CN113508284A - 封闭组织解离和低温贮藏 - Google Patents

Abstract

公开一种用于在封闭的柔性组织样本袋(10)中使组织样本解离为各个细胞或细胞团块的装置(100、200)；装置包括两个或更多个弹性脚(134/136、234/236)，其顺序地踏压组织样本袋接收区域(148、248)。还公开一种用于将热能传递到区域(148、248)或从区域(148、248)传递热能的热传递板(150、250)，板具有与区域(148、248)相邻的一个板表面(151、251)和背离区域(148、248)的暴露于外部热影响的相反表面(152、252)。另外公开一种组织样本接收袋(10)，该组织样本接收袋包括一个或多个柔性塑料腔(12)，其由两层塑料形成，该两层塑料围绕它们的边缘密封以形成大体上直线的周边，其中一个或多个腔(12)在周边内，且在周边的一侧处形成一个或多个可密封的通路端口(16)。袋的一部分留下不密封，以提供组织样本接收开口。

Description

封闭组织解离和低温贮藏

技术领域

本发明涉及用于在封闭体积中解离组织的设备和方法，以及用于解离组织的热控制的设备和方法。

背景技术

在医药和生物的许多领域中，需要取得组织样本并使它们解离为细胞团块和单个细胞来用于进一步处理。应用的数量大，且包括细胞的提取，例如：

a)可从诸如肝之类的组织中提取“原代细胞”，其然后可用于通常称为高通过量筛查(screen)的各种化验中；

b)组织渗透淋巴细胞(TIL)可从肿瘤组织中提取且用作用于自体细胞治疗的基础；

c)索状组织可用来提取间充质基质细胞；

d)可切除肿瘤并分析它们的细胞来用于“新抗原”；以及

e)组织可错位且可检查细胞，由此可出于包括个性化医药的许多目的来研究所谓的细胞多组学(例如蛋白质组学、基因组学、表观基因组学)。

在许多应用中，期望维持尽可能多的健康细胞并使它们保持在清洁、消毒的状况下。在该申请中，封闭、无菌、消毒和相似的用语意在意指生物材料由此与其周围环境分离的状况，但不必完全没有生物负荷或其它污染，只要少到足以使得此类生物负荷或其它污染(如果有任何的)对解离的材料的生存能力或可用性没有显著影响。

细胞的组织解离的一种技术从WO2018/130845已知，其内容通过引用并入本文中，如同措辞在本文中重复那样。在该申请中，公开用于解离固体组织以使真核细胞衍生为单个细胞或小细胞数量聚集体的无菌组织处理方法、套件和装置。本公开内容还描述一种半自动的无菌组织处理方法。WO2018/130845中解释，在固体组织解离期间的状况和收获细胞所花费的时间对最终细胞化(cellularise)材料的生存能力和恢复具有相当大的影响。提出一种与硬件一起可将酶引入到悬挂袋中以帮助解离的套件，该套件包括单独的袋，解离样本和低温保护剂可泵送到其中以用于在初始冷却之后冷冻。

US6439759描述一种揉捏装置，其包括内部挡板以帮助混合封闭的材料袋，但没有考虑该布置的热控制。

关于该背景，本发明的发明人认识到解离细胞需要考虑比WO2018/130845中考虑的更多的参数，以改进解离、冷冻和解冻过程的性能，特别是WO2018/130845或US6439759中没有解决的在此类过程期间的热控制。

发明内容

本发明涉及用于使组织有效地解离为各个细胞或细胞团块(典型为哺乳动物细胞)并解决在解离过程期间对于改进热控制的需要的呈踏压装置形式的设备。根据另一方面，本发明涉及与上文提到的踏压装置使用的热控制方法以及随后的解离组织处理步骤。根据另一方面，本发明涉及一种适于在上文提到的装置中使用的一次性柔性容器，例如袋。上文提到的方面在本文中所附的权利要求书中表示。考虑到下文的详细描述(其提供本发明的示例)，本发明的更多优点和益处对本领域技术人员将变得容易是明显的。

附图说明

现在将参照附图更详细地描述本发明，其中：

图1示出用于在封闭的样本容器内使组织解离为各个细胞或细胞团块的踏压装置的前视图；

图2和图3示出在两个不同的相应操作位置中的图1的装置；

图4示出前图中示出的装置的平面视图；

图5示出装置的备选构造的另一平面视图；

图6、图7和图8示出适合于与图1至图5的装置使用的样本容器的三个不同构造，

图9示出准备使用的样本袋；

图10、图11a、图11b和图11c示出密封样本袋的备选方式；

图12、图13和图14示出用于使袋准备使用的设备和技术；

图15示出使样本袋或容器负载到踏压装置中；

图16、图17和图18示出用于分开解离样本的设备；

图19、图20和图21示出用于控制样本或分开样本的温度的设备；以及

图23至图25示出踏压装置的另外的实施例。

具体实施方式

参照图1，示出用于在封闭且至少初始是无菌的大体上平侧且相对薄的样本容器袋10内使组织解离为各个细胞或细胞团块的踏压装置100。装置包括由部分的组件形成的壳体110，其可以可移除地插入到温度受控装置中，诸如受控温度速率改变的冷冻机、解冻机或加温器，例如称为Via Freeze ^TM的市售冷冻机，或提供温度上受控速率改变的任何其它装置(在图1中示意性地示出且大体上在本文中描述为冷冻机40)。实际上，壳体将包括覆盖物(未示出)。在使用中，装置和袋提供封闭系统，以解离组织(例如切除的肿瘤、切除的肿瘤的部分或针活组织检查等)，且然后低温贮藏所得到的细胞悬浮物来用于随后的分析，而不需要使解离样本传递到袋10外。

壳体110具有底盘112，马达单元114附接到底盘112，马达单元114包括电动马达和齿轮箱，齿轮箱具有10-300 rpm的输出速度。马达和齿轮箱114的输出轴具有曲柄116，曲柄116驱动连接杆118，连接杆118继而可枢转地连接到踏压机构120，对于曲柄116的每转，踏压机构120将移动通过一个踏压循环，即踏压循环在0.2秒与6秒之间。更详细地，该踏压机构具有平行四边形四杆连杆机构，该连杆机构包括两个间隔的枢轴122和124，该枢轴刚性地安装到底盘112，其分别可枢转地安装两个相反的平行水平杆126和128。水平杆中的每个具有两个平行的踏压杆130和132，在枢轴122和124的每侧上一个可枢转地连接到其，一起形成平行四边形连杆机构。连接杆118方便地可枢转地保持到顶部水平杆的延伸部，使得该延伸部的移动引起踏压杆130和132的循环上下运动(在示出的定向上)。脚组件134和136连接到每个踏压杆130和132，由于上文提到的循环运动，脚组件134和136将随着曲柄116的运动以顺序方式上下移动，即当一个脚向上时另一个将向下且反之亦然。

脚组件134和136各自包括平面底板138和140，每个板通过盘绕的金属弹簧146分别弹簧安装到上脚框架142和144。在上文描述的布置或等同的布置(如果使用)中，弹簧146预负载。在该情况下，组合的预负载优选为40-80 N，更优选为30-70 N，对于每个脚，优选为约60 N。组合的弹簧率为每mm行程1-5 N，优选为每mm约3 N，且预期的脚行程为约8-12 mm，优选为约10 mm。另外，每个脚的表面积意在为约20至50 cm²，优选为约35 cm²。这导致袋上的名义压力在零(当脚抬离袋或基本没有负载时)与最多达约6 N/cm²(约9 psi)之间。优选的名义压力约2 N/cm²(约3 psi)。然而，给定袋至少在踏压过程开始时可不包含均匀材料，然后将存在材料块，其中所施加的力将集中，且因此压力描述为‘名义的’，其为理想化的情形，例如提供朝踏压过程的结束所施加的袋10的最小压力阻力。

在底盘的底部处的是用于柔性袋10的接收区域148，且与接收区域148相邻的是热传递板150。区域148大到足以允许样本处理袋10可经由底盘的前部(前部在图1中示出)滑动到板150上。板包括：上表面151，袋10位于其上；以及下表面152，其在使用中暴露来用于外部影响的加热或冷却。上表面151大体上平行于每个脚的底板138和140，使得底板大体上平行于表面151移动。另一方式来说，平底板沿与表面151大体上垂直的方向移动，其防止机构120上显著的侧向力。板150由金属(优选为铝或铜或金或银或包含那些金属的合金)形成。在20摄氏度下测量的热导性优选地高于100 W/mK且更优选地高于200 W/mK。板150材料的厚度约3 mm或更小，且提供低的热质量，以及因此袋10的内容物的更快响应来遵从板的相反侧上的温度改变。

另外参照图2和图3，通过向马达单元114供应电流来操作装置，以驱动曲柄116，在该示例中如由箭头C所示出的那样顺时针。曲柄引起连接杆118操作上文描述的踏压机构120。将注意到，曲柄动程的顶部和底部(在该处最大的力施加到机构120)与每个脚组件134和136的最低位置重合。脚组件沿箭头U和D的方向上下移动以顺序地按摩样本袋10，使得袋10的内容物有可能移动到远离相应踏压脚的一侧。由于袋中潜在固体组织样本可移动远离踏压脚，且因为每个脚的底板138和140负载弹簧(其中即使当它们在它们动程的底部处时，为脚提供额外的弹性行程)，然后当较大的组织块意在解离时机构将卡住的可能性不大。顺序的踏压动作还减小袋10破裂的可能性。

图4是上文描述的装置100的平面视图，但在该视图中袋10并未就位。特别地，可看到脚组件134和136的相对并排位置，其是间隔的且具有以平面观察的共同区域，该区域约等于当平放时袋10的面积，但袋10面积的约正或负10%的面积上的差异具有效用。

图5示出装置100'的另一平面视图，装置100'在结构上类似于上文描述的装置100，但在该备选方案中，马达单元114的马达113通过使用90度齿轮箱115来与它的齿轮箱115的输出轴横向地布置，使得马达113不突出超过装置100'的后壁111。因此，如果需要，该装置100'可适配到较小的冷冻机体积中。

在上文提到的解离处理期间，由脚组件134和136施加的力由热传递板150响应。这意味着样本袋10在处理期间压靠板150的接触表面151，提供在样本袋10与板的表面151之间的良好表面接触，以及因此改进的热能传递。

图6、图7和图8示出上文提到的柔性样本袋10的不同实施例。使用中的袋在装置100或100'中的接收区域148中滑动到位且位于所提到的两个脚134和136下方。因此，袋具有约最多达12 mm厚度的大体上平的构造，具有某一额外的顺应性以便使组织样本适配于其中。如可从图6看到的，袋10的一种构造示为由仅在它们周边14处密封的两层塑料材料形成，以形成中心腔12和用于接入到腔12中的端口16。袋可由EVA形成。在使用中，优选的是，端口16或它们中的至少一个大到足以接受在必要的情况下切为小件且借助于注射器来通到袋腔12中的样本，即直径上约10 mm或更大。然而，还可能在袋的与端口相反的端部处包括所谓的‘拉链锁’通路，使得大的组织样本可放置到袋中且然后重新密封袋。‘拉链锁’可折叠上一次或多次以制成接缝，在弹性通道内部保持折叠或借助于另一夹具或多个夹具(未示出)来减小泄漏的可能性。作为备选方案，可开放袋10，且可添加组织。然后可使袋在它的内容物就位的情况下热封。袋10包括角孔口18，其用于使袋在使用中定位在装置中且在踏压期间使它保持就位。虽然图示出具有一个腔12的袋10，将可能提供具有多于一个腔(例如，两个、三个、四个或五个腔)的袋，例如多个腔中的每个是伸长的且具有初始开放的可热封的端部以及在它的其它端部处的用于引入试剂(诸如解离酶)且用于一旦解离完成或基本完成就撤回解离样本的可密封的端口。

图7示出借助于适配到角孔口18中的框架上的销钉24来安装在定位框架20中的图6的袋10。框架20是使袋10定位和保持在装置100/100'内就位的备选方式。框架20包括定位孔22，定位孔22与用于使袋在踏压期间定位和保持就位的装置协作。框架具有内开放窗26，其具有平滑的圆形内边缘23，以在使用中容纳腔12和踏压脚134和136。框架20使得更容易将袋10负载到装置100/100'中和卸载到装置100/100'外。

图8示出备选框架20'，其具有各自与框架20的构造类似的两个大体上对称的半部。每个框架半部另外具有柔性壳30，柔性壳30模制到框架20'，使得两个半部像包住袋10的蚌壳那样结合在一起。如果内部的袋10在使用中破裂，顶部和底部柔性壳用作堤。该特征对于传染性组织样本特别地有用。

可采用又一备选方案，未示出，简单的袋中袋布置来包含泄漏。在又一备选方案中，袋可包括基部，该基部具有弹性的(至少在室温下)单独的井，使得可在不使用整个样本的情况下移除样本的等分试样，例如在如下文描述的冷冻之后。备选地，可密封的袋还可热封为部分来用于允许样本分离。

在一个示例中，放置到袋10中的样本的处理可大部分地遵从WO2018/130845中描述的步骤。在该布置中，包含组织的密封袋10悬浮在水溶液中，该水溶液可包含消化酶，诸如胶原酶和蛋白酶，以加速经由端口16引入到袋中的组织的分解。这里，袋放置在板150上并从例如外部热源加温至大约35℃，以加速组织消化的速率。这里提出的一个重要差异在于，采用单个样本处理袋，以及消化酶可在解离之前或期间通过袋中的端口16中的一个引入。热传递板150可用来通过在它的下侧上加热板来将热能引入到袋中，以提供袋中用于酶促作用的期望温度。该热量可方便地来自电加热的加温板或在板150中或板150上的电加热元件。解离作用的量将取决于许多参数，例如初始组织样本的大小、密度和弹性，且因此用于解离的时间和踏压速率将显著地变化。过长或过度有力的踏压可导致细胞生存能力降低。因此，马达单元速度和解离周期是重要的。解决该问题的一个选择是根据查找表来对处理进行定时，该查找表包括解离类似样本所需的时间和输出速度。另一选择是测量执行解离处理所需要的随着时间的瞬时电功率或电能，或测量施加在板150或机构的另一部分上的力或应力，以及在达到预定阈值之后停止来指示样本已充足地解离了。在功率/力/应力减小时，解离更接近于完成。另一选择是测量通过袋的光吸收率—吸收率越大，样本越接近于完成解离。一旦解离完成，袋的内容物可传递，且细胞或受关注的其它成分可分离和放回到没用过的袋中来用于在装置100/100'中冷冻。备选地，且优选地，整个解离材料可留在袋和装置中来用于冷冻。低温保护剂通过端口16引入到袋中。

本方法与WO2018/130845中描述的方法之间的另一差异在于，一旦引入低温保护剂，袋中具有解离样本和低温保护剂安装(或保留在其中)的装置，以及整个装置安装在如上文描述的冷冻机40中。冷冻机的基部是冷的，且因此经由热传递板150从袋10吸取热能。为控制冰的构成并防止样本在袋它冷却时过冷，它可由脚134和136以上文描述的方式，虽然是以比用于解离的更慢的速率，按摩来控制冰成核且因此提高细胞在解冻之后的生存能力。可经由线导体向马达单元114供应电能来维持机构120在冷冻机(例如冷冻机40(图1))内部的运动。

由于装置可从冷冻机移除，使得在使用之后的清洁更容易。

当需要使用时，袋10中的冷冻的解离样本可通过板150的进一步外部加热和/或通过将装置100/100'部分地浸入在维持处于约37℃的加温的水浴中和移除低温保护剂来在装置100/100'中快速地解冻。在每种情况下，可在解冻期间按摩袋。如果酶仍存在，它们也可移除(如果需要)，例如借助于过滤。大体上，它们在低温贮藏期间对细胞将几乎没有影响或没有影响，因为它们的作用在低温下停止。对于相同的密封柔性袋10中的样本，发生所有的过程操纵、加温、解离、冷却、冷冻以及然后的解冻，且可在单个装置中执行。这不仅是时间和空间高效的，而且它使单个记录能够获取在处理期间对于样本所发生的一切(例如温度、持续期、解离速度、冷冻规程)并减小关于错误的可能性，诸如样本在处理机器之间的不受控的环境中花费过多的时间。

下文给出用于组织样本处理和冷冻中的设备和技术的更特定的示例。

图9示出由诸如EVA或PVC膜之类的热塑性材料形成且具有用于接受组织样本T的开口11的袋10的示例。袋包括管13，其附接到一个或多个端口16(图6)，该管包括一个或多个分支17、压缩阀19和标准鲁尔类型的连接器15。所示出的单个管线只是说明性的—袋10可包括经由多个端口16连接的额外平行管。

一旦组织T在袋10内部，开口11可由机械夹紧密封件9来密封，在图10中示为封闭和密封的，且在相同的图中以点划线示为开放的，和/或借助于使用如图11a中示出的热封机器50的热封，以产生一个或多个热封的封闭条(例如多个平行条)8，每种方法形成密封的腔12(图6、图7和图9)。

图11b和图11c中示出用于密封袋10的备选或额外的器件。如图11c中示出的，袋10在密封件8处热封之后可夹紧在两件式夹具60中，该夹具60包括由一对螺钉66迫使在一起的顶杆62和底杆64。图11b示出在分解状况下的夹具60，但在使用中螺钉66不需要在袋10插入之前完全从其余的夹具移除。顶杆62具有锥形凹部68，当夹紧时互补的楔形构成61位于锥形凹部68中。凹部和楔使夹紧力集中在楔65的顶点处，在顶点处提供比由平夹紧面可实现的更高的夹紧力。为了还更大的夹紧力，在顶杆中，顶点65在它的峰处具有小通道67，其在使用中与互补的脊状构成69相遇。力足以消除对于热封件8的需要，但为了额外的安全性，示出此类密封件。夹紧力由顶杆和底杆的厚度和刚度进一步增强，该顶杆和底杆不容易弯曲，且因此维持由螺钉66施加的夹紧力。图11c示出在夹紧状况下的夹具60。突起63与(如下文描述的)踏压装置100/100'或200的特征相遇来抑制夹具以及因此夹紧袋10在踏压期间的移动。夹具60的外周边和高度的大小和形状适配于样本接收区域148(或图22等的248)的互补部分中，且因此提供夹紧袋10在踏压期间的进一步定位。虽然未示出，夹具60可还并入额外的框架20、20'，如图7和图8中示出的，且使得夹具刚性地安装到框架的一端，且端口16(图6和图9)支承在框架的其它端处。

参照图12，在使用中，一旦密封，消化酶E可经由管13引入到腔12中，例如通过使用附接到分支连接件17的注射器5将酶注射到袋中。通过使袋保持在直立定向上，然后可通过撤回注射器5的活塞来将空气从腔12移除，如图13中示出的。酶E和组织T的初始混合可用手进行，如图14中示出的。

然后可开始将袋10负载到踏压装置100中来用于解离，有或没有框架20/20'和堤覆盖物30，如图15中示出的。

解离过程然后如上文描述的那样发生。一旦完成(其可花费几分钟与几小时之间，例如约10分钟至7小时，优选为40分钟至1小时)，解离的液化样本可细分为等分试样，例如使用上文描述的袋组，以及如图16中示出的连接到分支17的额外的样本等分试样袋7。在该情况下，注射器5用来使液化样本沿箭头F的方向吸取到袋10外，阀19a和19b开放，且与样本等分试样袋7相邻的阀19c封闭。一旦充足的样本撤回到注射器5中，阀19b封闭，阀19a保持开放，且阀19c开放。注射器然后用来迫使液体沿图17中箭头F的方向到样本等分试样袋7中。等分试样袋7的管13可借助于夹具热封机器55来热封并在图18中示出。可重复该过程，直到获得充足的等分试样，或直到没有更多的样本留下。袋可已经部分地分开，以使得密封住每个隔室更简单。

如上文描述的，样本袋10可保留在踏压装置100(图15)中，且踏压装置然后可负载到受控速率温度改变装置中，在该情况下是如图19中示出的冷冻机40。该技术允许踏压在冷冻期间继续，以抑制冰晶形成，但实际上，袋10可在冷冻之前移除，且冷冻机40然后在踏压期间仅用来通过热传递板来冷却样本。在备选方案中，等分试样样本袋7可替代整个样本袋10。在另一备选方案中，通过使踏压装置100安装在冷冻机40的顶部上(其中它的盖开放，因此基部150冷却)，冷冻机40可用来使未处理过的或处理过的样本平缓地冷却至约4摄氏度，如图20中示出的。在另一备选方案中，可能移除基部150并将该基部150放置到冷冻机中，其中冷冻机盖就位，如图21中示出的。在又一备选方案(未示出)中，袋10或7可直接在冷冻机40中冷冻。

本发明不看作是受上文描述的实施例所限制，而是可在所附权利要求书的范围内变化，如对本领域技术人员容易是明显的。例如，上文描述的踏压机构是优选的，因为它提供完全枢转的机械互连，其与滑动表面相比在冷状况下不太可能卡住，但该机构可用任何用于顺序地踏压两个或更多个脚的机械上等同的器件替代。所描述的平脚可用滚子脚替代，其中踏压运动是从侧部到侧部的，而不是上下的。所描述的踏压(或它的机械等同物)优选地处于每秒对于每个脚来说2个或3个踏压的速率以优化解离和最大限度地增加细胞恢复，且是稳定的踏压，但对于不同的细胞类型，踏压可更快或更慢或是间歇的。

由于装置100/100'意在放置于冷冻机中并经受极低的温度(例如负80摄氏度或更低)，金属部分(特别是像弹簧146那样的那些部分)的使用是优选的(由于聚合物部分在低温下变得更刚性得多)。此外，像活塞和缸那样的紧密适配的部分在非常低的温度下可变得卡住或不适配，因此像所描述的机构120那样的简单的可枢转的连杆机构是优选的。

图22、图23和图24示出备选的踏压装置200，其在大小和功能上类似于上文描述的装置100。装置200具有某些差异，其在下文更详细地描述。

参照图22，装置100与装置200之间的主要差异在于，装置200具有与装置100的机构120不同的踏压机构220。两个踏压脚234、236由24伏DC电动马达213(图23)以循环交替的踏压运动(类似于图2和图3中示出的运动)驱动，该电动马达213是电动马达单元214的部分，该电动马达单元214具有旋转编码器，该旋转编码器向控制器221(图23)提供反馈以用于监测和控制踏压运动的速度。马达经由有齿的带222驱动凸轮轴224。凸轮轴包括以180度偏移的一对凸轮230、232，其在该情况下各自以摆线形状为轮廓来提供凸轮从动件的简谐运动。每个凸轮可操作成移动凸轮从动组件，该凸轮从动组件包括相关联的弹性体的从动轮225、227，其依靠在凸轮的轮廓上，从动轮轴221、223与弹簧从动托架226、228成力传送关系。每个托架226、228在线性引导件229中滑动，且相应的脚234、236连接到托架。在相应的凸轮由马达克服回复弹簧231的推进力来旋转时，每个组件继而由从动轮中相应的一个(在它依靠凸轮轮廓与脚一起远离踏压状况时)迫使向上。在凸轮进一步旋转且凸轮轮廓后退时，与每个从动组件相关联的弹簧231以踏压力迫使组件和脚向下。

因此，踏压力受限于相关联的从动组件弹簧231的弹簧率且不是驱动马达的功率。1. 施加到袋的力在使用中受弹簧所限制，因为机构向上驱动脚且弹簧往回向下推它们。这保证：

a.马达不能停转(不管肿瘤的大小或结构(texture))；

b.不以过大的力压缩样本，且袋不会裂开；

c.施加到袋的最大压力低于在袋制造期间测试的压力；以及

d.如下文描述的，铰接袋接收区域248可接受样本袋和所使用的任何夹具，而不必使脚预定位。换句话说，当接受袋时，脚可在任何位置中，因为铰接样本区域248相对于脚是封闭的，且如果需要，当铰接区域相对于脚是封闭的时，任何样本可在那时由脚压缩。

还参照图23和图24，装置200还包括从装置壳体210延伸到两个脚234、236上部的柔性密封膜片241，其在脚底与踏压机构220的其余部分之间提供防流体和灰尘的密封。如果压缩袋在使用中裂开，该布置抑制机构污染。虽然膜片241是优选的，脚可在密封件中滑动，诸如唇状密封件，其安装到使机构220与袋区域248分开的隔板，并实现对机构污染的类似抑制(如果需要那样)。

装置200还包括热传递板250，其执行与热传递板150相同的功能。然而，该板250在铰链255处铰接到壳体的一侧(图24)，使得要踏压的袋的插入和移除(如图6、图7和图8中示出的)更容易。热传递板250包括温度传感器256，其允许板250和袋接收区域248的温度由控制器监测和记录，以用于质量控制。板250具有第一表面251和第二表面252，其具有与上文描述的表面151和152相同的功能。

每个脚相对于装置200的热传递板250是高度上可调节的，且它移动的指示也由控制器监测。因此，即使旋转编码器可指示马达在转动，仍可由控制器检测机械故障，诸如有齿的带222的故障，且可实施合适的动作，诸如发出警报。

装置200具有与装置100相同的外部尺寸，且装置的壳体210意在在冷冻机盖就位的情况下在受控速率冷冻机40内部滑动，如上文描述和图21中示出的。

为了方便，使用诸如上、下、上下之类的用语以及诸如脚、踏压(tread)和踏压了(treading)之类的更具描述性的用语来描述图中示出的本发明，但实际上，所示出的装置可以以任何方式定向，使得那些用语在该新定向上变得例如颠倒或不那么具描述性。因此，关于定向的限制不应由此类用语或等同的用语来解释。

本发明提供一种用于在封闭的柔性袋(10)中使组织样本解离为各个细胞或细胞团块的装置(100/100')，该装置包括机械解离机构(120)和组织样本袋接收区域(148)，所述装置还包括用于将热能传递到区域(148)或从区域(148)传递热能的热传递板(150)，该板具有与区域(148)相邻的第一板表面(151)和背离区域(148)的暴露于外部热影响的相反表面(152)。

Claims (21)

1.一种用于在封闭的柔性袋(10)中使组织样本解离为各个细胞或细胞团块的装置(200)，所述装置包括机械解离机构(220)和组织样本袋接收区域(248)，所述装置还包括用于将热能传递到所述区域(248)或从所述区域(248)传递热能的热传递板(250)，所述板具有与所述区域(248)相邻的第一板表面(251)和背离所述区域(248)的暴露于外部热影响的相反表面(252)，所述解离机构(220)包括多个踏压脚(234、236)，其各自仅通过来自相应的弹性部件(231)的力以大体上线性的运动朝所述第一板表面推进，且每个脚(234、236)在机械部件(230、232)的影响下能够进一步移动远离第一板，所述机械部件(230、232)还布置成在远离所述第一板的所述移动期间压缩所述相应的弹性部件(231)。

2.根据权利要求1所述的装置，其中，所述机构(220)包括两个或更多个脚(234/236)，其布置成顺序地踏压所述组织样本袋接收区域(28)。

3.根据权利要求2所述的装置，其中，所述线性运动是沿大体上垂直于所述第一板表面(151)的方向朝和远离所述袋接收区域(248)的运动。

4.根据权利要求2或3所述的装置，其中，所述机构(220)包括两个凸轮，其各自具有以180度旋转分离布置的凸角。

5.根据前述权利要求中任一项所述的装置，其中，当此类袋平放时，所述脚具有约等于(最多达正或负30%的)所述袋意在受踏压的面积的共同踏压面积。

6.根据权利要求2至5中任一项所述的装置，其中，所述脚在朝所述区域(248)移动时用来将样本袋直接地推到所述热传递板(250)的相邻的第一表面(251)上。

7.根据前述权利要求中任一项所述的装置，其中，所述热传递板(250)具有在20摄氏度下测量的100 W/mK或更大且优选地高于200 W/mK的热导性。

8.根据前述权利要求中任一项所述的装置，其中，所述脚在所述第一表面上方的最终推进位置是可调节的。

9.根据前述权利要求中任一项所述的装置，其中，所述机构(220)在壳体(210)内或基本在壳体(210)内，且所述组织样本袋接收区域(248)相对于所述壳体是能够分离或能够移动的，例如借助于铰链(255)。

10.根据前述权利要求中任一项所述的装置，其中，所述机构(220)相对于所述脚密封，例如借助于柔性膜片或滑动密封件。

11.一种用于低温贮藏解离细胞的系统，所述系统包括用于使组织样本解离为各个细胞或细胞团块的装置(200)，其可移除地设置在诸如加温器/冷冻机(40)之类的受控温度速率改变装置中，所述装置具有安装或可安装在其中的一个或多个封闭的柔性袋(10)，其用于包含用于解离的或由所述装置解离的样本，所述装置包括机械解离机构(220)和组织样本袋接收区域(248)，所述装置还包括用于将热能传递到所述区域(248)或从所述区域(248)传递热能的热传递板(250)，所述板具有与所述区域(248)相邻的第一板表面(251)和背离所述区域(248)的暴露于所述冷冻机(40)的热影响的相反表面(252)，所述解离机构(220)包括多个踏压脚(234、236)，其各自能够朝所述第一板表面推进，例如一个接着一个。

12.一种用于使组织样本解离为细胞或细胞团块的方法，所述方法包括按任何合适顺序的以下步骤：

a)提供密封或基本密封在柔性样本袋(10)中的组织样本；

b)提供装置(200)，所述装置(200)包括机械解离器(220)，包括样本袋接收区域(248)，且包括热传递板(250)，所述热传递板(250)具有与所述区域(248)相邻的第一表面(251)和背离所述区域(248)的暴露于外部热影响的相反表面(252)，且可选地包括根据前述权利要求所述的装置的其余特征中的任一个或多个；

c)使所述组织样本在所述装置(200)中经受解离，以及

d)借助于使所述装置设置在受控温度速率改变装置(40)中，经由所述板(250)将热能传递到所述袋中或传递到所述袋外。

13.根据权利要求12所述的方法，其中，步骤d)包括初始经由所述板(250)将热能引入到袋的内容物中以帮助酶促解离或解冻所述袋的内容物。

14.根据权利要求11所述的方法，其中，步骤d)包括移除热能来用于冷却所述袋的内容物或用于冷冻所述袋的内容物，且可选地包括在所述冷冻之前引入低温保护剂。

15.根据权利要求12至14中任一项所述的方法，其中，所述解离装置对所述袋施加循环压力，例如从零至最多达约6 N/cm²或在零与6 N/cm²之间的任何范围。

16.一种当与根据权利要求1至10所述的装置或根据权利要求11所述的系统使用时或当用于根据权利要求12至15中任一项所述的方法中时的组织样本接收袋。

17.一种组织样本接收袋(10)，所述组织样本接收袋(10)包括一个或多个柔性塑料腔(12)，其形成有大体上直线的周边，其中一个或多个腔(12)在所述周边内，且在所述周边的一侧处形成一个或多个可密封的或可封闭的通路端口(16)，可选地，所述周边还包括用于在踏压所述袋期间定位和固定所述袋的孔口。

18.一种组织样本接收袋(10)，所述组织样本接收袋(10)包括两个塑料层，其围绕它们边缘的大部分密封在一起以形成所述周边，且具有不密封的周边的区域，以在所述袋中形成用于将样本接收到所述袋中的开口，且具有呈管端口形式的额外的可封闭的开口。

19.根据权利要求18所述的组织样本接收袋，其中，所述组织样本接收袋还包括用于在使用中密封所述开口的夹具，所述夹具具有适合于定位在根据权利要求1至10或权利要求11所述的样本袋接收区域(148或248)内的互补夹紧部件。

20.根据权利要求17或18所述的组织样本接收袋，其中，所述组织样本接收袋还包括框架(20、20')，所述框架(20、20')具有开口(26)，所述开口(26)的大小接受所述一个或多个腔(12)，且其中所述周边的至少一部分叠盖所述框架，所述框架和所述周边具有互补的构成，以用于将所述周边的所述至少一部分保持于所述框架。

21.根据权利要求20所述的组织样本接收袋，其中，所述框架包括在使用中结合在一起的上部和下部，每个部分还包括柔性覆盖物(30)，所述柔性覆盖物(30)包封所述腔来用于用作围绕所述腔的堤。

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