JP4473570B2 - 生体内での微生物の生残性を向上させる方法及び生残性が向上した微生物 - Google Patents
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Description
また、微生物のhrcA遺伝子を破壊することにより、ヒト及び動物の消化管内での微生物の胃酸及び/または胆汁酸耐性を向上させる方法に関する。
更に、本発明は、hrcA遺伝子を破壊することにより、ヒト及び動物の生体内での生残性が向上した微生物に関する。また、hrcA遺伝子を破壊することにより、胃酸及び/または胆汁酸等のストレスに対して耐性が向上した微生物に関する。
また、本発明の微生物は、胃酸及び/または胆汁酸耐性が向上していることにより、腸管への到達率が上がり、生きている微生物が有する宿主への整腸作用等の有益な保健効果を有し、いわゆるプロバイオティクス機能が向上した微生物を含有する飲食品及び飼料を提供することができる。
更に、胃酸及び/または胆汁酸等の消化液耐性が弱かったためにプロバイオティクスとしての効果をこれまで期待されていなかった微生物についても、消化液耐性を付与してその汎用性を広げることを課題とする。
すなわち、本発明は、微生物のhrcA遺伝子を破壊することにより、該微生物のヒト及び動物の生体内での生残性を向上させる方法を提供することにある。
また、本発明は、微生物のhrcA遺伝子を破壊することにより、該微生物のヒト及び動物の消化管内での胃酸及び/または胆汁酸耐性を向上させる方法を提供することにある。
更に、本発明は、hrcA遺伝子を破壊することにより、ヒト及び動物の生体内での生残性が向上した微生物を提供することにある。
また、本発明は、hrcA遺伝子を破壊することにより、ヒト及び動物の消化管内での胃酸及び/または胆汁酸耐性が向上した微生物を提供することにある。
更にまた、本発明は、hrcA遺伝子を破壊することにより、ヒト及び動物の生体内、特に、ヒト及び動物の消化管内での胃酸及び/または胆汁酸耐性が向上した食用または飼料に供されるラクトバチルス属、ビフィドバクテリウム属、エンテロコッカス属、ラクトコッカス属、ストレプトコッカス属及びクロストリジウム属の微生物を提供することにある。
更にまた、本発明は、hrcA遺伝子を破壊することにより、ヒト及び動物の生体内、特に、ヒト及び動物の消化管内での胃酸及び/または胆汁酸耐性が向上したラクトバチルス・アシドフィルスまたはラクトバチルス・ガセリを提供することにある。
更にまた、本発明は、hrcA遺伝子を破壊することにより、ヒト及び動物の生体内、特に、ヒト及び動物の消化管内での胃酸及び/または胆汁酸耐性が向上したラクトバチルス・アシドフィルスSBT2062hrcA遺伝子破壊株(FERM P−19224またはFERM P−19337)またはラクトバチルス・ガセリSBT2055hrcA遺伝子破壊株を提供することにある。
更にまた、本発明は、hrcA遺伝子を破壊することにより、ヒト及び動物の生体内、特に、ヒト及び動物の消化管内での胃酸及び/または胆汁酸耐性が向上した微生物を含有することを特徴とする飲食品または飼料を提供することにある。
更には、本発明による、ヒト及び動物の生体内での微生物の生残性を向上させる方法は、消化管だけでなく他の体内の器官内への生きたままの到達や生残性を向上することができる。
また、胃酸及び/または胆汁酸等の消化液耐性がもともと弱いと考えられるStreptococcus diacetylactis、Sc.cremoris、 Sc.thermophilus等のストレプトコッカス属細菌、Lactococcus lactis等のラクトコッカス属細菌やLb.delbrueckii subsp.bulgaricus等のラクトバチルス属細菌といったいわゆる酪農乳酸菌も挙げられる。
遺伝子導入の方法としては、一般的な接合伝達法や形質転換法等が挙げられるが、特に、エレクトロポレーション法が適当である。
本発明の微生物は、菌体及び/または培養物をそのままの状態で利用することができ、また乾燥させて粉末状態にしても利用可能である。なお、これらの乾燥は、凍結乾燥で行うことが菌体等を変質・死滅させることなく乾燥することができるため好ましい。
本発明の微生物は、飲食品や飼料の製造工程中に原材料として添加することもできる。
更に、本発明の微生物は、賦形剤、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、流動性促進剤、滑沢剤等を使用して、糖衣錠やタブレット等の錠剤、顆粒剤、液剤、カプセル等の形態に製剤化して利用可能である。
更にまた、本発明の微生物は、紅茶、緑茶、果汁飲料、野菜飲料、乳製品、食肉製品、水産練製品、デザート類、ドレッシング類、健康食品類、麺類等の様々な飲食品に利用可能である。
更にまた、本発明の微生物のうち、乳酸菌は、醗酵乳やチーズ等の醗酵乳製品のスターター菌種として利用することができる。これらの乳酸菌を利用して乳酸醗酵させて調製したものや、醗酵ミックスにこれらの粉末等を添加することもできる。また、寒天やゼラチン等で固めたもの、醗酵後固まったカードを攪拌して液状にしたもの、更にアイスクリームと同様に凍結したものを含む。
更にまた、本発明の微生物は、牛、豚、鶏等の家畜用飼料に利用することができる。また、サイレージの醗酵を促進させるためのスターターとして利用することも可能である。
本発明の微生物は、乾燥菌体重量として通常飲食品中に0.01〜20(w/w)%、好ましくは0.1〜2(w/w)%添加すると良い。
以下に、実施例及び試験例を挙げ、本発明を更に詳しく説明する。しかし、本発明はこの記載内容に限定されるものではない。
(hrcA遺伝子の取得と導入プラスミドの構築))
プロバイオティクス菌として整腸作用等の生理効果が報告されているラクトバチルス・アシドフィルスSBT2062(FERM P−10730)株の染色体から、hrcA遺伝子周辺配列をPCR法により増幅した。PCRに用いたプライマーは、すでに決定しているラクトバチルス・アシドフィルスSBT2062(FERM P−10730)株のシーケンス情報を元に作製した。このラクトバチルス・アシドフィルスSBT2062(FERM P−10730)株のシーケンス情報は、本発明の出願人がシーケンスを行い決定したものである(Gene Bank Accession no. AB059359)。すなわち、以下に示すプライマーを合成して用いた(配列表参照)。
5’側:5’-GATCTCCTATGAAGAACTGCTC-3’(配列番号1)
3’側:5’-CACTGTCTTGGATCCAACTGGTTCA-3’(配列番号2)
<hrcA下流配列>
5’側:5’-CAACTGGATCCACCTTTTCATAGGGTAAAC-3’(配列番号3)
3’側:5’-AAATCATTTGGTAAGCTTGATCCTAATTT-3’(配列番号4)
すなわち、hrcA上流配列の5’側と3’側及びhrcA下流配列の5’側と3’側の配列からプライマーを合成した。これらのプライマーを用いたPCRの増幅断片を制限酵素処理(HindIII及びBamH I)したのち、エリスロマイシン耐性遺伝子を含むpG+host6ベクターのマルチクローニングサイトに上流−下流の順に挿入した。こうして、内部配列が欠落したhrcA遺伝子(hrcA’遺伝子)を含むプラスミドpG+host6::hrcA’が得られ、これを大腸菌に導入し、大量調製、精製を行った。
上記のようにして作成したプラスミドをWalkerらの方法(D.C.Walker,K.Aoyama and T.R.Klaenhammer, FEMS Microbiol.Lett. 138, 233-237(1996))に従い、電気パルス法を用いてラクトバチルス・アシドフィルスSBT2062(FERM P−10730)株に導入した。次に、導入したプラスミドを染色体へ挿入するため、プラスミド導入株をエリスロマイシン(シグマ社製)20mg/mlを含んだMRS培地(ディフコ社製)中、43℃で培養することにより相同組換えを誘発し、染色体上のhrcA遺伝子内部にプラスミドを挿入した。挿入株を選別するためエリスロマイシンを含んだ培地にて43℃で培養を継続し、染色体上に抗生物質耐性が付与されたhrcA遺伝子破壊株(シングルクロスオーバー)を取得した。本発明において得たラクトバチルス・アシドフィルスSBT2062hrcA遺伝子破壊株(シングルクロスオーバー)は、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに受託番号FERM P−19224として寄託している。
更にこのhrcA遺伝子破壊株について、形質を安定させるために低温(28℃)条件下、エリスロマイシンを含まないMRS培地で培養することによりプラスミドを脱落させ、プラスミド由来のhrcA’遺伝子と野生株のhrcA遺伝子を入れ替えることで、hrcA遺伝子破壊株(ダブルクロスオーバー)を取得した。本発明において得たラクトバチルス・アシドフィルスSBT2062hrcA遺伝子破壊株(ダブルクロスオーバー)は、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに受託番号FERM P−19337として寄託している。
実施例1で得られたhrcA遺伝子破壊株(シングルクロスオーバー)(以下、sΔhrcA株ということもある。)について、胃酸耐性試験を行った。対照として、ラクトバチルス・アシドフィルスSBT2062(FERM P−10730)野生株についても同様の試験を行った。
(方法)
鈴木らの方法(腸内細菌学雑誌,11,11-17(1997))を参考にして人工胃液試験を行った。ペプシン(和光純薬工業社製)0.4%を含む12.6%脱脂乳培地を塩酸でpH3.0及び2.5に調整したものを人工胃液混合物とし、これにMRS培地で培養後、洗浄した菌体を3%接種して、pH2.5のものは3時間、pH3.0のものは6時間、37℃で振とうした。振とう後の懸濁液をMRS寒天培地に塗布し、37℃で3日間、アネロパック(三菱ガス化学社製)を用いて嫌気培養を行った。培養後、生菌数を測定した。
(試験結果)
結果を表1及び図1に示した。sΔhrcA株は、野生株に比べてpH3.0・6時間処理後で約4倍、pH2.5・3時間処理後で約6倍と高い生残率を示した。
よって、hrcA遺伝子を破壊することにより、胃酸に対する耐性が向上することが明らかとなった。よって、ヒトまたは動物がこの菌体を摂取した際の腸内への到達率が高まると考えられる。
実施例1で得られたsΔhrcA株について、胆汁酸耐性試験を行った。対照として、ラクトバチルス・アシドフィルスSBT2062(FERM P−10730)野生株についても同様の試験を行った。
(方法)
ウシ胆汁末(OXOID社製)を3%含むPBS(-)緩衝液(日水製薬社製)に、MRS培地で培養後、洗浄した各菌株を1%接種し、37℃で3時間及び6時間処理した。処理後の懸濁液をMRS寒天培地に塗布し、37℃で3日間、アネロパック(三菱ガス化学社製)を用いて嫌気培養を行い、培養後、生菌数測定を行った。
(試験結果)
結果を表2、図2に示した。sΔhrcA株は、野生株と比較して、3時間処理後では約100倍、6時間処理後では約160倍の高い生残率を示した。
プロバイオティクス菌をヒトが摂取する際の一つの形態として、栄養的にも優れている醗酵乳の形態が考えられる。そこで、sΔhrcA株を用いて醗酵乳を調製した。更に、ヒトが摂取した場合のsΔhrcA株の消化液耐性について調べるため、鈴木らの方法(腸内細菌学雑誌,11,11-17(1997))に従い、人工消化試験を行った。
(人工胃液試験方法)
殺菌した醗酵乳ベース(無脂乳固形分9.5%、脂肪3.2%)にL. delbrueckii subsp.bulgaricus ATCC11842株、S. thermophilusATCC19258株を各1%接種し、更にMRS培地で培養後、洗浄したラクトバチルス・アシドフィルスSBT2062(FERM P−10730)野生株、またはsΔhrcA株を3%接種し、38℃で3時間醗酵させ、醗酵乳を調製した。調製した醗酵乳、市販牛乳、及び4%ペプシン溶液(和光純薬工業社製)を50:49:1の割合で混合し、塩酸を用いてpHを2.5に調整し、人工胃液混合物を調製した。調製後、37℃で振とう保存し、経時的に生菌数を測定した。なお、生菌数は変法LBS寒天培地(LBS Agar(BBL社製) 84 g、LAB-LEMCO POWDER(OXOID社製) 8 g、酢酸ナトリウム・三水塩 7.5 g、及び水1Lを、115℃15分間滅菌後、酢酸1.8mlを添加して調製する) に塗抹し、37℃で3日間、アネロパック(三菱ガス化学社製)を用いて嫌気培養を行った。培養後、生菌数測定を行った。
牛乳97.6 g、脱脂粉乳1.5 g 、酵母エキス(アサヒビール社製)0.5 g 及びウシ胆汁末(OXOID社製)0.4 gを混合溶解し、95℃で30分間加熱殺菌し、人工腸液基礎培地を調製した。人工腸液基礎培地、25%パンクレアチン(「パンクレアチンF」:天野エンザイム社製)溶液、及び人工胃液試験方法で使用したものと同じpH2.5で1時間処理後の人工胃液混合物(醗酵乳:市販牛乳:4%ペプシン溶液=50:49:1)を、96:1:3の割合で混合し、人工腸液混合物を調製した。この人工腸液混合物を37℃で嫌気的に保持し、経時的に生菌数を測定した。生菌数測定用培地は、人工胃液試験と同様の変法LBS寒天培地を使用し、人工胃液試験と同様の培養条件にて試験を行った。
人工胃液試験の結果を表3、図3に、人工腸液試験の結果を図4に示した。人工胃液試験は、sΔhrcA株は野生株と比較して、3時間処理後では約28倍、6時間処理後では約13倍の生残率を示した。一方、人工腸液試験では、sΔhrcA株と野生株の両株とも減少することなく、菌数を維持していた。
実施例1で得られたhrcA遺伝子破壊株(ダブルクロスオーバー)(以下、dΔhrcA株ということもある。)について、胃酸耐性試験を行った。対照として、ラクトバチルス・アシドフィルスSBT2062(FERM P−10730)野生株についても同様の試験を行った。
(方法)
鈴木らの方法(腸内細菌学雑誌,11,11-17(1997))を参考にして人工胃液試験を行った。ペプシン(和光純薬工業社製)0.4%を含むPBS緩衝液を塩酸でpH3.2に調整したものを人工胃液混合物とし、これにMRS培地で培養後、洗浄した菌体を3%接種して、3又は6時間、37℃で振とうした。振とう後の懸濁液をMRS寒天培地に塗布し、37℃で3日間、アネロパック(三菱ガス化学社製)を用いて嫌気培養を行った。培養後、生菌数を測定した。
(試験結果)
結果を表4及び図5に示した。dΔhrcA株は、野生株に比べて3時間処理後では約17倍、6時間処理後では約190倍の高い生残率を示した。
実施例1で得られたdΔhrcA株について、胆汁酸耐性試験を行った。対照として、ラクトバチルス・アシドフィルスSBT2062(FERM P−10730)野生株についても同様の試験を行った。
ウシ胆汁末(OXOID社製)を6%含むPBS(-)緩衝液(日水製薬社製)に、MRS培地で培養後、洗浄した各菌株を1%接種し、37℃で3時間及び6時間処理した。処理後の懸濁液をMRS寒天培地に塗布し、37℃で3日間、アネロパック(三菱ガス化学社製)を用いて嫌気培養を行い、培養後、生菌数測定を行った。
結果を表5、図6に示した。dΔhrcA株は、野生株と比較して、3時間処理後では約158倍、6時間処理後では約46倍の高い生残率を示した。
プロバイオティクス菌をヒトが摂取する際の一つの形態として、栄養的にも優れている醗酵乳の形態が考えられる。そこで、dΔhrcA株を用いて醗酵乳を調製した。更に、ヒトが摂取した場合のdΔhrcA株の消化液耐性について調べるため、鈴木らの方法(腸内細菌学雑誌,11,11-17(1997))に従い、人工消化試験を行った。
殺菌した醗酵乳ベース(無脂乳固形分9.5%、脂肪3.2%)にL. delbrueckii subsp.bulgaricus ATCC11842株、S. thermophilusATCC19258株を各1%接種し、更にMRS培地で培養後、洗浄したラクトバチルス・アシドフィルスSBT2062(FERM P−10730)野生株、またはdΔhrcA株を3%接種し、38℃で3時間醗酵させ、醗酵乳を調製した。調製した醗酵乳、市販牛乳、及び4%ペプシン溶液(和光純薬工業社製)を50:49:1の割合で混合し、塩酸を用いてpHを2.5に調整し、人工胃液混合物を調製した。調製後、37℃で振とう保存し、経時的に生菌数を測定した。なお、生菌数は変法LBS寒天培地(LBS Agar(BBL社製) 84 g、LAB-LEMCO POWDER(OXOID社製) 8 g、酢酸ナトリウム・三水塩 7.5 g、及び水1Lを、115℃15分間滅菌後、酢酸1.8mlを添加して調製する) に塗抹し、37℃で3日間、アネロパック(三菱ガス化学社製)を用いて嫌気培養を行った。培養後、生菌数測定を行った。
牛乳97.6 g、脱脂粉乳1.5 g 、酵母エキス(アサヒビール社製)0.5 g 及びウシ胆汁末(OXOID社製)0.4 gを混合溶解し、95℃で30分間加熱殺菌し、人工腸液基礎培地を調製した。人工腸液基礎培地、25%パンクレアチン(「パンクレアチンF」:天野エンザイム社製)溶液、及び人工胃液試験方法で使用したものと同じpH2.5で1時間処理後の人工胃液混合物(醗酵乳:市販牛乳:4%ペプシン溶液=50:49:1)を、96:1:3の割合で混合し、人工腸液混合物を調製した。この人工腸液混合物を37℃で嫌気的に保持し、経時的に生菌数を測定した。生菌数測定培地は、人工胃液試験と同様の変法LBS寒天培地を使用し、人工胃液試験と同様の培養条件にて試験を行った。
人工胃液試験の結果を表6、図7に、人工腸液試験の結果を図8に示した。人工胃液試験では、dΔhrcA株は野生株と比較して、3時間処理後では約45倍、6時間処理後では約16倍の生残率を示した。一方、人工腸液試験では、dΔhrcA株と野生株の両株とも減少することなく、菌数を維持していた。
(hrcA遺伝子の取得と導入プラスミドの構築))
プロバイオティクス菌として整腸作用等の生理効果が報告されているラクトバチルス・ガセリSBT2055(FERM P−15535)の染色体から、hrcA遺伝子周辺配列をPCR法により増幅した。PCRに用いたプライマーは、現在解析が進められていて、その大部分がすでに一般公開されているラクトバチルス・ガセリのシーケンス情報(NCBI Microbial Genomes Annotation Projectによる)を元に作製した。すなわち、以下に示すプライマーを合成して用いた(配列表参照)。
<hrcA上流配列>
5’側:5’-GGAGACCCTAATCAGGAAGATGGG-3’(配列番号5)
3’側:5’-GCACTTGAAAGCTTGACAGGCAGTTAATTC -3’(配列番号6)
<hrcA下流配列>
5’側:5’-GATGCTATTTCAAGCTTGATTGGTTTTAATCC-3’(配列番号7)
3’側:5’-GGCAACTACAGAAGGAGTTGTACG-3’(配列番号8)
すなわち、hrcA上流配列の5’側と3’側及びhrcA下流配列の5’側と3’側の配列からプライマーを合成した。これらのプライマーを用いたPCRの増幅断片を制限酵素(HindIII)処理したのち、エリスロマイシン耐性遺伝子を含むpG+host6ベクターのマルチクローニングサイトに上流−下流の順に挿入した。こうして、内部配列が欠落したhrcA遺伝子(hrcA’遺伝子)を含むプラスミドpG+host6::hrcA’が得られ、これを大腸菌に導入し、大量調製、精製を行った。
上記のようにして作成したプラスミドを実施例1で行った方法と同様にして、ラクトバチルス・ガセリSBT2055(FERM P−15535)株に導入した。次に実施例1で行った方法と同様にして相同組換えを誘発し、染色体上に抗生物質耐性が付与されたhrcA遺伝子破壊株(シングルクロスオーバー)を取得した。
更にこのhrcA遺伝子破壊株について、形質を安定させるために実施例1で行った方法と同様にしてプラスミドを脱落させ、プラスミド由来のhrcA’遺伝子と野生株のhrcA遺伝子を入れ替えることで、hrcA遺伝子破壊株(ダブルクロスオーバー)を取得した。本発明において得たラクトバチルス・ガセリSBT2055hrcA遺伝子破壊株(ダブルクロスオーバー)は、ラクトバチルス・ガセリSBT10842と命名して、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに寄託したところ、バイオセーフティーレベル2に該当するとして受託拒否となっているが、受託拒否証明を得ている。本微生物株は本出願人の研究所に保管されており、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターの管理と同様に、出願時に第三者に分譲する用意があったし、引き続き分譲する用意がある。
実施例18で得られたラクトバチルス・ガセリSBT2055hrcA遺伝子破壊株(ダブルクロスオーバー)(以下、dΔhrcA株ということもある。)について、胃酸耐性試験を行った。対照として、ラクトバチルス・ガセリSBT2055(FERM P−15535)野生株についても同様の試験を行った。
(方法)
鈴木らの方法(腸内細菌学雑誌,11,11-17(1997))を参考にして人工胃液試験を行った。ペプシン(和光純薬工業社製)0.4%を含む12.6%脱脂乳培地を塩酸でpH2.5に調整したものを人工胃液混合物とし、これにMRS培地で培養後、洗浄した菌体を3%接種して、37℃で6時間振とうした。振とう後の懸濁液をMRS寒天培地に塗布し、37℃で3日間、アネロパック(三菱ガス化学社製)を用いて嫌気培養を行った。培養後、生菌数を測定した。
結果を表7及び図9に示した。dΔhrcA株は、野生株に比べて6時間処理後で約10倍の高い生残率を示した。
よって、hrcA遺伝子を破壊することにより、胃酸に対する耐性が向上することが明らかとなった。よって、ヒトまたは動物がこの菌体を摂取した際の腸内への到達率が高まると考えられる。
Claims (6)
- 微生物のhrcA遺伝子を破壊することにより、ヒト及び動物の消化管内での微生物の生残性を向上させる方法であって、当該微生物が以下のいずれかである方法;
Lactobacillus acidophilus、Lb.gasseri、Lb.casei、Lb.salivarius、Lb.plantarum、Lb.johnsonii、Lb.reuteri、Lb.rhamnosus、Lb.fermentum、Lb.murinus、Bifidobacterium longum、Bif.bifidum、Bif.breve、Bif.animalis、Bif.thermophilum、Bif.pseudolongum、Enterococcus faecium、Ec.faecalis、Clostridium butyricum、Streptococcus diacetylactis、Sc.cremoris、Sc.thermophilus、Lactococcus lactis、Lb.delbrueckii subsp.bulgaricus。 - 微生物のhrcA遺伝子を破壊することにより、ヒト及び動物の消化管内での微生物の胃酸及び/または胆汁酸耐性を向上させる方法であって、当該微生物が以下のいずれかである方法;
Lactobacillus acidophilus、Lb.gasseri、Lb.casei、Lb.salivarius、Lb.plantarum、Lb.johnsonii、Lb.reuteri、Lb.rhamnosus、Lb.fermentum、Lb.murinus、Bifidobacterium longum、Bif.bifidum、Bif.breve、Bif.animalis、Bif.thermophilum、Bif.pseudolongum、Enterococcus faecium、Ec.faecalis、Clostridium butyricum、Streptococcus diacetylactis、Sc.cremoris、Sc.thermophilus、Lactococcus lactis、Lb.delbrueckii subsp.bulgaricus。 - hrcA遺伝子を破壊することにより、ヒト及び動物の消化管内での生残性が向上した、以下のいずれかの微生物;
Lactobacillus acidophilus 、Lb.gasseri、Lb.casei、Lb.salivarius、Lb.plantarum、Lb.johnsonii、Lb.reuteri、Lb.rhamnosus、Lb.fermentum、Lb.murinus、Bifidobacterium
longum、Bif.bifidum、Bif.breve、Bif.animalis、Bif.thermophilum、Bif.pseudolongum、Enterococcus faecium、Ec.faecalis、Clostridium butyricum、Streptococcus diacetylactis、Sc.cremoris、Sc.thermophilus、Lactococcus lactis、Lb.delbrueckii subsp
.bulgaricus。 - hrcA遺伝子を破壊することにより、ヒト及び動物の消化管内での胃酸及び/または胆汁酸耐性が向上した以下のいずれかの微生物;
Lactobacillus acidophilus 、Lb.gasseri、Lb.casei、Lb.salivarius、Lb.plantarum、Lb.johnsonii、Lb.reuteri、Lb.rhamnosus、Lb.fermentum、Lb.murinus、Bifidobacterium
longum、Bif.bifidum、Bif.breve、Bif.animalis、Bif.thermophilum、Bif.pseudolongum、Enterococcus faecium、Ec.faecalis、Clostridium butyricum、Streptococcus diacetylactis、Sc.cremoris、Sc.thermophilus、Lactococcus lactis、Lb.delbrueckii subsp.bulgaricus。 - 微生物がラクトバチルス・アシドフィルスSBT2062hrcA遺伝子破壊株(FERMP−19224 又は FERM P−19337)又はラクトバチルス・ガセリSBT2055hrcA遺伝子破壊株である請求項3又は4に記載の微生物。
- 請求項3乃至5のいずれかの微生物を含有することを特徴とする飲食品または飼料。
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