JP2019531474A5 - - Google Patents
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Claims (23)
- 第１の抗体を含む組成物であって、
２つ以上の蛍光標識および２つ以上のスペーサー分子が前記第１の抗体に共有結合し、 前記蛍光標識およびスペーサー分子が互いに共有結合していない、組成物。 - 前記第１の抗体が、等量の蛍光標識を用いて調製されたが前記スペーサー分子を含まない第２の抗体よりも高い蛍光発光レベルを示す、請求項１に記載の組成物。
- 前記第１の抗体が第２の抗体よりも高い蛍光発光レベルを示し、前記第１の抗体および前記第２の抗体がそれぞれ同数の共有結合した蛍光標識を有し、前記第２の抗体が共有結合したスペーサー分子を有さない、請求項１に記載の組成物。
- 前記スペーサー分子が、前記蛍光標識の消光を、前記スペーサー分子の非存在下での消光と比較して減少させる、請求項１に記載の組成物。
- 前記スペーサー分子が、反応性基を介して前記抗体にコンジュゲートされている、請求項１に記載の組成物。
- 前記反応性基がアミン基である、請求項５に記載の組成物。
- 前記アミン基がリジン残基上にある、請求項６に記載の組成物。
- 前記スペーサー分子が、
アルカノイル、アルケノイル、およびアルキノイル（−Ｃ（Ｏ）Ｃ n Ｈ m ）（式中、ｎは１〜２０個の原子であり、ｍ＞ｎであり、前記アルカノイル、アルケノイル、およびアルキノイルの炭素原子は、単結合、二重結合、および／または三重結合によって互いに結合することができ、また、前記アルカノイル、アルケノイル、およびアルキノイルのアルキル、アルケニル、およびアルキニル基は、ポリ（エチレン）グリコール部分（例えば、−（ＯＣＨ 2 ＣＨ 2 Ｏ） x −（ＣＨ 2 ） y −ＯＲ（式中、ｘは１〜２０であり、ｙは１〜６であり、そしてＲはＨまたはＣ 1~6 アルキルである）など）、アンモニウム（−ＮＨ 3 + ）、第４級アンモニウム（−ＮＲ 3 + ）基（式中、ＲはＣ 1~6 アルキルである）、またはホスホニウム基（−ＰＱ 3 + ）（式中、Ｑはアリール、置換アリール、またはＣ 1~6 アルキルである）でさらに置換されていてもよい）；
アルキル、アルケニル、およびアルキニル基（−Ｃ n Ｈ m ）（式中、ｎは１〜２０個の原子であり、ｍ＞ｎであり、前記アルキル、アルケニル、およびアルキニル基の炭素原子は、単結合、二重結合、および／または三重結合によって互いに結合することができ、また、前記アルキル、アルケニル、およびアルキニル基は、スルホネート基（−ＯＳＯ 3 −）、カルボキシレート基（−ＣＯ 2 −）、ホスフェート基（−ＯＰＯ 3 −）、ホスホネート基（−ＰＯ 3 −）、ポリ（エチレン）グリコール部分（例えば、−（ＯＣＨ 2 ＣＨ 2 Ｏ） x −（ＣＨ 2 ） y −ＯＲ（式中、ｘは１〜２０であり、ｙは１〜６であり、そしてＲはＨまたはＣ 1~6 アルキルである）など）、アンモニウム（−ＮＨ 3 + ）、第４級アンモニウム（−ＮＲ 3 + ）基（式中、ＲはＣ 1~6 アルキルである）、またはホスホニウム基（−ＰＱ 3 + ）（式中、Ｑはアリール、置換アリール、またはＣ 1~6 アルキルである）でさらに置換されていてもよい）；および
アセテート分子から選択されるか、または
前記スペーサー分子は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ＭＳ−（ＰＥＧ）、またはベタインを含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。 - 前記スペーサー分子が、アセテートおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）から選択される、請求項１に記載の組成物。
- 蛍光標識の抗体に対する比が１〜５０である、請求項１に記載の組成物。
- 蛍光標識の抗体に対する前記比が５〜３０である、請求項１０に記載の組成物。
- 蛍光標識された生体分子の蛍光を増加させる方法であって、
（ａ）スペーサー分子を生体分子にコンジュゲートすることと、
（ｂ）前記生体分子に蛍光標識をコンジュゲートすることと、を含み、
ステップ（ａ）および（ｂ）は同時にまたは任意の順序で行うことができ、
前記スペーサー分子と蛍光標識は互いにコンジュゲートされていない、方法。 - 前記スペーサー分子が、前記蛍光標識の消光を、前記スペーサー分子の非存在下での消光と比較して減少させる、請求項１２に記載の方法。
- 前記スペーサー分子が、反応性基を介して前記生体分子にコンジュゲートされている、請求項１２に記載の方法。
- 前記反応性基がアミン基である、請求項１４に記載の方法。
- 前記アミン基がリジン残基上にある、請求項１５に記載の方法。
- 前記スペーサー分子が、
アルカノイル、アルケノイル、およびアルキノイル（−Ｃ（Ｏ）Ｃ n Ｈ m ）（式中、ｎは１〜２０個の原子であり、ｍ＞ｎであり、前記アルカノイル、アルケノイル、およびアルキノイルの炭素原子は、単結合、二重結合、および／または三重結合によって互いに結合することができ、また、前記アルカノイル、アルケノイル、およびアルキノイルのアルキル、アルケニル、およびアルキニル基は、ポリ（エチレン）グリコール部分（例えば、−（ＯＣＨ 2 ＣＨ 2 Ｏ） x −（ＣＨ 2 ） y −ＯＲ（式中、ｘは１〜２０であり、ｙは１〜６であり、そしてＲはＨまたはＣ 1~6 アルキルである）など）、アンモニウム（−ＮＨ 3 + ）、第４級アンモニウム（−ＮＲ 3 + ）基（式中、ＲはＣ 1~6 アルキルである）、またはホスホニウム基（−ＰＱ 3 + ）（式中、Ｑはアリール、置換アリール、またはＣ 1~6 アルキルである）でさらに置換されていてもよい）；
アルキル、アルケニル、およびアルキニル基（−Ｃ n Ｈ m ）（式中、ｎは１〜２０個の原子であり、ｍ＞ｎであり、前記アルキル、アルケニル、およびアルキニル基の炭素原子は、単結合、二重結合、および／または三重結合によって互いに結合することができ、また、前記アルキル、アルケニル、およびアルキニル基は、スルホネート基（−ＯＳＯ 3 −）、カルボキシレート基（−ＣＯ 2 −）、ホスフェート基（−ＯＰＯ 3 −）、ホスホネート基（−ＰＯ 3 −）、ポリ（エチレン）グリコール部分（例えば、−（ＯＣＨ 2 ＣＨ 2 Ｏ） x −（ＣＨ 2 ） y −ＯＲ（式中、ｘは１〜２０であり、ｙは１〜６であり、そしてＲはＨまたはＣ 1~6 アルキルである）など）、アンモニウム（−ＮＨ 3 + ）、第４級アンモニウム（−ＮＲ 3 + ）基（式中、ＲはＣ 1~6 アルキルである）、またはホスホニウム基（−ＰＱ 3 + ）（式中、Ｑはアリール、置換アリール、またはＣ 1~6 アルキルである）でさらに置換されていてもよい）；および
アセテート分子から選択されるか、または
前記スペーサー分子は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ＭＳ−（ＰＥＧ）、またはベタインを含む、請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。 - 蛍光標識された生体分子を調製する方法であって、
（ａ）反応性基および２つ以上の蛍光標識をスペーサー分子にコンジュゲートし、それによって蛍光標識されたスペーサー分子を形成することと、
（ｂ）前記蛍光標識されたスペーサー分子を前記生体分子にコンジュゲートし、それによって前記蛍光標識された生体分子を形成することと、を含み、
前記蛍光標識された生体分子の個々の蛍光標識が、蛍光標識１個あたりに基づいて０．５以上の蛍光比を有する、方法。 - 平均１〜１０個の蛍光標識されたスペーサー分子が各生体分子にコンジュゲートされている、請求項１８に記載の方法。
- 平均３〜１０個の蛍光標識されたスペーサー分子が各生体分子にコンジュゲートされている、請求項１８に記載の方法。
- 前記スペーサー分子が、
アルカノイル、アルケノイル、およびアルキノイル（−Ｃ（Ｏ）Ｃ n Ｈ m ）（式中、ｎは１〜２０個の原子であり、ｍ＞ｎであり、前記アルカノイル、アルケノイル、およびアルキノイルの炭素原子は、単結合、二重結合、および／または三重結合によって互いに結合することができ、また、前記アルカノイル、アルケノイル、およびアルキノイルのアルキル、アルケニル、およびアルキニル基は、ポリ（エチレン）グリコール部分（例えば、−（ＯＣＨ 2 ＣＨ 2 Ｏ） x −（ＣＨ 2 ） y −ＯＲ（式中、ｘは１〜２０であり、ｙは１〜６であり、そしてＲはＨまたはＣ 1~6 アルキルである）など）、アンモニウム（−ＮＨ 3 + ）、第４級アンモニウム（−ＮＲ 3 + ）基（式中、ＲはＣ 1~6 アルキルである）、またはホスホニウム基（−ＰＱ 3 + ）（式中、Ｑはアリール、置換アリール、またはＣ 1~6 アルキルである）でさらに置換されていてもよい）；
アルキル、アルケニル、およびアルキニル基（−Ｃ n Ｈ m ）（式中、ｎは１〜２０個の原子であり、ｍ＞ｎであり、前記アルキル、アルケニル、およびアルキニル基の炭素原子は、単結合、二重結合、および／または三重結合によって互いに結合することができ、また、前記アルキル、アルケニル、およびアルキニル基は、スルホネート基（−ＯＳＯ 3 −）、カルボキシレート基（−ＣＯ 2 −）、ホスフェート基（−ＯＰＯ 3 −）、ホスホネート基（−ＰＯ 3 −）、ポリ（エチレン）グリコール部分（例えば、−（ＯＣＨ 2 ＣＨ 2 Ｏ） x −（ＣＨ 2 ） y −ＯＲ（式中、ｘは１〜２０であり、ｙは１〜６であり、そしてＲはＨまたはＣ 1~6 アルキルである）など）、アンモニウム（−ＮＨ 3 + ）、第４級アンモニウム（−ＮＲ 3 + ）基（式中、ＲはＣ 1~6 アルキルである）、またはホスホニウム基（−ＰＱ 3 + ）（式中、Ｑはアリール、置換アリール、またはＣ 1~6 アルキルである）でさらに置換されていてもよい）；および
アセテート分子から選択されるか、または
前記スペーサー分子は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ＭＳ−（ＰＥＧ）、またはベタインを含む、請求項１８〜２０のいずれか一項に記載の方法。 - 前記蛍光標識されたスペーサー分子がマルチアームポリマーである、請求項１８に記載の方法。
- マルチアームポリマーが分岐鎖ポリエチレングリコール分子である、請求項２２に記載の方法。
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2023
- 2023-10-16 US US18/380,388 patent/US20240042062A1/en active Pending
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