JP2020534837A - 活性細胞を含む方法、組成物、及び移植可能な要素 - Google Patents

活性細胞を含む方法、組成物、及び移植可能な要素 Download PDF

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Abstract

活性細胞（例えば、組み換え活性細胞、例えば、組み換えＲＰＥ細胞）又はその誘導体を含む細胞組成物、並びに活性細胞を含む組成物、医薬品、及び移植可能な要素、並びにその作製及び使用方法が本明細書に記載されている。この細胞及び組成物は、本明細書に記載の疾病、障害、又は状態の処置に有用な治療薬を発現し得る。【選択図】なし

Description

発明の詳細な説明
［優先権の主張］
本出願は、２０１７年９月２７日に出願された米国仮特許出願第６２／５６３，８７７号；２０１８年４月４日に出願された米国仮特許出願第６２／６５２，８８１号；及び２０１８年４月４日に出願された米国仮特許出願第６２／６５２，８８２号に対する優先権を主張するものである。上記の仮出願のそれぞれの開示内容は、全体が参照により本明細書に援用される。
［配列表］
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出され、全体が参照により本明細書に援用される配列表を含む。２０１８年９月２６日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、Ｓ２２２５−７０１５ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、サイズは２０５，１４５バイトである。
［背景］
移植された細胞、組織、及びデバイスの機能は、生成物を提供する能力及びレシピエントの生物学的免疫応答経路を含む多くの要因に依存している（Ａｎｄｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｍｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ（２００８）２０：８６−１００；Ｌａｎｇｅｒ，Ａｄｖ Ｍａｔｅｒ（２００９）２１：３２３５−３２３６）。細胞の選択及び免疫応答の調節によって、移植された細胞、組織、及びデバイスの適合度及び機能に対して有益な効果をもたらし得る。
［概要］
活性細胞、例えば、組み換え活性細胞、例えば、組み換え網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞又はその細胞誘導体を含む細胞組成物、並びに活性細胞を含む組成物、医薬品、及び移植可能な要素、並びにその作製及び使用方法が本明細書に記載されている。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の活性細胞、組成物、及び移植可能な要素は、例えば、患者における疾病、障害又は状態、例えば、血液凝固障害又はライソゾーム蓄積症の処置に有用な治療薬（補充薬剤（ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ ａｇｅｎｔ）など）を生成する。いくつかの実施形態において、活性細胞、例えば、組み換えＲＰＥ細胞を含む組成物及び移植可能な要素は、免疫応答又は患者における免疫応答の影響の調節が可能である。
一態様において、本開示は、治療薬を生成する（例えば、又は生成することが可能な）組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素を特徴とする。治療薬は、核酸（例えば、ヌクレオチド、ＤＮＡ、若しくはＲＮＡ）、ポリペプチド、脂質、糖（例えば、単糖、二糖、オリゴ糖、若しくは多糖）、又は小分子などの生物学的物質であり得る。いくつかの実施形態において、治療薬は、ポリペプチドであり、組み換え活性細胞は、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に動作可能に連結されるプロモータを含み、ここで、プロモータは、配列番号２３と同一であるか、又は実質的に同一であるヌクレオチド配列から本質的になる。いくつかの実施形態において、治療薬は、例えば、患者における血液凝固障害又はライソゾーム蓄積症の処置に有用な補充療法又は補充タンパク質である。
いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、単一の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、例えば、クラスターとして提供されるか又はマイクロキャリア上に配置される複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む。いくつかの実施形態において、組み換え活性細胞又は活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞又はＲＰＥ細胞）は、例えば、患者に移植される場合又は当該技術分野において認識されている参照方法、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応若しくは核酸のインサイツハイブリダイゼーション；脂質、糖及び小分子の質量分析；蛍光若しくは発光タグで修飾された薬剤のための顕微鏡法及び他の画像診断技術、及びポリペプチドのためのＥＬＩＳＡ若しくはウエスタンブロット法によって評価される場合、治療薬（例えば、ポリペプチド）を少なくとも５日間にわたって生成又は放出する。いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、封入構成要素（例えば、組み換え活性細胞又はその周囲にインサイツで形成される、又は組み換え活性細胞との組み合わせ前に予め形成される）を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、例えば、本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物で化学修飾される。
他の態様において、本開示は、患者を処置する方法であって、組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素を患者に投与するステップを含む方法を特徴とする。いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む。いくつかの実施形態において、患者はヒトである。いくつかの実施形態において、組み換え活性細胞（例えば、組み換え活性細胞）は、ヒト細胞（例えば、ヒトＲＰＥ細胞）である。いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、核酸（例えば、ヌクレオチド、ＤＮＡ、若しくはＲＮＡ）、ポリペプチド、脂質、糖（例えば、単糖、二糖、オリゴ糖、若しくは多糖）、又は小分子などの治療薬を生成する（例えば、又は生成することが可能な）組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む。いくつかの実施形態において、治療薬は、例えば、患者における血液凝固障害又はライソゾーム蓄積症の処置に有用な補充療法又は補充タンパク質である。いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、患者への移植又は注射のために配合される。いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、中枢神経系、脳、脊柱、眼、又は網膜以外の部位に投与、移植、又は提供される。いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、患者の腹膜腔（例えば、小腹膜嚢）、網、又は皮下脂肪に投与又は移植又は注射される。
他の態様において、本開示は、組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素を作製又は製造する方法を特徴とする。いくつかの実施形態において、この方法は、組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を提供し、組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を、例えば本明細書に記載の封入構成要素内に配置するステップを含む。いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な要素移植可能な要素は、例えば、クラスターとして提供されるか又はマイクロキャリア上に配置される複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む。いくつかの実施形態において、封入構成要素は、組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）、複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）、又は１つ若しくは複数の活性細胞を含むマイクロキャリア（例えば、ビーズ又はマトリックス）又はその周囲にインサイツで形成される。いくつかの実施形態において、封入構成要素は、封入される組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）、複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）、又は１つ若しくは複数の活性細胞を含むマイクロキャリア（例えば、ビーズ又はマトリックス）との組み合わせ前に予め形成される。いくつかの実施形態において、封入構成要素は、可撓性ポリマー（例えば、ＰＬＡ、ＰＬＧ、ＰＥＧ、ＣＭＣ、又は多糖、例えば、アルギン酸塩）を含む。いくつかの実施形態において、封入構成要素は、非可撓性ポリマー又は金属ハウジングを含む。いくつかの実施形態において、封入構成要素は、例えば、本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物で化学修飾される。
他の態様において、本開示は、組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素を評価する方法を特徴とする。いくつかの実施形態において、この方法は、組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を提供し、封入されるＲＰＥ細胞の構造又は機能パラメータを評価するステップを含む。いくつかの実施形態において、この方法は、ａ）生存率；ｂ）治療薬（例えば、組み換えＲＮＡ若しくはポリペプチド）の生成；ｃ）栄養分若しくは酸素の取り込み；又はｄ）老廃物の生成のうちの１つ以上について組み換え活性細胞又は複数の組み換え活性細胞を評価するステップを含む。いくつかの実施形態において、評価は、移植可能な要素の形成又は患者への移植可能な要素の投与の少なくとも１、５、１０、２０、３０、又は６０日後に行われる。
他の態様において、本開示は、組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素を監視する方法を特徴とする。いくつかの実施形態において、この方法は、例えば、患者又は患者由来のサンプルを試験することによって、パラメータのレベルを取得するステップ；及び例えば、患者又は患者由来のサンプルを試験することによって、取得された値を、基準値のものと比較するステップを含む。いくつかの実施形態において、パラメータは、ａ）細胞生存率；ｂ）治療薬（例えば、組み換えＲＮＡ若しくはポリペプチド）の生成のレベル；ｃ）栄養分若しくは酸素の取り込み；又はｄ）老廃物の生成を含む。いくつかの実施形態において、評価は、移植可能な要素の形成又は患者への移植可能な要素の投与の少なくとも１、５、１０、２０、３０、又は６０日後に行われる。
他の態様において、本開示は、複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を特徴とする。いくつかの実施形態において、複数の組み換え活性細胞は、予め選択された形状因子又は本明細書に記載の形状因子、例えば、組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）のクラスターを有する。いくつかの実施形態において、組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）のクラスターは、少なくとも約５、１０、２５、５０、７５、１００、２００、２５０、３００、４００、５００個、又はそれ以上の組み換え活性細胞を含む。いくつかの実施形態において、クラスターは、球形又は球状である。いくつかの実施形態において、クラスターは、単一層ではない。いくつかの実施形態において、クラスターは、約５００個の細胞／ｃｍ２以上の密度を有する。いくつかの実施形態において、複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）は、マイクロキャリア（例えば、ビーズ又はマトリックス）上に配置される。
他の態様において、本開示は、複数のチャンバを含む基材であって、各チャンバが、組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む、基材を特徴とする。いくつかの実施形態において、各チャンバは、複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む。いくつかの実施形態において、複数の組み換え活性細胞は、組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）のクラスターを含み、及び／又はマイクロキャリア（例えば、ビーズ又はマトリックス）上に配置される。
他の態様において、本開示は、組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）が上に配置されたマイクロキャリア、例えば、ビーズ又はマトリックスを特徴とする。
他の態様において、本開示は、組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）の調製物であって、少なくとも約１０，０００個の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）、例えば、少なくとも約１５，０００；２０，０００；２５，０００；３０，０００；３５，０００；４０，０００；５０，０００；６０，０００；７０，０００；８０，０００；９０，０００；１００，０００個又はそれ以上の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む、調製物を特徴とする。
本開示の１つ以上の実施形態の詳細が本明細書において記載されている。本開示の他の特徴、対象及び利点は、発明を実施するための形態、図面、実施例及び特許請求の範囲から明らかであろう。
様々な時点における非カプセル化活性細胞と比較される、組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含むカプセル化移植可能要素から放出された例示的なポリペプチドの量を示すグラフである。 組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む例示的なカプセル化移植可能要素の顕微鏡画像である。図示されるように、第ＶＩＩＩ〜ＢＤＤ因子を発現する活性細胞を含む移植可能な要素は、実験の期間を通して高い生存率を示す。 組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む例示的なカプセル化移植可能要素の顕微鏡画像である。図示されるように、第ＶＩＩＩ〜ＢＤＤ因子を発現する活性細胞を含む移植可能な要素は、実験の期間を通して高い生存率を示す。 例示的な組み換えＲＰＥ細胞によってコードされるヒト第ＶＩＩ〜ＢＤＤ因子タンパク質のアミノ酸配列（配列番号１）を示し、単一の配列に下線が引かれている。 ヒト野生型第ＩＸ因子タンパク質のアミノ酸配列（配列番号２）を示す。 単一細胞懸濁液を用いて調製された移植可能な要素（例えば、ヒドロゲルカプセル）についての細胞充填密度、細胞生存率、及びカプセル品質に対する細胞構造の影響を示す。図５Ａ〜５Ｆは、生細胞／死細胞（ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ）染色によって細胞生存率を示す、１０００万、１５００万、２０００万、３０００万、４０００万又は５０００万個の細胞／ｍｌアルギン酸塩溶液（Ｍ／ｍｌ）の単一細胞懸濁液から調製された組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む例示的なカプセル化移植可能要素の顕微鏡画像である。図５Ｇは、移植可能な要素の全体的な品質に対する単一細胞濃度の影響を示し、図５Ｈは、移植可能な要素中に含まれる細胞の数と、移植可能な要素の全体的な品質との関係を示す。 単一細胞懸濁液を用いて調製された移植可能な要素（例えば、ヒドロゲルカプセル）についての細胞充填密度、細胞生存率、及びカプセル品質に対する細胞構造の影響を示す。図５Ａ〜５Ｆは、生細胞／死細胞（ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ）染色によって細胞生存率を示す、１０００万、１５００万、２０００万、３０００万、４０００万又は５０００万個の細胞／ｍｌアルギン酸塩溶液（Ｍ／ｍｌ）の単一細胞懸濁液から調製された組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む例示的なカプセル化移植可能要素の顕微鏡画像である。図５Ｇは、移植可能な要素の全体的な品質に対する単一細胞濃度の影響を示し、図５Ｈは、移植可能な要素中に含まれる細胞の数と、移植可能な要素の全体的な品質との関係を示す。 単一細胞懸濁液を用いて調製された移植可能な要素（例えば、ヒドロゲルカプセル）についての細胞充填密度、細胞生存率、及びカプセル品質に対する細胞構造の影響を示す。図５Ａ〜５Ｆは、生細胞／死細胞（ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ）染色によって細胞生存率を示す、１０００万、１５００万、２０００万、３０００万、４０００万又は５０００万個の細胞／ｍｌアルギン酸塩溶液（Ｍ／ｍｌ）の単一細胞懸濁液から調製された組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む例示的なカプセル化移植可能要素の顕微鏡画像である。図５Ｇは、移植可能な要素の全体的な品質に対する単一細胞濃度の影響を示し、図５Ｈは、移植可能な要素中に含まれる細胞の数と、移植可能な要素の全体的な品質との関係を示す。 単一細胞懸濁液を用いて調製された移植可能な要素（例えば、ヒドロゲルカプセル）についての細胞充填密度、細胞生存率、及びカプセル品質に対する細胞構造の影響を示す。図５Ａ〜５Ｆは、生細胞／死細胞（ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ）染色によって細胞生存率を示す、１０００万、１５００万、２０００万、３０００万、４０００万又は５０００万個の細胞／ｍｌアルギン酸塩溶液（Ｍ／ｍｌ）の単一細胞懸濁液から調製された組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む例示的なカプセル化移植可能要素の顕微鏡画像である。図５Ｇは、移植可能な要素の全体的な品質に対する単一細胞濃度の影響を示し、図５Ｈは、移植可能な要素中に含まれる細胞の数と、移植可能な要素の全体的な品質との関係を示す。 単一細胞懸濁液を用いて調製された移植可能な要素（例えば、ヒドロゲルカプセル）についての細胞充填密度、細胞生存率、及びカプセル品質に対する細胞構造の影響を示す。図５Ａ〜５Ｆは、生細胞／死細胞（ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ）染色によって細胞生存率を示す、１０００万、１５００万、２０００万、３０００万、４０００万又は５０００万個の細胞／ｍｌアルギン酸塩溶液（Ｍ／ｍｌ）の単一細胞懸濁液から調製された組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む例示的なカプセル化移植可能要素の顕微鏡画像である。図５Ｇは、移植可能な要素の全体的な品質に対する単一細胞濃度の影響を示し、図５Ｈは、移植可能な要素中に含まれる細胞の数と、移植可能な要素の全体的な品質との関係を示す。 単一細胞懸濁液を用いて調製された移植可能な要素（例えば、ヒドロゲルカプセル）についての細胞充填密度、細胞生存率、及びカプセル品質に対する細胞構造の影響を示す。図５Ａ〜５Ｆは、生細胞／死細胞（ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ）染色によって細胞生存率を示す、１０００万、１５００万、２０００万、３０００万、４０００万又は５０００万個の細胞／ｍｌアルギン酸塩溶液（Ｍ／ｍｌ）の単一細胞懸濁液から調製された組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む例示的なカプセル化移植可能要素の顕微鏡画像である。図５Ｇは、移植可能な要素の全体的な品質に対する単一細胞濃度の影響を示し、図５Ｈは、移植可能な要素中に含まれる細胞の数と、移植可能な要素の全体的な品質との関係を示す。 単一細胞懸濁液を用いて調製された移植可能な要素（例えば、ヒドロゲルカプセル）についての細胞充填密度、細胞生存率、及びカプセル品質に対する細胞構造の影響を示す。図５Ａ〜５Ｆは、生細胞／死細胞（ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ）染色によって細胞生存率を示す、１０００万、１５００万、２０００万、３０００万、４０００万又は５０００万個の細胞／ｍｌアルギン酸塩溶液（Ｍ／ｍｌ）の単一細胞懸濁液から調製された組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む例示的なカプセル化移植可能要素の顕微鏡画像である。図５Ｇは、移植可能な要素の全体的な品質に対する単一細胞濃度の影響を示し、図５Ｈは、移植可能な要素中に含まれる細胞の数と、移植可能な要素の全体的な品質との関係を示す。 単一細胞懸濁液を用いて調製された移植可能な要素（例えば、ヒドロゲルカプセル）についての細胞充填密度、細胞生存率、及びカプセル品質に対する細胞構造の影響を示す。図５Ａ〜５Ｆは、生細胞／死細胞（ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ）染色によって細胞生存率を示す、１０００万、１５００万、２０００万、３０００万、４０００万又は５０００万個の細胞／ｍｌアルギン酸塩溶液（Ｍ／ｍｌ）の単一細胞懸濁液から調製された組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む例示的なカプセル化移植可能要素の顕微鏡画像である。図５Ｇは、移植可能な要素の全体的な品質に対する単一細胞濃度の影響を示し、図５Ｈは、移植可能な要素中に含まれる細胞の数と、移植可能な要素の全体的な品質との関係を示す。 スフェロイド細胞カプセルの懸濁液を用いて調製された移植可能な要素（例えば、ヒドロゲルカプセル）についての細胞充填密度、細胞生存率、及びカプセル品質に対する細胞構造の影響を示す。図６Ａ〜６Ｅは、生細胞／死細胞染色によって細胞生存率を示す、３０００万、４０００万、５０００万、７５００万及び１億個の細胞／ｍｌアルギン酸塩溶液（Ｍ／ｍｌ）のスフェロイド懸濁液から調製された組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む例示的なカプセル化移植可能要素の顕微鏡画像である。図６Ｆは、移植可能な要素の全体的な品質に対するスフェロイド濃度の影響を示し、図６Ｇは、移植可能な要素中に含まれる細胞の数と、移植可能な要素の全体的な品質との関係を示す。 スフェロイド細胞カプセルの懸濁液を用いて調製された移植可能な要素（例えば、ヒドロゲルカプセル）についての細胞充填密度、細胞生存率、及びカプセル品質に対する細胞構造の影響を示す。図６Ａ〜６Ｅは、生細胞／死細胞染色によって細胞生存率を示す、３０００万、４０００万、５０００万、７５００万及び１億個の細胞／ｍｌアルギン酸塩溶液（Ｍ／ｍｌ）のスフェロイド懸濁液から調製された組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む例示的なカプセル化移植可能要素の顕微鏡画像である。図６Ｆは、移植可能な要素の全体的な品質に対するスフェロイド濃度の影響を示し、図６Ｇは、移植可能な要素中に含まれる細胞の数と、移植可能な要素の全体的な品質との関係を示す。 スフェロイド細胞カプセルの懸濁液を用いて調製された移植可能な要素（例えば、ヒドロゲルカプセル）についての細胞充填密度、細胞生存率、及びカプセル品質に対する細胞構造の影響を示す。図６Ａ〜６Ｅは、生細胞／死細胞染色によって細胞生存率を示す、３０００万、４０００万、５０００万、７５００万及び１億個の細胞／ｍｌアルギン酸塩溶液（Ｍ／ｍｌ）のスフェロイド懸濁液から調製された組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む例示的なカプセル化移植可能要素の顕微鏡画像である。図６Ｆは、移植可能な要素の全体的な品質に対するスフェロイド濃度の影響を示し、図６Ｇは、移植可能な要素中に含まれる細胞の数と、移植可能な要素の全体的な品質との関係を示す。 Ｃｙｔｏｄｅｘ（登録商標）マイクロキャリアに付着された細胞の懸濁液を用いて調製された移植可能な要素（例えば、ヒドロゲルカプセル）についての細胞充填密度、細胞生存率、及びカプセル品質に対する細胞構造の影響を示す。図７Ａ〜７Ｆは、生細胞／死細胞染色によって細胞生存率を示す、１：８、１：４、１：２、１：１．５、１：１及び１：０．５（ペレット化されたマイクロキャリアのミリリットル：アルギン酸塩溶液のミリリットル）の体積比でＣｙｔｏｄｅｘ（登録商標）マイクロキャリア細胞懸濁液から調製された組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む例示的なカプセル化移植可能要素の顕微鏡画像である。図７Ｇは、移植可能な要素の全体的な品質に対するＣｙｔｏｄｅｘ（登録商標）マイクロキャリア濃度の影響を示し、図７Ｈは、移植可能な要素中に含まれる細胞の数と、移植可能な要素の全体的な品質との関係を示す。 Ｃｙｔｏｄｅｘ（登録商標）マイクロキャリアに付着された細胞の懸濁液を用いて調製された移植可能な要素（例えば、ヒドロゲルカプセル）についての細胞充填密度、細胞生存率、及びカプセル品質に対する細胞構造の影響を示す。図７Ａ〜７Ｆは、生細胞／死細胞染色によって細胞生存率を示す、１：８、１：４、１：２、１：１．５、１：１及び１：０．５（ペレット化されたマイクロキャリアのミリリットル：アルギン酸塩溶液のミリリットル）の体積比でＣｙｔｏｄｅｘ（登録商標）マイクロキャリア細胞懸濁液から調製された組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む例示的なカプセル化移植可能要素の顕微鏡画像である。図７Ｇは、移植可能な要素の全体的な品質に対するＣｙｔｏｄｅｘ（登録商標）マイクロキャリア濃度の影響を示し、図７Ｈは、移植可能な要素中に含まれる細胞の数と、移植可能な要素の全体的な品質との関係を示す。 Ｃｙｔｏｄｅｘ（登録商標）マイクロキャリアに付着された細胞の懸濁液を用いて調製された移植可能な要素（例えば、ヒドロゲルカプセル）についての細胞充填密度、細胞生存率、及びカプセル品質に対する細胞構造の影響を示す。図７Ａ〜７Ｆは、生細胞／死細胞染色によって細胞生存率を示す、１：８、１：４、１：２、１：１．５、１：１及び１：０．５（ペレット化されたマイクロキャリアのミリリットル：アルギン酸塩溶液のミリリットル）の体積比でＣｙｔｏｄｅｘ（登録商標）マイクロキャリア細胞懸濁液から調製された組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む例示的なカプセル化移植可能要素の顕微鏡画像である。図７Ｇは、移植可能な要素の全体的な品質に対するＣｙｔｏｄｅｘ（登録商標）マイクロキャリア濃度の影響を示し、図７Ｈは、移植可能な要素中に含まれる細胞の数と、移植可能な要素の全体的な品質との関係を示す。 Ｃｙｔｏｄｅｘ（登録商標）マイクロキャリアに付着された細胞の懸濁液を用いて調製された移植可能な要素（例えば、ヒドロゲルカプセル）についての細胞充填密度、細胞生存率、及びカプセル品質に対する細胞構造の影響を示す。図７Ａ〜７Ｆは、生細胞／死細胞染色によって細胞生存率を示す、１：８、１：４、１：２、１：１．５、１：１及び１：０．５（ペレット化されたマイクロキャリアのミリリットル：アルギン酸塩溶液のミリリットル）の体積比でＣｙｔｏｄｅｘ（登録商標）マイクロキャリア細胞懸濁液から調製された組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む例示的なカプセル化移植可能要素の顕微鏡画像である。図７Ｇは、移植可能な要素の全体的な品質に対するＣｙｔｏｄｅｘ（登録商標）マイクロキャリア濃度の影響を示し、図７Ｈは、移植可能な要素中に含まれる細胞の数と、移植可能な要素の全体的な品質との関係を示す。 Ｃｙｔｏｄｅｘ（登録商標）マイクロキャリアに付着された細胞の懸濁液を用いて調製された移植可能な要素（例えば、ヒドロゲルカプセル）についての細胞充填密度、細胞生存率、及びカプセル品質に対する細胞構造の影響を示す。図７Ａ〜７Ｆは、生細胞／死細胞染色によって細胞生存率を示す、１：８、１：４、１：２、１：１．５、１：１及び１：０．５（ペレット化されたマイクロキャリアのミリリットル：アルギン酸塩溶液のミリリットル）の体積比でＣｙｔｏｄｅｘ（登録商標）マイクロキャリア細胞懸濁液から調製された組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む例示的なカプセル化移植可能要素の顕微鏡画像である。図７Ｇは、移植可能な要素の全体的な品質に対するＣｙｔｏｄｅｘ（登録商標）マイクロキャリア濃度の影響を示し、図７Ｈは、移植可能な要素中に含まれる細胞の数と、移植可能な要素の全体的な品質との関係を示す。 Ｃｙｔｏｄｅｘ（登録商標）マイクロキャリアに付着された細胞の懸濁液を用いて調製された移植可能な要素（例えば、ヒドロゲルカプセル）についての細胞充填密度、細胞生存率、及びカプセル品質に対する細胞構造の影響を示す。図７Ａ〜７Ｆは、生細胞／死細胞染色によって細胞生存率を示す、１：８、１：４、１：２、１：１．５、１：１及び１：０．５（ペレット化されたマイクロキャリアのミリリットル：アルギン酸塩溶液のミリリットル）の体積比でＣｙｔｏｄｅｘ（登録商標）マイクロキャリア細胞懸濁液から調製された組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む例示的なカプセル化移植可能要素の顕微鏡画像である。図７Ｇは、移植可能な要素の全体的な品質に対するＣｙｔｏｄｅｘ（登録商標）マイクロキャリア濃度の影響を示し、図７Ｈは、移植可能な要素中に含まれる細胞の数と、移植可能な要素の全体的な品質との関係を示す。 Ｃｙｔｏｄｅｘ（登録商標）マイクロキャリアに付着された細胞の懸濁液を用いて調製された移植可能な要素（例えば、ヒドロゲルカプセル）についての細胞充填密度、細胞生存率、及びカプセル品質に対する細胞構造の影響を示す。図７Ａ〜７Ｆは、生細胞／死細胞染色によって細胞生存率を示す、１：８、１：４、１：２、１：１．５、１：１及び１：０．５（ペレット化されたマイクロキャリアのミリリットル：アルギン酸塩溶液のミリリットル）の体積比でＣｙｔｏｄｅｘ（登録商標）マイクロキャリア細胞懸濁液から調製された組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む例示的なカプセル化移植可能要素の顕微鏡画像である。図７Ｇは、移植可能な要素の全体的な品質に対するＣｙｔｏｄｅｘ（登録商標）マイクロキャリア濃度の影響を示し、図７Ｈは、移植可能な要素中に含まれる細胞の数と、移植可能な要素の全体的な品質との関係を示す。 Ｃｙｔｏｄｅｘ（登録商標）マイクロキャリアに付着された細胞の懸濁液を用いて調製された移植可能な要素（例えば、ヒドロゲルカプセル）についての細胞充填密度、細胞生存率、及びカプセル品質に対する細胞構造の影響を示す。図７Ａ〜７Ｆは、生細胞／死細胞染色によって細胞生存率を示す、１：８、１：４、１：２、１：１．５、１：１及び１：０．５（ペレット化されたマイクロキャリアのミリリットル：アルギン酸塩溶液のミリリットル）の体積比でＣｙｔｏｄｅｘ（登録商標）マイクロキャリア細胞懸濁液から調製された組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む例示的なカプセル化移植可能要素の顕微鏡画像である。図７Ｇは、移植可能な要素の全体的な品質に対するＣｙｔｏｄｅｘ（登録商標）マイクロキャリア濃度の影響を示し、図７Ｈは、移植可能な要素中に含まれる細胞の数と、移植可能な要素の全体的な品質との関係を示す。 ＣｕｌｔｉＳｐｈｅｒ（登録商標）マイクロキャリアに付着された細胞の懸濁液を用いて調製された移植可能な要素（例えば、ヒドロゲルカプセル）についての細胞充填密度、細胞生存率、及びカプセル品質に対する細胞構造の影響を示す。図８Ａ〜８Ｆは、生細胞／死細胞染色によって細胞生存率を示す、１：１４、１：１０、１：８、１：６、１：４及び１：２（ペレット化されたマイクロキャリアのｍＬ：ｍＬアルギン酸塩溶液）の体積比でＣｕｌｔｉＳｐｈｅｒ（登録商標）マイクロキャリア細胞懸濁液から調製された組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む例示的なカプセル化移植可能要素の顕微鏡画像である。図８Ｇは、移植可能な要素の全体的な品質に対するＣｕｌｔｉＳｐｈｅｒ（登録商標）マイクロキャリア濃度の影響を示し、図８Ｈは、移植可能な要素中に含まれる細胞の数と、移植可能な要素の全体的な品質との関係を示す。 ＣｕｌｔｉＳｐｈｅｒ（登録商標）マイクロキャリアに付着された細胞の懸濁液を用いて調製された移植可能な要素（例えば、ヒドロゲルカプセル）についての細胞充填密度、細胞生存率、及びカプセル品質に対する細胞構造の影響を示す。図８Ａ〜８Ｆは、生細胞／死細胞染色によって細胞生存率を示す、１：１４、１：１０、１：８、１：６、１：４及び１：２（ペレット化されたマイクロキャリアのｍＬ：ｍＬアルギン酸塩溶液）の体積比でＣｕｌｔｉＳｐｈｅｒ（登録商標）マイクロキャリア細胞懸濁液から調製された組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む例示的なカプセル化移植可能要素の顕微鏡画像である。図８Ｇは、移植可能な要素の全体的な品質に対するＣｕｌｔｉＳｐｈｅｒ（登録商標）マイクロキャリア濃度の影響を示し、図８Ｈは、移植可能な要素中に含まれる細胞の数と、移植可能な要素の全体的な品質との関係を示す。 ＣｕｌｔｉＳｐｈｅｒ（登録商標）マイクロキャリアに付着された細胞の懸濁液を用いて調製された移植可能な要素（例えば、ヒドロゲルカプセル）についての細胞充填密度、細胞生存率、及びカプセル品質に対する細胞構造の影響を示す。図８Ａ〜８Ｆは、生細胞／死細胞染色によって細胞生存率を示す、１：１４、１：１０、１：８、１：６、１：４及び１：２（ペレット化されたマイクロキャリアのｍＬ：ｍＬアルギン酸塩溶液）の体積比でＣｕｌｔｉＳｐｈｅｒ（登録商標）マイクロキャリア細胞懸濁液から調製された組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む例示的なカプセル化移植可能要素の顕微鏡画像である。図８Ｇは、移植可能な要素の全体的な品質に対するＣｕｌｔｉＳｐｈｅｒ（登録商標）マイクロキャリア濃度の影響を示し、図８Ｈは、移植可能な要素中に含まれる細胞の数と、移植可能な要素の全体的な品質との関係を示す。 組み換えＲＰＥ細胞又はＨＳ２７細胞内の様々な外因性のプロモータ（ＣＭＶ、ＣＡＰ又はＵｂｃ）によって駆動されるヒト第ＩＸ因子ポリペプチド（Ｆ９：ｈＦＩＸ、野生型；Ｆ９ｐ：ｈＦＩＸ−Ｐａｄｕａ）のインビトロ発現レベルを示す。 組み換えＲＰＥ細胞を生成するのに有用なＰｉｇｇｙＢａｃトランスポゾン発現ベクターの概略図である。 天然のヒトＦＶＩＩＩヌクレオチド配列（天然）のＢＤＤ形態で組み換えられた細胞による同じ第ＶＩＩＩ〜ＢＤＤ因子タンパク質の発現レベルと比べた、コドン最適化コード配列（ＣＯ２、ＣＯ３又はＣＯ６）で組み換えられたＲＰＥ細胞による図１に示される第ＶＩＩＩ〜ＢＤＤ因子タンパク質のインビトロ発現レベルを示す。 天然のヒトＦＶＩＩＩヌクレオチド配列（天然）のＢＤＤ形態で組み換えられたＲＰＥ細胞による図１に示される第ＶＩＩＩ〜ＢＤＤ因子タンパク質の発現レベルと比べた、コドン最適化ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤコード配列を用いて又は用いずに組み換えられたＲＰＥ細胞による様々な第ＶＩＩＩ〜ＢＤＤ因子変異体タンパク質のインビトロ発現レベルを示す。 非最適化コード配列（天然）で組み換えられたＲＰＥ細胞によるＦＩＸ−Ｐａｄｕａの発現と比べた、コドン最適化ＦＩＸ−Ｐａｄｕａコード配列（ＣＯ２、ＣＯ３又はＣＯ５）で組み換えられたＲＰＥ細胞によるヒト第ＩＸ因子タンパク質（ＦＩＸ−Ｐａｄｕａ）のインビトロ発現レベルを示す。 非最適化ＦＩＸコード配列（天然）を含む転写単位、又はコドン最適化ＦＩＸ−Ｐａｄｕａコード配列を含むことを除いて同じ転写単位の１つ若しくは２つのコピーで組み換えられたＲＰＥ細胞によるヒトＦＩＸ−Ｐａｄｕａのインビトロ発現レベルを示す。
［詳細な説明］
本開示は、活性細胞、例えば、網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）又はその細胞誘導体を含む細胞療法組成物、並びにその組成物及びこれを含む移植可能な要素を特徴とする。いくつかの実施形態において、活性細胞、組成物、及び移植可能な要素は、疾病、障害、又は状態の予防又は処置に有用である。本明細書に記載の活性細胞は、特定の条件（すなわち、接触阻止）における細胞密度の維持、隣接細胞の食作用、並びに可変の条件において生存及び成長する能力などの有利な特性を示す。いくつかの実施形態において、活性細胞は、治療薬（例えば、治療的ポリペプチド）を生成するように操作され、患者への投与に好適な材料に封入されるか、及び／又は患者への投与に好適な移植可能な要素中に存在する。
［定義］
以下の用語は、以下に提示されている意味を有することが意図されており、本開示の記載及び意図される範囲の理解に有用である。
本明細書において用いられるところ、「取得する（Ａｃｑｕｉｒｅ）」又は「取得している（ａｃｑｕｉｒｉｎｇ）」は、値又は物理的エンティティを「直接的に取得する」又は「間接的に取得する」ことによる、値（例えば数値若しくはイメージ）、又は、物理的エンティティ（例えばサンプル）の入手を達成することを指す。「直接的に取得する」とは、プロセスを実施（例えば分析方法又はプロトコルの実施）して、値又は物理的エンティティを得ることを意味する。「間接的に取得する」とは、他の団体又は提供者（例えば、物理的エンティティ又は値を直接的に取得した第三者の実験室）から値又は物理的エンティティを受け取ることを指す。値又は物理的エンティティを直接的に取得するステップは、物理的な物質における物理的な変更、又は、機器若しくはデバイスの使用を含むプロセスの実施を含む。値を直接的に取得するステップの例としては、ヒト患者からのサンプルの入手が挙げられる。値を直接的に取得するステップは、例えば、蛍光顕微鏡データを取得する蛍光顕微鏡といった、機器又はデバイスを使用するプロセスの実施を含む。
本明細書において用いられるところ、「活性細胞」は、以下の特徴を１つ以上有する細胞を指す：ａ）網膜色素上皮細胞（ＲＰＥ）又はこれに由来する細胞を含むものであって、ＲＰＥ細胞の一次細胞培養物に由来する細胞、天然のＲＰＥ細胞（例えばヒト又は他の哺乳動物由来）から直接単離された細胞（長期の培養を伴わない、例えば、細胞分裂が単離から５又は１０継代又は回未満）、形質転換、不死化、又は長期（例えば、細胞分裂から５又は１０継代又は回超）ＲＰＥ細胞培養物に由来する細胞が挙げられ；ｂ）低分化細胞から得られた細胞、例えば、ＲＰＥ細胞に発生、プログラム、若しくは再プログラム（例えばインビトロで）された細胞、又は、いずれかの遺伝子組み換えを除き、１種以上の天然ＲＰＥ細胞と実質的に同様である細胞、又はＲＰＥ細胞の一次若しくは長期培養物由来の細胞（例えば、このような活性細胞は、ＩＰＳ細胞から誘導可能である）；又はｃ）以下の特性を１つ以上有する細胞：ｉ）１種以上のバイオマーカーＣＲＡＬＢＰ、ＲＰＥ−６５、ＲＬＢＰ、ＢＥＳＴ１、又はαＢ−クリスタリンを発現するもの；ｉｉ）１種以上のバイオマーカーＣＲＡＬＢＰ、ＲＰＥ−６５、ＲＬＢＰ、ＢＥＳＴ１、又はαＢ−クリスタリンを発現しないもの；ｉｉｉ）網膜中に見出される天然のものであって、ブルッフ膜中の脈絡膜血管上に単一層を形成するもの；又はｉｖ）網膜における上皮輸送、光吸収、分泌、及び免疫調節を担うもの。実施形態において、本明細書に記載の活性細胞は、操作され、例えば、低分化細胞から得られた活性細胞は、操作され得る。他の実施形態において、活性細胞は、操作されていない。
いくつかの実施形態において、組み換え活性細胞を含む活性細胞は、膵島細胞ではない。本明細書において定義される膵島細胞は、任意の天然の又は任意の合成的に生成された、又は修飾された細胞であって、膵臓ランゲルハンス島の細胞の部分的若しくは全体的な機能を部分的若しくは全体的に再現する、模倣する又は他の形で発現することを意図された細胞を含む細胞である。組み換え活性細胞を含む活性細胞は、例えば、糖尿病又はインスリンで処置され得る別の疾病若しくは状態を処置するのに有効な量で、インスリン（例えば、インスリンＡ鎖、インスリンＢ鎖、又はプロインスリン）を産生することが可能でない。いくつかの実施形態において、活性細胞は、グルコース応答的にインスリンを産生することが可能でない。組み換え活性細胞を含む活性細胞は、分化したインスリン産生膵β細胞へと操作される誘導多能性細胞でない。
本明細書において用いられるところ、「投与する（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒ）」、「投与している（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）」、又は「投与（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」は、エンティティ（例えば、活性細胞、例えば、組み換えＲＰＥ細胞、又はその組成物、又は活性細胞を含む移植可能な要素）を、移植、吸収、経口摂取、注射、若しくは他の形で導入すること、又は患者にこれを提供することを指す。
本明細書において用いられるところ、「細胞」は、組み換え細胞、例えば、組み換え活性細胞、又は組み換えが行われていない細胞、例えば、非組み換え活性細胞を指す。
本明細書において用いられるところ、「保存的に修飾された変異体」又は保存的置換」は、そのアミノ酸配列中に１つ以上の保存的アミノ酸置換を有することを除いて、参照分子と同一である参照ペプチド又はポリペプチドの変異体を指す。実施形態において、保存的に修飾された変異体は、参照アミノ酸配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％又は９９％同一のアミノ酸配列からなる。保存的アミノ酸置換は、同様の特徴（例えば、電荷、側鎖サイズ、疎水性／親水性、骨格構造及び剛性など）を有し、且つ得られる置換ペプチド又はポリペプチドの生物活性に最小限の影響を与えるアミノ酸による、アミノ酸の置換を指す。機能的に類似したアミノ酸の保存的置換の表は、当該技術分野において周知であり、機能的特徴によって分類された例示的な置換が、以下のアミノ酸表１に記載されている。
Figure 2020534837
本明細書及び特許請求の範囲を通して用いられるところの「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」、及び「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」又は「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」などの変化形は、任意の記載される要素又は要素の群の包含、及び規定の分子、組成物、デバイス、又は方法の基本的又は新規な性質を実質的に変化させない、記載される要素と類似の又は異なる性質の他の要素の任意選択の包含を示す。非限定的な例として、記載されるアミノ酸配列から本質的になる治療用タンパク質は、それぞれ、治療用タンパク質の関連する生物活性を実質的に変化させない、１つ以上のアミノ酸残基の、Ｎ末端、Ｃ末端又は記載されるアミノ酸配列内における追加を含む１つ以上のアミノ酸も含み得る。別の非限定的な例として、記載されるヌクレオチド配列から本質的になるプロモータは、例えば、対応するＲＮＡ又はタンパク質レベルを定量化することによって決定される際、プロモータの関連する生物活性、例えば、動作可能に連結されるコード配列の転写の量を実質的に変化させない１つ以上のさらなるヌクレオチドを含有し得る。
本明細書において用いられるところ、「有効量」は、例えば疾病、障害、又は状態を処置するための生物学的応答を誘発するために十分な、活性細胞、例えば、組み換えＲＰＥ細胞の組成物、又は活性細胞、例えば、組み換えＲＰＥ細胞によって生成される薬剤、例えば、治療薬の量を指す。当業者に認識されるであろうとおり、有効量は、所望される生物学的エンドポイント、治療薬、組成物又は移植可能な要素の薬物動態学的、処置される状態、投与形態、並びに、患者の年齢及び健康状態などの要因に応じて様々であり得る。有効量は、治療的及び予防的処置を包含する。例えば、線維症状態を処置するために、化合物の有効量は、線維症を低減させるか、又は、線維組織の増殖若しくは転移を停止させ得る。
本明細書において用いられるところ、「内因性の核酸」とは、患者の細胞内で自然に生じる核酸である。
本明細書において用いられるところ、「内因性のポリペプチド」とは、患者の細胞内で自然に生じるポリペプチドである。
本明細書において用いられるところ、「組み換え細胞」とは、天然のものではない改変を有する細胞、例えば、活性細胞であり、典型的には、同様の条件下で組み換えがなされていない他の同様の細胞中に存在していない（又は、異なるレベルで存在する）核酸配列（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ）又はポリペプチドを含む（外因性の核酸配列）。実施形態において、組み換え細胞は外因性の核酸を含む（例えば、ベクター又は改変染色体配列）。実施形態において、組み換え細胞は、外因性のポリペプチドを含む。実施形態において、組み換え細胞は、組み換えがなされていない同様の細胞に存在しない外因性の核酸配列、例えば配列、例えばＤＮＡ又はＲＮＡを含む。実施形態において、外因性の核酸配列は染色体性であり、例えば、外因性の核酸配列は、内因性の染色体配列中に配置された外因性の配列である。実施形態において、外因性の核酸配列は、染色体性又は染色体外性である、例えば非組み込み型ベクターである。実施形態において、外因性の核酸配列は、ＲＮＡ配列、例えば、ｍＲＮＡを含む。実施形態において、外因性の核酸配列は、ＲＮＡとして発現される配列、例えばｍＲＮＡ又は調節ＲＮＡを含む染色体性又は染色体外性の外因性の核酸配列を含む。実施形態において、外因性の核酸配列は、ポリペプチドをコードする配列、又は、ポリペプチドとして発現される配列を含む染色体性又は染色体外性の核酸配列を含む。実施形態において、外因性の核酸配列は、第２の核酸配列の立体構造又は発現を調節する第１の染色体性又は染色体外性の外因性の核酸配列を含み、ここで、第２のアミノ酸配列は外因性又は内因性であることが可能である。例えば、組み換え細胞は、内因性の配列の発現を制御する外因性の核酸を含んでいることが可能である。実施形態において、組み換え細胞は、組み換えがなされていない同様の細胞において見出されるレベルとは異なるレベル又は分布で存在するポリペプチドを含み得る。実施形態において、組み換え細胞は、ＲＮＡ又はポリペプチドを提供するように組み換えられたＲＰＥ細胞を含む。例えば、組み換え細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）は、ＲＮＡとして発現される配列、例えば、ｍＲＮＡ又は調節ＲＮＡを含む染色体性又は染色体外性の外因性の核酸配列を含む、外因性の核酸配列を含み得る。実施形態において、組み換え細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）は、ポリペプチドをコードする配列、又は、ポリペプチドとして発現される配列を含む染色体性又は染色体外性の核酸配列を含む、外因性の核酸配列を含む。実施形態において、ポリペプチドは、天然のコード配列より高度のポリペプチドの発現を達成するようにコドン最適化配列によってコードされる。コドン最適化配列は、市販のアルゴリズム、例えば、ＧｅｎｅＯｐｔｉｍｚｅｒ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、ＯｐｔｉｍｕｍＧｅｎｅ（商標）（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ ＵＳＡ）、ＧｅｎｅＧＰＳ（登録商標）（ＡＴＵＭ，Ｎｅｗａｒｋ，ＣＡ ＵＳＡ）、又はＪａｖａ Ｃｏｄｏｎ Ａｄａｐａｔａｔｉｏｎ Ｔｏｏｌ（ＪＣａｔ，ｗｗｗ．ｊｃａｔ．ｄｅ，Ｇｒｏｔｅ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌ ３３，Ｉｓｓｕｅ ｓｕｐｐｌ＿２，ｐｐ．Ｗ５２６−Ｗ５３１（２００５）を用いて生成され得る。実施形態において、組み換え細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）は、内因性の配列の配置又は発現を調節する外因性の核酸配列を含む。
本明細書において用いられるところ、「外因性の核酸」は、患者細胞内で天然に存在しない核酸である。
本明細書において用いられるところ、「外因性のポリペプチド」は、患者細胞内で天然に存在しないポリペプチドである。
本明細書において用いられるところ、「第ＶＩＩ因子タンパク質」又は「ＦＶＩＩタンパク質」は、別段の定めがある場合を除き、当該技術分野において認識されているアッセイによって決定される際、ＦＶＩＩ生物活性、例えば、血液凝固の促進を有する、天然の第ＶＩＩ因子タンパク質又はその変異体のアミノ酸配列を含むポリペプチドを意味する。天然のＦＶＩＩは、一本鎖酵素前駆体、酵素前駆体様の二本鎖ポリペプチド及び完全に活性化された二本鎖形態（ＦＶＩＩａ）として存在する。いくつかの実施形態において、ＦＶＩＩへの言及は、酵素前駆体様及びＦＶＩＩａを含む、その一本鎖及び二本鎖形態を含む。本明細書に記載の活性細胞、例えば、組み換えＲＰＥ細胞によって発現され得るＦＶＩＩタンパク質は、野生型霊長類（例えば、ヒト）、ブタ、イヌ、及びマウスタンパク質、並びに１つ以上のアミノ酸置換及び／又は欠失を有する断片、突然変異体、変異体を含む、このような野生型タンパク質の変異体を含む。いくつかの実施形態において、変異体ＦＶＩＩタンパク質は、野生型第ＶＩＩａ因子の活性の少なくとも５０％、７５％、９０％又はそれ以上（＞１００％を含む）を有する完全に活性化された二本鎖形態（第ＶＩＩａ因子）へと活性化されることが可能である。ＦＶＩＩ及びＦＶＩＩａの変異体は公知であり、例えば、マルゼプタコグアルファ（ｍａｒｚｅｐｔａｃｏｇ ａｌｆａ）（活性化）（ＭａｒｚＡＡ）並びに欧州特許第１３７３４９３号明細書、米国特許第７７７１９９６号明細書、米国特許第９４７６０３７号明細書及び米国特許出願公開第２００８００５８２５５号明細書に記載されている変異体である。
第ＶＩＩ因子生物活性は、別段の定めがある場合を除き、当該技術分野において認識されているアッセイによって定量化され得る。例えば、生体液、例えば、血漿のサンプルのＦＶＩＩ生物活性は、（ｉ）脂質膜及び第Ｘ因子に埋め込まれたＴＦを含むシステムにおいて生成された第Ｘａ因子の量を測定すること（Ｐｅｒｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１９９１９−１９９２４，１９９７）；（ｉｉ）水性系における第Ｘ因子加水分解を測定すること；（ｉｉｉ）表面プラズモン共鳴に基づいて機器を用いてＴＦへのその物理的結合を測定すること（Ｐｅｒｓｓｏｎ，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｓ．４１３：３５９−３６３，１９９７）；又は（ｉｖ）合成基質の加水分解を測定すること；及び／又は（ｖ）ＴＦ非依存性インビトロ系におけるトロンビンの生成を測定することによって定量化され得る。実施形態において、ＦＶＩＩ活性は、市販の発色アッセイ（ＢＩＯＰＨＥＮ ＦＶＩＩ，ＨＹＰＨＥＮ ＢｉｏＭｅｄ Ｎｅｕｖｉｌｌｅ ｓｕｒ Ｏｉｓｅ，Ｆｒａｎｃｅ）によって評価され、ここで、ＦＶＩＩを含有する生体サンプルが、トロンボプラスチンカルシウム、第Ｘ及びＳＸａ−１１因子（第Ｘａ因子に特異的な発色性基質と混合される。
本明細書において用いられるところ、「第ＶＩＩＩ因子タンパク質」又は「ＦＶＩＩＩタンパク質」は、別段の定めがある場合を除き、当該技術分野において認識されているアッセイによって決定される際、ＦＶＩＩＩ生物活性、例えば、凝固活性を有する、天然の第ＶＩＩＩ因子ポリペプチド又はその変異体のアミノ酸配列を含むポリペプチドを意味する。本明細書に記載の活性細胞、例えば、組み換えＲＰＥ細胞によって発現され得るＦＶＩＩＩタンパク質は、野生型霊長類（例えば、ヒト）、ブタ、イヌ、及びマウスタンパク質、並びに１つ以上のアミノ酸置換及び／又は欠失、Ｂドメイン欠失（ＢＤＤ）変異体、一本鎖変異体及び半減期延長ポリペプチドを有する上記の野生型又は変異体のいずれかの融合を有する断片、突然変異体、変異体を含む、このような野生型タンパク質の変異体を含む。実施形態において、活性細胞は、Ｂドメインの完全又は部分的な欠失を有する前駆体第ＶＩＩＩ因子ポリペプチド（例えば、シグナル配列を有する）をコードするように組み換えられる。実施形態において、変異体ＦＶＩＩＩタンパク質を含有する一本鎖第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドをコードするように組み換えられた活性細胞は、好ましくは、対応する野生型第ＶＩＩＩ因子の凝固活性の少なくとも５０％、７５％、９０％又はそれ以上（＞１００％を含む）を有する。ＦＶＩＩＩタンパク質の凝固活性を測定するためのアッセイは、一段階又は二段階凝固アッセイ（Ｒｉｚｚａ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ ｏｆ ＦＶＩＩＩ：Ｃ ａｎｄ ＦＩＸａ ｉｎ Ｂｌｏｏｍ ｅｄ．Ｔｈｅ Ｈｅｍｏｐｈｅｌｉａｓ．ＮＹ Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ １９９２）又は発色性基質ＦＶＩＩＩ：Ｃアッセイ（Ｒｏｓｅｎ，Ｓ．１９８４．Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｈａｅｍａｔｏｌ ３３：１３９−１４５、補遺）を含む。
いくつかのＦＶＩＩＩ−ＢＤＤ変異体が公知であり、例えば、以下の米国特許第４，８６８，１１２号明細書（例えば、第２欄、２行から第１９欄、２１行及び表２）；同第５，１１２，９５０号明細書（例えば、第２欄、５５〜６８行、図２、及び実施例１）；同第５，１７１，８４４号明細書（例えば、第４欄、１２２行から第５欄、３６行）；同第５，５４３，５０２号明細書（例えば、第２欄、１７〜４６行）；同第５，５９５，８８６号明細書；同第５，６１０，２７８号明細書；同第５，７８９，２０３号明細書（例えば、第２欄、２６〜５１行及び実施例５〜８）；同第５，９７２，８８５号明細書（例えば、第１欄、２５行から第２欄、４０行）；同第６，０４８，７２０号明細書（例えば、第６欄、１〜２２行及び実施例１）；同第６，０６０，４４７号明細書；同第６，２２８，６２０号明細書；同第６，３１６，２２６号明細書（例えば、第４欄、４行から第５欄、２８行及び実施例１〜５）；同第６，３４６，５１３号明細書；同第６，４５８，５６３号明細書（例えば、第４欄、２５〜５３行）及び同第７，０４１，６３５号明細書（例えば、第２欄、１行から第３欄、１９行、第３欄、４０行から第４欄、６７行、第７欄、４３行から第８欄、２６行、及び第１１欄、５行から第１３欄、３９行）のいずれかに開示されている完全又は部分的なＢドメイン欠失を有する変異体が挙げられる。
いくつかの実施形態において、組み換えＲＰＥ細胞、例えば、ＡＲＰＥ−１９細胞によって発現されるＦＶＩＩＩ−ＢＤＤタンパク質は、Ｂドメインにおけるアミノ酸の以下の欠失の１つ以上を有する：（ｉ）２つのポリペプチド鎖への一次翻訳産物の細胞内プロセシングに不可欠なアミノ末端Ｂドメイン配列を除くＢドメインの大部分（国際公開第９１／０９１２２号パンフレット）；（ｉｉ）アミノ酸７４７〜１６３８（Ｈｏｅｂｅｎ Ｒ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５（１３）：７３１８−７３２３（１９９０））；アミノ酸７７１〜１６６６又はアミノ酸８６８〜１５６２（Ｍｅｕｌｉｅｎ Ｐ．，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．２（４）：３０１−６（１９８８）；アミノ酸９８２〜１５６２又は７６０〜１６３９（Ｔｏｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８３：５９３９−５９４２（１９８６））；アミノ酸７９７〜１５６２（Ｅａｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２５：８３４３−８３４７（１９８６））；７４１〜１６４６（Ｋａｕｆｍａｎ、国際公開第８７／０４１８７号パンフレット））、７４７〜１５６０（Ｓａｒｖｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＤＮＡ ６：５５３−５６４（１９８７））；アミノ酸７４１〜１６４８（Ｐａｓｅｋ、国際公開第８８／００８３１号パンフレット））、アミノ酸８１６〜１５９８又は７４１〜１６８９（Ｌａｇｎｅｒ（Ｂｅｈｒｉｎｇ Ｉｎｓｔ．Ｍｉｔｔ．（１９８８）Ｎｏ ８２：１６−２５、ＥＰ２９５５９７号明細書）の欠失；フーリンプロテアーゼ認識配列における１つ以上の残基を含む欠失、例えば、米国特許第９，９５６，２６９号明細書、第１０欄、６５行から第１１欄、３６行に記載されている特定の欠失のいずれかを含む、アミノ酸１６４３〜１６４８におけるＬＫＲＨＱＲ。
他の実施形態において、ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤタンパク質は、以下のＢドメインアミノ酸又はアミノ酸配列のいずれかを保持する：（ｉ）Ｂドメインにおける１つ以上のＮ−連結されたグリコシル化部位、例えば、残基７５７、７８４、８２８、９００、９６３、又は任意選択により９４３、最初の２２６アミノ酸又は最初の１６３アミノ酸（Ｍｉａｏ，Ｈ．Ｚ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０３（ａ）：３４１２−３４１９（２００４）、Ｋａｓｕｄａ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．６：１３５２−１３５９（２００８）、及びＰｉｐｅ，Ｓ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．９：２２３５−２２４２（２０１１）。
いくつかの実施形態において、ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤタンパク質は、米国特許第１０，０２３，６２８号明細書、同第９，３９４，３５３号明細書及び同第９，６７０，２６７号明細書に記載されているＲ１６４５及び／又はＲ１６４８位置における置換のいずれかを含む、この部位におけるタンパク質分解による切断を防ぐフーリンプロテアーゼ認識配列における１つ以上のアミノ酸の置換（アミノ酸１６４３〜１６４８におけるＬＫＲＨＱＲ）によって生成される一本鎖変異体である。
いくつかの実施形態において、上記のＦＶＩＩＩ−ＢＤＤタンパク質のいずれかは、以下の変位の１つ以上をさらに含み得る：ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤタンパク質の発現を改善するためのＦ３０９Ｓ置換（Ｍｉａｏ，Ｈ．Ｚ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０３（ａ）：３４１２−３４１９（２００４）；アルブミン融合（国際公開第２０１１／０２０８６６号パンフレット）；及びＦｃ融合（国際公開第０４／１０１７４０号パンフレット）。
別段の定めがある場合を除き、本明細書において言及されるすべてのＦＶＩＩＩ−ＢＤＤアミノ酸位置は、完全長ヒトＦＶＩＩＩにおける位置を指す。
本明細書において用いられるところ、「第ＩＸ因子タンパク質」又は「ＦＩＸタンパク質」は、別段の定めがある場合を除き、当該技術分野において認識されているアッセイによって決定される際、ＦＩＸ生物活性、例えば、凝固活性を有する天然の第ＩＸ因子タンパク質又はその変異体のアミノ酸配列を含むポリペプチドを意味する。ＦＩＸは、不活性な酵素前駆体として生成され、これは、活性化ペプチドの第ＸＩａ因子除去によって活性な形態に転化されて、１つ以上のジスルフィド結合によって一緒に保持された重鎖及び軽鎖が生成される。本明細書に記載の活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）によって発現され得るＦＩＸタンパク質は、野生型霊長類（例えば、ヒト）、ブタ、イヌ、及びマウスタンパク質、並びに半減期延長ポリペプチドを有する上記の野生型又は変異体タンパク質のいずれかの１つ以上のアミノ酸置換及び／又は欠失及び融合を有する断片、突然変異体、変異体を含む、このような野生型タンパク質の変異体を含む。実施形態において、活性細胞は、完全長野生型ヒト第ＩＸ因子ポリペプチド（例えば、シグナル配列を有する）又はその機能的変異体をコードするように組み換えられる。変異体ＦＩＸタンパク質は、好ましくは、野生型第ＶＩＸ因子の凝固活性の少なくとも５０％、７５％、９０％又はそれ以上（＞１００％を含む）を有する。ＦＩＸタンパク質の凝固活性を測定するためのアッセイとしては、Ｂｉｏｐｈｅｎ第ＩＸ因子アッセイ（Ｈｙｐｈｅｎ ＢｉｏＭｅｄ）及び一段階凝固アッセイ（活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）（例えば、欧州特許第２０３２ ６０７ Ｂ２号明細書に記載される）、トロンビン生成時間アッセイ（ＴＧＡ）及び回転式トロンボエラストメトリー（例えば、国際公開第２０１２／００６６２４号パンフレットに記載される）が挙げられる。
いくつかの機能的ＦＩＸ変異体が公知であり、以下の国際特許公報：国際公開第０２／０４０５４４ Ａ３号パンフレット、４頁、９〜３０行及び１５頁、６〜３１行；国際公開第０３／０２０７６４ Ａ２号パンフレット、１４〜２４頁の表２及び３、及び１２頁、１〜２７行；国際公開第２００７／１４９４０６ Ａ２号パンフレット、４頁、１行から１９頁、１１行；国際公開第２００７／１４９４０６ Ａ２号パンフレット、１９頁、１２行から２０頁、９行；国際公開第０８／１１８５０７ Ａ２号パンフレット、５頁、１４行から６頁、５行；国際公開第０９／０５１７１７ Ａ２号パンフレット、９頁、１１行から２０頁、２行；国際公開第０９／１３７２５４ Ａ２号パンフレット、２頁、段落［００６］から５頁、段落［０１１］及び１６頁、段落［０４４］から２４頁、段落［０５７］；国際公開第０９／１３０１９８ Ａ２号パンフレット、４頁、２６行から１２頁、６行；国際公開第０９／１４００１５ Ａ２号パンフレット、１１頁、段落［００４３］から１３頁、段落［００５３］；国際公開第２０１２／００６６２４号パンフレット；国際公開第２０１５／０８６４０６号パンフレットに記載されている機能的ＦＩＸ変異体のいずれかを含む本開示の活性細胞によって発現され得る。
一定の実施形態において、ＦＩＸポリペプチドは、ＦＩＸタンパク質の半減期を延長する異種ポリペプチド又は非ポリペプチド部分に融合された野生型又は変異体配列を含む。例示的な半減期延長部分としては、Ｆｃ、アルブミン、ＰＡＳ配列、トランスフェリン、ＣＴＰ（その４つのＯ−グリカンを有するヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）の２８アミノ酸Ｃ末端ペプチド（ＣＴＰ））、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、アルブミン結合ポリペプチド、アルブミン結合小分子、又はこれらのいずれかの組み合わせが挙げられる。例示的なＦＩＸポリペプチドは、国際公開第２０１２／００６６２４号パンフレットに記載されているｒＦＩＸＦｃタンパク質であり、これは、Ｆｃのヒンジ領域における２つのジスルフィド結合を介して一緒に結合されたＦＩＸＦｃ一本鎖（ＦＩＸＦ ｃ−ｓｃ）及びＦｃ一本鎖（Ｆｃ−ｓｃ）である。
ＦＩＸ変異体は、機能獲得及び機能喪失変異体も含む。機能獲得変異体の例は、ヒトＦＩＸの「Ｐａｄｕａ」変異体であり、これは、Ｒ（アルギニン）（配列番号２のアミノ酸位置３８４に対応する）の代わりに成熟タンパク質の位置３３８におけるＬ（ロイシン）を有し、野生型ヒトＦＩＸと比較してより高い触媒及び凝固活性を有する（Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７３：１２０８９−９４（１９９８））。機能喪失変異体の例は、成熟タンパク質の開始から５番目のアミノ酸位置におけるリジンと置換されるアラニンであり、これは、コラーゲンＩＶへの結合の低下（例えば、機能喪失）を有するタンパク質をもたらす。
本明細書において用いられるところ、「形状因子」は、複数の活性細胞中に存在する活性細胞の数、複数の活性細胞の形状、複数の活性細胞間の接触のレベル、又は複数の活性細胞間に形成される結合のレベルのうちの１つ以上を指す。実施形態において、複数の活性細胞は、サイズ、形状、互いに共有される接触、又は互いの間の結合の数に関連するパラメータの１つ以上又はすべてについて予め選択された値（又は本明細書に記載の値）を有するクラスター、又は他の集合又は他の複数として提供される。例えば、実施形態において、複数の活性細胞は、例えば、固定又は顕微鏡法によって評価される際、活性細胞当たりの結合の平均最小数を有する。実施形態において、活性細胞は、患者への投与又は提供の前、その間、又はその後の１つ以上又はすべてにおいて形状因子を示し得る。実施形態において、活性細胞は、患者への投与又は提供の前、その間、又はその後の１つ以上又はすべてにおいて形状因子を示し得る。例示的な形状因子は、活性細胞の単一層、活性細胞のクラスター、又はマイクロキャリア（例えば、ビーズ又はマトリックス）上の配置を含む。
本明細書において用いられるところ、「インターロイキン２タンパク質」又は「ＩＬ−２タンパク質」は、別段の定めがある場合を除き、当該技術分野において認識されているアッセイによって決定される際、ＩＬ−２生物活性を有する、例えば、Ｔｒｅｇ細胞におけるＩＬ−２受容体シグナル伝達を活性化する、天然のＩＬ−２タンパク質又はその変異体のアミノ酸配列を含むポリペプチドを意味する。本明細書に記載の活性細胞、例えば、組み換えＲＰＥ細胞によって発現され得るＩＬ−２タンパク質は、野生型霊長類（例えば、ヒト）、ブタ、イヌ、及びマウスタンパク質、並びにこのような野生型タンパク質の変異体を含む。変異体ＩＬ−２タンパク質は、好ましくは、対応する野生型ＩＬ−２の生物活性の少なくとも５０％、７５％、９０％又はそれ以上（＞１００％を含む）を有する。ＩＬ−２タンパク質のための生物活性アッセイが、米国特許第１０，０３５，８３６号明細書に記載されており、例えば、ＣＤ４＋ＣＤ２５−／低Ｔ細胞又はＮＫ細胞と比較して、Ｔｒｅｇ細胞におけるリン酸化ＳＴＡＴ５タンパク質のレベルを測定することを含む。本開示の活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）によって生成され得る変異体ＩＬ−２タンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｎ８８Ｒ、Ｎ８８Ｉ、Ｎ８８Ｇ、Ｄ２０Ｈ、Ｑ１２６Ｌ、Ｑ１２６Ｆ、及びＣ１２５Ｓ又はＣ１２５Ａの１つ以上を有するタンパク質を含む。
本明細書において用いられるところ、「移植可能な要素」は、活性細胞、例えば複数の活性細胞、例えば活性細胞のクラスターを含み、ここで、１つ又は複数の活性細胞は、封入構成要素（この封入構成要素は活性細胞以外である）中に完全に又は部分的に配置されており、例えば、封入構成要素は非細胞構成要素を含む。実施形態において、封入構成要素は、封入された１つ又は複数の活性細胞に対する免疫攻撃、又は免疫攻撃の影響を阻害する。実施形態において、封入構成要素は、半透膜又は半透性ポリマーマトリックス若しくはコーティングを含む。典型的には、封入構成要素は、例えば栄養分及び老廃物といった小分子の流過を許容する。典型的には、封入構成要素は、封入構成要素中に配置された活性細胞によって放出される治療薬（例えば、治療的ポリペプチド）の流過を許容する。実施形態において、封入構成要素中に配置することで、移植可能な要素に向けられる、例えば、移植可能な要素中の活性細胞に対する、患者の免疫応答、例えば、線維化応答の影響が、例えば、移植可能な要素中に配置されていない同様の活性細胞と比して最低限とされる。実施形態において、封入構成要素は、移植可能な要素に向けられる、例えば、封入構成要素又は移植可能な要素中の活性細胞に対する、患者の免疫応答、例えば、線維化応答の影響を、例えば、部分を含まない同様の移植可能な要素と比して最低限とする部分、例えば、本明細書に記載の部分（例えば、化合物表１中の化合物）を含む。いくつかの実施形態において、封入構成要素は、ポリマーヒドロゲルを含む。いくつかの実施形態において、ポリマーヒドロゲルは、化合物表１中の化合物（例えば、化合物１０１）で化学修飾されるアルギン酸塩を含み；実施形態において、このアルギン酸塩は、＜７５ｋＤａの分子量を有する。実施形態において、封入構成要素は、化学修飾アルギン酸塩及び非修飾アルギン酸塩の混合物を含むヒドロゲルカプセルであり；実施形態において、非修飾アルギン酸塩は、１５０ｋＤａ〜２５０ｋＤａの分子量を有する。実施形態において、化学修飾アルギン酸塩及び非修飾アルギン酸塩のそれぞれにおけるアルギン酸塩のＧ：Ｍ比は１を超える。
実施形態において、移植可能な要素は、活性細胞、例えば複数の活性細胞、例えば活性細胞のクラスター、又は例えば１つ若しくは複数の活性細胞を含むビーズ若しくはマトリックスといったマイクロキャリア上の細胞又はその周囲にインサイツで形成される、又は形成可能である封入構成要素を含む（本明細書において、「インサイツカプセル化移植可能要素」と称される）。
実施形態において、移植可能な要素は、可撓性ポリマー、例えば、アルギン酸塩（例えば、化学修飾アルギン酸塩）、ＰＬＡ、ＰＬＧ、ＰＥＧ、ＣＭＣ、又はこれらの混合物を含む封入構成要素（本明細書において、「ポリマーカプセル化移植可能デバイス」と称される）を含む。
インサイツカプセル化移植可能デバイス及びポリマーカプセル化移植可能デバイス（この分類は、相互に排他的ではない）は、本明細書において、総称してカプセル化移植可能要素と称される。
例示的なカプセル化移植可能要素は、活性細胞、例えば複数の活性細胞、例えば活性細胞のクラスター、又は例えば１つ若しくは複数の活性細胞を含むビーズ若しくはマトリックスといったマイクロキャリア、及び誘導体化されたアルギン酸塩のコーティングを含む封入要素を含む。いくつかの実施形態において、カプセル化移植可能要素は、約１．５ｍｍ、２ｍｍ、３ｍｍ、４ｍｍ、５ｍｍ ６ｍｍ、７ｍｍ、又は８ｍｍ以下の最大線形寸法を有する。
実施形態において、移植可能な要素は、例えば複数の活性細胞、例えば活性細胞のクラスター、又は例えば活性細胞を含むビーズ若しくはマトリックスといったマイクロキャリアといった封入される活性細胞との組み合わせ前に予め形成される封入構成要素を含む（本明細書において、デバイス系移植可能要素、又はＤＢ−移植可能要素と称される）。実施形態において、デバイス系移植可能要素は、ポリマー又は金属を含む封入構成要素を含む。例示的なデバイス系移植可能要素は、活性細胞、例えば複数の活性細胞、例えば活性細胞のクラスター、又は予め形成されるハウジング、例えば非可撓性ポリマー若しくは金属ハウジング若しくは可撓性ハウジング、例えば半透膜を含む封入構成要素中に配置される１つ若しくは複数の活性細胞を含む例えばビーズといったマイクロキャリアを含む。実施形態において、デバイス系移植可能要素は、少なくとも１．５ｍｍ、２ｍｍ、３ｍｍ、４ｍｍ、５ｍｍ ６ｍｍ、７ｍｍ、又は８ｍｍの最大線形寸法を有する。
本明細書において用いられるところ、「副甲状腺ホルモンタンパク質」又は「ＰＴＨタンパク質」は、例えば、当該技術分野において認識されているアッセイによって決定される際、ＰＴＨ生物活性を有する、天然の副甲状腺ホルモンポリペプチド又はその変異体のアミノ酸配列を含むポリペプチドを意味する。本明細書に記載の活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）によって発現され得るＰＴＨポリペプチドは、野生型霊長類（例えば、ヒト）、ブタ、イヌ、及びマウスポリペプチド、並びにこのような野生型ポリペプチドの変異体を含む。このようなＰＴＨポリペプチドは、プレプロ−ＰＴＨポリペプチド（１１５アミノ酸）、プロ−ＰＴＨポリペプチド（９０アミノ酸）、成熟８４−アミノ酸ペプチド（ＰＴＨ（１−８４））、及び生物学的に活性なその変異体、例えば、切断型変異体ペプチドＰＴＨ（１−３４）のための野生型ヒト配列から本質的になり得る。ヒト野生型配列における１つ以上のアミノ酸置換を有するＰＴＨペプチド変異体が、例えば、米国特許第７４１０９４８号明細書及び８５６３５１３号明細書並びに米国特許出願公開第２０１３０２１７６３０号明細書に記載されている。ＰＴＨ変異体は、好ましくは、対応する野生型ＰＴＨの生物活性の少なくとも５０％、７５％、９０％又はそれ以上（＞１００％を含む）を有する。タンデム質量分析法による特定のＰＴＨ変異体を検出するためのアッセイが、米国特許第８３８３４１７号明細書に記載されている。ＰＴＨペプチド変異体のための生物活性アッセイ、ｃＡＭＰレベルを測定することによって決定される際、アデニル酸シクラーゼの刺激が、米国特許第７４１０９４８号明細書に記載されている。
本明細書において用いられるところ、「ポリペプチド」は、ペプチド結合を介して結合されたアミノ酸残基を含み、少なくとも２、いくつかの実施形態において、少なくとも１０、５０、７５、１００、１５０、２００又はそれ以上のアミノ酸残基を有するポリマーを指す。「ポリペプチド」という用語は、２つ以上のアミノ酸の任意の１つ又は複数の鎖を含むことが意図され、限定されないが、ペプチド、ジペプチド、トリペプチド、オリゴペプチド及びタンパク質が挙げられ、「ポリペプチド」という用語は、これらの用語のいずれかの代わりに、又はこれらの用語のいずれかと同義的に使用され得る。「ポリペプチド」という用語はまた、限定されないが、タンパク質分解による切断（例えば、前駆体ポリペプチドの、成熟形態へのプロセシング）；ジスルフィド結合の形成；グリコシル化；脂質化；アセチル化；リン酸化；及びアミド化を含む、組み換え細胞内の外因性のヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドの翻訳後修飾の産物を指すことが意図される。
本明細書において用いられるところ、「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」、「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」、及び「予防している（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」は、投与又は治療の適用を含む処置であって、例えば、活性細胞、例えば、組み換えＲＰＥ細胞（例えば、本明細書に記載の）を、疾病、障害、又は状態の発症の前に、前記疾病、障害、又は状態に係る物理的徴候を妨げるために投与するステップを含む処置を指す。いくつかの実施形態において、「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」、「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」及び「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」は、疾病、障害又は状態の兆候又は症状が未だ発生していないか、又は、実測されていないことが必要とされる。いくつかの実施形態において、処置は、予防を含み、他の実施形態においては含まない。
「置換治療」又は「置換タンパク質」は、タンパク質の減少、変性又は欠乏に関連する疾病又は状態にある患者において減少している、不十分な量で存在している、変性した（例えば、変異した）、又は、欠乏しているタンパク質を置換又は増大させる治療用タンパク質又はその機能性画分である。例は、一定の血液凝固障害における一定の血液凝固因子、又は、一定のライソゾーム蓄積症における一定のライソゾーム酵素である。実施形態において、置換治療又は置換タンパク質は、内因性のタンパク質の機能が提供される。実施形態において、置換治療又は置換タンパク質は、置換されるタンパク質の、例えば野生型対立遺伝子又は障害に関連していない対立遺伝子といった天然の変異体と同一のアミノ酸配列を有する。実施形態において、置換治療若しくは置換タンパク質は、例えば野生型対立遺伝子又は障害に関連していない対立遺伝子であって、例えば患者が有する対立遺伝子といった天然変異体とは、アミノ酸残基の約１、２、３、４、５、１０、１５又は２０％以下でアミノ酸配列が異なる。
「配列同一性」又は「パーセント同一」は、本明細書において、２つのヌクレオチド配列又は２つのアミノ酸配列を指すために用いられる場合、２つの配列が比較され、比較ウィンドウ（ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｎｄｏｗ）又は指定される領域にわたって最大の一致のために整列される場合、２つの配列が規定の領域内で同じであるか、又は規定の領域内のヌクレオチド又はアミノ酸位置の規定のパーセンテージの同じヌクレオチド又はアミノ酸を有することを意味する。配列同一性は、限定されないが、米国特許出願公開第２０１７／０２３３４４５５ Ａ１号明細書に記載されているアルゴリズムのいずれかを含む、当該技術分野において公知の標準的な技術を用いて決定され得る。実施形態において、同一のヌクレオチド又はアミノ酸位置の規定のパーセンテージは、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上である。
本明細書において用いられるところ、「患者」は、ヒト又は非ヒト動物を指す。実施形態において、患者はヒト（すなわち、例えば任意の年齢群の男性又は女性、小児科の患者（例えば乳児、小児、青年）又は成人患者（例えば、若年成人、中年成人、又は老人））である。実施形態において、患者は、非ヒト動物、例えば哺乳動物（例えば、霊長類（例えばカニクイザル又はアカゲザル）である。実施形態において、患者は、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、又はイヌなどの商業的に関連する哺乳動物）又は鳥類（例えば、ニワトリ、アヒル、ガチョウ、又はシチメンチョウなどの商業的に関連する鳥類）である。一定の実施形態において、動物は哺乳動物である。動物は、オス又はメスであり得、任意の成長段階であり得る。非ヒト動物は遺伝子組み換え動物であり得る。実施形態において、患者はヒトである。
「転写単位」は、コード配列に動作可能に連結される少なくともプロモータ配列を含み、ＲＮＡ分子へのコード配列の転写又はＲＮＡ分子の、ポリペプチド分子への翻訳を制御又は促進する１つ以上のさらなる要素も含み得る、例えば外因性の核酸中に存在するＤＮＡ配列を意味する。いくつかの実施形態において、転写単位は、ポリアデニル化（ポリＡ）シグナル配列及びポリＡ部位も含む。実施形態において、転写単位は、例えば図５に示されるような、外因性の染色体外発現ベクター中に存在するか、又は本明細書に記載の組み換え活性細胞の染色体に組み込まれた外因性の配列として存在する。
本明細書において用いられるところ、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「処置する（ｔｒｅａｔ）」、及び「処置している（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、疾病、障害、若しくは状態の発症の低減、逆転、緩和、遅延の１つ以上、又は疾病、障害、若しくは状態の症状、兆候、若しくは基礎原因の１つ以上の進行の阻害を指す。実施形態において、処置は、疾病、障害若しくは状態の発症の低減、逆転、緩和、遅延、又は、疾病、障害若しくは状態の症状の進行の阻害を含む。実施形態において、処置は、疾病、障害若しくは状態の発症の低減、逆転、緩和、遅延、又は、疾病、障害若しくは状態の兆候の進行の阻害を含む。実施形態において、処置は、疾病、障害又は状態の基礎原因の発症の低減、逆転、緩和、低減又は遅延を含む。いくつかの実施形態において、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「処置する（ｔｒｅａｔ）」及び「処置している（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、疾病、障害又は状態の兆候又は症状が発生しているか、又は、実測されていることを必要とする。他の実施形態において、処置は、疾病又は状態の兆候又は症状が不在でも、例えば予防的処置で投与されてもよい。例えば、処置は、症状の発症（例えば、症状の履歴を鑑みて、及び／又は、遺伝的又は他の感受性要因を鑑みて）の前に感受性の個体に投与され得る。処置はまた、例えば再発を遅延又は予防するために、症状が回復した後も継続してもよい。いくつかの実施形態において、処置は予防を含み、他の実施形態においては含まない。
本明細書において用いられるところ、「フォン・ヴィレブランド因子タンパク質」又は「ｖＷＦタンパク質」は、別段の定めがある場合を除き、当該技術分野において認識されているアッセイによって決定される際、ｖＷＦ生物活性、例えば、ＦＶＩＩＩ結合活性を有する天然のｖＷＦポリペプチド又はその変異体のアミノ酸配列を含むポリペプチドを意味する。本明細書に記載の組み換え活性細胞によって発現され得るｖＷＦタンパク質は、野生型霊長類（例えば、ヒト）、ブタ、イヌ、及びマウスタンパク質、並びにこのような野生型タンパク質の変異体を含む。活性細胞（例えば、ＡＲＰＥ−１９細胞）は、以下のｖＷＦポリペプチドのいずれかをコードするように組み換えられ得る：２８１３アミノ酸の前駆体ｖＷＦ、２２アミノ酸のシグナルペプチドを欠くｖＷＦ、及び任意選択により、７４１アミノ酸のプレプロペプチド、２０５０アミノ酸の成熟ｖＷＦタンパク質、及びその切断型変異体、例えば、ｖＷＦ欠損マウスにおける内因性のＦＶＩＩＩレベルを安定させるのに十分なｖＷＦ断片、例えば、Ｄ’Ｄ３領域（アミノ酸７６４〜１２４７）又はＤ１Ｄ２Ｄ’Ｄ３領域を含有する切断型変異体；及び例えば、米国特許第９４５８２２３号明細書に記載されているように、Ｄ’領域における１つ以上のアミノ酸置換を有するｖＷＦ変異体。変異体ｖＷＦタンパク質は、好ましくは、対応する野生型ｖＷＦタンパク質の生物活性の少なくとも５０％、７５％、９０％又はそれ以上（＞１００％を含む）を有する。ｖＷＦの生物活性を決定するための当該技術分野において認識されているアッセイは、リストセチン補因子活性（Ｆｅｄｅｒｉｃｉ Ａ Ｂ ｅｔ ａｌ．２００４．Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ ８９：７７−８５）、血小板糖タンパク質複合体Ｉｂ−Ｖ−ＩＸのＧＰ ＩｂαへのｖＷＦの結合（Ｓｕｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．２００６．Ｃｌｉｎ Ａｐｐｌ Ｔｈｒｏｍｂ Ｈｅｍｏｓｔ．１２：３０５−３１０）、及びコラーゲン結合（Ｋａｌｌａｓ ＆ Ｔａｌｐｓｅｐ．２００１．Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ ８０：４６６−４７１）を含む。
いくつかの実施形態において、本開示の組み換え活性細胞によって産生されるｖＷＦタンパク質は、ｖＷＦタンパク質の半減期を延長する異種ポリペプチド又は非ポリペプチド部分に融合された天然又は変異体ｖＷＦアミノ酸配列を含む。例示的な半減期延長部分としては、Ｆｃ、アルブミン、ＰＡＳ配列、トランスフェリン、ＣＴＰ（その４つのＯ−グリカンを有するヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）の２８アミノ酸Ｃ末端ペプチド（ＣＴＰ））、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、アルブミン結合ポリペプチド、アルブミン結合小分子、又はこれらのいずれかの組み合わせが挙げられる。
［選択される化学的定義］
特定の官能基及び化学用語の定義を以下により詳細に記載する。化学元素は、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ，７５ｔｈ Ｅｄ．の内表紙のＰｅｒｉｏｄｏｉｃ Ｔａｂｌｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｌｅｍｅｎｔｓ，ＣＡＳ ｖｅｒｓｉｏｎに従って識別し、特定の官能基は、ここに記載されているとおり通常どおり定義している。また、有機化学の一般原則、並びに特定の官能基部分及び反応性は、Ｔｈｏｍａｓ Ｓｏｒｒｅｌｌ，Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂｏｏｋｓ，Ｓａｕｓａｌｉｔｏ、１９９９；Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｍａｒｃｈ，Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、２００１；Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８９；及びＣａｒｒｕｔｈｅｒｓ，Ｓｏｍｅ Ｍｏｄｅｒｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，１９８７に記載されている。
本明細書で用いている略語は、化学及び生物学の技術分野におけるその従来の意味を有する。本明細書に記載の化学構造及び式は、化学技術分野において既知である化学原子価に係る標準的な規則に従って構成されている。
値の範囲が列挙されている場合、範囲中の各値及び部分範囲が包含されることが意図されている。例えば「Ｃ１〜Ｃ６アルキル」は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ１〜Ｃ６、Ｃ１〜Ｃ５、Ｃ１〜Ｃ４、Ｃ１〜Ｃ３、Ｃ１〜Ｃ２、Ｃ２〜Ｃ６、Ｃ２〜Ｃ５、Ｃ２〜Ｃ４、Ｃ２〜Ｃ３、Ｃ３〜Ｃ６、Ｃ３〜Ｃ５、Ｃ３〜Ｃ４、Ｃ４〜Ｃ６、Ｃ４〜Ｃ５、及びＣ５〜Ｃ６アルキルを包含することが意図されている。
本明細書において用いられるところ、「アルキル」は、１〜２４個の炭素原子（「Ｃ１〜Ｃ２４アルキル」）を有する直鎖又は分岐飽和炭化水素基のラジカルを指す。いくつかの実施形態において、アルキル基は、１〜１２個の炭素原子（「Ｃ１〜Ｃ１２アルキル」）、１〜８個の炭素原子（「Ｃ１〜Ｃ８アルキル」）、１〜６個の炭素原子（「Ｃ１〜Ｃ６アルキル」）、１〜５個の炭素原子（「Ｃ１〜Ｃ５アルキル」）、１〜４個の炭素原子（「Ｃ１〜Ｃ４アルキル」）、１〜３個の炭素原子（「Ｃ１〜Ｃ３アルキル」）、１〜２個の炭素原子（「Ｃ１〜Ｃ２アルキル」）、又は１個の炭素原子を有する（「Ｃ１アルキル」）。いくつかの実施形態において、アルキル基は、２〜６個の炭素原子を有する（「Ｃ２〜Ｃ６アルキル」）。Ｃ１〜Ｃ６アルキル基の例としては、メチル（Ｃ１）、エチル（Ｃ２）、ｎ−プロピル（Ｃ３）、イソプロピル（Ｃ３）、ｎ−ブチル（Ｃ４）、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｃ４）、ｓｅｃ−ブチル（Ｃ４）、イソ−ブチル（Ｃ４）、ｎ−ペンチル（Ｃ５）、３−ペンタニル（Ｃ５）、アミル（Ｃ５）、ネオペンチル（Ｃ５）、３−メチル−２−ブタニル（Ｃ５）、第三級アミル（Ｃ５）、及びｎ−ヘキシル（Ｃ６）が挙げられる。アルキル基の追加の例としては、ｎ−ヘプチル（Ｃ７）、ｎ−オクチル（Ｃ８）などが挙げられる。アルキル基の各実例は独立して任意選択により置換され得、すなわち、非置換であるか（「非置換アルキル」）又は１個以上の置換基（例えば、実例として、１〜５個の置換基、１〜３個の置換基、又は１個の置換基）で置換されている（「置換アルキル」）。
本明細書において用いられるところ、「アルケニル」は、２〜２４個の炭素原子、１つ以上の炭素−炭素二重結合を有し、及び三重結合を有さない直鎖又は分岐炭化水素基のラジカル（「Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル」）を指す。いくつかの実施形態において、アルケニル基は、２〜１０個の炭素原子（「Ｃ２〜Ｃ１０アルケニル」）、２〜８個の炭素原子（「Ｃ２〜Ｃ８アルケニル」）、２〜６個の炭素原子（「Ｃ２〜Ｃ６アルケニル」）、２〜５個の炭素原子（「Ｃ２〜Ｃ５アルケニル」）、２〜４個の炭素原子（「Ｃ２〜Ｃ４アルケニル」）、２〜３個の炭素原子（「Ｃ２〜Ｃ３アルケニル」）、又は２個の炭素原子を有する（「Ｃ２アルケニル」）。１つ以上の炭素−炭素二重結合は、中間（２−ブテニルにおけるものなど）又は末端（１−ブテニルにおけるものなど）であることが可能である。Ｃ２〜Ｃ４アルケニル基の例としては、エテニル（Ｃ２）、１−プロペニル（Ｃ３）、２−プロペニル（Ｃ３）、１−ブテニル（Ｃ４）、２−ブテニル（Ｃ４）、ブタジエニル（Ｃ４）などが挙げられる。Ｃ２〜Ｃ６アルケニル基の例としては、前述のＣ２〜４アルケニル基並びにペンテニル（Ｃ５）、ペンタジエニル（Ｃ５）、ヘキセニル（Ｃ６）などが挙げられる。アルケニル基の各実例は独立して任意選択により置換され得、すなわち、非置換であるか（「非置換アルケニル」）又は１個以上の置換基（例えば、実例として、１〜５個の置換基、１〜３個の置換基、又は１個の置換基）で置換されている（「置換アルケニル」）。
本明細書において用いられるところ、「アルキニル」という用語は、２〜２４個の炭素原子、１つ以上の炭素−炭素三重結合を有する直鎖又は分岐炭化水素基のラジカル（「Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル」）を指す。いくつかの実施形態において、アルキニル基は、２〜１０個の炭素原子（「Ｃ２〜Ｃ１０アルキニル」）、２〜８個の炭素原子（「Ｃ２〜Ｃ８アルキニル」）、２〜６個の炭素原子（「Ｃ２〜Ｃ６アルキニル」）、２〜５個の炭素原子（「Ｃ２〜Ｃ５アルキニル」）、２〜４個の炭素原子（「Ｃ２〜Ｃ４アルキニル」）、２〜３個の炭素原子（「Ｃ２〜Ｃ３アルキニル」）、又は２個の炭素原子を有する（「Ｃ２アルキニル」）。１つ以上の炭素−炭素三重結合は、中間（２−ブチニルにおけるものなど）又は末端（１−ブチニルにおけるものなど）であることが可能である。Ｃ２〜Ｃ４アルキニル基の例としては、エチニル（Ｃ２）、１−プロピニル（Ｃ３）、２−プロピニル（Ｃ３）、１−ブチニル（Ｃ４）、２−ブチニル（Ｃ４）などが挙げられる。アルキニル基の各実例は独立して任意選択により置換され得、すなわち、非置換であるか（「非置換アルキニル」）又は１個以上の置換基（例えば、実例として、１〜５個の置換基、１〜３個の置換基、又は１個の置換基）で置換されている（「置換アルキニル」）。
本明細書において用いられるところ、「ヘテロアルキル」という用語は、非環式の安定な直鎖若しくは分岐鎖、又はこれらの組み合わせであって、少なくとも１個の炭素原子と、Ｏ、Ｎ、Ｐ、Ｓｉ、及びＳからなる群から選択される少なくとも１個のヘテロ原子とを含むものを指し、ここで、窒素原子及び硫黄原子は任意選択により酸化されていてもよく、窒素ヘテロ原子は任意選択により四級化されていてもよい。ヘテロ原子Ｏ、Ｎ、Ｐ、Ｓ、及びＳｉは、ヘテロアルキル基の任意の位置に配置されていてもよい。例示的なヘテロアルキル基としては、これらに限定されないが：−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ３、−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２、−Ｓ（Ｏ）−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ（Ｏ）２−ＣＨ３、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ−ＣＨ３、−Ｓｉ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２−ＣＨ＝Ｎ−ＯＣＨ３、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ３、−Ｏ−ＣＨ３、及び−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ３が挙げられる。２個又は３個以下のヘテロ原子が連続していてもよい（例えば−ＣＨ２−ＮＨ−ＯＣＨ３及び−ＣＨ２−Ｏ−Ｓｉ（ＣＨ３）３など）。「ヘテロアルキル」が引用され、続いて、特定のヘテロアルキル基が引用されている場合（−ＣＨ２Ｏ、−ＮＲＣＲＤなど）、用語ヘテロアルキル及び−ＣＨ２Ｏ又は−ＮＲＣＲＤは、重複していないか、又は相互に排他的ではないことが理解されるであろう。むしろ、特定のヘテロアルキル基が追加的な明確さのために引用されている。それ故、「ヘテロアルキル」という用語は、−ＣＨ２Ｏ、−ＮＲＣＲＤなどの特定のヘテロアルキル基を排除していると本明細書において解釈されるべきではない。
「アルキレン」、「アルケニレン」、「アルキニレン」、又は「ヘテロアルキレン」という用語は、単独で、又は他の置換基の一部として、別段の定めがある場合を除き、それぞれ、アルキル、アルケニル、アルキニル、又はヘテロアルキルから誘導される二価ラジカルを意味する。アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、又はヘテロアルキレン基は、例えば、Ｃ１〜Ｃ６員アルキレン、Ｃ１〜Ｃ６員アルケニレン、Ｃ１〜Ｃ６員アルキニレン、又はＣ１〜Ｃ６員ヘテロアルキレンと記載され得、ここで、「員」という用語は、部分中の非水素原子を指す。ヘテロアルキレン基の場合、ヘテロ原子は、鎖終端の一方又は両方を占有することも可能である（例えば、アルキレンオキシ、アルキレンジオキシ、アルキレンアミノ、アルキレンジアミノなど）。さらに、アルキレン及びヘテロアルキレン連結基について、連結基の式が書かれている方向によって連結基の向きは示唆されていない。例えば、式−Ｃ（Ｏ）２Ｒ’−は、−Ｃ（Ｏ）２Ｒ’−及び−Ｒ’Ｃ（Ｏ）２−の両方を表し得る。
本明細書において用いられるところ、「アリール」は、６〜１４個の環炭素原子及びゼロ個のヘテロ原子を芳香族環系中に有する（「Ｃ６〜Ｃ１４アリール」）、単環式又は多環式（例えば、二環式又は三環式）４ｎ＋２芳香族環系（例えば、環式アレイにおいて共有される６、１０、又は１４個のπ電子を有する）のラジカルを指す。いくつかの実施形態において、アリール基は６個の環炭素原子を有する（「Ｃ６アリール」；例えば、フェニル）。いくつかの実施形態において、アリール基は１０個の環炭素原子を有する（「Ｃ１０アリール」；例えば、１−ナフチル及び２−ナフチルなどのナフチル）。いくつかの実施形態において、アリール基は１４個の環炭素原子を有する（「Ｃ１４アリール」；例えば、アントラシル）。アリール基は、例えば、Ｃ６〜Ｃ１０員アリールと記載され得、ここで、「員」という用語は、部分中の非水素環原子を指す。アリール基としては、フェニル、ナフチル、インデニル、及びテトラヒドロナフチルが挙げられる。アリール基の各実例は独立して任意選択により置換され得、すなわち、非置換であるか（「非置換アリール」）又は１個以上の置換基で置換されている（「置換アリール」）。
本明細書において用いられるところ、「ヘテロアリール」は、環炭素原子及び１〜４個の環ヘテロ原子を芳香族環系中に有する５〜１０員単環式又は二環式４ｎ＋２芳香族環系（例えば、環式アレイにおいて共有される６又は１０個のπ電子を有する）のラジカルを指し、ここで、各ヘテロ原子は、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される（「５〜１０員ヘテロアリール」）。１個以上の窒素原子を含有するヘテロアリール基において、結合点は、原子価的に許容されるとおり、炭素又は窒素原子であることが可能である。ヘテロアリール二環系は、１個以上のヘテロ原子を一方又は両方の環中に含んでいることが可能である。「ヘテロアリール」はまた、上記に定義されているヘテロアリール環が、１個以上のアリール基と縮合しており、結合点がアリール又はヘテロアリール環のいずれかにある環系を含み、このような実例において、環員の数は、縮合（アリール／ヘテロアリール）環系中の環員の数を示す。一方の環がヘテロ原子を含有しない二環式ヘテロアリール基（例えば、インドリル、キノリニル、カルバゾリルなど）において、結合点は、いずれかの環にあることが可能であり、すなわち、結合点は、ヘテロ原子を有する環（例えば、２−インドリル）又はヘテロ原子を含有しない環（例えば、５−インドリル）のいずれかにあることが可能である。ヘテロアリール基は、例えば６〜１０員ヘテロアリールと記載され得、ここで、「員」という用語は、部分中の非水素環原子を指す。
いくつかの実施形態において、ヘテロアリール基は、環炭素原子及び１〜４個の環ヘテロ原子を芳香族環系中に有する５〜１０員芳香族環系であり、ここで、各ヘテロ原子は窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される（「５〜１０員ヘテロアリール」）。いくつかの実施形態において、ヘテロアリール基は、環炭素原子及び１〜４個の環ヘテロ原子を芳香族環系中に有する５〜８員芳香族環系であり、ここで、各ヘテロ原子は窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される（「５〜８員ヘテロアリール」）。いくつかの実施形態において、ヘテロアリール基は、環炭素原子及び１〜４個の環ヘテロ原子を芳香族環系中に有する５〜６員芳香族環系であり、ここで、各ヘテロ原子は窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される（「５〜６員ヘテロアリール」）。いくつかの実施形態において、５〜６員ヘテロアリールは、窒素、酸素、及び硫黄から選択される１〜３個の環ヘテロ原子を有する。いくつかの実施形態において、５〜６員ヘテロアリールは、窒素、酸素、及び硫黄から選択される１〜２個の環ヘテロ原子を有する。いくつかの実施形態において、５〜６員ヘテロアリールは、窒素、酸素、及び硫黄から選択される１個の環ヘテロ原子を有する。ヘテロアリール基の各実例は独立して任意選択により置換され得、すなわち、非置換であるか（「非置換ヘテロアリール」）又は１個以上の置換基で置換されている（「置換ヘテロアリール」）。
１個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロアリール基としては、限定されないが、ピロリル、フラニル及びチオフェニルが挙げられる。２個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロアリール基としては、限定されないが、イミダゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、及びイソチアゾリルが挙げられる。３個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロアリール基としては、限定されないが、トリアゾリル、オキサジアゾリル、及びチアジアゾリルが挙げられる。４個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロアリール基としては、限定されないが、テトラゾリルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な６員ヘテロアリール基としては、限定されないが、ピリジニルが挙げられる。２個のヘテロ原子を含有する例示的な６員ヘテロアリール基としては、限定されないが、ピリダジニル、ピリミジニル、及びピラジニルが挙げられる。３又は４個のヘテロ原子を含有する例示的な６員ヘテロアリール基としては、限定されないが、それぞれトリアジニル及びテトラジニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な７員ヘテロアリール基としては、限定されないが、アゼピニル、オキセピニル、及びチエピニルが挙げられる。例示的な５，６−二環式ヘテロアリール基としては、限定されないが、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾチオフェニル、イソベンゾチオフェニル、ベンゾフラニル、ベンゾイソフラニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンズイソキサゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンズチアゾリル、ベンズイソチアゾリル、ベンズチアジアゾリル、インドリジニル、及びプリニルが挙げられる。例示的な６，６−二環式ヘテロアリール基としては、限定されないが、ナフチリジニル、プテリジニル、キノリニル、イソキノリニル、シンノリニル、キノキサリニル、フタラジニル、及びキナゾリニルが挙げられる。他の例示的なヘテロアリール基としては、ヘム及びヘム誘導体が挙げられる。
本明細書において用いられるところ、「アリーレン」及び「ヘテロアリーレン」という用語は、単独で、又は他の置換基の一部として、それぞれ、アリール及びヘテロアリールから誘導される二価ラジカルを意味する。
本明細書において用いられるところ、「シクロアルキル」は、３〜１０個の環炭素原子（「Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル」）及びゼロ個のヘテロ原子を非芳香族環系中に有する非芳香族環状炭化水素基のラジカルを指す。いくつかの実施形態において、シクロアルキル基は、３〜８個の環炭素原子（「Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル」）、３〜６個の環炭素原子（「Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル」）、又は５〜１０個の環炭素原子を有する（「Ｃ５〜Ｃ１０シクロアルキル」）。シクロアルキル基は、例えば、Ｃ４〜Ｃ７員シクロアルキルと記載され得、ここで、「員」という用語は、部分中の非水素環原子を指す。例示的なＣ３〜Ｃ６シクロアルキル基としては、限定されないが、シクロプロピル（Ｃ３）、シクロプロペニル（Ｃ３）、シクロブチル（Ｃ４）、シクロブテニル（Ｃ４）、シクロペンチル（Ｃ５）、シクロペンテニル（Ｃ５）、シクロヘキシル（Ｃ６）、シクロヘキセニル（Ｃ６）、シクロヘキサジエニル（Ｃ６）などが挙げられる。例示的なＣ３〜Ｃ８シクロアルキル基としては、限定されないが、前述のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル基並びにシクロヘプチル（Ｃ７）、シクロヘプテニル（Ｃ７）、シクロヘプタジエニル（Ｃ７）、シクロヘプタトリエニル（Ｃ７）、シクロオクチル（Ｃ８）、シクロオクテニル（Ｃ８）、クバニル（Ｃ８）、ビシクロ［１．１．１］ペンタニル（Ｃ５）、ビシクロ［２．２．２］オクタニル（Ｃ８）、ビシクロ［２．１．１］ヘキサニル（Ｃ６）、ビシクロ［３．１．１］ヘプタニル（Ｃ７）などが挙げられる。例示的なＣ３〜Ｃ１０シクロアルキル基としては、限定されないが、前述のＣ３〜Ｃ８シクロアルキル基並びにシクロノニル（Ｃ９）、シクロノネニル（Ｃ９）、シクロデシル（Ｃ１０）、シクロデセニル（Ｃ１０）、オクタヒドロ−１Ｈ−インデニル（Ｃ９）、デカヒドロナフタレニル（Ｃ１０）、スピロ［４．５］デカニル（Ｃ１０）などが挙げられる。前述の例に例示されているとおり、一定の実施形態において、シクロアルキル基は、単環式（「単環式シクロアルキル」）であるか、又は二環系などの縮合、架橋若しくはスピロ環系を含有し（「二環式シクロアルキル」）、また、飽和であることが可能であり、又は部分不飽和であることが可能である。「シクロアルキル」はまた、上記に定義されているシクロアルキル環が、１個以上のアリール基と縮合しており、結合点がシクロアルキル環にある環系を含み、このような実例において、炭素の数は引き続きシクロアルキル環系中の炭素の数を示す。シクロアルキル基の各実例は独立して任意選択により置換され得、すなわち、非置換であるか（「非置換シクロアルキル」）又は１個以上の置換基で置換されている（「置換シクロアルキル」）。
本明細書において用いられるところ、「ヘテロシクリル」は、環炭素原子及び１〜４個の環ヘテロ原子を有する３〜１０員非芳香族環系のラジカルを指し、ここで、各ヘテロ原子は、窒素、酸素、硫黄、ホウ素、リン、及びケイ素から独立して選択される（「３〜１０員ヘテロシクリル」）。１個以上の窒素原子を含有するヘテロシクリル基において、結合点は、原子価的に許容されるとおり、炭素又は窒素原子であることが可能である。ヘテロシクリル基は、単環式（「単環式ヘテロシクリル」）又は二環系などの縮合、架橋若しくはスピロ環系（「二環式ヘテロシクリル」）であることが可能であり、また、飽和であることが可能であり、又は部分不飽和であることが可能である。ヘテロシクリル二環系は、１個以上のヘテロ原子を一方又は両方の環中に含んでいることが可能である。「ヘテロシクリル」はまた、上記に定義されているヘテロシクリル環が、１個以上のシクロアルキル基と縮合しており、結合点がシクロアルキル又はヘテロシクリル環のいずれかにある環系、又は上記に定義されているヘテロシクリル環が、１個以上のアリール又はヘテロアリール基と縮合しており、結合点がヘテロシクリル環にある環系を含み、このような実例において、環員の数は引き続きヘテロシクリル環系中の環員の数を示す。ヘテロシクリル基は、例えば、３〜７員ヘテロシクリルと記載され得、ここで、「員」という用語は、部分中における、非水素環原子、すなわち、炭素、窒素、酸素、硫黄、ホウ素、リン、及びケイ素を指す。ヘテロシクリルの各実例は独立して任意選択により置換され得、すなわち、非置換であるか（「非置換ヘテロシクリル」）又は１個以上の置換基で置換されている（「置換ヘテロシクリル」）。一定の実施形態において、ヘテロシクリル基は非置換３〜１０員ヘテロシクリルである。一定の実施形態において、ヘテロシクリル基は置換３〜１０員ヘテロシクリルである。
いくつかの実施形態において、ヘテロシクリル基は、環炭素原子及び１〜４個の環ヘテロ原子を有する５〜１０員非芳香族環系であり、ここで、各ヘテロ原子は、窒素、酸素、硫黄、ホウ素、リン、及びケイ素から独立して選択される（「５〜１０員ヘテロシクリル」）。いくつかの実施形態において、ヘテロシクリル基は、環炭素原子及び１〜４個の環ヘテロ原子を有する５〜８員非芳香族環系であり、ここで、各ヘテロ原子は、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される（「５〜８員ヘテロシクリル」）。いくつかの実施形態において、ヘテロシクリル基は、環炭素原子及び１〜４個の環ヘテロ原子を有する５〜６員非芳香族環系であり、ここで、各ヘテロ原子は、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される（「５〜６員ヘテロシクリル」）。いくつかの実施形態において、５〜６員ヘテロシクリルは、窒素、酸素、及び硫黄から選択される１〜３個の環ヘテロ原子を有する。いくつかの実施形態において、５〜６員ヘテロシクリルは、窒素、酸素、及び硫黄から選択される１〜２個の環ヘテロ原子を有する。いくつかの実施形態において、５〜６員ヘテロシクリルは、窒素、酸素、及び硫黄から選択される１個の環ヘテロ原子を有する。
１個のヘテロ原子を含有する例示的な３員ヘテロシクリル基としては、限定されないが、アジルジニル（ａｚｉｒｄｉｎｙｌ）、オキシラニル、チオレニル（ｔｈｉｏｒｅｎｙｌ）が挙げられる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な４員ヘテロシクリル基としては、限定されないが、アゼチジニル、オキセタニル及びチエタニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロシクリル基としては、限定されないが、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニル、ジヒドロチオフェニル、ピロリジニル、ジヒドロピロリル及びピロリル−２，５−ジオンが挙げられる。２個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロシクリル基としては、限定されないが、ジオキソラニル、オキサスルフラニル、ジスルフラニル、及びオキサゾリジン−２−オンが挙げられる。３個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロシクリル基としては、限定されないが、トリアゾリニル、オキサジアゾリニル、及びチアジアゾリニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な６員ヘテロシクリル基としては、限定されないが、ピペリジニル、ピペラジニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピリジニル、及びチアニルが挙げられる。２個のヘテロ原子を含有する例示的な６員ヘテロシクリル基としては、限定されないが、ピペラジニル、モルホリニル、ジチアニル、ジオキサニルが挙げられる。２個のヘテロ原子を含有する例示的な６員ヘテロシクリル基としては、限定されないが、トリアジナニル又はチオモルホリニル−１，１−ジオキシドが挙げられる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な７員ヘテロシクリル基としては、限定されないが、アゼパニル、オキセパニル及びチエパニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な８員ヘテロシクリル基としては、限定されないが、アゾカニル、オキセカニル及びチオカニルが挙げられる。Ｃ６アリール環に縮合した例示的な５員ヘテロシクリル基（本明細書において、５，６−二環式複素環とも称される）としては、限定されないが、インドリニル、イソインドリニル、ジヒドロベンゾフラニル、ジヒドロベンゾチエニル、ベンゾオキサゾリノニルなどが挙げられる。アリール環に縮合した例示的な６員ヘテロシクリル基（本明細書において、６，６−二環式複素環とも称される）としては、限定されないが、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニルなどが挙げられる。
本明細書において用いられるところ、「アミノ」は、ラジカル−ＮＲ７０Ｒ７１を指し、ここで、Ｒ７０及びＲ７１は各々独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ４〜Ｃ１０ヘテロシクリル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、及びＣ５〜Ｃ１０ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、アミノはＮＨ２を指す。
本明細書において用いられるところ、「シアノ」はラジカル−ＣＮを指す。
本明細書において用いられるところ、「ハロ」又は「ハロゲン」は、独立して、又は他の置換基の一部として、別段の定めがある場合を除き、フッ素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）、臭素（Ｂｒ）、又はヨウ素（Ｉ）原子を意味する。
本明細書において用いられるところ、「ヒドロキシ」はラジカル−ＯＨを指す。
本明細書において定義されるところ、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリール基は、任意選択により置換されている（例えば、「置換」若しくは「非置換」アルキル、「置換」若しくは「非置換」アルケニル、「置換」若しくは「非置換」アルキニル、「置換」若しくは「非置換」ヘテロアルキル、「置換」若しくは「非置換」シクロアルキル、「置換」若しくは「非置換」ヘテロシクリル、「置換」若しくは「非置換」アリール又は「置換」若しくは「非置換」ヘテロアリール基）。一般に、「置換されている」という用語は、用語「任意選択により」が先行しているか否かに関わらず、ある基（例えば炭素又は窒素原子）に存在する少なくとも１個の水素が許容される置換基で置き換えられることを意味し、この置換基は、例えば、置換により安定な化合物（例えば、再配列、環化、脱離、又は他の反応などによって自発的な変換を起こさない化合物）をもたらすものである。別段の定めがある場合を除き、「置換されている」基は、その基の１つ以上の置換可能な位置に置換基を有し、また、いずれかの所与の構造における２つ以上の位置が置換されている場合、この置換基は各位置において同一であるか又は異なる。「置換されている」という用語は、安定な化合物が形成される本明細書に記載の置換基のいずれかなどの、有機化合物のすべての許容可能な置換基による置換を含むことが想定される。本開示は、安定な化合物を得るためのあらゆるこのような組み合わせを想定する。本開示の目的のために、窒素などのヘテロ原子は、ヘテロ原子の原子価を満たすと共に、安定な部分の形成をもたらす、水素置換基及び／又は本明細書に記載のいずれかの好適な置換基を有し得る。
２個以上の置換基は、任意選択により結合されて、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、又はヘテロシクリル基を形成し得る。このようないわゆる環形成置換基は、典型的には、必須ではないが、環基礎構造に結合して見出される。一実施形態において、環形成置換基は基礎構造の隣接する構成員に結合している。例えば、環基礎構造の隣接する構成員に結合する２個の環形成置換基が、縮合環構造を形成する。他の実施形態において、環形成置換基は、基礎構造の単一の構成員に結合している。例えば、環基礎構造の単一の構成員に結合する２個の環形成置換基が、スピロ環式構造を形成する。さらに他の実施形態において、環形成置換基は、基礎構造の隣接していない構成員に結合している。
本明細書に記載の化合物は１つ以上の不斉中心を含んでいることが可能であり、それ故、例えば、鏡像異性体及び／又はジアステレオマーといった種々の異性形態で存在することが可能である。例えば、本明細書に記載の化合物は個々の鏡像異性体、ジアステレオマー若しくは幾何異性体の形態であることが可能であり、又はラセミ混合物及び１種以上の立体異性体が富化された混合物を含む立体異性体の混合物の形態であることが可能である。異性体は、キラル高圧液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）、並びにキラル塩の形成及び結晶化を含む当業者に公知の方法によって混合物から単離可能であり；又は好ましい異性体は、不斉合成により調製可能である。例えば、Ｊａｃｑｕｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ ａｎｄ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ（Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８１）；Ｗｉｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ３３：２７２５（１９７７）；Ｅｌｉｅｌ，Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｃａｒｂｏｎ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，ＮＹ，１９６２）；及びＷｉｌｅｎ，Ｔａｂｌｅｓ ｏｆ Ｒｅｓｏｌｖｉｎｇ Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｏｐｔｉｃａｌ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ ｐ．２６８（Ｅ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌ，Ｅｄ．，Ｕｎｉｖ．ｏｆ Ｎｏｔｒｅ Ｄａｍｅ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｏｔｒｅ Ｄａｍｅ，ＩＮ １９７２）を参照のこと。本開示はさらに、他の異性体を実質的に含まない個々の異性体として、及び代わりに、種々の異性体の混合物として、本明細書に記載の化合物を含む。
本明細書において用いられるところ、純粋な鏡像異性化合物は、化合物の他の鏡像異性体又は立体異性体を実質的に含まない（すなわち鏡像体過剰量である）。換言すると、「Ｓ」形態の化合物は「Ｒ」形態の化合物を実質的に含まず、それ故、「Ｒ」形態が鏡像体過剰量である。「鏡像異性体的に純粋な」又は「純粋な鏡像異性体」という用語は、化合物が、７５重量％超、８０重量％超、８５重量％超、９０重量％超、９１重量％超、９２重量％超、９３重量％超、９４重量％超、９５重量％超、９６重量％超、９７重量％超、９８重量％超、９９重量％超、９９．５重量％超、又は９９．９重量％超の鏡像異性体を含むことを示す。一定の実施形態において、重量は、化合物のすべての鏡像異性体又は立体異性体の総重量に基づく。
本明細書に記載の化合物はまた、１つ以上の同位体置換を含んでいてもよい。例えば、Ｈは、１Ｈ、２Ｈ（Ｄ又は重水素）、及び３Ｈ（Ｔ又は三重水素）を含むいずれかの同位体形態であり得；Ｃは、１２Ｃ、１３Ｃ、及び１４Ｃを含むいずれかの同位体形態であり得；Ｏは、１６Ｏ及び１８Ｏなどを含むいずれかの同位体形態であり得る。
「薬学的に許容可能な塩」という用語は、本明細書に記載の化合物に見出される特定の置換基に応じて、比較的無毒の酸又は塩基を伴って調製される有効な化合物の塩を含むことを意味する。本開示の化合物が比較的酸性の官能基を含有する場合、塩基付加塩は、このような中性型の化合物を、十分な量の所望の塩基と、そのまま、又は好適な不活性溶剤中において接触させることにより得ることが可能である。薬学的に許容可能な塩基付加塩の例としては、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、有機アミノ、若しくはマグネシウム塩、又は同様の塩が挙げられる。本開示の化合物が比較的塩基性の官能基を含有する場合、酸付加塩は、このような中性型の化合物を、十分な量の所望の酸と、そのまま、又は好適な不活性溶剤中において接触させることにより得ることが可能である。薬学的に許容可能な酸付加塩の例としては、塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、一水素炭酸、リン酸、一水素リン酸、二水素リン酸、硫酸、一水素硫酸、ヨウ化水素酸、又は亜リン酸などのような無機酸から誘導されるものが挙げられ、並びに酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トリルスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸などのような有機酸から誘導される塩が挙げられる。また、アルギニン酸塩などのアミノ酸の塩、及びグルクロン酸又はガラクツロン酸などのような有機酸の塩が含まれる（例えば、Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ６６：１−１９（１９７７）を参照のこと）。一定の本開示の特定の化合物は、塩基又は酸付加塩への化合物の転換を可能とする塩基性及び酸性官能基の両方を含有する。これらの塩は、当業者に公知の方法によって調製され得る。当業者に公知である他の薬学的に許容可能なキャリアが本開示に好適である。
塩形態に追加して、本開示は、プロドラッグ形態の化合物を提供する。本明細書に記載の化合物のプロドラッグは、生理学的状態で化学変化を容易に生起して本開示の化合物を提供する化合物である。さらに、プロドラッグは、エキソビボ環境における化学的又は生化学的方法によって本開示の化合物に転換されることが可能である。
一定の本開示の化合物は、非溶媒和形態、並びに水和物形態を含む溶媒和形態で存在することが可能である。一般に、溶媒和形態は非溶媒和形態と同等であり、本開示の範囲内に包含される。一定の本開示の化合物は、多数の結晶性又はアモルファス形態で存在し得る。一般に、すべての物理的形態が本開示によって想定される使用について同等であり、本開示の範囲内であることが意図されている。
「溶媒和物」という用語は、通常は加溶剤分解反応による、溶剤に付随する化合物の形態を指す。この物理的な付随は水素結合を含み得る。従来の溶剤としては、水、メタノール、エタノール、酢酸、ＤＭＳＯ、ＴＨＦ、ジエチルエーテルなどが挙げられる。本明細書に記載の化合物は、例えば結晶形態で調製され得、溶媒和され得る。好適な溶媒和物としては、薬学的に許容可能な溶媒和物が挙げられ、さらに、化学量論的溶媒和物及び非化学量論的溶媒和物の両方が挙げられる。
「水和物」という用語は、水に付随している化合物を指す。典型的には、化合物の水和物に含有される水分子の数は、水和物中の化合物分子の数に対する確定された割合である。従って、化合物の水和物は、例えば一般式Ｒ・ｘ Ｈ２Ｏ（式中、Ｒは化合物であり、ｘは０超の数字である）によって表され得る。
「互変異性体」という用語は、本明細書において用いられるところ、特定の化合物構造の相互変換可能な形態であって、水素原子及び電子の変位が様々である化合物を指す。それ故、２つの構造が、π電子及び原子（通常はＨ）の移動を介して平衡状態にあり得る。例えば、酸又は塩基のいずれかを伴う処理によって急速に相互変換されるため、エノール及びケトンは互変異性体である。互変異性体は、対象となる化合物の最適な化学反応性及び生物活性の獲得と関連性があり得る。
本明細書において用いられるところ、記号
Figure 2020534837
は、エンティティ、例えば、ポリマー（例えば、アルギン酸塩などのヒドロゲル形成ポリマー）又は移植可能な要素（例えば、デバイス若しくは材料）への結合を指す。
Figure 2020534837
によって表される結合は、エンティティ、例えば、ポリマー又は移植可能な要素への直接結合を指してもよく、結合基を介したエンティティへの連結を指し得る。本明細書において用いられるところ、「結合基」は、エンティティ（例えば、本明細書に記載のポリマー又は移植可能な要素）への式（ＩＩ）の化合物の連結のための部分を指し、当該技術分野において公知であるいずれかの結合化学を含み得る。例示的な結合基の列挙は、本明細書において参照によりその全体が援用される、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（３ｒｄ ｅｄ，Ｇｒｅｇ Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ：Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｉｎｃ，２０１３）に概説されている。いくつかの実施形態において、結合基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（ＲＣ）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｎ（ＲＤ）−、−ＮＣＮ−、−Ｃ（＝Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ））Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）ｘ−、−ＯＳ（Ｏ）ｘ−、−Ｎ（ＲＣ）Ｓ（Ｏ）ｘ−、−Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ）−、−Ｐ（ＲＦ）ｙ−、−Ｓｉ（ＯＲＡ）２−、−Ｓｉ（ＲＧ）（ＯＲＡ）−、−Ｂ（ＯＲＡ）−、又は金属を含み、ここで、ＲＡ、ＲＣ、ＲＤ、ＲＦ、ＲＧ、ｘ及びｙの各々は、独立して本明細書に記載されているとおりである。いくつかの実施形態において、結合基は、アミン、ケトン、エステル、アミド、アルキル、アルケニル、アルキニル、又はチオールを含む。いくつかの実施形態において、結合基は架橋剤である。いくつかの実施形態において、結合基は−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６−アルキレン）−であり、ここで、アルキレンはＲ１で置換され、Ｒ１は本明細書に記載されているとおりである。いくつかの実施形態において、結合基は−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６−アルキレン）−であり、ここで、アルキレンは、１〜２個のアルキル基（例えば、１〜２個のメチル基）で置換される。いくつかの実施形態において、結合基は−Ｃ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２−である。いくつかの実施形態において、結合基は−Ｃ（Ｏ）（メチレン）−であり、ここで、アルキレンは、１〜２個のアルキル基（例えば、１〜２個のメチル基）で置換される。いくつかの実施形態において、結合基は−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）−である。いくつかの実施形態において、結合基は−Ｃ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）−である。
［活性細胞］
活性細胞、例えば、組み換えＲＰＥ細胞又はＲＰＥ細胞に由来する組み換え細胞を含む、網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞又はＲＰＥ細胞に由来する細胞を含む細胞組成物、その組成物、これを含む移植可能な要素、並びにこのような細胞、組成物及び移植可能な要素を作製又は製造及び使用する方法が本明細書に開示されている。実施形態において、活性細胞、例えば、ＲＰＥ細胞は、組み換え活性細胞、例えば、組み換えＲＰＥ細胞である。
体内に天然に存在する際、ＲＰＥ細胞は、眼の上皮の基層を構成し、網膜中の光受容細胞の真後ろのブルッフ膜内又はブルッフ膜上の立方細胞の単一層を構成する。ＲＰＥ細胞は、栄養分を輸送し、イオン平衡を調節することによる網膜下腔の維持、並びに散乱光を捕捉し、レチノイドの貯蔵を促進することによる周りの網膜組織の損傷の防止に重要な役割を果たす（Ｓｐａｒｒｏｗ，Ｊ．Ｒ．ｅｔ ａｌ（２０１０）Ｃｕｒｒ Ｍｏｌ Ｍｅｄ １０：８０２−８２３）。ＲＰＥ細胞の機能異常は、黄斑変性症、中心性漿液性脈絡網膜症、及び網膜色素変性症などのいくつかの疾病の病理に関与している（Ｓａｔｏ，Ｒ．ｅｔ ａｌ（２０１３）Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ ５４：１７４０−１７４９）。
組み換え活性細胞、例えば、組み換えＲＰＥ細胞又はＲＰＥ細胞に由来する組み換え細胞が、本明細書に記載されており、本開示における使用のために利用され得る有利な特性を有する。例えば、実施形態において、活性細胞は、接触阻止を示すことができ、実施形態において、隣接細胞の食作用が可能であり、又はその両方である。実施形態において、これらの特性の一方又は両方が、恒常性維持機能を提供し；例えば、実施形態において、接触阻止は、貪食能力が細胞分裂及び死亡活性細胞の交換のためのより可能な環境を可能にしながら、カプセル化される活性細胞の機能又は完全性を損ない得る好ましくない増殖を防止又は阻害する。実施形態において、カプセル化される活性細胞は、インビトロ培養物中で、予め選択された期間にわたって、又は患者に移植されて、例えば、約１、２、３、４、５、１０、２０、３０、４５、６０、又は９０日間にわたって、約１０、２０、３０、４０又は５０％を超えて変動しない細胞の密度又は数を維持する。
実施形態において、活性細胞は、自己、同種、又は異種細胞である（これらの用語は、細胞と、細胞が投与される患者との間の関係について言及している）。
実施形態において、活性細胞は、不死化細胞であり、又は不死化細胞由来のものである。
実施形態において、活性細胞は、非不死化細胞であり、又は非不死化細胞由来のものである。
実施形態において、活性細胞は、低分化細胞（例えば、ＲＰＥ細胞より低分化）、例えば、多能性細胞、多分化能細胞、幹細胞、胚幹細胞、間葉幹細胞、人工多能性幹細胞に由来する細胞；再プログラム化細胞、再プログラム化幹細胞、又は再プログラム化幹細胞に由来する細胞である。低分化細胞は、天然細胞、低分化細胞、又は誘導された低分化細胞（例えば、それぞれ、幹細胞又は誘導された幹細胞）であることが可能である。
実施形態において、活性細胞は、天然誘導源、異種組織、同種組織、屍体、株細胞、又は一次細胞から誘導される。
活性細胞は、組み換え細胞、例えば、タンパク質又は核酸を発現するように組み換えられた細胞、又は代謝産物を産生するように組み換えられた細胞であり得る。活性細胞は、哺乳動物細胞、例えば、ヒト細胞であり得る。組み換え活性細胞は、哺乳動物細胞、例えば、ヒト細胞であり得る。
実施形態において、組み換え活性細胞は、染色体外発現ベクター中に存在するか、又は細胞内の１つ以上の染色体上部位に組み込まれ得る少なくとも１つの外因性の転写単位を含むＲＰＥ細胞である（又はＲＰＥ細胞に由来する）。実施形態において、転写単位は、ポリペプチドのコード配列に動作可能に連結されるプロモータを含み、ここで、プロモータは、配列番号２３、又は配列番号２３と実質的に同一である、例えば、配列番号２３と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくはそれ以上同一であるヌクレオチド配列から本質的になるか、又はそれからなる。実施形態において、プロモータは、配列番号２３からなる。実施形態において、ポリペプチドコード配列は、天然の配列（例えば、天然の野生型）又はコドン最適化配列である。実施形態において、転写単位は、ポリペプチドコード配列におけるＡＴＧ開始コドンの直ぐ上流のコザック翻訳配列（例えば、配列番号２６のヌクレオチド２０９４〜２０９９において記載されるコザック配列）をさらに含む。実施形態において、転写単位は、配列番号２４、又は配列番号２４と実質的に同一である、例えば、配列番号２４と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくはそれ以上同一であるヌクレオチド配列から本質的になるか、又はそれからなるポリＡ配列をさらに含む。実施形態において、転写単位は、染色体外発現ベクター中に存在する。実施形態において、組み換え細胞は、細胞ゲノムの同じ部位に並んで組み込まれる外因性の転写単位の２つ、３つ、４つ又はそれ以上のコピーを含む。実施形態において、転写単位は、配列番号２７又は配列番号２８から本質的になるか、又はそれからなる。
実施形態において、活性細胞は、培養物中の細胞の少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７９、８０、９０、９５、９８、又は９９％が、活性細胞、例えば、ＲＰＥ細胞又は組み換え活性細胞、例えば、組み換えＲＰＥ細胞である培養物に由来する。実施形態において、培養物は、活性細胞、例えば、ＲＰＥ細胞、又は組み換えＲＰＥ細胞、及び第２の細胞型、例えば、フィーダー細胞又は汚染細胞を含む。実施形態において、活性細胞は、細胞が投与される個体、例えば、同じ又は異なる個体に由来するＲＰＥ細胞、例えば、組み換え又は非組み換えＲＰＥ細胞である。
活性細胞は、様々な菌株のいずれかに由来し得る。ＲＰＥ細胞の例示的な菌株としては、ＡＲＰＥ−１９細胞、ＡＲＰＥ−１９−ＳＥＡＰ−２−ｎｅｏ細胞、ＲＰＥ−Ｊ細胞、及びｈＴＥＲＴ ＲＰＥ−１細胞が挙げられる。いくつかの実施形態において、活性細胞は、ＡＲＰＥ−１９細胞であるか、又はＡＲＰＥ−１９細胞に由来する。いくつかの実施形態において、活性細胞は、ＡＲＰＥ−１９（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２３０２（商標））細胞株に由来する組み換えＡＲＰＥ−１９細胞である。
実施形態において、活性細胞は、ＲＰＥ細胞、例えば、天然のＲＰＥ細胞に特徴的なバイオマーカー、例えば、抗原を発現する。いくつかの実施形態において、バイオマーカー（例えば、抗原）はタンパク質である。例示的なバイオマーカーとしては、ＣＲＡＬＢＰ、ＲＰＥ−６５、ＲＬＢＰ、ＢＥＳＴ１、又はαＢ−クリスタリンが挙げられる。実施形態において、活性細胞は、ＣＲＡＬＢＰ、ＲＰＥ−６５、ＲＬＢＰ、ＢＥＳＴ１、又はαＢ−クリスタリンのうちの少なくとも１つを発現する。実施形態において、活性細胞は、ＣＲＡＬＢＰ及びＲＰＥ−６５のうちの少なくとも１つを発現する。
実施形態において、複数の活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）、例えば、組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）は、予め選択された形状因子又は本明細書に記載の形状因子を有するか又はそのような形状因子中で提供される。実施形態において、形状因子は、単一層又はクラスターである。本明細書において用いられるところ、「活性細胞のクラスター、例えば、ＲＰＥ細胞のクラスター」は、単一層のものより低い、形状因子の表面積に対する細胞の比率を典型的に有する複数の活性細胞又は活性細胞の集合体を指す。いくつかの実施形態において、活性細胞のクラスターは、少なくとも約２、３、４、５、１０、５０、１００、２００、３００、４００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００、又は５，０００個の活性細胞を含む。いくつかの実施形態において、活性細胞のクラスターは、２〜５，０００個の細胞、２〜１，０００個の細胞、５〜１，０００個の細胞、５〜５００個の細胞、１０〜５００個の細胞を含む。いくつかの実施形態において、活性細胞のクラスターは、２〜１０個の細胞、５〜１０個の細胞、約５〜２０個の細胞、５〜５０個の細胞、又は１０〜１００個の細胞を含む。いくつかの実施形態において、活性細胞のクラスターは、５０〜１００個の細胞、５０〜２５０個の細胞、１００〜５００個の細胞、１００〜１，０００個の細胞、又は５００〜１，０００個の細胞を含む。実施形態において、細胞数の範囲の下端点、上端点、又は両方の端点が平均であり、５％変動し得る。実施形態において、細胞数の範囲の下端点、上端点、又は両方の端点が平均であり、１０％変動し得る。
実施形態において、活性細胞のクラスターは、スフェロイド、球形、若しくは楕円形状、又は曲面を有する任意の他の形状を有する。いくつかの実施形態において、活性細胞のクラスターは、スフェロイド形状を有し、ここで、活性細胞のクラスター中の細胞の少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％が、スフェロイド形状に適合する。いくつかの実施形態において、活性細胞のクラスターは、球形形状を有し、ここで、活性細胞のクラスター中の細胞の少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％が、球形形状に適合する。いくつかの実施形態において、活性細胞のクラスターは、楕円形状を有し、ここで、活性細胞のクラスター中の細胞の少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％が、楕円形状に適合する。
実施形態において、活性細胞のクラスターは、一定の寸法を含み、例えば、ｘ寸法、ｙ寸法、又はｚ寸法のそれぞれにおいてある範囲のサイズを有する。いくつかの実施形態において、ｘ、ｙ、又はｚ寸法の少なくとも１つの長さは、独立して、約１０μｍ超（例えば、約１５μｍ、約２０μｍ、約３０μｍ、約４０μｍ、約５０μｍ、約７５μｍ、約１００μｍ、約２５０μｍ、約５００μｍ、約７５０μｍ、約１ｍｍ、約１．１ｍｍ、約１．２ｍｍ、約１．３ｍｍ、約１．４ｍｍ、約１．５ｍｍ超、又はそれ以上）である。いくつかの実施形態において、活性細胞のクラスターのｘ、ｙ、又はｚ寸法の少なくとも１つの長さは、独立して、約２ｍｍ未満（例えば、約１．５ｍｍ、約１．４ｍｍ、約１．３ｍｍ、約１．２ｍｍ、約１．１ｍｍ、約１．０ｍｍ、約７５０μｍ、約５００μｍ、約２５０μｍ、約１００μｍ、約７５μｍ、約５０μｍ、約４０μｍ、約３０μｍ、約２０μｍ未満、又はそれ以下）である。
いくつかの実施形態において、活性細胞のクラスターのｘ、ｙ、又はｚ寸法の少なくとも１つの長さは、独立して、約１０μｍ〜約５ｍｍのサイズ（例えば、約２０μｍ〜約４ｍｍ、約５０μｍ〜約２ｍｍ、又は約１００μｍ〜約１．５ｍｍ）である。いくつかの実施形態において、活性細胞のクラスターのｘ、ｙ、又はｚ寸法の少なくとも２つの長さは、独立して、約１０μｍ〜約５ｍｍのサイズ（例えば、約２０μｍ〜約４ｍｍ、約５０μｍ〜約２ｍｍ、又は約１００μｍ〜約１．５ｍｍ）である。いくつかの実施形態において、活性細胞のクラスターのｘ、ｙ、又はｚ寸法の３つすべての長さは、独立して、約１０μｍ〜約５ｍｍのサイズ（例えば、約２０μｍ〜約４ｍｍ、約５０μｍ〜約２ｍｍ、又は約１００μｍ〜約１．５ｍｍ）である。
いくつかの実施形態において、活性細胞のクラスターの寸法のそれぞれは、独立して、他の寸法の約５％（例えば、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％ 約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約９５％）以内である。例えば、ＲＰＥ細胞のクラスターのｘ寸法は、ｙ寸法及びｚ寸法の両方の約５％（例えば、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％ 約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約９５％）であり得る。いくつかの実施形態において、活性細胞のクラスターのｙ寸法は、ｘ寸法及びｚ寸法の両方の約５％（例えば、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％ 約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約９５％）であり得る。他の実施形態において、活性細胞のクラスターのｚ寸法は、ｘ寸法及びｙ寸法の両方の約５％（例えば、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％ 約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約９５％）であり得る。
活性細胞のクラスターは、活性細胞によって分泌される基質、例えば、細胞外基質に埋め込まれ得る（例えば、埋め込まれた活性細胞のクラスター）。いくつかの実施形態において、活性細胞のクラスターは、活性細胞によって分泌される基質、例えば、細胞外基質によってカプセル化される（例えば、カプセル化された活性細胞のクラスター）。いくつかの実施形態において、細胞外基質は、タンパク質、例えば、コラーゲン（例えば、構造的コラーゲン又は抗血管新生コラーゲン、例えば、コラーゲンＩＶ、コラーゲンＩＩＩ、コラーゲンＶ、コラーゲンＶＩ、コラーゲンＸＶＩＩＩ）、ラミニン、エラスチン、インテグリン、又はフィブロネクチンを含む。細胞外基質又はその構成要素は、天然又は非天然のいずれかであり得る。いくつかの実施形態において、細胞外基質又はその構成要素は、天然であり、非天然構成要素が補充される。他の実施形態において、細胞外基質又はその構成要素は、非天然であり、天然の構成要素が補充される。
本明細書に記載の組成物及び方法において使用するための、例えば、ヒドロゲルカプセル中にカプセル化されるか又は予め選択された形状因子又は本明細書に記載の形状因子を有する複数の活性細胞、例えば活性細胞のクラスターにおいて使用するための活性細胞は、細胞周期の様々な段階にあり得る。いくつかの実施形態において、複数の活性細胞又は活性細胞のクラスター中の少なくとも１つの活性細胞は、細胞分裂を起こしている。細胞分裂は、例えば、ＤｅＦａｚｉｏ Ａ ｅｔ ａｌ（１９８７）Ｊ Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ Ｃｙｔｏｃｈｅｍ ３５：５７１−５７７及びＤｏｌｂｅａｒｅ Ｆ ｅｔ ａｌ（１９８３）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８０：５５７３−５５７７（これらはそれぞれ、本明細書において参照によりその全体が援用される）に記載されているように、当該技術分野において公知の任意の方法を用いて測定され得る。実施形態において、例えば、５−エチニル−２’デオキシウリジン（ＥｄＵ）アッセイ又は５−ブロモ−２’−デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）アッセイによって決定される際、少なくとも１、２、３、４、５、１０、又は２０％の細胞が、細胞分裂を起こしている。いくつかの実施形態において、細胞増殖は、顕微鏡法（例えば、蛍光顕微鏡法（例えば、紡錘体形成の低速度撮影若しくは評価）又はフローサイトメトリーによって可視化又は定量化される。いくつかの実施形態において、複数の活性細胞又は活性細胞のクラスター中の活性細胞は、細胞分裂を起こしておらず、静止状態でない。実施形態において、１、２、３、４、５、１０、又は２０％未満の細胞が、細胞分裂を起こしており、５−エチニル−２’デオキシウリジン（ＥｄＵ）アッセイ、５−ブロモ−２’−デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）アッセイ、顕微鏡法（例えば、蛍光顕微鏡法（例えば、紡錘体形成の低速度撮影若しくは評価）、又はフローサイトメトリー。
いくつかの実施形態において、複数の活性細胞又は活性細胞のクラスター中の活性細胞は、自食作用を起こすことが可能である。自食作用は、例えば、Ｂａｒｔｈ ｅｔ ａｌ（２０１０）Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ ２２１：１１７−１２４又はＺｈａｎｇ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｃｕｒｒ Ｐｒｏｔｏｃ Ｔｏｘｉｃｏｌ．６９：２０．１２．１−２０．１．２６（これらはそれぞれ、本明細書において参照によりその全体が援用される）に記載されているように、当該技術分野において公知の任意の方法を用いて測定され得る。例えば、自食作用は、５−エチニル−２’デオキシウリジン（ＥｄＵ）アッセイ、５−ブロモ−２’−デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）アッセイ、カチオン性両親媒性トレーサー（ＣＡＴ）アッセイ（ここで、色素が、迅速に細胞内に分配され、自食作用経路に関連する空胞を選択的に標識する）によって決定又は定量化され得る。いくつかの実施形態において、自食作用は、顕微鏡法（例えば、蛍光顕微鏡法（例えば、紡錘体形成の低速度撮影若しくは評価））によって可視化又は定量化される。いくつかの実施形態において、自食作用は、例えば、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌに記載されているように、ＬＣ３及びｐ６２の免疫ブロット分析、蛍光顕微鏡法によるオートファゴソーム形成の検出、及びタンデムｍＲＦＰ−ＧＦＰ蛍光顕微鏡法によるオートファゴソーム成熟の監視のうちの１つ以上によって分析される。実施形態において、例えば、５−エチニル−２’デオキシウリジン（ＥｄＵ）アッセイ、５−ブロモ−２’−デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）アッセイ、カチオン性両親媒性トレーサー（ＣＡＴ）アッセイ、又は顕微鏡法（例えば、蛍光顕微鏡法（例えば、紡錘体形成の低速度撮影若しくは評価）によって決定される際、少なくとも１、２、３、４、５、１０、又は２０％の細胞が、自食作用を起こすことが可能である。
いくつかの実施形態において、複数のＲＰＥ細胞又はＲＰＥ細胞のクラスター中のＲＰＥ細胞は、食作用を起こすことが可能である。食作用は、例えば、Ｏｄａ Ｔ ａｎｄ Ｍａｅｄａ Ｈ（１９８６）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ８８：１７５−１８３及びＮｕｕｔｉｌａ Ｊ ａｎｄ Ｌｉｌｉｕｓ ＥＭ（２００５）Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ａ（２００５）６５：９３−１０２（これらはそれぞれ、本明細書において参照によりその全体が援用される）に記載されているように、当該技術分野において公知の任意の方法を用いて測定され得る。例えば、食作用は、フルオレセイン標識抗体アッセイ（ここで、食作用経路を介した標識物質の取り込みが監視される）によって測定され得る。いくつかの実施形態において、食作用は、顕微鏡法（例えば、蛍光顕微鏡法（例えば、紡錘体形成の低速度撮影若しくは評価）又はフローサイトメトリーによって可視化又は定量化される。実施形態において、例えば、フルオレセイン標識抗体アッセイ、顕微鏡法（例えば、蛍光顕微鏡法（例えば、紡錘体形成の低速度撮影若しくは評価）、又はフローサイトメトリーによって決定される際、少なくとも１、２、３、４、５、１０、又は２０％の細胞が、食作用を起こすことが可能である。
実施形態において、複数又はクラスター中のＲＰＥ細胞の少なくとも１、２、３、４、５、１０、２０、４０、又は８０％が、生存している。細胞生存率は、例えば、Ｒｉｓｓ，Ｔ．ｅｔ ａｌ（２０１３）“Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙｓ”ｉｎ Ａｓｓａｙ Ｇｕｉｄａｎｃｅ Ｍａｎｕａｌ（Ｓｉｔｔａｐａｌａｍ，Ｇ．Ｓ．ｅｔ ａｌ，ｅｄｓ）に記載されているように、当該技術分野において公知の任意の方法を用いて測定され得る。例えば、細胞生存率は、ＡＴＰアッセイ、５−エチニル−２’デオキシウリジン（ＥｄＵ）アッセイ、５−ブロモ−２’−デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）アッセイによって測定又は定量化され得る。いくつかの実施形態において、細胞生存率は、顕微鏡法（例えば、蛍光顕微鏡法（例えば、紡錘体形成の低速度撮影若しくは評価）又はフローサイトメトリーによって可視化又は定量化される。実施形態において、例えば、ＡＴＰアッセイ、５−エチニル−２’デオキシウリジン（ＥｄＵ）アッセイ、５−ブロモ−２’−デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）アッセイ、顕微鏡法（例えば、蛍光顕微鏡法（例えば、紡錘体形成の低速度撮影若しくは評価）、又はフローサイトメトリーによって決定される際、複数又はクラスター中のＲＰＥ細胞の少なくとも１、２、３、４、５、１０、２０、４０又は８０％が、生存している。
本明細書に記載のパラメータのいずれかが、組織学、顕微鏡法、及び様々な機能アッセイなどの、当業者に公知の標準的な技術を用いて評価され得る。
いくつかの実施形態において、例えば活性細胞のクラスター中の、形状因子を有する活性細胞は、互いとの密着結合を形成する。実施形態において、例えば、当該技術分野において公知の方法、例えば、当該技術分野において公知の染色及び顕微鏡法アッセイによって決定される際、少なくとも１、２、３、４、５、１０、又は２０％の細胞が、形状因子の少なくとも１つの他の活性細胞との密着結合を有する。いくつかの実施形態において、例えば活性細胞のクラスター中の、形状因子を有する活性細胞は、互いとの密着結合を形成しない。実施形態において、例えば、当該技術分野において公知の方法、例えば、当該技術分野において公知の染色及び顕微鏡法アッセイによって決定される際、少なくとも１、２、３、４、５、１０、又は２０％の活性細胞が、形状因子の別の活性細胞との密着結合を有さない。いくつかの実施形態において、例えば活性細胞のクラスター中の、形状因子を有する活性細胞は、極性を示す。例えば、形状因子を有する活性細胞は、眼内（例えば、網膜）で、インサイツで極性特性を示し得る。実施形態において、例えば、当該技術分野において公知の方法、例えば、当該技術分野において公知の染色及び顕微鏡法アッセイによって決定される際、少なくとも１、２、３、４、５、１０、又は２０％の活性細胞が、極性を示す。いくつかの実施形態において、例えば活性細胞のクラスター中の、形状因子を有する活性細胞は、極性を示さない。実施形態において、例えば、当該技術分野において公知の方法、例えば、当該技術分野において公知の染色及び顕微鏡法アッセイによって決定される際、少なくとも１、２、３、４、５、１０、又は２０％の活性細胞が、極性を示す。
活性細胞、例えば、ＲＰＥ細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）は、非細胞キャリア（例えば、マイクロキャリア）上に配置され得る。いくつかの実施形態において、マイクロキャリアはビーズである。いくつかの実施形態において、マイクロキャリアは、ポリマー、例えば、プラスチック（例えば、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリエステル、ポリプロピレン）、ガラス、アクリルアミド、シリカ、シリコーンゴム、セルロース、デキストラン、コラーゲン（例えば、ゼラチン）、又はグリコサミノグリカンを含む。マイクロキャリアは、任意の形状又は形態であってもよく、球形（例えば、ビーズ）、平坦な円板、繊維、織物の円板、又は立方体が挙げられる。いくつかの実施形態において、マイクロキャリアは、極性表面又は荷電表面（例えば、負電荷又は正電荷）を有し得る。いくつかの実施形態において、マイクロキャリアは、平滑表面又はテクスチャ表面を有し得る。いくつかの実施形態において、活性細胞（例えば、組み換え活性細胞）は、マイクロキャリア表面への細胞表面タンパク質（例えば、糖タンパク質、例えば、フィブロネクチン）の吸着によってマイクロキャリアに結合される。マイクロキャリアのサイズは、約１０μｍ〜約５ｍｍ（例えば、約１０μｍ〜約３ｍｍ、１０μｍ〜約１ｍｍ、５０μｍ〜約１ｍｍ、１００μｍ〜約１ｍｍ、１００μｍ〜約５００μｍ）の範囲であり得る。
活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）は、当該技術分野において公知の任意の方法（例えば、Ｎｉｌｓｓｏｎ，Ｋ．（１９８８）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｒｅｖ ６：４０４−４３９を参照）を用いて、マイクロキャリア（例えば、ビーズ、例えば、ポリスチレンビーズ、例えば、Ｃｙｔｏｄｅｘ（登録商標）１マイクロキャリア）上に配置され得る。例えば、少量（例えば、約１ｇ、約５ｇ）のマイクロキャリアが、量り分けられ、緩衝液で洗浄され、滅菌され得る（例えば、オートクレーブによって）。次いで、滅菌したマイクロキャリアは、活性細胞の集団（例えば、約１０００万個の活性細胞、約２５００万個の活性細胞、約４０００万個の活性細胞、約１億個の活性細胞）を導入する前に、緩衝液及び培地で数回洗浄され得る。次いで、マイクロキャリア及び活性細胞の混合物は、穏やかに混合され、規定の温度（例えば、２５℃、３７℃）で（例えば、恒温培養器中で）インキュベートされ得る。インキュベーション後、細胞及びマイクロキャリア混合物は、フラスコに移され、移植可能な要素（例えば、本明細書に記載の移植可能な要素）中又はその内部への組み込みまで穏やかに撹拌され得る。
［治療薬］
本開示は、本明細書に記載の疾病、障害、又は状態の予防又は処置のための治療薬を産生する又は産生することが可能な活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）を特徴とする。実施形態において、活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）は、組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞、組み換えＡＲＰＥ−１９細胞）である。治療薬は、核酸（例えば、ヌクレオチド、ＤＮＡ、若しくはＲＮＡ）、ポリペプチド、脂質、糖（例えば、単糖、二糖、オリゴ糖、若しくは多糖）、又は小分子（これらはそれぞれ、以下にさらに詳述される）などの任意の生物学的物質であり得る。
いくつかの実施形態において、活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）は、核酸を産生する。本明細書に記載の活性細胞によって産生される核酸は、サイズが様々であり得、１つ以上のヌクレオシド又はヌクレオチド、例えば、２、３、４、５、１０、２５、５０超、又はそれ以上のヌクレオシド又はヌクレオチドを含有する。いくつかの実施形態において、核酸は、ＲＮＡ又はＤＮＡの短い断片であり、例えば、レポーターとして又は診断目的のために使用され得る。例示的な核酸としては、単一のヌクレオシド又はヌクレオチド（例えば、アデノシン、チミジン、シチジン、グアノシン、ウリジン一リン酸、イノシン一リン酸）、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ＲＮＡｉ）、及びＤＮＡ（例えば、ベクター、染色体ＤＮＡ）が挙げられる。いくつかの実施形態において、核酸は、約０．２５ｋＤ、０．５ｋＤ、１ｋＤ、１．５ｋＤ、２ｋＤ、２．５ｋＤ、５ｋＤ、１０ｋＤ、２５ｋＤ、５０ｋＤ、１００ｋＤ、１５０ｋＤ、２００ｋＤ、又はそれ以上の平均分子量を有する。
いくつかの実施形態において、治療薬は、ペプチド又はポリペプチド（例えば、タンパク質）、例えば、ホルモン、酵素、サイトカイン（例えば、炎症性サイトカイン又は抗炎症性サイトカイン）、増殖因子、凝固因子、又はリポタンパク質である。ＲＰＥ細胞によって産生されるペプチド又はポリペプチド（例えば、タンパク質）は、天然のアミノ酸配列を有することができ、又は天然の配列に対してアミノ酸突然変異、欠失又は付加を含有し得る。さらに、本開示と共に使用するためのペプチド又はポリペプチド（例えば、タンパク質）は、何らかの方法で、例えば、化学又は酵素修飾（例えば、グリコシル化、リン酸化）によって修飾され得る。いくつかの実施形態において、ペプチドは、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、４５、又は５０のアミノ酸を有する。いくつかの実施形態において、タンパク質は、５ｋＤ、１０ｋＤ、２５ｋＤ、５０ｋＤ、１００ｋＤ、１５０ｋＤ、２００ｋＤ、２５０ｋＤ、５００ｋＤ、又はそれ以上の平均分子量を有する。
いくつかの実施形態において、タンパク質はホルモンである。例示的なホルモンとしては、抗利尿ホルモン（ＡＤＨ）、オキシトシン、成長ホルモン（ＧＨ）、プロラクチン、成長ホルモン放出ホルモン（ＧＨＲＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、サイロトロピン放出ホルモン（ＴＲＨ）、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）、チロキシン、カルシトニン、副甲状腺ホルモン、アルドステロン、コルチゾール、エピネフリン、グルカゴン、インスリン、エストロゲン、プロゲステロン、及びテストステロンが挙げられる。いくつかの実施形態において、タンパク質は、インスリン（例えば、インスリンＡ鎖、インスリンＢ鎖、又はプロインスリン）である。いくつかの実施形態において、タンパク質は、成長ホルモン、例えば、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、組み換えヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）、ウシ成長ホルモン、メチオニン−ヒト成長ホルモン、ｄｅｓ−フェニルアラニンヒト成長ホルモン、及びブタ成長ホルモンである。いくつかの実施形態において、タンパク質は、インスリン（例えば、インスリンＡ鎖、インスリンＢ鎖、又はプロインスリン）でない。
いくつかの実施形態において、タンパク質は、増殖因子、例えば、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、神経増殖因子（ＮＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、形質転換増殖因子（ＴＧＦ）、及びインスリン様増殖因子−Ｉ及び−ＩＩ（ＩＧＦ−Ｉ及びＩＧＦ−ＩＩ）である。
いくつかの実施形態において、タンパク質は、凝固因子（ｃｌｏｔｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ）又は凝固因子（ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ）、例えば、血液凝固因子（ｂｌｏｏｄ ｃｌｏｔｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ）又は血液凝固因子（ｂｌｏｏｄ ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ）である。いくつかの実施形態において、タンパク質は、凝固、すなわち、血液が液体から固体又はゲルへと変換される過程に関与するタンパク質である。例示的な凝固因子（ｃｌｏｔｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ）及び凝固因子（ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ）としては、第Ｉ因子（例えば、フィブリノゲン）、第ＩＩ因子（例えば、プロトロンビン）、第ＩＩＩ因子（例えば、組織因子）、第Ｖ因子（例えば、プロアクセレリン、不安定因子）、第ＶＩ因子、第ＶＩＩ因子（例えば、安定因子、プロコンバーチン）、第ＶＩＩＩ因子（例えば、抗血友病因子Ａ）、第ＶＩＩＩＣ因子、第ＩＸ因子（例えば、抗血友病因子Ｂ）、第Ｘ因子（例えば、スチュアート・プロワー因子）、第ＸＩ因子（例えば、血漿トロンボプラスチン前駆物質）、第ＸＩＩ因子（例えば、ハーゲマン因子）、第ＸＩＩＩ因子（例えば、フィブリン安定化因子）、フォン・ヴィレブランド因子、プレカリクレイン、ヘパリン補因子ＩＩ、高分子量キニノーゲン（例えば、フィッツジェラルド因子）、抗トロンビンＩＩＩ、及びフィブロネクチンが挙げられる。いくつかの実施形態において、タンパク質は、プロテインＣなどの抗凝固因子である。
いくつかの実施形態において、タンパク質は抗体分子である。本明細書において用いられるところ、「抗体分子」という用語は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む、タンパク質、例えば、免疫グロブリン鎖又はその断片を指す。「抗体分子」という用語は、例えば、モノクローナル抗体（免疫グロブリンＦｃ領域を有する完全長抗体を含む）を含む。実施形態において、抗体分子は、完全長抗体、又は完全長免疫グロブリン鎖を含む。実施形態において、抗体分子は、完全長抗体、又は完全長免疫グロブリン鎖の抗原結合若しくは機能的断片を含む。実施形態において、抗体分子は、単一特異性抗体分子であり、単一のエピトープに結合し、例えば、それぞれが同じエピトープに結合する複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を有する単一特異性抗体分子である。実施形態において、抗体分子は、多特異性抗体分子であり、例えば、それは、複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、ここで、複数のうちの第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第１のエピトープに対する結合特異性を有し、複数のうちの第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第２のエピトープに対する結合特異性を有する。実施形態において、第１及び第２のエピトープは、同じ抗原、例えば、同じタンパク質（又は多量体タンパク質のサブユニット）上にある。実施形態において、多特異性抗体分子は、第３、第４又は第５の免疫グロブリン可変ドメインを含む。実施形態において、多特異性抗体分子は、二重特異性抗体分子、三重特異性抗体分子、又は四重特異性抗体分子である。
任意のクラスの全免疫グロブリン、その断片、及び抗体の抗原結合可変ドメインを少なくとも含む合成タンパク質を含む様々なタイプの抗体分子が、本明細書に記載の活性細胞によって産生され得る。抗体分子は、抗体、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４などのＩｇＧ抗体であり得る。抗体分子は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、一本鎖可変領域などを含む抗原結合断片の形態であり得る。抗体は、ポリクローナル又はモノクローナル（ｍＡｂ）であり得る。モノクローナル抗体は、それらが標的抗原に特異的に結合し、及び／又は所望の生物活性を示す限り、重鎖及び／又は軽鎖の一部が、特定の種に由来するか又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一又は同種である一方、鎖の残りの部分が、別の種に由来するか又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一又は同種である「キメラ」抗体、並びにこのような抗体の断片を含み得る。いくつかの実施形態において、抗体分子は、単一ドメイン抗体（例えば、ナノボディ）である。記載される抗体はまた、所望の機能を仲介する際の抗体の有効性を高めるために、組み換え手段、例えばアミノ酸の欠失、付加又は置換によって修飾され得る。例示的な抗体としては、抗β−ガラクトシダーゼ、抗コラーゲン、抗ＣＤ１４、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ４０、抗ＨＥＲ２、抗ＩＬ−１、抗ＩＬ−４、抗ＩＬ６、抗ＩＬ−１３、抗ＩＬ１７、抗ＩＬ１８、抗ＩＬ−２３、抗ＩＬ−２８、抗ＩＬ−２９、抗ＩＬ−３３、抗ＥＧＦＲ、抗ＶＥＧＦ、抗ＣＤＦ、抗フラジェリン、抗ＩＦＮ−α、抗ＩＦＮ−β、抗ＩＦＮ−γ、抗マンノース受容体、抗ＶＥＧＦ、抗ＴＬＲ１、抗ＴＬＲ２、抗ＴＬＲ３、抗ＴＬＲ４、抗ＴＬＲ５、抗ＴＬＲ６、抗ＴＬＲ９、抗ＰＤＦ、抗ＰＤ１、抗ＰＤＬ−１、又は抗神経成長因子抗体が挙げられる。いくつかの実施形態において、抗体は、抗神経成長因子抗体（例えば、フルラヌマブ、ファシヌマブ、タネズマブ）である。
いくつかの実施形態において、タンパク質は、例えば腫瘍壊死因子α及びβ、それらの受容体及びそれらの誘導体、レニンを含む、サイトカイン若しくはサイトカイン受容体、又はサイトカイン若しくはそれらの受容体を含むキメラタンパク質；リポタンパク質；コルヒチン；コルチコトロピン；バソプレシン；ソマトスタチン；リプレシン；パンクレオザイミン；ロイプロリド；α−１−アンチトリプシン；心房性ナトリウム利尿因子；肺表面活性剤；組織型プラスミノーゲン活性化因子（ｔ−ＰＡ）以外のプラスミノーゲン活性化因子、例えばウロキナーゼ；ボンベシン；トロンビン；エンケファリナーゼ；ＲＡＮＴＥＳ（活性化正常Ｔ細胞における発現及び分泌調節性（ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｏｎ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｎｏｒｍａｌｌｙ Ｔ−ｃｅｌｌ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ａｎｄ ｓｅｃｒｅｔｅｄ））；ヒトマクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ−１−α）；ヒト血清アルブミンなどの血清アルブミン；ミュラー管抑制因子；レラキシンＡ−鎖；レラキシンＢ−鎖；プロリラキシン（ｐｒｏｒｅｌａｘｉｎ）；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；絨毛性ゴナドトロピン；β−ラクタマーゼなどの微生物タンパク質；ＤＮａｓｅ；インヒビン；アクチビン；ホルモン又は増殖因子の受容体；インテグリン；プロテインＡ又はＤ；リウマチ因子；血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）；上皮増殖因子（ＥＧＦ）；ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、ＴＧＦ−β４、又はＴＧＦ−β５を含むＴＧＦ−α及びＴＧＦ−βなどの形質転換増殖因子（ＴＧＦ）；インスリン様増殖因子−Ｉ及び−ＩＩ（ＩＧＦ−Ｉ及びＩＧＦ−ＩＩ）；ｄｅｓ（１−３）−ＩＧＦ−Ｉ（脳ＩＧＦ−Ｉ）、インスリン様増殖因子結合タンパク質；ＣＤ−３、ＣＤ−４、ＣＤ−８、及びＣＤ−１９などのＣＤタンパク質；エリスロポエチン；骨誘導因子；免疫毒素；インターフェロン−α（例えば、インターフェロン．α．２Ａ）、−β、−γ、−λ及びコンセンサスインターフェロンなどのインターフェロン；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えば、Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、及びＧ−ＣＳＦ；インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ−１〜ＩＬ−１０；スーパーオキシドジスムターゼ；Ｔ細胞受容体；表面膜タンパク質；崩壊促進因子；輸送タンパク質；ホーミング受容体；アドレシン；プロスタグランジンなどの生殖阻害剤；生殖促進剤；調節タンパク質；イムノアドヘシンなどの、抗体（その断片を含む）及びキメラタンパク質；これらの化合物の前駆体、誘導体、プロドラッグ及び類似体、並びにこれらの化合物、又はそれらの前駆体、誘導体、プロドラッグ及び類似体の薬学的に許容可能な塩である。好適なタンパク質又はペプチドは、天然又は組み換えであってもよく、例えば、融合タンパク質、例えば、非治療的配列と融合される治療的ポリペプチドのアミノ酸配列、例えば、Ｆｃアミノ酸配列（例えば、配列番号３４）又はアルブミンアミノ酸配列（例えば、配列番号３５）が挙げられる。このような融合タンパク質は、治療的配列と非治療的アミノ酸配列との間にスペーサーアミノ酸配列を含み得る。
活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）によって産生されるポリペプチド（例えば、タンパク質）の例としては、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２（ＭＣＰ−１）、ＣＣＬ３（ＭＩＰ−１α）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ−１β）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９（ＣＣＬ１０）、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、ＣＸＣＬ１（ＫＣ）、ＣＸＣＬ２（ＳＤＦ１ａ）、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８（ＩＬ８）、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＬ１７、ＣＸ３ＣＬ１、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＴＮＦＡ、ＴＮＦＢ（ＬＴＡ）、ＴＮＦＣ（ＬＴＢ）、ＴＮＦＳＦ４、ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０ＬＧ）、ＴＮＦＳＦ６、ＴＮＦＳＦ７、ＴＮＦＳＦ８、ＴＮＦＳＦ９、ＴＮＦＳＦ１０、ＴＮＦＳＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＥＤＡ、ＩＬ２、ＩＬ１５、ＩＬ４、ＩＬ１３、ＩＬ７、ＩＬ９、ＩＬ２１、ＩＬ３、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ１１、ＩＬ２７、ＩＬ３０、ＩＬ３１、ＯＳＭ、ＬＩＦ、ＣＮＴＦ、ＣＴＦ１、ＩＬ１２ａ、ＩＬ１２ｂ、ＩＬ２３、ＩＬ２７、ＩＬ３５、ＩＬ１４、ＩＬ１６、ＩＬ３２、ＩＬ３４、ＩＬ１０、ＩＬ２２、ＩＬ１９、ＩＬ２０、ＩＬ２４、ＩＬ２６、ＩＬ２９、ＩＦＮＬ１、ＩＦＮＬ２、ＩＦＮＬ３、ＩＬ２８、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ４、ＩＦＮＡ５、ＩＦＮＡ６、ＩＦＮＡ７、ＩＦＮＡ８、ＩＦＮＡ１０、ＩＦＮＡ１３、ＩＦＮＡ１４、ＩＦＮＡ１６、ＩＦＮＡ１７、ＩＦＮＡ２１、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＫ、ＩＦＮＷ１、ＩＦＮＧ、ＩＬ１Ａ（ＩＬ１Ｆ１）、ＩＬ１Ｂ（ＩＬ１Ｆ２）、ＩＬ１Ｒａ（ＩＬ１Ｆ３）、ＩＬ１Ｆ５（ＩＬ３６ＲＮ）、ＩＬ１Ｆ６（ＩＬ３６Ａ）、ＩＬ１Ｆ７（ＩＬ３７）、ＩＬ１Ｆ８（ＩＬ３６Ｂ）、ＩＬ１Ｆ９（ＩＬ３６Ｇ）、ＩＬ１Ｆ１０（ＩＬ３８）、ＩＬ３３（ＩＬ１Ｆ１１）、ＩＬ１８（ＩＬ１Ｇ）、ＩＬ１７、ＫＩＴＬＧ、ＩＬ２５（ＩＬ１７Ｅ）、ＣＳＦ１（Ｍ−ＣＳＦ）、ＣＳＦ２（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＣＳＦ３（Ｇ−ＣＳＦ）、ＳＰＰ１、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＣＣＬ３Ｌ１、ＣＣＬ３Ｌ２、ＣＣＬ３Ｌ３、ＣＣＬ４Ｌ１、ＣＣＬ４Ｌ２、ＩＬ１７Ｂ、ＩＬ１７Ｃ、ＩＬ１７Ｄ、ＩＬ１７Ｆ、ＡＩＭＰ１（ＳＣＹＥ１）、ＭＩＦ、Ａｒｅｇ、ＢＣ０９６４４１、Ｂｍｐ１、Ｂｍｐ１０、Ｂｍｐ１５、Ｂｍｐ２、Ｂｍｐ３、Ｂｍｐ４、Ｂｍｐ５、Ｂｍｐ６、Ｂｍｐ７、Ｂｍｐ８ａ、Ｂｍｐ８ｂ、Ｃ１ｑｔｎｆ４、Ｃｃｌ２１ａ、Ｃｃｌ２７ａ、Ｃｄ７０、Ｃｅｒ１、Ｃｋｌｆ、Ｃｌｃｆ１、Ｃｍｔｍ２ａ、Ｃｍｔｍ２ｂ、Ｃｍｔｍ３、Ｃｍｔｍ４、Ｃｍｔｍ５、Ｃｍｔｍ６、Ｃｍｔｍ７、Ｃｍｔｍ８、Ｃｒｌｆ１、Ｃｔｆ２、Ｅｂｉ３、Ｅｄｎ１、Ｆａｍ３ｂ、Ｆａｓｌ、Ｆｇｆ２、Ｆｌｔ３ｌ、Ｇｄｆ１０、Ｇｄｆ１１、Ｇｄｆ１５、Ｇｄｆ２、Ｇｄｆ３、Ｇｄｆ５、Ｇｄｆ６、Ｇｄｆ７、Ｇｄｆ９、Ｇｍ１２５９７、Ｇｍ１３２７１、Ｇｍ１３２７５、Ｇｍ１３２７６、Ｇｍ１３２８０、Ｇｍ１３２８３、Ｇｍ２５６４、Ｇｐｉ１、Ｇｒｅｍ１、Ｇｒｅｍ２、Ｇｒｎ、Ｈｍｇｂ１、Ｉｆｎａ１１、Ｉｆｎａ１２、Ｉｆｎａ９、Ｉｆｎａｂ、Ｉｆｎｅ、Ｉｌ１７ａ、Ｉｌ２３ａ、Ｉｌ２５、Ｉｌ３１、Ｉｌｔｉｆｂ、Ｉｎｈｂａ、Ｌｅｆｔｙ１、Ｌｅｆｔｙ２、Ｍｓｔｎ、Ｎａｍｐｔ、Ｎｄｐ、Ｎｏｄａｌ、Ｐｆ４、Ｐｇｌｙｒｐ１、Ｐｒｌ７ｄ１、Ｓｃｇ２、Ｓｃｇｂ３ａ１、Ｓｌｕｒｐ１、Ｓｐｐ１、Ｔｈｐｏ、Ｔｎｆｓｆ１０、Ｔｎｆｓｆ１１、Ｔｎｆｓｆ１２、Ｔｎｆｓｆ１３、Ｔｎｆｓｆ１３ｂ、Ｔｎｆｓｆ１４、Ｔｎｆｓｆ１５、Ｔｎｆｓｆ１８、Ｔｎｆｓｆ４、Ｔｎｆｓｆ８、Ｔｎｆｓｆ９、Ｔｓｌｐ、Ｖｅｇｆａ、Ｗｎｔ１、Ｗｎｔ２、Ｗｎｔ５ａ、Ｗｎｔ７ａ、Ｘｃｌ１、エピネフリン、メラトニン、トリヨードチロニン、プロスタグランジン、ロイコトリエン、プロスタサイクリン、トロンボキサン、膵島アミロイドポリペプチド、ミュラー管抑制因子又はホルモン、アディポネクチン、コルチコトロピン、アンジオテンシン、バソプレシン、アルギニンバソプレシン、アトリオペプチン、脳性ナトリウム利尿ペプチド、カルシトニン、コレシストキニン、コルチスタチン、エンケファリン、エンドセリン、エリスロポエチン、卵胞刺激ホルモン、ガラニン、消化管抑制ポリペプチド、ガストリン、グレリン、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド−１、ゴナドトロピン放出ホルモン、ヘプシジン、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、ヒト胎盤性ラクトーゲン、インヒビン、ソマトメジン、レプチン、リポトロピン、メラノサイト刺激ホルモン、モチリン、オレキシン、オキシトシン、膵臓ポリペプチド、下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド、レラキシン、レニン、セクレチン、ソマトスタチン、トロンボポエチン、サイロトロピン、サイロトロピン放出ホルモン、血管作動性腸管ペプチド、アンドロゲン、α−グルコシダーゼ（酸性マルターゼとしても知られている）、グリコーゲンホスホリラーゼ、グリコーゲン脱分枝酵素、ホスホフルクトキナーゼ、ホスホグリセリン酸キナーゼ、ホスホグリセリン酸ムターゼ、乳酸脱水素酵素、カルニチンパルミチルトランスフェラーゼ、カルニチン、及びミオアデニル酸デアミナーゼが挙げられる。
いくつかの実施形態において、タンパク質は、補充療法又は補充タンパク質である。いくつかの実施形態において、補充療法又は補充タンパク質は、凝固因子（ｃｌｏｔｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ）又は凝固因子（ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ）、例えば、ｖＷＦ（天然のヒト因子ｖＷＦ若しくはその変異体を含む）、第ＶＩＩ因子（例えば、天然のヒト第ＶＩＩ因子アミノ酸配列若しくはその変異体を含む）、第ＶＩＩＩ因子（例えば、天然のヒト第ＶＩＩＩ因子アミノ酸配列若しくはその変異体を含む）又は第ＩＸ因子（例えば、天然のヒト第ＩＸ因子アミノ酸配列若しくはその変異体を含む）である。
いくつかの実施形態において、活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）は、ヒト第ＶＩＩＩ因子タンパク質、例えば、組み換え第ＶＩＩＩ因子タンパク質を発現するように組み換えられる。いくつかの実施形態において、組み換え第ＶＩＩＩ因子タンパク質は、Ｂ−ドメイン欠失組み換え第ＶＩＩＩ因子タンパク質（ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤ）又はその変異体である。いくつかの実施形態において、活性細胞は、組み換えＲＰＥ細胞（例えば、ＡＲＰＥ−１９細胞株に由来する）であり、図３に示されるＦＶＩＩＩ−ＢＤＤアミノ酸配列（配列番号１）をコードするか、又は配列番号３、４、５及び６に示される一本鎖ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤアミノ酸配列のうちの１つをコードする外因性の核酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、活性細胞（例えば、ＡＲＰＥ−１９細胞）は、第ＩＸ因子タンパク質、例えば、野生型ヒト第ＩＸ因子（ＦＩＸ）タンパク質又はその天然の多型変異体（例えば、配列番号２に示される前駆体ＦＩＸ配列のアミノ酸位置１９４に対応する、図４に示される成熟タンパク質のアミノ酸位置１４８においてトレオニンと置換されるアラニン）を発現するように組み換えられる。
いくつかの実施形態において、活性細胞（例えば、ＡＲＰＥ−１９細胞）は、野生型ＦＩＸタンパク質（ＦＩＸ−ＧＩＦ）の機能獲得（ＧＩＦ）変異体を発現するように組み換えられ、ここで、ＧＩＦ変異体は、対応する野生型ＦＩＸより高い比活性度を有する。いくつかの実施形態において、活性細胞は、組み換えＲＰＥ細胞（例えば、ＡＲＰＥ−１９細胞株に由来する）であり、配列番号２に示される変異体アミノ酸配列（第ＩＸ因子Ｐａｄｕａ）をコードする外因性の核酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、活性細胞（例えば、ＡＲＰＥ−１９細胞）は、例えば、ドメインＤ１〜Ｄ３（例えば、配列番号３３）からなるか、又はＤ’Ｄ３（例えば、配列番号３２）からなる、ｖＷＦの切断型変異体を発現するように組み換えられる。
いくつかの実施形態において、補充療法又は補充タンパク質は、酵素、例えば、α−ガラクトシダーゼ、α−Ｌ−イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）、又はＮ−スルホグルコサミンスルホヒドロラーゼ（ＳＧＳＨ）である。いくつかの実施形態において、補充療法又は補充タンパク質は、酵素、例えば、α−ガラクトシダーゼ（例えば、α−ガラクトシダーゼＡ）である。いくつかの実施形態において、補充療法又は補充タンパク質は、サイトカイン（例えば、インターロイキン２、例えば、配列番号２９）又は抗体である。いくつかの実施形態において、補充療法又は補充タンパク質は、副甲状腺ホルモンポリペプチド（例えば、配列番号３０又は配列番号３１）である。
いくつかの実施形態において、治療薬は、糖、例えば、単糖、二糖、オリゴ糖、又は多糖である。いくつかの実施形態において、糖は、トリオース、テトロース、ペントース、ヘキソース、又はヘプトース部分を含む。いくつかの実施形態において、糖は、直鎖単糖又は環化単糖を含む。いくつかの実施形態において、糖は、グルコース、ガラクトース、フルクトース、ラムノース、マンノース、アラビノース、グルコサミン、ガラクトサミン、シアル酸、マンノサミン、グルクロン酸、ガラクツロン酸、マンヌロン酸、又はグルロン酸部分を含む。いくつかの実施形態において、糖は、タンパク質に結合される（例えば、Ｎ−結合型グリカン又はＯ−結合型グリカン）。例示的な糖としては、グルコース、ガラクトース、フルクトース、マンノース、ラムノース、スクロース、リボース、キシロース、シアル酸、マルトース、アミロース、イヌリン、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、マンナン、レクチン、ペクチン、デンプン、セルロース、ヘパリン、ヒアルロン酸、キチン、アミロペクチン、又はグリコーゲンが挙げられる。いくつかの実施形態において、治療薬は、糖アルコールである。
いくつかの実施形態において、治療薬は脂質である。脂質は、疎水性又は両親媒性であってもよく、リポソーム、小胞、若しくは膜などの三次構造を形成するか、又はリポソーム、小胞、若しくは膜に挿入され得る。脂質は、脂肪酸、グリセロ脂質、グリセロリン脂質、ステロール脂質、プレノール脂質、スフィンゴ脂質、糖脂質、ポリケチド、又はスフィンゴ脂質を含み得る。封入された細胞によって産生される脂質の例としては、アナンダミド、ドコサヘキサエン酸、プロスタグランジン、ロイコトリエン、トロンボキサン、エイコサノイド、トリグリセリド、カンナビノイド、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、セラミド、スフィンゴミエリン、セレブロシド、ガングリオシド、エストロゲン、アンドロステロン、テストステロン、コレステロール、カロテノイド、キノン、ヒドロキノン、又はユビキノンが挙げられる。
いくつかの実施形態において、治療薬は小分子である。小分子は、細胞によって産生される天然産物を含み得る。いくつかの実施形態において、小分子は、利用可能性が不十分であり、又はリピンスキーのルールオブファイブと適合しない（小分子がヒトにおける経口で有効な薬物である見込みがあるかどうかを推定するのに使用される一連の指針；例えば、Ｌｉｐｉｎｓｋｉ，Ｃ．Ａ．ｅｔ ａｌ（２００１）Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ ４６：２−３６を参照のこと）。例示的な小分子天然産物としては、抗菌薬（例えば、カルモナム、ダプトマイシン、フィダキソマイシン、ホスホマイシン、イセパマイシン、ミクロノマイシン硫酸塩、ミオカマイシン、ムピロシン、ネチルマイシン硫酸塩、テイコプラニン、チエナマイシン、リファマイシン、エリスロマイシン、バンコマイシン）、抗寄生虫薬（例えば、アルテミシニン、イベルメクチン）、抗癌剤（例えば、ドキソルビシン、アクラルビシン、アミノレブリン酸、アルグラビン、オマセタキシンメペスクシナート、パクリタキセル、ペントスタチン、ペプロマイシン、ロミデプシン、トラベクテジン、アクチノマイシンＤ、ブレオマイシン、クロモマイシンＡ、ダウノルビシン、ロイコボリン、ネオカルジノスタチン、ストレプトゾシン、トラベクテジン、ビンブラスチン、ビンクリスチン）、抗糖尿病薬（例えば、ボグリボース）、中枢神経系薬剤（例えば、Ｌ−ドパ、ガランタミン、ジコノチド）、スタチン（例えば、メバスタチン）、抗真菌薬（例えば、フマギリン、シクロスポリン）、１−デオキシノジリマイシン、及びテオフィリン、ステロール（コレステロール、エストロゲン、テストステロン）が挙げられる。さらなる小分子天然産物が、本明細書において参照によりその全体が援用される、Ｎｅｗｍａｎ，Ｄ．Ｊ．ａｎｄ Ｃｒａｇｇ，Ｍ．（２０１６）Ｊ Ｎａｔ Ｐｒｏｄ ７９：６２９−６６１及びＢｕｔｌｅｒ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ（２０１４）Ｎａｔ Ｐｒｏｄ Ｒｅｐ ３１：１６１２−１６６１に記載されている。
いくつかの実施形態において、活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）は、非タンパク質又は非ペプチド小分子を合成するように組み換えられる。例えば、実施形態において、活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）は、スタチン（例えば、タウロスタチン（ｔａｕｒｏｓｔａｔｉｎ）、プラバスタチン、フルバスタチン、又はアトルバスタチン）を産生し得る。
いくつかの実施形態において、治療薬は、抗原（例えば、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、植物抗原、環境抗原、又は腫瘍抗原）である。抗原は、免疫賦活性である、すなわち、免疫応答を刺激するか又はそれが由来する生物又は分子に対して有効な免疫を提供することが可能であると当業者によって認識される。抗原は、核酸、ペプチド、タンパク質、糖、脂質、又はこれらの組み合わせであり得る。
本明細書に記載の活性細胞、例えば、組み換え活性細胞、例えば、組み換えＲＰＥ細胞は、単一の治療薬又は複数の治療薬を産生し得る。いくつかの実施形態において、活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）は、単一の治療薬を産生する。いくつかの実施形態において、活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）のクラスターは、単一の治療薬を産生する活性細胞を含む。いくつかの実施形態において、クラスター中の活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）の少なくとも約１％、５％、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は９９％が、単一の治療薬（例えば、本明細書に記載の治療薬）を産生する。いくつかの実施形態において、活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）は、複数の治療薬、例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０の治療薬を産生する。いくつかの実施形態において、活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）のクラスターは、複数の治療薬を産生する活性細胞を含む。いくつかの実施形態において、クラスター中の活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）の少なくとも約１％、５％、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は９９％が、複数の治療薬（例えば、本明細書に記載の治療薬）を産生する。
治療薬は、関連し得るか又は複合体を形成し得る。いくつかの実施形態において、治療薬は、活性形態で活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）から分泌又は放出される。いくつかの実施形態において、治療薬は、不活性形態で、例えば、プロドラッグとして、活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）から分泌又は放出される。後者の場合、治療薬は、酵素などの下流の薬剤によって活性化され得る。いくつかの実施形態において、治療薬は、活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）から分泌又は放出されず、細胞内に維持される。例えば、治療薬は、好ましくない物質の解毒又は代謝に関与する酵素に含まれていてもよく、好ましくない物質の解毒又は代謝が、細胞内で起こる。
［移植可能な要素］
本開示は、移植可能な要素中又は移植可能な要素上に完全に又は部分的に配置された活性細胞（例えば、組み換え活性細胞、例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む。移植可能な要素は、活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）の一部又は全体をカプセル化又はコーティングする封入要素を含み得る。実施形態において、移植可能な要素は、例えば複数の活性細胞、例えば活性細胞クラスター又はマイクロキャリア、例えば１つ又は複数の活性細胞を含むビーズ又はマトリックスといった、活性細胞又はその周囲にインサイツで形成される、又は、形成可能である封入構成要素を含む（本明細書において、「インサイツカプセル化移植可能要素」と称される）。
例示的な移植可能な要素及び封入構成要素は、金属、金属合金、セラミック、ポリマー、繊維、不活性材料、及びこれらの組み合わせなどの材料を含む。移植可能な要素は、活性細胞（例えば、組み換え活性細胞、例えば、組み換えＲＰＥ細胞）又は活性細胞（例えば、組み換え活性細胞、例えば、組み換えＲＰＥ細胞）のクラスターをカプセル化するのに使用され得る。移植可能な要素は、１つのタイプの材料から完全に構成されてもよく、又は単に表面又移植可能な要素の表面（例えば、外表面若しくは内表面）を指し得る。いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、例えば、本明細書に記載の化合物で化学修飾される。
いくつかの実施形態において、材料は、金属又は金属合金である。例示的な金属又は金属合金としては、チタン及びチタン族合金（例えば、ニチノール、ニッケルチタン合金、熱記憶合金材料）、白金、白金族合金、ステンレス鋼、タンタル、パラジウム、ジルコニウム、ニオブ、モリブデン、ニッケル−クロム、クロムモリブデン合金、又は特定のコバルト合金（例えば、コバルト−クロム及びコバルト−クロム−ニッケル合金、例えば、ＥＬＧＩＬＯＹ（登録商標）及びＰＨＹＮＯＸ（登録商標））が挙げられる。例えば、金属材料は、ステンレス鋼グレード３１６（ＳＳ ３１６Ｌ）（Ｆｅ、＜０．３％のＣ、１６〜１８．５％のＣｒ、１０〜１４％のＮｉ、２〜３％のＭｏ、＜２％のＭｎ、＜１％のＳｉ、＜０．４５％のＰ、及び＜０．０３％のＳから構成される）であり得る。
いくつかの実施形態において、材料はセラミックである。例示的なセラミック材料としては、酸化チタン、酸化ハフニウム、酸化イリジウム、酸化クロム、酸化アルミニウム、及び酸化ジルコニウムなどの、遷移元素の酸化物、炭化物、又は窒化物が挙げられる。シリカなどのケイ素系材料も使用され得る。
いくつかの実施形態において、材料はポリマーである。ポリマーは、直鎖、分岐、若しくは架橋ポリマー、又は選択された分子量範囲、重合度、粘度若しくはメルトフローレートのポリマーであり得る。分岐ポリマーは、以下のタイプ：星型ポリマー、櫛型ポリマー、ブラシ型ポリマー、デンドロン化ポリマー、ラダー、及びデンドリマーの１つ以上を含み得る。ポリマーは、熱応答性ポリマー、例えば、ゲル（例えば、熱若しくは特定の温度への曝露により固体若しくは液体になる）又は光架橋性ポリマーであり得る。例示的なポリマーとしては、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリアセチレン、ポリ（塩化ビニル）（ＰＶＣ）、ポリオレフィンコポリマー、ポリ（ウレタン）、ポリアクリレート及びポリメタクリレート、ポリアクリルアミド及びポリメタクリルアミド、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリエステル、ポリシロキサン、ポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）、ポリエーテル、ポリ（オルトエステル）、ポリ（カーボネート）、ポリ（ヒドロキシアルカノエート）、ポリフルオロカーボン、ＰＥＥＫ（登録商標）、Ｔｅｆｌｏｎ（登録商標）（ポリテトラフルオロエチレン、ＰＴＦＥ）、ＰＥＥＫ、シリコーン、エポキシ樹脂、Ｋｅｖｌａｒ（登録商標）、Ｄａｃｒｏｎ（登録商標）（エチレングリコール及びテレフタル酸から得られる縮合ポリマー）、ポリエチレングリコール、ナイロン、ポリアルケン、フェノール樹脂、天然及び合成エラストマー、接着剤及びシーラント、ポリオレフィン、ポリスルホン、ポリアクリロニトリル、多糖類及び天然ラテックスなどのバイオポリマー、コラーゲン、セルロースポリマー（例えば、アルキルセルロースなど）、ポリエチレングリコール及び２−ヒドロキシエチルメタクリレート（ＨＥＭＡ）、多糖類、ポリ（グリコール酸）、ポリ（Ｌ−乳酸）（ＰＬＬＡ）、ポリ（乳酸グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリジオキサノン（ＰＤＡ）、又はラセミポリ（乳酸）、ポリカーボネート、（例えば、ポリアミド（例えば、ナイロン））、フッ素樹脂、炭素繊維、アガロース、アルギン酸塩、キトサン、並びにこれらのブレンド又はコポリマーが挙げられる。
いくつかの実施形態において、材料はポリエチレンである。例示的なポリエチレンとしては：超低密度ポリエチレン（ＵＬＤＰＥ）（例えば、０．８９０〜０．９０５ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するポリマーと。コモノマーを含む）；超低密度ポリエチレン（ＶＬＤＰＥ）（例えば、０．９０５〜０．９１５ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するポリマーと。コモノマーを含む）；直鎖低密度ポリエチレン（ＬＬＤＰＥ）（例えば、０．９１５〜０．９３５ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するポリマーと。コモノマーを含む）；低密度ポリエチレン（ＬＤＰＥ）（例えば、約０．９１５〜０．９３５ｇ／ｍ３の範囲の密度を有するポリマーと）；中密度ポリエチレン（ＭＤＰＥ）（例えば、０．９２６〜０．９４０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するポリマーと。コモノマーを含有していてもいなくてもよい）；高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）（例えば、０．９４０〜０．９７０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するポリマーと。コモノマーを含有していてもいなくてもよい）が挙げられる。
いくつかの実施形態において、材料はポリプロピレンである。例示的なポリプロピレンとしては：本明細書において参照によりその全体が援用される、例えばＭｃＫｅｅｎ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｅｖｉｃｅｓ，３−Ｐｌａｓｔｉｃｓ Ｕｓｅｄ ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｅｖｉｃｅｓ，（２０１４）：２１−５３に記載されている、ホモポリマー、ランダムコポリマー（ホモ相コポリマー）及びインパクトコポリマー（ヘテロ相コポリマー）が挙げられる。
いくつかの実施形態において、材料はポリスチレンである。例示的なポリスチレンとしては、汎用性又は結晶ポリスチレン（ＰＳ又はＧＰＰＳ）、ハイインパクトポリスチレン（ＨＩＰＳ）、及び、シンジオタクチックポリスチレン（ＳＰＳ）ポリスチレンが挙げられる。
いくつかの実施形態において、材料は熱可塑性エラストマー（ＴＰＥ）である。例示的なＴＰＥとしては：（ｉ）ＴＰＡ−ポリアミドＴＰＥ、交互するハード及びソフトセグメントのブロックコポリマーを含んでなり、ハードブロック中にアミド化学結合、並びに、ソフトブロック中にエーテル及び／又はエステル結合を有するもの；（ｉｉ）ＴＰＣ−コポリエステルＴＰＥ、交互するハードセグメント及びソフトセグメントのブロックコポリマーからなり、主鎖中の化学結合はエステル及び／又はエーテルであるもの；（ｉｉｉ）ＴＰＯ−オレフィン系ＴＰＥ、ポリオレフィン及び従来のゴムのブレンドからなり、ブレンド中のゴム相は架橋をほとんど又はまったく有さないもの；（ｉｖ）ＴＰＳ−スチレン系ＴＰＥ、スチレン及び特定のジエンの少なくともトリブロックコポリマーからなり、ここで、２つの末端ブロック（ハードブロック）はポリスチレンであり、及び、内部ブロック（ソフトブロック）はポリジエン又は水素化ポリジエンであるもの；（ｖ）ＴＰＵ−ウレタンＴＰＥ、交互するハード及びソフトセグメントのブロックコポリマーからなり、ハードブロック中にウレタン化学結合、及び、ソフトブロック中にエーテル、エステル又は炭酸結合又はこれらの混合物を有するもの；（ｖｉ）ＴＰＶ−熱可塑性ゴム加硫物、熱可塑性材料及び従来のゴムのブレンドからなり、ここで、ゴムは、ブレンド及び混合ステップ中の動的加硫プロセスにより架橋されているもの；並びに、（ｖｉｉ）ＴＰＡ、ＴＰＣ、ＴＰＯ、ＴＰＳ、ＴＰＵ及びＴＰＶに分類されるもの以外のいずれかの組成物又は構造を含むＴＰＺ−未分類ＴＰＥが挙げられる。
いくつかの実施形態において、材料はポリマーであり、ポリマーはアルギン酸塩である。アルギン酸塩は、β−Ｄ−マンヌロン酸（Ｍ）及びα−Ｌ−グルロン酸（Ｇ）から構成される多糖である。いくつかの実施形態において、アルギン酸塩は、高グルロン酸（Ｇ）アルギン酸塩であり、約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％超、又はそれ以上のグルロン酸（Ｇ）を含む。いくつかの実施形態において、アルギン酸塩は、高マンヌロン酸（Ｍ）アルギン酸塩であり、約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％超、又はそれ以上のマンヌロン酸（Ｍ）を含む。いくつかの実施形態において、Ｍ：Ｇの比率は約１である。いくつかの実施形態において、Ｍ：Ｇの比率は１未満である。いくつかの実施形態において、Ｍ：Ｇの比率は１超である。
ポリマーは、移植可能な要素の封入構成要素（例えば、表面）に共有結合的に又は非共有結合的に付随していてもよい。いくつかの実施形態において、ポリマーは、移植可能な要素の封入構成要素（例えば、移植可能な要素の内表面又は外表面）に共有結合的に付随している。いくつかの実施形態において、ポリマーは、移植可能な要素の封入構成要素（例えば、移植可能な要素の内表面又は外表面）に非共有結合的に付随している。ポリマーは、限定されないが、封入構成要素又は移植可能な要素自体の表面への疎水性ポリマーの噴霧、湿潤、含浸、浸漬、例えば浸漬コーティング（例えば、術中浸漬コーティング）、塗布、又は他の形での適用を含む、当該技術分野における様々な技術によって適用され得る。
本明細書に記載の活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）は、材料又は多数の構成要素若しくは材料を含む封入構成要素又は移植可能なデバイス中に完全又は部分的にカプセル化されるか又は含まれ得る。例示的な構成要素又は材料は、純粋に構造的、治療的、又はその両方であることが可能である。封入構成要素又は移植可能な要素は、生体分子構成要素、例えば炭水化物、例えば多糖類、例えば、海洋性多糖類、例えば、アルギン酸塩、寒天、アガロース、カラゲナン、セルロース及びアミロース、キチン及びキトサン；例えばジアクリレートにより架橋された架橋多糖類；又は例えば、Ｌａｕｒｉｅｎｚｏ（２０１０），Ｍａｒ．Ｄｒｕｇｓ．８．９：２４３５−６５に記載されている多糖類若しくは誘導体／修飾物を含んでいることが可能である。
実施形態において、移植可能な要素は、可撓性ポリマー、例えば、アルギン酸塩（例えば、化学修飾アルギン酸塩）、ＰＬＡ、ＰＬＧ、ＰＥＧ、ＣＭＣ、又はこれらの混合物を含む封入構成要素を含む（本明細書において、「ポリマーカプセル化移植可能デバイス」と称される）。
実施形態において、移植可能な要素は、例えば複数の活性細胞、例えば活性細胞のクラスター、又は例えば１つ若しくは複数の活性細胞を含むビーズ若しくはマトリックスといったマイクロキャリアといった活性細胞又はその周囲にインサイツで形成される、又は形成可能である封入構成要素を含む（本明細書において、「インサイツカプセル化移植可能要素」と称される）。
実施形態において、移植可能な要素は、例えば複数の活性細胞、例えば活性細胞のクラスター、又は例えば活性細胞を含むビーズ若しくはマトリックスといったマイクロキャリアといった封入される活性細胞との組み合わせ前に予め形成される封入構成要素を含む（本明細書において、デバイス系移植可能要素と称される）。
移植可能な要素は、例えば抗体、タンパク質、酵素、又は増殖因子といったタンパク質又はポリペプチドを含んでいることが可能である。移植可能な要素は、グルコースオキシダーゼ（例えば、グルコースセンサ用）、センサ、ホスファターゼ、オキシゲナーゼ、ヒドロゲナーゼ、レダクターゼなどの、タンパク質又はポリペプチドの活性又は不活性画分を含んでいることが可能である。
移植可能な要素は、本明細書に記載の材料などの任意の材料を含んでいることが可能である。いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、１つの材料又は多くのタイプの材料から構成される。いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、ポリマー（例えば、ヒドロゲル、プラスチック）構成要素を含む。例示的なポリマーとしては、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリエステル（例えば、ＰＬＡ、ＰＬＧ、又はＰＧＡ、ポリヒドロキシアルカノエート（ＰＨＡ）、又は他の生体吸収性プラスチック）、ポリカーボネート、ポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、ポリアクリレート（例えば、アクリル又はＰＭＭＡ）、ヒドロゲル（例えば、アクリルポリマー又はアクリル及びシリコーンポリマーのブレンド）、ポリスルホン、ポリエーテルエーテルケトン、熱可塑性エラストマー（ＴＰＥ又はＴＰＵ）、熱硬化性エラストマー（例えば、シリコーン（例えば、シリコーンエラストマー））、ポリ−ｐ−キシリレン（Ｐａｒｙｌｅｎｅ）、フルオロポリマー（例えば、ＰＴＦＥ）、並びにポリ（アクリル酸）及び／又はポリ（アクリルアミド）などのポリアクリレート、又はこれらの混合物が挙げられる。
移植可能な要素は、非有機又は金属構成要素又は材料、例えば鋼（例えばステンレス鋼）、チタン、他の金属又は合金を含んでいることが可能である。移植可能な要素は、非金属構成要素又は材料、例えばセラミック又はヒドロキシアパタイト要素を含んでいることが可能である。
移植可能な要素は、導電性材料（例えば、金、白金、パラジウム、チタン、銅、アルミニウム、銀、金属、これらのいずれかの組み合わせ等）から形成される構成要素又は材料を含んでいることが可能である。
移植可能な要素は、２種以上の構成要素、例えば２種以上の本明細書に開示の構成要素、例えば２種以上の金属、プラスチック、セラミック、複合体又はハイブリッド材料を含んでいることが可能である。
金属含有移植可能な要素において、金属の量（例えば、重量％、実際の重量）は：少なくとも５％、例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％又はそれ以上（例えばｗ／ｗ）；２０％未満、例えば、２０％、１５％、１０％、５％、１％、０．５％、０．１％未満又はそれ以下であることが可能である。
プラスチック含有移植可能な要素において、プラスチックの量（例えば、％重量基準、実際の重量）は：少なくとも５％、例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％又はそれ以上、ｗ／ｗ；又は２０％未満、例えば、２０％、１５％、１０％、５％、１％、０．５％、０．１％未満又はそれ以下であることが可能である。
セラミック含有移植可能な要素において、セラミックの量（例えば、％重量基準、実際の重量）は：少なくとも５％、例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％又はそれ以上、ｗ／ｗ；又は２０％未満、例えば、２０％未満、１５％、１０％、５％、１％、０．５％、０．１％未満又はそれ以下であることが可能である。
本明細書に包含される移植可能な要素としては、内腔、例えば１つ、２つ以上の開口を有する内腔を伴って構成された、例えば管状デバイスといった移植可能な要素が挙げられる。典型的なステントが、内腔を伴い、２つの開口を有して構成されたデバイスの一例である。他の例としては、シャントが挙げられる。
本明細書に包含される移植可能な要素としては、例えば、身体の形状に合致するよう構成される可撓性の移植可能な要素が挙げられる。
本明細書に包含される移植可能な要素としては、例えば接着剤又は締結具であって、例えばトルク系又は摩擦系締結具であり、例えばスクリュー又はピンといった、移植可能な要素の位置を安定化させる構成要素が挙げられる。
本明細書に包含される移植可能な要素は、物質、例えば外因性の物質（例えば治療薬若しくは毒素）、又は内因性の体内産生物（例えばインスリン）を監視するよう構成され得る。いくつかの実施形態において、移植可能な要素は診断用である。
本明細書に包含される移植可能な要素は、物質、例えば外因性の物質、例えば治療薬を放出するように構成され得る。いくつかの実施形態において、治療薬は、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩である。いくつかの実施形態において、治療薬は生体材料である。いくつかの実施形態において、治療薬は、細胞、細胞産生物、組織、組織産生物、タンパク質、ホルモン、酵素、抗体、抗体画分、抗原、エピトープ、薬物、ワクチン、又はそのいずれかの誘導体である。
本明細書における移植可能な要素は、例えば人工関節（例えば膝、股関節、又は他の人工関節）といった、身体のシグナル又は動きに応答して立体構造が変化するよう構成され得る。
例示的な移植可能な要素としては、ステント、シャント、ドレッシング、眼用デバイス、ポート、センサ、整形外科固定具、インプラント（例えば、歯科インプラント、眼内インプラント、シリコーンインプラント、角膜インプラント、皮膚インプラント、胃内インプラント、顔面インプラント、股関節インプラント、骨インプラント、人工内耳、陰茎インプラント、失禁の制御用インプラント）、皮膚被覆デバイス、透析媒体、薬物送達デバイス、人工又は操作された臓器（例えば、脾臓、腎臓、肝臓、又は心臓）、ドレナージデバイス（例えば膀胱ドレナージデバイス）、細胞選択系、接着剤（例えば、セメント、クランプ、クリップ）、避妊具、子宮内デバイス、除細動器、線量計、電極、ポンプ（例えば点滴ポンプ）、フィルタ、塞栓形成デバイス、締結具、充填材、固定剤、グラフト、補聴器、心臓（ｃａｒｄｉｏ）若しくは心臓（ｈｅａｒｔ）−関連デバイス（例えば、ペースメーカー、心臓弁）、バッテリー又は電源、止血薬、失禁デバイス、椎体間固定デバイス、口腔内デバイス、レンズ、メッシュ、針、神経系刺激装置、パッチ、腹膜アクセス用デバイス、プレート、プラグ、圧力監視デバイス、リング、トランスポンダ、及びバルブが挙げられる。また、麻酔学、心血管系、臨床化学、耳鼻咽喉学、歯学、胃腸病学、泌尿器科学、血液学、免疫学、微生物学、神経内科学、産科学／婦人科学、眼科、整形外科学、病状、物理的製剤、放射線学、一般的又は形成手術、獣医学、精神医学、手術、及び／又は臨床中毒学の１つ以上において用いられるデバイスが含まれる。
いくつかの実施形態において、移植可能な要素としては、カプセル化された又は取り込まれた細胞又は組織が挙げられる。細胞又は組織は、ポリマー中にカプセル化され、又は取り込まれることが可能である。いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、ポリマー封入構成要素（例えば、アルギン酸塩）中に配置された活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）、例えば、活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）を含む。
いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、例えば神経系（例えば、末梢神経系（ＰＮＳ）又は中枢神経系（ＣＮＳ））、脈管系、骨格系、呼吸器系、内分泌系、リンパ系、生殖器系、又は胃腸管といった身体の特定の系を標的にするか又はそのような身体の特定の系に向けて設計される。いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、ＣＮＳに標的化される。いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、例えば、血液、眼、脳、皮膚、肺、胃、口、耳、脚、足、手、肝臓、心臓、腎臓、骨、膵臓、脾臓、大腸、小腸、脊髄、筋肉、卵巣、子宮、膣、又はペニスといった身体の特定の部分を標的にするか又はそのような身体の特定の部分に向けて設計される。
本明細書に包含される移植可能な要素としては、ＦＤＡクラス１、２、又は３デバイス、例えば、無分類であるか、又は人道的に用いられるデバイス（ＨＵＤ）として分類されていない、若しくは分類されているデバイスが挙げられる。
［移植可能な要素の特徴］
移植可能な要素（又は移植可能な要素全体）において用いられる構成要素又は材料は、以下の１つ以上に対して最適化されていることが可能である：生体的合成、例えば免疫拒絶又は線維症を最小限とするもの；耐熱性；弾性；引張強度；耐薬品性（例えば、油、グリース、消毒剤、漂白剤、加工助剤、又は、デバイスの生産、使用、クリーング、殺菌及び消毒において用いられる他の薬品）に対する耐性；電気特性；表面及び体積導電性又は抵抗性、絶縁耐力；トラッキング指数；機械特性；保管寿命、長期耐久性滅菌能（例えば、例えばデバイスの意図される使用に係る特性を維持しつつも、水蒸気、乾熱、エチレンオキシド（ＥｔＯ）、電子ビーム及び／又はガンマ線などの滅菌プロセスに耐える能力）、例えばオートクレーブ／水蒸気条件に対する耐熱性、水蒸気滅菌に対する加水分解安定性、ＥｔＯに対する耐薬品性、高エネルギー放射線（例えば、電子ビーム、ＵＶ及びγ）に対する耐性；又は、結晶構造。
移植可能な要素は、インビボ（例えば、インビボで構造化形状を形成する注射物質（例えば体温で））又はエキソビボでアセンブル可能である。
移植可能な要素はナノ次元の寸法を有していることが可能であり、例えば本明細書に記載のポリマー、例えばＰＬＡ製のナノ粒子といったナノ粒子を例えば含んでいることが可能である。ナノ粒子は、例えばマクロファージ及びクッパー細胞による取り込み（例えば、オプソニン作用と呼ばれるプロセス）を防止するよう；又は、ナノ粒子の循環半減期を変更するよう変性されている化学変性ナノ粒子であることが可能である。ナノ粒子は、鉄ナノ粒子（注射液）（例えば、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍａｇｎｅｔｉｃｓ製の鉄ナノ粒子）を含んでいることが可能である。例示的なナノ粒子は、本明細書において参照によりその全体が援用される、Ｖｅｉｓｅｈ ｅｔ ａｌ（２０１０）Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ ６２：２８４−３０４に記載されている。
移植可能な要素は、患者の網、患者の皮下脂肪、患者の筋肉内へのインプラント若しくは移植又は配置のために構成されていることが可能である。移植可能な要素は：皮膚上又は中；粘液性の表面、体腔、腹膜腔（例えば、網嚢）；ＣＮＳ、例えば、脳又は脊髄；臓器、例えば心臓、肝臓、腎臓、脾臓、肺、リンパ系、脈管構造、口腔、鼻腔、歯、ガム、胃腸管；骨；股関節；脂肪組織；筋肉組織；循環血液；眼（例えば眼内）；乳房、膣；子宮、関節、例えば、膝関節若しくは股関節、又は、脊椎へのインプラント若しくは移植又は配置のために構成されていることが可能である。いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、腹膜腔（例えば小腹膜嚢）へのインプラント若しくは移植又は配置のために構成されている。
移植可能な要素は、例えば作用電極及び基準電極を有する電気化学センサといった電気化学センサを含んでいることが可能である。例えば、電気化学センサは、分析物と反応して、眼装用デバイスが露出される体液中の分析物の濃度に関連するセンサ計測値を生成する、作用電極及び基準電極を備える。移植可能な要素は、例えば透明高分子材料中に少なくとも部分的に埋め込まれている凹面及び凸面の基材を有する例えば透明高分子材料製の窓を含んでいることが可能である。移植可能な要素はまた、アンテナ；並びに、電気化学センサ及びアンテナと電気的に接続されたコントローラの１つ以上を含む電子モジュールを備えていることが可能であり、ここで、コントローラは、電気化学センサを制御して、例えば装着できる移植可能な要素といった移植可能な要素が露出される体液中の分析物の濃度に関連するセンサ計測値を入手し、アンテナを用いてセンサ計測値を表示するよう構成されている。
いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、１ｍｍ超、好ましくは、１．５ｍｍ又はそれ以上である平均直径又はサイズを有する。いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、直径又はサイズが８ｍｍ程度であり得る。例えば、本明細書に記載の移植可能な要素は、１ｍｍ〜８ｍｍ、１ｍｍ〜６ｍｍ、１ｍｍ〜５ｍｍ、１ｍｍ〜４ｍｍ、１ｍｍ〜３ｍｍ、１ｍｍ〜２ｍｍ、１ｍｍ〜１．５ｍｍ、１．５ｍｍ〜８ｍｍ、１．５ｍｍ〜６ｍｍ、１．５ｍｍ〜５ｍｍ、１．５ｍｍ〜４ｍｍ、１．５ｍｍ〜３ｍｍ、１．５ｍｍ〜２ｍｍ、２ｍｍ〜８ｍｍ、２ｍｍ〜７ｍｍ、２ｍｍ〜６ｍｍ、２ｍｍ〜５ｍｍ、２ｍｍ〜４ｍｍ、２ｍｍ〜３ｍｍ、２．５ｍｍ〜８ｍｍ、２．５ｍｍ〜７ｍｍ、２．５ｍｍ〜６ｍｍ、２．５ｍｍ〜５ｍｍ、２．５ｍｍ〜４ｍｍ、２．５ｍｍ〜３ｍｍ、３ｍｍ〜８ｍｍ、３ｍｍ〜７ｍｍ、３ｍｍ〜６ｍｍ、３ｍｍ〜５ｍｍ、３ｍｍ〜４ｍｍ、３．５ｍｍ〜８ｍｍ、３．５ｍｍ〜７ｍｍ、３．５ｍｍ〜６ｍｍ、３．５ｍｍ〜５ｍｍ、３．５ｍｍ〜４ｍｍ、４ｍｍ〜８ｍｍ、４ｍｍ〜７ｍｍ、４ｍｍ〜６ｍｍ、４ｍｍ〜５ｍｍ、４．５ｍｍ〜８ｍｍ、４．５ｍｍ〜７ｍｍ、４．５ｍｍ〜６ｍｍ、４．５ｍｍ〜５ｍｍ、５ｍｍ〜８ｍｍ、５ｍｍ〜７ｍｍ、５ｍｍ〜６ｍｍ、５．５ｍｍ〜８ｍｍ、５．５ｍｍ〜７ｍｍ、５．５ｍｍ〜６ｍｍ、６ｍｍ〜８ｍｍ、６ｍｍ〜７ｍｍ、６．５ｍｍ〜８ｍｍ、６．５ｍｍ〜７ｍｍ、７ｍｍ〜８ｍｍ、又は７．５ｍｍ〜８ｍｍのサイズ範囲内である。いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、１ｍｍ〜８ｍｍの平均直径又はサイズを有する。いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、１ｍｍ〜４ｍｍの平均直径又はサイズを有する。いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、１ｍｍ〜２ｍｍの平均直径又はサイズを有する。
いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、例えば、材料の自由な流動を可能にするために、少なくとも１つの孔又は開口を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な要素の平均孔径は、約０．１μｍ〜約１０μｍである。例えば、平均孔径は、０．１μｍ〜１０μｍ、０．１μｍ〜５μｍ、０．１μｍ〜２μｍ、０．１５μｍ〜１０μｍ、０．１５μｍ〜５μｍ、０．１５μｍ〜２μｍ、０．２μｍ〜１０μｍ、０．２μｍ〜５μｍ、０．２５μｍ〜１０μｍ、０．２５μｍ〜５μｍ、０．５μｍ〜１０μｍ、０．７５μｍ〜１０μｍ、１μｍ〜１０μｍ、１μｍ〜５μｍ、１μｍ〜２μｍ、２μｍ〜１０μｍ、２μｍ〜５μｍ、又は５μｍ〜１０μｍである。いくつかの実施形態において、移植可能な要素の平均孔径は、約０．１μｍ〜１０μｍである。いくつかの実施形態において、移植可能な要素の平均孔径は、約０．１μｍ〜５μｍである。いくつかの実施形態において、移植可能な要素の平均孔径は、約０．１μｍ〜１μｍである。
いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、特定のサイズを超える材料が孔又は開口を通過するのを防ぐことが可能である。いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、５０ｋＤ、７５ｋＤ、１００ｋＤ、１２５ｋＤ、１５０ｋＤ、１７５ｋＤ、２００ｋＤ、２５０ｋＤ、３００ｋＤ、４００ｋＤ、５００ｋＤ、７５０ｋＤ、１，０００ｋＤ超の材料が通過するのを防ぐことが可能である。
移植可能な要素（例えば、本明細書に記載の移植可能な要素）は、患者への移植又は投与のための調製物又は組成物として提供され得る。いくつかの実施形態において、調製物又は組成物中の移植可能な要素の少なくとも２０％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％が、例えば平均孔径といった本明細書に記載の特徴を有する。
いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、数分間から数年間の範囲の様々な期間にわたって使用され得る。例えば、移植可能な要素は、約１時間から約１０年間にわたって使用され得る。いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、約１時間、２時間、４時間、８時間、１６時間、１日、４８時間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間、２週間、１ヶ月間、２ヶ月間、３ヶ月間、４ヶ月間、５ヶ月間、６ヶ月間、８ヶ月間、１０ヶ月間、１年間、１８ヶ月間、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、８年間、９年間、１０年間より長く、又はそれ以上にわたって使用される。移植可能な要素は、移植の期間のために構成され、例えば、予期される期間のすべて又は一部について線維症による線維形成不活性化に耐性であるよう構成され得る。
いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、例えば、患者の損傷を生じずに、又は周囲組織の崩壊をあまり生じずに、患者から容易に取り外し可能である。実施形態において、移植可能な要素は、例えば、低侵襲手術による挿入、摘出、又は切除によって、周囲組織からの移植可能な要素の最小限の分離を伴って又は手術による分離を伴わずに取り外し可能である。
移植可能な要素は、限定的に露出されるよう構成されていることが可能である（例えば、２日間未満、例えば、２日間、１日間、２４時間、２０時間、１６時間、１２時間、１０時間、８時間、６時間、５時間、４時間、３時間、２時間、１時間未満又はそれ以下）。移植可能な要素は、持続的に露出されるよう構成されていることが可能である（例えば、少なくとも２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、１月間、２月間、３月間、４月間、５月間、６月間、７月間、８月間、９月間、１０月間、１１月間、１２月間、１３月間、１４月間、１５月間、１６月間、１７月間、１８月間、１９月間、２０月間、２１月間、２２月間、２３月間、２４月間、１年間、１．５年間、２年間、２．５年間、３年間、３．５年間、４年間又はそれ以上）移植可能な要素は、永続的に露出されるよう構成されていることが可能である（例えば、少なくとも６月間、７月間、８月間、９月間、１０月間、１１月間、１２月間、１３月間、１４月間、１５月間、１６月間、１７月間、１８月間、１９月間、２０月間、２１月間、２２月間、２３月間、２４月間、１年間、１．５年間、２年間、２．５年間、３年間、３．５年間、４年間又はそれ以上）。
いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、国際公開第２０１２／１１２９８２号パンフレット、国際公開第２０１２／１６７２２３号パンフレット、国際公開第２０１４／１５３１２６号パンフレット、国際公開第２０１６／０１９３９１号パンフレット、米国特許出願公開第２０１２−０２１３７０８号明細書、米国特許出願公開第２０１６−００３０３５９号明細書、及び米国特許出願公開第２０１６−００３０３６０号明細書のいずれかに開示されている移植可能な要素でない。
実施形態において、移植可能な要素は、本明細書に記載の活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）を含む。実施形態において、移植可能な要素は、本明細書に記載の物質、例えば、治療薬を提供する、活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）、並びに別の細胞、例えば、組み換え細胞又は幹細胞を含む。
実施形態において、活性細胞は、ヒトＲＰＥ細胞（又はこれに由来する細胞、例えば、ＡＲＰＥ−１９細胞）であり、ポリペプチドはヒトポリペプチドである。実施形態において、活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）は、疾病、障害、又は状態（例えば、本明細書に記載される）を軽減する物質を提供する。
［移植可能な要素の化学修飾］
本開示は、活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素であって、化学修飾される移植可能な要素を特徴とする。化学修飾は、患者に投与されるとき、移植可能な要素に改善された特性、例えば、非修飾の移植可能な要素と比較して、患者における免疫応答の調節を与え得る。
いくつかの実施形態において、組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素の表面が、化合物で化学修飾される。いくつかの実施形態において、表面は、移植可能な要素の外表面又は内表面を含む。いくつかの実施形態において、組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素の表面（例えば、外表面）は、化合物で化学修飾される。いくつかの実施形態において、表面（例えば、外表面）は、化合物に共有結合される。いくつかの実施形態において、化合物は、少なくとも１つのヘテロアリール部分を含む。
いくつかの実施形態において、化合物は、式（Ｉ）：
Figure 2020534837
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、
Ａは、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（ＲＣ）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６−アルキレン）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６−アルケニレン）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｎ（ＲＤ）−、−ＮＣＮ−、−Ｃ（＝Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ））Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）ｘ−、−ＯＳ（Ｏ）ｘ−、−Ｎ（ＲＣ）Ｓ（Ｏ）ｘ−、−Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ）−、−Ｐ（ＲＦ）ｙ−、−Ｓｉ（ＯＲＡ）２−、−Ｓｉ（ＲＧ）（ＯＲＡ）−、−Ｂ（ＯＲＡ）−、又は金属であり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールの各々は、結合基（例えば、本明細書に定義される結合基）に結合され、１個以上のＲ１で任意選択により置換されており；
Ｌ１及びＬ３の各々は独立して、結合、アルキル、又はヘテロアルキルであり、ここで、アルキル及びヘテロアルキルの各々は、１個以上のＲ２で任意選択により置換されており；
Ｌ２は結合であり；
Ｍは、不在であるか、各々が１個以上のＲ３で任意選択により置換されている、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；
Ｐは、不在であるか、各々が１個以上のＲ４で任意選択により置換されている、シクロアルキル、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールであり；
Ｚは、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、−ＯＲＡ、−Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）ＲＡ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ５で任意選択により置換されており；
ＲＡ、ＲＢ、ＲＣ、ＲＤ、ＲＥ、ＲＦ、及びＲＧの各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、アジド、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ６で任意選択により置換されており；
又は、ＲＣ及びＲＤは、これらが結合している窒素原子と一緒になって、１個以上のＲ６で任意選択により置換されている環（例えば５〜７員環）を形成し；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、及びＲ６の各々は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、シアノ、アジド、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、−ＯＣ（Ｏ）ＲＢ１、−Ｎ（ＲＣ１）（ＲＤ１）、−Ｎ（ＲＣ１）Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ１）、ＳＲＥ１、Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ１、−ＯＳ（Ｏ）ｘＲＥ１、−Ｎ（ＲＣ１）Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ１、−Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ１）（ＲＤ１）、−Ｐ（ＲＦ１）ｙ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ７で任意選択により置換されており；
ＲＡ１、ＲＢ１、ＲＣ１、ＲＤ１、ＲＥ１、及びＲＦ１の各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ７で任意選択により置換されており；
各Ｒ７は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、シアノ、オキソ、ヒドロキシル、シクロアルキル、又はヘテロシクリルであり；
ｘは１又は２であり；
ｙは２、３、又は４である。
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ−ａ）：
Figure 2020534837
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、
Ａは、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（ＲＣ）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６−アルキレン）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６−アルケニレン）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｎ（ＲＤ）−、−ＮＣＮ−、−Ｃ（＝Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ））Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）ｘ−、−ＯＳ（Ｏ）ｘ−、−Ｎ（ＲＣ）Ｓ（Ｏ）ｘ−、−Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ）−、−Ｐ（ＲＦ）ｙ−、−Ｓｉ（ＯＲＡ）２−、−Ｓｉ（ＲＧ）（ＯＲＡ）−、−Ｂ（ＯＲＡ）−、又は金属であり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールの各々は、結合基（例えば、本明細書に定義される結合基）に結合され、１個以上のＲ１で任意選択により置換されており；
Ｌ１及びＬ３の各々は独立して、結合、アルキル、又はヘテロアルキルであり、ここで、アルキル及びヘテロアルキルの各々は、１個以上のＲ２で任意選択により置換されており；
Ｌ２は結合であり；
Ｍは、不在であるか、各々が１個以上のＲ３で任意選択により置換されている、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；
Ｐは、１個以上のＲ４で任意選択により置換されているヘテロアリールであり；
Ｚは、各々が１個以上のＲ５で任意選択により置換されている、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；
ＲＡ、ＲＢ、ＲＣ、ＲＤ、ＲＥ、ＲＦ、及びＲＧの各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、アジド、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ６で任意選択により置換されており；
又は、ＲＣ及びＲＤは、これらが結合している窒素原子と一緒になって、１個以上のＲ６で任意選択により置換されている環（例えば５〜７員環）を形成し；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、及びＲ６の各々は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、シアノ、アジド、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、−ＯＣ（Ｏ）ＲＢ１、−Ｎ（ＲＣ１）（ＲＤ１）、−Ｎ（ＲＣ１）Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ１）、ＳＲＥ１、Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ１、−ＯＳ（Ｏ）ｘＲＥ１、−Ｎ（ＲＣ１）Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ１、−Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ１）（ＲＤ１）、−Ｐ（ＲＦ１）ｙ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ７で任意選択により置換されており；
ＲＡ１、ＲＢ１、ＲＣ１、ＲＤ１、ＲＥ１、及びＲＦ１の各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ７で任意選択により置換されており；
各Ｒ７は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、シアノ、オキソ、ヒドロキシル、シクロアルキル、又はヘテロシクリルであり；
ｘは１又は２であり；
ｙは２、３、又は４である。
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）及び（Ｉ−ａ）について、Ａは、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６−アルキレン）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６−アルケニレン）−、又は−Ｎ（ＲＣ）−である。いくつかの実施形態において、Ａは、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、又は−Ｎ（ＲＣ）−である。いくつかの実施形態において、Ａは、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ−、又は−Ｎ（ＲＣ）−である。いくつかの実施形態において、Ａは、アルキル、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）、又は−Ｎ（ＲＣ）−である。いくつかの実施形態において、Ａは、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６−アルキレン）−、又は−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６−アルケニレン）−である。いくつかの実施形態において、Ａは−Ｎ（ＲＣ）−である。いくつかの実施形態において、Ａは−Ｎ（ＲＣ）−であり、ＲＣ及びＲＤは独立して、水素又はアルキルである。いくつかの実施形態において、Ａは−ＮＨ−である。いくつかの実施形態において、Ａは−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６−アルキレン）−であり、ここで、アルキレンはＲ１で置換されている。いくつかの実施形態において、Ａは−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６−アルキレン）−であり、Ｒ１はアルキル（例えば、メチル）である。いくつかの実施形態において、Ａは−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（メチレン）−であり、Ｒ１はアルキル（例えば、メチル）である。いくつかの実施形態において、Ａは−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）−である。いくつかの実施形態において、Ａは−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）−である。
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）及び（Ｉ−ａ）について、Ｌ１は結合、アルキル、又はヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ１は結合又はアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ１は結合である。いくつかの実施形態において、Ｌ１はアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ１はＣ１〜Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ１は、−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２、又は−ＣＨ２ＣＨ２−である。いくつかの実施形態において、Ｌ１は、−ＣＨ２−又は−ＣＨ２ＣＨ２−である。
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）及び（Ｉ−ａ）について、Ｌ３は結合、アルキル、又はヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ３は結合である。いくつかの実施形態において、Ｌ３はアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ３はＣ１〜Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ３は−ＣＨ２−である。いくつかの実施形態において、Ｌ３はヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ３は、１個以上のＲ２（例えば、オキソ）で任意選択により置換されているＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ３は、−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ２−、−ＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）２−、−ＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）３−、ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−、又は−ＣＨ２Ｏ−である。いくつかの実施形態において、Ｌ３は−ＣＨ２Ｏ−である。
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）及び（Ｉ−ａ）について、Ｍは、不在、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｍはヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｍは不在である。いくつかの実施形態において、Ｍはアルキル（例えば、Ｃ１〜Ｃ６アルキル）である。いくつかの実施形態において、Ｍは−ＣＨ２−である。いくつかの実施形態において、Ｍはヘテロアルキル（例えば、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル）である。いくつかの実施形態において、Ｍは（−ＯＣＨ２ＣＨ２−）ｚであり、ここで、ｚは、１〜１０から選択される整数である。いくつかの実施形態において、ｚは、１〜５から選択される整数である。いくつかの実施形態において、Ｍは、−ＯＣＨ２ＣＨ２−、（−ＯＣＨ２ＣＨ２−）２、（−ＯＣＨ２ＣＨ２−）３、（−ＯＣＨ２ＣＨ２−）４、又は（−ＯＣＨ２ＣＨ２−）５である。いくつかの実施形態において、Ｍは、−ＯＣＨ２ＣＨ２−、（−ＯＣＨ２ＣＨ２−）２、（−ＯＣＨ２ＣＨ２−）３、又は（−ＯＣＨ２ＣＨ２−）４である。いくつかの実施形態において、Ｍは（−ＯＣＨ２ＣＨ２−）３である。いくつかの実施形態において、Ｍはアリールである。いくつかの実施形態において、Ｍはフェニルである。いくつかの実施形態において、Ｍは非置換フェニルである。いくつかの実施形態において、Ｍは
Figure 2020534837
である。いくつかの実施形態において、Ｍは、Ｒ７（例えば、１個のＲ７）で置換されているフェニルである。いくつかの実施形態において、Ｍは
Figure 2020534837
である。いくつかの実施形態において、Ｒ７はＣＦ３である。
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）及び（Ｉ−ａ）について、Ｐは、不在、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｐは不在である。いくつかの実施形態において、式（Ｉ）及び（Ｉ−ａ）について、Ｐは、三環式、二環式、又は単環式ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｐは単環式ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｐは窒素含有ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｐは、単環式、窒素含有ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｐは５員ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｐは５員窒素含有ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｐは、テトラゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、又はトリアゾリル、ピロリル、オキサゾリル、又はチアゾリルである。いくつかの実施形態において、Ｐは、テトラゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、又はトリアゾリル、又はピロリルである。いくつかの実施形態において、Ｐはイミダゾリルである。いくつかの実施形態において、Ｐは
Figure 2020534837
である。いくつかの実施形態において、Ｐはトリアゾリルである。いくつかの実施形態において、Ｐは１，２，３−トリアゾリルである。いくつかの実施形態において、Ｐは
Figure 2020534837
である。
いくつかの実施形態において、Ｐはヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｐは、５員ヘテロシクリル又は６員ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｐはイミダゾリジノニル（ｉｍｉｄａｚｏｌｉｄｉｎｏｎｙｌ）である。いくつかの実施形態において、Ｐは
Figure 2020534837
である。いくつかの実施形態において、Ｐはチオモルホリニル−１，１−ジオキシジルである。いくつかの実施形態において、Ｐは
Figure 2020534837
である。
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）及び（Ｉ−ａ）について、Ｚは、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｚはヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、単環式又は二環式ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、酸素含有ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、４員ヘテロシクリル、５員ヘテロシクリル、又は６員ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは６員ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、６員酸素含有ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚはテトラヒドロピラニルである。いくつかの実施形態において、Ｚは
Figure 2020534837
である。いくつかの実施形態において、Ｚは、４員酸素含有ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは
Figure 2020534837
である。
いくつかの実施形態において、Ｚは、二環式酸素含有ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは無水フタル酸（ｐｈｔｈａｌｉｃ ａｎｈｙｄｒｉｄｙｌ）である。いくつかの実施形態において、Ｚは、硫黄含有ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、６員硫黄含有ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、窒素原子及び硫黄原子を含有する６員ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚはチオモルホリニル−１，１−ジオキシジルである。いくつかの実施形態において、Ｚは
Figure 2020534837
である。いくつかの実施形態において、Ｚは窒素含有ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは６員窒素含有ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは
Figure 2020534837
である。
いくつかの実施形態において、Ｚは二環式ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、１個以上のＲ５で任意選択により置換されている二環式窒素含有ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは２−オキサ−７−アザスピロ［３．５］ノナニルである。いくつかの実施形態において、Ｚは
Figure 2020534837
である。いくつかの実施形態において、Ｚは１−オキサ−３，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−２−オンである。いくつかの実施形態において、Ｚは
Figure 2020534837
である。
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）及び（Ｉ−ａ）について、Ｚはアリールである。いくつかの実施形態において、Ｚは単環式アリールである。いくつかの実施形態において、Ｚはフェニルである。いくつかの実施形態において、Ｚは単置換フェニル（例えば、１個のＲ５により）である。いくつかの実施形態において、Ｚは単置換フェニルであり、ここで、１個のＲ５は窒素含有基である。いくつかの実施形態において、Ｚは単置換フェニルであり、ここで、１個のＲ５はＮＨ２である。いくつかの実施形態において、Ｚは単置換フェニルであり、ここで、１個のＲ５は酸素含有基である。いくつかの実施形態において、Ｚは単置換フェニルであり、ここで、１個のＲ５は酸素含有ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｚは単置換フェニルであり、ここで、１個のＲ５はＯＣＨ３である。いくつかの実施形態において、Ｚは単置換フェニルであり、ここで、１個のＲ５はオルト位にある。いくつかの実施形態において、Ｚは単置換フェニルであり、ここで、１個のＲ５はメタ位にある。いくつかの実施形態において、Ｚは単置換フェニルであり、ここで、１個のＲ５はパラ位にある。
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）及び（Ｉ−ａ）について、Ｚはアルキルである。いくつかの実施形態において、ＺはＣ１〜Ｃ１２アルキルである。いくつかの実施形態において、ＺはＣ１〜Ｃ１０アルキルである。いくつかの実施形態において、ＺはＣ１〜Ｃ８アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、１〜５個のＲ５で置換されたＣ１〜Ｃ８アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、１個のＲ５で置換されたＣ１〜Ｃ８アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、１個のＲ５で置換されたＣ１〜Ｃ８アルキルであり、ここで、Ｒ５は、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、−ＯＣ（Ｏ）ＲＢ１、又は−Ｎ（ＲＣ１）（ＲＤ１）である。いくつかの実施形態において、Ｚは、１個のＲ５で置換されたＣ１〜Ｃ８アルキルであり、ここで、Ｒ５は、−ＯＲＡ１又は−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１である。いくつかの実施形態において、Ｚは、１個のＲ５で置換されたＣ１〜Ｃ８アルキルであり、ここで、Ｒ５は、−ＯＲＡ１又は−Ｃ（Ｏ）ＯＨである。いくつかの実施形態において、Ｚは−ＣＨ３である。
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）及び（Ｉ−ａ）について、Ｚはヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、ＺはＣ１〜Ｃ１２ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、ＺはＣ１〜Ｃ１０ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、ＺはＣ１〜Ｃ８ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、ＺはＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、１個以上のＲ５で任意選択により置換された窒素含有ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、１〜５個のＲ５で置換された窒素及び硫黄含有ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、Ｎ−メチル−２−（メチルスルホニル）エタン−１−アミニルである。
いくつかの実施形態において、Ｚは、−ＯＲＡ又は−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡである。いくつかの実施形態において、Ｚは、−ＯＲＡ（例えば、−ＯＨ又は−ＯＣＨ３）である。いくつかの実施形態において、Ｚは、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ）である。
いくつかの実施形態において、Ｚは水素である。
いくつかの実施形態において、Ｌ２は結合であり、Ｐ及びＬ３は独立して、不在である。いくつかの実施形態において、Ｌ２は結合であり、Ｐはヘテロアリールであり、Ｌ３は結合であり、Ｚは水素である。いくつかの実施形態において、Ｐはヘテロアリールであり、Ｌ３はヘテロアルキルであり、Ｚはアルキルである。
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩ）：
Figure 2020534837
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、環Ｍ１は、各々が１〜５個のＲ３で任意選択により置換されている、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；環Ｚ１は、１〜５個のＲ５で任意選択により置換されている、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールであり；Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、アミノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、又はＲ２ａ及びＲ２ｂ又はＲ２ｃ及びＲ２ｄの各々は一緒になってオキソ基を形成し；Ｘは、不在、Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１１）、Ｏ、又はＳであり；ＲＣは、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールの各々は、１〜６個のＲ６で任意選択により置換されており；Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６の各々は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、シアノ、アジド、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、−ＯＣ（Ｏ）ＲＢ１、−Ｎ（ＲＣ１）（ＲＤ１）、−Ｎ（ＲＣ１）Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ１）、ＳＲＥ１、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；Ｒ１０及びＲ１１の各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、−ＯＣ（Ｏ）ＲＢ１、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ１）、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；ＲＡ１、ＲＢ１、ＲＣ１、ＲＤ１、及びＲＥ１の各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールの各々は、１〜６個のＲ７で任意選択により置換されており；各Ｒ７は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、シアノ、オキソ、ヒドロキシル、シクロアルキル、又はヘテロシクリルであり；各ｍ及びｎは独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；
Figure 2020534837
は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。
いくつかの実施形態において、式（ＩＩ）の化合物は、式（ＩＩ−ａ）：
Figure 2020534837
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、環Ｍ２は、１個以上のＲ３で任意選択により置換されている、アリール又はヘテロアリールであり；環Ｚ２は、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり、又はＲ２ａ及びＲ２ｂ又はＲ２ｃ及びＲ２ｄの各々は一緒になってオキソ基を形成し；Ｘは、不在、Ｏ、又はＳであり；各Ｒ３及びＲ５は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；又は２個のＲ５は一緒になって、環Ｚ２に縮合した５〜６員環を形成し；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｍ及びｎは各々独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；ｐは、０、１、２、３、４、５、又は６であり；
Figure 2020534837
は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。
いくつかの実施形態において、式（ＩＩ−ａ）の化合物は、式（ＩＩ−ｂ）：
Figure 2020534837
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、環Ｚ２は、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールであり；各Ｒ３及びＲ５は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｐ及びｑは各々独立して、０、１、２、３、４、５、又は６であり；
Figure 2020534837
は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。
いくつかの実施形態において、式（ＩＩ−ａ）の化合物は、式（ＩＩ−ｃ）：
Figure 2020534837
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、環Ｚ２は、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールであり；Ｒ２ｃ及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり、又はＲ２ｃ及びＲ２ｄの各々は一緒になってオキソ基を形成し；各Ｒ３及びＲ５は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｍは、１、２、３、４、５、又は６であり；ｐ及びｑは各々独立して、０、１、２、３、４、５、又は６であり；
Figure 2020534837
は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩ−ｄ）：
Figure 2020534837
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、環Ｚ２は、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールであり；Ｘは、不在、Ｏ、又はＳであり；Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり、又はＲ２ａ及びＲ２ｂ又はＲ２ｃ及びＲ２ｄの各々は一緒になってオキソ基を形成し；各Ｒ５は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｍ及びｎは各々独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；ｐは、０、１、２、３、４、５、又は６であり；
Figure 2020534837
は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩＩ）：
Figure 2020534837
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、Ｍは、各々が１個以上のＲ３で任意選択により置換されている、アルキル又はアリールであり；Ｌ３は、１個以上のＲ２で任意選択により置換されている、アルキル又はヘテロアルキルであり；Ｚは、各々が１個以上のＲ５で任意選択により置換されている、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；Ｒ２ａ及びＲ２ｂの各々は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり、又はＲ２ａ及びＲ２ｂは一緒になってオキソ基を形成し；Ｒ２、Ｒ３、及びＲ５の各々は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｎは独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；
Figure 2020534837
は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。
いくつかの実施形態において、式（ＩＩＩ）の化合物は、式（ＩＩＩ−ａ）：
Figure 2020534837
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、Ｌ３は、各々が１個以上のＲ２で任意選択により置換されている、アルキル又はヘテロアルキルであり；Ｚは、各々が１個以上のＲ５で任意選択により置換されている、アルキル又はヘテロアルキルであり；Ｒ２ａ及びＲ２ｂの各々は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり、又はＲ２ａ及びＲ２ｂは一緒になってオキソ基を形成し；Ｒ２、Ｒ３、及びＲ５の各々は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｎは独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；
Figure 2020534837
は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＶ）：
Figure 2020534837
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、Ｚ１は、各々が１〜５個のＲ５で任意選択により置換されている、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、アミノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；又はＲ２ａ及びＲ２ｂ又はＲ２ｃ及びＲ２ｄは一緒になってオキソ基を形成し；ＲＣは、水素、アルキル、アルケニルであり、ここで、アルキル及びアルケニルの各々は、１〜６個のＲ６で任意選択により置換されており；Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６の各々は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｍ及びｎは各々独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；ｑは、０〜２５の整数であり；
Figure 2020534837
は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。
いくつかの実施形態において、式（ＩＶ）の化合物は、式（ＩＶ−ａ）：
Figure 2020534837
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、環Ｚ２は、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、ヘテロアルキル、ハロであり；又はＲ２ａ及びＲ２ｂ又はＲ２ｃ及びＲ２ｄは一緒になってオキソ基を形成し；Ｒ３及びＲ５の各々は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｍ及びｎは各々独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；ｏ及びｐは各々独立して、０、１、２、３、４、又は５であり；ｑは、０〜２５の整数であり；
Figure 2020534837
は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。
いくつかの実施形態において、式（ＩＶ−ａ）の化合物は、式（ＩＶ−ｂ）：
Figure 2020534837
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、Ｘは、Ｃ（Ｒ’）（Ｒ”）、Ｎ（Ｒ’）、又はＳ（Ｏ）ｘであり；Ｒ’及びＲ”の各々は独立して、水素、アルキル、ハロゲン、又はシクロアルキルであり；Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、ヘテロアルキル、又はハロであり；又はＲ２ａ及びＲ２ｂ又はＲ２ｃ及びＲ２ｄは一緒になってオキソ基を形成し；Ｒ３及びＲ５の各々は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｍ及びｎは各々独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；ｐは、０、１、２、３、４、又は５であり；ｑは、０〜２５の整数であり；ｘは、０、１、又は２であり；
Figure 2020534837
は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。
いくつかの実施形態において、化合物は、式（Ｉ）の化合物である。いくつかの実施形態において、Ｌ２は結合であり、Ｐ及びＬ３は独立して、不在である。いくつかの実施形態において、Ｌ２は結合であり、Ｐはヘテロアリールであり、Ｌ３は結合であり、Ｚは水素である。いくつかの実施形態において、Ｐはヘテロアリールであり、Ｌ３はヘテロアルキルであり、Ｚはアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ２は結合であり、Ｐ及びＬ３は独立して、不在である。いくつかの実施形態において、Ｌ２は結合であり、Ｐはヘテロアリールであり、Ｌ３は結合であり、Ｚは水素である。いくつかの実施形態において、Ｐはヘテロアリールであり、Ｌ３はヘテロアルキルであり、Ｚはアルキルである。
いくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＩ−ｂ）の化合物である。式（ＩＩ−ｂ）のいくつかの実施形態において、Ｒ２ｃ及びＲ２ｄの各々は独立して、水素であり、ｍは１であり、ｑは０であり、ｐは０であり、Ｚはヘテロシクリル（例えば、酸素含有ヘテロシクリル）である。いくつかの実施形態において、式（ＩＩ−ｂ）の化合物は、化合物１００である。
いくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＩ−ｃ）の化合物である。式（ＩＩ−ｃ）のいくつかの実施形態において、Ｒ２ｃ及びＲ２ｄの各々は独立して、水素であり、ｍは１であり、ｐは１であり、ｑは０であり、Ｒ５は−ＣＨ３であり、Ｚはヘテロシクリル（例えば、窒素含有ヘテロシクリル）である。いくつかの実施形態において、式（ＩＩ−ｃ）の化合物は、化合物１１３である。
いくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＩ−ｄ）の化合物である。式（ＩＩ−ｄ）のいくつかの実施形態において、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素であり、ｍは１であり、ｎは３であり、ＸはＯであり、ｐは０であり、Ｚはヘテロシクリル（例えば、酸素含有ヘテロシクリル）である。いくつかの実施形態において、式（ＩＩ−ｄ）の化合物は、化合物１１０又は化合物１１４である。
いくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＩＩ−ａ）の化合物である。式（ＩＩＩ−ａ）のいくつかの実施形態において、Ｒ２ａ及びＲ２ｂの各々は独立して、水素であり、ｎは１であり、ｑは０であり、Ｌ３は−ＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）２−であり、Ｚは−ＯＣＨ３である。いくつかの実施形態において、式（ＩＩＩ−ａ）の化合物は、化合物１１２である。
いくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＶ−ａ）の化合物である。式（ＩＶ−ａ）のいくつかの実施形態において、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素であり、ｍ及びｎの各々は独立して、１であり、ｐは０であり、ｑは３であり、ｏは０又は１であり、Ｒ５は、存在する場合、−ＮＨ２であり、Ｚは、アリール又はヘテロシクリル（例えば、窒素含有ヘテロシクリル）である。いくつかの実施形態において、式（ＩＶ−ａ）の化合物は、化合物１０１又は化合物１０２である。
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、国際公開第２０１２／１１２９８２号パンフレット、国際公開第２０１２／１６７２２３号パンフレット、国際公開第２０１４／１５３１２６号パンフレット、国際公開第２０１６／０１９３９１号パンフレット、国際公開第２０１７／０７５６３０号パンフレット、米国特許出願公開第２０１２−０２１３７０８号明細書、米国特許出願公開第２０１６−００３０３５９号明細書又は米国特許出願公開第２０１６−００３０３６０号明細書に開示されている化合物でない。
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、化合物表１に示される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩を含む。
Figure 2020534837
Figure 2020534837
Figure 2020534837
Figure 2020534837
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）（例えば、式（Ｉ−ａ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ｂ）、（ＩＩ−ｃ）、（ＩＩ−ｄ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）、（ＩＶ）、（ＩＶ−ａ）、又は（ＩＶ−ｂ））の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩は、
Figure 2020534837
又はその塩から選択される。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物は、
Figure 2020534837
又はいずれかの化合物の薬学的に許容可能な塩から選択される。
［化学修飾された移植可能な要素の特徴］
移植可能な要素は、式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容可能な塩、又は式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容可能な塩を含む材料でコーティングされ得る。実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、移植可能な要素の例えば内表面又は外表面といった表面に配置されている。いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、移植可能な要素に付随している封入構成要素の例えば内表面又は外表面といった表面に配置されている。実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、表面全体に均等に分布させられる。実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、表面全体に不均等に分布させられる。
いくつかの実施形態において、移植可能な要素（例えば、又はその封入構成要素）は、式（Ｉ）の化合物又は式（Ｉ）若しくはその薬学的に許容可能な塩を含む材料でコーティングされている（例えば、部分的又は全体が被覆されている）。いくつかの実施形態において、移植可能な要素（例えば、又はその封入構成要素）は、式（Ｉ）の化合物の単一層でコーティングされている。いくつかの実施形態において、デバイスは、式（Ｉ）の化合物の多層（例えば、少なくとも２層、３層、４層、５層、１０層、２０層、５０層又はそれ以上）でコーティングされている。
実施形態において、移植可能な要素の表面の第１の部分は、生物学的機能を調節（例えば下方制御又は上方制御）する式（Ｉ）の化合物を含み、及び、移植可能な要素の第２の部分は化合物を含まないか、又は、化合物の密度が実質的に低い。
実施形態において、移植可能な要素の表面の第１の部分は、免疫応答を調節（例えば下方制御）する式（Ｉ）の化合物を含み、及び、表面の第２の部分は、例えば免疫応答を上方制御する第２の式（Ｉ）の化合物を含み、移植可能な要素の第２の部分は化合物を含まないか、又は、化合物の密度が実質的に低い。
いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、式（Ｉ）の化合物、又は、式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容可能な塩を含む材料で対称的にコーティングされているか、又は、化学的に誘導体化されている。いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、式（Ｉ）の化合物、又は、式（Ｉ）の化合物）若しくはその薬学的に許容可能な塩を含む材料で非対称的にコーティングされているか、又は、化学的に誘導体化されている。例えば、例示的な移植可能な要素は、式（Ｉ）の化合物、又は、式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容可能な塩を含む材料で、部分的にコーティングされていてもよい（例えば、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％又は９９．９％コーティング）。
式（Ｉ）の化合物、又は、式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容可能な塩を含む材料でコーティングされているか、又は、化学的に誘導体化されている例示的な移植可能な要素は、自己組織化（例えば、ブロックコポリマー、吸着（例えば、競合的吸着）、相分離、微細化又はマスキングを介して）を介するなどの技術分野において公知であるいずれかの方法を用いて調製され得る。
いくつかの実施形態において、移植可能な要素は、２つ以上の異なる物理化学的特性（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上の異なる物理化学的特性）を示す表面を含む。
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物、式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容可能な塩を含む材料による例示的な移植可能な要素の表面のコーティング又は化学的誘導体化は、所与の面積当たりの結合している化合物の平均数、例えば密度として記載されている。例えば、例示的な移植可能な要素のコーティング又は化学的誘導体化の密度は、例えば前記移植可能な要素の表面又は内部において、０．０１、０．１、０．５、１、５、１０、１５、２０、５０、７５、１００、２００、４００、５００、７５０、１，０００、２，５００、又は５，０００化合物／平方μｍ又は平方ｍｍであり得る。
式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む移植可能な要素は、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含まない移植可能な要素と比して低減された免疫応答（例えば免疫応答のマーカー）を有し得る。免疫応答のマーカーは、以下の１つ以上である：カテプシンレベル、又は、例えばＥＬＩＳＡにより計測される、例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１３、ＩＬ−６、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４、ＣＣＬ２若しくはＣＣＬ４といった免疫応答のマーカーのレベル。いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む移植可能な要素では、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含まない移植可能な要素と比して、免疫応答（例えば免疫応答のマーカー）が、約１％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％又は約１００％低減されている。いくつかの実施形態において、低減された免疫応答（例えば免疫応答のマーカー）は、約３０分間、約１時間、約６時間、約１２時間、約１日間、約２日間、約３日間、約４日間、約１週間、約２週間、約１月間、約２月間、約３月間、約６月間又はそれ以上の期間後に計測される。いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物を含む移植可能な要素は、式（Ｉ）の化合物又はカプセル化された式（Ｉ）の化合物でコーティングされている。
式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む移植可能な要素は、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含まない移植可能な要素と比して高い免疫応答（例えば免疫応答のマーカー）を有し得る。免疫応答のマーカーは、以下の１つ以上である：カテプシン活性、又は、例えばＥＬＩＳＡにより計測される、例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１３、ＩＬ−６、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４、ＣＣＬ２若しくはＣＣＬ４といった免疫応答のマーカーのレベル。いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含むデバイスでは、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含まない移植可能な要素と比して、免疫応答（例えば免疫応答のマーカー）が、約１％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％若しくは約１００％、又は、約１０００％増加される。いくつかの実施形態において、増加された免疫応答（例えば免疫応答のマーカー）は、約３０分間、約１時間、約６時間、約１２時間、約１日間、約２日間、約３日間、約４日間、約１週間、約２週間、約１月間、約２月間、約３月間、約６月間又はそれ以上の期間後に計測される。いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物を含む移植可能な要素は、式（Ｉ）の化合物又はカプセル化された式（Ｉ）の化合物でコーティングされている。
移植可能な要素は滑らかな表面を有し得、又は、隆起、くぼみ、穴、スリット若しくは孔、又は、いずれかのこれらの組み合わせを備えていてもよい。前記隆起、くぼみ、穴、スリット又は孔は、任意のサイズ、例えば１０μｍ〜約１ｎｍ、約５μｍ〜約１ｎｍ、約２．５μｍ〜約１ｎｍ、１μｍ〜約１ｎｍ、５００ｎｍ〜約１ｎｍ又は約１００ｎｍ〜約１ｎｍであり得る。滑らかな表面又は隆起、くぼみ、穴、スリット若しくは孔、又は、いずれかのこれらの組み合わせは、式（Ｉ）の化合物、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む材料でコーティングされているか、又は、化学的に誘導体化されていてもよい。
移植可能な要素は、球状、回転楕円体、楕円体、ディスク、円柱体、円環体、立方体、スタジウム形状（ｓｔａｄｉｕｍｏｉｄ）、円錐体、角錐体、三角、矩形、正方形若しくはロッド状などの任意の好適な形状であり得、又は、湾曲した、若しくは、平坦な部分を含み得る。いずれかの成形された、湾曲した、又は、平坦な移植可能な要素は、式（Ｉ）の化合物、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む材料でコーティングされているか、又は、化学的に誘導体化されていてもよい。
［処置方法］
例えば、本明細書に記載の材料又はデバイスによってカプセル化されるＲＰＥ細胞の投与又は移植によって、患者における疾病、障害、又は状態を予防又は処置するための方法が本明細書に記載されている。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、疾病、障害、又は状態の少なくとも１つの症状を直接又は間接的に低減又は軽減する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、疾病、障害、又は状態の発症を予防するか又は遅らせる。
いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は、例えば神経系（例えば、末梢神経系（ＰＮＳ）又は中枢神経系（ＣＮＳ））、脈管系、骨格系、呼吸器系、内分泌系、リンパ系、生殖器系又は胃腸管といった身体の系に影響を及ぼす。いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は、例えば、血液、眼、脳、皮膚、肺、胃、口、耳、脚、足、手、肝臓、心臓、腎臓、骨、膵臓、脾臓、大腸、小腸、脊髄、筋肉、卵巣、子宮、膣又はペニスといった身体の一部に影響を及ぼす。
いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は、神経変性疾患、糖尿病、心臓病、自己免疫疾患、癌、肝疾患、ライソゾーム蓄積症、血液凝固障害又は凝固障害、整形外科状態、アミノ酸代謝障害である。
いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は神経変性疾患である。例示的な神経変性疾患としては、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病（ＰＤ）筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）及び脳性麻痺（ＣＰ）、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（ＤＲＰＬＡ）、神経核内封入体病（ＮＩＨＩＤ）、レビー小体型認知症、ダウン症候群、ハラーフォルデン・シュパッツ症候群、プリオン病、嗜銀顆粒性認知症、大脳皮質基底核変性症、パンチドランカー、びまん性神経原線維変化病、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー症候群、クロイツフェルト・ヤコブ病、ニーマン・ピック病３型、進行性核上性麻痺、亜急性硬化性全脳炎、脊髄小脳失調症、ピック病及び歯状核赤核・淡蒼球ルイ体萎縮症が挙げられる。
いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は、例えば、強皮症、多発性硬化症、狼瘡又は過敏症といった自己免疫疾患である。
いくつかの実施形態において、疾病は、例えば、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、肝硬変、ＮＡＳＨといった肝臓病である。
いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は癌である。例示的な癌としては、白血病、リンパ腫、メラノーマ、肺癌、脳癌（例えば、グリア芽細胞腫）、肉腫、膵癌、腎臓癌、肝臓癌、精巣癌、前立腺癌又は子宮癌が挙げられる。
いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は整形外科状態である。例示的な整形外科状態としては、骨粗鬆症、骨壊死、パジェット病又は骨折が挙げられる。
いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態はライソゾーム蓄積症である。例示的なライソゾーム蓄積症としては、ゴーシェ病（例えば、タイプＩ、タイプＩＩ、タイプＩＩＩ）、テイザックス病、ファブリー病、ファーバー病、ハーラー症候群（ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）としても知られる）、ハンター症候群、ライソゾーム酸性リパーゼ欠損症、ニーマン・ピック病、サラ病、サンフィリポ症候群（ムコ多糖症ＩＩＩＡ型（ＭＰＳ３Ａ）としても知られる）、多発性スルファターゼ欠損症、マロトー・ラミー症候群、異染性白質萎縮症、クラッベ病、シャイエ症候群、ハーラー・シャイエ症候群、スライ症候群、ヒアルロニダーゼ欠損症、ポンペ病、ダノン病、ガングリオシド蓄積症又はモルキオ症候群が挙げられる。
いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は、血液凝固障害又は凝固障害である。例示的な血液凝固障害又は凝固障害としては、血友病（例えば、血友病Ａ又は血友病Ｂ）、ヴォン・ヴィレブランド病、血小板減少症、尿毒症、ベルナール・スーリエ症候群、第ＸＩＩ因子欠乏症、ビタミンＫ欠乏症又は先天性無フィブリノゲン血症が挙げられる。
いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は、例えば、フェニルケトン尿症、チロシン血症（例えば、タイプ１又はタイプ２）、アルカプトン尿症、ホモシスチン尿症、高ホモシステイン血症、カエデ糖症といったアミノ酸代謝障害である。
いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は、例えば、高脂血症、高コレステロール血症、ガラクトース血症といった脂肪酸代謝疾患である。
いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は、例えば、レッシュ・ナイハン症候群といったプリン又はピリミジン代謝障害である。
本開示は、本明細書に記載の疾病、障害、又は状態に罹患しているか又は罹患している疑いのある患者を同定するための方法をさらに含み、このような同定の後、例えば、封入構成要素によって任意選択によりカプセル化され、及び本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物で任意選択により修飾された活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素、又はその組成物を患者に投与する。
［医薬組成物、キット、及び投与］
本開示は、活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）、並びにこれを含む医薬組成物を含む移植可能な要素、及びそのキットをさらに含む。
いくつかの実施形態において、医薬組成物は、活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）及び薬学的に許容可能な賦形剤を含む。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞、組み換えＲＰＥ細胞をカプセル化するヒドロゲルカプセル）及び薬学的に許容可能な賦形剤を含む。いくつかの実施形態において、活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）は、医薬組成物中において有効量で提供されている。いくつかの実施形態において、有効量は治療的有効量である。いくつかの実施形態において、有効量は予防的有効量である。
本明細書に記載の医薬組成物は、薬理学の技術分野において公知であるいずれかの方法によって調製可能である。一般に、このような調製方法は、活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞又はＲＰＥ細胞、すなわち、「有効成分」をカプセル化するヒドロゲルカプセル）と、キャリア、及び／又は１種以上の他の補助成分とを付随させるステップ、並びに次いで、必要である及び／又は所望される場合、生成物を所望の単一投与又は多投与量単位に成型及び／又はパッケージングするステップを含む。
薬学組成物は、単一の単位投与量及び／又は複数の単一単位投与量として、調製、パッケージ化、及び／又は、原体で販売されることが可能である。本明細書において用いられるところ、「単位投与量」は、所定の量の活性成分を含む薬学組成物の個別の量である。活性成分の量は一般に、患者に投与されることとなる活性成分の投与量、及び／又は、このような投与量の簡便な画分（例えばこのような投与量の半分若しくは三分の一など）と等しい。
本開示の薬学組成物中の活性成分、薬学的に許容可能な賦形剤、及び／又は、いずれかの追加の成分の相対量は、処置される患者のアイデンティティ、サイズ及び／又は状態に応じて、並びに、さらに、組成物が投与される経路に応じて様々であろう。一例として、組成物は、０．１％〜１００％（ｗ／ｗ）の活性成分を含み得る。
「薬学的に許容可能な賦形剤」という用語は、一緒に配合される化合物の薬理学的活性を破壊しない無毒性のキャリア、助剤、希釈剤、又はビヒクルを指す。本開示の医薬組成物の製造に有用な薬学的に許容可能な賦形剤は、医薬製剤の技術分野において周知であるもののいずれかであり、不活性希釈剤、分散剤及び／又は造粒剤、表面活性剤及び／又は乳化剤、崩壊剤、結合剤、防腐剤、緩衝剤、平滑剤、及び／又は油が挙げられる。本開示の医薬組成物の製造に有用な薬学的に許容可能な賦形剤としては、限定されないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、リン酸塩などの緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩又は電解質、例えば、プロタミン硫酸塩、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコール及び羊毛脂が挙げられる。
活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）、移植可能な要素、及びその組成物は、経口的、非経口的（皮下、筋肉内、及び皮内を含む）、局所的、直腸的、経鼻的、腫瘍内、髄腔内、口腔内、腟内に、又は移植されたレザバーを介して、投与され得る。いくつかの実施形態において、提供される化合物又は組成物は、皮下に又はインプラントによって投与可能である。
いくつかの実施形態において、活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）、移植可能な要素（例えば、ＲＰＥ細胞をカプセル化するヒドロゲルカプセル）、及びその組成物は、粘膜表面又は体腔などの、身体の特定の領域内又は領域上に投与又は移植され得る。投与又は移植の例示的な部位としては、腹膜腔（例えば、小腹膜嚢）、脂肪組織、心臓、眼、筋肉、脾臓、リンパ節、食道、鼻、副鼻腔、歯、歯茎、舌、口、のど、小腸、大腸、甲状腺、骨（例えば、股関節又は関節）、乳房、軟骨、膣、子宮、卵管、卵巣、陰茎、精巣、血管、肝臓、腎臓、中枢神経系（例えば、脳、脊髄、神経）、又は耳（例えば、蝸牛）が挙げられる。
いくつかの実施形態において、活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）、移植可能な要素、及びその組成物は、中枢神経系、例えば、脳、脊髄、神経以外の部位において投与又は移植される。いくつかの実施形態において、活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）、移植可能な要素、及びその組成物は、眼（例えば、網膜）以外の部位において投与又は移植される。
本開示の組成物の無菌注射液形態は、水性又は油性懸濁液であり得る。これらの懸濁液は、技術分野において公知である技術に従い、好適な分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤を用いて配合され得る。無菌注射調製物はまた、無毒性で許容可能な非経口希釈剤又は溶剤中の無菌注射溶液又は懸濁液（例えば１，３−ブタンジオール中の溶液として）であり得る。ビヒクル及び溶剤のうち、利用され得る許容可能なものは、水、リンゲル溶液及び等張性の塩化ナトリウム溶液である。加えて、無菌の不揮発性油が、溶剤又は懸濁媒として簡便に利用される。
眼科用途のためには、提供される薬学的に許容可能な組成物は、微粉化懸濁液として配合され得るか、又はワセリンなどの軟膏剤中に配合され得る。
有効成分の効果を持続性のものとするために、皮下又は筋肉内注射からの薬物の吸収を遅くすることが望ましいことがある。
いくつかの実施形態において、活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）は、マイクロキャリア（例えば、ビーズ、例えば、ポリスチレンビーズ）上に配置されている。
本明細書において提供される薬学組成物の説明は主にヒトへの投与に好適である薬学組成物に関するものであるが、このような組成物は一般に、すべての種類の動物に対する投与に好適であることは当業者によって理解されるであろう。組成物を種々の動物への投与に好適なものとするためのヒトへの投与に好適な薬学組成物の変更は十分に理解されており、通常の知識を有する獣医学薬理学者は、通常の実験によってこのような変更を設計及び／又は実施することが可能である。
活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）、移植可能な要素、及びその組成物は、投与の容易さ及び投与量の均一性のために、投与量単位形態（例えば、単一単位剤形）で配合され得る。しかしながら、本開示の組成物の合計投与量及び使用レジメンは、担当医師によって適切な医学的良識の範囲内で決定されることとなることが理解されるであろう。いずれかの特定の患者又は生体に係る特定の治療的に有効な投与量レベルは、処置される疾病及び障害の重症度；利用される特定の活性成分の活性；利用される特定の組成物；患者の年齢、体重、全体的な健康状態、性別及び規定食；利用される特定の活性成分の投与時間、投与経路及び排泄速度；処置期間；利用される特定の活性成分と組み合わされて、又は、同時に用いられる薬物；並びに、医学的技術分野において周知である同様の要因を含む多様な要因に応じることとなる。
有効量を達成するために必要とされる本明細書に記載される組成物の正確な量は、例えば患者の種、年齢及び全体的な状態、副作用又は疾患の重症度、特定の化合物のアイデンティティ、投与形態等に応じて、患者毎に様々となる。所望される投与量は、１日に３回、１日に２回、１日に１回、２日に１回、３日に１回、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、３ヶ月に１回、６ヶ月に１回、１年に１回又はそれ以下の頻度で送達可能である。一定の実施形態において、所望される投与量は、多投与（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４回又はそれ以上の投与）を用いて送達可能である。一定の実施形態において、組み換えＲＰＥ細胞をカプセル化するヒドロゲルカプセルの所望される投与量は、ヒドロゲルカプセルの前の投与のすべて又は実質的にすべての除去の後、送達される。
本明細書に記載の組成物が、１種以上の追加の薬学的薬剤と併用して投与され得ることが理解されるであろう。化合物又は組成物は、それらのバイオアベイラビリティを向上させ、それらの代謝を低下させ、及び／又は調節し、それらの排出を抑制し、及び／又は身体内におけるそれらの分布を調節する追加の薬学的薬剤と併用して投与され得る。用いられる療法が、同じ障害に対して所望の効果を達成し得、及び／又はそれが、異なる効果を達成し得ることも理解されるであろう。
組成物は、例えば併用療法として有用であり得る１種以上の追加の薬学的薬剤と同時に、その前に、又はその後に投与され得る。薬学的薬剤は、治療的に有効な薬剤を含む。薬学的薬剤は、予防的に有効な薬剤も含む。各追加の薬学的薬剤は、その薬学的薬剤のために決定された用量及び／又はタイムスケジュールで投与され得る。追加の薬学的薬剤はまた、互いに一緒に、及び／又は本明細書に記載の化合物若しくは組成物と一緒に、単回用量で投与されるか、又は異なる用量で別々に投与され得る。治療計画に用いるための特定の組み合わせは、本発明に係る化合物と、追加の薬学的薬剤との適合性及び／又は達成される所望の治療効果及び／又は予防効果を考慮に入れる。一般に、組み合わせて用いられる追加の薬学的薬剤は、それらが個別に用いられるレベルを超えないレベルで用いられることが見込まれる。いくつかの実施形態において、組み合わせて用いられるレベルは、個別に用いられるレベルより低い。
例示的な追加の薬学的薬剤としては、限定されないが、抗増殖剤、抗癌剤、抗糖尿病薬、抗炎症薬、免疫抑制剤、及び鎮痛剤が挙げられる。薬学的薬剤としては、薬物化合物（例えば、連邦規則集（Ｃｏｄｅ ｏｆ Ｆｅｄｅｒａｌ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ）（ＣＦＲ）中で示される、米国食品医薬品局（Ｕ．Ｓ．Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）によって承認される化合物）などの有機小分子、ペプチド、タンパク質、炭水化物、単糖、オリゴ糖、多糖、核タンパク質、ムコタンパク質、リポタンパク質、合成ポリペプチド若しくはタンパク質、タンパク質に結合される小分子、糖タンパク質、ステロイド、核酸、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ヌクレオチド、ヌクレオシド、オリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、脂質、ホルモン、ビタミン、及び細胞が挙げられる。
キット（例えば、医薬品包装）も本開示によって包含される。本発明に係るキットは、本明細書に記載の疾病、障害又は状態のいずれかを予防及び／又は処置するのに有用であり得る。提供されるキットは、本発明に係る医薬組成物又はデバイス及び容器（例えば、バイアル、アンプル、瓶、シリンジ、及び／又はディスペンサーパッケージ、又は他の好適な容器）を含み得る。いくつかの実施形態において、提供されるキットは、本発明に係る医薬組成物又はデバイスの希釈又は懸濁のための医薬品用賦形剤を含む第２の容器を任意選択によりさらに含み得る。いくつかの実施形態において、容器及び第２の容器中で提供される本発明に係る医薬組成物又はデバイスは、組み合わされて、１つの単位剤形が形成される。
［例示的な実施形態の列挙］
１．治療薬（例えば、核酸（例えば、ヌクレオチド、ＤＮＡ、若しくはＲＮＡ）、ポリペプチド、脂質、糖（例えば、単糖、二糖、オリゴ糖、若しくは多糖）、又は小分子）を産生又は放出する複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素であって、
ａ）例えば、患者に移植される場合又は本明細書に記載の参照方法、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応又は核酸のインサイツハイブリダイゼーション；脂質、糖及び小分子の質量分析；蛍光若しくは発光タグで修飾された薬剤のための顕微鏡法及び他の画像診断技術、及びポリペプチドのためのＥＬＩＳＡ若しくはウエスタンブロット法によって評価される場合、複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）又は移植可能な要素が、少なくとも５日間、少なくとも１０日間、少なくとも１ヶ月間、又は少なくとも３ヶ月間にわたって治療薬を産生又は放出し；
ｂ）例えば、インビトロで培養される場合、又は患者に移植される場合又は参照方法、例えば、上記のパートａ）に列挙される利用可能な参照方法によって評価される場合、複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）又は移植可能な要素が、１日当たり少なくとも１０ピコグラムの治療薬を産生又は放出し、例えば、少なくとも５日間にわたって１日当たり少なくとも１０ピコグラムの治療薬を産生し；
ｃ）例えば、上記のパートａ）に列挙される利用可能な参照方法によって評価される際、複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）又は移植可能な要素が、例えば移植可能な要素中にカプセル化されないか又は患者に埋め込み若しくは移植されない場合に対照細胞が産生する速度の少なくとも５０％（例えば、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）である、例えば、１日当たり少なくとも１０ピコグラムの治療薬の速度で、治療薬を産生又は放出し；
ｄ）例えば、上記のパートａ）に列挙される利用可能な参照方法によって評価される際、複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）又は移植可能な要素が、少なくとも５日間にわたって治療薬を産生又は放出し、１日当たり放出される量は、５０％（例えば、少なくとも約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、約５％、又はそれ以下）を超えて変動せず；
ｅ）患者への移植可能な要素の導入の際、例えば、上記のパートａ）に列挙される利用可能な参照方法によって評価される際、導入される要素から少なくとも約５ｃｍ、約１０ｃｍ、約２５ｃｍ、約５０ｃｍ、約７５ｃｍ、約１００ｃｍ又は約１５０ｃｍ離れた位置が有効濃度（例えば、治療的有効濃度）の治療薬（例えば、膵臓、肝臓、血液、又は眼の外側に見られる治療有効濃度）を受け取るように、十分な治療薬が、複数の組み換え活性細胞又は移植可能な要素によって産生又は放出され；
ｆ）例えば、上記のパートａ）に列挙される利用可能な参照方法によって評価される際、この要素が患者の腹膜腔に埋め込み又は移植される場合、例えば、治療薬の検出可能なレベル、例えば、１０ピコグラムが、組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）から少なくとも５ｃｍ、１０ｃｍ、２５ｃｍ、５０ｃｍ、７５ｃｍ、１００ｃｍ又は１５０ｃｍ離れた位置で見られるように、十分な治療薬が、複数の組み換え活性細胞又は移植可能な要素によって産生又は放出され；
ｇ）患者への導入の際、例えば、上記のパートａ）に列挙される利用可能な参照方法によって評価される際、産生又は放出される治療薬の約５０％（産生又は放出される治療薬の約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約９９％）が、患者の循環（例えば、末梢循環）に入るように、十分な治療薬が、複数の組み換え活性細胞又は移植可能な要素によって産生又は放出され；
ｈ）例えば、フルオレセイン標識抗体アッセイ、顕微鏡法（例えば、蛍光顕微鏡法（例えば、紡錘体形成の低速度撮影若しくは評価）、又はフローサイトメトリーによって評価される際、複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）が、食作用を起こすことが可能であり、参照非組み換え活性細胞（例えば、非組み換えＲＰＥ細胞）と比較して、例えば、約９９％、約９５％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６０％、又は約５０％のレベルの食作用を起こすことが可能であり；
ｉ）例えば、５−エチニル−２’デオキシウリジン（ＥｄＵ）アッセイ、５−ブロモ−２’−デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）アッセイ、カチオン性両親媒性トレーサー（ＣＡＴ）アッセイ、又は顕微鏡法（例えば、蛍光顕微鏡法（例えば、紡錘体形成の低速度撮影若しくは評価）、ＬＣ３及びｐ６２の免疫ブロット分析、蛍光顕微鏡法によるオートファゴソーム形成の検出、及びタンデムｍＲＦＰ−ＧＦＰ蛍光顕微鏡法によるオートファゴソーム成熟の監視によって評価される際、複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）が、自食作用を起こすことが可能であり、参照非組み換え活性細胞（例えば、非組み換えＲＰＥ細胞）と比較して、例えば、約９９％、約９５％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６０％、又は約５０％のレベルの自食作用を起こすことが可能であり；
ｊ）複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）が、例えば、組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）のクラスター、スフェロイド、又は集合体として、本明細書に記載の形状因子を有し；
ｋ）例えば、固定、顕微鏡法によって評価される際、複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）が、細胞当たり平均最小数の結合（例えば、密着結合）を有するか又はそれが可能であり；
ｌ）複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）が、非細胞キャリア（例えば、マイクロキャリア、例えば、ビーズ、例えば、ポリエステル、ポリスチレン、又はポリマービーズ）上に配置されており；
ｍ）例えば、顕微鏡法（例えば、５−エチニル−２’デオキシウリジン（ＥｄＵ）アッセイ）によって決定される際、複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）が、移植可能な要素へのカプセル化後に増殖するか又は増殖することが可能であり；
ｎ）例えば、顕微鏡法（例えば、５−エチニル−２’デオキシウリジン（ＥｄＵ）アッセイ）によって決定される際、複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）が、移植可能な要素へのカプセル化後に増殖しないか又は増殖することが可能でなく；又は
ｏ）患者への導入、投与、又は移植の際、有効濃度（例えば、治療有効濃度）の治療薬が、末梢血流中で見られる（例えば、治療有効濃度が、膵臓、肝臓、血液、又は眼の外側で見られる）ように、十分な治療薬が、複数の組み換え活性細胞又は移植可能な要素によって産生又は放出される、移植可能な要素。
２．複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素であって、複数の組み換え活性細胞中の各細胞が、ポリペプチド、例えば治療的ポリペプチドの産生を促進及び／又は調整する外因性の核酸を含み、ここで、例えば、患者に移植される場合又は参照方法、例えば、ＥＬＩＳＡ又はウエスタンブロット法によって評価される場合、複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）が、少なくとも５日間にわたってポリペプチドを産生又は放出する、移植可能な要素。
３．複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素であって、複数の組み換え活性細胞中の各細胞が、ポリペプチド、例えば治療的ポリペプチドの産生を促進及び／又は調整する外因性の核酸を含み、ここで、例えば、患者に移植される場合又は参照方法、例えば、ＥＬＩＳＡ又はウエスタンブロット法によって評価される場合、複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）が、１日当たり少なくとも１０ピコグラムのポリペプチドを産生又は放出し、例えば、少なくとも５日間にわたって１日当たり少なくとも１０ピコグラムのポリペプチドを産生する、移植可能な要素。
４．複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素であって、複数の組み換え活性細胞中の各細胞が、ポリペプチド、例えば治療的ポリペプチドの産生を促進及び／又は調整する外因性の核酸を含み、ここで、例えば、ＥＬＩＳＡ又はウエスタンブロット法によって評価される際、複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）が、移植可能な要素中にカプセル化されないか又は患者に埋め込み若しくは移植されない参照細胞の速度の少なくとも５０％（例えば、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）である、例えば、１日当たり少なくとも１０ピコグラムのポリペプチドの速度で、ポリペプチドを産生又は放出する、移植可能な要素。
５．複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素であって、複数の組み換え活性細胞中の各細胞が、ポリペプチド、例えば治療的ポリペプチドの産生を促進及び／又は調整する外因性の核酸を含み、ここで、例えばＥＬＩＳＡ又はウエスタンブロット法によって評価される際、複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）が、少なくとも５日間にわたってポリペプチドを産生又は放出し、１日当たり放出される量が、５０％（例えば、少なくとも約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、約５％、又はそれ以下）を超えて変動しない、移植可能な要素。
６．複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素であって、複数の組み換え活性細胞中の各細胞が、ポリペプチド、例えば治療的ポリペプチドの産生を促進及び／又は調整する外因性の核酸を含み、ここで、患者へのこの要素の導入の際、この要素から少なくとも約５ｃｍ、約１０ｃｍ、約２５ｃｍ、約５０ｃｍ、約７５ｃｍ、約１００ｃｍ又は約１５０ｃｍ離れた位置が、有効濃度（例えば、治療有効濃度）のポリペプチド（例えば、膵臓、肝臓、血液、又は眼の外側に見られる治療有効濃度）を受け取るように、十分なポリペプチドが、産生又は放出される、移植可能な要素。
７．複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素であって、複数の組み換え活性細胞中の各細胞が、ポリペプチド、例えば治療的ポリペプチドの産生を促進及び／又は調整する外因性の核酸を含み、ここで、この要素が患者の腹膜腔に埋め込み又は移植される場合、例えば、ポリペプチドの検出可能なレベル、例えば、１０ピコグラムが、この要素から少なくとも５ｃｍ、１０ｃｍ、２５ｃｍ、５０ｃｍ、７５ｃｍ、１００又は１５０ｃｍ離れた位置で見られるように、十分なポリペプチドが、産生又は放出される、移植可能な要素。
８．複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素であって、複数の組み換え活性細胞中の各細胞が、ポリペプチド、例えば治療的ポリペプチドの産生を促進及び／又は調整する外因性の核酸を含み、ここで、患者へのこの要素の導入の際、産生又は放出されるポリペプチドの約５０％（産生又は放出される治療的ポリペプチドの約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約９９％）が、患者の循環（例えば、末梢循環）に入るように、十分なポリペプチドが、産生又は放出される、移植可能な要素。
９．複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素であって、複数の組み換え活性細胞中の各細胞が、ポリペプチド、例えば治療的ポリペプチドの産生を促進及び／又は調整する外因性の核酸を含み、ここで、例えば、フルオレセイン標識抗体アッセイ、顕微鏡法（例えば、蛍光顕微鏡法（例えば、紡錘体形成の低速度撮影若しくは評価）、又はフローサイトメトリーによって評価される際、組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）が、食作用を起こすことが可能であり、例えば、参照非組み換え活性細胞（例えば、非組み換えＲＰＥ細胞）と比較して約９９％、約９５％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６０％、又は約５０％のレベルの食作用を起こすことが可能である、移植可能な要素。
１０．複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素であって、複数の組み換え活性細胞中の各細胞が、ポリペプチド、例えば治療的ポリペプチドの産生を促進及び／又は調整する外因性の核酸を含み、ここで、例えば、５−エチニル−２’デオキシウリジン（ＥｄＵ）アッセイ、５−ブロモ−２’−デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）アッセイ、カチオン性両親媒性トレーサー（ＣＡＴ）アッセイ、又は顕微鏡法（例えば、蛍光顕微鏡法（例えば、紡錘体形成の低速度撮影若しくは評価）、ＬＣ３及びｐ６２の免疫ブロット分析、蛍光顕微鏡法によるオートファゴソーム形成の検出、及びタンデムｍＲＦＰ−ＧＦＰ蛍光顕微鏡法によるオートファゴソーム成熟の監視によって評価される際、複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）が、自食作用を起こすことが可能であり、例えば、参照非組み換え活性細胞（例えば、非組み換えＲＰＥ細胞）と比較して約９９％、約９５％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６０％、又は約５０％のレベルの自食作用を起こすことが可能である、移植可能な要素。
１１．複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素であって、複数の組み換え活性細胞中の各細胞が、ポリペプチド、例えば治療的ポリペプチドの産生を促進及び／又は調整する外因性の核酸を含み、ここで、例えば、組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）のクラスター、スフェロイド、又は集合体として、本明細書に記載の形状因子を有する複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）が提供される、移植可能な要素。
１２．複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素であって、複数の組み換え活性細胞中の各細胞が、ポリペプチド、例えば治療的ポリペプチドの産生を促進及び／又は調整する外因性の核酸を含み、ここで、例えば、固定、顕微鏡法によって評価される際、複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）が、細胞当たり平均最小数の結合を有するか又はそれが可能である、移植可能な要素。
１３．複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素であって、複数の組み換え活性細胞中の各細胞が、ポリペプチド、例えば治療的ポリペプチドの産生を促進及び／又は調整する外因性の核酸を含み、ここで、複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）が、非細胞キャリア（例えば、マイクロキャリア、例えば、ビーズ、例えば、ポリエステル、ポリスチレン、又はポリマービーズ）上に配置されている、移植可能な要素。
１４．複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素であって、複数の組み換え活性細胞中の各細胞が、ポリペプチド、例えば治療的ポリペプチドの産生を促進及び／又は調整する外因性の核酸を含み、ここで、例えば、顕微鏡法によって決定される際、複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）が、移植可能な要素へのカプセル化後に増殖するか又は増殖することが可能である、移植可能な要素。
１５．複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素であって、複数の組み換え活性細胞中の各細胞が、ポリペプチド、例えば治療的ポリペプチドの産生を促進及び／又は調整する外因性の核酸を含み、ここで、例えば、顕微鏡法によって決定される際、複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）が、移植可能な要素へのカプセル化後に増殖しないか又は増殖することが可能でない、移植可能な要素。
１６．複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素であって、複数の組み換え活性細胞中の各細胞が、ポリペプチド、例えば治療的ポリペプチドの産生を促進及び／又は調整する外因性の核酸を含み、ここで、患者への導入、投与、又は移植の際、有効濃度（例えば、治療有効濃度）のポリペプチドが、末梢血流中で見られる（例えば、治療有効濃度が、膵臓、肝臓、血液、又は眼の外側で見られる）ように、十分なポリペプチドが、産生又は放出される、移植可能な要素。
１７．治療薬（例えば、核酸（例えば、ヌクレオチド、ＤＮＡ、若しくはＲＮＡ）、ポリペプチド、脂質、糖（例えば、単糖、二糖、オリゴ糖、若しくは多糖）、又は小分子）を産生又は放出する複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素。
１８．外因性の核酸が、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）分子又はＤＮＡ分子である、実施形態２〜１７のいずれか。
１９．ポリペプチド又は治療薬が、第Ｉ因子、第ＩＩ因子、第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩ因子及び第ＸＩＩＩ因子ポリペプチドからなる群から選択される、実施形態１〜１８のいずれか。
２０．ポリペプチド又は治療薬が、インスリンポリペプチド（例えば、インスリンＡ鎖、インスリンＢ鎖、又はプロインスリン）である、実施形態１〜１９のいずれかに記載の移植可能な要素。
２１．ポリペプチド又は治療薬が、インスリンポリペプチドでない（例えば、インスリンＡ鎖、インスリンＢ鎖、又はプロインスリンのいずれでもない）、実施形態１〜１８のいずれかに記載の移植可能な要素。
２２．複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素であって、複数の組み換え活性細胞中の各細胞が、第ＶＩＩＩ〜ＢＤＤ因子（ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤ）アミノ酸配列をコードする外因性の核酸を含む、移植可能な要素。
２３．ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤアミノ酸配列が、
ａ）配列番号１；
ｂ）配列番号３；
ｃ）配列番号４；
ｄ）配列番号５；
ｅ）配列番号６；
ｆ）配列番号７；
ｇ）７８７位にアルギニンの代わりにアラニン及び７９０位にアルギニンの代わりにアラニンを有する配列番号７；
ｈ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）又は（ｇ）中の配列の保存的に置換された変異体；及び
ｉ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）又は（ｈ）中の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上の配列同一性を有する配列
からなる群から選択される、実施形態２２に記載の移植可能な要素。
２４．外因性の核酸が、
ａ）配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７及び配列番号２７からなる群から選択されるか；又は
ｂ）ａ）に列挙される配列のいずれかと少なくとも９８％、９９％若しくはそれ以上の配列同一性を有するヌクレオチド配列である
コード配列を含む、実施形態２２に記載の移植可能な要素。
２５．外因性の核酸が、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７及び配列番号２７からなる群から選択されるコード配列を含む、実施形態２５に記載の移植可能な要素。
２６．外因性の核酸が、配列番号１６又は配列番号２７を含む、実施形態２２〜２５のいずれか１つに記載の移植可能な要素。
２７．複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素であって、複数の組み換え活性細胞中の各細胞が、第ＩＸ因子（ＦＩＸ）アミノ酸配列をコードする外因性の核酸を含む、移植可能な要素。
２８．ＦＩＸアミノ酸配列が、配列番号２若しくはその保存的に置換された変異体、又は配列番号２と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくはそれ以上の配列同一性を有する配列若しくは保存的に置換された変異体である、実施形態２４に記載の移植可能な要素。
２８ａ．ＦＩＸアミノ酸配列が、配列番号３６若しくはその保存的に置換された変異体、又は配列番号３６と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくはそれ以上の配列同一性を有する配列若しくはその保存的に置換された変異体である、実施形態２４に記載の移植可能な要素。
２９．外因性の核酸が、
ａ）配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２８からなる群から選択されるか；又は
ｂ）（ａ）中の配列のいずれかと少なくとも９８％、９９％若しくはそれ以上の配列同一性を有する
コード配列を含む、実施形態２７又は２８のいずれか１つに記載の移植可能な要素。
３０．外因性の核酸が、配列番号１９又は配列番号２８を含む、実施形態２７〜２９のいずれか１つに記載の移植可能な要素。
３１．組み換え活性細胞、例えば、ＲＰＥ細胞、又は活性細胞を含む移植可能な要素であって、活性細胞が、ポリペプチドのためのコード配列に動作可能に連結されるプロモータ配列を含む外因性の核酸を含み、ここで、プロモータ配列が、配列番号２３から本質的になるか、若しくは配列番号２３からなり、又は配列番号２３と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくはそれ以上の配列同一性を有する、組み換え活性細胞又は移植可能な要素。
３２．ポリペプチドが、
ａ）ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤアミノ酸配列、例えば、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７並びに７８７及び７９０位のそれぞれにアルギニンの代わりにアラニンを有する配列番号７からなる群から選択される配列；
ｂ）ＦＩＸアミノ酸配列、例えば、配列番号２又は配列番号２と少なくとも９５％、９６％、９７％ ９８％、９９％若しくはそれ以上の配列同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）インターロイキン２アミノ酸配列、例えば、配列番号２９又は配列番号２９と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくはそれ以上の配列同一性を有するアミノ酸配列；
ｄ）副甲状腺ホルモンアミノ酸配列、例えば、配列番号３０又は配列番号３０と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくはそれ以上の配列同一性を有するアミノ酸配列；又は
ｅ）フォン・ヴィレブランド因子アミノ酸配列、例えば、配列番号３２若しくは配列番号３３又は配列番号３２若しくは配列番号３３と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくはそれ以上の配列同一性を有するアミノ酸配列
であるアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる、実施形態３０に記載の組み換え活性細胞又は移植可能な要素。
３３．ポリペプチドが、配列番号１０を含み、コード配列が、配列番号１６又は配列番号１６と少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む、実施形態３１又は３２のいずれか１つに記載の組み換え活性細胞又は移植可能な要素。
３４．ポリペプチドが、配列番号２を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなり、コード配列が、配列番号１９又は配列番号１９と少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる、実施形態３０〜３２のいずれか１つに記載の組み換え活性細胞又は移植可能な要素。
３５．ポリペプチドが、配列番号３４又は配列番号３５をさらに含む、実施形態３０〜３４のいずれか１つに記載の活性細胞又は移植可能な要素。
３６．外因性の核酸が、コード配列の直ぐ上流にコザック配列を含む、実施形態３０〜３５のいずれか１つに記載の活性細胞又は移植可能な要素。
３７．コザック配列が、配列番号２６のヌクレオチド２０９４〜２０９９である、実施形態３６に記載の活性細胞又は移植可能な要素。
３８．プロモータ配列が配列番号２３である、実施形態３０〜３７のいずれか１つに記載の活性細胞又は移植可能な要素。
３９．組み換えＲＰＥ細胞（例えば、組み換えＡＲＰＥ−１９細胞）、又は組み換えＲＰＥ細胞を含む移植可能な要素であって、組み換えＲＰＥ細胞が、外因性の核酸を含み、外因性の核酸が、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、及び配列番号２１からなる群から選択されるコード配列を含む、組み換えＲＰＥ細胞又は移植可能な要素。
４０．外因性の核酸が、選択されたコード配列に動作可能に連結される配列番号２３を含む、実施形態３９に記載の組み換えＲＰＥ細胞又は移植可能な要素。
４１．外因性の核酸が、コード配列の直ぐ上流にコザック配列を含む、実施形態４０に記載の組み換えＲＰＥ細胞又は移植可能な要素。
４２．外因性の核酸が、配列番号２７又は配列番号２８を含む、実施形態３９〜４１のいずれか１つに記載の組み換えＲＰＥ細胞又は移植可能な要素。
４３．疾病の治療薬として提供される、前述の実施形態のいずれか１つに記載の移植可能な要素又は組み換え細胞。
４４．疾病が、血液凝固疾病又はライソゾーム蓄積症（例えば血友病（例えば血友病Ａ又は血友病Ｂ）、ファブリー病、ゴーシェ病、ポンペ病、又はＭＰＳ Ｉ）である、実施形態４３に記載の移植可能な要素又は組み換え細胞。
４５．予防的治療として提供される、前述の実施形態の前述のいずれか１つのいずれか１つに記載の移植可能な要素又は組み換え細胞。
４６．患者への注射（例えば、腹腔内、筋肉内、若しくは皮下注射）のために配合されるか、又は患者への移植（例えば、腹膜腔、例えば、小腹膜嚢へ）のために配合される、前述の実施形態のいずれか１つに記載の移植可能な要素。
４７．患者の小腹膜嚢、網、又は皮下脂肪に移植又は注射される、前述の実施形態のいずれか１つに記載の移植可能な要素又は組み換え細胞。
４８．第１の患者であって、第２の患者（例えば健常な患者）と比して、例えば血液テストによる測定で、ポリペプチド（例えば、血液凝固因子、例えば、第Ｉ因子、第ＩＩ因子、第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩ因子、又は第ＸＩＩＩ因子）が約５０％、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、２％、又は１％未満である第１の患者に投与される、前述の実施形態のいずれか１つに記載の移植可能な要素又は組み換え細胞。
４９．例えば、処置の効力のレベルを判定するために、患者におけるバイオマーカー（例えば血清バイオマーカー）のレベルが監視される、前述の実施形態のいずれか１つに記載の移植可能な要素又は組み換え細胞。
５０．組み換え活性細胞のクラスター（例えば、組み換えＲＰＥ細胞のクラスター）、又はマイクロキャリア（例えば、組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）又は複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含むビーズ若しくはマトリックス）を含む、前述の実施形態のいずれか１つに記載の移植可能な要素。
５１．複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）又はマイクロキャリア（例えば、複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含むビーズ若しくはマトリックス）が、複数のポリペプチドを産生する、実施形態５０に記載の移植可能な要素。
５２．移植可能な要素が、封入構成要素を含む、前述の実施形態のいずれか１つに記載の移植可能な要素。
５３．封入構成要素が、組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）、複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）、又は１つ若しくは複数の活性細胞を含むマイクロキャリア（例えば、ビーズ若しくはマトリックス）又はその周囲にインサイツで形成される、実施形態５２に記載の移植可能な要素。
５４．封入構成要素が、封入される組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）、複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）、又は１つ若しくは複数の活性細胞を含むマイクロキャリア（例えば、ビーズ若しくはマトリックス）との組み合わせ前に予め形成される、請求項５２に記載の移植可能な要素。
５５．封入構成要素が、可撓性ポリマー（例えば、ＰＬＡ、ＰＬＧ、ＰＥＧ、ＣＭＣ、又は多糖、例えば、アルギン酸塩）を含む、実施形態５２〜５４のいずれか１つに記載の移植可能な要素。
５６．封入構成要素が、非可撓性ポリマー又は金属ハウジングを含む、実施形態５２〜５４のいずれか１つに記載の移植可能な要素。
５７．化学修飾される、前述の実施形態のいずれか１つに記載の移植可能な要素。
５８．封入構成要素が化学修飾される、実施形態５２〜５７のいずれか１つに記載の移植可能な要素。
５９．前述の実施形態のいずれか１つに記載の移植可能な要素であって、ここで、移植可能な要素又はその封入構成要素は、式（Ｉ）：
Figure 2020534837
の化合物又はその塩で修飾され、式中、
Ａは、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（ＲＣ）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６−アルキレン）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６−アルケニレン）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｎ（ＲＤ）−、−ＮＣＮ−、−Ｃ（＝Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ））Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）ｘ−、−ＯＳ（Ｏ）ｘ−、−Ｎ（ＲＣ）Ｓ（Ｏ）ｘ−、−Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ）−、−Ｐ（ＲＦ）ｙ−、−Ｓｉ（ＯＲＡ）２−、−Ｓｉ（ＲＧ）（ＯＲＡ）−、−Ｂ（ＯＲＡ）−、又は金属であり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールの各々は、結合基（例えば、本明細書に定義される結合基）に結合され、１個以上のＲ１で任意選択により置換されており；
Ｌ１及びＬ３の各々は独立して、結合、アルキル、又はヘテロアルキルであり、ここで、アルキル及びヘテロアルキルの各々は、１個以上のＲ２で任意選択により置換されており；
Ｌ２は結合であり；
Ｍは、不在であるか、各々が１個以上のＲ３で任意選択により置換されている、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；
Ｐは、不在であるか、各々が１個以上のＲ４で任意選択により置換されている、シクロアルキル、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールであり；
Ｚは、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、−ＯＲＡ、−Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）ＲＡ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ５で任意選択により置換されており；
ＲＡ、ＲＢ、ＲＣ、ＲＤ、ＲＥ、ＲＦ、及びＲＧの各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、アジド、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ６で任意選択により置換されており；
又は、ＲＣ及びＲＤは、これらが結合している窒素原子と一緒になって、１個以上のＲ６で任意選択により置換されている環（例えば５〜７員環）を形成し；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、及びＲ６の各々は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、シアノ、アジド、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、−ＯＣ（Ｏ）ＲＢ１、−Ｎ（ＲＣ１）（ＲＤ１）、−Ｎ（ＲＣ１）Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ１）、ＳＲＥ１、Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ１、−ＯＳ（Ｏ）ｘＲＥ１、−Ｎ（ＲＣ１）Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ１、−Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ１）（ＲＤ１）、−Ｐ（ＲＦ１）ｙ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ７で任意選択により置換されており；
ＲＡ１、ＲＢ１、ＲＣ１、ＲＤ１、ＲＥ１、及びＲＦ１の各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ７で任意選択により置換されており；
各Ｒ７は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、シアノ、オキソ、ヒドロキシル、シクロアルキル、又はヘテロシクリルであり；
ｘは１又は２であり；
ｙは２、３、又は４である、移植可能な要素。
６０．実施形態５９に記載の移植可能な要素であって、ここで、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩ）：
（ＩＩ）、
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、
環Ｍ１は、各々が１〜５個のＲ３で任意選択により置換されている、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；
環Ｚ１は、１〜５個のＲ５で任意選択により置換されている、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールであり；
Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、アミノ、オキソ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；
Ｘは、不在、Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１１）、Ｏ、又はＳであり；
ＲＣは、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールの各々は、１〜６個のＲ６で任意選択により置換されており；
Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６の各々は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、シアノ、アジド、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、−ＯＣ（Ｏ）ＲＢ１、−Ｎ（ＲＣ１）（ＲＤ１）、−Ｎ（ＲＣ１）Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ１）、ＳＲＥ１、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；
Ｒ１０及びＲ１１の各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、−ＯＣ（Ｏ）ＲＢ１、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ１）、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；ＲＡ１、ＲＢ１、ＲＣ１、ＲＤ１、及びＲＥ１の各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールの各々は、１〜６個のＲ７で任意選択により置換されており；
各Ｒ７は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、シアノ、オキソ、ヒドロキシル、シクロアルキル、又はヘテロシクリルであり；
ｍ及びｎの各々は独立して、０、１、２、３、４、５、又は６であり；
Figure 2020534837
は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す、移植可能な要素。
６１．実施形態６０に記載の移植可能な要素であって、ここで、式（ＩＩ）の化合物は、式（ＩＩ−ａ）：
Figure 2020534837
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、
環Ｍ２は、アリール又はヘテロアリールであり；
環Ｚ２は、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールであり；
Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、ヘテロアルキル、又はオキソであり；
Ｘは、不在、Ｏ、又はＳであり；
各Ｒ５は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、−Ｎ（ＲＣ１）（ＲＤ１）、−Ｎ（ＲＣ１）Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、又は−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ１）であり；
又は２個のＲ５は一緒になって、環Ｚ２に縮合した５〜６員環を形成し；
ＲＡ１、ＲＢ１、ＲＣ１、ＲＤ１、及びＲＥ１の各々は独立して、水素、アルキル、ヘテロアルキルであり；
ｍ及びｐは各々独立して、０、１、２、３、４、５、又は６であり；
Figure 2020534837
は、移植可能な要素又はその封入構成要素（例えば、移植可能な要素又はその封入構成要素）に対する結合を指す、移植可能な要素。
６２．実施形態６０に記載の移植可能な要素であって、ここで、式（ＩＩ−ａ）の化合物は、式（ＩＩ−ｂ）：
Figure 2020534837
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、
環Ｚ２は、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールであり；
各Ｒ３及びＲ５は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；
各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；
ｐ及びｑは各々独立して、０、１、２、３、４、５、又は６であり；
Figure 2020534837
は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す、移植可能な要素。
６３．実施形態６０に記載の移植可能な要素であって、ここで、式（ＩＩ−ａ）の化合物は、式（ＩＩ−ｃ）：
Figure 2020534837
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、
環Ｚ２は、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールであり；
Ｒ２ｃ及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり、又はＲ２ｃ及びＲ２ｄの各々は一緒になってオキソ基を形成し；
各Ｒ３及びＲ５は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；
各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；
ｍは、１、２、３、４、５、又は６であり；
ｐ及びｑは各々独立して、０、１、２、３、４、５、又は６であり；
Figure 2020534837
は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す、移植可能な要素。
６４．実施形態６０に記載の移植可能な要素であって、ここで、式（ＩＩ−ａ）の化合物は、式（ＩＩ−ｄ）：
Figure 2020534837
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、
環Ｚ２は、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールであり；
Ｘは、不在、Ｏ、又はＳであり；
Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり、又はＲ２ａ及びＲ２ｂ又はＲ２ｃ及びＲ２ｄの各々は一緒になってオキソ基を形成し；
各Ｒ５は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；
各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；
ｍ及びｎは各々独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；
ｐは、０、１、２、３、４、５、又は６であり；
Figure 2020534837
は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す、移植可能な要素。
６５．実施形態５９に記載の移植可能な要素であって、ここで、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩＩ−ａ）：
Figure 2020534837
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、
Ｌ３は、各々が１個以上のＲ２で任意選択により置換されている、アルキル又はヘテロアルキルであり；
Ｚは、各々が１個以上のＲ５で任意選択により置換されている、アルキル又はヘテロアルキルであり；
Ｒ２ａ及びＲ２ｂの各々は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり、又はＲ２ａ及びＲ２ｂは一緒になってオキソ基を形成し；
Ｒ２、Ｒ３、及びＲ５の各々は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；
各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；
ｎは独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；
Figure 2020534837
は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す、移植可能な要素。
６６．実施形態５９に記載の移植可能な要素であって、ここで、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＶ−ａ）：
Figure 2020534837
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、
環Ｚ２は、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；
Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、ヘテロアルキル、ハロであり；又はＲ２ａ及びＲ２ｂ又はＲ２ｃ及びＲ２ｄは一緒になってオキソ基を形成し；
Ｒ３及びＲ５の各々は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；
ｍ及びｎは各々独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；
ｏ及びｐは各々独立して、０、１、２、３、４、又は５であり；
ｑは、０〜２５の整数であり；
Figure 2020534837
は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す、移植可能な要素。
６７．式（Ｉ）の化合物が、化合物表１に示される化合物である、実施形態５９〜６６のいずれか１つに記載の移植可能な要素。
６８．化合物が、
Figure 2020534837
又はその塩から選択される、実施形態５９〜６７のいずれか１つに記載の移植可能な要素。
６９．化合物が、化合物表１からの化合物１１０、化合物１１２、化合物１１３、又は化合物１１４から選択される、実施形態５９〜６７のいずれか１つに記載の移植可能な要素。
７０．移植可能な要素が、患者への移植の後、少なくとも３０日間、２ヶ月間、３ヶ月間、６ヶ月間、９ヶ月間、又は１２ヶ月間にわたって実質的に分解されない、前述の実施形態のいずれか１つに記載の移植可能な要素。
７１．移植可能な要素が、例えば移植の約５日後に、周囲組織への大きな損傷を伴わずに患者から取り外し可能である、前述の実施形態のいずれか１つに記載の移植可能な要素。
７２．患者を処置するか又は生成物（例えば治療用生成物）を患者に供給する方法であって、
実施形態１〜６９のいずれか１つに記載の移植可能な要素又は組み換え活性細胞を患者に投与又は提供し、それによって、患者を処置するか、又は生成物（例えば治療用生成物）を患者に供給するステップを含む、方法。
７３．患者を処置するステップを含む、実施形態７２に記載の方法。
７４．生成物（例えば治療用生成物）を患者に供給するステップを含む、実施形態７３に記載の方法。
７５．患者がヒトである、実施形態７２〜７４のいずれか１つに記載の方法。
７６．組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）が、ヒト細胞（例えば、ヒトＲＰＥ細胞）である、実施形態７２〜７５のいずれか１つに記載の方法。
７７．ポリペプチドが、抗体（例えば、抗神経成長因子抗体）、酵素（例えば、α−ガラクトシダーゼ又は凝固因子（例えば、血液凝固因子、例えば、活性化血液凝固因子）である、実施形態７２〜７６のいずれか１つに記載の方法。
７８．複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）又は移植可能な要素が、疾病の治療薬として提供される、実施形態７２〜７７のいずれか１つに記載の方法。
７９．疾病が、血液凝固疾病又はライソゾーム蓄積症（例えば血友病（例えば血友病Ａ又は血友病Ｂ）、ファブリー病、ゴーシェ病、ポンペ病、又はＭＰＳ Ｉ）である、実施形態７８に記載の方法。
８０．疾病が糖尿病である、実施形態７８に記載の方法。
８１．疾病が糖尿病でない、実施形態７８に記載の方法。
８２．移植可能な要素が、第１の患者であって、第２の患者（例えば健常な患者）と比して、例えば血液テストによる測定で、ポリペプチド（例えば、血液凝固因子、例えば、第Ｉ因子、第ＩＩ因子、第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩ因子、又は第ＸＩＩＩ因子）が約５０％、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、２％、又は１％未満である第１の患者に投与される、実施形態７２〜７７のいずれか１つに記載の方法。
８３．例えば、処置の効力のレベルを判定するために、患者におけるバイオマーカー（例えば血清バイオマーカー）のレベルが監視される、実施形態７２〜８２のいずれか１つに記載の方法。
８４．移植可能な要素が、中枢神経系、脳、脊柱、眼、又は網膜以外の部位に投与、移植、又は提供される、実施形態７２〜８３のいずれか１つに記載の方法。
８５．移植可能な要素が、中枢神経系、脳、脊柱、眼、又は網膜から少なくとも約１、２、５、又は１０センチメートルの部位に投与、移植、又は提供される、実施形態７２〜８３のいずれか１つに記載の方法。
８６．複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素を作製又は製造する方法であって、
複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）、例えば、本明細書に記載の組み換え活性細胞を提供するステップ、及び
複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を、封入構成要素、例えば、本明細書に記載の封入構成要素内に配置し、
それによって、移植可能な要素を作製又は製造するステップを含む、方法。
８７．複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素を評価する方法であって、
本明細書に記載の複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含む移植可能な要素を提供するステップ；及び
移植可能な要素又は複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）の構造又は機能パラメータを評価し、
それによって、移植可能な要素を評価するステップを含む、方法。
８８．複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）をインビトロで培養するか、又は組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）又は複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を、動物、例えば非ヒト動物、又はヒト患者において培養するステップをさらに含む、実施形態８７に記載の方法。
８９．
生存率；
組み換えポリペプチドの生成；
組み換えＲＮＡの生成；
栄養分若しくは酸素の取り込み；又は
老廃物の生成
のうちの１つ以上について、複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を評価するステップを含む、実施形態８７又は８８に記載の方法。
９０．生存率；組み換えポリペプチドの生成；組み換えＲＮＡの生成；栄養分若しくは酸素の取り込み；又は老廃物の生成のうちの１つ以上が所定の値を満たす場合、移植可能な要素を薬物製品に配合するステップをさらに含む、実施形態８７〜８９のいずれか１つに記載の方法。
９１．形状因子、例えば、本明細書に記載の形状因子に関連する細胞のパラメータを評価するステップを含む、実施形態８７〜９０のいずれか１つに記載の方法。
９２．評価が、複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を移植可能な要素内に配置した少なくとも１、５、１０、２０、３０、又は６０日後に行われる、実施形態８７〜９１のいずれかに記載の方法。
９３．評価が、組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）の培養の開始の少なくとも１、５、１０、２０、３０、又は６０日後に行われる、実施形態７２〜７９のいずれか１つに記載の方法。
９４．実施形態１〜７０のいずれか１つに記載の移植可能な要素を監視する方法であって、
例えば、患者又は患者由来のサンプルを試験することによって、患者における複数の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）によって放出される構成要素（例えば、ポリペプチド）のレベルを取得するステップ、又は
例えば、患者又は患者由来のサンプルを試験することによって、構成要素の活性に依存する生成物のレベルを取得し、
それによって、移植可能な要素を監視又は評価するステップを含む、方法。
９５．構成要素が、末梢循環、例えば末梢血中で測定される、実施形態９４に記載の方法。
９６．構成要素（例えば、ポリペプチド）のレベルが、基準値と比較される、実施形態９１〜９５のいずれか１つに記載の方法。
９７．レベル又は比較に応じて、例えば、追加の移植可能な要素又は追加の組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を必要とする又は必要としないと、患者が分類される、実施形態９１〜９６のいずれか１つに記載の方法。
９８．（例えば、レベル又は比較に応じて）、患者から移植可能な要素又は組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を取り出すステップを含む、実施形態９１〜９７のいずれか１つに記載の方法。
９９．レベルが、移植可能な要素又は組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を投与（例えば、移植又は注射）した約１時間〜約３０日後又は前の評価から約１時間〜約３０日後に取得される、実施形態９１〜９８のいずれか１つに記載の方法。
１００．予め選択された形状因子又は本明細書に開示の形状因子を有する複数の活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）。
１０１．形状因子が、組み換え活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）のクラスターを含む、実施形態１００に記載の複数の活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）。
１０２．クラスターが、少なくとも約１００、２００、３００、４００、又は５００個の活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）を含む、実施形態１０１に記載の複数の活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）。
１０３．複数のチャンバを含む基材であって、複数のチャンバの各チャンバが、活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）又は組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含有する、基材。
１０４．複数のチャンバの各チャンバが、複数の活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）又は組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）、例えば、本明細書に記載の形状因子、例えば、クラスター）を有する複数の組み換えＲＰＥ細胞を含む、実施形態１０３に記載の基材。
１０５．本明細書に記載の組み換え活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞、例えば、組み換えＲＰＥ細胞）又は活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞、例えば、組み換えＲＰＥ細胞）のクラスターが上に配置されたマイクロキャリア（例えば、ビーズ又はマトリックス）。
１０６．マイクロキャリアがポリスチレンビーズを含む、実施形態１０５に記載のマイクロキャリア。
１０７．組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）の調製物であって、少なくとも約１０，０００；１５，０００；２０，０００；２５，０００；３０，０００；４０，０００；５０，０００；６０，０００；又は７５，０００個の組み換え活性細胞（例えば、本明細書に記載の組み換えＲＰＥ細胞）を含む、調製物。
１０８．実施形態１〜７０のいずれか１つに記載の複数の移植可能な要素又は組み換え活性細胞を含む医薬組成物。
［実施例］
本明細書に記載の本開示がより完全に理解され得るよう、実施例が以下に記載されている。本出願に記載されている実施例は、本明細書において提供されている活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）、移植可能な要素、並びに組成物及び方法を例示するために提供されており、如何様にもその範囲を限定すると解釈されるべきではない。
［実施例１：活性細胞の培養］
ＡＲＰＥ−１９細胞が、当該技術分野において公知の任意の方法に従って、例えば以下のプロトコルに従って培養され得る。７５ｃｍ２の培養フラスコ中のＡＲＰＥ−１９細胞（ＡＴＣＣからの）を吸引して、培養培地を除去し、細胞層を、０．０５％（ｗ／ｖ）トリプシン／０．５３ｍＭのＥＤＴＡ溶液（「ＴｒｙｐｓｉｎＥＤＴＡ」）で短時間すすいで、トリプシン阻害剤を含有する血清をすべて除去する。２〜３ｍＬのトリプシン／ＥＤＴＡ溶液を、フラスコに添加し、細胞を、細胞層が分散されるまで、通常、５〜１５分間、倒立顕微鏡で観察した。凝集を避けるために、細胞を慎重に取り扱い、分散期間中フラスコをぶつけたり又は振ったりしないようにする。細胞が脱離しない場合、フラスコを３７℃に置いて、分散を促進する。細胞が分散したら、６〜８ｍＬの完全成長培地を添加し、細胞を、穏やかなピペッティングによって吸引する。細胞懸濁液を遠心分離管に移し、５〜１０にわたって約１２５×ｇで遠沈して、ＴｒｙｐｓｉｎＥＤＴＡを除去する。懸濁液を廃棄し、細胞を新鮮な成長培地に再懸濁させる。適切な分量の細胞懸濁液を新たな培養容器に添加し、これを３７℃でインキュベートした。培地を週に２〜３回取り替えた。
［実施例２Ａ：活性細胞クラスターの調製］
活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）のスフェロイドクラスターを、ＡｇｇｒｅＷｅｌｌ（商標）スフェロイドプレート（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）及び本明細書に概説されるプロトコルを用いて調製した。１日目に、すすぎ液（４ｍＬ）を各プレートに添加し、プレートを大型の遠心分離機において３，０００ＲＰＭで５分間にわたって遠沈した。すすぎ液をピペットによって除去し、４ｍＬの完全成長培地を添加した。ＲＰＥ細胞を所望の細胞密度でプレートに播種し、ウェル当たり３９０万個の細胞が直径１５０μｍのクラスターを生じ、及びヒドロゲルカプセル中へのカプセル化のための望ましい平均クラスター直径が約１００〜１５０μｍであるという一般的な経験則を踏まえて、凝集を防ぐために直ぐにピペッティングした。プレートを８００ＲＰＭで３分間にわたって遠沈し、プレートを、一晩、培養器に入れた。２日目に、プレートをインキュベーションから取り外した。広径ピペットチップを用いて、細胞を穏やかにピペッティングして、スフェロイドクラスターを取り除いた。クラスターを、４０μｍ又は８０μｍのセルストレーナーに通してろ過して、外部の脱離した単一細胞を除去し、次いで、２×１分間にわたって遠心分離機中で遠沈した。クラスターを、広径ピペットチップを用いて穏やかに再懸濁させ、穏やかに撹拌して、培地又は別の材料（例えば、アルギン酸塩）全体にわたってそれらを分配した。
或いは、ＡＲＰＥ−１９スフェロイドクラスターは、以下のプロトコルを用いて調製され得る。１日目に、ＡｇｇｒｅＷｅｌｌ（商標）プレートを、滅菌した組織培養フード中の包装から取り出す。２ｍＬのＡｇｇｒｅｗｅｌｌ（商標）すすぎ液を各ウェルに添加する。プレートを、５分間にわたって２，０００ｇで遠心分離して、気泡を除去する。ＡｇｇｒｅＷｅｌｌ（商標）すすぎ液を細胞から除去し、２ｍＬの完全成長培地で各ウェルをすすぐ。各ウェルについて２００万個のＡＲＰＥ−１９細胞を３．９ｍＬの完全成長培地中に添加する。プレートを、３分間にわたって１００ｇで遠心分離する。細胞を、３７℃で４８時間インキュベートする。３日目に、上記と同じプロトコルを用いて、スフェロイドクラスターを取り除く。
［実施例２Ｂ：マイクロキャリアにおける活性細胞の調製］
単一のＡＲＰＥ−１９細胞が、以下のプロトコルに従って、市販のマイクロキャリア（例えば、Ｃｕｌｔｉｓｐｈｅｒ（登録商標）マイクロキャリア、Ｃｙｔｏｄｅｘ（登録商標）マイクロキャリア、Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｅｎｈａｎｃｅｄ Ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ Ｍｉｃｒｏｃａｒｒｉｅｒｓ）に播種され得る。
所望の数のＡＲＰＥ−１９細胞（例えば、２０００万個の細胞）及び培養培地を、所望の総体積（例えば、１０ｍＬ）に達するように、コニカルチューブ中のマイクロキャリア（任意選択により、コラーゲンで被覆された）に添加する。所望の量の滅菌マイクロキャリアを、コニカルチューブ中でリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中の及び０．１ｍｇ／ｍＬのラット尾コラーゲンＩと組み合わせて、次いで、チューブを、少なくとも２時間にわたって室温で、２００ｒｐｍで振とうすることによって、マイクロキャリアを、コラーゲンで任意選択により被覆する。コラーゲン被覆マイクロキャリアを、ＰＢＳで３回、及び次いで培養培地で２回洗浄して、マイクロキャリアを、各洗浄後約５分間にわたって沈降させてから、上清を除去する。
細胞及びマイクロキャリアを含むコニカルチューブを、均質になるまで穏やかに振とうし、次いで、約２５分間にわたって３７Ｃの恒温培養器に入れ、これらの振とう及びインキュベートステップを１回繰り返す。コニカルチューブからの細胞及びマイクロキャリアを、３７Ｃに予め加熱された所望の量（例えば、７０ｍＬ）の培養培地を含むスピナーフラスコに添加し、追加の培養培地を添加して、フラスコ中の体積を所望の最終体積（例えば、９０ｍＬ）にする。次いで、細胞及びマイクロキャリアを、約４日間にわたって撹拌しながら３７Ｃでインキュベートする。所望の体積のマイクロキャリア／培地組成物を、微小遠心分離管に移し、マイクロキャリアを、Ｃａフリークレブス緩衝液中で１回洗浄してから、所望のアルギン酸塩カプセル化溶液中で懸濁させる。
［実施例３：化学修飾された移植可能な要素の調製のための例示的な化合物の合成］
［一般的なプロトコル］
以下の手順は、化学修飾された移植可能な要素の調製のための例示的な化合物を調製する方法を説明するものである。本明細書において提供されている化合物は、容易に入手可能である出発材料から、当業者に周知であろう以下に記載の特定の合成プロトコルに対する修正をしながら調製可能である。典型的又は好ましいプロセス条件（すなわち、反応温度、時間、反応体のモル比、溶剤、圧力等）が提示されている場合、別段の定めがある場合を除き、他のプロセス条件もまた用いることが可能であることが認識されるであろう。最適な反応条件は用いられる特定の反応体又は溶剤によって様々であり得るが、このような条件は、ルーチン的な最適化手法で当業者によって判定可能である。
さらに、当業者には明らかであろうとおり、一定の官能基が望ましくない反応に供されることを防止するために従来の保護基が必要であり得る。保護及び脱保護に関する、特定の官能基に係る好適な保護基の選択、並びに、好適な条件は、技術分野において周知である。例えば、数多くの保護基、並びに、その導入及び除去が、Ｇｒｅｅｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１、及び、その中で引用されている文献において記載されている。
［１，４−置換トリアゾールを得るためのヒュスゲン環化付加］
銅触媒ヒュスゲン［３＋２］環化付加を用いて、トリアゾール系化合物、並びに、その組成物、デバイス及び材料を調製した。範囲及び典型的なプロトコルは多くのレビューの主題となっている（例えば、Ｍｅｌｄａｌ，Ｍ．ａｎｄ Ｔｏｒｎｏｅ，Ｃ．Ｗ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．（２００８）１０８：２９５２−３０１５；Ｈｅｉｎ，Ｊ．Ｅ．ａｎｄ Ｆｏｋｉｎ，Ｖ．Ｖ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｒｅｖ．（２０１０）３９（４）：１３０２−１３１５；この両方は、本明細書において参照により援用されている）。
Figure 2020534837
上記の実施例において、アジドは、結合要素Ａを含有する画分における反応性部分であるが、一方で、アルキンは、側基Ｚの反応性構成要素である。以下に示されているとおり、これらの官能性のハンドルを交換して、構造的に関連しているトリアゾール生成物を生成することが可能である。これらの代替物の調製は同様であり、特別な考察を必要とはしない。
Figure 2020534837
ヨウ化物から開始される典型的なヒュスゲン環化付加手法の概要を以下に記載する。いくつかの事例において、ヨウ化物は、安全性のために反応の経過中にアジドに変換される。
Figure 2020534837
アジ化ナトリウム（１．１当量）、アスコルビン酸ナトリウム、（０．１当量）ｔ−Ｎ，Ｎ’−ジメチルシクロヘキサン−１，２−ジアミン（０．２５当量）、ヨウ化銅（Ｉ）のメタノール（１．０Ｍ、制限試薬）中の溶液を窒素を通気させて脱気し、アセチレン（１当量）及びヨウ化アリール（１．２当量）で処理した。この混合物を室温で５分間撹拌し、次いで、５５℃で１６時間温めた。次いで、反応を室温に冷却し、漏斗を通してろ過し、フィルタケーキをメタノールで洗浄した。組み合わせたろ液を濃縮し、シリカゲルにおけるフラッシュクロマトグラフィ（１２０ｇシリカ、ジクロロメタン中に０〜４０％の勾配（３％水性水酸化アンモニウム、２２％メタノール、残量ジクロロメタン）を介して精製して、所望の目標材料を得た。
アジドから開始される典型的なヒュスゲン環化付加手法の概要を以下に記載する。
Figure 2020534837
トリス［（１−ベンジル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］アミン（０．２当量）、トリエチルアミン（０．５当量）、ヨウ化銅（Ｉ）（０．０６当量）のメタノール（０．４Ｍ、制限試薬）中の溶液を、アセチレン（１．０当量）で処理し、０℃に冷却した。反応を３０分間かけて室温に温め、次いで、５５℃で１６時間加熱した。反応を室温に冷却し、濃縮し、ＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、ジクロロメタン中に０〜１００％の勾配（３％水性水酸化アンモニウム、２２％メタノール、残量ジクロロメタン）で精製して、所望の目標材料を得た。
［１，５−置換トリアゾールを得るためのヒュスゲン環化付加］
ヒュスゲン［３＋２］環化付加をまた、ルテニウム触媒を伴って行い、選択的に１，５−二置換生成物を得た（例えば、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００５，１２７，１５９９８−１５９９９；Ｂｏｒｅｎ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００８，１３０，８９２３−８９３０に記載されているとおり。これらの各々は、本明細書において参照によりその全体が援用される）。
Figure 2020534837
既述のとおり、以下に示されているとおり、アジド及びアルキン基を交換して、同様のトリアゾールを形成し得る。
Figure 2020534837
典型的な手法を以下に記載する：アルキン（１当量）及びアジド（１当量）のジオキサン（０．８Ｍ）中の溶液を、ペンタメチルシクロ−ペンタジエニルビス（トリフェニルホスフィン）ルテニウム（ＩＩ）クロリド（０．０２当量）のジオキサン（０．１６Ｍ）中の溶液に滴下した。バイアルを窒素でパージし、シールし、混合物を６０℃で１２時間加熱した。得られた混合物を濃縮し、シリカゲルにおけるフラッシュクロマトグラフィを介して精製して、必要とされた化合物を得た。
［（４−（４−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（３）のための実験手順］
Figure 2020534837
メタノール（９ｍＬ）及び水（１ｍＬ）中の（４−ヨードフェニル）メタンアミン（１、８４３ｍｇ、３．６２ｍｍｏｌ、１．０当量）、（１Ｓ，２Ｓ）−Ｎ１，Ｎ２−ジメチルシクロヘキサン−１，２−ジアミン（７４μＬ、０．４７ｍｍｏｌ、０．１３当量）、アスコルビン酸ナトリウム（７２ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ、０．１当量）、ヨウ化銅（６９ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ、０．１当量）、アジ化ナトリウム（４７０ｍｇ、７．２４ｍｍｏｌ、２．０当量）、及び１−メチル−４−（プロパ−２−イン−１−イル）ピペラジン（２、０．５ｇ、３．６２ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物を窒素で５分間パージし、５５℃に一晩加熱した。反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮し、褐色がかったスラリーをジクロロメタンで抽出した。セライトを、組み合わせたジクロロメタン相に添加し、溶剤を減圧下で除去した。粗生成物を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（８０ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から７．５％へと徐々に増加させて、（４−（４−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（３、０．４５ｇ、４３％）を得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ１５Ｈ２２Ｎ６についての計算値２８７．２；実測値２８７．１。
［Ｎ−（４−（４−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ベンジル）メタクリルアミド（４）のための実験手順］
Figure 2020534837
ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中の（４−（４−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（３、１．２ｇ、４．１９ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（０．７０ｍＬ、５．０３ｍｍｏｌ、１．２当量）の溶液を、氷浴で０℃に冷却し、塩化メタクリロイル（０．４３ｍＬ、４．４０ｍｍｏｌ、５ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中の１．０５当量）を添加した。反応を、氷浴で冷却しながら１日撹拌した。十（１０）グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（８０ｇ）によって精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から７．５％へと徐々に増加させた。溶剤を減圧下で除去し、得られた固体をジエチルエーテルで研和し、ろ過し、ジエチルエーテルで複数回洗浄して、Ｎ−（４−（４−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ベンジル）メタクリルアミド（４、０．４１ｇ、２８％の収率）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ１９Ｈ２６Ｎ６Ｏについての計算値３５５．２；実測値３５５．２。
［（４−（４−（（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（６）のための実験手順］
Figure 2020534837
メタノール（４０ｍＬ）及び水（４ｍＬ）中の（４−ヨードフェニル）メタンアミン（１、２．９５ｇ、１２．６４ｍｍｏｌ、１．０当量）、（１Ｓ，２Ｓ）−Ｎ１，Ｎ２−ジメチルシクロヘキサン−１，２−ジアミン（２５９μＬ、１．６４ｍｍｏｌ、０．１３当量）、アスコルビン酸ナトリウム（２５０ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ、０．１当量）、ヨウ化銅（２４１ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ、０．１当量）、アジ化ナトリウム（１．６４ｇ、２５．２９ｍｍｏｌ、２．０当量）、及び１−メチル−４−（プロパ−２−イン−１−イル）ピペラジン（５、２．０ｇ、１２．６４ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物を窒素で５分間パージし、５５℃に一晩加熱した。反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。残渣をジクロロメタンに溶解させ、ろ過し、セライト（１０ｇ）を用いて濃縮した。粗生成物を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（２２０ｇ）によって精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から６．２５％へと徐々に増加させて、（４−（４−（（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（６、１．３７ｇ、３５％）を得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ１５Ｈ２２Ｎ４Ｏ３についての計算値３０７．２；実測値３０７．０。
［Ｎ−（４−（４−（（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ベンジル）メタクリルアミド（７）のための実験手順］
Figure 2020534837
ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中の４−（４−（（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（６、１．６９ｇ、５．５２ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（０．９２ｍＬ、６．６２ｍｍｏｌ、１．２当量）の溶液を、氷浴で０℃に冷却し、塩化メタクリロイル（０．５７ｍＬ、５．７９ｍｍｏｌ、１．０５当量）を滴下して添加した。反応を室温で４時間撹拌した。十（１０）グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（８０ｇ）クロマトグラフィによって精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から１．２５％へと徐々に増加させて、Ｎ−（４−（４−（（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ベンジル）メタクリルアミド（７、１．７６ｇ、８５％の収率）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ１９Ｈ２６Ｎ４Ｏ４についての計算値３７５．２；実測値３７５．０。
［３−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）オキセタン（９）のための実験手順］
Figure 2020534837
ＴＨＦ（２００ｍＬ）中の水素化ナトリウム（２７．０ｇ、６７５ｍｍｏｌ、６０％の純度）の懸濁液を氷浴で冷却した。オキセタン−３−オール（８、２５ｇ、３３７ｍｍｏｌ）を滴下して添加し、０℃で３０分間撹拌した。次いで、３−ブロモプロパ１−イン（９、４１．２ｍＬ、３７１ｍｍｏｌ、８０％の純度）を滴下して添加した。混合物を、室温に温めながら一晩撹拌した。混合物をセライトでろ過し、ＴＨＦで洗浄し、減圧下でセライトを用いて濃縮した。粗生成物を、シリカゲル（２２０ｇ）で精製し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶離した。移動相中のＥｔＯＡｃの濃度を０から２５％へと増加させて、（９、１８．２５ｇ ４８％）の黄色の油を得た。
［３−（４−（（オキセタン−３−イルオキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）プロパン−１−アミン（１１）のための実験手順］
Figure 2020534837
メタノール（８０ｍＬ）中の３−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）オキセタン（９、７．９６ｇ、７１ｍｍｏｌ、１．０当量）、３−アジドプロパン−１−アミン（１０、７．８２ｇ、７８ｍｍｏｌ、１．１当量）、トリス［（１−ベンジル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−アミン（８．２９ｇ、１５．６ｍｍｏｌ、０．２２当量）、ヨウ化銅（１．３５ｇ、７．１ｍｍｏｌ、０．１当量）、及びトリエチルアミン（２．４７ｍＬ、１７．８ｍｍｏｌ、０．２５当量）の混合物を５５℃に温め、窒素雰囲気下で一晩撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、セライト（２０ｇ）を添加し、減圧下で濃縮した。粗生成物を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（２２０ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から１５％へと徐々に増加させて、３−（４−（（オキセタン−３−イルオキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）プロパン−１−アミン（１１、１１．８５ｇ、７９％）を黄色の油として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ９Ｈ１６Ｎ４Ｏ２についての計算値２１３．１；実測値２１３．０。
［Ｎ−（３−（４−（（オキセタン−３−イルオキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）プロピル）メタクリルアミド（１２）のための実験手順］
Figure 2020534837
ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中の３−（４−（（オキセタン−３−イルオキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）プロパン−１−アミン（１１、３．９４ｇ、１８．５６ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（３．１ｍＬ、２２．２８ｍｍｏｌ、１．２当量）の溶液を、氷浴で０℃に冷却し、塩化メタクリロイル（１．９９ｍＬ、２０．４２ｍｍｏｌ、１．１当量）を滴下して添加した。反応を、室温に温めながら一晩撹拌した。２０グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／メタノールを用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（２２０ｇ）によって精製した。メタノールの濃度を、０％から５％へと徐々に増加させて、Ｎ−（３−（４−（（オキセタン−３−イルオキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）プロピル）メタクリルアミド（１２、３．２２ｇ、６２％の収率）を固体として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ１３Ｈ２０Ｎ４Ｏ３についての計算値２８１．２；実測値２８１．０。
［Ｎ−（４−（１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ベンジル）メタクリルアミド（１４）のための実験手順］
Figure 2020534837
ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中の（４−（１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（１３、ＷｕＸｉから入手される、１．２ｇ、５．７０ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（１５ｍＬ、１０７．５５ｍｍｏｌ、１８．９当量）の溶液に、塩化メタクリロイル（８９３ｍｇ、８．５４ｍｍｏｌ、１．５当量）をゆっくりと滴下して添加した。反応を一晩撹拌した。２０グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲルクロマトグラフィによって精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から１．２５％へと徐々に増加させて、Ｎ−（４−（１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ベンジル）メタクリルアミド（１４、１．３８ｇ、４０％の収率）を得た。
［（４−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（１５）のための実験手順］
Figure 2020534837
メタノール（５０ｍＬ）及び水（１２ｍＬ）中の（４−ヨードフェニル）メタンアミン塩酸塩（５．０ｇ、１８．５５ｍｍｏｌ、１．０当量）、（１Ｓ，２Ｓ）−Ｎ１，Ｎ２−ジメチルシクロヘキサン−１，２−ジアミン（０．５９ｍＬ ３．７１ｍｍｏｌ、０．２当量）、アスコルビン酸ナトリウム（３６８ｍｇ、１．８６ｍｍｏｌ、０．１当量）、ヨウ化銅（５３０ｍｇ、２．７８ｍｍｏｌ、０．１５当量）、アジ化ナトリウム（２．４１ｇ、３７．１ｍｍｏｌ、２．０当量）、Ｅｔ３Ｎ（３．１１ｍＬ、２２．２６ｍｍｏｌ、１．２当量）及び２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン（２．６ｇ、１８．５５ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物を窒素で５分間パージし、５５℃に一晩加熱した。反応混合物を室温に冷却し、４１３ろ紙に通してろ過した。セライトを添加し、溶剤を減圧下で除去し、残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（１２０ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から６．２５％へと徐々に増加させて、（４−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（１５、３．５４ｇ、６６％）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ１５Ｈ２０Ｎ４Ｏ２についての計算値２８９．２；実測値２８９．２。
［Ｎ−（４−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ベンジル）メタクリルアミド（１６）のための実験手順］
Figure 2020534837
ＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）中の（４−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（１５、３．４６ｇ、１２．００ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（２．０１ｍＬ、１４．４０ｍｍｏｌ、１．２当量）の溶液を、氷浴で０℃に冷却し、塩化メタクリロイル（１．２３ｍＬ、１２．６０ｍｍｏｌ、１．０５当量、５ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に希釈される）を滴下して添加した。冷却浴を外し、反応を４時間撹拌した。２０グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（８０ｇ）によって精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から３．７５％へと徐々に増加させて、Ｎ−（４−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ベンジル）メタクリルアミド（１６、２．７４ｇ、６４％の収率）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ１９Ｈ２４Ｎ４Ｏ３についての計算値３５７．２；実測値３５７．３。
［Ｎ−（４−（４−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ベンジル）メタクリルアミド（１７）のための実験手順］
Figure 2020534837
Ｎ−（４−（４−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ベンジル）メタクリルアミド（１６、１．２ｇ、３．３７ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液を、室温で一晩、メタノール（６ｍＬ）及びＨＣｌ（１Ｎ、水溶液、９ｍＬ）に溶解させた。セライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。粗生成物を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（２４ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から１２．５％へと徐々に増加させて、Ｎ−（４−（４−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ベンジル）メタクリルアミド（１７、０．８５ｇ、９２％の収率）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ１４Ｈ１６Ｎ４Ｏ２についての計算値２７３．１；実測値２７３．１。
［（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）ベンジル）カルバメート（１９）のための実験手順］
Figure 2020534837
ジクロロメタン（１００ｍＬ）中のベンジル（４−（ヒドロキシメチル）ベンジル）カルバメート（２．７１ｇ、１０ｍｍｏｌ、１当量）、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン（１．８１ｍＬ、２０ｍｍｏｌ、２当量）、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（２８５ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ、０．１５当量）を室温で一晩撹拌した。セライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。１００％のヘキサンから開始し、ＥｔＯＡｃの濃度を１００％へと増加させる溶離剤としてヘキサン／ＥｔＯＡｃを用いて、シリカゲル（２４ｇ）で粗生成物を精製して、ベンジル（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）ベンジル）−カルバメート（１９、２．４ｇ、６８％）を無色の油として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ Ｃ２１Ｈ２５ＮＯ４についての計算値３７８．１７、実測値３７８．１７。
［（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−フェニル）メタンアミン（２０）のための実験手順］
Figure 2020534837
ＥｔＯＨ中の（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）ベンジル）カルバメート（１９、１．５ｇ、４．２ｍｍｏｌ、１当量）、パラジウム炭素（１６０ｍｇ、１０重量％）を、短時間の間排気し、次いで、水素を、バルーンを介して添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。セライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。粗生成物を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（１２ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から２５％へと徐々に増加させて、（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）フェニル）メタンアミン（２０、８９０ｍｇ、９５％）を無色の油として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ１３Ｈ１９ＮＯ２についての計算値２２２．１５、実測値２２２．１４。
［Ｎ−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）ベンジル）−メタクリルアミド（２１）のための実験手順］
Figure 2020534837
ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中の（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）フェニル）メタンアミン（２０、０．５ｇ、２．２６ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（０．４７ｍＬ、３．３９ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液を、短時間の間排気し、窒素でフラッシュした。塩化メタクリロイル（０．３３ｍＬ、３．３９ｍｍｏｌ、１．５当量）を滴下して添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。十（１０）グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。１００％のヘキサンから開始して、ＥｔＯＡｃの濃度を徐々に１００％へと増加させる溶離剤としてヘキサン／ＥｔＯＡｃを用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（１２ｇ）によって、残渣を精製して、Ｎ−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）ベンジル）メタクリルアミド（２１、０．４７ｇ、７２％の収率）を無色の固体として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ Ｃ１７Ｈ２３ＮＯ３についての計算値３１２．１６；実測値３１２．１７。
［実験手順（４−（４−（２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（２２）］
Figure 2020534837
メタノール（２０ｍＬ）及び水（５ｍＬ）中の（４−ヨードフェニル）メタンアミン（５．０ｇ、２１．４５ｍｍｏｌ、１．０当量）、（１Ｓ，２Ｓ）−Ｎ１，Ｎ２−ジメチルシクロヘキサン−１，２−ジアミン（０．４４ｍＬ ２．７９ｍｍｏｌ、０．１３当量）、アスコルビン酸ナトリウム（４２５ｍｇ、２．１５ｍｍｏｌ、０．１当量）、ヨウ化銅（４０９ｍｇ、２．１５ｍｍｏｌ、０．１当量）、アジ化ナトリウム（２．７９ｇ、４２．９１ｍｍｏｌ、２．０当量）、及び２−（ブタ−３−イン−１−イルオキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン（３．３６ｍＬ、２１．４５ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物を窒素で５分間パージし、５５℃に一晩加熱した。反応混合物を室温に冷却し、４１３ろ紙に通してろ過した。セライト（１０ｇ）を添加し、溶剤を減圧下で除去し、残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（２２０ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から５％へと徐々に増加させて、（４−（４−（２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（２２、３．１５ｇ、４９％）を固体として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ１６Ｈ２２Ｎ４Ｏ２についての計算値３０３．１８；実測値３０３．１８。
［Ｎ−（４−（４−（２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ベンジル）メタクリルアミド（２３）のための実験手順］
Figure 2020534837
ＣＨ２Ｃｌ２（５５ｍＬ）中の（４−（４−（２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（２２、３．１０ｇ、１０．２５ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（１．７１ｍＬ、１２．３０ｍｍｏｌ、１．２当量）の溶液を、氷浴で０℃に冷却し、塩化メタクリロイル（１．０５ｍＬ、１２．３０ｍｍｏｌ、１．２当量、５ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に希釈される）を滴下して添加した。冷却浴を外し、反応を４時間撹拌した。８グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（８０ｇ）によって精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から２．５％へと徐々に増加させて、Ｎ−（４−（４−（２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ベンジル）メタクリルアミド（２３、２．０６ｇ、５４％の収率）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ２０Ｈ２６Ｎ４Ｏ３についての計算値３７１．２０７８；実測値３７１．２０８５。
［実験手順（４−（１−（２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）フェニル）メタンアミン（２４）］
Figure 2020534837
メタノール（２４ｍＬ）及び水（６ｍＬ）中の（４−エチニルフェニル）メタンアミン（２．３６ｇ、１８．００ｍｍｏｌ、１．０当量）、（１Ｓ，２Ｓ）−Ｎ１，Ｎ２−ジメチルシクロヘキサン−１，２−ジアミン（０．５６ｍＬ、３．６０ｍｍｏｌ、０．２当量）、アスコルビン酸ナトリウム（３５７ｍｇ、１．８０ｍｍｏｌ、０．１当量）、ヨウ化銅（５１４ｍｇ、２．７０ｍｍｏｌ、０．１５当量）、及び２−（２−アジドエトキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン（３．０８、１８．００ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物を窒素で５分間パージし、５５℃に一晩加熱した。反応混合物を室温に冷却し、セライトでろ過し、ＭｅＯＨ（３×５０ｍＬ）ですすいだ。溶剤を減圧下で除去し、残渣をジクロロメタンに再溶解させ、セライト（２０ｇ）を添加し、溶剤を減圧下で除去し、残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（１２０ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から２５％へと徐々に増加させて、（４−（１−（２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）フェニル）メタンアミン（２４、３．５１ｇ、６４％）を黄色がかった油として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ１６Ｈ２２Ｎ４Ｏ２についての計算値３０３．１８１６；実測値３０３．１８１４。
［Ｎ−（４−（１−（２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）ベンジル）メタクリルアミド（２５）のための実験手順］
Figure 2020534837
ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中の（４−（１−（２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）フェニル）メタンアミン（２４、１．５ｇ、４．９６ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（１．０４ｍＬ、７．４４ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液を、短時間の間排気し、窒素でフラッシュした。塩化メタクリロイル（０．７２ｍＬ、７．４４ｍｍｏｌ、１．５当量）を滴下して添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。十（１０）グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。１００％のヘキサンから開始し、ＥｔＯＡｃの濃度を徐々に１００％へと増加させる溶離剤としてヘキサン／ＥｔＯＡｃを用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（４０ｇ）によって残渣を精製して、Ｎ−（４−（１−（２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）ベンジル）メタクリルアミド（２５、０．９ｇ、４９％の収率）を無色の固体として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ Ｃ２０Ｈ２６Ｎ４Ｏ３についての計算値３７１．２０７８；実測値３７１．２０７６。
［１−（４−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）エタン−１−アミン（２６）のための実験手順］
Figure 2020534837
メタノール（９ｍＬ）及び水（１ｍＬ）中の１−（４−ヨードフェニル）エタン−１−アミン塩酸塩（１．０ｇ、４．０５ｍｍｏｌ、１．０当量）、（１Ｓ，２Ｓ）−Ｎ１，Ｎ２−ジメチルシクロヘキサン−１，２−ジアミン（０．０８ｍＬ ０．５３ｍｍｏｌ、０．１３当量）、アスコルビン酸ナトリウム（８０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ、０．１当量）、ヨウ化銅（７７ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ、０．１当量）、アジ化ナトリウム（５２６ｇ、８．０９ｍｍｏｌ、２．０当量）、及び２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン（０．５７ｇ、４．０５ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物を窒素で５分間パージし、５５℃に一晩加熱した。反応混合物を室温に冷却し、溶剤を減圧下で除去した。残渣をジクロロメタンに再溶解させ、セライトのプラグでろ過した。セライトをろ液に添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（４０ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から５％へと徐々に増加させて、１−（４−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）エタン−１−アミン（２６、０．６２ｇ、５１％）を黄色がかった固体として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ１６Ｈ２２Ｎ４Ｏ２についての計算値３０３．２；実測値３０３．２。
［Ｎ−（１−（４−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）エチル）メタクリルアミド（２７）のための実験手順］
Figure 2020534837
ＣＨ２Ｃｌ２（１１ｍＬ）中の１−（４−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）エタン−１−アミン（２６、０．５２ｇ、１．７ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（０．２９ｍＬ、２．１ｍｍｏｌ、１．２当量）の溶液を、氷浴で０℃に冷却し、塩化メタクリロイル（０．１８ｍＬ、１．８ｍｍｏｌ、１．０５当量、１１ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２で希釈される）を滴下して添加した。冷却浴を外し、反応を４時間撹拌した。五（５）グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（４０ｇ）によって精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から２．５％へと徐々に増加させて、Ｎ−（１−（４−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）エチル）メタクリルアミド（２７、０．４９ｇ、７６％の収率）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ２０Ｈ２６Ｎ４Ｏ３についての計算値３７１．２０７８；実測値３７１．２０８７。
［（４−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）メタンアミン（２８）のための実験手順］
Figure 2020534837
メタノール（２４ｍＬ）及び水（６ｍＬ）中の（４−ヨード−２−（トリフルオロメチル）フェニル）メタンアミン（３．０ｇ、９．９７ｍｍｏｌ、１．０当量）、（１Ｓ，２Ｓ）−Ｎ１，Ｎ２−ジメチルシクロヘキサン−１，２−ジアミン（０．３１ｍＬ １．９９ｍｍｏｌ、０．２当量）、アスコルビン酸ナトリウム（１９７ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ、０．１当量）、ヨウ化銅（２８５ｍｇ、１．４９ｍｍｏｌ、０．１５当量）、アジ化ナトリウム（１．３０ｇ、１９．９３ｍｍｏｌ、２．０当量）、Ｅｔ３Ｎ（１．６７ｍＬ、１１．９６ｍｍｏｌ、１．２当量）及び２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン（１．４０ｇ、９．９７ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物を窒素で５分間パージし、５５℃に一晩加熱した。反応混合物を室温に冷却し、セライトプラグに通してろ過し、メタノール（３×５０ｍＬ）ですすいだ。セライトをろ液に添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（１２０ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から２５％へと徐々に増加させて、（４−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）メタンアミン（２８、２．５３ｇ、７１％）を緑色の油として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ１６Ｈ１９Ｎ４Ｏ２Ｆ３についての計算値３５７．２；実測値３５７．１。
［Ｎ−（４−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−２（トリフルオロメチル）ベンジル）メタクリルアミド（２９）のための実験手順］
Figure 2020534837
ＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍＬ）中の（４−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）メタンアミン（２８、１．０ｇ、２．８１ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（０．５９ｍＬ、４．２１ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液を、短時間の間排気し、窒素でフラッシュした。塩化メタクリロイル（０．４１ｍＬ、４．２１ｍｍｏｌ、１．５当量）を滴下して添加した。反応混合物を室温で６時間撹拌した。十（１０）グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。１００％のヘキサンから開始し、ＥｔＯＡｃの濃度を徐々に１００％へと増加させる溶離剤としてヘキサン／ＥｔＯＡｃを用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（４０ｇ）によって残渣を精製して、Ｎ−（４−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−２（トリフルオロメチル）ベンジル）メタクリルアミド（２９、０．６５ｇ、５５％の収率）を無色の固体として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ２０Ｈ２３Ｎ４Ｏ３Ｆ３についての計算値４２５．２；実測値４２５．１。
［３−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）プロパン−１−アミン（３０）のための実験手順］
Figure 2020534837
メタノール（５０ｍＬ）及び水（６ｍＬ）中の３−アジドプロパン−１−アミン塩酸塩（１．５ｇ、１４．９８ｍｍｏｌ、１．０当量）、トリス［（１−ベンジル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−アミン（１．９９ｇ、３．７５ｍｍｏｌ、０．２５当量）、ヨウ化銅（０．２９ｇ、１．５０ｍｍｏｌ、０．１当量）、及びトリエチルアミン（０．５２ｍＬ、３．７５ｍｍｏｌ、０．２５当量）の混合物を窒素で５分間パージし、０Ｃに冷却した。２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン（２．１０ｇ、１４．９８ｍｍｏｌ、１．０当量）を添加し、反応混合物を５５℃に温め、窒素雰囲気下で一晩撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、セライトプラグでろ過し、メタノール（３×５０ｍＬ）ですすいだ。セライト（２０ｇ）をろ液に添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（１２０ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から２０％へと徐々に増加させて、３−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）プロパン−１−アミン（３０、２．３６ｇ、６６％）を得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ１１Ｈ２０Ｎ４Ｏ２についての計算値２４１．２；実測値２４１．２。
［Ｎ−（３−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）プロピル）メタクリルアミド（３１）のための実験手順］
Figure 2020534837
ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中の３−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）プロパン−１−アミン（３０、１．０ｇ、４．１６ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（０．５８ｍＬ、４．１６ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液を、短時間の間排気し、窒素でフラッシュした。塩化メタクリロイル（０．４０ｍＬ、４．１６ｍｍｏｌ、１．０当量）を滴下して添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。十（１０）グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（４０ｇ）によって精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から２０％へと徐々に増加させて、Ｎ−（３−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）プロピル）メタクリルアミド（３１、０．９６ｇ、７５％の収率）を無色の油として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ１５Ｈ２４Ｎ４Ｏ３についての計算値３０９．２；実測値３０９．４。
［（４−（４−（（オキセタン−３−イルオキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（３２）のための実験手順］
Figure 2020534837
メタノール（２４ｍＬ）及び水（６ｍＬ）中の（４−ヨードフェニル）メタンアミン塩酸塩（２．６４ｇ、９．８０ｍｍｏｌ、１．０当量）、（１Ｓ，２Ｓ）−Ｎ１，Ｎ２−ジメチルシクロヘキサン−１，２−ジアミン（０．３１ｍＬ １．９６ｍｍｏｌ、０．２当量）、アスコルビン酸ナトリウム（１９８ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ、０．１当量）、ヨウ化銅（２７９ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ、０．１５当量）、アジ化ナトリウム（１．２７ｇ、１９．５９ｍｍｏｌ、２．０当量）、Ｅｔ３Ｎ（１．６４ｍＬ、１１．７５ｍｍｏｌ、１．２当量）及び３−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）オキセタン（９、１．１０ｇ、９．８０ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物を窒素で５分間パージし、５５℃に一晩加熱した。反応混合物を室温に冷却し、セライトプラグに通してろ過し、メタノール（３×５０ｍＬ）ですすいだ。セライトをろ液に添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（１２０ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から２５％へと徐々に増加させて、（４−（４−（（オキセタン−３−イルオキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（３２、１．４３ｇ、５６％）を油として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ１３Ｈ１６Ｎ４Ｏ２についての計算値２６１．１３４６；実測値２６１．１３４２。
［Ｎ−（４−（４−（（オキセタン−３−イルオキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ベンジル）メタクリルアミド（３３）のための実験手順］
Figure 2020534837
ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中の（４−（４−（（オキセタン−３−イルオキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（３２、０．５８ｇ、２．２３ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（０．４７ｍＬ、３．３４ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液を、短時間の間排気し、窒素でフラッシュした。塩化メタクリロイル（０．３２ｍＬ、３．３４ｍｍｏｌ、１．５当量）を滴下して添加した。反応混合物を室温で６時間撹拌した。十（１０）グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。１００％のヘキサンから開始し、ＥｔＯＡｃの濃度を徐々に１００％へと増加させる溶離剤としてヘキサン／ＥｔＯＡｃを用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（２４ｇ）によって残渣を精製して、Ｎ−（４−（４−（（オキセタン−３−イルオキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ベンジル）メタクリルアミド（３３、０．４８ｇ、６６％の収率）を無色の固体として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ１７Ｈ２０Ｎ４Ｏ３についての計算値３２９．１６０８；実測値３２９．１６１１。
［エチル１−（２−メタクリルアミドエチル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボキシレート（３５）のための実験手順］
Figure 2020534837
ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中のエチル１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボキシレート（３４、２．０ｇ、１０．９１ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（３．８０ｍＬ、２７．２９ｍｍｏｌ、２．５当量）の溶液を、短時間の間排気し、窒素でフラッシュした。塩化メタクリロイル（１．６０ｍＬ、１６．３７ｍｍｏｌ、１．５当量）を滴下して添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌した。十五（１５）グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（４０ｇ）によって精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から２５％へと徐々に増加させて、エチル１−（２−メタクリルアミドエチル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボキシレート（３５、１．２８ｇ、４７％の収率）を無色の固体として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ１２Ｈ１７Ｎ３Ｏ３についての計算値２５２．１；実測値２５２．１。
［Ｎ−（４−（１，１−ジオキシドチオモルホリノ）ベンジル）メタクリルアミド（３７）のための実験手順］
Figure 2020534837
ＣＨ２Ｃｌ２（８０ｍＬ）中の４−（４−（アミノメチル）フェニル）チオモルホリン１，１−ジオキシド塩酸塩（３６、１．１５ｇ、４．１５ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（１．３９ｍＬ、９．９７ｍｍｏｌ、２．４当量）の溶液に、塩化メタクリロイルの溶液（０．４３ｍＬ、４．３６ｍｍｏｌ、１．０５当量、ＣＨ２Ｃｌ２中、５ｍＬ）を滴下して添加した。反応混合物を室温で２２時間撹拌した。八（８）グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（８０ｇ）によって精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から３．７５％へと徐々に増加させて、Ｎ−（４−（１，１−ジオキシドチオモルホリノ）ベンジル）メタクリルアミド（３７、０．３２ｇ、２５％の収率）を固体として得た。
［Ｎ−メチル−Ｎ−（２−（メチルスルホニル）エチル）プロパ−２−イン−１−アミン（３８）のための実験手順］
Figure 2020534837
１−メチルスルホニルエチレン（４．９９ｇ、４７．０３ｍｍｏｌ、４．１３ｍＬ）及びＡｍｂｅｒｌｙｓｔ−１５（（３０％ ｗ／ｗ））の混合物に、Ｎ−メチルプロパ−２−イン−１−アミン（２．６ｇ、３７．６２ｍｍｏｌ）を滴下して添加した。混合物を室温で１２時間撹拌した。触媒をろ過によって除去し、ろ液を減圧下で濃縮して、Ｎ−メチル−Ｎ−（２−（メチルスルホニル）エチル）プロパ−２−イン−１−アミン（３８、６．４３ｇ、９８％）を油として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ７Ｈ１３ＮＳＯ２についての計算値１７６．１１；実測値１７６．１。
［Ｎ−（（１−（２−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）−Ｎ−メチル−２−（メチルスルホニル）エタン−１−アミン（４０）のための実験手順］
Figure 2020534837
メタノール（５０ｍＬ）及び水（６ｍＬ）中のＮ−メチル−Ｎ−（２−（メチルスルホニル）エチル）プロパ−２−イン−１−アミン（３８、５．０２ｇ、２８．６４ｍｍｏｌ、１．２５当量）、トリス［（１−ベンジル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−アミン（３．０４ｇ、５．７３ｍｍｏｌ、０．２５当量）、ヨウ化銅（４３６ｍｇ、２．２９ｍｍｏｌ、０．１当量）、及びトリエチルアミン（０．８ｍＬ、５．７ｍｍｏｌ、０．２５当量）の混合物を排気し、窒素で（３回）フラッシュし、氷浴で冷却した。２−（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン−１−アミン（３９、５．０２ｇ、２２．９１ｍｍｏｌ、１．０当量）を滴下して添加し、冷却浴を外し、混合物を５分間撹拌した。反応を５５℃に温め、窒素雰囲気下で一晩撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、セライト（２０ｇ）を添加し、減圧下で濃縮した。粗生成物を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（２２０ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から２５％へと徐々に増加させて、Ｎ−（（１−（２−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）−Ｎ−メチル−２−（メチルスルホニル）エタン−１−アミン（４０、４．９８ｇ、５５％）を油として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ１５Ｈ３１Ｎ５Ｏ５Ｓについての計算値３９４．２；実測値３９４．２。
［実験手順Ｎ−（２−（２−（２−（２−（４−（（メチル（２−（メチルスルホニル）エチル）アミノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）メタクリルアミド（４１）］
Figure 2020534837
ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）中のＮ−（（１−（２−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）−Ｎ−メチル−２−（メチルスルホニル）エタン−１−アミン（４０、１．０ｇ、２．５４ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（０．４３ｍＬ、３．０５ｍｍｏｌ、１．２当量）の溶液に、塩化メタクリロイル（０．３０ｍＬ、３．０５ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液を滴下して添加した。反応混合物を室温で５時間撹拌した。セライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（４０ｇ）によって精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から１２．５％へと徐々に増加させて、Ｎ−（２−（２−（２−（２−（４−（（メチル（２−（メチルスルホニル）エチル）アミノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）メタクリルアミド（４１、０．８６ｇ、７３％の収率）を油として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ１９Ｈ３５Ｎ５Ｏ６Ｓについての計算値４６２．２；実測値４６２．２。
［７−（プロパ−２−イン−１−イル）−２−オキサ−７−アザスピロ［３．５］ノナン（４２）のための実験手順］
Figure 2020534837
３−ブロモプロパ−１−イン（４．４ｍＬ、３９．３２ｍｍｏｌ １．０当量）を、メタノール（２００ｍＬ）中の２−オキサ−７−アザスピロ［３．５］ノナン（８．５４ｇ、３９．３２ｍｍｏｌ、１．０当量）、炭酸カリウム（１７．９ｇ、１２９．７ｍｍｏｌ、３．３当量）の混合物に添加し、室温で一晩撹拌した。混合物をろ過し、セライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／メタノールを用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（２２０ｇ）によって精製した。メタノールの濃度を、０％から５％へと徐々に増加させて、７−（プロパ−２−イン−１−イル）−２−オキサ−７−アザスピロ［３．５］ノナン（４２、４．４４ｇ、６８％）を油として得た。
［２−（２−（２−（２−（４−（（２−オキサ−７−アザスピロ［３．５］ノナン−７−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン−１−アミン（４３）のための実験手順］
Figure 2020534837
メタノール（５０ｍＬ）中の７−（プロパ−２−イン−１−イル）−２−オキサ−７−アザスピロ［３．５］ノナン（４２、２．５ｇ、１５．１３ｍｍｏｌ、１．０当量）、トリス［（１−ベンジル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−アミン（１．７７ｇ、３．３３ｍｍｏｌ、０．２２当量）、ヨウ化銅（２８８ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ、０．１当量）、及びトリエチルアミン（０．５３ｍＬ、３．８ｍｍｏｌ、０．２５当量）の混合物を氷浴で冷却した。２−（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン−１−アミン（３９、３．８６ｇ、１７．７０ｍｍｏｌ、１．１７当量）を滴下して添加し、冷却浴を外し、混合物を５分間撹拌した。反応を５５℃に温め、窒素雰囲気下で一晩撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、セライト（１０ｇ）を添加し、減圧下で濃縮した。粗生成物を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（２２０ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から１０％へと徐々に増加させて、２−（２−（２−（２−（４−（（２−オキサ−７−アザスピロ［３．５］ノナン−７−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン−１−アミン（４３、４．７６ｇ、８２％）を油として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ１８Ｈ３３Ｎ５Ｏ４についての計算値３８４．３；実測値３８４．２。
［Ｎ−（２−（２−（２−（２−（４−（（２−オキサ−７−アザスピロ［３．５］ノナン−７−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）メタクリルアミド（４４）のための実験手順］
Figure 2020534837
ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中の２−（２−（２−（２−（４−（（２−オキサ−７−アザスピロ［３．５］ノナン−７−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン−１−アミン（４３、２．６５ｇ、６．９１ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（１．１６ｍＬ、８．２９ｍｍｏｌ、１．２当量）の溶液を、窒素雰囲気下で、氷浴で冷却した。塩化メタクリロイル（０．７４ｍＬ、７．６ｍｍｏｌ、１．１当量）を滴下して添加した。冷却浴を外し、反応混合物を室温で４時間撹拌した。十（１０）グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／メタノールを用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（１２０ｇ）によって精製した。メタノールの濃度を、０％から１０％へと徐々に増加させて、Ｎ−（２−（２−（２−（２−（４−（（２−オキサ−７−アザスピロ［３．５］ノナン−７−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）メタクリルアミド（４４、１．５０ｇ、４８％の収率）を無色の油として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ２２Ｈ３７Ｎ５Ｏ５についての計算値４５２．２９；実測値４５２．２５。
［４−（（１−（２−（２−アミノエトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）チオモルホリン１，１−ジオキシド（４５）のための実験手順］
Figure 2020534837
メタノール（２０ｍＬ）中の４−（プロパ−２−イン−１−イル）チオモルホリン１，１−ジオキシド（１．１４ｇ、６．５８ｍｍｏｌ、１．０当量）、トリス［（１−ベンジル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−アミン（７６８ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ、０．２２当量）、ヨウ化銅（１２５ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ、０．１当量）、及びトリエチルアミン（０．２３ｍＬ、１．６５ｍｍｏｌ、０．２５当量）の混合物を氷浴で冷却した。２−（２−アジドエトキシ）エタン−１−アミン（１．００ｇ、７．７０ｍｍｏｌ、１．１７当量）を滴下して添加し、冷却浴を外し、混合物を５分間撹拌した。反応を５５℃に温め、窒素雰囲気下で一晩撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、セライト（１０ｇ）を添加し、減圧下で濃縮した。粗生成物を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（４０ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から９．５％へと徐々に増加させて、４−（（１−（２−（２−アミノエトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）チオモルホリン１，１−ジオキシド（４５、１．８６ｇ、９３％）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ１１Ｈ２１Ｎ５Ｏ４Ｓについての計算値３０４．１４３８；実測値３０４．１４４５。
［Ｎ−（２−（２−（４−（（１，１−ジオキシドチオモルホリノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エチル）メタクリルアミド（４６）のための実験手順］
Figure 2020534837
ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中の４−（（１−（２−（２−アミノエトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）チオモルホリン１，１−ジオキシド（４５、１．３２ｇ、４．３５ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（０．７３ｍＬ、５．２２ｍｍｏｌ、１．２当量）の溶液を、窒素雰囲気下で、氷浴で冷却した。塩化メタクリロイル（０．４７ｍＬ、４．８ｍｍｏｌ、１．１当量）を滴下して添加した。冷却浴を外し、反応混合物を室温で４時間撹拌した。十（１０）グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（１２０ｇ）によって精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から１．２５％へと徐々に増加させて、Ｎ−（２−（２−（４−（（１，１−ジオキシドチオモルホリノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エチル）−メタクリルアミド（４６、０．９０ｇ、５６％の収率）を無色の油として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ１５Ｈ２５Ｎ５Ｏ４Ｓについての計算値３７２．１７；実測値３７２．１５。
［４−（（１−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）チオモルホリン１，１−ジオキシド（４７）のための実験手順］
Figure 2020534837
メタノール（８０ｍＬ）中の４−（プロパ−２−イン−１−イル）チオモルホリン１，１−ジオキシド（４．６ｇ、２６．５５ｍｍｏｌ、１．０当量）、トリス［（１−ベンジル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−アミン（３．１ｇ、５．８４ｍｍｏｌ、０．２２当量）、ヨウ化銅（５０６ｍｇ、２．６６ｍｍｏｌ、０．１当量）、及びトリエチルアミン（０．９３ｍＬ、６．６４ｍｍｏｌ、０．２５当量）の混合物を氷浴で冷却した。２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エタン−１−アミン（５．００ｇ、２８．６８ｍｍｏｌ、１．０８当量）を滴下して添加し、冷却浴を外し、混合物を５分間撹拌した。反応を５５℃に温め、窒素雰囲気下で一晩撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、セライトを添加し、減圧下で濃縮した。粗生成物を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（２２０ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から１０％へと徐々に増加させて、４−（（１−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）チオモルホリン１，１−ジオキシド（４７、５．２６ｇ、５７％）を黄色がかった油として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ１３Ｈ２５Ｎ５Ｏ４Ｓについての計算値３４８．１７００；実測値３４８．１７００。
［実験手順Ｎ−（２−（２−（２−（４−（（１，１−ジオキシドチオモルホリノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エチル）メタクリルアミド（４８）］
Figure 2020534837
ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中の４−（（１−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）チオモルホリン１，１−ジオキシド（４７、１．４９ｇ、４．２９ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（０．７２ｍＬ、５．１５ｍｍｏｌ、１．２当量）の溶液を、窒素雰囲気下で、氷浴で冷却した。塩化メタクリロイル（０．４６ｍＬ、４．７ｍｍｏｌ、１．１当量）を滴下して添加した。冷却浴を外し、反応混合物を室温で４時間撹拌した。十（１０）グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／メタノールを用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（８０ｇ）によって精製した。メタノールの濃度を、０％から５％へと徐々に増加させて、Ｎ−（２−（２−（２−（４−（（１，１−ジオキシドチオモルホリノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エチル）−メタクリルアミド（４８、０．６７ｇ、３８％の収率）を無色の油として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ１７Ｈ２９Ｎ５Ｏ５Ｓについての計算値４１６．２０；実測値４１６．２０。
［４−（（１−（１４−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）チオモルホリン１，１−ジオキシド（４９）のための実験手順］
Figure 2020534837
メタノール（９０ｍＬ）中の４−（プロパ−２−イン−１−イル）チオモルホリン１，１−ジオキシド（５．０ｇ、２８．８６ｍｍｏｌ、１．０当量）、トリス［（１−ベンジル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−アミン（３．３７ｇ、６．３５ｍｍｏｌ、０．２２当量）、ヨウ化銅（５５０ｍｇ、２．８９ｍｍｏｌ、０．１当量）、及びトリエチルアミン（１．０１ｍＬ、７．２２ｍｍｏｌ、０．２５当量）の混合物を、氷浴で冷却した。１４−アジド−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカン−１−アミン（８．８６ｇ、３３．７７ｍｍｏｌ、１．１７当量）を滴下して添加し、冷却浴を外し、混合物を５分間撹拌した。反応を５５℃に温め、窒素雰囲気下で一晩撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、セライト（１５ｇ）を添加し、減圧下で濃縮した。粗生成物を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（２２０ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から１０％へと徐々に増加させて、４−（（１−（１４−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）チオモルホリン１，１−ジオキシド（４９、７．５６ｇ、６０％）を油として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ１７Ｈ３３Ｎ５Ｏ６Ｓについての計算値４３６．２２２４；実測値４３６．２２２８。
［実験手順Ｎ−（１４−（４−（（１，１−ジオキシドチオモルホリノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデシル）メタクリルアミド（５０）］
Figure 2020534837
ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中の４−（（１−（１４−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）チオモルホリン１，１−ジオキシド（４９、１．９５ｇ、４．７９ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（０．８０ｍＬ、５．７４ｍｍｏｌ、１．２当量）の溶液を、窒素雰囲気下で、氷浴で冷却した。塩化メタクリロイル（０．５１ｍＬ、５．２６ｍｍｏｌ、１．１当量）を滴下して添加した。冷却浴を外し、反応混合物を室温で４時間撹拌した。十（１０）グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／メタノールを用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（８０ｇ）によって精製した。メタノールの濃度を、０％から５％へと徐々に増加させて、Ｎ−（１４−（４−（（１，１−ジオキシドチオモルホリノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデシル）メタクリルアミド（５０、０．７６ｇ、３２％の収率）を無色の油として得た。ＬＣＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ２１Ｈ３７Ｎ５Ｏ７Ｓについての計算値５０４．２５；実測値５０４．２０。
［実施例４：細胞カプセル化のためのアルギン酸塩の化学修飾］
ポリマー材料が、実施例５において後述される活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）のカプセル化の前に、式（Ｉ）の化合物（又はその薬学的に許容可能な塩）で化学修飾され得る。ポリマー材料の修飾のための例示的な化合物の合成プロトコルが、実施例３において上に概説される。これらの化合物、又はその他が、任意のポリマー材料を化学修飾するのに使用され得る。
ポリマー材料が、当該技術分野において公知の方法を用いて、本明細書に記載のデバイス（例えば、本明細書に記載のヒドロゲルカプセル）の形成の前に、式（Ｉ）の化合物（又はその薬学的に許容可能な塩）で化学修飾され得る。
例えば、アルギン酸塩の場合、アルギン酸塩カルボン酸が、抗線維化化合物（ａｆｉｂｒｏｔｉｃ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）、例えば、式（Ｉ）の化合物で修飾されたアルギン酸塩を得るために１つ以上のアミン官能化化合物に対するカップリングのために活性化される。アルギン酸塩ポリマーを、水（３０ｍＬ／グラムポリマー）に溶解させ、２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン（０．５当量）Ｎ−メチルモルホリン（１当量）で処理する。この混合物に、アセトニトリル（０．３Ｍ）中の対象とする化合物（例えば、表２に示される化合物１０１）の溶液を添加する。
添加される化合物及びカップリング試薬の量は、アルギン酸塩に結合される化合物の所望の濃度、例えば、結合密度に応じて決まる。ＣＭ−ＬＭＷ−Ａｌｇ−１０１−Ｍｅｄｉｕｍポリマー溶液を調製するために、溶解された非修飾低分子量アルギン酸塩（およその分子量＜７５ｋＤａ、Ｇ：Ｍ比≧１．５）を、２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン（５．１ｍｍｏｌ／ｇアルギン酸塩）及びＮ−メチルモルホリン（１０．２ｍｍｏｌ／ｇアルギン酸塩）及び化合物１０１（５．４ｍｍｏｌ／ｇアルギン酸塩）で処理する。ＣＭ−ＬＭＷ−Ａｌｇ−１０１−Ｈｉｇｈポリマー溶液を調製するために、溶解された非修飾低分子量アルギン酸塩（およその分子量＜７５ｋＤａ、Ｇ：Ｍ比≧１．５）を、２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン（５．１ｍｍｏｌ／ｇアルギン酸塩）及びＮ−メチルモルホリン（１０．２ｍｍｏｌ／ｇアルギン酸塩）及び化合物１０１（５．４ｍｍｏｌ／ｇアルギン酸塩）で処理する。
反応を５５℃に１６時間温め、次いで室温に冷却し、ロータリー蒸発で穏やかに濃縮し、次いで、残渣を水に溶解させる。混合物をシアノ修飾シリカゲル（Ｓｉｌｉｃｙｃｌｅ）ベッドを通してろ過し、ろ過ケーキを水で洗浄する。次いで、得られる溶液を、十分に透析し（１０，０００ＭＷＣＯメンブラン）、アルギン酸塩溶液を、凍結乾燥によって濃縮して、所望の化学修飾アルギン酸塩を固体として得るか、又は２５ｃＰ〜３５ｃＰの粘度を有する化学修飾アルギン酸塩溶液を生成するのに好適な任意の技術を用いて濃縮する。
化学修飾アルギン酸塩の結合密度を、窒素パーセントの燃焼分析によって測定する。化学修飾アルギン酸塩の溶液を、水に対して２４時間透析し（１０，０００ＭＷＣＯメンブラン）、水を２回交換した後、一定重量になるまで凍結乾燥することによって、サンプルを調製する。
以下の実施例に記載されているヒドロゲルカプセルを生成するのに使用するために、窒素パーセントの燃焼分析によって決定される際、中程度（２％〜５％のＮ）又は高（５．１％〜８％のＮ）密度の低分子量アルギン酸塩（およその分子量＜７５ｋＤａ、Ｇ：Ｍ比≧１．５）に結合された化合物１０１（表１に示される）（本明細書において、ＣＭ−ＬＭＷ−Ａｌｇ−１０１−Ｍｅｄｉｕｍ及びＣＭ−ＬＭＷ−Ａｌｇ−１０１−Ｈｉｇｈと称される）を用いて、化学修飾アルギン酸塩ポリマーを調製した。別段の定めがある場合を除き、以下の実施例で作製されるカプセル中の化学修飾アルギン酸塩は、ＣＭ−ＬＭＷ−Ａｌｇ−１０１−Ｍｅｄｉｕｍである。
［実施例５：インサイツカプセル化移植可能要素の形成］
本明細書に記載のプロトコルに従って、活性細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）クラスターを、アルギン酸塩中にカプセル化して、ヒドロゲルカプセルとして構成されるインサイツカプセル化移植可能要素を形成した。カプセル化用のアルギン酸塩は、非修飾高分子量アルギン酸塩（ＰＲＯＮＯＶＡ（商標）ＳＬＧ１００，ＮｏｖａＭａｔｒｉｘ，Ｓａｎｄｖｉｋａ，Ｎｏｒｗａｙ，ｃａｔ．＃４２０２１０６、１５０ｋＤａ〜２５０ｋＤａのおよその分子量、Ｇ：Ｍ比≧１．５）及びＴＭＴＤ修飾アルギン酸塩（低分子量アルギン酸塩である）（ＰＲＯＮＯＶＡ（商標）ＶＬＶＧアルギン酸塩、ＮｏｖａＭａｔｒｉｘ（登録商標）Ｃａｔ．＃４２００５０６、およその分子量＜７５ｋＤａ、Ｇ：Ｍ比≧１．５）（実施例４に記載されるプロセスと同様のプロセスを用いて、表１からの化合物１０１で化学修飾される）の混合物であった。ＴＭＴＤ−アルギン酸塩を、０．８％の生理食塩水又は０．９％の生理食塩水に、重量体積比５％で最初に溶解させ、次いで、８０％のＴＭＴＤアルギン酸塩対２０％のＳＬＧ１００又は７０％のＴＭＴＤアルギン酸塩対３０％のＳＬＧ１００の体積比で重量体積比３％のＳＬＧ１００（同様にそれぞれ０．８％の生理食塩水又は０．９％の生理食塩水に溶解される）とブレンドした。
インサイツカプセル化移植可能要素の作製の前に、緩衝液を、オートクレーブ法によって滅菌し、アルギン酸塩溶液を、無菌プロセスを用いて０．２μｍフィルタに通したろ過によって滅菌した。静電液滴生成装置を以下のように設定した：ＥＳシリーズ０〜１００ｋＶ、２０ワット高電圧発電機（Ｇａｍｍａ ＥＳ ｓｅｒｉｅｓ，Ｇａｍｍａ Ｈｉｇｈ−Ｖｏｌｔａｇｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ＦＬ，ＵＳＡ）を、平滑先端針（ＳＡＩ Ｉｎｆｕｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＩＬ，ＵＳＡ）の上部及び下部に連結した。この針を、５ｍｌのルアーロックシリンジ（ＢＤ，ＮＪ，ＵＳＡ）に取り付け、垂直に配向されたシリンジポンプ（Ｐｕｍｐ １１ Ｐｉｃｏ Ｐｌｕｓ，Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ，ＭＡ，ＵＳＡ）に留め付けた。シリンジポンプは、アルギン酸塩を、２０ｍＭのバリウム架橋溶液（２５ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液、２０ｍＭのＢａＣｌ２、及び０．２Ｍのマンニトール）を含むガラス皿中へとくみ出した。いくつかの実験では、架橋溶液は、０．０１％のポロキサマー１８８も含んでいた。ＰｉｃｏＰｌｕｓシリンジポンプの設定は、直径１２．０６ｍｍであり、ヒドロゲルカプセルの目標サイズに応じて約０．１６ｍＬ／分〜０．２ｍｌ／分の流量であった。インサイツカプセル化移植可能要素（０．５ｍｍの球体サイズ）を、２５Ｇ平滑針、５ｋＶの電圧及び２００μｌ／分の流量を用いて生成した。１．５ｍｍの球体（例えば、カプセル）の形成のために、１８ゲージの平滑先端針（ＳＡＩ Ｉｎｆｕｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を、０．１６ｍＬ／分又は１０ｍＬ／時の流量で、１０秒に１２滴になるまで電圧を５〜９ｋＶの範囲内で調整しながら使用した。
カプセル化の直前に、培養された単一細胞（実質的に、実施例１に記載されるように調製される）、活性細胞クラスター（実質的に、実施例２Ａに記載されるように調製される）、又はマイクロキャリア上の細胞（実質的に、実施例２Ｂに記載されるように調製される）を、１分間にわたって１，４００ｒ．ｐ．ｍ．で遠心分離し、カルシウムフリークレブス・ヘンゼライト（ＫＨ）緩衝液（４．７ｍＭのＫＣｌ、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、１．２ｍＭのＫＨ２ＰＯ４、１．２ｍＭのＭｇＳＯ４×７Ｈ２Ｏ、１３５ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ≒７．４、≒２９０ｍＯｓｍ）で洗浄した。洗浄した後、細胞を再度遠心分離し、上清のすべてを吸引した。次いで、細胞ペレットを、ある範囲の単一細胞、クラスター又はマイクロキャリア密度（例えば、アルギン酸塩溶液ｍｌ当たりの単一細胞若しくはクラスターの数又はマイクロキャリアの体積）で、ＴＭＴＤアルギン酸塩：ＳＬＧ１００溶液（上述される）のうちの１つの中で再懸濁させた。インサイツカプセル化移植可能要素を、ＢａＣｌ２架橋溶液を用いて架橋させ、それらのサイズを、上述されるように制御した。架橋の直後に、インサイツカプセル化移植可能要素（ヒドロゲルカプセル）を、ＨＥＰＥＳ緩衝液（ＮａＣｌ １５．４２８ｇ、ＫＣｌ ０．７０ｇ、ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ ０．４８８ｇ、２リットルの脱イオン水中の５０ｍｌのＨＥＰＥＳ（１Ｍ）緩衝液（Ｇｉｂｃｏ，Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ））で４回洗浄し、使用するまで４℃で貯蔵した。形成後且つ使用前に、インサイツカプセル化移植可能要素を、光学顕微鏡法によって分析して、サイズを測定し、カプセル品質を評価した。
カプセル組成物中のカプセルの品質を調べるために、少なくとも２００個のカプセルを含有するアリコートを組成物から取り、ウェルプレートに移し、アリコート全体を、合計のうちの球状カプセルの数を計数することによって、品質について光学顕微鏡法によって調べた。
［実施例６：インサイツカプセル化移植可能要素からの第ＶＩＩＩ〜ＢＤＤ因子の分泌］
ＡＲＰＥ−１９細胞を、標準的なトランスフェクション技術を用いて、ヒト第ＶＩＩＩ〜ＢＤＤ因子をコードするベクターでトランスフェクトした。ベクターは、ゼオシン（ｚｅｏｃｉｎ）耐性遺伝子も含んでいた。トランスフェクションの２日後、細胞株を、ゼオシンが補充された完全成長培地中で、３７℃で単一細胞として培養し、次いで、培養された細胞を、実施例５に概説されるように、１．５ｍｍのアルギン酸塩の移植可能な要素中に単一細胞としてカプセル化した。
利用可能な第ＶＩＩＩ〜ＢＤＤ因子の量を決定するために、カプセル化細胞（Ｃａｐ）を遠沈し、上清を収集し、トランスフェクションの４時間、２４時間、４８時間、及び７２時間後にヒト第ＶＩＩＩ〜ＢＤＤ因子の存在についてＥＬＩＳＡ（ＶｉｓｕＬｉｚｅ ＦＶＩＩＩ Ａｎｔｉｇｅｎ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ，Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）によって分析した。これらの結果が、非カプセル化活性細胞（ＲＰＥ細胞、培養物）と比較され、図１に示される。
図２Ａ〜２Ｂに示されるように、移植可能な要素を、細胞生存率を評価するために、顕微鏡法によってさらに調べた。図示されるように、第ＶＩＩＩ〜ＢＤＤ因子を発現する活性細胞を含む移植可能な要素は、実験の期間を通して高い生存率を示す。
［実施例７：インビボでのカプセル化移植可能要素の評価］
組み換え活性細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）を含むカプセル化移植可能要素を、以下の手順に従って、マウス中で評価した。
準備：１〜４％イソフルオラン＋酸素の連続流（０．５Ｌ／ｍｉｎ）により麻酔下とすることにより、手術のためのマウスの準備を行った。手術前に、すべてのマウスに、前外科的鎮痛薬として０．０５〜０．１ｍｇ／ｋｇ（体重）の投与量のブプレノルフィンを皮下投与し、一緒に、脱水を防ぐために０．５ｍｌの０．９％生理食塩水を皮下に与えた。サイズ＃４０のバリカン刃のシェーバを用いて毛を除去して、動物の腹部における腹側正中線上において、約２ｃｍ×２ｃｍの領域を露わにした。ポビドンヨードで最低でも３回拭き（可能である場合には切開部位の中心から遠心方向外側に向けて）、続いて、７０％アルコールですすぐことにより、剃毛した領域全体の前無菌処理をした。最後に皮膚へのポビドンヨードの塗布も行った。テーブルの上面を７０％エタノールで消毒した後、手術部位を使い捨ての無菌紙でドレープをかけて、手術部位に周囲の毛が接触することを防止した。術者は、適切なＰＰＥ、更衣及びサージカルグローブを用いた。
外科手技：鋭利な手術用ブレード又はハサミを用いて、被検体であるマウスの皮膚及び腹白線から、腹部に、０．５〜０．７５ｃｍの正中切開で切開した。外科医は、切開を可能な限り小さく維持するよう試みた。０．７５ｃｍが、可能な最大切開サイズである。滅菌したプラスチックピペットを用いて、アルギン酸塩マイクロカプセル（細胞を含むか又は含まない）を腹膜腔に移植した。腹筋を５−０ Ｅｔｈｉｃｏｎ ｂｌａｃｋ ｓｉｌｋ又はＰＤＳ吸収性５．０−６．０モノフィラメント吸収性縫合糸で縫合して閉じ、外表皮膚層を、創傷クリップを用いて閉じた。これらの創傷クリップを、手術の７〜１０日後、完全な治癒が確認された後に取り外した。手技間に手術用器具から血液及び組織片を取り除き、機器も、ホットビーズ滅菌器を用いて動物間に再滅菌した。手術後に、動物を加熱パッド上又は加熱ランプ下のケージに戻し、麻酔から回復するまで監視した。
手術中の看護：Ｄｅｌｔａｐｈａｓｅ ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ ｐａｄを用いて動物を保温した。手術時間中、動物の両眼に無菌眼軟膏で水分を補給した。低体温症を防ぐために、手術部位を過剰に濡らさないよう注意をした。呼吸数及び特性を連続的に監視した。バイタルサインが極度な疼痛及び苦痛を示す場合、動物を頚椎脱臼により安楽死させた。
手術後の所望の時点で、動物を、ＣＯ２窒息により安楽死させ、アルギン酸塩カプセルを腹腔洗浄によって収集した。
これらの実験において使用される例示的なマウス株としては、ＡＫＸＬ３７／ＴｙＪ；第ＩＸ因子欠損株Ｂ６．１２９Ｐ２−Ｆ９ｔｍ１Ｄｗｓ／Ｊ；Ｂｉ，Ｌ ｅｔ ａｌ（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ １０：１１９−１２１）に記載されている第ＶＩＩＩ因子欠損株；α−ガラクトシダーゼ株Ｂ６；Ｏｈｓｈｉｍａ，Ｔ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｐｒｏｃ Ｎａｔ’ｌ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９４：２５４０−２５４４）に記載されている１２９−Ｇｌａｔｍ１Ｋｕｌ／Ｊ；及びＬｉｎ，Ｈ−Ｆ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｂｌｏｏｄ ９０：３９６２−３９６６に記載されている第ＩＸ因子欠損株が挙げられる。
［実施例８：組み換え活性細胞のカプセル化構造の比較］
単一の組み換え活性細胞（例えば、単一のＲＰＥ細胞又は単一のＲＰＥ細胞誘導体）、組み換え活性細胞のクラスター（例えば、組み換えＲＰＥ細胞のクラスター又はＲＰＥ細胞誘導体のクラスター）、及びマイクロキャリアに結合された組み換え活性細胞（例えば、マイクロキャリアに結合された組み換えＲＰＥ細胞）のアルギン酸塩ヒドロゲルカプセルへのカプセル化を比較する試験を、治療薬（例えば、タンパク質）の産生及び細胞生存率を調べるために行う。最大細胞負荷を、各構造について決定し、構造間の比較を、各構造について等しい細胞負荷で及び最大の細胞負荷で行う。細胞負荷、生存率、形態及びタンパク質分泌を、インビトロ及びインビボで評価する。インビボ薬物動態分析のために、実施例７に概説されるプロトコルに従って、カプセルを、マウスの腹腔内（ＩＰ）に移植し、規定の時点で、ＥＬＩＳＡによって血液中のタンパク質を検出し、カプセルを外植して、細胞生存率を決定した。
実施例５に記載されるように、上記の試験が、ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤタンパク質を発現するように組み換えられ、且つ１．５ｍｍのヒドロゲルカプセル中にカプセル化されたＡＲＰＥ−１９細胞を用いて行われた場合、細胞が単一細胞としてカプセル化されるか、細胞のクラスターとしてカプセル化されるか又はマイクロキャリアに結合された細胞としてカプセル化されるかにかかわらず、ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤ発現レベル及び細胞生存率は実質的に同じであった（データは示されていない）。
［実施例９：非組み換え活性細胞のカプセル化構造の比較］
細胞充填密度、細胞生存率及びカプセル品質に対する細胞構造の影響を、以下の構造：単一細胞、スフェロイドクラスター、Ｃｙｔｏｄｅｘ（登録商標）１マイクロキャリア上の細胞（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｃ０６４６）、Ｃｕｌｔｉｓｐｈｅｒ（登録商標）−Ｓマイクロキャリア上の細胞（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｍ９０４３）のうちの１つの中にＡＲＰＥ−１９野生型細胞（すなわち、非組み換え）をカプセル化したアルギン酸塩ヒドロゲルカプセル（１．５ｍｍ）を用いて調べた。
７０％のＴＭＴＤアルギン酸塩対３０％のＳＬＧ１００の体積比でブレンドし、次いで、様々な濃度のＡＲＰＥ−１９構造の１つをアルギン酸塩溶液中で懸濁させることによって、アルギン酸塩溶液を調製したことを除いて実施例５に記載されるように、ヒドロゲルカプセルを、アルギン酸塩溶液（修飾アルギン酸塩及び非修飾アルギン酸塩の混合物）から形成した。ヒドロゲルカプセルの組成物を、以下の懸濁液から調製した：（１）１０００万、１５００万、２０００万、３０００万、４０００万又は５０００万個の細胞／ｍｌアルギン酸塩溶液（Ｍ／ｍｌ）の単一の細胞懸濁液；３０００万、４０００万、５０００万、７５００万及び１億個の細胞／ｍｌアルギン酸塩溶液（Ｍ／ｍｌ）のスフェロイド懸濁液；１：８、１：４、１：２、１：１．５、１：１及び１：０．５の体積比（ペレット化されたマイクロキャリアのミリリットル：アルギン酸塩溶液のミリリットル）を有するＣｙｔｏｄｅｘマイクロキャリア懸濁液；１：１４、１：１０、１：８、１：６、１：４及び１：２の体積比（ペレット化されたマイクロキャリアのｍＬ：ｍＬアルギン酸塩溶液）を有するＣｕｌｔｉＳｐｈｅｒマイクロキャリア懸濁液。
ヒドロゲルカプセル組成物のそれぞれのアリコートを、ウェルプレートに入れ、ウェルプレートを、数時間にわたって３７℃で、培養器中で貯蔵し、次いで、カプセル化された細胞の生存率を、生細胞／死細胞染色（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＃Ｌ３２２４）、続いて、４倍の倍率での蛍光顕微鏡法を用いた染色された細胞の視覚化（生存細胞は緑色に染色され、死細胞は赤色に染色される）によって評価した。少なくとも１００カプセルのアリコートを調べ、アリコート中の球状カプセルのパーセンテージを計算することによって、カプセル品質を決定した。カプセル当たりの生存細胞の数を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）２．０ Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ９２４２）によって決定した。これらの評価の結果が、図５（単一細胞）、図６（スフェロイド）、図７（Ｃｙｔｏｄｅｘマイクロキャリア）及び図８（Ｃｕｌｔｉｓｐｈｅｒマイクロキャリア）に示される。
図５Ａに示されるように、生存細胞を含む球状カプセルが、すべての単一細胞懸濁液濃度で形成された。しかしながら、カプセル化された細胞の濃度が増加するにつれて、カプセル調製物の全体的な品質が、１０Ｍ／ｍｌについてほぼ１００％の球状カプセルから５０Ｍ／ｍｌについて９０％未満の球状カプセルへと低下された（図５Ｂ）。カプセル当たりの生存細胞の数は、アルギン酸塩溶液中の細胞負荷の増加と共に増加したが；これは、カプセル品質に低下に相当していた（図５Ｃ）。
ヒドロゲルカプセルが、スフェロイドクラスターの懸濁液を用いて調製された場合、図６Ａに示されるように、生存細胞を含む球状カプセルが、すべての細胞濃度で形成された。しかしながら、カプセル化された細胞の濃度が増加するにつれて、カプセル調製物の全体的な品質が、３０Ｍ／ｍｌについて９７％の球状カプセルから１００Ｍ／ｍｌについて約９３％の球状カプセルへと低下された（図６Ｂ）。カプセル当たりの生存細胞の数は、アルギン酸塩溶液中の細胞負荷の増加と共に増加したが；生存細胞の最大数は、５０Ｍ／ｍｌの中間の細胞濃度で観察され、これは、＞９８％の球状カプセルも有していた。カプセル品質は、細胞数と直接相関していなかった（図６Ｃ）。
図７Ａ及び図８Ａに示されるように、生存細胞を含む球状カプセルは、試験されるマイクロキャリア濃度のそれぞれからも形成された。
しかしながら、図７Ｂに示されるように、調製物中のカプセルの全体的な品質は、Ｃｙｔｏｄｅｘマイクロキャリアの濃度の増加と共に低下し、すなわち、カプセルバッチの全体的な品質は、最も低い濃度の懸濁液（１：８）での約９８％の球状カプセルから、最も高い濃度懸濁液１：０．５でのわずか７０％の球状カプセルへと低下された（図７Ｂ）。カプセル当たりの生存細胞の数が、アルギン酸塩懸濁液中のマイクロキャリア濃度の増加と共に増加した一方、これは、カプセル品質の低下に相当していた（図７Ｃ）。
対照的に、Ｃｕｌｔｉｓｐｈｅｒマイクロキャリア懸濁液から作製されたカプセル調製物については、全体的なカプセル品質は、マイクロキャリアの濃度が増加した際、９１〜９７％の範囲で比較的一定に保たれ、細胞濃度の明らかな傾向はなかった（図８Ｂ）。カプセル当たりの生存細胞の数は、アルギン酸塩溶液中のマイクロキャリア負荷の増加と共に増加した（図８Ｃ）。
［実施例１０．ＡＲＰＥ−１９細胞は、インビトロでの接触阻止を示す。］
ＡＲＰＥ−１９細胞を、１，０００及び４０，０００個の細胞／ウェルで、９６ウェルプレート中で平板培養した。野生型（ｗｔ）ＡＲＰＥ１９クラスターをカプセル化するヒドロゲルミリカプセル（ｍｉｌｌｉｃａｐｓｕｌｅ）を、実施例２Ａ及び５に記載されるように調製した。平板培養された細胞を播種した１及び７日後に、細胞を、新鮮な培地中で７２時間にわたって１０μｍの５−エチニル−２’−デオキシウリジン（ＥｄＵ）と共にインキュベートした。カプセル化の１、７、２１及び２８日後、カプセル化されたクラスターを、新鮮な培地中で７２時間にわたって１０μｍのＥｄＵと共にインキュベートした。それぞれ７２時間のインキュベーションの後、細胞を４％のパラホルムアルデヒド中で固定した。平板培養された細胞のサンプル及びカプセルを、Ｃｌｉｃｋ−ｉＴ ＥｄＵ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、Ｃ１０３３７）で、及びすべての核についてはＤＡＰＩ核酸染色で染色することによって、７２時間のインキュベーション期間中にＤＮＡを複製している細胞を同定するために、ＥｄＵ組み込みについて染色した。サンプルを蛍光顕微鏡法によって可視化した。
低密度で（１，０００個の細胞／ウェル）又は高密度で（４０，０００個の細胞／ウェル）播種された細胞は、播種の１日後に多くのＥｄＵ陽性細胞を有するが；４０，０００個の細胞を播種されたものと比較して１，０００個の細胞を最初に播種されたウェル中で、７日目までに、より多くの細胞がＥｄＵ陽性であり、より多くの増殖細胞が存在していた（データは示されていない）。これは、ＡＲＰＥ−１９細胞は、それらの密度がインビトロで増加するにつれて増殖を停止させる（例えば、接触阻止を示す）ことを実証している。カプセル化の１日後、カプセル化されたクラスターにおける細胞増殖は、平板培養された細胞中でより少なく；７日目までに及びそれ以降、増殖細胞が観察されなかった（データは示されていない）。従って、カプセル化されたＡＲＰＥ−１９細胞クラスターは、インビトロで接触阻止を示す。
［実施例１１．組み換えＲＰＥ細胞内の異種タンパク質産生における様々なプロモータの比較。］
第ＩＸ因子コード配列に動作可能に連結されるいくつかの試験プロモータのうちの１つを含有するＰｉｇｇｙＢａｃトランスポゾン発現ベクターを作製した。ＡＲＰＥ−１９及びＨＳ２７細胞株を、５％のＣＯ２及び３７℃で成長させ、リポフェクタミン（ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ）方法を用いて、２．５ｕｇの各ＰｉｇｇｙｂａｃトランスポゾンＤＮＡ発現構築物＋０．５ｕｇのｃｈｅｒｒｙ−ＣＡＧ−ＨｙＰＢａｓｅでトランスフェクトした。安定した細胞プールを生成するために、ＡＲＰＥ−１９細胞を、ピューロマイシンを用いて選択した。細胞を、約３週間にわたって保持し、増殖させ、この期間中、選択薬剤を含む新鮮な培地を３日置きに添加した。選択されたクローンの細胞特異的な生産性を評価するために、５００，０００個の細胞を、６ウェルプレート中で、デュプリケートで播種した。４時間後、培地を変更し、新鮮な培地と交換した。２４時間後、上清培地を収集し、生存細胞密度を評価した。細胞特異的な生産性（ｐｇ／細胞／日）を、ＦＩＸ濃度（ｈＦＩＸ ＥＬＩＳＡを用いて決定される）を、生存細胞の数に対してプロットすることによって決定した。
図９に示されるように、様々なプロモータを用いて組み換えられたＡＲＰ−１９細胞は、様々なレベルのＦＩＸ発現をもたらした。ＦＩＸコード配列に動作可能に連結されるＣＡＧプロモータを含む発現ベクターでトランスフェクトされた細胞は、ＦＩＸコード配列に動作可能に連結されるＣＭＶ又はＵｂｃプロモータを有する以外は同じ発現ベクターでトランスフェクトされた細胞より良好に機能した。意外なことに、ＣＡＧプロモータの制御下のＦＩＸの発現は、ＨＳ２７線維芽細胞細胞株中よりＡＲＰＥ−１９細胞中でより高かった。ＣＡＧ−ＦＩＸ構築物を有するＡＲＰＥ−１９細胞によるＦＩＸの長期のインビトロ発現を監視し（１ヶ月間）、細胞株の生産性は、ピューロマイシンの非存在下で変化しないままであり（データは示されていない）、これは、組み換えＡＲＰＥ−１９細胞によるＦＩＸ発現が安定していることを示す。
［実施例１１．ＲＰＥ細胞を操作するための例示的な発現ベクター］
ＲＰＥ細胞、例えば、ＡＲＰＥ−１９細胞が、２つのプラスミドによるＲＰＥ細胞の共トランスフェクションを含むＰｉｇｇｙＢａｃトランスポゾン系を用いて、外因性のポリペプチドを発現するように組み換えられ得る：（１）ＰｉｇｇｙＢａｃトランスポザーゼによって認識される逆方向末端反復配列（ＩＴＲ）要素間に挿入される対象とするポリペプチドを発現することが可能な転写単位を含むトランスポゾンベクター及び（２）ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポザーゼ酵素を発現するプラスミド。ＰｉｇｇｙＢａｃ系は、「カットアンドペースト」機構を介した遺伝子導入を仲介し、それによって、トランスポザーゼが、転写単位及びＩＴＲを、ＲＰＥ細胞のＴＴＡＡ染色体部位に組み込む。或いは、ＲＰＥ細胞は、トランスポゾンベクターのみで細胞をトランスフェクトすることによって、染色体外ベクターからの対象とするポリペプチドを発現するように組み換えられ得る。
ＲＰＥ細胞を操作するための例示的なトランスポゾンベクターが、図１０に示され（配列番号２６）、以下のベクター表に記載されるベクター要素を有する。ＲＰＥ細胞をトランスフェクトする前に、ＲＰＥ染色体部位に組み込まれる転写単位が、対象とするコード配列を、コザック配列の直後及びｐＣＡＧプロモータとの動作可能な連結中に挿入することによって作製される。
Figure 2020534837
［実施例１２．コドン最適化は、組み換えＲＰＥ細胞によるＦＶＩＩＩ発現を促進する。］
図１に示される組み換えヒトＦＶＩＩＩ−ＢＤＤアミノ酸配列（配列番号１）をコードするコドン最適化（ＣＯ）配列を、市販のアルゴリズムを用いて生成した。同じＦＶＩＩＩ−ＢＤＤポリペプチドをコードする野生型（例えば、非最適化）配列（配列番号８）を、対照（天然）として使用した。各ＣＯ及び天然配列を、図１０のトランスポゾン発現ベクターに挿入し、挿入部位は、コザック配列の直ぐ下流である。ＡＲＰＥ−１９細胞を、ＰｉｇｇｙＢａｃトランスポザーゼベクター及び天然トランスポゾンベクター又はＣＯトランスポゾンベクターで共トランスフェクトし、得られた組み換え細胞によるタンパク質産生（ｐｇ／細胞／日）を、ＥＬＩＳＡによって評価した。図１１は、野生型コード配列で組み換えられた細胞によるＦＶＩＩＩ−ＢＤＤ産生と比べた、上位３つのＣＯ構築物によるＦＶＩＩＩ−ＢＤＤ産生の増加倍率を示す。
他のＦＶＩＩＩ−ＢＤＤ変異体タンパク質に対するコドン最適化配列の使用の影響を評価するために、ｒｈＦＶＩＩＩ−ＢＤＤ ＣＯ６配列（配列番号１５）を修飾して（必要に応じて、ヌクレオチド置換又は付加によって）、ｒｈＳｃＦＶＩＩＩ−ＢＤＤ ２変異体（ｒｈＳｃＦＶＩＩＩ−ＢＤＤ ＣＯ、配列番号１６）又は一本鎖ａｄｄ−ｂａｃｋ ＢＤＤタンパク質変異体（ｒｈＳｃＦＶＩＩＩ−ＢＤＤ ＣＯ ａｄｄｂａｃｋ；配列番号１７）をコードするコドン最適化配列を生成した。対照コード配列は、元のＦＶＩＩＩ−ＢＤＤポリペプチド変異体（配列番号１）をコードする野生型（例えば、非最適化）コード配列（天然）、４つの異なる一本鎖ＢＤＤ変異体（配列番号３〜６）及びａｄｄｂａｃｋ ＦＶＩＩＩ変異体（配列番号７）であった。各ＣＯ変異体及び対照コード配列を、図１０のトランスポゾン発現ベクターに挿入し、挿入部位は、コザック配列の直ぐ下流である。ＡＲＰＥ−１９細胞を、ＰｉｇｇｙＢａｃトランスポザーゼベクター及びトランスポゾンベクターで共トランスフェクトした。得られた組み換え細胞によるＦＶＩＩＩタンパク質産生（ｐｇ／細胞／日）を、ＥＬＩＳＡによって評価した。図１２は、ｒｈＦＶＩＩＩ−ＢＤＤ（配列番号１）の産生と比べた、一本鎖ＢＤＤ変異体及びａｄｄｂａｃｋ ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤ変異体の産生の変化を示す。
［実施例１３．コドン最適化は、組み換えＲＰＥ細胞によるＦＩＸ発現を促進する。］
組み換えヒトＦＩＸ−Ｐａｄｕａ変異体ポリペプチド（配列番号２）をコードするコドン最適化（ＣＯ）配列（配列番号１９〜２１）を、市販のアルゴリズムを用いて生成した。同じＦＩＸ−Ｐａｄｕａポリペプチドをコードする野生型（例えば、非最適化）配列（配列番号１８）を対照（天然）として使用した。各ＣＯ及び天然配列を、図１０のトランスポゾン発現ベクターに挿入し、挿入部位は、コザック配列の直ぐ下流である。ＡＲＰＥ−１９細胞を、ＰｉｇｇｙＢａｃトランスポザーゼベクター及びトランスポゾンベクターで共トランスフェクトした。得られた組み換え細胞によるＦＩＸタンパク質産生（ｐｇ／細胞／日）を、ＥＬＩＳＡによって評価した。図１３は、野生型（例えば、非最適化）コード配列（天然）で組み換えられた細胞の産生と比べた、ＣＯ配列で組み換えられた細胞によるＦＩＸ−Ｐａｄｕａの産生を示す。
［実施例１４．複数のＦＩＸ転写単位によるＲＰＥ細胞のトランスフェクションは、組み換えＲＰＥ細胞内のＦＩＸ発現を増加させる。］
野生型コード配列（天然）を含むＰｉｇｇｙＢａｃトランスポザーゼベクター及びトランスポゾン発現ベクター（図１０）、コドン最適化配列（配列番号１９）を有するトランスポゾン発現ベクター（図１０）又はコドン最適化転写単位、すなわち、ｐＣＡＧプロモータ、コザック配列、配列番号１９及びｒＢＧ ｐＡ配列の重複を有することを除いて同じトランスポゾン発現ベクターで細胞を共トランスフェクトすることによって、ＦＩＸ−Ｐａｄｕａ（配列番号２）を発現するようにＲＰＥ細胞を操作した。得られた組み換え細胞によるＦＩＸタンパク質産生（ｐｇ／細胞／日）を、ＥＬＩＳＡによって評価し、結果が図１４に示される。
［均等物及び範囲］
本出願は、すべてが参照により本明細書において援用されている、種々の発行された特許、公開された特許出願、学術記事、書籍、マニュアル及び他の刊行物を参照する。援用された文献のいずれかと、本明細書との間に齟齬が存在する場合、本明細書が優先されるべきである。加えて、従来技術に属する本開示の特定の実施形態のいずれかは、いずれかの１つ以上の請求項からは明示的に除外され得る。このような実施形態は技術分野における当業者に公知であるとみなされるため、これらは、本明細書において明示的に除外されていない場合においても除外され得る。本開示の特定の実施形態のいずれかは、従来技術の存在に関連しているかに関係なく、いかなる理由によってもいずれかの請求項から除外可能である。
当業者は、多くのルーチン的な実験を行うことなく、本明細書に記載の特定の実施形態の均等物を認識又は確認可能である。本明細書に記載の本実施形態の範囲が上記の明細書、図面又は実施例に限定されることは意図されておらず、添付の特許請求の範囲に記載されているとおりであることが意図されている。当業者は、以下の特許請求の範囲において定義されているとおり、本開示の趣旨又は範囲を逸脱することなく、本記載に対する種々の変更及び修正が可能であり得ることを認めるであろう。

Claims (36)

  1. 組み換え活性細胞、又は前記組み換え活性細胞を含む移植可能な要素であって、前記組み換え活性細胞が、組み換え網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞又はＲＰＥ細胞に由来する組み換え細胞であり、前記組み換え活性細胞が、ポリペプチドをコードする外因性の核酸を含み、前記外因性の核酸が、以下のヌクレオチド配列：
    ａ）（ｉ）配列番号２３又は（ｉｉ）配列番号２３と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくはそれ以上の配列同一性を有する配列から本質的になるか、又はそれからなるプロモータ配列；
    ｂ）配列番号１；配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７又は７８７及び７９０位のそれぞれにアルギニンの代わりにアラニンを有する配列番号７を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる第ＶＩＩＩ〜ＢＤＤ因子（ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤ）ポリペプチドをコードするコード配列；
    ｃ）配列番号２を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる第ＩＸ因子（ＦＩＸ）ポリペプチドをコードするコード配列；
    ｄ）配列番号２９を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるインターロイキン−２ポリペプチド（ＩＬ−２）をコードするコード配列；
    ｅ）配列番号３０又は３１を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）ポリペプチドをコードするコード配列；
    ｆ）配列番号３２又は３３を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるフォン・ヴィレブランド因子（ｖＷＦ）ポリペプチドをコードするコード配列；
    ｇ）（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）又は（ｆ）中のアミノ酸配列の保存的に置換された変異体をコードするコード配列；及び
    ｈ）（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）又は（ｇ）中の前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくはそれ以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードするコード配列
    のうちの１つ以上を含む、組み換え活性細胞又は組み換え活性細胞を含む移植可能な要素。
  2. 組み換え活性細胞、又は前記組み換え活性細胞を含む移植可能な要素であって、前記組み換え活性細胞が、ポリペプチドをコードする外因性の核酸を含み、前記外因性の核酸が、以下のヌクレオチド配列：
    ａ）（ｉ）配列番号２３又は（ｉｉ）配列番号２３と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくはそれ以上の配列同一性を有する配列から本質的になるか、又はそれからなるプロモータ配列；
    ｂ）配列番号１；配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７又は７８７及び７９０位のそれぞれにアルギニンの代わりにアラニンを有する配列番号７を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる第ＶＩＩＩ〜ＢＤＤ因子（ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤ）ポリペプチドをコードするコード配列；
    ｃ）配列番号２を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる第ＩＸ因子（ＦＩＸ）ポリペプチドをコードするコード配列；
    ｄ）配列番号２９を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるインターロイキン−２ポリペプチド（ＩＬ−２）をコードするコード配列；
    ｅ）配列番号３０又は３１を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）ポリペプチドをコードするコード配列；
    ｆ）配列番号３２又は３３を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるフォン・ヴィレブランド因子（ｖＷＦ）ポリペプチドをコードするコード配列；
    ｇ）（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）又は（ｆ）中のアミノ酸配列の保存的に置換された変異体をコードするコード配列；及び
    ｈ）（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）又は（ｇ）中の前記アミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくはそれ以上の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードするコード配列
    のうちの１つ以上を含む、組み換え活性細胞又は組み換え活性細胞を含む移植可能な要素。
  3. 前記組み換え活性細胞が、以下の特徴を１つ以上有し：
    （ａ）それが、網膜色素上皮細胞（ＲＰＥ）又はこれに由来する細胞を含み；
    （ｂ）それが、低分化細胞から得られた細胞を含み；
    （ｃ）それが、以下の特性を１つ以上有する細胞：
    （ｉ）１種以上のバイオマーカーＣＲＡＬＢＰ、ＲＰＥ−６５、ＲＬＢＰ、ＢＥＳＴ１、又はαＢ−クリスタリンを発現するもの；
    （ｉｉ）１種以上のバイオマーカーＣＲＡＬＢＰ、ＲＰＥ−６５、ＲＬＢＰ、ＢＥＳＴ１、又はαＢ−クリスタリンを発現しないもの；
    （ｉｉｉ）網膜中に見出される天然のものであって、ブルッフ膜中の脈絡膜血管上に単一層を形成するもの；及び
    （ｉｖ）網膜における上皮輸送、光吸収、分泌、及び／又は免疫調節を担うもの
    を含む、請求項２に記載の組み換え活性細胞又は組み換え活性細胞を含む移植可能な要素。
  4. 前記ポリペプチドが、ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤポリペプチド又はＦＩＸポリペプチドである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組み換え活性細胞又は移植可能な要素。
  5. 前記ポリペプチドが、ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤポリペプチドであり、前記コード配列が、
    ａ）配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７及び配列番号２７；又は
    ｂ）ａ）に列挙される前記コード配列のいずれかと少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくはそれ以上の配列同一性を有するヌクレオチド配列
    を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組み換え活性細胞又は移植可能な要素。
  6. 前記ポリペプチドが、ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤポリペプチドであり、前記コード配列が、配列番号１６又は配列番号２７から本質的になるか、又はそれからなる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組み換え活性細胞又は移植可能な要素。
  7. 前記ポリペプチドが、ＦＩＸポリペプチドであり、前記コード配列が、
    ａ）配列番号１８、配列番号２０、配列番号２１又は配列番号２８；又は
    ｂ）ａ）に列挙される前記コード配列のいずれかと少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくはそれ以上の配列同一性を有するヌクレオチド配列
    を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組み換え活性細胞又は移植可能な要素。
  8. 前記ポリペプチドが、ＦＩＸポリペプチドであり、前記コード配列が、配列番号１９又は配列番号２８から本質的になるか、又はそれからなる請求項１〜４又は７のいずれか一項に記載の組み換え活性細胞又は移植可能な要素。
  9. 前記組み換え活性細胞が、ＡＲＰＥ−１９細胞である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組み換え活性細胞又は移植可能な要素。
  10. 複数の前記組み換え活性細胞を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の移植可能な要素。
  11. 組み換え活性細胞、例えば、ＲＰＥ細胞、又は前記組み換え活性細胞を含む移植可能な要素であって、前記組み換え活性細胞が、ポリペプチドのためのコード配列に動作可能に連結されるプロモータ配列を含む外因性の核酸を含み、ここで、前記プロモータ配列が、配列番号２３から本質的になるか、若しくは配列番号２３からなり、又は配列番号２３と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくはそれ以上の配列同一性を有する、組み換え活性細胞又は移植可能な要素。
  12. 前記ポリペプチドが、配列番号３、配列番号４、配列番号５又は配列番号６を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる、請求項１１に記載の組み換え活性細胞又は移植可能な要素。
  13. 前記ポリペプチドが、配列番号４を含み、前記コード配列が、配列番号１６又は配列番号１６と少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む、請求項１２に記載の組み換え活性細胞又は移植可能な要素。
  14. 前記ポリペプチドが、配列番号２を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる、請求項１１に記載の組み換え活性細胞。
  15. 前記ポリペプチドが、配列番号２を含み、前記コード配列が、配列番号１９又は配列番号１９と少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む、請求項１４に記載の組み換え活性細胞。
  16. 前記ポリペプチドが、配列番号３４又は配列番号３５をさらに含む、請求項１１〜１５のいずれか一項に記載の組み換え活性細胞。
  17. 前記外因性の核酸が、前記コード配列の直ぐ上流にコザック配列を含む、請求項１１〜１６のいずれか一項に記載の組み換え活性細胞。
  18. 前記コザック配列が、配列番号２６のヌクレオチド２０９４〜２０９９である、請求項１７に記載の組み換え活性細胞。
  19. 前記外因性の核酸が、前記コード配列に動作可能に連結されるポリＡシグナル配列を含み、前記ポリＡシグナル配列が、配列番号２６のヌクレオチド２１６３〜２６８４から本質的になるか、又はそれからなる、請求項１１〜１８のいずれか一項に記載の組み換え活性細胞。
  20. 前記プロモータ配列が、配列番号２３からなる、請求項１１〜１９のいずれか一項に記載の移植可能な要素又は組み換え活性細胞。
  21. 前記組み換え活性細胞が、ヒトＲＰＥ細胞である、請求項１１〜２０のいずれか一項に記載の移植可能な要素又は組み換え活性細胞。
  22. 前記外因性の核酸が、前記組み換え活性細胞の染色体に組み込まれる、請求項１１〜２１のいずれか一項に記載の移植可能な要素又は組み換え活性細胞。
  23. 前記ポリペプチドが、抗体（例えば、抗神経成長因子抗体）；酵素（例えば、α−ガラクトシダーゼ）；及び凝固因子（例えば、血液凝固因子、例えば、活性化血液凝固因子）からなる群から選択される、請求項１〜３又は１１のいずれか一項に記載の移植可能な要素又は組み換え活性細胞。
  24. 前記ポリペプチドが、インスリンポリペプチド（例えば、インスリンＡ鎖、インスリンＢ鎖、又はプロインスリン）である、請求項１〜３又は１１のいずれか一項に記載の移植可能な要素又は組み換え活性細胞。
  25. 前記ポリペプチドが、インスリンポリペプチド（例えば、インスリンＡ鎖、インスリンＢ鎖、又はプロインスリン）でない、請求項１〜３又は１１のいずれか一項に記載の移植可能な要素又は組み換え細胞。
  26. 前記移植可能な要素が、封入構成要素を含む、請求項１〜１０及び２０〜２５のいずれか一項に記載の移植可能な要素。
  27. 前記封入構成要素が、（ｉ）可撓性ポリマー（例えば、ＰＬＡ、ＰＬＧ、ＰＥＧ、ＣＭＣ、又は多糖、例えば、アルギン酸塩）又は（ｉｉ）非可撓性ポリマー又は金属ハウジングを含む、請求項２６に記載の移植可能な要素。
  28. 前記封入構成要素が、化学修飾される、請求項２６又は２７に記載の移植可能な要素。
  29. 前記移植可能な要素又はその封入構成要素が、式（Ｉ）：
    Figure 2020534837
    の化合物又はその塩で修飾され、式中、
    Ａは、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（ＲＣ）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６−アルキレン）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６−アルケニレン）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｎ（ＲＤ）−、−ＮＣＮ−、−Ｃ（＝Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ））Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）ｘ−、−ＯＳ（Ｏ）ｘ−、−Ｎ（ＲＣ）Ｓ（Ｏ）ｘ−、−Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ）−、−Ｐ（ＲＦ）ｙ−、−Ｓｉ（ＯＲＡ）２−、−Ｓｉ（ＲＧ）（ＯＲＡ）−、−Ｂ（ＯＲＡ）−、又は金属であり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールの各々は、結合基（例えば、本明細書に定義される結合基）に結合され、１個以上のＲ１で任意選択により置換されており；
    Ｌ１及びＬ３の各々は独立して、結合、アルキル、又はヘテロアルキルであり、ここで、アルキル及びヘテロアルキルの各々は、１個以上のＲ２で任意選択により置換されており；
    Ｌ２は結合であり；
    Ｍは、不在であるか、各々が１個以上のＲ３で任意選択により置換されている、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；
    Ｐは、不在であるか、各々が１個以上のＲ４で任意選択により置換されている、シクロアルキル、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールであり；
    Ｚは、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、−ＯＲＡ、−Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）ＲＡ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ５で任意選択により置換されており；
    ＲＡ、ＲＢ、ＲＣ、ＲＤ、ＲＥ、ＲＦ、及びＲＧの各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、アジド、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ６で任意選択により置換されており；
    又は、ＲＣ及びＲＤは、これらが結合している窒素原子と一緒になって、１個以上のＲ６で任意選択により置換されている環（例えば５〜７員環）を形成し；
    Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、及びＲ６の各々は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、シアノ、アジド、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、−ＯＣ（Ｏ）ＲＢ１、−Ｎ（ＲＣ１）（ＲＤ１）、−Ｎ（ＲＣ１）Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ１）、ＳＲＥ１、Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ１、−ＯＳ（Ｏ）ｘＲＥ１、−Ｎ（ＲＣ１）Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ１、−Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ１）（ＲＤ１）、−Ｐ（ＲＦ１）ｙ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ７で任意選択により置換されており；
    ＲＡ１、ＲＢ１、ＲＣ１、ＲＤ１、ＲＥ１、及びＲＦ１の各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ７で任意選択により置換されており；
    各Ｒ７は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、シアノ、オキソ、ヒドロキシル、シクロアルキル、又はヘテロシクリルであり；
    ｘは１又は２であり；
    ｙは２、３、又は４である、請求項２６〜２８のいずれか一項に記載の移植可能な要素。
  30. 式（Ｉ）の前記化合物が、化合物表１に示される化合物である、請求項２９に記載の移植可能な要素。
  31. 前記化合物が、
    Figure 2020534837
    又はその塩から選択される、請求項２９又は３０に記載の移植可能な要素。
  32. 前記化合物が、化合物表１からの化合物１１０、化合物１１２、化合物１１３、又は化合物１１４から選択される、請求項２９又は３０に記載の移植可能な要素。
  33. 前記封入構成要素が、アルギン酸塩ヒドロゲルカプセルである、請求項２６〜３２のいずれか一項に記載の移植可能な要素。
  34. 少なくとも約１０，０００、１５，０００又は２０，０００個の組み換えＡＲＰＥ−１９細胞を含む、請求項３３に記載の移植可能な要素。
  35. 薬学的に許容可能なキャリア中の請求項１〜３３のいずれか一項に記載の複数の移植可能な要素を含む医薬組成物。
  36. 前記移植可能な要素又は組成物を患者に投与又は提供し、それによって、前記患者を処置するか、又は生成物（例えば治療用生成物）を前記患者に供給するステップを含む方法によってヒト患者を処置するのに使用するための、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の移植可能な要素又は請求項３５に記載の医薬組成物。
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