KR20210135233A - 폐쇄된 조직 분해 및 냉동 보존 - Google Patents

Abstract

폐쇄된 가요성 조직 샘플 백(10)에서 조직 샘플을 개별 세포 또는 세포 덩어리로 분해하기 위한 디바이스(100, 200)가 개시되며, 이 디바이스는 조직 샘플 백 수용 영역(148, 248)을 순차적으로 트레딩하는 2개 이상의 탄성 풋(134/136, 234/236)을 포함한다. 또한, 영역(148, 248)으로 또는 영역으로부터 열 에너지를 전달하기 위한 열 전달 판(150, 250)이 개시되며, 이 판은 영역(148, 248)에 인접한 하나의 판 표면(151, 251) 및 영역(148, 248)의 반대쪽에 있는, 외부 열 영향에 노출된 대향 표면(152, 252)을 갖는다. 공동 또는 공동들(12)이 주연부 내에 있는 상태로 대체로 직선형 주연부를 형성하기 위해 그 에지 주위에 밀봉된 플라스틱의 2개의 층으로 형성된 하나 이상의 가요성 플라스틱 공동(12)을 포함하는 조직 샘플 수용 백(10)이 추가로 개시되며, 주연부의 적어도 일 측면에는 하나 이상의 밀봉 가능한 액세스 포트(16)가 형성된다. 백의 일 부분은 조직 샘플 수용 개구를 제공하기 위해 밀봉되지 않은 상태로 남아 있다.

Description

폐쇄된 조직 분해 및 냉동 보존

본 발명은 폐쇄 체적에서 조직의 분해를 위한 장치 및 방법, 및 분해된 조직의 열 제어를 위한 장치 및 방법에 관한 것이다.

의학 및 생물학의 많은 영역에서, 조직 샘플을 채취하고 추가 처리를 위해 세포 덩어리(cell clump)와 단일 세포로 분해할 필요가 있다. 용례의 수는 많고 세포의 추출을 포함하고, 예를 들면 다음과 같다:

a) "일차 세포"는 간과 같은 조직으로부터 추출될 수 있으며, 이어서 일반적으로 고처리량 스크리닝이라고 명명되는 다양한 분석에 사용될 수 있고;

b) 조직 침윤 림프구(Tissue Infiltrating Lymphocyte)(TIL)는 종양 조직으로부터 추출되어 자가 세포 치료의 기초로서 사용될 수 있으며;

c) 제대 조직(cord tissue)은 간엽 기질 세포(mesenchymal stromal cell)를 추출하는 데 사용될 수 있고;

d) 종양을 절제하고 "신생항원(neoantigen)"을 위해 세포를 분석할 수 있으며;

e) 조직이 탈구될 수 있고 세포가 검사될 수 있으며, 이에 의해 소위 세포의 다중체학(multi-omics)(예를 들어, 단백질체학(proteomic), 유전체학(genomic), 후성유전체학(epigenomic))이 개인 맞춤 의약품을 비롯하여 많은 목적을 위해 연구될 수 있다.

많은 용례에서, 가능한 한 많은 건강한 세포를 유지하고, 깨끗한 무균 상태로 유지하는 것이 바람직하다. 이 용례에서, 폐쇄, 무균, 멸균 등의 용어는 생물학적 물질이 주변 환경으로부터 분리되어 있지만, 반드시 바이오버든(bioburden) 또는 기타 오염물이 완전히 없을 필요는 없고, 단지 이러한 바이오버든 또는 기타 오염물(있다면)이 분해된 물질의 생존력이나 유용성에 큰 영향을 미치지 않을 정도로만 충분히 없는 상태를 의미하도록 의도된다.

세포의 조직 분해의 한가지 기술은 WO2018/130845호로부터 공지되어 있으며, 그 내용은 단어 선택이 본 명세서에서 반복되는 것처럼 본 명세서에 참조로 포함된다. 해당 출원에서는, 진핵 세포(eukaryotic cell)를 단일 세포 또는 작은 세포 수의 응집체로 유도하기 위해 고형 조직을 분해하기 위한 무균 조직 처리 방법, 키트 및 디바이스가 개시되어 있다. 그 개시는 또한 반자동 무균 조직 처리 방법을 설명한다. WO2018/130845에는 고형 조직 분해 중 조건 및 세포를 채취하는 데 걸리는 시간이 최종 세포화된 물질의 생존력 및 회수에 상당한 영향을 미친다는 것이 설명되어 있다. 하드웨어와 함께 분해를 돕기 위해 행잉 백에 효소를 도입할 수 있는 키트가 제안되었으며, 이 키트는 분해된 샘플을 펌핑할 수 있는 별개의 백 및 초기 냉각 후 동결을 위한 동결 방지제(cryoprotectant)를 포함한다.

US6439759호는 물질의 폐쇄된 백을 혼합하는 것을 돕기 위해 내부 배플을 포함하는 반죽 디바이스를 설명하지만, 이 배열의 열 제어는 고려되지 않는다.

이러한 배경으로, 본 발명의 발명자는 WO2018/130845호에서 고려된 것보다 더 많은 파라미터를 고려하여 세포를 분해하여, 분해, 동결, 해동 프로세스, 특히 WO2018/130845 또는 US6439759에서 해결되지 않은 그러한 프로세스 중의 열 제어를 개선할 필요가 있다는 것을 자각하였다.

본 발명은 조직을 개별 세포 또는 세포 덩어리, 통상적으로 포유동물 세포로 효과적으로 분해하고, 분해 프로세스 동안 개선된 열 제어의 필요성을 해결하기 위한 트레딩 디바이스 형태의 장치에 관한 것이다. 다른 양태에 따른 본 발명은 앞서 설명한 트레딩 디바이스(들)와 함께 사용되는 열 제어 방법 및 후속의 분해된 조직 처리 단계에 관한 것이다. 다른 양태에 따른 본 발명은 앞서 설명한 디바이스에 사용하도록 된 일회용 가요성 용기, 예를 들어 백에 관한 것이다. 앞서 설명한 양태는 본 명세서에 첨부된 청구범위에 나타낸다. 본 발명의 더 많은 이점 및 이익은 본 발명의 예를 제공하는 하기의 상세한 설명을 고려하여 본 기술 분야의 숙련자에게 쉽게 명백해질 것이다.

본 발명은 이제 첨부 도면을 참조하여 더 상세하게 설명될 것이며, 도면에서:
도 1은 폐쇄된 샘플 용기 내에서 조직을 개별 세포 또는 세포 덩어리로 분해하기 위한 트레딩 디바이스의 정면도를 도시하고;
도 2 및 도 3은 2개의 상이한 각각의 작동 위치에서 도 1의 디바이스를 도시하며;
도 4는 이전 도면에 도시된 디바이스의 평면도를 도시하고;
도 5는 디바이스의 대안적인 구성의 다른 평면도를 도시하며;
도 6, 도 7 및 도 8은 도 1 내지 도 5의 디바이스와 함께 사용하기에 적절한 샘플 용기의 세 가지 상이한 구성을 도시하고;
도 9는 사용을 위해 준비 중인 샘플 백을 도시하며;
도 10, 도 11a, 도 11b 및 도 11c는 샘플 백을 밀봉하는 대안적인 방법을 도시하고;
도 12, 도 13 및 도 14는 사용을 위해 백을 준비하기 위한 장치 및 기술을 도시하며;
도 15는 트레딩 디바이스에 샘플 백 또는 용기를 적재하는 것을 도시하고;
도 16, 도 17 및 도 18은 분해된 샘플을 분할하는 장치를 도시하며;
도 19, 도 20 및 도 21은 샘플 또는 분할된 샘플의 온도를 제어하기 위한 장치를 도시하고;
도 23 내지 도 25는 트레딩 디바이스의 다른 실시예를 도시한다.

도 1을 참조하면, 폐쇄되고 적어도 초기에는 무균이며 대체로 평탄면의 비교적 얇은 샘플 용기 백(10) 내에서 조직을 개별 세포 또는 세포 덩어리로 분해하기 위한 트레딩 디바이스(100)가 도시되어 있다. 이 디바이스는, 제어된 온도 속도 변화 냉동기, 해동기 또는 가온기, 예를 들어 Via Freeze™로서 공지된 상업적으로 이용 가능한 냉동기와 같은 온도 제어 디바이스, 또는 도 1에 개략적으로 도시되고 본 명세서에서 전체적으로 냉동기(40)로서 설명되는, 온도의 제어된 속도 변화를 제공하는 임의의 다른 디바이스에 제거 가능하게 삽입될 수 있는 부품들의 조립체로 형성된 하우징(110)을 포함한다. 실제로, 하우징은 예시되지 않은 커버를 포함할 것이다. 사용 시, 디바이스와 백은 폐쇄된 시스템을 제공하여 조직, 예를 들어 절제된 종양, 절제된 종양의 일부 또는 바늘 생검 등을 분해한 다음, 분해된 샘플을 백(10) 밖으로 옮길 필요 없이 후속 분석을 위해 결과적인 세포 현탁액을 저온 보존한다.

하우징(110)은 10 - 300 rpm의 출력 속도를 갖는 전기 모터 및 기어박스를 포함하는 모터 유닛(114)이 부착된 섀시(112)를 갖는다. 모터 및 기어박스(114)의 출력 샤프트는 커넥팅 로드(118)를 구동하는 크랭크(116)를 가지며, 커넥팅 로드는 차례로 트레딩 메커니즘(120)에 피봇 가능하게 연결되고, 트레딩 메커니즘은 크랭크(116)의 각각의 회전에 대해 하나의 트레딩 사이클, 즉, 0.2 내지 6 초의 트레딩 사이클을 통해 이동될 것이다. 보다 상세하게, 이 트레딩 메커니즘은 평행사변형의 4 바아 연동 장치를 갖고, 이 연동 장치는 2개의 대향 평행 수평 바아(126, 128)를 각각 피봇 가능하게 장착하는 섀시(112)에 견고하게 장착된 2개의 이격된 피봇(122, 124)을 포함한다. 각각의 수평 바아는 피봇(122, 124)의 각각의 측면에 하나씩 피봇 가능하게 연결된 2개의 평행한 트레딩 바아(130, 132)를 가져서, 함께 평행사변형 연동 장치를 형성한다. 커넥팅 로드(118)는 상단 수평 바아의 연장부에 알맞게 피봇 가능하게 유지되어, 그 연장부의 이동이 트레딩 바아(130, 132)의 주기적인 상하 운동(도시되어 있는 배향으로)을 야기한다. 각각의 트레딩 바아(130, 132)에는 풋 조립체(134, 136)가 연결되고, 이 풋 조립체는, 전술한 주기적인 운동에 의해, 크랭크(116)의 운동과 함께 순차적으로 상하로 이동하게 되고, 즉, 하나의 풋이 위로 올라갈 때 다른 하나는 아래로 내려가고 그 반대도 마찬가지이다.

풋 조립체(134, 136)는 각각 평탄면의 바닥 판(138, 140)을 각각 포함하고, 각각의 판은 코일형 금속 스프링(146)에 의해 상부 풋 프레임(142, 144)에 각각 스프링 장착된다. 앞서 설명한 배열 또는 동등한 배열(사용되는 경우)에서, 스프링(146)은 예하중을 받는다. 이 경우, 조합된 예하중은 바람직하게는 각각의 풋에 대해 40 - 80 N, 보다 바람직하게는 30 - 70 N, 바람직하게는 약 60 N이다. 조합된 스프링 속도는 이동 mm당 1 - 5 N, 바람직하게는 mm당 약 3 N이고 의도된 풋 이동은 약 8 - 12 mm, 바람직하게는 약 10 mm이다. 또한, 각각의 풋의 표면적은 약 20 내지 50 cm², 바람직하게는 약 35 cm²로 의도된다. 그 결과, 백에 대한 명목 압력이 0(풋이 백에서 들어올려지거나 실질적으로 하중이 없을 때)과 최대 약 6 N/cm²(약 9 psi) 사이가 된다. 바람직한 명목 압력은 약 2 N/cm²(약 3 psi)이다. 그러나, 백이, 적어도 트레딩 프로세스의 시작에서, 균질한 물질을 함유하지 않을 수 있다는 점을 고려하면, 인가된 힘이 집중되는 재료의 덩어리가 있을 것이고, 따라서 압력은, 예를 들어, 트레딩 프로세스의 종료를 향해 인가되는 백(10)의 최소 압력 저항을 제공하기 위해 이상적인 상황인 '명목'으로서 설명된다.

섀시의 하단에는 가요성 백(10)을 위한 수용 영역(148)이 있고 수용 영역(148)에 인접하여 열 전달 판(150)이 있다. 영역(148)은 섀시의 전방(전방은 도 1에 도시됨)을 통해 판(150) 상으로 활주 가능한 샘플 처리 백(10)을 수용하기에 충분히 크다. 판은 백(10)이 안착되는 상부 표면(151)과, 사용 시에 외부의 영향을 받는 가열 또는 냉각을 위해 노출되는 하부 표면(152)을 포함한다. 상부 표면(151)은 각각의 풋의 바닥 판(138, 140)에 대체로 평행하므로, 바닥 판은 표면(151)에 대체로 평행하게 이동한다. 다시 말해서, 평탄한 바닥 판은 표면(151)에 대해 대체로 직교 방향으로 이동하며, 이는 메커니즘(120)에 대한 상당한 측력을 방지한다. 판(150)은 금속, 바람직하게는 알루미늄 또는 구리 또는 금 또는 은, 또는 이들 금속을 함유하는 합금으로 형성된다. 열 전도율은 섭씨 20도에서 측정된 바람직하게는 100 W/m K 초과, 보다 바람직하게는 200 W/m K 초과이다. 판(150) 재료의 두께는 약 3 mm 이하이고 낮은 열 질량을 제공하므로 판의 반대측에서의 온도 변화를 따르도록 백(10)의 내용물의 더 빠른 반응을 제공한다.

추가로 도 2 및 도 3을 참조하면, 디바이스는 모터 유닛(114)에 전류를 공급함으로써 작동되어, 크랭크(116)를, 이 예에서는 화살표 C에 의해 도시된 바와 같이 시계 방향으로 구동시킨다. 크랭크는 커넥팅 로드(118)가 앞서 설명한 트레딩 메커니즘(120)을 작동하게 한다. 메커니즘(120)에 최대 힘이 인가되는 크랭크 스트로크의 상단 및 하단은 각각의 풋 조립체(134, 136)의 최하부 위치와 일치한다는 점이 유의된다. 풋 조립체는 화살표 U 및 D 방향으로 상하 이동하여 샘플 백(10)을 순차적으로 마사지함으로써, 백(10)의 내용물이 각각의 트레딩 풋으로부터 멀어지게 일 측면으로 이동할 기회를 갖는다. 백에 있는 잠재적으로 고형 조직 샘플이 트레딩 풋으로부터 멀어지게 이동될 수 있고 각각의 풋의 바닥 판(138, 140)이 스프링 하중을 받고 있기 때문에, 발이 스트로크의 하단에 있을 때에도 풋에 추가적인 탄성 이동이 제공되고, 이후에, 더 큰 조직 질량이 분해되도록 의도될 때 메커니즘이 재밍될 가능성이 적다. 순차적인 트레딩 운동은 또한 백(10)이 파열될 가능성을 감소시킨다.

도 4는 앞서 설명한 디바이스(100)의 평면도이지만, 이 도면에서는 백(10)이 제자리에 있지 않다. 특히, 풋 조립체(134, 136)의 상대적인 나란한 위치를 볼 수 있는 데, 이 위치는 이격되고 평면에서 볼 때 집합적 영역을 가지며, 이 영역은 평탄하게 놓였을 때 백(10)의 영역과 거의 동일하지만, 백(10) 영역의 약 ±10%의 영역 차이가 실용성을 갖는다.

도 5는 앞서 설명한 디바이스(100)와 구성이 유사한 디바이스(100')의 다른 평면도를 도시하지만, 이 대안에서 모터 유닛(114)의 모터(113)는 90도 기어박스(115)의 사용에 의해 그 기어박스(115)의 출력 샤프트에 대해 횡방향으로 배열되어, 모터(113)가 디바이스(100')의 후방벽(111)을 넘어 돌출되지 않는다. 따라서, 이 디바이스(100')는 필요한 경우 더 작은 냉동기 체적에 적합할 수 있다.

앞서 설명한 분해 처리 동안, 풋 조립체(134, 136)에 의해 인가된 힘은 열 전달 판(150)에 의해 반응된다. 이는 처리 동안 샘플 백(10)이 판(150)의 접촉 표면(151)에 대해 가압되어 샘플 백(10)과 판의 표면(151) 사이에 양호한 표면 접촉을 제공하고 결과적으로 개선된 열 에너지 전달을 제공한다는 것을 의미한다.

도 6, 도 7 및 도 8은 앞서 설명된 가요성 샘플 백(10)의 상이한 실시예를 도시한다. 사용 시에 백은 디바이스(100 또는 100')의 수용 영역(148)에 있는 제자리로 활주되고 언급한 2개의 풋(134, 136) 아래에 안착된다. 따라서, 백은 그 안에 조직 샘플을 맞추기 위한 약간의 추가 컴플라이언스와 함께 최대 약 12 mm 두께의 대체로 평탄한 구성을 갖는다. 도 6에서 볼 수 있는 바와 같이, 백(10)의 하나의 구성은 중심 공동(12)을 형성하기 위해 그 주연부(14)에서만 밀봉된 플라스틱 재료의 2개 층, 및 공동(12)으로의 액세스를 위한 포트(16)로 형성된 것으로 도시되어 있다. 백은 EVA로 형성될 수 있다. 사용 시에, 포트(16) 또는 그 중 적어도 하나는 필요한 경우 작은 피스로 잘려 주사기에 의해 백 공동(12)으로 통과된 샘플을 수용하기에 충분히 큰 것이, 즉, 직경이 약 10 mm 이상인 것이 바람직하다. 그러나, 큰 조직 샘플을 백에 넣은 다음 백을 다시 밀봉할 수 있도록, 포트 반대쪽에 있는 백 단부에 소위 '집록(zip-lock)' 액세스를 포함하는 것도 가능하다. '집록'은 누설 가능성을 감소시키기 위해 탄성 채널 내에 또는 다른 클램프 또는 클램프들(도시되지 않음)에 의해 절첩된 상태로 유지된 시임을 만들도록 한 번 이상 절첩될 수 있다. 대안으로서, 백(10)이 개방될 수 있고 조직이 추가될 수 있다. 이어서, 백은 내용물이 제자리에 있는 상태로 열 밀봉될 수 있다. 백(10)은 사용 시에 디바이스에 백을 위치 결정하고 트레딩 동안 백을 제자리에 유지하기 위한 코너 구멍(18)을 포함한다. 도면은 하나의 공동(12)을 갖는 백(10)을 도시하지만, 하나 초과의 공동, 예를 들어 2, 3, 4 또는 5개의 공동을 갖는 백을 제공하는 것이 가능하고, 예를 들어 복수의 공동 각각은 세장형이며 초기에 개방된 열 밀봉 가능한 단부, 및 분해 효소와 같은 시약을 도입하고 분해가 완료되거나 실질적으로 완료되면 분해된 샘플을 인출하기 위한 다른 단부의 밀봉 가능한 포트를 갖는다.

도 7은 코너 구멍(18)에 끼워지는 프레임 상의 못(24)에 의해 위치 결정 프레임(20)에 장착된 도 6의 백(10)을 도시한다. 프레임(20)은 디바이스(100/100') 내에서 백(10)을 제자리에 위치 결정하고 유지하는 대안적인 방법이다. 프레임(20)은 트레딩 동안 백을 제자리에 위치 결정하고 유지하기 위한 디바이스와 협력하는 위치 결정 구멍(22)을 포함한다. 프레임은 사용 시에 공동(12) 및 트레딩 풋(134, 136)을 수용하기 위해 매끄럽고 둥근 내부 에지(23)를 갖는 내부 개방 윈도우(26)를 갖는다. 프레임(20)은 디바이스(100/100') 내부 및 외부로 백(10)의 로딩 및 언로딩을 용이하게 한다.

도 8은 프레임(20)의 구성과 각각 유사한 2개의 대체로 대칭적인 절반부를 갖는 대안적인 프레임(20')을 도시한다. 각각의 프레임 절반부는 프레임(20')에 몰딩된 가요성 쉘(30)을 추가로 갖고, 이로써 2개의 절반부는 백(10)을 둘러싸는 조개 쉘처럼 함께 모이게 된다. 상단 및 하단 가요성 쉘은 사용 시에 내부의 백(10)이 파열되는 경우 제방으로서 작용한다. 이 피처는 감염 조직 샘플에 특히 유용하다.

도시되지 않은 또 다른 대안에서, 누설을 억제하기 위해 간단한 백-인-백 배열이 사용될 수 있다. 또 다른 대안에서, 백은 탄력 있는(적어도 실온에서) 별개의 웰을 갖는 베이스를 포함할 수 있어, 샘플의 적정량이 전체 샘플을 사용하지 않고, 예를 들어 아래에 설명되는 바와 같이 동결 후에 제거될 수 있다. 대안적으로, 밀봉 가능한 백은 샘플의 분리를 허용하는 부분으로 추가로 열 밀봉될 수 있다.

백(10)에 넣은 샘플의 처리는 하나의 예에서 WO2018/130845호에 설명된 단계를 대체로 따를 수 있다. 이러한 배열에서, 조직을 수용하는 밀봉된 백(10)은 포트(16)를 통해 백 내로 도입된 조직의 분해를 가속화하기 위해 콜라게나제 및 프로테아제와 같은 소화 효소를 함유할 수 있는 수용액에 현탁된다. 백은 여기에서 판(150) 상에 배치되고 조직 소화 속도를 가속화하기 위해, 예를 들어 외부 열원으로부터 약 35℃로 가온된다. 여기서 제안된 한 가지 중요한 차이점은 단일 샘플 처리 백이 사용되며, 분해 전 또는 분해 중에 백의 포트(16) 중 하나를 통해 소화 효소가 도입될 수 있다는 것이다. 열 전달 판(150)은 효소 작용을 위해 백에 원하는 온도를 제공하기 위해 그 밑면 상의 판을 가열함으로써 백에 열 에너지를 도입하는 데 사용될 수 있다. 상기 열은 전기적으로 가열된 가온 판, 또는 판(150) 내의 또는 판 상의 전기 가열 요소로부터 편리하게 올 수 있다. 분해 작용의 양은 수많은 파라미터, 예를 들어 초기 조직 샘플의 크기, 밀도 및 탄성에 따라 좌우되므로, 분해 시간과 트레딩 속도는 크게 달라질 것이다. 너무 길거나 너무 격렬한 트레딩은 세포 생존력을 저하시킬 수 있다. 따라서, 모터 유닛 속도와 분해 기간이 중요하다. 이 문제를 해결하는 한 가지 옵션은 유사한 샘플을 분해하는 데 필요한 시간과 출력 속도를 포함하는 룩업 테이블에 따라 처리 시간을 정하는 것이다. 또 다른 옵션은 분해 처리를 수행하는 데 필요한 시간 경과에 따른 순간 전력 또는 전기적 에너지를 측정하거나, 판(150) 또는 메커니즘의 다른 부분에 인가되는 힘 또는 응력을 측정하고, 미리 결정된 임계값에 도달한 후 정지하여, 샘플이 충분히 분해되었음을 나타내는 것이다. 전력/힘/응력이 감소함에 따라, 분해가 완료에 가까워진다. 또 다른 옵션은 백을 통한 광 흡광도를 측정하는 것이다 - 흡광도가 클수록, 샘플이 분해를 완료하는 데 더 가깝다. 분해가 완료되면 백 내용물을 옮길 수 있고, 세포 또는 관심 있는 다른 구성요소를 분리하여 디바이스(100/100')에서 동결하기 위해 새로운 백에 다시 넣을 수 있다. 대안적으로, 그리고 바람직하게는, 전체 분해된 물질이 동결을 위해 백 및 디바이스에 남겨질 수 있다. 포트(16)을 통해 백에 동결 방지제가 도입된다.

본 방법론과 WO2018/130845호에 설명된 것의 또 다른 차이점은 동결 방지제가 도입되면, 백에 분해된 샘플과 동결 방지제를 갖는 디바이스가 디바이스에 장착(또는 유지)되고, 전체 디바이스가 앞서 설명한 바와 같이 냉동기(40)에 장착된다는 것이다. 냉동기의 베이스는 저온이므로 열 전달 판(150)을 통해 백(10)으로부터 열 에너지를 끌어낸다. 백이 냉각되는 동안 얼음 형성을 제어하고 샘플의 과냉각을 방지하기 위해, 백은 분해보다 느린 속도일 지라도 앞서 설명한 방식으로 풋(134 및 136)에 의해 마사지될 수 있어, 얼음 핵형성을 제어하여 해동 후 세포의 생존력을 증가시킬 수 있다. 전기 에너지는 와이어 전도체를 통해 모터 유닛(114)에 공급되어 냉동기, 예를 들어 냉동기(40)(도 1) 내부의 메커니즘(120)의 운동을 유지할 수 있다.

냉동기로부터 디바이스를 제거할 수 있기 때문에, 사용 후 세정이 용이해진다.

사용에 필요한 경우, 백(10)의 냉동 분해 샘플은 판(150)의 추가 외부 가열에 의해, 및/또는 디바이스(100/100')를 약 37℃로 유지되고 동결 방지제가 제거된, 가온된 수조에 부분적으로 침지시킴으로써 디바이스(100/100')에서 신속하게 해동될 수 있다. 각각의 경우에, 백을 해동하는 동안 마사지할 수 있다. 효소가 여전히 존재하는 경우, 필요에 따라, 예를 들어 여과를 통해 효소도 제거할 수 있다. 일반적으로, 효소는 저온에서 그 작용이 중단되기 때문에 냉동 보존 동안 세포에 거의 또는 전혀 영향을 미치지 않는다. 모든 프로세스 조작, 가온, 분해, 냉각, 동결 및 해동은 동일한 밀봉된 가요성 백(10)의 샘플에서 발생하며 단일 디바이스에서 수행될 수 있다. 이는 시간과 공간이 효율적일 뿐만 아니라 처리 중에 샘플에 발생되는 모든 것, 예를 들어 온도, 지속 기간, 분해 속도, 동결 프로토콜을 단일 기록이 캡처하게 할 수 있으며, 처리 기계 사이의 제어되지 않은 환경에서 너무 많은 시간을 소비하는 샘플과 같은 오류 가능성을 감소시킨다.

조직 샘플 처리 및 동결에 사용되는 장치 및 기술의 보다 구체적인 예가 아래에 제공된다.

도 9는 EVA 또는 PVC 필름과 같은 열가소성 재료로 형성되고 조직 샘플(T)을 수용하기 위한 개구(11)를 갖는 백(10)의 예를 도시한다. 백은 하나 이상의 포트(16)(도 6)에 부착된 배관(13)을 포함하며, 이 배관은 하나 이상의 분기부(17), 압축 밸브(19), 및 표준 루어형 커넥터(15)를 포함한다. 도시된 단일 배관 라인은 단지 예시적이다 - 백(10)은 복수의 포트(16)를 통해 연결된 추가 평행 배관을 포함할 수 있다.

조직(T)이 백(10) 내부에 있으면, 개구(11)는 도 10에서 폐쇄 및 밀봉된 것으로 도시되고, 동일한 도면에서 사슬 점선으로 개방된 것으로 도시된 기계적 클램핑 밀봉부(9)에 의해, 및/또는 도 11a에 도시된 바와 같이 열 밀봉 기계(50)를 사용한 열 밀봉에 의해 밀봉되어, 열 밀봉된 폐쇄 스트립 또는 스트립(예를 들어, 복수의 평행 스트립)(8)을 생성할 수 있고, 각각의 방법은 밀봉된 공동(12)을 형성한다(도 6, 도 7 및 도 9).

백(10)을 밀봉하기 위한 대안적인 또는 추가적인 수단이 도 11b 및 도 11c에 도시되어 있다. 도 11c에 도시된 바와 같이, 밀봉부(8)에서 열 밀봉 후 백(10)은 투피스 클램프(60)에 클램핑될 수 있으며, 이 클램프는 한 쌍의 나사(66)에 의해 함께 강제되는 상단 바아(62) 및 하단 바아(64)를 포함한다. 도 11b는 분해된 상태의 클램프(60)를 도시하지만, 사용 시에 나사(66)는 백(10)의 삽입 전에 나머지 클램프로부터 완전히 제거될 필요는 없다. 상단 바아(62)는 클램핑될 때 상보적인 쐐기형 형성물(61)이 안착되는 테이퍼링 리세스(68)를 갖는다. 리세스와 쐐기는 쐐기(65)의 정점에 클램핑력을 집중시켜, 평탄한 클램핑면에 의해 달성될 수 있는 것보다 정점에서 더 높은 클램핑력을 제공한다. 더 많은 클램핑력을 위해, 정점(65)은 그 피크에 작은 채널(67)을 갖고, 이 채널은 사용 시에 상단 바아에서 상보적인 융기형 형성물(69)과 만난다. 힘은 열 밀봉부(8)의 필요성을 무효화하기에 충분하지만, 이러한 밀봉부는 추가적인 안전을 위해 예시되어 있다. 클램핑력은 쉽게 벤딩되지 않는 상단 및 하단 바아의 두께 및 강성에 의해 추가로 보강되어, 나사(66)에 의해 가해진 클램핑력을 유지한다. 도 11c는 클램핑된 상태의 클램프(60)를 도시한다. 돌출부(63)는 트레딩 디바이스(100/100' 또는 200(아래에서 설명됨))의 피처와 만나서, 트레딩 동안 클램프의 움직임을 억제하고 결과적으로 클램핑된 백(10)을 억제한다. 클램프(60)의 외주 및 높이는 샘플 수용 영역(148)(또는 도 22의 248, 이하 참조)의 상보적인 부분에 맞는 크기 및 형상을 가지며, 따라서 트레딩 동안 클램핑된 백(10)의 추가 위치를 제공한다. 예시되지는 않았지만, 클램프(60)는 또한 도 7 및 도 8에 도시된 바와 같이 추가 프레임(20, 20')을 통합할 수 있어, 클램프가 프레임의 일 단부에 견고하게 장착되고 포트(들)(16)(도 6 및 도 9)는 프레임의 다른 단부에서 지지된다.

도 12를 참조하면, 사용 시에, 일단 밀봉되면, 소화 효소(E)는, 예를 들어 분기 연결부(17)에 부착된 주사기(5)를 사용하여 백 내로 효소를 주사함으로써 배관(13)을 통해 공동(12) 내로 도입될 수 있다. 백을 직립 배향으로 유지함으로써, 공기는 도 13에 도시된 바와 같이 주사기(5)의 피스톤을 빼냄으로써 공동(12)로부터 제거될 수 있다. 효소(E)와 조직(T)의 초기 혼합은 도 14에 도시된 바와 같이 손으로 이루어질 수 있다.

그 다음, 도 15에 예시된 바와 같이, 프레임(20/20') 및 결합 커버(30)의 유무에 무관하게 분해를 위한 트레딩 디바이스(100) 내로 백(10)의 로딩이 시작될 수 있다.

이어서, 앞서 설명한 바와 같이 분해 프로세스가 발생한다. 몇 분 내지 몇 시간, 예를 들어 약 10분 내지 7시간, 바람직하게는 40분 내지 1시간이 걸릴 수 있는 완료가 이루어지면, 분해된 액화 샘플은, 예를 들어 앞서 설명한 백 세트를 사용하여 적정량으로 세분될 수 있고, 도 16에 도시된 바와 같이 추가 샘플 적정량 백(7)이 분기부(17)에 연결된다. 그 경우에, 주사기(5)는 액화된 샘플을 화살표 F 방향으로 백(10) 밖으로 빼내는 데 사용되며, 밸브(19a, 19b)는 개방되고 샘플 적정량 백(7)에 인접한 밸브(19c)는 폐쇄된다. 충분한 샘플이 주사기(5)로 회수되면, 밸브(19b)가 폐쇄되고, 밸브(19a)가 개방된 상태로 유지되며, 밸브(19c)가 개방된다. 이어서, 주사기를 사용하여 도 17의 화살표 F 방향으로 액체를 샘플 적정량 백(7)으로 강제한다. 적정량 백(7)의 배관(13)은 클램프 열 밀봉 기계(55)에 의해 열 밀봉될 수 있고 도 18에 도시되어 있다. 충분한 적정량을 획득할 때까지 또는 더 이상 샘플이 남지 않을 때까지 이 프로세스를 반복할 수 있다. 백은 각각의 구획의 밀봉을 더 간단하게 만들기 위해 이미 부분적으로 분할될 수 있다.

앞서 설명한 바와 같이, 샘플 백(10)은 트레딩 디바이스(100)(도 15)에 남아 있을 수 있고, 트레딩 디바이스는 그 다음 도 19에 도시된 바와 같이 제어된 속도 온도 변화 디바이스, 이 경우에 냉동기(40)에 로딩될 수 있다. 해당 기술은 동결 동안 트레딩이 계속되도록 하여 얼음 결정 형성을 억제하지만, 실제로 백(10)은 동결 전에 제거될 수 있고, 냉동기(40)는 이어서 트레딩 동안 열 전달 판을 통해 샘플을 냉각시키는 역할만 한다. 대안적으로, 적정량 샘플 백(7)은 전체 샘플 백(10)을 대신할 수 있다. 다른 대안에서, 냉동기(40)는, 도 20에 도시된 바와 같이, 베이스(150)가 냉각되도록 뚜껑이 개방된 상태로 냉동기(40)의 상단에 트레딩 디바이스(100)를 장착함으로써 미처리된 또는 처리된 샘플을 약 섭씨 4도까지 완만하게 냉각시키는 데 사용될 수 있다. 다른 대안에서, 베이스(150)를 제거하고 도 21에 도시된 바와 같이 냉동기 뚜껑이 제자리에 있는 상태에서 베이스를 냉동기에 넣는 것이 가능하다. 도시되지 않은 또 다른 대안에서, 백(10 또는 7)은 냉동기(40)에서 직접 냉동될 수 있다.

본 발명은 앞서 설명된 실시예에 의해 제한되는 것으로 고려되어서는 안 되며, 본 기술 분야의 숙련자에게 용이하게 자명한 바와 같이 첨부된 청구범위의 범위 내에서 변경될 수 있다. 예를 들어, 앞서 설명한 트레딩 메커니즘은 활주 표면보다 저온 조건에서 재밍이 덜 발생할 것 같은 완전히 피봇하는 기계적 상호 연결을 제공하기 때문에 선호되지만, 해당 메커니즘은 2개 이상의 풋을 순차적으로 트레딩하기 위한 임의의 기계적으로 동등한 수단으로 대체될 수 있다. 설명된 평탄한 풋은 트레딩 운동이 상하가 아니라 좌우로 움직이는 롤러 풋으로 대체될 수 있다. 설명된 트레딩 또는 그 기계적 등가물은 분해를 최적화하고 세포 회수를 최대화하기 위해 초당 각각의 풋에 대해 2 또는 3개의 트레드의 속도로 하는 것이 바람직하며, 안정적인 트레딩이지만, 트레딩은 다양한 세포 유형에 대해 더 빠르거나 느릴 수 있거나 간헐적일 수 있다.

디바이스(100/100')는 냉동기에 배치되어 극도로 낮은 온도(예를 들어, 영하 80도 이하)를 노출되도록 의도되므로, 폴리머 부품은 저온에서 훨씬 더 강성이 되기 때문에, 금속 부품, 특히 스프링(146)과 같은 부품을 사용하는 것이 바람직하다. 또한, 피스톤 및 실린더와 같이 단단히 끼워지는 부품은 매우 낮은 온도에서 재밍되거나 맞지 않을 수 있으므로 설명된 메커니즘(120)과 같은 간단한 피봇 가능한 연동 장치가 바람직하다.

도 22, 도 23 및 도 24는 앞서 설명한 디바이스(100)와 크기 및 기능이 유사한 대안적인 트레딩 디바이스(200)를 도시한다. 디바이스(200)는 아래에서 더 상세하게 설명되는 특정한 차이점을 갖는다.

도 22를 참조하면, 디바이스(100)와 디바이스(200) 사이의 주요 차이점은 디바이스(200)가 디바이스(100)의 메커니즘(120)과 상이한 트레딩 메커니즘(220)을 갖는다는 것이다. 2개의 트레딩 풋(234, 236)은 트레딩 운동 속도를 모니터링하고 제어하기 위해 제어기(221)(도 23)에 피드백을 제공하는 회전 인코더를 갖는 전기 모터 유닛(214)의 부품인 24볼트 DC 전기 모터(213)(도 23)에 의해, 도 2 및 도 3에 도시된 운동과 유사한 주기적인 대안 트레딩 운동으로 구동된다. 모터는 치형 벨트(222)를 통해 캠샤프트(224)를 구동한다. 캠샤프트는 180도로 오프셋된 한 쌍의 캠(230, 232)을 포함하며, 이 경우 각각의 캠은 캠 팔로워의 간단한 조화 운동을 제공하기 위해 사이클로이드 형상으로 프로파일링된다. 각각의 캠은, 캠의 프로파일 위로 올라타는 관련 엘라스토머 팔로워 휠(225, 227), 스프링 팔로워 캐리지(226, 228)와 힘 전달 관계에 있는 팔로워 휠 액슬(221, 223)을 포함하는 캠 종동자 조립체를 이동시키도록 작동 가능하다. 각각의 캐리지(226, 228)는 선형 가이드(229)에서 활주되며, 각각의 풋(234, 236)은 캐리지에 연결된다. 각각의 조립체는, 각각의 캠이 복귀 스프링(231)의 가압력에 대항하여 모터에 의해 회전됨에 따라, 풋과 함께 트레딩 상태로부터 멀어지게 캠 프로파일을 올라탈 때 팔로워 휠의 각각의 팔로워 휠에 의해 차례로 상향으로 강제된다. 캠이 더 회전되고 캠 프로파일이 후퇴함에 따라, 각각의 팔로워 조립체와 관련된 스프링(231)은 트레딩 힘으로 조립체와 풋을 하향으로 강제한다.

이에 의해, 트레딩 힘은 구동 모터의 동력이 아니라 관련된 팔로워 조립체 스프링(231)의 스프링 상수로 제한된다. 1. 백에 인가되는 힘은, 사용 시에, 메커니즘이 풋을 위로 구동하고 스프링이 풋을 다시 아래로 밀기 때문에 스프링에 의해 제한된다. 이는 다음을 확실하게 한다:

a. 모터는 멈출 수 없고(종양 크기 또는 텍스쳐에 무관하게);

b. 샘플은 과도한 힘으로 압축되지 않고 백이 분할되지 않으며;

c. 백에 인가되는 최대 압력은 백 제조 중에 테스트한 압력보다 낮고;

d. 아래에 설명되는 바와 같이, 힌지식 백 수용 영역(248)은 반드시 풋을 미리 위치 설정하지 않고도 샘플 백 및 사용된 임의의 클램프를 수용할 수 있다. 즉, 힌지식 샘플 영역(248)이 풋에 대해 폐쇄되어 있고, 필요한 경우 힌지식 영역이 풋에 대해 폐쇄되어 있을 때 임의의 샘플이 해당 시간에 풋에 의해 압축될 수 있기 때문에, 백을 수용할 때 풋은 임의의 위치에 있을 수 있다.

또한, 도 23 및 도 24를 참조하면, 디바이스(200)는 디바이스 하우징(210)으로부터 2개의 풋(234, 236)의 상부 부분으로 연장되는 가요성 밀봉 멤브레인(241)을 더 포함하며, 이는 풋의 바닥과 트레딩 메커니즘(220)의 나머지 부분 사이에 유체 저항 및 먼지 밀봉부를 제공한다. 이러한 배열은 사용 동안 압축된 백이 분할되는 경우 메커니즘의 오염을 억제한다. 멤브레인(241)이 바람직하지만, 백 영역(248)으로부터 메커니즘(220)을 분할하는 파티션에 장착된 입술 밀봉부와 같은 밀봉부에서 풋이 활주될 수 있고, 필요한 메커니즘의 유사한 오염 억제를 달성할 수 있다.

디바이스(200)는 열 전달 판(150)과 동일한 기능을 수행하는 열 전달 판(250)을 더 포함한다. 그러나, 이 판(250)은 힌지(255)(도 24)에서 하우징의 일 측면에 힌지 결합되므로, (도 6, 도 7 및 도 8에 도시된 바와 같이) 트레딩될 백의 삽입 및 제거가 더 쉽다. 열 전달 판(250)은 판(250) 및 백 수용 영역(248)의 온도가 품질 관리를 위해 제어기에 의해 모니터링되고 기록되게 하는 온도 센서(256)를 포함한다. 판(250)은 앞서 설명한 표면(151, 152)과 동일한 기능을 갖는 제1 및 제2 표면(251, 252)을 갖는다.

각각의 풋은 디바이스(200)의 열 전달 판(250)에 대해 높이가 조절 가능하고, 그 움직임의 표시는 제어기에 의해 또한 모니터링된다. 따라서, 회전 인코더가 모터가 회전하고 있음을 나타낼 수 있지만, 치형 벨트(222)의 고장과 같은 기계적 고장은 제어기에 의해 여전히 검출될 수 있으며, 경보 발령과 같은 적절한 조치가 구현될 수 있다.

디바이스(200)는 디바이스(100)와 동일한 외부 치수를 가지며, 디바이스의 하우징(210)은 앞서 설명되고 도 21에 예시되어 있는 바와 같이 냉동기 뚜껑이 제자리에 있는 상태에서 제어된 속도의 냉동기(40) 내부에서 활주하도록 의도된다.

편의상, 상부, 하부, 위 및 아래와 같은 용어와, 풋, 트레드 및 트레딩과 같은 더 설명적인 용어가 도면에 도시된 발명을 설명하는 데 사용되었지만, 실제로, 도시된 디바이스는 이러한 용어가, 예를 들어 반전되거나 그 새로운 배향에서 덜 설명적이도록 임의의 방식으로 배향될 수 있다. 따라서, 배향에 대한 제한은 이러한 용어 또는 동등한 용어에 의해 해석되어서는 안 된다.

본 발명은 폐쇄된 가요성 백(10)에서 조직 샘플을 개별 세포 또는 세포 덩어리로 분해하기 위한 디바이스(100/100')를 제공하며, 이 디바이스는 기계적 분해 메커니즘(120) 및 조직 샘플 백 수용 영역(148)을 포함하고, 상기 디바이스는 영역(148)으로 또는 영역으로부터 열 에너지를 전달하기 위한 열 전달 판(150)을 더 포함하고, 판은 영역(148)에 인접한 제1 판 표면(151) 및 영역(148)의 반대쪽에 있는, 외부 열 영향에 노출된 대향 표면(152)을 갖는다.

Claims (21)

1. 폐쇄된 가요성 백(10)에서 조직 샘플을 개별 세포 또는 세포 덩어리로 분해하기 위한 디바이스(200)로서, 이 디바이스는 기계적 분해 메커니즘(220) 및 조직 샘플 백 수용 영역(248)을 포함하고, 상기 디바이스는 영역(248)으로 또는 영역으로부터 열 에너지를 전달하기 위한 열 전달 판(250)을 더 포함하고, 판은 영역(248)에 인접한 제1 판 표면(251) 및 영역(248)의 반대쪽에 있는, 외부 열 영향에 노출된 대향 표면(252)을 갖고, 분해 메커니즘(220)은 각각의 탄성 부재(231)로부터의 힘에 의해서만 대체로 선형 운동으로 제1 판 표면을 향해 각각 압박되는 복수의 트레딩 풋(234, 236)를 포함하며, 각각의 풋(234, 236)은, 제1 판으로부터 멀어지는 이동 중에 상기 각각의 탄성 부재(231)를 압축하도록 또한 배열된 기계적 부재(230, 232)의 영향 하에 제1 판으로부터 멀어지게 추가로 이동 가능한, 디바이스.
2. 제1항에 있어서, 메커니즘(220)은 조직 샘플 백 수용 영역(28)을 순차적으로 트레딩하도록 배열된 2개 이상의 풋(234/236)을 포함하는, 디바이스.
3. 제2항에 있어서, 상기 선형 운동은 제1 판 표면(151)에 대체로 직교하는 방향으로 백 수용 영역(248)을 향해 그리고 그로부터 멀어지는 운동인, 디바이스.
4. 제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 메커니즘(220)은 180도 회전 분리로 배열된 로브를 각각 갖는 2개의 캠을 포함하는, 디바이스.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 풋은 그러한 백이 평탄하게 놓였을 때 트레딩되도록 의도된 백의 영역과 대략 동일한(최대 ±30%) 집합적 트레딩 영역을 갖는, 디바이스.
6. 제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 풋은, 영역(248)을 향해 이동할 때, 샘플 백을 열 전달 판(250)의 인접한 제1 표면(251) 상으로 직접 밀어넣는 역할을 하는, 디바이스.
7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 열 전달 판(250)은 섭씨 20도에서 측정된 100 W/m K 이상, 바람직하게는 200 W/m K 초과의 열 전도율을 갖는, 디바이스.
8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 표면 위의 풋의 최종적으로 압박된 위치는 조절 가능한, 디바이스.
9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 메커니즘(220)은 하우징(210) 내에 또는 실질적으로 상기 하우징 내에 있고, 조직 샘플 백 수용 영역(248)은, 예를 들어 힌지(255)에 의해 하우징에 대해 분리 가능하거나 이동 가능한, 디바이스.
10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 메커니즘(220)은, 예를 들어 가요성 멤브레인 또는 활주 밀봉부에 의해 상기 풋으로부터 밀봉되는, 디바이스.
11. 분해된 세포의 냉동 보존을 위한 시스템으로서, 시스템은 가온기/냉동기(40)와 같은 제어된 온도 속도 변화 디바이스에 제거 가능하게 배치된, 조직 샘플을 개별 세포 또는 세포 덩어리로 분해하기 위한 디바이스(200)를 포함하고, 디바이스는 상기 디바이스에 의해 분해하기 위한 또한 분해된 샘플을 수용하기 위한 하나 이상의 폐쇄된 가요성 백(10)을 내부에 장착하거나 장착할 수 있으며, 디바이스는 기계적 분해 메커니즘(220) 및 조직 샘플 백 수용 영역(248)을 포함하고, 상기 디바이스는 영역(248)으로 또는 영역으로부터 열 에너지를 전달하기 위한 열 전달 판(250)을 더 포함하고, 판은 영역(248)에 인접한 제1 판 표면(251) 및 영역(248)의 반대쪽에 있고 냉동기(40)의 열 영향에 노출되는 대향 표면(252)을 갖고, 분해 메커니즘(220)은 제1 판 표면을 향해, 예를 들어 번갈아 각각 압박할 수 있는 복수의 트레딩 풋(234, 236)를 포함하는, 시스템.
12. 조직 샘플을 세포 또는 세포 덩어리로 분해하는 방법으로서, 방법은, 임의의 적절한 순서로:
    a) 가요성 샘플 백(10)에 밀봉되거나 실질적으로 밀봉된 조직 샘플을 제공하는 단계;
    b) 기계적 분해기(220)를 포함하고, 샘플 백 수용 영역(248)을 포함하며, 영역(248)에 인접한 제1 표면(251) 및 영역(248)의 반대쪽에 있고 외부 열 영향에 노출된 대향 표면(252)을 갖는 열 전달 판(250)을 포함하고, 임의로 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 디바이스의 나머지 피처 중 어느 하나 이상을 포함하는 디바이스(200)를 제공하는 단계;
    c) 상기 조직 샘플을 디바이스(200)에서 분해하도록 하는 단계, 및
    d) 제어된 온도 속도 변화 디바이스(40)에 디바이스를 배치함으로써 상기 판(250)을 통해 백 내부 또는 외부로 열 에너지를 전달하는 단계를 포함하는, 방법.
13. 제12항에 있어서, 단계 d)는 처음에 판(250)을 통해 백 내용물에 열 에너지를 도입하여 효소 분해를 돕거나 백의 내용물을 해동시키는 단계를 포함하는, 방법.
14. 제11항에 있어서, 단계 d)는 백 내용물을 냉각시키기 위해 또는 백의 내용물을 동결시키기 위해 열 에너지를 제거하는 단계를 포함하고, 임의로 상기 동결 전에 동결 방지제의 도입을 포함하는, 방법.
15. 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 분해 디바이스는 백에, 예를 들어 0에서 최대 약 6 N/cm² 또는 0과 6 N/cm² 사이의 임의의 범위의 주기적인 압력을 가하는, 방법.
16. 제1항 내지 제10항의 디바이스 또는 제11항의 시스템과 함께 사용될 때, 또는 제12항 내지 제15항 중 어느 한 항의 방법에서 사용될 때의 조직 샘플 수용 백.
17. 조직 샘플 수용 백(10)으로서, 공동 또는 공동들(12)이 주연부 내에 있는 상태로 대체로 직선형 주연부가 형성된 하나 이상의 가요성 플라스틱 공동들(12)을 포함하고, 주연부의 일 측면에 하나 이상의 밀봉 가능하거나 폐쇄 가능한 액세스 포트(16)가 형성되며, 임의로 주연부는 또한 백의 트레딩 동안 백의 위치 및 고정을 위한 구멍을 포함하는, 조직 샘플 수용 백.
18. 조직 샘플 수용 백(10)으로서, 주연부를 형성하기 위해 그 에지 대부분의 주위에 함께 밀봉된 2개의 플라스틱 층을 포함하고, 백에 샘플을 수용하도록 백에 개구를 형성하기 위해 밀봉되지 않은 주연부의 영역을 갖고, 튜브 포트 형태의 추가적인 폐쇄 가능한 개구를 갖는, 조직 샘플 수용 백.
19. 제18항에 있어서, 사용 시에 개구를 밀봉하기 위한 클램프를 더 포함하고, 상기 클램프는 제1항 내지 제10항 또는 제11항에 따른 샘플 백 수용 영역(148 또는 248) 내의 위치에 적절한 상보적인 클램핑 부재를 갖는, 조직 샘플 수용 백.
20. 제17항 또는 제18항에 있어서, 공동 또는 공동들(12)을 수용하는 크기의 개구(26)를 갖는 프레임(20, 20')을 더 포함하고, 주연부의 적어도 일부는 프레임과 중첩하고, 프레임 및 주연부는 상기 주연부의 적어도 일부를 프레임에 대해 유지하기 위한 상보적인 형성물을 갖는, 조직 샘플 수용 백.
21. 제20항에 있어서, 프레임은 사용 시에 함께 모이는 상부 및 하부 부분을 포함하고, 각각의 부분은 공동 주위에 제방으로서 작용하도록 공동을 캡슐화하는 가요성 커버(30)를 더 포함하는, 조직 샘플 수용 백.

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