JP2020503844A - 抗呼吸器合胞体ウイルス抗体、及び、それらの生成及び使用の方法 - Google Patents
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Abstract
ＲＳＶサブタイプＡ、及び、ＲＳＶサブタイプＢに対する中和力を有する抗ＲＳＶ抗体を提供し、ならびに、それらの同定、単離、生成のための方法、及び、それらの調製、及び、使用のための方法を提供する。【選択図】なし
Description
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年１０月２１日に出願した米国仮特許出願第６２／４１１，５００号の利益を主張するものであり、その出願の全内容を、本明細書の一部を構成するものとして援用する。
本出願は、２０１６年１０月２１日に出願した米国仮特許出願第６２／４１１，５００号の利益を主張するものであり、その出願の全内容を、本明細書の一部を構成するものとして援用する。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出をした配列表を含んでおり、そして、その全内容を、本明細書の一部を構成するものとして援用する。２０１７年１０月２０日に作成をした当該ＡＳＣＩＩコピーは、名称「２００９１８６＿０２１７＿ＳＬ．ＴＸＴ」で格納をしており、かつ、大きさは、８６０，０２１バイトである。
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出をした配列表を含んでおり、そして、その全内容を、本明細書の一部を構成するものとして援用する。２０１７年１０月２０日に作成をした当該ＡＳＣＩＩコピーは、名称「２００９１８６＿０２１７＿ＳＬ．ＴＸＴ」で格納をしており、かつ、大きさは、８６０，０２１バイトである。
発明の分野
本発明は、特に、抗呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）抗体、及び、それらの機能的断片、ならびに、それらの調製及び使用のための方法及び試薬に関する。
本発明は、特に、抗呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）抗体、及び、それらの機能的断片、ならびに、それらの調製及び使用のための方法及び試薬に関する。
本明細書で引用したすべての参考文献には、あらゆる目的のために、本明細書の一部を構成するものとして、それらの内容を明示的に援用する、全般的に参照をした特許、特許出願、非特許文献、及び、刊行物があるが、これらに限定されない。
呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）は、幼児と高齢者において罹患率と死亡率が非常に高く、米国における乳児の入院の主要原因にもなっており、そして、世界中で、毎年、推定で、６４００万件の感染と、１６０，０００名もの死者を出している。しかしながら、何十年にもわたる研究にもかかわらず、安全かつ効果的なワクチン、または、ＲＳＶに対する治療用抗体、及び／または、予防用抗体の開発は未だ実現しておらず、防御免疫反応を誘導または提供する新たな戦略の必要性が浮き彫りになっている。（１−３）。実際のところ、現在までに、承認を受けたＲＳＶワクチンはなく、そして、モノクローナル抗体パリビズマブ（Ｓｙｎａｇｉｓ（登録商標）として市販された）を利用した受動予防は、一つには、その有効性があまり大きくないことから、高リスクの乳児に対象が限られている。
ある集団の小児たちは、ＲＳＶ感染症を発症する恐れがあり、そして、当該集団には、早産児（Ｈａｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３００：３９３−３９６）、気道に先天性奇形を有する小児、気管支肺異形成を有する小児（Ｇｒｏｏｔｈｕｉｓ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ ８２：１９９−２０３）、先天性心疾患を有する小児（ＭａｃＤｏｎａｌｄ ｅｔ ａｌ．， Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ． Ｊ．Ｍｅｄ．３０７：３９７−４００）、及び、先天性または後天性免疫不全症（Ｏｇｒａ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．Ｊ．７：２４６−２４９；及び、Ｐｏｈｌ ｅｔ ａｌ．，１９９２．Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１６５：１６６−１６９）、及び、嚢胞性線維症（Ａｂｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．１ １３：８２６−８３０）の小児が含まれる。
ＲＳＶは、成人の集団にも感染する。この集団では、ＲＳＶは、主に、上気道疾患を引き起こすが、高齢の患者（Ｅｖａｎｓ，Ａ．Ｓ．，ｅｄｓ．，１９８９，Ｖｉｒａｌ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｈｕｍａｎｓ．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ， ３ｒｄ ｅｄ．， Ｐｌｅｎｕｍ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｂｏｏｋ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ｐａｇｅｓ ５２５−５４４）、ならびに、免疫抑制を受けた成人、特に、骨髄移植患者（Ｈｅｒｔｚ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ６８：２６９−２８１）では、重篤な感染症や肺炎を起こす危険性が高くなり得る。その他の危険に曝されている患者として、鬱血性心不全の患者、そして、慢性閉塞性肺疾患（すなわち、ＣＯＰＤ）の患者がいる。養護老人ホームの入所者、及び、施設に収容した若年成人の間での流行の報告もある（Ｆａｌｓｅｙ，Ａ．Ｒ．，１９９１，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｈｏｓｐ． Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ． １２：６０２−６０８；及び、Ｇａｒｖｉｅ ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｂｒ．Ｍｅｄ．Ｊ．２８１：１２５３−１２５４）。
確立したＲＳＶ疾患に対する治療選択肢は限られているが、より重度の形態の下気道の疾患では、加湿酸素の投与と呼吸補助とを含む相当の支持療法を必要とする、ことが多い（Ｆｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ，１９９０，Ｆｉｅｌｄｓ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２ｎｄ ｅｄ．，Ｖｏｌ．１， Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐａｇｅｓ １０４５−１０７２）。
その他のニューモウイルスと同様に、ＲＳＶは、２つの主要な表面糖タンパク質、すなわち、融合タンパク質（Ｆ）と付着タンパク質（Ｇ）とを発現する。どちらも防御的中和抗体応答を誘導することが示されているが、Ｆは、Ｇよりも遺伝的に変動が少なく、感染に絶対に必要であり、ヒト血清での中和活性の大部分の標的である（４−８）。ＲＳＶ Ｆは、高リスクの乳児を、重篤な疾患から受動的に保護するために使用するモノクローナル抗体パリビズマブの標的でもある（９）。その結果、当該ＲＳＶ Ｆタンパク質は、ワクチン、及び、抗体をベースにした治療法にとって非常に魅力的な標的である、と考えられている。
成熟ＲＳＶ Ｆ糖タンパク質は、当初は、宿主細胞膜へ疎水性融合ペプチドを挿入する立体構造変化を受ける前に、準安定融合前立体配座で存在する（１０）。その後に、安定した細長い融合後の立体配座（ｐｏｓｔＦ）へとＦをリフォールディング（１１、１２）すると、ウイルス膜と宿主細胞膜との融合が起こる。その固有の不安定性が故に、当該ｐｒｅＦタンパク質は、溶液中でも、ウイルス表面上でも、ｐｏｓｔＦへと早々と誘発してしまう傾向がある（１３）。最近、タンパク質工学によってｐｒｅＦの安定化が達成されており（１４、１５）、また、安定化したｐｒｅＦが、ｐｏｓｔＦよりも高い力価の中和抗体を誘導することが動物モデルにおいて示されている（１５）。
重度のＲＳＶ疾患に対する防御において抗体を中和することの重要性があるにもかかわらず、ＲＳＶに対するヒト抗体応答の我々の理解は、ヒト血清、及び、わずかなＲＳＶ特異的ヒトモノクローナル抗体の研究に限定されていた（１６−１９）。これらのヒト抗体、ならびに、幾つかのマウス抗体が認識するエピトープは、ＲＳＶ Ｆでの少なくとも４つの「抗原部位」を規定している（１、１０、１６、１８−２０）（例えば、表１も参照されたい）。これらの部位の内の３つ、Ｉ、ＩＩ、及び、ＩＶは、ｐｒｅＦ及びｐｏｓｔＦの双方に存在するのに対して、抗原性部位φは、もっぱらｐｒｅＦに存在する。追加のｐｒｅＦ特異的エピトープは、抗体ＭＰＥ８（１７）及びＡＭ１４（２１）によって定義されている。血清マッピング研究では、部位φ指向性抗体が、大抵の個体において、中和抗体応答の大部分に関係していることが知られている（８）が、血清中和活性に寄与するさらなる抗体特異性は、未だに明らかになっていない。加えて、その他のウイルス標的で認められているような、特定の中和部位を認識するにあたって特定の抗体配列の特徴が必要であるか否かは、これまで知られていなかった（２２−２５）。したがって、中和力とエピトープ特異性との間の関係を理解することは、ＲＳＶに対する強力な中和応答を誘導するワクチン抗原の選択、及び／または、デザイン、ならびに、治療用抗体、及び／または、予防用抗体において有利である。
確立したＲＳＶ疾患に対する治療選択肢は限られているが、より重度の形態の下気道の疾患では、加湿酸素の投与と呼吸補助とを含む相当の支持療法を必要とすることが多い（Ｆｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ，１９９０，Ｆｉｅｌｄｓ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２ｎｄ ｅｄ．，Ｖｏｌ．１， Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐａｇｅｓ １０４５−１０７２）。
感染症の治療に対して承認を受けた唯一の薬物であるリバビリンは、ＲＳＶ感染症に関連する肺炎及び細気管支炎の処置において有効であることが示されており、免疫適格小児における重症ＲＳＶ疾患の経過を変えることが示されている（Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２５：２４−２９）。病院環境内で投与を受ける間にエアロゾル化薬物に曝され得る妊婦に対する潜在的なリスクが払拭できないため、リバビリンの使用は制限されている。
同様に、ワクチンは有用であるが、これまでに、市販向けワクチンは開発されていない。幾つかのワクチンの候補が断念されており、その他のワクチンが開発中である（Ｍｕｒｐｈｙ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓ．３２：１３−３６）。ワクチンの開発には、問題がある。特に、下気道疾患のピーク発生率が、２〜５ヶ月齢で認められるため、早期新生児期に免疫処置を必要とする。しかしながら、その時点での新生児の免疫反応は未熟であることが知られている。さらに、その時点での乳児は、未だに高力価の母性獲得ＲＳＶ抗体を有しており、このものは、ワクチンの免疫原性を低下し得る（Ｍｕｒｐｈｙ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６２：３９０７−３９１０；及び、Ｍｕｒｐｈｙ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｖａｃｃｉｎｅ９：１８５−１８９）。
現在のところ、ＲＳＶ疾患の予防について承認を受けた唯一の手法は、受動免疫である。例えば、Ｆタンパク質のエピトープに特異的なヒト化抗体であるパリビズマブ（ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標））は、ＲＳＶが引き起こす重篤な下気道疾患を予防するために、ＲＳＶのシーズン（北半球では１１月〜４月）を通じて、推奨された月用量の１５ｍｇ／体重ｋｇを、小児患者に筋肉内投与することが承認されている。ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標）は、ヒト（９５％）抗体配列とマウス（５％）抗体配列との複合体である（Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９７），Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓｅａｓｅｓ １７６：１２１５−１２２４、及び、米国特許第５，８２４，３０７号）。
ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標）は、小児患者でのＲＳＶ感染症の予防に首尾よく使用されてきたが、予防効果を得るためには、１５ｍｇ／ｋｇのＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標）の複数回の筋肉内用量を必要とする。複数回の筋肉内用量の抗体を投与する必要があるために、診療所に何度も通う必要があり、このことは、患者にとって不便であるだけでなく、用量を間違ってしまう可能性もある。
抗ＲＳＶ−Ｆ抗体の治療プロファイルを改善する努力によって、モタビズマブ、別名、ＮＵＭＡＸ（商標）の同定及び開発に至っている。しかしながら、臨床試験で、モタビズマブを投与した患者の特定数において重度の過敏反応が明らかになった。その後、このヒト化抗ＲＳＶ−Ｆ抗体のさらなる開発は行われていない。
ＲＳＶ−Ｆタンパク質に対するその他の抗体は、ＵＳ６６５６４６７、ＵＳ５８２４３０７、ＵＳ７７８６２７３、ＵＳ７６７０６００、ＵＳ７０８３７８４、ＵＳ６８１８２１６、ＵＳ７７００７３５、ＵＳ７５５３４８９、ＵＳ７３２３１７２、ＵＳ７２２９６１９、ＵＳ７４２５６１８、ＵＳ７７４０８５１、ＵＳ７６５８９２１、ＵＳ７７０４５０５、ＵＳ７６３５５６８、ＵＳ６８５５４９３、ＵＳ６５６５８４９、ＵＳ７５８２２９７、ＵＳ７２０８１６２、ＵＳ７７００７２０、ＵＳ６４１３７７１、ＵＳ５８１１５２４、ＵＳ６５３７８０９、ＵＳ５７６２９０５、ＵＳ７０７０７８６、ＵＳ７３６４７４２、ＵＳ７８７９３２９、ＵＳ７４８８４７７、ＵＳ７８６７４９７、ＵＳ５５３４４１１、ＵＳ６８３５３７２、ＵＳ７４８２０２４、ＵＳ７６９１６０３、ＵＳ８５６２９９６、ＵＳ８５６８７２６、ＵＳ９４４７１７３、ＵＳ２０１０００１５５９６、ＷＯ２００９０８８１５９Ａ１、及び、ＷＯ２０１４１５９８２２に記載されており、そして、それらから見出すことができる。今日まで、ＲＳＶ感染症の予防における使用について、規制当局から承認を受けたものは、ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標）だけである。
抗ＲＳＶ−Ｆ抗体の治療プロファイルを改善する努力によって、モタビズマブ、別名、ＮＵＭＡＸ（商標）の同定及び開発に至っている。しかしながら、臨床試験で、モタビズマブを投与した患者の特定数において重度の過敏反応が明らかになった。その後、このヒト化抗ＲＳＶ−Ｆ抗体のさらなる開発は行われていない。
ＲＳＶ−Ｆタンパク質に対するその他の抗体は、ＵＳ６６５６４６７、ＵＳ５８２４３０７、ＵＳ７７８６２７３、ＵＳ７６７０６００、ＵＳ７０８３７８４、ＵＳ６８１８２１６、ＵＳ７７００７３５、ＵＳ７５５３４８９、ＵＳ７３２３１７２、ＵＳ７２２９６１９、ＵＳ７４２５６１８、ＵＳ７７４０８５１、ＵＳ７６５８９２１、ＵＳ７７０４５０５、ＵＳ７６３５５６８、ＵＳ６８５５４９３、ＵＳ６５６５８４９、ＵＳ７５８２２９７、ＵＳ７２０８１６２、ＵＳ７７００７２０、ＵＳ６４１３７７１、ＵＳ５８１１５２４、ＵＳ６５３７８０９、ＵＳ５７６２９０５、ＵＳ７０７０７８６、ＵＳ７３６４７４２、ＵＳ７８７９３２９、ＵＳ７４８８４７７、ＵＳ７８６７４９７、ＵＳ５５３４４１１、ＵＳ６８３５３７２、ＵＳ７４８２０２４、ＵＳ７６９１６０３、ＵＳ８５６２９９６、ＵＳ８５６８７２６、ＵＳ９４４７１７３、ＵＳ２０１０００１５５９６、ＷＯ２００９０８８１５９Ａ１、及び、ＷＯ２０１４１５９８２２に記載されており、そして、それらから見出すことができる。今日まで、ＲＳＶ感染症の予防における使用について、規制当局から承認を受けたものは、ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標）だけである。
Ｈａｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３００：３９３−３９６
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ＭａｃＤｏｎａｌｄ ｅｔ ａｌ．， Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ． Ｊ．Ｍｅｄ．３０７：３９７−４００
Ｏｇｒａ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．Ｊ．７：２４６−２４９
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Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２５：２４−２９
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Ｍｕｒｐｈｙ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６２：３９０７−３９１０
Ｍｕｒｐｈｙ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｖａｃｃｉｎｅ９：１８５−１８９
Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９７），Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓｅａｓｅｓ １７６：１２１５−１２２４
サブタイプＡ及びサブタイプＢのＲＳＶウイルス株の少なくとも一方、しかし、好ましくは双方を中和し、かつ、Ｆタンパク質のＰｏｓｔＦ立体配座よりも、ＰｒｅＦの方を優先的に認識する、特異性が高く、親和性が大きく、そして、非常に強力な中和抗ＲＳＶ抗体、及び、その抗原結合断片の提供が依然として待望されている。抗ＲＳＶ及び抗ＨＭＰＶ交差中和抗体、及び、それらの抗原結合断片の提供も依然として待望されている。
本出願人は、とりわけ、健康な成人ヒトドナーの記憶Ｂ細胞に由来するＲＳＶ Ｆ特異的モノクローナル抗体の広範なパネルを発見し、単離し、及び、特徴付けを行い、そして、これらの抗体を用いて、ＲＳＶ Ｆの抗原トポロジーを包括的にマッピングした。ＲＳＶ Ｆ特異的ヒト抗体レパートリーの大部分を、Ｆタンパク質のＰｒｅＦ立体配座に対して、（ＰｏｓｔＦ形態と比較して）非常に強力な特異性を有する抗体から構成することが有利であり、ほとんどではないにしても、それらの多くは、中和アッセイにおいて、ＲＳＶサブタイプＡ及びＲＳＶサブタイプＢ株の一方または双方に対して顕著な中和力を示した。実際に、これらの抗体の多くは、Ｄ２５及びパブリズママブなどの従来の抗ＲＳＶ治療用抗体よりも数倍、約５〜１００倍、または、それ以上の大きな中和力を示し、したがって、ＲＳＶ感染症、及び、疾患を処置、及び／または、予防するための魅力的な治療候補、及び／または、予防候補として役立っている。
最も強力な抗体は、ｐｒｅＦ三量体の頂点付近に位置する２つの異なる抗原部位を標的とするものである、ことが知られており、これらの抗原部位を標的とする治療用抗体、及び／または、予防用抗体、ならびに、これらの抗原部位を保存する、ｐｒｅＦをベースにしたワクチン候補の開発について強力な支持が得られている。さらに、本明細書に記載及び開示した中和抗体は、受動的免疫学的予防を用いて、重症ＲＳＶ疾患の予防のための新たな機会をもたらす。
当該Ｆタンパク質が、ウイルスと細胞との融合、及び、ウイルスの細胞間伝播において果たす役割を考慮すると、本明細書に記載した抗体、及び、医薬組成物は、そのプロセスを阻害する方法を提供するものであり、それ故に、ＲＳＶに曝されている、もしくは、ＲＳＶで感染症になる危険がある患者の感染症を予防し、または、ＲＳＶに曝されている、もしくは、ＲＳＶで感染症になる危険がある、あるいは、ＲＳＶによる感染症を患っている患者におけるＲＳＶ感染症に関連する１つ以上の症状を処置、及び／または、改善するために使用し得る。また、本明細書に記載した抗体は、原因となる、または、既存の病状に起因している、さらに重症型のＲＳＶ感染症を経験し得る患者におけるＲＳＶ感染症を予防、または、治療するために使用し得る。本発明の抗体、及び／または、医薬組成物を用いた処置で恩恵を受け得る患者は、早産児、ＲＳＶシーズン（概ね晩秋（１１月）〜春先（４月）まで）に出生し、先天性心疾患、または、慢性肺疾患などのその他の既存の、または、原因となる病状が故にリスクのある満期産児、原因となる病状の有無に関係なく１歳以上の小児、施設入所患者または入院患者、または、鬱血性心不全（ＣＨＦ）、または、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）などの原因となる病状の有無に関係なく高齢者（６５歳を超える年齢）であり得る。そのような治療から恩恵を受け得る患者は、損傷を受けた肺、心血管、神経筋、または、免疫系に起因する病状に罹患し得る。例えば、患者は、気道の異常、あるいは、気道の機能不全、慢性肺疾患、慢性もしくは先天性の心疾患、呼吸器分泌物の取り扱いに支障をきたす神経筋疾患を罹患し得るものであり、または、患者は、重症複合型免疫不全症、あるいは、重症後天的免疫不全疾患が故に免疫抑制を受け得るものであり、あるいは、免疫抑制をもたらすその他の原因となる感染症もしくはがん性病態に由来し得るものであり、または、患者は、免疫抑制薬（例えば、移植患者の処置のために使用するあらゆる薬剤）、もしくは、放射線療法での処置が故に免疫抑制され得る。本発明の抗体、及び／または、医薬組成物から恩恵を受け得る患者は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症（ＣＦ）、気管支肺異形成症、鬱血性心不全（ＣＨＦ）、または、先天性心疾患を患った患者であり得る。
本発明の抗体、及び、それらの抗原結合断片は、公知の抗体と比較して、ＲＳＶの中和においてより効果的であるので、低用量の本発明の抗体、または、抗体断片、または、医薬組成物を用いて、ＲＳＶによる感染症に対してより高レベルの防御と、ＲＳＶ感染症に関連する症状のより効果的な処置、及び／または、改善をするために使用することができる。したがって、ＲＳＶ−Ｆ抗原に免疫特異的に結合する低用量の抗体、または、それらの断片を使用しても、重度の有害事象を起こしにくく、または、少ない。同様に、より効果的な中和抗体の使用は、当該抗体、または、抗体断片、または、医薬組成物に求められる投与頻度を、感染の予防、または、ウイルスの中和、または、ＲＳＶ感染症に関連する１つ以上の症状の処置または改善のために必要であると従前から考えられていた頻度よりも減少させ得る。ＲＳＶ感染症の症状として、酸素欠乏（低酸素症）、呼吸困難（呼吸促迫、または、息切れ）、咳、咳嗽（「アザラシ」咳）、発熱、鼻の発赤、鼻閉（鼻詰まり）、無呼吸、食欲減退、脱水症状、栄養不良、精神状態の変化、または、喘鳴があり得る。
そのような抗体、または、医薬組成物を、予防的に（当該ウイルスへ曝露、及び、当該ウイルスに感染する前に）投与して、ＲＳＶによる重症度または一次感染の期間を抑制し、または、当該感染に関連する少なくとも１つの症状を改善する場合に有用となり得る。当該抗体、または、医薬組成物は、単独で、または、ＲＳＶ感染症の処置において有用な第２の薬剤と組み合わせて使用し得る。特定の実施形態では、当該抗体、または、医薬組成物は、単独で、または、第２の薬剤と組み合わせて、一次感染の重症度もしくは期間を抑制するために、あるいは、当該感染症に関連する少なくとも１つの症状を改善するために、治療的に（当該ウイルスへ曝露、及び、当該ウイルスに感染した後に）投与し得る。特定の実施形態では、当該抗体、または、医薬組成物は、上記したものなど、ＲＳＶに感染する危険性がある患者を保護するための独立型療法として、予防的に使用し得る。これらの患者集団のいずれでも、本発明の抗体を、それら単独で、あるいは、第２の薬剤、例えば、リバビリンなどの抗ウイルス療法、または、その他の抗ウイルスワクチンと組み合わせて投与する場合に、それらを用いた処置による恩恵に預り得る。
本発明の抗体は、全長（例えば、ＩｇＧ１、または、ＩｇＧ４抗体）、または、抗原結合部分（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、または、ｓｃＦｖ断片）だけを含み得るものであり、そして、改変して機能性に影響を与える、例えば、残留エフェクター機能を排除し得る（Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ．，（２０００），Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：１９２５−１９３３）。
したがって、特定の実施形態では、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）Ｆタンパク質（Ｆ）に対して特異的に結合する単離した抗体、または、それらの抗原結合断片を提供し、当該抗体、または、その抗原結合断片のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及び、ＣＤＲＬ３アミノ酸配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つまたは少なくとも６つが、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４から選択した抗体の表６に開示したＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及び／または、ＣＤＲＬ３のアミノ酸配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つまたは少なくとも６つと、少なくとも７０％が同一であり、少なくとも７５％が同一であり、８０％が同一であり、少なくとも８５％が同一であり、少なくとも９０％が同一であり、少なくとも９５％が同一であり、少なくとも９６％が同一であり、少なくとも９７％が同一であり、少なくとも９８％が同一であり、少なくともが９９％、及び／または、その間のすべてのパーセンテージで同一であり、及び、当該抗体、または、その抗原結合断片はまた、以下の特徴、ａ）当該抗体、または、それらの抗原結合断片は、ＲＳＶ−Ｆに結合するための当該抗体、または、それらの抗原結合断片と交差競合する、ｂ）当該抗体、または、それらの抗原結合断片は、ＰｏｓｔＦ形態と比較して、ＲＳＶ−ＦのＰｒｅＦ形態に対して、良好な結合親和性を示す、ｃ）当該抗体、または、それらの抗原結合断片は、クリーン、または、低度の多反応性プロファイルを示す、ｄ）当該抗体、または、それらの抗原結合断片は、インビトロで、ＲＳＶサブタイプＡ、及び、ＲＳＶサブタイプＢに対して中和活性を示す、ｅ）当該抗体、または、それらの抗原結合断片は、部位φ、部位Ｉ、部位ＩＩ、部位ＩＩＩ、部位ＩＶ、または、部位ＶにてＲＳＶ−Ｆに対する抗原部位特異性を示す、ｆ）当該抗体、または、それらの抗原結合断片は、ＲＳＶ−Ｆ部位Ｉ、部位ＩＩ、または、部位ＩＶと比較して、ＲＳＶ−Ｆ部位φ、部位Ｖ、または、部位ＩＩＩに対して抗原部位特異性を示す、ｇ）当該抗体、または、それらの抗原結合断片が相互作用をするエピトープの少なくとも一部は、ＰｒｅＦのα３ヘリックス、及び、β３／β４ヘアピンを含む、ｈ）当該抗体、または、それらの抗原結合断片は、インビトロで、約０．５マイクログラム／ミリリットル（μｇ／ｍｌ）〜約５μｇ／ｍｌの間、約０．０５μｇ／ｍｌ〜約０．５μｇ／ｍｌの間、または、約０．０５ｍｇ／ｍｌ未満の中和力（ＩＣ５０）を示す、ｉ）表７Ａにおいて、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び、ＤＧと表示した当該ＲＳＶ−Ｆ変異体のいずれか１つに対する当該抗体、または、それらの抗原結合断片の結合親和性、及び／または、エピトープ特異性は、ＲＳＶ−Ｆ、または、ＲＳＶ−Ｆ ＤＳ−Ｃａｖ１に対する当該抗体、または、それらの抗原結合断片の結合親和性、及び／または、エピトープ特異性と比較して、減少または消失する、ｊ）当該抗体、または、それらの抗原結合性断片は、ヒトメタニューモウイルス（ＨＭＰＶ）に対する交差中和力（ＩＣ５０）を示す、ｋ）当該抗体、または、それらの抗原結合断片は、Ｄ２５、ＭＰＥ８、パリビズマブ、または、モタビズマブを備えていない、または、ｌ）当該抗体、または、それらの抗原結合断片は、Ｄ２５、及び／またはパリビズマブよりも、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約３５倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約５５倍、少なくとも約６０倍、少なくとも約７０倍、少なくとも約８０倍、少なくとも約９０倍、少なくとも約１００倍、約１００倍超、及び、前述したあらゆる数値の間にある倍数だけ高い中和力（ＩＣ５０）を示す、という特徴の１つ以上を有する。
他の特定の実施形態では、当該単離した抗体、または、それらの抗原結合断片は、上記の特徴ａ）〜ｌ）の少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または、少なくとも１２個を含む。
特定のその他の実施形態では、当該単離した抗体、または、それらの抗原結合断片は、ａ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つのＣＤＲＨ３アミノ酸配列、ｂ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つのＣＤＲＨ２アミノ酸配列、ｃ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つのＣＤＲＨ１アミノ酸配列、ｄ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つのＣＤＲＬ３アミノ酸配列、ｅ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つのＣＤＲＬ２アミノ酸配列、ｆ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つのＣＤＲＬ１アミノ酸配列、または、ｇ）ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）、及び、ｆ）の２つ以上のあらゆる組み合わせ、を含む。
特定のその他の実施形態では、当該単離した抗体、または、それらの抗原結合断片は、ａ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つの重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列、及び／または、ｂ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つの軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列、を含む。
特定のその他の実施形態では、当該単離した抗体、または、それらの抗原結合断片は、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つと、少なくとも７０％が同一であり、少なくとも７５％が同一であり、８０％が同一であり、少なくとも８５％が同一であり、少なくとも９０％が同一であり、少なくとも９５％が同一であり、少なくとも９６％が同一であり、少なくとも９７％が同一であり、少なくとも９８％が同一であり、少なくともが９９％が同一であり、及び／または、その間にあるすべてのパーセンテージで同一である抗体からなる群より選択する。
特定のその他の実施形態では、当該単離した抗体、または、それらの抗原結合断片は、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体からなる群から選択する。
その他の実施形態では、抗体をコードする単離した核酸配列、または、それらの抗原結合断片、または、本明細書に開示したその他の実施形態のいずれかのそれらの軽鎖、及び／または、重鎖を提供する。
その他の実施形態では、本明細書に開示したその他の実施形態の単離した核酸配列を含む発現ベクターを提供する。
その他の実施形態では、本明細書に開示したその他の実施形態の核酸配列または発現ベクターで、トランスフェクト、形質転換、または、形質導入した宿主細胞を提供する。
その他の実施形態では、本明細書に開示したその他の実施形態の単離した抗体、または、それらの抗原結合断片の１つ以上と、医薬として許容される担体、及び／または、賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。
その他の実施形態では、医薬組成物、本明細書に開示したその他の実施形態の１つ以上の核酸配列、または、本明細書に開示したその他の実施形態の１つ以上の発現ベクター、医薬として許容される担体、及び／または、賦形剤を提供する。
その他の実施形態では、本明細書に開示したその他の実施形態の核酸配列、または、本明細書に開示したその他の実施形態の発現ベクターを含むトランスジェニック生物を提供する。
その他の実施形態では、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症、または、ＲＳＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状を処置または予防する方法を提供しており、それらを必要とする患者、または、それらを必要とする疑いのある患者に対して、ａ）本明細書に開示したその他の実施形態の１つ以上の抗体、または、それらの抗原結合断片、ｂ）本明細書に開示したその他の実施形態の核酸配列、本明細書に開示したその他の実施形態の発現ベクター、本明細書に開示したその他の実施形態の宿主細胞、または、ｅ）本明細書に開示したその他の実施形態の医薬組成物、を投与して、ＲＳＶ感染症を、処置または予防し、または、ＲＳＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状を、処置、緩和、または、重症度を軽減することを含む。
その他の実施形態では、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症、及び／または、ヒトメタニューモウイルス（ＨＭＰＶ）感染症のいずれか、または、当該ＲＳＶ感染症、または、当該ＨＭＰＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状を処置または予防する方法を提供しており、それらを必要とする患者、または、それらを必要とする疑いのある患者に対して、ａ）本明細書に開示したその他の実施形態の１つ以上の抗体、または、それらの抗原結合断片、ｂ）本明細書に開示したその他の実施形態の核酸配列、ｃ）本明細書に開示したその他の実施形態の発現ベクター、ｄ）本明細書に開示したその他の実施形態の宿主細胞、または、ｅ）本明細書に開示したその他の実施形態の医薬組成物、を投与して、ＲＳＶ感染症を、処置または予防し、または、ＲＳＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状を、処置、緩和、または、重症度を軽減することを含む。その他の実施形態では、ａ）の１つ以上の抗体、または、それらの抗原結合断片を、表６に開示した抗体番号１７９、１８８、２１１、２２１、または、２２９と表示した抗体からなる群から選択する。
その他の実施形態では、その他の実施形態の方法が提供されており、当該方法は、患者に対して第２の治療薬を投与することをさらに含む。
その他の実施形態では、その他の実施形態の方法が提供されており、当該第２の治療薬は、抗ウイルス薬、ＲＳＶに特異的なワクチン、インフルエンザウイルスに特異的なワクチン、または、メタニューモウイルス（ＭＰＶ）に特異的なワクチン、ＲＳＶ抗原またはメタニューモウイルス（ＭＰＶ）抗原に特異的なｓｉＲＮＡ、ＲＳＶ抗原またはメタニューモウイルス（ＭＰＶ）抗原に特異的な二次抗体、抗ＩＬ−４Ｒ抗体、インフルエンザウイルス抗原に特異的な抗体、抗ＲＳＶ−Ｇ抗体、及び、ＮＳＡＩＤからなる群から選択する。
特定の実施形態では、１つ以上のあらゆる単離した抗体、もしくは、それらの抗原結合断片、及び、医薬として許容される担体、及び／または、賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
特定の実施形態では、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症の予防において、それを必要とする患者、または、それを必要とする疑いのある患者での使用、または、ＲＳＶ感染症に罹患している患者の処置での使用、または、当該感染症に関連する少なくとも１つの症状あるいは合併症の改善での使用のためのその他の実施形態の医薬組成物を提供しており、当該使用の結果、当該感染症の予防、または、当該感染症に関連する症状あるいは合併症の少なくとも１つの予防、改善、もしくは、重症度、及び／または、期間の抑制のいずれかに至る。
特定の実施形態では、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症、及び／または、ヒトメタニューモウイルス（ＨＭＰＶ）感染症、または、当該ＲＳＶ感染症、または、当該ＨＭＰＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状のいずれかの処置または予防において、それを必要とする患者、または、それを必要とする疑いのある患者での使用のためのその他の実施形態の医薬組成物を提供しており、当該使用の結果、当該感染症の予防、または、当該感染症に関連する少なくとも１つの症状あるいは合併症の少なくとも１つの予防、改善、もしくは、重症度、及び／または、期間の抑制のいずれかに至る。
特定のその他の実施形態では、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症の予防、または、ＲＳＶ感染症に罹患している患者の処置、または、当該感染症に関連する少なくとも１つの症状、もしくは、合併症の改善において、それらを必要とする患者に対して、それらを行うための医薬の製造におけるその他の実施形態の医薬組成物の使用を提供しており、当該使用の結果、当該感染症の予防、または、当該感染症に関連する症状あるいは合併症の少なくとも１つの予防、改善、もしくは、重症度、及び／または、期間の抑制のいずれかに至る。
特定のその他の実施形態では、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症、及び／または、ヒトメタニューモウイルス（ＨＭＰＶ）感染症、または、当該ＲＳＶ感染症、及び／または、当該ＨＭＰＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状のいずれかの予防であって、それらを必要とする患者、または、それらを必要とする疑いのある患者において予防をするための医薬の製造におけるその他の実施形態の医薬組成物の使用を提供しており、当該使用の結果、当該感染症の予防、または、当該感染症に関連する症状あるいは合併症の少なくとも１つの予防、改善、もしくは、重症度、及び／または、期間の抑制のいずれかに至る。
特に定義がされない限り、本明細書で使用するすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者が、一般的に理解するものと同じ意味を有する。本明細書で使用する用語「約」は、特定の列挙した数値に関して使用するとき、その値が、列挙した値から１％以下だけ変動し得ることを意味する。例えば、本明細書で使用する表現「約１００」は、９９と１０１、そして、その間のすべての値（例えば、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４など）を含む。
定義
「呼吸器合胞体ウイルス−Ｆタンパク質」、別名、「ＲＳＶ−Ｆ」または「ＲＳＶ Ｆ」は、Ｉ型膜貫通表面タンパク質であり、このものは、Ｎ末端切断シグナルペプチド、及び、Ｃ末端近傍の膜アンカーを有する（Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｐ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，（１９８４），ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）８１：７６８３−７６８７）。このＲＳＶ−Ｆタンパク質を、Ｆ０と表記した不活性６７ＫＤａ前駆体として合成する（Ｃａｌｄｅｒ，Ｌ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（２０００），２７７，１２２−１３１）。このＦ０タンパク質は、２つの部位で、フリン様プロテアーゼによって、ゴルジ複合体にてタンパク質分解的に活性化され、それぞれ、Ｎ末端及びＣ末端から２つのジスルフィド結合ポリペプチド、Ｆ２及びＦ１を生じる。２７個のアミノ酸のペプチド、別名、「ｐｅｐ２７」が放出されている。このｐｅｐ２７の両側にフリン開裂部位（ＦＣＳ）がある（Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｐ．Ｌ．，Ｍｏｔｔｅｔ，Ｇ．（１９９１），Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．，７２：３０９５−３１０１；Ｓｕｇｒｕｅ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，（２００１），Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．，８２，１３７５−１３８６）。当該Ｆ２サブユニットは、ヘプタドリピートＣ（ＨＲＣ）からなり、一方で、当該Ｆ１は、融合ポリペプチド（ＦＰ）、ヘプタドリピートＡ（ＨＲＡ）、ドメインＩ、ドメインＩＩ、ヘプタドリピートＢ（ＨＲＢ）、膜貫通（ＴＭ）及び細胞質ドメイン（ＣＰ）を含む（Ｓｕｎ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｕｅｓ（２０１３），５：２１ １−２２５を参照されたい）。このＲＳＶ−Ｆタンパク質は、細胞膜へのウイルス粒子の融合において役割を果たしており、そして、感染した細胞の表面で発現し、したがって、ウイルスの細胞間伝達、及び、シンシチウム形成において役割を果たす。当該ＲＳＶ−Ｆタンパク質のアミノ酸配列は、受託番号ＡＡＸ２３９９４としてＧｅｎＢａｎｋに提供されている。
「呼吸器合胞体ウイルス−Ｆタンパク質」、別名、「ＲＳＶ−Ｆ」または「ＲＳＶ Ｆ」は、Ｉ型膜貫通表面タンパク質であり、このものは、Ｎ末端切断シグナルペプチド、及び、Ｃ末端近傍の膜アンカーを有する（Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｐ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，（１９８４），ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）８１：７６８３−７６８７）。このＲＳＶ−Ｆタンパク質を、Ｆ０と表記した不活性６７ＫＤａ前駆体として合成する（Ｃａｌｄｅｒ，Ｌ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（２０００），２７７，１２２−１３１）。このＦ０タンパク質は、２つの部位で、フリン様プロテアーゼによって、ゴルジ複合体にてタンパク質分解的に活性化され、それぞれ、Ｎ末端及びＣ末端から２つのジスルフィド結合ポリペプチド、Ｆ２及びＦ１を生じる。２７個のアミノ酸のペプチド、別名、「ｐｅｐ２７」が放出されている。このｐｅｐ２７の両側にフリン開裂部位（ＦＣＳ）がある（Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｐ．Ｌ．，Ｍｏｔｔｅｔ，Ｇ．（１９９１），Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．，７２：３０９５−３１０１；Ｓｕｇｒｕｅ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，（２００１），Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．，８２，１３７５−１３８６）。当該Ｆ２サブユニットは、ヘプタドリピートＣ（ＨＲＣ）からなり、一方で、当該Ｆ１は、融合ポリペプチド（ＦＰ）、ヘプタドリピートＡ（ＨＲＡ）、ドメインＩ、ドメインＩＩ、ヘプタドリピートＢ（ＨＲＢ）、膜貫通（ＴＭ）及び細胞質ドメイン（ＣＰ）を含む（Ｓｕｎ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｕｅｓ（２０１３），５：２１ １−２２５を参照されたい）。このＲＳＶ−Ｆタンパク質は、細胞膜へのウイルス粒子の融合において役割を果たしており、そして、感染した細胞の表面で発現し、したがって、ウイルスの細胞間伝達、及び、シンシチウム形成において役割を果たす。当該ＲＳＶ−Ｆタンパク質のアミノ酸配列は、受託番号ＡＡＸ２３９９４としてＧｅｎＢａｎｋに提供されている。
ＲＳＶ−ＦのＰｒｅＦ三量体立体配座の安定化変異体、別名、「ＲＳＶ−ＤＳ−Ｃａｖ１」または「ＤＳ−Ｃａｖ１」は、とりわけ、Ｓｔｅｗａｒｔ−Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏｓ Ｏｎｅ，Ｖｏｌ. １０（６））：ｅ０１２８７７９、及び、ＷＯ ２０１１／０５０１６８に開示されており、そして、本明細書に開示した抗体の同定、単離、及び、特徴決定に使用した。
本明細書で使用する用語「実験室株」とは、インビトロ細胞培養において広く継代されているＲＳＶ株（サブタイプＡまたはＢ）のことを指す。「実験室株」は、それらの生物学的特性に影響を及ぼし得る適応変異を獲得することができる。本明細書で使用する「臨床株」とは、感染した個体から取得し、そして、少ない継代で組織培養にて単離及び増殖するＲＳＶ単離体（サブタイプＡまたはＢ）のことを指す。
用語「有効量９９」または「ＥＤ９９」は、アイソタイプ（ネガティブ）コントロールと比較して、ウイルス形成プラークの９９％が減少するという所望の効果をもたらす作用物質の投与量のことを指す。本発明において、当該ＥＤ９９は、例５に記載したように、インビボでウイルス感染を中和する（すなわち、９９％のウイルス量を減少させる）抗ＲＳＶ−Ｆ抗体の投与量のことを指す。
用語「ＩＣ５０」とは、生物学的または生化学的有用性に対する化合物（例えば、抗ＲＳＶ−Ｆ抗体）阻害の有効性を評価する「半最大阻害濃度」のことを指す。この定量的尺度は、特定の阻害剤が、所与の生物学的プロセスを半分まで阻害するのに必要な量のことを示す。特定の実施形態では、本明細書に開示した抗ＲＳＶ、及び／または、抗ＲＳＶ／抗ＨＭＰＶ交差中和抗体についてのＲＳＶウイルス中和力を、中和ＩＣ５０値として表示する。
「パリビズマブ」、別名、「ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標）」は、ＵＳ７，６３５，５６８、及び、ＵＳ５，８２４，３０７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖及び軽鎖可変ドメインを有するヒト化抗ＲＳＶ−Ｆ抗体である。ＲＳＶ−Ｆタンパク質に免疫特異的に結合するこの抗体は、現在のところ、高リスクの小児における重篤なＲＳＶ疾患の受動免疫予防薬としてＦＤＡから承認を受けており、そして、ＲＳＶシーズン（北半球では１１月から４月）を通じて、１５ｍｇ／体重ｋｇの推奨月用量で筋肉内投与する。ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標）は、９５％のヒト抗体配列と、５％のマウス抗体配列とから構成されている。Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９７），Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓｅａｓｅｓ １７６：１２１５−１２２４も参照されたい。
「モタビズマブ」、別名「ＮＵＭＡＸ（商標）」は、パリビズマブの重鎖及び軽鎖の相補性決定領域のインビトロでの親和性成熟によって誘導した増強した効力を示すＲＳＶ−Ｆ特異的ヒト化モノクローナル抗体である。参考までに、ＮＵＭＡＸ（商標）抗体のアミノ酸配列は、米国特許出願公開第２００３／００９１５８４号、及び、米国特許第６，８１８，２１６号、及び、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．３５０（１）：１２６−１４４，、及び、Ｗｕ，ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３６８：６５２−６６５に開示されている。また、本明細書では、抗体の重鎖を配列番号３５９として、そして、抗体の軽鎖を配列番号３６０として示す。
本明細書で使用する用語「処置する」、「処置」、及び、「処置すること」とは、１つ以上の治療剤の投与（１つ以上の予防薬または治療薬の投与などがあるが、これらに限定されない）の結果、上気道、及び／または、下気道ＲＳＶ感染症、及び／または、ヒトメタニューモウイルス（ＨＭＰＶ）、中耳炎、または、それに関連する症状もしくは呼吸状態（喘息、喘鳴、または、それらの組み合わせなど）の進行、重症度、及び／または、期間が、抑制し、または、改善することを指す。特定の実施形態では、これらの用語は、ＲＳＶ、及び／または、ＨＭＰＶの複製の抑制または阻害、その他の組織、または、対象へのＲＳＶ、及び／または、ＨＭＰＶの拡散（例えば、下気道への伝播）の阻害または抑制、ＲＳＶ、及び／または、ＨＭＰＶによる細胞の感染の阻害または抑制、または、上気道、及び／または、下気道ＲＳＶ感染症、または、中耳炎に関連する１つ以上の症状の改善のことを指す。
本明細書で使用する用語「予防する」、「予防すること」、及び「予防」とは、上気道、及び／または、下気道のＲＳＶ及び／またはＨＭＰＶ感染症、中耳炎、または、対象におけるそれに関連する呼吸病態の進行または発症の予防または阻害、治療剤の投与（例えば、予防薬または治療薬）に起因する、上気道ＲＳＶ及び／またはＨＭＰＶ感染症から下気道ＲＳＶ及び／またはＨＭＰＶ感染症、中耳炎、もしくは、それに関連する呼吸病態の進行の予防または阻害、上気道及び／または下気道のＲＳＶ及び／またはＨＭＰＶ感染症、中耳炎、もしくは、それに関連する呼吸病態の症状の予防、または、治療剤の組み合わせの投与（例えば、予防薬または治療薬の組み合わせ）のことを指す。本明細書で使用する用語「改善する」及び「軽減する」とは、病態、または、そのあらゆる症状の重症度の低減または減少のことを指す。
本明細書で使用する用語「抗体」は、ジスルフィド結合によって相互に結合した４本のポリペプチド鎖、２本の重（Ｈ）鎖と２本の軽（Ｌ）鎖とを含む免疫グロブリン分子（すなわち、「完全抗体分子」）、ならびに、その多量体（例えば、ＩｇＭ）、または、その抗原結合断片のことを指すことを意図する。各重鎖（ＨＣ）は、重鎖可変領域（「ＨＣＶＲ」または「ＶＨ」）と、重鎖定常領域（ドメインＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３からなる）とからなる。各軽鎖（ＬＣ）は、軽鎖可変領域（「ＬＣＶＲ」または「ＶＬ」）と、軽鎖定常領域（ＣＬ）とからなる。さらに、このＶＨ及びＶＬ領域は、保存が進んだ領域、別名、フレームワーク領域（ＦＲ）が点在している超可変領域、別名、相補性決定領域（ＣＤＲ）に細分することができる。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端へ、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で配置した３つのＣＤＲと４つのＦＲとからなる。本発明の特定の実施形態では、抗体（または、その抗原結合断片）のＦＲは、ヒト生殖細胞系列配列と同一とし得るか、あるいは、天然のもの、もしくは、人工的に改変したものとし得る。アミノ酸コンセンサス配列は、２つ以上のＣＤＲの並列分析に基づいて定義し得る。したがって、重鎖でのＣＤＲは、それぞれ、「ＣＨＲＨ１」、「ＣＤＲＨ２」、及び「ＣＤＲＨ３」と命名し、また、軽鎖でのＣＤＲは、「ＣＤＲＬ１」、「ＣＤＲＬ２」、及び、「ＣＤＲＬ３」と命名する。
また、１つ以上のＣＤＲ残基の置換、または、１つ以上のＣＤＲの置換も可能である。結合のために、１つまたは２つのＣＤＲを省くことができる抗体が、科学文献に記載されている。Ｐａｄｌａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９５ ＦＡＳＥＢ Ｊ．９：１３３−１３９）は、公表されている結晶構造に基づいて、抗体とそれらの抗原との間の接触領域を分析し、そして、ＣＤＲ残基の約５分の１から３分の１だけが、実際に当該抗原と接触している、と結論づけた。また、Ｐａｄｌａｎは、１つまたは２つのＣＤＲが抗原と接触するアミノ酸を持たない数多くの抗体を発見した（Ｖａｊｄｏｓ ｅｔ ａｌ．，２００２ Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３２０：４１５−４２８も参照されたい）。
抗原と接触していないＣＤＲ残基は、分子モデリングによって、及び／または、経験的に、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲの外側にあるＫａｂａｔ ＣＤＲの領域から、従前の研究に基づいて同定することができる（例えば、ＣＤＲＨ２の残基Ｈ６０〜Ｈ６５は必要とされないことが多い）。ＣＤＲ、または、その残基（複数可）を省略する場合、通常、その他のヒト抗体配列の対応する位置を占めるアミノ酸、または、そのような配列のコンセンサスで置換する。ＣＤＲ内の置換の位置、及び、置換するアミノ酸もまた、経験的に選択することができる。
本明細書に開示した完全ヒトモノクローナル抗体は、対応する生殖細胞系列配列と比較して、当該重鎖及び軽鎖可変ドメインのフレームワーク、及び／または、ＣＤＲ領域での１つ以上のアミノ酸置換、挿入、及び／または、欠失を含み得る。そのような変異は、本明細書に開示したアミノ酸配列を、例えば、公共の抗体配列データベースから入手可能な生殖細胞系列配列と比較することで、容易に確認することができる。本発明は、本明細書に開示したあらゆるアミノ酸配列に由来する抗体、及び、それらの抗原結合断片を含んでおり、１つ以上のフレームワーク、及び／または、ＣＤＲ領域内にある１つ以上のアミノ酸が、抗体が由来する生殖細胞系列配列での対応する残基（複数可）、または、別のヒト生殖細胞系列配列の対応する残基（複数可）、または、対応する生殖細胞系列残基（複数可）の保存的アミノ酸置換（そのような配列変化を、本明細書では「生殖細胞系列変異」と総称する）に変異する。当業者であれば、本明細書に開示した当該重鎖及び軽鎖可変領域配列を手始めに、１つ以上の個々の生殖細胞系列変異、または、それらの組み合わせを含む数多くの抗体、及び、抗原結合断片を容易に作製することができる。特定の実施形態では、ＶＨドメイン、及び／または、ＶＬドメイン内のすべてのフレームワーク残基、及び／または、ＣＤＲ残基を、当該抗体の由来元である生殖細胞系列配列に認められる残基に戻す変異をさせる。他の実施形態では、特定の残基だけが、例えば、ＦＲ１の最初の８個のアミノ酸、または、ＦＲ４の最後の８個のアミノ酸に認められる変異残基だけ、あるいは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、または、ＣＤＲ３に認められる変異残基だけを、元の生殖細胞系列配列に戻す変異をさせる。その他の実施形態では、１つ以上のフレームワーク、及び／または、ＣＤＲ残基（複数可）は、異なる生殖細胞系列配列（すなわち、抗体の由来元である生殖細胞系列配列とは異なる生殖細胞系列配列）の対応する残基（複数可）に変異する。さらに、本発明の抗体は、当該フレームワーク、及び／または、ＣＤＲ領域内の２つ以上の生殖細胞系列変異のあらゆる組み合わせを含み得るものであって、例えば、特定の個々の残基が、特定の生殖細胞系列配列の対応する残基に変異する一方で、元の生殖細胞系列配列とは異なる特定のその他の残基は、維持するか、あるいは、異なる生殖細胞系列配列の対応する残基に変異する。変異が一旦完了すると、１つ以上の生殖細胞系列変異を含む抗体及び抗原結合断片は、改善した結合特異性、増大した結合親和性、（場合によっては）改善または強化したアンタゴニストまたはアゴニストの生物学的特性、免疫原性の低下など、１つ以上の所望の特性について、容易に試験をすることができる。本発明は、この一般的な方法で取得した抗体及び抗原結合断片を含む。
また、本発明は、１つ以上の保存的置換を有する、本明細書に開示したＣＤＲアミノ酸配列のあらゆる変異体を含む完全モノクローナル抗体も含む。例えば、本発明は、本明細書に開示したあらゆるＣＤＲアミノ酸配列と比較して、例えば、１０個以下、８個以下、６個以下、４個以下などの保存的アミノ酸置換を有するＣＤＲアミノ酸配列を有する抗体を含む。
本明細書で使用する用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する抗体を含む、ことを意図している。本発明のヒトモノクローナル抗体は、例えば、ＣＤＲ、特に、ＣＤＲ３におけるヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列でコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダムもしくは部位特異的突然変異誘発、または、インビボでの体細胞突然変異によって導入する突然変異）を含み得る。
しかしながら、本明細書で使用する用語「ヒト抗体」は、ＣＤＲ配列が別の哺乳動物種（例えば、マウス）の生殖細胞系列に由来しているモノクローナル抗体を、ヒトＦＲ配列に移植する、ことは意図していない。
用語「ヒト化抗体」とは、当該抗体の１つ以上のＣＤＲが、１つ以上の対応するＣＤＲで置換されており、非ヒト由来（例えば、マウス、ラット、ウサギ、霊長類）抗体を取得するヒト抗体のことを指す。また、ヒト化抗体は、特定の非ＣＤＲ配列、または、そのような非ヒト抗体に由来する残基、ならびに、１つ以上の非ヒトＣＤＲ配列を含み得る。そのような抗体は、「キメラ」抗体とも称し得る。
用語「組換え」は、一般的には、遺伝子工学的方法で産生するあらゆるタンパク質、ポリペプチド、または、目的の遺伝子を発現する細胞のことを指す。タンパク質またはポリペプチドに関して使用する用語「組換え」は、組換えポリヌクレオチドの発現によって産生するポリペプチドのことを意味する。本発明の免疫原性組成物において使用するタンパク質は、天然の供給源から単離し得るものであり、あるいは、遺伝子工学的方法で産生し得る。
本発明の抗体は、幾つかの実施形態では、組換えヒト抗体とし得る。本明細書で使用する用語「組換えヒト抗体」は、組換え手段によって調製、発現、作成、または、単離した、ヒトまたはヒト化抗体を含むすべての抗体、例えば、宿主細胞（さらに後述する）にトランスフェクトした組換え発現ベクターを用いて発現した抗体、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリー（さらに後述する）から単離した抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離した抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０：６２８７−６２９５）、または、ヒト免疫グロブリン遺伝子配列のその他のＤＮＡ配列へのスプライシングに関与するあらゆるその他の手段によって調製、発現、作成、または、単離した抗体を含む、ことを意図する。そのような組換えヒト抗体は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する。しかしながら、特定の実施形態では、そのような組換えヒト抗体は、インビトロで、突然変異誘発（または、ヒトＩｇ配列についてのトランスジェニック動物を使用する場合は、インビボで、体細胞突然変異誘発）に付され、そして、当該組換え抗体のＶＨ領域及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系列ＶＨ及びＶＬ配列に由来し、関連してはいるが、インビボで、ヒト抗体生殖細胞系列レパートリー内に天然には存在し得ない。
用語「特異的に結合する」または「〜に対して特異的に結合する」などは、抗体、または、その抗原結合断片が、生理学的条件下で、比較的安定な抗原と複合体を形成することを意味する。特異的結合は、少なくとも約１×１０−６Ｍ以下の平衡解離定数によって特徴付けることができる（例えば、小さいＫＤは、緊密な結合を表す）。２つの分子が特異的に結合するかどうかを決定するための方法は、当該技術分野において周知であり、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴などがある。本明細書に記載したように、例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ ＨＴＸ機器（Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いた表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）、バイオレイヤー干渉測定法によって、例えば、ＲＳＶ−Ｆに対して特異的に結合する抗体を同定する。さらに、ＲＳＶ−Ｆタンパク質、及び、ＨＭＰＶによって発現する抗原などの１つ以上の追加の抗原に結合する多重特異性抗体、または、ＲＳＶ−Ｆの２つの異なる領域に結合する二重特異性抗体は、本明細書では、それでもなお、「特異的に結合する」抗体と考える。特定の実施形態では、本明細書に開示した抗体は、約１×１０−６Ｍ、約１×１０−７Ｍ、約１×１０−８Ｍ、約１×１０−９Ｍ、約１×１０−１０Ｍ、約１×１０−６Ｍと約１×１０−７Ｍとの間、約１×１０−７Ｍと約１×１０−８Ｍとの間、約１×１０−８Ｍと約１×１０−９Ｍとの間、または、約１×１０−９Ｍと約１×１０−１０Ｍとの間の平衡解離定数（つまりは、特異性）を示す。
用語「高親和性」抗体とは、ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶに対する結合親和性を有するモノクローナル抗体のことを指すものであり、同親和性は、表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）、例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ ＨＴＸ機器（Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用するバイオレイヤー干渉測定法、または、溶液親和性ＥＬＩＳＡで測定された、少なくとも１０−９Ｍ、より好ましくは、１０−１０Ｍ、より好ましくは１０−１１Ｍ、より好ましくは１０−１２ＭのＫＤとして示される。
用語「スローオフ速度」、「Ｋｏｆｆ」、または、「ｋｄ」は、ＲＳＶ−Ｆから解離する抗体を意味しており、同抗体は、表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）、または、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ ＨＴＸ機器（Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）によって決定された、１×１０−３ｓ”１以下、好ましくは、１×１０−４ｓ”１以下の速度定数を有する。
本明細書で使用する抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合断片」などの用語は、天然に存在する、酵素的に入手可能な、合成の、または、遺伝子操作したポリペプチド、または、糖タンパク質を含み、そのものは、抗原と特異的に結合して複合体を形成する。特定の実施形態では、本明細書で使用する抗体の「抗原結合部分」または「抗体断片」の用語は、ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶに結合する能力を保持している抗体の１つ以上の断片のことを指す。
抗体断片は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｄＡｂ断片、ＣＤＲを含む断片、または、単離したＣＤＲを含み得る。抗体の抗原結合断片は、例えば、タンパク質分解消化、または、抗体可変ドメイン、及び（任意の）定常ドメインをコードするＤＮＡの操作及び発現に関与する組換え遺伝子操作技術などの、あらゆる適切な標準技術を用いて、完全抗体分子から誘導し得る。そのようなＤＮＡは、公知であり、及び／または、例えば、市販品、ＤＮＡライブラリー（例えば、ファージ−抗体ライブラリーを含む）から容易に入手可能であり、または、合成することができる。当該ＤＮＡを、配列決定して、そして、化学的に、または、分子生物学的技術を用いて操作をして、例えば、１つ以上の可変ドメイン、及び／または、定常ドメインを適切な位置に配置し、あるいは、コドンを導入し、システイン残基を生成し、アミノ酸の修飾、付加、または、欠失などをし得る。
抗原結合断片の例として、（ｉ）Ｆａｂ断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、（ｉｉｉ）Ｆｄ断片、（ｉｖ）Ｆｖ断片、（ｖ）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子、（ｖｉ）ｄＡｂ断片、及び、（ｖｉｉ）抗体の超可変領域を模倣するアミノ酸残基（例えば、ＣＤＲ３ペプチドなどの単離した相補性決定領域（ＣＤＲ））、または、拘束性ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４ペプチドからなる最小認識単位などがあるが、これらに限定されない。本明細書で使用する表現「抗原結合断片」は、ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノボディ（例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディなど）、小型モジュラー免疫医薬（ＳＭＩＰ）、及び、シャーク可変ＩｇＮＡＲドメインなどのその他の遺伝子操作した分子も含む。
抗体の抗原結合断片は、一般的には、少なくとも一つの可変ドメインを含む。当該可変ドメインは、あらゆる大きさのもの、または、アミノ酸組成のものとし得るものであり、そして、一般的に、少なくとも１つのＣＤＲを含み、このものは、１つ以上のフレームワーク配列に隣接するか、または、インフレームにある。ＶＬドメインと会合したＶＨドメインを有する抗原結合断片において、当該ＶＨドメイン及びＶＬドメインは、あらゆる適切な配置で、互いに対して位置し得る。例えば、当該可変領域を、二量体とすることができ、そして、ＶＨ−ＶＨ、ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＬ二量体を含み得る。あるいは、抗体の当該抗原結合断片は、単量体ＶＨまたはＶＬドメインを含み得る。
特定の実施形態では、抗体の抗原結合断片は、少なくとも１つの定常ドメインに共有結合した少なくとも１つの可変ドメインを含み得る。本発明の抗体の抗原結合断片内に認め得る可変ドメイン及び定常ドメインの例示的な構成として、（ｉ）ＶＨ−ＣＨ１、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＨ２、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＨ３、（ｉｖ）ＶＨ−Ｃｈ１−Ｃｈ２、（ｖ）ＶＨ−Ｃｈ１−Ｃｈ２−Ｃｈ３、（ｖｉ）ＶＨ−ＣＨ２−ＣＨ３、（ｖｉｉ）ＶＨ−ＣＬ、（ｖｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１、（ｉｘ）ＶＬ−ＣＨ２、（ｘ）ＶＬ−ＣＨ３、（ｘｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２、（ｘｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３、（ｘｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ２−ＣＨ３、及び、（ｘｉｖ）ＶＬ−ＣＬがあるが、これらに限定されない。上掲の列挙した例示的な構成のいずれかを含む、可変ドメイン及び定常ドメインのあらゆる構成において、当該可変ドメイン及び定常ドメインは、互いに直接連結するか、または、完全ヒンジ、もしくは、部分ヒンジ、もしくは、リンカー領域のいずれかで連結することができる。ヒンジ領域は、少なくとも２つ（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０、または、それ以上）のアミノ酸からなり得るものであり、そのものは、単一のポリペプチド分子における隣接する可変ドメイン、及び／または、定常ドメインの間に柔軟である、または、半柔軟である連結をもたらす。さらに、本発明の抗体の抗原結合断片は、互いに非共有的会合をしており、及び／または、１つ以上の単量体ＶＨまたはＶＬドメインを（例えば、ジスルフィド結合（複数可）によって）有する、上掲の列挙したあらゆる可変ドメイン構成、及び、定常ドメイン構成のホモ二量体、または、ヘテロ二量体（または、その他の多量体）を含み得る。
完全抗体分子と同様に、抗原結合断片は、単一特異性、または、多重特異性（例えば、二重特異性）とし得る。抗体の多重特異性抗原結合断片は、一般的には、少なくとも２つの異なる可変ドメインを含み、各可変ドメインは、別々の抗原、または、同じ抗原の異なるエピトープに特異的に結合することができる。本明細書に開示した例示的な二重特異性抗体フォーマットを含むあらゆる多重特異性抗体フォーマットは、当該技術分野において利用可能な通常の技術を用いて、本発明の抗体の抗原結合断片に関する使用に役立て得る。
特定の実施形態では、本発明の抗体または抗体断片は、抗生物質、第２の抗ＲＳＶ−Ｆ抗体、抗ＨＭＰＶ抗体、ワクチン、または、トキソイド、または、ＲＳＶ感染症、及び／または、ＨＭＰＶ感染症の処置に有用なその他のあらゆる治療用部分などの治療用部分（「免疫抱合体」）にコンジュゲートし得る。
本明細書で使用する「単離した抗体」とは、異なる抗原特異性を有するその他の抗体（Ａｂ）を実質的に含まない抗体（例えば、ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶに特異的に結合する単離した抗体）、または、その断片を指すことを意図しており、ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶ以外の抗原に特異的に結合するＡｂを実質的に含まない。
本明細書で使用する「ブロッキング抗体」または「中和抗体」（または、「ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶ活性を中和する抗体」）とは、ＲＳＶ−Ｆ、または、ＨＭＰＶ抗原への結合が、本明細書に開示したように、ＲＳＶ−Ｆ及び／またはＨＭＰＶの少なくとも１つの生物学的活性の阻害をもたらす抗体を指すことを意図している。例えば、本発明の抗体は、ＲＳＶ及び／またはＨＭＰＶの宿主細胞への融合のブロック、または、シンシチウム形成の予防、または、ＲＳＶ及び／またはＨＭＰＶが引き起こす原発性疾患の予防に役立ち得る。あるいは、本発明の抗体は、ＲＳＶ感染症、及び／または、ＨＭＰＶ感染症の少なくとも１つの症状を改善する能力を実証し得る。ＲＳＶ−Ｆ及び／またはＨＭＰＶの生物学的活性のこの阻害は、ＲＳＶ−Ｆ及び／またはＨＭＰＶの生物学的活性の１つ以上の指標を、幾つかの標準的なインビトロアッセイ（本明細書に記載した中和アッセイなど）、または、当該技術分野で公知のインビボアッセイ（例えば、本明細書に記載した、ＲＳＶ及び／またはＨＭＰＶを接種し、続いて、１つ以上の抗体を投与して防御を検討する動物モデル）の１つ以上によって測定することで、評価できる。
本明細書で使用する用語「表面共鳴プラズマ」は、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）システム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ及びＰｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を使用して、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化を検出することで、リアルタイムの生体分子相互作用を分析することを可能にする光学現象のことを指す。
本明細書で使用する用語「ＫＤ」は、特定の抗体−抗原相互作用の平衡解離定数を指すことを意図している。
用語「エピトープ」は、パラトープとして知られている抗体分子の可変領域での特異的抗原結合部位と相互作用する抗原決定基のことを指す。単一の抗原は、複数のエピトープを有し得る。したがって、異なる抗体は、抗原上の異なる領域に結合し得るものであり、そして、異なる生物学的効果を有し得る。また、用語「エピトープ」は、Ｂ細胞、及び／または、Ｔ細胞が応答する抗原上の部位のことも指す。そのものは、抗体によって結合する抗原の領域のことも指す。エピトープは、構造的または機能的に定義され得る。機能的エピトープは、一般的に、構造的エピトープのサブセットであり、そして、当該相互作用の親和性に直接寄与するそれらの残基を有する。また、エピトープは、立体構造的、すなわち、非線形アミノ酸からもなり得る。特定の実施形態では、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基、または、スルホニル基などの分子の化学的に活性な表面群である決定基を含み得るものであり、そして、特定の実施形態では、特定の三次元構造特性、及び／または、比電荷特性を有し得る。
用語「実質的同一性」または「実質的に同一」とは、核酸またはその断片を指す場合には、その他の核酸（または、その相補鎖）を適切なヌクレオチド挿入または欠失と最適に整列させて、後述するＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ、または、ＧＡＰなどの配列同一性のあらゆる公知のアルゴリズムによって測定して、ヌクレオチド塩基の少なくとも約９０％、そして、より好ましくは、少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のヌクレオチド配列同一性があることを示す。したがって、特定のパーセンテージの「同一性」を示す核酸配列は、そのパーセンテージの同一性を共有し、及び／または、そのパーセンテージは互いに「同一」である。参照核酸分子に対して実質的な同一性を有する核酸分子は、ある場合には、当該参照核酸分子がコードするポリペプチドと同じ、または、実質的に類似のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードし得る。
特定の実施形態では、開示した抗体核酸配列は、その他の配列に対して、例えば、少なくとも７０％が同一であり、少なくとも７５％が同一であり、８０％が同一であり、少なくとも８５％が同一であり、少なくとも９０％が同一であり、少なくとも９５％が同一であり、少なくとも９６％が同一であり、少なくとも９７％が同一であり、少なくとも９８％が同一であり、少なくとも９９％、及び／または、その間のすべてのパーセンテージで同一であり、及び／または、そのようなパーセンテージでの同一性を互いが（または、本明細書に開示した抗体配列の特定のサブセットと）共有している。
ポリペプチドに適用する場合、用語「実質的同一性」または「実質的に同一」は、デフォルトギャップウェイトを使用するプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴなどで最適に整列した場合に、２つのペプチド配列が、少なくとも９０％の配列同一性、さらにより好ましくは、少なくとも９５％、９８％または９９％の配列同一性を共有することを意味する。したがって、特定のパーセンテージの「同一性」を示すアミノ酸配列は、そのパーセンテージの同一性を共有し、及び／または、そのパーセンテージは互いに「同一」である。したがって、ある特定のパーセンテージの「同一性」を示すアミノ酸配列は、そのパーセンテージで同一性を共有しており、及び／または、そのパーセンテージは互いに「同一」である。
特定の実施形態では、開示した抗体アミノ酸配列は、その他の配列に対して、例えば、少なくとも７０％が同一であり、少なくとも７５％が同一であり、少なくとも８０％が同一であり、少なくとも８５％が同一であり、少なくとも９０％が同一であり、少なくとも９５％が同一であり、少なくとも９６％が同一であり、少なくとも９７％が同一であり、少なくとも９８％が同一であり、少なくとも９９％が同一であり、及び／または、その間のすべてのパーセンテージで同一であり、及び／または、そのようなパーセンテージでの同一性を互いが（または、本明細書に開示した抗体配列の特定のサブセットと）共有している。
好ましくは、同一ではない残基の位置は、保存的アミノ酸置換によって異なる。「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が、類似の化学的性質（例えば、電荷、または、疎水性）を有する側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基での置換のことである。一般的に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能的特性を実質的に変えない。２つ以上のアミノ酸配列が、保存的置換によって互いに異なる場合、類似性のパーセントまたは程度は、置換の保存的性質を補正するために上方に補正し得る。この調整を行うための手段は、当業者に周知である。（例えば、Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９４）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２４：３０７−３３１を参照されたい）。類似の化学的性質を有する側鎖を持つアミノ酸の群の例として、１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、及び、イソロイシン、２）脂肪族−ヒドロキシル側鎖：セリン、及び、トレオニン、３）アミド含有側鎖：アスパラギン、及び、グルタミン、４）芳香族側鎖、フェニルアラニン、チロシン、及び、トリプトファン、５）塩基性側鎖：リジン、アルギニン、及び、ヒスチジン、６）酸性側鎖：アスパラギン酸、及び、グルタミン酸、及び、７）硫黄含有側鎖：システイン、及び、メチオニンがある。好ましい保存的アミノ酸置換基は、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタミン酸−アスパラギン酸、及び、アスパラギン−グルタミンである。あるいは、保存的置換とは、Ｇｏｎｎｅｔ ｅｔ ａｌ．（１９９２） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６：１４４３ ４５に開示されているＰＡＭ２５０対数尤度行列において、正の値を有するあらゆる変更である。「適度に保存的な」置換とは、ＰＡＭ２５０対数尤度行列において、負でない値を有するあらゆる変更である。
ポリペプチドの配列類似性は、一般的には、配列分析ソフトウェアを用いて測定する。タンパク質分析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含む様々な置換、欠失、及び、その他の修飾に割り当てられた類似性の尺度を用いて類似配列を照合する。例えば、ＧＣＧソフトウェアは、異なる生物種由来の相同ポリペプチド、または、野生型タンパク質と、そのムテインとの間での密接に関連したポリペプチド間の配列相同性または配列同一性を決定するためのデフォルトパラメーターと共に使用できるＧＡＰ及びＢＥＳＴＦＩＴなどのプログラムを含む。例えば、ＧＣＧバージョン６．１を参照されたい。また、ポリペプチド配列は、ＧＣＧバージョン６．１のプログラムであるＦＡＳＴＡを、デフォルトまたは推奨パラメーターと共に用いて比較することができる。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２、及び、ＦＡＳＴＡ３）は、クエリー配列と検索配列との間で最も重複する領域のアラインメント及びパーセント配列同一性を提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００）前出）。本発明の配列を、異なる生物由来の多数の配列を含むデータベースと比較するときの別の好ましいアルゴリズムは、デフォルトパラメーターを使用するコンピュータープログラムＢＬＡＳＴ、特に、ＢＬＡＳＴＰまたはＴＢＬＡＳＴＮである。（例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２１５：４０３ ４１０及び（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２５：３３８９ ４０２を参照されたい）。
特定の実施形態では、本発明の方法での使用のための当該抗体または抗体断片は、単一特異性、二重特異性、または、多重特異性とし得る。多重特異性抗体は、１つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに対して特異的であり、あるいは、２つ以上の標的ポリペプチドのエピトープに対して特異的な抗原結合ドメインを含み得る。本発明の関連で使用することができる例示的な二重特異性抗体フォーマットは、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）ＣＨ３ドメイン、及び、第２のＩｇ ＣＨ３ドメインの使用に関係しており、当該第１及び第２のＩｇ ＣＨ３ドメインは、互いに少なくとも１つのアミノ酸が異なっており、及び、少なくとも１つのアミノ酸の相違は、当該アミノ酸の相違が認められない二重特異性抗体と比較して、プロテインＡへの当該二重特異性抗体の結合を抑制する。ある実施形態では、当該第１のＩｇ ＣＨ３ドメインは、プロテインＡに結合しており、かつ、当該第２のＩｇ ＣＨ３ドメインは、Ｈ９５Ｒ修飾（ＩＭＧＴエクソン番号付与法によるもの、ＥＵ番号付与法ではＨ４３５Ｒ）などのプロテインＡ結合を抑制または消失させる突然変異を含む。当該第２のＣＨ３は、Ｙ９６Ｆ修飾（ＩＭＧＴによるもの、ＥＵではＹ４３６Ｆ）をさらに含み得る。当該第２のＣＨ３で認められ得るさらなる修飾として、ＩｇＧ１モノクローナル抗体の場合、Ｄ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、及び、Ｖ８２Ｉ（ＩＭＧＴによるもの、ＥＵでは、Ｄ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、及び、Ｖ４２２Ｉ）、ＩｇＧ２モノクローナル抗体の場合、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、及び、Ｖ８２Ｉ（ＩＭＧＴによるもの、ＥＵでは、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、及び、Ｖ４２２Ｉ）、及び、ＩｇＧ４モノクローナル抗体の場合、Ｑ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９Ｑ、及び、Ｖ８２Ｉ（ＩＭＧＴによるもの、ＥＵでは、Ｑ３５５Ｒ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９Ｑ、及び、Ｖ４２２Ｉ）がある。上記した二重特異性抗体フォーマットの変形は、本発明の範囲内であると考えられる。
語句「治療有効量」は、投与して所望の効果をもたらす量のことを意味する。正確な量は、処置の目的に応じて定まり、そして、当業者であれば、公知の技術を使用して確認することができる（例えば、Ｌｌｏｙｄ（１９９９）Ｔｈｅ Ａｒｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇを参照されたい）。
「免疫原性組成物」は、抗原／免疫原、例えば、ウイルスもしくは細菌などの微生物、または、その成分、タンパク質、ポリペプチド、タンパク質もしくはポリペプチドの断片、不活性化した全細胞、サブユニットもしくは弱毒化ウイルス、または、多糖類、または、それらの組み合わせを含む組成物に関するものであり、当該免疫原性組成物に存在する１つ以上の当該抗原／免疫原に対して、レシピエントの体液性及び／または細胞性免疫系を刺激するために投与する。本発明の免疫原性組成物は、全身経路を介して免疫原性組成物を投与する手段によって、ＲＳＶ感染症、及び／または、ＨＭＰＶ感染症に感受性のあるヒト、または、ＲＳＶ感染症、及び／または、ＨＭＰＶ感染症に罹患している、または、感受性であると疑われるヒトを処置するために使用することができる。これらの投与は、筋肉内（ｉ．ｍ．）、皮内（ｉ．ｄ．）、鼻腔内もしくは吸入経路、または、皮下（ｓ．ｃ．）経路を介した注射、パッチ、または、その他の経皮送達装置の適用を含むことができる。ある実施形態では、当該免疫原性組成物は、哺乳動物を受動的に保護または処置するために使用できるワクチンの製造、または、ポリクローナル抗体もしくはモノクローナル抗体の誘発において使用し得る。
互換的に用いる用語「ワクチン」または「ワクチン組成物」とは、動物において免疫反応を誘導する少なくとも１つの免疫原性組成物を含む組成物のことを指す。
特定の実施形態では、目的のタンパク質は、抗原を含む。分子に関する用語「抗原」、「免疫原」、「抗原性」、「免疫原性」、「抗原的に活性」、及び、「免疫学的に活性」は、特異的な体液性免疫反応、及び／または、細胞性免疫反応を誘導することができるあらゆる物質のことを指す。ある実施形態では、抗原は、上記のように定義したように、エピトープを含む。
本明細書で使用する「免疫学的防御量」とは、レシピエントにおいて免疫原性応答を誘導するのに有効であり、健康への悪影響、または、それらの合併症などの疾患の徴候または症状を、予防または改善するのに十分な抗原の量のことである。体液性免疫または細胞性免疫の一方または双方を誘導することができる。組成物に対する動物の当該免疫原性応答は、例えば、間接的に抗体力価の測定、リンパ球増殖アッセイを通して、または、直接に微生物を接種した後の徴候及び症状のモニタリングを通して、評価することができる。免疫原性組成物またはワクチンが付与した防御免疫は、例えば、接種生物の排出量の減少、対象の、死亡率、罹患率、体温、及び、全体的な体調などの臨床徴候の低下、健康、及び、パフォーマンスを測定することで、評価することができる。当該免疫反応は、細胞性、及び／または、体液性免疫の誘導を含むことができるが、これらに限定されない。治療上有効な当該組成物またはワクチンの量は、使用する特定の生物、または、処置または予防接種を受ける動物の病態に応じて変化し得る。
本明細書で使用する、対象における「免疫反応」または「免疫学的応答」とは、抗原／免疫源に対する体液性免疫反応、細胞性免疫反応、または、体液性及び細胞性免疫反応の発生のことを指す。「体液性免疫反応」とは、少なくとも部分的に、抗体が媒介したもののことを指す。「細胞性免疫反応」とは、Ｔリンパ球、または、その他の白血球、または、それらの双方が媒介するものであり、また、活性化Ｔ細胞、白血球、または、それらの双方が産生するサイトカイン、ケモカイン、及び、類似の分子の産生を含む。免疫反応は、当該技術分野において公知の標準的なイムノアッセイ、及び、中和アッセイを用いて決定することができる。
本明細書で使用する「免疫原性」とは、同定した疾患を引き起こす細菌またはウイルスに対して特異的な免疫反応を引き起こすタンパク質またはポリペプチドの能力のことを指す。
特に断りのない限り、本明細書で使用する用語「抗体」は、２つの免疫グロブリン重鎖、及び、２つの免疫グロブリン軽鎖を含む抗体分子（すなわち、「完全抗体分子」）、ならびに、それらの抗原結合断片を含むものと理解するものとする。本明細書で使用する抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合断片」などは、天然に存在し、酵素的に入手可能な、合成した、または、遺伝子操作をしたポリペプチドまたは糖タンパク質を含み、それらは、抗原に特異的に結合して、複合体を形成する。
ヒト抗体の調製
本明細書に開示したように、抗ＲＳＶ、及び／または、抗ＲＳＶ／抗ＨＭＰＦ交差中和抗体は、当業者に利用可能なＢ細胞選別技術、及び、例えば、実施例にて後述するようにして取得し得る。また、トランスジェニックマウスにおいてヒト抗体を産生する方法も当該技術分野において公知であり、そして、本開示に従って抗体を誘導するために使用し得る。本発明に関連して、ＲＳＶ−Ｆに特異的に結合するヒト抗体を作製するために、かようなあらゆる公知の方法を使用することができる（例えば、米国特許第６，５９６，５４１号を参照されたい）。
本明細書に開示したように、抗ＲＳＶ、及び／または、抗ＲＳＶ／抗ＨＭＰＦ交差中和抗体は、当業者に利用可能なＢ細胞選別技術、及び、例えば、実施例にて後述するようにして取得し得る。また、トランスジェニックマウスにおいてヒト抗体を産生する方法も当該技術分野において公知であり、そして、本開示に従って抗体を誘導するために使用し得る。本発明に関連して、ＲＳＶ−Ｆに特異的に結合するヒト抗体を作製するために、かようなあらゆる公知の方法を使用することができる（例えば、米国特許第６，５９６，５４１号を参照されたい）。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、固相または液相のいずれかに固定した抗原に結合させて測定した場合に、約１．０×１０−７Ｍ〜約１．０×１０−１２Ｍの範囲の親和性（ＫＤ）を有する。特定の実施形態では、本発明の抗体は、固相または液相のいずれかに固定した抗原に結合させて測定した場合に、約１×１０−７Ｍ〜約６×１０−１０Ｍの範囲の親和性（ＫＤ）を有する。特定の実施形態では、本発明の抗体は、固相または液相のいずれかに固定した抗原に結合させて測定した場合に、約１×１０−７Ｍ〜約９×１０−１０Ｍの範囲の親和性（ＫＤ）を有する。
本明細書に開示した抗ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、抗ＨＭＰＶ抗体、及び、抗体断片は、記載をした抗体のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を有するタンパク質を含むが、ＲＳＶ−Ｆに結合する能力を保持している。そのような変異抗体、及び、抗体断片は、親配列と比較した場合に、１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、または、置換を含むが、記載をした抗体と本質的に同等の生物学的活性を示す。同様に、本発明の抗体をコードするＤＮＡ配列は、開示した配列と比較した場合に、１つ以上のヌクレオチドの付加、欠失、または、置換を含むが、本発明の抗体または抗体断片と本質的に生物学的に同等な抗体または抗体断片をコードする配列を含む。
２つの抗原結合タンパク質、または、抗体が、例えば、同等の実験条件下で、単回投与または複数回投与のいずれかで同じモル用量を投与した場合に、吸収の速度及び程度に有意差を認められない医薬等価物または医薬代替物である場合は、生物学的に同等であると考えられる。幾つかの抗体は、吸収の程度は同等であるが、吸収の速度が同等ではない場合は、等価物または医薬代替物と考えられており、及び、かような吸収速度の差異が意図的なものであり、標識に反映されており、例えば、慢性的な使用での有効作用薬物濃度（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｂｏｄｙ ｄｒｕｇ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ）の達成に必須ではなく、そして、研究した特定の医薬品において医学的に重要ではないと考えられるため、なおも生物学的に同等であるとみなされ得る。
ある実施形態では、２つの抗原結合タンパク質は、それらの安全性、純度、及び、効力に臨床的重要性に差異が認められない場合には、それらは、生物学的に同等である。
ある実施形態では、２つの抗原結合タンパク質は、患者が、免疫原性における臨床的に有意な変化などの副作用のリスクを高めることなく、参照製品と生物学的製品との間で１回以上の切り替えを行うことができ、あるいは、そのような切り替えを行わずに継続的に処置した場合と比較して、有効性が低下することなく、参照製品と生物学的製品との間で１回以上の切り替えを行うことができる場合には、それらは、生物学的に同等である。
ある実施形態では、２つの抗原結合タンパク質は、それらの双方が、共通のメカニズム、または、１つ以上の使用の条件のための作用機序（複数可）によって作用する場合、そのような機序が公知である限りにおいて、それらは、生物学的に同等である。
生物学的同等性は、インビボ、及び／または、インビトロの方法によって実証し得る。生物学的同等性の測定として、例えば、（ａ）ヒト、または、その他の哺乳動物におけるインビボ試験であって、抗体、または、その代謝産物の濃度を、血液、血漿、血清、または、その他の体液において、時間との関数として測定する同インビボ試験、（ｂ）ヒトのインビボバイオアベイラビリティーデータと相関があり、かつ、合理的に予測できるインビトロ試験、（ｃ）抗体（または、その標的）の適切な急性薬理学的効果を、時間の関数として測定する、ヒト、または、その他の哺乳動物におけるインビボ試験、及び（ｄ）安全性、有効性、または、抗体のバイオアベイラビリティーまたは生物学的同等性を確立する、十分に管理がされた臨床試験がある。
本発明の抗体の生物学的同等な変異体は、例えば、残基または配列の様々な置換を行い、または、生物学的活性に必要ではない末端または内部残基または配列を削除することで構築できる。例えば、生物学的活性に必須でないシステイン残基を、欠失して、または、その他のアミノ酸と置換して、再生時に不必要または不正確な分子内ジスルフィド架橋の形成を防止することができる。その他にも、生物学的に同様な抗体は、抗体のグリコシル化特性を修飾するアミノ酸変化、例えば、グリコシル化を解消または除去する変異を含む抗体変異体を含み得る。
抗体の生物学的及び生物物理学的特徴
特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）Ｆタンパク質（Ｆ）に特異的に結合するものであり、かような抗体、または、その抗原結合断片のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及び／または、ＣＤＲＬ３アミノ酸配列の少なくとも１つが、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４から選択した抗体の表６に開示したＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及び／または、ＣＤＲＬ３のアミノ酸配列の少なくとも１つと、少なくとも７０％が同一であり、少なくとも７５％が同一であり、８０％が同一であり、少なくとも８５％が同一であり、少なくとも９０％が同一であり、少なくとも９５％が同一であり、少なくとも９６％が同一であり、少なくとも９７％が同一であり、少なくとも９８％が同一であり、少なくともが９９％が同一であり、１００％が同一であり、及び／または、その間のすべてのパーセンテージで同一である。特定の実施形態では、かような抗体は、後続の１１個の段落に開示されている、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または、それ以上の個数の特徴をも有する。
特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）Ｆタンパク質（Ｆ）に特異的に結合するものであり、かような抗体、または、その抗原結合断片のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及び／または、ＣＤＲＬ３アミノ酸配列の少なくとも１つが、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４から選択した抗体の表６に開示したＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及び／または、ＣＤＲＬ３のアミノ酸配列の少なくとも１つと、少なくとも７０％が同一であり、少なくとも７５％が同一であり、８０％が同一であり、少なくとも８５％が同一であり、少なくとも９０％が同一であり、少なくとも９５％が同一であり、少なくとも９６％が同一であり、少なくとも９７％が同一であり、少なくとも９８％が同一であり、少なくともが９９％が同一であり、１００％が同一であり、及び／または、その間のすべてのパーセンテージで同一である。特定の実施形態では、かような抗体は、後続の１１個の段落に開示されている、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または、それ以上の個数の特徴をも有する。
いかなる理論にも束縛することを望むものではないが、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、好ましくは、ＰｒｅＦ立体配座において、ＲＳＶ−Ｆに結合することで機能し得るものであり、そして、そうすることで、ウイルス膜と宿主細胞膜との融合をブロックするように作用すると考えられる。また、本発明の抗体は、ＲＳＶ−Ｆに結合することで機能し得るものであり、そして、そうすることで、細胞間のウイルスの伝播を阻止し、そして、細胞のＲＳＶ感染症に関連するシンシチウム形成を阻止する。有利には、ＲＳＶサブタイプＡ及びＲＳＶサブタイプＢの双方を、本明細書に開示した当該抗ＲＳＶ抗体の大部分によって、効果的にブロックまたは中和する。
特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、ＰｏｓｔＦ型のＲＳＶ−Ｆと比較して、ＰｒｅＦ型のＲＳＶ−Ｆに対して優れた結合親和性を示す。
その他の特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、有利には、クリーン、または、低度の多反応性プロファイルを示しており（例えば、ＷＯ２０１４／１７９３６３、及び、Ｘｕ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ、Ｏｃｔ；２６（１０）６６３−７０を参照されたい）、したがって、安全で、有効な、そして、開発可能な治療的、及び／または、予防的抗ＲＳＶ、及び／または、ＨＭＰＶ処置として、開発に特に適している。
特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、いかなる理論の束縛を受けることを望むものではないが、例えば、Ｆタンパク質のＰｒｅＦ立体配座の抗原性部位φ、Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、または、部位Ｖのいずれか１つ以上に結合することで、当該細胞膜へのＲＳＶ融合をブロックまたは阻害するように機能し得る。特定の実施形態では、本発明の抗体は、ＲＳＶ−Ｆ部位Ｉ、部位ＩＩ、または、部位ＩＶと比較して、ＰｒｅＦの部位φ、部位Ｖ、または、部位ＩＩＩに対して抗原部位特異性を示す。
特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片が相互作用するエピトープの少なくとも一部は、ＰｒｅＦのα３ヘリックス、及び、β３／β４ヘアピンの一部を含む。特定の実施形態では、このような抗体の実質的にすべてのエピトープが、ＰｒｅＦのα３ヘリックス、及び、β３／β４ヘアピンを含む。なおもさらなる実施形態では、本発明の抗体は、ＰｒｅＦのα３ヘリックス、及び、β３／β４ヘアピンの一部、または、実質的に全部を認識する抗体と交差競合する。
特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、約０．５マイクログラム／ミリリットル（μｇ／ｍｌ）〜約５μｇ／ｍｌの間、約０．０５μｇ／ｍｌ〜約０．５μｇ／ｍｌの間、または、約０．０５ｍｇ／ｍｌ未満のインビトロ中和力（ＩＣ５０）を示す。
特定の実施形態では、図７Ａにおいて、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び、ＤＧとして表示したＲＳＶ−Ｆ変異体のいずれかについての本発明の抗体、及び、その抗原結合断片の当該結合親和性、及び／または、エピトープ特異性は、ＲＳＶ−Ｆ、または、ＲＳＶ−Ｆ ＤＳ−Ｃａｖ１についての当該抗体、または、その抗原結合断片の当該結合親和性、及び／または、エピトープ特異性と比較して、抑制または解消されている。
特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、ヒトメタニューモウイルス（ＨＭＰＶ）ならびにＲＳＶに対して、交差中和力（ＩＣ５０）を示す。そのような特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、そのような抗体のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及び／または、ＣＤＲＬ３のアミノ酸配列の少なくとも１つが、表６に開示した抗体番号１７９、１８８、２１１、２２１、及び、２２９からなる群から選択した抗体の表６に開示したＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及び／または、ＣＤＲＬ３のアミノ酸配列の少なくとも１つと、少なくとも７０％が同一であり、少なくとも７５％が同一であり、８０％が同一であり、少なくとも８５％が同一であり、少なくとも９０％が同一であり、少なくとも９５％が同一であり、少なくとも９６％が同一であり、少なくとも９７％が同一であり、少なくとも９８％が同一であり、少なくともが９９％が同一であり、または１００％が同一であり、及び／または、その間のすべてのパーセンテージで同一である。
特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、Ｄ２５、ＭＰＥ８、パリビズマブ、モタビズマブ、または、ＡＭ−１４を備えていない。特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、Ｄ２５、ＭＰＥ８、パリビズマブ、または、モタビズマブを備えていない。特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、ＭＰＥ８、パリビズマブ、または、モタビズマブを備えていない。特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、Ｄ２５、パリビズマブ、または、モタビズマブを備えていない。特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、Ｄ２５を備えていない。特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、ＭＰＥ８を備えていない。特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、パリビズマブを備えていない。特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、モタビズマブを備えていない。
特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、Ｄ２５、ＭＰＥ８、パリビズマブ、モタビズマブ、及び／または、ＡＭ−１４の１つ以上を備えている。
特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、Ｄ２５及び／またはパリビズマブよりも、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約３５倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約５５倍、少なくとも約６０倍、少なくとも約７０倍、少なくとも約８０倍、少なくとも約９０倍、少なくとも約１００倍、約１００倍超、及び、前述したあらゆる数値の間にある倍数だけ高い中和力（ＩＣ５０）を示す。
特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つのＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つのＣＤＲＨ２アミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つのＣＤＲＨ１アミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つのＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つのＣＤＲＬ２アミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つのＣＤＲＬ１アミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、直前の６個の段落に開示されている２、３、４、５、または、６個の特徴のあらゆる組み合わせを含む。
特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つの重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つの軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つの重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列、及び、軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、それぞれ、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つと、少なくとも７０％が同一であり、少なくとも７５％が同一であり、８０％が同一であり、少なくとも８５％が同一であり、少なくとも９０％が同一であり、少なくとも９５％が同一であり、少なくとも９６％が同一であり、少なくとも９７％が同一であり、少なくとも９８％が同一であり、少なくともが９９％が同一であり、１００％が同一であり、及び／または、その間のすべてのパーセンテージで同一である。
特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、それぞれ、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体からなる群から選択する。
特定の実施形態では、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）Ｆタンパク質、及び、その抗原結合断片に特異的に結合する抗体、または、その抗原結合断片をコードする単離した核酸配列を提供しており、当該抗体、または、その抗原結合断片のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及び／または、ＣＤＲＬ３のアミノ酸配列の少なくとも１つが、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４から選択した抗体の表６に開示したＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及び／または、ＣＤＲＬ３のアミノ酸配列の少なくとも１つと、少なくとも７０％が同一であり、少なくとも７５％が同一であり、８０％が同一であり、少なくとも８５％が同一であり、少なくとも９０％が同一であり、少なくとも９５％が同一であり、少なくとも９６％が同一であり、少なくとも９７％が同一であり、少なくとも９８％が同一であり、少なくともが９９％が同一であり、１００％が同一であり、及び／または、その間のすべてのパーセンテージで同一である。特定の実施形態では、そのような核酸配列を、表６に開示したそれらの核酸配列、及び、それらの相補体から選択する。
特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片をコードする単離した核酸配列を提供しており、そのような核酸配列は、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体の当該ＣＤＲＨ３アミノ酸配列をコードする配列を含む。特定の実施形態では、そのような核酸配列を、表６に開示したそれらの核酸配列、及び、それらの相補体から選択する。
特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片をコードする単離した核酸配列を提供しており、そのような核酸配列は、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体の当該ＣＤＲＨ２アミノ酸配列をコードする配列を含む。特定の実施形態では、そのような核酸配列を、表６に開示したそれらの核酸配列、及び、それらの相補体から選択する。
特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片をコードする単離した核酸配列を提供しており、そのような核酸配列は、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体の当該ＣＤＲＨ１アミノ酸配列をコードする配列を含む。特定の実施形態では、そのような核酸配列を、表６に開示したそれらの核酸配列、及び、それらの相補体から選択する。
特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片をコードする単離した核酸配列を提供しており、そのような核酸配列は、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体の当該ＣＤＲＬ３アミノ酸配列をコードする配列を含む。特定の実施形態では、そのような核酸配列を、表６に開示したそれらの核酸配列、及び、それらの相補体から選択する。
特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片をコードする単離した核酸配列を提供しており、そのような核酸配列は、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体の当該ＣＤＲＬ２アミノ酸配列をコードする配列を含む。特定の実施形態では、そのような核酸配列を、表６に開示したそれらの核酸配列、及び、それらの相補体から選択する。
特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片をコードする単離した核酸配列を提供しており、そのような核酸配列は、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体の当該ＣＤＲＬ１アミノ酸配列をコードする配列を含む。特定の実施形態では、そのような核酸配列を、表６に開示したそれらの核酸配列、及び、それらの相補体から選択する。
特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片をコードする単離した核酸配列を提供しており、そのような核酸配列は、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体の重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列をコードする配列を含む。特定の実施形態では、そのような核酸配列を、表６に開示したそれらの核酸配列、及び、それらの相補体から選択する。
特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片をコードする単離した核酸配列を提供しており、そのような核酸配列は、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体の軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列をコードする配列を含む。特定の実施形態では、そのような核酸配列を、表６に開示したそれらの核酸配列、及び、それらの相補体から選択する。
特定の実施形態では、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片をコードする単離した核酸配列を提供しており、そのような核酸配列は、それぞれ、表６に開示した核酸配列、及び、それらの相補体のいずれか１つと、少なくとも７０％が同一であり、少なくとも７５％が同一であり、８０％が同一であり、少なくとも８５％が同一であり、少なくとも９０％が同一であり、少なくとも９５％が同一であり、少なくとも９６％が同一であり、少なくとも９７％が同一であり、少なくとも９８％が同一であり、少なくともが９９％が同一であり、１００％が同一であり、及び／または、その間のすべてのパーセンテージで同一である、配列からなる群から選択する。
特定の実施形態では、本明細書、及び、その全体を通して、及び、特に、直前の１０個の段落に開示した、当該単離した核酸配列を含む発現ベクターを提供する。
特定の実施形態では、直前に開示した当該核酸配列、及び／または、当該発現ベクターでトランスフェクト、形質転換、または、形質導入した宿主細胞を提供する。
エピトープマッピング及び関連技術
上記したように、そして、実施例で後述するように、本出願人は、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片のエピトープ特異性、ビンの割り当て、及び、抗原部位の割り当てを特徴付けた。そのような特徴付けをするための方法に加えて、当業者は、そのような特徴付けを実行するため、または、ポリペプチド内またはタンパク質内において抗体が「１つ以上のアミノ酸と相互作用する」かどうかを確認するために使用できる、様々なその他の技術が利用可能である。例示的な技術として、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ，ＮＹ）に記載されているものなど、所定のクロスブロッキングアッセイがある。その他の方法として、アラニンスキャニング突然変異分析、ペプチドブロット分析（Ｒｅｉｎｅｋｅ（２００４）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２４８：４４３−６３）、ペプチド開裂分析結晶学的研究、及び、ＮＭＲ分析がある。加えて、エピトープ切除、エピトープ抽出、及び、抗原の化学修飾などの方法を使用することができる（Ｔｏｍｅｒ（２０００）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ９：４８７−４９６）。抗体が相互作用するポリペプチド内のアミノ酸を同定するために使用することができる別の方法は、質量分析によって検出する水素／重水素交換である。一般論として、水素／重水素交換法は、目的のタンパク質を重水素標識し、続いて、抗体を重水素標識タンパク質に結合させることを含む。次に、当該タンパク質／抗体複合体は、水に移され、そして、当該抗体複合体によって保護されているアミノ酸内の交換可能なプロトンは、当該界面の一部ではないアミノ酸内の交換可能なプロトンよりも遅い速度で重水素から水素への逆交換を受ける。結果として、当該タンパク質／抗体界面の一部を形成するアミノ酸は、重水素を保持し得るものとなり、そして、それ故に、当該界面に含まれないアミノ酸と比較して、比較的に大きな質量を示す。当該抗体の解離後に、当該標的タンパク質は、プロテアーゼ開裂、及び、質量分析に供され、それにより、抗体が相互作用する特定のアミノ酸に対応する重水素標識残基を明らかにする。例えば、Ｅｈｒｉｎｇ（１９９９）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６７（２）：２５２−２５９，Ｅｎｇｅｎ ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ（２００１）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７３：２５６Ａ−２６５Ａを参照されたい。
上記したように、そして、実施例で後述するように、本出願人は、本発明の抗体、及び、その抗原結合断片のエピトープ特異性、ビンの割り当て、及び、抗原部位の割り当てを特徴付けた。そのような特徴付けをするための方法に加えて、当業者は、そのような特徴付けを実行するため、または、ポリペプチド内またはタンパク質内において抗体が「１つ以上のアミノ酸と相互作用する」かどうかを確認するために使用できる、様々なその他の技術が利用可能である。例示的な技術として、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ，ＮＹ）に記載されているものなど、所定のクロスブロッキングアッセイがある。その他の方法として、アラニンスキャニング突然変異分析、ペプチドブロット分析（Ｒｅｉｎｅｋｅ（２００４）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２４８：４４３−６３）、ペプチド開裂分析結晶学的研究、及び、ＮＭＲ分析がある。加えて、エピトープ切除、エピトープ抽出、及び、抗原の化学修飾などの方法を使用することができる（Ｔｏｍｅｒ（２０００）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ９：４８７−４９６）。抗体が相互作用するポリペプチド内のアミノ酸を同定するために使用することができる別の方法は、質量分析によって検出する水素／重水素交換である。一般論として、水素／重水素交換法は、目的のタンパク質を重水素標識し、続いて、抗体を重水素標識タンパク質に結合させることを含む。次に、当該タンパク質／抗体複合体は、水に移され、そして、当該抗体複合体によって保護されているアミノ酸内の交換可能なプロトンは、当該界面の一部ではないアミノ酸内の交換可能なプロトンよりも遅い速度で重水素から水素への逆交換を受ける。結果として、当該タンパク質／抗体界面の一部を形成するアミノ酸は、重水素を保持し得るものとなり、そして、それ故に、当該界面に含まれないアミノ酸と比較して、比較的に大きな質量を示す。当該抗体の解離後に、当該標的タンパク質は、プロテアーゼ開裂、及び、質量分析に供され、それにより、抗体が相互作用する特定のアミノ酸に対応する重水素標識残基を明らかにする。例えば、Ｅｈｒｉｎｇ（１９９９）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６７（２）：２５２−２５９，Ｅｎｇｅｎ ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ（２００１）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７３：２５６Ａ−２６５Ａを参照されたい。
当業者であれば、エピトープは、タンパク質の三次折り畳みによって並置した隣接アミノ酸または非隣接アミノ酸の双方から形成する、ことを理解する。隣接アミノ酸から形成したエピトープは、一般的には、変性溶媒への暴露時に保持するが、三次折り畳みによって形成したエピトープは、一般的には、変性溶媒での処理では失われてしまう。エピトープは、一般的には、少なくとも３個、通常は、少なくとも５または８〜１０個のアミノ酸を、独自の空間的立体配座に含む。
修飾支援プロファイリング（ＭＡＰ）、別名、抗原構造に基づいた抗体プロファイリング（ＡＳＡＰ）とは、化学的または酵素的に修飾した抗原表面に対する各抗体の結合プロファイルの類似性にしたがって、同じ抗原に対する数多くのモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を分類する方法である（米国公開公報第２００４／０１０１９２０号）。各カテゴリーは、その他のカテゴリーが表すエピトープとは明らかに異なる、または、部分的に重複する、のいずれかである独特のエピトープを反映し得る。この技術は、特徴付けが、遺伝的に異なる抗体に集中することができるように、遺伝的に同一の抗体の迅速なフィルタリングを可能にする。ハイブリドーマスクリーニングに適用した場合、ＭＡＰは、所望の特徴を有するモノクローナル抗体を産生する稀なハイブリドーマクローンの同定を容易にし得る。ＭＡＰを用いて、本発明の抗体を、異なるエピトープに結合する抗体の群に分類することができる。
特定の実施形態では、本発明の抗体、及び／または、その抗原結合断片は、例えば、実施例で開示した１つ以上のＦタンパク質パッチ変異体において改変されているアミノ酸残基を含むアミノ酸配列と相互作用し、そして、それらを、例えば、図７Ａに示しており、ＲＳＶ Ｆ変異型１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び、ＤＧと表示している。特定の実施形態では、そのような本発明の抗体、及び、その抗原結合断片は、ＲＳＶ Ｆ変異体２において改変したアミノ酸残基を含むアミノ酸配列と相互作用する。特定の実施形態では、本発明の抗体、及び／または、その抗原結合断片は、上記のように同定した領域（複数可）を超えて、約５〜１０個のアミノ酸残基、または、約１０〜１５個のアミノ酸残基、または、約１５〜２０個のアミノ酸残基だけ、ＲＳＶ−Ｆタンパク質のアミノ末端またはカルボキシ末端のいずれかに向かって伸びるアミノ酸残基と相互作用する。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、パリビズマブ、モタビズマブ、ＭＰＥ８、または、ＡＭ−１４と同じＲＳＶ−Ｆタンパク質上のエピトープに結合しない。
当業者であれば、当該技術分野で利用可能な所定の方法を使用することで、抗体が、参照抗ＲＳＶ−Ｆ抗体と同じエピトープに結合するか、または、それとの結合について競合するかどうかを容易に決定することができる、と理解する。例えば、試験抗体が、本発明の参照ＲＳＶ−Ｆ抗体と同じエピトープに結合するかどうかを決定するために、参照抗体を、飽和条件下でＲＳＶ−Ｆタンパク質またはペプチドに結合させる。次に、試験抗体がＲＳＶ−Ｆ分子に結合する能力を評価する。当該試験抗体が、参照抗ＲＳＶ−Ｆ抗体との飽和結合後にＲＳＶ−Ｆに結合することができる場合、当該試験抗体は、参照抗ＲＳＶ−Ｆ抗体とは異なるエピトープに結合すると結論付けることができる。逆に、当該試験抗体が、参照抗ＲＳＶ−Ｆ抗体との飽和結合後にＲＳＶ−Ｆ分子に結合できない場合、当該試験抗体は、本発明の参照抗ＲＳＶ−Ｆ抗体が結合したエピトープと同じエピトープに結合し得る。
抗体が、参照抗ＲＳＶ−Ｆ抗体との結合について競合するかどうかを決定するために、上記した結合方法論を、２つの手順で行う。第１の手順では、当該参照抗体を、飽和条件下でＲＳＶ−Ｆ分子に結合し、続いて、当該試験抗体の当該ＲＳＶ−Ｆ分子への結合を評価する。第２の手順では、当該試験抗体を、飽和条件下でＲＳＶ−Ｆ分子に結合させ、続いて、当該参照抗体の当該ＲＳＶ−Ｆ分子への結合を評価する。双方の手順において、第１の（飽和）抗体だけが、当該ＲＳＶ−Ｆ分子に結合することができる場合、当該試験抗体と当該参照抗体は、ＲＳＶ−Ｆへの結合について競合すると結論する。当業者であれば、参照抗体との結合について競合する抗体は、当該参照抗体と同一のエピトープに必ずしも結合するとは限らないが、重複または隣接エピトープを結合することで、当該参照抗体の結合を立体的にブロックし得る、ことを理解する。
２つの抗体が、それぞれ競合的に当該抗原への他方の結合を阻害する（ブロックする）場合、それら抗体は、同一または重複するエピトープに結合する。すなわち、１−、５−、１０−、２０−、または、１００−倍を超える一方の抗体は、他方の抗体の結合を、競合結合アッセイで測定して、少なくとも５０％、しかし、好ましくは７５％、９０％、または、９９％をも阻害する（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（１９９０）５０：１４９５−１５０２を参照されたい）。あるいは、一方の抗体の結合を抑制または解消する当該抗原での本質的にすべてのアミノ酸変異が、他方の結合を抑制または解消する場合、２つの抗体は、同じエピトープを有している。一方の抗体の結合を抑制または解消する幾つかのアミノ酸変異が、他方の抗体の結合を抑制または解消する場合、２つの抗体は、重複するエピトープを有している。
次いで、観察された当該試験抗体の結合の欠如が、実際に、当該参照抗体と同じエピトープへの結合に起因するものなのか、あるいは、立体ブロッキング（または、別の現象）が、観察された結合の欠如を原因とするものなのか、を確認するために、追加の所定の実験（例えば、ペプチド突然変異及び結合分析）をすることができる。この種の実験は、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、表面プラズモン共鳴、フローサイトメトリー、または、当該技術分野で利用可能なあらゆるその他の定量的もしくは定性的抗体結合アッセイを用いて実施することができる。
免疫抱合体
本発明は、ＲＳＶ、及び／または、ＨＭＰＶによる一次感染の重症度を軽減し、または、咳、発熱、肺炎、または、それらの重症度など、ＲＳＶ感染症、及び／または、ＨＭＰＶ感染に関連する症状の少なくとも１つを改善することができる作用物質などの治療用部分（「免疫抱合体」）にコンジュゲートしたヒトＲＳＶ−Ｆモノクローナル抗体を含む。そのような作用物質は、ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶに対する第２の異なる抗体、または、ワクチンとし得る。当該抗ＲＳＶ−Ｆ抗体、及び／または、抗ＨＭＰＶ抗体にコンジュゲートし得る治療用部分のタイプは、処置する病態、及び、達成するべき所望の治療効果を考慮に入れる。あるいは、所望の治療効果が、ＲＳＶ、及び／または、ＨＭＰＶ感染症に関連する後遺症もしくは症状、または、肺炎など、これに限定されない感染症に起因するあらゆる他の病態を処置する場合に、当該病態の後遺症または症状を処置するため、または、本発明の抗体のあらゆる副作用を軽減するために、作用物質を適切にコンジュゲートすることが有利であり得る。免疫抱合体を形成するための適切な作用物質の例は、当該技術分野において公知であり、例えば、ＷＯ０５／１０３０８１を参照されたい。
本発明は、ＲＳＶ、及び／または、ＨＭＰＶによる一次感染の重症度を軽減し、または、咳、発熱、肺炎、または、それらの重症度など、ＲＳＶ感染症、及び／または、ＨＭＰＶ感染に関連する症状の少なくとも１つを改善することができる作用物質などの治療用部分（「免疫抱合体」）にコンジュゲートしたヒトＲＳＶ−Ｆモノクローナル抗体を含む。そのような作用物質は、ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶに対する第２の異なる抗体、または、ワクチンとし得る。当該抗ＲＳＶ−Ｆ抗体、及び／または、抗ＨＭＰＶ抗体にコンジュゲートし得る治療用部分のタイプは、処置する病態、及び、達成するべき所望の治療効果を考慮に入れる。あるいは、所望の治療効果が、ＲＳＶ、及び／または、ＨＭＰＶ感染症に関連する後遺症もしくは症状、または、肺炎など、これに限定されない感染症に起因するあらゆる他の病態を処置する場合に、当該病態の後遺症または症状を処置するため、または、本発明の抗体のあらゆる副作用を軽減するために、作用物質を適切にコンジュゲートすることが有利であり得る。免疫抱合体を形成するための適切な作用物質の例は、当該技術分野において公知であり、例えば、ＷＯ０５／１０３０８１を参照されたい。
多重特異性抗体
本発明の抗体を、単一特異性、二重特異性、または、多重特異性とし得る。多重特異性抗体は、１つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに対して特異的であり得るか、または、２つ以上の標的ポリペプチドに対して特異的な抗原結合ドメインを含み得る。例えば、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０−６９；Ｋｕｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２２：２３８−２４４を参照されたい。本発明の抗体は、別の機能的分子、例えば、別のペプチドまたはタンパク質に連結または共発現させることができる。例えば、抗体またはその断片を、（例えば、化学的カップリング、遺伝的融合、非共有結合などにより）別の抗体または抗体断片などの１つ以上の他の分子実体に機能的に連結して、第二の結合特異性を有する二重特異性抗体、または、多重特異性抗体を産生することができる。
本発明の抗体を、単一特異性、二重特異性、または、多重特異性とし得る。多重特異性抗体は、１つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに対して特異的であり得るか、または、２つ以上の標的ポリペプチドに対して特異的な抗原結合ドメインを含み得る。例えば、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０−６９；Ｋｕｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２２：２３８−２４４を参照されたい。本発明の抗体は、別の機能的分子、例えば、別のペプチドまたはタンパク質に連結または共発現させることができる。例えば、抗体またはその断片を、（例えば、化学的カップリング、遺伝的融合、非共有結合などにより）別の抗体または抗体断片などの１つ以上の他の分子実体に機能的に連結して、第二の結合特異性を有する二重特異性抗体、または、多重特異性抗体を産生することができる。
本発明に関して使用することができる例示的な二重特異性抗体フォーマットは、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）ＣＨ３ドメインと第２のＩｇ ＣＨ３ドメインとの使用に関係しており、当該第１及び第２のＩｇ ＣＨ３ドメインは、少なくとも１つのアミノ酸で相違しており、及び、少なくとも１つのアミノ酸の相違は、当該アミノ酸の相違が無い二重特異性抗体と比較して、プロテインＡに対する二重特異性抗体の結合を抑制する。ある実施形態では、当該第１のＩｇ ＣＨ３ドメインは、プロテインＡに結合し、かつ、当該第２のＩｇ ＣＨ３ドメインは、Ｈ９５Ｒ修飾（ＩＭＧＴエクソン番号付与によるもの、ＥＵ番号付与ではＨ４３５Ｒ）などのプロテインＡ結合を抑制または解消する突然変異を含む。当該第２のＣＨ３は、Ｙ９６Ｆ修飾（ＩＭＧＴによるもの、ＥＵではＹ４３６Ｆ）をさらに含み得る。当該第２のＣＨ３内に認め得るさらなる修飾として、ＩｇＧ１抗体の場合、Ｄ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、及び、Ｖ８２Ｉ（ＩＭＧＴによるもの、ＥＵではＤ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、及び、Ｖ４２２Ｉ）、ＩｇＧ２抗体の場合、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、及び、Ｖ８２Ｉ（ＩＭＧＴによるもの、ＥＵではＮ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、及び、Ｖ４２２Ｉ）、及び、ＩｇＧ４抗体の場合、Ｑ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９Ｑ、及び、Ｖ８２Ｉ（ＩＭＧＴによるもの、ＥＵでは、Ｑ３５５Ｒ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９Ｑ、及び、Ｖ４２２Ｉ）がある。上記した二重特異性抗体フォーマットの変形は、本発明の範囲内である。
治療的投与及び製剤
本発明は、本発明の抗ＲＳＶ−Ｆ抗体、または、それらの抗原結合断片を含む治療用組成物を提供する。本発明の治療組成物の投与は、適切な担体、賦形剤、それに、製剤に取り込むと改善した移動性、送達、耐性などをもたらすその他の作用物質と共に投与する。数多くの適切な製剤が、すべての薬剤師に公知の処方集、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ、に見出すことができる。これらの製剤として、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、脂質（カチオン性、または、アニオン性）含有ベシクル（ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）など）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収性ペースト、水中油型及び油中水型エマルジョン、エマルジョンカルボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、及び、カルボワックスを含む半固体混合物がある。Ｐｏｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．”Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ ｆｏｒ ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ”ＰＤＡ（１９９８）Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ ５２：２３８−３１１も参照されたい。
本発明は、本発明の抗ＲＳＶ−Ｆ抗体、または、それらの抗原結合断片を含む治療用組成物を提供する。本発明の治療組成物の投与は、適切な担体、賦形剤、それに、製剤に取り込むと改善した移動性、送達、耐性などをもたらすその他の作用物質と共に投与する。数多くの適切な製剤が、すべての薬剤師に公知の処方集、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ、に見出すことができる。これらの製剤として、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、脂質（カチオン性、または、アニオン性）含有ベシクル（ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）など）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収性ペースト、水中油型及び油中水型エマルジョン、エマルジョンカルボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、及び、カルボワックスを含む半固体混合物がある。Ｐｏｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．”Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ ｆｏｒ ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ”ＰＤＡ（１９９８）Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ ５２：２３８−３１１も参照されたい。
本発明の各抗体の用量は、投与を受ける対象の年齢及び体格、標的疾患、病態、投与経路などに応じて変化し得る。患者のＲＳＶ感染症、及び／または、ＨＭＰＶ感染症を処置するため、または、患者のＲＳＶ感染症、及び／または、ＨＭＰＶ感染症に関連する咳または肺炎など、ＲＳＶ感染症、及び／または、ＨＭＰＶ感染症に関連する症状の１つ以上を処置するため、または、当該疾患の重症度を軽減するために、本発明の抗体を使用する場合、通常は、約０．０１〜約３０ｍｇ／体重ｋｇ、より好ましくは、約０．１〜約２０ｍｇ／体重ｋｇ、または、約０．１〜約１５ｍｇ／体重ｋｇ、または、約０．０２〜約７ｍｇ／体重ｋｇ、約０．０３〜約５ｍｇ／体重ｋｇ、または、約０．０５〜約３ｍｇ／体重ｋｇ、または、約１ｍｇ／体重ｋｇ、または、約３．０ｍｇ／体重ｋｇ、または、約１０ｍｇ／体重ｋｇ、または、約２０ｍｇ／体重ｋｇの単回投与量で、本発明の各抗体を、静脈内または皮下に投与することが有利である。必要に応じて、複数回投与し得る。当該病態の重症度に応じて、当該処置の頻度と期間を調整することができる。特定の実施形態では、本発明の抗体、または、その抗原結合断片は、少なくとも約０．１ｍｇ〜約８００ｍｇ、約１〜約６００ｍｇ、約５〜約３００ｍｇ、または、約１０〜約１５０ｍｇ、約１００ｍｇまで、または、約５０ｍｇまでの初期用量として投与することができる。特定の実施形態では、当該初回用量の後に、当該初回用量とほぼ同等、もしくは、それより少なくすることができる、第２の、または、複数の後続用量で、抗体、または、それらの抗原結合断片の投与を続けてもよく、当該後続用量を、少なくとも１日〜３日、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも９週間、少なくとも１０週間、少なくとも１２週間、または、少なくとも１４週間で分割する。
様々な送達系が公知であり、また、本発明の医薬組成物を投与するために使用することができ、例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセル、変異型ウイルスを発現することができる組換え細胞における封入、受容体媒介エンドサイトーシス（例えば、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２）がある。導入方法として、皮内、経皮、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、及び、経口経路があるが、これらに限定されない。当該組成物は、あらゆる好適な経路、例えば、注入またはボーラス注射、上皮または粘膜内層（例えば、口腔粘膜、鼻粘膜、直腸及び腸粘膜など）を介した吸収で投与し得るものであり、そして、その他の生物学的に活性な作用物質と共に投与し得る。投与は、全身的または局所的とし得る。それは、エアロゾル化製剤として送達し得る（米国公開公報第２０１１／０３１１ ５１５号、及び、米国公開公報第２０１２／０１２８６６９号を参照されたい）。吸入による呼吸器疾患の処置に有用な作用物質の送達は、普及が進んできている（Ａ．Ｊ．Ｂｉｔｏｎｔｉ ａｎｄ Ｊ．Ａ．Ｄｕｍｏｎｔ，（２００６），Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ，５８：１ １０６−１１８を参照されたい）。局所肺疾患の処置に有効であることに加えて、そのような送達機構は、抗体の全身送達にも有用であり得る（Ｍａｉｌｌｅｔ ｅｔ ａｌ．（２００８），Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌ．２５，Ｎｏ．６，２００８を参照されたい）。
また、医薬組成物は、ベシクル、特に、リポソームにて送達し得る（例えば、Ｌａｎｇｅｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３を参照されたい）。
特定の状況において、当該医薬組成物は、制御放出システムで送達することができる。ある実施形態では、ポンプを使用し得る。その他の実施形態では、ポリマー材料を使用することができる。さらに別の実施形態では、制御放出システムを、組成物の標的の近くに配置することができ、したがって、全身用量のほんの一部しか必要としない。
当該注射用製剤は、静脈内、皮下、皮内、及び、筋肉内注射、点滴注入などのための剤形を含み得る。これらの注射剤は、公知の方法で調製し得る。例えば、当該注射用製剤は、例えば、上記した抗体、または、その塩を、従来から注射剤に用いられている無菌の水性媒体、または、油性媒体に、溶解、懸濁、または、乳化することで調製し得る。注射用の当該水性媒体として、例えば、生理食塩水、グルコースを含む等張液、及び、その他の補助剤などがあり、これらは、アルコール（例えば、エタノール）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ−５０（水素化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０モル）付加物）］などの適切な可溶化剤と組み合わせて使用し得る。当該油性媒体として、例えば、ゴマ油、大豆油などを用いており、これらは、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどの溶解補助剤と組み合わせて使用し得る。このようにして調製した注射剤は、好ましくは、適切なアンプルに充填する。
本発明の医薬組成物は、標準的な針及び注射器を用いて、皮下または静脈内に送達することができる。加えて、皮下送達に関して、ペン型送達装置は、本発明の医薬組成物の送達において容易に利用できる。そのようなペン型送達装置は、再使用可能であり、または、使い捨てできる。再使用可能なペン型送達装置は、一般的に、医薬組成物を含む交換可能なカートリッジを利用する。当該カートリッジ内の全ての医薬組成物を投与して、当該カートリッジが空になると、空になった当該カートリッジを容易に廃棄して、当該医薬組成物を含む新たなカートリッジと交換することができる。続いて、当該ペン型送達装置を再利用することができる。使い捨て可能な当該ペン型送達装置は、交換可能なカートリッジを備えていない。むしろ、使い捨て可能な当該ペン型送達装置には、当該装置内のリザーバ内に保持される医薬組成物が予め充填されている。当該リザーバ内の当該医薬組成物が無くなると、当該装置全体を廃棄する。
数多くの再使用可能なペン型、及び、自動注射送達装置が、本発明の医薬組成物の皮下送達に適用できる。例として、ほんの数例を挙げると、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ Ｍｕｍｆｏｒｄ、Ｉｎｃ．，Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ，ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｂｕｒｇｈｄｏｒｆ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＨＵＭＡＬＯＧ ＭＩＸ ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏ．，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩ、及び、ＩＩＩ（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ，Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮ ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ，Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、及び、ＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ，Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）があるが、これらに必ずしも限定されない。本発明の医薬組成物の皮下送達に適用できる使い捨て可能なペン型送達装置の例として、ほんの数例を挙げると、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）、及び、ＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ（商標）自動注射器（Ａｍｇｅｎ，Ｔｈｏｕｓａｎｄ Ｏａｋｓ，ＣＡ）、ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ、ＬＰ）、及び、ＨＵＭＩＲＡ（商標）ペン（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｓ，Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ，ＩＬ）があるが、これらに必ずしも限定されない。
有利には、上記した経口または非経口使用のための当該医薬組成物は、活性成分の用量に適合するのに適した単位用量で剤形に調製する。単位用量でのそのような剤形として、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、注射剤（アンプル剤）、坐剤などがある。上記した抗体の含有量は、一般的には、単位用量、特に、注射剤の形態では、剤形あたり、約５〜約５００ｍｇであり、その他の剤形については、上記した抗体を、約５〜約１００ｍｇ、及び、約１０〜約２５０ｍｇで含むのが好ましい。
投与計画
特定の実施形態では、ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶに対する抗体の複数回用量を、所定の期間にわたって、対象に投与することができる。本発明のこの態様での方法は、ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶに対する抗体の複数回用量を対象に連続的に投与することを含む。本明細書で使用する「連続的に投与する」とは、ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶに対する抗体の各用量を、異なる時点で、例えば、所定の間隔（例えば、時間、日数、週数、または、月数）を空けた異なる日に、対象に投与することを意味する。本発明は、ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶに対する抗体、または、当該抗体の単一の初回用量、続いて、ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶに対する抗体の１つ以上の２次用量、及び、任意に、続けて、ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶに対する抗体の１つ以上の３次用量を、当該患者に連続的に投与することを含む、方法を含む。
特定の実施形態では、ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶに対する抗体の複数回用量を、所定の期間にわたって、対象に投与することができる。本発明のこの態様での方法は、ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶに対する抗体の複数回用量を対象に連続的に投与することを含む。本明細書で使用する「連続的に投与する」とは、ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶに対する抗体の各用量を、異なる時点で、例えば、所定の間隔（例えば、時間、日数、週数、または、月数）を空けた異なる日に、対象に投与することを意味する。本発明は、ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶに対する抗体、または、当該抗体の単一の初回用量、続いて、ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶに対する抗体の１つ以上の２次用量、及び、任意に、続けて、ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶに対する抗体の１つ以上の３次用量を、当該患者に連続的に投与することを含む、方法を含む。
用語「初回用量」、「２次用量」、及び、「３次用量」は、ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶに対する抗体の投与の一時的な順序のことを指す。したがって、「初回用量」とは、治療計画の開始時に投与する用量（別名、「ベースライン用量」）であり、「２次用量」とは、初回用量の後に投与する用量であり、そして、「３次用量」とは、２次用量の後に投与する用量のことである。初回、２次、及び、３次用量は、すべて、ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶに対する同量の抗体を含み得るが、一般的には、投与の頻度については互いに相違し得る。しかしながら、特定の実施形態では、初回、２次、及び／または、３次用量に含まれるＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶに対する抗体の量は、処置の過程で互いに変動する（例えば、必要に応じて増減する）。特定の実施形態では、２つ以上（例えば、２つ、３つ、４つ、または、５つ）の用量を、「負荷投与量」として、治療計画の開始時に投与し、続いて、後続の用量（例えば、「維持用量」）を低頻度で投与する。
本発明の例示的なある実施形態では、各２次用量、及び／または、３次用量は、直近の用量の１〜２６（例えば、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５、１５、１５．５、１６、１６．５、１７、１７．５、１８、１８．５、１９、１９．５、２０、２０．５、２１、２１．５、２２、２２．５、２３、２３．５、２４、２４．５、２５、２５．５、２６、２６．５、または、それ以上の）週数後に投与する。本明細書で使用する語句「直近の用量」とは、一連の複数回の投与において、介在用量もなく、まさに次の用量を投与する前に患者が投与を受ける、ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶに対する抗体の用量のことを意味する。
本発明のこの態様での方法は、ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶに対する抗体を、あらゆる数の２次用量、及び／または、３次用量で、患者に投与することを含み得る。例えば、特定の実施形態では、単一の２次用量だけを、患者に投与する。他の実施形態では、２つ以上（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、または、それ以上）の２次用量を、患者に投与する。同様に、特定の実施形態では、単一の３次用量だけを、患者に投与する。他の実施形態では、２つ以上（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、または、それ以上）の３次用量を、患者に投与する。
複数の２次用量が関係する実施形態では、各２次用量は、その他の２次用量と同じ頻度で投与し得る。例えば、各２次用量を、直近の用量の１〜２週間後に患者に投与し得る。同様に、複数の３次用量が関係する実施形態では、各３次用量は、その他の３次用量と同じ頻度で投与し得る。例えば、各３次用量は、直近の用量の２〜４週間後に患者に投与し得る。あるいは、２次用量、及び／または、３次用量を患者に投与する頻度は、当該治療計画の過程において変化し得る。臨床検査後の個々の患者の必要性に応じて、治療の過程でもまた、医師が、投与頻度を調整し得る。
したがって、特定の実施形態では、本明細書を通じて開示した本発明の抗体の１つ以上、または、その抗原結合断片と、医薬として許容される担体、及び／または、１つ以上の賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。その他の特定の実施形態では、１つ以上の本発明の抗体、または、その抗原結合断片をコードする１つ以上の核酸配列、または、そのような核酸配列を有する１つ以上の発現ベクター、及び、医薬として許容される担体、及び／または、１つ以上の賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
抗体の治療的使用
ＲＳＶ融合タンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に対する結合、及び、相互作用が故に、いかなる理論の拘束を受けることを望むものではないが、本発明の抗体、及び、それらの抗原結合断片は、ウイルスと宿主細胞膜との融合を防ぐこと、細胞間でのウイルスの拡散を防ぐこと、及び、シンシチウム形成を阻害することにおいて、有用であると考えられる。加えて、本出願人が、本明細書において、本発明の抗ＲＳＶ抗体、及び、それらの抗原結合断片のサブセットが、驚くべきことに、ＨＭＰＶに対して交差中和力を示すことを実証しており、よって、本発明の抗体、及び、それらの抗原結合断片は、予防的に投与した場合に、ＲＳＶ、及び／または、ＨＭＰＶを有する対象の感染症を予防する上で有利である。あるいは、本発明の抗体は、咳、発熱、肺炎などの感染症に関連する少なくとも１つの症状を改善し、または、感染症の重症度、期間、及び／または、頻度を抑制する上で有用であり得る。また、本発明の抗体は、ＲＳＶ感染症、及び／または、ＨＭＰＶ感染症を発症または獲得するリスクがある患者において、予防的に使用することも企図している。これらの患者として、早産児、ＲＳＶシーズン（晩秋から早春）、及び／または、ＨＭＰＶシーズンに出生した満期産児、高齢者（例えば、６５歳以上の方々）、または、病気に起因する免疫不全を有する患者、または、免疫抑制治療薬の処置を受けた患者、または、ＲＳＶ感染症の素因となる基礎疾患（例えば、嚢胞性線維症患者、鬱血性心不全、または、その他の心疾患を有する患者、気道障害を有する患者、ＣＯＰＤの患者）、及び／または、ＨＭＰＶ感染症の素因となる基礎疾患を有し得る患者がある。本発明の抗体は、単独で、または、第２の作用物質、もしくは、第３の作用物質と組み合わせて、ＲＳＶ感染症、及び／または、ＨＭＰＶ感染症を処置すること、あるいは、当該ＲＳＶ感染症、及び／または、ＨＭＰＶ感染症に関連する、そのような感染症に関連する、あるいは、同感染症を原因とする発熱、咳、細気管支炎、または、肺炎などの少なくとも１つの症状、もしくは、合併症を軽減するために利用し得る。当該第２または第３の作用物質は、本発明の抗体と同時に送達し得るものであり、または、それらは、本発明の抗体の前または後に別々に投与し得る。当該第２または第３の作用物質は、リバビリンなどの抗ウイルス剤、発熱または疼痛を軽減するＮＳＡＩＤ、または、その他の作用物質、ＲＳＶ−Ｆに特異的に結合する別の第２の抗体である別異の抗体、ＲＳＶ−Ｇなどの別のＲＳＶ抗原に結合する作用物質（例えば、抗体）、ＲＳＶに対するワクチン、ＲＳＶ抗原に特異的なｓｉＲＮＡなどの抗原とし得る。
ＲＳＶ融合タンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に対する結合、及び、相互作用が故に、いかなる理論の拘束を受けることを望むものではないが、本発明の抗体、及び、それらの抗原結合断片は、ウイルスと宿主細胞膜との融合を防ぐこと、細胞間でのウイルスの拡散を防ぐこと、及び、シンシチウム形成を阻害することにおいて、有用であると考えられる。加えて、本出願人が、本明細書において、本発明の抗ＲＳＶ抗体、及び、それらの抗原結合断片のサブセットが、驚くべきことに、ＨＭＰＶに対して交差中和力を示すことを実証しており、よって、本発明の抗体、及び、それらの抗原結合断片は、予防的に投与した場合に、ＲＳＶ、及び／または、ＨＭＰＶを有する対象の感染症を予防する上で有利である。あるいは、本発明の抗体は、咳、発熱、肺炎などの感染症に関連する少なくとも１つの症状を改善し、または、感染症の重症度、期間、及び／または、頻度を抑制する上で有用であり得る。また、本発明の抗体は、ＲＳＶ感染症、及び／または、ＨＭＰＶ感染症を発症または獲得するリスクがある患者において、予防的に使用することも企図している。これらの患者として、早産児、ＲＳＶシーズン（晩秋から早春）、及び／または、ＨＭＰＶシーズンに出生した満期産児、高齢者（例えば、６５歳以上の方々）、または、病気に起因する免疫不全を有する患者、または、免疫抑制治療薬の処置を受けた患者、または、ＲＳＶ感染症の素因となる基礎疾患（例えば、嚢胞性線維症患者、鬱血性心不全、または、その他の心疾患を有する患者、気道障害を有する患者、ＣＯＰＤの患者）、及び／または、ＨＭＰＶ感染症の素因となる基礎疾患を有し得る患者がある。本発明の抗体は、単独で、または、第２の作用物質、もしくは、第３の作用物質と組み合わせて、ＲＳＶ感染症、及び／または、ＨＭＰＶ感染症を処置すること、あるいは、当該ＲＳＶ感染症、及び／または、ＨＭＰＶ感染症に関連する、そのような感染症に関連する、あるいは、同感染症を原因とする発熱、咳、細気管支炎、または、肺炎などの少なくとも１つの症状、もしくは、合併症を軽減するために利用し得る。当該第２または第３の作用物質は、本発明の抗体と同時に送達し得るものであり、または、それらは、本発明の抗体の前または後に別々に投与し得る。当該第２または第３の作用物質は、リバビリンなどの抗ウイルス剤、発熱または疼痛を軽減するＮＳＡＩＤ、または、その他の作用物質、ＲＳＶ−Ｆに特異的に結合する別の第２の抗体である別異の抗体、ＲＳＶ−Ｇなどの別のＲＳＶ抗原に結合する作用物質（例えば、抗体）、ＲＳＶに対するワクチン、ＲＳＶ抗原に特異的なｓｉＲＮＡなどの抗原とし得る。
なおもさらなる本発明の実施形態では、本発明の抗体を、ＲＳＶ感染症、及び／または、ＨＭＰＶ感染症に罹患している患者を処置するための医薬組成物の調製のために使用する。本発明のさらに別の実施形態では、本発明の抗体を、ＲＳＶ、及び／または、ＨＭＰＶによる一次感染の重症度を軽減するため、または、感染期間を短縮するため、または、ＲＳＶ感染症、及び／または、ＨＭＰＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状を軽減するための医薬組成物の調製のために使用する。本発明のさらなる実施態様において、本発明の抗体は、抗ウイルス剤、トキソイド、ワクチン、第２のＲＳＶ−Ｆ抗体、もしくは、ＲＳＶ抗原に特異的であるＲＳＶ−Ｇ抗体などのあらゆるその他の抗体など、ＲＳＶ感染症、及び／または、ＨＭＰＶ感染症の処置に有用なあらゆるその他の作用物質を用いた補助療法、または、当業者に公知のあらゆるその他の緩和療法で使用する。
したがって、特定の実施形態では、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症、または、ＲＳＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状を、処置または予防する方法を提供しており、同方法は、それを必要とする患者、または、それを必要とすることが疑われる患者に対して、本明細書、及び、その全体を通して開示した本発明の抗体、または、それらの抗原結合断片の１つ以上、例えば、表６に開示した抗ＲＳＶ抗体の１つ以上を投与することを含み、その結果、当該ＲＳＶ感染症を処置または予防し、または、ＲＳＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状を、処置し、軽減し、または、重症度を低下させる。
特定の他の実施形態では、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症、または、ＲＳＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状を、処置または予防する方法を提供しており、同方法は、それを必要とする患者、または、それを必要とすることが疑われる患者に対して、本発明の抗体、または、それらの抗原結合断片の１つ以上をコードする核酸配列、表６に開示した核酸配列、または、その相補体などを投与することを含み、その結果、当該ＲＳＶ感染症を処置または予防し、または、ＲＳＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状を、処置し、軽減し、または、重症度を低下させる。
さらなる実施形態では、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症、または、ＲＳＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状を、処置または予防する方法を提供しており、同方法は、それを必要とする患者、または、それを必要とすることが疑われる患者に対して、核酸配列を有する宿主細胞、または、そのような核酸配列を含む発現ベクターを投与することを含み、そのような核酸配列は、表６に開示した配列、及び、その相補体からなる群から選択しており、その結果、当該ＲＳＶ感染症を処置または予防し、または、ＲＳＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状を、処置し、軽減し、または、重症度を低下させる。
さらなる実施形態では、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症、または、ＲＳＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状を、処置または予防する方法を提供しており、同方法は、それを必要とする患者、または、それを必要とすることが疑われる患者に対して、表６に開示した本発明の抗体、または、それらの抗原結合断片の１つ以上、１つ以上の核酸配列、もしくは、当該核酸配列を含む発現ベクターであって、当該核酸配列は、表６に開示した配列、及び、その相補体からなる群から選択する、１つ以上の核酸配列を有する１つ以上の宿主細胞、または、当該１つ以上の核酸配列を含む発現ベクターであって、当該核酸配列が、表６に開示した配列、及び、その相補体からなる群から選択している同発現ベクター、及び、医薬として許容される担体、及び／または、１つ以上の賦形剤のいずれかを含む医薬組成物を投与することを含み、その結果、当該ＲＳＶ感染症を処置または予防し、または、ＲＳＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状を、処置し、軽減し、または、重症度を低下させる。
特定の実施形態では、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症、もしくは、ヒトメタニューモウイルス（ＨＭＰＶ）感染症、または、当該ＲＳＶ感染症、もしくは、当該ＨＭＰＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状のいずれかを、処置または予防する方法を提供しており、同方法は、それを必要とする患者、または、それを必要とすることが疑われる患者に対して、本明細書、及び、その全体を通して開示した本発明の抗体、または、それらの抗原結合断片、例えば、表６に開示した抗ＲＳＶ抗体の１つ以上を投与することを含み、その結果、当該ＲＳＶ感染症を処置または予防し、または、ＲＳＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状を、処置し、軽減し、または、重症度を低下させる。特定の実施形態では、ａ）の当該１つ以上の抗体、または、それらの抗原結合断片は、表６に開示した抗体番号１７９、１８８、２１１、２２１、または、２２９と表示した抗体からなる群から選択する。
特定のその他の実施形態では、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症、もしくは、ヒトメタニューモウイルス（ＨＭＰＶ）感染症、または、当該ＲＳＶ感染症、もしくは、当該ＨＭＰＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状のいずれかを、処置または予防する方法を提供しており、同方法は、それを必要とする患者、または、それを必要とすることが疑われる患者に対して、本発明の抗体、または、それらの抗原結合断片の１つ以上をコードする核酸配列、例えば、表６に開示した核酸配列、及び、その相補体を投与することを含み、その結果、当該ＲＳＶ感染症を処置または予防し、または、ＲＳＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状を、処置し、軽減し、または、重症度を低下させる。特定の実施形態では、ａ）の当該１つ以上の抗体、または、それらの抗原結合断片は、表６に開示した抗体番号１７９、１８８、２１１、２２１、または、２２９と表示した抗体からなる群から選択する。
さらなる実施形態では、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症、もしくは、ヒトメタニューモウイルス（ＨＭＰＶ）感染症、または、当該ＲＳＶ感染症、もしくは、当該ＨＭＰＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状のいずれかを、処置または予防する方法を提供しており、同方法は、それを必要とする患者、または、それを必要とすることが疑われる患者に対して、核酸配列を有する宿主細胞、または、そのような核酸配列を含む発現ベクターを投与することを含み、そのような核酸配列は、表６に開示した配列、及び、その相補体からなる群から選択しており、その結果、当該ＲＳＶ感染症を処置または予防し、または、ＲＳＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状を、処置し、軽減し、または、重症度を低下させる。特定の実施形態では、ａ）の当該１つ以上の抗体、または、それらの抗原結合断片は、表６に開示した抗体番号１７９、１８８、２１１、２２１、または、２２９と表示した抗体からなる群から選択する。
さらなる実施形態では、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症、もしくは、ヒトメタニューモウイルス（ＨＭＰＶ）感染症、または、当該ＲＳＶ感染症、もしくは、当該ＨＭＰＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状のいずれかを、処置または予防する方法を提供しており、同方法は、それを必要とする患者、または、それを必要とすることが疑われる患者に対して、表６に開示した本発明の抗体、または、それらの抗原結合断片の１つ以上、１つ以上の核酸配列、もしくは、当該核酸配列を含む発現ベクターであって、当該核酸配列は、表６に開示した配列、及び、その相補体からなる群から選択している、１つ以上の核酸配列を有する１つ以上の宿主細胞、または、当該１つ以上の核酸配列を含む発現ベクターであって、当該核酸配列は、表６に開示した配列、及び、その相補体からなる群から選択している同発現ベクター、及び、医薬として許容される担体、及び／または、１つ以上の賦形剤のいずれかを含む医薬組成物を投与することを含み、その結果、当該ＲＳＶ感染症を処置または予防し、または、ＲＳＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状を、処置し、軽減し、または、重症度を低下させる。特定の実施形態では、ａ）の当該１つ以上の抗体、または、それらの抗原結合断片は、表６に開示した抗体番号１７９、１８８、２１１、２２１、または、２２９と表示した抗体からなる群から選択する。
併用療法
上記したように、特定の実施形態では、ここに開示した方法は、ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶに対する抗体、または、本発明の医薬組成物と組み合わせて１つ以上の追加の治療薬を対象に投与することを含む。本明細書で使用する表現「と組み合わせて」は、追加の治療薬が、抗体、または、抗ＲＳＶ−Ｆ抗体を含む医薬組成物の前に、後に、または、それと同時に投与することを意味する。また、用語「と組み合わせて」は、抗ＲＳＶ−Ｆ抗体、及び、第２の治療薬の連続的、または、同時の投与を含む。
上記したように、特定の実施形態では、ここに開示した方法は、ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶに対する抗体、または、本発明の医薬組成物と組み合わせて１つ以上の追加の治療薬を対象に投与することを含む。本明細書で使用する表現「と組み合わせて」は、追加の治療薬が、抗体、または、抗ＲＳＶ−Ｆ抗体を含む医薬組成物の前に、後に、または、それと同時に投与することを意味する。また、用語「と組み合わせて」は、抗ＲＳＶ−Ｆ抗体、及び、第２の治療薬の連続的、または、同時の投与を含む。
例えば、抗ＲＳＶ−Ｆ抗体を含む医薬組成物の「前」に投与する場合、追加の治療薬は、当該抗ＲＳＶ−Ｆ抗体を含む医薬組成物の投与の約７２時間、約６０時間、約４８時間、約３６時間、約２４時間、約１２時間、約１０時間、約８時間、約６時間、約４時間、約２時間、約１時間、約３０分、約１５分、または、約１０分前に投与し得る。当該抗ＲＳＶ−Ｆ抗体を含む医薬組成物の「後」に投与する場合、追加の治療薬は、当該抗ＲＳＶ−Ｆ抗体を含む医薬組成物の投与の約１０分、約１５分、約３０分、約１時間、約２時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約２４時間、約３６時間、約４８時間、約６０時間、または、約７２時間後に投与し得る。当該抗ＲＳＶ−Ｆ抗体を含む医薬組成物と「同時に」、または、一緒に投与するとは、当該追加の治療薬を、当該抗ＲＳＶ−Ｆ抗体を含む医薬組成物を別の剤形で投与して５分未満の内（前に、後に、または、同時に）当該対象に投与すること、あるいは、当該追加の治療薬と当該抗ＲＳＶ−Ｆ抗体の双方を含む単一の組み合わせ投与製剤として当該対象に投与すること、を意味する。
併用療法は、本発明の抗ＲＳＶ−Ｆ抗体、及び、本発明の抗体、または、本発明の抗体の生物学的に活性な断片を、有利に組み合わせ得るあらゆる追加の治療薬を含み得る。
例えば、第２または第３の治療薬は、肺内のウイルス量の減量を補助するために用いることができ、同治療薬として、抗ウイルス薬、例えば、リバビリンがある。また、これらの抗体は、上記したその他の療法と併用し得るものであり、同療法として、トキソイド、ＲＳＶに特異的なワクチン、ＲＳＶ−Ｆに特異的な二次抗体、または、ＲＳＶ−Ｇなどのその他のＲＳＶ抗原に特異的な抗体などがある。
抗体の診断的使用
また、本発明の抗ＲＳＶ抗体、及び、それらの抗原結合断片は、例えば、診断目的のために、試料に含まれるＲＳＶ、及び／または、ＨＭＰＶを検出、及び／または、測定するために使用し得る。ＲＳＶ、及び／または、ＨＭＰＶに起因すると考えられる感染症の確認は、本発明のあらゆる抗体の１つ以上の使用を通じて、ウイルスの存在を測定することで実施し得るものと考えられる。ＲＳＶ、及び／または、ＨＭＰＶについての診断アッセイの例は、例えば、患者から得た試料を本発明の抗ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶ抗体と接触させることを含み、当該抗ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶ抗体は、検出可能な標識、または、レポーター分子で標識しており、あるいは、患者試料由来のＦタンパク質を含むウイルスを選択的に単離するための捕捉リガンドとして使用する。あるいは、非標識抗ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶ抗体は、それ自体検出可能に標識されている二次抗体と組み合わせて、診断用途に使用することができる。検出可能な標識またはレポーター分子は、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、または、１２５Ｉなどの放射性同位体、フルオレセインイソチオシアネート、または、ローダミンなどの蛍光または化学発光部分、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼなどの酵素、とすることができる。試料に含まれるＦタンパク質、及び／または、ＨＭＰＶを含むＲＳＶを検出または測定するために使用できる具体的なアッセイの例として、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、及び、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）がある。
また、本発明の抗ＲＳＶ抗体、及び、それらの抗原結合断片は、例えば、診断目的のために、試料に含まれるＲＳＶ、及び／または、ＨＭＰＶを検出、及び／または、測定するために使用し得る。ＲＳＶ、及び／または、ＨＭＰＶに起因すると考えられる感染症の確認は、本発明のあらゆる抗体の１つ以上の使用を通じて、ウイルスの存在を測定することで実施し得るものと考えられる。ＲＳＶ、及び／または、ＨＭＰＶについての診断アッセイの例は、例えば、患者から得た試料を本発明の抗ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶ抗体と接触させることを含み、当該抗ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶ抗体は、検出可能な標識、または、レポーター分子で標識しており、あるいは、患者試料由来のＦタンパク質を含むウイルスを選択的に単離するための捕捉リガンドとして使用する。あるいは、非標識抗ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶ抗体は、それ自体検出可能に標識されている二次抗体と組み合わせて、診断用途に使用することができる。検出可能な標識またはレポーター分子は、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、または、１２５Ｉなどの放射性同位体、フルオレセインイソチオシアネート、または、ローダミンなどの蛍光または化学発光部分、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼなどの酵素、とすることができる。試料に含まれるＦタンパク質、及び／または、ＨＭＰＶを含むＲＳＶを検出または測定するために使用できる具体的なアッセイの例として、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、及び、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）がある。
本発明のＲＳＶ、及び／または、ＨＭＰＶ診断アッセイに使用することができる試料は、検出可能な量のＲＳＶ−Ｆタンパク質、及び／または、ＨＭＰＶ、または、それらの断片を含み、正常な条件下、または、病理学的条件下で 患者から入手可能なあらゆる組織または体液試料を含む。一般的に、健康な患者（例えば、ＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶの存在に関連する疾患または病態に罹患していない患者）から得た特定の試料に含まれるＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶのレベルを測定して、まずは、ＲＳＶ、及び／または、ＨＭＰＶ由来のＦタンパク質のベースライン、または、標準、レベルを確立する。次に、このベースラインレベルのＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶを、ＲＳＶ、及び／または、ＨＭＰＶ感染症、または、そのような感染症に関連する症状が疑われる個体から得た試料で測定したＲＳＶ−Ｆ、及び／または、ＨＭＰＶのレベルと比較することができる。
本出願人は、健康な成人ドナーの記憶Ｂ細胞から１０８個のＲＳＶ Ｆ特異的モノクローナル抗体を単離及び特徴付けることで、ＲＳＶ融合タンパク質（Ｆ）に対するヒト抗体応答を包括的にプロファイリングし、そして、ＲＳＶ Ｆの抗原トポロジーを包括的にマッピングするために、これらの抗体を使用した。ＲＳＶ Ｆに対する当該抗体応答は、幾つかの抗原部位を標的とする広範な種類のクローンからなることを突き止めた。最も強力な抗体のほぼ半分が、ＲＳＶ Ｆの融合前（ｐｒｅＦ）立体配座の頂点付近の脆弱なこれまでに未確定である部位を標的としており、この領域を標的とするＲＳＶ抗体の開発を強力にサポートするとともに、ｐｒｅＦタンパク質の膜−遠位半球を保存するワクチン候補を提供する。加えて、このクラスの抗体は、収束配列の特徴を示しており、したがって、ヒト試料でのこれらのタイプの抗体を迅速に検出するための将来の手段を提供する。このドナー由来のｐｒｅＦ特異的表面に結合した抗体の多くは、パリビズマブよりも１００倍以上強力であり、そして、幾つかは、ヒトメタニューモウイルス（ＨＭＰＶ）を交差中和する。まとめると、これらの結果は、ＲＳＶワクチン、及び、抗体ベースの治療候補のデザイン及び評価に影響を及ぼし、かつ、受動予防のための新しい選択肢を提供する。
ヒト健常成人ドナー由来のＲＳＶ Ｆ特異的モノクローナル抗体の大規模単離
ＲＳＶ Ｆに対するヒト抗体応答を包括的にプロファイルするために、本出願人は、健常成人ドナー（「ドナー００３」）の記憶Ｂ細胞から約１０８個のモノクローナル抗体を単離し、そして、特徴を決定した。このドナーは、ＲＳＶ感染症の病歴について記録はなかったが、健康な成人は、一生を通じて、複数のＲＳＶ感染症を経験するものと考えられている（２６）。
ＲＳＶ Ｆに対するヒト抗体応答を包括的にプロファイルするために、本出願人は、健常成人ドナー（「ドナー００３」）の記憶Ｂ細胞から約１０８個のモノクローナル抗体を単離し、そして、特徴を決定した。このドナーは、ＲＳＶ感染症の病歴について記録はなかったが、健康な成人は、一生を通じて、複数のＲＳＶ感染症を経験するものと考えられている（２６）。
このドナーにおけるＲＳＶ Ｆに対する記憶Ｂ細胞応答の大きさは、蛍光標識した融合前後のＲＳＶ Ｆ選別プローブの混合物で末梢Ｂ細胞を染色することで評価した（図６Ａ〜６Ｂ）（１１、１５）。両方のタンパク質を二重標識して、非特異的蛍光色素結合によるバックグラウンドを排除した（２７）。フローサイトメトリー分析は、クラススイッチした（ＩｇＧ＋及びＩｇＡ＋）末梢Ｂ細胞の０．０４〜０．１８％が、ＲＳＶ Ｆに特異的である（図１Ａ及び図Ｂ）ことを示しており、これは、実験的にＲＳＶ感染させた後に認められたＲＳＶ Ｆ特異的細胞のパーセンテージよりも顕著に低く、そして、このドナーが、おそらく、最近は、ＲＳＶに曝露していなかったことを示唆している（２８）。特に、インデックス選別は、循環ＲＳＶ Ｆ特異的Ｂ細胞の１７〜３８％が、ＩｇＡを発現することを示しており、これは、ＲＳＶ Ｆに対するＩｇＡ記憶Ｂ細胞が、末梢血に存在することを示す（図１Ｂ）。
当該ドナー試料から約２００個のＲＳＶ Ｆ特異的Ｂ細胞を単細胞選別し、そして、抗体可変重（ＶＨ）及び可変軽（ＶＬ）鎖遺伝子を、単細胞ＰＣＲによって救済した（２９）。続いて、１００個を超える同族重鎖及び軽鎖対をクローニングし、そして、さらなる特徴付けのために、遺伝子操作したＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ株で、全長ＩｇＧとして発現させた（３０）。予備的な結合研究は、ＲＳＶ Ｆ糖タンパク質（Ｆ）特異的Ｂ細胞からクローニングした抗体の約８０％が、組換えＲＳＶ Ｆタンパク質に結合する、ことを示した。
ＲＳＶ Ｆ特異的抗体レパートリーの配列分析
単離したモノクローナル抗体の配列分析は、ＲＳＶ−Ｆ特異的レパートリーが非常に多様であり、７０を超える独特の系統を含むことを明らかにした（図１Ｃ及び表２）。この結果は、ＨＩＶ感染患者（３７）、または、インフルエンザワクチン接種後の健康なドナー（３２）で認められた相対的に一部のレパートリーとは全く対照的である。非ＲＳＶ反応性抗体（３３）と比較して、当該ＲＳＶ Ｆ特異的レパートリーは、一般的に、特定のＶＨ生殖細胞系列遺伝子（ＶＨ１−１８、ＶＨ１−２、ＶＨ１−６９、ＶＨ２−７０、ＶＨ４−３０４、及び、ＶＨ５−５１）（図１Ｄ、及び、表２）、及び、長い重鎖の第３の相補性決定領域（ＣＤＲＨ３）の長さ（一般的に、約１４〜１８アミノ酸の長さ、図１Ｅ及び表２）に向かって傾斜していた。興味深いことに、抗ＨＩＶ−１、抗インフルエンザ、及び、抗ＨＣＶレパートリーでも、ＶＨ１−６９への偏りが認められており（３４−３６）、また、最近の研究は、急性デング感染症の間に、ＶＨ１−１８、ＶＨ１−２、及び、ＶＨ１−６９の相対的な使用量が大幅に増加していることを報告している（３７）。それゆえ、これらの特定の生殖細胞系列遺伝子セグメントは、ウイルスエンベロープタンパク質の認識を容易にする固有の特性を有し得る、ものと思われる。
単離したモノクローナル抗体の配列分析は、ＲＳＶ−Ｆ特異的レパートリーが非常に多様であり、７０を超える独特の系統を含むことを明らかにした（図１Ｃ及び表２）。この結果は、ＨＩＶ感染患者（３７）、または、インフルエンザワクチン接種後の健康なドナー（３２）で認められた相対的に一部のレパートリーとは全く対照的である。非ＲＳＶ反応性抗体（３３）と比較して、当該ＲＳＶ Ｆ特異的レパートリーは、一般的に、特定のＶＨ生殖細胞系列遺伝子（ＶＨ１−１８、ＶＨ１−２、ＶＨ１−６９、ＶＨ２−７０、ＶＨ４−３０４、及び、ＶＨ５−５１）（図１Ｄ、及び、表２）、及び、長い重鎖の第３の相補性決定領域（ＣＤＲＨ３）の長さ（一般的に、約１４〜１８アミノ酸の長さ、図１Ｅ及び表２）に向かって傾斜していた。興味深いことに、抗ＨＩＶ−１、抗インフルエンザ、及び、抗ＨＣＶレパートリーでも、ＶＨ１−６９への偏りが認められており（３４−３６）、また、最近の研究は、急性デング感染症の間に、ＶＨ１−１８、ＶＨ１−２、及び、ＶＨ１−６９の相対的な使用量が大幅に増加していることを報告している（３７）。それゆえ、これらの特定の生殖細胞系列遺伝子セグメントは、ウイルスエンベロープタンパク質の認識を容易にする固有の特性を有し得る、ものと思われる。
体細胞超変異（ＳＨＭ）の平均レベルは、ＶＨ遺伝子（ＣＤＲＨ３を除く）あたり、１６〜３０ヌクレオチド置換の範囲であり（図１Ｆ、及び、表２）、このものは、抗インフルエンザ抗体レパートリーで認められたＳＨＭの平均レベル（３２、３８）に匹敵し、また、ＲＳＶ感染症の再発性と一致している（２６）。興味深いことに、幾つかの抗体は、４０個以上のＶＨ遺伝子ヌクレオチド置換を含んでおり、このことは、複数回のＲＳＶ感染によって、非常に高レベルの体細胞超変異（ＳＨＭ）を有する抗体を生成することができる、ことを示唆している。
抗体の大部分は、ｐｒｅＦのみに対して結合する
次に、バイオレイヤー干渉法を使用して、融合前（ＤＳ−Ｃａｖ１）または融合後（Ｆ ΔＦＰ）立体配座で安定化したフリン開裂ＲＳＶ Ｆ細胞外ドメインに対する当該ＩｇＧの見かけの結合親和性を測定した（１１、１５）。抗体の比較的大きな割合（３６〜６７％）が、ｐｒｅＦにのみ結合した（図２Ａ及び図Ｂ；表３）。残りの大多数の抗体は、ｐｒｅＦ及びｐｏｓｔＦの両方に結合し、そして、５〜７％の抗体のみが、ｐｏｓｔＦ特異性のみを示した（図２Ａ及び図Ｂ；表３）。これらのドナーレパートリーにおけるｐｏｓｔＦ特異的抗体の低い有病率は、抗ＲＳＶ Ｆ血清結合活性の１０％未満が、ｐｏｓｔＦを特異的に標的とするという観察と一致している（８）。しかしながら、興味深いことに、交差反応性抗体の大部分は、ｐｏｓｔＦに対して、大きな見かけの親和性で結合しており（図２Ａ；表３）、このことは、これらの抗体が、おそらくは、インビボで、ｐｏｓｔＦによって誘発され、及び／または、ｐｏｓｔＦに対する親和性が成熟したことを示唆している。それ故に、ｐｒｅＦ−対ｐｏｓｔＦ−特異的抗体の顕著に高い割合は、インビボでのｐｒｅＦの存在量の増加よりもむしろ、ｐｏｓｔＦと比較して、ｐｒｅＦに独特な表面の高い免疫原性に起因すると思われる。最後に、ＲＳＶサブタイプ間の比較的に高度の配列保存に基づいて予想したように、ほとんどの抗体は、サブタイプＡ及びＢの双方に由来するＦタンパク質に対して結合反応性を示した（図２Ｃ；表３）。
次に、バイオレイヤー干渉法を使用して、融合前（ＤＳ−Ｃａｖ１）または融合後（Ｆ ΔＦＰ）立体配座で安定化したフリン開裂ＲＳＶ Ｆ細胞外ドメインに対する当該ＩｇＧの見かけの結合親和性を測定した（１１、１５）。抗体の比較的大きな割合（３６〜６７％）が、ｐｒｅＦにのみ結合した（図２Ａ及び図Ｂ；表３）。残りの大多数の抗体は、ｐｒｅＦ及びｐｏｓｔＦの両方に結合し、そして、５〜７％の抗体のみが、ｐｏｓｔＦ特異性のみを示した（図２Ａ及び図Ｂ；表３）。これらのドナーレパートリーにおけるｐｏｓｔＦ特異的抗体の低い有病率は、抗ＲＳＶ Ｆ血清結合活性の１０％未満が、ｐｏｓｔＦを特異的に標的とするという観察と一致している（８）。しかしながら、興味深いことに、交差反応性抗体の大部分は、ｐｏｓｔＦに対して、大きな見かけの親和性で結合しており（図２Ａ；表３）、このことは、これらの抗体が、おそらくは、インビボで、ｐｏｓｔＦによって誘発され、及び／または、ｐｏｓｔＦに対する親和性が成熟したことを示唆している。それ故に、ｐｒｅＦ−対ｐｏｓｔＦ−特異的抗体の顕著に高い割合は、インビボでのｐｒｅＦの存在量の増加よりもむしろ、ｐｏｓｔＦと比較して、ｐｒｅＦに独特な表面の高い免疫原性に起因すると思われる。最後に、ＲＳＶサブタイプ間の比較的に高度の配列保存に基づいて予想したように、ほとんどの抗体は、サブタイプＡ及びＢの双方に由来するＦタンパク質に対して結合反応性を示した（図２Ｃ；表３）。
特定の抗ウイルス抗体特異性が、多反応性及び自己反応性と関連している（３９−４１）ので、我々はまた、血清クリアランスなどの下流の挙動と相関する上記したハイスループットアッセイを用いて、多反応性について、ＲＳＶ抗体を試験した（４２、４３）。１７７個の臨床抗体、及び、幾つかの広範中和ＨＩＶ抗体も比較のために含めた。興味深いことに、上記した数多くのＨＩＶ広範中和抗体とは対照的に、ＲＳＶ Ｆ特異的抗体の大多数は、このアッセイにおいて、かなりの多反応性を欠いていた（図２Ｄ）。
ＲＳＶ Ｆ特異的抗体は、６つの主要抗原部位を標的とする
ＲＳＶ Ｆ特異的抗体の抗原特異性をマッピングするために、本出願人は、まず、上記した酵母に基づいたアッセイを用いて、競合的結合実験を行った（４４）。まず、これらの抗体を、上記した３つのｐｒｅＦ特異的抗体（１０、１７、２１）であるＤ２５、ＡＭ１４、及び、ＭＰＥ８と、ｐｒｅＦ及びｐｏｓｔＦの双方に結合するパリビズマブの親和性変異体であるモタビズマブ（１０、１１、４５）との競合について試験した。次いで、非競合抗体を、部位ＩＶ指向性モノクローナル抗体（１０１Ｆ）（４６）、部位Ｉ指向性抗体（部位Ｉ Ａｂ）、及び、２つの高親和性抗体（それぞれ、Ｈｉｇｈ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ａｂ １、及び、Ｈｉｇｈ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ａｂ ２）との競合について試験をしたが、それらは、互いに強力に競合せず、または、コントロール抗体のいずれとも強力に競合しなかった。この競合アッセイの結果に基づいて、各抗体に、ビンを割り当てた（例えば、表４を参照されたい）。
ＲＳＶ Ｆ特異的抗体の抗原特異性をマッピングするために、本出願人は、まず、上記した酵母に基づいたアッセイを用いて、競合的結合実験を行った（４４）。まず、これらの抗体を、上記した３つのｐｒｅＦ特異的抗体（１０、１７、２１）であるＤ２５、ＡＭ１４、及び、ＭＰＥ８と、ｐｒｅＦ及びｐｏｓｔＦの双方に結合するパリビズマブの親和性変異体であるモタビズマブ（１０、１１、４５）との競合について試験した。次いで、非競合抗体を、部位ＩＶ指向性モノクローナル抗体（１０１Ｆ）（４６）、部位Ｉ指向性抗体（部位Ｉ Ａｂ）、及び、２つの高親和性抗体（それぞれ、Ｈｉｇｈ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ａｂ １、及び、Ｈｉｇｈ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ａｂ ２）との競合について試験をしたが、それらは、互いに強力に競合せず、または、コントロール抗体のいずれとも強力に競合しなかった。この競合アッセイの結果に基づいて、各抗体に、ビンを割り当てた（例えば、表４を参照されたい）。
我々のエピトープ割り当ての分解能を確認及び向上させるために、ルミネックスベースのアッセイを使用して、ｐｒｅＦ変異体のパネルに対する各抗体の結合を測定した。各変異体は、クラスター化した２〜４個の突然変異を一緒に含んでおり、ｐｒｅＦの表面にパッチを形成している。ｐｒｅＦの表面を均一に覆う合計で９つのパッチが生成した（図７Ａ〜図７Ｃ）。グリカン依存性エピトープを標的とする抗体を同定するために、脱グリコシル化ｐｒｅＦも含めた。１０個のｐｒｅＦ変異体に対する各抗体の結合を、野生型ｐｒｅＦのそれと比較し、そして、パッチを割り当てるために使用した（例えば、表４を参照されたい）。以前に特徴付けした抗体Ｄ２５、ＡＭ１４、及び、モタビズマブを使用して、アッセイを検証した（例えば、図７Ｃ及び表４を参照されたい）。次に、ビンとパッチの組み合わせデータを使用して、各抗体を、以前に決定したＦタンパク質の構造、耐性変異、及び、二次構造要素に基づいて定義した単一の抗原部位（図３Ａ〜図３Ｇ）に割り当てた。全体として、これらのデータは、単離した抗体の大多数が、融合前ＲＳＶ Ｆの６つの優性抗原部位（φ、Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、及び、Ｖ）を標的とすることを示している。興味深いことに、単離した抗体のごく一部だけがＡＭ１４のそれと類似した結合プロファイルを有し、この四次エピトープを標的とする抗体は、自然感染の間に一般的に誘発されない、ことを示唆している。どの抗体もＦの脱グリコシル化に対して感受性ではなく、このことは、グリカン依存性抗体が、天然のＲＳＶ感染症によって稀に誘発することも実証している。
各抗原部位を標的とする抗体のｐｒｅＦ及びｐｏｓｔＦ結合活性の分析（例えば、図３Ｃ〜図３Ｇ；表４を参照されたい）は、３つの部位（φ、ＩＩＩ、及び、Ｖ）が、主として、ｐｒｅＦに認められることを明らかにした。部位φ及び部位ＩＩＩを標的とする抗体は、以前に報告がされており（１０、１７）、そして、これらの部位は、それぞれ、ｐｒｅＦスパイクの上面及び側面に位置している。このドナーに由来する抗体の２０％超が、部位φを認識し、そして、約２２％が、部位ＩＩＩを認識した。このドナーに由来する抗体の比較的に大きな部分（約１４％）が、第３のｐｒｅＦ特異的部位を認識しており、このことは、これまでに報告がされておらず、したがって、本明細書では領域部位Ｖと表示した（例えば、図３Ｃ〜図３Ｇ参照；表４を参照されたい）。部位Ｖ抗体の大部分は、Ｄ２５、ＭＰＥ８、及び、モタビズマブと競合したが、これら３つの抗体が認識したエピトープ間の距離を考えると予想外であった。当該パッチ突然変異体分析は、これらの抗体が、ｐｒｅＦのα３ヘリックス及びβ３／β４ヘアピンと相互作用することを明らかにした。この領域は、Ｄ２５、ＭＰＥ８、及び、モタビズマブが認識するエピトープの間に位置しており、このことは、このクラスの抗体について認められた異常な競合プロファイルを説明している（例えば、図８を参照されたい）。３つの主要なｐｒｅＦ特異的部位に加えて、抗原部位ＩＶを認識する多数の抗体は、ｐｒｅＦ特異的であり、これはおそらく、β２２との接触のためであり、このものは、移行の過程で、ｐｒｅＦからｐｏｓｔＦへと急激に再配置をする。まとめると、当該エピトープマッピングデータは、単離した抗体の大多数が、６つの優性抗原部位を標的としており、その約半分が、ｐｒｅＦで独占的に発現していることを示している。
かなり強力な中和抗体は、ｐｒｅＦ特異的エピトープを標的とする
次に、これらの抗体を、上記したハイスループット中和アッセイを用いて、ＲＳＶサブタイプＡ及びＢに対する中和活性について試験した（１５）。単離した抗体の６０％超が、中和活性を示しており、そして、約２０％が、強い中和力を示した（ＩＣ５０≦０．０５μｇ／ｍｌ）（例えば、図４Ａ及び図４Ｂ；表３を参照されたい）。特に、幾つかのクローン的に無関係の抗体は、Ｄ２５よりも５．０倍以上も強力であり、そして、パリビズマブよりも１００倍以上も強力であった（例えば、図４Ａ；表３を参照されたい）。興味深いことに、中和力とＳＨＭのレベルとの間に相関関係はなく、このことは、広範囲のＳＨＭが、ＲＳＶの強力な中和に必要でないことを示唆している。結合交差反応性データと一致して、大部分の中和抗体は、サブタイプＡ及びＢの双方に対して活性を示した（図４Ａ〜図４Ｃ；表３）。
次に、これらの抗体を、上記したハイスループット中和アッセイを用いて、ＲＳＶサブタイプＡ及びＢに対する中和活性について試験した（１５）。単離した抗体の６０％超が、中和活性を示しており、そして、約２０％が、強い中和力を示した（ＩＣ５０≦０．０５μｇ／ｍｌ）（例えば、図４Ａ及び図４Ｂ；表３を参照されたい）。特に、幾つかのクローン的に無関係の抗体は、Ｄ２５よりも５．０倍以上も強力であり、そして、パリビズマブよりも１００倍以上も強力であった（例えば、図４Ａ；表３を参照されたい）。興味深いことに、中和力とＳＨＭのレベルとの間に相関関係はなく、このことは、広範囲のＳＨＭが、ＲＳＶの強力な中和に必要でないことを示唆している。結合交差反応性データと一致して、大部分の中和抗体は、サブタイプＡ及びＢの双方に対して活性を示した（図４Ａ〜図４Ｃ；表３）。
次に、ｐｒｅＦ、及び、ｐｏｓｔＦ結合親和性と、中和力との間の関係を調べたところ、この関係は、ｐｒｅＦに対して優先的または独占的に結合した非常に強力な抗体の大部分を明確に実証した（例えば、図４Ｄ〜図４Ｇ；表３を参照されたい）。この差異を定量化すると、非常に強力な抗体（ＩＣ５０＜０．０５μｇ／ｍｌ）の８０％超が、ｐｒｅＦに特異的であり（例えば、図９；表３を参照されたい）、また、ｐｒｅＦ特異的抗体の中央値ＩＣ５０が、ｐｒｅＦ、及び、ｐｏｓｔＦ交差結合性抗体の当該中央値よりも８倍も低く、かつ、ｐｏｓｔＦを特異的に認識する抗体の当該中央値よりも８０倍も低い、ことを示した（例えば、図４Ｅ；表３を参照されたい）。重要なことに、ｐｒｅＦ結合と中和との間に正の相関があり（Ｐ＜０．００１、ｒ＝０．２４）、また、見かけのｐｒｅＦ ＫＤＳが、一般的に、中和ＩＣ５０とよく一致した（例えば、図５Ａ；表３を参照されたい）。対照的に、中和力とｐｏｓｔＦ親和性との間に相関はなかった（Ｐ＝０．４４、ｒ＝−０．０７）（例えば、図５Ｂ；表３を参照されたい）。この結果は、抗体媒介中和の占有モデルと一致しており（４７）、そして、ＤＳ−Ｃａｖ１が、天然のｐｒｅＦ三量体の忠実な抗原模倣物であることを示唆している。特に、１００ｐＭ未満のＩＣ５０で中和した抗体はごくわずかであり、このことは、これまでに提案されてきた親和性成熟の上限と一致する（４８、４９）。
次に、中和力と抗原性部位との間の関係を分析した。例えば、図５Ｃ、表３、及び、表４にまとめて表した結果は、非常に強力な中和抗体の６０％以上が、３つの融合前Ｆ特異的部位の２つである抗原部位φ及びＶを標的とした、ことを示した。対照的に、部位ＩＩＩ及びＩＶを標的とする抗体は、広範囲の中和力を示しており、そして、部位Ｉ及びＩＩを標的とする抗体は、一般的に、中程度の中和から非中和であった。同様の結果は、サブタイプＢについて測定した結合親和性及び中和力を用いた場合にも得られた（例えば、図１０Ａ〜図１０Ｃ；表３及び表４を参照されたい）。興味深いことに、部位ＩＶ特異的抗体のサブセットは、ｐｒｅＦ結合親和性に基づいて予想したよりも実質的に低い中和力で中和した（例えば、図５Ａ；表３を参照されたい）。この結果は、部位ＩＶ内の特定のエピトープが、組換えｐｒｅＦよりも、ビリオンが密集した表面に発現する天然のエンベロープスパイクに関して露出が少ない、ことを示唆し得る。
幾つかの抗体は、ＲＳＶ及びＨＭＰＶを交差中和する
ＲＳＶとヒトメタニューモウイルス（ＨＭＰＶ）Ｆタンパク質が、３３％のアミノ酸同一性を有しており、かつ、ある種のＲＳＶ Ｆ特異的抗体が、ＨＭＰＶと交差中和する（１７、５０）との前提で、このドナー由来の抗体を、ＨＭＰＶに対する中和活性について試験をした。試験した１０８個の抗体の内、５個が、ＨＭＰＶを中和し、そして、２個が、ＨＭＰＶ及びＲＳＶの双方に対して非常に強力な活性を示した（例えば、表５を参照されたい）。配列分析は、５個の抗体が、２つの異なるクローンファミリーを表すことを明らかにしており、このことは、異なるＶＨ生殖細胞系列遺伝子を利用しており、そして、可変ＣＤＲＨ３の長さ及び程度の体細胞超変異を含むことを明らかにした（例えば、表２、及び、配列表を参照されたい）。これらの交差中和抗体のすべてが、独占的に、ｐｒｅＦに結合し、かつ、ＭＰＥ８と競合しており（例えば、表５を参照されたい）、このことは、ＲＳＦとＨＭＰＶとを含む４つのニューモウイルスを、ＭＰＥ８が交差中和することを示す以前の研究（１７）と一致している。この結果は、特に、高度に保存したエピトープが、天然のＲＳＶ及び／またはＨＭＰＶ感染症の状況において、比較的免疫原性であることを示唆している。
ＲＳＶとヒトメタニューモウイルス（ＨＭＰＶ）Ｆタンパク質が、３３％のアミノ酸同一性を有しており、かつ、ある種のＲＳＶ Ｆ特異的抗体が、ＨＭＰＶと交差中和する（１７、５０）との前提で、このドナー由来の抗体を、ＨＭＰＶに対する中和活性について試験をした。試験した１０８個の抗体の内、５個が、ＨＭＰＶを中和し、そして、２個が、ＨＭＰＶ及びＲＳＶの双方に対して非常に強力な活性を示した（例えば、表５を参照されたい）。配列分析は、５個の抗体が、２つの異なるクローンファミリーを表すことを明らかにしており、このことは、異なるＶＨ生殖細胞系列遺伝子を利用しており、そして、可変ＣＤＲＨ３の長さ及び程度の体細胞超変異を含むことを明らかにした（例えば、表２、及び、配列表を参照されたい）。これらの交差中和抗体のすべてが、独占的に、ｐｒｅＦに結合し、かつ、ＭＰＥ８と競合しており（例えば、表５を参照されたい）、このことは、ＲＳＦとＨＭＰＶとを含む４つのニューモウイルスを、ＭＰＥ８が交差中和することを示す以前の研究（１７）と一致している。この結果は、特に、高度に保存したエピトープが、天然のＲＳＶ及び／またはＨＭＰＶ感染症の状況において、比較的免疫原性であることを示唆している。
ＲＳＶ Ｆ特異的抗体の親和性成熟
幾つかの実施形態は、表６に列挙する抗体のいずれかの親和性成熟抗体に関する（それぞれを、親和性成熟変異体を生成するための「親」抗体」として理解する）。親和性成熟抗体は、当該親抗体の１つ以上のあらゆるＣＤＲの突然変異生成によって生成し得る。特定の実施形態では、本発明は、当該ＣＤＲ配列、表６に記載のあらゆる抗体、または、表６に記載のあらゆる抗体の６つのＣＤＲ配列を含む抗体の各々での１つ以上の点突然変異、例えば、０個、１個、２個、または、３個の点突然変異を含む親和性成熟変異体を提供する。親和性成熟変異体は、例えば、結合の親和性を高める、または、Ｋｏｎを増大させる、または、Ｋｏｆｆを抑制させるなど、結合特性を最適化するための標準的な突然変異誘発技術を用いるあらゆる突然変異誘発方により作製することができ、かつ、当該親抗体と比較して、少なくとも２倍、５倍、１ｌｏｇ、または、２ｌｏｇｓ、または、３ｌｏｇｓのＫＤ差異によって特徴付けることができる。そのような親和性成熟抗体は、依然として親抗体と同じ結合特異性と、例えば、標的エピトープに結合する最適化した親和性とを有する。
幾つかの実施形態は、表６に列挙する抗体のいずれかの親和性成熟抗体に関する（それぞれを、親和性成熟変異体を生成するための「親」抗体」として理解する）。親和性成熟抗体は、当該親抗体の１つ以上のあらゆるＣＤＲの突然変異生成によって生成し得る。特定の実施形態では、本発明は、当該ＣＤＲ配列、表６に記載のあらゆる抗体、または、表６に記載のあらゆる抗体の６つのＣＤＲ配列を含む抗体の各々での１つ以上の点突然変異、例えば、０個、１個、２個、または、３個の点突然変異を含む親和性成熟変異体を提供する。親和性成熟変異体は、例えば、結合の親和性を高める、または、Ｋｏｎを増大させる、または、Ｋｏｆｆを抑制させるなど、結合特性を最適化するための標準的な突然変異誘発技術を用いるあらゆる突然変異誘発方により作製することができ、かつ、当該親抗体と比較して、少なくとも２倍、５倍、１ｌｏｇ、または、２ｌｏｇｓ、または、３ｌｏｇｓのＫＤ差異によって特徴付けることができる。そのような親和性成熟抗体は、依然として親抗体と同じ結合特異性と、例えば、標的エピトープに結合する最適化した親和性とを有する。
選択した抗ＲＳＶ抗体を、親和性成熟について同定した。並べたオリゴ類は、ＮＮＫ多様性を介して多様化させたＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及び、ＣＤＲＬ３配列を含んでいた。これらのＮＮＫオリゴ類を、以前に報告されたようにして、ＤＮＡシャフリングを介して親のＨＣまたはＬＣに組み込んだ（Ｓｔｅｍｍｅｒ ＷＰ ｅｔ ａｌ．， ＤＮＡ ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ ｂｙ ｒａｎｄｏｍ ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅａｓｓｅｍｂｌｙ：Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．１９９４ Ｏｃｔ ２５；９１（２２）：１０７４７−５１）。次に、ＶＨ及びＶＬ ＰＣＲ産物を、当該親の軽鎖または重鎖プラスミドのいずれかを既に含有している酵母に形質転換することで、ライブラリーを作製した。フローサイトメトリーを用いて、多様化したライブラリーを選択した。各ＦＡＣＳラウンドについて、漸減量の抗原を用いてこれらのライブラリーを親和により加圧し、そして、改善した結合親和性を有するクローンを選別し、そして、増殖させた。改善した結合集団が、フローサイトメトリー（一般的には、２ラウンドの選択）で認められたら、配列決定、及び、特徴付けのために、単一酵母クローンを選んだ（表６）。
具体的な実施形態は、表６の抗体１２８、１３３、及び、２２７の親和性成熟変異体に関する。特に、抗体番号２３２と２３３は、表６の番号１２８の抗体の親和性成熟変異体であり、抗体番号２３４〜２３６は、表６の番号１３３の抗体の親和性成熟変異体であり、そして、抗体番号２３７〜２４４は、表６の番号２２７の抗体の親和性成熟変異体である。
親和性成熟抗体の抗体生産及び精製
酵母クローンを、飽和まで増殖させた後に、振盪しながら、３０℃で、４８時間誘導した。誘導後、酵母細胞をペレット化し、そして、精製のために上清を回収した。プロテインＡカラムを用いてＩｇＧを精製し、そして、酢酸、ｐＨ２．０で溶出した。パパイン消化によってＦａｂ断片を生成し、そして、ＫａｐｐａＳｅｌｅｃｔ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）で精製した。
酵母クローンを、飽和まで増殖させた後に、振盪しながら、３０℃で、４８時間誘導した。誘導後、酵母細胞をペレット化し、そして、精製のために上清を回収した。プロテインＡカラムを用いてＩｇＧを精製し、そして、酢酸、ｐＨ２．０で溶出した。パパイン消化によってＦａｂ断片を生成し、そして、ＫａｐｐａＳｅｌｅｃｔ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）で精製した。
ＥＬＩＳＡに基づくミクロ中和アッセイにおけるＲＳＶインビトロ中和
インビトロＲＳＶ中和を、ＲＳＶ−Ａ株Ａ２（ＡＴＣＣ、ＶＲ１５４０Ｐ）を用いて、ＥＬＩＳＡに基づいたミクロ中和アッセイで試験をした。無血清ＭＥＭに段階希釈したモノクローナル抗体を含有する９６ウェルプレートに、ウイルス（約０．２５の感染の最終多重度）を加え、そして、４℃で、３０分間、プレインキュベートした。次いで、新たにトリプシン処理をしたＨｅｐ−２細胞（１．５×１０Ｅ４細胞／ウェル）を、５％ＦＣＳを補充したＭＥＭを含有する各ウェルに添加した。３７℃で、５％ＣＯ２で、４日間インキュベートした後に、培地を吸引し、そして、細胞を、２００μｌのＰＢＳ／ウェルで２回洗浄し、風乾し、そして、１００μｌのアセトン（８０％）で固定した。ＥＬＩＳＡによる発現ウイルスタンパク質の定量を用いて、ＲＳＶ複製を測定した。この目的のために、固定した細胞を、ＰＢＳ−０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０で、２回洗浄し、室温で、１時間、１％スキムミルクを含むＰＢＳでブロックし、次いでポリクローナルヤギ抗ＲＳＶ抗体調製物（ＢｉｏＲａｄ、＃７９５０−０００４）を用いて、ブロッキング緩衝液で、室温で、１時間、染色した。ロバ抗ヤギＩｇＧ ＨＲＰコンジュゲートを検出試薬として使用し、また、１段階−Ｕｌｔｒａ ＴＭＢ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、＃３４２０９）を基質として使用した。中和抗体の非存在下で、ウイルスに感染したコントロール細胞と比較して、ウイルス複製の％阻害を計算した。アイソタイプ適合コントロールモノクローナル抗体を、全実験で使った。モノクローナル抗体効力を、ウイルス複製の５０％減少をもたらす最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）として表示する。結果を、図１１に示し、そして、この設定において、すべてのモノクローナル抗体が、８．５ｎｇ／ｍｌ（ＡＤＩ−３１６７４）〜４９５．５ｎｇ／ｍｌ（ＡＤＩ−３１３７９）に及ぶ広範囲のＩＣ５０値で、ＲＳＶ−Ａ２を中和できたことを実証する。
インビトロＲＳＶ中和を、ＲＳＶ−Ａ株Ａ２（ＡＴＣＣ、ＶＲ１５４０Ｐ）を用いて、ＥＬＩＳＡに基づいたミクロ中和アッセイで試験をした。無血清ＭＥＭに段階希釈したモノクローナル抗体を含有する９６ウェルプレートに、ウイルス（約０．２５の感染の最終多重度）を加え、そして、４℃で、３０分間、プレインキュベートした。次いで、新たにトリプシン処理をしたＨｅｐ−２細胞（１．５×１０Ｅ４細胞／ウェル）を、５％ＦＣＳを補充したＭＥＭを含有する各ウェルに添加した。３７℃で、５％ＣＯ２で、４日間インキュベートした後に、培地を吸引し、そして、細胞を、２００μｌのＰＢＳ／ウェルで２回洗浄し、風乾し、そして、１００μｌのアセトン（８０％）で固定した。ＥＬＩＳＡによる発現ウイルスタンパク質の定量を用いて、ＲＳＶ複製を測定した。この目的のために、固定した細胞を、ＰＢＳ−０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０で、２回洗浄し、室温で、１時間、１％スキムミルクを含むＰＢＳでブロックし、次いでポリクローナルヤギ抗ＲＳＶ抗体調製物（ＢｉｏＲａｄ、＃７９５０−０００４）を用いて、ブロッキング緩衝液で、室温で、１時間、染色した。ロバ抗ヤギＩｇＧ ＨＲＰコンジュゲートを検出試薬として使用し、また、１段階−Ｕｌｔｒａ ＴＭＢ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、＃３４２０９）を基質として使用した。中和抗体の非存在下で、ウイルスに感染したコントロール細胞と比較して、ウイルス複製の％阻害を計算した。アイソタイプ適合コントロールモノクローナル抗体を、全実験で使った。モノクローナル抗体効力を、ウイルス複製の５０％減少をもたらす最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）として表示する。結果を、図１１に示し、そして、この設定において、すべてのモノクローナル抗体が、８．５ｎｇ／ｍｌ（ＡＤＩ−３１６７４）〜４９５．５ｎｇ／ｍｌ（ＡＤＩ−３１３７９）に及ぶ広範囲のＩＣ５０値で、ＲＳＶ−Ａ２を中和できたことを実証する。
考察
ＲＳＶ感染症に対するヒト抗体応答の詳細な理解は、ＲＳＶワクチン、ならびに、ＲＳＶ感染症の処置、及び／または、予防のための、治療用、及び／または、予防用抗体候補の開発及び評価を補助する。これまでの研究は、ヒト血清に含まれるＲＳＶ特異的中和抗体が標的化するエピトープを大まかにマッピングしていた（４、８）が、天然ＲＳＶ感染症が誘導する抗体の特異性及び機能的性質は、大部分が定義されないままである。本明細書に開示したように、ｐｒｅＦ及びｐｏｓｔＦ安定化タンパク質（１１、１５）、ハイスループット抗体単離プラットフォーム、及び、融合前Ｆ変異体の構造誘導したコレクションを用いて、自然に感染した成人ドナーにおいて、ＲＳＶ Ｆに対するヒト記憶Ｂ細胞応答をクローン的に分析し、そして、非常に強力かつ選択的なＲＳＶ中和性、ならびに、非常に強力な抗ＲＳＶ／抗ＨＭＰＶ交差選択性及び交差中和性のものを単離し、そして、特徴付けが行われた。
ＲＳＶ感染症に対するヒト抗体応答の詳細な理解は、ＲＳＶワクチン、ならびに、ＲＳＶ感染症の処置、及び／または、予防のための、治療用、及び／または、予防用抗体候補の開発及び評価を補助する。これまでの研究は、ヒト血清に含まれるＲＳＶ特異的中和抗体が標的化するエピトープを大まかにマッピングしていた（４、８）が、天然ＲＳＶ感染症が誘導する抗体の特異性及び機能的性質は、大部分が定義されないままである。本明細書に開示したように、ｐｒｅＦ及びｐｏｓｔＦ安定化タンパク質（１１、１５）、ハイスループット抗体単離プラットフォーム、及び、融合前Ｆ変異体の構造誘導したコレクションを用いて、自然に感染した成人ドナーにおいて、ＲＳＶ Ｆに対するヒト記憶Ｂ細胞応答をクローン的に分析し、そして、非常に強力かつ選択的なＲＳＶ中和性、ならびに、非常に強力な抗ＲＳＶ／抗ＨＭＰＶ交差選択性及び交差中和性のものを単離し、そして、特徴付けが行われた。
分析したレパートリーにおいて、ｐｒｅＦ及びｐｏｓｔＦの双方を認識する抗体に対するｐｒｅＦ特異的抗体の比は、１：１よりわずかに大きかった（例えば、図２Ｂを参照されたい）。これらの数値は、ヒト血清について報告された値より若干小さく、このことは、約７０％の抗Ｆ血清結合が、ｐｒｅＦに特異的であることを示すものであった（８）。この矛盾は、血清に含まれる個々の抗体のレベル間の差異、特定の特異性について得たＢ細胞表現型の差異、または、ドナー間での相違の結果であり得る。これらのわずかな差異にもかかわらず、双方の研究結果は、ｐｒｅＦ特異的エピトープ、及び、ｐｒｅ及びｐｏｓｔＦが共有するエピトープが、天然ＲＳＶ感染症の間は免疫原性であるのに対して、ｐｏｓｔＦの独特の表面は、免疫原性が顕著に低いことを示唆している。
本明細書に開示したレパートリー分析は、ＲＳＶ Ｆ特異的抗体の大多数が、融合前ＲＳＶ Ｆの６つの優性抗原部位、φ、Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、及び、Ｖを標的とすることを示した。これらの部位は、以前に決定した構造、ｐｒｅＦタンパク質のエピトープビニング／競合アッセイ、耐性変異、及び、二次構造要素に基づいて定義した。ＲＳＶ Ｆ抗原部位を説明するための命名法は、時代とともに進化してきており（６、５１〜５７）、また、従前のマッピング作業は、Ｆの融合後の立体配座に基づいており、ｐｒｅＦに独占的に存在する表面は含んでいなかった。ｐｒｅＦの結晶構造は、Ｆの構造及び機能に関する重要な情報、ならびに、ｐｒｅＦに独特な表面での抗体結合部位、及び、ｐｏｓｔＦと共有する表面をマッピングするための新しい試薬を提供した。一次近似では、各抗体は、主に、これらの部位の１つに割り当てることができる。しかしながら、抗体エピトープがＦの表面全体を覆っていること、及び、プロトマー内の２つ以上の隣接する抗原部位に結合する抗体、及び、プロトマーを横切って結合する四次抗体が存在する、可能性がある。
重要なことに、本明細書に開示した結果は、最も強力に中和する抗体が、抗原性部位φ及びＶを標的としており、それらは双方ともに、ｐｒｅＦ三量体の頂点付近に位置する、ことを示している。これらの知見は、中和活性の大部分が、ｐｒｅＦとのプレインキュベーションによって除去し得ること（４、８）、及び、部位φ以外のｐｒｅＦ特異的部位が、ｐｒｅＦ特異的中和抗体のかなりの割合を占めていること（８）、を決定したヒト血清マッピングから得られた結果と一致している。抗原部位φが、強力に中和する抗体の標的であることは示されているが（８、１０）、抗体と部位Ｖとの相互作用については、あまり理解がされていない。興味深いことに、大部分の部位Ｖ指向性抗体が、幾つかの収束配列の特徴を共有していることがわかっており、このことは、ハイスループット配列決定技術を用いて、これらのタイプの抗体をヒト試料で迅速に検出することが可能である、ことを示唆している（５８）。本出願人は、この発見が、ｐｒｅＦトリマーの頂点を保存することを目的とするＲＳＶワクチン候補に対する抗体応答のプロファイリングにおいて、特に有利であると予想する。
本明細書に記載した抗体の広範なパネルは、受動的予防、ならびに、ＲＳＶ感染症の処置のための新しい機会を提供する。これらの抗体の多くは、Ｄ２５よりも強力にＲＳＶを中和するものであり、それらは、危険な状態にある小児期の若年者でのＲＳＶの予防について臨床試験が現在行われているモノクローナル抗体であるＭＥＤＩ８８９７の基礎として機能する（５９）。加えて、これらの抗体のサブセットが、ＨＭＰＶを交差中和することを実証した。
有効なＲＳＶワクチンの開発は、幾つかの独自の課題を提示しており、そして、最適なワクチン接種戦略の選択は、最重要課題である。本明細書で提示した天然のＲＳＶ感染症に対するヒト抗体反応の詳細な分析は、そのようなワクチンの開発のための知見を提供する。重要なことに、これらの結果は、ｐｒｅＦ免疫原で免疫前ドナーを免疫化すると、中和反応を促進すると考えられるが、ｐｏｓｔＦ免疫原を使用すると、中程度または弱い中和活性を有するＢ細胞クローンが増殖する可能性が高い、ことを示唆している。同様に、ｐｒｅＦ免疫原を用いてＲＳＶナイーブ乳児を免疫化すると、ｐｏｓｔＦ免疫原と比較して、実質的に、より強力な中和活性に関連するエピトープを標的とするナイーブＢ細胞を活性化するものと期待される。加えて、理想的なＲＳＶワクチンは、抗原性部位φ及びＶは、天然のＲＳＶ感染症に応答して誘発する最も強力な抗体が標的とするので、同抗原性部位φ及びＶを保存するものと考えられる。
したがって、本明細書で開示したものは、ＲＳＶ感染症、及び／または、ＨＭＰＶ感染症の処置、及び／または、予防のための、高い選択性を有する強力な抗ＲＳＶ抗体、ならびに、非常に強力な交差中和性抗ＲＳＶ抗体、及び、抗ＨＭＰＶ抗体、ならびに、ワクチン候補である。さらに、本明細書に開示した当該試薬は、臨床試験の評価のための有用な一揃いのツールを提供し、このものは、現在、研究が進められている数多くのものから、最適なＲＳＶワクチン接種、または、抗体ベースの治療戦略を選択する上で重要である（６０）。
材料及び方法
研究デザイン
ＲＳＶ Ｆに対する抗体応答をプロファイルするために、末梢血単核細胞を、おおよそ２０〜３５歳の成人ドナーから取得し、そして、ＲＳＶ Ｆ反応性Ｂ細胞由来のモノクローナル抗体を単離した。これらの抗体を、配列決定、結合、エピトープマッピング、及び、中和アッセイによって特徴付けをした。この研究のための全てのサンプルは、志願者のインフォームドコンセントを得て収集した。この研究は、盲検化されておらず、また、無作為化もしていなかった。各アッセイについて、少なくとも２回の独立した実験を行った。
研究デザイン
ＲＳＶ Ｆに対する抗体応答をプロファイルするために、末梢血単核細胞を、おおよそ２０〜３５歳の成人ドナーから取得し、そして、ＲＳＶ Ｆ反応性Ｂ細胞由来のモノクローナル抗体を単離した。これらの抗体を、配列決定、結合、エピトープマッピング、及び、中和アッセイによって特徴付けをした。この研究のための全てのサンプルは、志願者のインフォームドコンセントを得て収集した。この研究は、盲検化されておらず、また、無作為化もしていなかった。各アッセイについて、少なくとも２回の独立した実験を行った。
ＲＳＶ Ｆ選別プローブの生成
可溶性融合前プローブ及び融合後プローブは、我々が以前に結晶化を行い、そして、それぞれが融合前及び融合後立体配座であると決定をしたＲＳＶ Ｆ ΔＦＰ及びＤＳ−Ｃａｖ１構築物に基づいた（１１、１５）。プローブの結合力を増加させるため、そして、ＲＳＶ Ｆタンパク質を均一に配向させるために、当該三量体ＲＳＶ Ｆタンパク質を、Ｃ末端ＡｖｉＴａｇのビオチン化を介して、四量体ストレプトアビジンに結合させた。各プローブについて、Ｃ末端にＨｉｓ−Ａｖｉをタグしたバージョンと、及び、Ｃ末端ＳｔｒｅｐＴａｇＩＩバージョンとの双方を、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ ２９３−Ｆ細胞に、同時トランスフェクトした。まず、分泌タンパク質を、Ｎｉ−ＮＴＡ樹脂で精製して、Ｈｉｓ−Ａｖｉタグを欠いている三量体を除去した。次いで、Ｎｉ−ＮＴＡ精製からの溶出液を、Ｓｔｒｅｐ−Ｔａｃｔｉｎ樹脂で精製した。Ｓｔｒｅｐ−Ｔａｃｔｉｎ樹脂に対する単一のＳｔｒｅｐＴａｇＩＩの低い結合力が故に、追加の洗浄工程は、単独で、ＳｔｒｅｐＴａｇｇｅｄ三量体を除去することができた。これにより、２つのＳｔｒｅｐＴａｇＩＩをタグしたモノマー、つまりは、Ｈｉｓ−Ａｖｉをタグした唯一のモノマーを含有するトリマーが精製されることとなった。この精製スキームは、三量体当たり単一のＡｖｉＴａｇをもたらし、このことは、３つのＡｖｉＴａｇを含む三量体タンパク質を、四量体ストレプトアビジンと共にインキュベートした場合に生じる、凝集または「デイジーチェーン」を大幅に減少させる。ＲＳＶ Ｆ三量体を、製造業者（Ａｖｉｄｉｔｙ、ＬＬＣ）の指示書にしたがって、ビオチンリガーゼＢｉｒＡを用いてビオチン化した。Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でサイズ排除クロマトグラフィーを行って、ビオチン化タンパク質を、過剰のビオチンから分離した。ＲＳＶ Ｆ三量体あたりのビオチン部分の数の定量は、Ｑｕａｎｔ＊Ｔａｇ Ｂｉｏｔｉｎ Ｋｉｔを用いて、製造業者（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の指示書にしたがって行った。
可溶性融合前プローブ及び融合後プローブは、我々が以前に結晶化を行い、そして、それぞれが融合前及び融合後立体配座であると決定をしたＲＳＶ Ｆ ΔＦＰ及びＤＳ−Ｃａｖ１構築物に基づいた（１１、１５）。プローブの結合力を増加させるため、そして、ＲＳＶ Ｆタンパク質を均一に配向させるために、当該三量体ＲＳＶ Ｆタンパク質を、Ｃ末端ＡｖｉＴａｇのビオチン化を介して、四量体ストレプトアビジンに結合させた。各プローブについて、Ｃ末端にＨｉｓ−Ａｖｉをタグしたバージョンと、及び、Ｃ末端ＳｔｒｅｐＴａｇＩＩバージョンとの双方を、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ ２９３−Ｆ細胞に、同時トランスフェクトした。まず、分泌タンパク質を、Ｎｉ−ＮＴＡ樹脂で精製して、Ｈｉｓ−Ａｖｉタグを欠いている三量体を除去した。次いで、Ｎｉ−ＮＴＡ精製からの溶出液を、Ｓｔｒｅｐ−Ｔａｃｔｉｎ樹脂で精製した。Ｓｔｒｅｐ−Ｔａｃｔｉｎ樹脂に対する単一のＳｔｒｅｐＴａｇＩＩの低い結合力が故に、追加の洗浄工程は、単独で、ＳｔｒｅｐＴａｇｇｅｄ三量体を除去することができた。これにより、２つのＳｔｒｅｐＴａｇＩＩをタグしたモノマー、つまりは、Ｈｉｓ−Ａｖｉをタグした唯一のモノマーを含有するトリマーが精製されることとなった。この精製スキームは、三量体当たり単一のＡｖｉＴａｇをもたらし、このことは、３つのＡｖｉＴａｇを含む三量体タンパク質を、四量体ストレプトアビジンと共にインキュベートした場合に生じる、凝集または「デイジーチェーン」を大幅に減少させる。ＲＳＶ Ｆ三量体を、製造業者（Ａｖｉｄｉｔｙ、ＬＬＣ）の指示書にしたがって、ビオチンリガーゼＢｉｒＡを用いてビオチン化した。Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でサイズ排除クロマトグラフィーを行って、ビオチン化タンパク質を、過剰のビオチンから分離した。ＲＳＶ Ｆ三量体あたりのビオチン部分の数の定量は、Ｑｕａｎｔ＊Ｔａｇ Ｂｉｏｔｉｎ Ｋｉｔを用いて、製造業者（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の指示書にしたがって行った。
単一Ｂ細胞の選別
抗ヒトＩｇＧ（ＢＶ６０５）、ＩｇＡ（ＦＩＴＣ）、ＣＤ２７（ＢＶ４２１）、ＣＤ８（ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５）、ＣＤ１４（ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５）、ＣＤ１９（ＰＥＣｙ７）、ＣＤ２０（ＰＥＣｙ７）、及び、二重標識ＤＳ−Ｃａｖ１とＦ ΔＦＰ四量体（各５０ｎＭ）との混合物を用いて、末梢血単核細胞を染色した。個々のＡｖｉＴａｇｇｅｄ ＲＳＶ Ｆタンパク質を、プレミアムグレードのフィコエリトリン標識ストレプトアビジン（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）、または、プレミアムグレードのアロフィコシアニン標識ストレプトアビジンと共に、少なくとも２０分間、氷上で、４：１のモル比で、インキュベートして、二重標識ＲＳＶ Ｆ四量体を生成した。各実験について、四量体を新たに調製した。単一細胞を、ＢＤ蛍光活性化セルソーターＡｒｉａ ＩＩで選別して、２０μＬ／ウェルの溶解緩衝液［５×ｆｉｒｓｔ ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の５μＬ、０．２５μＬ ＲＮａｓｅＯＵＴ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１．２５μＬ ジチオトレイトール（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、０．６２５μＬ ＮＰ−４０（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）、及び、１２．６μＬ ｄＨ２０］を含む９６ウェルＰＣＲプレート（ＢｉｏＲａｄ）に入れた。これらのプレートを、ドライアイス上で直ちに凍結した後、−８０℃で保存した。
抗ヒトＩｇＧ（ＢＶ６０５）、ＩｇＡ（ＦＩＴＣ）、ＣＤ２７（ＢＶ４２１）、ＣＤ８（ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５）、ＣＤ１４（ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５）、ＣＤ１９（ＰＥＣｙ７）、ＣＤ２０（ＰＥＣｙ７）、及び、二重標識ＤＳ−Ｃａｖ１とＦ ΔＦＰ四量体（各５０ｎＭ）との混合物を用いて、末梢血単核細胞を染色した。個々のＡｖｉＴａｇｇｅｄ ＲＳＶ Ｆタンパク質を、プレミアムグレードのフィコエリトリン標識ストレプトアビジン（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）、または、プレミアムグレードのアロフィコシアニン標識ストレプトアビジンと共に、少なくとも２０分間、氷上で、４：１のモル比で、インキュベートして、二重標識ＲＳＶ Ｆ四量体を生成した。各実験について、四量体を新たに調製した。単一細胞を、ＢＤ蛍光活性化セルソーターＡｒｉａ ＩＩで選別して、２０μＬ／ウェルの溶解緩衝液［５×ｆｉｒｓｔ ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の５μＬ、０．２５μＬ ＲＮａｓｅＯＵＴ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１．２５μＬ ジチオトレイトール（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、０．６２５μＬ ＮＰ−４０（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）、及び、１２．６μＬ ｄＨ２０］を含む９６ウェルＰＣＲプレート（ＢｉｏＲａｄ）に入れた。これらのプレートを、ドライアイス上で直ちに凍結した後、−８０℃で保存した。
抗体可変遺伝子の増幅及びクローニング
以前に報告がされたようにして（２２）、単一Ｂ細胞ＰＣＲを行った。つまりは、ＩｇＨ、Ｉｇλ、及び、Ｉｇκ可変遺伝子を、ＩｇＧ及びＩｇＡ特異的プライマーのカクテルを用いて、ＲＴ−ＰＣＲ、及び、ネスティッドＰＣＲ反応によって増幅した（２２）。ＰＣＲの第２ラウンドで使用したプライマーは、切断した発現ベクターに対して４０塩基対の５’及び３’相同性を含んでおり、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅへの相同組換えによるクローニングを可能にした（４０）。化学変換のための酢酸リチウム法を用いて、ＰＣＲ産物をＳ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅにクローニングした（４１）。各形質転換反応は、２０μＬの未精製の重鎖及び軽鎖ＰＣＲ産物と、２００ｎｇの切断した重鎖及び軽鎖プラスミドを含んでいた。形質転換の後に、個々の酵母コロニーを、配列決定、及び、特徴付けをするために選んだ。
以前に報告がされたようにして（２２）、単一Ｂ細胞ＰＣＲを行った。つまりは、ＩｇＨ、Ｉｇλ、及び、Ｉｇκ可変遺伝子を、ＩｇＧ及びＩｇＡ特異的プライマーのカクテルを用いて、ＲＴ−ＰＣＲ、及び、ネスティッドＰＣＲ反応によって増幅した（２２）。ＰＣＲの第２ラウンドで使用したプライマーは、切断した発現ベクターに対して４０塩基対の５’及び３’相同性を含んでおり、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅへの相同組換えによるクローニングを可能にした（４０）。化学変換のための酢酸リチウム法を用いて、ＰＣＲ産物をＳ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅにクローニングした（４１）。各形質転換反応は、２０μＬの未精製の重鎖及び軽鎖ＰＣＲ産物と、２００ｎｇの切断した重鎖及び軽鎖プラスミドを含んでいた。形質転換の後に、個々の酵母コロニーを、配列決定、及び、特徴付けをするために選んだ。
ＩｇＧ及びＦａｂ断片の発現と精製
抗ＲＳＶ Ｆ ＩｇＧは、以前に報告がされたようにして（２３）、２４ウェルプレートで増殖させたＳ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ培養物で発現させた。競合アッセイで使用するＦａｂ断片は、ＩｇＧを、パパインで、２時間、３０℃で、消化することで生成した。ヨードアセトアミドを添加して消化を停止し、そして、Ｆａｂ及びＦｃ混合物を、プロテインＡアガロースに通して、Ｆｃ断片及び未消化のＩｇＧを除去した。次いで、プロテインＡ樹脂のフロースルーを、ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（商標）ＩｇＧ−ＣＨ１アフィニティー樹脂（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に通し、そして、２００ｍＭ酢酸／５０ｍＭ ＮａＣｌ ｐＨ３．５で、１／８容量の２Ｍ Ｈｅｐｅｓ ｐＨ８．０に溶出した。次いで、Ｆａｂ断片を、ｐＨ７．０のＰＢＳに緩衝液交換した。
抗ＲＳＶ Ｆ ＩｇＧは、以前に報告がされたようにして（２３）、２４ウェルプレートで増殖させたＳ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ培養物で発現させた。競合アッセイで使用するＦａｂ断片は、ＩｇＧを、パパインで、２時間、３０℃で、消化することで生成した。ヨードアセトアミドを添加して消化を停止し、そして、Ｆａｂ及びＦｃ混合物を、プロテインＡアガロースに通して、Ｆｃ断片及び未消化のＩｇＧを除去した。次いで、プロテインＡ樹脂のフロースルーを、ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（商標）ＩｇＧ−ＣＨ１アフィニティー樹脂（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に通し、そして、２００ｍＭ酢酸／５０ｍＭ ＮａＣｌ ｐＨ３．５で、１／８容量の２Ｍ Ｈｅｐｅｓ ｐＨ８．０に溶出した。次いで、Ｆａｂ断片を、ｐＨ７．０のＰＢＳに緩衝液交換した。
バイオレイヤー干渉法結合分析
ＤＳ−Ｃａｖ１及びＦΔ ＦＰへのＩｇＧの結合を、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ ＨＴＸ装置（Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を用いたＢＬＩ測定で決定した。ハイスループットＫＤスクリーニングのために、ＩｇＧを、ＡＨＱセンサー（Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）に固定化し、そして、会合工程のために、０．１％ＢＳＡを含有するＰＢＳ（ＰＢＳＦ）に含まれる１００ｎＭの抗原に暴露し、続いて、ＰＢＳＦ緩衝液で解離工程を行った。ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ７を使用して、データを分析した。会合及び解離速度を計算するために、当該データを、１：１結合モデルに当てはめ、そして、ＫＤを、比率ｋｄ／ｋａを用いて計算した。
ＤＳ−Ｃａｖ１及びＦΔ ＦＰへのＩｇＧの結合を、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ ＨＴＸ装置（Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を用いたＢＬＩ測定で決定した。ハイスループットＫＤスクリーニングのために、ＩｇＧを、ＡＨＱセンサー（Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）に固定化し、そして、会合工程のために、０．１％ＢＳＡを含有するＰＢＳ（ＰＢＳＦ）に含まれる１００ｎＭの抗原に暴露し、続いて、ＰＢＳＦ緩衝液で解離工程を行った。ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ７を使用して、データを分析した。会合及び解離速度を計算するために、当該データを、１：１結合モデルに当てはめ、そして、ＫＤを、比率ｋｄ／ｋａを用いて計算した。
抗体競合アッセイ
以前に報告がされたようにして（２３）、抗体競合アッセイを行った。抗体競合は、コントロールの抗ＲＳＶ Ｆ Ｆａｂが、ＤＳ−Ｃａｖ１またはＦΔ ＦＰのいずれかに対する、酵母表面発現抗ＲＳＶ Ｆ ＩｇＧの結合を阻害する能力によって測定をした。５０ｎＭビオチン化ＤＳ−Ｃａｖ１またはＦΔ ＦＰを、１μＭ競合因子Ｆａｂと共に、室温で、３０分間、プレインキュベートし、次いで、抗ＲＳＶ Ｆ ＩｇＧを発現する酵母の懸濁液に添加した。未結合抗原を、０．１％ＢＳＡを含有するＰＢＳ（ＰＢＳＦ）で洗浄して除去した。洗浄後、１：５００希釈のストレプトアビジンＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６３３を用いて、結合抗原を検出し、そして、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて、フローサイトメトリーによって分析した。競合のレベルは、抗原のみのコントロールと比較して、競合因子Ｆａｂの存在下での抗原結合の減少倍数を測定することで評価した。抗原のみのコントロールと比較して、コントロールＦａｂの存在下で５倍を超える減少が認められた場合に、抗体を競合因子と考えた。
以前に報告がされたようにして（２３）、抗体競合アッセイを行った。抗体競合は、コントロールの抗ＲＳＶ Ｆ Ｆａｂが、ＤＳ−Ｃａｖ１またはＦΔ ＦＰのいずれかに対する、酵母表面発現抗ＲＳＶ Ｆ ＩｇＧの結合を阻害する能力によって測定をした。５０ｎＭビオチン化ＤＳ−Ｃａｖ１またはＦΔ ＦＰを、１μＭ競合因子Ｆａｂと共に、室温で、３０分間、プレインキュベートし、次いで、抗ＲＳＶ Ｆ ＩｇＧを発現する酵母の懸濁液に添加した。未結合抗原を、０．１％ＢＳＡを含有するＰＢＳ（ＰＢＳＦ）で洗浄して除去した。洗浄後、１：５００希釈のストレプトアビジンＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６３３を用いて、結合抗原を検出し、そして、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて、フローサイトメトリーによって分析した。競合のレベルは、抗原のみのコントロールと比較して、競合因子Ｆａｂの存在下での抗原結合の減少倍数を測定することで評価した。抗原のみのコントロールと比較して、コントロールＦａｂの存在下で５倍を超える減少が認められた場合に、抗体を競合因子と考えた。
ｐｒｅＦパッチ変異体の発現、精製、及び、ビオチン化
ｐｒｅＦ分子の表面を一様に覆う２〜４個の突然変異の９つのパッチのパネルを、融合前ＲＳＶ Ｆの構造に基づいてデザインした（１０）。モタビズマブ、１０１Ｆ、Ｄ２５、ＡＭ１４、及び、ＭＰＥ８が認識する部位を含む公知の抗原部位については、パッチは、ウイルスエスケープに関連している残基、あるいは、抗体結合に重要であることが知られている残基を含んでいた。可能な場合には、１８４個のサブタイプＡ、サブタイプＢ、及び、ウシＲＳＶ Ｆ配列に及ぶ高度に保存された残基を避けて、タンパク質構造を攪乱する可能性を最小限にした。各パッチ変異体に存在する突然変異を、図７Ａに示した。各パッチ変異体についての突然変異を、部位特異的ビオチン化のためのＣ末端ＡｖｉＴａｇを用いて、当該融合前安定化ＲＳＶ Ｆ（ＤＳ−Ｃａｖ１）構築物にクローニングした。タンパク質をＦｒｅｅＳｔｙｌｅ ２９３−Ｆ細胞から分泌させ、Ｎｉ−ＮＴＡ樹脂で精製し、及び、ビオチンリガーゼＢｉｒＡを使用して、製造業者（Ａｖｉｄｉｔｙ、ＬＬＣ）の指示書にしたがって、ビオチン化した。Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でサイズ排除クロマトグラフィーをして、ビオチン化タンパク質を、過剰のビオチンから分離した。１μＭのキフネンシンの存在下で、ＤＳ−Ｃａｖ１を発現させ、次いで、ビオチン化の前に、１０％（ｗｔ／ｗｔ）のＥｎｄｏＨで消化することで、ＤＳ−Ｃａｖ１の脱グリコシル化バージョンを生成した。
ｐｒｅＦ分子の表面を一様に覆う２〜４個の突然変異の９つのパッチのパネルを、融合前ＲＳＶ Ｆの構造に基づいてデザインした（１０）。モタビズマブ、１０１Ｆ、Ｄ２５、ＡＭ１４、及び、ＭＰＥ８が認識する部位を含む公知の抗原部位については、パッチは、ウイルスエスケープに関連している残基、あるいは、抗体結合に重要であることが知られている残基を含んでいた。可能な場合には、１８４個のサブタイプＡ、サブタイプＢ、及び、ウシＲＳＶ Ｆ配列に及ぶ高度に保存された残基を避けて、タンパク質構造を攪乱する可能性を最小限にした。各パッチ変異体に存在する突然変異を、図７Ａに示した。各パッチ変異体についての突然変異を、部位特異的ビオチン化のためのＣ末端ＡｖｉＴａｇを用いて、当該融合前安定化ＲＳＶ Ｆ（ＤＳ−Ｃａｖ１）構築物にクローニングした。タンパク質をＦｒｅｅＳｔｙｌｅ ２９３−Ｆ細胞から分泌させ、Ｎｉ−ＮＴＡ樹脂で精製し、及び、ビオチンリガーゼＢｉｒＡを使用して、製造業者（Ａｖｉｄｉｔｙ、ＬＬＣ）の指示書にしたがって、ビオチン化した。Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でサイズ排除クロマトグラフィーをして、ビオチン化タンパク質を、過剰のビオチンから分離した。１μＭのキフネンシンの存在下で、ＤＳ−Ｃａｖ１を発現させ、次いで、ビオチン化の前に、１０％（ｗｔ／ｗｔ）のＥｎｄｏＨで消化することで、ＤＳ−Ｃａｖ１の脱グリコシル化バージョンを生成した。
パッチ変異体の結合についてのＬｕｍｉｎｅｘアッセイ
当該パッチ変異体に対する単離した抗体の結合を、ハイスループットＬｕｍｉｎｅｘアッセイを用いて決定した。各ビオチン化変異体、及び、ＤＳ−Ｃａｖ１コントロールを、アビジンでコーティングしたＭａｇＰｌｅｘビーズ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）に結合させ、ビーズ識別番号を付与した各ビーズは、ビーズ内に埋め込まれた赤色及び赤外染料の独自の比率を反映していた。次いで、当該結合ビーズを、３８４ウェルプレートで、４００ｎＭ〜１．４ｐＭの範囲の各抗体の６倍連続希釈物と混合した。ＰＥコンジュゲートマウス抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ二次抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）と共にインキュベートする前に、磁気マイクロプレートウォッシャー（ＢｉｏＴｅｋ）を用いて、ビーズを洗浄した。ビーズを分類し、そして、ＦＬＥＸＭＡＰ ３Ｄフローサイトメーター（Ｌｕｍｉｎｅｘ）を用いて、ＰＥの結合を測定した。
当該パッチ変異体に対する単離した抗体の結合を、ハイスループットＬｕｍｉｎｅｘアッセイを用いて決定した。各ビオチン化変異体、及び、ＤＳ−Ｃａｖ１コントロールを、アビジンでコーティングしたＭａｇＰｌｅｘビーズ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）に結合させ、ビーズ識別番号を付与した各ビーズは、ビーズ内に埋め込まれた赤色及び赤外染料の独自の比率を反映していた。次いで、当該結合ビーズを、３８４ウェルプレートで、４００ｎＭ〜１．４ｐＭの範囲の各抗体の６倍連続希釈物と混合した。ＰＥコンジュゲートマウス抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ二次抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）と共にインキュベートする前に、磁気マイクロプレートウォッシャー（ＢｉｏＴｅｋ）を用いて、ビーズを洗浄した。ビーズを分類し、そして、ＦＬＥＸＭＡＰ ３Ｄフローサイトメーター（Ｌｕｍｉｎｅｘ）を用いて、ＰＥの結合を測定した。
ＲＳＶ中和アッセイ
以前に報告がされたようにして（６１）、ウイルスストックを調製及び維持した。原型サブタイプＡ（Ａ２株）及びサブタイプＢ（１８５３７）Ｆ遺伝子を発現する組換えｍＫａｔｅ−ＲＳＶ、及び、Ｋａｔｕｓｈｋａ蛍光タンパク質を、Ｈｏｔａｒｄ ｅｔ ａｌ（６２）に報告がされたようにして構築した。グルタミン、ペニシリン、及び、ストレプトマイシンを添加した１０％ウシ胎児血清を含有するイーグルの最小必須培地で、ＨＥｐ−２細胞を維持した。抗体中和を、蛍光プレートリーダー中和アッセイで測定した（１５）。２．４×１０４ＨＥｐ−２細胞を含む培地の３０μＬの溶液を、３８４ウェル黒色光学底プレート（Ｎｕｎｃ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に播種した。ＩｇＧ試料を、１：１０〜１：１６３８４０まで４倍に段階希釈し、そして、等量の組換えｍＫａｔｅ−ＲＳＶ Ａ２を加えた。試料を混合し、そして、３７℃で、１時間、インキュベートした。インキュベーションの後に、試料とウイルスとの混合物の５０μＬを、３８４ウェルプレートにある細胞に対して添加し、そして、３７℃で、２２〜２４時間、インキュベートした。次いで、アッセイプレートを、Ｅｘ ５８８ｎｍ、及び、Ｅｍ ６３５ｎｍにて、マイクロプレートリーダー（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｐａｒａｄｉｇｍ、ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｅｖｉｃｅｓ）で、蛍光強度について測定した。各試料についての中和のＩＣ５０は、Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．）を用いた曲線適合で計算した。
以前に報告がされたようにして（６１）、ウイルスストックを調製及び維持した。原型サブタイプＡ（Ａ２株）及びサブタイプＢ（１８５３７）Ｆ遺伝子を発現する組換えｍＫａｔｅ−ＲＳＶ、及び、Ｋａｔｕｓｈｋａ蛍光タンパク質を、Ｈｏｔａｒｄ ｅｔ ａｌ（６２）に報告がされたようにして構築した。グルタミン、ペニシリン、及び、ストレプトマイシンを添加した１０％ウシ胎児血清を含有するイーグルの最小必須培地で、ＨＥｐ−２細胞を維持した。抗体中和を、蛍光プレートリーダー中和アッセイで測定した（１５）。２．４×１０４ＨＥｐ−２細胞を含む培地の３０μＬの溶液を、３８４ウェル黒色光学底プレート（Ｎｕｎｃ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に播種した。ＩｇＧ試料を、１：１０〜１：１６３８４０まで４倍に段階希釈し、そして、等量の組換えｍＫａｔｅ−ＲＳＶ Ａ２を加えた。試料を混合し、そして、３７℃で、１時間、インキュベートした。インキュベーションの後に、試料とウイルスとの混合物の５０μＬを、３８４ウェルプレートにある細胞に対して添加し、そして、３７℃で、２２〜２４時間、インキュベートした。次いで、アッセイプレートを、Ｅｘ ５８８ｎｍ、及び、Ｅｍ ６３５ｎｍにて、マイクロプレートリーダー（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｐａｒａｄｉｇｍ、ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｅｖｉｃｅｓ）で、蛍光強度について測定した。各試料についての中和のＩＣ５０は、Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．）を用いた曲線適合で計算した。
ヒトメタニューモウイルス中和アッセイ
所定量のＧＦＰ発現ｈＭＰＶ組換えウイルス（ＮＬ／１／００、Ａ1亜系、Ｂｅｒｎａｄｅｔｔｅ ｖａｎ ｄｅｎ Ｈｏｏｇｅｎ、及び、Ｒｏｎ Ｆｏｕｃｈｉｅｒ，Ｒｏｔｔｅｒｄａｍ，ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓからの譲渡）を、段階希釈したモノクローナル抗体と混合した後に、１０％ウシ胎児血清を添加したＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ培地を含む９６ウェルプレートにある１１８個のベロ細胞を増殖する培養物に加えた。３６時間後に、培地を除去し、ＰＢＳを添加し、そして、１ウェル当たりのＧＦＰの量を、ＴｅｃａｎマイクロプレートリーダーＭ２００を用いて測定した。蛍光値は、無抗体のウイルスコントロールに対するパーセントとして表示した。
所定量のＧＦＰ発現ｈＭＰＶ組換えウイルス（ＮＬ／１／００、Ａ1亜系、Ｂｅｒｎａｄｅｔｔｅ ｖａｎ ｄｅｎ Ｈｏｏｇｅｎ、及び、Ｒｏｎ Ｆｏｕｃｈｉｅｒ，Ｒｏｔｔｅｒｄａｍ，ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓからの譲渡）を、段階希釈したモノクローナル抗体と混合した後に、１０％ウシ胎児血清を添加したＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ培地を含む９６ウェルプレートにある１１８個のベロ細胞を増殖する培養物に加えた。３６時間後に、培地を除去し、ＰＢＳを添加し、そして、１ウェル当たりのＧＦＰの量を、ＴｅｃａｎマイクロプレートリーダーＭ２００を用いて測定した。蛍光値は、無抗体のウイルスコントロールに対するパーセントとして表示した。
多反応性アッセイ
可溶化ＣＨＯ細胞膜調製物（ＳＭＰ）に対する結合を測定する前述したハイスループットアッセイ（４３）を用いて、抗体の多反応性を評価した。つまり、２００万個のＩｇＧ提示酵母を、９６ウェルアッセイプレートに移し、そして、ペレット化して上清を除去した。このペレットを、５０μｌの１：１０希釈ストックｂ−ＳＭＰに再懸濁し、そして、氷上で、２０分間、インキュベートした。次に、細胞を、氷冷ＰＢＳＦで２回洗浄し、そして、当該細胞ペレットを、５０μＬの二次標識混合物（Ｅｘｔｒａｖｉｄｉｎ−Ｒ−ＰＥ、抗ヒトＬＣＦＩＴＣ、及び、ヨウ化プロピジウム）に再懸濁した。この混合物を、氷上で、２０分間、インキュベートした後に、氷冷ＰＢＳＦで、２回洗浄した。次いで、細胞を、１００μＬの氷冷ＰＢＳＦに再懸濁し、そして、ＨＴＳ試料インジェクターを使用して、当該プレートを、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で泳動させた。フローサイトメトリーデータを、Ｒ−ＰＥチャネルにおける平均蛍光強度について分析し、そして、非特異的結合を評価するために、適切なコントロールに対して標準化をした。
可溶化ＣＨＯ細胞膜調製物（ＳＭＰ）に対する結合を測定する前述したハイスループットアッセイ（４３）を用いて、抗体の多反応性を評価した。つまり、２００万個のＩｇＧ提示酵母を、９６ウェルアッセイプレートに移し、そして、ペレット化して上清を除去した。このペレットを、５０μｌの１：１０希釈ストックｂ−ＳＭＰに再懸濁し、そして、氷上で、２０分間、インキュベートした。次に、細胞を、氷冷ＰＢＳＦで２回洗浄し、そして、当該細胞ペレットを、５０μＬの二次標識混合物（Ｅｘｔｒａｖｉｄｉｎ−Ｒ−ＰＥ、抗ヒトＬＣＦＩＴＣ、及び、ヨウ化プロピジウム）に再懸濁した。この混合物を、氷上で、２０分間、インキュベートした後に、氷冷ＰＢＳＦで、２回洗浄した。次いで、細胞を、１００μＬの氷冷ＰＢＳＦに再懸濁し、そして、ＨＴＳ試料インジェクターを使用して、当該プレートを、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で泳動させた。フローサイトメトリーデータを、Ｒ−ＰＥチャネルにおける平均蛍光強度について分析し、そして、非特異的結合を評価するために、適切なコントロールに対して標準化をした。
参考文献及び注記。
１． Ａ． Ｌ． Ｒｏｇｏｖｉｋ， Ｂ． Ｃａｒｌｅｔｏｎ， Ａ． Ｓｏｌｉｍａｎｏ， Ｒ． Ｄ． Ｇｏｌｄｍａｎ， Ｐａｌｉｖｉｚｕｍａｂ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ． Ｃａｎ Ｆａｍ Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ ５６， ７６９−７７２ （２０１０）．
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６． Ｊ． Ａ． Ｂｅｅｌｅｒ， Ｋ． ｖａｎ Ｗｙｋｅ Ｃｏｅｌｉｎｇｈ， Ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ｅｐｉｔｏｐｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｆ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ： ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｕｐｏｎ ｆｕｓｉｏｎ ｆｕｎｃｔｉｏｎ． Ｊ Ｖｉｒｏｌ ６３， ２９４１−２９５０ （１９８９）．
７． Ｒ． Ａ． Ｋａｒｒｏｎ， Ｄ． Ａ． Ｂｕｏｎａｇｕｒｉｏ， Ａ． Ｆ． Ｇｅｏｒｇｉｕ， Ｓ． Ｓ． Ｗｈｉｔｅｈｅａｄ， Ｊ． Ｅ． Ａｄａｍｕｓ， Ｍ． Ｌ． Ｃｌｅｍｅｎｔｓ−Ｍａｎｎ， Ｄ． Ｏ． Ｈａｒｒｉｓ， Ｖ． Ｂ． Ｒａｎｄｏｌｐｈ， Ｓ． Ａ． Ｕｄｅｍ， Ｂ． Ｒ． Ｍｕｒｐｈｙ， Ｍ． Ｓ． Ｓｉｄｈｕ， Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ （ＲＳＶ） ＳＨ ａｎｄ Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｒｅ ｎｏｔ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｖｉｒａｌ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ： ｃｌｉｎｉｃａｌ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｃｏｌｄ−ｐａｓｓａｇｅｄ， ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ ＲＳＶ ｓｕｂｇｒｏｕｐ Ｂ ｍｕｔａｎｔ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ ９４， １３９６１−１３９６６ （１９９７）．
８． Ｊ． Ｏ． Ｎｇｗｕｔａ， Ｍ． Ｃｈｅｎ， Ｋ． Ｍｏｄｊａｒｒａｄ， Ｍ． Ｇ． Ｊｏｙｃｅ， Ｍ． Ｋａｎｅｋｉｙｏ， Ａ． Ｋｕｍａｒ， Ｈ． Ｍ． Ｙａｓｓｉｎｅ， Ｓ． Ｍ． Ｍｏｉｎ， Ａ． Ｍ． Ｋｉｌｌｉｋｅｌｌｙ， Ｇ． Ｙ． Ｃｈｕａｎｇ， Ａ． Ｄｒｕｚ， Ｉ． Ｓ． Ｇｅｏｒｇｉｅｖ， Ｅ． Ｊ． Ｒｕｎｄｌｅｔ， Ｍ． Ｓａｓｔｒｙ， Ｇ． Ｂ． Ｓｔｅｗａｒｔ−Ｊｏｎｅｓ， Ｙ． Ｙａｎｇ， Ｂ． Ｚｈａｎｇ， Ｍ． Ｃ． Ｎａｓｏｎ， Ｃ． Ｃａｐｅｌｌａ， Ｍ． Ｅ． Ｐｅｅｐｌｅｓ， Ｊ． Ｅ． Ｌｅｄｇｅｒｗｏｏｄ， Ｊ． Ｓ． ＭｃＬｅｌｌａｎ， Ｐ． Ｄ． Ｋｗｏｎｇ， Ｂ． Ｓ． Ｇｒａｈａｍ， Ｐｒｅｆｕｓｉｏｎ Ｆ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｍａｇｎｉｔｕｄｅ ｏｆ ＲＳＶ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｓｅｒａ． Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ ７， ３０９ｒａ１６２ （２０１５）．
９． Ｔ． Ｉ．−Ｒ． Ｓ． Ｇｒｏｕｐ， Ｐａｌｉｖｉｚｕｍａｂ， ａ ｈｕｍａｎｉｚｅｄ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ， ｒｅｄｕｃｅｓ ｈｏｓｐｉｔａｌｉｚａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｈｉｇｈ−ｒｉｓｋ ｉｎｆａｎｔｓ． Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ １０２， ５３１−５３７ （１９９８）．
１０． Ｊ． Ｓ． ＭｃＬｅｌｌａｎ， Ｍ． Ｃｈｅｎ， Ｓ． Ｌｅｕｎｇ， Ｋ． Ｗ． Ｇｒａｅｐｅｌ， Ｘ． Ｄｕ， Ｙ． Ｙａｎｇ， Ｔ． Ｚｈｏｕ， Ｕ． Ｂａｘａ， Ｅ． Ｙａｓｕｄａ， Ｔ． Ｂｅａｕｍｏｎｔ， Ａ． Ｋｕｍａｒ， Ｋ． Ｍｏｄｊａｒｒａｄ， Ｚ． Ｚｈｅｎｇ， Ｍ． Ｚｈａｏ， Ｎ． Ｘｉａ， Ｐ． Ｄ． Ｋｗｏｎｇ， Ｂ． Ｓ． Ｇｒａｈａｍ， Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ＲＳＶ ｆｕｓｉｏｎ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｔｒｉｍｅｒ ｂｏｕｎｄ ｔｏ ａ ｐｒｅｆｕｓｉｏｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ． Ｓｃｉｅｎｃｅ ３４０， １１１３−１１１７ （２０１３）．
１１． Ｊ． Ｓ． ＭｃＬｅｌｌａｎ， Ｙ． Ｙａｎｇ， Ｂ． Ｓ． Ｇｒａｈａｍ， Ｐ． Ｄ． Ｋｗｏｎｇ， Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ ｆｕｓｉｏｎ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｔｈｅ ｐｏｓｔｆｕｓｉｏｎ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｒｅｖｅａｌｓ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ｅｐｉｔｏｐｅｓ． Ｊ Ｖｉｒｏｌ ８５， ７７８８−７７９６ （２０１１）．
１２． Ｋ． Ａ． Ｓｗａｎｓｏｎ， Ｅ． Ｃ． Ｓｅｔｔｅｍｂｒｅ， Ｃ． Ａ． Ｓｈａｗ， Ａ． Ｋ． Ｄｅｙ， Ｒ． Ｒａｐｐｕｏｌｉ， Ｃ． Ｗ． Ｍａｎｄｌ， Ｐ． Ｒ． Ｄｏｒｍｉｔｚｅｒ， Ａ． Ｃａｒｆｉ， Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｐｏｓｔｆｕｓｉｏｎ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ ｆｕｓｉｏｎ Ｆ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ （ＲＳＶ Ｆ） ｔｏ ｅｌｉｃｉｔ ｈｉｇｈ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｉｔｅｒｓ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １０８， ９６１９−９６２４ （２０１１）．
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１７． Ｄ． Ｃｏｒｔｉ， Ｓ． Ｂｉａｎｃｈｉ， Ｆ． Ｖａｎｚｅｔｔａ， Ａ． Ｍｉｎｏｌａ， Ｌ． Ｐｅｒｅｚ， Ｇ． Ａｇａｔｉｃ， Ｂ． Ｇｕａｒｉｎｏ， Ｃ． Ｓｉｌａｃｃｉ， Ｊ． Ｍａｒｃａｎｄａｌｌｉ， Ｂ． Ｊ． Ｍａｒｓｌａｎｄ， Ａ． Ｐｉｒａｌｌａ， Ｅ． Ｐｅｒｃｉｖａｌｌｅ， Ｆ． Ｓａｌｌｕｓｔｏ， Ｆ． Ｂａｌｄａｎｔｉ， Ａ． Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ， Ｃｒｏｓｓ−ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｏｕｒ ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓｅｓ ｂｙ ａ ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ． Ｎａｔｕｒｅ ５０１， ４３９−４４３ （２０１３）．
１８． Ｍ． Ｍａｇｒｏ， Ｄ． Ａｎｄｒｅｕ， Ｐ． Ｇｏｍｅｚ−Ｐｕｅｒｔａｓ， Ｊ． Ａ． Ｍｅｌｅｒｏ， Ｃ． Ｐａｌｏｍｏ， Ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｖｉｔｙ ｂｙ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ ｌｏｗ−ｍｏｌｅｃｕｌａｒ−ｗｅｉｇｈｔ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｔａｒｇｅｔｅｄ ａｇａｉｎｓｔ ｔｈｅ ｆｕｓｉｏｎ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ． Ｊ Ｖｉｒｏｌ ８４， ７９７０−７９８２ （２０１０）．
１９． Ｇ． Ｔａｙｌｏｒ， Ｅ． Ｊ． Ｓｔｏｔｔ， Ｊ． Ｆｕｒｚｅ， Ｊ． Ｆｏｒｄ， Ｐ． Ｓｏｐｐ， Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｐｉｔｏｐｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｂｙ ｍｕｒｉｎｅ ａｎｄ ｂｏｖｉｎｅ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ． Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ ７３ （ Ｐｔ ９）， ２２１７−２２２３ （１９９２）．
２０． Ｌ． Ｊ． Ｃａｌｄｅｒ， Ｌ． Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ｒｅｙｅｓ， Ｂ． Ｇａｒｃｉａ−Ｂａｒｒｅｎｏ， Ｓ． Ａ． Ｗｈａｒｔｏｎ， Ｊ． Ｊ． Ｓｋｅｈｅｌ， Ｄ． Ｃ． Ｗｉｌｅｙ， Ｊ． Ａ． Ｍｅｌｅｒｏ， Ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ ｔｈａｔ ｉｔ ｆｏｒｍｓ ｗｉｔｈ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ． Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２７１， １２２−１３１ （２０００）．
２１． Ｍ． Ｓ． Ｇｉｌｍａｎ， Ｓ． Ｍ． Ｍｏｉｎ， Ｖ． Ｍａｓ， Ｍ． Ｃｈｅｎ， Ｎ． Ｋ． Ｐａｔｅｌ， Ｋ． Ｋｒａｍｅｒ， Ｑ． Ｚｈｕ， Ｓ． Ｃ． Ｋａｂｅｃｈｅ， Ａ． Ｋｕｍａｒ， Ｃ． Ｐａｌｏｍｏ， Ｔ． Ｂｅａｕｍｏｎｔ， Ｕ． Ｂａｘａ， Ｎ． Ｄ． Ｕｌｂｒａｎｄｔ， Ｊ． Ａ． Ｍｅｌｅｒｏ， Ｂ． Ｓ． Ｇｒａｈａｍ， Ｊ． Ｓ． ＭｃＬｅｌｌａｎ， Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｐｒｅｆｕｓｉｏｎ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｈａｔ Ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｓ ａ Ｑｕａｔｅｒｎａｒｙ， Ｃｌｅａｖａｇｅ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｅｐｉｔｏｐｅ ｏｎ ｔｈｅ ＲＳＶ Ｆｕｓｉｏｎ Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ． ＰＬｏＳ Ｐａｔｈｏｇ １１， ｅ１００５０３５ （２０１５）．
２２． Ｍ． Ｇ． Ｊｏｙｃｅ， Ａ． Ｋ． Ｗｈｅａｔｌｅｙ， Ｐ． Ｖ． Ｔｈｏｍａｓ， Ｇ． Ｙ． Ｃｈｕａｎｇ， Ｃ． Ｓｏｔｏ， Ｒ． Ｔ． Ｂａｉｌｅｒ， Ａ． Ｄｒｕｚ， Ｉ． Ｓ． Ｇｅｏｒｇｉｅｖ， Ｒ． Ａ． Ｇｉｌｌｅｓｐｉｅ， Ｍ． Ｋａｎｅｋｉｙｏ， Ｗ． Ｐ． Ｋｏｎｇ， Ｋ． Ｌｅｕｎｇ， Ｓ． Ｎ． Ｎａｒｐａｌａ， Ｍ． Ｓ． Ｐｒａｂｈａｋａｒａｎ， Ｅ． Ｓ． Ｙａｎｇ， Ｂ． Ｚｈａｎｇ， Ｙ． Ｚｈａｎｇ， Ｍ． Ａｓｏｋａｎ， Ｊ． Ｃ． Ｂｏｙｉｎｇｔｏｎ， Ｔ． Ｂｙｌｕｎｄ， Ｓ． Ｄａｒｋｏ， Ｃ． Ｒ． Ｌｅｅｓ， Ａ． Ｒａｎｓｉｅｒ， Ｃ． Ｈ． Ｓｈｅｎ， Ｌ． Ｗａｎｇ， Ｊ． Ｒ． Ｗｈｉｔｔｌｅ， Ｘ． Ｗｕ， Ｈ． Ｍ． Ｙａｓｓｉｎｅ， Ｃ． Ｓａｎｔｏｓ， Ｙ． Ｍａｔｓｕｏｋａ， Ｙ． Ｔｓｙｂｏｖｓｋｙ， Ｕ． Ｂａｘａ， Ｊ． Ｃ． Ｍｕｌｌｉｋｉｎ， Ｋ． Ｓｕｂｂａｒａｏ， Ｄ． Ｃ． Ｄｏｕｅｋ， Ｂ． Ｓ． Ｇｒａｈａｍ， Ｒ． Ａ． Ｋｏｕｐ， Ｊ． Ｅ． Ｌｅｄｇｅｒｗｏｏｄ， Ｍ． Ｒｏｅｄｅｒｅｒ， Ｌ． Ｓｈａｐｉｒｏ， Ｐ． Ｄ． Ｋｗｏｎｇ， Ｊ． Ｒ． Ｍａｓｃｏｌａ， Ａ． Ｂ． ＭｃＤｅｒｍｏｔｔ， Ｖａｃｃｉｎｅ−Ｉｎｄｕｃｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｈａｔ Ｎｅｕｔｒａｌｉｚｅ Ｇｒｏｕｐ １ ａｎｄ Ｇｒｏｕｐ ２ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ Ｖｉｒｕｓｅｓ． Ｃｅｌｌ １６６， ６０９−６２３ （２０１６）．
２３． Ｊ． Ｔｒｕｃｋ， Ｍ． Ｎ． Ｒａｍａｓａｍｙ， Ｊ． Ｄ． Ｇａｌｓｏｎ， Ｒ． Ｒａｎｃｅ， Ｊ． Ｐａｒｋｈｉｌｌ， Ｇ． Ｌｕｎｔｅｒ， Ａ． Ｊ． Ｐｏｌｌａｒｄ， Ｄ． Ｆ． Ｋｅｌｌｙ， Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｂ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｕｓｉｎｇ ｐｕｂｌｉｃ ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ ａｎａｌｙｓｉｓ． Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９４， ２５２−２６１ （２０１５）．
２４． Ｐ． Ｐａｒａｍｅｓｗａｒａｎ， Ｙ． Ｌｉｕ， Ｋ． Ｍ． Ｒｏｓｋｉｎ， Ｋ． Ｋ． Ｊａｃｋｓｏｎ， Ｖ． Ｐ． Ｄｉｘｉｔ， Ｊ． Ｙ． Ｌｅｅ， Ｋ． Ｌ． Ａｒｔｉｌｅｓ， Ｓ． Ｚｏｍｐｉ， Ｍ． Ｊ． Ｖａｒｇａｓ， Ｂ． Ｂ． Ｓｉｍｅｎ， Ｂ． Ｈａｎｃｚａｒｕｋ， Ｋ． Ｒ． ＭｃＧｏｗａｎ， Ｍ． Ａ． Ｔａｒｉｑ， Ｎ． Ｐｏｕｒｍａｎｄ， Ｄ． Ｋｏｌｌｅｒ， Ａ． Ｂａｌｍａｓｅｄａ， Ｓ． Ｄ． Ｂｏｙｄ， Ｅ． Ｈａｒｒｉｓ， Ａ． Ｚ． Ｆｉｒｅ， Ｃｏｎｖｅｒｇｅｎｔ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｓｉｇｎａｔｕｒｅｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｄｅｎｇｕｅ． Ｃｅｌｌ ｈｏｓｔ ＆ ｍｉｃｒｏｂｅ １３， ６９１−７００ （２０１３）．
２５． Ｋ． Ｊ． Ｊａｃｋｓｏｎ， Ｙ． Ｌｉｕ， Ｋ． Ｍ． Ｒｏｓｋｉｎ， Ｊ． Ｇｌａｎｖｉｌｌｅ， Ｒ． Ａ． Ｈｏｈ， Ｋ． Ｓｅｏ， Ｅ． Ｌ． Ｍａｒｓｈａｌｌ， Ｔ． Ｃ． Ｇｕｒｌｅｙ， Ｍ． Ａ． Ｍｏｏｄｙ， Ｂ． Ｆ． Ｈａｙｎｅｓ， Ｅ． Ｂ． Ｗａｌｔｅｒ， Ｈ． Ｘ． Ｌｉａｏ， Ｒ． Ａ． Ａｌｂｒｅｃｈｔ， Ａ． Ｇａｒｃｉａ−Ｓａｓｔｒｅ， Ｊ． Ｃｈａｐａｒｒｏ−Ｒｉｇｇｅｒｓ， Ａ． Ｒａｊｐａｌ， Ｊ． Ｐｏｎｓ， Ｂ． Ｂ． Ｓｉｍｅｎ， Ｂ． Ｈａｎｃｚａｒｕｋ， Ｃ． Ｌ． Ｄｅｋｋｅｒ， Ｊ． Ｌａｓｅｒｓｏｎ， Ｄ． Ｋｏｌｌｅｒ， Ｍ． Ｍ． Ｄａｖｉｓ， Ａ． Ｚ． Ｆｉｒｅ， Ｓ． Ｄ． Ｂｏｙｄ， Ｈｕｍａｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｔｏ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ ｓｈｏｗ ｓｅｒｏｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｓｉｇｎａｔｕｒｅｓ ａｎｄ ｃｏｎｖｅｒｇｅｎｔ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔｓ． Ｃｅｌｌ ｈｏｓｔ ＆ ｍｉｃｒｏｂｅ １６， １０５−１１４ （２０１４）．
２６． Ｆ． Ｗ． Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ， Ａ． Ｍ． Ｃｏｌｌｉｅｒ， Ｗ． Ａ． Ｃｌｙｄｅ， Ｊｒ．， Ｆ． Ｗ． Ｄｅｎｎｙ， Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ−ｓｙｎｃｙｔｉａｌ−ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ， ｒｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｉｔｙ． Ａ ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ， ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ ｓｔｕｄｙ ｉｎ ｙｏｕｎｇ ｃｈｉｌｄｒｅｎ． Ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３００， ５３０−５３４ （１９７９）．
２７． Ｍ． Ａ． Ｍｏｏｄｙ， Ｂ． Ｆ． Ｈａｙｎｅｓ， Ａｎｔｉｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｂ ｃｅｌｌ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒｅａｇｅｎｔｓ： ｕｓｅ ａｎｄ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ． Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ａ ７３， １０８６−１０９２ （２００８）．
２８． Ｍ． Ｓ． Ｈａｂｉｂｉ， Ａ． Ｊｏｚｗｉｋ， Ｓ． Ｍａｋｒｉｓ， Ｊ． Ｄｕｎｎｉｎｇ， Ａ． Ｐａｒａｓ， Ｊ． Ｐ． ＤｅＶｉｎｃｅｎｚｏ， Ｃ． Ａ． ｄｅ Ｈａａｎ， Ｊ． Ｗｒａｍｍｅｒｔ， Ｐ． Ｊ． Ｏｐｅｎｓｈａｗ， Ｃ． Ｃｈｉｕ， Ｉ． Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ Ｓｅｖｅｒｅ Ａｃｕｔｅ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ， Ｉｍｐａｉｒｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ ＩｇＡ Ｂ−Ｃｅｌｌ Ｍｅｍｏｒｙ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｄｕｌｔｓ ｗｉｔｈ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｓｙｎｃｙｔｉａｌ Ｖｉｒｕｓ． Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ １９１， １０４０−１０４９ （２０１５）．
２９． Ｔ． Ｔｉｌｌｅｒ， Ｅ． Ｍｅｆｆｒｅ， Ｓ． Ｙｕｒａｓｏｖ， Ｍ． Ｔｓｕｉｊｉ， Ｍ． Ｃ． Ｎｕｓｓｅｎｚｗｅｉｇ， Ｈ． Ｗａｒｄｅｍａｎｎ， Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｒｏｍ ｓｉｎｇｌｅ ｈｕｍａｎ Ｂ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｓｉｎｇｌｅ ｃｅｌｌ ＲＴ−ＰＣＲ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｃｌｏｎｉｎｇ． Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ３２９， １１２−１２４ （２００８）．
３０． Ｚ． Ａ． Ｂｏｒｎｈｏｌｄｔ， Ｈ． Ｌ． Ｔｕｒｎｅｒ， Ｃ． Ｄ． Ｍｕｒｉｎ， Ｗ． Ｌｉ， Ｄ． Ｓｏｋ， Ｃ． Ａ． Ｓｏｕｄｅｒｓ， Ａ． Ｅ． Ｐｉｐｅｒ， Ａ． Ｇｏｆｆ， Ｊ． Ｄ． Ｓｈａｍｂｌｉｎ， Ｓ． Ｅ． Ｗｏｌｌｅｎ， Ｔ． Ｒ． Ｓｐｒａｇｕｅ， Ｍ． Ｌ． Ｆｕｓｃｏ， Ｋ． Ｂ． Ｐｏｍｍｅｒｔ， Ｌ． Ａ． Ｃａｖａｃｉｎｉ， Ｈ． Ｌ． Ｓｍｉｔｈ， Ｍ． Ｋｌｅｍｐｎｅｒ， Ｋ． Ａ． Ｒｅｉｍａｎｎ， Ｅ． Ｋｒａｕｌａｎｄ， Ｔ． Ｕ． Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ， Ｋ． Ｄ． Ｗｉｔｔｒｕｐ， Ｅ． Ｏ． Ｓａｐｈｉｒｅ， Ｄ． Ｒ． Ｂｕｒｔｏｎ， Ｐ． Ｊ． Ｇｌａｓｓ， Ａ． Ｂ． Ｗａｒｄ， Ｌ． Ｍ． Ｗａｌｋｅｒ， Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｔｅｎｔ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｒｏｍ ａ ｓｕｒｖｉｖｏｒ ｏｆ ｔｈｅ ２０１４ Ｅｂｏｌａ ｖｉｒｕｓ ｏｕｔｂｒｅａｋ． Ｓｃｉｅｎｃｅ ３５１， １０７８−１０８３ （２０１６）．
３１． Ｊ． Ｆ． Ｓｃｈｅｉｄ， Ｈ． Ｍｏｕｑｕｅｔ， Ｎ． Ｆｅｌｄｈａｈｎ， Ｍ． Ｓ． Ｓｅａｍａｎ， Ｋ． Ｖｅｌｉｎｚｏｎ， Ｊ． Ｐｉｅｔｚｓｃｈ， Ｒ． Ｇ． Ｏｔｔ， Ｒ． Ｍ． Ａｎｔｈｏｎｙ， Ｈ． Ｚｅｂｒｏｓｋｉ， Ａ． Ｈｕｒｌｅｙ， Ａ． Ｐｈｏｇａｔ， Ｂ． Ｃｈａｋｒａｂａｒｔｉ， Ｙ． Ｌｉ， Ｍ． Ｃｏｎｎｏｒｓ， Ｆ． Ｐｅｒｅｙｒａ， Ｂ． Ｄ． Ｗａｌｋｅｒ， Ｈ． Ｗａｒｄｅｍａｎｎ， Ｄ． Ｈｏ， Ｒ． Ｔ． Ｗｙａｔｔ， Ｊ． Ｒ． Ｍａｓｃｏｌａ， Ｊ． Ｖ． Ｒａｖｅｔｃｈ， Ｍ． Ｃ． Ｎｕｓｓｅｎｚｗｅｉｇ， Ｂｒｏａｄ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｍｅｍｏｒｙ Ｂ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ＨＩＶ−ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ． Ｎａｔｕｒｅ ４５８， ６３６−６４０ （２００９）．
３２． Ｊ． Ｗｒａｍｍｅｒｔ， Ｋ． Ｓｍｉｔｈ， Ｊ． Ｍｉｌｌｅｒ， Ｗ． Ａ． Ｌａｎｇｌｅｙ， Ｋ． Ｋｏｋｋｏ， Ｃ． Ｌａｒｓｅｎ， Ｎ． Ｙ． Ｚｈｅｎｇ， Ｉ． Ｍａｙｓ， Ｌ． Ｇａｒｍａｎ， Ｃ． Ｈｅｌｍｓ， Ｊ． Ｊａｍｅｓ， Ｇ． Ｍ． Ａｉｒ， Ｊ． Ｄ． Ｃａｐｒａ， Ｒ． Ａｈｍｅｄ， Ｐ． Ｃ． Ｗｉｌｓｏｎ， Ｒａｐｉｄ ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ｈｉｇｈ−ａｆｆｉｎｉｔｙ ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ． Ｎａｔｕｒｅ ４５３， ６６７−６７１ （２００８）．
３３． Ｓ． Ｄ． Ｂｏｙｄ， Ｂ． Ａ． Ｇａｅｔａ， Ｋ． Ｊ． Ｊａｃｋｓｏｎ， Ａ． Ｚ． Ｆｉｒｅ， Ｅ． Ｌ． Ｍａｒｓｈａｌｌ， Ｊ． Ｄ． Ｍｅｒｋｅｒ， Ｊ． Ｍ． Ｍａｎｉａｒ， Ｌ． Ｎ． Ｚｈａｎｇ， Ｂ． Ｓａｈａｆ， Ｃ． Ｄ． Ｊｏｎｅｓ， Ｂ． Ｂ． Ｓｉｍｅｎ， Ｂ． Ｈａｎｃｚａｒｕｋ， Ｋ． Ｄ． Ｎｇｕｙｅｎ， Ｋ． Ｃ． Ｎａｄｅａｕ， Ｍ． Ｅｇｈｏｌｍ， Ｄ． Ｂ． Ｍｉｋｌｏｓ， Ｊ． Ｌ． Ｚｅｈｎｄｅｒ， Ａ． Ｍ． Ｃｏｌｌｉｎｓ， Ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｇｅｒｍｌｉｎｅ Ｉｇ ｇｅｎｅ ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ ｉｎｆｅｒｒｅｄ ｆｒｏｍ ｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎ ｇｅｎｅ ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔｓ． Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８４， ６９８６−６９９２ （２０１０）．
３４． Ｊ． Ｓｕｉ， Ｗ． Ｃ． Ｈｗａｎｇ， Ｓ． Ｐｅｒｅｚ， Ｇ． Ｗｅｉ， Ｄ． Ａｉｒｄ， Ｌ． Ｍ． Ｃｈｅｎ， Ｅ． Ｓａｎｔｅｌｌｉ， Ｂ． Ｓｔｅｃ， Ｇ． Ｃａｄｗｅｌｌ， Ｍ． Ａｌｉ， Ｈ． Ｗａｎ， Ａ． Ｍｕｒａｋａｍｉ， Ａ． Ｙａｍｍａｎｕｒｕ， Ｔ． Ｈａｎ， Ｎ． Ｊ． Ｃｏｘ， Ｌ． Ａ． Ｂａｎｋｓｔｏｎ， Ｒ． Ｏ． Ｄｏｎｉｓ， Ｒ． Ｃ． Ｌｉｄｄｉｎｇｔｏｎ， Ｗ． Ａ． Ｍａｒａｓｃｏ， Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｂａｓｅｓ ｆｏｒ ｂｒｏａｄ−ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｖｉａｎ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ｖｉｒｕｓｅｓ． Ｎａｔ Ｓｔｒｕｃｔ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １６， ２６５−２７３ （２００９）．
３５． Ｃ． Ｃ． Ｈｕａｎｇ， Ｍ． Ｖｅｎｔｕｒｉ， Ｓ． Ｍａｊｅｅｄ， Ｍ． Ｊ． Ｍｏｏｒｅ， Ｓ． Ｐｈｏｇａｔ， Ｍ． Ｙ． Ｚｈａｎｇ， Ｄ． Ｓ． Ｄｉｍｉｔｒｏｖ， Ｗ． Ａ． Ｈｅｎｄｒｉｃｋｓｏｎ， Ｊ． Ｒｏｂｉｎｓｏｎ， Ｊ． Ｓｏｄｒｏｓｋｉ， Ｒ． Ｗｙａｔｔ， Ｈ． Ｃｈｏｅ， Ｍ． Ｆａｒｚａｎ， Ｐ． Ｄ． Ｋｗｏｎｇ， Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｉｏｎ ａｎｄ ＶＨ−ｇｅｎｅ ｕｓａｇｅ ｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｈａｔ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅ ｔｈｅ ＨＩＶ ｔｙｐｅ １ ｃｏｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ ｏｎ ｇｐ１２０． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １０１， ２７０６−２７１１ （２００４）．
３６． Ｃ． Ｈ． Ｃｈａｎ， Ｋ． Ｇ． Ｈａｄｌｏｃｋ， Ｓ． Ｋ． Ｆｏｕｎｇ， Ｓ． Ｌｅｖｙ， Ｖ（Ｈ）１−６９ ｇｅｎｅ ｉｓ ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｕｓｅｄ ｂｙ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｂ ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｍａｓ ａｎｄ ｂｙ ｎｏｒｍａｌ Ｂ ｃｅｌｌｓ ｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ Ｅ２ ｖｉｒａｌ ａｎｔｉｇｅｎ． Ｂｌｏｏｄ ９７， １０２３−１０２６ （２００１）．
３７． Ｅ． Ｅ． Ｇｏｄｏｙ−Ｌｏｚａｎｏ， Ｊ． Ｔｅｌｌｅｚ−Ｓｏｓａ， Ｇ． Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｇｏｎｚａｌｅｚ， Ｈ． Ｓａｍａｎｏ−Ｓａｎｃｈｅｚ， Ａ． Ａｇｕｉｌａｒ−Ｓａｌｇａｄｏ， Ａ． Ｓａｌｉｎａｓ−Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ， Ｂ． Ｃｏｒｔｉｎａ−Ｃｅｂａｌｌｏｓ， Ｈ． Ｖｉｖａｎｃｏ−Ｃｉｄ， Ｋ． Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｆｌｏｒｅｓ， Ｊ． Ｍ． Ｐｆａｆｆ， Ｋ． Ｍ． Ｋａｈｌｅ， Ｂ． Ｊ． Ｄｏｒａｎｚ， Ｒ． Ｅ． Ｇｏｍｅｚ−Ｂａｒｒｅｔｏ， Ｈ． Ｖａｌｄｏｖｉｎｏｓ−Ｔｏｒｒｅｓ， Ｉ． Ｌｏｐｅｚ−Ｍａｒｔｉｎｅｚ， Ｍ． Ｈ． Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ， Ｊ． Ｍａｒｔｉｎｅｚ−Ｂａｒｎｅｔｃｈｅ， Ｌｏｗｅｒ ＩｇＧ ｓｏｍａｔｉｃ ｈｙｐｅｒｍｕｔａｔｉｏｎ ｒａｔｅｓ ｄｕｒｉｎｇ ａｃｕｔｅ ｄｅｎｇｕｅ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｓ ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ ｗｉｔｈ ａ ｇｅｒｍｉｎａｌ ｃｅｎｔｅｒ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｂ ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ． Ｇｅｎｏｍｅ Ｍｅｄ ８， ２３ （２０１６）．
３８． Ｊ． Ｗｒａｍｍｅｒｔ， Ｄ． Ｋｏｕｔｓｏｎａｎｏｓ， Ｇ． Ｍ． Ｌｉ， Ｓ． Ｅｄｕｐｕｇａｎｔｉ， Ｊ． Ｓｕｉ， Ｍ． Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ， Ｍ． ＭｃＣａｕｓｌａｎｄ， Ｉ． Ｓｋｏｕｎｔｚｏｕ， Ｍ． Ｈｏｒｎｉｇ， Ｗ． Ｉ． Ｌｉｐｋｉｎ， Ａ． Ｍｅｈｔａ， Ｂ． Ｒａｚａｖｉ， Ｃ． Ｄｅｌ Ｒｉｏ， Ｎ． Ｙ． Ｚｈｅｎｇ， Ｊ． Ｈ． Ｌｅｅ， Ｍ． Ｈｕａｎｇ， Ｚ． Ａｌｉ， Ｋ． Ｋａｕｒ， Ｓ． Ａｎｄｒｅｗｓ， Ｒ． Ｒ． Ａｍａｒａ， Ｙ． Ｗａｎｇ， Ｓ． Ｒ． Ｄａｓ， Ｃ． Ｄ． Ｏ’Ｄｏｎｎｅｌｌ， Ｊ． Ｗ． Ｙｅｗｄｅｌｌ， Ｋ． Ｓｕｂｂａｒａｏ， Ｗ． Ａ． Ｍａｒａｓｃｏ， Ｍ． Ｊ． Ｍｕｌｌｉｇａｎ， Ｒ． Ｃｏｍｐａｎｓ， Ｒ． Ａｈｍｅｄ， Ｐ． Ｃ． Ｗｉｌｓｏｎ， Ｂｒｏａｄｌｙ ｃｒｏｓｓ−ｒｅａｃｔｉｖｅ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｄｏｍｉｎａｔｅ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ Ｂ ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｇａｉｎｓｔ ２００９ ｐａｎｄｅｍｉｃ Ｈ１Ｎ１ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ． Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ ２０８， １８１−１９３ （２０１１）．
３９． Ｓ． Ｆ． Ａｎｄｒｅｗｓ， Ｙ． Ｈｕａｎｇ， Ｋ． Ｋａｕｒ， Ｌ． Ｉ． Ｐｏｐｏｖａ， Ｉ． Ｙ． Ｈｏ， Ｎ． Ｔ． Ｐａｕｌｉ， Ｃ． Ｊ． Ｈｅｎｒｙ Ｄｕｎａｎｄ， Ｗ． Ｍ． Ｔａｙｌｏｒ， Ｓ． Ｌｉｍ， Ｍ． Ｈｕａｎｇ， Ｘ． Ｑｕ， Ｊ． Ｈ． Ｌｅｅ， Ｍ． Ｓａｌｇａｄｏ−Ｆｅｒｒｅｒ， Ｆ． Ｋｒａｍｍｅｒ， Ｐ． Ｐａｌｅｓｅ， Ｊ． Ｗｒａｍｍｅｒｔ， Ｒ． Ａｈｍｅｄ， Ｐ． Ｃ． Ｗｉｌｓｏｎ， Ｉｍｍｕｎｅ ｈｉｓｔｏｒｙ ｐｒｏｆｏｕｎｄｌｙ ａｆｆｅｃｔｓ ｂｒｏａｄｌｙ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｂ ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｔｏ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ． Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ ７， ３１６ｒａ１９２ （２０１５）．
４０． Ｍ． Ｌｉｕ， Ｇ． Ｙａｎｇ， Ｋ． Ｗｉｅｈｅ， Ｎ． Ｉ． Ｎｉｃｅｌｙ， Ｎ． Ａ． Ｖａｎｄｅｒｇｒｉｆｔ， Ｗ． Ｒｏｕｎｔｒｅｅ， Ｍ． Ｂｏｎｓｉｇｎｏｒｉ， Ｓ． Ｍ． Ａｌａｍ， Ｊ． Ｇａｏ， Ｂ． Ｆ． Ｈａｙｎｅｓ， Ｇ． Ｋｅｌｓｏｅ， Ｐｏｌｙｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ａｕｔｏｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ ａｍｏｎｇ ＨＩＶ−１ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ． Ｊ Ｖｉｒｏｌ ８９， ７８４−７９８ （２０１５）．
４１． Ｈ． Ｍｏｕｑｕｅｔ， Ｊ． Ｆ． Ｓｃｈｅｉｄ， Ｍ． Ｊ． Ｚｏｌｌｅｒ， Ｍ． Ｋｒｏｇｓｇａａｒｄ， Ｒ． Ｇ． Ｏｔｔ， Ｓ． Ｓｈｕｋａｉｒ， Ｍ． Ｎ． Ａｒｔｙｏｍｏｖ， Ｊ． Ｐｉｅｔｚｓｃｈ， Ｍ． Ｃｏｎｎｏｒｓ， Ｆ． Ｐｅｒｅｙｒａ， Ｂ． Ｄ． Ｗａｌｋｅｒ， Ｄ． Ｄ． Ｈｏ， Ｐ． Ｃ． Ｗｉｌｓｏｎ， Ｍ． Ｓ． Ｓｅａｍａｎ， Ｈ． Ｎ． Ｅｉｓｅｎ， Ａ． Ｋ． Ｃｈａｋｒａｂｏｒｔｙ， Ｔ． Ｊ． Ｈｏｐｅ， Ｊ． Ｖ． Ｒａｖｅｔｃｈ， Ｈ． Ｗａｒｄｅｍａｎｎ， Ｍ． Ｃ． Ｎｕｓｓｅｎｚｗｅｉｇ， Ｐｏｌｙｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｔｈｅ ａｐｐａｒｅｎｔ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｏｆ ａｎｔｉ−ＨＩＶ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｂｙ ｈｅｔｅｒｏｌｉｇａｔｉｏｎ． Ｎａｔｕｒｅ ４６７， ５９１−５９５ （２０１０）．
４２． Ｒ． Ｌ． Ｋｅｌｌｙ， Ｔ． Ｓｕｎ， Ｔ． Ｊａｉｎ， Ｉ． Ｃａｆｆｒｙ， Ｙ． Ｙｕ， Ｙ． Ｃａｏ， Ｈ． Ｌｙｎａｕｇｈ， Ｍ． Ｂｒｏｗｎ， Ｍ． Ｖａｓｑｕｅｚ， Ｋ． Ｄ． Ｗｉｔｔｒｕｐ， Ｙ． Ｘｕ， Ｈｉｇｈ ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｃｒｏｓｓ−ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｍｅａｓｕｒｅｓ ｆｏｒ ｈｕｍａｎ ＩｇＧ１ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｃｏｒｒｅｌａｔｅ ｗｉｔｈ ｃｌｅａｒａｎｃｅ ｒａｔｅｓ ｉｎ ｍｉｃｅ． ＭＡｂｓ， ０ （２０１５）．
４３． Ｙ． Ｘｕ， Ｗ． Ｒｏａｃｈ， Ｔ． Ｓｕｎ， Ｔ． Ｊａｉｎ， Ｂ． Ｐｒｉｎｚ， Ｔ． Ｙ． Ｙｕ， Ｊ． Ｔｏｒｒｅｙ， Ｊ． Ｔｈｏｍａｓ， Ｐ． Ｂｏｂｒｏｗｉｃｚ， Ｍ． Ｖａｓｑｕｅｚ， Ｋ． Ｄ． Ｗｉｔｔｒｕｐ， Ｅ． Ｋｒａｕｌａｎｄ， Ａｄｄｒｅｓｓｉｎｇ ｐｏｌｙｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ａｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｙｅａｓｔ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ： ａ ＦＡＣＳ−ｂａｓｅｄ， ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｔｏｏｌ． Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ ２６， ６６３−６７０ （２０１３）．
４４． Ｄ． Ｒ． Ｂｏｗｌｅｙ， Ａ． Ｆ． Ｌａｂｒｉｊｎ， Ｍ． Ｂ． Ｚｗｉｃｋ， Ｄ． Ｒ． Ｂｕｒｔｏｎ， Ａｎｔｉｇｅｎ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ａｎ ＨＩＶ−１ ｉｍｍｕｎｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｌｉｂｒａｒｙ ｄｉｓｐｌａｙｅｄ ｏｎ ｙｅａｓｔ ｙｉｅｌｄｓ ｍａｎｙ ｎｏｖｅｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｌｉｂｒａｒｙ ｄｉｓｐｌａｙｅｄ ｏｎ ｐｈａｇｅ． Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ ２０， ８１−９０ （２００７）．
４５． Ｈ． Ｗｕ， Ｄ． Ｓ． Ｐｆａｒｒ， Ｓ． Ｊｏｈｎｓｏｎ， Ｙ． Ａ． Ｂｒｅｗａｈ， Ｒ． Ｍ． Ｗｏｏｄｓ， Ｎ． Ｋ． Ｐａｔｅｌ， Ｗ． Ｉ． Ｗｈｉｔｅ， Ｊ． Ｆ． Ｙｏｕｎｇ， Ｐ． Ａ． Ｋｉｅｎｅｒ， Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｍｏｔａｖｉｚｕｍａｂ， ａｎ ｕｌｔｒａ−ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｕｐｐｅｒ ａｎｄ ｌｏｗｅｒ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｔｒａｃｔ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ ３６８， ６５２−６６５ （２００７）．
４６． Ｊ． Ｓ． ＭｃＬｅｌｌａｎ， Ｍ． Ｃｈｅｎ， Ｊ． Ｓ． Ｃｈａｎｇ， Ｙ． Ｙａｎｇ， Ａ． Ｋｉｍ， Ｂ． Ｓ． Ｇｒａｈａｍ， Ｐ． Ｄ． Ｋｗｏｎｇ， Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ａ ｍａｊｏｒ ａｎｔｉｇｅｎｉｃ ｓｉｔｅ ｏｎ ｔｈｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ ｆｕｓｉｏｎ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｃｏｍｐｌｅｘ ｗｉｔｈ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ １０１Ｆ． Ｊ Ｖｉｒｏｌ ８４， １２２３６−１２２４４ （２０１０）．
４７． Ｐ． Ｗ． Ｐａｒｒｅｎ， Ｄ． Ｒ． Ｂｕｒｔｏｎ， Ｔｈｅ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ． Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ７７， １９５−２６２ （２００１）．
４８． Ｊ． Ｆｏｏｔｅ， Ｈ． Ｎ． Ｅｉｓｅｎ， Ｋｉｎｅｔｉｃ ａｎｄ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｌｉｍｉｔｓ ｏｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｄｕｒｉｎｇ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ ９２， １２５４−１２５６ （１９９５）．
４９． Ｆ． Ｄ． Ｂａｔｉｓｔａ， Ｍ． Ｓ． Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ， Ａｆｆｉｎｉｔｙ ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｂ ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ａｎｔｉｇｅｎ： ａ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ， ａ ｃｅｉｌｉｎｇ， ａｎｄ ｔｈｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ ｏｆ ｏｆｆ−ｒａｔｅ． Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ８， ７５１−７５９ （１９９８）．
５０． Ｊ． Ｅ． Ｓｃｈｕｓｔｅｒ， Ｒ． Ｇ． Ｃｏｘ， Ａ． Ｋ． Ｈａｓｔｉｎｇｓ， Ｋ． Ｌ． Ｂｏｙｄ， Ｊ． Ｗａｄｉａ， Ｚ． Ｃｈｅｎ， Ｄ． Ｒ． Ｂｕｒｔｏｎ， Ｒ． Ａ． Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ， Ｊ． Ｖ． Ｗｉｌｌｉａｍｓ， Ａ ｂｒｏａｄｌｙ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｅｘｈｉｂｉｔｓ ｉｎ ｖｉｖｏ ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｇａｉｎｓｔ ｂｏｔｈ ｈｕｍａｎ ｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓ ａｎｄ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ． Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ ２１１， ２１６−２２５ （２０１５）．
５１． Ｂ． Ｆ． Ｆｅｒｎｉｅ， Ｐ． Ｊ． Ｃｏｔｅ， Ｊｒ．， Ｊ． Ｌ． Ｇｅｒｉｎ， Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ｔｏ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ． Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ． Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ （Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｎ．Ｙ．） １７１， ２６６−２７１ （１９８２）．
５２． Ｐ． Ｊ． Ｃｏｔｅ， Ｊｒ．， Ｂ． Ｆ． Ｆｅｒｎｉｅ， Ｅ． Ｃ． Ｆｏｒｄ， Ｊ． Ｗ． Ｓｈｉｈ， Ｊ． Ｌ． Ｇｅｒｉｎ， Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ： ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｖｉｒｕｓ ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ａｎｔｉｇｅｎ−ａｎｔｉｂｏｄｙ ｓｙｓｔｅｍｓ ｕｓｉｎｇ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｈｕｍａｎ ａｎｄ ｍｕｒｉｎｅ ｃｅｌｌｓ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｖｉｒｏｌｏｇｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄｓ ３， １３７−１４７ （１９８１）．
５３． Ｅ． Ｅ． Ｗａｌｓｈ， Ｊ． Ｈｒｕｓｋａ， Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ ｐｒｏｔｅｉｎｓ： ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ． Ｊ Ｖｉｒｏｌ ４７， １７１−１７７ （１９８３）．
５４． Ｌ． Ｊ． Ａｎｄｅｒｓｏｎ， Ｐ． Ｂｉｎｇｈａｍ， Ｊ． Ｃ． Ｈｉｅｒｈｏｌｚｅｒ， Ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ ｂｙ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ ａｎｄ ｍｉｘｔｕｒｅｓ ｏｆ Ｆ ａｎｄ Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ． Ｊ Ｖｉｒｏｌ ６２， ４２３２−４２３８ （１９８８）．
５５． Ｇ． Ｅ． Ｓｃｏｐｅｓ， Ｐ． Ｊ． Ｗａｔｔ， Ｐ． Ｒ． Ｌａｍｂｄｅｎ， Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｌｉｎｅａｒ ｅｐｉｔｏｐｅ ｏｎ ｔｈｅ ｆｕｓｉｏｎ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ． Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ ７１ （ Ｐｔ １）， ５３−５９ （１９９０）．
５６． Ｊ． Ａｒｂｉｚａ， Ｇ． Ｔａｙｌｏｒ， Ｊ． Ａ． Ｌｏｐｅｚ， Ｊ． Ｆｕｒｚｅ， Ｓ． Ｗｙｌｄ， Ｐ． Ｗｈｙｔｅ， Ｅ． Ｊ． Ｓｔｏｔｔ， Ｇ． Ｗｅｒｔｚ， Ｗ． Ｓｕｌｌｅｎｄｅｒ， Ｍ． Ｔｒｕｄｅｌ， ｅｔ ａｌ．， Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｗｏ ａｎｔｉｇｅｎｉｃ ｓｉｔｅｓ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｂｙ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｄｉｒｅｃｔｅｄ ａｇａｉｎｓｔ ｔｈｅ ｆｕｓｉｏｎ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ． Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ ７３ （Ｐｔ ９）， ２２２５−２２３４ （１９９２）．
５７． Ｊ． Ａ． Ｌｏｐｅｚ， Ｒ． Ｂｕｓｔｏｓ， Ｃ． Ｏｒｖｅｌｌ， Ｍ． Ｂｅｒｏｉｓ， Ｊ． Ａｒｂｉｚａ， Ｂ． Ｇａｒｃｉａ−Ｂａｒｒｅｎｏ， Ｊ． Ａ． Ｍｅｌｅｒｏ， Ａｎｔｉｇｅｎｉｃ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ ｆｕｓｉｏｎ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ． Ｊ Ｖｉｒｏｌ ７２， ６９２２−６９２８ （１９９８）．
５８． Ｂ． Ｊ． ＤｅＫｏｓｋｙ， Ｔ． Ｋｏｊｉｍａ， Ａ． Ｒｏｄｉｎ， Ｗ． Ｃｈａｒａｂ， Ｇ． Ｃ． Ｉｐｐｏｌｉｔｏ， Ａ． Ｄ． Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ， Ｇ． Ｇｅｏｒｇｉｏｕ， Ｉｎ−ｄｅｐｔｈ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｐａｉｒｅｄ ｈｅａｖｙ− ａｎｄ ｌｉｇｈｔ−ｃｈａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ． Ｎａｔ Ｍｅｄ ２１， ８６−９１ （２０１５）．
５９． Ｕ．Ｓ． Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌｉｂｒａｒｙ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， （ＮＣＴ０２２９０３４０， ｈｔｔｐｓ：／／ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ／）．
６０． ＰＡＴＨ， ＲＳＶ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｓｎａｐｓｈｏｔ （２０１６ ｈｔｔｐ：／／ｓｉｔｅｓ．ｐａｔｈ．ｏｒｇ／ｖａｃｃｉｎｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ／ｆｉｌｅｓ／２０１６／０７／ＲＳＶ−ｓｎａｐｓｈｏｔ−Ｊｕｌｙ＿１３＿２０１６．ｐｄｆ）．
６１． Ｂ． Ｓ． Ｇｒａｈａｍ， Ｍ． Ｄ． Ｐｅｒｋｉｎｓ， Ｐ． Ｆ． Ｗｒｉｇｈｔ， Ｄ． Ｔ． Ｋａｒｚｏｎ， Ｐｒｉｍａｒｙ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｃｅ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｍｅｄｉｃａｌ ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２６， １５３−１６２ （１９８８）．
６２． Ａ． Ｌ． Ｈｏｔａｒｄ， Ｆ． Ｙ． Ｓｈａｉｋｈ， Ｓ． Ｌｅｅ， Ｄ． Ｙａｎ， Ｍ． Ｎ． Ｔｅｎｇ， Ｒ． Ｋ． Ｐｌｅｍｐｅｒ， Ｊ． Ｅ． Ｃｒｏｗｅ， Ｊｒ．， Ｍ． Ｌ． Ｍｏｏｒｅ， Ａ ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ ｒｅｖｅｒｓｅ ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｓｙｓｔｅｍ ａｍｅｎａｂｌｅ ｔｏ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ． Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ４３４， １２９−１３６ （２０１２）．
略式の配列表を、以下の表６に示す。抗体１２４〜２３１についてのこの略式の配列表は、上記したようにして同定を行い、かつ、抗体番号（Ａｂ＃）１２４〜２３１として示した１０８個の抗体のそれぞれに含まれている以下の１６個の配列要素を、以下の順序で示す。
・ 重鎖可変領域（「ＨＣ」）核酸配列
・ 重鎖可変領域（「ＨＣ」）アミノ酸配列
・ 重鎖可変領域ＣＤＲ Ｈ１（「Ｈ１」）アミノ酸配列
・ 重鎖可変領域ＣＤＲ Ｈ１（「Ｈ１」）核酸配列
・ 重鎖可変領域ＣＤＲ Ｈ２（「Ｈ２」）アミノ酸配列
・ 重鎖可変領域ＣＤＲ Ｈ２（「Ｈ２」）核酸配列
・ 重鎖可変領域ＣＤＲ Ｈ３（「Ｈ３」）アミノ酸配列
・ 重鎖可変領域ＣＤＲ Ｈ３（「Ｈ３」）核酸配列
・ 軽鎖可変領域（「ＬＣ」）核酸配列
・ 軽鎖可変領域（「ＬＣ」）アミノ酸配列
・ 軽鎖可変領域ＣＤＲ Ｌ１（「Ｌ１」）アミノ酸配列
・ 軽鎖可変領域ＣＤＲ Ｌ１（「Ｌ１」）核酸配列
・ 軽鎖可変領域ＣＤＲ Ｌ２（「Ｌ２」）アミノ酸配列
・ 軽鎖可変領域ＣＤＲ Ｌ２（「Ｌ２」）核酸配列
・ 軽鎖可変領域ＣＤＲ Ｌ３（「Ｌ３」）アミノ酸配列
・ 軽鎖可変領域ＣＤＲ Ｌ３（「Ｌ３」）核酸配列
・ 重鎖可変領域（「ＨＣ」）核酸配列
・ 重鎖可変領域（「ＨＣ」）アミノ酸配列
・ 重鎖可変領域ＣＤＲ Ｈ１（「Ｈ１」）アミノ酸配列
・ 重鎖可変領域ＣＤＲ Ｈ１（「Ｈ１」）核酸配列
・ 重鎖可変領域ＣＤＲ Ｈ２（「Ｈ２」）アミノ酸配列
・ 重鎖可変領域ＣＤＲ Ｈ２（「Ｈ２」）核酸配列
・ 重鎖可変領域ＣＤＲ Ｈ３（「Ｈ３」）アミノ酸配列
・ 重鎖可変領域ＣＤＲ Ｈ３（「Ｈ３」）核酸配列
・ 軽鎖可変領域（「ＬＣ」）核酸配列
・ 軽鎖可変領域（「ＬＣ」）アミノ酸配列
・ 軽鎖可変領域ＣＤＲ Ｌ１（「Ｌ１」）アミノ酸配列
・ 軽鎖可変領域ＣＤＲ Ｌ１（「Ｌ１」）核酸配列
・ 軽鎖可変領域ＣＤＲ Ｌ２（「Ｌ２」）アミノ酸配列
・ 軽鎖可変領域ＣＤＲ Ｌ２（「Ｌ２」）核酸配列
・ 軽鎖可変領域ＣＤＲ Ｌ３（「Ｌ３」）アミノ酸配列
・ 軽鎖可変領域ＣＤＲ Ｌ３（「Ｌ３」）核酸配列
抗体２３２〜２４４の略式配列表は、上記したようにして同定を行い、かつ、抗体番号（Ａｂ＃）２３２〜２４４として示した１３個の抗体のそれぞれに含まれている以下の１０個の配列要素を、以下の順序で示す。
・ 重鎖可変領域（「ＨＣ」）核酸配列
・ 重鎖可変領域（「ＨＣ」）アミノ酸配列
・ 重鎖可変領域ＣＤＲ Ｈ１（「Ｈ１」）アミノ酸配列
・ 重鎖可変領域ＣＤＲ Ｈ２（「Ｈ２」）アミノ酸配列
・ 重鎖可変領域ＣＤＲ Ｈ３（「Ｈ３」）アミノ酸配列
・ 軽鎖可変領域（「ＬＣ」）核酸配列
・ 軽鎖可変領域（「ＬＣ」）アミノ酸配列
・ 軽鎖可変領域ＣＤＲ Ｌ１（「Ｌ１」）アミノ酸配列
・ 軽鎖可変領域ＣＤＲ Ｌ２（「Ｌ２」）アミノ酸配列
・ 軽鎖可変領域ＣＤＲ Ｌ３（「Ｌ３」）アミノ酸配列
・ 重鎖可変領域（「ＨＣ」）核酸配列
・ 重鎖可変領域（「ＨＣ」）アミノ酸配列
・ 重鎖可変領域ＣＤＲ Ｈ１（「Ｈ１」）アミノ酸配列
・ 重鎖可変領域ＣＤＲ Ｈ２（「Ｈ２」）アミノ酸配列
・ 重鎖可変領域ＣＤＲ Ｈ３（「Ｈ３」）アミノ酸配列
・ 軽鎖可変領域（「ＬＣ」）核酸配列
・ 軽鎖可変領域（「ＬＣ」）アミノ酸配列
・ 軽鎖可変領域ＣＤＲ Ｌ１（「Ｌ１」）アミノ酸配列
・ 軽鎖可変領域ＣＤＲ Ｌ２（「Ｌ２」）アミノ酸配列
・ 軽鎖可変領域ＣＤＲ Ｌ３（「Ｌ３」）アミノ酸配列
追加の実施形態
実施形態１
呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）Ｆタンパク質（Ｆ）に対して特異的に結合する単離した抗体、または、その抗原結合断片であって、当該抗体、または、その抗原結合断片のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及び、ＣＤＲＬ３アミノ酸配列の少なくとも１つが、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４から選択した抗体の表６に開示したＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及び／または、ＣＤＲＬ３のアミノ酸配列の少なくとも１つと、少なくとも７０％が同一であり、少なくとも７５％が同一であり、８０％が同一であり、少なくとも８５％が同一であり、少なくとも９０％が同一であり、少なくとも９５％が同一であり、少なくとも９６％が同一であり、少なくとも９７％が同一であり、少なくとも９８％が同一であり、少なくともが９９％が同一であり、及び／または、その間のすべてのパーセンテージで同一であり、及び、当該抗体、または、その抗原結合断片は、以下の特徴、
ａ）当該抗体、または、その抗原結合断片は、ＲＳＶ−Ｆに結合するための当該抗体、または、その抗原結合断片と交差競合する、
ｂ）当該抗体、または、その抗原結合断片は、ＰｏｓｔＦ形態と比較して、ＲＳＶ−ＦのＰｒｅＦ形態に対して、良好な結合親和性を示す、
ｃ）当該抗体、または、その抗原結合断片は、クリーン、または、低度の多反応性プロファイルを示す、
ｄ）当該抗体、または、その抗原結合断片は、インビトロで、ＲＳＶサブタイプＡ、及び、ＲＳＶサブタイプＢに対して中和活性を示す、
ｅ）当該抗体、または、その抗原結合断片は、部位φ、部位Ｉ、部位ＩＩ、部位ＩＩＩ、部位ＩＶ、または、部位Ｖにて、ＲＳＶ−Ｆに対する抗原部位特異性を示す、
ｆ）当該抗体、または、その抗原結合断片は、ＲＳＶ−Ｆ部位Ｉ、部位ＩＩ、または、部位ＩＶと比較して、ＲＳＶ−Ｆ部位φ、部位Ｖ、または、部位ＩＩＩに対して抗原部位特異性を示す、
ｇ）当該抗体、または、その抗原結合断片が相互作用をするエピトープの少なくとも一部は、ＰｒｅＦのα３ヘリックス、及び、β３／β４ヘアピンを含む、
ｈ）当該抗体、または、その抗原結合断片は、インビトロで、約０．５マイクログラム／ミリリットル（ｕｇ／ｍｌ）約５ｕｇ／ｍｌの間、約０．０５ｕｇ／ｍｌ〜約０．５ｕｇ／ｍｌの間、または、約０．０５ｍｇ／ｍｌ未満の中和力（ＩＣ５０）を示す、
ｉ）図７Ａにおいて、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び、ＤＧと表示した当該ＲＳＶ−Ｆ変異体のいずれか１つに対する当該抗体、または、その抗原結合断片の結合親和性、及び／または、エピトープ特異性は、ＲＳＶ−Ｆ、または、ＲＳＶ−Ｆ ＤＳ−Ｃａｖ１に対する当該抗体、または、その抗原結合断片の結合親和性、及び／または、エピトープ特異性と比較して、減少または消失する、
ｊ）当該抗体、または、その抗原結合性断片は、ヒトメタニューモウイルス（ＨＭＰＶ）に対する交差中和力（ＩＣ５０）を示す、
ｋ）当該抗体、または、その抗原結合断片は、Ｄ２５、ＭＰＥ８、パリビズマブ、モタビズマブを備えていない、
ｌ）当該抗体、または、その抗原結合断片は、Ｄ２５、及び／または、パリビズマブよりも、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約３５倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約５５倍、少なくとも約６０倍、少なくとも約７０倍、少なくとも約８０倍、少なくとも約９０倍、少なくとも約１００倍、約１００倍超、及び、前述したあらゆる数値の間にある倍数だけ高い中和力（ＩＣ５０）を示す、という当該特徴の１つ以上を有する、当該抗体、または、その抗原結合断片。
実施形態１
呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）Ｆタンパク質（Ｆ）に対して特異的に結合する単離した抗体、または、その抗原結合断片であって、当該抗体、または、その抗原結合断片のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及び、ＣＤＲＬ３アミノ酸配列の少なくとも１つが、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４から選択した抗体の表６に開示したＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及び／または、ＣＤＲＬ３のアミノ酸配列の少なくとも１つと、少なくとも７０％が同一であり、少なくとも７５％が同一であり、８０％が同一であり、少なくとも８５％が同一であり、少なくとも９０％が同一であり、少なくとも９５％が同一であり、少なくとも９６％が同一であり、少なくとも９７％が同一であり、少なくとも９８％が同一であり、少なくともが９９％が同一であり、及び／または、その間のすべてのパーセンテージで同一であり、及び、当該抗体、または、その抗原結合断片は、以下の特徴、
ａ）当該抗体、または、その抗原結合断片は、ＲＳＶ−Ｆに結合するための当該抗体、または、その抗原結合断片と交差競合する、
ｂ）当該抗体、または、その抗原結合断片は、ＰｏｓｔＦ形態と比較して、ＲＳＶ−ＦのＰｒｅＦ形態に対して、良好な結合親和性を示す、
ｃ）当該抗体、または、その抗原結合断片は、クリーン、または、低度の多反応性プロファイルを示す、
ｄ）当該抗体、または、その抗原結合断片は、インビトロで、ＲＳＶサブタイプＡ、及び、ＲＳＶサブタイプＢに対して中和活性を示す、
ｅ）当該抗体、または、その抗原結合断片は、部位φ、部位Ｉ、部位ＩＩ、部位ＩＩＩ、部位ＩＶ、または、部位Ｖにて、ＲＳＶ−Ｆに対する抗原部位特異性を示す、
ｆ）当該抗体、または、その抗原結合断片は、ＲＳＶ−Ｆ部位Ｉ、部位ＩＩ、または、部位ＩＶと比較して、ＲＳＶ−Ｆ部位φ、部位Ｖ、または、部位ＩＩＩに対して抗原部位特異性を示す、
ｇ）当該抗体、または、その抗原結合断片が相互作用をするエピトープの少なくとも一部は、ＰｒｅＦのα３ヘリックス、及び、β３／β４ヘアピンを含む、
ｈ）当該抗体、または、その抗原結合断片は、インビトロで、約０．５マイクログラム／ミリリットル（ｕｇ／ｍｌ）約５ｕｇ／ｍｌの間、約０．０５ｕｇ／ｍｌ〜約０．５ｕｇ／ｍｌの間、または、約０．０５ｍｇ／ｍｌ未満の中和力（ＩＣ５０）を示す、
ｉ）図７Ａにおいて、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び、ＤＧと表示した当該ＲＳＶ−Ｆ変異体のいずれか１つに対する当該抗体、または、その抗原結合断片の結合親和性、及び／または、エピトープ特異性は、ＲＳＶ−Ｆ、または、ＲＳＶ−Ｆ ＤＳ−Ｃａｖ１に対する当該抗体、または、その抗原結合断片の結合親和性、及び／または、エピトープ特異性と比較して、減少または消失する、
ｊ）当該抗体、または、その抗原結合性断片は、ヒトメタニューモウイルス（ＨＭＰＶ）に対する交差中和力（ＩＣ５０）を示す、
ｋ）当該抗体、または、その抗原結合断片は、Ｄ２５、ＭＰＥ８、パリビズマブ、モタビズマブを備えていない、
ｌ）当該抗体、または、その抗原結合断片は、Ｄ２５、及び／または、パリビズマブよりも、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約３５倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約５５倍、少なくとも約６０倍、少なくとも約７０倍、少なくとも約８０倍、少なくとも約９０倍、少なくとも約１００倍、約１００倍超、及び、前述したあらゆる数値の間にある倍数だけ高い中和力（ＩＣ５０）を示す、という当該特徴の１つ以上を有する、当該抗体、または、その抗原結合断片。
実施形態２
当該抗体、または、その抗原結合断片が、特徴ａ）〜ｌ）の少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または、少なくとも１２個を含む、実施形態１に記載の単離した抗体、または、その抗原結合断片。
当該抗体、または、その抗原結合断片が、特徴ａ）〜ｌ）の少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または、少なくとも１２個を含む、実施形態１に記載の単離した抗体、または、その抗原結合断片。
実施形態３
当該抗体、または、その抗原結合断片が、
ａ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つのＣＤＲＨ３アミノ酸配列、
ｂ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つのＣＤＲＨ２アミノ酸配列、
ｃ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つのＣＤＲＨ１アミノ酸配列、
ｄ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つのＣＤＲＬ３アミノ酸配列、
ｅ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つのＣＤＲＬ２アミノ酸配列、
ｆ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つのＣＤＲＬ１アミノ酸配列、または
ｇ）ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）、及び、ｆ）の２つ以上のあらゆる組み合わせ、
を含む、実施形態１または２に記載の単離した抗体、または、その抗原結合断片。
当該抗体、または、その抗原結合断片が、
ａ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つのＣＤＲＨ３アミノ酸配列、
ｂ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つのＣＤＲＨ２アミノ酸配列、
ｃ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つのＣＤＲＨ１アミノ酸配列、
ｄ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つのＣＤＲＬ３アミノ酸配列、
ｅ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つのＣＤＲＬ２アミノ酸配列、
ｆ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つのＣＤＲＬ１アミノ酸配列、または
ｇ）ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）、及び、ｆ）の２つ以上のあらゆる組み合わせ、
を含む、実施形態１または２に記載の単離した抗体、または、その抗原結合断片。
実施形態４
当該抗体、または、その抗原結合断片が、
ａ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つの重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列、及び／または、
ｂ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つの軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列、
を含む、実施形態１〜３のいずれか１つに記載の単離した抗体、または、その抗原結合断片。
当該抗体、または、その抗原結合断片が、
ａ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つの重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列、及び／または、
ｂ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つの軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列、
を含む、実施形態１〜３のいずれか１つに記載の単離した抗体、または、その抗原結合断片。
実施形態５
当該抗体を、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つと、少なくとも７０％が同一であり、少なくとも７５％が同一であり、８０％が同一であり、少なくとも８５％が同一であり、少なくとも９０％が同一であり、少なくとも９５％が同一であり、少なくとも９６％が同一であり、少なくとも９７％が同一であり、少なくとも９８％が同一であり、少なくともが９９％が同一であり、及び／または、その間にあるすべてのパーセンテージで同一である抗体からなる群より選択する、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の単離した抗体、または、その抗原結合断片。
当該抗体を、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つと、少なくとも７０％が同一であり、少なくとも７５％が同一であり、８０％が同一であり、少なくとも８５％が同一であり、少なくとも９０％が同一であり、少なくとも９５％が同一であり、少なくとも９６％が同一であり、少なくとも９７％が同一であり、少なくとも９８％が同一であり、少なくともが９９％が同一であり、及び／または、その間にあるすべてのパーセンテージで同一である抗体からなる群より選択する、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の単離した抗体、または、その抗原結合断片。
実施形態６
当該抗体を、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体からなる群から選択する、実施形態１〜５のいずれか１つに記載の単離した抗体、または、その抗原結合断片。
当該抗体を、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体からなる群から選択する、実施形態１〜５のいずれか１つに記載の単離した抗体、または、その抗原結合断片。
実施形態７
実施形態１〜６のいずれか１つに記載の抗体、または、その抗原結合断片をコードする単離した核酸配列。
実施形態１〜６のいずれか１つに記載の抗体、または、その抗原結合断片をコードする単離した核酸配列。
実施形態８
実施形態７に記載の単離した核酸配列を含む発現ベクター。
実施形態７に記載の単離した核酸配列を含む発現ベクター。
実施形態９
実施形態７に記載の核酸配列、または、実施形態８に記載の発現ベクターでトランスフェクト、形質転換、または、形質導入した宿主細胞。
実施形態７に記載の核酸配列、または、実施形態８に記載の発現ベクターでトランスフェクト、形質転換、または、形質導入した宿主細胞。
実施形態１０
実施形態１〜６のいずれか１つに記載の単離した抗体、または、それらの抗原結合断片の１つ以上と、医薬として許容される担体、及び／または、賦形剤とを含む医薬組成物。
実施形態１〜６のいずれか１つに記載の単離した抗体、または、それらの抗原結合断片の１つ以上と、医薬として許容される担体、及び／または、賦形剤とを含む医薬組成物。
実施形態１１
実施形態７に記載の核酸配列の１つ以上、または、実施形態８に記載の発現ベクターの１つ以上と、医薬として許容される担体、及び／または、賦形剤とを含む医薬組成物。
実施形態７に記載の核酸配列の１つ以上、または、実施形態８に記載の発現ベクターの１つ以上と、医薬として許容される担体、及び／または、賦形剤とを含む医薬組成物。
実施形態１２
実施形態７に記載の核酸配列、または、実施形態８に記載の発現ベクターを含むトランスジェニック生物。
実施形態７に記載の核酸配列、または、実施形態８に記載の発現ベクターを含むトランスジェニック生物。
実施形態１３
呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症、または、ＲＳＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状を処置または予防する方法であって、それらを必要とする患者、または、それらを必要とする疑いのある患者に対して、
ａ）実施形態１〜６のいずれかに記載の１つ以上の抗体、または、それらの抗原結合断片、
ｂ）実施形態７に記載の核酸配列、
ｃ）実施形態８に記載の発現ベクター、
ｄ）実施形態９に記載の宿主細胞、または、
ｅ）実施形態１０または実施形態１１に記載の医薬組成物、
を投与して、ＲＳＶ感染症を、処置または予防し、または、ＲＳＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状を、処置、緩和、または、重症度を軽減することを含む、前記方法。
呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症、または、ＲＳＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状を処置または予防する方法であって、それらを必要とする患者、または、それらを必要とする疑いのある患者に対して、
ａ）実施形態１〜６のいずれかに記載の１つ以上の抗体、または、それらの抗原結合断片、
ｂ）実施形態７に記載の核酸配列、
ｃ）実施形態８に記載の発現ベクター、
ｄ）実施形態９に記載の宿主細胞、または、
ｅ）実施形態１０または実施形態１１に記載の医薬組成物、
を投与して、ＲＳＶ感染症を、処置または予防し、または、ＲＳＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状を、処置、緩和、または、重症度を軽減することを含む、前記方法。
実施形態１４
呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症、または、ヒトメタニューモウイルス（ＨＭＰＶ）感染症のいずれか、または、ＲＳＶ感染症、または、前記ＨＭＰＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状を処置または予防する方法であって、それらを必要とする患者、または、それらを必要とする疑いのある患者に対して、
ａ）実施形態１〜６のいずれかに記載の１つ以上の抗体、または、それらの抗原結合断片、
ｂ）実施形態７に記載の核酸配列、
ｃ）実施形態８に記載の発現ベクター、
ｄ）実施形態９に記載の宿主細胞、または、
ｅ）実施形態１０または実施形態１１に記載の医薬組成物、
を投与して、ＲＳＶ感染症を、処置または予防し、または、ＲＳＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状を、処置、緩和、または、重症度を軽減することを含む、前記方法。
呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症、または、ヒトメタニューモウイルス（ＨＭＰＶ）感染症のいずれか、または、ＲＳＶ感染症、または、前記ＨＭＰＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状を処置または予防する方法であって、それらを必要とする患者、または、それらを必要とする疑いのある患者に対して、
ａ）実施形態１〜６のいずれかに記載の１つ以上の抗体、または、それらの抗原結合断片、
ｂ）実施形態７に記載の核酸配列、
ｃ）実施形態８に記載の発現ベクター、
ｄ）実施形態９に記載の宿主細胞、または、
ｅ）実施形態１０または実施形態１１に記載の医薬組成物、
を投与して、ＲＳＶ感染症を、処置または予防し、または、ＲＳＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状を、処置、緩和、または、重症度を軽減することを含む、前記方法。
実施形態１５
ａ）の当該１つ以上の抗体、または、それらの抗原結合断片を、表６に開示した抗体番号１７９、１８８、２１１、２２１、または、２２９と表示した抗体からなる群から選択する、実施形態１４に記載の方法。
ａ）の当該１つ以上の抗体、または、それらの抗原結合断片を、表６に開示した抗体番号１７９、１８８、２１１、２２１、または、２２９と表示した抗体からなる群から選択する、実施形態１４に記載の方法。
実施形態１６
当該方法が、当該患者に対して第２の治療薬を投与する、ことをさらに含む、実施形態１３〜１５のいずれか１つに記載の方法。
当該方法が、当該患者に対して第２の治療薬を投与する、ことをさらに含む、実施形態１３〜１５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１７
当該第２の治療薬を、抗ウイルス薬、ＲＳＶに特異的なワクチン、インフルエンザウイルスに特異的なワクチン、または、メタニューモウイルス（ＭＰＶ）に特異的なワクチン、ＲＳＶ抗原またはメタニューモウイルス（ＭＰＶ）抗原に特異的なｓｉＲＮＡ、ＲＳＶ抗原またはメタニューモウイルス（ＭＰＶ）抗原に特異的な二次抗体、抗ＩＬ−４Ｒ抗体、インフルエンザウイルス抗原に特異的な抗体、抗ＲＳＶ−Ｇ抗体、及び、ＮＳＡＩＤからなる群から選択する、実施形態１６に記載の方法。
当該第２の治療薬を、抗ウイルス薬、ＲＳＶに特異的なワクチン、インフルエンザウイルスに特異的なワクチン、または、メタニューモウイルス（ＭＰＶ）に特異的なワクチン、ＲＳＶ抗原またはメタニューモウイルス（ＭＰＶ）抗原に特異的なｓｉＲＮＡ、ＲＳＶ抗原またはメタニューモウイルス（ＭＰＶ）抗原に特異的な二次抗体、抗ＩＬ−４Ｒ抗体、インフルエンザウイルス抗原に特異的な抗体、抗ＲＳＶ−Ｇ抗体、及び、ＮＳＡＩＤからなる群から選択する、実施形態１６に記載の方法。
実施形態１８
実施形態１〜７のいずれか１つに記載の単離した抗体、または、その抗原結合断片の１つ以上と、医薬として許容される担体、及び／または、賦形剤とを含む医薬組成物。
実施形態１〜７のいずれか１つに記載の単離した抗体、または、その抗原結合断片の１つ以上と、医薬として許容される担体、及び／または、賦形剤とを含む医薬組成物。
実施形態１９
呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症の予防において、それを必要とする患者、または、それを必要とする疑いのある患者での使用、または、ＲＳＶ感染症に罹患している患者の処置での使用、または、当該感染症に関連する少なくとも１つの症状あるいは合併症の処置での改善のための実施形態１８に記載の医薬組成物であって、当該使用の結果、当該感染症の予防、または、当該感染症に関連する症状あるいは合併症の少なくとも１つの予防、改善、もしくは、重症度、及び／または、期間の抑制のいずれかに至る前記医薬組成物。
呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症の予防において、それを必要とする患者、または、それを必要とする疑いのある患者での使用、または、ＲＳＶ感染症に罹患している患者の処置での使用、または、当該感染症に関連する少なくとも１つの症状あるいは合併症の処置での改善のための実施形態１８に記載の医薬組成物であって、当該使用の結果、当該感染症の予防、または、当該感染症に関連する症状あるいは合併症の少なくとも１つの予防、改善、もしくは、重症度、及び／または、期間の抑制のいずれかに至る前記医薬組成物。
実施形態２０
呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症、あるいは、ヒトメタニューモウイルス（ＨＭＰＶ）感染症、または、当該ＲＳＶ感染症、あるいは、当該ＨＭＰＶ感染症に関連する症状の少なくとも１つのいずれかの処置または予防において、それを必要とする患者、または、それを必要とする疑いのある患者での使用のための実施形態１８に記載の医薬組成物であって、当該使用の結果、当該感染症の予防、または、当該感染症に関連する症状あるいは合併症の少なくとも１つの予防、改善、もしくは、重症度、及び／または、期間の抑制のいずれかに至る前記医薬組成物。
呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症、あるいは、ヒトメタニューモウイルス（ＨＭＰＶ）感染症、または、当該ＲＳＶ感染症、あるいは、当該ＨＭＰＶ感染症に関連する症状の少なくとも１つのいずれかの処置または予防において、それを必要とする患者、または、それを必要とする疑いのある患者での使用のための実施形態１８に記載の医薬組成物であって、当該使用の結果、当該感染症の予防、または、当該感染症に関連する症状あるいは合併症の少なくとも１つの予防、改善、もしくは、重症度、及び／または、期間の抑制のいずれかに至る前記医薬組成物。
実施形態２１
呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症の予防、または、ＲＳＶ感染症に罹患している患者の処置、または、当該感染症に関連する少なくとも１つの症状、もしくは、合併症の改善にあって、それらを必要とする患者において、それらを行うための医薬の製造における実施形態１８に記載の医薬組成物の使用であって、当該感染症の予防、または、当該感染症に関連する症状あるいは合併症の少なくとも１つの予防、改善、もしくは、重症度、及び／または、期間の抑制のいずれかに至る前記使用。
呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症の予防、または、ＲＳＶ感染症に罹患している患者の処置、または、当該感染症に関連する少なくとも１つの症状、もしくは、合併症の改善にあって、それらを必要とする患者において、それらを行うための医薬の製造における実施形態１８に記載の医薬組成物の使用であって、当該感染症の予防、または、当該感染症に関連する症状あるいは合併症の少なくとも１つの予防、改善、もしくは、重症度、及び／または、期間の抑制のいずれかに至る前記使用。
実施形態２２
呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症、あるいは、ヒトメタニューモウイルス（ＨＭＰＶ）感染症、または、当該ＲＳＶ感染症、あるいは、当該ＨＭＰＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状のいずれかの予防であって、それらを必要とする患者、または、それらを必要とする疑いのある患者において予防をするための医薬の製造における実施形態１８に記載の医薬組成物の使用であって、当該使用の結果、当該感染症の予防、または、当該感染症に関連する症状あるいは合併症の少なくとも１つの予防、改善、もしくは、重症度、及び／または、期間の抑制のいずれかに至る当該使用。
呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症、あるいは、ヒトメタニューモウイルス（ＨＭＰＶ）感染症、または、当該ＲＳＶ感染症、あるいは、当該ＨＭＰＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状のいずれかの予防であって、それらを必要とする患者、または、それらを必要とする疑いのある患者において予防をするための医薬の製造における実施形態１８に記載の医薬組成物の使用であって、当該使用の結果、当該感染症の予防、または、当該感染症に関連する症状あるいは合併症の少なくとも１つの予防、改善、もしくは、重症度、及び／または、期間の抑制のいずれかに至る当該使用。
Claims (22)
- 呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）Ｆタンパク質（Ｆ）に対して特異的に結合する単離した抗体、または、その抗原結合断片であって、前記抗体、または、その抗原結合断片のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及び、ＣＤＲＬ３アミノ酸配列の少なくとも１つが、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４から選択した抗体の表６に開示したＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及び／または、ＣＤＲＬ３のアミノ酸配列の少なくとも１つと、少なくとも７０％が同一であり、少なくとも７５％が同一であり、８０％が同一であり、少なくとも８５％が同一であり、少なくとも９０％が同一であり、少なくとも９５％が同一であり、少なくとも９６％が同一であり、少なくとも９７％が同一であり、少なくとも９８％が同一であり、少なくともが９９％であり、及び／または、その間のすべてのパーセンテージで同一であり、及び、前記抗体、または、その抗原結合断片は、以下の特徴、
ａ）前記抗体、または、その抗原結合断片は、ＲＳＶ−Ｆに結合するための前記抗体、または、その抗原結合断片と交差競合する、
ｂ）前記抗体、または、その抗原結合断片は、ＰｏｓｔＦ形態と比較して、ＲＳＶ−ＦのＰｒｅＦ形態に対して、良好な結合親和性を示す、
ｃ）前記抗体、または、その抗原結合断片は、クリーン、または、低度の多反応性プロファイルを示す、
ｄ）前記抗体、または、その抗原結合断片は、インビトロで、ＲＳＶサブタイプＡ、及び、ＲＳＶサブタイプＢに対して中和活性を示す、
ｅ）前記抗体、または、その抗原結合断片は、部位φ、部位Ｉ、部位ＩＩ、部位ＩＩＩ、部位ＩＶ、または、部位ＶにてＲＳＶ−Ｆに対する抗原部位特異性を示す、
ｆ）前記抗体、または、その抗原結合断片は、ＲＳＶ−Ｆ部位Ｉ、部位ＩＩ、または、部位ＩＶと比較して、ＲＳＶ−Ｆ部位φ、部位Ｖ、または、部位ＩＩＩに対して抗原部位特異性を示す、
ｇ）前記抗体、または、その抗原結合断片が相互作用をするエピトープの少なくとも一部は、ＰｒｅＦのα３ヘリックス、及び、β３／β４ヘアピンを含む、
ｈ）前記抗体、または、その抗原結合断片は、インビトロで、約０．５マイクログラム／ミリリットル（ｕｇ／ｍｌ）〜約５ｕｇ／ｍｌの間、約０．０５μｇ／ｍｌ〜約０．５μｇ／ｍｌの間、または、約０．０５ｍｇ／ｍｌ未満の中和力（ＩＣ５０）を示す、
ｉ）表７Ａにおいて、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び、ＤＧと表示した前記ＲＳＶ−Ｆ変異体のいずれか１つに対する前記抗体、または、その抗原結合断片の結合親和性、及び／または、エピトープ特異性は、ＲＳＶ−Ｆ、または、ＲＳＶ−Ｆ ＤＳ−Ｃａｖ１に対する前記抗体、または、その抗原結合断片の結合親和性、及び／または、エピトープ特異性と比較して、減少または消失する、
ｊ）前記抗体、または、その抗原結合性断片は、ヒトメタニューモウイルス（ＨＭＰＶ）に対する交差中和力（ＩＣ５０）を示す、
ｋ）前記抗体、または、その抗原結合断片は、Ｄ２５、ＭＰＥ８、パリビズマブ、モタビズマブ、または、ＡＭ−１４を備えていない、
ｌ）前記抗体、または、その抗原結合断片は、Ｄ２５、及び／または、パリビズマブよりも、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約３５倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約５５倍、少なくとも約６０倍、少なくとも約７０倍、少なくとも約８０倍、少なくとも約９０倍、少なくとも約１００倍、約１００倍超、及び、前記したあらゆる数値の間にある倍数だけ高い中和力（ＩＣ５０）を示す、という前記特徴の１つ以上を有する、前記抗体、または、その抗原結合断片。 - 前記抗体、または、その抗原結合断片が、特徴ａ）〜ｌ）の少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または、少なくとも１２個を含む、請求項１に記載の単離した抗体、または、その抗原結合断片。
- 前記抗体、または、その抗原結合断片が、
ａ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つのＣＤＲＨ３アミノ酸配列、
ｂ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つのＣＤＲＨ２アミノ酸配列、
ｃ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つのＣＤＲＨ１アミノ酸配列、
ｄ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つのＣＤＲＬ３アミノ酸配列、
ｅ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つのＣＤＲＬ２アミノ酸配列、
ｆ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つのＣＤＲＬ１アミノ酸配列、または
ｇ）ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）、及び、ｆ）の２つ以上のあらゆる組み合わせ、
を含む、請求項１または２に記載の単離した抗体、または、その抗原結合断片。 - 前記抗体、または、その抗原結合断片が、
ａ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つの重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列、及び／または、
ｂ）表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つの軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列、
を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の単離した抗体、または、その抗原結合断片。 - 前期抗体を、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体のいずれか１つと、少なくとも７０％が同一であり、少なくとも７５％が同一であり、８０％が同一であり、少なくとも８５％が同一であり、少なくとも９０％が同一であり、少なくとも９５％が同一であり、少なくとも９６％が同一であり、少なくとも９７％が同一であり、少なくとも９８％が同一であり、少なくともが９９％が同一であり、及び／または、その間にあるすべてのパーセンテージで同一である抗体からなる群より選択する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の単離した抗体、または、その抗原結合断片。
- 前記抗体を、表６に開示した抗体番号１２４〜抗体番号２４４と表示した抗体からなる群から選択する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の単離した抗体、または、その抗原結合断片。
- 請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗体、または、その抗原結合断片をコードする単離した核酸配列。
- 請求項７に記載の単離した核酸配列を含む発現ベクター。
- 請求項７に記載の核酸配列、または、請求項８に記載の発現ベクターでトランスフェクト、形質転換、または、形質導入した宿主細胞。
- 請求項１〜６のいずれか１項に記載の単離した抗体、または、それらの抗原結合断片の１つ以上と、医薬として許容される担体、及び／または、賦形剤とを含む医薬組成物。
- 請求項７に記載の核酸配列の１つ以上、または、請求項８に記載の発現ベクターの１つ以上と、医薬として許容される担体、及び／または、賦形剤とを含む医薬組成物。
- 請求項７に記載の核酸配列、または、請求項８に記載の発現ベクターを含むトランスジェニック生物。
- 呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症、または、ＲＳＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状を処置または予防する方法であって、それらを必要とする患者、または、それらを必要とする疑いのある患者に対して、
ａ）請求項１〜６のいずれかに記載の１つ以上の抗体、または、それらの抗原結合断片、
ｂ）請求項７に記載の核酸配列、
ｃ）請求項８に記載の発現ベクター、
ｄ）請求項９に記載の宿主細胞、または、
ｅ）請求項１０または請求項１１に記載の医薬組成物、
を投与して、ＲＳＶ感染症を、処置または予防し、または、ＲＳＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状を、処置、緩和、または、重症度を軽減することを含む、前記方法。 - 呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症、または、ヒトメタニューモウイルス（ＨＭＰＶ）感染症のいずれか、または、ＲＳＶ感染症、または、前記ＨＭＰＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状を処置または予防する方法であって、それらを必要とする患者、または、それらを必要とする疑いのある患者に対して、
ａ）請求項１〜６のいずれかに記載の１つ以上の抗体、または、それらの抗原結合断片、
ｂ）請求項７に記載の核酸配列、
ｃ）請求項８に記載の発現ベクター、
ｄ）請求項９に記載の宿主細胞、または、
ｅ）請求項１０または請求項１１に記載の医薬組成物、
を投与して、ＲＳＶ感染症を、処置または予防し、または、ＲＳＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状を、処置、緩和、または、重症度を軽減することを含む、前記方法。 - ａ）の前記１つ以上の抗体、または、それらの抗原結合断片が、表６に開示した抗体番号１７９、１８８、２１１、２２１、または、２２９として表示した抗体からなる群から選択する、請求項１４に記載の方法。
- 前記方法が、前記患者に対して第２の治療薬を投与する、ことをさらに含む、請求項１３〜１５のいずれか１項に記載の方法。
- 前記第２の治療薬を、抗ウイルス薬、ＲＳＶに特異的なワクチン、インフルエンザウイルスに特異的なワクチン、または、メタニューモウイルス（ＭＰＶ）に特異的なワクチン、ＲＳＶ抗原またはメタニューモウイルス（ＭＰＶ）抗原に特異的なｓｉＲＮＡ、ＲＳＶ抗原またはメタニューモウイルス（ＭＰＶ）抗原に特異的な二次抗体、抗ＩＬ−４Ｒ抗体、インフルエンザウイルス抗原に特異的な抗体、抗ＲＳＶ−Ｇ抗体、及び、ＮＳＡＩＤからなる群から選択する、請求項１６に記載の方法。
- 請求項１〜７のいずれか１項に記載の単離した抗体、または、その抗原結合断片の１つ以上と、医薬として許容される担体、及び／または、賦形剤とを含む医薬組成物。
- 呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症の予防において、それを必要とする患者、または、それを必要とする疑いのある患者での使用、または、ＲＳＶ感染症に罹患している患者の処置での使用、または、前記感染症に関連する少なくとも１つの症状あるいは合併症の改善での使用のための請求項１８に記載の医薬組成物であって、前記使用の結果、前記感染症の予防、または、前記感染症に関連する症状あるいは合併症の少なくとも１つの予防、改善、もしくは、重症度、及び／または、期間の抑制のいずれかに至る前記医薬組成物。
- 呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症、あるいは、ヒトメタニューモウイルス（ＨＭＰＶ）感染症、または、前記ＲＳＶ感染症、あるいは、前記ＨＭＰＶ感染症に関連する症状の少なくとも１つのいずれかの処置または予防において、それを必要とする患者、または、それを必要とする疑いのある患者での使用のための請求項１８に記載の医薬組成物であって、前記使用の結果、前記感染症の予防、または、前記感染症に関連する症状あるいは合併症の少なくとも１つの予防、改善、もしくは、重症度、及び／または、期間の抑制のいずれかに至る前記医薬組成物。
- 呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症の予防、または、ＲＳＶ感染症に罹患している患者の処置、または、前記感染症に関連する少なくとも１つの症状、もしくは、合併症の改善にあって、それらを必要とする患者において、それらを行うための医薬の製造における請求項１８に記載の医薬組成物の使用であって、前記感染症の予防、または、前記感染症に関連する症状あるいは合併症の少なくとも１つの予防、改善、もしくは、重症度、及び／または、期間の抑制のいずれかに至る前記使用。
- 呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症、あるいは、ヒトメタニューモウイルス（ＨＭＰＶ）感染症、または、前記ＲＳＶ感染症、あるいは、前記ＨＭＰＶ感染症に関連する少なくとも１つの症状のいずれかの予防であって、それらを必要とする患者、または、それらを必要とする疑いのある患者において予防をするための医薬の製造における請求項１８に記載の医薬組成物の使用であって、前記使用の結果、前記感染症の予防、または、前記感染症に関連する症状あるいは合併症の少なくとも１つの予防、改善、もしくは、重症度、及び／または、期間の抑制のいずれかに至る前記使用。
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