JP2022002532A

JP2022002532A - 衝撃波または機械的衝撃を使用する、細胞の分離、解離、および／または脱凝集

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Publication number: JP2022002532A
Application number: JP2021163876A
Authority: JP
Inventors: チ，ジョン; chi John; レイブン，レイモンド; Raven Raymond; リッチマン，マーク; Richman Mark; チ，ベン−チェン; Ben-Chen Chi
Original assignee: Synova Life Sciences Inc
Current assignee: Synova Life Sciences Inc
Priority date: 2016-03-17
Filing date: 2021-10-05
Publication date: 2022-01-11
Anticipated expiration: 2037-03-17
Also published as: EP3872164B1; BR112018068820B1; MX2018011181A; MX2021006967A; KR102419230B1; AU2023226696A1; CA3056209A1; JP2023116738A; CO2018011074A2; EP3872164A1; EP4324915A2; KR20210126154A; CN115011555A; KR20220103186A; JP7300486B2; AU2022201872A1; BR112018068820A2; US20240076622A1; KR20190016937A; US20190071644A1

Abstract

【課題】複数のユーザー介入の必要性なしに、短い時間の期間で直接的に所望の細胞画分を取得する、最適化された拡張性のある方法を提供する。【解決手段】組織から間質血管細胞画分を単離する方法であって、組織サンプルを、組織プロセッシング装置のプロセッシング容器に入れるステップと前記組織サンプルに機械的衝撃からの力を加えて、前記組織を破壊するステップと、前記組織から前記間質血管細胞画分を単離するステップとを含み、前記機械的衝撃は、最大３０，０００ｒｐｍの速度で上下方向に関節運動することによって前記容器と物理的に接触するインパクトアームによって生成され、前記インパクトアームが前記組織に物理的に接触しない、方法である。【選択図】なし

Description

細胞バイオプロセッシングは、バイオ医薬品製造の形態であり、その目標は、治療用細
胞の単離および／または生産のための再現性のあるロバストな製造プロセスを確立するこ
とである。

現在の細胞製造プロセスは、極めてユーザー依存型であり、多数のポイントにおいて人
間の介入を必要とする。その依存性に起因して、現在のプロセスは、面倒であり、極めて
多様であり、高価であり、低い収率となる。

例として、多くの現在の製造プロセスは、以下のように行われる。組織サンプル（脂肪
吸引物、全血、骨髄、臍帯血など）が、患者から取得される。取得された生物学的なサン
プルが、バイオプロセッシングのために研究所へ移送される。研究所において、細胞分離
技法が、所望の細胞画分を取得するために用いられる。次いで、細胞画分が単離され、患
者使用のためにポイントオブケア設備に戻されるように移送されるか、または、細胞膨張
のためにバイオリアクターの中への導入によってさらにプロセッシングされるかのいずれ
かである。細胞分離のいくつかの公知の方法は、所望の細胞画分を取得するために、サン
プルを異物（たとえば、ビーズ）と接触させることを必要とする、超音波キャビテーショ
ンを介した機械的な分離、酵素消化、または、他の機械的な手段の使用を含む。酵素の使
用は、規制順守負担（regulatory compliance burden）の増加を結果として生じさせる。
その理由は、酵素は、所望の結果を作り出すために、サンプルと直接的に接触した状態に
ならなければならないからである。また、酵素は、収穫された細胞の完全性を損なう可能
性があり、場合によっては、その特性を変化させる。高い動力を与えられるソニケーショ
ンの使用は、同様に不完全である。ソニケーターチップは、周波数が固定されており、細
胞または組織懸濁液の中へ導入されなければならず、それは、無菌状態に悪影響を与える
可能性を有している。追加的に、そのような高エネルギー音波の使用は、大量のエネルギ
ーをサンプルの中へ導入し、それは、熱として現れる。これは、細胞に損傷を与える可能
性があり、これは、使用可能な細胞の収率を低減させる。

取得されると、膨張した細胞製品は、次いで、それが清浄されて濃縮されるバイオリア
クターから移動させられる。テストサンプルが、品質検査のために、洗浄および濃縮され
た細胞製品から除去され、テスト結果が許容可能な製品を示す場合には、最終的に人工的
に作り出された細胞製品は、長期間の保管のために準備されるか、凍結保存のために準備
されるか、サンプルが導出された患者に投与されるか、または、先述のもののいくつかの
組み合わせのいずれかである。

認識され得るように、これらのステップのいくつかは、サンプルを１つの容器から別の
容器へ移動させることを必要とし、重度のユーザー介入を必要とし、重度のユーザー介入
は、プロセッシングの間に１つまたは複数のサンプルをラベル貼り間違えまたは取り扱い
ミスするリスクを増大させるだけでなく、場合によっては、サンプルの無菌状態、同一性
、純度、または効能に悪影響を与える。追加的に、このようにサンプルをプロセッシング
するために必要とされる時間は、所望の細胞画分が、何時間にもわたって（何日もという
ことはないとしても）患者への送達のための準備ができていないということを意味してお
り、これは、患者の健康に対して悪影響を有する可能性がある。危うくされた無菌状態に
関する可能性、および、細胞サンプルをプロセッシングするために必要とされる不合理に
長い時間の期間は、患者にとって、とりわけ、免疫力が低下した患者にとって、または、
即座の治療を要求する患者にとって、許容不可能であり、また、タイムリーで高品質の治
療を多くの患者に提供することを必要とする提供者にとって許容不可能である。

したがって、ポイントオブケアにおいて、複数のユーザー介入に対する必要性なしに、
短い時間の期間で直接的に所望の細胞画分を取得する、最適化された拡張性のある方法が
必要とされている。また、その方法を実施することができるデバイスも必要とされている
。そのような方法およびデバイスが、本開示によって提供される。開示されている方法お
よびデバイスは、プロセッシングのために細胞サンプルを研究所へ移送する必要性を排除
し、また、分離の間に細胞サンプルを異物と接触させず、ユーザーの接触がほとんどない
状態で、非常に短い時間の期間に所望の細胞サンプルを提供する、プロセッシングされた
サンプルを結果として生じさせ、それによって、高価な技術的資源の最適化を可能にする
。

本明細書で開示されているデバイスおよび方法は、いくつかの特徴を有しており、その
うちの一つとして、単独でその望ましい属性の原因とならない。以下に続く特許請求の範
囲を限定することなく、開示されているデバイスおよび方法の特定の特徴が、簡潔に議論
されることとなる。この議論を考慮した後に、および、とりわけ、「発明を実施するため
の形態」という標題の章を読んだ後に、当業者は、どのようにデバイスおよび方法の特徴
が、従来のシステムおよび方法を上回るいくつかの利点を提供するかということを理解す
ることとなる。

１つの態様では、本開示は、細胞サンプルのバイオプロセッシング、たとえば、自己幹
細胞療法のためにプロセッシングされる脂質組織サンプルのバイオプロセッシングに適切
な完全に閉じたシステムを提供する。システムは、大気に開放しておらず、したがって、
バイオプロセッシングの全体を通して、無菌のサンプルプロセッシングおよびサンプルの
移送を可能にする。

第１の態様では、細胞画分を組織サンプルから単離する方法が提供され、方法は、対象
から組織サンプルを取得するステップと、衝撃波、機械的衝撃からの力、または、その両
方に、組織サンプルを接触させるステップと、組織サンプルから細胞画分を単離するステ
ップと、を含み、衝撃波および／または機械的衝撃からの力の供給源は、組織サンプルと
物理的な接触をしない。

いくつかの実施形態では、組織は、脂肪組織、脳組織、咽頭組織、喉頭組織、心臓組織
、動脈組織、筋肉組織、肝臓組織、胆嚢組織、腎臓組織、小腸組織、大腸組織、リンパ節
組織、肺組織、脾臓組織、骨髄組織、胃組織、静脈組織、膵臓組織、膀胱組織、骨、歯、
象牙質組織、歯肉組織、皮膚組織、松果腺組織、下垂体組織、甲状腺組織、副腎組織、膵
臓組織、卵巣組織および睾丸組織から選択される。

いくつかの実施形態では、組織は脂肪組織である。

いくつかの実施形態では、組織サンプルは、衝撃波と接触させられ、衝撃波の供給源は
、衝撃波発生器によって動力を与えられる衝撃波アプリケーターである。

いくつかの実施形態では、組織サンプルは、機械的衝撃からの力と接触させられ、機械
的衝撃からの力の供給源は、モーターによって動力を与えられるインパクトアームである
。

いくつかの実施形態では、組織サンプルは、衝撃波および／または機械的衝撃からの力
と接触する前に、１回または複数回洗浄される。

いくつかの実施形態では、衝撃波は、組織サンプルを、複数の小さい細胞群、複数の個
々の細胞、または、その両方に分解する。

いくつかの実施形態では、機械的衝撃からの力は、組織サンプルを、複数の小さい細胞
群、複数の個々の細胞、または、その両方に分解する。

いくつかの実施形態では、細胞画分は、複数の小さい細胞群、複数の個々の細胞、また
は、その両方を含み、細胞画分の単離は、遠心分離によって行われる。

いくつかの実施形態では、遠心分離は、３分から３０分間、５００ｇから２，０００ｇ
の速度で行われる。

いくつかの実施形態では、遠心分離は、１０分間１，２００ｇで行われる。

いくつかの実施形態では、単離された細胞画分は、遠心分離の後に再懸濁させられる。

いくつかの実施形態では、細胞画分は、３０分以内に単離される。

第２の態様では、幹細胞を脂肪組織から単離する方法が提供され、方法は、対象から脂
肪組織サンプルを取得するステップと、組織サンプルを容器またはカートリッジの中へ置
くステップと、組織サンプルを機械的衝撃からの力にさらし、幹細胞を解放するステップ
と、脂肪組織から幹細胞画分を分離するステップと、幹細胞画分を遠心分離するステップ
と、を含み、機械的衝撃からの力の供給源は、脂肪組織に物理的に接触しない。

いくつかの実施形態では、脂肪組織は、機械的衝撃からの力にさらされる前に、１回ま
たは複数回洗浄される。

いくつかの実施形態では、機械的衝撃の力の供給源は、モーターによって動力を与えら
れるインパクトアームであり、モーターは、ギヤリングを含み、ギヤリングは、モーター
が全速力で動作しているときに、インパクトアームの速度を低減させることができる。

いくつかの実施形態では、機械的衝撃からの力は、容器またはカートリッジの壁部を通
して脂肪組織へ送達される。

いくつかの実施形態では、ギヤリングは、インパクトアームの中での速度の１／１０の
減速を可能にする。

いくつかの実施形態では、モーターは、０．７５インチのギヤ直径を含み、３，０００
ｒｐｍのモーター速度において、インパクトアームは、毎秒１１７．８インチの速度を有
している。

いくつかの実施形態では、幹細胞画分を分離することは、脂肪組織が、水性層から分離
することを可能にし、水性層は、幹細胞を含む。

いくつかの実施形態では、幹細胞は、３０分以内に脂肪組織から単離される。

いくつかの実施形態では、遠心分離は、３分から１０分間、５００ｇから１，６００ｇ
で行われる。

第３の態様では、幹細胞を脂肪組織から単離する方法が提供され、方法は、対象から脂
肪組織サンプルを取得するステップと、組織サンプルを容器またはカートリッジの中へ置
くステップと、組織サンプルを衝撃波にさらし、幹細胞を解放するステップと、脂肪組織
から幹細胞画分を分離するステップと、幹細胞画分を遠心分離するステップと、を含み、
衝撃波の供給源は、脂肪組織に物理的に接触しない。

いくつかの実施形態では、脂肪組織は、衝撃波にさらされる前に、１回または複数回洗
浄される。

いくつかの実施形態では、衝撃波の供給源は、衝撃波発生器によって動力を与えられる
衝撃波アプリケーターである。

いくつかの実施形態では、衝撃波は、容器またはカートリッジの壁部を通して脂肪組織
へ送達される。

いくつかの実施形態では、脂肪組織は、０．５ｂａｒから５．０ｂａｒのパワーを有す
る衝撃波にさらされる。

いくつかの実施形態では、容器は、０．２５ｍｍ厚の壁部を有するビニールバッグであ
り、脂肪組織は、２．０ｂａｒから２．５ｂａｒのパワーを有する衝撃波にさらされる。

いくつかの実施形態では、任意の１つの時点において衝撃波にさらされる脂肪組織の合
計面積は、１ｃｍ^２から１００ｃｍ^２の範囲にある。

いくつかの実施形態では、容器は、０．２５ｍｍ厚の壁部を有する１９オンスのビニー
ルバッグであり、脂肪組織サンプルの合計量は、３０ｃｃであり、任意の１つの時点にお
いて衝撃波にさらされる脂肪組織の合計面積は、５ｃｍ^２である。

いくつかの実施形態では、脂肪組織は、５，０００から１００，０００の範囲にあるい
くつかの衝撃波にさらされる。

本開示の特徴および利点は、例示目的の実施形態を記述する以下の詳細な説明および添
付の図面を参照して、さらに説明され得る。

本開示によって提供される実施形態による、細胞画分を組織サンプルから単離する方法の概観である。本開示によって提供されるシステムおよび方法において使用するのに適切な対外衝撃波デバイスの代表的な例を示す図である。本開示によって提供されるシステムおよび方法において使用するのに適切な機械的衝撃デバイスの代表的な例を示す図である。本開示によって提供される対外衝撃波および／または機械的衝撃デバイスとともに使用するのに適切なリジッドの自己完結型のカートリッジの第１の代表的な例を示す図である。示されている実施形態では、いくつかの内部コンポーネントは、可撓性の容器である。本開示によって提供される対外衝撃波および／または機械的衝撃デバイスとともに使用するのに適切なリジッドの自己完結型のカートリッジの代表的な例を示す図である。

本開示の実施形態が説明される前に、そのような実施形態が単なる例として提供される
ということ、および、本明細書で説明されている本開示の実施形態に対するさまざまな代
替例が、本開示を実施する際に用いられ得るということが理解されるべきである。ここで
、多数の変形例、変化例、および置換例が、本開示から逸脱することなく、当業者に考え
付くこととなる。

別段の定義がない限り、本明細書で使用されているすべての技術的用語および科学的用
語は、本開示が属する当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有している。本
明細書で説明されているものと同様または同等の方法および材料が、本開示の実施または
検査において使用され得るが、適切な方法および材料が、下記に説明されている。矛盾す
る場合には、定義を含む特許明細書が、支配することとなる。それに加えて、材料、方法
、および例は、単なる例示目的のものであり、限定することを意図していない。多数の変
形例、変化例、および置換例が、本開示から逸脱することなく、当業者に考え付くことと
なる。

明細書および特許請求の範囲に使用されているように、単数形「１つの（ａ）」、「１
つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈がそうでないことを明確に示してい
なければ、複数の言及を含む。たとえば、「１つの細胞」という用語は、複数の細胞（そ
の混合物を含む）を含む。

本明細書で使用されているように、「対外衝撃波」、「複数の対外衝撃波」、および／
または「ＥＳＷ」は、音波と同様に、機械的なエネルギーの急激な高い振幅パルスを意味
しており、それらは、関心のサンプルの外部で発生させられ、次いで、そのサンプルに伝
送される。その点で、ＥＳＷの発生源は、サンプルと物理的な接触をしない。衝撃波自身
は、サンプルに接触するが、発生源は、サンプルに接触しない。したがって、対外衝撃波
は、サンプルからのいくらかの距離にある供給源によって発生させられ、次いで、サンプ
ルに伝送される。伝送は、空気を通して、および／または、サンプルがその中に位置付け
されている容器の壁部を通して、行われることが可能である。ＥＳＷは、たとえば、サン
プル全体、または、サンプルの一部分だけをカバーする関心のエリアの中にＥＳＷを濃縮
させるために、焦点を合わせられたおよび／または方向付けされ得る。

本明細書で使用されているように、「対象」または「患者」は、哺乳類、たとえば、人
間を表している。

本開示によって提供される方法は、対外衝撃波、機械的衝撃、振動および／または、砕
石術の原理を利用し、組織サンプルを、より小さい断片、すなわち、細胞群および／また
は単一の細胞に粉砕し、その後に、所望の細胞画分が、サンプルから単離され得る。さま
ざまな態様において、この方法は、サンプルを対象から単離するステップであって、サン
プルは、関心の細胞タイプを含む、ステップと、そのサンプルを、ＥＳＷを発生させるた
めに使用されるデバイスと接触させるのではなく、対外衝撃波と接触させ、サンプルを小
さい細胞群および／または個々の細胞に分解するステップと、次いで、分解されたサンプ
ルから関心の細胞タイプを単離するステップとを含む。

本開示によって提供されるデバイスは、焦点を合わせられたおよび／もしくは方向付け
された衝撃波、ならびに／または、焦点を合わせられたおよび方向付けされた機械的衝撃
を利用し、関心のサンプルをバラバラにする。さまざまな態様において、本開示によって
提供されるデバイスは、衝撃波または機械的衝撃への露出の間に、無菌の閉じた環境にサ
ンプルを維持する。したがって、衝撃波および／または機械的衝撃は、閉じた無菌の容器
の外側に発生させられ、容器の１つまたは複数の壁部を通してその内部へ伝送され、その
内部に、サンプルが位置付けされている。

関心のサンプルから所定の距離にＥＳＷの供給源を維持することによって、ＥＳＷの供
給源（ＥＳＷを発生させるデバイス）は、サンプルと物理的な接触をしない。これは、サ
ンプルの無菌状態、およびサンプルから単離される任意の細胞画分の無菌状態を、大きく
改善する。医療提供者の視点から、これは、また、無菌状態の要件を大きく改善し、サン
プルから導出される関心の細胞画分が患者使用に関して無菌であることを保証するのを助
ける。追加的に、関心のサンプルからＥＳＷ発生源を維持することは、発生器がエネルギ
ーまたは熱を関心のサンプルの中へ追加すること（それは、細胞に損傷を与えるかまたは
細胞を殺し、ＤＮＡに損傷を与え、収率を劇的に減少させる可能性がある）とはならない
ということを保証する。その点で、本開示によって提供されるデバイスは、超音波などの
ような他の公知のシステムに対する改善である。

本開示によって提供される方法およびデバイスは、いくつかの実施形態では、３０分以
内において、組織サンプルから所望の細胞画分を迅速に単離することができる。開示され
ている方法およびデバイスが使用され得る速度は、サンプルから単離される所望の細胞画
分が、即座の使用のために利用可能であり得るという点において、重大な利点を付与する
。

方法
図１は、本開示によって提供される実施形態による、関心の細胞画分を組織サンプルか
ら単離する方法を提示している。

示されている実施形態では、方法は、第１に対象から組織を抽出することによって始ま
る（１００）。対外衝撃波にさらされるときに組織が破壊されることとなるという条件で
、組織は、任意のタイプのものであることが可能である。いくつかの実施形態では、組織
は、脂肪組織または脂質である。いくつかの実施形態では、組織は、内部器官、たとえば
、脳、咽頭、喉頭、心臓、動脈、筋肉、肝臓、胆嚢、腎臓、小腸、大腸、リンパ節、肺、
脾臓、骨髄、胃、静脈、膵臓、膀胱、骨、歯、象牙質、歯肉、または皮膚などからのもの
である。いくつかの実施形態では、組織は、内分泌系のコンポーネント、たとえば、松果
腺、下垂体、甲状腺、副腎、膵臓、卵巣、または睾丸からのものである。

抽出は、任意の数の公知の方法を介して行われることが可能である。いくつかの実施形
態では、組織抽出は、シリンジを介して行われる。いくつかの実施形態では、組織抽出は
、外科的に行われ、組織サンプルが、対象から除去されると、第１の容器の中へ置かれる
ようになっている。

次いで、組織は、プロセッシング容器またはカートリッジの中へ移送される１０５。本
開示によって提供されるデバイスは、高速で使いやすいＥＳＷ細胞バイオプロセッシング
に必要とされるコンポーネントのすべてを提供する。開示されている方法および／または
デバイスのコンポーネントのうちのいくつかは、互いから分離可能であるにもかかわらず
、それらは、完全に無菌の様式で互いに接続するように構成されており、それによって、
プロセッシングの間の１つのコンポーネントから別のコンポーネントへのサンプルの移送
を可能にする。その点で、サンプルの全体が、単一のシステムの中でプロセッシングされ
、それによって、無菌状態を保証する。

無菌の移送は、サンプルを外側の環境に露出させることなく実施される。その点で、移
送は、閉じた無菌の環境を維持することとなる任意の数の方式を介して行われることが可
能である。いくつかの実施形態では、移送は、対象から抽出されるサンプルを含有する第
１の容器と、プロセッシング容器またはカートリッジとの間で、オス型およびメス型のル
アーロックコネクターを互いに取り付けることによって達成される。いくつかの実施形態
では、移送は、無菌の接続デバイスを使用して、第１の容器およびプロセッシング容器ま
たはカートリッジを無菌ドッキングさせることによって達成される。サンプルは、機械的
にまたは重力流のいずれかによって、第１の容器からプロセッシング容器またはカートリ
ッジへ移送される。

いくつかの実施形態では、第１の容器は、カートリッジの中へ挿入されており、無菌の
接続デバイスを使用して無菌ドッキングされ、カートリッジの中のプロセッシング容器に
なる。プロセッシングチャンバーとしての第１の容器は、すでにサンプルを含有している
。

その点で、この開示において、１つの容器から別の容器へ移動させられるものとして、
組織および／または細胞サンプルが開示されるたびに、そのような移動は、閉じたシステ
ムの完全性を維持するように行われることが可能であり、それによって、サンプルを外側
の環境に露出させない。

サンプルがプロセッシング容器またはカートリッジへ移送されると、組織サンプルは、
１回または複数回、洗浄される１１０。洗浄は、無菌の生理食塩水溶液の使用を介して、
本明細書で説明されているように行われることが可能である。洗浄は、サンプルがプロセ
ッシングの前に可能な限り多くの不純物を欠いていることを保証し、したがって、そこか
ら単離されることとなる細胞画分の純度レベルを向上させる。

いくつかの実施形態では、洗浄は、プロセッシング容器またはカートリッジの機械的な
撹拌によって実施される。複数の洗浄ステップが望まれおよび／または必要である場合に
は、無菌の生理食塩水は、単一の洗浄が完了した後に、プロセッシング容器またはカート
リッジからドレン排出され、新しい無菌の生理食塩水が、それぞれの後続の洗浄のために
容器またはカートリッジの中へ導入される。その点で、無菌の生理食塩水がドレン排出さ
れ、新しい無菌の生理食塩水が容器またはカートリッジの中へ導入されるたびに、それは
、本明細書で説明されているように、閉じた無菌の環境を維持するように行われる。

洗浄の後に、組織サンプルはプロセッシングされる１１５。示されているように、プロ
セッシングは、ＥＳＷ、機械的衝撃、振動、および剪断、または、それらの組み合わせの
使用を介して、行われることが可能である。

いくつかの実施形態では、プロセッシングは、ＥＳＷを介して行われ、組織サンプルが
、複数の小さい細胞群に分解される。いくつかの実施形態では、プロセッシングは、ＥＳ
Ｗを介して行われ、組織サンプルが、複数の小さい細胞群および複数の個々の細胞に分解
される。いくつかの実施形態では、プロセッシングは、ＥＳＷを介して行われ、組織サン
プルが、複数の個々の細胞に完全に分解される。

いくつかの実施形態では、プロセッシングは、機械的衝撃および剪断を介して行われ、
組織サンプルが、複数の小さい細胞群に分解される。いくつかの実施形態では、プロセッ
シングは、機械的衝撃および剪断を介して行われ、組織サンプルが、複数の小さい細胞群
および複数の個々の細胞に分解される。いくつかの実施形態では、プロセッシングは、機
械的衝撃および剪断を介して行われ、組織サンプルは、複数の個々の細胞に完全に分解さ
れる。

いくつかの実施形態では、プロセッシングは、ＥＳＷおよび機械的衝撃および剪断の組
み合わせを介して行われ、組織サンプルが、複数の小さい細胞群に分解される。いくつか
の実施形態では、プロセッシングは、ＥＳＷおよび機械的衝撃および剪断の組み合わせを
介して行われ、組織サンプルが、複数の小さい細胞群および複数の個々の細胞に分解され
る。いくつかの実施形態では、プロセッシングは、ＥＳＷおよび機械的衝撃および剪断の
組み合わせを介して行われ、組織サンプルが、複数の個々の細胞に完全に分解される。

プロセッシングの後に、サンプルの残したものを表す細胞懸濁液（これは、複数の小さ
い細胞群、複数の個々の細胞、または、その両方である可能性がある）が、濾過および遠
心分離される１２０。濾過は、プロセッシング容器もしくはカートリッジとは別々のデバ
イスの中で、または、プロセッシング容器もしくはカートリッジそれ自体の中で、行われ
ることが可能である。いくつかの実施形態では、濾過は、別々のデバイスの中で行われ、
そのケースでは、細胞懸濁液は、本明細書で説明されているように、無菌の手段を介して
フィルターへ移送される。いくつかの実施形態では、細胞懸濁液が容器またはカートリッ
ジから１つまたは複数の遠心チューブの中へ移動させられているときに、濾過が行われる
。

いくつかの実施形態では、濾過デバイスへの移送は、プロセッシング容器またはカート
リッジと濾過デバイスとの間で、オス型のおよびメス型のルアーロックコネクターを互い
に取り付けることによって達成される。いくつかの実施形態では、移送は、無菌の接続デ
バイスを使用して、プロセッシング容器またはカートリッジおよび濾過デバイスを無菌ド
ッキングさせることによって達成される。サンプルは、機械的にまたは重力流のいずれか
によって、プロセッシング容器またはカートリッジから濾過デバイスへ移送される。

いくつかの実施形態では、濾過は、本明細書で説明されているように、プロセッシング
容器またはカートリッジの中で行われる。

さまざまな態様では、遠心分離は、プロセッシング容器またはカートリッジの外側で行
われる。いくつかの実施形態では、細胞懸濁液は、プロセッシング容器またはカートリッ
ジの内側に位置付けされている１つまたは複数の遠心チューブへ移送される。充填される
ときに、遠心チューブは、本明細書で説明されているように、プロセッシング容器または
カートリッジから遠心分離機へ無菌の手段を介して移動させられる。

いくつかの実施形態では、細胞懸濁液は、本明細書で説明されているように、プロセッ
シング容器またはカートリッジの外側に位置付けされている１つまたは複数の遠心チュー
ブへ、無菌の手段を介して移送される。充填されるときに、遠心チューブは、本明細書で
説明されているように、プロセッシング容器またはカートリッジから遠心分離機へ無菌の
手段を介して移動させられる。

遠心分離の持続期間および速度は、プロセッシングされている組織タイプに応じて、変
化することが可能である。いくつかの実施形態では、細胞懸濁液は、３〜３０分の期間間
、５００ｇ〜２，０００ｇの速度で遠心分離される。いくつかの実施形態では、細胞懸濁
液は、１０〜２５分間、１，０００ｇ〜１，８００ｇの速度で遠心分離される。いくつか
の実施形態では、細胞懸濁液は、１０分間１，２００ｇで遠心分離される。いくつかの実
施形態では、細胞懸濁液は、７分間１，２００ｇで遠心分離される。いくつかの実施形態
では、細胞懸濁液は、５分間１，２００ｇで遠心分離される。いくつかの実施形態では、
細胞懸濁液は、３分間１，２００ｇで遠心分離される。いくつかの実施形態では、細胞懸
濁液は、１０分間９００ｇで遠心分離される。いくつかの実施形態では、細胞懸濁液は、
７分間９００ｇで遠心分離される。いくつかの実施形態では、細胞懸濁液は、５分間９０
０ｇで遠心分離される。いくつかの実施形態では、細胞懸濁液は、３分間９００ｇで遠心
分離される。いくつかの実施形態では、細胞懸濁液は、１０分間６００ｇで遠心分離され
る。いくつかの実施形態では、細胞懸濁液は、７分間６００ｇで遠心分離される。いくつ
かの実施形態では、細胞懸濁液は、５分間６００ｇで遠心分離される。いくつかの実施形
態では、細胞懸濁液は、３分間６００ｇで遠心分離される。

細胞懸濁液の中に存在する複数の細胞タイプが遠心分離を介して互いから分離され得る
、多数の手段が存在している。たとえば、密度勾配が利用され得、遠心分離の間に、細胞
が、その固有の密度にしたがって、帯へと分離する。追加的に、サイズ排除プロトコルが
、サイズを介して細胞を分離するために使用され得る。追加的に、たとえば、プロセッシ
ングされる組織サンプルを静置させる（allowed to settle）ことによって、および、遠
心分離の前に、望ましくない細胞破片を所望の細胞画分から分離することによって、分離
は、遠心分離の前に始まることが可能である。使用される分離技法のタイプは、単離され
ることとなる所望の細胞画分に基づいて変化することが可能である。

所望の細胞画分が単離されると、細胞画分は、細胞画分が導出された対象への投与のた
めに再懸濁され得る１２５。いくつかの実施形態では、所望の細胞画分は、遠心チューブ
から取得される流体の小さい体積の中に再懸濁される。いくつかの実施形態では、所望の
細胞画分は、無菌の生理食塩水の中に再懸濁される。

１つの態様では、所望の細胞画分は、幹細胞であり、幹細胞が導出される組織は、脂質
である。

脂質から幹細胞をプロセッシングする方法の第１の実施形態は、以下の通りである。

脂質が、リポサクションを介して患者から取得される。リポサクションは、シリンジを
介して実施され得、ここで、脂質は、針を介して直接的に、または、リポサクションマシ
ンを介して、患者から除去される。リポサクションの間に除去される脂質の量は、望まれ
る幹細胞の数に応じて、変化することが可能である。いくつかの実施形態では、リポサク
ションは、ミニリポサクションであり、ミニリポサクションでは、約３０ｃｃから約５０
ｃｃの脂質が患者から除去される。いくつかの実施形態では、リポサクションは、マイク
ロリポサクションであり、マイクロリポサクションでは、約５ｃｃから約２９ｃｃの脂質
が患者から除去される。いくつかの実施形態では、リポサクションは、典型的な臨床的リ
ポサクションであり、そのケースでは、３００ｃｃ以上の脂質が患者から除去される。

脂質が患者から除去されると、脂質は、無菌のプロセッシング容器またはカートリッジ
の中へ移送される。移送は、本明細書で説明されているように、無菌の手段を介して行わ
れる。いくつかの実施形態では、脂質は、シリンジを介して患者から除去され、シリンジ
とプロセッシング容器またはカートリッジとの間で、オス型およびメス型のルアーロック
コネクターを互いに取り付けることによって、シリンジからプロセッシング容器またはカ
ートリッジへ移送される。いくつかの実施形態では、脂質は、シリンジを介して患者から
除去され、シリンジは、シリンジと容器またはカートリッジとの間で、オス型およびメス
型のルアーロックコネクターを互いに取り付けることによって、プロセッシング容器また
はカートリッジの中で無菌ドッキングされている。いくつかの実施形態では、脂質は、シ
リンジを介して患者から除去され、シリンジとカートリッジの中のプロセッシング容器ま
たはカートリッジとの間で、オス型およびメス型のルアーロックコネクターを互いに取り
付けることによって、シリンジからプロセッシング容器またはカートリッジへ移送される
。いくつかの実施形態では、脂質は、リポサクションデバイスを介して患者から除去され
、無菌の接続デバイスを使用してリポサクションデバイスおよびプロセッシング容器また
はカートリッジを無菌ドッキングさせることによって、リポサクションデバイスからプロ
セッシング容器またはカートリッジへ移送される。

いくつかの実施形態では、移送は、重力流を介して行われることが可能である。いくつ
かの実施形態では、移送は、機械的に行われることが可能であり、たとえば、シリンジの
プランジャーを物理的に押圧することによって、および、シリンジの内部からプロセッシ
ング容器またはカートリッジの内部へ脂質を押し込むことによって、行われることが可能
である。いくつかの実施形態では、移送は、ポンプなどのようなデバイスを介して行われ
ることが可能である。

脂質を受け入れるために使用される容器またはカートリッジの容積は、患者から取得さ
れる脂質の量とともに変化することが可能である。いくつかの実施形態では、ミニリポサ
クションを介して除去された３０ｃｃから５０ｃｃの脂質が、９流量オンスから１９流量
オンスの容積を有する容器またはカートリッジへ移送される。

次いで、患者から除去される脂質の量に等しい無菌の生理食塩水の体積が、脂質を洗浄
するために、容器またはカートリッジへ移送される。例として、３０ｃｃの脂質が患者か
ら除去された場合には、次いで、３０ｍＬの無菌の生理食塩水が、サンプルを洗浄するた
めに使用される。いくつかの実施形態では、次いで、患者から除去される脂質の量よりも
大きい無菌の生理食塩水の体積が、脂質を洗浄するために、容器またはカートリッジへ移
送される。例として、３０ｃｃの脂質が患者から除去された場合には、次いで、３５ｍＬ
の無菌の生理食塩水が、サンプルを洗浄するために使用される。いくつかの実施形態では
、次いで、患者から除去される脂質の量よりも小さい無菌の生理食塩水の体積が、脂質を
洗浄するために、容器またはカートリッジへ移送される。例として、３０ｃｃの脂質が患
者から除去された場合には、次いで、２５ｍＬの無菌の生理食塩水が、サンプルを洗浄す
るために使用される。いくつかの実施形態では、無菌の生理食塩水の体積の組み合わせが
、脂質を洗浄するために、脂質の量に追加される。容器またはカートリッジへの生理食塩
水の移送は、本明細書で説明されているように、システムの無菌状態を維持するように実
施される。いくつかの実施形態では、無菌の生理食塩水を保持する容器とプロセッシング
容器またはカートリッジとの間で、オス型およびメス型のルアーロックコネクターを互い
に取り付けることによって、無菌の生理食塩水は、容器またはカートリッジへ移送される
。いくつかの実施形態では、無菌の接続デバイスを使用して、無菌の生理食塩水容器およ
びプロセッシング容器またはカートリッジを無菌ドッキングさせることによって、無菌の
生理食塩水は、容器またはカートリッジへ移送される。

洗浄は、脂質および無菌の生理食塩水を含有する容器またはカートリッジを穏やかに振
るかまたは旋回させることによって実施される。

次いで、容器またはカートリッジは、（今では洗浄された）脂質が無菌の生理食塩水か
ら分離されるように置かれる。脂質は生理食塩水よりも密度が低いので、脂質は、生理食
塩水の上部に上昇して浮かぶこととなる。分離が行われるために必要とされる時間の量は
、脂質サンプルの個々の構成に応じて変化することとなる。いくつかの実施形態では、分
離は、１分から３０分で生じ得る。いくつかの実施形態では、分離は、１分から１５分で
生じ得る。いくつかの実施形態では、分離は、１分から１０分で生じ得る。いくつかの実
施形態では、分離は、１分から５分で生じ得る。いくつかの実施形態では、分離は、１０
秒から１分で生じ得る。

次いで、生理食塩水は、可能な限り完全に容器またはカートリッジからドレン排出され
、したがって、脂質だけが残る。ドレン排出は、本方法において利用される容器またはカ
ートリッジのタイプに応じて、さまざまな手段を介して行われることが可能である。いく
つかの実施形態では、生理食塩水は、容器またはカートリッジの底部に位置付けされてい
るチューブを介して、容器またはカートリッジから外へドレン排出される。ドレン排出は
、シリンジもしくはポンプのいずれかを使用して能動的に進行するか、または、重力流を
介して受動的に進行することが可能である。いくつかの実施形態では、ドレン排出は、本
明細書で説明されているように、無菌のシステムの完全性を維持するように行われる。

洗浄の完了後に、脂質が黄金色になり、生理食塩水がわずかにだけ濁るまで、洗浄が繰
り返される。いくつかの実施形態では、洗浄は、１〜５回行われ、いくつかの実施形態で
は、１〜４回行われ、いくつかの実施形態では、１〜３回行われ、いくつかの実施形態で
は、１〜２回行われ、いくつかの実施形態では、１回行われる。

洗浄が完了すると、脂質は、プロセッシングのために準備される。

随意的に、これは必要とされないが、無菌の生理食塩水が、プロセッシングのためのバ
ッグに追加される。生理食塩水の追加は、細胞および／または小さい細胞群がプロセッシ
ングの間に互いから離れるように自由に移動できる空間を提供することとなり、それによ
って、脂質を個々の細胞へと分解することを助ける。生理食塩水が追加される場合には、
本明細書で説明されているように、無菌のシステムの完全性を維持することとなる様式で
、生理食塩水が追加される。

随意的に追加される生理食塩水の体積は、変化することが可能である。いくつかの実施
形態では、追加される生理食塩水の体積は、患者から除去される脂質の体積の０倍から２
倍の範囲にある。いくつかの実施形態では、等しい量の生理食塩水が使用される（たとえ
ば、３０ｃｃの脂質に対して３０ｍＬの生理食塩水）。

過剰な空気が、ポンプまたはシリンジを使用して、容器またはカートリッジから除去さ
れる。いくつかの実施形態では、過剰な空気が、無菌の生理食塩水洗浄液がそこからドレ
ン排出される容器またはカートリッジの底部に位置付けされている同じチューブから除去
される。いくつかの実施形態では、空気は、本明細書で説明されているように、無菌の閉
じたシステムの完全性を維持する様式でドレン排出される。

次いで、プロセッシング容器またはカートリッジは、プロセッシング装置へ移動させら
れる。適切なプロセッシング装置２００の例が、図２に示されている。示されている実施
形態では、プロセッシング容器またはカートリッジ２０５は、プロセッシングのためのリ
ジッドプラットフォーム２１０の上に固着されている。プラットフォーム２１０は、ＥＳ
Ｗプロセッシングの間に、容器またはカートリッジ２０５の移動を制御する。

プラットフォーム２１０は、木材、金属、プラスチック、およびアクリルなどを含む、
任意の適切なリジッド材料から作製され得る。いくつかの実施形態では、プラットフォー
ム２１０は、木材から作製されている。

プロセッシング装置２００は、容器またはカートリッジ２０５の内部に衝撃波を送達す
ることができる衝撃波アプリケーター２１５を収容している。衝撃波アプリケーター２１
５は、アプリケータープラットフォーム２２０を介してプロセッシング装置２００の上に
収容されている。アプリケータープラットフォーム２２０および衝撃波アプリケーター２
１５は、容器またはカートリッジ２０５の中に含有されている脂質から所定の距離だけ離
れて維持され、衝撃波アプリケーター２１５が、決して、脂質と直接的に接触した状態に
置かれないようになっている。これは、脂質へ送達される衝撃波が対外的であり、または
ＥＳＷであるということを保証する。いくつかの実施形態では、衝撃波アプリケーター２
１５は、プロセッシング容器またはカートリッジ２０５と直接的に接触した状態に置かれ
ていてもよい。そのような実施形態では、容器またはカートリッジ２０５の壁部は、衝撃
波アプリケーター２１５が決して脂質と直接的に接触しないということを保証する。

アプリケータープラットフォーム２２０の移動、ひいては、衝撃波アプリケーター２１
５の移動は、３つの方向の平面（Ｘ、Ｙ、およびＺ）の中で行われることが可能であり、
そのそれぞれは、それ自身のモーター：Ｘ平面モーター２３０、Ｙ平面モーター２３５、
およびＺ平面モーター２４０によって制御される。いくつかの実施形態では、これらのモ
ーターは、ＮＥＭＡ１７ステッパーモーターである。モーター２３０、２３５、および
２４０のそれぞれは、モーターコントローラー２２５によって制御され、モーターコント
ローラー２２５は、容器またはカートリッジ２０５の上方および周りで、アプリケーター
プラットフォーム２２０および衝撃波アプリケーター２１５の移動を３次元で可能にする
。いくつかの実施形態では、モーターは、Ｍａｒｌｉｎファームウェアによってプログラ
ムされたＡｒｄｕｉｎｏマイクロプロセッサーｖ６ボードによって制御される。いくつか
の実施形態では、モーターは、Ｍａｒｌｉｎファームウェアを備えたＡｒｄｕｉｎｏｖ
６ボードによって制御される。いくつかの実施形態では、Ｘ平面モーター２３０だけが使
用される。いくつかの実施形態では、Ｙ平面モーター２３５だけが使用される。いくつか
の実施形態では、Ｚ平面モーター２４０だけが使用される。いくつかの実施形態では、Ｘ
平面モーター２３０だけが使用される。いくつかの実施形態では、Ｘ平面モーター２３０
およびＹ平面モーター２３５だけが使用される。いくつかの実施形態では、Ｘ平面モータ
ー２３０およびＺ平面モーター２４０だけが使用される。いくつかの実施形態では、Ｙ平
面モーター２３５およびＺ平面モーター２４０だけが使用される。いくつかの実施形態で
は、Ｘ平面モーター２３０、Ｙ平面モーター２３５、およびＺ平面モーター２４０が使用
される。

アプリケータープラットフォーム２２０および衝撃波アプリケーター２１５のこの３次
元の移動は、抽出されるサンプルの中の脂質のすべてが、プロセッシングの間に対外衝撃
波に露出されることを可能にする。

次いで、脂質をバラバラにするために、衝撃波が、衝撃波アプリケーター２１５から、
トランスミッションゲル、または、トランスミッションゲルを含有する膜を通して、容器
またはカートリッジ２０５の壁部を通して、脂質サンプルへ送達され、小さい細胞群およ
び個々の細胞を脂質から切り離す。いくつかの実施形態では、トランスミッションゲルは
、ＤＪＯ，ＬＬＣ，１４３０ＤｅｃｉｓｉｏｎＳｔｒｅｅｔ，Ｖｉｓｔａ，ＣＡ９
２０８１，ＵＳＡによってＣｈａｔｔａｎｏｏｇａのために製造されるＲＥＦ４２４８
ＣｏｎｄｕｃｔｏｒＴｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎＧｅｌである。プロセッシングの前
に無菌の生理食塩水が脂質に追加されるそれらの実施形態では、脂質から切り離された小
さい細胞群および／または個々の細胞が、生理食塩水の中へ移動することとなる。

衝撃波アプリケーター２１５は、衝撃波発生器２４５によって動力を与えられ、衝撃波
発生器２４５は、ＥＳＷを作り出し、ＥＳＷは、衝撃波アプリケーター２１５を介して脂
質へ伝送される。いくつかの実施形態では、衝撃波発生器は、ＳｔｏｒｚＭｅｄｉｃａ
ｌＡＧ，８２７４Ｔａｇｅｒｗｉｌｅｎ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ製のＭａｓｔｅｒ
ＰｕｌｓＭＰ１００である。いくつかの実施形態では、衝撃波発生器は、Ｌｕｍｓａｉ
ｌＩｎｄｕｓｔｒｉａｌＩｎｃ．，４／Ｆ，Ｎｏ．９Ｙｉ，Ｌａｎｅ２，Ｓｕｉ
ｄｅＲｏａｄ，Ｓｈａｎｇｈａｉ，２００３３１，Ｃｈｉｎａ製のＢＳ−ＳＷＴ２Ｘで
ある。

脂質へ送達されるＥＳＷのパワーは、変化することが可能である。たとえば、厚い壁で
囲まれた容器またはカートリッジ２０５の壁部を透過するために、ＥＳＷのパワーを増加
させることが必要である可能性がある。一般的に、脂質へ送達されるＥＳＷのパワーは、
容器もしくはカートリッジ２０５の壁部の厚さ、および／または、容器もしくはカートリ
ッジ２０５が作製されている材料に応じて、変化することが可能である。いくつかの実施
形態では、脂質へ送達されるＥＳＷのパワーは、０．５ｂａｒから５．０ｂａｒの範囲に
ある。いくつかの実施形態では、脂質へ送達されるＥＳＷのパワーは、１．０ｂａｒから
４．５ｂａｒの範囲にある。いくつかの実施形態では、脂質へ送達されるＥＳＷのパワー
は、１．５ｂａｒから４．０ｂａｒの範囲にある。いくつかの実施形態では、脂質へ送達
されるＥＳＷのパワーは、２．０ｂａｒから３．５ｂａｒの範囲にある。いくつかの実施
形態では、容器２０５は、０．２５ｍｍ厚の壁部を有するビニールバッグであり、ＥＳＷ
のパワーレベルは、２．０ｂａｒから２．５ｂａｒの範囲にある。

衝撃波アプリケーター２１５によって送達されるＥＳＷによってカバーされるエリアは
、変化することが可能である。衝撃波アプリケーター２１５によってカバーされるエリア
が大きくなればなるほど、ＥＳＷに露出される脂質の表面積は大きくなる。いくつかの実
施形態では、衝撃波アプリケーター２１５によってカバーされる合計面積は、１ｃｍ^２か
ら１００ｃｍ^２の範囲にあり、いくつかの実施形態では、１ｃｍ^２から９０ｃｍ^２の範囲
にあり、いくつかの実施形態では、１ｃｍ^２から８０ｃｍ^２の範囲にあり、いくつかの実
施形態では、１ｃｍ^２から７０ｃｍ^２の範囲にあり、いくつかの実施形態では、１ｃｍ^２
から６０ｃｍ^２の範囲にあり、いくつかの実施形態では、１ｃｍ^２から５０ｃｍ^２の範囲
にあり、いくつかの実施形態では、１ｃｍ^２から４０ｃｍ^２の範囲にあり、いくつかの実
施形態では、１ｃｍ^２から３０ｃｍ^２の範囲にあり、いくつかの実施形態では、１ｃｍ^２
から２０ｃｍ^２の範囲にあり、いくつかの実施形態では、１ｃｍ^２から１０ｃｍ^２の範囲
にあり、いくつかの実施形態では、１ｃｍ^２から５ｃｍ^２の範囲にある。いくつかの実施
形態では、衝撃波アプリケーター２１５によってカバーされる合計面積は、５ｃｍ^２であ
る。

１つの実施形態では、容器２０５は、０．２５ｍｍ厚の壁部を有する１９オンスのビニ
ールバッグであり、患者から取得される脂質の合計量は、３０ｃｃであり、および、随意
的な追加の３０ｍＬの生理食塩水（脂質サンプルに等しい体積）が、プロセッシングの前
にビニールバッグに追加される。この実施形態では、ＥＳＷに露出されるバッグの合計面
積、ひいては、脂質サンプルの合計量は、おおよそ５ｃｍ^２である。

脂質サンプルへ送達される衝撃波の数は、変化することが可能である。いくつかの実施
形態では、衝撃波の合計数は、５，０００から１００，０００の範囲にあり、いくつかの
実施形態では、１０，０００から５０，０００の範囲にあり、いくつかの実施形態では、
１０，０００から２５，０００の範囲にあり、いくつかの実施形態では、１０，０００か
ら２０，０００の範囲にある。いくつかの実施形態では、衝撃波の合計数は、２５，００
０である。

この実施形態では、幹細胞は、患者から取得される脂質サンプルから分離される。衝撃
波アプリケーター２１５の上の５ｃｍ^２のアプリケーターチップを使用して、２．０から
２．５のｂａｒ範囲における１０，０００から５０，０００の衝撃波数範囲は、幹細胞お
よび間質血管細胞画分の両方を脂質から分離するのに十分である。本明細書で使用されて
いるように、「間質血管細胞画分」は、細胞画分（これは、いくつかの実施形態では、脂
質である）を分離および解離することから取得される細胞を含む、プロセッシングされた
組織サンプルから取得される細胞画分を意味している。間質血管細胞画分は、限定するこ
となく、なかでも、幹細胞、成長因子、および前駆細胞を含む。

ＥＳＷが脂質サンプルに印加された後に、容器またはカートリッジは、短い時間の期間
にわたって、機械的な撹拌にさらされる。いくつかの実施形態では、機械的な撹拌は振る
ことである。いくつかの実施形態では、機械的な撹拌は、１回または複数回、容器または
カートリッジ２０５を逆さまにすることである。いくつかの実施形態では、短い時間の期
間は、１秒から３０秒の範囲にあり、いくつかの実施形態では、１秒から１５秒の範囲に
あり、いくつかの実施形態では、１秒から１０秒の範囲にある。いくつかの実施形態では
、短い時間の期間は、おおよそ１０秒である。撹拌は、脂質から遊離された幹細胞および
間質血管細胞画分が、容器またはカートリッジ２０５の中に依然として存在し得る脂肪質
の細胞破片および任意のなかなか消えない脂質組織から分離することを可能にする。

次いで、（今ではプロセッシングされた）脂質が、ＥＳＷによって脂質から分離された
幹細胞および間質血管細胞画分を今では含有する無菌の生理食塩水から分離されるように
、容器またはカートリッジ２０５は置かれる。脂質は、幹細胞を含有する生理食塩水より
も密度が低いので、脂質は、生理食塩水の上部に上昇して浮かぶこととなる。分離が行わ
れるために必要とされる時間の量は、脂質サンプルの個々の構成に応じて変化することと
なる。いくつかの実施形態では、分離は、１分から３０分で生じ得る。いくつかの実施形
態では、分離は、１分から１５分で生じ得る。いくつかの実施形態では、分離は、１分か
ら１０分で生じ得る。いくつかの実施形態では、分離は、１分から５分で生じ得る。いく
つかの実施形態では、分離は、１０秒から１分で生じ得る。いくつかの実施形態では、分
離は、１分未満に行われることが可能である。

幹細胞は、ここで、脂質サンプルから分離されており、ここで、無菌の生理食塩水層の
中に懸濁している。

次いで、幹細胞を含有する生理食塩水層は、可能な限り完全に容器またはカートリッジ
２０５から除去され、したがって、脂質だけが残る。除去は、本方法において利用される
容器またはカートリッジ２０５のタイプに応じて、さまざまな手段を介して行われること
が可能である。いくつかの実施形態では、生理食塩水は、容器またはカートリッジ２０５
の底部に位置付けされているチューブを介して、容器またはカートリッジ２０５から外へ
ドレン排出される。ドレン排出は、シリンジもしくはポンプのいずれかを使用して能動的
に進行するか、または、重力流を介して受動的に進行することが可能である。いくつかの
実施形態では、幹細胞を含有する層は、本明細書で説明されているように、閉じた無菌の
環境の完全性を維持することとなる様式で除去される。

いくつかの実施形態では、幹細胞を含有する生理食塩水層は、容器またはカートリッジ
２０５からの除去の間に、フィルターを通過させられる。フィルターのサイズは変化する
ことが可能である。いくつかの実施形態では、フィルターサイズは、４０μｍから１００
μｍの範囲にある。いくつかの実施形態では、フィルターサイズは、７０μｍである。さ
まざまな実施形態では、フィルターは、ナイロンである。

容器またはカートリッジ２０５からの除去の後または間のいずれかにおいて、幹細胞を
含有する生理食塩水は、１つまたは複数の遠心チューブの中へ移動させられる。いくつか
の実施形態では、移動は、本明細書で説明されているように、閉じた無菌の環境の完全性
を維持することとなる様式で行われる。遠心チューブの底部においてペレットの中へ幹細
胞を濃縮させるために、遠心分離が続く。

幹細胞は、３分から１０分にわたる５００ｇから１，６００ｇでの遠心分離によって濃
縮される。いくつかの実施形態では、幹細胞は、１０分にわたる１，２００ｇでの遠心分
離によって濃縮される。

流体は、チューブから除去され、底部に幹細胞だけを残す。流体は、デカンティング、
吸引、または同様の手段によって除去され得る。

少量の流体が、幹細胞を再懸濁させるために遠心チューブの中へ入れられる。いくつか
の実施形態では、遠心チューブに追加される流体の量は、１ｍＬから５ｍＬの範囲にある
。いくつかの実施形態では、流体は、生理食塩水、多血小板血漿、ヒアルロン酸、固定用
ゲル（fixing gel）、ヒドロゲル、スカッフォールド、フィブリン、グルー、または、先
述のもののいずれかの組み合わせである。いくつかの実施形態では、細胞が、遠心分離吸
引物の中に再懸濁される。

幹細胞が懸濁液の中に浮かんでいる状態で、幹細胞は、使用のための準備ができている
。そのような使用は、限定することなく、幹細胞が導出された患者の中への再導入、凍結
保存、および膨張などを含むことが可能である。いくつかの実施形態では、濃縮されて再
懸濁された幹細胞は、患者使用のために、皮下注射針を介してシリンジの中へ移動させら
れる。いくつかの実施形態では、濃縮されて再懸濁された幹細胞は、心臓、筋肉、骨、軟
骨、肝臓、腎臓、または、他の組織および器官構造体へと成長するための組織スカッフォ
ールドの中へ種を撒かれる。いくつかの実施形態では、濃縮されて再懸濁された幹細胞は
、幹細胞が多能性転写因子（pluripotency transcription factors）を表現することを引
き起こすによって、人工多能性幹細胞へと変換される。

脂質から幹細胞をプロセッシングする方法の第２の実施形態は、以下の通りである。

脂質が、リポサクションを介して患者から取得される。リポサクションは、シリンジを
介して実施され得、ここで、脂質は、針を介して直接的に、または、リポサクションマシ
ンを介して、患者から除去される。リポサクションの間に除去される脂質の量は、望まれ
る幹細胞の数に応じて、変化することが可能である。いくつかの実施形態では、脂質は、
シリンジを介して患者から除去され、シリンジは、シリンジとカートリッジとの間で、オ
ス型およびメス型のルアーロックコネクターを互いに取り付けることによって、カートリ
ッジの中で無菌ドッキングされている。いくつかの実施形態では、脂質は、シリンジを介
して患者から除去され、シリンジとカートリッジの中のプロセッシング容器またはカート
リッジとの間で、オス型およびメス型のルアーロックコネクターを互いに取り付けること
によって、シリンジからプロセッシング容器またはカートリッジへ移送される。いくつか
の実施形態では、リポサクションは、ミニリポサクションであり、ミニリポサクションで
は、約３０ｃｃから約５０ｃｃの脂質が患者から除去される。いくつかの実施形態では、
リポサクションは、マイクロリポサクションであり、マイクロリポサクションでは、約５
ｃｃから約２９ｃｃの脂質が患者から除去される。いくつかの実施形態では、リポサクシ
ョンは、典型的な臨床的リポサクションであり、そのケースでは、３００ｃｃ以上の脂質
が患者から除去される。

脂質が患者から除去されると、脂質は、無菌のプロセッシング容器またはカートリッジ
の中へ移送される。移送は、本明細書で説明されているように、無菌の手段を介して行わ
れる。いくつかの実施形態では、脂質は、シリンジを介して患者から除去され、シリンジ
とプロセッシング容器またはカートリッジとの間で、オス型およびメス型のルアーロック
コネクターを互いに取り付けることによって、シリンジからプロセッシング容器またはカ
ートリッジへ移送される。いくつかの実施形態では、脂質は、リポサクションデバイスを
介して患者から除去され、無菌の接続デバイスを使用してリポサクションデバイスおよび
プロセッシング容器またはカートリッジを無菌ドッキングさせることによって、リポサク
ションデバイスからプロセッシング容器またはカートリッジへ移送される。

次いで、患者から除去される脂質の量に等しい無菌の生理食塩水の体積が、脂質を洗浄
するために、容器またはカートリッジへ移送される。例として、３０ｃｃの脂質が患者か
ら除去された場合には、次いで、３０ｍＬの無菌の生理食塩水が、サンプルを洗浄するた
めに使用される。いくつかの実施形態では、脂質は、シリンジを介して患者から除去され
、シリンジは、シリンジとカートリッジとの間で、オス型およびメス型のルアーロックコ
ネクターを互いに取り付けることによって、カートリッジの中で無菌ドッキングされてい
る。いくつかの実施形態では、脂質は、シリンジを介して患者から除去され、シリンジと
カートリッジの中のプロセッシング容器またはカートリッジとの間で、オス型およびメス
型のルアーロックコネクターを互いに取り付けることによって、シリンジからプロセッシ
ング容器またはカートリッジへ移送される。容器またはカートリッジへの生理食塩水の移
送は、本明細書で説明されているように、システムの無菌状態を維持するように実施され
る。いくつかの実施形態では、無菌の生理食塩水を保持する容器とプロセッシング容器ま
たはカートリッジとの間で、オス型およびメス型のルアーロックコネクターを互いに取り
付けることによって、無菌の生理食塩水は、容器またはカートリッジへ移送される。いく
つかの実施形態では、無菌の接続デバイスを使用して、無菌の生理食塩水容器およびプロ
セッシング容器またはカートリッジを無菌ドッキングさせることによって、無菌の生理食
塩水は、容器またはカートリッジへ移送される。

次いで、容器またはカートリッジは、（今では洗浄された）脂質が無菌の生理食塩水か
ら分離されるように置かれる。脂質は生理食塩水よりも密度が低いので、脂質は、生理食
塩水の上部に上昇して浮かぶこととなる。分離が行われるために必要とされる時間の量は
、脂質サンプルの個々の構成に応じて変化することとなる。いくつかの実施形態では、分
離は、１分から３０分で生じ得る。いくつかの実施形態では、分離は、１分から１５分で
生じ得る。いくつかの実施形態では、分離は、１分から１０分で生じ得る。いくつかの実
施形態では、分離は、１分から５分で生じ得る。

洗浄の完了後に、脂質が黄金色になり、生理食塩水がわずかにだけ濁るまで、洗浄が繰
り返される。いくつかの実施形態では、洗浄は、１〜５回行われ、いくつかの実施形態で
は、１〜４回行われ、いくつかの実施形態では、１〜３回行われ、いくつかの実施形態で
は、１〜２回行われ、いくつかの実施形態では、１回行われ。

次いで、プロセッシング容器またはカートリッジは、プロセッシング装置へ移動させら
れる。適切なプロセッシング装置３００の例が、図３に示されている。示されている実施
形態では、プロセッシング容器またはカートリッジ２０５は、プロセッシングのためのリ
ジッドプラットフォーム３１５の上に固着されている。プラットフォーム３１５は、プロ
セッシングの間に、容器またはカートリッジ２０５の移動を制御する。

プラットフォーム３１５は、木材およびプラスチックなどを含む、任意の適切なリジッ
ド材料から作製され得る。いくつかの実施形態では、プラットフォーム３１５は、木材か
ら作製されている。

この実施形態では、機械的衝撃が使用され、脂質組織を粉砕し、幹細胞を解放する。

機械的衝撃は、モーター３０５によって発生させられ、モーター３０５は、インパクト
アーム３１０を駆動し、インパクトアーム３１０は、プロセッシングされることとなる脂
質を含有する容器またはカートリッジ２０５と物理的な接触をする。この実施形態では、
モーター３０５は、インパクトアーム３１０を駆動し、インパクトアーム３１０が上下に
関節運動するようになっており、その運動の範囲の底部において、容器またはカートリッ
ジ２０５と接触する。いくつかの実施形態では、モーターは、ＢｌａｃｋａｎｄＤｅ
ｃｋｅｒ，１０００ＳｔａｎｌｅｙＤｒｉｖｅ，ＮｅｗＢｒｉｔａｉｎ，ＣＴ０
６０５３，ＵＳＡ製のモデルＢＤＥＪＳ３００Ｃからの４．５Ａｍｐモーターである。

いくつかの実施形態では、モーター３０５は、可変速モーターであり、この可変速モー
ターは、０ｒｐｍから３０，０００ｒｐｍの範囲にあるレートで、いくつかの実施形態で
は、０ｒｐｍから２０，０００ｒｐｍの範囲にあるレートで、いくつかの実施形態では、
０ｒｐｍから１０，０００ｒｐｍの範囲にあるレートで、いくつかの実施形態では、０ｒ
ｐｍから５，０００ｒｐｍの範囲にあるレートで、インパクトアームを駆動するために調
節可能である。

いくつかの実施形態では、モーター３０５は、ギヤリングを含み、ギヤリングは、より
多くのトルクを発生させるために、モーター３０５が全速力（いくつかの実施形態では、
３０，０００ｒｐｍ）で動作しているときに、インパクトアーム３１０の速度を低減させ
ることができる。これが行われるときに、インパクトアーム３１０によって発生させられ
る運動量は、容器またはカートリッジ２０５の中の組織へ移送される。これは、脂質組織
が分解され、幹細胞が脂肪質の組織から遊離される、レートを大きく増加させる。

１つの実施形態では、モーター３０５は、３０，０００ｒｐｍから３，０００ｒｐｍの
速度において、１／１０の減速を可能にするようにギヤを取り付けられている。この実施
形態では、モーター３０５は、０．７５インチのギヤ直径を含み、これは、この１／１０
の減速を可能にする。３，０００ｒｐｍ、および、０．７５インチのギヤ直径において、
インパクトアーム３１０は、毎秒１１７．８インチの速度に到達し、その速度において、
インパクトアーム３１０は、前後に関節運動し、したがって、容器またはカートリッジ２
０５と接触する。インパクトアーム３１０が容器またはカートリッジ２０５と接触するこ
とができる速度は、大きく低減されたプロセッシング時間を可能にする。これは、非常に
長いプロセッシング時間を必要とする、公知のまたは既存の組織プロセッシング技法に対
して、重大な利点を持つ。

組織は、脂質が所望のレベルに分解されるまで、または、所望の量の幹細胞が脂質から
遊離されるまで、機械的衝撃に露出される。いくつかの実施形態では、脂質サンプルは、
３０分以内にプロセッシングされる。いくつかの実施形態では、脂質サンプルは、３０秒
から３０分の間でプロセッシングされ、いくつかの実施形態では、３０秒から２０分の間
でプロセッシングされ、いくつかの実施形態では、３０秒から１０分の間でプロセッシン
グされ、いくつかの実施形態では、３０秒から５分の間でプロセッシングされる。

プラットフォーム３１５の移動は、３つの方向の平面（Ｘ、Ｙ、およびＺ）の中で行わ
れ、そのそれぞれは、それ自身のモーター：Ｘ平面モーター２３０、Ｙ平面モーター２３
５、およびＺ平面モーター２４０によって制御される。いくつかの実施形態では、Ｘ平面
モーター２３０だけが使用される。いくつかの実施形態では、Ｙ平面モーター２３５だけ
が使用される。いくつかの実施形態では、Ｚ平面モーター２４０だけが使用される。いく
つかの実施形態では、Ｘ平面モーター２３０だけが使用される。いくつかの実施形態では
、Ｘ平面モーター２３０およびＹ平面モーター２３５だけが使用される。いくつかの実施
形態では、Ｘ平面モーター２３０およびＺ平面モーター２４０だけが使用される。いくつ
かの実施形態では、Ｙ平面モーター２３５およびＺ平面モーター２４０だけが使用される
。いくつかの実施形態では、Ｘ平面モーター２３０、Ｙ平面モーター２３５、およびＺ平
面モーター２４０が使用される。モーター２３０、２３５、および２４０のそれぞれは、
モーターコントローラー２２５によって制御され、モーターコントローラー２２５は、３
次元でのプラットフォーム３１５の移動を可能にする。

プラットフォーム３１５のこの最大で３次元の移動は、抽出されたサンプルの中の脂質
のすべてが、プロセッシングの間に機械的衝撃に露出されることを可能にし、サンプルお
よびプロセッシング装置の最適な位置決めを可能にする。

長さ、インパクト表面の面積、インパクト表面の数、および、インパクトアーム３１０
の形状は、変化することが可能である。いくつかの実施形態では、インパクト表面の合計
面積、および／または、インパクト表面の合計数を増加させることは、脂質サンプルをプ
ロセッシングするために必要とされる時間の量を低減させる。

次いで、（今ではプロセッシングされた）脂質が、機械的衝撃によって脂質から分離さ
れた幹細胞を今では含有する無菌の生理食塩水から分離されるように、容器またはカート
リッジ２０５は置かれる。脂質は、生理食塩水よりも密度が低いので、脂質は、生理食塩
水の上部に上昇して浮かぶこととなる。分離が行われるために必要とされる時間の量は、
脂質サンプルの個々の構成に応じて変化することとなる。いくつかの実施形態では、分離
は、１分から３０分で生じ得る。いくつかの実施形態では、分離は、１分から１５分で生
じ得る。いくつかの実施形態では、分離は、１分から１０分で生じ得る。いくつかの実施
形態では、分離は、１分から５分で生じ得る。いくつかの実施形態では、分離は、１分未
満に行われることが可能である。いくつかの実施形態では、分離は、１０秒から１分で生
じ得る。いくつかの実施形態では、分離は、１分未満に行われることが可能である。

幹細胞および間質血管細胞画分は、ここで、脂質サンプルから分離されており、ここで
、生理食塩水の中に懸濁している。

いくつかの実施形態では、幹細胞を含有する生理食塩水は、容器またはカートリッジ２
０５からの除去の間に、フィルターを通過させられる。フィルターのサイズは変化するこ
とが可能である。いくつかの実施形態では、フィルターサイズは、４０μｍから１００μ
ｍの範囲にある。いくつかの実施形態では、フィルターサイズは、７０μｍである。さま
ざまな実施形態では、フィルターは、ナイロンである。

少量の流体が、幹細胞を再懸濁させるために遠心チューブの中へ入れられる。いくつか
の実施形態では、遠心チューブに追加される流体の量は、１ｍＬから５ｍＬの範囲にある
。いくつかの実施形態では、流体は、生理食塩水、多血小板血漿、ヒアルロン酸、固定用
ゲル、ヒドロゲル、スカッフォールド、フィブリングルー、グルー、または、先述のもの
のいずれかの組み合わせである。いくつかの実施形態では、細胞が、遠心分離吸引物の中
に再懸濁される。

幹細胞が懸濁液の中にある状態で、幹細胞は、使用のための準備ができている。そのよ
うな使用は、限定することなく、幹細胞が導出された患者の中への再導入、凍結保存、お
よび膨張などを含むことが可能である。いくつかの実施形態では、濃縮されて再懸濁され
た幹細胞は、患者使用のために、皮下注射針を介してシリンジの中へ移動させられる。い
くつかの実施形態では、濃縮されて再懸濁された幹細胞は、心臓、筋肉、骨、軟骨、肝臓
、腎臓、または、他の組織および器官構造体へと成長するための組織スカッフォールドの
中へ種を撒かれる。いくつかの実施形態では、濃縮されて再懸濁された幹細胞は、幹細胞
が多能性転写因子を表現することを引き起こすによって、人工多能性幹細胞へと変換され
る。

上記に説明されている第１および第２の方法では、容器またはカートリッジ、および、
機械的なエネルギー供給源は、移動可能である。いくつかの実施形態では、脂質は、ＥＳ
Ｗまたはインパクト表面の下に設置されているチャンバーを通してポンプ送りされる。こ
れらの実施形態では、バッグおよび機械的なエネルギー供給源の両方は、適切な場所に固
定されており、組織は、チャンバーを通過させられ、ＥＳＷおよび／または機械的なエネ
ルギー供給源に露出される。

脂質から幹細胞をプロセッシングする方法の第３の実施形態は、以下の通りである。

脂質が患者から除去されると、脂質は、無菌のプロセッシングカートリッジの中へ移送
される。移送は、本明細書で説明されているように、無菌の手段を介して行われる。いく
つかの実施形態では、脂質は、シリンジを介して患者から除去され、シリンジとプロセッ
シングカートリッジとの間で、オス型およびメス型のルアーロックコネクターを互いに取
り付けることによって、シリンジからプロセッシングカートリッジへ移送される。いくつ
かの実施形態では、脂質は、シリンジを介して患者から除去され、シリンジは、シリンジ
とカートリッジとの間で、オス型およびメス型のルアーロックコネクターを互いに取り付
けることによって、カートリッジの中で無菌ドッキングされている。いくつかの実施形態
では、脂質は、シリンジを介して患者から除去され、シリンジとカートリッジの中のプロ
セッシング容器またはカートリッジとの間で、オス型およびメス型のルアーロックコネク
ターを互いに取り付けることによって、シリンジからプロセッシング容器またはカートリ
ッジへ移送される。いくつかの実施形態では、脂質は、リポサクションデバイスを介して
患者から除去され、無菌の接続デバイスを使用してリポサクションデバイスおよびプロセ
ッシングカートリッジを無菌ドッキングさせることによって、リポサクションデバイスか
らプロセッシングカートリッジへ移送される。

いくつかの実施形態では、移送は、重力流を介して行われることが可能である。いくつ
かの実施形態では、移送は、機械的に行われることが可能であり、たとえば、シリンジの
プランジャーを物理的に押圧することによって、および、シリンジの内部からプロセッシ
ングカートリッジの内部チャンバーの中へ脂質を押し込むことによって、行われることが
可能である。いくつかの実施形態では、移送は、ポンプなどのようなデバイスを介して行
われることが可能である。

脂質を受け入れるカートリッジ４００、５００の内部チャンバーの容積（たとえば、図
４および図５に提供されているカートリッジ実施形態を参照）は、患者から取得される脂
質の量とともに変化することが可能である。いくつかの実施形態では、ミニリポサクショ
ンを介して除去される３０ｃｃから５０ｃｃの脂質が、カートリッジ４００、５００の脂
肪チャンバー４０５、５０５へ移送される。

この実施形態では、脂質は、自己完結型のカートリッジ４００、５００の特定のコンポ
ーネント４０５、５０５の中へ注入され、カートリッジ４００、５００は、サンプルを外
側の環境に露出させることなく脂質サンプルのプロセッシングをカートリッジ４００、５
００の中に完全に収容するように設計されている。いくつかの実施形態では、脂質を受け
入れるカートリッジ４００、５００の中に位置付けされている脂肪チャンバー４０５、５
０５は、９流量オンスから１９流量オンスの容積を有する可撓性のバッグである。

さまざまな態様では、カートリッジ４００、５００は、ＥＳＷまたは機械的衝撃デバイ
ス、および、本明細書で開示されている方法のいずれかとともに使用するように設計され
ている。いくつかの実施形態では、プロセッシングは、下記に説明されているプロセッシ
ングステップのうちのいくつかを自動的に実行するマシンによって実施される。いくつか
の実施形態では、プロセッシングは、ユーザーによって実施され、ユーザーは、下記に説
明されているステップを手動で実施する。両方の実施形態において、プロセッシングは、
外部で制御され、カートリッジ４００、５００の内部プロセッシングが、サンプルが外側
の環境に露出されることもなく、無菌の様式で実施されるようになっている。

示されている実施形態では、脂質サンプルは、第１の一方向弁４１０、５１０に脂質サ
ンプルを通すことによって、脂肪チャンバー４０５、５０５の中へ導入される。第１の一
方向フロー弁４１０、５１０の方向は、示されているように、脂肪チャンバー４０５、５
０５の内部へ向かう方向になっている。いくつかの実施形態では、患者から取り出した後
の脂質を保持する容器と、プロセッシングカートリッジ４００、５００の第１の一方向弁
４１０、５１０との間で、オス型およびメス型のルアーロックコネクターを互いに取り付
けることによって、脂質は、脂肪チャンバー４０５、５０５の内部チャンバーの中へ導入
される。いくつかの実施形態では、脂質は、リポサクションデバイスを介して患者から除
去され、無菌の接続デバイスを使用して、リポサクションデバイスおよびプロセッシング
カートリッジを無菌ドッキングさせることによって、リポサクションデバイスからプロセ
ッシングカートリッジへ移送される。

脂肪チャンバー４０５、５０５の内側に入ると、脂質は、プロセッシングの前に洗浄さ
れる。カートリッジ４００、５００は、流体リザーバー４１５、５１５を含有しており、
流体リザーバー４１５、５１５は、無菌の生理食塩水で充填されており、いくつかの実施
形態では、無菌の１ｘリン酸緩衝生理食塩水で充填されており、これは、組織を洗浄する
ために使用される。無菌の生理食塩水を脂肪チャンバー４０５、５０５の内部へ導入する
ために、生理食塩水は、第２の一方向弁４２０、５２０を通して脂肪チャンバー４０５、
５０５の内部へ入れられる。フローの方向は、示されているようになっている。生理食塩
水は、外部アクチュエーター４２５、５２５の使用を介して、脂肪チャンバー４０５、５
０５の内部へ移動させられ、外部アクチュエーター４２５、５２５は、第１の一方向弁４
２０、５２０を通して生理食塩水を押し込むために、第１のプランジャー４３０、５３０
を移動させる。いくつかの実施形態では、外部アクチュエーター４２５、５２５は、ユー
ザーによって手動で動作させられ、ユーザーは、所望の量の生理食塩水が第２の一方向弁
４２０、５２０を通して脂肪チャンバー４０５、５０５の内部へ入れられるまで、アクチ
ュエーター４２５、５２５を押圧する。いくつかの実施形態では、外部アクチュエーター
４２５、５２５の移動は自動化されており、外部マシンが、外部アクチュエーター４２５
、５２５が示されている方向に移動することを引き起こし、それによって、第２の一方向
弁４２０、５２０を通して脂肪チャンバー４０５、５０５の内部へ入る所望の量の生理食
塩水を計量する。

洗浄は、脂質および無菌の生理食塩水を含有するカートリッジ４００、５００を穏やか
に振るかまたは旋回させることによって実施される。

次いで、カートリッジ４００、５００は、（今では洗浄された）脂質が無菌の生理食塩
水から分離されるように置かれる。この実施形態では、カートリッジ４００、５００は、
２つの変形例を有している。いくつかの実施形態では、カートリッジ４００、５００は、
固定された垂直方向の配向を有しており、脂肪チャンバー４０５、５０５の中に含有され
ている脂質および生理食塩水洗浄液が、常に自然に重力を介して互いから分離することと
なり、脂質が、脂肪チャンバー４０５、５０５の上部に浮かぶ。いくつかの実施形態では
、カートリッジ４００、５００は、水平方向の配向を有しており、垂直方向に回転させら
れ、脂質が浮かび、生理食塩水洗浄液から分離することを可能にする。脂質は生理食塩水
よりも密度が低いので、脂質は、生理食塩水の上部に上昇して浮かぶこととなる。分離が
行われるために必要とされる時間の量は、脂質サンプルの個々の構成に応じて変化するこ
ととなる。いくつかの実施形態では、分離は、１分から３０分で生じ得る。いくつかの実
施形態では、分離は、１分から１５分で生じ得る。いくつかの実施形態では、分離は、１
分から１０分で生じ得る。いくつかの実施形態では、分離は、１分から５分で生じ得る。
いくつかの実施形態では、分離は、１０秒から１分で生じ得る。いくつかの実施形態では
、分離は、１分未満に行われることが可能である。

次いで、生理食塩水は、可能な限り完全に脂肪チャンバー４０５、５０５からドレン排
出され、したがって、脂質だけが残る。ドレン排出は、本方法において利用されるカート
リッジ４００、５００のタイプに応じて、さまざまな手段を介して行われることが可能で
ある。いくつかの実施形態では、生理食塩水は、カートリッジ４００、５００の外側につ
ながる脂肪チャンバー４０５、５０５の底部に位置付けされているチューブを介して、脂
肪チャンバー４０５、５０５から外へカートリッジ４００、５００から離れるようにドレ
ン排出される。ドレン排出は、シリンジもしくはポンプのいずれかを使用して能動的に進
行するか、または、重力流を介して受動的に進行することが可能である。いくつかの実施
形態では、ドレン排出は、本明細書で説明されているように、無菌のシステムの完全性を
維持するように行われる。

いくつかの実施形態では、無菌の生理食塩水が流体リザーバー４１５、５１５から使い
尽くされるまで、洗浄が繰り返される。いくつかの実施形態では、脂肪チャンバー４０５
、５０５の中の生理食塩水洗浄液が十分に透明になり、洗浄の後に、５０％から１００％
の光が生理食塩水を通過し、高い程度の透明度を示すまで、洗浄が繰り返される。いくつ
かの実施形態では、設定数の洗浄サイクルが完了するまで、洗浄が繰り返され、設定数は
、いくつかの実施形態では、１回から５回の洗浄であり、いくつかの実施形態では、１回
から４回の洗浄であり、いくつかの実施形態では、１回から３回の洗浄であり、いくつか
の実施形態では、１回から２回の洗浄であり、いくつかの実施形態では、１回の洗浄であ
り、いくつかの実施形態では、２回の洗浄であり、いくつかの実施形態では、３回の洗浄
である。

洗浄が完了すると、脂質は、プロセッシングのための準備ができている。

脂肪チャンバー４０５、５０５の中の脂質は、幹細胞を脂質から遊離させるために、脂
質をＥＳＷおよび／または機械的衝撃にさらすことによって、方法１および２において上
記に説明されている方法のうちの１つにしたがってプロセッシングされる。いくつかの実
施形態では、カートリッジ４００、５００は、脂肪チャンバー４０５、５０５の上方に開
口部を有しており、最適なプロセスを可能にし、ＥＳＷ、および／または、機械的衝撃か
らの力が、カートリッジ４００、５００の外部のリジッドプラスチックを通過しないよう
になっている。そのような実施形態では、可撓性の脂肪チャンバー４０５、５０５壁部は
、プロセッシングのために露出される。

組織プロセッシングが完了した後に、脂質は、流体から分離して上部まで上昇すること
を許容される。上記に記述されているように、この実施形態では、カートリッジ４００、
５００は、２つの変形例を有している。いくつかの実施形態では、カートリッジ４００、
５００は、固定された垂直方向の配向を有しており、脂肪チャンバー４０５、５０５の中
に含有されているプロセッシングされた脂質および生理食塩水が、常に自然に重力を介し
て互いから分離することとなり、脂質が、脂肪チャンバー４０５、５０５の上部に浮かぶ
。いくつかの実施形態では、カートリッジ４００、５００は、水平方向の配向を有してお
り、垂直方向に回転させられ、脂質が浮かび、生理食塩水から分離することを可能にする
。脂質は生理食塩水よりも密度が低いので、脂質は、生理食塩水の上部に上昇して浮かぶ
こととなる。ここで、脂質から遊離された幹細胞は、生理食塩水層の中に含有されている
。

次いで、幹細胞を含有する生理食塩水は、脂肪チャンバー４０５、５０５から、カート
リッジ４００、５００の中に位置付けされている細胞リザーバー４３５、５３５へ、脂質
から離れるように、第３の一方向弁４４０、５４０を通して移動させられる。生理食塩水
は、第２の外部アクチュエーター４４５、５４５の使用を介して、細胞リザーバー４３５
、５３５の内部へ移動させられ、第２の外部アクチュエーター４４５、５４５は、第３の
一方向弁４４０、５４０を通して生理食塩水を押し込むために、第２のプランジャー４５
０、５５０を移動させる。細胞リザーバー４３５、５３５の中には、第２のプランジャー
４５０、５５０が、完全に閉じた構成で配向されており、細胞リザーバー４３５、５３５
が完全に閉じられているようになっている。このように、第２のアクチュエーター４４５
、５４５を移動させることは、第３の一方向弁４４０、５４０から離れるように、第２の
プランジャー４５０、５５０を移動させ、細胞リザーバー４３５、５３５の内側に軽度の
真空を生成させ、この真空は、幹細胞を含有する生理食塩水層を、脂肪チャンバー４０５
、５０５から、第３の一方向弁４４０、５４０を通して、細胞リザーバー４３５、５３５
の内部へ引き込む。いくつかの実施形態では、第２の外部アクチュエーター４４５、５４
５は、ユーザーによって手動で動作させられ、ユーザーは、幹細胞を含有する生理食塩水
の全体が第３の一方向弁４４０、５４０を通して細胞リザーバー４３５、５３５の内部へ
引き込まれるまで、第２のアクチュエーター４４５、５４５を引っ張る。いくつかの実施
形態では、第２の外部アクチュエーター４４５、５４５の移動は自動化されており、外部
マシンが、第２の外部アクチュエーター４４５、５４５を引っ張り、幹細胞を含有する生
理食塩水を細胞リザーバー４３５、５３５の中へ移動させる。

いくつかの実施形態では、幹細胞を含有する生理食塩水は、残された望まれない細胞破
片をプロセッシングされた脂肪質の組織から濾過して除くために、メッシュを通して引き
込まれる。いくつかの実施形態では、メッシュは、脂肪チャンバー４０５、５０５の中に
位置付けされており、脂肪チャンバー４０５、５０５の中において、メッシュは、第３の
一方向弁４４０、５４０の開口部をカバーしている。いくつかの実施形態では、メッシュ
は、細胞リザーバー４３５、５３５の内部に位置付けされており、細胞リザーバー４３５
、５３５の内部において、メッシュは、第３の一方向弁４４０、５４０の出口をカバーし
ている。いくつかの実施形態では、メッシュは、細胞リザーバーの内部に位置付けされて
おり、細胞リザーバーの内部において、メッシュは、第４の一方向弁４５５、５５５の開
口部をカバーしている。いくつかの実施形態では、メッシュの中の細孔は、サイズが４０
μｍから１００μｍの範囲にあり、いくつかの実施形態では、細孔は、サイズが７０μｍ
である。いくつかの実施形態では、メッシュは、ナイロンである。

図４に示されている実施形態では、幹細胞を含有する画分は、細胞リザーバー４３５の
内部から、第４の一方向弁４５５を通して、カートリッジ４００の中に含有されている遠
心チューブ４６０の中へ移送される。幹細胞画分は、第２の外部アクチュエーター４４５
の使用を介して、遠心チューブ４６０の中へ移動させられ、第２の外部アクチュエーター
４４５は、第３の一方向弁４４０を通して遠心チューブ４６０の中へ生理食塩水を押し込
むために、第２のプランジャー４５０を移動させる。本明細書で説明されているように、
この移動は、手動で実施され得るか、または、それは、自動化され得る。次いで、遠心チ
ューブ４６０は、遠心分離のために、カートリッジ４００から除去される。遠心分離は、
上記に説明されている２つの実施形態のいずれかに説明されているように進行し、幹細胞
のペレットが、遠心チューブ４６０の底部に残る。

図５に説明されている実施形態では、幹細胞を含有する画分は、細胞リザーバー５３５
の内部から、第４の一方向弁５５５を通して、カートリッジ５００の中に含有されている
遠心分離コンポーネント５６０の中へ移送される。遠心分離コンポーネント５６０は、三
角形のチャンバーであり、三角形のチャンバーは、遠心分離機コンポーネントとして作用
する。これは、細胞を生理食塩水から外へスピンさせ、細胞がチャンバーの外側縁部にお
ける単一のポイントに濃縮するようになっている。アクセスポート５６５は、ユーザーが
幹細胞ペレットへのアクセスを得ることを可能にし、ペレットを再懸濁させ、および／ま
たは、遠心分離コンポーネント５６０からペレットを除去するようになっている。いくつ
かの実施形態では、遠心分離コンポーネント５６０の動作は、外部装置によって自動化お
よび制御されており、ここで、外部装置は、チャンバーの中心においてカートリッジの中
へ挿入するモーターおよびギヤを通して、スピンチャンバーと係合している。その点で、
遠心分離コンポーネント５６０は、ダイレクトドライブであるかまたはギヤ付きであるこ
とが可能である。幹細胞を含有する層／下澄みが、上記に説明されているように、遠心分
離コンポーネントの中へロードされ、他方の側が、遠心分離の前にバランスさせられる。
遠心分離コンポーネントの中へ導入されると、幹細胞は、３分から１０分間、５００ｇか
ら１６００ｇで遠心分離される。いくつかの実施形態では、遠心分離は、１０分間１２０
０ｇで行われる。

細胞を再懸濁させるために、少量の流体が、チューブの中へ入れられる。これは、典型
的に、１ｍＬから５ｍＬである。流体は、生理食塩水、多血小板血漿、ヒアルロン酸、ま
たは、固定用ゲル、ヒドロゲル、スカッフォールド、またはフィブリンまたはグルー、ま
たは他の化合物であることが可能である。

細胞が懸濁液の中にある状態で、細胞は、さらなる使用のために、皮下注射針を通して
シリンジの中へ吸い込まれる。これは、プロセッシングマシンによって自動的に行われる
か、または、オペレーターによって手動で行われる。

少量の流体が、幹細胞を再懸濁させるために使用される。いくつかの実施形態では、細
胞を再懸濁させるために追加される流体の量は、１ｍＬから５ｍＬの範囲にある。いくつ
かの実施形態では、流体は、生理食塩水、多血小板血漿、ヒアルロン酸、固定用ゲル、ヒ
ドロゲル、スカッフォールド、フィブリン、グルー、または、先述のもののいずれかの組
み合わせである。いくつかの実施形態では、細胞が、遠心分離吸引物の中に再懸濁される
。

幹細胞が懸濁液の中に浮かんでいる状態で、幹細胞は、使用のための準備ができている
。そのような使用は、限定することなく、幹細胞が導出された患者の中への再導入、凍結
保存、および膨張などを含むことが可能である。いくつかの実施形態では、濃縮されて再
懸濁された幹細胞は、患者使用のために、皮下注射針を介してシリンジの中へ移動させら
れる。いくつかの実施形態では、濃縮されて再懸濁された幹細胞は、心臓、筋肉、骨、軟
骨、肝臓、腎臓、または、他の組織および器官構造体へと成長するための組織スカッフォ
ールドの中へ種を撒かれる。いくつかの実施形態では、濃縮されて再懸濁された幹細胞は
、幹細胞が多能性転写因子を表現することを引き起こすによって、人工多能性幹細胞へと
変換される。

デバイス
上述のように、本開示は、組織サンプルをバイオプロセッシングするための方法および
システムを提供する。また、さまざまな態様において、本開示は、開示されている方法と
ともに使用するのに適切な使いやすいデバイスを提供し、そのようなデバイスは、外側の
環境に対して閉じられており、単回使用のために設計されている。そのようなデバイスは
、単回使用カートリッジを含み、単回使用カートリッジは、単一のデバイスの中での完全
なプロセッシングを可能にする。

容器
上記に説明されている実施形態は、しおれた（wither）組織サンプル、脂質サンプル、
所望の細胞画分を含有する画分、幹細胞を含有する画分、または、先述のもののいずれか
の組み合わせの受容部として、１つまたは複数の容器を利用する。そのような容器は、図
１のステップ１０５において利用される容器；容器２０５；脂肪チャンバー４０５、５０
５；流体リザーバー４１５、５１５；および細胞リザーバー４３５、５３５を含む。これ
らの容器は、本開示によって提供されるシステムおよび方法とともに使用するのに適切で
あり、可撓性であるか、リジッドであるか、または半リジッドであることが可能である。
いくつかの実施形態では、容器は、シリンジである。

図１のステップ１０５において利用される容器；容器２０５；脂肪チャンバー４０５、
５０５；流体リザーバー４１５、５１５；および細胞リザーバー４３５、５３５のそれぞ
れは、それ自体によって、または、密閉型のカートリッジの一部として、外側の環境に対
して閉じられており、また、使い捨てのものである。

いくつかの実施形態では、図１のステップ１０５において利用される容器；容器２０５
；脂肪チャンバー４０５、５０５；流体リザーバー４１５、５１５；および細胞リザーバ
ー４３５、５３５のそれぞれは、可撓性の容器であり、たとえば、可撓性のバッグである
。そのような実施形態では、それぞれの容器は、エチレン酢酸ビニル（ＥＶＡ）、ポリ（
ビニル）クロライド（ＰＶＣ）、エチレン酢酸ビニル（ＥＶＡ）、ナイロン、または、他
のプラスチックから作製され得る。

可撓性の容器のそれぞれは、ブロー成形され得る。いくつかの実施形態では、可撓性の
容器のそれぞれは、ラジオ周波溶接されるか、高周波溶接されるか、または誘導加熱溶接
され得、また、ブロー成形され得る。

いくつかの実施形態では、可撓性の容器のそれぞれは、可撓性の容器の内部チャンバー
と流体接続している少なくとも１つの出口部を有する３次元のバッグである。いくつかの
実施形態では、単一の容器は、容器の内部チャンバーと流体接続している２つ以上の出口
部を有することが可能である。そのような出口部は、たとえば、容器の内部チャンバーか
ら流体をドレン排出させるために、または、容器の内部から別の容器へ流体を移動させる
ために使用され得る。

いくつかの実施形態では、容器は、縁部に沿って容器の外側に位置付けされている１つ
または複数の孔部を含むことが可能であり、１つまたは複数の孔部は、空間に容器を吊り
下げるために使用され得る。

容器の合計容積は、５流量オンスから５０流量オンスであることが可能であり、いくつ
かの実施形態では、９流量オンスから１９流量オンスであることが可能である。

いくつかの実施形態では、組織サンプル、無菌の生理食塩水、またはその他の形態で、
入力を受け取るために、容器は、別個のポイントにおいて入口ラインまたは接続部を受け
入れるように構成されており、入口ラインまたは接続部は、容器の内部と流体接続してい
る入口部に接続する。閉じた無菌の環境の完全性を維持するために、入口ラインまたは接
続部は、メス型のルアー接続部を含み、メス型のルアー接続部は、容器が外部デバイスに
接続されることを可能にし、容器は、組織サンプルを含有するシリンジ、物質がそこから
問題の容器の中へ移送されることとなる別の容器、またはその他である。他の実施形態で
は、入口ラインまたは接続部は、無菌の接続デバイスを使用して外部デバイスに接続する
ための無菌のドックを含む。

いくつかの実施形態では、容器は、平坦なバッグであることが可能であり、平坦なバッ
グは、上部縁部、底部縁部、および、２つの実質的に同様の側部縁部を有している。底部
縁部は、流体をバッグから外へドレン排出するために、バッグの内部と流体接続している
出口部を含む。また、平坦なバッグは、バッグの内部の中への材料の無菌での導入を可能
にする入口部を有している。

いくつかの実施形態では、容器は、形状が長方形になっている３次元のバッグであり、
３次元のバッグは、上部縁部、底部縁部、および、２つの実質的に同様の側部縁部を有し
ている。底部縁部は、流体を容器から外へドレン排出するために、容器の内部と流体接続
している出口部を含む。上部縁部は、容器の中への材料の導入のための、容器の内部と流
体接続している入口部を含む。

いくつかの実施形態では、容器は、ラインを介して１つまたは複数の他の容器に接続さ
れている。ラインは、ポリ（ビニル）クロライド（ＰＶＣ）、エチレン酢酸ビニル（ＥＶ
Ａ）、または、他の材料から作製され得るチュービングである。

いくつかの実施形態では、容器は、半リジッドであることが可能である。そのような実
施形態では、容器は、リジッドプラスチックハウジングを含み、リジッドプラスチックハ
ウジングは、その形状を維持しており、組織プロセッシングの間にハウジングの内側に可
撓性の容器を保持することができる。ハウジングは、それがプラットフォーム２１０また
は３１５への取り付けのポイントを含有するように構成されている。

リジッドプラスチックハウジングは、たとえば、高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）また
はポリプロピレン（ＰＰ）を含む、任意の適切なリジッドプラスチック材料から作製され
得る。リジッドプラスチック材料は、弾性的な変形を示さず、また、リジッドプラスチッ
ク材料は、可撓性のプラスチックによって典型的に表される弾性的な挙動のいずれを表す
こともない。リジッドプラスチックハウジングは、射出成形またはダイカットされ得る。

いくつかの実施形態では、可撓性の容器は、リジッドプラスチックハウジングの中に含
有されており、リジッドプラスチックハウジングは、可撓性の容器を完全に密閉してもよ
く、またはしなくてもよい。いくつかの実施形態では、可撓性の容器は、リジッドプラス
チックハウジングの中に完全に密閉されているわけではない。むしろ、ハウジングは、可
撓性の容器を部分的に密閉し、組織プロセッシングの間にそれを適切な場所に保持してい
る。

カートリッジ
さまざまな態様では、本開示とともに使用するのに適切なカートリッジは、それらの内
部の中に１つまたは複数の容器を収容することができる３次元の容器である。内部容器は
、１つまたは複数のラインおよび／または弁によって接続され得る。適切なカートリッジ
の例は、図４および図５に示されているカートリッジ４００、５００である。

いくつかの実施形態では、カートリッジは、リジッドプラスチック材料から作製されて
おり、リジッドプラスチック材料は、その形状を維持しており、組織プロセッシングの間
にカートリッジの内側に可撓性の容器のうちの少なくとも１つ、好ましくは、複数を保持
することができる。容器は、それらがプラットフォーム２１０または３１５への取り付け
の１つまたは複数のポイントを含有するように構成されている。

リジッドプラスチックは、たとえば、高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）またはポリプロ
ピレン（ＰＰ）を含む、任意の適切なリジッドプラスチック材料から作製され得る。リジ
ッドプラスチック材料は、弾性的な変形を示さず、また、リジッドプラスチック材料は、
可撓性のプラスチックによって典型的に表される弾性的な挙動のいずれを表すこともない
。リジッドプラスチックカートリッジは、射出成形またはダイカットされ得る。

容器の他の態様は、上記に説明されている。

遠心チューブ
本開示の方法およびデバイスとともに使用するのに適切な遠心チューブは、遠心ロータ
ーに正確にフィットするように設計されている、ガラスまたはプラスチックの精密に仕上
げられた高強度チューブである。遠心チューブの容量は、プロセッシングされることとな
る組織サンプルの合計体積に応じて、変化することが可能である。いくつかの実施形態で
は、遠心チューブは、１ｍＬから５０ｍＬの範囲にある容量、いくつかの実施形態では、
０．５ｍＬから２０ｍＬの範囲にある容量、およびいくつかの実施形態では、２５０μＬ
から２．０ｍＬの範囲にある容量を有している。

いくつかの実施形態では、遠心チューブは、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ（登録商標）チューブ
であり、いくつかの実施形態では、マイクロフュージチューブであり、いくつかの実施形
態では、マイクロ遠心チューブである。

遠心チューブの材料は、変化することが可能である。いくつかの実施形態では、遠心チ
ューブは、ガラスから作製されている。いくつかの実施形態では、遠心チューブは、プラ
スチックである。それぞれの実施形態では、遠心チューブは、単回使用のために設計され
ており、使い捨てのものである。いくつかの実施形態では、遠心チューブは、ポリエチレ
ンなどのような可撓性の透明なプラスチックから作製されており、形状が半円錐形状にな
っており、一体型のヒンジ式のシーリングキャップを含む。

一方向弁
一方向弁は、流体が単一の方向だけにそれを通って流れることを可能にする弁である。

さまざまな態様では、本開示のデバイスおよび方法とともに使用するのに適切な一方向
弁は、２ポート弁を含み、２ポート弁は、２つの開口部を有しており、一方は、流体が進
入するためのものであり、他方は、流体が離れるためのものである。一方向弁は、流体の
一定方向のフローを自動的に提供するように機能し、任意のユーザーの介入または制御を
必要としない。いくつかの実施形態では、本開示の方法およびデバイスに有用な一方向弁
は、ポリ（プロピレン）などのようなリジッドプラスチックから作製されている。

いくつかの実施形態では、本開示のデバイスおよび方法とともに使用するのに適切な一
方向弁は、ボール逆止弁であり、ボール逆止弁において、流体の逆流を防止するコンポー
ネントは、球形のボールである。いくつかの実施形態では、ボールは、一方向弁を閉じた
状態に維持することを助けるためにばね荷重式になっている。

いくつかの実施形態では、本開示のデバイスおよび方法とともに使用するのに適切な一
方向弁は、ダイヤフラム逆止弁であり、ダイヤフラム逆止弁は、弁閉鎖を生成させるよう
に位置決めされているフレキシングゴムダイヤフラムを含む。そのような実施形態では、
上流側に生成される圧力は、ユーザー介入によって、または、自動化されたプロセスを介
して、ダイヤフラムが開くこと、および、流体が弁を通って流れることを引き起こす。プ
ラスの圧力が停止すると、ダイヤフラムが閉じ、流体フローを終了させる。

いくつかの実施形態では、本開示のデバイスおよび方法とともに使用するのに適切な一
方向弁は、スウィング逆止弁、または、傾斜式ディスク逆止弁である。そのような実施形
態では、ディスクは、一方向への流体フローを可能にするために、および、反対側方向へ
の流体逆行を阻止するために使用される、弁の可動パーツである。

例
本明細書で説明されている材料、方法、および実施形態は、以下の例においてさらに定
義されている。また、特定の実施形態は、本明細書において例の中に定義されている。こ
れらの例は、特定の実施形態を示しているが、図示目的のためだけに与えられているとい
うことが理解されるべきである。本明細書での開示およびこれらの例から、当業者は、本
開示の本質的な特徴を確認することが可能であり、また、本開示の精神および範囲から逸
脱することなく、さまざまな使用法および条件にそれを適合させるように、本発明のさま
ざまな変形および修正を行うことが可能である。

例１
ＥＳＷ組織プロセッシングのための一般的プロトコル
脂肪吸引物が、対象から取得され、脂肪吸引物は、体積がおおよそ３０ｃｃである。プ
ロセッシングの前に、脂肪吸引物は、おおよそ０．２５インチ厚さの側壁部を有する、エ
チレン酢酸ビニル（ＥＶＡ）、ポリ（ビニル）クロライド（ＰＶＣ）、エチレン酢酸ビニ
ル（ＥＶＡ）またはナイロンの可撓性の無菌のバッグへ移送される。無菌のカテーテルバ
ッグが十分である。

生理食塩水バッグからのオス型のルアーロックコネクターを、可撓性のバッグの上に位
置付けされているメス型のルアーロックコネクターに接続することによって、および、生
理食塩水を可撓性のバッグの中へ手動でディスペンスすることによって、脂肪吸引物は、
可撓性のバッグの中へ導入される無菌の生理食塩水の等しい体積を使用して洗浄される。
次いで、脂肪吸引物および生理食塩水洗浄液は、可撓性のバッグを穏やかに振ることによ
って、機械的に撹拌される。

組織サンプル／生理食塩水洗浄液の混合物は、少なくとも１０分間静置させ、脂肪吸引
物が生理食塩水の上部に浮かぶことを可能にする。

下澄みまたは生理食塩水洗浄液は、可撓性のバッグの底部に位置付けされているドレン
ラインを介して、可撓性のバッグから除去される。シリンジをラインに接続することによ
って、および、下澄みをバッグから外へ引き出すことによって、または、重力流によって
、除去が行われることが可能である。

洗浄は、３〜４回繰り返され、最終的な洗浄でバッグの中の無菌の生理食塩水洗浄液を
残す。

次のステップは、ＭａｓｔｅｒｐｕｌｓＭＰ１００対外衝撃波発生器を使用して、対
外衝撃波を脂肪吸引物に印加することである。

発生器は、可撓性のバッグの壁部と接触してもよいが、衝撃波発生器が脂肪吸引物自体
に接触しないことを保証するように注意が払われるべきである。

必要な場合には、脂肪吸引物への衝撃波の印加の前に、超音波ゲルが可撓性のバッグの
側部に塗布されてもよい。

１分から３０分間、ＥＳＷを脂肪吸引物に印加する。

その後に、振るかまたは軽くボルテックスすることによって、可撓性のバッグを穏やか
に撹拌する。

今プロセッシングされた脂肪吸引物を静置し、脂肪質の組織の残りのものが生理食塩水
の上部に浮かぶことができるようになっている。

上記に説明されているように、無菌のシリンジをドレンチューブに取り付けることによ
って、および、可能な限り多くの下澄みを引き出すことによって、可撓性のバッグから下
澄みを除去する。残っている脂肪組織のいずれも取らない。

除去の間に、４０μｍ、７０μｍ、または１００μｍの細孔サイズを有する３つのナイ
ロンメッシュフィルターのうちの１つに下澄みを通す。

下澄みを１つまたは複数の無菌の遠心チューブの中へ分配する。奇数の数のチューブが
使用される場合には、無菌の生理食塩水を含有するバランスチューブがバランスのために
ローターの中に設置されることを保証する。

１０分間１，２００ｇで遠心分離する。

随意的に：１ｍＬＲＢＣ溶解バッファーの中にペレットを再懸濁させ、１０分間３７
℃で水槽の中で培養する。ＲＢＣバッファーを中和させる。

ＲＢＣ溶解バッファーが望まれない場合には、１ｍＬの無菌の生理食塩水の中に細胞ペ
レットを再懸濁させる。

細胞をカウントする。

例２
脂肪吸引物プロセッシング方法の比較
要約：この例に関して実施されるテストの目的は、コラゲナーゼ消化を使用して脂肪組
織から抽出される間葉系幹細胞からの有核細胞の収率と、対外衝撃波（ＥＳＷ）破砕のも
のとを比較することであった。

材料：
１，５００ｍＬの１ｘリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）
３５ｍＬの１ｘ赤血球（ＲＢＣ）溶解バッファー
２００ｍＬの０．１％コラゲナーゼタイプＩ
ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）の中の１５ｍＬの１０％ウシ胎児血清（ＦＢ
Ｓ）

方法：
コントロール
おおよそ２５０ｍＬの脂肪吸引物が、無菌の６０ｍＬカテーテルを使用して、１００ｍ
Ｌビーカーの中へ移送された。過剰な流体がビーカーの中へほとんど導入されないか全く
導入されないことを保証することに注意が払われた。

脂肪吸引物は、おおよそ等しい体積の無菌の１ｘＰＢＳによって４回洗浄された。それ
ぞれの洗浄に関して、無菌の１ｘＰＢＳがビーカーに追加され、２回はかき混ぜられ、混
合物は、静置させた。下澄みが、吸引することによってビーカーから除去された。脂肪吸
引物は、合計で４回洗浄された。

第４の洗浄の後に、サンプルは、１０分間静置させた。

無菌の１０ｍＬセロロジカルピペットが使用され、４５ｍＬの下澄みを、第４の最終的
な洗浄液から、３つの無菌の５０ｍＬ円錐形状のチューブの中へ、４０μｍ、７０μｍ、
および１００μｍチューブ無菌フィルターを通して移送した。合計で１３５ｍＬの下澄み
が、コントロールとして使用するために移送された。

コラゲナーゼ消化
２００ｍＬの脂肪吸引物が、無菌の５００ｍＬガラスボトルの中へ堆積させられた。２
００ｍＬの０．１％コラゲナーゼタイプＩが、ボトルに追加された。脂肪吸引物がコラゲ
ナーゼと均一に混合されることを保証するために、ボトルは、それを数回逆さまにするこ
とによって、軽く撹拌された。

次いで、ボトルは、３７℃で水槽の中へ置かれた。１０分ごとに、ボトルが、水槽から
除去され、数回逆さまにされ、脂肪吸引物を再分配し、ボトルが落ち着かされた。３０分
の培養の後に、ボトルは、最後にもう一回撹拌され、水槽から除去された。

ボトルの外部は、７０％ＥＴＯＨによってスプレーされ、ヒュームフードの中に置かれ
た。脂肪吸引物およびコラゲナーゼ混合物は、１０分間静置させた。

無菌の１０ｍＬセロロジカルピペットが使用され、３つの無菌の５０ｍＬ円錐形状のチ
ューブの中へ、４０μｍ、７０μｍ、および１００μｍチューブ無菌フィルターを通して
下澄みを移送した。合計で１３５ｍＬの下澄みが移送された。バランスのために４５ｍＬ
の水を含有する第４のチューブを含む、３つのチューブが、コラゲナーゼ消化された細胞
ペレットを取得するために、１０分間３７℃において１，２００ｇで遠心分離された。

コラゲナーゼ懸濁液を含有する３つのチューブの外部は、７０％ＥＴＯＨによってクリ
ーニングされ、ヒュームフードの中へ置かれ、バランスチューブを残した。上澄みが吸引
され、それぞれのチューブの中に細胞ペレットを残した。２５ｍＬセロロジカルピペット
を使用して、５ｍＬの１０％ＦＢＳが、それぞれのチューブの中へディスペンスされ、そ
れぞれのチューブは、ペレットを再懸濁させるために、５秒間ボルテックスされた。ＦＢ
Ｓは、任意の残りのコラゲナーゼ活性を中和させるために使用された。

３つのチューブは、１０分間３７℃において１，２００ｇで遠心分離された。遠心チュ
ーブの外部は、７０％ＥＴＯＨによってクリーニングされ、チューブは、ヒュームフード
の中に置かれた。上澄みが吸引され、細胞ペレットを残した。

ＥＳＷプロセッシング
２００ｍＬの脂肪吸引物が、無菌の６０ｍＬカテーテルシリンジを使用して、残りの下
澄みのすべてとともに、無菌の５００ｍＬレッグカテーテルバッグの中へ移送された。無
菌の１ｘＰＢＳが、２００ｍＬの合計流体体積を実現するために追加され、合計体積は、
脂肪吸引物を含む４００ｍＬであった。おおよそ２ｍＬの超音波ゲルが、カテーテルバッ
グに塗布された。大きいチップを使用して、２ｂａｒおよび２１Ｈｚにおいて、おおよそ
１０，０００ＥＳＷパルスが、バッグの内側のサンプルに投与された。このプロセスは、
追加的な１０，０００ＥＳＷパルスに関して、バッグの他方の側において繰り返された。
カテーテルバッグの外部が、７０％ＥＴＯＨによってクリーニングされ、それが、ヒュー
ムフードの中へ置かれた。

バッグが撹拌され、５００ｍＬビーカーの中に注ぎ込んで空にされ、懸濁液は、１０分
間静置させた。無菌の１０ｍＬセロロジカルピペットを使用して、下澄みが、３つの無菌
の５０ｍＬ円錐形状のチューブの中へ、４０μｍ、７０μｍ、および１００μｍチューブ
無菌フィルターを通して移送された。合計で１３５ｍＬの下澄みが移送された。

濃縮および溶解
コントロール懸濁液を含有する３つのチューブ、および、プロセッシングされた懸濁液
を含有する３つのチューブが、１０分間、１，２００ｇおよび３７℃で遠心分離された。
上澄みが、すべてのチューブから吸引され、それぞれのペレットを残し、５ｍＬの１ｘＲ
ＢＣ溶解バッファーが、それぞれのチューブに追加された。それぞれのチューブは、ペレ
ットを再懸濁させるために、５秒間ボルテックスされ、チューブは、１０分間、３７℃水
槽の中へ置かれた。

それぞれのチューブの外部は、７０％ＥＴＯＨによって消毒され、チューブは、ヒュー
ムフードの中に置かれた。２５ｍＬの無菌の１ｘＰＢＳが、溶解バッファーを希釈および
中和させるために、それぞれのチューブに追加された。

細胞カウンティング
無菌のマイクロピペットチップを使用して、３００μＬの無菌の１ｘＰＢＳが、６つの
無菌の０．５ｍＬマイクロ遠心チューブの中へ移送された。また、７５μＬのそれぞれの
５０ｍＬサンプルチューブが、細胞カウンティングのために、それぞれのマイクロ遠心チ
ューブの中へ移送された。

それぞれのサンプルの中の細胞の数が、ＭタイプおよびＳタイプの両方のカセットを備
えたＭｏｘｉＺ細胞カウンターを使用してカウントされた。カウントするために、１００
μＬのトリパンブルーが、それぞれのマイクロ遠心チューブに追加され、１０μＬのそれ
ぞれのサンプルが、ヘモサイトメーターウェルの中へロードされ、細胞がカウントされた
。

結果：
ＭｏｘｉＺ細胞カウンター
表１は、ＭｏｘｉＺ自動化細胞カウンターを使用した細胞カウントの結果を示している
。２つのタイプのカセットが、カウントするために使用された（ＭおよびＳ）。サンプル
列において、「ｃ」は、コラゲナーゼ消化を表し、「ｅ」は、ＥＳＷプロセッシングを表
し、「０」は、コントロールを表している。「完了」列の中の「ｙ」を伴うカウントだけ
が有効である。

ヘモサイトメーター
表２は、ビジュアルヘモサイトメーターから取得されるカウントを詳述しており、それ
ぞれの象限（quadrant）からの細胞カウント、象限の総計、希釈係数、および、合計の計
算された細胞を伴っている。細胞の数は、コントロール群の中の細胞のカウントを参照し
て考慮されるべきである。プロセッシングされた細胞とコントロール細胞との比率は、収
率の重要な指標である。

概要
ＭｏｘｉＺ自動化細胞カウンターを使用した有効なカウントのうち、コントロール、コ
ラゲナーゼ、およびＥＳＷに関して、細胞カウントに関する総平均は、表３に示されてい
る通りである。

コラゲナーゼは、一貫して、約３．８Ｅ＋０５細胞数／ｍＬを作り出した。ＥＳＷは、
１．６７ｅ＋０５から７．０８ｅ＋０５細胞数／ｍＬの範囲にあった。

ヘモサイトメーターカウントの中の細胞の比率を見ると、ＥＳＷプロセスは、最高の比
率を作り出し、その比率は、コントロールよりも１．７８倍から９．０倍高い範囲にあっ
た。コラゲナーゼだけが、コントロールよりも１．２９倍から２．８４倍高い範囲にある
比率を作り出した。

議論
これらのデータは、高い数の間葉系幹細胞を脂肪組織から作り出すために、ＥＳＷが効
果的であるということを示している。これらのデータに基づいて、間葉系幹細胞を取得す
るために、ＥＳＷが、脂肪組織の超音波プロセッシングまたはコラゲナーゼプロセッシン
グのいずれかに対する実行可能な代替例であるということが結論付けられた。ピークを比
較すると、ＥＳＷは、４．３２ｅ＋０５のコラゲナーゼピークと比較して７．０８ｅ＋０
５の細胞収率を作り出し、それは、１６４％の収率の増加であった。

上記に提示されているデータを所与として、５０ｃｃから６０ｃｃの脂肪吸引物のサン
プルが、ＥＳＷプロセッシングから約５百万個の細胞を生み出すこととなり、コラゲナー
ゼ消化から約３百万個の細胞を生み出すこととなるということを結論付けることが合理的
である。

したがって、幹細胞を脂肪組織から遊離させるためにＥＳＷを使用するということは、
公知の技法を上回る重大な利点を持つということが明らかである。

２００プロセッシング装置
２０５プロセッシング容器またはカートリッジ
２１０プラットフォーム
２１５衝撃波アプリケーター
２２０アプリケータープラットフォーム
２２５モーターコントローラー
２３０Ｘ平面モーター
２３５Ｙ平面モーター
２４０Ｚ平面モーター
２４５衝撃波発生器
３００プロセッシング装置
３０５モーター
３１０インパクトアーム
３１５プラットフォーム
４００カートリッジ
４０５脂肪チャンバー
４１０第１の一方向弁
４１５流体リザーバー
４２０第２の一方向弁
４２５外部アクチュエーター
４３０第１のプランジャー
４３５細胞リザーバー
４４０第３の一方向弁
４４５第２の外部アクチュエーター
４５０第２のプランジャー
４５５第４の一方向弁
４６０遠心チューブ
５００カートリッジ
５０５脂肪チャンバー
５１０第１の一方向弁
５１５流体リザーバー
５２０第２の一方向弁
５２５外部アクチュエーター
５３０第１のプランジャー
５３５細胞リザーバー
５４０第３の一方向弁
５４５第２の外部アクチュエーター
５５０第２のプランジャー
５５５第４の一方向弁
５６０遠心分離コンポーネント
５６５アクセスポート

本開示は以下の［１］から［３３］を含む。
［１］細胞画分を組織サンプルから単離する方法であって、上記方法は、
対象から組織サンプルを取得するステップと、
衝撃波、機械的衝撃からの力、または、その両方に、上記組織サンプルを接触させるステップと、
上記組織サンプルから細胞画分を単離するステップと、
を含み、
上記衝撃波および／または上記機械的衝撃からの上記力の供給源は、上記組織サンプルと物理的な接触をしない、方法。
［２］上記組織は、脂肪組織、脳組織、咽頭組織、喉頭組織、心臓組織、動脈組織、筋肉組織、肝臓組織、胆嚢組織、腎臓組織、小腸組織、大腸組織、リンパ節組織、肺組織、脾臓組織、骨髄組織、胃組織、静脈組織、膵臓組織、膀胱組織、骨、歯、象牙質組織、歯肉組織、皮膚組織、松果腺組織、下垂体組織、甲状腺組織、副腎組織、膵臓組織、卵巣組織および睾丸組織から選択される、上記［１］に記載の方法。
［３］上記組織は脂肪組織である、上記［１］または上記［２］に記載の方法。
［４］上記組織サンプルは、衝撃波と接触させられ、上記衝撃波の上記供給源は、衝撃波発生器によって動力を与えられる衝撃波アプリケーターである、上記［１］から［３］のいずれか一項に記載の方法。
［５］上記組織サンプルは、機械的衝撃からの力と接触させられ、上記機械的衝撃からの上記力の上記供給源は、モーターによって動力を与えられるインパクトアームである、上記［１］から［３］のいずれか一項に記載の方法。
［６］上記組織サンプルは、上記衝撃波および／または上記機械的衝撃からの上記力と接触する前に、１回または複数回洗浄される、上記［１］から［５］のいずれか一項に記載の方法。
［７］上記衝撃波は、上記組織サンプルを、複数の小さい細胞群、複数の個々の細胞、または、その両方に分解する、上記［１］から［４］または［６］のいずれか一項に記載の方法。
［８］上記機械的衝撃からの上記力は、上記組織サンプルを、複数の小さい細胞群、複数の個々の細胞、または、その両方に分解する、上記［１］から［３］、［５］または［６］のいずれか一項に記載の方法。
［９］上記細胞画分は、上記複数の小さい細胞群、複数の個々の細胞、または、その両方を含み、上記細胞画分の単離は、遠心分離によって行われる、上記［７］または上記［８］に記載の方法。
［１０］遠心分離は、３分から３０分間、５００ｇから２，０００ｇの速度で行われる、上記［９］に記載の方法。
［１１］遠心分離は、１０分間１，２００ｇで行われる、上記［１０］に記載の方法。［１２］上記単離された細胞画分は、遠心分離の後に再懸濁させられる、上記［９］から［１１］のいずれか一項に記載の方法。
［１３］上記細胞画分は、３０分以内に単離される、上記［１］から［３］、［５］、［６、］または［８］から［１２］のいずれか一項に記載の方法。
［１４］幹細胞を脂肪組織から単離する方法であって、上記方法は、
対象から脂肪組織サンプルを取得するステップと、
上記組織サンプルを容器またはカートリッジの中へ置くステップと、
上記組織サンプルを機械的衝撃からの力にさらし、上記幹細胞を解放するステップと、
上記脂肪組織から幹細胞画分を分離するステップと、
上記幹細胞画分を遠心分離するステップと、
を含み、
上記機械的衝撃からの上記力の供給源は、上記脂肪組織に物理的に接触しない、方法。［１５］上記脂肪組織は、上記機械的衝撃からの上記力にさらされる前に、１回または複数回洗浄される、上記［１４］に記載の方法。
［１６］上記機械的衝撃の上記力の上記供給源は、モーターによって動力を与えられるインパクトアームであり、上記モーターは、ギヤリングを含み、上記ギヤリングは、上記モーターが全速力で動作しているときに、上記インパクトアームの上記速度を低減させることができる、上記［１４］または上記［１５］に記載の方法。
［１７］上記機械的衝撃からの上記力は、上記容器またはカートリッジの壁部を通して上記脂肪組織へ送達される、上記［１４］または上記［１５］に記載の方法。
［１８］上記ギヤリングは、上記インパクトアームの中での速度の１／１０の減速を可能にする、上記［１５］から［１７］のいずれか一項に記載の方法。
［１９］上記モーターは、０．７５インチのギヤ直径を含み、３，０００ｒｐｍのモーター速度において、上記インパクトアームは、毎秒１１７．８インチの速度を有している、上記［１６］から［１８］のいずれか一項に記載の方法。
［２０］幹細胞画分を分離するステップは、上記脂肪組織が、水性層から分離することを可能にするステップを含み、上記水性層は、上記幹細胞を含む、上記［１４］から［１９］のいずれか一項に記載の方法。
［２１］上記幹細胞は、３０分以内に上記脂肪組織から単離される、上記［１４］から［２０］のいずれか一項に記載の方法。
［２２］遠心分離は、３分から１０分間、５００ｇから１，６００ｇで行われる、上記［１４］から［２１］のいずれか一項に記載の方法。
［２３］幹細胞を脂肪組織から単離する方法であって、上記方法は、
対象から脂肪組織サンプルを取得するステップと、
上記組織サンプルを容器またはカートリッジの中へ置くステップと、
上記組織サンプルを衝撃波にさらし、上記幹細胞を解放するステップと、
上記脂肪組織から幹細胞画分を分離するステップと、
上記幹細胞画分を遠心分離するステップと、
を含み、
上記衝撃波の供給源は、上記脂肪組織に物理的に接触しない、方法。
［２４］上記脂肪組織は、上記衝撃波にさらされる前に、１回または複数回洗浄される、上記［２３］に記載の方法。
［２５］上記衝撃波の上記供給源は、衝撃波発生器によって動力を与えられる衝撃波アプリケーターである、上記［２３］または上記［２４］に記載の方法。
［２６］上記衝撃波は、上記容器またはカートリッジの壁部を通して上記脂肪組織へ送達される、上記［２３］から［２５］のいずれか一項に記載の方法。
［２７］上記脂肪組織は、０．５ｂａｒから５．０ｂａｒのパワーを有する衝撃波にさらされる、上記［２３］から［２６］のいずれか一項に記載の方法。
［２８］上記容器は、０．２５ｍｍ厚の壁部を有するビニールバッグであり、上記脂肪組織は、２．０ｂａｒから２．５ｂａｒのパワーを有する衝撃波にさらされる、上記［２３］から［２７］のいずれか一項に記載の方法。
［２９］任意の１つの時点において上記衝撃波にさらされる上記脂肪組織の合計面積は、１ｃｍ ^２から１００ｃｍ ^２の範囲にある、上記［２３］から［２８］のいずれか一項に記載の方法。
［３０］上記容器は、０．２５ｍｍ厚の壁部を有する１９オンスのビニールバッグであり、上記脂肪組織サンプルの合計量は、３０ｃｃであり、任意の１つの時点において上記衝撃波にさらされる上記脂肪組織の合計面積は、５ｃｍ ^２である、上記［２３］に記載の方法。
［３１］上記脂肪組織は、５，０００から１００，０００の範囲にあるいくつかの衝撃波にさらされる、上記［２３］から［３０］のいずれか一項に記載の方法。
［３２］幹細胞画分を分離するステップは、上記脂肪組織が、水性層から分離することを可能にするステップを含み、上記水性層は、上記幹細胞を含む、上記［２３］から［３１］のいずれか一項に記載の方法。
［３３］遠心分離は、３分から１０分間、５００ｇから１，６００ｇで行われる、上記［２３］から［３２］のいずれか一項に記載の方法。
したがって、ポイントオブケアにおいて、複数のユーザー介入に対する必要性なしに、短い時間の期間で直接的に所望の細胞画分を取得する、最適化された拡張性のある方法が必要とされている。また、その方法を実施することができるデバイスも必要とされている。そのような方法およびデバイスが、本開示によって提供される。開示されている方法およびデバイスは、プロセッシングのために細胞サンプルを研究所へ移送する必要性を排除し、また、分離の間に細胞サンプルを異物と接触させず、ユーザーの接触がほとんどない状態で、非常に短い時間の期間に所望の細胞サンプルを提供する、プロセッシングされたサンプルを結果として生じさせ、それによって、高価な技術的資源の最適化を可能にする。

Claims

細胞画分を組織サンプルから単離する方法であって、前記方法は、
対象から組織サンプルを取得するステップと、
衝撃波、機械的衝撃からの力、または、その両方に、前記組織サンプルを接触させるス
テップと、
前記組織サンプルから細胞画分を単離するステップと、
を含み、
前記衝撃波および／または前記機械的衝撃からの前記力の供給源は、前記組織サンプル
と物理的な接触をしない、方法。
前記組織は、脂肪組織、脳組織、咽頭組織、喉頭組織、心臓組織、動脈組織、筋肉組織
、肝臓組織、胆嚢組織、腎臓組織、小腸組織、大腸組織、リンパ節組織、肺組織、脾臓組
織、骨髄組織、胃組織、静脈組織、膵臓組織、膀胱組織、骨、歯、象牙質組織、歯肉組織
、皮膚組織、松果腺組織、下垂体組織、甲状腺組織、副腎組織、膵臓組織、卵巣組織およ
び睾丸組織から選択される、請求項１に記載の方法。
前記組織は脂肪組織である、請求項１または請求項２に記載の方法。
前記組織サンプルは、衝撃波と接触させられ、前記衝撃波の前記供給源は、衝撃波発生
器によって動力を与えられる衝撃波アプリケーターである、請求項１から３のいずれか一
項に記載の方法。
前記組織サンプルは、機械的衝撃からの力と接触させられ、前記機械的衝撃からの前記
力の前記供給源は、モーターによって動力を与えられるインパクトアームである、請求項
１から３のいずれか一項に記載の方法。
前記組織サンプルは、前記衝撃波および／または前記機械的衝撃からの前記力と接触す
る前に、１回または複数回洗浄される、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
前記衝撃波は、前記組織サンプルを、複数の小さい細胞群、複数の個々の細胞、または
、その両方に分解する、請求項１から４または６のいずれか一項に記載の方法。
前記機械的衝撃からの前記力は、前記組織サンプルを、複数の小さい細胞群、複数の個
々の細胞、または、その両方に分解する、請求項１から３、５または６のいずれか一項に
記載の方法。
前記細胞画分は、前記複数の小さい細胞群、複数の個々の細胞、または、その両方を含
み、前記細胞画分の単離は、遠心分離によって行われる、請求項７または請求項８に記載
の方法。
遠心分離は、３分から３０分間、５００ｇから２，０００ｇの速度で行われる、請求項
９に記載の方法。
遠心分離は、１０分間１，２００ｇで行われる、請求項１０に記載の方法。
前記単離された細胞画分は、遠心分離の後に再懸濁させられる、請求項９から１１のい
ずれか一項に記載の方法。
前記細胞画分は、３０分以内に単離される、請求項１から３、５、６、または８から１
２のいずれか一項に記載の方法。
幹細胞を脂肪組織から単離する方法であって、前記方法は、
対象から脂肪組織サンプルを取得するステップと、
前記組織サンプルを容器またはカートリッジの中へ置くステップと、
前記組織サンプルを機械的衝撃からの力にさらし、前記幹細胞を解放するステップと、
前記脂肪組織から幹細胞画分を分離するステップと、
前記幹細胞画分を遠心分離するステップと、
を含み、
前記機械的衝撃からの前記力の供給源は、前記脂肪組織に物理的に接触しない、方法。
前記脂肪組織は、前記機械的衝撃からの前記力にさらされる前に、１回または複数回洗
浄される、請求項１４に記載の方法。
前記機械的衝撃の前記力の前記供給源は、モーターによって動力を与えられるインパク
トアームであり、前記モーターは、ギヤリングを含み、前記ギヤリングは、前記モーター
が全速力で動作しているときに、前記インパクトアームの前記速度を低減させることがで
きる、請求項１４または請求項１５に記載の方法。
前記機械的衝撃からの前記力は、前記容器またはカートリッジの壁部を通して前記脂肪
組織へ送達される、請求項１４または請求項１５に記載の方法。
前記ギヤリングは、前記インパクトアームの中での速度の１／１０の減速を可能にする
、請求項１５から１７のいずれか一項に記載の方法。
前記モーターは、０．７５インチのギヤ直径を含み、３，０００ｒｐｍのモーター速度
において、前記インパクトアームは、毎秒１１７．８インチの速度を有している、請求項
１６から１８のいずれか一項に記載の方法。
幹細胞画分を分離するステップは、前記脂肪組織が、水性層から分離することを可能に
するステップを含み、前記水性層は、前記幹細胞を含む、請求項１４から１９のいずれか
一項に記載の方法。
前記幹細胞は、３０分以内に前記脂肪組織から単離される、請求項１４から２０のいず
れか一項に記載の方法。
遠心分離は、３分から１０分間、５００ｇから１，６００ｇで行われる、請求項１４か
ら２１のいずれか一項に記載の方法。
幹細胞を脂肪組織から単離する方法であって、前記方法は、
対象から脂肪組織サンプルを取得するステップと、
前記組織サンプルを容器またはカートリッジの中へ置くステップと、
前記組織サンプルを衝撃波にさらし、前記幹細胞を解放するステップと、
前記脂肪組織から幹細胞画分を分離するステップと、
前記幹細胞画分を遠心分離するステップと、
を含み、
前記衝撃波の供給源は、前記脂肪組織に物理的に接触しない、方法。
前記脂肪組織は、前記衝撃波にさらされる前に、１回または複数回洗浄される、請求項
２３に記載の方法。
前記衝撃波の前記供給源は、衝撃波発生器によって動力を与えられる衝撃波アプリケー
ターである、請求項２３または請求項２４に記載の方法。
前記衝撃波は、前記容器またはカートリッジの壁部を通して前記脂肪組織へ送達される
、請求項２３から２５のいずれか一項に記載の方法。
前記脂肪組織は、０．５ｂａｒから５．０ｂａｒのパワーを有する衝撃波にさらされる
、請求項２３から２６のいずれか一項に記載の方法。
前記容器は、０．２５ｍｍ厚の壁部を有するビニールバッグであり、前記脂肪組織は、
２．０ｂａｒから２．５ｂａｒのパワーを有する衝撃波にさらされる、請求項２３から２
７のいずれか一項に記載の方法。
任意の１つの時点において前記衝撃波にさらされる前記脂肪組織の合計面積は、１ｃｍ
^２から１００ｃｍ^２の範囲にある、請求項２３から２８のいずれか一項に記載の方法。
前記容器は、０．２５ｍｍ厚の壁部を有する１９オンスのビニールバッグであり、前記
脂肪組織サンプルの合計量は、３０ｃｃであり、任意の１つの時点において前記衝撃波に
さらされる前記脂肪組織の合計面積は、５ｃｍ^２である、請求項２３に記載の方法。
前記脂肪組織は、５，０００から１００，０００の範囲にあるいくつかの衝撃波にさら
される、請求項２３から３０のいずれか一項に記載の方法。
幹細胞画分を分離するステップは、前記脂肪組織が、水性層から分離することを可能に
するステップを含み、前記水性層は、前記幹細胞を含む、請求項２３から３１のいずれか
一項に記載の方法。
遠心分離は、３分から１０分間、５００ｇから１，６００ｇで行われる、請求項２３か
ら３２のいずれか一項に記載の方法。