する。
「アンチセンス配列」とは、標的ＲＮＡとのハイブリダイズを可能にするオリゴヌクレオチドを構成するヌクレオチドの塩基配列を意味する。
「アンチセンス配列部分」は、オリゴヌクレオチド鎖のうち、前記アンチセンス配列を有する領域の部分構造を意味する。
なお、本明細書において、「アンチセンス配列」が、ヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチド鎖を含む又は含まないこと等は、対応する「アンチセンス配列部分」が、該ヌクレオチド若しくは該オリゴヌクレオチド鎖を含む又は含まないこと等と同様の意味を有する。また、該「アンチセンス配列」は、該ヌクレオチド若しくは該オリゴヌクレオチド鎖等を含む又は含まない「アンチセンス配列部分」の塩基配列と同様の意味を有する。
前記アンチセンス配列部分は、標的ＲＮＡの全体とハイブリダイズする必要はなく、標的ＲＮＡの少なくとも一部とハイブリダイズすればよいが、通常は、標的ＲＮＡの少なくとも一部とハイブリダイズする。例えば、標的ＲＮＡの部分配列に相補的なアンチセンス配列を有するオリゴヌクレオチド（ＤＮＡ、オリゴデオキシリボヌクレオチド又は通常アンチセンス効果が生じるように設計されたオリゴヌクレオチド等）と標的ＲＮＡの少なくとも一部がハイブリダイズすることによって、標的遺伝子の発現が制御される。また、アンチセンス配列部分の全体がハイブリダイズする必要はなく、一部がハイブリダイズしなくてもよいが、アンチセンス配列部分の全体がハイブリダイズすることが、好ましい。
前記アンチセンス配列と標的ＲＮＡの部分配列との相補性は、好ましくは７０％以上、より好ましくは８０％以上、さらに好ましくは９０％以上（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）である。アンチセンス配列部分と標的ＲＮＡの少なくとも一部とがハイブリダイズするために、それらの配列が完全に相補的である必要はないが、完全に相補的であることがさらにより好ましい。
前記アンチセンス配列は、「標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」を含む配列であるか、又は「少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まない」配列であることが好ましい。
当業者は、「標的ＲＮＡとのハイブリダイズを可能にする」アンチセンス配列に適合する塩基配列を、ＢＬＡＳＴプログラム等を利用することにより容易に決定することができる。「標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」に適合するヌクレオチド配列も同様である。
「標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」は、通常、４～３０の連続するヌクレオチドであるが、好ましくは４～２０の連続するヌクレオチドであり、より好ましくは５～１６の連続するヌクレオチドであり、さらに好ましくは６～１２の連続するヌクレオチドであり、特に好ましくは８～１０の連続するヌクレオチドである。前記連続するヌクレオチドは、好ましくは、デオキシリボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選ばれ、より好ましくは、デオキシリボヌクレオチドから独立して選ばれる。特に好ましくは、８～１０個の連続するデオキシリボヌクレオチドである。この連続するヌクレオチドは、それぞれ同一であっても、異なっていてもよい。
また、体内動態に優れているという観点から、この連続したヌクレオチドのうち、少なくとも１個のヌクレオチドがホスホロチオエート化されていることが好ましい。この連続するヌクレオチドのうち、３’末端及び５’末端のヌクレオチドのうち少なくとも一方がホスホロチオエート化されていることがより好ましい。この連続するヌクレオチドのうち、８０％のヌクレオチドがホスホロチオエート化されていることが更に好ましく、９０％のヌクレオチドがホスホロチオエート化されていることが更により好ましい。この連続するヌクレオチドの全てがホスホロチオエート化されていることが特に好ましい。
アンチセンス配列が、「標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」を含む配列である場合、標的ＲＮＡの部分配列に対する親和性又は核酸分解酵素に対する耐性が増大するという観点から、「標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」（アンチセンス配列部分）の３’側及び５’側の少なくとも一方に隣接して１～１０個の糖部修飾ヌクレオチドが結合していることが好ましく、該３’側及び５’側の少なくとも一方に隣接して１～７個の糖部修飾ヌクレオチドが結合していることがより好ましく、該３’側及び５’側の少なくとも一方に隣接して２～３個の糖部修飾ヌクレオチドが結合していることが更に好ましい。ここで、該３’側及び５’側の少なくとも一方における複数の糖部修飾ヌクレオチドの間に、一又は複数のデオキシリボヌクレオチド若しくはリボヌクレオチド又はその両方が含まれていてもよいが、該複数の糖部修飾ヌクレオチドは、連続していることが好ましい。また、該一又は複数の糖部修飾ヌクレオチドは、前記アンチセンス配列部分の３’側及び５’側の両方に隣接して結合していることが好ましい。該アンチセンス配列部分の３’側及び５’側の少なくとも一方に隣接して複数の糖部修飾ヌクレオチドが結合している場合、「隣接して複数の糖部修飾ヌクレオチドが結合している」とは、該複数の糖部修飾ヌクレオチド及び、該複数の糖部修飾ヌクレオチドの間に含まれるデオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖が隣接して結合していることを意味する。該３’側及び５’側の少なくとも一方に隣接して複数の糖部修飾ヌクレオチドが結合している場合、それぞれの糖部修飾ヌクレオチドは同一であっても、異なっていてもよい。
前記「標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」の３’側及び５’側の少なくとも一方に隣接して結合している糖部修飾ヌクレオチド部分は、標的ＲＮＡにハイブリダイズしてもよく、しなくてもよいが、標的ＲＮＡにハイブリダイズすることが前記と同様の観点から好ましい。
また、体内動態に優れているという観点から、前記「標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」の３’側及び５’側に位置する糖部修飾ヌクレオチドの少なくとも１個が、ホスホロチオエート化されていることが好ましく、３’側に位置する糖部修飾ヌクレオチドの少なくとも１個及び５’側に位置する糖部修飾ヌクレオチドの少なくとも１個がホスホロチオエート化されていることがより好ましく、５０％がホスホロチオエート化されていることがさらに好ましく、８０％がホスホロチオエート化されていることがさらにより好ましい。また、全てがホスホロチオエート化されていることが好ましい。該３’側に複数の糖部修飾ヌクレオチドが位置する場合、該ヌクレオチドの間の結合はホスホロチオエート化されていることが好ましく、該５’側に複数の糖部修飾ヌクレオチドが位置する場合も同様である。
「標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」の少なくとも一部は、分子内でハイブリダイズしてもよく、しなくてもよい。「標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」の３’側及び５’側の少なくとも一方に隣接して結合している糖部修飾ヌクレオチドも、分子内でハイブリダイズしてもよく、しなくてもよい。
アンチセンス配列が、「少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まない」配列である場合、該アンチセンス配列部分（ミックスマー）は、リボヌクレオチドを含んでも含まなくてもよく、デオキシリボヌクレオチドを含んでも含まなくてもよいが、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まない。該アンチセンス配列部分は、好ましくは、デオキシリボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選ばれるヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドの部分構造であり、糖部修飾ヌクレオチドの含有率は、例えば２５％以上である。糖部修飾ヌクレオチドの含有率は、標的ＲＮＡの部分配列に対する親和性又は核酸分解酵素に対する耐性が増大するという観点から、好ましくは３０％以上であり、より好ましくは５０％以上である。同様の観点から、このアンチセンス配列部分の３’側のヌクレオチド及び５’側のヌクレオチドの少なくとも一方が、糖部修飾ヌクレオチドであることが好ましく、前記３’側のヌクレオチド及び５’側のヌクレオチドが糖部修飾ヌクレオチドであることがより好ましい。
その他の態様として、前記アンチセンス配列部分の糖部修飾ヌクレオチドの含有率は、好ましくは１００％である。
「少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まない」アンチセンス配列部分は、連続する３個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まないことがより好ましい。
「少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まない」アンチセンス配列部分（ミックスマー）は、通常、４～３０の連続するヌクレオチドであるが、好ましくは８～２５の連続するヌクレオチドであり、より好ましくは１０～２０の連続するヌクレオチドであり、さらに好ましくは、１４～１６の連続するヌクレオチドであり、特に好ましくは、１５の連続するヌクレオチドである。この連続するヌクレオチドは、それぞれ同一であっても、異なっていてもよい。
また、体内動態に優れているという観点から、該「少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まない」アンチセンス配列部分（ミックスマー）を構成するヌクレオチドのうち、少なくとも１個のヌクレオチドがホスホロチオエート化されていることが好ましい。該アンチセンス配列部分の３’末端及び５’末端のヌクレオチドのうち少なくとも一方がホスホロチオエート化されていることがより好ましい。該アンチセンス配列部分が含むヌクレオチドの間の結合のうち、８０％がホスホロチオエート化されていることが更に好ましく、９０％がホスホロチオエート化されていることが更により好ましく、全てがホスホロチオエート化されていることが特に好ましい。
「少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まない」アンチセンス配列部分（ミックスマー）の少なくとも一部は、分子内でハイブリダイズしてもよいが、分子内でハイブリダイズしないことが好ましい。よって、一本鎖オリゴヌクレオチド分子は、該アンチセンス配列部分（ミックスマー）、第一ヌクレオチド配列部分、Ｌ、第二ヌクレオチド配列部分の順に、該アンチセンス配列部分を有し、前記アンチセンス配列部分が分子内でハイブリダイズしないように、Ｙが含むヌクレオチドの数が設定されるか、又は第一ヌクレオチド配列部分、Ｌ、第二ヌクレオチド配列部分、該アンチセンス配列部分（ミックスマー）の順にアンチセンス配列部分を有し、前記アンチセンス配列部分が分子内でハイブリダイズしないように、Ｘ（及びＸ’）が含むヌクレオチドの数が設定されることが好ましい。Ｌの５’末端から一本鎖オリゴヌクレオチド分子の５’末端までの間に一本鎖オリゴヌクレオチド分子が含むヌクレオチドの数と、Ｌの３’末端から一本鎖オリゴヌクレオチド分子の３’末端までの間に一本鎖オリゴヌクレオチド分子が含むヌクレオチドの数との差が、前記アンチセンス配列部分が含むヌクレオチドの数に近いことが好ましく、前記差は、通常、６～３０であり、好ましくは８～２５であり、より好ましくは１０～２０であり、さらに好ましくは、１４～１６の連続するヌクレオチドであり、特に好ましくは、１５の連続するヌクレオチドである。
「少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まない」アンチセンス配列部分の３’側及び５’側の少なくとも一方に隣接して１～１０個の糖部修飾ヌクレオチドが結合している必要はないが、結合していてもよい。この場合、該一又は複数の糖部修飾ヌクレオチドは、前記「標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」を含む配列の場合と同様であり、分子内でハイブリダイズしてもよく、しなくてもよいが、分子内でハイブリダイズしないことが好ましい。
アンチセンス配列部分に含まれる「糖部修飾ヌクレオチド」は、置換等により、標的ＲＮＡの部分配列に対する親和性が増大したヌクレオチド又は核酸分解酵素に対する耐性が増大したヌクレオチドであればよいが、好ましくは、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド、２’－ＭＯＥ（２’－Ｏ－メトキシエチル）化ヌクレオチド、２’－ＡＰ（２’－Ｏ－アミノプロピル）化ヌクレオチド、２’－フルオロ化ヌクレオチド、２’－Ｆ－アラビノヌクレオチド（２’－Ｆ－ＡＮＡ）、架橋化ヌクレオチド（ＢＮＡ（Ｂｒｉｄｇｅｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ））又は２’－Ｏ－メチルカルバモイルエチル化ヌクレオチド（ＭＣＥ）であり、より好ましくは、ＢＮＡ又は２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドであり、さらにより好ましくは、下記式（Ｉ）で表わされる部分構造を含むＬＮＡ、又は２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドであり、特に好ましくは、ＬＮＡである。アンチセンス配列部分の３’側に隣接して結合している一又は複数の糖部修飾ヌクレオチド及びアンチセンス配列部分の５’側に隣接して結合している一又は複数の糖部修飾ヌクレオチドについても同様である。
Figure 2022050389000001
式中、Ｂａｓｅは、塩基部分を表し、プリン－９－イル基又は２－オキソ－ピリミジン－１－イル基であり、該プリン－９－イル基及び２－オキソ－ピリミジン－１－イル基は、修飾されていないか、修飾されている。ここで２－オキソ－ピリミジン－１－イル基は、２－オキソ－１Ｈ－ピリミジン－１－イル基と同義である。また、プリン－９－イル基及び２－オキソ－ピリミジン－１－イル基は、それぞれの互変異性体をも包含する。
アンチセンス配列部分における糖部修飾ヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドの種類、数及び位置は、ここで開示する一本鎖オリゴヌクレオチドが奏するアンチセンス効果等に影響を与えうる。その種類、数及び位置は、標的ＲＮＡの配列等によっても異なるため、一概には言えないが、当業者は、前記アンチセンス法に関する文献の記載を参酌しながら、好ましい態様を決定することができる。また、塩基部分、糖部分又はホスホジエステル結合部分の修飾後の一本鎖オリゴヌクレオチドが有するアンチセンス効果を測定し、得られた測定値が、修飾前の一本鎖オリゴヌクレオチドのそれよりも有意に低下していなければ（例えば、修飾後一本鎖オリゴヌクレオチドの測定値が修飾前の一本鎖オリゴヌクレオチドの測定値の３０％以上であれば）、当該修飾が好ましい態様であると評価することができる。アンチセンス効果の測定は、例えば、後述の実施例において示されているように、細胞等に被検オリゴヌクレオチドを導入し、該被検オリゴヌクレオチドが奏するアンチセンス効果によって制御された標的ＲＮＡの発現量、標的ＲＮＡに関連しているｃＤＮＡの発現量、標的ＲＮＡに関連しているタンパク質の量等を、ノザンブロッティング、定量的ＰＣＲ、ウェスタンブロッティング等の公知の手法を適宜利用することによって行うことができる。アンチセンス配列部分の３’側に隣接して結合している一又は複数の糖部修飾ヌクレオチド、該複数の糖部修飾ヌクレオチドの間に含まれるデオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチド、アンチセンス配列部分の５’側に隣接して結合している一又は複数の糖部修飾ヌクレオチド、及び該複数の糖部修飾ヌクレオチドの間に含まれるデオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドについても同様である。
「少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まない」アンチセンス配列部分の３’側及び５’側の少なくとも一方の側の２個のヌクレオチドは、糖部修飾ヌクレオチドであることが好ましく、該糖部修飾ヌクレオチドは好ましくは架橋化ヌクレオチドであり、特に好ましくはＬＮＡである。該アンチセンス配列部分の３’側の２個のヌクレオチドが、糖部修飾ヌクレオチドであるとき、５’側の３個のヌクレオチドの２個以上が糖部修飾ヌクレオチドであり、該アンチセンス配列部分の末端側から順に、以下の順のいずれかで連結されていることが好ましい。該アンチセンス配列部分の５’側の２個のヌクレオチドが、糖部修飾ヌクレオチドであるとき、３’側の３個のヌクレオチドの２個以上が糖部修飾ヌクレオチドであり、該アンチセンス配列部分の末端側から順に、以下の順のいずれかで連結されていることが好ましい。なお、これらの順において、左側がアンチセンス配列部分の末端側であり、右側がアンチセンス配列部分の内側である。該糖部修飾ヌクレオチドは、好ましくは架橋化ヌクレオチドであり、特に好ましくはＬＮＡである。
糖部修飾ヌクレオチド－糖部修飾ヌクレオチド－糖部修飾ヌクレオチド
糖部修飾ヌクレオチド－糖部修飾ヌクレオチド－デオキシリボヌクレオチド
糖部修飾ヌクレオチド－デオキシリボヌクレオチド－糖部修飾ヌクレオチド
前記アンチセンス配列部分と分子内でハイブリダイズするヌクレオチド配列部分を一本鎖オリゴヌクレオチドが含む場合、前記「アンチセンス配列部分と分子内でハイブリダイズするヌクレオチド配列部分」における糖部修飾ヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドの種類、数及び修飾の位置は、一本鎖オリゴヌクレオチドが奏するアンチセンス効果等に影響を与える場合がある。その好ましい態様は、修飾対象となるヌクレオチドの種類、配列等によっても異なるため、一概には言えないが、前述のアンチセンス配列部分と同様に、修飾後の一本鎖オリゴヌクレオチドが有するアンチセンス効果を測定することにより特定することができる。特定の細胞内においてＲＮａｓｅＨ等のヌクレアーゼにより該「アンチセンス配列部分と分子内でハイブリダイズするヌクレオチド配列部分」が分解されることにより、アンチセンス配列部分を含むオリゴヌクレオチドが生成しアンチセンス効果を発揮し易いという観点から、該「アンチセンス配列部分と分子内でハイブリダイズするヌクレオチド配列部分」は、「ＲＮａｓｅＨによって切断される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」を含むことが好ましく、少なくとも１個のリボヌクレオチドを含むことが好ましい。また、オリゴリボヌクレオチドを含むことが好ましく、ＲＮＡを含むことがより好ましい。該連続するヌクレオチドは、リボヌクレオチドから独立して選ばれることがさらに好ましい。また、該連続するヌクレオチドは、互いにホスホジエステル結合で連結されていることがさらに好ましい。この連続するヌクレオチドは、それぞれ同一であっても、異なっていてもよい。
前記アンチセンス配列部分と前記「アンチセンス配列部分と分子内でハイブリダイズするヌクレオチド配列部分」との相補性は、好ましくは７０％以上、より好ましくは８０％以上、さらに好ましくは９０％以上（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％以上）である。アンチセンス配列部分と「アンチセンス配列部分と分子内でハイブリダイズするヌクレオチド配列部分」とがハイブリダイズするために、それらの配列が完全に相補的である必要はないが、完全に相補的であってもよい。また、前記「アンチセンス配列部分と分子内でハイブリダイズするヌクレオチド配列部分」の全体がアンチセンス配列部分にハイブリダイズする必要はなく、一部がハイブリダイズしなくてもよいが、全体がハイブリダイズしてもよい。
「アンチセンス配列部分と分子内でハイブリダイズするヌクレオチド配列部分」は、アンチセンス配列部分と部分的にハイブリダイズしてもよく、部分的にハイブリダイズするヌクレオチドの数は、通常、分子内でハイブリダイズした構造の安定性、前記標的ＲＮＡに対するアンチセンス効果の強さや、費用、合成収率等の他の要素に応じて選択される。
次に本発明におけるＸ、Ｘ’及びＹについて説明する。本発明には幾つかの実施態様があるが、まず、共通点を説明する。
Ｘは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される７～１００個のヌクレオチドからなる第一オリゴヌクレオチドに由来する基であり、該デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドは、それぞれ独立して修飾されていないか、糖部、塩基部及びリン酸部の少なくとも１つが修飾されている。第一オリゴヌクレオチドは、糖部、塩基部及びリン酸部の少なくとも１つが修飾されたヌクレオチドの少なくとも１個を含む。第一オリゴヌクレオチドは、ヌクレオチド配列Ｘを有し、ヌクレオチド配列Ｘは、第二オリゴヌクレオチドの少なくとも一部とのハイブリダイズを可能とし、ＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む第一ヌクレオチド配列を含む。
ヌクレオチド配列Ｘは、第一オリゴヌクレオチドを構成するヌクレオチドの塩基配列であり、第一ヌクレオチド配列を含む。第一ヌクレオチド配列は、第一ヌクレオチド配列部分を構成するヌクレオチドの塩基配列である。
Ｘに含まれるヌクレオチドの数は、７～１００であり、好ましくは７～５０である。Ｘに含まれるヌクレオチドの数は、通常、前記標的ＲＮＡに対するアンチセンス効果の強さ、分子内でハイブリダイズした構造の安定性、費用、合成収率等の他の要素に応じて選択される。詳細は後述する。
Ｙは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される４～１００個のヌクレオチドからなる第二オリゴヌクレオチドに由来する基であり、該デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドは、それぞれ独立して修飾されていないか、糖部、塩基部及びリン酸部の少なくとも１つが修飾されている。第二オリゴヌクレオチドは、ヌクレオチド配列Ｙを有し、ヌクレオチド配列Ｙは前記第一オリゴヌクレオチドの少なくとも一部とのハイブリダイズを可能とし、少なくとも１個のリボヌクレオチドを含む第二ヌクレオチド配列を含む。
ヌクレオチド配列Ｙは、第二オリゴヌクレオチドを構成するヌクレオチドの塩基配列であり、第二ヌクレオチド配列を含む。第二ヌクレオチド配列は、第二ヌクレオチド配列部分を構成するヌクレオチドの塩基配列である。
Ｙに含まれるヌクレオチドの数は、４～１００であり、好ましくは４～５０である。Ｙに含まれるヌクレオチドの数は、Ｘに含まれるヌクレオチドの数と同一であってもよく、異なっていてもよい。Ｙに含まれるヌクレオチドの数は、通常、前記標的ＲＮＡに対するアンチセンス効果の強さ、分子内でハイブリダイズした構造の安定性、費用、合成収率等の他の要素に応じて選択される。詳細は後述する。
ＸとＹとは、第一ヌクレオチド配列部分と第二ヌクレオチド配列部分とで分子内でハイブリダイズする。
第一ヌクレオチド配列と第二ヌクレオチド配列とは、第一ヌクレオチド配列部分と第二ヌクレオチド配列部分とがハイブリダイズするために完全に相補的である必要はないが、相補性は、好ましくは７０％以上であり、より好ましくは８０％以上であり、さらに好ましくは９０％以上（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）である。第一ヌクレオチド配列と第二ヌクレオチド配列とは、完全に相補的であってもよい。
ヌクレオチド配列Ｘとヌクレオチド配列Ｙとは、ＸとＹとがハイブリダイズするために完全に相補的である必要はないが、相補性は、好ましくは７０％以上であり、より好ましくは８０％以上であり、さらに好ましくは９０％以上（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）である。ヌクレオチド配列Ｘとヌクレオチド配列Ｙとは、完全に相補的であってもよい。
第一ヌクレオチド配列は、４～２５個の連続するヌクレオチドを含むことが好ましく、８～２０個の連続するヌクレオチドを含むことがより好ましい。一本鎖オリゴヌクレオチドが細胞内のＲＮａｓｅＨによって認識されるために、第一ヌクレオチド配列は、好ましくはデオキシリボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選ばれる配列であり、より好ましくは、デオキシリボヌクレオチドが連続する配列である。この連続するヌクレオチドは、それぞれ同一であっても、異なっていてもよい。
また、体内動態に優れているという観点から、第一ヌクレオチド配列部分のうち、少なくとも１個のヌクレオチドがホスホロチオエート化されていることが好ましい。第一ヌクレオチド配列部分の３’側及び５’側のヌクレオチドのうち少なくとも一方がホスホロチオエート化されていることがより好ましい。第一ヌクレオチド配列部分のうち、８０％のヌクレオチドがホスホロチオエート化されていることが更に好ましく、９０％のヌクレオチドがホスホロチオエート化されていることが更により好ましい。第一ヌクレオチド配列部分が含むヌクレオチドが、互いにホスホロチオエート結合で連結されていることが特に好ましい。さらに詳細は、後述する。
第二ヌクレオチド配列は、ＲＮａｓｅＨによって切断される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含むことが好ましく、４～２５個の連続するヌクレオチドを含むことがより好ましく、８～２２個の連続するヌクレオチドを含むことがさらに好ましい。この連続するヌクレオチドは、それぞれ同一であっても、異なっていてもよい。第二ヌクレオチド配列部分が細胞内のＲＮａｓｅＨによって切断されるために、第二ヌクレオチド配列部分は、オリゴリボヌクレオチドを含むことが好ましく、ＲＮＡを含むことがより好ましい。第二ヌクレオチド配列部分が含むヌクレオチドが、互いにホスホジエステル結合で連結されていることが特に好ましい。さらに詳細は、後述する。
ヌクレオチド配列Ｘ及びヌクレオチド配列Ｙの少なくとも一方は、標的ＲＮＡの少なくとも一部とのハイブリダイズを可能にするアンチセンス配列を含む。
Ｘ’は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される７～１００個のヌクレオチドからなる第四オリゴヌクレオチドに由来する基であり、該デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドは、それぞれ独立して修飾されていないか、糖部、塩基部及びリン酸部の少なくとも１つが修飾されている。第四オリゴヌクレオチドは、糖部、塩基部及びリン酸部の少なくとも１つが修飾されたヌクレオチドの少なくとも１個を含む。第四オリゴヌクレオチドは、ヌクレオチド配列Ｘ’を有し、ヌクレオチド配列Ｘ’は標的ＲＮＡとのハイブリダイズを可能にするアンチセンス配列である第四ヌクレオチド配列を含む。
ヌクレオチド配列Ｘ’は、第四オリゴヌクレオチドを構成するヌクレオチドの塩基配列であり、第四ヌクレオチド配列を含む。第四ヌクレオチド配列は、第四クレオチド配列部分を構成するヌクレオチドの塩基配列である。
Ｘ’に含まれるヌクレオチドの数は、７～１００であり、下限は好ましくは８であり、より好ましくは１０であり、更に好ましくは１２であり、更により好ましくは１３である。Ｘ’に含まれるヌクレオチドの数の上限は、好ましくは５０であり、より好ましくは３５であり、更に好ましくは２５であり、更により好ましくは２０である。Ｘ’に含まれるヌクレオチドの数は、好ましくは１０～５０であり、より好ましくは１０～３５であり、さらに好ましくは１２～２５塩基であり、さらにより好ましくは１３～２０塩基であり、特に好ましくは、１４～１５である。Ｘ’に含まれるヌクレオチドの数は、通常、前記標的ＲＮＡに対するアンチセンス効果の強さ、分子内でハイブリダイズした構造の安定性、費用、合成収率等の他の要素に応じて選択される。
Ｘにおける糖部修飾ヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドの種類、数及び修飾の位置は、一本鎖オリゴヌクレオチドが奏するアンチセンス効果等に影響を与える場合がある。その好ましい態様は、修飾対象となるヌクレオチドの種類、配列等によっても異なるため、一概には言えないが、前述のアンチセンス配列部分と同様に、修飾後の一本鎖オリゴヌクレオチドが有するアンチセンス効果を測定することにより特定することができる。Ｙ及びＸ’も、Ｘと同様である。
Ｘ’、Ｙ及びＸの２つ以上が、同一の標的ＲＮＡにハイブリダイズする場合、それらが有するアンチセンス配列はそれぞれ同一であってもよく、異なっていてもよい。Ｘ’、Ｙ及びＸは、それぞれ別の標的ＲＮＡにハイブリダイズしてもよい。
ヌクレオチド配列Ｘが、アンチセンス配列を有する場合、該アンチセンス配列は、「標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」を含むか、又は「少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まない」ことが好ましく、「標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」を含むことがより好ましい。第一ヌクレオチド配列がアンチセンス配列である場合、該アンチセンス配列は、「標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」を含む配列である。
ヌクレオチド配列Ｙが、アンチセンス配列を有する場合、該アンチセンス配列は、「標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」を含むか、又は「少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まない」ことが好ましく、「標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」を含むことがより好ましい。ヌクレオチド配列Ｘ’がアンチセンス配列を含む場合も同様である。
前記アンチセンス配列部分が、以下に述べる様に分子内でハイブリダイズする場合、特定の細胞内においてＲＮａｓｅＨ等のヌクレアーゼにより該アンチセンス配列部分が認識され、「アンチセンス配列部分と分子内でハイブリダイズするヌクレオチド配列部分」が分解されることにより、アンチセンス配列部分を含むオリゴヌクレオチドが生成しアンチセンス効果を発揮し易いという観点から、前記アンチセンス配列部分は「標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」を含むことが、好ましい。
ヌクレオチド配列Ｘがアンチセンス配列を有する場合、Ｙが、該「アンチセンス配列部分と分子内でハイブリダイズするヌクレオチド配列部分」（第八ヌクレオチド配列部分）を含んでもよい。第一ヌクレオチド配列がアンチセンス配列である場合は、該アンチセンス配列部分（第一ヌクレオチド配列部分）は第二ヌクレオチド配列部分とハイブリダイズする。
ヌクレオチド配列Ｘ’がアンチセンス配列を有する場合、Ｙが、該「アンチセンス配列部分と分子内でハイブリダイズするヌクレオチド配列部分」（第六ヌクレオチド配列部分）を含んでもよい。
ヌクレオチド配列Ｙが、アンチセンス配列を有する場合、Ｘが、該「アンチセンス配列部分と分子内でハイブリダイズするヌクレオチド配列部分」（第七ヌクレオチド配列部分）を含んでもよい。
次に、［Ａ］ヌクレオチド配列Ｘがアンチセンス配列を含む場合と、［Ｂ］ヌクレオチド配列Ｙがアンチセンス配列を含む場合のそれぞれの態様について順に説明する。
［Ａ］ヌクレオチド配列Ｘがアンチセンス配列を含む場合
ヌクレオチド配列Ｘがアンチセンス配列を含む場合、第一ヌクレオチド配列がアンチセンス配列であることが好ましい。また、その他の態様として、前記Ｘは、第一ヌクレオチド配列部分を前記アンチセンス配列部分とＬとの間に有することが好ましい。以下、順に説明するが、本発明の実施形態はそれらに限定されず、例えば、第一ヌクレオチド配列は、前記アンチセンス配列と部分的に重複していてもよい。
［Ａ－１］第一ヌクレオチド配列がアンチセンス配列である場合
第一ヌクレオチド配列がアンチセンス配列である場合、前記アンチセンス配列である第一ヌクレオチド配列は、「標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」を含む配列である。前記第一ヌクレオチド配列及び第一ヌクレオチド配列部分の好ましい態様等は、アンチセンス配列及びアンチセンス配列部分で述べた「標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」を含む配列等と同様である。また、第一ヌクレオチド配列部分の３’側及び５’側の少なくとも一方に隣接して１～１０個の糖部修飾ヌクレオチドが結合していることが好ましく、これら一又は複数の糖部修飾ヌクレオチドは、「標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」（アンチセンス配列部分）の３’側及び５’側の少なくとも一方に隣接している一又は複数の糖部修飾ヌクレオチドと同様である。
また、一本鎖オリゴヌクレオチドがＸ’－Ｌ’－Ｘなる部分構造を含む場合、ヌクレオチド配列Ｘ’が含むアンチセンス配列である前記第四ヌクレオチド配列は、「標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」を含む配列か、又は「少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まない」配列が好ましく、「標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」を含む配列であることがより好ましい。前記ヌクレオチド配列Ｘ’が含むアンチセンス配列の好ましい形態等は、前記アンチセンス配列、前記アンチセンス配列部分の説明と同様であり、アンチセンス配列部分の３’側に隣接して結合している一又は複数の糖部修飾ヌクレオチド及びアンチセンス配列部分の５’側に隣接して結合している一又は複数の糖部修飾ヌクレオチドについても前記と同様である。
第一ヌクレオチド配列は、前記共通点で述べた特徴に加え、４～２０の連続するヌクレオチドを含むことが好ましく、５～１６の連続するヌクレオチドを含むことがより好ましく、６～１２の連続するヌクレオチドを含むことがさらに好ましく、８～１０の連続するヌクレオチドを含むことがさらにより好ましく、８～１０の連続したデオキシリボヌクレオチドを含むことが特に好ましい。
ある実施形態において、Ｘに含まれるヌクレオチドの数の下限は好ましくは８であり、より好ましくは１０であり、更に好ましくは１２であり、更により好ましくは１３である。Ｘに含まれるヌクレオチドの数の上限は、好ましくは５０であり、より好ましくは３５であり、更に好ましくは２５であり、更により好ましくは２０である。Ｘに含まれるヌクレオチドの数は、好ましくは１０～５０であり、より好ましくは１０～３５であり、さらに好ましくは１２～２５であり、さらにより好ましくは１３～２０であり、特に好ましくは、１３～１５である。
ある実施形態において、Ｙに含まれるヌクレオチドの数とＸに含まれるヌクレオチドの数の差は、好ましくは１０以内であり、より好ましくは５以内であり、さらに好ましくは４以内であり、さらにより好ましくは２以内であり、特に好ましくは０である。
また、一本鎖オリゴヌクレオチドがＸ’－Ｌ’－Ｘなる部分構造を含む場合、ある実施形態において、Ｙに含まれるヌクレオチドの数とＸに含まれるヌクレオチドの数の差は、好ましくは１０以内であり、より好ましくは５以内であり、さらに好ましくは４以内であり、さらにより好ましくは２以内であり、特に好ましくは０である。Ｘ’に含まれるヌクレオチドの数は、共通点として前述した通りである。
一本鎖オリゴヌクレオチドがＸ’－Ｌ’－Ｘなる部分構造を含む場合、別の実施形態において、Ｘ’－Ｌ’－Ｘに含まれるヌクレオチドの数とＹに含まれるヌクレオチドの数の差は、好ましくは１０以内であり、より好ましくは５以内であり、さらに好ましくは４以内であり、さらにより好ましくは２以内であり、特に好ましくは０である。Ｘ’に含まれるヌクレオチドの数は、共通点として前述した通りである。
またこの場合、Ｙは第二ヌクレオチド配列に加えて、第四ヌクレオチド配列部分とのハイブリダイズを可能とし、少なくとも１個のリボヌクレオチドを含む第六ヌクレオチド配列をさらに含んでいてもよく、第五オリゴヌクレオチドに由来する基であるＬ’とのハイブリダイズを可能とする第十ヌクレオチド配列をさらに含んでいてもよい。すなわち、Ｙは、第二ヌクレオチド配列部分と第六ヌクレオチド配列部分とがこの順に連結したものであってもよく、第二ヌクレオチド配列部分と第十ヌクレオチド配列部分と第六ヌクレオチド配列部分とがこの順に連結したものであってもよい。第六ヌクレオチド配列の好ましい態様は、以下に述べる第二ヌクレオチド配列と同様である。第十ヌクレオチド配列部分の好ましい態様は、以下に述べるＬ’と同様である。
またこの場合、以下に述べるように、第二ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方が、隣接するヌクレオチドとホスホロチオエート結合で連結されていてもよいが、この場合にはホスホジエステル結合で連結されていることが好ましい。第二ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して一又は複数の糖部修飾ヌクレオチドが結合していてもよいが、この場合には結合していないことが好ましい。第六ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方は、隣接するヌクレオチドとホスホロチオエート結合で連結されていることが好ましく、その態様は、以下に述べる第二ヌクレオチド配列の場合と同様である。第六ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して一又は複数の糖部修飾ヌクレオチドが結合していることが好ましく、その態様は以下に述べる第二ヌクレオチド配列の場合と同様である。
第二ヌクレオチド配列は、前述の共通点に加え、４～２０の連続するヌクレオチドを含むことが好ましく、５～１６の連続するヌクレオチドを含むことがより好ましく、６～１２の連続するヌクレオチドを含むことがさらにより好ましく、８～１２の連続するヌクレオチドを含むことがさらにより好ましく、１０～１２の連続するヌクレオチドを含むことが特に好ましい。
該一本鎖オリゴヌクレオチドが特定の細胞の核内に送達されるまで、ＲＮａｓｅＡ等のＲＮＡ分解酵素による分解が抑制されるとともに、特定の細胞内においてはＲＮａｓｅＨ等のヌクレアーゼにより該第二オリゴヌクレオチドに由来する基が分解されることにより、第一オリゴヌクレオチドの少なくとも一部であって前記アンチセンス配列部分を含むオリゴヌクレオチドが生成しアンチセンス効果を発揮し易いという観点から、第二ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方が、隣接するヌクレオチドとホスホロチオエート結合で連結されていることが好ましい。Ｙが５’側でＬに結合する場合、第二ヌクレオチド配列部分の３’側が、隣接するヌクレオチドとホスホロチオエート結合で連結されていることがより好ましく、Ｙが３’側でＬに結合する場合、第二ヌクレオチド配列部分の５’側が、隣接するヌクレオチドとホスホロチオエート結合で連結されていることがより好ましい。また、ＲＮＡ分解酵素等の酵素による分解を抑制するという観点から、第二ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して１～１０個の糖部修飾ヌクレオチドが結合していることが好ましい。Ｙが５’側でＬに結合する場合、第二ヌクレオチド配列部分の３’側に隣接して１～７個の糖部修飾ヌクレオチドが結合していることがより好ましく、２又は３個の糖部修飾ヌクレオチドが結合していることがさらに好ましい。Ｙが３’側でＬに結合する場合、第二ヌクレオチド配列部分の５’側に隣接して１～７個の糖部修飾ヌクレオチドが結合していることがより好ましく、２又は３個の糖部修飾ヌクレオチドが結合していることがさらに好ましい。ここで、該３’側及び５’側の少なくとも一方における複数の糖部修飾ヌクレオチドの間に、複数のデオキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチド又はその両方が含まれていてもよいが、該複数の糖部修飾ヌクレオチドは、連続していることが好ましい。第二ヌクレオチド配列部分の３’側及び５’側の少なくとも一方に隣接して複数の糖部修飾ヌクレオチドが結合している場合、「隣接して複数の糖部修飾ヌクレオチドが結合している」とは、該複数の糖部修飾ヌクレオチド及び、該複数の糖部修飾ヌクレオチドの間に含まれるデオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖が隣接して結合していることを意味する。第二ヌクレオチド配列部分の３’側及び５’側の少なくとも一方に隣接して複数の糖部修飾ヌクレオチドが結合している場合、それぞれの糖部修飾ヌクレオチドは同一であっても、異なっていてもよい。
前記第二ヌクレオチド配列部分の３’側及び５’側の少なくとも一方に隣接して結合している糖部修飾ヌクレオチド部分は、第一オリゴヌクレオチドの一部にハイブリダイズしてもよく、しなくてもよいが、第一オリゴヌクレオチドの一部にハイブリダイズすることが好ましい。
前記第二ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して結合している糖部修飾ヌクレオチドは、好ましくは、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド、２’－ＭＯＥ（２’－Ｏ－メトキシエチル）化ヌクレオチド、２’－ＡＰ（２’－Ｏ－アミノプロピル）化ヌクレオチド、２’－フルオロ化ヌクレオチド、２’－Ｆ－アラビノヌクレオチド（２’－Ｆ－ＡＮＡ）、架橋化ヌクレオチド（ＢＮＡ（Ｂｒｉｄｇｅｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ））又は２’－Ｏ－メチルカルバモイルエチル化ヌクレオチド（ＭＣＥ）であり、より好ましくは、ＢＮＡ又は２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドであり、さらにより好ましくは、下記式（Ｉ）で表わされる部分構造を含むＬＮＡ、又は２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドであり、特に好ましくは、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドである。
Figure 2022050389000002
式中、Ｂａｓｅは、塩基部分を表し、プリン－９－イル基又は２－オキソ－ピリミジン－１－イル基であり、該プリン－９－イル基及び２－オキソ－ピリミジン－１－イル基は、修飾されていないか、修飾されている。
第二ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接するオリゴヌクレオチドのヌクレオチド数は、第一ヌクレオチド配列部分（例えば、第二ヌクレオチド配列部分がハイブリダイズするアンチセンス配列部分）の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接するオリゴヌクレオチドのヌクレオチド数と同一でも異なっていてもよいが、その差は、３以内であることが好ましく、１以内であることがより好ましく、同一であることが特に好ましい。第二ヌクレオチド配列部分の３’側に隣接して前記一又は複数の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド鎖が結合する場合、そのオリゴヌクレオチド鎖のヌクレオチド数は、第一ヌクレオチド配列部分の５’側に隣接して結合する一又は複数の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド鎖のヌクレオチド数と同一でも異なっていてもよいが、その差は、３以内であることが好ましく、１以内であることがより好ましく、同一であることが特に好ましい。第二ヌクレオチド配列部分の５’側に隣接して前記一又は複数の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド鎖が結合する場合、そのオリゴヌクレオチド鎖のヌクレオチド数は、第一ヌクレオチド配列部分の３’側に隣接して結合する１又は複数の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド鎖のヌクレオチド数と同一でも異なっていてもよいが、その差は、３以内であることが好ましく、１以内であることがより好ましく、同一であることが特に好ましい。
その他の態様として、さらにヌクレオチド配列Ｙがアンチセンス配列を含む場合、前記Ｙは、第二ヌクレオチド配列部分を前記アンチセンス配列部分とＬとの間に有することが好ましい。前記アンチセンス配列部分の配列は、後述する［Ｂ］ヌクレオチド配列Ｙがアンチセンス配列を含む場合のヌクレオチド配列Ｙが含むアンチセンス配列と同様である。
ヌクレオチド配列Ｙがアンチセンス配列を含む場合、第二ヌクレオチド配列は、前記共通点で述べた第二ヌクレオチド配列に加え、後述する［Ｂ］ヌクレオチド配列Ｙがアンチセンス配列を含む場合の第二ヌクレオチド配列と同様である。第一ヌクレオチド配列がアンチセンス配列であってヌクレオチド配列Ｙがアンチセンス配列を含む場合には、第二ヌクレオチド配列は、４～２５の連続するヌクレオチドを含むことが好ましく、１０～２５の連続するヌクレオチドを含むことがより好ましく、１２～２２の連続するヌクレオチドを含むことがさらにより好ましく、１２～１８の連続するヌクレオチドを含むことが特に好ましい。
第二ヌクレオチド配列部分に隣接して結合するヌクレオチドの態様、該ヌクレオチドとの結合は、後述する［Ｂ］ヌクレオチド配列Ｙがアンチセンス配列を含む場合と同様である。
ヌクレオチド配列Ｙがアンチセンス配列を含む場合、ある実施形態において、Ｘに含まれるヌクレオチドの数は、好ましくは１０～３５であり、より好ましくは１２～２５であり、さらにより好ましくは１２～１６であり、特に好ましくは１４～１５である。
Ｙに含まれるヌクレオチドの数は、Ｘに含まれるヌクレオチドの数よりも、「Ｙが含むアンチセンス配列部分」に含まれるヌクレオチドの数と同程度大きいことが好ましい。Ｙに含まれるヌクレオチドの数とＸに含まれるヌクレオチドの数との差は、好ましくは６～３０であり、より好ましくは８～２５であり、さらに好ましくは、１０～２０であり、さらにより好ましくは、１３～１５である。
ヌクレオチド配列Ｙがアンチセンス配列を含む場合、別の実施形態において、Ｘに含まれるヌクレオチドの数は、好ましくは２０～４０であり、より好ましくは、２４～３８であり、さらに好ましくは、２６～３８であり、さらにより好ましくは、２８～３３であり、さらにより好ましくは、３０～３２である。
この場合、Ｙに含まれるヌクレオチドの数とＸに含まれるヌクレオチドの数の差は、好ましくは１０以内であり、より好ましくは５以内であり、さらに好ましくは４以内であり、さらにより好ましくは２以内であり、特に好ましくは０である。
この場合、ヌクレオチド配列Ｘは、Ｙが含むアンチセンス配列部分とのハイブリダイズを可能とし、少なくとも１個のリボヌクレオチドを含む第七ヌクレオチド配列をさらに含んでいてもよい。ヌクレオチド配列Ｘが第七ヌクレオチド配列を含む場合、前記式Ｘ－Ｌ－Ｙで表される一本鎖オリゴヌクレオチドは、第七ヌクレオチド配列部分、第一ヌクレオチド配列部分、Ｌ、第二ヌクレオチド配列部分、Ｙが含むアンチセンス配列部分をこの順に有する。
前記第七ヌクレオチド配列部分の好ましい態様は、前記「アンチセンス配列部分と分子内でハイブリダイズするヌクレオチド配列部分」と同様である。中でも、第七ヌクレオチド配列は、１０～２０のヌクレオチドを含むことが好ましく、１２～１９のヌクレオチドを含むことがより好ましく、１３～１５のリボヌクレオチドを含むことが更に好ましい。
該一本鎖オリゴヌクレオチドが特定の細胞の核内に送達されるまで、ＲＮａｓｅＡ等のＲＮＡ分解酵素による分解が抑制されるとともに、特定の細胞内においてはＲＮａｓｅＨ等のヌクレアーゼにより該第二オリゴヌクレオチドに由来する基が分解されることにより、第一オリゴヌクレオチドの少なくとも一部であって前記アンチセンス配列部分を含むオリゴヌクレオチドが生成し、さらに、第二オリゴヌクレオチドの少なくとも一部であって、前記Ｙが含むアンチセンス配列部分を含むオリゴヌクレオチドが生成し、アンチセンス効果を発揮し易いという観点から、第七ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方が、隣接するヌクレオチドとホスホロチオエート結合で連結されていることが好ましい。Ｘが５’側でＬに結合する場合、第七ヌクレオチド配列部分の３’側が、隣接するヌクレオチドとホスホロチオエート結合で連結されていることがより好ましく、Ｘが３’側でＬに結合する場合、第七ヌクレオチド配列部分の５’側が、隣接するヌクレオチドとホスホロチオエート結合で連結されていることがより好ましい。また、ＲＮＡ分解酵素等の酵素による分解を抑制するという観点から、第七ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して１～１０個の糖部修飾ヌクレオチドが結合していることが好ましい。Ｘが５’側でＬに結合する場合、第七ヌクレオチド配列部分の３’側に隣接して１～７個の糖部修飾ヌクレオチドが結合していることがより好ましく、２又は３個の糖部修飾ヌクレオチドが結合していることがさらに好ましい。Ｘが３’側でＬに結合する場合、第七ヌクレオチド配列部分の５’側に隣接して１～７個の糖部修飾ヌクレオチドが結合していることがより好ましく、２又は３個の糖部修飾ヌクレオチドが結合していることがさらに好ましい。ここで、該３’側及び５’側の少なくとも一方における複数の糖部修飾ヌクレオチドの間に、複数のデオキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチド又はその両方が含まれていてもよいが、該複数の糖部修飾ヌクレオチドは、連続していることが好ましい。第七ヌクレオチド配列部分の３’側及び５’側の少なくとも一方に隣接して複数の糖部修飾ヌクレオチドが結合している場合、「隣接して複数の糖部修飾ヌクレオチドが結合している」とは、該複数の糖部修飾ヌクレオチド及び、該複数の糖部修飾ヌクレオチドの間に含まれるデオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖が隣接して結合していることを意味する。第七ヌクレオチド配列部分の３’側及び５’側の少なくとも一方に隣接して複数の糖部修飾ヌクレオチドが結合している場合、それぞれの糖部修飾ヌクレオチドは同一であっても、異なっていてもよい。
前記第七ヌクレオチド配列部分の３’側及び５’側の少なくとも一方に隣接して結合している糖部修飾ヌクレオチド部分は、第二オリゴヌクレオチドの一部にハイブリダイズしてもよく、しなくてもよいが、第二オリゴヌクレオチドの一部にハイブリダイズすることが好ましい。
第七ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接するオリゴヌクレオチドのヌクレオチド数は、前記Ｙが含むアンチセンス配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接するオリゴヌクレオチドのヌクレオチド数と同一でも異なっていてもよいが、その差は、３以内であることが好ましく、１以内であることがより好ましく、同一であることが特に好ましい。第七ヌクレオチド配列部分の３’側に隣接して前記一又は複数の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド鎖が結合する場合、そのヌクレオチド数は、Ｙが含むアンチセンス配列部分の５’側に隣接して結合する一又は複数の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド鎖のヌクレオチド数と同一でも異なっていてもよいが、その差は、３以内であることが好ましく、１以内であることがより好ましく、同一であることが特に好ましい。第七ヌクレオチド配列部分の５’側に隣接して前記一又は複数の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド鎖が結合する場合、そのオリゴヌクレオチド鎖のヌクレオチド数は、Ｙが含むアンチセンス配列部分の３’側に隣接して結合する１又は複数の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド鎖のヌクレオチド数と同一でも異なっていてもよいが、その差は、３以内であることが好ましく、１以内であることがより好ましく、同一であることが特に好ましい。
前記第七ヌクレオチド配列部分の３’側及び５’側の少なくとも一方に隣接して結合している糖部修飾ヌクレオチド部分の態様は、前記第二ヌクレオチド配列部分の３’側及び５’側の少なくとも一方に隣接して結合している糖部修飾ヌクレオチド部分と同様である。
［Ａ－２］Ｘが、第一ヌクレオチド配列部分を前記アンチセンス配列部分とＬとの間に有する場合
第一ヌクレオチド配列部分と前記アンチセンス配列部分とは、直接結合しても、それらの間にオリゴヌクレオチドを介して間接的に結合してもよいが、オリゴヌクレオチドを含んで間接的に結合していることが好ましい。
該アンチセンス配列は、「標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」を含む配列であっても、「少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まない」配列であってもよいが、該アンチセンス配列は「標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」を含む配列が好ましい。該配列の好ましい形態等は、前記アンチセンス配列及びアンチセンス配列部分の説明と同様であり、アンチセンス配列部分の３’側に隣接して結合している一又は複数の糖部修飾ヌクレオチド及びアンチセンス配列部分の５’側に隣接して結合している一又は複数の糖部修飾ヌクレオチドについても同様である。
アンチセンス配列が「標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」を含む配列であり、第一ヌクレオチド配列部分と前記アンチセンス配列部分とがオリゴヌクレオチドを介して間接的に結合している場合、該オリゴヌクレオチドは、前記アンチセンス配列部分の３’側及び５’側の少なくとも一方に隣接して結合している一又は複数の糖部修飾ヌクレオチドを含むことが好ましい。糖部修飾ヌクレオチドの態様は前述の通りである。また、該オリゴヌクレオチドは、生理的条件で分解されるオリゴヌクレオチドをさらに含むことが好ましい。生理的条件で分解されるオリゴヌクレオチドの態様は、後述するＬ’と同様である。よって、第一オリゴヌクレオチドは、第一ヌクレオチド配列部分、前記生理的条件で分解されるオリゴヌクレオチドに由来する基、前記一又は複数の糖部修飾ヌクレオチド、前記Ｘが含むアンチセンス配列部分、前記一又は複数の糖部修飾ヌクレオチドの順にこれらを有することが好ましい。
アンチセンス配列が「少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まない」配列であり、第一ヌクレオチド配列部分と前記Ｘが含むアンチセンス配列部分とがオリゴヌクレオチドを介して間接的に結合している場合、該オリゴヌクレオチドは、生理的条件で分解されるオリゴヌクレオチドが好ましい。生理的条件で分解されるオリゴヌクレオチドの態様は、後述するＬ’と同様である。
また、一本鎖オリゴヌクレオチドがＸ’－Ｌ’－Ｘなる部分構造を含む場合、ヌクレオチド配列Ｘ’が含むアンチセンス配列である第四ヌクレオチド配列は、［Ａ－１］で述べた第四ヌクレオチド配列と同様である。
第一ヌクレオチド配列は、前述の共通点に加え、中でも８～１７の連続するヌクレオチドを含むことが好ましく、８～１０の連続するヌクレオチドを含むことがより好ましい。
第二ヌクレオチド配列は、前述の共通点に加え、中でも４～２０の連続するヌクレオチドを含むことが好ましく、８～１９の連続するヌクレオチドを含むことがより好ましく、９～１１の連続するヌクレオチドを含むことがより好ましい。
前記第二ヌクレオチド配列部分の３’側及び５’側の少なくとも一方に隣接して結合している糖部修飾ヌクレオチド部分は、前記［Ａ－１］で詳細に述べた第二ヌクレオチド配列の３’側及び５’側の少なくとも一方に隣接して結合している糖部修飾ヌクレオチド部分と同様である。
Ｘに含まれるヌクレオチドの数は、好ましくは１０～５０であり、より好ましくは２０～４０であり、さらに好ましくは２０～３０であり、さらにより好ましくは２２～２８であり、特に好ましくは２５～２８である。
ある実施形態において、Ｙに含まれるヌクレオチドの数は、好ましくは、４～２５であり、より好ましくは８～２０であり、さらに好ましくは１０～２０であり、特に好ましくは１０～１６である。
この場合、Ｘに含まれるヌクレオチドの数はＹに含まれるヌクレオチドの数よりも大きく、その差は前記アンチセンス配列部分が含むヌクレオチドの数に近いことが好ましく、好ましくは６～３０であり、より好ましくは、８～２５であり、さらに好ましくは、１０～２０であり、さらにより好ましくは、１２～１５である。
また、別の実施形態において、Ｙに含まれるヌクレオチドの数は、好ましくは、１０～５０であり、より好ましくは２０～４０であり、さらに好ましくは２０～３０であり、さらにより好ましくは２２～２８であり、特に好ましくは２５～２８である。
この場合、Ｙに含まれるヌクレオチドの数とＸに含まれるヌクレオチドの数の差は、好ましくは１０以内であり、より好ましくは５以内であり、さらに好ましくは４以内であり、さらにより好ましくは２以内であり、特に好ましくは０である。
この場合、Ｙは第二ヌクレオチド配列部分に加えて、前記Ｘが有するアンチセンス配列部分とのハイブリダイズを可能とし、少なくとも１個のリボヌクレオチドを含む第八ヌクレオチド配列部分をさらに含んでいてもよく、第一ヌクレオチド配列部分と前記Ｘが有するアンチセンス配列部分とを連結するオリゴヌクレオチドとのハイブリダイズを可能とする第九ヌクレオチド配列部分を更に含んでいてもよい。すなわち、Ｙは、第二ヌクレオチド配列部分と第八ヌクレオチド配列部分とがこの順に連結したものであってもよく、第二ヌクレオチド配列部分と第九ヌクレオチド配列部分と第八ヌクレオチド配列部分とがこの順に連結したものであってもよい。
前記第八ヌクレオチド配列部分の好ましい態様は、前記「アンチセンス配列部分と分子内でハイブリダイズするヌクレオチド配列部分」と同様であり、前記第二ヌクレオチド配列部分と同様である。
前記第八ヌクレオチド配列部分の３’側及び５’側の少なくとも一方に隣接して結合している糖部修飾ヌクレオチド部分の態様も、第二ヌクレオチド配列部分の３’側及び５’側の少なくとも一方に隣接して結合している糖部修飾ヌクレオチド部分と同様である。第八ヌクレオチド配列部分の３’側及び５’側の少なくとも一方に隣接して結合している糖部修飾ヌクレオチド部分は、第一オリゴヌクレオチドの一部にハイブリダイズしてもよく、しなくてもよいが、第一オリゴヌクレオチドの一部にハイブリダイズすることが好ましい。第八ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接する１又は複数の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド鎖のヌクレオチド数は、前記Ｘが含むアンチセンス配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接する１又は複数の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド鎖のヌクレオチド数と同一でも異なっていてもよいが、その差は、３以内であることが好ましく、１以内であることがより好ましく、同一であることが特に好ましい。第八ヌクレオチド配列部分の３’側に隣接して前記一又は複数の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド鎖が結合する場合、そのヌクレオチド数は、前記Ｘが含むアンチセンス配列部分の５’側に隣接して結合する一又は複数の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド鎖のヌクレオチド数と同一でも異なっていてもよいが、その差は、３以内であることが好ましく、１以内であることがより好ましく、同一であることが特に好ましい。第八ヌクレオチド配列部分の５’側に隣接して前記一又は複数の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド鎖が結合する場合、そのヌクレオチド数は、前記Ｘが含むアンチセンス配列部分の３’側に隣接して結合する１又は複数の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド鎖のヌクレオチド数と同一でも異なっていてもよいが、その差は、３以内であることが好ましく、１以内であることがより好ましく、同一であることが特に好ましい。
この場合には、第二ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方が、隣接するヌクレオチドとホスホロチオエート結合で連結されていてもよいが、ホスホジエステル結合で連結されていることが好ましい。また、第二ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して一又は複数の糖部修飾ヌクレオチドが結合していてもよいが、結合していないことが好ましい。
第九ヌクレオチド配列部分の好ましい態様は、以下に述べるＬ’と同様である。
また、一本鎖オリゴヌクレオチドがＸ’－Ｌ’－Ｘなる部分構造を含む場合、ある実施形態において、Ｙに含まれるヌクレオチドの数とＸに含まれるヌクレオチドの数の差は、好ましくは１０以内であり、より好ましくは５以内であり、さらに好ましくは４以内であり、さらにより好ましくは２以内であり、特に好ましくは０である。
一本鎖オリゴヌクレオチドがＸ’－Ｌ’－Ｘなる部分構造を含む場合、別の実施形態において、Ｘ’－Ｌ’－Ｘに含まれるヌクレオチドの数とＹに含まれるヌクレオチドの数の差は、好ましくは１０以内であり、より好ましくは５以内であり、さらに好ましくは４以内であり、さらにより好ましくは２以内であり、特に好ましくは０である。
またこの場合、Ｙは第二ヌクレオチド配列部分に加えて、第四ヌクレオチド配列部分とのハイブリダイズを可能とし、少なくとも１個のリボヌクレオチドを含む第六ヌクレオチド配列部分をさらに含んでいてもよく、第五オリゴヌクレオチドに由来する基であるＬ’とのハイブリダイズを可能とする第十ヌクレオチド配列部分をさらに含んでいてもよい。すなわち、Ｙは、第二ヌクレオチド配列部分と第八ヌクレオチド配列部分と第六ヌクレオチド配列部分とがこの順に連結したものであってもよく、第二ヌクレオチド配列部分、第八ヌクレオチド配列部分、第十ヌクレオチド配列部分及び第六ヌクレオチド配列部分がこの順に連結したものであってもよく、第二ヌクレオチド配列部分、第九ヌクレオチド配列部分、第八ヌクレオチド配列部分及び第六ヌクレオチド配列部分がこの順に連結したものであってもよく、第二ヌクレオチド配列部分、第九ヌクレオチド配列部分、第八ヌクレオチド配列部分、第十ヌクレオチド配列部分及び第六ヌクレオチド配列部分がこの順に連結したものであってもよい。第六ヌクレオチド配列は、前記［Ａ－１］で述べた第六ヌクレオチド配列と同様である。第八ヌクレオチド配列及び第九ヌクレオチド配列は、前記の通りである。
またこの場合、第二ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方が、隣接するヌクレオチドとホスホロチオエート結合で連結されていてもよいが、この場合にはホスホジエステル結合で連結されていることが好ましい。第二ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して一又は複数の糖部修飾ヌクレオチドが結合していてもよいが、この場合には結合していないことが好ましい。同様に、第八ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方が、隣接するヌクレオチドとホスホロチオエート結合で連結されていてもよいが、この場合にはホスホジエステル結合で連結されていることが好ましい。第八ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して一又は複数の糖部修飾ヌクレオチドが結合していてもよいが、この場合には結合していないことが好ましい。第六ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方は、隣接するヌクレオチドとホスホロチオエート結合で連結されていることが好ましく、その態様は、前記［Ａ－１］で詳細に述べた第二ヌクレオチド配列の場合と同様である。第六ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して１又は複数の糖部修飾ヌクレオチドが結合していることが好ましく、その態様は前記前記［Ａ－１］で詳細に述べた第二ヌクレオチド配列の場合と同様である。
さらに、ヌクレオチド配列Ｙが、アンチセンス配列を含む場合、前記Ｙは、第二ヌクレオチド配列部分を前記アンチセンス配列部分とＬとの間に有することが好ましく、前記アンチセンス配列部分は、後述する［Ｂ］ヌクレオチド配列Ｙがアンチセンス配列を含む場合と同様である。
この場合、第二ヌクレオチド配列部分の態様は、［Ａ－１］で述べた、さらにヌクレオチド配列Ｙがアンチセンス配列を含む場合の第二ヌクレオチド配列部分の態様と同様である。第二ヌクレオチド配列部分に隣接して結合するヌクレオチドの態様、該ヌクレオチドとの結合は、後述する［Ｂ］ヌクレオチド配列Ｙがアンチセンス配列を含む場合と同様である。
この場合、ヌクレオチド配列Ｘは、Ｙが含むアンチセンス配列部分とのハイブリダイズを可能とし、少なくとも１個のリボヌクレオチドを含む第七ヌクレオチド配列をさらに含んでいてもよい。
この場合、ある実施態様では、式Ｘ－Ｌ－Ｙで表される一本鎖オリゴヌクレオチドは、Ｘが含むアンチセンス配列部分、第七ヌクレオチド配列部分、第一ヌクレオチド配列部分、Ｌ、第二ヌクレオチド配列部分及びＹが含むアンチセンス配列部分をこの順に有し、さらに前記第九ヌクレオチド配列部分及び前記第八ヌクレオチド配列部分をこの順に有してもよい。
別の実施態様では、式Ｘ－Ｌ－Ｙで表される一本鎖オリゴヌクレオチドは、第七ヌクレオチド配列部分、Ｘが含むアンチセンス配列部分、第一ヌクレオチド配列部分、Ｌ、第二ヌクレオチド配列部分、前記第九ヌクレオチド配列部分、前記第八ヌクレオチド配列部分及びＹが含むアンチセンス配列部分をこの順に有する。
［Ｂ］ヌクレオチド配列Ｙがアンチセンス配列を含む場合
前記Ｙは、第二ヌクレオチド配列部分を前記アンチセンス配列部分とＬとの間に有することが好ましい。第二ヌクレオチド配列部分と前記アンチセンス配列部分とは、直接結合しても、それらの間にオリゴヌクレオチドを介して間接的に結合してもよい。
該アンチセンス配列は、「標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」を含む配列か、又は「少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まない」配列であることが好ましく、該アンチセンス配列は「標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」を含む配列がより好ましい。該配列の好ましい形態等は、前記アンチセンス配列、アンチセンス配列部分の説明と同様であり、アンチセンス配列部分の３’側に隣接して結合している一又は複数の糖部修飾ヌクレオチド及びアンチセンス配列部分の５’側に隣接して結合している一又は複数の糖部修飾ヌクレオチドについても同様である。
アンチセンス配列が「標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」を含む配列である場合、第二ヌクレオチド配列部分と前記アンチセンス配列部分とがオリゴヌクレオチドを介して間接的に結合していることが好ましい。該オリゴヌクレオチドは、前記アンチセンス配列部分の３’側及び５’側の少なくとも一方に隣接して結合している一又は複数の糖部修飾ヌクレオチドであることが好ましく、その態様は前述の通りである。
アンチセンス配列が「少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まない」配列である場合、第二ヌクレオチド配列部分と前記アンチセンス配列部分とは、直接結合しても、それらの間にオリゴヌクレオチドを介して間接的に結合してもよいが、直接結合することが好ましい。オリゴヌクレオチドを介して間接的に結合する場合は、該オリゴヌクレオチドは、後述するＬ’と同様である。
該一本鎖オリゴヌクレオチドが特定の細胞の核内に送達されるまで、ＲＮａｓｅＡ等のＲＮＡ分解酵素による分解が抑制されるとともに、特定の細胞内においてはＲＮａｓｅＨにより該第二ヌクレオチド配列部分が分解されることにより、第二オリゴヌクレオチドの一部分であって前記アンチセンス配列部分を含むオリゴヌクレオチドが生成し、アンチセンス効果を発揮し易いという観点から、第二ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側が、隣接するヌクレオチドとホスホジエステル結合で連結されていることが好ましい。
また、第二ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドが結合していることが好ましい。Ｙが５’側でＬに結合する場合、第二ヌクレオチド配列部分の３’側に隣接して少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドが結合していることがより好ましく、Ｙが３’側でＬに結合する場合、第二ヌクレオチド配列部分の５’側に隣接して少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドが結合していることがより好ましい。
該糖部修飾ヌクレオチドは、アンチセンス配列が「標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチド」を含む場合、該アンチセンス配列部分の３’側及び５’側の一方に隣接して結合している一又は複数の糖部修飾ヌクレオチドであることが好ましく、その態様は前述と同様である。
該糖部修飾ヌクレオチドは、アンチセンス配列が「少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まない」場合、該アンチセンス配列部分の３’側及び５’側の一方の糖部修飾ヌクレオチドであることが好ましく、その態様は前述と同様である。
第二ヌクレオチド配列は、前記の共通点で述べた第二ヌクレオチド配列の態様に加え、４～２５の連続するヌクレオチドを含むことが好ましく、１０～２２の連続するヌクレオチドを含むことがより好ましく、１０～１６の連続するヌクレオチドを含むことがさらに好ましく、１２～１４の連続するリボヌクレオチドを含むことがさらにより好ましく、１２～１３の連続するリボヌクレオチドを含むことが特に好ましい。
前記同様、該一本鎖オリゴヌクレオチドが特定の細胞の核内に送達されるまで、ＲＮａｓｅＡ等のＲＮＡ分解酵素による分解が抑制されるとともに、特定の細胞内においてはＲＮａｓｅＨ等のヌクレアーゼにより該第二オリゴヌクレオチドに由来する基が分解されることにより、第二オリゴヌクレオチドの少なくとも一部であって前記アンチセンス配列部分を含むオリゴヌクレオチドが生成しアンチセンス効果を発揮し易いという観点から、第一ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方が、隣接するヌクレオチドとホスホロチオエート結合で連結されていることが好ましい。Ｘが５’側でＬに結合する場合、第一ヌクレオチド配列部分の３’側 が、隣接するヌクレオチドとホスホロチオエート結合で連結されていることがより好ましく、Ｘが３’側でＬに結合する場合、第一ヌクレオチド配列部分の５’側 が、隣接するヌクレオチドとホスホロチオエート結合で連結されていることがより好ましい。 ある実施態様においては、第一オリゴヌクレオチドに含まれるヌクレオチドが、ホスホロチオエート結合で互いに連結されていることが好ましい。
また、ＲＮＡ分解酵素等の酵素による分解を抑制するという観点から、第一ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して１～１０個の糖部修飾ヌクレオチドが結合していることが好ましい。Ｘが５’側でＬに結合する場合、第一ヌクレオチド配列部分の３’側に隣接して１～７個の糖部修飾ヌクレオチドが結合していることがより好ましく、２又は３個の糖部修飾ヌクレオチドが結合していることがさらに好ましい。Ｘが３’側でＬに結合する場合、第一ヌクレオチド配列部分の５’側に隣接して１～７個の糖部修飾ヌクレオチドが結合していることがより好ましく、２又は３個の糖部修飾ヌクレオチドが結合していることがさらに好ましい。ここで、該３’側及び５’側の少なくとも一方における複数の糖部修飾ヌクレオチドの間に、複数のデオキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチド又はその両方が含まれていてもよいが、該複数の糖部修飾ヌクレオチドは、連続していることが好ましい。第一ヌクレオチド配列部分の３’側及び５’側の少なくとも一方に隣接して複数の糖部修飾ヌクレオチドが結合している場合、「隣接して複数の糖部修飾ヌクレオチドが結合している」とは、該複数の糖部修飾ヌクレオチド及び、該複数の糖部修飾ヌクレオチドの間に含まれるデオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖が隣接して結合していることを意味する。第一ヌクレオチド配列部分の３’側及び５’側の少なくとも一方に隣接して複数の糖部修飾ヌクレオチドが結合している場合、それぞれの糖部修飾ヌクレオチドは同一であっても、異なっていてもよい。
前記第一ヌクレオチド配列部分の３’側及び５’側の少なくとも一方に隣接して結合している糖部修飾ヌクレオチド部分は、第二オリゴヌクレオチドの一部にハイブリダイズしてもよく、しなくてもよいが、第二オリゴヌクレオチドの一部にハイブリダイズすることが好ましい。
前記第一ヌクレオチド配列部分の３’側及び５’側の少なくとも一方に隣接して結合している糖部修飾ヌクレオチド部分は、前記［Ａ－１］で詳細に述べた第二ヌクレオチド配列の３’側及び５’側の少なくとも一方に隣接して結合している糖部修飾ヌクレオチド部分と同様である。
第一ヌクレオチド配列の態様は、前記共通点で述べた第一ヌクレオチド配列と同様であり、中でも４～２０の連続するヌクレオチドであり、好ましくは６～１６の連続するヌクレオチドであり、より好ましくは８～１２の連続するヌクレオチドであり、特に好ましくは９～１１の連続するデオキシリボヌクレオチドである。
ある実施態様において、Ｘに含まれるヌクレオチドの数は、好ましくは７～５０であり、より好ましくは８～３０であり、さらにより好ましくは１０～２０であり、特に好ましくは１０～１６である。
この場合、Ｘに含まれるヌクレオチドの数はＹに含まれるヌクレオチドの数よりも小さく、その差は好ましくは６～３０であり、より好ましくは、８～２５であり、さらに好ましくは、１０～２０であり、特に好ましくは１３～１５である。
ヌクレオチド配列Ｘは、Ｙが含むアンチセンス配列部分とのハイブリダイズを可能とし、少なくとも１個のリボヌクレオチドを含む第七ヌクレオチド配列をさらに含んでいてもよい。この場合、ある実施態様では、式Ｘ－Ｌ－Ｙで表される一本鎖オリゴヌクレオチドは、第七ヌクレオチド配列部分、第一ヌクレオチド配列部分、Ｌ、第二ヌクレオチド配列部分及びＹが含むアンチセンス配列部分をこの順に有する。第七ヌクレオチド配列の態様は、［Ａ－１］で前述した通りである。
この場合、Ｘに含まれるヌクレオチドの数は、好ましくは１０～５０であり、より好ましくは２０～４５であり、さらに好ましくは２５～４０であり、さらにより好ましくは、２６～３８であり、特に好ましくは、２８～３３である。
Ｙに含まれるヌクレオチドの数とＸに含まれるヌクレオチドの数の差は、好ましくは１０以内であり、より好ましくは５以内であり、さらに好ましくは４以内であり、さらにより好ましくは２以内であり、特に好ましくは０である。
さらにヌクレオチド配列Ｘが、アンチセンス配列を含んでもよく、その場合の態様については、［Ａ－１］及び［Ａ－２］で説明した通りである。
また、一本鎖オリゴヌクレオチドがＸ’－Ｌ’－Ｘなる部分構造を含む場合、ヌクレオチド配列Ｘ’が含む前記第四ヌクレオチド配列は、［Ａ－１］で述べた第四ヌクレオチド配列と同様である。
次に、Ｌ，Ｌ’及び機能性分子について説明する。以下は、前記の幾つかの態様に共通する。
Ｌは、生理的条件で分解されるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、前述のＸとＹとを連結するリンカーである。Ｌは前述のＸとＹとを、Ｘ－Ｌ－Ｙの順番で連結する。
Ｌ’は、生理的条件で分解されるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、前述のＸとＸ’とを連結するリンカーである。Ｌ’は前述のＸとＸ’とを、Ｘ’－Ｌ’－Ｘの順に連結する。
ＬとＸとは共有結合で連結され、例えば、ＬとＸのそれぞれの末端ヌクレオチドの糖部分（糖部修飾ヌクレオチドにおいては、糖骨格から置き換わった部分構造を含む）がホスホジエステル結合で連結されていることが好ましい。ＬとＹとは共有結合で連結され、例えば、ＬとＹのそれぞれの末端ヌクレオチドの糖部分（糖部修飾ヌクレオチドにおいては、糖骨格から置き換わった部分構造を含む）がホスホジエステル結合で連結されていることが好ましい。また同様に、Ｙにおける第二ヌクレオチド配列部分とＬとは、ホスホジエステル結合で連結されていることが好ましい。同様にＬ’とＸ’とは、ホスホジエステル結合で連結されていることが好ましく、Ｌ’とＸとは、ホスホジエステル結合で連結されていることが好ましい。
ここで、「生理的条件で分解されるオリゴヌクレオチドに由来する基」とは、生理的条件にて各種ＤＮａｓｅ（デオキシリボヌクレアーゼ）及びＲＮａｓｅ（リボヌクレアーゼ）等の酵素によって分解されるオリゴヌクレオチドに由来する基であればよく、該オリゴヌクレオチドを構成するヌクレオチドは、その一部あるいは全部において、塩基、糖若しくはリン酸塩結合に化学修飾がされていてもよく、されていなくてもよい。
Ｌは、前述のアンチセンス配列部分より速やかに分解されることが望ましい。Ｌは、好ましくはホスホジエステル結合で連結されたオリゴヌクレオチドに由来する基であり、さらに好ましくは、オリゴデオキシリボヌクレオチド又はオリゴリボヌクレオチドに由来する基であり、さらにより好ましくはＤＮＡ又はＲＮＡに由来する基である。Ｌ’は、Ｌと同様である。
Ｌは、Ｌのオリゴヌクレオチドに由来する基内において部分的に相補的な配列を含んでいてもよく、含んでいなくてもよいが、Ｌは、好ましくは、Ｌのオリゴヌクレオチドに由来する基内において部分的に相補的な配列を含んでいないオリゴヌクレオチドに由来する基である。そのようなオリゴヌクレオチドに由来する基の例として、ホスホジエステル結合で連結された（Ｎ）ｎ（Ｎは、それぞれ独立してアデノシン、ウリジン、シチジン、グアノシン、２’－デオキシアデノシン、チミジン、２’－デオキシシチジン、又は２’－デオキシグアノシンであり、ｎは１～４０の整数（繰り返し数）である。）を挙げることができる。中でも、ｎは好ましくは３～２０であり、より好ましくは４～１０であり、さらに好ましくは４～７であり、さらにより好ましくは、４又は５であり、特に好ましくは４である。Ｌ’についても、Ｌと同様である。Ｌ’については、その他の態様として、ｎは好ましくは、２～５であり、より好ましくは２～４である。
Ｌ’はＬと同一の配列であってもよく、別の配列であってもよい。
第一オリゴヌクレオチド、第二オリゴヌクレオチド、第三オリゴヌクレオチド、第四オリゴヌクレオチド又は第五オリゴヌクレオチドには、直接的に又は間接的に機能性分子が結合していてもよい。第一オリゴヌクレオチドがアンチセンス配列部分を含む場合、機能性分子は、第二オリゴヌクレオチドに結合していることが好ましい。機能性分子と第二オリゴヌクレオチドとの結合は、直接的でも、他の物質を介して間接的でもよいが、共有結合、イオン結合又は水素結合で第二オリゴヌクレオチドと機能性分子とが結合していることが好ましい。その結合の安定性が高いという観点から、共有結合で直接的に結合していること、又は共有結合でリンカー（連結基）を介して結合していることがより好ましい。第二オリゴヌクレオチドがアンチセンス配列部分を含む場合、機能性分子は、第一オリゴヌクレオチドに結合していることが好ましい。機能性分子と第一オリゴヌクレオチドとの結合は、機能性分子と第二オリゴヌクレオチドとの結合と同様である。第一オリゴヌクレオチド及び第二オリゴヌクレオチドが、それぞれアンチセンス配列部分を有する場合であって、Ｌから最も離れたアンチセンス配列部分を第二オリゴヌクレオチドが含むときは、機能性分子は、第一オリゴヌクレオチドに結合していることが好ましく、Ｌから最も離れたアンチセンス配列部分を第一オリゴヌクレオチドが含むときは、機能性分子は、第二オリゴヌクレオチドに結合していることが好ましい。機能性分子と第一オリゴヌクレオチド又は第二オリゴヌクレオチドとの結合は、前記と同様である。第四オリゴヌクレオチドがアンチセンス配列部分を有する場合、機能性分子は、第二オリゴヌクレオチドに結合していることが好ましい。機能性分子と第二オリゴヌクレオチドとの結合は、前記と同様である。
前記機能性分子が共有結合で、一本鎖オリゴヌクレオチドに結合する場合、前記機能性分子は、一本鎖オリゴヌクレオチド分子の３’末端又は５’末端に、直接的に又は間接的に結合していることが好ましい。前記リンカー又は機能性分子と、一本鎖オリゴヌクレオチド分子の末端ヌクレオチドとの結合は、機能性分子に応じて選択される。
前記リンカー又は機能性分子と、一本鎖オリゴヌクレオチド分子の末端ヌクレオチドとは、ホスホジエステル結合又は修飾されたホスホジエステル結合で連結されていることが好ましく、ホスホジエステル結合で連結されていることがより好ましい。ある実施態様では、第二オリゴヌクレオチドの末端ヌクレオチドと、前記リンカー又は機能性分子とが、ホスホジエステル結合又は修飾されたホスホジエステル結合で連結されていることが好ましく、ホスホジエステル結合で連結されていることがより好ましい。ある実施態様では、第一オリゴヌクレオチドの末端ヌクレオチドと、前記リンカー又は機能性分子とが、ホスホジエステル結合又は修飾されたホスホジエステル結合で連結されていることが好ましく、ホスホジエステル結合で連結されていることがより好ましい。
前記リンカー又は機能性分子は、一本鎖オリゴヌクレオチド分子の３’末端のヌクレオチドが有する３’位の酸素原子又は５’末端のヌクレオチドが有する５’位の酸素原子に直接連結されていてもよい。
「機能性分子」の構造は、特に制限はなく、それが結合することにより一本鎖オリゴヌクレオチドに所望の機能が付与される。所望の機能としては、標識機能、精製機能及び標的部位への送達機能が挙げられる。標識機能を付与する分子の例としては、蛍光タンパク質、ルシフェラーゼ等の化合物が挙げられる。精製機能を付与する分子の例としては、ビオチン、アビジン、Ｈｉｓタグペプチド、ＧＳＴタグペプチド、ＦＬＡＧタグペプチド等の化合物が挙げられる。
また、一本鎖オリゴヌクレオチドを特異性高く効率的に標的部位（例えば、標的細胞）に送達し、かつ当該一本鎖オリゴヌクレオチドによって標的遺伝子の発現を非常に効果的に制御するという観点から、機能性分子として、一本鎖オリゴヌクレオチドを標的部位に送達させる機能を有する分子が結合していることが好ましい。該送達機能を有する分子は、例えば、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・ファーマシューティカルズ・アンド・バイオファーマシューティクス、１０７巻、３２１～３４０頁（２０１６年）、アドバンスト・ドラッグ・デリバリー・レビューズ、１０４巻、７８～９２頁（２０１６年）、エキスパート・オピニオン・オン・ドラッグ・デリバリー、１１巻、７９１～８２２頁（２０１４年）等を参照できる。
標的ＲＮＡへの送達機能を付与する分子として、例えば、肝臓等に特異性高く効率的に一本鎖オリゴヌクレオチドを送達できるという観点から、脂質、糖が挙げられる。このような脂質としては、コレステロール；脂肪酸；ビタミンＥ（トコフェロール類、トコトリエノール類）、ビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミンＫ等の脂溶性ビタミン；アシルカルニチン、アシルＣｏＡ等の中間代謝物；糖脂質；グリセリド；それらの誘導体等が挙げられる。これらの中では、より安全性が高いという観点から、コレステロール、ビタミンＥ（トコフェロール類、トコトリエノール類）が好ましい。中でも、トコフェロール類がより好ましく、トコフェロールが更に好ましく、α－トコフェロールが特に好ましい。糖としては、アシアロ糖タンパク質受容体と相互作用を有する糖誘導体が挙げられる。
「アシアロ糖タンパク質受容体」は肝臓細胞表面に存在し、アシアロ糖タンパク質のガラクトース残基を認識して、その分子を細胞内に取り込み分解する作用を持つ。「アシアロ糖タンパク質受容体と相互作用する糖誘導体」は、ガラクトース残基と類似した構造を持ち、アシアロ糖タンパク質受容体との相互作用により細胞内に取り込まれる化合物が好ましく、例えば、ＧａｌＮａｃ（Ｎ－アセチルガラクトサミン）誘導体、ガラクトース誘導体及びラクトース誘導体が挙げられる。また、脳に特異性高く効率的に本発明の一本鎖オリゴヌクレオチドを送達できるという観点では、「機能性分子」として、糖（例えば、グルコース、スクロース等）が挙げられる。また、各臓器の細胞表面にある各種タンパク質に相互作用することにより、当該臓器に特異性高く効率的に一本鎖オリゴヌクレオチドを送達できるという観点では、「機能性分子」として、受容体のリガンド、抗体、それらの断片のペプチド又はタンパク質が挙げられる。
機能性分子と、第一オリゴヌクレオチド、第二オリゴヌクレオチド、第三オリゴヌクレオチド、第四オリゴヌクレオチド又は第五オリゴヌクレオチドとの結合を介するリンカーは、一本鎖オリゴヌクレオチド分子として機能性分子が有する機能を発揮できればよいため、該機能性分子と該オリゴヌクレオチドとを、安定して結合させるリンカーであれば特に限定されない。該リンカーとしては、例えば、ヌクレオチド数が２～２０のオリゴヌクレオチドに由来する基、アミノ酸数が２～２０のポリペプチドに由来する基、炭素数が２～２０のアルキレン基及び炭素数が２～２０のアルケニレン基等が挙げられるが、好ましくは、Ｃ２－２０アルキレン基又はＣ２－２０アルケニレン基（該アルキレン基及びアルケニレン基に含まれるメチレン基は、それぞれ独立して、無置換であるか、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、保護されたヒドロキシ基、オキソ基及びチオキソ基からなる群から選択される１つ以上の置換基により置換されている。また、該アルキレン基及びアルケニレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－、－ＮＲＢ－（ＲＢは、水素原子、Ｃ１－６アルキル基又はハロＣ１－６アルキル基である。）、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）－又は－Ｓ（Ｏ）２－により置き換えられている。）である。ここで、前記置換と置き換えを組み合わせて、リンカーは、－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ１－（Ｒ１は水素原子、Ｃ１－６アルキル基又はハロＣ１－６アルキル基を示す）、－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ１－（Ｒ１は水素原子、Ｃ１－６アルキル基又はハロＣ１－６アルキル基を示す）、－Ｃ（Ｓ）－ＮＲ１－（Ｒ１は水素原子、Ｃ１－６アルキル基又はハロＣ１－６アルキル基を示す）、－ＮＲ１－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ１－（Ｒ１はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１－６アルキル基又はハロＣ１－６アルキル基を示す）等で表される基を含んでいてもよい。
リンカーは、より好ましくは、Ｃ２－２０アルキレン基（該アルキレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－により置き換えられている。置き換えられていないメチレン基は、それぞれ独立して無置換であるか、又はヒドロキシ基又は保護されたヒドロキシ基に置換されている。）であり、さらに好ましくはＣ８－１２アルキレン基（該アルキレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－により置き換えられている。置き換えられていないメチレン基は、それぞれ独立して無置換であるか、又はヒドロキシ基に置換されている。）であり、特に好ましくは、１，８－オクチレン基である。またその他の態様として、リンカーは特に好ましくは、下記式（III）で表される基である。
Figure 2022050389000003
式中、一つの＊は、オリゴヌクレオチドに由来する基との結合位置（ヌクレオチドを構成する原子）を表し、他方の＊は、機能性分子に由来する基との結合位置（機能性分子に由来する基を構成する原子）を表す。
その他の態様として、リンカーは、より好ましくは、Ｃ２－２０アルキレン基（該アルキレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－若しくは－ＮＲＢ－（ＲＢは、水素原子又はＣ１－６アルキル基である。）により置き換えられている。置き換えられていないメチレン基は、それぞれ独立して無置換であるか、又は無置換であるか、オキソ基により置換されている。）であり、さらに好ましくは、式 －Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）ｅ－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）ｅ－Ｃ（Ｏ）－ （式中ｅは、それぞれ独立して１から６の整数である。）で表される基であり、特に好ましくは、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）２－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）２－Ｃ（Ｏ）－で表される基である。
前記「保護されたヒドロキシ基」の保護基は、機能性分子とオリゴヌクレオチドとを結合させる際に安定であればよいため、特に限定されない。例えば、プロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シンセシス（ＰＲＯＴＥＣＴＩＶＥ ＧＲＯＵＰＳ ＩＮ ＯＲＧＡＮＩＣ ＳＹＮＴＨＥＳＩＳ）、第３版、ジョン・ウィリー・アンド・サンズ（ＪＯＨＮ ＷＩＬＬＹ＆ＳＯＮＳ）出版（１９９９年）等に記載されている任意の保護基を挙げることができる。具体的には、メチル基、ベンジル基、ｐ－メトキシベンジル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、メトキシメチル基、メトキシエチル基、２－テトラヒドロピラニル基、エトキシエチル基、シアノエチル基、シアノエトキシメチル基、フェニルカルバモイル基、１，１－ジオキソチオモルホリン－４－チオカルバモイル基、アセチル基、ピバロイル基、ベンゾイル基、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、トリイソプロピルシリル基、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基、［（トリイソプロピルシリル）オキシ］メチル（Ｔｏｍ）基、１－（４－クロロフェニル）－４－エトキシピペリジン－４－イル（Ｃｐｅｐ）基、トリフェニルメチル（トリチル）基、モノメトキシトリチル基、ジメトキシトリチル（ＤＭＴｒ）基、トリメトキシトリチル基、９－フェニルキサンテン－９－イル（Ｐｉｘｙｌ）基、９－（ｐ－メトキシフェニル）キサンテン－９－イル（ＭＯＸ）基等を挙げることができる。「保護されたヒドロキシ基」の保護基は、好ましくは、ベンゾイル基、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、トリイソプロピルシリル基、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基、トリフェニルメチル（トリチル）基、モノメトキシトリチル基、ジメトキシトリチル基、トリメトキシトリチル基、９－フェニルキサンテン－９－イル基又は９－（ｐ－メトキシフェニル）キサンテン－９－イル基であり、より好ましくは、モノメトキシトリチル基、ジメトキシトリチル基又はトリメトキシトリチル基であり、さらにより好ましくはジメトキシトリチル基である。
核酸医薬品に用いる好ましい一本鎖オリゴヌクレオチドとしては以下に示すものが挙げられる。
１） 式
Ｘ－Ｌ－Ｙ
（式中、Ｘは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択され、糖部、塩基部及びリン酸部の少なくとも１つが修飾されたヌクレオチドの少なくとも１個を含む７～１００個のヌクレオチドからなる第一オリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択され、４～１００個のヌクレオチドからなる第二オリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌは、その両端で前記第一オリゴヌクレオチド及び第二オリゴヌクレオチドとそれぞれ共有結合し、生理的条件で分解される第三オリゴヌクレオチドに由来する基であり、第三オリゴヌクレオチドはホスホジエステル結合を含み、
前記第一オリゴヌクレオチドはヌクレオチド配列Ｘを有し、前記第二オリゴヌクレオチドはヌクレオチド配列Ｙを有し、
前記ヌクレオチド配列Ｘは、第二オリゴヌクレオチドの少なくとも一部とのハイブリダイズを可能とし、ＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む第一ヌクレオチド配列を含み、
前記ヌクレオチド配列Ｙは、第一オリゴヌクレオチドの少なくとも一部とのハイブリダイズを可能とし、少なくとも１個のリボヌクレオチドを含む第二ヌクレオチド配列を含み、
前記ヌクレオチド配列Ｘ及びヌクレオチド配列Ｙの少なくとも一方が、標的ＲＮＡとのハイブリダイズを可能にする少なくとも１つのアンチセンス配列を含み、
前記アンチセンス配列を２以上有する場合、それぞれのアンチセンス配列部分がハイブリダイズする標的ＲＮＡは同一でも異なっていてもよい。）
で表され、ＸとＹとが第一ヌクレオチド配列部分と第二ヌクレオチド配列部分とでハイブリダイズする一本鎖オリゴヌクレオチド。
２） Ｘが３’側でＬに結合し、Ｙが５’側でＬに結合する、１）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
３） Ｘが５’側でＬに結合し、Ｙが３’側でＬに結合する、１）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
４） 前記アンチセンス配列と標的ＲＮＡの配列との相補性が７０％以上である、１）から３）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
５） 第一ヌクレオチド配列と第二ヌクレオチド配列との相補性が７０％以上である、１）から４）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
６） 前記式 Ｘ－Ｌ－Ｙで表される一本鎖オリゴヌクレオチドに含まれるヌクレオチドが、ホスホジエステル結合、ホスホロチオエート結合、メチルホスホネート結合、メチルチオホスホネート結合、ホスホロジチオエート結合及びホスホロアミデート結合からなる群からそれぞれ独立して選ばれる少なくとも一種で互いに連結されている、１）から５）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
７） 式 Ｘ－Ｌ－Ｙで表される一本鎖オリゴヌクレオチドに含まれる各ヌクレオチドが、ホスホジエステル結合及びホスホロチオエート結合からそれぞれ独立して選ばれる少なくとも一種で互いに連結されている、１）から６）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
８） 第三オリゴヌクレオチドに含まれるヌクレオチドが、ホスホジエステル結合で互いに連結されている、１）から８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
９） 第三オリゴヌクレオチドが、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドからなる群から独立して選択される３～１０個のヌクレオチドからなる、１）から８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１０） 第三オリゴヌクレオチドが、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドからなる群から独立して選択される４～７個のヌクレオチドからなる、１）から９）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１１） 第三オリゴヌクレオチドが、オリゴデオキシリボヌクレオチド又はオリゴリボヌクレオチドである、１）から１０）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１２） 第三オリゴヌクレオチドが、ＤＮＡ又はＲＮＡである、１）から１１）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１３） 第三オリゴヌクレオチドが、ＲＮＡである、１）から１２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１４） 第一オリゴヌクレオチドは、第一ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドを含む、１）から１３）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１５） 第一オリゴヌクレオチドが、ホスホロチオエート結合を含む、１）から１４）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１６） 第一ヌクレオチド配列が、互いにホスホロチオエート結合で連結されたヌクレオチドを含む配列である、１）から１５）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１７） 第一ヌクレオチド配列が、少なくとも１個のデオキシリボヌクレオチドを含む４～２０個のヌクレオチドからなる配列である、１）から１６）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１８） 第一ヌクレオチド配列が、４～２０個のデオキシリボヌクレオチドからなる配列である、１）から１７）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１９） 第二ヌクレオチド配列は、ＲＮａｓｅＨによって切断される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列である、１）から１８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
２０） 第二ヌクレオチド配列が、４～２５個のリボヌクレオチドからなる配列である、１）から１９）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
２１） 第二オリゴヌクレオチドが、第二ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドを含む、１）から２０）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
２２） 第二オリゴヌクレオチドが、ホスホジエステル結合を含む、１）から２１）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
２３） 第二ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方が、隣接するヌクレオチドとホスホジエステル結合で連結されている、１）から２２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
２４） 第二ヌクレオチド配列が、互いにホスホジエステル結合で連結されたヌクレオチドを含む配列である、１）から２３）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
２５） Ｘが、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、前記ヌクレオチド配列Ｘが、少なくとも１つのアンチセンス配列を含む、１）から２４）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
２６） 前記第一ヌクレオチド配列が、前記アンチセンス配列である、２５）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
２７） 前記第一ヌクレオチド配列が、標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列である、２５）又は２６）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
２８） 第一オリゴヌクレオチドは、前記第一ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドを含む、２５）から２７）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
２９） 前記第一オリゴヌクレオチドに含まれるヌクレオチドが、ホスホロチオエート結合で互いに連結されている、２５）から２８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
３０） 第二ヌクレオチド配列が、４～２０個のリボヌクレオチドからなる配列である、２５）から２９）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
３１） 第二ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方が、隣接するヌクレオチドとホスホロチオエート結合で連結されている、２５）から３０）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
３２） 前記Ｘが、前記第一ヌクレオチド配列部分を前記アンチセンス配列部分とＬとの間に有する、２５）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
３３） 前記Ｘが、前記第一ヌクレオチド配列部分と前記アンチセンス配列部分との間に、生理的条件で分解されるオリゴヌクレオチドを含む、３２）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
３４） 前記Ｘが含む生理的条件で分解されるオリゴヌクレオチドが、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドからなる群から独立して選択される２～１０個のヌクレオチドからなる、３３）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
３５） 前記Ｘが含む生理的条件で分解されるオリゴヌクレオチドに含まれるヌクレオチドが、ホスホジエステル結合で互いに連結されている、３３）又は３４）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
３６） 前記Ｘが含む生理的条件で分解されるオリゴヌクレオチドが、２～７個のヌクレオチドからなるＤＮＡ又はＲＮＡである、３３）から３５）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
３７） 前記Ｘが含むアンチセンス配列部分が、ホスホロチオエート結合を含む、３２）から３６）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
３８） 前記ヌクレオチド配列Ｘが含むアンチセンス配列が、互いにホスホロチオエート結合で連結されたヌクレオチドを含む配列である、３２）から３７）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
３９） 第一オリゴヌクレオチドは、前記Ｘが含むアンチセンス配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドを含む、３２）から３８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
４０） 第一オリゴヌクレオチドは、前記Ｘが含むアンチセンス配列部分の５’側及び３’側に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドを含む、３２）から３９）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
４１） 前記Ｘが含むアンチセンス配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドは、前記Ｘが含むアンチセンス配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方と、ホスホロチオエート結合で連結されている、３９）又は４０）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
４２） 前記ヌクレオチド配列Ｘが含むアンチセンス配列が、糖部修飾ヌクレオチド及びデオキシリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～３０個のヌクレオチドからなる配列である、３２）から４１）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
４３） 前記ヌクレオチド配列Ｘが含むアンチセンス配列が、少なくとも１個のデオキシリボヌクレオチドを含む４～２０個のヌクレオチドからなる配列である、３２）から４２）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
４４） 前記ヌクレオチド配列Ｘが含むアンチセンス配列が、標的ＲＮＡとハイブリダイズした際に、ＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列である、３２）から４３）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
４５） 前記ヌクレオチド配列Ｘが含むアンチセンス配列が、４～２０個のデオキシリボヌクレオチドからなる配列である、３２）から４４）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
４６） 前記Ｘが含むアンチセンス配列部分は、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まない、３２）から４３）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
４７） 前記Ｘが含むアンチセンス配列部分の３’側のヌクレオチド及び５’側のヌクレオチドの少なくとも一方が、糖部修飾ヌクレオチドである、４６）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
４８） 前記Ｘが含むアンチセンス配列部分の３’側のヌクレオチド及び５’側のヌクレオチドが、糖部修飾ヌクレオチドである、４６）又は４７）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
４９） 前記ヌクレオチド配列Ｘが含むアンチセンス配列が、４～３０個の糖部修飾ヌクレオチドからなる配列である、３２）から４２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
５０） ヌクレオチド配列Ｙが、前記Ｘが含むアンチセンス配列部分の少なくとも一部とのハイブリダイズを可能とし、ＲＮａｓｅＨによって切断される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列を含む、３２）から４９）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
５１） 前記ＲＮａｓｅＨによって切断される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列が、４～２０個のリボヌクレオチドからなる配列である、５０）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
５２） 第二オリゴヌクレオチドが、前記ＲＮａｓｅＨによって切断される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドを含む、５０）又は５１）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
５３） 前記ＲＮａｓｅＨによって切断される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方が、隣接するヌクレオチドとホスホロチオエート結合で連結されている、５０）から５２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
５４） 第二ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方が、隣接するヌクレオチドとホスホロチオエート結合で連結されている、３２）から５３）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
５５） 前記ヌクレオチド配列Ｙが、少なくとも１つのアンチセンス配列を含む、１）から２８）及び３２）から５３）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
５６） 前記Ｙは、前記第二ヌクレオチド配列部分を前記アンチセンス配列部分とＬとの間に有する、５５）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
５７） 第二ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側が、隣接するヌクレオチドとホスホジエステル結合で連結されている、５５）又は５６）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
５８） 前記Ｙが含むアンチセンス配列部分が、ホスホロチオエート結合を含む、５５）から５７）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
５９） 前記Ｙが含むアンチセンス配列が、互いにホスホロチオエート結合で連結されたヌクレオチドを含む配列である、５５）から５８）のいずれか１つのいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
６０） 第二オリゴヌクレオチドは、前記Ｙが含むアンチセンス配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドを含む、５５）から５９）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
６１） 第二オリゴヌクレオチドは、前記Ｙが含むアンチセンス配列部分の５’側及び３’側に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドを含む、５５）から６０）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
６２） 前記Ｙが含むアンチセンス配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドは、前記Ｙが含むアンチセンス配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方と、ホスホロチオエート結合で連結されている、６０）又は６１）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
６３） 前記ヌクレオチド配列Ｙが含むアンチセンス配列が、糖部修飾ヌクレオチド及びデオキシリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～３０個のヌクレオチドからなる配列である、５５）から６２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
６４） 前記Ｙが含むアンチセンス配列が、少なくとも１個のデオキシリボヌクレオチドを含む４～２０個のヌクレオチドからなる配列である、５５）から６３）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
６５） 前記ヌクレオチド配列Ｙが含むアンチセンス配列が、標的ＲＮＡとハイブリダイズした際に、ＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列である、５５）から６４）のいずれか一つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
６６） 前記Ｙが含むアンチセンス配列が、４～２０個のデオキシリボヌクレオチドからなる配列である、５５）から６５）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
６７） 前記Ｙが含むアンチセンス配列部分は、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まない、５５）から６３）のいずれか一つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
６８） 前記Ｙが含むアンチセンス配列部分の３’側のヌクレオチド及び５’側のヌクレオチドの少なくとも一方が、糖部修飾ヌクレオチドである、６７）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
６９） 前記Ｙが含むアンチセンス配列部分の３’側のヌクレオチド及び５’側のヌクレオチドが、糖部修飾ヌクレオチドである、６７）又は６８）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
７０） 前記ヌクレオチド配列Ｙが含むアンチセンス配列が、４～３０個の糖部修飾ヌクレオチドからなる配列である、５５）から６３）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
７１） 前記ヌクレオチド配列Ｘが、前記Ｙが含むアンチセンス配列部分の少なくとも一部とのハイブリダイズを可能とし、ＲＮａｓｅＨによって切断される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列を含む、５５）から７０）のいずれか一つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
７２） 前記ＲＮａｓｅＨによって切断される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列が、４～２０個のリボヌクレオチドからなる配列である、７１）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
７３） 第一オリゴヌクレオチドが、前記ＲＮａｓｅＨによって切断される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドを含む、７１）又は７２）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
７４） 前記ＲＮａｓｅＨによって切断される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方が、隣接するヌクレオチドとホスホロチオエート結合で連結されている、７１）から７３）のいずれか一つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
７５） 式
Ｘ’－Ｌ’－
（式中、Ｘ’は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択され、糖部、塩基部及びリン酸部の少なくとも１つが修飾されたヌクレオチドの少なくとも１個を含む７～１００個のヌクレオチドからなる第四オリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌ’は、その両端で前記第一オリゴヌクレオチド及び第四オリゴヌクレオチドとそれぞれ共有結合し、生理的条件で分解される第五オリゴヌクレオチドに由来する基であり、
前記第四オリゴヌクレオチドは、ヌクレオチド配列Ｘ’を有し、ヌクレオチド配列Ｘ’は、標的ＲＮＡとのハイブリダイズを可能にするアンチセンス配列を含む。）
で表される基をさらに含む、１）から７４）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
７６） Ｘ’が、５’末端又は３’末端を含む、７５）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
７７） ヌクレオチド配列Ｘ’が含むアンチセンス配列と標的ＲＮＡの配列との相補性が７０％以上である、７５）又は７６）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
７８） 式 Ｘ’－Ｌ’－Ｘ－Ｌ－Ｙで表される一本鎖オリゴヌクレオチドに含まれるヌクレオチドが、それぞれ独立して、ホスホジエステル結合、ホスホロチオエート結合、メチルホスホネート結合、メチルチオホスホネート結合、ホスホロジチオエート結合及びホスホロアミデート結合からなる群から選ばれる少なくとも一種で互いに連結されている、７５）から７７）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
７９） 式 Ｘ’－Ｌ’－Ｘ－Ｌ－Ｙで表される一本鎖オリゴヌクレオチドに含まれる各ヌクレオチドが、それぞれ独立して、ホスホジエステル結合及びホスホロチオエート結合から選ばれる少なくとも一種で互いに連結されている、７５）から７８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
８０） 第五オリゴヌクレオチドはホスホジエステル結合を含む、７５）から７９）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
８１） 第五オリゴヌクレオチドに含まれるヌクレオチドが、ホスホジエステル結合で互いに連結されている、７５）から８０）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
８２） 第五オリゴヌクレオチドが、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドからなる群から独立して選択される３～１０個のヌクレオチドからなる、７５）から８１）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
８３） 第五オリゴヌクレオチドが、３～７個のヌクレオチドからなるオリゴデオキシリボヌクレオチド又はオリゴリボヌクレオチドである、７５）から８２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
８４） 第五オリゴヌクレオチドが、４又は５個のヌクレオチドからなるオリゴデオキシリボヌクレオチド又はオリゴリボヌクレオチドである、７５）から８３）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
８５） 第五オリゴヌクレオチドが、ＤＮＡ又はＲＮＡである、７５）から８４）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
８６） 第五オリゴヌクレオチドが、ＲＮＡである、７５）から８５）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
８７） 第四オリゴヌクレオチドが、ホスホロチオエート結合を含む、７５）から８６）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
８８） 前記ヌクレオチド配列Ｘ’が含むアンチセンス配列が、互いにホスホロチオエート結合で連結されたヌクレオチドを含む配列である、７５）から８７）のいずれか１つのいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
８９） 第四オリゴヌクレオチドに含まれるヌクレオチドが、ホスホロチオエート結合で互いに連結されている、７５）から８８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
９０） 第四オリゴヌクレオチドは、前記Ｘ’が含むアンチセンス配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドを含む、７５）から８９）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
９１） 第四オリゴヌクレオチドは、前記Ｘ’が含むアンチセンス配列部分の５’側及び３’側に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドを含む、７５）から９０）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
９２） 前記ヌクレオチド配列Ｘ’が含むアンチセンス配列が、糖部修飾ヌクレオチド及びデオキシリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～３０個のヌクレオチドからなる配列である、７５）から９１）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
９３） 前記ヌクレオチド配列Ｘ’が含むアンチセンス配列が、少なくとも１個のデオキシリボヌクレオチドを含む４～２０個のヌクレオチドからなる配列である、７５）から９２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
９４） Ｘ’が少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、ヌクレオチド配列Ｘ’が含むアンチセンス配列が、標的ＲＮＡとハイブリダイズした際に、ＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列である、７５）から９３）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
９５） 前記ヌクレオチド配列Ｘ’が含むアンチセンス配列が、４～２０個のデオキシリボヌクレオチドからなる配列である、７５）から９４）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
９６） 前記Ｘ’が含むアンチセンス配列部分は、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まない、７５）から９３）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
９７） 前記Ｘ’が含むアンチセンス配列部分の３’側のヌクレオチド及び５’側のヌクレオチドの少なくとも一方が、糖部修飾ヌクレオチドである、９６）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
９８） 前記Ｘ’が含むアンチセンス配列部分の３’側のヌクレオチド及び５’側のヌクレオチドが、糖部修飾ヌクレオチドである、９６）又は９７）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
９９） 前記ヌクレオチド配列Ｘ’が含むアンチセンス配列が、４～３０個の糖部修飾ヌクレオチドからなる配列である、７５）から９２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１００） ヌクレオチド配列Ｙが、前記Ｘ’が含むアンチセンス配列部分の少なくとも一部とのハイブリダイズを可能とし、ＲＮａｓｅＨによって切断される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列を含む、７５）から９９）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１０１） 前記ＲＮａｓｅＨによって切断される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列が、４～２０個のリボヌクレオチドからなる配列である、１００）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１０２） 第二オリゴヌクレオチドが、前記ＲＮａｓｅＨによって切断される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドを含む、１００）又は１０１）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１０３） 前記ＲＮａｓｅＨによって切断される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方が、隣接するヌクレオチドとホスホロチオエート結合で連結されている、１００）から１０２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１０４） Ｘが、５’末端又は３’末端を含む、１）から７４）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１０５） Ｙが、５’末端又は３’末端を含む、１）から１０３）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１０６） 標識機能、精製機能及び標的ＲＮＡへの送達機能からなる群から選択される少なくとも1種の機能を有する機能性分子に由来する基をさらに含む、１）から１０３）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１０７） 前記機能性分子に由来する基が、第二オリゴヌクレオチドに直接的又は間接的に結合している、１）から１０３）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１０８） 前記機能性分子に由来する基が、第一オリゴヌクレオチドに直接的又は間接的に結合している、１）から１０３）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１０９） 前記機能性分子に由来する基が、Ｃ２－２０アルキレン基又はＣ２－２０アルケニレン基（該アルキレン基及びアルケニレン基に含まれるメチレン基は、それぞれ独立して、無置換であるか、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、保護されたヒドロキシ基、オキソ基及びチオキソ基からなる群から選択される１つ以上の置換基により置換されている。また、該アルキレン基及びアルケニレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－、－ＮＲＢ－（ＲＢは、水素原子、Ｃ１－６アルキル基又はハロＣ１－６アルキル基である。）、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）－又は－Ｓ（Ｏ）２－により置き換えられている。）を介して、又は直接共有結合により第一オリゴヌクレオチド又は第二オリゴヌクレオチドと結合している、１０６）から１０８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１１０） 前記機能性分子に由来する基が連結したＣ２－２０アルキレン基又はＣ２－２０アルケニレン基と、第一オリゴヌクレオチド又は第二オリゴヌクレオチドとが、ホスホジエステル結合又は修飾されたホスホジエステル結合で連結されている、１０６）から１０９）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１１１） 前記機能性分子に由来する基が連結したＣ２－２０アルキレン基又はＣ２－２０アルケニレン基と、第一オリゴヌクレオチド又は第二オリゴヌクレオチドとが、ホスホジエステル結合で連結されている、１０６）から１１０）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１１２） 前記機能性分子が、糖、脂質、ペプチド及びタンパク質及びそれらの誘導体からなる群から選択される、１０６）から１１１）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１１３） 前記機能性分子が、コレステロール、脂肪酸、脂溶性ビタミン、糖脂質及びグリセリドからなる群から選択される脂質である、１０６）から１１２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１１４） 前記機能性分子が、コレステロール、トコフェロール及びトコトリエノールからなる群から選択される脂質である、１０６）から１１３）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１１５） 前記機能性分子がトコフェロールであり、トコフェロールのヒドロキシ基が、Ｃ２－２０アルキレン基（該アルキレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－により置き換えられている。置き換えられていないメチレン基は、それぞれ独立して無置換であるか、又はヒドロキシ基に置換されている。）を介して、第一オリゴヌクレオチド又は第二オリゴヌクレオチドと結合している、１０６）から１１４）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１１６） トコフェロールのヒドロキシ基が、１，８－オクチレン基を介して第一オリゴヌクレオチド又は第二オリゴヌクレオチドと結合している、１１５）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１１７） 前記機能性分子が、アシアロ糖タンパク質受容体と相互作用する糖誘導体である、１０６）から１１２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１１８） 前記機能性分子が、受容体のリガンド及び抗体からなる群から選択される、ペプチド又はタンパク質である、１０６）から１１２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１１９） 糖部修飾ヌクレオチドが、それぞれ独立して、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド、２’－Ｏ－メトキシエチル化ヌクレオチド、２’－Ｏ－アミノプロピル化ヌクレオチド、２’－フルオロ化ヌクレオチド、２’－Ｆ－アラビノヌクレオチド、架橋化ヌクレオチド又は２’－Ｏ－メチルカルバモイルエチル化ヌクレオチドである、１）から１１８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１２０） 糖部修飾ヌクレオチドが、それぞれ独立して、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド又はＬＮＡである、１）から１１９）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１２１） 式Ｘ’－Ｌ’－Ｘ－で表される部分構造を含み、当該部分構造は、式
Ｘ’１－Ｘ’２－Ｘ’３－Ｌ’－Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－
（式中、Ｘ’１は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される１から１０個のヌクレオチドからなり、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ’２は、Ｘ’が含むアンチセンス配列部分であって、
Ｘ’３は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される１から１０個のヌクレオチドからなり、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドに由来する基であり、該オリゴヌクレオチドが第五オリゴヌクレオチドと共有結合し、
Ｌ’は、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる２～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ１は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される１から１０個のヌクレオチドからなり、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分であって、前記第一ヌクレオチド配列は、アンチセンス配列であり、標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される、少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列であり、
Ｘ３は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される１から１０個のヌクレオチドからなり、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドに由来する基であり、該オリゴヌクレオチドが第三オリゴヌクレオチドと共有結合している。）で表される、７５）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１２２） Ｘ’１は、糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｘ’２は、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｘ’３は、糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１２１）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１２３） Ｘ’１は、ＬＮＡ、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド、２’－Ｏ－メトキシエチル化ヌクレオチド及び２’－Ｏ－メチルカルバモイルエチル化ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｘ’３は、ＬＮＡ、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド、２’－Ｏ－メトキシエチル化ヌクレオチド及び２’－Ｏ－メチルカルバモイルエチル化ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１２１）又は１２２）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１２４） Ｘ’１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｘ’３は、ＬＮＡから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１２１）から１２３）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１２５） 式Ｘ’Ｚ－Ｌ’－Ｘ－で表される部分構造を含み、当該部分構造は、式
Ｘ’Ｚ－Ｌ’－Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－
（式中、Ｘ’Ｚは、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まないアンチセンス配列部分であり、第五オリゴヌクレオチドと共有結合し、
Ｌ’は、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる２～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ１は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される１から１０個のヌクレオチドからなり、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分であって、前記第一ヌクレオチド配列は、アンチセンス配列であり、標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される、少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列であり、
Ｘ３は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される１から１０個のヌクレオチドからなり、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドに由来する基であり、該オリゴヌクレオチドが第三オリゴヌクレオチドと共有結合している。）で表される、７５）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１２６） Ｘ’Ｚは、デオキシリボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される６から３０個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｌ’は、デオキシリボヌクレオチドから独立して選択される２から５個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１２５）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１２７） Ｘ’Ｚは、デオキシリボヌクレオチド、ＬＮＡ、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド、２’－Ｏ－メトキシエチル化ヌクレオチド及び２’－Ｏ－メチルカルバモイルエチル化ヌクレオチドから独立して選択される６から３０個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１２５）又は１２６）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１２８） Ｘ’Ｚは、デオキシリボヌクレオチド及びＬＮＡから独立して選択される６から３０個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１２５）又は１２６）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１２９） Ｘ１は、糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｘ２は、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｘ３は、糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１２１）から１２８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１３０） Ｘ１は、ＬＮＡ、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド、２’－Ｏ－メトキシエチル化ヌクレオチド及び２’－Ｏ－メチルカルバモイルエチル化ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｘ３は、ＬＮＡ、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド、２’－Ｏ－メトキシエチル化ヌクレオチド及び２’－Ｏ－メチルカルバモイルエチル化ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１２１）から１２９）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１３１） Ｘ１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｘ３は、ＬＮＡから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１２１）から１３０）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１３２） 式Ｘ－で表される部分構造は、式
Ｘ４－Ｘ５－Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－
（式中、Ｘ４は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される１から１０個のヌクレオチドからなり、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ５は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される４～２０個のヌクレオチドからなり、少なくとも１個のリボヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ１は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される１から１０個のヌクレオチドからなり、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分であって、前記第一ヌクレオチド配列は、アンチセンス配列であり、標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される、少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列であり、
Ｘ３は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される１から１０個のヌクレオチドからなり、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドに由来する基であり、該オリゴヌクレオチドが第三オリゴヌクレオチドと共有結合している。）で表される、１）から２４）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１３３） Ｘ４は、糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｘ５は、１０～１９個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｘ１は、糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｘ２は、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｘ３は、糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１３２）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１３４） Ｘ４は、ＬＮＡ、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド、２’－Ｏ－メトキシエチル化ヌクレオチド及び２’－Ｏ－メチルカルバモイルエチル化ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｘ１は、ＬＮＡ、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド、２’－Ｏ－メトキシエチル化ヌクレオチド及び２’－Ｏ－メチルカルバモイルエチル化ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｘ３は、ＬＮＡ、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド、２’－Ｏ－メトキシエチル化ヌクレオチド及び２’－Ｏ－メチルカルバモイルエチル化ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１３２）又は１３３）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１３５） Ｘ４は、２個又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｘ１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｘ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１３２）から１３４）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１３６） 式Ｘ－で表される部分構造は、式
Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－
（式中、Ｘ１は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される１から１０個のヌクレオチドからなり、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分であって、前記第一ヌクレオチド配列は、アンチセンス配列であり、標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される、少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列であり、
Ｘ３は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される１から１０個のヌクレオチドからなり、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドに由来する基であり、該オリゴヌクレオチドが第三オリゴヌクレオチドと共有結合している。）で表される、１）から２４）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１３７） Ｘ１は、糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｘ２は、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｘ３は、糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のオリゴヌクレオチドに由来する基である、１３６）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１３８） Ｘ１は、ＬＮＡ、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド、２’－Ｏ－メトキシエチル化ヌクレオチド及び２’－Ｏ－メチルカルバモイルエチル化ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｘ３は、ＬＮＡ、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド、２’－Ｏ－メトキシエチル化ヌクレオチド及び２’－Ｏ－メチルカルバモイルエチル化ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１３６）又は１３７）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１３９） Ｘ１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｘ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１３６）から１３８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１４０） 式Ｘ－で表される部分構造は、式
ＸＺ １－ＸＺ ２－ＸＺ ３－Ｘ０－Ｘ２－
（式中、ＸＺ １は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される１から１０個のヌクレオチドからなり、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
ＸＺ ２は、Ｘが含むアンチセンス配列部分であって、
ＸＺ ３は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される１から１０個のヌクレオチドからなり、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ０は、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選択される２から７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分であって、第三オリゴヌクレオチドと共有結合している。）で表される、１）から２４）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１４１） ＸＺ １は、糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、ＸＺ ２は、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、ＸＺ ３は、糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｘ２は、８～１７個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１４０）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１４２） ＸＺ １は、ＬＮＡ、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド、２’－Ｏ－メトキシエチル化ヌクレオチド及び２’－Ｏ－メチルカルバモイルエチル化ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、ＸＺ ３は、ＬＮＡ、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド、２’－Ｏ－メトキシエチル化ヌクレオチド及び２’－Ｏ－メチルカルバモイルエチル化ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１４０）又は１４１）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１４３） ＸＺ １は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、ＸＺ ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１４０）から１４２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１４４）式Ｘ－で表される部分構造は、式
ＸＺ－Ｘ０－Ｘ２－
（式中、ＸＺは、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まないアンチセンス配列部分であり、
Ｘ０は、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選択される２から７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分であって、第三オリゴヌクレオチドと共有結合している。）で表される、１）から２４）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１４５） ＸＺは、デオキシリボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される６から３０個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｘ０は、デオキシリボヌクレオチドから独立して選択される２から５個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｘ２は、８～１７個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１４４）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１４６） ＸＺは、デオキシリボヌクレオチド、ＬＮＡ、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド、２’－Ｏ－メトキシエチル化ヌクレオチド及び２’－Ｏ－メチルカルバモイルエチル化ヌクレオチドから独立して選択される６から３０個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１４４）又は１４５）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１４７） ＸＺは、デオキシリボヌクレオチド及びＬＮＡから独立して選択される６から３０個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１４４）又は１４５）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１４８） 式Ｘ－で表される部分構造は、式
Ｘ１－Ｘ２－
（式中、Ｘ１は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される１から１０個のヌクレオチドからなり、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分であって、第三オリゴヌクレオチドと共有結合している。）で表される、１）から２４）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１４９） Ｘ１は、糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｘ２は、８～１２個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１４８）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１５０） Ｘ１は、ＬＮＡ、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド、２’－Ｏ－メトキシエチル化ヌクレオチド及び２’－Ｏ－メチルカルバモイルエチル化ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１４８）又は１４９）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１５１） Ｘ１は、２個又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１４８）から１５０）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１５２） 式－Ｙで表される部分構造は、式
－Ｙ２－Ｙ１
（式中、Ｙ２は、第二ヌクレオチド配列部分であり、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される４～２０個のヌクレオチドからなり、少なくとも１個のリボヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドに由来する基であり、該オリゴヌクレオチドが第三オリゴヌクレオチドと共有結合し、
Ｙ１は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される１から１０個のヌクレオチドからなり、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドに由来する基である。）で表される、１）から２４）及び１２１）から１４７）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１５３） Ｙ２は、１０～１３個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｙ１は、糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１５２）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１５４） Ｙ１は、ＬＮＡ、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド、２’－Ｏ－メトキシエチル化ヌクレオチド及び２’－Ｏ－メチルカルバモイルエチル化ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１５２）又は１５３）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１５５） Ｙ１は、２個又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１５２）から１５４）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１５６） 式－Ｙで表される部分構造は、式
－Ｙ２－Ｙ１
（式中、Ｙ２は、第二ヌクレオチド配列部分を含み、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される４～４０個のヌクレオチドからなり、少なくとも１個のリボヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドに由来する基であり、該オリゴヌクレオチドが第三オリゴヌクレオチドと共有結合し、
Ｙ１は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される１から１０個のヌクレオチドからなり、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドに由来する基である。）で表される、１）から２４）及び１２１）から１４７）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１５７） Ｙ２は、２５～３６個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｙ１は、糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１５６）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１５８） Ｙ１は、ＬＮＡ、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド、２’－Ｏ－メトキシエチル化ヌクレオチド及び２’－Ｏ－メチルカルバモイルエチル化ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１５６）又は１５７）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１５９） Ｙ１は、２個又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１５６）から１５８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１６０） 式－Ｙで表される部分構造は、式
－Ｙ０－ＹＺ ３－ＹＺ ２－ＹＺ １
（式中、Ｙ０は、第二ヌクレオチド配列部分であって、第三オリゴヌクレオチドと共有結合し、
ＹＺ ３は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される１から１０個のヌクレオチドからなり、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
ＹＺ ２は、Ｙが含むアンチセンス配列部分であり、
ＹＺ １は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される１から１０個のヌクレオチドからなり、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドに由来する基である。）で表される、１）から２４）及び１２１）から１５１）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１６１） Ｙ０は、１０～２２個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、ＹＺ ３は、糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、ＹＺ ２は、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、ＹＺ １は、糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１６０）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１６２） ＹＺ １は、ＬＮＡ、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド、２’－Ｏ－メトキシエチル化ヌクレオチド及び２’－Ｏ－メチルカルバモイルエチル化ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、ＹＺ ３は、ＬＮＡ、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド、２’－Ｏ－メトキシエチル化ヌクレオチド及び２’－Ｏ－メチルカルバモイルエチル化ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１６０）又は１６１）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１６３） ＹＺ １は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、ＹＺ ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１６０）から１６２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１６４） 式－Ｙで表される部分構造は、式
－Ｙ０－ＹＺ
（式中、Ｙ０は、第二ヌクレオチド配列部分であって、第三オリゴヌクレオチドと共有結合し、
ＹＺは、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まないアンチセンス配列部分である。）で表される、１）から２４）及び１２１）から１５１）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１６５） Ｙ０は、１０～２２個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、ＹＺは、デオキシリボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される６から３０個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１６４）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１６６） ＹＺは、デオキシリボヌクレオチド、ＬＮＡ、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド、２’－Ｏ－メトキシエチル化ヌクレオチド及び２’－Ｏ－メチルカルバモイルエチル化ヌクレオチドから独立して選択される６から３０個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１６４）又は１６５）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
１６７） ＹＺは、デオキシリボヌクレオチド及びＬＮＡから独立して選択される６から３０個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、１６４）又は１６５）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－１） 式
Ｘ－Ｌ－Ｙ
（式中、Ｘは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される７～１００個のヌクレオチドからなり、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含む第一オリゴヌクレオチドに由来する基であり、
第一オリゴヌクレオチドは、標的ＲＮＡとのハイブリダイズを可能にする第一ヌクレオチド配列を有し、第一ヌクレオチド配列は、前記標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列であり、
Ｙは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される４～１００個のヌクレオチドからなる第二オリゴヌクレオチドに由来する基であり、第二オリゴヌクレオチドは、前記第一オリゴヌクレオチドとのハイブリダイズを可能とし、少なくとも１個のリボヌクレオチドを含む第二ヌクレオチド配列を有し、
Ｌは、その両端で前記第一オリゴヌクレオチド及び第二オリゴヌクレオチドとそれぞれ共有結合し、生理的条件で分解される第三オリゴヌクレオチドに由来する基であり、第三オリゴヌクレオチドはホスホジエステル結合を含む。）で表され、
ＸとＹとが、前記第一ヌクレオチド配列部分と第二ヌクレオチド配列部分とで、分子内でハイブリダイズする一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－２） Ｘが３’側でＬに結合し、Ｙが５’側でＬに結合する、Ｂ－１）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－３） Ｘが５’側でＬに結合し、Ｙが３’側でＬに結合する、Ｂ－１）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－４） 第一ヌクレオチド配列と標的ＲＮＡの配列との相補性が７０％以上である、Ｂ－１）からＢ－３）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－５） 第一ヌクレオチド配列と第二ヌクレオチド配列との相補性が７０％以上である、Ｂ－１）からＢ－４）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－６） 第三オリゴヌクレオチドに含まれるヌクレオチドが、ホスホジエステル結合で互いに連結されている、Ｂ－１）からＢ－５）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－７） 第三オリゴヌクレオチドが、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドからなる群から独立して選択される３～１０個のヌクレオチドからなる、Ｂ－１）からＢ－６）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－８） 第三オリゴヌクレオチドが、オリゴデオキシリボヌクレオチド又はオリゴリボヌクレオチドである、Ｂ－１）からＢ－７）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－９） 第三オリゴヌクレオチドが、ＤＮＡ又はＲＮＡである、Ｂ－１）からＢ－８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－１０） 第三オリゴヌクレオチドが、ＲＮＡである、Ｂ－１）からＢ－９）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－１１） 第三オリゴヌクレオチドが、４又は５個のアデノシンからなるオリゴヌクレオチドである、Ｂ－１）からＢ－１０）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－１２） 第一オリゴヌクレオチドは、第一ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドを含む、Ｂ－１）からＢ－１１）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－１３） 第一オリゴヌクレオチドは、第一ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドを含む、Ｂ－１）からＢ－１２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－１４） 第一オリゴヌクレオチドが、ホスホロチオエート結合を含む、Ｂ－１）からＢ－１３）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－１５） 第一ヌクレオチド配列が、互いにホスホロチオエート結合で連結されたヌクレオチドを含む配列である、Ｂ－１）からＢ－１４）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－１６） 第一オリゴヌクレオチドに含まれるヌクレオチドが、ホスホロチオエート結合で互いに連結されている、Ｂ－１）からＢ－１５）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－１７） 第一ヌクレオチド配列が、少なくとも１個のデオキシリボヌクレオチドを含む４～２０個のヌクレオチドからなる配列である、Ｂ－１）からＢ－１６）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－１８） 第一ヌクレオチド配列が、４～２０個のデオキシリボヌクレオチドからなる配列である、Ｂ－１）からＢ－１７）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－１９） 第二ヌクレオチド配列は、ＲＮａｓｅＨによって切断される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列である、Ｂ－１）からＢ－１８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－２０） 第二ヌクレオチド配列が、４～２０個のリボヌクレオチドからなる配列である、Ｂ－１）からＢ－１９）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－２１） 第二ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方が、隣接するヌクレオチドとホスホロチオエート結合で連結されている、Ｂ－１９）又はＢ－２０）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－２２） 第二オリゴヌクレオチドが、第二ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドを含む、Ｂ－１９）からＢ－２１）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－２３） Ｙが、５’末端又は３’末端を含む、Ｂ－１）からＢ－２２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－２４） 標識機能、精製機能及び標的ＲＮＡへの送達機能からなる群から選択される少なくとも1種の機能を有する機能性分子に由来する基をさらに含む、Ｂ－１）からＢ－２２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－２５） 前記機能性分子に由来する基が、第二オリゴヌクレオチドに直接的又は間接的に結合している、Ｂ－２４）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－２６） 前記機能性分子に由来する基が、Ｃ２－２０アルキレン基又はＣ２－２０アルケニレン基（該アルキレン基及びアルケニレン基に含まれるメチレン基は、それぞれ独立して、無置換であるか、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、保護されたヒドロキシ基、オキソ基及びチオキソ基からなる群から選択される１つ以上の置換基により置換されている。また、該アルキレン基及びアルケニレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－、－ＮＲＢ－（ＲＢは、水素原子、Ｃ１－６アルキル基又はハロＣ１－６アルキル基である。）、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）－又は－Ｓ（Ｏ）２－により置き換えられている。）を介して、又は直接共有結合により第二オリゴヌクレオチドに結合している、Ｂ－２４）又はＢ－２５）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－２７） 前記機能性分子が、糖、脂質、ペプチド及びタンパク質及びそれらの誘導体からなる群から選択される、Ｂ－２４）からＢ－２６）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－２８） 前記機能性分子が、コレステロール、脂肪酸、脂溶性ビタミン、糖脂質及びグリセリドからなる群から選択される脂質である、Ｂ－２４）からＢ－２７）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－２９） 前記機能性分子が、コレステロール、トコフェロール及びトコトリエノールからなる群から選択される脂質である、Ｂ－２４）からＢ－２８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－３０） 前記機能性分子が、トコフェロールを含み、トコフェロールのヒドロキシ基が、Ｃ２－２０アルキレン基（該アルキレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－により置き換えられている。置き換えられていないメチレン基は、それぞれ独立して無置換であるか、又はヒドロキシ基に置換されている。）を介して第二オリゴヌクレオチドと結合している、Ｂ－２４）からＢ－２９）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－３１） 前記機能性分子が、トコフェロールを含み、トコフェロールのヒドロキシ基が、１，８－オクチレン基又は下記式（II）
Figure 2022050389000004
（式中、一つの＊は、第二オリゴヌクレオチドとの結合位置を表し、他方の＊は、トコフェロールとの結合位置を表す。）で表される基を介して第二オリゴヌクレオチドと結合している、Ｂ－２４）からＢ－３０）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－３２） 前記機能性分子が、アシアロ糖タンパク質受容体と相互作用する糖誘導体である、Ｂ－２４）からＢ－２７）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－３３） 前記機能性分子が、受容体のリガンド及び抗体からなる群から選択される、ペプチド又はタンパク質である、Ｂ－２４）からＢ－２７）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－３４） Ｘが、５’末端又は３’末端を含む、Ｂ－１）からＢ－３３）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－３５） 式
Ｘ’－Ｌ’－
（式中Ｘ’は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される７～１００個のヌクレオチドからなり、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含む第四オリゴヌクレオチドに由来する基であり、
第四オリゴヌクレオチドは、標的ＲＮＡとのハイブリダイズを可能にする第四ヌクレオチド配列を有し、
第四ヌクレオチド配列は、前記標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される、少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列であり、
Ｌ’は、その両端で前記第一オリゴヌクレオチド及び第四オリゴヌクレオチドとそれぞれ共有結合し、生理的条件で分解される第五オリゴヌクレオチドに由来する基である。ここで、第一ヌクレオチド配列部分がハイブリダイズする標的ＲＮＡと第四ヌクレオチド配列部分がハイブリダイズする標的ＲＮＡは、同一であるか又は異なっている。）
で表される基をさらに含む、Ｂ－１）からＢ－３３）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－３６） Ｘ’が、５’末端又は３’末端を含む、Ｂ－３５）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－３７） 第四ヌクレオチド配列と標的ＲＮＡの配列との相補性が７０％以上である、Ｂ－３５）又はＢ－３６）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－３８） 第五オリゴヌクレオチドに含まれるヌクレオチドが、ホスホジエステル結合で互いに連結されている、Ｂ－３５）からＢ－３７）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－３９） 第五オリゴヌクレオチドが、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドからなる群から独立して選択される３～１０個のヌクレオチドからなる、Ｂ－３５）からＢ－３８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－４０） 第五オリゴヌクレオチドが、ＤＮＡ又はＲＮＡである、Ｂ－３５）からＢ－３９）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－４１） 第五オリゴヌクレオチドが、３～７個のヌクレオチドからなるＲＮＡである、Ｂ－３５）からＢ－４０）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－４２） 第四オリゴヌクレオチドは、第四ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドを含む、Ｂ－３５）からＢ－４１）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－４３） 第四オリゴヌクレオチドは、第四ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドを含む、Ｂ－３５）からＢ－４２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－４４） 第四オリゴヌクレオチドが、ホスホロチオエート結合を含む、Ｂ－３５）からＢ－４３）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－４５） 第四ヌクレオチド配列が、互いにホスホロチオエート結合で連結されたヌクレオチドを含む配列である、Ｂ－３５）からＢ－４４）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－４６） 第四オリゴヌクレオチドに含まれるヌクレオチドが、ホスホロチオエート結合で互いに連結されている、Ｂ－３５）からＢ－４５）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－４７） 第四ヌクレオチド配列が、少なくとも１個のデオキシリボヌクレオチドを含む４～２０個のヌクレオチドからなる配列である、Ｂ－３５）からＢ－４６）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－４８） 第四ヌクレオチド配列が、４～２０個のデオキシリボヌクレオチドからなる配列である、Ｂ－３５）からＢ－４７）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－４９） 糖部修飾ヌクレオチドが、それぞれ独立して、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド、２’－Ｏ－メトキシエチル化ヌクレオチド、２’－Ｏ－アミノプロピル化ヌクレオチド、２’－フルオロ化ヌクレオチド、２’－Ｆ－アラビノヌクレオチド、架橋化ヌクレオチド又は２’－Ｏ－メチルカルバモイルエチル化ヌクレオチドである、Ｂ－１）からＢ－４８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－５０） 糖部修飾ヌクレオチドが、それぞれ独立して、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド又はＬＮＡである、Ｂ－１）からＢ－４９）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－５１） デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドにおける塩基部分が、アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、ウラシル（Ｕ）及び５－メチルシトシン（５－ｍｅ－Ｃ）からなる群から選ばれる少なくとも１種である、Ｂ－１）からＢ－５０）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－５２） 式Ｘ－で表される部分構造は、式
Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－
（式中、Ｘ１は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される１から１０個のヌクレオチドからなり、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分のオリゴヌクレオチドに由来する基であって、
Ｘ３は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される１から１０個のヌクレオチドからなり、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドに由来する基であり、該オリゴヌクレオチドが第三オリゴヌクレオチドと共有結合している。）で表される、Ｂ－１）からＢ－５１）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－５３） Ｘ１は、２個又は３個の糖部修飾ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｘ２は、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｘ３は、２個又は３個の糖部修飾ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、Ｂ－５２）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－５４） Ｘ１は、ＬＮＡ、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド、２’－Ｏ－メトキシエチル化ヌクレオチド及び２’－Ｏ－メチルカルバモイルエチル化ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｘ３は、ＬＮＡ、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド、２’－Ｏ－メトキシエチル化ヌクレオチド及び２’－Ｏ－メチルカルバモイルエチル化ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、Ｂ－５２）又はＢ－５３）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－５５） Ｘ１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｘ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、Ｂ－５２）からＢ－５４）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－５６） 式－Ｙで表される部分構造は、式
－Ｙ２－Ｙ１
（式中、Ｙ２は、第二ヌクレオチド配列部分のオリゴヌクレオチドに由来する基であり、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される４～２０個のヌクレオチドからなり、少なくとも１個のリボヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドに由来する基であり、該オリゴヌクレオチドが第三オリゴヌクレオチドと共有結合し、
Ｙ１は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択される１から１０個のヌクレオチドからなり、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドに由来する基である。）で表される、Ｂ－１）からＢ－５５）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－５７） Ｙ２は、１０～１３個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｙ１は、２個又は３個の糖部修飾ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、Ｂ－５６）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－５８） Ｙ１は、ＬＮＡ、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド、２’－Ｏ－メトキシエチル化ヌクレオチド及び２’－Ｏ－メチルカルバモイルエチル化ヌクレオチドから独立して選択される２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、Ｂ－５６）又はＢ－５７）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－５９） Ｙ１は、２個又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、Ｂ－５６）からＢ－５８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－６０） 式
Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｌ－Ｙ２－Ｙ１
（式中、Ｘ１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分のオリゴヌクレオチドに由来する基であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌは、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ２は、第二ヌクレオチド配列部分のオリゴヌクレオチドに由来する基であって、１０～１３個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ１は、２個又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３及びＹ１に含まれるヌクレオチドは、互いにホスホロチオエート結合で連結され、Ｌ及びＹ２に含まれるヌクレオチドは、互いにホスホジエステル結合で連結されている。）で表される、Ｂ－１）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－６１） 式
Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｌ－Ｙ２－Ｙ１－Ｂ－Ａ
（式中、Ｘ１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分のオリゴヌクレオチドに由来する基であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌは、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ２は、第二ヌクレオチド配列部分のオリゴヌクレオチドに由来する基であって、１０～１３個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ１は、２個又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｂは、Ｃ２－２０アルキレン基又はＣ２－２０アルケニレン基（該アルキレン基及びアルケニレン基に含まれるメチレン基は、それぞれ独立して、無置換であるか、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、保護されたヒドロキシ基、オキソ基及びチオキソ基からなる群から選択される１つ以上の置換基により置換されている。また、該アルキレン基及びアルケニレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－、－ＮＲＢ－（ＲＢは、水素原子、Ｃ１－６アルキル基又はハロＣ１－６アルキル基である。）、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）－又は－Ｓ（Ｏ）２－により置き換えられている。）であり、
Ａは、機能性分子に由来する基であり、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３及びＹ１に含まれるヌクレオチドは、互いにホスホロチオエート結合で連結され、Ｌ及びＹ２に含まれるヌクレオチドは、互いにホスホジエステル結合で連結されている。）で表される、Ｂ－２４）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－６２） Ｂは、Ｃ２－２０アルキレン基（該アルキレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－により置き換えられている。置き換えられていないメチレン基は、それぞれ独立して無置換であるか、又はヒドロキシ基に置換されている。）であり、Ａは、トコフェロールに由来する基である、Ｂ－６１）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－６３） Ｘ１とＸ２、Ｘ２とＸ３及びＹ２とＹ１のそれぞれの末端ヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合で連結され、Ｘ３とＬ及びＬとＹ２のそれぞれの末端ヌクレオチドは、ホスホジエステル結合で連結されている、Ｂ－６０）からＢ－６２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－６４） 式
Ｘ’１－Ｘ’２－Ｘ’３－Ｌ’－Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｌ－Ｙ２－Ｙ１
（式中、Ｘ１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分のオリゴヌクレオチドに由来する基であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ’１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ’２は、第四ヌクレオチド配列部分のオリゴヌクレオチドに由来する基であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ’３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌは、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌ’は、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる３～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ２は、第二ヌクレオチド配列部分のオリゴヌクレオチドに由来する基であって、１０～１３個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ１は、２個又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ’１、Ｘ’２、Ｘ’３及びＹ１に含まれるヌクレオチドは、互いにホスホロチオエート結合で連結され、Ｌ、Ｌ’及びＹ２に含まれるヌクレオチドは、互いにホスホジエステル結合で連結されている。）で表される、Ｂ－３５）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－６５） 式
Ｘ’１－Ｘ’２－Ｘ’３－Ｌ’－Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｌ－Ｙ２－Ｙ１－Ｂ－Ａ
（式中、Ｘ１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分のオリゴヌクレオチドに由来する基であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ’１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ’２は、第四ヌクレオチド配列部分のオリゴヌクレオチドに由来する基であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ’３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌは、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌ’は、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる３～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ２は、第二ヌクレオチド配列部分のオリゴヌクレオチドに由来する基であって、１０～１３個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ１は、２個又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｂは、Ｃ２－２０アルキレン基又はＣ２－２０アルケニレン基（該アルキレン基及びアルケニレン基に含まれるメチレン基は、それぞれ独立して、無置換であるか、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、保護されたヒドロキシ基、オキソ基及びチオキソ基からなる群から選択される１つ以上の置換基により置換されている。また、該アルキレン基及びアルケニレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－、－ＮＲＢ－（ＲＢは、水素原子、Ｃ１－６アルキル基又はハロＣ１－６アルキル基である。）、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）－又は－Ｓ（Ｏ）２－により置き換えられている。）であり、
Ａは、機能性分子に由来する基であり、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ’１、Ｘ’２、Ｘ’３及びＹ１に含まれるヌクレオチドは、互いにホスホロチオエート結合で連結され、Ｌ、Ｌ’及びＹ２に含まれるヌクレオチドは、互いにホスホジエステル結合で連結されている。）で表されるＢ－３５）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－６６） Ｂは、Ｃ２－２０アルキレン基（該アルキレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－により置き換えられている。置き換えられていないメチレン基は、それぞれ独立して無置換であるか、又はヒドロキシ基に置換されている。）であり、Ａは、トコフェロールに由来する基である、Ｂ－６５）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－６７） Ｘ１とＸ２、Ｘ２とＸ３、Ｘ’１とＸ’２、Ｘ’２とＸ’３及びＹ２とＹ１のそれぞれの末端ヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合で連結され、Ｘ３とＬ、ＬとＹ２、Ｘ’３とＬ’及びＬ’とＸ１のそれぞれの末端ヌクレオチドは、ホスホジエステル結合で連結されている、Ｂ－６４）からＢ－６６）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－６８） Ｘ１とＹ１とが分子内でハイブリダイズする、Ｂ－６０）からＢ－６７）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－６９） Ｘ１を構成するヌクレオチドの塩基配列と、Ｙ１を構成するヌクレオチドの塩基配列との相補性が、７０％以上である、Ｂ－６０）からＢ－６８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－７０） Ｘ３とＹ２とが分子内でハイブリダイズする、Ｂ－６０）からＢ－６９）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－７１） Ｘ２－Ｘ３を構成するヌクレオチドの塩基配列と、Ｙ２を構成するヌクレオチドの塩基配列との相補性が、７０％以上である、Ｂ－６０）からＢ－７０）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－７２） 式
Ｘ’１－Ｘ’２－Ｘ’３－Ｌ’ －Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｌ－Ｙ２－Ｙ１
（式中、Ｘ１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分のオリゴヌクレオチドに由来する基であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ’１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ’２は、第四ヌクレオチド配列部分のオリゴヌクレオチドに由来する基であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ’３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌは、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌ’は、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる３～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ２は、第二ヌクレオチド配列部分を含むオリゴヌクレオチドに由来する基であって、２５～３６個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ１は、２個又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ’１、Ｘ’２、Ｘ’３及びＹ１に含まれるヌクレオチドは、互いにホスホロチオエート結合で連結され、Ｌ、Ｌ’及びＹ２に含まれるヌクレオチドは、互いにホスホジエステル結合で連結されている。）で表される、Ｂ－３５）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－７３） 式
Ｘ’１－Ｘ’２－Ｘ’３－Ｌ’－Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｌ－Ｙ２－Ｙ１－Ｂ－Ａ
（式中、Ｘ１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分のオリゴヌクレオチドに由来する基であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ’１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ’２は、第四ヌクレオチド配列部分のオリゴヌクレオチドに由来する基であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ’３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌは、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌ’は、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる３～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ２は、第二ヌクレオチド配列部分を含むオリゴヌクレオチドに由来する基であって、２５～３６個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ１は、２個又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｂは、Ｃ２－２０アルキレン基又はＣ２－２０アルケニレン基（該アルキレン基及びアルケニレン基に含まれるメチレン基は、それぞれ独立して、無置換であるか、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、保護されたヒドロキシ基、オキソ基及びチオキソ基からなる群から選択される１つ以上の置換基により置換されている。また、該アルキレン基及びアルケニレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－、－ＮＲＢ－（ＲＢは、水素原子、Ｃ１－６アルキル基又はハロＣ１－６アルキル基である。）、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）－又は－Ｓ（Ｏ）２－により置き換えられている。）であり、
Ａは、機能性分子に由来する基であり、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ’１、Ｘ’２、Ｘ’３及びＹ１に含まれるヌクレオチドは、互いにホスホロチオエート結合で連結され、Ｌ、Ｌ’及びＹ２に含まれるヌクレオチドは、互いにホスホジエステル結合で連結されている。）で表される、Ｂ－３５）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－７４） Ｂは、Ｃ２－２０アルキレン基（該アルキレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－により置き換えられている。置き換えられていないメチレン基は、それぞれ独立して無置換であるか、又はヒドロキシ基に置換されている。）であり、Ａは、トコフェロールに由来する基である、Ｂ－７３）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－７５） Ｘ１とＸ２、Ｘ２とＸ３、Ｘ’１とＸ’２、Ｘ’２とＸ’３及びＹ２とＹ１のそれぞれの末端ヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合で連結され、Ｘ３とＬ、ＬとＹ２、Ｘ’３とＬ’及びＬ’とＸ１のそれぞれの末端ヌクレオチドは、ホスホジエステル結合で連結されている、Ｂ－７２）からＢ－７４）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－７６） Ｘ’１とＹ１とが分子内でハイブリダイズする、Ｂ－７２）からＢ－７５）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－７７） Ｘ’１を構成するヌクレオチドの塩基配列と、Ｙ１を構成するヌクレオチドの塩基配列との相補性が、７０％以上である、Ｂ－７２）からＢ－７６）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－７８） Ｘ’２－Ｘ’３－Ｌ’－Ｘ１とＹ２とが分子内でハイブリダイズする、Ｂ－７２）からＢ－７７）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－７９） Ｘ’２－Ｘ’３－Ｌ’－Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３を構成するヌクレオチドの塩基配列と、Ｙ２を構成するヌクレオチドの塩基配列との相補性が、７０％以上である、Ｂ－７２）からＢ－７８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－８０） Ｙ２は、ＲＮＡに由来する基である、Ｂ－５６）からＢ－７９）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－８１） Ｙ２は、１０～１３個のリボヌクレオチドからなるＲＮＡに由来する基である、Ｂ－５６）からＢ－７１）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｂ－８２） Ｌは、４～７個のヌクレオチドからなるＤＮＡ又はＲＮＡに由来する基である、Ｂ－１）からＢ－８１）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１） 式
Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｌ－Ｙ２－Ｙ１
（式中、Ｘ１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される、少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列であり、アンチセンス配列である第一ヌクレオチド配列を有し、
Ｘ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌは、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ２は、第二ヌクレオチド配列部分であって、１０～１３個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ１は、２個又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である。）で表される、１）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－２） 式
Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｌ－Ｙ２－Ｙ１－Ｂ－Ａ
（式中、Ｘ１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される、少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列であり、アンチセンス配列である第一ヌクレオチド配列を有し、
Ｘ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌは、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ２は、第二ヌクレオチド配列部分であって、１０～１３個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ１は、２個又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｂは、Ｃ２－２０アルキレン基又はＣ２－２０アルケニレン基（該アルキレン基及びアルケニレン基に含まれるメチレン基は、それぞれ独立して、無置換であるか、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、保護されたヒドロキシ基、オキソ基及びチオキソ基からなる群から選択される１つ以上の置換基により置換されている。また、該アルキレン基及びアルケニレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－、－ＮＲＢ－（ＲＢは、水素原子、Ｃ１－６アルキル基又はハロＣ１－６アルキル基である。）、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）－又は－Ｓ（Ｏ）２－により置き換えられている。）であり、
Ａは、機能性分子に由来する基である。）で表される、１０６）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－３） Ｂは、Ｃ２－２０アルキレン基（該アルキレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－により置き換えられている。置き換えられていないメチレン基は、それぞれ独立して無置換であるか、又はヒドロキシ基に置換されている。）であり、Ａは、トコフェロールに由来する基である、Ｃ－２）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－４） Ｂは、Ｙ１の末端ヌクレオチドとホスホジエステル結合で連結されている、Ｃ－２）又はＣ－３）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－５） Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３及びＹ１に含まれるヌクレオチドは、互いにホスホロチオエート結合で連結され、Ｌ及びＹ２に含まれるヌクレオチドは、互いにホスホジエステル結合で連結されている。）で表される、Ｃ－１）からＣ－４）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－６） Ｘ１とＸ２、Ｘ２とＸ３及びＹ２とＹ１のそれぞれの末端ヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合で連結され、Ｘ３とＬ及びＬとＹ２のそれぞれの末端ヌクレオチドは、ホスホジエステル結合で連結されている、Ｃ－１）からＣ－５）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－７） 式
Ｘ’Ｚ－Ｌ’－Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｌ－Ｙ２－Ｙ１
（式中、Ｘ１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される、少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列であり、アンチセンス配列である第一ヌクレオチド配列を有し、
Ｘ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ’Ｚは、アンチセンス配列部分を含み、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡの少なくとも一方を有し、デオキシリボヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから独立して選ばれる１０～２０個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌは、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌ’は、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる２～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ２は、第二ヌクレオチド配列部分であって、１０～１３個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ１は、２個又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である。）で表される、７５）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－８） 式
Ｘ’Ｚ－Ｌ’－Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｌ－Ｙ２－Ｙ１－Ｂ－Ａ
（式中、Ｘ１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される、少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列であり、アンチセンス配列である第一ヌクレオチド配列を有し、
Ｘ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ’Ｚは、アンチセンス配列部分を含み、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡの少なくとも一方を有し、デオキシリボヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから独立して選ばれる１０～２０個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌは、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌ’は、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる２～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ２は、第二ヌクレオチド配列部分であって、１０～１３個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ１は、２個又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｂは、Ｃ２－２０アルキレン基又はＣ２－２０アルケニレン基（該アルキレン基及びアルケニレン基に含まれるメチレン基は、それぞれ独立して、無置換であるか、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、保護されたヒドロキシ基、オキソ基及びチオキソ基からなる群から選択される１つ以上の置換基により置換されている。また、該アルキレン基及びアルケニレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－、－ＮＲＢ－（ＲＢは、水素原子、Ｃ１－６アルキル基又はハロＣ１－６アルキル基である。）、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）－又は－Ｓ（Ｏ）２－により置き換えられている。）であり、
Ａは、機能性分子に由来する基である。）で表される、１０６）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－９） Ｂは、Ｃ２－２０アルキレン基（該アルキレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－により置き換えられている。置き換えられていないメチレン基は、それぞれ独立して無置換であるか、又はヒドロキシ基に置換されている。）であり、Ａは、トコフェロールに由来する基であり、Ｃ－８）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１０） Ｂは、Ｙ１の末端ヌクレオチドとホスホジエステル結合で連結されている、Ｃ－８）又はＣ－９）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１１） Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ’Ｚ及びＹ１に含まれるヌクレオチドは、互いにホスホロチオエート結合で連結され、Ｌ、Ｌ’及びＹ２に含まれるヌクレオチドは、互いにホスホジエステル結合で連結されている、Ｃ－７）からＣ－１０）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１２） Ｘ１とＸ２、Ｘ２とＸ３及びＹ２とＹ１のそれぞれの末端ヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合で連結され、Ｘ３とＬ、ＬとＹ２、Ｘ’ＺとＬ’及びＬ’とＸ１のそれぞれの末端ヌクレオチドは、ホスホジエステル結合で連結されている、Ｃ－７）からＣ－１１）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１３） ＸＺが、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まない、Ｃ－７）からＣ－１２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１４） ＸＺの３’側及び５’側の少なくとも一方のヌクレオチドが、独立して２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから選ばれるヌクレオチドである、Ｃ－１３）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１５） ＸＺの３’側及び５’側のヌクレオチドが、独立して２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから選ばれるヌクレオチドである、Ｃ－１３）又はＣ－１４）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１６） ＸＺが、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから独立して選ばれるヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、Ｃ－１３）からＣ－１５）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１７） Ｘ１とＹ１とが分子内でハイブリダイズする、Ｃ－１）からＣ－１６）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１８） Ｘ１を構成するヌクレオチドの塩基配列と、Ｙ１を構成するヌクレオチドの塩基配列との相補性が、７０％以上である、Ｃ－１）からＣ－１７）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１９） Ｘ３とＹ２とが分子内でハイブリダイズする、Ｃ－１）からＣ－１８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－２０） 式Ｘ２－Ｘ３で表される部分構造を構成するヌクレオチドの塩基配列と、Ｙ２を構成するヌクレオチドの塩基配列との相補性が、７０％以上である、Ｃ－１）からＣ－１９）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－２１） 式
Ｘ’１－Ｘ’２－Ｘ’３－Ｌ’－Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｌ－Ｙ２－Ｙ１
（式中、Ｘ１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される、少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列であり、アンチセンス配列である第一ヌクレオチド配列を有し、
Ｘ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ’１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ’２は、Ｘ’が含むアンチセンス配列部分である第四ヌクレオチド配列部分であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される、少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列であり、アンチセンス配列である第四ヌクレオチド配列を有し、
Ｘ’３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌは、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌ’は、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる３～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ２は、第二ヌクレオチド配列部分であって、１０～１３個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ１は、２個又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である。）で表される、７５）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－２２） 式
Ｘ’１－Ｘ’２－Ｘ’３－Ｌ’－Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｌ－Ｙ２－Ｙ１－Ｂ－Ａ
（式中、Ｘ１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される、少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列であり、アンチセンス配列である第一ヌクレオチド配列を有し、
Ｘ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ’１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ’２は、Ｘ’が含むアンチセンス配列部分である第四ヌクレオチド配列部分であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される、少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列であり、アンチセンス配列である第四ヌクレオチド配列を有し、
Ｘ’３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌは、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌ’は、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる３～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ２は、第二ヌクレオチド配列部分であって、１０～１３個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ１は、２個又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｂは、Ｃ２－２０アルキレン基又はＣ２－２０アルケニレン基（該アルキレン基及びアルケニレン基に含まれるメチレン基は、それぞれ独立して、無置換であるか、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、保護されたヒドロキシ基、オキソ基及びチオキソ基からなる群から選択される１つ以上の置換基により置換されている。また、該アルキレン基及びアルケニレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－、－ＮＲＢ－（ＲＢは、水素原子、Ｃ１－６アルキル基又はハロＣ１－６アルキル基である。）、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）－又は－Ｓ（Ｏ）２－により置き換えられている。）であり、
Ａは、機能性分子に由来する基である。）で表される、１０６）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－２３） Ｂは、Ｃ２－２０アルキレン基（該アルキレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－により置き換えられている。置き換えられていないメチレン基は、それぞれ独立して無置換であるか、又はヒドロキシ基に置換されている。）であり、Ａは、トコフェロールに由来する基である、Ｃ－２２）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－２４） Ｂは、Ｙ１の末端ヌクレオチドとホスホジエステル結合で連結されている、Ｃ－２２）又はＣ－２３）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－２５） Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ’１、Ｘ’２、Ｘ’３及びＹ１に含まれるヌクレオチドは、互いにホスホロチオエート結合で連結され、Ｌ、Ｌ’及びＹ２に含まれるヌクレオチドは、互いにホスホジエステル結合で連結されている、Ｃ－２１）からＣ－２４）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－２６） Ｘ１とＸ２、Ｘ２とＸ３、Ｘ’１とＸ’２、Ｘ’２とＸ’３及びＹ２とＹ１のそれぞれの末端ヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合で連結され、Ｘ３とＬ、ＬとＹ２、Ｘ’３とＬ’及びＬ’とＸ１のそれぞれの末端ヌクレオチドは、ホスホジエステル結合で連結されている、Ｃ－２１）からＣ－２５）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－２７） Ｘ１とＹ１とが分子内でハイブリダイズする、Ｃ－２１）からＣ－２６）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－２８） Ｘ１を構成するヌクレオチドの塩基配列と、Ｙ１を構成するヌクレオチドの塩基配列との相補性が、７０％以上である、Ｃ－２１）からＣ－２７）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－２９） Ｘ３とＹ２とが分子内でハイブリダイズする、Ｃ－２１）からＣ－２８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－３０） 式Ｘ２－Ｘ３で表される部分構造を構成するヌクレオチドの塩基配列と、Ｙ２を構成するヌクレオチドの塩基配列との相補性が、７０％以上である、Ｃ－２１）からＣ－２９）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－３１） 式
Ｘ’１－Ｘ’２－Ｘ’３－Ｌ’－Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｌ－Ｙ２－Ｙ１
（式中、Ｘ１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される、少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列であり、アンチセンス配列である第一ヌクレオチド配列を有し、
Ｘ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ’１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ’２は、Ｘ’が含むアンチセンス配列部分である第四ヌクレオチド配列部分であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される、少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列であり、アンチセンス配列である第四ヌクレオチド配列を有し、
Ｘ’３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌは、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌ’は、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる３～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ２は、第二ヌクレオチド配列部分を含み、２５～３６個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ１は、２個又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である。）で表される、７５）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－３２） 式
Ｘ’１－Ｘ’２－Ｘ’３－Ｌ’－Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｌ－Ｙ２－Ｙ１－Ｂ－Ａ
（式中、Ｘ１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される、少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列であり、アンチセンス配列である第一ヌクレオチド配列を有し、
Ｘ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ’１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ’２は、Ｘ’が含むアンチセンス配列部分である第四ヌクレオチド配列部分であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される、少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列であり、アンチセンス配列である第四ヌクレオチド配列を有し、
Ｘ’３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌは、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌ’は、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる３～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ２は、第二ヌクレオチド配列部分を含み、２５～３６個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ１は、２個又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｂは、Ｃ２－２０アルキレン基又はＣ２－２０アルケニレン基（該アルキレン基及びアルケニレン基に含まれるメチレン基は、それぞれ独立して、無置換であるか、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、保護されたヒドロキシ基、オキソ基及びチオキソ基からなる群から選択される１つ以上の置換基により置換されている。また、該アルキレン基及びアルケニレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－、－ＮＲＢ－（ＲＢは、水素原子、Ｃ１－６アルキル基又はハロＣ１－６アルキル基である。）、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）－又は－Ｓ（Ｏ）２－により置き換えられている。）であり、
Ａは、機能性分子に由来する基である。）で表される、１０６）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－３３） Ｂは、Ｃ２－２０アルキレン基（該アルキレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－により置き換えられている。置き換えられていないメチレン基は、それぞれ独立して無置換であるか、又はヒドロキシ基に置換されている。）であり、Ａは、トコフェロールに由来する基である、Ｃ－３２）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－３４） Ｂは、Ｙ１の末端ヌクレオチドとホスホジエステル結合で連結されている、Ｃ－３２）又はＣ－３３）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－３５） Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ’１、Ｘ’２、Ｘ’３及びＹ１に含まれるヌクレオチドは、互いにホスホロチオエート結合で連結され、Ｌ、Ｌ’及びＹ２に含まれるヌクレオチドは、互いにホスホジエステル結合で連結されている、Ｃ－３１）からＣ－３４）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－３６） Ｘ１とＸ２、Ｘ２とＸ３、Ｘ’１とＸ’２、Ｘ’２とＸ’３及びＹ２とＹ１のそれぞれの末端ヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合で連結され、Ｘ３とＬ、ＬとＹ２、Ｘ’３とＬ’及びＬ’とＸ１のそれぞれの末端ヌクレオチドは、ホスホジエステル結合で連結されている、Ｃ－３１）からＣ－３５）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－３７） Ｘ’１とＹ１とが分子内でハイブリダイズする、Ｃ－３１）からＣ－３６）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－３８） Ｘ’１を構成するヌクレオチドの塩基配列と、Ｙ１を構成するヌクレオチドの塩基配列との相補性が、７０％以上である、Ｃ－３１）からＣ－３７）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－３９） 式Ｘ’２－Ｘ’３－Ｌ’－Ｘ１－Ｘ２で表される部分構造とＹ２とが分子内でハイブリダイズする、Ｃ－３１）からＣ－３８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－４０） 式Ｘ’２－Ｘ’３－Ｌ’－Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３で表される部分構造を構成するヌクレオチドの塩基配列と、Ｙ２を構成するヌクレオチドの塩基配列との相補性が、７０％以上である、Ｃ－３１）からＣ－３９）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－４１） Ｙ２は、１０～１３個のリボヌクレオチドからなるＲＮＡに由来する基である、Ｃ－１）からＣ－３０）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－４２） Ｙ２は、２５～３６個のリボヌクレオチドからなるＲＮＡに由来する基である、Ｃ－３１）からＣ－４０）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－４３） 式
Ｘ１－Ｘ２－Ｌ－Ｙ０－ＹＺ
（式中、Ｘ１は、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから独立して選ばれる２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分であって、８～１２個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌは、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ０は、第二ヌクレオチド配列部分であって、１０～１５個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
ＹＺは、アンチセンス配列部分を含み、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡの少なくとも一方を有し、デオキシリボヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから独立して選ばれる１０～２０個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である。）で表される、１）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－４４） 式
Ａ－Ｂ－Ｘ１－Ｘ２－Ｌ－Ｙ０－ＹＺ
（式中、Ａは、機能性分子に由来する基であり、
Ｂは、Ｃ２－２０アルキレン基又はＣ２－２０アルケニレン基（該アルキレン基及びアルケニレン基に含まれるメチレン基は、それぞれ独立して、無置換であるか、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、保護されたヒドロキシ基、オキソ基及びチオキソ基からなる群から選択される１つ以上の置換基により置換されている。また、該アルキレン基及びアルケニレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－、－ＮＲＢ－（ＲＢは、水素原子、Ｃ１－６アルキル基又はハロＣ１－６アルキル基である。）、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）－又は－Ｓ（Ｏ）２－により置き換えられている。）であり、
Ｘ１は、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから独立して選ばれる２個又は３個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分であって、８～１２個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌは、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ０は、第二ヌクレオチド配列部分であって、１０～１５個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
ＹＺは、アンチセンス配列部分を含み、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡの少なくとも一方を有し、デオキシリボヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから独立して選ばれる１０～２０個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である。）で表される、１０６）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－４５） Ｂは、Ｃ２－２０アルキレン基（該アルキレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－により置き換えられている。置き換えられていないメチレン基は、それぞれ独立して無置換であるか、又はヒドロキシ基に置換されている。）であり、Ａは、トコフェロールに由来する基である、Ｃ－４４）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－４６） Ｂは、Ｘ１の末端ヌクレオチドとホスホジエステル結合で連結されている、Ｃ－４４）又はＣ－４５）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－４７） Ｘ１、Ｘ２、ＹＺに含まれるヌクレオチドは、互いにホスホロチオエート結合で連結され、Ｌ及びＹ０に含まれるヌクレオチドは、互いにホスホジエステル結合で連結されている、Ｃ－４３）からＣ－４６）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－４８） Ｘ１とＸ２のそれぞれの末端ヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合で連結され、Ｘ２とＬ、ＬとＹ０及びＹ０とＹＺのそれぞれの末端ヌクレオチドが、ホスホジエステル結合で連結されている、Ｃ－４３）からＣ－４７）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－４９） Ｘ２とＹ０とが分子内でハイブリダイズする、Ｃ－４３）からＣ－４８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－５０） 式Ｘ１－Ｘ２で表される部分構造を構成するヌクレオチドの塩基配列と、Ｙ０を構成するヌクレオチドの塩基配列との相補性が、７０％以上である、Ｃ－４３）からＣ－４９）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－５１） Ｙ０は、１０～１５個のリボヌクレオチドからなるＲＮＡに由来する基である、Ｃ－４３）からＣ－５０）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－５２） 式
Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｌ－Ｙ０－ＹＺ
（式中、Ｘ１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌは、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個の
ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ０は、第二ヌクレオチド配列部分であって、１２～１６個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
ＹＺは、アンチセンス配列部分を含み、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡの少なくとも一方を有し、デオキシリボヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから独立して選ばれる１０～２０個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である。）で表される、１）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－５３） 第一ヌクレオチド配列はアンチセンス配列であり、標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される、少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列である、Ｃ－５２）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－５４） Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３及びＹＺに含まれるヌクレオチドは、互いにホスホロチオエート結合で連結され、Ｌ及びＹ０に含まれるヌクレオチドは、互いにホスホジエステル結合で連結されている、Ｃ－５２）又はＣ－５３）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－５５） Ｘ１とＸ２及びＸ２とＸ３のそれぞれの末端ヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合で連結され、Ｘ３とＬ、ＬとＹ０及びＹ０とＹＺのそれぞれの末端ヌクレオチドが、ホスホジエステル結合で連結されている、Ｃ－５２）からＣ－５４）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－５６） Ｘ２とＹ０とが分子内でハイブリダイズする、Ｃ－５２）からＣ－５５）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－５７） 式Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３で表される部分構造を構成するヌクレオチドの塩基配列と、Ｙ０を構成するヌクレオチドの塩基配列との相補性が、７０％以上である、Ｃ－５２）からＣ－５６）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－５８） Ｙ０は、１２～１６個のリボヌクレオチドからなるＲＮＡに由来する基である、Ｃ－５２）からＣ－５７）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－５９） 式－ＹＺで表される部分構造が、式－ＹＺ ３－ＹＺ ２－ＹＺ １で表され、
ＹＺ １は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
ＹＺ ２は、Ｙが含むアンチセンス配列部分であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
ＹＺ ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、Ｃ－４３）からＣ－５８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－６０） ＹＺが、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まない、Ｃ－４３）からＣ－５８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－６１） ＹＺの３’側及び５’側の少なくとも一方のヌクレオチドが、独立して２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから選ばれるヌクレオチドである、Ｃ－６０）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－６２） ＹＺの３’側及び５’側のヌクレオチドが、独立して２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから選ばれるヌクレオチドである、Ｃ－６０）又はＣ－６１）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－６３） ＹＺが、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから独立して選ばれるヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、Ｃ－６０）からＣ－６２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－６４） 式
Ｘ４－Ｘ５－Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｌ－Ｙ０－ＹＺ ３－ＹＺ ２－ＹＺ １
（式中、Ｘ４は、２個又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ５は、１０～１３個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌは、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ０は、第二ヌクレオチド配列部分であって、１２～１６個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
ＹＺ ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
ＹＺ ２は、Ｙが含むアンチセンス配列部分であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
ＹＺ １は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である。）で表される、１）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－６５） 第一ヌクレオチド配列はアンチセンス配列であり、標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される、少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列である、Ｃ－６４）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－６６） 式
Ａ－Ｂ－Ｘ４－Ｘ５－Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｌ－Ｙ０－ＹＺ ３－ＹＺ ２－ＹＺ １
（式中、Ａは、機能性分子に由来する基であり、
Ｂは、Ｃ２－２０アルキレン基又はＣ２－２０アルケニレン基（該アルキレン基及びアルケニレン基に含まれるメチレン基は、それぞれ独立して、無置換であるか、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、保護されたヒドロキシ基、オキソ基及びチオキソ基からなる群から選択される１つ以上の置換基により置換されている。また、該アルキレン基及びアルケニレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－、－ＮＲＢ－（ＲＢは、水素原子、Ｃ１－６アルキル基又はハロＣ１－６アルキル基である。）、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）－又は－Ｓ（Ｏ）２－により置き換えられている。）であり、
Ｘ４は、２個又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ５は、１０～１３個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌは、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ０は、第二ヌクレオチド配列部分であって、１２～１６個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
ＹＺ ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
ＹＺ ２は、Ｙが含むアンチセンス配列部分であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
ＹＺ １は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である。）で表される、１０６）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－６７） 第一ヌクレオチド配列はアンチセンス配列であり、標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される、少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列である、Ｃ－６６）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－６８） Ｂは、Ｃ２－２０アルキレン基（該アルキレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－により置き換えられている。置き換えられていないメチレン基は、それぞれ独立して無置換であるか、又はヒドロキシ基に置換されている。）であり、Ａは、トコフェロールに由来する基である、Ｃ－６６）又はＣ－６７）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－６９） Ｂは、Ｘ４の末端ヌクレオチドとホスホジエステル結合で連結されている、Ｃ－６６）からＣ－６８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－７０） Ｘ４、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、ＹＺ ３、ＹＺ ２及びＹＺ １に含まれるヌクレオチドは、互いにホスホロチオエート結合で連結され、Ｘ５、Ｌ及びＹ０に含まれるヌクレオチドは、互いにホスホジエステル結合で連結されている、Ｃ－６４）からＣ－６９）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－７１） Ｘ４とＸ５、Ｘ１とＸ２、Ｘ２とＸ３のそれぞれの末端ヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合で連結され、Ｘ５とＸ１、Ｘ３とＬ、ＬとＹ０及びＹ０とＹＺ ３のそれぞれの末端ヌクレオチドが、ホスホジエステル結合で連結されている、Ｃ－６４）からＣ－７０）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－７２） Ｘ２とＹ０とが分子内でハイブリダイズする、Ｃ－６４）からＣ－７１）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－７３） 式Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３で表される部分構造を構成するヌクレオチドの塩基配列と、Ｙ０を構成するヌクレオチドの塩基配列との相補性が、７０％以上である、Ｃ－６４）からＣ－７２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－７４） Ｘ５とＹＺ ２とが分子内でハイブリダイズする、Ｃ－６４）からＣ－７３）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－７５） Ｘ５を構成するヌクレオチドの塩基配列と、式ＹＺ ２－ＹＺ ３で表される部分構造を構成するヌクレオチドの塩基配列との相補性が、７０％以上である、Ｃ－６４）からＣ－７４）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－７６） Ｘ４とＹＺ １とが分子内でハイブリダイズする、Ｃ－６４）からＣ－７５）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－７７） Ｘ４を構成するヌクレオチドの塩基配列と、ＹＺ １を構成するヌクレオチドの塩基配列との相補性が、７０％以上である、Ｃ－６４）からＣ－７６）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－７８） Ｘ５は、１０～１３個のリボヌクレオチドからなるＲＮＡに由来する基である、Ｃ－６４）からＣ－７７）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－７９） Ｙ０は、１２～１６個のリボヌクレオチドからなるＲＮＡに由来する基である、Ｃ－５２）からＣ－７８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－８０） 式
Ｘ４－Ｘ５－Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｌ－Ｙ０－ＹＺ ３－ＹＺ ２－ＹＺ １
（式中、Ｘ４は、２個又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ５は、１２～１９個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌは、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ０は、第二ヌクレオチド配列部分であって、１４～２２個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
ＹＺ ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
ＹＺ ２は、Ｙが含むアンチセンス配列部分であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
ＹＺ １は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である。）で表される、１）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－８１） 第一ヌクレオチド配列はアンチセンス配列であり、標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される、少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列である、Ｃ－７４）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－８２） 式
Ａ－Ｂ－Ｘ４－Ｘ５－Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｌ－Ｙ０－ＹＺ ３－ＹＺ ２－ＹＺ １
（式中、Ａは、機能性分子に由来する基であり、
Ｂは、Ｃ２－２０アルキレン基又はＣ２－２０アルケニレン基（該アルキレン基及びアルケニレン基に含まれるメチレン基は、それぞれ独立して、無置換であるか、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、保護されたヒドロキシ基、オキソ基及びチオキソ基からなる群から選択される１つ以上の置換基により置換されている。また、該アルキレン基及びアルケニレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－、－ＮＲＢ－（ＲＢは、水素原子、Ｃ１－６アルキル基又はハロＣ１－６アルキル基である。）、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）－又は－Ｓ（Ｏ）２－により置き換えられている。）であり、
Ｘ４は、２個又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ５は、１２～１９個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ１は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌは、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ０は、第二ヌクレオチド配列部分であって、１４～２２個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
ＹＺ ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
ＹＺ ２は、Ｙが含むアンチセンス配列部分であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
ＹＺ １は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である。）で表される、１０６）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－８３） 第一ヌクレオチド配列はアンチセンス配列であり、前記アンチセンス配列は、標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される、少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列である、Ｃ－８２）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－８４） Ｂは、Ｃ２－２０アルキレン基（該アルキレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－により置き換えられている。置き換えられていないメチレン基は、それぞれ独立して無置換であるか、又はヒドロキシ基に置換されている。）であり、Ａは、トコフェロールに由来する基である、Ｃ－８２）又はＣ－８３）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－８５） Ｂは、Ｘ４の末端ヌクレオチドとホスホジエステル結合で連結されている、Ｃ－８２）からＣ－８４）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－８６） Ｘ４、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、ＹＺ ３、ＹＺ ２及びＹＺ １に含まれるヌクレオチドは、互いにホスホロチオエート結合で連結され、Ｘ５、Ｌ及びＹ０に含まれるヌクレオチドは、互いにホスホジエステル結合で連結されている、Ｃ－８０）からＣ－８５）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－８７） Ｘ４とＸ５、Ｘ１とＸ２、Ｘ２とＸ３のそれぞれの末端ヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合で連結され、Ｘ５とＸ１、Ｘ３とＬ、ＬとＹ０及びＹ０とＹＺ ３のそれぞれの末端ヌクレオチドが、ホスホジエステル結合で連結されている、Ｃ－８０）からＣ－８６）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－８８） Ｘ２とＹ０とが分子内でハイブリダイズする、Ｃ－８０）からＣ－８７）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－８９） 式Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３で表される部分構造を構成するヌクレオチドの塩基配列と、Ｙ０を構成するヌクレオチドの塩基配列との相補性が、７０％以上である、Ｃ－８０）からＣ－８８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－９０） Ｘ５とＹＺ ２とが分子内でハイブリダイズする、Ｃ－８０）からＣ－８９）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－９１） Ｘ５を構成するヌクレオチドの塩基配列と、式ＹＺ ２－ＹＺ ３で表される部分構造を構成するヌクレオチドの塩基配列との相補性が、７０％以上である、Ｃ－８０）からＣ－９０）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－９２） Ｘ５の一部分とＹ０の一部分とが分子内でハイブリダイズする、Ｃ－８０）からＣ－９１）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－９３） Ｘ５の一部分を構成するヌクレオチドの塩基配列と、Ｙ０の一部分を構成するヌクレオチドの塩基配列との相補性が、７０％以上である、Ｃ－８０）からＣ－９２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－９４） Ｘ４とＹＺ １とが分子内でハイブリダイズする、Ｃ－８０）からＣ－９３）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－９５） Ｘ４を構成するヌクレオチドの塩基配列と、ＹＺ １を構成するヌクレオチドの塩基配列との相補性が、７０％以上である、Ｃ－８０）からＣ－９４）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－９６） Ｘ５は、１２～１９個のリボヌクレオチドからなるＲＮＡに由来する基である、Ｃ－８０）からＣ－９５）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－９７） Ｙ０は、１４～２２個のリボヌクレオチドからなるＲＮＡに由来する基である、Ｃ－８０）からＣ－９６）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－９８） 式
ＸＺ－Ｘ０－Ｘ２－Ｌ－Ｙ２－Ｙ１
（式中、ＸＺは、アンチセンス配列部分を含み、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡの少なくとも一方を有し、デオキシリボヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから独立して選ばれる１０～２０個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ０は、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる２～５個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分であって、８～１７個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌは、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ２は、第二ヌクレオチド配列部分であって、８～１９個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ１は、２個又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である。）で表される、１）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－９９） 式
ＸＺ－Ｘ０－Ｘ２－Ｌ－Ｙ２－Ｙ１－Ｂ－Ａ
（式中、ＸＺは、アンチセンス配列部分を含み、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡの少なくとも一方を有し、デオキシリボヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから独立して選ばれる１０～２０個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ０は、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる２～５個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、第一ヌクレオチド配列部分であって、８～１７個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌは、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ２は、第二ヌクレオチド配列部分であって、８～１９個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ１は、２個又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｂは、Ｃ２－２０アルキレン基又はＣ２－２０アルケニレン基（該アルキレン基及びアルケニレン基に含まれるメチレン基は、それぞれ独立して、無置換であるか、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、保護されたヒドロキシ基、オキソ基及びチオキソ基からなる群から選択される１つ以上の置換基により置換されている。また、該アルキレン基及びアルケニレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－、－ＮＲＢ－（ＲＢは、水素原子、Ｃ１－６アルキル基又はハロＣ１－６アルキル基である。）、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）－又は－Ｓ（Ｏ）２－により置き換えられている。）であり、
Ａは、機能性分子に由来する基である。）で表される、１０６）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１００） Ｂは、Ｃ２－２０アルキレン基（該アルキレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－により置き換えられている。置き換えられていないメチレン基は、それぞれ独立して無置換であるか、又はヒドロキシ基に置換されている。）であり、Ａは、トコフェロールに由来する基である、Ｃ－９９）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１０１） Ｂは、Ｙ１の末端ヌクレオチドとホスホジエステル結合で連結されている、Ｃ－９９）又はＣ－１００）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１０２） ＸＺ、Ｘ２及びＹ１に含まれるヌクレオチドは、互いにホスホロチオエート結合で連結され、Ｘ０、Ｌ及びＹ２に含まれるヌクレオチドは、互いにホスホジエステル結合で連結されている、Ｃ－９８）からＣ－１０１）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１０３） Ｙ２とＹ１のそれぞれの末端ヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合で連結され、ＸＺとＸ０、Ｘ０とＸ２、Ｘ２とＬ及びＬとＹ２のそれぞれの末端ヌクレオチドは、ホスホジエステル結合で連結されている、Ｃ－９８）からＣ－１０２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１０４） Ｘ０とＹ１とが分子内でハイブリダイズする、Ｃ－９８）からＣ－１０３）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１０５） Ｘ０を構成するヌクレオチドの塩基配列と、Ｙ１を構成するヌクレオチドの塩基配列との相補性が、７０％以上である、Ｃ－９８）からＣ－１０４）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１０６） Ｘ２とＹ２とが分子内でハイブリダイズする、Ｃ－９８）からＣ－１０５）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１０７） Ｘ２を構成するヌクレオチドの塩基配列と、Ｙ２を構成するヌクレオチドの塩基配列との相補性が、７０％以上である、Ｃ－９８）からＣ－１０６）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１０８） ＸＺが、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まない、Ｃ－９８）からＣ－１０７）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１０９） ＸＺの３’末端及び５’末端の少なくとも一方のヌクレオチドが、独立して２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから選ばれるヌクレオチドである、Ｃ－９８）からＣ－１０８）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１１０） ＸＺの３’末端及び５’末端のヌクレオチドが、独立して２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから選ばれるヌクレオチドである、Ｃ－９８）からＣ－１０９）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１１１） 式ＸＺ－で表される部分構造が、式ＸＺ １－ＸＺ ２－ＸＺ ３－で表され、
ＸＺ １は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
ＸＺ ２は、アンチセンス配列部分であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
ＸＺ ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、Ｃ－９８）からＣ－１０７）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１１２） ＸＺが、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから独立して選ばれるヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、Ｃ－９８）からＣ－１０７）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１１３） Ｙ２は、８～１９個のリボヌクレオチドからなるＲＮＡに由来する基である、Ｃ－９８）からＣ－１１２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１１４） 式
ＸＺ－Ｘ２－Ｘ３－Ｌ－Ｙ３－Ｙ２－Ｙ１
（式中、ＸＺは、アンチセンス配列部分を含み、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡの少なくとも一方を有し、デオキシリボヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから独立して選ばれる１０～２０個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、リボヌクレオチドから独立して選ばれる４～８個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ３は、第一ヌクレオチド配列部分であって、４～８個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌは、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ３は、第二ヌクレオチド配列部分であって、４～８個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ２は、４～８個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ１は、２個又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である。）で表される、１）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１１５） 式
ＸＺ－Ｘ２－Ｘ３－Ｌ－Ｙ３－Ｙ２－Ｙ１－Ｂ－Ａ
（式中、ＸＺは、アンチセンス配列部分を含み、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡの少なくとも一方を有し、デオキシリボヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから独立して選ばれる１０～２０個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ２は、リボヌクレオチドから独立して選ばれる４～８個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｘ３は、第一ヌクレオチド配列部分であって、４～８個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌは、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ３は、第二ヌクレオチド配列部分であって、４～８個のリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ２は、４～８個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙ１は、２個又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｂは、Ｃ２－２０アルキレン基又はＣ２－２０アルケニレン基（該アルキレン基及びアルケニレン基に含まれるメチレン基は、それぞれ独立して、無置換であるか、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、保護されたヒドロキシ基、オキソ基及びチオキソ基からなる群から選択される１つ以上の置換基により置換されている。また、該アルキレン基及びアルケニレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－、－ＮＲＢ－（ＲＢは、水素原子、Ｃ１－６アルキル基又はハロＣ１－６アルキル基である。）、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）－又は－Ｓ（Ｏ）２－により置き換えられている。）であり、
Ａは、機能性分子に由来する基である。）で表される、１０６）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１１６） Ｂは、Ｃ２－２０アルキレン基（該アルキレン基のメチレン基は、それぞれ独立して、置き換えられていないか、又は－Ｏ－により置き換えられている。置き換えられていないメチレン基は、それぞれ独立して無置換であるか、又はヒドロキシ基に置換されている。）であり、Ａは、トコフェロールに由来する基である、Ｃ－９９）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１１７） Ｂは、Ｙ１の末端ヌクレオチドとホスホジエステル結合で連結されている、Ｃ－１１５）又はＣ－１１６）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１１８） ＸＺ、Ｘ３、Ｙ２及びＹ１に含まれるヌクレオチドは、互いにホスホロチオエート結合で連結され、Ｘ２、Ｌ及びＹ３に含まれるヌクレオチドは、互いにホスホジエステル結合で連結されている、Ｃ－１１４）からＣ－１１７）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１１９） Ｙ３とＹ２、Ｙ２とＹ１及びＸ２とＸ３のそれぞれの末端ヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合で連結され、ＸＺとＸ３、Ｘ３とＬ及びＬとＹ３のそれぞれの末端ヌクレオチドは、ホスホジエステル結合で連結されている、Ｃ－１１４）からＣ－１１８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１２０） Ｘ２とＹ２とが分子内でハイブリダイズし、Ｘ３とＹ３とが分子内でハイブリダイズする、Ｃ－１１４）からＣ－１１９）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１２１） Ｘ２を構成するヌクレオチドの塩基配列とＹ２を構成するヌクレオチドの塩基配列との相補性が、７０％以上であり、Ｘ３を構成するヌクレオチドの塩基配列とＹ３を構成するヌクレオチドの塩基配列との相補性が、７０％以上である、Ｃ－１１４）からＣ－１２０）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１２２） Ｘ２とＹ１とが分子内でハイブリダイズする、Ｃ－１１４）からＣ－１２１）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１２３） Ｘ２を構成するヌクレオチドの塩基配列と、Ｙ１を構成するヌクレオチドの塩基配列との相補性が、７０％以上である、Ｃ－１１４）からＣ－１２２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１２４） ＸＺが、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まない、Ｃ－１１４）からＣ－１２３）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１２５） ＸＺの３’末端及び５’末端の少なくとも一方のヌクレオチドが、独立して２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから選ばれるヌクレオチドである、Ｃ－１１４）からＣ－１２４）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１２６） ＸＺの３’末端及び５’末端のヌクレオチドが、独立して２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから選ばれるヌクレオチドである、Ｃ－１１４）からＣ－１２５に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１２７） 式ＸＺ－で表される部分構造が、式ＸＺ １－ＸＺ ２－ＸＺ ３－で表され、
ＸＺ １は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
ＸＺ ２は、アンチセンス配列部分であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
ＸＺ ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、Ｃ－１１４）からＣ－１２３）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１２８） ＸＺが、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから独立して選ばれるヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、Ｃ－１１４）からＣ－１２３）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１２９） デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドにおける塩基部分が、アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、ウラシル（Ｕ）及び５－メチルシトシン（５－ｍｅ－Ｃ）からなる群から選ばれる少なくとも１種である、１）から１６７）及びＣ－１）からＣ－１２８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１３０） Ｌは、４～７個のヌクレオチドからなるＤＮＡ又はＲＮＡに由来する基である、１）から１６７）及びＣ－１）からＣ－１２９）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１３１） 第三オリゴヌクレオチドが、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選択される４又は５個のヌクレオチドからなる、１）から１６７）及びＣ－１）からＣ－１３０）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－１３２） 第三オリゴヌクレオチドが、アデノシンからなるオリゴヌクレオチドである、１）から１６７）及びＣ－１）からＣ－１３１）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｄ－１） １）から１６７）及びＣ－１）からＣ－１３２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチドを有効成分として含有する医薬。
Ｄ－２） Ｂ－１）からＢ－８２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチドを有効成分として含有する医薬。
第一ヌクレオチド配列がアンチセンス配列であり、第一ヌクレオチド配列部分と第二ヌクレオチド配列部分とが、分子内でハイブリダイズするＢ－６０）又はＣ－１）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチドの概念図を図１に示す。図１に示される一本鎖オリゴヌクレオチドでは、２又は３個のＬＮＡからなるＸ１と、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなり、第一ヌクレオチド配列を有するＸ２と、２又は３個のＬＮＡからなるＸ３と、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるＬと、１０～１３個のリボヌクレオチドからなり、第二ヌクレオチド配列を有するＹ２と、２又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるＹ１とが、この順に結合している。Ｘ１からＹ１への結合方向は、５’から３’方向であっても、３’から５’方向であってもよい。図１では、第一ヌクレオチド配列を有するＸ２と、第二ヌクレオチド配列を有するＹ２とが二重鎖を形成している。Ｘ１とＹ１とは、二重鎖を形成していてもしていなくてもよいが、二重鎖を形成していることが好ましい。Ｘ３とＹ２とは、二重鎖を形成していてもしていなくてもよいが、二重鎖を形成していることが好ましい。
第一ヌクレオチド配列がアンチセンス配列であり、第一ヌクレオチド配列部分と第二ヌクレオチド配列部分とで分子内でハイブリダイズするＢ－６１）又はＣ－２）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチドの概念図を図２に示す。図２に示される一本鎖オリゴヌクレオチドでは、２又は３個のＬＮＡからなるＸ１と、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなり、第一ヌクレオチド配列を有するＸ２と、２又は３個のＬＮＡからなるＸ３と、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるＬと、１０～１３個のリボヌクレオチドからなり、第二ヌクレオチド配列を有するＹ２と、２又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるＹ１と、Ｃ２－２０アルキレン基等であるＢと、機能性分子に由来する基であるＡとが、この順に結合している。Ｘ１からＹ１への結合方向は、５’から３’方向であっても、３’から５’方向であってもよい。図２では、第一ヌクレオチド配列を有するＸ２と、第二ヌクレオチド配列を有するＹ２とが二重鎖を形成している。Ｘ１とＹ１とは、二重鎖を形成していてもしていなくてもよいが、二重鎖を形成していることが好ましい。Ｘ３とＹ２とは、二重鎖を形成していてもしていなくてもよいが、二重鎖を形成していることが好ましい。
第一ヌクレオチド配列がアンチセンス配列であり、第一ヌクレオチド配列部分と第二ヌクレオチド配列部分とで分子内でハイブリダイズするＢ－６４）又はＣ－２１）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチドの概念図を図３に示す。図３に示される一本鎖オリゴヌクレオチドでは、２又は３個のＬＮＡからなるＸ’１と、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなり、第四ヌクレオチド配列を有するＸ’２と、２又は３個のＬＮＡからなるＸ’３と、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる３～７個のヌクレオチドからなるＬ’と、２又は３個のＬＮＡからなるＸ１と、８～１０個のデオキシヌクレオチドからなり、第一ヌクレオチド配列を有するＸ２と、２又は３個のＬＮＡからなるＸ３と、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるＬと、１０～１３個のリボヌクレオチドからなり、第二ヌクレオチド配列を有するＹ２と、２又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるＹ１とが、この順に結合している。Ｘ’１からＹ１への結合方向は、５’から３’方向であっても、３’から５’方向であってもよい。図３では、第一ヌクレオチド配列を有するＸ２と、第二ヌクレオチド配列を有するＹ２とが二重鎖を形成している。Ｘ１とＹ１とは、二重鎖を形成していてもしていなくてもよいが、二重鎖を形成していることが好ましい。Ｘ３とＹ２とは、二重鎖を形成していてもしていなくてもよいが、二重鎖を形成していることが好ましい。
第一ヌクレオチド配列がアンチセンス配列であり、第一ヌクレオチド配列部分と第二ヌクレオチド配列部分とで分子内でハイブリダイズするＢ－６５）又はＣ－２２）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチドの概念図を図４に示す。図４に示される一本鎖オリゴヌクレオチドでは、２又は３個のＬＮＡからなるＸ’１と、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなり、第四ヌクレオチド配列を有するＸ’２と、２又は３個のＬＮＡからなるＸ’３と、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる３～７個のヌクレオチドからなるＬ’と、２又は３個のＬＮＡからなるＸ１と、８～１０個のデオキシヌクレオチドからなり、第一ヌクレオチド配列を有するＸ２と、２又は３個のＬＮＡからなるＸ３と、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるＬと、１０～１３個のリボヌクレオチドからなり、第二ヌクレオチド配列を有するＹ２と、２個又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるＹ１と、Ｃ２－２０アルキレン基等であるＢと、機能性分子に由来する基であるＡとが、この順に結合している。Ｘ’１からＹ１への結合方向は、５’から３’方向であっても、３’から５’方向であってもよい。図４では、第一ヌクレオチド配列を有するＸ２と、第二ヌクレオチド配列を有するＹ２とが二重鎖を形成している。Ｘ１とＹ１とは、二重鎖を形成していてもしていなくてもよいが、二重鎖を形成していることが好ましい。Ｘ３とＹ２とは、二重鎖を形成していてもしていなくてもよいが、二重鎖を形成していることが好ましい。
第一ヌクレオチド配列がアンチセンス配列であり、第一ヌクレオチド配列部分と第二ヌクレオチド配列部分とが分子内でハイブリダイズし、第四ヌクレオチド配列部分と第六ヌクレオチド配列部分とが分子内でハイブリダイズするＢ－７２）又はＣ－３１）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチドの概念図を図５に示す。図５に示される一本鎖オリゴヌクレオチドでは、２又は３個のＬＮＡからなるＸ’１と、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなり、第四ヌクレオチド配列を有するＸ’２と、２又は３個のＬＮＡからなるＸ’３と、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる３～７個のヌクレオチドからなるＬ’と、２又は３個のＬＮＡからなるＸ１と、８～１０個のデオキシヌクレオチドからなり、第一ヌクレオチド配列を有するＸ２と、２又は３個のＬＮＡからなるＸ３と、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるＬと、２５～３６個のリボヌクレオチドからなり、第二ヌクレオチド配列及び第六ヌクレオチド配列を有するＹ２と、２又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるＹ１とが、この順に結合している。Ｘ’１からＹ１への結合方向は、５’から３’方向であっても、３’から５’方向であってもよい。図５では、第一ヌクレオチド配列を有するＸ２と、Ｙ２の第二ヌクレオチド配列を有する部分とが二重鎖を形成し、第四ヌクレオチド配列を有するＸ’２と、Ｙ２の第六ヌクレオチド配列を有する部分とが二重鎖を形成している。Ｘ’１とＹ１とは、二重鎖を形成していてもしていなくてもよいが、二重鎖を形成していることが好ましい。Ｘ’３、Ｘ３、Ｌ’及びＸ１は、それぞれ独立して、Ｙ２と二重鎖を形成していてもしていなくてもよいが、二重鎖を形成していることが好ましい。また第二ヌクレオチド配列と第六ヌクレオチド配列とは同じであっても、異なっていてもよい。
第一ヌクレオチド配列がアンチセンス配列であり、第一ヌクレオチド配列部分と第二ヌクレオチド配列部分とが分子内でハイブリダイズし、第四ヌクレオチド配列部分と第六ヌクレオチド配列部分とが分子内でハイブリダイズするＢ－７３）又はＣ－３２）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチドの概念図を図６に示す。図６に示される一本鎖オリゴヌクレオチドでは、２又は３個のＬＮＡからなるＸ’１と、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなり、第四ヌクレオチド配列を有するＸ’２と、２又は３個のＬＮＡからなるＸ’３と、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる３～７個のヌクレオチドからなるＬ’と、２又は３個のＬＮＡからなるＸ１と、８～１０個のデオキシヌクレオチドからなり、第一ヌクレオチド配列を有するＸ２と、２又は３個のＬＮＡからなるＸ３と、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるＬと、２５～３６個のリボヌクレオチドからなり、第二ヌクレオチド配列及び第六ヌクレオチド配列を有するＹ２と、２又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるＹ１と、Ｃ２－２０アルキレン基等であるＢと、機能性分子に由来する基であるＡとが、この順に結合している。Ｘ’１からＹ１への結合方向は、５’から３’方向であっても、３’から５’方向であってもよい。図６では、第一ヌクレオチド配列を有するＸ２と、Ｙ２の第二ヌクレオチド配列を有する部分とが二重鎖を形成し、第四ヌクレオチド配列を有するＸ’２と、Ｙ２の第六ヌクレオチド配列を有する部分とが二重鎖を形成している。Ｘ’１とＹ１とは、二重鎖を形成していてもしていなくてもよいが、二重鎖を形成していることが好ましい。Ｘ’３、Ｘ３、Ｌ’及びＸ１は、それぞれ独立して、Ｙ２と二重鎖を形成していてもしていなくてもよいが、二重鎖を形成していることが好ましい。また第二ヌクレオチド配列と第六ヌクレオチド配列とは同じであっても、異なっていてもよい。
ヌクレオチド配列Ｙがアンチセンス配列を含み、第一ヌクレオチド配列部分と第二ヌクレオチド配列部分とが、分子内でハイブリダイズするＣ－４３）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチドの概念図を図７に示す。図７に示される一本鎖オリゴヌクレオチドでは、２又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから選ばれるヌクレオチドからなるＸ１と、８～１２個のデオキシリボヌクレオチドからなり、第一ヌクレオチド配列を有するＸ２と、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるＬと、１０～１５個のリボヌクレオチドからなり、第二ヌクレオチド配列を有するＹ０と、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡの少なくとも一方を有し、デオキシリボヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから独立して選ばれる１０～２０個のヌクレオチドからなり、アンチセンス配列を有するＹＺとが、この順に結合している。Ｘ１からＹＺへの結合方向は、５’から３’方向であっても、３’から５’方向であってもよい。図７では、第一ヌクレオチド配列を有するＸ２と、第二ヌクレオチド配列を有するＹ０とが二重鎖を形成している。Ｘ１とＹ０とは、二重鎖を形成していてもしていなくてもよいが、二重鎖を形成していることが好ましい。
ヌクレオチド配列Ｙがアンチセンス配列を含み、第一ヌクレオチド配列部分と第二ヌクレオチド配列部分とが、分子内でハイブリダイズするＣ－４４）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチドの概念図を図８に示す。図８に示される一本鎖オリゴヌクレオチドでは、機能性分子に由来する基であるＡと、Ｃ２－２０アルキレン基等であるＢと、２又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから選ばれるヌクレオチドからなるＸ１と、８～１２個のデオキシリボヌクレオチドからなり、第一ヌクレオチド配列を有するＸ２と、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるＬと、１０～１５個のリボヌクレオチドからなり、第二ヌクレオチド配列を有するＹ０と、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡの少なくとも一方を有し、１０～２０個のデオキシリボヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから独立して選ばれるヌクレオチドからなり、アンチセンス配列を有するＹＺとが、この順に結合している。Ｘ１からＹＺへの結合方向は、５’から３’方向であっても、３’から５’方向であってもよい。図８では、第一ヌクレオチド配列を有するＸ２と、Ｙ０の第二ヌクレオチド配列を有する部分とが二重鎖を形成している。Ｘ１とＹ０とは、二重鎖を形成していてもしていなくてもよいが、二重鎖を形成していることが好ましい。
ヌクレオチド配列Ｙがアンチセンス配列を含み、第一ヌクレオチド配列部分と第二ヌクレオチド配列部分とが、分子内でハイブリダイズするＣ－５２）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチドの概念図を図９に示す。第一ヌクレオチド配列は、アンチセンス配列であってもよい。図９に示される一本鎖オリゴヌクレオチドでは、２又は３個のＬＮＡからなるＸ１と、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなり、第一ヌクレオチド配列を有するＸ２と、２又は３個のＬＮＡからなるＸ３と、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるＬと、１２～１６個のリボヌクレオチドからなり、第二ヌクレオチド配列を有するＹ０と、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡの少なくとも一方を有し、デオキシリボヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから独立して選ばれる１０～２０個のヌクレオチドからなり、アンチセンス配列を有するＹＺとが、この順に結合している。Ｘ１からＹＺへの結合方向は、５’から３’方向であっても、３’から５’方向であってもよい。図９では、第一ヌクレオチド配列を有するＸ２と、第二ヌクレオチド配列を有するＹ０とが二重鎖を形成している。Ｘ１及びＸ３は、それぞれ独立して、Ｙ０とは、二重鎖を形成していてもしていなくてもよいが、二重鎖を形成していることが好ましい。
ヌクレオチド配列Ｙがアンチセンス配列を含み、第一ヌクレオチド配列部分と第二ヌクレオチド配列部分とが、分子内でハイブリダイズするＣ－６４）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチドの概念図を図１０に示す。図１０に示される一本鎖オリゴヌクレオチドでは、２又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるＸ４と、１０～１３個のリボヌクレオチドからなり、第七ヌクレオチド配列を有するＸ５と、２又は３個のＬＮＡからなるＸ１と、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなり、第一ヌクレオチド配列を有するＸ２と、２又は３個のＬＮＡからなるＸ３と、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるＬと、１２～１６個のリボヌクレオチドからなり、第二ヌクレオチド配列を有するＹ０と、２又は３個のＬＮＡからなるＹＺ ３と、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなり、Ｙが含むアンチセンス配列部分を有するＹＺ ２と、２又は３個のＬＮＡからなるＹＺ １とが、この順に結合している。Ｘ４からＹＺ １への結合方向は、５’から３’方向であっても、３’から５’方向であってもよい。第一ヌクレオチド配列は、アンチセンス配列であってもよい。図１０では、第一ヌクレオチド配列を有するＸ２と、第二ヌクレオチド配列を有するＹ０とが二重鎖を形成し、Ｙが含むアンチセンス配列部分を有するＹＺ ２と、第七ヌクレオチド配列を有するＸ５とが二重鎖を形成している。Ｘ１及びＸ３は、それぞれ独立して、Ｙ０とは、二重鎖を形成していてもしていなくてもよいが、二重鎖を形成していることが好ましい。Ｘ５とＹＺ ３とは、二重鎖を形成していてもしていなくてもよいが、二重鎖を形成していることが好ましい。Ｘ４とＹＺ １とは、二重鎖を形成していてもしていなくてもよいが、二重鎖を形成していることが好ましい。
ヌクレオチド配列Ｙがアンチセンス配列を含み、第一ヌクレオチド配列部分と第二ヌクレオチド配列部分とが、分子内でハイブリダイズするＣ－６６）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチドの概念図を図１１に示す。図１１に示される一本鎖オリゴヌクレオチドでは、機能性分子に由来する基であるＡと、Ｃ２－２０アルキレン基等であるＢと、２又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるＸ４と、１０～１３個のリボヌクレオチドからなり、第七ヌクレオチド配列を有するＸ５と、２又は３個のＬＮＡからなるＸ１と、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなり、第一ヌクレオチド配列を有するＸ２と、２又は３個のＬＮＡからなるＸ３と、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるＬと、１２～１６個のリボヌクレオチドからなり、第二ヌクレオチド配列を有するＹ０と、２又は３個のＬＮＡからなるＹＺ ３と、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなり、Ｙが含むアンチセンス配列部分を有するＹＺ ２と、２又は３個のＬＮＡからなるＹＺ １とが、この順に結合している。ＡからＹＺ １への結合方向は、５’から３’方向であっても、３’から５’方向であってもよい。第一ヌクレオチド配列は、アンチセンス配列であってもよい。図１１では、第一ヌクレオチド配列を有するＸ２と、第二ヌクレオチド配列を有するＹ０とが二重鎖を形成し、Ｙが含むアンチセンス配列部分を有するＹＺ ２と、第七ヌクレオチド配列を有するＸ５とが二重鎖を形成している。Ｘ１及びＸ３は、それぞれ独立して、Ｙ０とは、二重鎖を形成していてもしていなくてもよいが、二重鎖を形成していることが好ましい。Ｘ５とＹＺ ３とは、二重鎖を形成していてもしていなくてもよいが、二重鎖を形成していることが好ましい。Ｘ４とＹＺ １とは、二重鎖を形成していてもしていなくてもよいが、二重鎖を形成していることが好ましい。
ヌクレオチド配列Ｙがアンチセンス配列を含み、第一ヌクレオチド配列部分と第二ヌクレオチド配列部分とが、分子内でハイブリダイズするＣ－８０）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチドの概念図を図１２に示す。図１２に示される一本鎖オリゴヌクレオチドでは、２又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるＸ４と、１１～１９個のリボヌクレオチドからなり、第七ヌクレオチド配列を有するＸ５と、２又は３個のＬＮＡからなるＸ１と、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなり、第一ヌクレオチド配列を有するＸ２と、２又は３個のＬＮＡからなるＸ３と、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるＬと、１４～２２個のリボヌクレオチドからなり、第二ヌクレオチド配列を有するＹ０と、２又は３個のＬＮＡからなるＹＺ ３と、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなり、Ｙが含むアンチセンス配列部分を有するＹＺ ２と、２又は３個のＬＮＡからなるＹＺ １とが、この順に結合している。Ｘ４からＹＺ １への結合方向は、５’から３’方向であっても、３’から５’方向であってもよい。第一ヌクレオチド配列は、アンチセンス配列であってもよい。図１２では、第一ヌクレオチド配列を有するＸ２と、Ｙ０の第二ヌクレオチド配列を有する部分とが二重鎖を形成し、Ｙが含むアンチセンス配列部分を有するＹＺ ２と、第七ヌクレオチド配列を有するＸ５とが二重鎖を形成し、Ｙ０とＸ５とが部分的に二重鎖を形成している。Ｘ１及びＸ３は、それぞれ独立して、Ｙ０とは、二重鎖を形成していてもしていなくてもよいが、二重鎖を形成していることが好ましい。Ｘ５とＹＺ ３とは、二重鎖を形成していてもしていなくてもよいが、二重鎖を形成していることが好ましい。Ｘ４とＹＺ １とは、二重鎖を形成していてもしていなくてもよいが、二重鎖を形成していることが好ましい。
ヌクレオチド配列Ｙがアンチセンス配列を含み、第一ヌクレオチド配列部分と第二ヌクレオチド配列部分とが、分子内でハイブリダイズするＣ－８２）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチドの概念図を図１３に示す。図１３に示される一本鎖オリゴヌクレオチドでは、機能性分子に由来する基であるＡと、Ｃ２－２０アルキレン基等であるＢと、２又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるＸ４と、１１～１９個のリボヌクレオチドからなり、第七ヌクレオチド配列を有するＸ５と、２又は３個のＬＮＡからなるＸ１と、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなり、第一ヌクレオチド配列を有するＸ２と、２又は３個のＬＮＡからなるＸ３と、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるＬと、１４～２２個のリボヌクレオチドからなり、第二ヌクレオチド配列を有するＹ０と、２又は３個のＬＮＡからなるＹＺ ３と、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなり、Ｙが含むアンチセンス配列部分を有するＹＺ ２と、２又は３個のＬＮＡからなるＹＺ １とが、この順に結合している。ＡからＹＺ １への結合方向は、５’から３’方向であっても、３’から５’方向であってもよい。第一ヌクレオチド配列は、アンチセンス配列であってもよい。図１３では、第一ヌクレオチド配列を有するＸ２と、Ｙ０の第二ヌクレオチド配列を有する部分とが二重鎖を形成し、Ｙが含むアンチセンス配列部分を有するＹＺ ２と、第七ヌクレオチド配列を有するＸ５とが二重鎖を形成し、Ｙ０とＸ５とが部分的に二重鎖を形成している。Ｘ１及びＸ３は、それぞれ独立して、Ｙ０とは、二重鎖を形成していてもしていなくてもよいが、二重鎖を形成していることが好ましい。Ｘ５とＹＺ ３とは、二重鎖を形成していてもしていなくてもよいが、二重鎖を形成していることが好ましい。Ｘ４とＹＺ １とは、二重鎖を形成していてもしていなくてもよいが、二重鎖を形成していることが好ましい。
ヌクレオチド配列Ｘがアンチセンス配列を含み、第一ヌクレオチド配列部分と第二ヌクレオチド配列部分とで分子内でハイブリダイズするＣ－９８）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチドの概念図を図１４に示す。図１４に示される一本鎖オリゴヌクレオチドでは、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡの少なくとも一方を有し、１０～２０個のデオキシリボヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから独立して選ばれるヌクレオチドからなり、アンチセンス配列を有するＸＺと、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる２～５個のヌクレオチドからなるＸ０と、８～１７個のデオキシリボヌクレオチドからなり、第一ヌクレオチド配列を有するＸ２と、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるＬと、８～１９個のリボヌクレオチドからなり、第二ヌクレオチド配列を有するＹ２と、２個又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるＹ１とが、この順に結合している。ＸＺからＹ１への結合方向は、５’から３’方向であっても、３’から５’方向であってもよい。図１４では、第一ヌクレオチド配列を有するＸ２と、第二ヌクレオチド配列を有するＹ２とが二重鎖を形成している。Ｘ０とＹ１とは、二重鎖を形成していてもしていなくてもよいが、二重鎖を形成していることが好ましい。
ヌクレオチド配列Ｘがアンチセンス配列を含み、第一ヌクレオチド配列部分と第二ヌクレオチド配列部分とで分子内でハイブリダイズするＣ－９９）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチドの概念図を図１５に示す。図１５に示される一本鎖オリゴヌクレオチドでは、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡの少なくとも一方を有し、１０～２０個のデオキシリボヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから独立して選ばれるヌクレオチドからなり、アンチセンス配列を有するＸＺと、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる２～５個のヌクレオチドからなるＸ０と、８～１７個のデオキシリボヌクレオチドからなり、第一ヌクレオチド配列を有するＸ２と、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドから独立して選ばれる４～７個のヌクレオチドからなるＬと、８～１９個のリボヌクレオチドからなり、第二ヌクレオチド配列を有するＹ２と、２個又は３個の２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドからなるＹ１と、Ｃ２－２０アルキレン基等であるＢと、機能性分子に由来する基であるＡとが、この順に結合している。ＸＺからＡへの結合方向は、５’から３’方向であっても、３’から５’方向であってもよい。図１５では、第一ヌクレオチド配列を有するＸ２と、第二ヌクレオチド配列を有するＹ２とが二重鎖を形成している。Ｘ０とＹ１とは、二重鎖を形成していてもしていなくてもよいが、二重鎖を形成していることが好ましい。
本発明の一本鎖オリゴヌクレオチドを使用する好ましい方法としては以下に示すものが挙げられる。
Ｅ－１） １）から１６７）及びＣ－１）からＣ－１３２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチドと細胞を接触させる工程を含む、標的ＲＮＡの機能を制御する方法。
Ｅ－２） １）から１６７）及びＣ－１）からＣ－１３２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物を、哺乳動物に投与する工程を含む、該哺乳動物おける標的ＲＮＡの機能を制御する方法。
Ｅ－３） 哺乳動物がヒトである、Ｅ－２）に記載の方法。
Ｅ－４） 投与経路が経腸管的である、Ｅ－２）又はＥ－３）に記載の方法。
Ｅ－５） 投与経路が非経腸管的である、Ｅ－２）又はＥ－３）に記載の方法。
Ｅ－６） 哺乳動物において、標的ＲＮＡの機能を制御するための、１）から１６７）及びＣ－１）からＣ－１３２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチドの使用。
Ｅ－７） 哺乳動物において、標的ＲＮＡの機能を制御するための薬剤を製造するための、１）から１６７）及びＣ－１）からＣ－１３２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチドの使用。
Ｅ－８） 哺乳動物がヒトである、Ｅ－６）又はＥ－７）に記載の使用。
Ｅ－９） Ｂ－１）からＢ－８２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチドと細胞を接触させる工程を含む、標的ＲＮＡの機能を制御する方法。
Ｅ－１０） Ｂ－１）からＢ－８２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物を、哺乳動物に投与する工程を含む、該哺乳動物おける標的ＲＮＡの機能の発現を低減する方法。
Ｅ－１１） 哺乳動物がヒトである、Ｅ－１０）に記載の方法。
Ｅ－１２） 投与経路が経腸管的である、Ｅ－１０）又はＥ－１１）に記載の方法。
Ｅ－１３） 投与経路が非経腸管的である、Ｅ－１０）又はＥ－１１）に記載の方法。
Ｅ－１４） 哺乳動物において、標的ＲＮＡの機能を制御するための、Ｂ－１）からＢ－８２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチドの使用。
Ｅ－１５） 哺乳動物において、標的ＲＮＡの機能を制御するための薬剤を製造するための、Ｂ－１）からＢ－８２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチドの使用。
Ｅ－１６） 哺乳動物がヒトである、Ｅ－１４）又はＥ－１５）に記載の使用。
本発明における標的ＲＮＡの機能の制御は、アンチセンス配列部分がハイブリダイゼーションにより標的ＲＮＡの一部を被覆することによって生じる、翻訳の阻害又はエキソンスキッピング等のスプライシング機能が調節若しくは変換されること、又は、アンチセンス配列部分と標的ＲＮＡの一部とがハイブリダイズした部分が認識されることにより生じ得る前記標的ＲＮＡの分解によって、標的ＲＮＡの機能が抑制されること等を意味する。
Ｅ－１７） １）から１６７）及びＣ－１）からＣ－１３２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチドと細胞を接触させる工程を含む、標的遺伝子の発現を制御する方法。
Ｅ－１８） １）から１６７）及びＣ－１）からＣ－１３２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物を、哺乳動物に投与する工程を含む、該哺乳動物おける標的遺伝子の発現を制御する方法。
Ｅ－１９） 哺乳動物がヒトである、Ｅ－１８）に記載の方法。
Ｅ－２０） 投与経路が経腸管的である、Ｅ－１８）又はＥ－１９）に記載の方法。
Ｅ－２１） 投与経路が非経腸管的である、Ｅ－１８）又はＥ－１９）に記載の方法。
Ｅ－２２） 哺乳動物において、標的遺伝子の発現を制御するための、１）から１６７）及びＣ－１）からＣ－１１７）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチドの使用。
Ｅ－２３） 哺乳動物において、標的遺伝子の発現を制御するための薬剤を製造するための、１）から１６７）及びＣ－１）からＣ－１３２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチドの使用。
Ｅ－２４） 哺乳動物がヒトである、Ｅ－２２）又はＥ－２３）に記載の使用。
Ｅ－２５） Ｂ－１）からＢ－８２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチドと細胞を接触させる工程を含む、標的遺伝子の発現を制御する方法。
Ｅ－２６） Ｂ－１）からＢ－８２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物を、哺乳動物に投与する工程を含む、該哺乳動物おける標的遺伝子の発現を制御する方法。
Ｅ－２７） 哺乳動物がヒトである、Ｅ－２６）に記載の方法。
Ｅ－２８） 投与経路が経腸管的である、Ｅ－２６）又はＥ－２７）に記載の方法。
Ｅ－２９） 投与経路が非経腸管的である、Ｅ－２６）又はＥ－２７）に記載の方法。
Ｅ－３０） 哺乳動物において、標的遺伝子の発現を制御するための、Ｂ－１）からＢ－８２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチドの使用。
Ｅ－３１） 哺乳動物において、標的遺伝子の発現を制御するための薬剤を製造するための、Ｂ－１）からＢ－８２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチドの使用。
Ｅ－３２） 哺乳動物がヒトである、Ｅ－３０）又はＥ－３１）に記載の使用。
以上、一本鎖オリゴヌクレオチドの好適な態様について説明したが、本発明の一本鎖オリゴヌクレオチドは上記態様に限定されるものではない。一本鎖オリゴヌクレオチドは、例えばそれに含まれる、環内、環外を問わずそれらの互変異性、幾何異性を経由して存在することに加えて、その混合物或いはそれぞれの異性体の混合物として存在するものも含む。又、不斉中心が存在する場合、或いは異性化の結果、不斉中心が生じる場合はそれぞれの光学異性体及び任意の比率の混合物として存在するものも含む。また、不斉中心を２個以上持つ化合物の場合には、さらにそれぞれの光学異性によるジアステレオマーも存在する。本発明は、これらすべての型を、任意の割合で含んだものも含む。
本発明には、式（Ｉ）で表される一本鎖オリゴヌクレオチドの医薬的に許容され得る塩も含む。
式（Ｉ）で表される一本鎖オリゴヌクレオチドは、必要に応じて医薬的に許容され得る塩に変換することも、又は生成した塩から遊離させることもできる。式（Ｉ）で表される一本鎖オリゴヌクレオチドの医薬的に許容され得る塩としては、例えば、アルカリ金属（リチウム、ナトリウム、カリウムなど）、アルカリ土類金属（マグネシウム、カルシウムなど）、アンモニウム、有機塩基（トリエチルアミン、トリメチルアミンなど）、アミノ酸（グリシン、リシン、グルタミン酸など）、無機酸（塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸など）又は有機酸（酢酸、クエン酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、ベンゼンスルホン酸、メタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸など）との塩が挙げられる。
特に、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）－で表される部分構造が、－Ｐ（＝Ｏ）（Ｏ－）－で表されるアニオン性の部分構造へ変換されて、アルカリ金属（リチウム、ナトリウム、カリウムなど）、アルカリ土類金属（マグネシウム、カルシウムなど）又はアンモニウム等と塩を形成してもよい。また、ホスホロチオエート結合を形成する、－Ｐ（＝Ｏ）（ＳＨ）－で表される部分構造が、－Ｐ（＝Ｏ）（Ｓ－）－で表されるアニオン性の部分構造へ変換されて、同様に、アルカリ金属、アルカリ土類金属又はアンモニウム等と塩を形成してもよい。
本発明には、式（Ｉ）で表される一本鎖オリゴヌクレオチドのプロドラッグも含む。
プロドラッグとは、化学的又は代謝的に分解できる基を有する医薬品化合物の誘導体であり、加溶媒分解により又は生理的条件下のインビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）において分解され薬理学的に活性な医薬品化合物へと誘導される化合物である。適当なプロドラッグ誘導体を選択する方法及び製造する方法は、例えば デザイン オブ プロドラッグス（エルゼビア、アムステルダム １９８５）（Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ （Ｅｌｓｅｖｉｅｒ， Ａｍｓｔｅｒｄａｍ １９８５））に記載されている。本発明の場合、水酸基を有する場合は、その化合物と適当なアシルハライド、適当な酸無水物又は適当なハロゲン化アルキルオキシカルボニル化合物とを反応させることによって製造されるアシルオキシ誘導体のようなプロドラッグが例示される。プロドラッグとして特に好ましい構造としては－Ｏ－ＣＯＣ２Ｈ５、－Ｏ－ＣＯ（ｔ－Ｂｕ）、－Ｏ－ＣＯＣ１５Ｈ３１、－Ｏ－ＣＯ(ｍ－ＣＯ２Ｎａ－Ｐｈ)、－Ｏ－ＣＯＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｎａ－ＯＣＯＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ３、－Ｏ－ＣＯＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２又は－Ｏ－ＣＨ２ＯＣ(＝Ｏ)ＣＨ３などがあげられる。本発明を形成する一本鎖オリゴヌクレオチドがアミノ基を有する場合は、アミノ基を有する化合物と適当な酸ハロゲン化物、適当な混合酸無水物又は適当なハロゲン化アルキルオキシカルボニル化合物とを反応させることにより製造されるプロドラッグが例示される。プロドラッグとして特に好ましい構造としては、－ＮＨ－ＣＯ(ＣＨ２)２０ＯＣＨ３、－ＮＨ－ＣＯＣＨ(ＮＨ２)ＣＨ３、－ＮＨ－ＣＨ２ＯＣ(＝Ｏ)ＣＨ３等があげられる。
本発明の式（Ｉ）で示される一本鎖オリゴヌクレオチド又はその医薬的に許容される塩は、製造条件により任意の結晶形として存在することができ、任意の水和物として存在することができるが、これら結晶形や水和物及びそれらの混合物も本発明の範囲に含有される。またアセトン、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノールなどの有機溶媒を含む溶媒和物として存在することもあるが、これらの形態はいずれも本発明の範囲に含有される。
一本鎖オリゴヌクレオチドは、当業者であれば公知の方法を適宜選択することにより調製することができる。例えば、当業者は、標的ＲＮＡのヌクレオチド配列の情報に基づいて、一本鎖オリゴヌクレオチドのヌクレオチド配列を設計し、市販の核酸自動合成機（アプライドバイオシステムズ社製、ベックマン社製、ジーンデザイン社等）を用いて合成することができる。また、酵素を用いた反応によって合成することもできる。前記酵素としては、ポリメラ―ゼ、ライゲース及び制限酵素等が挙げられるが、これらに限定されない。すなわち、本実施形態に係る一本鎖オリゴヌクレオチドの製造方法は、Ｘ、Ｌ及びＹの少なくとも１つを含むオリゴヌクレオチドの３’末端又は５’末端でヌクレオチド鎖を伸長する工程を含むことができる。
機能性分子と該オリゴヌクレオチドとを結合させるための多くの方法は、当該分野においてよく知られており、例えば、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・ファーマシューティカルズ・アンド・バイオファーマシューティクス、１０７巻、３２１～３４０頁（２０１６年）、アドバンスト・ドラッグ・デリバリー・レビューズ、１０４巻、７８～９２頁（２０１６年）、エキスパート・オピニオン・オン・ドラッグ・デリバリー、１１巻、７９１～８２２頁（２０１４年）等を参照できる。例えば、機能性分子とリンカーとを公知の方法により結合させた後に、それをアミダイト化試薬によりアミダイト体へ、又はＨ－ホスホネート試薬によりＨ－ホスホネート体へと誘導し、オリゴヌクレオチドと結合させることができる。
得られるオリゴヌクレオチドを逆相カラムクロマトグラフィー等により精製することにより、一本鎖オリゴヌクレオチドを調製することができる。そして、調製された一本鎖オリゴヌクレオチドを適当な緩衝液中にて混合し、９０～９８℃にて数分間（例えば、５分間）かけて変性させた後、３０～７０℃にて１～８時間かけてハイブリダイズさせることにより、分子内でハイブリダイズした一本鎖オリゴヌクレオチドを調製することができる。当該分子内でハイブリダイズさせる工程を省略することができる場合がある。
一本鎖オリゴヌクレオチドは、標的遺伝子の発現を効果的に制御することができる。従って、一本鎖オリゴヌクレオチドを有効成分として含有する、例えば、標的遺伝子の発現をアンチセンス効果によって制御するための組成物を、本発明は提供することができる。特に、一本鎖オリゴヌクレオチドは、低濃度の投与により高い薬効を得ることができ、代謝性疾患、腫瘍、感染症といった標的遺伝子の発現亢進に伴う疾患を治療、予防、改善するための医薬組成物も、いくつかの実施形態において提供することができる。
一本鎖オリゴヌクレオチドを含む組成物は、公知の製剤学的方法により製剤化することができる。例えば、カプセル剤、錠剤、丸剤、液剤、散剤、顆粒剤、細粒剤、フィルムコーティング剤、ペレット剤、トローチ剤、舌下剤、咀嚼剤、バッカル剤、ペースト剤、シロップ剤、懸濁剤、エリキシル剤、乳剤、塗布剤、軟膏剤、硬膏剤、パップ剤、経皮吸収型製剤、ローション剤、吸引剤、エアゾール剤、注射剤、坐剤等として、経腸管的（経口的等）又は非経腸管的に使用することができる。
これら製剤化においては、薬理学上もしくは飲食品として許容される担体、具体的には、滅菌水や生理食塩水、植物油、溶剤、基剤、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、ｐＨ調節剤、安定剤、香味剤、芳香剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、結合剤、希釈剤、等張化剤、無痛化剤、増量剤、崩壊剤、緩衝剤、コーティング剤、滑沢剤、着色剤、甘味剤、粘稠剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤あるいはその他の添加剤等と適宜組み合わせることができる。
一本鎖オリゴヌクレオチドを含む組成物の投与形態としては特に制限はないが、経腸管的（経口的等）又は非経腸管的投与が挙げられる。より好ましくは、静脈内投与、動脈内投与、腹腔内投与、皮下投与、皮内投与、気道内投与、直腸投与、筋肉内投与、輸液による投与、髄腔内投与、脳室内投与、経鼻投与及び硝子体内投与等が挙げられる。
一本鎖オリゴヌクレオチドを利用した核酸医薬品が治療、予防、改善できる疾患は、特に制限されず、例えば、代謝性疾患、循環器疾患、腫瘍、感染症、眼疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、遺伝性希少疾患等、遺伝子の発現が原因となる疾患等が挙げられる。より具体的には、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、脊髄性筋委縮症、筋ジストロフィー（デュシェンヌ型筋ジストロフィー、筋強直性ジストロフィー、先天性筋ジストロフィー（福山型先天性筋ジストロフィー、ウールリッヒ型先天性筋ジストロフィー、メロシン欠損型先天性筋ジストロフィー、インテグリン欠損症、ウォーカーワールブルグ症候群等）、ベッカー型筋ジストロフィー、肢帯型筋ジストロフィー、三好型筋ジストロフィー、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー等）、ハンチントン病、アルツハイマー症、トランスサイレイチン型アミロイドーシス、家族性アミロイド性心筋症、多発性硬化症、クローン病、炎症性大腸疾患、先端巨大症、２型糖尿病、慢性腎症、ＲＳウイルス感染症、エボラ出血熱、マールブルグ熱、ＨＩＶ、インフルエンザ、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、肝硬変、慢性心不全、心筋線維化、心房細動、前立腺がん、メラノーマ、乳がん、膵臓癌、大腸癌、腎細胞癌、胆管癌、子宮頸癌、肝癌、肺癌、白血病、非ホジキンリンパ腫、アトピー性皮膚炎、緑内障、加齢性黄斑変性症等が挙げられる。前記疾患の種類に応じて、その疾患の原因となる遺伝子を前記標的遺伝子に設定し、さらに、前記標的遺伝子の配列に応じて、前記発現制御配列（例えば、アンチセンス配列）を適宜設定することができる。
ヒトなどの霊長類に加えて、様々な他の哺乳類の疾患を、一本鎖オリゴヌクレオチドを含む組成物により治療、予防、改善することができる。例えば、それだけに限らないが、ウシ（ｃｏｗ）、ヒツジ（ｓｈｅｅｐ）、ヤギ、ウマ（ｈｏｒｓｅ）、イヌ（ｄｏｇ）、ネコ（ｃａｔ）、テンジクネズミ、又は他のウシ（ｂｏｖｉｎｅ）、ヒツジ（ｏｖｉｎｅ）、ウマ（ｅｑｕｉｎｅ）、イヌ（ｃａｎｉｎｅ）、ネコ（ｆｅｌｉｎｅ）、マウスなどの齧歯類の種を含めた哺乳類の種の疾患を治療することができる。また、一本鎖オリゴヌクレオチドを含む組成物は、鳥類（例えば、ニワトリ）などの他の種においても適用することができる。
一本鎖オリゴヌクレオチドを含む組成物を、ヒトを含む動物に投与又は摂取する場合、その投与量又は摂取量は、対象の年齢、体重、症状、健康状態、組成物の種類（医薬品、飲食品など）等に応じて、適宜選択されるが、その投与量又は摂取量は、一本鎖オリゴヌクレオチド換算で０．０００１ｍｇ／ｋｇ／日～１００ｍｇ／ｋｇ／日であることが好ましい。
一本鎖オリゴヌクレオチドは、標的遺伝子の発現を非常に効果的に制御することができる。従って、ヒトを含む動物に一本鎖オリゴヌクレオチドを投与し、標的遺伝子の発現をアンチセンス効果によって制御する方法を提供することができる。また、一本鎖オリゴヌクレオチドを含む組成物を、ヒトを含む動物に投与することを含む、標的遺伝子の発現亢進等を伴う各種疾患を治療、予防、改善するための方法をも提供することができる。
以下、実施例及び比較例に基づいて本発明をより具体的に説明するが、実施形態は以下の実施例に限定されるものではない。
（実施例１から４、比較例１から５）
表１に記載されたオリゴヌクレオチドを、核酸自動合成機ｎＳ－８II（ジーンデザイン社製）を使用して調製した。標的遺伝子は、マウスＰｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ａｎｄ Ｔｅｎｓｉｎ Ｈｏｍｏｌｏｇ Ｄｅｌｅｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ １０（ＰＴＥＮ）である。なお、表１中の配列表記において、「（Ｌ）」はＬＮＡを意味し、「（Ｍ）」は２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチドを意味し、小文字のアルファベットはデオキシリボヌクレオチドを意味し、大文字のアルファベット（前記（Ｌ）及び（Ｍ）付のアルファベットは除く）はリボヌクレオチドを意味し、「＾」はホスホロチオエート結合を意味し、「５」は、そのヌクレオチドの塩基が５－メチルシトシンであることを意味し、「Ｃ８Ｔｏｃ－」は、５’末端のリン酸基の１つの酸素原子に、１，８－オクチレン基を介して、下記式（IV）で表されるトコフェロールのヒドロキシ基から水素原子を取り除いた部分が結合していることを意味する。また、表１に記載されたオリゴヌクレオチドの３’末端は、ヒドロキシ基であり、５’末端は、ヒドロキシ基である。
Figure 2022050389000005
Figure 2022050389000006
実施例１～４における分子内ハイブリダイゼーション及び、比較例１～３における２つのオリゴヌクレオチドの分子間ハイブリダイゼーションは、９５℃にて５分間加熱した後、３７℃にて１時間、定温にて放置することで行った。ハイブリダイゼーションの確認は、非変性ポリアクリドアミドゲル電気泳動により確認した。
［評価例１］
マウス脳内皮細胞株ｂ．ＥＮＤの細胞を２０００細胞／ウェルとなるように９６ウェルプレートに播き、５％ＣＯ２下３７℃にて２４時間培養した。表１の各オリゴヌクレオチドを、その最終濃度が１ｎＭ又は１０ｎＭとなるようにＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標） ＲＮＡｉＭａｘ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて各ウェルに添加した（トランスフェクション）。４時間後に培地を交換し、さらに２０時間後に細胞を回収し、細胞からＲＮｅａｓｙ ｍｉｎｉ ｋｉｔ （ＱＩＡＧＥＮ社製）を用いてＴｏｔａｌ ＲＮＡを抽出した。
Ｔｏｔａｌ ＲＮＡからＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（タカラバイオ株式会社製）を用いてｃＤＮＡを得た。得られたｃＤＮＡ及びＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ＩＤ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用いて７５００ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）によりリアルタイムＰＣＲを行い、ＰＴＥＮのｍＲＮＡ量を定量した。リアルタイムＰＣＲでは、ハウスキーピング遺伝子のｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎのｍＲＮＡ量も同時に定量し、ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎのｍＲＮＡ量に対するＰＴＥＮのｍＲＮＡ量をＰＴＥＮ発現レベルとして評価した。トランスフェクション操作を行わなかった細胞をコントロールとして用いた。結果を図１６に示す。
なお、用いたプライマーは、ＴａｑＭａｎ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）であり、Ａｓｓａｙ ＩＤは、以下のとおりであった：
マウスＰＴＥＮ定量用： Ｍｍ００４７７２０８＿ｍ１
マウスｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ定量用：Ｍｍ０２３４２３０＿ｇ１
図１６から明らかなように、本発明に係る一本鎖オリゴヌクレオチド（実施例１～４）はＨＤＯ（比較例１～３）及びＡＳＯ（比較例４、５）に比較して、高いアンチセンス効果を示すことが確認された。
（実施例５及び６、比較例４、６及び７）
表２に記載されたオリゴヌクレオチドを、核酸自動合成機ｎＳ－８II（ジーンデザイン社製）を使用して調製した。標的遺伝子は、ヒトＰｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ａｎｄ Ｔｅｎｓｉｎ Ｈｏｍｏｌｏｇ Ｄｅｌｅｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ １０（ＰＴＥＮ）及びヒトａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｂ（ＡｐｏＢ）である。なお、表２中の配列表記は、表１と同じである。
Figure 2022050389000007
実施例５～６における分子内ハイブリダイゼーション及び、比較例６における２つのオリゴヌクレオチドの分子間ハイブリダイゼーションは、９５℃にて５分間加熱した後、３７℃にて１時間、定温にて放置することで行った。ハイブリダイゼーションの確認は、非変性ポリアクリドアミドゲル電気泳動により確認した。
［評価例２］
ヒト肝癌由来細胞株ＨｕＨ－７の細胞を３０００細胞／ウェルとなるように９６ウェルプレートに播き、５％ＣＯ２下３７℃にて２４時間培養した。表２の各オリゴヌクレオチドを、その最終濃度が設定の濃度となるようにＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標） ＲＮＡｉＭａｘ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて各ウェルに添加した（トランスフェクション）。４時間後に培地を交換し、さらに２０時間後に細胞を回収し、細胞からＲＮｅａｓｙ ｍｉｎｉ ｋｉｔ （ＱＩＡＧＥＮ社製）を用いてＴｏｔａｌ ＲＮＡを抽出した。
Ｔｏｔａｌ ＲＮＡからＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（タカラバイオ株式会社製）を用いてｃＤＮＡを得た。得られたｃＤＮＡ及びＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ＩＤ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用いて７５００ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）によりリアルタイムＰＣＲを行い、ＰＴＥＮ及びＡｐｏＢのｍＲＮＡ量を定量した。リアルタイムＰＣＲでは、ハウスキーピング遺伝子のＧＡＰＤＨ（Ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ－３－Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）のｍＲＮＡ量も同時に定量し、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ量に対するＰＴＥＮ及びＡｐｏＢのｍＲＮＡ量を、それぞれＰＴＥＮ及びＡｐｏＢの発現レベルとして評価した。トランスフェクション操作を行わなかった細胞をコントロールとして用いた。結果を図１７及び図１８に示す。
なお、用いたプライマーは、ＴａｑＭａｎ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）であり、Ａｓｓａｙ ＩＤは、以下のとおりであった：
ヒトＰＴＥＮ定量用： Ｈｓ０２６２１２３０
ヒトＡｐｏＢ定量用： Ｈｓ００１８１１４２
ヒトＧＡＰＤＨ定量用： Ｈｓ９９９９９９０５＿ｍ１
図１７及び図１８から明らかなように、本発明に係る一本鎖オリゴヌクレオチド（実施例５～６）はＨＤＯ（比較例６）及びＡＳＯ（比較例４、７）に比較して、高いアンチセンス効果を示すことが確認された。
（実施例２及び７、比較例１及び４）
表３に記載されたオリゴヌクレオチドを、核酸自動合成機ｎＳ－８II（ジーンデザイン社製）を使用して調製した。標的遺伝子は、マウスＰｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ａｎｄ Ｔｅｎｓｉｎ Ｈｏｍｏｌｏｇ Ｄｅｌｅｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ １０（ＰＴＥＮ）である。なお、表３中の配列表記は、表１と同じである。
Figure 2022050389000008
実施例２及び７における分子内ハイブリダイゼーション及び、比較例１における２つのオリゴヌクレオチドの分子間ハイブリダイゼーションは、９５℃にて５分間加熱した後、３７℃にて１時間、定温にて放置することで行った。ハイブリダイゼーションの確認は、非変性ポリアクリドアミドゲル電気泳動により確認した。
［評価例３］
評価例１と同じ評価方法を用いて、表３の各オリゴヌクレオチドの最終濃度が設定の濃度となるようにし、ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎのｍＲＮＡ量に対するＰＴＥＮのｍＲＮＡ量をＰＴＥＮ発現レベルとして評価した。結果を図１９に示す。
図１９から明らかなように、本発明に係る一本鎖オリゴヌクレオチド（実施例７）はＨＤＯ（比較例１）及びＡＳＯ（比較例４）に比較して、高いアンチセンス効果を示すことが確認された。
（実施例５、６、８及び９、比較例６）
表４に記載されたオリゴヌクレオチドを、核酸自動合成機ｎＳ－８II（ジーンデザイン社製）を使用して調製した。標的遺伝子は、ヒトＰｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ａｎｄ Ｔｅｎｓｉｎ Ｈｏｍｏｌｏｇ Ｄｅｌｅｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ １０（ＰＴＥＮ）及びヒトａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｂ（ＡｐｏＢ）である。なお、表４中の配列表記は、表１と同じである。
Figure 2022050389000009
実施例５、６、８及び９における分子内ハイブリダイゼーション及び、比較例６における２つのオリゴヌクレオチドの分子間ハイブリダイゼーションは、９５℃にて５分間加熱した後、３７℃にて１時間、定温にて放置することで行った。ハイブリダイゼーションの確認は、非変性ポリアクリドアミドゲル電気泳動により確認した。
［評価例４］
評価例２と同じ評価方法を用いて、表４の各オリゴヌクレオチドの最終濃度が１ｎＭ又は１０ｎＭとなるようにし、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ量に対するＰＴＥＮ及びＡｐｏＢのｍＲＮＡ量を、それぞれＰＴＥＮ及びＡｐｏＢの発現レベルとして評価した。トランスフェクション操作を行わなかった細胞をコントロールとして用いた。結果を図２０及び図２１に示す。
図２０及び図２１から明らかなように、本発明に係る一本鎖オリゴヌクレオチド（実施例５、６、８及び９）はＨＤＯ（比較例６）に比較して、高いアンチセンス効果を示すことが確認された。
（実施例１０及び１１、比較例４、８及び９）
表５に記載されたオリゴヌクレオチドを、核酸自動合成機ｎＳ－８II（ジーンデザイン社製）を使用して調製した。標的遺伝子は、マウスＰｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ａｎｄ Ｔｅｎｓｉｎ Ｈｏｍｏｌｏｇ Ｄｅｌｅｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ １０（ＰＴＥＮ）である。なお、表５中の配列表記は、表１と同じである。
Figure 2022050389000010
実施例１０及び１１における分子内ハイブリダイゼーション及び、比較例８，９における２つのオリゴヌクレオチドの分子間ハイブリダイゼーションは、９５℃にて５分間加熱した後、３７℃にて１時間、定温にて放置することで行った。ハイブリダイゼーションの確認は、非変性ポリアクリドアミドゲル電気泳動により確認した。
［評価例５］
評価例１と同じ評価方法を用いて、表５の各オリゴヌクレオチドの最終濃度が設定の１ｎＭ又は１０ｎＭとなるようにし、ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎのｍＲＮＡ量に対するＰＴＥＮのｍＲＮＡ量をＰＴＥＮ発現レベルとして評価した。結果を図２２に示す。
図２２から明らかなように、本発明に係る一本鎖オリゴヌクレオチド（実施例１０及び１１）はＨＣＤＯ（比較例８，９）と同程度のアンチセンス効果を示し、ＡＳＯ（比較例４、７）に比較して、高いアンチセンス効果を示すことが確認された。
［評価例６］
実施例４及び実施例１０における、前記分子内ハイブリダイゼーション処理前後の非変性ポリアクリドアミドゲル電気泳動結果を図２３及び図２４に示す。一本鎖ＤＮＡのサイズマーカーとして、ジーンデザイン社製電気泳動用一本鎖ＤＮＡサイズマーカーを用いた。これは、ヌクレオチド数が１５、２０、３０、４０、５０、６０及び８０の一本鎖のＤＮＡを含む。二本鎖ＲＮＡのサイズマーカーとして、ジーンデザイン社製電気泳動用２本鎖ＲＮＡサイズマーカー用いた。これは、塩基対の数が１７、２１、２５及び２９の二本鎖のＲＮＡを含む。なお、図２３及び図２４中、「Ｌａｎｅ Ｎｏ．」は前記電気泳動試験におけるレーン番号を、「Ｅｘａｍｐｌｅ Ｎｏ．」は実施例番号を、「ｂｅｆｏｒｅ」は上記ハイブリダイゼーション処理前を、「ａｆｔｅｒ」は上記ハイブリダイゼーション処理後を、「ｓｓ－ＤＮＡ ｓｉｚｅ ｍａｒｋｅｒ」は、一本鎖ＤＮＡのサイズマーカーを、「ｄｓ－ＲＮＡ ｓｉｚｅ ｍａｒｋｅｒ」は、二本鎖ＲＮＡのサイズマーカーを、「ｍｅｒ」は塩基数を、「ｂｐ」は塩基対の数を意味する。
図２３及び図２４から明らかなように、本発明に係る一本鎖オリゴヌクレオチドは、特別なハイブリダイゼーション工程を経ることなく、分子内ハイブリダイゼーションの構造をとることが確認された。
（実施例５及び１２、比較例１０）
表６に記載されたオリゴヌクレオチドを、核酸自動合成機ｎＳ－８II（ジーンデザイン社製）を使用して調製した。標的遺伝子は、ヒトＰｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ａｎｄ Ｔｅｎｓｉｎ Ｈｏｍｏｌｏｇ Ｄｅｌｅｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ １０（ＰＴＥＮ）及びヒトａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｂ（ＡｐｏＢ）である。なお、表６中の配列表記は、表１と同じである。
Figure 2022050389000011
実施例５及び１２における分子内ハイブリダイゼーション及び、比較例１０における２つのオリゴヌクレオチドの分子間ハイブリダイゼーションは、９５℃にて５分間加熱した後、３７℃にて１時間、定温にて放置することで行った。ハイブリダイゼーションの確認は、非変性ポリアクリドアミドゲル電気泳動により確認した。
［評価例７］
評価例２と同じ評価方法を用いて、表６の各オリゴヌクレオチドの最終濃度が１ｎＭ又は１０ｎＭとなるようにし、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ量に対するＰＴＥＮ及びＡｐｏＢのｍＲＮＡ量を、それぞれＰＴＥＮ及びＡｐｏＢの発現レベルとして評価した。トランスフェクション操作を行わなかった細胞をコントロールとして用いた。結果を図２５及び図２６に示す。
図２５及び図２６から明らかなように、本発明に係る一本鎖オリゴヌクレオチド（実施例５及び１２）はＨＤＯ（比較例１０）に比較して、高いアンチセンス効果を示すことが確認された。
（実施例１３及び１４、比較例６）
表７に記載されたオリゴヌクレオチドを、核酸自動合成機ｎＳ－８II（ジーンデザイン社製）を使用して調製した。標的遺伝子は、ヒトＰｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ａｎｄ Ｔｅｎｓｉｎ Ｈｏｍｏｌｏｇ Ｄｅｌｅｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ １０（ＰＴＥＮ）である。なお、表７中の配列表記は、表１と同じである。
Figure 2022050389000012
実施例１３及び１４における分子内ハイブリダイゼーション及び、比較例６における２つのオリゴヌクレオチドの分子間ハイブリダイゼーションは、９５℃にて５分間加熱した後、３７℃にて１時間、定温にて放置することで行った。ハイブリダイゼーションの確認は、非変性ポリアクリドアミドゲル電気泳動により確認した。
［評価例８］
評価例２と同じ評価方法を用いて、表６の各オリゴヌクレオチドの最終濃度が１ｎＭ又は１０ｎＭとなるようにし、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ量に対するＰＴＥＮのｍＲＮＡ量を、ＰＴＥＮの発現レベルとして評価した。トランスフェクション操作を行わなかった細胞をコントロールとして用いた。結果を図２７に示す。
図２７から明らかなように、本発明に係る一本鎖オリゴヌクレオチド（実施例１３及び１４）はＨＤＯ（比較例６）と同程度のアンチセンス効果を示すことが確認された。
（実施例１５、比較例１１）
表８に記載されたオリゴヌクレオチドを、核酸自動合成機ｎＳ－８II（ジーンデザイン社製）を使用して調製した。標的遺伝子は、マウスａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｂ（ＡｐｏＢ）である。表８中の配列表記の、「Ｔｏｃ－ＴＥＧ-」は、５’末端のリン酸基の１つの酸素原子に、下記式（III－２）
Figure 2022050389000013
（式中、＊は、第二オリゴヌクレオチドとの結合位置を表し、＊＊は、トコフェロールとの結合位置を表す。）で表される基を介して、下記式（IV）で表されるトコフェロールのヒドロキシ基から水素原子を取り除いた部分が結合していることを意味する。
Figure 2022050389000014
その他の表記は表１と同じである。
Figure 2022050389000015
実施例１５における分子内ハイブリダイゼーション及び、比較例１１における２つのオリゴヌクレオチドの分子間ハイブリダイゼーションは、９５℃にて５分間加熱した後、３７℃にて１時間、定温にて放置することで行った。ハイブリダイゼーションの確認は、非変性ポリアクリドアミドゲル電気泳動により確認した。
［評価例９］
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（オス５週齢、日本チャールス・リバー社）へ、生理食塩水（大塚生食注、大塚製薬工場）に溶解した実施例１５及び比較例１１を、マウス個体あたりの投与量がアンチセンスオリゴヌクレオチド量換算で８．１ｎｍｏｌ／ｋｇ又は８１ｎｍｏｌ／ｋｇとなるように静脈投与した。コントロールとして、生理食塩水（大塚生食注、大塚製薬工場）のみを投与した。投与３日後に眼窩静脈叢から採血した後、イソフルラン麻酔下で肝臓組織を採取した。肝臓からのＲＮＡ抽出はＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ社製）を用いてＱｉａｇｅｎ社の推奨プロトコル通りに行った。 Ｔｏｔａｌ ＲＮＡからＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（タカラバイオ株式会社製）を用いてｃＤＮＡを得た。得られたｃＤＮＡ及びＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ＩＤ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用いて７５００ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）によりリアルタイムＰＣＲを行い、ＡｐｏＢのｍＲＮＡ量を定量した。リアルタイムＰＣＲでは、ハウスキーピング遺伝子のＣｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎのｍＲＮＡ量も同時に定量し、ＣｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎのｍＲＮＡ量に対するＡｐｏＢのｍＲＮＡ量を、ＡｐｏＢの発現レベルとして評価した。結果を図２８に示す。
なお、用いたプライマーは、ＴａｑＭａｎ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）であり、Ａｓｓａｙ ＩＤは、以下のとおりであった：
マウスＡｐｏＢ定量用： Ｍｍ０１５４５１５０＿ｍ１
マウスｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ定量用：Ｍｍ０２３４２３０＿ｇ１
また採取した血液を、室温にて２０分間静置した後、５０００ｒｐｍ、４℃にて１５分間遠心して血漿を分離した。それぞれの血漿について、デタミナーＬ ＴＣ（協和メデックス社製）を用いて血漿総コレステロール値を定量した。血漿３．２μＬに試薬Ｒ－１を２４０μＬ加えて３７℃にて５分間加温し、続いて試薬Ｒ－２を８０μＬ加えて３７℃にて５分間加温し、分光光度計を用いて６００ｎｍの吸光度を測定した。標準試薬による検量線を用いて値を算出した。結果を図２９に示す。なお図中、ｔｏｔａｌ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌは、前記血漿総コレステロール値を意味する。
図２８及び図２９から明らかなように、本発明に係る一本鎖オリゴヌクレオチド（実施例１５）はＨＤＯ（比較例１１）に比較して、高いアンチセンス効果を示すことが確認された。
（実施例１６、１７及び１８、比較例１２及び１３）
表９に記載されたオリゴヌクレオチドを、核酸自動合成機ｎＳ－８II（ジーンデザイン社製）を使用して調製した。標的ＲＮＡは、ｍｉＲＮＡ－１２２である。なお、表９中の配列表記は、表１と同じである。
Figure 2022050389000016
実施例１６、１７及び１８における分子内ハイブリダイゼーション及び、比較例１３における２つのオリゴヌクレオチドの分子間ハイブリダイゼーションは、９５℃にて５分間加熱した後、３７℃にて１時間、定温にて放置することで行った。ハイブリダイゼーションの確認は、非変性ポリアクリドアミドゲル電気泳動により確認した。
［評価例１０］
ヒト肝癌由来細胞株ＨｕＨ－７の細胞を２０００細胞／ウェルとなるように９６ウェルプレートに播き、５％ＣＯ２下３７℃にて２４時間培養した。表９の各オリゴヌクレオチドを、その最終濃度が０．４ｎＭとなるようにＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標） ＲＮＡｉＭａｘ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて各ウェルに添加した（トランスフェクション）。４時間後に培地を交換し、さらに２０時間後に細胞を回収し、細胞からＲＮｅａｓｙ ｍｉｎｉ ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）を用いてＴｏｔａｌ ＲＮＡを抽出した。
Ｔｏｔａｌ ＲＮＡからＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（タカラバイオ株式会社製）を用いてｃＤＮＡを得た。得られたｃＤＮＡ及びＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ＩＤ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用いて７５００ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）によりリアルタイムＰＣＲを行い、ｍｉＲＮＡ－１２２の標的遺伝子であるＡｌｄｏｌａｓｅ ＡのｍＲＮＡ量を定量した。リアルタイムＰＣＲでは、ハウスキーピング遺伝子のＧＡＰＤＨ（Ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ－３－Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）のｍＲＮＡ量も同時に定量し、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ量に対するＡｌｄｏｌａｓｅ ＡのｍＲＮＡ量を、Ａｌｄｏｌａｓｅ Ａの発現レベルとして評価した。トランスフェクション操作を行わなかった細胞をコントロールとして用いた。結果を図３０に示す。この際、Ａｌｄｏｌａｓｅ Ａの発現量が高いほど、アンチセンス効果が高いことになる。
なお、用いたプライマーは、ＴａｑＭａｎ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）であり、Ａｓｓａｙ ＩＤは、以下のとおりであった：
ヒトＡｌｄｏｌａｓｅ Ａ定量用： Ｈｓ００６０５１０８＿ｇ１
ヒトＧＡＰＤＨ定量用： Ｈｓ９９９９９９０５＿ｍ１
図３０から明らかなように、本発明に係る一本鎖オリゴヌクレオチド（実施例１６～１８）はＡＳＯ（比較例１２）より高いアンチセンス効果を示し、ＨＤＯ（比較例１３）と同程度あるいは高いアンチセンス効果を示すことが示された。
（実施例１５、比較例７及び１１）
表１０に記載されたオリゴヌクレオチドを、核酸自動合成機ｎＳ－８II（ジーンデザイン社製）を使用して調製した。標的遺伝子は、マウスａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｂ（ＡｐｏＢ）である。表１０中の配列表記は表１及び表８と同じである。
Figure 2022050389000017
実施例１５における分子内ハイブリダイゼーション及び、比較例１１における２つのオリゴヌクレオチドの分子間ハイブリダイゼーションは、９５℃にて５分間加熱した後、３７℃にて１時間、定温にて放置することで行った。ハイブリダイゼーションの確認は、非変性ポリアクリドアミドゲル電気泳動により確認した。
［評価例１１］
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（オス５週齢、日本チャールス・リバー社）へ、生理食塩水（大塚生食注、大塚製薬工場）に溶解した実施例１５、比較例１１及び比較例７を、マウス個体あたりの投与量がアンチセンスオリゴヌクレオチド量換算で８１ｎｍｏｌ／ｋｇとなるように静脈投与した。コントロールとして、生理食塩水（大塚生食注、大塚製薬工場）のみを投与した。投与３日後に眼窩静脈叢から採血した後、イソフルラン麻酔下で肝臓組織を採取した。肝臓からのＲＮＡ抽出はＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ社製）を用いてＱｉａｇｅｎ社の推奨プロトコル通りに行った。 Ｔｏｔａｌ ＲＮＡからＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（タカラバイオ株式会社製）を用いてｃＤＮＡを得た。得られたｃＤＮＡ及びＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ＩＤ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用いて７５００ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）によりリアルタイムＰＣＲを行い、ＡｐｏＢのｍＲＮＡ量を定量した。リアルタイムＰＣＲでは、ハウスキーピング遺伝子のＣｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎのｍＲＮＡ量も同時に定量し、ＣｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎのｍＲＮＡ量に対するＡｐｏＢのｍＲＮＡ量を、ＡｐｏＢの発現レベルとして評価した。結果を図３１に示す。
なお、用いたプライマーは、ＴａｑＭａｎ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）であり、Ａｓｓａｙ ＩＤは、以下のとおりであった：
マウスＡｐｏＢ定量用： Ｍｍ０１５４５１５０＿ｍ１
マウスｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ定量用：Ｍｍ０２３４２３０＿ｇ１
また採取した血液を、室温にて２０分間静置した後、５０００ｒｐｍ、４℃にて１５分間遠心して血漿を分離した。それぞれの血漿について、デタミナーＬ ＴＣ（協和メデックス社製）を用いて血漿総コレステロール値を定量した。血漿３．２μＬに試薬Ｒ－１を２４０μＬ加えて３７℃にて５分間加温し、続いて試薬Ｒ－２を８０μＬ加えて３７℃にて５分間加温し、分光光度計を用いて６００ｎｍの吸光度を測定した。標準試薬による検量線を用いて値を算出した。結果を図３２に示す。なお図中、ｔｏｔａｌ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌは、前記血漿総コレステロール値を意味する。
図３１及び図３２から明らかなように、本発明に係る一本鎖オリゴヌクレオチド（実施例１５）はＨＤＯ（比較例１１）及びＡＳＯ（比較例７）に比較して、高いアンチセンス効果を示すことが確認された。
［評価例１２］
実施例５における、前記分子内ハイブリダイゼーション処理前後の非変性ポリアクリドアミドゲル電気泳動結果を図３３に示す。一本鎖ＤＮＡのサイズマーカーとして、ジーンデザイン社製電気泳動用一本鎖ＤＮＡサイズマーカーを用いた。これは、ヌクレオチド数が１５、２０、３０、４０、５０、６０及び８０の一本鎖のＤＮＡを含む。二本鎖ＲＮＡのサイズマーカーとして、ジーンデザイン社製電気泳動用２本鎖ＲＮＡサイズマーカー用いた。これは、塩基対の数が１７、２１、２５及び２９の二本鎖のＲＮＡを含む。なお、図３３中の記号は図２３及び図２４に同じである。
図３３から明らかなように、本発明に係る一本鎖オリゴヌクレオチドは、特別なハイブリダイゼーション工程を経ることなく、分子内ハイブリダイゼーションの構造をとることが確認された。
本発明の一本鎖オリゴヌクレオチドを用いることによって、いくつかの実施形態においては、アンチセンス核酸を特異性高く効率的に特定の臓器（細胞）に送達し、かつ当該核酸によって、標的ＲＮＡの機能を効果的に制御すること、及び/又は標的遺伝子の発現を効果的に抑制することが可能となる。また、いくつかの実施形態における一本鎖オリゴヌクレオチドには、特定の臓器に送達させるための機能性分子として、脂質（例えば、トコフェロール、コレステロール）、糖（例えば、グルコース、スクロース）、タンパク質、ペプチド、抗体等の多種多様な分子を適用できるため、いくつかの実施形態における一本鎖オリゴヌクレオチドは、様々な臓器、組織、細胞を標的とすることができる。さらには、いくつかの実施形態における一本鎖オリゴヌクレオチドに、ＲＮａｓｅ等に対する耐性を付与するための修飾を施しても、そのアンチセンス効果は低減することはないため、いくつかの実施形態における一本鎖オリゴヌクレオチドは、経腸投与の態様でも利用できる。
したがって、いくつかの実施形態における一本鎖オリゴヌクレオチドは、低濃度の投与により高い薬効を得ることができ、かつアンチセンス核酸の標的以外の臓器における分布を抑制することにより、副作用も低減できるという点に優れているため、代謝性疾患、腫瘍、感染症等の、標的ＲＮＡの機能及び/又は標的遺伝子の発現亢進に伴う疾患を治療、予防するための医薬組成物等として、一本鎖オリゴヌクレオチドは有用である。
日本国特許出願２０１６－０１２８０４号（出願日：２０１６年１月２６日）及び日本国特許出願２０１６－１５８８３３（出願日：２０１６年８月１２日）の開示はその全体が参照により本明細書に取り込まれる。本明細書に記載された全ての文献、特許出願、及び技術規格は、個々の文献、特許出願、及び技術規格が参照により取り込まれることが具体的かつ個々に記された場合と同程度に、本明細書に参照により取り込まれる。
Ｃ－５９） 式－ＹＺで表される部分構造が、式－ＹＺ ３－ＹＺ ２－ＹＺ １で表され、
ＹＺ １は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
ＹＺ ２は、Ｙが含むアンチセンス配列部分であって、８～１０個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基であり、
ＹＺ ３は、２個又は３個のＬＮＡからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、Ｃ－４３）からＣ－５８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－６０） ＹＺが、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まない、Ｃ－４３）からＣ－５８）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－６１） ＹＺの３’側及び５’側の少なくとも一方のヌクレオチドが、独立して２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから選ばれるヌクレオチドである、Ｃ－６０）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－６２） ＹＺの３’側及び５’側のヌクレオチドが、独立して２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから選ばれるヌクレオチドである、Ｃ－６０）又はＣ－６１）に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Ｃ－６３） ＹＺが、２’－Ｏ－メチル化ヌクレオチド及びＬＮＡから独立して選ばれるヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドに由来する基である、Ｃ－６０）からＣ－６２）のいずれか１つに記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
Figure 2022050389000051
［評価例８］
評価例２と同じ評価方法を用いて、表７の各オリゴヌクレオチドの最終濃度が１ｎＭ又は１０ｎＭとなるようにし、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ量に対するＰＴＥＮのｍＲＮＡ量を、ＰＴＥＮの発現レベルとして評価した。トランスフェクション操作を行わなかった細胞をコントロールとして用いた。結果を図２７に示す。

Claims (40)

  1. 式
    Ｘ－Ｌ－Ｙ
    （式中、Ｘは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択され、糖部、塩基部及びリン酸部の少なくとも１つが修飾されたヌクレオチドの少なくとも１個を含む７～１００個のヌクレオチドからなる第一オリゴヌクレオチドに由来する基であり、
    Ｙは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択され、４～１００個のヌクレオチドからなる第二オリゴヌクレオチドに由来する基であり、
    Ｌは、その両端で前記第一オリゴヌクレオチド及び第二オリゴヌクレオチドとそれぞれ共有結合し、生理的条件で分解される第三オリゴヌクレオチドに由来する基であり、
    前記第一オリゴヌクレオチドはヌクレオチド配列Ｘを有し、前記第二オリゴヌクレオチドはヌクレオチド配列Ｙを有し、
    前記ヌクレオチド配列Ｘは、第二オリゴヌクレオチドの少なくとも一部とのハイブリダイズを可能とし、ＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む第一ヌクレオチド配列を含み、
    前記ヌクレオチド配列Ｙは第一オリゴヌクレオチドの少なくとも一部とのハイブリダイズを可能とし、少なくとも１個のリボヌクレオチドを含む第二ヌクレオチド配列を含み、
    前記ヌクレオチド配列Ｘ及びヌクレオチド配列Ｙの少なくとも一方が、標的ＲＮＡとのハイブリダイズを可能にする少なくとも１つのアンチセンス配列を含み、
    前記アンチセンス配列を２以上有する場合、それぞれのアンチセンス配列部分がハイブリダイズする標的ＲＮＡは同一でも異なっていてもよい。）
    で表され、ＸとＹとが第一ヌクレオチド配列部分と第二ヌクレオチド配列部分とでハイブリダイズする一本鎖オリゴヌクレオチド。
  2. Ｘが、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、前記第一ヌクレオチド配列が、前記アンチセンス配列であり、前記標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列である、請求項１に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  3. Ｘが３’側でＬに結合し、Ｙが５’側でＬに結合する、請求項１又は２に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  4. Ｘが５’側でＬに結合し、Ｙが３’側でＬに結合する、請求項１又は２に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  5. 第三オリゴヌクレオチドに含まれるヌクレオチドが、ホスホジエステル結合で互いに連結されている、請求項１から４のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  6. 第三オリゴヌクレオチドが、ＤＮＡ又はＲＮＡである、請求項１から５のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  7. 第一オリゴヌクレオチドは、第一ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドを含む、請求項１から６のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  8. 第一オリゴヌクレオチドは、第一ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドを含む、請求項１から７のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  9. 第一オリゴヌクレオチドが、ホスホロチオエート結合を含む、請求項１から８のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  10. 第一ヌクレオチド配列が、少なくとも１個のデオキシリボヌクレオチドを含む４～２０個のヌクレオチドからなる配列である、請求項１から９のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  11. 第二ヌクレオチド配列は、ＲＮａｓｅＨによって切断される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列である、請求項１から１０のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  12. 第二オリゴヌクレオチドが、第二ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドを含む、請求項１１に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  13. 第二ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方が、隣接するヌクレオチドとホスホロチオエート結合で連結されている、請求項１１又は１２に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  14. 前記ヌクレオチド配列Ｙが、少なくとも１つのアンチセンス配列を含む、請求項１から１３のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  15. 前記Ｙは、前記第二ヌクレオチド配列部分を前記アンチセンス配列部分とＬとの間に有する、請求項１４に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  16. 前記ヌクレオチド配列Ｙが含むアンチセンス配列が、標的ＲＮＡとハイブリダイズした際に、ＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列である、請求項１４又は１５に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  17. 前記Ｙが含むアンチセンス配列部分は、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まない、請求項１４又は１５に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  18. 前記ヌクレオチド配列Ｘが、前記Ｙが含むアンチセンス配列部分の少なくとも一部とのハイブリダイズを可能とし、ＲＮａｓｅＨによって切断される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列を含む、請求項１６又は１７に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  19. Ｘが、５’末端又は３’末端を含む、請求項１から１８のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  20. 式
    Ｘ’－Ｌ’－
    （式中、Ｘ’は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択され、糖部、塩基部及びリン酸部の少なくとも１つが修飾されたヌクレオチドの少なくとも１個を含む７～１００個のヌクレオチドからなる第四オリゴヌクレオチドに由来する基であり、
    Ｌ’は、その両端で前記第一オリゴヌクレオチド及び第四オリゴヌクレオチドとそれぞれ共有結合し、生理的条件で分解される第五オリゴヌクレオチドに由来する基であり、
    前記第四オリゴヌクレオチドは、標的ＲＮＡとのハイブリダイズを可能にするアンチセンス配列を有する。）
    で表される基をさらに含む、請求項１から１８のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  21. Ｘ’が、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、
    前記第四オリゴヌクレオチドが有するアンチセンス配列は、標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される、少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列である、請求項２０に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  22. 前記第四オリゴヌクレオチドが含むアンチセンス配列部分は、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、連続する４個のデオキシリボヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチド鎖を含まない、請求項２０に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  23. 前記第四オリゴヌクレオチドが含むアンチセンス配列部分は、前記第二オリゴヌクレオチドの少なくとも一部とハイブリダイズする、請求項２１又は２２に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  24. 第五オリゴヌクレオチドに含まれるヌクレオチドが、ホスホジエステル結合で互いに連結されている、請求項２０から２３のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  25. 第五オリゴヌクレオチドが、ＤＮＡ又はＲＮＡである、請求項２０から２４のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  26. 前記アンチセンス配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドを含む、請求項１から２５のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  27. 前記アンチセンス配列部分の５’側及び３’側に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドを含む、請求項１から２６のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  28. 前記アンチセンス配列が、少なくとも１個のデオキシリボヌクレオチドを含む４～２０個のヌクレオチドからなる配列である、請求項１から２７のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  29. 前記アンチセンス配列部分が、ホスホロチオエート結合を含む、請求項１から２８のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  30. Ｙが、５’末端又は３’末端を含む、請求項１から２９のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  31. 標識機能、精製機能及び標的部位への送達機能からなる群から選択される少なくとも１種の機能を有する機能性分子に由来する基をさらに含む、請求項１から３０のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  32. 前記機能性分子が、糖、脂質、ペプチド及びタンパク質並びにそれらの誘導体からなる群から選択される、請求項３１に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  33. 前記機能性分子が、コレステロール、トコフェロール及びトコトリエノールからなる群から選択される脂質である、請求項３１又は３２に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  34. 前記機能性分子が、アシアロ糖タンパク質受容体と相互作用する糖誘導体である、請求項３１又は３２に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  35. 前記機能性分子が、受容体のリガンド及び抗体からなる群から選択される、ペプチド又はタンパク質である、請求項３１又は３２に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
  36. 請求項１から３５のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチドと、薬理学上許容される担体とを含む、医薬組成物。
  37. 請求項１から３５のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチドと細胞とを接触させる工程を含む、標的ＲＮＡの機能を制御する方法。
  38. 請求項１から３５のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物を、哺乳動物に投与する工程を含む、該哺乳動物における標的ＲＮＡの機能を制御する方法。
  39. 哺乳動物において、標的ＲＮＡの機能を制御するための、請求項１から３５のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチドの使用。
  40. 請求項１から３５のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチドの製造方法であって、Ｘ、Ｌ及びＹの少なくとも１つを含むオリゴヌクレオチドの３’末端又は５’末端でヌクレオチド鎖を伸長する工程を含む、製造方法。
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