JP2021029219A - コーヒー滓を用いたシイタケ栽培方法および機能性成分の増収化方法 - Google Patents

Abstract

【課題】培養基（菌床）の主原料として、コーヒーの抽出滓と針葉樹を使用するシイタケ（Lentinula edodes）の栽培方法、及び機能性成分として、健康効果が期待されるアミノ酸含有量を増加させるシイタケの栽培方法を提供する。【解決手段】（１）針葉樹オガ粉にコーヒーの抽出滓を加えた培養基を用いることを特徴とするシイタケ（Lentinula edodes）の栽培方法。（２）シイタケのアミノ酸含有量を増加させる目的でオガ粉にコーヒーの抽出滓を用いるシイタケの栽培方法。（３）アミノ酸が、ＧＡＢＡ、グルタミン、オルニチン、又はアルギニンである（２）に記載するシイタケの栽培方法。【選択図】図３

Description

本願発明は、培養基（菌床）の主原料として、コーヒーの抽出滓と針葉樹オガ粉を使用するシイタケ（Lentinula edodes）の栽培方法に関する。
また本願発明は、機能性成分として、健康効果が期待されるアミノ酸含有量を増加させる目的で、培養基（菌床）の主原料として、コーヒーの抽出滓と針葉樹オガ粉、又はコーヒーの抽出滓と広葉樹オガ粉を使用するシイタケの栽培方法に関する。

シイタケはハラタケ目キシメジ科シイタケ属の食用キノコである。シイタケは日本、中国、韓国などで食用に栽培されるほか、東南アジアの高山帯やニュージーランドにも分布する。日本においては食卓に上る機会も多く、数あるキノコの中でも知名度、人気ともに高いもののひとつである。子実体の発生時期は初夏と秋で、適温は１０〜２５℃と幅があり菌株によって異なる。旨み成分として、５´−グアニル酸やグルタミン酸を豊富に含むので、食材としてだけでなく、出汁をとるのにも使われる。グアニル酸は生のシイタケでは総重量に占める割合が少ないが、乾燥して温度が上昇する過程で、リボヌクレアーゼやホスホモノエステラーゼなどの酵素の働きにより増加する。また栄養価としては炭水化物、食物繊維、ミネラルが主で、低カロリー食である。中国医学では生薬と称され、益気、健脾、健胃、化痰の作用があり、貧血や高血圧に効くとされる。近年は、β-グルカンの免疫強化、抗癌作用の研究が行われている。

シイタケの栽培は、昭和初期では原木栽培が行われたが、その後２０〜３０年前から菌床栽培が活発に行われ生産量が拡大している。
従来、シイタケ栽培用のオガ粉は広葉樹系がメインであり、安価に入手できる針葉樹系は活用が困難であると考えられていた。
ところが、２０１１年の震災以降、放射性物質のセシウムを吸収しやすい（移行係数が高い）キノコ類は、培地原料としてのセシウム含有量の低減化が重要な課題となった。
そのため、最近では広葉樹オガ粉の供給が逼迫していること、及び森林資源保護の観点から、広葉樹オガ粉の代替原料として、針葉樹オガ粉、及び現在産業廃棄物として大量に発生するコーヒーの抽出滓が脚光を浴び、種々のキノコの栽培に利用する試みがなされている。
しかしながら、シイタケの栽培に関しては、広葉樹オガ粉とコーヒー滓を用いたシイタケの栽培方法は知られているものの、安価に入手できる針葉樹オガ粉とコーヒー滓を組み合わせて使用した実際の栽培例は知られていない。

特開昭５７−１５５２１８ 特開平０１−１８７０３０ 特開平０２−１５６８２８ 特開平０５−１７６６２９

発明者等は、従来から、キノコの菌床栽培には不向きとされていた針葉樹オガ粉と、産業廃棄物として環境に多大の負荷をかけているコーヒーの抽出滓を組み合わせて使用すれば、良質なシイタケを栽培することができること、又、針葉樹オガ粉、広葉樹オガ粉を問わずコーヒーの抽出滓を組合わせて使用すれば、機能性成分として健康効果が期待されるシイタケのアミノ酸含有量を増加させることができることを知り本発明を完成した。

前記針葉樹オガ粉は、従来からキノコの菌床栽培には不向きとされているものである。
又、コーヒーの抽出滓は、焙煎したコーヒー豆を粉砕し、熱水又は水を加えてコーヒーを抽出した後の残渣を言うが、近年パック入りコーヒー飲料（缶コーヒー、ペットボットル入りコーヒー、紙容器入りコーヒー等）の生産量の増加に伴い、莫大な量が発生し、産業廃棄物として環境に多大の負荷をかけているものである。
そして、前記コーヒー滓は、元々は食品であるため、これを使用してキノコを栽培するのは、安全・安心の両面から非常に好ましい。
更に、コーヒー滓を使用して、キノコ中の機能成分を増加させる試みは、マンネンタケ（特開２０１２−６０９７４）、及びハナビラタケ以外には見つからない（特開２０１９−１１８２７８）。
本願発明は、以上の状況を踏まえて、コーヒーの抽出滓の有効利用を図るものである。

従って、本願発明は、下記の請求項１〜請求項２５により構成されている。
＜請求項１＞ 針葉樹オガ粉にコーヒーの抽出滓を加えた培養基を用いることを特徴とするシイタケ（Lentinula edodes）の栽培方法。
＜請求項２＞ コーヒーの抽出滓と針葉樹オガ粉の重量比が１：９〜９：１である請求項1に記載するシイタケの栽培方法。
＜請求項３＞ コーヒーの抽出滓と針葉樹オ粉の重量比が１：３〜１：１である請求項1、に記載するシイタケの栽培方法。
＜請求項４＞ シイタケのアミノ酸含有量を増加させる目的で、針葉樹オガ粉にコーヒーの抽出滓を加えた培養基を用いることを特徴とするシイタケの栽培方法。
＜請求項５＞ アミノ酸が、標準アミノ酸である請求項４に記載するシイタケの栽培方法。
＜請求項６＞ アミノ酸が、ＧＡＢＡ、グルタミン、オルニチン、又はアルギニンである請求項４に記載するシイタケの栽培方法。
＜請求項７＞ ＧＡＢＡ、グルタミン、オルニチン、又はアルギニンの生成部位がシイタケの柄部である請求項６に記載するシイタケの栽培方法。
＜請求項８＞ シイタケのアミノ酸含有量を増加させる目的で広葉樹オガ粉にコーヒーの抽出滓を加えた培養基を用いるシイタケの栽培方法。
＜請求項９＞ コーヒーの抽出滓と広葉樹オガ粉の重量比が１：９〜９：１である請求項８に記載するシイタケの栽培方法。
＜請求項１０＞ コーヒーの抽出滓と広葉樹オガ粉の重量比が１：３〜１：１である請求項８に記載するシイタケの栽培方法。
＜請求項１１＞ アミノ酸が、標準アミノ酸である請求項８に記載するシイタケの栽培方法。
＜請求項１２＞ アミノ酸が、ＧＡＢＡ、グルタミン、オルニチン、又はアルギニンである請求項８に記載するシイタケの栽培方法。
＜請求項１３＞ ＧＡＢＡ、グルタミン、オルニチン、又はアルギニンの生成部位がシイタケの柄部である請求項１２に記載するシイタケの栽培方法。
＜請求項１４＞ 請求項７記載のシイタケの柄部、又はシイタケの柄部に含まれるアミノ酸を利用する機能性食品の製造方法。
＜請求項１５＞ 請求項１３記載のシイタケの柄部、又はシイタケの柄部に含まれるアミノ酸を利用する機能性食品の製造方法。
＜請求項１６＞培養基として、コーヒーの抽出滓発生後、速やかに針葉樹オガ粉を添加した培養基を使用する請求項１〜請求項４のいずれかに記載するシイタケの栽培方法。
＜請求項１７＞培養基として、コーヒーの抽出滓発生後、速やかに広葉樹オガ粉を添加した培養基を使用する請求項８〜請求項１０のいずれかに記載するシイタケの栽培方法。
＜請求項１８＞ 主原料として、針葉樹オガ粉とコーヒー抽出滓の混合物を使用することを特徴とするシイタケの菌床用培養基の製造方法。
＜請求項１９＞ コーヒーの抽出滓と針葉樹オガ粉の重量比が１：９〜９：１である請求項1８に記載するシイタケの菌床用培養基の製造方法。
＜請求項２０＞ コーヒーの抽出滓と針葉樹オガ粉の重量比が１：３〜１：１である請求項１８に記載するシイタケの菌床用培養基の製造方法。
＜請求項２１＞ 主原料として、広葉樹オガ粉とコーヒー抽出滓の混合物を使用することを特徴とするシイタケの菌床用培養基の製造方法。
＜請求項２２＞ コーヒーの抽出滓と広葉樹オガ粉の重量比が１：９〜９：１である請求項２１に記載するシイタケの菌床用培養基の製造方法。
＜請求項２３＞ コーヒーの抽出滓と広葉樹オガ粉の重量比が１：３〜１：１である請求項２１に記載するシイタケの菌床用培養基の製造方法。
＜請求項２４＞ シイタケがマツタケ様シイタケである請求項１４に記載する機能性食品の製造方法。
＜請求項２５＞ シイタケがマツタケ様シイタケである請求項１５に記載する機能性食品の製造方法。

本願発明を以上のように構成する理由は、下記のとおりである。
（１）大量に発生するコーヒー抽出滓を、有効に利用できること。
（２）コーヒー抽出滓を使用することにより、従来キノコの菌床栽培には不向きとされていた、針葉樹オガ粉から良質なシイタケを栽培できること。
（３）コーヒー抽出滓を使用することにより、針葉樹オガ粉、広葉樹オガ粉を問わず、機能性成分として健康効果が期待されるシイタケのアミノ酸含有量（特にＧＡＢＡ、グルタミン、オルニチン、又はアルギニン等）を増加させることができること。
（４）機能性成分として健康効果が期待されるシイタケのアミノ酸は、通常食用とはされ難いシイタケの柄部にも、傘部に比較して、勝るとも劣らず生成されるので、ともすれば廃棄されがちな柄部から特有の機能性食品が製造できること。
（５）マツタケ様シイタケは、柄部が比較的多いので、機能性食品の製造に適していること。
（６）オガ粉（針葉樹オガ粉、広葉樹オガ粉）にコーヒー滓を添加したシイタケ栽培用培養基には、シイタケにアミノ酸（標準アミノ酸、非標準アミノ酸）を増量させる効果があるので、シイタケ菌株を接種前の培養基そのものに商品価値があること。
（７）コーヒー抽出滓は、そのまま放置すると、微生物（カビやバクテリア）が増殖し、非常に腐敗しやすい。これを防止するには、コーヒー抽出滓が発生後、速やかにオガ粉（針葉樹オガ粉、広葉樹オガ粉）を混合すると、微生物の増殖が抑制できるからである。

本発明によれば、産業廃棄物であるコーヒーの抽出滓と針葉樹オガ粉（広葉樹オガ粉に比較して安価）から、良質なシイタケを栽培することができる。
又、産業廃棄物であるコーヒーの抽出滓をオガ粉に添加して栽培すれば、針葉樹オガ粉、広葉樹オガ粉を問わず、健康効果が期待されるアミノ酸を多量に含むシイタケを栽培することができる。
従来、廃棄されがちなシイタケの柄部から、アミノ酸を豊富に含む機能性食品を製造できる。

シイタケの一般的な子実体形状を表す画像である。 コーヒー滓、広葉樹オガ粉、針葉樹オガ粉、フスマ、及び米糠を表す画像である。 各試験区におけるシイタケの収量を示すグラフである。 針葉樹オガ粉の各試験区におけるシイタケの発生状況と、菌床表面の褐変状況を示す画像である。 広葉樹オガ粉の各試験区におけるシイタケの発生状況と、菌床表面の褐変状況を示す画像である。 針葉樹へのコーヒー滓の添加量別培地によるシイタケの傘部の標準アミノ酸類含有量の変化を示すグラフである。 針葉樹へのコーヒー滓の添加量別培地によるシイタケの柄部の標準アミノ酸類含有量の変化を示すグラフである。 針葉樹へのコーヒー滓の添加量別培地によるシイタケの傘部の非標準アミノ酸類含有量の変化を示すグラフである。 針葉樹へのコーヒー滓の添加量別培地によるシイタケの柄部の非標準アミノ酸類含有量の変化を示すグラフである。 広葉樹へのコーヒー滓の添加量別培地によるシイタケの傘部の標準アミノ酸類含有量の変化を示すグラフである。 広葉樹へのコーヒー滓の添加量別培地によるシイタケの柄部の標準アミノ酸類含有量の変化を示すグラフである。 広葉樹へのコーヒー滓の添加量別培地によるシイタケの傘部の非標準アミノ酸類含有量の変化を示すグラフである。 広葉樹へのコーヒー滓の添加量別培地によるシイタケの柄部の非標準アミノ酸類含有量の変化を示すグラフである。 段落［００１２］（３）（ｃ）の培養基により栽培されたマツタケ様シイタケの子実体形状を表す画像である。

以下、下記に記載する実施例により詳細に説明する。
本願発明において、キノコの発生試験は、株式会社ハイファ研究所保有の下記の菌株を使用した。
シイタケ（Lentinula edodes） ：ＬＥＮ−５６株（略名：ＬＥ）
又、コーヒ滓は、味の素ＡＧＦ株式会社製を使用した。

（１）シイタケ菌株の準備
低温保管中のシイタケ菌株ＬＥをＰＤＡ培地シャーレに接種し、培養温度２３℃にて培養した。
（２）コーヒー滓を添加した菌床培地の調製〜培養
広葉樹オガ粉および針葉樹オガ粉の二種を用い、栄養源として米糠、フスマを任意の比率で添加した試験区をコントロールとした。また、対照区は各種オガクズの２５％および５０％を除き代替えとしてコーヒー滓を添加した試験区を設けて行った。それぞれの試験区の混合培地を撹拌し含水率６５％に調製した培地１ｋｇをフィルター付Ｐ．Ｐ．菌床袋へ充填した。各試験区培地を充填した培地は１２１℃で９０分間の殺菌を行い、放冷後にシイタケ菌株ＬＥを接種した。接種後はインキュベータ内２１℃で培養を行った。
（３）発生操作〜収穫〜サンプル保管
菌糸が蔓延・熟成した菌床状態を確認した後、発生操作を行った。発生環境は温度１５〜１８℃で十分な加湿状況で菌床を展開した。各試験区で発生した菌床状況の写真撮影および子実体の収量、さらに菌床表面の褐変状況を調査した。
収穫後のシイタケ子実体は今後の調査を進める分析用サンプルとして凍結保管した。
シイタケ子実体の発生試験は、針葉樹と広葉樹について、それぞれ下記の試験区で行った。
▲針葉樹
（ａ）Cont ：針葉樹オガ粉添加区＋栄養源
（ｂ）コーヒー滓２５％：針葉樹オガ粉７５％＋コーヒー滓２５％添加区＋栄養源
（ｃ）コーヒー滓５０％：針葉樹オガ粉５０％＋コーヒー滓５０％添加区＋栄養源
▲広葉樹
（ｄ）Cont ：広葉樹オガ粉添加区＋栄養源
（ｅ）コーヒー滓２５％：広葉樹オガ粉７５％＋コーヒー滓２５％添加区＋栄養源
（ｆ）コーヒー滓５０％：広葉樹オガ粉５０％＋コーヒー滓５０％添加区＋栄養源
（４）各試験区において、得られた子実体の重量を表１、及び図３に、コーヒー滓添加における各試験区の菌床表面の褐変状況（菌糸の発生状況）を表２に示す。

各試験区におけるシイタケ発生試験の発生状況（写真）を図４、及び図５に示す。

表１、表２、図３〜図５の結果は、針葉樹オガ粉にコーヒー滓を加えて菌床を作製すれば、広葉樹オガ粉の菌床と同様に、シイタケの栽培が十分に可能となることを示している。これは、針葉樹オガ粉はシイタケの菌床栽培用には不向きとされていた従来の知見を覆すものと言える。

（１）子実体サンプルの遊離アミノ酸の分析
（Ａ）シイタケ子実体のサンプル（子実体）調製
［００１６］の表１に示したシイタケ（図４、図５に示す６種）を傘部と柄部に分け、それぞれをアルミ袋に入れ凍結保管した（１２試験区）。
（Ｂ）遊離アミノ酸分析用の簡易的なサンプル調製および分析試験
各種シイタケの子実体サンプル（表１に示す（ａ）〜（ｅ））を傘部と柄部に分けて事前に調製されたもの（１２試験区）をそのままフードプロセッサーで粉砕した後、１０．０ｇをサンプリングした。これに７５％のエタノールを加えてホモジナイザーでホモジナイズした後、８０℃で２回還流抽出した。抽出液を回収後減圧濃縮し、最終的に水でメスアップして１００ｍｌに定容した。
この溶液をフィルター濾過した後、クエン酸リチウム緩衝液で１０倍希釈し、アミノ酸分析機に５０μl注入し、全自動アミノ酸分析装置にて分析した。
（Ｃ）測定対象アミノ酸類
（イ）標準アミノ酸類：
アスパラギン酸、スレオニン、セリン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、アラニン、バリン、シスチン、メチオニン、イソロイシン、ロイシン、チロシン、フェニルアラニン、ヒスチジン、リジン、トリプトファン、アルギニン、プロリン
（ロ）非標準アミノ酸類：
ホスホセリン、タウリン、ホスホエタノールアミン、尿素、サルコシン、a-アミノアジピン酸、シトルリン、a-アミノ酪酸、シスタチオニン、b-アラニン、b-アミノ酪酸、g-アミノ酪酸（GABA）、モノエタノールアミン、アンモニア、ヒドロキシリジン、オルニチン、1-メチルヒスチジン、3-メチルヒスチジン、アンセリン、カルノシン、ヒドロキシプロリン

（２）アミノ酸の分析結果
前記の各試験区により得られたシイタケの標準アミノ酸類、及び非標準アミノ酸類の分析結果を表３〜表１０、及び図６〜図１３に示す。
＊表３は、針葉樹オガ粉培地でのシイタケ傘部の標準アミノ酸類の分析結果を示す（図６参照）。
＊表４は、針葉樹オガ粉培地でのシイタケ柄部の標準アミノ酸類の分析結果を示す（図７参照）。
＊表５は、針葉樹オガ粉培地でのシイタケ傘部の非標準アミノ酸類の分析結果を示す（図８参照）。
＊表６は、針葉樹オガ粉培地でのシイタケ柄部の非標準アミノ酸類の分析結果を示す（図９参照）。
＊表７は、広葉樹オガ粉培地でのシイタケ傘部の標準アミノ酸類の分析結果を示す（図１０参照）。
＊表８は、広葉樹オガ粉培地でのシイタケ柄部の標準アミノ酸類の分析結果を示す（図１１参照）。
＊表９は、広葉樹オガ粉培地でのシイタケ傘部の非標準アミノ酸類の分析結果を示す（図１２参照）。
＊表１０は、広葉樹オガ粉培地でのシイタケ柄部の非標準アミノ酸類の分析結果を示す（図１３参照）。

前記標準アミノ酸、及び非標準アミノ酸の分析結果は、下記の好ましい結論が得られることを示している。
（１）オガ粉が針葉樹由来か、又は広葉樹由来かを問わず、これらにコーヒー滓を添加した培養基でシイタケを栽培すれば、標準アミノ酸及び非標準アミノ酸を豊富に含有したシイタケが栽培できる。
（２）利用価値が少ないシイタケの柄部には、通常摂取しにくい非標準アミノ酸（ＧＡＢＡ、グルタミン、オルニチン、又はアルギニン等）が豊富に蓄積されることが判明したので、これを利用した機能性食品の製造が可能となる。

アミノ酸を豊富に含む機能性食品の製造
（１）段落［００１２］の（３）、（ｃ）、及び（３）、（ｆ）で得られたシイタケの子実体の柄部を乾燥し、微粉末状の機能性食品を得た。
（２）前記微粉末の熱水、又はエタノール抽出物を凍結乾燥して、微粉末状の機能性食品を得た。
（３）本機能性食品の製造には、マツタケ様シイタケ（図１４参照）の柄部を用いたものについても製造した。

（１）針葉樹オガ粉にコーヒーの抽出滓を加えたシイタケの菌床用培地の製造
（イ）段落［００１２］の（３）、（ｃ）の配合物（混合物）を、含水率６５％に調製した。
（ロ）前記調整物をフィルター付Ｐ．Ｐ．菌床袋へ１ｋｇずつ充填した。
（ハ）前記袋入り充填物を、オートクレーブで１２１℃、９０分間殺菌後放冷しシイタケの菌床用培地を製造した。
（２）広葉樹オガ粉にコーヒーの抽出滓を加えたシイタケの菌床用培養基の製造
（イ）段落［００１２］の（３）、（ｆ）の配合物（混合物）を、含水率６５％に調製した。
（ロ）前記調整物をフィルター付Ｐ．Ｐ．菌床袋へ１ｋｇずつ充填した。
（ハ）前記袋入り充填物を、オートクレーブで１２１℃、９０分間殺菌後放冷しシイタケの菌床用培養基を製造した。

本発明によれば、産業廃棄物であるコーヒーの抽出滓と、使用価値の低い針葉樹オガ粉（広葉樹オガ粉に比較して安価）から、良質なシイタケを栽培することができ、又産業廃棄物であるコーヒーの抽出滓をオガ粉に添加して栽培すれば、針葉樹オガ粉、広葉樹オガ粉を問わず、健康効果が期待されるアミノ酸を多量に含むシイタケを栽培することができるので、産業上の利用可能性が大きい。

Claims (25)

1. 針葉樹オガ粉にコーヒーの抽出滓を加えた培養基を用いることを特徴とするシイタケ（Lentinula edodes）の栽培方法。
2. コーヒーの抽出滓と針葉樹オガ粉の重量比が１：９〜９：１である請求項1に記載するシイタケの栽培方法。
3. コーヒーの抽出滓と針葉樹オガ粉の重量比が１：３〜１：１である請求項1、に記載するシイタケの栽培方法。
4. シイタケのアミノ酸含有量を増加させる目的で、針葉樹オガ粉にコーヒーの抽出滓を加えた培養基を用いることを特徴とするシイタケの栽培方法。
5. アミノ酸が、標準アミノ酸である請求項４に記載するシイタケの栽培方法。
6. アミノ酸が、ＧＡＢＡ、グルタミン、オルニチン、又はアルギニンである請求項４に記載するシイタケの栽培方法。
7. ＧＡＢＡ、グルタミン、オルニチン、又はアルギニンの生成部位がシイタケの柄部である請求項６に記載するシイタケの栽培方法。
8. シイタケのアミノ酸含有量を増加させる目的で広葉樹オガ粉にコーヒーの抽出滓を加えた培養基を用いるシイタケの栽培方法。
9. コーヒーの抽出滓と広葉樹オガ粉の重量比が１：９〜９：１である請求項８に記載するシイタケの栽培方法。
10. コーヒーの抽出滓と広葉樹オガ粉の重量比が１：３〜１：１である請求項８に記載するシイタケの栽培方法。
11. アミノ酸が、標準アミノ酸である請求項８に記載するシイタケの栽培方法。
12. アミノ酸が、ＧＡＢＡ、グルタミン、オルニチン、又はアルギニンである請求項８に記載するシイタケの栽培方法。
13. ＧＡＢＡ、グルタミン、オルニチン、又はアルギニンの生成部位がシイタケの柄部である請求項１２に記載するシイタケの栽培方法。
14. 請求項７記載のシイタケの柄部、又はシイタケの柄部に含まれるアミノ酸を利用する機能性食品の製造方法。
15. 請求項１３記載のシイタケの柄部、又はシイタケの柄部に含まれるアミノ酸を利用する機能性食品の製造方法。
16. 培養基として、コーヒーの抽出滓発生後、速やかに針葉樹オガ粉を添加した培養基を使用する請求項１〜請求項４のいずれかに記載するシイタケの栽培方法。
17. 培養基として、コーヒーの抽出滓発生後、速やかに広葉樹オガ粉を添加した培養基を使用する請求項８〜請求項１０のいずれかに記載するシイタケの栽培方法。
18. 主原料として、針葉樹オガ粉とコーヒー抽出滓の混合物を使用することを特徴とするシイタケの菌床用培養基の製造方法。
19. コーヒーの抽出滓と針葉樹オガ粉の重量比が１：９〜９：１である請求項1８に記載するシイタケの菌床用培養基の製造方法。
20. コーヒーの抽出滓と針葉樹オガ粉の重量比が１：３〜１：１である請求項１８に記載するシイタケの菌床用培養基の製造方法。
21. 主原料として、広葉樹オガ粉とコーヒー抽出滓の混合物を使用することを特徴とするシイタケの菌床用培養基の製造方法。
22. コーヒーの抽出滓と広葉樹オガ粉の重量比が１：９〜９：１である請求項２１に記載するシイタケの菌床用培養基の製造方法。
23. コーヒーの抽出滓と広葉樹オガ粉の重量比が１：３〜１：１である請求項２１に記載するシイタケの菌床用培養基の製造方法。
24. シイタケがマツタケ様シイタケである請求項１４に記載する機能性食品の製造方法。
25. シイタケがマツタケ様シイタケである請求項１５に記載する機能性食品の製造方法。