JP2020535801A5 - - Google Patents

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  1. 発現産物をコードする異種核酸配列を含む組換え細菌を含む、ヒトの消化管におけるアセトアルデヒド濃度を低減するための組成物であって、発現産物が、アセトアルデヒドを酢酸へ酸化するアルデヒドデヒドロゲナーゼ(ALDH)酵素である、組成物。
  2. ALDH酵素をコードする核酸配列が、フラジェリン遺伝子プロモーターと機能的に連結されており、
    フラジェリン遺伝子プロモーターが、CsrA結合部位に変異を含み、
    該CsrA結合部位における変異が、ALDH酵素をコードするmRNA転写物へのCsrAの結合を阻害するが、ALDH酵素の発現を妨害せず、かつ
    組換え細菌が、FlgMによるシグマ因子の阻害を低減する内在性flgM遺伝子の変異を含む、
    請求項1記載の組成物。
  3. 細菌が、
    (a)プロバイオティック細菌である；
    (b)バチルス（Bacillus）、ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）、エンテロコッカス（Enterococcus）、エシェリキア（Escherichia）、ラクトバチルス（Lactobacillus）、ロイコノストック（Leuconostoc）、ペディオコッカス（Pediococcus）、およびストレプトコッカス（Streptococcus）より選択される属に属する細菌である；
    (c)バチルス属に属する細菌であり、任意で、B.スブチリス（B. subtilis）種に属する細菌である；ならびに/または
    (d)胞子形成細菌である、および/もしくは胞子形態にある、
    請求項1または2記載の組成物。
  4. 以下の対象に投与するための、請求項1〜3のいずれか一項記載の組成物：
    (a)24時間、12時間、6時間、3時間、もしくは1時間の時間である所定の時間以内にアルコールを消費した対象；
    (b)アルコールによる宿酔の1つもしくは複数の症状に苦しんでいる対象；
    (c)アルコールを消費していない対象；
    (d)24時間、12時間、6時間、3時間、もしくは1時間の時間である所定の時間以内にアルコールを消費していない対象；および/または
    (e)組換え細菌の投与後、24時間、12時間、6時間、3時間、もしくは1時間の時間の間にアルコールを消費する対象。
  5. 組成物の投与により、対象におけるアルコールによる宿酔の1つもしくは複数の症状が防止される、かつ/またはヒトの腸におけるアセトアルデヒド濃度が低減される、請求項1〜4のいずれか一項記載の組成物。
  6. 組換え細菌に含まれる異種核酸配列によってコードされる酵素が、ALDH酵素からなり、かつ/または組換え細菌の投与により、対象の血中アルコール含量に影響がない、請求項1〜5のいずれか一項記載の組成物。
  7. 経口投与用であり、かつ/または約10 4 〜約10 12 コロニー形成単位の組換え細菌を含む、請求項1〜6のいずれか一項記載の組成物。
  8. 異種核酸配列によってコードされる発現産物を対象の消化管へ送達するための、組換え細菌を含む組成物であって、
    組換え細菌が、フラジェリン遺伝子プロモーターと機能的に連結された発現産物をコードする異種核酸を含み、
    フラジェリン遺伝子プロモーターが、CsrA結合部位に変異を含み、
    該CsrA結合部位における変異が、発現産物をコードするmRNA転写物へのCsrAの結合を阻害するが、発現産物の発現を妨害せず、かつ
    組換え細菌が、FlgMによるシグマ因子の阻害を低減する内在性flgM遺伝子の変異を含む、
    組成物。
  9. フラジェリン遺伝子プロモーターが、B.スブチリスhagプロモーターであり、任意で、
    (a)CsrA結合部位における変異が、結合部位1(BS1)および結合部位2(BS2)から選択されるB.スブチリスhagプロモーターのCsrA結合部位における変異である；
    (b)CsrA結合部位における変異が、BS1のステムループ二次構造のステムにおける変異であるかもしくはBS2のステムループ二次構造のステムにおける変異である；
    (c)CsrA結合部位における変異が、配列AGGAを有するCsrA BS1認識配列における変異である；
    (d)CsrA結合部位における変異が、SEQ ID NO:2によるBS1変異であるかもしくはSEQ ID NO:3によるBS2変異である；および/または
    (e)CsrA結合部位における変異が、B.スブチリスhagプロモーターのシャイン・ダルガーノ配列を破壊しない、
    請求項2〜8のいずれか一項記載の組成物。
  10. 内在性flgM遺伝子における変異が、
    (a)flgM遺伝子の全部もしくは一部の欠失を含む、
    (b)flgMの活性部位をコードする配列における変異を含む、
    (c)FlgMのSigDとの結合に関係するアミノ酸をコードする配列における変異を含む、
    (d)FlgMタンパク質のC末端のFlgMの3番目のヘリックスもしくは4番目のヘリックスにおけるアミノ酸をコードする配列における変異を含む、
    (e)SEQ ID NO:11のI-58、K-62、I-65、G-68、D-73、およびA-78から選択されるアミノ酸をコードする配列における変異を含み、細菌がB.スブチリス種に属する；ならびに/または
    (f)SEQ ID NO:11のI-3、G-7、S-10、V-11、A-40、K-41、M43、I-58、L-61、K-62、I-65、Y-70、K-71、V-72、D-73、A-74、H-76、I-77、A-78、N-80、M-81、I-82、N-83、F-84、Y-85、およびK-86から選択されるアミノ酸をコードする配列における変異を含み、細菌がB.スブチリス種に属するものであり、
    任意で、内在性flgM遺伝子の変異が、FlgM生物活性を低減または消失させる、
    請求項2〜9のいずれか一項記載の組成物。
  11. シグマ因子がSigDである、請求項2〜10のいずれか一項記載の組成物。
  12. 組換え細菌が、発現産物を構成的に発現し、かつ/または
    組換え細菌の調製物が、pHyspankプロモーターの制御下で発現産物を発現した場合の同等の条件下で観察されるよりも、少なくとも約4倍多いと判定されるレベルで、発現産物が該調製物中に発現されていることを特徴とする、
    請求項1〜11のいずれか一項記載の組成物。
  13. 発現産物をコードする異種核酸配列を含む組換え細菌であって、発現産物が、アセトアルデヒドを酢酸へ酸化するアルデヒドデヒドロゲナーゼ(ALDH)酵素であり、任意で、細菌が発現産物を構成的に発現し、かつ/または細菌がB.スブチリス細菌である、組換え細菌。
  14. ALDH酵素をコードする核酸配列が、フラジェリン遺伝子プロモーターと機能的に連結されており、
    フラジェリン遺伝子プロモーターが、CsrA結合部位に変異を含み、
    該CsrA結合部位における変異が、ALDH酵素をコードするmRNA転写物へのCsrAの結合を阻害するが、ALDH酵素の発現を妨害せず、かつ
    組換え細菌が、FlgMによるシグマ因子の阻害を低減する内在性flgM遺伝子の変異を含む、
    請求項13記載の組換え細菌。
  15. (a)プロバイオティック細菌である；
    (b)バチルス（Bacillus）、ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）、エンテロコッカス（Enterococcus）、エシェリキア（Escherichia）、ラクトバチルス（Lactobacillus）、ロイコノストック（Leuconostoc）、ペディオコッカス（Pediococcus）、およびストレプトコッカス（Streptococcus）より選択される属に属する細菌である；
    (c)バチルス属に属する細菌であり、任意で、B.スブチリス（B. subtilis）種に属する細菌である；ならびに/または
    (d)胞子形成細菌である、および/もしくは胞子形態にある、
    請求項13または14記載の組換え細菌。
  16. 組換え細菌に含まれる異種核酸配列によってコードされる酵素が、ALDH酵素からなる、請求項13〜15のいずれか一項記載の組換え細菌。
  17. フラジェリン遺伝子プロモーターと機能的に連結された発現産物をコードする異種核酸を含み、
    フラジェリン遺伝子プロモーターが、CsrA結合部位に変異を含み、
    該CsrA結合部位における変異が、発現産物をコードするmRNA転写物へのCsrAの結合を阻害するが、発現産物の発現を妨害せず、かつ
    組換え細菌が、FlgMによるシグマ因子の阻害を低減する内在性flgM遺伝子の変異を含む、
    組換え細菌。
  18. フラジェリン遺伝子プロモーターが、B.スブチリスhagプロモーターであり、任意で、
    (a)CsrA結合部位における変異が、結合部位1(BS1)および結合部位2(BS2)から選択されるB.スブチリスhagプロモーターのCsrA結合部位における変異である；
    (b)CsrA結合部位における変異が、BS1のステムループ二次構造のステムにおける変異であるかもしくはBS2のステムループ二次構造のステムにおける変異である；
    (c)CsrA結合部位における変異が、配列AGGAを有するCsrA BS1認識配列における変異である；
    (d)CsrA結合部位における変異が、SEQ ID NO:2によるBS1変異であるかもしくはSEQ ID NO:3によるBS2変異である；および/または
    (e)CsrA結合部位における変異が、B.スブチリスhagプロモーターのシャイン・ダルガーノ配列を破壊しない、
    請求項14〜17のいずれか一項記載の組換え細菌。
  19. 内在性flgM遺伝子における変異が、
    (a)flgM遺伝子の全部もしくは一部の欠失を含む、
    (b)flgMの活性部位をコードする配列における変異を含む、
    (c)FlgMのSigDとの結合に関係するアミノ酸をコードする配列における変異を含む、
    (d)FlgMタンパク質のC末端のFlgMの3番目のヘリックスもしくは4番目のヘリックスにおけるアミノ酸をコードする配列における変異を含む、
    (e)SEQ ID NO:11のI-58、K-62、I-65、G-68、D-73、およびA-78から選択されるアミノ酸をコードする配列における変異を含み、細菌がB.スブチリス種に属するものである；ならびに/または
    (f)SEQ ID NO:11のI-3、G-7、S-10、V-11、A-40、K-41、M43、I-58、L-61、K-62、I-65、Y-70、K-71、V-72、D-73、A-74、H-76、I-77、A-78、N-80、M-81、I-82、N-83、F-84、Y-85、およびK-86から選択されるアミノ酸をコードする配列における変異を含み、細菌がB.スブチリス種に属するものであり、
    任意で、内在性flgM遺伝子の変異が、FlgM生物活性を低減または消失させる、
    請求項14〜18のいずれか一項記載の組換え細菌。
  20. シグマ因子がSigDである、請求項14〜19のいずれか一項記載の組成物。
  21. 組換え細菌が、発現産物を構成的に発現し、かつ/または
    組換え細菌の調製物が、pHyspankプロモーターの制御下で発現産物を発現した場合の同等の条件下で観察されるよりも、少なくとも約4倍多いと判定されるレベルで、発現産物が該調製物中に発現されていることを特徴とする、
    請求項13〜20のいずれか一項記載の組換え細菌。
  22. 請求項13〜21のいずれか一項記載の組換え細菌を含む組成物であって、任意で、組成物が、
    (a)経口投与用に製剤化されている、
    (b)約10 4 〜約10 12 コロニー形成単位の組換え細菌を含む、および/または
    (c)生理学的に許容される担体を含み、任意で、生理学的に許容される担体が、乳酸発酵食品、発酵乳製品、難消化性デンプン、食物繊維、炭水化物、タンパク質、グリコシル化タンパク質、水、カプセル増量剤、および粘着性材料からなる群より選択される
    組成物。
  23. 請求項13〜21のいずれか一項記載の組換え細菌を含む、細菌細胞培養物。
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