CN115813869A - 一种感知进食状态智能给药的重组菌含片 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种感知进食状态智能给药的重组菌含片，所述重组菌含片中包括重组菌活性菌粉，所述重组菌活性菌粉所感知信号为口腔进食产生的食物代谢产物；所述重组菌活性菌粉中含有活性重组菌，所述活性重组菌中具有重组基因质粒，所述质粒由食物代谢产物诱导型启动子和抗菌药物表达基因组成；所述诱导型启动子能够感知环境中麦芽糖浓度的变化，随之释放抗菌药物。本发明所述重组菌含片可从源头有效避免副作用，提高用药针对性，还能减小重组菌的生物质消耗，改善定植能力。
Description
技术领域
本发明涉及基因工程重组菌领域，更具体地涉及一种感知进食状态智能给药的重组菌含片。
背景技术
龋齿是世界上最普遍的细菌性流行病之一。龋齿的发生是由于口腔内的菌群失衡引起的内源性疾病，主要通过口腔内细菌对牙釉质中的矿质成分进行分解，造成了对牙齿硬组织不同程度的破坏，严重的龋齿甚至可以导致败血症的发生。对于龋齿的发生机制，专家普遍认为是细菌、口腔环境、宿主以及时间综合作用的结果：口腔细菌中的产酸细菌能够代谢食物残渣而产生酸性物质，造成牙本质脱矿化，革兰氏阳性菌能够分解牙齿中的有机质，造成“龋洞”；口腔环境中存在大量食物残渣，既能够作为牙菌斑形成的基质，同时为细菌正常代谢提供物质基础；宿主是龋齿形成的靶器官，受到牙齿的形状、矿化程度和组织结构影响。
目前，对于龋齿最广泛的治疗方法仍集中于机械法，清除牙菌斑或者消除齿龈带，配合密封剂对龋洞密封等，但机械法治疗龋齿对于患者来说无疑是一种巨大的痛苦。药物法也是治疗龋齿的常见方法，主要是使用含氟化合物对牙齿的脱矿化和再矿化过程进行干预治疗，其他药物通过抑制龋菌变异链球菌的生长或影响牙菌斑生物膜的产生来治疗龋齿，一般药物以药片或缓释剂的形式进行服用，其中的有效成分在口腔里持续发挥化学作用或缓释作用，但实际上并没有针对性地、区别性地在口腔细菌活跃的时候进行有效作用，忽略了口腔环境变化对于口腔细菌生长的影响，因此，其对于治疗龋齿收效甚微。
口腔微生物的繁殖与人通过进食在口腔积累的食物存在有明确的因果关系。微生物在进食前后的生理情况有较大差异。现有技术中的药物治疗对于不同时间段的口腔环境进行无差别用药。如果持续释放的药物剂量过高，则容易引起副作用。虽然可以通过选用较低副作用的药物减轻该效应，但无法从根源上解决。
益生菌是一种活性细菌，可为宿主提供有益健康的微生物。对于益生菌的常见应用主要是针对肠道微生物菌群。同时，益生菌也对多种疾病具有良好的治疗效果。在人体中，除了肠道系统以外，口腔中也聚集了大量的微生物。因此，将益生菌用以治疗口腔疾病引起了广泛重视。大量研究表明，益生菌能够预防常见的口腔疾病，如龋齿、牙周疾病等，在益生菌的干预治疗下都取得了较为积极地效果。越来越多的研究集中于以益生菌介入龋齿治疗上。现有技术中，不乏以益生菌作为主要成分的产品应用于预防或者治疗口腔疾病中。市场上常见的产品为益生菌牙膏，也即将益生菌成分添加至牙膏中，其作用机制为益生菌黏附于牙齿表面形成菌落，降低牙菌斑在牙齿表面的粘附，从而阻止病原菌与宿主基体间的黏附，减少口腔中变异链球菌的数量，提供广谱的抗菌活性。
然而，天然益生菌的选择有限。对于特定的需求，经过基因工程改造的重组菌能够作为载体，控制表达目标蛋白实现精准治疗。例如，近年来，经过基因改造的工程细菌被尝试直接用于医药用途。然而，研究表明，通过基因工程改造的重组菌药物也容易被宿主代谢并排出体外，造成重组菌在体内定植时间短、发挥效果的时间段，导致药效降低的技术问题。
发明内容
进食后可以作为一个有效的抑菌时间点。如果能仅在这个时间点选用合理的口腔抑菌药物，可以避免药物滥用。为实现在进食后针对性的释放药物，往往需要药物释放系统具有智能判定的进食的能力。然而口腔环境存在多种微生物，并且各微生物在口腔疾病中的角色也较为复杂。在进食前后，口腔的生理环境存在很大变化，多种理化指标均有显著差异。对于智能用药而言，需要选择有代表性的且不容易误判的指标。中国人的饮食习惯中碳水化合物在正餐中占比很高，在进食过程中，部分食物中的淀粉被分解为麦芽糖。因此，可以选择使用麦芽糖作为代表性的判定信息物质，通过在重组菌中引入感应麦芽糖的相关基因控制元件，触发口腔抗菌药物的合成，以实现智能给药。
针对上述技术问题，本发明提出了一种感知进食状态智能给药的重组菌含片。
在优选的实施方案中，所述重组菌含片的制备原料包括以下组分，按照重量百分比组成：重组菌活性菌粉0.1-10％，糖醇75-85％，膳食补充剂5-15％，果胶5-10％，片剂辅料1-5％。
优选地，所述重组菌活性中含有活性重组菌。
优选地，所述活性重组菌中具有重组基因质粒，所述质粒由诱导型启动子和抗菌药物表达序列组成。
优选地，所述诱导型启动子为环境因子诱导型启动子，具体为受到麦芽糖浓度诱导。
优选地，所述重组菌的种类为E.coli Nissle 1917、唾液乳杆菌(Lactobacillussalivarius)PM-A0006、乳双歧杆菌(Bifidobacterium)、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)或植物乳杆菌(LactobacillusPlantarum)中的至少一种
优选地，所述重组菌表达的抗菌药物为糖苷酶、抗菌肽LL-37、防御素、抗菌肽bactenecin、富组蛋白中的至少一种。
本发明还提供一种重组菌含片的制备方法，具体包括以下步骤：
S1、将糖醇、膳食补充剂和水混匀，高温灭菌；
S2、将S1中灭菌混合物密封，置于无菌环境下降至常温，加入重组菌活性粉末进行搅拌，冷冻干燥后得到重组菌活性混合物；
S3、将片剂辅料加水混合后进行高温灭菌，将其置于无菌环境下加入果胶进行搅拌，其温度降至常温后加入重组菌活性混合物搅拌均匀，干燥、压片，即得到重组菌含片。
有益效果：
口腔环境存在多种微生物，并且各种微生物在口腔疾病中的角色较为复杂，而进食前后对口腔环境中许多生理指标具有显著影响，能够实现针对进食后口腔环境进行针对性地释放药物，是药物释放系统具有智能判定的口腔环境的基础。同时，进食后也是进行有效抑菌的重要时段，本发明仅对该时段合理释放口腔抑菌药物，避免过度用药。
在摄取食物后的这段时间内，口腔细菌的生长、代谢、繁殖活动较为活跃。本发明采用环境诱导型启动子替换重组菌核酸序列中的启动子，通过环境因子对重组菌表达特定蛋白进行操控，诱导型启动子在接收环境信号后，诱导表达产生大量抗菌药物，能够针对活跃细菌在短时间内提高给药剂量，起到精准用药的效果。在未进食或进食后口腔环境恢复到进食前水平时，本发明所述的重组菌不进行或停止进行核酸序列的表达，停止在口腔环境中产生抗菌药物，达到智能给药的技术效果。
相比于传统化学药物，本发明可从源头有效避免副作用。
相比于固定表达的重组菌，本发明除了能够避免副作用，提高针对性，还能减小重组菌的生物质消耗，改善定植能力。
附图说明
图1为本发明实施例1所述的受MalT调控启动子的质粒结构。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
实施例1
本发明提供了一种感知进食状态智能给药的重组菌含片；所述重组菌为基于MalT感应系统的基因工程改造重组菌；
所述重组菌中具有重组基因质粒，所述质粒中诱导型启动子为受麦芽糖浓度诱导型启动子，具体为麦芽糖操纵子区域；
所述质粒中还包括抗菌药物表达基因，具体为DspB基因，所表达的抗菌药物为β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶。
所述麦芽糖操纵子区域基因序列如SEQ ID NO:3所示；
所述表达β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的DspB基因序列如SEQ ID NO:4所示；
细菌细胞通过PTS系统对环境中的麦芽糊精进行结合和转运。当环境中葡萄糖充足时，PTS系统激活，EIIA主要以去磷酸化的形式主要存在，抑制麦芽糖转运复合体MalFGK2的活性，即便膜间隙的麦芽糖结合蛋白MalE结合麦芽糊精，也不进行转运活动。而环境中葡萄糖缺乏时，EIIA主要以磷酸化形式存在，解除对MalFGK2的抑制效果。MalE结合麦芽糊精后，MalFGK2利用水解ATP释放的能量来转运麦芽糊精。激活后的MalFGK2释放转录因子MalT，MalT同时结合ATP和麦芽三糖而激活。
本发明以激活的MalT结合到麦芽糖代谢相关基因的操纵子区域，当环境中麦芽糖浓度升高时，能够激活相关基因合成抗菌药物，释放到环境后，能够有效抑制口腔细菌的生长繁殖。
当口腔环境中麦芽糖增多时，激活MalT诱导型启动子，开始表达抗菌药物，释放到口腔环境中后，针对代谢活跃的口腔细菌进行抑制作用。当口腔环境中的麦芽糖含量恢复到正常水平后，不再能激活诱导型启动子合成相应抗菌药物，从而减少合成或不合成抗菌药物。基于上述针对性抑菌机制，达到根据环境条件的智能给药的效果。
本发明中所重组菌的起始菌为Ecoli Nissle 1917，以质粒pET28a为载体，将麦芽糖操纵子、抗菌药物表达基因与载体片段连接，得到重组质粒。
所述重组菌目标质粒命名为pMalT-DspB，完整序列如SEQ ID NO:1所示。
构建所述质粒可使用不同方法，例如全合成或无缝克隆方法等：
使用全合成法，可以使用重叠PCR方法，一般可由试剂公司直接完成，所述质粒完整序列如SEQ ID NO:1所示。
使用无缝克隆法，将重组基因目标序列作为PCR扩增模板，所述重组基因目标序列包括麦芽糖操纵子区域基因和抗菌药物表达基因的完整序列片段，进行PCR扩增后，通过Gibson Assembly方法上述基因插入质粒；所述插入目标基因片段的序列如SEQ ID NO:2所示。此部分包含麦芽糖感应调控的相关启动子、RBS和抗菌药物的待插入序列部分，由试剂公司合成，充当PCR扩增模板
根据载体和插入序列设计引物序列：V-F和V-R用来扩增载体骨架；F-F和F-R包含和插入片段序列和载体重叠序列，用于扩增插入片段，15～25bp的重叠区用于GibsonAssembly。
V-F/V-R做引物，pET28作为模板通过PCR的方式扩增载体骨架。F-F/F-R做引物，包含合成序列的质粒作为模板，同样通过PCR的方式扩增插入片段。使用高保真酶2x预混液，扩增温度根据引物Tm值调整(Tm值下2～3度)，扩增时间根据扩增长度和酶扩增速度而调整。琼脂糖凝胶电泳分析扩增产物长度是否正确，扩增正确的PCR产物通过凝胶回收试剂盒回收扩增产物。对凝胶回收的扩增产物进行定量测量，评估浓度、纯度。
所述在载体上插入目标基因序列所使用的引物详细信息如下：
| 引物名称 | 引物序列 |
| V-F | CAAAGCCCGAAAGGAAGCTGAGTTG |
| F-F | CATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCGCCGGTGATGCCGGCCACGAT |
| V-R | TGAGCGCAACGCAATTAATGTAAGTTAG |
| F-R | CAACTCAGCTTCCTTTCGGGCTTTGTCACTCATCCCCATTCGTCTT |
混合纯化后的载体片段、插入序列片段(摩尔比1:1～1:3，载体片段总量～50ng，片段用量根据和载体的长度比来调整)和Gibson Assembly 2x预混液(使用过通用生物、生工的对应产品)，反应体系总体积10ul，50℃30min，结束后置于冰上等待转化。
电转感受态细胞的制备方法，具体包括以下步骤：
A.接种Nissle1917于含有5ml新鲜灭菌的LB培养基的试管中，37℃震荡培养过夜；
B.取上述过夜培养的菌液1ml至含有100ml新鲜灭菌LB培养基的250ml锥形瓶中，37℃震荡培养；
C.检测OD600，当OD600在0.5～0.8之间时，将培养物置于冰上15min；
D.将冰上冷却的培养物转移到冰上预冷的50ml无菌离心管中(注意配平)，4℃，4000g离心15min，弃净上清；
E.30ml提前冰浴的灭菌水重悬菌体沉淀，4℃，4000g离心15min，弃净上清，重复该步骤一次；
F.30ml高压灭菌并提前冰浴的10％甘油重悬菌体沉淀，4℃，4000g离心15min，弃净上清；
G.取5ml上述10％甘油重悬菌体沉淀，以100ul等份分装入无菌EP管中，液氮冷冻，-80℃长期存放。
所述重组质粒导入感受态细胞的方法为电转化法，具体包括以下步骤：
I.冰上解冻电转感受态细胞，将Gibson assembly加入到电转感受态中，冰上孵育5～10min；
II.转移DNA/感受态混合物至冰上预冷的电击杯中；
III.将电击杯放入电转仪上，启动点击程序；
IV.电击结束后，立刻向感受态细胞中加入约0.5～1ml新鲜LB培养基，无菌条件下转移至无菌EP管中。37℃震荡培养约50min；
V.离心收集菌体沉淀，保留部分液体培养基，重悬菌体，涂布到卡纳(pET28)抗性的固体LB平板上；37℃培养过夜。
为了保证重组菌中质粒序列是否与目标一致，进行克隆鉴定进行验证，具体包括以下步骤：
a)分装含有卡纳抗性的LB培养基至无菌EP管中，挑取37℃培养过夜平板上的克隆至EP管中，37℃震荡培养，至能看到较为明显的浑浊；
b)F-F/F-R做引物，菌液做模板，进行PCR扩增(低保真酶预混液)，并设置阴性和阳性对照；
c)琼脂糖凝胶鉴定克隆的扩增信号是否和阳性对照一致；
d)对于PCR鉴定正确的克隆，吸取菌液样品或扩增后抽取的质粒样品，进一步进行测序鉴定；
e)对于测序正确的克隆，备份菌液样品和质粒样品。
在所述重组质粒中，插入目标基因序列包括麦芽糖操纵子基因序列和DspB基因序列；
所述麦芽糖操纵区域序列为：
AAGTGGTTGAGATCACATTTCCTTGCTCATCCCCGCAACTCCTCCCTGCCTAATCCCCCGCAGGATGAGGAAGGTCAACATCGAGCCTGGCAAACTAGCGATACCTCTAGATCTAGAAATAAT；
所述DspB基因序列为：
ATGAATTGTTGCGTAAAAGGCAATTCCATATATCCGCAAAAAACAAGTACCAAGCAGACCGGATTAATGCTGGACATCGCCCGACATTTTTATTCACCCGAGGTGATTAAATCCTTTATTGATACCATCAGCCTTTCCGGCGGTAATTTTCTGCACCTGCATTTTTCCGACCATGAAAACTATGCGATAGAAAGCCATTTACTTAATCAACGTGCGGAAAATGCCGTGCAGGGCAAAGACGGTATTTATATTAATCCTTATACCGGAAAGCCATTCTTGAATTATCGGCAACTTGACGATATCAAAGCCTATGCTAAGGCAAAAGGCATTGAGTTGATTCCCGAACTTGACAGCCCGAATCACATGACGGCGATCTTTAAACTGGTGCAAAAAGACAGAGGGGTCAAGTACCTTCAAGGATTAAAATCACGCCAGGTAGATGATGAAATTGATATTACTAATGCTGACAGTATTACTTTTATGCAATCTTTAATGAGTGAGGTTATTGATATTTTTGGCGACACGAGTCAGCATTTTCATATTGGTGGCGATGAATTTGGTTATTCTGTGGAAAGTAATCATGAGTTTATTACGTATGCCAATAAACTATCCTACTTTTTAGAGAAAAAAGGGTTGAAAACCCGAATGTGGAATGACGGATTAATTAAAAATACTTTTGAGCAAATCAACCCGAATATTGAAATTACTTATTGGAGCTATGATGGCGATACGCAGGACAAAAATGAAGCTGCCGAGCGCCGTGATATGCGGGTCAGTTTGCCGGAGTTGCTGGCGAAAGGCTTTACTGTCCTGAACTATAATTCCTATTATCTTTACATTGTTCCGAAAGCTTCACCAACCTTCTCGCAAGATGCCGCCTTTGCCGCCAAAGATGTTATAAAAAATTGGGATCTTGGTGTTTGGGATGGACGAAACACCAAAAACCGCGTACAAAATACTCATGAAATAGCCGGCGCAGCATTATCGATCTGGGGAGAAGATGCAAAAGCGCTGAAAGACGAAACAATTCAGAAAAACACGAAAAGTTTATTGGAAGCGGTGATTCATAAGACGAATGGGGATGAGTGA；
所述插入合成序列为：
CGCCGGTGATGCCGGCCACGATGCGTCCGGCGTAGAGGATCGAGATCTCGATCCCCAAGTGGTTGAGATCACATTTCCTTGCTCATCCCCGCAACTCCTCCCTGCCTAATCCCCCGCAGGATGAGGAAGGTCAACATCGAGCCTGGCAAACTAGCGATACCTCTAGATCTAGAAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACCATGAATTGTTGCGTAAAAGGCAATTCCATATATCCGCAAAAAACAAGTACCAAGCAGACCGGATTAATGCTGGACATCGCCCGACATTTTTATTCACCCGAGGTGATTAAATCCTTTATTGATACCATCAGCCTTTCCGGCGGTAATTTTCTGCACCTGCATTTTTCCGACCATGAAAACTATGCGATAGAAAGCCATTTACTTAATCAACGTGCGGAAAATGCCGTGCAGGGCAAAGACGGTATTTATATTAATCCTTATACCGGAAAGCCATTCTTGAATTATCGGCAACTTGACGATATCAAAGCCTATGCTAAGGCAAAAGGCATTGAGTTGATTCCCGAACTTGACAGCCCGAATCACATGACGGCGATCTTTAAACTGGTGCAAAAAGACAGAGGGGTCAAGTACCTTCAAGGATTAAAATCACGCCAGGTAGATGATGAAATTGATATTACTAATGCTGACAGTATTACTTTTATGCAATCTTTAATGAGTGAGGTTATTGATATTTTTGGCGACACGAGTCAGCATTTTCATATTGGTGGCGATGAATTTGGTTATTCTGTGGAAAGTAATCATGAGTTTATTACGTATGCCAATAAACTATCCTACTTTTTAGAGAAAAAAGGGTTGAAAACCCGAATGTGGAATGACGGATTAATTAAAAATACTTTTGAGCAAATCAACCCGAATATTGAAATTACTTATTGGAGCTATGATGGCGATACGCAGGACAAAAATGAAGCTGCCGAGCGCCGTGATATGCGGGTCAGTTTGCCGGAGTTGCTGGCGAAAGGCTTTACTGTCCTGAACTATAATTCCTATTATCTTTACATTGTTCCGAAAGCTTCACCAACCTTCTCGCAAGATGCCGCCTTTGCCGCCAAAGATGTTATAAAAAATTGGGATCTTGGTGTTTGGGATGGACGAAACACCAAAAACCGCGTACAAAATACTCATGAAATAGCCGGCGCAGCATTATCGATCTGGGGAGAAGATGCAAAAGCGCTGAAAGACGAAACAATTCAGAAAAACACGAAAAGTTTATTGGAAGCGGTGATTCATAAGACGAATGGGGATGAGTGA。
所述重组菌活性菌粉的制备方法，具体包括以下步骤：
1、工程菌接种于LB液体培养基中，置于37℃、170r/min的恒温摇床上培养10h；
2、将种子液以3％(v/v)的比例接入装有20mL发酵培养基的三角瓶中，置于37℃恒温培养振荡器120r/min振荡培养16h；
3、将发酵液转移至离心管中，8500r/min离心8min，收集菌体。加入等体积生理盐水洗涤，轻轻吹打均匀沉淀，8500r/min离心8min，收集菌体，重复洗涤2次。洗涤后，加入等体积保护剂并吹打均匀，置于-80℃冰箱预冻2h，预冻结束后立即转入-55℃，真空度8Pa的超低温真空冷冻干燥机制成干菌粉。
本发明提供一种含有上述重组菌的含片，所述重组菌含片的制备原料包括以下组分，按照重量百分比组成：重组菌活性菌粉2％，山梨糖醇81％，低聚果糖5％，果胶7％，硬脂酸镁5％。
所述含有上述重组菌的含片的制备方法，具体包括以下步骤：
S1、将山梨糖醇、低聚果糖和水置于蓝口瓶中混匀，置于高温灭菌锅中灭菌1.5h，灭菌温度为120℃；
S2、待S1中灭菌混合物密封，置于无菌环境下降至常温，将重组菌活性粉末加入进行搅拌，冷冻干燥后得到重组菌活性混合物；
S3、将硬脂酸镁加水混合后进行120℃灭菌1.5h，将其置于无菌环境下加入果胶进行搅拌，其温度降至常温后加入重组菌活性混合物搅拌均匀，冷冻干燥后得到重组菌含片原料粉末，将其压片，即得到重组菌含片。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种感知进食状态智能给药的重组菌含片，其特征在于，所述重组菌含片中包括重组菌活性菌粉，所述重组菌活性菌粉所感知信号为口腔进食产生的食物代谢产物。
2.根据权利要求1所述的重组菌含片，其特征在于，所述重组菌活性菌粉中含有活性重组菌，所述活性重组菌中具有重组基因质粒，所述质粒由食物代谢产物诱导型启动子和抗菌药物表达基因组成。
3.根据权利要求1所述的重组菌含片，其特征在于，所述诱导型启动子的诱导信号为麦芽糖。
4.根据权利要求1所述的重组菌含片，其特征在于，所述诱导型启动子为MalT诱导型启动子。
5.根据权利要求1所述的重组菌含片，其特征在于，所述重组菌的种类为E.coliNissle 1917、唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)PM-A0006、乳双歧杆菌(Bifidobacterium)、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)或植物乳杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)中的至少一种。
6.根据权利要求1所述的重组菌含片，其特征在于，所述重组菌表达的抗菌药物为糖苷酶、抗菌肽LL-37、防御素、抗菌肽bactenecin、富组蛋白中的至少一种。
7.根据权利要求1所述的重组菌含片，其特征在于，所述重组菌的抗菌药物表达基因为DspB基因，所表达的抗菌药物为β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶。
8.根据权利要求1所述的重组菌含片，其特征在于，所述重组菌活性菌粉中含有基于MalT感应系统的基因工程改造重组菌，所述重组菌质粒中诱导型启动子为受Malt诱导型启动子，所述重组菌述质粒中还包括抗菌药物表达基因，具体为DspB基因，所表达的抗菌药物为β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶。
9.根据权利要求1所述的重组菌含片，其特征在于，所述重组菌含片的制备原料包括以下组分，按照重量百分比组成：重组菌活性菌粉0.1-10％，糖醇75-85％，膳食补充剂5-15％，果胶5-10％，片剂辅料1-5％。
10.一种如权利要求1-9所述智能感知进食状态智能给药的重组菌含片的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
S1、将糖醇、膳食补充剂和水混匀，高温灭菌；
S2、将S1中灭菌混合物密封，置于无菌环境下降至常温，加入重组菌活性粉末进行搅拌，冷冻干燥后得到重组菌活性混合物；
S3、将片剂辅料加水混合后进行高温灭菌，将其置于无菌环境下加入果胶进行搅拌，其温度降至常温后加入重组菌活性混合物搅拌均匀，干燥、压片，即得到重组菌含片。
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