JP2021177772A - 抗pacap抗体及びそれらの使用 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2015年4月16日出願の米国特許仮出願第62/148,550号、2015年4月16日出願の米国特許仮出願第62/148,557号、2015年4月16日出願の米国特許仮出願第62/148,562号、2015年4月16日出願の米国特許仮出願第62/148,596号、2015年4月16日出願の米国特許仮出願第62/148,643号、2015年4月16日出願の米国特許仮出願第62/148,583号、2015年4月16日出願の米国特許仮出願第62/148,640号の利益を請求し、それぞれその全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
本出願は、その開示の一部として、「43257o5809.txt」と名付けられ、165,209バイトのサイズを有し、2016年2月29日に作製された、電子配列の一覧テキストを包含し、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
本発明は概して、下垂体アデニル酸シクラーゼ−活性化ポリペプチド(「PACAP」)に特異的に結合する抗体及びそれらの抗原結合性断片、好ましくはヒト化、キメラ化、及びヒト抗体ならびにその抗原結合性断片、ならびにそのような抗体及びそれらの抗原結合性断片を含有する組成物、ならびにそれらの抗体、抗原結合性断片、及びその組成物の治療及び診断用途に関する。
れたい)。殊に、PACAPは、三叉神経血管系、三叉神経節、脊髄、視床下部、及び下垂体における存在を含めて、神経系全体で発現される。PACAPは、神経発生、神経保護、神経調節、神経性炎症、及び侵害受容において、複数の作用で役割を有する(Kaiser and Russo 2013)を参照されたい)。
Rev.,52(2):269−324,2000)。
iology:Regulatory,Integrative and Comparative Physiology,304(12):R1070−R1084,2013を参照されたい)。
of Disease,45:633−644 2012;Baun et al.,Cephalalgia,32(4):337−345,2012;Chan et al.,Pharmacology & Therapeutics,129:332−351,2011を参照されたい)。
Eng.J.Med.,350(11):1073−75,2004を参照されたい)。確立された心疾患を有する患者では、投与後に、冠動脈れん縮の理論上のリスクが存在し、稀な例では、トリプタンの摂取後に、心臓事象が起こることがある。したがって、それらは、冠動脈血管疾患を有する一部の患者には、不適応とされる。
おり、これらの状態におけるPACAPの役割を示唆している。さらに、血小板減少症におけるPACAPの役割を裏付けて、トリソミー18患者は、過剰なPACAPを有し、巨核球成熟の欠陥を示す(Schytz et al.2010;及びMoody et
al.,Curr.Opin.Endocrinol.Diabetes Obes.,18(1):61−67,2011を参照されたい)。
ーズハムスター卵巣(「CHO」)細胞;マウスセルトリ細胞(「TM4」細胞);アフリカミドリザル腎臓細胞(「VERO−76」細胞);ヒト子宮頸癌(「HELA」)細胞;イヌ腎臓細胞(「MDCK」);バッファローラット肝臓(「BRL」)細胞;ヒト肺細胞;ヒト肝臓(「HepG2」)細胞;マウス乳房腫瘍(「MMT」)細胞;TRI細胞;MRC5細胞;及びFS4細胞からなる群から選択される哺乳類の真核宿主細胞を提供する。好ましくは、哺乳類宿主細胞は、CHO細胞である。より好ましくは、哺乳類宿主細胞は、CHO K1細胞である。
Exclusion Assay、KINEXA(登録商標)、Sapidyne Instruments、Boise、ID)、またはSPRによって、例えば、25℃または37℃で測定した場合に、PACAPに、5×10−5M、10−5M、5×10−6M、10−6M、5×10−7M、10−7M、5×10−8M、10−8M、5×10−9M、10−9M、5×10−10M、10−10M、5×10−11M、10−11M、5×10−12M、10−12M、5×10−13M、または10−13M以下のKDで結合する。好ましくは、ヒト、ヒト化、またはキメラ化抗PACAP抗体、及びそれらの抗原結合性断片は、PACAPに、5×10−10M、10−10M、5×10−11M、10−11M、5×10−12M、または10−12M以下のKDで結合する。好ましくは、ヒト、ヒト化、またはキメラ化抗PACAP抗体、及びそれらの抗原結合性断片は、PACAPに、約100nM未満、約40nM未満、約1nM未満、約100pM未満、約50pM未満、または約25pM未満であるKDで結合する。代わりに、抗PACAP抗体及びそれらの抗原結合性断片は、PACAPに、約10pM〜約100pMであるKDで結合する。別の実施形態では、ヒト、ヒト化、またはキメラ化抗PACAP抗体及びそれらの抗原結合性断片は、PACAPに、5×10−4s−1、10−4s−1、5×10−5s−1、または10−5s−1以下のオフ速度(koff)で結合する。
立体構造エピトープ(複数可)に特異的に結合し、かつ/またはAb10及びAb20からなる群から選択される抗PACAP抗体と同じヒトPACAP上の線状または立体構造エピトープ(複数可)への結合について、競合することとなる(これらの抗PACAP抗体の可変及び定常領域の特異的アミノ酸配列、ならびにそのような可変及び定常領域をコードする核酸、ならびにアラニン走査法を使用して決定されるとおりの、それらが結合するエピトープを下に開示する)。殊に、本発明は、Ab10及びAb20からなる群から選択される抗PACAP抗体と同じヒトPACAP上の線状または立体構造エピトープ(複数可)に特異的に結合する抗PACAP抗体及びそれらの抗原結合性断片を包含する。下で開示されるとおり、例示的な実施形態では、エピトープ(複数可)を、アラニン走査変異ストラテジを使用して決定する。
a.ヒトPACAPの残基19、22、23、及び27のうちの少なくとも1個;
b.ヒトPACAPの残基19、22、23、24、及び27のうちの少なくとも1個;c.(a)〜(b)のいずれか1つの残基のうちの少なくとも2個;
d.(a)〜(b)のいずれか1つの残基のうちの少なくとも3個;
e.(a)〜(b)のいずれか1つの残基のうちの少なくとも4個;
f.(b)の5個すべての残基。
性断片は、(a)配列番号401のアミノ酸配列を有する重鎖、及び/または(b)配列番号421のアミノ酸配列を有する軽鎖を含むことができる。
、30000倍、100000倍、300000倍、1000000倍、3000000倍、10000000倍、30000000倍、またはそれ以上強い(例えば、ヒトPACAPへの結合についての前記抗体または断片のKDは、VIPへの結合についてのKDよりも10倍、30倍、100倍、300倍、1000倍、3000倍、10000倍、30000倍、100000倍、300000倍、1000000倍、3000000倍、10000000倍、または30000000倍低い)。
フェンタニル、メペリジン、メタドン、ナルブフィン、プロポキシフェン、及びペンタゾシン、またはそれらの薬学的に許容される塩が包含される。オピオイド鎮痛薬及び抗PACAP抗体またはその抗原結合性断片の組合せ投与は、それらによって誘発される鎮痛効果を増大させ得る。
れらの抗原結合性断片を使用する。
その抗原結合性断片は、PACAP27及び/またはPACAP38に結合し、PAC1−R、VPAC1−R、及び/またはVPAC2−RのそれぞれへのPACAP27及び/またはPACAP38結合を遮断する。好ましくは、抗PACAP抗体またはその抗原結合性断片は、PACAP27及び/またはPACAP38に結合し、PAC1−RへのPACAP27及び/またはPACAP38結合を遮断する。
フェニルカルボン酸誘導体;ならびにピロキシム、スドキシカム、及びイソキシカムを包含するオキシカムなど)、オピオイド鎮痛薬(モルヒネもしくはモルヒネ誘導体もしくはその薬学的に許容される塩;コデイン、ジヒドロコデイン、ジアセチルモルヒネ、ヒドロコドン、ヒドロモルホン、レボルファノール、オキシモルホン、アルフェンタニル、ブプレノルフィン、ブトルファノール、フェンタニール、スフェンタニル、メペリジン、メタドン、ナルブフィン、プロポキシフェン、及びペンタゾシンまたはそれらの薬学的に許容される塩など)、別の抗体(抗NGF抗体もしくは抗体断片または抗CGRPもしくは抗CGRP受容体(「抗CGRP−R」)抗体もしくは抗体断片など)、または非抗体生物薬、例えば、BOTOX(登録商標)である。
(i)ヒトPACAPの残基19、22、23、及び27のうちの少なくとも1個;
(ii)ヒトPACAPの残基19、22、23、24、及び27のうちの少なくとも1個;
(iii)(i)〜(ii)のいずれか1つの残基のうちの少なくとも2個;
(iv)(i)〜(ii)のいずれか1つの残基のうちの少なくとも3個;
(v)(i)〜(ii)のいずれか1つの残基のうちの少なくとも4個;
(v)(ii)の5個すべての残基。
血管作動性腸管ペプチド(「VIP」)に結合しないか、または感知できるほどに結合しないヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体またはそれらの抗体断片が含まれ得る。前記抗PACAP抗体またはそれらの抗体断片は、ヒトVIPに対する前記抗体または抗体断片のKDよりも少なくとも10倍、100倍、1000倍、10,000倍、または100,000倍低くあり得る(強くあり得る)ヒトPACAPについてのKDを有し得る。
結合性断片に関する。本発明の前記抗体または抗体断片が結合する本明細書において記載されているとおりの前記エピトープは、例えば、実施例12において開示されているとおりのアラニン走査または別の当技術分野で認識されている方法によって同定され得る。
b)配列番号461のアミノ酸配列を有する軽鎖を含んでよい。
し得る。
または皮下静脈内または筋肉内投与に適していてよい組成物に関する。本発明はまた、少なくとも1種の抗PACAP抗体もしくは抗体断片または抗イディオタイプ抗体の前記組成物が凍結乾燥されていてよく;かつ/または前記組成物が薬学的に許容される希釈剤、担体、溶解補助剤、乳化剤、防腐剤、またはそれらの混合物を含んでよい本発明の実施形態を包含する。本発明の前記組成物は、少なくとも1種の他の活性薬剤をさらに含んでよく、例えば、そこでは、他の活性薬剤は、化学療法薬、鎮痛薬、抗炎症薬、免疫抑制薬、サイトカイン、抗増殖薬、制吐薬、及び/または細胞毒素からなる群から選択されてよい。前記組成物はまた、注射による投与のために凍結乾燥、安定化、かつ/または製剤化されていてよい。
拮抗するか、それらを阻害、中和、または遮断し得て、かつVIPと実質的に相互作用し得ない(結合し得ない)治療または予防有効量のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗体断片を投与することを含んでよい方法に関する。
れへのPACAP結合を阻害し;(g)PAC1−R発現細胞へのPACAP結合を阻害し;(h)例えばグリコサミノグリカン(「GAG」)を介しての細胞表面へのPACAP結合を阻害し;(i)例えばGAGを介しての細胞表面へのそのような抗体のPACAP媒介性結合を阻害し;(j)PACAP誘導性環状アデノシン一リン酸(「cAMP」)産生を阻害し;ならびに/あるいは(k)対象に投与された場合に、PACAP誘導性血管拡張、羞明、肥満細胞脱顆粒、及び/またはニューロン活性化を減少させる、有効量のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗原結合性断片を投与することを含んでよい方法に関する。
経障害性疼痛、侵害受容性疼痛、内臓疼痛、月経痛、卵巣痛、変形性関節症疼痛、関節リウマチ疼痛、糖尿病性神経障害、坐骨神経痛、消化不良、過敏性腸症候群、炎症性腸疾患、クローン病、回腸炎、潰瘍性大腸炎、腎仙痛、月経困難、膀胱炎、間質性膀胱炎、月経期、分娩、閉経期、膵臓炎、統合失調症、うつ病、心的外傷後ストレス障害(「PTSD」)、不安障害、自己免疫性糖尿病、シェーグレン症候群、多発性硬化症、過活動性膀胱、気管支反応亢進、喘息、卒中、気管支炎、気管支拡張、気腫、慢性閉塞性肺疾患(「COPD」)、炎症性皮膚炎、腺組織における腺癌、臓器の胚組織における芽細胞腫、上皮組織における癌腫、血液細胞を形成する組織における白血病、リンパ組織におけるリンパ腫、骨髄における骨髄腫、結合または支持組織における肉腫、副腎癌、AIDS関連リンパ腫、貧血、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、類癌腫、子宮頸癌、化学療法、結腸癌、血球減少症、子宮内膜癌、食道癌、胃癌、頭部癌、頸部癌、肝胆道癌、腎臓癌、白血病、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキン病、神経系腫瘍、口腔癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌、尿道癌、骨髄の癌、多発性骨髄腫、骨に転移する腫瘍、神経及び中空臓器を浸潤する腫瘍、神経構造付近の腫瘍、尋常性ざそう、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、ケロイド、肥厚性瘢痕及び酒さ、内皮機能不全、レイノー症候群、冠動脈性心疾患(「CHD」)、冠動脈疾患(「CAD」)、心不全、末梢動脈疾患(「PAD」)、糖尿病、肺高血圧(「PH」)、結合組織障害、アレルギー性皮膚炎、乾癬、そう痒症、神経原性皮膚発赤、紅斑、サルコイドーシス、ショック、敗血症、オピエート離脱症候群、モルヒネ耐性、及びてんかんからなる群から選択される状態を有してよい方法を包含する。加えて、前記対象は、片頭痛、頭痛、及び疾患または状態と関連する疼痛からなる群から選択される状態を有してよく、その際、前記頭痛または片頭痛は、前兆を伴う片頭痛、前兆を伴わない片頭痛、片麻痺性片頭痛、群発性頭痛、片頭痛性神経痛、慢性頭痛、慢性片頭痛、薬物乱用頭痛、及び緊張性頭痛からなる群から選択されてよい。また、前記対象は、色盲、無虹彩、抗コリン作動薬に起因する羞明、無水晶体症、牛眼症、白内障、錐体ジストロフィー、眼の先天異常、ウイルス性結膜炎、角膜擦傷、角膜ジストロフィー、角膜潰瘍、角膜上皮細胞の破壊、水晶体転位症、眼内炎、疾患に起因する眼外傷、損傷に起因する眼外傷、感染に起因する眼外傷、霰粒腫、上強膜炎、緑内障、円錐角膜、視神経形成不全、小眼、先天性緑内障虹彩炎、視神経炎、色素拡散症候群、瞳孔散大、網膜剥離、角膜の瘢痕化、強膜及びブドウ膜炎からなる群から選択される羞明と関連する眼障害を有してよい。さらに、前記対象は、自閉症スペクトラム障害、キアリ形成異常、失読症、脳炎、髄膜炎、クモ膜下出血、後頭頭蓋の腫瘍、強直性脊椎炎、白色症、リボフラビン欠乏症、ベンゾジアゼピン、化学療法、チクングニア、シスチン症、エーレルス−ダンロー症候群、二日酔い、インフルエンザ、感染性単核細胞症、マグネシウム欠乏、水銀中毒、片頭痛、狂犬病、及びチロシン血症II型からなる群から選択される羞明と関連する神経系関連または神経状態を有してよい。加えて、前記対象は、前兆を伴う片頭痛、前兆を伴わない片頭痛、虹彩炎、ブドウ膜炎、髄膜炎、うつ病、双極性障害、群発性頭痛もしくは別の三叉神経・自律神経性頭痛(「TAC」)または眼瞼痙攣、うつ病、広場恐怖症及び双極性障害からなる群から選択される羞明関連障害を有してよい。
含み得る抗PACAP抗体または抗体断片であってよい本明細書において開示される方法のいずれかを包含する。
含んでよい、本明細書において開示される方法のいずれかに関する。
えばヘパリン、コンドロイチン、ケラチン、及びヒアルロン酸の1種または複数種を含んでよい少なくとも1つのGAGを介しての細胞表面への結合とのPACAPの相互作用を調節し得、さらに前記抗体もしくは抗体断片または方法は、PACAP38及び/またはPACAP27の受容体非依存性細胞取り込みを遮断または阻害し得、かつ/または細胞によるPACAP38及び/またはPACAP27のGAG依存性取り込みを阻害し得るか、または遮断し得る。
くは抗体断片及び/または抗CGRP受容体抗体もしくは抗体断片を以前に受けたことがあってよいか、または受けていてよい対象のための使用であってよく、さらにその際、前記対象は、抗CGRP抗体もしくは抗体断片及び/または抗CGRP受容体抗体もしくは抗体断片処置に十分には応答し得なかった片頭痛患者であってよく;かつ/または前記対象は、抗CGRP抗体もしくは抗体断片及び/または抗CGRP受容体抗体もしくは抗体断片に対する免疫応答を誘発し得た少なくとも1種の抗CGRP抗体もしくは抗体断片及び/または抗CGRP受容体抗体もしくは抗体断片投与を以前に受けたことがあってよい。
定義
本発明は、特定の方法論、プロトコル、細胞系、動物種または属、及び使用試薬に限定されず、変化し得ることを理解されたい。本明細書において使用される専門用語は、特定の実施形態のみを記載することを目的としたものであって、本発明の範囲を限定することを意図したものではなく、本発明は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されることとなることも理解されたい。本明細書において使用される場合、単数形「a」、「and」、及び「the」は、内容が別段に明確に述べていない限り、複数の指示物も包含する。したがって、例えば、「a cell(細胞)」との言及は、複数のそのような細胞を包含し、「the protein(タンパク質)」との言及は、1つまたは複数のタンパク質及び当業者に知られているその同等物の言及を包含する、などである。本明細書において使用される技術用語及び科学用語はすべて、別段に明確に指示されていない限り、本発明が属する分野の当業者に一般に理解される意味と同じ意味を有する。
PACAP38:
HSDGIFTDSYSRYRKQMAVKKYLAAVLGKRYKQRVKNK(配列番号1241)[ここで、C末端リシンはアミド化されている;ただし、この配列の任意の変異体、スプライシング変異型、アイソフォーム、オルソログ、同族体、及び変異型も]
PACAP27:
HSDGIFTDSYSRYRKQMAVKKYLAAVL(配列番号1242)[ここで、C末端リシンはアミド化されている;ただし、この配列の任意の変異体、スプライシング変異型、アイソフォーム、オルソログ、同族体、及び変異型も]。
る不快な感覚及び情動経験として定義される。疼痛は、神経原性、神経障害性、炎症性、または侵害受容性と分類され得る。
それらの量、及び/またはそれらに対する曝露を減少させることによる、その状態のために一般に使用される薬物及び/または治療の減少が包含される。重症度の低下には、特定の状態、症状、または障害の期間及び/または頻度の減少も包含される(例えば、個体において、次の一時性発作を遅延させるか、またはそれまでの時間を延長することを包含する)。
、薬物、化合物、または医薬組成物の有効投薬量は、予防または治療処置を直接的または間接的に達成するために十分な量である。臨床状況において理解されるとおり、薬物、化合物、または医薬組成物の有効投薬量は、別の薬物、化合物、または医薬組成物と組み合わせて達成されても、または達成されなくてもよい。したがって、1種または複数種の他の薬剤と併せて、所望の結果が達成され得るか、または達成されるならば、「有効投薬量」を、1種または複数種の治療薬を投与する状況で考慮してよく、かつ1種の薬剤を有効量で与えることを考慮してよい。
一実施形態では、Pichia属の交配コンピテント酵母は、Pichia pastoris種である。
ば、シグナル配列のためのDNAは、それがポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合に、ポリペプチドのためのDNAに作動可能に連結され;プロモーターまたはエンハンサーは、それが配列の転写に影響を及ぼす場合に、コード配列に作動可能に連結される。一般に、「作動可能に連結される」は、連結されるDNA配列が隣接しており、分泌リーダー(secretory leader)の場合には、隣接していて、かつリーディングフレーム内にあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは、隣接している必要はない。連結は、便利な制限部位でのライゲーション、または別法では、当業者に熟知されているPCR/組換え法によって達成される(GATEWAY(登録商標)Technology;Invitrogen、Carlsbad California)。そのような部位が存在しなければ、従来の実施に従って、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーが使用される。
自体の内に見いだされている。エンハンサーは、コード配列に対して5’または3’の位置で発現ベクターにスプライシングされてよいが、好ましくはプロモーターから5’の部位に位置する。
Landy,Site−Specific Recombination in Phage Lambda,in Lambda II,p.211−250,Cold Spring Harbor,NY:Cold Spring Harbor Press(1983)を参照されたい。組換えの後に、att部位が各親ベクターによって提供される配列から構成されるハイブリッド配列であるように、組換え部位に隣接するDNAセグメントが交換される。組み換えは、任意のトポロジーのDNA間で起こり得る。
あり、10g/L以上の高いタイターが得られ、10kL〜25kLのバイオリアクターから15〜100kgの量となる(Li et al.,2010)。抗体をコードするポリヌクレオチドを発現ベクターにクローニングすること、細胞にこれらの発現ベクターを遺伝子導入すること、遺伝子導入された細胞を選択すること、ならびに組換えモノクローナル抗体をこれらの細胞から発現及び精製することを含む、この生成法の様々な詳細は下記に提供する。
されていて、目的の遺伝子をそれらの後代に渡すことができる細胞は、「安定トランスフェクタント」と称される。そのような優性選択の例は、薬物のネオマイシン、ミコフェノール酸、及びハイグロマイシンを使用する。例示的な選択マーカーは、抗生物質ネオマイシンに対する抵抗性をコードする遺伝子である。選択は、ネオマイシン種の薬物、例えばG−418などの存在下で実施される。異種の遺伝子で成功裏に形質転換された細胞は、薬物抵抗性を付与するタンパク質を産生し、したがって、選択レジメンを生き延びる。
て、真核発現ベクターに適切に挿入される。
HK 570、ATCC No.CRL 10314);CHO細胞(CHO−K1、ATCC No.CCL 61;CHO−DG44、Urlaub et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,77:4216−4220(1980));マウスセルトリ細胞(TM4、Mather,Biol.Reprod.,23:243−251(1980));サル腎臓細胞(CV1 ATCC CCL 70);アフリカミドリザル腎臓細胞(VERO−76、ATCC CRL−1587);ヒト子宮頸癌細胞(HELA、ATCC CCL 2);イヌ腎臓細胞(MDCK、ATCC CCL 34);バッファローラット肝臓細胞(BRL 3A、ATCC CRL 1442);ヒト肺細胞(W138、ATCC CCL 75);ヒト肝臓細胞(Hep G2、HB
8065);マウス乳房腫瘍(MMT 060562、ATCC CCL51);TRI細胞(Mather et al.,Annals N.Y.Acad.Sci.,383:44−68(1982));MRC5細胞;FS4細胞;及びヒト肝細胞癌系(Hep G2)である。追加の適切な細胞系が、当技術分野で公知であり、American Type Culture Collection(Manassas、VA)などの公共寄託機関から入手可能である。
et al.,Bioengineering,1(4):188−212,2014を参照されたい)。
多くのモデルが市販されている)内でのバッチ供給プロセスで培養される(付着細胞または懸濁培養のいずれか)(Butler,M.,Appl.Microbiol.Biotechnol.,68:283−291,2005;及びKelley,B.,mAb,1(5):443−452,2009を参照されたい)。同じ体積の培地がバイオリアクターから取り出されながら、培地及び供給物が培養物に連続的に供給される潅流システムも利用可能である(Wurm,2004)。合成培地、市販の合成培地も、ウシ血清アルブミンなどの動物成分の使用などに伴う外部供給源からの汚染の可能性を回避して、バッチ供給培養において細胞を増殖させるために利用可能である。しかしながら、細胞密度、培養物生存率、及び生産性を増進させるために役立つ動物成分非含有加水分解物が市販されている(Li et al.,2010)。細胞培養培地を最適化する努力において、ローラーボトル内で利用可能なヘッドスペースに対する慎重な注意、増殖及び発現相中のレドックスの可能性、生成中にジスルフィド結合を維持するための還元剤の存在などを包含する多くの研究が行われている(例えば、Hutterer et al.,mAbs,5(4):608−613,2013;及びMullan et al.,BMC Proceed.,5(Suppl 8):P110,2011を参照されたい)。組換えモノクローナル抗体の生成中の有害な酸化の可能性に対処するために、様々な方法が開発されている(例えば、米国特許第8,574,869号を参照されたい)。培養細胞は、栄養素を連続的に、または別々の投与量として供給することによって増殖されてよい。多くの場合に、様々なプロセスパラメーター、例えば、細胞濃度、pH、温度、CO2、dO2、重量モル浸透圧濃度、グルコース、ラクタート、グルタミン、及びグルタマートなどの代謝産物の量などが、較正分析器との直接的な接続によるオンライで、またはオペレーターの介入によるオフラインのいずれかで、細胞増殖中に、プローブの使用によってモニターされる。培養ステップは典型的には、細胞選択のために当技術分野で公知の任意の手段によって、培養物中で増殖する細胞が、遺伝子導入された組換え遺伝子を維持することを保証することも伴う。
ロキシアパタイト(Ca5(PO4)3OH)2を使用するヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、及びこれらの技術の組合せが典型的には、組換えモノクローナル抗体の溶液を洗練させるために使用される。所望のモノクローナル抗体の最終配合及び濃度は、超遠心技術の使用によって達成され得る。精製収率は典型的には、70〜80%である(Kelley,2009)。
対応する断片も含まれる。クローニングされた遺伝子のin vitro突然変異誘発のための技術は公知である。通常の分子生物学的技術を使用して、タンパク質分解性分解に対するそれらの抵抗性を改善するように、または溶解特性を最適化するように、またはそれらを治療薬としてより適したものにするように修飾されているポリペプチドも、本発明に含まれる。
するcDNA)。対立遺伝子変異または天然に存在する変異イベントは、本明細書において定義するとおりのDNAの異種領域を生じさせない。
et al.,Clinical Immunology,pp.1−18,W.B.Sanders,Philadelphia,PA(1980);Kohl et al.,Immunology,48:187(1983)を参照されたい)を含む、抗体のその後のエフェクター機能を決定する一方で;可変領域は、それが反応することとなる抗原を決定する。軽鎖は、κ(カッパ)またはλ(ラムダ)のいずれかとして分類される。各重鎖クラスは、カッパまたはラムダ軽鎖のいずれかと共に調製され得る。軽鎖及び重鎖は、相互に共有結合により結合し、免疫グロブリンがハイブリドーマによって、またはB細胞によって生成される場合、2つの重鎖の「テール」部分は、共有結合によるジスルフィド結合によって相互に結合される。
インは、重鎖の第1の定常ドメインとアラインされており、かつ軽鎖可変ドメインは、重鎖の可変ドメインとアラインされている。
of Immunological Interest,4th ed.,Bethesda,MD:U.S.Dept.of Health and Human Services,Public Health Service,National Institutes of Health(1987)を参照されたい)。これらの表現は、Kabat et al.によって定義されるとおりの超可変領域(Sequences of Proteins of Immunological Interest,NIH Publication No.91−3242,Bethesda,MD:U.S.Dept.of Health and Human Services,National Institutes of Health(1983))または抗体の三次元構造における超可変ループ(Chothia and Lesk,J.Mol.Biol.,196:901−917 1987)を含む。各鎖におけるCDRは、フレームワーク領域(「FR」)によって近接して保持され、他の鎖からのCDRと共に、抗原結合性部位の形成に寄与する。CDR内には、抗体−抗原相互作用においてCDRによって使用される重要な接触残基となる選択性決定領域(「SDR」)と記載されている選択アミノ酸が存在する(Kashmiri et al.,Methods,36(1):25−34,2005)を参照されたい)。
and Regenmortel,J.Immunol.Methods,183:33−41(1995)において提供されている。
,New York,NY:Humana Press(2009)、及びEpitope Mapping Protocols,Methods in Molecular
Biology,editor Glenn Morris,1st Ed.,New
York,NY:Humana Press(1996)を参照されたい)。
る。これらの方法は、他の対照抗体と競合する抗体を同定及び/または評価するために適合させることができる。
.Mol.Biol.,281(1):61−67,1998;及びSaito and
Patterson,Methods,9(3):516−24,1996)を参照されたい。
において、本明細書において開示される抗PACAP抗体と特異的に相互作用するPACAPの特異的エピトープまたは残基を同定するために、アラニン走査法を使用する。
al.,Nature,355:275−278(1992)は、天然カウピーモザイクウイルスのカプシド表面上のFab−断片の物理的足跡を決定するために、極低温電子顕微鏡法、三次元イメージ再構成、及びX線結晶学の協調適用を使用した。
and Human Services,Public Health Service,National Institutes of Health,1991を参照されたい)。免疫グロブリンのFc領域は一般に、2つの定常ドメイン、CH2及びCH3を含む。
995)において総説されている。「FcR」にはまた、胎児への母性IgGの移入を担い(Guyer et al.,J.Immunol.,117:587,1976;及びKim et al.,J.Immunol.,24:249,1994)、かつ循環における抗体の半減期を調節及び/または延長するように主に機能する新生児受容体、FcRnが包含される。発現系及び/または配列の結果として、開示の抗PACAP抗体がアグリコシル化(aglycosylated)されている限りにおいて、本抗体は、FcRn受容体とは結合するが、Fcγ受容体とは結合しない(または僅かにしか結合しない)と予測される。
PACAPは、中枢神経系(「CNS」)及び末梢全体で発現する多機能性血管拡張性ペプチドである。PACAPは、セクレチン/VIP/GRHファミリーのメンバーである。PACAPは、2つのα−アミド化活性形態、すなわちPACAP38(配列番号1241)及びPACAP27(配列番号1242)で存在する。本明細書において、「PACAP」という用語には、別段に明確に示されていない限り、PACAP38及びPACAP27のいずれかまたは両方が含まれる。PACAPは、種の間で高度保存される。
.,PLoS ONE,9(3):e91541,2014)。それらの形質膜上にPACAP特異的受容体を欠いている細胞種、例えば、CHO−K1細胞を使用して、Doan et al.は、様々な形態の蛍光標識PACAP38及びPACAP27の受容体非依存性細胞取り込みに関係するそのような細胞の能力を実証するデータを提供した(Doan et al.,Biochem.Biophys.Acta,1823:940−949,2012)。
体は、これらの例示的なPACAP生物学的活性の1つ、それらの組合せ、またはすべてを阻害することができる。例えば、本明細書において提供される抗PACAP抗体及びそれらの抗原結合性断片は、PACAP誘導性血管拡張(実施例7及び実施例8を参照されたい)を阻害することができる。
抗体Ab10
一実施形態では、本発明は、配列番号410の重鎖定常領域に連結されている配列番号402の重鎖可変領域からなる配列番号401の配列を含む重鎖配列を持つ、PACAPに対して結合特異性を有する抗体及び抗原結合性断片を含む。
QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLNSYYMTWVRQAPGKGLEWIGFIDAGGDAYYASWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARDLDLWGQGTLVTVSS(配列番号402)。
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(配列番号410)。
号422の軽鎖可変領域からなる配列番号421の配列を含む軽鎖配列を含有する、PACAPに対して結合特異性を有する抗体及び抗原結合性断片を含む。
AAVLTQTPSPVSAAVGGTVTINCQSSESVYGNYLAWFQQKPGQPPKLLIYEASKLESGVPSRFSGSGSGTQFTLTISDLQCDDAATYYCAGGDISEGVAFGGGTEVVVKR(配列番号422)。
TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(配列番号430)。
くは配列番号422のポリペプチド配列、またはそれらに対して少なくとも90%もしくは95%同一であるポリペプチドを含むか、または別法ではそれらからなる。
Pとの結合においてAb10と競合する抗PACAP抗体、好ましくはAb10の配列と少なくとも90%、95%、96%、97%、98%、もしくは99%同一である配列を含有するもの、またはPACAP上で、Ab10と同じか、または重複するエピトープ(複数可)に結合する抗体である。
一実施形態では、本発明は、配列番号450の重鎖定常領域に連結されている配列番号442の重鎖可変領域からなる配列番号441の配列を含む重鎖配列を有する、PACAPに対して結合特異性を有する抗体及び抗原結合性断片を含む。
QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSSYYMSWVRQAPGKGLEWIGFIDTDGSAYYATWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARDLDLWGPGTLVTVSS(配列番号442)。
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPV
LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(配列番号450)。
AAVLTQTPSPVSAAVGGTVSISCQSSESVYSNYLAWFQQKPGQPPKFLIYEASKLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAGTYYCAGGYSSEGVAFGGGTEVVVKR(配列番号462)。
TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(配列番号470)。
おいて、一部の分子が規定の分子量よりも多い、一部は少ないであろうことを示している)。所望の治療プロファイル(例えば、所望の持続放出期間、もしあるならば生物学的活性に対する作用、取扱の容易さ、抗原性の程度または欠如、及び治療用タンパク質または類似体に対するポリエチレングリコールの他の既知の作用)に応じて、他のサイズを使用してよい。例えば、ポリエチレングリコールは、約200、500、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、8500、9000、9500、10,000、10,500、11,000、11,500、12,000、12,500、13,000、13,500、14,000、14,500、15,000、15,500、16,000、16,500、17,000、17,500、18,000、18,500、19,000、19,500、20,000、25,000、30,000、35,000、40,000、50,000、55,000、60,000、65,000、70,000、75,000、80,000、85,000、90,000、95,000、または100,000kDaの平均分子量を有してよい。分枝ポリエチレングリコールは、例えば、それぞれの開示が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第5,643,575号;Morpurgo et al.,Appl.Biochem.Biotechnol.,56:59−72(1996); Vorobjev et
al.,Nucleosides and Nucleotides,18:2745−2750(1999);及びCaliceti et al.,Bioconjug.Chem.,10:638−646(1999)において記載されている。
(すなわち、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる欧州特許第0322094号の図1及び2において示されているとおりのヒト血清アルブミンのアミノ酸1〜585)と融合される。本発明の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドも、本発明に含まれる。
本発明はさらに、PACAPに対して結合特異性を有する抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを対象とする。
一実施形態では、本発明はさらに、PACAPに対して結合特異性を有する抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを対象とする。本発明の一実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号401の重鎖配列をコードし、かつ配列番号412の重鎖可変領域コード配列及び配列番号420の重鎖定常領域コード配列からなる配列番号411のポリヌクレオチド配列を含むか、または別法ではそれらからなる。
cagtcggtggaggagtccgggggtcgcctggtcacgcctgggacacccctgacactcacctgcacagtctctggaatcgacctcaatagctactacatgacctgggtccgccaggctccagggaaggggctggaatggatcggattcattgatgctggtggtgacgcatactacgcgagctgggcgaaaggccgattcaccatctccaaaacctcgaccacggtggatctgaaaatcaccagtccgacaaccgaggacacggccacctatttctgtgccagagatcttgacttgtggggccagggcaccctggtcaccgtctcgagc(配列番号412)。
gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctg
cctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacgcgagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacgccagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa(配列番号420)。
gccgccgtgctgacccagactccatctcccgtgtctgcagctgtgggaggcacagtcaccatcaattgccagtccagtgagagtgtttacggtaactacttagcctggtttcagcagaaaccagggcagcctcccaagctcctgatctacgaagcatccaaactggaatctggggtcccatcgcggttcagcggcagtggatctgggacacagttcactctcaccatcagcgacttgcagtgtgacgatgctgccacttactactgtgcaggcggtgatattagtgaaggtgttgctttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaacgt(配列番号432)。
acggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcct
cagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt(配列番号440)。
異性を有するFab断片をコードするポリヌクレオチドを含むか、または別法ではそれらからなる。抗体Ab10に関して、全長Ab10抗体をコードするポリヌクレオチドは、配列番号401の重鎖配列をコードするポリヌクレオチド配列番号411、及び配列番号421の軽鎖配列をコードするポリヌクレオチド配列番号431を含むか、または別法ではそれらからなる。
一実施形態では、本発明はさらに、PACAPに対して結合特異性を有する抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを対象とする。本発明の一実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号441の重鎖配列をコードし、かつ配列番号452の重鎖可変領域コード配列及び配列番号460の重鎖定常領域コード配列からなる配列番号451のポリヌクレオチド配列を含むか、または別法ではそれらからなる。
cagtcggtggaggagtccgggggtcgcctggtcacgcctgggacacccctgacactcacctgcacagtctctggaatcgacctcagtagctactacatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggaatggatcggattcattgatactgatggtagcgcatactacgcgacctgggcgaaaggccgattcaccatctccaaaacctcgaccacggtggatctgaaaatcaccagtccgacaaccgaggacacggccacctatttctgtgccagagatcttgacttgtggggcccgggcaccctcgtcaccgtctcgagc(配列番号452)。
gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactca
cacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacgccagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa(配列番号460)。
gccgccgtgctgacccagactccatctcccgtgtctgcagctgtgggaggcacagtcagcatcagttgccagtccagtgagagtgtttatagtaactacttagcctggtttcagcagaaaccagggcagcctcctaagttcttgatctacgaagcatccaaactggcatctggggtcccatcgcggttcaaaggcagtggatctgggacacagttcactctcaccatcagcgacgtgcagtgtgacgatgctggcacttactactgtgcaggcggctatagtagtgaaggtgttgctttcggcggagggaccgaggtggtggtcaaacgt(配列番号472)。
acggtagcggccccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt(配列番号480)。
断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号441の重鎖配列もしくは配列番号442の可変重鎖配列のCDR(超可変領域)をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号454;配列番号456;及び配列番号458のポリヌクレオチド配列のうちの1つもしくは複数、ならびに/または配列番号461の軽鎖配列もしくは配列番号462の可変軽鎖配列のCDR(超可変領域)に対応する配列番号474;配列番号476;及び配列番号478のポリヌクレオチド配列のうちの1つもしくは複数、あるいはこれらのポリヌクレオチド配列の組合せを含むか、または別法ではそれらからなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体またはそれらの抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチドは、上に記載されたCDRのうちの1つまたは複数、可変重鎖及び可変軽鎖配列、ならびに重鎖及び軽鎖配列をコードするポリヌクレオチドの組合せ(それらのすべても含む)を含むか、または別法ではそれらからなる。
一実施形態では、本発明は、所望のPACAP抗原に対して特異的であるPACAPに対するモノクローナル抗体、またはそのような抗体に対応する核酸配列を生成するために使用することができる、少なくとも1つのPACAP抗原特異的細胞を単離するために使用され得る抗原特異的B細胞のクローン集団の調製及び単離を企図する。抗原特異的B細胞の前記クローン集団を調製及び単離する方法は、例えば、その開示がその全体で参照によって本明細書に組み込まれるCarvalho−Jensen et al.に付与された米国特許出願公開第2007/0269868号において教示されている。抗原特異的B細胞の前記クローン集団を調製及び単離する方法は、本明細書において実施例においても教示される。細胞集団をサイズまたは密度において「富化」する方法は、当技術分野で公知である。例えば、米国特許第5,627,052号を参照されたい。これらのステップを、抗原特異性による細胞集団の富化に加えて使用することができる。
別の実施形態では、本発明は、抗体重鎖及び軽鎖をヒト化するための方法を企図する。抗PACAP抗体に適用され得る抗体重鎖及び軽鎖をヒト化するための方法は例えば、それぞれの開示がそれらの全体で参照によって本明細書に組み込まれるOlson et al.に付与された米国特許出願公開第2009/0022659号、及びGarcia−Martinez et al.に付与された米国特許第7,935,340号において教示されている。
別の実施形態では、本発明は、抗PACAP抗体及びそれらの断片を生成するための方法を企図する。交配コンピテント酵母の多倍数体、好ましくは二倍体または四倍体株から分泌される抗PACAP抗体及びそれらの断片を生成する方法は、例えば、それぞれの開示がそれらの全体で参照によって本明細書に組み込まれるOlson et al.に付与された米国特許出願公開第2009/0022659号、及びGarcia−Martinez et al.に付与された米国特許第7,935,340号において教示されている。
ここに記載されるスクリーニングアッセイは、PACAP関連疾患または障害の症状を示す対象において、PACAPと関連する疾患及び障害を処置する際に有用であり得る高親和性抗PACAP Abを同定するために設計されている。
本発明の別の実施形態では、本明細書に記載の抗PACAP抗体、またはそれらの抗原結合性断片は、PACAPと関連する疾患及び障害の症状を寛解もしくは低減させるか、またはそれらを処置もしくは予防するために有用である。本明細書に記載の抗PACAP抗体、またはそれらの抗原結合性断片、さらにはそれらの組合せはまた、治療有効量で、PACAPと関連する疾患及び障害の処置を必要とする患者に、下記により詳細に記載されるとおりの医薬組成物の形態で投与され得る。
成する組織における白血病、リンパ組織におけるリンパ腫、骨髄における骨髄腫、結合または支持組織における肉腫、副腎癌、AIDS関連リンパ腫、貧血、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、類癌腫、子宮頸癌、化学療法、結腸癌、血球減少症、子宮内膜癌、食道癌、胃癌、頭部癌、頸部癌、肝胆道癌、腎臓癌、白血病、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキン病、神経系腫瘍、口腔癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌、尿道癌、骨髄の癌、多発性骨髄腫、骨に転移する腫瘍、神経及び中空臓器を浸潤する腫瘍、神経構造付近の腫瘍(さらに好ましくは、癌性疼痛は、内臓疼痛、好ましくは膵臓癌及び/または腹部における転移から生じる内臓疼痛を含む。さらに好ましくは、癌性疼痛は体性痛、好ましくは骨における転移、手術後疼痛、肉腫、結合組織の癌、骨組織の癌、骨髄の血液形成細胞のがん、多発性骨髄腫、白血病、原発性または続発性骨癌の1つまたは複数による体性痛を含む)、尋常性ざそう、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、ケロイド、肥厚性瘢痕及び酒さ、アレルギー性皮膚炎、乾癬、そう痒症、神経原性皮膚発赤、紅斑、体重減少、食欲不振、サルコイドーシス、ショック、敗血症、オピエート離脱症候群、モルヒネ耐性、てんかん、下部尿路(「LUT」)障害、例えば、尿路感染症、異常排尿、尿意逼迫、夜間頻尿、尿失禁、過活動膀胱の症状を寛解もしくは低減させるか、またはそれらを処置もしくは予防するために、かつそのようなLUT状態と関連する疼痛を予防または緩和するために有用である。好ましくは、本明細書に記載の本抗PACAP抗体及び抗原結合性断片は、片頭痛、頭痛、及び疼痛関連疾患または状態の症状を寛解もしくは低減し、それらを処置もしくは予防するために有用である。
合皮質、ならびに一次及び二次視覚皮質を包含する多数の皮質領域に広く投射する。これらの皮質投射は、羞明に加えて、運動麻痺または協調不能、視覚障害、及び集中欠如などの他の普通型片頭痛症状を説明する助けとなり得る。
底にある疾患の症状であり得るであろう。加えて、一部の一次性頭痛は、アルコール;特定の食物(例えば、硝酸塩を含有する加工肉);睡眠の変化または睡眠不足;劣悪な姿勢;欠食;及びストレスを包含する生活因子によって開始され得る。
経痛、卵巣痛、反射性交感神経性ジストロフィー、変形性関節症または関節リウマチ疼痛、下背部痛、糖尿病性神経障害、坐骨神経痛、消化不良、過敏性腸症候群、炎症性腸疾患、クローン病、回腸炎、潰瘍性大腸炎、腎仙痛、月経困難、膀胱炎、間質性膀胱炎、月経期、分娩、閉経期、膵臓炎、統合失調症、うつ病、心的外傷後ストレス障害、不安障害、糖尿病、自己免疫糖尿病、内皮機能不全、虚血、レイノー症候群、冠動脈性心疾患(「CHD」)、冠動脈疾患(「CAD」)、心不全、末梢動脈疾患(「PAD」)、肺高血圧(「PH」)、結合組織障害、卒中、シェーグレン症候群、多発性硬化症、過活動性膀胱、気管支反応亢進、喘息、気管支炎、気管支拡張、気腫、慢性閉塞性肺疾患(「COPD」)、炎症性皮膚炎、尋常性ざそう、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、ケロイド、肥厚性瘢痕及び酒さ、アレルギー性皮膚炎、乾癬、そう痒症、神経原性皮膚発赤、紅斑、サルコイドーシス、ショック、敗血症、オピエート離脱症候群が包含される。
害のいずれかと診断されているか、またはそれらに罹患するリスクを有すると考えられる個体であり得る。本発明はさらに、PACAP活性と関連する任意の疾患または障害(上述の例示的な疾患、障害、及び状態のいずれも包含)を処置、予防、及び/または寛解するための医薬品の製造における、本明細書において開示される医薬製剤のいずれかの使用を包含する。
本発明の一実施形態では、本明細書に記載の抗PACAP抗体、またはそれらのPACAP結合性断片、さらには、前記抗体またはそれらの抗原結合性断片の組合せは、対象に、0.1mg/mlと、およそ0.5、1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、または200mg/mlのいずれか1つとの間の濃度(+/−10%誤差)で投与される。
therapy,Philadelphia,PA:Lippincott Williams & Wilkins(2007)における教示によってガイドされる日常的な実験によって、当業者は、有効投薬量及び投与頻度を決定することができるであろう。
ェブタゾン、ナブメトン、ナプロキセン、N−アリールアントラニル酸、NGF、オキサメタシン、オキサプロジン、オキシカム、オキシフェンブタゾン、オキシトシン、パレコキシブ、フェナゾン、フェニルブタゾン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、ピルプロフェン、プロフェン、プログルメタシン、ピラゾリジン誘導体、ロフェコキシブ、サリチル酸サリチル、サリチルアミド、サリチラート、サブスタンスP、スルフィンピラゾン、スリンダク、スプロフェン、テノキシカム、チアプロフェン酸、トルフェナム酸、トルメチン、及びバルデコキシブも包含される。例えば、選択された抗PACAP抗体、またはそれらのPACAP結合性断片、さらには、これらの抗体または抗原結合性断片の組合せは、任意選択で、オキシトシンと組み合わせて投与され得、例えば、鼻用製剤において鼻腔内送達のために投与され得る。
フルドロコルチゾン、グルココルチコイド、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、ステロイド、及びトリアムシノロンも包含される。これらの活性薬剤の任意の適切な組合せも企図される。
、注入剤、及びそれらの組合せが包含される。
実質的に本明細書に記載のとおりの抗体選択プロトコルを使用することによって、PACAP38及びPACAP27に対して特異的な抗体のパネル、ならびにPACAP38のみに対して特異的な抗体のパネルを生成した。
ウサギをPACAP38(American Peptide、Vista、CA)(配列番号1241)で免疫化した。ペプチドを下記のとおりに免疫化のために調製した。1M NaClに補充されたダルベッコリン酸緩衝生理食塩水(「DPBS」)に溶解させた0.15ml体積の10mg/mlキーホールリンペットヘモシアニン(「KLH」)を1.0mlの1mg/mlペプチド(脱イオン水中に溶解)と混合した。次いで、1.0mlの40mMカルボジイミドを添加し、その後、室温で、穏やかに混合しながら12時間にわたってインキュベートした。過剰のカルボジイミド及び非コンジュゲートペプチドを、DPBSに対する透析によって除去し、その後、滅菌濾過した。次に、KLHの当初質量に等しい非コンジュゲートペプチドを添加し、その後、ウサギに注射するために調製した。別法では、等質量の滅菌KLH及びペプチドを、カルボジイミド化学作用を伴うことなく混合した。
PAC1−Rを介してのPACAP38(配列番号1241)誘導性シグナル伝達を中和する抗体を同定するために、ポリクローナル抗体溶液を初めに、プロテインAによって精製し、中性緩衝液に透析した。簡単には、抗体溶液を4×最終濃度(100pM)のPACAP38(配列番号1241)と共に1時間にわたってインキュベートした。抗体/抗原複合体をインキュベートしている間に、PAC1−R発現PC−12細胞(Japanese Collection of Research Bioresources
Cell Bank)を洗浄し、1ml当たり2×106細胞で、細胞培養培地中に再懸濁させた。細胞(10μl)及び抗原/抗体複合体(40μl)を均一性時間分解蛍光(「HTRF」)プレートに移し、室温で30分間にわたって振盪した。インキュベションの後に、溶解緩衝液中の20μlの(1:20希釈された)Eu3+クリプタート標識mAb抗cAMP及び20μlの(1:20希釈された)d2標識cAMPを添加し、プレートを振盪しながら1時間にわたってインキュベートした。インキュベーションの後に、プレートを読み取り(励起330nm、発光620/665nm)、620:665シ
グナルの比を決定した。
許容される力価が確立されたら、ウサギ(複数可)をと殺した。脾臓、リンパ節、及び全血を採取し、次のとおり処理した:
B細胞の培養を設定する当日に、PBMC、脾細胞、またはリンパ節バイアルを、使用のために解凍した。バイアルを液体窒素タンクから取り出し、解凍するまで37℃水浴に入れた。バイアルの内容物を15mlコニカル遠心管(Corning、Inc.、Corning、NY)に移し、10mlの改変RPMIをその管にゆっくりと添加した。細胞を5分間にわたって2000RPMで遠心し、上清を廃棄した。細胞を新鮮な培地10ml中に再懸濁させた。細胞密度及び生存率をトリパンブルーによって決定した。
洗浄の後に、細胞をPBF500μl中に再懸濁させ、取って置いた。MACS(登録商標)MSカラム(Miltenyi Biotec、Auburn、CA)をマグネットスタンド(Miltenyi Biotec、Auburn、CA)上で、PBF500μlで予めすすいだ。細胞懸濁液を、プレフィルターを介してカラムに施与し、結合しなかった画分を収集した。カラムをPBF緩衝液2.5mlで洗浄した。カラムをマグネットスタンドから取り外し、清潔な滅菌1.5ml EPPENDORF(商標)管上に入れた。PBF緩衝液1mlをそのカラムの頂部に添加し、ポジティブ選択された細胞を収集した。ポジティブ細胞画分の収率及び生存率をトリパンブルー染色によって決定した。ポジティブ選択は、出発細胞濃度1%の平均をもたらした。
抗PACAP38抗体を産生するウェルを同定するために、B細胞上清を抗原認識(ELISA)によって試験した。簡単には、NEUTRAVIDIN(商標)コーティングされたプレート(Thermo Fisher Scientific、Waltham、MA)を、ELISA緩衝液(PBS pH7.4中の0.5%魚皮ゼラチン)中で希釈されたN末端またはC末端ビオチン化PACAP38(AnaSpec Inc.、Fremont、CA)(1ウェル当たり50μl;1μg/ml)で、約1時間にわたって室温で、または別法では終夜4℃でコーティングした。次いで、プレートをさらに、ELISA緩衝液で1時間にわたって室温でさらにブロックし、0.05%Tween20(「洗浄緩衝液」)を含むPBSを使用して洗浄した。B細胞上清サンプル(50μl)をウェル上に移し、1時間にわたって室温でインキュベートした。このインキュベーションの後に、プレートを洗浄緩衝液で洗浄した。展開のために、抗ウサギ特異的Fc−ホースラディッシュペルオキシダーゼ(「Fc−HRP」)(ELISA緩衝液中で1:5000希釈)をウェル上に添加し、45分間にわたって室温でインキュベートした。洗浄溶液での3回の洗浄ステップの後に、プレートを、3,3’,5,5’−テトラメチルベンジジン(「TMB」)基質を使用して2分間にわたって室温で展開させ、反応物を、0.5M HClを使用してクエンチした。ウェル吸光度を450nmで読み取った。
PAC1−Rを介するPACAP38のシグナル伝達を遮断する抗PACAP38抗体を産生するウェルを同定するために、ELISAによるとPACAP38結合についてポジティブなウェルからの上清を、cAMP HTRF アッセイ(Cisbio US、Bedford、MA)において試験した。上清(78μl)を2μlの5nM PACAP38(American Peptide Company、Sunnyvale、
CA)と共に、1時間にわたって37℃でプレインキュベートした。インキュベーションの間に、PC−12細胞を、力価評価のために記載されたとおりに調製した。細胞(10μl)及び抗原/抗体複合体(40μl)をHTRFプレートに移し、室温で30分間にわたって振盪した。インキュベーションの後に、溶解緩衝液中の20μlの(1:20希釈された)Eu3+クリプタート標識mAb抗cAMP及び20μlの(1:20希釈された)d2標識cAMPを添加し、プレートを振盪しながら1時間にわたってインキュベートした。インキュベーションの後に、プレートを読み取って(励起330nm、発光620/665nm)、620:665シグナルの比を決定した。
抗原特異的B細胞を単離した(一般方法については、その全体で参照によって本明細書に組み込まれる共同所有公報WO2014/146074を参照されたい)。目的のウェルを含有するプレートを−70℃から取り出し、1ウェル当たり200μlの培地(10%RPMI完全、55μM β−メルカプトエタノール(「BME」))の5回の洗浄を使用して、各ウェルからの細胞を再び覆った。再び覆われた細胞を遠心によってペレット処理し、上清を慎重に除去した。次いで、各ウェルからの細胞を培地100μl中に再懸濁させ、96ウェルプレートに移した。細胞を90分間にわたって37℃でインキュベートした。インキュベーションの後に、細胞を遠心によってペレット処理し、イソチオシアン酸フルオレセイン標識(「FITC標識」)抗ウサギIgG(最終濃度6.25μg/ml)(Creative Diagnostics、Shirley、NY)で染色し、2mlまでの蛍光活性化細胞選別緩衝液(「FACS緩衝液」)(2%FBSを含有するダルベッコPBS)で洗浄し、FACS緩衝液250μl中に再懸濁させた。
組み合わされたRT−PCRベースの方法を使用して、単一の細胞選別されたB細胞から、抗体配列を回収した。標的免疫グロブリン遺伝子(重鎖及び軽鎖)、例えば、ウサギ免疫グロブリン配列の保存及び定常領域においてアニーリングするように、制限酵素を含有するプライマーを設計し、2ステップに枝分かれしたPCR回収を使用して、抗体配列を増幅させた。各ウェルからのアンプリコンを配列決定し、分析した。得られた配列クラスターからの代表的な抗体を組換えタンパク質発現のために選択した。ウサギ細胞から増幅された元の重鎖及び軽鎖可変領域を、制限酵素消化及びライゲーションによって、ならびにGibson法によって、ヒト重鎖及び軽鎖定常領域発現ベクターにクローニングした。サブクローニングDNA断片を含有するベクターを増幅及び精製した。サブクローニングされた重鎖及び軽鎖の配列を発現の前に検証した。
特異的B細胞から回収された抗体の抗原特異性及び機能的特性を決定するために、重鎖及び軽鎖プラスミドを同時遺伝子導入して、試験のためのウサギ/ヒトキメラ抗体を生成した。簡単には、重鎖及び軽鎖キメラプラスミドをHEK−293細胞に一過性に遺伝子
導入した。遺伝子導入を5〜7日間にわたってインキュベートし、採取したら、細胞を遠心によってペレット化した。上清をプロテインAによる精製に掛けた。次いで、得られた精製キメラ抗体を様々なアッセイにおいて評価し、特異性及び効力を確認した。
本発明によって生成される例示的な抗PACAP38及び抗PACAP27抗体の結合及び機能的特性を下記でさらに記載する。
PACAP38誘導性及びPACAP27誘導性PAC1−Rシグナル伝達を中和する抗PACAP抗体の能力を細胞ベースのアッセイにおいて試験した。
P38誘導性cAMP増大を阻害することを実証した(図16A〜Hを参照されたい)。加えて、これらの結果は、抗PACAP抗体Ab10、Ab20、Ab21、Ab1.H、Ab10.H、及びAb21.Hが、PAC1−Rを発現する細胞においてPACAP27誘導性cAMP増大を阻害するが、Ab22またはAb23は阻害しないことを実証した(図17A〜Hを参照されたい)。
PROTEON(商標)XPR36(Bio−Rad、Hercules、CA)上でSPRを使用して、ヒトPACAPについてのモノクローナル抗体の結合親和性を推定した。抗体を、全アミンカップリング(general amine coupling)(「GLC」または「GLM」)Chips(Bio−Rad、Hercules、CA)の表面に固定化した。Teknova(Cat# P1192、Teknova、Hollister、CA)から購入され、0.25Mアルギニン(J.T.BAKER(登録商標)製)、0.2mg/ml BSA(Jackson Immuno Research Labs、West Grove、PA)、及び0.005%アジ化ナトリウム(VWR International、Radnor、PA)を補充され、7にpH調節された1倍PBST緩衝液(4.3mMリン酸Na、1.4mMリン酸K、135mM
NaCl、2.7mM KCl 0.05%ポリソルベート−20)中で調製されたヒトPACAP38(配列番号1241)の希釈列を、抗体を照会するために使用した。抗原(1.23nM〜100nMの範囲)を典型的には、PROTEON(商標)Manager Software(v3.1.0.6(Bio−Rad、Hercules、CA))でグループ分けされた2〜4分の会合時間及び3〜120分の解離時間で順に流し、1:1のLangmuir結合モデルを使用してフィットさせた。分析物の照会の間に、0.85%リン酸を使用して、表面を再生させた。単一のKDを各抗体について、拡散速度付近に限定された会合時間(1.0×106)及び1.5×10−5に限定された解離時間で計算したが、その際、識別し得る分離は観察されなかった。
の会合時間及び3〜120分の解離時間で、ヒトVIP(配列番号1243)及びPACAP27(配列番号1242)についての抗体の結合親和性を決定した。
ヒトVPAC1−Rを介してのPACAP38誘導性シグナル伝達を中和する抗体を同定するために、ヒトVPAC1−Rを発現するCHO−K1細胞を、cAMP HTRF細胞をベースとするアッセイにおいて使用した。抗体希釈液を4×最終濃度(5nM)のPACAP38と共に1時間にわたってインキュベートした。抗体/抗原複合体を1時間にわたってインキュベートしている間に、VPAC1−R発現CHO−K1細胞(ヒトVPAC1−R cDNAをCHO−K1細胞(ATCC、カタログ#CCL−61)に安定的に遺伝子導入することによって、Alder Biopharmaceuticalsで生成;選択されたクローン1を、in vitroでの細胞をベースとするアッセイのために使用した)を0.25%トリプシンで4分間にわたって剥離した。細胞を洗浄し、培養培地1ml当たり1×106細胞で再懸濁させた。20μlのAb/抗原混合物を20μlの細胞と、HTRFプレート内で混合し、振盪しながら30分間にわたってインキュベートした。溶解緩衝液中の20μlのEu3+クリプタート標識抗cAMP mAb(1:20希釈)及び20μlの(1:20希釈)d2標識cAMPを各ウェルに添加し、振盪しながら1時間にわたってインキュベートした。各ウェル中のPACAP38の最終濃度は5nMであった。インキュベーションの後に、プレートを読み取り(励起330nm、発光620/665nm)、620:665シグナルの比を決定した。
ヒトVPAC2−Rを介してのPACAP38誘導性シグナル伝達を中和する抗体を同定するために、ヒトVPAC2−Rを発現するCHO−K1細胞を、cAMP HTRF細胞をベースとするアッセイにおいて使用した。抗体希釈液を4×最終濃度(1nM)のPACAP38と共に1時間にわたってインキュベートした。抗体/抗原複合体を1時間にわたってインキュベートしている間に、VPAC2−R発現CHO−K1細胞(ヒトVPAC2−R cDNAをCHO−K1細胞(ATCC、カタログ#CCL−61)に安定的に遺伝子導入することによって、Alder Biopharmaceuticalsで生成;選択されたクローン8を、in vitroでの細胞をベースとするアッセイのために使用した)を0.25%トリプシンで4分間にわたって剥離した。細胞を洗浄し、培養培地1ml当たり1×106細胞で再懸濁させた。20μlのAb/抗原混合物を20μlの細胞と、HTRFプレート内で混合し、振盪しながら30分間にわたってインキュベートした。溶解緩衝液中の20μlのEu3+クリプタート標識抗cAMP mAb(1:20希釈)及び20μlの(1:20希釈)d2標識cAMPを各ウェルに添加し、振盪しながら1時間にわたってインキュベートした。ウェル中のPACAP38の最終濃度は1nMであった。インキュベーションの後に、プレートを読み取り(励起330nm、発光620/665nm)、620:665シグナルの比を決定した。
PAC1−R発現細胞へのPACAP38結合を遮断する抗体を同定するために、PAC1−Rを発現する接着PC−12細胞(ATCC、Manassas、VA)を、EuropiumをベースとするPAC1−R発現細胞結合アッセイにおいて使用した。抗体溶液を10×最終濃度(100nMまたは30nM)のN末端ビオチン化PACAP38と共に1時間にわたってインキュベートし、次いで、24時間前に黒色透明ボトム96ウェルプレート(COSTAR(商標)、Corning Incorporated、Corning、NY)に播種されたPC−12細胞に添加し、さらに、1時間にわたって室温でインキュベートした。3回の洗浄の後に、細胞を20μlのEuropium標識ストレプトアビジン(PerkinElmer、Waltham、MA)と共に1時間にわたって室温でインキュベートした。細胞を3回洗浄し、次いで、20μlのDELFIA(登録商標)Enhancement溶液(PerkinElmer、Waltham、MA)を各ウェルに添加し、穏やかに振盪しながら15分間にわたってインキュベートした。プレートをSPECTRAMAX(登録商標)(Molecular Devices、Sunnyvale、CA)プレートリーダーで読み取った(時間分解蛍光(「TRF」))。
PACAP38を介してPAC1−R発現細胞の細胞表面に結合する抗PACAP抗体を同定するために、PAC1−Rを発現する接着PC−12細胞(Japanese Collection of Research Bioresources Cell Bank)を、細胞表面結合をベースとするアッセイにおいて使用した。結合実験を行うために、PAC1−R発現PC−12細胞を初めに、Corning 96ウェル白色ソリッドボトムプレート(Corning、Corning、NY)に播種した。細胞を初めに、1×105細胞/ウェルで、完全RPMI(「cRPMI」:10%滅菌熱不活化FBS及び1%滅菌抗生物質/抗真菌物質を補充されたRPMI培地)+10%FBSの溶液中で播種し、プレートを終夜、37℃でインキュベートした。結合アッセイの当日に、15μg/mlの当初濃度の抗体をDELFIA(登録商標)結合緩衝液(50mMトリス、150mM NaCl、0.1%アジド、2%ウマ血清)(Perkin−Elmer、Waltham、MA)中で1:3比で、60μLの合計体積に、別の96ウェル丸底プレート内で希釈した。PACAP38を、それをDELFIA(登録商標)結合緩衝液中で200nMの濃度に希釈することによって結合アッセイのために調製し、次いで、60μlの希釈PACAP38を抗体含有ウェルのそれぞれに添加して、抗体:抗原複合体を形成した。PACAP38を添加した後に、抗体:抗原複合体を室温で、振盪機上で1時間にわたってインキュベートした。別に、抗体:抗原複合体の添加のために、細胞をDELFIA(登録商標)洗浄緩衝液(50mMトリス、150mM NaCl、0.1%アジド)(Perkin−Elmer、Waltham、MA)で2回洗浄することによって、PC−12細胞を調製した。細胞を2回洗浄した後に、かつ抗体:抗原複合体を1時間にわたって室温でインキュベーションした後に、50μlの抗体:抗原複合体を、細胞を含有する各ウェルに添加した。次いで、細胞及び抗体:抗原複合体の混合物を30分間にわたって室温でインキュベートした。この30分間にわたるインキュベーション
の後に、各混合物をDELFIA(登録商標)洗浄緩衝液(Perkin−Elmer、Waltham、MA)で2回洗浄した。
PACAP38の皮内注射は、ウサギ及びヒトにおいて限局性血管拡張を誘発することが示されている(Warren et al.,J.Cardio.Pharmacol.,29(1):83−87,1992;Seelinger et al.,Am.J.Path.,177(5):2563−2575,2010)。in vivo有効性研究を行って、雄のNew Zealand WhiteウサギにおいてPACAP38の皮内注射によって誘導される限局性皮膚血管拡張を阻害するAb1.Hの活性を決定した。
rfalla、Sweden)を使用してモニターした。皮内PACAP38攻撃を次のとおりに行った:各動物は、ビヒクル(1つの部位またはROI)及び30pmole/部位のPACAP38(3部位または3ROI)の単回皮内投与(100μl/部位)を投与された。各ROIでの血液潅流速度は、潅流ユニット(「PU」)内のPeriCam PSI NRシステムによって報告され、PIMSoft(Ver.1.5,Perimed、Jarfalla、Sweden)を使用して分析された。
PACAP38の皮内注射は、ウサギ及びヒトにおいて限局性血管拡張を誘発することが示されている(Warren et al.,1992;及びSeelinger et al.,2010)。in vivo有効性研究を行って、雄のNew Zealand WhiteウサギにおいてPACAP38の皮内注射によって誘導される限局性皮膚血管拡張を阻害するAb10の活性を決定した。
示している。
製造者のガイドラインに従って、Ab1を10:1モル比で、ビオチン(Thermo
Fisher Scientific、Waltham、MA)を用いてビオチン化した。5ステップバイオレイヤー干渉法実験を次のとおりに行った:ステップ1で、ストレプトアビジンバイオセンサー(Pall ForteBio LLC、Menlo Park、CA)を、50秒間にわたって1倍反応速度緩衝液(Pall ForteBio
LLC、Menlo Park、CA、カタログ#18−5032のDBS中の1:10希釈液)中で平衡化させた。ステップ2で、1倍反応速度緩衝液中のビオチン化抗体Ab1の2μg/ml希釈液を、500秒間にわたって、ストレプトアビジンバイオセンサー上で固定化した。ステップ3で、抗体官能化バイオセンサーを、1倍反応速度緩衝液中の2μM非標識PACAPペプチド(American Peptide Company、Sunnyvale、CA、カタログ#34−0−20)の溶液中で200秒間にわたってインキュベートした。ステップ4で、1000秒の解離ステップのために、センサーを1倍反応速度緩衝液中の非標識抗体Ab10(図22A)または対照としての非標識抗体Ab1(図22B)の67nM溶液中に入れた。結合の安定性をステップ5の間、1倍反応速度緩衝液中での1000秒の解離についてモニターした。図22Aでは、Ab1捕捉されたPACAPによるAb10の「サンドイッチ式」捕捉は、PACAPへのこれら2種の抗体の同期及び非競合結合を示す。図22Bにおける対照実験は、Ab1捕捉されたPACAPによるAb1の最小の「サンドイッチ式」捕捉を示す。実験を、ForteBio OCTET(登録商標)QK装置(Pall ForteBio LLC、Menlo Park、CA)で、30℃及び1000RPMで行った。
PAC1−RへのPACAP27結合を遮断する抗体を同定するために、30nMの当初濃度の抗体をインキュベーション緩衝液(50mM Hepes pH7.4、1mM
CaCl2、5mM MgCl2、0.2%BSA)中で希釈し、一連の1:3希釈を行った。次いで、抗体希釈液(30nM、10nM、3nM、1nM、0.3nM、0.1nM、0.03nM、0.01nM、0.003nM、及び0.001nM)を混合し、25℃で30分間にわたって、インキュベーション緩衝液中の0.1nMの125I標識PACAP27と共にプレインキュベートした。次いで、抗体:125I標識PACAP27混合物を、インキュベーション緩衝液中の、ヒト組換えPAC1−Rロングアイソフォームを発現するChem−1細胞に由来する細胞膜の0.5μgアリコットに添加した。次いで、混合物を1時間にわたって25℃でインキュベートした。インキュベーションの後に、サンプルを濾過し、洗浄した。その後、フィルターをカウントして、125I標識PACAP27を定量した。実験対照として、細胞膜への非特異的結合を、0.1μMの標識PACAP27を使用して推定した。結果は、Ab1.H、Ab10.H、及びAb21.HがPAC1−RへのPACAP27結合を遮断することができたことを示し、それによって、表9において示される試験抗体によるリガンド−受容体結合の阻害が実証された。
羞明に対する抗PACAP抗体の作用を検査するために、マウスにPACAPを投与して、羞明を起こさせるマウスモデルを使用した。Kaiser et al.,J.Neurosci.,32(44):15439−15449,2012において記載されているとおりの明暗箱を使用する光嫌悪アッセイを使用して、羞明を検出した。次いで、マウスに、抗PACAP抗体Ab1.HまたはAb10.Hまたは無関連対照抗体を投与し、光に対するそれらの嫌悪を定量した。結果を図23〜25において反映させる。
Kaiser et al.において記載されているとおり、試験チャンバーは、3セットの16ビームの赤外アレイを含むプレキシガラス製オープンフィールド(幅27cm×深さ27cm×高さ20.3)であった(2セットの垂直ビームは、マウスの位置及び移動を検出するために1.0cmの高さで交差し、かつ第3のビームは、垂直方向の活動を検出するために、7.3cmの高さでチャンバーの幅に交差する)。フィールドを、上面はあるが床はない5面の黒色プレキシガラス製ボックスである暗色インサートによって、2つの当サイズの帯域に分割した。赤外光ビームを使用して、両方の帯域において追跡を可能にした。暗色インサートの開口部(5.2cm×6.8cm)によって、帯域間を自由に移動することを可能にした。暗色インサートは直接的な光を遮断するが、多少の光は開口部を介して、なお入り得た。各試験チャンバーを、換気のためのファンを備えた消音室(幅56cm×深さ38cm×高さ36cm)内に設置した(Med Associates,Inc.(登録商標)、St.Albans、VT)。6つのチャンバーからのデータを記録するために、Activity Monitor v6.02(Med Associated Inc.)を使用するコンピューターを使用した。
せる装置を、順応の間、オンにし、試験が完了するまで、オンのままにした。順応の間、室内には最小人数のヒトが存在した。0800CST及び1400CSTの間で、挙動試験を行った。いずれの異常な身体的状態(例えば、失明)も記述した。
明暗チャンバーに入れる前に、すべてのマウスを試験室内で少なくとも30〜60分間にわたって順応させた。チャンバー内の光度を初めは、2.7×103lxに設定した。マウスを毎日30分間にわたってチャンバー内で試験し、明暗チャンバーに露出した。基線測定の間に3日間の休息期間を設けて、マウスを明暗チャンバーに2回露出することによって、各マウスでの明所での基線時間を得た(図23及び25、それぞれ「基線1」及び「基線2」、または「基線」)。
マウスに、30mg/kgの抗PACAP抗体または対照IgG抗体(試験抗体と同じフレームワークを有し、ジゴキシゲニンを認識する陰性対照抗体)を腹腔内注射によって投与した。次いで、マウスをそれらのホームケージに戻して、試験前に1日(24時間)休息させた。次いで、マウスに0.6mg/kgのPACAPまたはビヒクルを腹腔内注射によって投与し、30分間にわたって休息させた。次いで、マウスを明暗チャンバー内に30分間にわたって入れた(図23及び図25、「処置」)。各マウスを明暗チャンバーに露出した後に、明暗チャンバー及び構成部品を、殺菌ワイプで清浄化し、乾燥させた。マウスを明暗チャンバーに入れてから約5〜7分後に、試験すべき次のマウスにPACAPまたはビヒクルを上記のとおり注射した。この間隔はおよそ、実験の間に明暗チャンバーを清浄化するために必要な時間量であった。
Kaiser et al.,J.Neurosci.,2012において記載されているとおり、5分間隔で30分間の試験期間にわたって、運動性を測定した。簡単には、垂直移動、例えば後脚立ちの回数、歩行距離(cm、歩行運動状態中に移動した全距離)、転位、及び休息(新たにビームを破断することなく過ごした時間のパーセンテージ)を光ビームによって測定した。すべての運動性パラメーターを各帯域において過ごした時間に対して正規化して、その帯域で過ごした異なる時間量が説明されるようにし;したがって、各パラメーターでの生の値を、5分間隔の間にその帯域で過ごした時間で割った。各チャンバーで過ごした時間を、GraphPad Prismソフトウェア(GraphPad Software、San Diego、CA)を使用して分析し、平均±平均の標準誤差(「SEM」)として報告した。post−hoc分析のためのボンフェローニ多重比較検定と共に、二元繰り返し測定ANOVAによって、比較を計算した。
いずれかを投与されたマウスは、IgG対照マウスと比較すると、明所においてより多くの時間を過ごしたことを示す。図23は、マウスが正常に、両方の基線測定においてと同様に挙動することを示す。他方で、図23において示されているデータは、対照IgG抗体及び次いでPACAPで処置されたマウス(四角形)が、抗PACAP抗体Ab1.H及び次いでPACAPを投与されたマウス(円形)よりも、統計学的に短い時間を明所において過ごすことを示す。(図23、「処置」を参照されたい)。図25において示されているデータも、マウスが正常に、基線測定においてと同様に挙動することを示す。他方で、図25において示されているデータは、対照IgG抗体及び次いでPACAPで処置されたマウス(三角形)が、抗PACAP抗体Ab10.H及び次いでPACAPを投与されたマウス(逆三角形)よりも、統計学的に短い時間を明所において過ごすことを示す。(図25、「処置」を参照されたい)。各測定の間の時間は、3日間であった。平均±SEMは、各5分間隔で示される。ビヒクルのみを投与されたマウスは、正常対照として挙動した。図24において示されているデータは、抗PACAP抗体Ab1.H、または対照IgG、及びビヒクル(それぞれ「ビヒクル+PAC Ab」及び「ビヒクル+対照抗体」)の投与がマウス挙動を顕著に変更することはなかったことを示す。図24も、PACAP及び対照IgGが投与された場合には、明所におけるマウスの平均時間が減少した(「PACAP+対照抗体」)一方で、抗PACAP抗体Ab1.H及びPACAPを投与されたマウスは、正常な、非光過敏挙動を示した(「PACAP+PAC Ab」)ことを示す。
本発明の抗PACAP抗体及びそれらの抗原結合性断片が結合する、PACAP内に含有されるエピトープを決定するために、アラニン走査実験を使用した。これらの実験を行うために、各位で天然のアミノ酸をアラニン(「Ala」)で置き換える単一点突然変異を用いて、PACAPペプチドを合成し、PACAP及び抗体の結合親和性に関連する単一点突然変異の結果を測定した。アラニン残基がすでに野生型PACAPの18、24、及び25位を占めているので、慣例に従って、PACAPへの本抗PACAP抗体の結合に対して、これらの位置でアラニンを除去することで起こり得る作用を決定するために、これらのAla残基をバリン(「Val」)で置き換えた。通常の慣例によって、これらのAla変異は、PACAP1−38における位置に、置換されたアミノ酸での文字コードを続けることで標識され、例えば、10Aは、アミノ酸10位でアラニンで置換されたPACAP1−38を示す。ヒトPACAP及び各変異ペプチドについてのモノクローナル抗体の結合を、PROTEON(商標)XRP36(Bio−Rad Laboratories、Hercules、CA)でSPRを使用して検出した。サンプル及びサンプル対照をPROTEON(商標)GLCセンサーチップ(Bio−Rad Laboratories、Hercules、CA)上に、標準的なアミンカップリングを使用する単一密度で固定化した。固定化のために使用された泳動用緩衝液は、DPBS/改変(HYCLONE(商標)GE Healthcare Life Sciences、Marlborough、MA)であり、固定化を25℃で行った。PROTEON(商標)GLCセンサーチップ(Bio−Rad Laboratories、Hercules、CA)を初期化し、製造者のプロトコルに従ってプレコンディショニングした(0.5%SDS、50mM NaOH、100mM HClの双方向注入)。PROTEON(商標)Chip(Bio−Rad Laboratories、Hercules、CA)のスポット上に特有の抗体を保証するために、固定化プロセスを段階的に行った。チップの表面を、1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド/N−ヒドロキシスクシンイミドの1:1混合物(「EDAC/NHS」)及び30μL/分の流速×5分で活性化させた。抗体サンプルを10mM HEPES 150mM NaCl pH7.2に予め透析または交換し、抗体濃度を、NANODROP(商標)2000分光光度計(Thermo Fisher Scientific、Waltham、MA)を使用して定量化した。固定化は、2000〜3000応答単位(「RU」)を目
標とした。10mM酢酸ナトリウム、pH5.5中の抗体サンプル(5μg/ml)を30μL/分×4分で流した。次の活性化に付随して、0.3Mエタノールアミンを使用して30μL/分の流速で、5分間にわたって、非活性化を達成した。
(i)Ab10:ヒトPACAPの残基19、22、23、及び27;
(ii)Ab20:ヒトPACAPの残基19、22、23、24、及び27;
(iii)Ab21:ヒトPACAPの残基19、22、23、及び27;
(iv)Ab22:ヒトPACAPの残基22、23、27、28、及び31;
(v)Ab23:ヒトPACAPの残基12、20、23、24、26、27、及び28。
発明の態様
[態様1]ヒトPACAPと関連する少なくとも1つの生物学的作用と拮抗するか、それらを阻害、中和、または遮断する、ヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗ヒト下垂体アデニル酸シクラーゼ−活性化ポリペプチド(「PACAP」)抗体または抗体断片。
[態様2]ヒトPACAPへの結合について、Ab10及びAb20からなる群から選択される抗体、または上述のいずれか1つの抗原結合性断片と特異的に競合する、ヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗体断片。
[態様3]Ab10及びAb20からなる群から選択される抗PACAP抗体、または上述のいずれか1つの抗原結合性断片が結合する少なくとも1つの線状または配座異性エピトープに特異的に結合する、ヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗体断片。
[態様4]Ab10及びAb20のいずれか1つ、または上述のいずれか1つの抗原結合性断片と同一のエピトープに結合する、先行態様のいずれかに記載のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗体断片。
[態様5]ヒトPACAPまたは対応するアミノ酸残基を含有するその断片もしくは変異体上のエピトープに特異的に結合し、その際、前記エピトープが、下記:
(i)ヒトPACAPの残基19、22、23、及び27のうちの少なくとも1個;
(ii)ヒトPACAPの残基19、22、23、24、及び27のうちの少なくとも1個;
(iii)(i)〜(ii)のいずれか1つの残基のうちの少なくとも2個;
(iv)(i)〜(ii)のいずれか1つの残基のうちの少なくとも3個;
(v)(i)〜(ii)のいずれか1つの残基のうちの少なくとも4個;
(vi)(ii)の5個すべての残基
からなる群から選択される、先行態様のいずれかに記載のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗体断片。
[態様6](a)ヒトPACAPの残基19、22、23、及び27のうちの1個または複数個を包含する対応するアミノ酸残基を含有するか;あるいは(b)態様5において記述したとおりの残基(i)または(ii)を含有するヒトPACAP上のエピトープ、またはそれらの断片もしくは変異体;(c)ヒト野生型PACAP38及びヒト野生型ヒトPACAP27において存在する、ヒトPACAP上のエピトープ、または対応するアミノ酸残基を含有するそれらの断片もしくは変異体に特異的に結合する、先行態様のいずれかに記載のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗体断片。
[態様7]ヒトPACAP上のエピトープ(または対応するアミノ酸残基を含有するその断片もしくは変異体)に特異的に結合し、前記エピトープが、例えば実施例12において開示されているとおりのアラニン走査によって同定される、態様3〜6のいずれかに記載のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗体断片。
[態様8](a)ヒト血管作動性腸管ペプチド(「VIP」)に結合しないか、または感知できるほどには結合しないか;(b)ヒトVIPに対する前記抗体または抗体断片のKDよりも少なくとも10、100、1000、10,000、または100,000倍低い(強い)ヒトPACAPについてのKDを有するか;または(c)ヒトPACAPによって誘発される少なくとも1つの生物学的作用を阻害または中和する、先行態様のいずれかに記載のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗体断片。
[態様9]下記:
(i)PAC1受容体(「PAC1−R」)、血管作動性腸管ペプチド受容体1型(「VPAC1−R」)、及び/または血管作動性腸管ペプチド受容体2型(「VPAC2−R」)の少なくとも1つのPACAP活性化を阻害、遮断、または防止すること;
(ii)PAC1−R、VPAC1−R、及びVPAC2−RのそれぞれのPACAP活性化を阻害、遮断、または防止すること;
(iii)PAC1−RのPACAP活性化を阻害、遮断、または防止すること;
(iv)PAC1−R、VPAC1−R、及び/またはVPAC2−Rの少なくとも1つへのPACAP結合を阻害することができること;
(v)PAC1−R、VPAC1−R、及び/またはVPAC2−RのそれぞれへのPACAP結合を阻害することができること;
(vi)PAC1−R発現細胞へのPACAP結合を阻害することができること;
(vii)VPAC1−R発現細胞へのPACAP結合を阻害することができること;
(viii)VPAC2−R発現細胞へのPACAP結合を阻害することができること;
(ix)例えばグリコサミノグリカン(「GAG」)を介しての細胞表面へのPACAP結合を阻害すること;
(x)例えばグリコサミノグリカン(「GAG」)を介しての細胞表面へのそのような抗体のPACAP媒介性結合を阻害すること;
(xi)PACAP誘導性cAMP産生を阻害、遮断、または防止すること;ならびに/あるいは
(xii)対象に投与された場合に、PACAP誘導性血管拡張を減少させること
のうちの少なくとも1つまたは複数を含む、先行態様のいずれかに記載のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗体断片。
[態様10]血管拡張、肥満細胞脱顆粒、及び/またはニューロン活性化の増大と関連する急性、一時性、または慢性状態を有するヒト対象を処置するために適した、先行態様のいずれかに記載のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗体断片。
[態様11]ヒトPACAP上で、Ab10またはAb20から選択される抗PACAP抗体と同じか、または重複する線状または立体構造エピトープ(複数可)に特異的に結合し、かつ/または同じ線状または立体構造エピトープ(複数可)への結合について競合する、先行態様のいずれかに記載のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
[態様12]前記抗体が結合するエピトープが、例えば、実施例12において開示されているとおりのアラニン走査によって同定される、先行態様のいずれかに記載のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
[態様13]Ab10またはAb20から選択される抗PACAP抗体の少なくとも2つ、少なくとも3つ、少なくとも4つ、または少なくとも5つの相補性決定領域(「CDR」)、好ましくはVHCDR3及びVLCDR3を含む、ヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
[態様14]Ab10またはAb20から選択される抗PACAP抗体の6つすべてのCDRを含む、態様13に記載のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
[態様15]結合親和性または免疫原性を推定上で変更する1つまたは複数の修飾を含有する上述のいずれかの配列変異体を含む、先行態様のいずれかに記載のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
[態様16](a)配列番号404からなるCDR1配列;配列番号406からなるCDR2配列;及び配列番号408からなるCDR3配列を含む可変重鎖;ならびに/または
(b)配列番号424からなるCDR1配列;配列番号426からなるCDR2配列;及び配列番号428からなるCDR3配列を含む可変軽鎖を含み、
その際、任意選択で、前記抗体が、配列番号402に対して少なくとも80、85、90、95、96、97、98、もしくは99%配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖、及び/または配列番号422に対して少なくとも80、85、90、95、96、97、98、もしくは99%配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含むか;あるいは配列番号402のアミノ酸配列を有する可変重鎖、及び/または配列番号422のアミノ酸配列を有する可変軽鎖を含むか;あるいは配列番号401のアミノ酸配列を有する重鎖、及び/または配列番号421のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、態様1〜15のいずれかに記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
[態様17](a)配列番号444からなるCDR1配列;配列番号446からなるCDR2配列;及び配列番号448からなるCDR3配列を含む可変重鎖;ならびに/または
(b)配列番号464からなるCDR1配列;配列番号466からなるCDR2配列;及び配列番号468からなるCDR3配列を含む可変軽鎖を含み、
その際、任意選択で、前記抗体が、配列番号442に対して少なくとも80、85、90、95、96、97、98、もしくは99%配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖、及び/または配列番号462に対して少なくとも80、85、90、95、96、97、98、もしくは99%配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖;あるいは配列番号442のアミノ酸配列を有する可変重鎖、及び/または配列番号462のアミノ酸配列を有する可変軽鎖;あるいは配列番号441のアミノ酸配列を有する重鎖、及び/または配列番号461のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、態様1〜15のいずれかに記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
[態様18]scFvs、キャメルボディ、ナノボディ、免疫グロブリン新規抗原受容体(Immunoglobulin New Antigen Receptor、「IgNAR」)、抗原結合性断片(「Fab」)断片、Fab’断片、MetMab様抗体、一価抗原結合性断片、及びF(ab’)2断片からなる群から選択される、態様1〜15のいずれかに記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
[態様19]N−グリコシル化及び/またはO−グリコシル化を実質的に、または完全に欠いている、先行態様のいずれかに記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
[態様20]ヒト定常ドメインを含み、任意選択で、前記抗体がIgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4抗体である、先行態様のいずれかに記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
[態様21]エフェクター機能、半減期、タンパク質分解、またはグリコシル化の少なくとも1つを変更するように修飾されているFc領域を含み、任意選択で、前記Fc領域が、N−及び/またはO−グリコシル化を変更または除去する1つまたは複数の変異を含有する、先行態様のいずれかに記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
[態様22]例えば、ELISA、バイオレイヤー干渉法(「BLI」)、KINEXA、または表面プラスモン共鳴によって25℃または37℃で決定された場合に、5×10−5M、10−5M、5×10−6M、10−6M、5×10−7M、10−7M、5×10−8M、10−8M、5×10−9M、10−9M、5×10−10M、10−10M、5×10−11M、10−11M、5×10−12M、10−12M、5×10−13M、または10−13M以下の結合親和性(KD)で、PACAPに結合する、先行態様のいずれかに記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
[態様23]5×10−10M、10−10M、5×10−11M、10−11M、5×10−12M、または10−12M以下の結合親和性(KD)でPACAPに結合する、先行態様のいずれかに記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
[態様24]5×10−4s−1、10−4s−1、5×10−5s−1、または10−5s−1以下のオフ速度(koff)でPACAPに結合する、先行態様のいずれかに記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
[態様25]検出可能な標識または治療薬に直接的または間接的に付着されている、先行態様のいずれかに記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
[態様26](a)対象に投与された場合に、PACAPによって誘発される少なくとも1つの生物学的作用を阻害または中和するか;(b)PACAP27及び/またはPACAP38に結合し、かつPAC1−R、VPAC1−R及び/またはVPAC2−RへのPACAP27及び/またはPACAP38結合を遮断するか;(c)PACAP27及び/またはPACAP38に結合し、かつPAC1−R、VPAC1−R、及びVPAC2−RのそれぞれへのPACAP27及び/またはPACAP38結合を遮断するか;または(d)PACAP27及び/またはPACAP38に結合し、かつPAC1−R発現細胞、VPAC1−R発現細胞、及び/またはVPAC2−R発現細胞へのPACAP27及び/またはPACAP38結合を遮断する、先行態様のいずれかに記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
[態様27](a)PAC1−R、VPAC1−R、またはVPAC2−Rの少なくとも1つのPACAP活性化を中和または阻害するか;(b)PAC1−R、VPAC1−R、及びVPAC2−RのそれぞれのPACAP活性化を中和または阻害するか;(c)PAC1−RのPACAP活性化を中和または阻害するか;(d)PAC1−R、VPAC1−R、またはVPAC2−Rの少なくとも1つへのPACAP結合を阻害することができるか;(e)PAC1−R、VPAC1−R、及びVPAC2−RのそれぞれへのPACAP結合を阻害することができるか;または(f)PAC1−R発現細胞、VPAC1−R発現細胞、及び/またはVPAC2−R発現細胞へのPACAP結合を阻害することができる、先行態様のいずれかに記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
[態様28](a)PACAP誘導性cAMP産生を阻害するか;または(b)PACAP誘導性血管拡張、肥満細胞脱顆粒、及び/またはニューロン活性化を減少させる、先行態様のいずれかに記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
[態様29](a)約100nM未満、(b)約40nM未満、(c)約100pM未満、(d)約50pM未満、(e)約25pM未満、または(f)約10pM〜約100pMであるKDで、PACAPに結合する、先行態様のいずれかに記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
[態様30](a)VIPと比較するとPACAPについてより強い親和性を有し、かつ/またはVIPに結合しないか;または(b)PACAPに対する前記抗体または抗原結合性断片の親和性が、VIPに対する前記抗体または抗原結合性断片の親和性よりも少なくとも10倍、30倍、100倍、300倍、1000倍、3000倍、10000倍、30000倍、100000倍、300000倍、1000000倍、3000000倍、10000000倍、30000000倍、またはそれ以上強い、先行態様のいずれかに記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
[態様31]少なくとも1つのエフェクター部分、化学的リンカー、検出可能な部分(蛍光色素、酵素、基質、生物発光材料、放射性材料、化学発光部分、またはそれらの混合物など)、または機能性部分に付着されている、先行態様のいずれかに記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
[態様32]それらが結合する抗PACAP抗体の1つまたは複数の生物学的作用を任意選択で中和する、先行態様のいずれかに記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片に対して産生される抗イディオタイプ抗体。
[態様33]対象において前記抗PACAP抗体または抗原結合性断片のin vivoレベルをモニターするか、または対象において前記抗PACAP抗体のin vivo作用を中和するために、態様32に記載の抗イディオタイプ抗体を使用する方法。
[態様34]治療、予防、または診断有効量の少なくとも1種の態様1〜32のいずれかに記載の抗PACAP抗体もしくは抗原結合性断片または抗イディオタイプ抗体を含む、治療、予防、または診断用途に適した組成物。
[態様35](a)注射、局所、経口、吸入、もしくは経皮での;または(b)皮下、静脈内、筋肉内、髄腔内、頬側内、膣内、経皮、腹腔内、もしくは肛門での投与に適している、態様34に記載の組成物。
[態様36]皮下投与に適しているか、または静脈内投与に適している、態様34に記載の組成物。
[態様37]薬学的に許容される希釈剤、担体、溶解補助剤、乳化剤、防腐剤、またはそれらの混合物をさらに含む、態様34〜37のいずれかに記載の組成物。
[態様38]別の活性薬剤、例えば、化学療法薬、鎮痛薬、抗炎症薬、免疫抑制薬、サイトカイン、抗増殖薬、制吐薬、または細胞毒素をさらに含む、態様34〜38のいずれかに記載の組成物。
[態様39]注射による投与のために凍結乾燥、安定化、及び/または製剤化されている、態様34〜38のいずれかに記載の組成物。
[態様40]態様1〜32のいずれかに記載の抗PACAP抗体もしくは抗原結合性断片または抗イディオタイプをコードする単離核酸配列または核酸配列。
[態様41]態様40に記載の1つまたは複数の単離核酸配列を含有する、1種または複数種のベクター。
[態様42]態様40に記載の1つまたは複数の単離核酸配列、または態様41に記載の1種または複数種のベクターを含む、宿主細胞。
[態様43]哺乳類、細菌、真菌、酵母、鳥類、両生類、植物、または昆虫細胞、例えば、糸状真菌または酵母であるか、または哺乳類細胞、任意選択で、PichiaまたはCHO細胞である、態様42に記載の宿主細胞。
[態様44]態様42〜43のいずれかに記載の宿主細胞を培養すること、または態様40に記載の核酸を、前記抗体または抗原結合性断片の発現をもたらす条件下で発現することを含む、抗PACAP抗体または抗原結合性断片を発現する方法。
[態様45]前記宿主細胞が、前記培養培地に、前記抗体または抗原結合性断片を安定発現及び分泌する酵母またはCHO細胞である、態様44に記載の方法。
[態様46]対象において、PACAPと関連する1つまたは複数の生物学的作用を遮断、阻害、遮断、または中和する方法であって、前記対象に、ヒトPACAPと関連する少なくとも1つの生物学的作用と拮抗するか、それらを阻害、中和、または遮断する治療または予防有効量のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗体断片を投与することを含む前記方法。
[態様47]対象において、下垂体アデニル酸シクラーゼ−活性化ポリペプチド(「PACAP」)と関連する1つまたは複数の生物学的作用を遮断、阻害、または中和する方法であって、対象に、ヒトPACAPと関連する少なくとも1つの生物学的作用と拮抗するか、それらを阻害、中和、または遮断し、かつ血管作動性腸管ペプチド(「VIP」)と実質的に相互作用しない(結合しない)治療または予防有効量のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗体断片を投与することを含む前記方法。
[態様48]対象において、下垂体アデニル酸シクラーゼ−活性化ポリペプチド(「PACAP」)と関連する1つまたは複数の生物学的作用、例えば、血管運動作用を遮断、阻害、遮断、または中和する方法であって、対象に、下記:
(a)PACAPによって誘発される少なくとも1つの生物学的作用を阻害、遮断、または中和すること;
(b)PAC1受容体(「PAC1−R」)、血管作動性腸管ペプチド受容体1型(「VPAC1−R」)、及び/または血管作動性腸管ペプチド受容体2型(「VPAC2−R」)の少なくとも1つのPACAP活性化を中和または阻害すること;
(c)PAC1−R、VPAC1−R、及びVPAC2−RのそれぞれのPACAP活性化を阻害、遮断、または中和すること;(d)PAC1−RのPACAP活性化を中和または阻害すること;
(d)PAC1−R、VPAC1−R、及び/またはVPAC2−Rの少なくとも1つへのPACAP結合を阻害することができること;
(e)PAC1−R、VPAC1−R、及び/またはVPAC2−RのそれぞれへのPACAP結合を阻害することができること;
(f)PAC1−R発現細胞へのPACAP結合を阻害することができること;
(g)VPAC1−R及び/またはVPAC2−R発現細胞へのPACAP結合を阻害することができること;
(h)例えばグリコサミノグリカン(「GAG」)を介しての細胞表面へのPACAP結合を阻害すること;
(i)例えばGAGを介しての細胞表面へのそのような抗体のPACAP媒介性結合を阻害すること;
(j)PACAP誘導性環状アデノシン一リン酸(「cAMP」)産生を阻害すること;ならびに/あるいは
(k)前記対象に投与された場合に、PACAP誘導性血管拡張、肥満細胞脱顆粒、及び/またはニューロン活性化を減少させること
の1つまたは複数を含む治療または予防有効量のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗体断片を投与することを含む前記方法。
[態様49]対象において、下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド(「PACAP」)と関連するか、またはそれによって誘発される血管拡張、例えば、硬膜動脈の血管拡張を遮断、阻害、または中和する方法であって、対象に、PACAPと関連するか、またはそれによって誘発される血管拡張を遮断、阻害、または中和する治療または予防有効量のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗体断片を投与することを含む前記方法。
[態様50]対象において、頭痛または片頭痛の発症、頻度、重症度、または期間を処置または予防する方法であって、それを必要とする対象に、次の作用:
(a)PACAPによって誘発される少なくとも1つの生物学的作用を阻害または中和すること;
(b)PAC1受容体(「PAC1−R」)、血管作動性腸管ペプチド受容体1型(「VPAC1−R」)、及び/または血管作動性腸管ペプチド受容体2型(「VPAC2−R」)の少なくとも1つのPACAP活性化を中和または阻害すること;
(c)PAC1−R、VPAC1−R、及びVPAC2−RのそれぞれのPACAP活性化を中和または阻害すること;
(d)PAC1−RのPACAP活性化を中和または阻害すること;(e)PAC1−R、VPAC1−R、及び/またはVPAC2−Rの少なくとも1つへのPACAP結合を阻害することができること;(f)PAC1−R、VPAC1−R、及び/またはVPAC2−RのそれぞれへのPACAP結合を阻害することができること;
(e)PAC1−R発現細胞へのPACAP結合を阻害することができること;
(f)VPAC1−R及び/またはVPAC2−R発現細胞へのPACAP結合を阻害することができること;
(g)例えばグリコサミノグリカン(「GAG」)を介しての細胞表面へのPACAP結合を阻害すること;
(h)例えばGAGを介しての細胞表面へのそのような抗体のPACAP媒介性結合を阻害すること;
(i)PACAP誘導性環状アデノシン一リン酸(「cAMP」)産生を阻害すること;ならびに/あるいは
(j)前記対象に投与された場合に、PACAP誘導性血管拡張、肥満細胞脱顆粒、及び/またはニューロン活性化を減少させること
の1つまたは複数を誘発する有効量のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗ヒト下垂体アデニル酸シクラーゼ−活性化ポリペプチド(「PACAP」)抗体または抗体断片を投与することを含む前記方法。
[態様51]前記頭痛または片頭痛が、前兆を伴う片頭痛、前兆を伴わない片頭痛、片麻痺性片頭痛、群発性頭痛、片頭痛性神経痛、慢性頭痛、慢性片頭痛、薬物乱用頭痛、及び緊張性頭痛から選択される、態様50に記載の方法。
[態様52]血管拡張、肥満細胞脱顆粒、及びニューロン活性化の増大の少なくとも1つまたは上述のいずれかの組合せと関連する急性、一時性、または慢性状態を有するヒト対象を処置する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の拮抗性ヒト、ヒト化、またはキメラ化抗ヒト下垂体アデニル酸シクラーゼ−活性化ポリペプチド(「PACAP」)抗体または抗体断片を投与することを含む前記方法。
[態様53]対象において、下垂体アデニル酸シクラーゼ−活性化ポリペプチド(「PACAP」)と関連する1つまたは複数の生物学的作用を遮断、阻害、または中和する方法であって、それを必要とする対象に、ヒトPACAPと関連する少なくとも1つの生物学的作用と拮抗するか、それらを阻害、中和、または遮断する有効量のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗原結合性断片を投与することを含む前記方法。
[態様54]対象において、下垂体アデニル酸シクラーゼ−活性化ポリペプチド(「PACAP」)と関連する1つまたは複数の生物学的作用を遮断、阻害、または中和する方法であって、それを必要とする対象に、ヒトPACAPと関連する少なくとも1つの生物学的作用と拮抗するか、それらを阻害、中和、または遮断し、かつ血管作動性腸管ペプチド(「VIP」)と実質的に相互作用しない(結合しない)有効量のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗原結合性断片を投与することを含む前記方法。
[態様55]対象において、下垂体アデニル酸シクラーゼ−活性化ポリペプチド(「PACAP」)と関連する1つまたは複数の生物学的作用を遮断、阻害、または中和する方法であって、それを必要とする対象に、(a)PACAPによって誘発される少なくとも1つの生物学的作用を阻害または中和し;(b)PAC1受容体(「PAC1−R」)、血管作動性腸管ペプチド受容体1型(「VPAC1−R」)、及び/または血管作動性腸管ペプチド受容体2型(「VPAC2−R」)の少なくとも1つのPACAP活性化を中和または阻害し;(c)PAC1−R、VPAC1−R、及びVPAC2−RのそれぞれのPACAP活性化を中和または阻害し;(d)PAC1−RのPACAP活性化を中和または阻害し;(e)PAC1−R、VPAC1−R、及び/またはVPAC2−Rの少なくとも1つへのPACAP結合を阻害することができ;(f)PAC1−R、VPAC1−R、及び/またはVPAC2−RのそれぞれへのPACAP結合を阻害することができ;(g)PAC1−R発現細胞へのPACAP結合を阻害することができ;(h)例えばグリコサミノグリカン(「GAG」)を介しての細胞表面へのPACAP結合を阻害することができ;(i)例えばGAGを介しての細胞表面へのそのような抗体のPACAP媒介性結合を阻害し;(j)PACAP誘導性環状アデノシン一リン酸(「cAMP」)産生を阻害し;ならびに/あるいは(k)前記対象に投与された場合に、PACAP誘導性血管拡張、肥満細胞脱顆粒、及び/またはニューロン活性化を減少させる有効量のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗原結合性断片を投与することを含む前記方法。
[態様56]対象において、頭痛または片頭痛の発症、頻度、重症度、または期間を処置または予防する方法であって、それを必要とする対象に、(a)PACAPによって誘発される少なくとも1つの生物学的作用を阻害または中和し;(b)PAC1受容体(「PAC1−R」)、血管作動性腸管ペプチド受容体1型(「VPAC1−R」)、及び/または血管作動性腸管ペプチド受容体2型(「VPAC2−R」)の少なくとも1つのPACAP活性化を中和または阻害し;(c)PAC1−R、VPAC1−R、及びVPAC2−RのそれぞれのPACAP活性化を中和または阻害し;(d)PAC1−RのPACAP活性化を中和または阻害し;(e)PAC1−R、VPAC1−R、及び/またはVPAC2−Rの少なくとも1つへのPACAP結合を阻害することができ;(f)PAC1−R、VPAC1−R、及び/またはVPAC2−RのそれぞれへのPACAP結合を阻害することができ;(g)PAC1−R発現細胞へのPACAP結合を阻害することができ;(h)おそらくグリコサミノグリカン(「GAG」)を介しての細胞表面へのPACAP結合を阻害することができ;(i)例えばGAGを介しての細胞表面へのそのような抗体のPACAP媒介性結合を阻害し;(j)PACAP誘導性環状アデノシン一リン酸(「cAMP」)産生を阻害し;ならびに/あるいは(k)前記対象に投与された場合に、PACAP誘導性血管拡張、肥満細胞脱顆粒、及び/またはニューロン活性化を減少させる有効量のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗原結合性断片を投与することを含む前記方法。
[態様57]前記頭痛または片頭痛が、前兆を伴う片頭痛、前兆を伴わない片頭痛、片麻痺性片頭痛、群発性頭痛、片頭痛性神経痛、慢性頭痛、慢性片頭痛、薬物乱用頭痛、及び緊張性頭痛からなる群から選択される、態様56に記載の方法。[態様58]血管拡張、肥満細胞脱顆粒、及びニューロン活性化の増大の少なくとも1つまたは上記のいずれかの組合せと関連する急性、一時性または慢性状態を有し得るヒト対象を処置する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の拮抗性ヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗ヒト下垂体アデニル酸シクラーゼ−活性化ポリペプチド(「PACAP」)抗体または抗原結合性断片を投与することを含む前記方法。
[態様59]態様1〜31のいずれかに記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片の投与を包含する、態様46〜58のいずれかに記載の方法。
[態様60]前記抗PACAP抗体または抗原結合性断片が、PACAP27及び/またはPACAP38に結合し、かつPAC1−R、VPAC1−R、及び/またはVPAC2−RへのPACAP27及び/またはPACAP38結合を遮断する、態様46〜59のいずれかに記載の方法。
[態様61]前記抗PACAP抗体または抗原結合性断片が、PACAP27及び/またはPACAP38に結合し、かつPAC1−R、VPAC1−R、及びVPAC2−RのそれぞれへのPACAP27及び/またはPACAP38結合を遮断する、態様46〜59のいずれかに記載の方法。
[態様62]前記抗PACAP抗体または抗原結合性断片が、PACAP27及び/またはPACAP38に結合し、かつPAC1−R発現細胞へのPACAP27及び/またはPACAP38結合を遮断する、態様46〜59のいずれかに記載の方法。
[態様63]PACAPへの前記抗体または抗原結合性断片の親和性が、VIPへの前記抗体または抗体断片の親和性よりも少なくとも10倍、30倍、100倍、300倍、1000倍、3000倍、10000倍、30000倍、100000倍、300000倍、1000000倍、3000000倍、10000000倍、30000000倍、またはそれ以上強い、態様46〜62のいずれかに記載の方法。
[態様64]前記対象が、(a)前兆を伴う片頭痛、前兆を伴わない片頭痛、片麻痺性片頭痛、群発性頭痛、片頭痛性神経痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、全体頭痛、ホットフラッシュ、慢性発作性片頭痛、頭部における潜在的構造問題による二次性頭痛、頸部における潜在的構造問題による二次性頭痛、脳神経痛、副鼻洞性頭痛、副鼻腔炎と関連する頭痛、アレルギー誘導性頭痛、アレルギー誘導性片頭痛、三叉神経痛、帯状疱疹後神経痛、幻想肢痛、線維筋痛症、反射性交感神経性ジストロフィー、疼痛、慢性疼痛、炎症性疼痛、術後切開疼痛、手術後疼痛、外傷関連疼痛、下背部痛、眼疼痛、歯痛、複合性局所疼痛症候群、癌性疼痛、原発性または転移性骨癌性疼痛、骨折痛、骨粗鬆症骨折痛、火傷から生じる疼痛、通風性関節痛、鎌状赤血球発症と関連する疼痛、側頭下顎障害と関連する疼痛、硬変、肝炎、神経原性疼痛、神経障害性疼痛、侵害受容性疼痛、内臓疼痛、月経痛、卵巣痛、変形性関節症疼痛、関節リウマチ疼痛、糖尿病性神経障害、坐骨神経痛、消化不良、過敏性腸症候群、炎症性腸疾患、クローン病、回腸炎、潰瘍性大腸炎、腎仙痛、月経困難、膀胱炎、間質性膀胱炎、月経期、分娩、閉経期、膵臓炎、統合失調症、うつ病、心的外傷後ストレス障害(「PTSD」)、不安障害、自己免疫性糖尿病、シェーグレン症候群、多発性硬化症、過活動性膀胱、気管支反応亢進、喘息、卒中、気管支炎、気管支拡張、気腫、慢性閉塞性肺疾患(「COPD」)、炎症性皮膚炎、腺組織における腺癌、臓器の胚組織における芽細胞腫、上皮組織における癌腫、血液細胞を形成する組織における白血病、リンパ組織におけるリンパ腫、骨髄における骨髄腫、結合または支持組織における肉腫、副腎癌、AIDS関連リンパ腫、貧血、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、類癌腫、子宮頸癌、化学療法、結腸癌、血球減少症、子宮内膜癌、食道癌、胃癌、頭部癌、頸部癌、肝胆道癌、腎臓癌、白血病、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキン病、神経系腫瘍、口腔癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌、尿道癌、骨髄の癌、多発性骨髄腫、骨に転移する腫瘍、神経及び中空臓器を浸潤する腫瘍、神経構造付近の腫瘍、尋常性ざそう、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、ケロイド、肥厚性瘢痕及び酒さ、内皮機能不全、レイノー症候群、冠動脈性心疾患(「CHD」)、冠動脈疾患(「CAD」)、心不全、末梢動脈疾患(「PAD」)、糖尿病、肺高血圧(「PH」)、結合組織障害、アレルギー性皮膚炎、乾癬、そう痒症、神経原性皮膚発赤、紅斑、サルコイドーシス、ショック、敗血症、オピエート離脱症候群、モルヒネ耐性、及びてんかんからなる群から選択される状態;(b)色盲、無虹彩、抗コリン作動薬に起因する羞明、無水晶体症、牛眼症、白内障、錐体ジストロフィー、眼の先天異常、ウイルス性結膜炎、角膜擦傷、角膜ジストロフィー、角膜潰瘍、角膜上皮細胞の破壊、水晶体転位症、眼内炎、疾患に起因する眼外傷、損傷に起因する眼外傷、感染に起因する眼外傷、霰粒腫、上強膜炎、緑内障、円錐角膜、視神経形成不全、小眼、先天性緑内障虹彩炎、視神経炎、色素拡散症候群、瞳孔散大、網膜剥離、角膜の瘢痕化、強膜及びブドウ膜炎からなる群から選択され得る羞明と関連する眼障害;(c)自閉症スペクトラム障害、キアリ形成異常、失読症、脳炎、髄膜炎、クモ膜下出血、後頭頭蓋の腫瘍、強直性脊椎炎、白色症、リボフラビン欠乏症、ベンゾジアゼピン、化学療法、チクングニア、シスチン症、エーレルス−ダンロー症候群、二日酔い、インフルエンザ、感染性単核細胞症、マグネシウム欠乏、水銀中毒、片頭痛、狂犬病、及びチロシン血症II型からなる群から選択される羞明と関連する神経系関連または神経状態;あるいは(d)前兆を伴う片頭痛、前兆を伴わない片頭痛、虹彩炎、ブドウ膜炎、髄膜炎、うつ病、双極性障害、群発性頭痛もしくは別の三叉神経・自律神経性頭痛(「TAC」)または眼瞼痙攣、うつ病、広場恐怖症及び双極性障害からなる群から選択される羞明関連障害を有する、態様46〜63のいずれかに記載の方法。
[態様65]前記対象が、片頭痛、頭痛、ならびに疼痛関連疾患または状態からなる群から選択される状態を有する、態様46〜63のいずれかに記載の方法。
[態様66]前記頭痛または片頭痛が、前兆を伴う片頭痛、前兆を伴わない片頭痛、片麻痺性片頭痛、群発性頭痛、片頭痛性神経痛、慢性頭痛、慢性片頭痛、薬物乱用頭痛、及び緊張性頭痛からなる群から選択される、態様65に記載の方法。
[態様67]前記抗体が、任意選択で態様1〜31のいずれかに記載のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗原結合性断片である、態様46〜66のいずれかに記載の方法。
[態様68]前記投与抗体が結合するエピトープが、アラニン走査によって同定される、態様46〜67のいずれかに記載の方法。
[態様69]前記抗PACAP抗体または抗原結合性断片が、Ab10またはAb20から選択される抗PACAP抗体の同じCDRを含む、態様67に記載の方法。
[態様70](a)化学療法薬、鎮痛薬、抗炎症薬、免疫抑制薬、サイトカイン、抗増殖薬、制吐薬、または細胞毒素;(b)鎮痛薬;(c)非ステロイド系抗炎症薬(「NSAID」)、オピオイド鎮痛薬、別の抗体または非抗体生物薬、任意選択で、抗NGF抗体または抗原結合性断片;あるいは(d)シクロオキシゲナーゼ1及び/またはシクロオキシゲナーゼ2阻害薬から選択されるNSAIDなどの別の薬剤を別々に投与すること、または同時投与することをさらに含む、態様46〜69のいずれかに記載の方法。
[態様71]前記他の薬剤が、抗カルシトニン遺伝子関連ペプチド(「CGRP」)抗体もしくは抗体断片及び/または抗CGRP受容体抗体もしくは抗体断片である、態様70に記載の方法。
[態様72]前記他の薬剤が、(a)(1)イブプロフェン、ナプロキセン、ナプロシン、ジクロフェナク、及びケトプロフェンを包含するプロピオン酸誘導体;(2)トルメチン及びスリンダクを包含する酢酸誘導体;(3)メフェナム酸及びメクロフェナム酸を包含するフェナム酸誘導体;(4)ジフルニサル及びフルフェニサルを包含するビフェニルカルボン酸誘導体;ならびに(5)ピロキシム、スドキシカム、及びイソキシカムを包含するオキシカムからなる群から選択されるNSAID;(b)コデイン、ジヒドロコデイン、ジアセチルモルヒネ、ヒドロコドン、ヒドロモルホン、レボルファノール、オキシモルホン、アルフェンタニル、ブプレノルフィン、ブトルファノール、フェンタニール、スフェンタニル、メペリジン、メタドン、ナルブフィン、プロポキシフェン、ペンタゾシン、及びそれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択されるオピオイド鎮痛薬;(c)モルヒネもしくはモルヒネ誘導体またはそれらの薬学的に許容される塩である、態様70に記載の方法。
[態様73]前記オピオイド鎮痛薬及び前記抗PACAP抗体または抗原結合性断片の組合せ投与が、単独で投与される前記オピオイド鎮痛薬または前記抗PACAP抗体もしくは抗原結合性断片のいずれかと比較して、鎮痛効果を増大させる、態様72に記載の方法。
[態様74]前記対象が、抗CGRP抗体もしくは抗体断片及び/または抗CGRP受容体抗体もしくは抗体断片を以前に受けたことがあり、かつ任意選択で、前記対象が、抗CGRP抗体及び/または抗CGRP受容体抗体または抗体断片処置に十分に応答しなかった片頭痛患者であるか、または前記対象が、前記抗CGRP抗体もしくは抗体断片及び/または前記抗CGRP受容体抗体もしくは抗体断片に対する免疫応答を誘発したことがある、態様46〜73のいずれかに記載の方法。
[態様75]血管拡張、cAMP産生、PLCに対するPACAPの作用を阻害して、Ca++及びPLDレベルまたはアデニル酸シクラーゼ活性を低下させる、先行態様のいずれかに記載の抗PACAP抗体もしくは抗体断片または方法。
[態様76]PAC1−R、VPAC1−R、またはVPAC2−Rのいずれかまたはすべてへのその結合に対する、PACAPの作用を阻害する、先行態様のいずれかに記載の抗PACAP抗体もしくは抗体断片または方法。
[態様77]神経発生、神経保護、神経調節、神経原性炎症、または侵害受容に対するPACAPの作用を阻害する、先行態様のいずれかに記載の抗PACAP抗体もしくは抗体断片または方法。
[態様78]例えば、少なくとも1つのグリコサミノグリカン(「GAG」)、例えばヘパリン、コンドロイチン、ケラチン、及びヒアルロン酸との相互作用を介しての、細胞表面とのPACAPの相互作用を調節する、先行態様のいずれかに記載の抗PACAP抗体もしくは抗体断片または方法。
[態様79]PACAP38及び/またはPACAP27の受容体非依存性細胞取り込みを遮断または阻害する、態様78に記載の抗体または抗体断片。
[態様80]細胞によるPACAP38及び/またはPACAP27のGAG依存性取り込みを阻害または遮断する、態様78〜79のいずれかに記載の抗体または抗体断片。
[態様81]先行態様のいずれかに記載の抗PACAP抗体または抗体断片の投与を含む、治療または予防方法。
[態様82]先行態様のいずれかに記載の抗PACAP抗体または抗体断片を含有する、ヒト治療において使用するための組成物。
[態様83]別の活性薬剤、例えば、(a)化学療法薬、鎮痛薬、抗炎症薬、免疫抑制薬、サイトカイン、抗増殖薬、制吐薬、または細胞毒素;(b)鎮痛薬;(c)非ステロイド系抗炎症薬(「NSAID」)、オピオイド鎮痛薬、別の抗体または非抗体生物薬;(d)抗NGF抗体または抗体断片;(e)抗カルシトニン遺伝子関連ペプチド(「CGRP」)抗体もしくは抗体断片及び/または抗CGRP受容体抗体もしくは抗体断片;(f)シクロオキシゲナーゼ1及び/またはシクロオキシゲナーゼ2阻害薬から選択されるNSAID;(g)(1)イブプロフェン、ナプロキセン、ナプロシン、ジクロフェナク、及びケトプロフェンを包含するプロピオン酸誘導体;(2)トルメチン及びスリンダクを包含する酢酸誘導体;(3)メフェナム酸及びメクロフェナム酸を包含するフェナム酸誘導体;(4)ジフルニサル及びフルフェニサルを包含するビフェニルカルボン酸誘導体;ならびに(5)ピロキシム、スドキシカム、及びイソキシカムを包含するオキシカムからなる群から選択されるNSAID;(h)コデイン、ジヒドロコデイン、ジアセチルモルヒネ、ヒドロコドン、ヒドロモルホン、レボルファノール、オキシモルホン、アルフェンタニル、ブプレノルフィン、ブトルファノール、フェンタニール、スフェンタニル、メペリジン、メタドン、ナルブフィン、プロポキシフェン、ペンタゾシン、及びそれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択されるオピオイド鎮痛薬;あるいは(i)モルヒネもしくはモルヒネ誘導体またはそれらの薬学的に許容される塩を含有する、態様82に記載の組成物。
[態様84]前記オピオイド鎮痛薬及び前記抗PACAP抗体または抗原結合性断片が、単独で投与される前記オピオイド鎮痛薬または前記抗PACAP抗体もしくは抗原結合性断片のいずれかと比較して、鎮痛効果を増大させる、態様83に記載の組成物。
[態様85]一緒に組み合わされているか、または組み合わせて投与される前記抗PACAP抗体または断片及び別の活性薬剤が、PACAP関連作用、例えば、片頭痛の処置もしくは予防に対して、または疼痛に対して相乗または相加効果を誘発する、先行態様のいずれかに記載の抗PACAP抗体もしくは断片またはそれらを含有する組成物。
[態様86]治療または診断、例えば、片頭痛の処置または予防における、先行態様のいずれかに記載の抗PACAP抗体もしくは断片または組成物の使用。
[態様87]ホットフラッシュ、前兆を伴う、もしくは伴わない片頭痛、片麻痺性片頭痛、群発性頭痛、片頭痛性神経痛、慢性頭痛、慢性片頭痛、薬物乱用頭痛、または緊張性頭痛の1つまたは複数の処置における、先行態様のいずれかに記載の抗PACAP抗体もしくは断片または組成物の使用。
[態様88]頭痛、例えば、前兆を伴う、もしくは伴わない片頭痛、片麻痺性片頭痛、群発性頭痛、片頭痛性神経痛、慢性頭痛、慢性片頭痛、薬物乱用頭痛、または緊張性頭痛の寛解、制御、その発生率の低下、またはその発生もしくは進行の遅延における、先行態様のいずれかに記載の抗PACAP抗体もしくは断片または組成物の使用。
[態様89]抗CGRP抗体もしくは抗体断片及び/または抗CGRP受容体抗体もしくは抗体断片を以前に受けたことがあるか、または受けている対象において使用するためであり、任意選択で、前記対象が、抗CGRP抗体もしくは抗体断片及び/または抗CGRP受容体抗体もしくは抗体断片処置に十分には応答しなかった片頭痛患者であるか、または前記対象が、少なくとも1種の抗CGRP抗体もしくは抗体断片及び/または抗CGRP受容体抗体もしくは抗体断片投与を以前に受けたことがあり、かつ前記抗CGRP抗体もしくは抗体断片及び/または抗CGRP受容体抗体もしくは抗体断片に対する免疫応答を誘発したことがある、態様88に記載の使用。
Claims (89)
- ヒトPACAPと関連する少なくとも1つの生物学的作用と拮抗するか、それらを阻害、中和、または遮断する、ヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗ヒト下垂体アデニル酸シクラーゼ−活性化ポリペプチド(「PACAP」)抗体または抗体断片。
- ヒトPACAPへの結合について、Ab10及びAb20からなる群から選択される抗体、または上述のいずれか1つの抗原結合性断片と特異的に競合する、ヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗体断片。
- Ab10及びAb20からなる群から選択される抗PACAP抗体、または上述のいずれか1つの抗原結合性断片が結合する少なくとも1つの線状または配座異性エピトープに特異的に結合する、ヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗体断片。
- Ab10及びAb20のいずれか1つ、または上述のいずれか1つの抗原結合性断片と同一のエピトープに結合する、先行請求項のいずれかに記載のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗体断片。
- ヒトPACAPまたは対応するアミノ酸残基を含有するその断片もしくは変異体上のエピトープに特異的に結合し、その際、前記エピトープが、下記:
(i)ヒトPACAPの残基19、22、23、及び27のうちの少なくとも1個;
(ii)ヒトPACAPの残基19、22、23、24、及び27のうちの少なくとも1個;
(iii)(i)〜(ii)のいずれか1つの残基のうちの少なくとも2個;
(iv)(i)〜(ii)のいずれか1つの残基のうちの少なくとも3個;
(v)(i)〜(ii)のいずれか1つの残基のうちの少なくとも4個;
(vi)(ii)の5個すべての残基
からなる群から選択される、先行請求項のいずれかに記載のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗体断片。 - (a)ヒトPACAPの残基19、22、23、及び27のうちの1個または複数個を包含する対応するアミノ酸残基を含有するか;あるいは(b)請求項5において記述したとおりの残基(i)または(ii)を含有するヒトPACAP上のエピトープ、またはそれらの断片もしくは変異体;(c)ヒト野生型PACAP38及びヒト野生型ヒトPACAP27において存在する、ヒトPACAP上のエピトープ、または対応するアミノ酸残基を含有するそれらの断片もしくは変異体に特異的に結合する、先行請求項のいずれかに記載のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗体断片。
- ヒトPACAP上のエピトープ(または対応するアミノ酸残基を含有するその断片もし
くは変異体)に特異的に結合し、前記エピトープが、例えば実施例12において開示され
ているとおりのアラニン走査によって同定される、請求項3〜6の1項に記載のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗体断片。 - (a)ヒト血管作動性腸管ペプチド(「VIP」)に結合しないか、または感知できるほどには結合しないか;(b)ヒトVIPに対する前記抗体または抗体断片のKDよりも少なくとも10、100、1000、10,000、または100,000倍低い(強い)ヒトPACAPについてのKDを有するか;または(c)ヒトPACAPによって誘発される少なくとも1つの生物学的作用を阻害または中和する、先行請求項のいずれかに記載のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗体断片。
- 下記:
(i)PAC1受容体(「PAC1−R」)、血管作動性腸管ペプチド受容体1型(「VPAC1−R」)、及び/または血管作動性腸管ペプチド受容体2型(「VPAC2−R」)の少なくとも1つのPACAP活性化を阻害、遮断、または防止すること;
(ii)PAC1−R、VPAC1−R、及びVPAC2−RのそれぞれのPACAP活性化を阻害、遮断、または防止すること;
(iii)PAC1−RのPACAP活性化を阻害、遮断、または防止すること;
(iv)PAC1−R、VPAC1−R、及び/またはVPAC2−Rの少なくとも1つへのPACAP結合を阻害することができること;
(v)PAC1−R、VPAC1−R、及び/またはVPAC2−RのそれぞれへのPACAP結合を阻害することができること;
(vi)PAC1−R発現細胞へのPACAP結合を阻害することができること;
(vii)VPAC1−R発現細胞へのPACAP結合を阻害することができること;
(viii)VPAC2−R発現細胞へのPACAP結合を阻害することができること;(ix)例えばグリコサミノグリカン(「GAG」)を介しての細胞表面へのPACAP結合を阻害すること;
(x)例えばグリコサミノグリカン(「GAG」)を介しての細胞表面へのそのような抗体のPACAP媒介性結合を阻害すること;
(xi)PACAP誘導性cAMP産生を阻害、遮断、または防止すること;ならびに/あるいは
(xii)対象に投与された場合に、PACAP誘導性血管拡張を減少させること
のうちの少なくとも1つまたは複数を含む、先行請求項のいずれかに記載のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗体断片。 - 血管拡張、肥満細胞脱顆粒、及び/またはニューロン活性化の増大と関連する急性、一時性、または慢性状態を有するヒト対象を処置するために適した、先行請求項のいずれかに記載のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗体断片。
- ヒトPACAP上で、Ab10またはAb20から選択される抗PACAP抗体と同じか、または重複する線状または立体構造エピトープ(複数可)に特異的に結合し、かつ/または同じ線状または立体構造エピトープ(複数可)への結合について競合する、先行請求項のいずれか1項に記載のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
- 前記抗体が結合するエピトープが、例えば、実施例12において開示されているとおりのアラニン走査によって同定される、先行請求項のいずれか1項に記載のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
- Ab10またはAb20から選択される抗PACAP抗体の少なくとも2つ、少なくとも3つ、少なくとも4つ、または少なくとも5つの相補性決定領域(「CDR」)、好ましくはVHCDR3及びVLCDR3を含む、ヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
- Ab10またはAb20から選択される抗PACAP抗体の6つすべてのCDRを含む、請求項13に記載のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
- 結合親和性または免疫原性を推定上で変更する1つまたは複数の修飾を含有する上述のいずれかの配列変異体を含む、先行請求項のいずれかに記載のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
- (a)配列番号404からなるCDR1配列;配列番号406からなるCDR2配列;及び配列番号408からなるCDR3配列を含む可変重鎖;ならびに/または
(b)配列番号424からなるCDR1配列;配列番号426からなるCDR2配列;及び配列番号428からなるCDR3配列を含む可変軽鎖を含み、
その際、任意選択で、前記抗体が、配列番号402に対して少なくとも80、85、90、95、96、97、98、もしくは99%配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖、及び/または配列番号422に対して少なくとも80、85、90、95、96、97、98、もしくは99%配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含むか;あるいは配列番号402のアミノ酸配列を有する可変重鎖、及び/または配列番号422のアミノ酸配列を有する可変軽鎖を含むか;あるいは配列番号401のアミノ酸配列を有する重鎖、及び/または配列番号421のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、請求項1〜15のいずれか1項に記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。 - (a)配列番号444からなるCDR1配列;配列番号446からなるCDR2配列;及び配列番号448からなるCDR3配列を含む可変重鎖;ならびに/または
(b)配列番号464からなるCDR1配列;配列番号466からなるCDR2配列;及び配列番号468からなるCDR3配列を含む可変軽鎖を含み、
その際、任意選択で、前記抗体が、配列番号442に対して少なくとも80、85、90、95、96、97、98、もしくは99%配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖、及び/または配列番号462に対して少なくとも80、85、90、95、96、97、98、もしくは99%配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖;あるいは配列番号442のアミノ酸配列を有する可変重鎖、及び/または配列番号462のアミノ酸配列を有する可変軽鎖;あるいは配列番号441のアミノ酸配列を有する重鎖、及び/または配列番号461のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、請求項1〜15のいずれか1項に記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。 - scFvs、キャメルボディ、ナノボディ、免疫グロブリン新規抗原受容体(Immunoglobulin New Antigen Receptor、「IgNAR」)、抗原結合性断片(「Fab」)断片、Fab’断片、MetMab様抗体、一価抗原結合性断片、及びF(ab’)2断片からなる群から選択される、請求項1〜15のいずれか1項に記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
- N−グリコシル化及び/またはO−グリコシル化を実質的に、または完全に欠いている、先行請求項のいずれか1項に記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
- ヒト定常ドメインを含み、任意選択で、前記抗体がIgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4抗体である、先行請求項のいずれか1項に記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
- エフェクター機能、半減期、タンパク質分解、またはグリコシル化の少なくとも1つを変更するように修飾されているFc領域を含み、任意選択で、前記Fc領域が、N−及び/またはO−グリコシル化を変更または除去する1つまたは複数の変異を含有する、先行請求項のいずれか1項に記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
- 例えば、ELISA、バイオレイヤー干渉法(「BLI」)、KINEXA、または表面プラスモン共鳴によって25℃または37℃で決定された場合に、5×10−5M、10−5M、5×10−6M、10−6M、5×10−7M、10−7M、5×10−8M、10−8M、5×10−9M、10−9M、5×10−10M、10−10M、5×10−11M、10−11M、5×10−12M、10−12M、5×10−13M、また
は10−13M以下の結合親和性(KD)で、PACAPに結合する、先行請求項のいずれか1項に記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。 - 5×10−10M、10−10M、5×10−11M、10−11M、5×10−12M、または10−12M以下の結合親和性(KD)でPACAPに結合する、先行請求項のいずれか1項に記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
- 5×10−4s−1、10−4s−1、5×10−5s−1、または10−5s−1以下のオフ速度(koff)でPACAPに結合する、先行請求項のいずれか1項に記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
- 検出可能な標識または治療薬に直接的または間接的に付着されている、先行請求項のいずれか1項に記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
- (a)対象に投与された場合に、PACAPによって誘発される少なくとも1つの生物学的作用を阻害または中和するか;(b)PACAP27及び/またはPACAP38に結合し、かつPAC1−R、VPAC1−R及び/またはVPAC2−RへのPACAP27及び/またはPACAP38結合を遮断するか;(c)PACAP27及び/またはPACAP38に結合し、かつPAC1−R、VPAC1−R、及びVPAC2−RのそれぞれへのPACAP27及び/またはPACAP38結合を遮断するか;または(d)PACAP27及び/またはPACAP38に結合し、かつPAC1−R発現細胞、VPAC1−R発現細胞、及び/またはVPAC2−R発現細胞へのPACAP27及び/またはPACAP38結合を遮断する、先行請求項のいずれか1項に記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
- (a)PAC1−R、VPAC1−R、またはVPAC2−Rの少なくとも1つのPACAP活性化を中和または阻害するか;(b)PAC1−R、VPAC1−R、及びVPAC2−RのそれぞれのPACAP活性化を中和または阻害するか;(c)PAC1−RのPACAP活性化を中和または阻害するか;(d)PAC1−R、VPAC1−R、またはVPAC2−Rの少なくとも1つへのPACAP結合を阻害することができるか;(e)PAC1−R、VPAC1−R、及びVPAC2−RのそれぞれへのPACAP結合を阻害することができるか;または(f)PAC1−R発現細胞、VPAC1−R発現細胞、及び/またはVPAC2−R発現細胞へのPACAP結合を阻害することができる、先行請求項のいずれか1項に記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
- (a)PACAP誘導性cAMP産生を阻害するか;または(b)PACAP誘導性血管拡張、肥満細胞脱顆粒、及び/またはニューロン活性化を減少させる、先行請求項のいずれか1項に記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
- (a)約100nM未満、(b)約40nM未満、(c)約100pM未満、(d)約50pM未満、(e)約25pM未満、または(f)約10pM〜約100pMであるKDで、PACAPに結合する、先行請求項のいずれか1項に記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
- (a)VIPと比較するとPACAPについてより強い親和性を有し、かつ/またはVIPに結合しないか;または(b)PACAPに対する前記抗体または抗原結合性断片の親和性が、VIPに対する前記抗体または抗原結合性断片の親和性よりも少なくとも10倍、30倍、100倍、300倍、1000倍、3000倍、10000倍、30000倍、100000倍、300000倍、1000000倍、3000000倍、10000000倍、30000000倍、またはそれ以上強い、先行請求項のいずれか1項に記
載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。 - 少なくとも1つのエフェクター部分、化学的リンカー、検出可能な部分(蛍光色素、酵素、基質、生物発光材料、放射性材料、化学発光部分、またはそれらの混合物など)、または機能性部分に付着されている、先行請求項のいずれか1項に記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片。
- それらが結合する抗PACAP抗体の1つまたは複数の生物学的作用を任意選択で中和する、先行請求項のいずれか1項に記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片に対して産生される抗イディオタイプ抗体。
- 対象において前記抗PACAP抗体または抗原結合性断片のin vivoレベルをモニターするか、または対象において前記抗PACAP抗体のin vivo作用を中和するために、請求項32に記載の抗イディオタイプ抗体を使用する方法。
- 治療、予防、または診断有効量の少なくとも1種の請求項1〜32のいずれか1項に記載の抗PACAP抗体もしくは抗原結合性断片または抗イディオタイプ抗体を含む、治療、予防、または診断用途に適した組成物。
- (a)注射、局所、経口、吸入、もしくは経皮での;または(b)皮下、静脈内、筋肉内、髄腔内、頬側内、膣内、経皮、腹腔内、もしくは肛門での投与に適している、請求項34に記載の組成物。
- 皮下投与に適しているか、または静脈内投与に適している、請求項34に記載の組成物。
- 薬学的に許容される希釈剤、担体、溶解補助剤、乳化剤、防腐剤、またはそれらの混合物をさらに含む、請求項34〜37のいずれか1項に記載の組成物。
- 別の活性薬剤、例えば、化学療法薬、鎮痛薬、抗炎症薬、免疫抑制薬、サイトカイン、抗増殖薬、制吐薬、または細胞毒素をさらに含む、請求項34〜38のいずれか1項に記載の組成物。
- 注射による投与のために凍結乾燥、安定化、及び/または製剤化されている、請求項34〜38のいずれか1項に記載の組成物。
- 請求項1〜32のいずれか1項に記載の抗PACAP抗体もしくは抗原結合性断片または抗イディオタイプをコードする単離核酸配列または核酸配列。
- 請求項40に記載の1つまたは複数の単離核酸配列を含有する、1種または複数種のベクター。
- 請求項40に記載の1つまたは複数の単離核酸配列、または請求項41に記載の1種または複数種のベクターを含む、宿主細胞。
- 哺乳類、細菌、真菌、酵母、鳥類、両生類、植物、または昆虫細胞、例えば、糸状真菌または酵母であるか、または哺乳類細胞、任意選択で、PichiaまたはCHO細胞である、請求項42に記載の宿主細胞。
- 請求項42〜43のいずれか1項に記載の宿主細胞を培養すること、または請求項40
に記載の核酸を、前記抗体または抗原結合性断片の発現をもたらす条件下で発現することを含む、抗PACAP抗体または抗原結合性断片を発現する方法。 - 前記宿主細胞が、前記培養培地に、前記抗体または抗原結合性断片を安定発現及び分泌する酵母またはCHO細胞である、請求項44に記載の方法。
- 対象において、PACAPと関連する1つまたは複数の生物学的作用を遮断、阻害、遮断、または中和する方法であって、前記対象に、ヒトPACAPと関連する少なくとも1つの生物学的作用と拮抗するか、それらを阻害、中和、または遮断する治療または予防有効量のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗体断片を投与することを含む前記方法。
- 対象において、下垂体アデニル酸シクラーゼ−活性化ポリペプチド(「PACAP」)と関連する1つまたは複数の生物学的作用を遮断、阻害、または中和する方法であって、対象に、ヒトPACAPと関連する少なくとも1つの生物学的作用と拮抗するか、それらを阻害、中和、または遮断し、かつ血管作動性腸管ペプチド(「VIP」)と実質的に相互作用しない(結合しない)治療または予防有効量のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗体断片を投与することを含む前記方法。
- 対象において、下垂体アデニル酸シクラーゼ−活性化ポリペプチド(「PACAP」)と関連する1つまたは複数の生物学的作用、例えば、血管運動作用を遮断、阻害、遮断、または中和する方法であって、対象に、下記:
(a)PACAPによって誘発される少なくとも1つの生物学的作用を阻害、遮断、または中和すること;
(b)PAC1受容体(「PAC1−R」)、血管作動性腸管ペプチド受容体1型(「VPAC1−R」)、及び/または血管作動性腸管ペプチド受容体2型(「VPAC2−R」)の少なくとも1つのPACAP活性化を中和または阻害すること;
(c)PAC1−R、VPAC1−R、及びVPAC2−RのそれぞれのPACAP活性化を阻害、遮断、または中和すること;(d)PAC1−RのPACAP活性化を中和または阻害すること;
(d)PAC1−R、VPAC1−R、及び/またはVPAC2−Rの少なくとも1つへのPACAP結合を阻害することができること;
(e)PAC1−R、VPAC1−R、及び/またはVPAC2−RのそれぞれへのPACAP結合を阻害することができること;
(f)PAC1−R発現細胞へのPACAP結合を阻害することができること;
(g)VPAC1−R及び/またはVPAC2−R発現細胞へのPACAP結合を阻害することができること;
(h)例えばグリコサミノグリカン(「GAG」)を介しての細胞表面へのPACAP結合を阻害すること;
(i)例えばGAGを介しての細胞表面へのそのような抗体のPACAP媒介性結合を阻害すること;
(j)PACAP誘導性環状アデノシン一リン酸(「cAMP」)産生を阻害すること;ならびに/あるいは
(k)前記対象に投与された場合に、PACAP誘導性血管拡張、肥満細胞脱顆粒、及び/またはニューロン活性化を減少させること
の1つまたは複数を含む治療または予防有効量のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗体断片を投与することを含む前記方法。 - 対象において、下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド(「PACAP」)と関連するか、またはそれによって誘発される血管拡張、例えば、硬膜動脈の血管拡張を遮断、
阻害、または中和する方法であって、対象に、PACAPと関連するか、またはそれによって誘発される血管拡張を遮断、阻害、または中和する治療または予防有効量のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗体断片を投与することを含む前記方法。 - 対象において、頭痛または片頭痛の発症、頻度、重症度、または期間を処置または予防する方法であって、それを必要とする対象に、次の作用:
(a)PACAPによって誘発される少なくとも1つの生物学的作用を阻害または中和すること;
(b)PAC1受容体(「PAC1−R」)、血管作動性腸管ペプチド受容体1型(「VPAC1−R」)、及び/または血管作動性腸管ペプチド受容体2型(「VPAC2−R」)の少なくとも1つのPACAP活性化を中和または阻害すること;
(c)PAC1−R、VPAC1−R、及びVPAC2−RのそれぞれのPACAP活性化を中和または阻害すること;
(d)PAC1−RのPACAP活性化を中和または阻害すること;(e)PAC1−R、VPAC1−R、及び/またはVPAC2−Rの少なくとも1つへのPACAP結合を阻害することができること;(f)PAC1−R、VPAC1−R、及び/またはVPAC2−RのそれぞれへのPACAP結合を阻害することができること;
(e)PAC1−R発現細胞へのPACAP結合を阻害することができること;
(f)VPAC1−R及び/またはVPAC2−R発現細胞へのPACAP結合を阻害することができること;
(g)例えばグリコサミノグリカン(「GAG」)を介しての細胞表面へのPACAP結合を阻害すること;
(h)例えばGAGを介しての細胞表面へのそのような抗体のPACAP媒介性結合を阻害すること;
(i)PACAP誘導性環状アデノシン一リン酸(「cAMP」)産生を阻害すること;ならびに/あるいは
(j)前記対象に投与された場合に、PACAP誘導性血管拡張、肥満細胞脱顆粒、及び/またはニューロン活性化を減少させること
の1つまたは複数を誘発する有効量のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗ヒト下垂体アデニル酸シクラーゼ−活性化ポリペプチド(「PACAP」)抗体または抗体断片を投与することを含む前記方法。 - 前記頭痛または片頭痛が、前兆を伴う片頭痛、前兆を伴わない片頭痛、片麻痺性片頭痛、群発性頭痛、片頭痛性神経痛、慢性頭痛、慢性片頭痛、薬物乱用頭痛、及び緊張性頭痛から選択される、請求項50に記載の方法。
- 血管拡張、肥満細胞脱顆粒、及びニューロン活性化の増大の少なくとも1つまたは上述のいずれかの組合せと関連する急性、一時性、または慢性状態を有するヒト対象を処置する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の拮抗性ヒト、ヒト化、またはキメラ化抗ヒト下垂体アデニル酸シクラーゼ−活性化ポリペプチド(「PACAP」)抗体または抗体断片を投与することを含む前記方法。
- 対象において、下垂体アデニル酸シクラーゼ−活性化ポリペプチド(「PACAP」)と関連する1つまたは複数の生物学的作用を遮断、阻害、または中和する方法であって、それを必要とする対象に、ヒトPACAPと関連する少なくとも1つの生物学的作用と拮抗するか、それらを阻害、中和、または遮断する有効量のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗原結合性断片を投与することを含む前記方法。
- 対象において、下垂体アデニル酸シクラーゼ−活性化ポリペプチド(「PACAP」)
と関連する1つまたは複数の生物学的作用を遮断、阻害、または中和する方法であって、それを必要とする対象に、ヒトPACAPと関連する少なくとも1つの生物学的作用と拮抗するか、それらを阻害、中和、または遮断し、かつ血管作動性腸管ペプチド(「VIP」)と実質的に相互作用しない(結合しない)有効量のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗原結合性断片を投与することを含む前記方法。 - 対象において、下垂体アデニル酸シクラーゼ−活性化ポリペプチド(「PACAP」)と関連する1つまたは複数の生物学的作用を遮断、阻害、または中和する方法であって、それを必要とする対象に、(a)PACAPによって誘発される少なくとも1つの生物学的作用を阻害または中和し;(b)PAC1受容体(「PAC1−R」)、血管作動性腸管ペプチド受容体1型(「VPAC1−R」)、及び/または血管作動性腸管ペプチド受容体2型(「VPAC2−R」)の少なくとも1つのPACAP活性化を中和または阻害し;(c)PAC1−R、VPAC1−R、及びVPAC2−RのそれぞれのPACAP活性化を中和または阻害し;(d)PAC1−RのPACAP活性化を中和または阻害し;(e)PAC1−R、VPAC1−R、及び/またはVPAC2−Rの少なくとも1つへのPACAP結合を阻害することができ;(f)PAC1−R、VPAC1−R、及び/またはVPAC2−RのそれぞれへのPACAP結合を阻害することができ;(g)PAC1−R発現細胞へのPACAP結合を阻害することができ;(h)例えばグリコサミノグリカン(「GAG」)を介しての細胞表面へのPACAP結合を阻害することができ;(i)例えばGAGを介しての細胞表面へのそのような抗体のPACAP媒介性結合を阻害し;(j)PACAP誘導性環状アデノシン一リン酸(「cAMP」)産生を阻害し;ならびに/あるいは(k)前記対象に投与された場合に、PACAP誘導性血管拡張、肥満細胞脱顆粒、及び/またはニューロン活性化を減少させる有効量のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗原結合性断片を投与することを含む前記方法。
- 対象において、頭痛または片頭痛の発症、頻度、重症度、または期間を処置または予防する方法であって、それを必要とする対象に、(a)PACAPによって誘発される少なくとも1つの生物学的作用を阻害または中和し;(b)PAC1受容体(「PAC1−R」)、血管作動性腸管ペプチド受容体1型(「VPAC1−R」)、及び/または血管作動性腸管ペプチド受容体2型(「VPAC2−R」)の少なくとも1つのPACAP活性化を中和または阻害し;(c)PAC1−R、VPAC1−R、及びVPAC2−RのそれぞれのPACAP活性化を中和または阻害し;(d)PAC1−RのPACAP活性化を中和または阻害し;(e)PAC1−R、VPAC1−R、及び/またはVPAC2−Rの少なくとも1つへのPACAP結合を阻害することができ;(f)PAC1−R、VPAC1−R、及び/またはVPAC2−RのそれぞれへのPACAP結合を阻害することができ;(g)PAC1−R発現細胞へのPACAP結合を阻害することができ;(h)おそらくグリコサミノグリカン(「GAG」)を介しての細胞表面へのPACAP結合を阻害することができ;(i)例えばGAGを介しての細胞表面へのそのような抗体のPACAP媒介性結合を阻害し;(j)PACAP誘導性環状アデノシン一リン酸(「cAMP」)産生を阻害し;ならびに/あるいは(k)前記対象に投与された場合に、PACAP誘導性血管拡張、肥満細胞脱顆粒、及び/またはニューロン活性化を減少させる有効量のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗原結合性断片を投与することを含む前記方法。
- 前記頭痛または片頭痛が、前兆を伴う片頭痛、前兆を伴わない片頭痛、片麻痺性片頭痛、群発性頭痛、片頭痛性神経痛、慢性頭痛、慢性片頭痛、薬物乱用頭痛、及び緊張性頭痛からなる群から選択される、請求項56に記載の方法。
- 血管拡張、肥満細胞脱顆粒、及びニューロン活性化の増大の少なくとも1つまたは上記のいずれかの組合せと関連する急性、一時性または慢性状態を有し得るヒト対象を処置す
る方法であって、それを必要とする対象に、有効量の拮抗性ヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗ヒト下垂体アデニル酸シクラーゼ−活性化ポリペプチド(「PACAP」)抗体または抗原結合性断片を投与することを含む前記方法。 - 請求項1〜31のいずれか1項に記載の抗PACAP抗体または抗原結合性断片の投与を包含する、請求項46〜58のいずれかに記載の方法。
- 前記抗PACAP抗体または抗原結合性断片が、PACAP27及び/またはPACAP38に結合し、かつPAC1−R、VPAC1−R、及び/またはVPAC2−RへのPACAP27及び/またはPACAP38結合を遮断する、請求項46〜59のいずれか1項に記載の方法。
- 前記抗PACAP抗体または抗原結合性断片が、PACAP27及び/またはPACAP38に結合し、かつPAC1−R、VPAC1−R、及びVPAC2−RのそれぞれへのPACAP27及び/またはPACAP38結合を遮断する、請求項46〜59のいずれか1項に記載の方法。
- 前記抗PACAP抗体または抗原結合性断片が、PACAP27及び/またはPACAP38に結合し、かつPAC1−R発現細胞へのPACAP27及び/またはPACAP38結合を遮断する、請求項46〜59のいずれか1項に記載の方法。
- PACAPへの前記抗体または抗原結合性断片の親和性が、VIPへの前記抗体または抗体断片の親和性よりも少なくとも10倍、30倍、100倍、300倍、1000倍、3000倍、10000倍、30000倍、100000倍、300000倍、1000000倍、3000000倍、10000000倍、30000000倍、またはそれ以上強い、請求項46〜62のいずれか1項に記載の方法。
- 前記対象が、(a)前兆を伴う片頭痛、前兆を伴わない片頭痛、片麻痺性片頭痛、群発性頭痛、片頭痛性神経痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、全体頭痛、ホットフラッシュ、慢性発作性片頭痛、頭部における潜在的構造問題による二次性頭痛、頸部における潜在的構造問題による二次性頭痛、脳神経痛、副鼻洞性頭痛、副鼻腔炎と関連する頭痛、アレルギー誘導性頭痛、アレルギー誘導性片頭痛、三叉神経痛、帯状疱疹後神経痛、幻想肢痛、線維筋痛症、反射性交感神経性ジストロフィー、疼痛、慢性疼痛、炎症性疼痛、術後切開疼痛、手術後疼痛、外傷関連疼痛、下背部痛、眼疼痛、歯痛、複合性局所疼痛症候群、癌性疼痛、原発性または転移性骨癌性疼痛、骨折痛、骨粗鬆症骨折痛、火傷から生じる疼痛、通風性関節痛、鎌状赤血球発症と関連する疼痛、側頭下顎障害と関連する疼痛、硬変、肝炎、神経原性疼痛、神経障害性疼痛、侵害受容性疼痛、内臓疼痛、月経痛、卵巣痛、変形性関節症疼痛、関節リウマチ疼痛、糖尿病性神経障害、坐骨神経痛、消化不良、過敏性腸症候群、炎症性腸疾患、クローン病、回腸炎、潰瘍性大腸炎、腎仙痛、月経困難、膀胱炎、間質性膀胱炎、月経期、分娩、閉経期、膵臓炎、統合失調症、うつ病、心的外傷後ストレス障害(「PTSD」)、不安障害、自己免疫性糖尿病、シェーグレン症候群、多発性硬化症、過活動性膀胱、気管支反応亢進、喘息、卒中、気管支炎、気管支拡張、気腫、慢性閉塞性肺疾患(「COPD」)、炎症性皮膚炎、腺組織における腺癌、臓器の胚組織における芽細胞腫、上皮組織における癌腫、血液細胞を形成する組織における白血病、リンパ組織におけるリンパ腫、骨髄における骨髄腫、結合または支持組織における肉腫、副腎癌、AIDS関連リンパ腫、貧血、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、類癌腫、子宮頸癌、化学療法、結腸癌、血球減少症、子宮内膜癌、食道癌、胃癌、頭部癌、頸部癌、肝胆道癌、腎臓癌、白血病、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキン病、神経系腫瘍、口腔癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌、尿道癌、骨髄の癌、多発性骨髄腫、骨に転移する腫瘍、神経及び中空臓器を浸潤する腫瘍、神経構造付近
の腫瘍、尋常性ざそう、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、ケロイド、肥厚性瘢痕及び酒さ、内皮機能不全、レイノー症候群、冠動脈性心疾患(「CHD」)、冠動脈疾患(「CAD」)、心不全、末梢動脈疾患(「PAD」)、糖尿病、肺高血圧(「PH」)、結合組織障害、アレルギー性皮膚炎、乾癬、そう痒症、神経原性皮膚発赤、紅斑、サルコイドーシス、ショック、敗血症、オピエート離脱症候群、モルヒネ耐性、及びてんかんからなる群から選択される状態;(b)色盲、無虹彩、抗コリン作動薬に起因する羞明、無水晶体症、牛眼症、白内障、錐体ジストロフィー、眼の先天異常、ウイルス性結膜炎、角膜擦傷、角膜ジストロフィー、角膜潰瘍、角膜上皮細胞の破壊、水晶体転位症、眼内炎、疾患に起因する眼外傷、損傷に起因する眼外傷、感染に起因する眼外傷、霰粒腫、上強膜炎、緑内障、円錐角膜、視神経形成不全、小眼、先天性緑内障虹彩炎、視神経炎、色素拡散症候群、瞳孔散大、網膜剥離、角膜の瘢痕化、強膜及びブドウ膜炎からなる群から選択され得る羞明と関連する眼障害;(c)自閉症スペクトラム障害、キアリ形成異常、失読症、脳炎、髄膜炎、クモ膜下出血、後頭頭蓋の腫瘍、強直性脊椎炎、白色症、リボフラビン欠乏症、ベンゾジアゼピン、化学療法、チクングニア、シスチン症、エーレルス−ダンロー症候群、二日酔い、インフルエンザ、感染性単核細胞症、マグネシウム欠乏、水銀中毒、片頭痛、狂犬病、及びチロシン血症II型からなる群から選択される羞明と関連する神経系関連または神経状態;あるいは(d)前兆を伴う片頭痛、前兆を伴わない片頭痛、虹彩炎、ブドウ膜炎、髄膜炎、うつ病、双極性障害、群発性頭痛もしくは別の三叉神経・自律神経性頭痛(「TAC」)または眼瞼痙攣、うつ病、広場恐怖症及び双極性障害からなる群から選択される羞明関連障害を有する、請求項46〜63のいずれか1項に記載の方法。 - 前記対象が、片頭痛、頭痛、ならびに疼痛関連疾患または状態からなる群から選択される状態を有する、請求項46〜63のいずれか1項に記載の方法。
- 前記頭痛または片頭痛が、前兆を伴う片頭痛、前兆を伴わない片頭痛、片麻痺性片頭痛、群発性頭痛、片頭痛性神経痛、慢性頭痛、慢性片頭痛、薬物乱用頭痛、及び緊張性頭痛からなる群から選択される、請求項65に記載の方法。
- 前記抗体が、任意選択で請求項1〜31のいずれか1項に記載のヒト、ヒト化、もしくはキメラ化抗PACAP抗体または抗原結合性断片である、請求項46〜66のいずれか1項に記載の方法。
- 前記投与抗体が結合するエピトープが、アラニン走査によって同定される、請求項46〜67のいずれか1項に記載の方法。
- 前記抗PACAP抗体または抗原結合性断片が、Ab10またはAb20から選択される抗PACAP抗体の同じCDRを含む、請求項67に記載の方法。
- (a)化学療法薬、鎮痛薬、抗炎症薬、免疫抑制薬、サイトカイン、抗増殖薬、制吐薬、または細胞毒素;(b)鎮痛薬;(c)非ステロイド系抗炎症薬(「NSAID」)、オピオイド鎮痛薬、別の抗体または非抗体生物薬、任意選択で、抗NGF抗体または抗原結合性断片;あるいは(d)シクロオキシゲナーゼ1及び/またはシクロオキシゲナーゼ2阻害薬から選択されるNSAIDなどの別の薬剤を別々に投与すること、または同時投与することをさらに含む、請求項46〜69のいずれか1項に記載の方法。
- 前記他の薬剤が、抗カルシトニン遺伝子関連ペプチド(「CGRP」)抗体もしくは抗体断片及び/または抗CGRP受容体抗体もしくは抗体断片である、請求項70に記載の方法。
- 前記他の薬剤が、(a)(1)イブプロフェン、ナプロキセン、ナプロシン、ジクロフ
ェナク、及びケトプロフェンを包含するプロピオン酸誘導体;(2)トルメチン及びスリンダクを包含する酢酸誘導体;(3)メフェナム酸及びメクロフェナム酸を包含するフェナム酸誘導体;(4)ジフルニサル及びフルフェニサルを包含するビフェニルカルボン酸誘導体;ならびに(5)ピロキシム、スドキシカム、及びイソキシカムを包含するオキシカムからなる群から選択されるNSAID;(b)コデイン、ジヒドロコデイン、ジアセチルモルヒネ、ヒドロコドン、ヒドロモルホン、レボルファノール、オキシモルホン、アルフェンタニル、ブプレノルフィン、ブトルファノール、フェンタニール、スフェンタニル、メペリジン、メタドン、ナルブフィン、プロポキシフェン、ペンタゾシン、及びそれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択されるオピオイド鎮痛薬;(c)モルヒネもしくはモルヒネ誘導体またはそれらの薬学的に許容される塩である、請求項70に記載の方法。 - 前記オピオイド鎮痛薬及び前記抗PACAP抗体または抗原結合性断片の組合せ投与が、単独で投与される前記オピオイド鎮痛薬または前記抗PACAP抗体もしくは抗原結合性断片のいずれかと比較して、鎮痛効果を増大させる、請求項72に記載の方法。
- 前記対象が、抗CGRP抗体もしくは抗体断片及び/または抗CGRP受容体抗体もしくは抗体断片を以前に受けたことがあり、かつ任意選択で、前記対象が、抗CGRP抗体及び/または抗CGRP受容体抗体または抗体断片処置に十分に応答しなかった片頭痛患者であるか、または前記対象が、前記抗CGRP抗体もしくは抗体断片及び/または前記抗CGRP受容体抗体もしくは抗体断片に対する免疫応答を誘発したことがある、請求項46〜73のいずれかに記載の方法。
- 血管拡張、cAMP産生、PLCに対するPACAPの作用を阻害して、Ca++及びPLDレベルまたはアデニル酸シクラーゼ活性を低下させる、先行請求項のいずれかに記載の抗PACAP抗体もしくは抗体断片または方法。
- PAC1−R、VPAC1−R、またはVPAC2−Rのいずれかまたはすべてへのその結合に対する、PACAPの作用を阻害する、先行請求項のいずれかに記載の抗PACAP抗体もしくは抗体断片または方法。
- 神経発生、神経保護、神経調節、神経原性炎症、または侵害受容に対するPACAPの作用を阻害する、先行請求項のいずれかに記載の抗PACAP抗体もしくは抗体断片または方法。
- 例えば、少なくとも1つのグリコサミノグリカン(「GAG」)、例えばヘパリン、コンドロイチン、ケラチン、及びヒアルロン酸との相互作用を介しての、細胞表面とのPACAPの相互作用を調節する、先行請求項のいずれかに記載の抗PACAP抗体もしくは抗体断片または方法。
- PACAP38及び/またはPACAP27の受容体非依存性細胞取り込みを遮断または阻害する、請求項78に記載の抗体または抗体断片。
- 細胞によるPACAP38及び/またはPACAP27のGAG依存性取り込みを阻害または遮断する、請求項78〜79のいずれか1項に記載の抗体または抗体断片。
- 先行請求項のいずれかに記載の抗PACAP抗体または抗体断片の投与を含む、治療または予防方法。
- 先行請求項のいずれかに記載の抗PACAP抗体または抗体断片を含有する、ヒト治療
において使用するための組成物。 - 別の活性薬剤、例えば、(a)化学療法薬、鎮痛薬、抗炎症薬、免疫抑制薬、サイトカイン、抗増殖薬、制吐薬、または細胞毒素;(b)鎮痛薬;(c)非ステロイド系抗炎症薬(「NSAID」)、オピオイド鎮痛薬、別の抗体または非抗体生物薬;(d)抗NGF抗体または抗体断片;(e)抗カルシトニン遺伝子関連ペプチド(「CGRP」)抗体もしくは抗体断片及び/または抗CGRP受容体抗体もしくは抗体断片;(f)シクロオキシゲナーゼ1及び/またはシクロオキシゲナーゼ2阻害薬から選択されるNSAID;(g)(1)イブプロフェン、ナプロキセン、ナプロシン、ジクロフェナク、及びケトプロフェンを包含するプロピオン酸誘導体;(2)トルメチン及びスリンダクを包含する酢酸誘導体;(3)メフェナム酸及びメクロフェナム酸を包含するフェナム酸誘導体;(4)ジフルニサル及びフルフェニサルを包含するビフェニルカルボン酸誘導体;ならびに(5)ピロキシム、スドキシカム、及びイソキシカムを包含するオキシカムからなる群から選択されるNSAID;(h)コデイン、ジヒドロコデイン、ジアセチルモルヒネ、ヒドロコドン、ヒドロモルホン、レボルファノール、オキシモルホン、アルフェンタニル、ブプレノルフィン、ブトルファノール、フェンタニール、スフェンタニル、メペリジン、メタドン、ナルブフィン、プロポキシフェン、ペンタゾシン、及びそれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択されるオピオイド鎮痛薬;あるいは(i)モルヒネもしくはモルヒネ誘導体またはそれらの薬学的に許容される塩を含有する、請求項82に記載の組成物。
- 前記オピオイド鎮痛薬及び前記抗PACAP抗体または抗原結合性断片が、単独で投与される前記オピオイド鎮痛薬または前記抗PACAP抗体もしくは抗原結合性断片のいずれかと比較して、鎮痛効果を増大させる、請求項83に記載の組成物。
- 一緒に組み合わされているか、または組み合わせて投与される前記抗PACAP抗体または断片及び別の活性薬剤が、PACAP関連作用、例えば、片頭痛の処置もしくは予防に対して、または疼痛に対して相乗または相加効果を誘発する、先行請求項のいずれかに記載の抗PACAP抗体もしくは断片またはそれらを含有する組成物。
- 治療または診断、例えば、片頭痛の処置または予防における、先行請求項のいずれかに記載の抗PACAP抗体もしくは断片または組成物の使用。
- ホットフラッシュ、前兆を伴う、もしくは伴わない片頭痛、片麻痺性片頭痛、群発性頭痛、片頭痛性神経痛、慢性頭痛、慢性片頭痛、薬物乱用頭痛、または緊張性頭痛の1つまたは複数の処置における、先行請求項のいずれかに記載の抗PACAP抗体もしくは断片または組成物の使用。
- 頭痛、例えば、前兆を伴う、もしくは伴わない片頭痛、片麻痺性片頭痛、群発性頭痛、片頭痛性神経痛、慢性頭痛、慢性片頭痛、薬物乱用頭痛、または緊張性頭痛の寛解、制御、その発生率の低下、またはその発生もしくは進行の遅延における、先行請求項のいずれかに記載の抗PACAP抗体もしくは断片または組成物の使用。
- 抗CGRP抗体もしくは抗体断片及び/または抗CGRP受容体抗体もしくは抗体断片を以前に受けたことがあるか、または受けている対象において使用するためであり、任意選択で、前記対象が、抗CGRP抗体もしくは抗体断片及び/または抗CGRP受容体抗体もしくは抗体断片処置に十分には応答しなかった片頭痛患者であるか、または前記対象が、少なくとも1種の抗CGRP抗体もしくは抗体断片及び/または抗CGRP受容体抗体もしくは抗体断片投与を以前に受けたことがあり、かつ前記抗CGRP抗体もしくは抗体断片及び/または抗CGRP受容体抗体もしくは抗体断片に対する免疫応答を誘発した
ことがある、請求項88に記載の使用。
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